JP5965702B2 - フローセル、これを用いた分析装置、及び分析方法 - Google Patents
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Description
狭い幅のスリットを作製すると製造コストが高くなる。また狭い幅のスリットを用いることで生体関連物質の捕捉率は低くなる。捕捉構造体がスリットを有さない場合には、溶液を送液する前に存在する空気(気泡)を追い出すことが困難となる。
生体関連物質にストレスが加わると、表現形が変わる可能性がある。またスリットに挟まっている生体関連物質に対して、流れ場からのせん断力も発生する。
上記背景技術で説明した方法を用いて、部分的に解決できている課題もあるが全てではない。本発明は、これらの要請全てに応えることのできる分析装置を提供するものである。
マイクロチップの流路内に細菌を捕捉するための構造体を設けておき、細菌を含む溶液を流しながら捕捉する。細菌を含む溶液を必要な量だけ送液できるため、細菌を含む溶液の濃度を調製する必要が無く、非常に希薄な溶液でも使用できる。
スリットで細菌を捕捉する原理ではないため、狭い幅のスリットを作製する必要はない。
1個あたりの捕捉構造体の捕捉率を計算することで、全ての細菌を捕捉する捕捉構造体数を算出できる。
スリットで細菌を捕捉するのではなく、死水域で捕捉するため、外力は加わらない。
#Trapped bacteria (1st column)を1以下にすることで、1つの捕捉構造体に複数の細菌が捕捉されるのを回避できる。
細菌を死水域で捕捉するため、流体からの外力は加わらない。
1.スリットを有する構造体は、スリットを通して、スリットを有さない構造体の流路下流側から流路上流側へ溶液を満たせるため、気泡が除去しやすい。
2.スリットを有する構造体は、スリットの幅などのパラメータを調整することで、死水域を形成できる。
3.スリットを有する構造体は、捕捉構造体同士の間隔、スリットの幅、流速などのパラメータを調整することで、捕捉率を変えることができる。捕捉率を大きくすることで、全ての生体関連物質を捕捉することができる。図1に示したスリット2は1箇所であるが、非特許文献2のように、スリットを複数個設けてもよい。
まず、サンプリングノズル20の洗浄を行う。このときの制御・演算部50による制御の手順を図15に示す。制御・演算部50は、最初にノズル駆動機構を制御して、サンプリングノズル20を洗浄槽68に移動する(S11)。次に、制御・演算部50は、ポンプ65によって洗浄液が循環している洗浄液循環流路66に接続されている第1電磁弁71を制御して開状態にする(S12)。マイクロシリンジ60のプランジャ61は、洗浄中であれば動かしても動かさなくてもよい。この状態では、ポンプ65から圧送された洗浄液が、第1電磁弁71、第1流路62を通ってマイクロシリンジ60に入り、そのままサンプリングノズル20を通ってノズル先端から洗浄槽68内に噴出される。この状態で、ノズル内側の洗浄が行われる。洗浄液としては純水を使用した。
次に、フローセル30の内部を洗浄する。このときの制御・演算部50による制御の手順を図16のフローチャートに示す。
図17のフローチャートを参照して、試薬ラック12中の所定位置の試薬容器11からサンプリングノズル20によって試薬を吸引する手順について説明する。ここで試薬は、細菌を含む溶液として説明する。
図18のフローチャートを参照して、サンプリングノズル20の先端に吸引・保持している試薬をフローセル30に注入する手順について説明する。
次に、検出の手順について、図20のフローチャートを参照して説明する。
次に、分析した細菌の回収手順について、図21のフローチャートを参照して説明する。
1a スリットを有する構造体
1aL スリットを有する構造体の左側
1aR スリットを有する構造体の右側
1b スリットを有さない構造体
2、2a、2b スリット
3、34 流路
4 生体関連物質
5 死水域
11 試薬容器
12 試薬ラック
13 試薬ラック台
14 予混合容器
20 サンプリングノズル
21 ガイドレール
22 直線移動ユニット
23 回転軸
24 アーム
30 フローセル
31 フローセルステージ
32 注入ポート
33 排出ポート
36 上部基板
37 下部基板
38 スペーサ
40 検出ユニット
41 光源
42 撮像装置
50 制御・演算部
51 入力部
52 表示部
53 液面検知部
60 マイクロシリンジ
61 プランジャ
62 第1流路
63 第2流路
64 洗浄液タンク
65 ポンプ
66 洗浄液循環流路
67 流量調節絞り
68 洗浄槽
69 廃液タンク
71 第1電磁弁
72 第2電磁弁
Claims (15)
- 流路と、前記流路に接続された注入口及び排出口とを有する、細胞または細菌の分析に用いるフローセルであって、
前記流路内には、前記細胞または細菌を捕捉する捕捉構造体が設けられ、前記捕捉構造体は死水域を形成する構造であり、前記死水域に前記細胞または細菌を捕捉し、
前記捕捉構造体は、前記細胞または細菌を通すスリットを有するスリット部材と、該スリット部材の下流側に該スリット部材に対向して設けられ、前記細胞または細菌を収容する収容部材とを備えていることを特徴とするフローセル。 - 請求項1において、
前記収容部材は、U字型の湾曲形状を有することを特徴とする、フローセル。 - 請求項2において、
前記収容部材は、前記スリットに対向する位置に窪みを有することを特徴とする、フローセル。 - 請求項1において、
前記捕捉構造体は、液が流れる方向及びその方向に直行する方向に行列状に並んでおり、
捕捉構造体は、行方向に等間隔に並んでおり、
偶数行目に配置された隣接する捕捉構造体の略中間に、奇数行目の捕捉構造体が配置されていることを特徴とする、フローセル。 - 請求項1において、
前記捕捉構造体の高さは、前記流路の高さと同じであることを特徴とする、フローセル。 - 請求項1において、
前記捕捉構造体は、一対の平行な曲線波形の構造体であり、この曲線波形は、周期性を持っており、かつ、各周期の波形は対称であり、
一対の構造体の一方は、上端にスリットを有しており、他方は、下端にスリットを有しており、それぞれのスリットは所定の間隔で設けられていることを特徴とする、フローセル。 - 請求項1において、
前記捕捉構造体の捕捉率は下流側に近づくにつれて高くなることを特徴とする、フローセル。 - 請求項7において、
前記捕捉構造体の大きさは、下流側に近づくにつれて大きくなることを特徴とする、フローセル。 - 請求項7において、
前記スリット部材のスリットの間隔は、下流側に近づくにつれて大きくなることを特徴とする、フローセル。 - 請求項7において、
前記捕捉構造体の行方向の数は、下流側に近づくにつれて多くなることを特徴とする、フローセル。 - 流路と、前記流路に接続された注入口及び排出口とを有する、フローセルを用いて細胞または細菌の分析を行う分析方法であって、
前記流路内に設けられた、前記細胞または細菌を捕捉する捕捉構造体によって死水域を形成し、前記死水域に前記細胞または細菌を捕捉する工程を有し、
前記捕捉構造体は、前記細胞または細菌を通すスリットを有するスリット部材と、該スリット部材の下流側に該スリット部材に対向して設けられ、前記細胞または細菌を収容する収容部材とを備えており、
前記細胞または細菌に対して、前記スリットの間隔が大きく、かつ、前記スリット部材と前記収容部材との隙間の間隔よりも大きいことを特徴とする分析方法。 - 請求項11において、
前記細胞または細菌が細菌、細胞、またはそれらの少なくともいずれか一方と微粒子との結合体のいずれかであることを特徴とする、分析方法。 - 請求項11において、
捕捉した細胞または細菌を検出する工程を有することを特徴とする、分析方法。 - 請求項13において、
前記検出する工程では、ラマン、明視野、暗視野、位相差、微分干渉、蛍光、発光、電子顕微鏡のいずれかを用いることを特徴とする、分析方法。 - 請求項13において、
前記検出する工程後に、送液速度、または送液速度と送液方向を変化させて細胞または細菌を回収する工程を有することを特徴とする、分析方法。
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