JP5030143B2

JP5030143B2 - TNF-α production inhibitor

Info

Publication number: JP5030143B2
Application number: JP2006291740A
Authority: JP
Inventors: 幸苗山崎; 泰広河野
Original assignee: National Institute of Advanced Industrial Science and Technology AIST
Current assignee: National Institute of Advanced Industrial Science and Technology AIST
Priority date: 2006-10-26
Filing date: 2006-10-26
Publication date: 2012-09-19
Anticipated expiration: 2026-10-26
Also published as: JP2008106013A

Description

本発明は医薬品及び健康食品において有用な、炎症性サイトカインTNF-αの産生を抑制する薬剤に関する。 The present invention relates to a drug that suppresses the production of inflammatory cytokine TNF-α, which is useful in pharmaceuticals and health foods.

TNF-αやIL-6などの炎症性サイトカインは、病原菌の侵入に対して免疫機能を賦活するなど本来は合目的な機能を有しているが、何らかの原因によって過剰に生産され続けるとリウマチ性関節炎、潰瘍性大腸炎、クローン病、2型糖尿病などさまざまな疾病を引き起こす。そのため、このような病態においてTNF-αなど炎症性サイトカインの生産を抑制する薬剤が開発されており、イブプロフェンやインドメタシン等既存の抗炎症剤の他、サリドマイド誘導体（非特許文献１参照）、ピラゾロン誘導体（非特許文献２参照）、合成クロメン誘導体（非特許文献３参照）、スベリヒユ科植物のアルカロイド（特許文献１参照）、クロモン誘導体（特許文献２参照）、肝実質細胞増殖因子（特許文献３参照）などがあるが、これらの疾病は慢性的な経過をたどることが多く治療は長期化することから、経口摂取が可能で副作用がなく安全な化合物が特に求められている。このような観点から、乳蛋白の断片ペプチド（特許文献４参照）、甘草やショウガの抽出物（特許文献５）、ドコサヘキサエン酸等の高度不飽和脂肪酸（特許文献６，７参照）など食品成分が注目されているが、より活性の強い化合物や当該活性のさらなる増強が必要である。 Inflammatory cytokines such as TNF-α and IL-6 have originally intended functions such as stimulating immune function against the invasion of pathogenic bacteria, but rheumaticity is caused by excessive production for some reason. Causes various diseases such as arthritis, ulcerative colitis, Crohn's disease, and type 2 diabetes. Therefore, drugs that suppress the production of inflammatory cytokines such as TNF-α in such pathological conditions have been developed. In addition to existing anti-inflammatory agents such as ibuprofen and indomethacin, thalidomide derivatives (see Non-Patent Document 1), pyrazolone derivatives (See Non-Patent Document 2), synthetic chromene derivatives (see Non-Patent Document 3), albeloids of the genus Euphorbiaceae (see Patent Document 1), chromone derivatives (see Patent Document 2), hepatocyte growth factor (see Patent Document 3) However, since these diseases often follow a chronic course and treatment is prolonged, there is a particular need for safe compounds that can be taken orally and have no side effects. From this point of view, food components such as milk protein fragment peptides (see Patent Document 4), licorice and ginger extracts (Patent Document 5), highly unsaturated fatty acids such as docosahexaenoic acid (see Patent Documents 6 and 7), and the like. Although attracting attention, there is a need for more active compounds and further enhancement of the activity.

特開2003-26586号公報Japanese Patent Laid-Open No. 2003-26586 特開2005-247762号公報JP 2005-247762 A 特開2000-239182号公報JP 2000-239182 A 特開2004-196707号公報JP 2004-196707 A WO2003/007974WO2003 / 007974 特表2006-511514号公報Special table 2006-511514 gazette 特開2000-159667号公報JP 2000-159667 A S. Niwayama et al., J. Med. Chem., 39, 3044-3045, 1996S. Niwayama et al., J. Med. Chem., 39, 3044-3045, 1996 M.P. Clark et al., J. Med. Chem., 47, 2724-2727, 2004M.P. Clark et al., J. Med. Chem., 47, 2724-2727, 2004 J-F. Cheng et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 13, 3647-3650, 2003J-F. Cheng et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 13, 3647-3650, 2003

本発明の課題は、上記現状に鑑み、安全性が高く、炎症性サイトカインであるＴＮＦ−αの産生抑制作用が十分に強く、抗炎症剤等として有用な新規な薬剤を開発する点にある。 An object of the present invention is to develop a novel drug that is highly safe and has a sufficiently strong inhibitory effect on the production of TNF-α, which is an inflammatory cytokine, and is useful as an anti-inflammatory agent.

上記課題を解決するため、本発明者らは鋭意検討の結果、一般式（１）で示される化合物がマクロファージ様に分化した単球系培養細胞（急性単球性白血病細胞、THP-1）を大腸菌のリポ多糖（LPS）で刺激した時のTNF-α産生あるいは他の炎症性サイトカインの産生を抑制することを見いだし、本発明を完成するに至った。
すなわち、本発明は以下のとおりである。 In order to solve the above-mentioned problems, the present inventors have intensively studied to obtain a monocyte cultured cell (acute monocytic leukemia cell, THP-1) in which the compound represented by the general formula (1) is differentiated like a macrophage. It has been found that TNF-α production or other inflammatory cytokine production is suppressed when stimulated with lipopolysaccharide (LPS) of E. coli, and the present invention has been completed.
That is, the present invention is as follows.

１）下記一般式（１）で示される化合物を活性成分として含有することを特徴とする、動物細胞におけるＴＮＦ−α産生抑制剤。

（ただし、式１中、R₁は水素原子、又はアルコキシ基、Ｒ２は水素原子、水酸基又はアルコキシ基、Ｒ３は水素原子、アルコキシ基又は分岐鎖を有する不飽和脂肪族炭化水素基、Ｒ４は水素又は水酸基をそれぞれ表し、Xは単結合、ビニレン基又はエチレン基を表し、Ｙはアミド基（-CO-NH-）、エステル基(−CO-O-)、又はカルボニル基(-CO-)を表し、Zは、水酸基により置換されているかあるいは非置換の炭素数1〜２０の２価脂肪族炭化水素基を表し、Qは水素原子、又は水酸基により置換されているかあるいは非置換の芳香族炭化水素基又は複素環基を表す。）

２）一般式（１）で示される化合物が下記一般式（２）で示されるフェルラ酸又はカフェイン酸の誘導体であることを特徴とする、上記１）に記載の動物細胞におけるＴＮＦ−α産生抑制剤。

（ただし、式２中、R₁ とR₂は水素原子、水酸基またはアルコキシ基であり、Y₁はイミノ基（NH）または酸素原子(O)であり、Zは炭素数１〜１０の２価脂肪族炭化水素基であり、Qは水素原子（H）、若しくは水酸基により置換されていてもよいフェニル基又インドリル基を表す。）

３）一般式（１）で示される化合物が下記一般式（３）で示されるバニリン酸又はプロトカテク酸の誘導体であることを特徴とする、上記１）に記載の動物細胞におけるＴＮＦ−α産生抑制剤。

（ただし、式３中、R₁ とR₂は水素原子、水酸基またはアルコキシ基であり、Y₁はイミノ基（NH）または酸素原子(O)であり、Zは炭素数１〜10の２価脂肪族炭化水素基であり、Qは水素原子（H）、若しくは水酸基で置換されていてもよいフェニル基を表す。）

４）一般式（１）で示される化合物が下記一般式（４）で示されるカルコン誘導体であることを特徴とする上記１）に記載の動物細胞におけるＴＮＦ−α産生抑制剤。

（ただし、式４中、R₁は水素原子又はアルコキシ基、R₂は水素原子又は分岐鎖を有する不飽和脂肪族炭化水素基、Ｒ３は水素又は水酸基を、それぞれ表し、Ｒ４は水素原子又は水酸基を表す。
５）一般式（１）で示される化合物が下記一般式（５）で示されるジンゲロールもしくはその類縁体であることを特徴とする、上記１）に記載の動物細胞におけるＴＮＦ−α産生抑制剤。

（ただし、式５中、Ｚ_１は炭素数４〜１１の１価脂肪族炭化水素基を表す。）

６）一般式（２）で表される化合物が、N-(β-フェネチル)フェルラミド、フェルロイルトリプタミン、フェルロイルチラミン、β-フェネチルフェルレート、フェルラ酸3-フェニル-2-プロペニル、N-(β-フェネチル)カフェイン酸アミド、及びカフェイン酸フェネチルエステルから選ばれたものであることを特徴とする、上記２）に記載の動物細胞におけるＴＮＦ−α産生抑制剤。

７）一般式（３）で表される化合物が、4-ヒドロキシ-3-メトキシ安息香酸3-フェニル-2-プロペニル、プロトカテク酸3-フェニル-2-プロペニル及びシリンガ酸3-フェニル-2-プロペニルから選ばれたものであることを特徴とする、上記３）に記載の動物細胞におけるＴＮＦ−α産生抑制剤。

８）一般式（４）で表される化合物が、４’−ヒドロキシカルコン、イソリキリチゲニン、キサントフモール、及びキサントアンゲロールから選ばれたものであることを特徴とする、上記４）に記載の動物細胞におけるＴＮＦ−α産生抑制剤。

９）一般式（５）で表される化合物が、[6]-ジンゲロールであることを特徴とする、上記５）に記載のＴＮＦ−α産生抑制剤。
1) A TNF-α production inhibitor in animal cells, comprising a compound represented by the following general formula (1) as an active ingredient.

(In formula 1, R ₁ is a hydrogen atom or an alkoxy group, R 2 is a hydrogen atom, a hydroxyl group or an alkoxy group, R 3 is a hydrogen atom, an alkoxy group or an unsaturated aliphatic hydrocarbon group having a branched chain, and R 4 is a hydrogen atom. Each represents a hydroxyl group, X represents a single bond, vinylene group or ethylene group, Y represents an amide group (—CO—NH—), an ester group (—CO—O—), or a carbonyl group (—CO—). Z represents a substituted or unsubstituted divalent aliphatic hydrocarbon group having 1 to 20 carbon atoms, and Q represents a hydrogen atom or a substituted or unsubstituted aromatic carbon group with a hydroxyl group. Represents a hydrogen group or a heterocyclic group.)

2) TNF-α production in animal cells according to 1) above, wherein the compound represented by the general formula (1) is a derivative of ferulic acid or caffeic acid represented by the following general formula (2) Inhibitor.

(In the formula 2, R ₁ and R ₂ are a hydrogen atom, a hydroxyl group or an alkoxy group, Y ₁ is an imino group (NH) or an oxygen atom (O), and Z is a divalent having 1 to 10 carbon atoms. An aliphatic hydrocarbon group, Q represents a hydrogen atom (H) or a phenyl group or an indolyl group optionally substituted by a hydroxyl group.

3) Inhibition of TNF-α production in animal cells according to 1) above, wherein the compound represented by the general formula (1) is a derivative of vanillic acid or protocatechuic acid represented by the following general formula (3) Agent.

(In the formula 3, R ₁ and R ₂ are a hydrogen atom, a hydroxyl group or an alkoxy group, Y ₁ is an imino group (NH) or an oxygen atom (O), and Z is a divalent having 1 to 10 carbon atoms. An aliphatic hydrocarbon group, Q represents a hydrogen atom (H) or a phenyl group optionally substituted by a hydroxyl group.

4) The TNF-α production inhibitor in animal cells according to 1) above, wherein the compound represented by the general formula (1) is a chalcone derivative represented by the following general formula (4).

(In formula 4, R ₁ represents a hydrogen atom or an alkoxy group, R ₂ represents a hydrogen atom or an unsaturated aliphatic hydrocarbon group having a branched chain, R 3 represents hydrogen or a hydroxyl group, and R 4 represents a hydrogen atom or a hydroxyl group, respectively. Represents.
5) The TNF-α production inhibitor in animal cells according to 1) above, wherein the compound represented by the general formula (1) is gingerol represented by the following general formula (5) or an analog thereof.

(However, in Equation 5, _{Z 1} represents a monovalent aliphatic hydrocarbon group having 4 to 11 carbon atoms.)

6) The compound represented by the general formula (2) is N- (β-phenethyl) ferramide, feruloyltryptamine, feruloyltyramine, β-phenethylferrate, ferulic acid 3-phenyl-2-propenyl, N- ( [beta] -phenethyl) caffeic acid amide and caffeic acid phenethyl ester, the TNF- [alpha] production inhibitor in animal cells according to 2) above.

7) The compound represented by the general formula (3) is 3-phenyl-2-propenyl 4-hydroxy-3-methoxybenzoate, 3-phenyl-2-propenyl protocatechuate and 3-phenyl-2-propenyl syringate The TNF-α production inhibitor for animal cells according to 3) above, which is selected from the group consisting of:

8) The compound represented by the general formula (4) is selected from 4′-hydroxychalcone, isoliquiritigenin, xanthohumol, and xanthoangelol, 4) above (2) A TNF-α production inhibitor in animal cells according to (1).

9) The TNF-α production inhibitor according to 5) above, wherein the compound represented by the general formula (5) is [6] -gingerol.

本発明において使用する、一般式（１）で表される化合物は、動物の免疫細胞におけるTNF-α等の炎症性サイトカインの産生を抑制する。その結果、個体レベルでは関節リウマチや潰瘍性大腸炎等の慢性炎症疾患の症状を緩和させる効果を有する。
一方、炎症性サイトカインの産生抑制物質として知られている従来のピラゾール誘導体等の物質は、安全性、副作用の問題を抱えているのに対し、本発明のフェノール性化合物やカルコン誘導体は、従来から、園芸作物や漢方薬、プロポリス等健康増進剤の成分として、喫食あるいは服用されていたものが多く、本発明の薬剤は安全性が高いものといえる。
ＴＮＦ-α等の炎症性サイトカインはリウマチや大腸炎ばかりでなく、肥満や誤嚥など色々な局面で過剰生産され、潜在的な疾病原因となっている。従って、このようなＴＮＦ−α等の炎症性サイトカインの恒常的なコントロールは健康維持にとり極めて重要な意義がある。本発明の薬剤は上述のように食品やそれに近縁する素材の成分で構成され安全性が高いため、日常的かつ長期の摂取が可能と考えられ、治療剤としてばかりでなく、健康維持機能性食品添加物としても有用な薬剤である。 The compound represented by the general formula (1) used in the present invention suppresses the production of inflammatory cytokines such as TNF-α in animal immune cells. As a result, it has the effect of alleviating symptoms of chronic inflammatory diseases such as rheumatoid arthritis and ulcerative colitis at the individual level.
On the other hand, conventional substances such as pyrazole derivatives known as inflammatory cytokine production inhibitors have problems of safety and side effects, whereas the phenolic compounds and chalcone derivatives of the present invention have been conventionally used. In many cases, the ingredients of health promoting agents such as horticultural crops, traditional Chinese medicines, and propolis have been eaten or taken, and the drug of the present invention can be said to have high safety.
Inflammatory cytokines such as TNF-α are overproduced in various aspects such as obesity and aspiration, as well as rheumatism and colitis, and cause potential diseases. Therefore, such constant control of inflammatory cytokines such as TNF-α is extremely important for maintaining health. As described above, the drug of the present invention is composed of ingredients of food and related materials, and is highly safe. Therefore, it is considered that daily and long-term ingestion is possible. It is a drug useful as a food additive.

本発明のＴＮＦ−α産生抑制剤は、以下の一般式（１）で表される化合物を有効成分として含有するものである。

（ただし、式１中、R₁は水素原子、又はアルコキシ基、Ｒ２は水素原子、水酸基又はアルコキシ基、Ｒ３は水素原子、アルコキシ基又は分岐鎖を有する不飽和脂肪族炭化水素基、Ｒ４は水素又は水酸基をそれぞれ表し、Xは単結合、ビニレン基又はエチレン基を表し、Ｙはアミド基（-CO-NH-）、エステル基(−CO-O-)、又はカルボニル基(-CO-)を表し、Zは、水酸基により置換されているかあるいは非置換の炭素数1〜２０の２価脂肪族炭化水素基を表し、Qは水素原子、又は水酸基により置換されているかあるいは非置換の芳香族炭化水素基又は複素環基を表す。 The TNF-α production inhibitor of the present invention contains a compound represented by the following general formula (1) as an active ingredient.

(In formula 1, R ₁ is a hydrogen atom or an alkoxy group, R 2 is a hydrogen atom, a hydroxyl group or an alkoxy group, R 3 is a hydrogen atom, an alkoxy group or an unsaturated aliphatic hydrocarbon group having a branched chain, and R 4 is a hydrogen atom. Each represents a hydroxyl group, X represents a single bond, vinylene group or ethylene group, Y represents an amide group (—CO—NH—), an ester group (—CO—O—), or a carbonyl group (—CO—). Z represents a substituted or unsubstituted divalent aliphatic hydrocarbon group having 1 to 20 carbon atoms, and Q represents a hydrogen atom or a substituted or unsubstituted aromatic carbon group with a hydroxyl group. Represents a hydrogen group or a heterocyclic group.

本発明の一般式（１）の化合物をさらに具体的に示すと以下のとおりである。
ａ）下記一般式（２）で示されるフェルラ酸又はカフェイン酸の誘導体。

（ただし、式２中、R₁ とR₂は水素原子、水酸基またはアルコキシ基であり、Y₁はイミノ基（NH）または酸素原子(O)であり、Zは炭素数１〜１０の２価脂肪族炭化水素基であり、Qは水素原子（H）、若しくは水酸基により置換されていてもよいフェニル基又インドリル基を表す。） More specifically, the compound of the general formula (1) of the present invention is as follows.
a) Ferulic acid or caffeic acid derivative represented by the following general formula (2).

(In the formula 2, R ₁ and R ₂ are a hydrogen atom, a hydroxyl group or an alkoxy group, Y ₁ is an imino group (NH) or an oxygen atom (O), and Z is a divalent having 1 to 10 carbon atoms. An aliphatic hydrocarbon group, Q represents a hydrogen atom (H) or a phenyl group or an indolyl group optionally substituted by a hydroxyl group.

b）下記一般式（３）で示されるバニリン酸又はプロトカテク酸の誘導体。

（ただし、式３中、R₁ とR₂は水素原子、水酸基またはアルコキシ基であり、Y₁はイミノ基（NH）または酸素原子(O)であり、Zは炭素数１〜10の２価脂肪族炭化水素基であり、Qは水素原子（H）、若しくは水酸基で置換されていてもよいフェニル基を表す。） b) A vanillic acid or protocatechuic acid derivative represented by the following general formula (3).

(In the formula 3, R ₁ and R ₂ are a hydrogen atom, a hydroxyl group or an alkoxy group, Y ₁ is an imino group (NH) or an oxygen atom (O), and Z is a divalent having 1 to 10 carbon atoms. An aliphatic hydrocarbon group, Q represents a hydrogen atom (H) or a phenyl group optionally substituted by a hydroxyl group.

c）下記一般式（４）で示されるカルコン誘導体。

（ただし、式４中、R₁は水素原子又はアルコキシ基、R₂は水素原子又は分岐鎖を有する不飽和脂肪族炭化水素基、Ｒ３は水素又は水酸基を、それぞれ表し、Ｒ４は水素原子又は水酸基を表す。 c) A chalcone derivative represented by the following general formula (4).

(In formula 4, R ₁ represents a hydrogen atom or an alkoxy group, R ₂ represents a hydrogen atom or an unsaturated aliphatic hydrocarbon group having a branched chain, R 3 represents hydrogen or a hydroxyl group, and R 4 represents a hydrogen atom or a hydroxyl group, respectively. Represents.

d）下記一般式（５）で示されるジンゲロールもしくはその類縁体。

（ただし、式５中、Ｚ_１は炭素数４〜１１の１価脂肪族炭化水素基を表す。） d) Zingerol represented by the following general formula (5) or an analog thereof.

(However, in Equation 5, _{Z 1} represents a monovalent aliphatic hydrocarbon group having 4 to 11 carbon atoms.)

また、本発明に使用する一般式（１）で示される化合物のうち、好ましいものの化学構造を具体的に例示すると、以下の5〜20の化合物が挙げられるが、これらに限定されるわけではない。

Moreover, when the chemical structure of a preferable thing is specifically illustrated among the compounds shown by General formula (1) used for this invention, the following 5-20 compounds are mentioned, However, It is not necessarily limited to these. .

これらの化合物の置換基を、一般式（１）中の置換基に対応させて以下に説明する。なお括弧内は、より具体的な一般式（２）〜（５）の中の該当する式の置換基と対応させたものである。
5の化合物（N-(β-フェネチル)フェルラミド）；一般式（１）中、R₂=- OMe, R₁= R_３= R_４= H, X =- CH＝CH-, Y=-CO-NH-基、Z=-CH₂CH₂-, Q=-C₆H₅である化合物（一般式（２）中、R₁=-OMe, R₂= H, Y₁=-NH-, Z=-CH₂CH₂-, Q=-C₆H₅である化合物）。
6の化合物(フェルロイルトリプタミン)；一般式（１）中、R₂=-OMe, R₁= R_３= R_４= H, X=-CH＝CH-, Y=-CO-NH-基、Z=-CH₂CH₂-, Q = 3-インドリル基である化合物（一般式（２）中、R₁=-OMe,R₂= H, Y₁=-NH-, Z=-CH₂CH₂-, Q = 3-インドリル基である化合物）。
７の化合物(フェルロイルチラミン)；一般式（１）中、R₂=- OMe, R₁= R_３= R_４= H, X=-CH＝CH-, Y=-CO-NH-基, Z =-CH₂CH₂-, Q = p-ヒドロキシフェニル基である化合物（一般式（２）中、R₁=-OMe, R₂= H, Y₁=-NH-, Z =-CH₂CH₂-, Q = p-ヒドロキシフェニル基である化合物）。
８の化合物(β-フェネチルフェルレート)；一般式（１）中、R₂=-OMe, R₁= R_３= R_４= H, X=-CH＝CH-, Y=-CO-O-基, Z=-CH₂CH₂-, Q =フェニル基である化合物（一般式（２）中、Ｒ₁=-OMe, R₂=H, Y₁=-O-, Z =-CH₂CH₂-, Q =フェニル基である化合物）。
９の化合物(フェルラ酸3-フェニル-2-プロペニル)；一般式（１）中、R₂=- OMe, R₁= R_３= R_４= H, X=-CH＝CH-, Y=-CO-O-基, Z=-CH₂CH＝CH-, Q=フェニル基である化合物（一般式（２）中、R₁=-OMe,R₂= H,Y₁=-O-, Z=-CH₂CH＝CH-, Q =フェニル基である化合物）。 The substituents of these compounds will be described below in correspondence with the substituents in the general formula (1). The parentheses correspond to the substituents of the corresponding formulas in the more specific general formulas (2) to (5).
5 compounds (N- (β-phenethyl) ferramide); in general formula (1), R ₂ = -OMe, R ₁ = R ₃ = R ₄ = H, X =-CH = CH-, Y = -CO -NH- group, a compound where Z = -CH ₂ CH _2- , Q = -C ₆ H ₅ (in general formula (2), R ₁ = -OMe, R ₂ = H, Y ₁ = -NH-, Compound in which Z = —CH ₂ CH ₂ —, Q = —C ₆ H ₅ ).
6 compounds (feruloyltryptamine); in the general formula (1), R ₂ = -OMe, R ₁ = R ₃ = R ₄ = H, X = -CH = CH-, Y = -CO-NH- group, A compound in which Z = -CH ₂ CH _2- , Q = 3-indolyl group (in general formula (2), R ₁ = -OMe, R ₂ = H, Y ₁ = -NH-, Z = -CH ₂ CH _2- , Q = 3-indolyl group).
7 compound (feruloyl tyramine); in the general formula (1), R ₂ = -OMe, R ₁ = R ₃ = R ₄ = H, X = -CH = CH-, Y = -CO-NH- group, A compound in which Z = -CH ₂ CH _2- , Q = p-hydroxyphenyl group (in formula (2), R ₁ = -OMe, R ₂ = H, Y ₁ = -NH-, Z = -CH ₂ Compound having CH _2- , Q = p-hydroxyphenyl group).
8 compounds (β-phenethyl ferrate); in the general formula (1), R ₂ = -OMe, R ₁ = R ₃ = R ₄ = H, X = -CH = CH-, Y = -CO-O- Group, Z = -CH ₂ CH _2- , Q = phenyl group (in general formula (2), R ₁ = -OMe, R ₂ = H, Y ₁ = -O-, Z = -CH ₂ CH _2- , compounds where Q = phenyl group).
9 compounds (3-phenyl-2-propenyl ferulate); in the general formula (1), R ₂ = -OMe, R ₁ = R ₃ = R ₄ = H, X = -CH = CH-, Y =- A compound in which CO—O— group, Z = —CH ₂ CH═CH—, Q = phenyl group (in the general formula (2), R ₁ = −OMe, R ₂ = H, Y ₁ = −O—, Z = —CH ₂ CH═CH—, Q = phenyl group).

１０の化合物(N-(β-フェネチル)カフェイン酸アミド)；一般式（１）中、R₁= R_３= R_４= H, R₂=- OH, X=-CH＝CH-, Y =-CO-NH-基,Z=-CH₂CH₂-, Q =-C₆H₅である化合物（一般式（２）中、R₁=-OH, R₂= H, Y₁=-NH-, Z=-CH₂CH₂-, Q =-C₆H₅である化合物）。
１１の化合物(カフェイン酸フェネチルエステル)；一般式（１）中、R₁= R_３= R_４= H, R₂=- OH, X =-CH＝CH-, Y =-CO-O-基, Z = -CH₂CH₂-, Q=-C₆H₅である化合物（一般式（２）中、R₁=-OH, R₂= H, Y₁=-O-, Z =-CH₂CH₂-, Q=-C₆H₅である化合物）。
１２の化合物(カフェイン酸3-フェニル-2-プロペニル)；一般式（１）中、R₁= R_３= R_４= H,R₂= - OH, X =-CH＝CH-, Y =-CO-O-基, Z =-CH₂CH＝CH-, Q=フェニル基である化合物（一般式（２）中、R₁=-OH, R₂= H,Y₁=-O-, Z=-CH₂CH＝CH-, Q =フェニル基である化合物）。 10 compounds (N- (β-phenethyl) caffeic acid amide); in the general formula (1), R ₁ = R ₃ = R ₄ = H, R ₂ = -OH, X = -CH = CH-, Y = -CO-NH- group, Z = -CH ₂ CH _2- , Q = -C ₆ H ₅ (in formula (2), R ₁ = -OH, R ₂ = H, Y ₁ =- _{_{NH-, Z = -CH 2 CH 2}} -, Q = -C 6 H 5 , compound).
11 compounds (caffeic acid phenethyl ester); in the general formula (1), R ₁ = R ₃ = R ₄ = H, R ₂ = -OH, X = -CH = CH-, Y = -CO-O- A group in which Z = -CH ₂ CH _2- , Q = -C ₆ H ₅ (in general formula (2), R ₁ = -OH, R ₂ = H, Y ₁ = -O-, Z =- Compound in which CH ₂ CH _2- , Q = -C ₆ H ₅ ).
12 compounds (3-phenyl-2-propenyl caffeate); in the general formula (1), R ₁ = R ₃ = R ₄ = H, R ₂ =-OH, X = -CH = CH-, Y = -CO-O- group, Z = -CH ₂ CH = CH-, Q = phenyl group (in general formula (2), R ₁ = -OH, R ₂ = H, Y ₁ = -O-, Compound in which Z = —CH ₂ CH═CH—, Q = phenyl group).

１３の化合物(4-ヒドロキシ-3-メトキシ安息香酸3-フェニル-2-プロペニル)；一般式（１）中、R₂=-OMe, R₁= R_３= R_４= H, X =単結合, Y=-CO-O-, Z =-CH₂CH＝CH-, Q =-C₆H₅である化合物（一般式（３）中、R₁=-OMe, R₂= H, Y₁=-O-, Z =-CH₂CH＝CH-, Q =-C₆H₅である化合物）。
１４の化合物（プロトカテク酸3-フェニル-2-プロペニル）；一般式（１）中、R₁=
R_３= R_４= H, R₂= - OH, X =単結合, Y=-CO-O-, Z =-CH₂CH＝CH-, Q =-C₆H₅である化合物（一般式（３）中、R₁=-OMe, R₂= H, Y₁=-O-, Z =-CH₂CH＝CH-, Q =-C₆H₅である化合物）。
１５の化合物（シリンガ酸3-フェニル-2-プロペニル）；一般式（１）中、R₁=R_４= H, R₂=R_３=- OMe, X=単結合, Y=-CO-O-, Z =-CH₂CH＝CH-, Q =-C₆H₅である化合物（一般式（３）中、R₁= R₂=-OMe, Y₁=-O-, Z =-CH₂CH＝CH-, Q =-C₆H₅である化合物）。 13 compounds (3-phenyl-2-propenyl 4-hydroxy-3-methoxybenzoate); in the general formula (1), R ₂ = -OMe, R ₁ = R ₃ = R ₄ = H, X = single bond , Y = —CO—O—, Z = —CH ₂ CH═CH—, Q = —C ₆ H ₅ (in formula (3), R ₁ = −OMe, R ₂ = H, Y ₁ = —O—, Z = —CH ₂ CH═CH—, Q = —C ₆ H ₅ ).
14 compounds (protocatechuate 3-phenyl-2-propenyl); in the general formula (1), R ₁ =
R ₃ = R ₄ = H, R ₂ =-OH, X = single bond, Y = -CO-O-, Z = -CH ₂ CH = CH-, Q = -C ₆ H ₅ (general formula In (3), R ₁ = -OMe, R ₂ = H, Y ₁ = -O-, Z = -CH ₂ CH = CH-, Q = -C ₆ H ₅ ).
15 compounds (3-phenyl-2-propenyl syringate); in the general formula (1), R ₁ = R ₄ = H, R ₂ = R ₃ = -OMe, X = single bond, Y = -CO-O -, Z = -CH ₂ CH = CH-, Q = -C ₆ H ₅ (in general formula (3), R ₁ = R ₂ = -OMe, Y ₁ = -O-, Z = -CH _{2 CH = CH-, Q = -C} 6 H 5 , compound).

１６の化合物（4’-ヒドロキシカルコン）；一般式（１）中、R₁= R₂= R_３=R_４= H, X=単結合, Y=-CO-基, Z=-CH＝CH-, Q=-C₆H₅である化合物（一般式（４）中、R₁= R₂= R_３=R_４= H, である化合物）。
１７の化合物（イソリキリチゲニン）；一般式（１）中、R₁= R₂= R₃=H, R₄= -OH, X=単結合, Y=-CO-基, Z=-CH＝CH-, Q=-p-OH-C₆H₅である化合物（一般式（４）中、R₁= =R₂=H,R₃= R₄₌ -OH である化合物）。
１８の化合物（キサントフモール）；一般式（１）中、R₂=H, R₄= -OH, R₁=-OMe,R₃= -CH₂CH=C(CH₃)₂, X=単結合, Y=-CO-基, Z=-CH＝CH-, Q=-p-OH-C₆H₅である化合物（一般式（４）中、R₁= -OMe, R₃= R₄= -OH, R₂= -CH₂CH=C(CH₃)₂である化合物）。
１９の化合物（キサントアンゲロール）；一般式（１）中、R₁=R₂=H,R₄= -OH, R₃= -CH₂CH=C(CH₃)CH₂CH₂CH=C(CH₃)₂, X=単結合, Y=-CO-基, Z=-CH＝CH-, Q=-p-OH-C₆H₅である化合物（一般式（４）中、R₁=H, R₃= R₄=-OH, R₂= -CH₂CH=C(CH₃)CH₂CH₂CH=C(CH₃)₂,である化合物）。
２０の化合物([6]-ジンゲロール)；一般式（１）中、R₂=- OMe, R₁= R₃= R₄= H, X=-CH₂CH₂-, Y=-CO-基, Z=-CH₂CH(OH)(CH₂)₄CH₂-, Q=Hである化合物（一般式（５）中、Ｚ_１=-(CH₂)₃CH₃である化合物）。 16 compounds (4′-hydroxychalcone); in the general formula (1), R ₁ = R ₂ = R ₃ = R ₄ = H, X = single bond, Y = -CO-group, Z = -CH = CH -, A compound in which Q = -C ₆ H ₅ (a compound in which R ₁ = R ₂ = R ₃ = R ₄ = H, in the general formula (4)).
17 compounds (isoliquiritigenin); in the general formula (1), R ₁ = R ₂ = R ₃ = H, R ₄ = -OH, X = single bond, Y = -CO-group, Z = -CH = CH-, Q = -p-OH-C ₆ H ₅ (a compound in which R ₁ == R ₂ = H, R ₃ = R _{4 =} -OH in the general formula (4)).
18 compounds (xanthohumol); in the general formula (1), R ₂ = H, R ₄ = -OH, R ₁ = -OMe, R ₃ = -CH ₂ CH = C (CH ₃ ) ₂ , X = Single bond, Y = -CO- group, Z = -CH = CH-, Q = -p-OH-C ₆ H ₅ (in general formula (4), R ₁ = -OMe, R ₃ = R _{_{4 = -OH, R 2 = -CH}} 2 CH = C (CH 3) 2 , compound).
19 compounds (xanthoangelol); in the general formula (1), R ₁ = R ₂ = H, R ₄ = -OH, R ₃ = -CH ₂ CH = C (CH ₃ ) CH ₂ CH ₂ CH = C (CH ₃ ) ₂ , X = single bond, Y = —CO— group, Z = —CH═CH—, Q = —p-OH—C ₆ H ₅ (in general formula (4), R ₁ = H, the compound _{_{R 3 = R 4 = -OH,}} R 2 = -CH 2 CH = C (CH 3) CH 2 CH 2 CH = C (CH 3) 2, a).
20 compounds ([6] -gingerol); in the general formula (1), R ₂ = -OMe, R ₁ = R ₃ = R ₄ = H, X = -CH ₂ CH _2- , Y = -CO- group , Z = —CH ₂ CH (OH) (CH ₂ ) ₄ CH ₂ —, Q = H (in general formula (5), a compound where Z ₁ = — (CH ₂ ) ₃ CH ₃ ).

本発明の上記フェルラ酸誘導体の代表例はフェルロイルトリプタミン（FATA）であり、この化合物の活性自体は既存の医薬品でありTNF-α抑制活性の知られているクロルプロマジン（M. Zinetti et al., Immunology, 86, 416-421, 1995）よりも弱いがイブプロフェンよりは強い。FATAはトウモロコシやベニバナの油糧種子に含まれており、FATAを有効成分とするTNF-α産生抑制剤の安全性は高い。FATAの他、N-(β−フェネチル)フェルラミド（FAPA）、フェルラ酸フェネチルエステル（FAPE）、フェルラ酸3-フェニル-2-プロペニル、カフェイン酸フェネチルエステル、カフェイン酸3-フェニル-2-プロペニル、カフェイン酸フェネチルアミド等、フェルラ酸あるいはカフェイン酸の誘導体はTNF-α産生抑制作用を示す。 A representative example of the ferulic acid derivative of the present invention is feruloyltryptamine (FATA), and the activity of this compound is an existing pharmaceutical and chlorpromazine (M. Zinetti et al., Known for its TNF-α inhibitory activity). Immunology, 86, 416-421, 1995) but stronger than ibuprofen. FATA is contained in oil seeds of corn and safflower, and TNF-α production inhibitors containing FATA as an active ingredient are highly safe. In addition to FATA, N- (β-phenethyl) ferramide (FAPA), ferulic acid phenethyl ester (FAPE), ferulic acid 3-phenyl-2-propenyl, caffeic acid phenethyl ester, caffeic acid 3-phenyl-2-propenyl Ferulic acid or caffeic acid derivatives such as caffeic acid phenethyl amide exhibit TNF-α production inhibitory action.

上記バニリン酸誘導体の代表例はバニリン酸3-フェニル-2-プロペニル、プロトカテク酸3-フェニル-2-プロペニル等であり、このようなバニリン酸エステルが、動物細胞におけるTNF-α産生を抑制することは本発明者により初めて見いだされたものである。
上記カルコン誘導体の代表例は、4’-ヒドロキシカルコン、イソリキリチゲニン、キサントフモール、キサントアンゲロール等であり、カルコン誘導体は、いずれも3〜10μM という低濃度で動物細胞におけるTNF-α産生を抑制する。 Representative examples of the vanillic acid derivatives are 3-phenyl-2-propenyl vanillate, 3-phenyl-2-propenyl protocatechuate, etc., and such vanillic acid ester suppresses TNF-α production in animal cells. Was first discovered by the present inventors.
Representative examples of the above chalcone derivatives are 4′-hydroxychalcone, isoliquiritigenin, xanthohumol, xanthoangelol, etc., all of which are TNF-α in animal cells at a low concentration of 3 to 10 μM. Suppresses production.

上記したカルコン類のうち、キサントフモールはビールのホップに含まれ、キサントアンゲロールは明日葉に含まれ、イソリキリチゲニンは甘草に含まれ、いずれも従来から喫食されてきたものであり安全性は高い。キサントフモールについての動物における安全性試験のデータ（100mg/Kg・dayの投与でも安全；R. Hussong et al., Mol. Nutr. Food Res., 49, 861-867, 2005）やカルコン自体について急性毒性を示すLD50が500mg/Kgの高投与量とされていること（MSDSに収録）から、簡単な構造のモノヒドロキシカルコンも通常使用される濃度域では安全性は高いと考えられる。 Of the chalcones described above, xanthohumol is contained in beer hops, xanthoangelol is contained in tomorrow, and isoliquiritigenin is contained in licorice, both of which have been eaten in the past. Safety is high. Data on animal safety studies on xanthohumol (safe for 100 mg / Kg · day administration; R. Hussong et al., Mol. Nutr. Food Res., 49, 861-867, 2005) and the chalcone itself Since LD50 showing acute toxicity is a high dose of 500 mg / Kg (recorded in MSDS), it is considered that the safety of monohydroxychalcone with a simple structure is high in the normal concentration range.

さらに、本発明で使用する、一般式（１）で示される化合物、すなわち、上記した、フェルラ酸又はカフェイン酸の誘導体、バニリン酸又はプロトカテク酸誘導体、カルコン誘導体、もしくはジンゲロール誘導体は、TNF-αの産生を抑制するほか、ＩＬ−６，ＩＬ−１β等の炎症性サイトカインの産生も抑制し、さらに動物細胞における一酸化窒素（ＮＯ）の産生も抑制する。一方、上記フェルラ酸誘導体やバニリン酸誘導体は、これらに加えて、インターロイキン８（IL-8）の産生も抑制する。 Furthermore, the compound represented by the general formula (1) used in the present invention, that is, the above-described derivative of ferulic acid or caffeic acid, vanillic acid or protocatechuic acid derivative, chalcone derivative, or gingerol derivative, In addition to the production of inflammatory cytokines such as IL-6 and IL-1β, and also the production of nitric oxide (NO) in animal cells. On the other hand, in addition to these, the ferulic acid derivative and vanillic acid derivative also suppress the production of interleukin 8 (IL-8).

これら化合物のTNF−α産生抑制作用を含め炎症性サイトカインの産生抑制作用は、炭素数16〜２２の不飽和脂肪酸あるいはそのグリセリドまたは低級アルキルエステルとの併用により全般的に顕著に増大され、さらに上記一酸化窒素（ＮＯ）の産生抑制作用も向上する。 The inflammatory cytokine production inhibitory action including the TNF-α production inhibitory action of these compounds is generally significantly increased by the combined use with an unsaturated fatty acid having 16 to 22 carbon atoms or a glyceride or lower alkyl ester thereof. Nitric oxide (NO) production inhibitory action is also improved.

このような炭素数１６〜２２の不飽和脂肪酸は、2重結合の数が１〜６の天然に広く分布している脂肪酸であり、具体的には、
ドコサヘキサエン酸(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z-docosahexaenoic acid)、
(n-6)ドコサペンタエン酸(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z-docosapentaenoic acid)、
(n-3)ドコサペンタエン酸(7Z,10Z,13Z,16Z,19Z-docosapentaenoic acid)、
エイコサペンタエン酸(5Z,8Z,11Z,14Z,17Z-eicosapentaenoic acid)、
アラキドン酸(5Z,8Z,11Z,14Z-eicosatetraenoic acid)、
ステアリドン酸(6Z,9Z,12Z,15Z-octadecatetraenoic acid)、
ホモ-γ-リノレン酸(8Z,11Z,14Z-eicosatrienoic acid)、
α-リノレン酸(9Z, 12Z, 15Z-octadecatrienoic acid)、
γ-リノレン酸(6Z, 9Z, 12Z-octadecatrienoic acid)、
リノール酸(9Z,12Z-octadecadienoic acid)、
オレイン酸(9Z-octadecenoic acid)、
共役リノレン酸（10E, 12Z-octadecadienoic acid
又は9Z,11E-octadecadienoic acid）などが挙げられる。これらのうちでは、とりわけ魚油に含まれるドコサヘキサエン酸やエイコサペンタエン酸等の高度不飽和脂肪酸が、高いTNF―α等の炎症性サイトカイン産生抑制効果をもたらす。 Such unsaturated fatty acids having 16 to 22 carbon atoms are fatty acids that are widely distributed in nature and have 1 to 6 double bonds.
Docosahexaenoic acid (4Z, 7Z, 10Z, 13Z, 16Z, 19Z-docosahexaenoic acid),
(n-6) docosapentaenoic acid (4Z, 7Z, 10Z, 13Z, 16Z-docosapentaenoic acid),
(n-3) docosapentaenoic acid (7Z, 10Z, 13Z, 16Z, 19Z-docosapentaenoic acid),
Eicosapentaenoic acid (5Z, 8Z, 11Z, 14Z, 17Z-eicosapentaenoic acid),
Arachidonic acid (5Z, 8Z, 11Z, 14Z-eicosatetraenoic acid),
Stearidonic acid (6Z, 9Z, 12Z, 15Z-octadecatetraenoic acid),
Homo-γ-linolenic acid (8Z, 11Z, 14Z-eicosatrienoic acid),
α-linolenic acid (9Z, 12Z, 15Z-octadecatrienoic acid),
γ-linolenic acid (6Z, 9Z, 12Z-octadecatrienoic acid),
Linoleic acid (9Z, 12Z-octadecadienoic acid),
Oleic acid (9Z-octadecenoic acid),
Conjugated linolenic acid (10E, 12Z-octadecadienoic acid
Or 9Z, 11E-octadecadienoic acid). Among these, highly unsaturated fatty acids such as docosahexaenoic acid and eicosapentaenoic acid contained in fish oil, among others, have a high inhibitory effect on the production of inflammatory cytokines such as TNF-α.

また、これらの不飽和脂肪酸はグリセリドであってもよく、モノグリセリド、ジグリセリド、トリグリセリドのいずれでもよく、また、グリセロール中の不飽和脂肪酸の結合位置は１、２、３位のいずれでもよく、さらにジグリセリド、トリグリセリドの場合には当該不飽和脂肪酸以外の脂肪酸、例えばパルミチン酸やステアリン酸が結合していても良い、また、低級アルキルエステルとしてはエチルエステルの他に、メチル、プロピル、もしくはブチルエステルであってもても良い。 These unsaturated fatty acids may be glycerides, and may be monoglycerides, diglycerides, or triglycerides, and the binding positions of unsaturated fatty acids in glycerol may be any of 1, 2, and 3 positions. In the case of triglycerides, fatty acids other than the unsaturated fatty acid, such as palmitic acid or stearic acid, may be bound. The lower alkyl ester may be methyl, propyl, or butyl ester in addition to ethyl ester. It does not matter.

一方、本発明に関わる一般式（１）で示される化合物のうち、フェルラ酸の誘導体は、天然から容易に抽出されるフェルラ酸やバニリン酸の適当な誘導体と、対応するアミンやアルコールを酸クロライド法やカルボジイミド法など公知の方法で縮合させることにより容易に製造できる。以下の実施例で用いたフェルロイルトリプタミン（FATA）等のフェノール性化合物の合成法は特開2005-225872、特願2005-61659、特願2005-218519に記載したところと同様である。カルコンやヒドロキシカルコン類も公知の方法で容易に合成できる。カルコン類のうち複雑な構造のキサントアンゲロール、[6]−ジンゲロール等、植物に豊富に含まれる化合物はそれらの植物から公知の方法で抽出製造される。例えばイソリキリチゲニンやリコカルコンAは甘草根から、ナリンゲニンカルコンはトマト果実から、キサントフモールはホップから、キサントアンゲロールやヒドロキシデリシンは明日葉の根、茎から、[6]−ジンゲロールはショウガ根茎から公知の方法で容易に抽出製造される。この場合、不都合な夾雑物がない限り、粗抽出物や部分精製品として用いることもできる。抽出は水やエタノールで容易に行なえる。本発明に用いる場合、一般式（１）の化合物の添加量は化合物の種類、精製の方法や程度、求められる効果の程度により、生理的に安全な範囲で加減する。例えば式２の化合物の添加量は飲用水の１mlもしくは食物の１ｇあたり数ｍg以下とするが、総摂取量や摂取形態に応じて、生理的に安全な範囲内で適宜増減する。
次に、本発明を実施例に基づいてさらに詳細に説明する。 On the other hand, among the compounds represented by the general formula (1) related to the present invention, ferulic acid derivatives include suitable derivatives of ferulic acid and vanillic acid that are easily extracted from nature, and corresponding amines and alcohols as acid chlorides. It can be easily produced by condensation by a known method such as a method or a carbodiimide method. The synthesis method of phenolic compounds such as feruloyltryptamine (FATA) used in the following examples is the same as described in JP-A-2005-225872, Japanese Patent Application 2005-61659, and Japanese Patent Application 2005-218519. Chalcones and hydroxychalcones can also be easily synthesized by known methods. Among chalcones, compounds rich in plants such as xanthoangelol and [6] -gingerol having a complex structure are extracted and produced from these plants by a known method. For example, isoliquiritigenin and lycochalcone A from licorice root, naringenin chalcone from tomato fruit, xanthohumol from hops, xanthoangelol and hydroxydericin from tomorrow leaf roots and stems, [6] -gingerol is ginger It is easily extracted from the rhizome by a known method. In this case, as long as there are no inconvenient impurities, it can be used as a crude extract or a partially purified product. Extraction can be easily performed with water or ethanol. When used in the present invention, the amount of the compound of the general formula (1) is adjusted within a physiologically safe range depending on the type of compound, the method and degree of purification, and the degree of effect required. For example, the amount of the compound of formula 2 is set to several mg or less per 1 ml of drinking water or 1 g of food, but it is appropriately increased or decreased within a physiologically safe range depending on the total intake amount and the intake form.
Next, the present invention will be described in more detail based on examples.

ヒトTHP-1急性単球性白血病細胞（大日本製薬株式会社より購入）を10％の牛胎仔血清（FBS）を含むRPMI-1640培地で前培養後、1 x 10⁵ cells/mlの懸濁液とし、0.1μMのphorbol 12-myristate 13-acetate (PMA) を添加してから0.1mlづつ96-wellプレートに分注した。2日間培養後、細胞がマクロファージ様に分化し底面に張り付いたことを検鏡・確認してから、各ウェルの培地を10μM のドコサヘキサエン酸（DHA、Cayman社製）を加えたかもしくは加えていない10％FBS入り新鮮培地の0.2mlづつに交換した。次いで各ウェルの培地に所定濃度（1〜10ｍM）のサンプルのエタノール溶液またはエタノールのみを2μl添加し、さらに3時間培養した。次いで、大腸菌細胞膜のリポ多糖（0127:B8、Sigma社製）を32μg/mlの濃度で含むリン酸緩衝液の6μlづつを各ウェルに添加し、20時間培養した。培地を回収し、ELISAキット（Endogen社製）でTNF-α濃度を測定した。培地を回収後ウェルに残った細胞は0.2％クリスタルバイオレット−20％メタノール液で染色し、十分水洗後、１％SDS水溶液の0.1mlづつを各ウェルに加えて色素を溶出させプレートリーダー（595nm）で吸光度を測定して細胞数の指標とした。 Human THP-1 acute monocytic leukemia cells (purchased from Dainippon Pharmaceutical Co., Ltd.) are pre-cultured in RPMI-1640 medium containing 10% fetal bovine serum (FBS) and then suspended at 1 x 10 ⁵ cells / ml After adding 0.1 μM phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA), 0.1 ml was dispensed into a 96-well plate. After culturing for 2 days, after confirming that the cells differentiated into macrophages and stuck to the bottom surface, 10 μM docosahexaenoic acid (DHA, Cayman) was added or not added to the medium in each well. The fresh medium containing 10% FBS was replaced with 0.2 ml each. Next, 2 μl of an ethanol solution of a sample having a predetermined concentration (1 to 10 mM) or ethanol alone was added to the medium of each well, and further cultured for 3 hours. Next, 6 μl of a phosphate buffer containing lipopolysaccharide (0127: B8, Sigma) of E. coli cell membrane at a concentration of 32 μg / ml was added to each well and cultured for 20 hours. The medium was collected and the TNF-α concentration was measured with an ELISA kit (Endogen). Cells collected in the well after collecting the medium are stained with 0.2% crystal violet-20% methanol solution, washed thoroughly with water, and 0.1 ml of 1% SDS aqueous solution is added to each well to elute the dye and plate reader (595 nm) The absorbance was measured by using as an index of cell number.

使用したサンプルのうち、Ibp（イブプロフェン、東京化成製）、Cpz,（クロルプロマジン、和光純薬製）、4’-OH-Chal（4’-ヒドロキシカルコン、和光純薬製）、Xhum（キサントフモール、Alexis社製）、Isoliq（イソリキリチゲニン、Extrasynthese社製）、Ging（[6]-ジンゲロール、和光純薬製）、CAPE（カフェイン酸フェネチルエステル、和光純薬製）はそれぞれ記載したメーカーから購入した。Xang（キサントアンゲロール）は明日葉の茎、根から文献（小澤貢ら、薬学雑誌、98、210-214、1978）の方法で抽出、精製、結晶化し、機器分析で構造を確認したものを使用した。フェルラ酸とバニリン酸の誘導体[N-(β-フェネチル)フェルラミド（FAPA）、フェルロイルトリプタミン（FATA）、フェルロイルチラミン（Fer-Tyr）、β-フェネチルフェルレート（FAPE）、フェルラ酸3-フェニル-2-プロペニル（Fer-oCinn）、N-(β-フェネチル)カフェイン酸アミド（CAPA）、カフェイン酸3-フェニル-2-プロペニル（Caff-oCinn）、4-ヒドロキシ-3-メトキシ安息香酸3-フェニル-2-プロペニル(Va-oCinn)、プロトカテク酸3-フェニル-2-プロペニル（Prot-oCinn）、及びシリンガ酸3-フェニル-2-プロペニル（Syr-oCinn）]は特開2005-225872と特願2005-218519において記載した方法で合成した。 Among the samples used, Ibp (Ibuprofen, manufactured by Tokyo Kasei), Cpz, (Chlorpromazine, manufactured by Wako Pure Chemical), 4'-OH-Chal (4'-hydroxychalcone, manufactured by Wako Pure Chemical), Xhum (Xanthohumol) , Alexis), Isoliq (Isolikiritigenin, Extrasynthese), Ging ([6] -Gingerol, Wako Pure Chemical), CAPE (Caffeic acid phenethyl ester, Wako Pure Chemical) Purchased from. Xang (Xanthoangelol) was extracted, purified and crystallized from stems and roots of tomorrow leaves by the method of literature (Mitsugu Ozawa et al., Pharmaceutical Journal, 98, 210-214, 1978), and the structure was confirmed by instrumental analysis. It was used. Derivatives of ferulic acid and vanillic acid [N- (β-phenethyl) ferramide (FAPA), feruloyltryptamine (FATA), feruloyltyramine (Fer-Tyr), β-phenethylferrate (FAPE), 3-phenyl ferulic acid -2-propenyl (Fer-oCinn), N- (β-phenethyl) caffeic acid amide (CAPA), caffeic acid 3-phenyl-2-propenyl (Caff-oCinn), 4-hydroxy-3-methoxybenzoic acid 3-phenyl-2-propenyl (Va-oCinn), 3-phenyl-2-propenyl protocatechuate (Prot-oCinn), and 3-phenyl-2-propenyl syringate (Syr-oCinn)] are disclosed in JP 2005-225872 And the method described in Japanese Patent Application 2005-218519.

結果を図１、図2、及び図３に示す。培養液中のサンプルの濃度（μM）は図中に示してある。これらの結果から、フェルラ酸誘導体のFATAやカルコン類等各種のフェノール性化合物が図中に表示された範囲で濃度依存的にTNF-αの産生を抑制し、さらに、培地にドコサヘキサエン酸が同時に添加されていると一層強く抑制することがわかる。なお、図１のBに示すように、細胞数の指標となる色素濃度は実験終了後にコントロールとサンプル間で通常１０％以下しか違いがなかったことから、TNF-α産生の大きな低下は細胞の逸失によるものではないことが確認された。 The results are shown in FIG. 1, FIG. 2, and FIG. The concentration (μM) of the sample in the culture is shown in the figure. From these results, various phenolic compounds such as ferulic acid derivatives FATA and chalcones suppressed the production of TNF-α in a concentration-dependent manner within the range shown in the figure, and docosahexaenoic acid was added to the medium at the same time It can be seen that the suppression is even stronger. As shown in FIG. 1B, the dye concentration, which is an indicator of the number of cells, usually had a difference of only 10% or less between the control and the sample after the experiment was completed. It was confirmed that it was not due to loss.

ドコサヘキサエン酸の代わりにエイコサペンタエン酸（EPA、Cayman社製）とα−リノレン酸（和光純薬製）を用いて実施例１と同様の実験を行なった。結果を図４に示す。この結果から、カルコン類やフェルラ酸誘導体によるTNF-α産生抑制作用がエイコサペンタエン酸やリノレン酸でも増強されることが確認された。 An experiment similar to Example 1 was performed using eicosapentaenoic acid (EPA, manufactured by Cayman) and α-linolenic acid (manufactured by Wako Pure Chemical Industries) instead of docosahexaenoic acid. The results are shown in FIG. From this result, it was confirmed that the TNF-α production inhibitory action by chalcones and ferulic acid derivatives is enhanced by eicosapentaenoic acid and linolenic acid.

〔参考例１〕
フェルラ酸誘導体、カルコン類、及び各種のフェノール性化合物を用いて実施例１と同様の実験を行ない、回収した培地中のインターロイキン６（IL-6）及びインターロイキン1β(IL-1β)の濃度をELISAキット（Endogen社製）で測定した。結果を図５と図６に示すが、これらの炎症性サイトカインの産生もFATAやキサントフモールで抑制され、さらに、この場合もドコサヘキサエン酸を併用すると一層強く抑制されることがわかる。 [Reference Example 1]
The same experiment as in Example 1 was performed using ferulic acid derivatives, chalcones, and various phenolic compounds, and the concentrations of interleukin 6 (IL-6) and interleukin 1β (IL-1β) in the collected medium Was measured with an ELISA kit (manufactured by Endogen). The results are shown in FIG. 5 and FIG. 6, and it can be seen that the production of these inflammatory cytokines is also suppressed by FATA and xanthohumol, and in this case, it is further strongly suppressed when docosahexaenoic acid is used in combination.

〔参考例２〕
炎症反応のシグナル分子として一酸化窒素(NO)も重要な役割を果たしており、NOの産生抑制も炎症の抑制につながる。マウスRAW264マクロファージ細胞株（理化学研究所から購入）を10％FBS入りのDMEM培地で前培養し、トリプシン処理で回収して2 x 10⁵ cells/mlの懸濁液とし、0.2mlづつ96-ウェルプレートに植え込んだ。2日間培養後、各ウェルの培地を10μM のドコサヘキサエン酸を加えたかもしくは加えていない10％FBS入り新鮮培地の0.2mlづつに交換した。次いで各ウェルの培地に所定濃度（1〜10ｍM）のサンプルのエタノール溶液またはエタノールのみを2μl添加し、さらに3時間培養した。次いで、330μg/mlの大腸菌細胞膜リポ多糖（0127:B8、Sigma社製）、3.2μg/mlのアルギニン、及び0.32μg/mlのIFN-γを含む水溶液を6μlづつ各ウェルに添加し、20時間培養した。培地を回収し、培地中でNOから転換生成した亜硝酸イオンをグリース試薬（Sigma社製）で定量した。また、細胞は実施例１と同様にクリスタルバイオレットで染色し吸光度を測定して細胞数の指標とした。図７のAに示した結果から、フェルラ酸誘導体やカルコン類がLPSで刺激されたマクロファージ細胞におけるNO産生を抑制すること、さらに、ドコサヘキサエン酸が同時に添加されると一層強く抑制することがわかる。なお、図７のBに示すように、細胞数の指標となる色素濃度は実験終了後にコントロールとサンプル間で通常１０％以下しか違いがなかったことから、NO産生の大きな低下は細胞の逸失によるものではないことが確認された。 [Reference Example 2]
Nitric oxide (NO) also plays an important role as a signal molecule of the inflammatory response, and suppression of NO production also leads to suppression of inflammation. Mouse RAW264 macrophage cell line (purchased from RIKEN) was pre-cultured in DMEM medium containing 10% FBS, recovered by trypsinization to give a suspension of 2 x 10 ⁵ cells / ml, 96-well in 0.2 ml increments Implanted in a plate. After culturing for 2 days, the medium in each well was replaced with 0.2 ml each of fresh medium containing 10% FBS with or without 10 μM docosahexaenoic acid. Next, 2 μl of an ethanol solution of a sample having a predetermined concentration (1 to 10 mM) or ethanol alone was added to the medium of each well, and further cultured for 3 hours. Next, 6 μl of an aqueous solution containing 330 μg / ml E. coli cell membrane lipopolysaccharide (0127: B8, Sigma), 3.2 μg / ml arginine, and 0.32 μg / ml IFN-γ was added to each well for 20 hours. Cultured. The medium was recovered, and nitrite ions converted from NO in the medium were quantified with a grease reagent (manufactured by Sigma). Further, the cells were stained with crystal violet in the same manner as in Example 1 and the absorbance was measured to obtain an index of the number of cells. From the results shown in FIG. 7A, it can be seen that ferulic acid derivatives and chalcones suppress NO production in macrophage cells stimulated with LPS, and further suppress more strongly when docosahexaenoic acid is added simultaneously. Note that, as shown in FIG. 7B, the dye concentration, which is an index of the number of cells, was usually only 10% or less between the control and the sample after the experiment was completed. It was confirmed that it was not a thing.

〔参考例３〕
実施例１と同様にしてTHP-1細胞を培養し、サンプルを添加後、リポ多糖（0127:B8）で刺激しさらに22時間培養した。回収した培地中のインターロイキン８（IL-8）の濃度をELISAキット（Endogen社製）で測定した。結果を図８に示すがフェルラ酸誘導体によりIL-8の産生が抑制されることがわかる。 [Reference Example 3]
THP-1 cells were cultured in the same manner as in Example 1. After adding the sample, stimulation with lipopolysaccharide (0127: B8) was performed, and the culture was further continued for 22 hours. The concentration of interleukin 8 (IL-8) in the collected medium was measured with an ELISA kit (manufactured by Endogen). The results are shown in FIG. 8, and it can be seen that the production of IL-8 is suppressed by the ferulic acid derivative.

Aはフェルラ酸誘導体とカルコン類及びそれらとドコサヘキサエン酸（DHA）の組合せによりTHP-1細胞におけるTNF-α産生が抑制されることを示すグラフである。縦軸の値は培地中のTNF-α濃度（2つのウェルの平均と標準偏差）であり、横軸に付した数字はサンプルの濃度（μM）である。Bは各ウェルの細胞をクリスタルバイオレットで染色し、洗浄後、色素を抽出して測定した吸光度（2つのウェルの平均と標準偏差）である。A is a graph showing that TNF-α production in THP-1 cells is suppressed by a combination of a ferulic acid derivative, chalcones, and docosahexaenoic acid (DHA). The value on the vertical axis is the TNF-α concentration (average and standard deviation of two wells) in the medium, and the number on the horizontal axis is the sample concentration (μM). B is the absorbance (average and standard deviation of two wells) measured by staining cells in each well with crystal violet, washing and extracting the dye. フェルラ酸やカフェイン酸の誘導体とドコサヘキサエン酸の組合せによりTHP-1細胞におけるTNF-α産生が抑制されることを示すグラフである。縦軸の値はコントロールウェルにおけるTNF-α濃度を100としたときのサンプルウェルにおけるTNF-α濃度の相対値（2つのウェルの平均と標準偏差）であり、横軸に付した数字はサンプルの濃度（μM）である。It is a graph which shows that TNF- (alpha) production in THP-1 cell is suppressed by the combination of a derivative of ferulic acid or caffeic acid, and docosahexaenoic acid. The value on the vertical axis is the relative value of the TNF-α concentration in the sample well when the TNF-α concentration in the control well is 100 (average and standard deviation of the two wells). Concentration (μM). ジンゲロール(Ging)とカルコン類及びドコサヘキサエン酸の組合せによりTHP-1細胞におけるTNF-α産生が抑制されることを示すグラフである。縦軸の値はコントロールウェルにおけるTNF-α濃度を100としたときのサンプルウェルにおけるTNF-α濃度の相対値（2つのウェルの平均と標準偏差）であり、横軸に付した数字はサンプルの濃度（μM）である。It is a graph which shows that TNF- (alpha) production in THP-1 cells is suppressed by the combination of gingerol (Ging), chalcones, and docosahexaenoic acid. The value on the vertical axis is the relative value of the TNF-α concentration in the sample well when the TNF-α concentration in the control well is 100 (average and standard deviation of the two wells). Concentration (μM). カルコン類とバニリン酸誘導体及びそれらとエイコサペンタエン酸（EPA）又はα-リノレン酸の組合せによりTHP-1細胞におけるTNF-α産生が抑制されることを示すグラフである。縦軸の値は培地中のTNF-α濃度（2つのウェルの平均と標準偏差）であり、横軸に付した数字はサンプルの濃度（μM）である。図中でPUFAなしとはエイコサペンタエン酸もα-リノレン酸も添加されていないことを示す。It is a graph which shows that TNF- (alpha) production in THP-1 cells is suppressed by the combination of chalcones, vanillic acid derivatives, and their combination with eicosapentaenoic acid (EPA) or [alpha] -linolenic acid. The value on the vertical axis is the TNF-α concentration (average and standard deviation of two wells) in the medium, and the number on the horizontal axis is the sample concentration (μM). In the figure, “without PUFA” means that neither eicosapentaenoic acid nor α-linolenic acid is added. フェルラ酸誘導体とカルコン類及びそれらとドコサヘキサエン酸の組合せによりTHP-1細胞におけるIL-6産生が抑制されることを示すグラフである。縦軸の値は培地中のIL-6濃度（2つのウェルの平均と標準偏差）であり、横軸に付した数字はサンプルの濃度（μM）である。It is a graph which shows that IL-6 production in a THP-1 cell is suppressed by the combination of a ferulic acid derivative, chalcones, and those and docosahexaenoic acid. The value on the vertical axis is the concentration of IL-6 in the medium (average and standard deviation of two wells), and the number on the horizontal axis is the concentration of the sample (μM). フェルラ酸誘導体とカルコン類及びそれらとドコサヘキサエン酸の組合せによりTHP-1細胞におけるIL-1β産生が抑制されることを示すグラフである。縦軸の値はコントロールウェルにおけるIL-1β濃度を100としたときの各ウェルにおけるIL-1β濃度の相対値（2つのウェルの平均と標準偏差）であり、横軸に付した数字はサンプルの濃度（μM）である。It is a graph which shows that IL-1 (beta) production in THP-1 cell is suppressed by the combination of a ferulic acid derivative, chalcones, and those and docosahexaenoic acid. The value on the vertical axis is the relative value of IL-1β concentration in each well (average and standard deviation of two wells) when the IL-1β concentration in the control well is 100. Concentration (μM). Aはフェルラ酸誘導体とカルコン類及びそれらとドコサヘキサエン酸の組合せによりマウスマクロファージRAW264細胞におけるNO産生が抑制されることを示すグラフである。縦軸の値はグリース試薬による発色の吸光度から求めたNOの相対生産量（LPSを加えたコントロールウェルの値を100％とする。各サンプルの各濃度について4ウェルの平均と標準偏差）であり、横軸に付した数字はサンプルの濃度（μM）である。Bは各ウェルの細胞をクリスタルバイオレットで染色し、洗浄後、色素を抽出して測定した吸光度（４つのウェルの平均と標準偏差）である。A is a graph showing that NO production in mouse macrophage RAW264 cells is suppressed by ferulic acid derivatives, chalcones, and combinations thereof with docosahexaenoic acid. The value on the vertical axis is the relative production amount of NO determined from the absorbance of color developed by the grease reagent (the value of the control well with LPS added is 100%. The average and standard deviation of 4 wells for each concentration of each sample) The number on the horizontal axis is the sample concentration (μM). B is the absorbance (average and standard deviation of 4 wells) measured by staining the cells of each well with crystal violet, washing and extracting the dye. フェルラ酸誘導体によりTHP-1細胞におけるIL-8産生が抑制されることを示すグラフである。縦軸の値はコントロールウェルにおけるIL-8濃度を100としたときのサンプルウェルにおけるIL-8濃度の相対値（2つのウェルの平均と標準偏差）であり、横軸に付した数字はサンプルの濃度（μM）である。It is a graph which shows that IL-8 production in THP-1 cells is suppressed by a ferulic acid derivative. The value on the vertical axis is the relative value of IL-8 concentration in the sample well when the IL-8 concentration in the control well is 100 (average and standard deviation of two wells). Concentration (μM).

Claims

Ferulic acid or caffeic acid derivative represented by the following general formula (2), vanillic acid or protocatechuic acid derivative represented by the general formula (3), chalcone derivative represented by the general formula (4), and general formula (5) And at least one of docosahexaenoic acid, eicosapentaenoic acid, α-linolenic acid or glycerides thereof, or a lower alkyl ester having 1 to 4 carbon atoms , together with any compound selected from gingerol or an analog thereof A TNF-α production inhibitor in animal cells, characterized by containing as an active ingredient.

(In the formula 2, R ₁ and R ₂ are a hydrogen atom, a hydroxyl group or an alkoxy group, Y ₁ is an imino group (NH) or an oxygen atom (O), and Z is a divalent having 1 to 10 carbon atoms. (It is an aliphatic hydrocarbon group, and Q represents a phenyl group or an indolyl group which may be substituted with a hydroxyl group.)

(In formula 3, R ₁ and R ₂ are a hydrogen atom, a hydroxyl group or an alkoxy group, Y ₁ is an imino group (NH) or an oxygen atom (O), and Z is a divalent having 1 to 10 carbon atoms. (It is an aliphatic hydrocarbon group, and Q represents a phenyl group which may be substituted with a hydroxyl group.)

(In the formula 4, R ₁ represents a hydrogen atom or an alkoxy group, R ₂ represents a hydrogen atom or an unsaturated aliphatic hydrocarbon group having a branched chain, R ₃ represents hydrogen or a hydroxyl group, and R ₄ represents a hydrogen atom. Or represents a hydroxyl group.)

(However, in Equation 5, Z ₁ represents a monovalent aliphatic hydrocarbon group having 4 to 11 carbon atoms.)

The compound represented by the general formula (2) is N- (β-phenethyl) ferramide, feruloyltryptamine, feruloyltyramine, β-phenethylferrate, 3-phenyl-2-propenyl ferulate, N- (β- 2. The TNF-α production inhibitor in animal cells according to claim 1, which is selected from phenethyl) caffeic acid amide and caffeic acid phenethyl ester.

The compound represented by the general formula (3) is selected from 3-phenyl-2-propenyl 4-hydroxy-3-methoxybenzoate, 3-phenyl-2-propenyl protocatechuate and 3-phenyl-2-propenyl syringate The TNF-α production inhibitor for animal cells according to claim 1, wherein the TNF-α production inhibitor is used.

The compound represented by the general formula (4) is selected from 4'-hydroxychalcone, isoliquiritigenin, xanthohumol, and xanthoangelol. Inhibitors for TNF-α production in animal cells.

The TNF-α production inhibitor according to claim 1, wherein the compound represented by the general formula (5) is [6] -gingerol.