JP5393488B2 - 複合材料の製造方法 - Google Patents
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Description
(a)疎水性の有機バルク材料を提供する工程と;
(b)まず、前記バルク材料の表面に、疎水性の部分を含む水溶性のペプチドを非共有的に結合させ;次に前記水溶性のペプチドを化学的又は酵素的に架橋させることにより、バルク材料上に親水性の表面コーティングを適用する工程とを含む、複合材料の製造方法に関する。
(b)得られたコポリマーの1つ以上の官能基をエチレン性不飽和基を有する有機化合物と反応させる工程とによって得られる、架橋性もしくは重合性のプレポリマーを架橋することによって得られるそれらである。この種のポリシロキサンヒドロゲルは、例えば、WO−A−01/71392に開示されている。
(a)式:
(式中、R1は、水素又はメチルであり、R2は、−COO−(CH2)2−OH、−CONH2、−CON(CH3)2、又は
である)の親水性のモノマー(場合により、1つ以上のさらなる親水性のモノマーと混合したもの)と;
式:
(式中、d1は、10〜500、好ましくは10〜300、より好ましくは20〜200及び特に25〜150の整数であり、(alk)は、直鎖又は分岐鎖のC2−C4アルキレン又はラジカル−(CH2)1−3−O−(CH2)1−3−であり、Xは、−O−又は−NH−であり、Qは、式:
のラジカルである)に相当するポリシロキサン架橋剤とを、官能基、特に2−メルカプトエタノール又は特に2−アミノエタンチオール(システアミン)を有する連鎖移動剤の存在下で共重合させる工程;及び
(b)得られたコポリマーを、エチレン性不飽和基を有する有機化合物、例えば2−イソシアナートエチルメタクリラート(IEM)、2−ビニル−アズラクトン、2−ビニル−4,4−ジメチル−アズラクトン、塩化アクリロイルもしくは塩化メタクリロイル、2−ヒドロキシエチルアクリラート(HEA)、2-ヒドロキシメタクリラート(HEMA)、グリシジルアクリラート又はグリシジルメタクリラート、特にIEM又は塩化アクリロイルと反応させる工程によって得られたプレポリマーを架橋することによって得られる。
A−C(O)−[NH−(ペプチド)−C(O)]−X1−R3 (3)
{式中、A−C(O)は、疎水性のラジカル、例えば、脂肪酸のラジカル、芳香族カルボン酸のラジカル及び芳香脂肪族カルボン酸のラジカルからなる群より選択されるラジカルであり、
[NH−(ペプチド)−C(O)]は、3つ以上のアミノ酸を含み、そのうちの少なくとも1つがリシン(Lys)又はグルタミン(Gln)であるアミノ酸配列を有するポリペプチドのラジカルであり、
X1−R3は、OHであり末端ペプチドカルボキシ基の一部であるか、あるいは、X1がO又はNR4(ここでR4は、水素又はC1−C2−アルキルである)であり、R3が、親水性の基である}のペプチドである。
Tyrx−(Ala)y−(Lys)z (4a)
(式中、xは、0又は1、好ましくは1の数であり;yは、0〜8、好ましくは1〜5、及び特に2〜4の数であり;zは、1〜20、好ましくは2〜10、及び特に2〜5の数であり;(x+y+z)の合計が、3〜20、好ましくは4〜12及び特に5〜8であり、IUPAC-IUB Biochemical Nomenclature Commissionの推奨する呼称に従い、Tyrは、チロシンを、Alaは、アラニンを、及びLysは、リシンを表す)を有する。
Tyr1−(Ala)3−(Lys)3 (4b)
を有するポリペプチドのラジカルであり、さらにより好適であるのは、SEQ ID NO 1:
Tyr−Ala−Lys−Ala−Lys−Lys−Ala (4c)
(ここでTyrは、Aに結合し、Alaは、R3に結合している)の合成ポリペプチドのラジカルである。
[NH−(ペプチド)−C(O)]は、タンパク質加水分解物、グルテンペプチド、ポリリシン、又はリシンと1つ以上の他のアミノ酸とのコポリマーからなる群より選択される、分子量400〜10000を有するポリペプチド由来のアミノ酸配列であり、
X1は、O又はNHであり、R3は、水素又は、スルホ、スルファト及び/もしくはカルボキシにより一置換又は二置換されているC1−C4−アルキルである}の水溶性ペプチドが結合する。
[NH−(ペプチド)−C(O)]は、カゼイン加水分解物;グルテンペプチド;ポリリシン;リシンと、アラニン、フェニルアラニン、セリン、チロシン及びトリプトファンからなる群より選択される1つ以上のアミノ酸との統計的コポリマー;及び式:
Tyr−Ala−Lys−Ala−Lys−Lys−Ala (4c)
(ここでTyrは、Aに結合し、Alaは、R3に結合している)のポリペプチドからなる群より選択される、分子量500〜1500を有するポリペプチド由来のアミノ酸配列であり;
X1は、O又はNHであり、R3は、水素又は、スルホもしくはカルボキシにより一置換されているC2−C3−アルキルである}の水溶性ペプチドが結合する。
H2N−(ペプチド)−C(O)OH (3a)
(式中、(ペプチド)は、上記の定義のとおりである)のペプチドを、式:
A−COOH (5)
(式中、Aは、前記の定義のとおりである)の化合物と、及び、該当する場合、式:
R3−X1H (6)
(式中、R3及びX1は、上記の定義のとおりである)の化合物と、任意の順序で反応させる。
(a)疎水性の有機バルク材料を提供する工程と、
(b)まず、
(b1)酵素トランスグルタミナーゼの基材として機能し、好ましくは上記式(3)(式に含まれる変数には、上記の意味及び優先順位が適用される)の化合物である、疎水性の部分を含むペプチドを前記バルク材料表面に結合させ;次に
(b2)タンパク質又はタンパク質加水分解物を、同様に酵素トランスグルタミナーゼの基材として機能するバルク材料表面に加え;その後
(b3)酵素、特にトランスグルタミナーゼで処理することにより、
バルク材料上に親水性の表面コーティングを適用する工程とを含む複合材料の製造方法を含む。
上記ペプチドを、Fmoc−固相ペプチド合成の標準的な方法を用いて、2−クロロトリチルアンカーを含むポリスチレン担体上で合成した。カップリングは、通常、o−(ベンゾトリアゾール−1−イル)−N,N,N’,N’−テトラメチル−ウロニウムヘキサフルオロフォスファート(TBTU)/1−ヒドロキシ−1H−ベンゾトリアゾール(HOBt)中で行い、及びカップリングの完了は、カイザー(Kaiser)試験により判明した。洗浄工程は、N,N−ジメチルホルムアミド(DMF)で行った。
(a)市販のAla−OH−2−クロロトリチル−ポリスチレン担体6.25gを、ペプチド合成反応器中のジクロロメタン50ml中に懸濁し、30分間保持した。ポリマー担体をDMFで洗浄し、その後いくらかのDMF中で再び懸濁した。
(b)Fmoc−Lys(Boc)−OHのカップリング:Fmoc−Lys(Boc)−OH 4.69g、TBTU 3.14g及びHOBt 1.35gをDMF20ml中に溶解した。N−エチル−ジイソプロピルアミン(DIPEA)3.4mlをこの溶液に加えた。得られた混合物を短時間撹拌し、次に工程(a)に従って得た懸濁液に加えた。得られた混合物を窒素下に約1時間保持した。その後、サンプルを採り、カイザー試験でチェックした。カイザー試験が陰性である場合、反応器から反応溶液を取り出し、ポリスチレン担体を、DMFで10回洗浄した。
(c)Fmoc保護基の切断:洗浄後、得られたポリマー担体に、DMF/ピペリジン混合物(80/20)30mlを加え、窒素をフラッシュしながら全体を1時間保持した。担体を次に再度、DMFで10回洗浄し、その後いくらかのDMF中に懸濁した。
(d)Fmoc−Lys(Boc)−OHのカップリング:第2のLys(Boc)を、工程(c)に従って調製したLys(Boc)−Ala−2−クロロトリチル−ポリスチレンに加えるために、工程(b)及び(c)を同じ方法で繰り返した。
(e)Fmoc−Ala−OHのカップリング:Fmoc−Ala−OH 3.11g、TBTU 3.14g及びHOBt 1.35gを、DMF20ml中に溶解した。DIPEA 3.4mlを得られた溶液に加えた。得られた混合物を短時間撹拌し、次に工程(d)に従って得た懸濁液に加えた。得られた混合物を窒素下に約1時間保持した。その後、サンプルを採り、カイザー試験でチェックした。カイザー試験が陰性の場合、反応溶液を反応器から取り出し、ポリスチレン担体をDMFで10回洗浄した。その後、Fmoc保護基の切断を工程(c)に記載のとおり行った。
(f)別のFmoc−Lys(Boc)−OH及びFmoc−Ala−OHのカップリング:両アミノ酸を、工程(e)に従って得たペプチドに上記工程(d)及び(e)に記載のものと同じ方法で、カップリングした。
(g)Fmoc−Tyr(tBu)−OH(tBu=t−ブチル)のカップリング:Fmoc−Tyr(tBu)−OH 4.6g、TBTU 3.14g及びHOBt 1.35gをDMF20mlに溶解し、その後、N−エチル−ジイソプロピルアミン(DIPEA)3.4mlをこの溶液に加えた。得られた混合物を短時間撹拌し、次に工程(a)に従って得た懸濁液に加えた。得られた混合物を窒素下に約1時間保持した。その後、サンプルを採り、カイザー試験でチェックした。カイザー試験が陰性の場合、反応溶液を反応器から取り出し、ポリスチレン担体を、DMFで洗浄した。
(h)Fmoc保護基の切断:洗浄後、得られたポリマー担体に、DMF/ピペリジン混合物(80/20)30mlを加え、窒素をフラッシュしながら混合物を1時間保持した。樹脂を次にイソプロパノール及びn−ヘキサンで3回洗浄し、その後高真空において乾燥させた。収量:Tyr(tBu)−Ala−Lys(Boc)−Ala−Lys(Boc)−Lys(Boc)−Alaを負荷したポリスチレン樹脂12g。
実施例1に従って得たTyr(tBu)−Ala−Lys(Boc)−Ala−Lys(Boc)−Lys(Boc)−Alaを負荷したポリスチレン担体2.4gを、ジクロロメタンと一緒にペプチド反応器中に懸濁し、30分間保持した。ポリスチレン担体を次にDMFで洗浄し、その後、いくらかのDMF中に再び懸濁した。別の広口ビンにおいて、パルミチン酸641mg、TBTU 786mg及びHOBt 338mgをDMFに溶解した。DIPEA850μlを加え完全に攪拌した後、この溶液を、懸濁したポリスチレン担体に加え、全体を約1時間窒素フラッシュ下に保持した。転換の完了をカイザー試験で確認した後、ポリマー担体をDMFで洗浄した。
実施例1に従って得たTyr(tBu)−Ala−Lys(Boc)−Ala−Lys(Boc)−Lys(Boc)−Alaを負荷したポリスチレン担体1gを、ジクロロメタンと一緒にペプチド反応器中に懸濁し、30分間保持した。ポリスチレン担体を次にDMFで洗浄し、その後、いくらかのDMF中に再び懸濁した。別の広口壜において、カプリン酸148mg、TBTU 271mg及びHOBt 116mgをDMFに溶解した。DIPEA 293μlを加え完全に攪拌した後、この溶液を、懸濁したポリスチレン担体に加え、全体を窒素で約2時間フラッシュした。転換の完了をカイザー試験で確認した後、反応混合物をろ過し、ポリマー担体をDMFで洗浄した。
実施例1に従って得たTyr(tBu)−Ala−Lys(Boc)−Ala−Lys(Boc)−Lys(Boc)−Alaを負荷したポリスチレン担体910mgを、ジクロロメタンと一緒にペプチド反応器中に懸濁し、30分間保持した。ポリスチレン担体を次にDMFで洗浄し、その後、いくらかのDMF中に再び懸濁した。別の広口壜において、フェニル酢酸105mg、TBTU 239mg及びHOBt 103mgをDMF中に溶解した。DIPEA 261μlを加え完全に攪拌した後、この溶液を、懸濁したポリスチレン担体に加え、全体を窒素で約1時間フラッシュした。転換の完了をカイザー試験で確認した後、ポリマー担体を洗浄した。
実施例1に従って得たTyr(tBu)−Ala−Lys(Boc)−Ala−Lys(Boc)−Lys(Boc)−Alaを負荷したポリスチレン担体910mgを、ジクロロメタンと一緒にペプチド反応器中に懸濁し、30分間保持した。ポリスチレン担体を次にDMFで洗浄し、その後、いくらかのDMF中に再び懸濁した。別の広口ビンにおいて、ナフチル酢酸141mg、TBTU 239mg及びHOBt 103mgをDMF中に溶解した。DIPEA 261μlを加え完全に攪拌した後、この溶液を、懸濁したポリスチレン担体に加え、全体を約1時間窒素でフラッシュした。転換の完了をカイザー試験で確認した後、ポリマー担体を洗浄した。
実施例2aに従って得たポリマー担体から、完全に保護されたペプチドを分離した。この目的のために、ジクロロメタン中にトリフルオロ酢酸1重量%を含む溶液20mlを、ポリマー担体材料に加え、全体を約2分間振とうさせた。トリフルオロ酢酸/ジクロロメタン溶液を用いた振とうプロセスを7回繰り返した。その後、ポリマー担体をジクロロメタン及びメタノールで3回洗浄した。合わせた切断及び洗浄用溶液をメタノール中のピリジン10重量%の溶液に加え、全体を次に真空中で原体積の約5%に相当する容量まで濃縮した。得られた溶液に、純水約80mlを加え、得られた白色の沈殿物をろ過した。冷水、冷NaHCO3溶液、再び冷水、冷KHSO4溶液0.05M、最後に再度水での洗浄を繰り返した後、得られた沈殿物を真空中P2O5で一晩乾燥させた。粗保護ペプチド収量1.56g。
実施例2b、2c及び2dに従って調製したペプチドをポリマー担体から分離し、一方で同時に側鎖の保護基を除去した。この目的のために、水2.5重量%、トリ−イソプロピルシラン2.5重量%及びトリフルオロ酢酸95重量%を含む溶液各20mlを、それぞれの保護ペプチドを含むポリマー担体に加え、全混合物を次に約1時間保持した。ポリマー担体を次にろ別し、その後、トリフルオロ酢酸で2回洗浄した。ろ液と洗浄溶液を組み合わせた後、溶媒を真空中で除去した。得られた油状残留物の結晶化をジエチルエーテル中での処理により開始した。収量(粗未保護ペプチド、それぞれベージュ色の結晶):
カプリノイル−Tyr−Ala−Lys−Ala−Lys−Lys−Ala−OH:432mg;
フェナク(phenac)−Tyr−Ala−Lys−Ala−Lys−Lys−Ala−OH:370mg;
ナフタク(naphtac)−Tyr−Ala−Lys−Ala−Lys−Lys−Ala−OH:395mg。
実施例3aに従って得たペプチド780mgを、DMF 40mlに溶解した。TBTU 160mg、HOBt 68mg、N−エチル−ジイソプロピルアミン340μl及びタウリン125mgをこの溶液に加え、反応混合物を窒素雰囲気で一晩撹拌した;それにより、最初の懸濁液は、透明な溶液に変化した。最後に、溶媒を真空中で除去し、固体残留物を結晶化し、さらにジエチルエーテルで洗浄した(収量:明褐色の固体1.4g)。
収量及び特性解析:
(i)カプリノイル−Tyr−Ala−Lys−Ala−Lys−Lys−Ala−OH:321mg、ESI-MS: 955.6 [M+Na]+
(ii)フェナク−Tyr−Ala−Lys−Ala−Lys−Lys−Ala−OH:276mg、ESI-MS: 919.5 [M+Na]+
(iii)ナフタク−Tyr−Ala−Lys−Ala−Lys−Lys−Ala−OH:260mg、ESI-MS: 969.5 [M+Na]+
(iv)パルミトイル−Tyr−Ala−Lys−Ala−Lys−Lys−Ala−タウリン:406mg、ESI-MS: 1146.7 [M+Na]+
実施例6:酵素的に架橋されたペプチドをその表面に結合させたソフトシリコンヒドロゲルコンタクトレンズの調製
疎水性のシリコンヒドロゲルコンタクトレンズ(lotrafilcon A、混合ポリシロキサン/ペルフルオロアルキルポリエーテル架橋剤、TRIS及びDMAの共重合生成物)を、まず、実施例4(パルミトイル−Tyr−Ala−Lys−Ala−Lys−Lys−Ala−タウリン)の精製ペプチド10mmolを含む水溶液中でインキュベートし、次にカゼイン加水分解物(Vitalarmor)1重量%を含む水溶液に移した。細菌トランスグルタミナーゼ2U/mlを40℃で加えて酵素的架橋を開始した。コーティングしたレンズを次にPBS緩衝液で洗浄し、121℃で20分間オートクレーブした。
実施例4のペプチドの結合は、ペプチド鎖のチロシン部分のテトラニトロメタンでのニトロ化反応により、黄色の着色が生じることにより観察することができた。カゼイン加水分解物の結合及び架橋は、レンズ表面の親水性及び湿潤性試験によって調べた。
(i)シリコンヒドロゲルコンタクトレンズの調製
(ia)PDMS架橋剤Iの調製
4Lビーカーにおいて、Na2CO3 24.13g、NaCl 80g及び脱イオン水1.52kgを混合して溶解した。別の4Lビーカーにおいて、ビス−3−アミノプロピル−ポリジメチルシロキサン(Shin-Etsu, MW 約11500)700gを、ヘキサン1000g中に溶解した。4L反応器に、タービン攪拌器付オーバーヘッド撹拌器及びマイクロフローコントローラー付250ml添加漏斗を装備した。2つの溶液を次に反応器に仕込み、激しく攪拌しながら15分間混合し、エマルションを作成した。塩化アクリロイル14.5gをヘキサン100ml中に溶解し、添加漏斗に仕込んだ。塩化アクリロイル溶液を、激しい攪拌下で1時間かけてエマルションに滴下した。添加完了後、エマルションを30分間撹拌し、次に攪拌を停止し、一晩、相を分離させた。水相をデカントし、有機相を、水に溶解した2.5%NaClの混合物2.0kgで2回洗浄した。有機相を次に硫酸マグネシウムで乾燥させ、1.0μmの除外でろ過し、ロータリエバポレーターで濃縮した。得られた油状物を、高真空乾燥で一定重量になるまでさらに精製した。得られた生成物を滴定により分析すると、C=C二重結合が0.175mEq/gであった。
4Lビーカーにおいて、Na2CO3 61.73g、NaCl 80g及び脱イオン水1.52kgを混合して溶解した。別の4Lビーカーにおいて、ビス−3−アミノプロピル−ポリジメチルシロキサン(Shin-Etsu, MW 約4500)700gを、ヘキサン1000g中に溶解した。4L反応器に、タービン攪拌器付オーバーヘッド撹拌器及びマイクロフローコントローラー付250ml添加漏斗を装備した。2つの溶液を次に反応器に仕込み、激しく攪拌しながら15分間混合し、エマルションを作成した。塩化アクリロイル36.6gをヘキサン100ml中に溶解し、添加漏斗に仕込んだ。塩化アクリロイル溶液を激しい攪拌下で1時間かけてエマルションに滴下した。添加完了後、エマルションを30分間撹拌し、次に攪拌を停止し、一晩、相を分離させた。水相をデカントし、有機相を、水に溶解した2.5%NaClの混合物2.0kgで2回洗浄した。有機相を次に硫酸マグネシウムで乾燥させ、1.0μmの除外でろ過し、ロータリエバポレーターで濃縮した。得られた油状物を、高真空乾燥で一定重量になるまでさらに精製した。得られた生成物を滴定により分析すると、C=C二重結合が0.435mEq/gであった。
2Lジャケット反応器に、加熱/冷却ループ、還流冷却器、N2インレット/真空アダプター、フィードチューブアダプター及びオーバーヘッド機械式撹拌器を装備した。(ia)によるPDMS架橋剤I 90.00g及び(ib)によるPDMS架橋剤II 30.00gを1−プロパノール480g中に溶解することにより溶液を生成した。この溶液を反応器に仕込み、8℃に冷却した。溶液を排気により15mBar未満に脱気し、真空を15分間保持し、次に乾燥窒素で再加圧した。この脱気手順を全部で3回繰り返した。反応器を乾燥窒素のブランケット下に保持した。
別のフラスコにおいて、モノマー溶液を、システアミン塩酸塩1.50g、AIBN 0.3g、DMA 55.275g、HEA 18.43g及び1−プロパノール364.5gを混合することにより調製した。この溶液をWhatman 540ろ紙でろ過し、次に、流速3.0ml/分で脱気装置及びHPLCポンプを通して反応器に加えた。反応温度を次に、加熱ランプで約1時間で68℃に上げた。
第2のフラスコにおいて、システアミン塩酸塩4.5g及び1−プロパノール395.5gを混合し、次にWhatman 540ろ紙でろ過することにより供給溶液を調製した。反応器の温度が68℃に達した時、この溶液を、脱気装置/HPLCポンプを通し3時間かけて徐々に反応器に投入した。次に、反応を68℃でさらに3時間継続させ、その時点で、加熱を停止し、反応器を室温まで冷ました。
反応混合物をフラスコに移し、ロータリエバポレーター上で、真空下40℃で、サンプル1000gが残るまで溶媒を除去した。次に、溶液を高速で攪拌しながら、徐々に脱イオン水2000gと混合した。さらに溶媒をサンプル2000gが残るまで除去した。この除去プロセスの間に、溶液は、徐々にエマルションになった。得られた材料を、浸透電気伝導度が2.5μS/cm未満になるまで、10kD分子量除去膜を用いた限外ろ過により精製した。このエマルションを、次にオーバーヘッド撹拌器、冷凍ループ、温度計、及びMetrohm Model 718 STAT TitrinoのpHメーター及び分配チップを装備した2−L反応器に仕込んだ。反応混合物を、次に1℃に冷却した。NaHCO3 7.99gをエマルションに仕込み、撹拌して溶解した。断続的に15%水酸化ナトリウム溶液を加えることにより、pH9.5を維持するようにTitrinoを設定した。塩化アクリロイル11.59mlを次にシリンジポンプを用いて1時間かけて加えた。エマルションをさらに1時間撹拌し、次に塩酸の15%溶液を加えることにより、反応混合物を中和するようにTitrinoを設定した。生成物を再び、浸透電気伝導度が2.5μS/cm未満になるまで、10kD分子量除去膜を用いた限外ろ過により精製した。最終的なマクロモノマーを凍結乾燥により単離した。
工程(ic)に従って得たポリマー18.83gを、1−プロパノール約200mlに溶解し、溶液総重量約70gまで濃縮し、0.45μmの除外でろ過した。固形分26.53%の溶液67.94gを回収した。2−ヒドロキシ−4’−ヒドロキシエチル−2−メチルプロピオフェノン(IRGACURE(登録商標)-2959, Ciba Specialty Chemicals)の1%溶液4.503gを加え、次に溶液を最終重量25.74g(固形分65.0%)まで濃縮した。
配合物200mgを、ポリ(プロピレン)コンタクトレンズ金型に分配し、金型を閉じた。次に金型に2.18mW/cm2の強度を有する紫外線源を15秒間照射した。金型を次に開き、レンズが接着した型半を、イソプロパノール80%、水20%(v/v)の混合物に一晩浸漬した。レンズをこの溶媒混合物で金型からすすいではずし、次に2時間ずつ2回新しいイソプロパノール/水の混合物のアリコートですすいだ。レンズの水を切り、次に脱イオン水に浸漬することにより水和した。それらを次に純水(3.0ml/レンズ)中で2時間3回すすいだ。
上記(id)に従って得た疎水性のシリコンヒドロゲルコンタクトレンズを、イソプロパノール中75℃で1分間インキュベートし、次に、実施例4の精製ペプチド(パルミトイル−Tyr−Ala−Lys−Ala−Lys−Lys−Ala−タウリン)10mmolを含むリン酸緩衝生理食塩溶液に移し、80℃で約1分間処理した。コンタクトレンズを次に緩衝生理食塩溶液に移し、2重量%ホルムアルデヒド溶液100μlを加えた。コンタクトレンズをその後121℃で30分間オートクレーブした。実施例4のペプチドの結合が、ペプチド鎖のチロシン部分のテトラニトロメタンでのニトロ化反応により、黄色の着色が生じることにより観察できた。目視による湿潤性及び親水性試験、並びに接触角の測定、及びスーダンブラック染色試験により、親水性の表面コーティングを調べた。
測定は、純水(Fluka製、20℃での表面張力72.5mN/M)を用いたKruss (Kruss GmbH, Hamburg, Germany)のDSA 10 液滴形状分析系での液滴法よって行った。測定目的のため、コンタクトレンズを保存溶液からピンセットで取り出し、過剰の保存溶液を穏やかに振とうして除去した。コンタクトレンズを、コンタクトレンズ型の雄部に置き、乾いた清浄な布で拭き取った。水滴(約1μl)を、次にレンズの頂点に添加し、この水滴(WCA(t)、サークルフィッティングモード)の経時的な接触角の変化を観察した;WCAは、グラフWCA(t)をt=0で外挿することによって計算した。
スーダンブラックB(Aldrich)0.5gを、ビタミンE油状物100g中に、撹拌下で一晩溶解することにより、0.5%(w/w)スーダンブラックの染料溶液を調製した。測定目的のため、表面処理したレンズを、まず、ガラスバイアル中のリン酸緩衝生理食塩溶液(pH7.2)2ml中でオートクレーブ(121℃で30分)した。コンタクトレンズを、次に溶液からピンセットで取り出し、表面の水の大部分が除去されるように、穏やかに振とうした。レンズを次に上記で調製したスーダンブラックの染料溶液に5分間入れた。その後、レンズを染料浴から取り出し、過剰の染料溶液を温水ですすぎ落とした。レンズを風乾させ、着色の度合いに従って評価した。
2 = 着色がないか、ほとんどない
1 = わずかな着色
0 = かなりの着色
Claims (12)
- (a)疎水性の有機バルク材料を提供する工程と;
(b)まず、疎水性の有機バルク材料の表面に、疎水性の部分を含む水溶性のペプチドを非共有的に結合させ;次に前記水溶性のペプチドを化学的又は酵素的に架橋させることにより、バルク材料上に親水性の表面コーティングを適用する工程とを含み、
バルク材料に非共有結合的に結合する疎水性の部分を含むペプチドが、式:
A−C(O)−[NH−(ペプチド)−C(O)]−X 1 −R 3 (3)
{式中、A−C(O)は、脂肪酸のラジカル、芳香族カルボン酸のラジカル及び芳香脂肪族カルボン酸のラジカルからなる群より選択されるラジカルであり、[NH−(ペプチド)−C(O)]は、3つ以上のアミノ酸を含み、そのうちの少なくとも1つがリシン(Lys)又はグルタミン(Gln)であるアミノ酸配列を有するポリペプチドのラジカルであり、
X 1 −R 3 は、OHであり末端ペプチドカルボキシ基の一部であるか、あるいは、X 1 がO又はNR 4 (ここでR 4 は、水素又は炭素原子数1若しくは2のアルキルである)であり、R 3 が、親水性の基である}のペプチドである、複合材料の製造方法。 - 疎水性の有機バルク材料が、ポリシロキサン、ペルフルオロアルキルポリエーテル、フッ素化ポリ(メタ)アクリラート、ポリアルキル(メタ)アクリラート、フッ素化ポリオレフィン又はそれらの混合物である、請求項1記載の方法。
- 疎水性の有機バルク材料が、ポリシロキサンヒドロゲル、ペルフルオロアルキルポリエーテルヒドロゲル又はそれらの混合物である、請求項1又は2記載の方法。
- ポリペプチドラジカル[NH−(ペプチド)−C(O)]の基礎をなすポリペプチドが、カゼイン加水分解物;グルテンペプチド;ポリリシン;又はリシンと、アラニン、フェニルアラニン、セリン、チロシン及びトリプトファンからなる群より選択される1つ以上の他のアミノ酸とのコポリマーである、請求項1記載の方法。
- ポリペプチドラジカル[NH−(ペプチド)−C(O)]の基礎をなすポリペプチドが、ポリリシン又は、リシンと、アラニン、フェニルアラニン、セリン、チロシン及びトリプトファンからなる群より選択されるアミノ酸とのコポリマーである、請求項1又は4のいずれか1項記載の方法。
- ポリペプチドラジカル[NH−(ペプチド)−C(O)]の基礎をなすポリペプチドが、SEQ ID NO 1:
Tyr−Ala−Lys−Ala−Lys−Lys−Ala (4c)
(ここで、式(4c)中のTyrは、C(O)を介して式(3)中のAに結合し、式(4c)中のC末端のAlaは、X 1 を介して式(3)中のR3に結合している)のコポリマーである、請求項1又は4のいずれか1項記載の方法。 - ポリペプチドの分子量範囲Mrが、400〜10000である、請求項1〜5のいずれか1項記載の方法。
- 親水性の表面コーティング工程(b)が、有機バルク材料に結合しているペプチドの架橋を、ホルムアルデヒド又はグルタルアルデヒドから選択される架橋剤を用いて、化学的に開始することにより終了される、請求項1〜7のいずれか1項記載の方法。
- 親水性の表面コーティング工程(b)が、有機バルク材料に結合しているペプチドを酵素的に架橋することにより終了される、請求項1〜7のいずれか1項記載の方法。
- (a)疎水性の有機バルク材料を提供する工程、及び
(b)まず、
(b1)酵素トランスグルタミナーゼの基材として機能し、疎水性の部分を含むペプチドを前記バルク材料表面に結合させ;次に
(b2)タンパク質又はタンパク質加水分解物を、同様に酵素トランスグルタミナーゼの基材として機能するバルク材料表面に加え;その後
(b3)トランスグルタミナーゼで処理することにより、
バルク材料に親水性の表面コーティングを適用する工程とを含む、請求項9記載の方法。 - 工程(b2)で添加されるタンパク質又はタンパク質加水分解物が、カゼイン加水分解物又はグルテンペプチドから選択される、請求項10記載の方法。
- 複合材料がコンタクトレンズである、請求項1〜11のいずれか1項記載の方法。
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