JP5097875B2 - Collagen extraction method - Google Patents
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Description
この発明は、コラーゲン抽出方法に関し、特に、収率良く質の高いコラーゲンを魚鱗から簡易に得ることができるコラーゲンの抽出方法に関する。 The present invention relates to a method for extracting collagen, and more particularly to a method for extracting collagen that can easily obtain high-quality collagen with high yield from fish scales .
従来、コラーゲン含有組織から様々な方法でコラーゲンが抽出されている。抽出されたコラーゲンは、たとえば、食品や化粧品に添加され、これらはコラーゲン含有製品として市場に供給される。 Conventionally, collagen has been extracted from collagen-containing tissues by various methods. The extracted collagen is added to food and cosmetics, for example, and these are supplied to the market as collagen-containing products.
このようなコラーゲン含有組織は、以前は主に牛などを原料としていた。しかし、近年、いわゆる狂牛病が各地で発生していることから牛を原料とした製品が敬遠される傾向があり、牛以外の原料からコラーゲン含有組織を得る必要も生じている。 Such collagen-containing tissues have been mainly made from cattle and the like. However, in recent years, so-called mad cow disease has occurred in various places, so there is a tendency for products made from cows to be avoided, and it is also necessary to obtain collagen-containing tissues from materials other than cows.
そこで、近年、コラーゲン含有組織を得るための牛以外の原料として魚類が用いられており、特に、魚鱗や魚皮が用いられている。具体的な製品としては、現在、魚から抽出したコラーゲンを配合した食品が「フィッシュコラーゲン」として市場に出回っている。 Therefore, in recent years, fish has been used as a raw material other than cattle for obtaining a collagen-containing tissue, and in particular, fish scales and fish skins are used. As a specific product, foods containing collagen extracted from fish are currently on the market as “fish collagen”.
魚からコラーゲンを抽出する方法としては、魚鱗や魚皮を熱水で煮出してコラーゲンを抽出する方法もあるが、このような方法では、コラーゲン繊維が変形したり分解したりしてしまい、抽出されるコラーゲンの質が低いものとなってしまう。そこで、魚から質の高いコラーゲンを抽出すべく様々な方法が検討されている（たとえば、特許文献１および特許文献２参照）。
しかしながら、従来の技術では以下の点で問題があった。
特許文献１に記載の方法は、魚鱗から粗コラーゲンを生成し、当該生成した粗コラーゲンを酸性水溶液中に浸漬させせることによりコラーゲンを抽出するものである。この方法においては各工程を１５℃以下の低温で行っており、これにより、コラーゲンが変形や分解等せずに質の高いコラーゲンを得ることができる。
具体的には、特許文献１では、生成した粗コラーゲン（粗魚鱗コラーゲン）に４℃〜５℃の酢酸水溶液を加えて３６時間〜４８時間経過させてコラーゲンを抽出している。そして、この抽出工程を３回繰り返している。その結果、粗コラーゲンに対して最終的に得られたコラーゲンの収率が約６．６％となっている。このように、この方法によると質の高いコラーゲンを得ることができるが、抽出工程を複数回行うという手間があるにもかかわらず収率が悪いため、実際の生産には不向きであるという問題点がある。
However, the conventional technique has the following problems.
In the method described in Patent Document 1, crude collagen is produced from fish scales, and collagen is extracted by immersing the produced crude collagen in an acidic aqueous solution. In this method, each step is performed at a low temperature of 15 ° C. or lower, and thereby high quality collagen can be obtained without deformation or decomposition of the collagen.
Specifically, in Patent Document 1, an aqueous acetic acid solution at 4 ° C. to 5 ° C. is added to the generated crude collagen (coarse fish scale collagen), and the collagen is extracted after 36 to 48 hours. And this extraction process is repeated 3 times. As a result, the yield of collagen finally obtained with respect to the crude collagen is about 6.6%. As described above, according to this method, high-quality collagen can be obtained, but the yield is poor in spite of the trouble of performing the extraction process multiple times, so that it is not suitable for actual production. There is.
また、特許文献２に記載の方法は、酵素を用いてコラーゲンの抽出を行う酵素処理を行っており、これにより、コラーゲンを収率よく抽出することができる。
具体的には、まず、粗コラーゲン（前処理済み魚鱗）を塩酸中に浸漬して膨張させた後に破砕し、当該破砕した粗コラーゲンに蛋白質分解酵素であるペプシンを加えて２４時間経過させる。その後、遠心分離により上澄み液と沈殿物とに分離し、沈殿物に対しては上記処理を繰り返し行い、合計でペプシンを加える処理を３回行っている。その結果、粗コラーゲンに対して最終的に得られたコラーゲンの収率が約７０．０％となっている。なお、この場合の収率は、処理工程を３回繰り返し行った後の合計の収率であり、１回の処理工程のみを行った場合の収率は依然として低いものであった。このように、この方法によると収率良くコラーゲンを抽出することもできるが各工程を繰り返し行わなければならないため、全体として煩雑な方法であり、また、各工程を一回行うのみでは収率が低いといった問題点がある。
Moreover, the method of patent document 2 is performing the enzyme process which extracts a collagen using an enzyme, Thereby, collagen can be extracted with a sufficient yield.
Specifically, first, crude collagen (pretreated fish scales) is immersed in hydrochloric acid to be swelled and then crushed, and pepsin as a proteolytic enzyme is added to the crushed crude collagen for 24 hours. Then, it isolate | separates into a supernatant liquid and a precipitate by centrifugation, the said process is repeatedly performed with respect to a precipitate, and the process which adds pepsin in total is performed 3 times. As a result, the yield of collagen finally obtained with respect to the crude collagen is about 70.0%. In addition, the yield in this case is a total yield after repeating a process process 3 times, and the yield when only one process process was performed was still low. Thus, according to this method, collagen can be extracted with a high yield, but each step must be repeated, which is a complicated method as a whole, and the yield can be increased by performing each step once. There is a problem that it is low.
本発明は上記に鑑みてなされたものであって、収率良く質の高いコラーゲンを簡易に得ることができるコラーゲンの抽出方法を提供することを目的とする。 This invention is made | formed in view of the above, Comprising: It aims at providing the extraction method of collagen which can obtain high quality collagen easily with a sufficient yield.
上記の目的を達成するために、請求項１に記載のコラーゲンの抽出方法は、魚鱗からコラーゲンを抽出する方法であって、魚鱗に対して脱灰工程を含む前処理を行って粗コラーゲンを生成する粗コラーゲン生成工程と、前記粗コラーゲン生成工程により生成された粗コラーゲンに対して、過酸化水素を用いて処理する過酸化水素処理工程を含む酸化処理を施す酸化処理工程と、酸化処理工程を施したものからコラーゲンを抽出する抽出工程と、を含むことを特徴とする。 To achieve the above object, the method for extracting collagen according to claim 1 is a method for extracting collagen from fish scales, the crude collagen pretreated containing demineralization process on fish scales A crude collagen production step, an oxidation treatment step of subjecting the crude collagen produced by the crude collagen production step to an oxidation treatment including a hydrogen peroxide treatment step of treating with the hydrogen peroxide, and an oxidation treatment step. And an extraction step of extracting collagen from the applied one .
すなわち、請求項１にかかる発明は、粗コラーゲンに対して酸化処理を施すことで、粗コラーゲンをコラーゲンの抽出がしやすい状態にすることができる。より詳しくは、通常は、コラーゲン含有組織から生成された状態の粗コラーゲンは、粗コラーゲン分子同士の架橋構造により分子同士が強く結合しており、コラーゲンが抽出しにくい状態となっている。そこで、粗コラーゲンに対して酸化処理を施すことで、粗コラーゲン分子同士の架橋構造を除去することができ、粗コラーゲンから容易にコラーゲンを抽出することが可能となる。 That is, in the invention according to claim 1, the crude collagen can be easily extracted by performing oxidation treatment on the crude collagen. More specifically, the crude collagen in a state produced from the collagen-containing tissue is usually in a state in which the molecules are strongly bonded to each other due to the crosslinked structure of the crude collagen molecules, and the collagen is difficult to extract. Therefore, by subjecting the crude collagen to oxidation treatment, the cross-linked structure between the crude collagen molecules can be removed, and the collagen can be easily extracted from the crude collagen.
ここで、酸化処理工程には、過酸化水素を用いて粗コラーゲンを処理する工程を含むので、特別な装置を導入することなく、処理液の入替えのみの簡便な作業にてコラーゲンを抽出することができる。 Here, since the oxidation treatment step includes a step of treating crude collagen with hydrogen peroxide, the collagen can be extracted by simple work of only replacing the treatment liquid without introducing a special apparatus. Can do.
また、その後は、たとえば、粗コラーゲンに酢酸等の酸性水溶液を添加することにより、酸性溶液にコラーゲンを溶解させて収率良くコラーゲンを抽出することができる。
また、このようにすることで、コラーゲンが変形や分解等しにくいため、質の高いコラーゲンを抽出することができる。ゆえに、簡易な方法でありながら、収率良く質の高いコラーゲンを得ることができる。
Thereafter, for example, by adding an acidic aqueous solution such as acetic acid to the crude collagen, the collagen can be dissolved in the acidic solution and the collagen can be extracted with good yield.
In addition, by doing this, collagen is not easily deformed or decomposed, so that high quality collagen can be extracted. Therefore, it is possible to obtain high-quality collagen with a high yield while being a simple method.
なお、粗コラーゲンに対して酸化処理を施すとは、広く粗コラーゲンを酸化させる状況に置くことを言い、その方法としては、たとえば、オゾン等の酸化剤を用いる方法や、電気分解を行う方法も挙げることができる。 Note that the performing oxidation treatment on the crude collagen, broadly refers to placing the crude collagen situation of oxidizing, as the method, for example, a method using an oxidizing agent such as ozone, a method of performing electrolysis Can be mentioned.
また、請求項１にかかる発明は、魚類からコラーゲンを抽出するので、牛に比べて需要を見込むことができるコラーゲンを抽出することができる。
また、コラーゲン含有組織を脱灰して粗コラーゲンを生成するので、質の高い粗コラーゲンを得ることができる。なお、脱灰するとは、広くカルシウム成分を除去することを言う。より詳しくは、魚類から得られるコラーゲン含有組織には、カルシウムが多く含まれており、このままの状態でコラーゲンを抽出すると不純物が混入しやすく抽出するコラーゲンの質が悪くなり、また、収率も悪くなってしまう。そこで、コラーゲン含有組織からカルシウム成分を除去して粗コラーゲンを生成することで、収率良く質の高い粗コラーゲンを得ることができる。
Moreover, since the invention concerning Claim 1 extracts collagen from fish, it can extract the collagen which can anticipate a demand compared with a cow.
Further, since the collagen-containing tissue is decalcified to produce crude collagen, high quality crude collagen can be obtained. In addition, decalcification means removing a calcium component widely. More specifically, collagen-containing tissues obtained from fish contain a large amount of calcium. If collagen is extracted as it is, impurities are easily mixed and the quality of the extracted collagen deteriorates, and the yield is also poor. turn into. Therefore, by removing the calcium component from the collagen-containing tissue to produce crude collagen, high-quality crude collagen can be obtained with high yield.
なお、魚鱗は、その成分の約５０％がカルシウム成分であり、残りの約５０％がたんぱく質である。そして、そのたんぱく質の約４０％がコラーゲンである。そのため、脱灰してカルシウム成分を除去することで、余分な成分を除去して質の高い粗コラーゲンを得ることができる。 Incidentally, fish scales is about 50% of calcium component of the component, the remaining approximately 50% Gatanpakushitsu. And about 40% of the protein is collagen. Therefore, by decalcifying and removing the calcium component, it is possible to remove excess components and obtain high quality crude collagen.
なお、脱灰する方法としては、コラーゲン含有組織を水酸化ナトリウム水溶液に浸漬してアルカリ処理する工程と、アルカリ処理した後のコラーゲン含有組織を塩酸溶液に浸漬して塩酸処理する工程とを含む方法を挙げることができる。このようにすることで、コラーゲン含有組織を良好に脱灰することができる。 The decalcification method includes a step of immersing the collagen-containing tissue in an aqueous sodium hydroxide solution and subjecting to alkali treatment, and a step of immersing the collagen-containing tissue after alkali treatment in a hydrochloric acid solution and treating with hydrochloric acid. Can be mentioned. By doing in this way, a collagen containing structure | tissue can be decalcified favorably.
また、請求項２に記載のコラーゲンの抽出方法は、請求項１に記載のコラーゲンの抽出方法において、前記過酸化水素処理工程が、水温がコラーゲンの変性温度以下かつ０℃以上の２０％〜４０％過酸化水素水に粗コラーゲンを４時間〜９６時間浸漬させる工程を含むものであることを特徴とする。 The collagen extraction method according to claim 2 is the collagen extraction method according to claim 1, wherein the hydrogen peroxide treatment step is performed at a water temperature of 20% to 40% of a collagen denaturation temperature or lower and 0 ° C or higher. The method includes a step of immersing crude collagen in 4% to 96 hours in% hydrogen peroxide water.
すなわち、請求項２にかかる発明は、効率的な条件のもとで粗コラーゲンに過酸化水素処理を行うことができる。
なお、コラーゲンの変性温度は、たとえば、コラーゲンが魚由来のものの場合には約３０℃である。また、コラーゲン水溶液の凝固点は、約０℃である。また、過酸化水素水の水温は、２０℃〜２５℃であることが好ましい。
That is, the invention according to claim 2 can perform hydrogen peroxide treatment on crude collagen under efficient conditions.
Note that the denaturation temperature of collagen, for example, in the case of those collagen derived from fish is about 30 ° C.. The freezing point of the aqueous collagen solution is about 0 ° C. The water temperature of the hydrogen peroxide solution is preferably 20 ° C to 25 ° C.
以上のように、本発明（請求項１）によれば、簡易な方法でありながら、収率良く質の高いコラーゲンを得ることができる。また、簡便な作業工程にてコラーゲンを抽出することができる。また、牛に比べて需要を見込むことができるコラーゲンを抽出することができる。本発明（請求項２）によれば、効率的な条件のもとで粗コラーゲンに過酸化水素処理を行うことができる。 As described above, according to the present invention (Claim 1), high-quality collagen can be obtained in a high yield with a simple method. Moreover, collagen can be extracted by a simple work process. In addition, collagen that can be expected to be demanded compared to cattle can be extracted. According to the present invention (Claim 2), it is possible to perform hydrogen peroxide treatment on crude collagen under efficient conditions.
以下、実施例および比較例により本発明を具体的に説明する。
本発明においては、原料として魚鱗を用い、特に、魚としてテラピアを用いた。
また、魚鱗を脱灰する工程としてアルカリ処理および塩酸処理を行った。このうち、アルカリ処理として魚鱗を水酸化ナトリウム水溶液に浸漬した。また、塩酸処理として魚鱗を塩酸溶液に浸漬した。また、魚鱗から得た粗コラーゲンを酸化処理する工程として、粗コラーゲンに過酸化水素水を加えた。
Hereinafter, the present invention will be specifically described with reference to Examples and Comparative Examples.
In the present invention, fish scales are used as raw materials, and in particular, tilapia is used as fish.
Moreover, alkali treatment and hydrochloric acid treatment were performed as a process for decalcifying fish scales. Among these, fish scales were immersed in an aqueous sodium hydroxide solution as an alkali treatment. Moreover, fish scales were immersed in a hydrochloric acid solution as a hydrochloric acid treatment. In addition, as a step of oxidizing the crude collagen obtained from fish scales, hydrogen peroxide water was added to the crude collagen.
なお、原料は魚鱗に限らず広くコラーゲン含有組織を含むものを用いることができる。たとえば、テラピア以外の魚を用いることもできるし、さらに、原料とする部分を魚皮とすることもできる。
また、魚鱗を脱灰する方法はカルシウムを除去するものであれば良く、アルカリ処理および塩酸処理を行うものに限られない。
Note that the raw material is not limited to fish scales, and a material containing a collagen-containing tissue can be used. For example, fish other than tilapia can be used, and further, the portion used as a raw material can be fish skin.
Moreover, the method of demineralizing fish scales should just remove calcium, and is not restricted to what performs an alkali treatment and hydrochloric acid treatment.
（実施例１）
乾燥したテラピアの魚鱗１００gを濃度０．１Nの水酸化ナトリウム水溶液に浸漬し、水温を１０℃に保って２４時間攪拌した。その後、魚鱗を水酸化ナトリウム水溶液から取出し、洗浄液が濁らなくなるまで魚鱗を洗浄した。
Example 1
100 g of dried tilapia fish scales were immersed in an aqueous sodium hydroxide solution having a concentration of 0.1 N, and the water temperature was kept at 10 ° C. and stirred for 24 hours. Thereafter, the fish scales were taken out from the aqueous sodium hydroxide solution, and the fish scales were washed until the washing solution became cloudy.
洗浄した魚鱗を濃度１％の塩酸溶液に浸漬し、塩酸溶液の水温を１０℃に保って１６時間攪拌した。その後、魚鱗を塩酸溶液から取出し、洗浄液が濁らなくなるまで魚鱗を洗浄した。
そして、洗浄した魚鱗をホモジナイザーを用いて粉砕した。粉砕した魚鱗を凍結乾燥することにより、５０ｇの「粗コラーゲン」を得た。
The washed fish scales were immersed in a hydrochloric acid solution having a concentration of 1%, and the water temperature of the hydrochloric acid solution was kept at 10 ° C. and stirred for 16 hours. Thereafter, the fish scales were taken out from the hydrochloric acid solution, and the fish scales were washed until the washing solution became cloudy.
The washed fish scales were pulverized using a homogenizer. The ground fish scales were freeze-dried to obtain 50 g of “crude collagen”.
上記のようにして得られた粗コラーゲンを２．５g計量し、当該計量した粗コラーゲンに濃度３０％の過酸化水素水を２５ml加え、２０℃〜２５℃の室温にて4時間、7時間、および１６時間経過させた。
次に、コラーゲンを抽出するために過酸化水素水と粗コラーゲンとの混合物に濃度０．０２Nの酢酸を２０ml加え、その状態で７２時間経過させた。
2.5 g of the crude collagen obtained as described above was weighed, and 25 ml of 30% hydrogen peroxide water was added to the weighed crude collagen, and the mixture was kept at a room temperature of 20 ° C. to 25 ° C. for 4 hours and 7 hours. And 16 hours.
Next, in order to extract collagen, 20 ml of acetic acid having a concentration of 0.02N was added to a mixture of hydrogen peroxide solution and crude collagen, and the state was allowed to elapse for 72 hours.
その後、過酸化水素水、粗コラーゲンおよび酢酸の混合物を回転数１０００rpmで１０分間遠心分離を行うことにより、不溶性成分を除去した。さらに、その混合物を透析することにより、過酸化水素、酢酸といった低分子成分を除去し、次いで、凍結乾燥を行った。
その結果、過酸化水素水を加えた後の経過時間が４時間の場合の収率が３６％、７時間の場合の収率が３９％、１６時間の場合の収率が６１．２％となった。
これより、粗コラーゲンに過酸化水素水を加えた後の経過時間は４時間〜１６時間が効率的であることが確認できた。
Thereafter, the mixture of hydrogen peroxide solution, crude collagen and acetic acid was centrifuged at 1000 rpm for 10 minutes to remove insoluble components. Further, the mixture was dialyzed to remove low molecular components such as hydrogen peroxide and acetic acid, and then freeze-dried.
As a result, the yield after adding hydrogen peroxide water was 36% when the elapsed time was 4 hours, 39% when 7 hours, and 61.2% when 16 hours. became.
From this, it was confirmed that the elapsed time after adding the hydrogen peroxide solution to the crude collagen was efficient for 4 to 16 hours.
（実施例２）
実施例１と同様の方法で得た粗コラーゲンを２．５g計量し、当該計量した粗コラーゲンに濃度１０％または２０％の過酸化水素水を２５ml加え、２０℃〜２５℃の室温にて4時間、7時間経過させた。
次に、コラーゲンを抽出するために過酸化水素水と粗コラーゲンとの混合物に濃度０．０２Nの酢酸を２０ml加え、その状態で７２時間経過させた。
(Example 2)
2.5 g of crude collagen obtained by the same method as in Example 1 was weighed, 25 ml of 10% or 20% hydrogen peroxide solution was added to the weighed crude collagen, and 4 ml was added at room temperature of 20 ° C. to 25 ° C. 7 hours passed.
Next, in order to extract collagen, 20 ml of acetic acid having a concentration of 0.02N was added to a mixture of hydrogen peroxide solution and crude collagen, and the state was allowed to elapse for 72 hours.
その後、過酸化水素水、粗コラーゲンおよび酢酸の混合物を回転数１０００rpmで１０分間遠心分離を行うことにより、不溶性成分を除去した。さらに、その混合物を透析することにより、過酸化水素、酢酸といった低分子成分を除去し、次いで、凍結乾燥を行った。
その結果、１０％過酸化水素水にて４時間処理を行ったものの収率が２．５％、７時間のものは３．５％であった。２０％過酸化水素水にて４時間処理を行ったものの収率が８％、７時間の場合の収率が１０．５％となった。
これより、２０％過酸化水素による酸化処理によってもコラーゲン抽出効率が向上することが確認できた。
Thereafter, the mixture of hydrogen peroxide solution, crude collagen and acetic acid was centrifuged at 1000 rpm for 10 minutes to remove insoluble components. Further, the mixture was dialyzed to remove low molecular components such as hydrogen peroxide and acetic acid, and then freeze-dried.
As a result, the yield of the product treated with 10% hydrogen peroxide solution for 4 hours was 2.5%, and that of 7 hours was 3.5%. The yield of the sample treated with 20% hydrogen peroxide solution for 4 hours was 8%, and the yield in the case of 7 hours was 10.5%.
From this, it was confirmed that the collagen extraction efficiency was improved by oxidation treatment with 20% hydrogen peroxide.
（実施例３）
実施例１と同様の方法で得た粗コラーゲンを２．０g計量し、当該計量した粗コラーゲンに濃度３０％の過酸化水素水を１５ml加え、２０℃〜２５℃の室温にて１６時間経過させた。
次に、過酸化水素水と粗コラーゲンとの混合物に濃度０．０２Nの酢酸を２０ml加え、その状態で７２時間経過させた。
(Example 3)
2.0 g of crude collagen obtained by the same method as in Example 1 was weighed, 15 ml of 30% hydrogen peroxide solution was added to the weighed crude collagen, and allowed to elapse for 16 hours at room temperature of 20 ° C. to 25 ° C. It was.
Next, 20 ml of 0.02N acetic acid was added to the mixture of hydrogen peroxide and crude collagen, and 72 hours were allowed to pass in that state.
その後、過酸化水素水、粗コラーゲンおよび酢酸の混合物を回転数１０００rpmで１０分間遠心分離を行うことにより、不溶性成分を除去した。
次いで、より収率良くコラーゲンを得るために、この混合物に水酸化ナトリウム水溶液を加えてpHを７．５とし、さらに、回転数１０００rpmで１０分間遠心分離を行うことにより、コラーゲンを沈殿させた。
Thereafter, the mixture of hydrogen peroxide solution, crude collagen and acetic acid was centrifuged at 1000 rpm for 10 minutes to remove insoluble components.
Next, in order to obtain collagen with higher yield, an aqueous sodium hydroxide solution was added to this mixture to adjust the pH to 7.5, and further, the mixture was centrifuged at 1000 rpm for 10 minutes to precipitate collagen.
そして、この混合物を濃度０．５０Ｎの酢酸に投入して溶解し、その後、透析することにより低分子成分を除去し、次いで、凍結乾燥を行った。
その結果、１．３８gのコラーゲンを得た。すなわち、収率は６９．０％であった。
Then, this mixture was dissolved in acetic acid having a concentration of 0.50 N, and thereafter, low molecular components were removed by dialysis, followed by lyophilization.
As a result, 1.38 g of collagen was obtained. That is, the yield was 69.0%.
（比較例１）
実施例１と同様の方法で得た粗コラーゲンを２．５g計量し、当該計量した粗コラーゲンに、たんぱく質分解酵素であるペプシンの濃度が０．１％であり、酢酸の濃度が０．０１Ｎである溶液を２５ml加え、さらに、水温を１０℃に保って７２時間経過させた。
(Comparative Example 1)
2.5 g of crude collagen obtained in the same manner as in Example 1 was weighed, and the concentration of pepsin, a proteolytic enzyme, was 0.1% and the concentration of acetic acid was 0.01 N in the weighed crude collagen. 25 ml of a solution was added, and the water temperature was kept at 10 ° C. for 72 hours.
その後、粗コラーゲン、ペプシンおよび酢酸の混合物を回転数１０００rpmで１０分間遠心分離を行うことにより、不溶性成分を除去した。さらに、その混合物を透析することにより、低分子成分を除去し、次いで、凍結乾燥を行った。
なお、比較例１は、本件発明の方法と従来技術の方法とを分かりやすく比較するため、特許文献２に記載の方法を参考にして行った。また、特許文献２によれば、各工程を複数回繰り返す方法が記載されているが、比較例１においては比較の便宜上、各工程を一回のみ行った。
Thereafter, the mixture of crude collagen, pepsin and acetic acid was centrifuged at 1000 rpm for 10 minutes to remove insoluble components. Further, the mixture was dialyzed to remove low molecular components and then lyophilized.
Note that Comparative Example 1 was performed with reference to the method described in Patent Document 2 in order to easily compare the method of the present invention with the method of the prior art. Further, according to Patent Document 2, a method of repeating each step a plurality of times is described, but in Comparative Example 1, each step was performed only once for the convenience of comparison.
その結果、０．１２gのコラーゲンを得た。すなわち、収率は４．８％であった。
これより、実施例１および実施例２と比較例１とを比較すると、過酸化水素処理を行った実施例１および実施例２の収率が、比較例１の収率に比べて高いことが確認できた。すなわち、同一時間で処理を行う場合には実施例１および実施例２の方法が比較例１の方法よりもコラーゲンを多く抽出でき、同一の量のコラーゲンを抽出する場合には実施例１および実施例２の方法が比較例１の方法よりも工程が少なく簡易な方法であることが確認できる。換言すれば、特許文献２にならってペプシンを用いて本願方法と比較できるように実験を構築した比較例１よりも、本願方法が遥かに効率的であることが確認できたと言える。
As a result, 0.12 g of collagen was obtained. That is, the yield was 4.8%.
From this, when Example 1 and Example 2 are compared with Comparative Example 1, the yield of Example 1 and Example 2 subjected to the hydrogen peroxide treatment is higher than that of Comparative Example 1. It could be confirmed. That is, when the treatment is performed at the same time, the method of Example 1 and Example 2 can extract more collagen than the method of Comparative Example 1, and when the same amount of collagen is extracted, Example 1 and It can be confirmed that the method of Example 2 is a simple method with fewer steps than the method of Comparative Example 1. In other words, it can be said that it has been confirmed that the method of the present application is far more efficient than Comparative Example 1 in which an experiment was constructed so that it can be compared with the method of the present application using pepsin following Patent Document 2.
（実施例４）
実施例２と同様の方法において、粗コラーゲンに過酸化水素水を加えた後の経過時間を種々に変更して測定結果を得た。過酸化水素水を加えた後の経過時間は、１６時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間および２週間の６種類として、それぞれの測定結果を得た。また、過酸化水素水は３４％のものを４５ml用いた。また、過酸化水素水の水温は１０℃に保った。
Example 4
In the same manner as in Example 2, the elapsed time after adding hydrogen peroxide solution to the crude collagen was variously changed to obtain measurement results. The elapsed time after adding hydrogen peroxide water was six hours of 16 hours, 24 hours, 48 hours, 72 hours, 96 hours, and 2 weeks, and the respective measurement results were obtained. Moreover, 45 ml of 34% hydrogen peroxide was used. The water temperature of the hydrogen peroxide solution was kept at 10 ° C.
その結果、経過時間が１６時間の場合の収率が２４．４％となり、経過時間が２４時間の場合の収率が２３．５％となり、経過時間が４８時間の場合の収率が３６．０％となり、経過時間が７２時間の場合の収率が３９．０％となり、経過時間が９６時間の場合の収率が４３．５％となり、経過時間が２週間の場合の収率が５３．０％となった。 As a result, the yield when the elapsed time is 16 hours is 24.4%, the yield when the elapsed time is 24 hours is 23.5%, and the yield when the elapsed time is 48 hours is 36. The yield when the elapsed time is 72 hours is 39.0%, the yield when the elapsed time is 96 hours is 43.5%, and the yield when the elapsed time is 2 weeks is 53%. 0.0%.
これより、粗コラーゲンに過酸化水素水を加えた後の経過時間は、１６時間〜９６時間、特に、１６時間〜４８時間が効率的であることが確認できた。すなわち、実施例１の結果を併せれば、粗コラーゲンに過酸化水素水を加えた後の経過時間は、４時間〜９６時間が効率的であり、特に１６時間〜４８時間が効率的であるといえる。
また、約４０％過酸化水素による酸化処理によってもコラーゲン抽出効率が向上することが確認できた。
From this, it was confirmed that the elapsed time after adding the hydrogen peroxide solution to the crude collagen was 16 hours to 96 hours, particularly, 16 hours to 48 hours. That is, when the results of Example 1 are combined, the elapsed time after adding the hydrogen peroxide solution to the crude collagen is efficient for 4 hours to 96 hours, and particularly effective for 16 hours to 48 hours. It can be said.
It was also confirmed that the collagen extraction efficiency was improved by oxidation treatment with about 40% hydrogen peroxide.
本発明は、魚鱗からコラーゲンを抽出する方法のみならず、広くコラーゲン含有組織からコラーゲンを抽出する方法として利用することができる。 The present invention can be used not only as a method for extracting collagen from fish scales but also as a method for widely extracting collagen from collagen-containing tissues.
Claims (2)
魚鱗に対して脱灰工程を含む前処理を行って粗コラーゲンを生成する粗コラーゲン生成工程と、
前記粗コラーゲン生成工程により生成された粗コラーゲンに対して、過酸化水素を用いて処理する過酸化水素処理工程を含む酸化処理を施す酸化処理工程と、
酸化処理工程を施したものからコラーゲンを抽出する抽出工程と、
を含むことを特徴とするコラーゲン抽出方法。 A method for extracting collagen from fish scales ,
A crude collagen production step for producing crude collagen by performing a pretreatment including a decalcification step on fish scales ,
An oxidation treatment step of subjecting the crude collagen produced by the crude collagen production step to an oxidation treatment including a hydrogen peroxide treatment step of treating with the hydrogen peroxide ,
An extraction process for extracting collagen from those subjected to an oxidation treatment process;
A method for extracting collagen.
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