JP6206953B2 - Method for testing the likelihood of developing adult T-cell leukemia - Google Patents
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Description
本発明は、試料中の可溶性インターロイキン−2受容体(以下、sIL−2Rと記す)を測定し、ヒトTリンパ球向性ウィルス1型(以下、HTLV−1と記す)キャリアにおける成人T細胞白血病(以下、ATLと記す)の発症し易さを試験する方法、並びにこれらの方法に用いるキットに関する。 The present invention measures a soluble interleukin-2 receptor (hereinafter referred to as sIL-2R) in a sample, and adult T cells in a human T lymphotropic virus type 1 (hereinafter referred to as HTLV-1) carrier The present invention relates to a method for testing the likelihood of developing leukemia (hereinafter referred to as ATL), and a kit used in these methods.
ヒトTリンパ球向性ウィルスは、レトロウィルスの1種であり、1型と2型の2つの型が存在する。このうち、1型、すなわち、HTLV−1は、日沼らによって成人T細胞白血病/リンパ腫の原因ウィルスとして同定されている(非特許文献1、2、3参照)。 Human T lymphotropic virus is a type of retrovirus, and there are two types, type 1 and type 2. Of these, type 1, ie, HTLV-1, has been identified as a causative virus for adult T-cell leukemia / lymphoma by Hinuma et al. (See Non-Patent Documents 1, 2, and 3).
ヒトにおけるHTLV−1感染は、主に母から子への垂直感染ならびに夫から妻への水平感染であるが、輸血による医原性感染も知られている。輸血による医原性感染は、1986年から開始された抗HTLV−1(または2)抗体を検査することにより防止されてきた。輸血による医原性感染の疫学的研究から、HTLV−1感染は血球細胞成分が介在していることが知られている。HTLV−1に感染すると、生体中に抗HTLV−1抗体が生成してくるので、抗HTLV−1抗体を測定することにより、HTLV−1の感染を知ることができる。 HTLV-1 infection in humans is mainly vertical transmission from mother to child and horizontal transmission from husband to wife, but iatrogenic infection by blood transfusion is also known. Iatrogenic infections from blood transfusions have been prevented by examining anti-HTLV-1 (or 2) antibodies, started in 1986. From epidemiological studies of iatrogenic infection by blood transfusion, it is known that HTLV-1 infection is mediated by blood cell components. When infected with HTLV-1, an anti-HTLV-1 antibody is produced in the living body. Therefore, by measuring the anti-HTLV-1 antibody, infection of HTLV-1 can be known.
抗HTLV−1抗体を測定する方法としては、免疫学的手法を用いた測定方法が知られており、ゼラチン粒子凝集法(PA法)、蛍光抗体法(FA法)、間接蛍光抗体法(IF法)、化学発光酵素免疫測定法(CLEIA法)、ウェスタンブロット法(WB法)などが知られている。HTLV−1キャリア 指導の手引き(厚生労働省研究班「本邦におけるHTLV-1感染及び関連疾患の実態調査と総合対策」、2011年)によると、一般医療機関ではスクリーニング検査としてPA法やCLEIA法が用いられる。スクリーニング検査で陽性と判断された場合であっても、WB法による確認検査が実施される。さらに、WB法による確認検査で判定保留となった場合、HTLV−1プロウイルスを検出するPCR法(ポリメラーゼ連鎖反応法)による検査を実施することがある。 As a method for measuring an anti-HTLV-1 antibody, a measurement method using an immunological technique is known. Gelatin particle aggregation method (PA method), fluorescent antibody method (FA method), indirect fluorescent antibody method (IF Method), chemiluminescent enzyme immunoassay (CLEIA method), Western blot method (WB method) and the like are known. According to HTLV-1 Career Guidance Guide (Ministry of Health, Labor and Welfare, Research Group “Study of HTLV-1 infection and related diseases in Japan and comprehensive measures”, 2011), general medical institutions use PA and CLEIA methods as screening tests. It is done. Even if it is determined to be positive by the screening test, a confirmation test by the WB method is performed. Further, when the determination is suspended in the confirmation test by the WB method, a test by the PCR method (polymerase chain reaction method) for detecting the HTLV-1 provirus may be performed.
HTLV−1が引き起こす疾患としては、例えば血流内やリンパ器官内で発症する成人T細胞性白血病/リンパ腫、脊髄内で発症するHTLV−1関連脊髄症(HAM/TSP)、眼球内で発症したブドウ膜炎(HU)等が知られている。 Diseases caused by HTLV-1 include, for example, adult T-cell leukemia / lymphoma that develops in the bloodstream and lymphoid organs, HTLV-1-related myelopathy that develops in the spinal cord (HAM / TSP), and in the eyeball Uveitis (HU) and the like are known.
ATLは、HTLV−1の感染が原因となって起こる独立した疾患である。HTLV−1キャリア(HTLV−1に感染した者で、上記のHTLV−1が引き起こす疾患を発症していない者)は、2008年の段階で、日本国内で約108万人と推定されている。また、年間HTLV−1キャリア1000人に1人の割合でATLを発症し、ATL生涯発症率はHTLV−1キャリアの約5%と言われている。発症率は非常に低いがひとたび発症するときわめて短期間で重篤な結果もたらすと言われている。 ATL is an independent disease caused by HTLV-1 infection. The number of HTLV-1 carriers (those who have been infected with HTLV-1 and who have not developed the disease caused by HTLV-1) is estimated to be about 1.08 million in Japan in 2008. Moreover, ATL develops at a rate of 1 in 1000 HTLV-1 carriers per year, and the ATL lifetime incidence is said to be about 5% of HTLV-1 carriers. Although the incidence is very low, once it develops, it is said to have very short and severe consequences.
ATLは、急性型、リンパ腫型、慢性型、くすぶり型の4種類の臨床病型に分類され、この臨床病型は化学療法を含めた治療方針の決定に広く使用されている。1990〜1995年の本邦全国ATL実態調査によると、ATL2123例中、急性型は1328例(62.6%)、リンパ腫型は505例(23.8%)、慢性型は176例(8.3%)、くすぶり型は114例(5.4%)であった。 ATLs are classified into four types of clinical disease types, acute type, lymphoma type, chronic type, and smoldering type, and this clinical type is widely used in determining treatment strategies including chemotherapy. According to the ATL survey in Japan from 1990 to 1995, among the ATL2123 cases, the acute type was 1328 cases (62.6%), the lymphoma type was 505 cases (23.8%), and the chronic type was 176 cases (8.3). %) And smoldering type was 114 cases (5.4%).
リンパ腫型及び急性型は高悪性度ATLと定義され、予後(生存率)が悪く早急な治療が必要となる。一方、くすぶり型や慢性型は低悪性度ATLと定義され、無治療で経過を観察することが一般的に行われている。このように、急性型、リンパ腫型に比べると、慢性型やくすぶり型は生存率が高いと言われている。 Lymphoma type and acute type are defined as high-grade ATL and have a poor prognosis (survival rate) and require immediate treatment. On the other hand, the smoldering type and the chronic type are defined as low-grade ATL, and it is a common practice to observe the course without treatment. As described above, it is said that the chronic type and the smoldering type have a higher survival rate than the acute type and the lymphoma type.
ATLの予後は極めて不良と言われている。現在のところ、mLSG15と呼ばれる多剤併用療法で最も良好な生存率が得られているが、生存期間の中央値は約13ヵ月、3年生存割合は約24%と依然極めて不良である。最近、CCR4(ケモカイン受容体4)をターゲットとした抗体医薬であるポテリジオ(登録商標)が承認され、第2相試験で再発高悪性度ATLに対する奏功率が50%であったことが報告されている。化学療法で十分な効果が期待できない場合は、骨髄移植(同種造血幹細胞移植)が積極的に行われるようになり、一部の患者では治癒も期待できるようになってきた(非特許文献4参照)。 The prognosis of ATL is said to be extremely poor. Currently, multi-drug combination therapy called mLSG15 has achieved the best survival, but the median survival is about 13 months and the 3-year survival rate is still about 24%, which is still very poor. Recently, Poterigio (registered trademark), an antibody drug targeting CCR4 (chemokine receptor 4) was approved, and it was reported that the response rate to relapsed high-grade ATL was 50% in a phase 2 study. Yes. When a sufficient effect cannot be expected with chemotherapy, bone marrow transplantation (allogeneic hematopoietic stem cell transplantation) has been actively performed, and some patients can also be expected to be cured (see Non-Patent Document 4). ).
ATL発症のリスクファクターに関する研究がいくつかの機関で実施されている。HTLV−1キャリアのうち一定の条件を満たしている者が、ATLを発症しやすいことが次第に分かってきており、母子感染、性別(男性)、加齢、特定のHLA(ヒト白血球抗原)、抗HTLV−1抗体タイター(titer)の上昇、sIL−2Rの上昇、白血球数の増加などがリスクファクターとして挙げられている。しかしながら、ATLを発症するキャリアと発症しないキャリアとを明確に分けることはできていない。「ATL発症高危険群の長期追跡と発病予防」のプロジェクト(Joint Study of Predisposing Factors of ATL Development:JSPFAD)の中で、感染から発症に至る生体内の変化が解析されている。 Studies on risk factors for the development of ATL have been conducted in several institutions. It has been gradually found that those who satisfy certain conditions among HTLV-1 carriers are likely to develop ATL, such as mother-to-child infection, sex (male), aging, specific HLA (human leukocyte antigen), Increased HTLV-1 antibody titer, increased sIL-2R, increased white blood cell count, and the like are listed as risk factors. However, it is not possible to clearly separate carriers that develop ATL from carriers that do not develop ATL. In the project “Joint Study of Predisposing Factors of ATL Development (JSPFAD)”, changes in the body from infection to onset are analyzed.
最近、HTLV−1キャリアからATLを発症した14症例の解析により、HTLV−1プロウイルス量の増加がリスクファクターであることが、JSPFADにより報告されている(非特許文献5参照)。しかしながら、プロウイルス量の測定では末梢血単核細胞中のHTLV−1感染細胞数の割合をみているため、末梢血にHTLV−1感染細胞(ATL細胞含む)がほとんど存在しないリンパ腫型の発症を予測することは難しい。 Recently, JSPFAD has reported that an increase in the amount of HTLV-1 provirus is a risk factor based on analysis of 14 cases that developed ATL from HTLV-1 carriers (see Non-Patent Document 5). However, since the amount of HTLV-1 infected cells in the peripheral blood mononuclear cells is observed in the measurement of the amount of provirus, the onset of lymphoma type in which almost no HTLV-1 infected cells (including ATL cells) are present in the peripheral blood It is difficult to predict.
また、HTLV−1外被の糖蛋白質gp46のAsp197-Leu216に対する抗体が、HTLV−1キャリアにおけるATL発症の判定に使用され得ることが報告されている(特許文献1参照)。 Further, it has been reported that an antibody against Asp197-Leu216 of glycoprotein gp46 of the HTLV-1 coat can be used to determine the onset of ATL in an HTLV-1 carrier (see Patent Document 1).
インターロイキン−2受容体(以下、IL−2Rと記す)はα鎖(CD25)、β鎖(CD122)、γ鎖(CD132)の3つの細胞膜表面タンパク質から構成され、α鎖はプロテアーゼによって切断され、sIL−2Rとして血中に遊離することが報告されている。sIL−2Rとは一般的に、プロテアーゼにより切断されたα鎖のことを指す。ATL細胞は制御性T細胞の表面形質を有しており、表面にCD25(IL−2Rα鎖)を発現しているため、sIL−2RはATLの病態モニタリングや予後予測の有用な指標として活用されている。最近、慢性型やくすぶり型のATL患者より採取された試料中のCD30と、IL−2Rとを測定することにより急性転化後の治療方針が決定できることも報告されている(特許文献2参照)。これらのことから、IL−2RはATLの発症予測因子のみならず急性転化予測因子としても期待されている。しかしながら、sIL−2R単独の特定の濃度を基準としてATLの発症を予測できることは、これまで報告されていない。 Interleukin-2 receptor (hereinafter referred to as IL-2R) is composed of three cell membrane surface proteins, α chain (CD25), β chain (CD122), and γ chain (CD132), which is cleaved by protease. SIL-2R is reported to be released into the blood. sIL-2R generally refers to the α chain cleaved by a protease. Since ATL cells have the surface traits of regulatory T cells and express CD25 (IL-2Rα chain) on the surface, sIL-2R is used as a useful indicator for ATL disease state monitoring and prognosis prediction. ing. Recently, it has also been reported that a treatment policy after blast crisis can be determined by measuring CD30 and IL-2R in samples collected from chronic or smoldering ATL patients (see Patent Document 2). Therefore, IL-2R is expected not only as a predictor of ATL onset but also as a predictor of acute transformation. However, it has not been reported so far that ATL can be predicted based on a specific concentration of sIL-2R alone.
本発明の課題は、HTLV−1キャリアにおけるATL発症の早期診断によるHTLV−1キャリアのQOL向上を指向し、HTLV−1キャリアにおけるATL発症し易さを試験する方法、並びに当該方法のためのキットを提供することにある。 An object of the present invention is to improve the QOL of an HTLV-1 carrier by early diagnosis of ATL onset in an HTLV-1 carrier, and to test the ease of occurrence of ATL in an HTLV-1 carrier, and a kit for the method Is to provide.
本発明者らは、本課題の解決のために鋭意検討し、HTLV−1キャリアから採取した検体中のsIL−2Rを測定することにより、HTLV−1キャリアのATLの発症し易さを予測できるという知見を見いだし、本発明を完成させた。 The present inventors diligently studied to solve this problem, and can predict the likelihood of HTLV-1 carrier onset of ATL by measuring sIL-2R in a sample collected from an HTLV-1 carrier. And the present invention was completed.
すなわち本発明は、[1]HTLV−1キャリアより採取された試料中のsIL−2Rを測定し、当該試料中のsIL−2Rの濃度が900U/mL以上であれば、当該キャリアはATLを発症しやすく、900U/mL未満であれば、当該キャリアはATLを発症しにくい、という基準と比較することにより、当該キャリアのATLの発症し易さを試験する方法に関する。この発明の他の態様としては、HTLV−1キャリアより採取された試料中のsIL−2Rを測定し、当該試料中のsIL−2Rの濃度が900U/mL以上であれば、当該キャリアはATLを発症しやすく、900U/mL未満であれば、当該キャリアはATLを発症しにくい、という基準と比較することにより、当該キャリアのATLの発症し易さを試験するためのデータの収集方法等を挙げることができる。 That is, the present invention measures sIL-2R in a sample collected from [1] HTLV-1 carrier, and if the concentration of sIL-2R in the sample is 900 U / mL or more, the carrier develops ATL. It relates to a method for testing the ease of onset of ATL of the carrier by comparing with a standard that the carrier is less likely to develop ATL if it is less than 900 U / mL. As another aspect of the present invention, sIL-2R in a sample collected from an HTLV-1 carrier is measured, and if the concentration of sIL-2R in the sample is 900 U / mL or more, the carrier has ATL. If it is easy to develop and less than 900 U / mL, the data collection method for testing the carrier's likelihood of developing ATL is listed by comparing with the standard that the carrier is unlikely to develop ATL. be able to.
また本発明は、[2]sIL−2R測定用試薬を含有することを特徴とする、HTLV−1キャリアのATLの発症し易さを試験するためのキットに関する。この発明の他の態様としては、sIL−2R測定用試薬と、sIL−2Rの測定の結果、試料中のsIL−2Rの濃度が900U/mL以上であれば、当該キャリアはATLを発症しやすく、900U/mL未満であれば、当該キャリアはATLを発症しにくい、という当該キャリアのATLの発症し易さについての記載を含む添付文書とを含有することを特徴とする、HTLV−1キャリアのATLの発症し易さを試験するためのキットや、sIL−2R測定用試薬を含有し、CD30測定用試薬を含有しないことを特徴とする、HTLV−1キャリアのATLの発症し易さを試験するためのキットを挙げることができる。 The present invention also relates to a kit for testing the ease of onset of ATL of an HTLV-1 carrier, which contains a reagent for measuring [2] sIL-2R. As another aspect of the present invention, if the sIL-2R measurement reagent and the sIL-2R measurement result indicate that the concentration of sIL-2R in the sample is 900 U / mL or more, the carrier is likely to develop ATL. HTLV-1 carrier, comprising a package insert containing a description of the ease of onset of ATL of the carrier that the carrier is less likely to develop ATL if less than 900 U / mL A test for testing the ease of onset of ATL and the test for the ease of onset of ATL in HTLV-1 carriers, which contains a sIL-2R measurement reagent and no CD30 measurement reagent Can be listed.
本発明により、HTLV−1キャリアのATL発症し易さを試験する方法、及び当該方法のためのキットが提供され、HTLV−1キャリアにおけるATL発症の早期診断が可能となり、HTLV−1キャリアのQOLが向上し得る。 INDUSTRIAL APPLICABILITY According to the present invention, a method for testing the ease of occurrence of ATL in an HTLV-1 carrier and a kit for the method are provided, which enables early diagnosis of ATL onset in an HTLV-1 carrier, and the QOL of the HTLV-1 carrier. Can be improved.
本発明において、HTLV−1キャリアとは、前記の通り、HTLV−1に感染しているが、ATL等のHTLV−1が引き起こす疾患を発症していない者を意味する。HTLV−1に感染していることは、粒子凝集法(Particle agglutination assay;PA法)、ELISA法、間接蛍光抗体法(Indirect Fluorescence assay)、蛍光免疫測定法(FIA法)、ウェスタンブロッティング法等のHTLV−1抗原を用いて生成された抗HTLV−1抗体を検出する方法や、PCR(Polymerase Chain Reaction)法、サザンブロッティング法等のHTLV−1プロウイルスDNAを検出する方法などの公知の検査法により確認されるが、通常、PA法又はFIA法による一次スクリーニングで陽性であった場合に、さらに世界保健機関(WHO)の基準(Weekly epidemiological record, vol. 65 (37), pp.281-283, 1990)等に基づいたウェスタンブロッティング法を行い、陽性であることが確認されたときに、対象がHTLV−1キャリアであると確認できる。 In the present invention, the HTLV-1 carrier means a person who is infected with HTLV-1 as described above but has not developed a disease caused by HTLV-1 such as ATL. Infection with HTLV-1 may be caused by particle agglutination assay (PA method), ELISA method, indirect fluorescence assay, fluorescent immunoassay method (FIA method), Western blotting method, etc. Known testing methods such as a method for detecting an anti-HTLV-1 antibody produced using an HTLV-1 antigen, a method for detecting HTLV-1 proviral DNA, such as a PCR (Polymerase Chain Reaction) method and a Southern blotting method However, if the primary screening by the PA method or the FIA method is positive, it is further confirmed by the World Health Organization (WHO) criteria (Weekly epidemiological record, vol. 65 (37), pp.281-283 , 1990) and the like, and when it is confirmed to be positive, it can be confirmed that the subject is an HTLV-1 carrier.
本発明において、ATLの発症とは、HTLV−1が原因でT細胞(Tリンパ球)が腫瘍化し、血中に腫瘍化したT細胞が検出された状態や、腫大したリンパ節や皮膚病変部において、腫瘍化したT細胞が検出された状態のことをいう。腫瘍化したT細胞は、例えばCD3、CD4等の腫瘍細胞表面抗原に対する抗体とセルソーター、フローサイトメーター等の細胞解析装置とを用いて、文献(Proc Natl Acad Sci USA, 101, 3781-3786 (2004)、Cancer Res, 65, 6207-6219 (2005))記載の方法に準じて検出することができる。 In the present invention, the onset of ATL refers to a state in which T cells (T lymphocytes) are tumorized due to HTLV-1 and tumor cells have been detected in the blood, swollen lymph nodes, or skin lesions. In the part, it refers to a state in which tumorous T cells have been detected. Tumorized T cells can be obtained by using antibodies against tumor cell surface antigens such as CD3 and CD4 and cell analyzers such as cell sorters and flow cytometers (Proc Natl Acad Sci USA, 101, 3781-3786 (2004). ), Cancer Res, 65, 6207-6219 (2005)).
本発明において、HTLV−1キャリアより採取された試料としては、当該キャリアから採取された試料であって、sIL−2Rが測定され得る試料であれば特に制限はなく、例えば血漿、血清等が挙げられる。 In the present invention, the sample collected from the HTLV-1 carrier is not particularly limited as long as it is a sample collected from the carrier and can measure sIL-2R. Examples thereof include plasma and serum. It is done.
本発明において、HTLV−1キャリアにおけるATL発症し易さの試験は、例えば以下の工程(1)〜(5)を含有する方法により行うことができる。
(1)HTLV−1キャリアより試料を採取する工程;
(2)工程(1)で採取された試料を用いて、当該試料中のsIL−2Rを測定する工程;
(3)予め作成したsIL−2R濃度とsIL−2Rの測定値との関係を表す検量線と、工程(2)での測定値とから、当該試料中のsIL−2R濃度を決定する工程;
(4)工程(3)で決定されたsIL−2R濃度を、sIL−2R濃度が900U/mL以上であれば、当該キャリアはATLを発症し易く、900U/mL未満であれば、当該キャリアはATLを発症しにくい、という基準と比較する工程;
(5)工程(4)における基準との比較により、当該キャリアのATLの発症し易さを判定する工程。
In the present invention, the test for the likelihood of ATL onset in the HTLV-1 carrier can be performed, for example, by a method comprising the following steps (1) to (5).
(1) A step of collecting a sample from an HTLV-1 carrier;
(2) A step of measuring sIL-2R in the sample using the sample collected in step (1);
(3) A step of determining the sIL-2R concentration in the sample from a calibration curve representing the relationship between the sIL-2R concentration prepared in advance and the measured value of sIL-2R, and the measured value in step (2);
(4) If the sIL-2R concentration determined in step (3) is sIL-2R concentration of 900 U / mL or more, the carrier is likely to develop ATL, and if it is less than 900 U / mL, the carrier is Comparing with criteria that ATL is unlikely to develop;
(5) A step of determining the ease of onset of ATL of the carrier by comparison with the reference in step (4).
HTLV−1キャリアより採取された試料中のsIL−2Rの測定は、公知の生体試料中のsIL−2R濃度の測定方法及びキットを用いることにより行うことができる。当該方法としては、生体試料中のsIL−2Rを測定可能とする方法であれば特に制限はないが、例えば免疫学的測定法が挙げられる。 Measurement of sIL-2R in a sample collected from an HTLV-1 carrier can be performed by using a known method and kit for measuring the concentration of sIL-2R in a biological sample. The method is not particularly limited as long as it can measure sIL-2R in a biological sample, and examples thereof include an immunological measurement method.
免疫学的測定法としては、任意の公知の免疫学的測定方法があげられ、例えば放射免疫測定法(RIA)、酵素免疫測定法(EIA又はELISA)、蛍光免疫測定法(FIA)、間接蛍光抗体法(Indirect Fluorescence assay)、発光免疫測定法(Luminescent immunoassay)、物理化学的測定法[比濁免疫測定法(TIA)、ラテックス凝集法(LAPIA)、微粒子計数免疫凝集測定法(PCIA)]、ウェスタンブロッティング法等が挙げられるが、ELISA法が好ましく用いられる[単クローン抗体実験マニュアル(講談社サイエンティフィック、1987)、続生化学実験講座5免疫生化学研究法(東京化学同人、1986)]。 Examples of the immunoassay include any known immunoassay, such as radioimmunoassay (RIA), enzyme immunoassay (EIA or ELISA), fluorescent immunoassay (FIA), indirect fluorescence. Antibody method (Indirect Fluorescence assay), luminescence immunoassay (Luminescent immunoassay), physicochemical assay [turbidimetric immunoassay (TIA), latex agglutination (LAPIA), microparticle counting immunoagglutination (PCIA)], The Western blotting method and the like can be mentioned, but the ELISA method is preferably used [Monoclonal antibody experiment manual (Kodansha Scientific, 1987), Secondary Biochemistry Laboratory Lecture 5 Immunobiochemistry Research Method (Tokyo Kagaku Dojin, 1986)].
免疫学的測定法においては、サンドイッチ法、競合法等を用いることができ、また、ホモジアニス法、ヘテロジニアス法等も用いることができる。 In the immunological measurement method, a sandwich method, a competitive method, or the like can be used, and a homogenis method, a heterogeneous method, or the like can also be used.
本発明において、試料中のsIL−2Rは、sIL−2R測定用試薬を用いて測定することができる。sIL−2R測定用試薬としては、例えばsIL−2Rに特異的に結合する第1の抗体が結合した固相、及びsIL−2Rに特異的に結合する第2の抗体に標識が結合した標識化第2抗体を含む試薬を例示することができる。第1の抗体におけるsIL−2Rの抗原決定部位と、第2の抗体におけるsIL−2Rの抗原決定部位とは同じであっても異なっていてもよい。 In the present invention, sIL-2R in a sample can be measured using a sIL-2R measurement reagent. Examples of the reagent for measuring sIL-2R include a solid phase in which a first antibody that specifically binds to sIL-2R is bound, and a label in which a label is bound to a second antibody that specifically binds to sIL-2R A reagent containing the second antibody can be exemplified. The antigen determining site of sIL-2R in the first antibody and the antigen determining site of sIL-2R in the second antibody may be the same or different.
標識化第2抗体における標識としては、例えばペルオキシダーゼ、アルカリ性ホスファターゼ等の酵素、125I等の放射性物質等が挙げられる。 Examples of the label in the labeled second antibody include enzymes such as peroxidase and alkaline phosphatase, and radioactive substances such as 125 I.
第1の抗体が結合した固相における該抗体と固相との結合としては、例えば非共有結合、共有結合等が挙げられる。非共有結合としては、例えば物理吸着等が挙げられる。共有結合としては、例えば該抗体と固相との直接的な結合や、リンカー等を介した該抗体と固相との間接的な結合等が挙げられる。 Examples of the bond between the antibody and the solid phase in the solid phase to which the first antibody is bound include non-covalent bonds and covalent bonds. Examples of non-covalent bonds include physical adsorption. Examples of the covalent bond include a direct bond between the antibody and the solid phase and an indirect bond between the antibody and the solid phase via a linker or the like.
固相としては、第1の抗体を固定化し、sIL−2Rの免疫学的測定法を可能にする固相であれば特に制限はなく、例えばマイクロタイタープレートなどのポリスチレンプレート、ガラス製または合成樹脂製の粒子物(ビーズ)、ガラス製または合成樹脂製の球状物(ボール)、ラテックス、磁性粒子、ニトロセルロース膜などの各種メンブレン、合成樹脂製の試験管などがあげられる。 The solid phase is not particularly limited as long as the first antibody is immobilized and the solid phase enabling immunoassay of sIL-2R is used. For example, a polystyrene plate such as a microtiter plate, glass or synthetic resin Examples thereof include particles made of beads (beads), glass or synthetic resin spheres (balls), latex, magnetic particles, various membranes such as nitrocellulose membrane, synthetic resin test tubes, and the like.
第1の抗体が結合した固相を用いることにより、検体中のsIL−2Rと、該固相上の該抗体との反応後、固相を洗浄することにより、未反応の物質を固相から除去することができるので好ましい。このsIL−2R測定用試薬を用いることにより、試料中のsIL−2Rを測定することができる。市販のsIL−2R測定用キットとしては、例えばセルフリーN IL−2R(協和メデックス社製)、デタミナーCL IL−2R(協和メデックス社製)、シーメンス・イムライズ IL−2R II(シーメンス社製)、シーメンス・イムライズ IL−2R II 2000(シーメンス社製)、IL−2Rテスト・BML(ビー・エム・エル社製)等が挙げられる。 By using the solid phase to which the first antibody is bound, the unreacted substance is removed from the solid phase by washing the solid phase after the reaction between sIL-2R in the specimen and the antibody on the solid phase. This is preferable because it can be removed. By using this sIL-2R measurement reagent, sIL-2R in a sample can be measured. Examples of commercially available kits for measuring sIL-2R include cell-free N IL-2R (manufactured by Kyowa Medex), determiner CL IL-2R (manufactured by Kyowa Medex), Siemens Imrise IL-2R II (manufactured by Siemens), Siemens Imrise IL-2R II 2000 (manufactured by Siemens), IL-2R test BML (manufactured by BML) and the like.
本発明におけるsIL−2R濃度の900U/mLは、セルフリーN IL−2Rの添付文書に記載された方法、すなわち、10%(W/V)インターロイキン2(IL−2)で4日間刺激した正常ヒトIL−2依存性T細胞の無細胞培養上清(無希釈)中に含まれるsIL−2R濃度を1000U/mLとする方法により決定される濃度、又は、セルフリーN IL−2Rでの測定と相関関係が認められる、他の測定により決定される濃度である。かかる他の測定により決定される濃度としては、セルフリーN IL−2Rを用いた測定により決定されるsIL−2R濃度に換算したときに、当該sIL−2R濃度と、少なくとも90%、好ましくは少なくとも95%、より好ましくは100%同一を示す濃度を挙げることができる。 The sIL-2R concentration of 900 U / mL in the present invention was stimulated for 4 days with the method described in the package insert of cell-free N IL-2R, ie, 10% (W / V) interleukin 2 (IL-2) The concentration determined by the method in which the concentration of sIL-2R contained in the cell-free culture supernatant (undiluted) of normal human IL-2-dependent T cells is 1000 U / mL, or the cell-free N IL-2R A concentration determined by other measurements that correlates with the measurement. As the concentration determined by such other measurement, when converted to the sIL-2R concentration determined by the measurement using cell-free N IL-2R, the sIL-2R concentration is at least 90%, preferably at least A concentration showing 95%, more preferably 100% identity can be mentioned.
本発明は、また、sIL−2R測定用試薬を含有することを特徴とする、HTLV−1キャリアのATLの発症し易さを試験するキットに関する。本発明のキットに用いられる、sIL−2R測定用試薬としては、前述のIL−2R測定用試薬を用いることができる。上記キットには、sIL−2R測定用試薬の他、HTLV−1キャリアのATLの発症し易さ(ATLの発症リスク)を判断するための指標、例えば、試料中のsIL−2Rの濃度が900U/mL以上であれば、当該キャリアはATLを発症しやすく、900U/mL未満であれば、当該キャリアはATLを発症しにくい、という基準と比較する旨が記載された添付文書を含むものが好ましい。 The present invention also relates to a kit for testing the ease of onset of ATL of an HTLV-1 carrier, comprising a reagent for measuring sIL-2R. As the reagent for measuring sIL-2R used in the kit of the present invention, the aforementioned reagent for measuring IL-2R can be used. In the kit, in addition to the reagent for measuring sIL-2R, an index for determining the likelihood of ATL onset of HTLV-1 carrier (ATL onset risk), for example, the concentration of sIL-2R in the sample is 900 U If the carrier is more than / mL, the carrier is likely to develop ATL, and if it is less than 900 U / mL, it preferably includes a package insert that states that the carrier is unlikely to develop ATL. .
以下、実施例により本発明を説明するが、本発明はこの実施例に限定されるものではない。 EXAMPLES Hereinafter, although an Example demonstrates this invention, this invention is not limited to this Example.
HTLV−1キャリア27症例のsIL-2R濃度
インフォームドコンセントを得たHTLV−1感染以外に疾患に罹患していないHTLV−1キャリア27人の血漿または血清中のsIL−2R濃度を、sIL−2R測定用キット[セルフリーN IL−2R(協和メデックス社製)]を用いて測定した。
SIL-2R concentration in 27 cases of HTLV-1 carrier The sIL-2R concentration in the plasma or serum of 27 HTLV-1 carriers not affected by disease other than HTLV-1 infection with informed consent was expressed as sIL-2R. Measurement was performed using a measurement kit [Cell-free N IL-2R (manufactured by Kyowa Medex)].
ある基準の時間から、ある目的のイベントが起こるまでの時間の解析手法を生存時間解析と言い、生存関数を推定するためにカプラン・マイヤー曲線が用いられる。また、比較した2群間の生存時間分布に差があるかどうか検定するために、ログランク検定(Peto-Peto検定、Cochran-Mantel-Haenszel検定ともいう)や一般化ウイルコクソン検定(Gehan-Breslow検定、Peto-Prentice検定ともいう)が用いられる。 A method for analyzing the time from a certain reference time until a certain target event occurs is called survival time analysis, and a Kaplan-Meier curve is used to estimate a survival function. In addition, in order to test whether there is a difference in survival time distribution between the two groups compared, log rank test (also called Peto-Peto test, Cochran-Mantel-Haenszel test) and generalized Wilcoxon test (Gehan-Breslow test) Test, also called Peto-Prentice test).
本実施例においては、HTLV−1キャリアのIL−2R濃度を測定した日を基準とし、ATL発症するまでの時間を次のようにして解析した。 In this example, the time until the onset of ATL was analyzed as follows, based on the day when the IL-2R concentration of the HTLV-1 carrier was measured.
27症例についてIL−2R濃度が900U/mL以上と900U/mL未満の2群に分け、HTLV−1キャリアのIL−2R濃度を測定した日(基準日)のsIL−2R濃度、ATL発症の有無、基準日からATL発症するまでの日数(ATLを発症していない症例は、基準日から数えてATLを発症しなかった期間)を調べた。その結果を表1に示す。また、表1のデータを元に作成したカプラン・マイヤー法による発症率曲線を図1に、ログランク検定および一般化ウイルコクソン検定の結果を表2に示した。 27 cases were divided into two groups with IL-2R concentrations of 900 U / mL or more and less than 900 U / mL, and the sIL-2R concentration on the day (reference day) when the IL-2R concentration of HTLV-1 carrier was measured, presence or absence of onset of ATL The number of days from the reference date until the onset of ATL (in the case where ATL did not develop from the reference date in cases where ATL did not develop) was examined. The results are shown in Table 1. Moreover, the incidence rate curve by the Kaplan-Meier method created based on the data of Table 1 is shown in FIG. 1, and the results of the log rank test and the generalized Wilcoxon test are shown in Table 2.
表2の結果より、ログランク検定、一般化ウイルコクソン検定、いずれの検定法においてもP値が0.05未満であったことから、sIL−2R濃度が900U/mL以上の群の方がATLを発症しやすいことが示された。 From the results shown in Table 2, since the P value was less than 0.05 in any of the log rank test, generalized Wilcoxon test, the group having a sIL-2R concentration of 900 U / mL or more was ATL. It was shown that it is easy to develop.
このように、HTLV−1キャリアの検体中のsIL−2R濃度を測定し、その濃度が900U/mL以上であればATLを発症しやすく、900U/mL未満であればATLを発症しにくいという基準と比較することにより、該キャリアのATLの発症し易さを試験することができる。 As described above, the sIL-2R concentration in the specimen of HTLV-1 carrier is measured, and if the concentration is 900 U / mL or more, ATL is likely to develop, and if it is less than 900 U / mL, it is difficult to develop ATL. By comparing with the above, it is possible to test the ease of onset of ATL of the carrier.
本発明により、HTLV−1キャリアにおけるATLの発症し易さを試験する方法、及び、当該方法のためのキットが提供される。 According to the present invention, a method for testing the susceptibility to developing ATL in an HTLV-1 carrier and a kit for the method are provided.
Claims (2)
ヒトTリンパ球向性ウィルス1型キャリアより採取された試料中のsIL−2Rの濃度が900U/mL以上であれば、当該キャリアは成人T細胞白血病を発症しやすく、900U/mL未満であれば、当該キャリアは成人T細胞白血病を発症しにくい、という基準と比較する旨が記載された添付文書
を含有することを特徴とする、ヒトTリンパ球向性ウィルス1型キャリアの成人T細胞白血病の発症し易さを試験するためのキット。 A reagent for measuring soluble interleukin-2 receptor (hereinafter referred to as sIL-2R) , and
If the concentration of sIL-2R in a sample collected from a human T lymphotropic virus type 1 carrier is 900 U / mL or more, the carrier is likely to develop adult T-cell leukemia , and if it is less than 900 U / mL An adult of a human T lymphocyte-tropic virus type 1 carrier, characterized in that it contains a package insert describing that the carrier is compared with a criterion that it is difficult to develop adult T-cell leukemia A kit for testing the ease of onset of T cell leukemia.
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