JP5252686B2

JP5252686B2 - Slab electrophoresis gel

Info

Publication number: JP5252686B2
Application number: JP2007556051A
Authority: JP
Inventors: 健一三井
Original assignee: 健一三井
Priority date: 2006-01-25
Filing date: 2007-01-25
Publication date: 2013-07-31
Anticipated expiration: 2027-01-25
Also published as: JPWO2007086597A1; WO2007086597A1

Description

本発明は、例えば電気泳動後、ゲルの支持体、および場合により型枠、を保持したまま、容易に染色又はブロッティングに供することができるスラブ型電気泳動用ゲルに関する。 The present invention relates to a slab electrophoresis gel that can be easily subjected to staining or blotting, for example, after electrophoresis, while retaining the support of the gel and, optionally, the formwork.

従来、分子生物学分野では、タンパク質や核酸を移動度の違いによって分離する電気泳動が行われている。当該電気泳動では、分子篩としてゲルが用いられている。
電気泳動に使用するゲルとして、ポリアクリルアミドゲルをプラスチックフィルムを支持体として固着させ、取り扱い易くしたものが既に市販されている。しかしながら、当該製品は、取り扱い易いものの、水平平板型電気泳動用であり、また使用する泳動装置も大型のものであるので、通常頻繁に使用されているスラブ型電気泳動用ゲルと比較して、汎用性に欠ける。また、電気泳動後、メンブレンに転写するには特殊な器具でゲルをフィルムから剥離させなければならず、その剥離した薄ゲルは極めて扱いにくい。
また、スラブ型電気泳動用ゲルとして市販されているプレキャストゲルパッケージは、品質が一定で、保存性も良い。しかしながら、当該ゲルはガラス板に挟んだ状態で供給されるので、コストがかかる。特許文献１には、プレキャスト型の電気泳動用ゲル構造体が開示されている。
一方、特許文献２には、電気泳動用ゲルフィルムに対する接着が改善された電気泳動用支持体が開示されている。また、特許文献３には、電気泳動法によるＤＮＡ塩基配列の測定に用いる電気泳動分析用ゲル・カセットが開示されている。
さらに、特許文献４には、電気泳動（特に、２次元電気泳動）に使用する選択的に透過性な多孔性ポリマーから形成されたゲル支持体チューブが開示されている。
アガロースゲルは核酸の電気泳動に多用され、低濃度のポリアクリルアミドゲルは大分子量のタンパク質の分離に有用だが、共にゲル強度が低く、通常のスラブ型電気泳動の実施は困難である。
従来、電気泳動後、ゲルの支持体、および場合により型枠、を保持したまま、容易に染色又はブロッティングに供することができるスラブ型電気泳動用ゲルは知られていなかった。
特開２００４−１３２９０７号公報米国特許第４，４１５，４２８号明細書特開平１０−２３９２７７号公報米国特許第６，８３３，０６０号明細書 Conventionally, in the field of molecular biology, electrophoresis for separating proteins and nucleic acids according to differences in mobility has been performed. In the electrophoresis, a gel is used as a molecular sieve.
As gels used for electrophoresis, polyacrylamide gels are fixed on a plastic film as a support and are easy to handle. However, although the product is easy to handle, it is for horizontal plate type electrophoresis, and since the electrophoresis apparatus to be used is large, compared with the slab type electrophoresis gel that is usually used frequently, It lacks versatility. Further, after electrophoresis, in order to transfer to the membrane, the gel must be peeled off from the film with a special instrument, and the peeled thin gel is extremely difficult to handle.
Moreover, the precast gel package marketed as a gel for slab type electrophoresis has a constant quality and good storage stability. However, since the said gel is supplied in the state pinched | interposed into the glass plate, cost starts. Patent Document 1 discloses a precast type gel structure for electrophoresis.
On the other hand, Patent Document 2 discloses a support for electrophoresis with improved adhesion to the gel film for electrophoresis. Patent Document 3 discloses a gel cassette for electrophoretic analysis used for measuring a DNA base sequence by electrophoresis.
Further, Patent Document 4 discloses a gel support tube formed from a selectively permeable porous polymer used for electrophoresis (particularly two-dimensional electrophoresis).
Agarose gels are frequently used for nucleic acid electrophoresis, and low-concentration polyacrylamide gels are useful for separating large molecular weight proteins, but both have low gel strength, making it difficult to perform normal slab electrophoresis.
Conventionally, a slab electrophoresis gel that can be easily subjected to staining or blotting while holding a gel support and optionally a formwork after electrophoresis has not been known.
JP 2004-132907 A U.S. Pat. No. 4,415,428 JP 10-239277 A US Pat. No. 6,833,060

本発明は、上述した実情に鑑み、例えば電気泳動後、ゲルの支持体、および場合により型枠、を保持したまま、容易に染色又はブロッティングに供することができるスラブ型電気泳動用ゲルを提供することを目的とする。
上記課題を解決するため鋭意研究を行った結果、まず、メッシュ様部材により片面又は両面を支持されたゲルが柔軟性と強度に富むことを見いだした。さらにそれを基に、２つのゲル枠と該２つのゲル枠の一方又は双方の面に配置したメッシュ様部材とゲル枠間に配置したスペーサーとゲル枠間のスペーサー幅に配置したランニングゲルとを含み、該ランニングゲルがゲル枠及びメッシュ様部材により支持されたスラブ型電気泳動用ゲルを見出し、本発明を完成するに至った。
本発明は以下を包含する。
（１）ゲル電気泳動用に供するスラブ型ゲルであって、当該ゲルを支持するためのメッシュ様部材と当該ゲルとが一体的に構成されてなることを特徴とするスラブ型電気泳動用ゲル。
（２）ゲル電気泳動用に供するスラブ型ゲルの一方又は双方の面に、当該ゲルを支持するためのメッシュ様部材が配置されてなることを特徴とする（１）記載のスラブ型電気泳動用ゲル。
（３）ゲル溶液とメッシュ様部材とを接触させた状態で当該ゲル溶液をゲル化することにより、スラブ型ゲルの一方又は双方の面にメッシュ様部材が固着されていることを特徴とする、（２）記載のスラブ型電気泳動用ゲル。
（４）上記ゲルの幅が１〜１０ｍｍであることを特徴とする、（１）記載のスラブ型電気泳動用ゲル。
（５）上記メッシュ様部材の目開きが０．２μｍ〜４，０００μｍであることを特徴とする、（１）記載のスラブ型電気泳動用ゲル。
（６）上記メッシュ様部材の材質がポリマーであることを特徴とする、（１）記載のスラブ型電気泳動用ゲル。
（７）２つのゲル枠と、
前記２つのゲル枠の一方又は双方の面に配置したメッシュ様部材と、
前記ゲル枠間に配置したスペーサーと、
前記ゲル枠間のスペーサー幅に配置したランニングゲルと、
を含み、前記ランニングゲルが前記ゲル枠及びメッシュ様部材により支持されていることを特徴とする、スラブ型電気泳動用ゲル。
（８）上記ランニングゲルの上部に、スタッキングゲルをさらに含むことを特徴とする、（７）記載のスラブ型電気泳動用ゲル。
（９）上記メッシュ様部材の目開きが０．２μｍ〜４，０００μｍであることを特徴とする、（７）記載のスラブ型電気泳動用ゲル。
（１０）上記メッシュ様部材の材質がポリマーであることを特徴とする、（７）記載のスラブ型電気泳動用ゲル。
（１１）上記ポリマーがポリエステル、ナイロン、ポリプロピレン、テフロン及びポリエチレンから成る群から選択されるポリマーであることを特徴とする、（１０）記載のスラブ型電気泳動用ゲル。
（１２）上記ゲルの幅が１〜１０ｍｍであることを特徴とする、（７）記載のスラブ型電気泳動用ゲル。
（１３）２つのゲル枠の一方又は双方の面にメッシュ様部材を配置する工程と、
前記ゲル枠間にスペーサーを配置し、前記２つのゲル枠を合わせる工程と、
前記ゲル枠間のスペーサー幅にランニングゲルを作製する工程と、
を含み、前記ランニングゲルが前記ゲル枠及びメッシュ様部材により支持されていることを特徴とする、（７）記載のスラブ型電気泳動用ゲルの製造方法。
（１４）上記ランニングゲルの上部に、スタッキングゲルを作製する工程をさらに含むことを特徴とする、（１３）記載の製造方法。
本明細書は本願の優先権の基礎である日本国特許出願２００６−１６８５２号の明細書および／または図面に記載される内容を包含する。In view of the above-described circumstances, the present invention provides a slab electrophoresis gel that can be easily subjected to staining or blotting after electrophoresis, for example, while retaining the gel support and, optionally, the formwork. For the purpose.
As a result of diligent research to solve the above problems, it was first found that a gel supported on one or both sides by a mesh-like member is rich in flexibility and strength. Furthermore, based on that, two gel frames, a mesh-like member arranged on one or both surfaces of the two gel frames, a spacer arranged between the gel frames, and a running gel arranged in the spacer width between the gel frames In addition, the present inventors have found a slab-type electrophoresis gel in which the running gel is supported by a gel frame and a mesh-like member, thereby completing the present invention.
The present invention includes the following.
(1) A slab type gel for gel electrophoresis, wherein a mesh-like member for supporting the gel and the gel are integrally formed.
(2) The slab type electrophoresis as described in (1), wherein a mesh-like member for supporting the gel is disposed on one or both sides of the slab type gel used for gel electrophoresis. gel.
(3) The gel solution is gelled in a state where the gel solution and the mesh-like member are in contact with each other, whereby the mesh-like member is fixed to one or both surfaces of the slab type gel, (2) Gel for electrophoresis according to slab type.
(4) The gel for slab electrophoresis according to (1), wherein the gel has a width of 1 to 10 mm.
(5) The gel for slab type electrophoresis according to (1), wherein the mesh-like member has an opening of 0.2 μm to 4,000 μm.
(6) The gel for slab electrophoresis according to (1), wherein the mesh-like member is made of a polymer.
(7) two gel frames;
A mesh-like member disposed on one or both surfaces of the two gel frames;
A spacer disposed between the gel frames;
A running gel arranged in a spacer width between the gel frames;
A slab electrophoresis gel, wherein the running gel is supported by the gel frame and a mesh-like member.
(8) The slab electrophoresis gel according to (7), further comprising a stacking gel above the running gel.
(9) The gel for slab electrophoresis according to (7), wherein the mesh-like member has an opening of 0.2 μm to 4,000 μm.
(10) The gel for slab type electrophoresis according to (7), wherein the material of the mesh-like member is a polymer.
(11) The gel for slab electrophoresis according to (10), wherein the polymer is a polymer selected from the group consisting of polyester, nylon, polypropylene, Teflon and polyethylene.
(12) The gel for slab electrophoresis according to (7), wherein the gel has a width of 1 to 10 mm.
(13) arranging a mesh-like member on one or both surfaces of the two gel frames;
Placing a spacer between the gel frames and aligning the two gel frames;
Producing a running gel in the spacer width between the gel frames;
And the running gel is supported by the gel frame and a mesh-like member. The method for producing a gel for slab electrophoresis according to (7), wherein
(14) The production method according to (13), further comprising a step of producing a stacking gel above the running gel.
This specification includes the contents described in the specification and / or drawings of Japanese Patent Application No. 2006-16852, which is the basis of the priority of the present application.

図１は、本発明に係るスラブ型電気泳動用ゲルの作製を示す。（１ａ、１ｂ：ゲル枠；２：メッシュ；３ａ、３ｂ：スペーサー；４ａ、４ｂ、４ｃ、４ｄ：両面テープ）
図２は、型枠付メッシュの作製を示す。（５：切込プレート；６：平プレート；７ａ、７ｂ、７ｃ、７ｄ：両面テープ；８：メッシュクロス；９ａ、９ｂ：スペーサー用ＰＥＴプレート；）
図３は、ＰＶＤＦ膜へのセミドライブロッティングの結果を示す。（（ａ）：対照ゲルのブロッティング、（ｂ）：型枠付メッシュゲルのブロッティング）
図４は、ＣＢＢ染色の結果を示す。（（ａ）：対照ゲルのＣＢＢ染色結果、（ｂ）：型枠付メッシュゲルのＣＢＢ染色結果）
図５は、銀染色の結果を示す。（（ａ）：対照ゲルの銀染色結果、（ｂ）：型枠付メッシュゲルの銀染色結果）FIG. 1 shows the preparation of a slab-type electrophoresis gel according to the present invention. (1a, 1b: gel frame; 2: mesh; 3a, 3b: spacer; 4a, 4b, 4c, 4d: double-sided tape)
FIG. 2 shows the production of a mesh with formwork. (5: slit plate; 6: flat plate; 7a, 7b, 7c, 7d: double-sided tape; 8: mesh cloth; 9a, 9b: PET plate for spacers)
FIG. 3 shows the results of semi-driving the PVDF membrane. ((A): Blotting of control gel, (b): Blotting of mesh gel with formwork)
FIG. 4 shows the results of CBB staining. ((A): CBB staining result of control gel, (b): CBB staining result of mesh gel with formwork)
FIG. 5 shows the results of silver staining. ((A): Silver staining result of control gel, (b): Silver staining result of mesh gel with formwork)

以下、本発明を詳細に説明する。
本発明のスラブ型電気泳動用ゲルは、ゲル電気泳動用に供するスラブ型ゲル面にメッシュ様部材を配置し、それらにより、ゲルが支持されていることを特徴とする。
すなわち、本発明は、ゲル電気泳動用に供するスラブ型ゲルであって、当該ゲルを支持するためのメッシュ様部材と当該ゲルとが一体的に構成されてなることを特徴とするスラブ型電気泳動用ゲルを特徴とする。
本発明において、メッシュ様部材は、ゲルの一方又は双方の面に配置される。
本発明のゲルを、図面を参照しながら、さらに具体的に説明する。
本発明に係るスラブ型電気泳動用ゲルは、図１に示すように、２つのゲル枠１ａ、１ｂと、ゲル枠１ａ、１ｂの一方又は双方の面に配置したメッシュ２と、ゲル枠１ａとゲル枠１ｂとの間に配置したスペーサー３ａ、３ｂと、ゲル枠１ａとゲル枠１ｂとの間のスペーサー幅に配置したランニングゲルとを含む。
なお、以下の説明ではゲル枠を設けたもののみを詳述するが、ゲル枠及びスペーサーを持たずメッシュ様部材のみを有するゲルとすることもでき、その製法は本法に準じる。また、以下の説明ではメッシュ様部材のうちメッシュを用いる場合を詳述するが、それ以外の素材を利用する場合も本法に準じる。
ゲル枠の縦方向及び横方向のサイズは、スラブ型電気泳動装置用ガラスプレートの対応するサイズと同等であることが好ましい。ゲル枠の材質としては、特に限定されないが、ガラス、ポリマー（例えば、ポリエチレンテレフタラート（ＰＥＴ）及びその他のポリエステル、テフロン、ナイロン、ポリプロピレン並びにポリエチレン）等が挙げられる。一方のゲル枠は、泳動面に合わせて、具体的にはスタッキングゲルのウェルの数に準じた幅とサンプルの泳動距離とに合わせて切り抜いた窓を有する。また、他方のゲル枠は、上記と同様の切り抜き窓の他に、コームの大きさに合わせた切込を有する（図１のゲル枠１ｂ）。
本発明において「メッシュ様部材」とは、１）ゲルを物理的に支持するとともに、２）電気泳動に供されたサンプルがブロッティング等の作業の際に面方向に選択的に通過可能な微細な隙間を有する面状の部材であれば特に限定されるものではない。さらに、電気泳動等の際に印加される電流を実質的に通すことのない材料から構成されるものが、サンプルの泳動を阻害する虞がなくより好ましい。より好ましいメッシュ様部材の一例としては、電気泳動等の際に印加される電流を実質的に通すことのない材料から構成されるメッシュ、多孔質、不織布が挙げられる。いずれのメッシュ様部材を選択するかについてはゲル電気泳動の目的、方法などにより適宜選択されるが、面方向のブロッティングの効率の観点ではメッシュが最も好ましく、ゲルの形状の維持の観点では発泡性プラスチック等の材料からなる多孔質メンブレンが最も好ましい。
本発明の好ましい形態として、メッシュ様部材はゲルと一体的に構成される。ここで「メッシュ様部材とゲルとが一体的に構成される」とは、メッシュ様部材が有する微細な隙間にゲルが咬み込むことで両者が一体不可分な状態となっている構成をさす。両者が一体的に構成されている限りにおいては、メッシュ様部材がゲルの中心部に配されていてもよく、ゲルの少なくとも一方の面に配されていてもよい。作製の容易さや使い勝手の点では、メッシュ様部材がゲルの少なくとも一方の面に配されていることが一般的により好ましい。なお、「メッシュ様部材がゲルの面に配されている」とは、メッシュ様部材がゲルの面近傍に配されている状態（つまり、メッシュ様部材が実質的にゲルの面に配されているとみなせる状態）も含む。
なお、メッシュ様部材とゲルとを一体的に構成する方法は特に限定されるものではないが、例えば、ゲル溶液とメッシュ様部材とを接触させた状態で当該ゲル溶液をゲル化する（固める）ことにより容易に作製可能である。
また、メッシュ様部材がゲル枠との組み合わせで用いられる場合には、当該メッシュ様部材はゲル枠の内側面又は外側面、好ましくはランニングゲルが作製される内側面にゲルと隣接して配置される。また、メッシュ様部材は、２つのゲル枠の一方又は双方に配置することができる。メッシュ様部材の数は、１又は複数であり、電気泳動やブロッティングに悪影響を及ぼさない限り、複数のメッシュ様部材を重ねてもよい。本発明において、メッシュ様部材は、ゲル枠とともにゲルを支持するために有効であり、且つブロッティングのためにメンブレンへのタンパク質やペプチドの移動も可能にする。従って、メッシュ様部材は、電気泳動に供するサンプル中のタンパク質やペプチドが透過でき、且つ作製されるゲルが透過しないような目開きを有する。目開きとは、大きなサイズの孔から微細なサイズの孔を意味し、多孔質であれば通常、ポアサイズによって定義することができる。そのサイズは、特に限定はされないが、例えば、０．２μｍ〜４，０００μｍ、好ましくは５．０μｍ〜４，０００μｍ、特に好ましくは１００μｍ〜２００μｍとし、メッシュ様部材が多孔質であれば、その平均ポアサイズを、０．２２μｍ〜０．４５μｍ以上とすることができる。また、メッシュ様部材の厚さは、例えば、５０μｍ〜２，５００μｍ、好ましくは６０μｍ〜２００μｍとする。さらに、メッシュ様部材の材質としては、上記特性を付与するいずれの材質でもよく、例えば、布、ポリマー（例えば、ポリエチレンテレフタラート（ＰＥＴ）及びその他のポリエステル、ナイロン、ポリプロピレン、テフロン並びにポリエチレン）等が挙げられるが、特にＰＥＴが好ましい。なお、本発明で使用するメッシュ様部材として、例えばＰＥＴ１０５（材質：ＰＥＴ、目開き：１０５μｍ、メッシュ１４５／ｉｎｃｈ、株式会社セミテック（大阪、日本）製）のような市販のメッシュクロスを使用することができる。
なお、メッシュ様部材がゲル枠との組み合わせで用いられる場合にも上述の通り、メッシュ様部材とゲルとが一体的に構成されていることが好ましい。
スペーサーは、ゲル枠間に配置することで、ランニングゲルが形成される空間を用意することができる。一般に、スペーサーの厚さ（スペーサー幅）が、そのままランニングゲルの厚さとなる。スペーサーの材質は、ゲル枠と同じであってもよいし、異なってもよく、例えば、ガラス、ポリマーなどである。
本発明において、ランニングゲル又はスタッキングゲルは、例えば、アクリルアミドとＮ，Ｎ’−メチレンビスアクリルアミドとから作製されるポリアクリルアミドゲルである。ランニングゲルのアクリルアミド濃度は、電気泳動に供するサンプル中のペプチドやタンパク質の分子量に応じて適宜選択することができる。また、ランニングゲルは、アクリルアミド濃度が均一なゲルだけでなく、アクリルアミド濃度に勾配をつけたグラジエントゲルであってもよい。
本発明のゲルのサイズ及び厚さは、特に制限はなく、使用目的に応じて任意のサイズ及び厚さとしうる。また、ゲルの形状は、通常、四角形（例えば、長方形および正方形）であり、細長いストリップ形状（例えば、幅１〜１０ｍｍ）の形状も含む。
本発明に係るスラブ型電気泳動用ゲルの製造方法（以下、単に「本発明に係る製造方法」という）では、まず２つのゲル枠の一方又は双方の面にメッシュ様部材を配置する。メッシュ様部材は、例えば、図１に示す両面テープ４ａ、４ｂ、４ｃ、４ｄを用いてゲル枠に固定させることができる。
次いで、本発明に係る製造方法では、メッシュ様部材を配置したゲル枠間にスペーサーを配置し、２つのゲル枠を合わせることで、ランニングゲル（及び必要に応じてスタッキングゲル）のための型枠を作製する。スペーサーは、例えば両面テープなどでゲル枠及びメッシュ様部材に固定することができる。
さらに、ゲル枠とメッシュ様部材とスペーサーとを含む型枠（以下、単に「型枠」又は「型枠付メッシュ」という）作製後、スラブ型電気泳動装置用ガラスプレートで型枠を挟み、型枠のスペーサー幅にランニングゲル溶液を注ぎ入れる。その際、スラブ型電気泳動装置用ガラスプレートは、側片と底辺とを防水テープで十分に密閉し、さらに両側をダブルクリップ等で押さえておく。ランニングゲル溶液は、直接又は例えばパスツールピペットを使用して型枠のスペーサー幅に注ぎ入れることができる。このようにして、型枠中にランニングゲルを固めることで、本発明に係るスラブ型電気泳動用ゲルを作製することができる。
さらに、必要に応じて、ランニングゲル上部にスタッキングゲル溶液を注ぎ入れ、その際に適当なコーム（くし）を差し込み、スタッキングゲルを作製することができる。スタッキングゲル溶液は、上述したランニングゲル溶液と同様に注ぎ入れることができる。固化後、コームはゲルから引き抜いてもよいし、そのまま保持されてもよい。このとき形成されるウエルは泳動サンプルウエルとして使用される。
このようにして作製された本発明に係るスラブ型電気泳動用ゲルは、スラブ型電気泳動装置用ガラスプレートから外して、例えばサランラップに包み使用時まで冷蔵保存することができる。使用時には、適当な容器に水を張り、水中で迅速に再度、本発明に係るスラブ型電気泳動用ゲルをスラブ型電気泳動装置用ガラスプレートに挟み込み、スラブ型電気泳動に供することができる。
以上のようにして作製した本発明に係るスラブ型電気泳動用ゲルは、ランニングゲル（及び必要に応じてスタッキングゲル）の一方又は双方の面がメッシュ様部材によって支持されている。さらに、必要に応じてゲル枠によってその支持は強化されている。このように、メッシュ様部材及び／又はゲル枠によりゲルが支持されていることにより、本発明に係るスラブ型電気泳動用ゲルは、通常使用されるスラブ型ゲルよりも物理的強度が高く、また取り扱いが容易である。
また、上述のように、本発明では例えば、ゲル溶液とメッシュ様部材とを接触させた状態で当該ゲル溶液をゲル化する（固める）ことにより、スラブ型ゲルの一方又は双方の面にメッシュ様部材が固着された（一体化された）構成をとることが出来る。この構成によれば、メッシュ様部材が有する微細な隙間にゲルが侵入し、ゲルとメッシュ様部材とがより強固に固着されるので、メッシュ様部材がゲル面から剥離する虞もないという効果も奏する。
また、電気泳動後、本発明に係るスラブ型電気泳動用ゲルは、従来のようにスラブ型電気泳動装置用ガラスプレートからゲルを剥離することなく、スラブ型電気泳動装置用ガラスプレートから外して、そのまま染色（例えば、クーマシーブリリアントブルー（ｃｏｏｍａｓｉｅｂｒｉｌｌｉａｎｔｂｌｕｅ；ＣＢＢ）染色や銀染色）又はブロッティングに供することができる。染色やブロッティングでは、本発明に係るスラブ型電気泳動用ゲルの支持体（すなわち、メッシュ様部材）、および場合により型枠、は保持される。
さらに、本発明に係るスラブ型電気泳動用ゲルをプレキャストゲルとして供給する場合、従来市販されているプレキャストゲルと異なり、ガラス板に挟んだ状態ではなく、ゲル枠に囲まれた裸のゲルパッケージとして供給でき、コストを低く抑えることができる。あるいは、本発明に係るスラブ型電気泳動用ゲルを、ブロッティング用のメンブレン（例えば、ＰＶＤＦ膜）とゲル枠を介して密着させて供給することも可能であり、電気泳動からブロッティングまでの操作がより簡便に行うことができる。
なお、言うまでもないが本発明におけるスラブ型ゲル（スラブ型電気泳動用ゲル）は平板状のゲルを指し、電気泳動時にはゲルの面を任意の方向（一般的には、水平方向又は垂直方向）に固定して使用することが出来る。
本発明のゲルを保存するときには、例えば、ポリマー製フィルムで包装するか、あるいはポリマー製バッグに入れて密封し、乾燥しない程度の十分な湿度下で冷暗所に保存する。
以下、実施例を用いて本発明をより詳細に説明するが、本発明の技術的範囲はこれら実施例に限定されるものではない。
〔実験方法〕
（１）型枠付メッシュの作製
型枠付メッシュの作製を図２に基づいて説明する。
１０ｃｍ（幅（Ｗ））ｘ１０ｃｍ（高さ（Ｈ））正方形のポリエチレンテレフタラート（ＰＥＴ）プレート（０．５ｍｍ厚）を２枚用意した。これら２枚のプレートについて、三辺より１ｃｍ、残りの一辺より２ｃｍの位置に８ｃｍ（Ｗ）ｘ７ｃｍ（Ｈ）の長方形を切り抜いた。一方のプレートはさらに、２ｃｍ幅の余白面を上にして立てたとき、両端から各１ｃｍの位置に、上端から１ｃｍの垂直幅で８ｃｍ（Ｗ）ｘ１ｃｍ（Ｈ）の長方形を切り抜いた。このプレートを切込プレート５と呼ぶ。また、他方のプレートを平プレート６と呼ぶことにする。
平プレート６の長方形切り抜き窓の四縁に１ｃｍ幅の両面テープ７ａ、７ｂ、７ｃ、７ｄを施した。次いで、１０ｃｍ（Ｗ）ｘ９ｃｍ（Ｈ）のメッシュクロス８（材質：ＰＥＴ、目開き１０５μｍ、メッシュ１４５／ｉｎｃｈ、製品名ＰＥＴ１０５、（株）セミテック、大阪）を、平プレート６の両側辺と底辺に合わせて長方形窓をふさぐように両面テープ７ａ、７ｂ、７ｃ、７ｄに貼り付けた。さらに、１ｃｍ（Ｗ）ｘ１０ｃｍ（Ｈ）ｘ０．１ｃｍ（奥行（Ｄ））のスペーサー用ＰＥＴプレート９ａ、９ｂの２枚の縁をそれぞれ切込プレート５の両端に上下を合わせて両面テープで貼り付け、切込が上方になるようにして平プレート６上のメッシュクロス８に重ねることで、型枠付メッシュを完成させた。
（２）ゲルの作製
上記（１）で得られた型枠付メッシュと同型同大のミニスラブ型電気泳動装置用ガラスプレート（１ｍｍ又は２ｍｍ厚）でこの型枠付メッシュを挟み、側辺と底辺を防水テープで十分に密閉し、両側をダブルクリップで押さえ、全体を安定して垂直に立たせ、以下の表１に示す組成から成るランニングゲル溶液を流し込んだ。

ランニングゲル溶液の注入後、水又はブタノールを重層して静置し、ゲル化させた（約１５分）。
次に、ランニングゲルの上部に、以下の表２に示す組成から成るスタッキングゲル溶液を流し込んだ。

スタッキングゲル溶液の注入後、厚さ０．７５ｍｍのコームをさしてゲル化させた（約１０分）。このようにして、型枠付メッシュに支持されたゲル（以下、「型枠付メッシュゲル」という：本発明に係るスラブ型電気泳動用ゲル）を作製した。
ゲル化後、ガラスプレートを外して、型枠付メッシュゲルを取り出し、サランラップに包み使用時まで冷蔵保存が可能であった。使用時は、適当な容器に水を張り、水中で素早く型枠付メッシュゲルをスラブ型電気泳動装置用ガラスプレートで挟んで密着させた。
（３）型枠付きメッシュゲルを用いた電気泳動
ミニスラブ型電気泳動装置（ＳＥ−８０１０、（株）ＳＩＣマリソル、東京）に型枠付メッシュゲルを備えたゲルプレート又は型枠付メッシュなしの通常のゲル（以下、「対照ゲル」という）を備えたゲルプレートをセットした。
一方、タンパク質試料（マウス脳由来の１００，０００ｘｇ遠心分離上清）（５μｇ）５μｌ又は分子量マーカー（プレシジョンｐｌｕｓスタンダード、（株）日本バイオラッドラボラトリーズ、東京）５μｌに、５×サンプルバッファー（組成：０．２５ＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ６．８）、１０％ＳＤＳ、βメルカプトエタノール３／１０容、５０％グリセロール、１％ＢＰＢ数滴）２μｌ及び蒸留水３μｌを加え、９５℃で３分間煮沸した。得られたサンプルを、上述のゲルプレートの各ウェルに添加した。
次いで、これらゲルプレートを用いて、以下の表３に示す組成から成る泳動バッファー中にて４０ｍＡで６０分間電気泳動した。

（４）ＰＶＤＦ膜へのセミドライブロッティング
８ｃｍ（Ｗ）×７ｃｍ（Ｈ）に切った濾紙６枚とＰＶＤＦ膜を用意した。以下の表４に示す組成から成るブロッティングバッファーに十分浸した濾紙３枚を重ねてセミドライブロッタ（ＡＥ６６７７、（株）アトー、東京）の陰極プレート上に置き、上記（３）で電気泳動した型枠付メッシュゲル又は対照ゲルを、枠内に濾紙がちょうどはまるように重ねた。
次いで、アルコール浸潤後、ブロッティングバッファーに十分浸しておいたＰＶＤＦ膜を空気が入らないようにゲルに密着させて重ねた。さらに、残りの濾紙３枚を重ねた。ガラスピペットの腹などを利用して、濾紙の上を軽くしごき、濾紙／ゲル／膜の間の空気を追い出した。
最後に、陽極プレートをかぶせ、１５０ｍＡにて１時間通電させた。

（５）クーマシーブリリアントブルー（ｃｏｏｍａｓｓｉｅｂｒｉｌｌｉａｎｔｂｌｕｅ；ＣＢＢ）染色及び銀染色
上記（３）で電気泳動した型枠付メッシュゲル又は対照ゲルの両端をメタルフリークリップ（プラスチック製）で押さえた。染色、脱色中のゲルの伸縮変形に伴うゆがみを低減させるために、ここで使用する通常のバッファー全てに０．３７５ＭＴｒｉｓ塩または０．３７５ＭＮａＣｌおよび１０％グリセロールを含ませて使用した。
（５−１）ＣＢＢ染色
ＣＢＢ染色は、まず型枠付メッシュゲル又は対照ゲルを以下の表５に示す組成から成るＣＢＢ染色液に浸して、室温で３０分間振盪した。

次いで、以下の表６に示す組成から成るＣＢＢ脱色液に型枠付メッシュゲル又は対照ゲルを浸し、キムワイプを添えて室温で１５分間振盪後、新しい脱色液に交換し、以後３０分間振盪するごとに液交換するという操作を数回繰り返した。

十分脱色されてバンドが明瞭になるまで振盪、液交換を繰り返した後、型枠付メッシュゲル又は対照ゲルを水で軽くリンスしてから、４０％メタノール／１０％酢酸／０．３７５ＭＮａＣｌ／１０％グリセロール液中に保存した。
（５−２）銀染色
銀染色は、まず型枠付メッシュゲル又は対照ゲルを５０％メタノール／０．３７５ＭＮａＣｌ／１０％グリセロールに浸し、室温で１時間振盪した。次いで、以下の表７に示す組成から成る銀染色液の溶液Ｃに型枠付メッシュゲル又は対照ゲルを１５分間浸した。

水で５分間洗浄した後、次いで表８に示す組成から成る現像液の溶液Ｄに型枠付メッシュゲル又は対照ゲルを浸し、像が現れるまで（約１５分間）振盪した。像が現れた後、型枠付メッシュゲル又は対照ゲルを水で軽くリンスした後、１０％ＥＤＴＡ／４０％メタノール／１０％酢酸／０．３７５ＭＮａＣｌ／１０％グリセロールに浸して保存した。

（６）メッシュゲルの物理的強度
上記（２）で作製した型枠付メッシュゲルのメッシュゲル部分又は対照ゲルの上端と下端とを合わせるように軽く折り曲げ、屈曲部分を少しずつ押していき、どのくらい強く押すとゲルが割れて壊れるか否かを観察した。
〔実験結果〕
上述のように行ったＰＶＤＦ膜へのセミドライブロッティング、ＣＢＢ染色及び銀染色の結果について、型枠付メッシュゲルの場合と対照ゲルの場合とを比較した写真を図３〜５に示す。
図３は、ＰＶＤＦ膜へのセミドライブロッティングの結果を示す。（ａ）の写真は、対照ゲルのブロッティングを示す。（ｂ）の写真は、型枠付メッシュゲルのブロッティングを示す。泳動像はいずれも分子量マーカー（プレシジョンプレステインドマーカー）である。
図４は、ＣＢＢ染色の結果を示す。（ａ）の写真は、対照ゲルのＣＢＢ染色結果を示す。（ｂ）の写真は、型枠付メッシュゲルのＣＢＢ染色結果を示す。（ａ）において、左側より１、２、８、９、１０レーンの各泳動像が、分子量マーカー（プレシジョンプレステインドマーカー）であり、一方、左側より３、４、５、６、７レーンの泳動像が各種濃度のタンパク質試料（マウス脳由来の１００，０００ｘｇ遠心分離上清）である。また、（ｂ）において、左側より１、２、７、８、９レーンの各泳動像が、分子量マーカー（プレシジョンプレステインドマーカー）であり、一方、左側より３、４、５、６レーンの泳動像が各種濃度のタンパク質試料（マウス脳由来の１００，０００ｘｇ遠心分離上清）である。
図５は、銀染色の結果を示す。（ａ）の写真は、対照ゲルの銀染色結果を示す。（ｂ）の写真は、型枠付メッシュゲルの銀染色結果を示す。（ａ）及び（ｂ）において、左側より１、５、６レーンの泳動像が、分子量マーカー（プレシジョンプレステインドマーカー）であり、一方、左側より２、３、４レーンの泳動像がタンパク質試料（マウス脳由来の１００，０００ｘｇ遠心分離上清）である。
図３〜５に示すように、型枠付メッシュゲル（本発明に係るスラブ型電気泳動用ゲル）を用いた泳動後の染色像及びブロッティング結果は、対照ゲル（通常のゲル）を用いた場合と比較して、全く同様の感度と分解能を示しており、型枠付メッシュゲルを従来のゲルと全く同じ目的で用いることができることが判った。
さらに、ゲルの物理的強度比較では、対照ゲルは折りたたんだ後、ごくわずかな圧力ですぐに割れてしまったが、一方、メッシュゲルはほぼ完全に折りたたんでも、壊れずに元に戻すことができた。Hereinafter, the present invention will be described in detail.
The gel for slab electrophoresis of the present invention is characterized in that a mesh-like member is disposed on a slab gel surface used for gel electrophoresis, and the gel is supported thereby.
That is, the present invention is a slab type gel used for gel electrophoresis, wherein the mesh-like member for supporting the gel and the gel are integrally configured. Gel for use.
In the present invention, the mesh-like member is disposed on one or both sides of the gel.
The gel of the present invention will be described more specifically with reference to the drawings.
As shown in FIG. 1, the slab electrophoresis gel according to the present invention includes two

gel frames

1a and 1b, a mesh 2 disposed on one or both surfaces of the

gel frames

1a and 1b, and a gel frame 1a. It includes

spacers

3a and 3b arranged between the gel frame 1b and a running gel arranged in a spacer width between the gel frame 1a and the gel frame 1b.
In the following description, only those provided with a gel frame will be described in detail. However, a gel having only a mesh-like member without a gel frame and a spacer may be used, and the production method conforms to this method. Moreover, although the case where a mesh is used among mesh-like members is explained in full detail in the following description, the case where other materials are used also conforms to this method.
The size of the gel frame in the vertical direction and the horizontal direction is preferably the same as the corresponding size of the glass plate for a slab type electrophoresis apparatus. The material of the gel frame is not particularly limited, and examples thereof include glass and polymers (for example, polyethylene terephthalate (PET) and other polyesters, Teflon, nylon, polypropylene, and polyethylene). One gel frame has a window cut out in accordance with the migration surface, specifically in accordance with the width corresponding to the number of wells of the stacking gel and the migration distance of the sample. The other gel frame has a cut in accordance with the size of the comb in addition to the same cutout window as described above (gel frame 1b in FIG. 1).
In the present invention, the “mesh-like member” means 1) a gel that physically supports the gel, and 2) a fine sample that can be selectively passed in the surface direction during work such as blotting. It is not particularly limited as long as it is a planar member having a gap. Further, a material made of a material that does not substantially pass an electric current applied during electrophoresis or the like is more preferable because there is no possibility of inhibiting sample migration. As an example of a more preferable mesh-like member, a mesh, a porous material, or a nonwoven fabric made of a material that does not substantially pass an electric current applied during electrophoresis or the like can be given. The mesh-like member to be selected is appropriately selected according to the purpose and method of gel electrophoresis, but mesh is most preferable from the viewpoint of the efficiency of blotting in the surface direction, and foaming from the viewpoint of maintaining the shape of the gel. A porous membrane made of a material such as plastic is most preferable.
As a preferred form of the present invention, the mesh-like member is formed integrally with the gel. Here, “the mesh-like member and the gel are integrally configured” refers to a configuration in which the gel is bitten into a minute gap of the mesh-like member so that the two are in an inseparable state. As long as both are integrally formed, the mesh-like member may be disposed at the center of the gel or may be disposed on at least one surface of the gel. In terms of ease of manufacture and ease of use, it is generally more preferable that the mesh-like member is disposed on at least one surface of the gel. “The mesh-like member is arranged on the gel surface” means that the mesh-like member is arranged in the vicinity of the gel surface (that is, the mesh-like member is substantially arranged on the gel surface). State that can be regarded as being).
The method for integrally configuring the mesh-like member and the gel is not particularly limited. For example, the gel solution is gelled (hardened) in a state where the gel solution and the mesh-like member are in contact with each other. Therefore, it can be easily manufactured.
Further, when the mesh-like member is used in combination with a gel frame, the mesh-like member is disposed adjacent to the gel on the inner or outer surface of the gel frame, preferably the inner surface on which the running gel is produced. The Also, the mesh-like member can be placed on one or both of the two gel frames. The number of mesh-like members is one or more, and a plurality of mesh-like members may be stacked as long as they do not adversely affect electrophoresis or blotting. In the present invention, the mesh-like member is effective for supporting the gel together with the gel frame, and also enables the transfer of proteins and peptides to the membrane for blotting. Therefore, the mesh-like member has an opening that allows the protein and peptide in the sample to be subjected to electrophoresis to permeate and prevents the produced gel from permeating. The term “mesh” refers to pores of a large size to a fine size. If the pore is porous, it can be generally defined by the pore size. Although the size is not particularly limited, for example, 0.2 μm to 4,000 μm, preferably 5.0 μm to 4,000 μm, particularly preferably 100 μm to 200 μm. If the mesh-like member is porous, its average The pore size can be set to 0.22 μm to 0.45 μm or more. The thickness of the mesh-like member is, for example, 50 μm to 2,500 μm, preferably 60 μm to 200 μm. Furthermore, the material of the mesh-like member may be any material that imparts the above characteristics, such as cloth, polymer (for example, polyethylene terephthalate (PET) and other polyesters, nylon, polypropylene, Teflon and polyethylene), and the like. Among them, PET is particularly preferable. As the mesh-like member used in the present invention, for example, a commercially available mesh cloth such as PET105 (material: PET, mesh opening: 105 μm, mesh 145 / inch, manufactured by Semitech Co., Ltd. (Osaka, Japan)) should be used. Can do.
In addition, when a mesh-like member is used in combination with a gel frame, it is preferable that the mesh-like member and the gel are integrally configured as described above.
By arranging the spacer between the gel frames, a space in which the running gel is formed can be prepared. Generally, the thickness of the spacer (spacer width) becomes the thickness of the running gel as it is. The material of the spacer may be the same as or different from that of the gel frame, such as glass or polymer.
In the present invention, the running gel or stacking gel is, for example, a polyacrylamide gel prepared from acrylamide and N, N′-methylenebisacrylamide. The acrylamide concentration of the running gel can be appropriately selected according to the molecular weight of the peptide or protein in the sample subjected to electrophoresis. The running gel is not limited to a gel having a uniform acrylamide concentration, but may be a gradient gel having a gradient in acrylamide concentration.
The size and thickness of the gel of the present invention are not particularly limited, and may be any size and thickness depending on the purpose of use. Moreover, the shape of the gel is usually a quadrangle (for example, a rectangle and a square), and includes an elongated strip shape (for example, a width of 1 to 10 mm).
In the method for producing a gel for slab electrophoresis according to the present invention (hereinafter simply referred to as “manufacturing method according to the present invention”), a mesh-like member is first disposed on one or both surfaces of two gel frames. The mesh-like member can be fixed to the gel frame using, for example, double-

sided tapes

4a, 4b, 4c, and 4d shown in FIG.
Next, in the manufacturing method according to the present invention, a spacer is placed between the gel frames on which the mesh-like members are arranged, and the two gel frames are combined to form a mold for a running gel (and a stacking gel if necessary). Is made. The spacer can be fixed to the gel frame and the mesh-like member with, for example, a double-sided tape.
Further, after producing a mold containing a gel frame, a mesh-like member and a spacer (hereinafter simply referred to as “formwork” or “mesh with formwork”), the mold is sandwiched between glass plates for a slab type electrophoresis apparatus. Pour the running gel solution into the spacer width of the frame. At that time, in the glass plate for a slab type electrophoresis apparatus, the side piece and the bottom are sufficiently sealed with a waterproof tape, and further, both sides are pressed with a double clip or the like. The running gel solution can be poured directly or into the spacer width of the mold using, for example, a Pasteur pipette. Thus, the slab type | mold electrophoresis gel which concerns on this invention is producible by hardening a running gel in a mold.
Furthermore, if necessary, a stacking gel solution can be poured into the upper portion of the running gel, and an appropriate comb can be inserted at that time to produce a stacking gel. The stacking gel solution can be poured in the same manner as the running gel solution described above. After solidification, the comb may be pulled out of the gel or may be retained as it is. The well formed at this time is used as an electrophoresis sample well.
The slab electrophoresis gel according to the present invention thus produced can be removed from the glass plate for a slab electrophoresis apparatus and wrapped in Saran wrap, for example, and stored refrigerated until use. At the time of use, a suitable container is filled with water, and the slab electrophoresis gel according to the present invention can be quickly and once again sandwiched in a glass plate for a slab electrophoresis apparatus in water.
In the slab electrophoresis gel according to the present invention produced as described above, one or both surfaces of a running gel (and a stacking gel as required) are supported by a mesh-like member. Further, the support is strengthened by a gel frame as required. As described above, since the gel is supported by the mesh-like member and / or the gel frame, the slab-type electrophoresis gel according to the present invention has higher physical strength than the slab-type gel that is usually used, and Easy to handle.
In addition, as described above, in the present invention, for example, by gelling (hardening) the gel solution in a state where the gel solution and the mesh-like member are in contact with each other, one or both surfaces of the slab type gel are mesh-like. It is possible to adopt a configuration in which the members are fixed (integrated). According to this configuration, since the gel enters the fine gap of the mesh-like member and the gel and the mesh-like member are more firmly fixed, there is also an effect that the mesh-like member is not likely to peel from the gel surface. Play.
Further, after electrophoresis, the slab electrophoresis gel according to the present invention is removed from the slab electrophoresis apparatus glass plate without peeling the gel from the slab electrophoresis apparatus glass plate as in the prior art. It can be directly used for staining (for example, Coomassie brilliant blue (CBB) staining or silver staining) or blotting. In dyeing and blotting, the support (that is, mesh-like member) of the gel for slab electrophoresis according to the present invention and, optionally, the formwork are retained.
Furthermore, when supplying the gel for slab electrophoresis according to the present invention as a precast gel, unlike a precast gel that is commercially available, it is not sandwiched between glass plates, but as a bare gel package surrounded by a gel frame. It can be supplied and the cost can be kept low. Alternatively, the slab-type electrophoresis gel according to the present invention can be supplied in close contact with a blotting membrane (for example, a PVDF membrane) via a gel frame, and the operation from electrophoresis to blotting can be further performed. It can be performed simply.
Needless to say, the slab type gel (slab type electrophoresis gel) in the present invention refers to a plate-like gel, and the surface of the gel is in an arbitrary direction (generally, a horizontal direction or a vertical direction) during electrophoresis. Can be used fixedly.
When storing the gel of the present invention, for example, it is packaged with a polymer film or sealed in a polymer bag and stored in a cool and dark place under sufficient humidity not to dry.
EXAMPLES Hereinafter, although this invention is demonstrated in detail using an Example, the technical scope of this invention is not limited to these Examples.
〔experimental method〕
(1) Production of mesh with formwork Production of a mesh with formwork will be described with reference to FIG.
Two 10 cm (width (W)) × 10 cm (height (H)) square polyethylene terephthalate (PET) plates (0.5 mm thick) were prepared. About these two plates, a rectangle of 8 cm (W) × 7 cm (H) was cut out at a position 1 cm from the three sides and 2 cm from the remaining one side. When one plate was further erected with a 2 cm wide blank face up, a rectangle of 8 cm (W) × 1 cm (H) was cut out at a position 1 cm from each end and a vertical width of 1 cm from the upper end. This plate is called a cutting plate 5. The other plate is called a flat plate 6.
Double-

sided tapes

7a, 7b, 7c and 7d having a width of 1 cm were applied to the four edges of the rectangular cutout window of the flat plate 6. Next, 10 cm (W) × 9 cm (H) mesh cloth 8 (material: PET, mesh opening 105 μm, mesh 145 / inch, product name PET105, Semitech Co., Ltd., Osaka) is placed on both sides and bottom of the flat plate 6. In addition, the double-

sided tapes

7a, 7b, 7c, and 7d were attached so as to close the rectangular windows. In addition, the two edges of the

spacer PET plates

9a and 9b measuring 1 cm (W) x 10 cm (H) x 0.1 cm (depth (D)) are attached to the both ends of the incision plate 5 and attached with double-sided tape. The mesh with the formwork was completed by overlapping the mesh cloth 8 on the flat plate 6 so that the notch was on the upper side.
(2) Preparation of gel The mold-attached mesh is sandwiched between glass plates (1 mm or 2 mm thick) for mini-slab type electrophoresis apparatus of the same size and size as the mesh with form obtained in (1) above, and the sides and bottom Was sufficiently sealed with waterproof tape, both sides were held with double clips, and the whole was made to stand stably and vertically, and a running gel solution having the composition shown in Table 1 below was poured.

After the injection of the running gel solution, it was allowed to stand still after being overlaid with water or butanol to gel (about 15 minutes).
Next, a stacking gel solution having the composition shown in Table 2 below was poured into the upper portion of the running gel.

After the injection of the stacking gel solution, a comb having a thickness of 0.75 mm was put to gel (about 10 minutes). In this manner, a gel supported by the mesh with a mold (hereinafter referred to as “mesh gel with a mold”: slab electrophoresis gel according to the present invention) was produced.
After gelation, the glass plate was removed, the mesh gel with mold was taken out, wrapped in Saran wrap, and refrigerated until use. At the time of use, an appropriate container was filled with water, and the mesh gel with a mold was quickly put in close contact with the glass plate for a slab type electrophoresis apparatus in water.
(3) Electrophoresis using a mesh gel with a mold A gel plate equipped with a mesh gel with a mold on a mini slab type electrophoresis apparatus (SE-8010, SIC Marisol Co., Ltd., Tokyo) or normal without a mesh with a mold A gel plate equipped with a gel (hereinafter referred to as “control gel”) was set.
On the other hand, 5 μl of a protein sample (100,000 × g centrifugation supernatant derived from mouse brain) (5 μg) or 5 μl of a molecular weight marker (Precision plus standard, Nippon Bio-Rad Laboratories, Tokyo) 5 × sample buffer (composition: 0) 2 μl of 25 M Tris-HCl (pH 6.8), 10% SDS, 3/10 volume of β-mercaptoethanol, 50% glycerol, 1% BPB several drops) and 3 μl of distilled water were added and boiled at 95 ° C. for 3 minutes. The resulting sample was added to each well of the gel plate described above.
Next, using these gel plates, electrophoresis was performed at 40 mA for 60 minutes in an electrophoresis buffer having the composition shown in Table 3 below.

(4) Semi-drive blotting on PVDF membrane Six sheets of filter paper cut into 8 cm (W) x 7 cm (H) and a PVDF membrane were prepared. Three filter papers sufficiently soaked in a blotting buffer having the composition shown in Table 4 below are stacked and placed on a cathode plate of a semi-drive lotter (AE6677, ATTO, Tokyo), and subjected to electrophoresis in (3) above. The attached mesh gel or control gel was layered so that the filter paper just fit within the frame.
Next, after alcohol infiltration, the PVDF membrane sufficiently immersed in the blotting buffer was placed in close contact with the gel so that air did not enter. Further, the remaining three filter papers were stacked. Using a glass pipette belly, etc., the filter paper was lightly rubbed to expel the air between the filter paper / gel / membrane.
Finally, an anode plate was put on and energized at 150 mA for 1 hour.

(5) Coomassie brilliant blue (CBB) staining and silver staining Both ends of the mesh gel with formwork or control gel subjected to electrophoresis in (3) above were pressed with metal-free clips (made of plastic). In order to reduce distortion caused by stretching and deformation of the gel during dyeing and decolorization, all of the usual buffers used here were used containing 0.375 M Tris salt or 0.375 M NaCl and 10% glycerol.
(5-1) CBB staining CBB staining was performed by first immersing a mesh gel with a mold or a control gel in a CBB staining solution having the composition shown in Table 5 below and shaking at room temperature for 30 minutes.

Next, soak a mesh gel with a mold or a control gel in a CBB decolorizing solution having the composition shown in Table 6 below, add Kimwipe, shake at room temperature for 15 minutes, replace with a new decolorizing solution, and then shake for 30 minutes. The operation of exchanging the liquid was repeated several times.

After shaking and liquid exchange were repeated until the color was sufficiently decolored and the band became clear, lightly rinse the mesh gel with mold or control gel with water, and then 40% methanol / 10% acetic acid / 0.375M NaCl / 10. Stored in% glycerol solution.
(5-2) Silver staining First, a mesh gel with a formwork or a control gel was immersed in 50% methanol / 0.375 M NaCl / 10% glycerol and shaken at room temperature for 1 hour. Next, a mesh gel with a mold or a control gel was immersed in a solution C of a silver staining solution having the composition shown in Table 7 below for 15 minutes.

After washing with water for 5 minutes, a mesh gel with a mold or a control gel was then immersed in a developer solution D having the composition shown in Table 8 and shaken until an image appeared (about 15 minutes). After the appearance of the image, the mold mesh mesh or control gel was lightly rinsed with water, and then immersed in 10% EDTA / 40% methanol / 10% acetic acid / 0.375 M NaCl / 10% glycerol and stored.

(6) Physical strength of mesh gel Fold lightly so that the mesh gel part of the mesh gel with formwork prepared in (2) above or the upper and lower ends of the control gel are aligned, and push the bent part little by little. It was observed whether the gel was broken or broken when pressed.
〔Experimental result〕
3 to 5 show photographs comparing the results of semi-drive blotting, CBB staining, and silver staining on the PVDF membrane performed as described above in the case of a mesh gel with a frame and the case of a control gel.
FIG. 3 shows the results of semi-driving the PVDF membrane. The photograph in (a) shows the blotting of the control gel. The photograph of (b) shows the blotting of the mesh gel with a formwork. All the electrophoretic images are molecular weight markers (precise prestained markers).
FIG. 4 shows the results of CBB staining. The photograph of (a) shows the CBB staining result of the control gel. The photograph of (b) shows the CBB staining result of the mesh gel with formwork. In (a), each migration image of 1, 2, 8, 9, 10 lanes from the left is a molecular weight marker (Precision Prestained marker), while migration of 3, 4, 5, 6, 7 lanes from the left Images are protein samples of various concentrations (100,000 xg centrifugation supernatant from mouse brain). Moreover, in (b), each migration image of 1, 2, 7, 8, 9 lanes from the left is a molecular weight marker (precise prestained marker), while the migration of 3, 4, 5, 6 lanes from the left Images are protein samples of various concentrations (100,000 xg centrifugation supernatant from mouse brain).
FIG. 5 shows the results of silver staining. The photograph of (a) shows the silver staining result of the control gel. The photograph of (b) shows the result of silver staining of the mesh gel with formwork. In (a) and (b), electrophoresis images of 1, 5, 6 lanes from the left are molecular weight markers (precision prestained markers), while electrophoresis images of 2, 3, 4 lanes from the left are protein samples ( 100,000 xg centrifugation supernatant from mouse brain).
As shown in FIGS. 3 to 5, the stained image and the blotting result after electrophoresis using a mesh gel with a mold (slab electrophoresis gel according to the present invention) are obtained when a control gel (ordinary gel) is used. Compared with, the same sensitivity and resolution were shown, and it was found that a mesh gel with a mold can be used for the same purpose as a conventional gel.
In addition, the physical strength comparison of the gels showed that the control gel collapsed and then cracked quickly with very little pressure, whereas the mesh gel could be restored to its original state without breaking even though it almost completely folded. It was.

本発明によれば、電気泳動後、支持体および場合により型枠、を保持したまま、容易に染色又はブロッティングに供することができるスラブ型電気泳動用ゲルが提供される。
本明細書で引用した全ての刊行物、特許および特許出願をそのまま参考として本明細書にとり入れるものとする。ADVANTAGE OF THE INVENTION According to this invention, the gel for electrophoresis of a slab type | mold which can be easily used for a dyeing | staining or blotting is provided, holding a support body and the formwork depending on the case after electrophoresis.
All publications, patents and patent applications cited herein are incorporated herein by reference in their entirety.

Claims

A slab type gel for gel electrophoresis,
Two gel frames and a spacer disposed between the gel frames, the gel is disposed in the spacer width between the gel frames,
A slab-type electrophoresis gel, wherein a mesh-like member for supporting the gel is disposed on one or both surfaces of the gel, and the mesh-like member and the gel are integrally formed. .

The mesh-like member is fixed to one or both surfaces of the slab type gel by gelling the gel solution in a state where the gel solution and the mesh-like member are in contact with each other. Slab electrophoresis gel.

The slab electrophoresis gel according to claim 1, wherein the gel has a width of 1 to 10 mm.

The slab electrophoresis gel according to claim 1, wherein the mesh-like member has an opening of 0.2 µm to 4,000 µm.

The slab electrophoresis gel according to claim 1, wherein a material of the mesh-like member is a polymer.

The slab electrophoresis gel according to any one of claims 1 to 5, wherein the gel is a running gel.

The slab electrophoresis gel according to claim 6 , further comprising a stacking gel on the running gel.