JP3759207B2 - Antibacterial agent and pharmaceutical composition - Google Patents

Description

【０００３】
〔式中、Ｒ¹ は水素又は炭素数１〜６のアルキルを表し、Ｒ² およびＲ³ はそれぞれ独立して、水素、置換若しくは非置換の炭素数１〜６のアルキル、又は置換若しくは非置換の炭素数１〜６のアシルを表し、Ｒ⁴ は置換又は非置換の炭素数１〜１２のアルキルを表し、Ｘ¹ 、Ｘ² 、Ｘ³ 、Ｘ⁴ およびＸ⁵ はそれぞれ独立して、水素又はハロゲンを表す。〕で表される化合物及びその製薬上許容される塩に関する。
【０００４】
式（Ｉ）で表される化合物は、文献未記載の新規化合物であり、従来公知の抗菌剤に比較して広範な抗菌スペクトルを有しており、抗菌剤として有用である。また、グルタミン酸輸送体（以下「グルタミン酸トランスポーター」という）の活性を阻害する作用を有しており、従って、上記式（Ｉ）で表される化合物は、グルタミン酸取り込み阻害剤としても有用である。
【０００５】
【従来の技術】
放線菌の一種が産生する物質として、２位ベンジル置換ピロールを基本骨格として有する各種誘導体及びその類縁化合物が取得され、これらが各種の抗菌活性を有することが知られていた。例えば、ピロロマイシンＢ（Ｐｙｒｒｏｌｏｍｙｃｉｎ Ｂ）、ピロロマイシンＣ（Ｐｙｒｒｏｌｏｍｙｃｉｎ Ｃ）、ピロロマイシンＤ（Ｐｙｒｒｏｌｏｍｙｃｉｎ Ｄ）、ピロロマイシンＥ（Ｐｙｒｒｏｌｏｍｙｃｉｎ Ｅ）等は、日本特許第８２５６４９２号明細書等で公知であり、ピオルテオリン（Ｐｙｏｌｕｔｅｏｒｉｎ）は、ジャーナル・オブ・アメリカン・ケミカル・ソサイエティ（Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．）８０巻、４７４９頁（１９５８）等で公知になっている。
【０００６】
しかしながら、これら公知の抗菌剤よりも更に広範な抗菌スペクトルを有する優れた抗菌剤の開発が強く求められていた。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、上記状況に鑑み、広範な抗菌スペクトルを有する抗菌剤として使用することができ、かつ、グルタミン酸取り込み阻害剤としても有用であり、それゆえにシナプス伝達の長期増強活性をも有している化合物を提供することを目的とするものである。
【０００８】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、鋭意研究を重ねた結果、放線菌の一種であるストレプトマイセス エスピー．ＰＡ−４８４２４が産生する物質が上記目的を達成するために有用であることをつきとめ、本発明を完成した。
本発明の要旨は、上記式（Ｉ）で表される新規化合物そのものにある。また、本発明の要旨は、この新規化合物を有効成分とする医薬組成物さらに詳しくは抗菌剤及びグルタミン酸取り込み阻害剤そのもの、この新規化合物の生産能を有するストレプトマイセス エスピー．ＰＡ−４８４２４、及び、この新規化合物の製造方法にもある。
【０００９】
本発明に係る上記医薬組成物は、優れた抗菌剤としてヒトを含む動物に適用することができるものである。本発明に係る抗菌剤は、グラム陰性菌、グラム陽性菌を含む広範囲の抗菌スペクトルを有しており、特にグラム陽性菌等に有効に作用することができる。
【００１０】
また、上記医薬組成物は、グルタミン酸取り込み阻害剤として活用することができる。グルタミン酸取り込み阻害活性は、神経細胞膜に存在するグルタミン酸トランスポーターに対する阻害に基づくものであり、シナプシスにおける神経伝達物質であるグルタミン酸の取り込みを抑制する。これによりグルタミン酸の不活性化を抑制し、グルタミン酸受容体の賦活化を持続するものである。このため、学習・記憶の増強作用等を発揮することが期待できる。
後に詳述するように、本発明の化合物は、毒性が極めて弱いので、これら医薬として適用するのに好適である。
【００１１】
以下に、本発明に係る式（Ｉ）で表される化合物について詳述する。
上記式中、Ｒ¹ は水素又は炭素数１〜６のアルキルを表し、Ｒ² およびＲ³ はそれぞれ独立して、水素、置換若しくは非置換の炭素数１〜６のアルキル、又は置換若しくは非置換の炭素数１〜６のアシルを表し、Ｒ⁴ は置換又は非置換の炭素数１〜１２のアルキルを表し、Ｘ¹ 、Ｘ² 、Ｘ³ 、Ｘ⁴ およびＸ⁵ はそれぞれ独立して、水素又はハロゲンを表す。
【００１２】
上記「置換若しくは非置換の炭素数１〜６のアルキル」とは、炭素数１〜６の直鎖状又は分枝鎖状のアルキルであって、置換又は非置換のものを意味し、例えば、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、イソブチル、ｔ−ブチル、ペンチル、ネオペンチル、イソペンチル、ヘキシル、及び、これらの置換体等を挙げることができ、上記置換体の置換基としては、例えば、メルカプト、スルフィノ、スルフォ、アミノ、イミノ、ヒドロキシ、アルコキシ、ハロゲン等を挙げることができる。上記「置換若しくは非置換の炭素数１〜６のアルキル」のうち、メチルが好ましい。
【００１３】
上記「置換若しくは非置換の炭素数１〜６のアシル」としては、例えば、ホルミル、アセチル、プロピオニル、マロニル、アクリロイル、イソブチリル、ブチリル、バレリル、ピバロイル、ヘキサノイル、アジポイル、グルタリル、メトキサリル、及び、これらの置換体等を挙げることができ、上記置換体の置換基としては、例えば、メルカプト、スルフィノ、スルフォ、アミノ、イミノ、ヒドロキシ、ハロゲン等を挙げることができる。上記「置換若しくは非置換の炭素数１〜６のアシル」のうち、アセチルが好ましい。
上記「置換又は非置換の炭素数１〜１２のアルキル」とは、炭素数１〜１２の直鎖状又は分枝鎖状のアルキルであって、置換又は非置換のものを意味し、例えば、上に例示した「置換若しくは非置換の炭素数１〜６のアルキル」に加えて、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシル、ウンデシル、ドデシル、及び、これらの置換体等を挙げることができ、上記置換体の置換基としては、例えば、メルカプト、スルフィノ、スルフォ、アミノ、イミノ、ヒドロキシ、アルコキシ、ハロゲン等を挙げることができる。上記「置換又は非置換の炭素数１〜１２のアルキル」のうち、ヘキシル、４−メチルペンチル、４−メチルヘキシル、５−メチルヘキシルが好ましい。
上記ハロゲンとしては、ふっ素、塩素、臭素、よう素等を挙げることができる。好ましくは、塩素又は臭素である。
【００１４】
上記式（Ｉ）で表される化合物の製薬上許容される塩としては、例えば、塩酸、硫酸、硝酸、リン酸、フッ化水素酸、臭化水素酸等の鉱酸の塩；ギ酸、酢酸、酒石酸、乳酸、クエン酸、フマール酸、マレイン酸、コハク酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、トルエンスルホン酸、ナフタレンスルホン酸、カンファースルホン酸等の有機酸の塩；ナトリウム、カリウム、カルシウム等のアルカリ金属又はアルカリ土類金属の塩等を挙げることができる。
【００１５】
本発明に係る式（Ｉ）で表される化合物のうち、下記式（Ｉ−ａ）〜（Ｉ−ｅ）で表される化合物、及び、それらのアルキル化物、アシル化物、ハロゲン化物、水素置換体等の誘導体が、抗菌活性、グルタミン酸取り込み阻害活性等の生物活性に優れているので好ましい。
【００１６】
【化３】

【００１７】
上記Ｉ−ａ、Ｉ−ｂ、Ｉ−ｃ、Ｉ−ｄ、Ｉ−ｅ等の化合物は、放線菌の一種であるストレプトマイセス エスピー．ＰＡ−４８４２４を用いて産生させることができる。
上記ストレプトマイセス エスピー．ＰＡ−４８４２４は、文献未記載の新規な放線菌であり、本発明者らによってはじめて記載されるものである。本菌株は、工業技術院生命工学工業技術研究所に、受託番号ＦＥＲＭ Ｐ−１４９４５号として寄託されている（受託日：平成７年５月２６日）。以下、上記ストレプトマイセス エスピー．ＰＡ−４８４２４の菌学的性質を詳述する。
【００１８】
１．形態学的性質
イースト・麦芽寒天培地、オートミール寒天培地、スターチ・無機塩寒天培地及びグリセリン・アスパラギン寒天培地のそれぞれの培地上で培養した場合、これらの全ての培地で良好に生育し、豊富に気菌糸を形成する。気菌糸の分枝様式は、単純分枝であって、車軸状分枝は観察されない。胞子は気菌糸上に着生し、鎖状に連なって直状又は波状を呈する。１胞子鎖あたりの胞子数は１０〜５０個である。電子顕微鏡下での胞子の表面構造は平滑である。菌核、胞子のう、基生菌糸の分断は認められない。
２．培養的性質
上述の各培地上における培養的諸性状を下記の表１に示す。
【００１９】
【表１】

【００２０】
３．生理学的性質
メラニン様色素は産生しない。
生育温度は１４〜３８℃であり、至適生育温度は２２〜２８℃である。
至適ｐＨは、ｐＨ５〜９である。
炭素源としてＤ−グルコース、Ｄ−フルクトース、Ｌ−ラムノース、Ｄ−マニトールを利用するが、Ｌ−アラビノース、キシロース、スクロース、イノシトール、ラフィノースは利用できない。
４．化学分類学的性質
菌体中のジアミノピメリン酸はＬＬ型である。
イソプレノイド・キノンの型はＭＫ−９（Ｈ₆ ，Ｈ₈ ）である。
【００２１】
上記諸性状から、本菌株はストレプトマイセス属に属する株であると判断することができる。ストレプトマイセス属の既知種の諸性状と比較したところ、炭素源の利用能において一致する種は見当たらないことから、本菌株を文献未記載の新規な放線菌であると判断した。
【００２２】
本発明に係る式（Ｉ）で表される化合物は、このものの生産能を有する微生物を培地に培養し、得られた培養物から式（Ｉ）で表される化合物の粗抽出物を分離した後、精製することによって製造することができる。また、本発明に係る式（Ｉ）で表される化合物が、このようにして製造された化合物の誘導体に相当する場合には、必要に応じて、上記精製の後、化学修飾することにより製造することができる。
【００２３】
上記微生物としては式（Ｉ）で表される化合物の生産能を有するものであれば特に限定されず、例えば、上記ストレプトマイセス エスピー．ＰＡ−４８４２４株、その変異株等を挙げることができる。
【００２４】
上記培養は、本発明化合物の生産能を有する微生物を公知の常法に従って行なうことができる。使用する培地としては、炭素源、窒素源、無機物及びその他栄養素を適当量含有するものであれば合成培地または天然培地のいずれでも好適に用いることができる。例えば、炭素源としてグルコース、マルトース、フルクトース、デンプン等の糖類、グリセロール、マンニトール、エタノール等のアルコール類、グリシン、アラニン、アスパラギン等のアミノ酸類、グルコン酸、ピルビン酸、酢酸等の脂肪酸類等一般的な炭素源より微生物の資化性を考慮して１種または２種以上を適宜選択して用いればよい。窒素源としては、肉エキス、ペプトン、酵母エキス、各種アミノ酸等の有機窒素化合物またはアンモニウム塩、硝酸塩、無機窒素化合物等より微生物の資化性を考慮して１種または２種以上を適宜選択して用いればよい。さらに、リン酸マグネシウム、炭酸カルシウム、亜鉛、銅、鉄等の金属塩類や、消泡剤、例えばポリプロピレングリコール等は必要に応じて添加することができる。
【００２５】
培養温度は微生物が発育し、本発明化合物を生産する範囲で適宜変更できるが、特に好ましいのは２２〜２８℃である。ｐＨは６〜８付近が好ましく、培養時間は普通７２〜９６時間程度であって、本発明化合物が最高力価に達する時間を見計らって適当な時間に培養を終了する。培養方法は回分培養、連続培養、振盪培養、通気攪拌培養等の通常用いられる方法であれば何でも好適に用いることができるが、始めに振盪培養し、その後、ジャーファーメンター等により通気攪拌培養する方法が好ましい。
【００２６】
上記分離は、微生物工業の分野で通常用いられている方法等により行うことができ、例えば、上述の方法に従って培養した培養液から遠心分離法等により得られた培養物をアセトン、酢酸エチル等で抽出し、硫酸ナトリウムを加えて濾過して減圧濃縮する手法；培養液にアセトン等の有機溶媒を加え、吸引濾過した後、更に、酢酸エチル等の有機溶媒で抽出する手法等を好適に採用することができる。
【００２７】
上記精製における処理方法は特に限定されず、例えば、上記分離工程で得られた粗抽出物をｎ−ヘキサン等で抽出した後、シリカゲル等の担体を用いるクロマトグラフィーおよび分取高速液体クロマトグラフィー等の組み合わせにより精製することができる。得られた精製物質をさらに酢酸エチル等の有機溶媒で抽出した後、減圧濃縮してｎ−ヘキサン、アセトン等の有機溶媒中で再び結晶化させる手法等により結晶を得ることができる。
【００２８】
本発明に係る式（Ｉ）で表される化合物が、このようにして製造された化合物の誘導体に相当する場合には、必要に応じて、上記精製の後、化学修飾することにより製造することができる。上記化学修飾としては、メチル化等のアルキル化、アセチル化等のアシル化、ハロゲン化、接触還元等の水素置換等を挙げることができる。
上記メチル化は、公知の方法等により行うことができ、例えば、トリメチルシリルジアゾメタン処理等の手法を好適に採用することができる。
上記アセチル化は、公知の方法等により行うことができ、例えば、無水酢酸処理等の手法を好適に採用することができる。
上記接触還元は、公知の方法等により行うことができ、例えば、Ｐｄ−Ｃ等の触媒の存在下に水素添加を行う手法等を好適に採用することができる。
【００２９】
本発明の化合物又はその製薬上許容される塩は、これを有効成分として用いることにより、各種の医薬組成物とすることができる。上記医薬組成物としては、上述の抗菌活性及びグルタミン酸取り込み阻害活性に基づいて、例えば、抗菌剤、グルタミン酸取り込み阻害剤等を挙げることができる。抗菌剤は医薬、動物薬のいずれにも用いることができる。
【００３０】
本発明の化合物又はその製薬上許容される塩を医薬又は動物薬として投与する場合、そのまま又は医薬的に許容される無毒性かつ不活性の担体中に、例えば０．１〜９９．５％、好ましくは、０．５〜９０％含有する医薬組成物として、ヒトを含む動物に投与される。
【００３１】
上記担体としては、固形、半固形又は液状の希釈剤、充填剤、及び、その他の処方用の助剤一種以上が用いられる。本発明の化合物又はその製薬上許容される塩は、投与単位形態で投与することが望ましい。本発明の化合物又はその製薬上許容される塩は、経口的又は非経口的に安全に投与することができる。非経口の投与形態として、組織内投与等の局所投与、皮下投与、筋肉内投与、動・静脈内投与等が挙げられる。
【００３２】
経口投与は、通常の方法に従って調製した固形又は液状の用量単位、例えば、末剤、散剤、錠剤、糖衣剤、カプセル剤、顆粒剤、懸濁剤、液剤、シロップ剤、ドロップ剤、舌下錠その他の剤型によって行うことができる。
必要に応じて、経口投与のための用量単位処方はマイクロカプセル化してもよい。この処方はまた被覆をしたり、高分子・ワックス等中に埋めこんだりすることにより作用時間の延長や持続放出をもたらすこともできる。
【００３３】
非経口投与は、通常の方法によって調製された液状用量単位形態、例えば溶液や懸濁液の形態の注射剤を用いることによって行うことができる。
これらの投与方法のうち、経口投与、注射による静脈内投与が好ましい。投与に際してはこれらの投与方法に適した剤型で投与されるのはもちろんである。
【００３４】
本発明の化合物の投与量は年齢、体重等の患者の状態、病気の性質と程度等を考慮した上で設定することが望ましいが、抗菌剤としてヒトへ経口的に投与する場合は、成人に対して０．１〜１００ｍｇ／ｋｇ／日、好ましくは、０．５〜１０ｍｇ／ｋｇ／日を１回〜数回に分けて投与すればよく、非経口的に投与する場合は、投与方法により大きく異なるが、通常０．００１〜１０ｍｇ／ｋｇ／日を１回〜数回に分けて投与すればよい。グルタミン酸取り込み阻害剤としては、経口的に投与する場合は０．０１〜１０ｍｇ／ｋｇ／日、好ましくは０．１〜１ｍｇ／ｋｇ／日を１回〜数回に分けて投与すればよく、非経口的に投与する場合は、通常０．００１〜１ｍｇ／ｋｇ／日を１回〜数回に分けて投与すればよい。
【００３５】
ヒト以外の動物、例えば、ニワトリ、豚、牛等の家禽及び家畜動物並びに魚類に対しても、経口的または非経口的に投与することができる。経口投与する場合、一般的には通常使用されている担体（例えば、脱脂米糠、脱脂大豆粉、ふすま、乳糖、水等）を混合した物を投与するか、あるいはこの様にして混合物したもの、もしくは本発明化合物単独を動物飼料もしくは水と混合して投与する方法が好ましい。該動物飼料としては、動物の飼料として一般に使用されるものであればいずれでもよく、例えば、とうもろこし、ふすま、米、麦、綿実粕、マイロ、大豆粕、魚粉、脱脂米糠、油脂、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、塩化ナトリウム、ビタミン剤、硫酸マグネシウム、硫酸鉄等が挙げられ、これらの一部または全部が混合して使用される。
【００３６】
本発明化合物の飼料中の含有量は、１日あたり５０〜２０００ｐｐｍの範囲が適当である。
非経口投与する場合は、上記医薬として非経口投与する場合と同様の方法で用いることができる。
本発明化合物の投与量は、通常、経口投与の場合、１０〜４００ｍｇ／ｋｇ／日であり、非経口投与の場合、５〜２００ｍｇ／ｋｇ／日であり、これを数日間連続投与する。
【実施例】
以下に実施例、試験例及び製剤例を掲げて本発明を更に詳しく説明するが、本発明はこれら実施例、試験例及び製剤例のみに限定されるものではない。
【００３７】
実施例１ Ｉ−ａ、Ｉ−ｂ、Ｉ−ｃ、Ｉ−ｄの単離
（１）産生菌
産生菌としては、ストレプトマイセス エスピー．ＰＡ−４８４２４を使用した。
（２）発酵工程
ソルブルスターチ０．５％、グルコース０．５％、ポリペプトン（日本製薬社製）０．５％、牛肉エキス（ディフコ社製）０．５％、酵母エキス（ディフコ社製）０．２５％、塩化ナトリウム０．２５％、水道水よりなる培地８００ｍｌ（２Ｎ−ＮａＯＨでｐＨ７．０に調整）を含む２Ｌ容三角フラスコにスラント培養したストレプトマイセス エスピー．ＰＡ−４８４２４を接種し、振幅７０ｍｍ、毎分１８０回転で、２８℃、７２時間振盪培養した。この培養液８００ｍｌを、グルコース１．０％、ソルブルスターチ３．０％、廃糖蜜２．０％、乾燥酵母１．０％、総合アミノ酸粉末Ｆ（味の素社製）１．０％、硫酸亜鉛７水塩０．００１％、りん酸第一カリウム０．００５％、消泡剤（ハイプロックスＤＰ−２０００、大日本インキ化学工業社製）０．０５％、水道水よりなる培地３５Ｌ（２Ｎ−ＮａＯＨでｐＨ７．０に調整）を含む５０Ｌ容ジャーファーメンターに接種し、通気量２４．５Ｌ／分、内圧０．３５ｋｇ／ｃｍ² Ｇ、攪拌回転数３００ｒｐｍ、培養温度２８℃で９６時間培養した。
【００３８】
（３）分離工程
上記工程を繰り返して得た培養液１４０Ｌを、６Ｎ塩酸でｐＨ３．５に調整し、シャープレス型遠心分離機を用いて湿菌体７ｋｇを得た。水道水３Ｌを加えた後、アセトン１２Ｌで２回抽出し、得られた抽出液を減圧濃縮し、水相５Ｌを得た。次に、酢酸エチル６Ｌで抽出した後、脱イオン水７Ｌで水洗し、Ｎａ₂ ＳＯ₄ ５００ｇを加えて濾過して、減圧濃縮し、粗抽出物を１２３ｇ得た。
【００３９】
（４）精製工程
上記工程で得られた１２３ｇの粗抽出物のうち、６５ｇを２０ｍｌの脱イオン水を含む６２０ｍｌのメタノールに溶解し、ｎ−ヘキサン２００ｍｌで２回分配し、ｎ−ヘキサン可溶化物を除き、粗抽出物を２４ｇ得た。この粗抽出物（２４ｇ）を塩化メチレン５０ｍｌに溶解し、内径５ｃｍ、長さ５０ｃｍのシリカゲル（ＭＥＲＣＫ Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ６０、７０〜２３０メッシュ）のカラムを用いて塩化メチレンでクロマトグラフィーを行い、抽出混合物の分画として８５０ｍｌを得、減圧濃縮後、ｎ−ヘキサンから結晶化を行い、１．１８ｇの粉末を得た。次に、上記粉末を６分割し、その各々を４ｍｌのメタノールに溶解し、ＹＭＣ ＯＤＳカラム（Ｓ−１５／３０μ、５．０ｉ．ｄ．×５０ｃｍ、ＣＨ₃ ＣＮ：０．１％Ｈ₃ ＰＯ₄ −Ｈ₂ Ｏ＝６５：３５、５０ｍｌ／分、２２０ｎｍ）を用いて、分取高速液体クロマトグラフィーを繰り返し行い、Ｉ−ａを主成分とする分画（計１．７Ｌ）を得た。分取液は、アセトニトリルを留去後、酢酸エチル５００ｍｌで抽出し、脱イオン水３００ｍｌで水洗した後、Ｎａ₂ ＳＯ₄ ５０ｇを加え濾過して、減圧濃縮し、ｎ−ヘキサンから結晶化を行い、７５１ｍｇのＩ−ａを得た。また、分取高速液体クロマトグラフィー工程で、副成分として、Ｉ−ｂを主成分とする分画（２５０ｍｌ）、Ｉ−ｃを主成分とする分画（５５０ｍｌ）、Ｉ−ｄを主成分とする分画（３００ｍｌ）を得、これらについても同様の処理を行い、Ｉ−ｂ、Ｉ−ｃ、Ｉ−ｄをそれぞれ３５ｍｇ、４１ｍｇ、１５ｍｇを得た。
【００４０】
得られたＩ−ａ〜Ｉ−ｄの化合物名及び物理化学的性状を下記に示した。
Ｉ−ａ
１．化合物名
（３−クロロ−５−ヘキシル−２，６−ジヒドロキシ−フェニル）−（４，５−ジクロロ−１Ｈ−ピロール−２−イル）−メタノン
２．物理化学的性状
外観：淡黄色の粉末
溶解性：ＣＨＣｌ₃ 、ジエチルエーテル、アセトン、酢酸エチル、メタノールに可溶。ｎ−ヘキサンに僅かに溶解。水に不溶。
融点：１４５〜１４７℃
［α］_D ^23.5＝±０℃（ｃ＝１．００５、メタノール）
元素分析値（Ｃ₁₇Ｈ₁₈ＮＯ₃ Ｃｌ₃ ）；
理論値；Ｃ：５２．２６ Ｈ：４．６４ Ｎ：３．５９ Ｃｌ：２７．２２
実測値；Ｃ：５１．９６ Ｈ：４．７５ Ｎ：３．６９ Ｃｌ：２６．９３
【００４１】
ＨＲ−ＬＳＩＭＳ、ｍ／ｚ：
理論値（Ｃ₁₇Ｈ₁₉ＮＯ₃ Ｃｌ₃ ）；３９０．０４３０
実測値；３９０．０４３３（ＭＨ⁺ ）
ＥＩ−ＭＳ、ｍ／ｚ：１８３（ベースピーク）、２５４、３８９（Ｍ⁺ ）
ＩＲ、λ_max ^CHCl3 ｃｍ^-1：３５１３、３４１９、２９５７、２９２８、２８５８、１６１３、１６００、１５７１、１４６９、１４２１、１３９３、１２４９、１１３７、１０６４、１０２４、８４８
ＵＶ（メタノール中）、ｎｍ（ε）：２２５（ｓｈ，１４５００）、３１０（１００００）、３５８（１０７００）
（希塩酸−メタノール中）、ｎｍ（ε）：２２５（ｓｈ，１３０００）、２６０（５２００）、３１０（１５０００）、３４０（ｓｈ，８８００）
（希ＮａＯＨ−メタノール中）、ｎｍ（ε）：２３３（ｓｈ，１３８００）、２８０（６４００）、３６９（２１３００）
【００４２】
¹ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃ ，６００ＭＨｚ）δ：０．８９（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ）、１．３１（４Ｈ，ｍ）、１．３５（２Ｈ，ｍ）、１．５６（２Ｈ，ｍ）、２．５５（２Ｈ，ｍ）、６．０８（１Ｈ，ｂｒ．ｓ）、７．０８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．９Ｈｚ）、７．２２（１Ｈ，ｓ）、９．７４（１Ｈ，ｂｒ．ｓ）、９．９４（１Ｈ，ｂｒ．ｓ）
¹³ＣＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃ ，１５０ＭＨｚ）δ：１４．１４（ｑ）、２２．６５（ｔ）、２９．１０（ｔ）、２９．２７（ｔ）、２９．４４（ｔ）、３１．７２（ｔ）、１１０．３１（ｓ）（×２）、１１２．６１（ｓ）、１１９．７６（ｄ）、１２１．６２（ｓ）、１２４．８１（ｓ）、１２８．９３（ｓ）、１３３．７７（ｄ）、１４７．８９（ｓ）、１５７．３１（ｓ）、１８２．７７（ｓ）
【００４３】
Ｉ−ａの赤外線スペクトルを図１に、紫外線スペクトルを図２に、 ¹ＨＮＭＲを図３に、¹³ＣＮＭＲを図４に示した。
【００４４】
Ｉ−ｂ
１．化合物名
［３−クロロ−２，６−ジヒドロキシ−５−（４−メチル−ペンチル）−フェニル］−（４，５−ジクロロ−１Ｈ−ピロール−２−イル）−メタノン
２．物理化学的性状
外観：淡黄色の粉末
溶解性：ＣＨＣｌ₃ 、ジエチルエーテル、アセトン、酢酸エチル、メタノールに可溶。ｎ−ヘキサンに僅かに溶解。水に不溶。
融点：１４８〜１５０℃
ＨＲ−ＬＳＩＭＳ、ｍ／ｚ：
理論値（Ｃ₁₇Ｈ₁₉ＮＯ₃ Ｃｌ₃ ）；３９０．０４３０
実測値；３９０．０４２９（ＭＨ⁺ ）
ＥＩ−ＭＳ、ｍ／ｚ：３８９（Ｍ⁺ ）
ＩＲ、λ_max ^CHCl3 ｃｍ^-1：３５１３、３４１９、２９５６、２９２８、２８６９、１６１３、１６０１、１５７１、１４６９、１４２１、１３９４、１３３８、１２５２、１１３８、１０６５、１０２４
ＵＶ（メタノール中）、ｎｍ（ε）：２５５（ｓｈ，１４３００）、３１０（１０４００）、３５８（１０３００）
（希塩酸−メタノール中）、ｎｍ（ε）：２２５（ｓｈ，１３１００）、２６０（５３００）、３１０（１４９００）、３４０（ｓｈ，８３００）
（希ＮａＯＨ−メタノール中）、ｎｍ（ε）：２３３（ｓｈ，１３５００）、２８０（６３００）、３７０（２０７００）
【００４５】
¹ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃ ，６００ＭＨｚ）δ：０．８８（６Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ）、１．２３（２Ｈ，ｍ）、１．５６（２Ｈ，ｍ）、１．５７（２Ｈ，ｍ）、２．５３（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ）、６．０７（１Ｈ，ｓ）、７．０９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．９Ｈｚ）、７．２２（１Ｈ，ｓ）、１０．０１（１Ｈ，ｓ）、９．５５（１Ｈ，ｂｒ．ｓ）
¹³ＣＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃ ，１５０ＭＨｚ）δ：２２．６０（ｑ）（×２）、２７．３１（ｔ）、２７．８８（ｄ）、２９．５０（ｔ）、３８．６６（ｔ）、１１０．２３（ｓ）（×２）、１１２．５５（ｓ）、１１９．５８（ｄ）、１２１．３７（ｓ）、１２４．８０（ｓ）、１２８．９１（ｓ）、１３３．７３（ｄ）、１４７．８４（ｓ）、１５７．３６（ｓ）、１８２．７０（ｓ）
【００４６】
Ｉ−ｂの赤外線スペクトルを図５に、紫外線スペクトルを図６に、 ¹ＨＮＭＲを図７に、¹³ＣＮＭＲを図８に示した。
【００４７】
Ｉ−ｃ
１．化合物名
［３−クロロ−２，６−ジヒドロキシ−５−（４−メチル−ヘキシル）−フェニル］−（４，５−ジクロロ−１Ｈ−ピロール−２−イル）−メタノン
２．物理化学的性状
外観：淡黄色の粉末
溶解性：ＣＨＣｌ₃ 、ジエチルエーテル、アセトン、酢酸エチル、メタノールに可溶。ｎ−ヘキサンに僅かに溶解。水に不溶。
融点：１３８〜１４０℃
ＨＲ−ＬＳＩＭＳ、ｍ／ｚ：
理論値（Ｃ₁₈Ｈ₂₁ＮＯ₃ Ｃｌ₃ ）；４０４．０５８７
実測値；４０４．０５８７（ＭＨ⁺ ）
ＥＩ−ＭＳ、ｍ／ｚ：１８３（ベースピーク）、２６８、４０３（Ｍ⁺ ）
ＩＲ、λ_max ^CHCl3 ｃｍ^-1：３５１３、３４２０、３２２６、２９６０、２９２８、２８７２、１６１３、１６００、１５７０、１４６３、１４２１、１３９３、１２５０、１１３８、１０６５、１０２４、９４３、９２９、８９４、８４０ＵＶ（メタノール中）、ｎｍ（ε）：２２５（ｓｈ，１５１００）、３１０（９８００）、３５７（９８００）
（希塩酸−メタノール中）、ｎｍ（ε）：２２５（ｓｈ，１３６００）、２５８（４９００）、３１０（１４２００）、３４０（ｓｈ，７９００）
（希ＮａＯＨ−メタノール中）、ｎｍ（ε）：２３３（ｓｈ，１３２００）、２８１（６１００）、３７１（１９７００）
【００４８】
¹ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃ ，６００ＭＨｚ）δ：０．８６（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ）、０．８６（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．２Ｈｚ）、１．１４（１Ｈ，ｍ）、１．１７（１Ｈ，ｍ）、１．３５（２Ｈ，ｍ）、１．３６（１Ｈ，ｍ）、１．５５（２Ｈ，ｍ）、２．５１（１Ｈ，ｄ，ｄ，ｄ，Ｊ＝６．７，８．８，１４．０Ｈｚ）、２．５５（１Ｈ，ｄ，ｄ，ｄ，Ｊ＝６．７，８．８，１４．０Ｈｚ）、６．０８（１Ｈ，ｓ）、７．０９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．９Ｈｚ）、７．２３（１Ｈ，ｓ）、９．５８（１Ｈ，ｂｒ．ｓ）、１０．００（１Ｈ，ｓ）
¹³ＣＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃ ，１５０ＭＨｚ）δ：１１．４１（ｑ）、１９．１７（ｑ）、２７．００（ｔ）、２９．４３（ｔ）、２９．５７（ｔ）、３４．２６（ｄ）、３６．３３（ｔ）、１１０．２３（ｓ）（×２）、１１２．５４（ｓ）、１１９．５８（ｄ）、１２１．３８（ｓ）、１２４．８１（ｓ）、１２８．９１（ｓ）、１３３．７２（ｄ）、１４７．８４（ｓ）、１５７．３４（ｓ）、１８２．７０（ｓ）
【００４９】
Ｉ−ｃの赤外線スペクトルを図９に、紫外線スペクトルを図１０に、 ¹ＨＮＭＲを図１１に、¹³ＣＮＭＲを図１２に示した。
【００５０】
Ｉ−ｄ
１．化合物名
［３−クロロ−２，６−ジヒドロキシ−５−（５−メチル−ヘキシル）−フェニル］−（４，５−ジクロロ−１Ｈ−ピロール−２−イル）−メタノン
２．物理化学的性状
外観：淡黄色の粉末
溶解性：ＣＨＣｌ₃ 、ジエチルエーテル、アセトン、酢酸エチル、メタノールに可溶。ｎ−ヘキサンに僅かに溶解。水に不溶。
融点：１５３〜１５５℃
ＨＲ−ＬＳＩＭＳ、ｍ／ｚ：
理論値（Ｃ₁₈Ｈ₂₁ＮＯ₃ Ｃｌ₃ ）；４０４．０５８７
実測値；４０４．０５８５（ＭＨ⁺ ）
ＥＩ−ＭＳ、ｍ／ｚ：１８３（ベースピーク）、２６８、４０３（Ｍ⁺ ）
ＩＲ、λ_max ^CHCl3 ｃｍ^-1：３５１３、３４１９、３２２２、２９５５、２９２８、２８５８、１６１３、１６０１、１５７１、１４６８、１４２１、１３９３、１２５０、１１３８、１０６５、１０２３、９４３、８４８
ＵＶ（メタノール中）、ｎｍ（ε）：２２５（ｓｈ，１３９００）、３１０（９３００）、３５８（１００００）
（希塩酸−メタノール中）、ｎｍ（ε）：２２５（ｓｈ，１３１００）、２６０（４８００）、３１０（１４１００）、３４０（ｓｈ，８０００）
（希ＮａＯＨ−メタノール中）、ｎｍ（ε）：２３３（ｓｈ，１３１００）、２７９（６１００）、３７０（１９６００）
【００５１】
¹ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃ ，６００ＭＨｚ）δ：０．８７（６Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ）、１．２１（２Ｈ，ｍ）、１．３４（２Ｈ，ｍ）、１．５３（３Ｈ，ｍ）、２．５５（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．７Ｈｚ）、６．０８（１Ｈ，ｓ）、７．０９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．６Ｈｚ）、７．２２（１Ｈ，ｓ）、９．５８（１Ｈ，ｂｒ．ｓ）、１０．００（１Ｈ，ｓ）
¹³ＣＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃ ，１５０ＭＨｚ）δ：２２．６５（ｑ）（×２）、２７．１９（ｔ）、２７．９２（ｄ）、２９．２８（ｔ）、２９．６９（ｔ）、３８．７７（ｔ）、１１０．２４（ｓ）（×２）、１１２．５４（ｓ）、１１９．５８（ｄ）、１２１．３８（ｓ）、１２４．７８（ｓ）、１２８．９１（ｓ）、１３３．７２（ｄ）、１４７．８５（ｓ）、１５７．３３（ｓ）、１８２．７０（ｓ）
【００５２】
Ｉ−ｄの赤外線スペクトルを図１３に、紫外線スペクトルを図１４に、 ¹ＨＮＭＲを図１５に、¹³ＣＮＭＲを図１６に示した。
【００５３】
得られたＩ−ａ〜Ｉ〜ｄの薄層クロマトグラフィー（以下「ＴＬＣ」という）及び高速液体クロマトグラフィー（以下「ＨＰＬＣ」という）の結果を下記に示した。
ＴＬＣのＲｆ値（濃硫酸で検出）：
（ＣＨ₂ Ｃｌ₂ ）Ｉ−ａ＝Ｉ−ｂ＝Ｉ−ｃ＝Ｉ−ｄ＝０．２８
（ｎ−ヘキサン：酢酸エチル＝２：１）Ｉ−ａ＝Ｉ−ｂ＝Ｉ−ｃ＝Ｉ−ｄ＝０．４０
ＨＰＬＣ分析：
保持時間；Ｉ−ａ＝８．４０分、Ｉ−ｂ＝７．７３分、Ｉ−ｃ＝１０．２１分、Ｉ−ｄ＝１０．６１分
ＨＰＬＣ分析の分析条件：
カラム；Ｕｌｔｒｏｎ ＶＸ−ＯＤＳ、５μｍ、４．６ｉ．ｄ．×１５０ｍｍ（信和化工社製）
移動相；０．１％Ｈ₃ ＰＯ₄ −ＣＨ₃ ＣＮ：０．１％Ｈ₃ ＰＯ₄ −水＝７５：２５
流速；１ｍｌ／分
検出波長；２２０ｎｍ
【００５４】
実施例２ Ｉ−ｅの単離
（１）産生菌
産生菌としては、ストレプトマイセス エスピー．ＰＡ−４８４２４を使用した。
（２）発酵工程
ソルブルスターチ０．５％、グルコース０．５％、ポリペプトン（日本製薬社製）０．５％、牛肉エキス（ディフコ社製）０．５％、酵母エキス（ディフコ社製）０．２５％、塩化ナトリウム０．２５％、水道水よりなる培地１００ｍｌ（２Ｎ−ＮａＯＨでｐＨ７．０に調整）を含む５００ｍｌ容三角フラスコにスラント培養したストレプトマイセス エスピー．ＰＡ−４８４２４の保存菌液（−８０℃に凍結保存）１ｍｌを接種し、振幅７０ｍｍ、毎分１８０回転で、２８℃、７２時間培養した。この培養液４ｍｌを、グルコース１．０％、ソルブルスターチ３．０％、廃糖蜜１．０％、臭化ナトリウム１．０％、乾燥酵母１．０％、総合アミノ酸粉末Ｆ（味の素社製）１．０％、硫酸亜鉛７水塩０．００１％、りん酸第一カリウム０．００５％、水道水よりなる培地１００ｍｌ（２Ｎ−ＮａＯＨでｐＨ７．０に調整）を含む５００ｍｌ容三角フラスコに接種し、振幅７０ｍｍ、毎分１８０回転で、２８℃、９６時間培養した。
【００５５】
（３）分離工程
上記工程により得た培養液５Ｌにアセトン５Ｌを加え、２時間攪拌した後、セライト３００ｇを用いて吸引濾過して得られたろ液から、減圧下アセトンを留去後、水層を酢酸エチル（３Ｌ）抽出し、粗抽出物（１．２ｇ）を得た。
【００５６】
（４）精製工程
上記工程で得られた粗抽出物１．２ｇを（メタノール：水＝９：１）１００ｍｌに溶解し、ｎ−ヘキサン１００ｍｌで２回抽出し、残渣のメタノール層から減圧下溶媒留去後、粗分画（７００ｍｇ）を得た。この粗分画（７００ｍｇ）をメタノール（５ｍｌ）に溶解し、シリカゲル（ＭＥＲＣＫ Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ６０、７０〜２３０メッシュ、１．９ｇ）に吸着、乾固させた後、内径３ｃｍ、長さ５０ｃｍのシリカゲル（ＭＥＲＣＫ Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ６０、７０〜２３０メッシュ、８０ｇ）カラムに積層し、トルエン：酢酸エチル＝９８：２を用いたクロマトグラフィーを行い、Ｉ−ｅを主成分とする分画（５０ｍｇ）を得た。次に、この分画（５０ｍｇ）をメタノール（１．２５ｍｌ）に溶解し、分取高速液体クロマトグラフィー（カラム：ＵＬＴＲＯＮ ＶＸ−ＯＤＳ ２０ｉ．ｄ．×２５０ｍｍ（信和化工社製））を繰り返し行い、Ｉ−ｅ溶出分画（１２０ｍｌ）を得た。クロマトグラフィーの条件は、溶出液としてアセトニトリル：０．１％ＴＦＡａｑ．＝７０：３０、流速８ｍｌ／分、試料注入量２５０ｍｌ／回とし、検出は２３０ｎｍで行った。分取液は、アセトニトリルを留去後、酢酸エチル（５０ｍｌ）で抽出した後、飽和食塩水（５０ｍｌ）で洗浄し、無水Ｎａ₂ ＳＯ₄ を加えて濾過して、減圧濃縮し、ｎ−ヘキサン−アセトンから結晶化を行い、１３．７ｍｇのＩ−ｅを得た。
【００５７】
得られたＩ−ｅの化合物名及び物理化学的性状を下記に示した。
Ｉ−ｅ
１．化合物名
（３−ブロモ−５−ヘキシル−２，６−ジヒドロキシ−フェニル）−（４，５−ジブロモ−１Ｈ−ピロール−２−イル）−メタノン
２．物理化学的性状
外観：淡褐色の粉末
融点：１２８〜１３０℃
ＨＲ−ＬＳＩＭＳ、ｍ／ｚ：
理論値（Ｃ₁₇Ｈ₁₉ＮＯ₃ Ｂｒ₃ ）；５２１．８９１６
実測値；５２１．８９１４（ＭＨ⁺ ）
Ｌ−ＳＩＭＳ、ｍ／ｚ：５２２（ＭＨ⁺ ）
ＩＲ、λ_max ^CHCl3 ｃｍ^-1：３４９３、３４１７、３０２１、３０１７、２９５７、２９２８、２８５７、１６１１、１５９６、１５６６、１４６３、１４２１、１４０３、１３８２、１２４０、１２２３、１２１３、１２０４、１１３２、１０５７、９８１、９３９、８９５、８３６
ＵＶ（メタノール中）、ｎｍ（ε）：２２４（ｓｈ，１７７００）、３１３．７（１１１００）、３５７．２（１０８００）
（希塩酸−メタノール中）、ｎｍ（ε）：２２５（ｓｈ，１５６００）、３１３．０（１５４００）
（希ＮａＯＨ−メタノール中）、ｎｍ（ε）：２２０（ｓｈ，２１９００）、２４０（ｓｈ，１３０００）、２８１．４（７０００）、３７０．３（２２４００）
【００５８】
¹ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃ ，３００ＭＨｚ）δ：０．８９（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ）、１．３１（６Ｈ，ｍ）、１．５９（２Ｈ，ｍ）、２．５５（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝８．１Ｈｚ）、６．０５（１Ｈ，ｓ）、７．１２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ）、７．３５（１Ｈ，ｓ）、９．７２（１Ｈ，ｂｒ．ｓ）、９．９３（１Ｈ，ｓ）
¹³ＣＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃ ，７５ＭＨｚ）δ：１４．１１、２２．６１、２９．０９、２９．２４、２９．４５、３１．６９、１００．００、１０１．７６、１１０．２３、１１０．９３、１２２．２５、１２５．３７、１３２．４５、１３６．５５、１４８．７８、１５７．９６、１８２．５８
【００５９】
Ｉ−ｅの赤外線スペクトルを図１７に、紫外線スペクトルを図１８に、 ¹ＨＮＭＲを図１９に、¹³ＣＮＭＲを図２０に示した。
【００６０】
得られたＩ−ｅのＴＬＣ及びＨＰＬＣの結果を下記に示した。
ＴＬＣのＲｆ値（濃硫酸で検出）：
（ＣＨ₂ Ｃｌ₂ ）Ｉ−ｅ＝０．３２（Ｉ−ａ＝０．２７）
（ｎ−ヘキサン：酢酸エチル＝２：１）Ｉ−ｅ＝０．４０（Ｉ−ａ＝０．３８）ＨＰＬＣ分析：
保持時間；Ｉ−ｅ＝１０．２２分（Ｉ−ａ＝８．１２分）
ＨＰＬＣ分析の分析条件：
カラム；Ｕｌｔｒｏｎ ＶＸ−ＯＤＳ、５μｍ、４．６ｉ．ｄ．×１５０ｍｍ（信和化工社製）
移動相；０．１％Ｈ₃ ＰＯ₄ −ＣＨ₃ ＣＮ：０．１％Ｈ₃ ＰＯ₄ −水＝７５：２５
流速；１ｍｌ／分
検出波長；２２０ｎｍ
【００６１】
実施例３ Ｉ−ａのアセチル化
Ｉ−ａ（８ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ）のピリジン（０．５ｍｌ）溶液に無水酢酸（０．２５ｍｌ）を加え１０分間攪拌した。反応液にトルエンを加え減圧下溶媒を留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（Ｍｅｒｃｋ Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ６０、７０〜２３０メッシュ、１ｇ）に付し、ＣＨ₂ Ｃｌ₂ ：メタノール＝５０：１の混合溶媒で溶出し、Ｉ−ａのジアセチル化物（以下このものを「Ｉ−ａ₁ 」という）（９ｍｇ）を得た。
【００６２】
このものの物理化学的性状を下記に示した。
ＨＲ−ＬＳＩＭＳ、ｍ／ｚ：
理論値（Ｃ₂₁Ｈ₂₃ＮＯ₅ Ｃｌ₃ ）；４７４．０６４２
実測値；４７４．０６４１（ＭＨ⁺ ）
ＬＳＩＭＳ、ｍ／ｚ：４７４（ＭＨ⁺ ）
ＩＲ、λ_max ^CHCl3 ｃｍ^-1：３４１８、２９５８、２９３０、２８５９、１７７２、１６３８、１４５３、１４２４、１３９０、１３７０、１３２３、１１８３、１１３９、１１００、１０５９、１０４３、１０２３、８９５
¹ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃ ，６００ＭＨｚ）δ：０．８９（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ）、１．３１（４Ｈ，ｍ）、１．３５（２Ｈ，ｍ）、１．５８（２Ｈ，ｍ）、２．０９（３Ｈ，ｓ）、２．１３（３Ｈ，ｓ）、２．４６（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ）、６．６６（１Ｈ，ｂｒ．ｓ）、７．４４（１Ｈ，ｓ）、９．５０（１Ｈ，ｂｒ．ｓ）
¹³ＣＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃ ，１５０ＭＨｚ）δ：１４．０６、２０．２６、２０．３５、２２．５３、２９．１１、２９．２７、２９．７８、３１．５１、１１２．８３、１１９．３０、１２２．２４、１２５．４８、１２６．９７、１２８．３９、１３２．０２、１３５．５５、１４２．６０、１４４．８７、１６７．５８、１６８．３４、１７７．８２
【００６３】
得られたＩ−ａ₁ の化学構造式を下記に示した。下記式中、Ａｃはアセチル基を表す。
【００６４】
【化４】

【００６５】
実施例４ Ｉ−ａのメチル化（１）
Ｉ−ａ（４０ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）のメタノール：ベンゼン（１：１）混合溶液（１ｍｌ）に過剰のトリメチルシリルジアゾメタン（１０％ｎ−ヘキサン溶液、ナカライテスク社製）を加え１２時間室温下に放置した。減圧下溶媒を留去し、残渣を薄層クロマトグラフィー（Ｐｒｅ−Ｃｏａｔｅｄ ＴＬＣ Ｐｌａｔｅｓ、ＳＩＬＩＣＡ ＧＥＬ Ｆ−２５４、Ｅ．Ｍｅｒｃｋ社製）に付し、ｎ−ヘキサン：酢酸エチル＝１５：１の混合溶媒で分離精製し、Ｉ−ａのトリメチル化物（以下このものを「Ｉ−ａ₂ 」という）（２０ｍｇ）を得た。
【００６６】
このものの物理化学的性状を下記に示した。
ＬＳＩＭＳ、ｍ／ｚ：４３２（ＭＨ⁺ ）
ＩＲ、λ_max ^CHCl3 ｃｍ^-1：２９５７、２９３０、２８５８、１６４２、１５８６、１５６９、１４６９、１４１６、１３８０、１３４２、１２５６、１１７３、１１４３、１１０４、１０７８、１００２、９７９、９４４、８８５、８６１ ¹ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃ ，６００ＭＨｚ）δ：０．８７（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ）、１．２９（４Ｈ，ｍ）、１．３４（２Ｈ，ｍ）、１．５８（２Ｈ，ｍ）、２．５４（２Ｈ，ｍ）、３．６５（３Ｈ，ｓ）、３．７５（３Ｈ，ｓ）、４．０５（３Ｈ，ｓ）、６．３７（１Ｈ，ｓ）、７．２４（１Ｈ，ｓ）
¹³ＣＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃ ，１５０ＭＨｚ）δ：１４．３３、２２．８３、２９．２６、３０．５４、３４．５６（×２）、６２．６４、６３．２０、１１１．０５、１２０．９８、１２３．０６、１２６．００、１２９．８２、１３０．０４、１３２．０５、１３３．８２、１５１．５５、１５４．４８、１８２．１５
【００６７】
得られたＩ−ａ₂ の化学構造式を下記に示した。
【００６８】
【化５】

【００６９】
実施例５ Ｉ−ａのメチル化（２）
Ｉ−ａ（１０ｍｇ、０．０２６ｍｍｏｌ）のベンゼン溶液（１ｍｌ）に過剰のトリメチルシリルジアゾメタン（１０％ｎ−ヘキサン溶液、ナカライテスク社製）を加え１２時間室温下に放置した。減圧下溶媒を留去し、残渣を薄層クロマトグラフィー（Ｐｒｅ−Ｃｏａｔｅｄ ＴＬＣ Ｐｌａｔｅｓ、ＳＩＬＩＣＡ ＧＥＬ Ｆ−２５４、Ｅ．Ｍｅｒｃｋ社製）に付し、ＣＨ₂ Ｃｌ₂ 溶媒で分離精製し、Ｉ−ａのジメチル化物（以下このものを「Ｉ−ａ₃ 」という）（３．６ｍｇ）を得た。
【００７０】
このものの物理化学的性状を下記に示した。
ＥＩＭＳ、ｍ／ｚ：１９７（ベースピーク）、２６８、４１７（Ｍ⁺ ）
ＩＲ、λ_max ^CHCl3 ｃｍ^-1：２９５７、２９２９、２８５８、１６００、１５７１、１５２３、１４６８、１４５５、１３９９、１３４４、１２７３、１１７９、１１４６、１１０４、１０７３、１００８、９６６、８９４、８５４
¹ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃ ，６００ＭＨｚ）δ：０．８９（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ）、１．３１（４Ｈ，ｍ）、１．３６（２Ｈ，ｍ）、１．５８（２Ｈ，ｍ）、２．５７（２Ｈ，ｍ）、３．６３（３Ｈ，ｓ）、４．００（３Ｈ，ｂｒ．ｓ）、６．７３（１Ｈ，ｓ）、７．２４（１Ｈ，ｓ）、８．４８（１Ｈ，ｂｒ．ｓ）
¹³ＣＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃ ，１５０ＭＨｚ）δ：１４．１１、２２．６０、２９．１２、２９．３４、２９．４１、３１．６７、３４．５１、６２．２２、１１０．９１、１１７．７９、１１８．２５、１２１．６３、１２５．８１、１２８．１２、１２９．６４、１３４．０１、１５２．１６、１５４．８３、１８４．０９
【００７１】
得られたＩ−ａ₃ の化学構造式を下記に示した。
【００７２】
【化６】

【００７３】
実施例６ Ｉ−ａのメチル化（３）
Ｉ−ａ（１０ｍｇ、０．０２６ｍｍｏｌ）のベンゼン溶液（１ｍｌ）を５〜１０℃に保ち、トリメチルシリルジアゾメタン（１０％ｎ−ヘキサン溶液、ナカライテスク社製）を加え２０分間放置した。減圧下溶媒を留去し、残渣を薄層クロマトグラフィー（Ｐｒｅ−Ｃｏａｔｅｄ ＴＬＣ Ｐｌａｔｅｓ、ＳＩＬＩＣＡＧＥＬ Ｆ−２５４、Ｅ．Ｍｅｒｃｋ社製）に付し、ＣＨ₂ Ｃｌ₂ 溶媒で分離精製し、Ｉ−ａのモノメチル化物（以下このものを「Ｉ−ａ₄ 」という）（６ｍｇ）を得た。
【００７４】
このものの物理化学的性状を下記に示した。
ＥＩＭＳ、ｍ／ｚ：１９７（ベースピーク）、２６８、４０３（Ｍ⁺ ）
ＩＲ、λ_max ^CHCl3 ｃｍ^-1：３４１８、３２４９、２９５７、２９２９、２８５８、１５９４、１５６２、１５０６、１４６７、１４２３、１３２９、１２６４、１１３９、１１０１、１０７３、１０２３、９８０、９３７、８９８、８５０、８４４
¹ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃ ，４００ＭＨｚ）δ：０．８９（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ）、１．３１（４Ｈ，ｍ）、１．３４（２Ｈ，ｍ）、１．５８（２Ｈ，ｍ）、２．５６（２Ｈ，ｍ）、３．６７（３Ｈ，ｓ）、７．１４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．９Ｈｚ）、７．２８（１Ｈ，ｓ）、９．６９（１Ｈ，ｂｒ．ｓ）、９．９７（１Ｈ，ｓ）
¹³ＣＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃ ，１００ＭＨｚ）δ：１４．１２、２２．６１、２９．１２、２９．２５、２９．５３、３１．６８、６２．６３、１１３．０１、１１５．７２、１１７．２３、１２０．３７、１２１．６３、１２８．７０、１２９．０８、１３５．０３、１５１．８９、１５６．９５、１８２．７７
【００７５】
得られたＩ−ａ₄ の化学構造式を下記に示した。
【００７６】
【化７】

【００７７】
実施例７ Ｉ−ａの接触還元
Ｉ−ａ（４０ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）のエタノール溶液（２ｍｌ）に１０％Ｐｄ−Ｃ（２８ｍｇ、５０％湿重量、日本エンゲルハルド社製）を加え室温下中圧（３ｋｇ／ｃｍ³ 水素ガス圧）水素添加を１７時間行う。触媒濾去後、減圧下に溶媒を留去し、残渣を高速液体クロマトグラフィー（Ｕｌｔｒｏｎ ＶＸ−ＯＤＳ、２．０ｉ．ｄ．×２５ｃｍ、アセトニトリル：０．１％Ｈ₃ ＰＯ₄ −水＝（６６：３４）から（８０：２０）へ３３分間のリニアグラジエント）に付し、Ｉ−ａの３種類の水素置換体（以下、これらのものをそれぞれ「Ｉ−ａ₅ 」、「Ｉ−ａ₆ 」、「Ｉ−ａ₇ 」という）及びＩ−ａをそれぞれ分離精製した。各フラクションは減圧下に溶媒を留去し、残渣の水層を酢酸エチルで抽出し、Ｉ−ａ₅ （１．３ｍｇ）、Ｉ−ａ₆ （４．４ｍｇ）、Ｉ−ａ₇ （３．１ｍｇ）及びＩ−ａ（２．２ｍｇ）をそれぞれ得た。
【００７８】
得られたＩ−ａ₅ 、Ｉ−ａ₆ 、Ｉ−ａ₇ の物理化学的性状を下記に示した。
【００７９】
Ｉ−ａ ₅
ＥＩＭＳ、ｍ／ｚ：１８３（ベースピーク）、２５４、３５５（Ｍ⁺ ）
ＩＲ、λ_max ^CHCl3 ｃｍ^-1：３５１５、３４３７、３１４１、２９５７、２９２８、２８５７、１６１３、１６０１、１５７３、１４５４、１４２１、１３８３、１３４１、１２４８、１１３４、１１０９、１０６４、１０２３、９４０、８９５、８４７
¹ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃ ，４００ＭＨｚ）δ：０．８９（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ）、１．３１（４Ｈ，ｍ）、１．３４（２Ｈ，ｍ）、１．５７（２Ｈ，ｍ）、２．５５（２Ｈ，ｍ）、６．３８（１Ｈ，ｔ，ｄ，Ｊ＝２．３，４．０Ｈｚ）、６．４４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ）、７．１４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ）、７．１４（１Ｈ，ｍ）、７．１８（１Ｈ，ｍ）、７．４０（１Ｈ，ｂｒ．ｓ）、８．８２（１Ｈ，ｓ）、９．５５（１Ｈ，ｂｒ．ｓ）
¹³ＣＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃ ，１５０ＭＨｚ）δ：１４．１３、２２．６３、２９．１０、２９．２８、２９．４５、３１．７２、１１０．３１、１１０．７２、１１５．０２、１１８．９４、１２２．９０、１２４．６１、１３０．８６、１３３．６０、１４８．０５、１５７．０５、１８３．７５
【００８０】
得られたＩ−ａ₅ の化学構造式を下記に示した。
【００８１】
【化８】

【００８２】
Ｉ−ａ ₆
ＥＩＭＳ、ｍ／ｚ：１４９（ベースピーク）、２２０、３２１（Ｍ⁺ ）
ＩＲ、λ_max ^CHCl3 ｃｍ^-1：３５２８、３４３７、３１４１、２９５７、２９２８、２８５７、１６２４、１５９４、１５７６、１４５４、１４２２、１３８５、１３４０、１２４５、１１７７、１１０８、１０３８、９８８、９３９、８３８
¹ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃ ，６００ＭＨｚ）δ：０．８８（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ）、１．３２（６Ｈ，ｍ）、１．５７（２Ｈ，ｍ）、２．５５（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ）、６．４１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ）、６．９８（１Ｈ，ｓ）、７．０７（２Ｈ，ｍ）、７．１４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ）、８．７７（１Ｈ，ｓ）、９．５２（１Ｈ，ｂｒ．ｓ）
¹³ＣＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃ ，１５０ＭＨｚ）δ：１４．１４、２２．６６、２９．１５、２９．３８、２９．６８、３１．７４、１０７．８０、１１０．１８、１１５．３１、１１７．９７、１２２．４３、１２３．２６、１３０．４９、１３５．７４、１５４．８１、１５６．４１、１８４．０７
【００８３】
得られたＩ−ａ₆ の化学構造式を下記に示した。
【００８４】
【化９】

【００８５】
Ｉ−ａ ₇
ＥＩＭＳ、ｍ／ｚ：１４９（ベースピーク）、２２０、２８７（Ｍ⁺ ）
ＩＲ、λ_max ^CHCl3 ｃｍ^-1：３５２３、３４４５、２９５６、２９２７、２８５６、１６２６、１５９３、１５７５、１５３９、１４７２、１４２４、１４００、１３４０、１１７６、１１１８、１１０３、１０９２、１０４６、９９３
¹ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃ ，６００ＭＨｚ）δ：０．８８（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ）、１．３１（４Ｈ，ｍ）、１．３５（２Ｈ，ｍ）、１．５７（２Ｈ，ｍ）、２．５５（２Ｈ，ｍ）、６．３８（１Ｈ，ｔ，ｄ，Ｊ＝２．３，４．０Ｈｚ）、６．４４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ）、７．１４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ）、７．１４（１Ｈ，ｍ）、７．１８（１Ｈ，ｍ）、７．４０（１Ｈ，ｂｒ．ｓ）、８．８２（１Ｈ，ｓ）、９．５５（１Ｈ，ｂｒ．ｓ）
¹³ＣＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃ ，１５０ＭＨｚ）δ：１４．１１、２２．６０、２９．１２、２９．３４、２９．４１、３１．６７、３４．５１、６２．２２、１１０．９１、１１７．７９、１１８．２５、１２１．６３、１２５．８１、１２８．１２、１２９．６４、１３４．０１、１５２．１６、１５４．８３、１８４．０９
【００８６】
得られたＩ−ａ₇ の化学構造式を下記に示した。
【００８７】
【化１０】

【００８８】
試験例１ 抗菌活性
Ｉ−ａ、Ｉ−ｂ、Ｉ−ｃ、Ｉ−ｄ、Ｉ−ｅのグラム陰性菌、グラム陽性菌に対する抗菌活性を測定して抗菌スペクトルを調べた。結果を表２に示した。
【００８９】
【表２】

【００９０】
表２中、菌名は、Ｅ．ｃｏｌｉ ＮＩＨＪ ＪＣ−２はＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ＮＩＨＪ ＪＣ−２を、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ ＡＴＣＣ２５６１９はＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ ＡＴＣＣ ２５６１９を、Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ ＡＴＣＣ ２７７３６はＫｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ ＡＴＣＣ ２７７３６を、Ａ．ｐｌｅｕｒｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ ＮＢ−００１はＡｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌｅｕｒｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ ＮＢ−００１を、Ｐ．ｍｕｌｔｏｃｉｄａ Ｄ−６はＰａｓｔｅｕｒｅｌｌａ ｍｕｌｔｏｃｉｄａ Ｄ−６を、Ｐ．ｐｉｓｃｉｃｉｄａ Ｎｏ．２はＰａｓｔｅｕｒｅｌｌａ ｐｉｓｃｉｃｉｄａ Ｎｏ．２を、Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ ＡＴＣＣ ４３６２９はＨｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ ＡＴＣＣ ４３６２９を、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ ＦＤＡ ２０９ＰはＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ ＦＤＡ ２０９Ｐを、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ １７００４ （ＭＲＳＡ）はＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ １７００４ （ＭＲＳＡ）を、Ｃ．ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ ＡＴＣＣ１３１２４はＣｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ ＡＴＣＣ １３１２４を、Ｅ．ｓｅｒｉｏｌｉｃｉｄａ ＳＮ８６１１９はＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｓｅｒｉｏｌｉｃｉｄａ ＳＮ８６１１９をそれぞれ示す。
【００９１】
表２中、最小阻止濃度（以下「ＭＩＣ」ともいう）は、表３に示す供試培地を接種源用培地及びＭＩＣ測定用培地とし、表３に示す培養条件の下で測定した。接種源濃度は、いずれも１０⁶ ＣＦＵ／ｍｌとした。
【００９２】
【表３】

【００９３】
表３中、供試培地は、（１）がＭｕｌｌｅｒ Ｈｉｎｔｏｎ Ｂｒｏｔｈ（ディフコ社製）を、（２）がＭｕｌｌｅｒ Ｈｉｎｔｏｎ Ａｇａｒ（ディフコ社製）を、（３）が０．０５％β−ＮＡＤ添加Ｃｏｌｏｍｂｉａ Ｂｒｏｔｈ（ディフコ社製）を、（４）が２％ＮａＣｌ添加Ｂｒａｉｎ Ｈｅａｒｔ Ｉｎｆｕｓｉｏｎ Ｂｒｏｔｈ（ディフコ社製）を、（５）が７％ウマ血液添加Ｂｌｌｏｄ Ａｇａｒ Ｂａｓｅ Ｎｏ．２（ディフコ社製）を、（６）がＣｏｏｃｋｅｄ Ｍｅａｔ Ｍｅｄｉｕｍ（ディフコ社製）を、（７）がＧＡＭ Ａｇａｒ（ディフコ社製）を、（８）がＴｒｙｐｔｏ−Ｓｏｙａ Ｂｒｏｔｈ（ニッスイ社製）を、（９）がＳｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ Ｄｉｓｋ Ａｇａｒ−Ｎ（ニッスイ社製）をそれぞれ示す。菌名は上記と同様である。
【００９４】
表２から明らかなように、本発明の物質は、グラム陰性菌、グラム陽性菌等に対する広範な抗菌活性を有している。グラム陰性菌の中では特にＰ．ｍｕｌｔｏｃｉｄａ，Ｐ．ｐｉｓｃｉｃｉｄａ及びＨ．ｐｙｌｏｒｉに強い活性を示した。また、グラム陽性菌に対しては全体的に顕著な抗菌活性を示し、ＭＲＳＡに対しても有効であった。特にＩ−ａ、Ｉ−ｂ、Ｉ−ｃ、Ｉ−ｅは、広い範囲の抗菌スペクトルを有することが明らかとなった。
【００９５】
試験例２ 小脳顆粒細胞におけるグルタミン酸トランスポーター阻害活性
下記の化合物について、小脳顆粒細胞におけるグルタミン酸トランスポーター阻害活性を調べた。
Ｉ−ａ、Ｉ−ｂ、Ｉ−ｃ、Ｉ−ｄ、Ｉ−ｅ、Ｉ−ａ₁ 、Ｉ−ａ₃ 、Ｉ−ａ₄ 、Ｉ−ａ₅ 、Ｉ−ａ₆ 、Ｉ−ａ₇
（１）検体の調製
検体は、すべてジメチルスルフォキサイド（ＤＭＳＯ）を用いて１０ｍｇ／ｍｌとなるように溶解した。活性測定のために持ち込むＤＭＳＯ濃度は４％以下とした。
【００９６】
（２）小脳顆粒細胞の調製
８日令のＳＤ系ラットの小脳を２０匹分摘出し、１％トリプシン液で１０分間３７℃で処理、ピペッティングにより細胞を分散させた。ナイロンメッシュを通し、大きな組織塊を除去した。ポリ−Ｌ−リジンを使用して表面をコーティングした２４ウェルディッシュ２０枚に分散した細胞を分注した。培地はα−ＭＥＭ培地に１０％ウシ血清、２５ｍＭ ＫＣｌを添加したものを用いた。細胞を２４ウェルディッシュに分注後２４〜４８時間に終濃度１０μＭシトシンβ−Ｄ−アラビノフラノシドを添加し、増殖性細胞を除去した。その後、３日置きに培地交換を行い、１〜２週目の細胞を実験に用いた（Ｍａｎｕａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ｎｅｒｖｏｕｓ Ｓｙｓｔｅｍ、２０３〜２０６頁（１９８９年）、Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ）。
【００９７】
（３）グルタミン酸トランスポーター活性の測定
上記の細胞をクレブス−リンゲル液（ＫＲＢ）で２回洗浄し、検体を含むＫＲＢを添加して３７℃１０分間処理した。更に［³Ｈ］ラベル体を含む１μＭグルタミン酸を添加して１０分間３７℃で反応させた。グルタミン酸取り込みの終了は細胞を１ｍｌの冷却ＫＲＢで２回洗浄した。そして、０．０５％のドデシル硫酸ナトリウムを含む０．０１％デオキシコール酸ナトリウムで細胞を溶解し、液体シンチレーションカウンターで［³Ｈ］の放射活性を測定した。
【００９８】
（４）スクリーニング方法
天然物培養液抽出物中から得られる神経細胞のグルタミン酸取り込み活性を阻害する検体を選択した。
更に、同じ細胞でＧＡＢＡの取り込み阻害活性を持たないものを選択した。
以上の操作により、グルタミン酸トランスポーター特異性の高い成分を選択した。
グルタミン酸取り込み阻害活性を指標に活性成分を分画精製した。
【００９９】
（５）結果
上記の１１の化合物に関して、そのグルタミン酸取り込み阻害活性の５０％阻害濃度（以下「ＩＣ₅₀」という）を表４に示した。
【０１００】
【表４】

【０１０１】
表４の結果、Ｉ−ａ、Ｉ−ｂ、Ｉ−ｃ、Ｉ−ｄは、グルタミン酸取り込み阻害のＩＣ₅₀値が０．８μＭで、Ｉ−ｅは、０．４μＭであった。更に、その阻害活性は、グルタミン酸取り込みを最大限６５％抑制するという部分的なものであった。
Ｉ−ａのグルタミン酸取り込み阻害様式は、Ｌｉｎｅ−Ｗｅａｖｅｒ Ｐｌｏｔ解析により非拮抗阻害型であることが認められた。
Ｉ−ａのＣｌ基、ＯＨ基を修飾した化合物では、グルタミン酸取り込み阻害活性がＩ−ａ、Ｉ−ｂ、Ｉ−ｃ、Ｉ−ｄ等よりも弱くなる傾向が認められた。
Ｉ−ａ₁ 、Ｉ−ａ₇ では、グルタミン酸取り込み阻害活性の最大値が９５％となった。
【０１０２】

ヒドロキシプロピルメチルセルロース及びステアリン酸マグネシウムを除く上記処方成分を均一に混合した後、ヒドロキシプロピルメチルセルロース８％（ｗ／ｗ）水溶液を結合剤として湿式造粒法にて打錠用顆粒を製造した。これにステアリン酸マグネシウムを混合した後、打錠機を用いて直径７ｍｍ、１錠重量１３０ｍｇに形成し、内服錠とした。
【０１０３】
製剤例２
Ｉ−ａ ３０ｍｇ
生理食塩水 ２００ｍｌ
Ｉ−ａを生理食塩水に溶解し、点滴剤とした。
【０１０４】
【発明の効果】
本発明により、広範な抗菌スペクトルを有する抗菌剤として使用することができるものを得ることができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】Ｉ−ａの赤外線スペクトルを示す図。
【図２】Ｉ−ａの紫外線スペクトルを示す図。
【図３】Ｉ−ａの ¹ＨＮＭＲスペクトルを示す図。
【図４】Ｉ−ａの¹³ＣＮＭＲスペクトルを示す図。
【図５】Ｉ−ｂの赤外線スペクトルを示す図。
【図６】Ｉ−ｂの紫外線スペクトルを示す図。
【図７】Ｉ−ｂの ¹ＨＮＭＲスペクトルを示す図。
【図８】Ｉ−ｂの¹³ＣＮＭＲスペクトルを示す図。
【図９】Ｉ−ｃの赤外線スペクトルを示す図。
【図１０】Ｉ−ｃの紫外線スペクトルを示す図。
【図１１】Ｉ−ｃの ¹ＨＮＭＲスペクトルを示す図。
【図１２】Ｉ−ｃの¹³ＣＮＭＲスペクトルを示す図。
【図１３】Ｉ−ｄの赤外線スペクトルを示す図。
【図１４】Ｉ−ｄの紫外線スペクトルを示す図。
【図１５】Ｉ−ｄの ¹ＨＮＭＲスペクトルを示す図。
【図１６】Ｉ−ｄの¹³ＣＮＭＲスペクトルを示す図。
【図１７】Ｉ−ｅの赤外線スペクトルを示す図。
【図１８】Ｉ−ｅの紫外線スペクトルを示す図。
【図１９】Ｉ−ｅの ¹ＨＮＭＲスペクトルを示す図。
【図２０】Ｉ−ｅの¹³ＣＮＭＲスペクトルを示す図。
【図２１】試験例２の各種細胞によるグルタミン酸取り込み阻害活性を示す図。白丸は大脳皮質細胞を、黒丸はＣ６グリオーマ細胞を、白四角はアストログリアを、黒四角は小脳顆粒細胞をそれぞれ示す。縦軸はグルタミン酸取り込み率（対照に対する百分率）を、横軸はＩ−ａの濃度（μＭ）を表す。[0001]
BACKGROUND OF THE INVENTION
The present invention relates to the following formula (I):
[0002]
[Chemical formula 2]

[0003]
[In the formula, R¹Represents hydrogen or alkyl having 1 to 6 carbon atoms, R²And R^ThreeEach independently represents hydrogen, substituted or unsubstituted alkyl having 1 to 6 carbon atoms, or substituted or unsubstituted acyl having 1 to 6 carbon atoms, R^FourRepresents a substituted or unsubstituted alkyl having 1 to 12 carbon atoms, and X¹, X², X^Three, X^FourAnd X^FiveEach independently represents hydrogen or halogen. And a pharmaceutically acceptable salt thereof.
[0004]
The compound represented by formula (I) is a novel compound not described in any literature, has a broad antibacterial spectrum as compared with conventionally known antibacterial agents, and is useful as an antibacterial agent. Further, it has an action of inhibiting the activity of a glutamate transporter (hereinafter referred to as “glutamate transporter”), and therefore the compound represented by the above formula (I) is also useful as a glutamate uptake inhibitor.
[0005]
[Prior art]
As a substance produced by one type of actinomycetes, various derivatives having a 2-position benzyl-substituted pyrrole as a basic skeleton and related compounds thereof have been obtained, and these have been known to have various antibacterial activities. For example, pyrrolomycin B, pyrrolomycin C, pyrrolomycin D, pyrrolomycin E, and the like are known in Japanese Patent No. 8256492, and the like. Luteolin is known from Journal of American Chemical Society, vol. 80, p. 4749 (1958).
[0006]
However, development of an excellent antibacterial agent having a broader antibacterial spectrum than these known antibacterial agents has been strongly demanded.
[0007]
[Problems to be solved by the invention]
In view of the above situation, the present invention can be used as an antibacterial agent having a broad antibacterial spectrum, and is also useful as an inhibitor of glutamate uptake, and therefore has a long-term potentiation activity of synaptic transmission. The object is to provide a compound.
[0008]
[Means for Solving the Problems]
As a result of intensive studies, the present inventors have found that Streptomyces sp. It was found that the substance produced by PA-48424 is useful for achieving the above object, and the present invention has been completed.
The gist of the present invention resides in the novel compound itself represented by the above formula (I). Further, the gist of the present invention is a pharmaceutical composition comprising the novel compound as an active ingredient, more specifically, an antibacterial agent and glutamic acid uptake inhibitor itself, and Streptomyces sp. There are also PA-48424 and the manufacturing method of this novel compound.
[0009]
The pharmaceutical composition according to the present invention can be applied to animals including humans as an excellent antibacterial agent. The antibacterial agent according to the present invention has a wide antibacterial spectrum including gram-negative bacteria and gram-positive bacteria, and can particularly effectively act on gram-positive bacteria.
[0010]
Moreover, the said pharmaceutical composition can be utilized as a glutamate uptake inhibitor. The glutamate uptake inhibitory activity is based on inhibition of a glutamate transporter present in the nerve cell membrane, and suppresses the uptake of glutamate, which is a neurotransmitter in synapses. This suppresses inactivation of glutamate and continues activation of glutamate receptors. For this reason, it can be expected to exert an effect of enhancing learning / memory.
As will be described in detail later, the compound of the present invention has a very low toxicity and is suitable for application as such a medicament.
[0011]
Hereinafter, the compound represented by the formula (I) according to the present invention will be described in detail.
In the above formula, R¹Represents hydrogen or alkyl having 1 to 6 carbon atoms, R²And R^ThreeEach independently represents hydrogen, substituted or unsubstituted alkyl having 1 to 6 carbon atoms, or substituted or unsubstituted acyl having 1 to 6 carbon atoms, R^FourRepresents a substituted or unsubstituted alkyl having 1 to 12 carbon atoms, and X¹, X², X^Three, X^FourAnd X^FiveEach independently represents hydrogen or halogen.
[0012]
The above-mentioned “substituted or unsubstituted alkyl having 1 to 6 carbon atoms” means a linear or branched alkyl having 1 to 6 carbon atoms, which is substituted or unsubstituted. Examples thereof include methyl, ethyl, propyl, isopropyl, isobutyl, t-butyl, pentyl, neopentyl, isopentyl, hexyl, and substituents thereof. Examples of the substituent of the above substituent include mercapto, sulfino, Examples include sulfo, amino, imino, hydroxy, alkoxy, halogen and the like. Of the above-mentioned “substituted or unsubstituted alkyl having 1 to 6 carbon atoms”, methyl is preferable.
[0013]
Examples of the above-mentioned “substituted or unsubstituted acyl having 1 to 6 carbon atoms” include, for example, formyl, acetyl, propionyl, malonyl, acryloyl, isobutyryl, butyryl, valeryl, pivaloyl, hexanoyl, adipoyl, glutaryl, methoxalyl, and these Examples of the substituent include the mercapto, sulfino, sulfo, amino, imino, hydroxy, halogen and the like. Of the above-mentioned “substituted or unsubstituted acyl having 1 to 6 carbon atoms”, acetyl is preferable.
The above-mentioned “substituted or unsubstituted alkyl having 1 to 12 carbon atoms” means a linear or branched alkyl having 1 to 12 carbon atoms, which is substituted or unsubstituted. In addition to the above-mentioned “substituted or unsubstituted alkyl having 1 to 6 carbon atoms”, heptyl, octyl, nonyl, decyl, undecyl, dodecyl, and substituted products thereof can be mentioned. Examples of the substituent include mercapto, sulfino, sulfo, amino, imino, hydroxy, alkoxy, halogen and the like. Of the above-mentioned “substituted or unsubstituted alkyl having 1 to 12 carbon atoms”, hexyl, 4-methylpentyl, 4-methylhexyl and 5-methylhexyl are preferable.
Examples of the halogen include fluorine, chlorine, bromine and iodine. Preferably, it is chlorine or bromine.
[0014]
Examples of the pharmaceutically acceptable salt of the compound represented by the above formula (I) include salts of mineral acids such as hydrochloric acid, sulfuric acid, nitric acid, phosphoric acid, hydrofluoric acid, hydrobromic acid; formic acid, acetic acid , Salt of organic acids such as tartaric acid, lactic acid, citric acid, fumaric acid, maleic acid, succinic acid, methanesulfonic acid, ethanesulfonic acid, benzenesulfonic acid, toluenesulfonic acid, naphthalenesulfonic acid, camphorsulfonic acid; sodium, potassium And salts of alkali metals such as calcium or alkaline earth metals.
[0015]
Among the compounds represented by the formula (I) according to the present invention, compounds represented by the following formulas (Ia) to (Ie), and alkylated products, acylated products, halides, and hydrogen substitutions thereof. Derivatives of the body and the like are preferable because they have excellent biological activities such as antibacterial activity and glutamate uptake inhibition activity.
[0016]
[Chemical Formula 3]

[0017]
The compounds such as Ia, Ib, Ic, Id, and Ie are Streptomyces sp. It can be produced using PA-48424.
Streptomyces sp. PA-48424 is a novel actinomycetes not described in the literature, and is described for the first time by the present inventors. This strain has been deposited at the National Institute of Advanced Industrial Science and Technology, under the accession number FERM P-14945 (date of accession: May 26, 1995). Hereinafter, the above Streptomyces sp. The bacteriological properties of PA-48424 will be described in detail.
[0018]
1. Morphological properties
When cultured on each of yeast / malt agar, oatmeal agar, starch / inorganic salt agar and glycerin / asparagine agar, it grows well on all these media and forms abundant aerial hyphae . The aerial hyphae branching pattern is simple, and no axle-like branching is observed. Spores grow on the aerial hyphae and form a straight or wavy chain in a chain. The number of spores per spore chain is 10-50. The surface structure of the spore under the electron microscope is smooth. No disruption of mycelium, spores, or basic hyphae.
2. Culture properties
The culture properties on each of the above-mentioned media are shown in Table 1 below.
[0019]
[Table 1]

[0020]
3. Physiological properties
No melanin-like pigment is produced.
Growth temperature is 14-38 degreeC, and optimal growth temperature is 22-28 degreeC.
The optimum pH is pH 5-9.
Although D-glucose, D-fructose, L-rhamnose, and D-mannitol are used as a carbon source, L-arabinose, xylose, sucrose, inositol, and raffinose cannot be used.
4). Chemical taxonomic properties
Diaminopimelic acid in the microbial cells is LL type.
The isoprenoid quinone type is MK-9 (H₆, H₈).
[0021]
From the above properties, this strain can be determined to be a strain belonging to the genus Streptomyces. When compared with the properties of known species of the genus Streptomyces, no species that matches the availability of the carbon source was found, so this strain was judged to be a novel actinomycete not described in the literature.
[0022]
The compound represented by the formula (I) according to the present invention is obtained by culturing a microorganism having the ability to produce the compound in a medium, and separating a crude extract of the compound represented by the formula (I) from the obtained culture. Then, it can manufacture by refine | purifying. In addition, when the compound represented by the formula (I) according to the present invention corresponds to a derivative of the compound thus produced, it is produced by chemical modification after the purification as necessary. can do.
[0023]
The microorganism is not particularly limited as long as it has the ability to produce the compound represented by the formula (I). For example, the above-mentioned Streptomyces sp. PA-48424 strain, its mutant strain, etc. can be mentioned.
[0024]
The above culture can be carried out according to a known conventional method using a microorganism capable of producing the compound of the present invention. As a medium to be used, any of a synthetic medium or a natural medium can be suitably used as long as it contains carbon sources, nitrogen sources, inorganic substances and other nutrients in appropriate amounts. For example, as a carbon source, sugars such as glucose, maltose, fructose and starch, alcohols such as glycerol, mannitol and ethanol, amino acids such as glycine, alanine and asparagine, fatty acids such as gluconic acid, pyruvic acid and acetic acid, etc. One kind or two or more kinds may be appropriately selected and used from various carbon sources in consideration of assimilability of microorganisms. As the nitrogen source, one or more kinds are appropriately selected from meat extract, peptone, yeast extract, organic nitrogen compounds such as various amino acids or ammonium salts, nitrates, inorganic nitrogen compounds and the like in consideration of assimilability of microorganisms. Can be used. Furthermore, metal salts such as magnesium phosphate, calcium carbonate, zinc, copper and iron, and antifoaming agents such as polypropylene glycol can be added as necessary.
[0025]
The culture temperature can be appropriately changed within the range in which microorganisms grow and produce the compound of the present invention, but is particularly preferably 22 to 28 ° C. The pH is preferably around 6-8, and the culture time is usually about 72-96 hours, and the culture is terminated at an appropriate time in anticipation of the time when the compound of the present invention reaches the maximum titer. Any culture method can be suitably used as long as it is a commonly used method such as batch culture, continuous culture, shaking culture, and aeration and agitation culture. First, shaking culture is performed, and then aeration and agitation culture is performed using a jar fermenter or the like. The method is preferred.
[0026]
The separation can be carried out by a method usually used in the field of microbial industry. For example, a culture obtained by centrifuging from a culture solution cultured according to the above-described method can be obtained with acetone, ethyl acetate or the like. Extraction, adding sodium sulfate, filtering and concentrating under reduced pressure; adding an organic solvent such as acetone to the culture solution, performing suction filtration, and further extracting with an organic solvent such as ethyl acetate be able to.
[0027]
The processing method in the said refinement | purification is not specifically limited, For example, after extracting the crude extract obtained at the said isolation | separation process with n-hexane etc., the chromatography using a support | carriers, such as a silica gel, and a preparative high performance liquid chromatography etc. It can be purified by combination. The obtained purified substance is further extracted with an organic solvent such as ethyl acetate, and then concentrated under reduced pressure, and a crystal can be obtained by a method of recrystallization in an organic solvent such as n-hexane and acetone.
[0028]
When the compound represented by the formula (I) according to the present invention corresponds to a derivative of the compound thus produced, it can be produced by chemical modification after the purification as necessary. Can do. Examples of the chemical modification include alkylation such as methylation, acylation such as acetylation, hydrogen substitution such as halogenation and catalytic reduction.
The methylation can be performed by a known method or the like. For example, a method such as trimethylsilyldiazomethane treatment can be suitably employed.
The acetylation can be performed by a known method or the like. For example, a technique such as acetic anhydride treatment can be suitably employed.
The catalytic reduction can be performed by a known method or the like. For example, a method of performing hydrogenation in the presence of a catalyst such as Pd—C can be suitably employed.
[0029]
The compound of the present invention or a pharmaceutically acceptable salt thereof can be made into various pharmaceutical compositions by using it as an active ingredient. Examples of the pharmaceutical composition include antibacterial agents and glutamate uptake inhibitors based on the antibacterial activity and glutamate uptake inhibitory activity described above. Antibacterial agents can be used for both medicine and veterinary drugs.
[0030]
When administering the compound of the present invention or a pharmaceutically acceptable salt thereof as a pharmaceutical or veterinary drug, as it is or in a pharmaceutically acceptable non-toxic and inert carrier, for example, 0.1 to 99.5%, Preferably, it is administered to animals including humans as a pharmaceutical composition containing 0.5 to 90%.
[0031]
As the carrier, a solid, semi-solid or liquid diluent, a filler, and one or more auxiliary agents for prescription are used. The compound of the present invention or a pharmaceutically acceptable salt thereof is desirably administered in a dosage unit form. The compound of the present invention or a pharmaceutically acceptable salt thereof can be safely administered orally or parenterally. Examples of parenteral dosage forms include topical administration such as intra-tissue administration, subcutaneous administration, intramuscular administration, and arterial / intravenous administration.
[0032]
Oral administration is a solid or liquid dosage unit prepared according to conventional methods, for example, powders, powders, tablets, dragees, capsules, granules, suspensions, solutions, syrups, drops, sublingual tablets It can be performed by other dosage forms.
If desired, dosage unit formulations for oral administration can be microencapsulated. This formulation can also provide extended action time or sustained release by coating or embedding in polymers, waxes, and the like.
[0033]
Parenteral administration can be performed by using a liquid dosage unit form prepared by a usual method, for example, an injection in the form of a solution or a suspension.
Of these administration methods, oral administration and intravenous administration by injection are preferred. Of course, it is administered in a dosage form suitable for these administration methods.
[0034]
The dose of the compound of the present invention is desirably set in consideration of the patient's condition such as age and weight, the nature and degree of illness, etc., but when administered orally to humans as an antibacterial agent, In contrast, 0.1 to 100 mg / kg / day, preferably 0.5 to 10 mg / kg / day may be administered once to several times. When administered parenterally, depending on the administration method Usually, 0.001 to 10 mg / kg / day may be divided into 1 to several times and administered. As the glutamate uptake inhibitor, when administered orally, 0.01 to 10 mg / kg / day, preferably 0.1 to 1 mg / kg / day may be administered once to several times. When orally administered, 0.001-1 mg / kg / day is usually divided into 1 to several times.
[0035]
It can be orally or parenterally administered to animals other than humans, for example, poultry and livestock animals such as chickens, pigs, and cattle, and fish. In the case of oral administration, a mixture of generally used carriers (for example, defatted rice bran, defatted soybean flour, bran, lactose, water, etc.) is administered, or a mixture obtained in this manner, Alternatively, a method in which the compound of the present invention alone is mixed with animal feed or water for administration is preferred. The animal feed may be any animal feed that is generally used as animal feed. For example, corn, bran, rice, wheat, cottonseed meal, milo, soybean meal, fish meal, defatted rice cake, fat, calcium carbonate , Calcium phosphate, sodium chloride, vitamins, magnesium sulfate, iron sulfate and the like, and a part or all of these are used in combination.
[0036]
The content of the compound of the present invention in the feed is suitably in the range of 50 to 2000 ppm per day.
When administered parenterally, it can be used in the same manner as when administered parenterally as the above medicament.
The dose of the compound of the present invention is usually 10 to 400 mg / kg / day in the case of oral administration, and 5 to 200 mg / kg / day in the case of parenteral administration, and this is continuously administered for several days.
【Example】
Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to Examples, Test Examples, and Formulation Examples, but the present invention is not limited only to these Examples, Test Examples, and Formulation Examples.
[0037]
Example 1Isolation of Ia, Ib, Ic, Id
(1) Producing bacteria
As a producing bacterium, Streptomyces sp. PA-48424 was used.
(2) Fermentation process
Solveable starch 0.5%, glucose 0.5%, polypeptone (manufactured by Nippon Pharmaceutical) 0.5%, beef extract (manufactured by Difco) 0.5%, yeast extract (manufactured by Difco) 0.25%, Streptomyces sp. Cultured in a slant in a 2 L Erlenmeyer flask containing 0.25% sodium chloride and 800 ml of a medium consisting of tap water (adjusted to pH 7.0 with 2N NaOH). PA-48424 was inoculated and cultured with shaking at 28 ° C. for 72 hours at an amplitude of 70 mm and 180 rpm. 800 ml of this culture broth, 1.0% glucose, 3.0% soluble starch, 2.0% molasses, 1.0% dry yeast, 1.0% synthetic amino acid powder F (Ajinomoto Co.), zinc sulfate 0.001% heptahydrate, 0.005% monopotassium phosphate, 0.05% antifoaming agent (Hyprox DP-2000, manufactured by Dainippon Ink & Chemicals, Inc.), 35 L of medium consisting of tap water (2N- 50L jar fermenter containing pH adjusted to 7.0 with NaOH), aeration rate 24.5L / min, internal pressure 0.35kg / cm²G, 96 hours of incubation at a stirring speed of 300 rpm and a culture temperature of 28 ° C.
[0038]
(3) Separation process
140 L of the culture solution obtained by repeating the above steps was adjusted to pH 3.5 with 6N hydrochloric acid, and 7 kg of wet cells were obtained using a sharpless centrifuge. After adding 3 L of tap water, extraction was performed twice with 12 L of acetone, and the resulting extract was concentrated under reduced pressure to obtain 5 L of an aqueous phase. Next, after extracting with 6 L of ethyl acetate, washing with 7 L of deionized water,₂SO_Four500 g was added, filtered, and concentrated under reduced pressure to obtain 123 g of a crude extract.
[0039]
(4) Purification process
Of the 123 g of crude extract obtained in the above step, 65 g was dissolved in 620 ml of methanol containing 20 ml of deionized water, and distributed twice with 200 ml of n-hexane to remove the solubilized product of n-hexane, 24 g of extract was obtained. This crude extract (24 g) was dissolved in 50 ml of methylene chloride, and chromatographed with methylene chloride using a column of silica gel (MERCK Kieselgel 60, 70-230 mesh) having an inner diameter of 5 cm and a length of 50 cm. As a result, 850 ml was obtained, and after concentration under reduced pressure, crystallization was performed from n-hexane to obtain 1.18 g of powder. Next, the powder is divided into 6 parts, each of which is dissolved in 4 ml of methanol, and YMC ODS column (S-15 / 30μ, 5.0id × 50 cm, CH_ThreeCN: 0.1% H_ThreePO_Four-H₂O = 65: 35, 50 ml / min, 220 nm), preparative high-performance liquid chromatography was repeated to obtain fractions (total 1.7 L) containing Ia as the main component. A fraction was extracted with 500 ml of ethyl acetate after distilling off acetonitrile, washed with 300 ml of deionized water, and then washed with Na.₂SO_Four50 g was added, filtered, concentrated under reduced pressure, and crystallized from n-hexane to obtain 751 mg of Ia. In the preparative high performance liquid chromatography step, as a subcomponent, a fraction containing Ib as a main component (250 ml), a fraction containing Ic as a main component (550 ml), and Id as a main component Fractions (300 ml) were obtained, and these were also treated in the same manner to obtain 35 mg, 41 mg, and 15 mg of Ib, Ic, and Id, respectively.
[0040]
The compound names and physicochemical properties of the obtained Ia to Id are shown below.
Ia
1. Compound name
(3-Chloro-5-hexyl-2,6-dihydroxy-phenyl)-(4,5-dichloro-1H-pyrrol-2-yl) -methanone
2. Physicochemical properties
Appearance: Light yellow powder
Solubility: CHCl_ThreeSoluble in diethyl ether, acetone, ethyl acetate and methanol. Slightly soluble in n-hexane. Insoluble in water.
Melting point: 145-147 ° C
[Α]_D ^23.5= ± 0 ° C. (c = 1.005, methanol)
Elemental analysis value (C₁₇H₁₈NO_ThreeCl_Three);
Theoretical value; C: 52.26 H: 4.64 N: 3.59 Cl: 27.22
Found: C: 51.96 H: 4.75 N: 3.69 Cl: 26.93
[0041]
HR-LSIMS, m / z:
Theoretical value (C₁₇H₁₉NO_ThreeCl_Three); 390.0430
Actual value: 390.0433 (MH⁺)
EI-MS, m / z: 183 (base peak), 254, 389 (M⁺)
IR, λ_max ^CHCl3cm^-1: 3513, 3419, 2957, 2928, 2858, 1613, 1600, 1571, 1469, 1421, 1393, 1249, 1137, 1064, 1024, 848
UV (in methanol), nm (ε): 225 (sh, 14500), 310 (10000), 358 (10700)
(Dilute hydrochloric acid in methanol), nm (ε): 225 (sh, 13000), 260 (5200), 310 (15000), 340 (sh, 8800)
(In dilute NaOH-methanol), nm (ε): 233 (sh, 13800), 280 (6400), 369 (21300)
[0042]
¹HNMR (CDCl_Three, 600 MHz) δ: 0.89 (3H, t, J = 6.9 Hz), 1.31 (4H, m), 1.35 (2H, m), 1.56 (2H, m), 2.55 (2H, m), 6.08 (1H, br.s), 7.08 (1H, d, J = 2.9 Hz), 7.22 (1H, s), 9.74 (1H, br.s) ), 9.94 (1H, br.s)
¹³CNMR (CDCl_Three, 150 MHz) δ: 14.14 (q), 22.65 (t), 29.10 (t), 29.27 (t), 29.44 (t), 31.72 (t), 110.31 (S) (× 2), 112.61 (s), 119.76 (d), 121.62 (s), 124.81 (s), 128.93 (s), 133.77 (d), 147.89 (s), 157.31 (s), 182.77 (s)
[0043]
The infrared spectrum of Ia is shown in FIG. 1, the ultraviolet spectrum is shown in FIG.¹HNMR is shown in FIG.¹³CNMR is shown in FIG.
[0044]
Ib
1. Compound name
[3-Chloro-2,6-dihydroxy-5- (4-methyl-pentyl) -phenyl]-(4,5-dichloro-1H-pyrrol-2-yl) -methanone
2. Physicochemical properties
Appearance: Light yellow powder
Solubility: CHCl_ThreeSoluble in diethyl ether, acetone, ethyl acetate and methanol. Slightly soluble in n-hexane. Insoluble in water.
Melting point: 148-150 ° C
HR-LSIMS, m / z:
Theoretical value (C₁₇H₁₉NO_ThreeCl_Three); 390.0430
Actual value: 390.0429 (MH⁺)
EI-MS, m / z: 389 (M⁺)
IR, λ_max ^CHCl3cm^-1: 3513, 3419, 2956, 2928, 2869, 1613, 1601, 1571, 1469, 1421, 1394, 1338, 1252, 1138, 1065, 1024
UV (in methanol), nm (ε): 255 (sh, 14300), 310 (10400), 358 (10300)
(Dilute hydrochloric acid in methanol), nm (ε): 225 (sh, 13100), 260 (5300), 310 (14900), 340 (sh, 8300)
(In dilute NaOH-methanol), nm (ε): 233 (sh, 13500), 280 (6300), 370 (20700)
[0045]
¹HNMR (CDCl_Three, 600 MHz) δ: 0.88 (6H, d, J = 6.6 Hz), 1.23 (2H, m), 1.56 (2H, m), 1.57 (2H, m), 2.53 (2H, t, J = 7.8 Hz), 6.07 (1H, s), 7.09 (1H, d, J = 2.9 Hz), 7.22 (1 H, s), 10.1 (1H , S), 9.55 (1H, br. S)
¹³CNMR (CDCl_Three, 150 MHz) δ: 22.60 (q) (× 2), 27.31 (t), 27.88 (d), 29.50 (t), 38.66 (t), 110.23 (s) (× 2), 112.55 (s), 119.58 (d), 121.37 (s), 124.80 (s), 128.91 (s), 133.73 (d), 147.84 (S), 157.36 (s), 182.70 (s)
[0046]
The infrared spectrum of Ib is shown in FIG. 5, the ultraviolet spectrum is shown in FIG.¹HNMR is shown in FIG.¹³CNMR is shown in FIG.
[0047]
Ic
1. Compound name
[3-Chloro-2,6-dihydroxy-5- (4-methyl-hexyl) -phenyl]-(4,5-dichloro-1H-pyrrol-2-yl) -methanone
2. Physicochemical properties
Appearance: Light yellow powder
Solubility: CHCl_ThreeSoluble in diethyl ether, acetone, ethyl acetate and methanol. Slightly soluble in n-hexane. Insoluble in water.
Melting point: 138-140 ° C
HR-LSIMS, m / z:
Theoretical value (C₁₈H_{twenty one}NO_ThreeCl_Three); 404.0587
Actual value: 404.0587 (MH⁺)
EI-MS, m / z: 183 (base peak), 268, 403 (M⁺)
IR, λ_max ^CHCl3cm^-1: 3513, 3420, 3226, 2960, 2928, 2872, 1613, 1600, 1570, 1463, 1421, 1393, 1250, 1138, 1065, 1024, 943, 929, 894, 840 UV (in methanol), nm (ε): 225 (sh, 15100), 310 (9800), 357 (9800)
(Dilute hydrochloric acid in methanol), nm (ε): 225 (sh, 13600), 258 (4900), 310 (14200), 340 (sh, 7900)
(In dilute NaOH-methanol), nm (ε): 233 (sh, 13200), 281 (6100), 371 (19700)
[0048]
¹HNMR (CDCl_Three, 600 MHz) δ: 0.86 (3H, t, J = 7.3 Hz), 0.86 (3H, d, J = 6.2 Hz), 1.14 (1H, m), 1.17 (1H, m), 1.35 (2H, m), 1.36 (1H, m), 1.55 (2H, m), 2.51 (1H, d, d, d, J = 6.7, 8.. 8,14.0 Hz), 2.55 (1H, d, d, d, J = 6.7, 8.8, 14.0 Hz), 6.08 (1 H, s), 7.09 (1 H, d , J = 2.9 Hz), 7.23 (1H, s), 9.58 (1H, br.s), 10.00 (1H, s)
¹³CNMR (CDCl_Three, 150 MHz) δ: 11.41 (q), 19.17 (q), 27.00 (t), 29.43 (t), 29.57 (t), 34.26 (d), 36.33 (T), 110.23 (s) (x2), 112.54 (s), 119.58 (d), 121.38 (s), 124.81 (s), 128.91 (s), 133.72 (d), 147.84 (s), 157.34 (s), 182.70 (s)
[0049]
The infrared spectrum of Ic is shown in FIG. 9, the ultraviolet spectrum is shown in FIG.¹HNMR is shown in FIG.¹³CNMR is shown in FIG.
[0050]
I-d
1. Compound name
[3-Chloro-2,6-dihydroxy-5- (5-methyl-hexyl) -phenyl]-(4,5-dichloro-1H-pyrrol-2-yl) -methanone
2. Physicochemical properties
Appearance: Light yellow powder
Solubility: CHCl_ThreeSoluble in diethyl ether, acetone, ethyl acetate and methanol. Slightly soluble in n-hexane. Insoluble in water.
Melting point: 153-155 ° C
HR-LSIMS, m / z:
Theoretical value (C₁₈H_{twenty one}NO_ThreeCl_Three); 404.0587
Actual value: 404.0585 (MH⁺)
EI-MS, m / z: 183 (base peak), 268, 403 (M⁺)
IR, λ_max ^CHCl3cm^-1: 3513, 3419, 3222, 2955, 2928, 2858, 1613, 1601, 1571, 1468, 1421, 1393, 1250, 1138, 1065, 1023, 943, 848
UV (in methanol), nm (ε): 225 (sh, 13900), 310 (9300), 358 (10000)
(Dilute hydrochloric acid in methanol), nm (ε): 225 (sh, 13100), 260 (4800), 310 (14100), 340 (sh, 8000)
(In dilute NaOH-methanol), nm (ε): 233 (sh, 13100), 279 (6100), 370 (19600)
[0051]
¹HNMR (CDCl_Three, 600 MHz) δ: 0.87 (6H, d, J = 6.8 Hz), 1.21 (2H, m), 1.34 (2H, m), 1.53 (3H, m), 2.55 (2H, t, J = 7.7 Hz), 6.08 (1H, s), 7.09 (1H, d, J = 2.6 Hz), 7.22 (1H, s), 9.58 (1H , Br.s), 10.00 (1H, s)
¹³CNMR (CDCl_Three, 150 MHz) δ: 22.65 (q) (× 2), 27.19 (t), 27.92 (d), 29.28 (t), 29.69 (t), 38.77 (t) 110.24 (s) (x2), 112.54 (s), 119.58 (d), 121.38 (s), 124.78 (s), 128.91 (s), 133.72 (D) 147.85 (s), 157.33 (s), 182.70 (s)
[0052]
The infrared spectrum of Id is shown in FIG. 13, the ultraviolet spectrum is shown in FIG.¹HNMR is shown in FIG.¹³CNMR is shown in FIG.
[0053]
The results of thin layer chromatography (hereinafter referred to as “TLC”) and high performance liquid chromatography (hereinafter referred to as “HPLC”) of the obtained Ia to Id were shown below.
TLC Rf value (detected with concentrated sulfuric acid):
(CH₂Cl₂Ia = Ib = Ic = Id = 0.28
(N-hexane: ethyl acetate = 2: 1) Ia = Ib = Ic = Id = 0.40
HPLC analysis:
Retention time; Ia = 8.40 minutes, Ib = 7.73 minutes, Ic = 10.21 minutes, Id = 10.61 minutes
Analysis conditions for HPLC analysis:
Column; Ultron VX-ODS, 5 μm, 4.6 i. d. × 150mm (manufactured by Shinwa Kako)
Mobile phase; 0.1% H_ThreePO_Four-CH_ThreeCN: 0.1% H_ThreePO_Four-Water = 75:25
Flow rate: 1 ml / min
Detection wavelength: 220 nm
[0054]
Example 2Isolation of Ie
(1) Producing bacteria
As a producing bacterium, Streptomyces sp. PA-48424 was used.
(2) Fermentation process
Solvel starch 0.5%, glucose 0.5%, polypeptone (manufactured by Nippon Pharmaceutical) 0.5%, beef extract (manufactured by Difco) 0.5%, yeast extract (manufactured by Difco) 0.25%, Streptomyces sp. Cultured in a slant culture in a 500 ml Erlenmeyer flask containing 100 ml of a medium consisting of 0.25% sodium chloride and tap water (adjusted to pH 7.0 with 2N NaOH). Inoculated with 1 ml of a stock solution of PA-48424 (preserved frozen at −80 ° C.) and cultured at 28 ° C. for 72 hours at an amplitude of 70 mm and 180 rpm. 4 ml of this culture broth was mixed with 1.0% glucose, 3.0% soluble starch, 1.0% waste molasses, 1.0% sodium bromide, 1.0% dry yeast, and synthetic amino acid powder F (manufactured by Ajinomoto Co., Inc.). ) In a 500 ml Erlenmeyer flask containing 1.0%, zinc sulfate heptahydrate 0.001%, monopotassium phosphate 0.005%, 100 ml of a medium consisting of tap water (adjusted to pH 7.0 with 2N NaOH) Inoculated and cultured at 28 ° C. for 96 hours at an amplitude of 70 mm and 180 rpm.
[0055]
(3) Separation process
After 5 L of acetone was added to 5 L of the culture solution obtained in the above step and stirred for 2 hours, acetone was distilled off under reduced pressure from the filtrate obtained by suction filtration using 300 g of Celite, and the aqueous layer was diluted with ethyl acetate (3 L). ) To obtain a crude extract (1.2 g).
[0056]
(4) Purification process
1.2 g of the crude extract obtained in the above step was dissolved in 100 ml of (methanol: water = 9: 1), extracted twice with 100 ml of n-hexane, and the solvent was distilled off from the methanol layer of the residue under reduced pressure. A fraction (700 mg) was obtained. This crude fraction (700 mg) was dissolved in methanol (5 ml), adsorbed and dried on silica gel (MERCK Kieselgel 60, 70-230 mesh, 1.9 g), and then silica gel (MERCK Kieselgel 60) having an inner diameter of 3 cm and a length of 50 cm. , 70-230 mesh, 80 g), and was subjected to chromatography using toluene: ethyl acetate = 98: 2 to obtain a fraction (50 mg) containing Ie as a main component. Next, this fraction (50 mg) was dissolved in methanol (1.25 ml), and preparative high-performance liquid chromatography (column: ULTRON VX-ODS 20 id × 250 mm (manufactured by Shinwa Chemical Industry Co., Ltd.)) was repeated. Ie elution fraction (120 ml) was obtained. Chromatographic conditions were as follows: acetonitrile: 0.1% TFA aq. = 70:30, flow rate 8 ml / min, sample injection amount 250 ml / times, and detection was performed at 230 nm. The fraction was extracted with ethyl acetate (50 ml) after distilling off acetonitrile, washed with saturated brine (50 ml), and dried over anhydrous Na₂SO_FourWas filtered, concentrated under reduced pressure, and crystallized from n-hexane-acetone to obtain 13.7 mg of Ie.
[0057]
The compound name and physicochemical properties of the obtained Ie are shown below.
Ie
1. Compound name
(3-Bromo-5-hexyl-2,6-dihydroxy-phenyl)-(4,5-dibromo-1H-pyrrol-2-yl) -methanone
2. Physicochemical properties
Appearance: Light brown powder
Melting point: 128-130 ° C
HR-LSIMS, m / z:
Theoretical value (C₁₇H₁₉NO_ThreeBr_Three); 521.8916
Found: 521.8914 (MH⁺)
L-SIMS, m / z: 522 (MH⁺)
IR, λ_max ^CHCl3cm^-1: 3493, 3417, 3021, 3017, 2957, 2928, 2857, 1611, 1596, 1566, 1463, 1421, 1403, 1382, 1240, 1223, 1213, 1204, 1132, 1057, 981, 939, 895, 836
UV (in methanol), nm (ε): 224 (sh, 17700), 313.7 (11100), 357.2 (10800)
(In dilute hydrochloric acid-methanol), nm (ε): 225 (sh, 15600), 313.0 (15400)
(In dilute NaOH-methanol), nm (ε): 220 (sh, 21900), 240 (sh, 13000), 281.4 (7000), 370.3 (22400)
[0058]
¹HNMR (CDCl_Three, 300 MHz) δ: 0.89 (3H, t, J = 6.9 Hz), 1.31 (6H, m), 1.59 (2H, m), 2.55 (2H, t, J = 8. 1 Hz), 6.05 (1 H, s), 7.12 (1 H, d, J = 2.7 Hz), 7.35 (1 H, s), 9.72 (1 H, br. S), 9.93 (1H, s)
¹³CNMR (CDCl_Three, 75 MHz) δ: 14.11, 22.61, 29.09, 29.24, 29.45, 31.69, 100.00, 101.76, 110.23, 110.93, 122.25, 125 .37, 132.45, 136.55, 148.78, 157.96, 182.58
[0059]
The infrared spectrum of Ie is shown in FIG. 17, the ultraviolet spectrum is shown in FIG.¹HNMR is shown in FIG.¹³CNMR is shown in FIG.
[0060]
The results of TLC and HPLC of the obtained Ie were shown below.
TLC Rf value (detected with concentrated sulfuric acid):
(CH₂Cl₂) Ie = 0.32 (Ia = 0.27)
(N-hexane: ethyl acetate = 2: 1) Ie = 0.40 (Ia = 0.38) HPLC analysis:
Retention time; Ie = 10.22 minutes (Ia = 8.12 minutes)
Analysis conditions for HPLC analysis:
Column; Ultron VX-ODS, 5 μm, 4.6 i. d. × 150mm (manufactured by Shinwa Kako)
Mobile phase; 0.1% H_ThreePO_Four-CH_ThreeCN: 0.1% H_ThreePO_Four-Water = 75:25
Flow rate: 1 ml / min
Detection wavelength: 220 nm
[0061]
Example 3Acetylation of Ia
Acetic anhydride (0.25 ml) was added to a solution of Ia (8 mg, 0.02 mmol) in pyridine (0.5 ml) and stirred for 10 minutes. Toluene was added to the reaction solution, the solvent was distilled off under reduced pressure, the residue was subjected to silica gel column chromatography (Merck Kieselgel 60, 70-230 mesh, 1 g), and CH.₂Cl₂Elution with a mixed solvent of: methanol = 50: 1 and diacetylated product of Ia (hereinafter referred to as “Ia₁(9 mg) was obtained.
[0062]
The physicochemical properties of this product are shown below.
HR-LSIMS, m / z:
Theoretical value (C_{twenty one}H_{twenty three}NO_FiveCl_Three); 474.0642
Actual value: 474.0641 (MH⁺)
LSIMS, m / z: 474 (MH⁺)
IR, λ_max ^CHCl3cm^-1: 3418, 2958, 2930, 2859, 1772, 1638, 1453, 1424, 1390, 1370, 1323, 1183, 1139, 1100, 1059, 1043, 1023, 895
¹HNMR (CDCl_Three, 600 MHz) δ: 0.89 (3H, t, J = 6.6 Hz), 1.31 (4H, m), 1.35 (2H, m), 1.58 (2H, m), 2.09 (3H, s), 2.13 (3H, s), 2.46 (2H, t, J = 7.8 Hz), 6.66 (1H, br. S), 7.44 (1H, s), 9.50 (1H, br.s)
¹³CNMR (CDCl_Three150 MHz) δ: 14.06, 20.26, 20.35, 22.53, 29.11, 29.27, 29.78, 31.51, 112.83, 119.30, 122.24, 125 .48, 126.97, 128.39, 132.02, 135.55, 142.60, 144.87, 167.58, 168.34, 177.82.
[0063]
Ia obtained₁The chemical structural formula of is shown below. In the following formula, Ac represents an acetyl group.
[0064]
[Formula 4]

[0065]
Example 4Methylation of Ia (1)
An excess of trimethylsilyldiazomethane (10% n-hexane solution, manufactured by Nacalai Tesque) was added to a methanol: benzene (1: 1) mixed solution (1 ml) of Ia (40 mg, 0.10 mmol) and left at room temperature for 12 hours. did. The solvent was distilled off under reduced pressure, and the residue was subjected to thin layer chromatography (Pre-Coated TLC Plates, SILICA GEL F-254, manufactured by E. Merck), and a mixed solvent of n-hexane: ethyl acetate = 15: 1. And purified by trimethylation of Ia (hereinafter referred to as “Ia₂”) (20 mg) was obtained.
[0066]
The physicochemical properties of this product are shown below.
LSIMS, m / z: 432 (MH⁺)
IR, λ_max ^CHCl3cm^-1: 2957, 2930, 2858, 1642, 1586, 1569, 1469, 1416, 1380, 1342, 1256, 1173, 1143, 1104, 1078, 1002, 979, 944, 885, 861¹HNMR (CDCl_Three, 600 MHz) δ: 0.87 (3H, t, J = 6.6 Hz), 1.29 (4H, m), 1.34 (2H, m), 1.58 (2H, m), 2.54 (2H, m), 3.65 (3H, s), 3.75 (3H, s), 4.05 (3H, s), 6.37 (1H, s), 7.24 (1H, s)
¹³CNMR (CDCl_Three, 150 MHz) δ: 14.33, 22.83, 29.26, 30.54, 34.56 (× 2), 62.64, 63.20, 111.05, 120.98, 123.06, 126 .00, 129.82, 130.04, 132.05, 133.82, 151.55, 154.48, 182.15
[0067]
Ia obtained₂The chemical structural formula of is shown below.
[0068]
[Chemical formula 5]

[0069]
Example 5Methylation of Ia (2)
An excess of trimethylsilyldiazomethane (10% n-hexane solution, manufactured by Nacalai Tesque) was added to a benzene solution (1 ml) of Ia (10 mg, 0.026 mmol) and allowed to stand at room temperature for 12 hours. The solvent was distilled off under reduced pressure, and the residue was subjected to thin-layer chromatography (Pre-Coated TLC Plates, SILICA GEL F-254, manufactured by E. Merck) and CH.₂Cl₂Separation and purification with a solvent, Ia dimethylate (hereinafter referred to as "Ia_Three(3.6 mg) was obtained.
[0070]
The physicochemical properties of this product are shown below.
EIMS, m / z: 197 (base peak), 268, 417 (M⁺)
IR, λ_max ^CHCl3cm^-1: 2957, 2929, 2858, 1600, 1571, 1523, 1468, 1455, 1399, 1344, 1273, 1179, 1146, 1104, 1073, 1008, 966, 894, 854
¹HNMR (CDCl_Three, 600 MHz) δ: 0.89 (3H, t, J = 6.6 Hz), 1.31 (4H, m), 1.36 (2H, m), 1.58 (2H, m), 2.57 (2H, m), 3.63 (3H, s), 4.00 (3H, br.s), 6.73 (1H, s), 7.24 (1H, s), 8.48 (1H, br.s)
¹³CNMR (CDCl_Three150 MHz) δ: 14.11, 22.60, 29.12, 29.34, 29.41, 31.67, 34.51, 62.22, 110.91, 117.79, 118.25, 121 .63, 125.81, 128.12, 129.64, 134.01, 152.16, 154.83, 184.09
[0071]
Ia obtained_ThreeThe chemical structural formula of is shown below.
[0072]
[Chemical 6]

[0073]
Example 6Methylation of Ia (3)
A benzene solution (1 ml) of Ia (10 mg, 0.026 mmol) was kept at 5 to 10 ° C., trimethylsilyldiazomethane (10% n-hexane solution, manufactured by Nacalai Tesque) was added and left for 20 minutes. The solvent was distilled off under reduced pressure, and the residue was subjected to thin-layer chromatography (Pre-Coated TLC Plates, SILICAGEL F-254, manufactured by E. Merck) and CH.₂Cl₂Separation and purification with a solvent, Ia monomethylated product (hereinafter referred to as "Ia_Four(6 mg) was obtained.
[0074]
The physicochemical properties of this product are shown below.
EIMS, m / z: 197 (base peak), 268, 403 (M⁺)
IR, λ_max ^CHCl3cm^-1: 3418, 3249, 2957, 2929, 2858, 1594, 1562, 1506, 1467, 1423, 1329, 1264, 1139, 1101, 1073, 1023, 980, 937, 898, 850, 844
¹HNMR (CDCl_Three, 400 MHz) δ: 0.89 (3H, t, J = 6.6 Hz), 1.31 (4H, m), 1.34 (2H, m), 1.58 (2H, m), 2.56 (2H, m), 3.67 (3H, s), 7.14 (1H, d, J = 2.9 Hz), 7.28 (1H, s), 9.69 (1H, br.s), 9.97 (1H, s)
¹³CNMR (CDCl_Three, 100 MHz) δ: 14.12, 22.61, 29.12, 29.25, 29.53, 31.68, 62.63, 113.01, 115.72, 117.23, 120.37, 121 .63, 128.70, 129.08, 135.03, 151.89, 156.95, 182.77
[0075]
Ia obtained_FourThe chemical structural formula of is shown below.
[0076]
[Chemical 7]

[0077]
Example 7 Catalytic reduction of Ia
To an ethanol solution (2 ml) of Ia (40 mg, 0.10 mmol), 10% Pd-C (28 mg, 50% wet weight, manufactured by Engelhard Japan) was added, and the medium pressure at room temperature (3 kg / cm^ThreeHydrogen gas pressure) Hydrogenation is carried out for 17 hours. After removing the catalyst by filtration, the solvent was distilled off under reduced pressure, and the residue was subjected to high performance liquid chromatography (Ultran VX-ODS, 2.0 id × 25 cm, acetonitrile: 0.1% H_ThreePO_Four-Water = (66:34) to (80:20) for 33 minutes linear gradient), three kinds of hydrogen substitution products of Ia (hereinafter, these are referred to as "Ia_Five"," Ia₆"," Ia₇And Ia were separated and purified. For each fraction, the solvent was distilled off under reduced pressure, and the aqueous layer of the residue was extracted with ethyl acetate._Five(1.3 mg), Ia₆(4.4 mg), Ia₇(3.1 mg) and Ia (2.2 mg) were obtained.
[0078]
Ia obtained_Five, I-a₆, I-a₇The physicochemical properties of were shown below.
[0079]
Ia _Five
EIMS, m / z: 183 (base peak), 254, 355 (M⁺)
IR, λ_max ^CHCl3cm^-1: 3515, 3437, 3141, 2957, 2928, 2857, 1613, 1601, 1573, 1454, 1421, 1383, 1341, 1248, 1134, 1109, 1064, 1023, 940, 895, 847
¹HNMR (CDCl_Three, 400 MHz) δ: 0.89 (3H, t, J = 6.6 Hz), 1.31 (4H, m), 1.34 (2H, m), 1.57 (2H, m), 2.55 (2H, m), 6.38 (1H, t, d, J = 2.3, 4.0 Hz), 6.44 (1H, d, J = 8.4 Hz), 7.14 (1H, d, J = 8.4 Hz), 7.14 (1H, m), 7.18 (1H, m), 7.40 (1H, br.s), 8.82 (1H, s), 9.55 (1H) , Br.s)
¹³CNMR (CDCl_Three150 MHz) δ: 14.13, 22.63, 29.10, 29.28, 29.45, 31.72, 110.31, 110.72, 115.02, 118.94, 122.90, 124 .61, 130.86, 133.60, 148.05, 157.05, 183.75
[0080]
Ia obtained_FiveThe chemical structural formula of is shown below.
[0081]
[Chemical 8]

[0082]
Ia ₆
EIMS, m / z: 149 (base peak), 220, 321 (M⁺)
IR, λ_max ^CHCl3cm^-1: 3528, 3437, 3141, 2957, 2928, 2857, 1624, 1594, 1576, 1454, 1422, 1385, 1340, 1245, 1177, 1108, 1038, 988, 939, 838
¹HNMR (CDCl_Three, 600 MHz) δ: 0.88 (3H, t, J = 7.0 Hz), 1.32 (6H, m), 1.57 (2H, m), 2.55 (2H, t, J = 8. 0 Hz), 6.41 (1 H, d, J = 8.2 Hz), 6.98 (1 H, s), 7.07 (2 H, m), 7.14 (1 H, d, J = 8.2 Hz) 8.77 (1H, s), 9.52 (1H, br. S)
¹³CNMR (CDCl_Three150 MHz) δ: 14.14, 22.66, 29.15, 29.38, 29.68, 31.74, 107.80, 110.18, 115.31, 117.97, 122.43, 123 .26, 130.49, 135.74, 154.81, 156.41, 184.07
[0083]
Ia obtained₆The chemical structural formula of is shown below.
[0084]
[Chemical 9]

[0085]
Ia ₇
EIMS, m / z: 149 (base peak), 220, 287 (M⁺)
IR, λ_max ^CHCl3cm^-1: 3523, 3445, 2956, 2927, 2856, 1626, 1593, 1575, 1539, 1472, 1424, 1400, 1340, 1176, 1118, 1103, 1092, 1046, 993
¹HNMR (CDCl_Three, 600 MHz) δ: 0.88 (3H, t, J = 7.0 Hz), 1.31 (4H, m), 1.35 (2H, m), 1.57 (2H, m), 2.55 (2H, m), 6.38 (1H, t, d, J = 2.3, 4.0 Hz), 6.44 (1H, d, J = 8.4 Hz), 7.14 (1H, d, J = 8.4 Hz), 7.14 (1H, m), 7.18 (1H, m), 7.40 (1H, br.s), 8.82 (1H, s), 9.55 (1H) , Br.s)
¹³CNMR (CDCl_Three150 MHz) δ: 14.11, 22.60, 29.12, 29.34, 29.41, 31.67, 34.51, 62.22, 110.91, 117.79, 118.25, 121 .63, 125.81, 128.12, 129.64, 134.01, 152.16, 154.83, 184.09
[0086]
Ia obtained₇The chemical structural formula of is shown below.
[0087]
Embedded image

[0088]
Test example 1Antibacterial activity
The antibacterial spectrum was examined by measuring the antibacterial activity of Ia, Ib, Ic, Id, and Ie against Gram negative bacteria and Gram positive bacteria. The results are shown in Table 2.
[0089]
[Table 2]

[0090]
In Table 2, the bacteria name is E. coli. E. coli NIHJ JC-2 is Escherichia coli NIHJ JC-2. aeruginosa ATCC 25619 is a Pseudomonas aeruginosa ATCC 25619, pneumoniae ATCC 27736 is the same as Klebsiella pneumoniae ATCC 27736. pleuropneumoniae NB-001 is the same as Actinobacillus pleuropneumoniae NB-001. multicida D-6 is Pasteurella multicida D-6. picicida no. 2 is Pasteurella piscida No. 2; 2 to H. pylori ATCC 43629 is the same as Helicobacter pylori ATCC 43629. aureus FDA 209P is a staphylococcus aureus FDA 209P. aureus 17004 (MRSA) is a staphylococcus aureus 17004 (MRSA); perfringens ATCC 13124 is a Clostridium perfringens ATCC 13124. serialoida SN86119 indicates Enterococcus serialoida SN86119, respectively.
[0091]
In Table 2, the minimum inhibitory concentration (hereinafter also referred to as “MIC”) was measured under the culture conditions shown in Table 3, using the test medium shown in Table 3 as the inoculum medium and the MIC measurement medium. The inoculum concentration is 10⁶CFU / ml.
[0092]
[Table 3]

[0093]
In Table 3, the test media are (1) Muller Hinton Broth (Difco), (2) Muller Hinton Agar (Difco), and (3) 0.05% β-NAD-added Colombia. Broth (manufactured by Difco), (4) 2% NaCl-added Brain Heart Infusion Broth (manufactured by Difco), (5) 7% horse blood-added Blod Agar Base No. 2 (Difco), (6) Cooked Meat Medium (Difco), (7) GAM Agar (Difco), (8) Trypto-Soya Broth (Nissui) (9) shows Sensitivity Disk Agar-N (manufactured by Nissui). The bacteria name is the same as above.
[0094]
As is apparent from Table 2, the substance of the present invention has a wide range of antibacterial activities against Gram-negative bacteria, Gram-positive bacteria and the like. Among gram-negative bacteria, P. multicida, P.M. pisicida and H. p. It showed strong activity against Pylori. Moreover, it showed remarkable antibacterial activity as a whole against Gram-positive bacteria and was also effective against MRSA. In particular, Ia, Ib, Ic, and Ie have been found to have a wide range of antibacterial spectrum.
[0095]
Test example 2Glutamate transporter inhibitory activity in cerebellar granule cells
The following compounds were examined for glutamate transporter inhibitory activity in cerebellar granule cells.
Ia, Ib, Ic, Id, Ie, Ia₁, I-a_Three, I-a_Four, I-a_Five, I-a₆, I-a₇
(1) Preparation of specimen
All specimens were dissolved to 10 mg / ml using dimethyl sulfoxide (DMSO). The DMSO concentration brought in for activity measurement was 4% or less.
[0096]
(2) Preparation of cerebellar granule cells
Twenty cerebellums of 8-day-old SD rats were excised and treated with 1% trypsin solution for 10 minutes at 37 ° C., and the cells were dispersed by pipetting. A large tissue mass was removed through a nylon mesh. Cells dispersed in 20 24-well dishes whose surfaces were coated with poly-L-lysine were dispensed. The medium used was an α-MEM medium supplemented with 10% bovine serum and 25 mM KCl. Cells were dispensed into 24-well dishes, and final concentrations of 10 μM cytosine β-D-arabinofuranoside were added 24-48 hours after removal of proliferating cells. Thereafter, the medium was changed every three days, and the cells of 1-2 weeks were used for the experiment (Manual of the Nervous System, pages 203-206 (1989), Alan R. Liss, Inc).
[0097]
(3) Measurement of glutamate transporter activity
The cells were washed twice with Krebs-Ringer solution (KRB), added with KRB containing the sample, and treated at 37 ° C. for 10 minutes. In addition [^ThreeH] 1 μM glutamic acid containing a labeled body was added and reacted at 37 ° C. for 10 minutes. At the end of glutamic acid uptake, the cells were washed twice with 1 ml of cold KRB. Then, the cells were lysed with 0.01% sodium deoxycholate containing 0.05% sodium dodecyl sulfate, and [^ThreeH] was measured for radioactivity.
[0098]
(4) Screening method
A specimen that inhibits glutamate uptake activity of nerve cells obtained from a natural product culture extract was selected.
Furthermore, the same cells having no GABA uptake inhibitory activity were selected.
Through the above operation, a component having high glutamate transporter specificity was selected.
The active ingredient was fractionated and purified using glutamate uptake inhibition activity as an index.
[0099]
(5) Results
Regarding the above 11 compounds, 50% inhibitory concentration (hereinafter referred to as “IC”)₅₀Is shown in Table 4.
[0100]
[Table 4]

[0101]
As a result of Table 4, Ia, Ib, Ic, and Id are ICs for inhibition of glutamate uptake.₅₀The value was 0.8 μM and Ie was 0.4 μM. Furthermore, the inhibitory activity was partial to suppress glutamic acid uptake by up to 65%.
The glutamic acid uptake inhibition mode of Ia was found to be a non-competitive inhibition type by Line-Weaver Plot analysis.
In the compounds modified with the Cl group and OH group of Ia, the glutamic acid uptake inhibitory activity tended to be weaker than that of Ia, Ib, Ic, Id and the like.
Ia₁, I-a₇Then, the maximum value of the glutamate uptake inhibitory activity was 95%.
[0102]

After mixing the above formulation components except hydroxypropylmethylcellulose and magnesium stearate uniformly, granules for tableting were produced by wet granulation method using hydroxypropylmethylcellulose 8% (w / w) aqueous solution as a binder. This was mixed with magnesium stearate, and then formed into a diameter of 7 mm and a tablet weight of 130 mg using a tableting machine to make an internal tablet.
[0103]
Formulation Example 2
Ia 30mg
200ml of physiological saline
Ia was dissolved in physiological saline to prepare a drop.
[0104]
【The invention's effect】
According to the present invention, what can be used as an antibacterial agent having a broad antibacterial spectrum can be obtained.
[Brief description of the drawings]
FIG. 1 is a diagram showing an infrared spectrum of Ia.
FIG. 2 is a diagram showing an ultraviolet spectrum of Ia.
Fig. 3 Ia¹The figure which shows a HNMR spectrum.
Fig. 4 Ia¹³The figure which shows a CNMR spectrum.
FIG. 5 is a diagram showing an infrared spectrum of Ib.
FIG. 6 is a diagram showing an ultraviolet spectrum of Ib.
FIG. 7: Ib¹The figure which shows a HNMR spectrum.
FIG. 8: Ib¹³The figure which shows a CNMR spectrum.
FIG. 9 is a diagram showing an infrared spectrum of Ic.
FIG. 10 is a diagram showing an ultraviolet spectrum of Ic.
FIG. 11: Ic¹The figure which shows a HNMR spectrum.
FIG. 12: Ic¹³The figure which shows a CNMR spectrum.
FIG. 13 is a diagram showing an infrared spectrum of Id.
FIG. 14 is a diagram showing an ultraviolet spectrum of Id.
FIG. 15: Id¹The figure which shows a HNMR spectrum.
FIG. 16: Id¹³The figure which shows a CNMR spectrum.
FIG. 17 is a diagram showing an infrared spectrum of Ie.
FIG. 18 is a diagram showing an ultraviolet spectrum of Ie.
FIG. 19 Ie¹The figure which shows a HNMR spectrum.
FIG. 20: Ie¹³The figure which shows a CNMR spectrum.
FIG. 21 is a graph showing glutamate uptake inhibition activity by various cells of Test Example 2. White circles indicate cerebral cortical cells, black circles indicate C6 glioma cells, white squares indicate astroglia, and black squares indicate cerebellar granule cells. The vertical axis represents the glutamate uptake rate (percentage relative to the control), and the horizontal axis represents the concentration of Ia (μM).

Claims (4)

Formula (I);

[Wherein, R ¹ represents hydrogen or alkyl having 1 to 6 carbon atoms, and R ² and R ³ each independently represents hydrogen, substituted or unsubstituted alkyl having 1 to 6 carbon atoms, or substituted or unsubstituted. R ⁴ represents a substituted or unsubstituted alkyl having 1 to 12 carbon atoms, and X ¹ , X ² , X ³ , X ⁴ and X ⁵ are each independently hydrogen. Or represents halogen. Or a pharmaceutically acceptable salt thereof.   A pharmaceutical composition comprising the compound according to claim 1 as an active ingredient.   An antibacterial agent comprising the compound according to claim 1 as an active ingredient.   Streptomyces sp. Having the ability to produce the compound according to claim 1. PA-48424.

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