JP5352882B2 - クロストリジウム属微生物を利用したセルロース分解酵素の生産方法及びクロストリジウム属微生物の培養増殖方法。 - Google Patents
クロストリジウム属微生物を利用したセルロース分解酵素の生産方法及びクロストリジウム属微生物の培養増殖方法。 Download PDFInfo
- Publication number
- JP5352882B2 JP5352882B2 JP2009277079A JP2009277079A JP5352882B2 JP 5352882 B2 JP5352882 B2 JP 5352882B2 JP 2009277079 A JP2009277079 A JP 2009277079A JP 2009277079 A JP2009277079 A JP 2009277079A JP 5352882 B2 JP5352882 B2 JP 5352882B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- cellulose
- clostridium
- culture
- culture method
- medium
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
- C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
- C12N9/2405—Glucanases
- C12N9/2434—Glucanases acting on beta-1,4-glucosidic bonds
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/22—Processes using, or culture media containing, cellulose or hydrolysates thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
- C12P21/02—Preparation of peptides or proteins having a known sequence of two or more amino acids, e.g. glutathione
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/02—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a hydroxy group
- C12P7/04—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a hydroxy group acyclic
- C12P7/06—Ethanol, i.e. non-beverage
- C12P7/08—Ethanol, i.e. non-beverage produced as by-product or from waste or cellulosic material substrate
- C12P7/10—Ethanol, i.e. non-beverage produced as by-product or from waste or cellulosic material substrate substrate containing cellulosic material
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/145—Clostridium
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02E—REDUCTION OF GREENHOUSE GAS [GHG] EMISSIONS, RELATED TO ENERGY GENERATION, TRANSMISSION OR DISTRIBUTION
- Y02E50/00—Technologies for the production of fuel of non-fossil origin
- Y02E50/10—Biofuels, e.g. bio-diesel
Description
化学的糖化処理は、アルカリ、酸を利用するものがあるが、古くより酸糖化がよく用いられている。酸糖化には濃硫酸糖化法と希硫酸二段糖化法とがあるが、硫酸を用いるため、廃棄物処理や環境負荷の低減を必要とし、低コスト化及びエネルギー変換効率に限界があるといわれている。
本発明の実施形態1は、セルロース資化能を有し、セルロース分解酵素を分泌するクロストリジウム属微生物を培養してセルロース分解酵素を生産させる方法であって、クロストリジウム属微生物が資化可能な炭素源を消化した後、炭素源を添加する操作を繰り返し、培地中にセルロース分解酵素を蓄積させるセルロース分解酵素の生産方法である。
桿菌(約1.6〜3.0μm)、胞子形成能あり
好熱性菌
生育温度:50℃〜65℃、至適生育温度60℃
生育pH:6.0〜9.0、至適pH7.0
偏性嫌気性菌 ガスN2及びCO2に生育(CO2の場合、培地に炭酸ナトリウムを0.4%程度加える)
培地上の特徴:酸素が入っている培地では生育不可。生育pH7.0で良好。セルロース、セロビオースに生育する。セルロースを含む培地ではセルロースがクリーム色になり分解する。
糖の資化性:セルロース、マンナン、キトサン、セロビオース、フラクトース及びソルビトール資化能を有する。
コロニー形態:セルロースを含む寒天培地ではハローを形成、コロニーは白く小さい。培養日数が経過するとコロニーの周囲に白い粘性を帯びた輪を形成することもある。胞子を形成。−80℃にて保存可能である。
16srRNA(16リボソームRNAコード配列):クロストリジウム・サーモセラムATCC27405株との間で99%の相同性を示す。
桿菌(約1.6〜3.0μm)、胞子形成能あり
好熱性菌
生育温度:55℃〜65℃、至適生育温度60℃
生育pH:6.0〜9.0、至適pH7.0
偏性嫌気性菌 ガスN2及びCO2に生育(CO2の場合、培地に炭酸ナトリウムを0.4%程度加える)
培地上の特徴:酸素が入っている培地では生育不可。生育pH7.0で良好。セルロース、セロビオースに生育する。セルロース含有培地ではセルロースがクリーム色になり分解する。
糖の資化性:セルロース、マンナン、キトサン、セロビオース、フラクトース及びソルビトール資化能を有する。
コロニー形態:セルロース含有寒天培地ではハローを形成、コロニーは白く小さい。培養日数が経過するとコロニーの周囲に白い粘性を帯びた輪を形成することもある。胞子を形成。−80℃にて保存可能である。
16srRNA(16リボソームRNAコード配列):クロストリジウム・サーモセラムATCC27405株との間で99%の相同性を示す。
本発明の実施形態2は、セルロース資化能を有し、セルロース分解酵素を分泌するクロストリジウム属微生物を培養してセルロース分解酵素を生産させる方法であって、上記クロストリジウム属微生物が資化可能な炭素源を消化した後、炭素源を添加する操作を繰り返すセルロース分解酵素の生産方法である。
本発明の実施形態3は、クロストリジウム属微生物を培養して増殖させる方法であって、クロストリジウム属微生物が資化可能な炭素源を消化した後、炭素源を添加する操作を繰り返すクロストリジウム属微生物の培養増殖方法である。
アビセラーゼ活性は、60℃で1時間、1%微結晶性セルロース粉末(シグマセルタイプ20 シグマ・アルドリッチ社)および5mM塩化カルシウムを含む50mM酢酸ナトリウム緩衝液(pH6.0)において酵素溶液を反応させ、遊離してきた還元糖量をソモジ・ネルソン法(澱粉・関連糖質酵素実験法 1998 生物化学実験法19:41−42学会出版センター)により測定を行なった。1分間に1μモルのグルコースを遊離する酵素の量を1ユニットと定義とした。
エンドグルカナーゼ活性は、基質としてセルロース粉末の代わりに1%カルボキシメチルセルロース(シグマ・アルドリッチ社)を用い、アビセラーゼ活性と同様に遊離してくる還元糖量をソモジ・ネルソン法により測定を行なった。またエンドグルカナーゼ活性のユニットは1分間に1μモルのグルコースを遊離する酵素の量を1ユニットと定義とした。
ヘミセルラーゼ活性としてキシラナーゼ活性を測定した。基質としてセルロース粉末の代わりに1%キシラン(オートスペルトキシラン;シグマ・アルドリッチ社)、遊離してくる還元糖量をソモジ・ネルソン法により測定を行なった。キシラナーゼユニットは、上記同様に1分間に1μモルのグルコースを遊離する酵素の量を1ユニットと定義とした。
図3の(A)は、アビセラーゼ活性、図3の(B)はエンドグルカナーゼ活性、図3の(C)はキシラナーゼ活性を示す。白抜き三角形(△)はクロストリジウム・サーモセラムATCC27405、白抜き丸印(○)はJK−S14の培養液1ml中の酵素活性を示す。図中の矢印はセミバッチ培養法におけるセルロース消費を確認後、セルロース添加を行った培養日を示している。
加熱した溶液を14,000回転、4℃で5分間、遠心分離し、不溶性セルロースとセルロソーム画分とに分離し、上清のセルロソーム画分を定法通り、変性ポリアクリルアミド電気泳動(SDS−PAGE)に供した。SDS−PAGEは4%〜20%グラジエント市販ポリアクリルアミドゲル(アトー社)を用いた。
図中、Mはタンパク質マーカーを示し、左数字はタンパク質マーカーの分子量をキロダルトンで示している。レーン1はバッチ培養法2日目の培養液1mlから調製したセルロソーム画分、レーン2はバッチ培養法4日目の培養液1mlから調製したセルロソーム画分、レーン3はバッチ培養法6日目の培養液1mlから調製したセルロソーム画分、レーン4はバッチ培養法9日目の培養液1mlから調製したセルロソーム画分である。またレーン5はセミバッチ培養法2日目の培養液1mlから調製したセルロソーム画分、レーン6はセミバッチ培養法4日目の培養液1mlから調製したセルロソーム画分、レーン7はセミバッチ培養法6日目の培養液1mlから調製したセルロソーム画分、レーン8はセミバッチ培養法9日目の培養液1mlから調製したセルロソーム画分である。
SDS−PAGE像の矢印はクロストリジウム・サーモセラムのセルロソーム構成タンパク質として知られている骨格タンパク質CipAと主要な酵素サブユニットCel48Sのタンパク質バンドの予想位置を示している。
酵素サブユニットCel48Sは、主要な酵素サブユニットであり、比較的多く発現していることが知られている。従ってクロストリジウム・サーモセラムJK−S14においてもこれらのタンパク質は分子量や発現量の比較により明瞭に確認することができる。
バッチ培養法のセルロソーム画分サンプルでは、4日目以降、CipAやCel48Sと同定されるタンパク質の顕著な増加は認められない。一方、セミバッチ培養法のセルロソーム画分では、セルロース基質添加により2日目から4日目にかけて、それぞれのタンパク質バンドが緩やかに増加してゆくことが認められた。特に、セミバッチ培養法4日目以降、上記セルロソーム構成タンパク質の発現量が急激に増加していることが認められた。これらの結果は、先の培養液中の総タンパク量の増加や酵素活性上昇に一致している現象であり、増加した総タンパク質の多くはセルロソームに由来するタンパク質であることが示唆された。
菌濃度に関してはセルロースと共存した場合、セルロースの濁度が測定に干渉するために菌濃度が正確に測定できず、分光高度計の使用は不適と考えられた。そこで菌体濃度上昇に伴う菌体タンパク質濃度を直接測定する方法で比較を行った。
先に培養液上清と分離するために遠心分離した沈殿画分、すなわち菌体および残存セルロース画分を50mMリン酸緩衝液(pH7.0)で数度洗浄し、適当量の同緩衝液に懸濁した。さらに同量の溶菌液(0.5M 水酸化ナトリウム・0.5%ラウリル硫酸ナトリウム)を加え、よく懸濁後、沸騰水浴上で10分間加熱し菌体を破壊、菌体タンパク質を抽出した。この菌体破壊液の一部を用い、BCAタンパク質測定キット(サーモサイエンティフィック社)を用いて測定を行った。タンパク質濃度の算出はウシ血清アルブミンを用い、上記同様に溶菌液と煮沸したものをスタンダードとして使用した。
図6の(A)はクロストリジウム・サーモセラムATCC27405の菌体濃度の変化を示している。黒塗りの三角形(▲)はバッチ培養法による菌体濃度の変化、白抜きの三角形(△)はセミバッチ培養用による菌体濃度の変化を示す。
図6の(B)はクロストリジウム・サーモセラムJK−S14の変化を示している。黒塗りの丸印(●)はバッチ培養法による菌体濃度の変化、白抜きの丸印(○)はセミバッチ培養用による菌体濃度の変化を示す。
図6の(A)及び(B)の菌体タンパク量は、培養液1ml中の菌体タンパク量を示している。図中の矢印はセミバッチ培養法におけるセルロース消費を確認後、再度セルロース添加を行った培養日を示している。
これらの結果はセミバッチ培養法により、単にセルロソーム構成タンパク質を含む総タンパク質の生産性が向上しただけでなく、菌体濃度増加も一因であることが示唆された。
使用した培養液はバッチ培養法およびセミバッチ培養法ともに培養9日目の培養液を使用した。培養液は14,000回転、4℃、5分間で遠心分離した後、上清を適当な濃度に蒸留水で希釈し測定に供した。
培養液に含まれる遊離糖の測定には、アミネックスHPX−87Pカラム(バイオラッド)による示差屈折検出器を備えた高速液体クロマトグラフィー(島津製作所製、Prominence)を用いた。
培養液の有機酸の測定には、ポストカラムpH緩衝化電気伝導度検出法を用いた高速液体クロマトグラフィー有機酸分析システム(島津製作所製、Prominence)を用いた。
培養液中のエタノールの測定は、エタノール濃度はガスクロマトグラフィー(島津製作所製、モデルBC−2014)を用いた。
生育に影響を与えると考えられる有機酸濃度は、酢酸においては同程度の蓄積であった。しかし、乳酸ではクロストリジウム・サーモセラムATCC27405では約3倍、クロストリジウム・サーモセラムJK−S14では10倍、バッチ培養法のほうが高濃度蓄積しており、増殖に影響しているものと考えられた。
一方、セミバッチ培養法ではバッチ培養法に比較し生成エタノール濃度が約2倍増加している。セミバッチ培養法では、バッチ培養法のようにセロビオース、グルコースや乳酸が蓄積せずに、これらの生成物は代謝しエタノールへ変換し、セルロース基質添加後も増殖や代謝活性が継続、持続していると推察された。
黒塗りの丸印(●)はセルロース濃度1%のバッチ培養法における培養液1ml中の総タンパク量を示し、白抜きの丸印(○)は初発セルロース濃度0.2%及び一回当たりの添加セルロース濃度を0.2%にし、4回投入を繰り返した際のセミバッチ培養法における培養液1ml中の総タンパク量を示している。図中の矢印はセミバッチ培養法における0.2%セルロースを消費後、再度0.2%セルロース添加を行った培養時期を示している。
セルロース培養液1ml中の総タンパク量はブラッドフォード・タンパク質測定キットにより、ウシ血清アルブミンをスタンダードに用い測定を行った。
Mはタンパク質分子量マーカーを、縦軸はタンパク質マーカーの分子量をキロダルトンで示している。レーン1〜3はバッチ培養法によるSDS−PAGE、レーン4〜6はセミバッチ培養法によるSDS−PAGEである。レーン1は、バッチ培養法2日目の培養液中のセルロソーム画分、レーン2はバッチ培養法4日目の培養液中のセルロソーム画分、レーン3はバッチ培養法7日目の培養液中のセルロソーム画分である。レーン4はセミバッチ培養法7日目にセルロース基質添加した際にサンプリングした培養液中のセルロソーム画分、レーン5はセミバッチ培養法9日目にセルロース基質添加した際にサンプリングした培養液中のセルロソーム画分、レーン6はセミバッチ培養法14日目にセルロース基質添加した際にサンプリングした培養液中のセルロソーム画分を示す。電気泳動写真の右に示した矢印はクロストリジウム・サーモセラムのセルロソーム構成タンパク質として知られている骨格タンパク質CipAと主要な酵素サブユニットCel48Sのタンパク質バンドを示している。
NITE P−628
Claims (9)
- セルロース資化能を有し、セルロース分解酵素を分泌するクロストリジウム属微生物を培養してセルロース分解酵素を生産させる方法であって、上記クロストリジウム属微生物がセルロース性物質を消化した後、セミバッチ培養法により、セルロース性物質を添加する操作を繰り返し、培地中にセルロース分解酵素を蓄積させる、セルロース分解酵素の生産方法。
- 前記培地に含有されるセルロース性物質の濃度が0.2〜5%以下の範囲である、請求項1記載のセルロース分解酵素の生産方法。
- 前記セルロース分解酵素がセルロソームを含有する酵素である、請求項2記載のセルロース分解酵素の生産方法。
- 前記セルロース資化能を有し、セルロース分解酵素を分泌するクロストリジウム属微生物がクロストリジウム・サーモセラムである、請求項3記載のセルロース分解酵素の生産方法。
- 前記セルロース資化能を有し、セルロース分解酵素を分泌するクロストリジウム属微生物がクロストリジウム・サーモセラムJK−S14である、請求項1記載のセルロース分解酵素の生産方法。
- クロストリジウム属微生物を培養して増殖させる方法であって、クロストリジウム属微生物がセルロース性物質を消化した後、セミバッチ培養法によりセルロース性物質を添加する操作を繰り返す、クロストリジウム属微生物の培養増殖方法。
- 炭素源供給後の培地に含有されるセルロース性物質の濃度が0.2〜5%以下の範囲である、請求項6記載のクロストリジウム属微生物の培養増殖方法。
- 前記クロストリジウム属微生物がクロストリジウム・サーモセラムである、請求項7記載のクロストリジウム属微生物の培養増殖方法。
- 前記クロストリジウム・サーモセラム微生物がクロストリジウム・サーモセラムJK−S14である、請求項8記載のクロストリジウム属微生物の培養増殖方法。
Priority Applications (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2009277079A JP5352882B2 (ja) | 2009-12-04 | 2009-12-04 | クロストリジウム属微生物を利用したセルロース分解酵素の生産方法及びクロストリジウム属微生物の培養増殖方法。 |
US12/959,290 US20110136174A1 (en) | 2009-12-04 | 2010-12-02 | Method for producing cellulolytic enzyme using clostridium microorganism and method for culturing and proliferating clostridium microorganism |
EP10193628A EP2330185A1 (en) | 2009-12-04 | 2010-12-03 | Method for producing cellulolytic enzyme using clostridium microorganism and method for culturing and proliferating clostridium microorganism |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2009277079A JP5352882B2 (ja) | 2009-12-04 | 2009-12-04 | クロストリジウム属微生物を利用したセルロース分解酵素の生産方法及びクロストリジウム属微生物の培養増殖方法。 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2011115110A JP2011115110A (ja) | 2011-06-16 |
JP5352882B2 true JP5352882B2 (ja) | 2013-11-27 |
Family
ID=43662259
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2009277079A Expired - Fee Related JP5352882B2 (ja) | 2009-12-04 | 2009-12-04 | クロストリジウム属微生物を利用したセルロース分解酵素の生産方法及びクロストリジウム属微生物の培養増殖方法。 |
Country Status (3)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20110136174A1 (ja) |
EP (1) | EP2330185A1 (ja) |
JP (1) | JP5352882B2 (ja) |
Families Citing this family (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP5943326B2 (ja) * | 2012-03-10 | 2016-07-05 | 国立研究開発法人国際農林水産業研究センター | グルコースの生産方法 |
US9850512B2 (en) | 2013-03-15 | 2017-12-26 | The Research Foundation For The State University Of New York | Hydrolysis of cellulosic fines in primary clarified sludge of paper mills and the addition of a surfactant to increase the yield |
US9951363B2 (en) | 2014-03-14 | 2018-04-24 | The Research Foundation for the State University of New York College of Environmental Science and Forestry | Enzymatic hydrolysis of old corrugated cardboard (OCC) fines from recycled linerboard mill waste rejects |
CN110540982B (zh) * | 2019-09-30 | 2021-11-02 | 江南大学 | 一种提高梭热杆菌纤维素酶酶活的发酵方法 |
Family Cites Families (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2009535067A (ja) * | 2006-05-01 | 2009-10-01 | ザ トラスティーズ オブ ダートマウス カレッジ | セルロース、Clostridiumthermocellum細胞、およびこれらの細胞によって発現されたセルラーゼの三元複合体によって媒介されるセルロースの加水分解のためのプロセス |
JP4923739B2 (ja) | 2006-05-30 | 2012-04-25 | トヨタ自動車株式会社 | 酸性セルラーゼ生産菌 |
WO2008133742A2 (en) * | 2006-12-06 | 2008-11-06 | Musc Foundation For Research Development | Apparatus and methods for the production of ethanol, hydrogen and electricity |
AU2010224284A1 (en) * | 2009-03-09 | 2011-10-06 | Qteros, Inc. | Production of fermentive end products from Clostridium sp. |
CN101851656B (zh) * | 2010-04-19 | 2012-08-29 | 中国科学院青岛生物能源与过程研究所 | 一种生产纤维素乙醇的方法 |
-
2009
- 2009-12-04 JP JP2009277079A patent/JP5352882B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
2010
- 2010-12-02 US US12/959,290 patent/US20110136174A1/en not_active Abandoned
- 2010-12-03 EP EP10193628A patent/EP2330185A1/en not_active Withdrawn
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP2330185A1 (en) | 2011-06-08 |
US20110136174A1 (en) | 2011-06-09 |
JP2011115110A (ja) | 2011-06-16 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Saratale et al. | Production and characterization of multiple cellulolytic enzymes by isolated Streptomyces sp. MDS | |
Liu et al. | Thermostable cellulase production of Aspergillus fumigatus Z5 under solid-state fermentation and its application in degradation of agricultural wastes | |
Wen et al. | Comparison and evaluation of concurrent saccharification and anaerobic digestion of Napier grass after pretreatment by three microbial consortia | |
Deswal et al. | Optimization of cellulase production by a brown rot fungus Fomitopsis sp. RCK2010 under solid state fermentation | |
Ahamed et al. | Culture-based strategies to enhance cellulase enzyme production from Trichoderma reesei RUT-C30 in bioreactor culture conditions | |
Li et al. | Effect of pH on cellulase production and morphology of Trichoderma reesei and the application in cellulosic material hydrolysis | |
Narra et al. | Simultaneous saccharification and fermentation of delignified lignocellulosic biomass at high solid loadings by a newly isolated thermotolerant Kluyveromyces sp. for ethanol production | |
Lodha et al. | Optimised cellulase production from fungal co-culture of Trichoderma reesei NCIM 1186 and Penicillium citrinum NCIM 768 under solid state fermentation | |
Zhu et al. | A comparison of the production of ethanol between simultaneous saccharification and fermentation and separate hydrolysis and fermentation using unpretreated cassava pulp and enzyme cocktail | |
Saratale et al. | Production of thermotolerant and alkalotolerant cellulolytic enzymes by isolated Nocardiopsis sp. KNU | |
Battan et al. | High-level xylanase production by alkaliphilic Bacillus pumilus ASH under solid-state fermentation | |
Li et al. | A consolidated bio-processing of ethanol from cassava pulp accompanied by hydrogen production | |
Wang et al. | Exploring the potential of lactic acid production from lignocellulosic hydrolysates with various ratios of hexose versus pentose by Bacillus coagulans IPE22 | |
Ye et al. | Conversion of acid hydrolysate of oil palm empty fruit bunch to L-lactic acid by newly isolated Bacillus coagulans JI12 | |
Dong et al. | Cellulase production by Aspergillus fumigatus MS13. 1 mutant generated by heavy ion mutagenesis and its efficient saccharification of pretreated sweet sorghum straw | |
Wang et al. | Efficient L-lactic acid production from sweet sorghum bagasse by open simultaneous saccharification and fermentation | |
Wang et al. | High-efficient production of citric acid by Aspergillus niger from high concentration of substrate based on the staged-addition glucoamylase strategy | |
Cunha et al. | Three-phasic fermentation systems for enzyme production with sugarcane bagasse in stirred tank bioreactors: Effects of operational variables and cultivation method | |
Shah et al. | Optimization of cellulase production by Penicillium oxalicum using banana agrowaste as a substrate | |
Qi et al. | L-Lactic acid production from Lactobacillus casei by solid state fermentation using rice straw | |
Chantarasiri | Novel halotolerant cellulolytic Bacillus methylotrophicus RYC01101 isolated from ruminant feces in Thailand and its application for bioethanol production | |
JP5352882B2 (ja) | クロストリジウム属微生物を利用したセルロース分解酵素の生産方法及びクロストリジウム属微生物の培養増殖方法。 | |
Liu et al. | One-pot fermentation for erythritol production from distillers grains by the co-cultivation of Yarrowia lipolytica and Trichoderma reesei | |
Afifi | Effective technological pectinase and cellulase by Saccharomyces cervisiae utilizing food wastes for citric acid production | |
Chandra et al. | Optimization of extraction of β-endoglucanase from the fermented bran of Aspergillus niger |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20121116 |
|
A871 | Explanation of circumstances concerning accelerated examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A871 Effective date: 20121127 |
|
A975 | Report on accelerated examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971005 Effective date: 20121213 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20130108 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20130311 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20130514 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20130722 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20130807 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 5352882 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
S533 | Written request for registration of change of name |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313533 |
|
R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |