JP4366497B2 - 生体膜に特異的に作用する新規なペプチド - Google Patents
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Description
i)ALR、WALR、WGALR、RLAWG、GWALR、RVL、KVL、RVG、KVG、GVR、VGR、RVA、RSV、RVS、KVS、SVKおよびVSKからなる群より選択される、第1の配列:
ii)ALR、WALR、WGALR、RLAWG、GWALR、RVL、KVL、RVG、KVG、GVR、VGR、RVA、RSV、RVS、KVS、SVKおよびVSKからなる群より選択される、第2の配列:ならびに
iii)ALR、WALR、WGALR、RLAWG、GWALR、RVL、KVL、RVG、KVG、GVR、VGR、RVA、RSV、RVS、KVS、SVKおよびVSKからなる群より選択される、第3の配列
を提供する。
(1)第1のペプチドをコードする塩基配列を含む第1のカセット;
(2)該第1のペプチドをコードする塩基配列と同じ読み枠である、第2のペプチドをコードする塩基配列を含む第2のカセットであって、ここで該第2のペプチドは該第1のペプチドのフレキシブルな動きを可能にする部位を含む、第2のカセット;ならびに
(3)該第1および第2のカセットの転写および翻訳に必須の塩基配列を含み、第1および第2のカセットと作動可能に連結された、第3のカセット、
の3つのカセットを含み、ここで、該ライブラリーは、該第1のカセットが互いに異なる、少なくとも2つの該核酸配列を含む、ライブラリーを提供する。
DNAライブラリーを構築する工程;
無細胞系において、該ライブラリー中のDNAを転写および翻訳してペプチドを調製し、該ペプチドと、リボソームおよびmRNAとの複合体を形成する工程;ならびに
膜モデルへ特異的に結合する該複合体を選択する工程、
を包含する、方法
を提供する。
(1)第1のペプチドをコードする塩基配列を含む第1のカセット;
(2)該第1のペプチドをコードする塩基配列と同じ読み枠である、第2のペプチドをコードする塩基配列を含む第2のカセットであって、ここで該第2のペプチドは該第1のペプチドのフレキシブルな動きを可能にする部位を含む、第2のカセット;ならびに
(3)該第1および第2のカセットの転写および翻訳に必須の塩基配列を含み、第1および第2のカセットと作動可能に連結された、第3のカセット、
の3つのカセットからなり得、ここで、該ライブラリーは、該第1のカセットが互いに異なる、少なくとも2つの該核酸配列を含み得る。
膜モデル作製のための脂質、
を含む、キット
を提供する。
本明細書中で使用される場合、用語「病原性」とは、病原体(細菌などの微生物を含む)が生物に感染し得る状態をいう。本明細書中で使用される場合、用語「動物病原性」の微生物とは、動物に感染し得る微生物をいい、そして用語「植物病原性」の微生物とは、植物に感染し得る微生物をいう。本明細書中で使用される場合、「腐敗性微生物」とは、食品または工業製品の腐敗を生じさせる微生物をいう。
(A.目的とする生体膜に作用するペプチドのスクリーニング方法)
本発明者らは、目的とする生体膜に作用するペプチドのスクリーニング方法を構築するにあたり、2種類の膜作動性ペプチド(マスト21(配列番号5)、マストパランX(配列番号10))を指標に用いた。マスト21は、微生物細胞膜に特異的に作用し動物細胞膜にはしない。一方、マストパランXは、微生物細胞膜、動物細胞膜の双方に作用する。すなわち、細胞膜構造に作用するペプチドの選択手法において、これら2種類のペプチドを選択の対象とした場合に、固定化膜モデルとして微生物細胞膜モデルを用いた場合はマスト21とマストパランXの双方が選抜され、動物細胞膜モデルを用いた場合はマストパランXのみが選抜され、しかも欠損を生じることなくペプチドのアミノ酸配列の全長が得られる手法を確立できれば、ランダムペプチドライブラリーから細胞膜構造に作用するペプチドをスクリーニングする方法に適するものであると考えた。しかし、これらのペプチドは、いずれも強い抗菌活性を示すため、ファージディスプレイや細菌表層ディスプレイ、酵母表層ディスプレイなどの生物の力を利用する段階を含む手法では、選抜が不可能であるか、または欠損が生じたものしか選抜されてこない。本発明者らは、スクリーニングの全過程を、無細胞系、すなわち、微生物やファージなどの生きた細胞の力を利用せずにインビトロで行うことにより、それらの生物に致死的なペプチドや、生物の増殖に影響を与える可能性のあるペプチドが選択の対象であっても、スクリーニングの過程におけるペプチドの生体への影響を完全に排除することができること、すなわち、生体への作用が期待されるアミノ酸配列の一部が欠損したり、排除されたりする可能性が著しく低下することを見出した。
(1)第1のペプチドをコードする塩基配列を含む第1のカセット;
(2)該第1のペプチドをコードする塩基配列と同じ読み枠である、第2のペプチドをコードする塩基配列を含む第2のカセットであって、ここで該第2のペプチドは該第1のペプチドのフレキシブルな動きを可能にする部位を含む、第2のカセット;ならびに
(3)該第1および第2のカセットの転写および翻訳に必須の塩基配列を含み、第1および第2のカセットと作動可能に連結された、第3のカセット、
の3つのカセットを含み、ここで、該ライブラリーは、該第1のカセットが互いに異なる、少なくとも2つの該核酸配列を含む。具体的には、最上流のカセットに、転写並びに翻訳に必須の塩基配列を組み込み、中央部のカセットに目的のペプチドに応じて設計したDNAライブラリーを入れ、最下流のカセットに発現したペプチドのフレキシブルな動きを可能とする部位を挿入するように設計した。好ましくは、このDNAライブラリーは、終止コドンを欠くDNAからなる。第2のカセットおよび第3のカセットは全てのライブラリーに共通して使用可能である。従って、第1のカセット、第2のカセットおよび第3のカセットを連結し、無細胞系における転写および翻訳を同時に進行させることにより、翻訳産物であるペプチドと転写産物であるmRNAの複合体が形成され、目的に応じたペプチドのアミノ酸配列と遺伝子情報との対応付けが容易なペプチドライブラリーの作製が可能となる。
DNAライブラリーを設計および構築する工程;
無細胞系において、該ライブラリーを転写および翻訳して、ペプチド・リボソーム・mRNA複合体を形成する工程;ならびに
膜モデルへ特異的に結合する該複合体を選択する工程、
を包含する方法を提供する。
上記の方法によって、生体膜に特異的に作用する新規ペプチドをスクリーニングし得る。1つの局面において、この生体膜は、微生物細胞膜であり得る。好ましくは、この微生物は、病原性微生物または腐敗性微生物であり得る。他の局面において、この生体膜は、真核生物細胞膜であり得る。好ましくは、この真核生物は、哺乳動物細胞であり得る。さらに好ましくは、この哺乳動物細胞は、癌細胞またはアポトーシス細胞であり得る。別の局面において、この生体膜は、微生物細胞であっても真核生物細胞であってもよい。
本発明は、有効な量の本発明の薬学的組成物を被験体に投与することによる、処置方法を開示する。好ましい実施態様において、薬学的組成物は、実質的に純粋である。この被験体は、好ましくは動物であり、この動物は、好ましくは、哺乳動物であり、最も好ましくはヒトである。
本発明はまた、本発明の薬学的組成物の1以上の成分で充填された1以上の容器を備える、薬学的包装物またはキットを提供する。必要に応じて、薬学的製品または生物学的製品の製造、使用または販売を取り締まる政府機関により指示される形態における通知(この通知は、ヒトでの投与のための製造、使用、販売の機関による認可を示す)が、このような容器に付随する。
本発明は、本発明のスクリーニング方法によって得られたペプチドに対する抗体を提供する。抗体を惹起するための免疫原は、本発明のペプチドをアジュバントと混合することによって調製される。あるいは、ペプチドは、より大きな免疫原タンパク質との融合タンパク質として作製される。ペプチドはまた、他のより大きな免疫原タンパク質(例えば、キーホールリンペット(keyhole limpet)ヘモシアニン)と共有結合される。免疫原は、代表的に、皮内に、皮下に、または筋肉中に投与される。免疫原は、実験動物(例えば、ウサギ、ヒツジおよびマウス)に対して抗体を作製するために投与される。必要に応じて、この動物脾臓細胞は、単離され、そしてミエローマ細胞と融合され、モノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマを形成する。
まず、終止コドンを欠いた、複数のペプチドをコードする塩基配列を含むカセットを含むライブラリーの設計および構築を行う。好ましくは、ペプチドをコードする塩基配列は、終止コドンを欠く。終止コドンがあると、後述する転写および翻訳の産物であるペプチド・リボソーム・mRNA複合体(PRM複合体)において、ペプチドとmRNAがリボソームを介して結合した複合体の状態が維持できないので好ましくない。しかし、後述するように、終止コドンが生じた場合やフレームシフトが生じた場合は、プレ選択によってスクリーニングから除外されるので、用いるDNAライブラリーは終止コドンを欠いたものに限定される必要がなく目的のペプチドに応じて作製すればよいことを、当業者は容易に理解する。
なお、前記スクリーニングを行なう前に、DNA合成やPCRの際に誤りが生じて、ペプチドライブラリーの全長が発現していない複合体を除くために、「プレ選抜」を行うことが好ましい。このプレ選抜の過程を経ることにより、不完全な塩基配列を実際のスクリーニング系に持ち込む確率が著しく低減される。
あらゆるライブラリーの設計に適用可能なように、DNAライブラリー構築のための遺伝子を、図1に示すように、3つの部分(第1のカセット、第2のカセットおよび第3のカセット)から構成した。第1のカセットは、複数の核酸配列を含むライブラリーを挿入する部位であり、スクリーニングにかけるライブラリーに相当する遺伝子の塩基配列を挿入する。ただし、翻訳産物であるペプチドとmRNAがリボソームとを介して結合したPRM複合体の状態を維持するために、第1のカセットに挿入する塩基配列は終止コドンを含まない。また、第2のカセットおよび第3のカセットを連結するために、第1のカセットの5’部位にNdeI部位を、3’部位にXbaI部位を付加した。
スクリーニングに供する、ペプチドライブラリーに対応する塩基配列を、化学合成して第1のカセットとした。第1のカセット内の塩基配列として使用した塩基配列は、(XXB)20XAGであるため、終止コドンを含まない。さらに、制限酵素部位を5’部位および3’部位に付加した。第1のカセットと第2のカセットとをDNAリガーゼにより結合した後、プライマー3および4(それぞれ、配列番号6および配列番号7)により第1のカセットと第2のカセットとの連結産物を増幅した。このPCR産物をNdeIで処理し、精製した後、第3のカセットとDNAリガーゼによって結合し、次いで第3のカセットと第1のカセットおよび第2のカセットとの連結産物を、プライマー1および4(それぞれ、配列番号8および配列番号7)を用いて増幅した。得られたPCR産物を、DNAライブラリーとして使用した。
構築したDNAライブラリ一0.5μgを、総量20μlの一工程転写および翻訳系に使用した。反応系は、大腸菌S30抽出液、20種類のアミノ酸を含んでおり、0,8μlのT7 RNAポリメラーゼを添加し、37℃で30分間反応させた。続いて、RNaseを含まないDNaseIを添加し、さらに20分間反応させ、鋳型DNAを完全に分解した。次いで、氷上で冷却すると同時に、マグネシウムの最終濃度が50mMとなるように、1Mの酢酸マグネシウム溶液を加え、ペプチド・リボソーム・mRNA複合体(PRM複合体)を安定化した。
続いて、プレ選抜を行った。プレ選抜の過程を経ることにより、DNA合成時やPCRの際に誤りが生じた結果、終始コドンが生じ、そのために目的のペプチドの全長が発現していない複合体を除くことができる。従って、不完全な塩基配列を実際のスクリーニング系に持ち込む確率が著しく低減される。
微生物細胞膜モデルとしては、ホスファチジルコリン:ホスファチジルグリセロール=1:1(総リン脂質量の1.4%のビオチン化ホスファチジルエタノールアミンを含む)の組成のリポソームを、動物細胞膜モデルとしては、ホスファチジルコリン:ホスファチジルグリセロール:コレステロール=10:1:1(総リン脂質量の1.4%のビオチン化ホスファチジルエタノールアミンを含む)の組成のリポソームを用いた。
スクリーニングを、図2に示したような流れで行った。プレ選抜後のDNAライブラリー0.5μgを、実施例3と同様に総量20μlの一工程転写および翻訳系を行い、ペプチド・リボソーム・mRNA複合体(PRM複合体)を形成させた。
本発明の方法と比較するため、ファージディスプレイ法と固定化膜モデル系を組み合わせたスクリーニングを行った。ファージディスプレイ法は、T7ファージシステム(Novagen社製)を用いて以下の条件および手順にて行った。発現させるペプチドをコードしている遺伝子に対し、化学合成する際にベクターアームヘの挿入に、一方の5’部位に5’−aattを、相補鎖の5’部位に5’−agctを導入して合成した。続いて、アニーリングにより2本鎖DNAとした。このDNAを、T7ファージベクターの左腕(left arm)と右腕(right arm)に挿入するが、左腕はttaaが、右腕はagctが突出するように予め処理しておいた。左腕、挿入するDNAおよび右腕を、DNAリガーゼにより連結して、発現用ベクターを構築した。
実施例6で得た最終増幅産物を、アガロースゲル電気泳動により確認した。その結果を図3に示す。図3中、レーン1および8は分子量マーカーを示す。レーン2〜4は微生物細胞膜モデルを使用した場合の結果を、レーン5〜7は動物細胞膜モデルを使用した場合の結果を示す。レーン2および6は、マスト21の結果を、レーン3および7はマストパランXの結果を、レーン4および5は、ライブラリーの挿入が無い場合の結果を示す。マストパランXの場合には、どちらの固定化膜モデルを使用してもスクリーニングされて、正しい分子量の位置にDNAのバンドが検出された。一方、マスト21の場合は、微生物細胞膜モデルを使用した場合のみ選抜された。いずれのペプチドも塩基配列を確認したところ、欠損などを生じずに全長が得られていた。
マスト21(配列番号5)をコードする遺伝子の塩基配列の代わりに、マストパランX(配列番号10)をコードする遺伝子の塩基配列を、第1のカセットに挿入して前記のスクリーニングを行った。微生物細胞膜モデルと動物細胞膜モデルのいずれを使用しても、RT−PCR後に、該当するDNAのシグナルが得られた(図3のレーン3および6)。この結果は、いずれのタイプの膜にも作用し、選択性がないというマストパランXの特性と一致した。また、サイクルを繰り返した後に塩基配列を確認した場合、ほとんどのクローンが、全長をコードしており、欠損が生じたりしている例は稀であった。このことは、本発明の方法が微生物細胞膜、動物細胞膜などの生体膜に作用するペプチドのスクリーニングに有効であることを示す。一方、ファージディスプレイ法と固定化膜モデル系を組み合わせたスクリ一ニング系を用いた場合は、ペプチドの濃縮効率が極めて悪い上、得られた塩基配列は全て欠損変異を生じていた。これらのことは、本発明の方法が、生物の増殖などに影響するペプチドであってもスクリーニング可能であることを示すものである。
強い抗菌活性を示すタキプレシンおよびその誘導体からなるライブラリーを、本発明によるスクリーニング系に供した。これと同じライブラリーをファージディスプレイ法と固定化膜モデル系を組み合わせたスクリーニング系に供した結果は、ファージ力価の上昇が極めて悪い上、最終的に得られたアミノ酸配列は100%欠損変異を生じていた。一方、本発明の方法によるスクリーニングの結果、全長のペプチドが効率的に得られた。このことは、本発明の手法が、生物に致死的なペプチドや、生物の増殖に影響するペプチドであっても適応可能な方法であることを示す。
第1のカセットにランダムな21アミノ酸からなるペプチドをコードする塩基配列を用いた。ただし、完全に、ランダムにすると終止コドンが生じて全長が得られないため、(XXB)20XAGという塩基配列を用いた(ここで、Xは、A、T、GまたはC、Bは、TまたはGである)。3番目のコドンをT,もしくはGに限定することにより、終止コドン出現の可能性を排除した。また、カセット連結の都合上、21番目のアミノ酸をコードする塩基配列をXAGとする必要があったため、出現するアミノ酸は、Tyr、His、Asn、Aspの4種類に限定された。上記のランダムペプチドライブラリーを第1のカセットとして使用し、実施例6に記載の方法に従って、カセットに連結した。
微生物細胞膜は、酸性脂質(PG、PS、リポ多糖など)が表層に露出しているため、負に荷電している。従って、微生物細胞膜に特異的に作用するペプチドの機能には、ペプチドが塩基性であることが必須である。さらに、生体防御ペプチドは、両親媒性の構造をとる事によって、微生物細胞膜に対する透過性を高め、ポア形成能を有し、そして微生物細胞膜に損傷を与えるということが考えられる。
微生物細胞膜に特異的に作用しかつ動物細胞膜には作用しないマスト21(配列番号5)のアミノ酸配列のうち、K(リジン)をR(アルギニン)に改変した。得られたペプチドを、マスト21R(配列番号107)と名付けた。マスト21Rは、マスト21同様に微生物細胞膜に特異的に作用する、強い抗菌活性を有した。
各ペプチドを、サワディーテクノロジー(東京)に合成を外注した。化学合成後、HPLCにより純度95%以上にまで精製した。精製ペプチドを、マススペクトロメトリーによって分子量を確認した。
リン脂質組成の異なる3種類のモデル膜を作製した:典型的な微生物細胞膜モデルとしてのリポソームA(PC/PG=1/1);微生物細胞膜モデルに近いモデルとしてのリポソームB(PC/PG=10/1);典型的な健康な動物細胞膜モデルとしてのリポソームC(PC/PG/Chl=10/1/1)。ここで、PCは、ホスファチジルコリン、PGは、ホスファチジルグリセロール、Chlは、コレステロールである。
リポソームを、96ウェルのマイクロプレートに加え、10mM HEPES緩衝液で希釈して使用した。カルセイン内包リポソーム100μl(20μM)/ウェルに、1、2、4、5μM(最終濃度)のペプチド水溶液を添加した後、一定時間ごとに、マイクロプレート対応蛍光光度計(Molecular Devices社製、SPECTRAmax GEMINI)を励起波長485nmおよび蛍光波長538nmで用いて、漏出するカルセイン量を検出した。カルセインは、リポソーム内部では蛍光消光のために蛍光を発し得ないが、ペプチドがリポソームに作用してリポソームに穴が開くことによって、リポソーム外に漏れ出すと、カルセインは、励起波長により蛍光を発する。
細胞膜構造に作用するための最小単位(3アミノ酸)のペプチドでは,顕著な膜への作用は検出されなかった(5%以下を、全てndと表示)。しかし、特異的に細胞膜構造に作用する能力が期待されるこれらの配列をタンデムに並べたペプチド(例えば、KLV5:KLVの配列を5回繰り返したKLVKLVKLVKLVKLV)に細胞膜構造に特異的に作用する能力が認められた。また、表中には記載しなかったが、KLVなどは、鎖長が延長されるに従って作用が高まった。KLVとKLV3との間で数%の膜構造に作用する能力の上昇が観察された。この上昇は、KLV3が特異的に細胞膜構造に作用することを示す。
(A:抗菌活性の評価法)
抗菌活性を、米国National Committee for Clinical Laboratory Standard(NCCL Documents M7−A3)に従って評価した。すなわち、マイクロタイタープレートを用いて、菌の増殖を阻害するペプチドの最小濃度を求めた。細菌を、感受性測定用ブイヨン培地(カザミノ酸 16.5g、ハートエキス粉末 3.0g、溶性デンプン 1.5g、ブドウ糖 2.0g、L−トリプトファン 0.05g、L−シスチン 0.05g、ビオチン5μg/L)で16時間培養した後、A600における吸光度を測定した。予め求めた濁度とコロニー形成単位(colony forming unit(CFU))との相関から、規定のCFUになるように感受性測定用ブイヨン培地で希釈した。各菌株を5×105CFU/ml(最終濃度)になるように添加した。各ペプチドの5mM水溶液、および感受性測定用ブイヨン培地を用いた1.6mM溶液を調製し、ここから段階希釈を行った(0.78μMを最小とした)。菌液50μlを分注したマイクロプレートに各濃度段階のペプチドを50μlずつ分注した(ペプチドの最終濃度は0.39μM〜800μM)。ペプチド無添加のものをネガティブコントロールとした。プレートを37℃で18時間静置培養し、菌の増殖を阻害する最小濃度(最小発育阻止濃度:MIC)を求めた。結果を、表5に示す。表中に記載の濃度を、μMで示す。
(A:溶血性の評価方法)
動物細胞膜モデルへの作用の指標として、赤血球に対する作用を評価した。
動物細胞膜に作用するために細胞毒性が強いペプチドであるマストパランX(表中、mastoparan X)は高い溶血性を示すが、得られた全てのペプチドは、低い溶血性しか示さなかった。これは、ペプチド配列のスクリーニングの過程において、動物細胞膜モデルに作用しないことを指標にした手法の有効性を示している。また、この結果は、表4に示した膜への作用の結果と一致している(リポソームCに対する作用が低い)。さらに、この結果は、得られたペプチドが、ヒトを含めた動物の細胞膜に対する作用が低いことを示し、安全性の高い抗菌剤、および微生物細胞膜に特異的に作用するシグナル配列として機能し得ることを示す。
抗癌活性を、米国国立研究所(NCI)にて行われてきたヒト癌細胞パネルによる抗癌剤スクリーニング方法(1990年)に準じる方法を使用して評価した。実験に用いた細胞は、以下の3つの細胞株である:HL60細胞(ヒト白血病由来細胞株);HeLa細胞(ヒト子宮癌由来細胞株);HCT116(ヒト大腸癌由来細胞株)。これらの細胞を使用する場合に適した培地は、それぞれ10% FCSを含むRPMI−1640培地;10% CSを含むMEM培地;10% FCSを含むMcCoy5A培地である。
マスト21、マスト21R、ALR6およびKVL6について、軟腐病の植物病原性細菌であるErwinia Carotovora(NBRC3380)に対する抗菌活性を、評価した。すなわち、マイクロタイタープレートを用いて、菌の増殖を阻害するペプチドの最小濃度を求めた。細菌を、培養培地(Difco Nutrient Broth 8g、NaCl 5g/L、pH7.0)で16時間培養した後、A600における吸光度を測定した後、菌株を1×106CFU/mlに調製した。各ペプチドの5mM水溶液を調製し、培養培地を用いて段階希釈を行った。菌液50μlを分注した96ウェルマイクロタイタープレートに各濃度段階のペプチドを50μlずつ分注した(菌株の最終濃度は5×105CFU/ml、ペプチドの最終濃度は0〜50μM)。プレートを30℃で16〜24時間静置培養し、菌の増殖を阻害する最小濃度(最小発育阻止濃度:MIC)を求めた(μMおよびμg/ml)。結果を、表9に示す。表中に記載の濃度を、μMで示す。
強力なアポトーシス誘導試薬であるシクロヘキシミドで処理したHL60細胞を、アポトーシス細胞として用いた。通常、アポトーシスが誘導されると、細胞核ではクロマチンの凝集が起こり、染色体の断片化が生じる。次いで、数時間以内にアポトーシス小体が形成される。シクロヘキシミド処理したアポトーシス細胞を位相差顕微鏡を用いて観察した場合、全細胞の80%以上において、このようなアポトーシス小体を確認した。
Claims (14)
- 配列RNWRGIAGMARRLLGRNWRLMを含む、ペプチド。
- 請求項1に記載のペプチドを含有する、微生物を殺傷するための薬学的組成物。
- 請求項1に記載のペプチドを含有する、食品または工業製品の腐敗を予防するための薬学的組成物。
- 請求項1に記載のペプチドを含有する、微生物による感染症を処置するための薬学的組成物。
- 請求項1に記載のペプチドを含有する、抗生物質。
- 請求項1に記載のペプチドを含有する、微生物感染部位に薬物を送達するための、薬学的送達物。
- 請求項1に記載のペプチドを含有する、癌を処置するための薬学的組成物。
- 請求項1に記載のペプチドを含有する、癌病変部位に薬物を送達するための、薬学的送達物。
- 請求項1に記載のペプチドを含有する、アポトーシスを抑制するための、薬学的組成物。
- 請求項1に記載のペプチドを含有する、アポトーシスが進行する部位に薬物を送達するための、薬学的送達物。
- 前記微生物が、動物病原性である、請求項2〜6のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
- 前記微生物が、植物病原性である、請求項2〜6のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
- 前記植物病原性微生物が、エルウィニア・カロトボラ(Erwinia Carotovora)である、請求項12に記載の薬学的組成物。
- 前記癌が、膀胱癌、胃癌、乳癌、肺癌、前立腺癌、グリア芽腫、大腸癌、子宮癌、卵巣癌、腎癌および白血病からなる群より選択される、請求項7または8に記載の薬学的組成物。
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