JP5394872B2 - Negusare nematode or cyst nematode control agent - Google Patents

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Description

本発明はネグサレセンチュウ又はシストセンチュウの防除剤に関し、栽培作物に対する害虫の防除技術の分野に属する。   The present invention relates to an agent for controlling Nematode nematode or cyst nematode, and belongs to the field of pest control techniques for cultivated crops.

近年、栽培作物に対する寄生性線虫類による被害が拡大し、問題となっている。この問題は特定作物を連作する場合に特に顕著となり、その作物への寄生性の強い線虫の土壌中の密度が高くなる結果、作物の生育を阻害したり、収量を低下させたりするなどの被害をもたらす。   In recent years, damage caused by parasitic nematodes on cultivated crops has become a problem. This problem is particularly noticeable when a particular crop is continuously cropped, and as a result of the high density of nematodes that are highly parasitic on the crop, the growth of the crop is hindered and the yield is reduced. Cause damage.

その対策として、従来、堆肥等の粗大有機物が用いられてきたが、この方法は、有害線虫に対する抑制効果は高いものの、大量に用いる必要があるので、労働負担が高く、さらに、作物の異常生長を招いたり、土壌中に病原菌が蔓延しやすくなるなどの欠点がある。   As countermeasures, coarse organic matter such as compost has been used in the past, but this method has a high inhibitory effect against harmful nematodes, but it is necessary to use a large amount, so that the labor burden is high, and there is a problem with crop abnormalities. There are drawbacks such as growth and the spread of pathogenic bacteria in the soil.

また、土壌中での線虫の繁殖を抑制する化学的物質を含有する植物、例えばマリーゴールド、クロタラリア、ギニアグラスなどを栽培作物と併せて植え付ける方法もあるが、この方法は目的とする作物の作付面積を制約するという難点がある。   There is also a method of planting plants containing chemical substances that suppress the growth of nematodes in soil, such as marigold, crotalaria, and guineagrass, together with cultivated crops. There is a difficulty in restricting the planting area.

さらに、播種あるいは植付け前にくん蒸処理用の農薬を用いた土壌消毒はコストも低く、現在最も汎用的に使用されている防除法であり、土壌中の線虫除去に効果を有するが、この方法は人畜に対する安全性を損なう懸念があり、また、有用微生物を死滅させるなど、土壌生態系への影響が大きい。さらに、リサージェンス(誘導多発性)と呼ばれるように、処理後、かえって対象害虫あるいは他の害虫が増加するという被害の常態化をしばしば誘発することが知られている。
Furthermore, soil disinfection using pesticides for fumigation before sowing or planting is low in cost and is currently the most widely used control method, and is effective in removing nematodes in soil. Has a concern that the safety to human livestock is impaired, and has a great impact on the soil ecosystem, such as killing useful microorganisms. Furthermore, it is known that after treatment, the normalization of damage is often induced after the treatment, in which target pests or other pests increase instead of being called resurgency (induced multiple occurrence).

また、物理的防除方法として、ハウスでの太陽熱を利用した消毒や、大量の潅水と熱とによる還元消毒なども効果的ではあるが、この方法は大規模な設備が必要で、コストや労働負担が高い。   In addition, as a physical control method, disinfection using solar heat in the house and reductive disinfection with a large amount of irrigation and heat are effective, but this method requires large-scale equipment and is costly and labor intensive. Is expensive.

そして、これらの対策方法は、いずれも予防的な方法であって、作付中に一旦寄生されると、それを排除して土壌を回復するのはきわめて困難であり、さらなる汚染を防ぐしかないのが実情である。   And all of these countermeasures are preventive, and once they are parasitized during planting, it is extremely difficult to eliminate them and restore the soil, and to prevent further contamination. Is the actual situation.

このような実情に対し、土壌生態系や人畜に与える影響がなく、安全性に優れ、しかも実施が容易な線虫の防除剤として、特許文献1にはネコブセンチュウに有効な天然物由来の防除剤が開示されており、センダングサ属、ヒメジョン属、ムカシヨモギ属などのキク科植物のアルコール抽出物及び蒸留水による煮沸抽出物が、ネコブセンチュウを不動化させる効果を有することが記載されている。   As a nematode control agent that has no impact on soil ecosystems and human livestock, is excellent in safety, and is easy to implement, Patent Document 1 discloses a natural product-derived control agent effective for root-knot nematodes. It is disclosed that an alcoholic extract of an Asteraceae plant such as Sendangsa, Himejon, and Solanum spp. And a boiled extract with distilled water have an effect of immobilizing root-knot nematodes.

特開2008−120749号公報JP 2008-12049A

しかし、前記特許文献1に記載のものは、ネコブセンチュウを対象とするもので、ネコブセンチュウと共に3大有害線虫とされるネグサレセンチュウおよびシストセンチュウについての記載はない。ネグサレセンチュウおよびシストセンチュウの被害を抑制することができれば、線虫病害による損害を大幅に削減することが可能であるが、同じ植物寄生性線虫であってもそれぞれの生態や作物に対する被害の及ぼし方は大きく異なり、ネコブセンチュウの場合は、幼虫が幼令期の限られた期間に植物根に侵入、定着し、根の組織を肥大させて養分を奪いながら成長し、成熟すると植物根組織表面に卵嚢を形成、その後土壌中に大量の幼虫が孵化し、被害を拡大していくのに対し、ネグサレセンチュウの場合は、根の組織内に産卵し、孵化した幼虫は根の中を加害活動するだけでなく、その生活環の大半において、好適な宿主を求め、植物根と土壌中を自由に移動することができるため、より広域に被害をもたらす。また、シストセンチュウは、土壌中にシストと呼ばれる強固の殻を形成し、その中に数百の卵を保護することができるため、乾燥や低温といった、ネコブセンチュウやネグサレセンチュウにとっては好ましくない環境下においても長期間耐えることができる。   However, the thing of the said patent document 1 is a root-knot nematode, and there is no description about the root-knot nematode and cyst nematode which are considered to be 3 major harmful nematodes with a root-knot nematode. If the damage to Negusale nematodes and cyst nematodes can be controlled, the damage caused by nematode diseases can be greatly reduced, but even with the same plant parasitic nematodes, damage to the respective ecology and crops can be reduced. In the case of root-knot nematode, the larva invades and settles in the plant root during a limited period of infancy, grows while taking away nutrients by enlarging the root tissue, and when matured, the surface of the plant root tissue On the other hand, a large number of larvae hatch in the soil and then spread the damage, whereas in the case of Negusa nematode, eggs are spawned in the root tissue, and the hatched larvae damage the roots. In addition to being active, in most of its life cycle it seeks suitable hosts and can move freely through plant roots and soil, causing damage to a wider area. In addition, cyst nematodes form a strong shell called cysts in the soil and can protect hundreds of eggs in them, which is not desirable for root-knot nematodes and nematode nematodes, such as dry and cold. Can withstand long periods of time.

また、ネコブセンチュウは花きでは、キク科、アスター、ガーベラ、ダリア、カーネーション、ストック、スイセン、スイートピー、シャクヤク、グラジオラス、ケイトウ、リンドウ、花木では、モモ、ヤナギ、アカシヤ、ナンテン、ウメ、サクラ、バラ、ツバキ、サザンカ、クレマチスなど、野菜類ではトマト、ナス、ウリ類、アブラナ科、ホウレンソウ、シュンギク、ネギ類、ショウガ、マメ科など、極めて多くの植物に寄生し、収穫低下などの被害を及ぼすが、ネグサレセンチュウの場合、ネコブセンチュウの寄生対象植物にも寄生することが報告されているが、その他代表的な寄生対象植物として、花きでは、ユリ、センニチコウ、スミレ、アプラナ科、花木では、カナメモチ、スイリュウ、ゴム、カエデ、マツ、ニレ、ヒノキ、その他樹木及びシバなどでの被害が多い。同様に、野菜類でも、イネ科、キク科の他、ニンジン、ダイコン、ゴボウなどの根菜類において被害が多いことが知られている。また、シストセンチュウとして代表的な種はジャガイモシストセンチュウやダイズシストセンチュウなどであり、これらは主に関東以北においてジャガイモ、大豆やアズキ、インゲンなどのマメ科作物に特異的に大きな被害を及ぼしている。   In addition, root-knot nematodes are asteraceae, aster, gerbera, dahlia, carnation, stock, narcissus, sweet pea, peonies, gladiolus, celosia, gentian, flowering trees, peach, willow, red oak, nanten, ume, cherry, rose, camellia. , Sasanqua, clematis, and other vegetables such as tomatoes, eggplants, cucumbers, cruciferous, spinach, garlic, leeks, ginger, legumes, etc. In the case of gusale nematode, it has been reported that it also parasitizes the parasitic plant of root-knot nematode. Rubber, maple, pine, elm, cypress, Other trees and damage in such as grass often. Similarly, it is known that there are many damages in root vegetables such as carrots, Japanese radish, and burdock as well as gramineous and asteraceae. Typical species of cyst nematodes are potato cyst nematodes and soybean cyst nematodes, which are particularly damaging to legume crops such as potato, soybean, azuki bean and green beans mainly in the Kanto region. Yes.

したがって、ネコブセンチュウと共に3大有害線虫を構成するネグサレセンチュウ及びシストセンチュウについては、別途、安全性や実施の容易性等に優れた防除剤の実現が望まれているのである。   Therefore, for the nematode nematodes and cyst nematodes that constitute the three major harmful nematodes together with root-knot nematodes, it is desired to separately realize a control agent having excellent safety and ease of implementation.

本発明は、前記課題を解決するためになされたものであって、まず、請求項1に記載の発明は、ネグサレセンチュウ又はシストセンチュウの防除剤であって、アワユキセンダングサの抽出物を有効成分とすることを特徴とする。   The present invention has been made to solve the above-mentioned problems. First, the invention according to claim 1 is a control agent for a nematode nematode or a cyst nematode, and is effective in using an extract of Amaranthus japonicum. It is characterized by being a component.

また、請求項2に記載の発明は、前記請求項1に記載のネグサレセンチュウ又はシストセンチュウの防除剤であって、アワユキセンダングサの乾燥微粉末10gに対して50mlの割合で水を加え、加熱後、液体成分を抽出して前記水のほぼ1/2の量に精製したものを原液とし、その原液又はその50倍までの希釈液であることを特徴とする。   The invention described in claim 2 is the control agent for the nematode nematode or cyst nematode according to claim 1, wherein water is added at a rate of 50 ml with respect to 10 g of dry fine powder of Ayuyukisendansa, After heating, the liquid component is extracted and purified to approximately half the amount of water as a stock solution, which is a stock solution or a diluted solution up to 50 times the stock solution.

また、請求項3に記載の発明は、前記請求項2に記載の発明におけるネグサレセンチュウの防除剤であって、前記原液又はその20倍までの希釈液であることを特徴とする。   The invention described in claim 3 is the control agent for the nematode nematode according to the invention described in claim 2, characterized in that it is the stock solution or a diluted solution up to 20 times thereof.

さらに、請求項4に記載の発明は、前記請求項2に記載の発明におけるシストセンチュウの防除剤であって、前記原液の10倍から20倍までの希釈液であることを特徴とする。   Furthermore, the invention described in claim 4 is a cyst nematode control agent in the invention described in claim 2, characterized in that it is a diluted solution of 10 to 20 times the stock solution.

本発明に係るネグサレセンチュウ又はシストセンチュウの防除剤によれば、アワユキセンダングサの抽出物が有効成分としてネグサレセンチュウ及びシストセンチュウに作用し、不動化ないし致死の効果を発揮して、これらのセンチュウが寄生することによる作物被害を防止もしくは軽減する。   According to the control agent of the nematode nematode or cyst nematode according to the present invention, the extract of Ayuyuki nengesa acts as an active ingredient on the nematode nematode and cyst nematode, exhibits the effect of immobilization or lethality, Prevent or reduce crop damage caused by nematode infestation.

特に、この防除剤は、日本国内及び国外において広範囲に自生する雑草の一種で、入手が容易なアワユキセンダングサを原材料とするから安価に製造でき、かつ使用に際しての大掛かりな設備等が不要である。しかも、天然由来物であり、かつ一部の地域では葉や茎を煎じて飲用したり、食用して利用されており、人畜や環境への影響がなく、土壌生態系を損なうおそれもない。   In particular, this control agent is a kind of weed that grows widely in Japan and abroad, and it can be manufactured at low cost because it is easily available, and it does not require large equipment for use. . Moreover, it is a natural product, and in some areas it is used by decocting and drinking leaves and stems, and has no effect on human livestock or the environment, and there is no risk of damaging the soil ecosystem.

特に、請求項3の発明に係る防除剤は、ネグサレセンチュウに対する即効性を有し、作物への寄生が認められてからであっても、被害を直ちに防止もしくは軽減することができる。   In particular, the control agent according to the invention of claim 3 has an immediate effect on the nematode nematode and can prevent or reduce damage immediately even after the infestation of the crop is recognized.

また、請求項4の発明に係る防除剤は、シストセンチュウに対する即効性を有し、同様に、作物への寄生が認められてからであっても、被害を直ちに防止もしくは軽減することができる。   In addition, the control agent according to the invention of claim 4 has an immediate effect on cyst nematode, and similarly, even after infestation of crops is recognized, damage can be immediately prevented or reduced.

ミナミネグサレセンチュウの生存状態と致死状態とを示す写真である。It is a photograph which shows the survival state and fatal state of Southern Nematode. ダイズシストセンチュウの生存状態と致死状態とを示す写真である。It is a photograph which shows the survival state and lethal state of soybean cyst nematode.

本発明のネグサレセンチュウ又はシストセンチュウ防除剤は、アワユキセンダングサの抽出物を有効成分とするもので、その原材料は、自生するアワユキセンダングサを採取することにより得られ、その生の状態又は乾燥させたものが素材となる。その場合に、花、葉、茎などを含む全草を素材として用いることができるが、根は除く方が好ましい。また、乾燥させた場合は、腐ることがないので、取り扱いに便である。   The pesticide for controlling nematode or cyst nematode according to the present invention comprises an extract of Ayuyukisendangusa as an active ingredient, and its raw material is obtained by collecting a native Ayuyusendangusa, in its raw state or dried The material used is the material. In that case, whole plants including flowers, leaves, stems and the like can be used as the material, but it is preferable to remove the roots. Further, when dried, it does not rot and is convenient for handling.

この素材からの原液の抽出は次のように行われる。   Extraction of the stock solution from this material is performed as follows.

まず、前記素材を細かく破砕ないし粉砕し、これに、乾燥素材の場合、質量で5〜数10倍の水を加え、該素材に浸透させる。素材が生の場合は、該素材自体が80%程度の水分を含んでいるので、乾燥素材の場合に比べて加える水の量は約1/5となる。   First, the raw material is finely crushed or pulverized, and in the case of a dry raw material, 5 to several tens of times by weight of water is added and allowed to penetrate into the raw material. When the raw material is raw, since the raw material itself contains about 80% of water, the amount of water added is about 1/5 compared to the case of the dry material.

次に、この水が浸透した素材を湯煎、煮沸等により加熱した後、冷却し、その後、圧搾分離法、遠心分離法、沈降分離法等により固液分離し、その液体部分をろ過し、必要に応じて周知の精製処理を加えて、防除剤の原液とする。   Next, the material infiltrated with water is heated by boiling water, boiling, etc., then cooled, and then solid-liquid separation is performed by squeezing separation method, centrifugal separation method, sedimentation separation method, etc. Depending on the conditions, a known purification treatment is added to obtain a stock solution of the control agent.

この原液は、そのまま又は濃縮され或いは水などで希釈されて液状の防除剤となり、或いは乾燥されて粒状或いは粉状の防除剤となる。   This stock solution is directly or concentrated or diluted with water to become a liquid control agent, or dried to become a granular or powdery control agent.

液状の防除剤の場合、一定の効果を得るには原液の50倍程度までの希釈液が望ましく、ほぼ100%の防除効果を得るためには、原液もしくは20倍程度までの希釈液とするのが望ましい。   In the case of a liquid control agent, a diluted solution up to about 50 times the stock solution is desirable to obtain a certain effect, and in order to obtain a control effect of almost 100%, the stock solution or a diluted solution up to about 20 times is used. Is desirable.

また、即効性が必要とされる場合は、ネグサレセンチュウ用防除剤としては、原液又は原液の20倍程度までの希釈液がよく、シストセンチュウ用防除剤としては、原液の10倍から20倍程度までの希釈液がよい。
In addition, when immediate effect is required, the control agent for nematode nematode is preferably a stock solution or a diluted solution up to about 20 times the stock solution, and the control agent for cyst nematode is 10 to 20 times the stock solution. Dilution to the extent is good.

この防除剤は、土壌へ散布することにより、液状の場合はさらに土壌中に灌注して用いることができるほか、適宜担体に担持させ、これを土壌表面又は土壌中に配置して用いることもできる。   In the case of liquid, this control agent can be used by further irrigating into the soil if it is in liquid form, or by appropriately supporting it on a carrier and placing it on the soil surface or in the soil. .

以下、本発明の実施例について説明する。   Examples of the present invention will be described below.

1.アワユキセンダングサ抽出液の調製
(1)琉球大学構内にて自生していた、変色・変形・モザイクウイルス等の感染のない開花期のアワユキセンダングサ株を選定し、根以外の全草を採取し、枯れた部位等を除去したものを素材とした。
(2)この素材を、乾燥機により100℃にて約2時間乾燥させた後、ミルを用いて微粉砕し、乾燥微粉末素材を得た。なお、乾燥方法としては、自然乾燥でもよく、その場合、乾燥持間は機械乾燥に比べて長くなる。
(3)乾燥微粉末素材を10g秤取し、ビーカーに入れ、蒸留水50mlを加えて十分浸透させた。
(4)前記ビーカーをラップ及びアルミホイルで蓋をし、100℃、30分間、湯煎で加熱後、放冷し、ガーゼを用いて圧搾し、粗抽出液を得た。
(5)この粗抽出液を、3000rpm、5分の条件下で遠心分離し、さらに上澄みをろ過して、約25mlの抽出液を得た。そして、この抽出液を、本実施例に係る防除剤の原液とした。
1. Preparation of Ayuyukisendanusa extract (1) Select the Awayukisendangusa strain that has grown naturally on the campus of the University of the Ryukyus and is free of discoloration, deformation, mosaic virus, etc. The material from which the withered part was removed was used as a material.
(2) This material was dried at 100 ° C. for about 2 hours with a dryer and then finely pulverized using a mill to obtain a dry fine powder material. As a drying method, natural drying may be used, and in that case, the drying time is longer than mechanical drying.
(3) 10 g of the dry fine powder material was weighed and placed in a beaker, and 50 ml of distilled water was added and sufficiently infiltrated.
(4) The beaker was covered with wrap and aluminum foil, heated in a hot water bath at 100 ° C. for 30 minutes, allowed to cool, and compressed with gauze to obtain a crude extract.
(5) This crude extract was centrifuged at 3000 rpm for 5 minutes, and the supernatant was filtered to obtain about 25 ml of extract. This extract was used as a stock solution of the control agent according to this example.

2.試験用センチュウ幼虫の準備
[シストセンチュウ]
中央農業総合研究センターから分譲された線虫汚染土壌中に含まれる蔵卵雌成虫(シスト)を実体顕微鏡下でピンセットを用いて破壊し、これをインゲンマメの根滲出液(約5ml)を入れたシャーレ内のキムワイプの上に置いた状態で、25℃のインキュベーターで孵化させた。1週間後、孵化した2期幼虫をパスツールピペットで回収し、1週間以内に実験に供試した。
2. Preparation of nematode larva for test [cyst nematode]
The adult female egg (cyst) contained in the nematode-contaminated soil distributed from the Central Agricultural Research Center was destroyed with tweezers under a stereomicroscope, and this was filled with kidney bean root exudate (approximately 5 ml). In a state where it was placed on a Kimwipe in a petri dish, it was hatched in an incubator at 25 ° C. One week later, the hatched second stage larvae were collected with a Pasteur pipette and used for the experiment within one week.

[ネグサレセンチュウ]
九州沖縄農業研究センターから分譲されたSH培地(保存液1:50ml、保存液2:10ml、保存液3:1ml、保存液4:1ml、保存液5:1ml、イノシトール:1g、ショ糖:30g、ゲランガム:3g、蒸留水:937ml)から増殖したミナミネグサレセンチュウをベルマン法により分離し、実験に供試した。
[Negusaresenchu]
SH medium distributed from Kyushu Okinawa Agricultural Research Center (stock solution 1:50 ml, stock solution 2:10 ml, stock solution 3: 1 ml, stock solution 4: 1 ml, stock solution 5: 1 ml, inositol: 1 g, sucrose: 30 g , Gellan gum: 3 g, distilled water: 937 ml) was isolated by the Bellman method and used for experiments.

ここで、前記保存液1〜5の組成は次の通りである。
保存液1(KNO:50g、水:1,000ml)
保存液2(MgSO・7HO:20g、NHPO:15g、CaCl・2HO:10g)
保存液3(MnSO・HO:5g、HBO:2.5g、ZnSO・7HO:500ml、KI500ml)
保存液4(CuSO・5HO:100ml、NaMoO・2HO:50ml、CoCl・6HO:50ml)
保存液5(塩酸チアミン:500ml、塩酸ピリドキシン:50ml、ニコチン酸:500ml、2,4−D:200ml)
また、ベルマン法とは、線虫自身の活動性を利用して土壌等から線虫を分離する周知の方法である。
Here, the composition of the preservation solutions 1 to 5 is as follows.
Stock solution 1 (KNO 3 : 50 g, water: 1,000 ml)
Preservation solution 2 (MgSO 4 · 7H 2 O: 20 g, NH 4 H 2 PO 4 : 15 g, CaCl 2 · 2H 2 O: 10 g)
Preservative 3 (MnSO 4 · H 2 O: 5 g, H 3 BO 3 : 2.5 g, ZnSO 4 · 7H 2 O: 500 ml, KI 500 ml)
Preservation solution 4 (CuSO 4 .5H 2 O: 100 ml, Na 2 MoO 4 .2H 2 O: 50 ml, CoCl 2 .6H 2 O: 50 ml)
Stock solution 5 (thiamine hydrochloride: 500 ml, pyridoxine hydrochloride: 50 ml, nicotinic acid: 500 ml, 2,4-D: 200 ml)
The Bellman method is a well-known method for separating nematodes from soil or the like using the activities of the nematodes themselves.

3.センチュウ懸濁液の密度調整
(1)三角フラスコ中で10℃に保存されているセンチュウ幼虫の懸濁液を滅菌済みのコマゴメピペットを用いて滅菌済みの遠沈管に入れ、遠心分離機を用いて、1000rpm、1秒の条件下で遠心分離し、幼虫を沈殿させた。
(2)滅菌済みのコマゴメピペットを用いて上澄みを取り除き、高密度の線虫懸濁液を得た。
(3)この懸濁液の一部を滅菌済みのコマゴメピペットを用いて滅菌済みの別容器に移し、タッチミキサーで撹拌した後、滅菌済みのピペットマンを用いて0.1ml採取し、これをプレパラート上に直線状に滴下した。
(4)顕微鏡(40倍)で観察しながら、カウンターを用いてプレパラート上の線虫をカウントした。
(5)必要に応じて遠沈管の高密度センチュウ懸濁液を足し、或いは滅菌済み蒸留水を加えて、0.1ml当たり130〜140頭となるように密度を調製した。
3. Density adjustment of nematode suspension (1) Put nematode larvae suspension stored in an Erlenmeyer flask at 10 ° C into a sterilized centrifuge tube using a sterilized coma pipette and use a centrifuge And centrifuging at 1000 rpm for 1 second to precipitate larvae.
(2) The supernatant was removed using a sterilized coma pipette to obtain a high density nematode suspension.
(3) A part of this suspension is transferred to a sterilized container using a sterilized comago pipette, stirred with a touch mixer, and then 0.1 ml is collected using a sterilized pipetman. It was dripped linearly on the preparation.
(4) While observing with a microscope (40 times), nematodes on the slide were counted using a counter.
(5) The density was adjusted so that it might become 130-140 heads per 0.1 ml by adding the high-density nematode suspension of a centrifuge tube as needed, or adding sterilized distilled water.

4.センチュウ不動化・致死試験
(1)実施例に係る液剤として、前述の防除剤の原液、及びこれを滅菌済み蒸留水で10倍、20倍、100倍にそれぞれ希釈したものを用意した。また、比較対照用として蒸留水を用意し、これらを滅菌済みのメスピペットを用いて滅菌済みの試験管にそれぞれ1mlずつ投入した。その際、ネグサレセンチュウ用として上記各条件ごとに5本ずつ、シストセンチュウ用として上記各条件ごとに、同じく5本ずつ用意した。
(2)次に、各試験管に滅菌済みのピペットマンを用いて上記の密度調製済み線虫懸濁液を0.1mlづつ加え、全量が1.1mlで、その中に130〜140頭の線虫が存在する試験液を生成した。その後、試験管をパラフィルムで蓋をした。
(3)前記試験管を、25℃の条件下で1日静置した後、タッチミキサーで撹拌した上で、試験液の全量を滅菌済みのパスツールピペットを用いてプレパラートに移し、顕微鏡(40倍)にて観察し、動いている線虫と不動化した(動かなくなった)線虫の数をそれぞれカウントし、全線虫のうちの不動化した線虫の率(不動化率)を求めた。その後、プレパラート上の試験液の全量を試験管に戻し、パラフィルムで蓋をした。
(4)同様に、試験開始後4日目及び7日目に、動いている線虫と不動化している線虫の数をカウントし、不動化率を求めた。
(5)7日目の測定後、試験液の全量を遠沈管に入れ、遠心分離機を用いて1000rpm、1秒の条件下で遠心分離した。その後、滅菌済みのコマゴメピペットを用いて上澄みを除去し、沈殿物を蒸留水で洗浄した後、滅菌水を約10ml加え、25℃で静置した。そして、1日静置した後、上澄みを取り除き、顕微鏡(40倍)にて全量を観察し、生存、致死を判定して、全線虫のうちの致死の線虫の率(致死率)を求めた。
4). Nematode immobilization / lethal test (1) As the liquid agent according to the examples, the above-mentioned stock solution of the control agent and those diluted 10-fold, 20-fold and 100-fold with sterilized distilled water were prepared. In addition, distilled water was prepared as a comparative control, and 1 ml of each was put into a sterilized test tube using a sterilized measuring pipette. At that time, five were prepared for each of the above conditions for the nematode nematode, and five were also prepared for each of the above conditions for the cyst nematode.
(2) Next, add 0.1 ml of the above density-adjusted nematode suspension to each test tube using a sterilized pipetman, and the total amount is 1.1 ml, and 130-140 lines are contained therein. A test solution with insects was produced. Thereafter, the test tube was covered with parafilm.
(3) The test tube was allowed to stand at 25 ° C. for 1 day, and then stirred with a touch mixer. Then, the entire amount of the test solution was transferred to a preparation using a sterilized Pasteur pipette, and the microscope (40 The number of moving nematodes and the number of immobile (immobilized) nematodes were counted, and the ratio of immobile nematodes among all nematodes (immobilization rate) was determined. . Thereafter, the entire amount of the test solution on the slide was returned to the test tube and covered with parafilm.
(4) Similarly, on the 4th and 7th days after the start of the test, the number of moving nematodes and immobilized nematodes was counted to determine the immobilization rate.
(5) After measurement on the seventh day, the entire amount of the test solution was put into a centrifuge tube and centrifuged using a centrifuge at 1000 rpm for 1 second. Thereafter, the supernatant was removed using a sterilized coma pipette, the precipitate was washed with distilled water, about 10 ml of sterilized water was added, and the mixture was allowed to stand at 25 ° C. Then, after standing for one day, the supernatant is removed, the whole amount is observed with a microscope (40 times), survival and lethality are judged, and the rate of lethal nematodes among all nematodes (lethal rate) is obtained. It was.

ここで、線虫の生存、致死の判定は、図1に示すミナミネグサレセンチュウ、図2に示すダイズシストセンチュウのいずれについても、(a)に示すように、比較的複雑に屈曲し、観察中、たえず動いているものを生存、(b)に示すように、棒状に硬直し、観察中、全く動かないものを致死とした。   Here, the determination of survival and lethality of nematodes is observed in both the southern nematode nematode shown in FIG. 1 and the soybean cyst nematode shown in FIG. Among them, those that were constantly moving survived, and as shown in (b), they were stiffened into a rod shape, and those that did not move at all during the observation were lethal.

5.試験結果
以上の試験結果は、ネグサレセンチュウについては表1、シストセンチュウについては表2に示すとおりである。なお、表中の数字の「a.a±b.b」の「a.a」は、各条件での5つの試験結果の平均値を示し、「b.b」はその平均値に対する標準偏差を示す。
5. Test Results The above test results are as shown in Table 1 for Negusa nematodes and in Table 2 for cyst nematodes. In the table, “aa” in the numbers “aa ± bb” indicates the average value of five test results under each condition, and “bb” is the standard deviation with respect to the average value. Indicates.

Figure 0005394872
Figure 0005394872

Figure 0005394872
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ミナミネグサレセンチュウについては、比較例では、不動化率が7日目でも30〜40%であるのに対し、実施例に係る防除剤の原液、10倍希釈液、20倍希釈液は、試験開始後1日目からほぼ100%の不動化率を示し、この不動化率を維持したまま、8日目の致死の判定においても、80〜100%の高い率で致死が確認された。   For the southern nematode nematode, in the comparative example, the immobilization rate is 30 to 40% even on the 7th day, whereas the stock solution of the control agent according to the example, the 10-fold diluted solution, and the 20-fold diluted solution were tested. The immobilization rate was almost 100% from the first day after the start, and the lethality was confirmed at a high rate of 80 to 100% in the determination of lethality on the 8th day while maintaining this immobilization rate.

なお、100倍希釈液は、1日目に高い不動化率を示したものの、その後、不動化率は低下し、比較例以上の防除効果は認められなかった。   In addition, although the 100 times dilution liquid showed the high immobilization rate on the 1st day, after that, the immobilization rate fell and the control effect more than a comparative example was not recognized.

以上により、アワユキセンダングサの抽出液を有効成分とする本実施例の防除剤は、その希釈度を適切に設定することにより、ネグサレセンチュウに対する高い防除効果を有することが確認された。その場合に、20倍希釈液でほぼ100%の不動化率、ほぼ80%の致死率が認められることから、50倍希釈液でもある程度の効果が得られることが推測される。   From the above, it was confirmed that the control agent of the present Example containing the extract of Ayuyukisendanusa as an active ingredient has a high control effect against Nematode nematode by appropriately setting the dilution. In that case, an immobilization rate of approximately 100% and a lethality rate of approximately 80% are observed with the 20-fold diluted solution, and it is estimated that a certain degree of effect can be obtained even with the 50-fold diluted solution.

また、原液、10倍希釈液、20倍希釈液は、その効果が試験開始後1日目から認められ、即効性を有することも確認された。   In addition, the effects of the stock solution, the 10-fold diluted solution, and the 20-fold diluted solution were recognized from the first day after the start of the test, and it was also confirmed that they had immediate effects.

ダイズシストセンチュウについては、比較例では、不動化率が7日目でも数%であって、ほとんど生存状態が維持されているのに対し、実施例に係る防除剤については、10倍希釈液、20倍希釈液は、試験開始後1日目からほぼ100%の不動化率を示し、この不動化率を維持したまま、8日目の致死の判定においても、ほぼ100%で致死が確認された。   As for soybean cyst nematode, in the comparative example, the immobilization rate was several% even on the seventh day, and the survival state was almost maintained, whereas the control agent according to the example was diluted 10 times. The 20-fold diluted solution showed an immobilization rate of almost 100% from the first day after the start of the test, and even in the determination of lethality on the eighth day while maintaining this immobilization rate, lethality was confirmed at almost 100%. It was.

原液は、試験開始後1日目には高い効果が得られなかったものの、4日目以降は不動化率が100%であり、そのまま8日目には致死にいたっている。   Although the stock solution did not show a high effect on the first day after the start of the test, the immobilization rate was 100% after the fourth day, and it was fatal on the eighth day.

なお、100倍希釈液は、ミナミネグサレセンチュウの場合と同様に、顕著な防除効果は認められなかった。 In addition, the 100-fold diluted solution did not have a remarkable control effect as in the case of the southern nematode.

以上により、アワユキセンダングサの抽出液を有効成分とする本実施例の防除剤は、その希釈度を適切に設定することにより、シストセンチュウに対する高い防除効果を有することが確認された。その場合に、20倍希釈液でほぼ100%の不動化率と致死率とが認められることから、50倍希釈液でもある程度の効果が得られることが推測される。   From the above, it was confirmed that the control agent of the present Example containing the extract of Ayuyukisendansa as an active ingredient has a high control effect against cyst nematode by appropriately setting the dilution. In that case, since an immobilization rate and a lethality rate of almost 100% are observed with the 20-fold diluted solution, it is estimated that a certain degree of effect can be obtained even with the 50-fold diluted solution.

また、10倍希釈液、20倍希釈液は、その効果が試験開始後1日目から認められ、即効性を有することも確認された。   In addition, the effects of the 10-fold diluted solution and the 20-fold diluted solution were recognized from the first day after the start of the test, and it was also confirmed that they had an immediate effect.

以上のように、本発明に係る防除剤は、入手容易な天然物であるアワユキセンダングサを原材料とすることにより、環境や人畜に対する安全性に優れ、かつ低コストで実施可能でありながら、ネグサレセンチュウ及びシストセンチュウに対する高い防除効果を有し、したがって、農産物の生産業において好適に利用される可能性がある。   As described above, the control agent according to the present invention is made from a natural natural raw material, Awayukisendangusa, which is excellent in safety to the environment and livestock and can be implemented at low cost. It has a high control effect on gusale nematodes and cyst nematodes, and thus may be suitably used in the agricultural production industry.

Claims (4)

アワユキセンダングサの抽出物を有効成分とすることを特徴とするネグサレセンチュウ又はシストセンチュウの防除剤。   A control agent for Negusale nematode or cyst nematode, characterized by comprising an extract of Awayukisendangusa as an active ingredient. アワユキセンダングサの乾燥微粉末10gに対して50mlの割合で水を加え、加熱後、液体成分を抽出して前記水のほぼ1/2の量に精製したものを原液とし、その原液又はその50倍までの希釈液であることを特徴とする請求項1に記載のネグサレセンチュウ又はシストセンチュウの防除剤。   Water is added at a ratio of 50 ml to 10 g of dry powder of Ayuyukisendansa, heated, extracted liquid components and purified to approximately half the amount of the water as a stock solution, the stock solution or 50 The control agent for Negusale nematode or cyst nematode according to claim 1, which is a dilute solution up to twice. 前記原液又はその20倍までの希釈液であることを特徴とする請求項2に記載のネグサレセンチュウの防除剤。   The control agent for Negusale nematodes according to claim 2, which is the stock solution or a diluted solution up to 20 times the stock solution. 前記原液の10倍から20倍までの希釈液であることを特徴とする請求項2に記載のシストセンチュウの防除剤。   The cyst nematode control agent according to claim 2, which is a diluted solution of 10 to 20 times the stock solution.
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