JP4320408B2

JP4320408B2 - A novel strain with bile acid binding ability

Info

Publication number: JP4320408B2
Application number: JP2005123407A
Authority: JP
Inventors: 武司魚住; 昭彦太田; 賢治西野; 益男星野; 由章星野; 達也井戸
Original assignee: MEIJI UNIVERSITY LEGAL PERSON
Current assignee: MEIJI UNIVERSITY LEGAL PERSON
Priority date: 2005-04-21
Filing date: 2005-04-21
Publication date: 2009-08-26
Anticipated expiration: 2025-04-21
Also published as: JP2006296307A

Description

本発明は、胆汁酸結合能を有する新規菌株、並びにそれを利用した食品及び動脈硬化予防剤に関する。 The present invention relates to a novel strain having bile acid binding ability, and a food and an arteriosclerosis preventive agent using the same.

コレステロールは、ステロイドホルモンや胆汁酸の合成原料となる一方、その血中濃度が高い場合には、動脈硬化、心筋梗塞、脳出血などの疾患の原因となる。このため、血中のコレステロール値が一定値以上の場合には、その値を薬剤によって下げることが一般に行われている。コレスチラミンは、このようなコレステロール低下薬の一つであり、腸管内で胆汁酸と結合し、その排泄を促進することによって、胆汁酸の原料であるコレステロールを減少させる働きを持つ。コレスチラミンは、コレステロール値の低下には有効な薬剤であるが、便秘や肝機能障害などの副作用があるため、日常的な使用には適さない。 Cholesterol is a synthetic raw material for steroid hormones and bile acids, but when its blood concentration is high, it causes diseases such as arteriosclerosis, myocardial infarction, and cerebral hemorrhage. For this reason, when the cholesterol level in the blood is a certain value or more, it is generally performed to lower the value with a drug. Cholestyramine is one of such cholesterol-lowering drugs, and has the function of reducing cholesterol, which is a raw material of bile acids, by binding to bile acids in the intestine and promoting their excretion. Cholestyramine is an effective drug for lowering cholesterol levels, but it is not suitable for daily use due to side effects such as constipation and liver dysfunction.

ところで、ラクトバチルス属に属する幾つかの菌株は、コレスチラミンと同様に胆汁酸結合能を持つことが知られている（特許文献１）。ラクトバチルス属の細菌は、ヨーグルトや漬物などの食品中に含まれている細菌であることから、人体に対する安全性は高い。従って、このラクトバチルス属の菌株を利用することにより、副作用のない安全なコレステロール低下薬を作り出せる可能性がある。 By the way, it is known that some strains belonging to the genus Lactobacillus have bile acid binding ability like cholestyramine (Patent Document 1). Bacteria belonging to the genus Lactobacillus are high in safety to the human body because they are contained in foods such as yogurt and pickles. Therefore, by using this Lactobacillus genus strain, there is a possibility that a safe cholesterol-lowering drug without side effects can be created.

特開２００３−２３５５０１号公報JP 2003-235501 A

上述したように、特許文献１中の菌株は、コレスチラミンと同様に胆汁酸結合能を持つ。しかし、その結合能は、コレスチラミンの結合能の４〜５割程度にすぎないため、実際にコレステロール値を下げることができるかどうかは必ずしも明らかではない。 As described above, the strain in Patent Document 1 has a bile acid binding ability like cholestyramine. However, since the binding ability is only about 40 to 50% of the binding ability of cholestyramine, it is not always clear whether the cholesterol level can actually be lowered.

本発明は、以上のような技術的背景の下になされたものであり、より胆汁酸結合能の高い菌株を提供することを目的とする。 The present invention has been made under the above technical background, and an object thereof is to provide a strain having a higher bile acid binding ability.

本発明者は、上記課題を解決するため鋭意検討を重ねた結果、ビール酵母を含むパン種から単離された菌株が非常に高い胆汁酸結合能を持ち、また、この菌株を高コレステロール飼料と共にラットに与えると、総コレステロール値の上昇が抑制されるだけでなく、善玉コレステロールと呼ばれるＨＤＬＣの値の低下が抑制されることを見出し、これらの知見に基づき、本発明を完成するに至った。 As a result of intensive studies to solve the above-mentioned problems, the present inventor has found that a strain isolated from bread seeds containing brewer's yeast has a very high bile acid-binding ability, and this strain is used together with a high cholesterol diet in rats. In addition, it was found that not only the increase in the total cholesterol level but also the decrease in the HDLC level called good cholesterol was suppressed, and based on these findings, the present invention was completed.

即ち、本発明は、以下の（１）〜（１６）を提供するものである。 That is, the present invention provides the following (1) to (16).

（１）ロイコノストックｓｐ．Ｂ０３２１株、ロイコノストックｓｐ．Ｂ０８１１株、ロイコノストックｓｐ．Ｂ０９１１株、及びラクトバチルス・プランタルムＢ１０２１株。 (1) Leuconostoc sp. B0321 strain, Leuconostoc sp. B0811 strain, Leuconostoc sp. B0911 strain and Lactobacillus plantarum B1021 strain.

（２）ロイコノストックｓｐ．Ｂ０３２１株の類似菌株。 (2) Leuconostoc sp. Similar strain of B0321 strain.

（３）配列番号１記載の塩基配列と同等の塩基配列で表される１６ＳｒＤＮＡを有することを特徴とする（２）記載のロイコノストックｓｐ．Ｂ０３２１株の類似菌株。 (3) It has 16S rDNA represented by a base sequence equivalent to the base sequence described in SEQ ID NO: 1, and the leuconostock sp. Similar strain of B0321 strain.

（４）リボース、Ｄ−キシロース、Ｌ−キシロース、グルコース、フルクトース、マンノース、α−メチル−Ｄ−マンノシド、α−メチル−Ｄ−グルコシド、セロビオース、マルトース、ラクトース、メリビオース、スクロース、ラフィノース、Ｄ−ツラノース、２−ケトグルコン酸、及び５−ケトグルコン酸に対する資化性を持ち、グリセロール、エリスリトール、Ｄ−アラビノース、Ｌ−アラビノース、アドニトール、β−メチル−Ｄ−キシロシド、ガラクトース、ソルボース、ラムノース、ズルシトール、イノシトール、マンニトール、ソルビトール、Ｎ−アセチル−グルコサミン、アミグダリン、アルブチン、エスクリン、サリシン、トレハロース、イヌリン、メレジトース、デンプン、グリコーゲン、キシリトール、ゲンチオビオース、Ｄ−リキソース、Ｄ−タガトース、Ｄ−フコース、Ｌ−フコース、Ｄ−アラビトール、Ｌ−アラビトール、及びグルコン酸に対する資化性を持たないことを特徴とする請求項２記載のロイコノストックｓｐ．Ｂ０３２１株の類似菌株。 (4) Ribose, D-xylose, L-xylose, glucose, fructose, mannose, α-methyl-D-mannoside, α-methyl-D-glucoside, cellobiose, maltose, lactose, melibiose, sucrose, raffinose, D-turanose , 2-ketogluconic acid, and 5-ketogluconic acid, and glycerol, erythritol, D-arabinose, L-arabinose, adonitol, β-methyl-D-xyloside, galactose, sorbose, rhamnose, dulcitol, inositol, Mannitol, sorbitol, N-acetyl-glucosamine, amygdalin, arbutin, esculin, salicin, trehalose, inulin, melezitose, starch, glycogen, xylitol, gentiobio , D- lyxose, D- tagatose, D- fucose, L- fucose, D- arabitol, L- arabitol, and Leuconostoc sp according to claim 2, wherein the no-assimilating against gluconate. Similar strain of B0321 strain.

（５）ロイコノストックｓｐ．Ｂ０８１１株の類似菌株。 (5) Leuconostoc sp. Similar strain of B0811 strain.

（６）配列番号２記載の塩基配列と同等の塩基配列で表される１６ＳｒＤＮＡを有することを特徴とする（５）記載のロイコノストックｓｐ．Ｂ０８１１株の類似菌株。 (6) It has 16S rDNA represented by a base sequence equivalent to the base sequence described in SEQ ID NO: 2, and the leuconostock sp. Similar strain of B0811 strain.

（７）グリセロール、Ｌ−アラビノース、リボース、Ｄ−キシロース、ガラクトース、グルコース、フルクトース、マンノース、ソルビトール、α−メチル−Ｄ−マンノシド、α−メチル−Ｄ−グルコシド、Ｎ−アセチル−グルコサミン、アミグダリン、エスクリン、セロビオース、マルトース、ラクトース、メリビオース、スクロース、トレハロース、メレジトース、ラフィノース、ゲンチオビオース、及びＤ−ツラノースに対する資化性を持ち、エリスリトール、Ｄ−アラビノース、Ｌ−キシロース、アドニトール、β−メチル−Ｄ−キシロシド、ソルボース、ラムノース、ズルシトール、イノシトール、マンニトール、アルブチン、サリシン、イヌリン、デンプン、グリコーゲン、キシリトール、Ｄ−リキソース、Ｄ−タガトース、Ｄ−フコース、Ｌ−フコース、Ｄ−アラビトール、Ｌ−アラビトール、グルコン酸、２−ケトグルコン酸、及び５−ケトグルコン酸に対する資化性を持たないことを特徴とする（５）記載のロイコノストックｓｐ．Ｂ０８１１株の類似菌株。 (7) Glycerol, L-arabinose, ribose, D-xylose, galactose, glucose, fructose, mannose, sorbitol, α-methyl-D-mannoside, α-methyl-D-glucoside, N-acetyl-glucosamine, amygdalin, esculin , Cellobiose, maltose, lactose, melibiose, sucrose, trehalose, melezitose, raffinose, gentiobiose, and D-turanose, and erythritol, D-arabinose, L-xylose, adonitol, β-methyl-D-xyloside, Sorbose, rhamnose, dulcitol, inositol, mannitol, arbutin, salicin, inulin, starch, glycogen, xylitol, D-lyxose, D-tagatose, D- Course, L- fucose, D- arabitol, L- arabitol, gluconate, 2-ketogluconic acid, and is characterized in that no assimilating for 5- ketogluconic acid (5) Leuconostoc sp description. Similar strain of B0811 strain.

（８）ロイコノストックｓｐ．Ｂ０９１１株の類似菌株。 (8) Leuconostoc sp. Similar strain of B0911 strain.

（９）配列番号３記載の塩基配列と同等の塩基配列で表される１６ＳｒＤＮＡを有することを特徴とする（８）記載のロイコノストックｓｐ．Ｂ０９１１株の類似菌株。 (9) It has 16S rDNA represented by a base sequence equivalent to the base sequence described in SEQ ID NO: 3, and the leuconostock sp. Similar strain of B0911 strain.

（１０）リボース、Ｄ−キシロース、Ｌ−キシロース、グルコース、フルクトース、マンノース、α−メチル−Ｄ−マンノシド、α−メチル−Ｄ−グルコシド、セロビオース、マルトース、ラクトース、メリビオース、スクロース、ラフィノース、及びＤ−ツラノースに対する資化性を持ち、グリセロール、エリスリトール、Ｄ−アラビノース、Ｌ−アラビノース、アドニトール、β−メチル−Ｄ−キシロシド、ガラクトース、ソルボース、ラムノース、ズルシトール、イノシトール、マンニトール、ソルビトール、Ｎ−アセチル−グルコサミン、アミグダリン、アルブチン、エスクリン、サリシン、トレハロース、イヌリン、メレジトース、デンプン、グリコーゲン、キシリトール、ゲンチオビオース、Ｄ−リキソース、Ｄ−タガトース、Ｄ−フコース、Ｌ−フコース、Ｄ−アラビトール、Ｌ−アラビトール、グルコン酸、２−ケトグルコン酸、及び５−ケトグルコン酸に対する資化性を持たないことを特徴とする（８）記載のロイコノストックｓｐ．Ｂ０９１１株の類似菌株。 (10) Ribose, D-xylose, L-xylose, glucose, fructose, mannose, α-methyl-D-mannoside, α-methyl-D-glucoside, cellobiose, maltose, lactose, melibiose, sucrose, raffinose, and D- It has assimilability for tulanose, glycerol, erythritol, D-arabinose, L-arabinose, adonitol, β-methyl-D-xyloside, galactose, sorbose, rhamnose, dulcitol, inositol, mannitol, sorbitol, N-acetyl-glucosamine, Amygdalin, arbutin, esculin, salicin, trehalose, inulin, melezitose, starch, glycogen, xylitol, gentiobiose, D-lyxose, D-tagatose, D Fucose, L- fucose, D- arabitol, L- arabitol, gluconate, 2-ketogluconic acid, and is characterized in that no assimilating for 5- ketogluconic acid (8) Leuconostoc sp description. Similar strain of B0911 strain.

（１１）ラクトバチルス・プランタルムＢ１０２１株の類似菌株。 (11) A similar strain of Lactobacillus plantarum B1021 strain.

（１２）配列番号４記載の塩基配列と同等の塩基配列で表される１６ＳｒＤＮＡを有することを特徴とする（１１）記載のラクトバチルス・プランタルムＢ１０２１株の類似菌株。 (12) A similar strain of the Lactobacillus plantarum B1021 strain according to (11), which has 16S rDNA represented by a base sequence equivalent to the base sequence described in SEQ ID NO: 4.

（１３）リボース、ガラクトース、グルコース、フルクトース、マンノース、マンニトール、ソルビトール、α−メチル−Ｄ−マンノシド、Ｎ−アセチル−グルコサミン、アミグダリン、エスクリン、サリシン、セロビオース、マルトース、ラクトース、メリビオース、スクロース、トレハロース、メレジトース、ラフィノース、ゲンチオビオース、Ｌ−アラビトール、及び２−ケトグルコン酸に対する資化性を持ち、グリセロール、エリスリトール、Ｄ−アラビノース、Ｌ−アラビノース、Ｄ−キシロース、Ｌ−キシロース、アドニトール、β−メチル−Ｄ−キシロシド、ソルボース、ラムノース、ズルシトール、イノシトール、α−メチル−Ｄ−グルコシド、アルブチン、イヌリン、デンプン、グリコーゲン、キシリトール、Ｄ−ツラノース、Ｄ−リキソース、Ｄ−タガトース、Ｄ−フコース、Ｌ−フコース、Ｄ−アラビトール、グルコン酸、及び５−ケトグルコン酸に対する資化性を持たないことを特徴とする（１１）記載のラクトバチルス・プランタルムＢ１０２１株の類似菌株。 (13) Ribose, galactose, glucose, fructose, mannose, mannitol, sorbitol, α-methyl-D-mannoside, N-acetyl-glucosamine, amygdalin, esculin, salicin, cellobiose, maltose, lactose, melibiose, sucrose, trehalose, melezitose , Raffinose, gentiobiose, L-arabitol, and 2-ketogluconic acid, and glycerol, erythritol, D-arabinose, L-arabinose, D-xylose, L-xylose, adonitol, β-methyl-D-xyloside Sorbose, rhamnose, dulcitol, inositol, α-methyl-D-glucoside, arbutin, inulin, starch, glycogen, xylitol, D-turan Lactobacillus plantarum according to (11), which is not assimilating to D-lyxose, D-tagatose, D-fucose, L-fucose, D-arabitol, gluconic acid, and 5-ketogluconic acid Similar strain of B1021 strain.

（１４）（１）乃至（１３）のいずれか記載の菌株を含有することを特徴とする食品。 (14) A food comprising the strain according to any one of (1) to (13).

（１５）食品が、パン、ヨーグルト、又は漬物であることを特徴とする（１４）記載の食品。 (15) The food according to (14), wherein the food is bread, yogurt, or pickles.

（１６）（１）乃至（１３）のいずれか記載の菌株を有効成分として含有することを特徴とする動脈硬化予防剤。 (16) An arteriosclerosis preventive agent comprising the strain according to any one of (1) to (13) as an active ingredient.

本発明の菌株は、高コレステロール食によって生じる総コレステロール値の上昇とＨＤＬＣ値の低下を抑制する作用を持つので、動脈硬化の予防などの用途に利用することができる。 Since the strain of the present invention has an action of suppressing an increase in total cholesterol level and a decrease in HDLC level caused by a high cholesterol diet, it can be used for applications such as prevention of arteriosclerosis.

以下、本発明を詳細に説明する。 Hereinafter, the present invention will be described in detail.

本発明には、ロイコノストックｓｐ．Ｂ０３２１株、ロイコノストックｓｐ．Ｂ０８１１株、ロイコノストックｓｐ．Ｂ０９１１株、及びラクトバチルス・プランタルムＢ１０２１株の４菌株が含まれる。これらの菌株は、それぞれ受託番号NITE P-42、NITE P-43、NITE P-44、NITE P-45として独立行政法人製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センター（住所：千葉県木更津市かずさ鎌足２−５−８）に寄託されている（受託日：平成１６年１２月７日）。これらの菌株の１６ＳｒＤＮＡの塩基配列は、それぞれ配列番号１、配列番号２、配列番号３及び配列番号４に示すとおりである。また、これらの菌株の糖に対する資化性（酸の生成）は、実施例７中の表８に示すとおりである。 In the present invention, Leuconostoc sp. B0321 strain, Leuconostoc sp. B0811 strain, Leuconostoc sp. 4 strains of B0911 strain and Lactobacillus plantarum B1021 strain are included. These strains are designated as NITE P-42, NITE P-43, NITE P-44, and NITE P-45, respectively. 2-5-8) (Deposit date: December 7, 2004). The base sequences of 16S rDNA of these strains are as shown in SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3 and SEQ ID NO: 4, respectively. Moreover, the assimilation property (acid production | generation) with respect to the saccharide | sugar of these strains is as showing in Table 8 in Example 7. FIG.

本発明には、前記４菌株の類似菌株も含まれる。ここで、「類似菌株」とは、前記４菌株と同様に高い胆汁酸結合能を有する菌株をいい、前記４菌株の変異株のほか、ビール酵母パン種中から新たに単離される前記４菌株と同様の性質を持つ菌株なども含まれる。ここでいう「高い胆汁酸結合能」とは、コレスチラミン比で、通常６０％以上、好適には６４％以上であることを意味するが、これらの数値に限定されるわけではない。 The present invention also includes similar strains of the four strains. Here, the “similar strain” refers to a strain having a high bile acid-binding ability as in the case of the four strains. In addition to the mutant strains of the four strains, the four strains newly isolated from brewer's yeast bread seeds and Also included are strains having similar properties. Here, “high bile acid binding ability” means that the cholestyramine ratio is usually 60% or more, preferably 64% or more, but is not limited to these values.

１６ＳｒＤＮＡの塩基配列は、細菌の分類における指標の一つである。従って、前記４菌株の１６ＳｒＤＮＡの塩基配列と同等の塩基配列で表される１６ＳｒＤＮＡを持つ菌株は、「類似菌株」に含まれる。即ち、配列番号１、配列番号２、配列番号３、及び配列番号４記載の塩基配列と同等の塩基配列で表される１６ＳｒＤＮＡを有する菌株は、それぞれロイコノストックｓｐ．Ｂ０３２１株、ロイコノストックｓｐ．Ｂ０８１１株、ロイコノストックｓｐ．Ｂ０９１１株、及びラクトバチルス・プランタルムＢ１０２１株の類似菌株である。なお、ここでいう「同等の塩基配列」とは、配列番号１〜４に記載した塩基配列と完全に同一である塩基配列のほか、完全に同一ではないが、１６ＳｒＤＮＡによる細菌分類学上同一であるとみなせる塩基配列も含まれる。通常、配列番号１〜４に記載した塩基配列と９９％以上相同である塩基配列は、配列番号１〜４に記載した塩基配列と同一であるとみなすことができる。糖に対する資化性も、細菌の分類における指標の一つである。従って、糖に対する資化性が、前記４菌株と同一の菌株は、「類似菌株」に含まれる。即ち、（１）リボース、Ｄ−キシロース、Ｌ−キシロース、グルコース、フルクトース、マンノース、α−メチル−Ｄ−マンノシド、α−メチル−Ｄ−グルコシド、セロビオース、マルトース、ラクトース、メリビオース、スクロース、ラフィノース、Ｄ−ツラノース、２−ケトグルコン酸、５−ケトグルコン酸に対する資化性を持ち、グリセロール、エリスリトール、Ｄ−アラビノース、Ｌ−アラビノース、アドニトール、β−メチル−Ｄ−キシロシド、ガラクトース、ソルボース、ラムノース、ズルシトール、イノシトール、マンニトール、ソルビトール、Ｎ−アセチル−グルコサミン、アミグダリン、アルブチン、エスクリン、サリシン、トレハロース、イヌリン、メレジトース、デンプン、グリコーゲン、キシリトール、ゲンチオビオース、Ｄ−リキソース、Ｄ−タガトース、Ｄ−フコース、Ｌ−フコース、Ｄ−アラビトール、Ｌ−アラビトール、グルコン酸に対する資化性を持たない菌株、（２）グリセロール、Ｌ−アラビノース、リボース、Ｄ−キシロース、ガラクトース、グルコース、フルクトース、マンノース、ソルビトール、α−メチル−Ｄ−マンノシド、α−メチル−Ｄ−グルコシド、Ｎ−アセチル−グルコサミン、アミグダリン、エスクリン、セロビオース、マルトース、ラクトース、メリビオース、スクロース、トレハロース、メレジトース、ラフィノース、ゲンチオビオース、Ｄ−ツラノースに対する資化性を持ち、エリスリトール、Ｄ−アラビノース、Ｌ−キシロース、アドニトール、β−メチル−Ｄ−キシロシド、ソルボース、ラムノース、ズルシトール、イノシトール、マンニトール、アルブチン、サリシン、イヌリン、デンプン、グリコーゲン、キシリトール、Ｄ−リキソース、Ｄ−タガトース、Ｄ−フコース、Ｌ−フコース、Ｄ−アラビトール、Ｌ−アラビトール、グルコン酸、２−ケトグルコン酸、５−ケトグルコン酸に対する資化性を持たない菌株、（３）リボース、Ｄ−キシロース、Ｌ−キシロース、グルコース、フルクトース、マンノース、α−メチル−Ｄ−マンノシド、α−メチル−Ｄ−グルコシド、セロビオース、マルトース、ラクトース、メリビオース、スクロース、ラフィノース、Ｄ−ツラノースに対する資化性を持ち、グリセロール、エリスリトール、Ｄ−アラビノース、Ｌ−アラビノース、アドニトール、β−メチル−Ｄ−キシロシド、ガラクトース、ソルボース、ラムノース、ズルシトール、イノシトール、マンニトール、ソルビトール、Ｎ−アセチル−グルコサミン、アミグダリン、アルブチン、エスクリン、サリシン、トレハロース、イヌリン、メレジトース、デンプン、グリコーゲン、キシリトール、ゲンチオビオース、Ｄ−リキソース、Ｄ−タガトース、Ｄ−フコース、Ｌ−フコース、Ｄ−アラビトール、Ｌ−アラビトール、グルコン酸、２−ケトグルコン酸、５−ケトグルコン酸に対する資化性を持たない菌株、及び（４）リボース、ガラクトース、グルコース、フルクトース、マンノース、マンニトール、ソルビトール、α−メチル−Ｄ−マンノシド、Ｎ−アセチル−グルコサミン、アミグダリン、エスクリン、サリシン、セロビオース、マルトース、ラクトース、メリビオース、スクロース、トレハロース、メレジトース、ラフィノース、ゲンチオビオース、Ｌ−アラビトール、２−ケトグルコン酸に対する資化性を持ち、グリセロール、エリスリトール、Ｄ−アラビノース、Ｌ−アラビノース、Ｄ−キシロース、Ｌ−キシロース、アドニトール、β−メチル−Ｄ−キシロシド、ソルボース、ラムノース、ズルシトール、イノシトール、α−メチル−Ｄ−グルコシド、アルブチン、イヌリン、デンプン、グリコーゲン、キシリトール、Ｄ−ツラノース、Ｄ−リキソース、Ｄ−タガトース、Ｄ−フコース、Ｌ−フコース、Ｄ−アラビトール、グルコン酸、５−ケトグルコン酸に対する資化性を持たない菌株は、それぞれロイコノストックｓｐ．Ｂ０３２１株、ロイコノストックｓｐ．Ｂ０８１１株、ロイコノストックｓｐ．Ｂ０９１１株、及びラクトバチルス・プランタルムＢ１０２１株の類似菌株である。 The base sequence of 16S rDNA is one of the indicators in bacterial classification. Therefore, a strain having 16S rDNA represented by a base sequence equivalent to the base sequence of 16S rDNA of the four strains is included in the “similar strain”. That is, each of the strains having 16S rDNA represented by a base sequence equivalent to the base sequences described in SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, and SEQ ID NO: 4 is leuconostock sp. B0321 strain, Leuconostoc sp. B0811 strain, Leuconostoc sp. It is a similar strain of B0911 strain and Lactobacillus plantarum B1021 strain. The “equivalent base sequence” as used herein means a base sequence that is completely identical to the base sequences described in SEQ ID NOs: 1 to 4, but is not completely identical, but is identical in terms of bacterial taxonomy by 16S rDNA. Base sequences that can be considered to be present are also included. Usually, a base sequence that is 99% or more homologous to the base sequences described in SEQ ID NOs: 1 to 4 can be regarded as identical to the base sequences described in SEQ ID NOs: 1 to 4. Utilization for sugar is also one of the indicators in bacterial classification. Therefore, strains having the same assimilability to sugar as the four strains are included in “similar strains”. (1) Ribose, D-xylose, L-xylose, glucose, fructose, mannose, α-methyl-D-mannoside, α-methyl-D-glucoside, cellobiose, maltose, lactose, melibiose, sucrose, raffinose, D -Tulanose, 2-ketogluconic acid, assimilability to 5-ketogluconic acid, glycerol, erythritol, D-arabinose, L-arabinose, adonitol, β-methyl-D-xyloside, galactose, sorbose, rhamnose, dulcitol, inositol , Mannitol, sorbitol, N-acetyl-glucosamine, amygdalin, arbutin, esculin, salicin, trehalose, inulin, melezitose, starch, glycogen, xylitol, gentiobio , D-lyxose, D-tagatose, D-fucose, L-fucose, D-arabitol, L-arabitol, a strain not assimilating to gluconic acid, (2) glycerol, L-arabinose, ribose, D- Xylose, galactose, glucose, fructose, mannose, sorbitol, α-methyl-D-mannoside, α-methyl-D-glucoside, N-acetyl-glucosamine, amygdalin, esculin, cellobiose, maltose, lactose, melibiose, sucrose, trehalose, Has assimilability for melezitose, raffinose, gentiobiose, D-turanose, erythritol, D-arabinose, L-xylose, adonitol, β-methyl-D-xyloside, sorbose, rhamnose, dulcito , Inositol, mannitol, arbutin, salicin, inulin, starch, glycogen, xylitol, D-lyxose, D-tagatose, D-fucose, L-fucose, D-arabitol, L-arabitol, gluconic acid, 2-ketogluconic acid, 5 -A strain having no assimilability to ketogluconic acid, (3) ribose, D-xylose, L-xylose, glucose, fructose, mannose, α-methyl-D-mannoside, α-methyl-D-glucoside, cellobiose, maltose , Lactose, melibiose, sucrose, raffinose, D-turanose, and glycerol, erythritol, D-arabinose, L-arabinose, adonitol, β-methyl-D-xyloside, galactose, sorbose, la Munose, dulcitol, inositol, mannitol, sorbitol, N-acetyl-glucosamine, amygdalin, arbutin, esculin, salicin, trehalose, inulin, melezitose, starch, glycogen, xylitol, gentiobiose, D-lyxose, D-tagatose, D-fucose, L-fucose, D-arabitol, L-arabitol, gluconic acid, 2-ketogluconic acid, strains not assimilating to 5-ketogluconic acid, and (4) ribose, galactose, glucose, fructose, mannose, mannitol, sorbitol , Α-methyl-D-mannoside, N-acetyl-glucosamine, amygdalin, esculin, salicin, cellobiose, maltose, lactose, melibiose, sucrose Trehalose, melezitose, raffinose, gentiobiose, L-arabitol, has an assimilability to 2-ketogluconic acid, glycerol, erythritol, D-arabinose, L-arabinose, D-xylose, L-xylose, adonitol, β-methyl-D -Xyloside, sorbose, rhamnose, dulcitol, inositol, α-methyl-D-glucoside, arbutin, inulin, starch, glycogen, xylitol, D-turanose, D-lyxose, D-tagose, D-fucose, L-fucose, D -Strains having no assimilability to arabitol, gluconic acid, and 5-ketogluconic acid are leuconostoc sp. B0321 strain, Leuconostoc sp. B0811 strain, Leuconostoc sp. It is a similar strain of B0911 strain and Lactobacillus plantarum B1021 strain.

本発明の菌株は、後述するように食品や動脈硬化予防剤に利用することができる。 The strain of the present invention can be used as a food or an arteriosclerosis preventive agent as described later.

本発明の食品は、上述した本発明の菌株を含有するものである。食品の種類は特に限定されず、パン、ヨーグルト、漬物、ピザなどを例示できる。 The food of the present invention contains the above-described strain of the present invention. The kind of food is not particularly limited, and examples thereof include bread, yogurt, pickles, and pizza.

本発明の食品は、その製造工程のいずれかの時期に本発明の菌株を添加することにより製造できる。添加する菌株は、生菌でも、乾燥菌体でもいずれでもよい（但し、本発明の菌株によって乳酸醗酵を行う場合は生菌を添加する。）。添加する菌株の量は食品の種類などによって異なるが、例えば、本発明の菌株を含むパンを製造する場合、原料中に４〜５重量％の生菌を添加すればよい。 The food of the present invention can be produced by adding the strain of the present invention at any time during the production process. The strain to be added may be either a live cell or a dry cell (however, when lactic acid fermentation is performed with the strain of the present invention, the live cell is added). The amount of the strain to be added varies depending on the type of food. For example, when producing bread containing the strain of the present invention, 4 to 5% by weight of live bacteria may be added to the raw material.

本発明の動脈硬化予防剤は本発明の菌株を含有するものである。本発明の動脈硬化予防剤は、経口薬に適用される一般的な製剤化方法に従って製造することができる。製剤化された動脈硬化予防剤中の本発明の菌株の含有率（濃度）は特に限定されないが、１日当たりの投与量は乾燥菌体として５〜３０ｇとするのが好ましい。 The arteriosclerosis-preventing agent of the present invention contains the strain of the present invention. The arteriosclerosis-preventing agent of the present invention can be produced according to a general formulation method applied to oral drugs. The content rate (concentration) of the strain of the present invention in the formulated arteriosclerosis preventive agent is not particularly limited, but the daily dose is preferably 5 to 30 g as dry cells.

以下、実施例により本発明を更に詳細に説明する。 Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to examples.

〔実施例１〕ビール酵母パン種からの乳酸菌の分離
ビール酵母パン種（製造元：有限会社ホシノ天然酵母パン種）と滅菌水（２５℃）を２：１で混合し、よく混ぜた後、静置培養した。その培養液（生種という）を、適当な濃度に希釈後、ＡＰＴ−トマトジュース寒天培地（表１）にスプレッドし、嫌気培養（２５℃、７２時間）し、出てきたコロニーを釣菌した。 [Example 1] Separation of lactic acid bacteria from beer yeast bread seeds Beer yeast bread seeds (manufacturer: Hoshino natural yeast bread seeds) and sterilized water (25 ° C) were mixed at a ratio of 2: 1 and mixed well, followed by stationary culture. . The culture broth (referred to as a live species) was diluted to an appropriate concentration, spread on APT-tomato juice agar medium (Table 1), anaerobically cultured (25 ° C., 72 hours), and the colonies that emerged were fished. .

〔実施例２〕乳酸菌株の胆汁酸結合能の測定（１）
実施例１で分離した乳酸菌株について、胆汁酸の主成分であるタウロコール酸に対する結合能を調べた。 [Example 2] Measurement of bile acid binding ability of lactic acid strain (1)
About the lactic acid strain isolate | separated in Example 1, the binding ability with respect to the taurocholic acid which is a main component of a bile acid was investigated.

０．０１Ｍのリン酸緩衝生理食塩水にタウロコール酸を加え、１．２５ｍＭのタウロコール酸溶液を調製した。この溶液１ｍｌに、Ｂ０１１１株、Ｂ１０２１株、Ｂ０３２１株、Ｂ０３１２株、Ｂ０３１１株、Ｂ１１１１株、及びＢ１３１１株の７株の乾燥菌体１５ｍｇを加え、３７℃で２．５時間インキュベートした。インキュベート後、遠心分離によって、乳酸菌を取り除き、上清中に残ったタウロコール酸の濃度（以下、これを「残存タウロコール酸濃度」という）を測定した。タウロコール酸濃度の測定は、市販のキット（「総胆汁酸−テストワコー」、製造販売：和光純薬工業株式会社）で発色させ、吸光度（５６０ｎｍ）を測定することによって行った。残存タウロコール酸濃度の測定は二回行い、その平均値を求めた。 Taurocholic acid was added to 0.01 M phosphate buffered saline to prepare a 1.25 mM taurocholic acid solution. To 1 ml of this solution, 15 mg of dry cells of 7 strains of B0111 strain, B1021 strain, B0321 strain, B0312 strain, B0311 strain, B1111 strain, and B1311 strain were added and incubated at 37 ° C. for 2.5 hours. After incubation, lactic acid bacteria were removed by centrifugation, and the concentration of taurocholic acid remaining in the supernatant (hereinafter referred to as “residual taurocholic acid concentration”) was measured. The taurocholic acid concentration was measured by coloring with a commercially available kit (“Total Bile Acid-Test Wako”, manufactured and sold by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) and measuring the absorbance (560 nm). The residual taurocholic acid concentration was measured twice and the average value was obtained.

また、乳酸菌を加えず、上記と同様に残存タウロコール酸の濃度を測定し、次式に従って各乳酸菌株の胆汁酸結合能を求めた。なお、乳酸菌を加えない場合の残存タウロコール酸の濃度は９６９．８μｍｏｌ／Ｌであった。 Further, the concentration of residual taurocholic acid was measured in the same manner as described above without adding lactic acid bacteria, and the bile acid binding ability of each lactic acid strain was determined according to the following formula. In addition, the density | concentration of the residual taurocholic acid when not adding lactic acid bacteria was 969.8 micromol / L.

胆汁酸結合能（％）＝｛（Ａ−Ｂ）／Ａ｝×１００
Ａ：乳酸菌を添加しない場合の残存タウロコール酸の濃度
Ｂ：乳酸菌を添加した場合の残存タウロコール酸の濃度
更に、胆汁酸吸着物質として知られているコレスチラミン１５ｍｇを、乳酸菌の代わりに用い、上記と同様に残存タウロコール酸の濃度を測定し、コレスチラミンの胆汁酸結合能を求め、この値を１００とした場合の各乳酸菌株の胆汁酸結合能の相対値（コレスチラミン比）も求めた。なお、コレスチラミンの胆汁酸結合能は９３．１％であった。以上の結果を表２に示す。 Bile acid binding capacity (%) = {(A−B) / A} × 100
A: Concentration of residual taurocholic acid without addition of lactic acid bacteria B: Concentration of residual taurocholic acid with addition of lactic acid bacteria Furthermore, 15 mg of cholestyramine known as a bile acid adsorbing substance was used instead of lactic acid bacteria, and Similarly, the concentration of residual taurocholic acid was measured, the bile acid binding ability of cholestyramine was determined, and the relative value (cholestyramine ratio) of the bile acid binding ability of each lactic acid strain when this value was taken as 100 was also determined. The bile acid binding ability of cholestyramine was 93.1%. The results are shown in Table 2.

表２に示すように、いずれの菌株も高い胆汁酸結合能を示した。 As shown in Table 2, all strains showed high bile acid binding ability.

〔実施例３〕乳酸菌株の胆汁酸結合能の測定（２）
乳酸菌株として、Ｂ０６１１株、Ｂ０７１１株、Ｂ０８１１株、Ｂ０９１１株、及びＢ１２１１株の５株を用い、他は実施例２と同様にして、各菌株の胆汁酸結合能等を求めた。なお、このときの乳酸菌を添加しない場合の残存タウロコール酸の濃度は１０９８μｍｏｌ／Ｌであり、また、コレスチラミンの胆汁酸結合能は１０２．４％であった。結果を表３に示す。 [Example 3] Measurement of bile acid binding ability of lactic acid strain (2)
As the lactic acid strain, 5 strains of B0611 strain, B0711 strain, B0811 strain, B0911 strain, and B1211 strain were used, and the bile acid binding ability of each strain was determined in the same manner as in Example 2. The concentration of residual taurocholic acid without adding lactic acid bacteria at this time was 1098 μmol / L, and the bile acid binding ability of cholestyramine was 102.4%. The results are shown in Table 3.

実施例２の場合と同様、いずれの菌株も高い胆汁酸結合能及びコレスチラミン比を示した。 As in Example 2, all strains showed high bile acid binding ability and cholestyramine ratio.

〔実施例４〕乳酸菌株の胆汁酸結合能の測定（３）
実施例２及び３で高い胆汁酸結合能を示した５株について、再度胆汁酸結合能を測定した。なお、このときの乳酸菌を添加しない場合の残存タウロコール酸の濃度は１１３９μｍｏｌ／Ｌであり、また、コレスチラミンの胆汁酸結合能は９４．５％であった。結果を表４に示す。 [Example 4] Measurement of bile acid binding ability of lactic acid strain (3)
About 5 strains which showed high bile acid binding ability in Examples 2 and 3, bile acid binding ability was measured again. The concentration of residual taurocholic acid without adding lactic acid bacteria at this time was 1139 μmol / L, and the bile acid binding ability of cholestyramine was 94.5%. The results are shown in Table 4.

表４に示すように、いずれの菌株も高い胆汁酸結合能を示した。 As shown in Table 4, all strains showed high bile acid binding ability.

〔実施例５〕乳酸菌株の胆汁酸結合能の測定（４）
実施例２及び４で高い胆汁酸結合能を示したＢ１０２１株、納豆菌ＩＯＫ−１株（市販のオーケー水戸納豆（製造者：株式会社オーサト）から分離）、ラクトバチルス・プランタラム（Lactobacillus plantarum）ＪＣＭ１１４９株（理化学研究所微生物系統保存施設より入手）、大腸菌Ｋ１２（λ）株の４株を用い、実施例２と同様にして、各菌株の胆汁酸結合能を調べた。ラクトバチルス・プランタラムＪＣＭ１１４９株は、特開２００３−２３５５０１号公報において使用されている菌株である。なお、このときの乳酸菌を添加しない場合の残存タウロコール酸の濃度は１０３７μｍｏｌ／Ｌであり、また、コレスチラミンの胆汁酸結合能は８８．６３％であった。結果を表５に示す。 [Example 5] Measurement of bile acid binding ability of lactic acid strain (4)
B1021 strain and Bacteria natto IOK-1 strain (separated from commercially available OKI Mito Natto (manufacturer: Authato Co., Ltd.)), Lactobacillus plantarum ( Lactobacillus plantarum ) which showed high bile acid binding ability in Examples 2 and 4 The bile acid binding ability of each strain was examined in the same manner as in Example 2 using 4 strains of JCM1149 strain (obtained from RIKEN Microbial System Storage Facility) and Escherichia coli K12 (λ) strain. Lactobacillus plantarum JCM1149 strain is a strain used in Japanese Patent Application Laid-Open No. 2003-235501. In this case, the concentration of residual taurocholic acid without addition of lactic acid bacteria was 1037 μmol / L, and the bile acid binding ability of cholestyramine was 88.63%. The results are shown in Table 5.

表５に示すように、Ｂ１０２１株は、他の菌株と比較して、胆汁酸結合能が著しく高かった。ラクトバチルス・プランタラムＪＣＭ１１４９株は、特開２００３−２３５５０１号公報中で高い胆汁酸結合能を示していたが、Ｂ１０２１株は、それよりも３倍以上も高い胆汁酸結合能を示した。 As shown in Table 5, the B1021 strain had significantly higher bile acid binding ability than other strains. The Lactobacillus plantarum JCM1149 strain showed a high bile acid binding ability in JP-A No. 2003-235501, while the B1021 strain showed a bile acid binding ability three times higher than that.

〔実施例６〕ＭＲＳ培地での生育
乳酸菌同定キットであるＡＰＩ５０ＣＨ（輸入販売：日本ビオメリュー株式会社）を用いた各乳酸菌株の同定を行う前に、ＭＲＳ培地（表７）において各乳酸菌株が生育できるかどうかを調べた。ＡＰＩ５０ＣＨによる乳酸菌の同定は、ＡＰＩ５０ＣＨＬ培地を用いて行うが、ＡＰＩ５０ＣＨＬ培地はＭＲＳ培地にブロモクレゾールパープルを加えたものである。従って、ＡＰＩ５０ＣＨによる同定は、菌株がＭＲＳ培地で生育可能であることが前提となる。 [Example 6] Growth on MRS medium Before identification of each lactic acid strain using API50CH (imported sales: Nihon Biomeryu Co., Ltd.) which is a lactic acid bacteria identification kit, each lactic acid strain grows on MRS medium (Table 7). I investigated whether it was possible. Identification of lactic acid bacteria by API50CH is performed using API50CHL medium, which is obtained by adding bromocresol purple to MRS medium. Therefore, identification by API50CH is based on the premise that the strain can grow on MRS medium.

表６に、各乳酸菌株のＭＲＳ培地における生育性を示す。また、各菌株の収量も併せて表５に示す。 Table 6 shows the viability of each lactic acid strain in the MRS medium. The yield of each strain is also shown in Table 5.

表６に示すように、幾つかの菌株はＭＲＳ培地で生育できなかった。生育できない原因はＭＲＳ培地中に含まれる酢酸ナトリウムにあると予想されたので、以下の実験ではＢ０３２１、Ｂ０９１１についてはＡＰＩ５０ＣＨＬ培地の代わりに、この培地から酢酸ナトリウムを除いた培地（以下、この培地を「ＭＡＰＩ培地」という）を使用することとした。 As shown in Table 6, some strains failed to grow on MRS medium. Since it was predicted that the cause of the growth failure was sodium acetate contained in the MRS medium, in the following experiment, for B0321 and B0911, instead of API50CHL medium, sodium acetate was removed from this medium (hereinafter referred to as this medium). "MAPI medium") was used.

〔実施例７〕乳酸菌株の糖の資化性試験
実施例１、２及び３で高い胆汁酸結合能を示したＢ０３２１株、Ｂ０８１１株、Ｂ０９１１株及びＢ１０２１株の４株について、ＡＰＩ５０ＣＨを用いて糖の資化性を調べた（但し、前述したようにB0321株、B0911株についてはＡＰＩ５０ＣＨＬ培地ではなく、ＭＡＰＩ培地を使用した。）。 [Example 7] Glucose assimilation test of lactic acid strains Using API50CH for 4 strains of B0321 strain, B0811 strain, B0911 strain and B1021 strain which showed high bile acid binding ability in Examples 1, 2 and 3. The assimilation of sugar was examined (however, as described above, MAPI medium was used instead of API50CHL medium for B0321 strain and B0911 strain).

なお、上記４株のいずれも、グラム染色：陽性、内生胞子形成：なし、カタラーゼの有無：なし、酸の生成：あり、形状：球菌あるいは桿菌、といった乳酸菌の特有の性質を示した。 In addition, all of the above 4 strains showed the characteristic properties of lactic acid bacteria such as Gram staining: positive, endospore formation: none, presence or absence of catalase: none, acid generation: existence, shape: cocci or bacilli.

各菌株の糖の資化性試験の結果を表８に示す。 Table 8 shows the results of the sugar utilization test for each strain.

以上の糖の資化性（酸生成）試験からＢ１０２１株はラクトバチルス・プランタルム（Lactobacillus plantarum）と同定された（同定確率：９９％）。Ｂ０８１１株はラクトバチルス・プランタルム（Lactobacillus plantarum）（同定確率：８５％）又はラクトバチルス・ペントサス（Lactobacillus pentosus）（同定確率：１５％）である可能性が示唆された。また、Ｂ０３２１株とＢ０９１１株は、ＡＰＩのデータベース上に対応する菌種がなかった。 B1021 strain was identified as Lactobacillus plantarum from the above sugar assimilation (acid production) test (identification probability: 99%). The B0811 strain Lactobacillus plantarum (Lactobacillus plantarum) (Identification Probability: 85%) or Lactobacillus pentosus (Lactobacillus pentosus) (Identification Probability: 15%) was suggested potentially. In addition, B0321 strain and B0911 strain did not have corresponding bacterial species on the API database.

Ｂ０３２１株、Ｂ０８１１株、Ｂ０９１１株の糖資化性（酸生成）データとロイコノストック・シュードメセンテロイデス（Leuconostoc pseudomesenteroides）の文献データ（John A. E. Farrow et al., International Journal of Systematic Bacteriology, Vol. 39, p.279-283 (1989) )との比較を表９に示す。 B0321 strain, B0811 strain, B0911 strain sugar utilization (acid production) data and Leuconostoc pseudomesenteroides literature data (John AE Farrow et al., International Journal of Systematic Bacteriology, Vol. 39, p.279-283 (1989)) is shown in Table 9.

この結果は、Ｂ０３２１株、Ｂ０８１１株、Ｂ０９１１株の糖資化性（酸生成）データが、ロイコノストック・シュードメセンテロイデスに類似する点もあるが、多くの糖においてその反応が異なることを示している。 This result shows that the sugar utilization (acid generation) data of B0321, B0811, and B0911 strains are similar to those of Leuconostoc pseudomecenteroides, but the reaction is different for many sugars. Show.

（APIによる４８時間反応のデータを示す。＋、−はそれぞれ陽性、陰性。Leu. pseudomesenteroidesの欄の数字は同種に属する７株の菌株中で陽性を示した菌株の率（％）を表しており、＋および−は、それが１００％と０％であることを表す。また、括弧内の数字は７２時間後の資化率を表す。）

(Shows data of 48-hour reaction by API. + And-are positive and negative, respectively. The numbers in the column of Leu. Pseudomesenteroides indicate the percentage (%) of positive strains among 7 strains belonging to the same species. (+ And-indicate that they are 100% and 0%, and the numbers in parentheses indicate the utilization rate after 72 hours.)

〔実施例８〕乳酸菌株の１６ＳｒＤＮＡのホモロジー検索
Ｂ０３２１株、Ｂ０８１１株、Ｂ０９１１株及びＢ１０２１株の４株の１６ＳｒＤＮＡの塩基配列を決定した。 [Example 8] Homology search of 16S rDNA of lactic acid strains The base sequences of 16S rDNA of 4 strains of B0321 strain, B0811 strain, B0911 strain and B1021 strain were determined.

１６ＳｒＤＮＡの塩基配列の決定は、以下のように行った。 Determination of the base sequence of 16S rDNA was performed as follows.

Ａ.菌体からのゲノム抽出
（１）ＡＰＴ寒天培地で嫌気培養（30℃、48時間）して得たコロニーをＡＰＴ液体培地50ml中で静置培養（30℃、48時間）した。 A. Genomic extraction from bacterial cells (1) Colonies obtained by anaerobic culture (30 ° C., 48 hours) on APT agar medium were statically cultured (30 ° C., 48 hours) in 50 ml of APT liquid medium.

（２）その培養液を遠心（9000×g、5分間）し、得られたペレットを緩衝液1ml（pH7.5、10ｍM Tris-HCl、150mM NaCl）に懸濁した後、Tris飽和フェノール150μl（pH7.5）を加えた。 (2) The culture was centrifuged (9000 × g, 5 minutes), and the resulting pellet was suspended in 1 ml of buffer (pH 7.5, 10 mM Tris-HCl, 150 mM NaCl), and then 150 μl of Tris saturated phenol ( pH 7.5) was added.

（３）その後、-80℃のディープフリーザーに入れての凍結、30℃のウォーターバスでの融解の作業を3回行った後に、0.3gのジルコニウムビーズを加えてbead-beating（1800rpm、5分間）を行った。 (3) After 3 times of freezing in a deep freezer at -80 ℃ and thawing in a water bath at 30 ℃, add 0.3g of zirconium beads and bead-beating (1800rpm, 5 minutes) )

（４）CI solution 150μl（体積比でクロロホルム：イソアミルアルコール＝24：1）を加えて、軽く撹拌し遠心（4℃、15000rpm、5分間）し、水層を採取した。 (4) CI solution 150 μl (volume ratio chloroform: isoamyl alcohol = 24: 1) was added, and the mixture was lightly stirred and centrifuged (4 ° C., 15000 rpm, 5 minutes), and an aqueous layer was collected.

（５）採取した水層に3M酢酸ナトリウム水溶液100μl（pH5.2）を加えた後、Tris飽和フェノール150μl、CI solution 150μlを加えて軽く撹拌し遠心（4℃、15000rpm、5分間）し水層を採取した。 (5) Add 100 μl of 3M sodium acetate aqueous solution (pH 5.2) to the collected aqueous layer, add 150 μl of Tris saturated phenol and 150 μl of CI solution, and gently stir and centrifuge (4 ° C., 15000 rpm, 5 minutes) Were collected.

（６）採取した水層にその2.5倍量のエタノールを加え、冷却（-80℃、10分）した後、遠心（4℃、15000rpm、5分）し、水層を静かに捨て、沈殿物をTE溶液500μlで溶解させた。 (6) Add 2.5 times the amount of ethanol to the collected water layer, cool (-80 ° C, 10 minutes), then centrifuge (4 ° C, 15000 rpm, 5 minutes), gently discard the water layer and deposit Was dissolved in 500 μl of TE solution.

（７）DNase-free RNase（Takara） 5units加え、インキュベート（37℃、15分間）した。 (7) 5 units of DNase-free RNase (Takara) was added and incubated (37 ° C., 15 minutes).

（８）（５）と（６）の操作を再度行い（液量はすべて半分）、得られた沈殿物を真空条件下に３０分おいて乾燥させ、30μlの滅菌水に溶解させた。 (8) The operations of (5) and (6) were performed again (all liquid volumes were half), and the resulting precipitate was dried for 30 minutes under vacuum conditions and dissolved in 30 μl of sterile water.

Ｂ．１６ＳｒＤＮＡ塩基配列の特異的増幅とゲルからの抽出
（１）ＰＣＲに用いた反応混合液とプログラムは以下の通りである。 B. Specific amplification of 16S rDNA base sequence and extraction from gel (1) The reaction mixture and program used for PCR are as follows.

ａ．反応混合液
ゲノム水溶液（Ａで得られた水溶液をさらに50倍希釈したもの）・・・1μl
プライマー・・・各1.5pmol
PerfectShot ExTaq kit（Takara）・・・25μl
滅菌水・・・反応混合液量が50μlになるようメスアップ
ｂ．ＰＣＲのプログラム
94℃で5分反応させた後、「94℃で30秒、72℃で1分」という反応を1サイクルとして25サイクル行い、その後72℃で7分反応させた。 a. Reaction mixture Genomic aqueous solution (50-fold diluted aqueous solution obtained in A) 1 μl
Primer ... 1.5pmol each
PerfectShot ExTaq kit （Takara）・・・ 25μl
Sterile water: Increase the volume of the reaction mixture to 50 μl b. PCR program
After reacting at 94 ° C. for 5 minutes, the reaction of “94 ° C. for 30 seconds, 72 ° C. for 1 minute” was performed for 25 cycles, and then reacted at 72 ° C. for 7 minutes.

なお、プライマーとしては、以下に示す16S 27f BamHと16S 1525r Hindを使用した。 As primers, 16S 27f BamH and 16S 1525r Hind shown below were used.

16S 27f BamH：5’-TTAGGATCCAGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’（配列番号５）
16S 1525r Hind：5’-CGGAAGCTTAAAGGAGGTGATCCAGCC-3’（配列番号６） 16S 27f BamH: 5'-TTAGGATCCAGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3 '(SEQ ID NO: 5)
16S 1525r Hind: 5'-CGGAAGCTTAAAGGAGGTGATCCAGCC-3 '(SEQ ID NO: 6)

（２）0.9%アガロースゲルのウェルにＰＣＲ反応溶液を注入し、電気泳動した。 (2) A PCR reaction solution was injected into a 0.9% agarose gel well and electrophoresed.

（３）エチジウムブロマイド染色し、紫外線照射下で目的のＰＣＲ産物が増幅されていることを確認後、その部分を切り取り一辺2mm程度になるまで細かく切り刻んだ後、飽和フェノール300μlに入れよく撹拌した。 (3) After ethidium bromide staining and confirming that the target PCR product was amplified under ultraviolet irradiation, the portion was cut out and finely cut to about 2 mm on a side, and then placed in 300 μl of saturated phenol and stirred well.

（４）凍結（-80℃、20分）、融解（30℃、5分）後よく撹拌し、遠心（15000×g、5分間）した。水層を採取し300μlのCI solutionを加えてよく撹拌し、再度遠心（15000×g、5分間）した。そして、また水層を採取した。 (4) After freezing (−80 ° C., 20 minutes) and thawing (30 ° C., 5 minutes), the mixture was well stirred and centrifuged (15000 × g, 5 minutes). The aqueous layer was collected, 300 μl of CI solution was added and stirred well, and then centrifuged again (15000 × g, 5 minutes). The aqueous layer was collected again.

（５）採取した水層にTris飽和フェノール150μl、CI solution 150μlを加えて撹拌し、遠心（15000×g、5分間）後、水層採取の操作を２回繰り返した。 (5) Tris saturated phenol 150 μl and CI solution 150 μl were added to the collected aqueous layer and stirred, and after centrifugation (15000 × g, 5 minutes), the operation of collecting the aqueous layer was repeated twice.

（６）採取した水層にその10分の1量の3M 酢酸ナトリウム水溶液を加えた後、その2.5倍量のエタノールを加えて冷却（-80℃、10分）し、遠心（15000×g、5分間）した。その後、水層部分を捨て沈殿物を採取した。 (6) After adding 1/10 volume of 3M sodium acetate aqueous solution to the collected aqueous layer, add 2.5 volumes of ethanol, cool (-80 ° C, 10 minutes), and centrifuge (15000 xg, 5 minutes). Thereafter, the aqueous layer was discarded and the precipitate was collected.

（７）得られた沈殿物を真空条件下に30分おいて乾燥させ、30μlの滅菌水に溶解させた。 (7) The obtained precipitate was dried under vacuum conditions for 30 minutes and dissolved in 30 μl of sterilized water.

（８）その溶解液の一部を使い260nmの吸光度を測定し、『ＤＮＡ濃度（μg
/ml）＝ＯＤ₂₆₀×50』（改訂遺伝子工学実験ノート上、第２版第２刷、田村隆明編、羊土社、２００２）をもとにＤＮＡ濃度を算出した。 (8) Using a part of the lysate, measure the absorbance at 260 nm, and measure “DNA concentration (μg
/ ml) = OD ₂₆₀ × 50 ”(on the revised genetic engineering experiment note, 2nd edition, 2nd edition, edited by Takaaki Tamura, Yodosha, 2002).

Ｃ．シークエンス反応と塩基配列決定
（１）シークエンス反応
ａ．反応混合液
鋳型ＤＮＡ溶液・・・20ng
プライマー（Sigma）・・・3.2 pmol
BigDye Terminator v3.1（Applied Biosystem）・・・4μl
Buffer（Applied Biosystem）・・・2μl
滅菌水・・・反応混合液総量が20μl
ｂ．シークエンス反応のプログラム
96℃で1分反応させた後、「96℃で30秒、60℃で４分」という反応を１サイクルとして25サイクル行った。 C. Sequence reaction and sequencing (1) Sequence reaction a. Reaction mixture Template DNA solution ... 20ng
Primer (Sigma) ・・・ 3.2 pmol
BigDye Terminator v3.1 (Applied Biosystem) ・・・ 4μl
Buffer (Applied Biosystem) 2 μl
Sterile water: Total reaction mixture is 20 μl
b. Sequence reaction program
After reacting at 96 ° C. for 1 minute, the reaction “96 ° C. for 30 seconds, 60 ° C. for 4 minutes” was performed for 25 cycles.

（２）BigDye Terminator v3.1 Cycle Sequencing Kit 日本語版プロトコール（Applied Biosystem）のEthanol/EDTA/Sodium Acetate法に従って、反応産物を精製した。 (2) The reaction product was purified according to the Ethanol / EDTA / Sodium Acetate method of the BigDye Terminator v3.1 Cycle Sequencing Kit Japanese protocol (Applied Biosystem).

（３）精製物をホルムアミド15μlに溶解し、ABI 310を用いて塩基配列を決定した。 (3) The purified product was dissolved in 15 μl of formamide, and the base sequence was determined using ABI 310.

なお、プライマーとしては、以下に示す16S 27f BamH、LAB0589f、LAB0677rf
EUB0933f、LAB0951r、及び16S 1525r Hindを使用した。 As primers, the following 16S 27f BamH, LAB0589f, LAB0677rf
EUB0933f, LAB0951r, and 16S 1525r Hind were used.

16S 27f BamH：5’-TTAGGATCCAGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’（配列番号７）
LAB0589f：5’-TCCGGATTTATTGGGCGTAAAGCGA-3’（配列番号８）
LAB0677rf：5’-CACCGCTACACATGGAG-3’（配列番号９）
EUB0933f：5’-GCACAAGCGGTGGAGCATGTGG-3’（配列番号１０）
LAB0951r：5’-TCGAATTAAACCACATGCTCCA-3’（配列番号１１）
16S 1525r Hind:5’-CGGAAGCTTAAAGGAGGTGATCCAGCC-3’（配列番号１２）
Ｂ０３２１株、Ｂ０８１１株、Ｂ０９１１株及びＢ１０２１株の１６ＳｒＤＮＡの塩基配列をそれぞれ配列番号１、配列番号２、配列番号３及び配列番号４に示す。 16S 27f BamH: 5'-TTAGGATCCAGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3 '(SEQ ID NO: 7)
LAB0589f: 5'-TCCGGATTTATTGGGCGTAAAGCGA-3 '(SEQ ID NO: 8)
LAB0677rf: 5'-CACCGCTACACATGGAG-3 '(SEQ ID NO: 9)
EUB0933f: 5'-GCACAAGCGGTGGAGCATGTGG-3 '(SEQ ID NO: 10)
LAB0951r: 5'-TCGAATTAAACCACATGCTCCA-3 '(SEQ ID NO: 11)
16S 1525r Hind: 5'-CGGAAGCTTAAAGGAGGTGATCCAGCC-3 '(SEQ ID NO: 12)
The base sequences of 16S rDNA of B0321 strain, B0811 strain, B0911 strain and B1021 strain are shown in SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3 and SEQ ID NO: 4, respectively.

これらの配列について、ｂｌａｓｔｎを用いてＧｅｎＢａｎｋ等のＤＮＡデータベースに対してホモロジー検索を行った。その結果、Ｂ０３２１株、Ｂ０８１１株、及びＢ０９１１株の１６ＳｒＤＮＡの塩基配列はいずれもロイコノストック・シュードメセンテロイデス（Leuconostoc pseudomesenteroides）のそれと９９．５％の相同性を示した。また、Ｂ１０２１株の１６ＳｒＤＮＡの塩基配列はラクトバチルス・プランタルムのそれと９９．４％の相同性を示した。 For these sequences, a homology search was performed on a DNA database such as GenBank using blastn. As a result, the base sequences of 16S rDNA of B0321 strain, B0811 strain, and B0911 strain all showed 99.5% homology with that of Leuconostoc pseudomesenteroides . Further, the base sequence of 16S rDNA of the B1021 strain showed 99.4% homology with that of Lactobacillus plantarum.

以上の結果から、Ｂ０３２１株、Ｂ０８１１株、及びＢ０９１１株の３株は、ロイコノストック・シュードメセンテロイデスに近い菌株である可能性もあるが、表９のように糖の資化性（酸生成）試験では不一致の点も多いので、これらの菌株は、ロイコノストックｓｐ．と同定した。 From the above results, it is possible that the B0321 strain, B0811 strain, and B0911 strain are strains close to Leuconostoc pseudomecenteroides, but as shown in Table 9, the utilization of sugar (acid These strains have been identified as Leuconostoc sp. Was identified.

Ｂ１０２１株は、１６ＳｒＤＮＡのホモロジー検索及び糖の資化性試験のいずれにおいても、ラクトバチルス・プランタルムという結果がでたので、この菌株はラクトバチルス・プランタルムと同定した。 The B1021 strain was identified as Lactobacillus plantarum because it showed a result of Lactobacillus plantarum in both the 16S rDNA homology search and the sugar assimilation test.

〔実施例９〕Ｂ１０２１株を用いたラット実験
７週齢のＳＤ雄ラット（日本クレア株式会社）を購入し、１週間予備飼育をした後実験に供した。飼育は、５：００−１９：００点灯、２２±２℃、湿度５０−７０％の条件で行った。ラットを１群６匹で、それを３群に分け、それぞれ表１０に示す３種類の高コレステロール飼料（Ａ．パン粉添加飼料、Ｂ．乳酸菌入りパン粉添加飼料、Ｃ．乾燥菌体添加飼料）を２１日間、自由摂食させた（以下、Ａ．パン粉添加飼料を摂食させた群を「Ａ群」、乳酸菌入りパン粉添加飼料を摂食させた群を「Ｂ群」、Ｃ．乾燥菌体添加飼料を摂食させた群を「Ｃ群」という）。 [Example 9] Rat experiment using B1021 strain Seven-week-old SD male rats (CLEA Japan, Inc.) were purchased, preliminarily reared for one week, and then subjected to experiments. The breeding was performed under the conditions of 5:00 to 19:00 lighting, 22 ± 2 ° C., and humidity 50 to 70%. There are 6 rats per group, which are divided into 3 groups, and each of the three types of high cholesterol diets shown in Table 10 (A. Bread crumb-added feed, B. Bread crumb-added feed containing lactic acid bacteria, C. Dried microbial cell-added feed) The group was allowed to eat freely for 21 days (hereinafter referred to as “Group A” which was fed with A. bread crumb-added feed, “Group B” was fed with bread crumb-added feed containing lactic acid bacteria, and C. dried cells. The group fed with the additive feed is referred to as “Group C”).

摂食量は毎日個別に測定し、体重も経時的に測定した。採血は軽いエーテル麻酔下で尾静脈より行い、０、７、１４、２１日目及び、２１日目の採血の後一昼夜絶食させた後２２日目に再び採血を行った。また２２日目の採血の後ただちに剖検し、主要臓器の重量を測定した。 Food intake was measured individually every day and body weight was also measured over time. Blood was collected from the tail vein under light ether anesthesia, and blood was collected again on the 0th, 7th, 14th, 21st and 21st days, and on the 22nd day after fasting overnight. Further, immediately after blood collection on the 22nd day, autopsy was performed, and the weights of major organs were measured.

血液はただちに遠心後、富士ドライケム（富士写真フィルム株式会社）を用いて血液の生化学値（血糖値、中性脂肪値、総コレステロール値、ＨＤＬＣ値、ＧＯＴ値、ＧＰＴ値）を測定した。 The blood was immediately centrifuged, and the blood biochemical values (blood glucose level, neutral fat level, total cholesterol level, HDLC level, GOT level, GPT level) were measured using Fuji Dry Chem (Fuji Photo Film Co., Ltd.).

なお、飼料Ａ、Ｃの中で使われるパンは表１１に示す配合率の製パン原料から製造した。飼料Ｂの中で使われるパンは、表１１に示す配合率の製パン原料に、Ｂ１０２１株を加えた原料から製造した。Ｂ１０２１株の添加量は、水を除いた原料の重量を１００％とした場合の５重量％（生乳酸菌体）とした。また、パン製造は松下電気産業株式会社ナショナル自動ホームベーカリー（松下電気産業株式会社製造）を使用し、原料の総重量４８０ｇずつ製造した。 In addition, the bread used in feed A and C was manufactured from the bread-making raw material of the mixture rate shown in Table 11. The bread used in the feed B was produced from a raw material obtained by adding B1021 strain to a raw material for bread making shown in Table 11. The amount of B1021 strain added was 5% by weight (raw lactic acid bacteria) when the weight of the raw material excluding water was 100%. In addition, National Auto Home Bakery (manufactured by Matsushita Electric Industrial Co., Ltd.) was used for bread production, and the total weight of raw materials was 480 g.

飼料Ｂ及びＣで使用するＢ１０２１株は、ＡＰＴ培地（表１２）で３０℃、４８時間培養した菌体を用いた。飼料Ｃで使用する乾燥菌体は、前記培養によって得られる菌体を１００℃で一夜乾燥させた後、粉砕したものを使用した。 B1021 strains used in feeds B and C were cells cultured in APT medium (Table 12) at 30 ° C. for 48 hours. As the dry cells used in the feed C, the cells obtained by the above culture were dried at 100 ° C. overnight and then pulverized.

パン粉は出来上がったパンを１０５℃で一夜乾燥させた後、ミキサーで粉末にしたものを使用した。 Bread crumbs were used after drying the finished bread at 105 ° C. overnight and then pulverizing with a mixer.

飼料配合調製はニッチク薬品工業株式会社に依頼し行った。また、パン製造の酵母は生イースト（オリエンタル酵母工業株式会社）を使用した。 The feed formulation was commissioned to Nicheku Pharmaceutical Co., Ltd. In addition, fresh yeast (Oriental Yeast Co., Ltd.) was used as the yeast for bread production.

採取した血液の生化学値等の結果を以下に示す。 Results such as biochemical values of the collected blood are shown below.

（１）血糖値の経時的変化
０日から２１日までの血糖値の経時的変化を図１に示す。図に示すように、各群とも０〜２１日間血糖値は一定の値で推移した。 (1) Change in blood glucose level over time FIG. 1 shows the change in blood glucose level over time from day 0 to day 21. As shown in the figure, the blood glucose level of each group changed at a constant value for 0 to 21 days.

（２）中性脂肪値の経時的変化
０日から２１日までの中性脂肪値の経時的変化を図２に示す。図に示すように、各群とも経時的に増加する傾向を示したが、その増加率は、Ｃ群で、他の２群に比べて有意差は認められないものの、やや抑制される傾向を示した。 (2) Change with time of triglyceride value The change with time of triglyceride value from day 0 to day 21 is shown in FIG. As shown in the figure, each group showed a tendency to increase over time, but the rate of increase was slightly lower in Group C, although no significant difference was observed compared to the other two groups. Indicated.

（３）総コレステロール値の経時的変化
０日から２１日までの総コレステロール値の経時的変化を図３に示す。図に示すように、７日目には６０％ほど増加し、１４、２１日目ではさらに増加傾向を示した。このことから３群とも高コレステロール食の影響を受けているものと考えられた。しかしながら、飼料の違いによる差は認められなかった。 (3) Temporal change in total cholesterol level The temporal change in total cholesterol level from day 0 to day 21 is shown in FIG. As shown in the figure, it increased by about 60% on the 7th day, and further increased on the 14th and 21st days. From this, it was considered that all three groups were affected by a high cholesterol diet. However, there was no difference due to differences in feed.

（４）ＨＤＬＣ値の経時的変化
０日から２１日までの総コレステロール値の経時的変化を図４に示す。図に示すように、善玉コレステロールであるＨＤＬＣ値は、３群とも経時的に減少する傾向を見せた。しかしながら、２１日目では、Ｂ群ではＡ群に比べ有意に高い値を示し、また、Ｃ群も、Ａ群に比べて高い値を示す傾向があった。 (4) Change in HDLC value with time FIG. 4 shows the change in total cholesterol value with time from day 0 to day 21. As shown in the figure, the HDLC value, which is good cholesterol, tended to decrease over time in all three groups. However, on the 21st day, the B group showed significantly higher values than the A group, and the C group also tended to show higher values than the A group.

また、ＨＤＬＣ値及び総コレステロール値から動脈硬化指数を算出し、動脈硬化指数の経時的変化も調べた（図には示さない。）。その結果、３群とも経時的に増加する傾向があったが、その増加はＢ群では有意に抑制され、Ｃ群でも増加抑制傾向がみられた。 In addition, the arteriosclerosis index was calculated from the HDLC value and the total cholesterol value, and the change with time of the arteriosclerosis index was also examined (not shown in the figure). As a result, all three groups tended to increase over time, but the increase was significantly suppressed in group B, and an increase suppression trend was also observed in group C.

（５）ＧＯＴ値及びＧＰＴ値の経時的変化
０日から２１日までのＧＯＴ値及びＧＰＴ値の経時的変化をそれぞれ図５及び図６に示す。ＧＯＴ値及びＧＰＴ値は肝機能の指標になる酵素活性であるが、図に示すように、それらは実験期間中は特に大きな変化を認められず、各群間にも差がなかった。 (5) Time-dependent change of GOT value and GPT value The time-dependent changes of the GOT value and the GPT value from the 0th day to the 21st day are shown in FIGS. 5 and 6, respectively. The GOT value and GPT value are enzyme activities that serve as indicators of liver function, but as shown in the figure, they did not change particularly greatly during the experimental period, and there was no difference between the groups.

（６）絶食時に採取した血液の生化学値
血液生化学性状については、絶食時の値で比較することが常法である。そこで、実験２２日目の絶食時における各群の血液の生化学値を比較した。各群の血糖値、中性脂肪値、総コレステロール値、ＨＤＬＣ値、ＧＯＴ値、ＧＰＴ値、及び動脈硬化指数を図７、図８、図９、図１０、図１１、図１２、及び図１３に示す。 (6) Biochemical values of blood collected at fasting It is usual to compare blood biochemical properties with values at fasting. Therefore, the biochemical values of blood in each group at the time of fasting on the 22nd day of the experiment were compared. The blood glucose level, triglyceride level, total cholesterol level, HDLC level, GOT level, GPT level, and arteriosclerosis index of each group are shown in FIG. 7, FIG. 8, FIG. 9, FIG. Shown in

中性脂肪値、総コレステロール値では、Ｂ群及びＣ群は、有意差は認められないものの、Ａ群と比較して低い値を示した（図８及び９）。また、ＨＤＬＣ（善玉コレステロール）値では、Ｂ群及びＣ群は、Ａ群に比べ有意に高い値を示した（図１０）。GOT値とGPT値については、A群、B群、C群の間に有意差は認められなかった（図１１および１２）。 In the triglyceride level and the total cholesterol level, the B group and the C group showed lower values compared to the A group although no significant difference was observed (FIGS. 8 and 9). Moreover, in HDLC (good cholesterol) value, the B group and the C group showed the value significantly higher than the A group (FIG. 10). Regarding the GOT value and the GPT value, no significant difference was observed among the groups A, B, and C (FIGS. 11 and 12).

（７）剖検所見
剖検時の体重、肝臓、腎臓の重量については、有意差は認められないものの、Ａ群に比べてＢ群及びＣ群はわずかに低い値を示した。肝臓は、正常時において表面は滑らかで明るい赤褐色を示すが、３群の肝臓は、異常に白く、また白い斑点が肝全体を覆い明らかに異常所見を示すものであった。また組織標本を作製し、光学顕微鏡による観察の結果、肝脂肪内に脂肪顆粒が多数認められ、精査を要するものの、脂肪肝の疑いが認められた。体脂肪（精巣上体脂肪＋腎脂肪）についても３群で大きな変化を認めなかった。 (7) Necropsy findings Although no significant differences were observed in the body weight, liver, and kidney weights at the time of necropsy, the B and C groups showed slightly lower values than the A group. The liver had a smooth and bright reddish brown surface under normal conditions, but the three groups of livers were abnormally white, and the white spots covered the entire liver and clearly showed abnormal findings. As a result of preparing a tissue specimen and observing with a light microscope, a large number of fat granules were observed in the liver fat, and although scrutiny was required, suspicion of fatty liver was observed. There was also no significant change in body fat (epididymal fat + kidney fat) in the 3 groups.

〔実施例１０〕Ｂ１０２１株を用いたヨーグルトの作製
Ｂ１０２１株をＡＰＴ培地（表１２）に植菌し、３０℃で２４時間培養した後、その培養液５ｍｌを５００ｍｌの牛乳（メグミルク、日本ミルクコミュニティ株式会社製造）と混合した。その後、３０℃で保温し、ｐＨを経時的に測定した。この結果を表１３に示す。 [Example 10] Preparation of yogurt using B1021 strain After inoculating B1021 strain into APT medium (Table 12) and culturing at 30 ° C for 24 hours, 5 ml of the culture solution was added to 500 ml of milk (Megmilk, Japan Milk Community). Mixed). Then, it kept at 30 degreeC and measured pH over time. The results are shown in Table 13.

表１３に示すように、菌接種から４日目にｐＨが４．５以下になった。参考のために市販のヨーグルト（明治ブルガリアヨーグルト微糖）のｐＨを調べてみたところ、そのｐＨは４．５であった。このことから、菌接種から４日目には、市販のヨーグルトと同様の品質のヨーグルトが生成していたものと考えられる。 As shown in Table 13, pH became 4.5 or less on the 4th day after the bacterial inoculation. When the pH of a commercially available yogurt (Meiji Bulgaria yogurt fine sugar) was examined for reference, the pH was 4.5. From this, it is considered that yogurt having the same quality as commercially available yogurt was produced on the fourth day after the inoculation.

上記のように牛乳のみで培養した場合、ヨーグルトができるまでにかなりの時間を要した。そこで、種々の添加物を牛乳に加え、菌接種から２４時間後のｐＨを測定し、ヨーグルト生成までの時間が短縮できるかどうかを検討した。添加物としては、市販のトマトジュース（日本デルモンテ株式会社製造）、Bacto Tryptone、Bacto Yeast Extractを用いた。菌接種から２４時間後のｐＨを表１４に示す。 When culturing only with milk as described above, it took a considerable amount of time to produce yogurt. Therefore, various additives were added to milk, and the pH was measured 24 hours after the bacterial inoculation to investigate whether the time until yogurt formation could be shortened. As the additive, commercially available tomato juice (manufactured by Nippon Del Monte), Bacto Tryptone, and Bacto Yeast Extract were used. Table 14 shows the pH 24 hours after the inoculation.

表１４に示すように、トマトジュース、Bacto Tryptone、Bacto Yeast Extractのいずれを添加した場合も、２４時間後のｐＨは４前後まで低下していた。この結果から、トマトジュース等の添加物を加えることにより、２４時間程度で十分な品質のヨーグルトを作製できると考えられる。 As shown in Table 14, even when any of tomato juice, Bacto Tryptone, and Bacto Yeast Extract was added, the pH after 24 hours had decreased to around 4. From this result, it is considered that yogurt of sufficient quality can be produced in about 24 hours by adding additives such as tomato juice.

〔実施例１１〕Ｂ１０２１株の食塩生育限界、ｐＨ耐性試験
Ｂ１０２１株について食塩生育限界試験と、ｐＨ耐性試験を行った。実験では種培養として、ＡＰＴ培地１０ｍｌ（１６．５ｍｌ試験管使用）に一白金耳Ｂ１０２１株を接種後、シリコ栓（信越ポリマー株式会社）をし、３０℃で２４時間培養した。そして、ＮａＣｌ濃度、ｐＨをそれぞれ変えた１０ｍｌのＡＰＴ培地に前培養物を１００μｌ接種した。その後、３０℃で培養した。 [Example 11] Salt growth limit and pH tolerance test of B1021 strain A salt growth limit test and a pH tolerance test were performed on the B1021 strain. In the experiment, as a seed culture, 10 ml of APT medium (using 16.5 ml test tube) was inoculated with one platinum ear B1021 strain, and then a silico stopper (Shin-Etsu Polymer Co., Ltd.) was used and cultured at 30 ° C. for 24 hours. Then, 100 μl of the preculture was inoculated into 10 ml of APT medium with different NaCl concentration and pH. Then, it culture | cultivated at 30 degreeC.

ｐＨ耐性試験の結果を表１５に、食塩生育限界試験の結果を表１６に示す。 The results of the pH tolerance test are shown in Table 15, and the results of the salt growth limit test are shown in Table 16.

表１５に示すように、Ｂ１０２１株はｐＨ３．５程度まで生育可能であった。また、表１６に示すように、Ｂ１０２１株は食塩濃度９．５％程度まで生育可能であった。一般的な漬物のｐＨは３．５〜４．５、食塩濃度は５〜９％程度であることから、Ｂ１０２１株は漬物の作製に使用できると考えられる。 As shown in Table 15, the B1021 strain was able to grow up to about pH 3.5. As shown in Table 16, the B1021 strain was able to grow to a salt concentration of about 9.5%. Since the pH of general pickles is 3.5 to 4.5 and the salt concentration is about 5 to 9%, it is considered that the B1021 strain can be used for the production of pickles.

Ａ〜Ｃ群の血糖値の経時的変化を示す図。The figure which shows the time-dependent change of the blood glucose level of AC group. Ａ〜Ｃ群の中性脂肪値の経時的変化を示す図。The figure which shows the time-dependent change of the triglyceride value of A-C group. Ａ〜Ｃ群の総コレステロール値の経時的変化を示す図。The figure which shows the time-dependent change of the total cholesterol value of A-C group. Ａ〜Ｃ群のＨＤＬＣ値の経時的変化を示す図。The figure which shows the time-dependent change of the HDLC value of A-C group. Ａ〜Ｃ群のＧＯＴ値の経時的変化を示す図。The figure which shows the time-dependent change of the GOT value of A-C group. Ａ〜Ｃ群のＧＰＴ値の経時的変化を示す図。The figure which shows the time-dependent change of the GPT value of A-C group. 高コレステロール飼料給餌後、絶食時のＡ〜Ｃ群の血糖値を示す図。The figure which shows the blood glucose level of the AC group at the time of fasting after feeding high cholesterol feed. 高コレステロール飼料給餌後、絶食時のＡ〜Ｃ群の中性脂肪値を示す図。The figure which shows the triglyceride value of the AC group at the time of fasting after high cholesterol feed feeding. 高コレステロール飼料給餌後、絶食時のＡ〜Ｃ群の総コレステロール値を示す図。The figure which shows the total cholesterol level of the AC group at the time of fasting after feeding high cholesterol feed. 高コレステロール飼料給餌後、絶食時のＡ〜Ｃ群のＨＤＬＣ値を示す図。The figure which shows the HDLC value of the AC group at the time of fasting after feeding high cholesterol feed. 高コレステロール飼料給餌後、絶食時のＡ〜Ｃ群のＧＯＴ値を示す図。The figure which shows the GOT value of the AC group at the time of fasting after high cholesterol feed feeding. 高コレステロール飼料給餌後、絶食時のＡ〜Ｃ群のＧＰＴ値を示す図。The figure which shows the GPT value of the AC group at the time of fasting after high cholesterol feed feeding. 高コレステロール飼料給餌後、絶食時のＡ〜Ｃ群の動脈硬化指数を示す図。The figure which shows the arteriosclerosis index | exponent of the AC group at the time of fasting after high cholesterol feed feeding.

Claims

Leuconostoc sp. B0321 strain, Leuconostoc sp. B0811 strain, Leuconostoc sp. B0911 strain or Lactobacillus plantarum B1021 strain.

A similar strain of Lactobacillus plantarum B1021 belonging to Lactobacillus plantarum and having a bile acid binding ability of 60% or more in terms of cholestyramine ratio.

The similar strain of Lactobacillus plantarum B1021 strain according to claim 2, which has 16S rDNA represented by a base sequence which is 99% or more homologous to the base sequence described in SEQ ID NO: 4.

Ribose, galactose, glucose, fructose, mannose, mannitol, sorbitol, α-methyl-D-mannoside, N-acetyl-glucosamine, amygdalin, esculin, salicin, cellobiose, maltose, lactose, melibiose, sucrose, trehalose, melezitose, raffinose, Having assimilability to gentiobiose, L-arabitol, and 2-ketogluconic acid, glycerol, erythritol, D-arabinose, L-arabinose, D-xylose, L-xylose, adonitol, β-methyl-D-xyloside, sorbose, Rhamnose, dulcitol, inositol, α-methyl-D-glucoside, arbutin, inulin, starch, glycogen, xylitol, D-turanose, D- Kisosu, D- tagatose, D- fucose, L- fucose, D- arabitol, gluconate, and 5-ketogluconic Lactobacillus plantarum B1021 strain of claim 2, wherein the no-assimilating to acid Similar strains.

A food comprising the strain according to any one of claims 1 to 4 .

The food according to claim 5, wherein the food is bread, yogurt, pickles or pizza.

An HDLC reduction inhibitor comprising the strain according to any one of claims 1 to 4 as an active ingredient .