JP3828603B2 - Pharmaceutical composition containing a pyrrolidinone derivative - Google Patents

Description

〔式中、Ｒは非置換または低級アルコシキ基もしくはニトロ基で置換されたフェニル基、またはピリジル基を表す〕で示されるピロリジノン誘導体は植物成長調節剤、メタン醗酵促進剤および脳循環代謝改善剤等として知られている（特開昭６１−２２９８０１号、特開昭６１−２３０７９８号、特開平２−２２５４５８号等参照）が、そのＩＬ−１β産生抑制作用、およびＴＮＦ遊離抑制作用についてはこれまでに知られていない。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
現在、慢性関節リウマチなどの炎症性疾患の治療には、ステロイド剤および非ステロイド系抗炎症剤が用いられている。ステロイド剤は各種の炎症性疾患における諸症状を顕著に改善するが、投与が長期化すると耐性化がおきること、消化器障害、皮膚障害、腎炎などの、ときには重篤である副作用が存在することが問題となっている。一方、非ステロイド系抗炎症剤は炎症症状を一時的に抑制するが、炎症性疾患を根本から治療するものではない。
このような状況においていくつかのＩＬ−１β産生抑制作用を有する化合物が炎症性疾患の治療薬として提案されているが、充分に満足できる化合物は得られていない。
そこでＩＬ−１βの産生を強力に抑制し、かつ安全性の高い化合物が求められていた。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは鋭意研究の結果、前述のピロリジノン誘導体が優れたＩＬ−１β産生阻害作用、およびＴＮＦα遊離抑制作用を有しており、慢性関節リウマチ治療薬、敗血症治療薬として有用なものであることを見出して本発明を完成させたのである。
【０００６】
すなわち本発明は、下記一般式（I）
【化３】

〔式中、Ｒは非置換または低級アルコキシ基もしくはニトロ基で置換されたフェニル基、またはピリジル基を表す〕で表されるピロリジノン誘導体またはその薬理学的に許容される塩を有効成分として含有する、ＩＬ−１β産生抑制剤、およびＴＮＦα遊離抑制剤に関するものであり、慢性関節リウマチ治療薬、敗血症治療薬として有用である。
【０００７】
前記一般式においてＲで示される低級アルコシキ基で置換されたフェニル基において、低級アルコシキ基とは炭素数１〜４の直鎖または分枝鎖のアルキルから誘導されるもの、例えばメトキシ基、エトキシ基、ｎ−プロポキシ基、ｉ−プロポキシ基、ｎ−ブトキシ基、ｉ−ブトキシ基、tert−ブトキシ基などが包含される。
【０００８】
一般式（Ｉ）で示されるピロリジノン誘導体として、例えば、以下に示される化合物が挙げられる。
１−シンナモイル−２−ピロリジノン（以下、「化合物１」という）、１−（ｏ−メトキシ−シンナモイル）−２−ピロリジノン（以下、「化合物２」という）、１−（ｍ−メトキシ−シンナモイル）−２−ピロリジノン（以下、「化合物３」という）、１−（ｐ−メトキシ−シンナモイル）−２−ピロリジノン（以下、「化合物４」という）、１−（３,４−ジメトキシ−シンナモイル）−２−ピロリジノン（以下、「化合物５」という）、１−（３,４,５−トリシンナモイル）−２−ピロリジノン（以下、「化合物６」という）、１−（ｏ−ニトロ−シンナモイル）−２−ピロリジノン（以下、「化合物７」という）、１−（ｍ−ニトロ−シンナモイル）−２−ピロリジノン（以下、「化合物８」という）、１−（ｐ−ニトロ−シンナモイル）−２−ピロリジノン（以下、「化合物９」という）、１−（２,４−ジニトロ−シンナモイル）−２−ピロリジノン「以下、「化合物１０」という）、１−（２,４,６−トリニトロ−シンナモイル）−２−ピロリジノン（以下、「化合物１１」という）、１−（３−（２−ピリジル）−アクリロイル）−２−ピロリジノン（以下、「化合物１２」という）、１−（３−（３−ピリジル）−アクリロイル）−２−ピロリジノン（以下、「化合物１３」という）、１−（３−（４−ピリジル）−アクリロイル）−２−ピロリジノン（以下、「化合物１４」という）。
これらのピロリジノン誘導体の構造を以下に示す。
【０００９】
【表１】

【００１０】
上記一般式（Ｉ）で示されるピロリジノン誘導体は所望によって薬理学的に許容され得る酸との塩に変換されたものとして用いることができ、これらの塩を含有するＩＬ−１β産生抑制剤、およびＴＮＦα遊離抑制剤も本発明に包含される。
薬理学的に許容され得る酸としては、例えば塩酸、硫酸、臭化水素酸、リン酸などの鉱酸との塩；メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸などの有機スルホン酸；酢酸、プロピオン酸、シュウ酸、コハク酸、マレイン酸、フマール酸、乳酸、酒石酸、リンゴ酸、クエン酸などの有機カルボン酸との塩などを挙げることができる。
【００１１】
本発明のＩＬ−１β産生抑制作用、およびＴＮＦα遊離抑制作用を有する一般式(Ｉ)で表されるピロリジノン誘導体は、その種類に応じて各種方法により製造できる。また、一般式(Ｉ)で表されるピロリジノン誘導体の塩は通常の塩形成反応により製造することができる。
このピロリジノン誘導体は、優れたＩＬ−１β産生抑制作用を有していること、しかも、低毒性であることから、慢性関節リウマチ、リウマチ様多発性関節炎、敗血症、全身性エリテマトーデス、全身性強皮症、ベーチェット病、結節性動脈周囲炎、潰瘍性大腸炎、活動性慢性肝炎、糸球体腎炎、変形性関節炎、痛風、アテローム硬化症、乾癬、アトピー性皮膚炎、骨粗鬆症などのＩＬ−１βが関与する疾患の予防または治療に有用である。
【００１２】
さらにこのピロリジノン誘導体はＴＮＦα遊離抑制作用を有することにより、ＴＮＦαが病態の進展に関与する疾患の予防または治療に有用である。これらの疾患には、例えば慢性関節リウマチ、リウマチ様多発性関節炎、敗血症、アトピー性皮膚炎等の前記のＩＬ−１βも関与する疾患、さらには後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）等が挙げられる。
【００１３】
このピロリジノン誘導体の有効な活性発現のための投与量は、通常、成人一人当たり１日５mgから６ｇであり、好ましくは、１０mgから３００mgである。この化合物の投与方法としては、例えば、経口投与、静脈内投与、皮下投与、筋肉内投与、直腸内投与、関節内投与などが挙げられるが、経口投与、関節内投与および静脈内投与が好ましい。
このピロリジノン誘導体は、任意慣用の製剤方法を用いて投与用に調製することができる。経口投与剤としては、例えば、錠剤、顆粒剤、粉末剤、硬カプセル剤、軟カプセル剤、経口用液体製剤などである。
【００１４】
経口投与用のために用いる錠剤およびカプセル剤等は、結合剤、例えば、デキストリン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、マクロゴールなど；賦形剤、例えば、乳糖、トウモロコシ澱粉、リン酸カルシウム、メタケイ酸アルミン酸マグネシウムなど；潤沢剤、例えば、ステアリン酸カルシウム、タルクなど；崩壊剤、例えば、カルボキシメチルセルロース、結晶セルロースなどのような慣用の成分を含有していてもよい。また、これらの製剤はこの技術分野において周知の方法でコーテイングしてもよい。
【００１５】
経口用液体製剤は、水性または油性の懸濁剤、乳剤、溶液、シロップ、エリキシル剤、その他であってもよく、または、使用する前に水もしくは他の適当なビヒクルで再溶解させる乾燥生成物であってもよい。このような液体製剤は普通に用いられる添加剤、例えば、懸濁化剤、例えば、ソルビットシロップ、カルボキシメチルセルロース、ゼラチン、ヒドロキシエチルセルロース、ステアリン酸アルミニウムゲル、水素添加食用油脂など；乳化剤、例えば、レシチン、モノオレイン酸グリセリド、アラビアゴムなど；非水溶性ビヒクル、例えば、パーム油、プロピレングリコール、エチルアルコールなど；防腐剤、例えば、p-ヒドロキシ安息香エチル、ソルビン酸などを含有していてもよい。
非経口投与用の剤型としては注射剤、坐剤などが考えられる。
注射剤は、必要によりｐＨ調製剤、緩衝剤、安定化剤、保存剤、可溶化剤などを添加し常法により調製される。
【００１６】
以下、実施例により本発明を具体的に説明する。なお、本発明はこれらの実施例により限定されるものではない。
【００１７】
【実施例】
実施例１ （ＩＬ−１β産生抑制作用の測定）
本発明のピロリジノン誘導体のＩＬ−１β産生抑制作用を以下の方法に従い測定した。
ＲＰＭＩ １６４０培地（バイオ ウィッターカー社製）に、１０v/v％の胎児牛血清、２ｍＭのグルタミン、５０μＭの２−メルカプトエタノール、６０μｇ／mlのペニシリンおよび１００μｇ／mlのストレプトマイシンを加えて混合し、これに、ヒト末梢血由来のＴＨＰ−１細胞（ＡＴＣＣ ＴＩＢ２０２）を加えて、懸濁させる。このＴＨＰ−１細胞の懸濁液を３７℃にて、酸素９５％および二酸化炭素５％の混合ガスの雰囲気下に維持し、継代培養する。
この継代培養した懸濁液の一部を、室温で１２００rpmで３分間遠心分離し、継代したＴＨＰ−１細胞を回収する。
【００１８】
次にＲＰＭＩ １６４０培地に２v/v％の胎児牛血清、２ｍＭのグルタミン、５０μＭの２−メルカプトエタノール、６０μｇ／mlのペニシリンおよび１００μｇ／mlのストレプトマイシンを加えて混合し、これに、前記の継代培養し回収したＴＨＰ−１細胞を最終濃度が３×１０⁶個／mlとなるように再懸濁させる。
この細胞再懸濁液を、０.５mlの容量ずつ２４ウェルの細胞培養用プレートに分注する。次いで、本発明のピロリジノン誘導体を特定の各濃度に溶解させたＤＭＳＯ溶液を各ウェルに２.５μlずつ添加する。該プレートを酸素９５％および二酸化炭素５％の混合ガスの雰囲気下で、３７℃にて１時間培養する。次いで、１２−ｏ−テトラデカノイルホルボール−１３−アセテート（以下、「ＰＭＡ」という）を最終濃度が２μｇ／mlとなるように、およびポリイノシン酸を最終濃度が２００μｇ／mlとなるように、それぞれ各ウェルに添加する。さらにこのプレートを酸素９５％および二酸化炭素５％の混合ガスの雰囲気下で、３７℃にて２４時間培養する。培養後、各ウェルからギルソン社のピペットマンにて上澄み液を回収し、上澄み液中のＩＬ−１β産生量をカイマン・ケミカル社のエンザイムイムノアッセイキットで測定する。
【００１９】
ピロリジノン誘導体の無添加時のＩＬ−１β産生量を１００とし、ＩＬ−１β産生量を５０％抑制する本発明の化合物の濃度をＩＣ₅₀とし、その結果を以下にμＭ単位で示す。
【表２】

【００２０】
実施例２（ＴＮＦα遊離抑制作用の測定）
本発明のピロリジノン誘導体のＴＮＦα遊離抑制作用を以下の方法に従い測定した。
ＲＰＭＩ １６４０培地（バイオ ウィッターカー社製）に、１０v/v％の胎児牛血清、２ｍＭのグルタミン、５０μＭの２−メルカプトエタノール、６０μｇ／mlのペニシリンおよび１００μｇ／mlのストレプトマイシンを加えて混合し、これにヒト末梢血由来のＴＨＰ−１細胞（ＡＴＣＣ ＴＩＢ２０２）を加えて、懸濁させる。このＴＨＰ−１細胞の懸濁液を３７℃にて、酸素９５％および二酸化炭素５％の混合ガスの雰囲気下に維持し、継代培養する。
この継代培養した懸濁液の一部を、室温で１２００rpmで３分間遠心分離し、継代培養したＴＨＰ−１細胞を回収する。
【００２１】
次にＲＰＭＩ １６４０培地に２v/v％の胎児牛血清、２ｍＭのグルタミン、５０μＭの２−メルカプトエタノール、６０μｇ／mlのペニシリンおよび１００μｇ／mlのストレプトマイシンを加えて混合し、これに、前記の継代培養し回収したＴＨＰ−１細胞を最終濃度が３×１０⁶個／mlとなるように再懸濁させる。
この細胞再懸濁液を、０.５mlの容量ずつ２４ウェルの細胞培養用プレートに分注し、３７℃にて１時間培養する。次いで、本発明のピロリジノン誘導体を特定の各濃度に溶解させたＤＭＳＯ溶液を各ウェルに２.５μlずつ添加する。該プレートを酸素９５％および二酸化炭素５％の混合ガスの雰囲気下で、３７℃にて１時間培養する。次いで、ＰＭＡを最終濃度が２μｇ／mlとなるように、および、ポリイノシン酸を最終濃度が２００μｇ／mlとなるように、それぞれ各ウェルに添加する。さらにこのプレートを酸素９５％および二酸化炭素５％の混合ガスの雰囲気下で、３７℃にて２４時間培養する。培養後、各ウェルからギルソン社のピペットマンにて上澄み液を回収し、上澄み液中のＴＮＦα遊離量をゼンザイム社のヒトＴＮＦαエライザキットを用いて測定する。
【００２２】
ピロリジノン誘導体の無添加時のＴＮＦα遊離量を１００とし、ＴＮＦα遊離量を５０％抑制する本発明の化合物の濃度をＩＣ₅₀とし、その結果を以下にμＭ単位で示す。
【表３】

【００２３】
実施例３（細胞毒性の有無の検討）
ピロリジノン誘導体の細胞毒性の有無を以下の方法に従い検討した。
ＲＰＭＩ １６４０培地（バイオ ウィッターカー社製）に、１０v/v％の胎児牛血清、２ｍＭのグルタミン、５０μＭの２−メルカプトエタノール、６０μｇ／mlのペニシリンおよび１００μｇ／mlのストレプトマイシンを加えて混合し、これにヒト末梢血由来のＴＨＰ−１細胞（ＡＴＣＣ ＴＩＢ２０２）を加えて、懸濁させる。このＴＨＰ−１細胞の懸濁液を３７℃にて、酸素９５％および二酸化炭素５％の混合ガスの雰囲気下に維持し、継代培養する。
この継代培養した懸濁液の一部を、室温で１２００rpmで３分間遠心分離し、継代培養したＴＨＰ−１細胞を回収する。
【００２４】
次にＲＰＭＩ １６４０培地に２v/v％の胎児牛血清、２ｍＭのグルタミン、５０μＭの２−メルカプトエタノール、６０μｇ／mlのペニシリンおよび１００μｇ／mlのストレプトマイシンを加えて混合し、これに、前記の継代培養し回収したＴＨＰ−１細胞を最終濃度が１×１０⁶個／mlとなるように再懸濁させる。
この細胞再懸濁液を、１mlの容量ずつ２４ウェルの細胞培養用プレートに分注する。次いで本発明のピロリジノン誘導体を特定の各濃度に溶解させたＤＭＳＯ溶液を各ウェルに５μlずつ添加する。該プレートを酸素９５％および二酸化炭素５％の混合ガスの雰囲気下、３７℃にて２４時間培養する。培養後、各ウェルに１００μｌのアラマー・ブルー(Alamar Blue; バイオソース社製）を添加し、さらに酸素９５％および二酸化炭素５％の混合ガスの雰囲気下、３７℃にて３時間培養する。
培養後、各ウェルからギルソン社のピペットマンにて上澄み液を回収し、上澄み液の５７０nmと６００nmの吸光度差を測定する。
試験するピロリジノン誘導体を含まないときの５７０nmと６００nmの吸光度差を基準とし、本発明のピロリジノン誘導体を添加した際の該吸光度差が、有意に減少したものを細胞毒性があるものとする。
本試験によれば５０μＭまでの濃度では本発明のピロリジノン誘導体に細胞毒性は認められなかった。
【００２５】
製剤例１ （錠剤）
錠剤１錠あたり下記の配合になるように製剤化を行なった。
化合物９ ２０mg
けい酸マグネシウム ２０mg
乳糖 ９８.５mg
ヒドロキシプロピルセルロース ７.５mg
ステアリン酸マグネシウム １mg
水素添加植物硬化油 ３mg
すなわち、化合物９、けい酸マグネシウム及び乳糖を混合し、これをヒドロキシプロピルセルロースを溶解したアルコール液で練合し、次いで適当な粒度に造粒し、乾燥、整粒後さらにステアリン酸マグネシウム及び水素添加植物硬化油を添加混合し均一な顆粒とした。次いでロータリー式打錠機により直径７.０mm、重量１５０mgおよび硬度６kgの錠剤を調製した。
【００２６】
製剤例２ （顆粒剤）
化合物９ １０mg
酸化マグネシウム ４０mg
りん酸水素カルシウム ３８mg
乳糖 １０mg
ヒドロキシプロピルセルロース ２０mg
上記処方例中ヒドロキシプロピルセルロースを除いた各原料を混合した後、これにヒドロキシプロピルセルロースを含有するアルコール溶液を加えて練合し、押出造粒機により造粒し、乾燥して顆粒を得た。この顆粒を整粒して１２メッシュの篩を通過し、４８メッシュの篩上に残留するものを顆粒剤とした。
【００２７】
製剤例３ （シロップ剤）

白糖、Ｄ−ソルビトール、パラオキシ安息香酸エチル、パラオキシ安息香酸プロピル及び化合物９を精製水（温水）６０ｇに溶解する。冷却後香味料を溶解したグリセリンおよび９６％エタノールの溶液を加える。次にこの混合物に精製水を加えて１００mlにする。
【００２８】
製剤例４ （注射液）

炭酸水素ナトリウム、塩化ナトリウム及び化合物１２の塩酸塩を注射用水に加えて溶解し、全量を１０.０mlとし、注射液とした。
【００２９】
製剤例５ （坐剤）
化合物９ ２ｇ
マクロゴール４０００ ２０ｇ
グリセリン ７８ｇ
化合物９をグリセリンに加えて溶解する。これに、マクロゴール４０００を加えて加温し溶解後、坐剤型に注入して冷却固化し１個あたり１.５ｇの坐剤を製造する。
【００３０】
【効果】
本発明のピロリジノン誘導体は、ＩＬ−１β産生抑制作用およびＴＮＦα遊離抑制作用を有しており、慢性関節リウマチ、敗血症などのＩＬ−１βおよび／またはＴＮＦαが関与する疾患の治療薬として有用である。[0001]
BACKGROUND OF THE INVENTION
The present invention relates to an interleukin-1β (hereinafter referred to as “IL-1β”) production inhibitor and a tumor necrosis factor α (hereinafter referred to as “TNFα”) release inhibitor containing a pyrrolidinone derivative as an active ingredient.
[0002]
[Prior art]
IL-1β is a protein produced mainly from immunocompetent cells such as macrophages and neutrophils, and is an important factor of immune response. Furthermore, it is known as a factor that plays a central role during inflammation or as a factor related to many biological reactions such as hematopoiesis, endocrine, and nerves.
For example, in recent years, the relationship with inflammatory diseases such as rheumatoid arthritis has been clarified, IL-1β is detected in the synovium of rheumatoid arthritis patients, and the IL-1β concentration in the joint fluid is locally It has also been reported to correlate with inflammatory findings.
[0003]
In addition, the following general formula (I)
[Chemical 2]

[Wherein R represents a phenyl group substituted with an unsubstituted or lower alkoxy group or a nitro group, or a pyridyl group] pyrrolidinone derivatives represented by plant growth regulators, methane fermentation promoters, cerebral circulation metabolism improvers, etc. (See JP-A-61-229801, JP-A-61-230798, JP-A-2-225458, etc.), but their IL-1β production inhibitory activity and TNF release inhibitory activity have been described so far. Not known to.
[0004]
[Problems to be solved by the invention]
Currently, steroids and non-steroidal anti-inflammatory agents are used to treat inflammatory diseases such as rheumatoid arthritis. Steroids significantly improve the symptoms of various inflammatory diseases, but there are side effects that are sometimes severe, such as tolerance, digestive disorders, skin disorders, nephritis, etc. Is a problem. On the other hand, non-steroidal anti-inflammatory drugs temporarily suppress inflammatory symptoms, but do not fundamentally treat inflammatory diseases.
Under such circumstances, some compounds having an inhibitory effect on IL-1β production have been proposed as therapeutic agents for inflammatory diseases, but no sufficiently satisfactory compound has been obtained.
Thus, a compound that strongly suppresses the production of IL-1β and has high safety has been demanded.
[0005]
[Means for Solving the Problems]
As a result of intensive studies, the present inventors have found that the above-mentioned pyrrolidinone derivatives have excellent IL-1β production inhibitory action and TNFα release inhibitory action, and are useful as therapeutic agents for rheumatoid arthritis and septicemia. As a result, the present invention has been completed.
[0006]
That is, the present invention provides the following general formula (I)
[Chemical 3]

[Wherein R represents a phenyl group substituted with an unsubstituted or lower alkoxy group or a nitro group, or a pyridyl group] or a pharmacologically acceptable salt thereof as an active ingredient , IL-1β production inhibitor, and TNFα release inhibitor, and are useful as a therapeutic agent for rheumatoid arthritis and a therapeutic agent for sepsis.
[0007]
In the phenyl group substituted with a lower alkoxy group represented by R in the above general formula, the lower alkoxy group is derived from a linear or branched alkyl having 1 to 4 carbon atoms, such as a methoxy group or an ethoxy group. N-propoxy group, i-propoxy group, n-butoxy group, i-butoxy group, tert-butoxy group and the like.
[0008]
Examples of the pyrrolidinone derivative represented by the general formula (I) include the following compounds.
1-cinnamoyl-2-pyrrolidinone (hereinafter referred to as “compound 1”), 1- (o-methoxy-cinnamoyl) -2-pyrrolidinone (hereinafter referred to as “compound 2”), 1- (m-methoxy-cinnamoyl) — 2-pyrrolidinone (hereinafter referred to as “compound 3”), 1- (p-methoxy-cinnamoyl) -2-pyrrolidinone (hereinafter referred to as “compound 4”), 1- (3,4-dimethoxy-cinnamoyl) -2- Pyrrolidinone (hereinafter referred to as “Compound 5”), 1- (3,4,5-tricinnamoyl) -2-pyrrolidinone (hereinafter referred to as “Compound 6”), 1- (o-nitro-cinnamoyl) -2-pyrrolidinone (hereinafter referred to as “Compound 5”) Hereinafter, referred to as “compound 7”, 1- (m-nitro-cinnamoyl) -2-pyrrolidinone (hereinafter referred to as “compound 8”), 1- (p-nitro-cinnamoyl). ) -2-pyrrolidinone (hereinafter referred to as “Compound 9”), 1- (2,4-dinitro-cinnamoyl) -2-pyrrolidinone “hereinafter referred to as“ Compound 10 ”), 1- (2,4,6-trinitro) -Cinnamoyl) -2-pyrrolidinone (hereinafter referred to as "Compound 11"), 1- (3- (2-pyridyl) -acryloyl) -2-pyrrolidinone (hereinafter referred to as "Compound 12"), 1- (3- ( 3-pyridyl) -acryloyl) -2-pyrrolidinone (hereinafter referred to as “Compound 13”), 1- (3- (4-pyridyl) -acryloyl) -2-pyrrolidinone (hereinafter referred to as “Compound 14”).
The structures of these pyrrolidinone derivatives are shown below.
[0009]
[Table 1]

[0010]
The pyrrolidinone derivative represented by the above general formula (I) can be used as desired after being converted into a salt with a pharmacologically acceptable acid, an IL-1β production inhibitor containing these salts, and TNFα release inhibitors are also encompassed by the present invention.
Examples of the pharmacologically acceptable acid include salts with mineral acids such as hydrochloric acid, sulfuric acid, hydrobromic acid and phosphoric acid; organic sulfonic acids such as methanesulfonic acid, benzenesulfonic acid and p-toluenesulfonic acid; Examples thereof include salts with organic carboxylic acids such as acetic acid, propionic acid, oxalic acid, succinic acid, maleic acid, fumaric acid, lactic acid, tartaric acid, malic acid and citric acid.
[0011]
The pyrrolidinone derivative represented by the general formula (I) having the IL-1β production inhibitory action and the TNFα release inhibitory action of the present invention can be produced by various methods depending on the kind thereof. Moreover, the salt of the pyrrolidinone derivative represented by the general formula (I) can be produced by a usual salt formation reaction.
Since this pyrrolidinone derivative has an excellent IL-1β production inhibitory action and low toxicity, rheumatoid arthritis, rheumatoid polyarthritis, sepsis, systemic lupus erythematosus, systemic scleroderma IL-1β such as Behcet's disease, nodular periarteritis, ulcerative colitis, active chronic hepatitis, glomerulonephritis, osteoarthritis, gout, atherosclerosis, psoriasis, atopic dermatitis, osteoporosis is involved Useful for prevention or treatment of disease.
[0012]
Furthermore, since this pyrrolidinone derivative has a TNFα release inhibitory action, it is useful for the prevention or treatment of diseases in which TNFα is involved in the development of disease states. Examples of these diseases include diseases involving IL-1β such as rheumatoid arthritis, rheumatoid polyarthritis, sepsis, and atopic dermatitis, and acquired immune deficiency syndrome (AIDS).
[0013]
The dosage for effective expression of this pyrrolidinone derivative is usually 5 mg to 6 g per adult, preferably 10 mg to 300 mg per day. Examples of the administration method of this compound include oral administration, intravenous administration, subcutaneous administration, intramuscular administration, rectal administration, and intraarticular administration, and oral administration, intraarticular administration and intravenous administration are preferred.
The pyrrolidinone derivative can be prepared for administration using any conventional formulation method. Examples of the oral administration agent include tablets, granules, powders, hard capsules, soft capsules, liquid preparations for oral use, and the like.
[0014]
Tablets and capsules used for oral administration include binders such as dextrin, hydroxypropylcellulose, hydroxypropylmethylcellulose, polyvinylpyrrolidone, macrogol and the like; excipients such as lactose, corn starch, calcium phosphate, metasilicate Magnesium aluminate and the like; lubricants such as calcium stearate, talc and the like; disintegrants such as carboxymethyl cellulose, crystalline cellulose and the like may be used. These formulations may also be coated by methods well known in the art.
[0015]
Oral liquid formulations may be aqueous or oily suspensions, emulsions, solutions, syrups, elixirs, etc., or dry products that are redissolved in water or other suitable vehicle before use. It may be. Such liquid formulations are commonly used additives such as suspending agents such as sorbit syrup, carboxymethylcellulose, gelatin, hydroxyethylcellulose, aluminum stearate gel, hydrogenated edible fats and oils; emulsifiers such as lecithin, Monooleic acid glyceride, gum arabic, etc .; water-insoluble vehicles such as palm oil, propylene glycol, ethyl alcohol, etc .; preservatives such as ethyl p-hydroxybenzoate, sorbic acid and the like may be included.
Examples of dosage forms for parenteral administration include injections and suppositories.
The injection is prepared by a conventional method with the addition of a pH adjusting agent, a buffering agent, a stabilizer, a preservative, a solubilizing agent and the like as necessary.
[0016]
Hereinafter, the present invention will be described specifically by way of examples. In addition, this invention is not limited by these Examples.
[0017]
【Example】
Example 1 (Measurement of IL-1β production inhibitory effect)
The IL-1β production inhibitory action of the pyrrolidinone derivative of the present invention was measured according to the following method.
RPMI 1640 medium (manufactured by Bio-Wittercar) was mixed with 10 v / v fetal calf serum, 2 mM glutamine, 50 μM 2-mercaptoethanol, 60 μg / ml penicillin and 100 μg / ml streptomycin. In addition, human peripheral blood-derived THP-1 cells (ATCC TIB202) are added and suspended. This suspension of THP-1 cells is maintained at 37 ° C. in an atmosphere of a mixed gas of 95% oxygen and 5% carbon dioxide, and subcultured.
A part of the subcultured suspension is centrifuged at 1200 rpm for 3 minutes at room temperature to recover the subcultured THP-1 cells.
[0018]
Next, RPMI 1640 medium was mixed with 2 v / v% fetal bovine serum, 2 mM glutamine, 50 μM 2-mercaptoethanol, 60 μg / ml penicillin and 100 μg / ml streptomycin, and the above passage was performed. The cultured and recovered THP-1 cells are resuspended to a final concentration of 3 × 10 ⁶ cells / ml.
Dispense this cell resuspension into 0.5-well volumes of 24-well cell culture plates. Next, 2.5 μl of a DMSO solution in which the pyrrolidinone derivative of the present invention is dissolved in each specific concentration is added to each well. The plate is incubated for 1 hour at 37 ° C. in an atmosphere of a mixed gas of 95% oxygen and 5% carbon dioxide. Next, 12-o-tetradecanoylphorbol-13-acetate (hereinafter referred to as “PMA”) is adjusted to a final concentration of 2 μg / ml, and polyinosinic acid is adjusted to a final concentration of 200 μg / ml. Add to each well. Furthermore, this plate is cultured at 37 ° C. for 24 hours in an atmosphere of a mixed gas of 95% oxygen and 5% carbon dioxide. After culturing, the supernatant is collected from each well with a Gilson Pipetman, and the amount of IL-1β produced in the supernatant is measured with an enzyme immunoassay kit from Caiman Chemical.
[0019]
The IL-1β production amount when no pyrrolidinone derivative is added is defined as 100, the concentration of the compound of the present invention that suppresses the IL-1β production amount by 50% is defined as IC ₅₀ , and the results are shown below in μM.
[Table 2]

[0020]
Example 2 (Measurement of TNFα release inhibitory action)
The TNFα release inhibitory action of the pyrrolidinone derivative of the present invention was measured according to the following method.
RPMI 1640 medium (manufactured by Bio-Wittercar) was mixed with 10 v / v fetal calf serum, 2 mM glutamine, 50 μM 2-mercaptoethanol, 60 μg / ml penicillin and 100 μg / ml streptomycin. To human peripheral blood-derived THP-1 cells (ATCC TIB202) and suspended. This suspension of THP-1 cells is maintained at 37 ° C. in an atmosphere of a mixed gas of 95% oxygen and 5% carbon dioxide, and subcultured.
A part of the subcultured suspension is centrifuged at 1200 rpm for 3 minutes at room temperature to recover the subcultured THP-1 cells.
[0021]
Next, RPMI 1640 medium was mixed with 2 v / v% fetal bovine serum, 2 mM glutamine, 50 μM 2-mercaptoethanol, 60 μg / ml penicillin and 100 μg / ml streptomycin, and the above passage was performed. The cultured and recovered THP-1 cells are resuspended to a final concentration of 3 × 10 ⁶ cells / ml.
This cell resuspension is dispensed in a volume of 0.5 ml to a 24-well cell culture plate and cultured at 37 ° C. for 1 hour. Next, 2.5 μl of a DMSO solution in which the pyrrolidinone derivative of the present invention is dissolved in each specific concentration is added to each well. The plate is incubated for 1 hour at 37 ° C. in an atmosphere of a mixed gas of 95% oxygen and 5% carbon dioxide. Then, PMA is added to each well to a final concentration of 2 μg / ml and polyinosinic acid to a final concentration of 200 μg / ml. Furthermore, this plate is cultured at 37 ° C. for 24 hours in an atmosphere of a mixed gas of 95% oxygen and 5% carbon dioxide. After culturing, the supernatant is collected from each well with a Gilson Pipetman, and the amount of TNFα released in the supernatant is measured using a human TNFα ELISA kit from Zenzyme.
[0022]
The TNFα release amount when no pyrrolidinone derivative is added is defined as 100, the concentration of the compound of the present invention that suppresses the TNFα release amount by 50% is defined as IC ₅₀ , and the results are shown below in μM.
[Table 3]

[0023]
Example 3 (Examination of the presence or absence of cytotoxicity)
The presence or absence of cytotoxicity of the pyrrolidinone derivative was examined according to the following method.
RPMI 1640 medium (manufactured by Bio-Wittercar) was mixed with 10 v / v fetal calf serum, 2 mM glutamine, 50 μM 2-mercaptoethanol, 60 μg / ml penicillin and 100 μg / ml streptomycin. To human peripheral blood-derived THP-1 cells (ATCC TIB202) and suspended. This suspension of THP-1 cells is maintained at 37 ° C. in an atmosphere of a mixed gas of 95% oxygen and 5% carbon dioxide, and subcultured.
A part of the subcultured suspension is centrifuged at 1200 rpm for 3 minutes at room temperature to recover the subcultured THP-1 cells.
[0024]
Next, RPMI 1640 medium was mixed with 2 v / v% fetal bovine serum, 2 mM glutamine, 50 μM 2-mercaptoethanol, 60 μg / ml penicillin and 100 μg / ml streptomycin, and the above passage was performed. The cultured and recovered THP-1 cells are resuspended to a final concentration of 1 × 10 ⁶ cells / ml.
This cell resuspension is dispensed into 24-well cell culture plates in 1 ml volumes. Next, 5 μl of a DMSO solution in which the pyrrolidinone derivative of the present invention is dissolved in each specific concentration is added to each well. The plate is incubated for 24 hours at 37 ° C. in an atmosphere of a mixed gas of 95% oxygen and 5% carbon dioxide. After culturing, 100 μl of Alamar Blue (manufactured by Biosource) is added to each well, and further cultured at 37 ° C. for 3 hours in an atmosphere of a mixed gas of 95% oxygen and 5% carbon dioxide.
After culturing, the supernatant is collected from each well with a Gilson Pipetman, and the difference in absorbance between 570 nm and 600 nm of the supernatant is measured.
Based on the difference in absorbance between 570 nm and 600 nm when the pyrrolidinone derivative to be tested is not included, the difference in absorbance when the pyrrolidinone derivative of the present invention is added is considered to be cytotoxic.
According to this test, the pyrrolidinone derivative of the present invention was not cytotoxic at concentrations up to 50 μM.
[0025]
Formulation Example 1 (Tablet)
Formulation was carried out so that each tablet had the following composition.
Compound 9 20mg
Magnesium silicate 20mg
Lactose 98.5mg
Hydroxypropylcellulose 7.5mg
Magnesium stearate 1mg
Hydrogenated hardened oil 3mg
That is, compound 9, magnesium silicate and lactose are mixed, kneaded with an alcohol solution in which hydroxypropylcellulose is dissolved, then granulated to an appropriate particle size, dried, sized and then further magnesium stearate and hydrogenated Plant hardened oil was added and mixed to obtain uniform granules. Subsequently, a tablet having a diameter of 7.0 mm, a weight of 150 mg and a hardness of 6 kg was prepared by a rotary tableting machine.
[0026]
Formulation Example 2 (Granule)
Compound 9 10mg
Magnesium oxide 40mg
Calcium hydrogen phosphate 38mg
Lactose 10mg
Hydroxypropylcellulose 20mg
After mixing the raw materials excluding hydroxypropylcellulose in the above formulation examples, an alcohol solution containing hydroxypropylcellulose was added and kneaded, granulated with an extrusion granulator, and dried to obtain granules. . The granules were sized, passed through a 12 mesh screen, and remained on the 48 mesh screen as granules.
[0027]
Formulation Example 3 (Syrup)

Sucrose, D-sorbitol, ethyl paraoxybenzoate, propyl paraoxybenzoate and compound 9 are dissolved in 60 g of purified water (warm water). After cooling, add a solution of glycerin and 96% ethanol in which the flavoring is dissolved. The mixture is then made up to 100 ml with purified water.
[0028]
Formulation Example 4 (Injection solution)

Sodium bicarbonate, sodium chloride and the hydrochloride of compound 12 were added to water for injection and dissolved to make the total volume 10.0 ml, which was an injection solution.
[0029]
Formulation Example 5 (suppository)
Compound 9 2g
Macrogol 4000 20g
Glycerin 78g
Compound 9 is dissolved in glycerin. To this, Macrogol 4000 is added, heated and dissolved, then poured into a suppository mold, cooled and solidified to produce 1.5 g of suppository per piece.
[0030]
【effect】
The pyrrolidinone derivative of the present invention has an inhibitory action on IL-1β production and an inhibitory action on TNFα release, and is useful as a therapeutic agent for diseases involving IL-1β and / or TNFα such as rheumatoid arthritis and sepsis.

Claims (1)

Formula (I)

[Wherein R represents a phenyl group substituted with an unsubstituted or lower alkoxy group or nitro group or a pyridyl group] or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient A pharmaceutical composition for treating or preventing a disease selected from the group consisting of rheumatoid arthritis, sepsis, and ulcerative colitis .