JP3579209B2

JP3579209B2 - 20-epi-22 (R) -lower alkyl vitamin D derivative and calcium metabolism improver containing the same as active ingredient

Info

Publication number: JP3579209B2
Application number: JP06745097A
Authority: JP
Inventors: 幸子山田; 恵子山本
Original assignee: 幸子山田
Priority date: 1997-03-04
Filing date: 1997-03-04
Publication date: 2004-10-20
Anticipated expiration: 2017-03-04
Also published as: WO1998039292A1; JPH10245372A

Description

【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、２０−エピ−２２（Ｒ）−低級アルキルビタミンＤ誘導体およびそれを有効成分とするカルシウム代謝改善剤に関する。さらに詳しくは、慢性腎不全、副甲状腺機能低下症、副甲状腺機能亢進症、骨軟化症、骨粗鬆症などのカルシウム代謝の欠陥症、乾癬などの皮膚疾患および骨髄性白血病、乳ガンに代表される悪性腫瘍などの細胞分化機能に異常をきたした疾患の治療薬として有用である２０−エピ−２２（Ｒ）−低級アルキルビタミンＤ誘導体および該２０−エピ−２２（Ｒ）−低級アルキルビタミンＤ誘導体を有効成分として含有するカルシウム代謝改善剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
近年、ビタミンＤの研究の進展に伴い、各種の１α−ヒドロキシビタミンＤ誘導体が医薬品として開発されてきており、例えば、１α−ヒドロキシビタミンＤ_３や、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ_３がすでに臨床的に骨粗鬆症治療薬として用いられている。
しかしながら、これらの化合物は、血中カルシウムの上昇作用などの副作用を呈することから、かかる副作用の少ないビタミンＤ誘導体の研究が近年、活発に行なわれてきている。前記ビタミンＤ誘導体として、例えば、２４，２５−ジヒドロキシビタミンＤ_３、２４−エピビタミンＤ_２などが骨粗鬆症治療薬として検討されており、また、２２−オキサ−１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ_３などが副甲状腺機能亢進症治療薬として検討されている。
本発明者らは、前記カルシウム代謝改善剤に有用な化合物として、２０−エピ−２２−メチルビタミンＤ誘導体をすでに開発している（特開平６−２５１５５号公報）。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
前記２０−エピ−２２−メチルビタミンＤ誘導体は、ビタミンＤ受容体結合活性が極めて高いという優れた性質を有するが、その反面、血中カルシウム上昇作用は高い。したがって、疾患を治療する立場から、高いビタミンＤ受容体結合活性を有し、安全性に優れたビタミンＤ誘導体の開発が望まれているのが実状である。
しかして、本発明は、前記従来技術に鑑みてなされたものであり、ビタミンＤ受容体結合活性が高く、血中カルシウム上昇作用がさほど高くなく、安全性により優れたビタミンＤ誘導体およびそれを含有するカルシウム代謝改善剤を提供することを目的とする。
【０００４】
【課題を解決するための手段】
即ち、本発明の要旨は、
式（Ｉ）：
【０００５】
【化３】

【０００６】
（式中、Ｒ¹、Ｒ²およびＲ³はそれぞれ水素原子または水酸基の保護基、Ｒ⁴はエチル基を示す）
で表わされる２０−エピ−２２（Ｒ）−低級アルキルビタミンＤ誘導体、ならびに該２０−エピ−２２（Ｒ）−低級アルキルビタミンＤ誘導体を有効成分として含有してなるカルシウム代謝改善剤
に関する。
【０００７】
【発明の実施の形態】
本発明者らは、２０−エピビタミンＤ誘導体の置換基の影響について詳細に検討を行なったところ、２０−エピ−２２（Ｒ）−低級アルキルビタミンＤ_３が極めて高い活性を有するとともに、副作用が小さいことが見出された。本発明は、かかる知見に基づいて完成されたものである。
【０００８】
本発明の２０−エピ−２２（Ｒ）−低級アルキルビタミンＤ誘導体は、前記したように、式（Ｉ）：
【０００９】
【化４】

【００１０】
（式中、Ｒ¹、Ｒ²およびＲ³はそれぞれ水素原子または水酸基の保護基、Ｒ⁴はエチル基を示す）
で表わされる化合物である。
【００１１】
式（Ｉ）において、Ｒ^１、Ｒ^２およびＲ^３が表わす水酸基の保護基としては、例えば、アセチル基、プロピオニル基、ブチリル基、イソブチリル基、ピバロイル基、ヘキサノイル基、ベンゾイル基などのアシル基；メトキシカルボニル基、エトキシカルボニル基、アリルオキシカルボニル基、ｔ−ブトキシカルボニル基、ベンジルオキシカルボニル基などのアルコキシカルボニル基；トリエチルシリル基、ｔ−ブチルジメチルシリル基、フェニルジメチルシリル基、トリイソプロピルシリル基などの有機シリル基；メトキシメチル基、１−エトキシエチル基、メトキシエトキシメチル基などのアルコキシメチル基；２−テトラヒドロフラニル基、２−テトラヒドロピラニル基などのオキサシクロアルキル基などを挙げることができる。
【００１２】
また、式（Ｉ）において、Ｒ ⁴ は、エチル基を示す。
【００１３】
式（Ｉ）で表わされる２０−エピ−２２（Ｒ）−低級アルキルビタミンＤ誘導体は、新規化合物であり、公知化合物である式（ＩＶ）：
【００１４】
【化５】

【００１５】
（式中、Ｒ^１、Ｒ^２およびＲ^３は前記と同じ）
で表わされるコレスタ−５，７，２２−トリエン−２４−オン誘導体またはそのジエン付加物を出発原料とし、式：
【００１６】
【化６】

【００１７】
（式中、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３およびＲ^４は前記と同じ）
で表わされるスキームにしたがって合成することができる。
【００１８】
前記スキームにしたがって得られる中間体である式（ＩＩＩ）で表わされる２０−エピ−２２（Ｒ）−低級アルキルプロビタミンＤ誘導体および式（ＩＩ）で表わされる２０−エピ−２２（Ｒ）−低級アルキルプレビタミンＤ誘導体は、いずれも新規化合物であり、また、これらのジエン付加物も新規化合物である。
【００１９】
ジエン付加物を形成するジエノフィルとしては、ビタミンＤ類の合成分野で用いられているものであれば特に限定がないが、本発明においては、Ｎ−フェニルトリアゾリンジオン、フタラジン−１，４−ジオンなどが好ましい。
【００２０】
前記スキームの各工程について以下に詳細に説明する。
【００２１】
式（ＩＶ）で表わされるコレスタ−５，７，２２−トリエン−２４−オン誘導体またはそのジエン付加物は、例えば、特開平６−２５１５５号公報などに記載されている方法にしたがって合成することができる。
【００２２】
前記コレスタ−５，７，２２−トリエン−２４−オン誘導体またはそのジエン付加物に、例えば、トリメチルシリルクロリドの存在下、低級アルキル銅試薬を作用させてシリルエノールエーテルとし、次いでシリル基を除去し、必要に応じ、水酸基を保護することにより、２２位に低級アルキル基が導入された式（Ｖ）で表わされるコレスタ−５，７−ジエン−２４−オン誘導体が得られる。
【００２３】
前記反応は、立体特異的に進行する。即ち、式（ＩＶ）において、２２位の二重結合がＺの立体配置である不飽和ケトン誘導体を出発原料として用いる場合には、２２位の立体配置がＲであるコレスタ−５，７−ジエン−２４−オン誘導体を得ることができる。
【００２４】
式（Ｖ）で表わされるコレスタ−５，７−ジエン−２４−オン誘導体の２４位のカルボニル基を、水素化ホウ素ナトリウム、水素化リチウムアルミニウム、水素化ジイソブチルアルミニウム、水素化トリイソブチルホウ素リチウムなどの還元剤を用いて還元させ、必要に応じて水酸基を保護することにより、式（ＶＩ）で表わされるコレスタ−５，７−ジエン−２４−オール誘導体が得られる。
【００２５】
式（ＶＩ）で表わされるコレスタ−５，７−ジエン−２４−オール誘導体の水酸基を、還元的に除去する常法により、例えば、式（ＶＩＩ）で表わされるジチオ炭酸エステルまたはチオ炭酸エステル誘導体に変換し、次いで該誘導体を水素化トリブチルスズなどでラジカル的に還元することにより、式（ＩＩＩ）で表わされる２０−エピ−２２（Ｒ）−低級アルキルプロビタミンＤ誘導体が得られる。
【００２６】
式（ＩＩＩ）で表わされる２０−エピ−２２（Ｒ）−低級アルキルプロビタミンＤ誘導体を光異性化させることにより、式（ＩＩ）で表わされる２０−エピ−２２（Ｒ）−低級アルキルプレビタミンＤ誘導体を得ることができ、これを熱異性化させたのち、必要に応じて脱保護することにより、式（Ｉ）で表わされる２０−エピ−２２（Ｒ）−低級アルキルビタミンＤ誘導体を得ることができる。
【００２７】
このようにして得られた式（Ｉ）で表わされる２０−エピ−２２（Ｒ）−低級アルキルビタミンＤ誘導体の反応混合物からの単離・精製は、一般に有機化合物を反応混合物から単離・精製する際に用いられている方法と同様の方法によって行なうことができる。例えば、反応混合物を濃縮することにより粗生成物を得、得られた粗生成物を必要に応じて再結晶、クロマトグラフィーなどに付すことによって行なう。
【００２８】
本発明の式（Ｉ）で表わされる２０−エピ−２２（Ｒ）−低級アルキルビタミンＤ誘導体は、１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ_３受容体に対して極めて高い結合活性を示し、しかもビタミンＤ結合タンパクとの親和性が低く、高い分化誘導能を有することから、乾癬などの皮膚疾患、骨髄性白血病、乳ガンに代表される悪性腫瘍などの細胞分化機能に異常をきたした疾患の治療薬として有用である。また、低カルシウム、低ビタミンＤ食ラットに対する投与においても血中カルシウムの上昇作用が弱く、急性毒性試験においても低毒性であったことから、副作用の少ない、骨粗鬆症、副甲状腺機能亢進症、慢性腎不全、骨軟化症などのカルシウム代謝の欠陥症の治療薬、即ち、カルシウム代謝改善剤としても有用である。
【００２９】
式（Ｉ）で表わされる２０−エピ−２２（Ｒ）−低級アルキルビタミンＤ誘導体を有効成分とする本発明のカルシウム代謝改善剤は、適当な剤型の医薬組成物として経口または非経口的に投与することができる。投与量は、年齢、症状、投与ルートなどによって異なるが、例えば、成人のカルシウム代謝の欠陥症の予防、治療のために投与する場合、通常、成人１日あたり０．０１〜５μｇ、好ましくは０．０５〜１μｇを１〜３回に分けて投与することが好都合であるが、医者の診断に応じて前記範囲を超えて投与することも勿論可能である。
【００３０】
本発明のカルシウム代謝改善剤は、有効成分である式（Ｉ）で表わされる２０−エピ−２２（Ｒ）−低級アルキルビタミンＤ誘導体の有効量と、薬理学的に許容される担体または賦形剤とを含有する組成物であってもよい。このような組成物は、経口または非経口投与に適する剤型として提供される。
【００３１】
即ち、経口投与のための組成物の剤型としては、例えば、固体または液体の剤型、具体的には錠剤、丸剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤、シロップ剤、乳剤、懸濁剤などがあげられる。このような組成物は、公知の方法によって製造され、製剤分野において通常用いられている担体または賦形剤を含有するものである。例えば、錠剤用の担体、賦形剤としては、乳糖、でんぷん、蔗糖、ステアリン酸マグネシウムなどがあげられる。
【００３２】
非経口投与のための組成物を、例えば、注射剤として用いる場合、公知の方法に従い、通常、注射剤に用いられている無菌の水性ないしは油性液に溶解、懸濁または乳化することによって該注射剤を調製することができる。注射用の水性液としては、生理食塩水、ブドウ糖などや、その他の補助液を含む等張液などがあげられ、これらは、適当な溶解補助剤などと併用してもよい。
【００３３】
かくして得られる本発明のカルシウム代謝改善剤には、式（Ｉ）で表わされる２０−エピ−２２（Ｒ）−低級アルキルビタミンＤ誘導体を配合することによって好ましくない相互作用を生じないかぎり、他の活性成分が含有されていてもよい。
【００３４】
【実施例】
次に、本発明を実施例に基づいてさらに詳細に説明するが、本発明はかかる実施例のみに限定されるものではない。
【００３５】
実施例１
アルゴンガス雰囲気下、臭化第一銅・ジメチルスルフィド錯体１１４ｍｇ（０．５５６ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（以下、ＴＨＦという）１ｍｌ懸濁液に、１．２１Ｍのエチルリチウム／ＴＨＦ溶液０．９２ｍｌ（１．１１ｍｍｏｌ）を−４０℃で滴下し、同温度にて０．５時間撹拌した。反応液を−７８℃に冷却し、トリメチルシリルクロリド８８．２μｌ（０．６９５ｍｍｏｌ）、ヘキサメチルリン酸トリアミド１２１μｌ（０．６９５ｍｍｏｌ）、（２２Ｚ）−（２０Ｓ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２５−メトキシメトキシコレスタ−５，７，２２−トリエン−２４−オン４０ｍｇ（０．０６９５ｍｍｏｌ）のＴＨＦ０．５ｍｌ溶液をこの順にそれぞれ滴下し、−７８℃で４０分間撹拌した。これにトリエチルアミン１．５ｍｌ、酢酸エチル１０ｍｌおよび水を添加し、室温に戻した後、有機層を水洗し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧下に溶媒を留去した。
【００３６】
得られた残渣を分取用薄層クロマトグラフィで精製することにより、下記の物性を有する（２３Ｚ）−（２０Ｓ，２２Ｓ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２２−エチル−２５−（メトキシメトキシ）−２４−トリメチルシリルオキシコレスタ−５，７，２３−トリエン１９．５ｍｇを得た（収率４１％）。
【００３７】
^１Ｈ−ＮＭＲ（２００ＭＨｚ）δ
０．１７（９Ｈ，ｓ，Ｓｉ（ＣＨ_３）_３）、０．６１（３Ｈ，ｓ，Ｈ−１８）、１．０１（３Ｈ，ｓ，Ｈ−１９）、１．３５および１．３６（各３Ｈ，ｓ，Ｈ−２６，Ｈ−２７）、３．３５（３Ｈ，ｓ，メトキシメチル基ＣＨ_３）、３．７７および３．８０（各３Ｈ，ｓ，メトキシカルボニル基ＣＨ_３）、４．５８−４．９５（２Ｈ，ｍ，Ｈ−１，Ｈ−３）、５．３８および５．６７（各１Ｈ，ｍ，Ｈ−６，Ｈ−７）
【００３８】
ＩＲ（ｎｅａｔ）ｃｍ^−１
２９５０、２８６０、１７４０、１４４０、１２４５、１１４０、１０３０
【００３９】
ＭＳｍ／ｚ
６２８（１）、５５２（３）、４７６（２）、４６５（１）、４０１（６）、３２５（５２）、２４９（３４）、１９７（６２）、１５５（２３）、１２５（５６）、７３（１００）
【００４０】
実施例２
アルゴンガス雰囲気下、（２３Ｚ）−（２０Ｓ，２２Ｓ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２２−エチル−２５−（メトキシメトキシ）−２４−トリメチルシリルオキシコレスタ−５，７，２３−トリエン１７５ｍｇ（０．２５３ｍｍｏｌ）のＴＨＦ２．５ｍｌ溶液に、−３５℃で１Ｍ−テトラブチルアンモニウムフルオリドＴＨＦ溶液３０４μｌ（０．３０４ｍｍｏｌ）を加え、同温度で１５分間撹拌した後、酢酸エチルで希釈して有機層を１０％−塩化アンモニウム水溶液、水および食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。
【００４１】
減圧下に濃縮して得られた残渣を分取用薄層クロマトグラフィで精製することにより、下記の物性を有する（２０Ｓ，２２Ｒ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２２−エチル−２５−（メトキシメトキシ）−２４−オキソコレスタ−５，７−ジエン１５０ｍｇを得た（収率９６％）。
【００４２】
^１Ｈ−ＮＭＲ（２００ＭＨｚ）δ
０．７０（３Ｈ，ｓ，Ｈ−１８）、０．７３（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，Ｈ−２１）、１．０１（３Ｈ，ｓ，Ｈ−１９）、１．３４および１．３７（各３Ｈ，ｓ，Ｈ−２６，Ｈ−２７）、３．４０（３Ｈ，ｓ，メトキシメチル基ＣＨ_３）、３．７８および３．８０（各３Ｈ，ｓ，メトキシカルボニル基ＣＨ_３）、４．７８−５．０２（２Ｈ，ｍ，Ｈ−１，Ｈ−３）、５．３７および５．６８（各１Ｈ，ｍ，Ｈ−６，Ｈ−７）
【００４３】
ＩＲ（ｎｅａｔ）ｃｍ^−１
２９５０、２８７０、１７４０、１７７０、１４４０、１３８０、１２６０、１１４５、１０３０
【００４４】
ＭＳｍ／ｚ
５８６（０．７）、５４２（２）、５１０（３）、４９７（２）、４６６（６）、３３６（１１）、３２６（９）、２４９（１８）、２２４（１１）、２１０（２２）、１５５（２７）、１４１（１７）、１０３（１００）
【００４５】
実施例３
（２０Ｓ，２２Ｒ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２２−エチル−２５−（メトキシメトキシ）−２４−オキソコレスタ−５，７−ジエン１４６ｍｇ（２３６ｍｍｏｌ）の塩化メチレン１ｍｌのＴＨＦ０．８ｍｌ溶液に、水素化ホウ素ナトリウム２３．２ｍｇ（０．６１４ｍｍｏｌ）を加え、室温で２時間攪拌した。反応液を塩化メチレンで希釈後、水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。
【００４６】
減圧下に濃縮して得られた残渣を分取用薄層クロマトグラフィで精製することにより、下記の物性を有する（２０Ｓ，２２Ｒ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２２−エチル−２４−ヒドロキシ−２５−（メトキシメトキシ）コレスタ−５，７−ジエン１３３ｍｇを得た（収率９１％）。
【００４７】
^１Ｈ−ＮＭＲ（２００ＭＨｚ）δ
３．７８および３．８０（各３Ｈ，ｓ，メトキシカルボニル基ＣＨ_３）、４．７６（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１）、４．８４（１Ｈ，ｍ，Ｈ−３）、５．３７および５．６８（各１Ｈ，ｍ，Ｈ−６，Ｈ−７）
【００４８】
ＩＲ（ｎｅａｔ）ｃｍ^−１
３５５０、２９５０、２８６０、１７５０、１４４０、１３８０、１３４０、１２６０、１１４０、１０３５
【００４９】
ＭＳｍ／ｚ
５８６（０．７）、５４４（５）、５１２（８）、４６８（８）、４３６（４０）、４０７（３２）、３６５（３９）、２７８（２３）、２４９（４０）、２２４（２３）、２０９（５６）、１５５（５３）、１４１（４５）、１０３（１００）
【００５０】
実施例４
アルゴンガス雰囲気下、（２０Ｓ，２２Ｒ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２２−エチル−２４−ヒドロキシ−２５−（メトキシメトキシ）コレスタ−５，７−ジエン９．７ｍｇ（０．０１５６ｍｍｏｌ）およびイミダゾール０．５ｍｇ（０．００７８ｍｍｏｌ）のＴＨＦ０．８ｍｌ溶液に、水素化ナトリウム９．４ｍｇ（油性、６０重量％品、０．２３４ｍｍｏｌ）を加え、室温で１．５時間攪拌した後、二硫化炭素１８．８μｌ（０．３１２ｍｍｏｌ）を加え、室温で１６時間攪拌した。この溶液にヨウ化メチル１２．１μｌ（０．１９５ｍｍｏｌ）を加え、室温で２時間攪拌した後、反応溶液を酢酸エチルで希釈して水および食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。
【００５１】
減圧下に濃縮して得られた残渣を分取用薄層クロマトグラフィで精製することにより、下記の物性を有する（２０Ｓ，２２Ｒ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２２−エチル−２４−［（メチルチオ）チオカルボニルオキシ］−２５−（メトキシメトキシ）コレスタ−５，７−ジエン７．０ｍｇを得た（収率６３％）。
【００５２】
^１Ｈ−ＮＭＲ（２００ＭＨｚ）δ
０．５６および０．６０（３Ｈ，ｓ，Ｈ−１８）、１．２８（６Ｈ，ｓ，Ｈ−２６，Ｈ−２７）、２．５４および２．５５（３Ｈ，ｓ，ＳＣＨ_３）、３．３７（３Ｈ，ｓ，メトキシメチル基ＣＨ_３）、３．７８および３．８０（各３Ｈ，ｓ，メトキシカルボニル基ＣＨ_３）、４．６３−５．００（４Ｈ，ｍ，Ｈ−１，Ｈ−３，ＯＣＨ_２Ｏ）、５．３７および５．６８（各１Ｈ，ｍ，Ｈ−６，Ｈ−７）、５．８４および５．９５（１Ｈ，ｍ，Ｈ−２４）
【００５３】
ＩＲ（ｎｅａｔ）ｃｍ^−１
２９５０、２８７５、１７４０、１４４０、１３８０、１３４０、１２６０、１１４０、１０５０
【００５４】
ＭＳｍ／ｚ
６７８（１）、５９０（３）、５４０（２）、５２８（３）、４９７（３）、４０６（２７）、３２５（５７）、２４９（４０）、２０９（４７）、１５５（５４）、９１（５６）、６９（１００）
【００５５】
実施例５
アルゴンガス雰囲気下、（２０Ｓ，２２Ｒ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２２−エチル−２４−［（メチルチオ）チオカルボニルオキシ］−２５−（メトキシメトキシ）コレスタ−５，７−ジエン２３．５ｍｇ（０．０３３０ｍｍｏｌ）、水素化トリブチル錫５３．０μｌ（０．１９８ｍｍｏｌ）およびアゾビスイソブチロニトリル２．７ｍｇ（０．０１６５ｍｍｏｌ）のトルエン１ｍｌ溶液を０．５時間加熱還流後、室温に戻し、減圧下溶媒を除去した。
【００５６】
得られた残渣を分取用薄層クロマトグラフィで精製することにより、下記の物性を有する（２０Ｓ，２２Ｒ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２２−エチル−２５−（メトキシメトキシ）コレスタ−５，７−ジエン１５．２ｍｇを得た（収率７６％）。
【００５７】
^１Ｈ−ＮＭＲ（２００ＭＨｚ）δ
０．６１（３Ｈ，ｓ，Ｈ−１８）、０．７０（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，Ｈ−２１）、１．０１（３Ｈ，ｓ，Ｈ−１９）、１．２２（６Ｈ，ｓ，Ｈ−２６，Ｈ−２７）、３．３７（３Ｈ，ｓ，メトキシメチル基ＣＨ_３）、３．７８および３．８０（各３Ｈ，ｓ，メトキシカルボニル基ＣＨ_３）、４．７１（２Ｈ，ｓ，ＯＣＨ_２Ｏ）、４．８４（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１）、４．９０（１Ｈ，ｍ，Ｈ−３）、５．３８および５．６８（各１Ｈ，ｍ，Ｈ−６，Ｈ−７）
【００５８】
ＩＲ（ｎｅａｔ）ｃｍ^−１
２９５０、２８６０、１７４５、１４４０、１３８０、１３４０、１２７０、１１４０、１０４０
【００５９】
ＭＳｍ／ｚ
５４２（７）、４６６（２９）、３９０（１００）、２７７（５８）、２４９（３２）、２０９（５８）、１５５（３８）、１４１（３６）、１０３（５６）、６９（８２）、５５（９１）
【００６０】
実施例６
（２０Ｓ，２２Ｒ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２２−エチル−２５−（メトキシメトキシ）コレスタ−５，７−ジエン１２．１ｍｇ（０．０２００ｍｍｏｌ）およびｐ−トルエンスルホン酸一水塩１９．０ｍｇ（０．１００ｍｍｏｌ）のエタノール２ｍｌ溶液を０．５時間加熱還流した後、５％水酸化カリウムメタノール溶液２ｍｌを加え、１時間加熱還流した。室温に戻した後、反応液を飽和塩化アンモニウム水溶液にあけ、酢酸エチルで２回抽出し、抽出液を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。
【００６１】
減圧下に溶媒を除去し、得られた残渣を分取用薄層クロマトグラフィで精製することにより、下記の物性を有する（２０Ｓ，２２Ｒ）−２２−エチル−１α，３β，２５−トリヒドロキシコレスタ−５，７−ジエン８．１９ｍｇを得た（収率９２％）。
【００６２】
^１Ｈ−ＮＭＲ（２００ＭＨｚ）δ
０．６３（３Ｈ，ｓ，Ｈ−１８）、０．７１（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，Ｈ−２１）、０．９４（３Ｈ，ｓ，Ｈ−１９）、１．２３（６Ｈ，ｓ，Ｈ−２６，Ｈ−２７）、３．７７（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１）、４．０６（１Ｈ，ｍ，Ｈ−３）、５．３８および５．７２（各１Ｈ，ｍ，Ｈ−６，Ｈ−７）
【００６３】
ＩＲ（ｎｅａｔ）ｃｍ^−１
３３８０、２９５０、２９３０、２８６０、１４６０、１３８０、１１５０、１０５５
【００６４】
ＭＳｍ／ｚ
４４４（１３）、４２６（２１）、４０８（１５）、３９３（１０）、２９５（１５）、２５１（１３）、２２７（２６）、１７１（２７）、１５７（３１）、６９（８８）、５９（９７）、５５（９１）
【００６５】
ＵＶ（エタノール）λｍａｘ：２７１、２８２、２９４ｎｍ
【００６６】
実施例７
（２０Ｓ，２２Ｒ）−２２−エチル−１α，３β，２５−トリヒドロキシコレスタ−５，７−ジエン２８．７ｍｇ（０．０６４５ｍｍｏｌ）のエタノール（９９．５％）２００ｍｌ溶液を攪拌下でアルゴンガスをバブリングしながら、０℃で４００Ｗ高圧水銀灯を用い、バイコール透過光にて３分間光照射を行なった後、１．５時間加熱還流した。反応液を濃縮後、得られた残渣を分取用薄層クロマトグラフィで精製し、原料の（２０Ｓ，２２Ｒ）−２２−エチル−１α，３β，２５−トリヒドロキシコレスタ−５，７−ジエンと生成物の（２０Ｓ，２２Ｒ）−２２−エチル−１α，３β，２５−トリヒドロキシ−９，１０−セココレスタ−５，７，１０（１９）−トリエンの混合物１３．８ｍｇを得た。
【００６７】
得られた混合物をアセチル化（無水酢酸８．２μｌ、ピリジン１１．７μｌ、塩化メチレン１ｍｌ、室温、１．５時間、分取用薄層クロマトグラフィで精製）、脱アセチル化（１Ｎ−ナトリウムメトキシド０．０５ｍｌ、メタノール０．５ｍｌ、ＴＨＦ０．５ｍｌ、０℃、２時間、分取用薄層クロマトグラフィで精製）を経て精製し、下記の物性を有する（２０Ｓ，２２Ｒ）−２２−エチル−１α，３β，２５−トリヒドロキシ−９，１０−セココレスタ−５，７，１０（１９）−トリエン、即ち（２０Ｓ，２２Ｒ）−２２−エチル−１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ_３（化合物Ｉ−Ａ）２．０２ｍｇを得た。
【００６８】
^１Ｈ−ＮＭＲ（２００ＭＨｚ）δ
０．５４（３Ｈ，ｓ，Ｈ−１８）、０．７０（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，Ｈ−２１）、１．２２（６Ｈ，ｓ，Ｈ−２６，Ｈ−２７）、４．２３（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１）、４．４３（１Ｈ，ｍ，Ｈ−３）、５．００および５．３３（各１Ｈ，ｍ，Ｈ−１９）、６．０２および６．３８（各１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．２Ｈｚ，Ｈ−７，Ｈ−６）
【００６９】
ＩＲ（ｎｅａｔ）ｃｍ^−１
３４００、２９５０、２８６０、１４６０、１３８０、１２１０、１１６０、１０５５
【００７０】
ＭＳｍ／ｚ
４４４（３）、４２６（６）、４０８（５）、３９３（３）、３１３（３）、３０２（１）、１５２（２６）、１３４（１００）、１０５（２９）
【００７１】
ＵＶ（エタノール）λｍａｘ：２６４ｎｍ、λｍｉｎ：２２７ｎｍ
【００７２】
実施例８
アルゴンガス雰囲気下、臭化第一銅・ジメチルスルフィド錯体１．３９９ｇ（１３．６０５ｍｍｏｌ）のＴＨＦ１０ｍｌ懸濁液に、１．６０Ｍのブチルリチウム／ヘキサン溶液８．５０ｍｌ（１３．６０５ｍｍｏｌ）を−３５〜−３０℃で滴下し、同温度にて０．５時間撹拌した。反応液を−７８℃に冷却し、トリメチルシリルクロリド１．０７９ｍｌ（８．５０３ｍｍｏｌ）、ヘキサメチルリン酸トリアミド１．４７９ｍｌ（８．５０３ｍｍｏｌ）および（２２Ｚ）−（２０Ｓ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２５−メトキシメトキシコレスタ−５，７，２２−トリエン−２４−オン５００ｍｇ（０．８５０３ｍｍｏｌ）のＴＨＦ５ｍｌ溶液をこの順にそれぞれ滴下し、−７８℃で４０分間撹拌した。これにトリエチルアミン１５ｍｌ、酢酸エチル１００ｍｌおよび水１５０ｍｌを加え、室温に戻した後、セライト濾過し、水層を酢酸エチル１００ｍｌで３回抽出し、合わせた有機層を水洗し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧下で溶媒を留去した。
【００７３】
得られた残渣をカラムクロマトグラフィで精製することにより、下記の物性を有する（２３Ｚ）−（２０Ｓ，２２Ｓ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２２−ブチル−２５−（メトキシメトキシ）−２４−トリメチルシリルオキシコレスタ−５，７，２３−トリエン４９６．８ｍｇを得た（収率７３％）。
【００７４】
^１Ｈ−ＮＭＲ（２００ＭＨｚ）δ
０．１９（９Ｈ，ｓ，Ｓｉ（ＣＨ_３）_３）、０．６０（３Ｈ，ｓ，Ｈ−１８）、０．８０（ｄ，３Ｈ，Ｈ−２１）、１．０１（３Ｈ，ｓ，Ｈ−１９）、１．３５および１．３６（各３Ｈ，ｓ，Ｈ−２６，Ｈ−２７）、３．２６（３Ｈ，ｓ，メトキシメチル基ＣＨ_３）、３．７８および３．８１（各３Ｈ，ｓ，メトキシカルボニル基ＣＨ_３）、４．６５（２Ｈ，ｍ，Ｈ−１，Ｈ−３）、５．３８および５．６７（各１Ｈ，ｍ，Ｈ−６，Ｈ−７）
【００７５】
実施例９
アルゴンガス雰囲気下、（２３Ｚ）−（２０Ｓ，２２Ｓ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２２−ブチル−２５−（メトキシメトキシ）−２４−トリメチルシリルオキシコレスタ−５，７，２３−トリエン４３６ｍｇ（０．６０６４ｍｍｏｌ）のＴＨＦ５．４５ｍｌ溶液に、−４３〜−４０℃で１Ｍ−テトラブチルアンモニウムフルオリドＴＨＦ溶液０．７０９ｍｌ（０．７０９ｍｍｏｌ）を加え、同温度で１５分間撹拌した後、酢酸エチルで希釈して有機層を５％−塩化アンモニウム水溶液、水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。
【００７６】
減圧下に濃縮して得られた残渣をカラムクロマトグラフィで精製することにより、下記の物性を有する（２０Ｓ，２２Ｒ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２２−ブチル−２５−（メトキシメトキシ）−２４−オキソコレスタ−５，７−ジエン２７０．３ｍｇを得た（収率６８．９％）。
【００７７】
^１Ｈ−ＮＭＲ（２００ＭＨｚ）δ
０．６９（３Ｈ，ｓ，Ｈ−１８）、０．７３（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，Ｈ−２１）、０．９０（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，ブチル基ＣＨ_３）、１．０１（３Ｈ，ｓ，Ｈ−１９）、１．３４および１．３７（各３Ｈ，ｓ，Ｈ−２６，Ｈ−２７）、３．４０（３Ｈ，ｓ，メトキシメチル基ＣＨ_３Ｏ）、３．７８および３．８０（各３Ｈ，ｓ，メトキシカルボニル基ＣＨ_３Ｏ）、４．７８−４．９７（２Ｈ，ｍ，Ｈ−１，Ｈ−３）、５．３７および５．６８（各１Ｈ，ｍ，Ｈ−６，Ｈ−７）
【００７８】
実施例１０
アルゴンガス雰囲気下、（２０Ｓ，２２Ｒ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２２−ブチル−２５−（メトキシメトキシ）−２４−オキソコレスタ−５，７−ジエン２６８．２ｍｇ（０．４１４６ｍｍｏｌ）の塩化メチレン１．３４ｍｌ溶液に、メタノール１．３４ｍｌおよび水素化ホウ素ナトリウム４１．１ｍｇ（１．８０６ｍｍｏｌ）を添加し、室温で２時間攪拌した。これに水素化ホウ素ナトリウム８．２２ｍｇを加え、室温でさらに２時間攪拌した。反応液を塩化メチレンで希釈後、水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。
【００７９】
減圧下に濃縮して得られた残渣をカラムクロマトグラフィで精製することにより、下記の物性を有する（２０Ｓ，２２Ｒ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２２−ブチル−２４−ヒドロキシ−２５−（メトキシメトキシ）コレスタ−５，７−ジエン２３３．７ｍｇを得た（収率８６．８％）。
【００８０】
^１Ｈ−ＮＭＲ（２００ＭＨｚ）δ
０．６６（３Ｈ，ｓ，Ｈ−１８）、０．６９および０．７８（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，Ｈ−２１）、０．９１（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，ブチル基ＣＨ_３）、１．００および１．０１（３Ｈ，ｓ、Ｈ−１９）、３．７８および３．８０（各３Ｈ，ｓ，メトキシカルボニル基ＣＨ_３）、４．６８−４．９８（４Ｈ，ｍ，Ｈ−１，Ｈ−３，ＯＣＨ_２Ｏ）、５．３８および５．６８（各１Ｈ，ｍ，Ｈ−６，Ｈ−７）
【００８１】
実施例１１
アルゴンガス雰囲気下、（２０Ｓ，２２Ｒ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２２−ブチル−２４−ヒドロキシ−２５−（メトキシメトキシ）コレスタ−５，７−ジエン１７１．７ｍｇ（０．２６４６ｍｍｏｌ）およびイミダゾール３．６０ｍｇ（０．０５２９ｍｍｏｌ）のＴＨＦ１．４ｍｌ溶液に水素化ナトリウム６３．５ｍｇ（油性、６０重量％品、１．５８８ｍｍｏｌ）を添加し、室温で２０分間攪拌した後、二硫化炭素１２８μｌ（２．１１７ｍｍｏｌ）を加え、室温で０．５時間攪拌した。この溶液にヨウ化メチル８３μｌ（１．３２３ｍｍｏｌ）を加え、室温で２時間攪拌した後、反応溶液を酢酸エチルで希釈して水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。
【００８２】
減圧下に濃縮して得られた残渣をカラムクロマトグラフィで精製することにより、下記の物性を有する（２０Ｓ，２２Ｒ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２２−ブチル−２４−［（メチルチオ）チオカルボニルオキシ］−２５−（メトキシメトキシ）コレスタ−５，７−ジエン２９．６ｍｇを得た（収率１５．１％）。
【００８３】
^１Ｈ−ＮＭＲ（２００ＭＨｚ）δ
０．５５および０．６０（３Ｈ，ｓ，Ｈ−１８）、０．７５（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，Ｈ−２１）、０．９２（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，ブチル基のＣＨ_３）、１．００および１．０１（３Ｈ，ｓ，Ｈ−１９）、１．２７（６Ｈ，ｓ，Ｈ−２６，Ｈ−２７）、２．５４および２．５５（３Ｈ，ｓ，ＳＣＨ_３）、３．３７（３Ｈ，ｓ，メトキシメチル基ＣＨ_３）、３．７８および３．８０（各３Ｈ，ｓ，メトキシカルボニル基ＣＨ_３）、４．６９−４．９４（４Ｈ，ｍ，Ｈ−１，Ｈ−３，ＯＣＨ_２Ｏ）、５．３６および５．６８（各１Ｈ，ｍ，Ｈ−６，Ｈ−７）、５．９２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．９５Ｈｚ，Ｈ−２４）
【００８４】
実施例１２
アルゴンガス雰囲気下、（２０Ｓ，２２Ｒ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２２−ブチル−２４−［（メチルチオ）チオカルボニルオキシ］−２５−（メトキシメトキシ）コレスタ−５，７−ジエン３４．７ｍｇ（０．０４６９５ｍｍｏｌ）、水素化トリブチル錫７６．９μｌ（０．２９３４ｍｍｏｌ）およびアゾビスイソブチロニトリル４．０ｍｇ（０．０２４５ｍｍｏｌ）のトルエン０．６２ｍｌ溶液を２５分間加熱還流後、室温に戻し、減圧下溶媒を除去した。
【００８５】
得られた残渣をカラムクロマトグラフィで精製することにより、下記の物性を有する（２０Ｓ，２２Ｒ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２２−ブチル−２５−（メトキシメトキシ）コレスタ−５，７−ジエン１３．０ｍｇを得た（収率４３．７％）。
【００８６】
^１Ｈ−ＮＭＲ（２００ＭＨｚ）δ
０．６１（３Ｈ，ｓ，Ｈ−１８）、０．７０（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，Ｈ−２１）、０．９１（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，ブチル基ＣＨ_３）、１．０１（３Ｈ，ｓ，Ｈ−１９）、１．２２（６Ｈ，ｓ，Ｈ−２６，Ｈ−２７）、３．３７（３Ｈ，ｓ，メトキシメチル基のＯＣＨ_３）、３．７８および３．８０（各３Ｈ，ｓ，メトキシカルボニル基のＣＨ_３）、４．７１（２Ｈ，ｓ，メトキシメチル基のＯＣＨ_２Ｏ）、４．８３（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１）、４．９０（１Ｈ，ｍ，Ｈ−３）、５．３８および５．６９（各１Ｈ，ｍ，Ｈ−６，Ｈ−７）
【００８７】
実施例１３
（２０Ｓ，２２Ｒ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２２−ブチル−２５−（メトキシメトキシ）コレスタ−５，７−ジエン１３．０ｍｇ（０．０２０５ｍｍｏｌ）をクロロホルム１．３９ｍｌに溶解させ、ｐ−トルエンスルホン酸一水塩１３．０ｍｇ（０．０６８ｍｍｏｌ）のエタノール１．３９ｍｌ溶液を加え、１時間加熱還流した。室温まで冷却した後、５％水酸化カリウム／エタノール溶液１．３９ｍｌを加え、１時間加熱還流した。室温に戻した後、反応液を酢酸エチルにて希釈し、５％塩化アンモニウム水溶液２０ｍｌ、水２０ｍｌにて順次洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。
【００８８】
減圧下に溶媒を除去し、得られた残渣をカラムクロマトグラフィで精製することにより、下記の物性を有する（２０Ｓ，２２Ｒ）−２２−ブチル−１α，３β，２５−トリヒドロキシコレスタ−５，７−ジエン７．２ｍｇを得た（収率７４％）。
【００８９】
^１Ｈ−ＮＭＲ（２００ＭＨｚ）δ
０．６３（３Ｈ，ｓ，Ｈ−１８）、０．７１（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，Ｈ−２１）、０．９０（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，ブチル基ＣＨ_３）、０．９５（３Ｈ，ｓ，Ｈ−１９）、１．２２（６Ｈ，ｓ，Ｈ−２６，Ｈ−２７）、３．７８（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１）、４．０７（１Ｈ，ｍ，Ｈ−３）、５．３９および５．７５（各１Ｈ，ｍ，Ｈ−６，Ｈ−７）
【００９０】
実施例１４
（２０Ｓ，２２Ｒ）−２２−ブチル−１α，３β，２５−トリヒドロキシコレスタ−５，７−ジエン１１．５ｍｇをエタノール（９９．５％）２４ｍｌに溶解した後、ベンゼン１８０ｍｌを加え、０℃で１５分間窒素を吹き込んだ。溶液をバブリングしながら０℃で４００Ｗ高圧水銀灯を用い、パイレックス透過光にて１５分間光照射を行なった後、１時間加熱還流した。
【００９１】
反応液を濃縮後、得られた残渣をＨＰＬＣ（（株）ワイエムシイ製、商品名：ＹＭＣ−ＰａｃｋＯＤＳ−Ａ、メタノール／水（容量比）＝８０／２０）で精製し、下記の物性を有する（２０Ｓ，２２Ｒ）−２２−ブチル−１α，３β，２５−トリヒドロキシ−９，１０−セココレスタ−５，７，１０（１９）−トリエン、即ち（２０Ｓ，２２Ｒ）−２２−ブチル−１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ_３（化合物Ｉ−Ｂ）１．１７ｍｇを得た。
【００９２】
^１Ｈ−ＮＭＲ（２００ＭＨｚ）δ
０．５７（３Ｈ，ｓ，Ｈ−１８）、０．７３（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，Ｈ−２１）、１．１７（６Ｈ，ｓ，Ｈ−２６，Ｈ−２７）、４．１２（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１）、４．３５（１Ｈ，ｍ，Ｈ−３）、４．９０および５．２９（各１Ｈ，ｍ，Ｈ−１９）、６．０８および６．３２（各１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０．９Ｈｚ，Ｈ−７，Ｈ−６）
ＵＶ（エタノール）λｍａｘ：２６４ｎｍ、λｍｉｎ：２２７ｎｍ
【００９３】
試験例１〔ウシ胸腺１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ_３受容体との結合性試験〕
（２０Ｓ，２２Ｒ）−２２−エチル−１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ_３（化合物Ｉ−Ａ）および（２０Ｓ，２２Ｒ）−２２−メチル−１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ_３（比較化合物）のウシ胸腺１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ_３受容体との結合能を測定した。
【００９４】
即ち、化合物Ｉ−Ａおよび比較化合物の段階的希釈溶液（１、２、４、８、１６、３２、６３、１２５、２５０、５００、５０００ｐｇ／５０μｌエタノール溶液）の各々に、ウシ胸腺１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ_３受容体（（株）ヤマサ製）溶液（５００μｌリン酸緩衝液）を添加し、撹拌したのち、室温で１時間プレインキュベイションした。各々にトリチウムラベルした１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ_３（４．８５ＴＢｑ／ｍｍｏｌ）１２５７０ｄｐｍ／５０μｌエタノール溶液を加え、撹拌し、４℃で一夜放置した後、ＤＣＣ（デキストランコーテッドチャコール）懸濁液（（株）ヤマサ製）を加え、攪拌し、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ_３受容体と結合していない試料（遊離型）を吸着させた。
【００９５】
反応混合物を遠心分離（３０００ｒｐｍ）することにより、ＤＣＣを分離し、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ_３受容体と結合している試料（結合型）を遊離型から分離（ＢＦ分離）した。上清５００μｌを採り、シンチレーションカウンターにて放射活性を測定し、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ_３受容体に結合しているトリチウムラベルした１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ_３の割合を求めて、トリチウムラベルした１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ_３の５０％が１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ_３受容体と結合する時の被験化合物の濃度（ＥＤ_５０値）を求めた。
【００９６】
対照化合物として、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ_３を用いて同様の試験を行ない、該化合物のＥＤ_５０値を求め、これを１とした時の被験化合物の結合活性の相対活性を求めた。その結果を表１に示す。
【００９７】
【表１】

【００９８】
なお、表１〜４中、対照化合物、比較化合物、化合物Ｉ−Ａおよび化合物Ｉ−Ｂは、以下の化合物を示す。
対照化合物：１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ_３
比較化合物：（２０Ｓ，２２Ｒ）−２２−メチル−１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ_３
化合物Ｉ−Ａ：（２０Ｓ，２２Ｒ）−２２−エチル−１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ_３
化合物Ｉ−Ｂ：（２０Ｓ，２２Ｒ）−２２−ブチル−１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ_３
【００９９】
試験例２〔ヒト骨髄性白血病細胞の分化誘導試験〕
イーグルの修飾培地（Ｅａｇｌｅ’ｓｍｏｄｉｆｉｅｄｍｅｄｉｕｍ）で培養したヒト骨髄性白血病細胞を培養皿に培養皿あたり２×１０^５個加えた。次に２つの被験化合物（２０Ｓ，２２Ｒ）−２２−エチル−１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ_３（化合物Ｉ−Ａ）および（２０Ｓ，２２Ｒ）−２２−ブチル−１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ_３（化合物Ｉ−Ｂ）をエタノール（５０μｌ）に溶解させて得られた段階的希釈溶液を加えた。
【０１００】
被験化合物のインキュベーション濃度は、いずれも１０^−７Ｍ、１０^−８Ｍ、１０^−９Ｍ、１０^−１０Ｍおよび１０^−１１Ｍの５段階である。
【０１０１】
４日間インキュベーションした後、スーパーオキシド産生をニトロブルーテトラゾリウム（ＮＢＴ）還元によって測定した。すなわち、ブルーホルマザンが細胞内に沈着して青染された細胞をそれぞれの濃度で２回、２００個以上の細胞をカウントして測定した。青染した細胞の全細胞数に対する割合から分化誘導の割合を求め、５０％の細胞が分化する時の被験化合物の濃度（ＥＤ_５０値）を求めた。
【０１０２】
対照化合物として、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ_３を用いて同様の試験を行ない、該化合物のＥＤ_５０値を求め、これを１とした時の被験化合物の分化誘導活性の相対活性を求めた。その結果を表２に示す。
【０１０３】
【表２】

【０１０４】
試験例３〔マウスにおける血中カルシウム上昇作用〕
８週齢雄性ｄｄＹマウス（ＳＬＣ）に、（２０Ｓ，２２Ｒ）−２２−ブチル−１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ_３（化合物Ｉ−Ｂ）、（２０Ｓ，２２Ｒ）−２２−メチル−１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ_３（比較化合物）または１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ_３（対照化合物）を静脈内投与し、投与２４時間後に眼窩採血（５０μｌ）を行ない、血中イオン化カルシウム値をイオン化カルシウム測定装置により測定した。得られた被験化合物投与群の各投与量毎の血中カルシウムイオン濃度を基に、それぞれの非投与群の血中カルシウムイオン濃度からの上昇率を求めた。その結果を表３に示す。
【０１０５】
【表３】

【０１０６】
試験例４〔ラットにおける血中カルシウム上昇作用〕
ビタミンＤ欠乏症ラットを、カルシウム０．４７重量％およびリン０．３重量％を含有したビタミンＤ欠乏食で１週間、次いでカルシウム量を０．０２重量％に減少させたビタミンＤ欠乏食で２週間飼育することによってつくった。
【０１０７】
本法によって得られたビタミンＤ欠乏症ラットの血清中の２５−ヒドロキシビタミンＤ_３と１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ_３は、検出限界以下である。
【０１０８】
次に、これらのラットに表４に示す量の１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ_３（対照化合物）、（２０Ｓ，２２Ｒ）−２２−メチル−１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ_３（比較化合物）または（２０Ｓ，２２Ｒ）−２２−エチル−１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ_３（化合物Ｉ−Ａ）のプロピレングリコール：エタノール（９５：５）０．１ｍｌ溶液を７日間腹腔内注射により投与した。最終投与から２４時間後に血清を取り出し、血清カルシウム濃度をＣａｌｃｅｔｔｅ自動カルシウム滴定装置を用いて測定した。ブランク実験も同様に行なった。非投与群の血中カルシウム濃度からの投与群の血中カルシウム濃度の上昇率を求めた。その結果を表４に示す。
【０１０９】
【表４】

【０１１０】
表１〜４に示された結果から、以下のことがわかる。
【０１１１】
（２０Ｓ，２２Ｒ）−２２−エチル−１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ_３（化合物Ｉ−Ａ）は、表１に示された結果からウシ胸腺１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ_３受容体と高い結合活性を有することがわかり、また、表２に示された結果からヒト骨髄性白血病細胞の分化誘導能が１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ_３（対照化合物）の３８倍程度と極めて強いことがわかる。さらに、表４に示された結果から、化合物Ｉ−Ａは、ビタミンＤ誘導体の副作用の指標の１つとなる血中カルシウム濃度上昇作用が対照化合物および比較化合物よりも弱いことがわかる。
【０１１２】
（２０Ｓ，２２Ｒ）−２２−ブチル−１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ_３（化合物Ｉ−Ｂ）についても、表３に示された結果から１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ_３（対照化合物）および比較化合物と比較して、血中カルシウム上昇作用が弱いことがわかる。また、表２に示されるように、化合物Ｉ−Ｂの分化誘導能は対照化合物の２倍程度と強い。
【０１１３】
以上の結果から、本発明の２０−エピ−２２（Ｒ）−低級アルキルビタミンＤ誘導体（Ｉ）は、副作用の少ない治療薬として有用であることがわかる。
【０１１４】
【発明の効果】
本発明の式（Ｉ）で表わされる２０−エピ−２２（Ｒ）−低級アルキルビタミンＤ誘導体は、高いビタミンＤ受容体結合活性を有し、安全性に優れたものであるので、副甲状腺機能低下症、副甲状腺機能亢進症、骨軟化症、骨粗鬆症などのカルシウム代謝の欠陥症、乾癬などの皮膚疾患および骨髄性白血病、乳ガンに代表される悪性腫瘍などの細胞分化機能に異常をきたした疾患の治療に有用なカルシウム代謝改善剤として好適に使用しうるものである。[0001]
TECHNICAL FIELD OF THE INVENTION
The present invention relates to a 20-epi-22 (R) -lower alkyl vitamin D derivative and a calcium metabolism improver containing the same as an active ingredient. More specifically, chronic renal failure, hypoparathyroidism, hyperparathyroidism, osteomalacia, deficiencies in calcium metabolism such as osteoporosis, skin diseases such as psoriasis and myeloid leukemia, and malignant tumors represented by breast cancer 20-epi-22 (R) -lower alkylvitamin D derivatives and 20-epi-22 (R) -lower alkylvitamin D derivatives useful as therapeutic agents for diseases having abnormal cell differentiation functions such as It relates to a calcium metabolism improving agent contained as a component.
[0002]
[Prior art]
In recent years, various 1α-hydroxyvitamin D derivatives have been developed as pharmaceuticals with the progress of research on vitamin D. For example, 1α-hydroxyvitamin D₃And 1α, 25-dihydroxyvitamin D₃Has already been clinically used as a therapeutic agent for osteoporosis.
However, since these compounds exhibit side effects such as an effect of increasing blood calcium, studies on vitamin D derivatives having few such side effects have been actively conducted in recent years. As the vitamin D derivative, for example, 24,25-dihydroxyvitamin D₃, 24-Epivitamin D₂Have been studied as therapeutic agents for osteoporosis, and 22-oxa-1,25-dihydroxyvitamin D₃Are being studied as therapeutics for hyperparathyroidism.
The present inventors have already developed a 20-epi-22-methylvitamin D derivative as a compound useful as the calcium metabolism improving agent (JP-A-6-25155).
[0003]
[Problems to be solved by the invention]
The 20-epi-22-methylvitamin D derivative has an excellent property of extremely high vitamin D receptor binding activity, but has a high blood calcium elevating effect. Therefore, from the standpoint of treating diseases, the development of vitamin D derivatives having high vitamin D receptor binding activity and excellent safety has been desired.
Thus, the present invention has been made in view of the above prior art, and has a high vitamin D receptor binding activity, a not so high blood calcium elevating effect, and a vitamin D derivative excellent in safety and containing the same. It is an object of the present invention to provide a calcium metabolism improving agent.
[0004]
[Means for Solving the Problems]
That is, the gist of the present invention is:
Formula (I):
[0005]
Embedded image

[0006]
(Where R¹, R^TwoAnd R^ThreeIs a protecting group for a hydrogen atom or a hydroxyl group,^FourIsEthyl groupIndicates)
20-epi-22 (R) -lower alkyl vitamin D derivative represented by the formula: and a calcium metabolism improver comprising the 20-epi-22 (R) -lower alkyl vitamin D derivative as an active ingredient
About.
[0007]
BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION
The present inventors have studied in detail the effect of the substituent of the 20-epivitamin D derivative and found that 20-epi-22 (R) -lower alkylvitamin D₃Has extremely high activity and small side effects. The present invention has been completed based on such findings.
[0008]
The 20-epi-22 (R) -lower alkyl vitamin D derivatives of the present invention have the formula (I):
[0009]
Embedded image

[0010]
(Where R¹, R^TwoAnd R^ThreeIs a protecting group for a hydrogen atom or a hydroxyl group,^FourIsEthyl groupIndicates)
It is a compound represented by these.
[0011]
In the formula (I), R¹, R²And R³Examples of the hydroxyl-protecting group represented by are, for example, acetyl, propionyl, butyryl,BHLilAcyl groups such as a group, a pivaloyl group, a hexanoyl group and a benzoyl group; alkoxycarbonyl groups such as a methoxycarbonyl group, an ethoxycarbonyl group, an allyloxycarbonyl group, a t-butoxycarbonyl group and a benzyloxycarbonyl group; a triethylsilyl group and a t- Organic silyl groups such as butyldimethylsilyl group, phenyldimethylsilyl group and triisopropylsilyl group; alkoxymethyl groups such as methoxymethyl group, 1-ethoxyethyl group and methoxyethoxymethyl group; 2-tetrahydrofuranyl group and 2-tetrahydropyrani And an oxacycloalkyl group such as an aryl group.
[0012]
In the formula (I),R ^Four IsChill groupShow.
[0013]
The 20-epi-22 (R) -lower alkyl vitamin D derivative represented by the formula (I) is a novel compound and is a known compound of the formula (IV):
[0014]
Embedded image

[0015]
(Where R¹, R²And R³Is the same as above)
Using a cholesta-5,7,22-trien-24-one derivative represented by the following formula or a diene adduct thereof as a starting material,
[0016]
Embedded image

[0017]
(Where R¹, R², R³And R⁴Is the same as above)
Can be synthesized according to the scheme represented by
[0018]
20-epi-22 (R) -lower alkyl provitamin D derivative represented by the formula (III) and 20-epi-22 (R) -lower represented by the formula (II), which are intermediates obtained according to the above scheme. The alkyl previtamin D derivatives are all novel compounds, and their diene adducts are also novel compounds.
[0019]
The dienophile forming the diene adduct is not particularly limited as long as it is used in the field of synthesizing vitamin D, but in the present invention, N-phenyltriazolinedione, phthalazine-1,4-dione are used. Are preferred.
[0020]
Each step of the above scheme will be described in detail below.
[0021]
The cholesta-5,7,22-trien-24-one derivative represented by the formula (IV) or a diene adduct thereof can be synthesized, for example, according to a method described in JP-A-6-25155. it can.
[0022]
For example, a lower alkyl copper reagent is allowed to act on the cholesta-5,7,22-trien-24-one derivative or a diene adduct thereof in the presence of trimethylsilyl chloride to form a silyl enol ether, and then the silyl group is removed. If necessary, a hydroxyl group is protected to obtain a cholesta-5,7-dien-24-one derivative represented by the formula (V) in which a lower alkyl group is introduced at the 22nd position.
[0023]
The reaction proceeds stereospecifically. That is, in the formula (IV), when an unsaturated ketone derivative in which the double bond at the 22-position has the configuration of Z is used as a starting material, the cholester-5,7-diene having the R-configuration at the 22-position is used. A 24-one derivative can be obtained.
[0024]
The carbonyl group at the 24-position of the cholesta-5,7-dien-24-one derivative represented by the formula (V) is replaced with sodium borohydride, lithium aluminum hydride, diisobutylaluminum hydride, lithium triisobutylborohydride or the like. The cholester-5,7-dien-24-ol derivative represented by the formula (VI) is obtained by reducing with a reducing agent and protecting the hydroxyl group as required.
[0025]
The hydroxyl group of the cholesta-5,7-dien-24-ol derivative represented by the formula (VI) is reductively removed by a conventional method, for example, to the dithiocarbonate or thiocarbonate derivative represented by the formula (VII). Conversion, followed by radical reduction of the derivative, such as with tributyltin hydride, gives the 20-epi-22 (R) -lower alkyl provitamin D derivative of formula (III).
[0026]
By photoisomerizing a 20-epi-22 (R) -lower alkyl provitamin D derivative represented by the formula (III), a 20-epi-22 (R) -lower alkyl previtamin represented by the formula (II) is obtained. D derivative can be obtained, which is thermally isomerized and, if necessary, deprotected to obtain a 20-epi-22 (R) -lower alkyl vitamin D derivative represented by the formula (I) be able to.
[0027]
Isolation and purification of the thus obtained 20-epi-22 (R) -lower alkyl vitamin D derivative represented by the formula (I) from the reaction mixture generally involves isolating and purifying the organic compound from the reaction mixture. It can be carried out by a method similar to the method used in the method. For example, the reaction is performed by concentrating the reaction mixture to obtain a crude product, and subjecting the obtained crude product to recrystallization, chromatography, or the like, as necessary.
[0028]
The 20-epi-22 (R) -lower alkyl vitamin D derivative represented by the formula (I) of the present invention is 1,25-dihydroxyvitamin D₃Malignant tumors represented by skin diseases such as psoriasis, myeloid leukemia, and breast cancer because they have extremely high binding activity to the receptor, have low affinity for vitamin D binding protein, and have high differentiation inducing ability It is useful as a therapeutic agent for diseases having abnormal cell differentiation functions. Also, when administered to rats with low calcium and low vitamin D diet, the effect of increasing blood calcium was weak, and the toxicity was low in the acute toxicity test, so that there were few side effects, osteoporosis, hyperparathyroidism, chronic kidney disease. It is also useful as a therapeutic agent for calcium metabolism deficiencies such as insufficiency and osteomalacia, ie, a calcium metabolism improving agent.
[0029]
The calcium metabolism-improving agent of the present invention containing a 20-epi-22 (R) -lower alkylvitamin D derivative represented by the formula (I) as an active ingredient can be orally or parenterally administered as a pharmaceutical composition having an appropriate dosage form. Can be administered. The dose varies depending on the age, symptoms, administration route and the like. For example, when administered for the prevention or treatment of a calcium metabolism deficiency in an adult, usually 0.01 to 5 μg, preferably 0 to 5 g / day for an adult. It is convenient to administer 0.05 to 1 μg in 1 to 3 divided doses, but it is of course also possible to administer beyond the above range depending on the diagnosis of a doctor.
[0030]
The calcium metabolism improving agent of the present invention comprises an effective amount of an active ingredient, a 20-epi-22 (R) -lower alkyl vitamin D derivative represented by the formula (I), and a pharmacologically acceptable carrier or excipient. And a composition containing the agent. Such compositions are provided in dosage forms suitable for oral or parenteral administration.
[0031]
That is, as the dosage form of the composition for oral administration, for example, solid or liquid dosage forms, specifically, tablets, pills, granules, powders, capsules, syrups, emulsions, suspensions, etc. Is raised. Such a composition is produced by a known method and contains a carrier or excipient commonly used in the pharmaceutical field. For example, carriers and excipients for tablets include lactose, starch, sucrose, magnesium stearate and the like.
[0032]
When the composition for parenteral administration is used, for example, as an injection, the injection is usually carried out by dissolving, suspending or emulsifying in a sterile aqueous or oily solution used for injection according to a known method. An agent can be prepared. Examples of aqueous liquids for injection include physiological saline, dextrose, etc., and isotonic solutions containing other auxiliary liquids. These may be used in combination with a suitable solubilizing agent.
[0033]
The calcium metabolism ameliorating agent of the present invention thus obtained may contain other 20-epi-22 (R) -lower alkylvitamin D derivatives represented by the formula (I) unless other undesirable interactions occur. An active ingredient may be contained.
[0034]
【Example】
Next, the present invention will be described in more detail based on examples, but the present invention is not limited to only these examples.
[0035]
Example 1
Under an argon gas atmosphere, 0.92 ml (1.11 mmol) of a 1.21 M ethyllithium / THF solution was added to a suspension of 114 mg (0.556 mmol) of cuprous bromide / dimethylsulfide complex in 1 ml of tetrahydrofuran (hereinafter referred to as THF). ) Was added dropwise at −40 ° C., and the mixture was stirred at the same temperature for 0.5 hour. The reaction solution was cooled to −78 ° C., and 88.2 μl (0.695 mmol) of trimethylsilyl chloride, 121 μl (0.695 mmol) of hexamethylphosphoric triamide, (22Z)-(20S) -1α, 3β-bis (methoxycarbonyloxy) ) -25-Methoxymethoxycholesta-5,7,22-trien-24-one A solution of 40 mg (0.0695 mmol) in 0.5 ml of THF was added dropwise in this order, and the mixture was stirred at -78 ° C for 40 minutes. After 1.5 ml of triethylamine, 10 ml of ethyl acetate and water were added thereto and the temperature was returned to room temperature, the organic layer was washed with water, dried over anhydrous sodium sulfate, and the solvent was distilled off under reduced pressure.
[0036]
The obtained residue is purified by preparative thin-layer chromatography to give (23Z)-(20S, 22S) -1α, 3β-bis (methoxycarbonyloxy) -22-ethyl-25- ( 19.5 mg of (methoxymethoxy) -24-trimethylsilyloxycholesta-5,7,23-triene was obtained (yield 41%).
[0037]
¹H-NMR (200 MHz) δ
0.17 (9H, s, Si (CH₃)₃), 0.61 (3H, s, H-18), 1.01 (3H, s, H-19), 1.35 and 1.36 (3H, s, H-26, H-27, respectively), 3.35 (3H, s, methoxymethyl group CH₃), 3.77 and 3.80 (3H, s, methoxycarbonyl group CH each)₃), 4.58-4.95 (2H, m, H-1, H-3), 5.38 and 5.67 (1H, m, H-6, H-7, respectively).
[0038]
IR (neat) cm^-1
2950, 2860, 1740, 1440, 1245, 1140, 1030
[0039]
MS m / z
628 (1), 552 (3), 476 (2), 465 (1), 401 (6), 325 (52), 249 (34), 197 (62), 155 (23), 125 (56), 73 (100)
[0040]
Example 2
Under an argon gas atmosphere, (23Z)-(20S, 22S) -1α, 3β-bis (methoxycarbonyloxy) -22-ethyl-25- (methoxymethoxy) -24-trimethylsilyloxycholesta-5,7,23- To a solution of 175 mg (0.253 mmol) of triene in 2.5 ml of THF was added 304 μl (0.304 mmol) of a 1M tetrabutylammonium fluoride THF solution at −35 ° C., and the mixture was stirred at the same temperature for 15 minutes and diluted with ethyl acetate. The organic layer was washed with a 10% aqueous solution of ammonium chloride, water and brine, and dried over anhydrous sodium sulfate.
[0041]
The residue obtained by concentration under reduced pressure is purified by preparative thin-layer chromatography to give (20S, 22R) -1α, 3β-bis (methoxycarbonyloxy) -22-ethyl-25 having the following physical properties. 150 mg of-(methoxymethoxy) -24-oxocholesta-5,7-diene were obtained (96% yield).
[0042]
¹H-NMR (200 MHz) δ
0.70 (3H, s, H-18), 0.73 (3H, d, J = 6.7 Hz, H-21), 1.01 (3H, s, H-19), 1.34 and 1 .37 (3H, s, H-26, H-27 each), 3.40 (3H, s, methoxymethyl group CH₃), 3.78 and 3.80 (each 3H, s, methoxycarbonyl group CH₃), 4.78-5.02 (2H, m, H-1, H-3), 5.37 and 5.68 (1H, m, H-6, H-7, respectively)
[0043]
IR (neat) cm^-1
2950, 2870, 1740, 1770, 1440, 1380, 1260, 1145, 1030
[0044]
MS m / z
586 (0.7), 542 (2), 510 (3), 497 (2), 466 (6), 336 (11), 326 (9), 249 (18), 224 (11), 210 (22) ), 155 (27), 141 (17), 103 (100)
[0045]
Example 3
(20S, 22R) -1α, 3β-bis (methoxycarbonyloxy) -22-ethyl-25- (methoxymethoxy) -24-oxocholesta-5,7-diene (146 mg, 236 mmol) in methylene chloride (1 ml) in THF (0.8 ml) To the mixture was added 23.2 mg (0.614 mmol) of sodium borohydride, and the mixture was stirred at room temperature for 2 hours. The reaction solution was diluted with methylene chloride, washed with water, and dried over anhydrous sodium sulfate.
[0046]
The residue obtained by concentration under reduced pressure is purified by preparative thin-layer chromatography to give (20S, 22R) -1α, 3β-bis (methoxycarbonyloxy) -22-ethyl-24 having the following physical properties. 133 mg of -hydroxy-25- (methoxymethoxy) cholesta-5,7-diene were obtained (yield 91%).
[0047]
¹H-NMR (200 MHz) δ
3.78 and 3.80 (each 3H, s, methoxycarbonyl group CH₃), 4.76 (1H, m, H-1), 4.84 (1H, m, H-3), 5.37 and 5.68 (1H, m, H-6, H-7 respectively)
[0048]
IR (neat) cm^-1
3550, 2950, 2860, 1750, 1440, 1380, 1340, 1260, 1140, 1035
[0049]
MS m / z
586 (0.7), 544 (5), 512 (8), 468 (8), 436 (40), 407 (32), 365 (39), 278 (23), 249 (40), 224 (23) ), 209 (56), 155 (53), 141 (45), 103 (100)
[0050]
Example 4
Under an argon gas atmosphere, 9.7 mg (0.0156 mmol) of (20S, 22R) -1α, 3β-bis (methoxycarbonyloxy) -22-ethyl-24-hydroxy-25- (methoxymethoxy) cholesta-5,7-diene ) And 0.5 mg (0.0078 mmol) of imidazole in 0.8 ml of THF were added with 9.4 mg of sodium hydride (oil-based, 60% by weight, 0.234 mmol), and stirred at room temperature for 1.5 hours. 18.8 μl (0.312 mmol) of carbon sulfide was added, and the mixture was stirred at room temperature for 16 hours. After adding 12.1 μl (0.195 mmol) of methyl iodide to this solution and stirring at room temperature for 2 hours, the reaction solution was diluted with ethyl acetate, washed with water and brine, and dried over anhydrous sodium sulfate.
[0051]
The residue obtained by concentration under reduced pressure is purified by preparative thin-layer chromatography to give (20S, 22R) -1α, 3β-bis (methoxycarbonyloxy) -22-ethyl-24 having the following physical properties. -[(Methylthio) thiocarbonyloxy] -25- (methoxymethoxy) cholesta-5,7-diene (7.0 mg) was obtained (yield: 63%).
[0052]
¹H-NMR (200 MHz) δ
0.56 and 0.60 (3H, s, H-18), 1.28 (6H, s, H-26, H-27), 2.54 and 2.55 (3H, s, SCH)₃), 3.37 (3H, s, methoxymethyl group CH₃), 3.78 and 3.80 (each 3H, s, methoxycarbonyl group CH₃), 4.63-5.00 (4H, m, H-1, H-3, OCH₂O), 5.37 and 5.68 (1H, m, H-6, H-7 each), 5.84 and 5.95 (1H, m, H-24)
[0053]
IR (neat) cm^-1
2950, 2875, 1740, 1440, 1380, 1340, 1260, 1140, 1050
[0054]
MS m / z
678 (1), 590 (3), 540 (2), 528 (3), 497 (3), 406 (27), 325 (57), 249 (40), 209 (47), 155 (54), 91 (56), 69 (100)
[0055]
Example 5
Under an argon gas atmosphere, (20S, 22R) -1α, 3β-bis (methoxycarbonyloxy) -22-ethyl-24-[(methylthio) thiocarbonyloxy] -25- (methoxymethoxy) cholesta-5,7-diene A solution of 23.5 mg (0.0330 mmol), 53.0 μl (0.198 mmol) of tributyltin hydride and 2.7 mg (0.0165 mmol) of azobisisobutyronitrile in 1 ml of toluene was heated under reflux for 0.5 hour, and then heated to room temperature. And the solvent was removed under reduced pressure.
[0056]
The obtained residue was purified by preparative thin-layer chromatography to give (20S, 22R) -1α, 3β-bis (methoxycarbonyloxy) -22-ethyl-25- (methoxymethoxy) cholesta having the following physical properties. 15.2 mg of -5,7-diene was obtained (76% yield).
[0057]
¹H-NMR (200 MHz) δ
0.61 (3H, s, H-18), 0.70 (3H, d, J = 6.4 Hz, H-21), 1.01 (3H, s, H-19), 1.22 (6H , S, H-26, H-27), 3.37 (3H, s, methoxymethyl group CH₃), 3.78 and 3.80 (each 3H, s, methoxycarbonyl group CH₃), 4.71 (2H, s, OCH)₂O), 4.84 (1H, m, H-1), 4.90 (1H, m, H-3), 5.38 and 5.68 (1H, m, H-6, H-7 respectively)
[0058]
IR (neat) cm^-1
2950, 2860, 1745, 1440, 1380, 1340, 1270, 1140, 1040
[0059]
MS m / z
542 (7), 466 (29), 390 (100), 277 (58), 249 (32), 209 (58), 155 (38), 141 (36), 103 (56), 69 (82), 55 (91)
[0060]
Example 6
(20S, 22R) -1α, 3β-bis (methoxycarbonyloxy) -22-ethyl-25- (methoxymethoxy) cholesta-5,7-diene 12.1 mg (0.0200 mmol) and p-toluenesulfonic acid monohydrate A solution of 19.0 mg (0.100 mmol) of the salt in 2 ml of ethanol was heated under reflux for 0.5 hour, then 2 ml of a 5% methanol solution of potassium hydroxide was added, and the mixture was heated under reflux for 1 hour. After returning to room temperature, the reaction solution was poured into a saturated aqueous solution of ammonium chloride, extracted twice with ethyl acetate, and the extract was washed with saturated saline and dried over anhydrous magnesium sulfate.
[0061]
The solvent was removed under reduced pressure, and the obtained residue was purified by preparative thin-layer chromatography to give (20S, 22R) -22-ethyl-1α, 3β, 25-trihydroxycholesta having the following physical properties. 8.19 mg of -5,7-diene was obtained (92% yield).
[0062]
¹H-NMR (200 MHz) δ
0.63 (3H, s, H-18), 0.71 (3H, d, J = 6.4 Hz, H-21), 0.94 (3H, s, H-19), 1.23 (6H) , S, H-26, H-27), 3.77 (1H, m, H-1), 4.06 (1H, m, H-3), 5.38 and 5.72 (1H, m each). , H-6, H-7)
[0063]
IR (neat) cm^-1
3380, 2950, 2930, 2860, 1460, 1380, 1150, 1055
[0064]
MS m / z
444 (13), 426 (21), 408 (15), 393 (10), 295 (15), 251 (13), 227 (26), 171 (27), 157 (31), 69 (88), 59 (97), 55 (91)
[0065]
UV (ethanol) λmax: 271, 282, 294 nm
[0066]
Example 7
(20S, 22R) -22-ethyl-1α, 3β, 25-trihydroxycholesta-5,7-diene 28.7 mg (0.0645 mmol) of ethanol (99.5%) 200 ml solution was stirred with argon gas. Was irradiated with a Vycor transmitted light for 3 minutes using a 400 W high-pressure mercury lamp at 0 ° C., and then heated to reflux for 1.5 hours. After concentrating the reaction solution, the obtained residue was purified by preparative thin-layer chromatography, and the starting material (20S, 22R) -22-ethyl-1α, 3β, 25-trihydroxycholesta-5,7-diene and 13.8 mg of a product mixture of (20S, 22R) -22-ethyl-1α, 3β, 25-trihydroxy-9,10-secocholesta-5,7,10 (19) -triene was obtained.
[0067]
The resulting mixture is acetylated (8.2 μl of acetic anhydride, 11.7 μl of pyridine, 1 ml of methylene chloride, room temperature, 1.5 hours, purified by preparative thin-layer chromatography), and deacetylated (1N-sodium methoxide 0 0.05 ml, methanol 0.5 ml, THF 0.5 ml, 0 ° C., 2 hours, purification by preparative thin-layer chromatography), and has the following physical properties (20S, 22R) -22-ethyl-1α, 3β , 25-Trihydroxy-9,10-secocholesta-5,7,10 (19) -triene, ie, (20S, 22R) -22-ethyl-1α, 25-dihydroxyvitamin D₃(Compound IA) 2.02 mg was obtained.
[0068]
¹H-NMR (200 MHz) δ
0.54 (3H, s, H-18), 0.70 (3H, d, J = 6.3 Hz, H-21), 1.22 (6H, s, H-26, H-27), 4 .23 (1H, m, H-1), 4.43 (1H, m, H-3), 5.00 and 5.33 (1H, m, H-19 each), 6.02 and 6.38. (Each 1H, d, J = 11.2Hz, H-7, H-6)
[0069]
IR (neat) cm^-1
3400, 2950, 2860, 1460, 1380, 1210, 1160, 1055
[0070]
MS m / z
444 (3), 426 (6), 408 (5), 393 (3), 313 (3), 302 (1), 152 (26), 134 (100), 105 (29)
[0071]
UV (ethanol) λmax: 264 nm, λmin: 227 nm
[0072]
Example 8
Under an argon gas atmosphere, 8.50 ml (13.605 mmol) of a 1.60 M butyllithium / hexane solution was added to a suspension of 1.399 g (13.605 mmol) of cuprous bromide / dimethylsulfide complex in 10 ml of THF at a temperature of −35 to −35. The mixture was added dropwise at −30 ° C., and the mixture was stirred at the same temperature for 0.5 hour. The reaction solution was cooled to −78 ° C., and 1.079 ml (8.503 mmol) of trimethylsilyl chloride, 1.479 ml (8.503 mmol) of hexamethylphosphoric triamide and (22Z)-(20S) -1α, 3β-bis (methoxy) A solution of 500 mg (0.8503 mmol) of carbonyloxy) -25-methoxymethoxycholesta-5,7,22-trien-24-one in 5 ml of THF was added dropwise in this order, and the mixture was stirred at -78 ° C for 40 minutes. After 15 ml of triethylamine, 100 ml of ethyl acetate and 150 ml of water were added thereto, the mixture was returned to room temperature, filtered through celite, the aqueous layer was extracted three times with 100 ml of ethyl acetate, and the combined organic layers were washed with water and dried over anhydrous sodium sulfate. The solvent was distilled off under reduced pressure.
[0073]
The obtained residue is purified by column chromatography to give (23Z)-(20S, 22S) -1α, 3β-bis (methoxycarbonyloxy) -22-butyl-25- (methoxymethoxy)-having the following physical properties. 496.8 mg of 24-trimethylsilyloxycholesta-5,7,23-triene was obtained (yield 73%).
[0074]
¹H-NMR (200 MHz) δ
0.19 (9H, s, Si (CH₃)₃), 0.60 (3H, s, H-18), 0.80 (d, 3H, H-21), 1.01 (3H, s, H-19), 1.35 and 1.36 (each 3H, s, H-26, H-27), 3.26 (3H, s, methoxymethyl group CH₃), 3.78 and 3.81 (3H, s, methoxycarbonyl group CH each)₃), 4.65 (2H, m, H-1, H-3), 5.38 and 5.67 (1H, m, H-6, H-7 respectively)
[0075]
Example 9
Under an argon gas atmosphere, (23Z)-(20S, 22S) -1α, 3β-bis (methoxycarbonyloxy) -22-butyl-25- (methoxymethoxy) -24-trimethylsilyloxycholesta-5,7,23- To a solution of 436 mg (0.6064 mmol) of triene in 5.45 ml of THF, 0.709 ml (0.709 mmol) of a 1 M tetrabutylammonium fluoride THF solution was added at −43 to −40 ° C., and the mixture was stirred at the same temperature for 15 minutes. After dilution with ethyl acetate, the organic layer was washed with 5% aqueous ammonium chloride solution, water, and dried over anhydrous sodium sulfate.
[0076]
The residue obtained by concentration under reduced pressure was purified by column chromatography to give (20S, 22R) -1α, 3β-bis (methoxycarbonyloxy) -22-butyl-25- (methoxymethoxy) having the following physical properties. ) -24-Oxocholesta-5,7-diene 270.3 mg was obtained (yield 68.9%).
[0077]
¹H-NMR (200 MHz) δ
0.69 (3H, s, H-18), 0.73 (3H, d, J = 6.1 Hz, H-21), 0.90 (3H, t, J = 6.7 Hz, butyl group CH)₃), 1.01 (3H, s, H-19), 1.34 and 1.37 (3H, s, H-26, H-27 each), 3.40 (3H, s, methoxymethyl group CH)₃O), 3.78 and 3.80 (each 3H, s, methoxycarbonyl group CH₃O), 4.78-4.97 (2H, m, H-1, H-3), 5.37 and 5.68 (1H, m, H-6, H-7 respectively)
[0078]
Example 10
Under an argon gas atmosphere, (20S, 22R) -1α, 3β-bis (methoxycarbonyloxy) -22-butyl-25- (methoxymethoxy) -24-oxocholesta-5,7-diene 268.2 mg (0.4146 mmol) 1.34 ml of methanol and 1.31 ml (1.806 mmol) of sodium borohydride were added to a solution of 1.34 ml of methylene chloride, followed by stirring at room temperature for 2 hours. 8.22 mg of sodium borohydride was added thereto, and the mixture was further stirred at room temperature for 2 hours. The reaction solution was diluted with methylene chloride, washed with water, and dried over anhydrous sodium sulfate.
[0079]
The residue obtained by concentration under reduced pressure is purified by column chromatography to give (20S, 22R) -1α, 3β-bis (methoxycarbonyloxy) -22-butyl-24-hydroxy-25 having the following physical properties. 233.7 mg of-(methoxymethoxy) cholesta-5,7-diene was obtained (86.8% yield).
[0080]
¹H-NMR (200 MHz) δ
0.66 (3H, s, H-18), 0.69 and 0.78 (3H, d, J = 6.7 Hz, H-21), 0.91 (3H, t, J = 6.7 Hz, Butyl group CH₃), 1.00 and 1.01 (3H, s, H-19), 3.78 and 3.80 (each 3H, s, methoxycarbonyl group CH₃), 4.68-4.98 (4H, m, H-1, H-3, OCH₂O), 5.38 and 5.68 (1H, m, H-6, H-7 each)
[0081]
Example 11
Under an argon gas atmosphere, 171.7 mg (0.2646 mmol) of (20S, 22R) -1α, 3β-bis (methoxycarbonyloxy) -22-butyl-24-hydroxy-25- (methoxymethoxy) cholesta-5,7-diene ) And 3.60 mg (0.0529 mmol) of imidazole in 1.4 ml of THF were added 63.5 mg of sodium hydride (oily, 60% by weight, 1.588 mmol), and the mixture was stirred at room temperature for 20 minutes, and then carbon disulfide was added. 128 μl (2.117 mmol) was added, and the mixture was stirred at room temperature for 0.5 hour. To this solution, 83 μl (1.323 mmol) of methyl iodide was added, and the mixture was stirred at room temperature for 2 hours. Then, the reaction solution was diluted with ethyl acetate, washed with water, and dried over anhydrous sodium sulfate.
[0082]
The residue obtained by concentration under reduced pressure was purified by column chromatography to give (20S, 22R) -1α, 3β-bis (methoxycarbonyloxy) -22-butyl-24-[(methylthio) having the following physical properties. ) Thiocarbonyloxy] -25- (methoxymethoxy) cholesta-5,7-diene (29.6 mg) was obtained (yield 15.1%).
[0083]
¹H-NMR (200 MHz) δ
0.55 and 0.60 (3H, s, H-18), 0.75 (3H, d, J = 6.8 Hz, H-21), 0.92 (3H, t, J = 6.4 Hz, Butyl CH₃), 1.00 and 1.01 (3H, s, H-19), 1.27 (6H, s, H-26, H-27), 2.54 and 2.55 (3H, s, SCH)₃), 3.37 (3H, s, methoxymethyl group CH₃), 3.78 and 3.80 (each 3H, s, methoxycarbonyl group CH₃), 4.69-4.94 (4H, m, H-1, H-3, OCH₂O), 5.36 and 5.68 (1H, m, H-6, H-7 each), 5.92 (1H, d, J = 9.95Hz, H-24)
[0084]
Example 12
Under an argon gas atmosphere, (20S, 22R) -1α, 3β-bis (methoxycarbonyloxy) -22-butyl-24-[(methylthio) thiocarbonyloxy] -25- (methoxymethoxy) cholesta-5,7-diene A solution of 34.7 mg (0.04695 mmol), 76.9 μl (0.2934 mmol) of tributyltin hydride and 4.0 mg (0.0245 mmol) of azobisisobutyronitrile in 0.62 ml of toluene was heated under reflux for 25 minutes, and then heated to room temperature. And the solvent was removed under reduced pressure.
[0085]
The obtained residue was purified by column chromatography to give (20S, 22R) -1α, 3β-bis (methoxycarbonyloxy) -22-butyl-25- (methoxymethoxy) cholesta-5,7 having the following physical properties. 13.0 mg of diene were obtained (43.7% yield).
[0086]
¹H-NMR (200 MHz) δ
0.61 (3H, s, H-18), 0.70 (3H, d, J = 6.7 Hz, H-21), 0.91 (3H, t, J = 6.7 Hz, butyl group CH₃), 1.01 (3H, s, H-19), 1.22 (6H, s, H-26, H-27), 3.37 (3H, s, OCH of methoxymethyl group)₃), 3.78 and 3.80 (CH of 3H, s, methoxycarbonyl group each)₃), 4.71 (OCH of 2H, s, methoxymethyl group)₂O), 4.83 (1H, m, H-1), 4.90 (1H, m, H-3), 5.38 and 5.69 (1H, m, H-6, H-7 respectively)
[0087]
Example 13
13.0 mg (0.0205 mmol) of (20S, 22R) -1α, 3β-bis (methoxycarbonyloxy) -22-butyl-25- (methoxymethoxy) cholesta-5,7-diene is dissolved in 1.39 ml of chloroform. Then, a solution of 13.0 mg (0.068 mmol) of p-toluenesulfonic acid monohydrate in 1.39 ml of ethanol was added, and the mixture was heated under reflux for 1 hour. After cooling to room temperature, 1.39 ml of a 5% potassium hydroxide / ethanol solution was added, and the mixture was heated under reflux for 1 hour. After returning to room temperature, the reaction solution was diluted with ethyl acetate, washed successively with 20 ml of a 5% aqueous ammonium chloride solution and 20 ml of water, and dried over anhydrous sodium sulfate.
[0088]
The solvent was removed under reduced pressure, and the obtained residue was purified by column chromatography to give (20S, 22R) -22-butyl-1α, 3β, 25-trihydroxycholesta-5,7 having the following physical properties. 7.2 mg of diene were obtained (74% yield).
[0089]
¹H-NMR (200 MHz) δ
0.63 (3H, s, H-18), 0.71 (3H, d, J = 6.1 Hz, H-21), 0.90 (3H, t, J = 7.0 Hz, butyl group CH)₃), 0.95 (3H, s, H-19), 1.22 (6H, s, H-26, H-27), 3.78 (1H, m, H-1), 4.07 (1H). , M, H-3), 5.39 and 5.75 (1H, m, H-6, H-7, respectively)
[0090]
Example 14
After dissolving 11.5 mg of (20S, 22R) -22-butyl-1α, 3β, 25-trihydroxycholesta-5,7-diene in 24 ml of ethanol (99.5%), 180 ml of benzene was added, and 0 ° C. For 15 minutes with nitrogen. The solution was irradiated with light for 15 minutes using Pyrex transmitted light at 0 ° C. using a 400 W high-pressure mercury lamp while bubbling the solution, and then heated and refluxed for 1 hour.
[0091]
After concentrating the reaction solution, the obtained residue was purified by HPLC (YMC-Pack, Inc., trade name: YMC-Pack ODS-A, methanol / water (volume ratio) = 80/20) and had the following physical properties. (20S, 22R) -22-butyl-1α, 3β, 25-trihydroxy-9,10-secocholesta-5,7,10 (19) -triene, that is, (20S, 22R) -22-butyl-1α, 25 -Dihydroxyvitamin D₃(Compound IB) 1.17 mg was obtained.
[0092]
¹H-NMR (200 MHz) δ
0.57 (3H, s, H-18), 0.73 (3H, d, J = 6.9 Hz, H-21), 1.17 (6H, s, H-26, H-27), 4 .12 (1H, m, H-1), 4.35 (1H, m, H-3), 4.90 and 5.29 (1H, m, H-19 respectively), 6.08 and 6.32. (Each 1H, d, J = 10.9Hz, H-7, H-6)
UV (ethanol) λmax: 264 nm, λmin: 227 nm
[0093]
Test Example 1 [Bovine thymus 1α, 25-dihydroxyvitamin D₃Binding test with receptor)
(20S, 22R) -22-ethyl-1α, 25-dihydroxyvitamin D₃(Compound IA) and (20S, 22R) -22-methyl-1α, 25-dihydroxyvitamin D₃(Comparative compound) Bovine thymus 1α, 25-dihydroxyvitamin D₃The ability to bind to the receptor was measured.
[0094]
That is, each of the serially diluted solutions (1, 2, 4, 8, 16, 32, 63, 125, 250, 500, 5000 pg / 50 μl ethanol solution) of compound IA and the comparative compound was added to bovine thymus 1α, 25 -Dihydroxyvitamin D₃A receptor (Yamasa Corporation) solution (500 μl phosphate buffer) was added, and the mixture was stirred and pre-incubated for 1 hour at room temperature. 1α, 25-dihydroxyvitamin D each labeled with tritium₃(4.85 TBq / mmol) Add 12570 dpm / 50 μl ethanol solution, stir and leave at 4 ° C. overnight, then add DCC (dextran coated charcoal) suspension (Yamasa Corporation), stir and add 1α, 25-dihydroxyvitamin D₃A sample not bound to the receptor (free form) was adsorbed.
[0095]
The DCC was separated by centrifuging the reaction mixture (3000 rpm) and 1α, 25-dihydroxyvitamin D₃The sample bound to the receptor (bound form) was separated from the free form (BF separation). Take 500 μl of the supernatant, measure the radioactivity with a scintillation counter, and determine 1α, 25-dihydroxyvitamin D₃Tritium-labeled 1α, 25-dihydroxyvitamin D bound to the receptor₃Of α, 25-dihydroxyvitamin D labeled with tritium₃50% of 1α, 25-dihydroxyvitamin D₃The concentration of the test compound when binding to the receptor (ED₅₀Value).
[0096]
As a control compound, 1α, 25-dihydroxyvitamin D₃A similar test was conducted using₅₀The value was determined, and the relative activity of the binding activity of the test compound when this was set to 1 was determined. Table 1 shows the results.
[0097]
[Table 1]

[0098]
In addition, in Tables 1-4, the control compound, the comparative compound, the compound IA, and the compound IB show the following compounds.
Reference compound: 1α, 25-dihydroxyvitamin D₃
Comparative compound: (20S, 22R) -22-methyl-1α, 25-dihydroxyvitamin D₃
Compound IA: (20S, 22R) -22-ethyl-1α, 25-dihydroxyvitamin D₃
Compound IB: (20S, 22R) -22-butyl-1α, 25-dihydroxyvitamin D₃
[0099]
Test Example 2 [Differentiation induction test of human myeloid leukemia cells]
Human myeloid leukemia cells cultured in Eagle's modified medium were cultured in culture dishes at a density of 2 × 10 5 per culture dish.⁵Added. Next, two test compounds (20S, 22R) -22-ethyl-1α, 25-dihydroxyvitamin D₃(Compound IA) and (20S, 22R) -22-butyl-1α, 25-dihydroxyvitamin D₃A serially diluted solution obtained by dissolving (Compound IB) in ethanol (50 μl) was added.
[0100]
The incubation concentration of the test compound was 10^-7M, 10^-8M, 10^-9M, 10^-10M and 10^-11There are five stages of M.
[0101]
After incubation for 4 days, superoxide production was measured by nitroblue tetrazolium (NBT) reduction. That is, blue-formazan was deposited in the cells and blue-stained cells were measured twice at each concentration by counting 200 or more cells. The ratio of differentiation induction was determined from the ratio of blue-stained cells to the total number of cells, and the concentration of the test compound at which 50% of the cells differentiated (ED₅₀Value).
[0102]
As a control compound, 1α, 25-dihydroxyvitamin D₃A similar test was conducted using₅₀The value was determined, and when this value was set to 1, the relative activity of the differentiation-inducing activity of the test compound was determined. Table 2 shows the results.
[0103]
[Table 2]

[0104]
Test Example 3 [Elevation of blood calcium in mice]
Eight-week-old male ddY mice (SLC) were given (20S, 22R) -22-butyl-1α, 25-dihydroxyvitamin D₃(Compound IB), (20S, 22R) -22-methyl-1α, 25-dihydroxyvitamin D₃(Comparative compound) or 1α, 25-dihydroxyvitamin D₃(Control compound) was intravenously administered, and orbital blood sampling (50 μl) was performed 24 hours after the administration, and the blood ionized calcium value was measured by an ionized calcium measuring device. Based on the blood calcium ion concentration for each dose of the obtained test compound administration group, the rate of increase from the blood calcium ion concentration of each non-administration group was determined. Table 3 shows the results.
[0105]
[Table 3]

[0106]
Test Example 4 [Elevation of blood calcium in rats]
Vitamin D deficient rats are fed for 1 week on a vitamin D deficient diet containing 0.47% by weight of calcium and 0.3% by weight of phosphorus, and then for 2 weeks on a vitamin D deficient diet containing reduced calcium to 0.02% by weight. Made by rearing.
[0107]
25-Hydroxyvitamin D in serum of vitamin D deficient rats obtained by this method₃And 1α, 25-dihydroxyvitamin D₃Is below the detection limit.
[0108]
Next, these rats were treated with the amount of 1α, 25-dihydroxyvitamin D shown in Table 4.₃(Control compound), (20S, 22R) -22-methyl-1α, 25-dihydroxyvitamin D₃(Comparative compound) or (20S, 22R) -22-ethyl-1α, 25-dihydroxyvitamin D₃A 0.1 ml solution of (Compound IA) in propylene glycol: ethanol (95: 5) was administered by intraperitoneal injection for 7 days. Serum was removed 24 hours after the last dose, and serum calcium concentration was measured using a Calcette automatic calcium titrator. A blank experiment was performed similarly. The rate of increase in the blood calcium concentration of the administration group from the blood calcium concentration of the non-administration group was determined. Table 4 shows the results.
[0109]
[Table 4]

[0110]
From the results shown in Tables 1 to 4, the following can be understood.
[0111]
(20S, 22R) -22-ethyl-1α, 25-dihydroxyvitamin D₃(Compound IA) was found to be bovine thymus 1α, 25-dihydroxyvitamin D from the results shown in Table 1.₃It has a high binding activity to the receptor, and the results shown in Table 2 show that the differentiation inducing ability of human myeloid leukemia cells is 1α, 25-dihydroxyvitamin D₃It turns out that it is extremely strong about 38 times of (control compound). Furthermore, from the results shown in Table 4, it can be seen that Compound IA has a weaker blood calcium concentration increasing effect, which is one of the indicators of the side effect of the vitamin D derivative, than the control compound and the comparative compound.
[0112]
(20S, 22R) -22-butyl-1α, 25-dihydroxyvitamin D₃(Compound IB) also showed 1α, 25-dihydroxyvitamin D from the results shown in Table 3.₃It can be seen that the blood calcium increasing effect is weaker than that of the (control compound) and the comparative compound. In addition, as shown in Table 2, the ability of Compound IB to induce differentiation is about twice as high as that of the control compound.
[0113]
From the above results, it can be seen that the 20-epi-22 (R) -lower alkyl vitamin D derivative (I) of the present invention is useful as a therapeutic drug with few side effects.
[0114]
【The invention's effect】
Since the 20-epi-22 (R) -lower alkyl vitamin D derivative represented by the formula (I) of the present invention has high vitamin D receptor binding activity and is excellent in safety, it has a parathyroid function. Deficiencies in calcium metabolism such as hypotension, hyperparathyroidism, osteomalacia, and osteoporosis, skin diseases such as psoriasis, and diseases in which cell differentiation functions are abnormal such as myeloid leukemia and malignant tumors represented by breast cancer Can be suitably used as a calcium metabolism improving agent useful for the treatment of.

Claims

Formula (I):

(In the formula, R ¹ , R ² and R ³ each represent a hydrogen atom or a hydroxyl-protecting group, and R ⁴ represents an ethyl group .)
20-epi-22 (R) -lower alkyl vitamin D derivative represented by the formula:

Formula (I):

(In the formula, R ¹ , R ² and R ³ each represent a hydrogen atom or a hydroxyl-protecting group, and R ⁴ represents an ethyl group .)
A calcium metabolism improving agent comprising a 20-epi-22 (R) -lower alkylvitamin D derivative represented by the following formula as an active ingredient: