JP4222810B2

JP4222810B2 - Gastric mucosa protective agent

Info

Publication number: JP4222810B2
Application number: JP2002312828A
Authority: JP
Inventors: 久司松田; 敏生森川; 雅之吉川
Original assignee: 株式会社タカマ
Priority date: 2002-10-28
Filing date: 2002-10-28
Publication date: 2009-02-12
Anticipated expiration: 2022-10-28
Also published as: JP2004143126A

Description

【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、胃粘膜保護剤に関し、より詳細には、ユリ科（Ｌｉｌｉａｃｅａｅ）ツクバネソウ属（Ｐａｒｉｓ）植物に含有されるステロイドサポニン（ｓｔｅｒｏｉｄｓａｐｏｎｉｎ）成分を利用してなる胃粘膜保護剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
本発明者らは、天然植物に由来した有効資源の開発にとりくんでいる。今日まで種々の効能・効果を有する植物資源を開発して来ている。
【０００３】
天然植物を採用した有用製品の開発分野の１つとして、合成品に代替する生体安全性に優れ、かつ、副作用のない胃粘膜保護剤の開発がある。
消化性潰瘍治療剤は大きく大別して攻撃因子抑制剤と防御因子増強剤の２つに区分され、胃粘膜保護剤は後者の区分に属する。胃や腸といった消化器官の粘膜が損傷をきたした種々の消化性潰瘍は、粘膜の防御能力が弱くなることと胃液などの攻撃因子の分泌などが多くなり、そのバランスがくずれたことに起因することが多い。
従来の消化性潰瘍治療には、Ｈ_２受容体拮抗剤のガスターやプトロンポンプ阻害剤などの攻撃因子抑制剤が広く用いられてきた。一方、治療・改善のみならず、予防的効果も期待される防御因子増強剤としては、セトラキセートなどの胃粘膜微少循環改善剤やスクラルファートなどの潰瘍病巣部位保護剤などが用いられてきたが、その比率は前記攻撃因子抑制剤と比較して少ないものであった。加えて、近年増加の一途をたどる高齢者に対しては身体機能が低下しているために、様々な代謝や排泄が遅くなり、攻撃因子抑制剤の使用では作用が強く現れる可能性が高く、むしろ防御因子増強剤の方が適していると言える。
しかし、これまで知られている防御因子増強剤は胃潰瘍の治療に高用量（例えばスクラルファートは、１回１〜１．２ｇを１日３回：１日量として３〜３．６ｇ、セトラキセートは、１回２００ｍｇを１日３〜４回：１日量として６００〜８００ｍｇ）が必要であり、より安全で効果の高い防御因子増強剤が求められている。
【０００４】
前記した胃粘膜保護剤の開発に関連して、本発明者は、先に胃粘膜保護作用を有する多数のトリテルペンサポニン（ｔｒｉｔｅｒｐｅｎｏｉｄｓａｐｏｎｉｎ）を明らかにしている。これらの研究成果は、例えば、ＬｉｆｅＳｃｉ．，６３，ＰＬ２４５〜２５０（１９９８）；Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，３７３，６３〜７０（１９９９）；ｃｈｅｍ．ｐｈｒａｍ．Ｂｕｌｌ．，４９，８６３〜８７０（２００１）に報告されている。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
本発明者らは、天然植物を利用した胃粘膜保護剤の開発において、更に有用な利用植物を求めて鋭意、検討を進めている。
この結果、ユリ科（Ｌｉｌｉａｃｅａｅ）ツクバネソウ属（Ｐａｒｉｓ）植物であり、ヒマラヤから中国南部、台湾にかけて分布する「重楼」の根茎の抽出エキスにエタノール誘発胃粘膜損傷に対して強い抑制作用があることを見い出した。
【０００６】
そして、この抽出エキス成分について検討したところ、胃粘膜損傷の抑制に有効な成分が、前記したトリテルペンサポニンとは異質のステロイドサポニン（ｓｔｅｒｏｉｄｓａｐｏｎｉｎ）であることを見い出した。
前記した知見をベースに重楼以外のユリ科（Ｌｉｌｉａｃｅａｅ）ツクバネソウ属（ｐａｒｉｓ）植物についても検討したところ、ユリ科ツクバネソウ属植物がステロイドサポニンを豊富に含有しており、この植物が胃粘膜保護剤として有用植物であることをつきとめた。
【０００７】
本発明は、前記知見をベースにして完成されたものである。
本発明により、合成品に代替し、生体安全性に優れ、かつ経済性に優れる胃粘膜保護剤が提供される。
【０００８】
【課題を解決するための手段】
本発明を概説すれば、本発明は、ユリ科（Ｌｉｌｉａｃｅａｅ）ツクバネソウ属（Ｐａｒｉｓ）植物に含有されるステロイドサポニン成分を利用してなる胃粘膜保護剤に関するものである。
【０００９】
以下、本発明の技術的構成について詳しく説明する。
【００１０】
本発明の胃粘膜保護剤は、ユリ科（Ｌｉｌｉａｃｅａｅ）のツクバネソウ属（Ｐａｒｉｓ）植物を起源とするものである。
ユリ科ツクバネソウ属植物である蚤休、重楼、王孫などは、中国伝総医学では天然薬物として位置付けられている。例えば、蚤休の薬効としては、解毒、鎮咳、強壮、強精などが伝承されており、また、癰腫、疔瘡、瘰癧、慢性器管炎、小児のひきつけの治療、疲労回復を目的に内服されたり、神経症皮膚炎、痔、ヘビの咬傷の治療に外用されたりしている。重楼の薬効は、膏薬にして腫瘍中毒に外用されている。また、王孫の薬効は、鎮痛、強壮、消腫などの薬効が伝承されており、衰弱疲労に内服されている。
しかしながら、これらの伝承薬効を科学的に証明するような医薬学的評価はほとんど行われておらず、ましてやユリ科ツクバネソウ属植物に胃粘膜保護に関する作用が認められたという報告はない。
【００１１】
本発明の胃粘膜保護剤に利用することができる植物は、ユリ科（Ｌｉｌｉａｃｅａｅ）ツクバネソウ属（Ｐａｒｉｓ）に属するものであれば特に限定されるものではない。例えば、蚤休（Ｐａｒｉｓｐｏｌｙｐｈｙｌｌａ）、重楼（Ｐａｒｉｓｐｅｔｉｏｌａｔａ）、王孫（Ｐａｒｉｓｔｅｔｒａｐｈｙｌｌａ）等を挙げることができる。
【００１２】
以下、本発明に利用することができる具体的な植物について、植物名、学名、産地（中国における省など）、を示す。
蚤休：七葉一枝花（学名：ＰａｒｉｓｐｏｌｙｐｈｙｌｌａＳＭＩＴＨｖａｒ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓＦＲＡＮＣＨ．、産地：江蘇、浙江、福建江西、安徴、湖北、四川、貴州、雲南、広東、広西など）、闊弁蚤休（ＰａｒｉｓｐｏｌｙｐｈｙｌｌａＳＭＩＴＨｖａｒ．ｐｌａｔｙｐｅｔａｌａＦＲＡＮＣＨ．、四川、雲南）、毛脈蚤休（ＰａｒｉｓｐｏｌｙｐｈｙｌｌａＳＭＩＴＨｖａｒ．ｐｕｂｅｓｓｅｎｓＨＡＮＤＭＡＺＺ．、四川、雲南）、狭葉蚤休（ＰａｒｉｓｐｏｌｙｐｈｙｌｌａＳＭＩＴＨｖａｒ．ｓｔｅｎｏｐｈｙｌｌａＦＲＡＮＣＨ．、四川、雲南）、金線重楼（ＰａｒｉｓｐｏｌｙｐｈｙｌｌａＳＭＩＴＨ、貴州、雲南、四川、チベットなど）、雲南重楼（ＰａｒｉｓｐｏｌｙｐｈｙｌｌａＳＭＩＴＨｖａｒ．ｙｕｎｎａｎｅｎｓｉｓＦＲＡＮＣＨ．、ＨＡＮＤ−ＭＡＺＺ．、雲南）、クルマバツクバネソウ（ＰａｒｉｓｑｕａｄｒｉｆｏｌｉａＬ．＝Ｐａｒｉｓｖｅｒｔｉｃｉｌｌａｔａ．、山西など、日本、朝鮮、サハリン、シベリア）、重楼：具柄王孫（ｐａｒｉｓｐｅｔｉｏｌａｔａＢＡＫｅｘＦＯＲＢ．、四川、広西など）、王孫：ツクバネソウ（ＰａｒｉｓｔｅｔｒｐｈｙｌｌａＡ．ＧＲＡＹ．、江蘇、浙江、江西、安徴、四川など、日本、朝鮮）などがある（「中薬大辞典」小学館編参照）。
【００１３】
これらの植物は、種類や産地などによって、その中に含有される成分の量や種類に若干の差異があるが、中国、朝鮮、日本、サハリン、シベリアなどの産地のほか、いずれの地域に生育しているものでも使用することができる。
前記植物の利用部位は、根茎などの地下部のみならず、葉など、ツクバネソウ属植物の全ての部位を利用することができる。
【００１４】
本発明の胃粘膜保護剤は、前記ユリ科ツクバネソウ属植物に含有されるステロイドサポニン（ｓｔｅｒｏｉｄｓａｐｏｎｉｎ）を有効成分とするものである。
前記ユリ科ツクバネソウ属植物から有効成分であるステロイドサポニンを利用する方法としては、これら植物の粉末体及び／又は抽出物を利用すればよい。例えば、抽出物を得るには、所望の抽出法を採用すればよい。後述するように、抽出操作により各種のステロイドサポニンが得られる。
一般的な抽出法としては、刻加工あるいは粉末化した植物を水あるいは低級アルコール（例えばメタノール、エタノール、ブタノール、イソプルパノールなど）あるいはそれらの混合溶媒にて、通常植物の約１０倍量以上の溶媒量にて、（１）室温下、冷浸抽出であれば一昼夜、（２）沸騰水浴下熱時抽出であれば２〜３時間、の抽出時間にて抽出すればよい。そして、抽出物を得るには、抽出液をろ別後、残渣に更に同量の溶媒を加え、同様の操作を２〜３回くり返し、抽出液をあわせて減圧下濃縮し、抽出物を得ればよい。
【００１５】
本発明において、ユリ科ツクバネソウ属植物の抽出物は、有効成分であるステロイドサポニンを含有しているものであれば有効であり、例えば重楼をメタノールで抽出したもの、更に溶媒分画して得たもの、更に精製したものなど、いずれであってもよい。
【００１６】
得られた抽出物は、濃縮して用いてもよい。濃縮は、低温減圧下で行うことが好ましい。また、この濃縮は乾固するまで行ってもよい。なお、濃縮する前にろ過し、ろ液を濃縮してもよい。
また、得られた抽出物は、精製処理に付してもよい。精製処理方法としては、クロマトグラフ法、イオン交換樹脂を使用する溶離法などを単独又は組み合せて使用する方法が挙げられる。
【００１７】
前記したクロマトグラフ法としては、順相クロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー、遠心液体クロマトグラフィー、カラムクロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィー等のいずれか又はそれらを組み合せてしようする方法が挙げられる。その際の担体、溶出溶媒などの精製条件は、各種クロマトグラフィーに対応して適宜選択することができる。例えば、順相クロマトグラフィーの場合には、クロロホルム−メタノール系の溶媒、逆相クロマトグラフィーの場合には水−メタノール系の溶媒を使用することができる。
【００１８】
また、前記したイオン交換樹脂を使用する溶離法としては、得られた抽出液を、水又は低級アルコールに希釈／溶解させ、この溶液をイオン交換樹脂に接触させて吸着させた後、低級アルコール又は水で溶離する方法が挙げられる。この際に使用される低級アルコールとしては種々のものを使用することができるがメタノールが好ましい。イオン交換樹脂としては、通常、当該分野の精製処理に使用されるものであれば特に限定されるものではなく、例えば、巨大網状構造で多孔性の架橋されたポリスチレン系樹脂、アーバンライト、セルローズ等が挙げられる。
【００１９】
ユリ科ツクバネソウ属植物の抽出物は、医薬的に受容な塩、賦形剤、保存剤、着色剤、矯味剤等とともに、医薬品又は食品の製造分野において公知の方法によって、顆粒、錠剤、カプセル剤などの種々の形態で使用することができる。
【００２０】
本発明において、ユリ科ツクバネソウ属植物の粉末及び／又は抽出物の使用量は、含有するステロイドサポニンの種類や含有量、精製の度合、水分含有量、あるいは、年齢、症状等によって異なる。例えば、予防のために用いるには、成人１回につき１０〜２００ｍｇ程度、抽出物では精製の度合いや水分含有量などに応じて１０〜２００ｍｇ程度、好ましくは１０〜５０ｍｇ程度が挙げられ、食前３０分位に１日３回服用するのが望ましい。
【００２１】
【実施例】
以下、本発明を実施例により更に詳しく説明する。
なお、本発明は実施例のものに限定されないことはいうまでもないことである。
１．重楼の抽出及び単離：
中国雲南省山の重楼（Ｐａｒｉｓｐｏｌｙｐｈｙｌｌａｖａｒ．ｙｕｎｎａｎｅｎｓｉｓ）の乾燥根茎２．５ｋｇを利用して有効成分の抽出を行った。なお、抽出・分画スキームの全体像を図１に示す。
【００２２】
以下、重楼の具体的な抽出法を説明する。
重楼（Ｐａｒｉｓｐｏｌｙｐｈｙｌｌａｖａｒ．ｙｕｎｎａｎｅｎｓｉｓ）の乾燥根茎２．５ｋｇを細断し、約１０倍量のメタノール（約２５Ｌ、ナカライテスク社製、特級）を加え、加熱還流下、３時間抽出した。抽出液をひだ折りろ紙（アドバンテック社製、Ｎｏ．２ろ紙）にてろ別した後、残査にメタノールを加え、同様の抽出操作を合計３回繰り返した。抽出液を合わせ、ロータリーエバポレーターにて減圧下、溶媒留去し、メタノール抽出エキス３１１ｇ（１２．４％生薬からの収率）を得た。
【００２３】
得られたメタノール抽出エキスをダイアイオンＨＰ−２０カラム（日本練水社製、移動相：水→メタノール）に付し、水溶出部２２０ｇ（８．８％）およびメタノール溶出部９１ｇ（３．６％）を得た。
前記メタノール溶出部８０ｇを順相シリカゲルカラムクロマトグラフィー［（ＳｉＯ_２ＢＷ−２００、富士シリシア社製、移動相：クロロホルム（ナカライテスク社製、特級）−メタノール（１０：１）→クロロホルム−メタノール−水（１０：３：０．５→７：３：０．５）→メタノール］にてＦｒ．１(７．７ｇ)、Ｆｒ．２（１．５ｇ）、Ｆｒ．３（１５．２ｇ）、Ｆｒ．４（４９．６ｇ）、Ｆｒ．５（３．５ｇ）を得た。
【００２４】
前記Ｆｒ．３を逆相シリカゲルカラムクロマトグラフィー［ＯＤＳクロマトレックス、富士シリシア社製、移動相：メタノール−水］および高速液体クロマトグラフィー［ＨＰＬＣ、探知器：ＲＩＤ−６Ａ、島津製作所社製；ポンプ：ＬＣ−１０ＡＳ、島津製作所社製；カラム：ＹＭＣ−ＰａｃｋＯＤＳ−ＡＬ２５０×２０ｍｍｉ．ｄ．，ＹＭＣ社製、移動相：アセトニトリル（東京化成社製、ＨＰＬＣ大量分取用）−水］または順相シリカゲルカラムクロマトグラフィー［ＳｉＯ_２ＢＷ−２００，移動相：クロロホルム−メタノール−水（１０：３：１、下層）→メタノール］にて分離・精製し、
１．ｐｅｎｎｏｇｅｎｉｎ３−Ｏ−α−Ｌ−ｒｈａｍｎｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ−（１→２）−〔α−Ｌ−ａｒａｂｉｎｏｆｕｒａｎｏｓｙｌ−（１→４）〕−β−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ（１，０．０１４％），
２．ｐｅｎｎｏｇｅｎｉｎ３−Ｏ−α−Ｌ−ｒｈａｍｎｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ−（１→４）−α−Ｌ−ｒｈａｍｎｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ（１→４）−〔α−Ｌ−ｒｈａｍｎｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ−（１→２）〕−β−ｇｒｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ（２，０．０１９％），
３．ｄｉｏｓｇｅｎｉｎ３−Ｏ−α−Ｌ−ｒｈａｍｎｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ−（１→２）−〔α−Ｌ−ａｒａｉｎｏｆｕｒａｎｏｓｙｌ−（１→４）］−β−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ（３，０．１０％）〕，
４．ｄｉｏｓｇｅｎｉｎ３−Ｏ−α−Ｌ−ｒｈａｍｎｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ−（１→４）−α−Ｌ−ｒｈａｍｎｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ−（１→４）−〔α−Ｌ−ｒｈａｍｎｏｐｙｒａｎｏｙｌ−（１−２）〕−β−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ（４，０．１０％），
５．ｐａｒｉｓａｐｏｎｉｎ（５，０．０１３％），
６．ｔｒｉｇｏｆｏｅｎｏｓｉｄｅＡ（６，０．０１４％），
９．ｅｄｙｓｔｅｒｏｎｅ（９，０．１８％），
を得た。
【００２５】
前記Ｆｒ．４を逆相シリカゲルカラムクロマトグラフィー〔ＯＤＳクロマトレックス、富士シリシア社製、移動相：メタノール−水〕および高速液体クロマトグラフィー〔ＨＰＬＣ，検知器：ＲＩＤ−６Ａ；ポンプ：ＬＣ−１０ＡＳ；カラム：ＤｅｖｅｌｏｓｉｌＣ３０ＵＧ−５２５０×２０ｍｍｉ．ｄ．（野村化学社製）、移動相：アセトニトリル−水〕または順相シリカゲルカラムクロマトグラフィー〔ＳｉＯ_２ＢＷ−２００，移動相：クロロホルム−メタノール水（１５：３：１、下層）→メタノール〕にて分離・精製し、ｄｉｏｓｇｅｎｉｎ３−Ｏ−α−Ｌ−ｒｈａｍｎｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ−（１→２）−〔α−Ｌ−ａｒａｂｉｎｏｆｕｒａｎｏｓｙｌ−（１→４）〕−β−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ（３，０．０１８％），ｄｉｏｓｇｅｎｉｎ３−Ｏ−α−Ｌ−ｒｈａｍｎｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ−（１→４）−α−Ｌ−ｒｈａｍｎｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ−（１→４）−〔α−Ｌ−ｒｈａｍｎｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ−（１→２）〕−β−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｉｓｉｄｅ（４，０．０１２％），ｐｒｏｔｏｇｒａｃｉｌｌｉｎ（７，０．１１％），ｄｉｃｈｏｔｏｍｉｎ（８，０．１６％）を得た。
【００２６】
前記抽出・分画スキームにより得られた各種のステロイドサポニン化合物（１〜９）の化学構造式は、下記の〔化１〕〜〔化９〕で示されるものである。なお、下記の化１〜化９は、前記化合物１〜９に対応するものである。
【００２７】
【化１】

【００２８】
【化２】

【００２９】
【化３】

【００３０】
【化４】

【００３１】
【化５】

【００３２】
【化６】

【００３３】
【化７】

【００３４】
【化８】

【００３５】
【化９】

【００３６】
前記化合物１〜８のステロイドサポニンにおいて、化合物１〜４はフロスタン型ステロイドサポニン、化合物５〜８はスピロスタン型ステロイドサポニン、といわれるものである。なお、化合物９はステロールといわれるものである。
なお、前記化５で示される化合物５〔ｐａｒｉｓａｐｏｎｉｎ〕は、本発明者らによって初めて確認された新しいステロイドサポニン化合物であり、別途に物質特許として特許出願がなされている。前記新規化合物である化合物５は、ツクバネソウ属（ｐａｒｉｓ）植物から見い出されたステロイドサポニン（ｓｔｅｒｏｉｄｓａｐｏｎｉｎ）ということで、ここではパリサポニン（ｐａｒｉｓａｐｏｎｉｎ）と命名（略称）されている。
【００３７】
２．胃粘膜保護作用の検証：
前記抽出・分画スキーム（図１参照）により得られた各種のステロイドサポニンの胃粘膜保護作用について検証した。
胃粘膜保護作用の有無について、次の二つのモデルをラットに適用して行った。
(1).エタノール誘発胃粘膜損傷モデル
２４〜２６時間絶食させたＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ系雄性ラット（体重約２５０ｇ）に被験物質を経口投与し、１時間後に９９．５％エタノール（１．５ｍｌ／匹）を経口投与した。１時間後にエーテル麻酔下、頚椎脱臼により安楽死させ、直ちに胃を摘出した。１．５％ホルマリン１０ｍｌを胃内に注入し固定した後、大彎に沿って切り開き、損傷の長さ（ｍｍ）を測定し、損傷係数とした（参考文献ＭａｔｓｕｄａＨ．ｅｔ．ａｌ．，ＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ，６３、ＰＬ２４５−２５０(１９９８)）。
(2).インドメタシン誘発胃粘膜損傷モデル
２４〜２６時間絶食させたＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ系雄性ラット (体重約２５０ｇ）に被験物質を経口投与し、１時間後にインドメタシンを２０ｍｇ／ｋｇの用量で経口投与した。４時間後にエーテル麻酔下、頚椎脱臼により安楽死させ、直ちに胃を摘出した。１．５％ホルマリン１０ｍｌを胃内に注入し固定した後、大彎に沿って切り開き、損傷の長さ（ｍｍ）を測定し、損傷係数とした。
【００３８】
２−(1)．ＭｅｏＨ抽出液（ＭｅＯＨｅｘｔｒａｃｔ）、ＭｅＯＨ溶出部、Ｈ_２Ｏ溶出部のエタノール誘発胃粘膜損傷抑制効果：
ＭｅＯＨ抽出液（ＭｅＯＨ−ｅｘｔｒａｃｔ）、及び、これを水→メタノールでカラム分離して得たＭｅＯＨ溶出部（ＭｅＯＨ−ｅｌｕｔｅｄｆｒａｃｔｉｏｎ）とＨ_２Ｏ溶出部（Ｈ_２Ｏ−ｅｌｕｔｅｄｆｒａｃｔｉｏｎ)について、エタノール誘発胃粘膜損傷の抑制効果について調べた。結果を下記の表１に示す。
なお、表１及び他の表において、数値はｔｈｅｍｅａｎ（平均値）±Ｓ．Ｅ．Ｍ（標準誤差）で示され、（＊）印は０．０５％、（＊＊）印は０．０１％、で有意差があることを意味している。
【００３９】
【表１】

【００４０】
表１より、胃損傷抑制効果は、ＭｅＯＨ溶出部、ＭｅＯＨ抽出液、Ｈ_２Ｏ溶出部の順で低下していることがわかる。
なお、表１において、Ｏｍｅｐｒａｚｏｌｅは、市販合成品（例えば、吉富製薬社製またはアストラ・ジャパン社製のオメパラゾール錠）の健胃剤（プロトン・ポンプ阻害剤）を意味する。
【００４１】
２−(2).化合物１〜４及びディオスゲニンのエタノール誘発胃粘膜損傷抑制効果：
次に、前記化合物１〜４及びディオスゲニン（ｄｉｏｓｇｅｎｉｎ）（前記化合物３の非糖部をなす化合物）のエタノール誘発胃粘膜損傷の抑制効果について調べた。結果を下記の表２に示す。
【００４２】
【表２】

【００４３】
表２より、胃損傷抑制効果は、化合物１〜２は化合物３〜４に比較して顕著であることがわかる。また、ディオスゲニンの活性は低いことがわかる。
これら化合物の前記した化学構造式からみて、化合物１〜２は化合物３〜４と比較して、１７位に水酸基を有することに特徴がある。
また、ディオスゲニンは、３位に糖部をもたない非糖部をなす化合物である。
このことからみて、ステロイドサポニンの胃損傷抑制効果において、３位糖鎖構造が活性発現に必須であり、１７位水酸基は強い活性発現に重要であることがわかる。
【００４４】
２−(3).化合物１〜４及びディオスゲニンのインドメタシン誘発胃粘膜損傷抑制効果：
次に、前記化合物１〜４及びディオスゲニン（ｄｉｏｓｇｅｎｉｎ）のインドメタシン誘発胃粘膜損傷の抑制効果について調べた。結果を下記の表３に示す。
【００４５】
【表３】

【００４６】
表３から、化合物１〜４は、低い投与用量のインドメタシン誘発胃粘膜損傷抑制効果において、前記エタノール誘発胃粘膜損傷抑制効果とほぼ同じ傾向を示していること、高い投与用量の場合には化合物３〜４が化合物１〜２より良い結果を示していることが判る。
【００４７】
２−(4).化合物５〜７のメタノール誘発胃粘膜損傷抑制効果：
次に、前記抽出・分画スキーム（図１参照）で抽出、単離された化合物５〜７のメタノール誘発胃粘膜損傷抑制効果について調べた。結果を下記の表４に示す。
【００４８】
【表４】

【００４９】
表４から化合物５〜７においても、低い投与用量（２．５〜５．０ｍｇ）で１０〜２０％の抑制率を示していることがわかり、これら化合物は胃粘膜保護剤として有用なものである。
【００５０】
２−(5).化合物５〜６のインドメタシン誘発胃粘膜損傷抑制効果：
次に、化合物５〜６のインドメタシン誘発胃粘膜損傷抑制効果について調べた。結果を下記の表５に示す
【００５１】
【表５】

【００５２】
表５から、化合物５〜６においても、低い投与用量において１０〜２０％の抑制率を示していることがわかり、これら化合物は胃粘膜保護剤として有用なものである。
【００５３】
２−(6).急性毒性試験
体重約２０〜２５ｇのｄｄＹ系マウスを雌、雄とも各一群１０匹とし、本発明の胃粘膜保護剤を５００ｍｇ／ｋｇを経口投与し、エサ、水を自由に与え、２ｗｅｅｋｓ、生死を観察した。その結果、死亡例や行動の異常なものは全く観察されず、本発明の胃粘膜保護剤が安全であることがわかった。
【００５４】
【発明の効果】
本発明により、従来のオメパラゾール（ｏｍｅｐａｒａｚｏｌｅ）等の合成医薬品系の胃粘膜保護剤に代る天然植物系の生体安全性と経済性に優れる胃粘膜保護剤が提供される。
即ち、本発明により、ユリ科（Ｌｉｌｉａｃｅａｅ）ツクバネソウ属（Ｐａｒｉｓ）植物に含有されるステロイドサポニン成分を有効成分とする生体安全性と経済性に優れる天然植物系の胃粘膜保護剤が提供される。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明の胃粘膜保護剤の主成分であるステロイドサポニンを重楼から得るための抽出・分画スキームを示す図である。[0001]
BACKGROUND OF THE INVENTION
The present invention relates to a gastric mucosal protective agent, and more particularly, to a gastric mucosal protective agent using a steroid saponin component contained in a Lilyaceae plant.
[0002]
[Prior art]
The present inventors are working on the development of effective resources derived from natural plants. To date, plant resources having various effects and effects have been developed.
[0003]
One field of development of useful products employing natural plants is the development of a protective agent for gastric mucosa that is superior in biological safety and has no side effects, replacing synthetic products.
The therapeutic agents for peptic ulcer are roughly classified into two types, an attack factor inhibitor and a protective factor enhancer, and the gastric mucosa protective agent belongs to the latter category. Various peptic ulcers in which the mucous membranes of the digestive organs such as the stomach and intestine have been damaged are caused by the loss of the mucosal defense ability and the secretion of attack factors such as gastric juice, which are out of balance. There are many cases.
Conventional antiulcer offensive factor inhibitors such as Gaster and Putoronponpu inhibitors of H ₂ receptor antagonists have been used widely. On the other hand, gastric mucosa microcirculation improving agents such as cetraxate and ulcer lesion site protecting agents such as sucralfate have been used as protective factor enhancers that are expected not only for treatment / improvement but also preventive effects. The ratio was small compared to the attack factor inhibitor. In addition, for elderly people who have continued to increase in recent years, since the body function has declined, various metabolisms and excretion are slow, and the use of an attack factor inhibitor is highly likely to appear, Rather, it can be said that a protective factor enhancer is more suitable.
However, known defense factor enhancers are high doses for the treatment of gastric ulcers (for example, sucralfate is 3 to 3.6 g as a daily dose of 1 to 1.2 g, 3 times a day, and cetraxate is 200 mg once to 3 to 4 times a day: 600 to 800 mg as a daily dose) is necessary, and safer and more effective defense factor enhancers are being sought.
[0004]
In connection with the development of the aforementioned gastric mucosa protective agent, the present inventors have previously revealed a large number of triterpenoid saponins having a gastric mucosa protective action. These research results are described in, for example, Life Sci. 63, PL 245-250 (1998); Eur. J. et al. Pharmacol. , 373, 63-70 (1999); chem. phram. Bull. 49, 863-870 (2001).
[0005]
[Problems to be solved by the invention]
In the development of a gastric mucosal protective agent using natural plants, the present inventors have been diligently studying for more useful plants.
As a result, it is a plant belonging to the genus Liliaceae (Paris), and the extract of rhizomes of “heirou” distributed from the Himalayas to southern China and Taiwan has a strong inhibitory effect on ethanol-induced gastric mucosal damage. I found out.
[0006]
And when this extract extract component was examined, it discovered that the effective component for suppression of gastric mucosa damage was a steroid saponin different from the above-mentioned triterpene saponin.
Based on the above findings, Lilyaceae plants other than Shigero were also examined. As a result, the plants of the genus Liliumaceae contained abundant steroid saponins. As a useful plant.
[0007]
The present invention has been completed based on the above findings.
According to the present invention, a gastric mucosal protective agent that provides an alternative to a synthetic product and is excellent in biological safety and economy is provided.
[0008]
[Means for Solving the Problems]
Briefly, the present invention relates to a gastric mucosal protective agent using a steroid saponin component contained in a plant of the genus Liliaceae (Paris).
[0009]
The technical configuration of the present invention will be described in detail below.
[0010]
The gastric mucosal protective agent of the present invention originates from a plant of the genus Parlias of the Lilyaceae family.
Lily family plants such as Bakki, Shigero, and Wang Sun, are regarded as natural drugs in Chinese Denso Medicine. For example, the medicinal effects of fallow have been passed down to detoxification, antitussive, tonic, strong, etc. Also, for the purpose of treating ulcers, pressure ulcers, hemorrhoids, chronic organitis, pediatric attraction, and recovery from fatigue It has been taken or applied externally to treat neurotic dermatitis, wrinkles, and snake bites. Shigerou's medicinal properties are applied to tumor poisoning as a plaster. In addition, the medicinal effects of the grandchildren, such as analgesic, tonic, and antitumor, have been handed down, and are used for debilitating fatigue.
However, there has been almost no pharmacological evaluation that scientifically proves these traditional medicinal effects, and there is no report that any action related to protecting the gastric mucosa has been observed in the liliaceae plants.
[0011]
The plant that can be used for the gastric mucosa protective agent of the present invention is not particularly limited as long as it belongs to the genus Liliaceae. For example, a paris polyphylla, a paris petiola, a grandchild (Paris tetraphylla), etc. can be mentioned.
[0012]
Hereinafter, plant names, scientific names, and production areas (such as provinces in China) are shown for specific plants that can be used in the present invention.
Nakkyu: Nanae Ichiehana (scientific name: Paris polyphylla SMITHvar. Chinensis FRANCH., Production area: Jiangsu, Zhejiang, Fujian Jiangxi, Anhui, Hubei, Sichuan, Guizhou, Yunnan, Guangdong, Guangxi, etc.) polyphylla SMITH var. , Gold line heavy tower (Paris polyphylla SMITH, Guizhou, Yunnan, Sichuan, Tibet, etc.), Yunnan heavy tower (Paris polyphylla SMITH va) Yunnanensis FRANCH., HAND-MAZZ., Yunnan), Paris quadrifolia L. = Paris verticillata., Sansai, etc., Japan, Korea, Sakhalin, Siberia, Heavy tower: B , Sichuan, Guangxi, etc.), and grandchildren: Pars tetrphylla A.GRAY., Jiangsu, Zhejiang, Jiangxi, Anhui, Sichuan, Japan, Korea), etc. (see “Chugakudai Dictionary” Shogakukan).
[0013]
These plants vary slightly in the amount and type of components contained in them depending on the type and production area, but they grow in any production area such as China, Korea, Japan, Sakhalin, and Siberia. You can also use what you have.
The use part of the said plant can utilize not only underground parts, such as a rhizome, but all the parts of the plants of the genus Euphorbia such as leaves.
[0014]
The gastric mucosa protective agent of the present invention comprises a steroid saponin contained in the Liliaceae plant as an active ingredient.
As a method of using a steroid saponin, which is an active ingredient, from the lilyaceae plant, a powder and / or an extract of these plants may be used. For example, a desired extraction method may be employed to obtain the extract. As will be described later, various steroid saponins are obtained by the extraction operation.
As a general extraction method, a chopped or pulverized plant is mixed with water, a lower alcohol (eg, methanol, ethanol, butanol, isopropanol, etc.) or a mixed solvent thereof, and the solvent amount is about 10 times or more that of a normal plant. In (1) at room temperature, if it is cold-dipped extraction, it will be extracted for a whole day and night. (2) If it is extracted in hot water bath, it will be extracted in 2-3 hours. In order to obtain an extract, after filtering the extract, the same amount of solvent is added to the residue, the same operation is repeated 2-3 times, and the extracts are combined and concentrated under reduced pressure to obtain an extract. Just do it.
[0015]
In the present invention, the extract of the plant belonging to the genus Lilyaceae is effective as long as it contains a steroid saponin which is an active ingredient. For example, it can be obtained by extracting a heavy tower with methanol, and further subjecting it to solvent fractionation. It may be any one of a purified product and a further purified product.
[0016]
The obtained extract may be used after being concentrated. Concentration is preferably performed under low temperature and reduced pressure. Further, this concentration may be performed until it is solidified. In addition, you may filter before concentrating and may concentrate a filtrate.
The obtained extract may be subjected to a purification treatment. Examples of the purification treatment method include a method using a chromatographic method, an elution method using an ion exchange resin, or the like alone or in combination.
[0017]
Examples of the chromatographic method described above include normal phase chromatography, reverse phase chromatography, high performance liquid chromatography, centrifugal liquid chromatography, column chromatography, thin layer chromatography and the like, or a method using a combination thereof. It is done. The purification conditions such as the carrier and the elution solvent can be appropriately selected according to various chromatographies. For example, in the case of normal phase chromatography, a chloroform-methanol solvent can be used, and in the case of reverse phase chromatography, a water-methanol solvent can be used.
[0018]
As an elution method using the above-described ion exchange resin, the obtained extract is diluted / dissolved in water or a lower alcohol, and this solution is brought into contact with the ion exchange resin to be adsorbed. The method of eluting with water is mentioned. As the lower alcohol used in this case, various alcohols can be used, but methanol is preferable. The ion exchange resin is not particularly limited as long as it is usually used for purification treatment in the field. For example, a porous crosslinked polystyrene-based resin having a large network structure, urbanite, cellulose, etc. Is mentioned.
[0019]
Lilyaceae plant extracts, together with pharmaceutically acceptable salts, excipients, preservatives, colorants, flavoring agents, etc., are prepared in the form of granules, tablets, capsules by methods known in the field of pharmaceutical or food production. It can be used in various forms.
[0020]
In the present invention, the amount of the powder and / or extract of the Lilyaceae plant varies depending on the type and content of the steroid saponin contained, the degree of purification, the water content, age, symptoms and the like. For example, about 10 to 200 mg per adult is used for prevention, and about 10 to 200 mg, preferably about 10 to 50 mg depending on the degree of purification, water content, etc. for the extract. It is desirable to take the quantile three times a day.
[0021]
【Example】
Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to examples.
Needless to say, the present invention is not limited to the examples.
1. Heavy tower extraction and isolation:
Extraction of active ingredients was performed using 2.5 kg of dried rhizomes from a heavy tower (Paris polyphylla var. Yunnanensis) in Yunnan Province, China. An overall image of the extraction / fractionation scheme is shown in FIG.
[0022]
Hereinafter, a specific method for extracting the heavy tower will be described.
The dried rhizome (2.5 kg) of Shirow (Paris polyphylla var. Yunnanensis) was shredded, about 10 times the amount of methanol (about 25 L, manufactured by Nacalai Tesque, special grade) was added, and the mixture was extracted with heating under reflux for 3 hours. The extract was filtered with fold-fold filter paper (Advantech, No. 2 filter paper), methanol was added to the residue, and the same extraction operation was repeated a total of 3 times. The extracts were combined, and the solvent was distilled off under reduced pressure using a rotary evaporator to obtain 311 g of methanol extract (yield from 12.4% crude drug).
[0023]
The obtained methanol extract was applied to a Diaion HP-20 column (manufactured by Nippon Nurimizu Co., Ltd., mobile phase: water → methanol), and the water elution part 220 g (8.8%) and the methanol elution part 91 g (3.6). %).
80 g of the methanol elution part was subjected to normal phase silica gel column chromatography [(SiO ₂ BW-200, manufactured by Fuji Silysia Ltd., mobile phase: chloroform (manufactured by Nacalai Tesque, special grade) -methanol (10: 1) → chloroform-methanol-water. (10: 3: 0.5 → 7: 3: 0.5) → methanol], Fr.1 (7.7 g), Fr.2 (1.5 g), Fr.3 (15.2 g), Fr. .4 (49.6 g) and Fr.5 (3.5 g) were obtained.
[0024]
Fr. 3 was reversed phase silica gel column chromatography [ODS Chromatrex, manufactured by Fuji Silysia Co., Ltd., mobile phase: methanol-water] and high performance liquid chromatography [HPLC, detector: RID-6A, manufactured by Shimadzu Corporation; pump: LC-10AS Manufactured by Shimadzu Corporation; column: YMC-Pack ODS-AL 250 × 20 mm i. d. , Manufactured by YMC, mobile phase: acetonitrile (manufactured by Tokyo Chemical Industry Co., Ltd., HPLC preparative) -water] or normal phase silica gel column chromatography [SiO ₂ BW-200, mobile phase: chloroform-methanol-water (10: 3: 1, lower layer) → methanol]
1. pennogenin 3-O-α-L-rhamnopyranosyl- (1 → 2)-[α-L-arabinofuranosyl- (1 → 4)]-β-glucopyranoside (1, 0.014%),
2. pennogenin 3-O-α-L-rhamnopyranosyl- (1 → 4) -α-L-rhamnopyranosyl (1 → 4)-[α-L-rhamnopyranosyl- (1 → 2)]-β-grucopyran. 019%),
3. diosgenin 3-O-α-L-rhamnopyranosyl- (1 → 2)-[α-L-aranofuranosyl- (1 → 4)]-β-glucopyranoside (3,0.10%)],
4). diosgenin 3-O-α-L-rhamnopyranosyl- (1 → 4) -α-L-rhamnopyranosyl- (1 → 4)-[α-L-rhamnopyranoyl- (1-2)]-β-glucopyroxide (0) .10%),
5. parasaponin (5,0.013%),
6). trifofoenoside A (6,0.014%),
9. edisterone (9, 0.18%),
Got.
[0025]
Fr. 4 is reverse phase silica gel column chromatography [ODS Chromatolex, manufactured by Fuji Silysia, mobile phase: methanol-water] and high performance liquid chromatography [HPLC, detector: RID-6A; pump: LC-10AS; column: Develosil C30UG. −5 250 × 20 mm i. d. (Manufactured by Nomura Chemical Co., Ltd.), mobile phase: acetonitrile-water] or normal phase silica gel column chromatography [SiO ₂ BW-200, mobile phase: chloroform-methanol water (15: 3: 1, lower layer) → methanol] Purified and diosgenin 3-O-α-L-rhamnopyranosyl- (1 → 2)-[α-L-arabinofuranosyl- (1 → 4)]-β-glucopyranoside (3,0.018%), diosgenin 3- O-α-L-rhamnopyranosyl- (1 → 4) -α-L-rhamnopyranosyl- (1 → 4)-[α-L-rhamnopyranosyl- (1 → 2)]-β-glucopynoside (4, 0.012%) ), Prototypecillin ( , 0.11%), was obtained dichotomin (8,0.16%).
[0026]
The chemical structural formulas of the various steroid saponin compounds (1-9) obtained by the extraction / fractionation scheme are those represented by the following [Chemical Formula 1] to [Chemical Formula 9]. The following chemical formulas 1 to 9 correspond to the compounds 1 to 9.
[0027]
[Chemical 1]

[0028]
[Chemical formula 2]

[0029]
[Chemical 3]

[0030]
[Formula 4]

[0031]
[Chemical formula 5]

[0032]
[Chemical 6]

[0033]
[Chemical 7]

[0034]
[Chemical 8]

[0035]
[Chemical 9]

[0036]
In the steroid saponins of compounds 1 to 8, compounds 1 to 4 are referred to as furostane type steroid saponins, and compounds 5 to 8 are referred to as spirostan type steroid saponins. Compound 9 is a so-called sterol.
The compound 5 (parasaponin) represented by the above chemical formula 5 is a new steroid saponin compound first confirmed by the present inventors, and a patent application has been filed separately as a substance patent. Compound 5, which is the novel compound, is a steroid saponin found in a plant of the genus Parris, and is herein named (abbreviated) as parisaponin.
[0037]
2. Verification of gastric mucosa protective action:
The gastric mucosa protective action of various steroid saponins obtained by the extraction / fractionation scheme (see FIG. 1) was verified.
The following two models were applied to rats for the presence or absence of gastric mucosa protective action.
(1) Ethanol-induced gastric mucosa damage model Sprague-Dawley male rats (body weight: about 250 g) fasted for 24-26 hours were orally administered with the test substance, and 99.5% ethanol (1.5 ml / mouse) after 1 hour. ) Was administered orally. One hour later, the patient was euthanized by cervical dislocation under ether anesthesia, and the stomach was immediately removed. After 10 ml of 1.5% formalin was injected and fixed in the stomach, it was cut open along the large fistula, the length of damage (mm) was measured, and it was used as the damage factor (reference material Matsuda H. et al., Life). Sciences, 63, PL 245-250 (1998)).
(2). Indomethacin-induced gastric mucosal injury model The test substance was orally administered to Sprague-Dawley male rats (weight approximately 250 g) fasted for 24 to 26 hours, and indomethacin was orally administered at a dose of 20 mg / kg after 1 hour. . Four hours later, the patient was euthanized by cervical dislocation under ether anesthesia, and the stomach was immediately removed. After injecting and fixing 10 ml of 1.5% formalin into the stomach, it was cut open along the large fistula and the length of damage (mm) was measured to obtain the damage factor.
[0038]
2- (1). Inhibition of ethanol-induced gastric mucosal damage by MeOH extract (MeOH extract), MeOH elution part, H ₂ O elution part:
Regarding the MeOH extract (MeOH-extract), and the MeOH elution fraction (MeOH-eluted fraction) and H ₂ O elution fraction (H ₂ O-eluted fraction) obtained by column separation of this with water → methanol, the ethanol-induced stomach The inhibitory effect of mucosal damage was investigated. The results are shown in Table 1 below.
In Table 1 and other tables, the numerical values are the mean (mean value) ± S. E. M (standard error), (*) mark means 0.05%, (**) mark means 0.01%, which means that there is a significant difference.
[0039]
[Table 1]

[0040]
From Table 1, it can be seen that the gastric damage inhibitory effect decreases in the order of the MeOH elution part, the MeOH extract, and the H ₂ O elution part.
In Table 1, Omeprazole means a healthy gastric agent (proton pump inhibitor) of a commercially available synthetic product (for example, omeparazole tablet made by Yoshitomi Pharmaceutical or Astra Japan).
[0041]
2- (2). Inhibitory effects of compounds 1-4 and diosgenin on ethanol-induced gastric mucosal damage:
Next, the inhibitory effect on the ethanol-induced gastric mucosal damage of the compounds 1 to 4 and diosgenin (compound forming the non-sugar part of the compound 3) was examined. The results are shown in Table 2 below.
[0042]
[Table 2]

[0043]
From Table 2, it can be seen that the gastric damage-suppressing effect is more remarkable for

compounds

1 and 2 than for

compounds

3 and 4. It can also be seen that the activity of diosgenin is low.
In view of the above-described chemical structural formulas of these compounds, the compounds 1-2 are characterized by having a hydroxyl group at the 17-position as compared with the compounds 3-4.
Diosgenin is a compound having a non-sugar part that does not have a sugar part at the 3-position.
From this, it can be seen that in the gastric damage inhibitory effect of steroid saponins, the 3-position sugar chain structure is essential for the expression of activity, and the 17-position hydroxyl group is important for the expression of strong activity.
[0044]
2- (3). Inhibitory effect of compounds 1-4 and diosgenin on indomethacin-induced gastric mucosal damage:
Next, the inhibitory effects of the compounds 1 to 4 and diosgenin on indomethacin-induced gastric mucosal damage were examined. The results are shown in Table 3 below.
[0045]
[Table 3]

[0046]
From Table 3, the compounds 1 to 4 show almost the same tendency as the ethanol-induced gastric mucosal damage inhibitory effect in the inhibitory effect of indomethacin-induced gastric mucosal damage at a low dose, and in the case of a high dose, compound 3 It can be seen that -4 shows better results than compounds 1-2.
[0047]
2- (4). Inhibitory effect of compounds 5 to 7 on methanol-induced gastric mucosal damage:
Next, the methanol-induced gastric mucosal damage inhibitory effect of the compounds 5 to 7 extracted and isolated by the extraction / fractionation scheme (see FIG. 1) was examined. The results are shown in Table 4 below.
[0048]
[Table 4]

[0049]
It can be seen from Table 4 that compounds 5 to 7 also show a 10 to 20% inhibition rate at a low dose (2.5 to 5.0 mg), and these compounds are useful as gastric mucosal protective agents. is there.
[0050]
2- (5). Inhibitory effect of compounds 5-6 on indomethacin-induced gastric mucosal damage:
Next, the inhibitory effect of compounds 5-6 on indomethacin-induced gastric mucosal damage was examined. The results are shown in Table 5 below.
[Table 5]

[0052]
From Table 5, it can be seen that compounds 5 to 6 also show a suppression rate of 10 to 20% at low doses, and these compounds are useful as gastric mucosal protective agents.
[0053]
2- (6). Acute toxicity test ddY mice weighing approximately 20 to 25 g, each group consisting of 10 females and 10 males, each of which is orally administered 500 mg / kg of the gastric mucosa protective agent of the present invention, and is free of food and water. 2 weeks, observed for life and death. As a result, no deaths or abnormal behavior were observed, and it was found that the gastric mucosa protective agent of the present invention was safe.
[0054]
【The invention's effect】
INDUSTRIAL APPLICABILITY According to the present invention, a natural plant-based gastric mucosal protective agent excellent in biosafety and economic efficiency is provided in place of a conventional synthetic medicinal gastric mucosal protective agent such as omeparazole.
That is, the present invention provides a natural plant-based gastric mucosal protective agent that is excellent in biological safety and economic efficiency, comprising a steroid saponin component contained in a Liliumaceae plant as an active ingredient.
[Brief description of the drawings]
FIG. 1 is a diagram showing an extraction / fractionation scheme for obtaining steroid saponin, which is a main component of the gastric mucosa protective agent of the present invention, from Shigeru.

Claims

A gastric mucosa protective agent using a steroid saponin component contained in a plant of the genus Liliaceae (Paris).

The gastric mucosa protective agent according to claim 1, wherein the plant of the genus Lilyaceae is a fallow, a heavy tower or a grandchild.

The gastric mucosa protective agent according to claim 1 or 2, wherein a plant belonging to the genus Lilyaceae is used in the form of a powder and / or an extract.