JP3508865B2

JP3508865B2 - プロスタグランジンｅ受容蛋白質、それをコードするｄｎａおよびその製造法

Info

Publication number: JP3508865B2
Application number: JP03225593A
Authority: JP
Inventors: 厚市川; 周成宮
Original assignee: 周成宮; 厚市川; 財団法人生産開発科学研究所
Priority date: 1992-02-24
Filing date: 1993-02-22
Publication date: 2004-03-22
Anticipated expiration: 2019-03-22
Also published as: EP0557966B1; CA2090278A1; US5576192A; DE69332321D1; JPH05320199A; DE69332321T2; EP0557966A1; ATE224913T1; US5804415A

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、プロスタグランジン
（ＰＧ）Ｅ，とりわけ生体内で消化管の収縮・弛緩，胃
酸および腸液の分泌，平滑筋の弛緩，神経伝達物質の遊
離等に広く関与している事が知られているプロスタグラ
ンジンＥ₂（ＰＧＥ₂）に対して、細胞膜上で結合し、Ｐ
ＧＥ₂などの情報を細胞内に伝達するＰＧＥ（とりわけ
ＰＧＥ₂）受容体（レセプター）およびそれをコードす
る遺伝子、ならびに該蛋白質の製造法に関するものであ
る。

【０００２】

【従来の技術】生体内でのＰＧＥ、特にＰＧＥ₂の重要
性は広く認識されており、各種アゴニストおよびアンタ
ゴニストを用いて、ＰＧＥ₂の生理・薬理作用とその作
用部位を解析した結果からＰＧＥ₂の受容体としてＥ
Ｐ₁，ＥＰ₂およびＥＰ₃の３種のサブタイプ受容体が存
在し、それぞれ異なった情報伝達に関与しているものと
考えられている。これらサブタイプ受容体はホスホリパ
ーゼＣの活性化およびアデニル酸サイクラーゼの刺激ま
たは抑制をそれぞれ誘発すると想定される（R. A. Cole
man, I. Kennedy, P. P. A. Humphrey, K. Bunce, お
よび P. Lumley, “Comprehensive Medicinal Chemist
ry", ed. C. Hansch, P. G. Sammes, および J.B. Tayl
or, vol. 3, P.643−714， Pergamon press, 1990およ
びAnnu. Rev. Pharm. Tox. 10, 213-239(1989))。ＰＧ
Ｅレセプターのサブタイプのうち、ＥＰ_２レセプターは
気管、回腸周囲の平滑筋の弛緩、種々の血管の拡張、腎
尿細管のナトリウムおよび水の再吸収に関与しているも
のと考えられている（Ｂｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏ
ｌ．８７，４５− （１９８６），Ｂｒ．Ｊ．
Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１０５，２７１−２７８
（１９９２），Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．
４７，１１５４−１１６１（１９６８）および
J. Biol. Chem. 263, 6155-6160 (1988))。さらに、Ｅ
Ｐ₂レセプターを介してのＰＧＥ₂の重要な作用は免疫系
および炎症の抑制である（Am. Rev. Respir. Dis. 135,
72-77 (1987))。また、ＥＰ₃レセプターを介してのＰ
ＧＥ₂の作用は胃酸の分泌抑制、神経伝達物質の遊離の
調節、脂肪組織での脂肪分解の抑制および腎尿細管での
ナトリウムおよび水の再吸収の抑制であると考えられて
いる（Gastroenterology 94, 1121-1129 (1988), Neuro
pharmacology 11, 177-187 (1972), J. Phrmacol. Exp.
Ther. 255, 11-16 (1990)およびJ. Lipid Res. 26, 12
7-134 (1984)およびJ. Clin. Invest. 74, 63-74(198
4)))。しかしながら、いずれのＰＧＥ₂受容体遺伝子の
クローニングも未だ成功しておらず、その分布，構造お
よび機能は未検討のままであり、これらを解明すること
が、ＰＧＥ，とりわけＰＧＥ₂の関与する疾病の解明，
ならびに該疾病に対する有用な医薬品の開発の目的上、
急務とされている。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】上記したとおり、ＰＧ
Ｅ受容体の実体は不明な点が多いが、少なくともその１
種をコードする遺伝子のクローニングに成功し、恒常的
にＰＧＥ受容体を発現する形質転換体を作製することが
できれば、他のＰＧＥ受容体の遺伝子クローニング，Ｐ
ＧＥ受容体の構造解明のみならず、ＰＧＥ，とりわけＰ
ＧＥ₂の生体内での役割も明確化されることが期待さ
れ、さらには該受容体を発現する形質転換体またはその
一部を免疫原とすることにより、受容体特異抗体の作出
が可能となり、受容体発現細胞の組織内分布が明確化さ
れることも期待される。

【０００４】

【課題を解決するための手段】一般に、プロスタグラン
ジン（ＰＧ）レセプターのリガンド結合部位のアミノ酸
配列は、高い相同性を示すと考えられている。従ってヒ
トトロンボキサン（ＴＸ）Ａ₂レセプター遺伝子のＤＮ
Ａ配列〔M. Hirata ら，Nature, 349, 617(1991)〕の一
部は、ＰＧＥ₂などのＰＧＥのレセプター遺伝子のＤＮ
Ａ配列に良く似ているものと想定される。そこで本発明
者らはこのような考えに基づいて、ヒトＴＸＡ₂レセプ
ター遺伝子の一部をプローブとして用いることにより、
マウスＰＧＥ₂レセプターのサブタイプであるＥＰ₃レセ
プターをコードする遺伝子をマウス細胞からクローニン
グすることに成功し、さらにマウスＥＰ₃レセプター遺
伝子の一部をプローブとして用いることにより、マウス
ＰＧＥ₂レセプターのサブタイプであるＥＰ₂レセプター
をコードする遺伝子をマウス細胞からクローニングする
ことに成功した。そして、これら遺伝子を含む組換えＤ
ＮＡを構築し、これらＤＮＡで形質転換したそれぞれの
形質転換体またはその一部がＰＧＥ₂に結合性を示すこ
とを見い出した。本発明者らは、これらの知見に基づ
き、さらに研究した結果、本発明を完成した。

【０００５】すなわち本発明は、（１）ＰＧＥを受容す
る作用を有する蛋白質、（２）上記（１）の蛋白質をコ
ードする遺伝子を含有する組換えＤＮＡ、（３）上記
（２）の組換えＤＮＡを含むベクター、（４）上記
（３）のベクターを保持する形質転換体および（５）上
記（４）の形質転換体を培養することを特徴とする上記
（１）の蛋白質の製造法である。本発明でいうＰＧＥと
しては、ＰＧＥ₁，ＰＧＥ₂などが挙げられるが、とりわ
けＰＧＥ₂が好ましい。また、例えばＰＧＥ₂を受容する
作用としては、膜貫通ドメインにＰＧＥ₂またはその類
似物質と特異的な結合性を示すこと、およびこれらリガ
ンドとの結合による構造変化が、細胞内ドメインで連関
するＧＴＰ結合蛋白の活性化を誘導することを指す。本
発明のＰＧＥを受容する作用を有する蛋白質（以下、Ｐ
ＧＥレセプターと称することがある）としては、ＰＧＥ
₂を受容する作用を有する蛋白質（以下、ＰＧＥ₂レセプ
ターと称することがある）が好ましく、ヒト型のもの、
ニワトリ型のもの、マウス型のものなどが挙げられ、ま
た、糖結合部位に糖鎖が結合した糖蛋白質、あるいはリ
ン酸化部位でリン酸化されたリン蛋白質などの複合蛋白
質であってもよい。該マウス型のＰＧＥ₂レセプターと
しては、たとえば〔図１〕で表されるアミノ酸配列（配
列番号：２）を有するもの、〔図４〕で表されるアミノ
酸配列（配列番号：５）を有するもの、〔図５〕で表さ
れるアミノ酸配列（配列番号：８）を有するものなどが
挙げられるが、ＰＧＥ₂を受容し、ＧＴＰ結合蛋白を活
性化する作用を有していれば、該アミノ酸配列の少なく
とも１個の構成アミノ酸を欠くもの、少なくとも１個の
構成アミノ酸が別のアミノ酸で置換されているもの、少
なくとも１個のアミノ酸が付加されたもの等のムテイン
であってもよく、さらに機能的なフラグメントであって
もよい。レセプターとＧ−蛋白の結合はいくつかの方法
で検索でき、例えば、グアニル酸によるレセプターの親
和性の変化を調べる方法がある（Ann. Rev. Biochem. 5
6, 615-649 (1987))。さらに該ＰＧＥレセプターのサブ
タイプとしては、ＥＰ₁，ＥＰ₂，ＥＰ₃（α、β）のい
ずれであってもよいが、好ましくは、ＥＰ₂，ＥＰ
₃（α、β）が挙げられる。ＰＧＥレセプターをコード
する遺伝子としては、ＰＧＥレセプターをコードするも
のであればいずれでもよいが、例えばマウス型のＰＧＥ
₂レセプターのサブタイプＥＰ_3αレセプターをコードす
る遺伝子として、〔図１〕における１〜１０９５番目の
塩基配列（配列番号：３）を有するもの、マウス型のＰ
ＧＥ₂レセプターのサブタイプＥＰ_3βレセプターをコ
ードする遺伝子として、〔図４〕における１〜１０８３
番目の塩基配列（配列番号：６）を有するもの、マウス
型のＰＧＥ₂レセプターのサブタイプＥＰ₂レセプターを
コードする遺伝子として、〔図５〕における１〜１５３
９番目の塩基配列（配列番号：９）を有するものなどが
挙げられる。

【０００６】本発明のＰＧＥレセプターをコードする遺
伝子を含有する組み換えＤＮＡを含むベクターは、例え
ば、（イ）ＰＧＥレセプターをコードするＲＮＡを分離
し、（ロ）該ＲＮＡから単鎖の相補ＤＮＡ（cＤＮＡ）
を、次いで二重鎖ＤＮＡを合成し、（ハ）該二重鎖ＤＮ
Ａをプラスミドに組み込み、（ニ）得られた組み換えプ
ラスミドで宿主を形質転換し、（ホ）得られた形質転換
体を培養後、形質転換体から適当な方法（例えば、ＤＮ
Ａプローブを用いたコロニーハイブリダイゼーション
法）により目的とするＤＮＡを含有するプラスミドを単
離し、（ヘ）そのプラスミドから目的とするクローン化
ＤＮＡを切り出し、（ト）該クローン化ＤＮＡをビーク
ル中のプロモーターの下流に連結する、ことにより製造
することができる。さらに上記ｃＤＮＡは、化学合成に
より製造することもできる。ＰＧＥレセプターをコード
するＲＮＡは、種々のＰＧＥレセプターの発現細胞，例
えばマウス肥満細胞腫株Ｐ−８１５細胞、ＩＬ−３依存
性細胞株ＢＮｕ−ｃｌ３細胞などから得ることができ
る。ＰＧＥレセプター発現細胞からＲＮＡを調製する方
法としては、グアニジンチオシアネート法〔J．M．Chir
gwinら，バイオケミストリー（Biochemistry），１８，
５２９４（１９７９）〕などが挙げられる。このように
して得られたＲＮＡを鋳型とし、逆転写酵素を用いて、
例えばH．Okayamaらの方法〔モレキュラー・アンド・セ
ルラー・バイオロジー（ Molecularand Cellular Bio
logy）２，１６１（１９８２）および同誌３，２８０
（１９８３）〕に従いcＤＮＡを合成し、得られたcＤＮ
Ａをプラスミドに組み込む。

【０００７】cＤＮＡを組み込むプラスミドとしては、
たとえば大腸菌由来のpＢＲ３２２〔ジーン（Gene），
２，９５（１９７７）〕，pＢＲ３２５〔ジーン，４，
１２１（１９７８）〕，pＵＣ１２〔ジーン，１９，２
５９（１９８２）〕，pＵＣ１３〔ジーン，１９，２５
９（１９８２）〕，pＵＣ１１８，pＵＣ１１９〔Method
sin Enzymology１５３，３−１１（１９８７）〕、枯
草菌由来のpＵＢ１１０〔バイオケミカル・バイオフィ
ジカル・リサーチ・コミュニケーション（Biochemical
and Biophysical Research Communication），１１
２，６７８（１９８３）〕などが挙げられるが、その他
のものであっても、宿主内で複製保持されるものであれ
ば、いずれをも用いることができる。プラスミドに組み
込む方法としては、たとえば、T．Maniatisら，モレキ
ュラー・クローニンク゛(Molecular Cloning）コールド・スプリ
ング・ハーバー・ラボラトリー（Cold Spring Harbor
Laboratory），第２３９頁（１９８２）に記載の方法
などが挙げられる。上記cＤＮＡが組み込まれたプラス
ミドとしては、たとえばヒト正常２倍体細胞mＲＮＡよ
り合成したcＤＮＡをpＣＤベクター〔Okayamaら，モレ
キュラー・セル・バイオロジー（Molecular Cell Bi
ology），３，２８０（１９８３）参照〕に組み込んで
作成した大腸菌x１７７６を宿主としたcＤＮＡライブラ
リーを用いて得られたプラスミドがあげられる。

【０００８】このようにして得られたプラスミドは、適
当な宿主たとえばエシェリキア（Escherichia）属菌，
バチルス（Bacillus）属菌などに導入する。上記エシェ
リキア属菌の例としては、エシェリキア・コリ（Escher
ichia coli）Ｋ１２ＤＨ１〔Proc．Natl．Acad．Sci．
ＵＳＡ，６０，１６０（１９６８）〕，Ｍ１０３〔ヌク
レイック・アシッズ・リサーチ，（Nucleic Acids Re
search）９，３０９（１９８１）〕，ＪＡ２２１〔ジャ
ーナル・オブ・モレキュラー・バイオロジー（Journal
of Molecular Biology）〕１２０，５１７（１９７
８）〕，ＨＢ１０１〔ジャーナル・オブ・モレキュラー
・バイオロジー，４１，４５９（１９６９）〕，Ｃ６０
０〔ジェネティックス（Genetics），３９，４４０（１
９５４）〕などが挙げられる。上記バチルス属菌として
は、たとえばバチルス・サチルス（Bacillus subtili
s），ＭＩ１１４（ジーン，２４，２５５（１９８
３）〕，２０７−２１〔ジャーナル・オブ・バイオケミ
ストリー（Journal of Biochemistry）９５，８７
（１９８４）〕などが挙げられる。形質転換する方法と
しては、たとえばT．Maniatisら，モレキュラー・クロ
ーニング（Molecular Cloning），コールド・スプリン
グ・ハーバー・ラボラトリー（Cold Spling Harbor
Laboratory）第２４９頁（１９８２）に記載のカルシウ
ムクロライド法あるいはカルシウムクロライド／ルビジ
ウムクロライド法などが挙げられる。

【０００９】このようにして得られた形質転換体中から
自体公知の方法、例えばコロニー・ハイブリダイゼーシ
ョン法〔ジーン１０，６３（１９８０）〕およびＤＮＡ
塩基配列決定法〔Proc．Natl．Acad．Sci．ＵＳＡ７
４，５６０（１９７７），ニュークレイックアシッズ
・リサーチ（Nucleic Acids Research）９，３０９（１
９８１）〕を用い、求めるクローンを選出する。このよ
うにして、クローン化されたＰＧＥレセプターをコード
する塩基配列を含有するＤＮＡを有するベクターを保持
する微生物が得られる。次に、該微生物からプラスミド
を単離する。該単離法としては、アルカリ法〔H．C．Bi
rmboimら，ヌクレイック・アシッズ・リサーチ（Nuclei
c Acids Research）１，１５１３（１９７９）〕など
が挙げられる。上記クローン化されたＰＧＥレセプター
をコードする遺伝子を含有する組み換えＤＮＡを有する
プラスミドはそのまま、または所望により制限酵素で切
り出して利用することができる。

【００１０】クローン化された遺伝子は、発現に適した
ビークル（ベクター）中のプロモーターの下流に連結し
て発現型ベクターを得ることができる。ベクターとして
は、上記の大腸菌由来のプラスミド（例、pＢＲ３２
２，pＢＲ３２５，pＵＣ１２，pＵＣ１３，pＵＣ１１
８，pＵＣ１１９），枯草菌由来プラスミド（例、pＵＢ
１１０，pＴＰ５，pＣ１９４），酵母由来プラスミド
（例、pＳＨ１９，pＳＨ１５），あるいはλファージな
どのバクテリオファージ，レトロウイルス，ワクシニア
ウイルスなどの動物ウイルスおよび動物発現用プラスミ
ド（例、pcＤＮＡＩ，pdＫＣＲ−dhfrなど）などがあげ
られる。該遺伝子はその５′末端に翻訳開始コドンとし
てのＡＴＧ（所望により適当なシグナルペプチドをコー
ドする塩基配列）を有し、また３′末端には翻訳終止コ
ドンとしてのＴＡＡ、ＴＧＡまたはＴＡＧ（好ましく
は、ＴＧＡ）を有していてもよい。さらに該遺伝子を発
現させるにはその上流にプロモーターを接続する。本発
明で用いられるプロモーターとしては、遺伝子の発現に
用いる宿主に対応して適切なプロモーターであればいか
なるものでもよい。また、形質転換する際の宿主がエシ
ェリキア属菌である場合は、Ｔ７プロモーター，trpプ
ロモーター，lacプロモーター，recＡプロモーター，λ
ＰＬプロモーター，リットルppプロモーターなどが、宿
主がバチルス属菌である場合は、ＳＰＯ１プロモータ
ー，ＳＰＯ２プロモーター，penＰプロモーターなど、
宿主が酵母である場合は、ＰＨＯ５プロモーター，ＰＧ
Ｋプロモーター，ＧＡＰプロモーター，ＡＤＨプロモー
ターなどが好ましい。とりわけ宿主がエシェリキア属菌
でプロモーターがtrpプロモーターまたはＴ７プロモー
ターであることが好ましい。宿主が動物細胞である場合
には、ＳＶ４０由来のプロモーター、レトロウイルスの
プロモーターなどが挙げられ、とりわけＳＶ４０由来の
プロモーターが好ましい。

【００１１】このようにして構築されたＤＮＡを含有す
るベクターを用いて、形質転換体を製造する。宿主とし
ては、たとえばエシェリキア属菌，バチルス属菌，酵
母，動物細胞などが挙げられる。上記エシェリキア属
菌，バチルス属菌の具体例としては、前記したものと同
様のものが挙げられる。上記酵母としては、たとえばサ
ッカロマイセスセレビシアエ（Saccharomycescerevisi
ae）ＡＨ２２Ｒ，ＮＡ８７−１１Ａ，ＤＫＤ−５Ｄなど
が挙げられる。動物細胞としては、たとえばサル細胞Ｃ
ＯＳ−７，Ｖero，チャイニーズハムスター卵巣細胞
（ＣＨＯ細胞），マウスＬ細胞，ヒトＦＬ細胞などが挙
げられる。上記エシェリキア属菌を形質転換するには、
たとえばProc．Natl．Acad．Sci．ＵＳＡ，６９，２１
１０（１９７２），ジーン，１７，１０７（１９８２）
などに記載の方法に従って行なわれる。バチルス属菌を
形質転換するには、たとえばモレキュラー・アンド・ジ
ェネラル・ジェネティックス（Molecular & General
Genetics），１６８，１１１（１９７９）などに記載
の方法に従って行なわれる。酵母を形質転換するには、
たとえばＰｒｏｃ．Natl．Acad．Sci．ＵＳＡ，７５；
１９２９（１９７８）に記載の方法に従って行なわれ
る。動物細胞を形質転換するには、たとえばヴィロロジ
ー（Virology），５２，４５６（１９７３）に記載の方
法に従って行なわれる。このようにして、ＰＧＥレセプ
ターのｃＤＮＡを含有するベクターで形質転換された形
質転換体が得られる。

【００１２】宿主がエシェリキア属菌，バチルス属菌で
ある形質転換体を培養する際、培養に使用される培地と
しては液体培地が適当であり、その中には該形質転換体
の生育に必要な炭素源，窒素源，無機物その他が含有せ
しめられる。炭素源としては、たとえばグルコース，デ
キストリン，可溶性澱粉，ショ糖など、窒素源として
は、たとえばアンモニウム塩類，硝酸塩類，コーンスチ
ープ・リカー，ペプトン，カゼイン，肉エキス，大豆
粕，バレイショ抽出液などの無機または有機物質，無機
物としてはたとえば塩化カルシウム，リン酸二水素ナト
リウム，塩化マグネシウムなどがあげられる。また、酵
母エキス，ビタミン類，生長促進因子などを添加しても
よい。培地のpＨは約６〜８が望ましい。エシェリキア
属菌を培養する際の培地としては、例えばグルコース、
カザミノ酸を含むＭ９培地〔Miller，ジャーナル・オブ
・エクスペリメンツ・イン・モレキュラー・ジェネティ
ックス（Journal of Experiments in Molecular G
enetics），４３１−４３３，Cold Spring Harbor L
aboratory， New York１９７２）〕が好ましい。ここ
に必要によりプロモーターを効率よく働かせるために、
たとえば３β−インドリルアクリル酸のような薬剤を
加えることができる。宿主がエシェリキア属菌の場合、
培養は通常約１５〜４３℃で約３〜２４時間行い、必要
により、通気や撹拌を加えることもできる。宿主がバチ
ルス属菌の場合、培養は通常約３０〜４０℃で約６〜２
４時間行ない、必要により通気や撹拌を加えることもで
きる。宿主が酵母である形質転換体を培養する際、培地
としては、たとえばバークホールダー（Burkholder）最
小培地〔Bostian，K．L．ら，Proc．Natl．Acad．Sci．
ＵＳＡ，７７，４５０５（１９８０）〕が挙げられる。
培地のpＨは約５〜８に調整するのが好ましい。培養は
通常約２０℃〜３５℃で約２４〜７２時間行い、必要に
応じて通気や撹拌を加える。宿主が動物細胞である形質
転換体を培養する際、培地としては、たとえばＭＥＭ培
地〔Science，１２２，５０１（１９５２）〕，ＤＭＥ
Ｍ培地〔Virology，８，３９６（１９５９）〕，ＲＰＭ
Ｉ１６４０培地〔ジャーナル・オブ・ザ・アメリカン・
メディカル・アソシエーション（The Journal of th
e AmericanMedical Association），１９９，５１９
（１９６７）〕，１９９培地〔プロシーディング・オブ
・ザ・ソサイエティ・フォー・ザ・バイオロジカル・メ
ディスン（Proceeding of the Society for the
Biologcal Medicine），７３，１（１９５０）〕など
が挙げられる。これにさらに約５〜２０％の胎児牛血清
を添加してもよい。pＨは約６〜８であるのが好まし
い。培養は通常約３０〜４０℃、培養時間は約１５〜６
０時間行い、必要に応じて通気や撹拌を加える。

【００１３】上記培養物から本発明のＰＧＥレセプター
を分離精製するには、例えば下記の方法により行うこと
ができる。本発明のＰＧＥレセプターを培養菌体あるい
は細胞から抽出するに際しては、培養後、公知の方法で
菌体あるいは細胞を集め、これを塩酸グアニジンなどの
蛋白質変性剤を含む緩衝液に懸濁して菌体外に目的のＰ
ＧＥレセプターを溶出させる方法、超音波、リゾチーム
および（または）凍結融解によって菌体あるいは細胞を
破壊したのち、遠心分離により本発明のＰＧＥレセプタ
ーを得る方法などが適宜用い得る。とりわけ、リゾチー
ムと超音波処理を併用する方法が好ましい。上記上澄液
から本発明のＰＧＥレセプターを精製するには、自体公
知の分離・精製法を適切に組み合わせて行なうことがで
きる。これらの公知の分離、精製法としては、塩析や溶
媒沈澱法などの溶解度を利用する方法、透析法、限外ろ
過法、ゲルろ過法、およびＳＤＳ−ポリアクリルアミド
ゲル電気泳動法などの主として分子量の差を利用する方
法、イオン交換クロマトグラフィーなどの荷電の差を利
用する方法、アフィニティークロマトグラフィーなどの
特異的親和性を利用する方法、逆相高速液体クロマトグ
ラフィーなどの疎水性の差を利用する方法、等電点電気
泳動法などの等電点の差を利用する方法などが挙げられ
る。このようにして得られた本発明のＰＧＥレセプター
は透析、凍結乾燥を行い、乾燥粉末とすることもでき
る。さらに、担体として血清アルブミンなどを添加して
保存することは、本発明のＰＧＥレセプターの容器への
吸着を防ぐことができ好適である。このようにして、実
質的に純粋な本発明のＰＧＥレセプターが得られる。本
発明の実質的に純粋な蛋白質としては、蛋白質含量とし
て９５％（w／w）以上であるもの、さらに好ましくは９
８％（w／w）以上であるものが挙げられる。以上のよう
にして得られたＰＧＥレセプター自体あるいはこれを発
現する形質転換体およびその一部は、例えばリガンドと
の結合試験に供することにより、そのアンタゴニスト，
アゴニスト活性を有する物質のスクリーニングに使用す
ることができる。またＰＧＥレセプターはそれ自体ＰＧ
Ｅのマスキング蛋白として使用することが可能である。
さらに本発明で得られたＰＧＥレセプターを発現する形
質転換体およびその一部は、該レセプターの抗体を取得
するために有効に利用することができる。

【００１４】本発明明細書および図面において、塩基、
アミノ酸、溶媒などを略号で表示する場合、ＩＵＰＡＣ
−ＩＵＢ Commision on Biochemical Nomenclature
による略号あるいは当該分野における慣用略号に基づく
ものであり、その例を下記する。またアミノ酸に関し光
学異性体があり得る場合は、特に明示しなければＬ−体
を示すものとする。なお、上記略号は、それに相当する
化合物のペプチド結合を形成しうる残基を示す場合もあ
る。ＤＮＡ：デオキシリボ核酸 cＤＮＡ：相補的デオキシリボ核酸Ａ：アデニンＴ：チミンＧ：グアニンＣ：シトシンＲＮＡ：リボ核酸 mＲＮＡ：メッセンジャーリボ核酸 dＡＴＰ：デオキシアデノシン三リン酸 dＴＴＰ：デオキシチミジン三リン酸 dＧＴＰ：デオキシグアノシン三リン酸 dＣＴＰ：デオキシシチジン三リン酸ＡＴＰ：アデノシン三リン酸ＥＤＴＡ：エチレンジアミン四酢酸ＳＤＳ：ドデシル硫酸ナトリウムＧlyまたはＧ：グリシンＡlaまたはＡ：アラニンＶalまたはＶ：バリンＬeuまたはＬ：ロイシンＩleまたはＩ：イソロイシンＳerまたはＳ：セリンＴhrまたはＴ：スレオニンＣysまたはＣ：システインＭetまたはＭ：メチオニンＧluまたはＥ：グルタミン酸ＧlnまたはＱ：グルタミンＡspまたはＤ：アスパラギン酸ＬysまたはＫ：リジンＡrgまたはＲ：アルギニンＨisまたはＨ：ヒスチジンＰheまたはＦ：フェニールアラニンＴyrまたはＹ：チロシンＴrpまたはＷ：トリプトファンＰroまたはＰ：プロリンＡsnまたはＮ：アスパラギン

【００１５】以下に示す実施例をもって、本発明をさら
に詳しく説明するが、本発明はこれらによってなんら限
定されるものではない。なお、後述の実施例１、２およ
び４でそれぞれ得られたクローン細胞ＭＰ６６０／ＫＣ
Ｒ、ＭＰ６５３／ＫＣＲおよびＣＨＯ／ＥＰ₂は、財団
法人発酵研究所（ＩＦＯ）および通商産業省微生物（生
命工学）工業技術研究所（ＦＲＩ）にそれぞれ寄託され
ている。受託日および受託番号を次の表１に示す。

【表１】

【００１６】

【実施例】実施例１（１）ＰＣＲ（polymerase chain reaction）法による
ヒトＴＸＡ₂レセプターｃＤＮＡと塩基配列相同性を示
すマウスｃＤＮＡフラグメントの増幅単鎖ｃＤＮＡはマウス肺由来全ＲＮＡからランダムプラ
イマー（ヘキサヌクレオチド）を用いて合成した。ＰＣ
ＲのプライマーにはヒトＴＸＡ₂レセプターｃＤＮＡ
（ＨＰＬ）のうち３番目および６番目の膜貫通（transm
embrane）ドメインをコードすると想定される部分を用
いた〔M. Hirata ら，Nature, 349, 617(1991)〕。マウ
ス肺ｃＤＮＡを鋳型としてZymoreactor（アトー社，東
京）で、９５℃・１分間熱変性，６０℃・３０秒間アニ
ーリング，７２℃・１．５分間ＤＮＡ合成を３０回繰り
返し、４１８bpのｃＤＮＡフラグメントを増幅させ、pB
luescript ＳＫ（＋）（Stratagene）でサブクローニン
グを行った。その結果、ＨＰＬの相当する部分に７８％
の塩基配列相同性を示す１つのクローンＬＴ３を得た。（２）マウスプロスタグランジンＥ₂受容体（ＥＰ_3α）
ｃＤＮＡのクローニングオリゴ（ｄＴ）プライミング法
により調製されたマウス肺ｃＤＮＡより、１．８キロベ
ース以上のものを選択し、ＥcoＲＩアダプター（New En
gland Biolabs社）を付け、λＺＡＰIIＤＮＡ（Stratag
ene）のＥcoＲＩ部位に挿入してｃＤＮＡライブラリー
を作製した。このｃＤＮＡライブラリーのクローン１．
９×１０⁵個を、上記（１）で得られたＬＴ３を用いた
ハイブリダイゼーションでスクリーニングを行った。ハ
イブリダイゼーションは５×Denhardt's 溶液（０．１
％Ficoll，０．１％ polyvinylpyrrolidone，０．１％
ウシ血清アルブミン）と０．５％ＳＤＳ（sodium dodec
yl sulfate）を含有する６×ＳＳＣ（９００mＭＮaＣ
l，９０mＭクエン酸ナトリウム）中５８℃で実施し、ハ
イブリダイゼーション後フィルターは、６０℃の１％Ｓ
ＤＳを含有する２×ＳＳＣで洗浄した。ＬＴ３にハイブ
リダイズするいくつかのクローンの中からシグナルの弱
いもの（ＭＬ６４）を選択し、このクローンをハイブリ
ダイゼーションプローブとして、マウスＰ−８１５肥満
細胞腫由来ｃＤＮＡをスクリーニングし、完全長ＤＮＡ
クローンの取得に努めた。Ｐ−８１５λＺＡＰIIライブ
ラリーの７．２×１０⁵個のクローンから、９クローン
を分離、塩基配列の解析を行った。核酸の塩基配列は、
ダイデオキシ塩基配列決定法（dideoxy chain terminat
ion method）により実施した。その結果、１０９５bpの
転写解読枠（open reading frame）を持つ完全長ＤＮＡ
クローン，ＭＰ６６０を得た。〔図１〕はＭＰ６６０の
ｃＤＮＡの塩基配列とそれから推定されるアミノ酸配列
（配列番号：１）を示す。アミノ酸配列の上線を記した
部分はI〜VIIの膜貫通ドメイン，★印は細胞外ドメイン
のＮ−グリコシレーション部位，●印はｃＡＭＰ−依存
タンパクリン酸化酵素によるリン酸化部位をそれぞれ示
す。

【００１７】（３）ＣＯＳ−１細胞でのｃＤＮＡの発現
とリガンド結合試験ＭＰ６６０のｃＤＮＡをＥcoＲＩで切り出し、pcＤＮＡ
I（Invitrogen）に挿入してサブクローニングし、この
プラスミドＤＮＡをＤＥＡＥ−デキストラン法〔D. J.
Sussmann とG. Milman, Mol. Cell. Biol., 4，1641(19
84)〕でＣＯＳ−１細胞にトランスフェクトした。７２
時間培養後、細胞を採取し、細胞膜を調製した〔M. Hir
ata ら，Nature, 349, 617(1991)〕。この細胞膜を用い
て〔³Ｈ〕で標識した種々のプロスタグランジンの結合
活性を調べたところ、〔³Ｈ〕ＰＧＥ₂が特異的に結合
することが分かった。また、得られたＰＧＥ₂レセプタ
ーはサブタイプＥＰ_3αレセプターであることが判明し
た。〔図２〕は〔³Ｈ〕ＰＧＥ₂のＭＰ６６０をトランス
フェクトした細胞膜への結合に対する種々のリガンドの
阻害活性を示す〔ａは種々のプロスタグランジンによる
阻害活性を示す（○，ＰＧＥ₂ ；●，ＰＧＥ₁；□を黒
く塗った印，iloprost；△，ＰＧＦ₂α；□，ＰＧ
Ｄ₂）。ｂはプロスタグランジン類似物質による阻害活
性を示す（▲，Ｍ＆Ｂ２８，７６７；●，ＧＲ６３７９
９Ｘ；△，butaprost；○，ＳＣ−１９２２０）]。ａは
結合の特異性を示しているが、非標識のプロスタグラン
デインによる〔³Ｈ〕ＰＧＥ₂の結合阻害は、ＰＧＥ₂＝
ＰＧＥ₁＞iloprost（ＰＧＩ₂のアナログ）＞ＰＧＦ_2α
＞ＰＧＤ₂の順序で認められた。ＰＧＥレセプターは種
々のアゴニスト、アンタゴニストにより薬理学的に３
種のレセプター型、ＥＰ₁，ＥＰ₂，ＥＰ₃に分けられて
いるので、ＰＧＥレセプターのサブタイプに特異的なリ
ガンドを用いて〔³Ｈ〕ＰＧＥ₂の結合の特異性をさらに
検討した。その結果を示したものがｂであるが、種々の
ＰＧＥアナログのうちＥＰ₃に特異的なアゴニスト、Ｇ
Ｒ６３７９９ＸとＭ＆Ｂ２８,７６７が同程度に
〔³Ｈ〕ＰＧＥ₂と競合し、ＰＧＥ₂それ自身よりも強く
結合した。一方、ＥＰ₁特異的なアンタゴニスト、ＳＣ
−１９２２０あるいはＥＰ₂特異的なアゴニスト、buta
prostとは競合は全く認められなかった。また〔³Ｈ〕Ｐ
ＧＥ₂は非導入細胞の細胞膜には結合しなかった。以上
の結果は、ＭＰ６６０がＰＧＥレセプターのＥＰ₃サブ
タイプをコードする遺伝子であることを裏付けた。（４）レセプター遺伝子の安定発現およびｃＡＭＰアッ
セイレセプター遺伝子を安定して発現する細胞を取得するた
め、Nakajima らによって記載された方法〔J. Biol. Ch
em., 267, 2437(1992)〕によりｃＤＮＡのトランスフェ
クションを行い、細胞株を取得した。すなわち、ＭＰ６
６０のＥｃｏＲＩフラグメントを、選択マーカーとして
マウスのdhfr遺伝子をもつ真核細胞用発現ベクター，pd
ＫＣＲ−dhfr〔S. Oikawa ら，Biochem. Biophys. Res.
Commun., 164, 39(1989)〕に挿入した。このプラスミ
ドをＣＨＯ−dhfr^-（dihydrofolate reductase活性欠
損）細胞〔G. Urlaub と L. A. Chasin, Proc. Natl. A
cad.Sci. USA, 77, 4216(1980)〕にカルシウム・リン酸
法〔F. L. Graham と A.J. van der Ｅb, Virology, 5
2, 456(1973)〕でトランスフェクトした。細胞をリボヌ
クレオシドおよびデオキシリボヌクレオシドを含まず、
ペニシリン１００ユニット／ml，ストレプトマイシン１
００μg／ml，１０％透析ウシ胎児血清（Cell Culture
Laboratories）を含むイーグルスメディウムのα−改変
培地〔S. Oikawa ら，Biochem. Biophys. Res. Commu
n., 1 64, 39(1989)〕中で選択培養を行った。増殖した
細胞をクローニングし、クローン細胞を取得した。トラ
ンスフェクトしたＥＰ_3αレセプターｃＤＮＡが発現し
ているかどうかはＲＮＡブロッティング法で確認した。
このようにして得られたＥＰ_3αレセプターを恒常的に
発現するＣＨＯ細胞〔ＭＰ６６０／ＫＣＲ細胞：ＩＦＯ
５０３６６；ＦＥＲＭＢＰ−３８０３〕を用いて、フォ
ルスコリン刺激によるｃＡＭＰ合成に及ぼすＰＧＥ₂ま
たはＥＰ₃選択的なアゴニストであるＭ＆Ｂ２８，７６
７の作用を調べた。その結果、これらの共存によりｃＡ
ＭＰの合成が阻害されることが判明した（〔図３〕参
照；●はＰＧＥ₂，□はＭ＆Ｂ２８，７６７を示す）。
〔図３〕に示したように、遺伝子を導入したＣＨＯ細
胞では、フォルスコリンによるｃＡＭＰの合成をＰＧＥ
₂は濃度依存的に抑制した。ＥＰ₃特異的アゴニストＭ＆
Ｂ２８,７６７も同様にフォルスコリンで誘導されるｃ
ＡＭＰの合成を抑制し、その作用はＰＧＥ₂よりも強か
った（Ｍ＆Ｂ２８,７６７のＩＣ₅₀＝１×１０^-12Ｍ，Ｐ
ＧＥ₂のＩＣ₅₀＝１×１０^-10Ｍ）。

【００１８】（５）各種組織におけるmＲＮＡの発現種々のマウスの組織から全ＲＮＡをＡＧＰＣ法〔P. Cho
mczynski と N. Sacchi, Anal. Biochem., 162, 156(19
87)〕により分離した。次にこの全ＲＮＡからpoly
（Ａ）⁺ＲＮＡをOligotex dＴ₃₀（宝酒造，京都，日
本）を用いて精製した。それぞれの組織のpoly（Ａ）⁺
ＲＮＡ１０μgを１．２％のアガロースゲル上で電気
泳動し、ナイロンフィルター（Hybond−Ｎ，Amersham
社）に移した後、³²ＰでラベルしたＭＰ６６０クローン
のＥcoＲＩ／ＢamＨＩフラグメントとハイブリダイズし
た。ハイブリダイゼーションは６×ＳＳＣ中６８℃で行
ない、フィルターは同温の１×ＳＳＣで洗浄した。その
結果、ＰＧＥ₂が薬理作用を示す組織、例えば腎臓，
胃，子宮等の組織およびＰ−８１５細胞に２．３キロベ
ースの強いバンドが認められた。その他７．０キロベー
ス付近にも、これらの組織，細胞にはバンドが認められ
た。

【００１９】実施例２（１）マウスプロスタグランジンＥ₂受容体（ＥＰ_3β）
ｃＤＮＡのクローニング実施例１と同様に、ＭＬ６４を
ハイブリダイゼーションプローブとして、マウスＰ−８
１５細胞由来ｃＤＮＡライブラリーから、いくつかのク
ローンを分離した。これらのクローンの塩基配列の解析
を行ったところ、実施例１記載のＭＰ６６０タイプ以外
に、１０８３bpの転写解読枠を持つ完全長ＤＮＡクロー
ンＭＰ６５３を得た。〔図４〕はＭＰ６５３のｃＤＮＡ
の塩基配列とそれから推定されるアミノ酸配列（配列番
号：４）を示す。ＭＰ６５３のｃＤＮＡの塩基配列は、
そのＣ末端部７７bp以外はＭＰ６６０のＣ末端部８９bp
を除いたものと同一である。ＭＰ６６０のＣ末端部８９
bpがスプライシング（splicing）を受け、そのあとに新
たに生じた stop codon までの８１bpが付加されたもの
がＭＰ６５３であると判定された（〔図５〕参照））。（２）ＣＯＳ−１細胞でのＭＰ６５３ｃＤＮＡの発現と
リガンド結合試験ＭＰ６５３のｃＤＮＡをＥcoＲＩで切
り出し、pcＤＮＡI（Invitrogen）に挿入してサブクロ
ーニングし、このプラスミドＤＮＡをＤＥＡＥ−デキス
トラン法〔D. J. Sussmann と G. Milman, Mol. Cell.
Biol., 4，1641(1984)〕でＣＯＳ−１細胞にトランスフ
ェクトした。７２時間培養後、細胞を採取し、細胞膜を
調製した〔M. Hirata ら，Nature, 349, 617(1991)〕。
この細胞膜を用いて〔³Ｈ〕で標識した種々のプロスタ
グランジンの結合活性を調べたところ、〔³Ｈ〕ＰＧＥ
₂が特異的に結合することが分かった。また、得られた
ＰＧＥ₂レセプターはサブタイプＥＰ_3βレセプターであ
ることが判明した。（ＭＰ６６０遺伝子でコードされる
レセプターをＥＰ_3α，ＭＰ６５３遺伝子でコードされ
るレセプターをＥＰ_3βと呼称する。）〔³Ｈ〕ＰＧＥ₂
のＥＰ_3βへの結合に対する種々のリガンドの阻害活性
は、ＥＰ_3αへの結合阻害活性と同様の結果を示した。

【００２０】（３）レセプター遺伝子の安定発現および
ｃＡＭＰアッセイレセプター遺伝子を安定して発現する細胞を取得するた
め、Nakajimaらによって記載された方法〔J. Biol. Che
m., 267, 2437(1992)〕によりｃＤＮＡのトランスフェ
クションを行い、細胞株を取得した。すなわち、ＭＰ６
５３のＥcoＲＩフラグメントを、選択マーカーとしてマ
ウスのdhfr遺伝子をもつ真核細胞用発現ベクター，pdＫ
ＣＲ−dhfr〔S. Oikawa ら，Biochem. Biophys. Res. C
ommun.,164, 39(1989)〕に挿入した。このプラスミドを
ＣＨＯ−dhfr^-（dihydrofolatereductase活性欠損）細
胞〔G. Urlaub と L. A. Chasin, Proc. Natl. Acad.Sc
i. USA, 77, 4216(1980)〕にカルシウム・リン酸法〔F.
L. Graham と A. J.van der Ｅb, Virology, 52, 456
(1973)〕でトランスフェクトした。細胞をリボヌクレオ
シドおよびデオキシリボヌクレオシドを含まず、ペニシ
リン１００ユニット／ml，ストレプトマイシン１００μ
g／ml，１０％透析ウシ胎児血清（Cell Culture Labora
tories）を含むイーグルスメディウムのα−改変培地
〔S. Oikawa ら，Biochem. Biophys. Res. Commun., 16
4, 39(1989)〕中で選択培養を行った。増殖した細胞を
クローニングし、クローン細胞を取得した。トランスフ
ェクトしたＥＰ_3β レセプターｃＤＮＡが発現している
かどうかはＲＮＡブロッティング法で確認した。このよ
うにして得られたＥＰ_3β レセプターを恒常的に発現
するＣＨＯ細胞〔ＭＰ６５３／ＫＣＲ細胞：ＩＦＯ５０
３９７；ＦＥＲＭＢＰ−４１８３〕を用いて、フォルス
コリン刺激によるｃＡＭＰ合成に及ぼすＰＧＥ₂または
ＥＰ₃選択的なアゴニストであるＭ＆Ｂ２８，７６７の
作用を調べた。その結果、これらの共存により、ＥＰ
_3β を発現する細胞もｃＡＭＰの合成が阻害されるこ
とが分かった。

【００２１】実施例３ＲＮＡの増幅それぞれの組織におけるＥＰ_3α 、ＥＰ_3β の発現の度
合いは Wang らの方法（Proc. Natl. Acad. Sci. 86, 9
717 (1989)）に準じた。すなわち、実施例１（５）で分
離したＲＮＡを Moloney murine leukemia virus の逆
転写酵素（Bethesda Research Laboratories 社）を用
いて random hexanucleotide priming 法によってｃＤ
ＮＡに転写した。それぞれＲＮＡ２.５μgからのｃＤＮ
Ａを鋳型に、プライマーとして６５１番から６８０番ま
で（ＰＣＲＩ）および１２６４番から１２９３番まで
（ＰＣＲII）の核酸配列を用いてＰＣＲ反応を行った。
５′末端を³²ＰでラベルしたＰＣＲII ０.３pmol（１.
０×１０⁶ c.p.m／pmol）を、それぞれのＰＣＲ反応で
使用した。反応は次の温度条件、９４℃４０秒，６０℃
４０秒，７２℃１.５分で２３回実施した。ＤＮＡを展
開したゲルを乾燥し、オートラジオグラフィーに供し
た。その結果、ＥＰ_3α ，ＥＰ_3β それぞれに相当する
二本のバンドが認められ、何れの組織でもＥＰ_3α が優
性に発現していることが分かった。

【００２２】実施例４（１）マウスプロスタグランジンＥ₂受容体（ＥＰ₂）ｃ
ＤＮＡのクローニングマウスＰ−８１５肥満細胞腫瘍由来ｃＤＮＡより２.０
キロベース以上のものを選択し、実施例１（２）に記載
の方法でｃＤＮＡライブラリーを作製した。ｃＤＮＡラ
イブラリーからの２.０×１０⁵クローンを、マウスＥＰ
₃ｃＤＮＡを鋳型にＰＣＲ法で調製したＥＰ₃レセプター
のＩ〜IVの膜貫通ドメインをカバーする４８２bpからな
るＤＮＡプローブで、きびしいあるいはゆるやかな条件
下のハイブリダイゼーションでスクリーニングを行っ
た。陽性クローンをＰＣＲで増幅後、塩基配列の解析を
行った。その結果、ＥＰ₃レセプターｃＤＮＡに属する
グループ（６クローン）とＥＰ₃とは相同性があるが同
一ではないグループ（５クローン）の２つのグループに
分類できた。後者の代表的なクローンＭＰ４１２は１５
３９bpの転写解読枠を持つ。〔図６〕はＭＰ４１２のｃ
ＤＮＡの塩基配列とそれから推定されるアミノ酸配列
（配列番号：７）を示す。このｃＤＮＡを実施例１
（３）記載と同様の方法でＣＯＳ−１細胞にトランスフ
ェクトした。

【００２３】（２）ＭＰ４１２ｃＤＮＡ発現細胞を用い
たＰＧＥ₂結合試験およびｃＤＮＡアッセイ（１）で得られたプラスミド導入ＣＯＳ−１細胞を７２
時間培養後、細胞を採取して細胞膜を調製し、〔³Ｈ〕
で標識した種々のプロスタグランジンの結合性を検討し
た。その結果〔³Ｈ〕ＰＧＥ₂が特異的に結合することが
分かった。非導入ＣＯＳ−１細胞の細胞膜には、
〔³Ｈ〕ＰＧＥ₂は殆んど結合しなかった。〔図７〕は、
結合の特異性を示す。種々の〔³Ｈ〕ＰＧＥ₂の細胞膜へ
の結合は、ＰＧＥ₂（○）＝ＰＧＥ₁（●）>> iloprost
（□を黒く塗った印）≧ＰＧＦ₂α（△）≧ＰＧＤ
₂（□）の順に阻害された。次にリガンド結合特異性の
検討を行った。〔図８〕は、その結果を示したもので、
ＰＧＥ₂の結合はＥＰ₂・ＥＰ₃のアゴニストである mis
oprostol（●）によって阻害され、ＥＰ₃アゴニストで
あるＭ＆Ｂ２８，７６７（△を黒く塗った印）では阻
害の程度は弱かった。一方、ＥＰ₁・ＥＰ₃のアゴニス
トである Sulprostone（□），ＥＰ₁アンタゴニストで
あるＳＣ−１９２２０（○），ＥＰ₂アゴニストである
butaprost（△）では阻害が起こらなかった。以上の結
果から、ＭＰ４１２遺伝子はＰＧＥレセプターのＥＰ₂
サブタイプをコードすると考えられた。ＥＰ₂アゴニス
トである butaprostが結合を阻害しなかったのは、種特
異性があるためか、あるいはＥＰ₂レセプターの他のサ
ブタイプに結合性を示すためなのかもしれない。ＥＰ₂
レセプターを通しての刺激はアデニレートサイクラーゼ
活性を高める。ｃＡＭＰアッセイのため、プラスミッド
ＤＮＡを lipofection 法〔P. L. Felgner ら Proc. Na
tl. Acad. Sci. 84, 7413(1987)〕でＣＯＳ−１細胞に
導入し、２４ウェルプレートで７２時間培養した。細胞
内のｃＡＭＰレベルは Nakajimaら〔J. Biol. Chem. 26
7, 2437(1992)〕の方法に従った。その結果、細胞内の
ｃＡＭＰレベルはＰＧＥ₂の濃度に依存的に上昇した
（〔図９〕，●：ＭＰ４１２をトランスフェクトしたＣ
ＯＳ−１細胞，○：トランスフェクトしていないＣＯＳ
−１細胞）。一方、フォルスコリン刺激で誘導されるｃ
ＡＭＰやイノシトールリン酸の産生を阻害しなかった。
これらの結果は、このレセプターがＥＰ₂サブタイプで
あることを示す。レセプター遺伝子を安定して発現する
細胞は、実施例１（４）に記載の方法と同様に行った。
すなわち、ＭＰ４１２のＥcoＲＩフラグメントをpdＫＣ
Ｒ−dhfrに挿入し、このプラスミドをＣＨＯ−dhfr^-細
胞にトランスフェクトして選択培養を行い、増殖した細
胞をクローニングすることにより、ＥＰ₂レセプターを
恒常的に発現するＣＨＯ細胞クローン〔ＣＨＯ／ＥＰ₂
細胞：ＩＦＯ５０３９６；ＦＥＲＭＢＰ−４１８２〕
を取得した。

【００２４】（３）各種組織におけるｍＲＮＡの発現実施例１（５）と同様の方法で調製した種々の組織から
の poly(Ａ)⁺ＲＮＡ１０μg を、１.２％アガロースゲ
ル上で電気泳動し、ナイロンフィルターに移した後、³²
ＰでラベルしたＭＰ４１２クローンのＥcoＲＩ／ＸhoＩ
フラグメントとハイブリダイズした。ハイブリダイゼー
ションは６×ＳＳＣ中６８℃で行ない、フィルターは同
温の２×ＳＳＣで洗浄した。その結果、ＰＧＥ₂によっ
て弛緩が起こる回腸、細胞内ｃＡＭＰレベルの増加によ
りＴ細胞の増殖阻害が起る胸腺等でｍＲＮＡの強い発現
がみられた。著明なバンドは、またＰＧＥ₂が気管や子
宮筋の弛緩作用を保有することから、肺臓，脾臓，心
臓，および子宮に認められた。しかしながら、精巣，肝
臓にはＥＰ₂ｍＲＮＡの発現はみられなかった。

【００２５】

【発明の効果】ＰＧＥ受容体をコードする遺伝子および
該遺伝子を発現する形質転換体は、他のＰＧ受容体の遺
伝子クローニング，ＰＧＥ受容体の構造解明，ＰＧＥの
機能解明に有用であるのみならず、ＰＧＥのアンタゴニ
スト，アゴニスト活性物質の探索，抗ＰＧＥ受容体抗体
の作出にも有用である。

【００２６】

【配列表】配列番号(SEQ ID NO)：1 配列の長さ(SEQUENCE LENGTH)：2107 配列の型(SEQUENCE TYPE)：nucleic acid 鎖の数(STRANDEDNESS)：singleトホ゜ロシ゛ -(TOPOLOGY)：linear 配列の種類(MOLECULE TYPE)：genomic DNA 配列： GCGGCGGGCG ATGGAGAGCA GAGCCTGGGC TCCGGCTGTC CCCCAGTGCA CTCTGCTGCT 60 ATCCCGCAGC TGAGCCGGGA GGCTCCGGCC CCGTGCGCCC TACCGTGGCC CCGCCACT 118 ATG GCT AGC ATG TGG GCG CCG GAG CAC TCT GCT GAA GCG CAC AGC AAC 166 Met Ala Ser Met Trp Ala Pro Glu His Ser Ala Glu Ala His Ser Asn 1 5 10 15 CTG TCA AGT ACT ACC GAC GAC TGC GGC TCC GTG TCC GTG GCC TTT CCC 214 Leu Ser Ser Thr Thr Asp Asp Cys Gly Ser Val Ser Val Ala Phe Pro 20 25 30 ATC ACC ATG ATG GTC ACT GGC TTC GTG GGC AAC GCG CTG GCC ATG CTG 262 Ile Thr Met Met Val Thr Gly Phe Val Gly Asn Ala Leu Ala Met Leu 35 40 45 CTC GTG TCG CGC AGC TAC CGG CGC CGC GAG AGC AAG CGC AAG AAG TCT 310 Leu Val Ser Arg Ser Tyr Arg Arg Arg Glu Ser Lys Arg Lys Lys Ser 50 55 60 TTC CTG CTG TGC ATT GGC TGG CTG GCG CTC ACC GAC TTA GTG GGG CAG 358 Phe Leu Leu Cys Ile Gly Trp Leu Ala Leu Thr Asp Leu Val Gly Gln 65 70 75 80 CTC CTG ACC AGC CCG GTG GTC ATC CTC GTG TAC CTG TCA CAG CGA CGC 406 Leu Leu Thr Ser Pro Val Val Ile Leu Val Tyr Leu Ser Gln Arg Arg 85 90 95 TGG GAG CAG CTC GAC CCA TCG GGG CGT CTG TGC ACC TTC TTC GGG CTA 454 Trp Glu Gln Leu Asp Pro Ser Gly Arg Leu Cys Thr Phe Phe Gly Leu 100 105 110 ACC ATG ACA GTG TTC GGG CTA TCC TCG CTC CTG GTG GCC AGC GCC ATG 502 Thr Met Thr Val Phe Gly Leu Ser Ser Leu Leu Val Ala Ser Ala Met 115 120 125 GCC GTG GAG CGC GCC CTG GCC ATC CGT GCG CCG CAC TGG TAT GCC AGC 550 Ala Val Glu Arg Ala Leu Ala Ile Arg Ala Pro His Trp Tyr Ala Ser 130 135 140 CAC ATG AAG ACT CGC GCC ACG CCG GTA CTG CTG GGC GTG TGG CTG TCT 598 His Met Lys Thr Arg Ala Thr Pro Val Leu Leu Gly Val Trp Leu Ser 145 150 155 160 GTG CTC GCC TTC GCG CTG CTG CCG GTG CTG GGC GTG GGC CGC TAC AGC 646 Val Leu Ala Phe Ala Leu Leu Pro Val Leu Gly Val Gly Arg Tyr Ser 165 170 175 GTG CAG TGG CCG GGC ACG TGG TGC TTC ATC AGC ACC GGG CCG GCG GGC 694 Val Gln Trp Pro Gly Thr Trp Cys Phe Ile Ser Thr Gly Pro Ala Gly 180 185 190 AAC GAG ACA GAC CCT GCG CGC GAG CCG GGC AGC GTG GCC TTT GCC TCC 742 Asn Glu Thr Asp Pro Ala Arg Glu Pro Gly Ser Val Ala Phe Ala Ser 195 200 205 GCC TTC GCC TGC TTG GGC TTG CTG GCT CTG GTG GTG ACC TTT GCC TGC 790 Ala Phe Ala Cys Leu Gly Leu Leu Ala Leu Val Val Thr Phe Ala Cys 210 215 220 AAC CTG GCG ACC ATC AAA GCC CTG GTG TCC CGC TGT CGG GCC AAA GCC 838 Asn Leu Ala Thr Ile Lys Ala Leu Val Ser Arg Cys Arg Ala Lys Ala 225 230 235 240 GCC GTC TCG CAG TCC AGC GCC CAG TGG GGC AGA ATC ACC ACG GAG ACG 886 Ala Val Ser Gln Ser Ser Ala Gln Trp Gly Arg Ile Thr Thr Glu Thr 245 250 255 GCC ATC CAG CTC ATG GGG ATC ATG TGT GTG CTG TCC GTC TGT TGG TCG 934 Ala Ile Gln Leu Met Gly Ile Met Cys Val Leu Ser Val Cys Trp Ser 260 265 270 CCG CTA TTG ATA ATG ATG TTG AAA ATG ATC TTC AAT CAG ATG TCG GTT 982 Pro Leu Leu Ile Met Met Leu Lys Met Ile Phe Asn Gln Met Ser Val 275 280 285 GAG CAA TGC AAG ACA CAG ATG GGA AAG GAG AAG GAG TGC AAT TCC TTT 1030 Glu Gln Cys Lys Thr Gln Met Gly Lys Glu Lys Glu Cys Asn Ser Phe 290 295 300 CTA ATT GCA GTT CGC CTG GCT TCG CTG AAC CAG ATC TTG GAT CCC TGG 1078 Leu Ile Ala Val Arg Leu Ala Ser Leu Asn Gln Ile Leu Asp Pro Trp 305 310 315 320 GTT TAT CTG CTG CTA AGA AAG ATC CTT CTT CGG AAG TTC TGC CAG ATC 1126 Val Tyr Leu Leu Leu Arg Lys Ile Leu Leu Arg Lys Phe Cys Gln Ile 325 330 335 AGA GAC CAC ACC AAC TAT GCT TCC AGC TCC ACC TCC TTG CCC TGC CCA 1174 Arg Asp His Thr Asn Tyr Ala Ser Ser Ser Thr Ser Leu Pro Cys Pro 340 345 350 GGC TCC TCA GCC CTG ATG TGG AGT GAC CAG CTG GAA AGA TGATGAACAA 1223 Gly Ser Ser Ala Leu Met Trp Ser Asp Gln Leu Glu Arg 355 360 365 CCTGAAGTGG ACTTTCATTG CAGTACCTGT TTCCCTGGGT CTGAGAATTT CTTCTCCCAG 1283 GGAAGGATGA CTGAGTATTT TGGATTGTAT CTTCTTTTGG CCTCAATTTT AAGTTTTCCT 1343 TGCCATTAAA CACACCGAGA CAAGCTTTCT TAGGATAATC TGAGAGTCTG GTTGTTAGCT 1403 GGTTCCTGTG AAGACTGAAG ACTCTGCACT TGAGACGGGG GCAAGACGAC ACAGAGCAGC 1463 ATGGAGAGAC TCAGTGCAGA AATATCTCCA GCCTCAGAAC CTTTGTGGAC ATGGACACCT 1523 TCATGTATTG ATAGTCTGAC TCTTCTAAAT AGGTCTGAAA AAGCAGCATA AGTTTTTAAA 1583 CAGTGAAGCA TCAATGTGTT GAGAGCAAAT GTTCATCTAA TAAGCCATGA GCCAAACAAG 1643 ACAAAAAGTC TACATGAGAG GCAAGAGAGA TTCTGCAAAG GGTATTTGTG CCAAGAAGGT 1703 ATACAGTACC ACAGAGTTGT GTCCTCAGTG AGAGTGGGAA ATAAGTTTCT AATTTAATTC 1763 TAATTACTGG CTCCTCAGTA ATTCAGGAAT CGTGCCATCA TTTCCCTGCT TTTAAAGGGA 1823 GAAGTTTAGC TAAAGACACA TTCCAGGTGT CACTAACAGT TCCAAAGCTA GGTGACTAAA 1883 TGTTCAGCTA GAGCTGTTAA AAGGAAAACC AGCTAATTAT CATTCCAGTC CAATGCTATT 1943 TTTGAATTAC TATCTACTTA AGATTTCTCA TAATTTGTGC TCAGGCAGCA CAATAAAAAG 2003 GGGGGGGCAA AATTACTAAG TGACAGTTAT TCTGCATCTA AGTCTGTGAC TTTTTTATGA 2063 AATAAAATGA TTTTGTCTGT GTTGAAATAA AAAAAAAAAA AAAA 2107

【００２７】配列番号(SEQ ID NO)：2 配列の長さ(SEQUENCE LENGTH)：365 配列の型(SEQUENCE TYPE)：amino acid トポロジ−(TOPOLOGY)：unknown 配列の種類(MOLECULE TYPE)：protein ハイポセティカル配列(HYPOTHTICAL SEQUENCE)：yes 配列： Met Ala Ser Met Trp Ala Pro Glu His Ser Ala Glu Ala His Ser Asn 1 5 10 15 Leu Ser Ser Thr Thr Asp Asp Cys Gly Ser Val Ser Val Ala Phe Pro 20 25 30 Ile Thr Met Met Val Thr Gly Phe Val Gly Asn Ala Leu Ala Met Leu 35 40 45 Leu Val Ser Arg Ser Tyr Arg Arg Arg Glu Ser Lys Arg Lys Lys Ser 50 55 60 Phe Leu Leu Cys Ile Gly Trp Leu Ala Leu Thr Asp Leu Val Gly Gln 65 70 75 80 Leu Leu Thr Ser Pro Val Val Ile Leu Val Tyr Leu Ser Gln Arg Arg 85 90 95 Trp Glu Gln Leu Asp Pro Ser Gly Arg Leu Cys Thr Phe Phe Gly Leu 100 105 110 Thr Met Thr Val Phe Gly Leu Ser Ser Leu Leu Val Ala Ser Ala Met 115 120 125 Ala Val Glu Arg Ala Leu Ala Ile Arg Ala Pro His Trp Tyr Ala Ser 130 135 140 His Met Lys Thr Arg Ala Thr Pro Val Leu Leu Gly Val Trp Leu Ser 145 150 155 160 Val Leu Ala Phe Ala Leu Leu Pro Val Leu Gly Val Gly Arg Tyr Ser 165 170 175 Val Gln Trp Pro Gly Thr Trp Cys Phe Ile Ser Thr Gly Pro Ala Gly 180 185 190 Asn Glu Thr Asp Pro Ala Arg Glu Pro Gly Ser Val Ala Phe Ala Ser 195 200 205 Ala Phe Ala Cys Leu Gly Leu Leu Ala Leu Val Val Thr Phe Ala Cys 210 215 220 Asn Leu Ala Thr Ile Lys Ala Leu Val Ser Arg Cys Arg Ala Lys Ala 225 230 235 240 Ala Val Ser Gln Ser Ser Ala Gln Trp Gly Arg Ile Thr Thr Glu Thr 245 250 255 Ala Ile Gln Leu Met Gly Ile Met Cys Val Leu Ser Val Cys Trp Ser 260 265 270 Pro Leu Leu Ile Met Met Leu Lys Met Ile Phe Asn Gln Met Ser Val 275 280 285 Glu Gln Cys Lys Thr Gln Met Gly Lys Glu Lys Glu Cys Asn Ser Phe 290 295 300 Leu Ile Ala Val Arg Leu Ala Ser Leu Asn Gln Ile Leu Asp Pro Trp 305 310 315 320 Val Tyr Leu Leu Leu Arg Lys Ile Leu Leu Arg Lys Phe Cys Gln Ile 325 330 335 Arg Asp His Thr Asn Tyr Ala Ser Ser Ser Thr Ser Leu Pro Cys Pro 340 345 350 Gly Ser Ser Ala Leu Met Trp Ser Asp Gln Leu Glu Arg 355 360 365

【００２８】配列番号(SEQ ID NO)：３配列の長さ（ＳＥＱＵＥＮＣＥＬＥＮＧＴＨ）：1095 配列の型(SEQUENCE TYPE)：nucleic acid 鎖の数(STRANDEDNESS)：single トポロジ−(TOPOLOGY)：linear 配列の種類(MOLECULE TYPE)：genomic DNA 配列： ATG GCT AGC ATG TGG GCG CCG GAG CAC TCT GCT GAA GCG CAC AGC AAC 48 CTG TCA AGT ACT ACC GAC GAC TGC GGC TCC GTG TCC GTG GCC TTT CCC 96 ATC ACC ATG ATG GTC ACT GGC TTC GTG GGC AAC GCG CTG GCC ATG CTG 144 CTC GTG TCG CGC AGC TAC CGG CGC CGC GAG AGC AAG CGC AAG AAG TCT 192 TTC CTG CTG TGC ATT GGC TGG CTG GCG CTC ACC GAC TTA GTG GGG CAG 240 CTC CTG ACC AGC CCG GTG GTC ATC CTC GTG TAC CTG TCA CAG CGA CGC 288 TGG GAG CAG CTC GAC CCA TCG GGG CGT CTG TGC ACC TTC TTC GGG CTA 336 ACC ATG ACA GTG TTC GGG CTA TCC TCG CTC CTG GTG GCC AGC GCC ATG 384 GCC GTG GAG CGC GCC CTG GCC ATC CGT GCG CCG CAC TGG TAT GCC AGC 432 CAC ATG AAG ACT CGC GCC ACG CCG GTA CTG CTG GGC GTG TGG CTG TCT 480 GTG CTC GCC TTC GCG CTG CTG CCG GTG CTG GGC GTG GGC CGC TAC AGC 528 GTG CAG TGG CCG GGC ACG TGG TGC TTC ATC AGC ACC GGG CCG GCG GGC 576 AAC GAG ACA GAC CCT GCG CGC GAG CCG GGC AGC GTG GCC TTT GCC TCC 624 GCC TTC GCC TGC TTG GGC TTG CTG GCT CTG GTG GTG ACC TTT GCC TGC 672 AAC CTG GCG ACC ATC AAA GCC CTG GTG TCC CGC TGT CGG GCC AAA GCC 720 GCC GTC TCG CAG TCC AGC GCC CAG TGG GGC AGA ATC ACC ACG GAG ACG 768 GCC ATC CAG CTC ATG GGG ATC ATG TGT GTG CTG TCC GTC TGT TGG TCG 816 CCG CTA TTG ATA ATG ATG TTG AAA ATG ATC TTC AAT CAG ATG TCG GTT 864 GAG CAA TGC AAG ACA CAG ATG GGA AAG GAG AAG GAG TGC AAT TCC TTT 912 CTA ATT GCA GTT CGC CTG GCT TCG CTG AAC CAG ATC TTG GAT CCC TGG 960 GTT TAT CTG CTG CTA AGA AAG ATC CTT CTT CGG AAG TTC TGC CAG ATC 1008 AGA GAC CAC ACC AAC TAT GCT TCC AGC TCC ACC TCC TTG CCC TGC CCA 1056 GGC TCC TCA GCC CTG ATG TGG AGT GAC CAG CTG GAA AGA
１０９５

【００２９】配列番号（ＳＥＱＩＤＮＯ）：4 配列の長さ(SEQUENCE LENGTH)：2035 配列の型(SEQUENCE TYPE)：nucleic acid 鎖の数(STRANDEDNESS)：single トポロジ−(TOPOLOGY)：linear 配列の種類(MOLECULE TYPE)：genomic DNA 配列： GAGAGCAGAG CCTGGGCTCC GGCTGTCCCC CAGTGCACTC TGCTGCTATC CCGCAGCTGA 60 GCCGGGAGGC TCCGGCCCCG TGCGCCCTAC CGTGGCCCCG CCACT ATG GCT AGC 114 Met Ala Ser 1 ATG TGG GCG CCG GAG CAC TCT GCT GAA GCG CAC AGC AAC CTG TCA AGT 162 Met Trp Ala Pro Glu His Ser Ala Glu Ala His Ser Asn Leu Ser Ser 5 10 15 ACT ACC GAC GAC TGC GGC TCC GTG TCC GTG GCC TTT CCC ATC ACC ATG 210 Thr Thr Asp Asp Cys Gly Ser Val Ser Val Ala Phe Pro Ile Thr Met 20 25 30 35 ATG GTC ACT GGC TTC GTG GGC AAC GCG CTG GCC ATG CTG CTC GTG TCG 258 Met Val Thr Gly Phe Val Gly Asn Ala Leu Ala Met Leu Leu Val Ser 40 45 50 CGC AGC TAC CGG CGC CGC GAG AGC AAG CGC AAG AAG TCT TTC CTG CTG 306 Arg Ser Tyr Arg Arg Arg Glu Ser Lys Arg Lys Lys Ser Phe Leu Leu 55 60 65 TGC ATT GGC TGG CTG GCG CTC ACC GAC TTA GTG GGG CAG CTC CTG ACC 354 Cys Ile Gly Trp Leu Ala Leu Thr Asp Leu Val Gly Gln Leu Leu Thr 70 75 80 AGC CCG GTG GTC ATC CTC GTG TAC CTG TCA CAG CGA CGC TGG GAG CAG 402 Ser Pro Val Val Ile Leu Val Tyr Leu Ser Gln Arg Arg Trp Glu Gln 85 90 95 CTC GAC CCA TCG GGG CGT CTG TGC ACC TTC TTC GGG CTA ACC ATG ACA 450 Leu Asp Pro Ser Gly Arg Leu Cys Thr Phe Phe Gly Leu Thr Met Thr 100 105 110 115 GTG TTC GGG CTA TCC TCG CTC CTG GTG GCC AGC GCC ATG GCC GTG GAG 498 Val Phe Gly Leu Ser Ser Leu Leu Val Ala Ser Ala Met Ala Val Glu 120 125 130 CGC GCC CTG GCC ATC CGT GCG CCG CAC TGG TAT GCC AGC CAC ATG AAG 546 Arg Ala Leu Ala Ile Arg Ala Pro His Trp Tyr Ala Ser His Met Lys 135 140 145 ACT CGC GCC ACG CCG GTA CTG CTG GGC GTG TGG CTG TCT GTG CTC GCC 594 Thr Arg Ala Thr Pro Val Leu Leu Gly Val Trp Leu Ser Val Leu Ala 150 155 160 TTC GCG CTG CTG CCG GTG CTG GGC GTG GGC CGC TAC AGC GTG CAG TGG 642 Phe Ala Leu Leu Pro Val Leu Gly Val Gly Arg Tyr Ser Val Gln Trp 165 170 175 CCG GGC ACG TGG TGC TTC ATC AGC ACC GGG CCG GCG GGC AAC GAG ACA 690 Pro Gly Thr Trp Cys Phe Ile Ser Thr Gly Pro Ala Gly Asn Glu Thr 180 185 190 195 GAC CCT GCG CGC GAG CCG GGC AGC GTG GCC TTT GCC TCC GCC TTC GCC 738 Asp Pro Ala Arg Glu Pro Gly Ser Val Ala Phe Ala Ser Ala Phe Ala 200 205 210 TGC TTG GGC TTG CTG GCT CTG GTG GTG ACC TTT GCC TGC AAC CTG GCG 786 Cys Leu Gly Leu Leu Ala Leu Val Val Thr Phe Ala Cys Asn Leu Ala 215 220 225 ACC ATC AAA GCC CTG GTG TCC CGC TGT CGG GCC AAA GCC GCC GTC TCG 834 Thr Ile Lys Ala Leu Val Ser Arg Cys Arg Ala Lys Ala Ala Val Ser 230 235 240 CAG TCC AGC GCC CAG TGG GGC AGA ATC ACC ACG GAG ACG GCC ATC CAG 882 Gln Ser Ser Ala Gln Trp Gly Arg Ile Thr Thr Glu Thr Ala Ile Gln 245 250 255 CTC ATG GGG ATC ATG TGT GTG CTG TCC GTC TGT TGG TCG CCG CTA TTG 930 Leu Met Gly Ile Met Cys Val Leu Ser Val Cys Trp Ser Pro Leu Leu 260 265 270 275 ATA ATG ATG TTG AAA ATG ATC TTC AAT CAG ATG TCG GTT GAG CAA TGC 978 Ile Met Met Leu Lys Met Ile Phe Asn Gln Met Ser Val Glu Gln Cys 280 285 290 AAG ACA CAG ATG GGA AAG GAG AAG GAG TGC AAT TCC TTT CTA ATT GCA 1026 Lys Thr Gln Met Gly Lys Glu Lys Glu Cys Asn Ser Phe Leu Ile Ala 295 300 305 GTT CGC CTG GCT TCG CTG AAC CAG ATC TTG GAT CCC TGG GTT TAT CTG 1074 Val Arg Leu Ala Ser Leu Asn Gln Ile Leu Asp Pro Trp Val Tyr Leu 310 315 320 CTG CTA AGA AAG ATC CTT CTT CGG AAG TTC TGC CAG ATG ATG AAC AAC 1122 Leu Leu Arg Lys Ile Leu Leu Arg Lys Phe Cys Gln Met Met Asn Asn 325 330 335 CTG AAG TGG ACT TTC ATT GCA GTA CCT GTT TCC CTG GGT CTG AGA ATT 1170 Leu Lys Trp Thr Phe Ile Ala Val Pro Val Ser Leu Gly Leu Arg Ile 340 345 350 355 TCT TCT CCC AGG GAA GGA TGACTGAGTA TTTTGGATTG TATCTTCTTT 1218 Ser Ser Pro Arg Glu Gly 360 TGGCCTCAAT TTTAAGTTTT CCTTGCCATT AAACACACCG AGACAAGCTT TCTTAGGATA 1278 ATCTGAGAGT CTGGTTGTTA GCTGGTTCCT GTGAAGACTG AAGACTCTGC ACTTGAGACG 1338 GGGGCAAGAC GACACAGAGC AGCATGGAGA GACTCAGTGC AGAAATATCT CCAGCCTCAG 1398 AACCTTTGTG GACATGGACA CCTTCATGTA TTGATAGTCT GACTCTTCTA AATAGGTCTG 1458 AAAAAGCAGC ATAAGTTTTT AAACAGTGAA GCATCAATGT GTTGAGAGCA AATGTTCATC 1548 TAATAAGCCA TGAGCCAAAC AAGACAAAAA GTCTACATGA GAGGCAAGAG AGATTCTGCA 1608 AAGGGTATTT GTGCCAAGAA GGTATACAGT ACCACAGAGT TGTGTCCTCA GTGAGAGTGG 1668 GAAATAAGTT TCTAATTTAA TTCTAATTAC TGGCTCCTCA GTAATTCAGG AATCGTGCCA 1728 TCATTTCCCT GCTTTTAAAG GGAGAAGTTT AGCTAAAGAC ACATTCCAGG TGTCACTAAC 1788 AGTTCCAAAG CTAGGTGACT AAATGTTCAG CTAGAGCTGT TAAAAGGAAA ACCAGCTAAT 1848 TATCATTCCA GTCCAATGCT ATTTTTGAAT TACTATCTAC TTAAGATTTC TCATAATTTG 1908 TGCTCAGGCA GCACAATAAA AAGGGGGGGG CAAAATTACT AAGTGACAGT TATTCTGCAT 1968 CTAAGTCTGT GACTTTTTTA TGAAATAAAA TGATTTTGTC TGTGTTGAAA TAAAAAAAAA 2028 AAAAAAA 2035

【００３０】配列番号(SEQ ID NO)：5 配列の長さ(SEQUENCE LENGTH)：361 配列の型(SEQUENCE TYPE)：amino acid トポロジ−(TOPOLOGY)：unknown 配列の種類(MOLECULE TYPE)：protein ハイポセティカル配列(HYPOTHTICAL SEQUENCE)：yes 配列： Met Ala Ser Met Trp Ala Pro Glu His Ser Ala Glu Ala His Ser Asn 1 5 10 15 Leu Ser Ser Thr Thr Asp Asp Cys Gly Ser Val Ser Val Ala Phe Pro 20 25 30 Ile Thr Met Met Val Thr Gly Phe Val Gly Asn Ala Leu Ala Met Leu 35 40 45 Leu Val Ser Arg Ser Tyr Arg Arg Arg Glu Ser Lys Arg Lys Lys Ser 50 55 60 Phe Leu Leu Cys Ile Gly Trp Leu Ala Leu Thr Asp Leu Val Gly Gln 65 70 75 80 Leu Leu Thr Ser Pro Val Val Ile Leu Val Tyr Leu Ser Gln Arg Arg 85 90 95 Trp Glu Gln Leu Asp Pro Ser Gly Arg Leu Cys Thr Phe Phe Gly Leu 100 105 110 Thr Met Thr Val Phe Gly Leu Ser Ser Leu Leu Val Ala Ser Ala Met 115 120 125 Ala Val Glu Arg Ala Leu Ala Ile Arg Ala Pro His Trp Tyr Ala Ser 130 135 140 His Met Lys Thr Arg Ala Thr Pro Val Leu Leu Gly Val Trp Leu Ser 145 150 155 160 Val Leu Ala Phe Ala Leu Leu Pro Val Leu Gly Val Gly Arg Tyr Ser 165 170 175 Val Gln Trp Pro Gly Thr Trp Cys Phe Ile Ser Thr Gly Pro Ala Gly 180 185 190 Asn Glu Thr Asp Pro Ala Arg Glu Pro Gly Ser Val Ala Phe Ala Ser 195 200 205 Ala Phe Ala Cys Leu Gly Leu Leu Ala Leu Val Val Thr Phe Ala Cys 210 215 220 Asn Leu Ala Thr Ile Lys Ala Leu Val Ser Arg Cys Arg Ala Lys Ala 225 230 235 240 Ala Val Ser Gln Ser Ser Ala Gln Trp Gly Arg Ile Thr Thr Glu Thr 245 250 255 Ala Ile Gln Leu Met Gly Ile Met Cys Val Leu Ser Val Cys Trp Ser 260 265 270 Pro Leu Leu Ile Met Met Leu Lys Met Ile Phe Asn Gln Met Ser Val 275 280 285 Glu Gln Cys Lys Thr Gln Met Gly Lys Glu Lys Glu Cys Asn Ser Phe 290 295 300 Leu Ile Ala Val Arg Leu Ala Ser Leu Asn Gln Ile Leu Asp Pro Trp 305 310 315 320 Val Tyr Leu Leu Leu Arg Lys Ile Leu Leu Arg Lys Phe Cys Gln Met 325 330 335 Met Asn Asn Leu Lys Trp Thr Phe Ile Ala Val Pro Val Ser Leu Gly 340 345 350 Leu Arg Ile Ser Ser Pro Arg Glu Gly 355 360

【００３１】配列番号(SEQ ID NO)：6 配列の長さ(SEQUENCE LENGTH)：1083 配列の型(SEQUENCE TYPE)：nucleic acid 鎖の数(STRANDEDNESS)：single トポロジ−(TOPOLOGY)：linear 配列の種類(MOLECULE TYPE)：genomic DNA 配列： ATG GCT AGC ATG TGG GCG CCG GAG CAC TCT GCT GAA GCG CAC AGC AAC 48 CTG TCA AGT ACT ACC GAC GAC TGC GGC TCC GTG TCC GTG GCC TTT CCC 96 ATC ACC ATG ATG GTC ACT GGC TTC GTG GGC AAC GCG CTG GCC ATG CTG 144 CTC GTG TCG CGC AGC TAC CGG CGC CGC GAG AGC AAG CGC AAG AAG TCT 192 TTC CTG CTG TGC ATT GGC TGG CTG GCG CTC ACC GAC TTA GTG GGG CAG 240 CTC CTG ACC AGC CCG GTG GTC ATC CTC GTG TAC CTG TCA CAG CGA CGC 288 TGG GAG CAG CTC GAC CCA TCG GGG CGT CTG TGC ACC TTC TTC GGG CTA 336 ACC ATG ACA GTG TTC GGG CTA TCC TCG CTC CTG GTG GCC AGC GCC ATG 384 GCC GTG GAG CGC GCC CTG GCC ATC CGT GCG CCG CAC TGG TAT GCC AGC 432 CAC ATG AAG ACT CGC GCC ACG CCG GTA CTG CTG GGC GTG TGG CTG TCT 480 GTG CTC GCC TTC GCG CTG CTG CCG GTG CTG GGC GTG GGC CGC TAC AGC 528 GTG CAG TGG CCG GGC ACG TGG TGC TTC ATC AGC ACC GGG CCG GCG GGC 576 AAC GAG ACA GAC CCT GCG CGC GAG CCG GGC AGC GTG GCC TTT GCC TCC 624 GCC TTC GCC TGC TTG GGC TTG CTG GCT CTG GTG GTG ACC TTT GCC TGC 672 AAC CTG GCG ACC ATC AAA GCC CTG GTG TCC CGC TGT CGG GCC AAA GCC 720 GCC GTC TCG CAG TCC AGC GCC CAG TGG GGC AGA ATC ACC ACG GAG ACG 768 GCC ATC CAG CTC ATG GGG ATC ATG TGT GTG CTG TCC GTC TGT TGG TCG 816 CCG CTA TTG ATA ATG ATG TTG AAA ATG ATC TTC AAT CAG ATG TCG GTT 864 GAG CAA TGC AAG ACA CAG ATG GGA AAG GAG AAG GAG TGC AAT TCC TTT 912 CTA ATT GCA GTT CGC CTG GCT TCG CTG AAC CAG ATC TTG GAT CCC TGG 960 GTT TAT CTG CTG CTA AGA AAG ATC CTT CTT CGG AAG TTC TGC CAG ATG 1008 ATG AAC AAC CTG AAG TGG ACT TTC ATT GCA GTA CCT GTT TCC CTG GGT 1056 CTG AGA ATT TCT TCT CCC AGG GAA GGA 1083

【００３２】配列番号(SEQ ID NO)：7 配列の長さ(SEQUENCE LENGTH)：2442 配列の型(SEQUENCE TYPE)：nucleic acid 鎖の数(STRANDEDNESS)：single トポロジ−(TOPOLOGY)：linear 配列の種類(MOLECULE TYPE)：genomic DNA 配列： AGCCTCTCTG GCTTTCCAAG CTTTTTTGAA AGCAAGATAC TCTGACCTCA GTTCCGGAAA 60 GTTGGCAGCC ACCGAGCCCC GGTTCCGAGA CAGCAAAAGC TTGACAAGTT CCGCACTGCG 120 TGGGAAGAGA CTG ATG GCT GAG GTT GGA GGT ACC ATT CCT AGA TCG AAC 169 Met Ala Glu Val Gly Gly Thr Ile Pro Arg Ser Asn 1 5 10 CGT GAG CTC CAA CGC TGT GTG TTA CTA ACC ACC ACC ATC ATG TCC ATC 217 Arg Glu Leu Gln Arg Cys Val Leu Leu Thr Thr Thr Ile Met Ser Ile 15 20 25 CCC GGA GTC AAC GCG TCC TTC TCC TCC ACT CCG GAG AGG CTG AAC AGC 265 Pro Gly Val Asn Ala Ser Phe Ser Ser Thr Pro Glu Arg Leu Asn Ser 30 35 40 CCG GTG ACC ATT CCC GCA GTG ATG TTC ATC TTC GGG GTG GTG GGC AAC 313 Pro Val Thr Ile Pro Ala Val Met Phe Ile Phe Gly Val Val Gly Asn 45 50 55 60 CTG GTG GCC ATC GTA GTA TTG TGC AAG TCG CGC AAG GAG CAG AAA GAG 361 Leu Val Ala Ile Val Val Leu Cys Lys Ser Arg Lys Glu Gln Lys Glu 65 70 75 ACG ACC TTT TAC ACT CTA GTA TGT GGG CTG GCT GTC ACT GAC CTT CTG 409 Thr Thr Phe Tyr Thr Leu Val Cys Gly Leu Ala Val Thr Asp Leu Leu 80 85 90 GGC ACC TTG TTG GTA AGC CCG GTG ACC ATC GCC ACA TAC ATG AAG GGC 457 Gly Thr Leu Leu Val Ser Pro Val Thr Ile Ala Thr Tyr Met Lys Gly 95 100 105 CAG TGG CCC GGA GAC CAG GCA CTG TGT GAC TAT AGC ACC TTC ATC CTA 505 Gln Trp Pro Gly Asp Gln Ala Leu Cys Asp Tyr Ser Thr Phe Ile Leu 110 115 120 CTT TTC TTC GGT CTG TCG GGT CTC AGC ATC ATC TGT GCC ATG AGC ATC 553 Leu Phe Phe Gly Leu Ser Gly Leu Ser Ile Ile Cys Ala Met Ser Ile 125 130 135 140 GAG CGC TAC CTG GCC ATC AAC CAC GCC TAC TTC TAC AGC CAC TAC GTG 601 Glu Arg Tyr Leu Ala Ile Asn His Ala Tyr Phe Tyr Ser His Tyr Val 145 150 155 GAC AAG CGG CTG GCC GGC CTC ACA CTC TTC GCC ATC TAT GCA TCT AAC 649 Asp Lys Arg Leu Ala Gly Leu Thr Leu Phe Ala Ile Tyr Ala Ser Asn 160 165 170 GTG CTG TTC TGC GCG CTG CCC AAC ATG GGC CTG GGC AGA TCC GAG CGG 697 Val Leu Phe Cys Ala Leu Pro Asn Met Gly Leu Gly Arg Ser Glu Arg 175 180 185 CAG TAC CCG GGC ACC TGG TGC TTC ATC GAC TGG ACC ACC AAC GTA ACG 745 Gln Tyr Pro Gly Thr Trp Cys Phe Ile Asp Trp Thr Thr Asn Val Thr 190 195 200 GCC TAC GCC GCC TTC TCT TAC ATG TAC GCC GGC TTC AGC TCC TTC CTC 793 Ala Tyr Ala Ala Phe Ser Tyr Met Tyr Ala Gly Phe Ser Ser Phe Leu 205 210 215 220 ATC CTT GCC ACC GTG CTC TGC AAC GTG CTG GTG TGC GGC GCG CTG CTC 841 Ile Leu Ala Thr Val Leu Cys Asn Val Leu Val Cys Gly Ala Leu Leu 225 230 235 CGC ATG CAC CGC CAG TTC ATG CGC CGC ACC TCG TTG GGC ACG GAG CAG 889 Arg Met His Arg Gln Phe Met Arg Arg Thr Ser Leu Gly Thr Glu Gln 240 245 250 CAC CAT GCG GCT GCC GCC GCC GCG GTA GCT TCG GTG GCC TGT CGG GGC 937 His His Ala Ala Ala Ala Ala Ala Val Ala Ser Val Ala Cys Arg Gly 255 260 265 CAC GCT GGG GCC TCC CCA GCC CTG CAG CGC CTC AGC GAC TTT CGC CGC 985 His Ala Gly Ala Ser Pro Ala Leu Gln Arg Leu Ser Asp Phe Arg Arg 270 275 280 CGC AGG AGT TTC CGG CGC ATC GCG GGT GCG GAG ATC CAG ATG GTC ATC 1033 Arg Arg Ser Phe Arg Arg Ile Ala Gly Ala Glu Ile Gln Met Val Ile 285 290 295 300 TTA CTC ATC GCC ACC TCT CTG GTG GTG CTC ATC TGC TCC ATT CCG CTC 1081 Leu Leu Ile Ala Thr Ser Leu Val Val Leu Ile Cys Ser Ile Pro Leu 305 310 315 GTG GTG CGA GTG TTC ATT AAC CAG TTA TAT CAG CCA AAC GTG GTG AAA 1129 Val Val Arg Val Phe Ile Asn Gln Leu Tyr Gln Pro Asn Val Val Lys 320 325 330 GAC ATC AGC AGA AAC CCA GAT TTG CAG GCC ATC AGG ATT GCT TCT GTG 1177 Asp Ile Ser Arg Asn Pro Asp Leu Gln Ala Ile Arg Ile Ala Ser Val 335 340 345 AAC CCC ATC CTG GAC CCC TGG ATT TAC ATC CTT CTT CGG AAG ACT GTG 1225 Asn Pro Ile Leu Asp Pro Trp Ile Tyr Ile Leu Leu Arg Lys Thr Val 350 355 360 CTC AGT AAA GCC ATA GAG AAG ATC AAG TGC CTC TTC TGC CGC ATT GGC 1273 Leu Ser Lys Ala Ile Glu Lys Ile Lys Cys Leu Phe Cys Arg Ile Gly 365 370 375 380 GGT TCC GGC AGA GAC AGC TCG GCC CAG CAC TGC TCA GAG AGT CGG AGG 1321 Gly Ser Gly Arg Asp Ser Ser Ala Gln His Cys Ser Glu Ser Arg Arg 385 390 395 ACA TCT TCC GCC ATG TCC GGC CAC TCT CGC TCC TTC CTC GCC CGG GAG 1369 Thr Ser Ser Ala Met Ser Gly His Ser Arg Ser Phe Leu Ala Arg Glu 400 405 410 TTA AAG GAG ATC AGC AGC ACG TCC CAG ACC CTC CTG TAC CTG CCA GAC 1417 Leu Lys Glu Ile Ser Ser Thr Ser Gln Thr Leu Leu Tyr Leu Pro Asp 415 420 425 CTG ACT GAA AGC AGC CTC GGA GGC AGG AAT TTG CTT CCA GGT TCG CAT 1465 Leu Thr Glu Ser Ser Leu Gly Gly Arg Asn Leu Leu Pro Gly Ser His 430 435 440 GGC ATG GGC CTG ACC CAA GCA GAC ACC ACC TCG CTG AGA ACT TTG CGA 1513 Gly Met Gly Leu Thr Gln Ala Asp Thr Thr Ser Leu Arg Thr Leu Arg 445 450 455 460 ATT TCC GAG ACC TCA GAC TCC TCC CAG GGC CAG GAC TCT GAG AGT GTC 1561 Ile Ser Glu Thr Ser Asp Ser Ser Gln Gly Gln Asp Ser Glu Ser Val 465 470 475 CTG TTG GTG GAT GAG GTT AGT GGG AGC CAC AGA GAG GAG CCT GCC TCT 1609 Leu Leu Val Asp Glu Val Ser Gly Ser His Arg Glu Glu Pro Ala Ser 480 485 490 AAA GGA AAC TCT CTG CAA GTC ACA TTC CCC AGT GAA ACT CTG AAA TTA 1657 Lys Gly Asn Ser Leu Gln Val Thr Phe Pro Ser Glu Thr Leu Lys Leu 495 500 505 TCT GAA AAA TGT ATA TAGTAGCTAA AGGGGGAATC TTATAAAATC CTGTGCAATA 1712 Ser Glu Lys Cys Ile 510 GACATACATA GCTGTACTCA GAAGGGCTGT CTTCATCTGG ACTCCCACTA GAGAACAGGC 1772 GAGCTCCTGA GGGCTCTCCA AGGCTGCAGA CTGAGGTCCT TGAGTGCCCA GGCTTGAAGC 1832 ACATTGGCTG TCATTCTGAT GTGACTCGAG ATTGCAGTTG CAACTTGGCA GCTTTTTTCT 1892 ACTGGACAGG AAGATGGCAG AAGCTACGCT ATTGTCATAG CAAAAGAGCT TTCTATTTGG 1952 CACATACCAG GGGTCCAGCT ACTGGAAGGG CTCTACCCCA AACTCTGAGG ACTACCTTAC 2012 AGCTGACTTA AGTGTCTCAC TAAAGCATGA AATGTGAATT TTTATTGTTG GAAATATAAT 2072 TTAAGGTATT TATGTTCTTC TCTGTGAGAA GGTTTATTGT TAATACAAGG TATAAAAAAC 2132 ACATGATATG CCCTCTCCTG CCAATATAAC CAGCTAATAT TGTCGATGTT ATTTTTTTTT 2192 TTCCATAAAC AAGTTCAGGC CAAAGTGTTG AAAACAGAGT GAAACTAATA TCTATAAAAT 2252 AGATATAAAT TTTTAAAATA GTTTAGTATC ATCAAAGAAA AAATAAGTAG TATTTAAGAT 2312 GTGAAAAATG AACAACCTAA AATATATTTT CCAAGCTATA TATAATAATG AAAAATAAAA 2372 ACATTACATT TATTTATCCA GAAAACTGTG ATTTTAGGAT TACCTAACAT TGCTGGTAAA 2432 TATTTTCAAC 2442

【００３３】配列番号(SEQ ID NO)：8 配列の長さ(SEQUENCE LENGTH)：513 配列の型(SEQUENCE TYPE)：amino acid トポロジ−(TOPOLOGY)：unknown 配列の種類(MOLECULE TYPE)：protein ハイポセティカル配列(HYPOTHTICAL SEQUENCE)：yes 配列： Met Ala Glu Val Gly Gly Thr Ile Pro Arg Ser Asn Arg Glu Leu Gln 1 5 10 15 Arg Cys Val Leu Leu Thr Thr Thr Ile Met Ser Ile Pro Gly Val Asn 20 25 30 Ala Ser Phe Ser Ser Thr Pro Glu Arg Leu Asn Ser Pro Val Thr Ile 35 40 45 Pro Ala Val Met Phe Ile Phe Gly Val Val Gly Asn Leu Val Ala Ile 50 55 60 Val Val Leu Cys Lys Ser Arg Lys Glu Gln Lys Glu Thr Thr Phe Tyr 65 70 75 80 Thr Leu Val Cys Gly Leu Ala Val Thr Asp Leu Leu Gly Thr Leu Leu 85 90 95 Val Ser Pro Val Thr Ile Ala Thr Tyr Met Lys Gly Gln Trp Pro Gly 100 105 110 Asp Gln Ala Leu Cys Asp Tyr Ser Thr Phe Ile Leu Leu Phe Phe Gly 115 120 125 Leu Ser Gly Leu Ser Ile Ile Cys Ala Met Ser Ile Glu Arg Tyr Leu 130 135 140 Ala Ile Asn His Ala Tyr Phe Tyr Ser His Tyr Val Asp Lys Arg Leu 145 150 155 160 Ala Gly Leu Thr Leu Phe Ala Ile Tyr Ala Ser Asn Val Leu Phe Cys 165 170 175 Ala Leu Pro Asn Met Gly Leu Gly Arg Ser Glu Arg Gln Tyr Pro Gly 180 185 190 Thr Trp Cys Phe Ile Asp Trp Thr Thr Asn Val Thr Ala Tyr Ala Ala 195 200 205 Phe Ser Tyr Met Tyr Ala Gly Phe Ser Ser Phe Leu Ile Leu Ala Thr 210 215 220 Val Leu Cys Asn Val Leu Val Cys Gly Ala Leu Leu Arg Met His Arg 225 230 235 240 Gln Phe Met Arg Arg Thr Ser Leu Gly Thr Glu Gln His His Ala Ala 245 250 255 Ala Ala Ala Ala Val Ala Ser Val Ala Cys Arg Gly His Ala Gly Ala 260 265 270 Ser Pro Ala Leu Gln Arg Leu Ser Asp Phe Arg Arg Arg Arg Ser Phe 275 280 285 Arg Arg Ile Ala Gly Ala Glu Ile Gln Met Val Ile Leu Leu Ile Ala 290 295 300 Thr Ser Leu Val Val Leu Ile Cys Ser Ile Pro Leu Val Val Arg Val 305 310 315 320 Phe Ile Asn Gln Leu Tyr Gln Pro Asn Val Val Lys Asp Ile Ser Arg 325 330 335 Asn Pro Asp Leu Gln Ala Ile Arg Ile Ala Ser Val Asn Pro Ile Leu 340 345 350 Asp Pro Trp Ile Tyr Ile Leu Leu Arg Lys Thr Val Leu Ser Lys Ala 355 360 365 Ile Glu Lys Ile Lys Cys Leu Phe Cys Arg Ile Gly Gly Ser Gly Arg 370 375 380 Asp Ser Ser Ala Gln His Cys Ser Glu Ser Arg Arg Thr Ser Ser Ala 385 390 395 400 Met Ser Gly His Ser Arg Ser Phe Leu Ala Arg Glu Leu Lys Glu Ile 405 410 415 Ser Ser Thr Ser Gln Thr Leu Leu Tyr Leu Pro Asp Leu Thr Glu Ser 420 425 430 Ser Leu Gly Gly Arg Asn Leu Leu Pro Gly Ser His Gly Met Gly Leu 435 440 445 Thr Gln Ala Asp Thr Thr Ser Leu Arg Thr Leu Arg Ile Ser Glu Thr 450 455 460 Ser Asp Ser Ser Gln Gly Gln Asp Ser Glu Ser Val Leu Leu Val Asp 465 470 475 480 Glu Val Ser Gly Ser His Arg Glu Glu Pro Ala Ser Lys Gly Asn Ser 485 490 495 Leu Gln Val Thr Phe Pro Ser Glu Thr Leu Lys Leu Ser Glu Lys Cys 500 505 510 Ile

【００３４】配列番号(SEQ ID NO)：９配列の長さ（ＳＥＱＵＥＮＣＥＬＥＮＧＴＨ）：1539 配列の型(SEQUENCE TYPE)：nucleic acid 鎖の数(STRANDEDNESS)：single トポロジ−(TOPOLOGY)：linear 配列の種類(MOLECULE TYPE)：genomic DNA 配列： ATG GCT GAG GTT GGA GGT ACC ATT CCT AGA TCG AAC CGT GAG CTC CAA 48 CGC TGT GTG TTA CTA ACC ACC ACC ATC ATG TCC ATC CCC GGA GTC AAC 96 GCG TCC TTC TCC TCC ACT CCG GAG AGG CTG AAC AGC CCG GTG ACC ATT 144 CCC GCA GTG ATG TTC ATC TTC GGG GTG GTG GGC AAC CTG GTG GCC ATC 192 GTA GTA TTG TGC AAG TCG CGC AAG GAG CAG AAA GAG ACG ACC TTT TAC 240 ACT CTA GTA TGT GGG CTG GCT GTC ACT GAC CTT CTG GGC ACC TTG TTG 288 GTA AGC CCG GTG ACC ATC GCC ACA TAC ATG AAG GGC CAG TGG CCC GGA 336 GAC CAG GCA CTG TGT GAC TAT AGC ACC TTC ATC CTA CTT TTC TTC GGT 384 CTG TCG GGT CTC AGC ATC ATC TGT GCC ATG AGC ATC GAG CGC TAC CTG 432 GCC ATC AAC CAC GCC TAC TTC TAC AGC CAC TAC GTG GAC AAG CGG CTG 480 GCC GGC CTC ACA CTC TTC GCC ATC TAT GCA TCT AAC GTG CTG TTC TGC 528 GCG CTG CCC AAC ATG GGC CTG GGC AGA TCC GAG CGG CAG TAC CCG GGC 576 ACC TGG TGC TTC ATC GAC TGG ACC ACC AAC GTA ACG GCC TAC GCC GCC 624 TTC TCT TAC ATG TAC GCC GGC TTC AGC TCC TTC CTC ATC CTT GCC ACC 672 GTG CTC TGC AAC GTG CTG GTG TGC GGC GCG CTG CTC CGC ATG CAC CGC 720 CAG TTC ATG CGC CGC ACC TCG TTG GGC ACG GAG CAG CAC CAT GCG GCT 768 GCC GCC GCC GCG GTA GCT TCG GTG GCC TGT CGG GGC CAC GCT GGG GCC 816 TCC CCA GCC CTG CAG CGC CTC AGC GAC TTT CGC CGC CGC AGG AGT TTC 864 CGG CGC ATC GCG GGT GCG GAG ATC CAG ATG GTC ATC TTA CTC ATC GCC 912 ACC TCT CTG GTG GTG CTC ATC TGC TCC ATT CCG CTC GTG GTG CGA GTG 960 TTC ATT AAC CAG TTA TAT CAG CCA AAC GTG GTG AAA GAC ATC AGC AGA 1008 AAC CCA GAT TTG CAG GCC ATC AGG ATT GCT TCT GTG AAC CCC ATC CTG 1056 GAC CCC TGG ATT TAC ATC CTT CTT CGG AAG ACT GTG CTC AGT AAA GCC 1104 ATA GAG AAG ATC AAG TGC CTC TTC TGC CGC ATT GGC GGT TCC GGC AGA 1152 GAC AGC TCG GCC CAG CAC TGC TCA GAG AGT CGG AGG ACA TCT TCC GCC 1200 ATG TCC GGC CAC TCT CGC TCC TTC CTC GCC CGG GAG TTA AAG GAG ATC 1248 AGC AGC ACG TCC CAG ACC CTC CTG TAC CTG CCA GAC CTG ACT GAA AGC 1296 AGC CTC GGA GGC AGG AAT TTG CTT CCA GGT TCG CAT GGC ATG GGC CTG 1344 ACC CAA GCA GAC ACC ACC TCG CTG AGA ACT TTG CGA ATT TCC GAG ACC 1392 TCA GAC TCC TCC CAG GGC CAG GAC TCT GAG AGT GTC CTG TTG GTG GAT 1440 GAG GTT AGT GGG AGC CAC AGA GAG GAG CCT GCC TCT AAA GGA AAC TCT 1488 CTG CAA GTC ACA TTC CCC AGT GAA ACT CTG AAA TTA TCT GAA AAA TGT 1536 ATA 1539

Ａ

【図面の簡単な説明】

【図１】ＰＧＥ₂レセプターをコードする遺伝子を含有
するクローン(ＭＰ６６０)の塩基配列およびそれから推
定されるアミノ酸配列（配列番号：１）を示す。

【図２】ＰＧＥ₂レセプターへの〔³Ｈ〕ＰＧＥ₂の結合
に対する種々のリガンドの阻害活性を示す。

【図３】ＰＧＥ₂レセプターを発現しているＣＨＯ細胞
のｃＡＭＰ合成に対する種々のリガンドの阻害活性を示
す。

【図４】ＰＧＥ₂レセプターをコードする遺伝子を含有
するクローン（ＭＰ６５３）の塩基配列およびそれから
推定されるアミノ酸配列（配列番号：４）を示す。

【図５】クローンＭＰ６６０とＭＰ６５３の関係の模式
図を示す。白抜きの箱は２つの共通する塩基配列を、灰
色の箱はαペプチドをコードする配列を、斜線の入った
箱はβペプチドをコードする配列をそれぞれ示す。また
膜貫通ドメインはストライプの入った箱で表す。

【図６】ＰＧＥ₂レセプターをコードする遺伝子を含有
するクローン（ＭＰ４１２）の塩基配列およびそれから
推定されるアミノ酸配列（配列番号：７）を示す。

【図７】ＰＧＥ₂レセプター（ＥＰ₂）への〔³Ｈ〕ＰＧ
Ｅ₂の結合に対する種々のリガンドの阻害活性を示す。

【図８】ＰＧＥ₂レセプター（ＥＰ₂）への〔³Ｈ〕ＰＧ
Ｅ₂の結合に対する種々のリガンドの阻害活性を示す。

【図９】ＰＧＥ₂刺激によるＰＧＥ₂レセプター（Ｅ
Ｐ₂）を発現または発現していないＣＯＳ−１細胞内の
ｃＡＭＰ含量を示す。

【符号の説明】〔図１〕のＩ〜VII、★および●は、それぞれ膜貫通ド
メイン、細胞外ドメインのＮ−グリコシレーション部
位、ｃＡＭＰ依存蛋白リン酸化酵素によるリン酸化部位
を示す。〔図２〕のａにおいて、○、●、□を黒く塗った印、△
および□は、それぞれＰＧＥ₂、ＰＧＥ₁、iloprost、Ｐ
ＧＦ_2αおよびＰＧＤ₂を示す。〔図２〕のｂにおいて、▲、●、△および○は、それぞ
れＭ＆Ｂ２８,７６７、ＧＲ６３７９９Ｘ、butaprostお
よびＳＣ−１９２２０を示す。〔図３〕の●および□は、それぞれＰＧＥ₂およびＭ＆
Ｂ２８,７６７を示す。〔図４〕のＩ〜VIIおよび★は、それぞれ膜貫通ドメイ
ンおよびストップコドンの位置示す。〔図６〕のＩ〜VII、★および●は、それぞれ膜貫通ド
メイン、細胞外ドメインのＮ−グリコシレーション部位
およびｃＡＭＰ依存蛋白リン酸化酵素によるリン酸化部
位を示す。〔図７〕の○、●、□を黒く塗った印、△および□は、
それぞれＰＧＥ₂、ＰＧＥ₁、iloprost、ＰＧＦ_2αおよ
びＰＧＤ₂を示す。〔図８〕の●、△を黒く塗った印、□、○および△は、
それぞれmisoprostol、Ｍ＆Ｂ２８,７６７、Sulproston
e、ＳＣ−１９２２０およびbutaprostを示す。〔図９〕の●および○は、それぞれＭＰ４１２をトラン
スフェクトしたＣＯＳ−１細胞およびトランスフェクト
していないＣＯＳ−１細胞を示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩＣ１２Ｒ 1:91）Ｃ１２Ｎ 15/00 Ａ (72)発明者成宮周京都府京都市西京区御陵大枝山５−９− 17 (56)参考文献ＷａｔａｎａｂｅＴ．，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ，，1991年，Ｖｏｌ．1074，398−405 ＡｔｓｕｓｈｉＩｒｉｅｅｔａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，1994年，Ｖｏｌ．224，161−166 (58)調査した分野(Int.Cl.⁷，ＤＢ名) ＰｕｂＭｅｄＧｅｎＢａｎｋ／ＥＭＢＬ／ＤＤＢＪ／ＧｅｎｅＳｅｑＳｗｉｓｓＰｒｏｔ／ＰＩＲ／ＧｅｎｅＳｅｑ

Claims

(57)【特許請求の範囲】

【請求項１】式 Met Ala Ser Met Trp Ala Pro Glu His Ser Ala Glu Ala His Ser Asn Leu Ser Ser Thr Thr Asp Asp Cys Gly Ser Val Ser Val Ala Phe Pro Ile Thr Met Met Val Thr Gly Phe Val Gly Asn Ala Leu Ala Met Leu Leu Val Ser Arg Ser Tyr Arg Arg Arg Glu Ser Lys Arg Lys Lys Ser Phe Leu Leu Cys Ile Gly Trp Leu Ala Leu Thr Asp Leu Val Gly Gln Leu Leu Thr Ser Pro Val Val Ile Leu Val Tyr Leu Ser Gln Arg Arg Trp Glu Gln Leu Asp Pro Ser Gly Arg Leu Cys Thr Phe Phe Gly Leu Thr Met Thr Val Phe Gly Leu Ser Ser Leu Leu Val Ala Ser Ala Met Ala Val Glu Arg Ala Leu Ala Ile Arg Ala Pro His Trp Tyr Ala Ser His Met Lys Thr Arg Ala Thr Pro Val Leu Leu Gly Val Trp Leu Ser Val Leu Ala Phe Ala Leu Leu Pro Val Leu Gly Val Gly Arg Tyr Ser Val Gln Trp Pro Gly Thr Trp Cys Phe Ile Ser Thr Gly Pro Ala Gly Asn Glu Thr Asp Pro Ala Arg Glu Pro Gly Ser Val Ala Phe Ala Ser Ala Phe Ala Cys Leu Gly Leu Leu Ala Leu Val Val Thr Phe Ala Cys Asn Leu Ala Thr Ile Lys Ala Leu Val Ser Arg Cys Arg Ala Lys Ala Ala Val Ser Gln Ser Ser Ala Gln Trp Gly Arg Ile Thr Thr Glu Thr Ala Ile Gln Leu Met Gly Ile Met Cys Val Leu Ser Val Cys Trp Ser Pro Leu Leu Ile Met Met Leu Lys Met Ile Phe Asn Gln Met Ser Val Glu Gln Cys Lys Thr Gln Met Gly Lys Glu Lys Glu Cys Asn Ser Phe Leu Ile Ala Val Arg Leu Ala Ser Leu Asn Gln Ile Leu Asp Pro Trp Val Tyr Leu Leu Leu Arg Lys Ile Leu Leu Arg Lys Phe Cys Gln Ile Arg Asp His Thr Asn Tyr Ala Ser Ser Ser Thr Ser Leu Pro Cys Pro Gly Ser Ser Ala Leu Met Trp Ser Asp Gln Leu Glu Arg で表されるアミノ酸配列、または当該アミノ酸配列にお
いて１乃至数個のアミノ酸が欠失、置換または付加され
たアミノ酸配列からなることを特徴とするプロスタグラ
ンジンＥ受容体。
【請求項２】式 Met Ala Ser Met Trp Ala Pro Glu His Ser Ala Glu Ala His Ser Asn Leu Ser Ser Thr Thr Asp Asp Cys Gly Ser Val Ser Val Ala Phe Pro Ile Thr Met Met Val Thr Gly Phe Val Gly Asn Ala Leu Ala Met Leu Leu Val Ser Arg Ser Tyr Arg Arg Arg Glu Ser Lys Arg Lys Lys Ser Phe Leu Leu Cys Ile Gly Trp Leu Ala Leu Thr Asp Leu Val Gly Gln Leu Leu Thr Ser Pro Val Val Ile Leu Val Tyr Leu Ser Gln Arg Arg Trp Glu Gln Leu Asp Pro Ser Gly Arg Leu Cys Thr Phe Phe Gly Leu Thr Met Thr Val Phe Gly Leu Ser Ser Leu Leu Val Ala Ser Ala Met Ala Val Glu Arg Ala Leu Ala Ile Arg Ala Pro His Trp Tyr Ala Ser His Met Lys Thr Arg Ala Thr Pro Val Leu Leu Gly Val Trp Leu Ser Val Leu Ala Phe Ala Leu Leu Pro Val Leu Gly Val Gly Arg Tyr Ser Val Gln Trp Pro Gly Thr Trp Cys Phe Ile Ser Thr Gly Pro Ala Gly Asn Glu Thr Asp Pro Ala Arg Glu Pro Gly Ser Val Ala Phe Ala Ser Ala Phe Ala Cys Leu Gly Leu Leu Ala Leu Val Val Thr Phe Ala Cys Asn Leu Ala Thr Ile Lys Ala Leu Val Ser Arg Cys Arg Ala Lys Ala Ala Val Ser Gln Ser Ser Ala Gln Trp Gly Arg Ile Thr Thr Glu Thr Ala Ile Gln Leu Met Gly Ile Met Cys Val Leu Ser Val Cys Trp Ser Pro Leu Leu Ile Met Met Leu Lys Met Ile Phe Asn Gln Met Ser Val Glu Gln Cys Lys Thr Gln Met Gly Lys Glu Lys Glu Cys Asn Ser Phe Leu Ile Ala Val Arg Leu Ala Ser Leu Asn Gln Ile Leu Asp Pro Trp Val Tyr Leu Leu Leu Arg Lys Ile Leu Leu Arg Lys Phe Cys Gln Met Met Asn Asn Leu Lys Trp Thr Phe Ile Ala Val Pro Val Ser Leu Gly Leu Arg Ile Ser Ser Pro Arg Glu Gly で表されるアミノ酸配列、または当該アミノ酸配列にお
いて１乃至数個のアミノ酸が欠失、置換または付加され
たアミノ酸配列からなることを特徴とするプロスタグラ
ンジンＥ受容体。
【請求項３】式 Met Ala Glu Val Gly Gly Thr Ile Pro Arg Ser Asn Arg Glu Leu Gln Arg Cys Val Leu Leu Thr Thr Thr Ile Met Ser Ile Pro Gly Val Asn Ala Ser Phe Ser Ser Thr Pro Glu Arg Leu Asn Ser Pro Val Thr Ile Pro Ala Val Met Phe Ile Phe Gly Val Val Gly Asn Leu Val Ala Ile Val Val Leu Cys Lys Ser Arg Lys Glu Gln Lys Glu Thr Thr Phe Tyr Thr Leu Val Cys Gly Leu Ala Val Thr Asp Leu Leu Gly Thr Leu Leu Val Ser Pro Val Thr Ile Ala Thr Tyr Met Lys Gly Gln Trp Pro Gly Asp Gln Ala Leu Cys Asp Tyr Ser Thr Phe Ile Leu Leu Phe Phe Gly Leu Ser Gly Leu Ser Ile Ile Cys Ala Met Ser Ile Glu Arg Tyr Leu Ala Ile Asn His Ala Tyr Phe Tyr Ser His Tyr Val Asp Lys Arg Leu Ala Gly Leu Thr Leu Phe Ala Ile Tyr Ala Ser Asn Val Leu Phe Cys Ala Leu Pro Asn Met Gly Leu Gly Arg Ser Glu Arg Gln Tyr Pro Gly Thr Trp Cys Phe Ile Asp Trp Thr Thr Asn Val Thr Ala Tyr Ala Ala Phe Ser Tyr Met Tyr Ala Gly Phe Ser Ser Phe Leu Ile Leu Ala Thr Val Leu Cys Asn Val Leu Val Cys Gly Ala Leu Leu Arg Met His Arg Gln Phe Met Arg Arg Thr Ser Leu Gly Thr Glu Gln His His Ala Ala Ala Ala Ala Ala Val Ala Ser Val Ala Cys Arg Gly His Ala Gly Ala Ser Pro Ala Leu Gln Arg Leu Ser Asp Phe Arg Arg Arg Arg Ser Phe Arg Arg Ile Ala Gly Ala Glu Ile Gln Met Val Ile Leu Leu Ile Ala Thr Ser Leu Val Val Leu Ile Cys Ser Ile Pro Leu Val Val Arg Val Phe Ile Asn Gln Leu Tyr Gln Pro Asn Val Val Lys Asp Ile Ser Arg Asn Pro Asp Leu Gln Ala Ile Arg Ile Ala Ser Val Asn Pro Ile Leu Asp Pro Trp Ile Tyr Ile Leu Leu Arg Lys Thr Val Leu Ser Lys Ala Ile Glu Lys Ile Lys Cys Leu Phe Cys Arg Ile Gly Gly Ser Gly Arg Asp Ser Ser Ala Gln His Cys Ser Glu Ser Arg Arg Thr Ser Ser Ala Met Ser Gly His Ser Arg Ser Phe Leu Ala Arg Glu Leu Lys Glu Ile Ser Ser Thr Ser Gln Thr Leu Leu Tyr Leu Pro Asp Leu Thr Glu Ser Ser Leu Gly Gly Arg Asn Leu Leu Pro Gly Ser His Gly Met Gly Leu Thr Gln Ala Asp Thr Thr Ser Leu Arg Thr Leu Arg Ile Ser Glu Thr Ser Asp Ser Ser Gln Gly Gln Asp Ser Glu Ser Val Leu Leu Val Asp Glu Val Ser Gly Ser His Arg Glu Glu Pro Ala Ser Lys Gly Asn Ser Leu Gln Val Thr Phe Pro Ser Glu Thr Leu Lys Leu Ser Glu Lys Cys Ile で表されるアミノ酸配列、または当該アミノ酸配列にお
いて１乃至数個のアミノ酸が欠失、置換または付加され
たアミノ酸配列からなることを特徴とするプロスタグラ
ンジンＥ受容体。
【請求項４】プロスタグランジンＥが、プロスタグラ
ンジンＥ_２である請求項１〜３に記載のプロスタグラン
ジンＥ受容体。
【請求項５】式 Met Ala Ser Met Trp Ala Pro Glu His Ser Ala Glu Ala His Ser Asn Leu Ser Ser Thr Thr Asp Asp Cys Gly Ser Val Ser Val Ala Phe Pro Ile Thr Met Met Val Thr Gly Phe Val Gly Asn Ala Leu Ala Met Leu Leu Val Ser Arg Ser Tyr Arg Arg Arg Glu Ser Lys Arg Lys Lys Ser Phe Leu Leu Cys Ile Gly Trp Leu Ala Leu Thr Asp Leu Val Gly Gln Leu Leu Thr Ser Pro Val Val Ile Leu Val Tyr Leu Ser Gln Arg Arg Trp Glu Gln Leu Asp Pro Ser Gly Arg Leu Cys Thr Phe Phe Gly Leu Thr Met Thr Val Phe Gly Leu Ser Ser Leu Leu Val Ala Ser Ala Met Ala Val Glu Arg Ala Leu Ala Ile Arg Ala Pro His Trp Tyr Ala Ser His Met Lys Thr Arg Ala Thr Pro Val Leu Leu Gly Val Trp Leu Ser Val Leu Ala Phe Ala Leu Leu Pro Val Leu Gly Val Gly Arg Tyr Ser Val Gln Trp Pro Gly Thr Trp Cys Phe Ile Ser Thr Gly Pro Ala Gly Asn Glu Thr Asp Pro Ala Arg Glu Pro Gly Ser Val Ala Phe Ala Ser Ala Phe Ala Cys Leu Gly Leu Leu Ala Leu Val Val Thr Phe Ala Cys Asn Leu Ala Thr Ile Lys Ala Leu Val Ser Arg Cys Arg Ala Lys Ala Ala Val Ser Gln Ser Ser Ala Gln Trp Gly Arg Ile Thr Thr Glu Thr Ala Ile Gln Leu Met Gly Ile Met Cys Val Leu Ser Val Cys Trp Ser Pro Leu Leu Ile Met Met Leu Lys Met Ile Phe Asn Gln Met Ser Val Glu Gln Cys Lys Thr Gln Met Gly Lys Glu Lys Glu Cys Asn Ser Phe Leu Ile Ala Val Arg Leu Ala Ser Leu Asn Gln Ile Leu Asp Pro Trp Val Tyr Leu Leu Leu Arg Lys Ile Leu Leu Arg Lys Phe Cys Gln で表されるアミノ酸配列、または当該アミノ酸配列にお
いて１乃至数個のアミノ酸が欠失、置換または付加され
たアミノ酸配列からなり、プロスタグランジンＥと特異
的な結合性を示すことを特徴とする蛋白質。
【請求項６】プロスタグランジンＥが、プロスタグラ
ンジンＥ_２である請求項５に記載の蛋白質。
【請求項７】請求項１に記載のプロスタグランジンＥ
受容体をコードする遺伝子を含有する組み換えＤＮＡ。
【請求項８】遺伝子が、式 ATG GCT AGC ATG TGG GCG CCG GAG CAC TCT GCT GAA GCG CAC AGC AAC CTG TCA AGT ACT ACC GAC GAC TGC GGC TCC GTG TCC GTG GCC TTT CCC ATC ACC ATG ATG GTC ACT GGC TTC GTG GGC AAC GCG CTG GCC ATG CTG CTC GTG TCG CGC AGC TAC CGG CGC CGC GAG AGC AAG CGC AAG AAG TCT TTC CTG CTG TGC ATT GGC TGG CTG GCG CTC ACC GAC TTA GTG GGG CAG CTC CTG ACC AGC CCG GTG GTC ATC CTC GTG TAC CTG TCA CAG CGA CGC TGG GAG CAG CTC GAC CCA TCG GGG CGT CTG TGC ACC TTC TTC GGG CTA ACC ATG ACA GTG TTC GGG CTA TCC TCG CTC CTG GTG GCC AGC GCC ATG GCC GTG GAG CGC GCC CTG GCC ATC CGT GCG CCG CAC TGG TAT GCC AGC CAC ATG AAG ACT CGC GCC ACG CCG GTA CTG CTG GGC GTG TGG CTG TCT GTG CTC GCC TTC GCG CTG CTG CCG GTG CTG GGC GTG GGC CGC TAC AGC GTG CAG TGG CCG GGC ACG TGG TGC TTC ATC AGC ACC GGG CCG GCG GGC AAC GAG ACA GAC CCT GCG CGC GAG CCG GGC AGC GTG GCC TTT GCC TCC GCC TTC GCC TGC TTG GGC TTG CTG GCT CTG GTG GTG ACC TTT GCC TGC AAC CTG GCG ACC ATC AAA GCC CTG GTG TCC CGC TGT CGG GCC AAA GCC GCC GTC TCG CAG TCC AGC GCC CAG TGG GGC AGA ATC ACC ACG GAG ACG GCC ATC CAG CTC ATG GGG ATC ATG TGT GTG CTG TCC GTC TGT TGG TCG CCG CTA TTG ATA ATG ATG TTG AAA ATG ATC TTC AAT CAG ATG TCG GTT GAG CAA TGC AAG ACA CAG ATG GGA AAG GAG AAG GAG TGC AAT TCC TTT CTA ATT GCA GTT CGC CTG GCT TCG CTG AAC CAG ATC TTG GAT CCC TGG GTT TAT CTG CTG CTA AGA AAG ATC CTT CTT CGG AAG TTC TGC CAG ATC AGA GAC CAC ACC AAC TAT GCT TCC AGC TCC ACC TCC TTG CCC TGC CCA GGC TCC TCA GCC CTG ATG TGG AGT GAC CAG CTG GAA AGA で表される塩基配列を有するＤＮＡである請求項７記載
の組み換えＤＮＡ。
【請求項９】請求項２に記載のプロスタグランジンＥ
受容体をコードする遺伝子を含有する組み換えＤＮＡ。
【請求項１０】遺伝子が、式 ATG GCT AGC ATG TGG GCG CCG GAG CAC TCT GCT GAA GCG CAC AGC AAC CTG TCA AGT ACT ACC GAC GAC TGC GGC TCC GTG TCC GTG GCC TTT CCC ATC ACC ATG ATG GTC ACT GGC TTC GTG GGC AAC GCG CTG GCC ATG CTG CTC GTG TCG CGC AGC TAC CGG CGC CGC GAG AGC AAG CGC AAG AAG TCT TTC CTG CTG TGC ATT GGC TGG CTG GCG CTC ACC GAC TTA GTG GGG CAG CTC CTG ACC AGC CCG GTG GTC ATC CTC GTG TAC CTG TCA CAG CGA CGC TGG GAG CAG CTC GAC CCA TCG GGG CGT CTG TGC ACC TTC TTC GGG CTA ACC ATG ACA GTG TTC GGG CTA TCC TCG CTC CTG GTG GCC AGC GCC ATG GCC GTG GAG CGC GCC CTG GCC ATC CGT GCG CCG CAC TGG TAT GCC AGC CAC ATG AAG ACT CGC GCC ACG CCG GTA CTG CTG GGC GTG TGG CTG TCT GTG CTC GCC TTC GCG CTG CTG CCG GTG CTG GGC GTG GGC CGC TAC AGC GTG CAG TGG CCG GGC ACG TGG TGC TTC ATC AGC ACC GGG CCG GCG GGC AAC GAG ACA GAC CCT GCG CGC GAG CCG GGC AGC GTG GCC TTT GCC TCC GCC TTC GCC TGC TTG GGC TTG CTG GCT CTG GTG GTG ACC TTT GCC TGC AAC CTG GCG ACC ATC AAA GCC CTG GTG TCC CGC TGT CGG GCC AAA GCC GCC GTC TCG CAG TCC AGC GCC CAG TGG GGC AGA ATC ACC ACG GAG ACG GCC ATC CAG CTC ATG GGG ATC ATG TGT GTG CTG TCC GTC TGT TGG TCG CCG CTA TTG ATA ATG ATG TTG AAA ATG ATC TTC AAT CAG ATG TCG GTT GAG CAA TGC AAG ACA CAG ATG GGA AAG GAG AAG GAG TGC AAT TCC TTT CTA ATT GCA GTT CGC CTG GCT TCG CTG AAC CAG ATC TTG GAT CCC TGG GTT TAT CTG CTG CTA AGA AAG ATC CTT CTT CGG AAG TTC TGC CAG ATG ATG AAC AAC CTG AAG TGG ACT TTC ATT GCA GTA CCT GTT TCC CTG GGT CTG AGA ATT TCT TCT CCC AGG GAA GGA で表される塩基配列を有するＤＮＡである請求項９記載
の組み換えＤＮＡ。
【請求項１１】請求項３に記載のプロスタグランジン
Ｅ受容体をコードする遺伝子を含有する組み換えＤＮ
Ａ。
【請求項１２】遺伝子が、式 ATG GCT GAG GTT GGA GGT ACC ATT CCT AGA TCG AAC CGT GAG CTC CAA CGC TGT GTG TTA CTA ACC ACC ACC ATC ATG TCC ATC CCC GGA GTC AAC GCG TCC TTC TCC TCC ACT CCG GAG AGG CTG AAC AGC CCG GTG ACC ATT CCC GCA GTG ATG TTC ATC TTC GGG GTG GTG GGC AAC CTG GTG GCC ATC GTA GTA TTG TGC AAG TCG CGC AAG GAG CAG AAA GAG ACG ACC TTT TAC ACT CTA GTA TGT GGG CTG GCT GTC ACT GAC CTT CTG GGC ACC TTG TTG GTA AGC CCG GTG ACC ATC GCC ACA TAC ATG AAG GGC CAG TGG CCC GGA GAC CAG GCA CTG TGT GAC TAT AGC ACC TTC ATC CTA CTT TTC TTC GGT CTG TCG GGT CTC AGC ATC ATC TGT GCC ATG AGC ATC GAG CGC TAC CTG GCC ATC AAC CAC GCC TAC TTC TAC AGC CAC TAC GTG GAC AAG CGG CTG GCC GGC CTC ACA CTC TTC GCC ATC TAT GCA TCT AAC GTG CTG TTC TGC GCG CTG CCC AAC ATG GGC CTG GGC AGA TCC GAG CGG CAG TAC CCG GGC ACC TGG TGC TTC ATC GAC TGG ACC ACC AAC GTA ACG GCC TAC GCC GCC TTC TCT TAC ATG TAC GCC GGC TTC AGC TCC TTC CTC ATC CTT GCC ACC GTG CTC TGC AAC GTG CTG GTG TGC GGC GCG CTG CTC CGC ATG CAC CGC CAG TTC ATG CGC CGC ACC TCG TTG GGC ACG GAG CAG CAC CAT GCG GCT GCC GCC GCC GCG GTA GCT TCG GTG GCC TGT CGG GGC CAC GCT GGG GCC TCC CCA GCC CTG CAG CGC CTC AGC GAC TTT CGC CGC CGC AGG AGT TTC CGG CGC ATC GCG GGT GCG GAG ATC CAG ATG GTC ATC TTA CTC ATC GCC ACC TCT CTG GTG GTG CTC ATC TGC TCC ATT CCG CTC GTG GTG CGA GTG TTC ATT AAC CAG TTA TAT CAG CCA AAC GTG GTG AAA GAC ATC AGC AGA AAC CCA GAT TTG CAG GCC ATC AGG ATT GCT TCT GTG AAC CCC ATC CTG GAC CCC TGG ATT TAC ATC CTT CTT CGG AAG ACT GTG CTC AGT AAA GCC ATA GAG AAG ATC AAG TGC CTC TTC TGC CGC ATT GGC GGT TCC GGC AGA GAC AGC TCG GCC CAG CAC TGC TCA GAG AGT CGG AGG ACA TCT TCC GCC ATG TCC GGC CAC TCT CGC TCC TTC CTC GCC CGG GAG TTA AAG GAG ATC AGC AGC ACG TCC CAG ACC CTC CTG TAC CTG CCA GAC CTG ACT GAA AGC AGC CTC GGA GGC AGG AAT TTG CTT CCA GGT TCG CAT GGC ATG GGC CTG ACC CAA GCA GAC ACC ACC TCG CTG AGA ACT TTG CGA ATT TCC GAG ACC TCA GAC TCC TCC CAG GGC CAG GAC TCT GAG AGT GTC CTG TTG GTG GAT GAG GTT AGT GGG AGC CAC AGA GAG GAG CCT GCC TCT AAA GGA AAC TCT CTG CAA GTC ACA TTC CCC AGT GAA ACT CTG AAA TTA TCT GAA AAA TGT ATA で表される塩基配列を有するＤＮＡである請求項１１記
載の組み換えＤＮＡ。
【請求項１３】請求項５に記載の蛋白質をコードする
遺伝子を含有する組み換えＤＮＡ。
【請求項１４】遺伝子が、式 ATG GCT AGC ATG TGG GCG CCG GAG CAC TCT GCT GAA GCG CAC AGC AAC CTG TCA AGT ACT ACC GAC GAC TGC GGC TCC GTG TCC GTG GCC TTT CCC ATC ACC ATG ATG GTC ACT GGC TTC GTG GGC AAC GCG CTG GCC ATG CTG CTC GTG TCG CGC AGC TAC CGG CGC CGC GAG AGC AAG CGC AAG AAG TCT TTC CTG CTG TGC ATT GGC TGG CTG GCG CTC ACC GAC TTA GTG GGG CAG CTC CTG ACC AGC CCG GTG GTC ATC CTC GTG TAC CTG TCA CAG CGA CGC TGG GAG CAG CTC GAC CCA TCG GGG CGT CTG TGC ACC TTC TTC GGG CTA ACC ATG ACA GTG TTC GGG CTA TCC TCG CTC CTG GTG GCC AGC GCC ATG GCC GTG GAG CGC GCC CTG GCC ATC CGT GCG CCG CAC TGG TAT GCC AGC CAC ATG AAG ACT CGC GCC ACG CCG GTA CTG CTG GGC GTG TGG CTG TCT GTG CTC GCC TTC GCG CTG CTG CCG GTG CTG GGC GTG GGC CGC TAC AGC GTG CAG TGG CCG GGC ACG TGG TGC TTC ATC AGC ACC GGG CCG GCG GGC AAC GAG ACA GAC CCT GCG CGC GAG CCG GGC AGC GTG GCC TTT GCC TCC GCC TTC GCC TGC TTG GGC TTG CTG GCT CTG GTG GTG ACC TTT GCC TGC AAC CTG GCG ACC ATC AAA GCC CTG GTG TCC CGC TGT CGG GCC AAA GCC GCC GTC TCG CAG TCC AGC GCC CAG TGG GGC AGA ATC ACC ACG GAG ACG GCC ATC CAG CTC ATG GGG ATC ATG TGT GTG CTG TCC GTC TGT TGG TCG CCG CTA TTG ATA ATG ATG TTG AAA ATG ATC TTC AAT CAG ATG TCG GTT GAG CAA TGC AAG ACA CAG ATG GGA AAG GAG AAG GAG TGC AAT TCC TTT CTA ATT GCA GTT CGC CTG GCT TCG CTG AAC CAG ATC TTG GAT CCC TGG GTT TAT CTG CTG CTA AGA AAG ATC CTT CTT CGG AAG TTC TGC CAG で表される塩基配列を有するＤＮＡである請求項１３記
載の組み換えＤＮＡ。
【請求項１５】請求項７〜１２記載の組み換えＤＮＡ
を含むベクター。
【請求項１６】請求項１５記載のベクターを保持する
形質転換体。
【請求項１７】請求項１６記載の形質転換体を培地に
培養し、培養物中にプロスタグランジンＥ受容体を生成
・蓄積せしめ、これを採取することを特徴とするプロス
タグランジンＥ受容体の製造法。
【請求項１８】請求項１３または１４記載の組み換え
ＤＮＡを含むベクター。
【請求項１９】請求項１８記載のベクターを保持する
形質転換体。
【請求項２０】請求項１９記載の形質転換体を培地に
培養し、培養物中にプロスタグランジンＥと特異的な結
合性を示す蛋白質を生成・蓄積せしめ、これを採取する
ことを特徴とするプロスタグランジンＥと特異的な結合
性を示す蛋白質の製造法。