【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、ヒト又は動物のためのウィルス性疾患の治療、発症予防、感染予防に有用である抗ウィルス剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
従来、フェノキサジン誘導体である、２−アミノフェノキサジン−３−オン誘導体及び３−アミノフェノキサジン−２−オン誘導体は、ガン細胞に対して強い抗腫瘍活性を示すことが知られている（例えば、特許文献１、特許文献２を参照）。
しかし、これらフェノキサジン誘導体が、それら以外の疾患に対して有効であることは知られていない。
【０００３】
【特許文献１】
特開平０２−１９３９８４号公報（第４頁左下欄、第２−７行）
【特許文献２】
特許第３２９０１７２号明細書（第５頁左欄、第３２−４０行）
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、２−アミノフェノキサジン−３−オン誘導体及び３−アミノフェノキサジン−２−オン誘導体の新規な用途を提供する。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
本発明は、式Iで表される２−アミノフェノキサジン−３−オン誘導体又はその薬理学的に許容される塩若しくはエステルを有効成分として含有する抗ウィルス剤を提供する。ここで式I中、Ｒ1、Ｒ2は、それぞれ独立に水素原子、炭素原子数１〜４の低級アルキル基、炭素原子数１〜４のアシル基及び炭素原子数１〜４のアシルオキシ基からなる群から任意に選択される。
【０００６】
式I
【化３】
【０００７】
また、本発明は式IIで表される３−アミノフェノキサジン−２−オン誘導体又はその薬理学的に許容される塩若しくはエステルを有効成分として含有する抗ウィルス剤を提供する。ここで式II中、Ｒ1、Ｒ2は、それぞれ独立に水素原子、炭素原子数１〜４の低級アルキル基、炭素原子数１〜４のアシル基及び炭素原子数１〜４のアシルオキシ基からなる群から任意に選択される。
【０００８】
式II
【化４】
【０００９】
【発明の実施の形態】
本発明の抗ウィルス剤は、式Iで表される２−アミノフェノキサジン−３−オン誘導体を有効性成分又はその薬理学的に許容される塩若しくはエステルを有効成分として含む。
【００１０】
式I
【化５】
【００１１】
式I中、Ｒ1、Ｒ2は、それぞれ独立に水素原子、炭素原子数１〜４の低級アルキル基、炭素原子数１〜４のアシル基及び炭素原子数１〜４のアシルオキシ基からなる群から任意に選択され、好ましくは水素原子、炭素原子数１〜３の低級アルキル基、炭素原子数１〜３のアシル基及び炭素原子数１〜３のアシルオキシ基からなる群から任意に選択される。好ましくは、Ｒ1がメチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ヒドロキシメチル基、ヒドロキシエチル基、メトキシ基、エトキシ基、メトキシメチル基、エトキシメチル基から選択され、Ｒ2がメチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ヒドロキシメチル基、ヒドロキシエチル基、メトキシ基、エトキシ基、メトキシメチル基、エトキシメチル基から選択される。さらに好ましくは、Ｒ1がメチル基かつＲ2が水素原子であり、あるいはＲ1がエチル基かつＲ2が水素原子である。
【００１２】
また、本発明の抗ウィルス剤は、式IIで表される３−アミノフェノキサジン−２−オン誘導体又はその薬理学的に許容される塩若しくはエステルを有効成分として含む。
【００１３】
式II
【化６】
【００１４】
式II中、Ｒ1、Ｒ2は、それぞれ独立に水素原子、炭素原子数１〜４の低級アルキル基、炭素原子数１〜４のアシル基及び炭素原子数１〜４のアシルオキシ基からなる群から任意に選択され、好ましくは水素原子、炭素原子数１〜３の低級アルキル基、炭素原子数１〜３のアシル基及び炭素原子数１〜３のアシルオキシ基からなる群から任意に選択される。好ましくは、Ｒ1がメチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ヒドロキシメチル基、ヒドロキシエチル基、メトキシ基、エトキシ基、メトキシメチル基、エトキシメチル基から選択され、Ｒ2がメチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ヒドロキシメチル基、ヒドロキシエチル基、メトキシ基、エトキシ基、メトキシメチル基、エトキシメチル基から選択される。さらに好ましくは、Ｒ1が水素原子かつＲ2がメチル基であり、あるいはＲ1が水素原子かつＲ2がエチル基である。
【００１５】
本発明の抗ウィルス剤で使用しうる塩は、例えば無機塩として、ナトリウム塩、カリウム塩などのアルカリ金属塩；マグネシウム塩などのアルカリ土類金属塩；銅塩、亜鉛塩などの金属塩類；有機塩として、ジエタノールアミン塩、２−アミノ−２−エチル−１，３−プロパンジオール塩、トリエタノールアミン塩などのアルカノールアミン塩；モルホリン塩、ピペラジン塩、ピペリジン塩などのヘテロ環アミン塩；アンモニウム塩、アルギニン塩、リジン塩、ヒスチジン塩などの塩基性アミノ酸塩を挙げることができる。ここで、塩基性アミノ酸は、Ｄ−体、Ｌ−体或いはこれらの混合物であってもよい。
【００１６】
本発明の抗ウィルス剤で使用しうるエステルとしては例えば、蟻酸エステル、酢酸エステル、プロピオン酸エステルを挙げることができる。
【００１７】
式IまたはIIで表される化合物は、好ましくは特許第３２９０１７２号公報、特開平０２−１９３９８４号公報に記載の方法に従い製造されるが、これらに限定されない。
【００１８】
本発明の抗ウィルス剤は、ウィルスの感染を抑制する効果がある。本発明でいう「抗ウィルス剤」とは、ウィルス性疾患の治療、発症予防、感染予防の目的に使用される薬剤を包含する。
【００１９】
本発明の抗ウィルス剤は、ヒト又は動物（イヌ、ネコなどのペット；ウシ、ウマ、ブタなどの家畜；ニワトリなどの家禽；マグロ、ハマチなどの魚類など）のために使用される。
【００２０】
本発明でいうウィルスは特に限定されないが、以下に示す分類に含まれるウィルスを包含する。以下、本発明でいうウィルスについて説明する。
【００２１】
ウィルスは、核酸の性状によって、ＲＮＡウィルスとＤＮＡウィルスに二分される。
Ａ．ＲＮＡウィルス
ＲＮＡウィルスは、１本鎖ＲＮＡウィルス及び２本鎖ＲＮＡウィルスに二分される。
１）１本鎖ＲＮＡウィルスは、ウィルス遺伝子自身がｍＲＮＡ活性を担うプラス鎖ＲＮＡウィルス、ウィルス遺伝子に相補的な遺伝子がｍＲＮＡ活性を担うマイナス鎖ＲＮＡウィルス、及びＲＮＡ−ＤＮＡ型に更に細分化される。
ａ）プラス鎖ＲＮＡウィルスは、エンベロープ（外被）の有無により更に細分化される。プラス鎖ＲＮＡウィルスであってかつエンベロープの無いウィルスとしては、ポリオウィルス（Poliovirus）、コクサッキーウィルス（Coxsackie virus）、ヒトライノウィルス（Human rhinovirus A）、Ａ型肝炎ウィルス（Hepatitis A virus）、脳心炎ウィルス（Encephalocarditis virus）などを含むピコルナウィルス科（Picornaviridae）、及びカリシウィルス科（Caliciviridae）、科は未分類であるＥ型肝炎ウィルス（Hepatitis E virus）などを含む。プラス鎖ＲＮＡウィルスであってかつエンベロープの有るウィルスとしては、シンドビスウィルス（Sindbis virus）、風疹ウィルス(Rubella virus)などを含むトガウィルス科（Togaviridae）、日本脳炎ウィルス(Japanese encephalitis virus)、黄熱ウィルス（Yellow fever virus）、Ｃ型肝炎ウィルス（Hepatitis C virus）などを含むフラビウィルス科（Flaviviridae）、及びコロナウィルス科（Coronaviridae）などを含む。
ｂ）マイナス鎖ＲＮＡウィルスはエンベロープを有し、狂犬病ウィルス(Rabies virus)、水疱性口内炎ウィルス（Vesicular stomatitis virus）などを含むラブドウィルス科（Rhabdoviridae）、エボラウィルス（Ebola virus）、マルブルグウィルス（Marburg virus）などを含むフィロウィルス科（Filoviridae）、センダイウィルス（Hemagglutinating virus of Japan）、はしかウィルス（Measles virus）、ＲＳウィルス（RS virus）、おたふくかぜウィルス（Mumpus virus）などを含むパラミキソウィルス科（Paramyxoviridae）、インフルエンザウィルス(Human influenza virus) などを含むオルソミキソウィルス科（Orthomyxoviridae）、腎症候性出血熱ウィルス（Hantaan virus）などを含むブニヤウィルス科（Bunyaviridae）、及びリンパ性脈絡髄膜炎ウィルス(Lymphocytic choriomeningitis virus)などを含むアレナウィルス科（Arenaviridae）などを含む。
ｃ）ＲＮＡ−ＤＮＡウィルスはエンベロープを有し、ヒトＴ細胞白血病ウィルスI型（Human T-cell leukemia virus type I）、ヒト後天性免疫不全ウィルス(Human immunodeficiency syndrome virus)などを含むレトロウィルス科(Retroviridae)などを含む。
２）２本鎖ＲＮＡウィルスは、エンベロープが無く、ロタウィルス（Rotavirus A）などを含むレオウィルス科（Reoviridae）、及びビルナウィルス科（Birnaviridae）などを含む。
【００２２】
Ｂ．ＤＮＡウィルス
ＤＮＡウィルスは、１本鎖ＤＮＡウィルス、不完全２本鎖ＤＮＡウィルス及び２本鎖ＤＮＡウィルスに分類される。
１）１本鎖ＤＮＡウィルスはエンベロープが無く、ヒトパルボウィルス（Human parvo virus）、ブタパルボウィルス（Porcine parvo virus）、イヌパルボウイルス (Canine parvo virus)、Ｂ１９ウィルス（B19 virus）、アデノ関連ウィルス２（Adeno-associated virus 2）などを含むパルボウィルス科（Parvoviridae）などを含む。
２）不完全２本鎖ＤＮＡウィルスはエンベロープが無く、Ｂ型肝炎ウィルス（Hepatitis B virus）などを含むヘバドナウィルス科(Hepadnaviridae）などを含む。
３）２本鎖ＤＮＡウィルスはエンベロープの有無により更に分類される。エンベロープを有する２本鎖ＤＮＡウィルスとしては、単純ヘルペスウィルス(Herpes simplex virus)、サイトメガロウィルス(cytomegalo virus)、ＥＢウィルス(EB virus) などを含むヘルペスウィルス科(Herpesviridae)、ワクチニアウィルス(vaccinia virus)、伝染性軟属腫ウィルス（Molluscum contagiosum virus）などを含むポックスウィルス科(Poxviridae)、及びイリドウィルス科(Iridoviridae)などを含む。エンベロープの無い２本鎖ＤＮＡウィルスとしては、ポリオマーウィルス(polyoma virus)、ＳＶ４０(SV 40)、ＪＣウィルス（JC virus）、ヒトパピローマウィルス（Human papilloma virus）などを含むパポーバウィルス科(Papovaviridae)、ヒトアデノウィルス(human adenovirus)などを含むアデノウィルス科(Adenoviridae)などを含む。
【００２３】
本発明の抗ウィルス剤は特に、一本鎖ＲＮＡウィルスまたは一本鎖ＤＮＡウィルスに有効である。本発明の抗ウィルス剤は特に、エンベロープの無いＲＮＡウィルスまたはＤＮＡウィルスに対して有効である。更には、本発明の抗ウィルス剤は、一本鎖ＲＮＡウィルスであってかつエンベロープの無いウィルス、或いは一本鎖ＤＮＡウィルスであってかつエンベロープの無いウィルスに対して顕著に有効である。
【００２４】
本発明の抗ウィルス剤によるウィルスの感染を阻止する作用機構は明らかではないが、ウィルスの増殖、複製を阻止することによると考えられる。
【００２５】
本発明の抗ウィルス剤は、一般的な医薬製剤の形態として用いられうる。該製剤には、通常使用される充填剤、増量剤、結合剤、付湿剤、崩壊剤、表面活性剤、滑沢剤などの希釈剤、或いは賦形剤を配合することができる。本発明の抗ウィルス剤は、各種の形態が治療目的に応じて選択でき、その代表的なものとして、錠剤、丸剤、散剤、液剤、懸濁剤、乳剤、顆粒剤、カプセル剤、坐剤、液剤、懸濁剤などの注射剤、点眼剤、または軟膏剤が挙げられる。
【００２６】
錠剤の形態に成形する担体としては、慣用されている各種の担体を使用することができる。例えば、乳糖、白糖、ブドウ糖、塩化ナトリウム、尿素、デンプン、炭酸カルシウム、カオリン、結晶セルロース、ケイ酸などの賦形剤；水、エタノール、プロパノール、単シロップ、ブドウ糖液、デンプン液、ゼラチン溶液、カルボキシメチルセルロース、セラック、メチルセルロース、リン酸カリウム、ポリビニルピロリドンなどの結合剤；乾燥デンプン、アルギン酸ナトリウム、カンテン末、ラミナラン末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸モノグリセリド、デンプン、乳糖などの崩壊剤；白糖、ステアリン、カカオバター、水素添加油などの崩壊抑制剤；第４級アンモニウム塩基、ラウリル硫酸ナトリウムなどの吸収促進剤、グリセリン、デンプンなどの保湿剤；デンプン、乳糖、カオリン、ベントナイト、コロイド状ケイ酸などの吸着剤；精製タルク、ステアリン酸塩、ホウ酸末、ポリエチレングリコールなどの滑沢剤を使用できる。さらに錠剤は必要に応じ通常の剤皮を施した錠剤、例えば糖衣錠、ゼラチン被包錠、腸溶被錠、フィルムコーティング錠或いは二重錠、多層錠とすることができる。
【００２７】
丸剤の形態に成形するに際しては、担体としてこの分野で従来公知のものを広く使用できる。その例としては、ブドウ糖、乳糖、デンプン、カカオ脂、硬化植物油、カオリン、タルクなどの賦形剤；アラビアゴム末、トラガント末、ゼラチン、エタノールなどの結合剤；ラミナラン、カンテンなどの崩壊剤を使用できる。
【００２８】
カプセル剤は、常法に従い、通常有効成分化合物を上記で例示した各種の担体と混合して硬質ゼラチンカプセル、軟質カプセルなどに充填して調製される。
【００２９】
坐剤の形態に成形するに際しては、担体として従来公知のものを広く使用できる。その例としては、ポリエチレングリコール、カカオ脂、高級アルコール、高級アルコールのエステル類、ゼラチン、半合成グリセライドなどを挙げることができる。
【００３０】
注射剤として調製される場合、液剤、乳剤及び懸濁剤は殺菌され、かつ血液となど張であるのが好ましい。これらの形態に成形するに際しては、希釈剤としてこの分野において慣用されているものをすべて使用できる。例えば、水、エタノール、マクロゴール、プロピレングリコール、エトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類などを使用できる。なお、この場合など張性の溶液を調製するに充分な量の食塩、ブドウ糖またはグリセリンを医薬製剤中に含有せしめてもよく、また通常の溶解補助剤、緩衝剤、無痛化剤などを添加してもよい。
【００３１】
軟膏剤として調製される場合には、この分野で従来公知の油性基剤を広く使用することができる。例えば、ラッカセイ油、ゴマ油、ダイズ油、サフラワー油、アボカド油、ヒマワリ油、トウモロコシ油、ナタネ油、メンジツ油、ヒマシ油、ツバキ油、ヤシ油、オリーブ油、ケシ油、カカオ油、牛脂、豚脂、羊毛油などの油脂類；ワセリン、パラフィン、シリコン油、スクワランなどの鉱物油；イソプロピルミリステート、ｎ−ブチルミリステート、イソプロピルリノレート、アセチルリシノレート、ステアリルリシノレート、ジエチルセバケート、ジイソプロピルアジペート、セチルアルコール、ステアリルアルコール、サラシミツロウ、鯨ロウ、木ロウなどの高級脂肪酸エステル、高級脂肪族アルコール及びワックス類、ステアリン酸、オレイン酸、パルミチン酸などの高級脂肪酸；炭素原子数１２〜１８の飽和又は不飽和脂肪酸のモノ−、ジ−、トリグリセライド混合物である。本発明の抗ウィルス剤では、これら基剤を１種単独で或いは２種以上混合して使用してもよい。
【００３２】
本発明の抗ウィルス剤には、慣用の添加剤、例えば金属石鹸、動物・植物抽出物、ビタミン剤、ホルモン剤、アミノ酸などの薬効剤、界面活性剤、色素、染料、顔料、香料、紫外線吸収剤、保湿剤、増粘剤、酸化防止剤、金属イオン封鎖剤、ｐＨ調整剤を必要に応じて適宜配合することができる。
【００３３】
また、本発明の抗ウィルス剤は、洗浄液中に配合することができ、例えば口腔洗浄剤、眼洗浄剤、膣洗浄剤として有用である。
【００３４】
洗浄剤として調製する場合には、この分野で通常用いられているものを配合することができ、例えば陽イオン性、陰イオン性、両イオン性、非イオン性の各種の界面活性剤；高級アルコールなどの油剤；カチオン化セルロースなどの毛髪柔軟剤；グリセリン、プロピレングリコール、ソルビット、マルチトールなどの保湿剤；メチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシビニルポリマー、ポリビニルアルコールなどの粘度調整剤；加水分解コラーゲンなどの皮膜形成剤；エタノールなどの溶剤；クエン酸、塩酸などのｐＨ調整剤；酸化防止剤；金属封鎖剤；殺菌剤；防腐剤；無機塩；抗フケ剤；ビタミン剤；色素；香料を任意に組み合わせて使用できる。
【００３５】
本発明の抗ウィルス剤は、スプレー塗布、刷毛塗りなどの方法や布雑巾、ウェットティッシュ、ペーパータオル、おしぼりなどに含浸させ或いはエアゾールとして用いるなどして、医療用具、医療器具、壁、床、日用品・一般用具類（例えば、家具類、メガネ、食器など）の清拭に用いることができる。本発明の抗ウィルス剤は、衣類、食品、食器、ガーゼ、シーツ、おむつ、カーテンなどの洗浄剤、仕上げ剤、柔軟剤、漂白剤などに添加することによって、抗ウィルス効果を発揮することもできる。また本発明の抗ウィルス剤は、石鹸、シャンプー、リンスなどの浴用剤に添加することによって、抗ウィルス効果を発揮することもできる。
【００３６】
本発明の抗ウィルス剤を、カーペット、カーテン、衣類などの繊維に予め塗布することにより、抗ウィルス作用を持つカーペット、カーテン、衣類などを製造できる。また本発明の抗ウィルス剤を、空気清浄機などの機械内部或いは活性炭に含有させることにより抗ウィルス作用を有する空気清浄機などを製造できる。
【００３７】
本発明の抗ウィルス剤の配合量は、その効能効果を有する限り特に限定されないが、通常、本発明の抗ウィルス剤を含む組成物中に０．０００１〜１０重量％程度、好ましくは０．００１〜５重量％程度含有させるのがよい。また、本発明の抗ウィルス剤を含む洗浄剤組成物として用いる場合には、適宜希釈して用いても良いため、有効成分化合物の含有量を０．０００１〜９０重量％程度とすることができ、好ましくは０．００１〜５重量％程度とするのがよい。
【００３８】
本発明の抗ウィルス剤の使用方法は、特に制限はなく、各種製剤形態、患者又は使用者の年齢、性別その他の条件、疾患の程度などに応じた方法で使用される。例えば錠剤、丸剤、液剤、懸濁剤、乳剤、顆粒剤及びカプセル剤の場合には、経口投与される。また注射剤の場合には単独で又はブドウ糖、アミノ酸などの通常の補液と混合して静脈内投与され、更に必要に応じて単独で筋肉内、皮内、皮下もしくは腹腔内投与される。坐剤の場合には直腸内投与される。外用剤の場合には患部に塗布される。洗浄剤として用いる場合には、その種類及び形態に応じて、常法に従って使用される。
【００３９】
本発明の抗ウィルス剤の使用量は、用法、対象となる患者又は動物或いは、使用者或いは動物の年齢、性別その他の条件、疾患の程度などにより適宜選択されるが通常、有効成分化合物の量が、一日当たり体重１ｋｇ当たり、約１〜２０ｍｇ程度となるようにするのがよく、１日に１〜３回程度に分けて使用されるのがよい。
【００４０】
以下、本発明を実施例により更に詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例により限定されるものではない。
【００４１】
製造例１及び２で使用したウシヘモグロビン溶液は、下記に従い製造した。１．２Ｌのウシ血液を遠心分離機（ＳＣＲ−２０ＢＳ型、株式会社日立製作所製）で遠心分離（１０，０００×１分）し、上清の血漿部分を除去し、約５００ｍＬの赤血球を得た。この赤血球に対して、４倍容量の０．９％塩化ナトリウム水溶液を加えて十分に攪拌し、遠心分離（１０，０００×１分）した。この上清を除いて得られる約５００ｍＬの赤血球浮遊液に対して、３．０Ｌの蒸留水を添加した。室温で１０分放置した後、遠心分離（１０，０００×２０分）を更におこない、ヘモグロビンを含む上清を回収し（約３Ｌ）、これをウシヘモグロビン溶液として使用した。
【００４２】
製造例１（２−アミノ−４，４ａ−ジヒドロ−４ａ，７−ジメチル−３Ｈ−フェノキサジン−３−オンの合成）
１．２ｇの２−アミノ−５−メチルフェノール（粉末、東京化成工業株式会社製）に１００ｍＬの蒸留水を加えて十分に攪拌した。引き続き２００ｍＬの０．２規定塩酸水溶液を加えて、完全に２−アミノ−５−メチルフェノールを溶解した。該溶液を攪拌しながら、４００ｍＬの０．１規定水酸化ナトリウム水溶液を少しずつ滴下した。ｐＨ７．０になった時点で、すぐに該溶液を３Ｌのウシヘモグロビン溶液に添加し十分に攪拌した後、３７℃で１２０時間保持した。引き続き、該反応液に対して約３倍容量のメタノールを添加し、ヘモグロビンとタンパク質とを変性させた。変性したヘモグロビンとタンパク質は、遠心分離機（ＳＣＲ−２０ＢＳ型、株式会社日立製作所製）で遠心分離し（８，０００ｇ×５分）、上澄みを得た。この上澄みを、ロータリーエバポレータ（ＮＥ型、東京理化器械株式会社製）を用いて、濃縮した。濃縮した試料（約３００ｍＬ）を５０％エタノールで膨潤させたセファデックスＬＨ２０樹脂（アマルシャム・ファルマシア・ジャパン株式会社製）を充填したカラム（内径７ｃｍ×高さ７０ｃｍ）に付した。溶出は５０％エタノール（容量／容量）で行い、一定時間毎に分画した。第４番目の黄褐色のバンドを回収し、ロータリーエバポレータで溶出溶媒を減圧下留去した。その結果、約３００ｍｇの茶褐色の粉末化合物を（合成物I）を得た。得られた化合物の純度を薄層クロマトグラフィーにより確認した（Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ ６０ Ｆ２５４、メルク株式会社製、Ｒｆ値 ０．５、展開溶媒 クロロホルム：アセトン＝４．５：１．５（容量：容量））。このようにして得られた合成物Iは、1Ｈ−ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ、型番ＪＥＯＬ ＪＭＮＭ−ＧＸ２７０、日本電子株式会社製）、13Ｃ−ＮＭＲ（５０．３ＭＨｚ、型番Ｖａｒｉａｎ ＸＬ−２００、バリアン株式会社製）、ＵＶ（型番Ｕ−２０００、株式会社日立製作所製）、ＩＲ（型番ＩＲ−７００、日本分光株式会社製）により、構造決定をした。その分析値は、以下の通りである。
【００４３】
1Ｈ−ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ6、２５℃）δ（ｐｐｍ）：１．１０（ｓ，３Ｈ，−ＣＨ3）、２．２７（ｓ，３Ｈ，Ａｒ−ＣＨ3）、２．９８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１５．６Ｈｚ，−ＣＨ2）、３．１８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１５．６Ｈｚ，−ＣＨ2）、６．０５（ｓ，１Ｈ，＝ＣＨ−）、６．３６（ｂｒｓ，２Ｈ，−ＮＨ2）、６．７１（ｂｒｓ，１Ｈ，Ａｒ−Ｈ）、６．７９（ｂｒｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，Ａｒ−Ｈ）、７．０９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，Ａｒ−Ｈ）。
【００４４】
13Ｃ−ＮＭＲ（５０．３ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ6、２５℃）δ（ｐｐｍ）：２０．８８（ｑ，−ＣＨ3）、２１．９７（ｑ，Ａｒ−ＣＨ3）、４９．１８（ｔ，−ＣＨ2）、７０．８６（ｓ，−Ｃ−Ｏ−）、１０５．８６（ｄ，Ａｒ−ＣＨ）、１１６．４８（ｄ，＝ＣＨ−）、１２２．９６（ｄ，Ａｒ−ＣＨ）、１２５．４２（ｄ，Ａｒ−ＣＨ）、１３２．６３（ｓ，＝Ｃ−）、１３６．４９（ｓ，Ａｒ−Ｃ）、１４３．７７（ｓ，Ａｒ−Ｃ）、１４６．３１（ｓ，Ａｒ−Ｃ）、１６０．７０（ｓ，Ｎ＝Ｃ）、１９１．４０（ｓ，ＣＯ）。
【００４５】
ＵＶ（λMeOH max）（ｎｍ、（ε））：２２６（１５．２）、２７２（９．８）、４０３（１８．６）。なお、０．３ｍｇの合成物Iの粉末を１ｍＬのメタノールに溶解させ、さらにこの溶液０．１ｍＬを採取し、２ｍＬのメタノールで希釈した後、吸収スペクトルを測定した。
【００４６】
ＩＲ（λνKBr max）（ｃｍ-1）：３４００、３３３０、３１８０、２９３０、１９６５、１６２５、１５８２、１５３５、１４９０、１３９５、１３７０、１３１０、１２９０、１２７０、１２３０、１１４５、１１２５、１１０５、１０６０、８８０、８５５、８４０、８１０。
【００４７】
合成物Iは２−アミノ−４，４ａ−ジヒドロ−４ａ，７−ジメチル−３Ｈ−フェノキサジン−３−オン（以下、「製造例１の２−アミノフェノキサジン−３−オン」という）であることが、1Ｈ−ＮＭＲ、13Ｃ−ＮＭＲ、ＵＶ、ＩＲの各分析値より同定された。
【００４８】
製造例２（３−アミノ−１，４ａ−ジヒドロ−４ａ，８−ジメチル−２Ｈ−フェノキサジン−２−オンの合成）
１．２ｇの２−アミノ−４−メチルフェノール（粉末、東京化成工業株式会社製）に１００ｍＬの蒸留水を加えて十分に攪拌し、引き続き２００ｍＬの０．２規定塩酸水溶液を加えて、完全に２−アミノ−４−メチルフェノールを溶解した。該溶液を攪拌しながら、４００ｍＬの０．１規定水酸化ナトリウム水溶液を少しずつ滴下した。ｐＨ７．４になった時点で、すぐに該溶液を３Ｌのウシヘモグロビン溶液に添加し十分に攪拌した後、３７℃で１４４時間保持した。引き続き、該反応液に対して約３倍容量のメタノールを添加し、ヘモグロビンとタンパク質とを変性させた。変性したヘモグロビンとタンパク質は、遠心分離機（ＳＣＲ−２０ＢＳ型、株式会社日立製作所製）で遠心分離し（８，０００ｇ×５分）、上澄みを得た。この上澄みを、ロータリーエバポレータ（ＮＥ型、東京理化器械株式会社製）を用いて、濃縮乾固した。乾固した上澄みに対して３００ｍＬのアセトンを加えてアセトン溶解成分を溶解して、該アセトン溶解成分を除去した。引き続き、塩を除くために、アセトン不溶の褐色の残留物に対して３００ｍＬのメタノールを添加して、褐色成分を抽出した。褐色成分を含むメタノール抽出液（約３００ｍＬ）を、ロータリーエバポレータで減圧下約５０ｍＬまで濃縮した。この濃縮液を５０％メタノールで膨潤させたセファデックスＬＨ２０樹脂（アマルシャム・ファルマシア・ジャパン株式会社製）を充填したカラム（内径７ｃｍ×高さ３０ｃｍ）に付した。溶出は５０％メタノール（容量／容量）で行い、一定時間毎に分画した。第２番目の褐色のバンドを回収し、ロータリーエバポレータで溶出溶媒を減圧下留去した。その結果、約２００ｍｇの暗褐色の粉末化合物（合成物II）を得た。得られた化合物の純度は薄層クロマトグラフィーにより確認した（逆層、Ｒｆ値 ０．４５、展開溶媒 クロロホルム：アセトン＝４．５：１．５（容量：容量））。このようにして得られた合成物IIは、1Ｈ−ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ、型番ＪＥＯＬ ＪＭＮＭ−ＧＸ ２７０、日本電子株式会社製）、13Ｃ−ＮＭＲ（５０．３ＭＨｚ、型番Ｖａｒｉａｎ ＸＬ−２００、バリアン株式会社製）、ＵＶ（型番Ｕ−２０００、株式会社日立製作所製）、ＩＲ（型番ＩＲ−７００、日本分光株式会社製）により、構造決定をした。その分析値は、以下の通りである。
【００４９】
1Ｈ−ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ6、２５℃）δ（ｐｐｍ）：１．３０（ｓ，３Ｈ，−ＣＨ3）、２．７８（ｓ，３Ｈ，Ａｒ−ＣＨ3）、３．２０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１４．９Ｈｚ，−ＣＨ2）、３．４０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１４．９Ｈｚ，−ＣＨ2）、５．８２（ｓ，１Ｈ，＝ＣＨ−）、６．９０（ｍ，３Ｈ，Ａｒ−Ｈ×３）。
【００５０】
13Ｃ−ＮＭＲ（５０．３ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ6、２５℃）δ（ｐｐｍ）：２０．４０（ｑ，Ａｒ−ＣＨ3）、２４．０３（ｑ，ＣＨ3）、５１．８１（ｔ，−ＣＨ2）、７２．００（ｓ，−Ｃ−Ｏ−）、１０１．７１（ｄ，＝ＣＨ−）、１１７．００（ｄ，Ａｒ−ＣＨ）、１１６．４４（ｄ，Ａｒ−ＣＨ）、１２４．７２（ｄ，Ａｒ−ＣＨ）、１２５．６２（ｓ，Ａｒ−Ｃ）、１３２．１６（ｓ，Ａｒ−Ｃ）、１３９．０８（ｓ，Ａｒ−Ｃ）、１４７．０３（ｓ，＝Ｃ−）、１５８．７９（ｓ，Ｎ＝Ｃ−）、１９３．６６（ｓ，ＣＯ）。
【００５１】
ＵＶ（λMeOH max）（ｎｍ、（ε））：２６７（１１．１２）、２８２（９．０８）、３０６（ｓｈ）（８．５５）、３４８（１３．６２）。なお、０．５ｍｇの合成物IIの粉末を１ｍＬのメタノールに溶解させ、さらにこの溶液０．１ｍＬを採取し、２．２ｍＬのメタノールで希釈した後、吸収スペクトルを測定した。
【００５２】
ＩＲ（λνKBr max）（ｃｍ-1）：３４５０、３０６０、２９８０、２９３０、１７２５、１６２０、１５９０、１５５０、１４６０、１４３０、１２８０、１２５０、１１１０、１０６０、９５０、８９０、８１０。
【００５３】
合成物IIは３−アミノ−１，４ａ−ジヒドロ−４ａ，８−ジメチル−２Ｈ−フェノキサジン−２−オン（以下、「製造例２の３−アミノフェノキサジン−２−オン」という）であることが、1Ｈ−ＮＭＲ、13Ｃ−ＮＭＲ、ＵＶ、ＩＲの各分析値より同定された。
【００５４】
実施例１
ベロ細胞（Vero cell：アフリカミドリザルの腎細胞の一種、国立医薬品衛生試験所細胞バンク室より入手）を１０％胎児子ウシ血清（ＦＣＳ、シグマ製）を含むα−ＭＥＭ培地中に懸濁し、２×１０-5〜３×１０-5濃度になるように９６ウェルプレート（１２穴×８列、旭テクノグラス株式会社製）上に播種した。播種したベロ細胞を、５％ＣＯ2存在下、３７℃で２日間培養した。
【００５５】
試験当日、製造例１の２−アミノフェノキサジン−３−オンを２０ｍＭになるようにＤＭＳＯで溶解した。該溶液を、１、２、４、８及び１６μＭになるようにα−ＭＥＭ培地で希釈した。各濃度の２−アミノフェノキサジン−３−オンを含むα−ＭＥＭ培地を、ベロ細胞にそれぞれ添加して静置した（試験群）。１時間後に培地をアスピレータで吸引除去し、５％ＣＯ2存在下、常法に従いＴＣＩＤ50（50% Tissue Culture Infectious Dose）が見られる希釈濃度に３７℃でポリオウィルス（Poliovirus）を含む原液を希釈して、ベロ細胞に１時間感染させた。上清をアスピレータで吸引除去した後、再び各濃度の２−アミノフェノキサジン−３−オンを含むα−ＭＥＭ培地を添加した。
【００５６】
５％ＣＯ2存在下、３７℃で培養し、添加の２日後に、ベロ細胞の破壊が見られたことを確認した。上清をアスピレータで吸引除去した後、４％パラホルムアルデヒドを含む生理食塩水を使用して、ベロ細胞をプレートに固定した（２時間、２５℃）。固定液をアスピレータで吸引除去した後、０．５％クリスタルバイオレッド液を添加して細胞を染色した（１時間、２５℃）。染色後、生理食塩水で細胞を３回洗浄し、風乾した。乾燥後、細胞に取り込まれた色素をエチレングリコール（１００％、１００μｌ）を使用しプレートを震動させて抽出した。プレートリーダー（ＥＬ３４０型、バイオテクインストルメンツ株式会社製）を使用し、５７７ｎｍでの吸光度（ＯＤ）を測定した。
【００５７】
対照として、２−アミノフェノキサジン−３−オンを含まないＤＭＳＯ溶液（対照群）を用いて上記と同じ操作を行い、５７７ｎｍでの吸光度を測定した。
それらの結果を図１に示す。
【００５８】
図１に示されるように、対照群（０μＭ）では、ポリオウィルスを含む原液を約６４倍に希釈した場合、ベロ細胞が５０％破壊された。一方、試験群（１、２、４、８及び１６μＭ）では、ポリオウィルスを含む原液を約１４〜約２８倍希釈した場合、ベロ細胞が５０％破壊された。このことから、ベロ細胞を５０％破壊するために、試験群では対照群に比べて濃い濃度でポリオウィルスを感染させることが必要であることが判る。従って２−アミノフェノキサジン−３−オンは、ポリオウィルスの感染を阻止している。
【００５９】
実施例２
実施例１のポリオウィルスをブタパルボウィルス（Porcine parvo virus）に変えて同じ試験を行った。その結果を図２に示す。
【００６０】
図２に示されるように、対照群（０μＭ）では、ブタパルボウィルスを含む原液を約６４倍に希釈した場合、ベロ細胞が５０％破壊された。一方、試験群（１、２、４、８及び１６μＭ）では、ブタパルボウィルスを含む原液を約７〜約３２倍希釈した場合、ベロ細胞が５０％破壊された。このことから、ベロ細胞を５０％破壊するために、試験群では対照群に比べて濃い濃度でポリオウィルスを感染させることが必要であることが判る。従って、２−アミノフェノキサジン−３−オンは、ブタパルボウィルスの感染を阻止している。
【００６１】
実施例３
ベロ細胞（Vero cell：アフリカミドリザルの腎細胞の一種、国立医薬品衛生試験所細胞バンク室より入手）を１０％胎児子ウシ血清（ＦＣＳ、シグマ製）を含むα−ＭＥＭ培地中に懸濁し、２×１０-5〜３×１０-5濃度になるように９６ウェルプレート（１２穴×８列、旭テクノグラス株式会社製）上に播種した。播種したベロ細胞を、５％ＣＯ2存在下、３７℃で２日間培養した。
【００６２】
試験当日、製造例２の３−アミノフェノキサジン−２−オンを２０ｍＭになるようにＤＭＳＯで溶解した。該溶液を、１、２、４、８、１６及び３２μＭになるようにα−ＭＥＭ培地で希釈した。各濃度の３−アミノフェノキサジン−２−オンを含むα−ＭＥＭ培地を、ベロ細胞にそれぞれ添加して静置した（試験群）。１時間後に培地をアスピレータで吸引除去し、５％ＣＯ2存在下、ＴＣＩＤ50が見られる希釈濃度に３７℃でポリオウィルス（Poliovirus）を含む原液を希釈して、ベロ細胞に１時間感染させた。上清をアスピレータで吸引除去した後、再び各濃度の３−アミノフェノキサジン−２−オンを含むα−ＭＥＭ培地を添加した。
【００６３】
５％ＣＯ2存在下、３７℃で培養し、添加の２日後に、ベロ細胞の破壊が見られたことを確認した。上清をアスピレータで吸引除去した後、４％パラホルムアルデヒドを含む生理食塩水を使用して、ベロ細胞をプレートに固定した（２時間、２５℃）。固定液をアスピレータで吸引除去した後、０．５％クリスタルバイオレッド液を添加して細胞を染色した（１時間、２５℃）。染色後、生理食塩水で細胞を３回洗浄し、風乾した。乾燥後、細胞に取り込まれた色素をエチレングリコール（１００％、１００μｌ）を使用しプレートを震動させて抽出した。プレートリーダー（ＥＬ３４０型、バイオテクインストルメンツ株式会社製）を使用し、５７７ｎｍでの吸光度（ＯＤ）を測定した。
【００６４】
対照として、３−アミノフェノキサジン−２−オンを含まないＤＭＳＯ溶液（対照群）を用いて上記と同じ操作を行い、５７７ｎｍでの吸光度を測定した。
それらの結果を図３に示す。
【００６５】
図３に示されるように、対照群（０μＭ）では、ポリオウィルスを含む原液を約６４倍に希釈した場合、ベロ細胞が５０％破壊された。一方、試験群（１、２、４、８、１６及び３２μＭ）では、ポリオウィルスを含む原液を約１４〜約２８倍希釈した場合、ベロ細胞が５０％破壊された。このことから、ベロ細胞を５０％破壊するために、試験群では対照群に比べて濃い濃度でポリオウィルスを感染させることが必要であることが判る。従って、３−アミノフェノキサジン−２−オンは、ポリオウィルスの感染を阻止している。
【００６６】
実施例４
実施例３のポリオウィルスを、ブタパルボウィルスに変えて同じ試験を行った。その結果を図４に示す。
【００６７】
図４に示されるように、対照群（０μＭ）では、ブタパルボウィルスを含む原液を約６４倍に希釈した場合、ベロ細胞が５０％破壊された。一方、試験群（１、２、４、８、１６及び３２μＭ）では、ブタパルボウィルスを含む原液を約７〜約３２倍希釈した場合、ベロ細胞が５０％破壊された。このことから、ベロ細胞を５０％破壊するために、試験群では対照群に比べて濃い濃度でポリオウィルスを感染させることが必要であることが判る。従って、３−アミノフェノキサジン−２−オンは、ブタパルボウィルスの感染を阻止している。
【００６８】
【発明の効果】
２−アミノフェノキサジン−３−オン誘導体及び３−アミノフェノキサジン−２−オン誘導体、並びにそれらの薬理学的に許容される塩及びエステルは、種々のウィルスに対して有効であるため、抗ウィルス剤として有効である。
【図面の簡単な説明】
【図１】図１は、実施例１における、２−アミノフェノキサジン−３−オンの濃度と、ポリオウィルスがベロ細胞に感染してベロ細胞を５０％破壊するときのポリオウィルス原液の希釈倍率との関係を示す。
【図２】図２は、実施例２における、２−アミノフェノキサジン−３−オンの濃度と、ブタパルボウィルスがベロ細胞に感染してベロ細胞を５０％破壊するときのブタパルボウィルス原液の希釈倍率との関係を示す。
【図３】図３は、実施例３における、３−アミノフェノキサジン−２−オンの濃度と、ポリオウィルスがベロ細胞に感染してベロ細胞を５０％破壊するときのポリオウィルス原液の希釈倍率との関係を示す。
【図４】図４は、実施例４における、３−アミノフェノキサジン−２−オンの濃度と、ブタパルボウィルスがベロ細胞に感染してベロ細胞を５０％破壊するときのブタパルボウィルス原液の希釈倍率との関係を示す。[0001]
BACKGROUND OF THE INVENTION
The present invention relates to an antiviral agent useful for treatment of viral diseases, prevention of onset, and prevention of infection for humans or animals.
[0002]
[Prior art]
Conventionally, 2-aminophenoxazin-3-one derivatives and 3-aminophenoxazin-2-one derivatives, which are phenoxazine derivatives, are known to exhibit strong antitumor activity against cancer cells (for example, , See Patent Document 1 and Patent Document 2).
However, it is not known that these phenoxazine derivatives are effective against other diseases.
[0003]
[Patent Document 1]
JP 02-193984 A (page 4, lower left column, lines 2-7)
[Patent Document 2]
Japanese Patent No. 3290172 (page 5, left column, lines 32-40)
[0004]
[Problems to be solved by the invention]
The present invention provides novel uses of 2-aminophenoxazin-3-one derivatives and 3-aminophenoxazin-2-one derivatives.
[0005]
[Means for Solving the Problems]
The present invention provides an antiviral agent containing a 2-aminophenoxazin-3-one derivative represented by the formula I or a pharmacologically acceptable salt or ester thereof as an active ingredient. Here, in formula I, R1, R2Are each independently selected from the group consisting of a hydrogen atom, a lower alkyl group having 1 to 4 carbon atoms, an acyl group having 1 to 4 carbon atoms, and an acyloxy group having 1 to 4 carbon atoms.
[0006]
Formula I
[Chemical 3]
[0007]
The present invention also provides an antiviral agent containing, as an active ingredient, a 3-aminophenoxazin-2-one derivative represented by formula II or a pharmacologically acceptable salt or ester thereof. Where R in formula II1, R2Are each independently selected from the group consisting of a hydrogen atom, a lower alkyl group having 1 to 4 carbon atoms, an acyl group having 1 to 4 carbon atoms, and an acyloxy group having 1 to 4 carbon atoms.
[0008]
Formula II
[Formula 4]
[0009]
DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
The antiviral agent of the present invention contains a 2-aminophenoxazin-3-one derivative represented by the formula I as an active ingredient, or a pharmacologically acceptable salt or ester thereof as an active ingredient.
[0010]
Formula I
[Chemical formula 5]
[0011]
In formula I, R1, R2Are each independently selected from the group consisting of a hydrogen atom, a lower alkyl group having 1 to 4 carbon atoms, an acyl group having 1 to 4 carbon atoms, and an acyloxy group having 1 to 4 carbon atoms, preferably hydrogen. It is arbitrarily selected from the group consisting of an atom, a lower alkyl group having 1 to 3 carbon atoms, an acyl group having 1 to 3 carbon atoms, and an acyloxy group having 1 to 3 carbon atoms. Preferably R1Is selected from methyl, ethyl, propyl, isopropyl, hydroxymethyl, hydroxyethyl, methoxy, ethoxy, methoxymethyl, ethoxymethyl, and R2Is selected from a methyl group, an ethyl group, a propyl group, an isopropyl group, a hydroxymethyl group, a hydroxyethyl group, a methoxy group, an ethoxy group, a methoxymethyl group, and an ethoxymethyl group. More preferably, R1Is a methyl group and R2Is a hydrogen atom or R1Is ethyl and R2Is a hydrogen atom.
[0012]
The antiviral agent of the present invention contains a 3-aminophenoxazin-2-one derivative represented by formula II or a pharmacologically acceptable salt or ester thereof as an active ingredient.
[0013]
Formula II
[Chemical 6]
[0014]
In formula II, R1, R2Are each independently selected from the group consisting of a hydrogen atom, a lower alkyl group having 1 to 4 carbon atoms, an acyl group having 1 to 4 carbon atoms, and an acyloxy group having 1 to 4 carbon atoms, preferably hydrogen. It is arbitrarily selected from the group consisting of an atom, a lower alkyl group having 1 to 3 carbon atoms, an acyl group having 1 to 3 carbon atoms, and an acyloxy group having 1 to 3 carbon atoms. Preferably R1Is selected from methyl, ethyl, propyl, isopropyl, hydroxymethyl, hydroxyethyl, methoxy, ethoxy, methoxymethyl, ethoxymethyl, and R2Is selected from a methyl group, an ethyl group, a propyl group, an isopropyl group, a hydroxymethyl group, a hydroxyethyl group, a methoxy group, an ethoxy group, a methoxymethyl group, and an ethoxymethyl group. More preferably, R1Is a hydrogen atom and R2Is a methyl group or R1Is a hydrogen atom and R2Is an ethyl group.
[0015]
Examples of salts that can be used in the antiviral agent of the present invention include inorganic salts such as alkali metal salts such as sodium salts and potassium salts; alkaline earth metal salts such as magnesium salts; metal salts such as copper salts and zinc salts; As salts, alkanolamine salts such as diethanolamine salt, 2-amino-2-ethyl-1,3-propanediol salt, triethanolamine salt; heterocyclic amine salts such as morpholine salt, piperazine salt, piperidine salt; ammonium salt, Examples thereof include basic amino acid salts such as arginine salt, lysine salt and histidine salt. Here, the basic amino acid may be D-form, L-form, or a mixture thereof.
[0016]
Examples of the ester that can be used in the antiviral agent of the present invention include formate ester, acetate ester, and propionate ester.
[0017]
The compound represented by Formula I or II is preferably produced according to the methods described in Japanese Patent No. 3290172 and Japanese Patent Laid-Open No. 02-193984, but is not limited thereto.
[0018]
The antiviral agent of the present invention has an effect of suppressing virus infection. The “antiviral agent” as used in the present invention includes a drug used for the purpose of treatment, prevention of infection, and prevention of infection of viral diseases.
[0019]
The antiviral agent of the present invention is used for humans or animals (pets such as dogs and cats; livestock such as cows, horses and pigs; poultry such as chickens; fish such as tuna and sea breams).
[0020]
Although the virus as used in the field of this invention is not specifically limited, The virus contained in the classification | category shown below is included. Hereinafter, the virus referred to in the present invention will be described.
[0021]
Viruses are divided into RNA viruses and DNA viruses depending on the nature of the nucleic acid.
A. RNA virus
RNA viruses are bisected into single-stranded RNA viruses and double-stranded RNA viruses.
1) The single-stranded RNA virus is further subdivided into a positive-strand RNA virus whose viral gene itself is responsible for mRNA activity, a negative-strand RNA virus whose gene complementary to the viral gene is responsible for mRNA activity, and RNA-DNA type .
a) The positive-strand RNA virus is further subdivided depending on the presence or absence of an envelope (outer coat). Positive-stranded RNA viruses with no envelope include poliovirus (Poliovirus), coxsackie virus, human rhinovirus A, hepatitis A virus (Hepatitis A virus), brain Picornaviridae including Encephalocarditis virus, and Caliciviridae, the family includes unclassified hepatitis E virus (Hepatitis E virus) and the like. Positive-strand RNA viruses with enveloped viruses include Sindbis virus, Rubella virus, Togaviridae, Japanese encephalitis virus, yellow fever virus (Yellow fever virus), Flaviviridae including Hepatitis C virus, Coronaviridae, and the like.
b) Negative-strand RNA viruses have an envelope and include Rabdoviridae, Ebola virus, Marburg virus (Rabdoviridae) including Rabies virus, Vesicular stomatitis virus, etc. Paramyxoviridae including Filoviridae, Hemagglutinating virus of Japan, Measles virus, RS virus, Mumpus virus, etc. (Paramyxoviridae), Orthomyxoviridae including influenza virus, Orthomyxoviridae, Bunyaviridae including nephrogenic hemorrhagic fever virus (Hantaan virus), and lymphocytic meningitis virus Arenaviruses including (Lymphocytic choriomeningitis virus) Includes departments (Arenaviridae).
c) RNA-DNA viruses have an envelope, and include retroviridae including human T-cell leukemia virus type I, human acquired immunodeficiency syndrome virus and the like. ) Etc.
2) The double-stranded RNA virus has no envelope, and includes Reoviridae (Rotaviridae) including Rotavirus A and Birnaviridae.
[0022]
B. DNA virus
DNA viruses are classified into single-stranded DNA viruses, incomplete double-stranded DNA viruses, and double-stranded DNA viruses.
1) Single-stranded DNA viruses have no envelope, human parvovirus, porcine parvovirus, canine parvovirus, B19 virus, adeno-associated virus 2 (Parvoviridae) including (Adeno-associated virus 2).
2) Incomplete double-stranded DNA viruses have no envelope, and include the Hepadnaviridae family including the hepatitis B virus.
3) Double-stranded DNA viruses are further classified according to the presence or absence of an envelope. Examples of double-stranded DNA viruses having an envelope include Herpesviridae, including herpes simplex virus, cytomegalovirus, EB virus, and vaccinia virus. ), Poxviridae including Infectious molluscum contagiosum virus, Iridoviridae and the like. Examples of double-stranded DNA viruses having no envelope include polyoma virus, SV40 (SV 40), JC virus (JC virus), human papilloma virus (Papovaviridae), human adenovirus Includes Adenoviridae, including (human adenovirus).
[0023]
The antiviral agent of the present invention is particularly effective for single-stranded RNA viruses or single-stranded DNA viruses. The antiviral agent of the present invention is particularly effective against RNA viruses or DNA viruses having no envelope. Furthermore, the antiviral agent of the present invention is remarkably effective against a single-stranded RNA virus having no envelope or a single-stranded DNA virus having no envelope.
[0024]
Although the mechanism of action for inhibiting the infection of the virus by the antiviral agent of the present invention is not clear, it is thought to be due to the inhibition of virus growth and replication.
[0025]
The antiviral agent of the present invention can be used in the form of a general pharmaceutical preparation. In the preparation, diluents such as fillers, extenders, binders, moisturizers, disintegrants, surfactants, lubricants and the like that are usually used, or excipients can be blended. The antiviral agent of the present invention can be selected in various forms according to the purpose of treatment, and representative examples thereof include tablets, pills, powders, solutions, suspensions, emulsions, granules, capsules, suppositories. , Injections such as liquids and suspensions, eye drops, and ointments.
[0026]
Various carriers that are conventionally used can be used as a carrier to be formed into a tablet form. For example, excipients such as lactose, sucrose, glucose, sodium chloride, urea, starch, calcium carbonate, kaolin, crystalline cellulose, silicic acid; water, ethanol, propanol, simple syrup, glucose solution, starch solution, gelatin solution, carboxy Binders such as methylcellulose, shellac, methylcellulose, potassium phosphate, polyvinylpyrrolidone; dry starch, sodium alginate, agar powder, laminaran powder, sodium bicarbonate, calcium carbonate, polyoxyethylene sorbitan fatty acid esters, sodium lauryl sulfate, stearic acid Disintegrating agents such as monoglyceride, starch and lactose; disintegration inhibitors such as sucrose, stearin, cocoa butter and hydrogenated oil; absorption accelerators such as quaternary ammonium base and sodium lauryl sulfate, glycerin Moisturizing agents such as starch; starch, lactose, kaolin, bentonite, adsorbents such as colloidal silicic acid; purified talc, stearates, boric acid powder, lubricants such as polyethylene glycol can be used. Further, the tablets can be made into tablets with ordinary coatings as necessary, for example, sugar-coated tablets, gelatin-encapsulated tablets, enteric-coated tablets, film-coated tablets, double tablets, and multilayer tablets.
[0027]
When forming into the form of a pill, those conventionally known in this field can be widely used as the carrier. Examples include excipients such as glucose, lactose, starch, cacao butter, hydrogenated vegetable oil, kaolin and talc; binders such as gum arabic powder, tragacanth powder, gelatin and ethanol; and disintegrants such as laminaran and agar it can.
[0028]
Capsules are usually prepared by mixing an active ingredient compound with the various carriers exemplified above and filling them into hard gelatin capsules, soft capsules and the like according to a conventional method.
[0029]
In molding into a suppository form, conventionally known carriers can be widely used. Examples thereof include polyethylene glycol, cacao butter, higher alcohols, higher alcohol esters, gelatin, semi-synthetic glycerides and the like.
[0030]
When prepared as injections, solutions, emulsions and suspensions are preferably sterilized and isotonic with blood. In molding into these forms, any conventionally used diluent in this field can be used. For example, water, ethanol, macrogol, propylene glycol, ethoxylated isostearyl alcohol, polyoxylated isostearyl alcohol, polyoxyethylene sorbitan fatty acid esters and the like can be used. In this case, a sufficient amount of sodium chloride, glucose, or glycerin may be included in the pharmaceutical preparation to prepare a tonic solution, and a normal solubilizing agent, buffer, soothing agent, etc. may be added. May be.
[0031]
When prepared as an ointment, oily bases conventionally known in this field can be widely used. For example, peanut oil, sesame oil, soybean oil, safflower oil, avocado oil, sunflower oil, corn oil, rapeseed oil, menthol oil, sunflower oil, camellia oil, palm oil, olive oil, poppy oil, cacao oil, beef tallow, lard Oils such as wool oil; mineral oils such as petrolatum, paraffin, silicon oil, squalane; isopropyl myristate, n-butyl myristate, isopropyl linoleate, acetyl ricinolate, stearyl ricinolate, diethyl sebacate, diisopropyl adipate, Higher fatty acid esters such as cetyl alcohol, stearyl alcohol, white beeswax, whale wax and tree wax, higher fatty alcohols and waxes, higher fatty acids such as stearic acid, oleic acid and palmitic acid; saturated or having 12 to 18 carbon atoms Monounsaturated fatty acids , Di -, a triglyceride mixture. In the antiviral agent of this invention, you may use these bases individually by 1 type or in mixture of 2 or more types.
[0032]
The antiviral agent of the present invention includes conventional additives such as metal soaps, animal / plant extracts, vitamins, hormones, amino acids and other medicinal agents, surfactants, dyes, dyes, pigments, fragrances, UV absorbers. An agent, a humectant, a thickener, an antioxidant, a sequestering agent, and a pH adjuster can be appropriately blended as necessary.
[0033]
In addition, the antiviral agent of the present invention can be blended in a cleaning liquid, and is useful as, for example, an oral cleaning agent, an eye cleaning agent, or a vaginal cleaning agent.
[0034]
In the case of preparing as a cleaning agent, those usually used in this field can be blended, for example, various cationic, anionic, amphoteric and nonionic surfactants; higher alcohols Oil softeners such as cationized cellulose; moisturizers such as glycerin, propylene glycol, sorbit and maltitol; viscosity modifiers such as methylcellulose, hydroxymethylcellulose, hydroxyethylcellulose, carboxyvinyl polymer, polyvinyl alcohol; hydrolyzed collagen Film-forming agents such as ethanol; solvents such as ethanol; pH adjusters such as citric acid and hydrochloric acid; antioxidants; sequestering agents; bactericides; antiseptics; inorganic salts; anti-dandruff agents; Can be used in combination.
[0035]
The antiviral agent of the present invention is applied to a method such as spray coating, brush coating, cloth cloth, wet tissue, paper towel, wet towel, etc. or used as an aerosol, etc. It can be used for cleaning general tools (for example, furniture, glasses, tableware, etc.). The antiviral agent of the present invention can also exert an antiviral effect by being added to cleaning agents such as clothing, food, tableware, gauze, sheets, diapers, curtains, finishing agents, softeners, bleaching agents, etc. . Further, the antiviral agent of the present invention can also exert an antiviral effect by being added to a bath agent such as soap, shampoo, or rinse.
[0036]
By applying the antiviral agent of the present invention to fibers such as carpets, curtains and clothes in advance, carpets, curtains, clothes and the like having an antiviral effect can be produced. Moreover, the air cleaner etc. which have an antiviral effect can be manufactured by making the antiviral agent of this invention contain the inside of machines, such as an air cleaner, or activated carbon.
[0037]
The compounding amount of the antiviral agent of the present invention is not particularly limited as long as it has the efficacy effect, but is usually about 0.0001 to 10% by weight, preferably 0.001 in the composition containing the antiviral agent of the present invention. It is good to contain about ˜5% by weight. In addition, when used as a cleaning composition containing the antiviral agent of the present invention, it may be diluted as appropriate, so that the content of the active ingredient compound can be about 0.0001 to 90% by weight. The amount is preferably about 0.001 to 5% by weight.
[0038]
The method of using the antiviral agent of the present invention is not particularly limited, and it is used in a method according to various preparation forms, the age of patients or users, sex and other conditions, the degree of disease, and the like. For example, in the case of tablets, pills, solutions, suspensions, emulsions, granules and capsules, they are administered orally. In the case of an injection, it is administered intravenously alone or mixed with a normal replacement fluid such as glucose or amino acid, and further administered alone intramuscularly, intradermally, subcutaneously or intraperitoneally as necessary. In the case of a suppository, it is administered intrarectally. In the case of an external preparation, it is applied to the affected area. When used as a cleaning agent, it is used in accordance with conventional methods depending on the type and form.
[0039]
The amount of the antiviral agent of the present invention is appropriately selected depending on the method of use, the subject patient or animal, the age of the user or animal, gender and other conditions, the degree of disease, etc. However, it should be about 1 to 20 mg per kg of body weight per day, and should be divided into about 1 to 3 times a day.
[0040]
EXAMPLES Hereinafter, although an Example demonstrates this invention further in detail, this invention is not limited by these Examples.
[0041]
The bovine hemoglobin solution used in Production Examples 1 and 2 was produced according to the following. 1.2L of bovine blood is centrifuged (10,000 × 1 minute) with a centrifuge (SCR-20BS type, manufactured by Hitachi, Ltd.), and the plasma portion of the supernatant is removed to obtain about 500 mL of red blood cells. It was. The red blood cells were mixed with a 4-fold volume of 0.9% aqueous sodium chloride solution, sufficiently stirred, and centrifuged (10,000 × 1 minute). 3.0 L of distilled water was added to about 500 mL of red blood cell suspension obtained by removing the supernatant. After standing at room temperature for 10 minutes, centrifugation (10,000 × 20 minutes) was further performed to recover the supernatant containing hemoglobin (about 3 L), which was used as a bovine hemoglobin solution.
[0042]
Production Example 1 (Synthesis of 2-amino-4,4a-dihydro-4a, 7-dimethyl-3H-phenoxazin-3-one)
100 mL of distilled water was added to 1.2 g of 2-amino-5-methylphenol (powder, manufactured by Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.) and sufficiently stirred. Subsequently, 200 mL of 0.2N hydrochloric acid aqueous solution was added to completely dissolve 2-amino-5-methylphenol. While stirring the solution, 400 mL of 0.1 N aqueous sodium hydroxide solution was added dropwise little by little. When the pH reached 7.0, the solution was immediately added to 3 L of bovine hemoglobin solution, stirred well, and kept at 37 ° C. for 120 hours. Subsequently, about 3 times the volume of methanol was added to the reaction solution to denature hemoglobin and protein. The denatured hemoglobin and protein were centrifuged (8,000 g × 5 minutes) with a centrifuge (SCR-20BS type, manufactured by Hitachi, Ltd.) to obtain a supernatant. The supernatant was concentrated using a rotary evaporator (NE type, manufactured by Tokyo Rika Kikai Co., Ltd.). The concentrated sample (about 300 mL) was applied to a column (inner diameter 7 cm × height 70 cm) packed with Sephadex LH20 resin (Amarsham Pharmacia Japan Co., Ltd.) swollen with 50% ethanol. Elution was performed with 50% ethanol (volume / volume) and fractionated at regular intervals. The fourth yellowish brown band was collected, and the elution solvent was distilled off under reduced pressure using a rotary evaporator. As a result, about 300 mg of a brown powder compound (Compound I) was obtained. The purity of the obtained compound was confirmed by thin layer chromatography (Kieselgel 60 F).254, Manufactured by Merck & Co., Inc., Rf value 0.5, developing solvent chloroform: acetone = 4.5: 1.5 (volume: volume)). The compound I thus obtained is1H-NMR (270 MHz, model number JEOL JMNM-GX270, manufactured by JEOL Ltd.),13Structure by C-NMR (50.3 MHz, model number Varian XL-200, manufactured by Varian Inc.), UV (model number U-2000, manufactured by Hitachi, Ltd.), IR (model number IR-700, manufactured by JASCO Corporation) I made a decision. The analysis values are as follows.
[0043]
1H-NMR (270 MHz, DMSO-d6, 25 ° C.) δ (ppm): 1.10 (s, 3H, —CHThree), 2.27 (s, 3H, Ar-CH)Three), 2.98 (d, 1H, J = 15.6 Hz, -CH2), 3.18 (d, 1H, J = 15.6 Hz, -CH2), 6.05 (s, 1H, = CH-), 6.36 (brs, 2H, -NH)2), 6.71 (brs, 1H, Ar-H), 6.79 (brd, 1H, J = 7.8 Hz, Ar-H), 7.09 (d, 1H, J = 7.8 Hz, Ar-). H).
[0044]
13C-NMR (50.3 MHz, DMSO-d6, 25 ° C.) δ (ppm): 20.88 (q, —CHThree), 21.97 (q, Ar-CH)Three), 49.18 (t, -CH2), 70.86 (s, -C-O-), 105.86 (d, Ar-CH), 116.48 (d, = CH-), 122.96 (d, Ar-CH), 125. 42 (d, Ar-CH), 132.63 (s, = C-), 136.49 (s, Ar-C), 143.77 (s, Ar-C), 146.31 (s, Ar- C), 160.70 (s, N = C), 191.40 (s, CO).
[0045]
UV (λMeOH max) (Nm, (ε)): 226 (15.2), 272 (9.8), 403 (18.6). In addition, 0.3 mg of the compound I powder was dissolved in 1 mL of methanol, and 0.1 mL of this solution was further collected and diluted with 2 mL of methanol, and then the absorption spectrum was measured.
[0046]
IR (λνKBr max) (Cm-1): 3400, 3330, 3180, 2930, 1965, 1625, 1582, 1535, 1490, 1395, 1370, 1310, 1290, 1270, 1230, 1145, 1125, 1105, 1060, 880, 855, 840, 810.
[0047]
Compound I is 2-amino-4,4a-dihydro-4a, 7-dimethyl-3H-phenoxazin-3-one (hereinafter referred to as “2-aminophenoxazin-3-one of Production Example 1”). But1H-NMR,13It was identified from each analysis value of C-NMR, UV and IR.
[0048]
Production Example 2 (Synthesis of 3-amino-1,4a-dihydro-4a, 8-dimethyl-2H-phenoxazin-2-one)
Add 100 mL of distilled water to 1.2 g of 2-amino-4-methylphenol (powder, manufactured by Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.) and stir well, and then add 200 mL of 0.2 N hydrochloric acid aqueous solution completely. 2-Amino-4-methylphenol was dissolved. While stirring the solution, 400 mL of 0.1 N aqueous sodium hydroxide solution was added dropwise little by little. When the pH reached 7.4, the solution was immediately added to 3 L of bovine hemoglobin solution, stirred well, and then kept at 37 ° C. for 144 hours. Subsequently, about 3 times the volume of methanol was added to the reaction solution to denature hemoglobin and protein. The denatured hemoglobin and protein were centrifuged (8,000 g × 5 minutes) with a centrifuge (SCR-20BS type, manufactured by Hitachi, Ltd.) to obtain a supernatant. The supernatant was concentrated and dried using a rotary evaporator (NE type, manufactured by Tokyo Rika Kikai Co., Ltd.). 300 mL of acetone was added to the dried supernatant to dissolve the acetone-dissolved component, and the acetone-dissolved component was removed. Subsequently, in order to remove the salt, 300 mL of methanol was added to the acetone-insoluble brown residue to extract the brown component. A methanol extract (about 300 mL) containing a brown component was concentrated to about 50 mL under reduced pressure using a rotary evaporator. This concentrated solution was applied to a column (inner diameter 7 cm × height 30 cm) packed with Sephadex LH20 resin (manufactured by Amarsham Pharmacia Japan) swollen with 50% methanol. Elution was performed with 50% methanol (volume / volume), and fractionated at regular intervals. The second brown band was collected and the elution solvent was distilled off under reduced pressure using a rotary evaporator. As a result, about 200 mg of a dark brown powder compound (Compound II) was obtained. The purity of the obtained compound was confirmed by thin layer chromatography (reverse layer, Rf value 0.45, developing solvent chloroform: acetone = 4.5: 1.5 (volume: volume)). The compound II thus obtained is1H-NMR (270 MHz, model number JEOL JNMM-GX 270, manufactured by JEOL Ltd.),13Structure by C-NMR (50.3 MHz, model number Varian XL-200, manufactured by Varian Inc.), UV (model number U-2000, manufactured by Hitachi, Ltd.), IR (model number IR-700, manufactured by JASCO Corporation) I made a decision. The analysis values are as follows.
[0049]
1H-NMR (270 MHz, DMSO-d6, 25 ° C.) δ (ppm): 1.30 (s, 3H, —CHThree), 2.78 (s, 3H, Ar-CH)Three), 3.20 (d, 1H, J = 14.9 Hz, -CH2), 3.40 (d, 1H, J = 14.9 Hz, -CH2), 5.82 (s, 1H, = CH-), 6.90 (m, 3H, Ar-Hx3).
[0050]
13C-NMR (50.3 MHz, DMSO-d6, 25 ° C.) δ (ppm): 20.40 (q, Ar—CHThree), 24.03 (q, CHThree) 51.81 (t, -CH2), 72.00 (s, —C—O—), 101.71 (d, ═CH—), 117.00 (d, Ar—CH), 116.44 (d, Ar—CH), 124. 72 (d, Ar-CH), 125.62 (s, Ar-C), 132.16 (s, Ar-C), 139.08 (s, Ar-C), 147.03 (s, = C -), 158.79 (s, N = C-), 193.66 (s, CO).
[0051]
UV (λMeOH max) (Nm, (ε)): 267 (11.12), 282 (9.08), 306 (sh) (8.55), 348 (13.62). In addition, 0.5 mg of the compound II powder was dissolved in 1 mL of methanol, and 0.1 mL of this solution was further collected and diluted with 2.2 mL of methanol, and then the absorption spectrum was measured.
[0052]
IR (λνKBr max) (Cm-1): 3450, 3060, 2980, 2930, 1725, 1620, 1590, 1550, 1460, 1430, 1280, 1250, 1110, 1060, 950, 890, 810.
[0053]
Compound II is 3-amino-1,4a-dihydro-4a, 8-dimethyl-2H-phenoxazin-2-one (hereinafter referred to as “3-aminophenoxazin-2-one of Production Example 2”). But1H-NMR,13It was identified from each analysis value of C-NMR, UV and IR.
[0054]
Example 1
Vero cell (Vero cell: a kind of African green monkey kidney cell, obtained from National Pharmacy Laboratory Cell Bank) suspended in α-MEM medium containing 10% fetal calf serum (FCS, Sigma), 2 × 10-Five~ 3x10-FiveIt seed | inoculated on 96 well plate (12 hole * 8 row | line, the Asahi Techno Glass Co., Ltd. product) so that it might become a density | concentration. Seeded Vero cells are 5% CO2In the presence, the cells were cultured at 37 ° C. for 2 days.
[0055]
On the test day, 2-aminophenoxazin-3-one of Production Example 1 was dissolved in DMSO so as to be 20 mM. The solution was diluted with α-MEM medium to 1, 2, 4, 8, and 16 μM. Α-MEM medium containing 2-aminophenoxazin-3-one at each concentration was added to Vero cells and allowed to stand (test group). After 1 hour, remove the medium with an aspirator and remove 5% CO.2In the presence, TCID according to conventional methods50A stock solution containing poliovirus was diluted at 37 ° C. to a dilution concentration at which (50% Tissue Culture Infectious Dose) was found, and Vero cells were infected for 1 hour. After aspirating and removing the supernatant with an aspirator, α-MEM medium containing 2-aminophenoxazin-3-one at each concentration was added again.
[0056]
5% CO2The cells were cultured at 37 ° C. in the presence, and it was confirmed that the destruction of Vero cells was observed 2 days after the addition. After removing the supernatant with an aspirator, the Vero cells were fixed to the plate using physiological saline containing 4% paraformaldehyde (2 hours, 25 ° C.). After the fixing solution was removed by suction with an aspirator, 0.5% crystal violet solution was added to stain the cells (1 hour, 25 ° C.). After staining, the cells were washed 3 times with physiological saline and air-dried. After drying, the dye incorporated into the cells was extracted by shaking the plate using ethylene glycol (100%, 100 μl). Using a plate reader (EL340 type, manufactured by Biotech Instruments Co., Ltd.), the absorbance (OD) at 777 nm was measured.
[0057]
As a control, a DMSO solution not containing 2-aminophenoxazin-3-one (control group) was used in the same manner as described above, and the absorbance at 576 nm was measured.
The results are shown in FIG.
[0058]
As shown in FIG. 1, in the control group (0 μM), when the stock solution containing poliovirus was diluted about 64 times, Vero cells were destroyed by 50%. On the other hand, in the test groups (1, 2, 4, 8 and 16 μM), when the stock solution containing poliovirus was diluted about 14 to about 28 times, Vero cells were destroyed by 50%. From this, it can be seen that in order to destroy 50% of Vero cells, it is necessary to infect the poliovirus in the test group at a higher concentration than in the control group. Thus, 2-aminophenoxazin-3-one blocks poliovirus infection.
[0059]
Example 2
The same test was conducted by replacing the poliovirus of Example 1 with porcine parvovirus. The result is shown in FIG.
[0060]
As shown in FIG. 2, in the control group (0 μM), when the stock solution containing porcine parvovirus was diluted about 64 times, Vero cells were destroyed by 50%. On the other hand, in the test groups (1, 2, 4, 8, and 16 μM), when the stock solution containing porcine parvovirus was diluted about 7 to about 32 times, Vero cells were destroyed by 50%. From this, it can be seen that in order to destroy 50% of Vero cells, it is necessary to infect the poliovirus in the test group at a higher concentration than in the control group. Thus, 2-aminophenoxazin-3-one blocks porcine parvovirus infection.
[0061]
Example 3
Vero cell (Vero cell: a kind of African green monkey kidney cell, obtained from National Pharmacy Laboratory Cell Bank) suspended in α-MEM medium containing 10% fetal calf serum (FCS, Sigma), 2 × 10-Five~ 3x10-FiveIt seed | inoculated on 96 well plate (12 hole * 8 row | line, the Asahi Techno Glass Co., Ltd. product) so that it might become a density | concentration. Seeded Vero cells are 5% CO2In the presence, the cells were cultured at 37 ° C. for 2 days.
[0062]
On the day of the test, 3-aminophenoxazin-2-one of Production Example 2 was dissolved in DMSO to a concentration of 20 mM. The solution was diluted with α-MEM medium to 1, 2, 4, 8, 16, and 32 μM. Α-MEM medium containing 3-aminophenoxazin-2-one at each concentration was added to Vero cells and allowed to stand (test group). After 1 hour, remove the medium with an aspirator and remove 5% CO.2In the presence, TCID50The stock solution containing poliovirus was diluted at 37 ° C. to a dilution concentration at which Vero cells were observed, and infected with Vero cells for 1 hour. After aspirating and removing the supernatant with an aspirator, α-MEM medium containing each concentration of 3-aminophenoxazin-2-one was added again.
[0063]
5% CO2The cells were cultured at 37 ° C. in the presence, and it was confirmed that destruction of Vero cells was observed 2 days after the addition. After removing the supernatant with an aspirator, Vero cells were fixed to the plate using physiological saline containing 4% paraformaldehyde (2 hours, 25 ° C.). After the fixing solution was removed by suction with an aspirator, 0.5% crystal violet solution was added to stain the cells (1 hour, 25 ° C.). After staining, the cells were washed 3 times with physiological saline and air-dried. After drying, the dye incorporated into the cells was extracted by shaking the plate using ethylene glycol (100%, 100 μl). Using a plate reader (EL340 type, manufactured by Biotech Instruments Inc.), the absorbance (OD) at 777 nm was measured.
[0064]
As a control, a DMSO solution not containing 3-aminophenoxazin-2-one (control group) was subjected to the same operation as described above, and the absorbance at 777 nm was measured.
The results are shown in FIG.
[0065]
As shown in FIG. 3, in the control group (0 μM), when the stock solution containing poliovirus was diluted about 64 times, Vero cells were destroyed by 50%. On the other hand, in the test groups (1, 2, 4, 8, 16, and 32 μM), when the stock solution containing poliovirus was diluted about 14 to about 28 times, Vero cells were destroyed by 50%. From this, it can be seen that in order to destroy 50% of Vero cells, it is necessary to infect the poliovirus in the test group at a higher concentration than in the control group. Thus, 3-aminophenoxazin-2-one prevents poliovirus infection.
[0066]
Example 4
The same test was performed by replacing the poliovirus of Example 3 with porcine parvovirus. The result is shown in FIG.
[0067]
As shown in FIG. 4, in the control group (0 μM), when the stock solution containing porcine parvovirus was diluted about 64 times, Vero cells were destroyed by 50%. On the other hand, in the test groups (1, 2, 4, 8, 16, and 32 μM), when the stock solution containing porcine parvovirus was diluted about 7 to about 32 times, Vero cells were destroyed by 50%. From this, it can be seen that in order to destroy 50% of Vero cells, it is necessary to infect the poliovirus in the test group at a higher concentration than in the control group. Thus, 3-aminophenoxazin-2-one prevents porcine parvovirus infection.
[0068]
【The invention's effect】
Since 2-aminophenoxazin-3-one derivatives and 3-aminophenoxazin-2-one derivatives and their pharmacologically acceptable salts and esters are effective against various viruses, antiviral It is effective as an agent.
[Brief description of the drawings]
FIG. 1 shows the concentration of 2-aminophenoxazin-3-one in Example 1 and the dilution ratio of poliovirus stock solution when poliovirus infects Vero cells and destroys Vero cells by 50%. Shows the relationship.
FIG. 2 shows the concentration of 2-aminophenoxazin-3-one and the concentration of porcine parvovirus stock when porcine parvovirus infects Vero cells and destroys Vero cells by 50% in Example 2. The relationship with the dilution rate is shown.
FIG. 3 shows the concentration of 3-aminophenoxazin-2-one in Example 3 and the dilution ratio of poliovirus stock solution when poliovirus infects Vero cells and destroys Vero cells by 50%. Shows the relationship.
FIG. 4 shows the concentration of 3-aminophenoxazin-2-one in Example 4 and the porcine parvovirus stock solution when porcine parvovirus infects Vero cells and destroys Vero cells by 50%. The relationship with the dilution rate is shown.
