JP4034632B2

JP4034632B2 - Composition for cooking rice containing lactic acid bacteria

Info

Publication number: JP4034632B2
Application number: JP2002288993A
Authority: JP
Inventors: 義隆廣▲瀬▼; 拓哉佐藤; 幸太郎室山; 憲朗山本; 伸二室▲崎▼; 佳弘山本
Original assignee: House Wellness Foods Corp
Current assignee: House Wellness Foods Corp
Priority date: 2002-10-01
Filing date: 2002-10-01
Publication date: 2008-01-16
Anticipated expiration: 2022-10-01
Also published as: JP2004121073A

Description

【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は免疫賦活作用を有する乳酸菌またはその処理物を有効成分とする炊飯用組成物に関する。
【０００２】
【従来の技術】
我々の体を病気から守っている生体防御機構は、生まれながらに備わっている自然免疫系と、生後、環境中の微生物などと接触することにより、学習・教育されていくより強く効率的な獲得免疫系とで構成されている。さらにこの獲得免疫系は、Ｔヘルパー１（Ｔｈ１）型免疫とＴヘルパー２（Ｔｈ２）型免疫とに大別され、それぞれ役割を分担している。
Ｔｈ１型免疫は、ウイルスや結核などの細胞内寄生細菌、腫瘍細胞などの排除を担い、Ｔｈ２型免疫は抗体を産生し、細菌や毒素の効率の良い処理を担っており、健やかな日常生活を送る上でＴｈ１型免疫とＴｈ２型免疫は、お互いに制御しながらバランス良く働いていることが重要である。しかし、現在は環境の清浄化や老化、ストレス、病気、栄養不足等によりＴｈ１型免疫とＴｈ２型免疫のバランス異常が引き起こされやすい状況にあると言えるため、現代人はＴｈ２型免疫が優位な傾向にあると言われている。そのことは、細菌、酵母、カビ、ウイルスなどの微生物による感染及び腫瘍に対する抵抗力の低下やアレルギー性疾患へのリスク増大に関連している。
【０００３】
細菌、酵母、カビ、ウイルスなどの微生物による感染や腫瘍に対する防御機構において中心的な役割を果たしているのは、Ｔ細胞、マクロファージ、ＮＫ細胞などである。これら免疫担当細胞の活性化にはサイトカインという分子が大きく関与しており、中でもインターロイキン１２（ＩＬ−１２）は初期感染系においても重要な役割を担っている。ＩＬ−１２は、Ｔｈ１型免疫応答を司る中心的なサイトカインであり、感染初期ではマクロファージ、ＮＫ細胞などにより産生される。産生されたＩＬ−１２はヘルパーＴ細胞をＴｈ１型へ誘導し、食細胞やキラー細胞等を活性化させるインターフェロンγ（ＩＦＮ−γ）の産生を促すことで感染細胞や種々の感染源を排除する。つまり、低下した免疫力を高め、初期感染系における免疫応答を賦活させるためには、ＩＬ−１２産生を促進することが重要である。
【０００４】
本来、生体防御を目的とするはずの免疫応答が結果として生体に危害を及ぼすものである場合、その免疫反応をアレルギー反応と呼んでいる。このアレルギー反応の関与する疾患を総称してアレルギー疾患と呼ぶことがある。
即時型過敏反応を特徴とするアレルギー疾患の成因には、ＩｇＥ抗体が大きく関与していることが知られている。Ｂ細胞が産生する抗体にはＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＤといった５つのクラスが存在するが、なかでもＩｇＧ抗体は血中濃度が最も高く、一般的なＴ細胞依存的な抗原抗体反応の中心を担っている。抗原と結合した血中のＩｇＧ抗体は好中球、ＮＫ細胞といったエフェクター細胞上のＦｃレセプターと結合し、活性化して抗原の排除を促す。本来、Ｔｈ１優位な環境下ではＩｇＧ２ａサブクラスが、Ｔｈ２優位な環境ではＩｇＧ１サブクラスが選択的に分泌され効率よく細菌や毒素といった抗原分子を排除するのだが、Ｔｈ１、Ｔｈ２のバランスに異常が生じるとＢ細胞の産生する抗体のクラスにも変化が生じる。Ｔｈ２型のサイトカインであるＩＬ−４は抗体産生を担うＢ細胞を活性化し、ＩｇＧ抗体産生を促進させるが過剰に存在すると、Ｂ細胞をＩｇＧ抗体産生細胞からＩｇＥ抗体産生細胞へと変化させる。
【０００５】
産生されたＩｇＥ抗体は抗原と結合すると、好中球、ＮＫ細胞といったエフェクター細胞ではなくマスト細胞や好塩基球といった顆粒球上のＦｃレセプターと結合し、細胞を活性化する。これが引き金となり、活性化されたマスト細胞は元々所持していたヒスタミン等のケミカルメディエーターを放出するとともに、プロスタグランジンやロイコトリエンといった炎症性のメディエーターを一気に合成、放出するようになる。これらの炎症性のメディエーターが、平滑筋の収縮・血管透過性亢進・小血管拡張・粘膜上への粘液分泌亢進・白血球遊走・神経刺激といった典型的なアレルギー性組織反応を導くのである。
つまり、ＩｇＥ抗体の過剰産生はアレルギー反応を誘発する大きな要因であり、過剰産生へとクラススイッチを誘発するＩＬ−４、さらにはＩＬ−４産生過多となるＴｈ２型へとシフトしすぎた環境自体がアレルギー反応の要因といえる。
Ｔｈ１型サイトカインであるＩＬ−１２及びＩＦＮ−γは、アレルギー疾患の要因であるＩＬ−４ならびにＩｇＥ抗体産生を抑制し、Ｔｈ２型へとシフトした生体環境をＴｈ１型へと改善する効果を有するため、こうしたアレルギー反応に有効である。
【０００６】
元来、乳酸菌を用いた健康食品としては、生菌体を直接経口的に摂取し、生存したまま腸内へ移行させ、腸内環境を整えることを目的とするものが主であった。腸内環境を構築する腸内フローラは、消化・吸収等の代謝系を維持、促進するのに必須であり、免疫系を含めた生体環境のバランスの改善に大きく寄与している。恒常的に生菌体を摂取することで、常に新しい腸内フローラを構築し代謝を活性化していくことは、健康増進につながるといえる。また、本発明者らが既に特許出願した通り（特許文献１〜５）、乳酸菌はＴリンパ球共刺激作用とＢリンパ球活性化抑制作用、ＩＬ−１２やＩＦＮ−γ等のサイトカインの産生促進作用を有するため、生体防御を主眼とした今後の機能性食品の開発において、乳酸菌は重要な役割を果たす存在であると言える。
【０００７】
従来から、乳酸菌、特に乳酸菌死菌体を用いた免疫賦活効果を有する素材も製品化されているが、サプリメントや飲料といった形状で製品化されることが多かった。やはり、粒子径の大きい菌体そのものを素材として使用するため、錠剤や懸濁液といった形に限定されてしまうのである。健康志向の強い欧米等ではまだしも、日本において錠剤といった薬的形状は敬遠されがちで、日常的に気軽に摂取するといった意識はなかなか浸透していないのが現状である。
【０００８】
さて、われわれ日本人の食生活に目を向けると、生活レベルが上がり食生活が豊かになった反面、食生活における選択の広がりが、嗜好的、即席的な食品のみを選ばせがちとなっている。栄養バランスの偏りは、高血圧や糖尿病といった生活習慣病を招き、同時に加齢やストレスにより低下した免疫機能に対しても悪影響を及ぼす。この免疫力の低下が結果として疾患にかかりやすい状況をつくってしまう。こうした食生活の中で、意識的に免疫賦活食品を摂取していくのは、よほどの意識レベルの向上が必要である。
【０００９】
【特許文献１】
特開平10−114667号公報
【特許文献２】
特開平10−167972号公報
【特許文献３】
特開平11−228425号公報
【特許文献４】
特開2001−64174号公報
【特許文献５】
特開2002−80364号公報
【特許文献６】
特開昭56-131349号公報
【特許文献７】
特開昭58-13356号公報
【特許文献８】
特開昭59-130157号公報
【特許文献９】
特開昭60-118153号公報
【特許文献１０】
米国特許第 4,765,996号明細書
【００１０】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は日常的に摂取する炊飯物の免疫賦活作用を炊飯調理の際に簡便に強化することができる炊飯用組成物を提供することを目的とする。
また、本発明は、免疫賦活作用が付与または強化されている炊飯穀類を提供することを目的とする。
【００１１】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、われわれ日本人の主食が米であり、選択の幅が広がった食生活においても米は唯一欠かさず食していることに着目し、米に免疫賦活作用を有する物質を付与して、米飯に免疫賦活作用を補うことは、習慣化していくうえで大変意義のあることであることを知見した。つまりこれは、意識することなく日常的に免疫機能を調節する、すなわちＴｈ１型免疫とＴｈ２型免疫がお互いに制御しながらバランスよく働いている状態で維持することにつながる。
本発明者らは、さらに研究を行ったところ、米飯の免疫賦活作用を付与または強化することができ、副作用がなく食品にも利用可能で、米飯の風味や味を損なわない添加物としては、乳酸菌が最適であることを見出した。すなわち、日常的に摂取する米飯をはじめとする炊飯穀物に免疫賦活作用を有する乳酸菌およびその処理物を添加することにより、食品による安全かつ安定な生体防御機構の正常化への是正およびその維持が可能となる。
【００１２】
従来の炊飯用組成物は食品機能の観点から見た場合、一次機能および二次機能面での強化を目的としたものである（特許文献６〜１０など）。すなわち、一次機能としては、栄養強化を目的としたミネラルおよびビタミン類の組成物、二次機能としては、炊飯後の炊飯物の形状および食感の長期安定化を目的とした油脂類組成物、または食味の改良および米特有の臭気を抑えることを目的とした酵素類組成物である。
一方で、健康の維持・増進および疾病や老化の予防を図るためには、三次機能面の強化、すなわち、生理活性物質を含有した食品による生体調節機能の強化を目的としたものが不可欠であるが、日常的に摂取する食品、例えば炊飯物用組成物としては生体機能の調節を目的としたものはなかった。
【００１３】
すなわち、本発明は、
（１）乳酸菌またはその処理物を有効成分として含有することを特徴とする免疫賦活作用を有する炊飯用組成物、
（２）乳酸菌が、ラクトバチルス（Lactobacillus）属、ストレプトコッカス（Streptococcus）属、ラクトコッカス（Lactococcus）属、ロイコノストック（Leuconostoc）属もしくはエンテロコッカス (Enterococcus)属に属する菌、またはそれらの混合菌である前記（１）記載の組成物、
（３）乳酸菌が、ラクトバチルス・プランタラム（Lactobacillus plantarum）である前記（１）記載の組成物、
（４）乳酸菌が、ラクトバチルス・プランタラムＬ−１３７株（Lactobacillus plantarum L-１３７）である前記（１）記載の組成物、
（５）乳酸菌またはその処理物を有効成分として含有する組成物を炊飯時に添加することを特徴とする免疫賦活作用が強化されている炊飯穀類を製造する方法、
（６）乳酸菌またはその処理物を含有することを特徴とする免疫賦活作用を有する炊飯穀類、
（７）乳酸菌またはその処理物の、炊飯穀物に免疫賦活作用を付与するための使用、
に関する。
【００１４】
【発明の実施の形態】
本発明における炊飯用組成物とは、穀類の炊飯に使用される組成物をいう。本発明で用いる穀類としては、特に限定されないが、例えば、精白米、７分づき米、胚芽米その他精白程度の異なる各種精米・精麦などが挙げられる。以下、代表として米を炊飯する際に用いる炊飯用組成物について詳細に述べるが、他の穀物についても全く同様である。
【００１５】
本発明において使用する乳酸菌としては、乳酸を産生しうる菌であれば特に限定されないが、具体的には、ラクトバチルス（Lactobacillus）属、ストレプトコッカス（Streptococcus）属、ラクトコッカス（Lactococcus）属、ロイコノストック（Leuconostoc）属またはエンテロコッカス (Enterococcus)属に属する乳酸菌などが挙げられる。より具体的に前記乳酸菌としては、例えば、ラクトバチルス・アシドフィリス（Lactobaccilus acidophilus）、ラクトバチルス・ブレビス（Lactobaccilus brevis）、ラクトバチルス・ブフネリ（Lactobaccilus buchneri）、ラクトバチルス・カゼイ（Lactobacillus casei）、ラクトバチルス・デルブリュキイ（Lactobaccilus delbrueckii）、ラクトバチルス・ファーメンタム（Lactobaccilus fermentum）、ラクトバチルス・ヘルベティカス（Lactobaccilus helveticus）、ラクトバチルス・ケフィア（Lactobaccilus kefir）、ラクトバチルス・パラカゼイ（Lactobaccilus paracasei）、ラクトバチルス・プランタラム（Lactobacillus plantarum）、ラクトバチルス・ラムノーサス（Lactobaccilus rhamnosus）、ラクトバチルス・サリバリウス（Lactobacillus salivarius）、ラクトバチルス・スポロゲネス（Lactobacillus sporogenes）、ストレプトコッカス・クレモリス（Streptococcus cremoris）、ストレプトコッカス・サーモフィルス（Streptococcus thermophilus）、ラクトコッカス・ラクティス（Lactococcus lactis）、ラクトコッカス・プランタラム（Lactococcus plantarum）、ラクトコッカス・ラフィノラクティス（Lactococcus raffinolactis）、ロイコノストック・シトロボラム（Leuconostoc citrovorum）、ロイコノストック・デキストラニウム（Leuconostoc dextranicum）、ロイコノストック・ラクティス（Leuconostoc lactis）、ロイコノストック・メセンテロイデス（Leuconostoc mescenteroides）、エンテロコッカス・フェーカリス(Enterococcus faecalis)、エンテロコッカス・フェシウム(Enterococcus faecium)等が挙げられる。
【００１６】
本発明において使用する乳酸菌としては、とりわけ、ラクトバチルス（Lactobacillus）属に属する菌が好ましく、例えば、ラクトバチルス・アシドフィリス、ラクトバチルス・ブレビス、ラクトバチルス・ブフネリ、ラクトバチルス・カゼイ、ラクトバチルス・デルブリュキイ、ラクトバチルス・ファーメンタム、ラクトバチルス・ヘルベティカス、ラクトバチルス・ケフィア、ラクトバチルス・パラカゼイ、ラクトバチルス・プランタラム、ラクトバチルス・ラムノーサス、ラクトバチルス・サリバリウス、ラクトバチルス・スポロゲネス等がより好ましい。特に、ラクトバチルス・プランタラムL−１３７株（Lactobacillus plantarum L-１３７）（ＦＥＲＭＢＰ−０８６０７；平成７年１１月３０日に寄託されたＦＥＲＭＰ−１５３１７号より移管）が好適に使用できる。
また、本発明においては、１種類の乳酸菌を単独で用いてもよいし、複数の乳酸菌を任意に組み合わせてもよい。
【００１７】
本発明において使用する乳酸菌の処理物としては、本発明において用いる乳酸菌により食品を発酵させてなる、菌体を含んだ発酵物をそのまま用いてもよいし、発酵物から菌体を採取し、生菌のまま、または、例えば、加熱、紫外線照射等により不活性化し、ペースト状態あるいは乾燥して用いることもできる。乳酸菌の培養物から分離した生菌体または死菌体をさらに摩砕、破砕、酵素分解、抽出処理をし、得られた処理物を必要により加熱滅菌、乾燥して用いることもできる。
【００１８】
本発明の炊飯用組成物に含まれる有効成分は、乳酸菌の生菌体よりも、それ以外の乳酸菌の処理物が好ましい。生菌体の形で製品化する場合、生菌であるがゆえ加工しにくいといった問題も存在し、液状物あるいは生菌パウダーといった限られた形状をとらざるを得ないというデメリットがあるからである。また、われわれの期待する免疫賦活作用に対しては、間接作用であるため期待した効果が現れる前にかなりの時間を有してしまう可能性がある。
【００１９】
乳酸菌またはその処理物を炊飯時に添加することにより免疫賦活効果を有した炊飯物を提供するにあたり、乳酸菌またはその処理物の熱安定性が問題として生じてくる。通常、炊飯は加水してから加熱を行うが、これらの工程により乳酸菌またはその処理物の免疫賦活効果が消失してしまうことがないことが必要である。この点については、乳酸菌またはその処理物の免疫賦活作用が、一般に炊飯条件で行われる加熱温度により消失しないこと、さらに実際に米に乳酸菌またはその処理物を添加してから炊飯してその免疫賦活活性が消失しないこと、乳酸菌またはその処理物を添加していない炊飯米と比較して、乳酸菌またはその処理物を添加してから炊いた炊飯米が高い免疫賦活作用を有していることは、本発明に至るまでの検討において充分確認している。
【００２０】
本発明にかかる炊飯用組成物には、乳酸菌またはその処理物以外に、公知の添加物質を含有させてもよい。そのような添加物質としては、例えば、味付け、風味の変化をつける目的で加えられるグルタミン酸ナトリウムもしくは蛋白加水分解物等の調味料；香料；栄養強化の目的で加えられるカルシウム塩、鉄等のミネラル；ビタミン類；古米等の食感を改良するために添加されるゼラチンや寒天等のゲル化剤や食用油脂；生体消化管内での澱粉質の消化・吸収を遅延させる効果を有する脂肪酸化合物などが挙げられる。
【００２１】
本発明の炊飯用組成物は、上記乳酸菌またはその処理物を含有していれば、どのような形態を呈していてもよい。具体的には、公知の賦形剤ないしは担体を用い、自体公知の方法に従い、例えば、錠剤、顆粒、カプセル、粉末、クリームもしくはペーストのような固体、または溶液、シロップ、乳液もしくは懸濁液のような液体の形状とすることができる。用いる賦形剤ないしは担体としては、例えば、デキストリン、コーンスターチ、乳糖、セルロースもしくはメチルセルロースのような固体賦形剤、または水、生理食塩水もしくはエタノールのような液体賦形剤が挙げられる。
【００２２】
本発明の炊飯用組成物は、一般に強化米として称される形状、すなわち米に乳酸菌またはその処理物が付着されている形状にて供給することもできる。かかる形状の炊飯用組成物は、米または加工した米に乳酸菌またはその処理物をコーティングしたり、乳酸菌またはその処理物の溶液に米穀を浸漬して浸透させた後乾燥したり、あるいはこれらの工程を組み合わしたりするなどして製造することができる。
前記コーティング方法としては、乳酸菌またはその処理物を油脂類またはロウ類などと共に加熱溶融し、溶融状態の液体を米粒に噴霧してコーティングするという方法が挙げられる。または、乳酸菌またはその処理物と共に蔗糖脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エステルもしくはソルビタン脂肪酸エステルなどの乳化剤、または大豆レシチン、アラビアガム、キサンタンガム、ゼラチンもしくは寒天などの天然糊料を用いて常法により乳化物を調整し、かかる乳化物を米粒に噴霧してコーティングするという方法も挙げられる。
【００２３】
上述の、一般的に強化米と称される形状においては、米の代わりに他の穀類や穀類を模造した加工品を用いることも可能である。すなわち、他の穀類または穀類を模造した加工品に乳酸菌またはその処理物をコーティングしたり、乳酸菌またはその処理物の溶液に他の穀類または穀類を模造した加工品を浸漬して浸透させた後乾燥したり、あるいはこれらの工程を組み合わしたりするなどして前記形状の炊飯用組成物を製造することができる。前記他の穀類としては、小麦もしくは燕麦などの麦類、そば、きび、キヌアまたはアマランサスなどが挙げられる。前記穀類を模造した加工品としては、米、麦もしくはとうもろこしなどの穀類から製造した粉類を加工して成型したもの、蒟蒻もしくは海藻類から調整したグルコマンナン、またはその他多糖類を加工して成型したものなどが挙げられる。さらに、前記穀類を模造した加工品を製造する際に、原料に乳酸菌またはその処理物を混練してから成型することによっても、本発明にかかる炊飯用組成物を製造することが可能である。
【００２４】
上記形状の本発明にかかる炊飯用組成物において、乳酸菌またはその処理物とともにさらに添加物質を含む場合は、乳酸菌またはその処理物と添加物質を予め混合しておき、それを米に付着させてもよいし、乳酸菌またはその処理物および添加物質を複数回に分けて順々に米に付着させてもよい。
【００２５】
上述のような本発明の炊飯用組成物を炊飯時に適量加えて炊飯することにより免疫賦活作用が強化されている炊飯された米（以下、米飯という。）を得ることができる。また、あらかじめ精白米などに本発明の炊飯用組成物を適量添加した状態で流通させるなどして供給することも可能であり、かかる炊飯用組成物含有米を炊飯することによっても免疫賦活作用が強化されている米飯を得ることができる。
上記炊飯方法としては、通常行われている炊飯方法に従えばよい。例えば、原料米を水洗し、普通１時間程度、水中に浸漬した後に水切りして蒸煮、またはそのまま炊飯する。この場合、水切り後の蒸煮は、たとえば連続式の業務用炊飯装置のようなものを使用して実施され、水切りせずにそのまま炊飯する場合はたとえば家庭用の炊飯器やその大型のものなどが用いられる。本発明の炊飯用組成物を添加する時期は炊飯前、炊飯途中、炊飯後の何れでもよいが、炊飯前が好ましい。具体的には、例えば生米を水洗してから添加し生米と共に水浸漬して炊飯を行ってもよく、あるいは水きりした後に加えてもよい。本発明の炊飯用組成物の添加量は、乳酸菌の種類または乳酸菌の処理方法などにより異なるので一概には言えない。例えば、米１合に対して乳酸菌を約０．０１ｍｇ以上、好ましくは約０．０２ｍｇ以上となるように本発明の炊飯用組成物を添加することが好ましい。本発明の炊飯用組成物の添加量の上限は、米飯の風味や品質を著しく損ねない限り、特に限定されない。
【００２６】
上記のような免疫賦活作用が強化されている米飯は、加工米飯の形態をとっていてもよい。加工米飯としては、例えば、レトルト米飯、無菌包装米飯、冷凍米飯、チルド米飯、乾燥米飯または缶詰米飯などが挙げられる。加工米飯は、公知の方法で容易に製造することができ、かかる製造時に本発明の炊飯用組成物を添加すればよい。また、本発明の炊飯用組成物を加工米飯と別包装とし、加工米飯を食するときに本発明の炊飯用組成物を添加することとしてもよい。
【００２７】
本発明の炊飯用組成物または炊飯穀類は、ＩＬ−１２およびＩＦＮ−γ産生誘導作用を有するため、これらの日常的な摂取によりＴｈ１型免疫を亢進させることが可能であり、Ｔｈ２型免疫が優位である現代人の免疫バランスを調節する効果が期待される。すなわち、本発明の炊飯用組成物または炊飯穀類は、（１）各種疾患に対する抵抗性の向上、（２）免疫抑制状態や免疫機能低下からの回復、（３）アレルギー反応の抑制に有効である。
【００２８】
各種疾患に対する抵抗性の向上という作用を利用することにより、具体的には、本発明の炊飯用組成物または炊飯穀類は、ウイルスもしくはバクテリア等の微生物による感染症；例えば、経口感染によるコレラ菌、毒素原性大腸菌、赤痢菌、サルモネラもしくはウイルス等の感染性腸炎；気道感染によるインフルエンザもしくは風邪症候群；口腔内感染による口内炎、歯周疾患；各種悪性腫瘍、例えば、消化管や呼吸器粘膜、肝・腎等の実質臓器に発生する非上皮性悪性腫瘍の予防や治療に有効である。
【００２９】
免疫抑制状態や免疫機能低下からの回復という作用を利用することにより、具体的には、本発明の炊飯用組成物または炊飯穀類は、腫瘍により誘導される免疫抑制状態や抗癌剤治療により誘導される免疫機能低下からの回復に適しており、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）の発症予防；リステリア菌、サルモネラ菌、結核菌もしくは癩菌等の細胞内寄生性細菌の防除；ストレスに起因するＴｈ１型免疫機能低下の改善等に有効であり、加齢に伴う免疫機能低下の抑制等にも適している。また、細胞内寄生性細菌のクラミジア菌に対する感染防御作用により、クラミジア菌感染との関わりが強く示唆されている動脈硬化発症に対しても予防的に働く。
【００３０】
また、アレルギー反応の抑制という作用を利用することにより、本発明の炊飯用組成物または炊飯穀類は、ＩＬ−１２産生誘導に伴うナイーブＴ細胞からのＴｈ１細胞への分化促進、及びＴｈ１細胞の活性化の促進に有効であり、Ｔｈ２型へとシフトした生体環境をＴｈ１型へと改善する効果を有する。さらに、活性化されたＴｈ１細胞により産生されたＩＦＮ−γに起因するＩＬ−４の産生抑制、及びＩｇＥ抗体産生の低下にも有効である。具体的には、本発明の炊飯用組成物または炊飯穀類は、典型的なアレルギー疾患である気管支喘息、小児喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、花粉症、枯草熱、食物アレルギー、蕁麻疹の一部、昆虫アレルギー、アレルギー性肝炎、アレルギー性胃腸疾患等の予防や治療に適している。
【００３１】
【実施例】
以下、実施例および試験例を挙げて本発明を具体的に説明するが、本発明は、それらによって何ら限定されるものではない。
【００３２】
＜実施例１ラクトバチルス・プランタラムＬ-１３７乾燥菌体の製造方法＞
乳酸菌培養培地であるGYP培地のグルコースを代わりにマルトースを加えた培地10ｍLにラクトバチルス・プランタラムＬ−１３７保存菌を植菌して32℃で18時間培養した。得られた培養液は100倍量の培地に添加して32℃で18時間培養することを２回繰り返し、最終的に90Lのスターターを作成した。得られたスターターを4300Lの培地に添加して32℃で24時間培養を行った。得られた本培養液は蒸気を用いて80℃まで加温し20分間温度保持することにより加熱殺菌を行った。これをフィルター濾過器に通液してラクトバチルス・プランタラムＬ−１３７加熱死菌体と培地を分離し、さらにフィルター濾過器に水を加圧通液することを２回繰返して洗浄を行った。このようにして得られた加熱死菌体は水に懸濁させ、さらに賦形剤としてデキストリンを加えて溶解させてから、スプレードライ装置にて噴霧乾燥を行い、最終的にラクトバチルス・プランタラムＬ−１３７の加熱死菌体を17.8％含有する粉末36kgが得られた。
【００３３】
＜試験例１＞
本試験例では、実施例１で得られたラクトバチルス・プランタラムＬ−１３７菌体粉末（ラクトバチルス・プランタラムＬ−１３７として１７．８％含有）を用いて、マウス脾臓リンパ球のインターロイキン１２産生反応に対するラクトバチルス・プランタラムＬ−１３７菌体の誘導効果を検証した。
マウス（ＢＡＬＢ／ｃ、雌、１２週齢）から無菌的に脾臓を摘出し、ＲＰＭＩ１６４０培地中で脾臓を押しつぶし、♯２００メッシュに通し脾臓細胞浮遊液を得た。脾臓細胞浮遊液の細胞数を自動血球計測装置で測定した後、細胞数を５×１０^６／ｍLの濃度にＲＰＭＩ１６４０培地で調製し、９６穴組織培養プレートに１穴当たり１００μＬを播種した。
【００３４】
ラクトバチルス・プランタラムＬ−137菌体は、リン酸緩衝液で１ｍｇ／ｍLに調製後、湯浴中で１００℃、１０分間の加熱殺菌処理を行い、ＲＰＭＩ１６４０培地でそれぞれ１μｇ／ｍＬに希釈して調製し、１穴当たり１００μＬで加えた。３７℃の５％炭酸ガス培養器内で２４時間培養し、培養後の培養上清をインターロイキン１２ｐ４０のエンザイムイムノアッセイで測定した。エンザイムイムノアッセイは、ラット抗マウスインターロイキン１２ＩｇＧ２ａ抗体（Genzyme 社製）をホウ酸緩衝液で１μｇ／ｍＬに調製した溶液を、９６穴エライサプレートに１穴当たり５０μＬ加え３７℃で1日間放置し、ラット抗マウスインターロイキン１２ＩｇＧ２ａ抗体を各穴に付着させたプレートを用いて行った。
【００３５】
培養上清を１穴当たり５０μＬ加え室温で９０分間放置し、培養上清中のインターロイキン１２ｐ４０をプレートに付着したラット抗マウスインターロイキン１２ＩｇＧ２ａ抗体と結合させた。洗浄後ビオチン化標識したヤギ抗マウスインターロイキン１２ＩｇＧ抗体（R&D system,inc. 社製）をホウ酸緩衝液で０.１μｇ／ｍＬに調製した溶液を、９６穴エライサプレートに１穴当たり１００μＬ加え、プレートに結合させたインターロイキン１２ｐ４０と結合させた。洗浄後ホウ酸緩衝液で１０００倍希釈したアビジン−ＨＲＰ（BD PharMingen 社製）を９６穴エライサプレートに１穴当たり１００μＬ加え、インターロイキン１２ｐ４０と結合したビオチン化標識ヤギ抗マウスインターロイキン１２ＩｇＧ抗体と結合させた。洗浄後、過酸化水素０.００６％とオルトフェニレンジアミン０.１％を含有するリン酸緩衝液を１穴当たり１００μＬ加え、室温で１０分間反応させた後、１.５Ｎ硫酸で反応を停止させた。マイクロプレートリーダーで吸光度４９２ｎｍを測定し、リコンビナントインターロイキン１２で作成した標準曲線から、培養上清中のインターロイキン１２の濃度を求めた。表１にその結果を示す。
【００３６】
【表１】

表１から明らかなごとくラクトバチルス・プランタラムＬ−１３７菌体粉末は、マウス脾臓リンパ球からのインターロイキン１２の産生を大幅に上昇させた。
【００３７】
＜試験例２＞
本発明では、乳酸菌の免疫賦活作用が、炊飯時の熱履歴により損失することがないことを確かめる必要がある。そこで、乳酸菌による免疫賦活作用の熱安定性を検討した。すなわち、乳酸菌を加熱処理し、その乳酸菌によるマウス脾臓リンパ球のインターロイキン１２産生反応誘導効果を検証した。乳酸菌は実施例１で得られたラクトバチルス・プランタラムＬ−１３７菌体粉末を使用した。マウス（ＢＡＬＢ／ｃ、雌、１５週齢）から無菌的に脾臓を摘出し、ＲＰＭＩ１６４０培地中で脾臓を押しつぶし、♯２００メッシュに通し脾臓細胞浮遊液を得た。脾臓細胞浮遊液の細胞数を自動血球計測装置で測定した後、細胞数を５×１０^６／ｍLの濃度にＲＰＭＩ１６４０培地で調製し、９６穴組織培養プレートに１穴当たり１００μＬを播種した。ラクトバチルス・プランタラムＬ−１３７菌体は、リン酸緩衝液で１ｍｇ／ｍＬに調製後、湯浴中１００℃で・２０分間、もしくは１００℃で３０分間、もしくは１００℃で４０分間の加熱処理を行った後、ＲＰＭＩ１６４０培地でそれぞれ１μｇ／ｍＬに希釈して調製し、１穴当たり１００μＬで加えた。３７℃の５％炭酸ガス培養器内で２４時間培養し、培養後の培養上清をインターロイキン１２ｐ４０のエンザイムイムノアッセイで測定した。エンザイムイムノアッセイは、ラット抗マウスインターロイキン１２ＩｇＧ２ａ抗体（Genzyme 社製）をホウ酸緩衝液で１μｇ／ｍＬに調製した溶液を、９６穴エライサプレートに１穴当たり５０μＬ加え３７℃で1日間放置し、ラット抗マウスインターロイキン１２ＩｇＧ２ａ抗体を各穴に付着させたプレートを用いて行った。
【００３８】
培養上清を１穴当たり５０μＬ加え室温で９０分間放置し、培養上清中のインターロイキン１２ｐ４０をプレートに付着したラット抗マウスインターロイキン１２ＩｇＧ２ａ抗体と結合させた。洗浄後ビオチン化標識したヤギ抗マウスインターロイキン１２ＩｇＧ抗体（R&D system,inc. 社製）をホウ酸緩衝液で０．１μｇ／ｍＬに調製した溶液を、９６穴エライサプレートに１穴当たり１００μＬ加え、プレートに結合させたインターロイキン１２ｐ４０と結合させた。洗浄後ホウ酸緩衝液で１０００倍希釈したアビジン−ＨＲＰ（BD PharMingen 社製）を９６穴エライサプレートに１穴当たり１００μＬ加え、インターロイキン１２ｐ４０と結合したビオチン化標識ヤギ抗マウスインターロイキン１２ＩｇＧ抗体と結合させた。洗浄後、過酸化水素０.００６％とオルトフェニレンジアミン０.１％を含有するリン酸緩衝液を１穴当たり１００μＬ加え、室温で１０分間反応させた後、１.５Ｎ硫酸で反応を停止させた。マイクロプレートリーダーで吸光度４９２ｎｍを測定し、リコンビナントインターロイキン１２で作成した標準曲線から、培養上清中のインターロイキン１２ｐ４０の濃度を求めた。表２にその結果を示す。
【００３９】
【表２】

表２から明らかなごとく、４０分間、１００℃で加熱処理してもラクトバチルス・プランタラムＬ−１３７菌体は、マウス脾臓リンパ球に対して、十分なインターロイキン１２の産生を誘導していた。
【００４０】
＜試験例３＞
乳酸菌を添加して米の炊飯を行い、その炊飯米に免疫賦活作用が認められるかを検討した。実施例１で得られたラクトバチルス・プランタラムＬ−１３７菌体粉末（Ｌ１３７として１７．８％含有）を精白米に添加してから通常の炊飯を行い、得られた炊飯米のインターロイキン１２産生反応、およびインターフェロンγ産生反応に対する増強効果をマウス脾臓リンパ球を用いて検証した。マウス（ＢＡＬＢ／ｃ、雌、１２週齢）から無菌的に脾臓を摘出し、ＲＰＭＩ１６４０培地中で脾臓を押しつぶし、♯２００メッシュに通し脾臓細胞浮遊液を得た。脾臓細胞浮遊液の細胞数を自動血球計測装置で測定した後、細胞数を５×１０^６／ｍＬの濃度にＲＰＭＩ１６４０培地で調製し、９６穴組織培養プレートに１穴当たり１００μＬを播種した。ラクトバチルス・プランタラムＬ−137菌体は米１合に対して１００ｍｇ添加して炊飯し、炊飯後の添加米１ｇを１０ｍＬのリン酸緩衝液にホモジナイザーですりつぶして懸濁した後、湯浴中で１００℃、１０分間の加熱殺菌処理を行い、ＲＰＭＩ１６４０培地でさらに１０倍希釈してサンプルとし、１穴当たり１００μＬで加えた。３７℃の５％炭酸ガス培養器内で２４時間培養し、培養後の培養上清をインターロイキン１２ｐ４０、あるいはインターフェロンγのエンザイムイムノアッセイで測定した。エンザイムイムノアッセイは、ラット抗マウスインターロイキン１２ＩｇＧ２ａ抗体（Genzyme 社製）、あるいはラット抗マウスインターフェロンγＩｇＧ１抗体（Endogen 社製）をホウ酸緩衝液で１μｇ／ｍＬ、または２μｇ／ｍＬにそれぞれ調製した溶液を、９６穴エライサプレートに１穴当たり５０μＬ加え３７℃で1日間放置し、ラット抗マウスインターロイキン１２ＩｇＧ２ａ抗体、あるいはラット抗マウスインターフェロンγＩｇＧ１抗体を各穴に付着させたプレートを用いて行った。
【００４１】
培養上清を１穴当たり５０μＬ加えて室温で９０分間放置し、培養上清中のインターロイキン１２ｐ４０、あるいはインターフェロンγをプレートに付着したラット抗マウスインターロイキン１２ＩｇＧ２ａ抗体、あるいはラット抗マウスインターフェロンγＩｇＧ１抗体と結合させた。このプレートを洗浄後、ビオチン化標識したヤギ抗マウスインターロイキン１２ＩｇＧ抗体（R&D system,inc. 社製）、あるいはビオチン化標識したラット抗マウスインターフェロンγＩｇＧ１抗体（Endogen 社製）をホウ酸緩衝液で０.１μｇ／ｍＬ、または０.５μｇ／ｍＬにそれぞれ調製した溶液を、９６穴エライサプレートに１穴当たり１００μL加え、プレートに結合させたインターロイキン１２ｐ４０、あるいはインターフェロンγと結合させた。洗浄後ホウ酸緩衝液で１０００倍希釈したアビジン−ＨＲＰ（BD PharMingen 社製）をそれぞれ９６穴エライサプレートに１穴当たり１００μＬ加え、インターロイキン１２ｐ４０、あるいはインターフェロンγと結合したビオチン化標識ヤギ抗マウスインターロイキン１２ＩｇＧ抗体、あるいはビオチン化標識ラット抗マウスインターフェロンγＩｇＧ１抗体と結合させた。洗浄後、過酸化水素０.００６％とオルトフェニレンジアミン０.１％を含有するリン酸緩衝液を１穴当たり１００μＬ加え、室温で１０分間反応させた後、１.５Ｎ硫酸で反応を停止させた。マイクロプレートリーダーで吸光度４９２ｎｍを測定し、リコンビナントインターロイキン１２、あるいはリコンビナントインターフェロンγで作成した標準曲線から、培養上清中のインターロイキン１２ｐ４０、あるいはインターフェロンγの濃度を求めた。なお、同様の操作で２回炊飯し、それぞれサンプル１、サンプル２として示した。表３にその結果を示す。
【００４２】
【表３】

表３から明らかなごとくラクトバチルス・プランタラムＬ−１３７菌体添加米は、無添加米（通常の炊飯米）と比較して、マウス脾臓リンパ球からのインターロイキン１２ｐ４０、あるいはインターフェロンγ産生を大幅に上昇させた。
【００４３】
＜試験例４＞
乳酸菌の米に対する添加量を検討するため、実施例１で得られたラクトバチルス・プランタラムＬ−１３７菌体粉末（Ｌ１３７として１７．８％含有）を用いて検討を行った。実施例１の菌体粉末を種々の濃度で精白米に添加してからそのまま炊飯して、ラクトバチルス・プランタラムＬ−１３７菌体添加米のインターロイキン１２産生反応に対する増強効果をマウス脾臓リンパ球を用いて検討し、有効添加濃度を検証した。マウス（ＢＡＬＢ／ｃ、雌、１２週齢）から無菌的に脾臓を摘出し、ＲＰＭＩ１６４０培地中で脾臓を押しつぶし、♯２００メッシュに通し脾臓細胞浮遊液を得た。脾臓細胞浮遊液の細胞数を自動血球計測装置で測定した後、細胞数を５×１０^６／ｍｌの濃度にＲＰＭＩ１６４０培地で調製し、９６穴組織培養プレートに１穴当たり１００μｌを播種した。ラクトバチルス・プランタラムＬ−１３７菌体粉末は米１合に対して０、０.１、１、１０、１００ｍｇでそれぞれ添加して炊飯し、炊飯後の添加米１ｇを１０ｍｌのリン酸緩衝液にホモジナイザーですりつぶして懸濁した後、湯浴中で１００℃、１０分間の加熱殺菌処理を行い、ＲＰＭＩ１６４０培地でさらに１０倍希釈してサンプルとし、１穴当たり１００μｌで加えた。３７℃の５％炭酸ガス培養器内で２４時間培養し、培養後の培養上清をインターロイキン１２ｐ４０のエンザイムイムノアッセイで測定した。エンザイムイムノアッセイは、ラット抗マウスインターロイキン１２ＩｇＧ２ａ抗体（Genzyme 社製）をホウ酸緩衝液で１μｇ／ｍｌに調製した溶液を、９６穴エライサプレートに１穴当たり５０μｌ加え３７℃で1日間放置し、ラット抗マウスインターロイキン１２ＩｇＧ２ａ抗体を各穴に付着させたプレートを用いて行った。
【００４４】
培養上清を１穴当たり５０μｌ加え室温で９０分間放置し、培養上清中のインターロイキン１２ｐ４０をプレートに付着したラット抗マウスインターロイキン１２ＩｇＧ２ａ抗体と結合させた。洗浄後ビオチン化標識したヤギ抗マウスインターロイキン１２ＩｇＧ抗体（R&D system,inc. 社製）をホウ酸緩衝液で０．１μｇ／ｍｌに調製した溶液を、９６穴エライサプレートに１穴当たり１００μｌ加え、プレートに結合させたインターロイキン１２ｐ４０と結合させた。洗浄後ホウ酸緩衝液で１０００倍希釈したアビジン−ＨＲＰ（BD PharMingen 社製）を９６穴エライサプレートに１穴当たり１００μｌ加え、インターロイキン１２ｐ４０と結合したビオチン化標識ヤギ抗マウスインターロイキン１２ＩｇＧ抗体と結合させた。洗浄後、過酸化水素０．００６％とオルトフェニレンジアミン０．１％を含有するリン酸緩衝液を１穴当たり１００μｌ加え、室温で１０分間反応させた後、１．５Ｎ硫酸で反応を停止させた。マイクロプレートリーダーで吸光度４９２ｎｍを測定し、リコンビナントインターロイキン１２で作成した標準曲線から、培養上清中のインターロイキン１２ｐ４０の濃度を求めた。表４にその結果を示す。
【００４５】
【表４】

表４から明らかなごとくラクトバチルス・プランタラムＬ−１３７菌体（Ｌ１３７として１７.８％含有）を白米一合に対して０．１ｍｇ以上添加することで、マウス脾臓リンパ球からのインターロイキン１２ｐ４０産生を大幅に上昇させた。したがって、乳酸菌がラクトバチラス・プランタラムＬ−１３７のときは米１合に対して菌体として約０．０２ｍｇ以上を使用すれば活性は充分得られると考えられた。
【００４６】
＜試験例５＞
本発明によると、例えば炊飯米に免疫賦活作用を付加するために乳酸菌を添加してから炊飯を行うが、乳酸菌あるいはその製剤を添加することにより炊飯米の食味などに著しく影響を与えないほうが好ましい。そこで、実施例１で得られたラクトバチラス・プランタラムＬ−１３７粉末を添加して米を炊飯し、得られた炊飯物の食味について、下記の通りに評価試験を行った。
評価試験は、精白米の炊飯物とラクトバチルス・プランタラムＬ−１３７菌体粉末を添加し炊飯した炊飯物（添加量：２０ｍｇ／米1合）との比較により実施した。パネラーは２０代から５０代の男女計１３名で行った。炊飯物Aを精白米の炊飯物、炊飯物Ｂをラクトバチルス・プランタラムＬ−１３７菌体粉末添加炊飯物とし、評価は炊飯物Ａと炊飯物Ｂとの一対比較で「かなり良い」（２点）、「やや良い」（１点）、「同じ」（０点）で、炊飯物Ｂ側を＋とした。評価項目は味、香り、食感の３項目で実施した。
【００４７】
【表５】

表中、ｔは検体統計量を示す。関連２群間の差を１標本ｔ検定法により検定した。すなわち、次式；ｔ＝ｄ・√ｎ／ｓ（式中、ｄは平均点、ｎは群数、ｓは標準偏差を表す。）により算出される検定統計量ｔを、ｔ分布表から求められる両側確立５％の値と比較することにより、有意水準５％として有意義検定を行った。
【００４８】
表５において、味、香りならびに食感のいずれにおいても|t|＜t(n-1,α)であり、精白米の炊飯物とラクトバチルス・プランタラムＬ−１３７菌体添加炊飯物との間に有意な差は認められなかった。これらの結果から明らかなように、ラクトバチルス・プランタラムＬ−１３７菌体添加による炊飯物の食味への影響は見られなかった。
【００４９】
【発明の効果】
本発明によれば、免疫賦活作用を有する炊飯用組成物が提供される。具体的には、乳酸菌またはその処理物を有効成分とすることを特徴とする炊飯用組成物が提供される。本発明の炊飯用組成物は、日常の炊飯時に添加することにより、炊飯物に対し食味に実質的な影響を与えることなく免疫賦活作用を強化することが可能である。すなわち、本発明によれば、日常的な食品の形状のまま摂取するという極めて簡便な方法かつ継続的摂取が可能な方法で、安全かつ安定な生体防御機構の正常化への是正およびその維持が可能となる。[0001]
BACKGROUND OF THE INVENTION
The present invention relates to a composition for cooking rice comprising an lactic acid bacterium having an immunostimulatory action or a processed product thereof as an active ingredient.
[0002]
[Prior art]
The biological defense mechanism that protects our bodies from diseases is a stronger and more efficient acquisition that is learned and educated by contacting the natural innate immune system and the microorganisms in the environment after birth. It consists of an immune system. Furthermore, this acquired immune system is roughly divided into T helper 1 (Th1) type immunity and T helper 2 (Th2) type immunity, and each of them shares a role.
Th1 type immunity is responsible for the elimination of intracellular parasitic bacteria such as viruses and tuberculosis, tumor cells, etc., and Th2 type immunity is the production of antibodies and is responsible for efficient treatment of bacteria and toxins. In sending, it is important that Th1-type immunity and Th2-type immunity work in a balanced manner while controlling each other. However, it can be said that the balance of Th1-type immunity and Th2-type immunity is likely to be caused by environmental cleanup, aging, stress, illness, nutritional deficiencies, etc., so modern people tend to be predominantly Th2-type immunity. It is said that there is. This is associated with infection by microorganisms such as bacteria, yeast, mold, and virus, decreased resistance to tumors, and increased risk of allergic diseases.
[0003]
T cells, macrophages, NK cells, etc. play a central role in defense mechanisms against infection and tumors by microorganisms such as bacteria, yeast, mold, and viruses. The activation of these immunocompetent cells involves a molecule called cytokine, and interleukin 12 (IL-12) plays an important role in the early infection system. IL-12 is a central cytokine that controls the Th1-type immune response, and is produced by macrophages, NK cells, and the like in the early stage of infection. Produced IL-12 induces helper T cells to Th1 type and promotes production of interferon γ (IFN-γ) that activates phagocytic cells, killer cells and the like, thereby eliminating infected cells and various infection sources. . That is, it is important to promote IL-12 production in order to increase the decreased immunity and activate the immune response in the early infection system.
[0004]
When an immune response that is originally intended to protect the body is a result of harming the living body, the immune reaction is called an allergic reaction. The diseases related to this allergic reaction are sometimes collectively referred to as allergic diseases.
It is known that IgE antibodies are largely involved in the pathogenesis of allergic diseases characterized by immediate hypersensitivity reactions. There are five classes of antibodies produced by B cells: IgA, IgM, IgG, IgE, and IgD. Among them, IgG antibody has the highest blood concentration and is a common T cell-dependent antigen-antibody reaction. It plays a central role. The IgG antibody in the blood bound to the antigen binds to the Fc receptor on the effector cells such as neutrophils and NK cells, and activates to promote the elimination of the antigen. Originally, the IgG2a subclass is selectively secreted in a Th1-dominant environment, and the IgG1 subclass is selectively secreted in a Th2-dominant environment to efficiently eliminate antigen molecules such as bacteria and toxins. However, if an abnormality occurs in the balance between Th1 and Th2, B Changes also occur in the class of antibodies produced by the cells. IL-4, which is a Th2-type cytokine, activates B cells responsible for antibody production and promotes IgG antibody production, but when present in excess, changes B cells from IgG antibody producing cells to IgE antibody producing cells.
[0005]
When the produced IgE antibody binds to an antigen, it binds to Fc receptors on granulocytes such as mast cells and basophils instead of effector cells such as neutrophils and NK cells, and activates the cells. This triggers the activated mast cells to release the chemical mediators such as histamine that they originally possessed, and to synthesize and release inflammatory mediators such as prostaglandins and leukotrienes all at once. These inflammatory mediators lead to typical allergic tissue reactions such as smooth muscle contraction, increased vascular permeability, small vessel dilation, increased mucus secretion on the mucosa, leukocyte migration, and nerve stimulation.
In other words, overproduction of IgE antibody is a major factor inducing allergic reaction, and IL-4 induces a class switch to overproduction, and also the environment itself that has shifted too much to the Th2 type that causes excessive production of IL-4. Is a factor in allergic reactions.
Since IL-12 and IFN-γ, which are Th1-type cytokines, suppress the production of IL-4 and IgE antibodies, which are allergic diseases, and have an effect of improving the biological environment shifted to Th2-type to Th1-type. It is effective for such allergic reactions.
[0006]
Originally, health foods using lactic acid bacteria were mainly intended to ingest live cells directly orally and transfer them to the intestine while remaining alive to prepare the intestinal environment. The intestinal flora that builds the intestinal environment is essential for maintaining and promoting the metabolic system such as digestion and absorption, and greatly contributes to the improvement of the balance of the biological environment including the immune system. It can be said that constantly ingesting viable cells to constantly build a new intestinal flora and activate the metabolism leads to health promotion. Moreover, as the inventors have already applied for a patent (Patent Documents 1 to 5), lactic acid bacteria promote T lymphocyte costimulation and B lymphocyte activation suppression, and production of cytokines such as IL-12 and IFN-γ. Since it has an action, it can be said that lactic acid bacteria play an important role in the development of functional foods with a focus on biological defense.
[0007]
Conventionally, materials having an immunostimulatory effect using lactic acid bacteria, particularly lactic acid bacteria killed cells, have been commercialized, but they have often been commercialized in the form of supplements and beverages. After all, since the microbial cell itself having a large particle size is used as a material, it is limited to a form such as a tablet or a suspension. In the health-conscious Europe and the United States, however, pharmaceutical forms such as tablets are apt to be avoided in Japan, and the consciousness that they are taken casually on a daily basis is not readily available.
[0008]
Now, when we look at the Japanese eating habits, the level of living has increased and the eating habits have become richer. On the other hand, the range of choices in eating habits tends to select only tasteful and instant foods. Yes. The bias in nutritional balance leads to lifestyle-related diseases such as hypertension and diabetes, and at the same time adversely affects immune functions that are reduced by aging and stress. This decline in immunity results in a situation that is susceptible to disease. It is necessary to raise the level of consciousness in order to consciously take immunostimulatory foods in such a diet.
[0009]
[Patent Document 1]
JP-A-10-114667
[Patent Document 2]
Japanese Patent Laid-Open No. 10-167972
[Patent Document 3]
JP-A-11-228425
[Patent Document 4]
JP 2001-64174 A
[Patent Document 5]
Japanese Patent Laid-Open No. 2002-80364
[Patent Document 6]
JP 56-131349 A
[Patent Document 7]
JP 58-13356
[Patent Document 8]
JP 59-130157 A
[Patent Document 9]
JP 60-118153 A
[Patent Document 10]
U.S. Pat.No. 4,765,996
[0010]
[Problems to be solved by the invention]
An object of this invention is to provide the composition for rice cooking which can reinforce the immunostimulation effect | action of the cooked rice taken daily on the occasion of cooking rice cooking.
Moreover, an object of this invention is to provide the rice cereals to which the immunostimulatory effect is provided or strengthened.
[0011]
[Means for Solving the Problems]
The inventors of the present invention pay attention to the fact that our Japanese staple food is rice, and rice is the only food that can be eaten even in diets with a wide range of choices. Thus, it was found that supplementing rice with an immunostimulatory effect is very significant in making it a habit. In other words, this leads to daily regulation of immune function without being conscious, that is, maintaining Th1 type immunity and Th2 type immunity in a balanced manner while controlling each other.
As a result of further research, the present inventors can impart or enhance the immunostimulatory effect of cooked rice, can be used for food without side effects, and as an additive that does not impair the flavor and taste of cooked rice, We found that lactic acid bacteria are optimal. In other words, by adding lactic acid bacteria having immunostimulatory action and processed products thereof to cooked rice grains including daily cooked rice, it is possible to correct and maintain a safe and stable normal defense mechanism by food. It becomes possible.
[0012]
The conventional composition for rice cooking is aimed at strengthening in terms of primary function and secondary function when viewed from the viewpoint of food function (Patent Documents 6 to 10, etc.). That is, as a primary function, a composition of minerals and vitamins for the purpose of nutrition enhancement, and as a secondary function, an oil and fat composition for the purpose of long-term stabilization of the shape and texture of cooked rice after cooking, Or it is an enzyme composition aiming at improving the taste and suppressing the odor peculiar to rice.
On the other hand, in order to maintain and promote health and prevent diseases and aging, it is essential to enhance the tertiary function, that is, to enhance the bioregulatory function with foods containing physiologically active substances. However, there are no foods that are ingested on a daily basis, for example, compositions for cooked rice, for the purpose of regulating biological functions.
[0013]
That is, the present invention
(1) A composition for cooking rice having an immunostimulatory action, comprising lactic acid bacteria or a processed product thereof as an active ingredient,
(2) The lactic acid bacterium is a bacterium belonging to the genus Lactobacillus, Streptococcus, Lactococcus, Leuconostoc or Enterococcus, or a mixed bacterium thereof The composition according to (1),
(3) The composition according to (1), wherein the lactic acid bacterium is Lactobacillus plantarum,
(4) The composition according to (1) above, wherein the lactic acid bacterium is Lactobacillus plantarum L-137 (Lactobacillus plantarum L-137),
(5) A method for producing cooked cereal grains with enhanced immunostimulatory action, comprising adding a composition containing lactic acid bacteria or a processed product thereof as an active ingredient during cooking,
(6) Rice cereals having an immunostimulatory action characterized by containing lactic acid bacteria or processed products thereof,
(7) Use of lactic acid bacteria or a processed product thereof for imparting an immunostimulating action to cooked rice grains,
About.
[0014]
DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
The composition for cooking rice in the present invention refers to a composition used for cooking rice. The cereals used in the present invention are not particularly limited, and examples thereof include polished rice, 7-minute rice, germinated rice, and other types of polished rice and polished wheat having different levels of polishing. Hereinafter, although the composition for rice cooking used when cooking rice as a representative is described in detail, it is completely the same also about other grains.
[0015]
The lactic acid bacterium used in the present invention is not particularly limited as long as it is a bacterium capable of producing lactic acid, and specifically, Lactobacillus genus, Streptococcus genus, Lactococcus genus, Leucono Examples thereof include lactic acid bacteria belonging to the genus Stock (Leuconostoc) or the genus Enterococcus. More specifically, examples of the lactic acid bacteria include Lactobaccilus acidophilus, Lactobaccilus brevis, Lactobaccilus buchneri, Lactobacillus casei, Lactobacillus casei, and Lactobacillus casei.・ Delbrukiy (Lactobaccilus delbrueckii), Lactobaccilus fermentum, Lactobaccilus helveticus, Lactobaccilus kefir, Lactobaccilus kefir, Lactobaccilus paracaseris (case) Lactobacillus plantarum), Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus salivarius, Lactobacillus sporogenes, Streptococcus cremoris, Streptococcus thermophilus, Lactococcus lactis, Lactococcus plantarum, Lactococcus raffinocoloffin Leuconostoc citrovorum, Leuconostoc dextranicum, Leuconostoc lactis, Leuconostoc mescenteroides, Enterococcus faecalis, Enterococcus faecalis Examples include fesium (Enterococcus faecium).
[0016]
As the lactic acid bacteria used in the present invention, bacteria belonging to the genus Lactobacillus are particularly preferable. , Lactobacillus fermentum, Lactobacillus helveticus, Lactobacillus kefir, Lactobacillus paracasei, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus rhamnosa Su, La C. bacillus salivaius, Lactobacillus sporogenes, etc. are more preferable. In particular, Lactobacillus plantarum L-137 strain (Lactobacillus plantarum L-137) (FERM BP-08607; transferred from FERM P-15317 deposited on November 30, 1995) Can be suitably used.
In the present invention, one type of lactic acid bacterium may be used alone, or a plurality of lactic acid bacteria may be arbitrarily combined.
[0017]
As the processed product of lactic acid bacteria used in the present invention, a fermented product containing bacterial cells obtained by fermenting food with the lactic acid bacteria used in the present invention may be used as it is, It can be used as it is, or, for example, inactivated by heating, ultraviolet irradiation, etc., in a paste state or dried. The live or dead cells separated from the culture of lactic acid bacteria can be further ground, crushed, enzymatically decomposed, and extracted, and the resulting processed product can be used after sterilization by heating and drying, if necessary.
[0018]
The active ingredient contained in the composition for cooking rice of the present invention is preferably a processed product of lactic acid bacteria other than the living lactic acid bacteria. When commercialized in the form of viable cells, there is a problem that it is difficult to process because it is viable, and there is a demerit that it has to take a limited form such as liquid or viable powder. . Moreover, since it is an indirect action with respect to the immunostimulatory action which we expect, it may have a considerable time before the expected effect appears.
[0019]
In providing a cooked rice having an immunostimulatory effect by adding lactic acid bacteria or a processed product thereof at the time of cooking, the thermal stability of the lactic acid bacteria or the processed product arises as a problem. Usually, the cooked rice is heated after being hydrated, but it is necessary that the immunostimulatory effect of the lactic acid bacteria or the processed product thereof is not lost by these steps. Regarding this point, the immunostimulatory effect of lactic acid bacteria or processed products thereof is not lost by the heating temperature generally performed under the rice cooking conditions, and further, the immunity activation by actually cooking rice after adding lactic acid bacteria or processed products to rice The fact that the activity does not disappear, the cooked rice cooked after adding the lactic acid bacteria or its treated product has a high immunostimulatory effect, compared to the cooked rice without the addition of the lactic acid bacteria or its treated product, It has been sufficiently confirmed in the study up to the present invention.
[0020]
You may make the composition for rice cooking concerning this invention contain a well-known additive substance other than lactic acid bacteria or its processed material. Examples of such additive substances include seasonings such as sodium glutamate or protein hydrolyzate added for the purpose of seasoning and changing the flavor; flavors; minerals such as calcium salts and iron added for the purpose of nutrition enhancement; Vitamins; Gelatinizers such as gelatin and agar added to improve the texture of old rice, etc. and edible fats and oils; Fatty acid compounds that have the effect of delaying the digestion and absorption of starch in the digestive tract It is done.
[0021]
The composition for cooking rice of the present invention may take any form as long as it contains the lactic acid bacterium or a processed product thereof. Specifically, using known excipients or carriers, according to methods known per se, for example, solids such as tablets, granules, capsules, powders, creams or pastes, or solutions, syrups, emulsions or suspensions. Such a liquid shape can be obtained. Excipients or carriers used include solid excipients such as dextrin, corn starch, lactose, cellulose or methylcellulose, or liquid excipients such as water, saline or ethanol.
[0022]
The composition for rice cooking of this invention can also be supplied in the shape generally called reinforced rice, ie, the shape where lactic acid bacteria or its processed material is adhered to the rice. The composition for cooking rice in such a shape is obtained by coating rice or processed rice with lactic acid bacteria or a processed product thereof, immersing rice grains in a solution of lactic acid bacteria or the processed product, and then drying, or drying these steps. Can be combined.
Examples of the coating method include a method in which lactic acid bacteria or a processed product thereof is heated and melted together with fats and oils or waxes, and a liquid in a molten state is sprayed onto rice grains to coat. Or, use lactic acid bacteria or their processed products together with emulsifiers such as sucrose fatty acid ester, glycerin fatty acid ester or sorbitan fatty acid ester, or natural paste such as soybean lecithin, gum arabic, xanthan gum, gelatin or agar to prepare an emulsion by a conventional method. And the method of spraying and coating this emulsion on rice grain is also mentioned.
[0023]
In the shape generally referred to as reinforced rice described above, it is also possible to use a processed product imitating other cereals or cereals instead of rice. In other words, other cereals or processed products imitating cereals are coated with lactic acid bacteria or a processed product thereof, or other cereals or processed products imitating cereals are immersed in a solution of lactic acid bacteria or processed products thereof and then dried. The composition for rice cooking of the said shape can be manufactured by combining these processes. Examples of the other cereals include wheat such as wheat or buckwheat, buckwheat, acne, quinoa or amaranth. The processed product imitating the cereals is a product obtained by processing and molding flour produced from cereals such as rice, wheat or corn, glucomannan prepared from straw or seaweed, or other polysaccharides. And the like. Furthermore, when manufacturing the processed goods which imitated the said cereal, it is possible to manufacture the composition for rice cooking concerning this invention also by kneading | molding, after kneading | mixing the lactic acid bacteria or its processed material to a raw material.
[0024]
In the composition for cooking rice according to the present invention having the above-described shape, when the lactic acid bacterium or the processed product thereof further contains an additive substance, the lactic acid bacterium or the processed product and the additive substance may be mixed in advance and adhered to the rice. Alternatively, the lactic acid bacteria or processed product thereof and the additive substance may be divided into a plurality of times and attached to the rice one after another.
[0025]
Cooked rice with enhanced immunostimulatory action (hereinafter referred to as cooked rice) can be obtained by adding an appropriate amount of the composition for rice cooking of the present invention as described above and cooking. It is also possible to supply the rice cooking composition of the present invention by adding it in a state of adding an appropriate amount to the polished rice in advance, and by cooking such rice-containing composition-containing rice, the immunostimulatory action is also possible. You can get fortified rice.
What is necessary is just to follow the rice cooking method currently performed as said rice cooking method. For example, raw rice is washed with water, usually immersed in water for about 1 hour, drained and steamed, or cooked as it is. In this case, the steaming after draining is carried out using, for example, a continuous business rice cooker, and when cooking as it is without draining, for example, a household rice cooker or its large one is used. Used. The timing for adding the composition for cooking rice of the present invention may be before cooking, during cooking, or after cooking, but is preferably before cooking. Specifically, for example, raw rice may be washed and then added and immersed in water with raw rice to cook rice, or may be added after draining. Since the amount of the rice cooking composition of the present invention varies depending on the type of lactic acid bacterium or the method for treating lactic acid bacterium, it cannot be generally stated. For example, it is preferable to add the composition for cooking rice of the present invention so that the amount of lactic acid bacteria is about 0.01 mg or more, preferably about 0.02 mg or more per 1 rice. The upper limit of the amount of the rice cooking composition of the present invention is not particularly limited as long as the flavor and quality of cooked rice are not significantly impaired.
[0026]
The cooked rice with enhanced immunostimulatory action as described above may take the form of processed cooked rice. Examples of the processed cooked rice include retort cooked rice, aseptic packaged cooked rice, frozen cooked rice, chilled cooked rice, dried cooked rice, and canned cooked rice. Processed cooked rice can be easily produced by a known method, and the composition for cooking rice of the present invention may be added during the production. Moreover, it is good also as making the composition for rice cooking of this invention into a package separately from processed rice, and adding the composition for rice cooking of this invention when eating processed rice.
[0027]
Since the composition for cooking rice or the cooked grains of the present invention has IL-12 and IFN-γ production inducing action, Th1 type immunity can be enhanced by daily intake of these, and Th2 type immunity is superior. It is expected to be effective in regulating the immune balance of modern people. That is, the composition for cooking rice or cooked grains of the present invention is effective for (1) improving resistance to various diseases, (2) recovering from an immunosuppressed state or immune function, and (3) suppressing allergic reactions. .
[0028]
By utilizing the effect of improving resistance to various diseases, specifically, the composition for cooking rice or the cooked grains of the present invention is an infection caused by microorganisms such as viruses or bacteria; for example, Vibrio cholerae by oral infection, Infectious enteritis such as enterotoxigenic Escherichia coli, Shigella, Salmonella or virus; influenza or cold syndrome due to respiratory tract infection; stomatitis due to oral infection; periodontal disease; various malignant tumors such as gastrointestinal tract, respiratory mucosa, liver It is effective in the prevention and treatment of non-epithelial malignant tumors that occur in parenchymal organs such as the kidney.
[0029]
Specifically, the composition for cooking rice or the cooked grains of the present invention is induced by an immunosuppressed state induced by a tumor or an anticancer agent treatment by utilizing the action of recovery from an immunosuppressed state or immune function decline. Suitable for recovery from reduced immune function and prevention of acquired immune deficiency syndrome (AIDS); control of intracellular parasitic bacteria such as Listeria monocytogenes, Salmonella, tuberculosis or Neisseria gonorrhoeae; Th1-type immunity resulting from stress It is effective in improving functional decline and is also suitable for suppressing immune functional decline associated with aging. In addition, the protective action of intracellular parasitic bacteria against Chlamydia bacteria prevents the development of arteriosclerosis, which is strongly suggested to be associated with Chlamydia infection.
[0030]
Further, by utilizing the action of suppressing allergic reaction, the composition for cooking rice or the cooked cereal of the present invention promotes differentiation of naive T cells into Th1 cells and induces Th1 cell activity accompanying IL-12 production induction. It is effective in promoting the conversion to the Th2 type, and has the effect of improving the biological environment shifted to the Th2 type to the Th1 type. Furthermore, it is also effective in suppressing IL-4 production caused by IFN-γ produced by activated Th1 cells and reducing IgE antibody production. Specifically, the composition for cooking rice or rice grains of the present invention is a typical allergic disease such as bronchial asthma, childhood asthma, allergic rhinitis, atopic dermatitis, hay fever, hay fever, food allergy, urticaria Some of them are suitable for the prevention and treatment of insect allergies, allergic hepatitis, allergic gastrointestinal diseases and the like.
[0031]
【Example】
EXAMPLES Hereinafter, although an Example and a test example are given and this invention is demonstrated concretely, this invention is not limited at all by them.
[0032]
<Example 1 Lactobacillus plantarum L-137 dry cell production method>
Lactobacillus plantarum L-137-preserving bacteria were inoculated into 10 mL of a medium in which maltose was added instead of glucose in the GYP medium, which was a lactic acid bacteria culture medium, and cultured at 32 ° C. for 18 hours. The obtained culture broth was added to a 100-fold amount of the medium and cultured at 32 ° C. for 18 hours twice to finally prepare a 90 L starter. The obtained starter was added to 4300 L of medium and cultured at 32 ° C. for 24 hours. The obtained main culture solution was heated and sterilized by heating to 80 ° C. using steam and maintaining the temperature for 20 minutes. This was passed through a filter filter to separate the Lactobacillus plantarum L-137 heated dead cells from the medium, and further washed twice by repeatedly passing water through the filter filter under pressure. . The heat-killed cells thus obtained are suspended in water, further dextrin is added as an excipient and dissolved, and then spray-dried with a spray-dryer, and finally Lactobacillus plantarum. 36 kg of powder containing 17.8% of L-137 heat-killed cells was obtained.
[0033]
<Test Example 1>
In this test example, the Lactobacillus plantarum L-137 cell powder obtained in Example 1 (containing 17.8% as Lactobacillus plantarum L-137) was used to interleukin mouse spleen lymphocytes. The inducing effect of Lactobacillus plantarum L-137 cells on 12 production reactions was verified.
The spleen was aseptically removed from a mouse (BALB / c, female, 12 weeks old), spleen was crushed in RPMI1640 medium, and passed through # 200 mesh to obtain a spleen cell suspension. After measuring the number of cells in the spleen cell suspension with an automatic hemocytometer, the number of cells was 5 × 10 ⁶ / ML was prepared in RPMI 1640 medium and seeded at 100 μL per well in a 96-well tissue culture plate.
[0034]
Lactobacillus plantarum L-137 cells are prepared to 1 mg / mL with a phosphate buffer, then heat-sterilized at 100 ° C. for 10 minutes in a hot water bath, and diluted to 1 μg / mL with RPMI1640 medium. And added at 100 μL per well. The cells were cultured in a 5% carbon dioxide incubator at 37 ° C. for 24 hours, and the culture supernatant after the culture was measured by an interleukin 12p40 enzyme immunoassay. In the enzyme immunoassay, a rat anti-mouse interleukin 12 IgG2a antibody (Genzyme) prepared at 1 μg / mL with borate buffer was added to a 96-well Elisa plate at 50 μL per well and allowed to stand at 37 ° C. for 1 day. This was carried out using a plate in which a rat anti-mouse interleukin 12 IgG2a antibody was attached to each hole.
[0035]
The culture supernatant was added at 50 μL per well and allowed to stand at room temperature for 90 minutes. The interleukin 12p40 in the culture supernatant was bound to the rat anti-mouse interleukin 12 IgG2a antibody attached to the plate. After washing, a biotinylated labeled goat anti-mouse interleukin 12 IgG antibody (R & D system, Inc.) prepared to 0.1 μg / mL with borate buffer was added to a 96-well Elisa plate at 100 μL per well. And interleukin 12p40 bound to the plate. After washing, 100 μL per well of avidin-HRP (BD PharMingen) diluted 1000-fold with borate buffer was added to a 96-well Elisa plate, and biotinylated labeled goat anti-mouse interleukin 12 IgG antibody bound to interleukin 12p40 and Combined. After washing, 100 μL of phosphate buffer containing 0.006% hydrogen peroxide and 0.1% orthophenylenediamine was added per well and reacted at room temperature for 10 minutes, then the reaction was stopped with 1.5N sulfuric acid. It was. The absorbance at 492 nm was measured with a microplate reader, and the concentration of interleukin 12 in the culture supernatant was determined from a standard curve prepared with recombinant interleukin 12. Table 1 shows the results.
[0036]
[Table 1]

As is clear from Table 1, Lactobacillus plantarum L-137 cell powder significantly increased the production of interleukin 12 from mouse spleen lymphocytes.
[0037]
<Test Example 2>
In the present invention, it is necessary to confirm that the immunostimulatory action of lactic acid bacteria is not lost due to the heat history during cooking. Therefore, the thermal stability of the immunostimulatory action by lactic acid bacteria was examined. That is, lactic acid bacteria were heat-treated, and the interleukin 12 production induction effect of mouse spleen lymphocytes by the lactic acid bacteria was verified. As the lactic acid bacteria, Lactobacillus plantarum L-137 cell powder obtained in Example 1 was used. The spleen was aseptically removed from a mouse (BALB / c, female, 15 weeks old), spleen was crushed in RPMI1640 medium, and passed through # 200 mesh to obtain a spleen cell suspension. After measuring the number of cells in the spleen cell suspension with an automatic hemocytometer, the number of cells was 5 × 10 ⁶ / ML was prepared in RPMI 1640 medium and seeded at 100 μL per well in a 96-well tissue culture plate. Lactobacillus plantarum L-137 cells are adjusted to 1 mg / mL with phosphate buffer, then heat-treated at 100 ° C. for 20 minutes, or at 100 ° C. for 30 minutes, or at 100 ° C. for 40 minutes. Then, each solution was diluted to 1 μg / mL with RPMI1640 medium and added at 100 μL per well. The cells were cultured in a 5% carbon dioxide incubator at 37 ° C. for 24 hours, and the culture supernatant after the culture was measured by an interleukin 12p40 enzyme immunoassay. In the enzyme immunoassay, a rat anti-mouse interleukin 12 IgG2a antibody (Genzyme) prepared at 1 μg / mL with borate buffer was added to a 96-well Elisa plate at 50 μL per well and allowed to stand at 37 ° C. for 1 day. This was carried out using a plate in which a rat anti-mouse interleukin 12 IgG2a antibody was attached to each hole.
[0038]
The culture supernatant was added at 50 μL per well and allowed to stand at room temperature for 90 minutes. The interleukin 12p40 in the culture supernatant was bound to the rat anti-mouse interleukin 12 IgG2a antibody attached to the plate. After washing, a solution prepared by adding biotinylated labeled goat anti-mouse interleukin 12 IgG antibody (R & D system, Inc.) to 0.1 μg / mL with borate buffer was added to a 96-well Elisa plate at 100 μL per well. And interleukin 12p40 bound to the plate. After washing, 100 μL per well of avidin-HRP (BD PharMingen) diluted 1000-fold with borate buffer was added to a 96-well Elisa plate, and biotinylated labeled goat anti-mouse interleukin 12 IgG antibody bound to interleukin 12p40 and Combined. After washing, 100 μL of phosphate buffer containing 0.006% hydrogen peroxide and 0.1% orthophenylenediamine was added per well and reacted at room temperature for 10 minutes, then the reaction was stopped with 1.5N sulfuric acid. It was. The absorbance at 492 nm was measured with a microplate reader, and the concentration of interleukin 12p40 in the culture supernatant was determined from the standard curve prepared with recombinant interleukin 12. Table 2 shows the results.
[0039]
[Table 2]

As is apparent from Table 2, Lactobacillus plantarum L-137 cells induced sufficient production of interleukin 12 on mouse spleen lymphocytes even after heat treatment at 100 ° C. for 40 minutes. .
[0040]
<Test Example 3>
Lactic acid bacteria were added to cook rice, and it was examined whether the cooked rice has an immunostimulatory effect. Lactobacillus plantarum L-137 cell powder obtained in Example 1 (containing 17.8% as L137) was added to polished rice and then cooked normally, and the resulting rice cooked rice interleukin 12 was used. The enhancement effect on the production reaction and interferon γ production reaction was verified using mouse spleen lymphocytes. The spleen was aseptically removed from a mouse (BALB / c, female, 12 weeks old), spleen was crushed in RPMI1640 medium, and passed through # 200 mesh to obtain a spleen cell suspension. After measuring the number of cells in the spleen cell suspension with an automatic hemocytometer, the number of cells was 5 × 10 ⁶ / ML was prepared in RPMI 1640 medium, and 100 μL per well was seeded in a 96-well tissue culture plate. Lactobacillus plantarum L-137 cells are cooked by adding 100 mg of rice per rice, and 1 g of the added rice after cooking is suspended in 10 mL phosphate buffer with a homogenizer and suspended in a hot water bath. Was sterilized by heating at 100 ° C. for 10 minutes, further diluted 10-fold with RPMI1640 medium to obtain a sample, and added at 100 μL per well. The cells were cultured in a 5% carbon dioxide incubator at 37 ° C. for 24 hours, and the culture supernatant after the culture was measured by an enzyme immunoassay for interleukin 12p40 or interferon γ. In the enzyme immunoassay, a solution obtained by preparing a rat anti-mouse interleukin 12 IgG2a antibody (Genzyme) or a rat anti-mouse interferon γ IgG1 antibody (Endogen) to 1 μg / mL or 2 μg / mL with borate buffer, 50 μL per well was added to a 96-well Elisa plate and allowed to stand at 37 ° C. for 1 day, and this was carried out using a plate with rat anti-mouse interleukin 12 IgG2a antibody or rat anti-mouse interferon γ IgG1 antibody attached to each hole.
[0041]
Add 50 μL of culture supernatant per well and let stand at room temperature for 90 minutes, and rat anti-mouse interleukin 12 IgG2a antibody or rat anti-mouse interferon γ IgG1 antibody with interleukin 12p40 or interferon γ attached to the plate on the plate Combined. After washing the plate, biotinylated labeled goat anti-mouse interleukin 12 IgG antibody (R & D system, Inc.) or biotinylated labeled rat anti-mouse interferon γ IgG1 antibody (Endogen) was washed with borate buffer. 100 μL per well of a solution prepared at 0.1 μg / mL or 0.5 μg / mL was added to a 96-well Elisa plate, and bound to interleukin 12p40 or interferon γ bound to the plate. After washing, 100 μL / well of avidin-HRP (BD PharMingen) diluted 1000-fold with borate buffer was added to each 96-well Elisa plate, and biotinylated labeled goat anti-mouse bound to interleukin 12p40 or interferon γ Interleukin-12 IgG antibody or biotinylated labeled rat anti-mouse interferon γIgG1 antibody was bound. After washing, 100 μL of phosphate buffer containing 0.006% hydrogen peroxide and 0.1% orthophenylenediamine was added per well and reacted at room temperature for 10 minutes, then the reaction was stopped with 1.5N sulfuric acid. It was. The absorbance at 492 nm was measured with a microplate reader, and the concentration of interleukin 12p40 or interferon γ in the culture supernatant was determined from a standard curve prepared with recombinant interleukin 12 or recombinant interferon γ. In addition, it cooked twice by the same operation, and was shown as the sample 1 and the sample 2, respectively. Table 3 shows the results.
[0042]
[Table 3]

As is apparent from Table 3, Lactobacillus plantarum L-137 added rice significantly increased interleukin 12p40 or interferon γ production from mouse spleen lymphocytes compared to non-added rice (normal cooked rice) Was raised.
[0043]
<Test Example 4>
In order to examine the amount of lactic acid bacteria added to rice, Lactobacillus plantarum L-137 cell powder (containing 17.8% as L137) obtained in Example 1 was used. The fungal powder of Example 1 was added to polished rice in various concentrations and then cooked as it was, and the effect of Lactobacillus plantarum L-137 added rice on the interleukin 12 production reaction was enhanced by mouse spleen lymphocytes. The effective addition concentration was verified. The spleen was aseptically removed from a mouse (BALB / c, female, 12 weeks old), spleen was crushed in RPMI1640 medium, and passed through # 200 mesh to obtain a spleen cell suspension. After measuring the number of cells in the spleen cell suspension with an automatic hemocytometer, the number of cells was 5 × 10 ⁶ Prepared in RPMI 1640 medium at a concentration of / ml and seeded 100 μl per well in a 96-well tissue culture plate. Lactobacillus plantarum L-137 cell powder is added to 0, 0.1, 1, 10, 100 mg of rice per rice and cooked, and 1 g of added rice after cooking is 10 ml of phosphate buffer. After suspending in a homogenizer, the mixture was sterilized by heating at 100 ° C. for 10 minutes in a hot water bath, further diluted 10-fold with RPMI1640 medium to obtain a sample, and added at 100 μl per well. The cells were cultured in a 5% carbon dioxide incubator at 37 ° C. for 24 hours, and the culture supernatant after the culture was measured by an interleukin 12p40 enzyme immunoassay. In the enzyme immunoassay, a solution prepared by preparing rat anti-mouse interleukin 12 IgG2a antibody (Genzyme) to 1 μg / ml with borate buffer was added to a 96-well Elisa plate at 50 μl per well and left at 37 ° C. for 1 day. This was carried out using a plate in which a rat anti-mouse interleukin 12 IgG2a antibody was attached to each hole.
[0044]
The culture supernatant was added in an amount of 50 μl per well and allowed to stand at room temperature for 90 minutes. The interleukin 12p40 in the culture supernatant was bound to the rat anti-mouse interleukin 12 IgG2a antibody attached to the plate. After washing, biotinylated labeled goat anti-mouse interleukin 12 IgG antibody (R & D system, Inc.) prepared in boric acid buffer to 0.1 μg / ml was added to a 96-well Elisa plate at 100 μl per well. And interleukin 12p40 bound to the plate. After washing, 100 μl per well of avidin-HRP (BD PharMingen) diluted 1000-fold with borate buffer was added to a 96-well Elisa plate, and biotinylated labeled goat anti-mouse interleukin 12 IgG antibody bound to interleukin 12p40 and Combined. After washing, 100 μl of phosphate buffer containing 0.006% hydrogen peroxide and 0.1% orthophenylenediamine was added per well and allowed to react at room temperature for 10 minutes, after which the reaction was stopped with 1.5N sulfuric acid. It was. The absorbance at 492 nm was measured with a microplate reader, and the concentration of interleukin 12p40 in the culture supernatant was determined from the standard curve prepared with recombinant interleukin 12. Table 4 shows the results.
[0045]
[Table 4]

As clearly shown in Table 4, Lactobacillus plantarum L-137 (containing 17.8% as L137) is added in an amount of 0.1 mg or more per white rice so that interleukin 12p40 from mouse spleen lymphocytes is added. Production was greatly increased. Therefore, when the lactic acid bacterium was Lactobacillus plantarum L-137, it was considered that sufficient activity could be obtained by using about 0.02 mg or more of cells as a microbial cell per rice.
[0046]
<Test Example 5>
According to the present invention, for example, in order to add an immunostimulatory effect to cooked rice, cooking is performed after adding lactic acid bacteria, but it is preferable not to significantly affect the taste of cooked rice by adding lactic acid bacteria or a preparation thereof. . Therefore, the Lactobacillus plantarum L-137 powder obtained in Example 1 was added to cook rice, and the taste of the resulting cooked food was evaluated as follows.
The evaluation test was carried out by comparing rice cooked rice with polished rice and rice cooked with the addition of Lactobacillus plantarum L-137 cell powder (added amount: 20 mg / one rice). The panelists were 13 men and women in their 20s to 50s. Rice cooked rice A is rice cooked with polished rice, rice cooked B is cooked with Lactobacillus plantarum L-137 cell powder, and the evaluation is “pretty good” by paired comparison between cooked rice A and cooked rice B (2 Point), “slightly good” (1 point), “same” (0 point), and the cooked rice B side was set to +. Evaluation items were implemented with three items of taste, aroma, and texture.
[0047]
[Table 5]

In the table, t represents the specimen statistic. Differences between the two related groups were tested by the 1-sample t-test. That is, the test statistic t calculated from the following formula: t = d · √n / s (where d is the average point, n is the number of groups, and s is the standard deviation) is obtained from the t distribution table. The significance test was performed at a significance level of 5% by comparing with the value of 5% established on both sides.
[0048]
In Table 5, it is | t | <t (n-1, α) in any of taste, aroma, and texture, and the cooked rice of polished rice and the cooked rice added with Lactobacillus plantarum L-137 cells There was no significant difference between them. As is clear from these results, no effect on the taste of cooked rice was observed due to the addition of Lactobacillus plantarum L-137 cells.
[0049]
【The invention's effect】
According to the present invention, a composition for cooking rice having an immunostimulatory effect is provided. Specifically, a composition for cooking rice is provided, which comprises lactic acid bacteria or a processed product thereof as an active ingredient. By adding the composition for rice cooking of the present invention at the time of daily rice cooking, it is possible to enhance the immunostimulatory action without substantially affecting the taste of the cooked rice. That is, according to the present invention, it is possible to correct and maintain a safe and stable biological defense mechanism in a normal manner by a very simple method of ingesting in the form of a daily food and a method that allows continuous ingestion. It becomes possible.

Claims

In producing raw rice by cooking raw rice, Lactobacillus plantarum L-137 ( Lactobacillus plantarum L-137) ( FERM BP-08607 ) A method for producing cooked rice having an immunostimulatory action, characterized by adding dead cell bodies.

Lactobacillus plantarum L-137 ( Lactobacillus plantarum L-137) ( FERM BP-08607 ) The production method according to claim 1, wherein 0.02 mg to 17.8 mg of the dead cells are added per raw material rice.

Lactobacillus plantarum L-137 ( Lactobacillus plantarum L-137) ( FERM BP-08607 ) The production method according to claim 1, wherein 0.178 to 17.8 mg of dead cell body is added per raw material rice.