JP3174280B2 - 自然発生アポｅ欠損高脂血症マウス - Google Patents
自然発生アポｅ欠損高脂血症マウスInfo
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Description
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の背景】発明の分野 本発明は、高脂血症を自然発生するマウスに関する。
【０００２】背景技術 高脂血症は、動脈硬化を進行させ、冠動脈疾患、虚血性
脳疾患など重篤な疾患の原因となることが明らかにされ
てきている。ヒトの高脂血症と同じまたは類似の病態を
発生させるモデル動物が存在するならば、高脂血症の発
症機序の解明、治療薬の開発にあたり、その寄与は大き
なものが期待される。
脳疾患など重篤な疾患の原因となることが明らかにされ
てきている。ヒトの高脂血症と同じまたは類似の病態を
発生させるモデル動物が存在するならば、高脂血症の発
症機序の解明、治療薬の開発にあたり、その寄与は大き
なものが期待される。
【０００３】高脂血症の自然発生モデルとしては、ＬＤ
Ｌレセプターを欠損したＷＨＨＬウサギが知られている
（Watanabe,Y., 1980, Athrosclerosis,36:261-268）。
このウサギは、ヒトの家族性高コレステロール血症の格
好のモデルとなり、脂質代謝機構の解明に大きな役割を
果たしてきた。
Ｌレセプターを欠損したＷＨＨＬウサギが知られている
（Watanabe,Y., 1980, Athrosclerosis,36:261-268）。
このウサギは、ヒトの家族性高コレステロール血症の格
好のモデルとなり、脂質代謝機構の解明に大きな役割を
果たしてきた。
【０００４】一方、近年の遺伝子工学の進歩により、脂
質代謝関連の遺伝子を導入したトランスジェニックマウ
ス、遺伝子を破壊したノックアウトマウスなどが作出さ
れており、例えばアポＥのノックアウトマウスも作出さ
れている（Piedrahita, J. A. et al. 1992, PNAS. 89,
4471-4475. および Zang, S. H. et al., 1992, Scie
nce 258, 468-471）。
質代謝関連の遺伝子を導入したトランスジェニックマウ
ス、遺伝子を破壊したノックアウトマウスなどが作出さ
れており、例えばアポＥのノックアウトマウスも作出さ
れている（Piedrahita, J. A. et al. 1992, PNAS. 89,
4471-4475. および Zang, S. H. et al., 1992, Scie
nce 258, 468-471）。
【０００５】その一方で、高脂血症の自然発生マウスが
提供されれば、ノックアウトマウスとの交配実験も可能
であり、高脂血症の原因解明の有用な情報源となると思
われるが、自然発生の高脂血症マウスの提供は依然なさ
れていない。
提供されれば、ノックアウトマウスとの交配実験も可能
であり、高脂血症の原因解明の有用な情報源となると思
われるが、自然発生の高脂血症マウスの提供は依然なさ
れていない。
【０００６】
【発明の概要】本発明者は、今般、高脂血症を自然発生
するマウスの作出に成功した。本発明はかかる知見に基
づくものである。
するマウスの作出に成功した。本発明はかかる知見に基
づくものである。
【０００７】よって、本発明は高脂血症を自然発生する
マウスの提供をその目的としている。
マウスの提供をその目的としている。
【０００８】そして本発明によるマウスは、以下の劣性
遺伝形質を有する自然発生高脂血症マウスである。 (a) 体の一部に脱毛および皮膚肥厚が認められ、ヒト
の黄色腫様を呈する。大動脈起始部に粥状硬化を認め
る。 (b) 静置血清は白濁し、血清コレステロール値は生下
時より極めて高い値を示し、３週齢では少なくとも１，
５００mg/dl を示す。 (c) アポＥタンパク質およびアポＥｍＲＮＡは認めら
れない。 (d) 正常マウスには認められないＩＤＬ（中間比重リ
ポタンパク）が認められる。正常マウスと比較して、Ｖ
ＬＤＬ（超低比重リポタンパク）の著しい増加と、ＨＤ
Ｌ（高比重リポタンパク）の著しい減少が認められる。
遺伝形質を有する自然発生高脂血症マウスである。 (a) 体の一部に脱毛および皮膚肥厚が認められ、ヒト
の黄色腫様を呈する。大動脈起始部に粥状硬化を認め
る。 (b) 静置血清は白濁し、血清コレステロール値は生下
時より極めて高い値を示し、３週齢では少なくとも１，
５００mg/dl を示す。 (c) アポＥタンパク質およびアポＥｍＲＮＡは認めら
れない。 (d) 正常マウスには認められないＩＤＬ（中間比重リ
ポタンパク）が認められる。正常マウスと比較して、Ｖ
ＬＤＬ（超低比重リポタンパク）の著しい増加と、ＨＤ
Ｌ（高比重リポタンパク）の著しい減少が認められる。
【０００９】
【発明の具体的説明】本発明によるマウスの入手可能性 本発明によるマウスは、本発明者らによって、埼玉県立
がんセンター研究所実験動物学研究室、埼玉県北足立郡
伊奈町大字小室８１８において継代維持されている。こ
の動物は、要求があれば、特許法施行規則第２７条の３
の規定に準じて、出願人より提供される。
がんセンター研究所実験動物学研究室、埼玉県北足立郡
伊奈町大字小室８１８において継代維持されている。こ
の動物は、要求があれば、特許法施行規則第２７条の３
の規定に準じて、出願人より提供される。
【００１０】本発明によるマウスの種類およびその特性 １）由来および種類 本発明によるマウスは、１９８８年および１９８９年に
福島県郡山市で捕獲した日本産野生マウス（Mus muscul
us molossinus ）に由来し、毛色は野生色（アグーチ）
である。このマウスを本発明者は、APOE Japan Mouseと
命名し、略称はAPOEJ マウスとした。また、遺伝子記号
をＡｐｏｅsm1stm とする。
福島県郡山市で捕獲した日本産野生マウス（Mus muscul
us molossinus ）に由来し、毛色は野生色（アグーチ）
である。このマウスを本発明者は、APOE Japan Mouseと
命名し、略称はAPOEJ マウスとした。また、遺伝子記号
をＡｐｏｅsm1stm とする。
【００１１】２）外観的特徴 ５週齢より上肢前腕部の脱毛と皮膚肥厚が観察される。
２ケ月齢より腹部被毛の異常および眼瞼周囲と耳介後部
の脱毛が認められ、上肢前腕部の肥厚は顕著になる（図
１参照）。これらはヒトの高脂血症に観察される黄色腫
様である。ヒトではアキレス腱部位の肥厚が観察される
が、このマウスでは後肢アキレス腱部位の肥厚は軽微で
ある。
２ケ月齢より腹部被毛の異常および眼瞼周囲と耳介後部
の脱毛が認められ、上肢前腕部の肥厚は顕著になる（図
１参照）。これらはヒトの高脂血症に観察される黄色腫
様である。ヒトではアキレス腱部位の肥厚が観察される
が、このマウスでは後肢アキレス腱部位の肥厚は軽微で
ある。
【００１２】３）病変部の病理組織 大動脈起始部の内膜にはコレステロールの針状結晶構造
物を有する粥状硬化を認める。病変部皮膚では、真皮が
泡沫状となり、大型の空胞とマクロファージによって占
められ、著しく肥厚している。一部にはコレステロール
の針状結晶構造物を有するマクロフアージの集塊と多核
巨細胞を認める。また、剖検では大腸漿膜に針頭大の白
斑部が認められ、リンパ節様組織を呈する。
物を有する粥状硬化を認める。病変部皮膚では、真皮が
泡沫状となり、大型の空胞とマクロファージによって占
められ、著しく肥厚している。一部にはコレステロール
の針状結晶構造物を有するマクロフアージの集塊と多核
巨細胞を認める。また、剖検では大腸漿膜に針頭大の白
斑部が認められ、リンパ節様組織を呈する。
【００１３】４）血液の性状 静置血液の血清部分は白濁し、白血球の増加が認められ
る。血清上層のクリーム層（カイロミクロン）は認めら
れない。
る。血清上層のクリーム層（カイロミクロン）は認めら
れない。
【００１４】血清コレステロール値は生下時より極めて
高値を示し、３週齢では１，５００から１，９００mg／
dl、４〜７ケ月齢では６００から９００mg／dl、９〜１
２ケ月齢では再び上昇して９００から１，９００mg／dl
を示す。
高値を示し、３週齢では１，５００から１，９００mg／
dl、４〜７ケ月齢では６００から９００mg／dl、９〜１
２ケ月齢では再び上昇して９００から１，９００mg／dl
を示す。
【００１５】トリグリセライド値は４〜７ケ月齢では絶
食時において９０から１４０mg／dlを示す。
食時において９０から１４０mg／dlを示す。
【００１６】５）血清リポタンパク像 本発明によるマウスの血清中のリポタンパク像は、アク
リルアミドゲルディスク電気泳動によれば、正常マウス
には認められないＩＤＬ（中間比重リポタンパク）が出
現する。また、正常マウスと比較してＶＬＤＬ（超低比
重リポタンパク）の著しい増加とＨＤＬ（高比重リポタ
ンパク）の減少が観察される。ＬＤＬ（低比重リポタン
パク）は本発明によるマウスおよび正常マウスにもほと
んど認められなかった。
リルアミドゲルディスク電気泳動によれば、正常マウス
には認められないＩＤＬ（中間比重リポタンパク）が出
現する。また、正常マウスと比較してＶＬＤＬ（超低比
重リポタンパク）の著しい増加とＨＤＬ（高比重リポタ
ンパク）の減少が観察される。ＬＤＬ（低比重リポタン
パク）は本発明によるマウスおよび正常マウスにもほと
んど認められなかった。
【００１７】６）アポリポタンパクＥ（アポＥ） 血清中に、例えば等電点ゲル電気泳動とイムノプロッテ
ィングにより、アポＥバンドは全く検出されない。ただ
し、正常マウスでは１本のアポＥバンドが認められ、本
発明によるマウスと正常マウスとの交配Ｆ１マウスで
は、正常マウスのアポＥバンドと同一の位置にほぼ半量
のアポＥバンドが認められる。
ィングにより、アポＥバンドは全く検出されない。ただ
し、正常マウスでは１本のアポＥバンドが認められ、本
発明によるマウスと正常マウスとの交配Ｆ１マウスで
は、正常マウスのアポＥバンドと同一の位置にほぼ半量
のアポＥバンドが認められる。
【００１８】７）アポＥのｍＲＮＡ 本発明によるマウスにおいて、ノザンブロッティングを
行うと、アポＥのｍＲＮＡの発現は認められない。ただ
し、正常マウスでは１本のｍＲＮＡバンドが認められ、
本発明によるマウスと正常マウスとの交配Ｆ１マウスで
は正常マウスのｍＲＮＡバンドと同一の位置にほぼ半量
のｍＲＮＡバンドが認められる。このことは、アポＥの
ＤＮＡの欠損を示唆するものである。
行うと、アポＥのｍＲＮＡの発現は認められない。ただ
し、正常マウスでは１本のｍＲＮＡバンドが認められ、
本発明によるマウスと正常マウスとの交配Ｆ１マウスで
は正常マウスのｍＲＮＡバンドと同一の位置にほぼ半量
のｍＲＮＡバンドが認められる。このことは、アポＥの
ＤＮＡの欠損を示唆するものである。
【００１９】８）遺伝 マウスのアポＥ遺伝子は第７染色体にのっていることが
すでにLusis, A. J.,et al (1987) J. Biol. Chem. 26
2: 7594-7604. によって明らかにされている。本発明に
よるマウスの交配実験によれば、高脂血症は常染色体劣
性遺伝様式によって発症し、単純なメンデル遺伝に従っ
た。すなわち、本発明によるマウスの本高脂血症は、ア
ポＥ遺伝子欠損のホモ接合個体によって発症する。一
方、ヘテロ接合個体の外観は正常であり、コレステロー
ル値および血清リポタンパク像も正常であった。
すでにLusis, A. J.,et al (1987) J. Biol. Chem. 26
2: 7594-7604. によって明らかにされている。本発明に
よるマウスの交配実験によれば、高脂血症は常染色体劣
性遺伝様式によって発症し、単純なメンデル遺伝に従っ
た。すなわち、本発明によるマウスの本高脂血症は、ア
ポＥ遺伝子欠損のホモ接合個体によって発症する。一
方、ヘテロ接合個体の外観は正常であり、コレステロー
ル値および血清リポタンパク像も正常であった。
【００２０】９）継代維持方法 黄色腫様皮膚病変の発症時期は雄よりも雌のほうが早
く、また重度になる傾向が強い。とくに雌では胸部の皮
膚肥厚が著しく、乳腺の腺房細胞は脂肪細胞に置換さ
れ、５対の乳頭のうち胸部の３対が泌乳不能になる傾向
が強い。したがって、継代維持はヘテロ接合雌個体とホ
モ接合個体の交配によって行う。この交配によって得ら
れる子のうち高脂血症の発症個体は雌雄共にすべてホモ
接合個体であり、外観上正常の個体は雌雄共にすべてヘ
テロ接合個体である。よって、次代を得るには同様にヘ
テロ接合雌個体とホモ接合雄個体による交配を行う。
く、また重度になる傾向が強い。とくに雌では胸部の皮
膚肥厚が著しく、乳腺の腺房細胞は脂肪細胞に置換さ
れ、５対の乳頭のうち胸部の３対が泌乳不能になる傾向
が強い。したがって、継代維持はヘテロ接合雌個体とホ
モ接合個体の交配によって行う。この交配によって得ら
れる子のうち高脂血症の発症個体は雌雄共にすべてホモ
接合個体であり、外観上正常の個体は雌雄共にすべてヘ
テロ接合個体である。よって、次代を得るには同様にヘ
テロ接合雌個体とホモ接合雄個体による交配を行う。
【００２１】外観によるホモ個体とヘテロ個体の判別は
４〜６週齢、すなわち交配時期までに前肢上腕の皮膚肥
厚の有無によって容易に行える。
４〜６週齢、すなわち交配時期までに前肢上腕の皮膚肥
厚の有無によって容易に行える。
【００２２】また生下時より血清コレステロールは高い
値を示し、血清は白濁するので、微量の採血により、早
期にホモ個体を判定することも可能である。
値を示し、血清は白濁するので、微量の採血により、早
期にホモ個体を判定することも可能である。
【００２３】１０）繁殖 ホモ接合個体を多量に実験に供する必要があるとき、お
よびホモ接合個体の胎児、新生児を得たい場合には、雌
雄ともホモ接合個体を交配に用いる。雌は胸部の皮膚異
常によって哺育不能になる傾向があるので、４〜５週齢
の早期にペアをつくり、初産時期を早くさせ哺育中も雄
を同居させることで、２〜３産が可能であり、多くの個
体が得られる。
よびホモ接合個体の胎児、新生児を得たい場合には、雌
雄ともホモ接合個体を交配に用いる。雌は胸部の皮膚異
常によって哺育不能になる傾向があるので、４〜５週齢
の早期にペアをつくり、初産時期を早くさせ哺育中も雄
を同居させることで、２〜３産が可能であり、多くの個
体が得られる。
【００２４】１１）飼育方法 アルミの普通ケージにチップ（床敷）を入れて普通食固
型飼料（例えば、日本クレア製、ＣＥ−２）を与える。
ケージ交換は週１回程度行う。野生由来マウスであるた
めに、俊敏であり、ジヤンプ力も強いので、逃亡防止の
ためにケージ交換には注意を要する。水は給水瓶で与え
る。ケージ内に４００ml程度の紙コップ（例えば尿検査
用）を横に入れてやることにより営巣し、繁殖性がよく
なる。ＳＰＦ環境での飼育が原則であるが、センダイウ
イルス（ＨＶＪ）などの感染症には弱いので注意が必要
である。
型飼料（例えば、日本クレア製、ＣＥ−２）を与える。
ケージ交換は週１回程度行う。野生由来マウスであるた
めに、俊敏であり、ジヤンプ力も強いので、逃亡防止の
ためにケージ交換には注意を要する。水は給水瓶で与え
る。ケージ内に４００ml程度の紙コップ（例えば尿検査
用）を横に入れてやることにより営巣し、繁殖性がよく
なる。ＳＰＦ環境での飼育が原則であるが、センダイウ
イルス（ＨＶＪ）などの感染症には弱いので注意が必要
である。
【００２５】１２）アポＥノックアウトマウスとの相違
点 本発明によるマウスと、アポＥノックアウトマウスとの
種々の項目につき相違点は、次の第１表に示される通り
である。
点 本発明によるマウスと、アポＥノックアウトマウスとの
種々の項目につき相違点は、次の第１表に示される通り
である。
【００２６】
【表１】 両者の最も大きな違いは血清総コレステロール値であ
る。ノザンブロッティングの結果から、いずれのマウス
もアポＥを欠損するにも関わらず、アポＥノックアウト
マウスはコレステロール値が５００ｍｇ／ｄｌであるの
に対して本発明によるマウスは１，８００ｍｇ／ｄｌを
越える。この値の差は、黄色腫様皮膚病変および粥状動
脈硬化の程度に反映している。すなわち、両者はアポＥ
の欠損という点で遺伝子型は共通であるが表現型として
のコレステロール値や黄色腫などの症状が大きく異な
る。このことは、アポＥノックアウトマウスの遺伝的背
景がラボラトリーマウスＣ５７ＢＬ／６Ｊ（Mus muscul
us domesticus ）であり、本発明によるマウスが日本産
野生マウス由来（Mus musculus molossinus ）であるこ
とと関係していると考えられる。高脂血症の発症には個
人差および人種差が存在する事が知られており、この様
な差異を考察するためのモデルとしても有用であると考
えられる。ちなみに、本発明によるマウスおよびアポＥ
ノックアウトマウスは、高脂肪食を負荷するとコレステ
ロール値はいずれのマウスも２，０００ｍｇ／ｄｌを越
える。
る。ノザンブロッティングの結果から、いずれのマウス
もアポＥを欠損するにも関わらず、アポＥノックアウト
マウスはコレステロール値が５００ｍｇ／ｄｌであるの
に対して本発明によるマウスは１，８００ｍｇ／ｄｌを
越える。この値の差は、黄色腫様皮膚病変および粥状動
脈硬化の程度に反映している。すなわち、両者はアポＥ
の欠損という点で遺伝子型は共通であるが表現型として
のコレステロール値や黄色腫などの症状が大きく異な
る。このことは、アポＥノックアウトマウスの遺伝的背
景がラボラトリーマウスＣ５７ＢＬ／６Ｊ（Mus muscul
us domesticus ）であり、本発明によるマウスが日本産
野生マウス由来（Mus musculus molossinus ）であるこ
とと関係していると考えられる。高脂血症の発症には個
人差および人種差が存在する事が知られており、この様
な差異を考察するためのモデルとしても有用であると考
えられる。ちなみに、本発明によるマウスおよびアポＥ
ノックアウトマウスは、高脂肪食を負荷するとコレステ
ロール値はいずれのマウスも２，０００ｍｇ／ｄｌを越
える。
【００２７】１３）モデル動物としての有用性 アポＥは、カイロミクロンレムナント、ＶＬＤＬ、ＩＤ
Ｌ、ＨＤＬなどのリポタンパクの構成アポリポタンパク
として存在し、血清脂質を輸送し、ＬＤＬレセプター
や、ＶＬＤＬレセプターを通じて脂質の細胞内への取り
込みを行っている。アポＥの欠損症は、ヒトのIII 型高
脂血症を呈するが、世界でも８例が報告されているに過
ぎないまれな疾患であり、同様のIII 型高脂血症の頻度
は我国では０．００４％である。アポＥ２ホモ個体は約
１〜３％であり、その５％のヒトはIII 型高脂血症を発
症する。
Ｌ、ＨＤＬなどのリポタンパクの構成アポリポタンパク
として存在し、血清脂質を輸送し、ＬＤＬレセプター
や、ＶＬＤＬレセプターを通じて脂質の細胞内への取り
込みを行っている。アポＥの欠損症は、ヒトのIII 型高
脂血症を呈するが、世界でも８例が報告されているに過
ぎないまれな疾患であり、同様のIII 型高脂血症の頻度
は我国では０．００４％である。アポＥ２ホモ個体は約
１〜３％であり、その５％のヒトはIII 型高脂血症を発
症する。
【００２８】よって、本発明によるマウスは、高脂血症
と動脈硬化の原因および脂質代謝の機序の解明、血清脂
質降下剤の開発、栄養学研究などの分野において、疾患
モデル動物としての利用が期待される。
と動脈硬化の原因および脂質代謝の機序の解明、血清脂
質降下剤の開発、栄養学研究などの分野において、疾患
モデル動物としての利用が期待される。
【００２９】上記のように本発明によるマウスは、アポ
ＥノックアウトマウスとアポＥの欠損という点において
共通であっても、コレステロール値、黄色腫などの症状
において大きく相違することから、本発明によるマウス
には、アポＥ以外の脂質代謝関連の原因遺伝子の存在が
予測される。また、本発明によるマウスは、遺伝的背景
という点においてアポＥノックアウトマウスのような従
来のラボラトリーマウス（ほとんどがＣ５７ＢＬ／６マ
ウスから作出される）とは大きく相違することから、従
来のラボラトリーマウスには見い出されない表現形質が
存在すると予測される。更に、アポＥは、他のアポリポ
タンパクとは異なり肝臓のみならず脳でも産生され、神
経の維持、再生、修復に関係すると考えられており、最
近アルツハイマー病との関係が見出されている。従っ
て、本発明によるマウスは未知の原因遺伝子を探索する
ためのモデルとして多方面での利用が期待される。
ＥノックアウトマウスとアポＥの欠損という点において
共通であっても、コレステロール値、黄色腫などの症状
において大きく相違することから、本発明によるマウス
には、アポＥ以外の脂質代謝関連の原因遺伝子の存在が
予測される。また、本発明によるマウスは、遺伝的背景
という点においてアポＥノックアウトマウスのような従
来のラボラトリーマウス（ほとんどがＣ５７ＢＬ／６マ
ウスから作出される）とは大きく相違することから、従
来のラボラトリーマウスには見い出されない表現形質が
存在すると予測される。更に、アポＥは、他のアポリポ
タンパクとは異なり肝臓のみならず脳でも産生され、神
経の維持、再生、修復に関係すると考えられており、最
近アルツハイマー病との関係が見出されている。従っ
て、本発明によるマウスは未知の原因遺伝子を探索する
ためのモデルとして多方面での利用が期待される。
【００３０】また、現在、世界中で広く用いられている
近交系ラボラトリーマウス（Mus musculus domesticus
）のほとんどは、ヨーロッパの野生マウスを起源とし
ており、これらの近交系間の遺伝子多型率は約５０％で
ある。一方、日本産野生マウス（Mus musculus molossi
nus ）は、ヨーロッパの野生マウスとおよそ１００万年
の遺伝的隔たりがあり２亜系間の多型率は約８０％であ
り、亜系間交配による繁殖も容易である。従って、疾患
モデル動物を用いた遺伝子マッピングやポジショナルク
ローニングなどの解析において日本産野生マウス由来で
ある本発明によるマウスは貴重な遺伝子資源であるとい
える。
近交系ラボラトリーマウス（Mus musculus domesticus
）のほとんどは、ヨーロッパの野生マウスを起源とし
ており、これらの近交系間の遺伝子多型率は約５０％で
ある。一方、日本産野生マウス（Mus musculus molossi
nus ）は、ヨーロッパの野生マウスとおよそ１００万年
の遺伝的隔たりがあり２亜系間の多型率は約８０％であ
り、亜系間交配による繁殖も容易である。従って、疾患
モデル動物を用いた遺伝子マッピングやポジショナルク
ローニングなどの解析において日本産野生マウス由来で
ある本発明によるマウスは貴重な遺伝子資源であるとい
える。
【００３１】
【実施例】作出の経緯 本発明による自然発生高脂血症マウスは、１９８８年福
島県郡山市で採取した１匹の雄マウスと翌１９８９年に
採取した１匹の雌マウスに由来する。同年この雌雄を交
配し以後、兄妹交配によって近交系化を開始した。１９
９２年にＦ４代にてＳＰＦ化（特定の病原微生物に感染
していない状態）を行った。
島県郡山市で採取した１匹の雄マウスと翌１９８９年に
採取した１匹の雌マウスに由来する。同年この雌雄を交
配し以後、兄妹交配によって近交系化を開始した。１９
９２年にＦ４代にてＳＰＦ化（特定の病原微生物に感染
していない状態）を行った。
【００３２】ＳＰＦ以後に近交系化を再スタートしたが
１９９４年、Ｆ４代の１雌個体に被毛の異常を発見し
た。異常は腹部を横断する立毛による特徴的な毛並みと
乳頭周囲の脱毛であった（図２）。このマウスについて
検索を行うと同時に、この異常が遺伝的疾患であること
を想定して、両親および同腹の兄妹の交配実験によって
本高脂血症マウス系を分離、継代を行い、本発明による
マウスを得た。現在、近交系化の途上であり、世代数は
Ｆ４＋Ｆ４（ＳＰＦ化以降）＋Ｆ６（突然変異以降）で
ある。
１９９４年、Ｆ４代の１雌個体に被毛の異常を発見し
た。異常は腹部を横断する立毛による特徴的な毛並みと
乳頭周囲の脱毛であった（図２）。このマウスについて
検索を行うと同時に、この異常が遺伝的疾患であること
を想定して、両親および同腹の兄妹の交配実験によって
本高脂血症マウス系を分離、継代を行い、本発明による
マウスを得た。現在、近交系化の途上であり、世代数は
Ｆ４＋Ｆ４（ＳＰＦ化以降）＋Ｆ６（突然変異以降）で
ある。
【００３３】血清リポタンパクの検出 血清中のリポタンパクの検出は、アクリルアミドゲルデ
ィスク電気泳動法（リポタンパク検出キット、リポフォ
ー（登録商標）、株式会社常光製）を用いて行った。デ
ィスクゲル電気泳動は、１０％アクリルアミドの分離用
ゲルに脂質染色液ズダンブラックと検体を含んだ濃縮ゲ
ルを重層し、トリス−ホウ酸緩衝液を用い、９０Ｖの定
電圧で約３０分泳動した。泳動終了後ただちに写真を撮
って記録した。
ィスク電気泳動法（リポタンパク検出キット、リポフォ
ー（登録商標）、株式会社常光製）を用いて行った。デ
ィスクゲル電気泳動は、１０％アクリルアミドの分離用
ゲルに脂質染色液ズダンブラックと検体を含んだ濃縮ゲ
ルを重層し、トリス−ホウ酸緩衝液を用い、９０Ｖの定
電圧で約３０分泳動した。泳動終了後ただちに写真を撮
って記録した。
【００３４】その結果は、図３に示す通りであった。す
なわち、正常マウスと比較してＶＬＤＬ（超低比重リポ
タンパク）の著しい増加とＨＤＬ（高比重リポタンパ
ク）の減少が観察され正常マウスには認められないＩＤ
Ｌ（中間比重リポタンパク）が確認された。ＬＤＬ（低
比重リポタンパク）は本発明によるマウスおよび正常マ
ウスにもほとんど認められなかった。ちなみにＬＤＬレ
セプターノックアウトマウスではＬＤＬが認められた。
なわち、正常マウスと比較してＶＬＤＬ（超低比重リポ
タンパク）の著しい増加とＨＤＬ（高比重リポタンパ
ク）の減少が観察され正常マウスには認められないＩＤ
Ｌ（中間比重リポタンパク）が確認された。ＬＤＬ（低
比重リポタンパク）は本発明によるマウスおよび正常マ
ウスにもほとんど認められなかった。ちなみにＬＤＬレ
セプターノックアウトマウスではＬＤＬが認められた。
【００３５】血清中のアポＥの検出 血清中のアポＥの検出は、アクリルアミドゲル電気泳動
と抗ヒトアポＥ血清、ＡＬＰ標識抗体を用いたイムノブ
ロット（フェノタイピングアポＥ判定キット（登録商
標）、株式会社常光製）によって行った。検体を３Ｍの
尿素、ｐＨ４．５〜８．０の５％アクリルアミド等電点
ゲル電気泳動によって分離し、泳動後タンパクをニトリ
セルロール膜に転写し、ブロッキングしたのち、第１抗
体反応、第２抗体反応、発色操作を行って検出した。
と抗ヒトアポＥ血清、ＡＬＰ標識抗体を用いたイムノブ
ロット（フェノタイピングアポＥ判定キット（登録商
標）、株式会社常光製）によって行った。検体を３Ｍの
尿素、ｐＨ４．５〜８．０の５％アクリルアミド等電点
ゲル電気泳動によって分離し、泳動後タンパクをニトリ
セルロール膜に転写し、ブロッキングしたのち、第１抗
体反応、第２抗体反応、発色操作を行って検出した。
【００３６】その結果は、図４に示される通りであっ
た。すなわち、本発明によるマウスにおいて、アポＥバ
ンドは全く検出されなかった。ただし、正常マウスでは
１本のアポＥバンドが認められ、本発明によるマウスと
正常マウスとの交配Ｆ１マウスでは、正常マウスのアポ
Ｅバンドと同一の位置にほぼ半量のアポＥバンドが認め
られた。また、アポＥノックアウトマウスのアポＥバン
ドも全く検出されなかった。
た。すなわち、本発明によるマウスにおいて、アポＥバ
ンドは全く検出されなかった。ただし、正常マウスでは
１本のアポＥバンドが認められ、本発明によるマウスと
正常マウスとの交配Ｆ１マウスでは、正常マウスのアポ
Ｅバンドと同一の位置にほぼ半量のアポＥバンドが認め
られた。また、アポＥノックアウトマウスのアポＥバン
ドも全く検出されなかった。
【００３７】アポＥのｍＲＮＡの検出 マウス肝臓より調製した全ＲＮＡを１％，０．６６Ｍ
ホルムアルデヒド−アガロ−スゲルで電気泳動し、アポ
ＥのｃＤＮＡをプローブに用いてノザンブロットを行っ
た。
ホルムアルデヒド−アガロ−スゲルで電気泳動し、アポ
ＥのｃＤＮＡをプローブに用いてノザンブロットを行っ
た。
【００３８】その結果は、図５に示される通りであっ
た。すなわち、本発明によるマウスにおいて、アポＥの
ｍＲＮＡは全く発現していなかった。一方、正常マウス
では１本のｍＲＮＡバンドが、本発明によるマウスと正
常マウスとの交配Ｆ１マウスでは正常マウスのｍＲＮＡ
バンドと同一の位置にほぼ半量のｍＲＮＡバンドを認め
た。また、アポＥノックアウトマウスのｍＲＮＡも全く
発現していなかった。
た。すなわち、本発明によるマウスにおいて、アポＥの
ｍＲＮＡは全く発現していなかった。一方、正常マウス
では１本のｍＲＮＡバンドが、本発明によるマウスと正
常マウスとの交配Ｆ１マウスでは正常マウスのｍＲＮＡ
バンドと同一の位置にほぼ半量のｍＲＮＡバンドを認め
た。また、アポＥノックアウトマウスのｍＲＮＡも全く
発現していなかった。
【図１】本発明による自然発生アポＥ欠損高脂血症マウ
ス（７ヶ月齢雌）の写真（生物の形態の写真）である。
眼瞼および耳介周囲の脱毛、前肢の皮膚肥厚が認められ
る。
ス（７ヶ月齢雌）の写真（生物の形態の写真）である。
眼瞼および耳介周囲の脱毛、前肢の皮膚肥厚が認められ
る。
【図２】本発明による自然発生アポＥ欠損高脂血症マウ
スと正常マウスの写真（生物の形態の写真、左右ともに
２ヶ月齢雌）である。 左：異常マウス、腹部を横断する立毛と、乳頭周囲の脱
毛と肥厚が認められる。 右：正常マウス
スと正常マウスの写真（生物の形態の写真、左右ともに
２ヶ月齢雌）である。 左：異常マウス、腹部を横断する立毛と、乳頭周囲の脱
毛と肥厚が認められる。 右：正常マウス
【図３】各種マウスのディスクゲル電気泳動法による血
清リポタンパクの存在および不存在を示した電気泳動写
真である。 レーン１：日本産野生由来正常マウス レーン２：自然発生アポＥ欠損高脂血症マウス レーン３：アポＥノックアウトマウス レーン４：ＬＤＬレセプターノックアウトマウス
清リポタンパクの存在および不存在を示した電気泳動写
真である。 レーン１：日本産野生由来正常マウス レーン２：自然発生アポＥ欠損高脂血症マウス レーン３：アポＥノックアウトマウス レーン４：ＬＤＬレセプターノックアウトマウス
【図４】各種マウスの等電点電気泳動によるアポＥタン
パクの存在および不存在を示した電気泳動写真である。 レーン１および２：自然発生アポＥ欠損高脂血症マウス レーン３および４：（正常マウス×自然発生アポＥ欠損
高脂血症マウス）Ｆ１ レーン５および６：日本産野生由来正常マウス レーン７および８：アポＥノックアウトマウス
パクの存在および不存在を示した電気泳動写真である。 レーン１および２：自然発生アポＥ欠損高脂血症マウス レーン３および４：（正常マウス×自然発生アポＥ欠損
高脂血症マウス）Ｆ１ レーン５および６：日本産野生由来正常マウス レーン７および８：アポＥノックアウトマウス
【図５】各種マウスのアポＥのｍＲＮＡの発現の有無を
示した電気泳動写真（ノーザンブロット）である。 レーン１：（アポＥノックアウトマウス×自然発生アポ
Ｅ欠損高脂血症マウス）Ｆ１ レーン２：正常Ｃ５７ＢＬ／６マウス レーン３：（正常Ｃ５７ＢＬ／６マウス×アポＥノック
アウトマウス）Ｆ１ レーン４：アポＥノックアウトマウス レーン５：日本産野生由来正常マウス レーン６：（正常マウス×自然発生アポＥ欠損高脂血症
マウス）Ｆ１ レーン７：自然発生アポＥ欠損高脂血症マウス
示した電気泳動写真（ノーザンブロット）である。 レーン１：（アポＥノックアウトマウス×自然発生アポ
Ｅ欠損高脂血症マウス）Ｆ１ レーン２：正常Ｃ５７ＢＬ／６マウス レーン３：（正常Ｃ５７ＢＬ／６マウス×アポＥノック
アウトマウス）Ｆ１ レーン４：アポＥノックアウトマウス レーン５：日本産野生由来正常マウス レーン６：（正常マウス×自然発生アポＥ欠損高脂血症
マウス）Ｆ１ レーン７：自然発生アポＥ欠損高脂血症マウス
Claims (2)
- 【請求項１】以下の劣性遺伝形質を有する、自然発生高
脂血症マウスAPOE Japan Mouse。 (a) 体の一部に脱毛および皮膚肥厚が認められ、ヒト
の黄色腫様を呈する。大動脈起始部に粥状硬化を認め
る。 (b) 静置血清は白濁し、血清コレステロール値は生下
時より極めて高い値を示し、３週齢では少なくとも１，
５００mg/dl を示す。 (c) アポＥタンパク質およびアポＥｍＲＮＡは認めら
れない。 (d) 正常マウスには認められないＩＤＬ（中間比重リ
ポタンパク）が認められる。正常マウスと比較して、Ｖ
ＬＤＬ（超低比重リポタンパク）の著しい増加と、ＨＤ
Ｌ（高比重リポタンパク）の著しい減少が認められる。 - 【請求項２】請求項１に記載のマウスの子孫であって、
以下の劣性遺伝形質を有する自然発生高脂血症マウス。 (a) 体の一部に脱毛および皮膚肥厚が認められ、ヒト
の黄色腫様を呈する。大動脈起始部に粥状硬化を認め
る。 (b) 静置血清は白濁し、血清コレステロール値は生下
時より極めて高い値を示し、３週齢では少なくとも１，
５００mg/dl を示す。 (c) アポＥタンパク質およびアポＥｍＲＮＡは認めら
れない。 (d) 正常マウスには認められないＩＤＬ（中間比重リ
ポタンパク）が認められる。正常マウスと比較して、Ｖ
ＬＤＬ（超低比重リポタンパク）の著しい増加と、ＨＤ
Ｌ（高比重リポタンパク）の著しい減少が認められる。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP30127896A JP3174280B2 (ja) | 1996-10-25 | 1996-10-25 | 自然発生アポｅ欠損高脂血症マウス |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP30127896A JP3174280B2 (ja) | 1996-10-25 | 1996-10-25 | 自然発生アポｅ欠損高脂血症マウス |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH10117631A JPH10117631A (ja) | 1998-05-12 |
| JP3174280B2 true JP3174280B2 (ja) | 2001-06-11 |
Family
ID=17894906
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP30127896A Expired - Lifetime JP3174280B2 (ja) | 1996-10-25 | 1996-10-25 | 自然発生アポｅ欠損高脂血症マウス |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3174280B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR101672842B1 (ko) * | 2014-11-28 | 2016-11-04 | 한용호 | 인조 속눈썹용 어플리케이터 |
-
1996
- 1996-10-25 JP JP30127896A patent/JP3174280B2/ja not_active Expired - Lifetime
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR101672842B1 (ko) * | 2014-11-28 | 2016-11-04 | 한용호 | 인조 속눈썹용 어플리케이터 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH10117631A (ja) | 1998-05-12 |
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