JP4245837B2 - 2 ', 5'-oligoadenylic acid analogs - Google Patents

Description

【００１１】
（上記式中、Ｙ¹及びＹ²は水素原子又は水酸基の保護基であり、Ｂはプリン又はピリミジン核酸塩基又はその類縁体である。）
しかしながら、上記化合物を用いたオリゴヌクレオチドの場合には、生体内でのヌクレアーゼ酵素耐性が低く、生体内での安定性に欠ける為、抗ウイルス活性、アンチセンス活性等が不充分であるという問題があった。
【００１２】
【発明が解決しようとする課題】
本発明者等は、抗ウイルス活性、抗腫瘍活性、優れたアンチセンス又はアンチジーン活性を有し、生体内で安定で、副作用の発現の少ない非天然型のオリゴヌクレオチド類縁体につき、永年に亘り、鋭意研究を行なった。その結果、分子内エーテル結合を有する3'‐4'架橋オリゴヌクレオチド類縁体及びヌクレオシド類縁体が、安定で優れた抗ウイルス薬、抗腫瘍薬、アンチセンス若しくはアンチジーン医薬、特定遺伝子の検出薬（プローブ）又は増幅開始の為のプライマー及びその製造中間体として有用であることを見出し、本発明を完成した。
【００１３】
【課題を解決するための手段】
本発明の新規3'‐4'架橋ヌクレオシド類縁体は
一般式（１）
【００１４】
【化６】

【００１５】
［式中、Ｒ¹及びＲ²は、同一又は異なって、水素原子、核酸合成の水酸基の保護基、リン酸基、核酸合成の保護基で保護されたリン酸基又は−Ｐ（Ｒ³）Ｒ⁴［式中、Ｒ³及びＲ⁴は、同一又は異なって、水酸基、核酸合成の保護基で保護された水酸基、メルカプト基、核酸合成の保護基で保護されたメルカプト基、アミノ基、炭素数１乃至４個のアルコキシ基、炭素数１乃至４個のアルキルチオ基、炭素数１乃至５個のシアノアルコキシ基又は炭素数１乃至４個のアルキル基で置換されたアミノ基を示す］を示し、
Ａは、炭素数１乃至４個のアルキレン基を示し、
Ｂは、プリン−９−イル基、２−オキソ−1,2−ジヒドロピリミジン−１−イル基又は下記α群から選択される置換基を有する置換プリン−９−イル基若しくは置換２−オキソ−1,2−ジヒドロピリミジン−１−イル基を示す。］で表わされる化合物及びその塩であり、
本発明の3'‐4'架橋オリゴヌクレオチド類縁体は
一般式（２）
【００１６】
【化７】

【００１７】
[式中、 Ａは、炭素数１乃至４個のアルキレン基を示し、
Ｂは、プリン−９−イル基、２−オキソ−1,2−ジヒドロピリミジン−１−イル基又は下記α群から選択される置換基を有する置換プリン−９−イル基若しくは置換２−オキソ−1,2−ジヒドロピリミジン−１−イル基を示す。］で表わされる構造を１又は２以上有するオリゴヌクレオチド類縁体及びその薬理学上許容される塩である。但し、上記構造を２以上含有する場合は、当該構造間でＢは同一又は異なる。
（α群）
水酸基、
核酸合成の保護基で保護された水酸基、
炭素数１乃至４個のアルコキシ基、
メルカプト基、
核酸合成の保護基で保護されたメルカプト基、
炭素数１乃至４個のアルキルチオ基、
アミノ基、
核酸合成の保護基で保護されたアミノ基、
炭素数１乃至４個のアルキル基で置換されたアミノ基、
炭素数１乃至４個のアルキル基、及び、
ハロゲン原子であり、
本発明の２'，５'-オリゴアデニル酸（２−５Ａ）類縁体は
一般式（３）
【００１８】
【化８】

【００１９】
[式中、 ｍは、１乃至３の整数を示し、ｎは、０または１を示し、Ｑは、酸素原子または硫黄原子を示し、Ｖは、水素原子、置換基を有していてもよい炭素数１乃至６個のアルキル基、置換基を有していてもよいアラルキル基または置換基を有していてもよいアリール基を示し、Ｅ¹ , Ｅ² 及びＥ³は、同一または異なって、Ｋ¹、Ｋ²、Ｋ³またはＫ⁴（Ｋ¹、Ｋ²、Ｋ³及びＫ⁴は、それぞれ、
【００２０】
【化９】

【００２１】
を示す。ここで、Ｂは、プリン−９−イル基又は下記α群から選択される置換基を有する置換プリン−９−イル基を示し、Ａは、炭素数１乃至４個のアルキレン基を示す。）、を示す。なお、Ｅ²は、ｍの繰り返しにおいてそれぞれ同一または異なっていてもよい。］で表わされるオリゴヌクレオチド類縁体（但し、Ｅ¹、Ｅ²及びＥ³が、すべてＫ¹である化合物及びすべてＫ²である化合物を除く。）及びその薬理学上許容される塩。
（α群）
水酸基、
核酸合成の保護基で保護された水酸基、
炭素数１乃至４個のアルコキシ基、
メルカプト基、
核酸合成の保護基で保護されたメルカプト基、
炭素数１乃至４個のアルキルチオ基、
アミノ基、
核酸合成の保護基で保護されたアミノ基、
炭素数１乃至４個のアルキル基で置換されたアミノ基、
炭素数１乃至４個のアルキル基、及び、
ハロゲン原子。
【００２２】
上記一般式（１）、（２）又は（３）中、Ａの「炭素数１乃至４個のアルキレン基」としては、例えば、メチレン、エチレン、トリメチレン、テトラメチレン基をあげることができ、好適には、メチレン又はエチレン基である。
【００２３】
上記一般式（１）、（２）又は（３）中、Ｒ¹及びＲ²の「核酸合成の水酸基の保護基」、並びにＲ³及びＲ⁴又はα群の「核酸合成の保護基で保護された水酸基」の保護基とは、核酸合成の際に安定して水酸基を保護し得るものであれば、特に限定はないが、具体的には、酸性又は中性条件で安定であり、加水素分解、加水分解、電気分解及び光分解のような化学的方法により開裂し得る保護基のことをいい、そのような保護基としては、例えば、ホルミル、アセチル、プロピオニル、ブチリル、イソブチリル、ペンタノイル、ピバロイル、バレリル、イソバレリル、オクタノイル、ノナノイル、デカノイル、３−メチルノナノイル、８−メチルノナノイル、３−エチルオクタノイル、３，７−ジメチルオクタノイル、ウンデカノイル、ドデカノイル、トリデカノイル、テトラデカノイル、ペンタデカノイル、ヘキサデカノイル、１−メチルペンタデカノイル、１４−メチルペンタデカノイル、１３，１３−ジメチルテトラデカノイル、ヘプタデカノイル、１５−メチルヘキサデカノイル、オクタデカノイル、１−メチルヘプタデカノイル、ノナデカノイル、アイコサノイル及びヘナイコサノイルのようなアルキルカルボニル基、スクシノイル、グルタロイル、アジポイルのようなカルボキシ化アルキルカルボニル基、クロロアセチル、ジクロロアセチル、トリクロロアセチル、トリフルオロアセチルのようなハロゲノ低級アルキルカルボニル基、メトキシアセチルのような低級アルコキシ低級アルキルカルボニル基、（Ｅ）−２−メチル−２−ブテノイルのような不飽和アルキルカルボニル基のような「脂肪族アシル基」；
メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓ−ブチル、tert−ブチル、ｎ−ペンチル、イソペンチル、２−メチルブチル、ネオペンチル、１−エチルプロピル、ｎ−ヘキシル、イソヘキシル、４−メチルペンチル、３−メチルペンチル、２−メチルペンチル、１−メチルペンチル、３，３−ジメチルブチル、２，２−ジメチルブチル、１，１−ジメチルブチル、１，２−ジメチルブチル、１，３−ジメチルブチル、２，３−ジメチルブチル、２−エチルブチルのような「低級アルキル基」；
エテニル、１−プロペニル、２−プロペニル、１−メチル−２−プロペニル、１−メチル−１−プロペニル、２−メチル−１−プロペニル、２−メチル−２−プロペニル、２−エチル−２−プロペニル、１−ブテニル、２−ブテニル、１−メチル−２−ブテニル、１−メチル−１−ブテニル、３−メチル−２−ブテニル、１−エチル−２−ブテニル、３−ブテニル、１−メチル−３−ブテニル、２−メチル−３−ブテニル、１−エチル−３−ブテニル、１−ペンテニル、２−ペンテニル、１−メチル−２−ペンテニル、２−メチル−２−ペンテニル、３−ペンテニル、１−メチル−３−ペンテニル、２−メチル−３−ペンテニル、４−ペンテニル、１−メチル−４−ペンテニル、２−メチル−４−ペンテニル、１−ヘキセニル、２−ヘキセニル、３−ヘキセニル、４−ヘキセニル、５−ヘキセニルのような「低級アルケニル基」；
ベンゾイル、α−ナフトイル、β−ナフトイルのようなアリールカルボニル基、２−ブロモベンゾイル、４−クロロベンゾイルのようなハロゲノアリールカルボニル基、２，４，６−トリメチルベンゾイル、４−トルオイルのような低級アルキル化アリールカルボニル基、４−アニソイルのような低級アルコキシ化アリールカルボニル基、２−カルボキシベンゾイル、３−カルボキシベンゾイル、４−カルボキシベンゾイルのようなカルボキシ化アリールカルボニル基、４−ニトロベンゾイル、２−ニトロベンゾイルのようなニトロ化アリールカルボニル基；２−（メトキシカルボニル） ベンゾイルのような低級アルコキシカルボニル化アリールカルボニル基、４−フェニルベンゾイルのようなアリール化アリールカルボニル基のような「芳香族アシル基」；
テトラヒドロピラン-2−イル、３−ブロモテトラヒドロピラン-2−イル、４−メトキシテトラヒドロピラン-4−イル、テトラヒドロチオピラン-2−イル、４−メトキシテトラヒドロチオピラン-4−イルのような「テトラヒドロピラニル又はテトラヒドロチオピラニル基」；テトラヒドロフラン-2−イル、テトラヒドロチオフラン-2−イルのような「テトラヒドロフラニル又はテトラヒドロチオフラニル基」；
トリメチルシリル、トリエチルシリル、イソプロピルジメチルシリル、t-ブチルジメチルシリル、メチルジイソプロピルシリル、メチルジ-t−ブチルシリル、トリイソプロピルシリルのようなトリ低級アルキルシリル基、ジフェニルメチルシリル、ジフェニルブチルシリル、ジフェニルイソプロピルシリル、フェニルジイソプロピルシリルのような１乃至２個のアリール基で置換されたトリ低級アルキルシリル基のような「シリル基」；
メトキシメチル、１，１−ジメチル−１−メトキシメチル、エトキシメチル、プロポキシメチル、イソプロポキシメチル、ブトキシメチル、t-ブトキシメチルのような「低級アルコキシメチル基」；
２−メトキシエトキシメチルのような「低級アルコキシ化低級アルコキシメチル基」；
２，２，２−トリクロロエトキシメチル、ビス(2−クロロエトキシ) メチルのような「ハロゲノ低級アルコキシメチル」；
１−エトキシエチル、１−( イソプロポキシ) エチルのような「低級アルコキシ化エチル基」；
２，２，２−トリクロロエチルのような「ハロゲン化エチル基」；
ベンジル、α−ナフチルメチル、β−ナフチルメチル、ジフェニルメチル、トリフェニルメチル、α−ナフチルジフェニルメチル、９−アンスリルメチルのような「１乃至３個のアリール基で置換されたメチル基」；
４−メチルベンジル、２，４，６-トリメチルベンジル、３，４，５−トリメチルベンジル、４−メトキシベンジル、４−メトキシフェニルジフェニルメチル、４、４’−ジメトキシトリフェニルメチル、２−ニトロベンジル、４−ニトロベンジル、４−クロロベンジル、４−ブロモベンジル、４−シアノベンジルのような「低級アルキル、低級アルコキシ、ハロゲン、シアノ基でアリール環が置換された１乃至３個のアリール基で置換されたメチル基」；
メトキシカルボニル、エトキシカルボニル、t-ブトキシカルボニル、イソブトキシカルボニルのような「低級アルコキシカルボニル基」；
4‐クロロフェニル、2-クロロフェニル、4‐メトキシフェニル、4‐ニトロフェニル、2,4-ジニトロフェニルのような「ハロゲン原子、低級アルコキシ基又はニトロ基で置換されたアリール基」
２，２，２−トリクロロエトキシカルボニル、２−トリメチルシリルエトキシカルボニルのような「ハロゲン又はトリ低級アルキルシリル基で置換された低級アルコキシカルボニル基」；
ビニルオキシカルボニル、アリールオキシカルボニルのような「アルケニルオキシカルボニル基」；
ベンジルオキシカルボニル、４−メトキシベンジルオキシカルボニル、３，４−ジメトキシベンジルオキシカルボニル、２−ニトロベンジルオキシカルボニル、４−ニトロベンジルオキシカルボニルのような１乃至２個の「低級アルコキシ又はニトロ基でアリール環が置換されていてもよいアラルキルオキシカルボニル基」をあげることができ、
Ｒ¹及びＲ²の「核酸合成の水酸基の保護基」においては、好適には、「脂肪族アシル基」、「芳香族アシル基」、「１乃至３個のアリール基で置換されたメチル基」、「低級アルキル、低級アルコキシ、ハロゲン、シアノ基でアリール環が置換された１乃至３個のアリール基で置換されたメチル基」又は「シリル基」であり、さらに、好適には、アセチル基、ベンゾイル基、ベンジル基、ｐ−メトキシベンゾイル基、ジメトキシトリチル基、モノメトキシトリチル基又はtert-ブチルジフェニルシリル基であり、
Ｒ³及びＲ⁴又はα群の「核酸合成の保護基で保護された水酸基」の保護基においては、好適には、「１乃至３個のアリール基で置換されたメチル基」、「ハロゲン原子、低級アルコキシ基又はニトロ基で置換されたアリール基」、「低級アルキル基」又は「低級アルケニル基」であり、さらに好適には、ベンジル基、2-クロロフェニル基、4‐クロロフェニル基又は2-プロペニル基である。
【００２４】
上記一般式（１）中、Ｒ¹及びＲ²の「核酸合成の保護基で保護されたリン酸基」の保護基とは、核酸合成の際に安定してリン酸基を保護し得るものであれば、特に限定はないが、具体的には、酸性又は中性条件で安定であり、加水素分解、加水分解、電気分解及び光分解のような化学的方法により開裂し得る保護基のことをいい、そのような保護基としては、例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓ−ブチル、tert−ブチル、ｎ−ペンチル、イソペンチル、２−メチルブチル、ネオペンチル、１−エチルプロピル、ｎ−ヘキシル、イソヘキシル、４−メチルペンチル、３−メチルペンチル、２−メチルペンチル、１−メチルペンチル、３，３−ジメチルブチル、２，２−ジメチルブチル、１，１−ジメチルブチル、１，２−ジメチルブチル、１，３−ジメチルブチル、２，３−ジメチルブチル、２−エチルブチルのような「低級アルキル基」；
２−シアノエチル、２−シアノ−１，１−ジメチルエチルのような「シアノ化低級アルキル基」；
２−メチルジフェニルシリルエチル、２−トリメチルシリルエチル、２−トリフェニルシリルエチルのような「シリル基で置換されたエチル基」；
２，２，２−トリクロロエチル、２，２，２−トリブロモエチル、２，２，２−トリフルオロエチル、２，２，２−トリクロロ−１、１−ジメチルエチルのような「ハロゲン化低級アルキル基」；
エテニル、１−プロペニル、２−プロペニル、１−メチル−２−プロペニル、１−メチル−１−プロペニル、２−メチル−１−プロペニル、２−メチル−２−プロペニル、２−エチル−２−プロペニル、１−ブテニル、２−ブテニル、１−メチル−２−ブテニル、１−メチル−１−ブテニル、３−メチル−２−ブテニル、１−エチル−２−ブテニル、３−ブテニル、１−メチル−３−ブテニル、２−メチル−３−ブテニル、１−エチル−３−ブテニル、１−ペンテニル、２−ペンテニル、１−メチル−２−ペンテニル、２−メチル−２−ペンテニル、３−ペンテニル、１−メチル−３−ペンテニル、２−メチル−３−ペンテニル、４−ペンテニル、１−メチル−４−ペンテニル、２−メチル−４−ペンテニル、１−ヘキセニル、２−ヘキセニル、３−ヘキセニル、４−ヘキセニル、５−ヘキセニルのような「低級アルケニル基」；
シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、ノルボルニル、アダマンチルのような「シクロアルキル基」；
２−シアノブテニルのような「シアノ化低級アルケニル基」；
ベンジル、α−ナフチルメチル、β−ナフチルメチル、インデニルメチル、フェナンスレニルメチル、アントラセニルメチル、ジフェニルメチル、トリフェニルメチル、１−フェネチル、２−フェネチル、１−ナフチルエチル、２−ナフチルエチル、１−フェニルプロピル、２−フェニルプロピル、３−フェニルプロピル、１−ナフチルプロピル、２−ナフチルプロピル、３−ナフチルプロピル、１−フェニルブチル、２−フェニルブチル、３−フェニルブチル、４−フェニルブチル、１−ナフチルブチル、２−ナフチルブチル、３−ナフチルブチル、４−ナフチルブチル、１−フェニルペンチル、２−フェニルペンチル、３−フェニルペンチル、４−フェニルペンチル、５−フェニルペンチル、１−ナフチルペンチル、２−ナフチルペンチル、３−ナフチルペンチル、４−ナフチルペンチル、５−ナフチルペンチル、１−フェニルヘキシル、２−フェニルヘキシル、３−フェニルヘキシル、４−フェニルヘキシル、５−フェニルヘキシル、６−フェニルヘキシル、１−ナフチルヘキシル、２−ナフチルヘキシル、３−ナフチルヘキシル、４−ナフチルヘキシル、５−ナフチルヘキシル、６−ナフチルヘキシルのような「アラルキル基」；
４−クロロベンジル、２−（４−ニトロフェニル）エチル、o−ニトロベンジル、４−ニトロベンジル、２、４−ジニトロベンジル、４−クロロ−２−ニトロベンジルのような「ニトロ基、ハロゲン原子でアリール環が置換されたアラルキル基」；
フェニル、インデニル、ナフチル、フェナンスレニル、アントラセニルのような「アリール基」；
２−メチルフェニル、２，６−ジメチルフェニル、２−クロロフェニル，４−クロロフェニル、２，４−ジクロロフェニル、２，５−ジクロロフェニル、２−ブロモフェニル、４−ニトロフェニル、４−クロロ−２−ニトロフェニルのような「低級アルキル基、ハロゲン原子、ニトロ基で置換されたアリール基」を挙げる事ができ、
好適には、「低級アルキル基」、「シアノ基で置換された低級アルキル基」、「アラルキル基」、「ニトロ基、ハロゲン原子でアリール環が置換されたアラルキル基」又は「低級アルキル基、ハロゲン原子、ニトロ基で置換されたアリール基」であり、さらに好適には、２−シアノエチル基、２，２，２−トリクロロエチル基、ベンジル基、2-クロロフェニル基又は4‐クロロフェニル基である。
【００２５】
上記一般式（１）、（２）又は（３）中、Ｒ³及びＲ⁴又はα群の「炭素数１乃至４個のアルコキシ基」としては、例えば、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、イソプロポキシ、ｎ−ブトキシ、イソブトキシ、ｓ−ブトキシ又はtert−ブトキシをあげることができ、好適には、メトキシ又はエトキシ基である。
【００２６】
上記一般式（１）、（２）又は（３）中、Ｒ³及びＲ⁴又は「核酸合成の保護基で保護されたメルカプト基」の保護基としては、核酸合成の際に安定してメルカプト基を保護し得るものであれば、特に限定はないが、具体的には、酸性又は中性条件で安定であり、加水素分解、加水分解、電気分解及び光分解のような化学的方法により開裂し得る保護基をいい、例えば、上記水酸基の保護基としてあげたものの他、メチルチオ、エチルチオ、tert−ブチルチオのようなアルキルチオ基、ベンジルチオのようなアリールチオ基等の「ジスルフィドを形成する基」をあげることができ、好適には、「脂肪族アシル基」又は「芳香族アシル基」であり、さらに、好適には、ベンゾイル基である。
【００２７】
上記一般式（１）、（２）又は（３）中、Ｒ³及びＲ⁴又はα群の「炭素数１乃至４個のアルキルチオ基」としては、例えば、メチルチオ、エチルチオ、プロピルチオ、イソプロピルチオ、ブチルチオ、イソブチルチオ、ｓ−ブチルチオ、tert−ブチルチオをあげることができ、好適には、メチルチオ又はエチルチオ基である。
【００２８】
上記一般式（１）、（２）又は（３）中、Ｒ³及びＲ⁴又はα群の「核酸合成の保護基で保護されたアミノ基」の保護基としては、核酸合成の際に安定してアミノ基を保護し得るものであれば、特に限定はないが、具体的には、酸性又は中性条件で安定であり、加水素分解、加水分解、電気分解及び光分解のような化学的方法により開裂し得る保護基をいい、例えば、ホルミル、アセチル、プロピオニル、ブチリル、イソブチリル、ペンタノイル、ピバロイル、バレリル、イソバレリル、オクタノイル、ノナノイル、デカノイル、３−メチルノナノイル、８−メチルノナノイル、３−エチルオクタノイル、３，７−ジメチルオクタノイル、ウンデカノイル、ドデカノイル、トリデカノイル、テトラデカノイル、ペンタデカノイル、ヘキサデカノイル、１−メチルペンタデカノイル、１４−メチルペンタデカノイル、１３，１３−ジメチルテトラデカノイル、ヘプタデカノイル、１５−メチルヘキサデカノイル、オクタデカノイル、１−メチルヘプタデカノイル、ノナデカノイル、アイコサノイル及びヘナイコサノイルのようなアルキルカルボニル基、スクシノイル、グルタロイル、アジポイルのようなカルボキシ化アルキルカルボニル基、クロロアセチル、ジクロロアセチル、トリクロロアセチル、トリフルオロアセチルのようなハロゲノ低級アルキルカルボニル基、メトキシアセチルのような低級アルコキシ低級アルキルカルボニル基、（Ｅ）−２−メチル-2−ブテノイルのような不飽和アルキルカルボニル基等の「脂肪族アシル基」；
ベンゾイル、α−ナフトイル、β−ナフトイルのようなアリールカルボニル基、２−ブロモベンゾイル、４−クロロベンゾイルのようなハロゲノアリールカルボニル基、２，４，６-トリメチルベンゾイル、４−トルオイルのような低級アルキル化アリールカルボニル基、４−アニソイルのような低級アルコキシ化アリールカルボニル基、２−カルボキシベンゾイル、３−カルボキシベンゾイル、４−カルボキシベンゾイルのようなカルボキシ化アリールカルボニル基、４−ニトロベンゾイル、２−ニトロベンゾイルのようなニトロ化アリールカルボニル基；２−（メトキシカルボニル) ベンゾイルのような低級アルコキシカルボニル化アリールカルボニル基、４−フェニルベンゾイルのようなアリール化アリールカルボニル基等の「芳香族アシル基」；
メトキシカルボニル、エトキシカルボニル、t-ブトキシカルボニル、イソブトキシカルボニルのような「低級アルコキシカルボニル基」；
２，２，２−トリクロロエトキシカルボニル、２−トリメチルシリルエトキシカルボニルのような「ハロゲン又はトリ低級アルキルシリル基で置換された低級アルコキシカルボニル基」；
ビニルオキシカルボニル、アリールオキシカルボニルのような「アルケニルオキシカルボニル基」；
ベンジルオキシカルボニル、４−メトキシベンジルオキシカルボニル、３，４−ジメトキシベンジルオキシカルボニル、２−ニトロベンジルオキシカルボニル、４−ニトロベンジルオキシカルボニルのような１乃至２個の「低級アルコキシ又はニトロ基でアリール環が置換されていてもよいアラルキルオキシカルボニル基」をあげることができ、好適には、「脂肪族アシル基」又は「芳香族アシル基」であり、さらに好適には、ベンゾイル基である。
【００２９】
上記一般式（１）、（２）又は（３）中、Ｒ³及びＲ⁴又はα群の「炭素数１乃至４個のアルキル基で置換されたアミノ基」としては、例えば、メチルアミノ、エチルアミノ、プロピルアミノ、イソプロピルアミノ、ブチルアミノ、イソブチルアミノ、ｓ−ブチルアミノ、tert−ブチルアミノ、ジメチルアミノ、ジエチルアミノ、ジプロピルアミノ、ジイソプロピルアミノ、ジブチルアミノ、ジイソブチルアミノ、ジ（ｓ−ブチル）アミノ、ジ（tert−ブチル）アミノをあげることができ、好適には、メチルアミノ、エチルアミノ、ジメチルアミノ、ジエチルアミノまたはジイソプロピルアミノ基である。
【００３０】
上記一般式（１）中、Ｒ³及びＲ⁴の「炭素数１乃至５個のシアノアルコキシ基」とは、上記「炭素数１乃至４個のアルコキシ基」にシアノ基が置換した基をいい、その様な基としては、例えば、例えば、シアノメトキシ、２−シアノエトキシ、３−シアノプロポキシ、４−シアノブトキシ、３−シアノ−２メチルプロポキシ、又は１−シアノメチル−１，１−ジメチルメトキシをあげることができ、好適には、２−シアノエトキシ基である。
【００３１】
上記一般式（１）、（２）又は（３）中、α群の「炭素数１乃至４個のアルキル基」としては、例えば、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｓ−ブチル、tert−ブチルをあげることができ、好適には、メチル又はエチル基である。
【００３２】
上記一般式（１）、（２）又は（３）中、α群の「ハロゲン原子」としては、例えば、フッ素原子、塩素原子、臭素原子又はヨウ素原子をあげることができ、好適には、フッ素原子又は塩素原子である。
【００３３】
上記一般式（３）中、Ｖの「置換基を有していてもよい炭素数１乃至６個のアルキル基」としては、例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓ−ブチル、tert−ブチル、ｎ−ペンチル、イソペンチル、２−メチルブチル、ネオペンチル、１−エチルプロピル、ｎ−ヘキシル、イソヘキシル、４−メチルペンチル、３−メチルペンチル、２−メチルペンチル、１−メチルペンチル、３，３−ジメチルブチル、２，２−ジメチルブチル、１，１−ジメチルブチル、１，２−ジメチルブチル、１，３−ジメチルブチル、２，３−ジメチルブチル、２−エチルブチルのような「低級アルキル基」；
１−ヒドロキシメチル、2-ヒドロキシエチル、３-ヒドロキシプロピル、４-ヒドロキシブチル、2-ヒドロキシプロピル、1-メチル−2-ヒドロキシエチル、1-メチル−1-ヒドロキシエチル、1,１-ジメチル−２-ヒドロキシエチル、２-ヒドロキシブチル、３-ヒドロキシブチル、１-メチル−3−ヒドロキシプロピル、2-メチル−3−ヒドロキシプロピルのような「ヒドロキシル基で置換された低級アルキル基」；
１−アミノメチル、2-アミノエチル、３-アミノプロピル、４-アミノブチル、2-アミノプロピル、1-メチル−2-アミノエチル、1-メチル−1-アミノエチル、1,１-ジメチル−２-アミノエチル、２-アミノブチル、３-アミノブチル、１-メチル−3−アミノプロピル、2-メチル−3−アミノプロピルのような「アミノ基で置換された低級アルキル基」；
１−メトキシメチル、2-メトキシエチル、３-メトキシプロピル、４-メトキシブチル、2-メトキシプロピル、1-メチル−2-メトキシエチル、1-メチル−1-メトキシエチル、1,１-ジメチル−２-メトキシエチル、２-メトキシブチル、３-メトキシブチル、１-メチル−3−メトキシプロピル、2-メチル−3−メトキシプロピル、１−エトキシメチル、2-エトキシエチル、３-エトキシプロピル、４-エトキシブチル、2-エトキシプロピル、1-メチル−2-エトキシエチル、1-メチル−1-エトキシエチル、1,１-ジメチル−２-エトキシエチル、２-エトキシブチル、３-エトキシブチル、１-メチル−3−エトキシプロピル、2-メチル−3−エトキシプロピルのような「アルコキシ基で置換された低級アルキル基」；
シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、ノルボルニル、アダマンチルのような「シクロアルキル基」をあげることができ、好適には、2-ヒドロキシエチル基である。
【００３４】
上記一般式（３）中、Ｖの「置換基を有していてもよいアラルキル基」としては、例えば、ベンジル、α−ナフチルメチル、β−ナフチルメチル、インデニルメチル、フェナンスレニルメチル、アントラセニルメチル、ジフェニルメチル、トリフェニルメチル、１−フェネチル、２−フェネチル、１−ナフチルエチル、２−ナフチルエチル、１−フェニルプロピル、２−フェニルプロピル、３−フェニルプロピル、１−ナフチルプロピル、２−ナフチルプロピル、３−ナフチルプロピル、１−フェニルブチル、２−フェニルブチル、３−フェニルブチル、４−フェニルブチル、１−ナフチルブチル、２−ナフチルブチル、３−ナフチルブチル、４−ナフチルブチル、１−フェニルペンチル、２−フェニルペンチル、３−フェニルペンチル、４−フェニルペンチル、５−フェニルペンチル、１−ナフチルペンチル、２−ナフチルペンチル、３−ナフチルペンチル、４−ナフチルペンチル、５−ナフチルペンチル、１−フェニルヘキシル、２−フェニルヘキシル、３−フェニルヘキシル、４−フェニルヘキシル、５−フェニルヘキシル、６−フェニルヘキシル、１−ナフチルヘキシル、２−ナフチルヘキシル、３−ナフチルヘキシル、４−ナフチルヘキシル、５−ナフチルヘキシル、６−ナフチルヘキシルのような「アラルキル基」；
４−クロロベンジル、２−（４−ニトロフェニル）エチル、o−ニトロベンジル、４−ニトロベンジル、２、４−ジニトロベンジル、４−クロロ−２−ニトロベンジルのような「ニトロ基、ハロゲン原子でアリール環が置換されたアラルキル基」をあげることができる。
【００３５】
上記一般式（３）中、Ｖの「置換基を有していてもよいアリール基」としては、例えば、２−メチルフェニル、２，６−ジメチルフェニル、２−クロロフェニル，４−クロロフェニル、２，４−ジクロロフェニル、２，５−ジクロロフェニル、２−ブロモフェニル、４−ニトロフェニル、４−クロロ−２−ニトロフェニルのような「低級アルキル基、ハロゲン原子、ニトロ基で置換されたアリール基」を挙げる事ができる。
【００３６】
上記一般式（１）、（２）又は（３）中、Ｂの「プリン−９−イル基」及び「置換プリン−９−イル基」全体で、好適な基は、６−アミノプリン−９−イル（すなわち、アデニニル）、アミノ基が核酸合成の保護基で保護された６−アミノプリン−９−イル、６−アミノ−８−ブロモプリン−９−イル、アミノ基が核酸合成の保護基で保護された６−アミノ−８−ブロモプリン−９−イル、６−アミノ−８−クロロプリン−９−イル、アミノ基が核酸合成の保護基で保護された６−アミノ−８−クロロプリン−９−イル、６−アミノ−８−フルオロプリン−９−イル、アミノ基が核酸合成の保護基で保護された６−アミノ−８−フルオロプリン−９−イル、６−アミノ−８−メトキシプリン−９−イル、アミノ基が核酸合成の保護基で保護された６−アミノ−８−メトキシプリン−９−イル、６−アミノ−８−エトキシプリン−９−イル、アミノ基が核酸合成の保護基で保護された６−アミノ−８−エトキシプリン−９−イル、６−アミノ−８−ｔ−ブトキシプリン−９−イル、アミノ基が核酸合成の保護基で保護された６−アミノ−８−ｔ−ブトキシプリン−９−イル、２，６−ジアミノプリン−９−イル、２−アミノ−６−クロロプリン−９−イル、アミノ基が核酸合成の保護基で保護された２−アミノ−６−クロロプリン−９−イル、２−アミノ−６−フルオロプリン−９−イル、アミノ基が核酸合成の保護基で保護された２−アミノ−６−フルオロプリン−９−イル、２−アミノ−６−ブロモプリン−９−イル、アミノ基が核酸合成の保護基で保護された２−アミノ−６−ブロモプリン−９−イル、２−アミノ−６−ヒドロキシプリン−９−イル（すなわち、グアニニル）、アミノ基が核酸合成の保護基で保護された２−アミノ−６−ヒドロキシプリン−９−イル、６−アミノ−２−メトキシプリン−９−イル、アミノ基が核酸合成の保護基で保護された６−アミノ−２−メトキシプリン−９−イル、６−アミノ−２−クロロプリン−９−イル、アミノ基が核酸合成の保護基で保護された６−アミノ−２−クロロプリン−９−イル、６−アミノ−２−フルオロプリン−９−イル、アミノ基が核酸合成の保護基で保護された６−アミノ−２−フルオロプリン−９−イル、２，６−ジメトキシプリン−９−イル、２，６−ジクロロプリン−９−イル又は６−メルカプトプリン−９−イル基であり、さらに好適には、６−ベンゾイルアミノプリン−９−イル、アデニニル、２−イソブチリルアミノ−６−ヒドロキシプリン−９−イル又はグアニニル基である。
【００３７】
上記一般式（１）、（２）又は（３）中、Ｂの「２−オキソ−1,2−ジヒドロピリミジン−１−イル基」及び「置換２−オキソ−1,2−ジヒドロピリミジン−１−イル基」全体で、好適な基は、２−オキソ−４−アミノ−1,2−ジヒドロピリミジン−１−イル（すなわち、シトシニル）、アミノ基が核酸合成の保護基で保護された２−オキソ−４−アミノ−1,2−ジヒドロピリミジン−１−イル、２−オキソ−４−アミノ−５−フルオロ−1,2−ジヒドロピリミジン−１−イル、アミノ基が核酸合成の保護基で保護された２−オキソ−４−アミノ−５−フルオロ−1,2−ジヒドロピリミジン−１−イル、４−アミノ−２−オキソ−５−クロロ−1,2−ジヒドロピリミジン−１−イル、アミノ基が核酸合成の保護基で保護された４−アミノ−２−オキソ−５−クロロ−1,2−ジヒドロピリミジン−１−イル、２−オキソ−４−メトキシ−1,2−ジヒドロピリミジン−１−イル、２−オキソ−４−メルカプト−1,2−ジヒドロピリミジン−１−イル、２−オキソ−４−ヒドロキシ−1,2−ジヒドロピリミジン−1−イル（すなわち、ウラシニル）、２−オキソ−４−ヒドロキシ−５−メチルピリミジン−１−イル（すなわち、チミニル）又は４−アミノ−５−メチル−２−オキソ−1,2−ジヒドロピリミジン−１−イル（すなわち、５−メチルシトシニル）基であり、さらに好適には、２−オキソ−４−ベンゾイルアミノ−1,2−ジヒドロピリミジン−１−イル、シトシニル、チミニル、ウラシニル、２−オキソ−４−ベンゾイルアミノ−５−メチル−1,2−ジヒドロピリミジン−１−イル、又は５−メチルシトシニル基である。
【００３８】
「ヌクレオシド類縁体」とは、プリン又はピリミジン塩基と糖が結合した「ヌクレオシド」のうち、非天然型のものを言う。
【００３９】
「オリゴヌクレオチド類縁体」とは、同一又は異なる上記「ヌクレオシド」がリン酸ジエステル結合で２乃至５０個結合した「オリゴヌクレオチド」の非天然型誘導体をいい、そのような類縁体としては、好適には、糖部分が修飾された糖誘導体；リン酸ジエステル結合部分がチオエート化されたチオエート誘導体；末端のリン酸部分がエステル化されたエステル体；プリン塩基上のアミノ基がアミド化されたアミド体を挙げることができ、さらに好適には、糖部分が修飾された糖誘導体及びリン酸ジエステル結合部分がチオエート化されたチオエート誘導体を挙げる事が出来る。
「２'，５'-オリゴアデニル酸類縁体」とは、同一又は異なる上記「ヌクレオシド」が２'，５'-リン酸ジエステル結合で３乃至５個結合し、5’-末端にモノリン酸誘導体、場合によって2’-末端にモノリン酸誘導体が結合した、「２'，５'-オリゴアデニル酸」の非天然型誘導体をいい、そのような類縁体としては、好適には、糖部分が修飾された糖誘導体；リン酸ジエステル結合部分がチオエート化されたチオエート誘導体；末端のリン酸部分が置換化されたリン酸誘導体；プリン塩基上が置換化されたプリン誘導体を挙げることができ、さらに好適には、糖部分が修飾された糖誘導体及びリン酸ジエステル結合部分がチオエート化されたチオエート誘導体を挙げる事が出来る。
【００４０】
「その塩」とは、本発明の化合物（１）は、塩にすることができるので、その塩をいい、そのような塩としては、好適にはナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩のようなアルカリ金属塩、カルシウム塩、マグネシウム塩のようなアルカリ土類金属塩、アルミニウム塩、鉄塩、亜鉛塩、銅塩、ニッケル塩、コバルト塩等の金属塩；アンモニウム塩のような無機塩、ｔ−オクチルアミン塩、ジベンジルアミン塩、モルホリン塩、グルコサミン塩、フェニルグリシンアルキルエステル塩、エチレンジアミン塩、Ｎ−メチルグルカミン塩、グアニジン塩、ジエチルアミン塩、トリエチルアミン塩、ジシクロヘキシルアミン塩、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン塩、クロロプロカイン塩、プロカイン塩、ジエタノールアミン塩、Ｎ−ベンジル−フェネチルアミン塩、ピペラジン塩、テトラメチルアンモニウム塩、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン塩のような有機塩等のアミン塩；弗化水素酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、沃化水素酸塩のようなハロゲン原子化水素酸塩、硝酸塩、過塩素酸塩、硫酸塩、燐酸塩等の無機酸塩；メタンスルホン酸塩、トリフルオロメタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩のような低級アルカンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、p-トルエンスルホン酸塩のようなアリ−ルスルホン酸塩、酢酸塩、りんご酸塩、フマ−ル酸塩、コハク酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、蓚酸塩、マレイン酸塩等の有機酸塩；及び、グリシン塩、リジン塩、アルギニン塩、オルニチン塩、グルタミン酸塩、アスパラギン酸塩のようなアミノ酸塩を挙げることができる。
【００４１】
「その薬理上許容される塩」とは、本発明のオリゴヌクレオチド類縁体は、塩にすることができるので、その塩をいい、そのような塩としては、好適にはナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩のようなアルカリ金属塩、カルシウム塩、マグネシウム塩のようなアルカリ土類金属塩、アルミニウム塩、鉄塩、亜鉛塩、銅塩、ニッケル塩、コバルト塩等の金属塩；アンモニウム塩のような無機塩、ｔ−オクチルアミン塩、ジベンジルアミン塩、モルホリン塩、グルコサミン塩、フェニルグリシンアルキルエステル塩、エチレンジアミン塩、Ｎ−メチルグルカミン塩、グアニジン塩、ジエチルアミン塩、トリエチルアミン塩、ジシクロヘキシルアミン塩、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン塩、クロロプロカイン塩、プロカイン塩、ジエタノールアミン塩、Ｎ−ベンジル−フェネチルアミン塩、ピペラジン塩、テトラメチルアンモニウム塩、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン塩のような有機塩等のアミン塩；弗化水素酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、沃化水素酸塩のようなハロゲン原子化水素酸塩、硝酸塩、過塩素酸塩、硫酸塩、燐酸塩等の無機酸塩；メタンスルホン酸塩、トリフルオロメタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩のような低級アルカンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、p-トルエンスルホン酸塩のようなアリ−ルスルホン酸塩、酢酸塩、りんご酸塩、フマ−ル酸塩、コハク酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、蓚酸塩、マレイン酸塩等の有機酸塩；及び、グリシン塩、リジン塩、アルギニン塩、オルニチン塩、グルタミン酸塩、アスパラギン酸塩のようなアミノ酸塩を挙げることができる。
【００４２】
本発明の化合物（１）及びその塩のうち、好適な化合物としては、
（１）Ｒ¹が、水素原子、脂肪族アシル基、芳香族アシル基、１乃至３個のアリール基で置換されたメチル基、低級アルキル、低級アルコキシ、ハロゲン若しくはシアノ基でアリール環が置換された１乃至３個のアリール基で置換されたメチル基、又は、シリル基である化合物及びその塩、
（２）Ｒ¹が、水素原子、アセチル基、ベンゾイル基、ベンジル基、ｐ−メトキシベンジル基、ジメトキシトリチル基、モノメトキシトリチル基又はtert-ブチルジフェニルシリル基である化合物及びその塩、
（３）Ｒ²が、水素原子、脂肪族アシル基、芳香族アシル基、１乃至３個のアリール基で置換されたメチル基、低級アルキル、低級アルコキシ、ハロゲン若しくはシアノ基でアリール環が置換された１乃至３個のアリール基で置換されたメチル基、シリル基、ホスホロアミダイト基、ホスホニル基、リン酸基又は核酸合成の保護基で保護されたリン酸基である化合物及びその塩、
（４）Ｒ²が、水素原子、アセチル基、ベンゾイル基、ベンジル基、ｐ−メトキシベンジル基、tert-ブチルジフェニルシリル基、-P(OC₂H₄CN)(NCH(CH₃)₂)、-P(OCH₃)(NCH(CH₃)₂)、ホスホニル基、又は、２−クロロフェニル若しくは４−クロロフェニルリン酸基である化合物及びその塩、
（５）Ａが、メチレン又はエチレン基である化合物及びその塩、
（６）Ｂが、６−アミノプリン−９−イル（すなわち、アデニニル）、アミノ基が核酸合成の保護基で保護された６−アミノプリン−９−イル、２，６−ジアミノプリン−９−イル、６−アミノ−８−ブロモプリン−９−イル、アミノ基が核酸合成の保護基で保護された６−アミノ−８−ブロモプリン−９−イル、６−アミノ−８−クロロプリン−９−イル、アミノ基が核酸合成の保護基で保護された６−アミノ−８−クロロプリン−９−イル、６−アミノ−８−フルオロプリン−９−イル、アミノ基が核酸合成の保護基で保護された６−アミノ−８−フルオロプリン−９−イル、６−アミノ−８−メトキシプリン−９−イル、アミノ基が核酸合成の保護基で保護された６−アミノ−８−メトキシプリン−９−イル、６−アミノ−８−エトキシプリン−９−イル、アミノ基が核酸合成の保護基で保護された６−アミノ−８−エトキシプリン−９−イル、６−アミノ−８−ｔ−ブトキシプリン−９−イル、アミノ基が核酸合成の保護基で保護された６−アミノ−８−ｔ−ブトキシプリン−９−イル、２−アミノ−６−クロロプリン−９−イル、アミノ基が核酸合成の保護基で保護された２−アミノ−６−クロロプリン−９−イル、２−アミノ−６−フルオロプリン−９−イル、アミノ基が核酸合成の保護基で保護された２−アミノ−６−フルオロプリン−９−イル、２−アミノ−６−ブロモプリン−９−イル、アミノ基が核酸合成の保護基で保護された２−アミノ−６−ブロモプリン−９−イル、２−アミノ−６−ヒドロキシプリン−９−イル（すなわち、グアニニル）、アミノ基が核酸合成の保護基で保護された２−アミノ−６−ヒドロキシプリン−９−イル、６−アミノ−２−メトキシプリン−９−イル、ミノ基が核酸合成の保護基で保護された６−アミノ−２−メトキシプリン−９−イル、６−アミノ−２−クロロプリン−９−イル、アミノ基が核酸合成の保護基で保護された６−アミノ−２−クロロプリン−９−イル、６−アミノ−２−フルオロプリン−９−イル、アミノ基が核酸合成の保護基で保護された６−アミノ−２−フルオロプリン−９−イル、２，６−ジメトキシプリン−９−イル、２，６−ジクロロプリン−９−イル、６−メルカプトプリン−９−イル、２−オキソ−４−アミノ−1,2−ジヒドロピリミジン−１−イル（すなわち、シトシニル）、アミノ基が核酸合成の保護基で保護された２−オキソ−４−アミノ−1,2−ジヒドロピリミジン−１−イル、２−オキソ−４−アミノ−５−フルオロ−1,2−ジヒドロピリミジン−１−イル、アミノ基が核酸合成の保護基で保護された２−オキソ−４−アミノ−５−フルオロ−1,2−ジヒドロピリミジン−１−イル、４−アミノ−２−オキソ−５−クロロ−1,2−ジヒドロピリミジン−１−イル、アミノ基が核酸合成の保護基で保護された４−アミノ−２−オキソ−５−クロロ−1,2−ジヒドロピリミジン−１−イル、２−オキソ−４−メトキシ−1,2−ジヒドロピリミジン−１−イル、２−オキソ−４−メルカプト−1,2−ジヒドロピリミジン−１−イル、２−オキソ−４−ヒドロキシ−1,2−ジヒドロピリミジン−1−イル（すなわち、ウラシニル）、２−オキソ−４−ヒドロキシ−５−メチルピリミジン−１−イル（すなわち、チミニル）、４−アミノ−５−メチル−２−オキソ−1,2−ジヒドロピリミジン−１−イル（すなわち、５−メチルシトシニル）基又はアミノ基が核酸合成の保護基で保護された４−アミノ−５−メチル−２−オキソ−1,2−ジヒドロピリミジン−１−イル基である化合物及びその塩、
（７）Ｂが、６−ベンゾイルアミノプリン−９−イル、アデニニル、６−アミノ−８−ブロモプリン−９−イル、６−ベンゾイルアミノ−８−ブロモプリン−９−イル、６−アミノ−８−クロロプリン−９−イル、６−ベンゾイルアミノ−８−クロロプリン−９−イル、６−アミノ−８−フルオロプリン−９−イル、６−ベンゾイルアミノ−８−フルオロプリン−９−イル、６−アミノ−８−メトキシプリン−９−イル、６−ベンゾイルアミノ−８−メトキシプリン−９−イル、６−アミノ−８−エトキシプリン−９−イル、６−ベンゾイルアミノ−８−エトキシプリン−９−イル、６−アミノ−８−ｔ−ブトキシプリン−９−イル、６−ベンゾイルアミノ−８−ｔ−ブトキシプリン−９−イル、２−イソブチリルアミノ−６−ヒドロキシプリン−９−イル、グアニニル、２−オキソ−４−ベンゾイルアミノ−1,2−ジヒドロピリミジン−１−イル、シトシニル、２−オキソ−５−メチル−４−ベンゾイルアミノ−1,2−ジヒドロピリミジン−１−イル、５−メチルシトシニル、ウラシニル又はチミニル基である化合物及びその塩をあげることができる。
【００４３】
又、上記（１）乃至（２）、(３)乃至（４）又は（６）乃至（７）は、番号が大きくなるに従って、より好適な化合物を示し、一般式（１）において、Ｒ¹を（１）乃至（２）から任意に選択し、Ｒ²を（３）乃至（４）から任意に選択し、Ａを（５）から任意に選択し、Ｂを（６）乃至（７）から任意に選択し、又、これらを任意に組み合わせて得られた化合物およびその塩も好適であり、特に好適な組み合わせは、(2)-(3)-(5)-(6)、(2)-(3)-(5)-(7)、(2)-(4)-(5)-(6)及び(2)-(4)-(5)-(7)であり、更に好適には、下記群から選択される化合物及びその塩である。
【００４４】
(化合物群)
３’-Ｏ,４’-Ｃ-エチレングアノシン、
３’-Ｏ,４’-Ｃ-エチレンアデノシン、
５’-Ｏ-ジメトキシトリチル-３’-Ｏ,４’-Ｃ-エチレン-６-Ｎ-ベンゾイルアデノシン、
５’-Ｏ-ジメトキシトリチル-３’-Ｏ,４’-Ｃ-エチレン-２-Ｎ-イソブチリルグアノシン、
３’-Ｏ,４’-Ｃ-エチレン-２-Ｎ-イソブチリルグアノシン、
３’-Ｏ,４’-Ｃ-エチレン-６-Ｎ-ベンゾイルアデノシン、
５'-Ｏ-ジメトキシトリチル‐３’-Ｏ,４’-Ｃ-エチレン-６-Ｎ-ベンゾイルアデノシン‐２'-Ｏ‐（２‐シアノエチル Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル）ホスホロアミダイト
５'-Ｏ-ジメトキシトリチル‐３’-Ｏ,４’-Ｃ-エチレン-２-Ｎ-イソブチリルグアノシン‐２'-Ｏ‐（２‐シアノエチル Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル）ホスホロアミダイト
３’-Ｏ,４’-Ｃ-エチレンウリジン、
３’-Ｏ,４’-Ｃ-エチレン−５−メチルウリジン、
３’-Ｏ,４’-Ｃ-エチレンシチジン、
３’-Ｏ,４’-Ｃ-エチレン-５-メチルシチジン、
２’,５’-ジ-Ｏ-ベンジル-３’-Ｏ,４’-Ｃ-エチレンウリジン、
５’-Ｏ-ジメトキシトリチル-３’-Ｏ,４’-Ｃ-エチレンウリジン、
５’-Ｏ-ジメトキシトリチル-３’-Ｏ,４’-Ｃ-エチレン-５−メチルウリジン、
５’-Ｏ-ジメトキシトリチル-３’-Ｏ,４’-Ｃ-エチレン-４-Ｎ-ベンゾイルシチジン、
５’-Ｏ-ジメトキシトリチル-３’-Ｏ,４’-Ｃ-エチレン-４-Ｎ-ベンゾイル-５-メチルシチジン、
３’-Ｏ,４’-Ｃ-エチレン-４-Ｎ-ベンゾイルシチジン、
３’-Ｏ,４’-Ｃ-エチレン-４-Ｎ-ベンゾイル-５-メチルシチジン、
5'-Ｏ-ジメトキシトリチル‐３’-Ｏ,４’-Ｃ-エチレン-ウリジン‐２'-Ｏ‐（２‐シアノエチル Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル）ホスホロアミダイト、
5'-Ｏ-ジメトキシトリチル‐３’-Ｏ,４’-Ｃ-エチレン-５−メチルウリジン-２'-Ｏ‐（２‐シアノエチル Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル）ホスホロアミダイト、
5'-Ｏ-ジメトキシトリチル‐３’-Ｏ,４’-Ｃ-エチレン-４-Ｎ-ベンゾイルシチジン‐２'-Ｏ‐（２‐シアノエチル Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル）ホスホロアミダイト、
5'-Ｏ-ジメトキシトリチル‐３’-Ｏ,４’-Ｃ-エチレン-４-Ｎ-ベンゾイル−５−メチルシチジン‐2'-Ｏ‐（２‐シアノエチル Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル）ホスホロアミダイト、
３'−O，４'−C−６−アミノ−８−ブロモアデノシン、
５'−O−ジメトキシトリチル−３'−O，４'−C−６−ベンゾイルアミノ−８−ブロモアデノシン、
５'−O−ジメトキシトリチル−３'−O，４'−C−６−ベンゾイルアミノ−８−ブロモアデノシン２'−O−（２−シアノエチル N,N−ジイソプロピル）ホスホロアミダイト、
３'−O，４'−C−６−アミノ−８−クロロアデノシン、
５'−O−ジメトキシトリチル−３'−O，４'−C−６−ベンゾイルアミノ−８−クロロアデノシン、
５'−O−ジメトキシトリチル−３'−O，４'−C−６−ベンゾイルアミノ−８−クロロアデノシン２'−O−（２−シアノエチル N,N−ジイソプロピル）ホスホロアミダイト、
３'−O，４'−C−６−アミノ−８−フルオロアデノシン、
５'−O−ジメトキシトリチル−３'−O，４'−C−６−ベンゾイルアミノ−８−フルオロアデノシン、
５'−O−ジメトキシトリチル−３'−O，４'−C−６−ベンゾイルアミノ−８−フルオロアデノシン２'−O−（２−シアノエチル N,N−ジイソプロピル）ホスホロアミダイト、
３'−O，４'−C−６−アミノ−８−メトキシアデノシン、
５'−O−ジメトキシトリチル−３'−O，４'−C−６−ベンゾイルアミノ−８−メトキシアデノシン、
５'−O−ジメトキシトリチル−３'−O，４'−C−６−ベンゾイルアミノ−８−メトキシアデノシン２'−O−（２−シアノエチル N,N−ジイソプロピル）ホスホロアミダイト、
３'−O，４'−C−６−アミノ−８−エトキシアデノシン、
５'−O−ジメトキシトリチル−３'−O，４'−C−６−ベンゾイルアミノ−８−エトキシアデノシン、
５'−O−ジメトキシトリチル−３'−O，４'−C−６−ベンゾイルアミノ−８−エトキシアデノシン２'−O−（２−シアノエチル N,N−ジイソプロピル）ホスホロアミダイト、
３'−O，４'−C−６−アミノ−８−ｔ−ブトキシアデノシン、
５'−O−ジメトキシトリチル−３'−O，４'−C−６−ベンゾイルアミノ−８−ｔ−ブトキシアデノシン、及び、
５'−O−ジメトキシトリチル−３'−O，４'−C−６−ベンゾイルアミノ−８−ｔ−ブトキシアデノシン２'−O−（２−シアノエチル N,N−ジイソプロピル）ホスホロアミダイト。
【００４５】
本発明の一般式（２）で表される構造を１又は２以上含有するオリゴヌクレオチド類縁体及びその薬理学上許容される塩のうち、好適なものとしては、
（８）Ａが、メチレン又はエチレン基であるオリゴヌクレオチド類縁体及びその薬理学上許容される塩、
（９）Ｂが、６−アミノプリン−９−イル（すなわち、アデニニル）、アミノ基が核酸合成の保護基で保護された６−アミノプリン−９−イル、２，６−ジアミノプリン−９−イル、６−アミノ−８−ブロモプリン−９−イル、アミノ基が核酸合成の保護基で保護された６−アミノ−８−ブロモプリン−９−イル、６−アミノ−８−クロロプリン−９−イル、アミノ基が核酸合成の保護基で保護された６−アミノ−８−クロロプリン−９−イル、６−アミノ−８−フルオロプリン−９−イル、アミノ基が核酸合成の保護基で保護された６−アミノ−８−フルオロプリン−９−イル、６−アミノ−８−メトキシプリン−９−イル、アミノ基が核酸合成の保護基で保護された６−アミノ−８−メトキシプリン−９−イル、６−アミノ−８−エトキシプリン−９−イル、アミノ基が核酸合成の保護基で保護された６−アミノ−８−エトキシプリン−９−イル、６−アミノ−８−ｔ−ブトキシプリン−９−イル、アミノ基が核酸合成の保護基で保護された６−アミノ−８−ｔ−ブトキシプリン−９−イル、２−アミノ−６−クロロプリン−９−イル、アミノ基が核酸合成の保護基で保護された２−アミノ−６−クロロプリン−９−イル、２−アミノ−６−フルオロプリン−９−イル、アミノ基が核酸合成の保護基で保護された２−アミノ−６−フルオロプリン−９−イル、２−アミノ−６−ブロモプリン−９−イル、アミノ基が核酸合成の保護基で保護された２−アミノ−６−ブロモプリン−９−イル、２−アミノ−６−ヒドロキシプリン−９−イル（すなわち、グアニニル）、アミノ基が核酸合成の保護基で保護された２−アミノ−６−ヒドロキシプリン−９−イル、アミノ基及び水酸基が保護された２−アミノ−６−ヒドロキシプリン−９−イル、６−アミノ−２−メトキシプリン−９−イル、アミノ基が核酸合成の保護基で保護された６−アミノ−２−メトキシプリン−９−イル、６−アミノ−２−クロロプリン−９−イル、アミノ基が核酸合成の保護基で保護された６−アミノ−２−クロロプリン−９−イル、６−アミノ−２−フルオロプリン−９−イル、アミノ基が核酸合成の保護基で保護された６−アミノ−２−フルオロプリン−９−イル、２，６−ジメトキシプリン−９−イル、２，６−ジクロロプリン−９−イル、６−メルカプトプリン−９−イル、２−オキソ−４−アミノ−1,2−ジヒドロピリミジン−１−イル（すなわち、シトシニル）、アミノ基が核酸合成の保護基で保護された２−オキソ−４−アミノ−1,2−ジヒドロピリミジン−１−イル、２−オキソ−４−アミノ−５−フルオロ−1,2−ジヒドロピリミジン−１−イル、アミノ基が核酸合成の保護基で保護された２−オキソ−４−アミノ−５−フルオロ−1,2−ジヒドロピリミジン−１−イル、４−アミノ−２−オキソ−５−クロロ−1,2−ジヒドロピリミジン−１−イル、アミノ基が核酸合成の保護基で保護された４−アミノ−２−オキソ−５−クロロ−1,2−ジヒドロピリミジン−１−イル、２−オキソ−４−メトキシ−1,2−ジヒドロピリミジン−１−イル、２−オキソ−４−メルカプト−1,2−ジヒドロピリミジン−１−イル、２−オキソ−４−ヒドロキシ−1,2−ジヒドロピリミジン−1−イル（すなわち、ウラシニル）、２−オキソ−４−ヒドロキシ−５−メチルピリミジン−１−イル（すなわち、チミニル）、４−アミノ−５−メチル−２−オキソ−1,2−ジヒドロピリミジン−１−イル（すなわち、５−メチルシトシニル）基又はアミノ基が核酸合成の保護基で保護された４−アミノ−５−メチル−２−オキソ−1,2−ジヒドロピリミジン−１−イル基であるオリゴヌクレオチド類縁体及びその薬理学上許容さ
れる塩、
（１０）Ｂが、６−ベンゾイルアミノプリン−９−イル、アデニニル、６−アミノ−８−ブロモプリン−９−イル、６−ベンゾイルアミノ−８−ブロモプリン−９−イル、６−アミノ−８−クロロプリン−９−イル、６−ベンゾイルアミノ−８−クロロプリン−９−イル、６−アミノ−８−フルオロプリン−９−イル、６−ベンゾイルアミノ−８−フルオロプリン−９−イル、６−アミノ−８−メトキシプリン−９−イル、６−ベンゾイルアミノ−８−メトキシプリン−９−イル、６−アミノ−８−エトキシプリン−９−イル、６−ベンゾイルアミノ−８−エトキシプリン−９−イル、６−アミノ−８−ｔ−ブトキシプリン−９−イル、６−ベンゾイルアミノ−８−ｔ−ブトキシプリン−９−イル、２−イソブチリルアミノ−６−ヒドロキシプリン−９−イル、グアニニル、２−オキソ−４−ベンゾイルアミノ−1,2−ジヒドロピリミジン−１−イル、シトシニル、２−オキソ−５−メチル−４−ベンゾイルアミノ−1,2−ジヒドロピリミジン−１−イル、５−メチルシトシニル、ウラシニル又はチミニル基であるオリゴヌクレオチド類縁体及びその薬理学上許容される塩をあげることができる。
【００４６】
又、上記（９）乃至（１０）は、番号が大きくなるに従って、より好適なオリゴヌクレオチド類縁体を示し、一般式（２）において、Ａを（８）から任意に選択し、Ｂを（９）乃至（１０）から任意に選択し、又、これらを任意に組み合わせて得られたオリゴヌクレオチド類縁体およびその薬理学上許容される塩も好適であり、特に好適な組み合わせは(8)-(9)及び(8)-(10)である。
【００４７】
本発明の一般式（３）で表される構造を有する２'，５'-オリゴアデニル酸類縁体及びその薬理学上許容される塩のうち、好適なものとしては、
（８）Ａが、メチレン又はエチレン基である２'，５'-オリゴアデニル酸類縁体及びその薬理学上許容される塩、
（９）Ｂが、６−アミノプリン−９−イル（すなわち、アデニニル）、６−アミノ−８−ブロモプリン−９−イル、６−アミノ−８−クロロプリン−９−イル、６−アミノ−８−フルオロプリン−９−イル、６−アミノ−８−メトキシプリン−９−イル、６−アミノ−８−エトキシプリン−９−イル、６−アミノ−８−ｔ−ブトキシプリン−９−イル、６−アミノ−２−ブロモプリン−９−イル、６−アミノ−２−クロロプリン−９−イル、６−アミノ−２−フルオロプリン−９−イル、６−アミノ−２−メトキシプリン−９−イル、６−アミノ−２−エトキシプリン−９−イル、６−アミノ−２−ｔ−ブトキシプリン−９−イル、2,6-ジアミノプリン−９−イル基である２'，５'-オリゴアデニル酸類縁体及びその薬理学上許容される塩。
【００４８】
本発明の上記式（１）の化合物に包含される、具体的な化合物を表１及び表２に例示する。但し、本発明の化合物は、これらに限定されるものではない。
【００４９】
表１及び表２において、Ｍｅは、メチル基を示し、Ｂｎは、ベンジル基を示し、Ｂｚは、ベンゾイル基を示し、ＰＭＢは、ｐ−メトキシベンジル基を示し、Ｔｒは、トリフェニルメチル基を示し、ＭＭＴｒは、４−メトキシトリフェニルメチル（モノメトキシトリチル）基を示し、ＤＭＴｒは、４，４’−ジメトキシトリフェニルメチル（ジメトキシトリチル）基を示し、ＴＭＴｒは、４，４’，４’’−トリメトキシトリフェニルメチル（トリメトキシトリチル）基を示し、ＴＭＳは、トリメチルシリル基を示し、ＴＢＤＭＳは、tert−ブチルジメチルシリル基を示し、ＴＢＤＰＳは、tert−ブチルジフェニルシリル基を示し、ＴＩＰＳは、トリイソプロピルシリル基を示す。
【００５０】
【化１０】

【００５１】
【表１】
−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−
例 示
化合物
番 号 A R¹ R² R⁵ R⁶
−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−
1-1 CH₂ H H H H
1-2 CH₂ H H H NH₂
1-3 CH₂ H H H OH
1-4 CH₂ H H OH H
1-5 CH₂ H H OH NH₂
1-6 CH₂ H H OH OH
1-7 CH₂ H H NH₂ H
1-8 CH₂ H H NH₂ NH₂
1-9 CH₂ H H NH₂ Cl
1-10 CH₂ H H NH₂ F
1-11 CH₂ H H NH₂ Br
1-12 CH₂ H H NH₂ OH
1-13 CH₂ H H OMe H
1-14 CH₂ H H OMe OMe
1-15 CH₂ H H OMe NH₂
1-16 CH₂ H H Cl H
1-17 CH₂ H H Br H
1-18 CH₂ H H F H
1-19 CH₂ H H Cl Cl
1-20 CH₂ H H SH H
1-21 CH₂ Bn H NHBz H
1-22 CH₂ Bn H OH NHCOCH(CH₃)₂
1-23 CH₂ Bn Ac NHBz H
1-24 CH₂ Bn Ac OH NHCOCH(CH₃)₂
1-25 CH₂ PMB H NHBz H
1-26 CH₂ PMB H OH NHCOCH(CH₃)₂
1-27 CH₂ PMB Ac NHBz H
1-28 CH₂ PMB Ac OH NHCOCH(CH₃)₂
1-29 CH₂ Tr H NHBz H
1-30 CH₂ MMTr H NHBz H
1-31 CH₂ DMTr H NHBz H
1-32 CH₂ Ac Ac NHBz H
1-33 CH₂ Tr H OH NHCOCH(CH₃)₂
1-34 CH₂ MMTr H OH NHCOCH(CH₃)₂
1-35 CH₂ DMTr H OH NHCOCH(CH₃)₂
1-36 CH₂ Ac Ac OH NHCOCH(CH₃)₂
1-37 CH₂ TBDPS Ac NHBz H
1-38 CH₂ TBDMS H NHBz H
1-39 CH₂ TBDPS H NHBz H
1-40 CH₂ TIPS H NHBz H
1-41 CH₂ TBDPS Ac OH NHCOCH(CH₃)₂
1-42 CH₂ TBDMS H OH NHCOCH(CH₃)₂
1-43 CH₂ TBDPS H OH NHCOCH(CH₃)₂
1-44 CH₂ TIPS H OH NHCOCH(CH₃)₂
1-45 (CH₂)₂ H H H H
1-46 (CH₂)₂ H H H NH₂
1-47 (CH₂)₂ H H H OH
1-48 (CH₂)₂ H H OH H
1-49 (CH₂)₂ H H OH NH₂
1-50 (CH₂)₂ H H OH OH
1-51 (CH₂)₂ H H NH₂ H
1-52 (CH₂)₂ H H NH₂ NH₂
1-53 (CH₂)₂ H H NH₂ Cl
1-54 (CH₂)₂ H H NH₂ F
1-55 (CH₂)₂ H H NH₂ Br
1-56 (CH₂)₂ H H NH₂ OH
1-57 (CH₂)₂ H H OMe H
1-58 (CH₂)₂ H H OMe OMe
1-59 (CH₂)₂ H H OMe NH₂
1-60 (CH₂)₂ H H Cl H
1-61 (CH₂)₂ H H Br H
1-62 (CH₂)₂ H H F H
1-63 (CH₂)₂ H H Cl Cl
1-64 (CH₂)₂ H H SH H
1-65 (CH₂)₂ Bn H NHBz H
1-66 (CH₂)₂ Bn H OH NHCOCH(CH₃)₂
1-67 (CH₂)₂ Bn Ac NHBz H
1-68 (CH₂)₂ Bn Ac OH NHCOCH(CH₃)₂
1-69 (CH₂)₂ PMB H NHBz H
1-70 (CH₂)₂ PMB H OH NHCOCH(CH₃)₂
1-71 (CH₂)₂ PMB Ac NHBz H
1-72 (CH₂)₂ PMB Ac OH NHCOCH(CH₃)₂
1-73 (CH₂)₂ Tr H NHBz H
1-74 (CH₂)₂ MMTr H NHBz H
1-75 (CH₂)₂ DMTr H NHBz H
1-76 (CH₂)₂ Ac Ac NHBz H
1-77 (CH₂)₂ Tr H OH NHCOCH(CH₃)₂
1-78 (CH₂)₂ MMTr H OH NHCOCH(CH₃)₂
1-79 (CH₂)₂ DMTr H OH NHCOCH(CH₃)₂
1-80 (CH₂)₂ Ac Ac OH NHCOCH(CH₃)₂
1-81 (CH₂)₂ TBDPS Ac NHBz H
1-82 (CH₂)₂ TBDMS H NHBz H
1-83 (CH₂)₂ TBDPS H NHBz H
1-84 (CH₂)₂ TIPS H NHBz H
1-85 (CH₂)₂ TBDPS Ac OH NHCOCH(CH₃)₂
1-86 (CH₂)₂ TBDMS H OH NHCOCH(CH₃)₂
1-87 (CH₂)₂ TBDPS H OH NHCOCH(CH₃)₂
1-88 (CH₂)₂ TIPS H OH NHCOCH(CH₃)₂
1-89 (CH₂)₃ H H H H
1-90 (CH₂)₃ H H H NH₂
1-91 (CH₂)₃ H H H OH
1-92 (CH₂)₃ H H OH H
1-93 (CH₂)₃ H H OH NH₂
1-94 (CH₂)₃ H H OH OH
1-95 (CH₂)₃ H H NH₂ H
1-96 (CH₂)₃ H H NH₂ NH₂
1-97 (CH₂)₃ H H NH₂ Cl
1-98 (CH₂)₃ H H NH₂ F
1-99 (CH₂)₃ H H NH₂ Br
1-100 (CH₂)₃ H H NH₂ OH
1-101 (CH₂)₃ H H OMe H
1-102 (CH₂)₃ H H OMe OMe
1-103 (CH₂)₃ H H OMe NH₂
1-104 (CH₂)₃ H H Cl H
1-105 (CH₂)₃ H H Br H
1-106 (CH₂)₃ H H F H
1-107 (CH₂)₃ H H Cl Cl
1-108 (CH₂)₃ H H SH H
1-109 (CH₂)₃ Bn H NHBz H
1-110 (CH₂)₃ Bn H OH NHCOCH(CH₃)₂
1-111 (CH₂)₃ Bn Ac NHBz H
1-112 (CH₂)₃ Bn Ac OH NHCOCH(CH₃)₂
1-113 (CH₂)₃ PMB H NHBz H
1-114 (CH₂)₃ PMB H OH NHCOCH(CH₃)₂
1-115 (CH₂)₃ PMB Ac NHBz H
1-116 (CH₂)₃ PMB Ac OH NHCOCH(CH₃)₂
1-117 (CH₂)₃ Tr H NHBz H
1-118 (CH₂)₃ MMTr H NHBz H
1-119 (CH₂)₃ DMTr H NHBz H
1-120 (CH₂)₃ Ac Ac NHBz H
1-121 (CH₂)₃ Tr H OH NHCOCH(CH₃)₂
1-122 (CH₂)₃ MMTr H OH NHCOCH(CH₃)₂
1-123 (CH₂)₃ DMTr H OH NHCOCH(CH₃)₂
1-124 (CH₂)₃ Ac Ac OH NHCOCH(CH₃)₂
1-125 (CH₂)₃ TNDPS Ac NHBz H
1-126 (CH₂)₃ TBDMS H NHBz H
1-127 (CH₂)₃ TBDPS H NHBz H
1-128 (CH₂)₃ TIPS H NHBz H
1-129 (CH₂)₃ TBDPS Ac OH NHCOCH(CH₃)₂
1-130 (CH₂)₃ TBDMS H OH NHCOCH(CH₃)₂
1-131 (CH₂)₃ TBDPS H OH NHCOCH(CH₃)₂
1-132 (CH₂)₃ TIPS H OH NHCOCH(CH₃)₂
1-133 (CH₂)₄ H H H H
1-134 (CH₂)₄ H H H NH₂
1-135 (CH₂)₄ H H H OH
1-136 (CH₂)₄ H H OH H
1-137 (CH₂)₄ H H OH NH₂
1-138 (CH₂)₄ H H OH OH
1-139 (CH₂)₄ H H NH₂ H
1-140 (CH₂)₄ H H NH₂ NH₂
1-141 (CH₂)₄ H H NH₂ Cl
1-142 (CH₂)₄ H H NH₂ F
1-143 (CH₂)₄ H H NH₂ Br
1-144 (CH₂)₄ H H NH₂ OH
1-145 (CH₂)₄ H H OMe H
1-146 (CH₂)₄ H H OMe OMe
1-147 (CH₂)₄ H H OMe NH₂
1-148 (CH₂)₄ H H Cl H
1-149 (CH₂)₄ H H Br H
1-150 (CH₂)₄ H H F H
1-151 (CH₂)₄ H H Cl Cl
1-152 (CH₂)₄ H H SH H
1-153 (CH₂)₄ Bn H NHBz H
1-154 (CH₂)₄ Bn H OH NHCOCH(CH₃)₂
1-155 (CH₂)₄ Bn Ac NHBz H
1-156 (CH₂)₄ Bn Ac OH NHCOCH(CH₃)₂
1-157 (CH₂)₄ PMB H NHBz H
1-158 (CH₂)₄ PMB H OH NHCOCH(CH₃)₂
1-159 (CH₂)₄ PMB Ac NHBz H
1-160 (CH₂)₄ PMB Ac OH NHCOCH(CH₃)₂
1-161 (CH₂)₄ Tr H NHBz H
1-162 (CH₂)₄ MMTr H NHBz H
1-163 (CH₂)₄ DMTr H NHBz H
1-164 (CH₂)₄ Ac Ac NHBz H
1-165 (CH₂)₄ Tr H OH NHCOCH(CH₃)₂
1-166 (CH₂)₄ MMTr H OH NHCOCH(CH₃)₂
1-167 (CH₂)₄ DMTr H OH NHCOCH(CH₃)₂
1-168 (CH₂)₄ Ac Ac OH NHCOCH(CH₃)₂
1-169 (CH₂)₄ TBDPS Ac NHBz H
1-170 (CH₂)₄ TBDMS H NHBz H
1-171 (CH₂)₄ TBDPS H NHBz H
1-172 (CH₂)₄ TIPS H NHBz H
1-173 (CH₂)₄ TBDPS Ac OH NHCOCH(CH₃)₂
1-174 (CH₂)₄ TBDMS H OH NHCOCH(CH₃)₂
1-175 (CH₂)₄ TBDPS H OH NHCOCH(CH₃)₂
1-176 (CH₂)₄ TIPS H OH NHCOCH(CH₃)₂
1-177 CH₂ H H OH NHCOCH(CH₃)₂
1-178 CH₂ H H NHBz H
1-179 (CH₂)₂ H H OH NHCOCH(CH₃)₂
1-180 (CH₂)₂ H H NHBz H
1-181 (CH₂)₃ H H OH NHCOCH(CH₃)₂
1-182 (CH₂)₃ H H NHBz H
1-183 (CH₂)₄ H H OH NHCOCH(CH₃)₂
1-184 (CH₂)₄ H H NHBz H
1-185 CH₂ DMTr P(N(iPr)₂)(OC₂H₄CN) OH NHCOCH(CH₃)₂
1-186 CH₂ DMTr P(N(iPr)₂)(OC₂H₄CN) NHBz H
1-187 (CH₂)₂ DMTr P(N(iPr)₂)(OC₂H₄CN) OH NHCOCH(CH₃)₂
1-188 (CH₂)₂ DMTr P(N(iPr)₂)(OC₂H₄CN) NHBz H
1-189 (CH₂)₃ DMTr P(N(iPr)₂)(OC₂H₄CN) OH NHCOCH(CH₃)₂
1-190 (CH₂)₃ DMTr P(N(iPr)₂)(OC₂H₄CN) NHBz H
1-191 (CH₂)₄ DMTr P(N(iPr)₂)(OC₂H₄CN) OH NHCOCH(CH₃)₂
1-192 (CH₂)₄ DMTr P(N(iPr)₂)(OC₂H₄CN) NHBz H
1-193 CH₂ DMTr P(N(iPr)₂)(OCH₃) OH NHCOCH(CH₃)₂
1-194 CH₂ DMTr P(N(iPr)₂)(OCH₃) NHBz H
1-195 (CH₂)₂ DMTr P(N(iPr)₂)(OCH₃) OH NHCOCH(CH₃)₂
1-196 (CH₂)₂ DMTr P(N(iPr)₂)(OCH₃) NHBz H
1-197 (CH₂)₃ DMTr P(N(iPr)₂)(OCH₃) OH NHCOCH(CH₃)₂
1-198 (CH₂)₃ DMTr P(N(iPr)₂)(OCH₃) NHBz H
1-199 (CH₂)₄ DMTr P(N(iPr)₂)(OCH₃) OH NHCOCH(CH₃)₂
1-200 (CH₂)₄ DMTr P(N(iPr)₂)(OCH₃) NHBz H
1-201 CH₂ DMTr P(O)(OH)H OH NHCOCH(CH₃)₂
1-202 CH₂ DMTr P(O)(OH)H NHBz H
1-203 (CH₂)₂ DMTr P(O)(OH)H OH NHCOCH(CH₃)₂
1-204 (CH₂)₂ DMTr P(O)(OH)H NHBz H
1-205 (CH₂)₃ DMTr P(O)(OH)H OH NHCOCH(CH₃)₂
1-206 (CH₂)₃ DMTr P(O)(OH)H NHBz H
1-207 (CH₂)₄ DMTr P(O)(OH)H OH NHCOCH(CH₃)₂
1-208 (CH₂)₄ DMTr P(O)(OH)H NHBz H
1-209 CH₂ H Ac NHBz H
−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−
【００５２】
【化１１】

【００５３】
【表２】
−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−
例 示
化合物
番 号 A R¹ R² R⁷ R⁸
−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−
2-1 CH₂ H H OH H
2-2 CH₂ H H OH CH₃
2-3 CH₂ H H NH₂ H
2-4 CH₂ H H NH₂ CH₃
2-5 CH₂ H H NH₂ F
2-6 CH₂ H H Cl H
2-7 CH₂ H H OMe H
2-8 CH₂ H H SH H
2-9 CH₂ Bn H OH H
2-10 CH₂ Bn Ac OH H
2-11 CH₂ PMB H OH H
2-12 CH₂ PMB Ac OH H
2-13 CH₂ Tr H OH H
2-14 CH₂ MMTr H OH H
2-15 CH₂ DMTr H OH H
2-16 CH₂ Ac Ac OH H
2-17 CH₂ TBDPS Ac OH H
2-18 CH₂ TBDMS H OH H
2-19 CH₂ TBDPS H OH H
2-20 CH₂ TIPS H OH H
2-21 CH₂ Bn H OH CH₃
2-22 CH₂ Bn Ac OH CH₃
2-23 CH₂ PMB Ac OH CH₃
2-24 CH₂ PMB PMB OH CH₃
2-25 CH₂ Tr H OH CH₃
2-26 CH₂ MMTr H OH CH₃
2-27 CH₂ DMTr H OH CH₃
2-28 CH₂ Ac Ac OH CH₃
2-29 CH₂ TBDPS Ac OH CH₃
2-30 CH₂ TBDMS H OH CH₃
2-31 CH₂ TBDPS H OH CH₃
2-32 CH₂ TIPS H OH CH₃
2-33 CH₂ Bn H NHBz H
2-34 CH₂ Bn Ac NHBz H
2-35 CH₂ PMB H NHBz H
2-36 CH₂ PMB Ac NHBz H
2-37 CH₂ Tr H NHBz H
2-38 CH₂ MMTr H NHBz H
2-39 CH₂ DMTr H NHBz H
2-40 CH₂ Ac Ac NHBz H
2-41 CH₂ TBDPS Ac NHBz H
2-42 CH₂ TBDMS H NHBz H
2-43 CH₂ TBDPS H NHBz H
2-44 CH₂ TIPS H NHBz H
2-45 CH₂ Bn H NHBz CH₃
2-46 CH₂ Bn Ac NHBz CH₃
2-47 CH₂ PMB H NHBz CH₃
2-48 CH₂ PMB Ac NHBz CH₃
2-49 CH₂ Tr H NHBz CH₃
2-50 CH₂ MMTr H NHBz CH₃
2-51 CH₂ DMTr H NHBz CH₃
2-52 CH₂ Ac Ac NHBz CH₃
2-53 CH₂ TBDPS Ac NHBz CH₃
2-54 CH₂ TBDMS H NHBz CH₃
2-55 CH₂ TBDPS H NHBz CH₃
2-56 CH₂ TIPS H NHBz CH₃
2-57 (CH₂)₂ H H OH H
2-58 (CH₂)₂ H H OH CH₃
2-59 (CH₂)₂ H H NH₂ H
2-60 (CH₂)₂ H H NH₂ CH₃
2-61 (CH₂)₂ H H NH₂ F
2-62 (CH₂)₂ H H Cl H
2-63 (CH₂)₂ H H OMe H
2-64 (CH₂)₂ H H SH H
2-65 (CH₂)₂ Bn H OH H
2-66 (CH₂)₂ Bn Ac OH H
2-67 (CH₂)₂ PMB H OH H
2-68 (CH₂)₂ PMB Ac OH H
2-69 (CH₂)₂ Tr H OH H
2-70 (CH₂)₂ MMTr H OH H
2-71 (CH₂)₂ DMTr H OH H
2-72 (CH₂)₂ Ac Ac OH H
2-73 (CH₂)₂ TBDPS Ac OH H
2-74 (CH₂)₂ TBDMS H OH H
2-75 (CH₂)₂ TBDPS H OH H
2-76 (CH₂)₂ TIPS H OH H
2-77 (CH₂)₂ Bn H OH CH₃
2-78 (CH₂)₂ Bn Ac OH CH₃
2-79 (CH₂)₂ PMB H OH CH₃
2-80 (CH₂)₂ PMB Ac OH CH₃
2-81 (CH₂)₂ Tr H OH CH₃
2-82 (CH₂)₂ MMTr H OH CH₃
2-83 (CH₂)₂ DMTr H OH CH₃
2-84 (CH₂)₂ Ac Ac OH CH₃
2-85 (CH₂)₂ TBDPS Ac OH CH₃
2-86 (CH₂)₂ TBDMS H OH CH₃
2-87 (CH₂)₂ TBDPS H OH CH₃
2-88 (CH₂)₂ TIPS H OH CH₃
2-89 (CH₂)₂ Bn H NHBz H
2-90 (CH₂)₂ Bn Ac NHBz H
2-91 (CH₂)₂ PMB H NHBz H
2-92 (CH₂)₂ PMB Ac NHBz H
2-93 (CH₂)₂ Tr H NHBz H
2-94 (CH₂)₂ MMTr H NHBz H
2-95 (CH₂)₂ DMTr H NHBz H
2-96 (CH₂)₂ Ac Ac NHBz H
2-97 (CH₂)₂ TBDPS Ac NHBz H
2-98 (CH₂)₂ TBDMS H NHBz H
2-99 (CH₂)₂ TBDPS H NHBz H
2-100 (CH₂)₂ TIPS H NHBz H
2-101 (CH₂)₂ Bn H NHBz CH₃
2-102 (CH₂)₂ Bn Bn NHBz CH₃
2-103 (CH₂)₂ PMB Ac NHBz CH₃
2-104 (CH₂)₂ PMB Ac NHBz CH₃
2-105 (CH₂)₂ Tr H NHBz CH₃
2-106 (CH₂)₂ MMTr H NHBz CH₃
2-107 (CH₂)₂ DMTr H NHBz CH₃
2-108 (CH₂)₂ Ac Ac NHBz CH₃
2-109 (CH₂)₂ TBDPS Ac NHBz CH₃
2-110 (CH₂)₂ TBDMS H NHBz CH₃
2-111 (CH₂)₂ TBDPS H NHBz CH₃
2-112 (CH₂)₂ TIPS H NHBz CH₃
2-113 (CH₂)₃ H H OH H
2-114 (CH₂)₃ H H OH CH₃
2-115 (CH₂)₃ H H NH₂ H
2-116 (CH₂)₃ H H NH₂ CH₃
2-117 (CH₂)₃ H H NH₂ F
2-118 (CH₂)₃ H H Cl H
2-119 (CH₂)₃ H H OMe H
2-120 (CH₂)₃ H H SH H
2-121 (CH₂)₃ Bn H OH H
2-122 (CH₂)₃ Bn Ac OH H
2-123 (CH₂)₃ PMB H OH H
2-124 (CH₂)₃ PMB Ac OH H
2-125 (CH₂)₃ Tr H OH H
2-126 (CH₂)₃ MMTr H OH H
2-127 (CH₂)₃ DMTr H OH H
2-128 (CH₂)₃ Ac Ac OH H
2-129 (CH₂)₃ TBDPS Ac OH H
2-130 (CH₂)₃ TBDMS H OH H
2-131 (CH₂)₃ TBDPS H OH H
2-132 (CH₂)₃ TIPS H OH H
2-133 (CH₂)₃ Bn H OH CH₃
2-134 (CH₂)₃ Bn Ac OH CH₃
2-135 (CH₂)₃ PMB Ac OH CH₃
2-136 (CH₂)₃ PMB PMB OH CH₃
2-137 (CH₂)₃ Tr H OH CH₃
2-138 (CH₂)₃ MMTr H OH CH₃
2-139 (CH₂)₃ DMTr H OH CH₃
2-140 (CH₂)₃ Ac Ac OH CH₃
2-141 (CH₂)₃ TBDPS Ac OH CH₃
2-142 (CH₂)₃ TBDMS H OH CH₃
2-143 (CH₂)₃ TBDPS H OH CH₃
2-144 (CH₂)₃ TIPS H OH CH₃
2-145 (CH₂)₃ Bn H NHBz H
2-146 (CH₂)₃ Bn Ac NHBz H
2-147 (CH₂)₃ PMB H NHBz H
2-148 (CH₂)₃ PMB Ac NHBz H
2-149 (CH₂)₃ Tr H NHBz H
2-150 (CH₂)₃ MMTr H NHBz H
2-151 (CH₂)₃ DMTr H NHBz H
2-152 (CH₂)₃ Ac Ac NHBz H
2-153 (CH₂)₃ TBDPS Ac NHBz H
2-154 (CH₂)₃ TBDMS H NHBz H
2-155 (CH₂)₃ TBDPS H NHBz H
2-156 (CH₂)₃ TIPS H NHBz H
2-157 (CH₂)₃ Bn H NHBz CH₃
2-158 (CH₂)₃ Bn Ac NHBz CH₃
2-159 (CH₂)₃ PMB H NHBz CH₃
2-160 (CH₂)₃ PMB Ac NHBz CH₃
2-161 (CH₂)₃ Tr H NHBz CH₃
2-162 (CH₂)₃ MMTr H NHBz CH₃
2-163 (CH₂)₃ DMTr H NHBz CH₃
2-164 (CH₂)₃ Ac Ac NHBz CH₃
2-165 (CH₂)₃ TBDPS Ac NHBz CH₃
2-166 (CH₂)₃ TBDMS H NHBz CH₃
2-167 (CH₂)₃ TBDPS H NHBz CH₃
2-168 (CH₂)₃ TIPS H NHBz CH₃
2-169 (CH₂)₄ H H OH H
2-170 (CH₂)₄ H H OH CH₃
2-171 (CH₂)₄ H H NH₂ H
2-172 (CH₂)₄ H H NH₂ CH₃
2-173 (CH₂)₄ H H NH₂ F
2-174 (CH₂)₄ H H Cl H
2-175 (CH₂)₄ H H OMe H
2-176 (CH₂)₄ H H SH H
2-177 (CH₂)₄ Bn H OH H
2-178 (CH₂)₄ Bn Ac OH H
2-179 (CH₂)₄ PMB H OH H
2-180 (CH₂)₄ PMB Ac OH H
2-181 (CH₂)₄ Tr H OH H
2-182 (CH₂)₄ MMTr H OH H
2-183 (CH₂)₄ DMTr H OH H
2-184 (CH₂)₄ Ac Ac OH H
2-185 (CH₂)₄ TBDPS Ac OH H
2-186 (CH₂)₄ TBDMS H OH H
2-187 (CH₂)₄ TBDPS H OH H
2-188 (CH₂)₄ TIPS H OH H
2-189 (CH₂)₄ Bn H OH CH₃
2-190 (CH₂)₄ Bn Ac OH CH₃
2-191 (CH₂)₄ PMB H OH CH₃
2-192 (CH₂)₄ PMB Ac OH CH₃
2-193 (CH₂)₄ Tr H OH CH₃
2-194 (CH₂)₄ MMTr H OH CH₃
2-195 (CH₂)₄ DMTr H OH CH₃
2-196 (CH₂)₄ Ac Ac OH CH₃
2-197 (CH₂)₄ TBDPS Ac OH CH₃
2-198 (CH₂)₄ TBDMS H OH CH₃
2-199 (CH₂)₄ TBDPS H OH CH₃
2-200 (CH₂)₄ TIPS H OH CH₃
2-201 (CH₂)₄ Bn H NHBz H
2-202 (CH₂)₄ Bn Ac NHBz H
2-203 (CH₂)₄ PMB H NHBz H
2-204 (CH₂)₄ PMB Ac NHBz H
2-205 (CH₂)₄ Tr H NHBz H
2-206 (CH₂)₄ MMTr H NHBz H
2-207 (CH₂)₄ DMTr H NHBz H
2-208 (CH₂)₄ Ac Ac NHBz H
2-209 (CH₂)₄ TBDPS Ac NHBz H
2-210 (CH₂)₄ TBDMS H NHBz H
2-211 (CH₂)₄ TBDPS H NHBz H
2-212 (CH₂)₄ TIPS H NHBz H
2-213 (CH₂)₄ Bn H NHBz CH₃
2-214 (CH₂)₄ Bn Ac NHBz CH₃
2-215 (CH₂)₄ PMB H NHBz CH₃
2-216 (CH₂)₄ PMB Ac NHBz CH₃
2-217 (CH₂)₄ Tr H NHBz CH₃
2-218 (CH₂)₄ MMTr H NHBz CH₃
2-219 (CH₂)₄ DMTr H NHBz CH₃
2-220 (CH₂)₄ Ac Ac NHBz CH₃
2-221 (CH₂)₄ TBDPS Ac NHBz CH₃
2-222 (CH₂)₄ TBDMS H NHBz CH₃
2-223 (CH₂)₄ TBDPS H NHBz CH₃
2-224 (CH₂)₄ TIPS H NHBz CH₃
2-225 CH₂ H H NHBz H
2-226 CH₂ H H NHBz CH₃
2-227 (CH₂)₂ H H NHBz H
2-228 (CH₂)₂ H H NHBz CH₃
2-229 (CH₂)₃ H H NHBz H
2-230 (CH₂)₃ H H NHBz CH₃
2-231 (CH₂)₄ H H NHBz H
2-232 (CH₂)₄ H H NHBz CH₃
2-233 CH₂ DMTr P(N(iPr)₂)(OC₂H₄CN) OH H
2-234 CH₂ DMTr P(N(iPr)₂)(OC₂H₄CN) OH CH₃
2-235 CH₂ DMTr P(N(iPr)₂)(OC₂H₄CN) NHBz H
2-236 CH₂ DMTr P(N(iPr)₂)(OC₂H₄CN) NHBz CH₃
2-237 (CH₂)₂ DMTr P(N(iPr)₂)(OC₂H₄CN) OH H
2-238 (CH₂)₂ DMTr P(N(iPr)₂)(OC₂H₄CN) OH CH₃
2-239 (CH₂)₂ DMTr P(N(iPr)₂)(OC₂H₄CN) NHBz H
2-240 (CH₂)₂ DMTr P(N(iPr)₂)(OC₂H₄CN) NHBz CH₃
2-241 (CH₂)₃ DMTr P(N(iPr)₂)(OC₂H₄CN) OH H
2-242 (CH₂)₃ DMTr P(N(iPr)₂)(OC₂H₄CN) OH CH₃
2-243 (CH₂)₃ DMTr P(N(iPr)₂)(OC₂H₄CN) NHBz H
2-244 (CH₂)₃ DMTr P(N(iPr)₂)(OC₂H₄CN) NHBz CH₃
2-245 (CH₂)₄ DMTr P(N(iPr)₂)(OC₂H₄CN) OH H
2-246 (CH₂)₄ DMTr P(N(iPr)₂)(OC₂H₄CN) OH CH₃
2-247 (CH₂)₄ DMTr P(N(iPr)₂)(OC₂H₄CN) NHBz H
2-248 (CH₂)₄ DMTr P(N(iPr)₂)(OC₂H₄CN) NHBz CH₃
2-249 CH₂ DMTr P(N(iPr)₂)(OCH₃) OH H
2-250 CH₂ DMTr P(N(iPr)₂)(OCH₃) OH CH₃
2-251 CH₂ DMTr P(N(iPr)₂)(OCH₃) NHBz H
2-252 CH₂ DMTr P(N(iPr)₂)(OCH₃) NHBz CH₃
2-253 (CH₂)₂ DMTr P(N(iPr)₂)(OCH₃) OH H
2-254 (CH₂)₂ DMTr P(N(iPr)₂)(OCH₃) OH CH₃
2-255 (CH₂)₂ DMTr P(N(iPr)₂)(OCH₃) NHBz H
2-256 (CH₂)₂ DMTr P(N(iPr)₂)(OCH₃) NHBz CH₃
2-257 (CH₂)₃ DMTr P(N(iPr)₂)(OCH₃) OH H
2-258 (CH₂)₃ DMTr P(N(iPr)₂)(OCH₃) OH CH₃
2-259 (CH₂)₃ DMTr P(N(iPr)₂)(OCH₃) NHBz H
2-260 (CH₂)₃ DMTr P(N(iPr)₂)(OCH₃) NHBz CH₃
2-261 (CH₂)₄ DMTr P(N(iPr)₂)(OCH₃) OH H
2-262 (CH₂)₄ DMTr P(N(iPr)₂)(OCH₃) OH CH₃
2-263 (CH₂)₄ DMTr P(N(iPr)₂)(OCH₃) NHBz H
2-264 (CH₂)₄ DMTr P(N(iPr)₂)(OCH₃) NHBz CH₃
−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−
上記表１乃至２中、好適な化合物は、（１−５）、（１−７）、（１−２３）、（１−２４）、（１−３１）、（１−３２）、（１−３５）、（１−３６）、（１−３７）、（１−３９）、（１−４１）、（１−４３）、（１−４９）、（１−５１）、（１−６７）、（１−６８）、（１−７５）、（１−７６）、（１−７９）、（１−８０）、（１−８１）、（１−８３）、（１−８５）、（１−８７）、（１−９３）、（１−９５）、（１−１１１）、（１−１１２）、（１−１１５）、（１−１１６）、（１−１１９）、（１−１２０）、（１−１２３）、（１−１２４）、（１−１２５）、（１−１２７）、（１−１２９）、（１−１３１）、（１−１３７）、（１−１３９）、（１−１５５）、（１−１５６）、（１−１６３）、（１−１６４）、（１−１６７）、（１−１６８）、（１−１６９）、（１−１７１）、（１−１７３）、（１−１７５）、（１−１７７）、（１−１７８）、（１−１８５）、（１−１８６）、（１−１９３）、（１−１９４）、（１−２０１）、（１−２０２）、（２−１）、（２−２）、（２−３）、（２−４）、（２−１０）、（２−１５）、（２−１６）、（２−１７）、（２−１９）、（２−２２）、（２−２７）、（２−２８）、（２−２９）、（２−３１）、（２−３４）、（２−３９）、（２−４０）、（２−４１）、（２−４３）、（２−４６）、（２−５１）、（２−５２）、（２−５３）、（２−５５）、（２−５７）、（２−５８）、（２−５９）、（２−６０）、（２−６６）、（２−７１）、（２−７２）、（２−７３）、（２−７５）、（２−７８）、（２−８３）、（２−８４）、（２−８５）、（２−８７）、（２−９０）、（２−９５）、（２−９６）、（２−９７）、（２−９９）、（２−１０２）、（２−１０７）、（２−１０８）、（２−１０９）、（２−１１１）、（２−１１３）、（２−１１４）、（２−１１５）、（２−１１６）、（２−１２２）、（２−１２７）、（２−１２８）、（２−１２９）、（２−１３１）、（２−１３４）、（２−１３９）、（２−１４０）、（２−１４１）、（２−１４３）、（２−１４６）、（２−１５１）、（２−１５２）、（２−１５３）、（２−１５５）、（２−１５８）、（２−１６３）、（２−１６４）、（２−１６５）、（２−１６７）、（２−１６９）、（２−１７０）、（２−１７１）、（２−１７２）、（２−１７８）、（２−１８３）、（２−１８４）、（２−１８５）、（２−１８７）、（２−１９０）、（２−１９５）、（２−１９６）、（２−１９７）、（２−１９９）、（２−２０２）、（２−２０７）、（２−２０８）、（２−２０９）、（２−２１１）、（２−２１４）、（２−２１９）、（２−２２０）、（２−２２１）、（２−２２３）、（２−２２５）、（２−２２６）、（２−２３３）、（２−２３４）、（２−２３５）又は（２−２３６）であり、さらに好適には、
３’-Ｏ,４’-Ｃ-エチレングアノシン（１−５）、
３’-Ｏ,４’-Ｃ-エチレンアデノシン（１−７）、
５’-Ｏ-ジメトキシトリチル-３’-Ｏ,４’-Ｃ-エチレン-６-Ｎ−ベンゾイルアデノシン （１−３１）、
５’-Ｏ-ジメトキシトリチル-３’-Ｏ,４’-Ｃ-エチレン-２-Ｎ−イソブチリルグアノシン（１−３５）、
３’-Ｏ,４’-Ｃ-エチレン-２-Ｎ−イソブチリルグアノシン（１−１７７）、
３’-Ｏ,４’-Ｃ-エチレン-６-Ｎ−ベンゾイルアデノシン（１−１７８）、
5'-Ｏ-ジメトキシトリチル‐３’-Ｏ,４’-Ｃ-エチレン-２-Ｎ-イソブチリルグアノシン‐２'-Ｏ‐（２‐シアノエチル Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル）ホスホロアミダイト（１−１８５）、
5'-Ｏ-ジメトキシトリチル‐３’-Ｏ,４’-Ｃ-エチレン-６-Ｎ-ベンゾイルアデノシン‐２'-Ｏ‐（２‐シアノエチル Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル）ホスホロアミダイト（１−１８６）、
３’-Ｏ,４’-Ｃ-エチレンウリジン（２−１）、
３’-Ｏ,４’-Ｃ-エチレン5−メチルウリジン（２−２）、
３’-Ｏ,４’-Ｃ-エチレンシチジン（２−３）、
３’-Ｏ,４’-Ｃ-エチレン-５-メチルシチジン（２−４）、
２’,５’-ジ-Ｏ-ベンジル-３’-Ｏ,４’-Ｃ-エチレンウリジン（２−１０）、
５’-Ｏ-ジメトキシトリチル-３’-Ｏ,４’-Ｃ-エチレンウリジン（２−１５）、
５’-Ｏ-ジメトキシトリチル-３’-Ｏ,４’-Ｃ-エチレン-5−メチルウリジン（２−２７）、
５’-Ｏ-ジメトキシトリチル-３’-Ｏ,４’-Ｃ-エチレン-４-Ｎ−ベンゾイルシチジン（２−３９）、
５’-Ｏ-ジメトキシトリチル-３’-Ｏ,４’-Ｃ-エチレン-４-Ｎ−ベンゾイル-５-メチルシチジン（２−５１）、
３’-Ｏ,４’-Ｃ-エチレン-４-Ｎ−ベンゾイルシチジン（２−２２５）、
３’-Ｏ,４’-Ｃ-エチレン-４-Ｎ−ベンゾイル-５-メチルシチジン（２−２２６）、
5'-Ｏ-ジメトキシトリチル‐３’-Ｏ,４’-Ｃ-エチレン-ウリジン‐２'-Ｏ‐（２‐シアノエチル Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル）ホスホロアミダイト（２−２３３）、
5'-Ｏ-ジメトキシトリチル‐３’-Ｏ,４’-Ｃ-エチレン-5−メチルウリジン-2'-Ｏ‐（２‐シアノエチル Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル）ホスホロアミダイト（２−２３４）、
5'-Ｏ-ジメトキシトリチル‐３’-Ｏ,４’-Ｃ-エチレン-４-Ｎ-ベンゾイルシチジン‐2'-Ｏ‐（２‐シアノエチル Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル）ホスホロアミダイト（２−２３５）、又は、
5'-Ｏ-ジメトキシトリチル‐３’-Ｏ,４’-Ｃ-エチレン-４-Ｎ-ベンゾイル−５−メチルシチジン‐2'-Ｏ‐（２‐シアノエチル Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル）ホスホロアミダイト（２−２３６）である。
【００５４】
表３において、Ｋ^Xと表記された化合物は、以下の構造を有する化合物ユニットを示す。
【００５５】
【化１２】

【００５６】
【表３】
【００５７】
【化１３】

【００５８】
−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−
No. ｍ Ｅ¹ Ｅ² Ｅ³ ｎ Ｑ Ｖ
−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−
3-1 1 Ｋ^3-1 Ｋ¹ Ｋ¹ 0 - -
3-2 1 Ｋ¹ Ｋ^3-1 Ｋ¹ 0 - -
3-3 1 Ｋ¹ Ｋ¹ Ｋ^3-1 0 - -
3-4 1 Ｋ^3-1 Ｋ^3-1 Ｋ¹ 0 - -
3-5 1 Ｋ^3-1 Ｋ¹ Ｋ^3-1 0 - -
3-6 1 Ｋ¹ Ｋ^3-1 Ｋ^3-1 0 - -
3-7 1 Ｋ^3-1 Ｋ^3-1 Ｋ^3-1 0 - -
3-8 1 Ｋ^3-1 Ｋ¹ Ｋ¹ 1 O C₂H₄OH
3-9 1 Ｋ¹ Ｋ¹ Ｋ^3-1 1 O C₂H₄OH
3-10 1 Ｋ^3-4 Ｋ¹ Ｋ¹ 0 - -
3-11 1 Ｋ¹ Ｋ¹ Ｋ^3-4 0 - -
3-12 1 Ｋ^3-2 Ｋ¹ Ｋ¹ 0 - -
3-13 1 Ｋ¹ Ｋ^3-2 Ｋ¹ 0 - -
3-14 1 Ｋ¹ Ｋ¹ Ｋ^3-2 0 - -
3-15 1 Ｋ^3-2 Ｋ^3-2 Ｋ¹ 0 - -
3-16 1 Ｋ^3-2 Ｋ¹ Ｋ^3-2 0 - -
3-17 1 Ｋ¹ Ｋ^3-2 Ｋ^3-2 0 - -
3-18 1 Ｋ^3-2 Ｋ^3-2 Ｋ^3-2 0 - -
3-19 1 Ｋ^3-2 Ｋ¹ Ｋ¹ 1 O C₂H₄OH
3-20 1 Ｋ¹ Ｋ¹ Ｋ^3-2 1 O C₂H₄OH
3-21 1 Ｋ^3-5 Ｋ¹ Ｋ¹ 0 - -
3-22 1 Ｋ¹ Ｋ¹ Ｋ^3-5 0 - -
3-23 1 Ｋ^3-3 Ｋ¹ Ｋ¹ 0 - -
3-24 1 Ｋ¹ Ｋ^3-3 Ｋ¹ 0 - -
3-25 1 Ｋ¹ Ｋ¹ Ｋ^3-3 0 - -
3-26 1 Ｋ^3-3 Ｋ^3-3 Ｋ¹ 0 - -
3-27 1 Ｋ^3-3 Ｋ¹ Ｋ^3-3 0 - -
3-28 1 Ｋ¹ Ｋ^3-3 Ｋ^3-3 0 - -
3-29 1 Ｋ^3-3 Ｋ^3-3 Ｋ^3-3 0 - -
3-30 1 Ｋ^3-3 Ｋ¹ Ｋ¹ 1 O C₂H₄OH
3-31 1 Ｋ¹ Ｋ¹ Ｋ^3-3 1 O C₂H₄OH
3-32 1 Ｋ^3-6 Ｋ¹ Ｋ¹ 0 - -
3-33 1 Ｋ¹ Ｋ¹ Ｋ^3-6 0 - -
3-34 2 Ｋ^3-1 Ｋ¹Ｋ¹ Ｋ¹ 0 - -
3-35 2 Ｋ¹ Ｋ^3-1Ｋ¹ Ｋ¹ 0 - -
3-36 2 Ｋ¹ Ｋ¹Ｋ^3-1 Ｋ¹ 0 - -
3-37 2 Ｋ^3-1 Ｋ^3-1Ｋ¹ Ｋ¹ 0 - -
3-38 2 Ｋ^3-1 Ｋ¹Ｋ^3-1 Ｋ¹ 0 - -
3-39 2 Ｋ¹ Ｋ^3-1Ｋ^3-1 Ｋ¹ 0 - -
3-40 2 Ｋ^3-1 Ｋ^3-1Ｋ^3-1 Ｋ¹ 0 - -
3-41 2 Ｋ^3-1 Ｋ¹Ｋ¹ Ｋ^3-1 0 - -
3-42 2 Ｋ¹ Ｋ¹Ｋ^3-1 Ｋ^3-1 0 - -
3-43 2 Ｋ^3-1 Ｋ¹Ｋ¹ Ｋ¹ 1 O C₂H₄OH
3-44 2 Ｋ¹ Ｋ¹Ｋ^3-1 Ｋ¹ 1 O C₂H₄OH
3-45 2 Ｋ^3-4 Ｋ¹Ｋ¹ Ｋ¹ 0 - -
3-46 2 Ｋ¹ Ｋ¹Ｋ^3-4 Ｋ¹ 0 - -
3-47 2 Ｋ^3-2 Ｋ¹Ｋ¹ Ｋ¹ 0 - -
3-48 2 Ｋ¹ Ｋ^3-2Ｋ¹ Ｋ¹ 0 - -
3-49 2 Ｋ¹ Ｋ¹Ｋ^3-2 Ｋ¹ 0 - -
3-50 2 Ｋ^3-2 Ｋ^3-2Ｋ¹ Ｋ¹ 0 - -
3-51 2 Ｋ^3-2 Ｋ¹Ｋ^3-2 Ｋ¹ 0 - -
3-52 2 Ｋ¹ Ｋ^3-2Ｋ^3-2 Ｋ¹ 0 - -
3-53 2 Ｋ^3-2 Ｋ^3-2Ｋ^3-2 Ｋ¹ 0 - -
3-54 2 Ｋ^3-2 Ｋ¹Ｋ¹ Ｋ^3-2 0 - -
3-55 2 Ｋ¹ Ｋ¹Ｋ^3-2 Ｋ^3-2 0 - -
3-56 2 Ｋ^3-2 Ｋ¹Ｋ¹ Ｋ¹ 1 O C₂H₄OH
3-57 2 Ｋ¹ Ｋ¹Ｋ^3-2 Ｋ¹ 1 O C₂H₄OH
3-58 2 Ｋ^3-5 Ｋ¹Ｋ¹ Ｋ¹ 0 - -
3-59 2 Ｋ¹ Ｋ¹Ｋ^3-5 Ｋ¹ 0 - -
3-60 2 Ｋ^3-3 Ｋ¹Ｋ¹ Ｋ¹ 0 - -
3-61 2 Ｋ¹ Ｋ^3-3Ｋ¹ Ｋ¹ 0 - -
3-62 2 Ｋ¹ Ｋ¹Ｋ^3-3 Ｋ¹ 0 - -
3-63 2 Ｋ^3-3 Ｋ^3-3Ｋ¹ Ｋ¹ 0 - -
3-64 2 Ｋ^3-3 Ｋ¹Ｋ^3-3 Ｋ¹ 0 - -
3-65 2 Ｋ¹ Ｋ^3-3Ｋ^3-3 Ｋ¹ 0 - -
3-66 2 Ｋ^3-3 Ｋ^3-3Ｋ^3-3 Ｋ¹ 0 - -
3-67 2 Ｋ^3-3 Ｋ¹Ｋ¹ Ｋ^3-3 0 - -
3-68 2 Ｋ¹ Ｋ¹Ｋ^3-3 Ｋ^3-3 0 - -
3-69 2 Ｋ^3-3 Ｋ¹Ｋ¹ Ｋ¹ 1 O C₂H₄OH
3-70 2 Ｋ¹ Ｋ¹Ｋ^3-3 Ｋ¹ 1 O C₂H₄OH
3-71 2 Ｋ^3-6 Ｋ¹Ｋ¹ Ｋ¹ 0 - -
3-72 2 Ｋ¹ Ｋ¹Ｋ^3-6 Ｋ¹ 0 - -
3-73 1 Ｋ^3-2 Ｋ¹ Ｋ^3-2 1 O C₂H₄OH
3-72 1 Ｋ² Ｋ¹ Ｋ^3-2 1 O C₂H₄OH
−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−
【００５９】
【発明の実施の形態】
本発明の化合物（１）は、以下に述べるＡ法又はＢ法により、製造することができる。
【００６０】
【化１４】

【００６１】
Ａ法及びＢ法中、Ｘ及びＹは、同一又は異なって保護基を示し、Ｚはアシル基を示し、Ａは、前述と同意義を示し、Ｂ¹は、プリン−９−イル基、２−オキソ−1,2−ジヒドロピリミジン−１−イル基又は前述のα群から選択される置換基を有する置換プリン−９−イル基若しくは２−オキソ−1,2−ジヒドロピリミジン−１−イル基を示すが、アミノ基で置換されたものは除かれ、Ｂ²は、プリンー９−イル基、２−オキソ−1,2−ジヒドロピリミジン−１−イル基又は前述のα群から選択される置換基を有する置換プリン−９−イル基若しくは２−オキソ−1,2−ジヒドロピリミジン−１−イル基を示すが、核酸合成の保護基で保護されたアミノ基で置換されたものは除かれ、Ｒ⁹は、酸素原子と共に脱離基を形成する基を示す。
【００６２】
Ｘ及びＹの定義における「保護基」としては、例えば、ホルミル、アセチル、プロピオニル、ブチリル、イソブチリル、ペンタノイル、ピバロイル、バレリル、イソバレリル、オクタノイル、ノナノイル、デカノイル、３−メチルノナノイル、８−メチルノナノイル、３−エチルオクタノイル、３，７−ジメチルオクタノイル、ウンデカノイル、ドデカノイル、トリデカノイル、テトラデカノイル、ペンタデカノイル、ヘキサデカノイル、１−メチルペンタデカノイル、１４−メチルペンタデカノイル、１３，１３−ジメチルテトラデカノイル、ヘプタデカノイル、１５−メチルヘキサデカノイル、オクタデカノイル、１−メチルヘプタデカノイル、ノナデカノイル、アイコサノイル及びヘナイコサノイルのようなアルキルカルボニル基、スクシノイル、グルタロイル、アジポイルのようなカルボキシ化アルキルカルボニル基、クロロアセチル、ジクロロアセチル、トリクロロアセチル、トリフルオロアセチルのようなハロゲノ低級アルキルカルボニル基、メトキシアセチルのような低級アルコキシ低級アルキルカルボニル基、（Ｅ）−２−メチル-2−ブテノイルのような不飽和アルキルカルボニル基等の「脂肪族アシル基」；
ベンゾイル、α−ナフトイル、β−ナフトイルのようなアリールカルボニル基、２−ブロモベンゾイル、４−クロロベンゾイルのようなハロゲノアリ−ルカルボニル基、２，４，６-トリメチルベンゾイル、４−トルオイルのような低級アルキル化アリ−ルカルボニル基、４−アニソイルのような低級アルコキシ化アリ−ルカルボニル基、２−カルボキシベンゾイル、３−カルボキシベンゾイル、４−カルボキシベンゾイルのようなカルボキシ化アリ−ルカルボニル基、４−ニトロベンゾイル、２−ニトロベンゾイルのようなニトロ化アリ−ルカルボニル基；２−（メトキシカルボニル) ベンゾイルのような低級アルコキシカルボニル化アリ−ルカルボニル基、４−フェニルベンゾイルのようなアリ−ル化アリ−ルカルボニル基等の「芳香族アシル基」のような「アシル型」の保護基;
メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓ−ブチル、tert−ブチル、ｎ−ペンチル、イソペンチル、２−メチルブチル、ネオペンチル、１−エチルプロピル、ｎ−ヘキシル、イソヘキシル、４−メチルペンチル、３−メチルペンチル、２−メチルペンチル、１−メチルペンチル、３，３−ジメチルブチル、２，２−ジメチルブチル、１，１−ジメチルブチル、１，２−ジメチルブチル、１，３−ジメチルブチル、２，３−ジメチルブチル、２−エチルブチルのような「低級アルキル基」；
エテニル、１−プロペニル、２−プロペニル、１−メチル−２−プロペニル、１−メチル−１−プロペニル、２−メチル−１−プロペニル、２−メチル−２−プロペニル、２−エチル−２−プロペニル、１−ブテニル、２−ブテニル、１−メチル−２−ブテニル、１−メチル−１−ブテニル、３−メチル−２−ブテニル、１−エチル−２−ブテニル、３−ブテニル、１−メチル−３−ブテニル、２−メチル−３−ブテニル、１−エチル−３−ブテニル、１−ペンテニル、２−ペンテニル、１−メチル−２−ペンテニル、２−メチル−２−ペンテニル、３−ペンテニル、１−メチル−３−ペンテニル、２−メチル−３−ペンテニル、４−ペンテニル、１−メチル−４−ペンテニル、２−メチル−４−ペンテニル、１−ヘキセニル、２−ヘキセニル、３−ヘキセニル、４−ヘキセニル、５−ヘキセニルのような「低級アルケニル基」；
ベンゾイル、α−ナフトイル、β−ナフトイルのようなアリールカルボニル基、２−ブロモベンゾイル、４−クロロベンゾイルのようなハロゲノアリールカルボニル基、２，４，６-トリメチルベンゾイル、４−トルオイルのような低級アルキル化アリールカルボニル基、４−アニソイルのような低級アルコキシ化アリールカルボニル基、２−カルボキシベンゾイル、３−カルボキシベンゾイル、４−カルボキシベンゾイルのようなカルボキシ化アリールカルボニル基、４−ニトロベンゾイル、２−ニトロベンゾイルのようなニトロ化アリールカルボニル基；２−（メトキシカルボニル) ベンゾイルのような低級アルコキシカルボニル化アリールカルボニル基、４−フェニルベンゾイルのようなアリール化アリールカルボニル基のような「芳香族アシル基」；
テトラヒドロピラン-2−イル、３−ブロモテトラヒドロピラン-2−イル、４−メトキシテトラヒドロピラン-4−イル、テトラヒドロチオピラン-2−イル、４−メトキシテトラヒドロチオピラン-4−イルのような「テトラヒドロピラニル又はテトラヒドロチオピラニル基」；テトラヒドロフラン-2−イル、テトラヒドロチオフラン-2−イルのような「テトラヒドロフラニル又はテトラヒドロチオフラニル基」；
トリメチルシリル、トリエチルシリル、イソプロピルジメチルシリル、t-ブチルジメチルシリル、メチルジイソプロピルシリル、メチルジ-t−ブチルシリル、トリイソプロピルシリルのようなトリ低級アルキルシリル基、ジフェニルメチルシリル、ジフェニルブチルシリル、ジフェニルイソプロピルシリル、フェニルジイソプロピルシリルのような１乃至２個のアリール基で置換されたトリ低級アルキルシリル基のような「シリル基」；
メトキシメチル、１，１−ジメチル−１−メトキシメチル、エトキシメチル、プロポキシメチル、イソプロポキシメチル、ブトキシメチル、t-ブトキシメチルのような「低級アルコキシメチル基」；
２−メトキシエトキシメチルのような「低級アルコキシ化低級アルコキシメチル基」；
２，２，２−トリクロロエトキシメチル、ビス(2−クロロエトキシ) メチルのような「ハロゲノ低級アルコキシメチル」；
１−エトキシエチル、１−( イソプロポキシ) エチルのような「低級アルコキシ化エチル基」；
２，２，２−トリクロロエチルのような「ハロゲン化エチル基」；
ベンジル、α−ナフチルメチル、β−ナフチルメチル、ジフェニルメチル、トリフェニルメチル、α−ナフチルジフェニルメチル、９−アンスリルメチルのような「１乃至３個のアリール基で置換されたメチル基」；
４−メチルベンジル、２，４，６-トリメチルベンジル、３，４，５−トリメチルベンジル、４−メトキシベンジル、４−メトキシフェニルジフェニルメチル、４、４’−ジメトキシトリフェニルメチル、２−ニトロベンジル、４−ニトロベンジル、４−クロロベンジル、４−ブロモベンジル、４−シアノベンジルのような「低級アルキル、低級アルコキシ、ハロゲン、シアノ基でアリール環が置換された１乃至３個のアリール基で置換されたメチル基」；
メトキシカルボニル、エトキシカルボニル、t-ブトキシカルボニル、イソブトキシカルボニルのような「低級アルコキシカルボニル基」；
4‐クロロフェニル、2-クロロフェニル、4‐メトキシフェニル、4‐ニトロフェニル、2,4-ジニトロフェニルのような「ハロゲン原子、低級アルコキシ基又はニトロ基で置換されたアリール基」
２，２，２−トリクロロエトキシカルボニル、２−トリメチルシリルエトキシカルボニルのような「ハロゲン又はトリ低級アルキルシリル基で置換された低級アルコキシカルボニル基」；
ビニルオキシカルボニル、アリールオキシカルボニルのような「アルケニルオキシカルボニル基」；
ベンジルオキシカルボニル、４−メトキシベンジルオキシカルボニル、３，４−ジメトキシベンジルオキシカルボニル、２−ニトロベンジルオキシカルボニル、４−ニトロベンジルオキシカルボニルのような１乃至２個の「低級アルコキシ又はニトロ基でアリール環が置換されていてもよいアラルキルオキシカルボニル基」があげられる。
【００６３】
Ｒ⁹の「脱離基を形成する基」としては、例えば、メタンスルホニル、エタンスルホニルのような低級アルキルスルホニル基、トリフルオロメタンスルホニルのような、ハロゲン置換低級アルキルスルホニル基、ｐ−トルエンスルホニルのようなアリールスルホニル基をあげることができ、好適には、メタンスルホニル基又はｐ−トルエンスルホニル基である。
【００６４】
Zの定義における「アシル基」としては、、例えば、ホルミル、アセチル、プロピオニル、ブチリル、イソブチリル、ペンタノイル、ピバロイル、バレリル、イソバレリル、オクタノイル、ノナノイル、デカノイル、３−メチルノナノイル、８−メチルノナノイル、３−エチルオクタノイル、３，７−ジメチルオクタノイル、ウンデカノイル、ドデカノイル、トリデカノイル、テトラデカノイル、ペンタデカノイル、ヘキサデカノイル、１−メチルペンタデカノイル、１４−メチルペンタデカノイル、１３，１３−ジメチルテトラデカノイル、ヘプタデカノイル、１５−メチルヘキサデカノイル、オクタデカノイル、１−メチルヘプタデカノイル、ノナデカノイル、アイコサノイル及びヘナイコサノイルのようなアルキルカルボニル基、スクシノイル、グルタロイル、アジポイルのようなカルボキシ化アルキルカルボニル基、クロロアセチル、ジクロロアセチル、トリクロロアセチル、トリフルオロアセチルのようなハロゲノ低級アルキルカルボニル基、メトキシアセチルのような低級アルコキシ低級アルキルカルボニル基、（Ｅ）−２−メチル-2−ブテノイルのような不飽和アルキルカルボニル基等の「脂肪族アシル基」；
ベンゾイル、α−ナフトイル、β−ナフトイルのようなアリールカルボニル基、２−ブロモベンゾイル、４−クロロベンゾイルのようなハロゲノアリ−ルカルボニル基、２，４，６-トリメチルベンゾイル、４−トルオイルのような低級アルキル化アリ−ルカルボニル基、４−アニソイルのような低級アルコキシ化アリ−ルカルボニル基、２−カルボキシベンゾイル、３−カルボキシベンゾイル、４−カルボキシベンゾイルのようなカルボキシ化アリ−ルカルボニル基、４−ニトロベンゾイル、２−ニトロベンゾイルのようなニトロ化アリ−ルカルボニル基；２−（メトキシカルボニル) ベンゾイルのような低級アルコキシカルボニル化アリ−ルカルボニル基、４−フェニルベンゾイルのようなアリ−ル化アリ−ルカルボニル基等の「芳香族アシル基」があげられる。
【００６５】
以下、Ａ至B法の各工程につき、詳しく説明する。
（Ａ−１工程）
本工程は、不活性溶剤中、塩基触媒の存在下、後述するC乃至E法により製造される化合物（３）に、脱離基導入試薬を反応させて、化合物（４）を製造する工程である。
【００６６】
使用される溶剤としては、例えば、ヘキサン、ヘプタン、リグロイン、石油エーテルのような脂肪族炭化水素類；ベンゼン、トルエン、キシレンのような芳香族炭化水素類；メチレンクロリド、クロロホルム、四塩化炭素、ジクロロエタン、クロロベンゼン、ジクロロベンゼンのようなハロゲン化炭化水素類；蟻酸エチル、酢酸エチル、酢酸プロピル、酢酸ブチル、炭酸ジエチルのようなエステル類；ジエチルエ−テル、ジイソプロピルエ−テル、テトラヒドロフラン、ジオキサン、ジメトキシエタン、ジエチレングリコールジメチルエーテルのようなエ−テル類；アセトン、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトン、イソホロン、シクロヘキサノンのようなケトン類；ニトロエタン、ニトロベンゼンのようなニトロ化合物類；アセトニトリル、イソブチロニトリルのようなニトリル類；ホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチル−２−ピロリドン、Ｎ−メチルピロリジノン、ヘキサメチルホスホロトリアミドのようなアミド類；スルホランのようなスルホキシド類；ピリジン類をあげることができるが、好適には、ピリジンである。
【００６７】
使用される塩基触媒としては、好適には、トリエチルアミン、ピリジン、ジメチルアミノピリジンのような塩基である。
【００６８】
使用される脱離基導入試薬としては、例えば、メタンスルホニルクロリド、エタンスルホニルブロミドのようなアルキルスルホニルハライド類；p-トルエンスルホニルクロリドのようなアリールスルホニルハライド類をあげることができ、好適には、メタンスルホニルクロリド及びp-トルエンスルホニルクロリドである。
【００６９】
反応温度は、使用される原料化合物、溶剤、脱離基導入試薬、塩基触媒により異なるが、通常、０℃乃至５０℃であり、好適には、１０乃至４０℃である。
【００７０】
反応時間は、使用される原料化合物、溶剤、脱離基導入試薬、塩基触媒、反応温度により異なるが、通常、１０分乃至２４時間であり、好適には、１乃至１０時間である。
【００７１】
反応終了後、本反応の目的化合物(4)は、例えば、反応液を中和し、反応混合物を濃縮し、水と酢酸エチルのような混和しない有機溶媒を加え、水洗後、目的化合物を含む有機層を分離し、無水硫酸マグネシウム等で乾燥後、溶剤を留去することで得られる。
【００７２】
得られた化合物は、必要ならば、常法、例えば、再結晶、シリカゲルカラムクロマトグラフィー等によって更に精製できる。
（Ａ−２工程）
本工程は、溶剤中、酸触媒の存在下、Ａ−１工程で製造される化合物（４）に、酸無水物を反応し、化合物（５）を製造する工程である。
【００７３】
使用される溶剤としては、例えば、ジエチルエーテル、ジオキサン、テトラヒドロフランのようなエーテル類；アセトニトリル、イソブチロニトリルのようなニトリル類；ホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチル−２−ピロリドン、Ｎ−メチルピロリジノン、ヘキサメチルホスホロトリアミドのようなアミド類；酢酸のような有機酸等をあげることができるが、好適には、酢酸である。
【００７４】
使用される酸触媒としては、例えば、塩酸、硫酸、硝酸等の無機酸をあげることができるが、好適には、硫酸（特に、濃硫酸）である。
【００７５】
使用される酸無水物としては、例えば、無水酢酸、無水プロピオン酸等の低級脂肪族カルボン酸の無水物をあげることができるが、好適には、無水酢酸である。
【００７６】
反応温度は、使用される原料化合物、溶剤、酸触媒、酸無水物により異なるが、通常、０℃乃至５０℃であり、好適には、１０乃至４０℃である。
【００７７】
反応時間は、使用される原料化合物、溶剤、酸触媒、酸無水物、反応温度により異なるが、通常、１０分乃至１２時間であり、好適には、３０分乃至３時間である。
【００７８】
反応終了後、本反応の目的化合物(５)は、例えば、反応混合物を濃縮し、水と酢酸エチルのような混和しない有機溶媒を加え、水洗後、目的化合物を含む有機層を分離し、無水硫酸マグネシウム等で乾燥後、溶剤を留去することで得られる。
【００７９】
得られた化合物は、必要ならば、常法、例えば、再結晶、シリカゲルカラムクロマトグラフィー等によって更に精製できる。
（Ａ−３工程）
本工程は、不活性溶剤中、酸触媒の存在下、Ａ−２工程で製造される化合物（５）に、文献（H. Vorbueggen, K. Krolikiewicz and B, Bennua, Chem. Ber., 114, 1234-1255 (1981)）に従って調製した、所望の置換基を有していてもよいプリン又はピリミジンに対応するトリメチルシリル化体を反応させて、化合物（６）を製造する工程である。
【００８０】
使用される溶剤としては、ベンゼン、トルエン、キシレンのような芳香族炭化水素類；メチレンクロリド、クロロホルム、四塩化炭素、１，２−ジクロロエタン、クロロベンゼン、ジクロロベンゼンのようなハロゲン化炭化水素類；アセトニトリル、イソブチロニトリルのようなニトリル類；ホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチル−２−ピロリドン、Ｎ−メチルピロリジノン、ヘキサメチルホスホロトリアミドのようなアミド類；硫化炭素等をあげることができるが、好適には、トルエン、1,2-ジクロロエタンである。
【００８１】
使用される酸触媒としては、例えば、AlCl₃, SnCl₄,TiCl₄, ZnCl₂, BF₃, トリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリルのようなルイス酸触媒等をあげることができ、好適には、トリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリルである。
【００８２】
反応温度は、使用される原料化合物、溶剤、酸触媒により異なるが、通常、０℃から１００℃であり、好適には、５０℃乃１００℃である。
【００８３】
反応時間は、使用される原料化合物、溶剤、酸触媒、反応温度により異なるが、通常、１時間乃至２４時間であり、好適には、１時間乃至８時間である。
【００８４】
反応終了後、本反応の目的化合物(６)は、例えば、反応混合物を濃縮し、水と酢酸エチルのような混和しない有機溶媒を加え、水洗後、目的化合物を含む有機層を分離し、無水硫酸マグネシウム等で乾燥後、溶剤を留去することで得られる。
【００８５】
得られた化合物は、必要ならば、常法、例えば、再結晶、シリカゲルカラムクロマトグラフィー等によって更に精製できる。
（Ａ−４工程）
本工程は、Ａ−３工程で製造される化合物（６）の保護基Ｙを除去し、本発明の化合物（６ａ）を製造する工程である。
【００８６】
脱保護の方法は、保護基の種類によって異なるが、他の副反応を生じない方法であれば、特に限定はなく、例えば、”Protective Groups in Organic Synthesis” (Theodora W. Greene著、 1981年、A Wiley-Interscience Publication発行)に記載の方法によって行うことができる。
【００８７】
特に、水酸基の保護基が、アラルキル基又はアラルキルオキシカルボニル基である場合には、通常、溶媒中で、還元剤と接触させることにより（好適には、触媒下に常温にて接触還元）除去する方法又は酸化剤を用いて除去する方法が好適である。接触還元による除去において使用される溶媒としては、本反応に関与しないものであれば特に限定はないが、メタノール、エタノール、イソプロパノールのようなアルコール類、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、ジオキサンのようなエーテル類、トルエン、ベンゼン、キシレンのような芳香族炭化水素類、ヘキサン、シクロヘキサンのような脂肪族炭化水素類、酢酸エチル、酢酸プロピルのようなエステル類、酢酸のような脂肪酸類又はこれらの有機溶媒と水との混合溶媒が好適である。
【００８８】
使用される触媒としては、通常、接触還元反応に使用されるものであれば、特に限定はないが、好適には、パラジウム炭素、水酸化パラジウム、ラネーニッケル、酸化白金、白金黒、ロジウム−酸化アルミニウム、トリフェニルホスフィン−塩化ロジウム、パラジウム−硫酸バリウムが用いられる。
【００８９】
圧力は、特に限定はないが、通常１乃至１０気圧で行なわれる。
【００９０】
反応温度及び反応時間は、出発物質、溶媒及び触媒の種類等により異なるが、通常、０乃至１００℃で、５分乃至２４時間実施される。
【００９１】
特に、水酸基の保護基が、ｐ−メトキシベンジル基である場合には、通常、溶媒中で、酸化による除去する方法が好適である。
【００９２】
酸化による除去において使用される溶媒としては、本反応に関与しないものであれば特に限定はないが、好適には、含水有機溶媒である。
【００９３】
このような有機溶媒として好適には、アセトンのようなケトン類、メチレンクロリド、クロロホルム、四塩化炭素のようなハロゲン化炭化水素類、アセトニトリルのようなニトリル類、ジエチルエ−テル、テトラヒドロフラン、ジオキサンのようなエ−テル類、ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミド、ヘキサメチルホスホロトリアミドのようなアミド類及びジメチルスルホキシドのようなスルホキシド類を挙げることができる。
【００９４】
使用される酸化剤としては、酸化に使用される化合物であれば特に限定はないが、好適には、過硫酸カリウム、過硫酸ナトリウム、アンモニウムセリウムナイトレイト(CAN) 、2,3-ジクロロ-5,6- ジシアノ-p- ベンゾキノン(DDQ) が用いられる。
【００９５】
反応温度及び反応時間は、出発物質、溶媒及び触媒の種類等により異なるが、通常、０乃至１５０℃で、１０分乃至２４時間実施される。
【００９６】
反応終了後、本反応の目的化合物(６a)は、例えば、反応混合物を濃縮し、水と酢酸エチルのような混和しない有機溶媒を加え、水洗後、目的化合物を含む有機層を分離し、無水硫酸マグネシウム等で乾燥後、溶剤を留去することで得られる。
【００９７】
得られた化合物は、必要ならば、常法、例えば、再結晶、シリカゲルカラムクロマトグラフィー等によって更に精製できる。
（Ａ−４ａ工程）
本工程は、Ａ−４工程で製造される化合物（６ａ）の3’−OH基とOR⁹基による環化反応を行い、（１ａ）を製造する工程である。
【００９８】
使用される溶剤としては、水；ピリジン類；アセトニトリル、イソブチロニトリルのようなニトリル類；ホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチル−２−ピロリドン、Ｎ−メチルピロリジノン、ヘキサメチルホスホロトリアミドのようなアミド類；あるいはそれらの混合溶剤であり、好適には、水及びピリジンの混合溶剤である。
【００９９】
使用される塩基触媒としては、例えば、水酸化ナトリウム、水酸化カリウムのようなアルカリ金属水酸化物；炭酸ナトリウム、炭酸カリウムのようなアルカリ金属炭酸塩；ナトリウムメトキシド、ナトリウムエトキシドのようなアルカリ金属アルコキシド；アンモニア水等をあげることができ、好適には、アルカリ金属水酸化物（特に、水酸化ナトリウム）である。
【０１００】
反応温度は、使用される原料化合物、溶剤、酸触媒により異なるが、通常、０℃乃至５０℃であり、好適には、１０℃乃至３０℃である。
【０１０１】
反応時間は、使用される原料化合物、溶剤、酸触媒、反応温度により異なるが、通常、1分乃至5時間であり、好適には、1分乃至30分である。
【０１０２】
反応終了後、本反応の目的化合物(１ａ)は、例えば、反応混合物を濃縮し、水と酢酸エチルのような混和しない有機溶媒を加え、水洗後、目的化合物を含む有機層を分離し、無水硫酸マグネシウム等で乾燥後、溶剤を留去することで得られる。
【０１０３】
得られた化合物は、必要ならば、常法、例えば、再結晶、シリカゲルカラムクロマトグラフィー等によって更に精製できる。
（Ａ−５工程）
本工程は、不活性溶剤中、Ａ−４a工程で得られる化合物（１ａ）の保護基Xを除去し、化合物（１ｂ）を製造する工程である。
【０１０４】
脱保護の方法は、保護基の種類によって異なるが、他の副反応を生じない方法であれば、特に限定はなく、例えば、”Protective Groups in Organic Synthesis” (Theodora W. Greene、Peter G. M.Wuts著、 1999年、A Wiley-Interscience Publication発行)に記載の方法によって、行うことができる。
【０１０５】
特に、保護基が、（１）「脂肪族アシル基又は芳香族アシル基」、（２）「１乃至３個のアリール基で置換されたメチル基」又は「低級アルキル、低級アルコキシ、ハロゲン、シアノ基でアリール環が置換された１乃至３個のアリール基で置換されたメチル基」、（３）「シリル基」の場合には、以下の方法により行うことができる。
（１）脂肪族アシル基及び芳香族アシル基の場合は、通常、不活性溶剤中、塩基を反応させて行う。
【０１０６】
使用される溶剤は、水と混合しやすく、反応を阻害せず、出発物質をある程度以上溶解するものであれば、特に限定はなく、例えば含水のまたは無水の、ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミドのようなアミド類；メチレンクロリド、クロロホルム、１，２−ジクロロエタン又は四塩化炭素ようなハロゲン化炭化水素類；テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル、ジオキサンのようなエーテル類が挙げられ、好適には、エーテル類であり、更に好適には、テトラヒドロフランである。
【０１０７】
使用される塩基としては、水酸化リチウム、水酸化カリウム、水酸化ナトリウムのようなアルカリ金属水酸化物；炭酸ナトリウム、炭酸カリウムのようなアルカリ金属炭酸塩；ナトリウムメトキシド、ナトリウムエトキシドのようなアルカリ金属アルコキシド；アンモニア水、アンモニア／メタノール溶液のようなアンモニア溶液をあげることができる。
【０１０８】
反応温度は、０℃乃至６０℃であり、好適には、２０乃至４０℃である。
【０１０９】
反応時間は、１０分乃至２４時間であり、好適には、１乃至３時間である。
【０１１０】
反応終了後、本反応の目的化合物(１ｂ)は、例えば、反応混合物を濃縮し、水と酢酸エチルのような混和しない有機溶媒を加え、水洗後、目的化合物を含む有機層を分離し、無水硫酸マグネシウム等で乾燥後、溶剤を留去することで得られる。
【０１１１】
得られた化合物は必要ならば常法、例えば、再結晶またはシリカゲルカラムクロマトグラフィー等によって更に精製できる。
（２）保護基が「１乃至３個のアリール基で置換されたメチル基」又は「低級アルキル、低級アルコキシ、ハロゲン、シアノ基でアリール環が置換された１乃至３個のアリール基で置換されたメチル基」の場合には、不活性溶剤中、還元剤を用いて行う。
【０１１２】
使用される溶剤としては、メタノ−ル、エタノ−ル、イソプロパノ−ルのようなアルコ−ル類；ジエチルエ−テル、テトラヒドロフラン、ジオキサンのようなエ−テル類；トルエン、ベンゼン、キシレンのような芳香族炭化水素類；ヘキサン、シクロヘキサンのような脂肪族炭化水素類；酢酸エチル、酢酸プロピルのようなエステル類；酢酸のような有機酸類又はこれらの有機溶媒と水との混合溶媒が好適である。
【０１１３】
使用される還元剤としては、通常、接触還元反応に使用されるものであれば、特に限定はないが、好適には、パラジウム炭素、ラネ−ニッケル、酸化白金、白金黒、ロジウム−酸化アルミニウム、トリフェニルホスフィン−塩化ロジウム、パラジウム−硫酸バリウムが用いられる。
【０１１４】
圧力は、特に限定はないが、通常１乃至１０気圧で行なわれる。
【０１１５】
反応温度は、０℃乃至６０℃であり、好適には、２０乃至４０℃である。
【０１１６】
反応時間は、１０分乃至２４時間であり、好適には、１乃至３時間である。
【０１１７】
反応終了後、本反応の目的化合物(１ｂ)は、例えば、反応混合物から、還元剤を除去し、水と酢酸エチルのような混和しない有機溶媒を加え、水洗後、目的化合物を含む有機層を分離し、無水硫酸マグネシウム等で乾燥後、溶剤を留去することで得られる。
【０１１８】
得られた化合物は、必要ならば、常法、例えば、再結晶、シリカゲルカラムクロマトグラフィー等によって更に精製できる。
【０１１９】
「３個のアリール基で置換されたメチル基」、すなわち、トリチル基の場合は酸を用いて行うこともできる。
【０１２０】
その場合に、使用する溶剤としては、ベンゼン、トルエン、キシレンのような芳香族炭化水素類；メチレンクロリド、クロロホルム、四塩化炭素、１，２−ジクロロエタン、クロロベンゼン、ジクロロベンゼンのようなハロゲン化炭化水素類；メタノ−ル、エタノ−ル、イソプロパノ−ル、tert-ブタノールのようなアルコ−ル類；アセトニトリル、イソブチロニトリルのようなニトリル類；ホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチル−２−ピロリドン、Ｎ−メチルピロリジノン、ヘキサメチルホスホロトリアミドのようなアミド類；酢酸のような有機酸類をあげることができ、好適には、有機酸（特に、酢酸）又はアルコール類（特に、tert-ブタノール）である。
【０１２１】
使用する酸としては、好適には、酢酸又はトリフルオロ酢酸である。
【０１２２】
反応温度は、０℃乃至６０℃であり、好適には、２０乃至４０℃である。
【０１２３】
反応時間は、１０分乃至２４時間であり、好適には、１乃至３時間である。
【０１２４】
反応終了後、本反応の目的化合物(１ｂ)は、例えば、反応混合物を中和し、水と酢酸エチルのような混和しない有機溶媒を加え、水洗後、目的化合物を含む有機層を分離し、無水硫酸マグネシウム等で乾燥後、溶剤を留去することで得られる。
得られた化合物は、必要ならば、常法、例えば、再結晶、シリカゲルカラムクロマトグラフィー等によって更に精製できる。
（３）保護基が、「シリル基」の場合は、通常、弗化テトラブチルアンモニウム、弗化水素酸、弗化水素酸−ピリジン、弗化カリウムのような弗素アニオンを生成する化合物で処理するか、又は、酢酸、メタンスルホン酸、パラトルエンスルホン酸、トリフルオロ酢酸、トリフルオロメタンスルホン酸のような有機酸又は塩酸のような無機酸で処理することにより除去できる。
【０１２５】
尚、弗素アニオンにより除去する場合に、蟻酸、酢酸、プロピオン酸のような有機酸を加えることによって、反応が促進することがある。
【０１２６】
使用される溶媒としては、反応を阻害せず、出発物質をある程度溶解するものであれば特に限定はないが、好適には、ジエチルエ−テル、ジイソプロピルエ−テル、テトラヒドロフラン、ジオキサン、ジメトキシエタン、ジエチレングリコールジメチルエーテルのようなエ−テル類；アセトニトリル、イソブチロニトリルのようなニトリル類；水；酢酸のような有機酸及びこれらの混合溶媒を挙げることができる。
【０１２７】
反応温度は、０℃乃至１００℃であり、好適には、２０乃至７０℃である。
【０１２８】
反応時間は、５分乃至４８時間であり、好適には、１乃至２４時間である。
【０１２９】
反応終了後、本反応の目的化合物(１ｂ)は、例えば、反応混合物を濃縮し、水と酢酸エチルのような混和しない有機溶媒を加え、水洗後、目的化合物を含む有機層を分離し、無水硫酸マグネシウム等で乾燥後、溶剤を留去することで得られる。
得られた化合物は必要ならば常法、例えば、再結晶またはシリカゲルカラムクロマトグラフィー等によって更に精製できる。
（Ａ−６工程）
本工程は、不活性溶剤中、塩基触媒の存在下、Ａ−５工程で得られる化合物（１ｂ）に存在する保護基Ｚを除去して、本発明の化合物（１ｃ）を製造する工程である。
【０１３０】
使用される溶剤としては、水；ピリジン類；アセトニトリル、イソブチロニトリルのようなニトリル類；ホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチル−２−ピロリドン、Ｎ−メチルピロリジノン、ヘキサメチルホスホロトリアミドのようなアミド類；あるいはそれらの混合溶剤であり、好適には、水及びピリジンの混合溶剤である。
【０１３１】
使用される塩基触媒としては、例えば、水酸化ナトリウム、水酸化カリウムのようなアルカリ金属水酸化物；炭酸ナトリウム、炭酸カリウムのようなアルカリ金属炭酸塩；ナトリウムメトキシド、ナトリウムエトキシドのようなアルカリ金属アルコキシド；アンモニア水等をあげることができ、好適には、アルカリ金属水酸化物（特に、水酸化ナトリウム）である。
【０１３２】
反応温度は、使用される原料化合物、溶剤、酸触媒により異なるが、通常、０℃乃至５０℃であり、好適には、１０℃乃至３０℃である。
【０１３３】
反応時間は、使用される原料化合物、溶剤、酸触媒、反応温度により異なるが、通常、1分乃至5時間であり、好適には、1分乃至30分である。
【０１３４】
反応終了後、本反応の目的化合物(１ａ)は、例えば、反応混合物を濃縮し、水と酢酸エチルのような混和しない有機溶媒を加え、水洗後、目的化合物を含む有機層を分離し、無水硫酸マグネシウム等で乾燥後、溶剤を留去することで得られる。
【０１３５】
得られた化合物は、必要ならば、常法、例えば、再結晶、シリカゲルカラムクロマトグラフィー等によって更に精製できる。
【０１３６】
又、B¹上の官能基が脱保護された場合には、必要に応じて通常の方法（例えば、”Protective Groups in Organic Synthesis” (Theodora W. Greene、Peter G. M.Wuts著、 1999年、A Wiley-Interscience Publication発行)に記載の方法）に準じて再度官能基が保護される。
（Ａ−７工程）
本工程は、不活性溶剤中、Ａ−６工程で得られる化合物（１ｃ）のＢ¹に存在する保護基を除去するため、脱保護試薬を反応させて、本発明の化合物（１ｄ）を製造する工程である。
【０１３７】
脱保護の方法は、保護基の種類によって異なるが、他の副反応を生じない方法であれば、特に限定はなく、例えば、”Protective Groups in Organic Synthesis” (Theodora W. Greene 著、 1981年、A Wiley-Interscience Publication発行)に記載の方法によって、行うことができる。
【０１３８】
特に、保護基が、脂肪族アシル基又は芳香族アシル基の場合には、以下の方法により行うことができる。
【０１３９】
すなわち、保護基が脂肪族アシル基及び芳香族アシル基の場合は、通常、不活性溶剤中、塩基を反応させて行う。
【０１４０】
使用される溶剤は、水と混合しやすく、反応を阻害せず、出発物質をある程度以上溶解するものであれば、特に限定はなく、例えば含水のまたは無水の、メタノール、エタノールのようなアルコール類；ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミドのようなアミド類；メチレンクロリド、クロロホルム、１，２−ジクロロエタン又は四塩化炭素ようなハロゲン化炭化水素類；テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル、ジオキサンのようなエーテル類をあげることができ、好適には、アルコール類であり、更に好適には、メタノールである。
【０１４１】
使用される塩基としては、水酸化リチウム、水酸化カリウム、水酸化ナトリウムのようなアルカリ金属水酸化物；炭酸ナトリウム、炭酸カリウムのようなアルカリ金属炭酸塩；ナトリウムメトキシド、ナトリウムエトキシドのようなアルカリ金属アルコキシド；アンモニアをあげることができ、好適には、アンモニアである。
【０１４２】
反応温度は、０℃乃至５０℃であり、好適には、１０乃至４０℃である。
【０１４３】
反応時間は、１０分乃至２４時間であり、好適には、１０乃至１５時間である。反応終了後、例えば、反応混合物を濃縮し、水と酢酸エチルのような混和しない有機溶媒を加え、水洗後、目的化合物を含む有機層を分離し、無水硫酸マグネシウム等で乾燥後、溶剤を留去することで得られる。
【０１４４】
得られた化合物は、必要ならば、常法、例えば、再結晶、シリカゲルカラムクロマトグラフィー等によって更に精製できる。
なお、（A-5工程）及び（A-６工程）、（A-5工程）乃至（A-7工程）、又は、（A-6工程）及び（A-7）工程は所望に応じ、一度に行う事ができ、(1a)又は(1b)から目的化合物(1b)、(1c)又は(1d)を1段階の反応で得る事も可能である。
（Ｂ−１工程）
本工程は、不活性溶剤中、後述するC乃至E法により製造することができる化合物（３）に脱保護試薬を反応させて、保護基Ｙを除去し、化合物（７）を製造する工程である。
【０１４５】
脱保護の方法は、保護基の種類によって異なるが、他の副反応を生じない方法であれば、特に限定はなく、例えば、”Protective Groups in Organic Synthesis” (Theodora W. Greene著、 1981年、A Wiley-Interscience Publication発行)に記載の方法によって行うことができる。
【０１４６】
特に、水酸基の保護基が、アラルキル基又はアラルキルオキシカルボニル基である場合には、通常、溶媒中で、還元剤と接触させることにより（好適には、触媒下に常温にて接触還元）除去する方法又は酸化剤を用いて除去する方法が好適である。接触還元による除去において使用される溶媒としては、本反応に関与しないものであれば特に限定はないが、メタノール、エタノール、イソプロパノールのようなアルコール類、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、ジオキサンのようなエーテル類、トルエン、ベンゼン、キシレンのような芳香族炭化水素類、ヘキサン、シクロヘキサンのような脂肪族炭化水素類、酢酸エチル、酢酸プロピルのようなエステル類、酢酸のような脂肪酸類又はこれらの有機溶媒と水との混合溶媒が好適である。
【０１４７】
使用される触媒としては、通常、接触還元反応に使用されるものであれば、特に限定はないが、好適には、パラジウム炭素、水酸化パラジウム、ラネーニッケル、酸化白金、白金黒、ロジウム−酸化アルミニウム、トリフェニルホスフィン−塩化ロジウム、パラジウム−硫酸バリウムが用いられる。
【０１４８】
圧力は、特に限定はないが、通常１乃至１０気圧で行なわれる。
【０１４９】
反応温度及び反応時間は、出発物質、溶媒及び触媒の種類等により異なるが、通常、０乃至１００℃で、５分乃至２４時間実施される。
【０１５０】
特に、水酸基の保護基が、ｐ−メトキシベンジル基である場合には、通常、溶媒中で、酸化による除去する方法が好適である。
【０１５１】
酸化による除去において使用される溶媒としては、本反応に関与しないものであれば特に限定はないが、好適には、含水有機溶媒である。
【０１５２】
このような有機溶媒として好適には、アセトンのようなケトン類、メチレンクロリド、クロロホルム、四塩化炭素のようなハロゲン化炭化水素類、アセトニトリルのようなニトリル類、ジエチルエ−テル、テトラヒドロフラン、ジオキサンのようなエ−テル類、ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミド、ヘキサメチルホスホロトリアミドのようなアミド類及びジメチルスルホキシドのようなスルホキシド類を挙げることができる。
【０１５３】
使用される酸化剤としては、酸化に使用される化合物であれば特に限定はないが、好適には、過硫酸カリウム、過硫酸ナトリウム、アンモニウムセリウムナイトレイト(CAN) 、2,3-ジクロロ-5,6- ジシアノ-p- ベンゾキノン(DDQ) が用いられる。
【０１５４】
反応温度及び反応時間は、出発物質、溶媒及び触媒の種類等により異なるが、通常、０乃至１５０℃で、１０分乃至２４時間実施される。
（Ｂ−２工程）
本工程は、不活性溶剤中、Ｂ−１工程で製造される化合物（７）に脱離基導入試薬を反応させて、化合物（７ａ）を製造する工程である。
【０１５５】
本工程は（A-1工程）に準じて行われる。
【０１５６】
得られた化合物は、必要ならば、常法、例えば、再結晶、シリカゲルカラムクロマトグラフィー等によって更に精製できる。
（Ｂ−２ａ工程）
本工程は、Ｂ−２工程で製造される化合物（７ａ）の3'−OH基とOR⁹基による環化反応を行い、（８）を製造する工程である。
【０１５７】
使用される溶剤としては、水；ピリジン類；ジエチルエ−テル、ジイソプロピルエ−テル、テトラヒドロフラン、ジオキサン、ジメトキシエタン、ジエチレングリコールジメチルエーテルのようなエ−テル類；アセトニトリル、イソブチロニトリルのようなニトリル類；ホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチル−２−ピロリドン、Ｎ−メチルピロリジノン、ヘキサメチルホスホロトリアミドのようなアミド類；あるいはそれらの混合溶剤であり、好適には、水及びピリジンの混合溶剤もしくはテトラヒドロフランである。
【０１５８】
使用される塩基触媒としては、例えば、含水反応系においては、水酸化ナトリウム、水酸化カリウムのようなアルカリ金属水酸化物；炭酸ナトリウム、炭酸カリウムのようなアルカリ金属炭酸塩；ナトリウムメトキシド、ナトリウムエトキシドのようなアルカリ金属アルコキシド；アンモニア水、無水反応系においては、ナトリウムメトキシド、ナトリウムメチルスルフィニルメチリド、ｎ−ブチルリチウム、リチウムジイソプロピルアミド、ｔ−ブトキシカリウム、リチウムヘキサメチレンジシラザン等をあげることができ、好適には、アルカリ金属水酸化物（特に、水酸化ナトリウム）である。
【０１５９】
反応温度は、使用される原料化合物、溶剤、酸触媒により異なるが、通常、−７８℃乃至５０℃であり、好適には、−２０℃乃至２０℃である。
【０１６０】
反応時間は、使用される原料化合物、溶剤、酸触媒、反応温度により異なるが、通常、1分乃至5時間であり、好適には、1０分乃至1時間である。
【０１６１】
反応終了後、本反応の目的化合物(８)は、例えば、反応混合物を濃縮し、水と酢酸エチルのような混和しない有機溶媒を加え、水洗後、目的化合物を含む有機層を分離し、無水硫酸マグネシウム等で乾燥後、溶剤を留去することで得られる。
【０１６２】
得られた化合物は、必要ならば、常法、例えば、再結晶、シリカゲルカラムクロマトグラフィー等によって更に精製できる。
（Ｂ−３工程）
本工程は、溶剤中、酸触媒の存在下、Ｂ−２a工程で製造される化合物（８）に、酸無水物を反応し、化合物（９）を製造する工程である。
【０１６３】
本工程は（A-2工程）に準じて行われる。
【０１６４】
得られた化合物は、必要ならば、常法、例えば、再結晶、シリカゲルカラムクロマトグラフィー等によって更に精製できる。
（Ｂ−４工程）
本工程は、不活性溶剤中、Ｂ−３工程で製造される化合物（９）の保護基Xを除去し、化合物（１０）を製造する工程である。
【０１６５】
本工程は（A-5工程）に準じて行われる。
【０１６６】
得られた化合物は必要ならば常法、例えば、再結晶またはシリカゲルカラムクロマトグラフィー等によって更に精製できる。
（Ｂ−５工程）
本工程は、不活性溶剤中、Ｂ−４工程で製造される化合物（１０）に、塩基触媒の存在下又は非存在下、酸無水物、酸クロライド又はカルボン酸を反応させて、化合物（１１）を製造する工程である。
【０１６７】
使用される溶剤としては、好適には、ベンゼン、トルエン、キシレンのような芳香族炭化水素類；メチレンクロリド、クロロホルム、四塩化炭素、ジクロロエタン、クロロベンゼン、ジクロロベンゼンのようなハロゲン化炭化水素類；蟻酸エチル、酢酸エチル、酢酸プロピル、酢酸ブチル、炭酸ジエチルのようなエステル類；ジエチルエ−テル、ジイソプロピルエ−テル、テトラヒドロフラン、ジオキサン、ジメトキシエタン、ジエチレングリコールジメチルエーテルのようなエ−テル類；アセトン、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトン、イソホロン、シクロヘキサノンのようなケトン類；ニトロエタン、ニトロベンゼンのようなニトロ化合物類；アセトニトリル、イソブチロニトリルのようなニトリル類；ホルムアミド、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルアセトアミド、ヘキサメチルホスホロトリアミドのようなアミド類；ジメチルスルホキシド、スルホランのようなスルホキシド類；トリメチルアミン、トリエチルアミン、Ｎ−メチルモルホリン等の脂肪族三級アミン類；ピリジン、ピコリンのような芳香族アミンなどがあげられ、さらに好適には、ハロゲン化炭化水素類（特にメチレンクロリド）、芳香族アミン（特にピリジン）である。
【０１６８】
本方法に使用される塩基は、例えば、炭酸リチウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウムのようなアルカリ金属炭酸塩類；炭酸水素リチウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸水素カリウムのようなアルカリ金属重炭酸塩類；水素化リチウム、水素化ナトリウム、水素化カリウムのようなアルカリ金属水素化物類；水酸化リチウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウムのようなアルカリ金属水酸化物類；リチウムメトキシド、ナトリウムメトキシド、ナトリウムエトキシド、カリウムｔ−ブトキシドのようなアルカリ金属アルコキシド類；トリエチルアミン、トリブチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、Ｎ−メチルモルホリン、ピリジン、４−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）ピリジン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン、Ｎ，Ｎ−ジエチルアニリン、１，５−ジアザビシクロ［４．３．０］ノナ−５−エン、１，４−ジアザビシクロ［２．２．２］オクタン（ＤＡＢＣＯ）、１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］−７−ウンデセン（ＤＢＵ）のような有機アミン類であり、好適には有機アミン類（特に好適には、トリエチルアミン）である。
【０１６９】
使用されるカルボン酸としては、例えば、水酢酸、プロピオン酸等の低級脂肪族カルボン酸をあげることができるが、好適には、酢酸である。
【０１７０】
特にカルボン酸が用いられる場合には、脱水縮合試薬を用いる事ができ、そのような脱水縮合試薬としては、
（a）ジエチルホスホリルシアニド、ジフェニルホスホリルアジド、シアノ燐酸ジエチルのような燐酸エステル類；
（b）１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド、１，３−ジイソプロピルカルボジイミド、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド等のカルボジイミド類；前記カルボジイミド類と下記塩基の組合せ；前記カルボジイミド類とＮ−ヒドロキシスクシンイミド、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール、Ｎ−ヒドロキシ−５−ノルボルネン−２，３−ジカルボキシイミドのようなＮ−ヒドロキシ類の組合せ；
（c）２，２’−ジピリジル ジサルファイド、２，２’−ジベンゾチアゾリルジサルファイドのようなジサルファイド類とトリフェニルホスフィン、トリブチルホスフィンのようなホスフィン類の組合せ；
（d）Ｎ，Ｎ’−ジスクシンイミジルカ−ボネート、ジ−２−ピリジル カーボネート、Ｓ、Ｓ’−ビス（１−フェニル−１Ｈ−テトラゾール−５−イル）ジチオカーボネートのようなカーボネート類；
（e）Ｎ，Ｎ’−ビス（２−オキソ−３−オキサゾリジニル）ホスフィニッククロライドのようなホスフィニッククロライド類；
（f）Ｎ，Ｎ’−ジスクシンイミジルオキザレート、Ｎ，Ｎ’−ジフタルイミドオキザレート、Ｎ，Ｎ’−ビス（５−ノルボルネン−２，３−ジカルボキシイミジル）オキザレート、１，１’−ビス（ベンゾトリアゾリル）オキザレート、１，１’−ビス（６−クロロベンゾトリアゾリル）オキザレート、１，１’−ビス（６−トリフルオロメチルベンゾトリアゾリル）オキザレートのようなオキザレート類；
（g）前記ホスフィン類とアゾジカルボン酸ジエチル、１，１’−（アゾジカルボニル）ジピペリジンのようなアゾジカルボン酸エステル又はアゾジカルボキシアミド類の組合せ；
（h）Ｎ−エチル−５−フェニルイソオキサゾリウム−３’−スルホナートのようなＮ−低級アルキル−５−アリールイソオキサゾリウム−３’−スルホナート類；
（i）ジ−２−ピリジルジセレニドのようなジヘテロアリールジセレニド類；
（j）ｐ−ニトロベンゼンスルホニルトリアゾリドのようなアリールスルホニルトリアゾリド類；
（k）２−クロル−１−メチルピリジニウム ヨーダイドのような２−ハロ−１−低級アルキルピリジニウム ハライド類；
（l）１，１’−オキザリルジイミダゾ−ル、Ｎ，Ｎ’−カルボニルジイミダゾ−ルのようなイミダゾール類；
（m）３−エチル−２−クロロ−ベンゾチアゾリウム フルオロボレートのような３−低級アルキル−２−ハロゲン−ベンゾチアゾリウム フルオロボレート類；
（n）３−メチル−ベンゾチアゾール−２−セロンのような３−低級アルキル−ベンゾチアゾール−２−セロン類；
（o）フェニルジクロロホスフェート、ポリホスフェートエステルのようなホスフェート類；
（p）クロロスルホニルイソシアネートのようなハロゲノスルホニルイソシアネート類；
（q）トリメチルシリルクロリド、トリエチルシリルクロリドのようなハロゲノシラン類；
（r）メタンスルホニルクロリドのような低級アルカンスルホニルハライド；
（s）Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルクロロホルマミジウムクロリドのようなＮ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラ低級アルキルハロゲノホルマミジウムクロリド類を挙げることができるが、好適には、カルボジイミド類、及び、ホスフィン類とアゾジカルボン酸エステル又はアゾジカルボキシアミド類の組合せである。
【０１７１】
使用される酸無水物としては、例えば、無水酢酸、無水プロピオン酸等の低級脂肪族カルボン酸の無水物をあげることができるが、好適には、無水酢酸である。
【０１７２】
使用される酸クロライドとしては、例えば、アセチルクロライド、プロピオン酸クロライド等の低級脂肪族カルボン酸クロライドをあげることができるが、好適には、アセチルクロライドである。
【０１７３】
反応温度は、使用される原料化合物、溶剤、触媒、カルボン酸、カルボン酸クロライドにより異なるが、通常、０℃乃至１５０℃であり、好適には、２０乃至１００℃である。
【０１７４】
反応時間は、使用される原料化合物、溶剤、触媒、カルボン酸、カルボン酸クロライド、酸無水物、反応温度により異なるが、通常、１０分乃至１２時間であり、好適には、３０分乃至３時間である。
【０１７５】
反応終了後、本反応の目的化合物(１１)は、例えば、反応混合物を濃縮し、水と酢エチルのような混和しない有機溶媒を加え、水洗後、目的化合物を含む有機層を分離し、無水硫酸マグネシウム等で乾燥後、溶剤を留去することで得られる。
【０１７６】
得られた化合物は、必要ならば、常法、例えば、再結晶、シリカゲルカラムクロマトグラフィー等によって更に精製できる。
（Ｂ−６工程）
本工程は、不活性溶剤中、酸触媒の存在下、B-5工程で製造される化合物（11）に、文献（H. Vorbrggen, K. Krolikiewicz and B, Bennua, Chem. Ber., 114, 1234-1255 (1981)）に従って調製した、所望の置換基を有していてもよいプリン又はピリミジンに対応するトリメチルシリル化体を反応させて、化合物（1e）を製造する工程である。
【０１７７】
本工程は（A-3工程）に準じて行われる。
【０１７８】
得られた化合物は、必要ならば、常法、例えば、再結晶、シリカゲルカラムクロマトグラフィー等によって更に精製できる
（Ｂ−７工程）
本工程は、不活性溶剤中、B−６工程で得られる化合物（１ｅ）のＺを除去するため、脱保護試薬を反応させて、本発明の化合物（１ｃ）を製造する工程である。
【０１７９】
本工程は（A-6工程に）準じて行われる。
【０１８０】
得られた化合物は、必要ならば、常法、例えば、再結晶、シリカゲルカラムクロマトグラフィー等によって更に精製できる。
【０１８１】
又、B¹上の官能基が脱保護された場合には、必要に応じて通常の方法（例えば、”Protective Groups in Organic Synthesis” (Theodora W. Greene、Peter G. M.Wuts著、 1999年、A Wiley-Interscience Publication発行)に記載の方法）に準じて再度官能基が保護される。
【０１８２】
なお、化合物（９）に対して（Ｂ−６）工程を行うことにより、（１ａ）を合成することが出来、その後、Ａ法に従って（Ａ−５）、（Ａ−６）工程を行うことで（１ｃ）を得ることもできる。
【０１８３】
前述した中間体（３）は、以下に述べるC乃至E法により、製造することができる。
【０１８４】
【化１５】

【０１８５】
Ｃ乃至Ｅ法中、Ｘ及びＹは、前述と同意義を示し、Ｒ¹⁰は、酸素原子と一緒になって脱離基を形成する基を示し、Ｅは、エチレン、トリメチレン又はテトラメチレン基を示し、Wは、単結合、メチレン又はエチレン基を示す。
【０１８６】
Ｒ¹⁰の脱離基を形成する基としては、前述のＲ⁹にあげられるものと同様のものがあげられ、好適には、トリフルオロメタンスルホニル基である。
【０１８７】
Ｒ¹²及びＲ¹³は、同一であって水素原子を示すか、一緒になって酸素原子を示す。
【０１８８】
Ｒ¹¹は、Ｒ¹²及びＲ¹³が一緒になって酸素原子を示す場合には、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｓ−ブチル、tert−ブチルのような炭素数１乃至４個のアルキル基であり、好適には、メチル基であり、Ｒ¹²及びＲ¹³が同一であって水素原子の場合には、ベンジル基のようなアラルキル基；メトキシメチル基のようなアルコキシアルキル基；ベンジルオキシメチル基のようなベンジルオキシメチル基又はベンジルオキシメチル基のようなアラルキルオキシメチル基；メトキシエトキシメチル基のようなアルコキシアルコキシアルキル基；トリメチルシリル、t-ブチルジメチルシリル、ジフェニルメチルシリル、ジフェニルブチルシリル、ジフェニルイソプロピルシリル、フェニルジイソプロピルシリルのようなシリル基をあげることができる。
【０１８９】
C法又はD法で使用される原料化合物である化合物（12）は、以下の方法で、製造することができる。
【０１９０】
すなわち、市販の1,2,5,6-ジイソプロピリデンD-グルコースを出発原料とし、既知の方法(R.D.Youssefyeh, J.P.H.Verheyden, J.G.Moffatt. J.Org.Chem., 44, 1301-1309 (1979))に準じて、化合物（12）の「Ｘ」の部分が水素原子に相当する化合物を製造し、次いで、既知の方法（特開平10‐304889）に従って製造することができる。又、市販の1,2,5,6-ジイソプロピリデンD-グルコースを出発原料とし、既知の方法(Mersmaeker, Alain De, Leberton, Jacques, Jouanno, Chantal, Fritsh, Valerie, Wolf, Romain M., Wedenborn, Sebastian, Syn. Lett., 11, 1287-1290)(1997))に準じて1,2-ジイソプロピリデンD-アロフラノースを合成し、これを用いて、既知の方法(Wood, William W., Watson, Graham M., J.Chem. Soc. Chem. Commun., 21, 1599-1600(1986))に準じてアルデヒド体
【０１９１】
【化１６】

【０１９２】
を合成し、次いで、アルデヒド基を通常の方法（例えば、Hudlicky "Reductionsin Organic Chemistory", Ellis Horwood(1984)等に記載の方法)に準じて還元反応を行う事によっても得ることができる。
【０１９３】
以下、C乃至E法の各工程につき、詳しく説明する。
（C法）
（C−１工程）
本工程は、不活性溶剤中、塩基触媒の存在下、前述の方法で製造される化合物（12）に、脱離基導入試薬を反応させて、化合物（13）を製造する工程である。
【０１９４】
本工程は（A-1工程)と同様に行われる。
【０１９５】
得られた化合物は、必要ならば、常法、例えば、再結晶、シリカゲルカラムクロマトグラフィー等によって更に精製できる。
（C−２工程）
本工程は、不活性溶剤中、C−１工程で製造される化合物（13）に、シアノ化試薬を反応させて、化合物（14）を製造する工程である。
【０１９６】
使用される溶剤としては、例えば、ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミドのようなアミド類；メチレンクロリド、クロロホルム、１，２−ジクロロエタン又は四塩化炭素ようなハロゲン化炭化水素類；テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル、ジオキサンのようなエーテル類；アセトニトリル；ジメチルスルホキシド等をあげることができるが、好適には、アミド類（ジメチルホルムアミド）である。
【０１９７】
使用されるシアノ化試薬としては、例えば、KCN, NaCN、シアン化トリメチルシラン等をあげることができるが、好適には、NaCNである。
【０１９８】
反応温度は、使用される原料化合物、溶剤、シアノ化試薬により異なるが、通常、０℃乃至１００℃であり、３０℃乃至７０℃である。
【０１９９】
反応時間は、使用される原料化合物、溶剤、シアノ化試薬、反応温度により異なるが、通常、３０分乃至１２時間であり、好適には、１乃至３時間である。
【０２００】
反応終了後、本反応の目的化合物(14)は、例えば、反応混合物を濃縮し、水と酢酸エチルのような混和しない有機溶媒を加え、水洗後、目的化合物を含む有機層を分離し、無水硫酸マグネシウム等で乾燥後、溶剤を留去することで得られる。
【０２０１】
得られた化合物は、必要ならば、常法、例えば、再結晶、シリカゲルカラムクロマトグラフィー等によって更に精製できる。
（C−３工程）
本工程は、不活性溶剤中、C−２工程で製造される化合物（14）に、還元剤を反応させて、化合物（15）を製造する工程である。
【０２０２】
使用される溶剤としては、例えば、メチレンクロリド、クロロホルム、１，２−ジクロロエタン又は四塩化炭素ようなハロゲン化炭化水素類；ヘキサン、ヘプタン、リグロイン、石油エーテルのような脂肪族炭化水素類；ベンゼン、トルエン、キシレンのような芳香族炭化水素類；ジエチルエ−テル、ジイソプロピルエ−テル、テトラヒドロフラン、ジオキサン、ジメトキシエタン、ジエチレングリコールジメチルエーテルのようなエ−テル類；アセトン、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトン、イソホロン、シクロヘキサノンのようなケトン類等をあげることができるが、好適には、ハロゲン化炭化水素類（特に、メチレンクロリド）である。
【０２０３】
使用される還元剤としては、ジイソブチルアルミニウム水素、トリエトキシアルミニウム水素等をあげることができるが、好適には、ジイソブチルアルミニウムハイドライドである。
【０２０４】
反応温度は、使用される原料化合物、溶剤、還元剤により異なるが、−１００℃乃至−５０℃であり、好適には、−９０℃乃至−７０である。
【０２０５】
反応時間は、使用される原料化合物、溶剤、還元剤、反応温度により異なるが、通常、３０分乃至１２時間であり、好適には、１乃至５時間である。
【０２０６】
反応終了後、本反応の目的化合物(15)は、例えば、反応混合物を濃縮し、水と酢酸エチルのような混和しない有機溶媒を加え、水洗後、目的化合物を含む有機層を分離し、無水硫酸マグネシウム等で乾燥後、溶剤を留去することで得られる。
【０２０７】
得られた化合物は、必要ならば、常法、例えば、再結晶、シリカゲルカラムクロマトグラフィー等によって更に精製できる。
（C−４工程）
本工程は、不活性溶剤中、C−３工程で製造される化合物（15）に、還元剤を反応させて、Ａ法の原料化合物の一つである化合物（３ａ）を製造する工程である。
【０２０８】
使用される溶剤としては、例えば、メタノ−ル、エタノ−ル、ｎ−プロパノ−ル、イソプロパノ−ル、ｎ−ブタノ−ル、イソブタノ−ル、ｔ−ブタノ−ル、イソアミルアルコ−ル、ジエチレングリコール、グリセリン、オクタノール、シクロヘキサノール、メチルセロソルブのようなアルコ−ル類；酢酸等をあげることができるが、好適には、アルコール類（特に、エタノール）である。
【０２０９】
使用される還元剤としては、例えば、水素化ホウ素ナトリウム、水素化ホウ素リチウムのような水素化ホウ素アルカリ金属；水素化アルミニウムリチウム、水素化リチウムトリエトキシドアルミニウムのような水素化アルミニウム化合物；ボラン等をあげることができるが、好適には、水素化ホウ素ナトリウムである。
【０２１０】
反応温度は、使用される原料化合物、溶剤、還元剤により異なるが、通常、０℃乃至５０℃であり、好適には、１０乃至４０℃である。
【０２１１】
反応時間は、使用される原料化合物、溶剤、還元剤、反応温度により異なるが、通常、１０分乃至１２時間であり、好適には、３０分乃至５時間である。
【０２１２】
反応終了後、本反応の目的化合物(３ａ)は、例えば、還元剤を分解し、反応混合物を濃縮し、水と酢酸エチルのような混和しない有機溶媒を加え、水洗後、目的化合物を含む有機層を分離し、無水硫酸マグネシウム等で乾燥後、溶剤を留去することで得られる。
【０２１３】
得られた化合物は、必要ならば、常法、例えば、再結晶、シリカゲルカラムクロマトグラフィー等によって更に精製できる。
（D法）
（D−１工程）
本工程は、不活性溶剤中、前述の方法で製造される化合物（12）に、酸化剤を反応させて、化合物（１6）を製造する工程である。
【０２１４】
使用される溶剤としては、例えば、ヘキサン、ヘプタン、リグロイン、石油エーテルのような脂肪族炭化水素類；ベンゼン、トルエン、キシレンのような芳香族炭化水素類；メチレンクロリド、クロロホルム、四塩化炭素、ジクロロエタン、クロロベンゼン、ジクロロベンゼンのようなハロゲン化炭化水素類；蟻酸エチル、酢酸エチル、酢酸プロピル、酢酸ブチル、炭酸ジエチルのようなエステル類；ジエチルエ−テル、ジイソプロピルエ−テル、テトラヒドロフラン、ジオキサン、ジメトキシエタン、ジエチレングリコールジメチルエーテルのようなエ−テル類；アセトン、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトン、イソホロン、シクロヘキサノンのようなケトン類；をあげることができるが、好適には、ハロゲン化炭化水素類（特に、メチレンクロリド）である。
【０２１５】
使用される酸化剤としては、スワン(Swern)酸化用試薬、デスマーチン(Dess-Martin)酸化用試薬, ピリジン塩酸塩・三酸化クロム錯体（ピリジニウムクロロクロメート、ピリジニウムジクロメート）のような三酸化クロム錯体等をあげることができるが、好適な試薬としては、スワン酸化用試薬（すなわち、ジメチルスルホキシド−オキザリルクロリド）である。
【０２１６】
反応温度は、使用される原料化合物、溶剤、酸化剤により異なるが、通常、−１００℃乃至−５０℃であり、好適には、−１００乃至−７０℃である。
【０２１７】
反応時間は、使用される原料化合物、溶剤、酸化剤、反応温度によって異なるが、通常、３０分乃至１２時間であり、好適には、１乃至５時間である。
【０２１８】
反応終了後、本反応の目的化合物(１6)は、例えば、酸化剤を分解し、反応混合物を濃縮し、水と酢酸エチルのような混和しない有機溶媒を加え、水洗後、目的化合物を含む有機層を分離し、無水硫酸マグネシウム等で乾燥後、溶剤を留去することで得られる。
【０２１９】
得られた化合物は、必要ならば、常法、例えば、再結晶、シリカゲルカラムクロマトグラフィー等によって更に精製できる。
（D−２工程）
本工程は、不活性溶剤中、D−１工程で製造される化合物（16）に、増炭素試薬を反応させて、化合物（17）を製造する工程である。
【０２２０】
使用される溶剤としては、例えば、ヘキサン、ヘプタン、リグロイン、石油エーテルのような脂肪族炭化水素類；ベンゼン、トルエン、キシレンのような芳香族炭化水素類；メチレンクロリド、クロロホルム、四塩化炭素、ジクロロエタン、クロロベンゼン、ジクロロベンゼンのようなハロゲン化炭化水素類；蟻酸エチル、酢酸エチル、酢酸プロピル、酢酸ブチル、炭酸ジエチルのようなエステル類；ジエチルエ−テル、ジイソプロピルエ−テル、テトラヒドロフラン、ジオキサン、ジメトキシエタン、ジエチレングリコールジメチルエーテルのようなエ−テル類；アセトン、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトン、イソホロン、シクロヘキサノンのようなケトン類；をあげることができるが、好適には、ハロゲン化炭化水素類（特に、メチレンクロリド）である。
【０２２１】
使用される試薬としては、ウィッティヒ(Wittig)試薬、ホーナー・エモンズ(Horner-Emmons)試薬、ピターソン(Peterson)反応試薬、TiCl₄-CH₂Cl₂-Zn系反応剤、テーベ(Tebbe)試薬等をあげることができるが、好適には、ウィッティヒ試薬、ホーナー・エモンズ試薬及びテーベ試薬である。
【０２２２】
使用される塩基としては、水素化ナトリウム、ナトリウムメチルスルフィニルメチリド、ｎ−ブチルリチウム、リチウムジイソプロピルアミド、ｔ−ブトキシカリウム、リチウムヘキサメチレンジシラザン等があげられる。
【０２２３】
反応温度は、使用される原料化合物、溶剤、増炭素試薬により異なるが、通常、−２０℃乃至２０℃であり、好適には、０℃である。
【０２２４】
反応時間は、使用される原料化合物、溶剤、増炭素試薬、反応温度によって異なるが、３０分乃至１２時間、好適には、１乃至５時間である。
【０２２５】
反応終了後、本反応の目的化合物(17)は、例えば、反応混合物を濃縮し、水と酢酸エチルのような混和しない有機溶媒を加え、水洗後、目的化合物を含む有機層を分離し、無水硫酸マグネシウム等で乾燥後、溶剤を留去することで得られる。
【０２２６】
得られた化合物は、必要ならば、常法、例えば、再結晶、シリカゲルカラムクロマトグラフィー等によって更に精製できる。
（D−３工程）
本工程は、不活性溶剤中、D−２工程で製造される化合物（17）のオレフィンの末端炭素に選択的に水酸基を導入して、化合物（３ａ）を製造する工程である。
【０２２７】
使用される溶剤としては、例えば、ヘキサン、ヘプタン、リグロイン、石油エーテルのような脂肪族炭化水素類；ベンゼン、トルエン、キシレンのような芳香族炭化水素類；メチレンクロリド、クロロホルム、四塩化炭素、ジクロロエタン、クロロベンゼン、ジクロロベンゼンのようなハロゲン化炭化水素類；蟻酸エチル、酢酸エチル、酢酸プロピル、酢酸ブチル、炭酸ジエチルのようなエステル類；ジエチルエ−テル、ジイソプロピルエ−テル、テトラヒドロフラン、ジオキサン、ジメトキシエタン、ジエチレングリコールジメチルエーテルのようなエ−テル類；アセトン、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトン、イソホロン、シクロヘキサノンのようなケトン類をあげることができるが、好適には、エーテル類（特に、テトラヒドロフラン）である。
【０２２８】
使用される反応試薬としては、ボラン、ジシアミルボラン、セキシルボラン、9-BBN(9-ボラビシクロ[3.3.1]ノナン)等をあげることができるが、好適には、9-BBNである。
【０２２９】
反応温度は、使用される原料化合物、溶剤、試薬により異なるが、０℃乃至５０℃であり、好適には、１０乃至４０℃である。
【０２３０】
反応時間は、使用される原料化合物、溶剤、試薬、反応温度により異なるが、通常、６乃至４８時間であり、好適には、１２乃至２４時間である。
【０２３１】
反応終了後、本反応の目的化合物(３ａ)は、例えば、反応混合物を濃縮し、水と酢酸エチルのような混和しない有機溶媒を加え、水洗後、目的化合物を含む有機層を分離し、無水硫酸マグネシウム等で乾燥後、溶剤を留去することで得られる。
【０２３２】
得られた化合物は、必要ならば、常法、例えば、再結晶、シリカゲルカラムクロマトグラフィー等によって更に精製できる。
（E法）
（E−１工程）
本工程は、不活性溶剤中、D−１工程で製造される化合物（１6）に、増炭素試薬を反応させて、化合物（18）を製造する工程である。
【０２３３】
使用される溶剤としては、例えば、ヘキサン、ヘプタン、リグロイン、石油エーテルのような脂肪族炭化水素類；ベンゼン、トルエン、キシレンのような芳香族炭化水素類；メチレンクロリド、クロロホルム、四塩化炭素、ジクロロエタン、クロロベンゼン、ジクロロベンゼンのようなハロゲン化炭化水素類；蟻酸エチル、酢酸エチル、酢酸プロピル、酢酸ブチル、炭酸ジエチルのようなエステル類；ジエチルエ−テル、ジイソプロピルエ−テル、テトラヒドロフラン、ジオキサン、ジメトキシエタン、ジエチレングリコールジメチルエーテルのようなエ−テル類；アセトン、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトン、イソホロン、シクロヘキサノンのようなケトン；アセトニトリル、イソブチロニトリルのようなニトリル類；ホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチル−２−ピロリドン、Ｎ−メチルピロリジノン、ヘキサメチルホスホロトリアミドのようなアミド類をあげることができるが、好適には、エーテル類（特に、テトラヒドロフラン）等をあげることができる
使用される増炭素試薬としては、トリフェニルホスホラニリデン酢酸メチル、エトキシカルボニルメチル(トリフェニル)ホスホニウムブロミド、メトキシメチルトリフェニルホスホニウムクロリドのようなウィッティヒ(Wittig)試薬；ジエチルホスホノ酢酸エチルエステル、3-ジエチルホスホノプロピオン酸エチルエステル、ジフェニルホスホノ酢酸エチルエステルのようなホーナー・エモンズ(Horner-Emmons)試薬等をあげることができる。
【０２３４】
使用される塩基としては、水素化ナトリウム、ナトリウムメチルスルフィニルメチリド、ｎ−ブチルリチウム、リチウムジイソプロピルアミド、ｔ−ブトキシカリウム、リチウムヘキサメチレンジシラザン等があげられる。
【０２３５】
反応温度は、使用される原料化合物、溶剤、試薬により異なるが、通常、−２０℃乃至４０℃であり、好適には、０乃至２０℃である。
【０２３６】
反応時間は、使用される原料化合物、溶剤、試薬、反応温度によって異なるが、３０分乃至１２時間、好適には、１乃至５時間である。
【０２３７】
反応終了後、本反応の目的化合物(18)は、例えば、反応混合物を濃縮し、水と酢酸エチルのような混和しない有機溶媒を加え、水洗後、目的化合物を含む有機層を分離し、無水硫酸マグネシウム等で乾燥後、溶剤を留去することで得られる。
【０２３８】
得られた化合物は、必要ならば、常法、例えば再結晶、またはシリカゲルカラムクロマトグラフィー等によって更に精製できる。
（E−２工程）
本工程は、不活性溶剤中、E−１工程で製造される化合物（18）に、還元剤を反応させて、化合物（19）を製造する工程である。
【０２３９】
本工程は、 Ａ−５工程の（２）に準じて実施することができる。但し、Ｒ¹¹が、置換基を有していてもよいベンジル基で、かつ、Ｒ¹²及びＲ¹³が水素原子である場合には,この工程により、化合物（３ｂ）を直接製造することができる。（E−３工程）
本工程は、不活性溶剤中、E−２工程で製造される化合物（19）に、還元剤を反応させて、Ａ法又はB法の原料化合物の一つである化合物（３ｂ）を製造する工程である。
（ａ）Ｒ¹²とＲ¹³とが一緒になって酸素原子である場合
使用される溶剤としては、例えば、メタノ−ル、エタノ−ル、ｎ−プロパノ−ル、イソプロパノ−ル、ｎ−ブタノ−ル、イソブタノ−ル、ｔ−ブタノ−ル、イソアミルアルコ−ル、ジエチレングリコール、グリセリン、オクタノール、シクロヘキサノール、メチルセロソルブのようなアルコ−ル類；酢酸等をあげることができるが、好適には、アルコール類（特に、エタノール）である。
【０２４０】
使用される還元剤としては、例えば、水素化ホウ素リチウムのような水素化ホウ素アルカリ金属；水素化アルミニウムリチウム、水素化リチウムトリエトキシドアルミニウムのような水素化アルミニウム化合物；ボラン等をあげることができるが、好適には、ボランあるいは水素化アルミニウムリチウムである。
【０２４１】
反応温度は、使用される原料化合物、溶剤、還元剤により異なるが、通常、０℃乃至５０℃であり、好適には、１０乃至４０℃である。
【０２４２】
反応時間は、使用される原料化合物、溶剤、還元剤、反応温度により異なるが、通常、１０分乃至１２時間であり、好適には、３０分乃至５時間である。
【０２４３】
反応終了後、本反応の目的化合物(３ｂ)は、例えば、還元剤を分解し、反応混合物を濃縮し、水と酢酸エチルのような混和しない有機溶媒を加え、水洗後、目的化合物を含む有機層を分離し、無水硫酸マグネシウム等で乾燥後、溶剤を留去することで得られる。
【０２４４】
得られた化合物は、必要ならば、常法、例えば、再結晶、シリカゲルカラムクロマトグラフィー等によって更に精製できる。
（ｂ）Ｒ¹²とＲ¹³とが水素の場合でＲ¹¹がベンジル基以外の場合
Ｒ¹¹がシリル基の場合には、Ａ−５工程の（３）の方法に準じて実施することができる。
【０２４５】
Ｒ¹¹がフェネチル基のようなアラルキル基；メトキシメチル基のようなアルコキシアルキル基；ベンジルオキシメチル基のようなベンジルオキシメチル基又はベンジルオキシメチル基のようなアラルキルオキシメチル基；メトキシエトキシメチル基のようなアルコキシアルコキシアルキル基等の場合には、酸触媒を用い、その場合に使用される酸触媒としてはｐ−トルエンスルホン酸、トリフルオロ酢酸、ジクロロ酢酸のような有機酸、BF₃、AlCl₃のようなルイス酸をあげることが出来る。
【０２４６】
使用される溶剤としては、例えば、ベンゼン、トルエン、キシレンのような芳香族炭化水素類；メチレンクロリド、クロロホルム、四塩化炭素、１，２−ジクロロエタン、クロロベンゼン、ジクロロベンゼンのようなハロゲン化炭化水素類；アセトニトリル、イソブチロニトリルのようなニトリル類；ホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチル−２−ピロリドン、Ｎ−メチルピロリジノン、ヘキサメチルホスホロトリアミドのようなアミド類；硫化炭素等をあげることが出来る。
【０２４７】
反応温度は、使用される原料化合物、溶剤、酸触媒により異なるが、通常、０℃乃至５０℃であり、好適には、１０乃至４０℃である。
【０２４８】
反応時間は、使用される原料化合物、溶剤、酸触媒、反応温度により異なるが、通常、１０分乃至１２時間であり、好適には、３０分乃至５時間である。
【０２４９】
反応終了後、本反応の目的化合物(３ｂ)は、例えば、反応混合物を中和し、水と酢酸エチルのような混和しない有機溶媒を加え、水洗後、目的化合物を含む有機層を分離し、無水硫酸マグネシウム等で乾燥後、溶剤を留去することで得られる。
【０２５０】
得られた化合物は、必要ならば、常法、例えば、再結晶、シリカゲルカラムクロマトグラフィー等によって更に精製できる。
【０２５１】
本発明の化合物（１）を用い、以下に述べるF法により、修飾ヌクレオシドを含むオリゴヌクレオチド又はそのチオエート誘導体を製造することができる。
【０２５２】
【化１７】

【０２５３】
F法中、Ａは、前述と同意義を示し、Ｒ¹³は、水酸基の保護基（特に、メトキシ基で置換されていてもよいトリチル基）を示し、Ｒ¹⁴は、ホスホニル基、後述するモノ置換−クロロ（アルコキシ）ホスフィン類又はジ置換−アルコキシホスフィン類を反応することにより形成される基を示す。
（F法）
（F−１工程）
本工程は、不活性溶剤中、Ａ法で製造される化合物（１ｃ）に、保護化試薬を反応させて、化合物（20）を製造する工程である。
【０２５４】
使用される溶剤としては、好適には、ベンゼン、トルエン、キシレンのような芳香族炭化水素類；メチレンクロリド、クロロホルム、四塩化炭素、ジクロロエタン、クロロベンゼン、ジクロロベンゼンのようなハロゲン化炭化水素類；蟻酸エチル、酢酸エチル、酢酸プロピル、酢酸ブチル、炭酸ジエチルのようなエステル類；ジエチルエ−テル、ジイソプロピルエ−テル、テトラヒドロフラン、ジオキサン、ジメトキシエタン、ジエチレングリコールジメチルエーテルのようなエ−テル類；アセトン、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトン、イソホロン、シクロヘキサノンのようなケトン類；ニトロエタン、ニトロベンゼンのようなニトロ化合物類；アセトニトリル、イソブチロニトリルのようなニトリル類；ホルムアミド、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルアセトアミド、ヘキサメチルホスホロトリアミドのようなアミド類；ジメチルスルホキシド、スルホランのようなスルホキシド類；トリメチルアミン、トリエチルアミン、Ｎ−メチルモルホリン等の脂肪族三級アミン類；ピリジン、ピコリンのような芳香族アミンなどがあげられ、さらに好適には、ハロゲン化炭化水素類（特にメチレンクロリド）、芳香族アミン（特にピリジン）である。
使用される保護化試薬としては、５’位のみを選択的に保護でき、酸性、中性の条件下、除去できるものであれば、特に制限はないが、好適には、トリチルクロリド、モノメトキシトリチルクロリド、ジメトキシトリチルクロリドのようなトリアリールメチルハライド類又はジメトキシトリチル-O-トリフラートのようなトリアリールメタノールエーテルである。
保護化試薬としてトリアリールメチルハライド類を用いる場合には、通常、塩基を用いる。
その場合において、使用される塩基としては、ピリジン、ジメチルアミノピリジン、ピロリジノピリジン等の複素環アミン類、トリメチルアミン、トリエチルアミン等の脂肪族三級アミン類があげられ、好適には、ピリジン、ジメチルアミノピリジン、ピロリジノピリジンである。
【０２５５】
溶剤として、液状の塩基を用いる場合には、該塩基自体が脱酸剤として働くので、改めて塩基を加える必要はない。
【０２５６】
反応温度は、使用される原料、試薬、溶剤などにより通常０乃至１５０℃であり、好適には２０乃至１００℃である。また、反応時間は使用される原料、溶剤、反応温度などにより異なるが、通常１乃至１００時間であり、好適には、２乃至２４時間である。
【０２５７】
反応終了後、本反応の目的化合物(20)は、例えば、反応混合物を濃縮し、水と酢酸エチルのような混和しない有機溶媒を加え、水洗後、目的化合物を含む有機層を分離し、無水硫酸マグネシウム等で乾燥後、溶剤を留去することで得られる。
【０２５８】
得られた化合物は、必要ならば、常法、例えば、再結晶、シリカゲルカラムクロマトグラフィー等によって更に精製できる。
【０２５９】
なお、Ａ法における化合物（１ｂ）に対して本工程を行うことで、化合物（２０）の2’位水酸基がＯＺ基である化合物を代わりに得ることが出来る。これに対して（Ａ−６）工程を行うことで、化合物（２０）を得ることも出来る。
（F−２工程）
本工程は、不活性溶剤中、F−１工程で製造される化合物（20）に、アミダイト化に通常用いるモノ置換−クロロ（アルコキシ）ホスフィン類又はジ置換−アルコキシホスフィン類を反応させて、化合物（２１）を製造する工程である。
【０２６０】
使用される溶剤としては、反応に影響を与えないものであれば、特に限定はないが、好適には、テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル、ジオキサンのようなエーテル類；メチレンクロリド、クロロホルム、四塩化炭素、ジクロロエタン、クロロベンゼン、ジクロロベンゼンのようなハロゲン化炭化水素類が挙げられる。
【０２６１】
使用されるモノ置換−クロロ（アルコキシ）ホスフィン類としては、例えば、クロロ（モルホリノ）メトキシホスフィン、クロロ（モルホリノ）シアノエトキシホスフィン、クロロ（ジメチルアミノ）メトキシホスフィン、クロロ（ジメチルアミノ）シアノエトキシホスフィン、クロロ（ジイソプロピルアミノ）メトキシホスフィン、クロロ（ジイソプロピルアミノ）シアノエトキシホスフィンのようなホスフィン類があげられ、好適には、クロロ（モルホリノ）メトキシホスフィン、クロロ（モルホリノ）シアノエトキシホスフィン、クロロ（ジイソプロピルアミノ）メトキシホスフィン、クロロ（ジイソプロピルアミノ）シアノエトキシホスフィンである。
【０２６２】
モノ置換−クロロ（アルコキシ）ホスフィン類を用いる場合には、脱酸剤が使用され、その場合に、使用される脱酸剤としては、ピリジン、ジメチルアミノピリジンのような複素環アミン類、トリメチルアミン、トリエチルアミン、ジイソプロピルアミンのような脂肪族アミン類があげられるが、好適には、脂肪族アミン類（特にジイソプロピルアミン）である。
【０２６３】
使用されるジ置換−アルコキシホスフィン類としては、例えば、ビス（ジイソプロピルアミノ）シアノエトキシホスフィン、ビス（ジエチルアミノ）メタンスルホニルエトキシホスフィン、ビス（ジイソプロピルアミノ）（2,2,2-トリクロロエトキシ）ホスフィン、ビス（ジイソプロピルアミノ）（4-クロロフェニルメトキシ）ホスフィンのようなホスフィン類をあげることができ、好適には、ビス（ジイソプロピルアミノ）シアノエトキシホスフィンである。
【０２６４】
ジ置換−アルコキシホスフィン類を用いる場合には、酸が使用され、その場合に、使用される酸としては、好適には、テトラゾール、酢酸又はｐ−トルエンスルホン酸である。
【０２６５】
反応温度は、特に限定はないが、通常０乃至８０℃であり、好適には、室温である。
【０２６６】
反応時間は、使用する原料、試薬、温度等により異なるが、通常、５分乃至３０時間であり、好適には、室温で反応した場合、３０分乃至１０時間である。
【０２６７】
反応終了後、本反応の目的化合物(２１)は、目的化合物は、例えば、反応混合物を適宜中和し、又、不溶物が存在する場合には、濾過により除去した後、水と酢酸エチルのような混和しない有機溶媒を加え、水洗後、目的化合物を含む有機層を分離し、無水硫酸マグネシウム等で乾燥後、溶剤を留去することによって得られる。得られた目的化合物は必要ならば、常法、例えば、再結晶、再沈殿又はクロマトグラフィ−等によって更に精製できる。
【０２６８】
又は、本工程は、不活性溶剤中（好適には、メチレンクロリドのようなハロゲン化炭化水素類）、F−１で製造される化合物（20）に、トリス−（１，２，４−トリアゾリル）ホスファイトを反応した後、水を加えて、Ｈ−ホスホネート化して、化合物（21）を製造する工程である。
【０２６９】
反応温度は、特に限定はないが、通常−２０乃至１００℃であり、好適には、１０乃至４０℃である。
【０２７０】
反応時間は、使用する原料、試薬、温度等により異なるが、通常、５分から３０時間であり、好適には、室温で反応した場合、３０分である
反応終了後、本反応の目的化合物(21)は、例えば、反応混合物を適宜中和し、又、不溶物が存在する場合には、濾過により除去した後、水と酢酸エチルのような混和しない有機溶媒を加え、水洗後、目的化合物を含む有機層を分離し、無水硫酸マグネシウム等で乾燥後、溶剤を留去することによって得られる。得られた目的化合物は必要ならば、常法、例えば、再結晶、再沈殿又はクロマトグラフィ−等によって更に精製できる。
（F−３工程）
本工程は、少なくとも１つ以上のF−２で製造される化合物（２１）、及び、所望のヌクレオチド配列のオリゴヌクレオチド類縁体を製造するのに必要な市販のホスホロアミダイト試薬等を使用して、通常の方法により、ＤＮＡ自動合成機上、目的のオリゴヌクレオチド類縁体および２−５Ａ類縁体を製造する工程である。
【０２７１】
所望のヌクレオチド配列を持つオリゴヌクレオチド類縁体および２−５Ａ類縁体は、ＤＮＡ合成機、例えばパーキンエルマー社のホスホロアミダイト法によるモデル３９２などを用いて文献（Nucleic AcidsResearch, 12, 4539(1984)）記載の方法に準じて合成することが出来る。
【０２７２】
又、所望により、チオエート化する場合は、硫黄のほかテトラエチルチウラムジスルフィド（ＴＥＴＤ、アプライドバイオシステムズ社）、Beaucage試薬（ミリポア社）等の３価のリン酸に反応させてチオエートを形成する試薬を用い、文献（Tetarhedron Letters, 32, 3005(1991)、J. Am. Chem. Soc., 112, 1253(1990)）記載の方法に準じてチオエート誘導体を得る事が出来る。
【０２７３】
得られる粗製のオリゴヌクレオチド類縁体および２−５Ａ類縁体は、逆相クロマトカラムを使用して精製し、精製物の純度をＨＰＬＣで分析することにより確認することができる。
【０２７４】
得られるオリゴヌクレオチド類縁体の鎖長は、ヌクレオシド単位として、通常、２乃至５０個であり、好適には、１０乃至３０個である。
【０２７５】
又、所望のオリゴヌクレオチド類縁体および２−５Ａ類縁体の2’(3’)-末端ヌクレオシドが、修飾ヌクレオシドである場合は、以下に述べるＧ法で製造される、本ヌクレオシドがジカルボン酸を介してアルキル鎖を有する高分子化合物と結合した固相担体を用いることで、所望のオリゴヌクレオチド類縁体および２−５Ａ類縁体を合成することが出来る。
Ｇ法で用いられるＲ¹⁵は-(CH₂)h-基（hは２乃至８の整数である）を示し、Ｒ¹⁶は、水酸基、置換基を有していてもよいフェニルオキシ基、あるいはハロゲンで置換されていてもよいエチルオキシ基を示し、Ｒ¹⁷は酸素原子、硫黄原子又はＮＨ基を示し、ＨＲ¹⁷−Ｐ（丸囲み）は高分子化合物を表す。
（Ｇ法）
【０２７６】
【化１８】

【０２７７】
（Ｇ−１工程）
本工程は、不活性溶剤中、Ｆ法で製造される化合物（２０）に、ジカルボン酸無水物を反応させて、化合物（２１）を製造する工程である。
【０２７８】
使用される溶剤としては、反応を阻害せず、出発物質をある程度溶解するものであれば特に限定はないが、ベンゼン、トルエン、キシレンのような芳香族炭化水素類；メチレンクロリド、クロロホルムのようなハロゲン化炭化水素類；エーテル、テトラヒドロフラン、ジオキサン、ジメトキシエタンのようなエーテル類；ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミド、ヘキサメチルホスホロトリアミドのようなアミド類；ジメチルスルホキシドのようなスルホキシド類；アセトン、メチルエチルケトンのようなケトン類；ピリジンのような複素環アミン類又はアセトニトリルのようなニトリル類をあげることができ、好適には、塩化メチレンのようなハロゲン化炭化水素があげられる。
【０２７９】
使用される脱酸剤としては、ピリジン、ジメチルアミノピリジン、ピロリジノピリジンのようなピリジン類があげられるが、好適には、ジメチルアミノピリジンである。
【０２８０】
使用されるジカルボン酸無水物としては、炭素数３乃至１６個のα，ω−アルキルジカルボン酸の無水物であれば、特に限定はないが、好適にはコハク酸無水物である。
【０２８１】
反応温度と反応時間は使用される、酸無水物、脱酸剤等により異なるが、コハク酸無水物を用い、ジメチルアミノピリジンを脱酸剤として使用する場合には、室温で３０分である。
【０２８２】
反応終了後、目的の化合物は常法に従って、反応混合物から採取される。例えば、反応混合物を適宜中和し、又、不溶物が存在する場合には濾過により除去した後、水と酢酸エチルのような混和しない有機溶媒を加え、水洗後、目的化合物を含む有機層を分離し、無水硫酸マグネシウム等で乾燥後、溶剤を留去することによって得られる。得られた目的化合物は必要ならば、常法、例えば再結晶、再沈殿又はクロマトグラフィ−等によって更に精製できる。
（Ｇ−２工程）
本工程は、不活性溶剤中、遊離のカルボキシル基を有する化合物（２１）のカルボキシル基にエステル形成試薬を反応させた後、置換基を有していてもよいフェノールと反応させ、活性エステル（２２）を形成させる工程である。
【０２８３】
使用される溶剤としては、反応を阻害しないものであれば特に限定はないが、ベンゼン、トルエン、キシレンのような芳香族炭化水素類；メチレンクロリド、クロロホルム、四塩化炭素、ジクロロエタン、クロロベンゼン、ジクロロベンゼンのようなハロゲン化炭化水素類；蟻酸エチル、酢酸エチル、酢酸プロピル、酢酸ブチル、炭酸ジエチルのようなエステル類、アセトン、メチルエチルケトンメチルイソブチルケトン、イソホロン、シクロヘキサノンのようなケトン類；ニトロエタン、ニトロベンゼンのようなニトロ化合物類；アセトニトリル、イソブチロニトリルのようなニトリル類；ホルムアミド、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルアセトアミド、ヘキサメチルホスホロトリアミドのようなアミド類；ジメチルスルホキシド、スルホランのようなスルホキシド類があげられ、好適にはハロゲン化炭化水素類（特にメチレンクロリド）、アミド類（特にジメチルホルムアミド）である。
【０２８４】
使用されるフェノールとしては、活性エステルとして使用できるものであれば特に限定はないが、４−ニトロフェノール、２，４−ジニトロフェノール、２，４，５−トリクロルフェノール、２，３，４，５，６−ペンタクロロフェノール、２，３，５，６−テトラフルオロフェノールをあげることができるが、好適にはペンタクロロフェノールである。
【０２８５】
使用されるエステル形成試薬としては、例えば、Ｎ−ヒドロキシサクシイミド、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール、Ｎ−ヒドロキシ−５−ノルボルネン−２，３−ジカルボキシイミドのようなＮ−ヒドロキシ化合物類；１，１′−オキザリルジイミダゾール、Ｎ，Ｎ′−カルボニルジイミダゾールのようなジイミダゾール化合物類；２，２′−ジピリジルジサルファイドのようなジサルファイド化合物類；Ｎ，Ｎ′−ジサクシンイミジルカーボネートのようなコハク酸化合物類；Ｎ，Ｎ′−ビス（２−オキソ−３−オキサゾリジニル）ホスフィニッククロライドのようなホスフィニッククロライド化合物類；Ｎ，Ｎ′−ジサクシンイミジルオキザレート（ＤＳＯ）、Ｎ，Ｎ−ジフタールイミジルオキザレート（ＤＰＯ）、Ｎ，Ｎ′−ビス（ノルボルネニルサクシンイミジル）オキザレート（ＢＮＯ）、１，１′−ビス（ベンゾトリアゾリル）オキザレート（ＢＢＴＯ）、１，１′−ビス（６−クロロベンゾトリアゾリル）オキザレート（ＢＣＴＯ）、１，１′−ビス（６−トリフルオロメチルベンゾトリアゾリル）オキザレート（ＢＴＢＯ）のようなオキザレート化合物類、ジシクロヘキシルカーボジイミド（ＤＣＣ）などのカーボジイミド類があげられ、好適にはジイミダゾール化合物類、カーボジイミド類（特に、ＤＣＣ）である。
【０２８６】
反応温度及び反応時間は、使用されるエステル形成試薬及び溶剤の種類によって異なるが、０℃乃至１００℃で５乃至５０時間、特にペンタクロルフェノールとＤＣＣをＤＭＦ中で使用する場合には室温で１８時間である。
【０２８７】
反応終了後、目的の化合物は常法に従って、反応混合物から採取される。例えば、反応混合物を適宜中和し、又、不溶物が存在する場合には濾過により除去した後、水と酢酸エチルのような混和しない有機溶媒を加え、水洗後、目的化合物を含む有機層を分離し、無水硫酸マグネシウム等で乾燥後、溶剤を留去することによって得られる。得られた目的化合物は必要ならば、常法、例えば再結晶、再沈殿又はクロマトグラフィ−等によって更に精製できる。
（第Ｇ−３工程）
本工程は、不活性溶剤中、第５工程で得られる活性化されたカルボキシル基をする化合物（２２）をアルキレン基を介してアミノ基、水酸基、スルフヒドリル基等の結合したコントロールポアグラス（ＣＰＧ）のような高分子物質（２３）に反応させて、オリゴヌクレオチド合成のための担体として使用できる高分子誘導体（２４）を得る工程である。
【０２８８】
本工程に使用される高分子物質（２３）は、一般に担体として使用されるものであれば、特に限定はないが、担体の、粒子の大きさ、三次元網目構造による表面積の広さ、親水基部位の比率、化学組成、圧力に対する強度等について検討する必要がある。
【０２８９】
使用される担体としては、セルロース、デキストラン、アガロ−スのような多糖類誘導体、ポリアクリルアミドゲル、ポリスチレンジュシ、ポリエチレングリコールのような合成高分子、シリカゲル、多孔性ガラス、金属酸化物のような無機物質等を挙げることができ、具体的には、アミノプロピル−ＣＰＧ、長鎖アミノアルキル−ＣＰＧ（以上、ＣＰＧ Inc. 製）、コスモシールＮＨ2 、コスモシールＤｉｏｌ（以上、ナカライテスク社製）、ＣＰＣ−Silica Carrier SilaneCoated、アミノプロピル−ＣＰＧ−５５０Å、アミノプロピル−ＣＰＧ−１４００Å、ポリエチレン グリコール ５０００ モノメチルエーテル（以上、Ｆｕｒｕｋａ社製）、ｐ−アルコキシベンジル アルコール レジン、アミノメチルレジン、ヒドロキシメチル レジン（以上、国産化学社製）、ポリエチレングリコール １４０００ モノメチルエーテル（以上、ユニオン カーバイド社製）のような市販の担体を挙げることができるが、これらに限定されるものではない。
【０２９０】
また、担体に結合した官能基としては、好適には、アミノ基、スルフヒドリル基、水酸基を挙げることができる。
【０２９１】
本工程に使用される溶剤としては反応を阻害せず、出発物質をある程度溶解するものであれば特に限定はないが、好適には、ベンゼン、トルエン、キシレンのような芳香族炭化水素類；メチレンクロリド、クロロホルム、四塩化炭素、ジクロロエタン、クロロベンゼン、ジクロロベンゼンのようなハロゲン化炭化水素類；蟻酸エチル、酢酸エチル、酢酸プロピル、酢酸ブチル、炭酸ジエチルのようなエステル類、アセトン、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトン、イソホロン、シクロヘキサノンのようなケトン類；ニトロエタン、ニトロベンゼンのようなニトロ化合物類；アセトニトリル、イソブチロニトリルのようなニトリル類；ホルムアミド、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルアセトアミド、ヘキサメチルホスホロトリアミドのようなアミド類；ジメチルスルホキシド、スルホランのようなスルホキシド類があげられ、好適にはハロゲン化炭化水素類（特にメチレンクロリド）、アミド類（特にジメチルホルムアミド）である。反応温度は通常−２０乃至１５０℃であり、好適には０乃至５０℃である。反応時間は使用される原料、溶剤、反応温度などにより異なるが、通常１乃至２００時間であり、好適には、２４乃至１００時間である。反応終了後、目的の化合物は常法に従って、反応混合物から採取される。例えば、反応混合物中から、濾過により高分子担体を回収し、メチレンクロリドのような有機溶媒で洗浄後、減圧下乾燥することによって得られる。
【０２９２】
得られたオリゴヌクレオチド類縁体の相補鎖形成能及びヌクレアーゼ酵素耐性は、以下の方法に従い、調べることができる。
（試験方法１）
得られた種々のオリゴヌクレオチド類縁体と、相補的な配列を有する天然のＤＮＡあるいはＲＮＡからなるオリゴヌクレオチドとをアニーリング処理し、融解温度（Ｔｍ値）を測定することにより、本発明のオリゴヌクレオチド類縁体の相補ＤＮＡおよびＲＮＡに対するハイブリッド形成能を調べる。
【０２９３】
リン酸ナトリウム緩衝液オリゴヌクレオチド類縁体と天然型相補オリゴヌクレオチドを同量加えたサンプル溶液を、沸騰水中に浴し、時間をかけてゆっくり室温まで冷却する（アニーリング）。分光光度計（例えば、島津 UV-2100PC）のセル室内で、サンプル溶液を２０℃から９０℃まで温度を少しずつ上昇させ、２６０ｎｍにおける紫外線吸収を測定する。
（試験方法２）ヌクレアーゼ酵素耐性の測定
オリゴヌクレオチドを緩衝液中にて、ヌクレアーゼを加えて加温する。ヌクレアーゼとしては、蛇毒ホスホジエステラーゼ、エンドヌクレアーゼＰ１、エンドヌクレアーゼＳ１等が用いられる。緩衝液としては、酵素に適する緩衝液であれば制限はないが、蛇毒ホスホジエステラーゼの場合トリス‐塩酸緩衝液、エンドヌクレアーゼＰ１の場合酢酸ナトリウムバッファー等が使用される。また必要に応じて緩衝液に金属イオンを加える。金属イオンとしては、蛇毒ホスホジエステラーゼの場合Ｍｇ²⁺、エンドヌクレアーゼの場合Ｚｎ²⁺等が用いられる。反応温度は０〜１００℃が好適であり、さらに３０〜５０℃が好適である。
【０２９４】
一定時間後、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）を加え、１００℃で２分間加熱することにより、反応を停止させる。
【０２９５】
オリゴヌクレオチドの残量の定量には、オリゴヌクレオチドをラジオアイソトープ等で標識し切断反応生成物をイメージアナライザー等で定量する方法、切断反応生成物を逆相高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）で定量する方法、切断反応生成物を色素（エチジウムブロマイド等）で染色し、コンピューターを用いた画像処理により定量する方法などが用いられる。
（試験方法３）RNaseLアゴニスト活性の測定
緩衝液中にて、２−５A誘導体、RNase Lおよび基質 RNAを加え、RNase Lによって切断されるRNA基質の量を測定することによって２−５A誘導体のRNaseLアゴニスト活性を測定することができる。文献（Dong, B. and Silverman, R.H. J. Biol. Chem. 1997, 272, 22236-22242）に従って調整することができる。また、5'末端に一リン酸を有した2'-5'トリアデニレートRNase Lは、天然型２−５AとしてRNaseLを活性化できることが知られている（Kitade, Y., Wakana, M., Tsuboi, T., Yatome, C., Bayly, S.F., Player, M.R., Torrence, P.F., Bioorg. Med. Chem. Lett., 2000, 10, 329-331）。一価および二価の金属イオン、ATPを含有する緩衝液中にて、本発明の２−５A誘導体、RNase LおよびRNA基質を加え反応させる。一価の金属イオンとしてはK⁺, Na⁺等が用いられ、二価の金属イオンとしてはMg²⁺,Ca²⁺, Mn²⁺, Pb²⁺等が用いられる。緩衝液としては、中性からアルカリ性で使用される緩衝液であれば制限はないが、トリス−塩酸緩衝液、グリシル−グリシン−水酸化ナトリウム緩衝液等が使用され得る。反応温度は、０〜１００℃が好適であり、さらに３０〜５０℃が好適である。
一定時間後、反応液中に反応停止液（尿素およびエチレンジアミン四酢酸、以下「EDTA」）を加えることにより反応を停止させる。
RNase Lにより切断されるRNA基質は、RNase Lの切断基質になるポリリボヌクレオチドであれば特に限定しないが、例えば、長さ５〜５０までの任意の配列を有する合成オリゴリボヌクレオチド、任意のトランスファーRNA(ｔRNA)、任意のリボソーマルRNA（ｒRNA）、任意のメッセンジャーRNA(ｍRNA)等を用いることが出来る。切断反応の定量には、RNA基質の5'末端をラジオアイソートープ等で標識し切断反応生成物をゲル電気泳動等で分離後イメージアナライザー等で定量する方法、切断反応生成物を逆相高速液体クロマトグラフィー（HPLC）で定量する方法、切断反応生成物をゲル電気泳動等で分離後、色素（エチジウムブロマイド、SYBR GREEN II RNA ゲルステイン（モレキュラープローブ社製）等）で染色し、コンピューターを用いた画像処理により定量する方法などが用いられる。
【０２９６】
本発明の一般式（２）で表される構造を１又は２以上含有するオリゴヌクレオチド類縁体の投与形態としては、例えば、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤若しくはシロップ剤等による経口投与又は注射剤若しくは坐剤等による非経口投与を示し、これらの製剤は、賦形剤（例えば、乳糖、白糖、葡萄糖、マンニトール、ソルビトールのような糖誘導体；トウモロコシデンプン、バレイショデンプン、α澱粉、デキストリンのような澱粉誘導体；結晶セルロースのようなセルロース誘導体；アラビアゴム；デキストラン；プルランのような有機系賦形剤：及び、軽質無水珪酸、合成珪酸アルミニウム、珪酸カルシウム、メタ珪酸アルミン酸マグネシウムのような珪酸塩誘導体；燐酸水素カルシウムのような燐酸塩；炭酸カルシウムのような炭酸塩；硫酸カルシウムのような硫酸塩等の無機系賦形剤を挙げることができる。）、滑沢剤（例えば、ステアリン酸、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウムのようなステアリン酸金属塩；タルク；コロイドシリカ；ビーガム、ゲイ蝋のようなワックス類；硼酸；アジピン酸；硫酸ナトリウムのような硫酸塩；グリコール；フマル酸；安息香酸ナトリウム；ＤＬロイシン；脂肪酸ナトリウム塩；ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリル硫酸マグネシウムのようなラウリル硫酸塩；無水珪酸、珪酸水和物のような珪酸類；及び、上記澱粉誘導体を挙げることができる。）、結合剤（例えば、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、マクロゴール、及び、前記賦形剤と同様の化合物を挙げることができる。）、崩壊剤（例えば、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシ基メチルセルロース、カルボキシ基メチルセルロースカルシウム、内部架橋カルボキシ基メチルセルロースナトリウムのようなセルロース誘導体；カルボキシ基メチルスターチ、カルボキシ基メチルスターチナトリウム、架橋ポリビニルピロリドンのような化学修飾されたデンプン・セルロース類を挙げることができる。）、安定剤（メチルパラベン、プロピルパラベンのようなパラオキシ安息香酸エステル類；クロロブタノール、ベンジルアルコール、フェニルエチルアルコールのようなアルコール類；塩化ベンザルコニウム；フェノール、クレゾールのようなフェノール類；チメロサール；デヒドロ酢酸；及び、ソルビン酸を挙げることができる。）、矯味矯臭剤（例えば、通常使用される、甘味料、酸味料、香料等を挙げることができる。）、希釈剤等の添加剤を用いて周知の方法で製造される。
【０２９７】
その使用量は症状、年齢、投与方法等により異なるが、例えば、経口投与の場合には、１回当り、下限として、0.01mg/kg 体重（好ましくは、0.1mg/kg 体重）、上限として、1000mg/kg 体重（好ましくは、100mg/kg 体重）を、静脈内投与の場合には、１回当り、下限として、0.001mg/kg 体重（好ましくは、0.01mg/kg 体重）、上限として、100mg/kg 体重（好ましくは、10mg/kg 体重）を１日当り１乃至数回症状に応じて投与することが望ましい。
以下、実施例、参考例及び試験例をあげて、本発明をさらに詳しく説明する。
【０２９８】
【実施例】
（実施例１）
2'- Ｏ - アセチル -5'- Ｏ - ｔ−ブチルジフェニルシリル -3'- Ｏ ,4'- Ｃ - エチレン−５−メチルウリジン（例示化合物番号2-29）
参考例６で得られた2'-Ｏ-アセチル-3'-Ｏ-ベンジル-4'-ｐ-トルエンスルホニルオキシエチル-5'-O-ｔ-ブチルジフェニルシリル-５-メチルウリジン（１２０ｍｇ、０．１４５mmol）をメタノール（１０ml）に溶解し、２０％水酸化パラジウム-炭素を１００ｍｇ加え、得られた反応液を、水素雰囲気下、常圧で2日間攪拌した。触媒を濾過し、濾液の溶媒を減圧下留去後、得られた残渣を、シリカゲルクロマトグラフィーにより精製し（ジクロロメタン：メタノール＝４０：１）、無色アモルファス状物質（７０ｍｇ、０．１２４mmol，収率８５％）を得た。¹H-NMR (400MHz, CDCl₃) : 1.14(9H, s), 1.43(3H, s), 1.91(1H, dt, 8.0 and 13Hz), 2.08(1H, ddd, 4.8, 6.3 and 13Hz), 2.16(3H, s), 3.72(1H, d, 11Hz),3.97(1H, dt, 4.8 and 8Hz), 4.11(1H, m), 4.13(1H, d, 11Hz), 4.64(1H, d, 5.0Hz), 5.28(1H, dd, 5.0 and 8.4Hz), 6.33(1H, d, 8.4Hz), 7.4-7.7(10H, m),
8.01(1H, s).
FABMS(mNBA)：549[M+H]⁺
（実施例２）
5'- Ｏ - ｔブチルジフェニルシリル -3'- Ｏ ,4'- Ｃ - エチレン−５−メチルウリジン（例示化合物番号2-31）
少量の水に炭酸カリウムを１０ｍｇ溶かし、メタノール１０mlを加え、さらに実施例１で得られた2'-Ｏ-アセチル-5'-Ｏ-ｔ−ブチルジフェニルシリル-3'-Ｏ,4'-Ｃ-エチレン−５−メチルウリジン（７０ｍｇ、０．１２４mmol）を溶解し、３時間放置した。反応終了後、水及び酢酸エチルを加え、分液し、有機層を水、飽和食塩水で洗い、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。減圧下、溶媒を留去し、無色固体（４３ｍｇ、０．１０mmol，収率８１％）を得た。
¹H-NMR (400MHz, CDCl₃) : 1.11(9H, s), 1.47(3H, d, 1.5Hz), 1.95(1H, dt, 8.4 and 13.3Hz), 2.10(1H, ddd, 4.4, 6.3 and 13.3Hz), 2.93(1H, d, 10Hz), 3.71(1H, d, 11Hz), 4.06(2H, m), 4.08(1H, d, 11Hz), 4.28(1H, m), 4.44(1H, d, 5.2Hz), 6.01(1H, d, 7.9Hz), 7.4-7.7(10H, m), 8.23(1H, s).FABMS(mNBA)：523[M+H]⁺
（実施例３）
3'- Ｏ ,4'- Ｃ - エチレン−５−メチルウリジン（例示化合物番号2-2）
窒素気流下、実施例２で得られた5'-Ｏ-ｔブチルジフェニルシリル-3'-Ｏ,4'-Ｃ-エチレン−５−メチルウリジン（１９ｍｇ、０．０３６３mmol）を無水テトラヒドロフラン（２ml）に溶解し、そこへ１．０Ｍ−テトラブチルアンモニウムフロリド／テトラヒドロフラン溶液（０．０５ml、０．０５mmol）を加え、９０分室温で撹拌した。反応終了後、メタノール０．５mlを加え、溶媒を留去し、得られた残渣を、シリカゲルクロマトグラフィーにより精製し（ジクロロメタン：メタノール＝１２：１）、無色固体（７ｍｇ、０．０２４６mmol，収率６８％）を得た。
¹H-NMR (400MHz, CD₃OD) : 1.89(3H, s), 2.03(2H, t, 6.9Hz), 3.69(1H, d, 12Hz), 3.85(1H, d, 12Hz), 4.02(2H, t, 6.9Hz), 4.26(1H, d, 4.9Hz), 4.31(1H,dd, 4.9 and 7.9Hz), 5.97(1H, d, 7.9Hz), 7.88(1H, s).FABMS(mNBA)：285[M+H]⁺
（実施例４）
2'- Ｏ - アセチル -5'- Ｏ - ｔ−ブチルジフェニルシリル -3'- Ｏ ,4'- Ｃ - エチレン -6- Ｎ - ベンゾイルアデノシン（例示化合物番号1-37）
参考例７で得られた2'-Ｏ-アセチル-3'-Ｏ-ベンジル-4'-ｐ-トルエンスルホニルオキシエチル-5'-O-t-ブチルジフェニルシリル-6-Ｎ-ベンゾイルアデノシン（６８ｍｇ、０．０７２３mmol）をメタノール（１０ml）に溶解し、２０％水酸化パラジウム-炭素を２０ｍｇ加え、得られた反応液を、水素雰囲気下、５０気圧で2日間攪拌した。触媒を濾過し、濾液の溶媒を減圧下留去後、得られた残渣を、シリカゲルクロマトグラフィーにより精製し（ジクロロメタン：メタノール＝１６：１）、無色アモルファス状物質（１１ｍｇ、０．０１６２mmol，収率２１％）を得た。
¹H-NMR (400MHz, CDCl₃) : 1.12(9H, s), 2.09(3H, s), 2.16(2H, m), 3.78(1H,d, 11Hz), 4.05(1H, dt, 5.0, 8.7Hz), 4.15(1H, d, 11Hz), 4.17(1H, m), 4.73(1H, d, 4.8Hz), 5.82(1H, dd, 4.8 and 8.0Hz), 6.36(1H, 8.0Hz), 7.35-7.70(13H, m), 8.02(2H, d, 7.4Hz), 8.22(1H, s), 8.72(1H, s), 9.03(1H, s).FABMS(mNBA)：678[M+H]⁺
（実施例５）
2'- Ｏ - アセチル -3'- Ｏ ,4'- Ｃ - エチレン -6- Ｎ - ベンゾイルアデノシン（例示化合物番号1-209）
実施例４で得られた2'-Ｏ-アセチル-5'-Ｏ-ｔ−ブチルジフェニルシリル-3'-Ｏ,4'-Ｃ-エチレン-6-Ｎ-ベンゾイルアデノシン（１１ｍｇ、０．０１６２mmol）を無水テトラヒドロフラン（２ml）に溶解し、そこへ１．０Ｍ−テトラブチルアンモニウムフロリド／テトラヒドロフラン溶液（０．０３ml、０．０３mmol）を加え、９０分室温で撹拌した。メタノール２mlを加え、溶媒を留去し、得られた残渣を、シリカゲルクロマトグラフィーにより精製し（ジクロロメタン：メタノール＝１２：１）、無色固体（７ｍｇ、０．０１５９mmol，収率９８％）を得た。
¹H-NMR (400MHz, CDCl₃) : 2.09(3H, s), 2.10(1H, m), 2.22(1H, ddd, 4.7, 6.5 and 13Hz), 3.74(1H, t, 11Hz), 4.10-4.20(3H, m), 4.83(1H, d, 4.6Hz), 5.85(1H, dd, 4.6 and 8.1Hz), 6.07(1H, d, 8.1Hz), 6.36(1, d, 11Hz), 7.56(2H, t, 7.5Hz), 7.65(1H, t, 7.5Hz), 8.05(2H, 7.5Hz), 8.82(1H, s), 9.04(1H, s).
FABMS(mNBA)：440[M+H]⁺
（実施例６）
3'- Ｏ ,4'- Ｃ - エチレンアデノシン（例示化合物番号1-7）
実施例５で得られた2'-Ｏ-アセチル-3'-Ｏ,4'-Ｃ-エチレン-6-Ｎ-ベンゾイルアデノシン(7mg、0.0159mmol)を飽和アンモニア／メタノール溶液(5ml)に溶解し、一晩放置した。
【０２９９】
反応終了後、溶媒を減圧下留去し、得られた残渣をシリカゲルクロマトグラフィーにより精製し（ジクロロメタン：メタノール＝７：１）、白色粉末（約５ｍｇ、定量的収率）を得た。
【０３００】
¹H-NMR (400MHz, CD₃OD) : 2.12(2H, t, 5.8Hz), 3.75(1H, d, 12Hz), 3.94(1H, d, 12Hz), 4.04(2H, m), 4.39(1H, d, 4.4Hz), 4.78(1H, dd, 4.4 and 8.0Hz), 6.03(1H, d, 8.0Hz), 8.44(1H, s), 8.58(1H, s).FABMS(mNBA)：294[M+H]⁺
（実施例７）
2 ’ , 5'- ジアセトキシ‐ 3'- Ｏ ,4'- Ｃ - エチレン -6- Ｎ - ベンゾイルアデノシン（例示化合物番号１−３２）
窒素気流下、室温で参考例１６で得られた２，３−ジアセトキシ−６ａ−アセトキシメチル−ヘキサヒドロ−フロ[３，２‐ｄ]フラン（１．８８ｇ、６．２２mmol）を無水１，２−ジクロロエタン（１００ml）に溶解し、そこに、前記の文献（H. Vorbueggen,K.Krolikiewicz and B,Bennua, Chem.Ber.,114,1234-1255(1981)）に従って調製したトリメチルシリル化ベンゾイルアデニン（４．６０ｇ、約１２mmol）を加えた。さらに、そこへ、トリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリル（１．０ml、５．５mmol）を滴下し、８時間加熱還流した。
【０３０１】
反応終了後、反応液に炭酸水素ナトリウム飽和水溶液（約１００ml）を加え、セライトを用いてろ過し、濾液にジクロロメタン（約１００ml）を加え、有機層を炭酸水素ナトリウム飽和水溶液（約１００ml）、次いで飽和食塩水（約１００ml）で洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。減圧下、溶媒を留去後、得られた残渣をシリカゲルクロマトグラフィーにより精製し（ジクロロメタン：メタノール＝１００：８）、無色アモルファス状の目的物（２．５２ｇ、５．２３mmol、収率８４％）を得た。
【０３０２】
¹H-NMR (400MHz, CDCl₃) : 2.09(3H, s), 2.18(3H, s), 2.19(1H, m), 2,30(1H, ddd, 4.1, 6.2 and 13Hz), 4.15(2H, m), 4.43(1H, d, 12Hz), 4.48(1H, d, 12Hz), 4.70(1H, d, 4.9Hz), 5.81(1H, dd, 4.9 and 7.9Hz), 6.33(1H, d, 7.9Hz), 7.52-7.64(3H, m), 8.03(2H, m), 8.23(1H, s), 8.81(1H, s), 8.95(1H, brs).
FABMS(mNBA)：482[M+H]⁺.
（実施例８）
3'- Ｏ ,4'- Ｃ - エチレン -6- Ｎ - ベンゾイルアデノシン（例示化合物番号１−１７８）
実施例７で得られた2’, 5'-Ｏ-ジアセトキシ‐3'-Ｏ,4'-Ｃ-エチレン-6-Ｎ-ベンゾイルアデノシン（１．３９ｇ、２．８９mmol）をピリジン１５mlに溶かし、１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液６mlを加え、２０分間室温で撹拌した。反応終了後、０．１Ｎ酢酸水で反応液を中和し、溶媒を留去した。得られた残渣をそのまま、シリカゲルクロマトグラフィーを用いて精製し（ジクロロメタン：メタノール＝１０：１）、無色アモルファス状の目的物（８８９ｍｇ、２．２４mmol、収率７７％）を得た。
【０３０３】
¹H-NMR (400MHz, MeOD) : 2.14(2H, m), 3.31(2H,m), 3.76(1H, d, 12Hz), 3.99(1H, d, 12Hz), 4.12(2H, m), 4.42(1H, 4.7Hz), 4.92(1H, dd, 4.7 and 8.0Hz), 6.09(1H, d, 8.0Hz), 7.54-7.68(3H, m), 8.08(2H, d, 7.2Hz), 8.63(1H, s), 8.70(1H, s).
FABMS(mNBA)：398[M+H]⁺.
（実施例９）
5'- Ｏ - ジメトキシトリチル‐ 3'- Ｏ ,4'- Ｃ - エチレン -6- Ｎ - ベンゾイルアデノシン（例示化合物番号１−３１）
実施例８で得られた3'-Ｏ,4'-Ｃ-エチレン-6-Ｎ-ベンゾイルアデノシン（１．８９ｇ、４．７６mmol）を無水ピリジンで共沸脱水後、窒素気流下、無水ピリジン（２０ml）に溶解した．これに４,４’−ジメトキシトリチルトリフルオロメタンスルホン酸（２．７ｇ、６．０mmol）を添加し、１００℃、５時間加熱した。
反応溶液に少量のメタノール（約３ml）を加えた後、溶媒を減圧下濃縮し、水（約５０ml）を加え，クロロホルム（約100ml）で抽出した。有機層を炭酸水素ナトリウム飽和水溶液（約50ml×２）、飽和食塩水（約50ml）で洗浄後、溶媒を減圧下濃縮し、得られた残渣を、シリカゲルクロマトグラフィーを用いて精製し（ジクロロメタン：メタノール＝１００：１０）、無色アモルファス状の目的物（900mg、1.28mmol、収率２７％）を得た。
【０３０４】
¹H-NMR (400MHz, CDCl₃) : 2.08(1H, dt, 8.8 and 13Hz), 2.19(1H, dt, 5.0 and 13Hz), 3.30(1H, d, 10Hz), 3.59(1H, d, 10Hz), 3.76(3H, s), 3.77(3H, s), 4.08(2H, m), 4.25(1H, brs), 4.50(1H, d, 5.0Hz), 5.02(1H, brd, 5.0Hz),6.06(1H, d, 7.2Hz), 6.79(4H, d, 8.7Hz), 7.2-7.6(12H, m),8.03(2H, d, 7.4Hz), 8.25(1H, s), 8.77(1H, s), 9.19(1H, s).FABMS(mNBA)：700[M+H]⁺
（実施例１０）
5'- Ｏ - ジメトキシトリチル‐ 3'- Ｏ ,4'- Ｃ - エチレン -6- Ｎ - ベンゾイルアデノシン‐ 2'- Ｏ‐（ 2 ‐シアノエチル Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルホスホロアミダイト）（例示化合物番号1−１８６）
実施例９で得られた5'-Ｏ-ジメトキシトリチル‐3'-Ｏ,4'-Ｃ-エチレン-6-Ｎ-ベンゾイルアデノシン（８２０ｍｇ、１．１７mmol）を無水ピリジンで共沸脱水した後、窒素気流下、無水ジクロロメタン(２０ml)に溶解し、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミンテトラゾール塩（３４０ｍｇ，２．０mmol）、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトライソプロピル− ２−シアノエチルホスホロアミダイト（６３５μｌ，２．０mmol）を加え、４５℃で５時間攪拌した。反応溶液を炭酸水素ナトリウム飽和水溶液（１０ml）、飽和食塩水（１０ml）で洗浄後、溶媒を減圧下濃縮し、得られた残渣を、シリカゲルクロマトグラフィーを用いて精製し（ジクロロメタン：酢酸エチル＝４：１）、無色アモルファス状の目的物（８３５ｍｇ、０．９２７mmol、収率８０％）を得た。
【０３０５】
¹ H-NMR(400MHz, CDCl₃) : 0.7-1.2(12H, m), 1.26(1H, m), 2.16(1H, m), 2.38(2H, m), 3.5-3.7(6H, m), 3.78(3H, s), 3.79(3H, s), 3.8-4.2(3H, m), 4.5(1H, d, 4.7Hz), 6.2(1H, d, 7.9Hz), 6.82(4H, m), 7.2-7.6(12H, m), 8.02(2H, m), 8.18(1H, s), 8.68(1H, s), 9.03(1H, brs).
（実施例１１）
（オリゴヌクレオチド類縁体の合成）
核酸合成機（PE Biosystems社製 ABI model392 DNA/RNA synthesiser）を用い、1.0μmolスケールで行った。各合成サイクルにおける溶媒、試薬、ホスホロアミダイトの濃度は天然オリゴヌクレオチド合成の場合と同じであり、溶媒、試薬、天然型ヌクレオシドのホスホロアミダイトは全てPE Biosystems社製のものを用いた。3’−の水酸基がCPG支持体に結合した5’−Ｏ−ＤＭＴｒ−チミジン（1.0μmol）のＤＭＴｒ基をトリクロロ酢酸によって脱保護し、その5’−水酸基に天然ヌクレオチド合成用のアミダイト及び実施例10の化合物を用いて縮合反応を繰り返し行い、それぞれの配列の修飾オリゴヌクレオチド類縁体を合成した。合成サイクルは以下の通りである。
合成サイクル
1) detritylation トリクロロ酢酸/ジクロロメタン；85sec
2) coupling ホスホロアミダイト(25eq)、テトラゾール/アセトニトリル；25secor 10min
3) capping 1-メチルイミダゾール/テトラヒドロフラン、無水酢酸/ピリジン/テトラヒドロフラン；15sec
4) oxidation ヨウ素/水/ピリジン/テトラヒドロフラン；15sec
上記において、サイクル2)で実施例１０の化合物を用いて反応を行う場合は、10分間反応を行い、その他のホスホロアミダイトを用いる場合は25秒間反応を行った。
【０３０６】
目的配列を有するオリゴヌクレオチド合成し、合成サイクルの１）まで行い5'−DMTｒ基を脱保護した後は、常法に従い、濃アンモニア水処理によってオリゴマーを支持体から切り出すとともに、リン原子上の保護基シアノエチル基をはずし、さらに核酸塩基上の保護基をはずした。
【０３０７】
得られた天然型オリゴヌクレオチド、及び修飾オリゴヌクレオチド類縁体は、逆相HPLCで精製を行い、目的のオリゴヌクレオチドを得た。
【０３０８】
本合成法に従い、以下の配列:
５’−ttttttttttnt−３’（配列表の配列番号 １）
で示される配列を有し、塩基番号１１のアデノシンの糖部分が3'-Ｏ,4'-Ｃ-エチレンアデノシンであるオリゴヌクレオチド類縁体（以下「オリゴヌクレオチド（1)」とする。）を得た（収量0.55μmol（ 55% yield））。
【０３０９】
なお、オリゴヌクレオチド類縁体の収量(mol)は、260nmにおける吸光度（A260）を測定し、「Handbook of Biochemistry and Molecular Biology, 3rd Edition, Nucleic Acids-Volume 1」(CRC press)のP589に記載の計算法により算出されたモル吸光率を用いて、Lambert-Beerの法則から求めた。また収量（重量）は収量(mol)に分子量を掛け合わせることで計算的に求めた。（以下、オリゴヌクレオチド類縁体、2−5A類縁体の収量は同様の方法により求めた。）
得られた修飾オリゴヌクレオチド類縁体の精製は、逆相HPLC（HPLC：島津製作所製LC−VP；カラム： GLサイエンス Inertsil Prep-ODS(20×250mm)；0.1M酢酸トリエチルアミン水溶液(TEAA), pH7；10→60%CH₃CN / 30min, linear gradient；40℃；10ml/min；254nm）にて行い、29.6分に溶出する分画を集めた。本化合物はHPLC(和光純薬Wakosil DNA(4.6×150mm), 0.1M TEAA, pH7, 10→50% CH₃CN /20min, linear gradient, 60℃, 1ml/min)で分析すると16.58分に溶出された。
（λmax = 263nm）
（実施例１２）
2 ’ - アセトキシ -3 ’ -O,4 ’ -C- プロピレン -5 ’ -O- tert- ブチルジフェニルシラニル -6N- ベンゾイル - アデノシン
参考例２２で得られた2-アセトキシ-7a-(tert-ブチルジフェニルシラニルオキシメチル)-ヘキサヒドロ-フロ[3,2-b]ピラン-3-イル-酢酸エステルをトルエン共沸脱水後、窒素気流下、無水トルエン（１００ｍｌ）に溶かし、そこに前記の文献（H.Vorbrueggen,K.Krolikiewicz and B,Bennua,Chem.Ber.,114,1234-1255(1981)）に従って調製したトリメチルシリル化ベンゾイルアデニン（約６．９ｇ、約１８mmol）、トリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリル（２．７ml、１５mmol）を加え、１１０℃で２時間加熱還流した。反応終了後、反応液に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（約１００ｍｌ）を加え、析出物をセライトろ過した。ろ液にジクロロメタン（２００ｍｌ）を加え、有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（約２００ｍｌ）、飽和食塩水（約２００ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。溶媒を減圧下留去した後、得られた残渣を、シリカゲルクロマトグラフィーを用いて精製し（ジクロロメタン：メタノール＝５０：１）、無色アモルファス状の目的物（４．７６ｇ、６．８７mmol、収率８１％）を得た。
【０３１０】
¹H-NMR (400MHz, CDCl₃) : 1.11(9H, s), 1.60(1H, m), 1.82(1H, m), 1.94(1H, m), 2.07(1H, m), 2.08(3H, s), 3.41(1H, dt, 2.2 and 11Hz), 3.51(1H, d,11Hz), 4.06(1H, m), 4.29(1H, d, 11Hz), 4.58(1H, d, 2.9Hz), 6.41(2H, m),7.3-8.1(15H, m), 8.05(1H, s), 8.41(1H, s), 8.94(1H, s). FABMS(mNBA)： 692[M+H]⁺
（実施例１３）
2 ’ - アセトキシ -3 ’ -O,4 ’ -C- プロピレン -6N- ベンゾイル - アデノシン
実施例１２で得られた2’-アセトキシ-3’-O,4’-C-プロピレン-5’-O-tert-ブチルジフェニルシラニル-6N-ベンゾイル-アデノシン（４．６８ｇ、６．７５ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（１００ｍｌ）に溶かし、tert-ブチルアンモニウムフロリド−テトラヒドロフラン溶液（１．０Ｍ）（１ｍｌ，１ｍｍｏｌ）を加え、室温で５時間撹拌した。反応終了後、反応液にジクロロメタン（１００ｍｌ）を加え、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（約１００ｍｌ）、水（１００ｍｌ）、飽和食塩水（約１００ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。溶媒を減圧下留去した後、得られた残渣を、シリカゲルクロマトグラフィーを用いて精製し（ジクロロメタン：メタノール＝１００：４）、無色アモルファス状の目的物（２．７４ｇ、６．０４mmol、収率９０％）を得た。
【０３１１】
¹H-NMR (400MHz, CDCl₃) : 1.59(2H, m), 1.89(1H, m), 2.06(3H, s), 3.43(1H, dt, 2.9 and 11Hz), 3.69(1H, dd, 11 and 13Hz), 3.80(1H, dd, 3.7 and 13Hz), 4.6(1H, m), 4.45(1H, d, 4.4Hz), 6.20(1H, dd, 4.4 and 8.0Hz), 6.27(1H, d, 8.0Hz), 6.53(1H, dd, 3.7 and 11Hz), 7.5-7.7(3H, m), 8.30(2H, m), 8.06(1H, s), 8.81(1H, s), 9.06(1H, s). FABMS(mNBA)： 454[M+H]⁺（実施例１４）
2 ’ - アセトキシ -3 ’ -O,4 ’ -C- プロピレン -5 ’ -O- ジメトキシトリチル -6N- ベンゾイル - アデノシン
実施例１３で得られた2’-アセトキシ-3’-O,4’-C-プロピレン-6N-ベンゾイル-アデノシン（１．７ｇ、３．７５ｍｍｏｌ）を窒素気流下、無水ピリジン（５０ｍｌ）に溶かし、そこに４,４’−ジメトキシトリチルトリフルオロメタンスルホン酸（６mmol）を加え、１００℃で６時間撹拌した。反応終了後、溶媒を留去し、ジクロロメタン（１００ｍｌ）を加え、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（約１００ｍｌ）、飽和食塩水（約１００ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。溶媒を減圧下留去した後、得られた残渣を、シリカゲルクロマトグラフィーを用いて精製し（ジクロロメタン：メタノール＝１００：２）、淡黄色アモルファス状の目的物（２．６２ｇ、３．４７mmol、収率９２％）を得た。
【０３１２】
¹H-NMR (400MHz, CDCl₃) : 1.57(1H, m), 1.81(1H, m), 1.98(2H, m), 2.08(3H, s), 3.08(1H, d, 9.8Hz), 3.45(1H, m), 3.75(1H, d, 9.8Hz), 3.77(3H, s),3.78(3H, s), 4.07(1H, m), 4.62(1H, d, 3.1Hz), 6.40(2H, m), 6.83(4H, m),7.2-7.7(12H, m), 7.97(1H, s), 8.02(2H, d, 7.2Hz), 8.45(1H, s), 9.00(1H,s). FABMS(mNBA)： 758[M+H]⁺
（実施例１５）
3 ’ -O,4 ’ -C- プロピレン -5 ’ -O- ジメトキシトリチル -6N- ベンゾイル - アデノシン
実施例１４で得られた2’-アセトキシ-3’-O,4’-C-プロピレン-5’-O-ジメトキシトリチル-6N-ベンゾイル-アデノシン（２．４ｇ、３．１７ｍｍｏｌ）を１０％含水ピリジン（１０ｍｌ）に溶かし、０℃に冷却した。そこに水酸化ナトリウム水溶液（１Ｎ）（６ｍｌ）を加え、室温で１５分撹拌した。反応終了後、ピリジンを留去し、ジクロロメタン（５０ｍｌ）を加え、有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（約５０ｍｌ）、水（５０ｍｌ）、飽和食塩水（約５０ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。溶媒を減圧留去した後、得られた残渣を、シリカゲルクロマトグラフィーを用いて精製し（ジクロロメタン：メタノール＝１００：４）、無色アモルファス状の目的物（１．６０ｇ、２．２４mmol、収率７１％）を得た。
【０３１３】
¹H-NMR (400MHz, CDCl₃) : 1.59(1H, m), 1.94(3H, m), 3.11(1H, d, 10Hz), 3.34(1H, d, 10Hz), 3.48(1H, m), 3.76(6H, s), 4.12(2H, m), 4.19(1H, d, 3.7Hz), 5.08(1H, m), 6.07(1H, d, 6.6Hz), 6.77(4H, m), 7.2-7.6(12H, m), 8.02(1H, s), 8.03(2H, d, 7.3Hz), 8.67(1H, s), 9.10(1H, s). FABMS(mNBA)： 715[M+H]⁺
（実施例１６）
3 ’ -O,4 ’ -C- プロピレン -5 ’ -O- ジメトキシトリチル -6N- ベンゾイル - アデノシン‐ 2'- Ｏ‐（ 2 ‐シアノエチル Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルホスホロアミダイト）
実施例１５で得られた3’-O,4’-C-プロピレン-5’-O-ジメトキシトリチル-6N-ベンゾイル-アデノシン（４１８ｍｇ、０．５８６ｍｍｏｌ）を窒素気流下、無水ジクロロメタン(１０ml)に溶解し、N,N−ジイソプロピルアミンテトラゾール塩（１７１ｍｇ，１．０mmol）、N,N,N’,N’−テトライソプロピル ２−シアノエチルホスホロアミダイト（３１８μｌ，１．０mmol）を加え、４５℃で３時間攪拌した。反応溶液を炭酸水素ナトリウム飽和水溶液（１０ml）、飽和食塩水（１０ml）で洗浄後、溶媒を減圧留去し、得られた残渣を、シリカゲルクロマトグラフィーを用いて精製し（ジクロロメタン：酢酸エチル＝２：１）、目的の無色アモルファス状ジアステレオマー混合物（５２４ｍｇ、０．５７３mmol、収率９８％）を得た。
【０３１４】
¹H-NMR (400MHz, CDCl₃) : FABMS(mNBA)： 914[M+H]⁺
（実施例１７）
【０３１５】
【化１９】

【０３１６】
実施例９で得られた3’-O,4’-C-エチレン-5’-O-ジメトキシトリチル-6N-ベンゾイル-アデノシン（１００ｍｇ、０．１４２ｍｍｏｌ）を窒素気流下、無水ピリジン（１ｍｌ）に溶かし、コハク酸無水物（２０ｍｇ、０．１９４ｍｍｏｌ）、4-ジメチルアミノピリジン（２４ｍｇ、０．１９４ｍｍｏｌ）を加え、室温で一晩撹拌した。溶媒を減圧下留去し、残渣を、シリカゲルクロマトグラフィーを用いて精製し（ジクロロメタン：メタノール＝２５：１）、得られた無色アモルファス状化合物（１１５ｍｇ、０．１４２mmol、収率１００％）を得た。これを無水ジメチルホルムアミド（３ｍｌ）に溶かし、ペンタクロロフェノール（６３ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）、N,N’-ジシクロヘキシルカルボジイミド（４３ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）を加え、室温で２４時間撹拌した。析出物をろ過後、ろ液を減圧下濃縮し、ベンゼンを加え析出物を再度ろ過した。ろ液を減圧下濃縮し、無水ジメチルホルムアミド（３ｍｌ）を加え、そこにトリエチルアミン（６０μｌ、０．４４ｍｍｏｌ）、ロングチェーンアルキルアミノグラス（５００Å、粒子サイズ：１２０/２００メッシュ）（ＣＰＧ Ｉｎｃ製）（１、５ｇ）を加え、６０℃、１０時間、さらに室温で７２時間放置した。ＣＰＧをろ過し、さらにジクロロメタンで洗浄した後、ＣＰＧにアプライドバイオシステムズ社ＤＮＡ合成機ＡＢＩ３９２用キャッピング試薬２種（無水酢酸/ピリジン/テトラヒドロフラン）（１‐メチルイミダゾール/テトラヒドロフラン）をそれぞれ１０ｍｌ加え、１０分放置した。ＣＰＧをろ過し、ピリジン、ジクロロメタンの順に洗浄し、減圧乾燥し、目的物（約１．４ｇ、ジメトキシトリチル基の導入量＝５０μｍｏｌ/ｇ）を得た。
（実施例１８）
【０３１７】
【化２０】

【０３１８】
実施例１５で得られた3’-O,4’-C-プロピレン-5’-O-ジメトキシトリチル-6N-ベンゾイル-アデノシン（２９０ｍｇ、０．４０６ｍｍｏｌ）を窒素気流下、無水ピリジン（４ｍｌ）に溶かし、コハク酸無水物（７３ｍｇ、０．７３ｍｍｏｌ）、4-ジメチルアミノピリジン（８９ｍｇ、０．７３ｍｍｏｌ）を加え、室温で一晩撹拌した。溶媒を減圧下留去し、残渣を、シリカゲルクロマトグラフィーを用いて精製し（ジクロロメタン：メタノール＝２０：１）、得られた無色アモルファス状化合物（２４５ｍｇ、０．３００mmol、収率７４％）を得た。これを無水ジメチルホルムアミド（４ｍｌ）に溶かし、ペンタクロロフェノール（８２ｍｇ、０．２７６ｍｍｏｌ）、N,N’-ジシクロヘキシルカルボジイミド（５７ｍｇ、０．２７６ｍｍｏｌ）を加え、室温で２４時間撹拌した。析出物をろ過後、ろ液を減圧下濃縮し、ベンゼンを加え析出物を再度ろ過した。ろ液を減圧下濃縮し、無水ジメチルホルムアミド（８ｍｌ）を加え、そこにトリエチルアミン（７５μｌ、０．５４ｍｍｏｌ）、ロングチェーンアルキルアミノグラス（５００Å、粒子サイズ：１２０/２００メッシュ）（ＣＰＧ Ｉｎｃ製）（１ｇ）を加え、６０℃、４８時間放置した。ＣＰＧをろ過し、さらにジクロロメタンで洗浄した後、ＣＰＧにアプライドバイオシステムズ社ＤＮＡ合成機ＡＢＩ３９２用キャッピング試薬２種（無水酢酸/ピリジン/テトラヒドロフラン）（１‐メチルイミダゾール/テトラヒドロフラン）をそれぞれ１０ｍｌ加え、１０分放置した。ＣＰＧをろ過し、ピリジン、ジクロロメタンの順に洗浄し、減圧乾燥し、目的物（約１ｇ、ジメトキシトリチル基の導入量＝５６μｍｏｌ/ｇ）を得た。
（実施例１９）(H-K^3-1-K¹-K¹-K¹-OH)の合成（例示化合物番号３−３４）
核酸合成機（PE Biosystems社製 ABI model392 DNA/RNA synthesiser）を用い、2.0μmolスケールで行った。各合成サイクルにおける溶媒、試薬、ホスホロアミダイトの濃度は天然オリゴヌクレオチド合成の場合と同じであり、溶媒、試薬は全てPE Biosystems社製のものを用いた。実施例１０以外のホスホロアミダイトは、3’-tBDSilyl-ribo Adenosine(N-bz)phosphramidite（ChemGene社）、ChemicalPhosphorylationReageantII（5’-リン酸化試薬）（Glen Research社）を用いた。3’位の水酸基がCPG支持体に結合した5’−Ｏ−ＤＭＴｒ−リボアデノシン（2.0μmol）のＤＭＴｒ基をトリクロロ酢酸によって脱保護し、その天然アデノシンユニットとして5’−水酸基に3’-tBDSilyl-ribo Adenosine(N-bz)phosphramiditeを、修飾アデノシンユニットとして実施例１０の化合物を用いて縮合反応を繰り返し行い、最後に5’-リン酸ユニットとしてChemicalPhosphorylationReageantIIを縮合させ、目的の配列を有する保護された２−５Ａ類縁体を合成した。合成サイクルは以下の通りである。
合成サイクル
1) detritylation トリクロロ酢酸/ジクロロメタン；85sec
2) coupling ホスホロアミダイト(25eq)、テトラゾール/アセトニトリル； 10乃至20min（６０℃）
3) capping 1-メチルイミダゾール/テトラヒドロフラン、無水酢酸/ピリジン/テトラヒドロフラン；15sec
4) oxidation ヨウ素/水/ピリジン/テトラヒドロフラン；15sec
上記において、2)ではカラムカートリッジを合成機から取り外し、６０℃でインキュベートした。2)のカップリング反応を２回繰り返してから、3)へ進んだ。
【０３１９】
目的配列を有する保護された２−５Ａ類縁体を5'−DMTｒ基をつけたまま合成した後、濃アンモニア水−エタノール（４：１）混合物で処理することによってオリゴマーを支持体から切り出すとともに、リン原子上の保護基シアノエチル基とアデニン塩基上のベンゾイル基をはずした。溶媒を減圧下留去し、残った残渣を逆相ＨＰＬＣ（島津製作所製LC−VP；カラム（GLサイエンス Inertsil Prep-ODS(20×250mm)）；0.1M酢酸トリエチルアミン水溶液(TEAA), pH7；5→60%CH₃CN(30min, linear gradient)；40℃；10ml/min；254nm）にて精製し、32.1分に溶出する分画を集めた。溶媒を減圧下留去した後、８０％酢酸水を加え30分放置しDMTr基を除去し、溶媒を留去した後、濃アンモニア水−エタノール（４：１）混合物を加え、30分放置した。溶媒を留去した後、塩酸水（2N）を加え、pH2．0に調整し、30℃、5時間反応させシリル基を除去した。アンモニア水で中和し溶媒を留去した後、逆相ＨＰＬＣ（島津製作所製LC−VP；カラム（GLサイエンス Inertsil Prep-ODS(20×250mm)）；0.1M酢酸トリエチルアミン水溶液(TEAA), pH7；2.5→17.5%CH₃CN(30min, linear gradient)；40℃；10ml/min；254nm）にて精製し、21.9分に溶出する分画を集めた。本化合物はHPLC(カラム（和光純薬Wakosil DNA(4.6×150mm)）； 0.1M TEAA, pH7；2.5→12.5% CH₃CN (20min, linear gradient)； 60℃；1ml/min)で分析すると15.96分に溶出された。（600μg (308nmol)）（λmax(H₂O) = 258.6nm）
（実施例２０）(H-K¹-K^3-1-K¹-K¹-OH)の合成（例示化合物番号３−３５）
実施例１９と同様の方法に従って、DNA合成機を用いて目的の配列を有する２−５Ａ類縁体を5'−DMTｒ基をつけたまま合成した。
【０３２０】
濃アンモニア水−エタノール（４：１）混合物で処理することによってオリゴマーを支持体から切り出すとともに、リン原子上の保護基シアノエチル基とアデニン塩基上のベンゾイル基をはずした。溶媒を減圧下留去し、残った残渣を逆相ＨＰＬＣ（島津製作所製LC−VP；カラム（GLサイエンス Inertsil Prep-ODS(20×250mm)）；0.1M酢酸トリエチルアミン水溶液(TEAA), pH7；5→60%CH₃CN(30min, linear gradient)；40℃；10ml/min；254nm）にて精製し、33.8分に溶出する分画を集めた。溶媒を減圧下留去した後、８０％酢酸水を加え30分放置しDMTr基を除去し、溶媒を留去した後、濃アンモニア水−エタノール（４：１）混合物を加え、30分放置した。溶媒を留去した後、塩酸水（2N）を加え、pH2．0に調整し、30℃、5時間反応させシリル基を除去した。アンモニア水で中和し溶媒を留去した後、逆相ＨＰＬＣ（島津製作所製LC−VP；カラム（GLサイエンス Inertsil Prep-ODS(20×250mm)）；0.1M酢酸トリエチルアミン水溶液(TEAA), pH7；2.5→17.5%CH₃CN(30min, linear gradient)；40℃；10ml/min；254nm）にて精製し、20.7分に溶出する分画を集めた。本化合物はHPLC(カラム（和光純薬Wakosil DNA(4.6×150mm)）； 0.1M TEAA, pH7；2.5→12.5% CH₃CN (20min, linear gradient)； 60℃；1ml/min)で分析すると11.24分に溶出された。（506μg (260nmol)）（λmax(H₂O) = 258.5nm））
（実施例２１）(H-K¹- K¹-K^3-1-K¹-OH)の合成（例示化合物番号３−３６）
実施例１９と同様の方法に従って、DNA合成機を用いて目的の配列を有する２−５Ａ類縁体を5'−DMTｒ基をつけたまま合成した。
【０３２１】
濃アンモニア水−エタノール（４：１）混合物で処理することによってオリゴマーを支持体から切り出すとともに、リン原子上の保護基シアノエチル基とアデニン塩基上のベンゾイル基をはずした。溶媒を減圧下留去し、残った残渣を逆相ＨＰＬＣ（島津製作所製LC−VP；カラム（GLサイエンス Inertsil Prep-ODS(20×250mm)）；0.1M酢酸トリエチルアミン水溶液(TEAA), pH7；5→60%CH₃CN(30min, linear gradient)；40℃；10ml/min；254nm）にて精製し、35.8分に溶出する分画を集めた。溶媒を減圧下留去した後、８０％酢酸水を加え30分放置しDMTr基を除去し、溶媒を留去した後、濃アンモニア水−エタノール（４：１）混合物を加え、30分放置した。溶媒を留去した後、塩酸水（2N）を加え、pH2．0に調整し、30℃、5時間反応させシリル基を除去した。アンモニア水で中和し溶媒を留去した後、逆相ＨＰＬＣ（島津製作所製LC−VP；カラム（GLサイエンス Inertsil Prep-ODS(20×250mm)）；0.1M酢酸トリエチルアミン水溶液(TEAA), pH7；2.5→17.5%CH₃CN(30min, linear gradient)；40℃；10ml/min；254nm）にて精製し、20.7分に溶出する分画を集めた。本化合物はHPLC(カラム（和光純薬Wakosil DNA(4.6×150mm)）； 0.1M TEAA, pH7；2.5→12.5% CH₃CN (20min, linear gradient)； 60℃；1ml/min)で分析すると11.03分に溶出された。（352μg (181nmol)）（λmax(H₂O) = 260.0nm）
（実施例２２）(H-K^3-1-K^3-1-K¹-K¹-OH)の合成（例示化合物番号３−３７）
実施例１９と同様の方法に従って、DNA合成機を用いて目的の配列を有する２−５Ａ類縁体を5'−DMTｒ基をつけたまま合成した。
【０３２２】
濃アンモニア水−エタノール（４：１）混合物で処理することによってオリゴマーを支持体から切り出すとともに、リン原子上の保護基シアノエチル基とアデニン塩基上のベンゾイル基をはずした。溶媒を減圧下留去し、残った残渣を逆相ＨＰＬＣ（島津製作所製LC−VP；カラム（GLサイエンス Inertsil Prep-ODS(20×250mm)）；0.1M酢酸トリエチルアミン水溶液(TEAA), pH7；5→60%CH₃CN(30min, linear gradient)；40℃；10ml/min；254nm）にて精製し、29.2分に溶出する分画を集めた。溶媒を減圧下留去した後、８０％酢酸水を加え30分放置しDMTr基を除去し、溶媒を留去した後、濃アンモニア水−エタノール（４：１）混合物を加え、30分放置した。溶媒を留去した後、塩酸水（2N）を加え、pH2．0に調整し、30℃、5時間反応させシリル基を除去した。アンモニア水で中和し溶媒を留去した後、逆相ＨＰＬＣ（島津製作所製LC−VP；カラム（GLサイエンス Inertsil Prep-ODS(20×250mm)）；0.1M酢酸トリエチルアミン水溶液(TEAA), pH7；2.5→17.5%CH₃CN(30min, linear gradient)；40℃；10ml/min；254nm）にて精製し、24.2分に溶出する分画を集めた。本化合物はHPLC(カラム（和光純薬Wakosil DNA(4.6×150mm)）； 0.1M TEAA, pH7；2.5→12.5% CH₃CN (20min, linear gradient)； 60℃；1ml/min)で分析すると12.05分に溶出された。（710μg (366nmol)）（λmax(H₂O) = 258.9nm）
（実施例２３）(H-K^3-1-K¹-K^3-1-K¹-OH)の合成（例示化合物番号３−３８）
実施例１９と同様の方法に従って、DNA合成機を用いて目的の配列を有する２−５Ａ類縁体を5'−DMTｒ基をつけたまま合成した。
【０３２３】
濃アンモニア水−エタノール（４：１）混合物で処理することによってオリゴマーを支持体から切り出すとともに、リン原子上の保護基シアノエチル基とアデニン塩基上のベンゾイル基をはずした。溶媒を減圧下留去し、残った残渣を逆相ＨＰＬＣ（島津製作所製LC−VP；カラム（GLサイエンス Inertsil Prep-ODS(20×250mm)）；0.1M酢酸トリエチルアミン水溶液(TEAA), pH7；5→60%CH₃CN(30min, linear gradient)；40℃；10ml/min；254nm）にて精製し、29.8分に溶出する分画を集めた。溶媒を減圧下留去した後、８０％酢酸水を加え30分放置しDMTr基を除去し、溶媒を留去した後、濃アンモニア水−エタノール（４：１）混合物を加え、30分放置した。溶媒を留去した後、塩酸水（2N）を加え、pH2．0に調整し、30℃、5時間反応させシリル基を除去した。アンモニア水で中和し溶媒を留去した後、逆相ＨＰＬＣ（島津製作所製LC−VP；カラム（GLサイエンス Inertsil Prep-ODS(20×250mm)）；0.1M酢酸トリエチルアミン水溶液(TEAA), pH7；2.5→17.5%CH₃CN(30min, linear gradient)；40℃；10ml/min；254nm）にて精製し、23.7分に溶出する分画を集めた。本化合物はHPLC(カラム（和光純薬Wakosil DNA(4.6×150mm)）； 0.1M TEAA, pH7；2.5→12.5% CH₃CN (20min, linear gradient)； 60℃；1ml/min)で分析すると14.18分に溶出された。（678μg (348nmol)）（λmax(H₂O) = 258.8nm）
（実施例２４）(H-K¹-K^3-1-K^3-1-K¹-OH)の合成（例示化合物番号３−３９）
実施例１９と同様の方法に従って、DNA合成機を用いて目的の配列を有する２−５Ａ類縁体を5'−DMTｒ基をつけたまま合成した。
【０３２４】
濃アンモニア水−エタノール（４：１）混合物で処理することによってオリゴマーを支持体から切り出すとともに、リン原子上の保護基シアノエチル基とアデニン塩基上のベンゾイル基をはずした。溶媒を減圧下留去し、残った残渣を逆相ＨＰＬＣ（島津製作所製LC−VP；カラム（GLサイエンス Inertsil Prep-ODS(20×250mm)）；0.1M酢酸トリエチルアミン水溶液(TEAA), pH7；5→60%CH₃CN(30min, linear gradient)；40℃；10ml/min；254nm）にて精製し、32.1分に溶出する分画を集めた。溶媒を減圧下留去した後、８０％酢酸水を加え30分放置しDMTr基を除去し、溶媒を留去した後、濃アンモニア水−エタノール（４：１）混合物を加え、30分放置した。溶媒を留去した後、塩酸水（2N）を加え、pH2．0に調整し、30℃、5時間反応させシリル基を除去した。アンモニア水で中和し溶媒を留去した後、逆相ＨＰＬＣ（島津製作所製LC−VP；カラム（GLサイエンス Inertsil Prep-ODS(20×250mm)）；0.1M酢酸トリエチルアミン水溶液(TEAA), pH7；2.5→17.5%CH₃CN(30min, linear gradient)；40℃；10ml/min；254nm）にて精製し、23.0分に溶出する分画を集めた。本化合物はHPLC(カラム（和光純薬Wakosil DNA(4.6×150mm)）； 0.1M TEAA, pH7；2.5→12.5% CH₃CN (20min, linear gradient)； 60℃；1ml/min)で分析すると13.62分に溶出された。（248μg (128nmol)）（λmax(H₂O) = 259.3nm）
（実施例２５）(H-K^3-1-K^3-1-K^3-1-K¹-OH)の合成（例示化合物番号３−４０）
実施例１９と同様の方法に従って、DNA合成機を用いて目的の配列を有する２−５Ａ類縁体を5'−DMTr基をつけたまま合成した。
【０３２５】
濃アンモニア水−エタノール（４：１）混合物で処理することによってオリゴマーを支持体から切り出すとともに、リン原子上の保護基シアノエチル基とアデニン塩基上のベンゾイル基をはずした。溶媒を減圧下留去し、残った残渣を逆相ＨＰＬＣ（島津製作所製LC−VP；カラム（GLサイエンス Inertsil Prep-ODS(20×250mm)）；0.1M酢酸トリエチルアミン水溶液(TEAA), pH7；5→60%CH₃CN(30min, linear gradient)；40℃；10ml/min；254nm）にて精製し、27.4分に溶出する分画を集めた。溶媒を減圧下留去した後、８０％酢酸水を加え30分放置しDMTr基を除去し、溶媒を留去した後、濃アンモニア水−エタノール（４：１）混合物を加え、30分放置した。溶媒を留去した後、塩酸水（2N）を加え、pH2．0に調整し、30℃、5時間反応させシリル基を除去した。アンモニア水で中和し溶媒を留去した後、逆相ＨＰＬＣ（島津製作所製LC−VP；カラム（GLサイエンス Inertsil Prep-ODS(20×250mm)）；0.1M酢酸トリエチルアミン水溶液(TEAA), pH7；2.5→17.5%CH₃CN(30min, linear gradient)；40℃；10ml/min；254nm）にて精製し、33.9分に溶出する分画を集めた。本化合物はHPLC(カラム（和光純薬Wakosil DNA(4.6×150mm)）； 0.1M TEAA, pH7；2.5→12.5% CH₃CN (20min, linear gradient)； 60℃；1ml/min)で分析すると16.58分に溶出された。（515μg (265nmol)）（λmax(H₂O) = 259.6nm）
（実施例２６）(H-K^3-1-K¹-K¹-OH)の合成（例示化合物番号３−１）
実施例１９と同様の方法に従って、DNA合成機を用いて目的の配列を有する２−５Ａ類縁体を5'−DMTｒ基をつけたまま合成した。
【０３２６】
濃アンモニア水−エタノール（４：１）混合物で処理することによってオリゴマーを支持体から切り出すとともに、リン原子上の保護基シアノエチル基とアデニン塩基上のベンゾイル基をはずした。溶媒を減圧下留去し、残った残渣を逆相ＨＰＬＣ（島津製作所製LC−VP；カラム（和光純薬Wakosil DNA(10.0×250mm)）；0.1M酢酸トリエチルアミン水溶液(TEAA), pH7；5→60%CH₃CN(30min, linear gradient)；60℃；2ml/min）にて精製し、33.3分に溶出する分画を集めた。溶媒を減圧下留去した後、８０％酢酸水を加え30分放置しDMTr基を除去し、溶媒を留去した後、濃アンモニア水−エタノール（４：１）混合物を加え、30分放置した。溶媒を留去した後、塩酸水（2N）を加え、pH2．0に調整し、30℃、5時間反応させシリル基を除去した。アンモニア水で中和し溶媒を留去した後、逆相ＨＰＬＣ（島津製作所製LC−VP；カラム（和光純薬Wakosil DNA(10.0×250mm)）；0.1M酢酸トリエチルアミン水溶液(TEAA), pH7；2.5→17.5%CH₃CN(30min, linear gradient)；60℃；2ml/min）にて精製し、18.9分に溶出する分画を集めた。本化合物はHPLC(カラム（和光純薬Wakosil DNA(4.6×150mm)）； 0.1M TEAA, pH7；2.5→10% CH₃CN (20min, linear gradient)； 60℃；1ml/min)で分析すると10.20分に溶出された。（923μg (610nmol)）（λmax(H₂O) = 258.7nm）
（実施例２７）(H-K¹-K^3-1-K¹-OH)の合成（例示化合物番号３−２）
実施例１９と同様の方法に従って、DNA合成機を用いて目的の配列を有する２−５Ａ類縁体を5'−DMTｒ基をつけたまま合成した。
【０３２７】
濃アンモニア水−エタノール（４：１）混合物で処理することによってオリゴマーを支持体から切り出すとともに、リン原子上の保護基シアノエチル基とアデニン塩基上のベンゾイル基をはずした。溶媒を減圧下留去し、残った残渣を逆相ＨＰＬＣ（島津製作所製LC−VP；カラム（和光純薬Wakosil DNA(10.0×250mm)）；0.1M酢酸トリエチルアミン水溶液(TEAA), pH7；5→60%CH₃CN(30min, linear gradient)；60℃；2ml/min）にて精製し、35.9分に溶出する分画を集めた。溶媒を減圧下留去した後、８０％酢酸水を加え30分放置しDMTr基を除去し、溶媒を留去した後、濃アンモニア水−エタノール（４：１）混合物を加え、30分放置した。溶媒を留去した後、塩酸水（2N）を加え、pH2．0に調整し、30℃、5時間反応させシリル基を除去した。アンモニア水で中和し溶媒を留去した後、逆相ＨＰＬＣ（島津製作所製LC−VP；カラム（和光純薬Wakosil DNA(10.0×250mm)）；0.1M酢酸トリエチルアミン水溶液(TEAA), pH7；2.5→17.5%CH₃CN(30min, linear gradient)；60℃；2ml/min）にて精製し、17.8分に溶出する分画を集めた。本化合物はHPLC(カラム（和光純薬Wakosil DNA(4.6×150mm)）； 0.1M TEAA, pH7；2.5→10% CH₃CN (20min, linear gradient)； 60℃；1ml/min)で分析すると9.56分に溶出された。（750μg (496nmol)）（λmax(H₂O) = 258.8nm）
（実施例２８）(H-K¹-K¹-K^3-1-OH)の合成（例示化合物番号３−３）
実施例１９と同様の方法に従って、DNA合成機を用いて目的の配列を有する２−５Ａ類縁体を5'−DMTｒ基をつけたまま合成した。ただし、DNA合成機上で用いた固相担体は、実施例１７のCPG担体を用いた。
【０３２８】
濃アンモニア水−エタノール（４：１）混合物で処理することによってオリゴマーを支持体から切り出すとともに、リン原子上の保護基シアノエチル基とアデニン塩基上のベンゾイル基をはずした。溶媒を減圧下留去し、残った残渣を逆相ＨＰＬＣ（島津製作所製LC−VP；カラム（和光純薬Wakosil DNA(10.0×250mm)）；0.1M酢酸トリエチルアミン水溶液(TEAA), pH7；5→60%CH₃CN(30min, linear gradient)；60℃；2ml/min）にて精製し、34.2分に溶出する分画を集めた。溶媒を減圧下留去した後、８０％酢酸水を加え30分放置しDMTr基を除去し、溶媒を留去した後、濃アンモニア水−エタノール（４：１）混合物を加え、30分放置した。溶媒を留去した後、塩酸水（2N）を加え、pH2．0に調整し、30℃、5時間反応させシリル基を除去した。アンモニア水で中和し溶媒を留去した後、逆相ＨＰＬＣ（島津製作所製LC−VP；カラム（和光純薬Wakosil DNA(10.0×250mm)）；0.1M酢酸トリエチルアミン水溶液(TEAA), pH7；2.5→17.5%CH₃CN(30min, linear gradient)；60℃；2ml/min）にて精製し、21.1分に溶出する分画を集めた。本化合物はHPLC(カラム（和光純薬Wakosil DNA(4.6×150mm)）； 0.1M TEAA, pH7；2.5→10% CH₃CN (20min, linear gradient)； 60℃；1ml/min)で分析すると11.32分に溶出された。（1025μg (824nmol)）（λmax(H₂O) = 258.7nm）
（実施例２９）(H-K^3-1-K^3-1-K¹-OH)の合成（例示化合物番号３−４）
実施例１９と同様の方法に従って、DNA合成機を用いて目的の配列を有する２−５Ａ類縁体を5'−DMTｒ基をつけたまま合成した。
【０３２９】
濃アンモニア水−エタノール（４：１）混合物で処理することによってオリゴマーを支持体から切り出すとともに、リン原子上の保護基シアノエチル基とアデニン塩基上のベンゾイル基をはずした。溶媒を減圧下留去し、残った残渣を逆相ＨＰＬＣ（島津製作所製LC−VP；カラム（和光純薬Wakosil DNA(10.0×250mm)）；0.1M酢酸トリエチルアミン水溶液(TEAA), pH7；5→60%CH₃CN(30min, linear gradient)；60℃；2ml/min）にて精製し、30.56分に溶出する分画を集めた。溶媒を減圧下留去した後、８０％酢酸水を加え30分放置しDMTr基を除去し、溶媒を留去した後、濃アンモニア水−エタノール（４：１）混合物を加え、30分放置した。溶媒を留去した後、塩酸水（2N）を加え、pH2．0に調整し、30℃、5時間反応させシリル基を除去した。アンモニア水で中和し溶媒を留去した後、逆相ＨＰＬＣ（島津製作所製LC−VP；カラム（和光純薬Wakosil DNA(10.0×250mm)）；0.1M酢酸トリエチルアミン水溶液(TEAA), pH7；2.5→17.5%CH₃CN(30min, linear gradient)；60℃；2ml/min）にて精製し、22.1分に溶出する分画を集めた。本化合物はHPLC(カラム（和光純薬Wakosil DNA(4.6×150mm)）； 0.1M TEAA, pH7；2.5→10% CH₃CN (20min, linear gradient)； 60℃；1ml/min)で分析すると11.95分に溶出された。（1216μg (804nmol)）（λmax(H₂O) = 259.8nm）
（実施例３０）(H-K^3-1-K¹-K^3-1-OH)の合成（例示化合物番号３−５）
実施例１９と同様の方法に従って、DNA合成機を用いて目的の配列を有する２−５Ａ類縁体を5'−DMTｒ基をつけたまま合成した。ただし、DNA合成機上で用いた固相担体は、実施例１７のCPG担体を用いた。
【０３３０】
濃アンモニア水−エタノール（４：１）混合物で処理することによってオリゴマーを支持体から切り出すとともに、リン原子上の保護基シアノエチル基とアデニン塩基上のベンゾイル基をはずした。溶媒を減圧下留去し、残った残渣を逆相ＨＰＬＣ（島津製作所製LC−VP；カラム（和光純薬Wakosil DNA(10.0×250mm)）；0.1M酢酸トリエチルアミン水溶液(TEAA), pH7；5→60%CH₃CN(30min, linear gradient)；60℃；2ml/min）にて精製し、34.1分に溶出する分画を集めた。溶媒を減圧下留去した後、８０％酢酸水を加え30分放置しDMTr基を除去し、溶媒を留去した後、濃アンモニア水−エタノール（４：１）混合物を加え、30分放置した。溶媒を留去した後、塩酸水（2N）を加え、pH2．0に調整し、30℃、5時間反応させシリル基を除去した。アンモニア水で中和し溶媒を留去した後、逆相ＨＰＬＣ（島津製作所製LC−VP；カラム（和光純薬Wakosil DNA(10.0×250mm)）；0.1M酢酸トリエチルアミン水溶液(TEAA), pH7；2.5→17.5%CH₃CN(30min, linear gradient)；60℃；2ml/min）にて精製し、20.3分に溶出する分画を集めた。本化合物はHPLC(カラム（和光純薬Wakosil DNA(4.6×150mm)）； 0.1M TEAA, pH7；2.5→10% CH₃CN (20min, linear gradient)； 60℃；1ml/min)で分析すると11.31分に溶出された。（1665μg (1101nmol)）（λmax(H₂O) = 258.9nm）
（実施例３１）(H-K¹-K^3-1-K^3-1-OH)の合成（例示化合物番号３−６）
実施例１９と同様の方法に従って、DNA合成機を用いて目的の配列を有する２−５Ａ類縁体を5'−DMTｒ基をつけたまま合成した。ただし、DNA合成機上で用いた固相担体は、実施例１７のCPG担体を用いた。
【０３３１】
濃アンモニア水−エタノール（４：１）混合物で処理することによってオリゴマーを支持体から切り出すとともに、リン原子上の保護基シアノエチル基とアデニン塩基上のベンゾイル基をはずした。溶媒を減圧下留去し、残った残渣を逆相ＨＰＬＣ（島津製作所製LC−VP；カラム（和光純薬Wakosil DNA(10.0×250mm)）；0.1M酢酸トリエチルアミン水溶液(TEAA), pH7；5→60%CH₃CN(30min, linear gradient)；60℃；2ml/min）にて精製し、35.4分に溶出する分画を集めた。溶媒を減圧下留去した後、８０％酢酸水を加え30分放置しDMTr基を除去し、溶媒を留去した後、濃アンモニア水−エタノール（４：１）混合物を加え、30分放置した。溶媒を留去した後、塩酸水（2N）を加え、pH2．0に調整し、30℃、5時間反応させシリル基を除去した。アンモニア水で中和し溶媒を留去した後、逆相ＨＰＬＣ（島津製作所製LC−VP；カラム（和光純薬Wakosil DNA(10.0×250mm)）；0.1M酢酸トリエチルアミン水溶液(TEAA), pH7；2.5→17.5%CH₃CN(30min, linear gradient)；60℃；2ml/min）にて精製し、20.7分に溶出する分画を集めた。本化合物はHPLC(カラム（和光純薬Wakosil DNA(4.6×150mm)）； 0.1M TEAA, pH7；2.5→10% CH₃CN (20min, linear gradient)； 60℃；1ml/min)で分析すると11.16分に溶出された。（1132μg (748nmol)）（λmax(H₂O) = 259.1nm）
（実施例３２）(H-K^3-1-K^3-1-K^3-1-OH)の合成（例示化合物番号３−７）
実施例１９と同様の方法に従って、DNA合成機を用いて目的の配列を有する２−５Ａ類縁体を5'−DMTｒ基をつけたまま合成した。ただし、DNA合成機上で用いた固相担体は、実施例１７のCPG担体を用いた。
【０３３２】
濃アンモニア水−エタノール（４：１）混合物で処理することによってオリゴマーを支持体から切り出すとともに、リン原子上の保護基シアノエチル基とアデニン塩基上のベンゾイル基をはずした。溶媒を減圧下留去し、残った残渣を逆相ＨＰＬＣ（島津製作所製LC−VP；カラム（和光純薬Wakosil DNA(10.0×250mm)）；0.1M酢酸トリエチルアミン水溶液(TEAA), pH7；5→60%CH₃CN(30min, linear gradient)；60℃；2ml/min）にて精製し、30.7分に溶出する分画を集めた。溶媒を減圧下留去した後、８０％酢酸水を加え30分放置しDMTr基を除去し、溶媒を留去した後、濃アンモニア水−エタノール（４：１）混合物を加え、30分放置した。溶媒を留去した後、塩酸水（2N）を加え、pH2．0に調整し、30℃、5時間反応させシリル基を除去した。アンモニア水で中和し溶媒を留去した後、逆相ＨＰＬＣ（島津製作所製LC−VP；カラム（和光純薬Wakosil DNA(10.0×250mm)）；0.1M酢酸トリエチルアミン水溶液(TEAA), pH7；2.5→17.5%CH₃CN(30min, linear gradient)；60℃；2ml/min）にて精製し、23.3分に溶出する分画を集めた。本化合物はHPLC(カラム（和光純薬Wakosil DNA(4.6×150mm)）； 0.1M TEAA, pH7；2.5→10% CH₃CN (20min, linear gradient)； 60℃；1ml/min)で分析すると13.14分に溶出された。（890μg (588nmol)）（λmax(H₂O) = 259.4nm）
（実施例３３）(H-K^3-1-K¹-K¹-K^3-1-OH)の合成（例示化合物番号３−４１）
実施例１９と同様の方法に従って、DNA合成機を用いて目的の配列を有する２−５Ａ類縁体を5'−DMTｒ基をつけたまま合成した。ただし、DNA合成機上で用いた固相担体は、実施例１７のCPG担体を用いた。
【０３３３】
濃アンモニア水−エタノール（４：１）混合物で処理することによってオリゴマーを支持体から切り出すとともに、リン原子上の保護基シアノエチル基とアデニン塩基上のベンゾイル基をはずした。溶媒を減圧下留去し、残った残渣を逆相ＨＰＬＣ（島津製作所製LC−VP；カラム（GLサイエンス Inertsil Prep-ODS(20×250mm)）；0.1M酢酸トリエチルアミン水溶液(TEAA), pH7；50%CH₃CN(isocratic)；40℃；10ml/min）にて精製し、12.3分に溶出する分画を集めた。溶媒を減圧下留去した後、８０％酢酸水を加え30分放置しDMTr基を除去し、溶媒を留去した後、濃アンモニア水−エタノール（４：１）混合物を加え、30分放置した。溶媒を留去した後、塩酸水（2N）を加え、pH2．0に調整し、30℃、5時間反応させシリル基を除去した。アンモニア水で中和し溶媒を留去した後、逆相ＨＰＬＣ（島津製作所製LC−VP；カラム（GLサイエンス Inertsil Prep-ODS(20×250mm)）；0.1M酢酸トリエチルアミン水溶液(TEAA), pH7；7→9.9%CH₃CN(20min, linear gradient)；40℃；10ml/min）にて精製し、14.3分に溶出する分画を集めた。本化合物はHPLC(カラム（和光純薬Wakosil DNA(4.6×150mm)）； 0.1M TEAA, pH7；5→9% CH₃CN (20min, linear gradient)； 60℃；1ml/min)で分析すると10.41分に溶出された。（1794μg (1002nmol)）（λmax(H₂O) = 258.4nm）
（実施例３４）(H-K¹-K¹-K^3-1-K^3-1-OH)の合成（例示化合物番号３−４２）
実施例１９と同様の方法に従って、DNA合成機を用いて目的の配列を有する２−５Ａ類縁体を5'−DMTｒ基をつけたまま合成した。ただし、DNA合成機上で用いた固相担体は、実施例１７のCPG担体を用いた。
【０３３４】
濃アンモニア水−エタノール（４：１）混合物で処理することによってオリゴマーを支持体から切り出すとともに、リン原子上の保護基シアノエチル基とアデニン塩基上のベンゾイル基をはずした。溶媒を減圧下留去し、残った残渣を逆相ＨＰＬＣ（島津製作所製LC−VP；カラム（GLサイエンス Inertsil Prep-ODS(20×250mm)）；0.1M酢酸トリエチルアミン水溶液(TEAA), pH7；60%CH₃CN(isocratic)；40℃；10ml/min）にて精製し、8.8分に溶出する分画を集めた。溶媒を減圧下留去した後、８０％酢酸水を加え30分放置しDMTr基を除去し、溶媒を留去した後、濃アンモニア水−エタノール（４：１）混合物を加え、30分放置した。溶媒を留去した後、塩酸水（2N）を加え、pH2．0に調整し、30℃、5時間反応させシリル基を除去した。アンモニア水で中和し溶媒を留去した後、逆相ＨＰＬＣ（島津製作所製LC−VP；カラム（GLサイエンス Inertsil Prep-ODS(20×250mm)）；0.1M酢酸トリエチルアミン水溶液(TEAA), pH7；7→9.9%CH₃CN(20min, linear gradient)；40℃；10ml/min）にて精製し、14.9分に溶出する分画を集めた。本化合物はHPLC(カラム（和光純薬Wakosil DNA(4.6×150mm)）； 0.1M TEAA, pH7；5→9% CH₃CN (20min, linear gradient)； 60℃；1ml/min)で分析すると11.30分に溶出された。（1843μg (1029nmol)）（λmax(H₂O) = 258.5nm）
（実施例３５）(H-K^3-1-K¹-K¹-OP(O)(C₂H₄OH)OH)の合成（例示化合物番号３−８）
実施例１９と同様の方法に従って、DNA合成機を用いて目的の配列を有する２−５Ａ類縁体を5'−DMTｒ基をつけたまま合成した。ただし、DNA合成機上で用いた固相担体は、特開平７−８７９８２に実施例１２ｂとして記載されているCPG担体を用いた。
【０３３５】
濃アンモニア水−エタノール（４：１）混合物で処理することによってオリゴマーを支持体から切り出すとともに、リン原子上の保護基シアノエチル基とアデニン塩基上のベンゾイル基をはずした。溶媒を減圧下留去し、残った残渣を逆相ＨＰＬＣ（島津製作所製LC−VP；カラム（GLサイエンス Inertsil Prep-ODS(20×250mm)）；0.1M酢酸トリエチルアミン水溶液(TEAA), pH7；52%CH₃CN(isocratic)；40℃；10ml/min）にて精製し、10.8分に溶出する分画を集めた。溶媒を減圧下留去した後、８０％酢酸水を加え30分放置しDMTr基を除去し、溶媒を留去した後、濃アンモニア水−エタノール（４：１）混合物を加え、30分放置した。溶媒を留去した後、塩酸水（2N）を加え、pH2．0に調整し、30℃、5時間反応させシリル基を除去した。アンモニア水で中和し溶媒を留去した後、逆相ＨＰＬＣ（島津製作所製LC−VP；カラム（GLサイエンス Inertsil Prep-ODS(20×250mm)）；0.1M酢酸トリエチルアミン水溶液(TEAA), pH7；7→9.9%CH₃CN(20min, linear gradient)；40℃；10ml/min）にて精製し、12.0分に溶出する分画を集めた。本化合物はHPLC(カラム（和光純薬Wakosil DNA(4.6×150mm)）； 0.1M TEAA, pH7；5→9% CH₃CN (20min, linear gradient)； 60℃；1ml/min)で分析すると7.05分に溶出された。（510μg (327nmol)）（λmax(H₂O) = 259.0nm）
（実施例３６）(H-K¹-K¹-K^3-1-OP(O)(C₂H₄OH)OH)の合成（例示化合物番号３−９）
実施例１９と同様の方法に従って、DNA合成機を用いて目的の配列を有する２−５Ａ類縁体を5'−DMTｒ基をつけたまま合成した。ただし、DNA合成機上で用いた固相担体は、特開平７−８７９８２に実施例１２ｂとして記載されているCPG担体を用いた。
【０３３６】
濃アンモニア水−エタノール（４：１）混合物で処理することによってオリゴマーを支持体から切り出すとともに、リン原子上の保護基シアノエチル基とアデニン塩基上のベンゾイル基をはずした。溶媒を減圧下留去し、残った残渣を逆相ＨＰＬＣ（島津製作所製LC−VP；カラム（GLサイエンス Inertsil Prep-ODS(20×250mm)）；0.1M酢酸トリエチルアミン水溶液(TEAA), pH7；55%CH₃CN(isocratic)；40℃；10ml/min）にて精製し、11.9分に溶出する分画を集めた。溶媒を減圧下留去した後、８０％酢酸水を加え30分放置しDMTr基を除去し、溶媒を留去した後、濃アンモニア水−エタノール（４：１）混合物を加え、30分放置した。溶媒を留去した後、塩酸水（2N）を加え、pH2．0に調整し、30℃、5時間反応させシリル基を除去した。アンモニア水で中和し溶媒を留去した後、逆相ＨＰＬＣ（島津製作所製LC−VP；カラム（GLサイエンス Inertsil Prep-ODS(20×250mm)）；0.1M酢酸トリエチルアミン水溶液(TEAA), pH7；7→9.9%CH₃CN(20min, linear gradient)；40℃；10ml/min）にて精製し、9.99分に溶出する分画を集めた。本化合物はHPLC(カラム（和光純薬Wakosil DNA(4.6×150mm)）； 0.1M TEAA, pH7；5→9% CH₃CN (20min, linear gradient)； 60℃；1ml/min)で分析すると5.34分に溶出された。（834μg (535nmol)）（λmax(H₂O) = 258.2nm）
（実施例３７）(H-K^3-2-K¹-K¹-K¹-OH)の合成（例示化合物番号３−４７）
実施例１９と同様の方法に従って、DNA合成機を用いて目的の配列を有する２−５Ａ類縁体を5'−DMTｒ基をつけたまま合成した。ただし、修飾ヌクレオシドのホスホロアミダイトとして実施例１６の化合物を用いた。
【０３３７】
濃アンモニア水−エタノール（４：１）混合物で処理することによってオリゴマーを支持体から切り出すとともに、リン原子上の保護基シアノエチル基とアデニン塩基上のベンゾイル基をはずした。溶媒を減圧下留去し、残った残渣を逆相ＨＰＬＣ（島津製作所製LC−VP；カラム（GLサイエンス Inertsil Prep-ODS(20×250mm)）；0.1M酢酸トリエチルアミン水溶液(TEAA), pH7；51%CH₃CN(isocratic)；40℃；10ml/min）にて精製し、11.3分に溶出する分画を集めた。溶媒を減圧下留去した後、８０％酢酸水を加え30分放置しDMTr基を除去し、溶媒を留去した後、濃アンモニア水−エタノール（４：１）混合物を加え、30分放置した。溶媒を留去した後、塩酸水（2N）を加え、pH2．0に調整し、30℃、5時間反応させシリル基を除去した。アンモニア水で中和し溶媒を留去した後、逆相ＨＰＬＣ（島津製作所製LC−VP；カラム（GLサイエンス Inertsil Prep-ODS(20×250mm)）；0.1M酢酸トリエチルアミン水溶液(TEAA), pH7；7→9.9%CH₃CN(20min, linear gradient)；40℃；10ml/min）にて精製し、16.8分に溶出する分画を集めた。本化合物はHPLC(カラム（和光純薬Wakosil DNA(4.6×150mm)）； 0.1M TEAA, pH7；5→9% CH₃CN (20min, linear gradient)； 60℃；1ml/min)で分析すると12.15分に溶出された。（1480μg (832nmol)）（λmax(H₂O) = 258.5nm）
（実施例３８）(H-K¹-K¹- K^3-2-K¹-OH)の合成（例示化合物番号３−４９）
実施例１９と同様の方法に従って、DNA合成機を用いて目的の配列を有する２−５Ａ類縁体を5'−DMTｒ基をつけたまま合成した。ただし、修飾ヌクレオシドのホスホロアミダイトとして実施例１６の化合物を用いた。
【０３３８】
濃アンモニア水−エタノール（４：１）混合物で処理することによってオリゴマーを支持体から切り出すとともに、リン原子上の保護基シアノエチル基とアデニン塩基上のベンゾイル基をはずした。溶媒を減圧下留去し、残った残渣を逆相ＨＰＬＣ（島津製作所製LC−VP；カラム（GLサイエンス Inertsil Prep-ODS(20×250mm)）；0.1M酢酸トリエチルアミン水溶液(TEAA), pH7；56%CH₃CN(isocratic)；40℃；10ml/min）にて精製し、11.2分に溶出する分画を集めた。溶媒を減圧下留去した後、８０％酢酸水を加え30分放置しDMTr基を除去し、溶媒を留去した後、濃アンモニア水−エタノール（４：１）混合物を加え、30分放置した。溶媒を留去した後、塩酸水（2N）を加え、pH2．0に調整し、30℃、5時間反応させシリル基を除去した。アンモニア水で中和し溶媒を留去した後、逆相ＨＰＬＣ（島津製作所製LC−VP；カラム（GLサイエンス Inertsil Prep-ODS(20×250mm)）；0.1M酢酸トリエチルアミン水溶液(TEAA), pH7；7→9.9%CH₃CN(20min, linear gradient)；40℃；10ml/min）にて精製し、14.7分に溶出する分画を集めた。本化合物はHPLC(カラム（和光純薬Wakosil DNA(4.6×150mm)）； 0.1M TEAA, pH7；5→9% CH₃CN (20min, linear gradient)； 60℃；1ml/min)で分析すると10.12分に溶出された。（940μg (528nmol)）（λmax(H₂O) = 258.9nm）
（実施例３９）
実施例１１と同様の方法により、以下の配列:
５’−ttttttttttnt−３’（配列表の配列番号 １）
で示される配列を有し、塩基番号１１のアデノシンの糖部分が3'-Ｏ,4'-Ｃ-プロピレンアデノシンであるオリゴヌクレオチド類縁体（以下「オリゴヌクレオチド（５）」とする。）を得た。（収量0.55μmol（ 55% yield）） ただし、修飾ヌクレオシドのホスホロアミダイトとして実施例１６の化合物を用いた。
得られたオリゴヌクレオチド（２）の精製は、逆相HPLC（HPLC：島津製作所製LC−VP；カラム： 和光純薬Wakosil DNA(10.0×250mm；0.1M酢酸トリエチルアミン水溶液(TEAA), pH7；10→21%CH₃CN / 30min, linear gradient；60℃；2ml/min）にて行い、19.1分に溶出する分画を集めた。本化合物はHPLC(和光純薬WakosilDNA(4.6×150mm), 0.1M TEAA, pH7, 7→25% CH₃CN /20min, linear gradient, 60℃, 1ml/min)で分析すると12.40分に溶出された。（λmax = 264nm）
（実施例４０）(H-K^3-2-K¹-K^3-2-OP(O)(C₂H₄OH)OH)の合成（例示化合物番号３−７３）
実施例１９と同様の方法に従って、DNA合成機を用いて目的の配列を有する２−５Ａ類縁体を5'−DMTｒ基まではずした形で合成した。ただし、修飾アデノシンユニットとして実施例16を用い、DNA合成機上で用いた固相担体は、特開平７−８７９８２に実施例１２ｂとして記載されているCPG担体を用いた。
濃アンモニア水−エタノール（４：１）混合物で処理することによってオリゴマーを支持体から切り出すとともに、リン原子上の保護基シアノエチル基とアデニン塩基上のベンゾイル基をはずした。溶媒を減圧下留去し、残った残渣を逆相ＨＰＬＣ（島津製作所製LC−VP；カラム（GLサイエンス Inertsil Prep-ODS(20×250mm)）；0.1M酢酸トリエチルアミン水溶液(TEAA), pH7；5→15%CH₃CN(30min, linear gradient)；40℃；10ml/min）にて精製し、22.8分に溶出する分画を集めた。本化合物はHPLC(カラム（東ソー TSKgel super ODS(4.6×50mm)）； 0.1M TEAA, pH7；7→15% CH₃CN (10min, linear gradient)； 60℃；1ml/min)で分析すると12.9分に溶出された。（654μg (405nmol)）（λmax(H₂O) = 258nm）
（実施例４１）(H-K²-K¹-K^3-2-OP(O)(C₂H₄OH)OH)の合成（例示化合物番号３−７４）
実施例１９と同様の方法に従って、DNA合成機を用いて目的の配列を有する２−５Ａ類縁体を5'−DMTｒ基をつけたまま合成した。ただし、修飾アデノシンユニットとして実施例16を用い、DNA合成機上で用いた固相担体は、特開平７−８７９８２に実施例１２ｂとして記載されているCPG担体を用いた。また、5’−リン酸ユニットとしてChemical Phosphorylation Reagent IIを用いた縮合後のヨウ素水による酸化に代えて、Beaucage試薬（Aldrich社）1g/アセトニトリル溶液100ml溶液をボトル15に取り付け、5分間の処理を2回行うことによってチオリン酸とした。
濃アンモニア水−エタノール（４：１）混合物で処理することによってオリゴマーを支持体から切り出すとともに、リン原子上の保護基シアノエチル基とアデニン塩基上のベンゾイル基をはずした。溶媒を減圧下留去し、残った残渣を逆相ＨＰＬＣ（島津製作所製LC−VP；カラム（GLサイエンス Inertsil Prep-ODS(20×250mm)）；0.1M酢酸トリエチルアミン水溶液(TEAA), pH7；53%CH₃CN(isocratic)；40℃；10ml/min）にて精製し、チオリン酸に由来するジアステレオマーの13.7分と16.0分に溶出する２つの分画を集め、１つに合わせた。溶媒を減圧下留去した後、８０％酢酸水を加え30分放置しDMTr基を除去し、溶媒を留去した後、濃アンモニア水−エタノール（４：１）混合物を加え、30分放置した。溶媒を留去した後、塩酸水（2N）を加え、pH2．0に調整し、30℃、5時間反応させシリル基を除去した。アンモニア水で中和し溶媒を留去した後、逆相ＨＰＬＣ（島津製作所製LC−VP；カラム（GLサイエンス Inertsil Prep-ODS(20×250mm)）；0.1M酢酸トリエチルアミン水溶液(TEAA), pH7；5→11%CH₃CN(30min, linear gradient)；40℃；10ml/min）にて精製し、11.7分に溶出する分画と21.6分に溶出する分画（目的化合物が5'-チオリン酸部分でジスルフィド結合を形成することによりダイマー化した化合物）を集めた。ダイマー化合物は、1mM DTT水溶液中で目的とするモノマー体（実施例41の化合物）へと還元した。本化合物はHPLC(カラム（東ソー TSKgel super ODS(4.6×50mm)）； 0.1M TEAA, pH7；7→15% CH₃CN (10min, linear gradient)； 60℃；1ml/min)で分析すると10.1分に溶出された。（194μg (122nmol)）（λmax(H₂O) = 258nm）
（参考例１）
3- Ｏ - ベンジル -4- ホルミル -5- Ｏ - ｔ - ブチルジフェニルシリル -1,2- Ｏ - イソプロピリデン - α - Ｄ - エリスロペントフラノース
窒素気流下、−７８℃に冷却した無水ジクロロメタン（１５０ml）に、塩化オキザリル（３．５３ml、４０．５mmol）を加え、そこへ、無水ジクロロメタン（７５ml）に溶解したジメチルスルホキシド（４．６２ml、６４．８mmol）を滴下した。２０分攪拌後、反応試薬液に無水ジクロロメタン（７５ml）に溶解した3-Ｏ-ベンジル-4-C-ヒドロキシメチル-5-Ｏ-ｔ-ブチルジフェニルシリル-1,2-Ｏ-イソプロピリデン-α-Ｄ-エリスロペントフラノース（特開平10-304889に記載の方法に従って製造することができる）（７．４０ｇ、１３．５０mmol）を滴下し、さらに、３０分攪拌した。さらにまた、トリエチルアミン（１６．７ml、１２０mmol）を加え、ゆっくり室温に戻した。反応液に水（約２００ml）を加え、分液し、有機層を水、次いで飽和食塩水で洗い、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。減圧下、溶媒を留去後、シリカゲルクロマトグラフィーにより精製し（ヘキサン：酢酸エチル＝５：１）、無色油状物質（６．８２ｇ、１２．４９mmol，収率９３％）を得た。
（参考例２）
3- Ｏ - ベンジル -4- ビニル -5- Ｏ - ｔ - ブチルジフェニルシリル -1,2- Ｏ - イソプロピリデン - α - Ｄ - エリスロペントフラノース
窒素気流下、参考例１で得られた3-Ｏ-ベンジル-4-ホルミル-5-Ｏ-ｔ-ブチルジフェニルシリル-1,2-Ｏ-イソプロピリデン-α-Ｄ-エリスロペントフラノース（６．８２ｇ、１２．４９mmol）を無水テトラヒドロフラン（２００ml）に溶解し、０℃に冷却した。そこへ、０．５Ｍ−テーベ試薬／トルエン溶液（２８ml、１４．０mmol）を滴下後、０℃で１時間攪拌した。
【０３３９】
反応終了後、ジエチルエーテル（２００ml）を加えた後、０．１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（３０ｍ）をゆっくり加えた。得られた析出物をセライトを用いて濾過し、濾取物をジエチルエーテルで洗い、分液し、有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥した。減圧下、溶媒を留去後、得られた残渣をアルミナ（塩基性）クロマトグラフィーにより粗精製し（酢酸エチル）、さらに、得られた粗精製物をシリカゲルクロマトグラフィーによりさらに精製し（ヘキサン：酢酸エチル＝７：１）、無色油状物質（１．６８ｇ、３．０９mmol，収率２５％）を得た。
¹H-NMR (400MHz, CDCl₃) : 0.97(9H, s), 1.32(3H, s), 1.54(1H, s), 3.49(1H,d, 11Hz), 3.53(1H, d, 11Hz), 4.45(1H, d, 4.9Hz), 4.64(1H, t, 3.8Hz), 4.65(1H, d, 12Hz), 4.82(1H, d, 12Hz), 5.18(1H, dd, 1.9 and 11Hz), 5.44(1H,dd, 1.9 and 18Hz), 5.80(1H, d, 3.8Hz), 6.16(1H, dd, 11 and 18Hz), 7.2-7.7(15H, m).
FABMS(mNBA)：545[M+H]⁺
（参考例３）
3- Ｏ - ベンジル -4- ヒドロキシエチル -5- Ｏ - ｔ - ブチルジフェニルシリル -1,2- Ｏ - イソプロピリデン - α - Ｄ - エリスロペントフラノース
窒素気流下、参考例２で得られた3-Ｏ-ベンジル-4-ビニル-5-Ｏ-ｔ-ブチルジフェニルシリル-1,2-Ｏ-イソプロピリデン-α-Ｄ-エリスロペントフラノース（１．６８ｇ、３．０９mmol）を無水テトラヒドロフラン（５０ml）に溶解し、そこへ、０．５Ｍの９−ＢＢＮ（９−ボラビシクロ［３．３．１］ノナン）／テトラヒドロフラン溶液（１０ml、５mmol）を滴下し、室温で一晩攪拌した。
【０３４０】
反応液に泡が出なくなるまで水を加えた後、３Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（５ml）を加えた。さらに、３０％過酸化水素水（１０ml）を、反応液が３０乃至５０℃になるようにゆっくり加え、その後３０分攪拌した。
【０３４１】
反応終了後、反応混合物に、飽和食塩水及び酢酸エチルを加え、分液し、有機層を中性リン酸バッファー、次いで、飽和食塩水で洗い、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。減圧下、溶媒を留去後、得られた残渣をシリカゲルクロマトグラフィーにより精製し（ヘキサン：酢酸エチル＝5：1）、無色油状物質（1154ｍｇ、2.05mmol，収率66％）を得た。
¹H-NMR (400MHz, CDCl₃) : 0.99(9H, s), 1.36(3H, s), 1.68(3H, s), 1.70(1H,ddd, 3.3, 6.2 and 20Hz), 2.45(1H, ddd, 4.0, 8.6 and 20Hz), 3.42(1H, d, 11Hz), 3.68(2H, m), 3.74(1H, d, 11Hz), 4.29(1H, d, 5.2Hz), 4.56(1H, d, 12Hz), 4.69(1H, dd, 4.0 and 5.2Hz), 4.81(1H, d, 12Hz), 5.80(1H, d, 4.0), 7.3-7.7(15H, m).
FABMS(mNBA)：563[M+H]⁺
（参考例４）
3- Ｏ - ベンジル -4-( ｐ - トルエンスルホニルオキシエチル )-5- Ｏ - ｔ - ブチルジフェニルシリル -1,2- Ｏ - イソプロピリデン - α - Ｄ - エリスロペントフラノース
窒素気流下、参考例３で得られた3-Ｏ-ベンジル-4-ヒドロキシエチル-5-Ｏ-ｔ-ブチルジフェニルシリル-1,2-Ｏ-イソプロピリデン-α-Ｄ-エリスロペントフラノース（９８０ｍｇ 、１．７４mmol）を予めトルエンで共沸脱水し、これを無水ジクロロメタン（３０ml）に溶解し、０℃に冷却した。そこへ、トリエチルアミン（１．２５ml、９mmol）、ジメチルアミノピリジン（２０ｍｇ、０．１７mmol）、塩化ｐ−トルエンスルホニル（５７２ｍｇ、３mmol）を加え、室温で一晩攪拌した。
【０３４２】
反応終了後、反応液に炭酸水素ナトリウム飽和水溶液を加え、分液し、有機層を、炭酸水素ナトリウム飽和水溶液、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。
【０３４３】
減圧下、溶媒を留去後、得られた残渣を、シリカゲルクロマトグラフィーにより精製し（ヘキサン：酢酸エチル＝９：１、その後７：１）、無色油状物質（９５３ｍｇ、１．３３mmol，７６％）を得た。
¹H-NMR (400MHz, CDCl₃) : 0.95(9H, s), 1.30(3H, s), 1.46(3H, s), 1.89(1H,ddd, 6.9, 9 and 15Hz), 2.38(3H, s), 2.52(1H, ddd, 5.4, 9 and 15Hz), 3.35(1H, d, 11Hz), 3.58(1H, d, 11Hz), 4.14(1H, dt, 6.9 and 9Hz), 4.19(1H, d, 5.2Hz), 4.27(1H, dt, 5.4 and 9Hz), 4.49(1H, d, 12Hz), 4.61(1H, dd, 4.0and 5.2), 4.74(1H, d, 12Hz), 5.71(1H, d, 4.0Hz), 7.2-7.7(19H, m).FABMS(mNBA)：717[M+H]⁺
（参考例５）
1,2- ジ - Ｏ - アセチル -3- Ｏ - ベンジル -4-( ｐ - トルエンスルホニルオキシエチル ) -5- Ｏ - ｔ - ブチルジフェニルシリル - α - Ｄ - エリスロペントフラノース
参考例４で得られた3-Ｏ-ベンジル-4-(ｐ-トルエンスルホニルオキシエチル)-5-Ｏ-ｔ-ブチルジフェニルシリル-1,2-Ｏ-イソプロピリデン-α-Ｄ-エリスロペントフラノース９３３ｍｇ （１．３０mmol）を酢酸１０mlに溶解し、無水酢酸１．１３ml （１２mmol）、濃硫酸０．０１mlを加え、室温で１時間攪拌した。反応液を氷冷水５０mlにあけ、さらに３０分攪拌した。飽和食塩水、酢酸エチルを加え、有機層を中性リン酸バッファー、炭酸水素ナトリウム飽和水溶液、飽和食塩水で洗い、硫酸マグネシウム無水物で乾燥した。溶媒を留去後、得られた残渣をシリカゲルクロマトグラフィーにより精製し（ヘキサン：酢酸エチル＝３：１）、無色油状物質 ６１１ｍｇ（０．８０３mmol，収率６２％, α:β= 1 : 14）を得た。
¹H-NMR (400MHz, CDCl₃) (β体): 11.06(9H, s), 1.79(3H, s), 2.06(3H, s), 2.15(1H, m), 2.33(1H, ddd, 5, 10 and 15Hz), 2.43(3H, s), 3.52(1H, d, 10Hz), 3.55(1H, d, 10Hz), 4.22(1H, dt, 6.0 and 10Hz), 4.27(1H, d, 5.1Hz), 4.34(1H, dt, 5.3 and 10Hz), 4.51(1H, d, 11Hz), 4.57(1H, d, 11Hz), 5.33(1H,d, 5.1Hz), 6.08(1H, s), 7.1-7.7(19H, m).FABMS(mNBA)：761[M+H]⁺
（参考例６）
2'- Ｏ - アセチル -3'- Ｏ - ベンジル -4'- ｐ - トルエンスルホニルオキシエチル -5'-O- ｔ - ブチルジフェニルシリル - ５ - メチルウリジン
参考例５で得られた1,2-ジ-Ｏ-アセチル-3-Ｏ-ベンジル-4-(ｐ-トルエンスルホニルオキシエチル) -5-Ｏ-ｔ-ブチルジフェニルシリル-α-Ｄ-エリスロペントフラノース（２６８ｍｇ、０．３５２mmol）を、無水１，２−ジクロロエタン（１０ml）に溶解した。そこへ、前記の文献（H.Vorbrueggen,K.Krolikiewicz andB,Bennua,Chem.Ber.,114,1234-1255(1981)）に従って調製したトリメチルシリル化チミン（１９０ｍｇ、約０．７mmol）を加え、０℃に冷却し、さらに、トリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリル（０．１３ml、０．７mmol）を加え、その後、５０℃で３時間撹拌した。反応液を、室温に戻し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（約１０ml）を加えた。
【０３４４】
反応終了後、反応混合物に塩化メチレン（約２０ml）を加えて、攪拌し、析出した白色不溶物をセライトを用いて濾過した。得られた濾液から有機層を分離し、有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を留去後、得られた残渣をシリカゲルクロマトグラフィーにより精製し（ヘキサン：酢酸エチル ＝ １．５：１、その後１：１）、無色アモルファス状物質 ２４１ｍｇ（０．２９１mmol，収率８３％）を得た。
¹H-NMR (400MHz, CDCl₃) : 1.08(9H, s), 1.57(3H, s), 2.07(3H, s), 2.39(3H,s), 3.55(1H, d, 11Hz), 3.79(1H, d, 11Hz), 4.12(2H, m), 4.36(1H, d, 6Hz), 4.39(1H, d, 11Hz), 4.55(1H, d, 11Hz), 5.38(1H, t, 6Hz), 6.01(1H, d, 6Hz), 7.2-7.6(19H, m), 7.96(1H, s).
FABMS(mNBA)：827[M+H]⁺
（参考例７）
2'- Ｏ - アセチル -3'- Ｏ - ベンジル -4'- ｐ - トルエンスルホニルオキシエチル -5'-O-t- ブチルジフェニルシリル -6- Ｎ - ベンゾイルアデノシン
参考例５で得られた1,2-ジ-Ｏ-アセチル-3-Ｏ-ベンジル-4-(ｐ-トルエンスルホニルオキシエチル) -5-Ｏ-ｔ-ブチルジフェニルシリル-α-Ｄ-エリスロペントフラノース（３４０ｍｇ、０．４４７mmol）を、無水１，２−ジクロロエタン（１０ml）に溶解した。そこへ、前記の文献（H.Vorbrueggen,K.Krolikiewicz andB,Bennua,Chem.Ber.,114,1234-1255(1981)）に従って調製したトリメチルシリル化ベンゾイルアデニン（３０７ｍｇ、約０．８mmol）を加え、０℃に冷却し、さらに、トリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリル（０．１４５ml、０．８mmol）を加え、その後、２時間加熱還流した。反応液を、室温に戻し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（約１０ml）を加えた。反応終了後、反応混合物に塩化メチレン（約２０ml）を加えて、攪拌し、析出した白色不溶物をセライトを用いて濾過した。得られた濾液から有機層を分離し、有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を留去後、得られた残渣をシリカゲルクロマトグラフィーにより精製し（ジクロロメタン：メタノール ＝ ５０：１）、無色アモルファス状物質 １５５ｍｇ（０．１６５mmol，収率３４％）を得た。¹H-NMR (400MHz, CDCl₃) : 1.01(9H, s), 2.04(3H, s), 2.15(1H, m), 2.38(3H,s), 2.40(1H, m), 3.53(1H, d, 11Hz), 3.82(1H, d, 11Hz), 4.21(1H, m), 4.25(1H, m), 4.53(1H, d, 11Hz), 4.58(1H, d, 11Hz), 4.70(1H, d, 5.8Hz), 5.97(1H, t, 5.4Hz), 6.10(1H, d, 5.0Hz), 7.2-8.0(24H, m), 8.04(1H, s), 8.58(1H, s), 8.95(1H, s).
FABMS(mNBA)：940[M+H]⁺
（参考例８）
3- Ｏ -p- メトキシベンジル -4- ヒドロキシメチル‐ 1,2- Ｏ - イソプロピリデン - α - Ｄ - エリスロペントフラノース
６−（４‐メトキシ−ベンジルオキシ）−２，２−ジメチル−テトラヒドロ−フロ[２，３−ｄ]−１，３−ジオキソール−５−カルバルデヒド（6-(4-methoxy-benzyloxy)-2,2-dimethyl-tetrahydro-furo[2,3-d][1,3]dioxole-5-carbaldehyde）（３４５０ｍｇ、１１．１９mmol）（Wood, William W.; Watson, Graham M. J.Chem.Soc.Chem.Commun. 21, 1986, 1599-1600）を水５０ml/テトラヒドロフラン５０ml混合液に溶かし、０℃に冷却した。これにホルムアルデヒド（３７％ ｉｎ Ｈ₂Ｏ）６．５mlおよび１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液３０mlを加え、室温で一晩撹拌した。反応終了後、反応液にジクロロメタン（約３００ml）を加え、分液した。有機層を０．１Ｎ塩酸、炭酸水素ナトリウム飽和水溶液（約２００ml）、飽和食塩水（約２００ml）で洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を減圧下濃縮し、得られた残渣を、シリカゲルクロマトグラフィーを用いて精製し（ヘキサン：酢酸エチル＝１：３）、無色固体の目的物（３５１０ｍｇ、１０．３２mmol、収率９２％）を得た。
¹H-NMR (400MHz, CDCl₃) : 1.34(3H, s), 1.64(3H, s), 1.84(1H, dd, 3.7 and 9.5Hz), 2.38(1H, t, 7.0Hz), 3.55(1H, dd, 9.5 and 12Hz), 3.77(1H, dd, 3.7and 12Hz), 3.82(3H, s), 3.90(2H, m), 4.20(1H, d, 5.1Hz), 4.50(11Hz), 4.63(1H, dd, 3.7 and 5.1Hz), 4.74(1H, d, 11Hz), 5.76(1H, 3.7Hz), 6.90(2H, m), 7.30(2H, m).
FABMS(mNBA)：341[M+H]⁺.
（参考例９）
3- Ｏ -p- メトキシベンジル -4- ヒドロキシメチル -5- Ｏ - ベンジル -1,2- Ｏ - イソプロピリデン - α - Ｄ - エリスロペントフラノース
窒素気流下、3-Ｏ-p-メトキシベンジル-4-ヒドロキシメチル‐1,2-Ｏ-イソプロピリデン-α-Ｄ-エリスロペントフラノース（３０００ｍｇ、８．８２mmol）を無水ジメチルホルムアミド４５mlに溶かし、０℃に冷却した。水素化ナトリウム（６０％ in mineral oil）３５０ｍｇを加え、２０分間、０℃で撹拌した後、ベンジルブロミド（１．０５ml、８．８２mmol）をゆっくり滴下し、その後室温で一晩撹拌した。反応終了後、反応液を氷水にあけてから、酢酸エチル（約１００ml×３）で抽出した。有機層を炭酸水素ナトリウム飽和水溶液（約２００ml）、飽和食塩水（約２００ml）で洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を減圧下濃縮し、得られた残渣を、シリカゲルクロマトグラフィーを用いて精製し（ヘキサン：酢酸エチル＝２．５：１）、無色油状の目的物（２．１２ｇ、４．９３mmol、収率５６％）を得た。
¹H-NMR (400MHz, CDCl₃) : 1.34(3H, s), 1.63(3H, s), 3.52(1H, d, 11Hz), 3.59(1H, d, 11Hz), 3.80(3H, s), 3.82(1H, d, 12Hz), 3.89(1H, d, 12Hz), 4.25(1H, d, 5.1Hz), 4.44(1H, d, 12Hz), 4.45(1H, d, 12Hz), 4.54(1H, d, 12Hz),4.61(1H, dd, 3.7 and 5.1Hz), 4.71(1H, d, 12Hz), 5.77(1H, d, 3.7Hz), 6.85-6.89(2H, m), 7.23-7.36(7H, m). FABMS(mNBA)：431[M+H]⁺.
（参考例１０）
3- Ｏ -p- メトキシベンジル -4- ホルミル -5- Ｏ - ベンジル -1,2- Ｏ - イソプロピリデン - α - Ｄ - エリスロペントフラノース
3-Ｏ-p-メトキシベンジル-4-ヒドロキシメチル-5-Ｏ-ベンジル-1,2-Ｏ-イソプロピリデン-α-Ｄ-エリスロペントフラノース（2.07g、4.81mmol）を用いて、参考例１と同様の方法により無色油状の目的物（1.73ｇ、4.06mmol、収率85％）を得た。
【０３４５】
¹H-NMR (400MHz, CDCl₃) : 1.34(3H, s), 1.60(3H, s), 3.60(1H, d, 11Hz), 3.65(1H, d, 11Hz), 3.80(3H, s), 4.34(1H, d, 4.4Hz), 4.46(1H, d, 12Hz), 4.50-4.58(3H, m), 4.64(1H, d, 12Hz), 5.82(1H, d, 3.3Hz), 6.85-6.88(2H, m), 7.22-7.35(7H, m), 9.90(1H, s).
FABMS(mNBA)：429[M+H]⁺.
（参考例１１）
3- Ｏ -p- メトキシベンジル -4- ビニル -5- Ｏ - ベンジル -1,2- Ｏ - イソプロピリデン - α - Ｄ - エリスロペントフラノース
水素化ナトリウム（６０％ in mineral oil）８５ｍｇを無水ジメチルホルスルホキシド２mlに懸濁し、８０℃で４５分間撹拌した。室温に戻したあとここに、メチルトリフェニルホスホニウムブロミド（７５７ｍｇ、２．１２mmol）を溶かした無水ジメチルホルスルホキシド溶液３mlを滴下し、室温で１０分間撹拌した。さらに3-Ｏ-p-メトキシベンジル-4-ホルミル-5-Ｏ-ベンジル-1,2-Ｏ-イソプロピリデン-α-Ｄ-エリスロペントフラノース（７５８ｍｇ、１．７７mmol）を溶かした無水ジメチルホルスルホキシド溶液３mlを滴下し、室温で１時間撹拌した。反応終了後、反応液を氷水にあけ、酢酸エチル（約５０ml×３）で抽出後、有機層を水（約１００ml）、飽和食塩水（約１００ml）で洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を減圧下濃縮し、得られた残渣を、シリカゲルクロマトグラフィーを用いて精製し（ヘキサン：酢酸エチル＝５：１）、無色油状の目的物（４５５ｍｇ、１．０７mmol、収率６０％）を得た。
【０３４６】
¹H-NMR (400MHz, CDCl₃) :1.28(3H, s), 1.52(3H, s), 3.28(1H, d, 11Hz), 3.33(1H, d, 11Hz), 3.79(3H, s), 4.23(1H, d, 5.1Hz), 4.40(1H, d, 12Hz), 4.50-4.55(3H, m), 4.69(1H, d, 12Hz), 5.24(1H, dd, 2.0 and 12Hz), 5.51(1H, dd, 2.0 and 17Hz), 5.75(1H, d, 3.7Hz), 6.18(1H, dd, 12 and 17Hz), 6.84-6.88(2H, m), 7.21-7.35(7H, m).
FABMS(mNBA)：449[M+Na]⁺ , 365[M+K]⁺.
（参考例１２）
3- Ｏ -p- メトキシベンジル -4- ヒドロキシエチル -5- Ｏ - ベンジル -1,2- Ｏ - イソプロピリデン - α - Ｄ - エリスロペントフラノース
3-Ｏ-p-メトキシベンジル-4-ビニル-5-Ｏ-ベンジル-1,2-Ｏ-イソプロピリデン-α-Ｄ-エリスロペントフラノース（４８５ｍｇ、１．１４mmol）を用いて、参考例３と同様の方法により無色油状の目的物（３２３ｍｇ、０．７２７mmol、収率６４％）を得た。
【０３４７】
¹H-NMR (400MHz, CDCl₃) : 1.33(3H, s), 1.66(3H, s), 1.77(1H, 3.7, 6.6 and 15Hz), 2.48(1H, dq, 4.4, and 15Hz), 3.28(1H, d, 11Hz), 3.53(1H, d, 11Hz), 3.74(1H, m), 3.80(3H, s), 3.83(1H, m), 4.11(1H, d, 5.1Hz), 4.43(1H,d, 12Hz), 4.48(1H, d, 12Hz), 4.52(1H, d, 12Hz), 4.62(1H, dd, 3.7 and 5.1Hz), 4.69(1H, d, 12Hz), 5.76(1H, d, 3.7Hz), 6.86(2H, m), 7.22-7.36(7H, m).
FABMS(mNBA)：445[M+H]⁺.
（参考例１３）
4- ヒドロキシエチル -5- Ｏ - ベンジル -1,2- Ｏ - イソプロピリデン - α - Ｄ - エリスロペントフラノース
3-Ｏ-p-メトキシベンジル-4-ヒドロキシエチル-5-Ｏ-ベンジル-1,2-Ｏ-イソプロピリデン-α-Ｄ-エリスロペントフラノース（１３．５ｇ、３０．３６mmol）を１０％含水ジクロロメタン溶液２００mlに溶かし、そこに２，３‐ジクロロ-５，６‐ジシアノ-１，４‐ベンゾキノン（９５％）（８．７ｇ、３６．４３mmol）を加え、室温で４時間撹拌した。反応終了後、反応液をジクロロメタン（約３００ml）で抽出し、有機層を炭酸水素ナトリウム飽和水溶液（約３００ml）、飽和食塩水（約３００ml）で洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を減圧下濃縮し、得られた残渣を、シリカゲルクロマトグラフィーを用いて精製し（ヘキサン：酢酸エチル＝１：２）、無色油状の目的物（７．９ｇ、２４．３８mmol、収率８０％）を得た。
【０３４８】
¹H-NMR (400MHz, CDCl₃) : 1.38(3H, s), 1.62(3H, s), 1.86(1H, dq, 3.7 and 15Hz), 2.19(1H, ddd, 4.4, 8.0 and 15Hz), 3.46(1H, d, 10Hz), 3.50(1H, d, 10Hz), 3.74(1H, dq, 3.7 and 12Hz), 3.85(1H, dq, 3.7, 12Hz), 4.25(1H, d, 6.6Hz), 4.51(1H, d, 12Hz), 4.57(1H, d, 12Hz), 4.72(1H, dd, 4.4 and 6.6Hz), 5.88(1H, d, 4.4Hz), 7.2-7.4(5H, m).
FABMS(mNBA)：325[M+H]⁺.
（参考例１４）
６ａ−ベンジルオキシメチル−２，２−ジメチル−ヘキサヒドロ−フロ [ ２’，３’：４，５ ] フロ [ ２，３−ｄ ] − 1,3 −ジオキソール
4-ヒドロキシエチル-5-Ｏ-ベンジル-1,2-Ｏ-イソプロピリデン-α-Ｄ-エリスロペントフラノース（７．９ｇ、２４．３８mmol）を無水ピリジン２００mlに溶かし、ｐ‐トルエンスルホン酸クロリド（５．７２ｇ、３０mmol）を加え、室温で一晩撹拌した。反応終了後、ピリジンを留去し、炭酸水素ナトリウム飽和水溶液（約１００ml）を加え、酢酸エチル（約２００ml×２）で抽出した。有機層を炭酸水素ナトリウム飽和水溶液（約１００ml）、飽和食塩水（約１００ml）で洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を減圧下濃縮し、得られた残渣を、シリカゲルクロマトグラフィーを用いて精製し（ヘキサン：酢酸エチル＝２：１）、白色固体の目的物（６．９３ｇ、２２．６４mmol、収率９３％）を得た。
【０３４９】
¹H-NMR (400MHz, CDCl₃) : 1.37(3H, s), 1.63(3H, s), 1.82(1H, ddd, 8.0, 10 and 13Hz), 2.11(1H, ddd, 3.0, 6.5 and 13Hz), 3.41(1H, d, 10Hz), 3.70(1H, d, 10Hz), 4.04(1H, dt, 2.2 and 8.1Hz), 4.20(1H, ddd, 6.3, 8.0 and 10Hz), 4.49(1H, d, 5.9Hz), 4.52(1H, d, 12Hz), 4.60(1H, d, 12Hz), 4.62(1H, dd, 3.7 and 5.9Hz), 5.92(1H, d, 3.7Hz), 7.2-7.4(5H, m).FABMS(mNBA)：307[M+H]⁺.
（参考例１５）
２，３−ジアセトキシ−６ａ−ベンジルオキシメチル−ヘキサヒドロ−フロ [ ３，２‐ｄ ] フラン
参考例１４で得られた６ａ−ベンジルオキシメチル−２，２−ジメチル−ヘキサヒドロ−フロ[２’，３’：４，５]フロ[２，３−ｄ]−1,3−ジオキソール（６．８ｇ、２２．２２mmol）を用いて、参考例５と同様の方法により無色油状の目的物（７．０３ｇ、２０．１mmol、収率９０％）（α：β＝約３：４）を得た。
【０３５０】
¹H-NMR (400MHz, CDCl₃) :（α体）2.03(1H, dt, 9.0 and 13Hz), 2.12(1H, m), 2.12(3H, s), 2.15(3H, s), 3.50(1H, d, 10Hz), 3.67(1H, d, 10Hz), 4.01(1H, dt, 3.2 and 8.3Hz), 4.25(1H, ddd, 6.4, 8.4 and 9.6Hz), 4.51(1H, d, 5.3Hz), 4.52(1H, d, 12Hz), 4.62(1H, d, 12Hz), 5.12(1H, t, 5.3Hz), 6.46(1H, d, 5.3Hz), 7.2-7.4(5H, m). （β体）2.01(3H, s), 2.06(1H, ddd, 8.0, 10and 13Hz), 2.13(1H, dq, 2.8 and 13Hz), 2.14(3H, s), 3.61(1H, d, 10Hz), 3.65(1H, d, 10Hz), 3.92(1H, ddd, 5.9, 8.5 and 10Hz), 4.01(1H, dt, 2.7 and 8.5Hz), 4.58(1H, d, 12Hz), 4.60(1H, d, 5.7Hz), 4.62(1H, d, 12Hz), 5.17(1H, dd, 3.2 and 5.7Hz), 6.24(1H, d, 3.2Hz), 7.2-7.4(5H, m).FABMS(mNBA)：349[M-H]⁺.
（参考例１６）
２，３−ジアセトキシ−６ａ−アセトキシメチル−ヘキサヒドロ−フロ [ ３，２‐ｄ ] フラン
参考例１５で得られた化合物（６．９３ｇ、１９．８mmol）を酢酸エチル１００mlに溶かし、パラジウム−活性炭（１５０ｍｇ）を加え、常圧水素下、室温で１時間撹拌した。反応終了後、パラジウム−活性炭をろ過し、溶媒を留去した。残渣を無水ピリジン８０mlに溶かし、無水酢酸１０mlを加え、室温で３０分間撹拌した。反応終了後、溶媒を留去し、炭酸水素ナトリウム飽和水溶液（約１００ml）を加え、酢酸エチル（約１００ml）で抽出した。有機層を炭酸水素ナトリウム飽和水溶液（約１００ml）、飽和食塩水（約１００ml）で洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を減圧下濃縮し、得られた残渣を、シリカゲルクロマトグラフィーを用いて精製し（ヘキサン：酢酸エチル＝１．５：１）、白色固体の目的物（α：β＝約１：１）（４．１３ｇ、１３．６７mmol、収率６９％）を得た。
【０３５１】
¹H-NMR (400MHz, CDCl₃) : α体）2.08(1H, m), 2.11(3H, s), 2.13(3H, s), 2.16 (3H, s), 2.21(1H, dq, 2.9 and 13Hz), 4.05(1H, dt, 2.9 and 8.0Hz), 4.10(1H, d, 12Hz), 4.29(1H, ddd, 6.6, 8.0 and 10Hz), 4.36(1H, d, 12Hz), 4.49(1H, d, 5.1Hz), 5.09(1H, t, 5.1Hz), 6.45(1H, d, 5.1Hz). （β体）2.01(1H, ddd, 8.0, 10 and 13Hz), 2.10(3H, s), 2.12(3H, s), 2.15(3H, s), 2.19(1H, ddd, 2.2, 5.9 and 13Hz), 3.90(1H, ddd, 5.9, 8.8 and 10Hz), 4.04(1H,dt, 2.2 and 8.0), 4.25(1H, d, 12Hz), 4.35(1H, d, 12Hz), 4.60(1H, d, 5.8Hz), 5.15(1H, dd, 2.9 and 5.8Hz), 6.27(1H, d, 2.9Hz).
FABMS(mNBA)：303[M+H]⁺
（参考例１７）
3-[6- ベンジルオキシ -5-(tert- ブチルジフェニルシラニルオキシメチル )-2,2- ジメチルテトラヒドロ - フロ [2,3-d][1,3] ジオキソール -5- イル ]- アクリル酸エチルエステル
窒素気流下、ジエチルホスホノ酢酸エチル（１１．５ｍｌ、５７．４mmol）を無水テトラヒドロフラン２００mlに溶かし、そこに水素化ナトリウム（６０％ミネラルオイル懸濁液）（２．３ｇ、５７．４ｍｍｏｌ）を加え、室温で１０分撹拌後、無水テトラヒドロフラン（２００ｍｌ）に溶かした3-Ｏ-p-メトキシベンジル-4-ホルミル-5-Ｏ-ベンジル-1,2-Ｏ-イソプロピリデン-α-Ｄ-エリスロペントフラノース（２６．１ｇ、４７．８mmol）（特開2000-297097に記載の方法に従って製造することができる）を滴下した後、室温で３０分撹拌した。反応終了後、反応液に水（約１００ｍｌ）を加え、酢酸エチル（約４００ｍｌ）で抽出し、有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（約２００ml）、飽和食塩水（約２００ml）で洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。溶媒を減圧下留去し、得られた残渣を、シリカゲルクロマトグラフィーを用いて精製し（ヘキサン：酢酸エチル＝７：１）、無色油状の目的物（２５．４ｇ、４１．２mmol、収率８６％）を得た。
【０３５２】
¹H-NMR (400MHz, CDCl₃) : 1.04(9H, s), 1.30(3H, t, 7.3Hz), 1.45(3H, s),1.62(3H, s), 3.54(1H, d, 10Hz), 3,58(1H, d, 10Hz), 4.2(2H, m), 4.39(1H,d, 6.3Hz), 4.59(1H, d, 10Hz), 4.58(1H, dd, 4.4 and 6.3Hz), 4.77(1H, d, 10Hz), 5.90(1H, d, 4.4Hz), 6.24(1H, d, 16Hz), 7.3-7.7(16H, m).
FABMS(mNBA)：639[M+Na]⁺
（参考例１８）
3-[5-(tert- ブチルジフェニルシラニルオキシメチル )-6- ヒドロキシ -2,2- ジメチルテトラヒドロ - フロ [2,3-d][1,3] ジオキソール -5- イル ]- プロピオン酸エチルエステル
参考例１７で得られた3-[6-ベンジルオキシ-5-(tert-ブチルジフェニルシラニルオキシメチル)-2,2-ジメチルテトラヒドロ-フロ[2,3-d][1,3]ジオキソール-5-イル]-アクリル酸エチルエステル（１８．０ｇ、２９．２ｍｍｏｌ）を酢酸エチル（８０ｍｌ）に溶かし、さらに２０％水酸化パラジウム-炭素（５ｇ）を加え、水素下（4MPa）、１０時間撹拌し接触還元を行った。触媒を濾過し、濾液の溶媒を減圧下留去後、得られた残渣を、シリカゲルクロマトグラフィーにより精製し（ヘキサン：酢酸エチル＝５：１）、無色油状の目的物（１１．０ｇ、２０．８mmol、収率７１％）を得た。
【０３５３】
¹H-NMR (400MHz, CDCl₃) : 1.04(9H, s), 1.20(3H, t, 7.3Hz), 1.38(3H, s),1.61(3H, s), 1.85(1H, m), 2.22(2H, m), 2.48(1H, m), 2.68(1H, d, 8.0Hz),3.50(1H, d, 10Hz), 3,58(1H, d, 10Hz), 4.07(2H, q, 7.3Hz), 4.39(1H, dd, 6.3 and 8.0Hz), 4.73(1H, dd, 4.4 and 6.3Hz), 5.90(1H, d, 4.4Hz), 7.3-7.7(10H, m). FABMS(mNBA)：527[M-H]⁺, 551[M+Na]⁺
（参考例１９）
3-[5-(tert- ブチルジフェニルシラニルオキシメチル )-5-(3- ヒドロキシ - プロピレン )-2,2- ジメチルテトラヒドロ - フロ [2,3-d][1,3] ジオキソール -6- オール
窒素気流下、参考例１８で得られた3-[5-(tert-ブチルジフェニルシラニルオキシメチル)-6-ヒドロキシ-2,2-ジメチルテトラヒドロ-フロ[2,3-d][1,3]ジオキソール-5-イル]-プロピオン酸エチルエステル（８．８ｇ、１６．６ｍｍｏｌ）を無水テトラヒドロフラン（２００ｍｌ）に溶かし、水素化トリ-sec-ブチルホウ素リチウム−テトラヒドロフラン溶液（１Ｍ）を８０ｍｌ（８０ｍｍｏｌ）加え、室温で３０分撹拌した。反応終了後、酢酸水溶液を気泡が出なくなるまで加え、その後酢酸エチル（約２００ｍｌ）を加えた。飽和食塩水（約２００ｍｌ）で洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。溶媒を減圧下留去し、得られた残渣を、シリカゲルクロマトグラフィーを用いて精製し（ヘキサン：酢酸エチル＝２：１）、無色油状の目的物（７．３ｇ、１５．０mmol、収率９０％）を得た。
【０３５４】
¹H-NMR (400MHz, CDCl₃) : 1.05(9H, s), 1.39(3H, s), 1.52(1H, m), 1.61(3H, s), 1.70(1H, m), 1.88(1H, m), 1.95(1H, m), 2.70(1H, d, 8.0Hz), 3.56(1H, d, 11Hz), 3.58(2H, m), 3.66(1H, d, 11Hz), 4.42(1H, dd, 6.6 and 8.0Hz), 4.77(1H, dd, 4.4 and 6.6Hz), 5.93(1H, d, 4.4Hz), 7.3-7.7(10H, m). FABMS(mNBA)：487[M+H]⁺, 509[M+Na]⁺
（参考例２０）
3-[5-(tert- ブチルジフェニルシラニルオキシメチル )-6- ヒドロキシ -2,2- ジメチルテトラヒドロ - フロ [2,3-d][1,3] ジオキソール -5- イル ]- プロピレン p- トルエンスルホン酸エステル
窒素気流下、参考例１９で得られた3-[5-(tert-ブチルジフェニルシラニルオキシメチル)-5-(3-ヒドロキシプロピレン)-2,2-ジメチルテトラヒドロ-フロ[2,3-d][1,3]ジオキソール-6-オール（７．２ｇ、１４．９ｍｍｏｌ）を無水ジクロロメタン（２００ｍｌ）に溶かし、トリエチルアミン（５．０ｍｌ、３６ｍｍｏｌ）、塩化p-トルエンスルホニル（３．４３ｇ、１８．０ｍｍｏｌ）および4-ジメチルアミノピリジン（１００ｍｇ、０．８１ｍｍｏｌ）を加え、室温で一晩撹拌した。反応終了後、反応液を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（約２００ｍｌ）、飽和食塩水（約２００ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。溶媒を減圧下留去し、得られた残渣を、シリカゲルクロマトグラフィーを用いて精製し（ヘキサン：酢酸エチル＝３：１）、無色油状の目的物（８．９ｇ、１３．９mmol、収率９３％）を得た。
【０３５５】
¹H-NMR (400MHz, CDCl₃) : 1.03(9H, s), 1.37(3H, s), 1.53(3H, s), 1.76(2H, m), 2.42(3H, s), 2.58(1H, d, 8.0Hz), 3.46(1H, d, 11Hz), 3.53(1H, d, 11Hz), 3.97(2H, m), 4.33(1H, dd, 6.4 and 8.0Hz), 4.71(1H, dd, 4.4 and 6.4Hz), 5.87(1H, d, 4.4Hz), 7.3-7.8(14H, m). FABMS(mNBA)：663[M+Na]⁺
（参考例２１）
tert- ブチル -(2,2- ジメチル - テトラヒドロ -1,3,4,8- テトラオキサ - シクロペンタ [ α ] インデン -7a- イルメトキシ )- ジフェニル - シラン
窒素気流下、参考例２０で得られた3-[5-(tert-ブチル-ジフェニル-シラニルオキシメチル)-6-ヒドロキシ-2,2-ジメチル-テトラヒドロ-フロ[2,3-d][1,3]ジオキソール-5-イル]-プロピレンp-トルエンスルホン酸エステルを無水テトラヒドロフラン６０ｍｌに溶かし、０℃に冷却した。そこにリチウムヘキサメチレンジシラザン-テトラヒドロフラン溶液（１．０Ｍ）を１７ｍｌ（１７ｍｍｏｌ）滴下し、室温で３０分撹拌した。反応終了後、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（約１００ｍｌ）を加え、酢酸エチル（１００ｍｌ）で抽出した。飽和食塩水（約１００ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させたあと、溶媒を減圧下留去し、得られた残渣を、シリカゲルクロマトグラフィーを用いて精製し（ヘキサン：酢酸エチル＝７：１）、無色油状の目的物（５．８ｇ、１２．４mmol、収率８９％）を得た。
【０３５６】
¹H-NMR (400MHz, CDCl₃) : 1.05(9H, s), 1.38(1H, s), 1.42(1H, m), 1.64(1H, s), 1.73(2H, m), 2.01(1H, m), 3.57(3H, m), 4.12(1H, m), 4.15(1H, d, 5.9Hz), 4.90(1H, dd, 4.4 and 5.9Hz), 5.87(1H, d, 4.4Hz), 7.4-7.7(10Hz, m). FABMS(mNBA)： 467[M-H]⁺, 491[M+Na]⁺
（参考例２２）
2- アセトキシ -7a-(tert- ブチル - ジフェニル - シラニルオキシメチル )- ヘキサヒドロ - フロ [3,2-b] ピラン -3- イル - 酢酸エステル
参考例２１で得られたtert-ブチル-(2,2-ジメチル-テトラヒドロ-1,3,4,8-テトラオキサ-シクロペンタ[α]インデン-7a-イルメトキシ)-ジフェニル-シラン（４．３７ｇ、９．３２ｍｍｏｌ）を酢酸（６０ｍｌ）に溶かし、０℃に冷却した。そこに無水酢酸（１０ｍｌ）、濃硫酸（２０μｌ）を加え、室温で３０分撹拌した。反応終了後、水（１００ｍｌ）を加え、さらに１時間撹拌した。酢酸エチル（約２００ｍｌ）を加え抽出し、有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（約２００ｍｌ×３）、飽和食塩水（約２００ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させたあと、溶媒を減圧下留去した。得られた残渣を、シリカゲルクロマトグラフィーを用いて精製し（ヘキサン：酢酸エチル＝４：１）、無色油状の目的のジアステレオマー混合物（４．３３ｇ、８．４４mmol、収率９１％）を得た。
【０３５７】
¹H-NMR (400MHz, CDCl₃) : less polar diastereomer 1.09(9H, s), 1.48(1H,m), 1.57(3H, s), 1.83(2H, m), 1.90(1H, m), 1.94(3H, s), 2.16(3H, s), 3.29(1H, dt, 2.2 and 11Hz), 3.42(1H, d, 11Hz), 3.57(1H, d, 11Hz), 3.96(1H,m), 4,34(1H, d, 4.4Hz), 5.43(1H, t, 4.4Hz), 6.35(1H, d, 4.4Hz), 7.4-7.8(10H, m). more polar diastereomer 1.07(9H, s), 1.45(1H, m), 1.68(1H, m),1.82(2H, m), 2.15(3H, s), 2.17(3H, s), 3.28(1H, dt, 2.9 and 11Hz), 3.39(1H, d, 11Hz), 3.42(1H, d, 11Hz), 4.02(1H, m), 4.22(1H, d, 4.4Hz), 5.59(1H, t, 5.1Hz), 6.41(1H, d, 5.1Hz), 7.4-7.7(10H, m). FABMS(mNBA)： 535[M+Na]⁺
（試験例１）
（ヌクレアーゼ酵素耐性の測定）
各種オリゴヌクレオチド(80μｇ)を含むバッファー溶液2250μl（50mM Tris(pH8.0) and 10mM MgCl₂）に3'-エキソヌクレアーゼ（phosphodiesterase from Crotalus durissus (Boehringer Mannheim)）0.3μｇを加え、混合液を37℃に保ち反応を行った（酵素濃度0.13μg/ml）。一定時間後に混合液の一部を取り、９０℃で２分間加熱することにより、酵素を失活させ反応を停止させた。各時間における混合液中のオリゴヌクレオチドの残量を逆相高速液体カラムクロマトグラフィーで定量し、ヌクレアーゼ存在下でのオリゴヌクレオチド量の経時的変化を測定した。
【０３５８】
試験に用いたオリゴヌクレオチド
1. 実施例１１で得られたオリゴヌクレオチド（１）。
2. 特開平１０−１９５０９８号に従って調整した配列:
５'−ttttttttttnt−３'（配列表の配列番号１）
で示される配列を有し、nが3'-O,4'-C-メチレンアデノシンであるオリゴヌクレオチド（以下、「オリゴヌクレオチド(2)」とする。)
3. 配列:
５'−ttttttttttnt−３'（配列表の配列番号１）
で示される配列を有し、nがリボアデノシンであり、且つnの2'-水酸基とnの3'側チミジンの5'-水酸基が2',5'リン酸ジエステルで結合しているオリゴヌクレオチド（以下、「オリゴヌクレオチド(3)」とする。)
4. 配列:
５'−ttttttttttnt−３'（配列表の配列番号１）
で示される配列を有し、nが2'-デオキシアデノシンである天然型オリゴヌクレオチド（以下、「オリゴヌクレオチド(４)」とする。)
（結果）
図１に示すように本発明のオリゴヌクレオチド類縁体は天然型と比して顕著なヌクレアーゼ耐性を示した。更に、既知の非天然型オリゴヌクレオチド類縁体と比しても顕著なヌクレアーゼ耐性を示した。
（試験例２）
（ヌクレアーゼ酵素耐性の測定）
各種オリゴヌクレオチド(40μｇ)を含むバッファー溶液960μl（50mM Tris(pH8.0) and 10mM MgCl₂）に3'-エキソヌクレアーゼ（phosphodiesterase from Crotalus durissus (Boehringer Mannheim)）1μｇ(40ul水溶液)を加え、混合液を37℃に保ち反応を行った（酵素濃度1μｇ/ml）。一定時間後に混合液の一部(200μl)を取り、９０℃で２分間加熱することにより、酵素を失活させ反応を停止させた。各時間における混合液中のオリゴヌクレオチドの残量を逆相高速液体カラムクロマトグラフィーで定量し、ヌクレアーゼ存在下でのオリゴヌクレオチド量の経時的変化を測定した。
【０３５９】
試験に用いたオリゴヌクレオチド
1. 実施例１１で得られたオリゴヌクレオチド（１）。
2. 実施例３９で得られたオリゴヌクレオチド（５）。
3. 特開平１０−１９５０９８号に従って調整した配列:
５'−ttttttttttnt−３'（配列表の配列番号１）
で示される配列を有し、nが3'-O,4'-C-メチレンアデノシンであるオリゴヌクレオチド（以下、「オリゴヌクレオチド(２)」とする。)
4. 配列:
５'−ttttttttttnt−３'（配列表の配列番号１）
で示される配列を有し、nがリボアデノシンであり、且つnの2'-水酸基とnの3'側チミジンの5'-水酸基が2',5'リン酸ジエステルで結合しているオリゴヌクレオチド（以下、「オリゴヌクレオチド(３)」とする。)
5. 配列:
５'−ttttttttttnt−３'（配列表の配列番号１）
で示される配列を有し、nが2'-デオキシアデノシンである天然型オリゴヌクレオチド（以下、「オリゴヌクレオチド(４)」とする。)
（結果）
図２に示すように本発明のオリゴヌクレオチド類縁体は天然型と比して顕著なヌクレアーゼ耐性を示した。更に、既知の非天然型オリゴヌクレオチド類縁体と比しても顕著なヌクレアーゼ耐性を示した。
（試験例３）RNase L誘導活性の測定
本発明の２−５A類縁体のRNase L誘導活性は、5S リボソーマルRNA (rRNA)を基質としてその分解速度から算出した。ここで用いたRNase Lは、文献（Dong, B. and Silverman, R.H. J. Biol. Chem. 1997, 272, 22236-22242）に従って調整したものを用いた。 RNase L活性測定の反応液の組成は、20 mM トリス-塩酸 (pH 7.5)，10 mM 酢酸マグネシウム，8 mM 2-メルカプトエタノール，90 mM 塩化カリウム，0.1 mM ATP，0.1〜100 nM 実施例化合物（実施例１９、実施例２１），60 nM RNase Lおよび1.0 μg 5S rRNAを含む20 μLとした。酵素反応は、実施例化合物とRNase Lを0℃で30分間プレインキュベートした後、5S rRNAを反応液に添加して開始した。反応を30℃で30分間行った後、20 μLの反応停止液 (9 M 尿素, 3 mM EDTA, 0.02% ブロモフェノールブルー, 0.02% キシレンシアノール) を混和しポリアクリルアミドゲル電気泳動に供した。電気泳動は7M 尿素, 1×TBE (89.2 mM トリス, 89 mM ホウ酸，2 mM EDTA) を含む10%ポリアクリルアミドゲルを用い、1×TBEを電極液として250 V定電圧で行った。ゲルは0.5 μg/mLのエチジウムブロミドによる15分間の染色および精製水による30分間の脱色の後、300 nmの紫外線を照射し、RNAが発する蛍光をデジタルカメラC-1000L (オリンパス光学工業株式会社) で撮影した。画像はコンピュータープログラムNIH Image 1.61を使用して解析し、5S rRNAのバンド消失を定量化した。50％のｒRNA量を切断するのに必要な２−５A類縁体の用量をEC50とする。
試験に用いた２−５A類縁体
１、 実施例１９で得られた２−５A類縁体（６）
２、 実施例２１で得られた２−５A類縁体（７）
３、 文献（Imai, J. and Torrence, P.F., J. Org. Chem. 1981 46, 4015-4021）に従って調整した天然型２−５A「H-K1-K1-K1」
（結果）
【０３６０】
【表４】

【表５】

【表６】

表４、５及び６に示すように、本発明である新規２−５A類縁体は、数十nM又は数nMレベルという高いRNase L誘導活性を示した。
【０３６１】
本発明である２−５A類縁体は、試験例２の結果より天然型２−５Aと比べ数十倍以上ヌクレアーゼに対して安定であることから、これらの結果を総合して考えあわせると、本発明である２−５A類縁体は、安定で優れたRNase L誘導活性を示す抗ウィルス薬として有用である。
【０３６２】
【発明の効果】
本発明の新規な２−５A類縁体及び3'-4'架橋オリゴヌクレオチド類縁体は、安定で優れた抗ウィルス薬、抗腫瘍薬、アンチセンス若しくはアンチジーン医薬、特定遺伝子の検出薬（プローブ）又は増幅開始の為のプライマーとして有用である。
【０３６３】
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明のオリゴヌクレオチド類縁体、天然型オリゴヌクレオチド、既知の非天然型オリゴヌクレオチド類縁体のヌクレアーゼ酵素耐性を示す。
【図２】本発明のオリゴヌクレオチド類縁体、天然型オリゴヌクレオチド、既知の非天然型オリゴヌクレオチド類縁体のヌクレアーゼ酵素耐性を示す。
【配列表フリーテキスト】
配列番号１
<223> 人工配列の説明： ヌクレアーゼ耐性をテストするための合成オリゴヌクレオチド
<220> 配列の特徴
<221> 配列の種類：修飾塩基
<222> 特徴を表す位置：11
<223> 特徴の説明：アデニンまたは修飾アデニン
【配列表】

[0001]
BACKGROUND OF THE INVENTION
The present invention relates to a 2-5A (ie, 2 ′, 5′-oligoadenylic acid) analog known as an in vivo substance having antiviral activity, a stable and excellent antisense or antigene drug, or a specific The present invention relates to a novel 3'-4'-bridged oligonucleotide analogue and a novel 3'-4'-bridged nucleoside analogue that is an intermediate for its production, which have excellent activity as a gene detection agent (probe) or primer for initiation of amplification. .
[0002]
[Prior art]
2-5A (Pharmacol. Ther. Vol. 78, No. 2, pp. 55-113, 1998), which is known as an in vivo substance having antiviral activity, is a combination of 2 'and 5' of two adenosines. It is an oligonucleotide composed of 3 or more nucleotide units in which a hydroxyl group is bonded by a phosphodiester group and triphosphate is bonded to the 5 ′ end. When virus-infected cells are stimulated with interferon from outside the cells, 2-5A synthase is induced in the presence of virus-derived dsRNA, and 2-5A is produced from ATP.
[0003]
2-5A is a substance that converts inactive RNase (RNaseL) into active RNaseL in the host cell. Active RNase L prevents viral growth in cells by degrading viral mRNA.
[0004]
In addition, transfection of ovarian cancer cell Hel1B with 2-5A causes specific cleavage of 185rRNA, and is known to exhibit antitumor activity by apoptosis through cytochrome c release and caspase activation ( J. Interferon Cytokine Res., 20, 1091-1100 (2000)).
Therefore, 2-5A can be expected as a virus growth inhibitor, that is, an antiviral agent or an antitumor agent. In addition, in an in vitro experiment using RNase L, RNase L is activated if it is an oligonucleotide composed of 3 or more adenosine units having a monophosphate and 2'-5 'phosphodiester bond at the 5' end. It is known that (Pharmacol. Ther. Vol. 78, No. 2, pp. 55-113, 1998; J. Biol. Chem. Vol. 270, No. 11, pp. 5963-5978) However, 2-5A itself is 2 Since it is easily degraded to AMP and ATP by ', 5'-phosphodiesterase, a 2-5A analog having the same activity and higher stability is desired when used as a virus growth inhibitor.
[0005]
Oligonucleotide analogs having excellent antisense or antigene activity and stable in vivo are expected as useful pharmaceuticals, and have a high ability to form a complementary strand with DNA or mRNA. Oligonucleotide analogs are useful as detection agents for specific genes or as primers for starting amplification.
[0006]
In contrast, natural oligonucleotides are known to be rapidly degraded by various nucleases present in blood and cells. In addition, natural oligonucleotides may not have sufficient sensitivity as detection agents for specific genes or primers for initiating amplification due to limitations due to affinity with complementary base sequences.
[0007]
In order to overcome these drawbacks, various non-natural oligonucleotide analogues have been produced, and attempts have been made to develop them as drugs or detection agents for specific genes. That is, for example, an oxygen atom bonded to a phosphorus atom in the phosphodiester bond of an oligonucleotide is substituted with a sulfur atom, an oxygen atom is substituted with a methyl group, an oxygen atom is substituted with a boron atom, an oligo Chemically modified nucleotides such as sugar or base are known. For example, ISIS has developed ISIS2922 (Vitravene), a thioate oligonucleotide, as a therapeutic agent for human cytomegalovirus retinitis and sells it in the United States.
[0008]
However, in the above-mentioned non-natural oligonucleotide analogues, the strength of antisense or antigene activity, that is, the ability to form a stable complementary strand with DNA or mRNA, the stability against various nucleases, and various proteins in vivo Considering the expression of side effects caused by non-specific binding to non-naturally occurring oligonucleotides with superior in vivo stability, low side effect expression, and high ability to form complementary strands An analog was desired. Further, in synthesizing such a non-naturally occurring oligonucleotide, a nucleoside analog that can be synthesized easily by using the same synthetic means as a natural type such as a DNA synthesizer or a PCR method has been desired.
[0009]
Further, a chemical structure related to the compound of the present application, that is, one having an oxetane structure is described in JP-A-10-195098.
[0010]
[Chemical formula 5]

[0011]
(In the above formula, Y¹And Y²Is a protecting group for a hydrogen atom or a hydroxyl group, and B is a purine or pyrimidine nucleobase or an analog thereof. )
However, in the case of oligonucleotides using the above-mentioned compounds, there is a problem that antiviral activity, antisense activity, etc. are insufficient due to low nuclease enzyme resistance in vivo and lack of stability in vivo. there were.
[0012]
[Problems to be solved by the invention]
The inventors of the present invention have long been concerned with non-naturally occurring oligonucleotide analogs that have antiviral activity, antitumor activity, excellent antisense or antigene activity, are stable in vivo, and have few side effects. , Earnest research. As a result, 3'-4 'cross-linked oligonucleotide analogs and nucleoside analogs with intramolecular ether bonds have been found to be stable and excellent antiviral drugs, antitumor drugs, antisense or antigene drugs, specific gene detection drugs ( The present invention was completed by finding it useful as a probe) or a primer for starting amplification and an intermediate for the production thereof.
[0013]
[Means for Solving the Problems]
The novel 3'-4 'bridged nucleoside analogs of the present invention are
General formula (1)
[0014]
[Chemical 6]

[0015]
[Wherein R¹And R²Are the same or different and are a hydrogen atom, a protecting group for a hydroxyl group for nucleic acid synthesis, a phosphate group, a phosphate group protected with a protecting group for nucleic acid synthesis, or -P (R^Three) R^Four[Wherein R^ThreeAnd R^FourAre the same or different and are a hydroxyl group, a hydroxyl group protected with a protecting group for nucleic acid synthesis, a mercapto group, a mercapto group protected with a protecting group for nucleic acid synthesis, an amino group, an alkoxy group having 1 to 4 carbon atoms, a carbon number A 1 to 4 alkylthio group, a cyanoalkoxy group having 1 to 5 carbon atoms or an amino group substituted with an alkyl group having 1 to 4 carbon atoms]
A represents an alkylene group having 1 to 4 carbon atoms,
B represents a purine-9-yl group, a 2-oxo-1,2-dihydropyrimidin-1-yl group, or a substituted purin-9-yl group having a substituent selected from the following α group or a substituted 2-oxo- 1,2-Dihydropyrimidin-1-yl group is shown. And a salt thereof,
The 3′-4 ′ cross-linked oligonucleotide analog of the present invention is
General formula (2)
[0016]
[Chemical 7]

[0017]
[In the formula, A represents an alkylene group having 1 to 4 carbon atoms;
B represents a purine-9-yl group, a 2-oxo-1,2-dihydropyrimidin-1-yl group, or a substituted purin-9-yl group having a substituent selected from the following α group or a substituted 2-oxo- 1,2-Dihydropyrimidin-1-yl group is shown. ] Or a pharmacologically acceptable salt thereof. However, when two or more of the above structures are contained, B is the same or different between the structures.
(Α group)
Hydroxyl group,
A hydroxyl group protected with a protecting group for nucleic acid synthesis,
An alkoxy group having 1 to 4 carbon atoms,
Mercapto group,
A mercapto group protected with a protecting group for nucleic acid synthesis,
An alkylthio group having 1 to 4 carbon atoms,
An amino group,
An amino group protected with a protecting group for nucleic acid synthesis,
An amino group substituted with an alkyl group having 1 to 4 carbon atoms,
An alkyl group having 1 to 4 carbon atoms, and
A halogen atom,
The 2 ′, 5′-oligoadenylic acid (2-5A) analog of the present invention is
General formula (3)
[0018]
[Chemical 8]

[0019]
[Wherein, m represents an integer of 1 to 3, n represents 0 or 1, Q represents an oxygen atom or a sulfur atom, and V represents a hydrogen atom or a substituent. An alkyl group having 1 to 6 carbon atoms, an aralkyl group which may have a substituent, or an aryl group which may have a substituent;¹ , E² And E^ThreeAre the same or different and K¹, K², K^ThreeOr K^Four(K¹, K², K^ThreeAnd K^FourRespectively
[0020]
[Chemical 9]

[0021]
Indicates. Here, B represents a purine-9-yl group or a substituted purin-9-yl group having a substituent selected from the following α group, and A represents an alkylene group having 1 to 4 carbon atoms. ). E²May be the same or different in repeating m. ] An oligonucleotide analogue represented by the formula (E¹, E²And E^ThreeBut all K¹And all K²Is excluded. ) And pharmacologically acceptable salts thereof.
(Α group)
Hydroxyl group,
A hydroxyl group protected with a protecting group for nucleic acid synthesis,
An alkoxy group having 1 to 4 carbon atoms,
Mercapto group,
A mercapto group protected with a protecting group for nucleic acid synthesis,
An alkylthio group having 1 to 4 carbon atoms,
An amino group,
An amino group protected with a protecting group for nucleic acid synthesis,
An amino group substituted with an alkyl group having 1 to 4 carbon atoms,
An alkyl group having 1 to 4 carbon atoms, and
Halogen atom.
[0022]
In the general formula (1), (2) or (3), examples of the “alkylene group having 1 to 4 carbon atoms” of A include methylene, ethylene, trimethylene, and tetramethylene groups. Is a methylene or ethylene group.
[0023]
In the general formula (1), (2) or (3), R¹And R²"Hydroxyl synthesis hydroxyl protecting group" and R^ThreeAnd R^FourAlternatively, the protecting group of the α group “hydroxyl group protected with a protecting group for nucleic acid synthesis” is not particularly limited as long as it can stably protect a hydroxyl group during nucleic acid synthesis. , Refers to a protecting group that is stable under acidic or neutral conditions and can be cleaved by a chemical method such as hydrogenolysis, hydrolysis, electrolysis, and photolysis. Formyl, acetyl, propionyl, butyryl, isobutyryl, pentanoyl, pivaloyl, valeryl, isovaleryl, octanoyl, nonanoyl, decanoyl, 3-methylnonanoyl, 8-methylnonanoyl, 3-ethyloctanoyl, 3,7-dimethyloctanoyl, undecanoyl, dodecanoyl, Tridecanoyl, tetradecanoyl, pentadecanoyl, hexadecanoyl, 1-methylpentade Alkylcarbonyl groups such as noyl, 14-methylpentadecanoyl, 13,13-dimethyltetradecanoyl, heptadecanoyl, 15-methylhexadecanoyl, octadecanoyl, 1-methylheptadecanoyl, nonadecanoyl, icosanoyl and heinacosanoyl; Carboxylated alkylcarbonyl groups such as succinoyl, glutaroyl, adipoyl, halogeno lower alkylcarbonyl groups such as chloroacetyl, dichloroacetyl, trichloroacetyl, trifluoroacetyl, lower alkoxy lower alkylcarbonyl groups such as methoxyacetyl, (E) An “aliphatic acyl group” such as an unsaturated alkylcarbonyl group such as 2-methyl-2-butenoyl;
Methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, isobutyl, s-butyl, tert-butyl, n-pentyl, isopentyl, 2-methylbutyl, neopentyl, 1-ethylpropyl, n-hexyl, isohexyl, 4-methyl Pentyl, 3-methylpentyl, 2-methylpentyl, 1-methylpentyl, 3,3-dimethylbutyl, 2,2-dimethylbutyl, 1,1-dimethylbutyl, 1,2-dimethylbutyl, 1,3-dimethyl “Lower alkyl groups” such as butyl, 2,3-dimethylbutyl, 2-ethylbutyl;
Ethenyl, 1-propenyl, 2-propenyl, 1-methyl-2-propenyl, 1-methyl-1-propenyl, 2-methyl-1-propenyl, 2-methyl-2-propenyl, 2-ethyl-2-propenyl, 1-butenyl, 2-butenyl, 1-methyl-2-butenyl, 1-methyl-1-butenyl, 3-methyl-2-butenyl, 1-ethyl-2-butenyl, 3-butenyl, 1-methyl-3- Butenyl, 2-methyl-3-butenyl, 1-ethyl-3-butenyl, 1-pentenyl, 2-pentenyl, 1-methyl-2-pentenyl, 2-methyl-2-pentenyl, 3-pentenyl, 1-methyl- 3-pentenyl, 2-methyl-3-pentenyl, 4-pentenyl, 1-methyl-4-pentenyl, 2-methyl-4-pentenyl, 1-hexenyl, 2-hexenyl , 3-hexenyl, 4-hexenyl, 5-A "lower alkenyl group" such as hexenyl;
Arylcarbonyl groups such as benzoyl, α-naphthoyl and β-naphthoyl, halogenoarylcarbonyl groups such as 2-bromobenzoyl and 4-chlorobenzoyl, lower alkyls such as 2,4,6-trimethylbenzoyl and 4-toluoyl Arylcarbonyl group, lower alkoxylated arylcarbonyl group such as 4-anisoyl, 2-carboxybenzoyl, 3-carboxybenzoyl, carboxylated arylcarbonyl group such as 4-carboxybenzoyl, 4-nitrobenzoyl, 2-nitrobenzoyl Nitrated arylcarbonyl groups such as: 2- (methoxycarbonyl) lower alkoxycarbonylated arylcarbonyl groups such as benzoyl, arylated arylcarbonyl groups such as 4-phenylbenzoyl Family acyl group ";
“Tetrahydro, such as tetrahydropyran-2-yl, 3-bromotetrahydropyran-2-yl, 4-methoxytetrahydropyran-4-yl, tetrahydrothiopyran-2-yl, 4-methoxytetrahydrothiopyran-4-yl "Pyranyl or tetrahydrothiopyranyl group"; "tetrahydrofuranyl or tetrahydrothiofuranyl group" such as tetrahydrofuran-2-yl, tetrahydrothiofuran-2-yl;
Tri-lower alkylsilyl groups such as trimethylsilyl, triethylsilyl, isopropyldimethylsilyl, t-butyldimethylsilyl, methyldiisopropylsilyl, methyldi-t-butylsilyl, triisopropylsilyl, diphenylmethylsilyl, diphenylbutylsilyl, diphenylisopropylsilyl, phenyl A “silyl group” such as a tri-lower alkylsilyl group substituted with 1 to 2 aryl groups such as diisopropylsilyl;
“Lower alkoxymethyl groups” such as methoxymethyl, 1,1-dimethyl-1-methoxymethyl, ethoxymethyl, propoxymethyl, isopropoxymethyl, butoxymethyl, t-butoxymethyl;
A “lower alkoxylated lower alkoxymethyl group” such as 2-methoxyethoxymethyl;
“Halogeno lower alkoxymethyl” such as 2,2,2-trichloroethoxymethyl, bis (2-chloroethoxy) methyl;
“Lower alkoxylated ethyl groups” such as 1-ethoxyethyl, 1- (isopropoxy) ethyl;
“Ethyl halide groups” such as 2,2,2-trichloroethyl;
“Methyl groups substituted with 1 to 3 aryl groups” such as benzyl, α-naphthylmethyl, β-naphthylmethyl, diphenylmethyl, triphenylmethyl, α-naphthyldiphenylmethyl, 9-anthrylmethyl;
4-methylbenzyl, 2,4,6-trimethylbenzyl, 3,4,5-trimethylbenzyl, 4-methoxybenzyl, 4-methoxyphenyldiphenylmethyl, 4,4′-dimethoxytriphenylmethyl, 2-nitrobenzyl, 4-nitrobenzyl, 4-chlorobenzyl, 4-bromobenzyl, 4-cyanobenzyl- "lower alkyl, lower alkoxy, halogen, substituted with 1 to 3 aryl groups substituted with aryl ring by cyano group Methyl group ";
“Lower alkoxycarbonyl” such as methoxycarbonyl, ethoxycarbonyl, t-butoxycarbonyl, isobutoxycarbonyl;
“Aryl group substituted by halogen atom, lower alkoxy group or nitro group” such as 4-chlorophenyl, 2-chlorophenyl, 4-methoxyphenyl, 4-nitrophenyl, 2,4-dinitrophenyl
A “lower alkoxycarbonyl group substituted with a halogen or a tri-lower alkylsilyl group” such as 2,2,2-trichloroethoxycarbonyl, 2-trimethylsilylethoxycarbonyl;
“Alkenyloxycarbonyl groups” such as vinyloxycarbonyl, aryloxycarbonyl;
1 to 2 “lower alkoxy or nitro group with aryl ring such as benzyloxycarbonyl, 4-methoxybenzyloxycarbonyl, 3,4-dimethoxybenzyloxycarbonyl, 2-nitrobenzyloxycarbonyl, 4-nitrobenzyloxycarbonyl” Can be substituted aralkyloxycarbonyl group,
R¹And R²In the “nucleic acid protecting group for nucleic acid synthesis”, “aliphatic acyl group”, “aromatic acyl group”, “methyl group substituted with 1 to 3 aryl groups”, “lower alkyl” , A lower alkoxy, a halogen, a methyl group substituted with 1 to 3 aryl groups substituted with an aryl ring with a cyano group ”or“ silyl group ”, and more preferably an acetyl group, a benzoyl group, a benzyl group Group, p-methoxybenzoyl group, dimethoxytrityl group, monomethoxytrityl group or tert-butyldiphenylsilyl group,
R^ThreeAnd R^FourOr the protecting group of the “hydroxyl group protected with a protecting group for nucleic acid synthesis” in the α group is preferably “a methyl group substituted with 1 to 3 aryl groups”, “halogen atom, lower alkoxy group or “Aryl group substituted with nitro group”, “lower alkyl group” or “lower alkenyl group”, more preferably benzyl group, 2-chlorophenyl group, 4-chlorophenyl group or 2-propenyl group.
[0024]
In the general formula (1), R¹And R²The protecting group of “phosphate group protected by a protecting group for nucleic acid synthesis” is not particularly limited as long as it can stably protect the phosphate group during nucleic acid synthesis, but specifically, Means a protecting group that is stable under acidic or neutral conditions and can be cleaved by chemical methods such as hydrogenolysis, hydrolysis, electrolysis and photolysis. Examples of such protecting groups include: , Methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, isobutyl, s-butyl, tert-butyl, n-pentyl, isopentyl, 2-methylbutyl, neopentyl, 1-ethylpropyl, n-hexyl, isohexyl, 4- Methylpentyl, 3-methylpentyl, 2-methylpentyl, 1-methylpentyl, 3,3-dimethylbutyl, 2,2-dimethylbutyl, 1,1-dimethylbutyl, 1,2-dimethyl “Lower alkyl groups” such as rubutyl, 1,3-dimethylbutyl, 2,3-dimethylbutyl, 2-ethylbutyl;
A “cyanated lower alkyl group” such as 2-cyanoethyl and 2-cyano-1,1-dimethylethyl;
“Ethyl groups substituted with silyl groups” such as 2-methyldiphenylsilylethyl, 2-trimethylsilylethyl, 2-triphenylsilylethyl;
“Halogenated lower” such as 2,2,2-trichloroethyl, 2,2,2-tribromoethyl, 2,2,2-trifluoroethyl, 2,2,2-trichloro-1, 1-dimethylethyl An alkyl group ";
Ethenyl, 1-propenyl, 2-propenyl, 1-methyl-2-propenyl, 1-methyl-1-propenyl, 2-methyl-1-propenyl, 2-methyl-2-propenyl, 2-ethyl-2-propenyl, 1-butenyl, 2-butenyl, 1-methyl-2-butenyl, 1-methyl-1-butenyl, 3-methyl-2-butenyl, 1-ethyl-2-butenyl, 3-butenyl, 1-methyl-3- Butenyl, 2-methyl-3-butenyl, 1-ethyl-3-butenyl, 1-pentenyl, 2-pentenyl, 1-methyl-2-pentenyl, 2-methyl-2-pentenyl, 3-pentenyl, 1-methyl- 3-pentenyl, 2-methyl-3-pentenyl, 4-pentenyl, 1-methyl-4-pentenyl, 2-methyl-4-pentenyl, 1-hexenyl, 2-hexenyl , 3-hexenyl, 4-hexenyl, 5-A "lower alkenyl group" such as hexenyl;
"Cycloalkyl groups" such as cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclohexyl, cycloheptyl, norbornyl, adamantyl;
A “cyanated lower alkenyl group” such as 2-cyanobutenyl;
Benzyl, α-naphthylmethyl, β-naphthylmethyl, indenylmethyl, phenanthrenylmethyl, anthracenylmethyl, diphenylmethyl, triphenylmethyl, 1-phenethyl, 2-phenethyl, 1-naphthylethyl, 2-naphthyl Ethyl, 1-phenylpropyl, 2-phenylpropyl, 3-phenylpropyl, 1-naphthylpropyl, 2-naphthylpropyl, 3-naphthylpropyl, 1-phenylbutyl, 2-phenylbutyl, 3-phenylbutyl, 4-phenyl Butyl, 1-naphthylbutyl, 2-naphthylbutyl, 3-naphthylbutyl, 4-naphthylbutyl, 1-phenylpentyl, 2-phenylpentyl, 3-phenylpentyl, 4-phenylpentyl, 5-phenylpentyl, 1-naphthyl Pentyl, 2-naphthylpentyl , 3-naphthylpentyl, 4-naphthylpentyl, 5-naphthylpentyl, 1-phenylhexyl, 2-phenylhexyl, 3-phenylhexyl, 4-phenylhexyl, 5-phenylhexyl, 6-phenylhexyl, 1-naphthylhexyl "Aralkyl groups" such as 2-naphthylhexyl, 3-naphthylhexyl, 4-naphthylhexyl, 5-naphthylhexyl, 6-naphthylhexyl;
4-nitrobenzyl, 2- (4-nitrophenyl) ethyl, o-nitrobenzyl, 4-nitrobenzyl, 2,4-dinitrobenzyl, 4-chloro-2-nitrobenzyl, etc. An aralkyl group substituted with an aryl ring ";
“Aryl groups” such as phenyl, indenyl, naphthyl, phenanthrenyl, anthracenyl;
2-methylphenyl, 2,6-dimethylphenyl, 2-chlorophenyl, 4-chlorophenyl, 2,4-dichlorophenyl, 2,5-dichlorophenyl, 2-bromophenyl, 4-nitrophenyl, 4-chloro-2-nitrophenyl Such as “lower alkyl group, halogen atom, aryl group substituted by nitro group”,
Preferably, a “lower alkyl group”, “a lower alkyl group substituted with a cyano group”, “aralkyl group”, “nitro group, an aralkyl group with an aryl ring substituted with a halogen atom” or “lower alkyl group, halogen” Atom, aryl group substituted by nitro group ”, more preferably 2-cyanoethyl group, 2,2,2-trichloroethyl group, benzyl group, 2-chlorophenyl group or 4-chlorophenyl group.
[0025]
In the general formula (1), (2) or (3), R^ThreeAnd R^FourOr as the “C 1-4 alkoxy group” of the α group, for example, methoxy, ethoxy, n-propoxy, isopropoxy, n-butoxy, isobutoxy, s-butoxy or tert-butoxy can be mentioned, A methoxy or ethoxy group is preferred.
[0026]
In the general formula (1), (2) or (3), R^ThreeAnd R^FourAlternatively, the protecting group of the “mercapto group protected with a protecting group for nucleic acid synthesis” is not particularly limited as long as it can stably protect a mercapto group during nucleic acid synthesis. Specifically, A protective group that is stable under acidic or neutral conditions and can be cleaved by a chemical method such as hydrogenolysis, hydrolysis, electrolysis and photolysis. Examples thereof include “disulfide-forming groups” such as alkylthio groups such as methylthio, ethylthio and tert-butylthio, and arylthio groups such as benzylthio, preferably “aliphatic acyl groups” or “aromatic acyl groups”. And more preferably a benzoyl group.
[0027]
In the general formula (1), (2) or (3), R^ThreeAnd R^FourExamples of the “alkylthio group having 1 to 4 carbon atoms” of the α group include, for example, methylthio, ethylthio, propylthio, isopropylthio, butylthio, isobutylthio, s-butylthio, tert-butylthio, and preferably , Methylthio or ethylthio group.
[0028]
In the general formula (1), (2) or (3), R^ThreeAnd R^FourThe α-group “amino group protected with a protecting group for nucleic acid synthesis” is not particularly limited as long as it can stably protect an amino group during nucleic acid synthesis. Refers to protecting groups that are stable under acidic or neutral conditions and can be cleaved by chemical methods such as hydrogenolysis, hydrolysis, electrolysis and photolysis, such as formyl, acetyl, propionyl, butyryl, Isobutyryl, pentanoyl, pivaloyl, valeryl, isovaleryl, octanoyl, nonanoyl, decanoyl, 3-methylnonanoyl, 8-methylnonanoyl, 3-ethyloctanoyl, 3,7-dimethyloctanoyl, undecanoyl, dodecanoyl, tridecanoyl, tetradecanoyl, pentadecana Noyl, hexadecanoyl, 1-methylpentadecanoyl, 14-methylpe Alkylcarbonyl groups such as tadecanoyl, 13,13-dimethyltetradecanoyl, heptadecanoyl, 15-methylhexadecanoyl, octadecanoyl, 1-methylheptadecanoyl, nonadecanoyl, icosanoyl and henaicosanoyl, succinoyl, glutaroyl, adipoyl and the like Carboxylated alkylcarbonyl groups, halogeno lower alkylcarbonyl groups such as chloroacetyl, dichloroacetyl, trichloroacetyl, trifluoroacetyl, lower alkoxy lower alkylcarbonyl groups such as methoxyacetyl, (E) -2-methyl-2- “Aliphatic acyl groups” such as unsaturated alkylcarbonyl groups such as butenoyl;
Arylcarbonyl groups such as benzoyl, α-naphthoyl and β-naphthoyl, halogenoarylcarbonyl groups such as 2-bromobenzoyl and 4-chlorobenzoyl, lower alkyls such as 2,4,6-trimethylbenzoyl and 4-toluoyl Arylcarbonyl groups, lower alkoxylated arylcarbonyl groups such as 4-anisoyl, 2-carboxybenzoyl, 3-carboxybenzoyl, carboxylated arylcarbonyl groups such as 4-carboxybenzoyl, 4-nitrobenzoyl, 2-nitrobenzoyl Nitrated arylcarbonyl groups such as 2-alkoxycarbonylated arylcarbonyl groups such as 2- (methoxycarbonyl) benzoyl, arylated arylcarbonyl groups such as 4-phenylbenzoyl, and the like. Ru group ";
“Lower alkoxycarbonyl” such as methoxycarbonyl, ethoxycarbonyl, t-butoxycarbonyl, isobutoxycarbonyl;
A “lower alkoxycarbonyl group substituted with a halogen or a tri-lower alkylsilyl group” such as 2,2,2-trichloroethoxycarbonyl, 2-trimethylsilylethoxycarbonyl;
“Alkenyloxycarbonyl groups” such as vinyloxycarbonyl, aryloxycarbonyl;
1 to 2 “lower alkoxy or nitro group with aryl ring such as benzyloxycarbonyl, 4-methoxybenzyloxycarbonyl, 3,4-dimethoxybenzyloxycarbonyl, 2-nitrobenzyloxycarbonyl, 4-nitrobenzyloxycarbonyl” Can be an “aralkyloxycarbonyl group optionally substituted”, preferably an “aliphatic acyl group” or “aromatic acyl group”, and more preferably a benzoyl group.
[0029]
In the general formula (1), (2) or (3), R^ThreeAnd R^FourOr the “amino group substituted with an alkyl group having 1 to 4 carbon atoms” of α group includes, for example, methylamino, ethylamino, propylamino, isopropylamino, butylamino, isobutylamino, s-butylamino, tert -Butylamino, dimethylamino, diethylamino, dipropylamino, diisopropylamino, dibutylamino, diisobutylamino, di (s-butyl) amino, di (tert-butyl) amino, preferably methylamino, An ethylamino, dimethylamino, diethylamino or diisopropylamino group;
[0030]
In the general formula (1), R^ThreeAnd R^Four“C1-C5 cyanoalkoxy group” means a group in which the above-mentioned “C1-C4 alkoxy group” is substituted with a cyano group. Examples of such a group include, for example, cyano And methoxy, 2-cyanoethoxy, 3-cyanopropoxy, 4-cyanobutoxy, 3-cyano-2methylpropoxy, or 1-cyanomethyl-1,1-dimethylmethoxy, preferably 2-cyanoethoxy It is a group.
[0031]
In the general formula (1), (2) or (3), examples of the “alkyl group having 1 to 4 carbon atoms” of the α group include methyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl, isobutyl, and s-butyl. Tert-butyl, preferably a methyl or ethyl group.
[0032]
In the general formula (1), (2) or (3), examples of the “halogen atom” in the α group include a fluorine atom, a chlorine atom, a bromine atom or an iodine atom. An atom or a chlorine atom.
[0033]
In the general formula (3), examples of the “optionally substituted alkyl group having 1 to 6 carbon atoms” for V include, for example, methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, isobutyl , S-butyl, tert-butyl, n-pentyl, isopentyl, 2-methylbutyl, neopentyl, 1-ethylpropyl, n-hexyl, isohexyl, 4-methylpentyl, 3-methylpentyl, 2-methylpentyl, 1-methyl Such as pentyl, 3,3-dimethylbutyl, 2,2-dimethylbutyl, 1,1-dimethylbutyl, 1,2-dimethylbutyl, 1,3-dimethylbutyl, 2,3-dimethylbutyl, 2-ethylbutyl “Lower alkyl group”;
1-hydroxymethyl, 2-hydroxyethyl, 3-hydroxypropyl, 4-hydroxybutyl, 2-hydroxypropyl, 1-methyl-2-hydroxyethyl, 1-methyl-1-hydroxyethyl, 1,1-dimethyl-2 A “lower alkyl group substituted with a hydroxyl group” such as -hydroxyethyl, 2-hydroxybutyl, 3-hydroxybutyl, 1-methyl-3-hydroxypropyl, 2-methyl-3-hydroxypropyl;
1-aminomethyl, 2-aminoethyl, 3-aminopropyl, 4-aminobutyl, 2-aminopropyl, 1-methyl-2-aminoethyl, 1-methyl-1-aminoethyl, 1,1-dimethyl-2 A “lower alkyl group substituted by an amino group” such as 2-aminoethyl, 2-aminobutyl, 3-aminobutyl, 1-methyl-3-aminopropyl, 2-methyl-3-aminopropyl;
1-methoxymethyl, 2-methoxyethyl, 3-methoxypropyl, 4-methoxybutyl, 2-methoxypropyl, 1-methyl-2-methoxyethyl, 1-methyl-1-methoxyethyl, 1,1-dimethyl-2 -Methoxyethyl, 2-methoxybutyl, 3-methoxybutyl, 1-methyl-3-methoxypropyl, 2-methyl-3-methoxypropyl, 1-ethoxymethyl, 2-ethoxyethyl, 3-ethoxypropyl, 4-ethoxy Butyl, 2-ethoxypropyl, 1-methyl-2-ethoxyethyl, 1-methyl-1-ethoxyethyl, 1,1-dimethyl-2-ethoxyethyl, 2-ethoxybutyl, 3-ethoxybutyl, 1-methyl- “Lower alkyl group substituted by alkoxy group” such as 3-ethoxypropyl, 2-methyl-3-ethoxypropyl;
“Cycloalkyl group” such as cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclohexyl, cycloheptyl, norbornyl and adamantyl can be exemplified, and 2-hydroxyethyl group is preferred.
[0034]
In the general formula (3), examples of the “aralkyl group optionally having a substituent” for V include benzyl, α-naphthylmethyl, β-naphthylmethyl, indenylmethyl, phenanthrenylmethyl, Anthracenylmethyl, diphenylmethyl, triphenylmethyl, 1-phenethyl, 2-phenethyl, 1-naphthylethyl, 2-naphthylethyl, 1-phenylpropyl, 2-phenylpropyl, 3-phenylpropyl, 1-naphthylpropyl, 2-naphthylpropyl, 3-naphthylpropyl, 1-phenylbutyl, 2-phenylbutyl, 3-phenylbutyl, 4-phenylbutyl, 1-naphthylbutyl, 2-naphthylbutyl, 3-naphthylbutyl, 4-naphthylbutyl, 1-phenylpentyl, 2-phenylpentyl, 3-phenylpentyl, 4- Phenylpentyl, 5-phenylpentyl, 1-naphthylpentyl, 2-naphthylpentyl, 3-naphthylpentyl, 4-naphthylpentyl, 5-naphthylpentyl, 1-phenylhexyl, 2-phenylhexyl, 3-phenylhexyl, 4- “Aralkyl groups” such as phenylhexyl, 5-phenylhexyl, 6-phenylhexyl, 1-naphthylhexyl, 2-naphthylhexyl, 3-naphthylhexyl, 4-naphthylhexyl, 5-naphthylhexyl, 6-naphthylhexyl;
4-nitrobenzyl, 2- (4-nitrophenyl) ethyl, o-nitrobenzyl, 4-nitrobenzyl, 2,4-dinitrobenzyl, 4-chloro-2-nitrobenzyl, etc. And an aralkyl group substituted with an aryl ring.
[0035]
In the general formula (3), examples of the “aryl group optionally having a substituent” of V include, for example, 2-methylphenyl, 2,6-dimethylphenyl, 2-chlorophenyl, 4-chlorophenyl, 2, “Lower alkyl group, halogen atom, aryl group substituted by nitro group” such as 4-dichlorophenyl, 2,5-dichlorophenyl, 2-bromophenyl, 4-nitrophenyl, 4-chloro-2-nitrophenyl I can do things.
[0036]
In the above general formula (1), (2) or (3), the preferred “purin-9-yl group” and “substituted purin-9-yl group” of B are preferably 6-aminopurine-9. 6-aminopurin-9-yl, 6-amino-8-bromopurin-9-yl, amino group protected with a protecting group for nucleic acid synthesis, amino group is a protecting group for nucleic acid synthesis Protected 6-amino-8-bromopurin-9-yl, 6-amino-8-chloropurin-9-yl, 6-amino-8-chloropurine in which the amino group is protected with a protecting group for nucleic acid synthesis -9-yl, 6-amino-8-fluoropurin-9-yl, 6-amino-8-fluoropurin-9-yl, 6-amino-8-methoxy in which the amino group is protected with a protecting group for nucleic acid synthesis Purin-9-yl, amino group protected with nucleic acid synthesis protecting group 6-amino-8-methoxypurin-9-yl, 6-amino-8-ethoxypurin-9-yl, 6-amino-8-ethoxypurine-9- in which the amino group is protected with a protecting group for nucleic acid synthesis Yl, 6-amino-8-t-butoxypurin-9-yl, 6-amino-8-t-butoxypurin-9-yl, 2,6-diaminopurine in which the amino group is protected with a protecting group for nucleic acid synthesis -9-yl, 2-amino-6-chloropurin-9-yl, 2-amino-6-chloropurin-9-yl, 2-amino-6-fluoro in which the amino group is protected with a protecting group for nucleic acid synthesis Purine-9-yl, 2-amino-6-fluoropurin-9-yl, 2-amino-6-bromopurin-9-yl, amino group protected with a protecting group for nucleic acid synthesis, amino group for nucleic acid synthesis 2-amino-6-protected with a protecting group Lomopurin-9-yl, 2-amino-6-hydroxypurin-9-yl (ie, guaninyl), 2-amino-6-hydroxypurin-9-yl having an amino group protected with a protecting group for nucleic acid synthesis, 6 -Amino-2-methoxypurin-9-yl, 6-amino-2-methoxypurin-9-yl, 6-amino-2-chloropurin-9-yl in which the amino group is protected with a protecting group for nucleic acid synthesis, 6-amino-2-chloropurin-9-yl, 6-amino-2-fluoropurin-9-yl, amino group protected with a protecting group for nucleic acid synthesis, amino group protected with a protecting group for nucleic acid synthesis 6-amino-2-fluoropurin-9-yl, 2,6-dimethoxypurin-9-yl, 2,6-dichloropurin-9-yl or 6-mercaptopurin-9-yl, and more preferably Is 6- Benzoylaminopurin-9-yl, adeninyl, 2-isobutyrylamino-6-hydroxypurin-9-yl or guaninyl group.
[0037]
In the above general formula (1), (2) or (3), “2-oxo-1,2-dihydropyrimidin-1-yl group” of B and “substituted 2-oxo-1,2-dihydropyrimidine-1” In the entirety of “-yl group”, a suitable group is 2-oxo-4-amino-1,2-dihydropyrimidin-1-yl (ie, cytosynyl), 2-amino group protected with a protecting group for nucleic acid synthesis. Oxo-4-amino-1,2-dihydropyrimidin-1-yl, 2-oxo-4-amino-5-fluoro-1,2-dihydropyrimidin-1-yl, amino group protected with a protecting group for nucleic acid synthesis 2-oxo-4-amino-5-fluoro-1,2-dihydropyrimidin-1-yl, 4-amino-2-oxo-5-chloro-1,2-dihydropyrimidin-1-yl, amino group Is protected with a protecting group for nucleic acid synthesis. Loro-1,2-dihydropyrimidin-1-yl, 2-oxo-4-methoxy-1,2-dihydropyrimidin-1-yl, 2-oxo-4-mercapto-1,2-dihydropyrimidin-1-yl 2-oxo-4-hydroxy-1,2-dihydropyrimidin-1-yl (ie uracinyl), 2-oxo-4-hydroxy-5-methylpyrimidin-1-yl (ie thyminyl) or 4-amino A 5-methyl-2-oxo-1,2-dihydropyrimidin-1-yl (ie 5-methylcytosinyl) group, more preferably 2-oxo-4-benzoylamino-1,2-dihydropyrimidine -1-yl, cytosynyl, thyminyl, uracinyl, 2-oxo-4-benzoylamino-5-methyl-1,2-dihydropyrimidin-1-yl, or 5-methylcytosinyl It is.
[0038]
The “nucleoside analog” refers to a non-natural type of “nucleoside” in which a purine or pyrimidine base and a sugar are bonded.
[0039]
“Oligonucleotide analog” refers to a non-natural derivative of “oligonucleotide” in which 2 to 50 identical or different “nucleosides” above are linked by phosphodiester bonds. As such analog, Is a sugar derivative in which the sugar moiety is modified; a thioate derivative in which the phosphodiester bond moiety is thioated; an ester in which the terminal phosphate moiety is esterified; an amide in which the amino group on the purine base is amidated More preferred examples include sugar derivatives in which the sugar moiety is modified and thioate derivatives in which the phosphodiester bond moiety is thioated.
“2 ′, 5′-oligoadenylic acid analog” means 3 to 5 of the same or different “nucleoside” linked by 2 ′, 5′-phosphodiester bond, and monophosphate derivative at 5′-terminal. , Refers to a non-natural derivative of “2 ′, 5′-oligoadenylic acid” optionally having a monophosphate derivative attached to the 2′-terminus, and as such an analog, the sugar moiety is preferably modified Thioate derivatives in which the phosphodiester bond moiety is thioated; phosphoric acid derivatives in which the terminal phosphate moiety is substituted; and purine derivatives in which the purine base is substituted. Examples thereof include a sugar derivative in which a sugar moiety is modified and a thioate derivative in which a phosphodiester bond moiety is thioated.
[0040]
The “salt” refers to a salt of the compound (1) of the present invention because it can be converted into a salt. Such a salt is preferably a sodium salt, potassium salt or lithium salt. Alkaline earth metal salts such as alkali metal salts, calcium salts and magnesium salts, metal salts such as aluminum salts, iron salts, zinc salts, copper salts, nickel salts and cobalt salts; inorganic salts such as ammonium salts, t- Octylamine salt, dibenzylamine salt, morpholine salt, glucosamine salt, phenylglycine alkyl ester salt, ethylenediamine salt, N-methylglucamine salt, guanidine salt, diethylamine salt, triethylamine salt, dicyclohexylamine salt, N, N′-di Benzylethylenediamine salt, chloroprocaine salt, procaine salt, diethanolamine salt, N-benzyl- Amine salts such as ethenylamine salts, piperazine salts, tetramethylammonium salts, organic salts such as tris (hydroxymethyl) aminomethane salts; hydrofluoric acid salts, hydrochlorides, hydrobromides, hydroiodides Inorganic acid salts such as halogen hydrides, nitrates, perchlorates, sulfates, phosphates; lower alkane sulfonates such as methanesulfonate, trifluoromethanesulfonate, ethanesulfonate , Aryl sulfonates such as benzenesulfonate, p-toluenesulfonate, acetate, malate, fumarate, succinate, citrate, tartrate, oxalate, maleic acid And organic acid salts such as salts; and amino acid salts such as glycine salt, lysine salt, arginine salt, ornithine salt, glutamate salt and aspartate salt.
[0041]
The “pharmacologically acceptable salt” refers to a salt thereof, since the oligonucleotide analog of the present invention can be converted into a salt, and such a salt is preferably a sodium salt, potassium salt, Alkali metal salts such as lithium salts, alkaline earth metal salts such as calcium salts and magnesium salts, metal salts such as aluminum salts, iron salts, zinc salts, copper salts, nickel salts and cobalt salts; such as ammonium salts Inorganic salt, t-octylamine salt, dibenzylamine salt, morpholine salt, glucosamine salt, phenylglycine alkyl ester salt, ethylenediamine salt, N-methylglucamine salt, guanidine salt, diethylamine salt, triethylamine salt, dicyclohexylamine salt, N , N′-dibenzylethylenediamine salt, chloroprocaine salt, procaine salt, dietano Amine salts such as ruamine salts, N-benzyl-phenethylamine salts, piperazine salts, tetramethylammonium salts, tris (hydroxymethyl) aminomethane salts; hydrofluoric acid salts, hydrochlorides, hydrobromides Inorganic acid salts such as halogen hydrides such as hydroiodide, nitrates, perchlorates, sulfates and phosphates; methanesulfonate, trifluoromethanesulfonate, ethanesulfonate Lower alkane sulfonate, benzene sulfonate, aryl sulfonate such as p-toluene sulfonate, acetate, malate, fumarate, succinate, citrate, tartaric acid Organic acids such as salts, oxalates, maleates; and amino acids such as glycine, lysine, arginine, ornithine, glutamate, aspartate There may be mentioned acid salts.
[0042]
Among the compounds (1) and salts thereof of the present invention, suitable compounds include
(1) R¹1 to 3 whose aryl ring is substituted with a hydrogen atom, an aliphatic acyl group, an aromatic acyl group, a methyl group substituted with 1 to 3 aryl groups, a lower alkyl, a lower alkoxy, a halogen or a cyano group A methyl group or a silyl group substituted with an aryl group of
(2) R¹Are a hydrogen atom, acetyl group, benzoyl group, benzyl group, p-methoxybenzyl group, dimethoxytrityl group, monomethoxytrityl group or tert-butyldiphenylsilyl group and salts thereof,
(3) R²1 to 3 whose aryl ring is substituted with a hydrogen atom, an aliphatic acyl group, an aromatic acyl group, a methyl group substituted with 1 to 3 aryl groups, a lower alkyl, a lower alkoxy, a halogen or a cyano group A methyl group, a silyl group, a phosphoramidite group, a phosphonyl group, a phosphate group, or a phosphate group protected with a protecting group for nucleic acid synthesis, and salts thereof, substituted with an aryl group of
(4) R²Are hydrogen atom, acetyl group, benzoyl group, benzyl group, p-methoxybenzyl group, tert-butyldiphenylsilyl group, -P (OC₂H_FourCN) (NCH (CH_Three)₂), -P (OCH_Three) (NCH (CH_Three)₂), A phosphonyl group, or a compound that is a 2-chlorophenyl or 4-chlorophenyl phosphate group and a salt thereof,
(5) A compound in which A is a methylene or ethylene group and a salt thereof,
(6) B is 6-aminopurin-9-yl (ie, adeninyl), 6-aminopurin-9-yl having an amino group protected with a protecting group for nucleic acid synthesis, 2,6-diaminopurine-9- 6-amino-8-bromopurin-9-yl, 6-amino-8-bromopurin-9-yl, 6-amino-8-chloropurine-9 in which the amino group is protected with a protecting group for nucleic acid synthesis 6-amino-8-chloropurin-9-yl, 6-amino-8-fluoropurin-9-yl, wherein the amino group is a protecting group for nucleic acid synthesis Protected 6-amino-8-fluoropurin-9-yl, 6-amino-8-methoxypurine-9-yl, 6-amino-8-methoxypurine- in which the amino group is protected with a protecting group for nucleic acid synthesis 9-yl, 6-amino-8-ethoxy Purin-9-yl, 6-amino-8-ethoxypurin-9-yl, 6-amino-8-t-butoxypurin-9-yl, amino group protected with a protecting group for nucleic acid synthesis, amino group nucleic acid 6-amino-8-t-butoxypurin-9-yl, 2-amino-6-chloropurin-9-yl, protected with a protecting group for synthesis, 2-amino-6-chloropurin-9-yl, protected with a protecting group for nucleic acid synthesis Amino-6-chloropurin-9-yl, 2-amino-6-fluoropurin-9-yl, 2-amino-6-fluoropurin-9-yl in which the amino group is protected with a protecting group for nucleic acid synthesis, 2 -Amino-6-bromopurin-9-yl, 2-amino-6-bromopurin-9-yl, 2-amino-6-hydroxypurin-9-yl having an amino group protected with a protecting group for nucleic acid synthesis ( That is, guanylyl), amino group 2-amino-6-hydroxypurin-9-yl, 6-amino-2-methoxypurin-9-yl protected with a protecting group for acid synthesis, 6-amino having a mino group protected with a protecting group for nucleic acid synthesis 2-methoxypurin-9-yl, 6-amino-2-chloropurin-9-yl, 6-amino-2-chloropurin-9-yl having an amino group protected with a protecting group for nucleic acid synthesis, 6- Amino-2-fluoropurin-9-yl, 6-amino-2-fluoropurin-9-yl, 2,6-dimethoxypurin-9-yl, 2,6 in which the amino group is protected with a protecting group for nucleic acid synthesis -Dichloropurin-9-yl, 6-mercaptopurin-9-yl, 2-oxo-4-amino-1,2-dihydropyrimidin-1-yl (ie, cytosynyl), amino group is a protecting group for nucleic acid synthesis Protected 2-oxo-4 -Amino-1,2-dihydropyrimidin-1-yl, 2-oxo-4-amino-5-fluoro-1,2-dihydropyrimidin-1-yl, amino group protected with a protecting group for nucleic acid synthesis 2 -Oxo-4-amino-5-fluoro-1,2-dihydropyrimidin-1-yl, 4-amino-2-oxo-5-chloro-1,2-dihydropyrimidin-1-yl, amino group is nucleic acid synthesis 4-amino-2-oxo-5-chloro-1,2-dihydropyrimidin-1-yl, 2-oxo-4-methoxy-1,2-dihydropyrimidin-1-yl protected with a protecting group of -Oxo-4-mercapto-1,2-dihydropyrimidin-1-yl, 2-oxo-4-hydroxy-1,2-dihydropyrimidin-1-yl (ie, uracinyl), 2-oxo-4-hydroxy- 5-methylpyrimidine-1-y (Ie, thyminyl), 4-amino-5-methyl-2-oxo-1,2-dihydropyrimidin-1-yl (ie, 5-methylcytosinyl) group or amino group is protected with a protecting group for nucleic acid synthesis Compounds which are 4-amino-5-methyl-2-oxo-1,2-dihydropyrimidin-1-yl groups and salts thereof,
(7) B is 6-benzoylaminopurin-9-yl, adeninyl, 6-amino-8-bromopurin-9-yl, 6-benzoylamino-8-bromopurin-9-yl, 6-amino-8 -Chloropurin-9-yl, 6-benzoylamino-8-chloropurin-9-yl, 6-amino-8-fluoropurin-9-yl, 6-benzoylamino-8-fluoropurin-9-yl, 6 -Amino-8-methoxypurin-9-yl, 6-benzoylamino-8-methoxypurin-9-yl, 6-amino-8-ethoxypurin-9-yl, 6-benzoylamino-8-ethoxypurine-9 -Yl, 6-amino-8-t-butoxypurin-9-yl, 6-benzoylamino-8-t-butoxypurin-9-yl, 2-isobutyrylamino-6-hydroxy 9-yl, guaninyl, 2-oxo-4-benzoylamino-1,2-dihydropyrimidin-1-yl, cytosynyl, 2-oxo-5-methyl-4-benzoylamino-1,2-dihydropyrimidine- Examples thereof include compounds which are 1-yl, 5-methylcytosinyl, uracinyl or thyminyl groups and salts thereof.
[0043]
The above (1) to (2), (3) to (4) or (6) to (7) indicate more suitable compounds as the number increases.¹Is arbitrarily selected from (1) to (2), and R²Can be arbitrarily selected from (3) to (4), A can be arbitrarily selected from (5), B can be arbitrarily selected from (6) to (7), and any combination thereof can be obtained. Compounds and their salts are also preferred, and particularly preferred combinations are (2)-(3)-(5)-(6), (2)-(3)-(5)-(7), (2 )-(4)-(5)-(6) and (2)-(4)-(5)-(7), more preferably a compound selected from the following group and a salt thereof.
[0044]
(Compound group)
3'-O, 4'-C-ethylene guanosine,
3'-O, 4'-C-ethyleneadenosine,
5'-O-dimethoxytrityl-3'-O, 4'-C-ethylene-6-N-benzoyladenosine,
5'-O-dimethoxytrityl-3'-O, 4'-C-ethylene-2-N-isobutyrylguanosine,
3'-O, 4'-C-ethylene-2-N-isobutyryl guanosine,
3'-O, 4'-C-ethylene-6-N-benzoyladenosine,
5'-O-dimethoxytrityl-3'-O, 4'-C-ethylene-6-N-benzoyladenosine-2'-O- (2-cyanoethyl N, N-diisopropyl) phosphoramidite
5'-O-dimethoxytrityl-3'-O, 4'-C-ethylene-2-N-isobutyrylguanosine-2'-O- (2-cyanoethyl N, N-diisopropyl) phosphoramidite
3'-O, 4'-C-ethyleneuridine,
3'-O, 4'-C-ethylene-5-methyluridine,
3'-O, 4'-C-ethylenecytidine,
3'-O, 4'-C-ethylene-5-methylcytidine,
2 ', 5'-di-O-benzyl-3'-O, 4'-C-ethyleneuridine,
5'-O-dimethoxytrityl-3'-O, 4'-C-ethyleneuridine,
5'-O-dimethoxytrityl-3'-O, 4'-C-ethylene-5-methyluridine,
5'-O-dimethoxytrityl-3'-O, 4'-C-ethylene-4-N-benzoylcytidine,
5'-O-dimethoxytrityl-3'-O, 4'-C-ethylene-4-N-benzoyl-5-methylcytidine,
3'-O, 4'-C-ethylene-4-N-benzoylcytidine,
3'-O, 4'-C-ethylene-4-N-benzoyl-5-methylcytidine,
5'-O-dimethoxytrityl-3'-O, 4'-C-ethylene-uridine-2'-O- (2-cyanoethyl N, N-diisopropyl) phosphoramidite,
5'-O-dimethoxytrityl-3'-O, 4'-C-ethylene-5-methyluridine-2'-O- (2-cyanoethyl N, N-diisopropyl) phosphoramidite,
5'-O-dimethoxytrityl-3'-O, 4'-C-ethylene-4-N-benzoylcytidine-2'-O- (2-cyanoethyl N, N-diisopropyl) phosphoramidite,
5'-O-dimethoxytrityl-3'-O, 4'-C-ethylene-4-N-benzoyl-5-methylcytidine-2'-O- (2-cyanoethyl N, N-diisopropyl) phosphoramidite,
3′-O, 4′-C-6-amino-8-bromoadenosine,
5'-O-dimethoxytrityl-3'-O, 4'-C-6-benzoylamino-8-bromoadenosine,
5′-O-dimethoxytrityl-3′-O, 4′-C-6-benzoylamino-8-bromoadenosine 2′-O- (2-cyanoethyl N, N-diisopropyl) phosphoramidite,
3′-O, 4′-C-6-amino-8-chloroadenosine,
5'-O-dimethoxytrityl-3'-O, 4'-C-6-benzoylamino-8-chloroadenosine,
5'-O-dimethoxytrityl-3'-O, 4'-C-6-benzoylamino-8-chloroadenosine 2'-O- (2-cyanoethyl N, N-diisopropyl) phosphoramidite,
3′-O, 4′-C-6-amino-8-fluoroadenosine,
5'-O-dimethoxytrityl-3'-O, 4'-C-6-benzoylamino-8-fluoroadenosine,
5'-O-dimethoxytrityl-3'-O, 4'-C-6-benzoylamino-8-fluoroadenosine 2'-O- (2-cyanoethyl N, N-diisopropyl) phosphoramidite,
3′-O, 4′-C-6-amino-8-methoxyadenosine,
5'-O-dimethoxytrityl-3'-O, 4'-C-6-benzoylamino-8-methoxyadenosine,
5'-O-dimethoxytrityl-3'-O, 4'-C-6-benzoylamino-8-methoxyadenosine 2'-O- (2-cyanoethyl N, N-diisopropyl) phosphoramidite,
3'-O, 4'-C-6-amino-8-ethoxyadenosine,
5'-O-dimethoxytrityl-3'-O, 4'-C-6-benzoylamino-8-ethoxyadenosine,
5'-O-dimethoxytrityl-3'-O, 4'-C-6-benzoylamino-8-ethoxyadenosine 2'-O- (2-cyanoethyl N, N-diisopropyl) phosphoramidite,
3′-O, 4′-C-6-amino-8-t-butoxyadenosine,
5′-O-dimethoxytrityl-3′-O, 4′-C-6-benzoylamino-8-t-butoxyadenosine, and
5'-O-dimethoxytrityl-3'-O, 4'-C-6-benzoylamino-8-t-butoxyadenosine 2'-O- (2-cyanoethyl N, N-diisopropyl) phosphoramidite.
[0045]
Among the oligonucleotide analogs containing one or more structures represented by the general formula (2) of the present invention and pharmacologically acceptable salts thereof,
(8) an oligonucleotide analog in which A is a methylene or ethylene group and a pharmacologically acceptable salt thereof,
(9) B is 6-aminopurin-9-yl (ie, adeninyl), 6-aminopurine-9-yl having an amino group protected with a protecting group for nucleic acid synthesis, 2,6-diaminopurine-9- 6-amino-8-bromopurin-9-yl, 6-amino-8-bromopurin-9-yl, 6-amino-8-chloropurine-9 in which the amino group is protected with a protecting group for nucleic acid synthesis 6-amino-8-chloropurin-9-yl, 6-amino-8-fluoropurin-9-yl, wherein the amino group is a protecting group for nucleic acid synthesis Protected 6-amino-8-fluoropurin-9-yl, 6-amino-8-methoxypurine-9-yl, 6-amino-8-methoxypurine- in which the amino group is protected with a protecting group for nucleic acid synthesis 9-yl, 6-amino-8-ethoxy Purin-9-yl, 6-amino-8-ethoxypurin-9-yl, 6-amino-8-t-butoxypurin-9-yl, amino group protected with a protecting group for nucleic acid synthesis, amino group nucleic acid 6-amino-8-t-butoxypurin-9-yl, 2-amino-6-chloropurin-9-yl, protected with a protecting group for synthesis, 2-amino-6-chloropurin-9-yl, protected with a protecting group for nucleic acid synthesis Amino-6-chloropurin-9-yl, 2-amino-6-fluoropurin-9-yl, 2-amino-6-fluoropurin-9-yl in which the amino group is protected with a protecting group for nucleic acid synthesis, 2 -Amino-6-bromopurin-9-yl, 2-amino-6-bromopurin-9-yl, 2-amino-6-hydroxypurin-9-yl having an amino group protected with a protecting group for nucleic acid synthesis ( That is, guanylyl), amino group 2-amino-6-hydroxypurin-9-yl protected with a protecting group for acid synthesis, 2-amino-6-hydroxypurin-9-yl, 6-amino-2-methoxy protected with amino group and hydroxyl group Purin-9-yl, 6-amino-2-methoxypurin-9-yl, 6-amino-2-chloropurin-9-yl, amino group protected with nucleic acid synthesis protecting group 6-amino-2-chloropurin-9-yl protected with a protecting group, 6-amino-2-fluoropurin-9-yl, 6-amino-2-protected amino group with a protecting group for nucleic acid synthesis Fluoropurin-9-yl, 2,6-dimethoxypurin-9-yl, 2,6-dichloropurin-9-yl, 6-mercaptopurin-9-yl, 2-oxo-4-amino-1,2- Dihydropyrimidin-1-yl ( That is, cytosynyl), 2-oxo-4-amino-1,2-dihydropyrimidin-1-yl in which the amino group is protected with a protecting group for nucleic acid synthesis, 2-oxo-4-amino-5-fluoro-1, 2-dihydropyrimidin-1-yl, 2-oxo-4-amino-5-fluoro-1,2-dihydropyrimidin-1-yl in which the amino group is protected with a protecting group for nucleic acid synthesis, 4-amino-2- Oxo-5-chloro-1,2-dihydropyrimidin-1-yl, 4-amino-2-oxo-5-chloro-1,2-dihydropyrimidin-1-yl amino group protected with a protecting group for nucleic acid synthesis 2-oxo-4-methoxy-1,2-dihydropyrimidin-1-yl, 2-oxo-4-mercapto-1,2-dihydropyrimidin-1-yl, 2-oxo-4-hydroxy-1, 2-dihydropyrimidin-1-yl Uracinyl), 2-oxo-4-hydroxy-5-methylpyrimidin-1-yl (ie, thyminyl), 4-amino-5-methyl-2-oxo-1,2-dihydropyrimidin-1-yl Oligonucleotide analogs wherein the (ie 5-methylcytosinyl) group or amino group is a 4-amino-5-methyl-2-oxo-1,2-dihydropyrimidin-1-yl group protected with a protecting group for nucleic acid synthesis And its pharmacological tolerance
Salt,
(10) B is 6-benzoylaminopurin-9-yl, adeninyl, 6-amino-8-bromopurin-9-yl, 6-benzoylamino-8-bromopurin-9-yl, 6-amino-8 -Chloropurin-9-yl, 6-benzoylamino-8-chloropurin-9-yl, 6-amino-8-fluoropurin-9-yl, 6-benzoylamino-8-fluoropurin-9-yl, 6 -Amino-8-methoxypurin-9-yl, 6-benzoylamino-8-methoxypurin-9-yl, 6-amino-8-ethoxypurin-9-yl, 6-benzoylamino-8-ethoxypurine-9 -Yl, 6-amino-8-t-butoxypurin-9-yl, 6-benzoylamino-8-t-butoxypurin-9-yl, 2-isobutyrylamino-6-hydroxy Phosphorin-9-yl, guaninyl, 2-oxo-4-benzoylamino-1,2-dihydropyrimidin-1-yl, cytosynyl, 2-oxo-5-methyl-4-benzoylamino-1,2-dihydropyrimidine- Examples include oligonucleotide analogs that are 1-yl, 5-methylcytosinyl, uracinyl, or thyminyl groups, and pharmacologically acceptable salts thereof.
[0046]
In addition, the above (9) to (10) indicate more preferable oligonucleotide analogs as the number increases. In the general formula (2), A is arbitrarily selected from (8), and B is (9 ) To (10) are arbitrarily selected, and oligonucleotide analogs obtained by arbitrarily combining them and pharmacologically acceptable salts thereof are also suitable. Particularly preferred combinations are (8)-( 9) and (8)-(10).
[0047]
Among the 2 ′, 5′-oligoadenylic acid analogs having a structure represented by the general formula (3) of the present invention and pharmacologically acceptable salts thereof, preferred are:
(8) 2 ′, 5′-oligoadenylic acid analogs in which A is a methylene or ethylene group and pharmacologically acceptable salts thereof,
(9) B is 6-aminopurin-9-yl (ie, adeninyl), 6-amino-8-bromopurin-9-yl, 6-amino-8-chloropurin-9-yl, 6-amino- 8-fluoropurin-9-yl, 6-amino-8-methoxypurin-9-yl, 6-amino-8-ethoxypurin-9-yl, 6-amino-8-t-butoxypurin-9-yl, 6-amino-2-bromopurin-9-yl, 6-amino-2-chloropurin-9-yl, 6-amino-2-fluoropurin-9-yl, 6-amino-2-methoxypurine-9- 2 ', 5'-oligo which is yl, 6-amino-2-ethoxypurin-9-yl, 6-amino-2-t-butoxypurin-9-yl, 2,6-diaminopurin-9-yl group Adenylic acid analogs and pharmacologically acceptable salts thereof.
[0048]
Specific compounds included in the compound of the above formula (1) of the present invention are exemplified in Tables 1 and 2. However, the compound of the present invention is not limited to these.
[0049]
In Tables 1 and 2, Me represents a methyl group, Bn represents a benzyl group, Bz represents a benzoyl group, PMB represents a p-methoxybenzyl group, and Tr represents a triphenylmethyl group. MMTr represents a 4-methoxytriphenylmethyl (monomethoxytrityl) group, DMTr represents a 4,4′-dimethoxytriphenylmethyl (dimethoxytrityl) group, and TMTr represents 4,4 ′, 4 ′. Represents a '-trimethoxytriphenylmethyl (trimethoxytrityl) group, TMS represents a trimethylsilyl group, TBDMS represents a tert-butyldimethylsilyl group, TBDPS represents a tert-butyldiphenylsilyl group, and TIPS represents Represents a triisopropylsilyl group.
[0050]
[Chemical Formula 10]

[0051]
[Table 1]
--------------------------------
Example
Compound
Number A R¹        R²              R^Five      R⁶
--------------------------------
1-1 CH₂           H H H H
1-2 CH₂           H H H NH₂
1-3 CH₂           H H H OH
1-4 CH₂           H H OH H
1-5 CH₂           H H OH NH₂
1-6 CH₂           H H OH OH
1-7 CH₂           H H NH₂     H
1-8 CH₂           H H NH₂     NH₂
1-9 CH₂           H H NH₂     Cl
1-10 CH₂           H H NH₂     F
1-11 CH₂           H H NH₂     Br
1-12 CH₂           H H NH₂     OH
1-13 CH₂           H H OMe H
1-14 CH₂           H H OMe OMe
1-15 CH₂           H H OMe NH₂
1-16 CH₂           H H Cl H
1-17 CH₂           H H Br H
1-18 CH₂           H H F H
1-19 CH₂           H H Cl Cl
1-20 CH₂           H H SH H
1-21 CH₂           Bn H NHBz H
1-22 CH₂           Bn H OH NHCOCH (CH_Three)₂
1-23 CH₂           Bn Ac NHBz H
1-24 CH₂           Bn Ac OH NHCOCH (CH_Three)₂
1-25 CH₂          PMB H NHBz H
1-26 CH₂          PMB H OH NHCOCH (CH_Three)₂
1-27 CH₂          PMB Ac NHBz H
1-28 CH₂          PMB Ac OH NHCOCH (CH_Three)₂
1-29 CH₂           Tr H NHBz H
1-30 CH₂          MMTr H NHBz H
1-31 CH₂          DMTr H NHBz H
1-32 CH₂          Ac Ac NHBz H
1-33 CH₂           Tr H OH NHCOCH (CH_Three)₂
1-34 CH₂          MMTr H OH NHCOCH (CH_Three)₂
1-35 CH₂          DMTr H OH NHCOCH (CH_Three)₂
1-36 CH₂          Ac Ac OH NHCOCH (CH_Three)₂
1-37 CH₂          TBDPS Ac NHBz H
1-38 CH₂          TBDMS H NHBz H
1-39 CH₂          TBDPS H NHBz H
1-40 CH₂          TIPS H NHBz H
1-41 CH₂          TBDPS Ac OH NHCOCH (CH_Three)₂
1-42 CH₂          TBDMS H OH NHCOCH (CH_Three)₂
1-43 CH₂          TBDPS H OH NHCOCH (CH_Three)₂
1-44 CH₂          TIPS H OH NHCOCH (CH_Three)₂
1-45 (CH₂)₂         H H H H
1-46 (CH₂)₂         H H H NH₂
1-47 (CH₂)₂         H H H OH
1-48 (CH₂)₂         H H OH H
1-49 (CH₂)₂         H H OH NH₂
1-50 (CH₂)₂         H H OH OH
1-51 (CH₂)₂         H H NH₂     H
1-52 (CH₂)₂         H H NH₂     NH₂
1-53 (CH₂)₂         H H NH₂     Cl
1-54 (CH₂)₂         H H NH₂     F
1-55 (CH₂)₂         H H NH₂     Br
1-56 (CH₂)₂         H H NH₂     OH
1-57 (CH₂)₂         H H OMe H
1-58 (CH₂)₂         H H OMe OMe
1-59 (CH₂)₂         H H OMe NH₂
1-60 (CH₂)₂         H H Cl H
1-61 (CH₂)₂         H H Br H
1-62 (CH₂)₂         H H F H
1-63 (CH₂)₂         H H Cl Cl
1-64 (CH₂)₂         H H SH H
1-65 (CH₂)₂         Bn H NHBz H
1-66 (CH₂)₂         Bn H OH NHCOCH (CH_Three)₂
1-67 (CH₂)₂         Bn Ac NHBz H
1-68 (CH₂)₂         Bn Ac OH NHCOCH (CH_Three)₂
1-69 (CH₂)₂        PMB H NHBz H
1-70 (CH₂)₂        PMB H OH NHCOCH (CH_Three)₂
1-71 (CH₂)₂        PMB Ac NHBz H
1-72 (CH₂)₂        PMB Ac OH NHCOCH (CH_Three)₂
1-73 (CH₂)₂         Tr H NHBz H
1-74 (CH₂)₂       MMTr H NHBz H
1-75 (CH₂)₂       DMTr H NHBz H
1-76 (CH₂)₂       Ac Ac NHBz H
1-77 (CH₂)₂         Tr H OH NHCOCH (CH_Three)₂
1-78 (CH₂)₂       MMTr H OH NHCOCH (CH_Three)₂
1-79 (CH₂)₂       DMTr H OH NHCOCH (CH_Three)₂
1-80 (CH₂)₂       Ac Ac OH NHCOCH (CH_Three)₂
1-81 (CH₂)₂       TBDPS Ac NHBz H
1-82 (CH₂)₂       TBDMS H NHBz H
1-83 (CH₂)₂       TBDPS H NHBz H
1-84 (CH₂)₂        TIPS H NHBz H
1-85 (CH₂)₂        TBDPS Ac OH NHCOCH (CH_Three)₂
1-86 (CH₂)₂       TBDMS H OH NHCOCH (CH_Three)₂
1-87 (CH₂)₂       TBDPS H OH NHCOCH (CH_Three)₂
1-88 (CH₂)₂        TIPS H OH NHCOCH (CH_Three)₂
1-89 (CH₂)_Three         H H H H
1-90 (CH₂)_Three         H H H NH₂
1-91 (CH₂)_Three         H H H OH
1-92 (CH₂)_Three         H H OH H
1-93 (CH₂)_Three         H H OH NH₂
1-94 (CH₂)_Three         H H OH OH
1-95 (CH₂)_Three         H H NH₂     H
1-96 (CH₂)_Three         H H NH₂    NH₂
1-97 (CH₂)_Three         H H NH₂    Cl
1-98 (CH₂)_Three         H H NH₂    F
1-99 (CH₂)_Three         H H NH₂    Br
1-100 (CH₂)_Three         H H NH₂    OH
1-101 (CH₂)_Three         H H OMe H
1-102 (CH₂)_Three         H H OMe OMe
1-103 (CH₂)_Three         H H OMe NH₂
1-104 (CH₂)_Three         H H Cl H
1-105 (CH₂)_Three         H H Br H
1-106 (CH₂)_Three         H H F H
1-107 (CH₂)_Three         H H Cl Cl
1-108 (CH₂)_Three         H H SH H
1-109 (CH₂)_Three         Bn H NHBz H
1-110 (CH₂)_Three         Bn H OH NHCOCH (CH_Three)₂
1-111 (CH₂)_Three         Bn Ac NHBz H
1-112 (CH₂)_Three         Bn Ac OH NHCOCH (CH_Three)₂
1-113 (CH₂)_Three        PMB H NHBz H
1-114 (CH₂)_Three        PMB H OH NHCOCH (CH_Three)₂
1-115 (CH₂)_Three        PMB Ac NHBz H
1-116 (CH₂)_Three        PMB Ac OH NHCOCH (CH_Three)₂
1-117 (CH₂)_Three         Tr H NHBz H
1-118 (CH₂)_Three       MMTr H NHBz H
1-119 (CH₂)_Three       DMTr H NHBz H
1-120 (CH₂)_Three         Ac Ac NHBz H
1-121 (CH₂)_Three         Tr H OH NHCOCH (CH_Three)₂
1-122 (CH₂)_Three       MMTr H OH NHCOCH (CH_Three)₂
1-123 (CH₂)_Three       DMTr H OH NHCOCH (CH_Three)₂
1-124 (CH₂)_Three         Ac Ac OH NHCOCH (CH_Three)₂
1-125 (CH₂)_Three      TNDPS Ac NHBz H
1-126 (CH₂)_Three      TBDMS H NHBz H
1-127 (CH₂)_Three      TBDPS H NHBz H
1-128 (CH₂)_Three       TIPS H NHBz H
1-129 (CH₂)_Three      TBDPS Ac OH NHCOCH (CH_Three)₂
1-130 (CH₂)_Three      TBDMS H OH NHCOCH (CH_Three)₂
1-131 (CH₂)_Three      TBDPS H OH NHCOCH (CH_Three)₂
1-132 (CH₂)_Three       TIPS H OH NHCOCH (CH_Three)₂
1-133 (CH₂)_Four         H H H H
1-134 (CH₂)_Four         H H H NH₂
1-135 (CH₂)_Four         H H H OH
1-136 (CH₂)_Four         H H OH H
1-137 (CH₂)_Four         H H OH NH₂
1-138 (CH₂)_Four         H H OH OH
1-139 (CH₂)_Four         H H NH₂   H
1-140 (CH₂)_Four         H H NH₂   NH₂
1-141 (CH₂)_Four         H H NH₂   Cl
1-142 (CH₂)_Four         H H NH₂   F
1-143 (CH₂)_Four         H H NH₂   Br
1-144 (CH₂)_Four         H H NH₂   OH
1-145 (CH₂)_Four         H H OMe H
1-146 (CH₂)_Four         H H OMe OMe
1-147 (CH₂)_Four         H H OMe NH₂
1-148 (CH₂)_Four         H H Cl H
1-149 (CH₂)_Four         H H Br H
1-150 (CH₂)_Four         H H F H
1-151 (CH₂)_Four         H H Cl Cl
1-152 (CH₂)_Four         H H SH H
1-153 (CH₂)_Four         Bn H NHBz H
1-154 (CH₂)_Four         Bn H OH NHCOCH (CH_Three)₂
1-155 (CH₂)_Four         Bn Ac NHBz H
1-156 (CH₂)_Four         Bn Ac OH NHCOCH (CH_Three)₂
1-157 (CH₂)_Four        PMB H NHBz H
1-158 (CH₂)_Four        PMB H OH NHCOCH (CH_Three)₂
1-159 (CH₂)_Four        PMB Ac NHBz H
1-160 (CH₂)_Four        PMB Ac OH NHCOCH (CH_Three)₂
1-161 (CH₂)_Four         Tr H NHBz H
1-162 (CH₂)_Four       MMTr H NHBz H
1-163 (CH₂)_Four       DMTr H NHBz H
1-164 (CH₂)_Four         Ac Ac NHBz H
1-165 (CH₂)_Four         Tr H OH NHCOCH (CH_Three)₂
1-166 (CH₂)_Four       MMTr H OH NHCOCH (CH_Three)₂
1-167 (CH₂)_Four       DMTr H OH NHCOCH (CH_Three)₂
1-168 (CH₂)_Four         Ac Ac OH NHCOCH (CH_Three)₂
1-169 (CH₂)_Four      TBDPS Ac NHBz H
1-170 (CH₂)_Four      TBDMS H NHBz H
1-171 (CH₂)_Four      TBDPS H NHBz H
1-172 (CH₂)_Four       TIPS H NHBz H
1-173 (CH₂)_Four      TBDPS Ac OH NHCOCH (CH_Three)₂
1-174 (CH₂)_Four      TBDMS H OH NHCOCH (CH_Three)₂
1-175 (CH₂)_Four      TBDPS H OH NHCOCH (CH_Three)₂
1-176 (CH₂)_Four       TIPS H OH NHCOCH (CH_Three)₂
1-177 CH₂         H H OH NHCOCH (CH_Three)₂
1-178 CH₂         H H NHBz H
1-179 (CH₂)₂       H H OH NHCOCH (CH_Three)₂
1-180 (CH₂)₂       H H NHBz H
1-181 (CH₂)_Three       H H OH NHCOCH (CH_Three)₂
1-182 (CH₂)_Three       H H NHBz H
1-183 (CH₂)_Four       H H OH NHCOCH (CH_Three)₂
1-184 (CH₂)_Four       H H NHBz H
1-185 CH₂         DMTr P (N (iPr)₂) (OC₂H_FourCN) OH NHCOCH (CH_Three)₂
1-186 CH₂         DMTr P (N (iPr)₂) (OC₂H_FourCN) NHBz H
1-187 (CH₂)₂       DMTr P (N (iPr)₂) (OC₂H_FourCN) OH NHCOCH (CH_Three)₂
1-188 (CH₂)₂       DMTr P (N (iPr)₂) (OC₂H_FourCN) NHBz H
1-189 (CH₂)_Three       DMTr P (N (iPr)₂) (OC₂H_FourCN) OH NHCOCH (CH_Three)₂
1-190 (CH₂)_Three       DMTr P (N (iPr)₂) (OC₂H_FourCN) NHBz H
1-191 (CH₂)_Four       DMTr P (N (iPr)₂) (OC₂H_FourCN) OH NHCOCH (CH_Three)₂
1-192 (CH₂)_Four       DMTr P (N (iPr)₂) (OC₂H_FourCN) NHBz H
1-193 CH₂         DMTr P (N (iPr)₂) (OCH_Three) OH NHCOCH (CH_Three)₂
1-194 CH₂         DMTr P (N (iPr)₂) (OCH_Three) NHBz H
1-195 (CH₂)₂       DMTr P (N (iPr)₂) (OCH_Three) OH NHCOCH (CH_Three)₂
1-196 (CH₂)₂       DMTr P (N (iPr)₂) (OCH_Three) NHBz H
1-197 (CH₂)_Three       DMTr P (N (iPr)₂) (OCH_Three) OH NHCOCH (CH_Three)₂
1-198 (CH₂)_Three       DMTr P (N (iPr)₂) (OCH_Three) NHBz H
1-199 (CH₂)_Four       DMTr P (N (iPr)₂) (OCH_Three) OH NHCOCH (CH_Three)₂
1-200 (CH₂)_Four       DMTr P (N (iPr)₂) (OCH_Three) NHBz H
1-201 CH₂         DMTr P (O) (OH) H OH NHCOCH (CH_Three)₂
1-202 CH₂         DMTr P (O) (OH) H NHBz H
1-203 (CH₂)₂       DMTr P (O) (OH) H OH NHCOCH (CH_Three)₂
1-204 (CH₂)₂       DMTr P (O) (OH) H NHBz H
1-205 (CH₂)_Three       DMTr P (O) (OH) H OH NHCOCH (CH_Three)₂
1-206 (CH₂)_Three       DMTr P (O) (OH) H NHBz H
1-207 (CH₂)_Four       DMTr P (O) (OH) H OH NHCOCH (CH_Three)₂
1-208 (CH₂)_Four       DMTr P (O) (OH) H NHBz H
1-209 CH₂          H Ac NHBz H
--------------------------------
[0052]
Embedded image

[0053]
[Table 2]
-------------------------------
Example
Compound
Number A R¹        R²              R⁷      R⁸
-------------------------------
2-1 CH₂           H H OH H
2-2 CH₂           H H OH CH_Three
2-3 CH₂           H H NH₂     H
2-4 CH₂           H H NH₂     CH_Three
2-5 CH₂           H H NH₂     F
2-6 CH₂           H H Cl H
2-7 CH₂           H H OMe H
2-8 CH₂           H H SH H
2-9 CH₂          Bn H OH H
2-10 CH₂          Bn Ac OH H
2-11 CH₂         PMB H OH H
2-12 CH₂         PMB Ac OH H
2-13 CH₂          Tr H OH H
2-14 CH₂        MMTr H OH H
2-15 CH₂        DMTr H OH H
2-16 CH₂          Ac Ac OH H
2-17 CH₂       TBDPS Ac OH H
2-18 CH₂       TBDMS H OH H
2-19 CH₂       TBDPS H OH H
2-20 CH₂        TIPS H OH H
2-21 CH₂          Bn H OH CH_Three
2-22 CH₂          Bn Ac OH CH_Three
2-23 CH₂         PMB Ac OH CH_Three
2-24 CH₂         PMB PMB OH CH_Three
2-25 CH₂          Tr H OH CH_Three
2-26 CH₂        MMTr H OH CH_Three
2-27 CH₂        DMTr H OH CH_Three
2-28 CH₂          Ac Ac OH CH_Three
2-29 CH₂       TBDPS Ac OH CH_Three
2-30 CH₂       TBDMS H OH CH_Three
2-31 CH₂       TBDPS H OH CH_Three
2-32 CH₂        TIPS H OH CH_Three
2-33 CH₂          Bn H NHBz H
2-34 CH₂          Bn Ac NHBz H
2-35 CH₂         PMB H NHBz H
2-36 CH₂         PMB Ac NHBz H
2-37 CH₂          Tr H NHBz H
2-38 CH₂        MMTr H NHBz H
2-39 CH₂        DMTr H NHBz H
2-40 CH₂          Ac Ac NHBz H
2-41 CH₂       TBDPS Ac NHBz H
2-42 CH₂       TBDMS H NHBz H
2-43 CH₂       TBDPS H NHBz H
2-44 CH₂        TIPS H NHBz H
2-45 CH₂          Bn H NHBz CH_Three
2-46 CH₂          Bn Ac NHBz CH_Three
2-47 CH₂         PMB H NHBz CH_Three
2-48 CH₂         PMB Ac NHBz CH_Three
2-49 CH₂          Tr H NHBz CH_Three
2-50 CH₂        MMTr H NHBz CH_Three
2-51 CH₂        DMTr H NHBz CH_Three
2-52 CH₂          Ac Ac NHBz CH_Three
2-53 CH₂       TBDPS Ac NHBz CH_Three
2-54 CH₂       TBDMS H NHBz CH_Three
2-55 CH₂       TBDPS H NHBz CH_Three
2-56 CH₂        TIPS H NHBz CH_Three
2-57 (CH₂)₂        H H OH H
2-58 (CH₂)₂        H H OH CH_Three
2-59 (CH₂)₂        H H NH₂     H
2-60 (CH₂)₂        H H NH₂     CH_Three
2-61 (CH₂)₂        H H NH₂     F
2-62 (CH₂)₂        H H Cl H
2-63 (CH₂)₂        H H OMe H
2-64 (CH₂)₂        H H SH H
2-65 (CH₂)₂       Bn H OH H
2-66 (CH₂)₂       Bn Ac OH H
2-67 (CH₂)₂      PMB H OH H
2-68 (CH₂)₂      PMB Ac OH H
2-69 (CH₂)₂       Tr H OH H
2-70 (CH₂)₂     MMTr H OH H
2-71 (CH₂)₂     DMTr H OH H
2-72 (CH₂)₂       Ac Ac OH H
2-73 (CH₂)₂    TBDPS Ac OH H
2-74 (CH₂)₂    TBDMS H OH H
2-75 (CH₂)₂    TBDPS H OH H
2-76 (CH₂)₂     TIPS H OH H
2-77 (CH₂)₂       Bn H OH CH_Three
2-78 (CH₂)₂       Bn Ac OH CH_Three
2-79 (CH₂)₂      PMB H OH CH_Three
2-80 (CH₂)₂      PMB Ac OH CH_Three
2-81 (CH₂)₂       Tr H OH CH_Three
2-82 (CH₂)₂     MMTr H OH CH_Three
2-83 (CH₂)₂     DMTr H OH CH_Three
2-84 (CH₂)₂       Ac Ac OH CH_Three
2-85 (CH₂)₂    TBDPS Ac OH CH_Three
2-86 (CH₂)₂    TBDMS H OH CH_Three
2-87 (CH₂)₂    TBDPS H OH CH_Three
2-88 (CH₂)₂     TIPS H OH CH_Three
2-89 (CH₂)₂       Bn H NHBz H
2-90 (CH₂)₂       Bn Ac NHBz H
2-91 (CH₂)₂      PMB H NHBz H
2-92 (CH₂)₂      PMB Ac NHBz H
2-93 (CH₂)₂       Tr H NHBz H
2-94 (CH₂)₂     MMTr H NHBz H
2-95 (CH₂)₂     DMTr H NHBz H
2-96 (CH₂)₂       Ac Ac NHBz H
2-97 (CH₂)₂    TBDPS Ac NHBz H
2-98 (CH₂)₂    TBDMS H NHBz H
2-99 (CH₂)₂    TBDPS H NHBz H
2-100 (CH₂)₂     TIPS H NHBz H
2-101 (CH₂)₂       Bn H NHBz CH_Three
2-102 (CH₂)₂       Bn Bn NHBz CH_Three
2-103 (CH₂)₂      PMB Ac NHBz CH_Three
2-104 (CH₂)₂      PMB Ac NHBz CH_Three
2-105 (CH₂)₂       Tr H NHBz CH_Three
2-106 (CH₂)₂     MMTr H NHBz CH_Three
2-107 (CH₂)₂     DMTr H NHBz CH_Three
2-108 (CH₂)₂       Ac Ac NHBz CH_Three
2-109 (CH₂)₂    TBDPS Ac NHBz CH_Three
2-110 (CH₂)₂    TBDMS H NHBz CH_Three
2-111 (CH₂)₂    TBDPS H NHBz CH_Three
2-112 (CH₂)₂     TIPS H NHBz CH_Three
2-113 (CH₂)_Three        H H OH H
2-114 (CH₂)_Three        H H OH CH_Three
2-115 (CH₂)_Three        H H NH₂     H
2-116 (CH₂)_Three        H H NH₂     CH_Three
2-117 (CH₂)_Three        H H NH₂     F
2-118 (CH₂)_Three        H H Cl H
2-119 (CH₂)_Three        H H OMe H
2-120 (CH₂)_Three        H H SH H
2-121 (CH₂)_Three       Bn H OH H
2-122 (CH₂)_Three       Bn Ac OH H
2-123 (CH₂)_Three      PMB H OH H
2-124 (CH₂)_Three      PMB Ac OH H
2-125 (CH₂)_Three       Tr H OH H
2-126 (CH₂)_Three     MMTr H OH H
2-127 (CH₂)_Three     DMTr H OH H
2-128 (CH₂)_Three       Ac Ac OH H
2-129 (CH₂)_Three    TBDPS Ac OH H
2-130 (CH₂)_Three    TBDMS H OH H
2-131 (CH₂)_Three    TBDPS H OH H
2-132 (CH₂)_Three     TIPS H OH H
2-133 (CH₂)_Three       Bn H OH CH_Three
2-134 (CH₂)_Three       Bn Ac OH CH_Three
2-135 (CH₂)_Three      PMB Ac OH CH_Three
2-136 (CH₂)_Three      PMB PMB OH CH_Three
2-137 (CH₂)_Three       Tr H OH CH_Three
2-138 (CH₂)_Three     MMTr H OH CH_Three
2-139 (CH₂)_Three     DMTr H OH CH_Three
2-140 (CH₂)_Three       Ac Ac OH CH_Three
2-141 (CH₂)_Three    TBDPS Ac OH CH_Three
2-142 (CH₂)_Three    TBDMS H OH CH_Three
2-143 (CH₂)_Three    TBDPS H OH CH_Three
2-144 (CH₂)_Three     TIPS H OH CH_Three
2-145 (CH₂)_Three       Bn H NHBz H
2-146 (CH₂)_Three       Bn Ac NHBz H
2-147 (CH₂)_Three      PMB H NHBz H
2-148 (CH₂)_Three      PMB Ac NHBz H
2-149 (CH₂)_Three       Tr H NHBz H
2-150 (CH₂)_Three     MMTr H NHBz H
2-151 (CH₂)_Three     DMTr H NHBz H
2-152 (CH₂)_Three       Ac Ac NHBz H
2-153 (CH₂)_Three    TBDPS Ac NHBz H
2-154 (CH₂)_Three    TBDMS H NHBz H
2-155 (CH₂)_Three    TBDPS H NHBz H
2-156 (CH₂)_Three     TIPS H NHBz H
2-157 (CH₂)_Three       Bn H NHBz CH_Three
2-158 (CH₂)_Three       Bn Ac NHBz CH_Three
2-159 (CH₂)_Three      PMB H NHBz CH_Three
2-160 (CH₂)_Three      PMB Ac NHBz CH_Three
2-161 (CH₂)_Three       Tr H NHBz CH_Three
2-162 (CH₂)_Three     MMTr H NHBz CH_Three
2-163 (CH₂)_Three     DMTr H NHBz CH_Three
2-164 (CH₂)_Three       Ac Ac NHBz CH_Three
2-165 (CH₂)_Three    TBDPS Ac NHBz CH_Three
2-166 (CH₂)_Three    TBDMS H NHBz CH_Three
2-167 (CH₂)_Three    TBDPS H NHBz CH_Three
2-168 (CH₂)_Three     TIPS H NHBz CH_Three
2-169 (CH₂)_Four        H H OH H
2-170 (CH₂)_Four        H H OH CH_Three
2-171 (CH₂)_Four        H H NH₂     H
2-172 (CH₂)_Four        H H NH₂     CH_Three
2-173 (CH₂)_Four        H H NH₂     F
2-174 (CH₂)_Four        H H Cl H
2-175 (CH₂)_Four        H H OMe H
2-176 (CH₂)_Four        H H SH H
2-177 (CH₂)_Four       Bn H OH H
2-178 (CH₂)_Four       Bn Ac OH H
2-179 (CH₂)_Four      PMB H OH H
2-180 (CH₂)_Four      PMB Ac OH H
2-181 (CH₂)_Four       Tr H OH H
2-182 (CH₂)_Four     MMTr H OH H
2-183 (CH₂)_Four     DMTr H OH H
2-184 (CH₂)_Four       Ac Ac OH H
2-185 (CH₂)_Four    TBDPS Ac OH H
2-186 (CH₂)_Four    TBDMS H OH H
2-187 (CH₂)_Four    TBDPS H OH H
2-188 (CH₂)_Four     TIPS H OH H
2-189 (CH₂)_Four       Bn H OH CH_Three
2-190 (CH₂)_Four       Bn Ac OH CH_Three
2-191 (CH₂)_Four      PMB H OH CH_Three
2-192 (CH₂)_Four      PMB Ac OH CH_Three
2-193 (CH₂)_Four       Tr H OH CH_Three
2-194 (CH₂)_Four     MMTr H OH CH_Three
2-195 (CH₂)_Four     DMTr H OH CH_Three
2-196 (CH₂)_Four       Ac Ac OH CH_Three
2-197 (CH₂)_Four    TBDPS Ac OH CH_Three
2-198 (CH₂)_Four    TBDMS H OH CH_Three
2-199 (CH₂)_Four    TBDPS H OH CH_Three
2-200 (CH₂)_Four     TIPS H OH CH_Three
2-201 (CH₂)_Four       Bn H NHBz H
2-202 (CH₂)_Four       Bn Ac NHBz H
2-203 (CH₂)_Four      PMB H NHBz H
2-204 (CH₂)_Four      PMB Ac NHBz H
2-205 (CH₂)_Four       Tr H NHBz H
2-206 (CH₂)_Four     MMTr H NHBz H
2-207 (CH₂)_Four     DMTr H NHBz H
2-208 (CH₂)_Four       Ac Ac NHBz H
2-209 (CH₂)_Four    TBDPS Ac NHBz H
2-210 (CH₂)_Four    TBDMS H NHBz H
2-211 (CH₂)_Four    TBDPS H NHBz H
2-212 (CH₂)_Four     TIPS H NHBz H
2-213 (CH₂)_Four       Bn H NHBz CH_Three
2-214 (CH₂)_Four       Bn Ac NHBz CH_Three
2-215 (CH₂)_Four      PMB H NHBz CH_Three
2-216 (CH₂)_Four      PMB Ac NHBz CH_Three
2-217 (CH₂)_Four       Tr H NHBz CH_Three
2-218 (CH₂)_Four     MMTr H NHBz CH_Three
2-219 (CH₂)_Four     DMTr H NHBz CH_Three
2-220 (CH₂)_Four       Ac Ac NHBz CH_Three
2-221 (CH₂)_Four    TBDPS Ac NHBz CH_Three
2-222 (CH₂)_Four    TBDMS H NHBz CH_Three
2-223 (CH₂)_Four    TBDPS H NHBz CH_Three
2-224 (CH₂)_Four     TIPS H NHBz CH_Three
2-225 CH₂         H H NHBz H
2-226 CH₂         H H NHBz CH_Three
2-227 (CH₂)₂      H H NHBz H
2-228 (CH₂)₂      H H NHBz CH_Three
2-229 (CH₂)_Three      H H NHBz H
2-230 (CH₂)_Three      H H NHBz CH_Three
2-231 (CH₂)_Four      H H NHBz H
2-232 (CH₂)_Four      H H NHBz CH_Three
2-233 CH₂         DMTr P (N (iPr)₂) (OC₂H_FourCN) OH H
2-234 CH₂         DMTr P (N (iPr)₂) (OC₂H_FourCN) OH CH_Three
2-235 CH₂         DMTr P (N (iPr)₂) (OC₂H_FourCN) NHBz H
2-236 CH₂         DMTr P (N (iPr)₂) (OC₂H_FourCN) NHBz CH_Three
2-237 (CH₂)₂       DMTr P (N (iPr)₂) (OC₂H_FourCN) OH H
2-238 (CH₂)₂       DMTr P (N (iPr)₂) (OC₂H_FourCN) OH CH_Three
2-239 (CH₂)₂       DMTr P (N (iPr)₂) (OC₂H_FourCN) NHBz H
2-240 (CH₂)₂       DMTr P (N (iPr)₂) (OC₂H_FourCN) NHBz CH_Three
2-241 (CH₂)_Three       DMTr P (N (iPr)₂) (OC₂H_FourCN) OH H
2-242 (CH₂)_Three       DMTr P (N (iPr)₂) (OC₂H_FourCN) OH CH_Three
2-243 (CH₂)_Three       DMTr P (N (iPr)₂) (OC₂H_FourCN) NHBz H
2-244 (CH₂)_Three       DMTr P (N (iPr)₂) (OC₂H_FourCN) NHBz CH_Three
2-245 (CH₂)_Four       DMTr P (N (iPr)₂) (OC₂H_FourCN) OH H
2-246 (CH₂)_Four       DMTr P (N (iPr)₂) (OC₂H_FourCN) OH CH_Three
2-247 (CH₂)_Four       DMTr P (N (iPr)₂) (OC₂H_FourCN) NHBz H
2-248 (CH₂)_Four       DMTr P (N (iPr)₂) (OC₂H_FourCN) NHBz CH_Three
2-249 CH₂         DMTr P (N (iPr)₂) (OCH_Three) OH H
2-250 CH₂         DMTr P (N (iPr)₂) (OCH_Three) OH CH_Three
2-251 CH₂         DMTr P (N (iPr)₂) (OCH_Three) NHBz H
2-252 CH₂         DMTr P (N (iPr)₂) (OCH_Three) NHBz CH_Three
2-253 (CH₂)₂       DMTr P (N (iPr)₂) (OCH_Three) OH H
2-254 (CH₂)₂       DMTr P (N (iPr)₂) (OCH_Three) OH CH_Three
2-255 (CH₂)₂       DMTr P (N (iPr)₂) (OCH_Three) NHBz H
2-256 (CH₂)₂       DMTr P (N (iPr)₂) (OCH_Three) NHBz CH_Three
2-257 (CH₂)_Three       DMTr P (N (iPr)₂) (OCH_Three) OH H
2-258 (CH₂)_Three       DMTr P (N (iPr)₂) (OCH_Three) OH CH_Three
2-259 (CH₂)_Three       DMTr P (N (iPr)₂) (OCH_Three) NHBz H
2-260 (CH₂)_Three       DMTr P (N (iPr)₂) (OCH_Three) NHBz CH_Three
2-261 (CH₂)_Four       DMTr P (N (iPr)₂) (OCH_Three) OH H
2-262 (CH₂)_Four       DMTr P (N (iPr)₂) (OCH_Three) OH CH_Three
2-263 (CH₂)_Four       DMTr P (N (iPr)₂) (OCH_Three) NHBz H
2-264 (CH₂)_Four       DMTr P (N (iPr)₂) (OCH_Three) NHBz CH_Three
--------------------------------
In Tables 1 and 2, suitable compounds are (1-5), (1-7), (1-23), (1-24), (1-31), (1-32), (1 -35), (1-36), (1-37), (1-39), (1-41), (1-43), (1-49), (1-51), (1-67) ), (1-68), (1-75), (1-76), (1-79), (1-80), (1-81), (1-83), (1-85), (1-87), (1-93), (1-95), (1-111), (1-112), (1-115), (1-116), (1-119), (1 -120), (1-123), (1-124), (1-125), (1-127), (1-129), (1-131), (1-137), (1-139) ), (1-155), (1-156), (1-163), 1-164), (1-167), (1-168), (1-169), (1-171), (1-173), (1-175), (1-177), (1- 178), (1-185), (1-186), (1-193), (1-194), (1-201), (1-202), (2-1), (2-2) , (2-3), (2-4), (2-10), (2-15), (2-16), (2-17), (2-19), (2-22), ( 2-27), (2-28), (2-29), (2-31), (2-34), (2-39), (2-40), (2-41), (2- 43), (2-46), (2-51), (2-52), (2-53), (2-55), (2-57), (2-58), (2-59) , (2-60), (2-66), (2-71), (2-72), 2-73), (2-75), (2-78), (2-83), (2-84), (2-85), (2-87), (2-90), (2- 95), (2-96), (2-97), (2-99), (2-102), (2-107), (2-108), (2-109), (2-111) , (2-113), (2-114), (2-115), (2-116), (2-122), (2-127), (2-128), (2-129), ( 2-131), (2-134), (2-139), (2-140), (2-141), (2-143), (2-146), (2-151), (2- 152), (2-153), (2-155), (2-158), (2-163), (2-164), (2-165), (2-167), (2-169) , (2-170), (2 -171), (2-172), (2-178), (2-183), (2-184), (2-185), (2-187), (2-190), (2-195) ), (2-196), (2-197), (2-199), (2-202), (2-207), (2-208), (2-209), (2-211), (2-214), (2-219), (2-220), (2-221), (2-223), (2-225), (2-226), (2-233), (2 -234), (2-235) or (2-236), more preferably
3'-O, 4'-C-ethyleneguanosine (1-5),
3'-O, 4'-C-ethyleneadenosine (1-7),
5'-O-dimethoxytrityl-3'-O, 4'-C-ethylene-6-N-benzoyladenosine (1-31),
5'-O-dimethoxytrityl-3'-O, 4'-C-ethylene-2-N-isobutyrylguanosine (1-35),
3'-O, 4'-C-ethylene-2-N-isobutyryl guanosine (1-177),
3'-O, 4'-C-ethylene-6-N-benzoyladenosine (1-178),
5′-O-dimethoxytrityl-3′-O, 4′-C-ethylene-2-N-isobutyrylguanosine-2′-O- (2-cyanoethyl N, N-diisopropyl) phosphoramidite (1- 185),
5'-O-dimethoxytrityl-3'-O, 4'-C-ethylene-6-N-benzoyladenosine-2'-O- (2-cyanoethyl N, N-diisopropyl) phosphoramidite (1-186) ,
3'-O, 4'-C-ethyleneuridine (2-1),
3'-O, 4'-C-ethylene 5-methyluridine (2-2),
3'-O, 4'-C-ethylenecytidine (2-3),
3'-O, 4'-C-ethylene-5-methylcytidine (2-4),
2 ', 5'-di-O-benzyl-3'-O, 4'-C-ethyleneuridine (2-10),
5'-O-dimethoxytrityl-3'-O, 4'-C-ethyleneuridine (2-15),
5'-O-dimethoxytrityl-3'-O, 4'-C-ethylene-5-methyluridine (2-27),
5'-O-dimethoxytrityl-3'-O, 4'-C-ethylene-4-N-benzoylcytidine (2-39),
5'-O-dimethoxytrityl-3'-O, 4'-C-ethylene-4-N-benzoyl-5-methylcytidine (2-51),
3'-O, 4'-C-ethylene-4-N-benzoylcytidine (2-225),
3'-O, 4'-C-ethylene-4-N-benzoyl-5-methylcytidine (2-226),
5'-O-dimethoxytrityl-3'-O, 4'-C-ethylene-uridine-2'-O- (2-cyanoethyl N, N-diisopropyl) phosphoramidite (2-233),
5'-O-dimethoxytrityl-3'-O, 4'-C-ethylene-5-methyluridine-2'-O- (2-cyanoethyl N, N-diisopropyl) phosphoramidite (2-234),
5'-O-dimethoxytrityl-3'-O, 4'-C-ethylene-4-N-benzoylcytidine-2'-O- (2-cyanoethyl N, N-diisopropyl) phosphoramidite (2-235) Or
5'-O-dimethoxytrityl-3'-O, 4'-C-ethylene-4-N-benzoyl-5-methylcytidine-2'-O- (2-cyanoethyl N, N-diisopropyl) phosphoramidite ( 2-236).
[0054]
In Table 3, K^XThe compound described as represents a compound unit having the following structure.
[0055]
Embedded image

[0056]
[Table 3]
[0057]
Embedded image

[0058]
---------------------------
No. m E¹ E² E^Three n Q V
---------------------------
3-1 1K^3-1 K¹ K¹ 0--
3-2 1 K¹ K^3-1 K¹ 0--
3-3 1K¹ K¹ K^3-1 0--
3-4 1K^3-1 K^3-1 K¹ 0--
3-5 1K^3-1 K¹ K^3-1 0--
3-6 1K¹ K^3-1 K^3-1 0--
3-7 1K^3-1 K^3-1 K^3-1 0--
3-8 1K^3-1 K¹ K¹ 1 O C₂H_FourOH
3-9 1K¹ K¹ K^3-1 1 O C₂H_FourOH
3-10 1K^3-4 K¹ K¹ 0--
3-11 1K¹ K¹ K^3-4 0--
3-12 1K^3-2 K¹ K¹ 0--
3-13 1K¹ K^3-2 K¹ 0--
3-14 1K¹ K¹ K^3-2 0--
3-15 1K^3-2 K^3-2 K¹ 0--
3-16 1K^3-2 K¹ K^3-2 0--
3-17 1K¹ K^3-2 K^3-2 0--
3-18 1K^3-2 K^3-2 K^3-2 0--
3-19 1 K^3-2 K¹ K¹ 1 O C₂H_FourOH
3-20 1 K¹ K¹ K^3-2 1 O C₂H_FourOH
3-21 1 K^3-5 K¹ K¹ 0--
3-22 1 K¹ K¹ K^3-5 0--
3-23 1 K^3-3 K¹ K¹ 0--
3-24 1K¹ K^3-3 K¹ 0--
3-25 1K¹ K¹ K^3-3 0--
3-26 1K^3-3 K^3-3 K¹ 0--
3-27 1 K^3-3 K¹ K^3-3 0--
3-28 1 K¹ K^3-3 K^3-3 0--
3-29 1 K^3-3 K^3-3 K^3-3 0--
3-30 1 K^3-3 K¹ K¹ 1 O C₂H_FourOH
3-31 1 K¹ K¹ K^3-3 1 O C₂H_FourOH
3-32 1 K^3-6 K¹ K¹ 0--
3-33 1K¹ K¹ K^3-6 0--
3-34 2K^3-1 K¹K¹ K¹ 0--
3-35 2K¹ K^3-1K¹ K¹ 0--
3-36 2K¹ K¹K^3-1 K¹ 0--
3-37 2K^3-1 K^3-1K¹ K¹ 0--
3-38 2K^3-1 K¹K^3-1 K¹ 0--
3-39 2K¹ K^3-1K^3-1 K¹ 0--
3-40 2K^3-1 K^3-1K^3-1 K¹ 0--
3-41 2K^3-1 K¹K¹ K^3-1 0--
3-42 2K¹ K¹K^3-1 K^3-1 0--
3-43 2K^3-1 K¹K¹ K¹ 1 O C₂H_FourOH
3-44 2K¹ K¹K^3-1 K¹ 1 O C₂H_FourOH
3-45 2K^3-4 K¹K¹ K¹ 0--
3-46 2K¹ K¹K^3-4 K¹ 0--
3-47 2K^3-2 K¹K¹ K¹ 0--
3-48 2K¹ K^3-2K¹ K¹ 0--
3-49 2K¹ K¹K^3-2 K¹ 0--
3-50 2K^3-2 K^3-2K¹ K¹ 0--
3-51 2K^3-2 K¹K^3-2 K¹ 0--
3-52 2K¹ K^3-2K^3-2 K¹ 0--
3-53 2K^3-2 K^3-2K^3-2 K¹ 0--
3-54 2K^3-2 K¹K¹ K^3-2 0--
3-55 2K¹ K¹K^3-2 K^3-2 0--
3-56 2K^3-2 K¹K¹ K¹ 1 O C₂H_FourOH
3-57 2K¹ K¹K^3-2 K¹ 1 O C₂H_FourOH
3-58 2K^3-5 K¹K¹ K¹ 0--
3-59 2K¹ K¹K^3-5 K¹ 0--
3-60 2K^3-3 K¹K¹ K¹ 0--
3-61 2K¹ K^3-3K¹ K¹ 0--
3-62 2K¹ K¹K^3-3 K¹ 0--
3-63 2K^3-3 K^3-3K¹ K¹ 0--
3-64 2K^3-3 K¹K^3-3 K¹ 0--
3-65 2K¹ K^3-3K^3-3 K¹ 0--
3-66 2K^3-3 K^3-3K^3-3 K¹ 0--
3-67 2K^3-3 K¹K¹ K^3-3 0--
3-68 2K¹ K¹K^3-3 K^3-3 0--
3-69 2K^3-3 K¹K¹ K¹ 1 O C₂H_FourOH
3-70 2K¹ K¹K^3-3 K¹ 1 O C₂H_FourOH
3-71 2K^3-6 K¹K¹ K¹ 0--
3-72 2K¹ K¹K^3-6 K¹ 0--
3-73 1 K^3-2 K¹ K^3-2 1 O C₂H_FourOH
3-72 1K² K¹ K^3-2 1 O C₂H_FourOH
----------------------------
[0059]
DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
Compound (1) of the present invention can be produced by Method A or Method B described below.
[0060]
Embedded image

[0061]
In Method A and Method B, X and Y are the same or different and each represents a protecting group, Z represents an acyl group, A represents the same meaning as described above, B¹Is a purine-9-yl group, a 2-oxo-1,2-dihydropyrimidin-1-yl group, or a substituted purin-9-yl group having a substituent selected from the aforementioned α group or 2-oxo-1 , 2-dihydropyrimidin-1-yl group, except for those substituted with an amino group;²Is a purin-9-yl group, a 2-oxo-1,2-dihydropyrimidin-1-yl group or a substituted purin-9-yl group having a substituent selected from the aforementioned α group or 2-oxo-1, A 2-dihydropyrimidin-1-yl group, which is substituted with an amino group protected with a protecting group for nucleic acid synthesis, is excluded, and R⁹Represents a group which forms a leaving group with an oxygen atom.
[0062]
Examples of the “protecting group” in the definition of X and Y include, for example, formyl, acetyl, propionyl, butyryl, isobutyryl, pentanoyl, pivaloyl, valeryl, isovaleryl, octanoyl, nonanoyl, decanoyl, 3-methylnonanoyl, 8-methylnonanoyl, 3-ethyl Octanoyl, 3,7-dimethyloctanoyl, undecanoyl, dodecanoyl, tridecanoyl, tetradecanoyl, pentadecanoyl, hexadecanoyl, 1-methylpentadecanoyl, 14-methylpentadecanoyl, 13,13-dimethyltetradecane Alkylcarbonyl groups such as noyl, heptadecanoyl, 15-methylhexadecanoyl, octadecanoyl, 1-methylheptadecanoyl, nonadecanoyl, icosanoyl and henaicosanoyl; Carboxylated alkylcarbonyl groups such as sinoyl, glutaroyl and adipoyl, halogeno lower alkylcarbonyl groups such as chloroacetyl, dichloroacetyl, trichloroacetyl and trifluoroacetyl, lower alkoxy lower alkylcarbonyl groups such as methoxyacetyl, (E) An “aliphatic acyl group” such as an unsaturated alkylcarbonyl group such as 2-methyl-2-butenoyl;
Arylcarbonyl groups such as benzoyl, α-naphthoyl and β-naphthoyl, halogenoarylcarbonyl groups such as 2-bromobenzoyl and 4-chlorobenzoyl, lower groups such as 2,4,6-trimethylbenzoyl and 4-toluoyl Alkylated arylcarbonyl groups, lower alkoxylated arylcarbonyl groups such as 4-anisoyl, carboxylated arylcarbonyl groups such as 2-carboxybenzoyl, 3-carboxybenzoyl, 4-carboxybenzoyl, 4- Nitrobenzoyl, nitrated arylcarbonyl groups such as 2-nitrobenzoyl; lower alkoxycarbonylated arylcarbonyl groups such as 2- (methoxycarbonyl) benzoyl, arylated aryls such as 4-phenylbenzoyl -Aromatic acyl such as An “acyl-type” protecting group such as
Methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, isobutyl, s-butyl, tert-butyl, n-pentyl, isopentyl, 2-methylbutyl, neopentyl, 1-ethylpropyl, n-hexyl, isohexyl, 4-methyl Pentyl, 3-methylpentyl, 2-methylpentyl, 1-methylpentyl, 3,3-dimethylbutyl, 2,2-dimethylbutyl, 1,1-dimethylbutyl, 1,2-dimethylbutyl, 1,3-dimethyl “Lower alkyl groups” such as butyl, 2,3-dimethylbutyl, 2-ethylbutyl;
Ethenyl, 1-propenyl, 2-propenyl, 1-methyl-2-propenyl, 1-methyl-1-propenyl, 2-methyl-1-propenyl, 2-methyl-2-propenyl, 2-ethyl-2-propenyl, 1-butenyl, 2-butenyl, 1-methyl-2-butenyl, 1-methyl-1-butenyl, 3-methyl-2-butenyl, 1-ethyl-2-butenyl, 3-butenyl, 1-methyl-3- Butenyl, 2-methyl-3-butenyl, 1-ethyl-3-butenyl, 1-pentenyl, 2-pentenyl, 1-methyl-2-pentenyl, 2-methyl-2-pentenyl, 3-pentenyl, 1-methyl- 3-pentenyl, 2-methyl-3-pentenyl, 4-pentenyl, 1-methyl-4-pentenyl, 2-methyl-4-pentenyl, 1-hexenyl, 2-hexenyl , 3-hexenyl, 4-hexenyl, 5-A "lower alkenyl group" such as hexenyl;
Arylcarbonyl groups such as benzoyl, α-naphthoyl and β-naphthoyl, halogenoarylcarbonyl groups such as 2-bromobenzoyl and 4-chlorobenzoyl, lower alkyls such as 2,4,6-trimethylbenzoyl and 4-toluoyl Arylcarbonyl groups, lower alkoxylated arylcarbonyl groups such as 4-anisoyl, 2-carboxybenzoyl, 3-carboxybenzoyl, carboxylated arylcarbonyl groups such as 4-carboxybenzoyl, 4-nitrobenzoyl, 2-nitrobenzoyl Nitrated arylcarbonyl groups such as; lower alkoxycarbonylated arylcarbonyl groups such as 2- (methoxycarbonyl) benzoyl; arylated arylcarbonyl groups such as 4-phenylbenzoyl; An acyl group ";
“Tetrahydro, such as tetrahydropyran-2-yl, 3-bromotetrahydropyran-2-yl, 4-methoxytetrahydropyran-4-yl, tetrahydrothiopyran-2-yl, 4-methoxytetrahydrothiopyran-4-yl "Pyranyl or tetrahydrothiopyranyl group"; "tetrahydrofuranyl or tetrahydrothiofuranyl group" such as tetrahydrofuran-2-yl, tetrahydrothiofuran-2-yl;
Tri-lower alkylsilyl groups such as trimethylsilyl, triethylsilyl, isopropyldimethylsilyl, t-butyldimethylsilyl, methyldiisopropylsilyl, methyldi-t-butylsilyl, triisopropylsilyl, diphenylmethylsilyl, diphenylbutylsilyl, diphenylisopropylsilyl, phenyl A “silyl group” such as a tri-lower alkylsilyl group substituted with 1 to 2 aryl groups such as diisopropylsilyl;
“Lower alkoxymethyl groups” such as methoxymethyl, 1,1-dimethyl-1-methoxymethyl, ethoxymethyl, propoxymethyl, isopropoxymethyl, butoxymethyl, t-butoxymethyl;
A “lower alkoxylated lower alkoxymethyl group” such as 2-methoxyethoxymethyl;
“Halogeno lower alkoxymethyl” such as 2,2,2-trichloroethoxymethyl, bis (2-chloroethoxy) methyl;
“Lower alkoxylated ethyl groups” such as 1-ethoxyethyl, 1- (isopropoxy) ethyl;
“Ethyl halide groups” such as 2,2,2-trichloroethyl;
“Methyl groups substituted with 1 to 3 aryl groups” such as benzyl, α-naphthylmethyl, β-naphthylmethyl, diphenylmethyl, triphenylmethyl, α-naphthyldiphenylmethyl, 9-anthrylmethyl;
4-methylbenzyl, 2,4,6-trimethylbenzyl, 3,4,5-trimethylbenzyl, 4-methoxybenzyl, 4-methoxyphenyldiphenylmethyl, 4,4′-dimethoxytriphenylmethyl, 2-nitrobenzyl, 4-nitrobenzyl, 4-chlorobenzyl, 4-bromobenzyl, 4-cyanobenzyl- "lower alkyl, lower alkoxy, halogen, substituted with 1 to 3 aryl groups substituted with aryl ring by cyano group Methyl group ";
“Lower alkoxycarbonyl” such as methoxycarbonyl, ethoxycarbonyl, t-butoxycarbonyl, isobutoxycarbonyl;
“Aryl group substituted by halogen atom, lower alkoxy group or nitro group” such as 4-chlorophenyl, 2-chlorophenyl, 4-methoxyphenyl, 4-nitrophenyl, 2,4-dinitrophenyl
A “lower alkoxycarbonyl group substituted with a halogen or a tri-lower alkylsilyl group” such as 2,2,2-trichloroethoxycarbonyl, 2-trimethylsilylethoxycarbonyl;
“Alkenyloxycarbonyl groups” such as vinyloxycarbonyl, aryloxycarbonyl;
1 to 2 “lower alkoxy or nitro group with aryl ring such as benzyloxycarbonyl, 4-methoxybenzyloxycarbonyl, 3,4-dimethoxybenzyloxycarbonyl, 2-nitrobenzyloxycarbonyl, 4-nitrobenzyloxycarbonyl” Are optionally substituted aralkyloxycarbonyl groups.
[0063]
R⁹Examples of the “group that forms a leaving group” include a lower alkylsulfonyl group such as methanesulfonyl and ethanesulfonyl, a halogen-substituted lower alkylsulfonyl group such as trifluoromethanesulfonyl, and an aryl such as p-toluenesulfonyl. A sulfonyl group can be mentioned, Preferably it is a methanesulfonyl group or a p-toluenesulfonyl group.
[0064]
Examples of the “acyl group” in the definition of Z include, for example, formyl, acetyl, propionyl, butyryl, isobutyryl, pentanoyl, pivaloyl, valeryl, isovaleryl, octanoyl, nonanoyl, decanoyl, 3-methylnonanoyl, 8-methylnonanoyl, 3-ethyloctanoyl Noyl, 3,7-dimethyloctanoyl, undecanoyl, dodecanoyl, tridecanoyl, tetradecanoyl, pentadecanoyl, hexadecanoyl, 1-methylpentadecanoyl, 14-methylpentadecanoyl, 13,13-dimethyltetradecanoyl Alkylcarbonyl groups such as heptadecanoyl, 15-methylhexadecanoyl, octadecanoyl, 1-methylheptadecanoyl, nonadecanoyl, icosanoyl and henaicosanoyl; Carboxylated alkylcarbonyl groups such as noyl, glutaroyl and adipoyl, halogeno lower alkylcarbonyl groups such as chloroacetyl, dichloroacetyl, trichloroacetyl and trifluoroacetyl, lower alkoxy lower alkylcarbonyl groups such as methoxyacetyl, (E) An “aliphatic acyl group” such as an unsaturated alkylcarbonyl group such as 2-methyl-2-butenoyl;
Arylcarbonyl groups such as benzoyl, α-naphthoyl and β-naphthoyl, halogenoarylcarbonyl groups such as 2-bromobenzoyl and 4-chlorobenzoyl, lower groups such as 2,4,6-trimethylbenzoyl and 4-toluoyl Alkylated arylcarbonyl groups, lower alkoxylated arylcarbonyl groups such as 4-anisoyl, carboxylated arylcarbonyl groups such as 2-carboxybenzoyl, 3-carboxybenzoyl, 4-carboxybenzoyl, 4- Nitrobenzoyl, nitrated arylcarbonyl groups such as 2-nitrobenzoyl; lower alkoxycarbonylated arylcarbonyl groups such as 2- (methoxycarbonyl) benzoyl, arylated aryls such as 4-phenylbenzoyl -Aromatic acyl such as Ru group ”.
[0065]
Hereinafter, each step of the A to B method will be described in detail.
(Step A-1)
This step is a step of producing a compound (4) by reacting a leaving group introduction reagent with the compound (3) produced by the C to E method described later in the presence of a base catalyst in an inert solvent. is there.
[0066]
Examples of the solvent used include aliphatic hydrocarbons such as hexane, heptane, ligroin and petroleum ether; aromatic hydrocarbons such as benzene, toluene and xylene; methylene chloride, chloroform, carbon tetrachloride and dichloroethane. Halogenated hydrocarbons such as chlorobenzene and dichlorobenzene; esters such as ethyl formate, ethyl acetate, propyl acetate, butyl acetate and diethyl carbonate; diethyl ether, diisopropyl ether, tetrahydrofuran, dioxane, dimethoxyethane, Ethers such as diethylene glycol dimethyl ether; ketones such as acetone, methyl ethyl ketone, methyl isobutyl ketone, isophorone and cyclohexanone; nitro compounds such as nitroethane and nitrobenzene; aceto Nitriles such as tolyl and isobutyronitrile; amides such as formamide, N, N-dimethylformamide, N, N-dimethylacetamide, N-methyl-2-pyrrolidone, N-methylpyrrolidinone and hexamethylphosphorotriamide Examples thereof include sulfoxides such as sulfolane; pyridines, and pyridine is preferred.
[0067]
The base catalyst used is preferably a base such as triethylamine, pyridine or dimethylaminopyridine.
[0068]
Examples of the leaving group introduction reagent to be used include alkylsulfonyl halides such as methanesulfonyl chloride and ethanesulfonyl bromide; arylsulfonyl halides such as p-toluenesulfonyl chloride, and preferably Methanesulfonyl chloride and p-toluenesulfonyl chloride.
[0069]
While the reaction temperature varies depending on the raw material compound, solvent, leaving group introduction reagent and base catalyst used, it is generally 0 ° C. to 50 ° C., preferably 10 to 40 ° C.
[0070]
The reaction time varies depending on the raw material compound used, the solvent, the leaving group introduction reagent, the base catalyst, and the reaction temperature, but is usually 10 minutes to 24 hours, and preferably 1 to 10 hours.
[0071]
After completion of the reaction, the target compound (4) of this reaction includes, for example, neutralizing the reaction solution, concentrating the reaction mixture, adding an immiscible organic solvent such as water and ethyl acetate, washing with water, and then containing the target compound. The organic layer is separated and dried over anhydrous magnesium sulfate, and the solvent is distilled off.
[0072]
If necessary, the obtained compound can be further purified by a conventional method such as recrystallization, silica gel column chromatography and the like.
(Step A-2)
This step is a step of producing compound (5) by reacting an acid anhydride with compound (4) produced in step A-1 in the presence of an acid catalyst in a solvent.
[0073]
Examples of the solvent used include ethers such as diethyl ether, dioxane and tetrahydrofuran; nitriles such as acetonitrile and isobutyronitrile; formamide, N, N-dimethylformamide, N, N-dimethylacetamide, N Examples include amides such as -methyl-2-pyrrolidone, N-methylpyrrolidinone, and hexamethylphosphorotriamide; organic acids such as acetic acid, but acetic acid is preferred.
[0074]
Examples of the acid catalyst used include inorganic acids such as hydrochloric acid, sulfuric acid, and nitric acid, and sulfuric acid (particularly concentrated sulfuric acid) is preferred.
[0075]
Examples of the acid anhydride used include lower aliphatic carboxylic acid anhydrides such as acetic anhydride and propionic anhydride, and acetic anhydride is preferred.
[0076]
The reaction temperature varies depending on the raw material compound, solvent, acid catalyst, and acid anhydride to be used, but is usually 0 ° C. to 50 ° C., preferably 10 to 40 ° C.
[0077]
While the reaction time varies depending on the raw material compound, solvent, acid catalyst, acid anhydride, and reaction temperature used, it is generally 10 minutes to 12 hours, preferably 30 minutes to 3 hours.
[0078]
After completion of the reaction, the target compound (5) of this reaction is obtained by, for example, concentrating the reaction mixture, adding water and an immiscible organic solvent such as ethyl acetate, washing with water, separating the organic layer containing the target compound, and adding anhydrous It can be obtained by distilling off the solvent after drying with magnesium sulfate or the like.
[0079]
If necessary, the obtained compound can be further purified by a conventional method such as recrystallization, silica gel column chromatography and the like.
(Step A-3)
In this process, compound (5) produced in step A-2 in an inert solvent in the presence of an acid catalyst is added to the literature (H. Vorbueggen, K. Krolikiewicz and B, Bennua, Chem. Ber., 114, 1234-1255 (1981)) is a step of producing a compound (6) by reacting a trimethylsilylated product corresponding to purine or pyrimidine which may have a desired substituent.
[0080]
Solvents used include aromatic hydrocarbons such as benzene, toluene and xylene; halogenated hydrocarbons such as methylene chloride, chloroform, carbon tetrachloride, 1,2-dichloroethane, chlorobenzene and dichlorobenzene; acetonitrile Nitriles such as isobutyronitrile; amides such as formamide, N, N-dimethylformamide, N, N-dimethylacetamide, N-methyl-2-pyrrolidone, N-methylpyrrolidinone, hexamethylphosphorotriamide Carbon sulfide and the like can be mentioned, and toluene and 1,2-dichloroethane are preferred.
[0081]
As the acid catalyst used, for example, AlCl_Three, SnCl_Four, TiCl_Four, ZnCl₂, BF_ThreeLewis acid catalyst such as trimethylsilyl trifluoromethanesulfonate, and the like, preferably trimethylsilyl trifluoromethanesulfonate.
[0082]
The reaction temperature varies depending on the raw material compound, solvent, and acid catalyst used, but is usually from 0 ° C to 100 ° C, and preferably from 50 ° C to 100 ° C.
[0083]
While the reaction time varies depending on the raw material compound, solvent, acid catalyst, and reaction temperature used, it is generally 1 hour to 24 hours, preferably 1 hour to 8 hours.
[0084]
After completion of the reaction, the target compound (6) of this reaction is obtained by, for example, concentrating the reaction mixture, adding water and an immiscible organic solvent such as ethyl acetate, washing with water, and separating the organic layer containing the target compound. It can be obtained by distilling off the solvent after drying with magnesium sulfate or the like.
[0085]
If necessary, the obtained compound can be further purified by a conventional method such as recrystallization, silica gel column chromatography and the like.
(Step A-4)
This step is a step for producing the compound (6a) of the present invention by removing the protecting group Y of the compound (6) produced in the step A-3.
[0086]
The method of deprotection varies depending on the type of protecting group, but is not particularly limited as long as it does not cause other side reactions. For example, “Protective Groups in Organic Synthesis” (Theodora W. Greene, 1981, A Wiley-Interscience Publication).
[0087]
In particular, when the hydroxyl protecting group is an aralkyl group or an aralkyloxycarbonyl group, it is usually removed by contacting with a reducing agent in a solvent (preferably catalytic reduction at room temperature under a catalyst). A method or a method of removing using an oxidizing agent is preferred. The solvent used in the removal by catalytic reduction is not particularly limited as long as it does not participate in this reaction, but alcohols such as methanol, ethanol and isopropanol, ethers such as diethyl ether, tetrahydrofuran and dioxane, Aromatic hydrocarbons such as toluene, benzene and xylene, aliphatic hydrocarbons such as hexane and cyclohexane, esters such as ethyl acetate and propyl acetate, fatty acids such as acetic acid, or organic solvents thereof and water A mixed solvent with is preferable.
[0088]
The catalyst to be used is not particularly limited as long as it is usually used for a catalytic reduction reaction, but preferably palladium carbon, palladium hydroxide, Raney nickel, platinum oxide, platinum black, rhodium-aluminum oxide. , Triphenylphosphine-rhodium chloride, palladium-barium sulfate are used.
[0089]
The pressure is not particularly limited, but is usually 1 to 10 atmospheres.
[0090]
While the reaction temperature and reaction time vary depending on the starting materials, solvent and catalyst, etc., the reaction is usually carried out at 0 to 100 ° C. for 5 minutes to 24 hours.
[0091]
In particular, when the hydroxyl-protecting group is a p-methoxybenzyl group, a method of removing it by oxidation in a solvent is usually preferable.
[0092]
The solvent used in the removal by oxidation is not particularly limited as long as it does not participate in this reaction, but is preferably a hydrous organic solvent.
[0093]
Preferred examples of such an organic solvent include ketones such as acetone, methylene chloride, chloroform, halogenated hydrocarbons such as carbon tetrachloride, nitriles such as acetonitrile, diethyl ether, tetrahydrofuran, and dioxane. And ethers, amides such as dimethylformamide, dimethylacetamide, hexamethylphosphorotriamide, and sulfoxides such as dimethyl sulfoxide.
[0094]
The oxidizing agent used is not particularly limited as long as it is a compound used for oxidation, but preferably potassium persulfate, sodium persulfate, ammonium cerium nitrate (CAN), 2,3-dichloro-5 , 6-Dicyano-p-benzoquinone (DDQ) is used.
[0095]
While the reaction temperature and reaction time vary depending on the starting materials, solvent and catalyst, etc., the reaction is usually carried out at 0 to 150 ° C. for 10 minutes to 24 hours.
[0096]
After completion of the reaction, the target compound (6a) of this reaction is obtained by, for example, concentrating the reaction mixture, adding water and an immiscible organic solvent such as ethyl acetate, washing with water, separating the organic layer containing the target compound, and anhydrous It can be obtained by distilling off the solvent after drying with magnesium sulfate or the like.
[0097]
If necessary, the obtained compound can be further purified by a conventional method such as recrystallization, silica gel column chromatography and the like.
(Step A-4a)
In this step, 3'-OH group of compound (6a) produced in Step A-4 and OR⁹This is a step of producing (1a) by carrying out a cyclization reaction with a group.
[0098]
Solvents used include water; pyridines; nitriles such as acetonitrile and isobutyronitrile; formamide, N, N-dimethylformamide, N, N-dimethylacetamide, N-methyl-2-pyrrolidone, N- Amides such as methylpyrrolidinone and hexamethylphosphorotriamide; or a mixed solvent thereof, preferably a mixed solvent of water and pyridine.
[0099]
Examples of the base catalyst used include alkali metal hydroxides such as sodium hydroxide and potassium hydroxide; alkali metal carbonates such as sodium carbonate and potassium carbonate; alkalis such as sodium methoxide and sodium ethoxide Metal alkoxide; ammonia water and the like can be mentioned, and alkali metal hydroxide (especially sodium hydroxide) is preferable.
[0100]
The reaction temperature varies depending on the raw material compound, solvent and acid catalyst used, but is usually 0 ° C. to 50 ° C., preferably 10 ° C. to 30 ° C.
[0101]
The reaction time varies depending on the raw material compound used, the solvent, the acid catalyst, and the reaction temperature, but is usually 1 minute to 5 hours, and preferably 1 minute to 30 minutes.
[0102]
After completion of the reaction, the target compound (1a) of this reaction is obtained by, for example, concentrating the reaction mixture, adding an immiscible organic solvent such as water and ethyl acetate, washing with water, separating the organic layer containing the target compound, and adding anhydrous It can be obtained by distilling off the solvent after drying with magnesium sulfate or the like.
[0103]
If necessary, the obtained compound can be further purified by a conventional method such as recrystallization, silica gel column chromatography and the like.
(Step A-5)
This step is a step of producing compound (1b) by removing the protecting group X of compound (1a) obtained in step A-4a in an inert solvent.
[0104]
The deprotection method varies depending on the type of protecting group, but is not particularly limited as long as it does not cause other side reactions. For example, “Protective Groups in Organic Synthesis” (Theodora W. Greene, by Peter GMWuts 1999, published by A Wiley-Interscience Publication).
[0105]
In particular, the protecting group is (1) “aliphatic acyl group or aromatic acyl group”, (2) “methyl group substituted with 1 to 3 aryl groups” or “lower alkyl, lower alkoxy, halogen, cyano” In the case of “methyl group substituted with 1 to 3 aryl groups in which the aryl ring is substituted with a group” and (3) “silyl group”, it can be carried out by the following method.
(1) In the case of an aliphatic acyl group and an aromatic acyl group, the reaction is usually carried out by reacting a base in an inert solvent.
[0106]
The solvent used is not particularly limited as long as it is easy to mix with water, does not inhibit the reaction, and dissolves the starting material to some extent. For example, water-containing or anhydrous dimethylformamide, dimethylacetamide, etc. Amides; halogenated hydrocarbons such as methylene chloride, chloroform, 1,2-dichloroethane, or carbon tetrachloride; ethers such as tetrahydrofuran, diethyl ether, dioxane, and preferably ethers; Tetrahydrofuran is preferred.
[0107]
Bases used include alkali metal hydroxides such as lithium hydroxide, potassium hydroxide and sodium hydroxide; alkali metal carbonates such as sodium carbonate and potassium carbonate; sodium methoxide and sodium ethoxide Examples thereof include alkali metal alkoxides; ammonia solutions such as aqueous ammonia and ammonia / methanol solutions.
[0108]
The reaction temperature is 0 ° C to 60 ° C, preferably 20 to 40 ° C.
[0109]
The reaction time is 10 minutes to 24 hours, preferably 1 to 3 hours.
[0110]
After completion of the reaction, the target compound (1b) of this reaction is obtained by, for example, concentrating the reaction mixture, adding water and an immiscible organic solvent such as ethyl acetate, washing with water, and separating the organic layer containing the target compound. It can be obtained by distilling off the solvent after drying with magnesium sulfate or the like.
[0111]
If necessary, the obtained compound can be further purified by a conventional method such as recrystallization or silica gel column chromatography.
(2) The protecting group is substituted with “1 to 3 aryl groups substituted with 1 to 3 aryl groups” or “1 to 3 aryl groups with the aryl ring substituted with lower alkyl, lower alkoxy, halogen or cyano group” In the case of “methyl group”, the reaction is carried out using a reducing agent in an inert solvent.
[0112]
Solvents used include alcohols such as methanol, ethanol and isopropanol; ethers such as diethyl ether, tetrahydrofuran and dioxane; aromatics such as toluene, benzene and xylene. Aliphatic hydrocarbons such as hexane and cyclohexane; esters such as ethyl acetate and propyl acetate; organic acids such as acetic acid or a mixed solvent of these organic solvents and water are preferable.
[0113]
The reducing agent to be used is not particularly limited as long as it is usually used for a catalytic reduction reaction, but preferably palladium carbon, Raney-nickel, platinum oxide, platinum black, rhodium-aluminum oxide, Triphenylphosphine-rhodium chloride and palladium-barium sulfate are used.
[0114]
The pressure is not particularly limited, but is usually 1 to 10 atmospheres.
[0115]
The reaction temperature is 0 ° C to 60 ° C, preferably 20 to 40 ° C.
[0116]
The reaction time is 10 minutes to 24 hours, preferably 1 to 3 hours.
[0117]
After completion of the reaction, the target compound (1b) of this reaction is obtained, for example, by removing the reducing agent from the reaction mixture, adding an immiscible organic solvent such as water and ethyl acetate, washing with water, and then removing the organic layer containing the target compound. It isolate | separates and it obtains by distilling a solvent off after drying with anhydrous magnesium sulfate etc.
[0118]
If necessary, the obtained compound can be further purified by a conventional method such as recrystallization, silica gel column chromatography and the like.
[0119]
In the case of a “methyl group substituted with three aryl groups”, that is, a trityl group, the reaction can be performed using an acid.
[0120]
In that case, the solvents used are aromatic hydrocarbons such as benzene, toluene, xylene; halogenated hydrocarbons such as methylene chloride, chloroform, carbon tetrachloride, 1,2-dichloroethane, chlorobenzene, and dichlorobenzene. Alcohols such as methanol, ethanol, isopropanol and tert-butanol; nitriles such as acetonitrile and isobutyronitrile; formamide, N, N-dimethylformamide, N, N- Amides such as dimethylacetamide, N-methyl-2-pyrrolidone, N-methylpyrrolidinone, hexamethylphosphorotriamide; organic acids such as acetic acid can be mentioned, and organic acids (particularly acetic acid) are preferred. Or alcohols (particularly tert-butanol).
[0121]
The acid used is preferably acetic acid or trifluoroacetic acid.
[0122]
The reaction temperature is 0 ° C to 60 ° C, preferably 20 to 40 ° C.
[0123]
The reaction time is 10 minutes to 24 hours, preferably 1 to 3 hours.
[0124]
After completion of the reaction, the target compound (1b) of this reaction is obtained by, for example, neutralizing the reaction mixture, adding an immiscible organic solvent such as water and ethyl acetate, washing with water, and separating the organic layer containing the target compound. It can be obtained by distilling off the solvent after drying over anhydrous magnesium sulfate or the like.
If necessary, the obtained compound can be further purified by a conventional method such as recrystallization, silica gel column chromatography and the like.
(3) When the protecting group is a “silyl group”, it is usually treated with a compound that generates a fluorine anion such as tetrabutylammonium fluoride, hydrofluoric acid, hydrofluoric acid-pyridine, or potassium fluoride. Alternatively, it can be removed by treatment with acetic acid, methanesulfonic acid, paratoluenesulfonic acid, trifluoroacetic acid, trifluoromethanesulfonic acid or an inorganic acid such as hydrochloric acid.
[0125]
In addition, when removing with a fluorine anion, reaction may be accelerated | stimulated by adding organic acids, such as formic acid, an acetic acid, and propionic acid.
[0126]
The solvent to be used is not particularly limited as long as it does not inhibit the reaction and dissolves the starting material to some extent, but is preferably diethyl ether, diisopropyl ether, tetrahydrofuran, dioxane, dimethoxyethane, diethylene glycol. Examples thereof include ethers such as dimethyl ether; nitriles such as acetonitrile and isobutyronitrile; water; organic acids such as acetic acid and mixed solvents thereof.
[0127]
The reaction temperature is 0 ° C. to 100 ° C., preferably 20 to 70 ° C.
[0128]
The reaction time is 5 minutes to 48 hours, preferably 1 to 24 hours.
[0129]
After completion of the reaction, the target compound (1b) of this reaction is obtained by, for example, concentrating the reaction mixture, adding water and an immiscible organic solvent such as ethyl acetate, washing with water, and separating the organic layer containing the target compound. It can be obtained by distilling off the solvent after drying with magnesium sulfate or the like.
If necessary, the obtained compound can be further purified by a conventional method such as recrystallization or silica gel column chromatography.
(Step A-6)
This step is a step for producing the compound (1c) of the present invention by removing the protecting group Z present in the compound (1b) obtained in the step A-5 in the presence of a base catalyst in an inert solvent. .
[0130]
Solvents used include water; pyridines; nitriles such as acetonitrile and isobutyronitrile; formamide, N, N-dimethylformamide, N, N-dimethylacetamide, N-methyl-2-pyrrolidone, N- Amides such as methylpyrrolidinone and hexamethylphosphorotriamide; or a mixed solvent thereof, preferably a mixed solvent of water and pyridine.
[0131]
Examples of the base catalyst used include alkali metal hydroxides such as sodium hydroxide and potassium hydroxide; alkali metal carbonates such as sodium carbonate and potassium carbonate; alkalis such as sodium methoxide and sodium ethoxide Metal alkoxide; ammonia water and the like can be mentioned, and alkali metal hydroxide (especially sodium hydroxide) is preferable.
[0132]
The reaction temperature varies depending on the raw material compound, solvent and acid catalyst used, but is usually 0 ° C. to 50 ° C., preferably 10 ° C. to 30 ° C.
[0133]
The reaction time varies depending on the raw material compound used, the solvent, the acid catalyst, and the reaction temperature, but is usually 1 minute to 5 hours, and preferably 1 minute to 30 minutes.
[0134]
After completion of the reaction, the target compound (1a) of this reaction is obtained by, for example, concentrating the reaction mixture, adding an immiscible organic solvent such as water and ethyl acetate, washing with water, separating the organic layer containing the target compound, and adding anhydrous It can be obtained by distilling off the solvent after drying with magnesium sulfate or the like.
[0135]
If necessary, the obtained compound can be further purified by a conventional method such as recrystallization, silica gel column chromatography and the like.
[0136]
B¹If the above functional group is deprotected, the usual method (eg “Protective Groups in Organic Synthesis” (Theodora W. Greene, by Peter GMWuts, 1999, A Wiley-Interscience Publication) The functional group is again protected according to the method described in).
(Step A-7)
In this step, compound B (1c) B obtained in step A-6 in an inert solvent is used.¹In order to remove the protecting group present in the compound, a deprotecting reagent is reacted to produce the compound (1d) of the present invention.
[0137]
The deprotection method varies depending on the type of protecting group, but is not particularly limited as long as it does not cause other side reactions. For example, “Protective Groups in Organic Synthesis” (Theodora W. Greene, 1981, A Wiley-Interscience Publication).
[0138]
In particular, when the protective group is an aliphatic acyl group or an aromatic acyl group, the following method can be used.
[0139]
That is, when the protecting group is an aliphatic acyl group or an aromatic acyl group, the reaction is usually carried out by reacting a base in an inert solvent.
[0140]
The solvent used is not particularly limited as long as it is easy to mix with water, does not inhibit the reaction, and dissolves the starting material to some extent. For example, water-containing or anhydrous alcohols such as methanol and ethanol Amides such as dimethylformamide and dimethylacetamide; halogenated hydrocarbons such as methylene chloride, chloroform, 1,2-dichloroethane and carbon tetrachloride; ethers such as tetrahydrofuran, diethyl ether and dioxane Alcohols are preferable, and methanol is more preferable.
[0141]
Bases used include alkali metal hydroxides such as lithium hydroxide, potassium hydroxide and sodium hydroxide; alkali metal carbonates such as sodium carbonate and potassium carbonate; sodium methoxide and sodium ethoxide Alkali metal alkoxide; ammonia can be mentioned, and ammonia is preferred.
[0142]
The reaction temperature is 0 ° C. to 50 ° C., preferably 10 to 40 ° C.
[0143]
The reaction time is 10 minutes to 24 hours, preferably 10 to 15 hours. After completion of the reaction, for example, the reaction mixture is concentrated, water and an immiscible organic solvent such as ethyl acetate are added, washed with water, the organic layer containing the target compound is separated, dried over anhydrous magnesium sulfate, etc., and the solvent is distilled off. It is obtained by leaving.
[0144]
If necessary, the obtained compound can be further purified by a conventional method such as recrystallization, silica gel column chromatography and the like.
In addition, (A-5 process) and (A-6 process), (A-5 process) thru | or (A-7 process), or (A-6 process) and (A-7) process are as desired. The target compound (1b), (1c) or (1d) can be obtained from (1a) or (1b) by a one-step reaction.
(Process B-1)
This step is a step of producing a compound (7) by removing a protecting group Y by reacting a deprotecting reagent with a compound (3) that can be produced by the C to E methods described below in an inert solvent. is there.
[0145]
The method of deprotection varies depending on the type of protecting group, but is not particularly limited as long as it does not cause other side reactions. For example, “Protective Groups in Organic Synthesis” (Theodora W. Greene, 1981, A Wiley-Interscience Publication).
[0146]
In particular, when the hydroxyl protecting group is an aralkyl group or an aralkyloxycarbonyl group, it is usually removed by contacting with a reducing agent in a solvent (preferably catalytic reduction at room temperature under a catalyst). A method or a method of removing using an oxidizing agent is preferred. The solvent used in the removal by catalytic reduction is not particularly limited as long as it does not participate in this reaction, but alcohols such as methanol, ethanol and isopropanol, ethers such as diethyl ether, tetrahydrofuran and dioxane, Aromatic hydrocarbons such as toluene, benzene and xylene, aliphatic hydrocarbons such as hexane and cyclohexane, esters such as ethyl acetate and propyl acetate, fatty acids such as acetic acid, or organic solvents thereof and water A mixed solvent with is preferable.
[0147]
The catalyst to be used is not particularly limited as long as it is usually used for a catalytic reduction reaction, but preferably palladium carbon, palladium hydroxide, Raney nickel, platinum oxide, platinum black, rhodium-aluminum oxide. , Triphenylphosphine-rhodium chloride, palladium-barium sulfate are used.
[0148]
The pressure is not particularly limited, but is usually 1 to 10 atmospheres.
[0149]
While the reaction temperature and reaction time vary depending on the starting materials, solvent and catalyst, etc., the reaction is usually carried out at 0 to 100 ° C. for 5 minutes to 24 hours.
[0150]
In particular, when the hydroxyl-protecting group is a p-methoxybenzyl group, a method of removing it by oxidation in a solvent is usually preferable.
[0151]
The solvent used in the removal by oxidation is not particularly limited as long as it does not participate in this reaction, but is preferably a hydrous organic solvent.
[0152]
Preferred examples of such an organic solvent include ketones such as acetone, methylene chloride, chloroform, halogenated hydrocarbons such as carbon tetrachloride, nitriles such as acetonitrile, diethyl ether, tetrahydrofuran, and dioxane. And ethers, amides such as dimethylformamide, dimethylacetamide, hexamethylphosphorotriamide, and sulfoxides such as dimethyl sulfoxide.
[0153]
The oxidizing agent used is not particularly limited as long as it is a compound used for oxidation, but preferably potassium persulfate, sodium persulfate, ammonium cerium nitrate (CAN), 2,3-dichloro-5 , 6-Dicyano-p-benzoquinone (DDQ) is used.
[0154]
While the reaction temperature and reaction time vary depending on the starting materials, solvent and catalyst, etc., the reaction is usually carried out at 0 to 150 ° C. for 10 minutes to 24 hours.
(Step B-2)
This step is a step for producing a compound (7a) by reacting a leaving group introduction reagent with the compound (7) produced in the step B-1 in an inert solvent.
[0155]
This step is performed according to (Step A-1).
[0156]
If necessary, the obtained compound can be further purified by a conventional method such as recrystallization, silica gel column chromatography and the like.
(Step B-2a)
In this step, 3'-OH group and OR of compound (7a) produced in B-2 step⁹This is a step for producing (8) by carrying out a cyclization reaction with a group.
[0157]
Solvents used include water; pyridines; ethers such as diethyl ether, diisopropyl ether, tetrahydrofuran, dioxane, dimethoxyethane, and diethylene glycol dimethyl ether; nitriles such as acetonitrile and isobutyronitrile; Amides such as formamide, N, N-dimethylformamide, N, N-dimethylacetamide, N-methyl-2-pyrrolidone, N-methylpyrrolidinone, hexamethylphosphorotriamide; or a mixed solvent thereof, preferably Is a mixed solvent of water and pyridine or tetrahydrofuran.
[0158]
Examples of the base catalyst used include alkali metal hydroxides such as sodium hydroxide and potassium hydroxide; alkali metal carbonates such as sodium carbonate and potassium carbonate; sodium methoxide and sodium in a hydrous reaction system. Alkali metal alkoxides such as ethoxide; ammonia water, and anhydrous reaction systems include sodium methoxide, sodium methylsulfinyl methylide, n-butyllithium, lithium diisopropylamide, t-butoxypotassium, lithium hexamethylene disilazane, etc. Preferred is an alkali metal hydroxide (especially sodium hydroxide).
[0159]
The reaction temperature varies depending on the raw material compound, the solvent and the acid catalyst used, but is usually −78 ° C. to 50 ° C., and preferably −20 ° C. to 20 ° C.
[0160]
While the reaction time varies depending on the raw material compound used, the solvent, the acid catalyst, and the reaction temperature, it is generally 1 minute to 5 hours, and preferably 10 minutes to 1 hour.
[0161]
After completion of the reaction, the target compound (8) of this reaction can be obtained by, for example, concentrating the reaction mixture, adding water and an immiscible organic solvent such as ethyl acetate, washing with water, and separating the organic layer containing the target compound. It can be obtained by distilling off the solvent after drying with magnesium sulfate or the like.
[0162]
If necessary, the obtained compound can be further purified by a conventional method such as recrystallization, silica gel column chromatography and the like.
(Step B-3)
This step is a step of producing a compound (9) by reacting an acid anhydride with the compound (8) produced in the step B-2a in the presence of an acid catalyst in a solvent.
[0163]
This step is performed according to (Step A-2).
[0164]
If necessary, the obtained compound can be further purified by a conventional method such as recrystallization, silica gel column chromatography and the like.
(Step B-4)
This step is a step for producing a compound (10) by removing the protecting group X of the compound (9) produced in the step B-3 in an inert solvent.
[0165]
This step is performed according to (Step A-5).
[0166]
If necessary, the obtained compound can be further purified by a conventional method such as recrystallization or silica gel column chromatography.
(Step B-5)
In this step, the compound (10) produced in the step B-4 is reacted with an acid anhydride, acid chloride or carboxylic acid in the presence or absence of a base catalyst in an inert solvent to give the compound (11 ).
[0167]
The solvent used is preferably an aromatic hydrocarbon such as benzene, toluene or xylene; a halogenated hydrocarbon such as methylene chloride, chloroform, carbon tetrachloride, dichloroethane, chlorobenzene or dichlorobenzene; formic acid Esters such as ethyl, ethyl acetate, propyl acetate, butyl acetate, diethyl carbonate; ethers such as diethyl ether, diisopropyl ether, tetrahydrofuran, dioxane, dimethoxyethane, diethylene glycol dimethyl ether; acetone, methyl ethyl ketone, methyl Ketones such as isobutyl ketone, isophorone and cyclohexanone; nitro compounds such as nitroethane and nitrobenzene; nitriles such as acetonitrile and isobutyronitrile; formamide and dimethyl Amides such as formamide (DMF), dimethylacetamide and hexamethylphosphorotriamide; Sulfoxides such as dimethyl sulfoxide and sulfolane; Aliphatic tertiary amines such as trimethylamine, triethylamine and N-methylmorpholine; pyridine and picoline Examples of such aromatic amines include halogenated hydrocarbons (particularly methylene chloride) and aromatic amines (particularly pyridine).
[0168]
Examples of the base used in the present method include alkali metal carbonates such as lithium carbonate, sodium carbonate and potassium carbonate; alkali metal bicarbonates such as lithium hydrogen carbonate, sodium hydrogen carbonate and potassium hydrogen carbonate; lithium hydride Alkali metal hydrides such as sodium hydride, potassium hydride; alkali metal hydroxides such as lithium hydroxide, sodium hydroxide, potassium hydroxide; lithium methoxide, sodium methoxide, sodium ethoxide, Alkali metal alkoxides such as potassium t-butoxide; triethylamine, tributylamine, diisopropylethylamine, N-methylmorpholine, pyridine, 4- (N, N-dimethylamino) pyridine, N, N-dimethylaniline, N, N- Diethylaniline, 1, -Diazabicyclo [4.3.0] non-5-ene, 1,4-diazabicyclo [2.2.2] octane (DABCO), 1,8-diazabicyclo [5.4.0] -7-undecene (DBU) ), Preferably organic amines (particularly preferably triethylamine).
[0169]
Examples of the carboxylic acid used include lower aliphatic carboxylic acids such as hydroacetic acid and propionic acid, and acetic acid is preferred.
[0170]
In particular, when a carboxylic acid is used, a dehydration condensation reagent can be used. As such a dehydration condensation reagent,
(A) Phosphate esters such as diethyl phosphoryl cyanide, diphenyl phosphoryl azide, diethyl cyanophosphate;
(B) Carbodiimides such as 1,3-dicyclohexylcarbodiimide, 1,3-diisopropylcarbodiimide, 1-ethyl-3- (3-dimethylaminopropyl) carbodiimide; a combination of the carbodiimides and the following bases; the carbodiimides and N A combination of N-hydroxys such as hydroxysuccinimide, 1-hydroxybenzotriazole, N-hydroxy-5-norbornene-2,3-dicarboximide;
(C) a combination of disulfides such as 2,2'-dipyridyl disulfide and 2,2'-dibenzothiazolyl disulfide and phosphines such as triphenylphosphine and tributylphosphine;
(D) carbonates such as N, N'-disuccinimidyl carbonate, di-2-pyridyl carbonate, S, S'-bis (1-phenyl-1H-tetrazol-5-yl) dithiocarbonate;
(E) phosphinic chlorides such as N, N'-bis (2-oxo-3-oxazolidinyl) phosphinic chloride;
(F) N, N'-disuccinimidyl oxalate, N, N'-diphthalimido oxalate, N, N'-bis (5-norbornene-2,3-dicarboxyimidyl) oxalate, 1, Such as 1′-bis (benzotriazolyl) oxalate, 1,1′-bis (6-chlorobenzotriazolyl) oxalate, 1,1′-bis (6-trifluoromethylbenzotriazolyl) oxalate Oxalates;
(G) A combination of the phosphines and azodicarboxylic acid esters or azodicarboxamides such as diethyl azodicarboxylate, 1,1 '-(azodicarbonyl) dipiperidine;
(H) N-lower alkyl-5-arylisoxazolium-3'-sulfonates such as N-ethyl-5-phenylisoxazolium-3'-sulfonate;
(I) diheteroaryl diselenides such as di-2-pyridyl diselenide;
(J) arylsulfonyl triazolides such as p-nitrobenzenesulfonyl triazolide;
(K) 2-Chloro-1-methylpyridinium 2-halo-1-lower alkylpyridinium halides such as iodide;
(L) Imidazoles such as 1,1'-oxalyldiimidazole and N, N'-carbonyldiimidazole;
(M) 3-lower alkyl-2-halogen-benzothiazolium fluoroborates such as 3-ethyl-2-chloro-benzothiazolium fluoroborate;
(N) 3-lower alkyl-benzothiazole-2-thelones such as 3-methyl-benzothiazole-2-thelone;
(O) Phosphate such as phenyl dichlorophosphate, polyphosphate ester;
(P) halogenosulfonyl isocyanates such as chlorosulfonyl isocyanate;
(Q) halogenosilanes such as trimethylsilyl chloride and triethylsilyl chloride;
(R) a lower alkanesulfonyl halide such as methanesulfonyl chloride;
(S) N, N, N ′, N′-tetra lower alkyl halogenoformamidium chlorides such as N, N, N ′, N′-tetramethylchloroformamidium chloride may be mentioned, Is a combination of carbodiimides and phosphines and azodicarboxylic esters or azodicarboxamides.
[0171]
Examples of the acid anhydride used include lower aliphatic carboxylic acid anhydrides such as acetic anhydride and propionic anhydride, and acetic anhydride is preferred.
[0172]
Examples of the acid chloride used include lower aliphatic carboxylic acid chlorides such as acetyl chloride and propionic acid chloride, and acetyl chloride is preferred.
[0173]
The reaction temperature varies depending on the raw material compound, solvent, catalyst, carboxylic acid, and carboxylic acid chloride used, but is usually 0 ° C. to 150 ° C., and preferably 20 to 100 ° C.
[0174]
The reaction time varies depending on the raw material compound, solvent, catalyst, carboxylic acid, carboxylic acid chloride, acid anhydride, and reaction temperature used, but is usually 10 minutes to 12 hours, preferably 30 minutes to 3 hours. It is.
[0175]
After completion of the reaction, the target compound (11) of this reaction is prepared by, for example, concentrating the reaction mixture, adding water and an immiscible organic solvent such as ethyl acetate, washing with water, separating the organic layer containing the target compound, and adding anhydrous It can be obtained by distilling off the solvent after drying with magnesium sulfate or the like.
[0176]
If necessary, the obtained compound can be further purified by a conventional method such as recrystallization, silica gel column chromatography and the like.
(Step B-6)
In this process, the compound (11) produced in the process B-5 in the presence of an acid catalyst in an inert solvent is added to the literature (H. Vorbrggen, K. Krolikiewicz and B, Bennua, Chem. Ber., 114, 1234-1255 (1981)) is a step of producing a compound (1e) by reacting a trimethylsilylated product corresponding to purine or pyrimidine which may have a desired substituent.
[0177]
This step is performed according to (Step A-3).
[0178]
The obtained compound can be further purified by a conventional method such as recrystallization or silica gel column chromatography if necessary.
(Step B-7)
This step is a step for producing a compound (1c) of the present invention by reacting with a deprotecting reagent in order to remove Z of the compound (1e) obtained in the step B-6 in an inert solvent.
[0179]
This step is performed according to (A-6 step).
[0180]
If necessary, the obtained compound can be further purified by a conventional method such as recrystallization, silica gel column chromatography and the like.
[0181]
B¹If the above functional group is deprotected, the usual method (eg “Protective Groups in Organic Synthesis” (Theodora W. Greene, by Peter GMWuts, 1999, A Wiley-Interscience Publication) The functional group is again protected according to the method described in).
[0182]
In addition, (1a) can be synthesize | combined by performing a (B-6) process with respect to a compound (9), and (A-5) and (A-6) processes are performed according to A method after that. (1c) can also be obtained.
[0183]
The intermediate (3) described above can be produced by the C to E methods described below.
[0184]
Embedded image

[0185]
In methods C to E, X and Y are as defined above, and R^TenRepresents a group which forms a leaving group together with an oxygen atom, E represents an ethylene, trimethylene or tetramethylene group, and W represents a single bond, methylene or ethylene group.
[0186]
R^TenAs the group that forms the leaving group,⁹Examples thereof are the same as those mentioned above, and a trifluoromethanesulfonyl group is preferred.
[0187]
R¹²And R¹³Are the same and represent a hydrogen atom or together represent an oxygen atom.
[0188]
R¹¹Is R¹²And R¹³Are an alkyl group having 1 to 4 carbon atoms such as methyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl, isobutyl, s-butyl, tert-butyl, , A methyl group, and R¹²And R¹³Are the same and are hydrogen atoms, an aralkyl group such as a benzyl group; an alkoxyalkyl group such as a methoxymethyl group; an aralkyl group such as a benzyloxymethyl group such as a benzyloxymethyl group or a benzyloxymethyl group Examples thereof include oxymethyl groups; alkoxyalkoxyalkyl groups such as methoxyethoxymethyl groups; silyl groups such as trimethylsilyl, t-butyldimethylsilyl, diphenylmethylsilyl, diphenylbutylsilyl, diphenylisopropylsilyl, and phenyldiisopropylsilyl.
[0189]
Compound (12), which is a raw material compound used in Method C or Method D, can be produced by the following method.
[0190]
That is, commercially available 1,2,5,6-diisopropylidene D-glucose was used as a starting material, and a known method (RDYoussefyeh, JPHVerheyden, JGMoffatt.J.Org.Chem., 44, 1301-1309 (1979 )), A compound in which the “X” part of compound (12) corresponds to a hydrogen atom can be produced, and then produced according to a known method (Japanese Patent Laid-Open No. 10-304889). Further, commercially available 1,2,5,6-diisopropylidene D-glucose is used as a starting material, and a known method (Mersmaeker, Alain De, Leberton, Jacques, Jouanno, Chantal, Fritsh, Valerie, Wolf, Romain M., According to Wedenborn, Sebastian, Syn.Lett., 11, 1287-1290) (1997)), 1,2-diisopropylidene D-allofuranose was synthesized and used in a known method (Wood, William W , Watson, Graham M., J. Chem. Soc. Chem. Commun., 21, 1599-1600 (1986))
[0191]
Embedded image

[0192]
Then, the aldehyde group can be obtained by a reduction reaction according to a conventional method (for example, the method described in Hudlicky “Reductionsin Organic Chemistory”, Ellis Horwood (1984), etc.).
[0193]
Hereinafter, each step of the C to E methods will be described in detail.
(C method)
(Step C-1)
This step is a step for producing a compound (13) by reacting a leaving group introduction reagent with the compound (12) produced by the above-described method in the presence of a base catalyst in an inert solvent.
[0194]
This step is performed in the same manner as (Step A-1).
[0195]
If necessary, the obtained compound can be further purified by a conventional method such as recrystallization, silica gel column chromatography and the like.
(Step C-2)
This step is a step of producing a compound (14) by reacting the compound (13) produced in the step C-1 with a cyanating reagent in an inert solvent.
[0196]
Examples of the solvent used include amides such as dimethylformamide and dimethylacetamide; halogenated hydrocarbons such as methylene chloride, chloroform, 1,2-dichloroethane, and carbon tetrachloride; tetrahydrofuran, diethyl ether, and dioxane. Ethers; acetonitrile; dimethyl sulfoxide, and the like. Among them, amides (dimethylformamide) are preferable.
[0197]
Examples of the cyanating reagent to be used include KCN, NaCN, and trimethylsilane cyanide, and NaCN is preferable.
[0198]
The reaction temperature varies depending on the raw material compound, solvent, and cyanating reagent to be used, but is usually 0 ° C. to 100 ° C., and 30 ° C. to 70 ° C.
[0199]
While the reaction time varies depending on the raw material compound used, the solvent, the cyanating reagent, and the reaction temperature, it is generally 30 minutes to 12 hours, and preferably 1 to 3 hours.
[0200]
After completion of the reaction, the target compound (14) of this reaction is obtained by, for example, concentrating the reaction mixture, adding water and an immiscible organic solvent such as ethyl acetate, washing with water, and separating the organic layer containing the target compound. It can be obtained by distilling off the solvent after drying with magnesium sulfate or the like.
[0201]
If necessary, the obtained compound can be further purified by a conventional method such as recrystallization, silica gel column chromatography and the like.
(Step C-3)
This step is a step of producing a compound (15) by reacting a compound (14) produced in the step C-2 with a reducing agent in an inert solvent.
[0202]
Examples of the solvent used include halogenated hydrocarbons such as methylene chloride, chloroform, 1,2-dichloroethane or carbon tetrachloride; aliphatic hydrocarbons such as hexane, heptane, ligroin and petroleum ether; benzene, Aromatic hydrocarbons such as toluene and xylene; ethers such as diethyl ether, diisopropyl ether, tetrahydrofuran, dioxane, dimethoxyethane, diethylene glycol dimethyl ether; acetone, methyl ethyl ketone, methyl isobutyl ketone, isophorone, cyclohexanone Examples of such ketones include halogenated hydrocarbons (especially methylene chloride).
[0203]
Examples of the reducing agent that can be used include diisobutylaluminum hydrogen and triethoxyaluminum hydrogen, and diisobutylaluminum hydride is preferable.
[0204]
The reaction temperature varies depending on the raw material compound, the solvent and the reducing agent used, but is -100 ° C to -50 ° C, preferably -90 ° C to -70.
[0205]
The reaction time varies depending on the raw material compound used, the solvent, the reducing agent, and the reaction temperature, but is usually 30 minutes to 12 hours, and preferably 1 to 5 hours.
[0206]
After completion of the reaction, the target compound (15) of this reaction is obtained by, for example, concentrating the reaction mixture, adding an immiscible organic solvent such as water and ethyl acetate, washing with water, separating the organic layer containing the target compound, and adding anhydrous It can be obtained by distilling off the solvent after drying with magnesium sulfate or the like.
[0207]
If necessary, the obtained compound can be further purified by a conventional method such as recrystallization, silica gel column chromatography and the like.
(Step C-4)
This step is a step of producing a compound (3a) which is one of the raw material compounds of Method A by reacting a reducing agent with the compound (15) produced in the step C-3 in an inert solvent. .
[0208]
Examples of the solvent used include methanol, ethanol, n-propanol, isopropanol, n-butanol, isobutanol, t-butanol, isoamyl alcohol, diethylene glycol, Examples include alcohols such as glycerin, octanol, cyclohexanol and methyl cellosolve; acetic acid and the like, and alcohols (particularly ethanol) are preferred.
[0209]
Examples of the reducing agent used include alkali metal borohydrides such as sodium borohydride and lithium borohydride; aluminum hydride compounds such as lithium aluminum hydride and lithium triethoxide aluminum; borane and the like. Among them, sodium borohydride is preferable.
[0210]
The reaction temperature varies depending on the raw material compound, solvent and reducing agent used, but is usually 0 ° C. to 50 ° C., preferably 10 to 40 ° C.
[0211]
The reaction time varies depending on the raw material compound used, the solvent, the reducing agent, and the reaction temperature, but is usually 10 minutes to 12 hours, and preferably 30 minutes to 5 hours.
[0212]
After completion of the reaction, the target compound (3a) of this reaction is obtained by, for example, decomposing the reducing agent, concentrating the reaction mixture, adding an immiscible organic solvent such as water and ethyl acetate, washing with water, It is obtained by separating the layers and drying with anhydrous magnesium sulfate or the like and then distilling off the solvent.
[0213]
If necessary, the obtained compound can be further purified by a conventional method such as recrystallization, silica gel column chromatography and the like.
(D method)
(Process D-1)
This step is a step of producing a compound (16) by reacting an oxidizing agent with the compound (12) produced by the above-described method in an inert solvent.
[0214]
Examples of the solvent used include aliphatic hydrocarbons such as hexane, heptane, ligroin and petroleum ether; aromatic hydrocarbons such as benzene, toluene and xylene; methylene chloride, chloroform, carbon tetrachloride and dichloroethane. Halogenated hydrocarbons such as chlorobenzene and dichlorobenzene; esters such as ethyl formate, ethyl acetate, propyl acetate, butyl acetate and diethyl carbonate; diethyl ether, diisopropyl ether, tetrahydrofuran, dioxane, dimethoxyethane, Ethers such as diethylene glycol dimethyl ether; ketones such as acetone, methyl ethyl ketone, methyl isobutyl ketone, isophorone, and cyclohexanone; can be mentioned, preferably halogenated hydrocarbons (special , Methylene chloride).
[0215]
Oxidizing agents used are Swern oxidation reagent, Dess-Martin oxidation reagent, chromium trioxide such as pyridine hydrochloride / chromium trioxide complex (pyridinium chlorochromate, pyridinium dichromate) Although a complex etc. can be mention | raise | lifted, a reagent for a swan oxidation (namely, dimethylsulfoxide-oxalyl chloride) is mentioned as a suitable reagent.
[0216]
The reaction temperature varies depending on the raw material compound, the solvent, and the oxidizing agent used, but is usually −100 ° C. to −50 ° C., and preferably −100 to −70 ° C.
[0217]
The reaction time varies depending on the raw material compound used, the solvent, the oxidizing agent, and the reaction temperature, but is usually 30 minutes to 12 hours, and preferably 1 to 5 hours.
[0218]
After completion of the reaction, the target compound (16) of this reaction is decomposed, for example, by oxidizing the oxidizing agent, concentrating the reaction mixture, adding an immiscible organic solvent such as water and ethyl acetate, washing with water, and then containing the target compound. It is obtained by separating the layers and drying with anhydrous magnesium sulfate or the like and then distilling off the solvent.
[0219]
If necessary, the obtained compound can be further purified by a conventional method such as recrystallization, silica gel column chromatography and the like.
(Step D-2)
This step is a step for producing a compound (17) by reacting the compound (16) produced in the step D-1 with an carbon increasing reagent in an inert solvent.
[0220]
Examples of the solvent used include aliphatic hydrocarbons such as hexane, heptane, ligroin and petroleum ether; aromatic hydrocarbons such as benzene, toluene and xylene; methylene chloride, chloroform, carbon tetrachloride and dichloroethane. Halogenated hydrocarbons such as chlorobenzene and dichlorobenzene; esters such as ethyl formate, ethyl acetate, propyl acetate, butyl acetate and diethyl carbonate; diethyl ether, diisopropyl ether, tetrahydrofuran, dioxane, dimethoxyethane, Ethers such as diethylene glycol dimethyl ether; ketones such as acetone, methyl ethyl ketone, methyl isobutyl ketone, isophorone, and cyclohexanone; can be mentioned, preferably halogenated hydrocarbons (special , Methylene chloride).
[0221]
Reagents used include Wittig reagent, Horner-Emmons reagent, Peterson reaction reagent, TiCl_Four-CH₂Cl₂-Zn-based reactants, Tebbe reagents and the like can be mentioned, and Wittig reagents, Horner-Emmons reagents and Thebes reagents are preferred.
[0222]
Examples of the base used include sodium hydride, sodium methylsulfinyl methylide, n-butyl lithium, lithium diisopropylamide, t-butoxy potassium, lithium hexamethylene disilazane and the like.
[0223]
The reaction temperature varies depending on the raw material compound, the solvent, and the carbon increasing reagent used, but is usually −20 ° C. to 20 ° C., and preferably 0 ° C.
[0224]
The reaction time varies depending on the raw material compound used, the solvent, the carbon increasing reagent, and the reaction temperature, but is 30 minutes to 12 hours, preferably 1 to 5 hours.
[0225]
After completion of the reaction, the target compound (17) of this reaction is obtained by, for example, concentrating the reaction mixture, adding water and an immiscible organic solvent such as ethyl acetate, washing with water, separating the organic layer containing the target compound, and adding anhydrous It can be obtained by distilling off the solvent after drying with magnesium sulfate or the like.
[0226]
If necessary, the obtained compound can be further purified by a conventional method such as recrystallization, silica gel column chromatography and the like.
(Step D-3)
This step is a step of producing a compound (3a) by selectively introducing a hydroxyl group into the terminal carbon of the olefin of the compound (17) produced in the step D-2 in an inert solvent.
[0227]
Examples of the solvent used include aliphatic hydrocarbons such as hexane, heptane, ligroin and petroleum ether; aromatic hydrocarbons such as benzene, toluene and xylene; methylene chloride, chloroform, carbon tetrachloride and dichloroethane. Halogenated hydrocarbons such as chlorobenzene and dichlorobenzene; esters such as ethyl formate, ethyl acetate, propyl acetate, butyl acetate and diethyl carbonate; diethyl ether, diisopropyl ether, tetrahydrofuran, dioxane, dimethoxyethane, Examples include ethers such as diethylene glycol dimethyl ether; ketones such as acetone, methyl ethyl ketone, methyl isobutyl ketone, isophorone, and cyclohexanone. It is a Rofuran).
[0228]
Examples of the reaction reagent used include borane, diciamylborane, sexylborane, 9-BBN (9-borabicyclo [3.3.1] nonane), and 9-BBN is preferable.
[0229]
The reaction temperature varies depending on the raw material compound, solvent and reagent used, but is 0 ° C. to 50 ° C., preferably 10 to 40 ° C.
[0230]
While the reaction time varies depending on the raw material compound, solvent, reagent, and reaction temperature used, it is generally 6 to 48 hours, preferably 12 to 24 hours.
[0231]
After completion of the reaction, the target compound (3a) of this reaction is obtained by, for example, concentrating the reaction mixture, adding water and an immiscible organic solvent such as ethyl acetate, washing with water, separating the organic layer containing the target compound, and adding anhydrous It can be obtained by distilling off the solvent after drying with magnesium sulfate or the like.
[0232]
If necessary, the obtained compound can be further purified by a conventional method such as recrystallization, silica gel column chromatography and the like.
(E method)
(Step E-1)
This step is a step of producing a compound (18) by reacting the compound (16) produced in the step D-1 with an carbon increasing reagent in an inert solvent.
[0233]
Examples of the solvent used include aliphatic hydrocarbons such as hexane, heptane, ligroin and petroleum ether; aromatic hydrocarbons such as benzene, toluene and xylene; methylene chloride, chloroform, carbon tetrachloride and dichloroethane. Halogenated hydrocarbons such as chlorobenzene and dichlorobenzene; esters such as ethyl formate, ethyl acetate, propyl acetate, butyl acetate and diethyl carbonate; diethyl ether, diisopropyl ether, tetrahydrofuran, dioxane, dimethoxyethane, Ethers such as diethylene glycol dimethyl ether; ketones such as acetone, methyl ethyl ketone, methyl isobutyl ketone, isophorone and cyclohexanone; nitriles such as acetonitrile and isobutyronitrile; form Amides such as amide, N, N-dimethylformamide, N, N-dimethylacetamide, N-methyl-2-pyrrolidone, N-methylpyrrolidinone, and hexamethylphosphorotriamide are preferable. And ethers (especially tetrahydrofuran)
The carbon increasing reagents used include Wittig reagents such as methyl triphenylphosphoranylidene acetate, ethoxycarbonylmethyl (triphenyl) phosphonium bromide, methoxymethyl triphenylphosphonium chloride; diethylphosphonoacetic acid ethyl ester, 3 -Horner-Emmons reagents such as diethylphosphonopropionic acid ethyl ester and diphenylphosphonoacetic acid ethyl ester.
[0234]
Examples of the base used include sodium hydride, sodium methylsulfinyl methylide, n-butyl lithium, lithium diisopropylamide, t-butoxy potassium, lithium hexamethylene disilazane and the like.
[0235]
The reaction temperature varies depending on the raw material compound, solvent, and reagent used, but is usually -20 ° C to 40 ° C, and preferably 0 to 20 ° C.
[0236]
While the reaction time varies depending on the raw material compound, solvent, reagent, and reaction temperature used, it is 30 minutes to 12 hours, preferably 1 to 5 hours.
[0237]
After completion of the reaction, the target compound (18) of this reaction is obtained by, for example, concentrating the reaction mixture, adding water and an immiscible organic solvent such as ethyl acetate, washing with water, separating the organic layer containing the target compound, and adding anhydrous It can be obtained by distilling off the solvent after drying with magnesium sulfate or the like.
[0238]
If necessary, the obtained compound can be further purified by a conventional method such as recrystallization or silica gel column chromatography.
(Step E-2)
This step is a step of producing a compound (19) by reacting the compound (18) produced in the step E-1 with a reducing agent in an inert solvent.
[0239]
This process can be implemented according to (2) of A-5 process. However, R¹¹Is an optionally substituted benzyl group, and R¹²And R¹³When is a hydrogen atom, compound (3b) can be directly produced by this step. (Step E-3)
In this step, the compound (19b) produced in step E-2 is reacted with a reducing agent in an inert solvent to produce a compound (3b) which is one of the raw material compounds of Method A or Method B. It is a process.
(A) R¹²And R¹³Together with an oxygen atom
Examples of the solvent used include methanol, ethanol, n-propanol, isopropanol, n-butanol, isobutanol, t-butanol, isoamyl alcohol, diethylene glycol, Examples include alcohols such as glycerin, octanol, cyclohexanol and methyl cellosolve; acetic acid and the like, and alcohols (particularly ethanol) are preferred.
[0240]
Examples of the reducing agent used include alkali metal borohydrides such as lithium borohydride; aluminum hydride compounds such as lithium aluminum hydride and lithium triethoxide aluminum; borane and the like. However, borane or lithium aluminum hydride is preferable.
[0241]
The reaction temperature varies depending on the raw material compound, solvent and reducing agent used, but is usually 0 ° C. to 50 ° C., preferably 10 to 40 ° C.
[0242]
The reaction time varies depending on the raw material compound used, the solvent, the reducing agent, and the reaction temperature, but is usually 10 minutes to 12 hours, and preferably 30 minutes to 5 hours.
[0243]
After completion of the reaction, the target compound (3b) of this reaction is decomposed, for example, by decomposing the reducing agent, concentrating the reaction mixture, adding an immiscible organic solvent such as water and ethyl acetate, washing with water, and then containing the target compound. It is obtained by separating the layers and drying with anhydrous magnesium sulfate or the like and then distilling off the solvent.
[0244]
If necessary, the obtained compound can be further purified by a conventional method such as recrystallization, silica gel column chromatography and the like.
(B) R¹²And R¹³And when R is hydrogen¹¹When is not benzyl group
R¹¹When is a silyl group, the reaction can be carried out according to the method of (3) in step A-5.
[0245]
R¹¹Is an aralkyl group such as a phenethyl group; an alkoxyalkyl group such as a methoxymethyl group; a benzyloxymethyl group such as a benzyloxymethyl group or an aralkyloxymethyl group such as a benzyloxymethyl group; In the case of an alkoxyalkoxyalkyl group or the like, an acid catalyst is used, and the acid catalyst used in that case is an organic acid such as p-toluenesulfonic acid, trifluoroacetic acid or dichloroacetic acid, BF_Three, AlCl_ThreeLewis acids such as
[0246]
Examples of the solvent used include aromatic hydrocarbons such as benzene, toluene and xylene; halogenated hydrocarbons such as methylene chloride, chloroform, carbon tetrachloride, 1,2-dichloroethane, chlorobenzene and dichlorobenzene. Nitriles such as acetonitrile and isobutyronitrile; such as formamide, N, N-dimethylformamide, N, N-dimethylacetamide, N-methyl-2-pyrrolidone, N-methylpyrrolidinone and hexamethylphosphorotriamide Amides; carbon sulfide and the like can be mentioned.
[0247]
The reaction temperature varies depending on the raw material compound, solvent and acid catalyst used, but is usually 0 ° C. to 50 ° C., preferably 10 to 40 ° C.
[0248]
While the reaction time varies depending on the raw material compound, solvent, acid catalyst, and reaction temperature used, it is generally 10 minutes to 12 hours, preferably 30 minutes to 5 hours.
[0249]
After completion of the reaction, the target compound (3b) of this reaction is, for example, neutralized the reaction mixture, water and an immiscible organic solvent such as ethyl acetate are added, washed with water, and the organic layer containing the target compound is separated. It can be obtained by distilling off the solvent after drying over anhydrous magnesium sulfate or the like.
[0250]
If necessary, the obtained compound can be further purified by a conventional method such as recrystallization, silica gel column chromatography and the like.
[0251]
Using compound (1) of the present invention, an oligonucleotide containing a modified nucleoside or a thioate derivative thereof can be produced by Method F described below.
[0252]
Embedded image

[0253]
In Method F, A represents the same meaning as described above, and R¹³Represents a protecting group for a hydroxyl group (particularly, a trityl group optionally substituted with a methoxy group), and R¹⁴Represents a group formed by reacting a phosphonyl group, a mono-substituted-chloro (alkoxy) phosphine or a di-substituted-alkoxyphosphine described later.
(F method)
(Step F-1)
This step is a step of producing a compound (20) by reacting a protecting reagent with the compound (1c) produced by Method A in an inert solvent.
[0254]
The solvent used is preferably an aromatic hydrocarbon such as benzene, toluene or xylene; a halogenated hydrocarbon such as methylene chloride, chloroform, carbon tetrachloride, dichloroethane, chlorobenzene or dichlorobenzene; formic acid Esters such as ethyl, ethyl acetate, propyl acetate, butyl acetate, diethyl carbonate; ethers such as diethyl ether, diisopropyl ether, tetrahydrofuran, dioxane, dimethoxyethane, diethylene glycol dimethyl ether; acetone, methyl ethyl ketone, methyl Ketones such as isobutyl ketone, isophorone and cyclohexanone; nitro compounds such as nitroethane and nitrobenzene; nitriles such as acetonitrile and isobutyronitrile; formamide and dimethyl Amides such as formamide (DMF), dimethylacetamide and hexamethylphosphorotriamide; Sulfoxides such as dimethyl sulfoxide and sulfolane; Aliphatic tertiary amines such as trimethylamine, triethylamine and N-methylmorpholine; pyridine and picoline Examples of such aromatic amines include halogenated hydrocarbons (particularly methylene chloride) and aromatic amines (particularly pyridine).
The protecting reagent to be used is not particularly limited as long as it can selectively protect only the 5 ′ position and can be removed under acidic and neutral conditions, but is preferably trityl chloride, monomethoxy. Triarylmethyl halides such as trityl chloride, dimethoxytrityl chloride or triarylmethanol ethers such as dimethoxytrityl-O-triflate.
When triarylmethyl halides are used as the protecting reagent, a base is usually used.
In that case, examples of the base used include heterocyclic amines such as pyridine, dimethylaminopyridine, and pyrrolidinopyridine, and aliphatic tertiary amines such as trimethylamine and triethylamine. Preferably, pyridine, dimethylamino are used. Pyridine and pyrrolidinopyridine.
[0255]
When a liquid base is used as the solvent, the base itself functions as a deoxidizing agent, so that it is not necessary to add a base again.
[0256]
The reaction temperature is usually 0 to 150 ° C., preferably 20 to 100 ° C., depending on the raw materials, reagents and solvents used. The reaction time varies depending on the raw materials used, the solvent, the reaction temperature, and the like, but is usually 1 to 100 hours, preferably 2 to 24 hours.
[0257]
After completion of the reaction, the target compound (20) of this reaction is obtained by, for example, concentrating the reaction mixture, adding water and an immiscible organic solvent such as ethyl acetate, washing with water, and separating the organic layer containing the target compound. It can be obtained by distilling off the solvent after drying with magnesium sulfate or the like.
[0258]
If necessary, the obtained compound can be further purified by a conventional method such as recrystallization, silica gel column chromatography and the like.
[0259]
In addition, by performing this step on the compound (1b) in Method A, a compound in which the 2′-position hydroxyl group of the compound (20) is an OZ group can be obtained instead. On the other hand, a compound (20) can also be obtained by performing a (A-6) process.
(Step F-2)
In this step, the compound (20) produced in Step F-1 is reacted with a mono-substituted-chloro (alkoxy) phosphine or a di-substituted-alkoxyphosphine usually used for amidite formation in an inert solvent to produce a compound. (21) is a process of manufacturing.
[0260]
The solvent used is not particularly limited as long as it does not affect the reaction, and preferably ethers such as tetrahydrofuran, diethyl ether, dioxane; methylene chloride, chloroform, carbon tetrachloride, dichloroethane. , Halogenated hydrocarbons such as chlorobenzene and dichlorobenzene.
[0261]
Examples of mono-substituted chloro (alkoxy) phosphines used include chloro (morpholino) methoxyphosphine, chloro (morpholino) cyanoethoxyphosphine, chloro (dimethylamino) methoxyphosphine, chloro (dimethylamino) cyanoethoxyphosphine, chloro Examples include phosphines such as (diisopropylamino) methoxyphosphine and chloro (diisopropylamino) cyanoethoxyphosphine, preferably chloro (morpholino) methoxyphosphine, chloro (morpholino) cyanoethoxyphosphine, chloro (diisopropylamino) methoxyphosphine. Chloro (diisopropylamino) cyanoethoxyphosphine.
[0262]
In the case of using mono-substituted chloro (alkoxy) phosphines, a deoxidizing agent is used. In this case, as the deoxidizing agent used, heterocyclic amines such as pyridine and dimethylaminopyridine, trimethylamine, Aliphatic amines such as triethylamine and diisopropylamine are listed, and aliphatic amines (particularly diisopropylamine) are preferred.
[0263]
Examples of the di-substituted alkoxyphosphine used include bis (diisopropylamino) cyanoethoxyphosphine, bis (diethylamino) methanesulfonylethoxyphosphine, bis (diisopropylamino) (2,2,2-trichloroethoxy) phosphine, and bis Examples include phosphines such as (diisopropylamino) (4-chlorophenylmethoxy) phosphine, and bis (diisopropylamino) cyanoethoxyphosphine is preferable.
[0264]
When using di-substituted-alkoxyphosphines, an acid is used. In this case, the acid used is preferably tetrazole, acetic acid or p-toluenesulfonic acid.
[0265]
The reaction temperature is not particularly limited, but is usually 0 to 80 ° C., and preferably room temperature.
[0266]
While the reaction time varies depending on the raw materials, reagents, temperature, etc. used, it is generally 5 minutes to 30 hours, and preferably 30 minutes to 10 hours when reacted at room temperature.
[0267]
After completion of the reaction, the target compound (21) of this reaction is prepared by neutralizing the reaction mixture as appropriate, for example, and if insolubles are present, the target compound (21) is removed by filtration, and then added with water and ethyl acetate. Such an immiscible organic solvent is added, and after washing with water, the organic layer containing the target compound is separated, dried over anhydrous magnesium sulfate and the like, and then the solvent is distilled off. If necessary, the obtained target compound can be further purified by a conventional method such as recrystallization, reprecipitation or chromatography.
[0268]
Alternatively, this step is carried out by adding tris- (1,2,4-triazolyl) to the compound (20) produced by F-1 in an inert solvent (preferably a halogenated hydrocarbon such as methylene chloride). In this step, compound (21) is produced by reacting phosphite and then adding water to form H-phosphonate.
[0269]
The reaction temperature is not particularly limited, but is usually −20 to 100 ° C., preferably 10 to 40 ° C.
[0270]
While the reaction time varies depending on the raw materials, reagents, temperature, etc. used, it is generally 5 minutes to 30 hours, and preferably 30 minutes when reacted at room temperature.
After completion of the reaction, the target compound (21) of this reaction, for example, neutralizes the reaction mixture as appropriate, and if insolubles are present, it is removed by filtration and then immiscible with water and ethyl acetate. It is obtained by adding an organic solvent, washing with water, separating the organic layer containing the target compound, drying over anhydrous magnesium sulfate and the like, and then distilling off the solvent. If necessary, the obtained target compound can be further purified by a conventional method such as recrystallization, reprecipitation or chromatography.
(Step F-3)
This step uses at least one compound (21) produced with F-2 and a commercially available phosphoramidite reagent necessary for producing an oligonucleotide analogue having a desired nucleotide sequence. This is a step for producing the target oligonucleotide analog and 2-5A analog on an automatic DNA synthesizer by a conventional method.
[0271]
Oligonucleotide analogs and 2-5A analogs having the desired nucleotide sequence can be obtained using a DNA synthesizer such as model 392 by PerkinElmer's phosphoramidite method (Nucleic Acids Research,12, 4539 (1984)).
[0272]
If desired, when thioating, a reagent that forms thioate by reacting with trivalent phosphoric acid such as tetraethylthiuram disulfide (TETD, Applied Biosystems), Beaucage reagent (Millipore), etc. in addition to sulfur is used. , Literature (Tetarhedron Letters,32, 3005 (1991), J. Am. Chem. Soc.,112, 1253 (1990)), a thioate derivative can be obtained.
[0273]
The resulting crude oligonucleotide analog and 2-5A analog can be purified using a reverse phase chromatography column, and the purity of the purified product can be confirmed by HPLC.
[0274]
The chain length of the resulting oligonucleotide analog is usually 2 to 50, preferably 10 to 30, nucleoside units.
[0275]
In addition, when the 2 ′ (3 ′)-terminal nucleoside of the desired oligonucleotide analog and 2-5A analog is a modified nucleoside, the nucleoside produced by Method G described below is mediated by a dicarboxylic acid. Thus, the desired oligonucleotide analog and 2-5A analog can be synthesized by using a solid phase carrier bonded to a polymer compound having an alkyl chain.
R used in the G method¹⁵Is-(CH₂) h-group (h is an integer from 2 to 8), R¹⁶Represents a hydroxyl group, a phenyloxy group which may have a substituent, or an ethyloxy group which may be substituted with a halogen;¹⁷Represents an oxygen atom, a sulfur atom or an NH group, and HR¹⁷-P (circle) represents a polymer compound.
(G method)
[0276]
Embedded image

[0277]
(Step G-1)
This step is a step for producing a compound (21) by reacting a dicarboxylic acid anhydride with the compound (20) produced by Method F in an inert solvent.
[0278]
The solvent to be used is not particularly limited as long as it does not inhibit the reaction and dissolves the starting material to some extent, but aromatic hydrocarbons such as benzene, toluene and xylene; such as methylene chloride and chloroform Halogenated hydrocarbons; ethers such as ether, tetrahydrofuran, dioxane and dimethoxyethane; amides such as dimethylformamide, dimethylacetamide and hexamethylphosphorotriamide; sulfoxides such as dimethylsulfoxide; acetone and methyl ethyl ketone Ketones; heterocyclic amines such as pyridine; and nitriles such as acetonitrile. Preferred are halogenated hydrocarbons such as methylene chloride.
[0279]
Examples of the deoxidizing agent to be used include pyridines such as pyridine, dimethylaminopyridine and pyrrolidinopyridine, and dimethylaminopyridine is preferred.
[0280]
The dicarboxylic acid anhydride used is not particularly limited as long as it is an anhydride of an α, ω-alkyldicarboxylic acid having 3 to 16 carbon atoms, but is preferably a succinic anhydride.
[0281]
The reaction temperature and reaction time vary depending on the acid anhydride, deoxidizer, etc. used, but when succinic anhydride is used and dimethylaminopyridine is used as the deoxidizer, it is 30 minutes at room temperature.
[0282]
After completion of the reaction, the target compound is collected from the reaction mixture according to a conventional method. For example, the reaction mixture is appropriately neutralized, and if insoluble matter is present, it is removed by filtration, water and an immiscible organic solvent such as ethyl acetate are added, and after washing with water, the organic layer containing the target compound is removed. After separating and drying over anhydrous magnesium sulfate or the like, the solvent is distilled off. If necessary, the obtained target compound can be further purified by a conventional method such as recrystallization, reprecipitation or chromatography.
(Step G-2)
In this step, an ester-forming reagent is reacted with the carboxyl group of the compound (21) having a free carboxyl group in an inert solvent, and then reacted with a phenol which may have a substituent to produce an active ester (22 ) Is formed.
[0283]
The solvent used is not particularly limited as long as it does not inhibit the reaction, but aromatic hydrocarbons such as benzene, toluene, xylene; methylene chloride, chloroform, carbon tetrachloride, dichloroethane, chlorobenzene, dichlorobenzene Halogenated hydrocarbons such as: ethyl formate, ethyl acetate, propyl acetate, butyl acetate, esters such as diethyl carbonate, ketones such as acetone, methyl ethyl ketone methyl isobutyl ketone, isophorone, cyclohexanone; nitroethane, nitrobenzene, etc. Nitro compounds; nitriles such as acetonitrile and isobutyronitrile; amides such as formamide, dimethylformamide (DMF), dimethylacetamide and hexamethylphosphorotriamide; dimethylsulfoxy , Sulfoxides such as sulfolane and the like, preferably halogenated hydrocarbons (particularly methylene chloride) are amides (particularly dimethylformamide).
[0284]
The phenol to be used is not particularly limited as long as it can be used as an active ester, but 4-nitrophenol, 2,4-dinitrophenol, 2,4,5-trichlorophenol, 2,3,4,5. , 6-pentachlorophenol and 2,3,5,6-tetrafluorophenol, but pentachlorophenol is preferred.
[0285]
Examples of the ester forming reagent used include N-hydroxy compounds such as N-hydroxysuccinimide, 1-hydroxybenzotriazole, N-hydroxy-5-norbornene-2,3-dicarboximide; Diimidazole compounds such as' -oxalyldiimidazole, N, N'-carbonyldiimidazole; disulfide compounds such as 2,2'-dipyridyl disulfide; N, N'-disuccinimidyl carbonate Succinic acid compounds such as; phosphinic chloride compounds such as N, N′-bis (2-oxo-3-oxazolidinyl) phosphinic chloride; N, N′-disuccinimidyl oxalate (DSO) N, N-diphtal imidyl oxalate (DPO), N, N′-bis ( Rubornenyl succinimidyl) oxalate (BNO), 1,1′-bis (benzotriazolyl) oxalate (BBTO), 1,1′-bis (6-chlorobenzotriazolyl) oxalate (BCTO), 1 , 1'-bis (6-trifluoromethylbenzotriazolyl) oxalate (BTBO), carbodiimides such as dicyclohexylcarbodiimide (DCC), preferably diimidazole compounds, carbodiimide (Especially DCC).
[0286]
The reaction temperature and reaction time vary depending on the type of ester forming reagent and solvent used, but are 0 to 100 ° C. for 5 to 50 hours, particularly at room temperature when pentachlorophenol and DCC are used in DMF. It's time.
[0287]
After completion of the reaction, the target compound is collected from the reaction mixture according to a conventional method. For example, the reaction mixture is appropriately neutralized, and if insoluble matter is present, it is removed by filtration, water and an immiscible organic solvent such as ethyl acetate are added, and after washing with water, the organic layer containing the target compound is removed. After separating and drying over anhydrous magnesium sulfate or the like, the solvent is distilled off. If necessary, the obtained target compound can be further purified by a conventional method such as recrystallization, reprecipitation or chromatography.
(Step G-3)
This step is a control pore glass (CPG) in which an activated carboxyl group-containing compound (22) obtained in the fifth step is bonded to an amino group, a hydroxyl group, a sulfhydryl group, etc. via an alkylene group in an inert solvent. In which a polymer derivative (24) that can be used as a carrier for oligonucleotide synthesis is obtained.
[0288]
The polymer substance (23) used in this step is not particularly limited as long as it is generally used as a carrier, but the size of the carrier, the large surface area due to the three-dimensional network structure, the hydrophilicity It is necessary to examine the ratio of base sites, chemical composition, strength against pressure, and the like.
[0289]
Examples of the carrier used include polysaccharide derivatives such as cellulose, dextran and agarose, polyacrylamide gel, polystyrene jus, synthetic polymers such as polyethylene glycol, silica gel, porous glass, and inorganic materials such as metal oxides. Examples include substances such as aminopropyl-CPG, long-chain aminoalkyl-CPG (above, produced by CPG Inc.), Cosmosil NH2, Cosmosil Diol (above, produced by Nacalai Tesque), CPC. -Silica Carrier SilaneCoated, aminopropyl-CPG-550Å, aminopropyl-CPG-1400Å, polyethylene glycol 5000 monomethyl ether (above, manufactured by Furuka), p-alkoxybenzyl alcohol resin, aminomethyl resin, hydroxymethyl resin (above, Production Chemical Co.), polyethylene glycol 14000 monomethyl ether (above, there may be mentioned commercially available carriers such as manufactured by Union Carbide), but is not limited thereto.
[0290]
Moreover, as a functional group couple | bonded with the support | carrier, an amino group, a sulfhydryl group, and a hydroxyl group can be mentioned suitably.
[0291]
The solvent used in this step is not particularly limited as long as it does not inhibit the reaction and dissolves the starting material to some extent, but is preferably an aromatic hydrocarbon such as benzene, toluene, xylene; Halogenated hydrocarbons such as chloride, chloroform, carbon tetrachloride, dichloroethane, chlorobenzene, dichlorobenzene; esters such as ethyl formate, ethyl acetate, propyl acetate, butyl acetate, diethyl carbonate, acetone, methyl ethyl ketone, methyl isobutyl ketone , Ketones such as isophorone and cyclohexanone; nitro compounds such as nitroethane and nitrobenzene; nitriles such as acetonitrile and isobutyronitrile; formamide, dimethylformamide (DMF), dimethylacetamide, hexamethylphosphoroto Amides such as amides; dimethyl sulfoxide, sulfoxides, such as sulfolane and the like, preferably halogenated hydrocarbons (particularly methylene chloride) are amides (particularly dimethylformamide). The reaction temperature is usually −20 to 150 ° C., preferably 0 to 50 ° C. The reaction time varies depending on the raw materials used, the solvent, the reaction temperature, and the like, but is usually 1 to 200 hours, preferably 24 to 100 hours. After completion of the reaction, the target compound is collected from the reaction mixture according to a conventional method. For example, the polymer carrier is recovered from the reaction mixture by filtration, washed with an organic solvent such as methylene chloride, and then dried under reduced pressure.
[0292]
The ability to form complementary strands and resistance to nuclease enzyme of the obtained oligonucleotide analog can be examined according to the following method.
(Test method 1)
The oligonucleotide analogs of the present invention are obtained by annealing the obtained various oligonucleotide analogs and oligonucleotides made of natural DNA or RNA having complementary sequences and measuring the melting temperature (Tm value). The body's ability to hybridize to complementary DNA and RNA is examined.
[0293]
A sample solution containing the same amount of sodium phosphate buffer oligonucleotide analog and natural complementary oligonucleotide is bathed in boiling water and slowly cooled to room temperature over time (annealing). In the cell chamber of a spectrophotometer (for example, Shimadzu UV-2100PC), the temperature of the sample solution is gradually increased from 20 ° C. to 90 ° C., and ultraviolet absorption at 260 nm is measured.
(Test method 2) Measurement of nuclease enzyme resistance
The oligonucleotide is warmed with nuclease in buffer. As the nuclease, snake venom phosphodiesterase, endonuclease P1, endonuclease S1 and the like are used. The buffer is not particularly limited as long as it is suitable for the enzyme, but in the case of snake venom phosphodiesterase, a Tris-hydrochloric acid buffer, in the case of endonuclease P1, sodium acetate buffer or the like is used. If necessary, metal ions are added to the buffer solution. Metal ions include Mg in the case of snake venom phosphodiesterase.²⁺In the case of endonuclease, Zn²⁺Etc. are used. The reaction temperature is preferably 0 to 100 ° C, more preferably 30 to 50 ° C.
[0294]
After a certain time, ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA) is added and the reaction is stopped by heating at 100 ° C. for 2 minutes.
[0295]
For quantification of the remaining amount of oligonucleotide, a method in which the oligonucleotide is labeled with a radioisotope and the cleavage reaction product is quantified with an image analyzer or the like, and a method in which the cleavage reaction product is quantified by reversed-phase high performance liquid chromatography (HPLC) A method of staining the cleavage reaction product with a dye (such as ethidium bromide) and quantifying it by image processing using a computer is used.
(Test method 3) Measurement of RNaseL agonist activity
In a buffer, 2-5A derivative, RNase L and substrate RNA are added, and by measuring the amount of RNA substrate cleaved by RNase L, the RNaseL agonist activity of 2-5A derivative can be measured. It can be adjusted according to the literature (Dong, B. and Silverman, R.H. J. Biol. Chem. 1997, 272, 22236-22242). Further, 2′-5 ′ triadenylate RNase L having a monophosphate at the 5 ′ end is known to be able to activate RNase L as natural type 2-5A (Kitade, Y., Wakana, M. et al. , Tsuboi, T., Yatome, C., Bayly, SF, Player, MR, Torrence, PF, Bioorg. Med. Chem. Lett., 2000, 10, 329-331). In a buffer containing monovalent and divalent metal ions and ATP, the 2-5A derivative of the present invention, RNase L and RNA substrate are added and reacted. K as a monovalent metal ion⁺, Na⁺Mg is used as the divalent metal ion.²⁺, Ca²⁺, Mn²⁺, Pb²⁺Etc. are used. The buffer is not particularly limited as long as it is a neutral to alkaline buffer, but a Tris-hydrochloric acid buffer, a glycyl-glycine-sodium hydroxide buffer, or the like can be used. 0-100 degreeC is suitable for reaction temperature, and also 30-50 degreeC is suitable.
After a certain time, the reaction is stopped by adding a reaction stop solution (urea and ethylenediaminetetraacetic acid, hereinafter referred to as “EDTA”) to the reaction solution.
The RNA substrate cleaved by RNase L is not particularly limited as long as it is a polyribonucleotide that can be cleaved by RNase L. For example, a synthetic oligoribonucleotide having an arbitrary sequence up to 5 to 50 in length, any transfer RNA (tRNA), arbitrary ribosomal RNA (rRNA), arbitrary messenger RNA (mRNA), and the like can be used. For quantification of the cleavage reaction, the RNA substrate is labeled at the 5 'end with a radioisotope, etc., and the cleavage reaction product is separated by gel electrophoresis and then quantified with an image analyzer or the like. Method for quantification by liquid chromatography (HPLC), separation of cleavage reaction products by gel electrophoresis, etc., staining with dyes (ethidium bromide, SYBR GREEN II RNA gel stain (Molecular Probes, etc.)), and using a computer For example, a method for quantifying by image processing is used.
[0296]
Examples of the administration form of the oligonucleotide analog containing one or more structures represented by the general formula (2) of the present invention include oral administration or injection by tablets, capsules, granules, powders, syrups, etc. Parenteral administration by suppository or suppository, etc., and these preparations are excipients (eg sugar derivatives such as lactose, sucrose, sucrose, mannitol, sorbitol; corn starch, potato starch, alpha starch, dextrin etc. Starch derivatives; cellulose derivatives such as crystalline cellulose; gum arabic; dextran; organic excipients such as pullulan; and silicates such as light anhydrous silicic acid, synthetic aluminum silicate, calcium silicate, magnesium metasilicate aluminate Derivatives; Phosphate such as calcium hydrogen phosphate; Carbonate such as calcium carbonate Inorganic fillers such as sulfates such as calcium sulfate), lubricants (eg, stearic acid, calcium stearate, metal stearate such as magnesium stearate; talc; colloidal silica Waxes such as veegum and gay wax; boric acid; adipic acid; sulfate such as sodium sulfate; glycol; fumaric acid; sodium benzoate; DL leucine; fatty acid sodium salt; such as sodium lauryl sulfate and magnesium lauryl sulfate Lauryl sulfates; silicic acids such as silicic anhydride, silicic acid hydrates; and the above starch derivatives), binders (for example, hydroxypropylcellulose, hydroxypropylmethylcellulose, polyvinylpyrrolidone, macrogol, and The same compound as the excipient ), Disintegrants (for example, cellulose derivatives such as low substituted hydroxypropyl cellulose, carboxy group methyl cellulose, carboxy group methyl cellulose calcium, internally crosslinked sodium carboxy group methyl cellulose; carboxy group methyl starch, carboxy group methyl starch sodium) , Chemically modified starch and cellulose such as cross-linked polyvinyl pyrrolidone), stabilizers (paraoxybenzoates such as methylparaben and propylparaben; chlorobutanol, benzyl alcohol, phenylethyl alcohol, etc.) Benzalkonium chloride; phenols such as phenol and cresol; thimerosal; dehydroacetic acid; and sorbic acid Kill. ), Flavoring agents (for example, commonly used sweeteners, acidulants, fragrances, etc.), and additives such as diluents, and the like.
[0297]
The amount used varies depending on symptoms, age, administration method, etc. For example, in the case of oral administration, the lower limit is 0.01 mg / kg body weight (preferably 0.1 mg / kg body weight), and the upper limit is When administered intravenously, 1000 mg / kg body weight (preferably 100 mg / kg body weight) is 0.001 mg / kg body weight (preferably 0.01 mg / kg body weight) as the lower limit and 100 mg as the upper limit per administration. It is desirable to administer / kg body weight (preferably 10 mg / kg body weight) once to several times a day depending on the symptoms.
Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to Examples, Reference Examples and Test Examples.
[0298]
【Example】
Example 1
2'- O - Acetyl -Five'- O - t-Butyldiphenylsilyl -3'- O ,Four'- C - Ethylene-5-methyluridine(Exemplary compound number 2-29)
2′-O-acetyl-3′-O-benzyl-4′-p-toluenesulfonyloxyethyl-5′-O-t-butyldiphenylsilyl-5-methyluridine (120 mg, 0) obtained in Reference Example 6 .145 mmol) was dissolved in methanol (10 ml), 100 mg of 20% palladium hydroxide-carbon was added, and the resulting reaction solution was stirred at normal pressure under hydrogen atmosphere for 2 days. The catalyst was filtered off, and the solvent of the filtrate was distilled off under reduced pressure. The resulting residue was purified by silica gel chromatography (dichloromethane: methanol = 40: 1) to give a colorless amorphous substance (70 mg, 0.124 mmol, yield). 85%).¹H-NMR (400MHz, CDCl_Three): 1.14 (9H, s), 1.43 (3H, s), 1.91 (1H, dt, 8.0 and 13Hz), 2.08 (1H, ddd, 4.8, 6.3 and 13Hz), 2.16 (3H, s), 3.72 (1H , d, 11Hz), 3.97 (1H, dt, 4.8 and 8Hz), 4.11 (1H, m), 4.13 (1H, d, 11Hz), 4.64 (1H, d, 5.0Hz), 5.28 (1H, dd, 5.0 and 8.4Hz), 6.33 (1H, d, 8.4Hz), 7.4-7.7 (10H, m),
8.01 (1H, s).
FABMS (mNBA): 549 [M + H]⁺
(Example 2)
Five'- O - t-butyldiphenylsilyl -3'- O ,Four'- C - Ethylene-5-methyluridine(Exemplary Compound No. 2-31)
Dissolve 10 mg of potassium carbonate in a small amount of water, add 10 ml of methanol, and further 2′-O-acetyl-5′-Ot-butyldiphenylsilyl-3′-O, 4′-C obtained in Example 1. -Ethylene-5-methyluridine (70 mg, 0.124 mmol) was dissolved and allowed to stand for 3 hours. After completion of the reaction, water and ethyl acetate were added for liquid separation, and the organic layer was washed with water and saturated brine, and dried over anhydrous magnesium sulfate. The solvent was distilled off under reduced pressure to obtain a colorless solid (43 mg, 0.10 mmol, yield 81%).
¹H-NMR (400MHz, CDCl_Three): 1.11 (9H, s), 1.47 (3H, d, 1.5Hz), 1.95 (1H, dt, 8.4 and 13.3Hz), 2.10 (1H, ddd, 4.4, 6.3 and 13.3Hz), 2.93 (1H, d , 10Hz), 3.71 (1H, d, 11Hz), 4.06 (2H, m), 4.08 (1H, d, 11Hz), 4.28 (1H, m), 4.44 (1H, d, 5.2Hz), 6.01 (1H, d, 7.9Hz), 7.4-7.7 (10H, m), 8.23 (1H, s) .FABMS (mNBA): 523 [M + H]⁺
(Example 3)
3'- O ,Four'- C - Ethylene-5-methyluridine(Exemplary compound number 2-2)
Under a nitrogen stream, 5′-Otbutyldiphenylsilyl-3′-O, 4′-C-ethylene-5-methyluridine (19 mg, 0.0363 mmol) obtained in Example 2 was added to anhydrous tetrahydrofuran (2 ml). Then, 1.0M-tetrabutylammonium fluoride / tetrahydrofuran solution (0.05 ml, 0.05 mmol) was added thereto and stirred at room temperature for 90 minutes. After completion of the reaction, 0.5 ml of methanol was added, the solvent was distilled off, and the resulting residue was purified by silica gel chromatography (dichloromethane: methanol = 12: 1), colorless solid (7 mg, 0.0246 mmol, yield). 68%).
¹H-NMR (400MHz, CD_ThreeOD): 1.89 (3H, s), 2.03 (2H, t, 6.9Hz), 3.69 (1H, d, 12Hz), 3.85 (1H, d, 12Hz), 4.02 (2H, t, 6.9Hz), 4.26 ( 1H, d, 4.9Hz), 4.31 (1H, dd, 4.9 and 7.9Hz), 5.97 (1H, d, 7.9Hz), 7.88 (1H, s) .FABMS (mNBA): 285 [M + H]⁺
(Example 4)
2'- O - Acetyl -Five'- O - t-Butyldiphenylsilyl -3'- O ,Four'- C - ethylene -6- N - Benzoyladenosine(Exemplary Compound No. 1-37)
2′-O-acetyl-3′-O-benzyl-4′-p-toluenesulfonyloxyethyl-5′-Ot-butyldiphenylsilyl-6-N-benzoyladenosine obtained in Reference Example 7 (68 mg, 0 0.0723 mmol) was dissolved in methanol (10 ml), 20 mg of 20% palladium hydroxide-carbon was added, and the resulting reaction solution was stirred at 50 atm under hydrogen atmosphere for 2 days. The catalyst was filtered off, and the solvent of the filtrate was distilled off under reduced pressure. The resulting residue was purified by silica gel chromatography (dichloromethane: methanol = 16: 1) to give a colorless amorphous substance (11 mg, 0.0162 mmol, yield). 21%).
¹H-NMR (400MHz, CDCl_Three): 1.12 (9H, s), 2.09 (3H, s), 2.16 (2H, m), 3.78 (1H, d, 11Hz), 4.05 (1H, dt, 5.0, 8.7Hz), 4.15 (1H, d, 11Hz), 4.17 (1H, m), 4.73 (1H, d, 4.8Hz), 5.82 (1H, dd, 4.8 and 8.0Hz), 6.36 (1H, 8.0Hz), 7.35-7.70 (13H, m), 8.02 (2H, d, 7.4Hz), 8.22 (1H, s), 8.72 (1H, s), 9.03 (1H, s) .FABMS (mNBA): 678 [M + H]⁺
(Example 5)
2'- O - Acetyl -3'- O ,Four'- C - ethylene -6- N - Benzoyladenosine(Exemplary Compound No. 1-209)
2'-O-acetyl-5'-Ot-butyldiphenylsilyl-3'-O, 4'-C-ethylene-6-N-benzoyladenosine (11 mg, 0.0162 mmol) obtained in Example 4 Was dissolved in anhydrous tetrahydrofuran (2 ml), 1.0 M tetrabutylammonium fluoride / tetrahydrofuran solution (0.03 ml, 0.03 mmol) was added thereto, and the mixture was stirred for 90 minutes at room temperature. 2 ml of methanol was added, the solvent was distilled off, and the resulting residue was purified by silica gel chromatography (dichloromethane: methanol = 12: 1) to obtain a colorless solid (7 mg, 0.0159 mmol, yield 98%). .
¹H-NMR (400MHz, CDCl_Three): 2.09 (3H, s), 2.10 (1H, m), 2.22 (1H, ddd, 4.7, 6.5 and 13Hz), 3.74 (1H, t, 11Hz), 4.10-4.20 (3H, m), 4.83 (1H , d, 4.6Hz), 5.85 (1H, dd, 4.6 and 8.1Hz), 6.07 (1H, d, 8.1Hz), 6.36 (1, d, 11Hz), 7.56 (2H, t, 7.5Hz), 7.65 ( 1H, t, 7.5Hz), 8.05 (2H, 7.5Hz), 8.82 (1H, s), 9.04 (1H, s).
FABMS (mNBA): 440 [M + H]⁺
(Example 6)
3'- O ,Four'- C - Ethylene adenosine(Exemplary compound numbers 1-7)
2′-O-acetyl-3′-O, 4′-C-ethylene-6-N-benzoyladenosine (7 mg, 0.0159 mmol) obtained in Example 5 was dissolved in a saturated ammonia / methanol solution (5 ml). , Left overnight.
[0299]
After completion of the reaction, the solvent was distilled off under reduced pressure, and the resulting residue was purified by silica gel chromatography (dichloromethane: methanol = 7: 1) to obtain a white powder (about 5 mg, quantitative yield).
[0300]
¹H-NMR (400MHz, CD_ThreeOD): 2.12 (2H, t, 5.8Hz), 3.75 (1H, d, 12Hz), 3.94 (1H, d, 12Hz), 4.04 (2H, m), 4.39 (1H, d, 4.4Hz), 4.78 ( 1H, dd, 4.4 and 8.0Hz), 6.03 (1H, d, 8.0Hz), 8.44 (1H, s), 8.58 (1H, s) .FABMS (mNBA): 294 [M + H]⁺
(Example 7)
2 ' , Five'- Diacetoxy 3'- O ,Four'- C - ethylene -6- N - Benzoyladenosine(Exemplary Compound No. 1-32)
2,3-diacetoxy-6a-acetoxymethyl-hexahydro-furo [3,2-d] furan (1.88 g, 6.22 mmol) obtained in Reference Example 16 at room temperature under nitrogen flow was added to anhydrous 1,2- Trimethylsilylated benzoyladenine (4) dissolved in dichloroethane (100 ml) and prepared according to the above literature (H. Vorbueggen, K. Krolikiewicz and B, Bennua, Chem. Ber., 114, 1234-1255 (1981)). .60 g, about 12 mmol) was added. Further, trimethylsilyl trifluoromethanesulfonate (1.0 ml, 5.5 mmol) was added dropwise thereto, and the mixture was heated to reflux for 8 hours.
[0301]
After completion of the reaction, a saturated aqueous solution of sodium hydrogencarbonate (about 100 ml) was added to the reaction solution, filtered using Celite, dichloromethane (about 100 ml) was added to the filtrate, and the organic layer was saturated with aqueous sodium bicarbonate solution (about 100 ml), The extract was washed with saturated brine (about 100 ml) and dried over anhydrous magnesium sulfate. After distilling off the solvent under reduced pressure, the obtained residue was purified by silica gel chromatography (dichloromethane: methanol = 100: 8), and the colorless amorphous target product (2.52 g, 5.23 mmol, yield 84%). Got.
[0302]
¹H-NMR (400MHz, CDCl_Three): 2.09 (3H, s), 2.18 (3H, s), 2.19 (1H, m), 2,30 (1H, ddd, 4.1, 6.2 and 13Hz), 4.15 (2H, m), 4.43 (1H, d , 12Hz), 4.48 (1H, d, 12Hz), 4.70 (1H, d, 4.9Hz), 5.81 (1H, dd, 4.9 and 7.9Hz), 6.33 (1H, d, 7.9Hz), 7.52-7.64 (3H , m), 8.03 (2H, m), 8.23 (1H, s), 8.81 (1H, s), 8.95 (1H, brs).
FABMS (mNBA): 482 [M + H]⁺.
(Example 8)
3'- O ,Four'- C - ethylene -6- N - Benzoyladenosine(Exemplary compound number 1-178)
2 ′, 5′-O-diacetoxy-3′-O, 4′-C-ethylene-6-N-benzoyladenosine (1.39 g, 2.89 mmol) obtained in Example 7 was dissolved in 15 ml of pyridine, 6 ml of 1N aqueous sodium hydroxide solution was added and stirred for 20 minutes at room temperature. After completion of the reaction, the reaction solution was neutralized with 0.1N aqueous acetic acid, and the solvent was distilled off. The obtained residue was purified as it was using silica gel chromatography (dichloromethane: methanol = 10: 1) to obtain a colorless amorphous target product (889 mg, 2.24 mmol, yield 77%).
[0303]
¹H-NMR (400MHz, MeOD): 2.14 (2H, m), 3.31 (2H, m), 3.76 (1H, d, 12Hz), 3.99 (1H, d, 12Hz), 4.12 (2H, m), 4.42 ( 1H, 4.7Hz), 4.92 (1H, dd, 4.7 and 8.0Hz), 6.09 (1H, d, 8.0Hz), 7.54-7.68 (3H, m), 8.08 (2H, d, 7.2Hz), 8.63 (1H , s), 8.70 (1H, s).
FABMS (mNBA): 398 [M + H]⁺.
Example 9
Five'- O - Dimethoxytrityl- 3'- O ,Four'- C - ethylene -6- N - Benzoyladenosine(Exemplary Compound No. 1-31)
The 3′-O, 4′-C-ethylene-6-N-benzoyladenosine (1.89 g, 4.76 mmol) obtained in Example 8 was azeotropically dehydrated with anhydrous pyridine, and then anhydrous pyridine ( 20 ml). To this was added 4,4'-dimethoxytrityltrifluoromethanesulfonic acid (2.7 g, 6.0 mmol) and heated at 100 ° C for 5 hours.
A small amount of methanol (about 3 ml) was added to the reaction solution, the solvent was concentrated under reduced pressure, water (about 50 ml) was added, and the mixture was extracted with chloroform (about 100 ml). The organic layer was washed with a saturated aqueous solution of sodium hydrogencarbonate (about 50 ml × 2) and saturated brine (about 50 ml), the solvent was concentrated under reduced pressure, and the resulting residue was purified using silica gel chromatography (dichloromethane: Methanol = 100: 10), and colorless amorphous target product (900 mg, 1.28 mmol, yield 27%) was obtained.
[0304]
¹H-NMR (400MHz, CDCl_Three): 2.08 (1H, dt, 8.8 and 13Hz), 2.19 (1H, dt, 5.0 and 13Hz), 3.30 (1H, d, 10Hz), 3.59 (1H, d, 10Hz), 3.76 (3H, s), 3.77 (3H, s), 4.08 (2H, m), 4.25 (1H, brs), 4.50 (1H, d, 5.0Hz), 5.02 (1H, brd, 5.0Hz), 6.06 (1H, d, 7.2Hz), 6.79 (4H, d, 8.7Hz), 7.2-7.6 (12H, m), 8.03 (2H, d, 7.4Hz), 8.25 (1H, s), 8.77 (1H, s), 9.19 (1H, s). FABMS (mNBA): 700 [M + H]⁺
(Example 10)
Five'- O - Dimethoxytrityl- 3'- O ,Four'- C - ethylene -6- N - Benzoyladenosine 2'- O- ( 2 -Cyanoethyl N, N-diisopropyl phosphoramidite)(Exemplary compound number 1-186)
After 5′-O-dimethoxytrityl-3′-O, 4′-C-ethylene-6-N-benzoyladenosine (820 mg, 1.17 mmol) obtained in Example 9 was azeotropically dehydrated with anhydrous pyridine, Under nitrogen stream, dissolved in anhydrous dichloromethane (20 ml), N, N-diisopropylaminetetrazole salt (340 mg, 2.0 mmol), N, N, N ′, N′-tetraisopropyl-2-cyanoethyl phosphoramidite (635 μl) 2.0 mmol) and stirred at 45 ° C. for 5 hours. The reaction solution was washed with a saturated aqueous solution of sodium hydrogencarbonate (10 ml) and saturated brine (10 ml), the solvent was concentrated under reduced pressure, and the resulting residue was purified by silica gel chromatography (dichloromethane: ethyl acetate = 4). 1), a colorless amorphous target product (835 mg, 0.927 mmol, yield 80%) was obtained.
[0305]
¹H-NMR (400MHz, CDCl_Three): 0.7-1.2 (12H, m), 1.26 (1H, m), 2.16 (1H, m), 2.38 (2H, m), 3.5-3.7 (6H, m), 3.78 (3H, s), 3.79 ( 3H, s), 3.8-4.2 (3H, m), 4.5 (1H, d, 4.7Hz), 6.2 (1H, d, 7.9Hz), 6.82 (4H, m), 7.2-7.6 (12H, m), 8.02 (2H, m), 8.18 (1H, s), 8.68 (1H, s), 9.03 (1H, brs).
(Example 11)
(Synthesis of oligonucleotide analogues)
A nucleic acid synthesizer (ABI model 392 DNA / RNA synthesizer manufactured by PE Biosystems) was used at a 1.0 μmol scale. The concentrations of the solvent, reagent, and phosphoramidite in each synthesis cycle were the same as in the case of natural oligonucleotide synthesis, and the solvents, reagents, and phosphorylamidites of natural nucleosides were all manufactured by PE Biosystems. The DMTr group of 5′-O-DMTr-thymidine (1.0 μmol) in which the 3′-hydroxy group was bound to the CPG support was deprotected with trichloroacetic acid, and the amidite for natural nucleotide synthesis and the examples were used. The condensation reaction was repeated using 10 compounds to synthesize modified oligonucleotide analogues of the respective sequences. The synthesis cycle is as follows.
Synthesis cycle
1) detritylation trichloroacetic acid / dichloromethane; 85 sec
2) coupling phosphoramidite (25eq), tetrazole / acetonitrile; 25secor 10min
3) capping 1-methylimidazole / tetrahydrofuran, acetic anhydride / pyridine / tetrahydrofuran; 15 sec
4) oxidation iodine / water / pyridine / tetrahydrofuran; 15 sec
In the above, when the reaction of Example 10 was performed in cycle 2), the reaction was performed for 10 minutes, and when using other phosphoramidites, the reaction was performed for 25 seconds.
[0306]
After synthesizing the oligonucleotide having the target sequence and deprotecting the 5'-DMTr group up to 1) of the synthesis cycle, the oligomer is cleaved from the support by concentrated aqueous ammonia treatment and protected on the phosphorus atom according to a conventional method. The group cyanoethyl was removed, and the protecting group on the nucleobase was removed.
[0307]
The resulting natural oligonucleotide and modified oligonucleotide analog were purified by reverse phase HPLC to obtain the target oligonucleotide.
[0308]
In accordance with this synthesis method, the following sequence:
5'-ttttttttttnt-3 '(SEQ ID NO: 1 in the sequence listing)
And an oligonucleotide analog (hereinafter referred to as “oligonucleotide (1)”) in which the sugar moiety of adenosine of base number 11 is 3′-O, 4′-C-ethyleneadenosine. (Yield 0.55 μmol (55% yield)).
[0309]
In addition, the yield (mol) of the oligonucleotide analogue was measured by measuring the absorbance at 260 nm (A260), and calculating according to P589 of “Handbook of Biochemistry and Molecular Biology, 3rd Edition, Nucleic Acids-Volume 1” (CRC press). Using the molar absorptance calculated by the method, it was obtained from Lambert-Beer's law. The yield (weight) was calculated by multiplying the yield (mol) by the molecular weight. (Hereinafter, the yields of oligonucleotide analogs and 2-5A analogs were determined by the same method.)
Purification of the obtained modified oligonucleotide analog was performed by reversed-phase HPLC (HPLC: LC-VP manufactured by Shimadzu Corporation; column: GL Science Inertsil Prep-ODS (20 × 250 mm); 0.1 M aqueous triethylamine acetate (TEAA), pH 7; 10 → 60% CH_ThreeCN / 30 min, linear gradient; 40 ° C .; 10 ml / min; 254 nm), and fractions eluting at 29.6 minutes were collected. This compound is HPLC (Wakosil DNA (4.6 × 150mm), 0.1M TEAA, pH7, 10 → 50% CH_Three(CN / 20min, linear gradient, 60 ° C, 1ml / min), it was eluted at 16.58 minutes.
(Λmax = 263nm)
Example 12
2 ' - Acetoxy -3 ' -O, 4 ' -C- propylene -Five ' -O- tert- Butyl diphenylsilanyl -6N- Benzoyl - Adenosine
The 2-acetoxy-7a- (tert-butyldiphenylsilanyloxymethyl) -hexahydro-furo [3,2-b] pyran-3-yl-acetate obtained in Reference Example 22 was subjected to toluene azeotropic dehydration, and then subjected to nitrogen. Trimethylsilylated benzoyladenine dissolved in anhydrous toluene (100 ml) under a stream of air and prepared according to the above literature (H. Vorbrueggen, K. Krolikiewicz and B, Bennua, Chem. Ber., 114, 1234-1255 (1981)) (About 6.9 g, about 18 mmol) and trimethylsilyl trifluoromethanesulfonate (2.7 ml, 15 mmol) were added, and the mixture was heated to reflux at 110 ° C. for 2 hours. After completion of the reaction, a saturated aqueous sodium hydrogen carbonate solution (about 100 ml) was added to the reaction solution, and the precipitate was filtered through celite. Dichloromethane (200 ml) was added to the filtrate, and the organic layer was washed with a saturated aqueous sodium hydrogen carbonate solution (about 200 ml) and saturated brine (about 200 ml), and dried over anhydrous magnesium sulfate. After the solvent was distilled off under reduced pressure, the resulting residue was purified using silica gel chromatography (dichloromethane: methanol = 50: 1) to give a colorless amorphous target product (4.76 g, 6.87 mmol, yield). 81%).
[0310]
¹H-NMR (400MHz, CDCl_Three): 1.11 (9H, s), 1.60 (1H, m), 1.82 (1H, m), 1.94 (1H, m), 2.07 (1H, m), 2.08 (3H, s), 3.41 (1H, dt, 2.2 and 11Hz), 3.51 (1H, d, 11Hz), 4.06 (1H, m), 4.29 (1H, d, 11Hz), 4.58 (1H, d, 2.9Hz), 6.41 (2H, m), 7.3-8.1 (15H, m), 8.05 (1H, s), 8.41 (1H, s), 8.94 (1H, s). FABMS (mNBA): 692 [M + H]⁺
(Example 13)
2 ' - Acetoxy -3 ' -O, 4 ' -C- propylene -6N- Benzoyl - Adenosine
2′-Acetoxy-3′-O, 4′-C-propylene-5′-O-tert-butyldiphenylsilanyl-6N-benzoyl-adenosine (4.68 g, 6.75 mmol) obtained in Example 12 Was dissolved in tetrahydrofuran (100 ml), tert-butylammonium fluoride-tetrahydrofuran solution (1.0 M) (1 ml, 1 mmol) was added, and the mixture was stirred at room temperature for 5 hours. After completion of the reaction, dichloromethane (100 ml) was added to the reaction solution, washed with a saturated aqueous sodium hydrogen carbonate solution (about 100 ml), water (100 ml) and saturated brine (about 100 ml), and dried over anhydrous magnesium sulfate. After the solvent was distilled off under reduced pressure, the resulting residue was purified using silica gel chromatography (dichloromethane: methanol = 100: 4) to give a colorless amorphous target product (2.74 g, 6.04 mmol, yield). 90%).
[0311]
¹H-NMR (400MHz, CDCl_Three): 1.59 (2H, m), 1.89 (1H, m), 2.06 (3H, s), 3.43 (1H, dt, 2.9 and 11Hz), 3.69 (1H, dd, 11 and 13Hz), 3.80 (1H, dd , 3.7 and 13Hz), 4.6 (1H, m), 4.45 (1H, d, 4.4Hz), 6.20 (1H, dd, 4.4 and 8.0Hz), 6.27 (1H, d, 8.0Hz), 6.53 (1H, dd , 3.7 and 11Hz), 7.5-7.7 (3H, m), 8.30 (2H, m), 8.06 (1H, s), 8.81 (1H, s), 9.06 (1H, s). FABMS (mNBA): 454 [ M + H]⁺(Example 14)
2 ' - Acetoxy -3 ' -O, 4 ' -C- propylene -Five ' -O- Dimethoxytrityl -6N- Benzoyl - Adenosine
2′-acetoxy-3′-O, 4′-C-propylene-6N-benzoyl-adenosine (1.7 g, 3.75 mmol) obtained in Example 13 was dissolved in anhydrous pyridine (50 ml) under a nitrogen stream. Then, 4,4′-dimethoxytrityltrifluoromethanesulfonic acid (6 mmol) was added thereto, followed by stirring at 100 ° C. for 6 hours. After completion of the reaction, the solvent was distilled off, dichloromethane (100 ml) was added, washed with a saturated aqueous sodium hydrogen carbonate solution (about 100 ml) and saturated brine (about 100 ml), and dried over anhydrous magnesium sulfate. After the solvent was distilled off under reduced pressure, the resulting residue was purified using silica gel chromatography (dichloromethane: methanol = 100: 2) to obtain a pale yellow amorphous target product (2.62 g, 3.47 mmol, yield). 92%).
[0312]
¹H-NMR (400MHz, CDCl_Three): 1.57 (1H, m), 1.81 (1H, m), 1.98 (2H, m), 2.08 (3H, s), 3.08 (1H, d, 9.8Hz), 3.45 (1H, m), 3.75 (1H) , d, 9.8Hz), 3.77 (3H, s), 3.78 (3H, s), 4.07 (1H, m), 4.62 (1H, d, 3.1Hz), 6.40 (2H, m), 6.83 (4H, m ), 7.2-7.7 (12H, m), 7.97 (1H, s), 8.02 (2H, d, 7.2Hz), 8.45 (1H, s), 9.00 (1H, s). FABMS (mNBA): 758 [M + H]⁺
(Example 15)
Three ' -O, 4 ' -C- propylene -Five ' -O- Dimethoxytrityl -6N- Benzoyl - Adenosine
10% water containing 2'-acetoxy-3'-O, 4'-C-propylene-5'-O-dimethoxytrityl-6N-benzoyl-adenosine (2.4 g, 3.17 mmol) obtained in Example 14 Dissolved in pyridine (10 ml) and cooled to 0 ° C. Sodium hydroxide aqueous solution (1N) (6 ml) was added there, and it stirred at room temperature for 15 minutes. After completion of the reaction, pyridine was distilled off, dichloromethane (50 ml) was added, and the organic layer was washed with saturated aqueous sodium hydrogen carbonate solution (about 50 ml), water (50 ml), saturated brine (about 50 ml), and anhydrous magnesium sulfate. Dried. After the solvent was distilled off under reduced pressure, the obtained residue was purified using silica gel chromatography (dichloromethane: methanol = 100: 4), and the colorless amorphous target product (1.60 g, 2.24 mmol, yield 71). %).
[0313]
¹H-NMR (400MHz, CDCl_Three): 1.59 (1H, m), 1.94 (3H, m), 3.11 (1H, d, 10Hz), 3.34 (1H, d, 10Hz), 3.48 (1H, m), 3.76 (6H, s), 4.12 ( 2H, m), 4.19 (1H, d, 3.7Hz), 5.08 (1H, m), 6.07 (1H, d, 6.6Hz), 6.77 (4H, m), 7.2-7.6 (12H, m), 8.02 ( 1H, s), 8.03 (2H, d, 7.3Hz), 8.67 (1H, s), 9.10 (1H, s). FABMS (mNBA): 715 [M + H]⁺
(Example 16)
Three ' -O, 4 ' -C- propylene -Five ' -O- Dimethoxytrityl -6N- Benzoyl - Adenosine 2'- O- ( 2 -Cyanoethyl N, N-diisopropyl phosphoramidite)
3′-O, 4′-C-propylene-5′-O-dimethoxytrityl-6N-benzoyl-adenosine (418 mg, 0.586 mmol) obtained in Example 15 was added to anhydrous dichloromethane (10 ml) under a nitrogen stream. Dissolve and add N, N-diisopropylamine tetrazole salt (171 mg, 1.0 mmol), N, N, N ′, N′-tetraisopropyl 2-cyanoethyl phosphoramidite (318 μl, 1.0 mmol) at 45 ° C. Stir for 3 hours. The reaction solution was washed with a saturated aqueous solution of sodium hydrogencarbonate (10 ml) and saturated brine (10 ml), the solvent was distilled off under reduced pressure, and the resulting residue was purified using silica gel chromatography (dichloromethane: ethyl acetate = 2). 1), and the desired colorless amorphous diastereomeric mixture (524 mg, 0.573 mmol, yield 98%) was obtained.
[0314]
¹H-NMR (400MHz, CDCl_Three): FABMS (mNBA): 914 [M + H]⁺
(Example 17)
[0315]
Embedded image

[0316]
3′-O, 4′-C-ethylene-5′-O-dimethoxytrityl-6N-benzoyl-adenosine (100 mg, 0.142 mmol) obtained in Example 9 was added to anhydrous pyridine (1 ml) under a nitrogen stream. After dissolution, succinic anhydride (20 mg, 0.194 mmol) and 4-dimethylaminopyridine (24 mg, 0.194 mmol) were added, and the mixture was stirred overnight at room temperature. The solvent was distilled off under reduced pressure, and the residue was purified using silica gel chromatography (dichloromethane: methanol = 25: 1) to obtain the resulting colorless amorphous compound (115 mg, 0.142 mmol, yield 100%). It was. This was dissolved in anhydrous dimethylformamide (3 ml), pentachlorophenol (63 mg, 0.21 mmol) and N, N′-dicyclohexylcarbodiimide (43 mg, 0.21 mmol) were added, and the mixture was stirred at room temperature for 24 hours. After filtering the precipitate, the filtrate was concentrated under reduced pressure, benzene was added, and the precipitate was filtered again. The filtrate was concentrated under reduced pressure, anhydrous dimethylformamide (3 ml) was added, and triethylamine (60 μl, 0.44 mmol), long chain alkylamino glass (500 mm, particle size: 120/200 mesh) (manufactured by CPG Inc) ( 1, 5 g) was added, and the mixture was allowed to stand at 60 ° C. for 10 hours and further at room temperature for 72 hours. CPG was filtered and further washed with dichloromethane, and then 10 ml each of 2 kinds of capping reagents (acetic anhydride / pyridine / tetrahydrofuran) (1-methylimidazole / tetrahydrofuran) for Applied Biosystems DNA synthesizer ABI392 were added to CPG for 10 minutes. I left it alone. CPG was filtered, washed with pyridine and dichloromethane in this order, and dried under reduced pressure to obtain the desired product (about 1.4 g, amount of dimethoxytrityl group introduced = 50 μmol / g).
(Example 18)
[0317]
Embedded image

[0318]
3′-O, 4′-C-propylene-5′-O-dimethoxytrityl-6N-benzoyl-adenosine (290 mg, 0.406 mmol) obtained in Example 15 was added to anhydrous pyridine (4 ml) under a nitrogen stream. After dissolution, succinic anhydride (73 mg, 0.73 mmol) and 4-dimethylaminopyridine (89 mg, 0.73 mmol) were added, and the mixture was stirred overnight at room temperature. The solvent was distilled off under reduced pressure, and the residue was purified using silica gel chromatography (dichloromethane: methanol = 20: 1) to obtain the resulting colorless amorphous compound (245 mg, 0.300 mmol, yield 74%). It was. This was dissolved in anhydrous dimethylformamide (4 ml), pentachlorophenol (82 mg, 0.276 mmol) and N, N′-dicyclohexylcarbodiimide (57 mg, 0.276 mmol) were added, and the mixture was stirred at room temperature for 24 hours. After filtering the precipitate, the filtrate was concentrated under reduced pressure, benzene was added, and the precipitate was filtered again. The filtrate was concentrated under reduced pressure, anhydrous dimethylformamide (8 ml) was added, and triethylamine (75 μl, 0.54 mmol), long chain alkylamino glass (500 mm, particle size: 120/200 mesh) (manufactured by CPG Inc) ( 1 g) was added and left at 60 ° C. for 48 hours. CPG was filtered and further washed with dichloromethane, and then 10 ml each of 2 kinds of capping reagents (acetic anhydride / pyridine / tetrahydrofuran) (1-methylimidazole / tetrahydrofuran) for Applied Biosystems DNA synthesizer ABI392 were added to CPG for 10 minutes. I left it alone. CPG was filtered, washed with pyridine and dichloromethane in that order, and dried under reduced pressure to obtain the desired product (about 1 g, introduction amount of dimethoxytrityl group = 56 μmol / g).
(Example 19) (H-K^3-1-K¹-K¹-K¹-OH) (Exemplary Compound No. 3-34)
Using a nucleic acid synthesizer (ABI model 392 DNA / RNA synthesizer manufactured by PE Biosystems), it was carried out at a 2.0 μmol scale. The concentration of the solvent, reagent, and phosphoramidite in each synthesis cycle was the same as in the case of natural oligonucleotide synthesis, and all solvents and reagents were manufactured by PE Biosystems. As phosphoramidites other than Example 10, 3'-tBDSilyl-ribo Adenosine (N-bz) phosphramidite (ChemGene), ChemicalPhosphorylationReageantII (5'-phosphorylation reagent) (Glen Research) was used. The DMTr group of 5′-O-DMTr-riboadenosine (2.0 μmol) having a hydroxyl group at the 3 ′ position bound to the CPG support is deprotected with trichloroacetic acid, and 3′-tBDSilyl is converted to the 5′-hydroxyl group as its natural adenosine unit. -ribo Adenosine (N-bz) phosphramidite is subjected to the condensation reaction repeatedly using the compound of Example 10 as a modified adenosine unit, and finally ChemicalPhosphorylationReageantII is condensed as a 5'-phosphate unit to protect the target sequence. 2-5A analogs were synthesized. The synthesis cycle is as follows.
Synthesis cycle
1) detritylation trichloroacetic acid / dichloromethane; 85 sec
2) coupling phosphoramidite (25eq), tetrazole / acetonitrile; 10-20min (60 ° C)
3) capping 1-methylimidazole / tetrahydrofuran, acetic anhydride / pyridine / tetrahydrofuran; 15 sec
4) oxidation iodine / water / pyridine / tetrahydrofuran; 15 sec
In 2) above, the column cartridge was removed from the synthesizer and incubated at 60 ° C. The coupling reaction of 2) was repeated twice and then proceeded to 3).
[0319]
After synthesizing a protected 2-5A analog having the target sequence with the 5′-DMTr group attached, the oligomer was excised from the support by treatment with concentrated aqueous ammonia-ethanol (4: 1) mixture; The protecting group cyanoethyl group on the phosphorus atom and the benzoyl group on the adenine base were removed. The solvent was distilled off under reduced pressure, and the remaining residue was subjected to reverse-phase HPLC (LC-VP manufactured by Shimadzu Corporation; column (GL Science Inertsil Prep-ODS (20 × 250 mm)); 0.1 M aqueous triethylamine acetate (TEAA), pH 7; 5 → 60% CH_ThreeThe mixture was purified by CN (30 min, linear gradient); 40 ° C .; 10 ml / min; 254 nm), and fractions eluted at 32.1 minutes were collected. After the solvent was distilled off under reduced pressure, 80% aqueous acetic acid was added and allowed to stand for 30 minutes to remove the DMTr group. After the solvent was distilled off, a concentrated aqueous ammonia-ethanol (4: 1) mixture was added and left for 30 minutes. . After the solvent was distilled off, aqueous hydrochloric acid (2N) was added to adjust to pH 2.0, and the reaction was carried out at 30 ° C. for 5 hours to remove the silyl group. After neutralizing with ammonia water and distilling off the solvent, reverse-phase HPLC (LC-VP manufactured by Shimadzu Corporation; column (GL Science Inertsil Prep-ODS (20 × 250 mm)); 0.1M aqueous triethylamine acetate (TEAA), pH 7; 2.5 → 17.5% CH_ThreeThe mixture was purified by CN (30 min, linear gradient); 40 ° C .; 10 ml / min; 254 nm), and fractions eluted at 21.9 minutes were collected. This compound is HPLC (column (Wakosil DNA (4.6 × 150mm))); 0.1M TEAA, pH7; 2.5 → 12.5% CH_ThreeWhen analyzed at CN (20 min, linear gradient); 60 ° C .; 1 ml / min), it was eluted at 15.96 minutes. (600μg (308nmol)) (λmax (H₂O) = 258.6nm)
(Example 20) (H-K¹-K^3-1-K¹-K¹-OH) (Exemplary Compound No. 3-35)
According to the same method as in Example 19, a 2-5A analog having the target sequence was synthesized using a DNA synthesizer with the 5′-DMTr group attached.
[0320]
The oligomer was excised from the support by treatment with concentrated aqueous ammonia-ethanol (4: 1) mixture, and the protecting group cyanoethyl group on the phosphorus atom and the benzoyl group on the adenine base were removed. The solvent was distilled off under reduced pressure, and the remaining residue was subjected to reverse-phase HPLC (LC-VP manufactured by Shimadzu Corporation; column (GL Science Inertsil Prep-ODS (20 × 250 mm)); 0.1 M aqueous triethylamine acetate (TEAA), pH 7; 5 → 60% CH_ThreeThe mixture was purified by CN (30 min, linear gradient); 40 ° C .; 10 ml / min; 254 nm), and fractions eluted at 33.8 minutes were collected. After the solvent was distilled off under reduced pressure, 80% aqueous acetic acid was added and allowed to stand for 30 minutes to remove the DMTr group. After the solvent was distilled off, a concentrated aqueous ammonia-ethanol (4: 1) mixture was added and left for 30 minutes. . After the solvent was distilled off, aqueous hydrochloric acid (2N) was added to adjust to pH 2.0, and the reaction was carried out at 30 ° C. for 5 hours to remove the silyl group. After neutralizing with ammonia water and distilling off the solvent, reverse-phase HPLC (LC-VP manufactured by Shimadzu Corporation; column (GL Science Inertsil Prep-ODS (20 × 250 mm)); 0.1M aqueous triethylamine acetate (TEAA), pH 7; 2.5 → 17.5% CH_ThreePurified with CN (30 min, linear gradient); 40 ° C .; 10 ml / min; 254 nm), and fractions eluting at 20.7 min were collected. This compound is HPLC (column (Wakosil DNA (4.6 × 150mm))); 0.1M TEAA, pH7; 2.5 → 12.5% CH_ThreeWhen analyzed at CN (20 min, linear gradient); 60 ° C .; 1 ml / min), it was eluted at 11.24 minutes. (506μg (260nmol)) (λmax (H₂O) = 258.5nm))
(Example 21) (H-K¹-K¹-K^3-1-K¹-OH) (Exemplary Compound No. 3-36)
According to the same method as in Example 19, a 2-5A analog having the target sequence was synthesized using a DNA synthesizer with the 5′-DMTr group attached.
[0321]
The oligomer was excised from the support by treatment with concentrated aqueous ammonia-ethanol (4: 1) mixture, and the protecting group cyanoethyl group on the phosphorus atom and the benzoyl group on the adenine base were removed. The solvent was distilled off under reduced pressure, and the remaining residue was subjected to reverse phase HPLC (LC-VP manufactured by Shimadzu Corporation; column (GL Science Inertsil Prep-ODS (20 × 250 mm)); 0.1 M aqueous triethylamine acetate (TEAA), pH 7; 5 → 60% CH_ThreeThe mixture was purified by CN (30 min, linear gradient); 40 ° C .; 10 ml / min; 254 nm), and fractions eluting at 35.8 minutes were collected. After the solvent was distilled off under reduced pressure, 80% aqueous acetic acid was added and allowed to stand for 30 minutes to remove the DMTr group. After the solvent was distilled off, a concentrated aqueous ammonia-ethanol (4: 1) mixture was added and left for 30 minutes. . After the solvent was distilled off, aqueous hydrochloric acid (2N) was added to adjust to pH 2.0, and the reaction was carried out at 30 ° C. for 5 hours to remove the silyl group. After neutralizing with ammonia water and distilling off the solvent, reverse-phase HPLC (LC-VP manufactured by Shimadzu Corporation; column (GL Science Inertsil Prep-ODS (20 × 250 mm)); 0.1M aqueous triethylamine acetate (TEAA), pH 7; 2.5 → 17.5% CH_ThreePurified with CN (30 min, linear gradient); 40 ° C .; 10 ml / min; 254 nm), and fractions eluting at 20.7 min were collected. This compound is HPLC (column (Wakosil DNA (4.6 × 150mm))); 0.1M TEAA, pH7; 2.5 → 12.5% CH_ThreeWhen analyzed at CN (20 min, linear gradient); 60 ° C .; 1 ml / min), it was eluted at 11.03 minutes. (352μg (181nmol)) (λmax (H₂O) = 260.0nm)
(Example 22) (H-K^3-1-K^3-1-K¹-K¹-OH) (Exemplary Compound No. 3-37)
According to the same method as in Example 19, a 2-5A analog having the target sequence was synthesized using a DNA synthesizer with the 5′-DMTr group attached.
[0322]
The oligomer was excised from the support by treatment with concentrated aqueous ammonia-ethanol (4: 1) mixture, and the protecting group cyanoethyl group on the phosphorus atom and the benzoyl group on the adenine base were removed. The solvent was distilled off under reduced pressure, and the remaining residue was subjected to reverse-phase HPLC (LC-VP manufactured by Shimadzu Corporation; column (GL Science Inertsil Prep-ODS (20 × 250 mm)); 0.1 M aqueous triethylamine acetate (TEAA), pH 7; 5 → 60% CH_ThreeThe mixture was purified by CN (30 min, linear gradient); 40 ° C .; 10 ml / min; 254 nm), and fractions eluted at 29.2 minutes were collected. After the solvent was distilled off under reduced pressure, 80% aqueous acetic acid was added and allowed to stand for 30 minutes to remove the DMTr group. After the solvent was distilled off, a concentrated aqueous ammonia-ethanol (4: 1) mixture was added and left for 30 minutes. . After the solvent was distilled off, aqueous hydrochloric acid (2N) was added to adjust to pH 2.0, and the reaction was carried out at 30 ° C. for 5 hours to remove the silyl group. After neutralizing with ammonia water and distilling off the solvent, reverse-phase HPLC (LC-VP manufactured by Shimadzu Corporation; column (GL Science Inertsil Prep-ODS (20 × 250 mm)); 0.1M aqueous triethylamine acetate (TEAA), pH 7; 2.5 → 17.5% CH_ThreeThe mixture was purified by CN (30 min, linear gradient); 40 ° C .; 10 ml / min; 254 nm), and fractions eluted at 24.2 minutes were collected. This compound is HPLC (column (Wakosil DNA (4.6 × 150mm))); 0.1M TEAA, pH7; 2.5 → 12.5% CH_ThreeWhen eluted with CN (20 min, linear gradient); 60 ° C .; 1 ml / min), it was eluted at 12.05 minutes. (710μg (366nmol)) (λmax (H₂O) = 258.9nm)
(Example 23) (H-K^3-1-K¹-K^3-1-K¹-OH) (Exemplary Compound No. 3-38)
According to the same method as in Example 19, a 2-5A analog having the target sequence was synthesized using a DNA synthesizer with the 5′-DMTr group attached.
[0323]
The oligomer was excised from the support by treatment with concentrated aqueous ammonia-ethanol (4: 1) mixture, and the protecting group cyanoethyl group on the phosphorus atom and the benzoyl group on the adenine base were removed. The solvent was distilled off under reduced pressure, and the remaining residue was subjected to reverse-phase HPLC (LC-VP manufactured by Shimadzu Corporation; column (GL Science Inertsil Prep-ODS (20 × 250 mm)); 0.1 M aqueous triethylamine acetate (TEAA), pH 7; 5 → 60% CH_ThreePurified with CN (30 min, linear gradient); 40 ° C .; 10 ml / min; 254 nm) and fractions eluting at 29.8 minutes were collected. After the solvent was distilled off under reduced pressure, 80% aqueous acetic acid was added and allowed to stand for 30 minutes to remove the DMTr group. After the solvent was distilled off, a concentrated aqueous ammonia-ethanol (4: 1) mixture was added and left for 30 minutes. . After the solvent was distilled off, aqueous hydrochloric acid (2N) was added to adjust to pH 2.0, and the reaction was carried out at 30 ° C. for 5 hours to remove the silyl group. After neutralizing with ammonia water and distilling off the solvent, reverse-phase HPLC (LC-VP manufactured by Shimadzu Corporation; column (GL Science Inertsil Prep-ODS (20 × 250 mm)); 0.1M aqueous triethylamine acetate (TEAA), pH 7; 2.5 → 17.5% CH_ThreeThe mixture was purified by CN (30 min, linear gradient); 40 ° C .; 10 ml / min; 254 nm), and fractions eluted at 23.7 minutes were collected. This compound is HPLC (column (Wakosil DNA (4.6 × 150mm))); 0.1M TEAA, pH7; 2.5 → 12.5% CH_ThreeWhen analyzed at CN (20 min, linear gradient); 60 ° C .; 1 ml / min), it was eluted at 14.18 minutes. (678μg (348nmol)) (λmax (H₂O) = 258.8nm)
(Example 24) (H-K¹-K^3-1-K^3-1-K¹-OH) (Exemplary Compound No. 3-39)
According to the same method as in Example 19, a 2-5A analog having the target sequence was synthesized using a DNA synthesizer with the 5′-DMTr group attached.
[0324]
The oligomer was excised from the support by treatment with concentrated aqueous ammonia-ethanol (4: 1) mixture, and the protecting group cyanoethyl group on the phosphorus atom and the benzoyl group on the adenine base were removed. The solvent was distilled off under reduced pressure, and the remaining residue was subjected to reverse phase HPLC (LC-VP manufactured by Shimadzu Corporation; column (GL Science Inertsil Prep-ODS (20 × 250 mm)); 0.1 M aqueous triethylamine acetate (TEAA), pH 7; 5 → 60% CH_ThreeThe mixture was purified by CN (30 min, linear gradient); 40 ° C .; 10 ml / min; 254 nm), and fractions eluted at 32.1 minutes were collected. After the solvent was distilled off under reduced pressure, 80% aqueous acetic acid was added and allowed to stand for 30 minutes to remove the DMTr group. After the solvent was distilled off, a concentrated aqueous ammonia-ethanol (4: 1) mixture was added and left for 30 minutes. . After the solvent was distilled off, aqueous hydrochloric acid (2N) was added to adjust to pH 2.0, and the reaction was carried out at 30 ° C. for 5 hours to remove the silyl group. After neutralizing with ammonia water and distilling off the solvent, reverse-phase HPLC (LC-VP manufactured by Shimadzu Corporation; column (GL Science Inertsil Prep-ODS (20 × 250 mm)); 0.1M aqueous triethylamine acetate (TEAA), pH 7; 2.5 → 17.5% CH_ThreeThe mixture was purified by CN (30 min, linear gradient); 40 ° C .; 10 ml / min; 254 nm), and fractions eluted at 23.0 minutes were collected. This compound is HPLC (column (Wakosil DNA (4.6 × 150mm))); 0.1M TEAA, pH7; 2.5 → 12.5% CH_ThreeWhen eluted with CN (20 min, linear gradient); 60 ° C .; 1 ml / min), it was eluted at 13.62 minutes. (248μg (128nmol)) (λmax (H₂O) = 259.3nm)
(Example 25) (H-K^3-1-K^3-1-K^3-1-K¹-OH) (Exemplary Compound No. 3-40)
According to the same method as in Example 19, a 2-5A analog having the target sequence was synthesized with a 5′-DMTr group attached using a DNA synthesizer.
[0325]
The oligomer was excised from the support by treatment with concentrated aqueous ammonia-ethanol (4: 1) mixture, and the protecting group cyanoethyl group on the phosphorus atom and the benzoyl group on the adenine base were removed. The solvent was distilled off under reduced pressure, and the remaining residue was subjected to reverse-phase HPLC (LC-VP manufactured by Shimadzu Corporation; column (GL Science Inertsil Prep-ODS (20 × 250 mm)); 0.1 M aqueous triethylamine acetate (TEAA), pH 7; 5 → 60% CH_ThreeThe mixture was purified by CN (30 min, linear gradient); 40 ° C .; 10 ml / min; 254 nm), and fractions eluted at 27.4 minutes were collected. After the solvent was distilled off under reduced pressure, 80% aqueous acetic acid was added and allowed to stand for 30 minutes to remove the DMTr group. After the solvent was distilled off, a concentrated aqueous ammonia-ethanol (4: 1) mixture was added and left for 30 minutes. . After the solvent was distilled off, aqueous hydrochloric acid (2N) was added to adjust to pH 2.0, and the reaction was carried out at 30 ° C. for 5 hours to remove the silyl group. After neutralizing with ammonia water and distilling off the solvent, reverse-phase HPLC (LC-VP manufactured by Shimadzu Corporation; column (GL Science Inertsil Prep-ODS (20 × 250 mm)); 0.1M aqueous triethylamine acetate (TEAA), pH 7; 2.5 → 17.5% CH_ThreeThe mixture was purified by CN (30 min, linear gradient); 40 ° C .; 10 ml / min; 254 nm), and fractions eluting at 33.9 minutes were collected. This compound is HPLC (column (Wakosil DNA (4.6 × 150mm))); 0.1M TEAA, pH7; 2.5 → 12.5% CH_ThreeWhen eluted with CN (20 min, linear gradient); 60 ° C .; 1 ml / min), it was eluted at 16.58 minutes. (515μg (265nmol)) (λmax (H₂O) = 259.6nm)
(Example 26) (H-K^3-1-K¹-K¹-OH) (Exemplary Compound No. 3-1)
According to the same method as in Example 19, a 2-5A analog having the target sequence was synthesized using a DNA synthesizer with the 5′-DMTr group attached.
[0326]
The oligomer was excised from the support by treatment with concentrated aqueous ammonia-ethanol (4: 1) mixture, and the protecting group cyanoethyl group on the phosphorus atom and the benzoyl group on the adenine base were removed. The solvent was distilled off under reduced pressure, and the remaining residue was subjected to reverse phase HPLC (LC-VP manufactured by Shimadzu Corporation; column (Wakosil DNA (10.0 × 250 mm)); 0.1 M aqueous triethylamine acetate (TEAA), pH 7; 5 → 60% CH_ThreeThe mixture was purified by CN (30 min, linear gradient); 60 ° C .; 2 ml / min), and fractions eluted at 33.3 minutes were collected. After the solvent was distilled off under reduced pressure, 80% aqueous acetic acid was added and allowed to stand for 30 minutes to remove the DMTr group. After the solvent was distilled off, a concentrated aqueous ammonia-ethanol (4: 1) mixture was added and left for 30 minutes. . After the solvent was distilled off, aqueous hydrochloric acid (2N) was added to adjust to pH 2.0, and the reaction was carried out at 30 ° C. for 5 hours to remove the silyl group. After neutralizing with aqueous ammonia and distilling off the solvent, reverse-phase HPLC (LC-VP manufactured by Shimadzu Corporation; column (Wakosil DNA (10.0 × 250 mm)); 0.1 M aqueous triethylamine acetate (TEAA), pH 7; 2.5 → 17.5% CH_ThreePurified with CN (30 min, linear gradient); 60 ° C .; 2 ml / min), fractions eluting at 18.9 minutes were collected. This compound is HPLC (column (Wakosil DNA (4.6 × 150mm)); 0.1M TEAA, pH7; 2.5 → 10% CH_ThreeWhen analyzed at CN (20 min, linear gradient); 60 ° C .; 1 ml / min), it was eluted at 10.20 minutes. (923μg (610nmol)) (λmax (H₂O) = 258.7nm)
(Example 27) (H-K¹-K^3-1-K¹-OH) (Exemplary Compound No. 3-2)
According to the same method as in Example 19, a 2-5A analog having the target sequence was synthesized using a DNA synthesizer with the 5′-DMTr group attached.
[0327]
The oligomer was excised from the support by treatment with concentrated aqueous ammonia-ethanol (4: 1) mixture, and the protecting group cyanoethyl group on the phosphorus atom and the benzoyl group on the adenine base were removed. The solvent was distilled off under reduced pressure, and the remaining residue was subjected to reverse phase HPLC (LC-VP manufactured by Shimadzu Corporation; column (Wakosil DNA (10.0 × 250 mm)); 0.1 M aqueous triethylamine acetate (TEAA), pH 7; 5 → 60% CH_ThreePurified with CN (30 min, linear gradient); 60 ° C .; 2 ml / min), fractions eluting at 35.9 min were collected. After the solvent was distilled off under reduced pressure, 80% aqueous acetic acid was added and allowed to stand for 30 minutes to remove the DMTr group. After the solvent was distilled off, a concentrated aqueous ammonia-ethanol (4: 1) mixture was added and left for 30 minutes. . After the solvent was distilled off, aqueous hydrochloric acid (2N) was added to adjust to pH 2.0, and the reaction was carried out at 30 ° C. for 5 hours to remove the silyl group. After neutralizing with aqueous ammonia and distilling off the solvent, reverse-phase HPLC (LC-VP manufactured by Shimadzu Corporation; column (Wakosil DNA (10.0 × 250 mm)); 0.1 M aqueous triethylamine acetate (TEAA), pH 7; 2.5 → 17.5% CH_ThreePurified with CN (30 min, linear gradient); 60 ° C .; 2 ml / min), fractions eluting at 17.8 minutes were collected. This compound is HPLC (column (Wakosil DNA (4.6 × 150mm)); 0.1M TEAA, pH7; 2.5 → 10% CH_ThreeWhen eluted with CN (20 min, linear gradient); 60 ° C .; 1 ml / min), it was eluted at 9.56 minutes. (750μg (496nmol)) (λmax (H₂O) = 258.8nm)
(Example 28) (H-K¹-K¹-K^3-1-OH) (Exemplary Compound No. 3-3)
According to the same method as in Example 19, a 2-5A analog having the target sequence was synthesized using a DNA synthesizer with the 5′-DMTr group attached. However, the CPG carrier of Example 17 was used as the solid phase carrier used on the DNA synthesizer.
[0328]
The oligomer was excised from the support by treatment with concentrated aqueous ammonia-ethanol (4: 1) mixture, and the protecting group cyanoethyl group on the phosphorus atom and the benzoyl group on the adenine base were removed. The solvent was distilled off under reduced pressure, and the remaining residue was subjected to reverse phase HPLC (LC-VP manufactured by Shimadzu Corporation; column (Wakosil DNA (10.0 × 250 mm)); 0.1 M aqueous triethylamine acetate (TEAA), pH 7; 5 → 60% CH_ThreePurified with CN (30 min, linear gradient); 60 ° C .; 2 ml / min), fractions eluting at 34.2 minutes were collected. After the solvent was distilled off under reduced pressure, 80% aqueous acetic acid was added and allowed to stand for 30 minutes to remove the DMTr group. After the solvent was distilled off, a concentrated aqueous ammonia-ethanol (4: 1) mixture was added and left for 30 minutes. . After the solvent was distilled off, aqueous hydrochloric acid (2N) was added to adjust to pH 2.0, and the reaction was carried out at 30 ° C. for 5 hours to remove the silyl group. After neutralizing with aqueous ammonia and distilling off the solvent, reverse-phase HPLC (LC-VP manufactured by Shimadzu Corporation; column (Wakosil DNA (10.0 × 250 mm)); 0.1 M aqueous triethylamine acetate (TEAA), pH 7; 2.5 → 17.5% CH_ThreeThe mixture was purified by CN (30 min, linear gradient); 60 ° C .; 2 ml / min), and fractions eluting at 21.1 minutes were collected. This compound is HPLC (column (Wakosil DNA (4.6 × 150mm)); 0.1M TEAA, pH7; 2.5 → 10% CH_ThreeWhen eluted with CN (20 min, linear gradient); 60 ° C .; 1 ml / min), it was eluted at 11.32 minutes. (1025μg (824nmol)) (λmax (H₂O) = 258.7nm)
(Example 29) (H-K^3-1-K^3-1-K¹-OH) (Exemplary Compound No. 3-4)
According to the same method as in Example 19, a 2-5A analog having the target sequence was synthesized using a DNA synthesizer with the 5′-DMTr group attached.
[0329]
The oligomer was excised from the support by treatment with concentrated aqueous ammonia-ethanol (4: 1) mixture, and the protecting group cyanoethyl group on the phosphorus atom and the benzoyl group on the adenine base were removed. The solvent was distilled off under reduced pressure, and the remaining residue was subjected to reverse phase HPLC (LC-VP manufactured by Shimadzu Corporation; column (Wakosil DNA (10.0 × 250 mm)); 0.1 M aqueous triethylamine acetate (TEAA), pH 7; 5 → 60% CH_ThreePurified with CN (30 min, linear gradient); 60 ° C .; 2 ml / min), fractions eluting at 30.56 minutes were collected. After the solvent was distilled off under reduced pressure, 80% aqueous acetic acid was added and allowed to stand for 30 minutes to remove the DMTr group. After the solvent was distilled off, a concentrated aqueous ammonia-ethanol (4: 1) mixture was added and left for 30 minutes. . After the solvent was distilled off, aqueous hydrochloric acid (2N) was added to adjust to pH 2.0, and the reaction was carried out at 30 ° C. for 5 hours to remove the silyl group. After neutralizing with aqueous ammonia and distilling off the solvent, reverse-phase HPLC (LC-VP manufactured by Shimadzu Corporation; column (Wakosil DNA (10.0 × 250 mm)); 0.1 M aqueous triethylamine acetate (TEAA), pH 7; 2.5 → 17.5% CH_ThreeThe mixture was purified by CN (30 min, linear gradient); 60 ° C .; 2 ml / min), and fractions eluted at 22.1 minutes were collected. This compound is HPLC (column (Wakosil DNA (4.6 × 150mm)); 0.1M TEAA, pH7; 2.5 → 10% CH_ThreeWhen eluted with CN (20 min, linear gradient); 60 ° C .; 1 ml / min), it was eluted at 11.95 minutes. (1216μg (804nmol)) (λmax (H₂O) = 259.8nm)
(Example 30) (H-K^3-1-K¹-K^3-1-OH) (Exemplary Compound No. 3-5)
According to the same method as in Example 19, a 2-5A analog having the target sequence was synthesized using a DNA synthesizer with the 5′-DMTr group attached. However, the CPG carrier of Example 17 was used as the solid phase carrier used on the DNA synthesizer.
[0330]
The oligomer was excised from the support by treatment with concentrated aqueous ammonia-ethanol (4: 1) mixture, and the protecting group cyanoethyl group on the phosphorus atom and the benzoyl group on the adenine base were removed. The solvent was distilled off under reduced pressure, and the remaining residue was subjected to reverse phase HPLC (LC-VP manufactured by Shimadzu Corporation; column (Wakosil DNA (10.0 × 250 mm)); 0.1 M aqueous triethylamine acetate (TEAA), pH 7; 5 → 60% CH_ThreePurified with CN (30 min, linear gradient); 60 ° C .; 2 ml / min), fractions eluting at 34.1 min were collected. After the solvent was distilled off under reduced pressure, 80% aqueous acetic acid was added and allowed to stand for 30 minutes to remove the DMTr group. After the solvent was distilled off, a concentrated aqueous ammonia-ethanol (4: 1) mixture was added and left for 30 minutes. . After the solvent was distilled off, aqueous hydrochloric acid (2N) was added to adjust to pH 2.0, and the reaction was carried out at 30 ° C. for 5 hours to remove the silyl group. After neutralizing with aqueous ammonia and distilling off the solvent, reverse-phase HPLC (LC-VP manufactured by Shimadzu Corporation; column (Wakosil DNA (10.0 × 250 mm)); 0.1 M aqueous triethylamine acetate (TEAA), pH 7; 2.5 → 17.5% CH_ThreeThe mixture was purified with CN (30 min, linear gradient); 60 ° C .; 2 ml / min), and fractions eluted at 20.3 minutes were collected. This compound is HPLC (column (Wakosil DNA (4.6 × 150mm)); 0.1M TEAA, pH7; 2.5 → 10% CH_ThreeWhen eluted with CN (20 min, linear gradient); 60 ° C .; 1 ml / min), it was eluted at 11.31 minutes. (1665μg (1101nmol)) (λmax (H₂O) = 258.9nm)
(Example 31) (H-K¹-K^3-1-K^3-1-OH) (Exemplary Compound No. 3-6)
According to the same method as in Example 19, a 2-5A analog having the target sequence was synthesized using a DNA synthesizer with the 5′-DMTr group attached. However, the CPG carrier of Example 17 was used as the solid phase carrier used on the DNA synthesizer.
[0331]
The oligomer was excised from the support by treatment with concentrated aqueous ammonia-ethanol (4: 1) mixture, and the protecting group cyanoethyl group on the phosphorus atom and the benzoyl group on the adenine base were removed. The solvent was distilled off under reduced pressure, and the remaining residue was subjected to reverse phase HPLC (LC-VP manufactured by Shimadzu Corporation; column (Wakosil DNA (10.0 × 250 mm)); 0.1 M aqueous triethylamine acetate (TEAA), pH 7; 5 → 60% CH_ThreeThe mixture was purified by CN (30 min, linear gradient); 60 ° C .; 2 ml / min), and fractions eluted at 35.4 minutes were collected. After the solvent was distilled off under reduced pressure, 80% aqueous acetic acid was added and allowed to stand for 30 minutes to remove the DMTr group. After the solvent was distilled off, a concentrated aqueous ammonia-ethanol (4: 1) mixture was added and left for 30 minutes. . After the solvent was distilled off, aqueous hydrochloric acid (2N) was added to adjust to pH 2.0, and the reaction was carried out at 30 ° C. for 5 hours to remove the silyl group. After neutralizing with aqueous ammonia and distilling off the solvent, reverse-phase HPLC (LC-VP manufactured by Shimadzu Corporation; column (Wakosil DNA (10.0 × 250 mm)); 0.1 M aqueous triethylamine acetate (TEAA), pH 7; 2.5 → 17.5% CH_ThreePurified with CN (30 min, linear gradient); 60 ° C .; 2 ml / min), fractions eluting at 20.7 min were collected. This compound is HPLC (column (Wakosil DNA (4.6 × 150mm)); 0.1M TEAA, pH7; 2.5 → 10% CH_ThreeWhen eluted with CN (20 min, linear gradient); 60 ° C .; 1 ml / min), it was eluted at 11.16 minutes. (1132μg (748nmol)) (λmax (H₂O) = 259.1nm)
(Example 32) (H-K^3-1-K^3-1-K^3-1-OH) (Exemplified Compound No. 3-7)
According to the same method as in Example 19, a 2-5A analog having the target sequence was synthesized using a DNA synthesizer with the 5′-DMTr group attached. However, the CPG carrier of Example 17 was used as the solid phase carrier used on the DNA synthesizer.
[0332]
The oligomer was excised from the support by treatment with concentrated aqueous ammonia-ethanol (4: 1) mixture, and the protecting group cyanoethyl group on the phosphorus atom and the benzoyl group on the adenine base were removed. The solvent was distilled off under reduced pressure, and the remaining residue was subjected to reverse phase HPLC (LC-VP manufactured by Shimadzu Corporation; column (Wakosil DNA (10.0 × 250 mm)); 0.1 M aqueous triethylamine acetate (TEAA), pH 7; 5 → 60% CH_ThreeThe mixture was purified by CN (30 min, linear gradient); 60 ° C .; 2 ml / min), and fractions eluted at 30.7 minutes were collected. After the solvent was distilled off under reduced pressure, 80% aqueous acetic acid was added and allowed to stand for 30 minutes to remove the DMTr group. After the solvent was distilled off, a concentrated aqueous ammonia-ethanol (4: 1) mixture was added and left for 30 minutes. . After the solvent was distilled off, aqueous hydrochloric acid (2N) was added to adjust to pH 2.0, and the reaction was carried out at 30 ° C. for 5 hours to remove the silyl group. After neutralizing with aqueous ammonia and distilling off the solvent, reverse-phase HPLC (LC-VP manufactured by Shimadzu Corporation; column (Wakosil DNA (10.0 × 250 mm)); 0.1 M aqueous triethylamine acetate (TEAA), pH 7; 2.5 → 17.5% CH_ThreePurified with CN (30 min, linear gradient); 60 ° C .; 2 ml / min), fractions eluting at 23.3 minutes were collected. This compound is HPLC (column (Wakosil DNA (4.6 × 150mm)); 0.1M TEAA, pH7; 2.5 → 10% CH_ThreeWhen eluted with CN (20 min, linear gradient); 60 ° C .; 1 ml / min), it was eluted at 13.14 minutes. (890μg (588nmol)) (λmax (H₂O) = 259.4nm)
(Example 33) (H-K^3-1-K¹-K¹-K^3-1-OH) (Exemplary Compound No. 3-41)
According to the same method as in Example 19, a 2-5A analog having the target sequence was synthesized using a DNA synthesizer with the 5′-DMTr group attached. However, the CPG carrier of Example 17 was used as the solid phase carrier used on the DNA synthesizer.
[0333]
The oligomer was excised from the support by treatment with concentrated aqueous ammonia-ethanol (4: 1) mixture, and the protecting group cyanoethyl group on the phosphorus atom and the benzoyl group on the adenine base were removed. The solvent was distilled off under reduced pressure, and the remaining residue was subjected to reverse-phase HPLC (LC-VP manufactured by Shimadzu Corporation; column (GL Science Inertsil Prep-ODS (20 × 250 mm)); 0.1 M aqueous triethylamine acetate (TEAA), pH 7; 50 % CH_ThreeCN (isocratic); 40 ° C .; 10 ml / min), and fractions eluting at 12.3 minutes were collected. After the solvent was distilled off under reduced pressure, 80% aqueous acetic acid was added and allowed to stand for 30 minutes to remove the DMTr group. After the solvent was distilled off, a concentrated aqueous ammonia-ethanol (4: 1) mixture was added and left for 30 minutes. . After the solvent was distilled off, aqueous hydrochloric acid (2N) was added to adjust to pH 2.0, and the reaction was carried out at 30 ° C. for 5 hours to remove the silyl group. After neutralizing with ammonia water and distilling off the solvent, reverse-phase HPLC (LC-VP manufactured by Shimadzu Corporation; column (GL Science Inertsil Prep-ODS (20 × 250 mm)); 0.1M aqueous triethylamine acetate (TEAA), pH 7; 7 → 9.9% CH_ThreeThe mixture was purified by CN (20 min, linear gradient); 40 ° C .; 10 ml / min), and fractions eluted at 14.3 minutes were collected. This compound is HPLC (column (Wakosil DNA (4.6 × 150mm))); 0.1M TEAA, pH7; 5 → 9% CH_ThreeWhen eluted with CN (20 min, linear gradient); 60 ° C .; 1 ml / min), it was eluted at 10.41 minutes. (1794μg (1002nmol)) (λmax (H₂O) = 258.4nm)
(Example 34) (H-K¹-K¹-K^3-1-K^3-1-OH) (Exemplary Compound No. 3-42)
According to the same method as in Example 19, a 2-5A analog having the target sequence was synthesized using a DNA synthesizer with the 5′-DMTr group attached. However, the CPG carrier of Example 17 was used as the solid phase carrier used on the DNA synthesizer.
[0334]
The oligomer was excised from the support by treatment with concentrated aqueous ammonia-ethanol (4: 1) mixture, and the protecting group cyanoethyl group on the phosphorus atom and the benzoyl group on the adenine base were removed. The solvent was distilled off under reduced pressure, and the remaining residue was subjected to reverse phase HPLC (LC-VP manufactured by Shimadzu Corporation; column (GL Science Inertsil Prep-ODS (20 × 250 mm)); 0.1 M aqueous triethylamine acetate (TEAA), pH 7; 60 % CH_ThreeCN (isocratic); 40 ° C .; 10 ml / min), and fractions eluting at 8.8 minutes were collected. After the solvent was distilled off under reduced pressure, 80% aqueous acetic acid was added and allowed to stand for 30 minutes to remove the DMTr group. After the solvent was distilled off, a concentrated aqueous ammonia-ethanol (4: 1) mixture was added and left for 30 minutes. . After the solvent was distilled off, aqueous hydrochloric acid (2N) was added to adjust to pH 2.0, and the reaction was carried out at 30 ° C. for 5 hours to remove the silyl group. After neutralizing with ammonia water and distilling off the solvent, reverse-phase HPLC (LC-VP manufactured by Shimadzu Corporation; column (GL Science Inertsil Prep-ODS (20 × 250 mm)); 0.1M aqueous triethylamine acetate (TEAA), pH 7; 7 → 9.9% CH_ThreeThe mixture was purified by CN (20 min, linear gradient); 40 ° C .; 10 ml / min), and fractions eluted at 14.9 minutes were collected. This compound is HPLC (column (Wakosil DNA (4.6 × 150mm))); 0.1M TEAA, pH7; 5 → 9% CH_ThreeWhen eluted with CN (20 min, linear gradient); 60 ° C .; 1 ml / min), it was eluted at 11.30 minutes. (1843μg (1029nmol)) (λmax (H₂O) = 258.5nm)
(Example 35) (H-K^3-1-K¹-K¹-OP (O) (C₂H_FourSynthesis of OH) OH) (Exemplary Compound Nos. 3-8)
According to the same method as in Example 19, a 2-5A analog having the target sequence was synthesized using a DNA synthesizer with the 5′-DMTr group attached. However, the solid phase carrier used on the DNA synthesizer was the CPG carrier described as Example 12b in JP-A-7-87982.
[0335]
The oligomer was excised from the support by treatment with concentrated aqueous ammonia-ethanol (4: 1) mixture, and the protecting group cyanoethyl group on the phosphorus atom and the benzoyl group on the adenine base were removed. The solvent was distilled off under reduced pressure, and the remaining residue was subjected to reverse phase HPLC (LC-VP manufactured by Shimadzu Corporation; column (GL Science Inertsil Prep-ODS (20 × 250 mm)); 0.1 M aqueous triethylamine acetate (TEAA), pH 7; 52 % CH_ThreeCN (isocratic); 40 ° C .; 10 ml / min), and fractions eluting at 10.8 minutes were collected. After the solvent was distilled off under reduced pressure, 80% aqueous acetic acid was added and allowed to stand for 30 minutes to remove the DMTr group. After the solvent was distilled off, a concentrated aqueous ammonia-ethanol (4: 1) mixture was added and left for 30 minutes. . After the solvent was distilled off, aqueous hydrochloric acid (2N) was added to adjust to pH 2.0, and the reaction was carried out at 30 ° C. for 5 hours to remove the silyl group. After neutralizing with ammonia water and distilling off the solvent, reverse-phase HPLC (LC-VP manufactured by Shimadzu Corporation; column (GL Science Inertsil Prep-ODS (20 × 250 mm)); 0.1M aqueous triethylamine acetate (TEAA), pH 7; 7 → 9.9% CH_ThreePurified with CN (20 min, linear gradient); 40 ° C .; 10 ml / min), and fractions eluting at 12.0 minutes were collected. This compound is HPLC (column (Wakosil DNA (4.6 × 150mm))); 0.1M TEAA, pH7; 5 → 9% CH_ThreeWhen analyzed at CN (20 min, linear gradient); 60 ° C .; 1 ml / min), it was eluted at 7.05 minutes. (510μg (327nmol)) (λmax (H₂O) = 259.0nm)
(Example 36) (H-K¹-K¹-K^3-1-OP (O) (C₂H_FourSynthesis of (OH) OH) (Exemplary Compound Nos. 3-9)
According to the same method as in Example 19, a 2-5A analog having the target sequence was synthesized using a DNA synthesizer with the 5′-DMTr group attached. However, the solid phase carrier used on the DNA synthesizer was the CPG carrier described as Example 12b in JP-A-7-87982.
[0336]
The oligomer was excised from the support by treatment with concentrated aqueous ammonia-ethanol (4: 1) mixture, and the protecting group cyanoethyl group on the phosphorus atom and the benzoyl group on the adenine base were removed. The solvent was distilled off under reduced pressure, and the remaining residue was subjected to reverse-phase HPLC (LC-VP manufactured by Shimadzu Corporation; column (GL Science Inertsil Prep-ODS (20 × 250 mm)); 0.1 M aqueous triethylamine acetate (TEAA), pH 7; 55 % CH_ThreeCN (isocratic); 40 ° C .; 10 ml / min), and fractions eluting at 11.9 minutes were collected. After the solvent was distilled off under reduced pressure, 80% aqueous acetic acid was added and allowed to stand for 30 minutes to remove the DMTr group. After the solvent was distilled off, a concentrated aqueous ammonia-ethanol (4: 1) mixture was added and left for 30 minutes. . After the solvent was distilled off, aqueous hydrochloric acid (2N) was added to adjust to pH 2.0, and the reaction was carried out at 30 ° C. for 5 hours to remove the silyl group. After neutralizing with ammonia water and distilling off the solvent, reverse-phase HPLC (LC-VP manufactured by Shimadzu Corporation; column (GL Science Inertsil Prep-ODS (20 × 250 mm)); 0.1M aqueous triethylamine acetate (TEAA), pH 7; 7 → 9.9% CH_ThreeThe mixture was purified by CN (20 min, linear gradient); 40 ° C .; 10 ml / min), and fractions eluting at 9.99 minutes were collected. This compound is HPLC (column (Wakosil DNA (4.6 × 150mm))); 0.1M TEAA, pH7; 5 → 9% CH_ThreeWhen eluted with CN (20 min, linear gradient); 60 ° C .; 1 ml / min), it was eluted at 5.34 minutes. (834μg (535nmol)) (λmax (H₂O) = 258.2nm)
(Example 37) (H-K^3-2-K¹-K¹-K¹-OH) (Exemplary Compound No. 3-47)
According to the same method as in Example 19, a 2-5A analog having the target sequence was synthesized using a DNA synthesizer with the 5′-DMTr group attached. However, the compound of Example 16 was used as the phosphoramidite of the modified nucleoside.
[0337]
The oligomer was excised from the support by treatment with concentrated aqueous ammonia-ethanol (4: 1) mixture, and the protecting group cyanoethyl group on the phosphorus atom and the benzoyl group on the adenine base were removed. The solvent was distilled off under reduced pressure, and the remaining residue was subjected to reverse-phase HPLC (LC-VP manufactured by Shimadzu Corporation; column (GL Science Inertsil Prep-ODS (20 × 250 mm)); 0.1 M aqueous triethylamine acetate (TEAA), pH 7; 51 % CH_ThreeCN (isocratic); 40 ° C .; 10 ml / min), and fractions eluting at 11.3 minutes were collected. After the solvent was distilled off under reduced pressure, 80% aqueous acetic acid was added and allowed to stand for 30 minutes to remove the DMTr group. After the solvent was distilled off, a concentrated aqueous ammonia-ethanol (4: 1) mixture was added and left for 30 minutes. . After the solvent was distilled off, aqueous hydrochloric acid (2N) was added to adjust to pH 2.0, and the reaction was carried out at 30 ° C. for 5 hours to remove the silyl group. After neutralizing with ammonia water and distilling off the solvent, reverse-phase HPLC (LC-VP manufactured by Shimadzu Corporation; column (GL Science Inertsil Prep-ODS (20 × 250 mm)); 0.1M aqueous triethylamine acetate (TEAA), pH 7; 7 → 9.9% CH_ThreeThe mixture was purified by CN (20 min, linear gradient); 40 ° C .; 10 ml / min), and fractions eluting at 16.8 minutes were collected. This compound is HPLC (column (Wakosil DNA (4.6 × 150mm))); 0.1M TEAA, pH7; 5 → 9% CH_ThreeWhen analyzed at CN (20 min, linear gradient); 60 ° C .; 1 ml / min), it was eluted at 12.15 minutes. (1480μg (832nmol)) (λmax (H₂O) = 258.5nm)
(Example 38) (H-K¹-K¹-K^3-2-K¹-OH) (Exemplary Compound No. 3-49)
According to the same method as in Example 19, a 2-5A analog having the target sequence was synthesized using a DNA synthesizer with the 5′-DMTr group attached. However, the compound of Example 16 was used as the phosphoramidite of the modified nucleoside.
[0338]
The oligomer was excised from the support by treatment with concentrated aqueous ammonia-ethanol (4: 1) mixture, and the protecting group cyanoethyl group on the phosphorus atom and the benzoyl group on the adenine base were removed. The solvent was distilled off under reduced pressure, and the remaining residue was subjected to reverse-phase HPLC (LC-VP manufactured by Shimadzu Corporation; column (GL Science Inertsil Prep-ODS (20 × 250 mm)); 0.1 M aqueous triethylamine acetate (TEAA), pH 7; 56 % CH_ThreeCN (isocratic); 40 ° C .; 10 ml / min), and fractions eluting at 11.2 minutes were collected. After the solvent was distilled off under reduced pressure, 80% aqueous acetic acid was added and allowed to stand for 30 minutes to remove the DMTr group. After the solvent was distilled off, a concentrated aqueous ammonia-ethanol (4: 1) mixture was added and left for 30 minutes. . After the solvent was distilled off, aqueous hydrochloric acid (2N) was added to adjust to pH 2.0, and the reaction was carried out at 30 ° C. for 5 hours to remove the silyl group. After neutralizing with ammonia water and distilling off the solvent, reverse-phase HPLC (LC-VP manufactured by Shimadzu Corporation; column (GL Science Inertsil Prep-ODS (20 × 250 mm)); 0.1M aqueous triethylamine acetate (TEAA), pH 7; 7 → 9.9% CH_ThreeThe mixture was purified by CN (20 min, linear gradient); 40 ° C .; 10 ml / min), and fractions eluted at 14.7 minutes were collected. This compound is HPLC (column (Wakosil DNA (4.6 × 150mm))); 0.1M TEAA, pH7; 5 → 9% CH_ThreeWhen eluted with CN (20 min, linear gradient); 60 ° C .; 1 ml / min), it was eluted at 10.12 minutes. (940μg (528nmol)) (λmax (H₂O) = 258.9nm)
(Example 39)
In the same manner as in Example 11, the following sequence:
5'-ttttttttttnt-3 '(SEQ ID NO: 1 in the sequence listing)
And an oligonucleotide analog (hereinafter referred to as “oligonucleotide (5)”) in which the sugar moiety of the adenosine of base number 11 is 3′-O, 4′-C-propylene adenosine. It was. (Yield 0.55 μmol (55% yield)) However, the compound of Example 16 was used as the phosphoramidite of the modified nucleoside.
Purification of the resulting oligonucleotide (2) was carried out by reversed-phase HPLC (HPLC: LC-VP manufactured by Shimadzu Corporation; column: Wako Pure Chemical Industries Wakosil DNA (10.0 × 250 mm; 0.1 M triethylamine acetate aqueous solution (TEAA), pH 7; 10 → 21% CH_ThreeCN / 30min, linear gradient; 60 ° C; 2ml / min), and fractions eluting at 19.1 minutes were collected. This compound is HPLC (WakosilDNA (4.6 × 150mm), 0.1M TEAA, pH7, 7 → 25% CH_Three(CN / 20min, linear gradient, 60 ℃, 1ml / min), it was eluted at 12.40 minutes. (Λmax = 264nm)
(Example 40) (H-K^3-2-K¹-K^3-2-OP (O) (C₂H_FourSynthesis of (OH) OH) (Exemplary Compound No. 3-73)
According to the same method as in Example 19, a 2-5A analog having the target sequence was synthesized using a DNA synthesizer with the 5′-DMTr group removed. However, Example 16 was used as a modified adenosine unit, and the CPG carrier described as Example 12b in JP-A-7-87982 was used as the solid phase carrier used on the DNA synthesizer.
The oligomer was excised from the support by treatment with concentrated aqueous ammonia-ethanol (4: 1) mixture, and the protecting group cyanoethyl group on the phosphorus atom and the benzoyl group on the adenine base were removed. The solvent was distilled off under reduced pressure, and the remaining residue was subjected to reverse-phase HPLC (LC-VP manufactured by Shimadzu Corporation; column (GL Science Inertsil Prep-ODS (20 × 250 mm)); 0.1 M aqueous triethylamine acetate (TEAA), pH 7; 5 → 15% CH_ThreeThe mixture was purified by CN (30 min, linear gradient); 40 ° C .; 10 ml / min), and fractions eluted at 22.8 minutes were collected. This compound is HPLC (column (Tosoh TSKgel super ODS (4.6 × 50mm)); 0.1M TEAA, pH7; 7 → 15% CH_ThreeWhen eluted with CN (10 min, linear gradient); 60 ° C .; 1 ml / min), it was eluted at 12.9 minutes. (654μg (405nmol)) (λmax (H₂O) = 258nm)
Example 41 (H-K²-K¹-K^3-2-OP (O) (C₂H_FourSynthesis of (OH) OH) (Exemplary Compound No. 3-74)
According to the same method as in Example 19, a 2-5A analog having the target sequence was synthesized using a DNA synthesizer with the 5′-DMTr group attached. However, Example 16 was used as a modified adenosine unit, and the CPG carrier described as Example 12b in JP-A-7-87982 was used as the solid phase carrier used on the DNA synthesizer. In addition, instead of oxidation with iodine water after condensation using Chemical Phosphorylation Reagent II as a 5'-phosphate unit, a Beaucage reagent (Aldrich) 1 g / acetonitrile solution 100 ml solution was attached to bottle 15 and treated for 5 minutes. It was made thiophosphoric acid by performing twice.
The oligomer was excised from the support by treatment with concentrated aqueous ammonia-ethanol (4: 1) mixture, and the protecting group cyanoethyl group on the phosphorus atom and the benzoyl group on the adenine base were removed. The solvent was distilled off under reduced pressure, and the remaining residue was subjected to reverse phase HPLC (LC-VP manufactured by Shimadzu Corporation; column (GL Science Inertsil Prep-ODS (20 × 250 mm)); 0.1 M aqueous triethylamine acetate (TEAA), pH 7; 53 % CH_ThreeTwo fractions eluting at 13.7 and 16.0 minutes of the diastereomers derived from thiophosphoric acid were collected and combined into one (CN (isocratic); 40 ° C .; 10 ml / min). After the solvent was distilled off under reduced pressure, 80% aqueous acetic acid was added and allowed to stand for 30 minutes to remove the DMTr group. After the solvent was distilled off, a concentrated aqueous ammonia-ethanol (4: 1) mixture was added and left for 30 minutes. . After the solvent was distilled off, aqueous hydrochloric acid (2N) was added to adjust to pH 2.0, and the reaction was carried out at 30 ° C. for 5 hours to remove the silyl group. After neutralizing with ammonia water and distilling off the solvent, reversed-phase HPLC (LC-VP manufactured by Shimadzu Corporation; column (GL Science Inertsil Prep-ODS (20 × 250 mm)); 0.1M triethylamine acetate aqueous solution (TEAA), pH 7; 5 → 11% CH_ThreePurified with CN (30 min, linear gradient); 40 ° C; 10 ml / min), fraction eluted at 11.7 minutes and fraction eluted at 21.6 minutes (the target compound forms a disulfide bond at the 5'-thiophosphate moiety) The dimerized compound) was collected. The dimer compound was reduced to the target monomer form (compound of Example 41) in 1 mM DTT aqueous solution. This compound is HPLC (column (Tosoh TSKgel super ODS (4.6 × 50mm)); 0.1M TEAA, pH7; 7 → 15% CH_ThreeWhen eluted with CN (10 min, linear gradient); 60 ° C .; 1 ml / min), it was eluted at 10.1 minutes. (194μg (122nmol)) (λmax (H₂O) = 258nm)
(Reference Example 1)
3- O - Benzyl -Four- Formyl -Five- O - t - Butyldiphenylsilyl -1,2- O - Isopropylidene - α - D - Erythropent furanose
Oxalyl chloride (3.53 ml, 40.5 mmol) was added to anhydrous dichloromethane (150 ml) cooled to −78 ° C. under a nitrogen stream, and dimethyl sulfoxide (4.62 ml, 64 ml) dissolved in anhydrous dichloromethane (75 ml) was added thereto. .8 mmol) was added dropwise. After stirring for 20 minutes, 3-O-benzyl-4-C-hydroxymethyl-5-Ot-butyldiphenylsilyl-1,2-O-isopropylidene-α dissolved in anhydrous dichloromethane (75 ml) in the reaction reagent solution. -D-erythropentofuranose (which can be produced according to the method described in JP-A-10-304889) (7.40 g, 13.50 mmol) was added dropwise, and the mixture was further stirred for 30 minutes. Furthermore, triethylamine (16.7 ml, 120 mmol) was added and the temperature was slowly returned to room temperature. Water (about 200 ml) was added to the reaction solution and the phases were separated, and the organic layer was washed with water and then with saturated brine, and dried over anhydrous magnesium sulfate. After evaporating the solvent under reduced pressure, the residue was purified by silica gel chromatography (hexane: ethyl acetate = 5: 1) to obtain a colorless oily substance (6.82 g, 12.49 mmol, yield 93%).
(Reference Example 2)
3- O - Benzyl -Four- vinyl -Five- O - t - Butyldiphenylsilyl -1,2- O - Isopropylidene - α - D - Erythropent furanose
Under a nitrogen stream, 3-O-benzyl-4-formyl-5-Ot-butyldiphenylsilyl-1,2-O-isopropylidene-α-D-erythropentofuranose obtained in Reference Example 1 (6. 82 g, 12.49 mmol) was dissolved in anhydrous tetrahydrofuran (200 ml) and cooled to 0 ° C. Thereto was added dropwise 0.5M-Thebes reagent / toluene solution (28 ml, 14.0 mmol), and the mixture was stirred at 0 ° C. for 1 hour.
[0339]
After completion of the reaction, diethyl ether (200 ml) was added, and then a 0.1N aqueous sodium hydroxide solution (30 m) was slowly added. The resulting precipitate was filtered using celite, and the filtered product was washed with diethyl ether and separated, and the organic layer was dried over anhydrous magnesium sulfate. After evaporating the solvent under reduced pressure, the resulting residue was roughly purified by alumina (basic) chromatography (ethyl acetate), and the resulting crude product was further purified by silica gel chromatography (hexane: acetic acid). Ethyl = 7: 1), colorless oily substance (1.68 g, 3.09 mmol, yield 25%) was obtained.
¹H-NMR (400MHz, CDCl_Three): 0.97 (9H, s), 1.32 (3H, s), 1.54 (1H, s), 3.49 (1H, d, 11Hz), 3.53 (1H, d, 11Hz), 4.45 (1H, d, 4.9Hz) , 4.64 (1H, t, 3.8Hz), 4.65 (1H, d, 12Hz), 4.82 (1H, d, 12Hz), 5.18 (1H, dd, 1.9 and 11Hz), 5.44 (1H, dd, 1.9 and 18Hz) , 5.80 (1H, d, 3.8Hz), 6.16 (1H, dd, 11 and 18Hz), 7.2-7.7 (15H, m).
FABMS (mNBA): 545 [M + H]⁺
(Reference Example 3)
3- O - Benzyl -Four- Hydroxyethyl -Five- O - t - Butyldiphenylsilyl -1,2- O - Isopropylidene - α - D - Erythropent furanose
Under a nitrogen stream, 3-O-benzyl-4-vinyl-5-Ot-butyldiphenylsilyl-1,2-O-isopropylidene-α-D-erythropentofuranose obtained in Reference Example 2 (1. 68 g, 3.09 mmol) was dissolved in anhydrous tetrahydrofuran (50 ml), and 0.5 M 9-BBN (9-borabicyclo [3.3.1] nonane) / tetrahydrofuran solution (10 ml, 5 mmol) was added dropwise thereto. Stir at room temperature overnight.
[0340]
Water was added until no bubbles appeared in the reaction solution, and 3N aqueous sodium hydroxide solution (5 ml) was added. Further, 30% hydrogen peroxide solution (10 ml) was slowly added so that the reaction solution became 30 to 50 ° C., and then stirred for 30 minutes.
[0341]
After completion of the reaction, saturated brine and ethyl acetate were added to the reaction mixture, and the mixture was separated. The organic layer was washed with a neutral phosphate buffer and then with saturated brine, and dried over anhydrous magnesium sulfate. After evaporating the solvent under reduced pressure, the obtained residue was purified by silica gel chromatography (hexane: ethyl acetate = 5: 1) to obtain a colorless oily substance (1154 mg, 2.05 mmol, 66% yield).
¹H-NMR (400MHz, CDCl_Three): 0.99 (9H, s), 1.36 (3H, s), 1.68 (3H, s), 1.70 (1H, ddd, 3.3, 6.2 and 20Hz), 2.45 (1H, ddd, 4.0, 8.6 and 20Hz), 3.42 (1H, d, 11Hz), 3.68 (2H, m), 3.74 (1H, d, 11Hz), 4.29 (1H, d, 5.2Hz), 4.56 (1H, d, 12Hz), 4.69 (1H, dd, 4.0 and 5.2Hz), 4.81 (1H, d, 12Hz), 5.80 (1H, d, 4.0), 7.3-7.7 (15H, m).
FABMS (mNBA): 563 [M + H]⁺
(Reference Example 4)
3- O - Benzyl -Four-( p - Toluenesulfonyloxyethyl )-Five- O - t - Butyldiphenylsilyl -1,2- O - Isopropylidene - α - D - Erythropent furanose
Under a nitrogen stream, 3-O-benzyl-4-hydroxyethyl-5-Ot-butyldiphenylsilyl-1,2-O-isopropylidene-α-D-erythropentofuranose (980 mg) obtained in Reference Example 3 was obtained. 1.74 mmol) was azeotropically dehydrated with toluene in advance, and this was dissolved in anhydrous dichloromethane (30 ml) and cooled to 0 ° C. Thereto were added triethylamine (1.25 ml, 9 mmol), dimethylaminopyridine (20 mg, 0.17 mmol) and p-toluenesulfonyl chloride (572 mg, 3 mmol), and the mixture was stirred overnight at room temperature.
[0342]
After completion of the reaction, a saturated aqueous solution of sodium hydrogen carbonate was added to the reaction solution and the phases were separated, and the organic layer was washed with a saturated aqueous solution of sodium bicarbonate and saturated brine, and dried over anhydrous magnesium sulfate.
[0343]
After distilling off the solvent under reduced pressure, the resulting residue was purified by silica gel chromatography (hexane: ethyl acetate = 9: 1, then 7: 1), colorless oil (953 mg, 1.33 mmol, 76%) Got.
¹H-NMR (400MHz, CDCl_Three): 0.95 (9H, s), 1.30 (3H, s), 1.46 (3H, s), 1.89 (1H, ddd, 6.9, 9 and 15Hz), 2.38 (3H, s), 2.52 (1H, ddd, 5.4 , 9 and 15Hz), 3.35 (1H, d, 11Hz), 3.58 (1H, d, 11Hz), 4.14 (1H, dt, 6.9 and 9Hz), 4.19 (1H, d, 5.2Hz), 4.27 (1H, dt , 5.4 and 9Hz), 4.49 (1H, d, 12Hz), 4.61 (1H, dd, 4.0and 5.2), 4.74 (1H, d, 12Hz), 5.71 (1H, d, 4.0Hz), 7.2-7.7 (19H , m) .FABMS (mNBA): 717 [M + H]⁺
(Reference Example 5)
1,2- The - O - Acetyl -3- O - Benzyl -Four-( p - Toluenesulfonyloxyethyl ) -Five- O - t - Butyldiphenylsilyl - α - D - Erythropent furanose
3-O-benzyl-4- (p-toluenesulfonyloxyethyl) -5-Ot-butyldiphenylsilyl-1,2-O-isopropylidene-α-D-erythropentofuranose obtained in Reference Example 4 933 mg (1.30 mmol) was dissolved in 10 ml of acetic acid, 1.13 ml (12 mmol) of acetic anhydride and 0.01 ml of concentrated sulfuric acid were added, and the mixture was stirred at room temperature for 1 hour. The reaction solution was poured into 50 ml of ice-cold water and further stirred for 30 minutes. Saturated brine and ethyl acetate were added, and the organic layer was washed with a neutral phosphate buffer, a saturated aqueous solution of sodium hydrogen carbonate, and saturated brine, and dried over anhydrous magnesium sulfate. After distilling off the solvent, the obtained residue was purified by silica gel chromatography (hexane: ethyl acetate = 3: 1), and colorless oily substance 611 mg (0.803 mmol, yield 62%, α: β = 1: 14) Got.
¹H-NMR (400MHz, CDCl_Three) (β form): 11.06 (9H, s), 1.79 (3H, s), 2.06 (3H, s), 2.15 (1H, m), 2.33 (1H, ddd, 5, 10 and 15Hz), 2.43 (3H , s), 3.52 (1H, d, 10Hz), 3.55 (1H, d, 10Hz), 4.22 (1H, dt, 6.0 and 10Hz), 4.27 (1H, d, 5.1Hz), 4.34 (1H, dt, 5.3 and 10Hz), 4.51 (1H, d, 11Hz), 4.57 (1H, d, 11Hz), 5.33 (1H, d, 5.1Hz), 6.08 (1H, s), 7.1-7.7 (19H, m) .FABMS ( mNBA): 761 [M + H]⁺
(Reference Example 6)
2'- O - Acetyl -3'- O - Benzyl -Four'- p - Toluenesulfonyloxyethyl -5'-O- t - Butyldiphenylsilyl - 5 - Methyluridine
1,2-di-O-acetyl-3-O-benzyl-4- (p-toluenesulfonyloxyethyl) -5-Ot-butyldiphenylsilyl-α-D-erythropent obtained in Reference Example 5 Furanose (268 mg, 0.352 mmol) was dissolved in anhydrous 1,2-dichloroethane (10 ml). Thereto was added trimethylsilylated thymine (190 mg, about 0.7 mmol) prepared according to the above-mentioned literature (H. Vorbrueggen, K. Krolikiewicz and B, Bennua, Chem. Ber., 114, 1234-1255 (1981)). The mixture was cooled to 0 ° C., trimethylsilyl trifluoromethanesulfonate (0.13 ml, 0.7 mmol) was added, and the mixture was stirred at 50 ° C. for 3 hours. The reaction solution was returned to room temperature, and saturated aqueous sodium hydrogen carbonate solution (about 10 ml) was added.
[0344]
After completion of the reaction, methylene chloride (about 20 ml) was added to the reaction mixture and stirred, and the precipitated white insoluble matter was filtered using Celite. The organic layer was separated from the obtained filtrate, and the organic layer was washed with saturated brine and dried over anhydrous magnesium sulfate. After distilling off the solvent, the residue obtained was purified by silica gel chromatography (hexane: ethyl acetate = 1.5: 1, then 1: 1), and 241 mg of colorless amorphous substance (0.291 mmol, yield 83%) Got.
¹H-NMR (400MHz, CDCl_Three): 1.08 (9H, s), 1.57 (3H, s), 2.07 (3H, s), 2.39 (3H, s), 3.55 (1H, d, 11Hz), 3.79 (1H, d, 11Hz), 4.12 ( 2H, m), 4.36 (1H, d, 6Hz), 4.39 (1H, d, 11Hz), 4.55 (1H, d, 11Hz), 5.38 (1H, t, 6Hz), 6.01 (1H, d, 6Hz), 7.2-7.6 (19H, m), 7.96 (1H, s).
FABMS (mNBA): 827 [M + H]⁺
(Reference Example 7)
2'- O - Acetyl -3'- O - Benzyl -Four'- p - Toluenesulfonyloxyethyl -5'-Ot- Butyldiphenylsilyl -6- N - Benzoyladenosine
1,2-di-O-acetyl-3-O-benzyl-4- (p-toluenesulfonyloxyethyl) -5-Ot-butyldiphenylsilyl-α-D-erythropent obtained in Reference Example 5 Furanose (340 mg, 0.447 mmol) was dissolved in anhydrous 1,2-dichloroethane (10 ml). There, trimethylsilylated benzoyladenine (307 mg, about 0.8 mmol) prepared according to the above-mentioned literature (H. Vorbrueggen, K. Krolikiewicz and B, Bennua, Chem. Ber., 114, 1234-1255 (1981)) was added, After cooling to 0 ° C., trimethylsilyl trifluoromethanesulfonate (0.145 ml, 0.8 mmol) was added, and then the mixture was heated to reflux for 2 hours. The reaction solution was returned to room temperature, and saturated aqueous sodium hydrogen carbonate solution (about 10 ml) was added. After completion of the reaction, methylene chloride (about 20 ml) was added to the reaction mixture and stirred, and the precipitated white insoluble matter was filtered using Celite. The organic layer was separated from the obtained filtrate, and the organic layer was washed with saturated brine and dried over anhydrous magnesium sulfate. After the solvent was distilled off, the obtained residue was purified by silica gel chromatography (dichloromethane: methanol = 50: 1) to obtain 155 mg (0.165 mmol, yield 34%) of a colorless amorphous substance.¹H-NMR (400MHz, CDCl_Three): 1.01 (9H, s), 2.04 (3H, s), 2.15 (1H, m), 2.38 (3H, s), 2.40 (1H, m), 3.53 (1H, d, 11Hz), 3.82 (1H, d, 11Hz), 4.21 (1H, m), 4.25 (1H, m), 4.53 (1H, d, 11Hz), 4.58 (1H, d, 11Hz), 4.70 (1H, d, 5.8Hz), 5.97 (1H , t, 5.4Hz), 6.10 (1H, d, 5.0Hz), 7.2-8.0 (24H, m), 8.04 (1H, s), 8.58 (1H, s), 8.95 (1H, s).
FABMS (mNBA): 940 [M + H]⁺
(Reference Example 8)
3- O -p- Methoxybenzyl -Four- Hydroxymethyl 1,2- O - Isopropylidene - α - D - Erythropent furanose
6- (4-methoxy-benzyloxy) -2,2-dimethyl-tetrahydro-furo [2,3-d] -1,3-dioxole-5-carbaldehyde (6- (4-methoxy-benzyloxy) -2 , 2-dimethyl-tetrahydro-furo [2,3-d] [1,3] dioxole-5-carbaldehyde) (3450 mg, 11.19 mmol) (Wood, William W .; Watson, Graham MJChem. Soc. Chem. Commun. 21, 1986, 1599-1600) was dissolved in a 50 ml water / 50 ml tetrahydrofuran mixture and cooled to 0 ° C. Formaldehyde (37% in H)₂O) 6.5 ml and 1N aqueous sodium hydroxide solution 30 ml were added and stirred overnight at room temperature. After completion of the reaction, dichloromethane (about 300 ml) was added to the reaction solution to separate it. The organic layer was washed with 0.1N hydrochloric acid, a saturated aqueous solution of sodium hydrogencarbonate (about 200 ml) and saturated brine (about 200 ml), and then dried over anhydrous magnesium sulfate. The solvent was concentrated under reduced pressure, and the resulting residue was purified using silica gel chromatography (hexane: ethyl acetate = 1: 3) to give the desired product (3510 mg, 10.32 mmol, 92% yield) as a colorless solid. Obtained.
¹H-NMR (400MHz, CDCl_Three): 1.34 (3H, s), 1.64 (3H, s), 1.84 (1H, dd, 3.7 and 9.5Hz), 2.38 (1H, t, 7.0Hz), 3.55 (1H, dd, 9.5 and 12Hz), 3.77 (1H, dd, 3.7and 12Hz), 3.82 (3H, s), 3.90 (2H, m), 4.20 (1H, d, 5.1Hz), 4.50 (11Hz), 4.63 (1H, dd, 3.7 and 5.1Hz) , 4.74 (1H, d, 11Hz), 5.76 (1H, 3.7Hz), 6.90 (2H, m), 7.30 (2H, m).
FABMS (mNBA): 341 [M + H]⁺.
(Reference Example 9)
3- O -p- Methoxybenzyl -Four- Hydroxymethyl -Five- O - Benzyl -1,2- O - Isopropylidene - α - D - Erythropent furanose
Under a nitrogen stream, 3-O-p-methoxybenzyl-4-hydroxymethyl-1,2-O-isopropylidene-α-D-erythropentofuranose (3000 mg, 8.82 mmol) was dissolved in 45 ml of anhydrous dimethylformamide. Cooled to ° C. After adding 350 mg of sodium hydride (60% in mineral oil) and stirring at 0 ° C. for 20 minutes, benzyl bromide (1.05 ml, 8.82 mmol) was slowly added dropwise and then stirred overnight at room temperature. After completion of the reaction, the reaction solution was poured into ice water and extracted with ethyl acetate (about 100 ml × 3). The organic layer was washed with a saturated aqueous solution of sodium hydrogencarbonate (about 200 ml) and saturated brine (about 200 ml) and then dried over anhydrous magnesium sulfate. The solvent was concentrated under reduced pressure, and the resulting residue was purified using silica gel chromatography (hexane: ethyl acetate = 2.5: 1) to give the desired product as a colorless oil (2.12 g, 4.93 mmol, yield). 56%).
¹H-NMR (400MHz, CDCl_Three): 1.34 (3H, s), 1.63 (3H, s), 3.52 (1H, d, 11Hz), 3.59 (1H, d, 11Hz), 3.80 (3H, s), 3.82 (1H, d, 12Hz), 3.89 (1H, d, 12Hz), 4.25 (1H, d, 5.1Hz), 4.44 (1H, d, 12Hz), 4.45 (1H, d, 12Hz), 4.54 (1H, d, 12Hz), 4.61 (1H, dd, 3.7 and 5.1Hz), 4.71 (1H, d, 12Hz), 5.77 (1H, d, 3.7Hz), 6.85-6.89 (2H, m), 7.23-7.36 (7H, m). FABMS (mNBA): 431 [M + H]⁺.
(Reference Example 10)
3- O -p- Methoxybenzyl -Four- Formyl -Five- O - Benzyl -1,2- O - Isopropylidene - α - D - Erythropent furanose
Reference Example 1 using 3-O-p-methoxybenzyl-4-hydroxymethyl-5-O-benzyl-1,2-O-isopropylidene-α-D-erythropentofuranose (2.07 g, 4.81 mmol) In the same manner as above, a colorless oily target product (1.73 g, 4.06 mmol, yield 85%) was obtained.
[0345]
¹H-NMR (400MHz, CDCl_Three): 1.34 (3H, s), 1.60 (3H, s), 3.60 (1H, d, 11Hz), 3.65 (1H, d, 11Hz), 3.80 (3H, s), 4.34 (1H, d, 4.4Hz) , 4.46 (1H, d, 12Hz), 4.50-4.58 (3H, m), 4.64 (1H, d, 12Hz), 5.82 (1H, d, 3.3Hz), 6.85-6.88 (2H, m), 7.22-7.35 (7H, m), 9.90 (1H, s).
FABMS (mNBA): 429 [M + H]⁺.
(Reference Example 11)
3- O -p- Methoxybenzyl -Four- vinyl -Five- O - Benzyl -1,2- O - Isopropylidene - α - D - Erythropent furanose
85 mg of sodium hydride (60% in mineral oil) was suspended in 2 ml of anhydrous dimethylformulsulfoxide and stirred at 80 ° C. for 45 minutes. After returning to room temperature, 3 ml of an anhydrous dimethylformsulfoxide solution in which methyltriphenylphosphonium bromide (757 mg, 2.12 mmol) was dissolved was added dropwise and stirred at room temperature for 10 minutes. Further, anhydrous dimethylformsulfoxide in which 3-O-p-methoxybenzyl-4-formyl-5-O-benzyl-1,2-O-isopropylidene-α-D-erythropentofuranose (758 mg, 1.77 mmol) was dissolved 3 ml of the solution was added dropwise and stirred at room temperature for 1 hour. After completion of the reaction, the reaction solution was poured into ice water, extracted with ethyl acetate (about 50 ml × 3), the organic layer was washed with water (about 100 ml) and saturated brine (about 100 ml), and dried over anhydrous magnesium sulfate. The solvent was concentrated under reduced pressure, and the resulting residue was purified using silica gel chromatography (hexane: ethyl acetate = 5: 1) to give the desired product (455 mg, 1.07 mmol, yield 60%) as a colorless oil. Obtained.
[0346]
¹H-NMR (400MHz, CDCl_Three): 1.28 (3H, s), 1.52 (3H, s), 3.28 (1H, d, 11Hz), 3.33 (1H, d, 11Hz), 3.79 (3H, s), 4.23 (1H, d, 5.1Hz) , 4.40 (1H, d, 12Hz), 4.50-4.55 (3H, m), 4.69 (1H, d, 12Hz), 5.24 (1H, dd, 2.0 and 12Hz), 5.51 (1H, dd, 2.0 and 17Hz), 5.75 (1H, d, 3.7Hz), 6.18 (1H, dd, 12 and 17Hz), 6.84-6.88 (2H, m), 7.21-7.35 (7H, m).
FABMS (mNBA): 449 [M + Na]⁺ , 365 [M + K]⁺.
(Reference Example 12)
3- O -p- Methoxybenzyl -Four- Hydroxyethyl -Five- O - Benzyl -1,2- O - Isopropylidene - α - D - Erythropent furanose
Using 3-O-p-methoxybenzyl-4-vinyl-5-O-benzyl-1,2-O-isopropylidene-α-D-erythropentofuranose (485 mg, 1.14 mmol), A colorless oily target product (323 mg, 0.727 mmol, yield 64%) was obtained by the same method.
[0347]
¹H-NMR (400MHz, CDCl_Three): 1.33 (3H, s), 1.66 (3H, s), 1.77 (1H, 3.7, 6.6 and 15Hz), 2.48 (1H, dq, 4.4, and 15Hz), 3.28 (1H, d, 11Hz), 3.53 ( 1H, d, 11Hz), 3.74 (1H, m), 3.80 (3H, s), 3.83 (1H, m), 4.11 (1H, d, 5.1Hz), 4.43 (1H, d, 12Hz), 4.48 (1H , d, 12Hz), 4.52 (1H, d, 12Hz), 4.62 (1H, dd, 3.7 and 5.1Hz), 4.69 (1H, d, 12Hz), 5.76 (1H, d, 3.7Hz), 6.86 (2H, m), 7.22-7.36 (7H, m).
FABMS (mNBA): 445 [M + H]⁺.
(Reference Example 13)
Four- Hydroxyethyl -Five- O - Benzyl -1,2- O - Isopropylidene - α - D - Erythropent furanose
10% aqueous dichloromethane containing 3-O-p-methoxybenzyl-4-hydroxyethyl-5-O-benzyl-1,2-O-isopropylidene-α-D-erythropentofuranose (13.5 g, 30.36 mmol) Dissolved in 200 ml of the solution, 2,3-dichloro-5,6-dicyano-1,4-benzoquinone (95%) (8.7 g, 36.43 mmol) was added thereto and stirred at room temperature for 4 hours. After completion of the reaction, the reaction solution was extracted with dichloromethane (about 300 ml), and the organic layer was washed with a saturated aqueous solution of sodium hydrogencarbonate (about 300 ml) and saturated brine (about 300 ml) and then dried over anhydrous magnesium sulfate. The solvent was concentrated under reduced pressure, and the resulting residue was purified using silica gel chromatography (hexane: ethyl acetate = 1: 2) to give the desired product (7.9 g, 24.38 mmol, 80% yield) as a colorless oil. )
[0348]
¹H-NMR (400MHz, CDCl_Three): 1.38 (3H, s), 1.62 (3H, s), 1.86 (1H, dq, 3.7 and 15Hz), 2.19 (1H, ddd, 4.4, 8.0 and 15Hz), 3.46 (1H, d, 10Hz), 3.50 (1H, d, 10Hz), 3.74 (1H, dq, 3.7 and 12Hz), 3.85 (1H, dq, 3.7, 12Hz), 4.25 (1H, d, 6.6Hz), 4.51 (1H, d, 12Hz), 4.57 (1H, d, 12Hz), 4.72 (1H, dd, 4.4 and 6.6Hz), 5.88 (1H, d, 4.4Hz), 7.2-7.4 (5H, m).
FABMS (mNBA): 325 [M + H]⁺.
(Reference Example 14)
6a-Benzyloxymethyl-2,2-dimethyl-hexahydro-furo [ 2 ', 3': 4, 5 ] Flow [ 2,3-d ] − 1,3 -Dioxole
4-Hydroxyethyl-5-O-benzyl-1,2-O-isopropylidene-α-D-erythropentofuranose (7.9 g, 24.38 mmol) was dissolved in 200 ml of anhydrous pyridine, and p-toluenesulfonic acid chloride ( (5.72 g, 30 mmol) was added and stirred at room temperature overnight. After completion of the reaction, pyridine was distilled off, saturated aqueous sodium hydrogencarbonate (about 100 ml) was added, and the mixture was extracted with ethyl acetate (about 200 ml × 2). The organic layer was washed with a saturated aqueous solution of sodium hydrogencarbonate (about 100 ml) and saturated brine (about 100 ml) and then dried over anhydrous magnesium sulfate. The solvent was concentrated under reduced pressure, and the resulting residue was purified using silica gel chromatography (hexane: ethyl acetate = 2: 1) to give the desired product as a white solid (6.93 g, 22.64 mmol, 93% yield). )
[0349]
¹H-NMR (400MHz, CDCl_Three): 1.37 (3H, s), 1.63 (3H, s), 1.82 (1H, ddd, 8.0, 10 and 13Hz), 2.11 (1H, ddd, 3.0, 6.5 and 13Hz), 3.41 (1H, d, 10Hz) , 3.70 (1H, d, 10Hz), 4.04 (1H, dt, 2.2 and 8.1Hz), 4.20 (1H, ddd, 6.3, 8.0 and 10Hz), 4.49 (1H, d, 5.9Hz), 4.52 (1H, d , 12Hz), 4.60 (1H, d, 12Hz), 4.62 (1H, dd, 3.7 and 5.9Hz), 5.92 (1H, d, 3.7Hz), 7.2-7.4 (5H, m) .FABMS (mNBA): 307 [M + H]⁺.
(Reference Example 15)
2,3-diacetoxy-6a-benzyloxymethyl-hexahydro-furo [ 3,2-d ] Franc
6a-Benzyloxymethyl-2,2-dimethyl-hexahydro-furo [2 ′, 3 ′: 4,5] furo [2,3-d] -1,3-dioxole obtained in Reference Example 14 (6. 8 g, 22.22 mmol), and a colorless oily target product (7.03 g, 20.1 mmol, yield 90%) (α: β = about 3: 4) was obtained in the same manner as in Reference Example 5. .
[0350]
¹H-NMR (400MHz, CDCl_Three): (Α-form) 2.03 (1H, dt, 9.0 and 13Hz), 2.12 (1H, m), 2.12 (3H, s), 2.15 (3H, s), 3.50 (1H, d, 10Hz), 3.67 (1H , d, 10Hz), 4.01 (1H, dt, 3.2 and 8.3Hz), 4.25 (1H, ddd, 6.4, 8.4 and 9.6Hz), 4.51 (1H, d, 5.3Hz), 4.52 (1H, d, 12Hz) , 4.62 (1H, d, 12Hz), 5.12 (1H, t, 5.3Hz), 6.46 (1H, d, 5.3Hz), 7.2-7.4 (5H, m). (Β form) 2.01 (3H, s), 2.06 (1H, ddd, 8.0, 10and 13Hz), 2.13 (1H, dq, 2.8 and 13Hz), 2.14 (3H, s), 3.61 (1H, d, 10Hz), 3.65 (1H, d, 10Hz), 3.92 ( 1H, ddd, 5.9, 8.5 and 10Hz), 4.01 (1H, dt, 2.7 and 8.5Hz), 4.58 (1H, d, 12Hz), 4.60 (1H, d, 5.7Hz), 4.62 (1H, d, 12Hz) , 5.17 (1H, dd, 3.2 and 5.7Hz), 6.24 (1H, d, 3.2Hz), 7.2-7.4 (5H, m). FABMS (mNBA): 349 [MH]⁺.
(Reference Example 16)
2,3-diacetoxy-6a-acetoxymethyl-hexahydro-furo [ 3,2-d ] Franc
The compound obtained in Reference Example 15 (6.93 g, 19.8 mmol) was dissolved in 100 ml of ethyl acetate, palladium-activated carbon (150 mg) was added, and the mixture was stirred at room temperature for 1 hour under normal pressure hydrogen. After completion of the reaction, palladium-activated carbon was filtered and the solvent was distilled off. The residue was dissolved in 80 ml of anhydrous pyridine, 10 ml of acetic anhydride was added, and the mixture was stirred at room temperature for 30 minutes. After completion of the reaction, the solvent was distilled off, saturated aqueous sodium hydrogencarbonate (about 100 ml) was added, and the mixture was extracted with ethyl acetate (about 100 ml). The organic layer was washed with a saturated aqueous solution of sodium hydrogencarbonate (about 100 ml) and saturated brine (about 100 ml) and then dried over anhydrous magnesium sulfate. The solvent was concentrated under reduced pressure, and the resulting residue was purified using silica gel chromatography (hexane: ethyl acetate = 1.5: 1) to give the desired product (α: β = about 1: 1) as a white solid ( 4.13 g, 13.67 mmol, 69% yield).
[0351]
¹H-NMR (400MHz, CDCl_Three): α-form) 2.08 (1H, m), 2.11 (3H, s), 2.13 (3H, s), 2.16 (3H, s), 2.21 (1H, dq, 2.9 and 13Hz), 4.05 (1H, dt, 2.9 and 8.0Hz), 4.10 (1H, d, 12Hz), 4.29 (1H, ddd, 6.6, 8.0 and 10Hz), 4.36 (1H, d, 12Hz), 4.49 (1H, d, 5.1Hz), 5.09 (1H , t, 5.1Hz), 6.45 (1H, d, 5.1Hz). (Beta) 2.01 (1H, ddd, 8.0, 10 and 13Hz), 2.10 (3H, s), 2.12 (3H, s), 2.15 ( 3H, s), 2.19 (1H, ddd, 2.2, 5.9 and 13Hz), 3.90 (1H, ddd, 5.9, 8.8 and 10Hz), 4.04 (1H, dt, 2.2 and 8.0), 4.25 (1H, d, 12Hz) , 4.35 (1H, d, 12Hz), 4.60 (1H, d, 5.8Hz), 5.15 (1H, dd, 2.9 and 5.8Hz), 6.27 (1H, d, 2.9Hz).
FABMS (mNBA): 303 [M + H]⁺
(Reference Example 17)
3- [6- Benzyloxy -5- (tert- Butyl diphenylsilanyloxymethyl ) -2,2- Dimethyltetrahydro - Flow [2,3-d] [1,3] Dioxol -Five- Il ]- Acrylic acid ethyl ester
Under a nitrogen stream, ethyl diethylphosphonoacetate (11.5 ml, 57.4 mmol) was dissolved in 200 ml of anhydrous tetrahydrofuran, and sodium hydride (60% mineral oil suspension) (2.3 g, 57.4 mmol) was added thereto. After stirring at room temperature for 10 minutes, 3-O-p-methoxybenzyl-4-formyl-5-O-benzyl-1,2-O-isopropylidene-α-D-erythropent dissolved in anhydrous tetrahydrofuran (200 ml) Furanose (26.1 g, 47.8 mmol) (which can be produced according to the method described in JP-A No. 2000-297097) was added dropwise, followed by stirring at room temperature for 30 minutes. After completion of the reaction, water (about 100 ml) is added to the reaction solution, and the mixture is extracted with ethyl acetate (about 400 ml). The organic layer is washed with saturated aqueous sodium hydrogen carbonate solution (about 200 ml) and saturated brine (about 200 ml), and then anhydrous. Dried over magnesium sulfate. The solvent was distilled off under reduced pressure, and the resulting residue was purified using silica gel chromatography (hexane: ethyl acetate = 7: 1) to give the desired product (25.4 g, 41.2 mmol, yield 86) as a colorless oil. %).
[0352]
¹H-NMR (400MHz, CDCl_Three): 1.04 (9H, s), 1.30 (3H, t, 7.3Hz), 1.45 (3H, s), 1.62 (3H, s), 3.54 (1H, d, 10Hz), 3,58 (1H, d, 10Hz), 4.2 (2H, m), 4.39 (1H, d, 6.3Hz), 4.59 (1H, d, 10Hz), 4.58 (1H, dd, 4.4 and 6.3Hz), 4.77 (1H, d, 10Hz), 5.90 (1H, d, 4.4Hz), 6.24 (1H, d, 16Hz), 7.3-7.7 (16H, m).
FABMS (mNBA): 639 [M + Na]⁺
(Reference Example 18)
3- [5- (tert- Butyl diphenylsilanyloxymethyl ) -6- Hydroxy -2,2- Dimethyltetrahydro - Flow [2,3-d] [1,3] Dioxol -Five- Il ]- Propionic acid ethyl ester
3- [6-Benzyloxy-5- (tert-butyldiphenylsilanyloxymethyl) -2,2-dimethyltetrahydro-furo [2,3-d] [1,3] dioxole- obtained in Reference Example 17 5-yl] -acrylic acid ethyl ester (18.0 g, 29.2 mmol) was dissolved in ethyl acetate (80 ml), 20% palladium hydroxide-carbon (5 g) was added, and the mixture was stirred under hydrogen (4 MPa) for 10 hours. Then, catalytic reduction was performed. The catalyst was filtered off, and the solvent of the filtrate was distilled off under reduced pressure. The resulting residue was purified by silica gel chromatography (hexane: ethyl acetate = 5: 1) to give the desired product (11.0 g, 20. 8 mmol, 71% yield).
[0353]
¹H-NMR (400MHz, CDCl_Three): 1.04 (9H, s), 1.20 (3H, t, 7.3Hz), 1.38 (3H, s), 1.61 (3H, s), 1.85 (1H, m), 2.22 (2H, m), 2.48 (1H , m), 2.68 (1H, d, 8.0Hz), 3.50 (1H, d, 10Hz), 3,58 (1H, d, 10Hz), 4.07 (2H, q, 7.3Hz), 4.39 (1H, dd, 6.3 and 8.0Hz), 4.73 (1H, dd, 4.4 and 6.3Hz), 5.90 (1H, d, 4.4Hz), 7.3-7.7 (10H, m). FABMS (mNBA): 527 [MH]⁺, 551 [M + Na]⁺
(Reference Example 19)
3- [5- (tert- Butyl diphenylsilanyloxymethyl ) -5- (3- Hydroxy - propylene ) -2,2- Dimethyltetrahydro - Flow [2,3-d] [1,3] Dioxol -6- Oar
Under nitrogen flow, 3- [5- (tert-butyldiphenylsilanyloxymethyl) -6-hydroxy-2,2-dimethyltetrahydro-furo [2,3-d] [1,3] obtained in Reference Example 18 was obtained. ] Dioxole-5-yl] -propionic acid ethyl ester (8.8 g, 16.6 mmol) was dissolved in anhydrous tetrahydrofuran (200 ml) and 80 ml (80 mmol) of tri-sec-butyl boron lithium hydride-tetrahydrofuran solution (1 M) was dissolved. In addition, the mixture was stirred at room temperature for 30 minutes. After completion of the reaction, an aqueous acetic acid solution was added until no bubbles appeared, and then ethyl acetate (about 200 ml) was added. After washing with saturated brine (about 200 ml), it was dried over anhydrous magnesium sulfate. The solvent was distilled off under reduced pressure, and the resulting residue was purified using silica gel chromatography (hexane: ethyl acetate = 2: 1) to give the desired product (7.3 g, 15.0 mmol, yield 90) as a colorless oil. %).
[0354]
¹H-NMR (400MHz, CDCl_Three): 1.05 (9H, s), 1.39 (3H, s), 1.52 (1H, m), 1.61 (3H, s), 1.70 (1H, m), 1.88 (1H, m), 1.95 (1H, m) , 2.70 (1H, d, 8.0Hz), 3.56 (1H, d, 11Hz), 3.58 (2H, m), 3.66 (1H, d, 11Hz), 4.42 (1H, dd, 6.6 and 8.0Hz), 4.77 ( 1H, dd, 4.4 and 6.6Hz), 5.93 (1H, d, 4.4Hz), 7.3-7.7 (10H, m). FABMS (mNBA): 487 [M + H]⁺, 509 [M + Na]⁺
(Reference Example 20)
3- [5- (tert- Butyl diphenylsilanyloxymethyl ) -6- Hydroxy -2,2- Dimethyltetrahydro - Flow [2,3-d] [1,3] Dioxol -Five- Il ]- propylene p- Toluenesulfonic acid ester
Under nitrogen flow, 3- [5- (tert-butyldiphenylsilanyloxymethyl) -5- (3-hydroxypropylene) -2,2-dimethyltetrahydro-furo [2,3-d] obtained in Reference Example 19 was used. ] [1,3] dioxol-6-ol (7.2 g, 14.9 mmol) was dissolved in anhydrous dichloromethane (200 ml), triethylamine (5.0 ml, 36 mmol), p-toluenesulfonyl chloride (3.43 g, 18. 0 mmol) and 4-dimethylaminopyridine (100 mg, 0.81 mmol) were added and stirred at room temperature overnight. After completion of the reaction, the reaction solution was washed with a saturated aqueous sodium hydrogen carbonate solution (about 200 ml) and saturated brine (about 200 ml), and dried over anhydrous magnesium sulfate. The solvent was distilled off under reduced pressure, and the resulting residue was purified using silica gel chromatography (hexane: ethyl acetate = 3: 1) to give the desired product (8.9 g, 13.9 mmol, yield 93) as a colorless oil. %).
[0355]
¹H-NMR (400MHz, CDCl_Three): 1.03 (9H, s), 1.37 (3H, s), 1.53 (3H, s), 1.76 (2H, m), 2.42 (3H, s), 2.58 (1H, d, 8.0Hz), 3.46 (1H , d, 11Hz), 3.53 (1H, d, 11Hz), 3.97 (2H, m), 4.33 (1H, dd, 6.4 and 8.0Hz), 4.71 (1H, dd, 4.4 and 6.4Hz), 5.87 (1H, d, 4.4Hz), 7.3-7.8 (14H, m). FABMS (mNBA): 663 [M + Na]⁺
(Reference Example 21)
tert- Butyl -(2,2- Dimethyl - Tetrahydro -1,3,4,8- Tetraoxa - Cyclopenta [ α ] Inden -7a- Ilmethoxy )- Diphenyl - Silane
3- [5- (tert-butyl-diphenyl-silanyloxymethyl) -6-hydroxy-2,2-dimethyl-tetrahydro-furo [2,3-d] [obtained in Reference Example 20 under a nitrogen stream 1,3] dioxol-5-yl] -propylene p-toluenesulfonic acid ester was dissolved in 60 ml of anhydrous tetrahydrofuran and cooled to 0 ° C. Thereto, 17 ml (17 mmol) of a lithium hexamethylene disilazane-tetrahydrofuran solution (1.0 M) was added dropwise and stirred at room temperature for 30 minutes. After completion of the reaction, a saturated aqueous sodium hydrogen carbonate solution (about 100 ml) was added, and the mixture was extracted with ethyl acetate (100 ml). After washing with saturated brine (about 100 ml) and drying over anhydrous magnesium sulfate, the solvent was distilled off under reduced pressure, and the resulting residue was purified using silica gel chromatography (hexane: ethyl acetate = 7: 1) The desired product (5.8 g, 12.4 mmol, yield 89%) was obtained as a colorless oil.
[0356]
¹H-NMR (400MHz, CDCl_Three): 1.05 (9H, s), 1.38 (1H, s), 1.42 (1H, m), 1.64 (1H, s), 1.73 (2H, m), 2.01 (1H, m), 3.57 (3H, m) , 4.12 (1H, m), 4.15 (1H, d, 5.9Hz), 4.90 (1H, dd, 4.4 and 5.9Hz), 5.87 (1H, d, 4.4Hz), 7.4-7.7 (10Hz, m). FABMS (mNBA): 467 [MH]⁺, 491 [M + Na]⁺
(Reference Example 22)
2- Acetoxy -7a- (tert- Butyl - Diphenyl - Silanyloxymethyl )- Hexahydro - Flow [3,2-b] Piran -3- Il - Acetate
Tert-Butyl- (2,2-dimethyl-tetrahydro-1,3,4,8-tetraoxa-cyclopenta [α] inden-7a-ylmethoxy) -diphenyl-silane (4.37 g, 9) obtained in Reference Example 21 .32 mmol) was dissolved in acetic acid (60 ml) and cooled to 0 ° C. Acetic anhydride (10 ml) and concentrated sulfuric acid (20 μl) were added thereto, and the mixture was stirred at room temperature for 30 minutes. After completion of the reaction, water (100 ml) was added and the mixture was further stirred for 1 hour. Ethyl acetate (about 200 ml) was added for extraction, and the organic layer was washed with saturated aqueous sodium hydrogen carbonate solution (about 200 ml × 3) and saturated brine (about 200 ml), dried over anhydrous magnesium sulfate, and then the solvent was removed under reduced pressure. Distilled off. The obtained residue was purified using silica gel chromatography (hexane: ethyl acetate = 4: 1) to obtain the desired diastereomeric mixture (4.33 g, 8.44 mmol, yield 91%) as a colorless oil. It was.
[0357]
¹H-NMR (400MHz, CDCl_Three): less polar diastereomer 1.09 (9H, s), 1.48 (1H, m), 1.57 (3H, s), 1.83 (2H, m), 1.90 (1H, m), 1.94 (3H, s), 2.16 (3H , s), 3.29 (1H, dt, 2.2 and 11Hz), 3.42 (1H, d, 11Hz), 3.57 (1H, d, 11Hz), 3.96 (1H, m), 4,34 (1H, d, 4.4Hz ), 5.43 (1H, t, 4.4Hz), 6.35 (1H, d, 4.4Hz), 7.4-7.8 (10H, m). More polar diastereomer 1.07 (9H, s), 1.45 (1H, m), 1.68 ( 1H, m), 1.82 (2H, m), 2.15 (3H, s), 2.17 (3H, s), 3.28 (1H, dt, 2.9 and 11Hz), 3.39 (1H, d, 11Hz), 3.42 (1H, d, 11Hz), 4.02 (1H, m), 4.22 (1H, d, 4.4Hz), 5.59 (1H, t, 5.1Hz), 6.41 (1H, d, 5.1Hz), 7.4-7.7 (10H, m) FABMS (mNBA): 535 [M + Na]⁺
(Test Example 1)
(Measurement of nuclease enzyme resistance)
Buffer solution 2250μl (50mM Tris (pH8.0) and 10mM MgCl) containing various oligonucleotides (80μg)₂) Was added with 0.3 μg of 3′-exonuclease (phosphodiesterase from Crotalus durissus (Boehringer Mannheim)), and the mixture was kept at 37 ° C. to carry out the reaction (enzyme concentration 0.13 μg / ml). A part of the mixture was taken after a certain period of time and heated at 90 ° C. for 2 minutes to deactivate the enzyme and stop the reaction. The remaining amount of the oligonucleotide in the mixed solution at each time was quantified by reversed-phase high-performance liquid column chromatography, and the change with time of the amount of oligonucleotide in the presence of nuclease was measured.
[0358]
Oligonucleotides used for testing
1. Oligonucleotide (1) obtained in Example 11.
2. An arrangement prepared according to JP 10-195098:
5′-ttttttttttnt-3 ′ (SEQ ID NO: 1 in the sequence listing)
And n is 3′-O, 4′-C-methyleneadenosine (hereinafter referred to as “oligonucleotide (2)”).
3. Array:
5′-ttttttttttnt-3 ′ (SEQ ID NO: 1 in the sequence listing)
An oligonucleotide in which n is riboadenosine and the 2′-hydroxyl group of n and the 5′-hydroxyl group of 3′-side thymidine of n are bound by a 2 ′, 5′-phosphodiester (Hereinafter referred to as “oligonucleotide (3)”.)
4. Array:
5′-ttttttttttnt-3 ′ (SEQ ID NO: 1 in the sequence listing)
And a natural type oligonucleotide wherein n is 2′-deoxyadenosine (hereinafter referred to as “oligonucleotide (4)”).
(result)
As shown in FIG. 1, the oligonucleotide analog of the present invention showed remarkable nuclease resistance compared to the natural type. Furthermore, it showed remarkable nuclease resistance compared to known non-natural oligonucleotide analogues.
(Test Example 2)
(Measurement of nuclease enzyme resistance)
960 μl of buffer solution containing various oligonucleotides (40 μg) (50 mM Tris (pH 8.0) and 10 mM MgCl₂) 1 μg (40 ul aqueous solution) of 3′-exonuclease (phosphodiesterase from Crotalus durissus (Boehringer Mannheim)) was added, and the mixture was kept at 37 ° C. to carry out the reaction (enzyme concentration 1 μg / ml). After a certain time, a part (200 μl) of the mixed solution was taken and heated at 90 ° C. for 2 minutes to inactivate the enzyme and stop the reaction. The remaining amount of the oligonucleotide in the mixed solution at each time was quantified by reversed-phase high-performance liquid column chromatography, and the change with time of the amount of oligonucleotide in the presence of nuclease was measured.
[0359]
Oligonucleotides used for testing
1. Oligonucleotide (1) obtained in Example 11.
2. Oligonucleotide (5) obtained in Example 39.
3. Arrangement prepared according to JP-A-10-195098:
5′-ttttttttttnt-3 ′ (SEQ ID NO: 1 in the sequence listing)
An oligonucleotide having the sequence represented by the formula (1) and n being 3′-O, 4′-C-methyleneadenosine (hereinafter referred to as “oligonucleotide (2)”).
4. Array:
5′-ttttttttttnt-3 ′ (SEQ ID NO: 1 in the sequence listing)
An oligonucleotide in which n is riboadenosine and the 2′-hydroxyl group of n and the 5′-hydroxyl group of 3′-side thymidine of n are bound by a 2 ′, 5′-phosphodiester (Hereinafter referred to as “oligonucleotide (3)”.)
5. Array:
5′-ttttttttttnt-3 ′ (SEQ ID NO: 1 in the sequence listing)
And a natural type oligonucleotide wherein n is 2′-deoxyadenosine (hereinafter referred to as “oligonucleotide (4)”).
(result)
As shown in FIG. 2, the oligonucleotide analog of the present invention showed remarkable nuclease resistance compared to the natural type. Furthermore, it showed remarkable nuclease resistance compared to known non-natural oligonucleotide analogues.
(Test Example 3) Measurement of RNase L-inducing activity
The RNase L-inducing activity of the 2-5A analog of the present invention was calculated from its degradation rate using 5S ribosomal RNA (rRNA) as a substrate. The RNase L used here was prepared according to literature (Dong, B. and Silverman, R.H. J. Biol. Chem. 1997, 272, 22236-22242). The composition of the reaction solution for RNase L activity measurement was 20 mM Tris-hydrochloric acid (pH 7.5), 10 mM magnesium acetate, 8 mM 2-mercaptoethanol, 90 mM potassium chloride, 0.1 mM ATP, 0.1 to 100 nM Example compound ( Example 19, Example 21), 20 μL containing 60 nM RNase L and 1.0 μg 5S rRNA. The enzyme reaction was started by preincubating the Example compound and RNase L at 0 ° C. for 30 minutes, and then adding 5S rRNA to the reaction solution. After performing the reaction at 30 ° C. for 30 minutes, 20 μL of a reaction stop solution (9 M urea, 3 mM EDTA, 0.02% bromophenol blue, 0.02% xylene cyanol) was mixed and subjected to polyacrylamide gel electrophoresis. Electrophoresis was performed using a 10% polyacrylamide gel containing 7M urea, 1 × TBE (89.2 mM Tris, 89 mM boric acid, 2 mM EDTA) and 1 × TBE as an electrode solution at a constant voltage of 250 V. The gel was stained with 0.5 μg / mL ethidium bromide for 15 minutes and decolorized with purified water for 30 minutes, and then irradiated with UV light at 300 nm, and the fluorescence emitted by RNA was digital camera C-1000L (Olympus Optical Co., Ltd.) Taken with Images were analyzed using the computer program NIH Image 1.61 to quantify 5S rRNA band loss. The dose of 2-5A analog required to cleave 50% rRNA is defined as EC50.
2-5A analog used in the test
1. 2-5A analog (6) obtained in Example 19
2, 2-5A analog (7) obtained in Example 21
3. Natural type 2-5A “H-K1-K1-K1” prepared according to the literature (Imai, J. and Torrence, P.F., J. Org. Chem. 1981 46, 4015-4021)
(result)
[0360]
[Table 4]

[Table 5]

[Table 6]

As shown in Tables 4, 5 and 6, the novel 2-5A analog of the present invention showed a high RNase L-inducing activity of several tens of nM or several nM level.
[0361]
The 2-5A analog according to the present invention is more than tens of times more stable against nuclease than the natural type 2-5A from the results of Test Example 2. Therefore, when these results are considered together, The 2-5A analog, which is the invention, is useful as an antiviral agent exhibiting stable and excellent RNase L-inducing activity.
[0362]
【The invention's effect】
The novel 2-5A analog and 3′-4 ′ cross-linked oligonucleotide analog of the present invention are stable and excellent antiviral drugs, antitumor drugs, antisense or antigene drugs, and detection agents (probes) for specific genes. Or it is useful as a primer for starting amplification.
[0363]
[Brief description of the drawings]
FIG. 1 shows the nuclease enzyme resistance of oligonucleotide analogues, natural oligonucleotides, known non-natural oligonucleotide analogues of the present invention.
FIG. 2 shows the nuclease enzyme resistance of the oligonucleotide analogs, natural oligonucleotides, and known non-natural oligonucleotide analogs of the present invention.
[Sequence Listing Free Text]
SEQ ID NO: 1
<223> Artificial Sequence Description: Synthetic Oligonucleotides for Testing Nuclease Resistance
<220> Array characteristics
<221> Sequence type: modified base
<222> Position that represents the feature: 11
<223> Feature Description: Adenine or Modified Adenine
[Sequence Listing]

Claims (13)

General formula (1)

[Wherein, R ¹ and R ² are the same or different and are a hydrogen atom, a protecting group for a hydroxyl group for nucleic acid synthesis, a phosphate group, a phosphate group protected with a protecting group for nucleic acid synthesis, or —P (R ³ ) R ⁴ [wherein R ³ and R ⁴ are the same or different and are a hydroxyl group, a hydroxyl group protected with a protecting group for nucleic acid synthesis, a mercapto group, a mercapto group protected with a protecting group for nucleic acid synthesis, an amino group, carbon Represents an amino group substituted with an alkoxy group having 1 to 4 carbon atoms, an alkylthio group having 1 to 4 carbon atoms, a cyanoalkoxy group having 1 to 5 carbon atoms, or an alkyl group having 1 to 4 carbon atoms] ,
A represents an ethylene group,
B represents a purine-9-yl group, a 2-oxo-1,2-dihydropyrimidin-1-yl group, or a substituted purin-9-yl group having a substituent selected from the following α group or a substituted 2-oxo- 1,2-Dihydropyrimidin-1-yl group is shown. And the salts thereof.
(Α group)
Hydroxyl group,
A hydroxyl group protected with a protecting group for nucleic acid synthesis,
An alkoxy group having 1 to 4 carbon atoms,
Mercapto group,
A mercapto group protected with a protecting group for nucleic acid synthesis,
An alkylthio group having 1 to 4 carbon atoms,
An amino group,
An amino group protected with a protecting group for nucleic acid synthesis,
An amino group substituted with an alkyl group having 1 to 4 carbon atoms,
An alkyl group having 1 to 4 carbon atoms, and
Halogen atom. R ¹ is a hydrogen atom, an aliphatic acyl group, an aromatic acyl group, a methyl group substituted with 1 to 3 aryl groups, a lower alkyl, a lower alkoxy, a halogen or a cyano group. The compound and its salt of Claim 1 which are the methyl group substituted by three aryl groups, or a silyl group. The compound according to claim 1 or a salt thereof, wherein R ¹ is a hydrogen atom, an acetyl group, a benzoyl group, a benzyl group, a p-methoxybenzyl group, a dimethoxytrityl group, a monomethoxytrityl group, or a tert-butyldiphenylsilyl group. . R ² is a hydrogen atom, an aliphatic acyl group, an aromatic acyl group, a methyl group substituted with 1 to 3 aryl groups, a lower alkyl, a lower alkoxy, a halogen or a cyano group. The phosphoric acid group protected by a methyl group, a silyl group, a phosphoramidite group, a phosphonyl group, a phosphoric acid group or a protecting group for nucleic acid synthesis substituted with three aryl groups. 2. The compound according to item 1 and a salt thereof. R ² is a hydrogen atom, acetyl group, benzoyl group, benzyl group, p-methoxybenzyl group, tert-butyldiphenylsilyl group, —P (OC ₂ H ₄ CN) (N (CH (CH ₃ ) ₂ ) ₂ ) _{, -P (OCH 3) (N} (CH (CH 3) 2) 2), a phosphonyl group, or a 2-chlorophenyl or 4-chlorophenyl phosphoric acid group, according to any one of claims 1 to 3 And their salts. B is 6-aminopurin-9-yl (ie, adenylyl), 6-aminopurin-9-yl, 6-amino-8-bromopurin-9-yl in which the amino group is protected with a protecting group for nucleic acid synthesis 6-amino-8-bromopurin-9-yl, 6-amino-8-chloropurin-9-yl, wherein the amino group is protected with a protecting group for nucleic acid synthesis, and the amino group is protected with a protecting group for nucleic acid synthesis. 6-amino-8-chloropurin-9-yl, 6-amino-8-fluoropurin-9-yl, 6-amino-8-fluoropurine-9- in which the amino group is protected with a protecting group for nucleic acid synthesis Yl, 6-amino-8-methoxypurin-9-yl, 6-amino-8-methoxypurin-9-yl, 6-amino-8-ethoxypurine-9 in which the amino group is protected with a protecting group for nucleic acid synthesis -Yl and amino groups are for nucleic acid synthesis 6-amino-8-ethoxypurin-9-yl, 6-amino-8-t-butoxypurin-9-yl protected with a protecting group, 6-amino- in which the amino group is protected with a protecting group for nucleic acid synthesis 8-t-butoxypurin-9-yl, 2,6-diaminopurin-9-yl, 2,6-diaminopurin-9-yl, amino group protected with a protecting group for nucleic acid synthesis, 2-amino-6 -Chloropurin-9-yl, 2-amino-6-chloropurin-9-yl, amino group protected with a protecting group for nucleic acid synthesis, 2-amino-6-fluoropurin-9-yl, amino group nucleic acid 2-amino-6-fluoropurin-9-yl, 2-amino-6-bromopurin-9-yl protected with a protecting group for synthesis, 2-amino- with amino group protected with a protecting group for nucleic acid synthesis 6-Bromopurin-9-yl, 2-amino- -Hydroxypurin-9-yl (ie, guaninyl), 2-amino-6-hydroxypurin-9-yl, 6-amino-2-methoxypurin-9-yl in which the amino group is protected with a protecting group for nucleic acid synthesis 6-amino-2-methoxypurin-9-yl, 6-amino-2-chloropurin-9-yl in which the amino group is protected with a protecting group for nucleic acid synthesis, and the amino group is protected with a protecting group for nucleic acid synthesis. 6-amino-2-chloropurin-9-yl, 6-amino-2-fluoropurin-9-yl, 6-amino-2-fluoropurine-9- in which the amino group is protected with a protecting group for nucleic acid synthesis Yl, 2,6-dimethoxypurin-9-yl, 2,6-dichloropurin-9-yl, 6-mercaptopurin-9-yl, 2-oxo-4-amino-1,2-dihydropyrimidine-1- Ill (ie , Cytosinyl), 2-oxo-4-amino-1,2-dihydropyrimidin-1-yl, amino group protected with a protecting group for nucleic acid synthesis, 2-oxo-4-amino-5-fluoro-1,2 -Dihydropyrimidin-1-yl, 2-oxo-4-amino-5-fluoro-1,2-dihydropyrimidin-1-yl, 4-amino-2-oxo in which the amino group is protected with a protecting group for nucleic acid synthesis -5-chloro-1,2-dihydropyrimidin-1-yl, 4-amino-2-oxo-5-chloro-1,2-dihydropyrimidin-1-yl in which the amino group is protected with a protecting group for nucleic acid synthesis 2-oxo-4-methoxy-1,2-dihydropyrimidin-1-yl, 2-oxo-4-mercapto-1,2-dihydropyrimidin-1-yl, 2-oxo-4-hydroxy-1,2 -Dihydropyrimidin-1-yl (ie Racinyl), 2-oxo-4-hydroxy-5-methylpyrimidin-1-yl (ie, thyminyl), 4-amino-5-methyl-2-oxo-1,2-dihydropyrimidin-1-yl (ie, is a 5-Mechirushitoshiniru) group or an amino group protected with a protecting group of nucleic acid synthesis of 4-amino-5-methyl-2-oxo-1,2-dihydro-pyrimidin-1-yl group, of claims 1 to 5 The compound and its salt of any one. B is 6-benzoylaminopurin-9-yl, adeninyl, 6-amino-8-bromopurin-9-yl, 6-benzoylamino-8-bromopurin-9-yl, 6-amino-8-chloropurine -9-yl, 6-benzoylamino-8-chloropurin-9-yl, 6-amino-8-fluoropurin-9-yl, 6-benzoylamino-8-fluoropurin-9-yl, 6-amino- 8-methoxypurin-9-yl, 6-benzoylamino-8-methoxypurin-9-yl, 6-amino-8-ethoxypurin-9-yl, 6-benzoylamino-8-ethoxypurin-9-yl, 6-amino-8-t-butoxypurin-9-yl, 6-benzoylamino-8-t-butoxypurin-9-yl, 2-isobutyrylamino-6-hydroxypurine- -Yl, guaninyl, 2-oxo-4-benzoylamino-1,2-dihydropyrimidin-1-yl, cytosynyl, 2-oxo-5-methyl-4-benzoylamino-1,2-dihydropyrimidin-1-yl , 5 Mechirushitoshiniru a Urashiniru or thyminyl group, and salts thereof according to any one of claims 1 to 5. Compounds selected from the following group and salts thereof: 3′-O, 4′-C-propylene guanosine, 3′-O, 4′-C-propylene adenosine, 5′-O-dimethoxytrityl-3′-O, 4'-C-propylene-6-N-benzoyladenosine, 5'-O-dimethoxytrityl-3'-O, 4'-C-propylene-2-N-isobutyrylguanosine, 3'-O, 4 ' -C-propylene-2-N-isobutyrylguanosine, 3'-O, 4'-C-propylene-6-N-benzoyladenosine, 5'-O-dimethoxytrityl-3'-O, 4'-C -Propylene-6-N-benzoyladenosine-2'-O- (2-cyanoethyl N, N-diisopropyl) phosphoramidite, 5'-O-dimethoxytrityl-3'-O, 4'-C-propylene-2 -N-isobutyrylguanosine-2'-O- (2-cyanoethyl N, N-diisopropyl) phosphoramidite, 3'-O, 4'-C -Propyleneuridine, 3'-O, 4'-C-propylene-5-methyluridine, 3'-O, 4'-C-propylenecytidine, 3'-O, 4'-C-propylene-5-methylcytidine 2 ', 5'-di-O-benzyl-3'-O, 4'-C-propyleneuridine, 5'-O-dimethoxytrityl-3'-O, 4'-C-propyleneuridine, 5'- O-dimethoxytrityl-3'-O, 4'-C-propylene-5-methyluridine, 5'-O-dimethoxytrityl-3'-O, 4'-C-propylene-4-N-benzoylcytidine, 5 '-O-dimethoxytrityl-3'-O, 4'-C-propylene-4-N-benzoyl-5-methylcytidine, 3'-O, 4'-C-propylene-4-N-benzoylcytidine, 3 '-O, 4'-C-propylene-4-N-benzoyl-5-methylcytidine, 5'-O-dimethoxytrityl-3'-O, 4'-C-propylene-uridine-2'-O- ( 2-cyanoethyl , N-diisopropyl) phosphoramidite, 5'-O-dimethoxytrityl-3'-O, 4'-C-propylene-5-methyluridine-2'-O- (2-cyanoethyl N, N-diisopropyl) phospho Loamidite, 5'-O-dimethoxytrityl-3'-O, 4'-C-propylene-4-N-benzoylcytidine-2'-O- (2-cyanoethyl N, N-diisopropyl) phosphoramidite and 5 '-O-dimethoxytrityl-3'-O, 4'-C-propylene-4-N-benzoyl-5-methylcytidine-2'-O- (2-cyanoethyl N, N-diisopropyl) phosphoramidite. The following general formula (2)

[In the formula, A represents an ethylene group,
B represents a purine-9-yl group, a 2-oxo-1,2-dihydropyrimidin-1-yl group, or a substituted purin-9-yl group having a substituent selected from the following α group or a substituted 2-oxo- 1,2-Dihydropyrimidin-1-yl group is shown. ] An oligonucleotide analog containing one or more structures represented by the formula: and a pharmacologically acceptable salt thereof. However, when two or more of the above structures are contained, B is the same or different between the structures.
(Α group)
Hydroxyl group,
A hydroxyl group protected with a protecting group for nucleic acid synthesis,
An alkoxy group having 1 to 4 carbon atoms,
Mercapto group,
A mercapto group protected with a protecting group for nucleic acid synthesis,
An alkylthio group having 1 to 4 carbon atoms,
An amino group,
An amino group protected with a protecting group for nucleic acid synthesis,
An amino group substituted with an alkyl group having 1 to 4 carbon atoms,
An alkyl group having 1 to 4 carbon atoms, and
Halogen atom. B is 6-aminopurin-9-yl (ie, adenylyl), 6-aminopurin-9-yl, 6-amino-8-bromopurin-9-yl in which the amino group is protected with a protecting group for nucleic acid synthesis 6-amino-8-bromopurin-9-yl, 6-amino-8-chloropurin-9-yl, wherein the amino group is protected with a protecting group for nucleic acid synthesis, and the amino group is protected with a protecting group for nucleic acid synthesis. 6-amino-8-chloropurin-9-yl, 6-amino-8-fluoropurin-9-yl, 6-amino-8-fluoropurine-9- in which the amino group is protected with a protecting group for nucleic acid synthesis Yl, 6-amino-8-methoxypurin-9-yl, 6-amino-8-methoxypurin-9-yl, 6-amino-8-ethoxypurine-9 in which the amino group is protected with a protecting group for nucleic acid synthesis -Yl and amino groups are for nucleic acid synthesis 6-amino-8-ethoxypurin-9-yl, 6-amino-8-t-butoxypurin-9-yl protected with a protecting group, 6-amino- in which the amino group is protected with a protecting group for nucleic acid synthesis 8-t-butoxypurin-9-yl, 2,6-diaminopurin-9-yl, 2-amino-6-chloropurin-9-yl, 2-amino in which the amino group is protected with a protecting group for nucleic acid synthesis -6-chloropurin-9-yl, 2-amino-6-fluoropurin-9-yl, 2-amino-6-fluoropurin-9-yl having an amino group protected with a protecting group for nucleic acid synthesis, 2- Amino-6-bromopurin-9-yl, 2-amino-6-bromopurin-9-yl, 2-amino-6-hydroxypurin-9-yl in which the amino group is protected with a protecting group for nucleic acid synthesis (ie , Guanylyl), amino group is a nucleic acid compound 2-amino-6-hydroxypurin-9-yl, 6-amino-2-methoxypurin-9-yl protected with a protecting group of 6-amino-2 wherein the amino group is protected with a protecting group for nucleic acid synthesis -Methoxypurin-9-yl, 6-amino-2-chloropurin-9-yl, 6-amino-2-chloropurin-9-yl, 6-amino- in which the amino group is protected with a protecting group for nucleic acid synthesis 2-fluoropurin-9-yl, 6-amino-2-fluoropurin-9-yl, 2,6-dimethoxypurin-9-yl, 2,6-dichloro in which the amino group is protected with a protecting group for nucleic acid synthesis Purin-9-yl, 6-mercaptopurin-9-yl, 2-oxo-4-amino-1,2-dihydropyrimidin-1-yl (ie, cytosynyl), the amino group is protected with a protecting group for nucleic acid synthesis 2-oxo-4-a Mino-1,2-dihydropyrimidin-1-yl, 2-oxo-4-amino-5-fluoro-1,2-dihydropyrimidin-1-yl, 2-amino group protected with a protecting group for nucleic acid synthesis Oxo-4-amino-5-fluoro-1,2-dihydropyrimidin-1-yl, 4-amino-2-oxo-5-chloro-1,2-dihydropyrimidin-1-yl, amino group is used for nucleic acid synthesis 4-amino-2-oxo-5-chloro-1,2-dihydropyrimidin-1-yl protected with a protecting group, 2-oxo-4-methoxy-1,2-dihydropyrimidin-1-yl, 2- Oxo-4-mercapto-1,2-dihydropyrimidin-1-yl, 2-oxo-4-hydroxy-1,2-dihydropyrimidin-1-yl (ie, uracinyl), 2-oxo-4-hydroxy-5 -Methylpyrimidin-1-yl ( That is, thyminyl), 4-amino-5-methyl-2-oxo-1,2-dihydropyrimidin-1-yl (ie, 5-methylcytosinyl) group or amino group is protected with a protecting group for nucleic acid synthesis. The oligonucleotide analog and the pharmacologically acceptable salt thereof according to claim 9 , which is an amino-5-methyl-2-oxo-1,2-dihydropyrimidin-1-yl group. B is 6-benzoylaminopurin-9-yl, adeninyl, 6-amino-8-bromopurin-9-yl, 6-benzoylamino-8-bromopurin-9-yl, 6-amino-8-chloropurine -9-yl, 6-benzoylamino-8-chloropurin-9-yl, 6-amino-8-fluoropurin-9-yl, 6-benzoylamino-8-fluoropurin-9-yl, 6-amino- 8-methoxypurin-9-yl, 6-benzoylamino-8-methoxypurin-9-yl, 6-amino-8-ethoxypurin-9-yl, 6-benzoylamino-8-ethoxypurin-9-yl, 6-amino-8-t-butoxypurin-9-yl, 6-benzoylamino-8-t-butoxypurin-9-yl, 2-isobutyrylamino-6-hydroxypurine- -Yl, guaninyl, 2-oxo-4-benzoylamino-1,2-dihydropyrimidin-1-yl, cytosynyl, 2-oxo-5-methyl-4-benzoylamino-1,2-dihydropyrimidin-1-yl The oligonucleotide analog and the pharmacologically acceptable salt thereof according to claim 9 or 10 , which is a 5-methylcytosinyl, uracinyl or thyminyl group. The following general formula (3)

[Wherein, m represents an integer of 1 to 3, n represents 0 or 1, Q represents an oxygen atom or a sulfur atom, and V represents a hydrogen atom or a substituent. An alkyl group having 1 to 6 carbon atoms, an aralkyl group which may have a substituent or an aryl group which may have a substituent, and E ¹ , E ² and E ³ may be the same or different; , K ¹ , K ² , K ³ or K ⁴ (K ¹ , K ² , K ³ and K ⁴ are respectively

Indicates. Here, B represents a purine-9-yl group or a substituted purin-9-yl group having a substituent selected from the following α group, and A represents an ethylene group. ). Note that E ² may be the same or different in each repetition of m. And the pharmacologically acceptable salts thereof (excluding compounds wherein E ¹ , E ² and E ³ are all K ¹ and compounds wherein all are K ² ).
(Α group)
Hydroxyl group,
A hydroxyl group protected with a protecting group for nucleic acid synthesis,
An alkoxy group having 1 to 4 carbon atoms,
Mercapto group,
A mercapto group protected with a protecting group for nucleic acid synthesis,
An alkylthio group having 1 to 4 carbon atoms,
An amino group,
An amino group protected with a protecting group for nucleic acid synthesis,
An amino group substituted with an alkyl group having 1 to 4 carbon atoms,
An alkyl group having 1 to 4 carbon atoms, and
Halogen atom. B is 6-aminopurin-9-yl (ie, adeninyl), 6-amino-8-bromopurin-9-yl, 6-amino-8-chloropurin-9-yl, 6-amino-8-fluoro. Purin-9-yl, 6-amino-8-methoxypurin-9-yl, 6-amino-8-ethoxypurin-9-yl, 6-amino-8-t-butoxypurin-9-yl, 6-amino 2-bromopurin-9-yl, 6-amino-2-chloropurin-9-yl, 6-amino-2-fluoropurin-9-yl, 6-amino-2-methoxypurin-9-yl, 6 The oligonucleotide analogue according to claim 12 , which is -amino-2-ethoxypurin-9-yl, 6-amino-2-t-butoxypurin-9-yl, 2,6-diaminopurin-9-yl group The body and its pharmacologically acceptable salt.

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