JP3328058B2 - Method for producing immunodiagnostic drug - Google Patents
Method for producing immunodiagnostic drugInfo
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Description
【0001】[0001]
【産業上の利用分野】本発明は、血清、尿等の体液中に
存在する抗原あるいは抗体を検出する免疫診断薬の製造
方法に関し、より詳細には、ラテックス粒子等の免疫測
定用不溶性担体に、測定しようとする物質に対応する抗
原または抗体を物理吸着させるに当たり、抗体または抗
原を効率よく大量に吸着させうるラテックス粒子を簡便
かつ迅速に選定する方法に関するものである。BACKGROUND OF THE INVENTION 1. Field of the Invention The present invention relates to a method for producing an immunodiagnostic agent for detecting an antigen or an antibody present in a body fluid such as serum or urine, and more particularly to a method for producing an insoluble carrier for immunoassay such as latex particles. The present invention relates to a method for simply and quickly selecting latex particles capable of efficiently adsorbing a large amount of an antibody or an antigen in physically adsorbing an antigen or an antibody corresponding to a substance to be measured.
【0002】[0002]
【従来の技術】血清、尿等の体液中に存在する抗原ある
いは抗体を検出することは、疾患の診断に極めて重要な
手段のひとつである。特に免疫学的方法として、被検体
中に含まれる抗原あるいは抗体を、それらに対応する抗
体あるいは抗原を固定化したラテックス粒子等の不溶性
担体に作用させ、抗原抗体反応の結果生じた凝集塊を、
光学的あるいは肉眼で検出する方法が行われている。2. Description of the Related Art Detection of antigens or antibodies present in body fluids such as serum and urine is one of extremely important means for diagnosing diseases. In particular, as an immunological method, the antigen or antibody contained in the subject is allowed to act on an insoluble carrier such as a latex particle on which the corresponding antibody or antigen is immobilized, and an aggregate formed as a result of the antigen-antibody reaction,
Optical or visual detection methods have been used.
【0003】上記免疫反応を行わせるにあたり、抗原あ
るいは抗体を固定化する不溶性担体としては赤血球や、
または非生物学的材料であるベントナイト、コロジオン
粒子、カオリン、活性炭、ポリスチレンラテックス粒
子、ポリビニルトルエンラテックス粒子、合成ゴムラテ
ックス粒子等がある。In carrying out the above-mentioned immune reaction, insoluble carriers for immobilizing antigens or antibodies include erythrocytes,
Or, there are non-biological materials such as bentonite, collodion particles, kaolin, activated carbon, polystyrene latex particles, polyvinyl toluene latex particles, and synthetic rubber latex particles.
【0004】上記不溶性担体のうち、ポリスチレンラテ
ックス粒子等の合成ラテックス粒子は、合成物質である
ため、保存時の安定性が他の担体よりも優れ、抗原、抗
体等の蛋白質や脂質等の生理活性物質を強く吸着し、さ
らにこうして結合した抗原、抗体の性質を変化なく保持
しうる点でも優れているため、多くの免疫反応試薬に繁
用されている。[0004] Among the above insoluble carriers, synthetic latex particles such as polystyrene latex particles are synthetic substances, and therefore have better stability during storage than other carriers, and have physiological activities such as proteins such as antigens and antibodies and lipids. It is also widely used in many immunoreaction reagents because it is excellent in that it can strongly adsorb substances and can maintain the properties of antigens and antibodies thus bound without change.
【0005】[0005]
【発明が解決しようとする課題】上記のような種々の不
溶性担体の中で、目的とする検出系に最適なものを選択
しようとした場合、通常は粒径、比重、原材料であるモ
ノマー等を一次的な指標としている。しかし、実際に
は、測定対象物質に対応する抗体もしくは抗原をいくつ
かのラテックス粒子に固定化し、測定対象物質を含む検
体と反応させた際の感度、特異性、再現性等の試薬性能
から判断し、ラテックス粒子を決定しているのが実情で
ある。このような選定方法は、キット開発の最終段階で
は必要かつ有効であるが、抗原もしくは抗体の固定化条
件や反応測定条件の至適化がまだ行われていない開発初
期においては、この方法では有望な候補を見逃す恐れが
ある。また、多数のラテックス粒子を評価するために、
高価かつ貴重な標準品や患者血清を多量に使わねばなら
ない等、コスト面でも負担が大きい。このため、簡易で
迅速かつ血清のような生物材料を用いない評価方法が望
まれていた。When it is desired to select the most insoluble carrier among the various insoluble carriers as described above for the target detection system, usually, the particle size, specific gravity, monomer and the like as the raw material, etc. It is a primary indicator. However, in practice, the antibody or antigen corresponding to the substance to be measured is immobilized on some latex particles and judged from the reagent performance such as sensitivity, specificity, and reproducibility when reacted with the sample containing the substance to be measured. The fact is that latex particles are determined. Such a selection method is necessary and effective in the final stage of kit development, but it is promising in the early stage of development when the conditions for immobilizing antigen or antibody and the conditions for measuring the reaction have not yet been optimized. There is a risk of missing a candidate. Also, to evaluate a large number of latex particles,
Costs are heavy, such as the need to use large amounts of expensive and valuable standard products and patient serum. Therefore, a simple and rapid evaluation method that does not use biological materials such as serum has been desired.
【0006】また、上記のような不溶性担体に抗原もし
くは抗体を固定化する方法として、物理吸着法、イオン
結合法、共有結合法、包括法等の方法(たとえば、『固
定化酵素』(千畑一郎編、昭和50年3月20日、
(株)講談社発行、参照)が採用されるが、とりわけ物
理吸着法は簡便である点が望ましい。As a method for immobilizing an antigen or an antibody on the insoluble carrier as described above, methods such as a physical adsorption method, an ionic bonding method, a covalent bonding method, an inclusive method (for example, “Immobilized enzyme” (Ichirou Chibatake) Hen, March 20, 1975,
(See Kodansha Co., Ltd.), but the physical adsorption method is particularly preferable because it is simple.
【0007】物理吸着法は、上記の様な不溶性担体表面
と、吸着させようとする物質との間に働く疎水性相互作
用を利用した固定化方法である。実際には疎水性相互作
用以外にも、靜電的作用や、分子間力等、複数のメカニ
ズムが働いていると考えられるが、これらの作用の大き
さは数値化することが困難である。このため実際にはラ
テックス単位面積あたりの物質の吸着量をもって、該不
溶性担体の『吸着力の強さ』を定量的に表わすのが一般
的であった。[0007] The physical adsorption method is an immobilization method utilizing the hydrophobic interaction acting between the surface of the insoluble carrier as described above and the substance to be adsorbed. Actually, it is considered that a plurality of mechanisms such as an electrostatic action and an intermolecular force are acting in addition to the hydrophobic interaction, but it is difficult to quantify the magnitude of these actions. For this reason, in practice, the "adsorption strength" of the insoluble carrier is generally quantitatively expressed by the amount of the adsorbed substance per unit area of the latex.
【0008】本発明者らは、上記の作用の中で数値化お
よび測定が容易な、『ゼータ電位』というパラメーター
に着目した。この『ゼータ電位』は、コロイド粒子表面
近傍の電気二重層のすべり面の電位差を実験的に求めた
値であるが、粒子表面の電荷密度を反映する値として利
用されている。The present inventors have paid attention to a parameter called “zeta potential” which is easy to digitize and measure among the above-mentioned functions. This “zeta potential” is a value obtained by experimentally determining the potential difference of the slip surface of the electric double layer near the colloid particle surface, and is used as a value reflecting the charge density on the particle surface.
【0009】ある物質を不溶性担体に吸着させようとし
た場合、その物質の荷電量が最も小さい状態(タンパク
ならば等電点付近)が、分子内の電気的な反発が最も小
さく、物質がコンパクトな分子形態になるため、これを
大量に吸着できると言われている。本発明者らは、同様
に不溶性担体自身の表面も、荷電量が小さい方が、物質
との電気的な反発力が小さくなり、吸着が効果的に行わ
れるのではないかと考えた。つまり、担体のゼータ電位
の大小を測定することにより、物質の吸着量の多さ、ひ
いては不溶性担体側の吸着力の強さを推定しようとし
た。When a substance is adsorbed on an insoluble carrier, the state in which the amount of charge of the substance is the smallest (near the isoelectric point in the case of protein) is the smallest in the molecule, and the electric repulsion in the molecule is the smallest, and the substance is compact. It is said that it can be adsorbed in large quantities because of its molecular form. The present inventors have similarly thought that the smaller the charge amount of the surface of the insoluble carrier itself, the smaller the electric repulsion with the substance, and the more effective the adsorption. In other words, by measuring the magnitude of the zeta potential of the carrier, an attempt was made to estimate the large amount of the substance adsorbed and, consequently, the strength of the adsorption force on the insoluble carrier side.
【0010】ラテックス粒子の懸濁液の場合、その自己
凝集を防ぐために、品質管理上ゼータ電位は−40から
−30mVの範囲にあることが好ましいとされている。
しかし、診断薬の製造や反応系に用いる様な生理的条件
をもつ緩衝液を用いてゼータ電位を測定した場合、重合
開始剤の残存量や懸濁液中のイオン種との相互作用、そ
の他種々の条件によって、それぞれのラテックス粒子が
示すゼータ電位が大きく変動することはあまり知られて
いない。In the case of a suspension of latex particles, the zeta potential is preferably in the range of -40 to -30 mV for quality control in order to prevent self-aggregation.
However, when the zeta potential is measured using a buffer having physiological conditions such as those used in the production of diagnostic reagents and reaction systems, the residual amount of polymerization initiator, interaction with ionic species in suspension, It is not widely known that the zeta potential of each latex particle greatly varies depending on various conditions.
【0011】本発明の目的は、ラテックス粒子等の免疫
測定用不溶性担体に、測定しようとする物質に対応する
抗原または抗体を物理吸着させるに当たり、抗体または
抗原を効率よく大量に吸着させうるラテックス粒子を簡
便かつ迅速に選定する方法を提供することにある。An object of the present invention is to provide a method for physically adsorbing an antigen or an antibody corresponding to a substance to be measured on an insoluble carrier for immunoassay, such as a latex particle. Is to provide a simple and quick method for selecting
【0012】[0012]
【課題を解決するための手段】本発明者らは、測定に用
いる緩衝液のpH、イオン強度、イオン種等を鋭意研究
した結果、不溶性担体表面のゼータ電位が−40から−
30mVといった比較困難な狭い範囲の値ではなく、比
較検討が容易な−60から−10mVといった広い範囲
の値を示す測定条件を見い出した。そのような条件下で
複数のラテックス粒子のゼータ電位を測定したところ、
得られたゼータ電位が小さいラテックス粒子ほど、物質
の吸着量が多く、試薬としての感度も高くなることを見
い出した。Means for Solving the Problems The present inventors have conducted intensive studies on the pH, ionic strength, ionic species and the like of a buffer used for measurement. As a result, the zeta potential on the surface of the insoluble carrier was changed from −40 to −40.
We have found measurement conditions that show values in a wide range such as −60 to −10 mV that are easy to compare and examine, instead of values in a narrow range such as 30 mV, which is difficult to compare. When the zeta potential of a plurality of latex particles was measured under such conditions,
It has been found that the latex particles having a lower zeta potential have a larger amount of adsorbed substance and a higher sensitivity as a reagent.
【0013】すなわち、ラテックス粒子のゼータ電位を
測定する際の条件は、(1) 使用する緩衝液のイオン強度
は5mM以上50mM以下であること、(2) 使用する緩
衝液のpHは、生理的な条件であるpH5.0〜8.5
の範囲であることである。The conditions for measuring the zeta potential of latex particles are as follows: (1) the ionic strength of the buffer used is 5 mM or more and 50 mM or less; (2) the pH of the buffer used is PH 5.0 to 8.5, which is a good condition
Is within the range.
【0014】以上の2点のうち少なくとも1つを満たす
条件下で測定し、得られたゼータ電位が、−20mV以
上0mV以下を示すものが、対象としたラテックス粒子
群の中でも比較的良好な結果が期待されることがわかっ
た。Measured under conditions satisfying at least one of the above-mentioned two points, those having a zeta potential of -20 mV or more and 0 mV or less show relatively good results among the target latex particle groups. Turned out to be expected.
【0015】本発明で評価される不溶性担体は、赤血球
や、または非生物学的材料であるベントナイト、コロジ
オン粒子、カオリン、活性炭、合成ゼラチン粒子、ポリ
スチレンラテックス粒子、ポリビニルトルエンラテック
ス粒子、合成ゴムラテックス粒子等である。好ましくは
ポリスチレンラテックス粒子等の合成ラテックス粒子で
あり、表面にアミド基、カルボキシル基等の官能基を導
入した化学修飾ラテックス粒子も適用できる。また、本
発明はポリスチレンラテックス粒子等の表面にポリアニ
オン(硫酸デキストランナトリウム、ヘパリンナトリウ
ム等)処理を施し、表面に負電荷を導入した表面処理ラ
テックス粒子も適用できる。The insoluble carrier evaluated in the present invention is erythrocytes or non-biological materials such as bentonite, collodion particles, kaolin, activated carbon, synthetic gelatin particles, polystyrene latex particles, polyvinyl toluene latex particles, and synthetic rubber latex particles. And so on. Preferred are synthetic latex particles such as polystyrene latex particles, and chemically modified latex particles having a functional group such as an amide group or a carboxyl group introduced on the surface can also be used. The present invention can also be applied to a surface-treated latex particle in which a polyanion latex particle or the like is subjected to a polyanion (dextran sulfate sodium, heparin sodium or the like) treatment and a negative charge is introduced into the surface.
【0016】本発明で使用するゼータ電位測定装置は、
市販されている光散乱法を利用した一般的なゼータ電位
測定装置であれば、特に限定されない。好ましくは大塚
電子社製のレーザーゼータ電位計LEZA−600等、
希薄溶液系で測定する検出器が望ましい。The zeta potential measuring device used in the present invention is:
There is no particular limitation as long as it is a general zeta potential measuring device using a commercially available light scattering method. Preferably, a laser zeta electrometer LEZA-600 manufactured by Otsuka Electronics Co., Ltd.
A detector measuring in a dilute solution system is desirable.
【0017】本発明で担体の懸濁に使用される緩衝液の
イオン種は、リン酸系、酢酸系、トリス等、試薬の製造
および反応系で通常用いる、生理的な条件を示すもので
あれば、とくに限定されない。望ましくは、リン酸ナト
リウム、リン酸カリウム等のリン酸系の緩衝液が用いら
れる。The ionic species of the buffer solution used for suspending the carrier in the present invention may be a phosphate-based, acetic-based, or tris-based ionic species which is a physiological condition commonly used in the production and reaction of reagents. It is not particularly limited. Preferably, a phosphate buffer such as sodium phosphate or potassium phosphate is used.
【0018】使用する緩衝液のイオン強度は、好ましく
は5〜50mM、さらに好ましくは7.5〜30mM、
最も好ましくは10〜20mMである。The ionic strength of the buffer used is preferably 5 to 50 mM, more preferably 7.5 to 30 mM,
Most preferably, it is 10 to 20 mM.
【0019】使用する緩衝液のpHは、ラテックス粒子
の変成を引き起こすような強酸、強アルカリ性以外なら
広く適用できる。好ましくは、通常の生理学的条件であ
る、pH5.0〜pH8.5の範囲である。該条件下で
比較可能なゼータ電位が得られなかった場合には、さら
に吸着させようとする物質の等電点付近のpHを有する
緩衝液を用いることが好ましい。この場合、リン脂質の
ように等電点を有しない物質については、逆にリン脂質
自身のゼータ電位を異なるpHを示す緩衝液により測定
し、ゼータ電位が極小となるpHをもって、リン脂質の
等電点とみなしてもよい。The pH of the buffer to be used can be widely applied as long as it is not a strong acid or strong alkali that causes denaturation of latex particles. Preferably, it is in the range of pH 5.0 to pH 8.5, which is a normal physiological condition. If no comparable zeta potential is obtained under these conditions, it is preferable to use a buffer having a pH near the isoelectric point of the substance to be further adsorbed. In this case, for a substance having no isoelectric point, such as a phospholipid, the zeta potential of the phospholipid itself is measured with a buffer having a different pH, and the pH at which the zeta potential is minimized is determined. It may be regarded as an electric point.
【0020】[0020]
【実施例】次に実施例により本発明をさらに詳しく説明
する。Next, the present invention will be described in more detail by way of examples.
【0021】実施例1 緩衝液pH値のゼータ電位に対する影響 (1) ラテックス液 ポリスチレンラテックス懸濁液(積水化学社製、固型分
10%(W/V)、平均粒径0.400μm)およびカ
ルボタイプラテックス懸濁液(積水化学社製、固型分1
0%(W/V)、平均粒径0.330μm)を用いた。Example 1 Influence of Buffer pH on Zeta Potential (1) Latex Liquid Polystyrene latex suspension (manufactured by Sekisui Chemical Co., solid content 10% (W / V), average particle size 0.400 μm) and Carbo-type latex suspension (manufactured by Sekisui Chemical Co., Ltd., solid component 1
0% (W / V), average particle size 0.330 μm).
【0022】(2) 緩衝液 以下の緩衝液を調製した。調製はいずれも25℃で超純
水を用いて行った。 (2)-1 50mM 酢酸−酢酸ナトリウム緩衝液 50mM酢酸(ナカライテスク社製、試薬特級)と50
mM酢酸ナトリウム(ナカライテスク社製、試薬特級)
水溶液を混合し、pHが4.50、5.00、5.50
程度となるように緩衝液を調製した。(2) Buffer The following buffer was prepared. Each preparation was performed at 25 ° C. using ultrapure water. (2) -1 50 mM acetic acid-sodium acetate buffer solution 50 mM acetic acid (Nacalai Tesque, special grade reagent) and 50 mM acetic acid
mM sodium acetate (Nacalai Tesque, special grade reagent)
The aqueous solutions are mixed and the pH is 4.50, 5.00, 5.50
A buffer solution was prepared so as to be about the same.
【0023】(2)-2 50mM リン酸緩衝液 50mMリン酸二水素ナトリウム(ナカライテスク社
製、試薬特級)水溶液と50mMリン酸水素二ナトリウ
ム(ナカライテスク社製、試薬特級)水溶液を混合し、
pHが5.50、6.00、6.50、7.00、7.
50程度となるように緩衝液を調製した。(2) -2 50 mM phosphate buffer solution A 50 mM sodium dihydrogen phosphate (Nacalai Tesque, special grade reagent) aqueous solution and a 50 mM disodium hydrogen phosphate (Nacalai Tesque, special grade reagent) aqueous solution are mixed.
pH is 5.50, 6.00, 6.50, 7.00, 7.
A buffer solution was prepared to be about 50.
【0024】(2)-3 50mM トリス−HCl緩衝液 50mM塩酸(ナカライテスク社製、試薬特級)と50
mMトリス(ヒドロキシメチル)アミノメタン(ナカラ
イテスク社製、試薬特級)水溶液を混合し、pHが8.
00、8.50、9.00程度となるように緩衝液を調
製した。(2) -3 50 mM Tris-HCl buffer 50 mM hydrochloric acid (Nacalai Tesque, special grade reagent) and 50 mM Tris-HCl buffer
An aqueous solution of mM tris (hydroxymethyl) aminomethane (special grade reagent, manufactured by Nacalai Tesque, Inc.) was mixed, and the pH was adjusted to 8.
Buffer solutions were prepared so as to be about 00, 8.50, and 9.00.
【0025】実際に得られたpHと緩衝液成分を表1に
まとめて示す。Table 1 shows the actually obtained pH and buffer components.
【0026】[0026]
【表1】 (3) ゼータ電位測定装置 大塚電子社製ゼータ電位計『LEZA−600』を用い
た。[Table 1] (3) Zeta potential measurement device A zeta potential meter “LEZA-600” manufactured by Otsuka Electronics Co., Ltd. was used.
【0027】使用方法は機器添付のマニュアルに従って
行った。The method of use was in accordance with the manual attached to the device.
【0028】(4) 試料の調製および測定 上記(2) で調製した緩衝液50mlをガラスのサンプル
瓶に入れ、(1) のラテックス液を1μl添加し、これら
を混和転倒にてよく攪拌した。得られた試料を『LEZ
A−600』の試料用セル中に満たし、ゼータ電位の測
定を行った。(4) Preparation and Measurement of Sample 50 ml of the buffer solution prepared in the above (2) was put into a glass sample bottle, 1 μl of the latex solution of the above (1) was added, and these were mixed well and inverted and stirred well. The obtained sample is referred to as “LEZ
A-600 ", and the zeta potential was measured.
【0029】(5) 結果 ポリスチレンラテックス粒子(平均粒径0.400μ
m)およびカルボタイプラテックス粒子(平均粒径0.
330μm)について、それぞれ得られたゼータ電位の
値を表2にまとめて示す。また、それぞれのラテックス
粒子についてpHとゼータ電位とをプロットした。これ
を図1に示す。(5) Results Polystyrene latex particles (average particle size 0.400 μm)
m) and carbo-type latex particles (average particle size
Table 2 collectively shows the values of the obtained zeta potentials for each of the samples (330 μm). Further, the pH and the zeta potential were plotted for each latex particle. This is shown in FIG.
【0030】[0030]
【表2】 表2および図1から明らかなように、各ラテックス粒子
は、緩衝液のpHに応じて表2および図1に示したよう
な広範なゼータ電位値を示た。pH4.50付近および
pH8.50以上ではゼータ電位が急激に増加あるいは
減少したが、これはラテックス粒子表面が、強酸または
強アルカリ条件下で変成したためと考えられる。[Table 2] As is clear from Table 2 and FIG. 1, each latex particle exhibited a wide range of zeta potential values as shown in Table 2 and FIG. 1 depending on the pH of the buffer solution. At around pH 4.50 and at pH 8.50 or higher, the zeta potential rapidly increased or decreased. This is considered to be because the surface of the latex particles was denatured under strong acid or strong alkali conditions.
【0031】また、表面にカルボキシル基を有するカル
ボタイプラテックス粒子の方が、ポリスチレンタイプよ
りも全般的に低いゼータ電位を示すことがわかった。It has also been found that carbo-type latex particles having a carboxyl group on the surface generally show a lower zeta potential than polystyrene-type latex particles.
【0032】通常生理的な条件であるpH5.0〜8.
5の範囲では、ポリスチレンタイプは−20〜−10m
V、カルボタイプは−20〜−40mVと、安定した値
を示すことがわかった。Usually, physiological conditions of pH 5.0 to 8.0.
In the range of 5, the polystyrene type is -20 to -10 m
V and the carbotype were found to show stable values of -20 to -40 mV.
【0033】実施例2 緩衝液イオン強度のゼータ電位に対する影響 (1) ラテックス液 ポリスチレンラテックス懸濁液(積水化学社製、固型分
10%(W/V)、平均粒径0.400μm)を用い
た。Example 2 Effect of Buffer Ionic Strength on Zeta Potential (1) Latex Liquid A polystyrene latex suspension (manufactured by Sekisui Chemical Co., Ltd., solid content 10% (W / V), average particle size 0.400 μm) was prepared. Using.
【0034】(2) 緩衝液 以下の緩衝液を調製した。調製はいずれも25℃で超純
水を用いて行った。(2) Buffer The following buffer was prepared. Each preparation was performed at 25 ° C. using ultrapure water.
【0035】(2)-1 リン酸緩衝液 10、30、50、75、100、150mMリン酸二
水素ナトリウム(ナカライテスク社製、試薬特級)水溶
液と10、30、50、75、100、150mMリン
酸水素二ナトリウム(ナカライテスク社製、試薬特級)
水溶液を混合し、pHが7.40となるような10、3
0、50、75、100、150mMのリン酸緩衝液を
調製した。(2) -1 Phosphate buffer solution 10, 30, 50, 75, 100, 150 mM Aqueous sodium dihydrogen phosphate (manufactured by Nacalai Tesque, reagent special grade) aqueous solution, and 10, 30, 50, 75, 100, 150 mM Disodium hydrogen phosphate (Nacalai Tesque, special grade reagent)
The aqueous solution is mixed, and the pH is adjusted to 7.40.
0, 50, 75, 100, and 150 mM phosphate buffers were prepared.
【0036】(2)-2 リン酸−NaCl緩衝液 上記の方法で調製した10mMリン酸緩衝液にNaCl
(ナカライテスク社製、試薬特級)水溶液を添加し、イ
オン強度が30、50、75、100、150mMとな
るようにしたリン酸−NaCl緩衝液を調製した。(2) -2 Phosphate-NaCl buffer NaCl was added to the 10 mM phosphate buffer prepared by the above method.
An aqueous solution (reagent grade, manufactured by Nacalai Tesque, Inc.) was added to prepare a phosphate-NaCl buffer solution having an ionic strength of 30, 50, 75, 100, or 150 mM.
【0037】(3) ゼータ電位測定装置 実施例1と同様のものを用いた。(3) Zeta potential measuring device The same device as in Example 1 was used.
【0038】(4) 試料の調製および測定 上記(2) で調製した緩衝液50mlをガラスのサンプル
瓶に入れ、(1) のラテックス液を1μl添加し、これら
を混和転倒にてよく攪拌した。得られた試料のゼータ電
位を実施例1と同様にして測定した。(4) Preparation and Measurement of Sample 50 ml of the buffer solution prepared in the above (2) was placed in a glass sample bottle, 1 μl of the latex solution of (1) was added, and these were mixed well and inverted and stirred well. The zeta potential of the obtained sample was measured in the same manner as in Example 1.
【0039】(5) 結果 ポリスチレンラテックス粒子(平均粒径0.400μ
m)について、それぞれ得られたゼータ電位の値を表3
にまとめて示す。また、それぞれのラテックス粒子につ
いてpHとゼータ電位とをプロットした。これを図2に
示す。(5) Results Polystyrene latex particles (average particle size 0.400 μm)
Table 3 shows the values of the obtained zeta potentials for m).
Are shown together. Further, the pH and the zeta potential were plotted for each latex particle. This is shown in FIG.
【0040】[0040]
【表3】 表3および図2から明らかなように、ポリスチレンタイ
プラテックス粒子の場合、イオン強度は小さいほどラテ
ックス粒子のゼータ電位は低かった。これより、ゼータ
電位の測定はイオン強度50mM以下、できれば10〜
30mMの範囲で測定するとが望ましいことがわかる。[Table 3] As is clear from Table 3 and FIG. 2, in the case of polystyrene type latex particles, the lower the ionic strength, the lower the zeta potential of the latex particles. From this, the measurement of the zeta potential was performed at an ionic strength of 50 mM or less, preferably 10 to
It is understood that it is desirable to measure in the range of 30 mM.
【0041】実施例3 各種ラテックス粒子のゼータ電位測定とウシ血清アルブ
ミン吸着量の関係 11種類のポリスチレンタイプラテックス粒子につい
て、実施例1および2から得られた好適な条件、すなわ
ちイオン強度50mM以下、pH5.0〜8.5の条件
下で、ゼータ電位を測定した。また、それぞれのラテッ
クス粒子について、ウシ血清アルブミンを吸着させ、単
位面積あたりのウシ血清アルブミンとゼータ電位の関係
を調べた。Example 3 Relationship between Zeta Potential Measurements of Various Latex Particles and Bovine Serum Albumin Adsorption Amount With respect to 11 types of polystyrene type latex particles, suitable conditions obtained from Examples 1 and 2, that is, ionic strength of 50 mM or less, pH 5 The zeta potential was measured under the conditions of 0.0 to 8.5. In addition, bovine serum albumin was adsorbed to each latex particle, and the relationship between bovine serum albumin and zeta potential per unit area was examined.
【0042】(1) ポリスチレンラテックス液 積水化学社製のポリスチレンタイプラテックス(いずれ
も固型分10%(W/V))11種類(平均0.08
7、0.192、0.206、0.217、0.30
5、0.315、0.313、0.320、0.33
7、0.346、0.400μm)を用いた。(1) Polystyrene latex liquid 11 types of polystyrene type latex manufactured by Sekisui Chemical Co., Ltd. (all 10% solid content (W / V)) (average 0.08)
7, 0.192, 0.206, 0.217, 0.30
5, 0.315, 0.313, 0.320, 0.33
7, 0.346, 0.400 μm).
【0043】(2) ゼータ電位測定 ラテックス粒子を懸濁させる緩衝液に50mM酢酸−酢
酸ナトリウム緩衝液(pH5.0)を用いた以外はすべ
て実施例1と同様にしてゼータ電位を測定した。(2) Measurement of zeta potential The zeta potential was measured in the same manner as in Example 1 except that a 50 mM acetic acid-sodium acetate buffer (pH 5.0) was used as a buffer for suspending latex particles.
【0044】(3) ウシ血清アルブミンの固定化 各ラテックス懸濁液(固型分10%(W/V))0.1
mlをポリスチレンチューブに分注し、スターラーを用
いて攪拌した。1%(W/V)のウシ血清アルブミン
(Miles 社製、Fraction V、試薬特級、以下BSAと
略す)を含む50mM酢酸−酢酸ナトリウム緩衝液(p
H5.0)(以下1%BSA/酢酸緩衝液と略す)2.
0mlを添加し、25℃で1時間攪拌した。そののち、
高速冷却遠心機にて遠心洗浄を行い、上清中に残存した
BSAの量を、O.D.280nmから求めた。添加し
たBSAの総量から残存したBSA量を減じた値をラテ
ックス粒子表面に固定化されたBSA量とみなした。ま
た、それぞれのラテックス粒子について、単位面積あた
りのBSA吸着量を算出した。(3) Immobilization of bovine serum albumin Each latex suspension (solid content 10% (W / V)) 0.1
ml was dispensed into a polystyrene tube and stirred using a stirrer. 50 mM acetic acid-sodium acetate buffer (p / p) containing 1% (W / V) bovine serum albumin (Miles, Fraction V, reagent grade, hereinafter abbreviated as BSA)
H5.0) (hereinafter abbreviated as 1% BSA / acetate buffer)
0 ml was added and the mixture was stirred at 25 ° C. for 1 hour. after that,
After centrifugal washing with a high-speed cooling centrifuge, the amount of BSA remaining in the supernatant was D. It was determined from 280 nm. The value obtained by subtracting the amount of the remaining BSA from the total amount of the added BSA was regarded as the amount of the BSA immobilized on the surface of the latex particles. The amount of BSA adsorbed per unit area was calculated for each latex particle.
【0045】比較例1 各種ラテックス粒子のゼータ電位測定(従来条件)とウ
シ血清アルブミン吸着量の関係 ラテックス粒子を懸濁する緩衝液として、100mMリ
ン酸緩衝液(pH7.40)を用いた以外はすべて実施
例3と同様の操作を行った。Comparative Example 1 Relationship between Zeta Potential Measurement of Various Latex Particles (Conventional Conditions) and Amount of Bovine Serum Albumin Adsorbed Except that 100 mM phosphate buffer (pH 7.40) was used as a buffer for suspending latex particles. All operations were the same as in Example 3.
【0046】結 果 各ラテックス粒子のゼータ電位(実施例3および比較例
1)および単位面積あたりのBSA吸着量を表4にまと
めて示す。Results The zeta potential (Example 3 and Comparative Example 1) of each latex particle and the amount of BSA adsorbed per unit area are shown in Table 4.
【0047】[0047]
【表4】 以上のように、本発明に基づいて測定したゼータ電位
は、BSAの吸着量と良好な相関を示すことがわかっ
た。比較例1で求められたゼータ電位は表3に示したよ
うに、−40〜−30mVの範囲に集束し、BSA吸着
量との関連は把握しにくかった。[Table 4] As described above, it was found that the zeta potential measured based on the present invention shows a good correlation with the amount of BSA adsorbed. As shown in Table 3, the zeta potential determined in Comparative Example 1 was focused in the range of -40 to -30 mV, and it was difficult to grasp the relationship with the BSA adsorption amount.
【0048】実施例4 梅毒レアギン抗原吸着量とゼータ電位との関係 11種類のポリスチレンタイプラテックス粒子につい
て、実施例1および2から最適な条件と推測される条件
で、ゼータ電位を測定した。また、それぞれのラテック
ス粒子について、梅毒レアギン抗原を吸着させ、単位面
積あたりの抗原とゼータ電位の関係を調べた。Example 4 Relationship between the Adsorbed Amount of Syphilis Reargin Antigen and Zeta Potential The zeta potential of 11 kinds of polystyrene type latex particles was measured under the conditions presumed to be optimum from Examples 1 and 2. In addition, syphilis raregin antigen was adsorbed to each latex particle, and the relationship between the antigen per unit area and zeta potential was examined.
【0049】(1) ポリスチレンラテックス液 積水化学社製のポリスチレンタイプラテックス(いずれ
も固型分10%(W/V))11種類(平均0.08
7、0.192、0.206、0.217、0.30
5、0.315、0.313、0.320、0.33
7、0.346、0.400μm)を用いた。(1) Polystyrene latex liquid 11 types of polystyrene type latex manufactured by Sekisui Chemical (all 10% solid content (W / V)) (average 0.08)
7, 0.192, 0.206, 0.217, 0.30
5, 0.315, 0.313, 0.320, 0.33
7, 0.346, 0.400 μm).
【0050】(2) ゼータ電位測定 ラテックス粒子を懸濁させる緩衝液に10mMリン酸緩
衝液(pH6.50)を用いた以外はすべて実施例3と
同様にしてゼータ電位を測定した。(2) Measurement of zeta potential The zeta potential was measured in the same manner as in Example 3 except that a 10 mM phosphate buffer (pH 6.50) was used as a buffer for suspending latex particles.
【0051】(3) 梅毒レアギン抗原の調製 カルジオライピンのエタノール溶液(シグマ社製、試薬
特級、5mg/ml)2ml、フォスファチジルコリン
(ナカライテスク社製、試薬特級)をエタノール(ナカ
ライテスク社製、試薬特級、99%)に溶解して10m
g/mlのエタノール溶液としてもの10ml、および
コレステロール(ナカライテスク社製、試薬特級)を同
じく10mg/mlのエタノール溶液にしたもの3ml
を合わせ、これらをよく混合して抗原液とした。(3) Preparation of Syphilis Reagin Antigen 2 ml of an ethanol solution of cardiolipin (Sigma, reagent grade, 5 mg / ml) and phosphatidylcholine (Nacalai Tesque, reagent grade) were added to ethanol (Nacalai Tesque, 10m after dissolving in reagent grade, 99%)
g / ml ethanol solution, 10 ml, and cholesterol (Nacalai Tesque, reagent grade) in the same 10 mg / ml ethanol solution, 3 ml
And mixed well to obtain an antigen solution.
【0052】(4) 梅毒レアギン抗原の固定化 各ラテックス懸濁液(固型分10%(W/V))0.1
mlをポリスチレンチューブに分注し、スターラーを用
いて攪拌した。1%(W/V)の梅毒レアギン抗原1.
0mlを添加し、25℃で1時間攪拌した。そののち、
高速冷却遠心機にて遠心洗浄を行い、上清中に残存した
リン脂質の量を、市販のリン脂質定量用キットを用いて
求めた。添加したリン脂質の総量から残存したリン脂質
量を減じた値をラテックス粒子表面に固定化されたリン
脂質量とみなした。また、それぞれのラテックス粒子に
ついて、単位面積あたりのリン脂質吸着量を算出した。(4) Immobilization of syphilis raregin antigen Each latex suspension (solid content 10% (W / V)) 0.1
ml was dispensed into a polystyrene tube and stirred using a stirrer. 1% (W / V) syphilis reagin antigen
0 ml was added and the mixture was stirred at 25 ° C. for 1 hour. after that,
Centrifugal washing was performed with a high-speed cooling centrifuge, and the amount of phospholipid remaining in the supernatant was determined using a commercially available kit for phospholipid quantification. The value obtained by subtracting the amount of the remaining phospholipid from the total amount of the added phospholipid was regarded as the amount of the phospholipid immobilized on the surface of the latex particles. Further, the phospholipid adsorption amount per unit area was calculated for each latex particle.
【0053】結 果 各ラテックス粒子のゼータ電位(実施例4および比較例
1)および単位面積あたりのリン脂質吸着量を表5およ
び図4にまとめて示す。Results The zeta potential (Example 4 and Comparative Example 1) of each latex particle and the amount of phospholipid adsorbed per unit area are shown in Table 5 and FIG.
【0054】[0054]
【表5】 表5および図4から明らかなように、ゼータ電位が高い
ほどラテックス粒子単位面積あたりのリン脂質吸着量は
大きくなり、両者の間には良好な相関が見られる。実施
例5 各種ゼータ電位と梅毒レアギン抗原測定用試薬の性能と
の関係 実施例4において、ゼータ電位が−20mV以上であっ
た2種類のラテックス粒子(平均粒径0.400μmお
よび0.320μmのもの)を用いて、梅毒レアギン抗
体測定用試薬を調製した。[Table 5] As is clear from Table 5 and FIG. 4, the higher the zeta potential, the larger the amount of phospholipid adsorbed per unit area of latex particles, and a good correlation is seen between the two. Example 5 Relationship between Various Zeta Potentials and Performance of Reagent for Syphilis Reagin Antigen Measurement In Example 4, two kinds of latex particles having a zeta potential of −20 mV or more (with an average particle size of 0.400 μm and 0.320 μm) ) Was used to prepare a reagent for measuring syphilis reagin antibody.
【0055】(1) 試薬および血清 (a) ポリスチレンラテックス液 実施例4で使用したポリスチレンラテックス(積水化学
社製、固型分10%(W/V)平均粒径0.400μ
m、0.320μm)をそのまま用いた。(1) Reagents and serum (a) Polystyrene latex solution Polystyrene latex used in Example 4 (manufactured by Sekisui Chemical Co., Ltd., solid content 10% (W / V), average particle size 0.400 μm)
m, 0.320 μm) was used as it was.
【0056】(b) 抗原液 実施例4で用いたものを使用した。(B) Antigen solution The antigen solution used in Example 4 was used.
【0057】(c) ブロッキング用緩衝液 100mM リン酸水素二ナトリウム(12水和物)お
よび100mM リン酸二水素ナトリウム(2水和物)
を混合してpHを7.40に調整したリン酸緩衝液(以
下100mMリン酸緩衝液と略す)に、BSAを1%
(W/V)、アジ化ナトリウム(ナカライテスク社製、
試薬特級)を0.1%(W/V)になるように添加した
ものをブロッキング用緩衝液とした。(C) Blocking buffer: 100 mM disodium hydrogen phosphate (decahydrate) and 100 mM sodium dihydrogen phosphate (dihydrate)
In a phosphate buffer (hereinafter abbreviated as 100 mM phosphate buffer) adjusted to pH 7.40 by adding
(W / V), sodium azide (Nacalai Tesque,
A reagent (special grade reagent) was added to a concentration of 0.1% (W / V) to obtain a blocking buffer.
【0058】(d) ラテックス保存用緩衝液 100mMリン酸緩衝液にBSAを1%(W/V)、ア
ジ化ナトリウムを0.1%(W/V)、EDTA(ナカ
ライテスク社製、試薬特級)を10mM、塩化コリン
(ナカライテスク社製、試薬特級)を500mMになる
ように添加したものをラテックス保存用緩衝液とした。(D) Latex preservation buffer solution 100% phosphate buffer solution contains 1% (W / V) of BSA, 0.1% (W / V) of sodium azide, and EDTA (special grade reagent, manufactured by Nacalai Tesque, Inc.). ) Was added to 10 mM and choline chloride (Nacalai Tesque, reagent grade) to 500 mM was used as a latex storage buffer.
【0059】(e) 検体希釈用緩衝液 100mMリン酸緩衝液にグルコシルエチルメタクリレ
ートのホモポリマー(日本精化社製、平均分子量27
万、Glucosylethylmethacryrate :以下pGEMAと略
す)を1%(W/V)、BSAを0.25%(W/
V)、アジ化ナトリウムを0.1%(W/V)になるよ
うに添加したものを検体希釈用緩衝液とした。 (f) 梅毒陰性血清 正常家兎より採取された血清で、RPR−カードテスト
法(化学及び血清療法研究所社製)およびセロディアT
PHAキット(富士レビオ社製)の両方により陰性と判
定されたものを用いた。(E) Specimen dilution buffer 100 mM phosphate buffer in glucosylethyl methacrylate homopolymer (Nippon Seika Co., Ltd., average molecular weight 27
Glucosylethylmethacryrate: 1% (W / V), BSA 0.25% (W / V)
V) and sodium azide added to a concentration of 0.1% (W / V) were used as a sample dilution buffer. (f) Syphilis-negative serum Serum collected from normal rabbits, using the RPR-card test method (manufactured by Chemistry and Serological Therapy Laboratories) and Cellodia T
Those determined to be negative by both PHA kits (manufactured by Fujirebio) were used.
【0060】(g) 梅毒陽性血清 実験的に梅毒菌を採取し、梅毒にした家兎より採取され
た血清で、RPRカードテスト法(化学及び血清療法研
究所社製)およびセロディアTPHAキット(富士レビ
オ社製)の両方により陽性と判定されたものを用いた。(G) Syphilis Positive Serum Sera syphilis was experimentally collected, and serum collected from syphilitized rabbits was subjected to the RPR card test method (manufactured by Chemistry and Serological Therapy Laboratories) and a cellodia TPHA kit (Fuji Rebio Inc.) were used.
【0061】(2) 試薬の調製 10%(W/V)ポリスチレンラテックス液0.1ml
をポリカーボネートチューブ中で攪拌させながら、これ
に抗原液1.0mlを一気に添加した。引き続き室温で
1時間攪拌したのち、ブロッキング用緩衝液2.0ml
を一気に添加し、1.5時間、室温で攪拌した。次に、
高速冷却遠心機(日立HR26型)で、19000×
g、10℃で30分遠心洗浄を行った。得られたラテッ
クス粒子の沈渣にラテックス保存用緩衝液5.0mlを
添加し、タッチミキサーにてよく攪拌したのち、高速冷
却遠心機で、19000×g、10℃で30分遠心洗浄
を行った。この洗浄操作を3回繰り返した。(2) Preparation of reagent 0.1 ml of 10% (W / V) polystyrene latex liquid
Was stirred in a polycarbonate tube, to which 1.0 ml of the antigen solution was added at once. After stirring for 1 hour at room temperature, 2.0 ml of blocking buffer
Was added all at once, and the mixture was stirred at room temperature for 1.5 hours. next,
19000 × with high-speed cooling centrifuge (Hitachi HR26 type)
g and centrifugal washing at 10 ° C. for 30 minutes. After adding 5.0 ml of a buffer solution for storing latex to the sediment of the obtained latex particles and thoroughly stirring with a touch mixer, the mixture was centrifuged and washed with a high-speed cooling centrifuge at 19000 × g at 10 ° C. for 30 minutes. This washing operation was repeated three times.
【0062】最終的に得られた沈渣にラテックス保存用
緩衝液2.0mlを添加し、沈渣をタッチミキサーにて
よく攪拌し、超音波破砕機(アトラソン社製、マイクロ
チップ、出力目盛3、50%サイクル)にて氷浴中、1
分間ソニケートし、分散させた。こののち、さらにラテ
ックス保存用緩衝液6.0mlを添加し、タッチミキサ
ーで十分混合させた後、固型分0.125%(W/V)
のラテックス懸濁液として4℃にて保存した。To the finally obtained sediment, 2.0 ml of a buffer solution for storing latex was added, and the sediment was thoroughly stirred with a touch mixer, and was subjected to an ultrasonic crusher (manufactured by Atlasson, microchip, output scale 3, 50). % Cycle) in an ice bath.
Sonicate for a minute and disperse. Thereafter, 6.0 ml of a latex storage buffer was further added, and the mixture was sufficiently mixed with a touch mixer. Then, the solid content was 0.125% (W / V).
Was stored at 4 ° C. as a latex suspension.
【0063】(3) 検体の調製 (1) で得られた梅毒家兎血清のうち陽性検体として、R
PR法で8倍を示したものを、生理食塩水(0.9%N
aCl水溶液)にて、2、4、8倍希釈し、4、2、1
倍を示す血清を調製した。また、陰性検体として生理食
塩水および正常家兎血清をそのまま用いた。(3) Preparation of the sample As a positive sample among the syphilis rabbit serum obtained in (1), R
What showed 8 times by the PR method was replaced with physiological saline (0.9% N
aCl aqueous solution), and dilute 2, 4, 8 times
Serum showing fold was prepared. Physiological saline and normal rabbit serum were used as negative samples as they were.
【0064】(4) 自動分析装置による検体の測定 以下に、全自動生化学分析装置日立7150型(日立製
作所社製)により、検体中の抗リン脂質抗体を測定する
方法を示す。(4) Measurement of Specimen by Automatic Analyzer A method for measuring anti-phospholipid antibodies in a specimen by using a fully automatic biochemical analyzer Hitachi 7150 (manufactured by Hitachi, Ltd.) is described below.
【0065】 測定モード ; Original Abs パラメーター; 検体量 20μl ラテックス試薬量 50μl 検体希釈用緩衝液量 350μl 測定波長 ; 570nm 測定時間 ; 検体分注の後、ただちに検体希釈用緩衝液量を添加し混合 したのち、ラテックス試薬を添加し混合した。ラテックス 試薬の添加後80秒後から320秒後の吸光度の変化量を もとめ、これを反応量とした。Measurement mode; Original Abs parameters; Sample volume 20 μl Latex reagent volume 50 μl Sample dilution buffer volume 350 μl Measurement wavelength; 570 nm Measurement time; Immediately after sample dispensing, add sample dilution buffer volume and mix The latex reagent was added and mixed. The amount of change in absorbance from 80 seconds to 320 seconds after the addition of the latex reagent was determined, and this was defined as the reaction amount.
【0066】 検 体 ; (3) で調製した梅毒陽性血清の希釈系列および生理食塩水 、梅毒陰性血清をそれぞれn=2で測定した。Specimen: The dilution series of syphilis-positive serum prepared in (3), and physiological saline and syphilis-negative serum were each measured at n = 2.
【0067】比較例3 各種ラテックス粒子のゼータ電位測定(従来条件)と梅
毒レアギン抗体測定用試薬の性能との関係 実施例4において、ゼータ電位が−20mV以下であっ
た2種類のラテックス粒子(平均粒径0.192μmお
よび0.087μm)を用いて、梅毒レアギン抗体測定
用試薬を調製した。試薬の調製および性能評価はすべて
実施例5と同様に行った。この測定結果を表6および図
5にまとめて示す。Comparative Example 3 Relationship between Zeta Potential Measurement of Various Latex Particles (Conventional Conditions) and Performance of Reagent for Syphilis Reagin Antibody Measurement In Example 4, two types of latex particles having a zeta potential of -20 mV or less (average) Reagents for measuring syphilis reagin antibody were prepared using particle diameters of 0.192 μm and 0.087 μm). Preparation of reagents and performance evaluation were all performed in the same manner as in Example 5. The measurement results are shown in Table 6 and FIG.
【0068】[0068]
【表6】 表6および図5から明らかなように、ゼータ電位が−2
0mV以上のラテックス粒子を用いた試薬は比較例に比
べて高感度であった。[Table 6] As is clear from Table 6 and FIG. 5, the zeta potential was -2.
Reagents using latex particles of 0 mV or more were more sensitive than the comparative examples.
【0069】[0069]
【発明の効果】本発明によれば、ラテックス粒子等の免
疫測定用不溶性担体に、測定しようとする物質に対応す
る抗原または抗体を物理吸着させるに当たり、抗体また
は抗原を効率よく大量に吸着させうるラテックス粒子を
簡便かつ迅速に選定することができる。According to the present invention, when an antigen or an antibody corresponding to a substance to be measured is physically adsorbed on an insoluble carrier for immunoassay such as latex particles, the antibody or the antigen can be efficiently adsorbed in a large amount. Latex particles can be easily and quickly selected.
【図1】pHとゼータ電位の関係を示すグラフである。FIG. 1 is a graph showing the relationship between pH and zeta potential.
【図2】イオン強度とゼータ電位の関係を示すグラフで
ある。FIG. 2 is a graph showing the relationship between ionic strength and zeta potential.
【図3】ゼータ電位とBSA吸着量の関係を示すグラフ
である。FIG. 3 is a graph showing the relationship between zeta potential and BSA adsorption amount.
【図4】ゼータ電位とリン脂質吸着量の関係を示すグラ
フである。FIG. 4 is a graph showing the relationship between zeta potential and phospholipid adsorption amount.
【図5】抗リン脂質抗体抗体価と吸光度変化量の関係を
示すグラフである。FIG. 5 is a graph showing the relationship between the anti-phospholipid antibody antibody titer and the amount of change in absorbance.
Claims (2)
する物質に対応する抗原または抗体を物理吸着させるに
当たり、pH5.0から8.5を示す緩衝液を用いて該
不溶性担体を懸濁し、懸濁状の担体のゼータ電位を測定
し、得られたゼータ電位値が−20mV以上0mV未満
の範囲にある担体を選択して、上記吸着に用いることを
特徴とする免疫診断薬の製造方法。When an antigen or an antibody corresponding to a substance to be measured is physically adsorbed on an insoluble carrier for immunoassay, the insoluble carrier is suspended using a buffer having a pH of 5.0 to 8.5, A method for producing an immunodiagnostic agent, comprising measuring a zeta potential of a suspended carrier, selecting a carrier having an obtained zeta potential value in a range of -20 mV or more and less than 0 mV, and using the carrier for the adsorption.
する物質に対応する抗原または抗体を物理吸着させるに
当たり、5mM以上50mM以下のイオン強度を有する
緩衝液を用いて該不溶性担体を懸濁し、懸濁状の担体の
ゼータ電位を測定し、得られたゼータ電位値が−20m
V以上0mV未満の範囲にある担体を選択して、上記吸
着に用いることを特徴とする免疫診断薬の製造方法。2. An insoluble carrier for immunoassay, in which the antigen or antibody corresponding to the substance to be measured is physically adsorbed, the insoluble carrier is suspended using a buffer having an ionic strength of 5 mM or more and 50 mM or less, The zeta potential of the suspended carrier was measured, and the resulting zeta potential value was -20 m
A method for producing an immunodiagnostic agent, wherein a carrier having a range of V or more and less than 0 mV is selected and used for the adsorption.
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JP06127794A JP3328058B2 (en) | 1994-03-30 | 1994-03-30 | Method for producing immunodiagnostic drug |
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JPH07270423A JPH07270423A (en) | 1995-10-20 |
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