JP4247385B2 - C型肝炎ウイルスのns3プロテアーゼを標的とする、ヘテロ二量体を形成するrna分子 - Google Patents
C型肝炎ウイルスのns3プロテアーゼを標的とする、ヘテロ二量体を形成するrna分子 Download PDFInfo
- Publication number
- JP4247385B2 JP4247385B2 JP2003396530A JP2003396530A JP4247385B2 JP 4247385 B2 JP4247385 B2 JP 4247385B2 JP 2003396530 A JP2003396530 A JP 2003396530A JP 2003396530 A JP2003396530 A JP 2003396530A JP 4247385 B2 JP4247385 B2 JP 4247385B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- rna
- protease
- seq
- stem
- activity
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
- 108700012707 hepatitis C virus NS3 Proteins 0.000 title description 2
- 230000008685 targeting Effects 0.000 title 1
- 108091008103 RNA aptamers Proteins 0.000 claims description 71
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 40
- 241000711549 Hepacivirus C Species 0.000 claims description 28
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 26
- 101710144111 Non-structural protein 3 Proteins 0.000 claims description 9
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 127
- 101800001838 Serine protease/helicase NS3 Proteins 0.000 description 39
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 22
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 18
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 17
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 17
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 16
- 235000019419 proteases Nutrition 0.000 description 16
- 239000000833 heterodimer Substances 0.000 description 14
- 238000000034 method Methods 0.000 description 14
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 13
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 12
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 12
- 208000005176 Hepatitis C Diseases 0.000 description 11
- 108091023037 Aptamer Proteins 0.000 description 10
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 10
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 10
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 8
- 101800001020 Non-structural protein 4A Proteins 0.000 description 8
- 101800001014 Non-structural protein 5A Proteins 0.000 description 8
- 238000010187 selection method Methods 0.000 description 7
- 101800001554 RNA-directed RNA polymerase Proteins 0.000 description 6
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 6
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 6
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 6
- 101800001019 Non-structural protein 4B Proteins 0.000 description 5
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 5
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 5
- 101710132601 Capsid protein Proteins 0.000 description 4
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 4
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 4
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 4
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 4
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 4
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 3
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 3
- 101710172711 Structural protein Proteins 0.000 description 3
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 3
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 3
- 125000005842 heteroatom Chemical group 0.000 description 3
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 3
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 3
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 3
- 206010008909 Chronic Hepatitis Diseases 0.000 description 2
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 2
- 108010022999 Serine Proteases Proteins 0.000 description 2
- 102000012479 Serine Proteases Human genes 0.000 description 2
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 2
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- 108091069025 single-strand RNA Proteins 0.000 description 2
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 2
- 108090000317 Chymotrypsin Proteins 0.000 description 1
- 101710094648 Coat protein Proteins 0.000 description 1
- 101710118188 DNA-binding protein HU-alpha Proteins 0.000 description 1
- 101100316028 Drosophila melanogaster Uggt gene Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 241000672609 Escherichia coli BL21 Species 0.000 description 1
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 241000710781 Flaviviridae Species 0.000 description 1
- 102100021181 Golgi phosphoprotein 3 Human genes 0.000 description 1
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 101710125418 Major capsid protein Proteins 0.000 description 1
- 108060004795 Methyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 101710144128 Non-structural protein 2 Proteins 0.000 description 1
- 101710199667 Nuclear export protein Proteins 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 101710141454 Nucleoprotein Proteins 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 101710083689 Probable capsid protein Proteins 0.000 description 1
- 102000006382 Ribonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010083644 Ribonucleases Proteins 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710137500 T7 RNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- -1 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000037429 base substitution Effects 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 1
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 229960002376 chymotrypsin Drugs 0.000 description 1
- 230000007882 cirrhosis Effects 0.000 description 1
- 208000019425 cirrhosis of liver Diseases 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 125000001295 dansyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(N(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H])=C2C([H])=C([H])C([H])=C(C2=C1[H])S(*)(=O)=O 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 150000002611 lead compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000001638 lipofection Methods 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000019423 liver disease Diseases 0.000 description 1
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 1
- 230000006959 non-competitive inhibition Effects 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- RGCLLPNLLBQHPF-HJWRWDBZSA-N phosphamidon Chemical compound CCN(CC)C(=O)C(\Cl)=C(/C)OP(=O)(OC)OC RGCLLPNLLBQHPF-HJWRWDBZSA-N 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000004043 responsiveness Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 108010036927 trypsin-like serine protease Proteins 0.000 description 1
- 108010087967 type I signal peptidase Proteins 0.000 description 1
Images
Description
テロ二量体を形成するRNA分子に関する。本発明はさらに、該RNA分子を含むC型肝炎の診
断、予防または治療用の医薬組生物に関する。
(NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A、NS5B)に変換される(図1参照)。
いる。NS3のN末端側の約1/3にはプロテアーゼドメイン、C末端側の約2/3にはヘリカーゼ
ドメインがコードされている。NS3のヒスチジン1083、アスパラギン酸1107及びセリン1165はセリンプロテアーゼファミリーの中でもキモトリプシン系に属しているようなNS3プロテアーゼの触媒作用のトリアッド(三つ組み)を構成している。NS3領域にコードされて
いるセリンプロテアーゼ(以下、「NS3プロテアーゼ」という)の活性は、非構造蛋白質
間の切断(4箇所;NS3/NS4A、NS4A/NS4B、NS4B/NS5A、NS5A/NS5B;図1参照)に関与しており、NS4Aによって促進されることが報告されている(Hijikata, M. et al., J. Virol., 67:4665-4675, 1993b等)。これらの知見から、NS3プロテアーゼ活性は、HCV増殖に必
要な因子の一つと結論づけられる。このためNS3プロテアーゼ活性阻害剤は、HCV疾患の予防薬および治療薬となりうると考えられている。
的に阻害可能なRNAアプタマーを創製することに成功した(特許文献1参照)。アプタマ
ー(aptamer)は、アミノ酸のような小分子からタンパク質、さらにはウイルスのような
高分子を認識する核酸分子であり、インビトロ選択法によって得ることができる。
上記RNAアプタマーを分割することができると、各々の分子のみではプロテアーゼ阻害活
性を持たない(或いは弱い阻害活性を示す)が、各々の分子を混合することによってヘテ
ロ二量体RNA分子を形成した状態ではプロテアーゼ結合活性並びに阻害活性を有する(或
いは結合活性並びに阻害活性が上昇する)といった機能性RNA分子となりうることが予想
される。
ゼに対して結合活性並びに阻害活性を有する(或いは結合活性並びに阻害活性が上昇する)といった機能性RNA分子を提供することである。
るRNAアプタマーのループ構造の一部を除去しても、NS3プロテアーゼに対する結合活性並びに阻害活性を保持すること、及び当該ループ構造の一部を除去することで上記RNAアプ
タマーをヘテロ二量体として構成できることを見出し、本発明を完成するに至った。
(1) ヘテロ二量体を形成する一組のRNA分子からなり、C型肝炎ウイルス由来のNS3タンパク質に対する結合活性及び阻害活性を有するRNAアプタマー。
(2) 上記一組のRNA分子のうち一方のRNA分子は単独で上記結合活性及び阻害活性を有
し、他方のRNA分子との間でヘテロ二量体を形成した状態で上記結合活性及び阻害活性が
上昇することを特徴とする(1)記載のRNAアプタマー。
(3) 上記一組のRNA分子のうち一方のRNA分子が、ループ構造を形成する下記の塩基配
列5’-GAWUGGGAC-3’(WはA又はU)を有することを特徴とする(1)記載のRNAアプタマー。
(4) 上記ループ構造を形成する塩基配列の両末端側にステム構造を形成する塩基配列
を有し、ループ-ステム構造を形成していることを特徴とする(3)記載のRNAアプタマー。
(5) 上記一方のRNA分子は、下記の塩基配列5'-RGGAGA-3'(RはA又はG)に対して相補
鎖を形成しうる塩基配列を有することを特徴とする(3)記載のRNAアプタマー。
(6) 上記相補鎖を形成しうる塩基配列は下記の塩基配列5’-UCUCCU-3’であることを
特徴とする(5)記載のRNAアプタマー。
(7) 上記ループ-ステム構造が5’-GAGGGUAGAAUGGGACUACCUUU-3’(配列番号1)からなる塩基配列であることを特徴とする(4)記載のRNAアプタマー。
(8) 上記ループ-ステム構造と上記相補鎖を形成しうる塩基配列との間にリンカー配列を有することを特徴とする(5)記載のRNAアプタマー。
(9) 上記リンカー配列は下記の塩基配列5’-CCUC-3’であることを特徴とする(8)記載のRNAアプタマー。
(10) 上記一方のRNA分子は、上記ループ構造の5'末端側に、上記他方のRNA分子との間でステム構造を形成しうる塩基配列を有することを特徴とする(3)記載のRNAアプタマー。
(11) 上記ステム構造を形成しうる塩基配列は、
(i) 5’-GCUUCGGGAUUU-3’(配列番号2)
(ii) 5’-GGGAUUU-3’
(iii) 5’-GGGAGAUUU-3’
からなる群から選択される塩基配列であることを特徴とする(10)記載のRNAアプタマー。
(12) 上記一方のRNA配列は、下記の塩基配列
5’-GGGAGAUUUGAGGGUAGAAUGGGACUACCUUUCCUCUCUCCUU-3’(配列番号3)
5’-GCUUCGGGAUUUGAGGGUAGAAUGGGACUACCUUUCCUCUCUCCUU-3’(配列番号4)
(iii)5’-GGGAUUUGAGGGUAGAAUGGGACUACCUUUCCUCUCUCCUU-3’(配列番号5)
からなる群から選択される何れかの塩基配列からなることを特徴とする(2)記載のRNAアプタマー。
(13) 上記一組のRNA分子のうち他方のRNA分子が、下記の塩基配列5’-RGGAGA-3’(R
はA又はGである)を有することを特徴とする(2)記載のRNAアプタマー。
(14) 上記他方のRNA分子は、上記塩基配列の3’末端側に、上記一方のRNA分子との間
で相補鎖を形成する塩基配列を有することを特徴とする(13)記載のRNAアプタマー。
(15) 上記他方のRNA分子は、下記の塩基配列
(i) 5’-AUCUCCC-3’
(ii) 5’-AUUCCGA-3’
(iii) 5’-AUCCCGA-3’
(iv) 5’-AUUCC-3’
(v) 5’-AUCCC-3’
からなる群から選択される何れかの塩基配列を有することを特徴とする(13)記載のRNAア
プタマー。
(16) 上記他方のRNA分子は下記の塩基配列
(i) 5’-AAGGAGAAUCUCCC-3’(配列番号6)
(ii) 5’-GGGAGAAUCUCCC-3’(配列番号7)
(iii) 5’-GGGAGAAUUCCGA-3’(配列番号8)
(iv) 5’-GGGAGAAUCCCGA-3’(配列番号9)
(v) 5’-GGGAGAAUUCC-3’(配列番号10)
(vi) 5’-GGGAGAAUCCC-3’(配列番号11)
からなる群から選択される配列からなることを特徴とする(13)記載のRNAアプタマー。
(17) (1)〜(16)のいずれか一に記載のRNAアプタマーを含むC型肝炎診断医薬組成物。
(18) (1)〜(16)のいずれか一に記載のRNAアプタマーを含むC型肝炎予防医薬組成物。
(19) (1)〜(16)のいずれか一に記載のRNAアプタマーを含むC型肝炎治療医薬組成物。
性を有しているが、ヘテロ二量体を形成することによって阻害活性を発現するか、または阻害活性が上昇する。すなわち、本発明に係るヘテロ二量体RNAアプタマーは、モレキュ
ラービーコンなどを利用した診断方法への応用や、C型肝炎ウイルスに感染したが発症し
ていないキャリアに対する発症予防やC型肝炎発症後の治療に使用可能であり、診断成績
、治療成績の向上が期待できる。
って得ることができる。この選択法では、ランダムな配列を持つRNA分子のプールから特
定のタンパク質に結合するRNA分子を選択し、増幅するサイクルをくり返すことによって
、上記プールから非常に特異的に結合するRNA分子をアプタマーとして同定する。すなわ
ち、最初はごく僅かしかないそのような分子もPCR法で増幅され、結合の弱い分子はサイ
クルをくり返すことで淘汰され、最終的に特異的に結合する分子のみが残る。
成した構造をいう。
テロ二量体をとった場合、「ヘテロ二量体RNA」と称する。
型肝炎ウイルス由来のNS3プロテアーゼに対して結合することによって、そのプロテアー
ゼ活性を阻害することができる。なお、以下の説明において、本発明に係るRNA分子をヘ
テロ二量体RNAアプタマーと称する場合もある。
ヘテロ二量体RNAアプタマーの基礎となる、HCVのNS3プロテアーゼに対して阻害活性を
示す一本鎖RNAアプタマーについて説明する。
できる。また、NS3プロテアーゼ活性ドメインは、NS3プロテアーゼにおけるアミノ酸番号1027〜1218に相当するドメインであり、以下の説明においてΔNS3と称する。
(5’-GA(A /U)UGGAC-3’)を形成していることが推測される(図2Bにおける四角で囲
われた領域及び図2Cにおける太字の領域)。
を確認することもできる。一本鎖RNAアプタマーのΔNS3に対する解離定数を算出した結果、3つとも約10 nMであった。また、ΔNS3及びMBP-NS3(NS3プロテアーゼの全アミノ酸配列を含むもの)のプロテアーゼ活性に対する抑制効果を調べた結果、すべての一本鎖RNA
アプタマーが約90%の阻害活性を示した。さらに、p41(NS4Aの一部の配列を含む合成
ペプチドでNS4Aと機能相補し、NS3プロテアーゼ活性を促進する。)存在下におけるMBP-NS3のプロテアーゼ活性の抑制効果を調べたところ、すべての一本鎖RNAアプタマーが約7
0%の阻害活性を示した。
析した結果、非競合的な阻害様式を示し、阻害物質定数は約100 nMであった。これらの結果から、得られた3種類の一本鎖RNAアプタマーは、NS3プロテアーゼに対して特異的親和
性を示し、抗HCV剤としてのリード化合物の候補になりうることが示唆された。
る場合もある。図3参照)も、両活性に関与していることが判明した。
る場合もある。図3参照)は、ΔNS3プロテアーゼ阻害活性に関して直接関与していなか
った。しかしながら、Stem IとStem-loop IIIとの間には、ΔNS3プロテアーゼ阻害活性を維持するための特定の三次構造を必要とするために、Stem-loop IIにおけるステム構造(以下、「Stem II」と称する場合もある。図3参照)が必要であることが判明した。ただし、このStem IIに関しては配列非依存的であって二本鎖構造を取るような配列であれば
如何なる配列であってもよい。
に分割可能で、両RNA分子を混合することによりG9-I様の高次構造を形成し、ΔNS3プロテアーゼ阻害活性を有するヘテロ二量体RNAアプタマーとなる。なお、以下の説明において
、G9-Iからloop IIを欠失させた構成のG9-I様の高次構造において、Stem-Loop IIIを含む塩基配列を「Long RNA」と称し、Stem-Loop IIIを含まない塩基配列を「Short RNA」と称する。
5’-GAWUGGGAC-3’(配列中、WはA又はUである。)
端側には、ステム構造をとりうる塩基配列がそれぞれ存在する。ステム構造をとりうる塩基配列としては、特に限定されず、如何なる塩基配列であってもよい。ループ-ステム構
造をとる塩基配列としては、特に限定されないが、以下の配列番号1に表す塩基配列を例示することができる。
5’-GAGGGUAGAWUGGGACUACCUUU-3’(配列番号1、(配列中、WはAまたはUである。))
する。すなわち、Long RNAに含まれ、Short RNAとの間でStem Iを形成する塩基配列とし
ては、例えば、5’-UCUCCC-3’を挙げることができるが、この配列に限定されない。例えば、Long RNAは、5’-UCUCCU-3’といった塩基配列のように、1塩基程度であればミスマッチの塩基(下線部)を含んでいてもよい。
造(ループ-ステム構造「Stem-loop III」)と上記ステム構造(「Stem I」)との間に、活性を有する三次構造を維持するためにリンカーが存在する。このリンカーの塩基配列としては、特に限定されないが、例えば5’-CCUC-3’とすることができる。
上記ループ構造(ループ-ステム構造「Stem-loop III」)の5’末端側に、Short RNAとの間でステム構造(「Stem I」)を形成し、活性を有する三次構造を維持するための塩基配列が存在する。Long RNAに含まれ、Stem Iを形成する塩基配列としては、特に限定されないが、例えば、5’-GCUUCGGGAUUU-3’(配列番号2)を挙げることができる。
(i) 5’-GGGAUUU-3’
(ii) 5’-GGGAGAUUU-3’
であってもよい。
特に、Short RNAは、上述したLong RNAとStem Iを形成する領域(以下「領域1」)とし
て、下記の3種類の塩基配列のうち何れかを有する。
(i) 5’-GGGAGA-3’
(ii) 5’-AGGAGA-3’
(iii) 5’-AAGGAGA-3’
(i) 5’-AUCUCCC-3’
(ii) 5’-AUUCCGA-3’
(iii) 5’-AUCCCGA-3’
(iv) 5’-AUUCC-3’
(v) 5’-AUCCC-3’
れている。なお、領域1と領域2の間には、リンカー配列が存在していてもしていなくてもよい。
、下記の3種類の塩基配列のうち何れかからなるRNA分子を使用することができる。
(i) 5’-GGGAGAUUUGAGGGUAGAAUGGGACUACCUUUCCUCUCUCCUU-3’(配列番号3)
(ii) 5’-GCUUCGGGAUUUGAGGGUAGAAUGGGACUACCUUUCCUCUCUCCUU-3’(配列番号4)
(iii) 5’-GGGAUUUGAGGGUAGAAUGGGACUACCUUUCCUCUCUCCUU-3’(配列番号5)
を挙げることができる。
(i) 5’-AAGGAGAAUCUCCC-3’(配列番号6)
(ii) 5’-GGGAGAAUCUCCC-3’(配列番号7)
(iii) 5’-GGGAGAAUUCCGA-3’(配列番号8)
(iv) 5’-GGGAGAAUCCCGA-3’(配列番号9)
(v) 5’-GGGAGAAUUCC-3’(配列番号10)
(vi) 5’-GGGAGAAUCCC-3’(配列番号11)
を挙げることができる。
が挙げられる。また、好ましいShort RNAとしては、配列番号9又は11表される塩基配
列からなるRNAが挙げられる。(図4中Type2およびType3)。
以上説明した本発明に係るヘテロ二量体RNAアプタマーは、HCV由来のNS3プロテアーゼ
の活性を阻害する。例えば、評価対象のヘテロ二量体RNA分子がHCV由来のNS3プロテアー
ゼの活性を阻害するか否かは、ΔNS3のプロテアーゼ活性の阻害効率を測定することによ
って検討することができる。
基質を使用することで、生成物を蛍光強度として検出することができる。
以上説明した本発明に係るヘテロ二量体RNAアプタマーは、HCV由来のNS3プロテアーゼ
に対して結合活性を示す。例えば、評価対象のヘテロ二量体RNA分子がHCV由来のNS3プロ
テアーゼに対して結合活性を示すか否かは、ΔNS3に対する結合活性を測定することによ
って検討することができる。
面プラズモン共鳴検出装置等によって検出することができる。
以上説明した本発明に係るヘテロ二量体RNAアプタマーは、C型肝炎を診断、予防または治療するために用いることができる。すなわち、上述したヘテロ二量体RNAアプタマーは
、HCVのNS3プロテアーゼの活性を阻害するため、HCVの増殖を低減することができる。
述したヘテロ二量体RNAアプタマーを導入する。細胞内にHCVが存在していれば、そのNS3
プロテアーゼをヘテロ二量体RNAアプタマーにより特異的に検出することができる。これ
により、被検者におけるHCV陽性又は陰性を判別することができる。例えば、一方のRNA分子の末端に蛍光プローブ化合物を共有結合でつなげたもの等と他方のRNA分子とを混合後
、細胞抽出液を加え、その後適当な分離系を用いて該ヘテロ二量体とNS3プロテアーゼと
の複合体を分離し、蛍光検出器等で検出する方法等があげられる。
マーの導入は、例えば、導入対象のヘテロ二量体RNAアプタマーをリポソームに封入し細
胞内に取り込む方法(“lipidic vector systems for gene transfer”(1997) R.J lee and L. Huang Crit, Rev. Ther. Drug Carrier Sys. 14: 173-206; 中西守ら、蛋白質 核酸 酵素 vol.44, No. 11, 1590-1596 (1999))、リン酸カルシウム法、エレクトロポレーション法、リポフェクション法、マイクロインジェクション法、遺伝子銃による方法などで行うことができる。
薬上許容される担体(例えば生理食塩水、緩衝液などの希釈剤)を含むことができる。本発明の医薬組生物は、C型肝炎の予防または治療に使用することができる。被験者への投
与量、投与方法、投与頻度は、被験者の年令、体重、性別、疾病の状態、重篤度、生体の応答性によって適宜変化させうるし、また、治療の有効性が認められるまで、あるいは疾病状態の軽減が達成されるまでの期間にわたり投与が継続される。
二量体アプタマー構成RNA分子等の構築
ここで使用したΔNS3タンパク質はすでに本発明者が報告した方法により大腸菌BL21株
により精製した(Vishunuvardhan, D. et al., FEBS Lett., 402: 209-212, 1997)。
5’-AGAAATACGACTCACTATAGGGAGAATTTGAGGGTAGAATGGGAC -3’(配列番号12)
(ii) Type1 r-プライマー
5’-AAGGAGAGAGGAAAGGTAGTCCCATTCTACCCTC-3’(配列番号13)
(i) Type2 f-プライマー
5’-AGAAATACGACTCACTATAGCTTCGGGATTTGAGGGTAGAATGGG -3’(配列番号14)
(ii) Type3 r-プライマー
5’-AAGGAGAGAGGAAAGGTAGTCCCATTCTACCCTCAAATCCC -3’(配列番号15)
(i) Type3 f-プライマー
5’-AGAAATACGACTCACTATAGGGATTTGAGGGTAGAATGGG -3’(配列番号16)
(ii) Type3 r-プライマー
5’-AAGGAGAGAGGAAAGGTAGTCCCATTCTACCCTCAAATCCC -3’(配列番号15)
のサイクルを25回、次いで72℃、60 sec)。得られたDNA断片を精製し、精製したDNA断片を、T7 RNAポリメラーゼ(EPICENTRE社製)を用いてRNAに転写して以下の実験に用いた。
(i) 5’-AAGGAGAAUCUCCC-3’(配列番号6)
(ii) 5’-GGGAGAAUCUCCC-3’(配列番号7)
(iii) 5’-GGGAGAAUUCCGA-3’(配列番号8)
(iv) 5’-GGGAGAAUCCCGA-3’(配列番号9)
(v) 5’-GGGAGAAUUCC-3’(配列番号10)
(vi) 5’-GGGAGAAUCCC-3’(配列番号11)
二量体アプタマーによるΔNS3プロテアーゼ阻害活性の測定
実施例1で作製したLong RNAとShort RNAを用いて、ヘテロ二量体RNAアプタマーによるΔNS3プロテアーゼ阻害活性を測定した。なお、本例では、基本的に垣内らによって報告
された方法(Kakiuchi, N. et al., Biochem. Biophys. Res. Commun. 210:1059-1065, 1995)に従った。
、40分反応した。反応混液をHPLCで分離し、蛍光(励起波長:340 nm、発光波長:510 nm)測定により、合成基質から産物の生成量を測定した。
た。
害活性を示さないか、或いは弱い阻害活性を示した。また、図5Cに示すように、Type2及びType3のLong RNAは、Short RNAの濃度に依存して阻害活性を示し、両RNA分子の比が1
:1の時、80%強の阻害活性を示した。一方、Type1のLong RNAは同条件下で、約20
%程度の阻害活性を示した。さらに、Type2、Type3のLong RNAに関しては、より安定な塩基対を組むShort RNAの方(配列番号9および11)が、若干強い阻害活性を示した(図5C
)。
二量体アプタマーのΔNS3への結合活性
実施例2で阻害活性の強かったType2及びType3のLong RNAを含むヘテロ二量体RNAアプ
タマーについて、ΔNS3に対する結合活性を検討した。具体的には、ΔNS3(0.8 μM)に
対して1当量のLong RNA(0.8 μM)と0〜1当量のShort RNA (0〜0.8μM)の混液を加
え、室温で30分反応した。結果を図6に示す。図6に示す結果から、Type2及びType3のLong RNAは、Short RNAの濃度に依存してそれぞれ結合活性の上昇を示し、両RNA分子の比が1:1の時、10%弱の結合活性を示すことが分かった。また、Type2及びType3のLong
RNAともに、より安定な塩基対を組むShort RNAの方(配列番号9および11)が、若干強い結合活性を示すことが明らかとなった。
Claims (1)
- 以下の組合せ:
5’-GGGAGAUUUGAGGGUAGAAUGGGACUACCUUUCCUCUCUCCUU-3’(配列番号3)と5’-AAGGAGAAUCUCCC-3’(配列番号6)又は5’-GGGAGAAUCUCCC-3’(配列番号7)との組合せ;
5’-GCUUCGGGAUUUGAGGGUAGAAUGGGACUACCUUUCCUCUCUCCUU-3’(配列番号4)と5’-GGGAGAAUUCCGA-3’(配列番号8)又は5’-GGGAGAAUCCCGA-3’(配列番号9)との組合せ;及び
5’-GGGAUUUGAGGGUAGAAUGGGACUACCUUUCCUCUCUCCUU-3’(配列番号5)5’-GGGAGAAUUCC-3’(配列番号10)又は5’-GGGAGAAUCCC-3’(配列番号11)との組合せ
から選択され、C型肝炎ウイルス由来のNS3タンパク質に対する結合活性及び阻害活性を有するRNAアプタマー。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2003396530A JP4247385B2 (ja) | 2003-11-27 | 2003-11-27 | C型肝炎ウイルスのns3プロテアーゼを標的とする、ヘテロ二量体を形成するrna分子 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2003396530A JP4247385B2 (ja) | 2003-11-27 | 2003-11-27 | C型肝炎ウイルスのns3プロテアーゼを標的とする、ヘテロ二量体を形成するrna分子 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2005151890A JP2005151890A (ja) | 2005-06-16 |
JP4247385B2 true JP4247385B2 (ja) | 2009-04-02 |
Family
ID=34721946
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2003396530A Expired - Lifetime JP4247385B2 (ja) | 2003-11-27 | 2003-11-27 | C型肝炎ウイルスのns3プロテアーゼを標的とする、ヘテロ二量体を形成するrna分子 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP4247385B2 (ja) |
Cited By (25)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US7778031B1 (en) | 2009-07-15 | 2010-08-17 | Teradyne, Inc. | Test slot cooling system for a storage device testing system |
US7848106B2 (en) | 2008-04-17 | 2010-12-07 | Teradyne, Inc. | Temperature control within disk drive testing systems |
US7890207B2 (en) | 2008-04-17 | 2011-02-15 | Teradyne, Inc. | Transferring storage devices within storage device testing systems |
US7904211B2 (en) | 2008-04-17 | 2011-03-08 | Teradyne, Inc. | Dependent temperature control within disk drive testing systems |
US7908029B2 (en) | 2008-06-03 | 2011-03-15 | Teradyne, Inc. | Processing storage devices |
US7911778B2 (en) | 2008-04-17 | 2011-03-22 | Teradyne, Inc. | Vibration isolation within disk drive testing systems |
US7929303B1 (en) | 2010-02-02 | 2011-04-19 | Teradyne, Inc. | Storage device testing system cooling |
US7932734B2 (en) | 2009-07-15 | 2011-04-26 | Teradyne, Inc. | Individually heating storage devices in a testing system |
US7940529B2 (en) | 2009-07-15 | 2011-05-10 | Teradyne, Inc. | Storage device temperature sensing |
US7945424B2 (en) | 2008-04-17 | 2011-05-17 | Teradyne, Inc. | Disk drive emulator and method of use thereof |
US7987018B2 (en) | 2008-04-17 | 2011-07-26 | Teradyne, Inc. | Transferring disk drives within disk drive testing systems |
US7996174B2 (en) | 2007-12-18 | 2011-08-09 | Teradyne, Inc. | Disk drive testing |
US8041449B2 (en) | 2008-04-17 | 2011-10-18 | Teradyne, Inc. | Bulk feeding disk drives to disk drive testing systems |
US8102173B2 (en) | 2008-04-17 | 2012-01-24 | Teradyne, Inc. | Thermal control system for test slot of test rack for disk drive testing system with thermoelectric device and a cooling conduit |
US8116079B2 (en) | 2009-07-15 | 2012-02-14 | Teradyne, Inc. | Storage device testing system cooling |
US8238099B2 (en) | 2008-04-17 | 2012-08-07 | Teradyne, Inc. | Enclosed operating area for disk drive testing systems |
US8405971B2 (en) | 2007-12-18 | 2013-03-26 | Teradyne, Inc. | Disk drive transport, clamping and testing |
US8482915B2 (en) | 2008-04-17 | 2013-07-09 | Teradyne, Inc. | Temperature control within disk drive testing systems |
US8547123B2 (en) | 2009-07-15 | 2013-10-01 | Teradyne, Inc. | Storage device testing system with a conductive heating assembly |
US8628239B2 (en) | 2009-07-15 | 2014-01-14 | Teradyne, Inc. | Storage device temperature sensing |
US10775408B2 (en) | 2018-08-20 | 2020-09-15 | Teradyne, Inc. | System for testing devices inside of carriers |
US10845410B2 (en) | 2017-08-28 | 2020-11-24 | Teradyne, Inc. | Automated test system having orthogonal robots |
US10948534B2 (en) | 2017-08-28 | 2021-03-16 | Teradyne, Inc. | Automated test system employing robotics |
US10983145B2 (en) | 2018-04-24 | 2021-04-20 | Teradyne, Inc. | System for testing devices inside of carriers |
US11226390B2 (en) | 2017-08-28 | 2022-01-18 | Teradyne, Inc. | Calibration process for an automated test system |
-
2003
- 2003-11-27 JP JP2003396530A patent/JP4247385B2/ja not_active Expired - Lifetime
Cited By (41)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US7996174B2 (en) | 2007-12-18 | 2011-08-09 | Teradyne, Inc. | Disk drive testing |
US8549912B2 (en) | 2007-12-18 | 2013-10-08 | Teradyne, Inc. | Disk drive transport, clamping and testing |
US8467180B2 (en) | 2007-12-18 | 2013-06-18 | Teradyne, Inc. | Disk drive transport, clamping and testing |
US8405971B2 (en) | 2007-12-18 | 2013-03-26 | Teradyne, Inc. | Disk drive transport, clamping and testing |
US8140182B2 (en) | 2008-04-17 | 2012-03-20 | Teradyne, Inc. | Bulk feeding disk drives to disk drive testing systems |
US8102173B2 (en) | 2008-04-17 | 2012-01-24 | Teradyne, Inc. | Thermal control system for test slot of test rack for disk drive testing system with thermoelectric device and a cooling conduit |
US8712580B2 (en) | 2008-04-17 | 2014-04-29 | Teradyne, Inc. | Transferring storage devices within storage device testing systems |
US8238099B2 (en) | 2008-04-17 | 2012-08-07 | Teradyne, Inc. | Enclosed operating area for disk drive testing systems |
US8655482B2 (en) | 2008-04-17 | 2014-02-18 | Teradyne, Inc. | Enclosed operating area for storage device testing systems |
US7911778B2 (en) | 2008-04-17 | 2011-03-22 | Teradyne, Inc. | Vibration isolation within disk drive testing systems |
US7945424B2 (en) | 2008-04-17 | 2011-05-17 | Teradyne, Inc. | Disk drive emulator and method of use thereof |
US7987018B2 (en) | 2008-04-17 | 2011-07-26 | Teradyne, Inc. | Transferring disk drives within disk drive testing systems |
US7848106B2 (en) | 2008-04-17 | 2010-12-07 | Teradyne, Inc. | Temperature control within disk drive testing systems |
US8305751B2 (en) | 2008-04-17 | 2012-11-06 | Teradyne, Inc. | Vibration isolation within disk drive testing systems |
US8041449B2 (en) | 2008-04-17 | 2011-10-18 | Teradyne, Inc. | Bulk feeding disk drives to disk drive testing systems |
US8451608B2 (en) | 2008-04-17 | 2013-05-28 | Teradyne, Inc. | Temperature control within storage device testing systems |
US8095234B2 (en) | 2008-04-17 | 2012-01-10 | Teradyne, Inc. | Transferring disk drives within disk drive testing systems |
US7904211B2 (en) | 2008-04-17 | 2011-03-08 | Teradyne, Inc. | Dependent temperature control within disk drive testing systems |
US8482915B2 (en) | 2008-04-17 | 2013-07-09 | Teradyne, Inc. | Temperature control within disk drive testing systems |
US8117480B2 (en) | 2008-04-17 | 2012-02-14 | Teradyne, Inc. | Dependent temperature control within disk drive testing systems |
US7890207B2 (en) | 2008-04-17 | 2011-02-15 | Teradyne, Inc. | Transferring storage devices within storage device testing systems |
US8160739B2 (en) | 2008-04-17 | 2012-04-17 | Teradyne, Inc. | Transferring storage devices within storage device testing systems |
US8086343B2 (en) | 2008-06-03 | 2011-12-27 | Teradyne, Inc. | Processing storage devices |
US7908029B2 (en) | 2008-06-03 | 2011-03-15 | Teradyne, Inc. | Processing storage devices |
US8628239B2 (en) | 2009-07-15 | 2014-01-14 | Teradyne, Inc. | Storage device temperature sensing |
US7932734B2 (en) | 2009-07-15 | 2011-04-26 | Teradyne, Inc. | Individually heating storage devices in a testing system |
US8279603B2 (en) | 2009-07-15 | 2012-10-02 | Teradyne, Inc. | Test slot cooling system for a storage device testing system |
US8466699B2 (en) | 2009-07-15 | 2013-06-18 | Teradyne, Inc. | Heating storage devices in a testing system |
US7778031B1 (en) | 2009-07-15 | 2010-08-17 | Teradyne, Inc. | Test slot cooling system for a storage device testing system |
US8116079B2 (en) | 2009-07-15 | 2012-02-14 | Teradyne, Inc. | Storage device testing system cooling |
US8547123B2 (en) | 2009-07-15 | 2013-10-01 | Teradyne, Inc. | Storage device testing system with a conductive heating assembly |
US7995349B2 (en) | 2009-07-15 | 2011-08-09 | Teradyne, Inc. | Storage device temperature sensing |
US7940529B2 (en) | 2009-07-15 | 2011-05-10 | Teradyne, Inc. | Storage device temperature sensing |
US7920380B2 (en) | 2009-07-15 | 2011-04-05 | Teradyne, Inc. | Test slot cooling system for a storage device testing system |
US8687356B2 (en) | 2010-02-02 | 2014-04-01 | Teradyne, Inc. | Storage device testing system cooling |
US7929303B1 (en) | 2010-02-02 | 2011-04-19 | Teradyne, Inc. | Storage device testing system cooling |
US10845410B2 (en) | 2017-08-28 | 2020-11-24 | Teradyne, Inc. | Automated test system having orthogonal robots |
US10948534B2 (en) | 2017-08-28 | 2021-03-16 | Teradyne, Inc. | Automated test system employing robotics |
US11226390B2 (en) | 2017-08-28 | 2022-01-18 | Teradyne, Inc. | Calibration process for an automated test system |
US10983145B2 (en) | 2018-04-24 | 2021-04-20 | Teradyne, Inc. | System for testing devices inside of carriers |
US10775408B2 (en) | 2018-08-20 | 2020-09-15 | Teradyne, Inc. | System for testing devices inside of carriers |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP2005151890A (ja) | 2005-06-16 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP4247385B2 (ja) | C型肝炎ウイルスのns3プロテアーゼを標的とする、ヘテロ二量体を形成するrna分子 | |
US5874565A (en) | Nucleic acids comprising a highly conserved novel 3 terminal sequence element of the hepatitis C virus | |
Jiang et al. | Picornavirus morphogenesis | |
Tuthill et al. | Picornaviruses | |
De Francesco et al. | Approaching a new era for hepatitis C virus therapy: inhibitors of the NS3-4A serine protease and the NS5B RNA-dependent RNA polymerase | |
Fan et al. | The intrinsic disorder status of the human hepatitis C virus proteome | |
JP2005507660A (ja) | ssRNAウイルス感染の処置のためのアンチセンス抗ウイルス剤および方法 | |
JP2010042015A (ja) | フラビウィルス感染の処置のためのオリゴヌクレオチドアナログおよび方法 | |
Rothman et al. | Associations among clinical, immunological, and viral quasispecies measurements in advanced chronic hepatitis C | |
To et al. | Targeting the channel activity of viroporins | |
Soler et al. | Virological effects of ISIS 14803, an antisense oligonucleotide inhibitor of hepatitis C virus (HCV) internal ribosome entry site (IRES), on HCV IRES in chronic hepatitis C patients and examination of the potential role of primary and secondary HCV resistance in the outcome of treatment | |
Mirian et al. | Oligonucleotide aptamers: potential novel molecules against viral hepatitis | |
Zhang et al. | An engineered ACE2 decoy receptor can be administered by inhalation and potently targets the BA. 1 and BA. 2 omicron variants of SARS-CoV-2 | |
ES2346717T3 (es) | Metodo y composiciones para identificar y caracterizar la hepatitis c. | |
JP3612551B2 (ja) | C型肝炎ウイルスのns3プロテアーゼを阻害するrna分子 | |
Massariol et al. | Protease and helicase activities of hepatitis C virus genotype 4, 5, and 6 NS3–NS4A proteins | |
Gazina et al. | Viral targets of acylguanidines | |
Altamirano et al. | Identification of hepatitis C virus genotypes among hospitalized patients in British Columbia, Canada | |
Sookoian | New therapies on the horizon for hepatitis C | |
EP1185663B1 (en) | Novel gbv sequence | |
Tremblay et al. | HCV NS3/4A protease inhibitors and the road to effective direct-acting antiviral therapies | |
CN103965292B (zh) | 乙型脑炎病毒包膜蛋白结合肽的结构与用途 | |
Maekawa et al. | Host dependent variation of hepatitis C virus: phylogenetic analyses | |
Worman et al. | Molecular biology of liver disorders: the hepatitis C virus and molecular targets for drug development | |
Shier et al. | Effect of RNA interference on the hepatitis C virus core expression in HepG2/C3A cells using genotype 4 isolates from Saudi patients |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20050502 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20080122 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20080324 |
|
RD03 | Notification of appointment of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7423 Effective date: 20080324 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20080826 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20081023 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20081216 |
|
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 4247385 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
S533 | Written request for registration of change of name |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313533 |
|
R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
EXPY | Cancellation because of completion of term |