JP4251866B2 - Composition having inhibitory action and curative action on alcoholic liver injury, and method for producing the composition - Google Patents
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Description
【０００１】
【発明が属する技術分野】
本発明は大麦を原料とする焼酎製造において副生する大麦焼酎蒸留残液を固液分離して液体分を得、該液体分を合成吸着剤を使用する吸着分離処理に付して合成吸着剤非吸着画分を得、該合成吸着剤非吸着画分をイオン交換樹脂を使用するイオン交換処理に付してイオン交換樹脂非吸着画分を得、該イオン交換樹脂非吸着画分を限外濾過膜を使用する限外濾過処理に付して濃縮液を得、該濃縮液に有機溶媒を添加することにより分取した、有機溶媒不溶性画分からなるアルコール性肝障害に対する発症抑制作用及び治癒作用を有する組成物及びその製造方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
近年におけるアルコール飲料の消費量の増加に伴って，アルコール性肝障害者の数は増加傾向にあり、生活習慣病の一つとして認識されるようになってきた。こうしたアルコール性肝障害の具体的症状としては、アルコール性脂肪肝、アルコール性肝炎、アルコール性肝線維症、アルコール性肝硬変、或いはアルコール性脂肪肝によって誘発するアルコール性高脂血症等を挙げることができる。そして、アルコール性脂肪肝が慢性に経過すると肝細胞の周りに線維ができるアルコール性肝線維症に移行することが知られており、該アルコール性肝線維症において肝細胞に入る血液量が減少して肝臓のタンパク質合成能や有毒物質分解能が低下すると、肝臓が徐々に硬く変性しアルコール性肝硬変に至ることが知られている。
【０００３】
ところで、大麦焼酎を製造する際に副成する大麦焼酎蒸留残液の肝障害予防作用については、以下のことが知られている。即ち、該大麦焼酎蒸留残液がオロチン酸投与によるラットの肝臓への脂質の蓄積を抑制することが報告されている［日本栄養・食糧学会総会講演要旨集、Vol.53, 53(1999)参照］（以下、当該文献を非特許文献1と呼称することとし、後述の【０００５】に別途記載することとする）。さらに該大麦焼酎蒸留残液が有する上記の脂肪肝抑制作用は、ワイン粕やビール粕に比べて強く、該作用はいも焼酎蒸留残液には全く認められず、米焼酎蒸留残液では極めて小さいことから、大麦焼酎蒸留残液のみに特有のものであることが報告されている［日本醸造協会誌、Vol.94, No.9, 768(1999)参照］（以下、当該文献を非特許文献2と呼称することとし、後述の【０００５】に別途記載することとする）。また、前記大麦焼酎蒸留残液がウイルス性肝障害と同様の症状を呈することが知られているD-ガラクトサミン誘発性肝障害に対する発症抑制作用を有し、該発症抑制作用は該大麦焼酎蒸留残液を遠心分離に付すことにより得られる液体分に認められることが報告されている［日本醸造協会誌、Vol.95, No.9, 706(2000)参照］（以下、当該文献を非特許文献3と呼称することとし、後述の【０００５】に別途記載することとする）。
特開2001-145472号公報には、大麦を原料とする焼酎製造において副成する大麦焼酎蒸留残液を固液分離して液体分を得、該液体分にアルカリを添加してアルカリ可溶性画分を分取し、該アルカリ可溶性画分を酸で中和して中性可溶性画分を得、該中性可溶性画分にエタノールを添加することにより分取した、有機酸、タンパク質、及びヘミセルロースを含有するエタノール不溶性画分からなる組成物が、ラットを使用した実験において、オロチン酸誘発性肝障害に対する発症抑制作用を有することが記載されている（以下、当該公報を特許文献1と呼称することとし、後述の【０００５】に別途記載することとする）。
【０００４】
特許第3191956号には、トウモロコシフスマより得られたヘミセルロースの部分分解物を主成分とするアルコール性脂肪肝抑制剤が、エタノール溶液投与によるラットの脂肪肝形成に対し、脂肪肝を抑制する作用を有することが記載されている（以下、当該公報を特許文献2と呼称することとし、後述の【０００５】に別途記載することとする）。また、特許文献2には、前記トウモロコシフスマから得られたヘミセルロースの部分分解物が「セルエース」の商品名で市販されていることが記載されている。［平成3年3月（社）菓子総合技術センター発行「農林水産省食品流通局委託事業 No.8 飲食料品用機能性素材有効利用技術シリーズ水溶性コーンファイバー（アラビノキシラン）」3頁］には、「セルエース」の商品名で市販されているトウモロコシフスマから得られたヘミセルロースの部分分解物はアラビノース及びキシロースからなるアラビノキシランを主成分とし、キシロース40.32%、アラビノース27.76%、ウロン酸11.86%、ガラクトース5.91%、及びグルコース2.30%の組成を有するものであることが記載されている（以下、当該文献を非特許文献4と呼称することとし、後述の【０００５】に別途記載することとする）。更に、［New Food Industry Vol.42 No.9, 6(2000)］には、「セルエース」の商品名で市販されているトウモロコシフスマから得られたヘミセルロースの部分分解物が、急性アルコール性脂肪肝に対する抑制作用を有することが記載されている（以下、当該文献を非特許文献5と呼称することとし、後述の【０００５】に別途記載することとする）。
【０００５】
【特許文献１】
特開2001-145472号公報
【特許文献２】
特許第3191956号
【非特許文献１】
日本栄養・食糧学会総会講演要旨集、Vol.53, 53(1999)
【非特許文献２】
日本醸造協会誌、Vol.94, No.9, 768(1999)
【非特許文献３】
日本醸造協会誌、Vol.95, No.9, 706(2000)
【非特許文献４】
平成3年3月（社）菓子総合技術センター発行 「農林水産省食品流通局委託事業 No.8 飲食料品用機能性素材有効利用技術シリーズ 水溶性コーンファイバー（アラビノキシラン）」 3頁
【非特許文献５】
New Food Industry Vol.42 No.9, 6(2000)
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
大麦焼酎蒸留残液が有する肝障害予防作用については、上述したように、非特許文献1乃至非特許文献3には、大麦焼酎蒸留残液又は大麦焼酎蒸留残液を固液分離することにより得られる液体分（以下、これらを大麦焼酎蒸留残液の液体分と呼称することとする。）がオロチン酸誘発性肝障害及びD-ガラクトサミン誘発性肝障害に対する発症抑制作用を有することが記載されているが、アルコール性肝障害に対する発症抑制作用及び治癒作用を有するか否かについては示唆するところすらない。また、特許文献1にはエタノール不溶性画分がオロチン酸誘発性肝障害に対する発症抑制作用を有することが記載されているが、該エタノール不溶性画分が前記アルコール性肝障害に対する発症抑制作用及び治癒作用を有するか否かについては示唆するところすらない。即ち、該大麦焼酎蒸留残液からアルコール性肝障害に対する発症抑制作用及び治癒作用を有する画分を分取した例はこれまでに全く知られていない。
【０００７】
ところで、オロチン酸誘発性肝障害は、オロチン酸により肝臓での脂肪合成が促進され、さらに肝臓から血中への脂肪の移行が抑制され、それにより脂肪肝を誘発する肝障害であることが知られている。また，D-ガラクトサミン誘発性肝障害は、D-ガラクトサミンにより肝細胞の壊死が促進され、それにより肝炎を誘発する肝障害であることが知られている。
【０００８】
一方、本発明においていうアルコール性肝障害は、アルコールの過剰摂取によって誘発されるアルコール性肝炎、アルコール性脂肪肝、及びアルコール性高脂血症を包含して意味する。前記アルコール性脂肪肝は、エタノールにより脂肪組織から肝臓への脂肪酸の移行が促進され、肝臓における脂肪酸や中性脂肪の合成が促進され、更に、肝臓における脂肪酸の分解が抑制されること等によって、肝臓内に中性脂肪が蓄積されることにより誘発される脂肪肝であることが知られている。前記アルコール性肝炎は、エタノールの代謝産物であるアセトアルデヒドや酢酸或いはこれらが産生される際に発生する活性酸素が、肝細胞に対して障害性を示すことにより誘発される肝炎であることが知られている。また、前記アルコール性高脂血症は、上述したように肝臓内に蓄積した過剰の中性脂肪が分泌型の超低比重リポタンパク（VLDL）として大量に血中に放出されることにより発症するものであることが知られている。そして、こうしたアルコール性肝障害においては、風船様腫大や肝細胞壊死等の肝炎の病変、或いは大滴性脂肪滴を含有する肝細胞からなる脂肪肝の所見が肝小葉の終末肝静脈周辺領域を中心として進展していくことが知られている。なお、肝臓は主に肝細胞からなり、小葉間結合組織で区切られた肝小葉を一単位として機能しており、この直径1mmほどの肝小葉が多数集合して肝臓ができている。従って、こうしたそれぞれの肝障害の因果関係からすると、アルコール性肝障害は、オロチン酸誘発性肝障害及びD-ガラクトサミン誘発性肝障害とは客観的に区別されるものであり、ある種の成分がオロチン酸誘発性肝障害又はD-ガラクトサミン誘発性肝障害に対して発症抑制作用或いは治癒作用を有することが判っていても、該成分がアルコール性肝障害に対しても同様の発症抑制作用或いは治癒作用を有するか否かは、容易に予測できるものでは到底ない。
【０００９】
このような従来技術に鑑みて、本発明は大麦焼酎蒸留残液を固液分離して液体分を得、該液体分を合成吸着剤を使用する吸着分離処理に付して合成吸着剤非吸着画分を得、該合成吸着剤非吸着画分をイオン交換樹脂を使用するイオン交換処理に付してイオン交換樹脂非吸着画分を得、該イオン交換樹脂非吸着画分を限外濾過膜を使用する限外濾過処理に付して濃縮液を得、該濃縮液に有機溶媒を添加することにより分取した、アルコール性肝障害に対する強力な発症抑制作用及び治癒作用を有する有機溶媒不溶性画分からなる組成物を提供することを目的とするものである。
【００１０】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、文献1乃至文献3には大麦焼酎蒸留残液の液体分がD-ガラクトサミン誘発性肝障害及びオロチン酸誘発性肝障害に対する発症抑制作用を有することが記載されていることに鑑み、該大麦焼酎蒸留残液の液体分が、アルコール性肝障害に対して発症抑制作用を示すか否かを明らかにすることを目的として、実験を介して鋭意検討を行った。その結果、前記大麦焼酎蒸留残液の液体分は、前記アルコール性肝障害に対する発症抑制作用を僅かに有するものの、アルコール性肝障害の発症を積極的に抑制する目的での薬剤としての実使用を示唆する程のものではないことが判明した。
【００１１】
ところで、本発明者らの内の三者は他の二者と共同で、大麦焼酎蒸留残液の液体分を合成吸着剤を用いる吸着分離処理に付すことにより得られる吸着画分は、オロチン酸誘発性脂肪肝及びD-ガラクトサミン誘発性肝障害に対する発症抑制作用を有するが、大麦焼酎蒸留残液の液体分を合成吸着剤を用いる吸着分離処理に付すことにより副成する合成吸着剤非吸着画分は、オロチン酸誘発性脂肪肝及びD-ガラクトサミン誘発性肝障害に対する発症抑制作用を有しないことを見出した（特願2002-56929号として出願済）。こうしたことから、前記合成吸着剤非吸着画分は薬理作用を有しないことから無用なものとみなして廃棄していた。ところが、本発明者らは、このように無用なものとして廃棄していた前記合成吸着剤非吸着画分を用いて、そのアルコール性肝障害に対する発症抑制作用及び治癒作用の有無を実験を介して検討したところ、該合成吸着剤非吸着画分がアルコール性肝障害に対する優れた発症抑制作用を有し且つアルコール性肝障害に対する優れた治癒作用を有することを見出した（特願2002-250991号として出願済）。当該発見に引き続いて、該合成吸着剤非吸着画分に含まれる有効成分、即ち、アルコール性肝障害に対する強力な発症抑制作用及び治癒作用を有する成分、を分画精製すべく、鋭意、研究を重ねたところ、該合成吸着剤非吸着画分をイオン交換樹脂を使用するイオン交換処理に付してイオン交換樹脂非吸着画分を得、該イオン交換樹脂非吸着画分を限外濾過膜を使用する限外濾過処理に付して濃縮液を得、該濃縮液に有機溶媒を添加することにより分取した有機溶媒不溶性画分が、アルコール性肝障害に対して際立った発症抑制作用及び治癒作用を有することを見出した。
【００１２】
本発明は、このような発見に基づいて完成に至ったものである。本発明の目的は、大麦焼酎蒸留残液を固液分離して液体分を得、該液体分を合成吸着剤を使用する吸着分離処理に付して合成吸着剤非吸着画分を得、該合成吸着剤非吸着画分をイオン交換樹脂を使用するイオン交換処理に付してイオン交換樹脂非吸着画分を得、該イオン交換樹脂非吸着画分を限外濾過膜を使用する限外濾過処理に付して濃縮液を得、該濃縮液に有機溶媒を添加することにより得られる有機溶媒不溶性画分からなる、アルコール性肝障害に対して際立った発症抑制作用及び治癒作用を有する医薬用組成物を提供することにある。本発明の他の目的は、こうした薬理作用を有する組成物の製造方法を提供することにある。
【００１３】
以下に本発明を完成するにあたり、本発明者らが行った実験について詳述する。本発明はこれらの実験において得られた知見に基づいて完成したものである。本発明者らは、上述したように、非特許文献1乃至非特許文献3には大麦焼酎蒸留残液の液体分がD-ガラクトサミン誘発性肝障害及びオロチン酸誘発性脂肪肝に対する発症抑制作用を有することが記載されていることに鑑みて、該大麦焼酎蒸留残液の液体分がアルコール性肝障害に対しても発症抑制作用を示すか否かを明らかにするために、該大麦焼酎蒸留残液の液体分（A）を用いて以下の実験を行い、鋭意検討した。
即ち、3週齢Wistar系雄性ラット（日本SLC）24匹にエタノール含有率を徐々に上げながら（3%→4%→5%)エタノール含有液体飼料を6日間与えた後、1群12匹として、対照群及び試験群からなる2群に分けた。その際、前記各群におけるラットの平均体重に係る分散に統計学的有意差が生じないように前記24匹のラットを振り分けた。対照群のラットに対しては5%エタノール含有液体飼料、試験群のラットに対しては該5%エタノール含有液体飼料に大麦焼酎蒸留残液の液体分（A）の凍結乾燥物粉末（A’）1%を添加した液体飼料をそれぞれ4週間与えて飼育した。対照群及び試験群とは別に前記3週齢Wistar系雄性ラット12匹からなる無処置群を設け、該無処置群のラットに対しては他の2群と摂取カロリーを同一にするために5%エタノールの代わりにマルトース-デキストリン等量混合物を添加したエタノール非含有液体飼料を4週間与えて飼育した。但し、上記3群とも、各液体飼料の1日あたりの給餌量（摂取カロリー）を70ml（70kcal）に制限した。実験最終日（試験開始後4週間目）に、飼育したラットのそれぞれの腹部大動脈から採血を行い、肝臓を摘出した。採取した血液は血清分離後、血清総コレステロール、血清HDL-コレステロール、血清LDL-コレステロール、血清トリグリセリド、血清リン脂質、血清遊離脂肪酸、及び血清ALT（GPT）を測定した。また、摘出した肝臓については、肝臓重量、肝臓総コレステロール、肝臓トリグリセリド、及び肝臓リン脂質を測定した。得られた結果は平均値±標準誤差（SEM）で表し、統計処理は以下の手順で行った。即ち、無処置群と対照群の比較はStudent's test法を用いて解析し、次いで対照群と試験群の比較はTukey-Kramer法を用いて解析し、それぞれの解析において危険率0.05%以下を有意として判定した。更に、摘出した前記肝臓から採取した肝細胞をHE染色に付した後、オリンパス光学工業（株）製の生物顕微鏡BX51を用いて200倍の倍率で該肝細胞の形態観察を行った。
【００１４】
その結果、対照群は、無処置群と比較して、血清総コレステロール濃度、血清HDL-コレステロール濃度、血清LDL-コレステロール濃度、血清トリグリセリド濃度及び血清リン脂質濃度が有意に増加して、アルコール性高脂血症が誘発されていることが判明した。また、対照群は、無処置群と比較して、肝臓トリグリセリド濃度及び肝臓リン脂質濃度が有意に増加して、アルコール性脂肪肝が誘発されていることが判明した。更に、対照群は、無処置群と比較して、血中ALT(GPT)濃度が有意に増加し、肝細胞の生物顕微鏡観察においては肝小葉の終末肝静脈周辺領域における肝細胞壊死と風船様腫大が顕著に認められ、アルコール性肝炎が誘発されていることが判明した。一方、試験群は、対照群と比較して、血清LDL-コレステロール濃度、血清トリグリセリド濃度及び肝臓トリグリセリド濃度の上昇が抑制される傾向を示し、肝細胞の生物顕微鏡観察においても肝小葉の終末肝静脈周辺領域における肝細胞壊死と風船様腫大が僅かに減少する傾向を示した。
以上の結果から、前記大麦焼酎蒸留残液の液体分（A）の凍結乾燥物粉末（A’）は、アルコール性肝障害の発症を積極的に抑制する目的での薬剤としての実使用を示唆する程のものではないことが判明した。
【００１５】
次に、本発明者らは、次に述べる実験を介して、大麦焼酎蒸留残液の液体分から得られるどのような画分がアルコール性肝障害に対する発症抑制作用に寄与しているかを明らかにするために、大麦焼酎蒸留残液の液体分を合成吸着剤を用いる吸着分離処理に付すことにより得られる吸着画分をアルカリを用いて溶出することにより得られる脱着画分（B）を用いて以下の実験を行い、鋭意検討した。
即ち、3週齢Wistar系雄性ラット（日本SLC）24匹にエタノール含有率を徐々に上げながら（3%→4%→5%)エタノール含有液体飼料を6日間与えた後、1群12匹として、対照群及び試験群からなる2群に分けた。その際、前記各群におけるラットの平均体重に係る分散に統計学的有意差が生じないように前記24匹のラットを振り分けた。対照群のラットに対しては5%エタノール含有液体飼料、試験群のラットに対しては該5%エタノール含有液体飼料に上記脱着画分（B）の凍結乾燥物粉末（B’）1%を添加した液体飼料をそれぞれ4週間与えて飼育した。対照群及び試験群とは別に前記3週齢Wistar系雄性ラット12匹からなる無処置群を設け、該無処置群のラットに対しては他の2群と摂取カロリーを同一にするために5%エタノールの代わりにマルトース-デキストリン等量混合物を添加したエタノール非含有液体飼料を4週間与えて飼育した。但し、上記3群とも、各液体飼料の1日あたりの給餌量（摂取カロリー）を70ml（70kcal）に制限した。実験最終日（試験開始後4週間目）に、飼育したラットのそれぞれの腹部大動脈から採血を行い、肝臓を摘出した。採取した血液は血清分離後、血清総コレステロール、血清HDL-コレステロール、血清LDL-コレステロール、血清トリグリセリド、血清リン脂質、血清遊離脂肪酸、及び血清ALT（GPT）を測定した。また、摘出した肝臓については、肝臓重量、肝臓総コレステロール、肝臓トリグリセリド、及び肝臓リン脂質を測定した。得られた結果は平均値±標準誤差（SEM）で表し、統計処理は以下の手順で行った。即ち、無処置群と対照群の比較はStudent's test法を用いて解析し、次いで対照群と試験群の比較はTukey-Kramer法を用いて解析し、それぞれの解析において危険率0.05%以下を有意として判定した。更に、摘出した前記肝臓から採取した肝細胞をHE染色に付した後、オリンパス光学工業（株）製の生物顕微鏡BX51を用いて200倍の倍率で該肝細胞の形態観察を行った。
【００１６】
その結果、対照群は、無処置群と比較して、血清総コレステロール濃度、血清HDL-コレステロール濃度、血清LDL-コレステロール濃度、血清トリグリセリド濃度及び血清リン脂質濃度が有意に増加して、アルコール性高脂血症が誘発されていることが判明した。また、対照群は、無処置群と比較して、肝臓トリグリセリド濃度及び肝臓リン脂質濃度が有意に増加して、アルコール性脂肪肝が誘発されていることが判明した。更に、対照群は、無処置群と比較して、血中ALT(GPT)濃度が有意に増加し、肝細胞の生物顕微鏡観察においては肝小葉の終末肝静脈周辺領域における肝細胞壊死と風船様腫大が顕著に認められ、アルコール性肝炎が誘発されていることが判明した。一方、試験群は、対照群と比較して、該ラットの血清トリグリセリド濃度の上昇が抑制される傾向を示したが、肝臓トリグリセリド濃度の上昇を全く抑制せず、肝細胞の生物顕微鏡観察においても肝小葉の終末肝静脈周辺領域における肝細胞壊死と風船様腫大が顕著に認められた。即ち、上記脱着画分（B）の凍結乾燥物粉末（B’）は、アルコール性高脂血症の誘発を抑制する傾向を僅かに示したが、アルコール性脂肪肝及びアルコール性肝炎の誘発を抑制する傾向は全く示さなかった。
以上の結果から、上記脱着画分（B）の凍結乾燥物粉末（B’）は、アルコール性肝障害に対する発症抑制作用を実質的に有さないことが判明した。
【００１７】
そこで、本発明者らは、大麦焼酎蒸留残液の液体分を合成吸着剤を用いる吸着分離処理に付すことにより得られる合成吸着剤非吸着画分が、アルコール性肝障害に対して効果的な発症抑制作用を示すのではないかと推測して、大麦焼酎蒸留残液の液体分を合成吸着剤を用いる吸着分離処理に付すことにより得られる合成吸着剤非吸着画分（C）を用いて以下の実験を行い、鋭意検討した。
即ち、3週齢Wistar系雄性ラット（日本SLC）24匹にエタノール含有率を徐々に上げながら（3%→4%→5%)エタノール含有液体飼料を6日間与えた後、1群12匹として、対照群及び試験群からなる2群に分けた。その際、前記各群におけるラットの平均体重に係る分散に統計学的有意差が生じないように前記24匹のラットを振り分けた。対照群のラットに対しては5%エタノール含有液体飼料、試験群のラットに対しては該5%エタノール含有液体飼料に上記合成吸着剤非吸着画分（C）の凍結乾燥物粉末（C’）1%を添加した液体飼料をそれぞれ4週間与えて飼育した。対照群及び試験群とは別に前記3週齢Wistar系雄性ラット12匹からなる無処置群を設け、該無処置群のラットに対しては他の2群と摂取カロリーを同一にするために5%エタノールの代わりにマルトース-デキストリン等量混合物を添加したエタノール非含有液体飼料を4週間与えて飼育した。但し、上記3群とも、各液体飼料の1日あたりの給餌量（摂取カロリー）を70ml（70kcal）に制限した。実験最終日（試験開始後4週間目）に、飼育したラットのそれぞれの腹部大動脈から採血を行い、肝臓を摘出した。採取した血液は血清分離後、血清総コレステロール、血清HDL-コレステロール、血清LDL-コレステロール、血清トリグリセリド、血清リン脂質、血清遊離脂肪酸、及び血清ALT（GPT）を測定した。また、摘出した肝臓については、肝臓重量、肝臓総コレステロール、肝臓トリグリセリド、及び肝臓リン脂質を測定した。得られた結果は平均値±標準誤差（SEM）で表し、統計処理は以下の手順で行った。即ち、無処置群と対照群の比較はStudent's test法を用いて解析し、次いで対照群と試験群の比較はTukey-Kramer法を用いて解析し、それぞれの解析において危険率0.05%以下を有意として判定した。更に、摘出した前記肝臓から採取した肝細胞をHE染色に付した後、オリンパス光学工業（株）製の生物顕微鏡BX51を用いて200倍の倍率で該肝細胞の形態観察を行った。
【００１８】
その結果、対照群は、無処置群と比較して、血清総コレステロール濃度、血清HDL-コレステロール濃度、血清LDL-コレステロール濃度、血清トリグリセリド濃度及び血清リン脂質濃度が有意に増加して、アルコール性高脂血症が誘発されていることが判明した。また、対照群は、無処置群と比較して、肝臓トリグリセリド濃度及び肝臓リン脂質濃度が有意に増加して、アルコール性脂肪肝が誘発されていることが判明した。更に、対照群は、無処置群と比較して、血中ALT(GPT)濃度が有意に増加し、肝細胞の生物顕微鏡観察においては肝小葉の終末肝静脈周辺領域における肝細胞壊死と風船様腫大が顕著に認められ、アルコール性肝炎が誘発されていることが判明した。一方、試験群は、対照群と比較して、該ラットの血清LDL-コレステロール濃度と血清トリグリセリド濃度、及び肝臓トリグリセリド濃度の上昇を有意に抑制し、肝細胞の生物顕微鏡観察においても肝小葉の終末肝静脈周辺領域における肝細胞壊死と風船様腫大がほとんど認められなかった。以上の実験結果から、上記合成吸着剤非吸着画分（C）の凍結乾燥物粉末（C’）は、アルコール性肝障害に対する顕著な発症抑制作用を有することが判った。
【００１９】
こうしたことから、大麦焼酎蒸留残液が有するアルコール性肝障害の発症抑制作用に寄与する成分は、大麦焼酎蒸留残液を固液分離して液体分を得、該液体分を合成吸着剤を使用する吸着分離処理に付すことにより得られる合成吸着剤非吸着画分に分画された状態で存在することが判明した。
【００２０】
そこで、本発明者らは、前記合成吸着剤非吸着画分に含まれるアルコール性肝障害に対する強力な発症抑制作用を有する成分を明らかにすることを目的として、鋭意検討を行った。即ち、本発明者らは、大麦を原料とする焼酎製造において副生する大麦焼酎蒸留残液を固液分離して液体分を得、該液体分を合成吸着剤を使用する吸着分離処理に付すことにより得られる合成吸着剤非吸着画分が、成分の１つとして多糖類を含有していることに鑑み、該合成吸着剤非吸着画分に含まれる多糖類がアルコール性肝障害に対する発症抑制作用に関与しているか否かを明らかにするために鋭意検討を行った。即ち、前記有機溶媒不溶性画分に含まれる多糖類以外の成分である、アミノ酸、ペプチド、タンパク質、有機酸、或いは大麦由来のポリフェノール等を除去することを目的として以下の実験を行った。具体的には、大麦焼酎蒸留残液の液体分に含まれる大麦由来のポリフェノール等を除去することを目的として、大麦焼酎蒸留残液を固液分離することにより得た液体分を合成吸着剤を使用した吸着分離処理に付して合成吸着剤非吸着画分を得、次に、該合成吸着剤非吸着画分に含まれるアミノ酸、ペプチド、タンパク質及び有機酸を除去することを目的として、該合成吸着剤非吸着画分を種々のイオン交換樹脂を使用したイオン交換処理に付すことによって異なる種類のイオン交換樹脂非吸着画分を得、得られたそれぞれのイオン交換樹脂非吸着画分に別々に有機溶媒を添加することにより分取したそれぞれの有機溶媒不溶性画分が、アルコール性肝障害に対してどのような発症抑制作用を有するか否かを明らかにするために以下の実験を行った。
即ち、大麦焼酎蒸留残液を固液分離することにより得た液体分を合成吸着剤を使用する吸着分離処理に付すことにより合成吸着剤非吸着画分を得、得られた合成吸着剤非吸着画分を、各種のイオン交換樹脂、具体的には、陽イオン交換樹脂、陰イオン交換樹脂及び両者の混床型イオン交換樹脂を用いたイオン交換処理に付してイオン交換樹脂非吸着画分を得、それぞれのイオン交換樹脂非吸着画分にエタノールを添加することにより有機溶媒不溶性画分を得た。得られたそれぞれの有機溶媒不溶性画分について、遊離糖類、多糖類、有機酸類、及び粗タンパクを測定した。また、それぞれの有機溶媒不溶性画分がアルコール性肝障害に対して発症抑制作用を示すか否かを明らかにするために、以下の実験を行った。
【００２１】
以下の実験1乃至実験7に供する目的で大麦焼酎の製造を行った。原料としては、大麦（70%精白）を用いた。
【麹の製造】
大麦を40重量%吸水させ、40分間蒸した後、40℃まで放冷し、大麦トンあたり1kgの種麹（白麹菌）を接種し、38℃、RH95%で24時間、32℃、RH92%で20時間保持することにより、大麦麹を製造した。
【蒸麦の製造】
大麦を40重量%吸水させ、40分間蒸した後、40℃まで放冷することにより、蒸麦を製造した。
【００２２】
【大麦焼酎及び大麦焼酎蒸留残液の製造】
1次仕込みでは前述の方法で製造した大麦麹（大麦として3トン）に、水3.6キロリットル及び酵母として焼酎酵母の培養菌体1kg（湿重量）を加えて1次もろみを得、得られた1次もろみを5日間の発酵（1段目の発酵）に付した。次いで、2次仕込みでは、上記1段目の発酵を終えた1次もろみに、水11.4キロリットル、前述の方法で製造した蒸麦（大麦として7トン）を加えて11日間の発酵（2段目の発酵）に付した。発酵温度は1次仕込み、2次仕込みとも25℃とした。上記2段目の発酵を終えた2次もろみを常法により単式蒸留に付し、大麦焼酎10キロリットルと大麦焼酎蒸留残液15キロリットルを得た。得られた大麦焼酎蒸留残液を以下の実験1乃至実験7に用いた。
【００２３】
【実験１】
前記【００２２】において得た大麦焼酎蒸留残液から以下に示す方法により有機溶媒不溶性画分を分画した。即ち、前記大麦焼酎蒸留残液を8000rpm、10minの条件で遠心分離して大麦焼酎蒸留残液の液体分を得、得られた液体分をオルガノ（株）製の合成吸着剤アンバーライトXAD-16を充填したカラムに通して吸着分離処理に付すことにより、該カラムの合成吸着剤に対して非吸着性を示す素通り液からなる合成吸着剤非吸着画分を分取した。得られた合成吸着剤非吸着画分1Lを凍結乾燥に付すことにより該合成吸着剤非吸着画分の凍結乾燥物57.2ｇを得た。
【００２４】
【実験２】
前記【００２２】において得た大麦焼酎蒸留残液から以下に示す方法により有機溶媒不溶性画分を分画した。即ち、前記大麦焼酎蒸留残液を8000rpm、10minの条件で遠心分離して大麦焼酎蒸留残液の液体分を得、得られた液体分をオルガノ（株）製の合成吸着剤アンバーライトXAD-16を充填したカラムに通して吸着分離処理に付すことにより、該カラムの合成吸着剤に対して非吸着性を示す素通り液からなる合成吸着剤非吸着画分を分取した。得られた合成吸着剤非吸着画分をBrix10に調整し、Brix10に調整した該合成吸着剤非吸着画分10Lを、5L容量のオルガノ（株）製アンバーライトIRC76（弱酸性陽イオン交換樹脂）を充填したカラムに通して、イオン交換樹脂非吸着画分を得、得られたイオン交換樹脂非吸着画分をBrix60に調整後、終濃度75容量%になるようにエタノールを加え、8000rpm、10minの条件で遠心分離して有機溶媒不溶性画分を分取し、該有機溶媒不溶性画分を凍結乾燥に付すことにより有機溶媒不溶性画分の凍結乾燥物53ｇを得た。
【００２５】
【実験３】
前記【００２２】において得た大麦焼酎蒸留残液から以下に示す方法により有機溶媒不溶性画分を分画した。即ち、前記大麦焼酎蒸留残液を8000rpm、10minの条件で遠心分離して大麦焼酎蒸留残液の液体分を得、得られた液体分をオルガノ（株）製の合成吸着剤アンバーライトXAD-16を充填したカラムに通して吸着分離処理に付すことにより、該カラムの合成吸着剤に対して非吸着性を示す素通り液からなる合成吸着剤非吸着画分を分取した。得られた合成吸着剤非吸着画分をBrix10に調整し、Brix10に調整した該合成吸着剤非吸着画分10Lを、5L容量のオルガノ（株）製アンバーライトIRA67（弱酸性陰イオン交換樹脂）を充填したカラムに通して、イオン交換樹脂非吸着画分を得、得られたイオン交換樹脂非吸着画分をBrix60に調整後、終濃度75容量%になるようにエタノールを加え、8000rpm、10minの条件で遠心分離して有機溶媒不溶性画分を分取し、該有機溶媒不溶性画分を凍結乾燥に付すことにより有機溶媒不溶性画分の凍結乾燥物59ｇを得た。
【００２６】
【実験４】
前記【００２２】において得た大麦焼酎蒸留残液から以下に示す方法により有機溶媒不溶性画分を分画した。即ち、前記大麦焼酎蒸留残液を8000rpm、10minの条件で遠心分離して大麦焼酎蒸留残液の液体分を得、得られた液体分をオルガノ（株）製の合成吸着剤アンバーライトXAD-16を充填したカラムに通して吸着分離処理に付すことにより、該カラムの合成吸着剤に対して非吸着性を示す素通り液からなる合成吸着剤非吸着画分を分取した。得られた合成吸着剤非吸着画分をBrix10に調整し、Brix10に調整した該合成吸着剤非吸着画分10Lを、5L容量のオルガノ（株）製アンバーライトIR120B（強酸性陽イオン交換樹脂）を充填したカラムに通して、イオン交換樹脂非吸着画分を得、得られたイオン交換樹脂非吸着画分をBrix60に調整後、終濃度75容量%になるようにエタノールを加え、8000rpm、10minの条件で遠心分離して有機溶媒不溶性画分を分取し、該有機溶媒不溶性画分を凍結乾燥に付すことにより有機溶媒不溶性画分の凍結乾燥物56ｇを得た。
【００２７】
【実験５】
前記【００２２】において得た大麦焼酎蒸留残液から以下に示す方法により有機溶媒不溶性画分を分画した。即ち、前記大麦焼酎蒸留残液を8000rpm、10minの条件で遠心分離して大麦焼酎蒸留残液の液体分を得、得られた液体分をオルガノ（株）製の合成吸着剤アンバーライトXAD-16を充填したカラムに通して吸着分離処理に付すことにより、該カラムの合成吸着剤に対して非吸着性を示す素通り液からなる合成吸着剤非吸着画分を分取した。得られた合成吸着剤非吸着画分をBrix10に調整し、Brix10に調整した該合成吸着剤非吸着画分10Lを、5L容量のオルガノ（株）製アンバーライト200CT（強酸性陽イオン交換樹脂）を充填したカラムに通して、イオン交換樹脂非吸着画分を得、得られたイオン交換樹脂非吸着画分をBrix60に調整後、終濃度75容量%になるようにエタノールを加え、8000rpm、10minの条件で遠心分離して有機溶媒不溶性画分を分取し、該有機溶媒不溶性画分を凍結乾燥に付すことにより有機溶媒不溶性画分の凍結乾燥物41ｇを得た。
【００２８】
【実験６】
前記【００２２】において得た大麦焼酎蒸留残液から以下に示す方法により有機溶媒不溶性画分を分画した。即ち、前記大麦焼酎蒸留残液を8000rpm、10minの条件で遠心分離して大麦焼酎蒸留残液の液体分を得、得られた液体分をオルガノ（株）製の合成吸着剤アンバーライトXAD-16を充填したカラムに通して吸着分離処理に付すことにより、該カラムの合成吸着剤に対して非吸着性を示す素通り液からなる合成吸着剤非吸着画分を分取した。得られた合成吸着剤非吸着画分をBrix10に調整し、Brix10に調整した該合成吸着剤非吸着画分10Lを、5L容量のオルガノ（株）製アンバーライトIRA402BL（最強塩基性陰イオン交換樹脂）を充填したカラムに通して、イオン交換樹脂非吸着画分を得、得られたイオン交換樹脂非吸着画分をBrix60に調整後、終濃度75容量%になるようにエタノールを加え、8000rpm、10minの条件で遠心分離して有機溶媒不溶性画分を分取し、該有機溶媒不溶性画分を凍結乾燥に付すことにより有機溶媒不溶性画分の凍結乾燥物23ｇを得た。
【００２９】
【実験７】
前記【００２２】において得た大麦焼酎蒸留残液から以下に示す方法により有機溶媒不溶性画分を分画した。即ち、前記大麦焼酎蒸留残液を8000rpm、10minの条件で遠心分離して大麦焼酎蒸留残液の液体分を得、得られた液体分をオルガノ（株）製の合成吸着剤アンバーライトXAD-16を充填したカラムに通して吸着分離処理に付すことにより、該カラムの合成吸着剤に対して非吸着性を示す素通り液からなる合成吸着剤非吸着画分を分取した。得られた合成吸着剤非吸着画分をBrix10に調整し、Brix10に調整した該合成吸着剤非吸着画分10Lを、3.5L容量のオルガノ（株）製アンバーライトIRC76（弱酸性陽イオン交換樹脂）と1.5L容量のオルガノ（株）製アンバーライトIRA67（弱塩基性陰イオン交換樹脂）を混合することにより得た混床イオン交換樹脂を充填したカラムに通して、混床イオン交換樹脂非吸着画分を得、得られた混床イオン交換樹脂非吸着画分をBrix60に調整後、終濃度75容量%になるようにエタノールを加え、8000rpm、10minの条件で遠心分離して有機溶媒不溶性画分を分取し、該有機溶媒不溶性画分を凍結乾燥に付すことにより有機溶媒不溶性画分の凍結乾燥物19ｇを得た。
【００３０】
上記実験1乃至実験7で得たそれぞれの凍結乾燥物について、以下の方法によりアルコール性肝障害に対する発症抑制作用を評価した。
即ち、7週齢Wistar系雄性ラット（日本チャールスリバー）80匹にエタノール含有率を徐々に上げながら（3%→4%→5%)エタノール含有液体飼料を6日間与えて飼育した後、引き続き5%エタノール含有液体飼料で4週間飼育を行い、該4週間目にそれらのラットのそれぞれについて採血を行い、血漿を分離して血清脂質を測定し、1群10匹として、対照群、試験群1乃至試験群7からなる8群に分けた。その際、前記各群におけるラットの平均体重に係る分散に統計学的有意差が生じないように前記80匹のラットを振り分けた。該対照群のラットに対しては前記エタノール含有液体飼料投与群と摂取カロリーを同一にするために前記5%エタノールの代わりにマルトース-デキストリン等量混合物を添加したエタノール非含有液体飼料を2週間与えて飼育した。試験群1乃至試験群7に対しては該エタノール非含有液体飼料に前記実験1乃至実験7で得たそれぞれの凍結乾燥物粉末1%を添加した液体飼料を2週間与えて飼育した。更に対照群、試験群1乃至試験群7とは別に前記7週齢Wistar系雄性ラット10匹からなる無処置群を設け、該無処置群のラットに対しては該エタノール非含有液体飼料を6週間与えて飼育した。但し、上記9群とも、各液体飼料の1日あたりの給餌量（摂取カロリー）を70ml（70kcal）に制限した。上記9群の全てについて、実験最終日（実験開始後6週間目）に、飼育したラットのそれぞれの腹部大動脈から採血を行い、肝臓を摘出した。採取した血液は血清分離後、血清総コレステロール、血清LDL-コレステロール、血清トリグリセリド、血清リン脂質、血清ALT(GPT)、及び血清AST(GOT)を測定した。また、摘出した肝臓については、肝臓重量、肝臓総コレステロール、肝臓トリグリセリド、及び肝臓リン脂質を測定した。得られた結果は平均値±標準誤差（SEM）で表し、統計処理は以下の手順で行った。即ち、無処置群と対照群の比較はStudent's test法を用いて解析し、次いで対照群に対する試験群1乃至試験群7の比較はTukey-Kramer法を用いて解析し、それぞれの解析において危険率0.05%以下を有意として判定した。更に、摘出した前記肝臓から採取した肝細胞をHE染色に付した後、オリンパス光学工業（株）製の生物顕微鏡BX51を用いて200倍の倍率で該肝細胞の形態観察を行った。
【００３１】
実験1乃至実験7で得たそれぞれの凍結乾燥物について、多糖類含量、多糖類由来のアラビノース及びキシロースの合計含量、及びアルコール性肝障害に対する発症抑制作用の実験結果から以下の事実が判明した。即ち、前記対照群と比較して、前記実験1乃至実験7で得た凍結乾燥物の全てにおいてアルコール性肝障害に対する発症抑制作用が認められた。この中で、前記実験5で得た凍結乾燥物を添加した液体飼料で飼育した試験群5において、極めて顕著なアルコール性肝障害に対する発症抑制効果が認められた。一方、前記実験1で得た凍結乾燥物を添加した液体飼料で飼育した試験群1においては、アルコール性肝障害に対する発症抑制効果の程度が最も低かった。
【００３２】
【多糖類含量の測定】
（多糖類由来のアラビノース及びキシロースの合計含量の測定）
そこで、上記実験1乃至実験7で得たそれぞれの凍結乾燥物について、多糖類含量、及び多糖類由来のアラビノース及びキシロースの合計含量を測定した。
即ち、前記実験1乃至実験7で得たそれぞれの凍結乾燥物0.05gにイオン交換水1mlを加えて溶解し、これに濃塩酸200μlを加えて、95℃、4時間の条件で加水分解を行い、0.80μmのメンブランフィルターでろ過してろ液を得、該ろ液を高速液体クロマトグラフに注入して、前記実験1乃至実験7で得たそれぞれの凍結乾燥物に含まれる多糖類の含量、及び多糖類由来のアラビノース及びキシロースの合計含量を求めた。高速液体クロマトグラフ分析は、Waters製Waters600を用い、検出器に昭和電工株式会社製示差屈折計RI-71を使用し、カラムはBioRad社製Aminex HPX-87H(300mm×7.8mm)を使用した。カラム温度は60℃とし、移動相には5mM硫酸を用い、流量は0.5ml/min、試料注入量は20μlとした。
【００３３】
実験1乃至実験7で得たそれぞれの凍結乾燥物の多糖類含量の測定結果、並びに、該多糖類由来のアラビノース及びキシロースの合計含量の測定結果から以下の事実が判明した。即ち、前記実験5で得た凍結乾燥物の多糖類含量、並びに、該多糖類由来のアラビノース及びキシロースの合計含量が、それぞれ最も高い値を示した。一方、前記実験1で得た凍結乾燥物の多糖類含量、並びに、該多糖類由来のアラビノース及びキシロースの合計含量が、それぞれ最も低い値を示した。更に、前記実験1乃至実験7で得た凍結乾燥物のそれぞれが有するアルコール性肝障害に対する発症抑制作用の強さは、該凍結乾燥物に含まれる多糖類由来のアラビノース及びキシロースの合計含量に比例して高まる傾向が認められることが明らかになった。
【００３４】
以上の結果から、前記実験1乃至実験7で得たそれぞれの凍結乾燥物が有するアルコール性肝障害に対する発症抑制作用は、該凍結乾燥物に含まれる、アラビノース及びキシロースを主たる構成要素とする多糖類に由来している可能性が極めて高いことが明らかになった。
【００３５】
【分子量分布の測定】
そこで、上記実験1乃至実験7で得たそれぞれの凍結乾燥物に含まれる、アラビノース及びキシロースを主たる構成要素とする多糖類の分子量を明らかにするために、それぞれの有機溶媒不溶性画分が有する分子量分布を測定した。
即ち、昭和電工株式会社製のShodex standard P-82（分子量1300乃至1660000）、及びマルトトリオース（分子量504）から成る分子量標準品をそれぞれ別々に0.1mol /L硝酸ナトリウム溶液に溶解して0.05W/V%濃度の標準液を得、該標準液を高速液体クロマトグラフに注入して検量線を作成した。次に、前記実験1乃至実験7で得たそれぞれの凍結乾燥物0.02gを用意し、これに0.1mol/L硝酸ナトリウム溶液10ml を加え、室温で一晩放置した後、孔径0.45μmのメンブランフィルターでろ過してろ液を得、該ろ液を高速液体クロマトグラフに注入して、システムインスツルメンツ株式会社製480データステーションGPCプログラムを用いて分子量分布を求めた。高速液体クロマトグラフ分析は、昭和電工株式会社製Shodex GPC SYSTEM-21 を用い、検出器に昭和電工株式会社製示差屈折計RI-71Sを使用し、カラムは東ソー株式会社製TSKgel GMPWXL(φ7.8mm×300mm)を2本連結して使用した。カラム温度は40℃とし、移動相には0.1mol/L硝酸ナトリウム溶液を用い、流量は1.0ml/min、試料注入量は100μlとした。
【００３６】
上記方法により実験1乃至実験7で得たそれぞれの凍結乾燥物についてそれぞれの分子量分布を測定した結果、該凍結乾燥物に含まれる多糖類由来のアラビノース及びキシロースの合計含量が高いほど、分子量10,000乃至100,000からなる画分の割合が高まることが判明した。
【００３７】
このようなことから、本発明者らは、前記凍結乾燥物に含まれる、アラビノース及びキシロースを主たる構成要素とする多糖類は、主として10,000乃至100,000の分子量を有しているのではないかと推測し、限外濾過を用いて、有機溶媒不溶性画分の分画精製を検討した。
[限外濾過による有機溶媒不溶性画分の分画精製]
実験1乃至実験7で得たそれぞれの凍結乾燥物について、上記方法により分子量分布を測定した結果、実験5で得た凍結乾燥物が、分子量10,000乃至100,000からなる画分の割合が最も高く、しかも多糖類由来のアラビノース及びキシロースの合計含量も最も高いことが判明した。そこで、以下に示す手順により、限外濾過処理を介した前記凍結乾燥物の分画精製を行った。
即ち、【００２２】で得た大麦焼酎蒸留残液を、8000rpm、10minの条件で遠心分離して大麦焼酎蒸留残液の液体分を得、得られた液体分をオルガノ（株）製の合成吸着剤アンバーライトXAD-16を充填したカラムに通して吸着分離処理に付すことにより、該カラムの合成吸着剤に対して非吸着性を示す素通り液からなる合成吸着剤非吸着画分を分取した。得られた合成吸着剤非吸着画分をBrix10に調整し、Brix10に調整した該合成吸着剤非吸着画分1Lを、500ml容量のオルガノ（株）製アンバーライト200CT（強酸性陽イオン交換樹脂）を充填したカラムに通して、イオン交換樹脂非吸着画分を得、得られたイオン交換樹脂非吸着画分をA/G テクノロジー社製の限外濾過膜UFP-30-E-4MA（分画分子量30,000）による処理に付して濃縮液を得、得られた濃縮液をBrix20に調整後、終濃度75容量%になるようにエタノールを加え、8000rpm、10minの条件で遠心分離して有機溶媒不溶性画分を分取し、該有機溶媒不溶性画分を凍結乾燥に付すことにより有機溶媒不溶性画分の凍結乾燥物1.3ｇを得た。
【００３８】
得られた凍結乾燥物について、【００３２】に記載の方法により、多糖類由来のアラビノース及びキシロースの合計含量を測定した。その結果、多糖類由来のアラビノース及びキシロースの合計含量は、78.5重量%にまで高まっていることが判明した。また、得られた凍結乾燥物について、【００３５】に記載の方法により分子量分布の測定を行った。その結果、該凍結乾燥物の分子量分布は100,000以上が11%、30,000乃至100,000が29%、10,000乃至30,000が24%、3,000乃至10,000が21%、1,000乃至3,000が6%、500乃至1,000が2%、500以下が7%であることが判明した。そして、得られたクロマトグラムの結果から、該凍結乾燥物のクロマトグラムは、分子量30,000乃至100,000の範囲に最も高いピークを有することが明らかになった。そこで、【００３０】に記載の方法により、【００３７】で得た凍結乾燥物のアルコール性肝障害に対する発症抑制作用を評価した。その結果、該凍結乾燥物が有するアルコール性肝障害に対する発症抑制作用は際立ったものであることが判明した。
【００３９】
以上の実験結果から、大麦焼酎蒸留残液の液体分から得られる前記有機溶媒不溶性画分からなる凍結乾燥物が有するアルコール性肝障害に対する前記発症抑制作用は、該有機溶媒不溶性画分からなる凍結乾燥物に含まれる、アラビノース及びキシロースを主たる構成要素とする多糖類に由来し、こうしたアラビノース及びキシロースを主たる構成要素とする多糖類を著量含有する組成物は、大麦を原料とする焼酎製造において副生する大麦焼酎蒸留残液を固液分離して液体分を得、該液体分を合成吸着剤を使用する吸着分離処理に付して合成吸着剤非吸着画分を得、該合成吸着剤非吸着画分をイオン交換樹脂を使用するイオン交換処理に付してイオン交換樹脂非吸着画分を得、得られたイオン交換樹脂非吸着画分を限外濾過膜を使用する限外濾過処理に付して濃縮液を得、該濃縮液に有機溶媒を添加することにより有機溶媒不溶性画分として分取できることが判明した。そして、該有機溶媒不溶性画分からなる凍結乾燥物は、成分分析の結果、多糖類78.5重量%、粗タンパク3.3重量%、有機酸0.2重量%、遊離糖類1.5重量%を含有し、該画分は多糖類を主たる成分として含有することが判った。
【００４０】
そこで、本発明者らは、アルコール性肝障害に対して発症抑制作用を有することが判明した前記合成吸着剤非吸着画分の凍結乾燥物粉末、及びアルコール性肝障害に対して際立った発症抑制作用を有することが判明した前記有機溶媒不溶性画分の凍結乾燥物粉末が、既に発症したアルコール性肝障害に対して治癒作用を有するか否かを明らかにするために、以下の実験を行った。
即ち、7週齢Wistar系雄性ラット（日本チャールスリバー）30匹にエタノール含有率を徐々に上げながら（3%→4%→5%)エタノール含有液体飼料を6日間与えて飼育した後、引き続き5%エタノール含有液体飼料で4週間飼育を行い、該4週間目にそれらのラットのそれぞれについて採血を行い、血漿を分離して血清脂質を測定し、1群10匹として、対照群、試験群1、及び試験群2からなる3群に分けた。その際、前記各群におけるラットの平均体重に係る分散に統計学的有意差が生じないように前記30匹のラットを振り分けた。該対照群のラットに対しては前記エタノール含有液体飼料投与群と摂取カロリーを同一にするために前記5%エタノールの代わりにマルトース-デキストリン等量混合物を添加したエタノール非含有液体飼料を2週間与えて飼育した。該試験群1に対しては該エタノール非含有液体飼料に前記合成吸着剤非吸着画分の凍結乾燥物粉末1%を添加した液体飼料を2週間与えて飼育した。該試験群2に対しては該エタノール非含有液体飼料に前記有機溶媒不溶性画分の凍結乾燥物粉末1%を添加した液体飼料を2週間与えて飼育した。更に対照群、試験群1及び試験群2とは別に前記7週齢Wistar系雄性ラット10匹からなる無処置群を設け、該無処置群のラットに対しては該エタノール非含有液体飼料を6週間与えて飼育した。但し、上記4群とも、各液体飼料の1日あたりの給餌量（摂取カロリー）を70ml（70kcal）に制限した。上記4群の全てについて、実験最終日（実験開始後6週間目）に、飼育したラットのそれぞれの腹部大動脈から採血を行い、肝臓を摘出した。採取した血液は血清分離後、血清総コレステロール、血清LDL-コレステロール、血清トリグリセリド、血清リン脂質、血清ALT(GPT)、及び血清AST(GOT)を測定した。また、摘出した肝臓については、肝臓重量、肝臓総コレステロール、肝臓トリグリセリド、及び肝臓リン脂質を測定した。得られた結果は平均値±標準誤差（SEM）で表し、統計処理は以下の手順で行った。即ち、無処置群と対照群の比較はStudent's test法を用いて解析し、次いで対照群に対するA群及びB群の比較はTukey-Kramer法を用いて解析し、それぞれの解析において危険率0.05%以下を有意として判定した。更に、摘出した前記肝臓から採取した肝細胞をHE染色に付した後、オリンパス光学工業（株）製の生物顕微鏡BX51を用いて200倍の倍率で該肝細胞の形態観察を行った。
【００４１】
その結果、対照群は、エタノール含有液体飼料を与えて飼育することにより上昇した血清総コレステロール濃度、血清LDL-コレステロール濃度、及び肝臓トリグリセリド濃度が僅かに低下するのみで、それぞれの正常値に近似する程度が極めて小なるものであった。一方、試験群1及び試験群2の血清総コレステロール濃度、血清LDL-コレステロール濃度、血清トリグリセリド濃度、血清リン脂質濃度、血清ALT（GPT）濃度、血清AST（GOT）濃度、及び肝臓総コレステロール濃度のそれぞれの値は、対照群のそれぞれの値と比較して有意に低い値、即ち、それぞれの正常値と実質的に同等の値を示し、特に、試験群2のほうが試験群1よりも更に正常値に近似した値を示した。また、試験群1及び試験群2においては、肝細胞の生物顕微鏡観察においても肝小葉の終末肝静脈周辺領域における肝細胞壊死と風船様腫大がほとんど認められなかった。
即ち、前記有機溶媒不溶性画分の凍結乾燥物粉末が有するアルコール性肝障害に対する治癒作用は、前記合成吸着剤非吸着画分の凍結乾燥物粉末が有する同作用を凌駕するものであることが明らかになった。
【００４２】
以上の実験結果から、大麦を原料とする焼酎の製造において副成する大麦焼酎蒸留残液を固液分離して液体分を得、該液体分を合成吸着剤を使用する吸着分離処理に付して合成吸着剤非吸着画分を得、該合成吸着剤非吸着画分をイオン交換樹脂を使用するイオン交換処理に付してイオン交換樹脂非吸着画分を得、該イオン交換樹脂非吸着画分を限外濾過膜を使用する限外濾過処理に付して濃縮液を得、該濃縮液に有機溶媒を添加することにより得られる有機溶媒不溶性画分が、アルコール性肝障害に対する極めて強力な発症抑制作用及び治癒作用を有することが判明した。当該事実から、大麦を原料とする焼酎の製造において副成する大麦焼酎蒸留残液を固液分離することにより得られる液体分は、アルコール性肝障害の発症抑制及び治癒に寄与する成分を含有し、該成分は、前記液体分を合成吸着剤を使用する吸着分離処理に付して合成吸着剤非吸着画分を得、該合成吸着剤非吸着画分をイオン交換樹脂を使用するイオン交換処理に付してイオン交換樹脂非吸着画分を得、該イオン交換樹脂非吸着画分を限外濾過膜を使用する限外濾過処理に付して濃縮液を得、該濃縮液に有機溶媒を添加することにより得られる有機溶媒不溶性画分の中に分画されて含有されることが判明した。
【００４３】
上述したように本発明者らは、大麦を原料とする焼酎製造において副成する大麦焼酎蒸留残液を固液分離することにより得られる液体分は、アルコール性肝障害の発症抑制及び治癒に寄与する成分を含有し、該成分は、前記液体分を合成吸着剤を使用する吸着分離処理に付して合成吸着剤非吸着画分を得、該合成吸着剤非吸着画分をイオン交換樹脂を使用するイオン交換処理に付してイオン交換樹脂非吸着画分を得、該イオン交換樹脂非吸着画分を限外濾過膜を使用する限外濾過処理に付して濃縮液を得、該濃縮液に有機溶媒を添加することにより得られる有機溶媒不溶性画分からなる組成物が、アルコール性肝障害に対して際立った発症抑制作用及び治癒作用を有することを見出した。大麦焼酎蒸留残液から得られる有機溶媒不溶性画分についてのこの発見は、今までに全く例のない新事実である。このように、本発明は、該有機溶媒不溶性画分を治療目的で医薬として使用できるという該有機溶媒不溶性画分の有用な用途を創出するものである。
【００４４】
本発明者らは、上記課題を達成すべく、実験を介して鋭意研究を重ねた結果、大麦を原料とする焼酎製造において副成する大麦焼酎蒸留残液を固液分離して液体分を得、該液体分を合成吸着剤を使用する吸着分離処理に付して合成吸着剤非吸着画分を得、該合成吸着剤非吸着画分をイオン交換樹脂を使用するイオン交換処理に付してイオン交換樹脂非吸着画分を得、該イオン交換樹脂非吸着画分を限外濾過膜を使用する限外濾過処理に付して濃縮液を得、該濃縮液に有機溶媒を添加することにより有機溶媒不溶性画分を分取し、該有機溶媒不溶性画分を成分分析に付した結果、多糖類78.5重量%、粗タンパク3.3重量%、有機酸0.2重量%、遊離糖類1.5重量%を含有し、該画分は多糖類を主たる成分として含有することが判った。
更に該有機溶媒不溶性画分を凍結乾燥に付した場合、白色の性状を有することが判明した。そして、こうした特徴を有する該有機溶媒不溶性画分は、アルコール誘発性肝障害に対して際立った発症抑制作用及び治癒作用を有することが判明した。本発明はこれらの判明した事実に基づくものである。
【００４５】
なお、特許文献1に記載の脂肪肝抑制作用を有する組成物は、本発明の組成物と同様に大麦焼酎蒸留残液から分取されるものである。しかし特許文献1に記載の該組成物が有する主たる成分は分子量3000以下のものであり、該組成物に含まれるヘミセルロースはキシロースを主たる構成要素とすることから、本発明の組成物とは明確に区別される別異のものである。
【００４６】
上述したように、特許文献2に記載のアルコール性脂肪肝抑制剤は、トウモロコシフスマから澱粉質及び蛋白質を除去した残部をアルカリ抽出することにより得られるヘミセルロースをキシラナーゼで処理することにより得られる部分分解物を有効成分とするものである。また、非特許文献4には、前記特許文献2に記載のトウモロコシフスマから得られたヘミセルロースの部分分解物（商品名セルエース）が、【０００４】に記載したとおり、キシロース、アラビノース、ウロン酸、ガラクトース、及びグルコースを含有するものであることが記載されている。よって、特許文献2と非特許文献4は、同じ「トウモロコシフスマから得られたヘミセルロースの部分分解物（商品名セルエース）」に係るものである。一方、本発明の組成物は、前記トウモロコシフスマとは全く異なる大麦焼酎蒸留残液から得られるものである。即ち、本発明の組成物は、特許文献2に記載のヘミセルロースの部分分解物の製造工程とは全く異なる製造工程を介して得られるものである。そして、本発明の組成物は、アラビノース、キシロース及びグルコースのみを含有し、特許文献2に記載のヘミセルロースの部分分解物が有するウロン酸を実質的に含有していない。よって、本発明の組成物は、特許文献2に記載の「トウモロコシフスマより得られたヘミセルロースの部分分解物」を有効成分とするアルコール性脂肪肝抑制剤から明確に区別される別異のものであることは明白である。
【００４７】
尚、非特許文献4には、「トウモロコシフスマより得られたヘミセルロースの部分分解物（商品名セルエース）」の分子量が約20万であることが記載されているが、当該分子量を決定づけるに至った実験データは全く記載されていない。そこで、本発明者らは、特許文献2において、ヘミセルロースの部分分解物が商品名「セルエース」（日本食品化工株式会社製）として市販されていることが記載されていることから、「セルエース」を入手し、前記【００３５】に記載の方法により該セルエースの分子量分布を測定した。その結果、該セルエースの分子量分布は、100万以上が1%、30万乃至100万が9%、100,000乃至30万が30%、30,000乃至100,000が30%、10,000乃至30,000が11%、3000乃至10,000が4%、1000乃至3000が2%、1000以下が13%であり、そのクロマトグラムは分子量100,000乃至30万の範囲にピークトップを有する単一のピークのみからなり、その重量平均分子量(Mw)は150,000であることが判明した。
一方、上述したように本発明の組成物の分子量分布は、100,000以上がわずか11%に過ぎず、分子量3,000乃至100,000からなる成分が全体の74%を占めている。しかも、本発明の組成物が示すクロマトグラムは、分子量30,000乃至100,000の範囲に最も高いピークを有している。
従って、本発明の組成物が有する分子量分布は、「セルエース」、即ち、トウモロコシフスマから得られたヘミセルロースの部分分解物からなる組成物が有する分子量分布とは全く異なる。また上述したように、本発明の組成物は、トウモロコシフスマから得られたヘミセルロースの部分分解物が含有するウロン酸を実質的に含有していない。この点からしても、本発明の組成物が、特許文献2に記載の「ヘミセルロースの部分分解物」からなるアルコール性脂肪肝抑制剤とは明らかに区別される別異のものであることは明白である。
【００４８】
【実施態様例】
本発明は上記目的を達成するものであり、アルコール性肝障害に対して強力な発症抑制作用及び治癒作用を有する組成物及びその製造方法を提供する。即ち、大麦を原料とする焼酎の製造において副成する大麦焼酎蒸留残液を固液分離して液体分を得、該液体分を合成吸着剤を使用する吸着分離処理に付して合成吸着剤非吸着画分を得、該合成吸着剤非吸着画分をイオン交換樹脂を使用するイオン交換処理に付してイオン交換樹脂非吸着画分を得、該イオン交換樹脂非吸着画分を限外濾過膜を使用する限外濾過処理に付して濃縮液を得、該濃縮液に有機溶媒を添加することにより得られる有機溶媒不溶性画分からなる、アルコール性肝障害に対して際立った発症抑制作用及び治癒作用を有する組成物及びその製造方法を提供する。また、本発明は、該組成物からなる医薬を提供する。
【００４９】
以下に、本発明の好ましい態様について述べるが、本発明はこれらに限定されるものではない。
本発明の組成物は以下のようにして製造される。即ち該組成物の製造方法は、大麦を使用する蒸留酒の製造において副成する大麦焼酎蒸留残液を固液分離して液体分を得る第1の工程、該液体分を合成吸着剤を使用する吸着分離処理に付して合成吸着剤非吸着画分を得る第2の工程、該合成吸着剤非吸着画分をイオン交換樹脂を使用するイオン交換処理に付してイオン交換樹脂非吸着画分を得る第3の工程、該イオン交換樹脂非吸着画分を限外濾過膜を使用する限外濾過処理に付して濃縮液を得る第4の工程、及び該濃縮液に有機溶媒を添加することにより有機溶媒不溶性画分を分取する第5の工程からなる。
以下に、本発明の該製造方法を実施する際に使用する、大麦を原料とする焼酎の製造において副成する大麦焼酎蒸留残液、及び各工程について詳述する。
【００５０】
本発明において使用する大麦焼酎蒸留残液は、代表的には、大麦又は精白大麦を原料として大麦麹及び蒸麦を製造し、得られた大麦麹及び蒸麦中に含まれるでんぷんを該大麦麹の麹により糖化し、それらを酵母によるアルコール発酵に付して焼酎熟成もろみを得、得られた焼酎熟成もろみを減圧蒸留または常圧蒸留等の単式蒸留装置を用いて蒸留する際に蒸留残渣として副生するもの、即ち、大麦焼酎の蒸留残液を意味する。
【００５１】
本発明において、大麦焼酎蒸留残液を得るに際して、大麦焼酎の製造に用いる大麦麹は、通常の大麦焼酎製造において行われている製麹条件で製造すればよく、用いる麹菌株としては、一般的に大麦焼酎製造で使用する白麹菌（Aspergillus kawachii）が好ましい。或いは泡盛製造で使用する黒麹菌（Aspergillus awamori）及び清酒製造等で使用する黄麹(Aspergillus oryzae）などのAspergillus属の菌株を用いることもできる。また大麦焼酎の製造に用いる酵母は、一般的に焼酎製造の際に使用する各種の焼酎醸造用酵母を使用することができる。
【００５２】
本発明において、大麦焼酎の製造における蒸留工程で得られた大麦焼酎蒸留残液を固液分離して液体分を得る第1の工程は、大麦焼酎蒸留残液から原料大麦、あるいは大麦麹由来の水不溶性の発酵残渣等のSS分を除去することを目的として行うものである。この第1の工程における当該固液分離は、スクリュープレス方式やローラープレス方式の固液分離方法によるか、或いはろ過圧搾式の固液分離機を用いて予備分離を行い、次いで遠心分離機、ケイソウ土ろ過装置、セラミックろ過装置、或いはろ過圧搾機等を用いて本発明により実施できる本固液分離処理を行う。
【００５３】
第1の工程で得られた大麦焼酎蒸留残液の液体分を合成吸着剤を使用した吸着分離処理に付すことにより合成吸着剤非吸着画分を得る第2の工程は、大麦焼酎蒸留残液の液体分に含まれているポリフェノール等の成分を除去することを目的として行うものである。この第2の工程で使用する合成吸着剤としては、芳香族系、芳香族系修飾型、或いはメタクリル系の合成吸着剤を用いることができる。第2の工程で使用する合成吸着剤の好適な具体例としては、オルガノ（株）製のアンバーライトXAD-4、アンバーライトXAD-16、アンバーライトXAD-1180及びアンバーライトXAD-2000、三菱化学（株）製のセパビーズSP850及びダイヤイオンHP20等の芳香族系（又はスチレン系とも言う）合成吸着剤、オルガノ（株）製のアンバーライトXAD-7及び三菱化学（株）製のダイヤイオンHP2MG等のメタクリル系（又はアクリル系とも言う）合成吸着剤を挙げることができる。これらの他、場合によっては三菱化学（株）製のセパピーズSP207等の芳香族系修飾型合成吸着剤を用いることができる。
【００５４】
第2の工程で得られた合成吸着剤非吸着画分をイオン交換樹脂を使用するイオン交換処理に付してイオン交換樹脂非吸着画分を得る第3の工程においては、該合成吸着剤非吸着画分に含まれるアミノ酸、ペプチド、タンパク質、及び有機酸を、イオン交換樹脂を用いて除去することを目的として行うものである。第3の工程で使用するイオン交換樹脂としては、陽イオン交換樹脂、陰イオン交換樹脂、或いは両者を混合した混床イオン交換樹脂を使用することができる。陽イオン交換樹脂の場合、強酸性陽イオン交換樹脂及び弱酸性陽イオン交換樹脂のいずれであっても使用することができ、陰イオン交換樹脂の場合、強塩基性陰イオン交換樹脂及び弱塩基性陰イオン交換樹脂のいずれであっても使用することができる。また混床イオン交換樹脂の場合には、上述した陽イオン交換樹脂と陰イオン交換樹脂を自由に組み合わせて所定の割合で混合して使用することができる。こうしたイオン交換樹脂の好適な具体例としては、オルガノ（株）製のアンバーライト200CT及びアンバーライトIR120B等の強酸性陽イオン交換樹脂、アンバーライトIRC76等の弱酸性陽イオン交換樹脂、アンバーライトIRA402BL等の最強塩基性陰イオン交換樹脂、アンバーライトIRA67等の弱塩基性陰イオン交換樹脂、或いは、前記弱酸性陽イオン交換樹脂と前記弱塩基性陰イオン交換樹脂の両者を所定の割合で混合することにより得られる混床型イオン交換樹脂等を用いることができる。これらのうち、大麦焼酎蒸留残留液に含まれているアミノ酸やペプチド等を除去する観点においては、前記弱酸性陽イオン交換樹脂アンバーライトIRC76と前記弱塩基性陰イオン交換樹脂アンバーライトIRA67の両者を所定の割合で混合することにより得られる混床型イオン交換樹脂、或いは、強酸性陽イオン交換樹脂アンバーライト200CTを使用することが特に好ましい。
【００５５】
第3の工程で得られた該イオン交換樹脂非吸着画分を限外濾過膜を使用する限外濾過処理に付して濃縮液を得る第4の工程においては、NK細胞賦活化作用に関与する成分である、アラビノース及びキシロースを主たる構成要素とする多糖類を限外濾過膜を用いて濃縮することを目的として行うものである。第4の工程で使用する限外濾過膜としては、いかなる膜材質及び膜モジュール型式のものであっても使用することができ、分画分子量は、好ましくは3000以上、特に好ましくは10,000乃至50,000のものを使用することができる。
【００５６】
第4の工程で得られた濃縮液に有機溶媒を添加することにより有機溶媒不溶性画分を分取する第5の工程においては、適宜の有機溶媒を所定の終濃度になるまで添加する。この場合、有機溶媒はエタノールが至適であるが、これに限定されるものではない。有機溶媒の終濃度は成分の生産効率に影響し、該有機溶媒の最適終濃度は、好ましくは5容量%以上、より好ましくは、30乃75容量%である。
【００５７】
このようにして得られる本発明の組成物である上記有機溶媒不溶性画分はそのままの状態で、或いはこれを凍結乾燥等に付すことにより乾燥物粉末にして、アルコール性肝障害に対する強力な発症抑制作用及び治癒作用を有する医薬として使用することができる。
【００５８】
【実施例】
以下に実施例を挙げて本発明を具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例によって何ら限定されるものではない。
【００５９】
【実施例１】
前記【００２２】において得た大麦焼酎蒸留残液を、8000rpm、10minの条件で遠心分離して大麦焼酎蒸留残液の液体分を得、得られた液体分をオルガノ（株）製の合成吸着剤アンバーライトXAD-16を充填したカラムに通して吸着分離処理に付すことにより、該カラムの合成吸着剤に対して非吸着性を示す素通り液からなる合成吸着剤非吸着画分を分取した。得られた合成吸着剤非吸着画分をBrix10に調整後、Brix10に調整した該合成吸着剤非吸着画分1Lを、500ml容量のオルガノ（株）製アンバーライト200CT（強酸性陽イオン交換樹脂）を充填したカラムに通して、イオン交換樹脂非吸着画分を得、得られたイオン交換樹脂非吸着画分をA/G テクノロジー社製の限外濾過膜UFP-30-E-4MA（分画分子量30,000）による処理に付して濃縮液を得、得られた濃縮液をBrix20に調整後、終濃度75容量%になるようにエタノールを加え、8000rpm、10minの条件で遠心分離して有機溶媒不溶性画分を分取し、該有機溶媒不溶性画分を凍結乾燥に付すことにより有機溶媒不溶性画分の凍結乾燥物1.3ｇを得た。該凍結乾燥物を粉砕し灰白色で無味無臭の組成物を得た。
【００６０】
【比較例１】
前記【００２２】において得た大麦焼酎蒸留残液を8000rpm、10minの条件で遠心分離して大麦焼酎蒸留残液の液体分を得、得られた液体分をオルガノ（株）製の合成吸着剤アンバーライトXAD-16を充填したカラムに通して吸着分離処理に付すことにより、該カラムの合成吸着剤に対して非吸着性を示す素通り液からなる合成吸着剤非吸着画分を分取した。得られた合成吸着剤非吸着画分1Lを凍結乾燥に付すことにより該合成吸着剤非吸着画分の凍結乾燥物57.2ｇを得た。該凍結乾燥物を粉砕し灰白色で無味無臭の組成物を得た。
【００６１】
実施例1で得た凍結乾燥物粉末（組成物）、及び比較例1で得た凍結乾燥物粉末のそれぞれを以下の試験例1に供し、アルコール性肝障害に対する発症抑制作用を評価した。
【００６２】
【試験例１】
本発明の組成物が有するアルコール性肝障害の発症に対する顕著な抑制作用を明らかにするために以下の試験例1を行った。
即ち、3週齢Wistar系雄性ラット（日本SLC）36匹にエタノール含有率を徐々に上げながら（3%→4%→5%)エタノール含有液体飼料を6日間与えた後、1群12匹として、対照群、試験群1、及び試験群2からなる3群に分けた。その際、前記各群におけるラットの平均体重に係る分散に統計学的有意差が生じないように前記36匹のラットを振り分けた。対照群のラットに対しては5%エタノール含有液体飼料を4週間与えて飼育した。試験群1のラットに対しては5%エタノール含有液体飼料に実施例1で得た凍結乾燥物粉末1%を添加した液体飼料を4週間与えて飼育した。試験群2のラットに対しては5%エタノール含有液体飼料に比較例1で得た凍結乾燥物粉末1%を添加した液体飼料を4週間与えて飼育した。対照群、試験群1、及び試験群2とは別に前記3週齢Wistar系雄性ラット12匹からなる無処置群を設け、該無処置群のラットに対しては他の3群と摂取カロリーを同一にするために5%エタノールの代わりにマルトース-デキストリン等量混合物を添加したエタノール非含有液体飼料を4週間与えて飼育した。但し、上記4群とも、各液体飼料の1日あたりの給餌量（摂取カロリー）を70ml（70kcal）に制限した。実験最終日（試験開始後4週間目）に、飼育したラットのそれぞれの腹部大動脈から採血を行い、肝臓を摘出した。採取した血液は血清分離後、血清総コレステロール、血清HDL-コレステロール、血清LDL-コレステロール、血清トリグリセリド、血清リン脂質、血清遊離脂肪酸、及び血清ALTを測定した。また、摘出した肝臓については、肝臓重量、肝臓総コレステロール、肝臓トリグリセリド、及び肝臓リン脂質を測定した。得られた結果は平均値±標準誤差（SEM）で表し、統計処理は以下の手順で行った。即ち、無処置群と対照群の比較はStudent's test法を用いて解析し、次いで対照群に対する試験群1及び試験群2の比較はTukey-Kramer法を用いて解析し、それぞれの解析において危険率0.05%以下を有意として判定した。更に、摘出した前記肝臓から採取した肝細胞をHE染色に付した後、オリンパス光学工業（株）製の生物顕微鏡BX51を用いて200倍の倍率で該肝細胞の形態観察を行った。
【００６３】
【評価１】
上記で得られた血清総コレステロール、血清HDL-コレステロール、血清LDL-コレステロール、血清トリグリセリド、血清リン脂質、血清遊離脂肪酸、及び血清ALTの測定結果を表1に示し、肝臓重量、肝臓総コレステロール、肝臓トリグリセリド、及び肝臓リン脂質の測定結果から以下の事実が判明した。
即ち、対照群は、無処置群と比較して、血清総コレステロール濃度、血清HDL-コレステロール濃度、血清LDL-コレステロール濃度、血清トリグリセリド濃度及び血清リン脂質濃度が有意に増加して、アルコール性高脂血症が誘発されていることが判明した。また、対照群は、無処置群と比較して、肝臓トリグリセリド濃度及び肝臓リン脂質濃度が有意に増加して、アルコール性脂肪肝が誘発されていることが判明した。更に、対照群は、無処置群と比較して、血中ALT(GPT)濃度が有意に増加し、肝細胞の生物顕微鏡観察においては肝小葉の終末肝静脈周辺領域における肝細胞壊死と風船様腫大が顕著に認められ、アルコール性肝炎が誘発されていることが判明した。一方、試験群1及び試験群2は、血清LDL-コレステロール濃度、血清トリグリセリド濃度、及び肝臓トリグリセリド濃度の上昇が有意に抑制され、特に、試験群1のほうが試験群2よりも更に正常値に近似した値を示した。また、試験群1及び試験群2には、肝細胞の生物顕微鏡観察においてもアルコール性肝障害に特異的に認められる肝小葉の終末肝静脈周辺領域における肝細胞壊死と風船様腫大がほとんど認められなかった。
【００６４】
以上の結果から、実施例1で得た本発明の凍結乾燥物粉末は、比較例1で得た凍結乾燥物粉末よりも、アルコール性肝障害の誘発を更に著しく抑制し、アルコール性肝障害に対して卓越した発症抑制作用を示すことが判明した。
即ち、本発明の組成物は、アルコール性肝障害に対して際立った発症抑制作用を有することが明らかとなった。
【００６５】
実施例1で得た凍結乾燥物粉末（組成物）及び比較例1で得た凍結乾燥物粉末のそれぞれを以下の試験例2に供し、アルコール性肝障害に対する治癒作用を評価した。
【００６６】
【試験例２】
本試験例では、エタノール含有液体飼料で4週間飼育することによりアルコール性肝障害を発症したラットについて、実施例1で得た凍結乾燥物粉末（本発明の組成物）及び比較例1で得た凍結乾燥物粉末のそれぞれを用いて飼育することにより、アルコール性肝障害に対する治癒作用を評価した。
即ち、7週齢Wistar系雄性ラット（日本チャールスリバー）30匹にエタノール含有率を徐々に上げながら（3%→4%→5%)エタノール含有液体飼料を6日間与えて飼育した後、引き続き5%エタノール含有液体飼料で4週間飼育を行い、該4週間目にそれらのラットのそれぞれについて採血を行い、血漿を分離して血清脂質を測定した。その後該30匹のラットを1群10匹として、対照群、試験群1及び試験群2の3群に振り分けた。その際、前記各群におけるラットの平均体重に係る分散に統計学的有意差が生じないように該30匹のラットを振り分けた。対照群のラットに対しては前記エタノール含有液体飼料投与群と摂取カロリーを同一にするために5%エタノールの代わりにマルトース-デキストリン等量混合物を添加したエタノール非含有液体飼料を2週間与えて飼育した。試験群1のラットに対してはエタノール非含有液体飼料に実施例1で得た凍結乾燥物粉末1%を添加した液体飼料を2週間与えて飼育した。試験群2のラットに対してはエタノール非含有液体飼料に比較例1で得た凍結乾燥物粉末1%を添加した液体飼料を2週間与えて飼育した。更に対照群、試験群1及び試験群2とは別に前記7週齢Wistar系雄性ラット10匹からなる無処置群を設け、無処置群のラットに対してはエタノール非含有液体飼料を6週間与えて飼育した。但し、上記4群とも、各液体飼料の1日あたりの給餌量（摂取カロリー）を70ml（70kcal）に制限した。上記4群の全てについて、実験最終日（実験開始後6週間目）に、飼育したラットのそれぞれの腹部大動脈から採血を行い、肝臓を摘出した。採取した血液は血清分離後、血清総コレステロール、血清LDL-コレステロール、血清トリグリセリド、血清リン脂質、血清ALT(GPT)、及び血清AST(GOT)を測定した。また、摘出した肝臓については、肝臓重量、肝臓総コレステロール、肝臓トリグリセリド、及び肝臓リン脂質を測定した。得られた結果は平均値±標準誤差（SEM）で表し、統計処理は以下の手順で行った。即ち、無処置群と対照群の比較はStudent's test法を用いて解析し、次いで対照群に対する試験群1及び試験群2の比較はTukey-Kramer法を用いて解析し、それぞれの解析において危険率0.05%以下を有意として判定した。更に、摘出した前記肝臓から採取した肝細胞をHE染色に付した後、オリンパス光学工業（株）製の生物顕微鏡BX51を用いて200倍の倍率で該肝細胞の形態観察を行った。
【００６７】
【評価２】
上記で得られた血清総コレステロール、血清LDL-コレステロール、血清トリグリセリド、血清リン脂質、血清ALT、及び血清ASTの測定結果、並びに、肝臓重量、肝臓総コレステロール、肝臓トリグリセリド、及び肝臓リン脂質の測定結果から以下の事実が判明した。
即ち、対照群は、血清総コレステロール及び血清LDL-コレステロールが無処置群よりも有意に高い値を示し、血清トリグリセリド及び血清リン脂質も無処置群よりも高まる傾向が認められ、肝細胞の生物顕微鏡観察においてはアルコール性肝障害に特異的に認められる肝小葉の終末肝静脈周辺領域における肝細胞壊死と風船様腫大が顕著に観察された。一方、試験群1及び試験群2は、血清総コレステロール濃度、血清LDL-コレステロール濃度、血清トリグリセリド濃度、血清リン脂質濃度、血清ALT濃度、血清AST濃度、肝臓総コレステロール濃度、及び肝臓トリグリセリド濃度が、対照群と比較して有意に低い値を示し、特に、試験群1のほうが試験群2よりも更に正常値に近似した値を示した。また、試験群1及び試験群2は、肝細胞の生物顕微鏡観察においてはアルコール性肝障害に特異的に認められる肝小葉の終末肝静脈周辺領域における肝細胞壊死と風船様腫大が対照群と比較して著しく減少しているのが観察された。
以上の結果から、実施例1で得た本発明の凍結乾燥物粉末は、比較例1で得た凍結乾燥物粉末を凌駕し、アルコール性肝障害を更に著しく治癒し、アルコール性肝障害に対して際立った治癒作用を示すことが判明した。
即ち、本発明の組成物は、アルコール性肝障害に対して卓越した治癒作用を有するものであることが判明した。
【００６８】
実施例1で得た凍結乾燥物粉末（組成物）及び比較例1で得た凍結乾燥物粉末のそれぞれを以下の試験例3に供し、アルコール性肝障害に対する治癒作用を試験例2とは異なる方法で評価した。
【試験例３】
7週齢Wistar系雄性ラット（日本チャールスリバー）30匹にエタノール含有率を徐々に上げながら（3%→4%→5%)エタノール含有液体飼料を6日間与えて飼育した後、引き続き5%エタノール含有液体飼料で4週間飼育を行い、該4週間目にそれらのラットのそれぞれについて採血を行い、血漿を分離して血清脂質を測定した。その後、該30匹のラットを1群10匹として、対照群、試験群1及び試験群2の3群に振り分けた。その際、前記各群におけるラットの平均体重に係る分散に統計学的有意差が生じないように該30匹のラットを振り分けた。対照群のラットに対しては5%エタノール含有液体飼料を2週間与えて飼育した。試験群1のラットに対しては5%エタノール含有液体飼料に実施例1で得た凍結乾燥物粉末1%を添加した液体飼料を2週間与えて飼育した。試験群2のラットに対しては5%エタノール含有液体飼料に比較例1で得た凍結乾燥物粉末1%を添加した液体飼料を2週間与えて飼育した。更に対照群、試験群1及び試験群2とは別に7週齢Wistar系雄性ラット10匹からなる無処置群を設け、該無処置群のラットに対しては、前記5%エタノール含有液体飼料と摂取カロリーを同一にするために5%エタノールの代わりにマルトース-デキストリン等量混合物を添加したエタノール非含有液体飼料を6週間与えて飼育した。但し、上記4群とも、各液体飼料の1日あたりの給餌量（摂取カロリー）を70ml（70kcal）に制限した。上記4群の全てについて、実験最終日（実験開始後6週間目）に、飼育したラットのそれぞれの腹部大動脈から採血を行い、肝臓を摘出した。採取した血液は血清分離後、血清総コレステロール、血清LDL-コレステロール、血清トリグリセリド、血清リン脂質、血清ALT、及び血清ASTを測定した。また、摘出した肝臓については、肝臓重量、肝臓総コレステロール、肝臓トリグリセリド、及び肝臓リン脂質を測定した。得られた結果は平均値±標準誤差（SEM）で表し、統計処理は以下の手順で行った。即ち、無処置群と対照群の比較はStudent's test法を用いて解析し、次いで対照群に対する試験群1及び試験群2の比較はTukey-Kramer法を用いて解析し、それぞれの解析において危険率0.05%以下を有意として判定した。更に、摘出した前記肝臓から採取した肝細胞をHE染色に付した後、オリンパス光学工業（株）製の生物顕微鏡BX51を用いて200倍の倍率で該肝細胞の形態観察を行った。
【００６９】
【評価３】
上記で得られた血清総コレステロール、血清LDL-コレステロール、血清トリグリセリド、血清リン脂質、血清ALT、及び血清ASTの測定結果、並びに、肝臓重量、肝臓総コレステロール、肝臓トリグリセリド、及び肝臓リン脂質の測定結果から以下の事実が判明した。
即ち、対照群は、無処置群と比較して、血清総コレステロール濃度、血清LDL-コレステロール濃度、血清トリグリセリド濃度、血清リン脂質濃度、血清ALT濃度、肝臓重量、肝臓総コレステロール濃度、及び肝臓トリグリセリド濃度が有意に高い値を示し、肝細胞の生物顕微鏡観察においてはアルコール性肝障害に特異的に認められる肝小葉の終末肝静脈周辺領域における肝細胞壊死と風船様腫大が顕著に認められた。一方、試験群1及び試験群2は、血清トリグリセリド濃度、血清総コレステロール濃度、血清リン脂質濃度、血清LDL-コレステロール濃度、及び肝臓総コレステロール濃度及び肝臓トリグリセリド濃度が、対照群と比較して有意に低い値を示し、特に、試験群1のほうが試験群2よりも更に正常値に近似した値を示した。また、試験群1及び試験群2は、肝細胞の生物顕微鏡観察においてはアルコール性肝障害に特異的に認められる肝小葉の終末肝静脈周辺領域における肝細胞壊死と風船様腫大が対照群と比較して著しく減少しているのが観察された。
以上の結果から、実施例1で得た本発明の凍結乾燥物粉末は、比較例1で得た凍結乾燥物粉末を凌駕し、アルコール性肝障害を更に著しく治癒し、アルコール性肝障害に対して際立った治癒作用を示すことが判明した。
即ち、本発明の組成物は、アルコール性肝障害に対して卓越した治癒作用を有するものであることが判明した。
【００７０】
以上、試験例1に述べた結果から明らかなように、本発明の組成物は大麦焼酎蒸留残液の液体分を合成吸着剤を使用する吸着分離処理に付すことにより得られる合成吸着剤非吸着画分を卓越した強力なアルコール性肝障害の発症抑制作用を有し、エタノール投与によるアルコール性肝障害の発症を強力に抑制することが判明した。さらに試験例2及び試験例3に述べた結果から明らかなように、本発明の組成物は、既に発症したアルコール性肝障害を顕著に治癒することが判明した。
【００７１】
【使用例１】
実施例1で得た凍結乾燥物粉末を用い、以下に記す材料配合割合で他の担体材料と混合し、打錠機を用いて医薬用錠剤を作製した。
材料配合割合：実施例1で得た凍結乾燥物粉末35重量％、シュガーエステル5重量％、オリゴ糖30重量％、乳糖30重量％
【００７２】
【発明の効果】
以上、詳述したように本発明の大麦を原料とする焼酎製造において副成する大麦焼酎蒸留残液を固液分離して液体分を得、該液体分を合成吸着剤を使用する吸着分離処理に付して合成吸着剤非吸着画分を得、該合成吸着剤非吸着画分をイオン交換樹脂を使用するイオン交換処理に付してイオン交換樹脂非吸着画分を得、該イオン交換樹脂非吸着画分を限外濾過膜を使用する限外濾過処理に付して濃縮液を得、該濃縮液に有機溶媒を添加することにより得られる有機溶媒不溶性画分からなる組成物は、アルコール性肝障害の発症に対しての著しい抑制作用及び治癒作用を有す。[0001]
[Technical field to which the invention belongs]
In the present invention, a barley shochu distillation residue produced as a by-product in the production of shochu using barley as a raw material is subjected to solid-liquid separation to obtain a liquid component, and the liquid component is subjected to an adsorption separation process using a synthetic adsorbent. A non-adsorbed fraction is obtained, and the synthetic adsorbent non-adsorbed fraction is subjected to an ion exchange treatment using an ion exchange resin to obtain an ion-exchange resin non-adsorbed fraction. An ultrafiltration treatment using a filtration membrane to obtain a concentrated solution, and an organic solvent-insoluble fraction fractionated by adding an organic solvent to the concentrated solution. And a method for producing the same.
[0002]
[Prior art]
With the increase in consumption of alcoholic beverages in recent years, the number of alcoholic liver disorders has been increasing and has been recognized as one of lifestyle-related diseases. Specific symptoms of such alcoholic liver disorders include alcoholic fatty liver, alcoholic hepatitis, alcoholic liver fibrosis, alcoholic cirrhosis, or alcoholic hyperlipidemia induced by alcoholic fatty liver it can. And it is known that when alcoholic fatty liver progresses chronically, it shifts to alcoholic liver fibrosis in which fibers are formed around hepatocytes, and the amount of blood entering the hepatocytes decreases in the alcoholic liver fibrosis. It is known that when the protein synthesis ability and the toxic substance resolution of the liver decrease, the liver gradually becomes hard and denatured, resulting in alcoholic cirrhosis.
[0003]
By the way, the following things are known about the liver injury preventive action of the barley shochu distillation residual liquid by-produced when manufacturing barley shochu. That is, it has been reported that the barley shochu distillation residue suppresses lipid accumulation in the liver of rats by administration of orotic acid [see the Annual Meeting of the Japanese Society of Nutrition and Food Science, Vol. 53, 53 (1999) (Hereinafter, this document will be referred to as Non-Patent Document 1, and will be described separately in the following [0005]). Furthermore, the above-mentioned fatty liver inhibitory action of the barley shochu distillation residue is stronger than that of wine koji or beer koji, and this action is not observed at all in shochu distillate residue, but is extremely small in rice shochu distillation residue. Therefore, it is reported that it is peculiar only to the barley shochu distillation residue [see the Journal of the Japan Brewing Association, Vol.94, No.9, 768 (1999)]. 2 and will be described separately in the later [0005]). In addition, the barley shochu distillation residue has an onset-inhibiting action against D-galactosamine-induced liver damage, which is known to exhibit the same symptoms as viral hepatopathy, and the onset-inhibiting action is the barley shochu distillation residue. It has been reported that the liquid content obtained by subjecting the liquid to centrifugation [see Japan Brewing Association Journal, Vol. 95, No. 9, 706 (2000)] (hereinafter referred to as non-patent literature) 3 and will be described separately in the following [0005]).
Japanese Patent Laid-Open No. 2001-145472 discloses that a barley shochu distillation residue obtained as a by-product in the production of shochu using barley as a raw material is subjected to solid-liquid separation to obtain a liquid, and an alkali is added to the liquid to obtain an alkali-soluble fraction. The neutral soluble fraction was neutralized with an acid to obtain a neutral soluble fraction, and the organic acid, protein, and hemicellulose separated by adding ethanol to the neutral soluble fraction were collected. It is described that the composition comprising the ethanol-insoluble fraction contained has an inhibitory effect on the development of orotic acid-induced liver injury in experiments using rats (hereinafter, this publication is referred to as Patent Document 1). , Which will be described separately in [0005] described later).
[0004]
Japanese Patent No. 3319156 describes that an alcoholic fatty liver inhibitor mainly composed of a partial degradation product of hemicellulose obtained from corn bran has the effect of inhibiting fatty liver against the formation of fatty liver in rats by ethanol solution administration. (Hereinafter, this publication will be referred to as Patent Document 2 and will be described separately in the later-mentioned paragraph [0005]). Patent Document 2 describes that a partially decomposed product of hemicellulose obtained from the corn bran is sold under the trade name “Cel Ace”. [3 pages published by the Confectionery Technology Center in March 1991, "Commissioned by the Ministry of Agriculture, Forestry and Fisheries, Food Distribution Bureau, No. 8 Functional Material Effective Use Technology for Food and Drink, Water-soluble Corn Fiber (Arabinoxylan)" on page 3] The partially decomposed product of hemicellulose obtained from corn bran sold under the trade name `` Celace '' is mainly composed of arabinoxylan consisting of arabinose and xylose, xylose 40.32%, arabinose 27.76%, uronic acid 11.86%, galactose 5.91 % And glucose 2.30% (hereinafter referred to as Non-Patent Document 4 and separately described in the following [0005]). Further, [New Food Industry Vol.42 No.9, 6 (2000)] describes a partial degradation product of hemicellulose obtained from corn bran marketed under the trade name “Cel Ace”. (Hereinafter, this document will be referred to as Non-Patent Document 5 and will be described separately in the following [0005]).
[0005]
[Patent Document 1]
Japanese Patent Laid-Open No. 2001-145472
[Patent Document 2]
Patent No.3191956
[Non-Patent Document 1]
Abstracts of Annual Meeting of Japanese Society of Nutrition and Food Science, Vol.53, 53 (1999)
[Non-Patent Document 2]
Journal of Japan Brewing Association, Vol.94, No.9, 768 (1999)
[Non-Patent Document 3]
Journal of Japan Brewing Association, Vol.95, No.9, 706 (2000)
[Non-Patent Document 4]
March, 1991 Issued by the Confectionery Technology Center “Commissioned by the Ministry of Agriculture, Forestry and Fisheries, Food Distribution Bureau, No.8 Technology for Effective Use of Functional Materials for Food and Drink, Water-soluble Corn Fiber (Arabinoxylan)”, page 3
[Non-Patent Document 5]
New Food Industry Vol.42 No.9, 6 (2000)
[0006]
[Problems to be solved by the invention]
As described above, the non-patent document 1 to non-patent document 3 describe the barley shochu distillation residue obtained by solid-liquid separating the barley shochu distillation residue or the barley shochu distillation residue. The liquid components (hereinafter referred to as the liquid components of the barley shochu distillation residue) have an onset inhibitory action against orotic acid-induced liver injury and D-galactosamine-induced liver injury. However, there is no suggestion as to whether or not it has a suppressive action and a curative action on alcoholic liver damage. Patent Document 1 describes that the ethanol-insoluble fraction has a suppressive action against orotic acid-induced liver injury, but the ethanol-insoluble fraction has a suppressive action and a healing effect against the alcoholic liver injury. There is no suggestion as to whether or not it has. That is, no example has been known so far in which a fraction having an onset-inhibiting action and a healing action against alcoholic liver damage is fractionated from the barley shochu distillation residue.
[0007]
By the way, it is known that orotic acid-induced liver injury is a liver injury that promotes fatty synthesis in the liver by orotic acid and further suppresses the transfer of fat from the liver to the blood, thereby inducing fatty liver. It has been. Moreover, it is known that D-galactosamine-induced liver injury is liver injury in which hepatocyte necrosis is promoted by D-galactosamine, thereby inducing hepatitis.
[0008]
On the other hand, the alcoholic liver disorder referred to in the present invention includes alcoholic hepatitis, alcoholic fatty liver, and alcoholic hyperlipidemia induced by excessive intake of alcohol. The alcoholic fatty liver promotes the transfer of fatty acids from adipose tissue to the liver by ethanol, promotes the synthesis of fatty acids and neutral fats in the liver, and further suppresses the degradation of fatty acids in the liver, etc. It is known to be fatty liver induced by accumulation of neutral fat in the liver. It is known that the alcoholic hepatitis is hepatitis induced by the fact that acetaldehyde or acetic acid, which is a metabolite of ethanol, or active oxygen generated when these are produced is toxic to hepatocytes. ing. Moreover, the alcoholic hyperlipidemia is caused by excessive release of neutral fat accumulated in the liver as described above to be released into the blood in a large amount as a secreted very low density lipoprotein (VLDL). It is known to be a thing. In such alcoholic liver disorders, hepatic lesions such as balloon-like swelling and hepatocyte necrosis, or findings of fatty liver consisting of hepatocytes containing large droplets of lipid droplets are the areas around the terminal hepatic veins of hepatic lobule It is known that progress will be centered on. The liver mainly consists of hepatocytes and functions as a unit of hepatic lobule separated by connective tissue between lobule, and the liver is made up of many hepatic lobule about 1mm in diameter. Therefore, according to the causal relationship between these liver disorders, alcoholic liver disorders are objectively distinguished from orotic acid-induced liver disorders and D-galactosamine-induced liver disorders. Even if it has been found that orotic acid-induced hepatic disorder or D-galactosamine-induced hepatic disorder has an onset-suppressing action or curative action, the component also has similar onset-suppressing action or cure for alcoholic liver disorder Whether or not it has an effect cannot be easily predicted.
[0009]
In view of such conventional technology, the present invention solid-liquid separates barley shochu distillation residual liquid to obtain a liquid component, which is subjected to an adsorption separation process using a synthetic adsorbent, and does not adsorb a synthetic adsorbent. A fraction is obtained, the synthetic adsorbent non-adsorbed fraction is subjected to an ion exchange treatment using an ion exchange resin to obtain an ion exchange resin non-adsorbed fraction, and the ion exchange resin non-adsorbed fraction is subjected to an ultrafiltration membrane. An organic solvent-insoluble fraction having a potent onset-inhibiting action and healing action against alcoholic liver damage, obtained by subjecting to ultrafiltration treatment using a lyophilized solution, and being collected by adding an organic solvent to the concentrated liquid It aims at providing the composition which consists of minutes.
[0010]
[Means for Solving the Problems]
The present inventors describe that the liquid content of the barley shochu distillation residue has a suppressive action against D-galactosamine-induced liver injury and orotic acid-induced liver injury in References 1 to 3. In view of the above, for the purpose of clarifying whether or not the liquid content of the barley shochu distillation residue exhibits an onset-inhibiting action against alcoholic liver injury, intensive studies were conducted through experiments. As a result, the liquid content of the barley shochu distillation residual liquid has a slight inhibitory action against the alcoholic liver disorder, but the actual use as a drug for the purpose of actively suppressing the development of alcoholic liver disorder. It turned out not to be suggestive.
[0011]
By the way, the three of the present inventors, together with the other two, adsorbed fraction obtained by subjecting the liquid content of the barley shochu distillation residue to an adsorption separation process using a synthetic adsorbent is orotic acid. Synthetic adsorbent non-adsorbed fraction, which has an inhibitory effect on inducible fatty liver and D-galactosamine-induced hepatic injury, but is a by-product by subjecting the liquid content of barley shochu distillation residue to adsorption separation using synthetic adsorbent Was found to have no inhibitory effect on orotic acid-induced fatty liver and D-galactosamine-induced liver injury (filed as Japanese Patent Application No. 2002-56929). For these reasons, the non-adsorbed fraction of the synthetic adsorbent has no pharmacological action and has been regarded as useless and discarded. However, the present inventors have used the synthetic adsorbent non-adsorbed fraction discarded as useless in this way to determine whether or not there is an onset inhibitory action and a healing action for alcoholic liver injury through experiments. Upon examination, the synthetic adsorbent non-adsorbed fraction was found to have an excellent onset inhibitory action against alcoholic liver damage and an excellent healing action against alcoholic liver damage (Japanese Patent Application No. 2002-250991) Applied) Subsequent to the discovery, in order to fractionate and purify the active ingredient contained in the non-adsorbed fraction of the synthetic adsorbent, that is, a component having a strong onset-suppressing action and a healing action against alcoholic liver injury, intensive research has been conducted. As a result, the synthetic adsorbent non-adsorbed fraction was subjected to an ion exchange treatment using an ion exchange resin to obtain an ion exchange resin non-adsorbed fraction, and the ion exchange resin non-adsorbed fraction was passed through an ultrafiltration membrane. An ultrafiltration treatment used to obtain a concentrated solution, and an organic solvent-insoluble fraction collected by adding an organic solvent to the concentrated solution is a remarkable onset inhibitory action and cure for alcoholic liver injury It was found to have an action.
[0012]
The present invention has been completed based on such findings. The object of the present invention is to obtain a liquid component by solid-liquid separation of the barley shochu distillation residue, and subjecting the liquid component to an adsorption separation process using a synthetic adsorbent to obtain a synthetic adsorbent non-adsorbed fraction, The synthetic adsorbent non-adsorbed fraction is subjected to ion exchange treatment using an ion exchange resin to obtain an ion exchange resin non-adsorbed fraction, and the ion exchange resin non-adsorbed fraction is subjected to ultrafiltration using an ultrafiltration membrane. A pharmaceutical composition comprising an organic solvent-insoluble fraction obtained by subjecting to treatment and adding an organic solvent to the concentrate, and having a remarkable onset-inhibiting action and healing action against alcoholic liver injury To provide things. Another object of the present invention is to provide a method for producing a composition having such a pharmacological action.
[0013]
The experiments conducted by the present inventors in completing the present invention are described in detail below. The present invention has been completed based on the knowledge obtained in these experiments. As described above, the present inventors, in Non-Patent Document 1 to Non-Patent Document 3, show that the liquid content of the barley shochu distillation residual liquid has a suppressive action against D-galactosamine-induced liver injury and orotic acid-induced fatty liver. In order to clarify whether the liquid content of the barley shochu distillation residue has an inhibitory action against alcoholic liver injury, the barley shochu distillation residue The following experiment was conducted using the liquid component (A), and intensive studies were conducted.
That is, 24 ethanol male rats (Japan SLC) 3 weeks old were fed with ethanol-containing liquid feed for 6 days while gradually increasing the ethanol content (3% → 4% → 5%). The control group and the test group were divided into two groups. At that time, the 24 rats were distributed so that there was no statistically significant difference in the variance relating to the average body weight of the rats in each group. For the control group of rats, 5% ethanol-containing liquid feed, for the test group of rats, the 5% ethanol-containing liquid feed was lyophilized powder (A ' ) Liquid feed supplemented with 1% was fed for 4 weeks each. In addition to the control group and the test group, an untreated group consisting of 12 3-week-old Wistar male rats was provided, and the rats in the untreated group had 5 in order to make the calorie intake the same as the other two groups. An ethanol-free liquid feed supplemented with a mixture of equal amounts of maltose-dextrin instead of% ethanol was fed for 4 weeks and reared. However, in the above three groups, the daily feed amount (calorie intake) of each liquid feed was limited to 70 ml (70 kcal). On the last day of the experiment (four weeks after the start of the test), blood was collected from each abdominal aorta of the reared rat, and the liver was removed. The collected blood was subjected to serum separation, and serum total cholesterol, serum HDL-cholesterol, serum LDL-cholesterol, serum triglyceride, serum phospholipid, serum free fatty acid, and serum ALT (GPT) were measured. Moreover, about the extracted liver, liver weight, liver total cholesterol, liver triglyceride, and liver phospholipid were measured. The obtained results were expressed as mean ± standard error (SEM), and statistical processing was performed according to the following procedure. That is, the comparison between the untreated group and the control group was analyzed using the Student's test method, and then the comparison between the control group and the test group was analyzed using the Tukey-Kramer method. In each analysis, a risk rate of 0.05% or less was significant. Judged as. Further, hepatocytes collected from the extracted liver were subjected to HE staining, and then the morphology of the hepatocytes was observed at 200 times magnification using a biological microscope BX51 manufactured by Olympus Optical Co., Ltd.
[0014]
As a result, the control group significantly increased serum alcohol concentration, serum HDL-cholesterol concentration, serum LDL-cholesterol concentration, serum triglyceride concentration, and serum phospholipid concentration compared with the untreated group. It was found that lipemia was induced. In addition, the control group was found to have significantly increased liver triglyceride concentration and liver phospholipid concentration compared to the untreated group, and alcoholic fatty liver was induced. Furthermore, in the control group, the blood ALT (GPT) concentration increased significantly compared with the untreated group, and hepatocyte necrosis and balloon-like in the region around the terminal hepatic vein of hepatic lobule were observed in the biomicroscopic observation of hepatocytes. Enlargement was noticeable, and alcoholic hepatitis was found to have been induced. On the other hand, the test group showed a tendency to suppress the increase in serum LDL-cholesterol concentration, serum triglyceride concentration, and liver triglyceride concentration compared with the control group. Hepatocyte necrosis and balloon-like swelling in the surrounding area tended to decrease slightly.
From the above results, the lyophilized powder (A ') of the liquid portion (A) of the barley shochu distillation residue suggests its practical use as a drug for the purpose of actively suppressing the onset of alcoholic liver damage It turns out that it is not enough.
[0015]
Next, the present inventors clarify what fraction obtained from the liquid content of the barley shochu distillation residue contributes to the onset-suppressing action against alcoholic liver injury through the experiment described below. Therefore, using the desorption fraction (B) obtained by eluting the adsorbed fraction obtained by subjecting the barley shochu distillation residue liquid to the adsorption separation treatment using the synthetic adsorbent with alkali, the following The experiment was conducted and earnestly examined.
That is, 24 ethanol male rats (Japan SLC) 3 weeks old were fed with ethanol-containing liquid feed for 6 days while gradually increasing the ethanol content (3% → 4% → 5%). The control group and the test group were divided into two groups. At that time, the 24 rats were distributed so that there was no statistically significant difference in the variance relating to the average body weight of the rats in each group. 5% ethanol-containing liquid feed for the control group rats, and 1% of the lyophilized product powder (B ′) of the desorption fraction (B) to the 5% ethanol-containing liquid feed for the test group rats. Each of the added liquid feeds was fed for 4 weeks and reared. In addition to the control group and the test group, an untreated group consisting of 12 3-week-old Wistar male rats was provided, and the rats in the untreated group had 5 in order to make the calorie intake the same as the other two groups. An ethanol-free liquid feed supplemented with a mixture of equal amounts of maltose-dextrin instead of% ethanol was fed for 4 weeks and reared. However, in the above three groups, the daily feed amount (calorie intake) of each liquid feed was limited to 70 ml (70 kcal). On the last day of the experiment (four weeks after the start of the test), blood was collected from each abdominal aorta of the reared rat, and the liver was removed. The collected blood was subjected to serum separation, and serum total cholesterol, serum HDL-cholesterol, serum LDL-cholesterol, serum triglyceride, serum phospholipid, serum free fatty acid, and serum ALT (GPT) were measured. Moreover, about the extracted liver, liver weight, liver total cholesterol, liver triglyceride, and liver phospholipid were measured. The obtained results were expressed as mean ± standard error (SEM), and statistical processing was performed according to the following procedure. That is, the comparison between the untreated group and the control group was analyzed using the Student's test method, and then the comparison between the control group and the test group was analyzed using the Tukey-Kramer method. In each analysis, a risk rate of 0.05% or less was significant. Judged as. Further, hepatocytes collected from the extracted liver were subjected to HE staining, and then the morphology of the hepatocytes was observed at 200 times magnification using a biological microscope BX51 manufactured by Olympus Optical Co., Ltd.
[0016]
As a result, the control group significantly increased serum alcohol concentration, serum HDL-cholesterol concentration, serum LDL-cholesterol concentration, serum triglyceride concentration, and serum phospholipid concentration compared with the untreated group. It was found that lipemia was induced. In addition, the control group was found to have significantly increased liver triglyceride concentration and liver phospholipid concentration compared to the untreated group, and alcoholic fatty liver was induced. Furthermore, in the control group, the blood ALT (GPT) concentration increased significantly compared with the untreated group, and hepatocyte necrosis and balloon-like in the region around the terminal hepatic vein of hepatic lobule were observed in the biomicroscopic observation of hepatocytes. Enlargement was noticeable, and alcoholic hepatitis was found to have been induced. On the other hand, the test group showed a tendency to suppress the increase in the serum triglyceride concentration of the rat as compared with the control group, but did not suppress the increase in the liver triglyceride concentration at all. Hepatocyte necrosis and balloon-like swelling were prominent in the peripheral region of the terminal hepatic vein of the liver lobule. That is, the lyophilized powder (B ′) of the desorption fraction (B) showed a slight tendency to suppress the induction of alcoholic hyperlipidemia, but it induced the induction of alcoholic fatty liver and alcoholic hepatitis. No tendency to suppress was shown.
From the above results, it was found that the lyophilized powder (B ′) of the desorption fraction (B) has substantially no onset suppressing action against alcoholic liver injury.
[0017]
Accordingly, the present inventors have found that a synthetic adsorbent non-adsorbed fraction obtained by subjecting the liquid content of barley shochu distillation residue to an adsorption separation process using a synthetic adsorbent is effective for alcoholic liver injury. Presuming that it may have an onset-inhibiting effect, using the synthetic adsorbent non-adsorbed fraction (C) obtained by subjecting the liquid content of the barley shochu distillation residue to an adsorption separation process using a synthetic adsorbent The experiment was conducted and earnestly examined.
That is, 24 ethanol male rats (Japan SLC) 3 weeks old were fed with ethanol-containing liquid feed for 6 days while gradually increasing the ethanol content (3% → 4% → 5%). The control group and the test group were divided into two groups. At that time, the 24 rats were distributed so that there was no statistically significant difference in the variance relating to the average body weight of the rats in each group. For the control group of rats, a liquid feed containing 5% ethanol, and for the test group of rats, the lyophilized powder (C ' ) Liquid feed supplemented with 1% was fed for 4 weeks each. In addition to the control group and the test group, an untreated group consisting of 12 3-week-old Wistar male rats was provided, and the rats in the untreated group had 5 in order to make the calorie intake the same as the other two groups. An ethanol-free liquid feed supplemented with a mixture of equal amounts of maltose-dextrin instead of% ethanol was fed for 4 weeks and reared. However, in the above three groups, the daily feed amount (calorie intake) of each liquid feed was limited to 70 ml (70 kcal). On the last day of the experiment (four weeks after the start of the test), blood was collected from each abdominal aorta of the reared rat, and the liver was removed. The collected blood was subjected to serum separation, and serum total cholesterol, serum HDL-cholesterol, serum LDL-cholesterol, serum triglyceride, serum phospholipid, serum free fatty acid, and serum ALT (GPT) were measured. Moreover, about the extracted liver, liver weight, liver total cholesterol, liver triglyceride, and liver phospholipid were measured. The obtained results were expressed as mean ± standard error (SEM), and statistical processing was performed according to the following procedure. That is, the comparison between the untreated group and the control group was analyzed using the Student's test method, and then the comparison between the control group and the test group was analyzed using the Tukey-Kramer method. In each analysis, a risk rate of 0.05% or less was significant. Judged as. Further, hepatocytes collected from the extracted liver were subjected to HE staining, and then the morphology of the hepatocytes was observed at 200 times magnification using a biological microscope BX51 manufactured by Olympus Optical Co., Ltd.
[0018]
As a result, the control group significantly increased serum alcohol concentration, serum HDL-cholesterol concentration, serum LDL-cholesterol concentration, serum triglyceride concentration, and serum phospholipid concentration compared with the untreated group. It was found that lipemia was induced. In addition, the control group was found to have significantly increased liver triglyceride concentration and liver phospholipid concentration compared to the untreated group, and alcoholic fatty liver was induced. Furthermore, in the control group, the blood ALT (GPT) concentration increased significantly compared with the untreated group, and hepatocyte necrosis and balloon-like in the region around the terminal hepatic vein of hepatic lobule were observed in the biomicroscopic observation of hepatocytes. Enlargement was noticeable, and alcoholic hepatitis was found to have been induced. On the other hand, the test group significantly suppressed the increase in serum LDL-cholesterol concentration, serum triglyceride concentration, and liver triglyceride concentration in the rat compared with the control group. There were almost no hepatocellular necrosis and balloon-like swelling in the area surrounding the hepatic vein. From the above experimental results, it was found that the lyophilized powder (C ′) of the above-mentioned synthetic adsorbent non-adsorbed fraction (C) has a remarkable onset inhibitory action against alcoholic liver injury.
[0019]
Therefore, the ingredients that contribute to the suppression of the onset of alcoholic liver damage in the barley shochu distillation residue are obtained by solid-liquid separation of the barley shochu distillation residue, and the liquid is used as a synthetic adsorbent. It was found that the synthetic adsorbent non-adsorbed fraction obtained by subjecting it to the adsorption separation treatment was fractionated.
[0020]
Therefore, the present inventors have conducted intensive studies for the purpose of clarifying a component having a strong onset-inhibiting action against alcoholic liver injury contained in the non-adsorbed fraction of the synthetic adsorbent. That is, the present inventors obtain a liquid component by solid-liquid separation of a barley shochu distillation residue produced as a by-product in the production of shochu using barley as a raw material, and subject the liquid component to an adsorption separation process using a synthetic adsorbent. In view of the fact that the synthetic adsorbent non-adsorbed fraction thus obtained contains a polysaccharide as one of its components, the polysaccharide contained in the synthetic adsorbent non-adsorbed fraction suppresses the onset of alcoholic liver injury. In order to clarify whether or not it is involved in the action, intensive studies were conducted. That is, the following experiment was conducted for the purpose of removing amino acids, peptides, proteins, organic acids, or polyphenols derived from barley, which are components other than polysaccharides contained in the organic solvent-insoluble fraction. Specifically, for the purpose of removing barley-derived polyphenols and the like contained in the liquid content of the barley shochu distillation residual liquid, the liquid content obtained by solid-liquid separation of the barley shochu distillation residual liquid is used as a synthetic adsorbent. For the purpose of removing amino acids, peptides, proteins and organic acids contained in the synthetic adsorbent non-adsorbed fraction by subjecting to the used adsorption separation treatment, Different types of ion-exchange resin non-adsorbed fractions are obtained by subjecting the synthetic adsorbent non-adsorbed fraction to ion exchange treatment using various ion-exchange resins. The following experiments were conducted in order to clarify what each organic solvent-insoluble fraction collected by adding an organic solvent to alcoholic liver has an onset inhibitory effect on alcoholic liver injury. It was.
That is, the liquid content obtained by solid-liquid separation of the barley shochu distillation residue is subjected to an adsorption separation process using a synthetic adsorbent to obtain a synthetic adsorbent non-adsorbed fraction, and the resulting synthetic adsorbent non-adsorbed The fraction is subjected to ion exchange treatment using various ion exchange resins, specifically, cation exchange resin, anion exchange resin, and mixed bed type ion exchange resin of both, and the non-adsorbed fraction of ion exchange resin. Then, ethanol was added to each ion-exchange resin non-adsorbed fraction to obtain an organic solvent-insoluble fraction. About each obtained organic-solvent insoluble fraction, free saccharides, polysaccharides, organic acids, and crude protein were measured. In addition, the following experiment was conducted in order to clarify whether each organic solvent-insoluble fraction has a suppressive action on alcoholic liver injury.
[0021]
Barley shochu was produced for the purpose of the following Experiment 1 to Experiment 7. Barley (70% refined) was used as a raw material.
[Manufacture of firewood]
40% barley water absorbed, steamed for 40 minutes, allowed to cool to 40 ° C, inoculated with 1 kg of seed meal (birch) per ton of barley, 38 ° C, RH95% for 24 hours, 32 ° C, RH92% The barley koji was manufactured by holding for 20 hours.
[Manufacture of steamed barley]
Steamed barley was produced by absorbing 40% by weight of barley, steaming for 40 minutes, and allowing to cool to 40 ° C.
[0022]
[Manufacture of barley shochu and barley shochu distillation residue]
In the first preparation, barley koji (3 tons as barley) produced by the above method was added with 3.6 kiloliters of water and 1 kg (wet weight) of cultured cells of shochu yeast as yeast to obtain primary mash. The first moromi was subjected to fermentation for 5 days (first stage fermentation). Next, in the secondary charge, 11.4 kiloliters of water and steamed barley (7 tons as barley) produced by the method described above were added to the primary mash after the first stage fermentation for 11 days (two stages). (Fermentation of the eyes). The fermentation temperature was set to 25 ° C. for both the primary charge and the secondary charge. The secondary mash after the second stage fermentation was subjected to simple distillation by a conventional method to obtain 10 kiloliters of barley shochu and 15 kiloliters of barley shochu distillation residue. The obtained barley shochu distillation residue was used in the following Experiments 1 to 7.
[0023]
[Experiment 1]
The organic solvent insoluble fraction was fractionated by the following method from the barley shochu distillation residue obtained in the above. That is, the barley shochu distillation residue was centrifuged at 8000 rpm for 10 minutes to obtain a liquid portion of the barley shochu distillation residue, and the resulting liquid portion was used as a synthetic adsorbent Amberlite XAD-16 manufactured by Organo Corporation. The adsorbent separation process was performed by passing through a column packed with a fraction, and the synthetic adsorbent non-adsorbed fraction consisting of a flow-through liquid exhibiting non-adsorbability with respect to the synthetic adsorbent of the column was fractionated. The synthetic adsorbent non-adsorbed fraction 1 L thus obtained was freeze-dried to obtain 57.2 g of a freeze-dried product of the synthetic adsorbent non-adsorbed fraction.
[0024]
[Experiment 2]
The organic solvent insoluble fraction was fractionated by the following method from the barley shochu distillation residue obtained in the above. That is, the barley shochu distillation residue was centrifuged at 8000 rpm for 10 minutes to obtain a liquid portion of the barley shochu distillation residue, and the resulting liquid portion was used as a synthetic adsorbent Amberlite XAD-16 manufactured by Organo Corporation. The adsorbent separation process was performed by passing through a column packed with a fraction, and the synthetic adsorbent non-adsorbed fraction consisting of a flow-through liquid exhibiting non-adsorbability with respect to the synthetic adsorbent of the column was fractionated. The obtained synthetic adsorbent non-adsorbed fraction was adjusted to Brix10, and 10 L of the synthetic adsorbent non-adsorbed fraction adjusted to Brix10 was used as a 5 L capacity Amberlite IRC76 (weakly acidic cation exchange resin) manufactured by Organo Corporation. To obtain a non-adsorbed fraction of ion exchange resin, adjust the obtained non-adsorbed resin fraction to Brix 60, add ethanol to a final concentration of 75% by volume, 8000 rpm, 10 min The organic solvent insoluble fraction was collected by centrifugation under the above conditions, and the organic solvent insoluble fraction was freeze-dried to obtain 53 g of a lyophilized product of the organic solvent insoluble fraction.
[0025]
[Experiment 3]
The organic solvent insoluble fraction was fractionated by the following method from the barley shochu distillation residue obtained in the above. That is, the barley shochu distillation residue was centrifuged at 8000 rpm for 10 minutes to obtain a liquid portion of the barley shochu distillation residue, and the resulting liquid portion was used as a synthetic adsorbent Amberlite XAD-16 manufactured by Organo Corporation. The adsorbent separation process was performed by passing through a column packed with a fraction, and the synthetic adsorbent non-adsorbed fraction consisting of a flow-through liquid exhibiting non-adsorbability with respect to the synthetic adsorbent of the column was fractionated. The obtained synthetic adsorbent non-adsorbed fraction was adjusted to Brix10, and 10 L of the synthetic adsorbent non-adsorbed fraction adjusted to Brix10 was used as a 5 L capacity Amberlite IRA67 (weakly acidic anion exchange resin) manufactured by Organo Corp. To obtain a non-adsorbed fraction of ion exchange resin, adjust the obtained non-adsorbed resin fraction to Brix 60, add ethanol to a final concentration of 75% by volume, 8000 rpm, 10 min The organic solvent insoluble fraction was collected by centrifugation under the above conditions, and the organic solvent insoluble fraction was freeze-dried to obtain 59 g of a lyophilized product of the organic solvent insoluble fraction.
[0026]
[Experiment 4]
The organic solvent insoluble fraction was fractionated by the following method from the barley shochu distillation residue obtained in the above. That is, the barley shochu distillation residue was centrifuged at 8000 rpm for 10 minutes to obtain a liquid portion of the barley shochu distillation residue, and the resulting liquid portion was used as a synthetic adsorbent Amberlite XAD-16 manufactured by Organo Corporation. The adsorbent separation process was performed by passing through a column packed with a fraction, and the synthetic adsorbent non-adsorbed fraction consisting of a flow-through liquid exhibiting non-adsorbability with respect to the synthetic adsorbent of the column was fractionated. The obtained synthetic adsorbent non-adsorbed fraction was adjusted to Brix10, and 10 L of the synthetic adsorbent non-adsorbed fraction adjusted to Brix10 was used as a 5 L capacity Amberlite IR120B (strongly acidic cation exchange resin) manufactured by Organo Corporation. To obtain a non-adsorbed fraction of ion exchange resin, adjust the obtained non-adsorbed resin fraction to Brix 60, add ethanol to a final concentration of 75% by volume, 8000 rpm, 10 min The organic solvent insoluble fraction was collected by centrifugation under the above conditions, and the organic solvent insoluble fraction was freeze-dried to obtain 56 g of a lyophilized product of the organic solvent insoluble fraction.
[0027]
[Experiment 5]
The organic solvent insoluble fraction was fractionated by the following method from the barley shochu distillation residue obtained in the above. That is, the barley shochu distillation residue was centrifuged at 8000 rpm for 10 minutes to obtain a liquid portion of the barley shochu distillation residue, and the resulting liquid portion was used as a synthetic adsorbent Amberlite XAD-16 manufactured by Organo Corporation. The adsorbent separation process was performed by passing through a column packed with a fraction, and the synthetic adsorbent non-adsorbed fraction consisting of a flow-through liquid exhibiting non-adsorbability with respect to the synthetic adsorbent of the column was fractionated. The obtained synthetic adsorbent non-adsorbed fraction was adjusted to Brix10, and 10 L of the synthetic adsorbent non-adsorbed fraction adjusted to Brix10 was used as a 5 L capacity Amberlite 200CT (strongly acidic cation exchange resin) manufactured by Organo Corporation. To obtain a non-adsorbed fraction of ion exchange resin, adjust the obtained non-adsorbed resin fraction to Brix 60, add ethanol to a final concentration of 75% by volume, 8000 rpm, 10 min The organic solvent insoluble fraction was collected by centrifugation under the above conditions, and the organic solvent insoluble fraction was freeze-dried to obtain 41 g of a lyophilized product of the organic solvent insoluble fraction.
[0028]
[Experiment 6]
The organic solvent insoluble fraction was fractionated by the following method from the barley shochu distillation residue obtained in the above. That is, the barley shochu distillation residue was centrifuged at 8000 rpm for 10 minutes to obtain a liquid portion of the barley shochu distillation residue, and the resulting liquid portion was used as a synthetic adsorbent Amberlite XAD-16 manufactured by Organo Corporation. The adsorbent separation process was performed by passing through a column packed with a fraction, and the synthetic adsorbent non-adsorbed fraction consisting of a flow-through liquid exhibiting non-adsorbability with respect to the synthetic adsorbent of the column was fractionated. The obtained synthetic adsorbent non-adsorbed fraction was adjusted to Brix 10, and 10 L of the synthetic adsorbent non-adsorbed fraction adjusted to Brix 10 was added to Amberlite IRA402BL (the strongest basic anion exchange resin) manufactured by Organo Corporation. ) To obtain an ion-exchange resin non-adsorbed fraction, and after adjusting the obtained ion-exchange resin non-adsorbed fraction to Brix 60, ethanol was added to a final concentration of 75% by volume, 8000 rpm, Centrifugation was carried out for 10 min to collect an organic solvent insoluble fraction, and the organic solvent insoluble fraction was freeze-dried to obtain 23 g of a lyophilized product of the organic solvent insoluble fraction.
[0029]
[Experiment 7]
The organic solvent insoluble fraction was fractionated by the following method from the barley shochu distillation residue obtained in the above. That is, the barley shochu distillation residue was centrifuged at 8000 rpm for 10 minutes to obtain a liquid portion of the barley shochu distillation residue, and the resulting liquid portion was used as a synthetic adsorbent Amberlite XAD-16 manufactured by Organo Corporation. The adsorbent separation process was performed by passing through a column packed with a fraction, and the synthetic adsorbent non-adsorbed fraction consisting of a flow-through liquid exhibiting non-adsorbability with respect to the synthetic adsorbent of the column was fractionated. The obtained synthetic adsorbent non-adsorbed fraction was adjusted to Brix 10, and 10 L of the synthetic adsorbent non-adsorbed fraction adjusted to Brix 10 was added to Amberlite IRC76 (weakly acidic cation exchange resin) manufactured by Organo Corporation. ) And 1.5L capacity Amberlite IRA67 (weakly basic anion exchange resin) made by Organo Corp., and mixed bed ion exchange resin non-adsorbed through a column packed with mixed bed ion exchange resin After preparing the fraction and mixing the mixed-bed ion exchange resin non-adsorbed fraction to Brix 60, add ethanol to a final concentration of 75% by volume, and centrifuge at 8000 rpm for 10 min to separate the organic solvent insoluble fraction. The organic solvent insoluble fraction was subjected to lyophilization to obtain 19 g of a lyophilized product of the organic solvent insoluble fraction.
[0030]
Each freeze-dried product obtained in Experiment 1 to Experiment 7 was evaluated for the onset-suppressing action against alcoholic liver injury by the following method.
That is, 80 7-week-old Wistar male rats (Nippon Charles River) were fed with ethanol-containing liquid feed for 6 days while gradually raising the ethanol content (3% → 4% → 5%). The rats were fed with a liquid feed containing% ethanol for 4 weeks, blood was collected from each of these rats during the 4 weeks, plasma was separated and serum lipids were measured, and 10 mice per group were used as a control group, test group 1 Or divided into 8 groups consisting of test group 7. At that time, the 80 rats were distributed so that there was no statistically significant difference in the variance relating to the average body weight of the rats in each group. In order to make the calorie intake the same as that of the ethanol-containing liquid feed administration group, the control group rats were given an ethanol-free liquid feed supplemented with an equivalent mixture of maltose-dextrin instead of the 5% ethanol for 2 weeks. And raised. Test group 1 to test group 7 were fed with a liquid feed obtained by adding 1% of each lyophilized powder obtained in Experiments 1 to 7 to the ethanol-free liquid feed for 2 weeks. Further, in addition to the control group, test group 1 to test group 7, an untreated group comprising 10 7-week-old Wistar male rats was provided, and the ethanol-free liquid feed was applied to the rats of the untreated group. Feeded for weeks and reared. However, in the above 9 groups, the daily feed amount (calorie intake) of each liquid feed was limited to 70 ml (70 kcal). For all nine groups, blood was collected from the abdominal aorta of each of the reared rats on the last day of the experiment (six weeks after the start of the experiment), and the liver was removed. The collected blood was subjected to serum separation, and serum total cholesterol, serum LDL-cholesterol, serum triglyceride, serum phospholipid, serum ALT (GPT), and serum AST (GOT) were measured. Moreover, about the extracted liver, liver weight, liver total cholesterol, liver triglyceride, and liver phospholipid were measured. The obtained results were expressed as mean ± standard error (SEM), and statistical processing was performed according to the following procedure. That is, the comparison between the untreated group and the control group was analyzed using the Student's test method, and then the comparison of test group 1 to test group 7 with respect to the control group was analyzed using the Tukey-Kramer method. 0.05% or less was judged as significant. Further, hepatocytes collected from the extracted liver were subjected to HE staining, and then the morphology of the hepatocytes was observed at 200 times magnification using a biological microscope BX51 manufactured by Olympus Optical Co., Ltd.
[0031]
For the lyophilized products obtained in Experiments 1 to 7, the following facts were found from the experimental results of the polysaccharide content, the total content of arabinose and xylose derived from the polysaccharide, and the onset inhibitory action against alcoholic liver injury. That is, compared with the control group, all of the lyophilized products obtained in Experiments 1 to 7 were found to have a suppressive action against alcoholic liver injury. Among them, in test group 5 bred with a liquid feed supplemented with the lyophilized product obtained in Experiment 5, an extremely remarkable onset suppression effect on alcoholic liver injury was observed. On the other hand, in Test Group 1 bred with a liquid feed supplemented with the lyophilized product obtained in Experiment 1, the degree of the onset-suppressing effect on alcoholic liver injury was the lowest.
[0032]
[Measurement of polysaccharide content]
(Measurement of total content of arabinose and xylose derived from polysaccharides)
Therefore, the polysaccharide content and the total content of arabinose and xylose derived from the polysaccharide were measured for each lyophilized product obtained in Experiment 1 to Experiment 7.
That is, 0.05 ml of each lyophilized product obtained in Experiments 1 to 7 was dissolved by adding 1 ml of ion-exchanged water, 200 μl of concentrated hydrochloric acid was added thereto, and hydrolysis was performed at 95 ° C. for 4 hours. , Filtering through a 0.80 μm membrane filter to obtain a filtrate, injecting the filtrate into a high performance liquid chromatograph, the content of polysaccharides contained in each of the lyophilized products obtained in Experiments 1 to 7, and The total content of polysaccharide-derived arabinose and xylose was determined. For high performance liquid chromatographic analysis, Waters600 manufactured by Waters was used, a differential refractometer RI-71 manufactured by Showa Denko KK was used as a detector, and Aminex HPX-87H (300 mm × 7.8 mm) manufactured by BioRad was used as a column. The column temperature was 60 ° C., 5 mM sulfuric acid was used for the mobile phase, the flow rate was 0.5 ml / min, and the sample injection volume was 20 μl.
[0033]
The following facts were found from the measurement results of the polysaccharide content of each lyophilized product obtained in Experiments 1 to 7, and the measurement results of the total content of arabinose and xylose derived from the polysaccharide. That is, the polysaccharide content of the lyophilized product obtained in Experiment 5 and the total content of arabinose and xylose derived from the polysaccharide showed the highest values. On the other hand, the polysaccharide content of the freeze-dried product obtained in Experiment 1 and the total content of arabinose and xylose derived from the polysaccharide showed the lowest values. Further, each of the freeze-dried products obtained in Experiments 1 to 7 has a strength of suppressing the onset of alcoholic liver damage, which is proportional to the total content of arabinose and xylose derived from polysaccharides contained in the freeze-dried product. It became clear that there was a tendency to increase.
[0034]
From the above results, the onset-inhibitory action against alcoholic liver damage of each lyophilized product obtained in Experiments 1 to 7 is a polysaccharide mainly comprising arabinose and xylose contained in the lyophilized product. It was revealed that the possibility of being derived from
[0035]
[Measurement of molecular weight distribution]
Therefore, in order to clarify the molecular weight of the polysaccharides mainly composed of arabinose and xylose contained in each lyophilized product obtained in Experiment 1 to Experiment 7, the molecular weight of each organic solvent insoluble fraction is Distribution was measured.
That is, 0.05 W obtained by dissolving separately a molecular weight standard product consisting of Shodex standard P-82 (molecular weight 1300 to 1660,000) and maltotriose (molecular weight 504) manufactured by Showa Denko KK in 0.1 mol / L sodium nitrate solution. A standard solution of / V% concentration was obtained, and the standard solution was injected into a high performance liquid chromatograph to prepare a calibration curve. Next, 0.02 g of each lyophilized product obtained in Experiment 1 to Experiment 7 was prepared, 10 ml of 0.1 mol / L sodium nitrate solution was added thereto, and allowed to stand overnight at room temperature, and then a membrane filter having a pore size of 0.45 μm. Filtration was performed to obtain a filtrate, the filtrate was injected into a high performance liquid chromatograph, and a molecular weight distribution was determined using a 480 Data Station GPC program manufactured by System Instruments Co., Ltd. For high performance liquid chromatographic analysis, Shodex GPC SYSTEM-21 manufactured by Showa Denko Co., Ltd. is used, and a differential refractometer RI-71S manufactured by Showa Denko Co., Ltd. is used as a detector, and the column is TSKgel GMPWXL (φ7.8 mm manufactured by Tosoh Corporation). 2 × 300 mm) were connected and used. The column temperature was 40 ° C., a 0.1 mol / L sodium nitrate solution was used for the mobile phase, the flow rate was 1.0 ml / min, and the sample injection volume was 100 μl.
[0036]
As a result of measuring the molecular weight distribution of each lyophilized product obtained in Experiments 1 to 7 by the above method, the higher the total content of arabinose and xylose derived from polysaccharides contained in the lyophilized product, the higher the molecular weight 10,000 to It turned out that the proportion of 100,000 fractions increased.
[0037]
From these facts, the present inventors presume that the polysaccharide mainly composed of arabinose and xylose contained in the lyophilized product has a molecular weight of 10,000 to 100,000. Then, fractionation purification of the organic solvent insoluble fraction was examined using ultrafiltration.
[Fractionation of organic solvent insoluble fractions by ultrafiltration]
As a result of measuring the molecular weight distribution of each lyophilized product obtained in Experiments 1 to 7, the lyophilized product obtained in Experiment 5 had the highest fraction of molecular weight 10,000 to 100,000, and The total content of polysaccharide-derived arabinose and xylose was also found to be the highest. Therefore, fractional purification of the lyophilized product through ultrafiltration was performed by the following procedure.
That is, the barley shochu distillation residue obtained in [0022] was centrifuged under the conditions of 8000 rpm and 10 min to obtain a liquid content of the barley shochu distillation residue, and the obtained liquid content was synthesized and adsorbed by Organo Co., Ltd. By passing through a column packed with the adsorbent Amberlite XAD-16 and subjecting it to an adsorption separation treatment, fractions of the synthetic adsorbent non-adsorbed fraction consisting of a flow-through liquid exhibiting non-adsorbability with respect to the synthetic adsorbent of the column were fractionated. . The obtained synthetic adsorbent non-adsorbed fraction was adjusted to Brix 10, and 1 L of the synthetic adsorbent non-adsorbed fraction adjusted to Brix 10 was 500 ml capacity Amberlite 200CT (strongly acidic cation exchange resin) manufactured by Organo Corporation. To obtain a non-adsorbed fraction of ion-exchange resin, and the obtained non-adsorbed fraction of ion-exchange resin was subjected to ultrafiltration membrane UFP-30-E-4MA (fractionation by A / G Technology). A concentrated solution is obtained by treatment with a molecular weight of 30,000), the resulting concentrated solution is adjusted to Brix 20, ethanol is added to a final concentration of 75% by volume, and the mixture is centrifuged at 8000 rpm for 10 minutes to obtain an organic solvent. The insoluble fraction was collected, and the organic solvent insoluble fraction was lyophilized to obtain 1.3 g of a lyophilized product of the organic solvent insoluble fraction.
[0038]
With respect to the obtained lyophilized product, the total content of arabinose and xylose derived from polysaccharides was measured by the method described in ## EQU1 ## As a result, it was found that the total content of polysaccharide-derived arabinose and xylose increased to 78.5% by weight. Further, the molecular weight distribution of the obtained lyophilized product was measured by the method described in the following. As a result, the molecular weight distribution of the lyophilized product is 11% for 100,000 or more, 29% for 30,000 to 100,000, 24% for 10,000 to 30,000, 21% for 3,000 to 10,000, 6% for 1,000 to 3,000, 2 for 500 to 1,000. %, 500 or less was found to be 7%. From the obtained chromatogram results, it was revealed that the chromatogram of the lyophilized product had the highest peak in the molecular weight range of 30,000 to 100,000. Thus, the onset-inhibiting action against alcoholic liver injury of the lyophilized product obtained in [0037] was evaluated by the method described in [0030]. As a result, it has been found that the freeze-dried product has a remarkable effect of suppressing the onset of alcoholic liver injury.
[0039]
From the above experimental results, the onset-inhibiting action against alcoholic liver injury of the lyophilized product comprising the organic solvent-insoluble fraction obtained from the liquid content of the barley shochu distillation residue is the lyophilized product comprising the organic solvent-insoluble fraction. The composition containing a large amount of polysaccharides mainly composed of arabinose and xylose, which is derived from polysaccharides mainly composed of arabinose and xylose, is by-produced in the production of shochu using barley as a raw material. The barley shochu distillation residual liquid is solid-liquid separated to obtain a liquid component, and the liquid component is subjected to an adsorption separation process using a synthetic adsorbent to obtain a synthetic adsorbent non-adsorbed fraction. The fraction is subjected to an ion exchange treatment using an ion exchange resin to obtain an ion exchange resin non-adsorbed fraction, and the obtained ion exchange resin non-adsorbed fraction is subjected to ultrafiltration using an ultrafiltration membrane. To obtain a concentrated solution is subjected to over-treatment, by adding an organic solvent to the concentrate can be fractionated as an organic solvent-insoluble fraction was found. As a result of component analysis, the lyophilized product comprising the organic solvent-insoluble fraction contains 78.5 wt% polysaccharide, 3.3 wt% crude protein, 0.2 wt% organic acid, and 1.5 wt% free saccharide. It was found to contain polysaccharide as the main component.
[0040]
Therefore, the present inventors have developed a freeze-dried powder of the non-adsorbed fraction of the synthetic adsorbent that has been found to have an inhibitory effect on alcoholic liver injury, and a markedly suppressed onset of alcoholic liver injury. In order to clarify whether the lyophilized powder of the organic solvent-insoluble fraction, which was found to have an action, had a healing action against alcoholic liver disorders that had already developed, the following experiment was conducted. .
That is, 30 7-week-old male Wistar rats (Japanese Charles River) were fed with ethanol-containing liquid feed for 6 days while gradually increasing the ethanol content (3% → 4% → 5%). The rats were fed with a liquid feed containing% ethanol for 4 weeks, blood was collected from each of these rats during the 4 weeks, plasma was separated and serum lipids were measured, and 10 mice per group were used as a control group, test group 1 And 3 groups consisting of test group 2. At that time, the 30 rats were distributed so that there was no statistically significant difference in the variance related to the average body weight of the rats in each group. In order to make the calorie intake the same as that of the ethanol-containing liquid feed administration group, the control group rats were given an ethanol-free liquid feed supplemented with an equivalent mixture of maltose-dextrin instead of the 5% ethanol for 2 weeks. And raised. The test group 1 was bred with a liquid feed obtained by adding 1% of a freeze-dried powder of the non-adsorbed fraction of the synthetic adsorbent to the ethanol-free liquid feed for 2 weeks. For the test group 2, the ethanol-free liquid feed was fed with a liquid feed obtained by adding 1% of a freeze-dried powder of the organic solvent-insoluble fraction for 2 weeks. Further, in addition to the control group, test group 1 and test group 2, an untreated group comprising 10 7-week-old Wistar male rats was provided, and the ethanol-free liquid feed was added to the rats of the untreated group. Feeded for weeks and reared. However, in the above four groups, the daily feed amount (calorie intake) of each liquid feed was limited to 70 ml (70 kcal). For all four groups, blood was collected from the abdominal aorta of each of the reared rats on the last day of the experiment (six weeks after the start of the experiment), and the liver was removed. The collected blood was subjected to serum separation, and serum total cholesterol, serum LDL-cholesterol, serum triglyceride, serum phospholipid, serum ALT (GPT), and serum AST (GOT) were measured. Moreover, about the extracted liver, liver weight, liver total cholesterol, liver triglyceride, and liver phospholipid were measured. The obtained results were expressed as mean ± standard error (SEM), and statistical processing was performed according to the following procedure. That is, the comparison between the untreated group and the control group was analyzed using the Student's test method, and then the comparison between the group A and B with respect to the control group was analyzed using the Tukey-Kramer method. The following were determined to be significant. Further, hepatocytes collected from the extracted liver were subjected to HE staining, and then the morphology of the hepatocytes was observed at 200 times magnification using a biological microscope BX51 manufactured by Olympus Optical Co., Ltd.
[0041]
As a result, in the control group, the serum total cholesterol concentration, serum LDL-cholesterol concentration, and liver triglyceride concentration increased by feeding with ethanol-containing liquid feed were slightly decreased, and approximated to their normal values. The degree was extremely small. On the other hand, serum total cholesterol concentration, serum LDL-cholesterol concentration, serum triglyceride concentration, serum phospholipid concentration, serum ALT (GPT) concentration, serum AST (GOT) concentration, and liver total cholesterol concentration of test group 1 and test group 2 Each value is significantly lower than the respective value in the control group, that is, substantially equal to the respective normal value. In particular, test group 2 is more normal than test group 1. The value approximated to the value is shown. Further, in Test Group 1 and Test Group 2, hepatocyte necrosis and balloon-like swelling in the peripheral region of the terminal hepatic vein of the hepatic lobule were hardly observed even in the biomicroscopic observation of hepatocytes.
That is, it is clear that the healing action against alcoholic liver injury of the freeze-dried powder of the organic solvent-insoluble fraction exceeds the same action of the freeze-dried powder of the non-adsorbed fraction of the synthetic adsorbent. Became.
[0042]
From the above experimental results, the barley shochu distillation residue obtained as a by-product in the production of shochu using barley as a raw material is subjected to solid-liquid separation to obtain a liquid component, which is subjected to an adsorption separation process using a synthetic adsorbent. A synthetic adsorbent non-adsorbed fraction is obtained, and the synthetic adsorbent non-adsorbed fraction is subjected to an ion exchange treatment using an ion exchange resin to obtain an ion exchange resin non-adsorbed fraction. The fraction is subjected to an ultrafiltration treatment using an ultrafiltration membrane to obtain a concentrated solution, and an organic solvent-insoluble fraction obtained by adding an organic solvent to the concentrated solution is extremely powerful against alcoholic liver injury. It was found to have an onset-suppressing action and a healing action. From this fact, the liquid component obtained by solid-liquid separation of the barley shochu distillation residue that is a by-product in the production of shochu using barley as a raw material contains components that contribute to the suppression and cure of alcoholic liver damage. The component is subjected to an adsorption separation process using a synthetic adsorbent to obtain a synthetic adsorbent non-adsorbed fraction, and the synthetic adsorbent non-adsorbed fraction is subjected to an ion exchange resin using an ion exchange resin. To obtain an ion-exchange resin non-adsorbed fraction, and subject the ion-exchange resin non-adsorbed fraction to ultrafiltration using an ultrafiltration membrane to obtain a concentrated solution. It was found that it was fractionated and contained in the organic solvent insoluble fraction obtained by addition.
[0043]
As described above, the present inventors have obtained a liquid component obtained by solid-liquid separation of the barley shochu distillation residue obtained as a by-product in the production of shochu using barley as a raw material, contributing to the suppression and cure of alcoholic liver damage. The component is subjected to an adsorption separation process using a synthetic adsorbent to obtain a synthetic adsorbent non-adsorbed fraction, and the synthetic adsorbent non-adsorbed fraction is treated with an ion exchange resin. Ion exchange treatment used to obtain an ion exchange resin non-adsorbed fraction, the ion exchange resin non-adsorbed fraction subjected to ultrafiltration treatment using an ultrafiltration membrane to obtain a concentrated solution, the concentration It has been found that a composition comprising an organic solvent-insoluble fraction obtained by adding an organic solvent to the solution has a marked onset-suppressing action and healing action against alcoholic liver damage. This discovery of an organic solvent insoluble fraction obtained from barley shochu distillation residue is a new fact that has never been seen before. Thus, the present invention creates a useful application of the organic solvent-insoluble fraction that can be used as a medicament for therapeutic purposes.
[0044]
As a result of earnest research through experiments to achieve the above-mentioned problems, the present inventors obtained a liquid component by solid-liquid separation of barley shochu distillation residue produced as a by-product in the production of shochu using barley as a raw material. The liquid component is subjected to an adsorption separation process using a synthetic adsorbent to obtain a synthetic adsorbent non-adsorbed fraction, and the synthetic adsorbent non-adsorbed fraction is subjected to an ion exchange process using an ion exchange resin. By obtaining an ion-exchange resin non-adsorbed fraction, subjecting the ion-exchange resin non-adsorbed fraction to ultrafiltration using an ultrafiltration membrane to obtain a concentrate, and adding an organic solvent to the concentrate The organic solvent insoluble fraction was collected, and the organic solvent insoluble fraction was subjected to component analysis.As a result, the polysaccharide contained 78.5% by weight, crude protein 3.3% by weight, organic acid 0.2% by weight, and free saccharide 1.5% by weight. The fraction was found to contain polysaccharides as the main component.
Further, when the organic solvent insoluble fraction was freeze-dried, it was found to have white properties. And it became clear that this organic solvent insoluble fraction which has such a characteristic has the onset inhibitory action and healing action outstanding with respect to alcohol-induced liver injury. The present invention is based on these found facts.
[0045]
In addition, the composition having a fatty liver inhibitory action described in Patent Document 1 is fractionated from a barley shochu distillation residue as in the case of the composition of the present invention. However, the main component of the composition described in Patent Document 1 has a molecular weight of 3000 or less, and the hemicellulose contained in the composition contains xylose as a main component, so it is clearly different from the composition of the present invention. It is a different thing that is distinguished.
[0046]
As described above, the alcoholic fatty liver inhibitor described in Patent Document 2 is a partial decomposition obtained by treating hemicellulose obtained by alkali extraction of the remainder obtained by removing starch and protein from corn bran with xylanase. The thing which uses a thing as an active ingredient. Non-patent document 4 discloses a partially decomposed product of hemicellulose (trade name Celace) obtained from corn bran as described in Patent Document 2, as described in 0004, xylose, arabinose, uronic acid, galactose. , And glucose. Therefore, Patent Document 2 and Non-Patent Document 4 relate to the same “partially decomposed product of hemicellulose obtained from corn bran (trade name Celace)”. On the other hand, the composition of the present invention is obtained from a barley shochu distillation residue completely different from the corn bran. That is, the composition of the present invention is obtained through a manufacturing process completely different from the manufacturing process of the partially decomposed product of hemicellulose described in Patent Document 2. And the composition of this invention contains only arabinose, xylose, and glucose, and does not contain substantially the uronic acid which the partial decomposition product of the hemicellulose of patent document 2 has. Therefore, the composition of the present invention is a different one that is clearly distinguished from the alcoholic fatty liver inhibitor containing as an active ingredient the “partially decomposed product of hemicellulose obtained from corn bran” described in Patent Document 2. It is clear that there is.
[0047]
Non-Patent Document 4 describes that the molecular weight of “partially decomposed hemicellulose obtained from corn bran (trade name Celace)” is about 200,000, which led to the determination of the molecular weight. No experimental data is described. Therefore, the inventors described in Patent Document 2 that a partially decomposed product of hemicellulose is marketed under the trade name “Cel Ace” (manufactured by Nippon Shokuhin Kako Co., Ltd.). Obtained and measured the molecular weight distribution of the cell ace by the method described above. As a result, the molecular weight distribution of Cell Ace is 1% for 1 million or more, 9% for 300,000 to 1 million, 30% for 100,000 to 300,000, 30% for 30,000 to 100,000, 11% for 10,000 to 30,000, 3000 to 3000 10,000 is 4%, 1000 to 3000 is 2%, 1000 or less is 13%, and its chromatogram consists of only a single peak having a peak top in the range of molecular weight 100,000 to 300,000, and its weight average molecular weight (Mw ) Turned out to be 150,000.
On the other hand, as described above, in the molecular weight distribution of the composition of the present invention, 100,000 or more is only 11%, and a component having a molecular weight of 3,000 to 100,000 accounts for 74% of the total. Moreover, the chromatogram exhibited by the composition of the present invention has the highest peak in the molecular weight range of 30,000 to 100,000.
Therefore, the molecular weight distribution possessed by the composition of the present invention is completely different from the molecular weight distribution possessed by “cell ace”, that is, a composition comprising a partially degraded hemicellulose obtained from corn bran. Moreover, as above-mentioned, the composition of this invention does not contain substantially the uronic acid which the partial decomposition product of the hemicellulose obtained from corn bran contains. Even in this respect, the composition of the present invention is different from the alcoholic fatty liver suppressor comprising the “partially decomposed product of hemicellulose” described in Patent Document 2. It is obvious.
[0048]
Embodiment Example
The present invention achieves the above-mentioned object, and provides a composition having a strong onset-inhibiting action and healing action against alcoholic liver injury and a method for producing the same. That is, a barley shochu distillation residue obtained as a by-product in the production of shochu using barley as a raw material is subjected to solid-liquid separation to obtain a liquid component, and the liquid component is subjected to an adsorption separation process using a synthetic adsorbent. A non-adsorbed fraction is obtained, and the synthetic adsorbent non-adsorbed fraction is subjected to an ion exchange treatment using an ion exchange resin to obtain an ion-exchange resin non-adsorbed fraction. A concentrated solution obtained by subjecting to an ultrafiltration treatment using a filtration membrane to obtain a concentrated solution, and an organic solvent-insoluble fraction obtained by adding an organic solvent to the concentrated solution. And a composition having a healing action and a method for producing the same. The present invention also provides a medicament comprising the composition.
[0049]
Although the preferable aspect of this invention is described below, this invention is not limited to these.
The composition of the present invention is produced as follows. That is, the method for producing the composition is a first step of obtaining a liquid component by solid-liquid separation of the barley shochu distillation residue as a by-product in the production of distilled liquor using barley, and using the synthetic adsorbent for the liquid component. A second step of obtaining a non-adsorbed fraction of a synthetic adsorbent by subjecting it to an adsorption separation treatment, and subjecting the non-adsorbed fraction of the synthetic adsorbent to an ion exchange treatment using an ion exchange resin. A third step of obtaining a fraction, a fourth step of subjecting the ion-exchange resin non-adsorbed fraction to an ultrafiltration treatment using an ultrafiltration membrane to obtain a concentrate, and adding an organic solvent to the concentrate This comprises a fifth step of fractionating the organic solvent insoluble fraction.
Below, the barley shochu distillation residual liquid by-produced in manufacture of the shochu using barley as a raw material used when implementing this manufacturing method of this invention, and each process are explained in full detail.
[0050]
The barley shochu distillation residual liquid used in the present invention typically produces barley koji and steamed barley using barley or polished barley as a raw material, and the starch contained in the obtained barley koji and steamed barley is used as the barley koji. Saccharified with koji, and subjected to alcohol fermentation with yeast to obtain shochu-ripened mash, and as a distillation residue when the obtained shochu-ripened mash is distilled using a single distillation apparatus such as vacuum distillation or atmospheric distillation By-product, that is, the distillation residue of barley shochu.
[0051]
In the present invention, when the barley shochu distillation residue is obtained, the barley koji used for the production of barley shochu may be produced under the koji-making conditions used in normal barley shochu production. In particular, Aspergillus kawachii used in the production of barley shochu is preferred. Alternatively, strains belonging to the genus Aspergillus such as Aspergillus awamori used in awamori production and Aspergillus oryzae used in sake production and the like can also be used. Moreover, the yeast used for manufacture of barley shochu can use various yeast for shochu brewing generally used in shochu manufacture.
[0052]
In the present invention, the first step of obtaining a liquid component by solid-liquid separation of the barley shochu distillation residue obtained in the distillation step in the production of barley shochu is a raw material barley or barley koji-derived from the barley shochu distillation residue. The purpose is to remove SS components such as water-insoluble fermentation residues. In the first step, the solid-liquid separation is performed by a solid-liquid separation method such as a screw press method or a roller press method, or by using a filtration and compression-type solid-liquid separator, followed by a centrifugal separator, a diatomaceous earth. The solid-liquid separation process that can be performed according to the present invention is performed using a soil filtration device, a ceramic filtration device, or a filtration press.
[0053]
The second step of obtaining the non-adsorbed fraction of the barley shochu distillation residue by subjecting the liquid content of the barley shochu distillation residue obtained in the first step to the adsorption separation process using the synthetic adsorbent is The purpose is to remove components such as polyphenols contained in the liquid. As the synthetic adsorbent used in the second step, an aromatic, aromatic modified or methacrylic synthetic adsorbent can be used. Specific examples of the synthetic adsorbent used in the second step include Amberlite XAD-4, Amberlite XAD-16, Amberlite XAD-1180 and Amberlite XAD-2000, manufactured by Organo Corporation, Mitsubishi Chemical Aromatic (or styrene) synthetic adsorbents such as Sepabead SP850 and Diaion HP20 manufactured by Co., Ltd., Amberlite XAD-7 manufactured by Organo Co., Ltd. and Diaion HP2MG manufactured by Mitsubishi Chemical Co., Ltd. Methacrylic (or acrylic) synthetic adsorbents. In addition to these, aromatic modified synthetic adsorbents such as Sephapez SP207 manufactured by Mitsubishi Chemical Corporation may be used in some cases.
[0054]
In the third step of obtaining the ion-exchange resin non-adsorbed fraction by subjecting the synthetic adsorbent non-adsorbed fraction obtained in the second step to ion exchange treatment using an ion-exchange resin, the synthetic adsorbent non-adsorbed fraction is obtained. The purpose is to remove amino acids, peptides, proteins, and organic acids contained in the adsorbed fraction using an ion exchange resin. As the ion exchange resin used in the third step, a cation exchange resin, an anion exchange resin, or a mixed bed ion exchange resin in which both are mixed can be used. In the case of a cation exchange resin, either a strong acid cation exchange resin or a weak acid cation exchange resin can be used. In the case of an anion exchange resin, a strong basic anion exchange resin and a weak basic cation exchange resin can be used. Any anion exchange resin can be used. In the case of a mixed bed ion exchange resin, the above-described cation exchange resin and anion exchange resin can be freely combined and used at a predetermined ratio. Preferable specific examples of such ion exchange resins include strongly acidic cation exchange resins such as Amberlite 200CT and Amberlite IR120B manufactured by Organo Corporation, weak acidic cation exchange resins such as Amberlite IRC76, Amberlite IRA402BL, etc. The strongest basic anion exchange resin, weakly basic anion exchange resin such as Amberlite IRA67, or the weakly acidic cation exchange resin and the weakly basic anion exchange resin are mixed at a predetermined ratio. The mixed bed type ion exchange resin obtained by the above can be used. Among these, in terms of removing amino acids and peptides contained in the barley shochu distillation residual liquid, both the weakly acidic cation exchange resin Amberlite IRC76 and the weakly basic anion exchange resin Amberlite IRA67 are used. It is particularly preferable to use a mixed bed type ion exchange resin obtained by mixing at a predetermined ratio or a strongly acidic cation exchange resin Amberlite 200CT.
[0055]
In the fourth step of obtaining a concentrated solution by subjecting the non-adsorbed fraction obtained in the third step to ultrafiltration using an ultrafiltration membrane, it is involved in the NK cell activation effect. The purpose of this is to concentrate a polysaccharide mainly composed of arabinose and xylose using an ultrafiltration membrane. As the ultrafiltration membrane used in the fourth step, any membrane material and membrane module type can be used, and the molecular weight cut-off is preferably 3000 or more, particularly preferably 10,000 to 50,000. Things can be used.
[0056]
In the fifth step of collecting an organic solvent-insoluble fraction by adding an organic solvent to the concentrated liquid obtained in the fourth step, an appropriate organic solvent is added until a predetermined final concentration is reached. In this case, ethanol is optimal as the organic solvent, but the organic solvent is not limited thereto. The final concentration of the organic solvent affects the production efficiency of the components, and the optimum final concentration of the organic solvent is preferably 5% by volume or more, more preferably 30 to 75% by volume.
[0057]
The organic solvent-insoluble fraction, which is the composition of the present invention thus obtained, is used as it is or by subjecting it to freeze-drying, etc., to obtain a dry product powder, which can strongly suppress the onset of alcoholic liver damage. It can be used as a medicament having an action and a healing action.
[0058]
【Example】
EXAMPLES The present invention will be specifically described below with reference to examples, but the present invention is not limited to these examples.
[0059]
[Example 1]
The barley shochu distillation residue obtained in the above-mentioned method was centrifuged under the conditions of 8000 rpm and 10 min to obtain a liquid content of the barley shochu distillation residue, and the resulting liquid content was a synthetic adsorbent made by Organo Corporation. By passing through a column packed with Amberlite XAD-16 and subjecting it to an adsorption separation process, a fraction of the synthetic adsorbent non-adsorbed consisting of a flow-through liquid exhibiting non-adsorbing properties with respect to the synthetic adsorbent of the column was fractionated. The resultant synthetic adsorbent non-adsorbed fraction was adjusted to Brix10, and then 1 L of the synthetic adsorbent non-adsorbed fraction adjusted to Brix10 was added to 500 ml of Amberlite 200CT (strongly acidic cation exchange resin) manufactured by Organo Corporation. To obtain a non-adsorbed fraction of ion-exchange resin, and the obtained non-adsorbed fraction of ion-exchange resin was subjected to ultrafiltration membrane UFP-30-E-4MA (fractionation by A / G Technology). A concentrated solution is obtained by treatment with a molecular weight of 30,000), the resulting concentrated solution is adjusted to Brix 20, ethanol is added to a final concentration of 75% by volume, and the mixture is centrifuged at 8000 rpm for 10 minutes to obtain an organic solvent. The insoluble fraction was collected, and the organic solvent insoluble fraction was lyophilized to obtain 1.3 g of a lyophilized product of the organic solvent insoluble fraction. The freeze-dried product was pulverized to obtain an off-white and tasteless and odorless composition.
[0060]
[Comparative Example 1]
The barley shochu distillation residue obtained in the above was centrifuged at 8000 rpm for 10 min to obtain a liquid portion of the barley shochu distillation residue, and the resulting liquid portion was used as a synthetic adsorbent amber made by Organo Corporation. By passing through a column packed with lite XAD-16 and subjecting it to an adsorption separation treatment, a non-adsorbed fraction of the synthetic adsorbent consisting of a flow-through liquid exhibiting non-adsorbability with respect to the synthetic adsorbent of the column was fractionated. The synthetic adsorbent non-adsorbed fraction 1 L thus obtained was freeze-dried to obtain 57.2 g of a freeze-dried product of the synthetic adsorbent non-adsorbed fraction. The freeze-dried product was pulverized to obtain an off-white and tasteless and odorless composition.
[0061]
Each of the lyophilized product powder (composition) obtained in Example 1 and the lyophilized product powder obtained in Comparative Example 1 was subjected to the following Test Example 1 to evaluate the onset inhibitory action against alcoholic liver injury.
[0062]
[Test Example 1]
In order to clarify the remarkable inhibitory action against the onset of alcoholic liver injury of the composition of the present invention, the following Test Example 1 was conducted.
In other words, 36 male 3-week-old Wistar rats (Japan SLC) were given ethanol-containing liquid feed for 6 days while gradually increasing the ethanol content (3% → 4% → 5%). The control group, test group 1 and test group 2 were divided into three groups. At that time, the 36 rats were distributed so that there was no statistically significant difference in the variance relating to the average weight of the rats in each group. The control group of rats was fed with 5% ethanol-containing liquid feed for 4 weeks. Test group 1 rats were fed with a liquid feed obtained by adding 1% of the lyophilized powder obtained in Example 1 to a liquid feed containing 5% ethanol for 4 weeks. Test group 2 rats were fed with 5% ethanol-containing liquid feed supplemented with 1% lyophilized powder obtained in Comparative Example 1 for 4 weeks. Separately from the control group, test group 1 and test group 2, an untreated group consisting of 12 3-week-old male male Wistar rats was provided. In order to make it the same, an ethanol-free liquid feed supplemented with a mixture of equal amounts of maltose-dextrin instead of 5% ethanol was fed for 4 weeks. However, in the above four groups, the daily feed amount (calorie intake) of each liquid feed was limited to 70 ml (70 kcal). On the last day of the experiment (four weeks after the start of the test), blood was collected from each abdominal aorta of the reared rat, and the liver was removed. The collected blood was subjected to serum separation, and serum total cholesterol, serum HDL-cholesterol, serum LDL-cholesterol, serum triglyceride, serum phospholipid, serum free fatty acid, and serum ALT were measured. Moreover, about the extracted liver, liver weight, liver total cholesterol, liver triglyceride, and liver phospholipid were measured. The obtained results were expressed as mean ± standard error (SEM), and statistical processing was performed according to the following procedure. That is, the comparison between the untreated group and the control group was analyzed using the Student's test method, and then the comparison between the test group 1 and test group 2 with respect to the control group was analyzed using the Tukey-Kramer method. 0.05% or less was judged as significant. Further, hepatocytes collected from the extracted liver were subjected to HE staining, and then the morphology of the hepatocytes was observed at 200 times magnification using a biological microscope BX51 manufactured by Olympus Optical Co., Ltd.
[0063]
[Evaluation 1]
The measurement results of serum total cholesterol, serum HDL-cholesterol, serum LDL-cholesterol, serum triglyceride, serum phospholipid, serum free fatty acid, and serum ALT obtained above are shown in Table 1, liver weight, liver total cholesterol, liver The following facts were found from the measurement results of triglycerides and liver phospholipids.
That is, the control group significantly increased serum total cholesterol concentration, serum HDL-cholesterol concentration, serum LDL-cholesterol concentration, serum triglyceride concentration, and serum phospholipid concentration, compared with the untreated group. It was found that blood was induced. In addition, the control group was found to have significantly increased liver triglyceride concentration and liver phospholipid concentration compared to the untreated group, and alcoholic fatty liver was induced. Furthermore, in the control group, the blood ALT (GPT) concentration increased significantly compared with the untreated group, and hepatocyte necrosis and balloon-like in the region around the terminal hepatic vein of hepatic lobule were observed in the biomicroscopic observation of hepatocytes. Enlargement was noticeable, and alcoholic hepatitis was found to have been induced. On the other hand, in test group 1 and test group 2, increases in serum LDL-cholesterol concentration, serum triglyceride concentration, and liver triglyceride concentration were significantly suppressed. In particular, test group 1 was closer to normal values than test group 2 Showed the value. In Test Group 1 and Test Group 2, almost all hepatocellular necrosis and balloon-like swelling were observed in the peripheral region of the terminal hepatic vein of the hepatic lobule, which was also specifically observed in alcoholic liver damage in the biomicroscopic observation of hepatocytes. I couldn't.
[0064]
From the above results, the lyophilized product powder of the present invention obtained in Example 1 significantly suppresses the induction of alcoholic liver injury more than the lyophilized product powder obtained in Comparative Example 1, resulting in alcoholic liver injury. On the other hand, it was proved to have an excellent onset suppression effect.
That is, it has been clarified that the composition of the present invention has a remarkable onset-suppressing action against alcoholic liver injury.
[0065]
Each of the lyophilized product powder (composition) obtained in Example 1 and the lyophilized product powder obtained in Comparative Example 1 was subjected to Test Example 2 below, and the healing action against alcoholic liver injury was evaluated.
[0066]
[Test Example 2]
In this test example, the lyophilized product powder obtained in Example 1 (composition of the present invention) and Comparative Example 1 were obtained for rats that developed alcoholic liver injury by feeding on an ethanol-containing liquid feed for 4 weeks. By raising each of the freeze-dried powders, the healing effect on alcoholic liver injury was evaluated.
That is, 30 7-week-old male Wistar rats (Japanese Charles River) were fed with ethanol-containing liquid feed for 6 days while gradually increasing the ethanol content (3% → 4% → 5%). Each of the rats was bred with a liquid feed containing% ethanol for 4 weeks, and blood was collected from each of the rats in the 4th week, and plasma lipids were separated to measure serum lipids. Thereafter, the 30 rats were divided into 3 groups of 10 groups per group, control group, test group 1 and test group 2. At that time, the 30 rats were distributed so that there was no statistically significant difference in the variance relating to the average body weight of the rats in each group. In order to make the calorie intake the same as the group containing the ethanol-containing liquid feed, the control group rats were fed with ethanol-free liquid feed supplemented with an equal mixture of maltose-dextrin instead of 5% ethanol for 2 weeks. did. Test group 1 rats were fed with a liquid feed in which 1% of the freeze-dried powder obtained in Example 1 was added to an ethanol-free liquid feed for 2 weeks. Test group 2 rats were fed with a liquid feed in which 1% of the freeze-dried powder obtained in Comparative Example 1 was added to the ethanol-free liquid feed for 2 weeks. In addition to the control group, test group 1 and test group 2, an untreated group consisting of 10 7-week-old Wistar male rats was provided, and ethanol-free liquid feed was given to the untreated group rats for 6 weeks. And raised. However, in the above four groups, the daily feed amount (calorie intake) of each liquid feed was limited to 70 ml (70 kcal). For all four groups, blood was collected from the abdominal aorta of each of the reared rats on the last day of the experiment (six weeks after the start of the experiment), and the liver was removed. The collected blood was subjected to serum separation, and serum total cholesterol, serum LDL-cholesterol, serum triglyceride, serum phospholipid, serum ALT (GPT), and serum AST (GOT) were measured. Moreover, about the extracted liver, liver weight, liver total cholesterol, liver triglyceride, and liver phospholipid were measured. The obtained results were expressed as mean ± standard error (SEM), and statistical processing was performed according to the following procedure. That is, the comparison between the untreated group and the control group was analyzed using the Student's test method, and then the comparison between the test group 1 and test group 2 with respect to the control group was analyzed using the Tukey-Kramer method. 0.05% or less was judged as significant. Further, hepatocytes collected from the extracted liver were subjected to HE staining, and then the morphology of the hepatocytes was observed at 200 times magnification using a biological microscope BX51 manufactured by Olympus Optical Co., Ltd.
[0067]
[Evaluation 2]
Measurement results of serum total cholesterol, serum LDL-cholesterol, serum triglyceride, serum phospholipid, serum ALT, and serum AST obtained above, and measurement results of liver weight, liver total cholesterol, liver triglyceride, and liver phospholipid The following facts were revealed.
That is, in the control group, serum total cholesterol and serum LDL-cholesterol showed significantly higher values than in the untreated group, and serum triglycerides and serum phospholipids tended to be higher than in the untreated group. In the observation, hepatocellular necrosis and balloon-like swelling in the peripheral region of the terminal hepatic vein of the hepatic lobule, which were specifically observed in alcoholic liver injury, were observed. On the other hand, test group 1 and test group 2, serum total cholesterol concentration, serum LDL-cholesterol concentration, serum triglyceride concentration, serum phospholipid concentration, serum ALT concentration, serum AST concentration, liver total cholesterol concentration, and liver triglyceride concentration, The value was significantly lower than that of the control group. In particular, test group 1 showed a value closer to the normal value than test group 2. In addition, in test group 1 and test group 2, hepatocyte necrosis and balloon-like swelling in the region around the terminal hepatic vein of hepatic lobule, which is specifically observed in alcoholic liver injury in the biomicroscopic observation of hepatocytes, were compared with the control group. A significant decrease was observed in comparison.
From the above results, the lyophilized product powder of the present invention obtained in Example 1 surpassed the lyophilized product powder obtained in Comparative Example 1, and healed alcoholic liver disorder more significantly. It was found to show a remarkable healing effect.
That is, it was found that the composition of the present invention has an excellent healing action against alcoholic liver injury.
[0068]
Each of the lyophilized product powder (composition) obtained in Example 1 and the lyophilized product powder obtained in Comparative Example 1 was subjected to Test Example 3 below, and the healing action for alcoholic liver injury was different from Test Example 2 The method was evaluated.
[Test Example 3]
30 7-week-old male Wistar rats (Japanese Charles River) were fed with ethanol-containing liquid feed for 6 days while gradually increasing the ethanol content (3% → 4% → 5%), and then continued with 5% ethanol. The containing liquid feed was raised for 4 weeks, and blood was collected from each of the rats during the 4th week. Plasma was separated and serum lipids were measured. Thereafter, the 30 rats were divided into 3 groups, 10 groups per group, control group, test group 1 and test group 2. At that time, the 30 rats were distributed so that there was no statistically significant difference in the variance relating to the average body weight of the rats in each group. The control group rats were fed with 5% ethanol-containing liquid feed for 2 weeks. Test group 1 rats were fed with a liquid feed obtained by adding 1% of the lyophilized powder obtained in Example 1 to a liquid feed containing 5% ethanol for 2 weeks. Test group 2 rats were fed with a liquid feed obtained by adding 1% of the freeze-dried powder obtained in Comparative Example 1 to a liquid feed containing 5% ethanol for 2 weeks. Further, in addition to the control group, test group 1 and test group 2, an untreated group consisting of 10 7-week-old Wistar male rats was provided.For the rats of the untreated group, the 5% ethanol-containing liquid feed and In order to make the calorie intake the same, an ethanol-free liquid feed supplemented with a mixture of equal amounts of maltose-dextrin instead of 5% ethanol was fed for 6 weeks. However, in the above four groups, the daily feed amount (calorie intake) of each liquid feed was limited to 70 ml (70 kcal). For all four groups, blood was collected from the abdominal aorta of each of the reared rats on the last day of the experiment (six weeks after the start of the experiment), and the liver was removed. The collected blood was subjected to serum separation, and then serum total cholesterol, serum LDL-cholesterol, serum triglyceride, serum phospholipid, serum ALT, and serum AST were measured. Moreover, about the extracted liver, liver weight, liver total cholesterol, liver triglyceride, and liver phospholipid were measured. The obtained results were expressed as mean ± standard error (SEM), and statistical processing was performed according to the following procedure. That is, the comparison between the untreated group and the control group was analyzed using the Student's test method, and then the comparison between the test group 1 and test group 2 with respect to the control group was analyzed using the Tukey-Kramer method. 0.05% or less was judged as significant. Further, hepatocytes collected from the extracted liver were subjected to HE staining, and then the morphology of the hepatocytes was observed at 200 times magnification using a biological microscope BX51 manufactured by Olympus Optical Co., Ltd.
[0069]
[Evaluation 3]
Measurement results of serum total cholesterol, serum LDL-cholesterol, serum triglyceride, serum phospholipid, serum ALT, and serum AST obtained above, and measurement results of liver weight, liver total cholesterol, liver triglyceride, and liver phospholipid The following facts were revealed.
That is, the control group compared to the untreated group, serum total cholesterol concentration, serum LDL-cholesterol concentration, serum triglyceride concentration, serum phospholipid concentration, serum ALT concentration, liver weight, liver total cholesterol concentration, and liver triglyceride concentration The liver microscopic observation of hepatocytes showed markedly hepatocyte necrosis and balloon-like swelling in the peripheral region of the terminal hepatic vein of the hepatic lobule, which was specifically observed in alcoholic liver injury. On the other hand, in test group 1 and test group 2, serum triglyceride concentration, serum total cholesterol concentration, serum phospholipid concentration, serum LDL-cholesterol concentration, and liver total cholesterol concentration and liver triglyceride concentration were significantly higher than those in the control group. In particular, the test group 1 showed a value closer to the normal value than the test group 2 showed. In addition, in test group 1 and test group 2, hepatocyte necrosis and balloon-like swelling in the region around the terminal hepatic vein of hepatic lobule, which is specifically observed in alcoholic liver injury in the biomicroscopic observation of hepatocytes, were compared with the control group. A significant decrease was observed in comparison.
From the above results, the lyophilized product powder of the present invention obtained in Example 1 surpassed the lyophilized product powder obtained in Comparative Example 1, and healed alcoholic liver disorder more significantly. It was found to show a remarkable healing effect.
That is, it was found that the composition of the present invention has an excellent healing action against alcoholic liver injury.
[0070]
As is apparent from the results described in Test Example 1, the composition of the present invention is a non-adsorbed synthetic adsorbent obtained by subjecting the liquid content of the barley shochu distillation residue to an adsorption separation process using a synthetic adsorbent. It has been found that it has an excellent alcoholic liver injury-suppressing effect with an excellent fraction, and strongly suppresses alcoholic liver injury caused by ethanol administration. Further, as is clear from the results described in Test Example 2 and Test Example 3, it was found that the composition of the present invention markedly healed alcoholic liver injury that had already developed.
[0071]
[Usage example 1]
The freeze-dried powder obtained in Example 1 was used and mixed with other carrier materials at the following material mixing ratios, and pharmaceutical tablets were prepared using a tableting machine.
Material blending ratio: 35% by weight of lyophilized powder obtained in Example 1, 5% by weight of sugar ester, 30% by weight of oligosaccharide, 30% by weight of lactose
[0072]
【The invention's effect】
As described above in detail, the barley shochu distillation residue obtained as a by-product in the production of shochu using the barley of the present invention is subjected to solid-liquid separation to obtain a liquid component, and the liquid component is adsorbed and separated using a synthetic adsorbent. The synthetic adsorbent non-adsorbed fraction is obtained by subjecting the synthetic adsorbent non-adsorbed fraction to an ion exchange treatment using an ion exchange resin to obtain an ion exchange resin non-adsorbed fraction. The composition comprising an organic solvent insoluble fraction obtained by subjecting the non-adsorbed fraction to an ultrafiltration treatment using an ultrafiltration membrane to obtain a concentrated liquid and adding an organic solvent to the concentrated liquid is alcoholic. Has significant inhibitory and curative effects on the development of liver damage.
Claims (7)
分子量分布：
１００，０００以上 １１％
３０，０００乃至１００，０００ ２９％
１０，０００乃至 ３０，０００ ２４％
３，０００乃至 １０，０００ ２１％
１，０００乃至 ３，０００ ６％
５００乃至 １，０００ ２％
５００以下 ７％The barley shochu distillation residue obtained as a by-product in the production of shochu using barley as a raw material is subjected to solid-liquid separation to obtain a liquid component, which is then subjected to an adsorption separation process using an aromatic synthetic adsorbent or a methacrylic synthetic adsorbent To obtain a non-adsorbed fraction of the synthetic adsorbent, and the non-adsorbed fraction of the synthetic adsorbent is weakly acidic cation exchange resin, strongly acidic cation exchange resin, weakly basic anion exchange resin, strongly basic anion. Ion exchange treatment using ion exchange resin using ion exchange resin selected from exchange resin, strongest basic anion exchange resin, and mixed bed type ion exchange resin of these cation exchange resin and anion exchange resin Obtaining a resin non-adsorbed fraction, subjecting the ion-exchange resin non-adsorbed fraction to ultrafiltration using an ultrafiltration membrane to obtain a concentrated liquid, and adding an organic solvent to the concentrated liquid. Without containing uronic acid substantially. Loin consists arabinose and glucose, xylose / arabinose ratio> containing polysaccharide is 2.0, and inhibiting the onset and therapeutic agent of alcoholic hepatopathy comprising an organic solvent-insoluble fraction having a molecular weight distribution below.
Molecular weight distribution:
100,000 or more 11%
30,000 to 100,000 29%
10,000 to 30,000 24%
3,000 to 10,000 21%
1,000 to 3,000 6%
500 to 1,000 2%
500 or less 7%
分子量分布：
１００，０００以上 １１％
３０，０００乃至１００，０００ ２９％
１０，０００乃至 ３０，０００ ２４％
３，０００乃至 １０，０００ ２１％
１，０００乃至 ３，０００ ６％
５００乃至 １，０００ ２％
５００以下 ７％A step of obtaining a liquid component by solid-liquid separation of the barley shochu distillation residue produced as a by-product in the production of shochu using barley as a raw material, an adsorptive separation process using the liquid component as an aromatic synthetic adsorbent or a methacrylic synthetic adsorbent A step of obtaining a synthetic adsorbent non-adsorbed fraction by subjecting the synthetic adsorbent non-adsorbed fraction to a weakly acidic cation exchange resin, a strongly acidic cation exchange resin, a weakly basic anion exchange resin, and a strongly basic It is subjected to an ion exchange treatment using an anion exchange resin, the strongest basic anion exchange resin, and an ion exchange resin selected from a mixed bed type ion exchange resin of these cation exchange resin and anion exchange resin. A step of obtaining an ion-exchange resin non-adsorbed fraction, a step of subjecting the ion-exchange resin non-adsorbed fraction to ultrafiltration using an ultrafiltration membrane to obtain a concentrate, and adding an organic solvent to the concentrate By substantially reducing uronic acid A step of fractionating an organic solvent-insoluble fraction containing a polysaccharide consisting of xylose, arabinose, and glucose and having a xylose / arabinose ratio> 2.0 and having the following molecular weight distribution. A method for producing a therapeutic agent for suppressing the onset of alcoholic liver disorder , which is characterized.
Molecular weight distribution:
100,000 or more 11%
30,000 to 100,000 29%
10,000 to 30,000 24%
3,000 to 10,000 21%
1,000 to 3,000 6%
500 to 1,000 2%
500 or less 7%
分子量分布：
１００，０００以上 １１％
３０，０００乃至１００，０００ ２９％
１０，０００乃至 ３０，０００ ２４％
３，０００乃至 １０，０００ ２１％
１，０００乃至 ３，０００ ６％
５００乃至 １，０００ ２％
５００以下 ７％
５００以下 ７％A process for producing barley shochu by subjecting barley koji produced from brown barley or polished barley as a raw material to yeast for shochu to produce aged mash, and subjecting the aged mash to distillation (A), and It consists of the process (B) which processes the barley shochu distillation residual liquid by-produced as a distillation residue when manufacturing the barley shochu in the process (A). In the process (B), the barley shochu distillation residual liquid solid liquid A step of obtaining a liquid component by separation, a step of subjecting the liquid component to an adsorption separation process using an aromatic synthetic adsorbent or a methacrylic synthetic adsorbent to obtain a synthetic adsorbent non-adsorbed fraction, the synthetic adsorbent The non-adsorbed fraction is divided into weakly acidic cation exchange resin, strongly acidic cation exchange resin, weakly basic anion exchange resin, strongly basic anion exchange resin, strongest basic anion exchange resin, and their cation exchange. Resin and anion exchange resin Obtaining an ion-exchange resin non-adsorbed fraction is subjected to ion exchange treatment using an ion exchange resin selected from the mixed bed ion-exchange resin, using an ultrafiltration membrane the ion exchange resin non-adsorbed fraction A step of obtaining a concentrate by subjecting to an ultrafiltration treatment, and an organic solvent added to the concentrate to substantially contain uronic acid and consisting of xylose, arabinose and glucose, and a xylose / arabinose ratio The step of fractionating an organic solvent insoluble fraction containing a polysaccharide of> 2.0 and having the following molecular weight distribution is sequentially performed, and the step (A) and the step (B) are continuously performed. A method for continuously producing an agent for suppressing and treating the onset of alcoholic liver injury comprising the barley shochu and the organic solvent-insoluble fraction.
Molecular weight distribution:
100,000 or more 11%
30,000 to 100,000 29%
10,000 to 30,000 24%
3,000 to 10,000 21%
1,000 to 3,000 6%
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500 or less 7%
500 or less 7%
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