JP5385836B2 - リパーゼ阻害剤 - Google Patents

Description

本発明は、飲食物の品質保持や皮膚炎予防、更には生活習慣病予防に効果があるリパーゼ阻害剤に関する。

リパーゼは脂質を分解する酵素である。微生物由来のリパーゼは、飲食物の劣化や異臭を発生させる原因となり、また皮膚常在菌産生リパーゼは、ニキビや皮膚炎などの皮膚疾患や体臭の原因となり得るものである。
また、高脂肪食品を摂取した場合、膵リパーゼの働きで脂質が分解され、それが体内に吸収された後、再合成されエネルギー源となる。その際、血中のトリグリセリド（ＴＧ）量が増加し、高脂血症や脂肪肝を誘発したり、脂質代謝異常になったりする。また、脂質が分解され体内に吸収されたにも関わらず、エネルギーとして消費されない場合、余剰ＴＧが脂肪細胞に蓄積されて肥満になる。

そこで、飲食物の品質保持や異臭発生抑制、ニキビや皮膚炎の予防、生活習慣病の予防を図るべく、現在までに様々なリパーゼ阻害剤が開発されてきた。
例えば、ヒノキチオールを有効成分として含むリパーゼ阻害剤（特許文献１）、キダチキンバイ抽出物、タコノキ属植物抽出物、マウンテンブルーベリーなどの果実やニガリを含むリパーゼ阻害剤（特許文献２）、クローブのエタノール抽出物を含むリパーゼ阻害剤（特許文献３）、サボンソウ又はウコギを含むリパーゼ阻害剤（特許文献４）などが知られている。

しかしながら、現状において、リパーゼ阻害剤の安全性や阻害効果、安定確保など全ての面において満足を得られるリパーゼ阻害剤は少ないのが実情である。

特許第３８３２８７１号公報 特開２００７−１４５７５３号公報 特許第３５５９４８２号公報 特開２００６−３４８０５４号公報

上記状況に鑑み、本発明は、天然物に由来し人体に対する安全性が高く、かつ、リパーゼ阻害効果に優れているリパーゼ阻害剤を提供することを目的とする。

本発明者らは、鋭意研究を重ねた結果、キナ酸ジエステル誘導体がリパーゼ阻害活性能を有するという知見を得て本発明を完成した。
すなわち、本発明は、キナ酸ジエステル誘導体を有効成分としてリパーゼ阻害剤を提供できるというものである。

ここで、キナ酸ジエステル誘導体とは、下記化学式（Ｉ）で表される物質であり、式中、Ｒ１〜３のいずれか１つが水素原子、他はそれぞれ独立にシナモイル基、クマロイル基、カフェオイル基またはフェルロイル基で表されるものである。上記キナ酸ジエステル誘導体は、ジカフェオイルキナ酸、ジクマロイルキナ酸、ジフェルロイルキナ酸、クマロイルカフェオイルキナ酸、クマロイルフェルロイルキナ酸、カフェオイルフェルロイルキナ酸から選択されることが好ましい。
キナ酸ジエステル誘導体は、様々な植物に含まれている。

また、本発明のリパーゼ阻害剤の有効成分は、ジカフェオイルキナ酸（ｄｉＣＱＡ）が好ましく、ｄｉＣＱＡの中でも更に好ましくは、３，４−ジカフェオイルキナ酸（３，４−ｄｉＣＱＡ）である。
リパーゼ阻害効果を有することが既知である５−カフェオイルキナ酸（５−ＣＱＡ）のリパーゼ阻害効果と比べて、ｄｉＣＱＡのリパーゼ阻害効果は２倍以上であり、３，４−ｄｉＣＱＡのリパーゼ阻害効果は５倍以上である。

上記の本発明のリパーゼ阻害剤は、天然物由来であり人体に対する安全性が高く、生活習慣予防剤、食品添加物、化粧品、医薬組成品として好適に利用できる。

本発明のリパーゼ阻害剤は、上述の如く、天然物に由来するものであるため人体に対する安全性が高く、かつ、リパーゼ阻害効果に優れている。そのため、飲食品として日常的に摂取することにより、脂質の体内吸収を抑制して、肥満や高脂血症を予防することができる。また、微生物リパーゼに起因する飲食品、化粧品中の劣化を抑制することができる。さらに、皮膚常在菌産生リパーゼによる体臭、皮膚疾患を抑制することができる。

リパーゼ阻害率を示すグラフ

以下、本発明の実施形態について、図面を参照しながら詳細に説明していく。なお、本発明の範囲は、以下の実施例や図示例に限定されるものではなく、幾多の変更が可能である。

上述した如く、キナ酸ジエステル誘導体は、様々な植物に含まれている。特に、アカネ科植物に属するコーヒー生豆は、キナ酸ジエステル誘導体の含有量が５〜１０％程度、多いものでは含有量が１０％を越えるため、キナ酸ジエステル誘導体を得るための原材料として好適である。
そのため、以下の実施例では、コーヒー生豆を用いてキナ酸ジエステル誘導体を調製している。

(被験物質の精製)
キナ酸ジエステル誘導体は、コーヒー生豆を用いて調製した。すなわちコーヒー生豆を粉砕後、超臨界抽出（ＣＯ_２，４５ＭＰａ，７０℃）、アルコール抽出（６０％エタノール，５０℃，１時間）し、抽出液を減圧濃縮した。この濃縮液をスプレードライ（吹付け時温度１８０℃）により乾固したコーヒー生豆抽出物を調製した。

次に、同抽出物を用いてＴＯＹＯＰＥＡＲＬ ＨＷ‐４０Ｆ（東ソー社製）カラムクロマトグラフィーを行った。カラム内径５．５ｃｍ、高さ２５ｃｍ、流速は１ｍＬ／ｍｉｎで溶出した。
はじめに０．０５％酢酸（ｖ／ｖ）を用いて溶出し、モノカフェオイルキナ酸及びモノフェルロイルキナ酸画分を得た。続いて、ジカフェオイルキナ酸を、メタノールの５０〜１００％（ｖ／ｖ）グラジエントにより溶出し、ジカフェオイルキナ酸画分を得た。

得られたモノカフェオイルキナ酸及びモノフェルロイルキナ酸画分、ジカフェオイルキナ酸画分は、分取ＨＰＬＣ ＰＬＣ‐５６１（ジーエルサイエンス社製）により、目的のピークを分取し、５‐カフェオイルキナ酸（５‐ＣＱＡ）、３，４‐ジカフェオイルキナ酸（３，４‐ｄｉＣＱＡ）、３，５‐ジカフェオイルキナ酸（３，５‐ｄｉＣＱＡ）、４，５‐ジカフェオイルキナ酸（４，５‐ｄｉＣＱＡ）を精製した。

以下に分離条件を記す。
・カラム：Ｉｎｅｒｔｓｉｌ
ＯＤＳ‐３ ２５０Ｘ１９ｍｍ ｉ．ｄ．(ジーエルサイエンス社製)
・カラム温度：４０℃
・移動相：溶媒Ａ(０．２％酢酸中２０％メタノール)及び溶媒Ｂ(メタノール)
・検出：ＵＶ ３２６ｎｍ
・流速：１５ｍＬ／ｍｉｎ

カフェオイルフェルロイルキナ酸（ＣＦＱＡ）は、上記ジカフェオイルキナ酸画分から、さらにＴＯＹＯＰＥＡＲＬ ＨＷ‐４０Ｆ カラムクロマトグラフィーを用いて５０％エタノール（ｖ／ｖ）にて目的画分を溶出し、分取ＨＰＬＣにより上記と同様の分離条件で単離、精製した。

（リパーゼ阻害評価方法）
トリオレイン（ナカライテスク社製）８０ｍｇ、レシチン（ナカライテスク社製）１０ｍｇ、タウロコール酸ナトリウム（ナカライテスク社製）５ｍｇに９ｍＬの０．１Ｍ
ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）を加え、超音波処理をして基質溶液とした。この基質溶液４０μLに多段階に濃度を振った被験物質４０μＬを加え、３７℃で３０分インキュベートした。次いで、１５，０００単位／ｍＬのブタ膵臓由来リパーゼ（ＥＰＣ社製）２０μLを加えて、さらに３７℃で３０分インキュベートした。この際生じた遊離脂肪酸をＡＣＳ・ＡＣＯＤ法により測定した。

すなわち、アシル−ＣｏＡシンターゼにより遊離脂肪酸から生成したアシル−ＣｏＡをアシル−ＣｏＡオキシダーゼで酸化し、同時に生成される過酸化水素とペルオキシダーゼにより縮合したＭＥＨＡと４−アミノアンチピリンの発色を、マイクロプレートリーダー（コロナ社製）を用いて５５０ｎｍで測定し、その値からオレイン酸換算での遊離脂肪酸量を算出し、さらに下記式（１）からリパーゼ阻害率（％）を算出した。算出結果を図１に示す。

さらに、各被験物質についてそれぞれＩＣ_５０を求めた。ここで、統計処理はＤｕｎｎｅｔｔのＣ検定を用いて行い、ｐ＜０．０５にて各群間の統計学的有意差を、異符号を用いて表した。結果を下記表１に示す。

上記表１に示す結果によれば、５‐カフェオイルキナ酸（５‐ＣＱＡ）のリパーゼ阻害活性（ＩＣ_５０）が３．３９ｍＭであったのに対し、キナ酸ジエステル誘導体（３，４‐ｄｉＣＱＡ、３，５‐ｄｉＣＱＡ、４，５‐ｄｉＣＱＡ及びＣＦＱＡ）のＩＣ_５０は０．５４〜１．５７ｍＭであり、５‐ＣＱＡの約２．２〜６．３倍のリパーゼ阻害効果が認められた。
キナ酸ジエステル誘導体間では、ジカフェオイルキナ酸に強いリパーゼ阻害効果が認められ、さらには、その中でも３，４‐ｄｉＣＱＡに顕著に強いリパーゼ阻害効果が認められたのである。

本発明のリパーゼ阻害剤は、生活習慣予防剤、食品添加物、化粧品、医薬組成品として有用である。

Claims (3)

1. ３，４−ジカフェオイルキナ酸を有効成分とするリパーゼ阻害剤（但し、糖尿病、肥満症および高脂血症の予防剤並びに治療剤を除く）。
   
   
2. 皮膚常在菌産生リパーゼによる体臭または皮膚疾患の抑制剤として用いられる請求項１のリパーゼ阻害剤。
3. 前記３，４−ジカフェオイルキナ酸のリパーゼ阻害効果が、５−カフェオイルキナ酸のリパーゼ阻害効果の５倍以上であることを特徴とする請求項１又は２のリパーゼ阻害剤。