JP4071837B2

JP4071837B2 - Reagent composition for detecting ascorbic acid and test piece

Info

Publication number: JP4071837B2
Application number: JP20635496A
Authority: JP
Inventors: 敏久井上
Original assignee: Arkray Inc
Current assignee: Arkray Inc
Priority date: 1996-07-02
Filing date: 1996-07-02
Publication date: 2008-04-02
Anticipated expiration: 2016-07-02
Also published as: JPH1019874A

Description

【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、液体試料中の、さらに詳しくは、全血、血清、血漿、尿、髄液、唾液などの生体試料中のアスコルビン酸を検出するための試薬組成物及び試験片に関する。
【０００２】
【従来の技術】
液体試料中のアスコルビン酸を検出するための方法は、種々存在し、知られている。
例えば、特開昭５５−１４２２４９号には、キレート剤と鉄（III）イオン（又は銅（II）イオン）との錯体、金属指示薬、緩衝剤などを用いた方法が示されている。
また、特開昭５７−１５４０５６号、特開昭５８−６３８５０号、特開昭６０−１６２９５４号、特開平１−２５９２６０号には、インドフェノール系色素を用いた方法が示されている。
また、特開昭５４−８０７９３号、特開昭５９−１０６４７６号、特開平１−２１３５７４号には、テトラゾリウム系色素を用いた方法が示されている。
また、特開昭５４−３０８９０号には、オキサジン系色素を用いた方法が示されている。
また、特開昭４８−１００１８７号、特開昭５６−８５５０号には、モリブデン酸を用いた方法が示されている。
また、特開昭６０−６８７０号には、銅イオンを用いて、アスコルビン酸が酸化されて出る過酸化水素による検出を用いた方法が示されている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
最近の尿試験片、例えばグルコース、潜血などの項目においては、尿中のアスコルビン酸等還元性物質の影響をある程度の濃度までは、回避できるように工夫されてきているが、充分なものではなく、還元性物質を検出するために、測定レンジが広い試験片が必要となってきている。
しかし、上記の従来技術では、１００ｍｇ／ｄｌ程度までのアスコルビン酸しか検出できないという課題があった。
【０００４】
【課題を解決するための手段】
本発明は、上記課題を解決するために、液体試料中のアスコルビン酸を検出するための試薬組成物において、
（ｉ）鉄（III）化合物、
（ii）鉄（II）イオン検出試薬、
（iii）酸化剤
を含み、かつ
酸化剤がヨウ素酸塩であることを特徴とするアスコルビン酸検出用組成物である。
また、液体試料中のアスコルビン酸を検出するための試験片において、上記の試薬組成物を保持体に保持することを特徴とする試験片である。
【０００５】
【発明の実施の形態】
本発明は、さらに、緩衝剤を含むことが好ましい。
緩衝剤は、リン酸緩衝液、酢酸緩衝液、マロン酸緩衝液、クエン酸緩衝液など種々用いることができる。
また、緩衝剤のｐＨは、２〜７であることが好ましい。
【０００６】
さらに、本発明には、ポリマーや界面活性剤を含むことができる。
ポリマーは、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、アルギン酸ナトリウム、ポリアクリル酸ナトリウム、ゼラチンなど種々用いることができる。
界面活性剤は、ポリオキシエチレンオクチルフェニルエーテル（トリトンＸ−１００）、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート（ツイーン２０）、ポリオキシエチレンソルビタンモノステアレート（ツイーン６０）、ポリオキシエチレンラウリルエーテル（ブリッジ３５）、ポリオキシエチレンセチルエーテル（ブリッジ５８）など種々用いることができる。
【０００７】
本発明における鉄（ＩＩＩ）化合物は、エチレンジアミン四酢酸一ナトリウム鉄（ＩＩＩ）、シュウ酸アンモニュウム鉄（ＩＩＩ）水和物、硫酸鉄（ＩＩＩ）アンモニュウム水和物、塩化鉄（ＩＩＩ）等のキレート化合物やイオン化合物から選択することができる。
【０００８】
また、鉄（ＩＩ）イオン検出試薬は、２，２’−ビピリジン、２，２’−ビキノリン、１，１０−フェナントトリン等の化合物や誘導体から選択することができる。
【０００９】
また、酸化剤は、ヨウ素酸ナトリウム、ヨウ素酸カリウムなどのヨウ素酸塩であるが、ヨウ素酸ナトリウムが好ましい。
本発明は、さらに、液体試料中のアスコルビン酸を検出するための液状試薬や錠剤試薬に応用することも可能である。
以下に実施例を示すが、本発明はこれに限定されるものではない。
【００１０】
【実施例１】
濾紙（ワットマン社製；３ＭＭＣｈｒ）を、下記に示す試薬含浸液に含浸、乾燥した。
＜処方＞
２，２’−ビピリジン（ナカライテスク製）３ｇ
エチレンジアミン四酢酸鉄（ＩＩＩ）−ナトリウム４ｇ
（ナカライテスク製）
ヨウ素酸ナトリウム（ナカライテスク製）１ｇ
ポリビニルピロリドンＫ−３０（ナカライテスク製）１０ｇ
０．５Ｍクエン酸／クエン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ４）８０ｍｌ
エタノール２０ｍｌ
【００１１】
【実施例２】
濾紙（ワットマン社製；３ＭＭＣｈｒ）を、下記に示す試薬含浸液に含浸、乾燥した。
＜処方＞
１，１０−フェナントロリン（ナカライテスク製）３ｇ
エチレンジアミン四酢酸鉄（ＩＩＩ）−ナトリウム４ｇ
（ナカライテスク製）
ヨウ素酸ナトリウム（ナカライテスク製）１ｇ
ポリビニルピロリドンＫ−３０（ナカライテスク製）１０ｇ
０．５Ｍクエン酸／クエン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ４）８０ｍｌ
エタノール２０ｍｌ
【００１２】
【比較例１】
濾紙（ワットマン社製；３ＭＭＣｈｒ）を、下記に示す試薬含浸液に含浸、乾燥した。
＜処方＞
２，２’−ビピリジン（ナカライテスク製）３ｇ
エチレンジアミン四酢酸鉄（ＩＩＩ）一ナトリウム４ｇ
（ナカライテスク製）
ポリビニルピロリドンＫ−３０（ナカライテスク製）１０ｇ
０．５Ｍクエン酸／クエン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ４）８０ｍｌ
エタノール２０ｍｌ
【００１３】
【比較例２】
濾紙（ワットマン社製；３ＭＭＣｈｒ）を、下記に示す試薬含浸液に含浸、乾燥した。
＜処方＞
１，１０−フェナントロリン（ナカライテスク製）３ｇ
エチレンジアミン四酢酸鉄（ＩＩＩ）一ナトリウム４ｇ
（ナカライテスク製）
ポリビニルピロリドンＫ−３０（ナカライテスク製）１０ｇ
０．５Ｍクエン酸／クエン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ４）８０ｍｌ
エタノール２０ｍｌ
【００１４】
実施例１、２及び比較例１、２にて作製したこの片面に両面テープ（ソニーケミカル製；Ｔ４０００）を貼り、５ｍｍ×５ｍｍにカットし、試薬部分を得た。これを５ｍｍ×６０ｍｍのＰＥＴフィルムの先端部に貼付し、試験片を得た。
＜測定方法＞
実施例１、２及び比較例１、２にて作製した上記試験片の試薬部分に下記試料１〜６を７μｌ滴下して、各試験紙の最大吸収波長における１分後の反射率変化を、色差計（日本分光製；Σ−９０）を用いて、測定した。
試料１；蒸留水
試料２；アスコルビン酸水溶液（１０ｍｇ／ｌ）
試料３；アスコルビン酸水溶液（３０ｍｇ／ｌ）
試料４；アスコルビン酸水溶液（５０ｍｇ／ｌ）
試料５；アスコルビン酸水溶液（１００ｍｇ／ｌ）
試料６；アスコルビン酸水溶液（３００ｍｇ／ｌ）
ここで、最大吸収波長は、実施例１及び比較例１においては５４０ｎｍ、実施例２及び比較例２においては５１０ｎｍとなった。
＜結果＞
結果として、実施例と比較例の最大吸収波長における反射率変化をまとめ、表１に示す。
【００１５】
【表１】

上記結果より、実施例１、２による試験片は、比較例１、２による試験片に比べて、測定レンジはかなり広くなっている。
しかも、試薬部分の発色は、発色系であるため肉眼比色においても有利である。
【００１６】
【発明の効果】
本発明によって、従来よりも広い測定レンジを持つ試験片を作製することが可能になった。[0001]
BACKGROUND OF THE INVENTION
The present invention, in a liquid sample, the detail is al, whole blood, serum, plasma, urine, spinal fluid, a reagent composition and a test strip for detecting ascorbic acid in biological samples such as saliva.
[0002]
[Prior art]
Method for detecting ascorbic acid in the liquid sample, various exist, are known.
For example, Japanese Patent Application Laid-Open No. 55-142249 discloses a method using a complex of a chelating agent and iron (III) ions (or copper (II) ions), a metal indicator, a buffering agent and the like.
JP-A-57-154056, JP-A-58-63850, JP-A-60-162955, and JP-A-1-259260 show methods using indophenol dyes.
JP-A-54-80793, JP-A-59-106476, and JP-A-1-213574 disclose a method using a tetrazolium dye.
JP-A-54-30890 discloses a method using an oxazine dye.
Japanese Patent Application Laid-Open Nos. 48-1000018 and 56-8550 disclose methods using molybdic acid.
Japanese Patent Laid-Open No. 60-6870 discloses a method using detection with hydrogen peroxide which is produced by oxidizing ascorbic acid using copper ions.
[0003]
[Problems to be solved by the invention]
In recent urine test specimens such as glucose and occult blood, it has been devised to avoid the effects of reducing substances such as ascorbic acid in urine to a certain level, but it is not sufficient. In order to detect a reducing substance, a test piece having a wide measurement range is required.
However, the above conventional technique has a problem that only ascorbic acid up to about 100 mg / dl can be detected.
[0004]
[Means for Solving the Problems]
To solve the above problems, the present invention provides a reagent composition for detecting ascorbic acid in a liquid sample.
(I) an iron (III) compound,
(Ii) an iron (II) ion detection reagent,
(Iii) an oxidizing agent only contains, and
The composition for detecting ascorbic acid, wherein the oxidizing agent is iodate .
Further, in the test piece for detecting ascorbic acid in the liquid sample, the test composition is characterized in that the reagent composition is held on a holding body.
[0005]
DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
The present invention preferably further includes a buffer.
Various buffers such as a phosphate buffer, an acetate buffer, a malonate buffer, and a citrate buffer can be used.
Moreover, it is preferable that pH of a buffering agent is 2-7.
[0006]
Further, the present invention can include a polymer and a surfactant.
Various polymers such as hydroxypropyl cellulose, polyvinyl pyrrolidone, polyvinyl alcohol, sodium alginate, sodium polyacrylate, gelatin and the like can be used.
Surfactants include polyoxyethylene octyl phenyl ether (Triton X-100), polyoxyethylene sorbitan monolaurate (Tween 20), polyoxyethylene sorbitan monostearate (Tween 60), polyoxyethylene lauryl ether (Bridge 35). ), Polyoxyethylene cetyl ether (bridge 58), and the like.
[0007]
The iron (III) compound in the present invention is a chelate compound such as ethylenediaminetetraacetic acid monosodium iron (III), ammonium oxalate iron (III) hydrate, iron (III) ammonium hydrate, iron (III) chloride, etc. Or an ionic compound.
[0008]
The iron (II) ion detection reagent can be selected from compounds and derivatives such as 2,2′-bipyridine, 2,2′-biquinoline, 1,10-phenanthrin.
[0009]
Further, the oxidizing agent is sodium iodate, although Ru iodate der, such as potassium iodate, sodium iodate is preferred.
The present invention can also be applied to liquid reagents and tablet reagents for detecting ascorbic acid in a liquid sample.
Examples are shown below, but the present invention is not limited thereto.
[0010]
[Example 1]
A filter paper (manufactured by Whatman; 3MMChr) was impregnated in the reagent impregnation solution shown below and dried.
<Prescription>
2,2'-bipyridine (manufactured by Nacalai Tesque) 3 g
Ethylenediaminetetraacetic acid iron (III) -sodium 4 g
(Nacalai Tesque)
Sodium iodate (manufactured by Nacalai Tesque) 1 g
Polyvinylpyrrolidone K-30 (manufactured by Nacalai Tesque) 10 g
0.5 M citrate / sodium citrate buffer (pH 4) 80 ml
Ethanol 20 ml
[0011]
[Example 2]
A filter paper (manufactured by Whatman; 3MMChr) was impregnated in the reagent impregnation solution shown below and dried.
<Prescription>
1,10-phenanthroline (manufactured by Nacalai Tesque) 3 g
Ethylenediaminetetraacetic acid iron (III) -sodium 4 g
(Nacalai Tesque)
Sodium iodate (manufactured by Nacalai Tesque) 1 g
Polyvinylpyrrolidone K-30 (manufactured by Nacalai Tesque) 10 g
0.5 M citrate / sodium citrate buffer (pH 4) 80 ml
Ethanol 20 ml
[0012]
[Comparative Example 1]
A filter paper (manufactured by Whatman; 3MMChr) was impregnated in the reagent impregnation solution shown below and dried.
<Prescription>
2,2'-bipyridine (manufactured by Nacalai Tesque) 3 g
Ethylenediaminetetraacetic acid iron (III) monosodium 4 g
(Nacalai Tesque)
Polyvinylpyrrolidone K-30 (manufactured by Nacalai Tesque) 10 g
0.5 M citrate / sodium citrate buffer (pH 4) 80 ml
Ethanol 20 ml
[0013]
[Comparative Example 2]
A filter paper (manufactured by Whatman; 3MMChr) was impregnated in the reagent impregnation solution shown below and dried.
<Prescription>
1,10-phenanthroline (manufactured by Nacalai Tesque) 3 g
Ethylenediaminetetraacetic acid iron (III) monosodium 4 g
(Nacalai Tesque)
Polyvinylpyrrolidone K-30 (manufactured by Nacalai Tesque) 10 g
0.5 M citrate / sodium citrate buffer (pH 4) 80 ml
Ethanol 20 ml
[0014]
A double-sided tape (manufactured by Sony Chemicals; T4000) was applied to one side produced in Examples 1 and 2 and Comparative Examples 1 and 2, and cut into 5 mm × 5 mm to obtain a reagent portion. This was stuck on the front-end | tip part of 5 mm x 60 mm PET film, and the test piece was obtained.
<Measurement method>
7 μl of the following samples 1 to 6 were dropped on the reagent portions of the test pieces prepared in Examples 1 and 2 and Comparative Examples 1 and 2, and the reflectance change after 1 minute at the maximum absorption wavelength of each test paper was Measurement was performed using a color difference meter (manufactured by JASCO; Σ-90).
Sample 1; Distilled water sample 2; Ascorbic acid aqueous solution (10 mg / l)
Sample 3; ascorbic acid aqueous solution (30 mg / l)
Sample 4: Ascorbic acid aqueous solution (50 mg / l)
Sample 5: Ascorbic acid aqueous solution (100 mg / l)
Sample 6: Ascorbic acid aqueous solution (300 mg / l)
Here, the maximum absorption wavelength was 540 nm in Example 1 and Comparative Example 1, and 510 nm in Example 2 and Comparative Example 2.
<Result>
As a result, the change in reflectance at the maximum absorption wavelength in Examples and Comparative Examples is summarized and shown in Table 1.
[0015]
[Table 1]

From the above results, the measurement range of the test pieces according to Examples 1 and 2 is considerably wider than that of the test pieces according to Comparative Examples 1 and 2.
In addition, since the coloring of the reagent portion is a coloring system, it is advantageous also in the naked eye colorimetry.
[0016]
【The invention's effect】
The present invention makes it possible to produce a test piece having a wider measurement range than before.

Claims

In a reagent composition for detecting ascorbic acid in a liquid sample,
(I) an iron (III) compound,
(Ii) an iron (II) ion detection reagent,
(Iii) An ascorbic acid detection composition comprising an oxidizing agent, and the oxidizing agent is an iodate.

The composition for detecting ascorbic acid according to claim 1, further comprising a buffer.

The composition for detecting ascorbic acid according to claim 2, wherein the pH of the buffer is 2 to 7.

Furthermore, a polymer is contained, The composition for ascorbic acid detection in any one of Claims 1-3 characterized by the above-mentioned.

Furthermore, surfactant is included, The composition for an ascorbic acid detection in any one of Claims 1-4 characterized by the above-mentioned.

Iron (III) compound is ethylenediaminetetraacetic acid monosodium iron (III), ammonium oxalate iron (III) hydrate, iron (III) ammonium sulfate hydrate, and chelate or ionic compound of iron (III) chloride The composition for detecting ascorbic acid according to claim 1, wherein the composition is selected from.

Iron (II) ion detection reagent, 2,2' Bipiri di emissions, 2,2'-biquinoline, 1,10-phenanthroline and ascorbic acid according to claim 1, characterized in that selected derivatives thereof Detection composition.

A test piece for detecting ascorbic acid in a liquid sample, wherein the reagent composition according to claim 1 is held on a holding body.