JP6188465B2 - 筋緊張亢進改善薬 - Google Patents

Description

本発明は、筋緊張亢進改善薬に関し、より詳細にはＡ型ボツリヌス毒素を含有する筋緊張亢進改善薬に関する。

嫌気性のグラム陽性菌であるクロストリジウム・ボツリナム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ）が産生するボツリヌス毒素は地球上で最も致死性の高い神経毒素の一つであり、これまでに血清型Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、ＦおよびＧの７種のボツリヌス菌由来の神経毒素とその特性が明らかにされている。これらはそれぞれ血清型に特異的な中和抗体で識別される。ボツリヌス毒素の血清型の違いにより、それらが影響する動物類、誘発される麻痺の重症度および持続期間等が異なる。ボツリヌス毒素の活性中心蛋白質の分子量は、既知のボツリヌス毒素血清型の７つ全てにおいて約１５０ｋＤａ神経毒素（ＮＴＸ）である。

全てのボツリヌス毒素はボツリヌス菌から産生される場合、関係する無毒蛋白質と結合した複合体の分子形態をとる。Ａ型ボツリヌス毒素は、９００ｋＤａ（ＬＬ毒素）、５００ｋＤａ（Ｌ毒素）、または３００ｋＤａ（Ｍ毒素）の分子形態として、ボツリヌス菌から産生される（図１；ＷＯ２００８／０５０８６６の図より引用）。これらボツリヌス毒素は、アルカリ条件下（ｐＨ約７．２以上）でＮＴＸとＮＴＮＨの部分（無毒非ＨＡである蛋白質）が解離するため、この性質を利用することで、１５０ｋＤａのＮＴＸ（神経毒素が活性を有する中心の蛋白質、Ｓ毒素とも呼ばれる。）のみを単離することができる。これら、ＬＬ毒素、Ｌ毒素、Ｍ毒素は、ボツリヌス毒素複合体、プロジェニター毒素などと呼ばれている。これらボツリヌス毒素は、小腸上部で吸収された場合には、リンパ管内で無毒蛋白質と神経毒素に解離する。解離した神経毒素は、その重鎖Ｃ末端側で神経終末の受容体に結合し、受容体を介して取り込まれる。その後、軽鎖のもつ亜鉛メタロエンドペプチダーゼ活性により神経シナプス前膜の蛋白質を特異的に切断し、カルシウム依存性のアセチルコリンの放出を阻害して、シナプスでの神経伝達を遮断する（非特許文献１）。

ボツリヌス毒素は、ボツリヌス中毒においては全身の神経伝達を遮断してヒトを死に至らしめる毒素ではあるが、逆にその活性を積極的に利用して、有用な神経筋伝達阻害剤として利用されている。特に、異常な筋緊張性亢進を来たす疾患、例えばジストニアの患者の筋肉内に直接投与することによって、局所の筋緊張を緩和する治療薬として用いられている（非特許文献２）。例えば、Ａ型ボツリヌス毒素複合体（ＬＬ毒素）であるＢＯＴＯＸ（登録商標）（Ａｌｌｅｒｇａｎ Ｉｎｃ．，）は、眼瞼痙攣、斜視および片側顔面痙攣、頚部ジストニアの治療用、並びに眉間のしわの治療用としてアメリカ食品薬品局（ＦＤＡ）によって承認されている。また、Ｂ型ボツリヌス毒素であるＭＹＯＢＬＯＣ（登録商標）（Ｅｌａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，）も頚部ジストニア治療用薬としてＦＤＡによって承認されている。非Ａ型ボツリヌス毒素は、Ａ型ボツリヌス毒素と比較して、やや低い効力およびやや短い活性期間を有するといわれている。

近年、ボツリヌス毒素の作用は、（１）神経筋接合部、（２）自律神経節、（３）神経節後の副交感神経末端、（４）神経節後の交感神経末端、（５）痛覚受容線維などの部位で確認されている。骨格筋の神経筋接合部では、ムスカリン性アセチルコリン作動性神経終末が主な作用部位である。自律神経節のうち、副交感神経節への直接作用は臨床作用と関連すると考えられている。また、末梢自律神経への作用には、ＡＴＰ、ＶＩＰ（ｖａｓｏａｃｔｉｖｅ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ）、ｓｕｂｓｔａｎｃｅ Ｐの放出阻害やＮＯ（ｎｉｔｒｉｃ ｏｘｉｄｅ）合成酵素の作用を阻害することが報告されている。また、ボツリヌス毒素が痛みの緩和に有用であることが知られるようになった。この作用において、ボツリヌス毒素は、グルタミン酸、ｓｕｂｓｔａｎｃｅ Ｐ、ＣＧＲＰ（ｃａｌｃｉｔｏｎｉｎ ｇｅｎｅ−ｒｅｌａｔｅｄ ｐｅｐｔｉｄｅ）の放出を阻害することが報告されている（非特許文献２）。このように、ボツリヌス毒素は様々な神経において、様々な神経伝達物質の放出を阻害する有用な神経筋伝達阻害剤である。

現在、治療用ボツリヌス毒素製剤の生物学的力価は、マウスＬＤ_５０単位によって通常表されている。１ＬＤ_５０は、マウスへの腹腔内投与に基づくＬＤ_５０として定義されている。これは試験に供したマウスの半数が死亡する量であり、マウスの呼吸筋が弛緩される結果として、マウスが死亡するときの神経毒素の濃度または量から力価単位を定量している。現在市販されているＡ型ボツリヌス毒素複合体（Ａｌｌｅｒｇａｎ Ｉｎｃ．， ＢＯＴＯＸ（登録商標）、１００単位含有）のマウスにおける１ＬＤ_５０（つまり１単位）は、約５０ピコグラム（ｐｇ）である。

治療用ボツリヌス毒素製剤は、Ａｌｌｅｒｇａｎ Ｉｎｃ． （米国）、Ｉｐｓｅｎ Ｌｉｍｉｔｅｄ （英国）、Ｅｌａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ（アイルランド）から入手可能である。これらの治療用ボツリヌス製剤は、関係する無毒蛋白質と結合した分子形態を取った神経毒素複合体（ＬＬ毒素）を精製した製剤である。近年では、２００５年に無毒蛋白を含まないＡ型ＮＴＸ製剤（Ｍｅｒｚ Ｐｈａｒｍａ， Ｘｅｏｍｉｎ（登録商標）、ドイツ）が発売され、また米国でも同様な別製剤の臨床試験も実施されており、次世代製剤の開発も積極的に行われている。

現在市販されているＡ型ボツリヌス毒素製剤である、Ａｌｌｅｒｇａｎ Ｉｎｃ．のＢＯＴＯＸ（登録商標）とＩｐｓｅｎ ＬｉｍｉｔｅｄのＤｙｓｐｏｒｔ（登録商標）は、その毒素複合体の成分として、ＨＡ１７、ＨＡ３４、およびＨＡ７０のＨａｅｍａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ（ＨＡ）蛋白を持つ神経毒素複合体（ＬＬ毒素）である（ＨＡ陽性体）。

また、１９９０年に乳児ボツリヌス症の患者から単離されたタイプのボツリヌス毒素はＡ型ではあるものの、ＨＡ蛋白を含まないＭ毒素のみを産生する（ＨＡ陰性体）。ＨＡ蛋白を含まないボツリヌス毒素を産生するＡ型ボツリヌス菌は、１９８６年に日本で最初に乳児ボツリヌス症に関する患者から同定されている（非特許文献３）。この臨床分離株としては、Ｋｙｏｔｏ−Ｆ、Ｃｈｉｂａ−Ｈ、Ｙ−８０３６、７Ｉ０３−Ｈ、７Ｉ０５−Ｈ、ＫＺｌ８２８が挙げられる。

従来のＡ型ボツリヌス毒素に代表される多くのボツリヌス毒素は、複合体の成分として、Ｈａｅｍａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ（ＨＡ）タンパク質を持つ神経毒素複合体として見出されている。ＨＡ１７、ＨＡ３４、およびＨＡ７０などのＨＡタンパク質をコードする遺伝子は、Ａ、Ｂ、Ｃ、ＤおよびＧ型ボツリヌス菌の神経毒素遺伝子群に含まれているが、乳児ボツリヌス症由来ボツリヌス菌群の遺伝子では欠損している。また、乳児ボツリヌス症由来ボツリヌス菌群の遺伝子は、ｐ４７などの調節遺伝子を含んでいる（非特許文献４）。さらに、乳児ボツリヌス症由来ボツリヌス菌の産生するボツリヌス毒素のＮＴＮＨタンパク質の配列は、Ｃ型菌の無毒非ＨＡ蛋白質ＮＴＮＨ遺伝子とＡ型菌の無毒非ＨＡ蛋白質ＮＴＮＨ遺伝子の寄せ集め、すなわちモザイク型である（非特許文献５）。

従来のＡ型ボツリヌス毒素はＮＴＮＨ蛋白質、および少なくとも３個のＨＡ蛋白質（ＨＡ１７、ＨＡ３４、およびＨＡ７０）を含むが、乳児ボツリヌス症原因ボツリヌス菌由来のボツリヌス毒素はＮＴＮＨ蛋白質だけを含んでいて、ＨＡ蛋白質を欠く（非特許文献６）。

市販のＡ型ボツリヌス毒素製剤の製造に使用されている菌株については、ＢＯＴＯＸ（登録商標）およびＸｅｏｍｉｎ（登録商標）はＨＡＬＬ株であり、Ｄｙｓｐｏｒｔ（登録商標）はＮＣＴＣ２９１６株であることが報告されており（非特許文献７、８）、これらはＨＡ蛋白質を含むＡ型ボツリヌス毒素、つまりＡ１型ボツリヌス毒素に分類される。一方で、乳児ボツリヌス症原因ボツリヌス菌由来のボツリヌス毒素は、Ａ２型ボツリヌス毒素に分類される。

高度精製ボツリヌス毒素は、古くはＴｓｅ ＣＫ．， ｅｔ ａｌ．らの文献（非特許文献９）に報告があり、さらに、ＷＯ１９９６／０１１６９９（特許文献２）で、精製方法の記載例（ｐ６， ｌｉｎｅ ９−ｐ７， ｌｉｎｅ ２）や薬剤組成（ｐ１１， Ｔａｂｌｅ ２）に関する報告がなされている。ボツリヌス毒素のうち、ＮＴＸ（Ｓ毒素）のみを精製した高度精製ボツリヌス毒素を得ることも可能である。なお、例えばＡ型ボツリヌス毒素のＮＴＸをＡ型ＮＴＸと記載することがある。また、例えばＡ１型ボツリヌス毒素のＮＴＸをＡ１ＮＴＸ、Ａ２型ボツリヌス毒素のＮＴＸをＡ２ＮＴＸと記載することがある。

ＷＯ２００８／０５０８６６ ＷＯ１９９６／０１１６９９ ＷＯ２００９／１２３１７４ ＷＯ２０１０／０１３４９４ ＷＯ２００８／０１３４９５

Ｊａｎｋｏｖｉｃ Ｊ． ｅｔ ａｌ．， Ｃｕｒｒ． Ｏｐｉｎ． Ｎｅｕｒｏｌ．， （７）： ｐ．３５８−３６６， １９９４ 梶龍兒ら、「ジストニアとボツリヌス治療」、診断と治療社、２００５年 Ｓａｋａｇｕｃｈｉ Ｇ． ｅｔ ａｌ．， Ｉｎｔ． Ｊ． Ｆｏｏｄ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．， １１： ｐ．２３１−２４２， １９９０ Ｋｕｂｏｔａ Ｔ． ｅｔ ａｌ．， ＦＥＭＳ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ｌｅｔｔｅｒｓ．， １５８： ｐ．２１５−２２１， １９９８ Ｋｕｂｏｔａ Ｔ． ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｂｉｏｐｈｙｓ． Ｒｅｓ． Ｃｏｍｍｕｎ．， ２２４（３）： ｐ．８４３−８４８， １９９６ Ｓａｋａｇｕｃｈｉ Ｇ． ｅｔ ａｌ．， Ｉｎｔ． Ｊ． Ｆｏｏｄ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ． １１： ｐ．２３１−２４２， １９９０ 梶龍兒ら、「ジストニアとボツリヌス治療」、診断と治療社、：２３，１９９６年 Ｄｒｅｓｓｌｅｒ Ｄ． ｅｔ ａｌ．， Ｄｉｓａｂｉｌ Ｒｅｈａｂｉｌ． ２９（２３）： ｐ．１７６１−１７６８， ２００７ Ｔｓｅ ＣＫ． ｅｔ ａｌ．， Ｅｕｒ． Ｊ． Ｂｉｏｃｈｅｍ．， １２２（３）： ｐ．４９３−５００， １９８２ 梶龍兒ら、ボツリヌス治療総論―ボツリヌス毒素製剤の基礎知識―、診断と治療社、２００９年

本発明は、効果的に筋緊張亢進を改善させることを課題とする。

本発明者らは、驚くべき事に、Ａ型ボツリヌス毒素を筋緊張亢進部位に投与し、投与後３時間以内に当該筋緊張亢進部位を運動させることにより、当該部位の筋緊張亢進を著しく改善できることを見出し、さらに改良を重ねて本発明を完成させるに至った。

すなわち、本発明は例えば以下の項に記載の主題を包含する。
項１．
Ａ型ボツリヌス毒素が、筋緊張亢進部位に投与され、投与後３時間以内に前記筋緊張亢進部位を運動させるように用いられることを特徴とする、Ａ型ボツリヌス毒素を含有する筋緊張亢進改善薬。
項２．
前記筋緊張亢進部位を少なくとも０．５〜３時間運動させるように用いられることを特徴とする、請求項１に記載の筋緊張亢進改善薬。
項３．
投与直後から０．５〜３時間前記筋緊張亢進部位を運動させるように用いられることを特徴とする、請求項１に記載の筋緊張亢進改善薬。
項４．
筋緊張亢進部位が、痙縮部位又は固縮部位である、項１〜３のいずれかに記載の筋緊張亢進改善薬。
項５．
Ａ型ボツリヌス毒素がＡ２ＮＴＸである、項１〜４のいずれかに記載の筋緊張亢進改善薬。
項６．
（ａ）Ａ型ボツリヌス毒素を筋緊張亢進部位に投与すること、及び
（ｂ）投与後３時間以内に前記筋緊張亢進部位を運動させること
を含む、筋緊張亢進改善方法。
項７．
（ｂ）が、
投与後３時間以内に前記筋緊張亢進部位を少なくとも０．５〜３時間運動させること
である、項６に記載の筋緊張亢進改善方法。
項８．
（ｂ）が、
投与直後から０．５〜３時間前記筋緊張亢進部位を運動させること
である、項６に記載の筋緊張亢進改善方法。
項９．
筋緊張亢進部位が、痙縮部位又は固縮部位である、項６〜８のいずれかに記載の筋緊張亢進改善方法。
項１０．
Ａ型ボツリヌス毒素がＡ２ＮＴＸである、項６〜９のいずれかに記載の筋緊張亢進改善方法。

本願発明によれば、筋緊張亢進を著しく改善させることができる。

ボツリヌス毒素蛋白質複合体の分子形態を表す図である。

以下、本発明について、さらに詳細に説明する。

本発明は、Ａ型ボツリヌス毒素を含有する筋緊張亢進改善薬を包含する。当該筋緊張亢進改善薬は、筋緊張亢進部位に投与され、投与後３時間以内に前記筋緊張亢進部位を運動させるように用いられることを特徴とする。

また本発明は、（ａ）Ａ型ボツリヌス毒素を筋緊張亢進部位に投与すること、及び（ｂ）投与後３時間以内に前記筋緊張亢進部位を運動させることを含む、筋緊張亢進改善方法も包含する。

ボツリヌス毒素を筋緊張亢進の改善のために用いることは従来から行われていたが、その効果は必ずしも十分ではなかった。また、この場合にも、ボツリヌス毒素を筋緊張亢進部位に投与した後に筋緊張が弛緩するのを待って運動（リハビリ運動）を行うことが通常であり、むしろ、ボツリヌス毒素を投与した後に筋緊張亢進部位を急に運動させることは控えるべきであるとも考えられていた。実際、上肢痙縮・下肢痙縮等の筋緊張亢進の改善のために既に日本で承認されているＡ型ボツリヌス毒素製剤ＢＯＴＯＸ（登録商標）の添付文書の「重要な基本注意」欄には「日常生活を制限されていた患者は、本剤投与後、過度の筋収縮を伴う労作を避け、活動を徐々に再開する」よう記載されている。

これに対して、本発明の筋緊張亢進改善薬は、Ａ型ボツリヌス毒素を筋緊張亢進部位に投与した後、３時間以内に前記筋緊張亢進部位を運動させるように用いられることが特徴であり、また、本発明の筋緊張亢進改善方法は、（ａ）Ａ型ボツリヌス毒素を筋緊張亢進部位に投与すること、及び（ｂ）投与後３時間以内に前記筋緊張亢進部位を運動させることを含むことが特徴であって、このように投与から短時間のうちに運動を行うことにより、筋緊張亢進を大幅に改善することができる。

本発明において、Ａ型ボツリヌス毒素としては、ＬＬ毒素、Ｌ毒素、Ｍ毒素、Ｓ毒素（ＮＴＸ）のいずれを用いることもでき、中でもＳ毒素（ＮＴＸ）が好ましい。また、これらの毒素分類に当てはまらずとも、ＮＴＸ部を含むＡ型ボツリヌス毒素の一部分であれば、本発明に用い得る。

なお、ＮＴＸのような、高度精製ボツリヌス毒素は、イオン交換クロマトグラフィー、ゲルろ過、疎水クロマトグラフィー等を適宜組み合わせて精製することができる。具体的にはボツリヌス菌の培養上清についてろ過による除菌を行い、得られるＭ毒素をＵＦ膜等の方法により濃縮できる。Ｍ毒素をｐＨ７以上の条件にすることで、神経毒素（ＮＴＸ）と無毒蛋白質（ＮＴＮＨ）に分離することができる。その後、例えば陽イオン交換クロマトグラフィーにより粗精製し、毒素活性のある分画を集めて、更にゲルろ過で精製することができる。

また、Ａ型ボツリヌス毒素には、Ａ１型、Ａ２型、Ａ３型、Ａ４型の4種類が存在するが、これらのいずれをも用いることができる。中でもＡ１型又はＡ２型であることが好ましく、Ａ２型であることがより好ましい。筋緊張亢進部位にＡ型ボツリヌス毒素を投与した際、筋緊張亢進部位以外（通常部位）にまで当該毒素が広がると、その通常部位は麻痺等が起こるおそれもあるところ、Ａ２型の方がＡ１型に比べて投与部位に留まり易い性質があることから、好ましい。

特に、Ａ１ＮＴＸ又はＡ２ＮＴＸが好ましく、Ａ２ＮＴＸがより好ましい。

Ａ型ボツリヌス毒素は、１種単独で又は２種以上を組み合わせて用いることができる。最初に用いるのがＡ２型（特にＡ２ＮＴＸ）であることが好ましい。

本発明の筋緊張亢進改善薬は、Ａ型ボツリヌス毒素そのものであってもよく、Ａ型ボツリヌス毒素及び薬理学的に許容されるその他成分を含む医薬組成物であってもよい。当該その他成分は、本発明の効果を損なわない範囲で用いられる。当該その他成分は、薬理学的に許容される担体、ビヒクル等であり得る。本発明の筋緊張亢進改善薬は好ましくは注射剤であるので、例えば水（注射用水）、緩衝剤、等張化剤、安定化剤、保存剤等が挙げられる。より具体的には、例えば塩化ナトリウム、グリセリン、リン酸塩類等が挙げられる。また、ボツリヌス毒素の安定化のためにヒト血清アルブミンが有効であることが知られており、安定化剤としてヒト血清アルブミンを好ましく用い得る。これらの含有量は、適宜設定することができる。

また、本発明の筋緊張亢進改善薬は常法に従って製造することができる。本発明の筋緊張亢進改善薬の剤形としては、注射剤が好適である。注射剤として用いる場合は、例えばバイアル入り薬剤とすることができる。

例えば、ボツリヌス毒素とボツリヌス毒素安定化物質（ヒト血清アルブミンが好ましい）を溶媒に溶解後、無菌ろ過し、アンプル、バイアル等に充填して本発明の組成物を製造することができる。また、ボツリヌス毒素を予めボツリヌス毒素安定化物質を溶解した溶媒に溶解後、無菌ろ過しアンプル等に充填することもできる。溶媒は、注射用蒸留水、生理食塩水、０．０１Ｍ〜０．１Ｍのリン酸緩衝液等を用いることができ、必要に応じて、エタノール、グリセリン等を混合することもできる。さらに、ボツリヌス毒素とボツリヌス毒素安定化物質を溶媒に溶解後、無菌ろ過し、バイアル等に充填後、凍結乾燥して、本発明の筋緊張亢進改善薬（凍結乾燥製剤）とすることもできる。また、ボツリヌス毒素とボツリヌス毒素安定化物質を混合後、バイアル等に無菌充填することもできる。例えば精製したボツリヌス毒素を（好ましくはボツリヌス毒素安定化物質とともに）、最終濃度が０．１〜５ｍｇ／ｍｌ、好ましくは０．５〜２ｍｇ／ｍｌになるように加え、冷蔵保存、冷凍保存あるいは凍結乾燥することができる。溶解状態での本発明の筋緊張亢進改善薬のｐＨは、通常３〜８であり、好ましくは４〜７であり、より好ましくは５〜７である。

本発明を適用する筋緊張亢進としては、痙縮、固縮等が好ましく挙げられ、痙縮がより好ましい。痙縮は痙性・痙攣・攣縮・痙直などとも呼ばれる。また、ここでの固縮は強剛の意味を包含する。痙縮としては、上肢痙縮（例えば肩関節の内転・内旋、手関節の屈曲、肘関節の屈曲、にぎりこぶし状変形、前腕の回内、掌中への母指屈曲など）、下肢痙縮（例えば股間接の内転、膝関節の過伸展、股間接の屈曲、尖足・内反尖足、膝関節の屈曲、母趾過伸展など）、痙性斜頸等が例示できる。

本発明の筋緊張亢進改善薬の使用量は、投与部位に応じて適宜設定することができる。１回の総投与量がＡ型ボツリヌス毒素１０〜４００単位程度が好ましく、２０〜３００単位程度がより好ましい。投与は、１箇所に行ってもよいし、複数箇所（例えば２、３、４箇所）に行ってもよい。特に、筋緊張亢進部位に複数の緊張筋が存在する場合には、各緊張筋に分割して投与することが好ましい。このような場合、１箇所に投与する量はＡ型ボツリヌス毒素１０〜２００単位程度が好ましく、１０〜１５０単位程度がより好ましく、２０〜１００単位程度がさらに好ましい。なお、本明細書におけるボツリヌス毒素の「単位」は、マウス腹腔内へ投与した際の１ＬＤ_５０を１単位としたものである。

本発明の筋緊張亢進改善薬は、筋緊張亢進部位に投与された後、投与後３時間以内に当該筋緊張亢進部位を運動させるように用いられる。従来、ボツリヌス毒素製剤投与後に急に運動を行うことは控えるべきとされていたところ、投与後３時間以内という投与から短時間のうちに、投与部位（すなわち筋緊張亢進部位）の運動を開始することにより、劇的に筋緊張が改善し得る。投与後１時間以内に筋緊張亢進部位を運動開始させることが好ましく、投与後３０分以内がより好ましく、投与後１５分以内がさらに好ましく、投与直後がよりさらに好ましい。

運動の内容としては、筋緊張部分が健康である場合の通常の動きを行うことが挙げられる。例えばリハビリテーション（リハビリ）として行われる通常の運動療法での運動を行うことが好ましい。また、リハビリとして行われる運動に限らず、筋緊張部分が健康である場合の通常の動きを行うことでもよい。例えば歩行障害がある患者では、注射直後に歩くことにより、患部の筋を用いることでもよい。また例えば、筋緊張亢進部位が関節部位を含むのであれば、関節可動域（ＲＯＭ）運動を行うことが好ましい。また、患者自身の意思で筋緊張亢進部位を動かすことが難しい場合には、運動のための補助を活用してもよい。ここでの補助は、患者の運動を補助するものであれば特に制限はされず、運動補助者や運動補助具等が含まれる。例えば、補助者が患者の運動の補助を行いながら、徐々に患者自身の意思で動かすようにすることができる。また、例えば、最初は一人での歩行が困難である患者が、歩行補助具等を用いて歩行を行うことができる。また、補助具として、昨今、パワードスーツ（ロボットスーツ）を医療・介護分野で活用しようという動きが盛んであり、本発明の運動の補助具として、パワードスーツを用いることも有用である。

運動の長さとしては、０．５〜３時間程度が好適であり、２〜３時間がより好適である。適度に休憩を入れてもよい。ある程度、筋緊張亢進部位が繰り返し動かされるように運動を行うことが望ましい。

最も好ましい形態の一つは、投与直後から２〜３時間、筋緊張亢進部位を運動させることである。

また、投与後３時間以内に前記筋緊張亢進部位を運動させた後は、定期的に同様の運動を行うことが好ましい。例えば、投与の翌日からは、一定期間（例えば少なくとも１〜２週間は）、同様に筋緊張亢進部位を運動させることが好ましい。一日１回又は２〜３回程度運動を行うことが好ましい。また、１回の運動時間は０．５〜２時間（好ましくは１〜１．５時間）程度とすることができる。このような投与の翌日からの一定期間の定期的運動は、本発明の効果をより一層好ましく発揮させ得るため好ましい。

なお、当該一定期間の定期的運動の後も、リハビリのため運動を継続していくことが好ましいことは、もちろんである。

また、上記（ａ）（ｂ）を含む本発明の筋緊張亢進改善方法についても、投与部位、投与するＡ型ボツリヌス毒素の種類・投与量・投与方法、投与後に行う運動の時間・内容、投与後から運動を行うまでの時間等、筋緊張亢進改善薬について上で記載した内容が共通する。

以下、本発明を具体的に説明するが、本発明は下記の例に限定されるものではない。
製造例１：Ａ型ボツリヌス菌由来ＮＴＸの精製
乳児ボツリヌス症の患者から分離されたタイプのＡ型ボツリヌス菌であるＣｈｉｂａ−Ｈ株を用い、Ｓａｋａｇｕｃｈｉ Ｇ．， Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ａｓｐｅｃｔｓ ｏｆ ｂｏｔｕｌｉｓｍ： Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｏｒａｌ ｔｏｘｉｃｉｔｉｅｓ ｏｆ Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｔｏｘｉｎｓ．， ２１−３４， Ｌｅｗｉｓ ＧＥ．， １９８１， Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋに記載された方法に従って、ボツリヌスＡ型Ｍ毒素を精製した。

そして、当該ボツリヌスＭ毒素を１０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．５）に対して透析した後、同緩衝液で平衡化したＤＥＡＥセファロースカラムに吸着させ、同緩衝液の０〜０．３ｍｏｌ／Ｌ ＮａＣｌ濃度勾配で溶出し、神経毒素（ＮＴＸ）と無毒蛋白質（ＮＴＮＨ）に分離した。得られた高度精製ＮＴＸ（Ａ２ＮＴＸ）はＹＭ−１０メンブラン（アミコン社製）で１ｍｇ／ｍＬまで濃縮し、５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．５）に対して透析した後、使用時まで−８０℃に保存した。これを試験サンプル（注射剤）とした。

なお、試験サンプルの投与にあたっては、マウス腹腔内へ投与した際のボツリヌス毒素の１ＬＤ_５０を１単位とした。

実施例１
＜被験者１＞
主訴：痙縮に対する治療希望。歩行障害の改善目的。
現病歴：１９８８年、３７歳時に右被殻出血を発症した。その後、左片麻痺が後遺症となり、徐々に痙縮が出現した。
治療前神経学的所見：顔面を含む左片麻痺、
左半身の触覚低下，両下肢振動覚高度低下
Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ａｓｈｗｏｒｔｈ Ｓｃａｌｅ足関節４
握力測定（３回） 右のみ ２５−２５−２５（ｋｇ）
平行棒内の歩行訓練はしているが、自宅では立位保持が何とか可能であった。
内反尖足で、つま先しか接地していない。
Ｂｒｓ（Brunnstrom Stage） 左上肢：III 左下肢：IV
ＢＩ（Barthel Index）：６５点（歩行−１０、階段−１０、更衣−１０、入浴−５）
＜治療方法及び結果＞
試験サンプル（Ａ２ＮＴＸ：３００単位）を被験者の筋緊張亢進部位へ注射（右腓腹筋内側頭１５０単位、右後脛骨筋１５０単位）した。直後に３時間足関節のＲＯＭ運動を行った。この時に一部パワードスーツ（ロボットスーツ）を下肢に装着しＲＯＭ運動を効率的に行った。翌日からは同様のＲＯＭ運動を１時間ずつ、１週間行った。
１週間後の被験者の状態は次の通りであった。
・Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ａｓｈｗｏｒｔｈ Ｓｃａｌｅ足関節３
・握力測定（３回） 右のみ ２３．８−２９．２−２９．２（ｋｇ）
・ＢＩとＢｒｓは変化無し
・足関節の可動域制限改善し、足底部の接地面積が拡大した。そのため、短下肢装具と４脚杖を使用し、25年ぶりに歩行訓練（１０ｍ×２）が可能となった。
・脱力や自覚的副作用、血液検査での副作用は見られなかった。

実施例２
＜被験者２＞
40歳 男性、脳性麻痺
主訴：痙縮に対する治療希望。歩行障害の改善目的。
現病歴：
小児期より両下肢の痙縮による筋緊張の亢進があり、通常は車いすにより移動しており、歩行は介助なしには不可能であった。握力は右２０ｋｇ・左２１ｋｇであった。Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ａｓｈｗｏｒｔｈ Ｓｃａｌｅは股関節で２膝関節で３、足関節で３であった。
＜治療方法及び結果＞
試験サンプルを、被験者の両側下腿筋（後脛骨筋）と大腿内転筋に注射し（Ａ２ＮＴＸ：計４００単位）、直後から３時間連続して介助により歩行を行わせ、罹患筋を収縮させた。同様の下肢罹患筋のＲＯＭ運動や歩行を含むリハビリを1日２時間、毎日行った。
約1週間後から、生まれて初めて、自力で歩行可能となり、1か月後には毎日１ｋｍを自力で歩行可能になった。Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ａｓｈｗｏｒｔｈ Ｓｃａｌｅは股関節で２、膝関節で２、足関節で２となり、著明に改善した。 握力は右２０ｋｇ・左２１ｋｇであり、全身の筋力の低下など副作用は見られなかった。

実施例３
＜被験者３＞
55歳男性 脳卒中後の下肢痙縮
主訴：痙縮に対する治療希望。歩行障害の改善目的。
現病歴：
2年前に右脳出血により左片麻痺となり下肢は膝関節で90度屈曲した形の筋緊張の亢進により、起立歩行が不可能であった。握力は右４０ｋｇ・左４ｋｇであった。Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ａｓｈｗｏｒｔｈ Ｓｃａｌｅは左股関節で３、膝関節で４、足関節で３であった。
＜治療方法及び結果＞
両側大腿後面筋（ハムストリング筋）に試験サンプル（Ａ２ＮＴＸ：計４００単位）を注射し、入院させて直後から3時間、理学療法士による膝関節を進展する受動的なＲＯＭ運動を受けた。患者の両上肢で屈曲した膝関節を進展させるなどのリハビリも併用し、罹患筋を収縮させた。膝関節の進展はその後毎日１時間入院中に続けて行った。
約1週間後から２年ぶりに自力で歩行可能になった。握力は右４０ｋｇ・左４ｋｇであり、全身の筋力の低下など副作用は見られなかった。Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ａｓｈｗｏｒｔｈ Ｓｃａｌｅは左股関節で２、膝関節で３、足関節で３であり、著明に改善した。
３か月後に、下肢筋の緊張が再度亢進したため、ＢＯＴＯＸ（登録商標）３００単位を同様に注射し、直後の３時間外来でＲＯＭ運動を患者本人が健側の上下肢を用いて行ったところ、Ａ２ＮＴＸ使用時と同様、著明な筋緊張の改善が見られ、歩行はさらに改善した。

比較例１
＜被験者＞
３９歳男性、遺伝性痙性対麻痺
職歴：事務
主訴：歩行障害
現病歴：小学生の時より、座位で踵をあげると両足の痙攣を自覚していた。２３ー４歳頃から歩行中に足が引っかかるような感じが出現視、緩徐に増悪した。
家族歴：父４０歳頃から同様の歩行障害＋、血族結婚（−）
治療前神経学的所見：はさみ足歩行、内反尖足であり、踵を接地せずに歩行。
握力測定（座位で３回）４３／３２， ４０／３５， ４１／３５
＜治療方法及び結果＞
外来にて試験サンプル（Ａ２ＮＴＸ４００単位）を筋緊張亢進部位へ投与（両側後脛骨筋１００単位ずつ、腓腹筋内側頭１００単位ずつ）した。ただ、特に直後のリハビリは行わなかったが、１日後から自力でつかまりながら歩行練習を１日３時間おこなった。。
１ヶ月後外来受診した際の被験者の状態は次の通りであった。Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ａｓｈｗｏｒｔｈ Ｓｃａｌｅは両側股関節で３、膝関節で４、足関節で３であり、治療前と比べて不変であった。
・歩行様式変化なし
・握力測定（座位で３回）４７／３８， ４２／４３， ４０／３６ 〔優位な握力低下無し〕
・自覚的な副作用や血液検査上の副作用なし。

比較例２
＜被験者＞
５７歳男性、脳出血後右片麻痺
主訴：歩行障害
現病歴：8年前に左脳出血により、右の上下肢が麻痺、その後筋緊張が亢進し（痙縮）、右足関節が内反伸展し、歩行が不可能になった。
＜治療方法及び結果＞
右後脛骨筋と腓腹筋にＢＯＴＯＸ（登録商標）を４００単位を注射したが、遠方から自動車で受診していたため、直後の3時間にはリハビリや罹患筋を収縮させることはできなかった。翌日から１日３時間の歩行訓練を理学療法士の指導のもと行ったが、1か月後でも右の足関節の緊張は変化なく、自力での歩行も不可能なままであった。
Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ａｓｈｗｏｒｔｈ Ｓｃａｌｅは右股関節で３、膝関節で３、足関節で４であり、不変であった。

また、歩行障害のある痙縮患者に対して、（Ｉ）試験サンプル投与直後に３時間運動を行ったケース、及び（ＩＩ）試験サンプル投与直後に運動を行わなかったケース、の結果を集計したところ（上記各例の結果も含む）、（Ｉ）のケースでは６例中４例で歩行が可能となるまで歩行障害が改善した一方、（ＩＩ）のケースでは７例中歩行可能となった例は１例も無かった。

なお、上記各例において評価に用いたＭｏｄｉｆｉｅｄ Ａｓｈｗｏｒｔｈ Ｓｃａｌｅは、関節の抵抗感や可動性を評価するスケールであり、次の基準により判断がなされる。

０：筋緊張の亢進はみられない。
１：軽度の筋緊張亢進がある。引っ掛かりとその消失、または屈曲・伸展の最終域でわずかな抵抗がある。
１＋：軽度の筋緊張亢進がある。明らかな引っ掛かりがあり、それに続くわずかな抵抗を可動域の１／２以下で認める。
２：よりはっきりとした筋緊張亢進を全可動域で認める。しかし、運動は可能である。
３：かなりの筋緊張亢進がある。他動運動は困難である。
４：患部は硬直し、屈曲・伸展は困難である。

Claims (4)

1. Ａ型ボツリヌス毒素が、筋緊張亢進部位に投与され、投与後３時間以内に前記筋緊張亢進部位を少なくとも０．５〜３時間運動させるように用いられることを特徴とし、Ａ型ボツリヌス毒素がＳ毒素（ＮＴＸ）である、
   Ａ型ボツリヌス毒素を含有する筋緊張亢進改善薬。
2. 投与直後から０．５〜３時間前記筋緊張亢進部位を運動させるように用いられることを特徴とする、請求項１に記載の筋緊張亢進改善薬。
3. 筋緊張亢進部位が、痙縮部位又は固縮部位である、請求項１又は２に記載の筋緊張亢進改善薬。
4. Ａ型ボツリヌス毒素がＡ２ＮＴＸである、請求項１〜３のいずれかに記載の筋緊張亢進改善薬。

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