JP3570561B2 - Carrier that recognizes vascular endothelial injury site - Google Patents
Carrier that recognizes vascular endothelial injury site Download PDFInfo
- Publication number
- JP3570561B2 JP3570561B2 JP10700694A JP10700694A JP3570561B2 JP 3570561 B2 JP3570561 B2 JP 3570561B2 JP 10700694 A JP10700694 A JP 10700694A JP 10700694 A JP10700694 A JP 10700694A JP 3570561 B2 JP3570561 B2 JP 3570561B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- drug
- site
- drug carrier
- carrier according
- vascular endothelial
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
Images
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は、血管内皮損傷部位を認識し、当該血管内皮損傷部位を診断または治療するための薬物を封入してなる薬物担体に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
血管、特に大動脈の内皮に生じる損傷が、血管平滑筋細胞の過剰増殖などを生じて動脈硬化症の発生の原因のひとつであることは広く知られるところである（ロスら、ニューイングランドジャーナルオブメディシン（Ｒ．Ｒｏｓｓｅｔａｌ，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．），３１４，４８８（１９８６））。このような傷害を生ずる原因としては血栓形成、あるいは過酸化反応による内皮細胞の傷害などがあるが、最近冠動脈の狭窄部位を物理的力により圧迫、あるいは、切削、あるいは焼き切りなどの方法で拡大する療法が実用化されるにともない、このような物理的処置により傷害された部位において組織の肥厚が起こり、いったん拡大された血管腔が再び狭窄するいわゆる再狭窄が問題とされている。
【０００３】
特に、狭窄した冠動脈を経皮的に血管内に導入したカテーテルを用いて物理的圧迫力により拡大する方法（ＰＴＣＡ）は、狭心症等の虚血性心疾患の治療法として非常に広範囲に普及しており、処置後３０〜５０％の患者に生じる再狭窄の予防は当該疾患の治療にとって最も重要な課題となっている。この再狭窄は主として血管平滑筋細胞の過剰増殖によって引き起こされるため、この増殖を抑える作用を持つ薬物による再狭窄の防止が試みられている。しかし現在までのところ、シャーレ上に培養した平滑筋細胞の増殖を抑制する効果を持つ薬物は多数見つけられるが、臨床的に効果のある薬物は皆無である（キャッセルス、サーキュレーション（Ｗ．Ｃａｓｓｃｅｌｌｓ，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ），８６（３），７２４（１９９２））。
【０００４】
このように臨床的に効果が認められない原因のひとつとして、当該薬物を静脈内投与や経口投与によって全身的に投与した場合には、当該薬物の全身への作用を起こすことのない投与量によっては、血管内皮傷害部位において平滑筋細胞の増殖を抑制するに充分な濃度を確保することができないことがあげられる。例えばヘパリンはこのような作用を有する薬物であるが、全身的に投与する場合には、出血傾向などの作用のため、充分量の薬物の投与は困難である。しかしこれを血管局所に投与すればそのような作用無しに血管肥厚を抑制し得ることは岡田らによる実験で確かめられている（岡田知久ら，ディディエス（ＤＤＳ），７（１），５１，（１９９２））。彼らは、開胸して、当該血管の外部にヘパリン入りのゲルを外から張り付ける方法で血管局所における薬物濃度の充分な上昇とそれによる治療効果を確認している。
【０００５】
しかしながらこのような投与方法は、余りに生体にとって侵襲が大きすぎ、特に低侵襲な治療法であることがその実用的価値のひとつとなっているＰＴＣＡ療法と組み合わせる方法としては到底認められないものである。すなわち当該分野においては、経口、静脈内、あるいは最も侵襲度の高い場合でもカテーテルによる局所投与など侵襲度の低い投与法によっても血管皮傷害部位に特異的にかつ充分な濃度で薬物を集積させることができる薬物担体、すなわち血管内皮傷害部位への特異的集積度が高く、かつ高い薬物包有力を有する薬物担体が望まれているが、そのような薬物担体はこれまで実現されていなかった。
【０００６】
近年、リポソーム、エマルジョン、リピッドマイクロスフェア、ナノパーテイクルなどの閉鎖小胞を薬物担体としてドラッグデリバリーシステムに応用しようとする研究が盛んに行われるようになってきた。
【０００７】
しかし、これら閉鎖小胞を上記分野における薬物担体として用いる上での最大の問題点として、体内動態の制御が極めて困難であることが上げられる。特に閉鎖小胞は肝臓や脾臓などの細網内皮系（ＲＥＳ）に補足されやすくそのため、ＲＥＳ以外の体内器官へのターゲッティングは非常に難しく、特に、血管内皮が損傷している部位へのターゲッティングはまったく考慮されてこなかった。
【０００８】
さらに、閉鎖小胞に物質を封入しようとする際、一般的に用いられている膜材から構成される閉鎖小胞では高濃度の薬物を封入することができずに、結果としてこれら閉鎖小胞のメリットを生かしきれないばかりか、製造コスト増をまねくなどの問題や、血液中では安定性がすこぶる悪く、閉鎖小胞同志が血液中の蛋白質を介して凝集してしまうなどの問題がこれら薬物担体の実用化を困難なものとしてきた。
【０００９】
これらの問題点を克服するために、様々な工夫が考案されている。例えば、膜構成成分としてステアリルアミンなどの荷電物質を用いることにより血中滞留性の向上をもたらしめる方法（特開昭６３−７７８２４号）、シアル酸、グルクロン酸などの糖およびその誘導体により小胞の表面を修飾する方法（バイオケミカバイオフィジックアクタ（ＢＢＡ），１１２６，２５５（１９９２）、ディディエス（ＤＤＳ），７，３４５（１９９２））、ポリエチレングリコールのごとき親水性高分子の誘導体を蛋白質吸着抑制剤として用いる方法を開示している（特開平２−１４９５１２号、特開平３−２１８３０９号）。また、膜構成成分として、グルコサミン誘導体を用いたものなどが、開示されている（特開平４−１５９２１６号）。
【００１０】
しかしこれらの方法のどれによっても、血管内皮傷害部位への特異的集積が高く、高い薬物包有力を有する薬物担体は実現されていなかった。
【００１１】
【発明が解決しようとする課題】
したがって、本発明の目的は、薬物封入率が高く、体内安定性に優れ、なおかつ、例えばＰＴＣＡ施行後や動脈硬化病巣などの血管内皮が損傷している部位を認識することのできる薬物担体を供給することにある。
【００１２】
【課題を解決するための手段】
上記目的は以下の本発明によって解決される。
【００１３】
（１）１）リン脂質あるいはその誘導体、および／またはリン脂質以外の脂質あるいはその誘導体と、
２）生理的ｐＨ範囲で陽電荷を帯びる部位を有する化合物と疎水性化合物との誘導体と、
３）親水性高分子を疎水性化合物と結合させた誘導体と、
４）薬物とを含有し、
前記生理的ｐＨ範囲で陽電荷を帯びる部位および親水性高分子部位の少なくとも一部が前記担体の表面に存在し、該薬物が内部に封入されることを特徴とする薬物担体。
【００１４】
（２）前記担体が、血管内皮損傷部位を認識する担体である上記（１）に記載の薬物担体。
【００１５】
（３）内部に血管内皮損傷部位を診断および／または治療するための薬物を封入してなる上記（１）または（２）に記載の薬物担体。
【００１６】
（４）前記担体の径が０． ０２〜２５０μｍ の大きさを有する微小粒子よりなる上記（１）乃至（３）のいずれかに記載の薬物担体。
【００１７】
（５）前記担体が、巨大分子、微集合体、微粒子、微小球、ナノ小球、リポソームおよびエマルジョンのうちの少なくとも一つから構成される上記（１）乃至（４）のいずれかに記載の薬物担体。
【００１８】
（６）前記担体がさらに安定化剤、および／または酸化防止剤、および／またはその他の表面修飾剤を含有する上記（１）乃至（５）のいずれかに記載の薬物担体。
【００１９】
（７）前記生理的ｐＨ範囲で陽電荷を帯びる部位を有する化合物が、少なくとも一つ以上の脂肪族第一，二級アミノ基、アミジノ基、芳香族第一、二級アミノ基を有する化合物、及びさらに前記化合物に１つ以上の水酸基を有する残基と結合させた化合物からなる上記（１）乃至（６）のいずれかに記載の薬物担体。
【００２０】
（８）前記生理的ｐＨ範囲で陽電荷を帯びる部位を有する化合物が、アミノ糖である上記（１）乃至（６）のいずれかに記載の薬物担体。
【００２１】
（９）上記アミノ糖が、グルコサミン、ガラクトサミン、マンノサミン、イノラミン酸、イノラミン酸エステルなどの単糖、およびこれらの遊離型ないし各種グリコシドからなる上記（８）に記載の薬物担体。
【００２２】
（１０）上記アミノ糖が、キチンなどのオリゴ糖、多糖、およびこれらの遊離型ないし各種グリコシドからなる上記（８）に記載の薬物担体。
【００２３】
（１１）前記親水性高分子誘導体が、ポリエチレングリコールの、長鎖脂肪族アルコール、ステロール、ポリオキシプロピレンアルキル、またはグリセリン脂肪酸エステルとの誘導体である上記（１）乃至（１０）のいずれかに記載の薬物担体。
【００２４】
（１２）前記血管内皮損傷部位を診断および／または治療するための薬物が、電気的に中性あるいはアニオン性である上記（３）乃至（１１）のいずれかに記載の薬物担体。
【００２５】
（１３）前記血管内皮損傷部位を診断および／または治療するための薬物が、抗炎症剤、抗癌剤、酵素剤、抗生物質、抗酸化剤、脂質取り込み阻害剤、ホルモン剤、アンジオテンシン変換酵素阻害剤、平滑筋細胞の増殖・遊走阻害剤、血小板凝集阻害剤、ケミカルメデイエーターの遊離抑制剤、あるいは血管内皮細胞の増殖または抑制剤である上記（３）乃至（１２）のいずれかに記載の薬物担体。
【００２６】
（１４）前記血管内皮損傷部位を診断および／または治療するための薬物が、グリコサミノグリカン及びその誘導体である上記（３）乃至（１２）のいずれかに記載の薬物担体。
【００２７】
（１５）前記血管内皮損傷部位を診断および／または治療するための薬物が、オリゴおよび／または多糖、およびそれらの誘導体である上記（３）乃至（１２）のいずれかに記載の薬物担体。
【００２８】
（１６）前記血管内皮損傷部位を診断および／または治療するための薬物が、Ｘ線造影剤、放射性同位元素標識核医学診断薬、核磁気共鳴診断用診断薬等の各種体内診断薬である上記（３）乃至（１２）のいずれかに記載の薬物担体。
【００２９】
（１７）前記血管内皮損傷部位を診断および／または治療するための薬物が、ヘパリン、テオフェリン、サイクリックＡＭＰ（ｃＡＭＰ）、カプトプリル、パパベリン、フォルスコリンの中の少なくとも１つである上記（３）乃至（１２）のいずれかに記載の薬物担体。
【００３０】
本発明者らは、各種薬物担体の体内動態を制御するファクターについて研究を進めていく過程において、まったく驚くべきことに、薬物担体表面に、生理的ｐＨ範囲で陽電荷を帯びる部位を有する化合物の、前記生理的ｐＨ範囲で陽電荷を帯びる部位の少なくとも一部を存在させると、薬物担体が血管内皮損傷部位へ集積することを見出した。
【００３１】
また、さらに驚くべきことには、前記陽電荷を帯びた部位を存在させた薬物担体の表面に、さらに親水性高分子を存在させることによって、前記担体の血管内皮損傷部位への集積性はまったく阻害されず、一方で、担体の血液中での凝集の防止による血液中での安定性の確保ならびにＲＥＳ補足の回避による血中滞留性の向上が可能になることを見い出し、本発明を完成させた。
【００３２】
従って、上記目的に沿う本発明は、表面に生理的ｐＨ範囲で陽電荷を帯びる部位を有し、その内部に血管内皮損傷部位を診断および／または治療するための薬物を封入してなる血管内皮損傷部位を認識する薬物担体である。また、その表面にさらに親水性高分子が存在する薬物担体である。
【００３３】
本発明の担体は粒径が０． ０２〜２５０μｍ、とりわけ０． ０５〜０． ４μｍの大きさが好ましい。
【００３４】
また、構造としては様々な形態が考えられ、限定する必要はないが、特にその内部に薬物を高濃度封入することのできる潜在的機能を有する、巨大分子、微集合体、微粒子、微小球、ナノ小球、リポソームおよびエマルジョンのうちより少なくとも一つ以上からなることが最も望ましい。
【００３５】
本発明において、薬物担体の構成成分として生理的ｐＨ範囲で陽電荷を帯びる部位を有する化合物、さらには親水性高分子部位を有する親水性高分子誘導体を有していればよいが、これら以外の構成成分としては、上記の形態を形成できるものであれば特にその配合に限定する必要はないが、その安全性や、生体内において安定性を考慮すると、リン脂質あるいはその誘導体、リン脂質以外の脂質あるいはその誘導体、または安定化剤、酸化防止剤、その他の表面修飾剤の配合が望ましい。
【００３６】
リン脂質としては、ホスファチジルコリン（＝レシチン）、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジン酸、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、スフィンゴミエリン、カルジオリビン等の天然あるいは合成のリン脂質、またはこれらを常法にしたがって水素添加したもの等を挙げることができる。
【００３７】
安定化剤としては、膜流動性を低下させるコレステロールなどのステロール、あるいはグリセロール、シュクロースなどの糖類が挙げられる。
【００３８】
酸化防止剤としては、トコフェロール同族体すなわちビタミンＥなどが挙げられる。トコフェロールには、α，β，γ，δの４個の異性体が存在するが本発明においてはいずれも使用できる。
【００３９】
その他の表面修飾剤としては、グルクロン酸、シアル酸、デキストランなどの水溶性多糖類の誘導体等が挙げられる。
【００４０】
生理的ｐＨ範囲で陽電荷を帯びる部位を有する化合物に関しては、薬物担体の構造安定を損なうものでなければ特に限定されるものではないが、少なくとも一つ以上の脂肪族第一，二級アミノ基、アミジノ基、芳香族第一、二級アミノ基を有する化合物、及び前記化合物に１つ以上の水酸基を有する残基と結合させた化合物が挙げられる。
【００４１】
具体的には、前記化合物とパルミチン酸、ステアリン酸等の長鎖脂肪族アルコール、ステロール、ポリオキシプロピレンアルキル、またはグリセリン脂肪酸エステル等の疎水性化合物との誘導体が好ましい。これら誘導体は、疎水性化合物部位を薬物担体（例えばリポソーム）の膜へ安定に挿入することができ、前記生理的ｐＨ範囲で陽電荷を帯びる部位を薬物担体の表面に存在させることができる。
【００４２】
また、前記生理的ｐＨ範囲で陽電荷を帯びる部位を有する化合物としては、アミノ糖が挙げられ、前記アミノ糖としては、グルコサミン、ガラクトサミン、マンノサミン、イノラミン酸、イノラミン酸エステルなどの単糖、及びキチンなどのオリゴ糖、多糖、またこれらの遊離型ないし各種グリコシドが挙げられる。
【００４３】
前記アミノ糖は、疎水性化合物部位を薬物担体（例えばリポソーム）の膜へ安定に挿入することができ、前記生理的ｐＨ範囲で陽電荷を帯びる部位を担体の表面に存在させることができる。
【００４４】
本発明において、生理的ｐＨ範囲とは、生体内、主に血液中、細胞質及びそこに存在するオルガネラの内部等のｐＨ範囲であり、具体的にはｐＨ４〜１０で、より好ましくはｐＨ６〜８である。
【００４５】
本発明において、表面に存在させる親水性高分子部位としては、薬物担体の構造安定を損なうものでなければ特に限定されるものではない。親水性高分子としては様々なものが考えられる。例えば、ポリエチレングリコール、デキストラン、プルラン、フィコール、ポリビニルアルコール、スチレン−無水マレイン酸交互共重合体、ジビニルエーテル−無水マレイン酸交互共重合体、合成ポリアミノ酸、アミロース、アミロペクチン、キトサン、マンナン、シクロデキストリン、ペクチン、カラギーナンなどである。その中でもポリエチレングリコールは血中滞留性を向上させる効果が顕著であり、最も望ましい。
【００４６】
また、前記親水性高分子は、長鎖脂肪族アルコール、ステロール、ポリオキシプロピレンアルキル、またはグリセリン脂肪酸エステル等の疎水性化合物と結合させた誘導体を用いることによって、疎水性化合物部位を薬物担体（例えば、リポソーム）の膜へ安定に挿入することができる。そのことにより、薬物担体表面に親水性高分子を存在させることができる。
【００４７】
本発明において具体的に用いることができる親水性高分子誘導体としては、ポリエチレングリコール−フォスファチジルエタノールアミン等が挙げられる。
【００４８】
本発明において、薬物担体に封入する薬剤としては、内皮傷害部位の診断および／または治療の目的に応じて薬学的に許容し得る薬理的活性物質、生理的活性物質または診断用物質を用いることができる。
【００４９】
封入する薬剤の性質として、基本的にはどの物質においても問題ないが、担体の表面が陽電荷を持つ特徴から、電気的に中性あるいはアニオン性である物質の方が高封入率が期待できる。
【００５０】
封入する薬剤の種類としては、薬物担体の形成を損ねないかぎり特に限定されるものではなく、血管内皮損傷部位における様々の反応を抑制し、正常な血管組織へ誘導する薬物であれば何等の制限なく使用できる。具体的には、抗炎症剤、抗癌剤、酵素剤、抗生物質、抗酸化剤、脂質取り込み阻害剤、ホルモン剤、アンジオテンシン変換酵素阻害剤、平滑筋細胞の増殖・遊走阻害剤、血小板凝集阻害剤、ケミカルメデイエーターの遊離抑制剤、あるいは血管内皮細胞の増殖促進または抑制剤等として使用可能なものが挙げられる。
【００５１】
特に、ヘパリンなどの硫酸化グリコサミノグリカン、オリゴおよび多糖およびそれらの誘導体は血管内皮損傷部位において血管肥厚の原因である平滑筋細胞の増殖・遊走を阻害する物質として有効である。その他にも、テオフェリン、サイクリックＡＭＰ（ｃＡＭＰ）、カプトプリル、パパベリン、フォルスコリンなどが挙げられる。
【００５２】
しかし基本的には本発明の担体の構成を有すれば、血管内皮損傷部位に集積する性質を持つものであるから、その部位の疾患の特徴に応じて、それに最適な薬物を選択することにおいて何等の制限はない。特に傷害部位では、血小板の活性化が起こり易く、また各種白血球の集積が認められ様々のケミカルメデイエーターを放出して炎症反応を引き起こしている。またこれら組織では、脂質の過酸化や、脂質取り込みの亢進が起こることもよく知られており、これら反応が複合的に進行して動脈硬化性の病変を引き起こすものと考えられる。これらの現象の病変形成への寄与は症例毎に各々異なると予想されることから、これらの症状へ対応した薬物は全て本発明の対象とすることができることは言うまでもない。
【００５３】
また、薬物治療に先立って、障害部位を特定することは重要であり、この目的と使用し得る各種体内診断薬（Ｘ線造影剤、放射性同位元素標識核医学診断薬、核磁気共鳴診断用診断薬等）は、本発明の担体に封入することにより血管障害部の特異的診断を可能にするものであり、前記診断薬も本発明の対象とすることができることは言うまでもない。
【００５４】
本発明の薬物担体は常法によって容易に得ることができるが、その一例を以下に示す。フラスコ内に生理的ｐＨ範囲で陽電荷を帯びる部位を有する化合物及びリン脂質等の他の担体構成成分を、クロロホルム等の有機溶媒により混合し、有機溶媒を留去後真空乾燥することによりフラスコ内壁に薄膜を形成させる。次に、当該フラスコ内に薬物を加え、激しく撹拌することにより、リポソーム分散液を得る。得られたリポソーム分散液を遠心分離し、上清をデカンテーションし封入されなかった薬物を除去することにより、薬物担体を分散液として得ることができる。また、上記の各構成成分を混合し、高圧吐出型乳化機により高圧吐出させることにより得ることもできる。
【００５５】
本発明の薬物担体は、静注などによって投与可能であるが、特に好ましい方法はカテーテルを血管内に挿入して、その先端を血管内皮損傷部位付近に導き、当該カテーテルを通して投与する方法が好ましい。
【００５６】
本発明の薬物担体は、血中及び血管内皮損傷部位での滞留性に優れており、１回の投与後、６時間以上は血中に滞留し、３日以上は血管内皮損傷部位に安定に滞留している。
【００５７】
また、本発明の薬物担体はＰＴＣＡ術後などにより血管損傷が発生してから、特に１時間以内に投与することが効果的である。なぜならば、血管損傷が発生してから約１時間してから投与すると一時的に本発明の薬物担体の血管損傷部位への集積が減少するためである。これは、血小板等の血管損傷部位への付着の影響が考えられる。したがって、本発明の薬物担体は血管損傷が発生してから１時間以内に投与することが好ましい。
【００５８】
しかしながら、ある程度時間が経過すると本発明の薬物担体の血管損傷部へ集積性は再び向上する。したがって、血管損傷発生後１時間以降の投与が無効になる訳ではなく、その後の投与も有効である。
【００５９】
【実施例】
以下に実施例を示し、本発明を更に詳細に説明する。
【００６０】
（参考例１）式Ｉ にその構造を示す６−ｏ−パルミトイル−メチル−Ｄ−ガラクトサミナイド（６−ｏ−ｐａｌｍｉｔｏｙｌ−ｍｅｔｈｙｌ−Ｄ−ｇａｌａｃｔｏｓａｍｉｎｉｄｅ）を膜構成成分として含有するリポソームを下記の通りに調製した。
【００６１】
下記の３種類の膜構成成分を、それぞれクロロホルム溶液として容量５０ｍｌのナス型フラスコに加え混合した。
【００６２】
・フォスファチジルコリン（濃度１００ｍＭ）：８４０μｌ・コレステロール（濃度１００ｍＭ）：２４０μｌ・６−ｏ−パルミトイル−メチル−Ｄ−ガラクトサミナイド（１０ｍＭ）：１２００μｌ
【００６３】
【化１】
さらに、クロロホルム１０ｍｌを加えた。クロロホルムを留去した後、一晩真空乾燥することによりフラスコ内壁に脂質薄膜を形成した。次いで、１００μｇのヘパリンを溶解させた３００ｍＭソルビトール／１０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液４ｍｌをフラスコ内に加え、激しく浸盪撹拌することにより、リポソーム（ＭＬＶ）分散液を得た。
【００６５】
この分散液を遠心分離（１２０，０００ｇ、７０分間）した。上清をデカンテーションし、未封入のヘパリンを除去することにより、リポソームのペレットを得た。このペレットを３００ｍＭソルビトール／１０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌに分散することにより、ヘパリンを封入した標記のリポソーム分散液を得た。
【００６６】
（参考例２）本実施例に使用する６−ｏ−パルミトイル−メチル−Ｄ−ガラクトサミナイドは以下の通りに作製した。
【００６７】
公知の手法に従ってＤ−ガラクトサミナイドからＮ−ベンジルオキシカルボニル−メチル−Ｄ−ガラクトサミナイドを得て、ピリジン（５０ｍｌ）中に当該Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−メチル−Ｄ−ガラクトサミナイド（９． ３ｇ）とパルミトイルクロリド（８ｍｌ）を加え、窒素ガス雰囲気下、室温で２４時間撹拌する。反応終了後、反応混合物を１０％氷冷塩酸中に注入し、酢酸エチルで抽出する。その後、抽出液を飽和炭酸水素ナトリウム（ＮａＨＣＯ３ ）、食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウム（Ｎａ２ ＳＯ４ ）で乾燥した後、溶媒を除去して粗生成物を得て、さらに酢酸エチル溶液から再結晶してＮ−ベンジルオキシカルボニル−６−ｏ−パルミトイル−メチル−Ｄ−ガラクトサミナイド（７． ６５ｇ）を得た。
【００６８】
このＮ−ベンジルオキシカルボニル−６−ｏ−パルミトイル−メチル−Ｄ−ガラクトサミナイド（１． ３５ｇ）をメタノール（５０ｍｌ）に溶解し、触媒量の５％Ｐｄ−Ｃを加え、常温、常圧下で２４時間接触還元を行い、反応終了後これを濾過して溶媒を除去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して目的化合物の６−ｏ−パルミトイル−メチル−Ｄ−ガラクトサミナイド（８７４ｍｇ）を得た。このものの下記に示すデータは式Ｉ の構造を支持する。
【００６９】
ｍ．ｐ．：１２２〜１２４℃元素分析：実測値Ｃ＝６４． ２４％，Ｈ＝１０． ８４％，Ｎ＝３． ０４％計算値Ｃ＝６４． ００％，Ｈ＝１０． ５１％，Ｎ＝３．２５％（Ｃ２３Ｈ４３Ｏ６ Ｎとしての計算値）
【００７０】
ＩＲ（ＫＢｒ）：３３５３ｃｍ−１，２９１７ｃｍ−１，２８５４ｃｍ−１，１７２８ｃｍ−１，１４６２ｃｍ−１ＭＳ（ＦＡＢ）：４３５（Ｍ＋１）＋
【００７１】
１ Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ− ｄ６ ）δ（ｐｐｍ）：５． １５（ｎ，１Ｈ），５． ００（ｎ，１Ｈ），４． ５１（ｄ，Ｊ＝３．４Ｈｚ，１Ｈ），４． ３０（ｄ，Ｊ＝１０． ６Ｈｚ，１Ｈ），４． ０４（ｄｄ，Ｊ＝６． ６Ｈｚ，Ｊ＝６． ８Ｈｚ，１Ｈ），３． ５３（ｍ，１Ｈ），３． ２６（ｓ，３Ｈ），３． １０（ｍ，２Ｈ），２． ４０（ｍ，１Ｈ），２． ２９（ｔ，Ｊ＝７． ２Ｈｚ，２Ｈ），１． ５１（ｍ，２Ｈ），１． ２４（ｂ，２４Ｈ），０． ８６（ｔ，Ｊ＝６． ０Ｈｚ，３Ｈ）。
【００７２】
（実施例１）６−ｏ−パルミトイル−メチル−Ｄ−ガラクトサミナイドおよび式ＩＩにその構造を示すポリエチレングリコール−フォスファチジルエタノールアミン重合体（ＰＥＧ−ＰＥ）を膜構成成分として含有するリポソームの調製を下記の通りに調製した。
【００７３】
下記４種類の膜構成成分を、それぞれクロロホルム溶液として容積５０ｍｌのナス型フラスコに加え混合した。
【００７４】
・フォスファチジルコリン（濃度１００ｍＭ）：８４０μｌ・コレステロール（濃度１００ｍＭ）：２４０μｌ・６−ｏ−パルミトイル−メチル−Ｄ−ガラクトサミナイド（１０ｍＭ）：１２００μｌ・ＰＥＧ−ＰＥ（濃度０． ４Ｗ／Ｖ％）：１０００μｌ。
【００７５】
【化２】
以下、上記参考例１と同様に操作し、ヘパリンを保持した標記のリポソーム分散液を得た。
【００７７】
（実施例２）式ＩＩＩ にその構造を示すグルカミンパルミトイルエステルを膜構成成分として含有するリポソームの調製を下記の通りに調製した。
【００７８】
下記４種類の膜構成成分を、それぞれクロロホルム溶液として容積５０ｍｌのナス型フラスコに加え混合した。
【００７９】
・フォスファチジルコリン（濃度１００ｍＭ）：８４０μｌ・コレステロール（濃度１００ｍＭ）：２４０μｌ・グルカミンパルミトイルエステル（濃度１０ｍＭ）：１２００μｌ・ＰＥＧ−ＰＥ（濃度０． ４Ｗ／Ｖ％）：１０００μｌ。
【００８０】
【化３】
以下、上記参考例１と同様に操作し、ヘパリンを保持した標記のリポソーム分散液を得た。
【００８２】
（試験例１：ヘパリンの封入率の測定）参考例１及び実施例１において使用したヘパリンのリポソーム中への封入率を次の様にして求めた。まず、遠心分離した後の上清中におけるヘパリン量をカルバゾール法で定量することにより、リポソーム中に封入されなかったヘパリン量を求めた。これをリポソーム調製にあたって最初に添加したヘパリンの総量と比較することにより、リポソーム中へのヘパリンの封入率を求めた。
【００８３】
比較のために、６−ｏ−パルミトイル−メチル−Ｄ−ガラクトサミナイド及びＰＥＧ−ＰＥを用いることなく上記実施例と同様の方法で調製したリポソーム分散液を調製した。そして、上記と同様の方法でヘパリンの封入率を求めた。結果を表１に示す。
【００８４】
【表１】
以上の結果から明らかなとおり、生理的ｐＨ範囲で陽電荷を帯びる部位を有する化合物、あるいは生理的ｐＨ範囲で陽電荷を帯びる部位を有する化合物及び親水性高分子誘導体を含むリポソームはこれを含まない中性リポソームに比べて、ヘパリンの高い封入率を示した。
【００８６】
また、表には記さないが本発明の他の生理的ｐＨ範囲で陽電荷を帯びる部位を有する化合物を含んだリポソームも同様な優れた結果を示した。
【００８７】
（試験例２：体内動態１）ウレタンで麻酔されたＳＤ雄ラットの大腿静脈より、参考例１及び実施例１に準じて調製されたカルボキシフルオレセイン（Ｃａｒｂｏｘｙｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ）１００ｍＭを封入させたリポソーム分散液５００μｌを静注した。経時的に血液をエッペンドルフチューブに採取した。採取した血液について蛍光強度を測定することにより、体内動態を測定した。
【００８８】
また、比較のために、６−ｏ−パルミトイル−メチル−Ｄ−ガラクトサミナイド及びＰＥＧ−ＰＥを用いることなく、上記実施例に準じて調製されたリポソーム分散液について、上記と同様の方法で体内動態を測定した。結果を図１に示す。
【００８９】
図１から明らかなとおり、生理的ｐＨ範囲で陽電荷を帯びる部位を有する化合物を膜構成成分として含有せしめたリポソームは、それを含有しないリポソームに比べて、血中滞留性が高いことが確認された。また、さらに親水性高分子（ＰＥＧ−ＰＥ）により表面修飾されているリポソームは、生理的ｐＨ範囲で陽電荷を帯びる部位を有する化合物のみの場合よりもさらに血中滞留性が高いことが確認された。
【００９０】
また、図には記さないが本発明の他の生理的ｐＨ範囲で陽電荷を帯びる部位を有する化合物を含んだリポソームも同様な優れた結果を示した。
【００９１】
（試験例３：臓器分布１）ウレタンで麻酔されたＳＤ雄ラットの大腿静脈から２フレンチのバルーンカテーテルを挿入し、頚動脈部を５回擦過することにより、血管内皮障害モデルを作成した。
【００９２】
擦過後直ちに大腿静脈より、参考例１及び実施例１に準じて調製されたカルボキシフルオレセイン（Ｃａｒｂｏｘｙｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ）１００ｍＭを封入させたリポソーム分散液５００μｌを静注した。３時間後、１６時間後、２４時間後、３日後に頸動脈を採取した。採取した頸動脈からカルボキシフルオレスセインを抽出し、蛍光強度を測定することにより頸動脈へのリポソームの集積量を測定した。
【００９３】
さらに、頚動脈部を擦過しないラット大腿静脈より、参考例１及び実施例１に準じて調製されたカルボキシフルオレスイセン１００ｍＭを封入させたリポソーム分散液５００μｌを静注した後、上記と同様の方法で頚動脈へのリポソームの分布状況を測定した。
【００９４】
また、比較のために、６−ｏ−パルミトイル−メチル−Ｄ−ガラクトサミナイド及びＰＥＧ−ＰＥを用いることなく、上記実施例に準じて調製されたリポソーム分散液について、上記と同様の方法で血管内皮障害モデルの頸動脈へのリポソームの集積量を測定した。
【００９５】
血管内皮障害モデルにおける３時間後の参考例１，実施例１及び比較対照の結果を図２に、経時的に３日間測定した実施例１の結果を図３に示す。また、図示しないが血管内皮が損傷していない場合の集積量は、比較の血管内皮障害モデルの頸動脈へのリポソームの集積量とほぼ同等であった。
【００９６】
以上の結果から明らかなとおり、生理的ｐＨ範囲で陽電荷を帯びる部位を有する化合物を膜構成成分として含有せしめたリポソーム、あるいは生理的ｐＨ範囲で陽電荷を帯びる部位を有する化合物および親水性高分子誘導体を膜構成成分として含有せしめた本発明のリポソームは、それらを含有しないリポソームに比べて血管損傷部位への集積性が高く、さらに内皮が損傷していない血管と比べて血管損傷部位へ集積性が高いことから血管損傷部位へのターゲッティング性に優れている。
【００９７】
また、擦過後直ちに投与した場合、３日間は血管損傷部に滞留されることが判った。
【００９８】
さらに同様なラットによる試験を実施例２に準じて調製されたリポソームについて同様に行った結果、図４に示す通り他の実施例と同様な優れた効果を示した。
【００９９】
また、図には記さないが本発明の他の生理的ｐＨ範囲で陽電荷を帯びる部位を有する化合物を含んだ担体も同様な優れた結果を示した。
【０１００】
（試験例４：体内動態２）ラットの代わりに去勢ブタ（３０ｋｇ）を用いて試験例２と同様な実験を行った。つまり、ケタミンで麻酔されたブタの大腿静脈より、実施例１に準じて調製されたカルボキシフルオレセイン（Ｃａｒｂｏｘｙｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ）１００ｍＭを封入させたリポソーム分散液３０ｍｌを静注した。経時的に血液を採取した。採取した血液から血漿を得て、その血漿の蛍光強度を測定することにより体内動態を測定した。
【０１０１】
また、比較のために、６−ｏ−パルミトイル−メチル−Ｄ−ガラクトサミナイド及びＰＥＧ−ＰＥを用いることなく、上記実施例に準じて調製されたリポソーム分散液について、上記と同様の方法で体内動態を測定した。
【０１０２】
その結果、試験例２と同様な優れた血中滞留性を示し、本発明は大型動物であるブタにも有効であることが示された。また比較対照も試験例２と同様な結果であった。
【０１０３】
（試験例５：臓器分布２）ケタミンで麻酔された去勢ブタ（３０ｋｇ）の大腿動脈から７． ５フレンチのバルーンカテーテルを挿入し、頚動脈部を５回擦過することにより、血管内皮障害モデルを作成した。
【０１０４】
大腿静脈より実施例１に準じて調製されたカルボキシフルオレセイン１００ｍＭを封入させたリポソーム分散液３０ｍｌを静注した。３時間後にブタの頚動脈を採取した。採取した頚動脈からカルボキシフローレスセンを抽出し、蛍光強度を測定することにより頚動脈へのリポソームの分布状況を測定した。
【０１０５】
さらに、頚動脈部を擦過しないブタについても、大腿静脈より、参考例１及び実施例１に準じて調製されたカルボキシフルオレスセイン１００ｍＭを封入させたリポソーム分散液３０ｍｌを静注した後、上記と同様の方法で頚動脈へのリポソームの分布状況を測定した。
【０１０６】
比較のために、ＰＥＧ−ＰＥ、６−ｏ−パルミトイル−メチル−Ｄ−ガラクトサミナイドを用いることなく上記実施例に準じて調製されたリポソーム分散液について上記と同様の方法で頚動脈へのリポソームの分布状況を測定した。
【０１０７】
試験例３で行ったラットによる結果とともに 図５に示す通り、優れた血管損傷部位へ集積性を示した。また、比較対照のリポソームは血管損傷部位へ集積性は示さなかった。
【０１０８】
以上の結果から、本発明はよりヒトに近い血管を持つと言われ、かつ大型動物であるブタにも有効であることが示された。また、図には記さないが本発明の他の生理的ｐＨ範囲で陽電荷を帯びる部位を有する化合物を含んだリポソームも同様な優れた結果を示した。
【０１０９】
（試験例６：臓器集積性）ウレタンで麻酔されたＳＤ雄ラットの大腿動脈から２フレンチのバルーンカテーテルを挿入し、頚動脈部を５回擦過することにより、血管内皮障害モデルを６群分作成した。
【０１１０】
実施例１に準じて調製されたカルボキシフルオレセイン１００ｍＭを封入させたリポソーム分散液５００μｌをラット群別に大腿静脈より、擦過直後、０． １、０． ５、１、３、６、２４時間後にそれぞれ静注した。各群ともに投与後３時間後に頚動脈を採取した。採取した頚動脈からカルボキシフルオレスセインを抽出し、蛍光強度を測定することにより各群の頚動脈へのリポソームの分布状況の変化を測定した。結果を図６に示す。
【０１１１】
その結果、擦過後１時間経過した付近では、一時的なリポソームの集積性の低下が観察されるが、それ以後はコンスタントに集積されることが判った。すなわち、リポソームは血管損傷部が生じてから１時間以内の投与が特に効果的であるが、血管損傷後１時間の経過後においても効果があることが判った。
【０１１２】
また、本発明の他の生理的ｐＨ範囲で陽電荷を帯びる部位を有する化合物を含んだリポソームも同様な結果を示した。
【０１１３】
（試験例７：封入薬物別リポソーム製剤の血管肥厚の抑制効果）実施例１のヘパリン入りリポソームと同様にして、サイクリックＡＭＰ（ｃＡＭＰ）、カプトプリル、パパベリン、フォルスコリンを封入したリポソーム製剤を作成した。コントロールには薬物未封入のリポソームを用いた。
【０１１４】
ウレタンで麻酔されたＳＤ雄ラットの大腿動脈から２フレンチのバルーンカテーテルを挿入し、頚動脈部を４回擦過することにより、血管内皮障害モデルを作成した。各薬物入りリポソーム製剤を尾静脈から７日間にわたり投与した後、頚動脈を採取した。採取した頚動脈の断面の中膜と内膜の面積比によって血管肥厚度を求めた。算出方法を図７に示し、結果を表２に示す。
【０１１５】
【表２】
表２に示す通り、各薬物入りリポソーム製剤は優れた血管肥厚の抑制効果を示した。
【０１１７】
（試験例８：急性毒性）この試験の目的は、本発明の薬物担体の毒性が、従来のものの毒性と比較してどの程度であるかを知ることである。そのために、薬物未封入の状態で調製された本発明の薬物担体と従来の薬物担体のそれぞれについて、ラットに対する致死毒性試験を行った。
【０１１８】
（被験液の調製）
１）６−ｏ−パルミトイル−メチル−Ｄ−ガラクトサミナイドを含有する本発明のリポソーム分散液ヘパリンを加えなかった点を除き、参考例１と同様の方法で、６−ｏ−パルミトイル−メチル−Ｄ−ガラクトサミナイド、ＰＥＧ−ＰＥを含有するリポソーム分散液を得た。これを限外ろ過膜を用いて濃縮し、さらに必要に応じて注射用滅菌蒸留水で希釈して被験液とした。
【０１１９】
２）６−ｏ−パルミトイル−メチル−Ｄ−ガラクトサミナイド及びＰＥＧ−ＰＥを含有する本発明のリポソーム分散液
ヘパリンを加えなかった点を除き、実施例１と同様の方法で、６−ｏ−パルミトイル−メチル−Ｄ−ガラクトサミナイド、ＰＥＧ−ＰＥを含有するリポソーム分散液を得た。これを限外ろ過膜を用いて濃縮し、さらに必要に応じて注射用滅菌蒸留水で希釈して被験液とした。
【０１２０】
３）従来のリポソーム分散液
比較のために、６−ｏ−パルミトイル−メチル−Ｄ−ガラクトサミナイド、ＰＥＧ−ＰＥを用いることなく、実施例と同様の方法で中性リポソーム分散液を得た。これを限外ろ過膜を用いて濃縮し、さらに必要に応じて注射用滅菌蒸留水で希釈して被験液とした。
【０１２１】
（方法）検疫した５週齢のＳＤ雄性ラットを１群３匹に区分し、腹腔内に上記の被験液２．０ｍｌを１回投与した。一方、溶媒対照群として、滅菌蒸留水２．０ｍｌを投与した。
【０１２２】
被験液投与後、１６日間にわたって少なくとも１日１回、注意深く一般状態を観察して毒性徴候、死亡状況を記録した。
【０１２３】
（結果）表３に示す通りである。
【０１２４】
【表３】
上記の試験結果に示したように、本発明の薬物担体については、観察期間中死亡例はなかった。しかし、従来の薬物担体においては、投与開始後１日目から体重が激減し、１５日目までに表中に示した様に大半が死亡した。これはその後の臓器所見から、従来の薬物担体では血液中において血球成分等と会合あるいはリポソーム同士の会合により、血中に凝集塊が生成され、肺などに塞栓を形成してしまうことが原因であることが確認された。この結果から、本発明の薬物担体は、従来公知の薬物担体に比べて、極めて毒性が低く、安全性の高いものであると言える。
【０１２６】
また、表には記さないが本発明の他の生理的ｐＨ範囲で陽電荷を帯びる部位を有する化合物を含んだ担体も同様な優れた結果を示した。
【０１２７】
【発明の効果】
以上、詳細に説明したように、本発明の薬物担体は、従来の薬物担体と比較して、中性あるいはアニオン性の物質の封入率が高く、また、血管内皮損傷部位へのターゲッティング性が非常に高い。また、安全性も非常に高い。
【０１２８】
このような特徴から、薬学的に許容し得る薬理的活性物質、生理的活性物質または診断用物質を封入させた本発明の新規薬物担体は、血管内皮損傷部位における診断及び治療という目的に対して非常に効果的である。例えば、ヘパリン、多糖類およびその硫酸化体、ならびにテオフェリン、サイクリックＡＭＰ（ｃＡＭＰ）、カプトプリル、パパベリン、フォルスコリンなどを封入した場合は、血管内皮が損傷した部位における平滑筋細胞の遊走を抑える血管肥厚防止薬として有用である。
【図面の簡単な説明】
【図１】ラットにおける本発明及び比較のリポソームの血中滞留性を示す。
【図２】ラットにおける本発明及び比較のリポソームの血管内皮損傷部位への集積性を示す。
【図３】ラットにおける本発明のリポソームの血管内皮損傷部位での滞留性の経時的変化を示す。
【図４】ラットにおける本発明の他のリポソームの血管内皮損傷部位での滞留性の経時的変化を示す。
【図５】ブタおよびラットにおける本発明及び比較のリポソームの血管内皮損傷部位への集積性を示す。
【図６】血管損傷から投与までの時間と本発明のリポソームの血管損傷部位への集積性を示す。
【図７】試験例７における血管肥厚度の求め方を示す。[0001]
[Industrial applications]
The present invention relates to a drug carrier that recognizes a vascular endothelial damage site and encapsulates a drug for diagnosing or treating the vascular endothelial damage site.
[0002]
[Prior art]
It is widely known that damage to blood vessels, particularly to the endothelium of the aorta, is one of the causes of arteriosclerosis due to excessive proliferation of vascular smooth muscle cells (Ross et al., New England Journal of Medicine ( R. Rossetal, N. Engl. J. Med.), 314, 488 (1986)). Causes of such injuries include thrombus formation or endothelial cell injury due to peroxidation. Recently, stenosis in coronary arteries is expanded by physical force such as compression, cutting, or burning. As the therapy is put into practical use, so-called restenosis, in which tissue thickening occurs at a site injured by such physical treatment and the enlarged blood vessel lumen is once again narrowed, has become a problem.
[0003]
In particular, a method of expanding a stenotic coronary artery by physical compression using a catheter percutaneously introduced into a blood vessel (PTCA) is very widely used as a treatment for ischemic heart disease such as angina pectoris. Therefore, prevention of restenosis occurring in 30 to 50% of patients after the treatment is the most important issue for treatment of the disease. Since this restenosis is mainly caused by excessive proliferation of vascular smooth muscle cells, an attempt has been made to prevent restenosis by a drug having an action of suppressing this proliferation. However, to date, there are a large number of drugs that have the effect of suppressing the growth of smooth muscle cells cultured on petri dishes, but none have clinically effective effects (Cassels, Circulation (W. Cassells, Circulation), 86 (3), 724 (1992)).
[0004]
One of the reasons for the lack of clinical efficacy is that when the drug is administered systemically by intravenous or oral administration, the dose may not cause systemic effects of the drug. Is that it is not possible to secure a concentration sufficient to suppress the proliferation of smooth muscle cells at the site of vascular endothelial injury. For example, heparin is a drug having such an effect, but when administered systemically, it is difficult to administer a sufficient amount of the drug due to effects such as bleeding tendency. However, it has been confirmed by experiments by Okada et al. That administration of this compound to local blood vessels can suppress vascular hypertrophy without such an effect (Tomohisa Okada et al., Didies (DDS), 7 (1), 51, (1992)). They confirmed that a sufficient increase in the drug concentration in the local blood vessel and a therapeutic effect by the method of applying a gel containing heparin to the outside of the blood vessel from the outside after thoracotomy was performed.
[0005]
However, such an administration method is too invasive for a living body, and is hardly recognized as a method in combination with PTCA therapy, which is one of its practical values, especially as a minimally invasive therapy. . That is, in the art, it is necessary to accumulate a drug specifically and sufficiently at a site of vascular skin injury by a low invasive administration method such as oral, intravenous, or even in the most invasive case, by local administration using a catheter. There has been a demand for a drug carrier capable of producing such a drug, that is, a drug carrier having a high degree of specific accumulation at the site of vascular endothelial injury and a high drug-encapsulating ability, but such drug carriers have not been realized so far.
[0006]
In recent years, studies have been actively conducted to apply closed vesicles such as liposomes, emulsions, lipid microspheres, and nanoparticle as drug carriers to drug delivery systems.
[0007]
However, the biggest problem in using these closed vesicles as drug carriers in the above fields is that control of pharmacokinetics is extremely difficult. In particular, closed vesicles are easily captured by the reticuloendothelial system (RES), such as the liver and spleen, and are therefore very difficult to target to internal organs other than the RES. Not considered at all.
[0008]
In addition, when trying to enclose substances in closed vesicles, closed vesicles composed of commonly used membrane materials cannot enclose a high concentration of drug, resulting in these closed vesicles These drugs not only take full advantage of the drug, but also lead to increased production costs and other problems, such as poor stability in blood, and aggregation of closed vesicles via proteins in the blood. Practical use of carriers has been difficult.
[0009]
Various devices have been devised to overcome these problems. For example, a method of using a charged substance such as stearylamine as a membrane component to improve the retention in blood (Japanese Patent Application Laid-Open No. 63-77824), and a method using a sugar such as sialic acid and glucuronic acid and derivatives thereof to reduce A method for modifying the surface of a cell (Biochemical Biophysical Actor (BBA), 1126, 255 (1992), Didies (DDS), 7,345 (1992)), a method using a derivative of a hydrophilic polymer such as polyethylene glycol as a protein A method for use as an adsorption inhibitor is disclosed (JP-A-2-149512, JP-A-3-218309). Further, a film using a glucosamine derivative as a membrane component has been disclosed (JP-A-4-159216).
[0010]
However, none of these methods has realized a drug carrier having a high specific accumulation at a site of vascular endothelial injury and a high drug-encapsulating ability.
[0011]
[Problems to be solved by the invention]
Therefore, an object of the present invention is to provide a drug carrier which has a high drug encapsulation rate, has excellent stability in the body, and can recognize a site where vascular endothelium is damaged, for example, after PTCA or atherosclerotic lesion. Is to do.
[0012]
[Means for Solving the Problems]
The above object is solved by the present invention described below.
[0013]
(1)1) a phospholipid or a derivative thereof, and / or a lipid other than the phospholipid or a derivative thereof,
2) a derivative of a compound having a site having a positive charge in a physiological pH range and a hydrophobic compound;
3) a derivative in which a hydrophilic polymer is bonded to a hydrophobic compound;
4) containing a drug,
Positively charged site in the physiological pH rangeAnd at least a part of the hydrophilic polymer site is present on the surface of the carrier, and the drug is encapsulated insideA drug carrier, characterized in that:
[0014]
(2)The carrier is a carrier that recognizes a vascular endothelial injury site.(1)3. The drug carrier according to
[0015]
(3)The above wherein a drug for diagnosing and / or treating a vascular endothelial injury site is enclosed therein.(1) or (2)3. The drug carrier according to
[0016]
(4)The diameter of the carrier is 0. The fine particles having a size of from 02 to 250 μm.(1) to (3)The drug carrier according to any one of the above.
[0017]
(5)Wherein the carrier is composed of at least one of a macromolecule, a microassembly, a microparticle, a microsphere, a nanosphere, a liposome, and an emulsion.(1) to (4)The drug carrier according to any one of the above.
[0018]
(6)The above wherein the carrier further comprises a stabilizer, and / or an antioxidant, and / or another surface modifier.(1) to (5)The drug carrier according to any one of the above.
[0019]
(7)The compound having a site having a positive charge in the physiological pH range is a compound having at least one or more aliphatic primary and secondary amino groups, an amidino group, an aromatic primary and secondary amino group, and further comprising A compound comprising a compound bonded to a residue having one or more hydroxyl groups.(1) to (6)The drug carrier according to any one of the above.
[0020]
(8)The compound having a site having a positive charge in the physiological pH range is an amino sugar.(1) to (6)The drug carrier according to any one of the above.
[0021]
(9)The amino sugars are glucosamine, galactosamine, mannosamine, inolaminic acid, monosaccharides such as inolaminic acid esters, and free or various glycosides thereof.(8)3. The drug carrier according to
[0022]
(10)The amino sugars are oligosaccharides such as chitin, polysaccharides, and free or various glycosides thereof;(8)3. The drug carrier according to
[0023]
(11)The above (1) to (1) to wherein the hydrophilic polymer derivative is a derivative of polyethylene glycol with a long-chain aliphatic alcohol, sterol, polyoxypropylene alkyl, or glycerin fatty acid ester.(10)The drug carrier according to any one of the above.
[0024]
(12)The drug for diagnosing and / or treating the vascular endothelial injury site is electrically neutral or anionic.(3) to (11)The drug carrier according to any one of the above.
[0025]
(13)Drugs for diagnosing and / or treating the vascular endothelial injury site include anti-inflammatory agents, anticancer agents, enzyme agents, antibiotics, antioxidants, lipid uptake inhibitors, hormonal agents, angiotensin converting enzyme inhibitors, smooth muscle cells A growth / migration inhibitor, a platelet aggregation inhibitor, a chemical mediator release inhibitor, or a vascular endothelial cell growth or inhibitor(3) to (12)The drug carrier according to any one of the above.
[0026]
(14)The drug for diagnosing and / or treating a vascular endothelial injury site is glycosaminoglycan and a derivative thereof.(3) to (12)The drug carrier according to any one of the above.
[0027]
(15)The above-mentioned drug for diagnosing and / or treating a vascular endothelial injury site is an oligo and / or polysaccharide and a derivative thereof.(3) to (12)The drug carrier according to any one of the above.
[0028]
(16)The drug for diagnosing and / or treating the vascular endothelial damage site is an in-vivo diagnostic agent such as an X-ray contrast agent, a radioisotope-labeled nuclear medicine diagnostic agent, or a diagnostic agent for nuclear magnetic resonance diagnosis.(3) to (12)The drug carrier according to any one of the above.
[0029]
(17)The above-mentioned drug for diagnosing and / or treating a vascular endothelial injury site is at least one of heparin, theopherin, cyclic AMP (cAMP), captopril, papaverine, and forskolin.(3) to (12)The drug carrier according to any one of the above.
[0030]
In the process of conducting research on factors controlling the pharmacokinetics of various drug carriers, the present inventors surprisingly surprisingly found that a compound having a site having a positive charge in a physiological pH range on the surface of the drug carrier. It has been found that the presence of at least a part of the site having a positive charge in the physiological pH range causes the drug carrier to accumulate at the site of vascular endothelial damage.
[0031]
Further, more surprisingly, by further presenting a hydrophilic polymer on the surface of the drug carrier in which the positively charged site is present, the accumulation property of the carrier on the vascular endothelial injury site is completely reduced. It has been found that it is not inhibited, on the other hand, it is possible to secure stability in blood by preventing agglutination of the carrier in blood and to improve retention in blood by avoiding RES supplementation. Was.
[0032]
Accordingly, the present invention, which meets the above-mentioned object, provides a vascular endothelium having a positively charged site on a surface in a physiological pH range and in which a drug for diagnosing and / or treating a vascular endothelial damaged site is encapsulated. It is a drug carrier that recognizes the damage site. Further, it is a drug carrier having a hydrophilic polymer further on its surface.
[0033]
The carrier of the present invention has a particle size of 0.1. 02-250 μm, especially 0. 05 to 0. A size of 4 μm is preferred.
[0034]
In addition, various forms are conceivable as the structure, and it is not necessary to limit the form. In particular, macromolecules, microaggregates, microparticles, microspheres, which have a potential function of encapsulating a drug in a high concentration therein, Most desirably, it consists of at least one of nanospheres, liposomes and emulsions.
[0035]
In the present invention, a compound having a site that takes a positive charge in a physiological pH range as a component of the drug carrier, and further a hydrophilic polymer derivative having a hydrophilic polymer site may be used. It is not necessary to particularly limit the composition of the component as long as it can form the above-mentioned form.However, in consideration of its safety and stability in vivo, phospholipids or derivatives thereof, other than phospholipids It is desirable to add lipids or derivatives thereof, or stabilizers, antioxidants, and other surface modifiers.
[0036]
Examples of the phospholipid include natural or synthetic phospholipids such as phosphatidylcholine (= lecithin), phosphatidylglycerol, phosphatidic acid, phosphatidylcholine, phosphatidylethanolamine, phosphatidylserine, phosphatidylinositol, sphingomyelin, cardioribine, and the like. And the like added.
[0037]
Stabilizers include sterols such as cholesterol that reduce membrane fluidity, or saccharides such as glycerol and sucrose.
[0038]
Antioxidants include tocopherol homologs, such as vitamin E. Tocopherol has four isomers of α, β, γ, and δ, and any of them can be used in the present invention.
[0039]
Other surface modifiers include derivatives of water-soluble polysaccharides such as glucuronic acid, sialic acid, and dextran.
[0040]
The compound having a site having a positive charge in a physiological pH range is not particularly limited as long as it does not impair the structural stability of the drug carrier, but at least one or more aliphatic primary and secondary amino groups. And a compound having an amidino group, an aromatic primary or secondary amino group, and a compound in which the compound is bonded to a residue having one or more hydroxyl groups.
[0041]
Specifically, a derivative of the above compound with a hydrophobic compound such as a long-chain aliphatic alcohol such as palmitic acid or stearic acid, sterol, polyoxypropylene alkyl, or glycerin fatty acid ester is preferable. These derivatives can stably insert a hydrophobic compound site into the membrane of a drug carrier (for example, a liposome), and allow a site having a positive charge in the physiological pH range to be present on the surface of the drug carrier.
[0042]
Examples of the compound having a site having a positive charge in the physiological pH range include amino sugars, and the amino sugars include glucosamine, galactosamine, mannosamine, inolaminic acid, monosaccharides such as inolaminic acid ester, and chitin. Oligosaccharides and polysaccharides, and their free or various glycosides.
[0043]
In the amino sugar, a hydrophobic compound site can be stably inserted into a membrane of a drug carrier (for example, a liposome), and a site having a positive charge in the physiological pH range can be present on the surface of the carrier.
[0044]
In the present invention, the physiological pH range is a pH range in the living body, mainly in the blood, in the cytoplasm and in the inside of the organelles present therein, and specifically, in the range of 4 to 10, more preferably in the range of 6 to 8 It is.
[0045]
In the present invention, the hydrophilic polymer site present on the surface is not particularly limited as long as the structure stability of the drug carrier is not impaired. Various hydrophilic polymers can be considered. For example, polyethylene glycol, dextran, pullulan, ficoll, polyvinyl alcohol, styrene-maleic anhydride alternating copolymer, divinyl ether-maleic anhydride alternating copolymer, synthetic polyamino acid, amylose, amylopectin, chitosan, mannan, cyclodextrin, Pectin, carrageenan and the like. Among them, polyethylene glycol is most desirable because it has a remarkable effect of improving blood retention.
[0046]
In addition, the hydrophilic polymer uses a derivative bonded to a hydrophobic compound such as a long-chain aliphatic alcohol, sterol, polyoxypropylene alkyl, or glycerin fatty acid ester, so that the hydrophobic compound site is a drug carrier (for example, , Liposomes) can be stably inserted into the membrane. This allows the hydrophilic polymer to be present on the drug carrier surface.
[0047]
Examples of the hydrophilic polymer derivative that can be specifically used in the present invention include polyethylene glycol-phosphatidylethanolamine.
[0048]
In the present invention, a pharmaceutically acceptable pharmacologically active substance, physiologically active substance or diagnostic substance may be used as a drug to be encapsulated in a drug carrier, depending on the purpose of diagnosis and / or treatment of an endothelial injury site. it can.
[0049]
As a property of the drug to be encapsulated, there is basically no problem with any substance, but the electrically neutral or anionic substance can be expected to have a higher encapsulation rate due to the characteristic that the surface of the carrier has a positive charge. .
[0050]
The type of drug to be encapsulated is not particularly limited as long as the formation of the drug carrier is not impaired, and any restriction is imposed on the drug that suppresses various reactions at the site of vascular endothelial injury and induces normal vascular tissue. Can be used without. Specifically, anti-inflammatory agents, anticancer agents, enzyme agents, antibiotics, antioxidants, lipid uptake inhibitors, hormonal agents, angiotensin converting enzyme inhibitors, smooth muscle cell proliferation / migration inhibitors, platelet aggregation inhibitors, Those which can be used as a chemical mediator release inhibitor, or an agent for promoting or suppressing the growth of vascular endothelial cells, and the like are included.
[0051]
In particular, sulfated glycosaminoglycans such as heparin, oligo and polysaccharides and derivatives thereof are effective as substances that inhibit proliferation and migration of smooth muscle cells that cause vascular hypertrophy at sites of vascular endothelial injury. Other examples include theopherin, cyclic AMP (cAMP), captopril, papaverine, and forskolin.
[0052]
However, basically, the carrier of the present inventionIf you have the configuration ofSince it has the property of accumulating at the site of vascular endothelial injury, there is no limitation in selecting the most appropriate drug according to the characteristics of the disease at that site. In particular, at the site of injury, activation of platelets is likely to occur, and accumulation of various leukocytes is observed, releasing various chemical mediators to cause an inflammatory reaction. It is also well known that in these tissues, lipid peroxidation and enhancement of lipid uptake occur, and it is considered that these reactions proceed in a complex manner to cause arteriosclerotic lesions. Since the contribution of these phenomena to lesion formation is expected to be different for each case, it goes without saying that all drugs corresponding to these symptoms can be targeted by the present invention.
[0053]
In addition, it is important to identify the site of injury prior to drug treatment. For this purpose, various in-vivo diagnostic agents (X-ray contrast agents, radioisotope-labeled nuclear medicine diagnostic agents, diagnostics for nuclear magnetic resonance diagnosis) can be used. Drugs and the like) enable specific diagnosis of a vascular lesion by being enclosed in the carrier of the present invention, and it goes without saying that the above-mentioned diagnostic agents can also be targeted by the present invention.
[0054]
The drug carrier of the present invention can be easily obtained by a conventional method. One example is shown below. A compound having a site having a positive charge in a physiological pH range and other carrier components such as phospholipids in a flask are mixed with an organic solvent such as chloroform, and the organic solvent is distilled off, followed by vacuum drying to thereby form an inner wall of the flask. To form a thin film. Next, a drug is added to the flask and stirred vigorously to obtain a liposome dispersion. The drug carrier can be obtained as a dispersion by centrifuging the obtained liposome dispersion and decanting the supernatant to remove the unencapsulated drug. Alternatively, it can be obtained by mixing the above-mentioned respective components and discharging the mixture by a high-pressure discharge emulsifier.
[0055]
The drug carrier of the present invention can be administered by intravenous injection or the like, but a particularly preferable method is to insert a catheter into a blood vessel, guide the distal end of the drug into the vicinity of a vascular endothelial injury site, and administer the drug through the catheter.
[0056]
The drug carrier of the present invention has excellent retention properties in blood and at sites of vascular endothelial damage, and stays in the blood for at least 6 hours after a single administration, and stably stays at the site of vascular endothelial damage for at least 3 days. It is staying.
[0057]
In addition, it is effective to administer the drug carrier of the present invention particularly within one hour after vascular damage occurs after PTCA operation or the like. This is because, when administered about 1 hour after the occurrence of vascular injury, the accumulation of the drug carrier of the present invention at the site of vascular injury temporarily decreases. This may be due to the effect of platelets and the like adhering to the vascular injury site. Therefore, it is preferable to administer the drug carrier of the present invention within one hour after the occurrence of vascular injury.
[0058]
However, after a certain period of time, the ability of the drug carrier of the present invention to accumulate in the damaged blood vessel is improved again. Therefore, administration after 1 hour after the occurrence of vascular injury is not invalidated, and subsequent administration is also effective.
[0059]
【Example】
Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to Examples.
[0060]
(Reference Example 1) Liposomes containing 6-o-palmitoyl-methyl-D-galactosaminide whose structure is shown in Formula I as a membrane component were prepared as follows. .
[0061]
The following three types of membrane components were each added as a chloroform solution to a 50 ml eggplant-shaped flask and mixed.
[0062]
Phosphatidylcholine (
[0063]
Embedded image
Further, 10 ml of chloroform was added. After distilling off chloroform, vacuum drying was carried out overnight to form a lipid thin film on the inner wall of the flask. Next, 4 ml of 300 mM sorbitol / 10 mM Tris-HCl buffer in which 100 μg of heparin was dissolved was added to the flask, and the mixture was vigorously stirred and stirred to obtain a liposome (MLV) dispersion.
[0065]
This dispersion was centrifuged (120,000 g, 70 minutes). The supernatant was decanted to remove unencapsulated heparin, thereby obtaining a liposome pellet. The pellet was dispersed in 300 mM sorbitol / 10 mM Tris-HCl to obtain a liposome dispersion liquid encapsulating heparin.
[0066]
(Reference example26) 6-o-palmitoyl-methyl-D-galactosaminide used in this example was prepared as follows.
[0067]
N-benzyloxycarbonyl-methyl-D-galactosaminide was obtained from D-galactosaminide according to a known method, and the N-benzyloxycarbonyl-methyl-D-galactosaminide was dissolved in pyridine (50 ml). (9.3 g) and palmitoyl chloride (8 ml) are added, and the mixture is stirred at room temperature for 24 hours under a nitrogen gas atmosphere. After completion of the reaction, the reaction mixture is poured into 10% ice-cold hydrochloric acid and extracted with ethyl acetate. Thereafter, the extract was washed with saturated sodium bicarbonate (NaHCO3).3) And brine, and dried over anhydrous sodium sulfate (Na2SO4), The solvent was removed to give a crude product, which was further recrystallized from an ethyl acetate solution to give N-benzyloxycarbonyl-6-o-palmitoyl-methyl-D-galactosaminide (7. 65 g) were obtained.
[0068]
This N-benzyloxycarbonyl-6-o-palmitoyl-methyl-D-galactosaminide (1.35 g) was dissolved in methanol (50 ml), and a catalytic amount of 5% Pd-C was added. After completion of the reaction, the mixture was filtered to remove the solvent, and the residue was purified by silica gel column chromatography to give 6-o-palmitoyl-methyl-D-galactosaminide (874 mg) of the target compound. ) Got. The data shown below support the structure of Formula I.
[0069]
m. p. : 122 to 124 ° C Elemental analysis: Found C = 64. 24%, H = 10. 84%, N = 3. 04% calculated value C = 64. 00%, H = 10. 51%, N = 3.25% (C23H43O6(Calculated value as N)
[0070]
IR (KBr): 3353cm-1, 2917cm-1, 2854cm-1, 1728cm-1, 1462cm-1MS (FAB): 435 (M + 1)+
[0071]
1H-NMR (DMSO-d6) Δ (ppm): 5. 15 (n, 1H), 5. 00 (n, 1H), 4. 3. 51 (d, J = 3.4 Hz, 1H); 30 (d, J = 10.6 Hz, 1H); 04 (dd, J = 6.6 Hz, J = 6.8 Hz, 1H); 53 (m, 1H); 26 (s, 3H), 3. 10 (m, 2H), 2. 40 (m, 1H); 29 (t, J = 7.2 Hz, 2H); 51 (m, 2H), 1. 24 (b, 24H), 0. 86 (t, J = 6.0 Hz, 3H).
[0072]
(Example1) Preparation of liposomes containing 6-o-palmitoyl-methyl-D-galactosaminide and polyethylene glycol-phosphatidylethanolamine polymer (PEG-PE), whose structure is shown in formula II, as membrane constituents: Prepared as follows.
[0073]
The following four types of membrane components were each added as a chloroform solution to a 50 ml eggplant-shaped flask and mixed.
[0074]
Phosphatidylcholine (
[0075]
Embedded image
Below,Reference Example 1By the same operation as described above, a liposome dispersion of the title holding heparin was obtained.
[0077]
(Example22.) Preparation of liposomes containing glucamine palmitoyl ester whose structure is shown in formula III as membrane constituent was prepared as follows.
[0078]
The following four types of membrane constituents were each added as a chloroform solution to a 50 ml eggplant-shaped flask and mixed.
[0079]
Phosphatidylcholine (
[0080]
Embedded image
Below,Reference Example 1In the same manner as in the above, a liposome dispersion of the title holding heparin was obtained.
[0082]
(Test example 1: Measurement of encapsulation rate of heparin)Reference Example 1 and Example 1The encapsulation rate of heparin used in the above in liposomes was determined as follows. First, the amount of heparin not encapsulated in the liposome was determined by quantifying the amount of heparin in the supernatant after centrifugation by the carbazole method. By comparing this with the total amount of heparin initially added in preparing the liposome, the encapsulation rate of heparin in the liposome was determined.
[0083]
For comparison, a liposome dispersion prepared in the same manner as in the above example without using 6-o-palmitoyl-methyl-D-galactosaminide and PEG-PE was prepared. Then, the encapsulation rate of heparin was determined by the same method as described above. Table 1 shows the results.
[0084]
[Table 1]
As is clear from the above results, a compound having a site having a positive charge in a physiological pH range, or a compound having a site having a positive charge in a physiological pH range and a liposome containing a hydrophilic polymer derivative do not include this. Heparin showed a higher encapsulation rate than neutral liposomes.
[0086]
In addition, although not shown in the table, liposomes containing a compound having a site having a positive charge in another physiological pH range of the present invention also showed similar excellent results.
[0087]
(Test Example 2: Pharmacokinetics 1) From the femoral vein of an SD male rat anesthetized with urethaneReference Example 1 and Example 1500 μl of a liposome dispersion liquid containing 100 mM of carboxyfluorescein prepared according to the procedure described above was injected intravenously. Over time, blood was collected in Eppendorf tubes. The pharmacokinetics were measured by measuring the fluorescence intensity of the collected blood.
[0088]
For comparison, a liposome dispersion prepared according to the above example without using 6-o-palmitoyl-methyl-D-galactosaminide and PEG-PE was prepared in the same manner as described above. Pharmacokinetics were measured. The results are shown in FIG.
[0089]
As is clear from FIG. 1, it was confirmed that the liposome containing a compound having a site having a positive charge in a physiological pH range as a membrane component has higher retention in blood than the liposome containing no liposome. Was. In addition, it was confirmed that the liposome surface-modified with a hydrophilic polymer (PEG-PE) has a higher retention in blood than a compound having only a site having a positive charge in a physiological pH range. Was.
[0090]
Although not shown in the figure, liposomes containing a compound having a positively charged site in another physiological pH range of the present invention also showed similar excellent results.
[0091]
(Test Example 3: Organ distribution 1) A 2 French balloon catheter was inserted from the femoral vein of an SD male rat anesthetized with urethane, and the carotid artery was rubbed five times to create a vascular endothelial disorder model.
[0092]
Immediately after abrasion from the femoral vein,Reference Example 1 and Example 1500 μl of a liposome dispersion liquid containing 100 mM of carboxyfluorescein prepared according to the procedure described above was injected intravenously. The carotid artery was collected at 3, 16, 24, and 3 days. Carboxyfluorescein was extracted from the collected carotid artery, and the amount of liposome accumulated in the carotid artery was measured by measuring the fluorescence intensity.
[0093]
Furthermore, from the rat femoral vein that does not scrape the carotid artery,Reference Example 1 and Example 1After intravenously injecting 500 μl of a liposome dispersion liquid containing 100 mM of carboxyfluorescein prepared according to the above, the distribution of liposomes in the carotid artery was measured in the same manner as described above.
[0094]
For comparison, a liposome dispersion prepared according to the above example without using 6-o-palmitoyl-methyl-D-galactosaminide and PEG-PE was prepared in the same manner as described above. The amount of liposome accumulated in the carotid artery of a vascular endothelial disorder model was measured.
[0095]
3 hours later in vascular endothelial injury modelReference Example 1, Example 1FIG. 2 shows the results of the comparison and the comparison and control over three days.Example 1FIG. 3 shows the results. Although not shown, the accumulation amount when the vascular endothelium was not damaged was almost equal to the accumulation amount of the liposome in the carotid artery of the comparative vascular endothelial damage model.
[0096]
As is clear from the above results, a compound having a site having a positive charge in a physiological pH range.Containing liposomes as membrane constituentsAlternatively, the liposome of the present invention containing a compound having a positively charged site in a physiological pH range and a hydrophilic polymer derivative as a membrane component has a higher accumulation property at a vascular injury site than a liposome containing no liposome. In addition, as compared with a blood vessel in which the endothelium is not damaged, the ability to accumulate at a vascular injury site is high, and therefore, the targeting property to a vascular injury site is excellent.
[0097]
In addition, when administered immediately after rubbing, it was found that the drug was retained at the vascular injury site for 3 days.
[0098]
Further similar rat experiments2The liposomes prepared in accordance with the method described in Example 1 showed the same excellent effects as those of the other examples as shown in FIG.
[0099]
Although not shown in the figure, a carrier containing a compound having a site having a positive charge in another physiological pH range of the present invention also showed similar excellent results.
[0100]
(Test Example 4: Pharmacokinetics 2) The same experiment as in Test Example 2 was performed using castrated pigs (30 kg) instead of rats. In other words, from the pig femoral vein anesthetized with ketamine,130 ml of a liposome dispersion liquid containing 100 mM of carboxyfluorescein prepared according to the above method was injected intravenously. Blood was collected over time. Plasma was obtained from the collected blood, and the pharmacokinetics was measured by measuring the fluorescence intensity of the plasma.
[0101]
For comparison, a liposome dispersion prepared according to the above example without using 6-o-palmitoyl-methyl-D-galactosaminide and PEG-PE was prepared in the same manner as described above. Pharmacokinetics were measured.
[0102]
As a result, the same excellent retention in blood as in Test Example 2 was shown, indicating that the present invention is also effective for pigs, which are large animals. Also, the comparative control had the same results as in Test Example 2.
[0103]
(Test Example 5: Organ distribution 2) From the femoral artery of a castrated pig (30 kg) anesthetized with ketamine. A 5 French balloon catheter was inserted, and the carotid artery was rubbed 5 times to create a vascular endothelial disorder model.
[0104]
Example from femoral vein130 ml of a liposome dispersion liquid containing 100 mM of carboxyfluorescein prepared according to 1. was injected intravenously. Three hours later, the carotid artery of the pig was collected. Carboxy floressen was extracted from the collected carotid artery, and the distribution of liposomes to the carotid artery was measured by measuring the fluorescence intensity.
[0105]
Furthermore, for pigs that do not rub the carotid artery,Reference Example 1 and Example 1After intravenously injecting 30 ml of a liposome dispersion liquid containing 100 mM carboxyfluorescein prepared according to the above, the distribution of liposomes in the carotid artery was measured in the same manner as described above.
[0106]
For comparison, a liposome dispersion prepared in accordance with the above example without using PEG-PE, 6-o-palmitoyl-methyl-D-galactosaminide was injected into the carotid artery in the same manner as described above. Was measured.
[0107]
As shown in FIG. 5 together with the results of the rats performed in Test Example 3, excellent accumulation was observed at the site of vascular injury. In addition, the liposome of the control did not show accumulation at the site of vascular injury.
[0108]
From the above results, the present invention is said to have blood vessels closer to humans, and was shown to be effective also for pigs, which are large animals. Although not shown in the figure, liposomes containing a compound having a positively charged site in another physiological pH range of the present invention also showed similar excellent results.
[0109]
(Test Example 6: Organ Accumulation Property) A 2 French balloon catheter was inserted from the femoral artery of an SD male rat anesthetized with urethane, and the carotid artery was rubbed 5 times, thereby creating 6 groups of vascular endothelial damage models. .
[0110]
Example1500 μl of a liposome dispersion containing 100 mM of carboxyfluorescein prepared according to the method described in 1. above was immediately rubbed from the femoral vein of each rat group with 0.1 μm. 1, 0. After 5, 1, 3, 6, and 24 hours, they were injected intravenously. In each group, the carotid artery was collected 3 hours after administration. Carboxyfluorescein was extracted from the collected carotid artery, and the change in the distribution of liposomes to the carotid artery in each group was measured by measuring the fluorescence intensity. FIG. 6 shows the results.
[0111]
As a result, a temporary decrease in the accumulation of liposomes was observed around 1 hour after the rubbing, but it was found that the accumulation was constant thereafter. In other words, it was found that administration of the liposome within one hour from the occurrence of a vascular injury is particularly effective, but that the liposome is also effective one hour after the vascular injury.
[0112]
In addition, liposomes containing a compound having a positively charged site in another physiological pH range of the present invention showed similar results.
[0113]
(Test Example 7: Inhibitory effect of liposome preparation by encapsulated drug on vascular hypertrophy)1A liposome preparation containing cyclic AMP (cAMP), captopril, papaverine, and forskolin was prepared in the same manner as the liposome containing heparin. Liposomes containing no drug were used as controls.
[0114]
A 2 French balloon catheter was inserted from the femoral artery of an SD male rat anesthetized with urethane, and the carotid artery was rubbed four times to create a vascular endothelial injury model. After administering each drug-containing liposome formulation from the tail vein for 7 days, the carotid artery was collected. The degree of vascular hypertrophy was determined from the area ratio between the media and the intima of the cross section of the collected carotid artery. The calculation method is shown in FIG. 7, and the results are shown in Table 2.
[0115]
[Table 2]
As shown in Table 2, each drug-containing liposome preparation exhibited an excellent inhibitory effect on vascular hypertrophy.
[0117]
(Test Example 8: Acute toxicity) The purpose of this test is to know the degree of toxicity of the drug carrier of the present invention as compared with the toxicity of the conventional drug carrier. To this end, lethal toxicity tests were performed on rats for each of the drug carrier of the present invention and a conventional drug carrier prepared in a state where no drug was encapsulated.
[0118]
(Preparation of test solution)
1) Except that heparin was not added to the liposome dispersion of the present invention containing 6-o-palmitoyl-methyl-D-galactosaminide,Reference Example 1A liposome dispersion containing 6-o-palmitoyl-methyl-D-galactosaminide and PEG-PE was obtained in the same manner as described above. This was concentrated using an ultrafiltration membrane and, if necessary, diluted with sterile distilled water for injection to prepare a test solution.
[0119]
2) Liposomal dispersion of the present invention containing 6-o-palmitoyl-methyl-D-galactosaminide and PEG-PE
Example except that heparin was not added1A liposome dispersion containing 6-o-palmitoyl-methyl-D-galactosaminide and PEG-PE was obtained in the same manner as described above. This was concentrated using an ultrafiltration membrane and, if necessary, diluted with sterile distilled water for injection to prepare a test solution.
[0120]
3) Conventional liposome dispersion
For comparison, a neutral liposome dispersion was obtained in the same manner as in Example without using 6-o-palmitoyl-methyl-D-galactosaminide and PEG-PE. This was concentrated using an ultrafiltration membrane and, if necessary, diluted with sterile distilled water for injection to prepare a test solution.
[0121]
(Method) The quarantined 5-week-old SD male rats were divided into 3 rats per group, and 2.0 ml of the above-mentioned test solution was administered once intraperitoneally. On the other hand, as a solvent control group, 2.0 ml of sterilized distilled water was administered.
[0122]
After administration of the test solution, general conditions were carefully observed at least once a day for 16 days, and signs of toxicity and death were recorded.
[0123]
(Results) As shown in Table 3.
[0124]
[Table 3]
As shown in the above test results, no death occurred during the observation period for the drug carrier of the present invention. However, in the case of the conventional drug carriers, the body weight was drastically reduced from the first day after the start of administration, and almost all died by the 15th day as shown in the table. This is due to the fact that subsequent drug findings show that with conventional drug carriers, aggregates are formed in the blood due to association with blood cell components and the like or association between liposomes in blood, resulting in the formation of emboli in the lungs and the like. It was confirmed that there was. From these results, it can be said that the drug carrier of the present invention has extremely low toxicity and high safety as compared with conventionally known drug carriers.
[0126]
Although not shown in the table, a carrier containing a compound having a site having a positive charge in another physiological pH range of the present invention also showed similar excellent results.
[0127]
【The invention's effect】
As described above in detail, the drug carrier of the present invention has a higher encapsulation rate of neutral or anionic substances as compared with conventional drug carriers, and has a very high targeting property to vascular endothelial damage sites. High. Also, safety is very high.
[0128]
Due to such characteristics, the novel drug carrier of the present invention, in which a pharmaceutically acceptable pharmacologically active substance, physiologically active substance or diagnostic substance is encapsulated, is useful for diagnosis and treatment of vascular endothelial injury site. Very effective. For example, when heparin, a polysaccharide and a sulfated form thereof, and theophylline, cyclic AMP (cAMP), captopril, papaverine, and forskolin are encapsulated, blood vessels that suppress smooth muscle cell migration at a site where vascular endothelium is damaged are included. It is useful as a thickening inhibitor.
[Brief description of the drawings]
FIG. 1 shows blood retention of the present invention and comparative liposomes in rats.
FIG. 2 shows the accumulation property of the liposome of the present invention and a comparative liposome in a vascular endothelial injury site in rats.
FIG. 3 shows the time course of the retention of the liposome of the present invention at the site of vascular endothelial injury in rats.
FIG. 4 shows the time course of the retention of other liposomes of the present invention at the site of vascular endothelial injury in rats.
FIG. 5 shows the accumulation property of the liposome of the present invention and the comparative liposome at sites of vascular endothelial injury in pigs and rats.
FIG. 6 shows the time from vascular injury to administration and the accumulation of the liposome of the present invention at the site of vascular injury.
7 shows how to determine the degree of vascular hypertrophy in Test Example 7. FIG.
Claims (17)
２）生理的ｐＨ範囲で陽電荷を帯びる部位を有する化合物と疎水性化合物との誘導体と、
３）親水性高分子を疎水性化合物と結合させた誘導体と、
４）薬物とを含有し、
前記生理的ｐＨ範囲で陽電荷を帯びる部位および親水性高分子部位の少なくとも一部が前記担体の表面に存在し、該薬物が内部に封入されることを特徴とする薬物担体。 1) a phospholipid or a derivative thereof, and / or a lipid other than the phospholipid or a derivative thereof,
2) a derivative of a compound having a site having a positive charge in a physiological pH range and a hydrophobic compound;
3) a derivative in which a hydrophilic polymer is bonded to a hydrophobic compound;
4) containing a drug,
A drug carrier, wherein at least a part of a site having a positive charge in the physiological pH range and a hydrophilic polymer site are present on the surface of the carrier, and the drug is encapsulated therein .
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10700694A JP3570561B2 (en) | 1993-07-27 | 1994-05-20 | Carrier that recognizes vascular endothelial injury site |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP18454893 | 1993-07-27 | ||
| JP5-184548 | 1993-07-27 | ||
| JP10700694A JP3570561B2 (en) | 1993-07-27 | 1994-05-20 | Carrier that recognizes vascular endothelial injury site |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0789874A JPH0789874A (en) | 1995-04-04 |
| JP3570561B2 true JP3570561B2 (en) | 2004-09-29 |
Family
ID=26447084
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP10700694A Expired - Lifetime JP3570561B2 (en) | 1993-07-27 | 1994-05-20 | Carrier that recognizes vascular endothelial injury site |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3570561B2 (en) |
Families Citing this family (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5837283A (en) * | 1997-03-12 | 1998-11-17 | The Regents Of The University Of California | Cationic lipid compositions targeting angiogenic endothelial cells |
| AU6366599A (en) * | 1998-10-29 | 2000-05-22 | Sankyo Company Limited | Liposome with lowered toxicity |
| JP4827277B2 (en) * | 1998-11-02 | 2011-11-30 | テルモ株式会社 | Liposome |
| WO2000025748A1 (en) | 1998-11-02 | 2000-05-11 | Terumo Kabushiki Kaisha | Liposomes |
| CA2442146A1 (en) * | 2001-03-29 | 2002-10-10 | The Scripps Research Institute | Formulations comprising entrapped active ingredients and uses thereof |
| KR20070019941A (en) * | 2003-09-03 | 2007-02-16 | 교와 핫꼬 고교 가부시끼가이샤 | Compound modified with glycerol derivative |
| CA2553714A1 (en) * | 2004-01-23 | 2005-08-04 | Keio University | Support accumulating in injured part in vascular channel |
| JP4669665B2 (en) * | 2004-04-12 | 2011-04-13 | 正彦 阿部 | Polycation-modified liposome having no cytotoxicity and method for producing the same |
| JPWO2009125858A1 (en) * | 2008-04-07 | 2011-08-04 | 静岡県公立大学法人 | 2-Lipid dispersion preparation containing indolinone derivative |
-
1994
- 1994-05-20 JP JP10700694A patent/JP3570561B2/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0789874A (en) | 1995-04-04 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN110545799B (en) | Recombinant bionic nano-carrier delivery system for targeting activation of CD44 molecule, and preparation method and application thereof | |
| JP3074733B2 (en) | Fat emulsion | |
| JP6112615B2 (en) | Nanoparticles for skin and systemic delivery of drugs | |
| JP2003530362A (en) | Lipid-based systems for targeting diagnostic agents | |
| JP3919227B2 (en) | Amidine derivative and drug carrier comprising the same | |
| US20140287024A1 (en) | Nanoparticle-based delivery system with oxidized phospholipids as targeting ligands for the prevention, diagnosis and treatment of atherosclerosis | |
| US11737977B2 (en) | Cerasome delivery system for targeting activated CD44 molecule, preparation method and use thereof | |
| JP3570561B2 (en) | Carrier that recognizes vascular endothelial injury site | |
| Tretiakova et al. | Liposomal formulation of a melphalan lipophilic prodrug: Studies of acute toxicity, tolerability, and antitumor efficacy | |
| KR100847626B1 (en) | Liposome preparation containing slightly water-soluble camptothecin | |
| US8859001B2 (en) | Fenoldopam formulations and pro-drug derivatives | |
| CN106659795A (en) | Liposomal mupirocin | |
| JP4827277B2 (en) | Liposome | |
| WO2000025748A1 (en) | Liposomes | |
| CN107669637B (en) | Artemether liposome for injection and preparation method and application thereof | |
| Luo et al. | Efficient treatment of atherosclerosis by dexamethasone acetate and rapamycin Co-Loaded mPEG-DSPE calcium phosphate nanoparticles | |
| EP0636363B1 (en) | Drug delivery system | |
| WO2005021012A1 (en) | Drug carrier having gemcitabine enclosed therein | |
| Zhang et al. | PEGylation of ginsenoside rg3-entrapped bovine serum albumin nanoparticles: Preparation, characterization, and in vitro biological studies | |
| JPH07145038A (en) | Constituent component for membrane of small closed cell | |
| US20090306032A1 (en) | Use of solid lipid nanoparticles Comprising Cholesteryl Propionate and/or Cholesteryl Butyrate | |
| CN116196279B (en) | Cholesterol-free liposome of venenum bufonis extract, and preparation method and application thereof | |
| US20230404928A1 (en) | Nanocapsule and uses thereof | |
| RU2670091C1 (en) | Method for delivering nanoparticles intended for the transport of drugs to the brain of mammals through the blood-brain barrier | |
| JP2009143879A (en) | Liposome and x-ray contrast medium |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20040608 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20040617 |
|
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20070702 Year of fee payment: 3 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20080702 Year of fee payment: 4 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20090702 Year of fee payment: 5 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100702 Year of fee payment: 6 |