JP3806456B2 - Cancer cell metastasis inhibitor 6- (trichloroacetamide) -4,5-dihydroxypiperidine-3-carboxylic acid and 6-guanidino-4,5-dihydroxypiperidine-3-carboxylic acid and related substances - Google Patents

Description

で示される(3S,4S,5R,6R)-6-(トリフルオロアセタミド)-4,5-ジヒドロキシピペ リジン-3-カルボン酸またはその塩を製造する方法として、西村らの方法〔「Bull. Chem. Soc. Jpn.」65巻、978−986頁(1992年)、ならびに「J.Antibiotics」 45巻、954−962頁および963−970頁(1992年)参照〕によりリボースから製造される(3S,4S,5R,6R)-6-(トリフルオロアセタミド)-3,4,5-トリヒドロキシピペリジ ンを出発化合物として用い、これを一連の反応工程で化学的に変換することから成る方法が本発明者らにより発明され、特開平6-157458号明細書に記載されて知られていた。しかるにこの既知の方法は、原料として高価なＬ−リボースを使用し、多数の工程を要すること、およびその目的生成物である(3S,4S,5R,6R)-6- (トリフルオロアセタミド)-4,5-ジヒドロキシピペリジン-3-カルボン酸の収率が約１％と低いこと等の欠点を有し、実用化には困難を伴うものであった。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
癌の制圧のための現行の薬物治療、外科手術或いは放射線による癌の治療法等は、そられの有効性が癌細胞の転移を抑制できることで更に高められると期待されている。しかし、癌細胞の転移を抑制する活性を作用の主体とする活性物質は数少なく、臨床で用いられているものは未だない。従って、毒性が低く且つ水溶性を有し、しかも癌転移抑制作用の強い化合物であって癌の治療ならびに予防に有効な新しい化合物を提供することが強く要望されている。
【０００５】
また、前記の(3S,4S,5R,6R)-6-(トリフルオロアセタミド)-4,5-ジヒドロキシ ピペリジン-3-カルボン酸を効率よく製造できる新規な方法を開発することも望 まれている。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
そこで本発明者らは、種々研究を行った。その研究の一環として、放線菌であるストレプトミセス・パーチシラス・バリニタス・クインツム（Streptomyces verticillus var. quintum)（微工研菌寄第507号)の培養で製造できる次式(Ａ）

で示されるシアスタチンＢ(特公昭55-46714号明細書)から１位のイミノ基の保護のための１工程で次の一般式(III−１)

〔式中、Ｒ¹ はイミノ基保護基、例えばターシャリーブトキシカルボニル基である〕で示されるN-保護-シアスタチンＢを合成し、この式(III−１)の化合物を原料として用い、これから数工程で新規な中間体化合物として次の一般式(II)

〔式中、Ｒ¹ はイミノ基保護基、例えばターシャリーブトキシカルボニル基であり、Ｘ¹ とＸ² は夫々に１価のヒドロキシル基保護基であるか、あるいはＸ¹ Ｘ² の両者は共同して次式

（但し、Ｒ^a およびＲ^b は、互いに同じ又は異なってもよく、それぞれが水素原子、アルキル基又はアリール基、特にフェニル基である）で示される２価のヒドロキシル基保護基１個を示し、あるいはベンジリデン基、シクロアルキリデン基またはテトラヒドロピラニリデン基を示す〕で表される(3R,4S,5R,6S)-N-保護-6-アミノ-3-ヒドロキシメチル-4,5-ジヒドロキシ-4,5-O-ジ保護-ピペリジンを 合成し、さらにこの一般式(II)の中間体化合物を経て前記の(3S,4S,5R,6R)-6- (トリフルオロアセタミド)-4,5-ジヒドロキシピペリジン-3-カルボン酸またはそれの塩類を高収率で製造できる新規な方法を開発することに成功した。
【０００７】
さらに本発明者らは、新規な癌細胞転移抑制物質を得る目的で研究を進めた。その結果、前記の合成方法で作成した一般式(II)の中間体化合物を利用して、数工程を経て、次式（Ｉａ）

で示される(3S,4S,5R,6R)-6-(トリクロロアセタミド)-4,5-ジヒドロキシピペリ ジン-3-カルボン酸と、次式（Ｉｂ）

で示される(3S,4S,5R,6R)-6-グアニジノ-4,5-ジヒドロキシピペリジン-3-カルボン酸とを新規化合物として合成することに成功した。
【０００８】
本発明者らは、癌細胞の転移の抑制作用を評価する実験評価系により、上記の式(Ｉａ)の(3S,4S,5R,6R)-6-(トリクロロアセタミド)-4,5-ジヒドロキシピペリ ジン-3-カルボン酸と式（Ｉｂ）の(3S,4S,5R,6R)-6-グアニジノ-4,5-ジヒドロキシピペリジン-3-カルボン酸、およびそれらの塩が極めて優れた癌細胞転移抑制 活性を有することを見出した。これらの知見に基づいて本発明を完成した。
【０００９】
従って第一の本発明は、新規な癌細胞転移抑制物質として、次の一般式（Ｉ）

〔式中、Ｒはトリクロロアセタミド基またはグアニジノ基である〕で示される(3S,4S,5R,6R)−6−(トリクロロアセタミド)−4,5−ジヒドロキシピペリジン−3−カルボン酸あるいは(3S,4S,5R,6R)−6−グアニジノ−4,5−ジヒドロキシピペリジン−3−カルボン酸またはそれらの塩を提供する。
【００１０】
上記の一般式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉａ）

で示される(3S,4S,5R,6R)-6-(トリクロロアセタミド)-4,5-ジヒドロキシピペリ ジン-3-カルボン酸および式（Ｉｂ）

で示される(3S,4S,5R,6R)-6-グアニジノ-4,5-ジヒドロキシピペリジン-3-カルボン酸を包含する。一般式(Ｉ)の化合物の塩には、それのカルボン酸基における製薬学的に許容できる金属との塩、例えばアルカリ金属塩、例えばナトリウム塩、あるいはアルカリ土類金属塩、例えばカルシウム塩ならびにアンモニウム塩がある。また(3S,4S,5R,6R)-6-(トリクロロアセタミド)-4,5-ジヒドロキシピペリジ ン-3-カルボン酸および(3S,4S,5R,6R)-6-グアニジノ-4,5-ジヒドロキシピペリジン-3-カルボン酸のイミノ基における酸付加塩も包含され、特に製薬学的に許容 できる鉱酸、例えば塩酸、硫酸、あるいは有機酸、例えば酢酸、プロピオン酸、等との製薬学的に許容できる酸付加塩がある。
【００１１】
第一の本発明による式(Ｉａ）の(3S,4S,5R,6R)-6-(トリクロロアセタミド)-4,5-ジヒドロキシピペリジン-3-カルボン酸および式（Ｉｂ）の(3S,4S,5R,6R)-6- グアニジノ-4,5-ジヒドロキシピペリジン-3-カルボン酸およびそれらの塩が癌細胞転移抑制活性を有することを下記の試験例により例証する。
【００１２】
試験例１
第一の本発明による式（Ｉａ）および（Ｉｂ）の化合物の癌細胞転移抑制作用の評価はキジマ−スダ(Kijima-Suda)らの方法(「Cancer Research」46巻、858−862頁、1986年）に準じて行なった。
【００１３】
試験法：マウスの腫瘍であるメラノーマＢ16株よりフィドラー(Fidler)の方法（「Method in Cancer Research」15巻、399−439頁、1978年）に準じてメラノ ーマＢ16高転移株を選択し、使用した。
【００１４】
そのように選択されたメラノーマＢ16高転移株を牛胎児血清を加えたダルベコ培地に植え、24時間、５％ＣＯ₂ の存在下37℃で先づ培養した。その後、式(Ｉａ）の(3S,4S,5R,6R)-6-(トリクロロアセタミド)-4,5-ジヒドロキシピペリジン-3-カルボン酸または(Ｉｂ）の(3S,4S,5R,6R)-6-グアニジノ-4,5-ジヒドロキ シピペリジン-3-カルボン酸を後記の表Ｉに示す濃度で加え、72時間、５％ＣＯ₂の存在下に37℃で培養した。このようにして増殖した細胞をトリプシンとEDTA溶液で培養容器より剥がした。この細胞を平衡塩類溶液で生細胞として１ml当たり１×10⁶ 個の細胞の濃度になるように懸濁した。
【００１５】
この細胞懸濁液の0.1mlをＢＤＦ₁ マウス（雌、７週令）の尾静脈に投与して 移植した。14日間飼育した後、開腹して肺を摘出し、肺表面及び内部に形成されたＢ16高転移株のコロニーを計数し、薬剤処理をしなかった対照試験群と比較した。その結果を次の表１に示した。
【００１６】

【００１７】
表１に示した試験結果より明らかな通り、第１の本発明による式（Ｉａ）の (3S,4S,5R,6R)-6-(トリクロロアセタミド)-4,5-ジヒドロキシピペリジン-3-カルボン酸および式（Ｉｂ）の(3S,4S,5R,6R)-6-グアニジノ-4,5-ジヒドロキシピペ リジン-3-カルボン酸は、投与した薬剤濃度を上げるのに従って、肺に転移形成 される癌細胞コロニーの数を減少させており、肺への転移を強く抑制していることを示す。従って、既存の制癌剤と同時に投与して、また、外科手術療法或いは放射線療法時に本発明の一般式（Ｉ）の化合物を投与することで制癌効果を著しく高め得ることができるものであり、癌の治療法に極めて有用な薬剤である。
【００１８】
また、前記した一般式(II)で示される(3R,4S,5R,6S)-N-アミノ-3-ヒドロキシ メチル-4,5-ジヒドロキシ-4,5-O-ジ保護-ピペリジンは、既知の癌細胞転移抑制 物質として前記の式（Ｉｃ）で示される(3S,4S,5R,6R)-6-(トリフルオロアセタ ミド)-4,5-ジヒドロキシピペリジン-3-カルボン酸のみならず、今回合成された 新規な癌細胞転移抑制物質として式（Ｉａ）の(3S,4S,5R,6R)-6-(トリクロロア セタミド)-4,5-ジヒドロキシピペリジン-3-カルボン酸および式（Ｉｂ）の（3S,4S,5R,6R)-6-グアニジノ-4,5-ジヒドロキシピペリジン-3-カルボン酸の合成に有用である新規な中間体化合物である。
【００１９】
従って第二の本発明においては、一般式（II）

〔式中、Ｒ¹はイミノ基保護基としてのアルコキシカルボニル基、アリールオキシカルボニル基またはアラルキルオキシカルボニル基であり、Ｘ¹とＸ²は夫々に１価のヒドロキシル基保護基としてのトリアルキルシリル基であるか、あるいはＸ¹とＸ²の両者は共同して次式

（但しＲ^aおよびＲ^bは、互いに同じ又は異なってもよく、それぞれが水素原子、アルキル基又はアリール基である）で示される２価のヒドロキシル基保護基１個を示し、あるいはベンジリデン基、シクロアルキリデン基またはテトラヒドロピラニリデン基を示す〕で表される（3R,4S,5R,6S)−N−保護−6−アミノ−3−ヒドロキシメチル−4,5−ジヒドロキシ−4,5−O−ジ保護−ピペリジンまたはその塩が提供される。
【００２０】
さらに、上記の一般式(II)のピペリジン誘導体は、前記の式（Ａ）のシアスタチンＢの１位のイミノ基に常法でイミノ基保護基、好ましくはアルコキシカルボニル基型のイミノ基保護基を導入して得られた前記の一般式(III−１)のシアス タチンＢのイミノ基保護誘導体から出発すると、後記される４工程を経て製造できるものである。
【００２１】
従って、第三の本発明においては、一般式（III−１)

〔式中、Ｒ¹は先に記載の一般式（II）におけるＲ¹と同じ意味をもつイミノ基保護基である〕のN−保護−シアスタチンＢの４位および５位のヒドロキシル基を１価または２価のヒドロキシル基保護基で保護して次の一般式（III−２）

〔式中、Ｒ¹はイミノ基保護基としてのアルコキシカルボニル基、アリールオキシカルボニル基またはアラルキルオキシカルボニル基であり、Ｘ¹とＸ²は夫々に１価のヒドロキシル基保護基としてのトリアルキルシリル基であるか、あるいはＸ¹とＸ²の両者は共同して次式

（但し、Ｒ^aおよびＲ^bは、互いに同じ又は異なってもよく、水素原子、アルキル基又はアリール基である）で示される２価のヒドロキシル基保護基１個を示し、あるいはベンジリデン基、シクロアルキリデン基またはテトラヒドロピラニリデン基を示す〕で表されるN−保護−4,5−ジ−O−保護−シアスタチンＢを生成し、この式（III−２）の化合物の３位のカルボキシル基をエステル化剤と反応させて次の一般式（III−３）

〔式中、Ｒ¹、Ｘ¹、Ｘ²は前記と同じ意味をもち、Ｒ²はエステル形成基である〕で示されるシアスタチンＢ保護誘導体を生成し、続いて式（III−３）化合物の３位の基−ＣＯ₂Ｒ²を還元によりヒドロキシメチル基に転化して次の一般式（III−４）

〔式中、Ｒ¹、Ｘ¹及びＸ²は前記と同じ意味をもつ〕で示される（3R,4S,5R,6Rまたは6S)−6−アセタアミド−N−保護−3−ヒドロキシメチル−4,5−O−ジ保護−4,5−ピペリジンジオールを生成し、さらに一般式（III−４）の化合物の６位のアセタミド基から脱アセチル化により遊離のアミノ基を形成することを特徴とする、次の一般式（II）

〔式中、Ｒ¹、Ｘ¹、Ｘ²は前記と同じ意味をもつ〕で示される（3R,4S,5R,6S）−N−保護−6−アミノ−3−ヒドロキシメチル−4,5−O−ジ保護−ピペリジンの製造法が提供される。
【００２２】
第二の本発明による前記の一般式(II)の(3R,4S,5R,6S)-N-保護-6-アミノ-3-ヒドロキシメチル-4,5-ジヒドロキシ-4,5-ジ保護ピペリジンにおいて、またこの化合物(II)を合成する第三の本発明の方法で原料として用いる前記の一般式(III−１)で示されるN-保護-シアスタチンＢにおいて、Ｒ¹ であるイミノ基保護基はターシャリーブトキシカルボニル基（ＣＨ₃)₃ＣＯ-ＣＯ-（略号：Ｂｏｃ）である のが便利である。
【００２３】
上記の化合物におけるイミノ基保護基（Ｒ¹ ）としては、Ｂｏｃ基に代えて、一般の常用のイミノ基保護基が糖化学で知られる保護法により導入して利用できる。
【００２４】
Ｂｏｃ基に代え、例えば適当なイミノ基保護基（Ｒ¹ ）はアルコキシカルボニル基、アリールオキシカルボニル基又はアラルキルオキシカルボニル基であることができる。
【００２５】
一般式(II)の化合物、ならびに一般式(III−１0)、(III−２)、(III−３)および(III−４)の化合物の４位及び５位のヒドロキシル基を保護する適当なヒドロ キシル基保護基（Ｘ¹ 、Ｘ² ）はイソプロピリデン基であるのが便利であるが、一般的にはその他の各種の基を利用できる。すなわち、次式

〔但しＲ^a 及びＲ^b は、互いに同じ又は異なってもよく、それぞれが水素、アルキル基(好ましくは炭素数１〜４の低級アルキル基)又はアリール基(好ましく はフェニル基又は置換フェニル基、例えばパラ−メトキシフェニル基)である〕 で表される２価のヒドロキシル基保護基(イソプロピリデン基を包含）を利用で き、またこれに代えてベンジリデン基により、あるいはシクロアルキリデン基、例ばシクロヘキシリデン基またはテトラヒドロピラニリデン基により４位および５位のヒロドキシル基を保護することも便利である。
【００２６】
このような２価のヒドロキシル基保護基の導入は、糖の化学において、隣接する２個の炭素原子に夫々、結合するヒドロキシル基２個を同時に保護するための慣用のヒドロキシル基保護の技術に従って行なわれる。また別に適当な１価のヒドロキシル基保護基としてトリアルキルシリル基、特にターシャリーブチルジメチルシリル基を用いて糖化学で知られる常用の技術で導入できる。
【００２７】
第三の本発明の方法において、式(III−１)のN-保護-シアスタチンＢの４位および５位のヒドロキシル基を保護する反応では、保護基として4,5-O-イソプロピリデン基を導入する場合で例示すると、式(III−１)の化合物を例えばN,N-ジメ チルホルムアミドなどの有機溶媒に溶解し、その溶液に例えば2,2-ジメトキシプロパン（イソプロピリデン基の導入剤として使用）を加え、さらにクロロトリメチルシランの如き塩化アルキルシラン、またはパラトルエンスルホン酸などの酸触媒を加えて室温で数時間反応させることにより、式(III−２）の4,5-O-ジ-保 護-シアスタチンＢ（但し、Ｘ¹ およびＸ² が共同してイソプロピリデン基を示 す場合）を得る。
【００２８】
なお、上記のヒドロキシル基保護反応に用いられた2,2-ジメトキシプロパンに代えて、ベンツアルデヒドジメチルアセタール又は1,1-ジメトキシシクロヘキサンあるいはその他の各種アセタールおよびケタール試薬を用いると4,5-O-ベンジリデン基又はシクロヘキシリデン基を導入された又はその他のアセタールおよびケタール化された一般式(III−２)の化合物が得られる。
【００２９】
つぎに、一般式（III−２）の化合物の３位カルボキシル基にエステル形成基 を導入するため、該化合物を、N,N-ジメチルホルムアミドなどの有機溶剤に溶解し、その溶液にジイソプロピルアミンやトリエチルアミンなどの塩基を加え、この塩基の存在下にエステル化剤として例えばメトキシエトキシメチルクロリドを加える。得られる反応混合物を室温で数時間反応させることにより一般式(III−３)のエステル化化合物（但しＲ² がメトキシエトキシメチル基である場合）を 得る。
【００３０】
なお、上記のエステル化反応にエステル化剤として用いられたメトキシエトキシメチルクロリドに代えて、アルキルクロリド、アリールクロリド、アラルキルクロリドや、低級（Ｃ₁〜Ｃ₆ )アルコキシメチルクロリド、アラルキルオキシメチルクロリド、又はメトキシメチルクロリド等の如きアルコキシ置換−低級アルコキシメチルクロリドをエステル形成基(Ｒ² )の導入剤として用いると、式(III−３)の化合物におけるエステル形成基Ｒ² が夫々に、アルキル基、アリール基 、アラルキル基、低級アルコキシメチル基、アラルキルオキシメチル基、又はアルコキシ置換−低級アルコキシメチル基である場合の化合物が生成される。
【００３１】
次に、一般式(III−３)の化合物の３位のカルボキシレート基(-ＣＯ₂Ｒ² ）を還元するために、該化合物をトラヒドロフラン等の単一の有機溶剤、あるいはこれらの混合有機溶剤に溶解し、この溶液に水素化ホウ素ナトリウム、水素化リチウムアルミニウムまたは水素化ジイソブチルアルミニウムなどの還元剤を加え、室温で数時間反応させると、３位のカルボキシレート基-ＣＯ₂Ｒ² が還元によりヒドロキシメチル基に転化される。これにより、一般式(III−４)のアルコール 化合物を得る。
【００３２】
つぎに、一般式(III−４)の化合物の６位のアセタミド基を遊離したアミノ基 に転化させるため、該化合物をヒドラジン水和物に溶解し、例えば50〜100℃で ７〜14日間反応させるとアセタミド基からアセチル基が脱離されて遊離したアミノ基を有する一般式(II)の化合物を得る。
【００３３】
上述した第三の本発明の方法により合成された一般式(II)のピペリジン誘導体は、これを用いると、後に説明するように、数工程を経て、新規な癌細胞転移抑制物質として式（Ｉａ）の(3S,4S,5R,6R)-6-(トリクロロアセタミド)-4,5-ジヒ ドロキシピペリジン-3-カルボン酸および式（Ｉｂ）の(3S,4S,5R,6R)-6-グアニ ジノ-4,5-ジヒドロキシピペリジン-3-カルボンを合成できる。また既知の癌細胞転移抑制物質として式（Ｉｃ）の (3S,4S,5R,6R)-6-(トリフルオロアセタミド)-4,5-ジヒドロキシピペリジン-3-カルボン酸を合成できる。
【００３４】
従って、第四の本発明においては、次の一般式(II)

〔式中、Ｒ¹ 、Ｘ¹ 、Ｘ² 前記と同じ意味をもつ〕で示される(3R,4S,5R,6S)-N-保護-6-ヒドロキシメチル-4,5-ジヒドロキシ-4,5-O-ジ保護-ピペリジンの６位アミノ基をトリクロロアセチル化させて次の一般式（IV−１）

〔式中、Ｒ¹ 、Ｘ¹ 、Ｘ² は前記と同じ意味をもちＲ³ はトリクロロアセタミド基であり、６位の立体化学はＲ¹ がＲ³ よりCahn-Ingold-Prelog則で優先順位が低いイミノ基保護基である場合には(R)-配置であるが、Ｒ¹ がＲ³ より優先順位が高いイミノ基保護基である場合には(S)-配置である〕示される（3R,4S,5R, 6R又は6S)-N-保護-6-(トリクロロアセタミド)-3-ヒドロキシメチル-4,5-O-ジ保 護-ピペリジンを生成し、次にこの式（IV−１）の化合物の３位ヒドロキシメチ ル基を酸化によりカルボキシル基に転化して次の一般式（Ｖ−１）

〔式中、Ｒ¹ 、Ｒ³ 、Ｘ¹、Ｘ²及び６位の立体化学は前記と同じ意味をもつ〕で示される(3S,4S,5R,6R又は6S)-N-保護-6-(トリクロロアセタミド)-3-ヒドロキシメチル-4,5-O-ジ保護-ピペリジン-3-カルボン酸を生成し、次にこの式（Ｖ− １）の化合物からイミノ基保護基(Ｒ¹ )及びヒドロキシル基保護基(Ｘ¹、Ｘ² ）を脱離することを特徴とする、次式（Ｉａ）

で示される(3S,4S,5R,6R)-6-(トリクロロアセタミド)-4,5-ジヒドロキシピペリ ジン-3-カルボン酸またはその塩の製造法が提供される。
【００３５】
第四の本発明の方法において、式(II)の化合物の６位アミノ基をトリクロロアセチル化する反応は、式(II)の化合物を塩化メチレン等の有機溶剤に溶解し、この溶液にピリジンやトリエチルアミン等の塩基を加え、この塩基の存在下に塩化トリクロロアセチル（トリクロロアセチル化剤）を加え、０℃で数十分間反応させることにより、式（IV−１）のトリクロロアセチル化化合物を得る。なお、上記のトリクロロアセチル化反応に用いられた塩化トリクロロアセチルに代えて、トリクロロ酢酸無水物を用いても同様に式（IV−１）のトリクロロアセチル化合物が得られる。
【００３６】
つぎに、得られた式（IV−１）の化合物を四塩化炭素とアセトニトリルの混合溶剤に溶解し、この溶液にメタ過ヨウ素酸ナトリウムの水溶液を加え、さらに酸化ルテニウムを加えて、室温で激しく攪拌して数時間反応させる。これにより、式（IV−１）の化合物の３位ヒドロキシメチル基がカルボキシル基に酸化されるから、式（Ｖ−１）のカルボン酸化合物を得る。なお、上記のヒドロキシメチル基の酸化は、一般的にはアルコールを酸化してカルボン酸に変換させる既知の各種の酸化方法でも行なえる。
【００３７】
その後、酸化工程で得られた一般式（Ｖ−１）の化合物からイミノ基保護基 （Ｒ¹ ）とヒドロキシル基保護基（Ｘ¹ 、Ｘ² ）を脱離する工程は、それぞれの保護基の種類に応じて適当な慣用な脱保護技術により実施できる。
【００３８】
例えば一般式（Ｖ−１）の化合物から残留するイミノ基保護基（Ｒ¹ ）としてのターシャリーブトキシカルボニル基（Ｂｏｃ）を脱離し、またヒドロキシル保護基（Ｘ¹ 、Ｘ² ）としてのイソプロピリデン基を脱離する。これらの脱保護反応のためには、好ましくは、１〜４規定の塩化水素−ジオキサンなどの塩化水素を含む有機溶媒に式（Ｖ−１）の化合物を溶解し、室温に４〜15時間放置してイミノ基保護基（Ｒ¹ ）ならびにヒドロキシル保護（Ｘ¹ 、Ｘ² ）を除去するのがよい。このようにして、目的の新規物質として式（Ｉａ）の化合物が塩酸付加塩として生成する。
【００３９】
また、第五の本発明においては、次の一般式(II)

〔式中、Ｒ¹ 、Ｘ¹ 、Ｘ² は前記と同じ意味をもつ〕で示される（3R,4S,5R, 6S)-N-保護-6-アミノ-3-ヒドロキシメチル-4,5-ジヒドロキシ-4,5-O-ジ保護-ピ ペリジンの６位アミノ基をアミジノ化反応にかけて次の一般式（IV−２）

〔式中、Ｒ¹ 、Ｘ¹ 、Ｘ² は前記と同じ意味をもち、Ｒ⁴ はN,N'-保護された 又は未保護のグアニジノ基であり、６位の立体化学はＲ¹ がＲ⁴よりCahn-Ingold-Prelog則で優先順位で低いイミノ基保護基である場合には(R)-配置であるが、 Ｒ¹ がＲ⁴ より優先順位が高いイミノ基保護基である場合には（Ｓ）−配置である〕で示される(3R,4S,5R,6R又は6S)-N-保護-6-保護-又は未保護-グアニジノ-3-ヒドロキシメチル-4,5-ジヒドロキシ-4,5-O-ジ保護-ピペリジンを生成し、次に この式（IV−２）の化合物の３位ヒドロキシメチル基を酸化によりカルボキシル基に転化して次の一般式（Ｖ−２）

〔式中、Ｒ¹ 、Ｒ⁴ 、Ｘ¹、Ｘ²及び６位の立体化学は前記と同じ意味をもつ〕で示される(3S,4S,5R,6R又は6S)-N-保護-6-グアニジノ-3-ヒドロキシメチル-4, 5-ジヒドロキシ-4,5-O-ジ保護-ピペリジン-3-カルボン酸を生成し、次にこの式 (Ｖ−２)の化合物からイミノ基保護基(Ｒ¹ )及びヒドロキシル基保護基（Ｘ¹、 Ｘ² ）、ならびにグアニジル基上の保護基を脱離することを特徴とする、次式 （Ｉｂ）

で示される(3S,4S,5R,6R)-6-グアニジノ-4,5-ヒドロキシピペリジン-3-カルボン酸またはその塩の製造法が提供される。
【００４０】
第五の本発明の方法において、第１の工程として、式(II)の化合物の６位アミノ基をアミジノ化させる反応は、６位アミノ基にアミジノ基〔H₂N(HN=)C-〕を導入する既知の方法により行うことができ、これにより６位置換基としてグアニジノ基が形成される。
【００４１】
このアミジノ化反応のためには、式(II)の化合物をN,N-ジメチルホルムアミド等の有機溶剤に溶解し、この溶解にトリエチルアミンやジイソプロピルエチルアミン等の塩基を加え、この塩基の存在下にN,N-ジ-(ターシャリーブトキシカルボニル)チオ尿素と塩化第二水銀を加え、０℃で数時間反応させることにより、式 (IV−２)のグアニジノ化合物を得る。なお、前記のようにアミジノ化剤として、N,N-ジ-(ターシャリーブトキシカルボニル)チオ尿素を用いる場合、式(II)の化 合物から生成される式(IV−２)のグアニジノ化合物は、より正確に表示すると、次式

〔式中、Ｒ¹ 、Ｘ¹ 、Ｘ² は前記と同じ意味をもち、Ｂｏｃはターシャリーブトキシカルボニル基を示す〕で表わされるN,N'-保護されたグアニジノ基をもつ 化合物である。しかしながら、この式（IV−２）の化合物はそのまま次段の３位ヒドロキシメチル基の酸化反応の工程にかけることができ、またその次後の工程として式（Ｖ−２）のカルボン酸化合物からイミノ基保護基（Ｒ¹ ）およびヒドロキシル基保護基（Ｘ¹ 、Ｘ² ）を脱離させる反応の工程を行う時にはグアニジノ基上の保護基も同時に脱離できる。従って、式（IV−２）の化合物のグアニジノ基上にある保護基の存在は簡略化して表示される。しかも、前記のN,N-ジ-(ターシャリーブトキシカルボニル)チオ尿素に代えて、一般的には、N,N-ジ-(アル コキシカルボニル)チオ尿素も使用できる。
【００４２】
さらに、上記の式(II)の化合物の６位のアミノ基をグアニジノ基に転化する反応は、一般的にアミノ基をグアニジノ基に変換させる既知の各種のグアニジノ化方法でも行い得る。
【００４３】
第五の本発明の方法においても、第２の工程として、式（IV−２）の化合物の３位ヒドロキシメチル基をカルボキシル基に転化させる酸化反応は、第四の本発明の方法において式（IV−１）の化合物を酸化する工程と全く同じ要領で行い得る。さらに、第３工程として、式（Ｖ−２）の化合物から保護基（Ｒ¹ 、Ｘ¹ 、Ｘ² ）、ならびにグアニジノ基上の保護基を脱離する反応も、第四の本発明の方法で式（Ｖ−１）の化合物を脱保護反応にかける工程と同様に行い得る。これによって、目的の新規物質である式（Ｉｂ）の化合物またはその塩酸付加塩が生成する。
【００４４】
さらにまた、第六の本発明においては、前記の既知の癌細胞転移抑制物質である式（Ｉｃ）の化合物の新規で効率がよい製造法として、次の一般式(II)

〔式中、Ｒ¹ 、Ｘ¹ 、Ｘ²は前記と同じ意味をもつ〕で示される(3R,4S,5R,6S)-N-保護-6-アミノ-3-ヒドロキシメチル-4,5-ジヒドロキシ-4,5-O-ジ保護-ピペリジンの６位アミノ基をトリフルオロアセチル化して次の一般式（IV−３）

〔式中、Ｒ¹ 、Ｘ¹ 、Ｘ² は前記と同じ意味をもち、Ｒ⁵ はトリフルオロアセタミド基であり、６位の立体化学はＲ¹ がＲ⁵ よりCahn-Ingold-Prelog則で優先順位が低いイミノ基保護基である場合には(R)-配置であるが、Ｒ¹ がＲ⁵ より優先順位が高いイミノ基保護基である場合には、(S)-配置である〕で示される(3R,4S,5R,6R又は6S)-N-保護-6-(トリフルオロアセタミド)-3-ヒドロキシメチル-4,5-ジヒドロキシ-4,5-O-ジ保護-ピペリジンを生成し、次のこの式（IV−３）の化 合物の３位ヒドロキシメチル基を酸化によりカルボキシル基に転化して次の一般式（Ｖ−３）

〔式中、Ｒ¹ 、Ｒ⁵ 、Ｘ¹、Ｘ²及び６位の立体化学は前記と同じ意味をもつ〕で示される(3S,4S,5R,6R又は6S)-N-保護-6-(トリフルオロアセタミド)-3-ヒドロキシメチル-4,5-ジヒドロキシ-4,5-O-ジ保護-ピペリジン-3-カルボン酸を生成し、次にこの式（Ｖ−３）の化合物からイミノ基保護基（Ｒ¹ ）及びヒドロキシル基保護基（Ｘ¹ 、Ｘ² ）を脱離することを特徴とする、次式（Ｉｃ）

で示される(3S,4S,5R,6R)-6-(トリフルオロアセタミド)-4,5-ジヒドロキシピペ リジン-3-カルボン酸またはその塩の製造法が提供される。
【００４５】
第六の本発明の方法において、第１工程として、(II)の化合物の６位アミノ基をトリフルオロアセチル化する反応は、式(II)の化合物をN,N-ジメチルホルムアミド等の有機溶剤に溶解し、この溶液にジイソプロピルエチルアミンやトリエチルアミン等の塩基を加え、この塩基の存在下にトリフルオロ酢酸エチルを加え、40〜80℃で数日間反応させることにより、式（IV−３）のトリフルオロアセチル化合物を得る。なお、上記のトリフルオロアセチル化反応に用いられたトリフルオロ酢酸エチルに代えて、トリフルオロアセチルクロリドやトリフルオロ酢酸無水物を用いても、同様にトリフルオロアセチル化反応を行い得る。
【００４６】
次の第２工程として、式（IV−３）のフルオロアセチル化合物の３位ヒドロキシメチル基をカルボキシル基に転化させる反応は、第四の本発明の方法における対応する工程と同様な要領で実施できる。また、生成された式（Ｖ−３）のカルボン酸化合物からイミノ基保護基（Ｒ¹ ）とヒドロキシル保護基（Ｘ¹ 、Ｘ² ）を第３工程として脱離させる反応も、第四の本発明の方法の対応する工程と同じ要領で実施できる。こうして、既知である式（Ｉｃ）の(3S,4S,5R,6R)-6-(トリ フルオロアセタミド)-4,5-ジヒドロキシビペリジン-3-カルボン酸が高収率で収 得できる。
【００４７】
次に、第二の本発明による一般式(II)の(3R,4S,5R,6S)-N-保護-6-アミノ-3-ヒドロキシメチル-4,5-ジヒドロキシ-4,5-ジ保護ピペリジンの一例である(3R,4S, 5R,6S)-6-アミノ-N-(ターシャリーブトキシカルボニル)-3-ヒドロキシメチル-4,5-O-イソプロピリデン-3,4-ピペリジンジオールを式（Ａ）のシアスタンチンＢ から出発して第三の本発明の方法により製造する場合の複数の工程からなる反応経路を次の反応チャート（１）を参照して説明する。
【００４８】
但し後記の反応チャートではＢｏｃはイミノ基保護基としてのターシャリーブトキシカルボニル基（ＣＨ₃)₃ＣＯ-ＣＯ-を示し、ＭＥＭはメトキシエトキシメ チル基を示す。
【００４９】

【００５０】
すなわち、上記の反応チャート(１)について実施される反応工程を簡略に説明すると、式(Ａ)のシアスタチンＢを一工程の方法［西村ら；「Natural Product Lett.」１巻、39−44頁(1992年)参照］によって、式(IIIａ)で示されるN-(ター シャリーブトキシカルボニル)-シアスタチンＢ［mp.145〜146℃，［α］_D ²⁴＋19.6°(ｃ0.24，水）］を製造できる。この式(IIIａ)の化合物を出発物質として用い、この化合物を例えばN,N-ジメチルホルムアミドなどの各種有機溶剤に溶解し、その溶液に２，２−ジメトキシプロパンを加え、またクロロトリメチルシランやクロロトリエチルシラン等の塩化アルキルシラン、またはパラトルエンスルホン酸などの酸触媒を加えて室温で数時間ケタール化の反応をさせることにより式(IIIｂ)の4,5-O-イソプロピリデン化化合物を得る（反応工程ａ）。
【００５１】
つぎに、式（IIIｂ)の化合物をN,N-ジメチルホルムアミドなどの有機溶剤に溶解し、その溶液にジイソプロピルアミンやトリエチルアミンなどの塩基を加え、この塩基の存在下にメトキシエトキシメチルクロリドを加え室温で数時間エステル化の反応をさせることにより式（IIIｃ）のエステル化合物を得る（反応工程 ｂ)。
【００５２】
つぎに、式(IIIｃ)の化合物をテトラヒドロフラン等の単一の有機溶剤、およ びこれらの混合有機溶剤に溶解し、この溶液に水素化ホウ素ナトリウムや水素化リチウムアルミニウム、水素化ジイソブチルアルミニウムなどの還元剤を加え、室温で数時間還元反応させることにより式(IIａ)のアルコール化合物を得る(反 応工程ｃ）。
【００５３】
つぎに、式(IIａ)の化合物をヒドラジン水和物に溶解し、50〜100℃で７〜14 日間反応させると、アセチル基の脱離が起き、この脱アセチル化により、式(II ｂ)で示されるアミノ基が遊離した化合物を得る(反応工程ｄ)。この式（IIｂ） の化合物が第二の本発明による一般式(II)の化合物の一例である。
【００５４】
さらに、上記の式（IIｂ）の化合物から出発して第四の本発明の方法により、第１の本発明による式(Ｉａ）の(3S,4S,5R,6R)-6-(トリクロロアセタミド)-4,5-ジヒドロキシピペリジン-3-カルボン酸を製造する反応経路を次の反応チャート （２）について示す。
【００５５】

【００５６】
反応チャート(２)について説明するに、式（IIｂ）の化合物を塩化メチレン等の有機溶剤に溶解し、この溶液にピリジンやトリエチルアミン等の塩基を加え、この塩基の存在下に塩化トリクロロアセチルを加え、０℃で数十分間反応させることにより、式（IVａ）のトリクロロアセタミド化合物を得る(反応工程ｅ)。なお、前記の塩化トリクロロアセチルに代えて、トリクロロ酢酸無水物を用いても同様に式（IVａ）の化合物が得られる。
【００５７】
つぎに、式(IVａ)化合物を四塩化炭素とアセトニトリルの混合溶剤に溶解し、この溶液にメタ過ヨウ素酸ナトリウムの水溶液を加え、さらに酸化ルテニウムを加えて、室温で激しく攪拌して数時間反応して酸化させることにより式（Ｖａ）のカルボン酸化合物を得る(反応工程ｆ)。
【００５８】
つぎに、式（Ｖａ）の化合物から、残留するイミノ基保護基としてのターシャリーブトキシカルボニル基（Ｂｏｃ）を脱離し、またヒドロキシル保護基としてのイソプロピリデン基を脱離する(反応工程ｇ)。このためには、１〜４規定の塩化水素−ジオキサンなどの塩化水素を含む有機溶媒に化合物（Ｖａ）を溶解し、室温に４〜15時間放置してイミノ基保護基（Ｂｏｃ）ならびにイソプロピリデン基を除去するのがよい。このようにすると、式（Ｉａ）の化合物が塩酸塩として生成する。
【００５９】
さらにまた、前記の式（IIｂ）の化合物から出発して、第五の本発明の方法により、第１の本発明による式（Ｉｂ）の(3S,4S,5R,6R)-6-グアニジノ-4,5-ジヒ ドロキシピペリジン-3-カルボン酸を製造する反応経路を次の反応チャート(３）について示す。
【００６０】

【００６１】
反応チャート（３）について説明するに、式（IIｂ）の化合物をN,N-ジメチルホルムアミド等の有機溶剤に溶解し、この溶液にトリエチルアミンやジイソプロピルエチルアミン等の塩基を加え、この塩基の存在下にN,N-ジ-(ターシャリーブトキシカルボニル)チオ尿素と塩化第二水銀を加え、０℃で数時間反応させるこ とにより、Ｂｏｃ基２個で保護されたグアニジノ基を有する式（IVｂ）のグアニジノ化合物を得る(反応工程ｈ)。
【００６２】
つぎに、式（IVｂ）の化合物を四塩化炭素とアセトニトリルの混合溶剤に溶解し、この溶液に反応チャート（２）の反応工程（ｆ）と同様にして、メタ過ヨウ素酸ナトリウムの水溶液を加え、さらに酸化ルテニウムを加えて、室温で激しく攪拌して数時間反応して酸化させることにより式（Ｖｂ）のカルボン酸化合物を得る(反応工程ｉ)。
【００６３】
つぎに、式（Ｖｂ）の化合物から、残留するイミノ基保護基としてのターシャリーブトキシカルボニル基（Ｂｏｃ）、ならびにグアニジノ基上の保護基であるＢｏｃ基２個を脱離し、またヒドロキシル保護基としてのイソプロピリデン基を脱離する（反応工程ｊ）。このためには、反応チャート（２）の反応工程（ｇ）と同様に、１〜４規定の塩化水素−ジオキサンなどの塩化水素を含む有機溶媒に化合物（Ｖｂ）を溶解し、室温に４〜15時間放置してイミノ基保護基(Ｂｏｃ)ならびにイソプロピリデン基を除去するのがよい。このようにすると、式（Ｉｂ）の化合物が塩酸塩として生成する。
【００６４】
次いて、前記の式(IIｂ)の化合物から出発して、第六の本発明の方法により、式（Ｉｃ）の(3S,4S,5R,6R)-6-(トリフルオロアセタミド)-4,5-ジヒドロキシピ ペリジン-3-カルボン酸を製造する反応経路を次の反応チャート（４）について 示す。
【００６５】

【００６６】
反応チャート（４）について説明するに、式（IIｂ）の化合物をN,N-ジメチルホルムアミド等の有機溶剤に溶解し、この溶液にジイソプロピルエチルアミンやトリエチルアミン等の塩基を加え、この塩基の存在下にトリフルオロ酢酸エチルを加え、40〜80℃で数日間反応させることにより、式（IVｃ）のトリフルオロアセタミド化合物を得る(反応工程ｋ)。なお、前記のトリフルオロ酢酸エチルに代えて、トリフルオロアセチルクロリドやトリフルオロ酢酸無水物を用いても同様に式（IVｃ）の化合物が得られる。
【００６７】
つぎに、式（IVｃ）の化合物を四塩化炭素とアセトニトリルの混合溶剤に溶解し、この溶液に反応チャート（２）の反応工程（ｆ）と同様にして、メタ過ヨウ素酸ナトリウムの水溶液を加え、さらに酸化ルテニウムを加えて、室温で激しく攪拌して数時間反応して酸化させることにより式（Ｖｃ）のカルボン酸化合物を得る（反応工程ｌ）。
【００６８】
つぎに、式（Ｖｃ）の化合物から、残留するイミノ基保護基としてのターシャリーブトキシカルボニル基（Ｂｏｃ）を脱離し、またヒドロキシル保護基としてのイソプロピリデン基を脱離する（反応工程ｍ）。このためには、反応チャート（２）の反応工程（ｇ）と同様に、１〜４規定の塩化水素−ジオキサンなどの塩化水素を含む有機溶媒に化合物（Ｖｃ）を溶解し、室温に４〜15時間放置してイミノ基保護基（Ｂｏｃ）ならびにイソプロピリデン基を除去するのがよい。このようにすると、式（Ｉｃ）の化合物が塩酸塩として生成する。
【００６９】
前記の反応チャート（１）〜（４）に示された式（Ｉａ）、式（Ｉｂ）および（Ｉｃ）の各化合物の製造の反応経路では、式（IIｂ）の出発化合物のイミノ基保護基がＢｏｃ基であり且つヒドロキシル基保護基がイソプロピリデン基である場合について説明したけれども、式（IIｂ）の化合物におけるＢｏｃ基及びイソプロピリデン基に代えて、それぞれに、一般の常用のイミノ基保護基及び常用のヒドロキシル基保護基を糖化学で知られる保護法により導入して利用できることは自明である。
【００７０】
更に、イミノ基保護基とヒドロキシル基保護基を脱離する工程は、反応チャート（２）の反応工程（ｇ）について説明した方法に準じて、またそれぞれの保護基の種類に応じて適当な慣用な脱保護技術により実施できる。
【００７１】
前記の第四、第五および第六の本発明の方法でそれぞれに得られた式（Ｉａ）の化合物および式（Ｉｂ）の化合物ならびに式（Ｉｃ）の化合物が上記のごとき塩酸塩などの酸付加塩の形で収得された場合には、その酸付加塩の形の化合物の水溶液を常法により陽イオン交換樹脂、例えばダウエックス50Ｗ（米国ダウケミカル社製）Ｈ型で処理することにより、またはアンモニアを含有する溶媒系によるクロマトグラフィーで精製することにより、遊離のイミノ塩基の形の化合物 (Ｉａ)および化合物(Ｉｂ)ならびに化合物(Ｉｃ）が得られる。また、式(Ｉａ）の化合物および式（Ｉｂ）の化合物ならびに式（Ｉｃ）の化合物が遊離のカルボン酸の形である場合には、常法で無機塩基で処理することによりカルボン酸塩の形に転化できる。
【００７２】
【発明の実施の形態】
以下に、前出の反応チャート（１）〜（４）に示された各反応工程を例示する本発明の実施例を示すが、これらは単に例示であって本発明を限定するものではない。本発明を逸脱しない範囲で種々の変形および修正が可能であることは言うまでもない。
【００７３】
実施例１
（ａ）N-(ターシャリーブトキシカルボニル)-4,5-O-イソプロピリデンシアス タチンＢ［式(IIIｂ)の化合物］の製造
式(IIIａ)の化合物、すなわちN-(ターシャリーブトキシカルボニル)-シアスタチンＢ(0.955ｇ，３mmol)をN,N-ジメチルホルムアミド(ＤＭＦ)(15ml）に懸濁させ、これに2,2-ジメトキシプロパン(3.69ml，30mmol）およびクロロトリメチル シラン(1.90ml，15mmol)を加えた。得られた混合物を室温で２時間攪拌した後、ピリジン(1.5ml)を加えて反応を停止させた。
【００７４】
反応液をクロロホルムで希釈し、これに水を加えて抽出した後、水相をクロロホルム−メタノール（９：１）の混合溶媒で３回抽出した。有機相を合わせ、無水硫酸マグネシウムで乾燥した後、ろ過した。ろ液を減圧濃縮し、残留物をトルエンで３回共沸した後、展開溶媒としてクロロホルム−メタノール−濃アンモニア水（２：１：0.3）を用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、 無色泡末状の固体として表題の化合物を1.05ｇ（98％）得た。
【００７５】
比旋光度： [α]_D ²³ ＋29°(ｃ0.88，メタノール）
¹Ｈ-ＮＭＲスペクトル(270MHz，ＣＤ₃ＯＤ)，δppm：1.32，1.38(each ３Ｈ，ｓ，イソプロピリデン)，1.46（９Ｈ，ｓ，ＣＯＯＣ(ＣＨ₃)₃ ），1.94（３Ｈ，ｓ，ＣＯＣＨ₃ ），2.96（１Ｈ，ｄｄｄ，ｊ＝12.5, 5.1, 2.6Hz，３−Ｈ）， 3.43（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝12.5Hz，２−Ｈ_ax），3.60（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝12.5， 5.1Hz，２−Ｈ_oq），4.47（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝7.6, 2.3Hz，５−Ｈ），4.80（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝7.6, 2.6Hz，４−Ｈ），5.78（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝2.3Hz，６−Ｈ）．
【００７６】
（ｂ）N-(ターシャリーブトキシカルボニル)-4,5-"-イソプロピリデンシアス タチンＢの２−メトキシエトキシメチルエステル［式(IIIｃ)の化合物］の製造 前項（ａ）で得た式(IIIｂ)の化合物(2.51ｇ，７mmol）をＤＭＦ（50ml）に溶解し、これにジイソプロピルエチルアミン(4.88ml，28mmol）および塩化2-メトキ シエトキシメチル（1.60ml，14mmol）を加えた。得られた混合物を室温で２時間攪拌した後、水(0.2ml)を加えて反応を停止させた。反応液をクロロホルムで希 釈し、これに水を加えて抽出した後、水相をクロロホルムで３回抽出した。有機相を合わせ、無水硫酸マグネシウムで乾燥した後、ろ過した。ろ液を減圧濃縮し、残留物をトルエンで３回共沸した後、展開溶媒としてクロロメタン−メタノール（20：１）を用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、無色シロップとして表題化合物を2.61ｇ（83％）得た。
【００７７】
比旋光度： [α]_D ²⁵ −18.7°（ｃ0.91，クロロホルム）
¹Ｈ−ＮＭＲスペクトル（400MHz，ＣＤＣｌ₃ ），δppm ：1.32，1.44(each ３Ｈ，ｓ，イソプロピリデン），1.47（９Ｈ，ｓ，ＣＯＯＣ(ＣＨ₃)₃ )，1.98 (３Ｈ，ｓ，ＣＯＣＨ₃ )，2.99（１Ｈ，broad ｍ，３−Ｈ），3.37（１Ｈ，ｔ，Ｊ=12.7Hz，２−Ｈ_ax），3.39（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ₃ ），3.56（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝ 4.4Hz，ＯＣＨ₂−ＣＨ ₂−ＯＣＨ₃ )，3.76−3.82（３Ｈ，ｍ，Ｏ−ＣＨ ₂−ＣＨ₂−ＯＣＨ₃ ，２−Ｈ_eq），4.69（１Ｈ，broad ｄ，Ｊ＝７Hz，５−Ｈ），4.82 (１Ｈ，broad ｄｄ，Ｊ＝７，３Hz，４−Ｈ)，5.40(２Ｈ，ｓ，ＣＯＯＣＨ₂Ｏ），5.59（１Ｈ，broad ｓ，６−Ｈ），5.91（１Ｈ，broad ｓ，ＮＨ）．
【００７８】
（ｃ）(3R,4S,5R,6S)-6-アセタミド-N-(ターシャリーブトキシカルボニル)-3-ヒドロキシメチル-4,5-O-イソプロピリデン-4,5-ピペリジンオール〔式（IIａ）の化合物〕の製造
前項（ｂ）で得た式(IIIｃ)の化合物 (2.59ｇ，5.8mmol)をテトラヒドロフラ ン（50ml）と2,2,2-トリフルオロエタノール（５ml）の混合溶媒に溶かし、これに水素化ホウ素ナトリウム(0.685ｇ，17.4mmol)を加えた。その得られた混合物 を室温で１時間攪拌して還元反応を行った。その後、水(1.5ml)を加えて反応を 停止させ、さらに室温で30分間攪拌した。反応液を減圧濃縮した後、残留物に水を加え、クロロホルムで３回抽出した。有機相(クロロホルム抽出液)を合わせ、無水硫酸マグネシウムで乾燥した後、ろ過した。ろ液を減圧濃縮した後、残留物を展開溶媒としてジクロロメタン−メタノール(12：１)を用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、無色泡末状固体として表題化合物を1.98ｇ（99％）得た。
【００７９】
比旋光度： [α]_D ²⁵ ＋27°（ｃ0.95，クロロホルム）
¹Ｈ−ＮＭＲスペクトル（400MHz，ＣＤＣｌ₃ ），δppm ：1.33，1.45(each ３Ｈ，ｓ，イソプロピリデン），1.46（９Ｈ，ｓ，ＣＯＯＣ(ＣＨ₃)₃ ），1.98 (３Ｈ，ｓ，ＣＯＣＨ₃ ），2.06（１Ｈ，ｍ，５−Ｈ），2.22（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝ 5.6Hz，ＯＨ)，3.16（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝12.4Hz，６−Ｈ_eq），3.50（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝12.4， 3.7Hz，６−Ｈ_eq），3.72−3.80（２Ｈ，ｍ，−ＣＨ ₂ＯＨ），4.52 (１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝7.3， 2.4Hz，３−Ｈ)，4.59（１Ｈ，broad ｄ，Ｊ＝7.3Hz，４−Ｈ），5.73（１Ｈ，broad ｓ，２−Ｈ），5.84（１Ｈ，broad ｓ，ＮＨ）．
【００８０】
（ｄ）(3R,4S,5R,6S)-6-アミノ-N-(ターシャリーブトキシカルボニル)-3-ヒドロキシメチル-4,5-O-イソプロピリデン-3,4-ピペリジンジオール［式（IIｂ）の化合物］の製造
前項（ｃ）で得た式（IIａ）の化合物（1.03ｇ，３mmol）をヒドラジン水和物（Ｈ₂ＮＮＨ₂・ｘＨ₂Ｏ，20ml)に溶かし、70℃で10日間攪拌した。式（IIａ）の化合物の６位のアセタミド基からアセチル基が脱離される反応が起きた。その反応液を室温まで冷却した後、反応液を減圧濃縮した。残留物に水を加え、クロロホルムで３回抽出した。有機相（クロロホルム抽出液）を合わせ、無水硫酸マグネシウムで乾燥した後、ろ過した。ろ液を減圧濃縮し、残留物を展開溶媒として酢酸エチル−メタノール（50：１）を用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィーおよび展開溶媒として酢酸エチル−メタノール（10：１）を用いるシリカゲル分取薄相クロマトグラフィーで精製し、無色シロップとして第二の本発明による表題化合物を0.488ｇ（54％）得た。また、このとき、未反応である式（IIａ） の化合物を0.332ｇ（32％）回収した。
【００８１】
比旋光度： [α]_D ²⁶ −14.4°（ｃ0.99，クロロホルム）
¹Ｈ−ＮＭＲスペクトル（400MHz，ＣＤＣｌ₃ ），δppm ：1.35，1.45（each ３Ｈ，ｓ，イソプロピリデン），1.48（９Ｈ，ｓ，ＣＯＯＣ(ＣＨ₃)₃ ），2.40 (１Ｈ，ｍ，５−Ｈ），3.19（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝12.2Hz，６−Ｈ_ax），3.46(１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝12.2， 3.9Hz，６−Ｈ_oq)，3.71−3.80（２Ｈ，ｍ，−ＣＨ ₂ＯＨ），4.35（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝7.3， 2.9Hz，３−Ｈ），4.57（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝7.3，2.0Hz，４−Ｈ），5.08（１Ｈ，broad ｓ，２−Ｈ）．
【００８２】
実施例２
（ａ）(3R,4S,5R,6S)-N-(ターシャリーブトキシカルボニル)-3-ヒドロキシメ チル-4,5-O-イソプロピリデン-6-トリクロロアセタアミド-4,5-ピペリジンジオ ール［式（IVａ)の化合物］の製造
実施例１(ｄ）で得た式(IIｂ)の化合物(124mg，0.41mmol)をジクロロメタ(2.5ml)に溶かし、０℃に冷却した。これにピリジン（0.13ml，1.65mmol）、塩化ト リクロロアセチル（0.10ml，0.91mmol）を加え、０℃で10分間攪拌して化合物 （IIｂ）の６位のアミノ基のトリクロロアセチル化反応を行った。その反応溶液をクロロホルムで希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で２回、水で２回洗浄した。有機相を無水硫酸マグネシウムで乾燥した後、綿栓ろ過した。ろ液の溶媒を減圧留去した後、残留物をトルエンで３回共沸し、淡黄色固体を得た。
【００８３】
この固体を飽和炭酸カリウムメタノール溶液(３ml)に溶かし、室温で10分間攪拌した後、溶媒を減圧留去した。残留物をクロロホルムに溶かし、飽和塩化アンモニウム水溶液で２回洗浄した。有機相を無水硫酸マグネシウムで乾燥した後、綿栓ろ過した。ろ液の溶媒を減圧留去した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒：トルエン−アセトン、５：１）で精製し、無色泡状固体として表題化合物を162mg（88％）得た。
【００８４】
比旋光度： [α]_D ²⁵ ＋16.8°(ｃ3.82，メタノール）
¹Ｈ−ＮＭＲスペクトル（ＣＤ₃ＯＤ)，δppm ：1.36（３Ｈ，ｓ，イソプロピ リデン)，1.48（12Ｈ，ｓ，イソプロピリデン，ＣＯＯＣ(ＣＨ₃)₃ ），1.95(１Ｈ，ｔ，Ｊ＝5.6Hz，ＯＨ），2.01（１Ｈ，broad ｍ，５−Ｈ），3.16（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝12.2Hz，６−Ｈ_ax），3.59（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝12.2 and 4.4Hz，６−Ｈ_eq），3.79（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝5.6Hz，−ＣＨ ₂ＯＨ），4.58（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝7.3 and 2.4Hz，３−Ｈ），4.62（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝7.3 and 2.0Hz，４−Ｈ），5.73（１Ｈ，broad ｓ，６−Ｈ），6.81（１Ｈ，−ＮＨＣＯ−）．
【００８５】
（ｂ） (3S,4S,5R,6S)-N-(ターシャリーブトキシカルボニル)-4,5-ジヒドロキシ-4,5-O-イソプロピリデン-6-トリクロロアセタミド-3-ピペリジンカルボン酸 ［式（Ｖａ）の化合物］の製造
前項（ａ）で得た式（IVａ)の化合物(152mg，0.34mmol)を四塩化炭素（２ml）−アセトニトリル（２ml）の混合溶媒に溶かし、これにメタ過ヨウ素酸ナトリウム(218mg，1.02mmol)を水（３ml）に溶かして加えた。この二相溶液に二酸化テ ニウム(IV)(8.0mg）を加え、室温で30分間激しく攪拌した。式（IVａ）の化合物３位のヒドロキシメチル基が酸化によりカルボキシル基に転化される反応が起きた。その反応液から有機相と水相を分液し、水相を酢酸エチルで３回抽出した。有機相を合わせ、2-プロパノール(0.5ml)を加えて室温で１時間攪拌した。析出 した固体を減圧ろ過して除いた後、ろ液を水で１回洗浄した。有機相を無水硫酸マグネシウムで乾燥した後、綿栓ろ過した。ろ液の溶媒を減圧留去した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒：クロロホルム−メタノール−濃アンモニア水、50：10：１）で精製し、無色不定形固体として表題化合物を119mg（76％）得た。
【００８６】
比旋光度： [α]_D ²⁴ ＋3.6°(ｃ0.87，メタノール）
¹Ｈ−ＮＭＲスペクトル（ＣＤ₃ ＯＤ），δppm ：1.35 and 1.41 (３Ｈ，ｓ，イソプロピリデン），1.48（９Ｈ，ｓ，ＣＯＯＣ(ＣＨ₃₎₃ ），3.06（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝12.7， 4.9 and 2.9Hz，３−Ｈ），3.44（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝12.5Hz，２−Ｈ_ax），3.66（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝12.2 and 4.9Hz，２−Ｈ_eq），4.53（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝7.3 and 2.0Hz，５−Ｈ），4.84（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝7.3 and 2.0Hz，４−Ｈ），5.76（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝ 2.0Hz，６−Ｈ）．
【００８７】
（ｃ）(3S,4S,5R,6R)-6-(トリクロロアセタミド)-4,5-ジヒドロキシピペリジ ン-3-カルボン酸［式（Ｉａ）の化合物］の製造
前項（ｂ）で得た式（Ｖａ）の化合物（32mg，70μmol)を４Ｍ塩酸−ジオキサン溶液(１ml)に溶かし、室温で一晩攪拌した。保護基の脱離反応が起きた。白色固体が析出して懸濁した反応溶液にジエチルエーテルを加えてよく攪拌した後、析出した白色固体を遠心分離によって沈澱させ、上澄みを除いた。この後、沈殿をジエチルエーテルに懸濁させ、遠心分離した後、上澄みを除く操作を２回繰り返した。得られた沈殿を風乾した後、減圧下に乾燥させ、無色固体として第一の本発明による式（Ｉａ）の表題化合物を26mg(105％）得た。
【００８８】
比旋光度： [α]_D ²⁶ ＋31.0°(ｃ0.71，水）
¹Ｈ−ＮＭＲスペクトル(Ｄ₂Ｏ)，δppm ：3.15(１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝9.8， 8.3and 2.1Hz，３−Ｈ），3.56（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝8.3Hz，２−Ｈａ），3.56（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝9.8Hz，２−Ｈｂ)，4.22(１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝10.3 and 2.4Hz，５−Ｈ)，4.62(１Ｈ，ｔ，Ｊ＝2.4Hz，４−Ｈ)，5.16（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝10.3Hz，６−Ｈ)．
【００８９】
実施例３
（ａ）(3R,4S,5R,6S)-N-(ターシャリーブトキシカルボニル)-6-[N,N'-ジ(ターシャリーブトキシカルボニル)]グアニジノ-3-ヒドロキシメチル-4,5-O-イソプロピリデン-4,5-ピペリジンジオール［式（IVｂ)の化合物］の製造
実施例１(ｄ)で得た式（IIｂ）の化合物(109mg，0.36mmol)をＤＭＦ(２ml）に溶かし、０℃に冷却した。これにトリエチルアミン(0.20ml，1.44mmol) 、N,N'-ジ-(ターシャリーブトキシカルボニル)チオ尿素(199mg，0.72mmol) 、塩化第二 水銀(II)(196mg，0.72mmol)を加え、０℃で２時間攪拌して反応を行った。黄土 色の固体が析出した反応溶液に酢酸エチルを加え、遠心分離して固体を沈殿させた後、上澄みを別に移した。この後、沈殿を酢酸エチルに懸濁させ、遠心分離した後、上澄みを別に移す操作を２回繰り返した。上澄みを合わせ、水で２回、少量の飽和塩化ナトリウム水溶液で１回洗浄した。有機相を無水硫酸マグネシウムで乾燥した後、綿栓ろ過した。ろ液の溶媒を減圧留去した。残留物をトルエンで３回共沸した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒：クロロホルム−メタノール、100：１）で精製し、無色不定形固体として表題化合物を184mg(94％)得た。
【００９０】
比旋光度： [α]_D ²⁴ ＋45.6°(ｃ0.83，クロロホルム）
¹Ｈ−ＮＭＲスペクトル（ＣＤＣｌ₃ ），δppm ：1.34 and 1.45（３Ｈ，ｓ，イソプロピリデン），1.45，1.47 and 1.49（９Ｈ，ｓ，ＣＯＯＣ(ＣＨ₃)₃ ），2.08（１Ｈ，ｍ，５−Ｈ），3.21（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝12.2Hz，６−Ｈax），3.50 (１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝12.2 and 4.4Hz，６−Ｈ_eq)，3.77（１Ｈ，ＡＢ_q ，Ｊ＝11.2and 6.4Hz，−ＣＨ ₂ＯＨ），3.81（１Ｈ，ＡＢ_q ，Ｊ＝11.2 and 4.9Hz，−ＣＨ ₂ＯＨ），4.56（２Ｈ，ｓ，３−Ｈ，４−Ｈ），6.19（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝6.4Hz，２−Ｈ），8.35（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝6.4Hz，−ＮＨ−），11.37 （１Ｈ，ｓ， −ＮＨ−）．
【００９１】
（ｂ） (3S,4S,5R,6S)-N-(ターシャリーブトキシカルボニル)-6-[N,N'-ジ(タ ーシャリーブトキシカルボニル)]グアニジノ-4,5-ジヒドロキシ-4,5-O-イソプロピリデン-3-ピペリジンカルボン酸〔式（Ｖｂ）の化合物〕の製造
前項（ａ）で得た式（IVｂ）の化合物(155mg，0.29mmol) を四塩化炭素（２ml−アセトニトリル（２ml）の混合溶媒に溶かし、これにメタ過ヨウ素酸ナトリウム(183mg，0.86mmol) を水（３ml）に溶かして加えた。この二相溶液に二酸化ルテニウム(IV)(8.0mg)を加え、室温で30分間激しく攪拌して酸化反応を行った。 その反応溶液から有機相と水相を分液し、水相を酢酸エチルで３回抽出した。有機相を合わせ、２−プロパノール(0.5ml) を加えて室温で２時間攪拌した。析出した固体を減圧ろ過して除いた後、ろ液を水で１回洗浄した。有機相を無水硫酸マグネシウムで乾燥した後、綿栓ろ過した。ろ液の溶媒を減圧留去した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒：クロロホルム−メタノール−濃アンモニア水、70：10：１）で精製し、無色不定形固体として表題化合物を109mg（69％）得た。
【００９２】
比旋光度： [α]_D ²⁵ ＋41.3°(ｃ0.67，メタノール）
¹Ｈ−ＮＭＲスペクトル（ＣＤ₃ＯＤ），δppm ：1.35 and 1.41 （３Ｈ，ｓ，イソプロピリデン)，1.46，1.50（27Ｈ，broad ｓ，ＣＯＯＣ(ＣＨ₃₎₃ ×３），2.84（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝12.7，4.6 and 2.4Hz，３−Ｈ)，3.46（１Ｈ，broadｔ，Ｊ＝12.7Hz，２−Ｈ_ax），3.68（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝12.7 and 4.6Hz，２− Ｈ_eq），4.61（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝7.3 and 2.0Hz，５−Ｈ)，4.86（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝7.3 and 2.4Hz，４−Ｈ），6.04（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝2.0Hz，６−Ｈ）．
【００９３】
（ｃ）(3S,4S,5R,6R)-6-グアニジノ-4,5-ジヒドロキシピペリジン-3-カルボン酸〔式（Ｉｂ）の化合物〕の製造
前項（ｂ）で得た式（Ｖｂ）の化合物（39mg，70μmol)をジクロロメタン(0.6ml) に溶かし、その溶液にトリフルオロ酢酸(0.6ml) を加え、室温で８時間攪拌した。保護基であるＢｏｃ基を脱離する反応が起きた。その反応液から溶媒を減圧留去し、残留物をトルエンで３回、水で１回共沸した後、吸着樹脂ダイヤイオンＨＰ20（Ｈ₂Ｏ）で精製した。精製物をメタノールで３回共沸して無色不定形 固体とした後、極小量のメタノールに溶かした。その溶液に４Ｍ塩酸−ジオキサン溶液（１ml）を加え、さらにジエチルエーテルを加えてよく攪拌して反応させた。イソプロピリデン基の脱離する反応が起きた。反応液中に無色固体が析出した。析出した固体を遠心分離によって沈殿させ、上澄みを除いた。この後、沈殿をジエチルエーテルに懸濁させ、遠心分離した後、上澄みを除く操作を２回繰り返した。得られた沈殿を風乾した後、減圧下に乾燥させ、無色固体として第一の本発明による式（Ｉｂ）の表題化合物を19mg（94％）得た。
【００９４】
比旋光度： [α]_D ²⁶ ＋26.6°(ｃ0.39，水）
¹Ｈ−ＮＭＲスペクトル（Ｄ₂Ｏ），δppm ：3.10（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝8.8 and 2.0Hz，３−Ｈ），3.54（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝8.8Hz，２−Ｈ），4.01（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝9.8 and 2.5Hz，５−Ｈ），4.60（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝2.2Hz，４−Ｈ），5.04 （１Ｈ，ｄ，Ｊ＝9.8Hz，６−Ｈ）．
【００９５】
実施例４
（ａ）(3R,4S,5R,6S)-N-(ターシャリーブトキシカルボニル)-6-トリフルオロ アセタミド-3-ヒドロキシメチル-4,5-O-イソプロピリデン-4,5-ピペリジンジオ ール〔式（IVｃ）の化合物〕の製造
実施例１(ｄ)で得た式(IIｂ）の化合物(0.407ｇ，1.35mmol）をＤＭＦ(８ml）に溶かし、これにジイソプロピルエチルアミン（2.35ml，13.5mmol）およびトリフルオロ酢酸エチル（1.61ml，13.5mmol）を加え、60℃で36時間攪拌した。式 （IIｂ）の化合物の６位のアミノ基がトリフルオロアセチル化される反応が起きた。その反応液を室温まで冷却した後、クロロホルムで希釈し、これを水で３回洗浄した。このとき、水相は１回毎にクロロホルムで逆抽出した。有機相を合わせ、無水硫酸マグネシウムで乾燥した後、ろ過した。ろ液を減圧濃縮し、残留物をトルエンで３回共沸した後、展開溶媒としてトルエン−アセトン（５：１）を用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、無色シロップとして表題化合物を0.434ｇ（81％）得た。
【００９６】
比旋光度： [α]_D ²⁵ ＋26°(ｃ0.94，クロロホルム）
¹Ｈ−ＮＭＲスペクトル（400MHz，ＣＤＣｌ₃ ），δppm ：1.35，1.47(each ３Ｈ，ｓ，イソプロピリデン），1.46（９Ｈ，ｓ，ＣＯＯＣ(ＣＨ₃₎₃ ），2.02 (１Ｈ，ｍ，５−Ｈ），2.15（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝5.6Hz，ＯＨ），3.14（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝12.5Hz，６−Ｈ_ax），3.57（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝12.5， 4.2Hz，６−Ｈ_eq），3.73−3.82（２Ｈ，ｍ，−ＣＨ ₂ＯＨ），4.56（２Ｈ，broad ｓ，３−Ｈ，４− Ｈ），5.78（１Ｈ，broad ｓ，２−Ｈ），6.72（１Ｈ，broad ｓ，ＮＨ）．
【００９７】
（ｂ）(3S,4S,5R,6S)-N-(ターシャリーブトキシカルボニル)-6-トリフルオロ アセタミド-4,5-ジヒドロキシ-4,5-O-イソプロピリデンピペリジン-3-カルボン 酸〔式（Ｖｃ）の化合物〕の製造
前項(ａ)で得た式（IVｃ）の化合物(0.398ｇ，１mmol）を四塩化炭素（６ml）とアセトニトリル(６ml)の混合溶媒に溶かし、これにメタ過ヨウ素酸ナトリウム(0.642ｇ，３mmol）を水（９ml）に溶かしたものを加えた。この２相溶液に酸化ルテニウム(IV)(４mg）を加え、室温で激しく攪拌して２時間反応を行った。そ の後、反応溶液から有機相と水相を分離し、水相を酢酸エチルで３回抽出した。有機相と酢酸エチル抽出液とを合わせ、これに2-プロパノール(0.5ml) を加えて室温で１時間攪拌した後、析出した固体をろ過して除去した後、ろ液を水で１回洗浄した。この有機相を無水硫酸マグネシウムで乾燥した後、ろ過した。ろ液を減圧濃縮した後、残留物を展開溶媒としてクロロホルム−メタノール−濃アンモニア水（３：１：0.1)を用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、無色不定形固体として表題化合物を0.306ｇ（74％）を得た。
【００９８】
比旋光度： [α]_D ²³ ＋29°(ｃ0.90，メタノール）
融点： 200℃（分解）
¹Ｈ−ＮＭＲスペクトル（400MHz，ＣＤ₃ＯＤ），δppm ：1.34，1.40 (each ３Ｈ，ｓ，イソプロピリデン），1.47（９Ｈ，ｓ，ＣＯＯＣ(ＣＨ₃₎₃ ），2.96 （１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝11.7，4.2, 2.4Hz，３−Ｈ），3.41（１Ｈ，broad ｔ，Ｊ＝11.7Hz，２−Ｈ_ax），3.64（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝11.7， 4.2Hz，２−Ｈ_eq），4.50（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝7.8, 2.0Hz，５−Ｈ），4.83（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝7.8, 2.4Hz，４−Ｈ），5.78（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝2.0Hz，６−Ｈ）．
【００９９】
（ｃ）(3S,4S,5R,6R)-6-(トリフルオロアセタミド)-4,5-ジヒドロキシピペリ ジン-3-カルボン酸〔式（Ｉｂ）の化合物〕の製造
前項（ｂ）で得た式（Ｖｃ）の化合物 153mgを４規定の塩化水素を含むジオキサン 4.5mlに溶解し、室温で一晩攪拌すると化合物（Ｖｃ）から保護基が脱離される反応が起き、そしてその反応液から固体が析出した。析出した固体をジオキサンで洗浄し、乾燥して無色固体として第六の本発明で目的とされる式（Ｉｃ）の表題化合物 110mg（96％）を得た。
【０１００】
比施光度： [α]_D ³¹ ＋27°(ｃ0.22，水）
融点： 130℃（分解）
¹Ｈ−ＮＭＲスペクトル（270MHz，Ｄ₂Ｏ），δppm ：2.92（１Ｈ，ｄｄｄ， Ｊ＝10.8， 2.3Hz，３−Ｈ)，3.32−3.39（２Ｈ，ｍ，２−Ｈ₂ )，3.96（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝10.6， 2.6Hz，５−Ｈ），4.42（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝2.3Hz，４−Ｈ）， 5.01（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝10.6Hz，６−Ｈ）．[0001]
BACKGROUND OF THE INVENTION
The present invention relates to (3S, 4S, 5R, 6R) -6- (trichloroacetamide) -4,5-dihydroxypiperidine-3-carboxylic acid and (3S, 4S, 5R), which are novel substances having cancer cell metastasis inhibitory activity. , 6R) -6-guanidino-4,5-dihydroxypiperidine-3-carboxylic acid and its related substances or their salts. The present invention also relates to a method for producing these novel substances.
[0002]
Furthermore, the present invention is a compound which has been previously invented by the present inventors with low toxicity, water solubility and strong cancer metastasis-inhibiting action, and is effective in the treatment and prevention of cancer (3S, 4S , 5R, 6R) -6- (trifluoroacetamide) -4,5-dihydroxypiperidine-3-carboxylic acid or a salt thereof (Japanese Unexamined Patent Publication No. Hei 6-157458 and Japanese Patent Application No. Hei 4-332143) Also includes a novel process for the preparation of siastatin B.
[0003]
[Prior art]
Conventionally, the following formula (Ic)

As a method of producing (3S, 4S, 5R, 6R) -6- (trifluoroacetamide) -4,5-dihydroxypiperidine-3-carboxylic acid or a salt thereof represented by the method of Nishimura et al. Chem. Soc. Jpn. ”65, 978-986 (1992), and“ J. Antibiotics ”45, 954-962 and 963-970 (1992)). Because (3S, 4S, 5R, 6R) -6- (trifluoroacetamide) -3,4,5-trihydroxypiperidine is used as a starting compound and this is chemically converted in a series of reaction steps. This method was invented by the present inventors and was known as described in JP-A-6-157458. However, this known method uses expensive L-ribose as a raw material, requires a large number of steps, and is the target product (3S, 4S, 5R, 6R) -6- (trifluoroacetamide) The yield of -4,5-dihydroxypiperidine-3-carboxylic acid was as low as about 1%, and it was difficult to put into practical use.
[0004]
[Problems to be solved by the invention]
Current drug treatments for cancer control, surgical treatment or cancer treatment by radiation are expected to be further enhanced by the ability to suppress cancer cell metastasis. However, there are only a few active substances whose action is mainly to suppress the metastasis of cancer cells, and none are used clinically. Therefore, there is a strong demand to provide a new compound that has low toxicity and water solubility, and has a strong cancer metastasis-inhibiting action and is effective in the treatment and prevention of cancer.
[0005]
It is also desired to develop a new method capable of efficiently producing the above (3S, 4S, 5R, 6R) -6- (trifluoroacetamide) -4,5-dihydroxypiperidine-3-carboxylic acid. Yes.
[0006]
[Means for Solving the Problems]
Therefore, the present inventors conducted various studies. As part of that research, the following formula (A) can be produced by culturing the actinomycetes Streptomyces verticillus var. Quintum (Mikken Kenkyu No. 507)

The following general formula (III-1) in one step for the protection of the imino group at the 1-position from the siastatin B (Japanese Patent Publication No. 55-46714)

[In the formula, R¹Is an imino group-protecting group, for example, a tertiary butoxycarbonyl group], and the compound of formula (III-1) is used as a raw material. The following general formula (II) as a compound

[In the formula, R¹Is an imino protecting group such as a tertiary butoxycarbonyl group, and X¹And X²Are each a monovalent hydroxyl protecting group or X¹X²Both of the following formula

(However, R^aAnd R^bMay be the same or different from each other, each of which is a hydrogen atom, an alkyl group or an aryl group, particularly a phenyl group), or a benzylidene group, a cycloalkylidene group or (3R, 4S, 5R, 6S) -N-protected-6-amino-3-hydroxymethyl-4,5-dihydroxy-4,5-O-diprotected-piperidine represented by (denotes a tetrahydropyranylidene group) And further through the intermediate compound of the general formula (II), the (3S, 4S, 5R, 6R) -6- (trifluoroacetamide) -4,5-dihydroxypiperidine-3-carboxylic acid or We have succeeded in developing a new method that can produce its salts in high yield.
[0007]
Furthermore, the present inventors conducted research for the purpose of obtaining a novel cancer cell metastasis inhibitor. As a result, the intermediate compound of the general formula (II) prepared by the synthesis method described above was used, and after several steps, the following formula (Ia)

(3S, 4S, 5R, 6R) -6- (trichloroacetamide) -4,5-dihydroxypiperidine-3-carboxylic acid represented by the following formula (Ib)

(3S, 4S, 5R, 6R) -6-guanidino-4,5-dihydroxypiperidine-3-carboxylic acid represented by the above has been successfully synthesized as a novel compound.
[0008]
The inventors of the present invention evaluated (3S, 4S, 5R, 6R) -6- (trichloroacetamide) -4,5 of the above formula (Ia) by an experimental evaluation system for evaluating the suppressive action of cancer cell metastasis. -Dihydroxypiperidine-3-carboxylic acid and (3S, 4S, 5R, 6R) -6-guanidino-4,5-dihydroxypiperidine-3-carboxylic acid of the formula (Ib) and their salts are excellent It was found to have cancer cell metastasis inhibitory activity. The present invention has been completed based on these findings.
[0009]
  Therefore, the first present invention provides a novel cancer cell metastasis inhibitor as the following general formula (I):

[Wherein R is a trichloroacetamide group or a guanidino group] (3S, 4S, 5R, 6R) -6- (trichloroacetamide) -4,5-dihydroxypiperidine-3-carboxylic acidOr(3S, 4S, 5R, 6R) -6-guanidino-4,5-dihydroxypiperidine-3-carboxylic acid or a salt thereof is provided.
[0010]
The compounds of general formula (I) above are of formula (Ia)

(3S, 4S, 5R, 6R) -6- (trichloroacetamide) -4,5-dihydroxypiperidine-3-carboxylic acid represented by formula (Ib)

(3S, 4S, 5R, 6R) -6-guanidino-4,5-dihydroxypiperidine-3-carboxylic acid represented by Salts of compounds of general formula (I) include salts with pharmaceutically acceptable metals in their carboxylic acid groups, such as alkali metal salts, such as sodium salts, or alkaline earth metal salts, such as calcium salts and ammonium There is salt. (3S, 4S, 5R, 6R) -6- (trichloroacetamide) -4,5-dihydroxypiperidin-3-carboxylic acid and (3S, 4S, 5R, 6R) -6-guanidino-4, Also included are acid addition salts at the imino group of 5-dihydroxypiperidine-3-carboxylic acid, particularly pharmaceutical preparations with pharmaceutically acceptable mineral acids such as hydrochloric acid, sulfuric acid, or organic acids such as acetic acid, propionic acid, etc. Are acceptable acid addition salts.
[0011]
The (3S, 4S, 5R, 6R) -6- (trichloroacetamide) -4,5-dihydroxypiperidine-3-carboxylic acid of formula (Ia) according to the first invention and (3S, The following test examples illustrate that 4S, 5R, 6R) -6-guanidino-4,5-dihydroxypiperidine-3-carboxylic acid and their salts have cancer cell metastasis inhibitory activity.
[0012]
Test example 1
The evaluation of the cancer cell metastasis-suppressing action of the compounds of the formulas (Ia) and (Ib) according to the first invention was carried out by the method of Kijima-Suda et al. Year).
[0013]
Test method: A melanoma B16 highly metastatic strain is selected from the mouse melanoma B16 strain according to the method of Fidler (“Method in Cancer Research” Vol. 15, 399-439, 1978). used.
[0014]
The so-selected melanoma B16 metastatic strain is planted in Dulbecco's medium supplemented with fetal calf serum, 24 hours, 5% CO₂ Was first cultured at 37 ° C. Then (3S, 4S, 5R, 6R) -6- (trichloroacetamide) -4,5-dihydroxypiperidine-3-carboxylic acid of formula (Ia) or (3S, 4S, 5R, 6R of (Ib) ) -6-guanidino-4,5-dihydroxypiperidine-3-carboxylic acid was added at the concentrations shown in Table I below and 72 hours, 5% CO₂In the presence of The cells thus proliferated were detached from the culture vessel with trypsin and EDTA solution. 1 × 10 per ml of this cell as a living cell in balanced salt solution⁶Suspended to a concentration of individual cells.
[0015]
0.1 ml of this cell suspension₁Mice (female, 7 weeks old) were administered into the tail vein and transplanted. After 14 days of breeding, the abdomen was opened, the lungs were removed, colonies of B16 high metastasis formed on and inside the lungs were counted, and compared with the control test group that was not treated with the drug. The results are shown in Table 1 below.
[0016]

[0017]
As is apparent from the test results shown in Table 1, (3S, 4S, 5R, 6R) -6- (trichloroacetamide) -4,5-dihydroxypiperidine-3 of the formula (Ia) according to the first invention -Carboxylic acid and (3S, 4S, 5R, 6R) -6-guanidino-4,5-dihydroxypiperidine-3-carboxylic acid of formula (Ib) form metastases in the lung as the administered drug concentration is increased The number of cancer cell colonies to be reduced is reduced, indicating that the metastasis to the lung is strongly suppressed. Therefore, the anticancer effect can be remarkably enhanced by administering the compound of the general formula (I) of the present invention at the same time as the existing anticancer agent or by administering the compound of the general formula (I) of the present invention at the time of surgical treatment or radiotherapy. It is an extremely useful drug for the treatment of
[0018]
In addition, (3R, 4S, 5R, 6S) -N-amino-3-hydroxymethyl-4,5-dihydroxy-4,5-O-diprotected-piperidine represented by the general formula (II) is known. In addition to (3S, 4S, 5R, 6R) -6- (trifluoroacetamide) -4,5-dihydroxypiperidine-3-carboxylic acid represented by the above formula (Ic) as a cancer cell metastasis inhibitor of As a novel cancer cell metastasis inhibitor synthesized this time, (3S, 4S, 5R, 6R) -6- (trichloroacetamide) -4,5-dihydroxypiperidine-3-carboxylic acid of formula (Ia) and formula (Ib) ) Is a novel intermediate compound useful for the synthesis of (3S, 4S, 5R, 6R) -6-guanidino-4,5-dihydroxypiperidine-3-carboxylic acid.
[0019]
  Therefore, in the second invention, the general formula (II)

[In the formula, R¹Is an imino protecting groupAs an alkoxycarbonyl group, aryloxycarbonyl group or aralkyloxycarbonyl groupAnd X¹And X²Are each a monovalent hydroxyl protecting groupAs a trialkylsilyl groupOr X¹And X²Both of the following formula

(However, R^aAnd R^bMay be the same or different from each other, each of which is a hydrogen atom, an alkyl group or an arylOn the basis(3R, 4S, 5R, 6S) -N-protected- represents one divalent hydroxyl protecting group represented by the formula (or a benzylidene group, cycloalkylidene group or tetrahydropyranylidene group). 6-amino-3-hydroxymethyl-4,5-dihydroxy-4,5-O-diprotected-piperidine or a salt thereof is provided.
[0020]
Further, the piperidine derivative of the above general formula (II) has an imino group protecting group, preferably an alkoxycarbonyl group-type imino group protecting group, in the usual manner on the 1-position imino group of the cyanastatin B of the above formula (A). Starting from the imino group-protected derivative of the thiastatin B of the general formula (III-1) obtained by introduction, it can be produced through the following four steps.
[0021]
  Accordingly, in the third aspect of the present invention, the general formula (III-1)

[In the formula, R¹Is R in the general formula (II) described above¹N-protection of the cyanostatin B having the same meaning as in formula (III-), the hydroxyl groups at the 4-position and 5-position of cyanastatin B are protected with a monovalent or divalent hydroxyl protecting group, and the following general formula (III- 2)

[In the formula, R¹Is an imino protecting groupAs an alkoxycarbonyl group, aryloxycarbonyl group or aralkyloxycarbonyl groupAnd X¹And X²Are each a monovalent hydroxyl protecting groupAs a trialkylsilyl groupOr X¹And X²Both of the following formula

(However, R^aAnd R^bMay be the same or different from each other, and may be a hydrogen atom, an alkyl group, or aryl.On the basisN-protection-4,5-di-O-protection represented by a divalent hydroxyl group protecting group represented by the formula (or a benzylidene group, a cycloalkylidene group or a tetrahydropyranylidene group). Siastatin B is produced, and the carboxyl group at the 3-position of the compound of formula (III-2) is reacted with an esterifying agent to give the following general formula (III-3)

[In the formula, R¹, X¹, X²Has the same meaning as above, R²Is an ester-forming group], followed by the group —CO at the 3-position of the compound of formula (III-3)₂R²Is converted to a hydroxymethyl group by reduction to give the following general formula (III-4)

[In the formula, R¹, X¹And X²Have the same meaning as above] (3R, 4S, 5R, 6R or 6S) -6-acetamido-N-protected-3-hydroxymethyl-4,5-O-diprotected-4,5-piperidine A diol is formed, and a free amino group is formed by deacetylation from the 6-position acetamide group of the compound of the general formula (III-4), and the following general formula (II)

[In the formula, R¹, X¹, X²Has the same meaning as described above]. (3R, 4S, 5R, 6S) -N-protected-6-amino-3-hydroxymethyl-4,5-O-diprotected-piperidine The
[0022]
(3R, 4S, 5R, 6S) -N-protected-6-amino-3-hydroxymethyl-4,5-dihydroxy-4,5-diprotected piperidine of the above general formula (II) according to the second invention In the N-protected-siastatin B represented by the general formula (III-1) used as a raw material in the third method of the present invention for synthesizing this compound (II), R¹The imino protecting group is a tertiary butoxycarbonyl group (CH_Three)_ThreeIt is convenient that it is CO-CO- (abbreviation: Boc).
[0023]
The imino group protecting group (R¹), Instead of the Boc group, a general conventional imino group-protecting group can be introduced by a protection method known in sugar chemistry.
[0024]
Instead of the Boc group, for example, a suitable imino group protecting group (R¹) Can be an alkoxycarbonyl group, an aryloxycarbonyl group or an aralkyloxycarbonyl group.
[0025]
Appropriate protection for the hydroxyl groups at positions 4 and 5 of compounds of general formula (II) and of compounds of general formulas (III-10), (III-2), (III-3) and (III-4) Hydroxyl protecting group (X¹, X²) Is conveniently an isopropylidene group, but in general, various other groups can be used. That is, the following formula

[However, R^aAnd R^bMay be the same or different from each other, and each is hydrogen, an alkyl group (preferably a lower alkyl group having 1 to 4 carbon atoms) or an aryl group (preferably a phenyl group or a substituted phenyl group such as a para-methoxyphenyl group). A divalent hydroxyl protecting group (including isopropylidene group) can be used, and alternatively, by a benzylidene group or by a cycloalkylidene group, such as a cyclohexylidene group or a tetrahydropyranylidene group It is also convenient to protect the 4- and 5-position hydroxy groups.
[0026]
The introduction of such a divalent hydroxyl protecting group is carried out in accordance with conventional hydroxyl protecting techniques for simultaneously protecting two hydroxyl groups bonded to two adjacent carbon atoms, respectively, in sugar chemistry. It is. Alternatively, a trialkylsilyl group, particularly a tertiary butyldimethylsilyl group, can be introduced as a suitable monovalent hydroxyl group protecting group by a conventional technique known in sugar chemistry.
[0027]
In the third method of the present invention, in the reaction for protecting the hydroxyl groups at the 4-position and 5-position of N-protected-siastatin B of the formula (III-1), a 4,5-O-isopropylidene group is used as a protecting group. In the case of introduction, for example, the compound of the formula (III-1) is dissolved in an organic solvent such as N, N-dimethylformamide and the solution is dissolved in, for example, 2,2-dimethoxypropane (as an isopropylidene group introducing agent). Use), and an alkyl catalyst such as chlorotrimethylsilane or an acid catalyst such as p-toluenesulfonic acid is added and reacted at room temperature for several hours to give 4,5-O-di of formula (III-2). -Protect-siastatin B (however, X¹And X²Together indicate an isopropylidene group).
[0028]
In place of 2,2-dimethoxypropane used in the above hydroxyl group protection reaction, 4,5-O- A benzylidene group or cyclohexylidene group-introduced or other acetal and ketalized compound of general formula (III-2) is obtained.
[0029]
Next, in order to introduce an ester-forming group into the 3-position carboxyl group of the compound of the general formula (III-2), the compound is dissolved in an organic solvent such as N, N-dimethylformamide, and diisopropylamine or A base such as triethylamine is added and, for example, methoxyethoxymethyl chloride is added as an esterifying agent in the presence of this base. The resulting reaction mixture is reacted at room temperature for several hours to give an esterified compound of general formula (III-3) (where R²Is a methoxyethoxymethyl group).
[0030]
In place of methoxyethoxymethyl chloride used as an esterifying agent in the above esterification reaction, alkyl chloride, aryl chloride, aralkyl chloride, lower (C₁~ C₆ ) An alkoxy-substituted-lower alkoxymethyl chloride such as alkoxymethyl chloride, aralkyloxymethyl chloride, or methoxymethyl chloride is converted to an ester-forming group (R²) Ester forming group R in the compound of formula (III-3)²Are each an alkyl group, an aryl group, an aralkyl group, a lower alkoxymethyl group, an aralkyloxymethyl group, or an alkoxy-substituted lower alkoxymethyl group.
[0031]
Next, the carboxylate group (—CO 2) at the 3-position of the compound of the general formula (III-3)₂R²) Is dissolved in a single organic solvent such as trahydrofuran or a mixed organic solvent thereof, and this solution is dissolved in a solution such as sodium borohydride, lithium aluminum hydride or diisobutylaluminum hydride. When a reducing agent is added and allowed to react for several hours at room temperature, the carboxylate group --CO₂R²Is converted to a hydroxymethyl group by reduction. As a result, an alcohol compound of the general formula (III-4) is obtained.
[0032]
Next, in order to convert the 6-position acetamide group of the compound of the general formula (III-4) into a liberated amino group, the compound is dissolved in hydrazine hydrate and reacted at 50 to 100 ° C. for 7 to 14 days, for example. As a result, a compound of the general formula (II) having a free amino group is obtained by removing the acetyl group from the acetamide group.
[0033]
When the piperidine derivative of the general formula (II) synthesized by the method of the third invention described above is used, the compound (Ia) is obtained as a novel cancer cell metastasis inhibitor through several steps, as will be described later. ) (3S, 4S, 5R, 6R) -6- (trichloroacetamide) -4,5-dihydroxypiperidine-3-carboxylic acid and (3S, 4S, 5R, 6R)-of formula (Ib)- 6-guanidino-4,5-dihydroxypiperidine-3-carboxylic acid can be synthesized. Further, (3S, 4S, 5R, 6R) -6- (trifluoroacetamide) -4,5-dihydroxypiperidine-3-carboxylic acid of the formula (Ic) can be synthesized as a known cancer cell metastasis inhibitor.
[0034]
Accordingly, in the fourth aspect of the present invention, the following general formula (II)

[In the formula, R¹, X¹, X²(3R, 4S, 5R, 6S) -N-protected-6-hydroxymethyl-4,5-dihydroxy-4,5-O-diprotected-piperidine 6-position amino group Is trichloroacetylated to give the following general formula (IV-1)

[In the formula, R¹, X¹, X²Has the same meaning as above and R^ThreeIs a trichloroacetamide group, and the stereochemistry at the 6-position is R¹Is R^ThreeIn the case of an imino group protecting group having a lower priority in the Cahn-Ingold-Prelog rule, the (R) -configuration is used.¹Is R^Three(In the case of a higher-priority imino protecting group, it is in the (S) -configuration)] (3R, 4S, 5R, 6R or 6S) -N-protected-6- (trichloroacetamide) -3 -Hydroxymethyl-4,5-O-diprotected-piperidine is formed, and then the 3-position hydroxymethyl group of the compound of formula (IV-1) is converted to a carboxyl group by oxidation to give the following general formula (V-1)

[In the formula, R¹, R^Three, X¹, X²And the stereochemistry at the 6-position has the same meaning as described above] (3S, 4S, 5R, 6R or 6S) -N-protected-6- (trichloroacetamide) -3-hydroxymethyl-4,5 -O-diprotected-piperidine-3-carboxylic acid is formed, and then the imino group protecting group (R¹) And a hydroxyl protecting group (X¹, X²In the following formula (Ia)

A method for producing (3S, 4S, 5R, 6R) -6- (trichloroacetamide) -4,5-dihydroxypiperidine-3-carboxylic acid or a salt thereof represented by the formula:
[0035]
In the fourth method of the present invention, the reaction of trichloroacetylating the 6-position amino group of the compound of the formula (II) is carried out by dissolving the compound of the formula (II) in an organic solvent such as methylene chloride. A trichloroacetylated compound of the formula (IV-1) is obtained by adding a base such as triethylamine, adding trichloroacetyl chloride (trichloroacetylating agent) in the presence of this base, and reacting at 0 ° C. for several tens of minutes. . In addition, it replaces with the trichloroacetyl chloride used for said trichloroacetylation reaction, and even if it uses a trichloroacetic anhydride, the trichloroacetyl compound of a formula (IV-1) will be obtained similarly.
[0036]
Next, the compound of the formula (IV-1) thus obtained is dissolved in a mixed solvent of carbon tetrachloride and acetonitrile, an aqueous solution of sodium metaperiodate is added to this solution, and further ruthenium oxide is added. Stir for several hours. Thereby, since the 3-position hydroxymethyl group of the compound of the formula (IV-1) is oxidized to a carboxyl group, the carboxylic acid compound of the formula (V-1) is obtained. The hydroxymethyl group can be oxidized by various known oxidation methods that generally convert alcohol to carboxylic acid.
[0037]
Then, the imino group protecting group (R) is obtained from the compound of the general formula (V-1) obtained in the oxidation step.¹) And a hydroxyl protecting group (X¹, X²) Can be removed by an appropriate conventional deprotection technique depending on the type of each protecting group.
[0038]
For example, the imino group protecting group (R) remaining from the compound of the general formula (V-1)¹) As a tertiary butoxycarbonyl group (Boc) and a hydroxyl protecting group (X¹, X²) Is removed. For these deprotection reactions, the compound of formula (V-1) is preferably dissolved in an organic solvent containing hydrogen chloride such as 1 to 4 N hydrogen chloride-dioxane and allowed to stand at room temperature for 4 to 15 hours. Imino protecting group (R¹) As well as hydroxyl protection (X¹, X²) Should be removed. In this way, the compound of formula (Ia) is produced as the hydrochloric acid addition salt as the desired new substance.
[0039]
In the fifth aspect of the present invention, the following general formula (II)

[In the formula, R¹, X¹, X²Have the same meaning as described above] (3R, 4S, 5R, 6S) -N-protected-6-amino-3-hydroxymethyl-4,5-dihydroxy-4,5-O-diprotected-pi By subjecting the 6-position amino group of peridine to an amidinolysis reaction, the following general formula (IV-2)

[In the formula, R¹, X¹, X²Has the same meaning as above, R^FourIs an N, N'-protected or unprotected guanidino group, and the stereochemistry at the 6-position is R¹Is R^FourIn the case of an imino group protecting group having a lower priority according to the Cahn-Ingold-Prelog rule, the (R) -configuration is used.¹Is R^Four(3R, 4S, 5R, 6R or 6S) -N-protected-6-protected- or unprotected-guanidino represented by (S) -configuration when the higher priority is an imino protecting group -3-Hydroxymethyl-4,5-dihydroxy-4,5-O-diprotected-piperidine is formed, and then the 3-position hydroxymethyl group of the compound of formula (IV-2) is converted to a carboxyl group by oxidation. And the following general formula (V-2)

[In the formula, R¹, R^Four, X¹, X²And the stereochemistry at the 6-position has the same meaning as above) (3S, 4S, 5R, 6R or 6S) -N-protected-6-guanidino-3-hydroxymethyl-4,5-dihydroxy-4, 5-O-diprotected-piperidine-3-carboxylic acid is formed, and the imino protecting group (R¹) And a hydroxyl protecting group (X¹, X²And a protecting group on the guanidyl group is eliminated, and the following formula (Ib)

A process for producing (3S, 4S, 5R, 6R) -6-guanidino-4,5-hydroxypiperidine-3-carboxylic acid or a salt thereof represented by the formula:
[0040]
In the fifth method of the present invention, as the first step, the reaction for amidinating the 6-position amino group of the compound of formula (II) is carried out by reacting the amidino group [H₂N (HN =) C-] can be carried out by a known method, whereby a guanidino group is formed as a 6-position substituent.
[0041]
For this amidinolysis reaction, the compound of formula (II) is dissolved in an organic solvent such as N, N-dimethylformamide, and a base such as triethylamine or diisopropylethylamine is added to the dissolution, and N is added in the presence of this base. , N-di- (tertiarybutoxycarbonyl) thiourea and mercuric chloride are added and reacted at 0 ° C. for several hours to obtain a guanidino compound of the formula (IV-2). As described above, when N, N-di- (tertiarybutoxycarbonyl) thiourea is used as the amidinating agent, the guanidino compound of the formula (IV-2) produced from the compound of the formula (II) Is more accurately displayed,

[In the formula, R¹, X¹, X²Has the same meaning as described above, and Boc represents a tertiary butoxycarbonyl group] and has a N, N′-protected guanidino group. However, the compound of the formula (IV-2) can be directly subjected to the subsequent oxidation step of the 3-position hydroxymethyl group, and the subsequent step from the carboxylic acid compound of the formula (V-2) Imino protecting group (R¹) And a hydroxyl protecting group (X¹, X²) Can be removed simultaneously with the protecting group on the guanidino group. Therefore, the presence of a protecting group on the guanidino group of the compound of formula (IV-2) is displayed in a simplified manner. Moreover, in general, N, N-di- (alkoxycarbonyl) thiourea can also be used in place of the N, N-di- (tertiarybutoxycarbonyl) thiourea.
[0042]
Further, the reaction for converting the amino group at the 6-position of the compound of the above formula (II) into a guanidino group can be generally performed by various known guanidinolation methods in which the amino group is converted into a guanidino group.
[0043]
Also in the method of the fifth aspect of the present invention, as the second step, the oxidation reaction for converting the 3-position hydroxymethyl group of the compound of the formula (IV-2) to a carboxyl group is represented by the formula ( It can be carried out in exactly the same manner as the step of oxidizing the compound of IV-1). Furthermore, as the third step, a protecting group (R¹, X¹, X²), And the reaction for removing the protecting group on the guanidino group can be carried out in the same manner as in the step of subjecting the compound of formula (V-1) to the deprotection reaction by the method of the fourth invention. As a result, the compound of formula (Ib) or its hydrochloric acid addition salt, which is the target novel substance, is formed.
[0044]
Furthermore, in the sixth aspect of the present invention, the following general formula (II) is used as a novel and efficient production method of the compound of formula (Ic), which is a known cancer cell metastasis inhibitor.

[In the formula, R¹, X¹, X²Has the same meaning as described above] (3R, 4S, 5R, 6S) -N-protected-6-amino-3-hydroxymethyl-4,5-dihydroxy-4,5-O-diprotected-piperidine The 6-position amino group of trifluoroacetylated by the following general formula (IV-3)

[In the formula, R¹, X¹, X²Has the same meaning as above, R^FiveIs a trifluoroacetamide group and the stereochemistry at the 6-position is R¹Is R^FiveIn the case of an imino group protecting group having a lower priority in the Cahn-Ingold-Prelog rule, the (R) -configuration is used.¹Is R^Five(3R, 4S, 5R, 6R or 6S) -N-protected-6- (trifluoroacetamide) in the case of a higher-priority imino group protecting group is (S) -configuration) -3-Hydroxymethyl-4,5-dihydroxy-4,5-O-diprotected-piperidine is produced, and the 3-hydroxymethyl group of the following compound of formula (IV-3) is oxidized to a carboxyl group Into the following general formula (V-3)

[In the formula, R¹, R^Five, X¹, X²And the stereochemistry at the 6-position has the same meaning as above)-(3S, 4S, 5R, 6R or 6S) -N-protected-6- (trifluoroacetamide) -3-hydroxymethyl-4,5 -Dihydroxy-4,5-O-diprotected-piperidine-3-carboxylic acid is formed, and then the imino protecting group (R¹) And a hydroxyl protecting group (X¹, X²In the following formula (Ic)

A process for producing (3S, 4S, 5R, 6R) -6- (trifluoroacetamide) -4,5-dihydroxypiperidine-3-carboxylic acid or a salt thereof represented by the formula:
[0045]
In the sixth method of the present invention, as the first step, the reaction of trifluoroacetylating the 6-position amino group of the compound of (II) is carried out by converting the compound of formula (II) into an organic solvent such as N, N-dimethylformamide. Into this solution, a base such as diisopropylethylamine or triethylamine is added, ethyl trifluoroacetate is added in the presence of this base, and the reaction is carried out at 40 to 80 ° C. for several days to obtain a trivalent compound of formula (IV-3). A fluoroacetyl compound is obtained. In addition, it can replace with the ethyl trifluoroacetate used for said trifluoroacetylation reaction, and can perform a trifluoroacetylation reaction similarly even if it uses trifluoroacetyl chloride and trifluoroacetic anhydride.
[0046]
As the next second step, the reaction for converting the 3-position hydroxymethyl group of the fluoroacetyl compound of formula (IV-3) to a carboxyl group can be carried out in the same manner as the corresponding step in the method of the fourth invention. . Further, the imino group protecting group (R¹) And a hydroxyl protecting group (X¹, X²) In the third step can also be carried out in the same manner as the corresponding step of the fourth method of the present invention. Thus, the known (3S, 4S, 5R, 6R) -6- (trifluoroacetamide) -4,5-dihydroxybiperidine-3-carboxylic acid of the formula (Ic) was obtained in a high yield. it can.
[0047]
Next, (3R, 4S, 5R, 6S) -N-protected-6-amino-3-hydroxymethyl-4,5-dihydroxy-4,5-diprotected of general formula (II) according to the second invention An example of piperidine is (3R, 4S, 5R, 6S) -6-amino-N- (tertiarybutoxycarbonyl) -3-hydroxymethyl-4,5-O-isopropylidene-3,4-piperidinediol. A reaction route consisting of a plurality of steps in the case of producing by the method of the third present invention starting from the cyanastine B of (A) will be described with reference to the following reaction chart (1).
[0048]
However, in the reaction chart below, Boc is a tertiary butoxycarbonyl group (CH_Three)_ThreeCO-CO- is shown, and MEM is a methoxyethoxymethyl group.
[0049]

[0050]
That is, the reaction process carried out for the above reaction chart (1) will be briefly described. A method of the step (Nishimura et al .; “Natural Product Lett.”, Vol. 39, pages 44 to 44) (See 1992)], N- (tertiary butoxycarbonyl) -siastatin B represented by the formula (IIIa) [mp. 145 to 146 ° C., [α]_D ^{twenty four}+ 19.6 ° (c0.24, water)]. Using this compound of formula (IIIa) as a starting material, this compound is dissolved in various organic solvents such as N, N-dimethylformamide, 2,2-dimethoxypropane is added to the solution, and chlorotrimethylsilane or chloro A 4,5-O-isopropylidened compound of the formula (IIIb) is obtained by adding an acid catalyst such as trichlorosilane alkyl silane or p-toluene sulfonic acid and carrying out a ketalization reaction at room temperature for several hours ( Reaction step a).
[0051]
Next, the compound of formula (IIIb) is dissolved in an organic solvent such as N, N-dimethylformamide, a base such as diisopropylamine or triethylamine is added to the solution, and methoxyethoxymethyl chloride is added in the presence of this base at room temperature. The ester compound of formula (IIIc) is obtained by carrying out an esterification reaction for several hours at (reaction step b).
[0052]
Next, the compound of the formula (IIIc) is dissolved in a single organic solvent such as tetrahydrofuran or a mixed organic solvent thereof, and a reducing agent such as sodium borohydride, lithium aluminum hydride, diisobutylaluminum hydride or the like is added to this solution. And an alcohol compound of the formula (IIa) is obtained by performing a reduction reaction at room temperature for several hours (reaction step c).
[0053]
Next, when the compound of the formula (IIa) is dissolved in hydrazine hydrate and reacted at 50 to 100 ° C. for 7 to 14 days, acetyl group elimination occurs, and this deacetylation results in the formula (II b). To obtain a compound in which the amino group is released (reaction step d). This compound of formula (IIb) is an example of a compound of general formula (II) according to the second invention.
[0054]
Furthermore, starting from the compound of formula (IIb) above, the method of the fourth invention provides a (3S, 4S, 5R, 6R) -6- (trichloroaceta of formula (Ia) according to the first invention. The reaction route for producing (mid) -4,5-dihydroxypiperidine-3-carboxylic acid is shown in the following reaction chart (2).
[0055]

[0056]
To explain the reaction chart (2), the compound of formula (IIb) is dissolved in an organic solvent such as methylene chloride, a base such as pyridine or triethylamine is added to this solution, and trichloroacetyl chloride is added in the presence of this base. By reacting at 0 ° C. for several tens of minutes, a trichloroacetamide compound of the formula (IVa) is obtained (reaction step e). It should be noted that the compound of formula (IVa) can be similarly obtained by using trichloroacetic anhydride instead of trichloroacetyl chloride.
[0057]
Next, the compound of formula (IVa) is dissolved in a mixed solvent of carbon tetrachloride and acetonitrile, an aqueous solution of sodium metaperiodate is added to this solution, further ruthenium oxide is added, and the mixture is vigorously stirred at room temperature for several hours. To obtain a carboxylic acid compound of the formula (Va) (reaction step f).
[0058]
Next, the tertiary butoxycarbonyl group (Boc) as the remaining imino group protecting group is eliminated from the compound of the formula (Va), and the isopropylidene group as the hydroxyl protecting group is eliminated (reaction step g). For this purpose, the compound (Va) is dissolved in an organic solvent containing hydrogen chloride such as 1 to 4 N hydrogen chloride-dioxane and left at room temperature for 4 to 15 hours to leave the imino group protecting group (Boc) and isopropylidene. The group should be removed. In this way, the compound of formula (Ia) is formed as the hydrochloride salt.
[0059]
Furthermore, starting from the compounds of the above formula (IIb), according to the method of the fifth invention, (3S, 4S, 5R, 6R) -6-guanidino- of the formula (Ib) according to the first invention A reaction route for producing 4,5-dihydroxypiperidine-3-carboxylic acid is shown in the following reaction chart (3).
[0060]

[0061]
To explain the reaction chart (3), the compound of the formula (IIb) is dissolved in an organic solvent such as N, N-dimethylformamide, and a base such as triethylamine or diisopropylethylamine is added to this solution. By adding N, N-di- (tertiarybutoxycarbonyl) thiourea and mercuric chloride and reacting at 0 ° C. for several hours, the compound of formula (IVb) having a guanidino group protected with two Boc groups is obtained. A guanidino compound is obtained (reaction step h).
[0062]
Next, the compound of formula (IVb) is dissolved in a mixed solvent of carbon tetrachloride and acetonitrile, and an aqueous solution of sodium metaperiodate is added to this solution in the same manner as in reaction step (f) of reaction chart (2). Further, ruthenium oxide is added, and the mixture is vigorously stirred at room temperature and reacted for several hours to oxidize to obtain a carboxylic acid compound of the formula (Vb) (reaction step i).
[0063]
Next, from the compound of the formula (Vb), the remaining tertiary butoxycarbonyl group (Boc) as the imino group protecting group and two Boc groups which are protecting groups on the guanidino group are eliminated, and the hydroxyl protecting group is used. The isopropylidene group is removed (reaction step j). For this purpose, similarly to the reaction step (g) of the reaction chart (2), the compound (Vb) is dissolved in an organic solvent containing hydrogen chloride such as 1 to 4 N hydrogen chloride-dioxane, and 4 to 4 at room temperature. The imino group protecting group (Boc) and the isopropylidene group may be removed by leaving for 15 hours. In this way, the compound of formula (Ib) is formed as the hydrochloride salt.
[0064]
Next, starting from the compound of formula (IIb) above, the method of the sixth invention provides (3S, 4S, 5R, 6R) -6- (trifluoroacetamide) -4 of formula (Ic). The reaction route for producing 1,5-dihydroxypiperidine-3-carboxylic acid is shown in the following reaction chart (4).
[0065]

[0066]
To explain the reaction chart (4), the compound of the formula (IIb) is dissolved in an organic solvent such as N, N-dimethylformamide, and a base such as diisopropylethylamine or triethylamine is added to this solution. By adding ethyl trifluoroacetate and reacting at 40 to 80 ° C. for several days, a trifluoroacetamide compound of the formula (IVc) is obtained (reaction step k). The compound of the formula (IVc) can be similarly obtained by using trifluoroacetyl chloride or trifluoroacetic anhydride in place of the above-mentioned ethyl trifluoroacetate.
[0067]
Next, the compound of formula (IVc) is dissolved in a mixed solvent of carbon tetrachloride and acetonitrile, and an aqueous solution of sodium metaperiodate is added to this solution in the same manner as in reaction step (f) of reaction chart (2). Further, ruthenium oxide is added, and the mixture is vigorously stirred at room temperature and reacted for several hours to oxidize to obtain a carboxylic acid compound of the formula (Vc) (reaction step 1).
[0068]
Next, the tertiary butoxycarbonyl group (Boc) as the remaining imino group protecting group is eliminated from the compound of the formula (Vc), and the isopropylidene group as the hydroxyl protecting group is eliminated (reaction step m). For this purpose, the compound (Vc) is dissolved in an organic solvent containing hydrogen chloride such as 1 to 4 N hydrogen chloride-dioxane in the same manner as in the reaction step (g) of the reaction chart (2), and 4 to 4 at room temperature. The imino group protecting group (Boc) and the isopropylidene group are preferably removed by leaving for 15 hours. In this way, the compound of formula (Ic) is formed as the hydrochloride salt.
[0069]
In the reaction pathway for the production of each compound of formula (Ia), formula (Ib) and (Ic) shown in the above reaction charts (1) to (4), the imino group protecting group of the starting compound of formula (IIb) Is a Boc group and the hydroxyl group protecting group is an isopropylidene group, but instead of the Boc group and the isopropylidene group in the compound of the formula (IIb), respectively, a common conventional imino group protecting group is used. It is obvious that a conventional hydroxyl protecting group can be introduced by a protecting method known in sugar chemistry.
[0070]
Furthermore, the step of removing the imino group-protecting group and the hydroxyl group-protecting group can be carried out according to the method described for the reaction step (g) in the reaction chart (2), or according to the conventional method appropriate for the type of each protecting group. This can be done with a simple deprotection technique.
[0071]
The compounds of the formula (Ia) and the compound of the formula (Ib) and the compound of the formula (Ic) obtained by the above-mentioned fourth, fifth and sixth methods of the present invention are acids such as hydrochlorides as described above. When it is obtained in the form of an addition salt, an aqueous solution of the compound in the form of the acid addition salt is treated with a cation exchange resin, for example, Dowex 50W (manufactured by Dow Chemical Co., Ltd.) H type by a conventional method. Alternatively, purification by chromatography with a solvent system containing ammonia gives the compounds (Ia) and (Ib) and (Ic) in the form of the free imino base. When the compound of the formula (Ia), the compound of the formula (Ib) and the compound of the formula (Ic) are in the form of a free carboxylic acid, they are treated with an inorganic base by a conventional method to form a carboxylate salt. Can be converted to
[0072]
DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
Examples of the present invention illustrating the respective reaction steps shown in the above reaction charts (1) to (4) are shown below, but these are merely examples and do not limit the present invention. Needless to say, various changes and modifications can be made without departing from the scope of the present invention.
[0073]
Example 1
(A) Production of N- (tertiary butoxycarbonyl) -4,5-O-isopropylidene statin B [compound of formula (IIIb)]
A compound of formula (IIIa), ie N- (tertiary butoxycarbonyl) -siastatin B (0.955 g, 3 mmol), was suspended in N, N-dimethylformamide (DMF) (15 ml) and 2,2-dimethoxy was suspended therein. Propane (3.69 ml, 30 mmol) and chlorotrimethylsilane (1.90 ml, 15 mmol) were added. The resulting mixture was stirred at room temperature for 2 hours, and then pyridine (1.5 ml) was added to stop the reaction.
[0074]
The reaction solution was diluted with chloroform, extracted with water, and the aqueous phase was extracted three times with a mixed solvent of chloroform-methanol (9: 1). The organic phases were combined, dried over anhydrous magnesium sulfate and filtered. The filtrate was concentrated under reduced pressure, and the residue was azeotroped three times with toluene, and then purified by silica gel column chromatography using chloroform-methanol-concentrated aqueous ammonia (2: 1: 0.3) as a developing solvent. 1.05 g (98%) of the title compound as a solid.
[0075]
Specific rotation: [α]_D ^{twenty three} + 29 ° (c0.88, methanol)
¹H-NMR spectrum (270 MHz, CD_ThreeOD), δppm: 1.32, 1.38 (each 3H, s, isopropylidene), 1.46 (9H, s, COOC (CH_Three)_Three), 1.94 (3H, s, COCH_Three), 2.96 (1H, ddd, j = 12.5, 5.1, 2.6Hz, 3-H), 3.43 (1H, t, J = 12.5Hz, 2-H_ax), 3.60 (1H, dd, J = 12.5, 5.1Hz, 2-H_oq), 4.47 (1H, dd, J = 7.6, 2.3 Hz, 5-H), 4.80 (1H, d, J = 7.6, 2.6 Hz, 4-H), 5.78 (1H, d, J = 2.3 Hz, 6) -H).
[0076]
(B) Preparation of N- (tertiary butoxycarbonyl) -4,5-"-isopropylideneciastatin B 2-methoxyethoxymethyl ester [compound of formula (IIIc)] (IIIb) obtained in the previous section (a) ) Compound (2.51 g, 7 mmol) was dissolved in DMF (50 ml), and diisopropylethylamine (4.88 ml, 28 mmol) and 2-methoxyethoxymethyl chloride (1.60 ml, 14 mmol) were added thereto. After stirring at room temperature for 2 hours, the reaction was stopped by adding water (0.2 ml) The reaction solution was diluted with chloroform, extracted with water, and the aqueous phase was extracted with chloroform three times. The organic phases were combined, dried over anhydrous magnesium sulfate and filtered, the filtrate was concentrated under reduced pressure, the residue was azeotroped three times with toluene, and chloromethane-methanol (20: 1) was added as a developing solvent. Silica gel column chromatography used Purification by Rafi, 2.61g (83%) of the title compound as a colorless syrup was obtained.
[0077]
Specific rotation: [α]_D ^{twenty five} -18.7 ° (c0.91, chloroform)
¹H-NMR spectrum (400 MHz, CDCl_Three), Δppm: 1.32, 1.44 (each 3H, s, isopropylidene), 1.47 (9H, s, COOC (CH_Three)_Three), 1.98 (3H, s, COCH_Three), 2.99 (1H, broad m, 3-H), 3.37 (1H, t, J = 12.7Hz, 2-H_ax), 3.39 (3H, s, OCH_Three), 3.56 (2H, t, J = 4.4Hz, OCH₂−CH ₂-OCH_Three), 3.76-3.82 (3H, m, O-CH ₂-CH₂-OCH_Three, 2-H_eq), 4.69 (1H, broad d, J = 7 Hz, 5-H), 4.82 (1H, broad dd, J = 7, 3 Hz, 4-H), 5.40 (2H, s, COOCH₂O), 5.59 (1H, broad s, 6-H), 5.91 (1H, broad s, NH).
[0078]
(C) (3R, 4S, 5R, 6S) -6-acetamido-N- (tertiarybutoxycarbonyl) -3-hydroxymethyl-4,5-O-isopropylidene-4,5-piperidineol [formula (IIa ) Compound]
The compound of formula (IIIc) (2.59 g, 5.8 mmol) obtained in the previous item (b) is dissolved in a mixed solvent of tetrahydrofuran (50 ml) and 2,2,2-trifluoroethanol (5 ml), and borohydride is added thereto. Sodium (0.685 g, 17.4 mmol) was added. The resulting mixture was stirred at room temperature for 1 hour to carry out a reduction reaction. Thereafter, water (1.5 ml) was added to stop the reaction, and the mixture was further stirred at room temperature for 30 minutes. The reaction mixture was concentrated under reduced pressure, water was added to the residue, and the mixture was extracted 3 times with chloroform. The organic phases (chloroform extracts) were combined, dried over anhydrous magnesium sulfate, and then filtered. After the filtrate was concentrated under reduced pressure, the residue was purified by silica gel column chromatography using dichloromethane-methanol (12: 1) as a developing solvent to obtain 1.98 g (99%) of the title compound as a colorless foamy solid.
[0079]
Specific rotation: [α]_D ^{twenty five} + 27 ° (c0.95, chloroform)
¹H-NMR spectrum (400 MHz, CDCl_Three), Δppm: 1.33, 1.45 (each 3H, s, isopropylidene), 1.46 (9H, s, COOC (CH_Three)_Three), 1.98 (3H, s, COCH_Three), 2.06 (1H, m, 5-H), 2.22 (1H, t, J = 5.6 Hz, OH), 3.16 (1H, t, J = 12.4 Hz, 6-H)_eq), 3.50 (1H, dd, J = 12.4, 3.7Hz, 6-H_eq), 3.72-3.80 (2H, m, -CH ₂OH), 4.52 (1H, dd, J = 7.3, 2.4 Hz, 3-H), 4.59 (1H, broad d, J = 7.3 Hz, 4-H), 5.73 (1H, broad s, 2-H), 5.84 (1H, broad s, NH).
[0080]
(D) (3R, 4S, 5R, 6S) -6-amino-N- (tertiarybutoxycarbonyl) -3-hydroxymethyl-4,5-O-isopropylidene-3,4-piperidinediol [formula (IIb ) Compound]
The compound of formula (IIa) (1.03 g, 3 mmol) obtained in the previous item (c) was converted to hydrazine hydrate (H₂NNH₂XH₂O, 20 ml) and stirred at 70 ° C. for 10 days. A reaction occurred in which the acetyl group was eliminated from the 6-position acetamide group of the compound of formula (IIa). After cooling the reaction solution to room temperature, the reaction solution was concentrated under reduced pressure. Water was added to the residue and extracted three times with chloroform. The organic phases (chloroform extracts) were combined, dried over anhydrous magnesium sulfate, and then filtered. The filtrate was concentrated under reduced pressure, and the residue was subjected to silica gel column chromatography using ethyl acetate-methanol (50: 1) as a developing solvent and silica gel preparative thin phase chromatography using ethyl acetate-methanol (10: 1) as a developing solvent. To give 0.488 g (54%) of the title compound according to the second invention as a colorless syrup. At this time, 0.332 g (32%) of the unreacted compound of the formula (IIa) was recovered.
[0081]
Specific rotation: [α]_D ²⁶ -14.4 ° (c0.99, chloroform)
¹H-NMR spectrum (400 MHz, CDCl_Three), Δ ppm: 1.35, 1.45 (each 3H, s, isopropylidene), 1.48 (9H, s, COOC (CH_Three)_Three), 2.40 (1H, m, 5-H), 3.19 (1H, t, J = 12.2 Hz, 6-H_ax), 3.46 (1H, dd, J = 12.2, 3.9Hz, 6-H_oq), 3.71-3.80 (2H, m, -CH ₂OH), 4.35 (1H, dd, J = 7.3, 2.9Hz, 3-H), 4.57 (1H, dd, J = 7.3, 2.0Hz, 4-H), 5.08 (1H, broad s, 2-H) .
[0082]
Example 2
(A) (3R, 4S, 5R, 6S) -N- (tert-butoxycarbonyl) -3-hydroxymethyl-4,5-O-isopropylidene-6-trichloroacetamide-4,5-piperidinedio Of a compound [compound of formula (IVa)]
The compound of formula (IIb) obtained in Example 1 (d) (124 mg, 0.41 mmol) was dissolved in dichlorometa (2.5 ml) and cooled to 0 ° C. To this was added pyridine (0.13 ml, 1.65 mmol) and trichloroacetyl chloride (0.10 ml, 0.91 mmol), and the mixture was stirred at 0 ° C. for 10 minutes to effect trichloroacetylation of the amino group at position 6 of compound (IIb). went. The reaction solution was diluted with chloroform and washed twice with a saturated aqueous sodium bicarbonate solution and twice with water. The organic phase was dried over anhydrous magnesium sulfate and filtered with a cotton plug. After the solvent of the filtrate was distilled off under reduced pressure, the residue was azeotroped three times with toluene to obtain a pale yellow solid.
[0083]
This solid was dissolved in a saturated potassium carbonate methanol solution (3 ml) and stirred at room temperature for 10 minutes, and then the solvent was distilled off under reduced pressure. The residue was dissolved in chloroform and washed twice with a saturated aqueous ammonium chloride solution. The organic phase was dried over anhydrous magnesium sulfate and filtered with a cotton plug. The solvent of the filtrate was distilled off under reduced pressure. The residue was purified by silica gel column chromatography (developing solvent: toluene-acetone, 5: 1) to obtain 162 mg (88%) of the title compound as a colorless foamy solid.
[0084]
Specific rotation: [α]_D ^{twenty five} + 16.8 ° (c3.82, methanol)
¹H-NMR spectrum (CD_ThreeOD), δ ppm: 1.36 (3H, s, isopropylidene), 1.48 (12H, s, isopropylidene, COOC (CH_Three)_Three), 1.95 (1H, t, J = 5.6 Hz, OH), 2.01 (1H, broad m, 5-H), 3.16 (1H, t, J = 12.2 Hz, 6-H)_ax), 3.59 (1H, dd, J = 12.2 and 4.4 Hz, 6-H_eq), 3.79 (2H, t, J = 5.6Hz, -CH ₂OH), 4.58 (1H, dd, J = 7.3 and 2.4 Hz, 3-H), 4.62 (1H, dd, J = 7.3 and 2.0 Hz, 4-H), 5.73 (1H, broad s, 6-H) , 6.81 (1H, -NHCO-).
[0085]
(B) (3S, 4S, 5R, 6S) -N- (tertiary butoxycarbonyl) -4,5-dihydroxy-4,5-O-isopropylidene-6-trichloroacetamide-3-piperidinecarboxylic acid [ Of compound of formula (Va)]
The compound of formula (IVa) obtained in the preceding item (a) (152 mg, 0.34 mmol) was dissolved in a mixed solvent of carbon tetrachloride (2 ml) -acetonitrile (2 ml), and this was dissolved in sodium metaperiodate (218 mg, 1.02 mmol). Was dissolved in water (3 ml) and added. To this two-phase solution was added titanium dioxide (IV) (8.0 mg), and the mixture was vigorously stirred at room temperature for 30 minutes. A reaction in which the hydroxymethyl group at the 3-position of the compound of formula (IVa) was converted to a carboxyl group by oxidation occurred. The organic phase and the aqueous phase were separated from the reaction solution, and the aqueous phase was extracted three times with ethyl acetate. The organic phases were combined, 2-propanol (0.5 ml) was added, and the mixture was stirred at room temperature for 1 hour. The precipitated solid was removed by filtration under reduced pressure, and the filtrate was washed once with water. The organic phase was dried over anhydrous magnesium sulfate and filtered with a cotton plug. The solvent of the filtrate was distilled off under reduced pressure. The residue was purified by silica gel column chromatography (developing solvent: chloroform-methanol-concentrated aqueous ammonia, 50: 10: 1) to obtain 119 mg (76%) of the title compound as a colorless amorphous solid.
[0086]
Specific rotation: [α]_D ^{twenty four} + 3.6 ° (c0.87, methanol)
¹H-NMR spectrum (CD_ThreeOD), δ ppm: 1.35 and 1.41 (3H, s, isopropylidene), 1.48 (9H, s, COOC (CH_{3) 3}), 3.06 (1H, ddd, J = 12.7, 4.9 and 2.9Hz, 3-H), 3.44 (1H, t, J = 12.5Hz, 2-H_ax), 3.66 (1H, dd, J = 12.2 and 4.9Hz, 2-H_eq), 4.53 (1H, dd, J = 7.3 and 2.0 Hz, 5-H), 4.84 (1H, dd, J = 7.3 and 2.0 Hz, 4-H), 5.76 (1H, d, J = 2.0 Hz, 6) -H).
[0087]
(C) Preparation of (3S, 4S, 5R, 6R) -6- (trichloroacetamide) -4,5-dihydroxypiperidine-3-carboxylic acid [compound of formula (Ia)]
The compound of the formula (Va) obtained in the preceding item (b) (32 mg, 70 μmol) was dissolved in 4M hydrochloric acid-dioxane solution (1 ml) and stirred overnight at room temperature. The elimination reaction of the protecting group occurred. Diethyl ether was added to the reaction solution in which a white solid was precipitated and suspended, and the mixture was stirred well. Then, the precipitated white solid was precipitated by centrifugation, and the supernatant was removed. Thereafter, the precipitate was suspended in diethyl ether, centrifuged, and the operation of removing the supernatant was repeated twice. The resulting precipitate was air dried and then dried under reduced pressure to give 26 mg (105%) of the title compound of formula (Ia) according to the first invention as a colorless solid.
[0088]
Specific rotation: [α]_D ²⁶ + 31.0 ° (c0.71, water)
¹H-NMR spectrum (D₂O), δ ppm: 3.15 (1H, ddd, J = 9.8, 8.3and 2.1 Hz, 3-H), 3.56 (1H, d, J = 8.3 Hz, 2-Ha), 3.56 (1H, d, J = 9.8 Hz, 2-Hb), 4.22 (1H, dd, J = 10.3 and 2.4 Hz, 5-H), 4.62 (1H, t, J = 2.4 Hz, 4-H), 5.16 (1H, d, J = 10.3) Hz, 6-H).
[0089]
Example 3
(A) (3R, 4S, 5R, 6S) -N- (tertiarybutoxycarbonyl) -6- [N, N'-di (tertiarybutoxycarbonyl)] guanidino-3-hydroxymethyl-4,5-O -Isopropylidene-4,5-piperidinediol [compound of formula (IVb)]
The compound of formula (IIb) obtained in Example 1 (d) (109 mg, 0.36 mmol) was dissolved in DMF (2 ml) and cooled to 0 ° C. To this was added triethylamine (0.20 ml, 1.44 mmol), N, N′-di- (tertiarybutoxycarbonyl) thiourea (199 mg, 0.72 mmol), mercuric chloride (II) (196 mg, 0.72 mmol). The reaction was carried out with stirring at 2 ° C. for 2 hours. Ethyl acetate was added to the reaction solution in which an ocher solid precipitated, and the mixture was centrifuged to precipitate the solid, and then the supernatant was transferred separately. Thereafter, the operation of suspending the precipitate in ethyl acetate, centrifuging, and transferring the supernatant separately was repeated twice. The supernatants were combined and washed twice with water and once with a small amount of saturated aqueous sodium chloride solution. The organic phase was dried over anhydrous magnesium sulfate and filtered with a cotton plug. The solvent of the filtrate was distilled off under reduced pressure. The residue was azeotroped three times with toluene and then purified by silica gel column chromatography (developing solvent: chloroform-methanol, 100: 1) to obtain 184 mg (94%) of the title compound as a colorless amorphous solid.
[0090]
Specific rotation: [α]_D ^{twenty four} + 45.6 ° (c0.83, chloroform)
¹H-NMR spectrum (CDCl_Three), Δppm: 1.34 and 1.45 (3H, s, isopropylidene), 1.45, 1.47 and 1.49 (9H, s, COOC (CH_Three)_Three), 2.08 (1H, m, 5-H), 3.21 (1H, t, J = 12.2 Hz, 6-Hax), 3.50 (1H, dd, J = 12.2 and 4.4 Hz, 6-H_eq), 3.77 (1H, AB_q, J = 11.2and 6.4Hz, -CH ₂OH), 3.81 (1H, AB_q, J = 11.2 and 4.9Hz, -CH ₂OH), 4.56 (2H, s, 3-H, 4-H), 6.19 (1H, d, J = 6.4 Hz, 2-H), 8.35 (1H, d, J = 6.4 Hz, -N)H-), 11.37 (1H, s, -NH-).
[0091]
(B) (3S, 4S, 5R, 6S) -N- (tertiary butoxycarbonyl) -6- [N, N'-di (tertiary butoxycarbonyl)] guanidino-4,5-dihydroxy-4,5 Of -O-isopropylidene-3-piperidinecarboxylic acid [compound of formula (Vb)]
The compound of formula (IVb) obtained in the preceding item (a) (155 mg, 0.29 mmol) was dissolved in a mixed solvent of carbon tetrachloride (2 ml-acetonitrile (2 ml), and sodium metaperiodate (183 mg, 0.86 mmol) was added thereto. Ruthenium (IV) dioxide (8.0 mg) was added to this two-phase solution, and the mixture was vigorously stirred at room temperature for 30 minutes to carry out an oxidation reaction. The aqueous phase was extracted three times with ethyl acetate, the organic phases were combined, 2-propanol (0.5 ml) was added, and the mixture was stirred at room temperature for 2 hours. The filtrate was washed once with water, the organic phase was dried over anhydrous magnesium sulfate and filtered with a cotton plug, the solvent of the filtrate was distilled off under reduced pressure, and the residue was subjected to silica gel column chromatography (developing solvent: chloroform-methanol). -Purified with concentrated aqueous ammonia, 70: 10: 1), no The title compound 109 mg (69%) was obtained as an amorphous solid.
[0092]
Specific rotation: [α]_D ^{twenty five} + 41.3 ° (c0.67, methanol)
¹H-NMR spectrum (CD_ThreeOD), δppm: 1.35 and 1.41 (3H, s, isopropylidene), 1.46, 1.50 (27H, broad s, COOC (CH_{3) 3}× 3), 2.84 (1H, ddd, J = 12.7, 4.6 and 2.4Hz, 3-H), 3.46 (1H, broadt, J = 12.7Hz, 2-H_ax), 3.68 (1H, dd, J = 12.7 and 4.6 Hz, 2-H_eq), 4.61 (1H, dd, J = 7.3 and 2.0 Hz, 5-H), 4.86 (1H, dd, J = 7.3 and 2.4 Hz, 4-H), 6.04 (1H, d, J = 2.0 Hz, 6) -H).
[0093]
(C) Preparation of (3S, 4S, 5R, 6R) -6-guanidino-4,5-dihydroxypiperidine-3-carboxylic acid [compound of formula (Ib)]
The compound of the formula (Vb) obtained in the preceding item (b) (39 mg, 70 μmol) was dissolved in dichloromethane (0.6 ml), trifluoroacetic acid (0.6 ml) was added to the solution, and the mixture was stirred at room temperature for 8 hours. A reaction to remove the Boc group as a protecting group occurred. The solvent was distilled off from the reaction solution under reduced pressure, and the residue was azeotroped three times with toluene and once with water, followed by adsorption resin Diaion HP20 (H₂O). The purified product was azeotroped with methanol three times to give a colorless amorphous solid, and then dissolved in a minimal amount of methanol. A 4M hydrochloric acid-dioxane solution (1 ml) was added to the solution, diethyl ether was further added, and the mixture was stirred well to react. A reaction occurred in which the isopropylidene group was eliminated. A colorless solid precipitated in the reaction solution. The precipitated solid was precipitated by centrifugation, and the supernatant was removed. Thereafter, the precipitate was suspended in diethyl ether, centrifuged, and the operation of removing the supernatant was repeated twice. The resulting precipitate was air dried and then dried under reduced pressure to give 19 mg (94%) of the title compound of formula (Ib) according to the first invention as a colorless solid.
[0094]
Specific rotation: [α]_D ²⁶ + 26.6 ° (c0.39, water)
¹H-NMR spectrum (D₂O), δ ppm: 3.10 (1H, dt, J = 8.8 and 2.0 Hz, 3-H), 3.54 (2H, d, J = 8.8 Hz, 2-H), 4.01 (1H, dd, J = 9.8 and 2.5) Hz, 5-H), 4.60 (1H, t, J = 2.2 Hz, 4-H), 5.04 (1H, d, J = 9.8 Hz, 6-H).
[0095]
Example 4
(A) (3R, 4S, 5R, 6S) -N- (tertiarybutoxycarbonyl) -6-trifluoroacetamido-3-hydroxymethyl-4,5-O-isopropylidene-4,5-piperidinediol Production of [compound of formula (IVc)]
The compound of formula (IIb) obtained in Example 1 (d) (0.407 g, 1.35 mmol) was dissolved in DMF (8 ml), and diisopropylethylamine (2.35 ml, 13.5 mmol) and ethyl trifluoroacetate (1.61 ml, 13.5 mmol) was added and the mixture was stirred at 60 ° C. for 36 hours. A reaction occurred in which the amino group at the 6-position of the compound of formula (IIb) was trifluoroacetylated. The reaction solution was cooled to room temperature, diluted with chloroform, and washed three times with water. At this time, the aqueous phase was back-extracted with chloroform every time. The organic phases were combined, dried over anhydrous magnesium sulfate and filtered. The filtrate was concentrated under reduced pressure, the residue was azeotroped three times with toluene, and then purified by silica gel column chromatography using toluene-acetone (5: 1) as a developing solvent, and 0.434 g (81 %)Obtained.
[0096]
Specific rotation: [α]_D ^{twenty five} + 26 ° (c0.94, chloroform)
¹H-NMR spectrum (400 MHz, CDCl_Three), Δppm: 1.35, 1.47 (each 3H, s, isopropylidene), 1.46 (9H, s, COOC (CH_{3) 3}), 2.02 (1H, m, 5-H), 2.15 (1H, t, J = 5.6 Hz, OH), 3.14 (1H, t, J = 12.5 Hz, 6-H)_ax), 3.57 (1H, dd, J = 12.5, 4.2Hz, 6-H_eq), 3.73-3.82 (2H, m, -CH ₂OH), 4.56 (2H, broad s, 3-H, 4-H), 5.78 (1H, broad s, 2-H), 6.72 (1H, broad s, NH).
[0097]
(B) (3S, 4S, 5R, 6S) -N- (tert-butoxycarbonyl) -6-trifluoroacetamide-4,5-dihydroxy-4,5-O-isopropylidenepiperidine-3-carboxylic acid [formula Compound of (Vc)]
The compound of formula (IVc) obtained in the preceding item (a) (0.398 g, 1 mmol) was dissolved in a mixed solvent of carbon tetrachloride (6 ml) and acetonitrile (6 ml), and this was mixed with sodium metaperiodate (0.642 g, 3 mmol). Was dissolved in water (9 ml). Ruthenium (IV) oxide (4 mg) was added to this two-phase solution, and the mixture was vigorously stirred at room temperature for 2 hours. Thereafter, the organic phase and the aqueous phase were separated from the reaction solution, and the aqueous phase was extracted three times with ethyl acetate. The organic phase and the ethyl acetate extract were combined, and 2-propanol (0.5 ml) was added thereto and stirred at room temperature for 1 hour. The precipitated solid was removed by filtration, and the filtrate was washed once with water. did. The organic phase was dried over anhydrous magnesium sulfate and filtered. After the filtrate was concentrated under reduced pressure, the residue was purified by silica gel column chromatography using chloroform-methanol-concentrated aqueous ammonia (3: 1: 0.1) as a developing solvent, and 0.306 g (74 of 74) of the title compound was obtained as a colorless amorphous solid. %).
[0098]
Specific rotation: [α]_D ^{twenty three} + 29 ° (c0.90, methanol)
Melting point: 200 ° C (decomposition)
¹H-NMR spectrum (400 MHz, CD_ThreeOD), δppm: 1.34, 1.40 (each 3H, s, isopropylidene), 1.47 (9H, s, COOC (CH_{3) 3}), 2.96 (1H, ddd, J = 11.7, 4.2, 2.4Hz, 3-H), 3.41 (1H, broad t, J = 11.7Hz, 2-H_ax), 3.64 (1H, dd, J = 11.7, 4.2Hz, 2-H_eq), 4.50 (1H, dd, J = 7.8, 2.0 Hz, 5-H), 4.83 (1H, dd, J = 7.8, 2.4 Hz, 4-H), 5.78 (1H, d, J = 2.0 Hz, 6 -H).
[0099]
(C) Preparation of (3S, 4S, 5R, 6R) -6- (trifluoroacetamide) -4,5-dihydroxypiperidine-3-carboxylic acid [compound of formula (Ib)]
When 153 mg of the compound of the formula (Vc) obtained in the previous item (b) is dissolved in 4.5 ml of dioxane containing 4N hydrogen chloride and stirred overnight at room temperature, a reaction occurs in which the protecting group is eliminated from the compound (Vc). And solid precipitated from the reaction liquid. The precipitated solid was washed with dioxane and dried to obtain 110 mg (96%) of the title compound of the formula (Ic) targeted in the sixth invention as a colorless solid.
[0100]
Specific light intensity: [α]_D ³¹ + 27 ° (c0.22, water)
Melting point: 130 ° C (decomposition)
¹H-NMR spectrum (270 MHz, D₂O), δppm: 2.92 (1H, ddd, J = 10.8, 2.3 Hz, 3-H), 3.32-3.39 (2H, m, 2-H₂), 3.96 (1H, dd, J = 10.6, 2.6Hz, 5-H), 4.42 (1H, t, J = 2.3Hz, 4-H), 5.01 (1H, d, J = 10.6Hz, 6-H) ).

Claims (8)

Formula (I)

[Wherein R is a trichloroacetamide group or a guanidino group] (3S, 4S, 5R, 6R) -6- (trichloroacetamide) -4,5-dihydroxypiperidine-3-carboxylic acid Alternatively (3S, 4S, 5R, 6R) -6-guanidino-4,5-dihydroxypiperidine-3-carboxylic acid or a salt thereof. The following formula (Ia) wherein R in the general formula (I) is a trichloroacetamide group in claim 1

The compound of Claim 1 which is (3S, 4S, 5R, 6R) -6- (trichloroacetamide) -4,5-dihydroxypiperidine-3-carboxylic acid or a salt thereof represented by The following formula (Ib) wherein R in the general formula (I) is a guanidino group in claim 1

In a shown by (3S, 4S, 5R, 6R ) -6- guanidino-4,5-dihydroxy-3-carboxylic acid or a salt thereof A compound according to claim 1. Formula (II)

[Wherein, R ¹ is an alkoxycarbonyl group, aryloxycarbonyl group or aralkyloxycarbonyl group as an imino group protecting group, and X ¹ and X ² are each a trialkylsilyl group as a monovalent hydroxyl group protecting group. Or both X ¹ and X ² jointly

(Wherein R ^a and R ^b may be the same or different from each other, and each represents a hydrogen atom, an alkyl group or an aryl group ), represents one divalent hydroxyl group protecting group, or a benzylidene group or a cycloalkylidene group Or represents a tetrahydropyranylidene group] represented by (3R, 4S, 5R, 6S) -N-protected-6-amino-3-hydroxymethyl-4,5-dihydroxy-4,5-O-diprotected- Piperidine or a salt thereof. Formula (III-1)

Wherein R ¹ is an imino group-protecting group having the same meaning as R ¹ in the general formula (II) according to claim 4 , and the 4- and 5-position hydroxyl groups of N-protected-siastatin B Protected with a monovalent or divalent hydroxyl protecting group and represented by the following general formula (III-2)

[Wherein, R ¹ is an alkoxycarbonyl group, aryloxycarbonyl group or aralkyloxycarbonyl group as an imino group protecting group, and X ¹ and X ² are each a trialkylsilyl group as a monovalent hydroxyl group protecting group. Or both X ¹ and X ² jointly

(Wherein R ^a and R ^b may be the same or different from each other, and each represents a hydrogen atom, an alkyl group or an aryl group), represents one divalent hydroxyl group protecting group, or a benzylidene group or a cycloalkylidene group N-protected-4,5-di-O-protected-siastatin B represented by formula (III-2) is esterified, and the carboxyl group at the 3-position of the compound of formula (III-2) is esterified The following general formula (III-3)

[Wherein R ¹ , X ¹ , X ² have the same meaning as described above, and R ² is an ester-forming group] is produced, followed by the compound of formula (III-3) The group -CO ₂ R ² at the 3-position of the compound is converted to a hydroxymethyl group by reduction to give the following general formula (III-4)

[Wherein R ¹ , X ¹ and X ² have the same meaning as described above] (3R, 4S, 5R, 6S) -6-acetamido-N-protected-3-hydroxymethyl-4,5- O-diprotected-4,5-piperidinediol is produced, and a free amino group is formed by deacetylation from the 6-position acetamide group of the compound of general formula (III-4), General formula (II)

[Wherein R ¹ , X ¹ and X ² have the same meaning as described above] (3R, 4S, 5R, 6S) -N-protected-6-amino-3-hydroxymethyl-4,5- Process for the preparation of dihydroxy-4,5-O-diprotected-piperidine. The following general formula ( II )

[Wherein R ¹ , X ¹ and X ² have the same meaning as described in claim 5] (3R, 4S, 5R, 6S) -N-protected-6-amino-3-hydroxymethyl -4,5-dihydroxy-4,5-O-diprotected-triperoxyacetylation of the 6-position amino group of piperidine to give the following general formula (IV-1)

[Wherein R ¹ , X ¹ and X ² have the same meaning as described above, R ³ is a trichloroacetamide group, and the stereochemistry at the 6-position is such that R ¹ is Cahn-Ingold-Prelog rule from group R ^3. In the case of an imino group-protecting group having a low priority, the (R) -configuration is used, but when R ¹ is an imino group-protecting group having a higher priority than the group R ³ , the (S) -configuration is used. (3R, 4S, 5R, 6R or 6S) -N-protected-6- (trichloroacetamide) -3-hydroxymethyl-4,5-dihydroxy-4,5-O-diprotected-piperidine Next, the 3-position hydroxymethyl group of the compound of the formula (IV-1) is converted into a carboxyl group by oxidation to give the following general formula (V-1)

[Wherein R ¹ , R ³ , X ¹ , X ² and the 6-position stereochemistry have the same meaning as described above] (3R, 4S, 5R, 6R or 6S) -N-protected-6 -(Trichloroacetamide) -3-hydroxymethyl-4,5-dihydroxy-4,5-O-diprotected-piperidine-3-carboxylic acid is produced, and then from this compound of formula (V-1) Imino group protecting group (R ¹ ) and hydroxyl group protecting group (X ¹ , X ² ) are eliminated, and the following formula (Ia)

(3S, 4S, 5R, 6R) -6- (trichloroacetamide) -4,5-dihydroxypiperidine-3-carboxylic acid or a salt thereof represented by the formula: The following general formula (II)

[Wherein R ¹ , X ¹ , X ² have the same meaning as described in claim 5] (3R, 4S, 5R, 6S) -N-protected-6-amino-3-hydroxymethyl -4,5-dihydroxy-4,5-O-diprotected-the amino group at the 6-position of piperidine is subjected to an amidination reaction to give the following general formula (IV-2)

[Wherein R ¹ , X ¹ and X ² have the same meaning as described above, R ⁴ is an N, N′-protected or unprotected guanidino group, and the stereochemistry at the 6-position is the group R ¹ When the imino group protecting group has a lower priority in the Cahn-Ingold-Prelog rule than R ^4, it is the (R) -configuration, but when R ¹ is an imino group protecting group having a higher priority than the group R ⁴ (3R, 4S, 5R, 6R or 6S) -N-protected-6-protected- or unprotected-guanidino-3-hydroxymethyl-4,5-dihydroxy- 4,5-O-diprotected-piperidine is formed, and then the 3-position hydroxymethyl group of the compound of formula (IV-2) is converted to a carboxyl group by oxidation to give the following general formula (V-2)

[Wherein R ¹ , R ⁴ , X ¹ , X ² and the stereochemistry at the 6-position have the same meaning as described above] (3S, 4S, 5R, 6R or 6S) -N-protected-6 -Guanidino-3-hydroxymethyl-4,5-dihydroxy-4,5-O-diprotected-piperidine-3-carboxylic acid is formed, and the imino group protecting group ( R ¹ ) and a hydroxyl group protecting group (X ¹ , X ² ), and a protecting group on the guanidyl group are eliminated, the following formula (Ib)

(3S, 4S, 5R, 6R) -6-guanidino-4,5-dihydroxypiperidine-3-carboxylic acid or a salt thereof represented by the formula: The following general formula (II)

[Wherein R ¹ , X ¹ and X ² have the same meaning as described in claim 5] (3R, 4S, 5R, 6S) -N-protected-6-amino-3-hydroxymethyl -4,5-Dihydroxy-4,5-O-diprotected-The 6-position amino group of piperidine is trifluoroacetylated and the following general formula (IV-3)

[Wherein R ¹ , X ¹ , X ² have the same meanings as described above, R ⁵ is a trifluoroacetamide group, and the stereochemistry at the 6-position is Cahn-Ingold-Prelog rule from the R ¹ group R ⁵ In the case of an imino group-protecting group having a low priority, the (R) -configuration is used, but when R ¹ is an imino group-protecting group having a higher priority than the group R ⁵ , the (S) -configuration is used. (3R, 4S, 5R, 6R or 6S) -N-protected-6- (trifluoroacetamide) -3-hydroxymethyl-4,5-dihydroxy-4,5-O-diprotected-piperidine Next, the 3-position hydroxymethyl group of the compound of the formula (IV-3) is converted into a carboxyl group by oxidation to give the following general formula (V-3)

[Wherein R ¹ , R ⁵ , X ¹ , X ² and the stereochemistry at the 6-position have the same meaning as described above] (3S, 4S, 5R, 6R or 6S) -N-protected-6- (Trifluoroacetamide) -3-hydroxymethyl-4,5-dihydroxy-4,5-O-diprotected-piperidine-3-carboxylic acid is produced, and then the compound of formula (V-3) is imino A group protecting group (R ¹ ) and a hydroxyl group protecting group (X ¹ , X ² ) are eliminated, and the following formula (Ic)

(3S, 4S, 5R, 6R) -6- (trifluoroacetamide) -4,5-dihydroxypiperidine-3-carboxylic acid or a salt thereof represented by the formula: