JP5162748B2 - バイオ分子素子、バイオセンサー分子の支持体となる脂肪酸と脂質の積層分子薄膜およびその製造方法 - Google Patents
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Description
脂質にはフォスファチジルコリンに見られるような疎水性の炭化水素鎖が二本と親水性のリン酸基に分かれた分子構造をもち、これが二分子で逆さまに向かい合うようにして炭化水素鎖を一個の膜蛋白質分子の疎水性領域を包む形で多数の数十個〜100個の脂質分子に膜蛋白質は取り囲まれて、脂質二重層という細胞膜によくみられる膜空間構造の中で機能している。
前記脂肪酸はステアリン酸等アルキン酸である。
前記脂肪酸はレチノイン酸等イオノン環を有する脂肪酸である。
前記脂肪酸はステアリン酸等アルキン酸である膜部分とレチノイン酸等イオノン環を有する脂肪酸である膜部分の組み合わせである。
前記脂質はフォスファチジルコリン等リン脂質である。
前記リン脂質はジミリストイルフォスファチジルコリン、ジパルミトイルフォスファチジルコリン等リン脂質である。
前記分子薄膜は単分子膜あるいは二分子膜である。
前記積層体は前記脂肪酸あるいはリン脂質の単分子膜あるいは二分子膜を積層して形成される。
前記膜蛋白質とは前記脂質二分子膜中において安定化し機能発現する。
本発明の有機薄膜の製造方法は、溶媒中に懸濁した脂質に超音波を印加して分散させた上で、基板上に形成した脂肪酸の単分子薄膜の上に垂直浸漬法等で接合させる。
前記有機薄膜は最上段に脂質分子、その下部に脂肪酸の基本構成の有機薄膜となる。
前記有機薄膜接合過程の前に脂質を分散させる溶媒は有機溶媒を用いる。
前記有機溶媒には沸点が40℃〜70℃の範囲にある有機溶媒を用いる。
前記有機溶媒はヘキサンを用いる。
前記有機薄膜に膜蛋白質等分子を導入するには有機溶媒中で懸濁したリン脂質に膜蛋白質等分子混合することにより最上段に脂質分子及び膜蛋白質等分子、その下部に脂肪酸の構成の有機薄膜を得る。
前記垂直浸漬法とはラングミュアーブロジェット法等による基板上への有機薄膜の累積形成される。
一般に水に馴染む部分である親水基は水に馴染む部分同士、水と馴染まない部分である疎水基は水と馴染まない部分同士で引き合う性質がある。一般的にLB膜作製に用いられる垂直浸漬法では、この性質を利用して固体基板の表面が水に馴染む場合は固体基板を予め水面下に沈めておき、水面上に単分子膜を作製してから基板を水面上に上昇させる。そして、水面が固体基板の上昇に伴い固体基板の周辺で上の方にわずかに膨らむので、単分子膜の親水基部分が固体基板上に引き寄せられる。単分子膜が理想的に累積された場合、固体基板の表面には疎水基部分が露出していることになる。
紫外可視分光法からは二つの重要な情報を得ることができる。一つは吸収波長(λmax,nm)である。これは電子遷移のエネルギー情報を含んでおり、吸収を示す実際の発色団に関する情報が得られる。もう一つは、モル吸光係数εと呼ばれる量であり、一定波長で分子に固有な量であり、光の吸収による電子遷移の起こりやすさの目安である。もし,電子遷移が容易に起こるならば,光は強く吸収され、εの値は大きい。逆に、遷移が容易に起こるならば、εの値は小さい。モル吸光係数と発色団の濃度(mol L-1)の関係はランベルト-ベールの法則で表される。
紫外-可視分光計は吸光度を直接データ記録媒体であるハードディスクに記録する。また試料セルは普通光路長1cmにつくられている。この場合、εは直接次式により求められる。
分子の振動および回転状態は,赤外領域の電磁波を吸収することによって励起される。この領域は可視領域より長波長側にある。このような分子の振動および回転に関する情報は、直接的に、赤外(IR)スペクトルにおける吸収から得ることができる。IRスペクトルにおける吸収帯の位置は,赤外線の波長λ(単位はμまたはμm)で示すことができる。有機化合物分子の構造解析に用いられる特性吸収帯は、次に示す領域にある。
IRスペクトルでは、ふつう4000-400cm-1の波数領域が用いられる。
有機化合物分子中の多くの官能基が特徴的な振動を示し、これがIRスペクトルのある一定の領域の吸収帯に対応する。分子振動は官能基内で局所的に起こり、分子内のほかの部分に及ぶことはない。したがって、特定の官能基の存在がその吸収帯によって同定できる。
1)LB膜作製装置を使用し、水槽を蒸留水で満たす。
2)吸引ポンプで水面洗浄を行う。
3)浮子を設置し、洗浄した基板を水面上に浸漬させる。(垂直浸漬法Y型)
4)所定の試薬を水面上にシリンジでゆっくりと展開、20分間放置し、溶媒であるヘキサンの揮発を待つ。
5)浮子に錘を付け、表面圧により水面上の有機分子を凝集させる。
6)基板の昇降を行うモーターを起動させ、成膜を開始する。
7)基板へ所定回数の累積終了後、蒸留水によって洗浄後、窒素ガス雰囲気下で乾燥させ、紫外可視光吸収スペクトル測定および赤外吸収スペクトル測定を行い光吸収特性の解析を行う。
8)走査型プローブ顕微鏡を用いて、薄膜の表面構造解析を行う。
以下、その詳細について説明する。
第一段階として、まず、試料として固体粉末のDMPC(ナカライテスク社より購入)を用意し、体積5mL、濃度3.2mMになるように秤量しバイヤルビンに入れて体積を5mLとなるようにヘキサン溶媒を添加し、そのバイヤルビンを卓上超音波発振器(日本アレックス社,NEOCLEANER-R)によって超音波を加振し溶媒であるヘキサン中でDMPCを分散させた。肉眼でも一様に分散している状態と判別できた。発明者が設計自作したLB法作製装置の水槽に溜めて静置した蒸留水の水中に予め10mmの深さで鉛直に浸しておいた10mm×15mm×1mmのサイズの石英基板のある水面上にその溶液をすばやく60μLをシリンジで分取してゆっくりと展開させ、有機溶媒の揮発と膜の形成のために20分間静置した。
である。
上式に錘が0.15g時の水面の面積値と実数値を代入すると、A=38.9〔Å〕となる。Ikonen等によると均一に圧縮された1分子当たりのDMPC分子は、50Å2と報告されており、本実験で得た数値はほぼ一致していることが言えた。
なお、図7の1は石英基板、2はDMPC、3はステアリン酸である。
なお、図10の1は石英基板、2はDMPC、4はレチノイン酸である。
2 DMPC
3 ステアリン酸
4 レチノイン酸
5 DMPC膜(円形段差)
6 DMPC膜(脂質曲面)
Claims (15)
- 脂肪酸及び脂質の分子薄膜の積層体を含む薄膜であって、
前記脂肪酸からなる第一種層と前記脂質からなる第二種層とを備え、
前記第一種層が基板上に形成され、前記第二種層が前記第一種層上に形成されている、薄膜。 - 前記脂肪酸が、イオノン環を有する脂肪酸、又は、イオノン環を有する脂肪酸及びアルキン酸である、請求項1に記載の薄膜。
- 前記イオノン環を有する脂肪酸がレチノイン酸である、請求項2に記載の薄膜。
- 前記脂質がリン脂質である、請求項1に記載の薄膜。
- 前記リン脂質が、ジミリストイルフォスファチジルコリン、又は、ジパルミトイルフォスファチジルコリンである、請求項4に記載の薄膜。
- 前記第一種層が3層である、請求項1〜5のいずれかに記載の薄膜。
- 前記第二種層が2層である、請求項1〜6のいずれかに記載の薄膜。
- 前記脂肪酸がレチノイン酸であり、前記薄膜の表面が幅200nm前後の一様な曲面状の凸面の集合体で構成されている、請求項1〜7のいずれかに記載の薄膜。
- 膜蛋白質を導入したときに該膜蛋白質が前記第二種層中で安定化して機能発現する、請求項7に記載の薄膜。
- 脂肪酸及び脂質の分子薄膜の積層体を含む有機薄膜の製造方法であって、
基板上に一層又は複数層の前記脂肪酸の分子薄膜を形成する工程と、
溶媒及び前記脂質を含む懸濁液に超音波を印加して前記脂質を分散させ、垂直浸漬法によって前記基板上に形成された前記脂肪酸の分子薄膜上に前記脂質の分子薄膜を接合させる工程と、
を備える、有機薄膜の製造方法。 - 前記脂質を分散させる溶媒として有機溶媒を用いることを特徴とする請求項10に記載の有機薄膜の製造方法。
- 前記有機溶媒として沸点が40℃〜70℃の範囲にある有機溶媒を用いることを特徴とする請求項11に記載の有機薄膜の製造方法。
- 前記有機溶媒としてヘキサンを用いることを特徴とする請求項12に記載の有機薄膜の製造方法。
- 前記懸濁液に膜蛋白質分子を混合することにより最上段に前記脂質分子及び前記膜蛋白質分子、その下部に前記脂肪酸の構成の有機薄膜を得ることを特徴とする請求項10乃至13のいずれか一つに記載の有機薄膜の製造方法。
- 前記垂直浸漬法とはラングミュアーブロジェット法によって前記基板上に前記有機薄膜を累積形成されることである請求項10に記載の有機薄膜の製造方法。
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