JP5992393B2 - 調製方法 - Google Patents
調製方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP5992393B2 JP5992393B2 JP2013257625A JP2013257625A JP5992393B2 JP 5992393 B2 JP5992393 B2 JP 5992393B2 JP 2013257625 A JP2013257625 A JP 2013257625A JP 2013257625 A JP2013257625 A JP 2013257625A JP 5992393 B2 JP5992393 B2 JP 5992393B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- cells
- sample
- solid support
- hours
- stored
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/0081—Purging biological preparations of unwanted cells
- C12N5/0087—Purging against subsets of blood cells, e.g. purging alloreactive T cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N1/00—Preservation of bodies of humans or animals, or parts thereof
- A01N1/02—Preservation of living parts
- A01N1/0205—Chemical aspects
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N1/00—Preservation of bodies of humans or animals, or parts thereof
- A01N1/02—Preservation of living parts
- A01N1/0205—Chemical aspects
- A01N1/0231—Chemically defined matrices, e.g. alginate gels, for immobilising, holding or storing cells, tissue or organs for preservation purposes; Chemically altering or fixing cells, tissue or organs, e.g. by cross-linking, for preservation purposes
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
- G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
- G01N33/5044—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics involving specific cell types
- G01N33/5047—Cells of the immune system
- G01N33/505—Cells of the immune system involving T-cells
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56966—Animal cells
- G01N33/56972—White blood cells
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6863—Cytokines, i.e. immune system proteins modifying a biological response such as cell growth proliferation or differentiation, e.g. TNF, CNF, GM-CSF, lymphotoxin, MIF or their receptors
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Hematology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Dentistry (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Virology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Description
本発明は、全血試料から細胞を保存しかつ精製するための方法に関する。特に、発明は、リンパ球および抗原提示細胞の集団がインビトロで細胞性免疫反応を測定するアッセイで用いるのに有効に安定化されかつ精製されるように、全血試料から細胞を保存しかつ精製するための方法に関する。
細胞性免疫(CMI)反応は、個体の免疫状態を定義するために一般に用いられる。通常、臨床免疫学の技術分野において、CMI反応という用語は、インビボ皮膚試験、リンパ球増殖アッセイ、および特定の抗原の存在下で末梢血単核球(PBMC)により産生されるサイトカインのインビトロ検出を包含する。本明細書において記載される発明は、1つのクラスのCMI反応、すなわち特定の抗原に対するサイトカインに基づくインビトロCMI反応を測定するよう設計されたアッセイ技術(以下「CMIアッセイ」と略す)で用いるための、単離された全血試料由来の細胞を操作し、安定化し、調製するための改良された方法に対応する。
[請求項101]
全血試料由来の細胞を保存しかつ精製する方法であって、該試料を細胞の精製前におよび/または精製後に少なくとも6時間保存する段階、ならびにポジティブまたはネガティブ親和性選択段階を包含している方法により細胞性免疫アッセイ(cell-mediated immunoassay) (CMIアッセイ)で用いるためのリンパ球および抗原提示細胞の集団を精製する段階を含む、前記方法。
[請求項102]
前記試料が少なくとも10時間保存される、請求項101記載の方法。
[請求項103]
前記試料が少なくとも12時間保存される、請求項102記載の方法。
[請求項104]
前記試料が12から36時間、12から48時間、または24から48時間保存される、請求項103記載の方法。
[請求項105]
前記試料が2〜8℃で保存される、前記請求項のいずれか一項記載の方法。
[請求項106]
前記試料が18〜25℃で保存される、請求項101から104のいずれか一項記載の方法。
[請求項107]
前記精製方法が顆粒球を取り除くためのネガティブ親和性選択段階を含む、請求項101から106のいずれか一項記載の方法。
[請求項108]
前記試料を抗CD66b抗体および抗グリコホリンA抗体を含む抗体調製物と接触させて、赤血球および顆粒球を凝集させる段階、ならびに遠心分離により調製物から該赤血球および顆粒球を取り除く段階を含む、請求項107記載の方法。
[請求項109]
前記顆粒球が、前記試料を抗CD15リガンドを含む固体支持体と接触させて試料からCD15+細胞を取り除くことにより取り除かれる、請求項107記載の方法。
[請求項110]
前記固体支持体が磁気ビーズを含む方法であって、試料を該磁気ビーズと接触させてCD15+細胞をビーズに結合させる段階、およびCD15+細胞が結合しているビーズを試料から分離する段階を含む、請求項109記載の方法。
[請求項111]
試料中の赤血球が溶解またはろ過により取り除かれる、請求項109から110のいずれか一項記載の方法。
[請求項112]
精製が、試料における、全細胞に対するT細胞の比率および全細胞に対する抗原提示細胞の比率の両方の増加をもたらし;かつ/または試料が、保存または精製またはCMIアッセイでの使用の前のいかなる時点でも凍結されていない、前記請求項のいずれか一項記載の方法。
[請求項113]
前記細胞に対するポジティブ親和性選択段階を含む方法であって、任意で該親和性選択段階がT細胞の全ての種類を選択する、請求項101から106のいずれか一項記載の方法。
[請求項114]
前記試料と、前記リンパ球および抗原提示細胞の表面上に存在する細胞表面タンパク質に結合するリガンドが付着している固体支持体とを接触させ、それによってリンパ球および抗原提示細胞の調製物を単離する段階を含む、請求項113記載の方法。
[請求項115]
CD4+、CD8+、CD19+および/またはCD14+細胞を全血試料から単離するために、前記固体支持体が、1つまたは複数の抗CD4、抗CD8、抗CD19および抗CD14リガンドを含む、請求項114記載の方法。
[請求項116]
リンパ球および抗原提示細胞の前記調製物が、アッセイで用いる前に固体支持体から分離される、請求項114または115記載の方法。
[請求項117]
リンパ球および抗原提示細胞の前記調製物が、アッセイで用いるために前記固体支持体上で保持される、請求項114または115記載の方法。
[請求項118]
前記固体支持体が磁気ビーズを含む、請求項114から117のいずれか一項記載の方法。
[請求項119]
各前記磁気ビーズがそれに抗CD4、抗CD8および抗CD19リガンドを結合させている、請求項118記載の方法。
[請求項120]
各磁気ビーズがそれに1つまたは複数の抗CD4、抗CD8または抗CD19を結合させており、かつ該磁気ビーズがCD4+、CD8+およびCD19+細胞に結合している固体支持体を提供するように一緒に混合される、請求項118記載の方法。
[請求項121]
全血試料を増殖培地で希釈する段階、および処理された全血試料を少なくとも6時間保存する段階を含む、該全血試料を処理しかつ保存する方法であって、保存後に、リンパ球および抗原提示細胞の集団を、細胞性免疫アッセイ(CMIアッセイ)で用いるために得ることができる、前記方法。
[請求項122]
細胞性免疫アッセイで用いるために、保存後に前記全血試料からリンパ球および抗原提示細胞の調製物を精製する段階をさらに含む、請求項121記載の方法。
[請求項123]
前記全血試料が細胞増殖培地により1:1の比率で希釈される、請求項121または122記載の方法。
[請求項124]
前記細胞増殖培地がAIM-Vである、請求項121、122または123記載の方法。
[請求項125]
請求項101から120または122のいずれか一項記載の方法に従って全血試料を保存する段階ならびにリンパ球および抗原提示細胞の集団を精製する段階、ならびにリンパ球および抗原提示細胞の調製物をELISPOTアッセイで用いる段階を含む、ELISPOTアッセイを行う方法。
[請求項126]
ELISPOTアッセイにおいて全血に由来する単離したT細胞のペプチド特異的サイトカイン反応を維持する方法であって、ポジティブまたはネガティブ親和性選択を用いて全血試料からT細胞および抗原提示細胞を含む細胞の集団を単離する段階を含む、前記方法。
[請求項127]
- T細胞および抗原提示細胞の集団が、請求項107から126のいずれか一項で定義される方法により全血から単離される;かつ/または
- 前記試料が、親和性選択前に少なくとも10時間、少なくとも12時間、もしくは12から36時間、12から48時間もしくは24から48時間保存される;かつ/または
- 前記試料が、親和性選択前に2〜8℃もしくは18〜25℃で保存される、
請求項126記載の方法。
[請求項128]
ELISPOTアッセイで用いるのに適したリンパ球および抗原提示細胞を調製する方法であって、ろ過により赤血球を取り除く段階、任意で、赤血球はフィルターに通過させながら前記全血試料をフィルターに通し、続いてリンパ球および抗原提示細胞をフィルターから集める段階を含む、前記方法。
[請求項129]
前記フィルターを逆洗して(back flush)、前記リンパ球および抗原提示細胞を回収する、請求項128記載の方法。
[請求項130]
ヒト由来の試料に対して行われる方法であって、任意で該試料が疾患を診断するためのCMIアッセイで用いられる、前記請求項のいずれか一項記載の方法。
[請求項131]
以下を含む、請求項125の方法を行うためのキット:
(i) 任意でマイクロタイタープレートに付着させた、サイトカイン特異的抗体、ならびに
(ii) 任意で固体支持体に結合させた、請求項109および115のいずれか一項で定義される1つまたは複数のリガンド/抗体、ならびに
(iii) 任意で、細胞を保存しかつ精製する方法を行うための説明書、および/またはELISPOTアッセイを行うための説明書。
[請求項132]
以下を含む、請求項101から120、126および127のいずれか一項記載のリンパ球および抗原提示細胞の集団を精製するためのキット:
(i) 任意で固体支持体に結合させた、請求項109および115のいずれか一項で定義される1つまたは複数のリガンド/抗体;ならびに
(ii) 任意で、精製を行うための説明書。
本発明は、ELISPOTアッセイなどのCMIアッセイで用いるために全血試料から細胞を保存しかつ精製する方法を提供する。本発明はまた、細胞増殖培地での希釈により全血試料を処理し、処理された全血試料を保存する方法を提供する。この方法は、血液試料から単離されたリンパ球およびAPCのペプチド特異的サイトカイン反応をELISPOTアッセイなどのCMIアッセイで用いるのに十分であるように、好ましくは診断方法で有用であるようにすることができる。
(i) 任意でマイクロタイタープレートに付着させた、サイトカイン特異的抗体、ならびに
(ii) 任意で固体支持体に結合させた、親和性選択で用いられ得る本明細書において言及される1つまたは複数のリガンド、ならびに
(iii) 任意で、ELISPOTアッセイおよび/または細胞を保存しかつ精製する方法を行うための説明書。
静脈穿刺後直ちに、合計78ドナーそれぞれの、10 mlリチウムヘパリンバキュテイナ(BD Biosciences, Oxford, UK)1本分の全血をT-SPOT.TBアッセイキット(Oxford Immunotec, Abingdon, UK)を用いて6ヶ月間にわたって処理した。キットに添付の製造者の説明書に従って方法を実施した。この方法は以下を含む:(a) 末梢血単核球(PBMC)の調製のための標準的なフィコール法−Sample Collection and Preparation, Procedure 2の "alternative blood collection methods"およびNote 2.参照;(b) 生細胞をトリパンブルー色素排除法を用いて計数した(Freshney, R. (1987) Culture of Animal Cells: A Manual of Basic Technique, p.117, Alan R. Liss, Inc., New York);(c) 細胞をGIBCO AIM-V (Invitrogen, Paisley, UK)で希釈し100 μlあたり250,000細胞とした;(d) 250,000個(100 μl)のフィコール抽出細胞を抗ガンマインターフェロンで予めコーティングされた各マイクロタイタープレートウェルに以下のうち1つと共に加えた:フィトヘマグルチニン(PHA)陽性対照、またはM. tuberculosis由来の特定の試験抗原(パネルA、パネルB)、またはT-SPOT.TBキットで抗原が提供されないサイトメガロウイルス/エプスタイン・バーウイルス/インフルエンザウイルス由来の特定の試験抗原(CEF; Mabtech, Sweden);(e) プレートを16から20時間(37℃、5% CO2)インキュベートし、アルカリフォスファターゼ結合二次抗体を添加する前にリン酸緩衝食塩水(PBS)で4回洗い、1時間2〜8℃でインキュベートした;(f) ウェルを4回洗浄し、次に5-ブロモ-4-クロロ-3'インドイルホスフェート/ニトロブルーテトラゾリウム(BCIP/NBT)を加え、7分間インキュベートした。スポットが発生した後に、反応を蒸留水を用いて停止した;(g) 37℃で4時間乾燥させた後、各ウェルでスポットを形成した細胞(SFC)の数を記録し、解析した。
一日目に、静脈穿刺の2時間以内に、9ドナーそれぞれに由来する10 mlリチウムヘパリンバキュテイナ2本分の全血を、1本は暗中RT (18〜25℃)で、もう1本は冷蔵庫内(2〜8℃)で保存した。
結果を、フィコールのみで処理された「新鮮な」試料がELISPOTアッセイで100%のSFC数を産生すると仮定して正規化した。上部3列はSFC数の平均値を示し、下部3列は標準偏差を示す。
静脈穿刺後直ちに、10 ml リチウムヘパリンバキュテイナ2本分の全血を4ドナーそれぞれから1ヶ月間にわたって集めた。
N.B. ドナー3および4について、(-)ウェルは抗原なしを示し;(+)ウェルはPHA (5 μg/ml)ありを示す。
2つの異なる実験を、それぞれ15または11ドナーいずれかのグループ由来のプールされた全血を用いて行った。
逆洗白血球フィルタ膜(PALL Medical)を用いることの実施可能性およびさらにそのような膜上に捕獲される細胞の安定性を、静脈穿刺後T0およびT24時間で調べた。捕獲された細胞を1ドナーについては冷蔵庫内(2〜8℃)でおよび2番目のドナーについてはRT (18〜25℃)で、膜上で保存した。この膜分離法を標準的なフィコールPBMC分離法の側面に沿って各時点および温度で行った。
2つの異なる実験を各15のドナー由来の全血の試料を用いて行った。
Claims (24)
- 以下の段階を含む、インビトロ細胞性免疫アッセイを行う方法:
(i)個体からの全血試料を少なくとも8時間保存する段階;
(ii)ポジティブまたはネガティブ親和性選択段階を包含している方法により前記保存試料中に存在する顆粒球からT細胞および抗原提示細胞の集団を精製する段階;および
(iii)前記細胞の集団を細胞性免疫アッセイで用いて、T細胞における抗原特異的反応を測定する段階。 - 前記試料が少なくとも10時間保存される、請求項1記載の方法。
- 前記試料が少なくとも12時間保存される、請求項2記載の方法。
- 前記試料が12から36時間、12から48時間、または24から48時間保存される、請求項3記載の方法。
- 前記試料が2〜8℃で保存される、請求項1から4のいずれか一項記載の方法。
- 前記試料が18〜25℃で保存される、請求項1から4のいずれか一項記載の方法。
- 前記精製方法が顆粒球を取り除くためのネガティブ親和性選択段階を含む、請求項1から6のいずれか一項記載の方法。
- 前記試料を抗CD66b抗体および抗グリコホリンA抗体を含む抗体調製物と接触させて、赤血球および顆粒球を凝集させる段階、ならびに遠心分離により調製物から該赤血球および顆粒球を取り除く段階を含む、請求項7記載の方法。
- 抗CD15リガンドを含む固体支持体と前記試料を接触させて試料からCD15+細胞を取り除くことにより、前記顆粒球が取り除かれる、請求項7記載の方法。
- 前記固体支持体が磁気ビーズを含み、方法が、試料を該磁気ビーズと接触させてCD15+細胞をビーズに結合させる段階、およびCD15+細胞が結合しているビーズを試料から分離する段階を含む、請求項9記載の方法。
- 試料中の赤血球が溶解またはろ過により取り除かれる、請求項9から10のいずれか一項記載の方法。
- 精製が、試料における、全細胞に対するT細胞の比率および全細胞に対する抗原提示細胞の比率の両方の増加をもたらし;かつ/または試料が、保存または精製または細胞性免疫アッセイでの使用の前のいかなる時点でも凍結されていない、請求項1から11のいずれか一項記載の方法。
- T細胞の全ての種類を選択する、前記細胞に対するポジティブ親和性選択段階を含む、請求項1から6のいずれか一項記載の方法。
- 前記試料と、前記T細胞および抗原提示細胞の表面上に存在する細胞表面タンパク質に結合するリガンドが付着している固体支持体とを接触させ、それによってT細胞および抗原提示細胞の調製物を単離する段階を含む、請求項13記載の方法。
- CD4+、CD8+、CD19+および/またはCD14+細胞を全血試料から単離するために、前記固体支持体が、1つまたは複数の抗CD4、抗CD8、抗CD19および抗CD14リガンドを含む、請求項14記載の方法。
- T細胞および抗原提示細胞の前記調製物が、アッセイで用いる前に固体支持体から分離される、請求項14または15記載の方法。
- T細胞および抗原提示細胞の前記調製物が、アッセイで用いるために前記固体支持体上で保持される、請求項14または15記載の方法。
- 前記固体支持体が磁気ビーズを含む、請求項14から17のいずれか一項記載の方法。
- 各前記磁気ビーズがそれに抗CD4、抗CD8および抗CD19リガンドを結合させている、請求項18記載の方法。
- 各磁気ビーズがそれに1つまたは複数の抗CD4、抗CD8または抗CD19リガンドを結合させており、かつ該磁気ビーズが、一緒に混合されCD4+、CD8+およびCD19+細胞に結合する固体支持体を提供する、請求項18記載の方法。
- 細胞性免疫アッセイがELISPOTアッセイである、請求項1から20のいずれか一項記載の方法。
- 試料が-5℃〜40℃の温度で8から48時間保存される、請求項1から21のいずれか一項記載の方法。
- 以下を含む、請求項21記載の方法を行うためのキット:
(i) マイクロタイタープレートに付着させた、サイトカイン特異的抗体、ならびに
(ii) 固体支持体に結合させた、抗CD15、抗CD4、抗CD8、抗CD19および抗CD14リガンド/抗体からなる群より選択される1つまたは複数のリガンド/抗体、ならびに
(iii) 細胞を保存しかつ精製する方法を行うための説明書、および/またはELISPOTアッセイを行うための説明書。 - 請求項1から20のいずれか一項記載の方法において使用するためのキットであって、
(i) 固体支持体に結合させた、抗CD15、抗CD4、抗CD8、抗CD19および抗CD14リガンド/抗体からなる群より選択される1つまたは複数のリガンド/抗体;ならびに
(ii) 精製を行うための説明書
を含む、T細胞および抗原提示細胞の集団を精製するための前記キット。
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
GB0619853.5 | 2006-10-06 | ||
GBGB0619853.5A GB0619853D0 (en) | 2006-10-06 | 2006-10-06 | Preparation method |
Related Parent Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2009530943A Division JP2010505408A (ja) | 2006-10-06 | 2007-10-05 | 調製方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2014112089A JP2014112089A (ja) | 2014-06-19 |
JP5992393B2 true JP5992393B2 (ja) | 2016-09-14 |
Family
ID=37454163
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2009530943A Withdrawn JP2010505408A (ja) | 2006-10-06 | 2007-10-05 | 調製方法 |
JP2013257625A Active JP5992393B2 (ja) | 2006-10-06 | 2013-12-13 | 調製方法 |
Family Applications Before (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2009530943A Withdrawn JP2010505408A (ja) | 2006-10-06 | 2007-10-05 | 調製方法 |
Country Status (11)
Country | Link |
---|---|
US (3) | US20100035283A1 (ja) |
EP (1) | EP2084508B1 (ja) |
JP (2) | JP2010505408A (ja) |
CN (1) | CN101529221B (ja) |
AT (1) | ATE516488T1 (ja) |
AU (1) | AU2007303994B2 (ja) |
CA (1) | CA2665205C (ja) |
DK (1) | DK2084508T3 (ja) |
ES (1) | ES2366491T3 (ja) |
GB (1) | GB0619853D0 (ja) |
WO (1) | WO2008041004A2 (ja) |
Families Citing this family (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB0619853D0 (en) | 2006-10-06 | 2006-11-15 | Oxford Immunotec Ltd | Preparation method |
GB201605210D0 (en) * | 2016-03-29 | 2016-05-11 | Oxford Immunotec Ltd | Assay |
US11561219B2 (en) | 2016-08-26 | 2023-01-24 | Juno Therapeutics, Inc. | Methods of enumerating particles present in a cell composition |
CN108152503A (zh) * | 2017-12-19 | 2018-06-12 | 上海澜帆实业有限公司 | 酶联免疫斑点印迹的自身免疫检测试剂盒及其操作流程 |
US11273179B2 (en) | 2018-03-12 | 2022-03-15 | Medeor Therapeutics, Inc. | Methods for treating non-cancerous disorders using hematopoietic cells |
US10881692B2 (en) | 2018-04-05 | 2021-01-05 | Medeor Therapeutics, Inc. | Compositions for establishing mixed chimerism and methods of manufacture thereof |
US10842821B2 (en) | 2018-04-05 | 2020-11-24 | Medeor Therapeutics, Inc. | Cellular compositions derived from prior organ donors and methods of manufacture and use thereof |
US11435350B2 (en) | 2018-09-18 | 2022-09-06 | Medeor Therapeutics, Inc. | Methods of analysis of blood from deceased donors |
US11813376B2 (en) | 2018-09-18 | 2023-11-14 | Medeor Therapeutics, Inc. | Cellular compositions derived from deceased donors to promote graft tolerance and manufacture and uses thereof |
Family Cites Families (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5576185A (en) * | 1994-04-15 | 1996-11-19 | Coulter Corporation | Method of positive or negative selection of a population or subpopulation of a sample utilizing particles and gravity sedimentation |
GB9624456D0 (en) * | 1996-11-25 | 1997-01-15 | Isis Innovation | Assay method |
JPH11142401A (ja) * | 1997-11-11 | 1999-05-28 | Sekisui Chem Co Ltd | 細胞機能測定方法 |
US7135335B2 (en) * | 1999-05-28 | 2006-11-14 | Stemcell Technologies Inc. | Method for separating cells using immunorosettes |
JPWO2006011681A1 (ja) * | 2004-07-30 | 2008-05-01 | 株式会社メディネット | 白血球培養用血液の保存方法、輸送方法、末梢血単核球の保存方法、輸送方法及びそれらを用いた白血球の培養方法 |
GB0619853D0 (en) * | 2006-10-06 | 2006-11-15 | Oxford Immunotec Ltd | Preparation method |
-
2006
- 2006-10-06 GB GBGB0619853.5A patent/GB0619853D0/en not_active Ceased
-
2007
- 2007-10-05 DK DK07824054.6T patent/DK2084508T3/da active
- 2007-10-05 AT AT07824054T patent/ATE516488T1/de active
- 2007-10-05 JP JP2009530943A patent/JP2010505408A/ja not_active Withdrawn
- 2007-10-05 CN CN2007800371404A patent/CN101529221B/zh active Active
- 2007-10-05 CA CA2665205A patent/CA2665205C/en active Active
- 2007-10-05 ES ES07824054T patent/ES2366491T3/es active Active
- 2007-10-05 EP EP07824054A patent/EP2084508B1/en active Active
- 2007-10-05 AU AU2007303994A patent/AU2007303994B2/en active Active
- 2007-10-05 WO PCT/GB2007/003800 patent/WO2008041004A2/en active Application Filing
-
2009
- 2009-04-06 US US12/419,068 patent/US20100035283A1/en not_active Abandoned
-
2011
- 2011-04-12 US US13/084,980 patent/US20110201031A1/en not_active Abandoned
- 2011-10-05 US US13/253,598 patent/US9090871B2/en active Active
-
2013
- 2013-12-13 JP JP2013257625A patent/JP5992393B2/ja active Active
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US9090871B2 (en) | 2015-07-28 |
ATE516488T1 (de) | 2011-07-15 |
US20120028277A1 (en) | 2012-02-02 |
DK2084508T3 (da) | 2011-10-17 |
AU2007303994A1 (en) | 2008-04-10 |
ES2366491T3 (es) | 2011-10-20 |
WO2008041004A2 (en) | 2008-04-10 |
JP2010505408A (ja) | 2010-02-25 |
GB0619853D0 (en) | 2006-11-15 |
WO2008041004A3 (en) | 2008-12-18 |
AU2007303994B2 (en) | 2013-03-14 |
US20110201031A1 (en) | 2011-08-18 |
EP2084508A2 (en) | 2009-08-05 |
EP2084508B1 (en) | 2011-07-13 |
JP2014112089A (ja) | 2014-06-19 |
US20100035283A1 (en) | 2010-02-11 |
CA2665205A1 (en) | 2008-04-10 |
CN101529221A (zh) | 2009-09-09 |
CN101529221B (zh) | 2012-05-30 |
CA2665205C (en) | 2015-06-30 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP5992393B2 (ja) | 調製方法 | |
JP4151986B2 (ja) | リンパ球機能の測定方法 | |
Zhou et al. | Impact of human granulocyte and monocyte isolation procedures on functional studies | |
US20100008892A1 (en) | Quality assays for antigen presenting cells | |
CA2124319A1 (en) | Method and kit for the detection of antibodies directed against a virus | |
Campbell | Detection and enrichment of antigen-specific CD4+ and CD8+ T cells based on cytokine secretion | |
JP5144950B2 (ja) | ナチュラルキラー活性の評価方法 | |
Chesneau et al. | New method for the expansion of highly purified human regulatory granzyme B-expressing B cells | |
US7169571B2 (en) | Methods for measurement of lymphocyte function | |
JP2007510149A (ja) | アッセイ | |
US20070243576A1 (en) | Method to confirm immunosuppression in human patients by measuring lymphocyte activation | |
JP7061342B2 (ja) | エフェクター制御性t細胞の検出及び調製 | |
JPH02291966A (ja) | 全細胞に適用できる検定キットおよび方法 | |
WO2016096914A1 (en) | Methods for testing the presence of protective antigen-induced memory cd8+ t cells | |
Raulf et al. | TRANSCRIPTOMIC PROFILING OF RENAL ALLOGRAFT BIOPSIES AND PERIPHERAL BLOOD FOR DIFFERENTIAL DIAGNOSIS: ESTABLISHING ROBUST REJECTION SIGNATURES. |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20150408 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20150706 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20151005 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20160314 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20160613 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20160803 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20160817 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 5992393 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |