JP3055973B2 - Antibiotic aldecarmycin and its production method, and its derivative and its production method - Google Patents
Antibiotic aldecarmycin and its production method, and its derivative and its production methodInfo
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Description
【0001】[0001]
【産業上の利用分野】本発明は抗菌活性を有する新規な
抗生物質であるアルデカルマイシンおよびアセタール誘
導体に関し、またアルデカルマイシンおよびそのアセタ
ール誘導体の製造法に関する。さらに本発明はアルデカ
ルマイシンを生産できる特性を持つ新規な微生物、スト
レプトミセス MJ147−72F6株に関する。さら
に本発明はアルデカルマイシンおよびそれのアセタール
誘導体を有効成分とする抗菌剤に関する。BACKGROUND OF THE INVENTION 1. Field of the Invention The present invention relates to a new antibiotic having antibacterial activity, aldecarmycin and an acetal derivative, and to a method for producing aldecarmycin and an acetal derivative thereof. Further, the present invention relates to Aldeca
The present invention relates to a novel microorganism, Streptomyces strain MJ147-72F6, which has properties capable of producing lumycin. Further, the present invention relates to an antibacterial agent containing aldecarmycin and an acetal derivative thereof as an active ingredient.
【0002】[0002]
【従来の技術】細菌感染症の化学療法において、多剤耐
性菌の出現は重大な問題である。従来知られるまたは使
用されている既知の抗菌性化合物とは異なる化学構造上
の骨格を有し且つ優れた抗菌活性と性質を示す新しい化
合物を発見または創製することは常に要望されており、
そのための研究が行われている。BACKGROUND OF THE INVENTION In chemotherapy of bacterial infections, the emergence of multidrug-resistant bacteria is a serious problem. It is always desirable to find or create new compounds that have a different chemical structure backbone than previously known or used known antibacterial compounds and that exhibit excellent antibacterial activity and properties.
Research for that purpose is being conducted.
【0003】[0003]
【発明が解決すべき課題】本発明は、上記の要望に応え
ることのできる抗菌活性をもつ新規な抗生物質を提供す
ることを目的にするものである。SUMMARY OF THE INVENTION An object of the present invention is to provide a novel antibiotic having an antibacterial activity capable of meeting the above demand.
【0004】[0004]
【課題を解決するための手段】そこで本発明者らは有用
な新規抗生物質を発見すべく研究を行い、その結果、新
規な微生物として、ストレプトミセス属に属する菌株を
分離することに成功し、またこの菌株が新しい構造骨格
を有する抗生物質を産生することを見い出した。そし
て、この物質を単離することに成功してMJ147−7
2F6物質と当初は命名した。そして、この物質の名を
アルデカルマイシン(Aldecalmycin)と今
回、改称した。このアルデカルマイシンがグラム陽性の
細菌並びにその薬剤耐性菌(メチシリン耐性菌等)に抗
菌活性を示すことを見い出した。さらに研究を続けてア
ルデカルマイシンのアセタール誘導体{後記の式(I)
のRが である場合の誘導体}を作り分析することにより、アル
デカルマイシンの化学構造を決定した。そしてアルデカ
ルマイシンが新規化合物であること及びヘキサピラノー
ス環を含むことを確認し、後記の式(I)により表わせ
ることを知見した。Means for Solving the Problems The present inventors conducted research to find a useful new antibiotic, and as a result, succeeded in isolating a strain belonging to the genus Streptomyces as a novel microorganism, They have also found that this strain produces antibiotics with a new structural skeleton. And succeeded in isolating this substance, MJ147-7
It was initially named 2F6 substance. And the name of this substance
Aldecalmycin and now
Times, renamed. The aldehyde duocarmycin has been found to exhibit antimicrobial activity on bacteria and their drug-resistant bacteria Gram-positive (methicillin-resistant bacteria and the like). Furthermore A continued research
Acetal derivative of Le decal mycin {hereinafter of the formula (I)
Of R Make it derivatives when} By By analyzing Al
The chemical structure of decarmycin was determined. And Aldeka
It was confirmed that rumycin was a novel compound and contained a hexapyranose ring, and it was found that it could be represented by the formula (I) described below.
【0005】しかして、本発明は、ストレプトミセス属
に属する微生物を培養して得られて本発明者らによりア
ルデカルマイシンと命名された物質およびその製造法、
並びにそのアセタール誘導体およびその製造法について
提供するものである。さらに、本発明はアルデカルマイ
シンおよびそのアセタール誘導体を有効成分とする抗菌
剤を提供するものである。[0005] Thus, the present invention is, A by obtained by the present inventors by culturing a microorganism belonging to the genus Streptomyces
A substance named rudecarmycin and its production method,
And an acetal derivative thereof and a production method thereof. Further, the present invention provides
An antimicrobial agent comprising syn and an acetal derivative thereof as an active ingredient.
【0006】すなわち、第1の本発明によると次式
(I) 〔式中、Rはアルデヒド基−CHOである〕で表わされ
る抗生物質アルデカルマイシンもしくはその水和物が提
供される。That is, according to the first invention, the following formula (I) [Wherein R is an aldehyde group -CHO], or an antibiotic aldecarmycin or a hydrate thereof.
【0007】本発明による式(I)のアルデカルマイシ
ンの理化学的性質は次の通りである。According to the present invention, aldecarmish of formula (I)
Physicochemical properties of the emissions is as follows.
【0008】(1)外観 白色粉末 (2)分子式 C33H54O9 (3)元素分析 実験値 計算値(C33H54O9 ・1/2 H2 Oとして) C 65.48 65.64% H 9.29 9.18% O 25.47 25.18% (4)高分解能質量分析(HRFABMS:負イオンモ
ード) 実験値 :593.3687(M−H)- 計算値(C33H53O9 として):593.3689 (5)融点 125〜128℃ (6)比旋光度 [α]D 26−78.7°(c 1.0,メタノール) (7)紫外線吸収スペクトル 添付図面の図1に示す通りである。[0008] (1) Appearance White powder (2) Molecular formula C 33 H 54 O 9 (3 ) Elemental analysis Found Calculated (as C 33 H 54 O 9 · 1/2 H 2 O) C 65.48 65. 64% H 9.29 9.18% O 25.47 25.18% (4) high resolution mass spectrometry (HRFABMS: negative ion mode) Found: 593.3687 (M-H) - calcd (C 33 H (As 53 O 9 ): 593.3689 (5) Melting point 125-128 ° C. (6) Specific rotation [α] D 26 -78.7 ° (c 1.0, methanol) (7) Ultraviolet absorption spectrum As shown in FIG.
【0009】(8)赤外線吸収スペクトル(KBr錠剤
法) 添付図面の図2の通りである。(8) Infrared absorption spectrum (KBr tablet method) As shown in FIG. 2 of the accompanying drawings.
【0010】(9)プロトン核磁気共鳴スペクトル 400MHzにおいて重メタノール中で室温にて測定し
たプロトンNMRスペクトルは、添付図面の図3に示す
通りである。(9) Proton nuclear magnetic resonance spectrum The proton NMR spectrum measured at room temperature in heavy methanol at 400 MHz is as shown in FIG. 3 of the accompanying drawings.
【0011】(10)炭素13核磁気共鳴スペクトル 100MHzにおいて重メタノール中で室温にて測定し
た炭素13NMRスペクトルは、添付図面の図4に示す
通りである。(10) Carbon-13 nuclear magnetic resonance spectrum The carbon-13 NMR spectrum measured at room temperature in deuterated methanol at 100 MHz is as shown in FIG. 4 of the accompanying drawings.
【0012】(11)溶解性 メタノール、エタノール、ジオキサン、ジメチルスルフ
ォキシドに可溶であるが水、ヘキサンに不溶である。(11) Solubility It is soluble in methanol, ethanol, dioxane, and dimethyl sulfoxide, but insoluble in water and hexane.
【0013】(12)TLC シリカゲル60F254 (メルク社製)の薄層クロマトグ
ラフィーで展開溶媒としてクロロホルム−メタノール
(20:3)で展開したときのRf値は0.39であ
る。(12) TLC Silica gel 60F 254 (manufactured by Merck) has an Rf value of 0.39 when developed with chloroform-methanol (20: 3) as a developing solvent.
【0014】なお、本発明の式(I)のアルデカルマイ
シンの水和物は式(I)のRとしてのアルデヒド基−C
HOが基−CH(OH)2 の形に変化しているものであ
る。これは、含水有機溶媒中でのNMR分析から認めら
れる。The aldecarmay of the formula (I) of the present invention
The hydrate of syn is an aldehyde group -C as R in the formula (I).
HO is changed to the form of the group -CH (OH) 2 . This is seen from NMR analysis in aqueous organic solvents.
【0015】以下に、次式(I′−a) で表わされるアルデカルマイシンのアセタール誘導体の
理化学的性質を示す。The following formula (I'-a) The physicochemical properties of the acetal derivative of aldecarmycin represented by are shown.
【0016】(1)外観 白色粉末 (2)分子式 C35H58O10 (3)高分解能質量分析(HRFABMS:負イオンモ
ード) 実験値 :637.3935(M−H)- 計算値(C35H57O10として):637.3952 (4)融点 113〜117℃ (5)比旋光度 [α]D 26−73.6°(c 1.0,メタノール) (6)紫外線吸収スペクトル 末端吸収のみである。[0016] (1) Appearance White powder (2) Molecular formula C 35 H 58 O 10 (3 ) High resolution mass spectrometry (HRFABMS: negative ion mode) Found: 637.3935 (M-H) - calcd (C 35 as H 57 O 10): 637.3952 ( 4) mp 113 to 117 ° C. (5) specific rotation [α] D 26 -73.6 ° ( c 1. 0, methanol) (6) ultraviolet absorption spectrum terminus Only absorption.
【0017】(7)赤外線吸収スペクトル(KBr錠剤
法) 添付図面の図5に示す通りである。(7) Infrared absorption spectrum (KBr tablet method) As shown in FIG. 5 of the accompanying drawings.
【0018】(8)プロトン核磁気共鳴スペクトル 400MHzにおいて重メタノール中で室温にて測定し
たプロトンNMRスペクトルは、添付図面の図6に示す
通りである。(8) Proton nuclear magnetic resonance spectrum The proton NMR spectrum measured at room temperature in heavy methanol at 400 MHz is as shown in FIG. 6 of the accompanying drawings.
【0019】(9)炭素13核磁気共鳴スペクトル 100MHzにおいて重メタノール中で室温にて測定し
た炭素13プロトンNMRスペクトルは、添付図面の図
7に示す通りである。(9) Carbon-13 nuclear magnetic resonance spectrum A carbon-13 proton NMR spectrum measured at room temperature in heavy methanol at 100 MHz is as shown in FIG. 7 of the accompanying drawings.
【0020】(10)溶解性 メタノール、エタノール、ジオキサン、ジメチルスルフ
ォキシドに可溶であるが、水、ヘキサンに不溶である。(10) Solubility It is soluble in methanol, ethanol, dioxane, and dimethyl sulfoxide, but insoluble in water and hexane.
【0021】(11)TLC シリカゲル60F254 (メルク社製)の薄層クロマトグ
ラフィーで展開溶媒としてクロロホルム−メタノール
(20:3)で展開したときのRf値は0.46であ
る。[0021] (11) chloroform as the developing solvent a thin layer chromatography TLC on silica gel 60F 254 (Merck) - methanol (20: 3) Rf value when developed in a 0.46.
【0022】本発明による新規抗生物質であるアルデカ
ルマイシンが前記の式(I)で示される化学構造を有す
ることは、前記の式(I′−a)で示されるアルデカル
マイシンのアセタール誘導体のプロトンNMR,炭素1
3NMR等の分析を詳細に検討することにより前記の通
り決定された。 Aldeca , a novel antibiotic according to the invention
The fact that lumycin has the chemical structure represented by the above formula (I) is based on the fact that the alkyne represented by the above formula (I'-a)
Proton NMR of acetal derivative of mycin , carbon 1
It was determined as described above by examining the analysis such as 3NMR in detail.
【0023】本発明による式(I)のアルデカルマイシ
ンおよび式(I′−a)のアルデカルマイシン・アセタ
ール誘導体は後記の生物学的性質を有する。According to the present invention, the aldehyde carmishi of the formula (I)
Aldehyde duocarmycin-acetamide <br/> Lumpur derivatives of emissions and Formula (I'-a) has a later biological properties.
【0024】すなわち、アルデカルマイシン(I)およ
びそのアセタール誘導体(I′−a)は、薬剤耐性菌
(メチシリン耐性菌等)を含むグラム陽性の細菌に対し
て抗菌活性を示す。またアルデカルマイシンおよびその
アセタール誘導体は、ほ乳動物に対する急性毒性が低
い。That is, aldecarmycin (I) and its acetal derivative (I'-a) exhibit antibacterial activity against Gram-positive bacteria including drug-resistant bacteria (such as methicillin-resistant bacteria). Aldecarmycin and its acetal derivatives also have low acute toxicity to mammals.
【0025】試験例1 各種の微生物に対するアルデカルマイシン(I)および
そのアセタール誘導体(I′−a)の抗菌スペクトルは
日本化学療法学会標準法に基づき、ミュラ・ヒントン寒
天培地上で倍数希釈法によって測定した。その結果を表
1に示す。The antimicrobial spectrum of aldehyde duocarmycin for Test Example 1 various microorganisms (I) and its acetal derivatives (I'-a) is based on the Japanese Society of Chemotherapy standard method, by a serial dilution method on Murat Hinton agar It was measured. Table 1 shows the results.
【0026】表 1 最小発育阻止濃度(MIC.)(μg/ml) アルデカルマイシン(I) アルデカルマイシン のアセタール誘導体 供 試 菌 (I′−a) スタフィロコッカス・ アウレウス FDA209P 6.25 6.25 スタフィロコッカス・ アウレウス スミス 12.5 6.25 スタフィロコッカス・ アウレウス(多剤耐性) MS9610 6.25 6.25 スタフィロコッカス・ アウレウス(メチシリン 耐性)No. 5 12.5 6.25 スタフィロコッカス・ アウレウス(メチシリン 耐性)No. 17 12.5 6.25 ミクロコッカス・ルテウス FDA16 12.5 12.5 ミクロコッカス・ルテウス IFO3333 12.5 12.5 ミクロコッカス・ルテウス PCI1001 50 12.5 バチルス・アントラシス 6.25 6.25 バチルス・ズブチリス NRRL B-558 6.25 6.25 バチルス・ズブチリス PCI219 6.25 6.25 バチルス・セレウス ATCC10702 6.25 6.25 コリネバクテリウム・ ボビス 1810 12.5 6.25 エシエリヒア・コリ NIHJ >100 >100 エシエリヒア・コリ K-12 >100 >100 シゲラ・ディセンテリエ JS11910 >100 >100 サルモネラ・ティフィ T-63 >100 >100 プロテウス・ブリガリス OX19 >100 >100 セラチア・マルセッセンス >100 >100 シユドモナス・エルギノサ A3 >50 100 シユドモナス・エルギノサ GN315 100 >100 クレブシエラ・ニュウ モニエ PCI602 >100 >100 マイコバクテリウム・スメ グマティス ATCC607 100 12.5 カンジダ・アルビカンス 3147 100 25 試験例2 マウスを使用して式(I)のアルデカルマイシンおよび
式(I′−a)のアルデカルマイシンのアセタール誘導
体の急性毒性を試験するに当たって、10%ジメチルス
ルホキシドおよび少量のツイーン80含有の生理食塩水
にアルデカルマイシンまたはそのアセタール誘導体を溶
解し、その溶液を尾静脈に注射し、マウスを14日間観
察した。その結果、アルデカルマイシンのLD50は10
0mg/kg、または前記アルデカルマイシンのアセタ
ール誘導体は、100mg/kgで毒性は認められなか
った。[0026] Table 1 Minimum Inhibitory Concentration (MIC.) (Μg / ml ) aldehyde duocarmycin (I) aldehyde duocarmycin acetal derivative of the trial bacteria (I'-a) Staphylococcus aureus FDA209P 6.25 6. 25 Staphylococcus aureus Smith 12.5 6.25 Staphylococcus aureus (multidrug resistance) MS9610 6.25 6.25 Staphylococcus aureus (methicillin resistance) No. 5 12.5 6.25 Staphylo Coccus aureus (methicillin resistance) No. 17 12.5 6.25 Micrococcus luteus FDA16 12.5 12.5 Micrococcus luteus IFO3333 12.5 12.5 Micrococcus luteus PCI1001 50 12.5 Bacillus anthracis 6.25 6.25 Bacillus subtilis NRRL B-558 6.2 6.25 Bacillus subtilis PCI219 6.25 6.25 Bacillus cereus ATCC10702 6.25 6.25 Corynebacterium bovis 1810 12.5 6.25 Escherichia coli NIHJ>100> 100 Escherichia coli K-12>100> 100 Shigella discenterier JS11910>100> 100 Salmonella typhi T-63>100> 100 Proteus brigaris OX19>100> 100 Serratia marcessens>100> 100 Cyudomonas aeruginosa A3> 50 100 Shiudomonas eruginosa 100 GN Arudekaru Klebsiella Niu Monnier PCI602> 100> 100 Mycobacterium smelling Gumatisu ATCC607 100 12.5 Candida albicans 3147 100 25 test example 2 mice using the formula (I) In testing the leucine and wherein the acute toxicity of the acetal derivative of the aldehyde duocarmycin the (I'-a), dissolved aldehyde duocarmycin or its nitrous acetal derivative 10% dimethyl sulfoxide and a small amount of Tween 80 containing saline The solution was injected into the tail vein and the mice were observed for 14 days. As a result, LD 50 of aldehyde duocarmycin 10
At 0 mg / kg or the acetal derivative of aldecarmycin, no toxicity was observed at 100 mg / kg.
【0027】さらに、第2の本発明によると、ストレプ
トミセス属に属する前記の式(I)のアルデカルマイシ
ンの生産菌を培養し、培養物からアルデカルマイシンを
採取することを特徴とする式(I)の抗生物質アルデカ
ルマイシンの製造法が提供される。Furthermore, according to the second aspect of the present invention, aldehyde Karma Ishi of the formulas belonging to the genus Streptomyces (I)
Culturing the emissions of producing bacteria, antibiotics Arudeka of formula (I) and recovering the aldehyde duocarmycin from the culture
A method for producing lumycin is provided.
【0028】本発明の方法で使用するアルデカルマイシ
ン生産菌は前述した理化学的性質および生物学的性質を
有する抗生物質を生産する能力を有するものであれば、
その種を問わず使用でき広範な微生物から選ぶことがで
きる。かかる微生物のうち、アルデカルマイシン生産菌
の具体的な好適の一例は、本発明者らにより平成元年9
月に微生物化学研究所において東京都世田谷区の土壌よ
り分離された放線菌で、MJ147−72F6の菌株番
号が付された菌株である。 Aldecarmica used in the method of the present invention
If emission-producing bacterium those having the ability to produce antibiotics with physicochemical and biological properties described above,
It can be used regardless of its species and can be selected from a wide range of microorganisms. Among such microorganisms, a specific preferred example of an aldecarmycin- producing bacterium was disclosed by the present inventors in 1989.
This is an actinomycete isolated from soil in Setagaya-ku, Tokyo at the Institute for Microbial Chemistry in the month, and has a strain number of MJ147-72F6.
【0029】以下にMJ147−72F6株の菌学的諸
性質について記載する。Hereinafter, various bacteriological properties of the MJ147-72F6 strain will be described.
【0030】1.形態 MJ147−72F6株は、分枝した基中菌糸より、6
〜8回転のらせんを有する気菌糸を伸長する。輪生枝お
よび胞子のうは認められない。気菌糸の先端には50個
以上の胞子の連鎖を認め、胞子の大きさは約0.6〜
0.7×0.7〜1.2ミクロンであった。なお、胞子
の表面は平滑である。1. Morphology MJ147-72F6 strain shows 6
Elongate aerial hyphae with ~ 8 turns of helix. Rotating branches and spores are not found. A chain of 50 or more spores is observed at the tip of the aerial hyphae, and the size of the spores is
It was 0.7 × 0.7 to 1.2 microns. The spore surface is smooth.
【0031】2.各種培地における生育状態 色の記載について〔 〕内に示す標準は、コンティナー
・コーポレーション・オブ・アメリカのカラー・ハーモ
ニー・マニュアル(Container Corpor
ation of America のcolor h
armoneymanual)を用いた。2. Growing state in various media Regarding the description of the color The standard shown in [] is the color harmony manual (Container Corporation) of Container Corporation of America.
coloration of the nation of America
armonymanual) was used.
【0032】(1)シュクロース・硝酸塩寒天培地(2
7℃培養) 無色の発育上に、黄味灰〔1 1/2ec,Putty〕の
気菌糸をうっすらと着生し、溶解性色素は認められな
い。(1) Sucrose / nitrate agar medium (2
(Culture at 7 ° C.) On colorless growth, aerial hyphae of yellowish ash [1 1/2 ec, Putty] are slightly formed, and no soluble pigment is observed.
【0033】(2)グルコース・アスパラギン寒天培地
(27℃培養) 発育は貧弱でうす黄、気菌糸は着生せず、溶解性色素は
認められない。(2) Glucose-asparagine agar medium (cultured at 27 ° C.) The growth is poor, light yellow and aerial hypha do not form, and no soluble pigment is observed.
【0034】(3)グリセリン・アスパラギン寒天培地
(ISP−培地5、27℃培養) 発育は明るい茶灰〔2ge,Covert Tan〜2
ig,Slate Tan〕、気菌糸は着生せず、溶解
性色素はわずかに茶灰をおびる。(3) Glycerin-asparagine agar medium (ISP-medium 5, cultured at 27 ° C.) The growth is bright brown ash [2ge, Covert Tan ~ 2
ig, Slate Tan], aerial mycelium does not form, and the soluble pigment slightly browns.
【0035】(4)スターチ・無機塩寒天培地(ISP
−培地4、27℃培養) 発育は良好で、うすオリーブ〔1 1/2ie,Lt Ol
ive〕〜うす黄茶〔2ie,Lt Mustard
Tan〜2le,Mustard〕を呈し、黄味灰〔1
ba,Yellow Tint〕の気菌糸を着生する。
溶解性色素は認められない。(4) Starch / inorganic salt agar medium (ISP
-Medium 4, cultivated at 27 ° C) The growth is good, and the light olives [1 1 / 2ie, Lt Ol
ive]-light yellow tea [2ie, Lt Mustard]
Tan ~ 2le, Mustard] and yellowish ash [1
ba, Yellow Tint].
No soluble dye is observed.
【0036】(5)チロシン寒天培地(ISP−培地
7、27℃培養) 発育はうす黄茶〔2ie,Lt Mustard Ta
n〕〜オリーブ灰〔1li,Lt Olive Dra
b〕、気菌糸は着生せず、溶解性色素は認められない。(5) Tyrosine agar medium (ISP-medium 7, cultured at 27 ° C.) The growth is light yellow tea [2ie, Lt Mustard Ta].
n] to olive ash [1 li, Lt Olive Dra
b), no aerial mycelia formed and no soluble pigment was observed.
【0037】(6)栄養寒天培地(27℃培養) 発育は貧弱で、黄茶〔3ni,Clove Brow
n〕、気菌糸は着生せず、溶解性色素は認められない。(6) Nutrient agar medium (cultured at 27 ° C.) The growth is poor, and yellow tea [3ni, Close Brow]
n], aerial mycelia did not form and no soluble pigment was observed.
【0038】(7)イースト・麦芽寒天培地(ISP−
培地2、27℃培養) 発育は、うす黄茶〔2ng,Dull Gold〜2p
i,MustardBrown〕、気菌糸は着生せず、
溶解性色素はわずかに茶色味を帯びる。(7) Yeast / malt agar medium (ISP-
Medium 2, culture at 27 ° C.) The growth is light yellow tea [2 ng, Dull Gold to 2 p.
i, Mustard Brown], aerial mycelium does not form,
The soluble pigment is slightly brownish.
【0039】(8)オートミール・寒天培地(ISP−
培地3、27℃培養) 発育は無色、黄味灰〔2ba,Pearl〕の気菌糸を
わずかに着生し、溶解性色素は認められない。(8) Oatmeal / agar medium (ISP-
(Medium 3, culture at 27 ° C.) The growth is colorless, slightly forming aerial hyphae of yellowish ash [2ba, Pearl], and no soluble pigment is observed.
【0040】(9)グリセリン・硝酸塩寒天培地(27
℃培養) 発育は無色、気菌糸は着生せず、溶解性色素は認められ
ない。(9) Glycerin / nitrate agar medium (27
The growth is colorless, aerial mycelia do not form, and no soluble pigment is observed.
【0041】(10)スターチ寒天培地(27℃培養) うす黄茶〔2ie,Lt Mustard Tan〕〜
灰味黄茶〔2pl,Mustard Brown〕の発
育上に、白色の気菌糸をわずかに着生する。溶解性色素
は認められない。(10) Starch agar medium (cultured at 27 ° C.) Light yellow tea [2ie, Lt Mustard Tan]
White aerial mycelium develops slightly on the growth of ashy yellow tea [2 pl, Mustard Brown]. No soluble dye is observed.
【0042】(11)リンゴ酸石灰寒天培地(27℃培
養) 発育は無色、気菌糸は着生せず、溶解性色素は認められ
ない。(11) Lime malate agar medium (cultured at 27 ° C.) Growth is colorless, aerial mycelia do not form, and no soluble pigment is observed.
【0043】(12)セルロース(濾紙片添加合成液、
27℃培養) 発育は無色、気菌糸は着生せず、溶解性色素は認められ
ない。(12) Cellulose (Synthetic solution containing filter paper pieces,
(Culture at 27 ° C.) Growth is colorless, aerial mycelia do not form, and no soluble pigment is observed.
【0044】(13)ゼラチン穿刺培養 15%単純ゼラチン培地(20℃培養)では、発育はう
す黄、気菌糸は着生せず、溶解性色素は認められない。
グルコース・ペプトン・ゼラチン培地の場合、27℃培
養では生育が認められず、20℃培養でごくわずかに無
色の発育を認めるが、気菌糸および溶解性色素は観察さ
れない。(13) Gelatin Puncture Culture In a 15% simple gelatin medium (cultured at 20 ° C.), the growth is pale yellow, aerial mycelia do not form, and no soluble pigment is observed.
In the case of the glucose / peptone / gelatin medium, no growth was observed in the culture at 27 ° C, and very slight colorless growth was observed in the culture at 20 ° C, but no aerial hyphae and no soluble pigment were observed.
【0045】(14)脱脂牛乳(37℃培養) 発育は無色〜うす黄、気菌糸は着生せず、溶解性色素も
認められない。(14) Skim milk (cultured at 37 ° C.) The growth is colorless to pale yellow, no aerial mycelia form, and no soluble pigment is observed.
【0046】3.生理的性質 (1)生育温度範囲 グルコース・アスパラギン寒天培地(グルコース1.0
%,アスパラギン0.05%,リン酸二カリウム0.0
5%,紐寒天3.0%,pH7.0)およびスターチ・
無機塩寒天培地(ISP−培地4)を用い、6℃、10
℃、20℃、24℃、27℃、30℃、37℃、50℃
の各温度で試験した結果、50℃を除き、そのいずれの
温度でも発育し、生育至適温度は24℃付近と思われ
る。3. Physiological properties (1) Growth temperature range Glucose / asparagine agar medium (glucose 1.0
%, Asparagine 0.05%, dipotassium phosphate 0.0
5%, string agar 3.0%, pH 7.0) and starch
Using an inorganic salt agar medium (ISP-medium 4), 6 ° C, 10
° C, 20 ° C, 24 ° C, 27 ° C, 30 ° C, 37 ° C, 50 ° C
As a result of the test at each temperature, growth was observed at any temperature except 50 ° C., and the optimum growth temperature was considered to be around 24 ° C.
【0047】(2)ゼラチンの液化(15%単純ゼラチ
ン培地、20℃培養;グルコース・ペプトン・ゼラチン
培地、20℃および27℃培養) 15%単純ゼラチン培地では培養後7日目頃より液化が
始まるが、その作用は中等度である。グルコース・ペプ
トン・ゼラチン培地においては、生育が極めて悪く、培
養後20日間を経過しても液化は認められなかった。(2) Liquefaction of gelatin (15% simple gelatin medium, cultivation at 20 ° C .; glucose / peptone gelatin medium, cultivation at 20 ° C. and 27 ° C.) In a 15% simple gelatin medium, liquefaction starts about 7 days after culturing. However, its effect is moderate. The growth was extremely poor in the glucose / peptone / gelatin medium, and no liquefaction was observed even after 20 days from the culture.
【0048】(3)スターチの加水分解(スターチ・無
機塩寒天培地およびスターチ寒天培地、いずれも27℃
培養) いずれの培地においても培養後10日目頃より、水解性
が認められその作用は中等度である。(3) Hydrolysis of starch (starch / inorganic salt agar medium and starch agar medium, both at 27 ° C.)
Cultivation) In any medium, water degradability is observed from about 10 days after culturing, and the action is moderate.
【0049】(4)脱脂牛乳の凝固・ペプトン化(脱脂
牛乳、37℃培養) 35日間の培養で凝固及びペプトン化は認められない。(4) Coagulation and peptone conversion of skim milk (defatted milk, cultivation at 37 ° C.) No coagulation or peptone formation was observed after culturing for 35 days.
【0050】(5)メラニン様色素の生成(トリプトン
・イースト・ブロス、ISP−培地1;ペプトン・イー
スト・鉄寒天培地、ISP−培地6;チロシン寒天培
地、ISP−培地7;いずれも27℃培養) いずれの培地でも陰性である。(5) Production of melanin-like pigment (trypton yeast broth, ISP-medium 1; peptone yeast iron agar medium, ISP-medium 6; tyrosine agar medium, ISP-medium 7; all cultured at 27 ° C. ) Both media are negative.
【0051】(6)炭素源の利用性(プリドハム・ゴド
リーブ寒天培地、ISP−培地9;スターチ・無機塩寒
天培地(ISP−培地4)のスターチ抜き;いずれも2
7℃培養) 双方の培地で、D−グルコース、L−アラビノース、D
−キシロース、ラムノース、スターチを利用して発育
し、シュクロース、イノシトール、ラフィノースは利用
しない。D−フラクトース、D−マンニトール、ラクト
ースはおそらく利用すると思われる。(6) Utilization of carbon source (Pridham-Godlieve agar medium, ISP-medium 9); starch / inorganic salt agar medium (ISP-medium 4) without starch;
(Culture at 7 ° C) D-glucose, L-arabinose, D-glucose
-It grows using xylose, rhamnose and starch and does not use sucrose, inositol and raffinose. D-fructose, D-mannitol, lactose are likely to be utilized.
【0052】(7)リンゴ酸石灰の溶解(リンゴ酸石灰
寒天培地、27℃培養) 陰性である。(7) Dissolution of malate lime (maleic acid lime agar medium, cultivation at 27 ° C.) Negative.
【0053】(8)硝酸塩の還元反応(0.1%硝酸カ
リウム含有ペプトン水、ISP−培地8、27℃培養) 陰性である。(8) Nitrate reduction reaction (peptone water containing 0.1% potassium nitrate, ISP-medium 8, cultured at 27 ° C.) Negative.
【0054】(9)セルロースの分解(濾紙片添加合成
液、27℃培養) 40日間培養の観察では分解は認められない。(9) Decomposition of Cellulose (Synthetic Solution with Filter Paper Strips, Cultivation at 27 ° C.) No decomposition was observed in the observation for 40 days of culture.
【0055】以上の性状を要約すると、MJ147−7
2F6株は、その形態上、気菌糸がらせん形成を有し、
輪生枝及び胞子のうは認められない。気菌糸の先端には
50個以上の胞子を連鎖し、その表面は平滑である。種
々の培地で、発育は無色あるいはうす黄茶を呈し、気菌
糸は着生が少なく、溶解性色素も認められない。至適生
育温度は24℃付近にあり、比較的低い温度でも生育が
認められる。メラニン様色素の生成は陰性、スターチの
水解性は中等度、脱脂牛乳の凝固・ペプトン化は認めら
れず、15%単純ゼラチンの液化は中等度である。この
生産菌はアロエ(ユリ科 アロエ属 キダチロカイ)エ
キスにグリセリン、イーストエキス及び無機塩を加えた
特殊な培地上に30℃で分離されたものであるが、その
組成の培地に最も良く生育する。次に生育の良いのがス
ターチ・無機塩寒天培地(ISP−培地4)であり、生
育の良い場合は黄味灰の気菌糸を豊富(ぼってりと)に
着生する。又、前に述べた生育状態の記載では顕著でな
いが、グリセリン・アスパラギン寒天培地(ISP−培
地5)等でCovert Tan〜Slate Tan
の発育と記されており、黒っぽい色を呈するのもこの株
の特徴である。To summarize the above properties, MJ147-7
The 2F6 strain has, in its form, aerial hyphae forming a helix,
Rotating branches and spores are not observed. More than 50 spores are linked to the tip of the aerial hyphae, and the surface is smooth. In various media, growth is colorless or pale yellowish brown, aerial mycelia are less adherent, and no soluble pigment is observed. The optimum growth temperature is around 24 ° C., and growth is observed even at relatively low temperatures. Production of melanin-like pigment-negative, water-degradable starch is moderate, coagulation and peptone of skimmed milk was not observed, the liquefaction of a 15% simple gelatin is moderate. This producing bacterium is isolated at 30 ° C. on a special medium obtained by adding glycerin, yeast extract and inorganic salt to an aloe (Alliaceae, Aloe spp.), And grows best on a medium having that composition. The next best growth is the starch / inorganic salt agar medium (ISP-medium 4), and when the growth is good, the aerial mycelium of yellowish ash grows abundantly. In addition, although not remarkable in the description of the growth state described above, Cover Tan to Slate Tan on glycerin-asparagine agar medium (ISP-medium 5) or the like.
This strain is characterized by a dark color.
【0056】なお、細胞壁に含まれる2,6−ジアミノ
ピメリン酸はLL−型であった。The 2,6-diaminopimelic acid contained in the cell wall was of the LL-type.
【0057】これらの性状より、MJ147−72F6
株は、ストレプトミセス(Streptomyces)
属に属すると考えられる。From these properties, MJ147-72F6
The strain is Streptomyces
It is considered to belong to the genus.
【0058】MJ147−72F6株を工業技術院微生
物工業技術研究所に寄託申請し、平成3年4月9日、微
工研菌寄第12174号として受託された。The MJ147-72F6 strain was applied for deposit with the Research Institute of Microbial Industry and Technology of the National Institute of Advanced Industrial Science and Technology, and was deposited on April 9, 1991 as Microkoken Kenkyu No. 12174.
【0059】第2の本発明の方法においては、アルデカ
ルマイシンの製造は次の通り行われる。In the second method of the present invention, Aldeca
The production of lumycin is performed as follows.
【0060】すなわち、アルデカルマイシンの製造はア
ルデカルマイシン生産菌を栄養培地中に接種して、27
℃の温度で好気的に振とうしながら培養することによっ
て行われ、アルデカルマイシンを含む培養物が得られ
る。このような目的に用いる栄養培地としては、放線菌
の栄養源として使用しうるものが使用される。栄養源と
して、例えば市販されているペプトン、肉エキス、コー
ン・スティープ・リカー、落花生粉、大豆粉、酵母エキ
ス、硫酸アンモニウム等の窒素源が使用でき、また、グ
リセリン、でん粉、グルコース、ガラクトース、デキス
トリン等の炭水化物あるいは脂肪などの炭素源が使用で
きる。さらに、食塩、リン酸塩、炭酸カルシウムなどの
無機塩を添加して使用できる。その他必要に応じて微量
の金属塩を添加することができる。これらのものは、ア
ルデカルマイシン生産菌が利用し、アルデカルマイシン
の生産に役立つものであればよく、公知の放線菌の培養
材料はすべて用いることができるアルデカルマイシン生
産菌は、ストレプトミセス属に属するアルデカルマイシ
ンの生産能を有する微生物が使用される。具体的には、
本発明者らの分離したストレプトミセス MJ147−
72F6株がアルデカルマイシンを生産することが本発
明者らによって明らかにされているが、その他の菌株に
ついては、抗生物質生産菌の単離の常法によって自然界
より分離することが可能である。また、ストレプトミセ
ス MJ147−72F6株を含めて、アルデカルマイ
シンの生産菌を放射線照射その他の変異処理に付して、
アルデカルマイシンの生産能を高める余地も残ってい
る。さらに、遺伝子工学的手法によってアルデカルマイ
シンの生産も可能である。[0060] In other words, production of aldehyde Cal clarithromycin is A
Rudecarmycin producing bacteria were inoculated into a nutrient medium and
The culture is performed by aerobically shaking at a temperature of ° C. to obtain a culture containing aldecarmycin . As a nutrient medium used for such a purpose, a medium that can be used as a nutrient source for actinomycetes is used. As a nutrient source, for example, commercially available nitrogen sources such as peptone, meat extract, corn steep liquor, peanut flour, soy flour, yeast extract, ammonium sulfate, etc., and glycerin, starch, glucose, galactose, dextrin, etc. Carbon sources such as carbohydrates or fats can be used. Further, inorganic salts such as salt, phosphate and calcium carbonate can be added for use. In addition, a trace amount of a metal salt can be added as needed. These things, A
Le decal mycin producing strain using, as long as it helps in the production of aldehyde duocarmycin <br/>, aldehyde duocarmycin raw <br/> Sankin that can be used all culture materials known actinomycetes may , aldehyde karma Issy belonging to the genus Streptomyces
Microorganism capable of producing emissions are used. In particular,
Our isolated Streptomyces MJ147-
72F6 strain is able to produce the aldehyde duocarmycin has been clarified by the present inventors, but for other strains, can be separated from nature by conventional methods of isolation of the antibiotic-producing bacteria. In addition, Aldecalmy, including Streptomyces strain MJ147-72F6,
Sin- producing bacteria were subjected to irradiation and other mutation treatments,
There is still room for increasing the productivity of aldecarmycin . In addition, Arudekarumai by genetic engineering techniques
Thin production is also possible.
【0061】アルデカルマイシンは、ストレプトミセス
属に属するアルデカルマイシン生産菌を適当な培地で好
気的に培養し、その培養液から目的物を採取することに
よって製造することができる。培養温度は、アルデカル
マイシン生産菌の発育が実質的に阻害されずにこの抗生
物質の生産しうる範囲であれば、特に制約されるもので
はなく、使用する生産菌に応じて選択できるが、好まし
くは25−30℃の範囲内の温度を挙げることができ
る。[0061] Aldecarmycin can be produced by aerobically culturing aldecarmycin- producing bacteria belonging to the genus Streptomyces in a suitable medium, and collecting the target substance from the culture. The culture temperature is Aldecal
There is no particular limitation as long as this antibiotic can be produced without substantially inhibiting the growth of the mycin- producing bacterium, and it can be selected according to the producing bacterium to be used. The temperature in the range of can be mentioned.
【0062】アルデカルマイシンの生産のための種母と
しては、寒天培地上、MJ147−72F6株の斜面培
養から得た生育物を使用する。[0062] As the seed for the production of aldehyde duocarmycin, on an agar medium, using a growth product obtained from slant culture of MJ147-72F6 strain.
【0063】このMJ147−72F6株の生育は通常
3ないし4日で最高に達するが、一般に充分な抗菌活性
が培地に付与されるまで続ける。この培養液中のアルデ
カルマイシンの力価の経時変化はバチルス・ステアロサ
ーモフィルスを被検菌とする円筒平板法により測定でき
る。[0063] Although the highest in the growth of MJ147-72F6 share is usually 3 to 4 days is reached, continue to generally sufficient antimicrobial activity is imparted to the culture areas. Alde in this culture
The titer of aging of Karumaishin can be measured by a cylindrical plate method to test bacteria Bacillus stearothermophilus.
【0064】第2の本発明の方法においては、上記のよ
うにして得られた培養物からアルデカルマイシンを採取
するが、採取法としては微生物の生産する代謝産物を採
取するのに用いられる手段を適宜利用することからな
る。たとえば、水と混ざらない溶媒による抽出の手段、
各種吸着剤に対する吸着親和性の差を利用する手段、ゲ
ルろ過、向流分配を利用したクロマトグラフィーなどを
単独または組み合わせて利用しアルデカルマイシンを採
取できる。In the second method of the present invention, aldecarmycin is collected from the culture obtained as described above. The method for collecting aldecarmycin is a method used for collecting metabolites produced by microorganisms. As appropriate. For example, means of extraction with a solvent that does not mix with water,
Aldecarmycin can be collected using a method utilizing the difference in adsorption affinity for various adsorbents, gel filtration, chromatography using countercurrent distribution, or the like, alone or in combination.
【0065】また、分離した菌体からは、適当な有機溶
媒を用いた溶媒抽出法や菌体破砕による溶出法により菌
体から抽出し上記と同様に単離精製して採取することが
できる。かくして、前記した抗生物質アルデカルマイシ
ンが得られる。前記の式(I′−a)で表わされるアル
デカルマイシンのアセタール誘導体は、式(I)のアル
デカルマイシンを後記の実施例2に示される如くジオキ
サンに溶解し、酸性条件下で2価アルコールとしてエチ
レングリコールと反応させることによって得られたもの
である。その反応液からは、水と混じらない有機溶媒に
よる抽出、吸着、向流分配を利用したクロマトグラフィ
ー、ゲルろ過等を組合せることにより、式(I′−a)
で表わされるアルデカルマイシンのアセタール誘導体を
採取できた。The isolated cells can be extracted from the cells by a solvent extraction method using an appropriate organic solvent or an elution method by crushing the cells, isolated and purified in the same manner as described above, and collected. Thus, the above-mentioned antibiotic aldecarmyci
Emissions can be obtained. Al represented by the above formula (I'-a)
Acetal derivative decal clarithromycin is of formula (I)
It is obtained by dissolving decarmycin in dioxane as shown in Example 2 below and reacting it with ethylene glycol as a dihydric alcohol under acidic conditions. From the reaction solution, extraction with an organic solvent immiscible with water, adsorption, chromatography using countercurrent distribution, gel filtration, and the like are combined to obtain a compound of the formula (I'-a).
An acetal derivative of aldecarmycin represented by the following formula was obtained.
【0066】他方、一般的には、式(I)のアルデカル
マイシンのアルデヒド基(−CHO)に後記の式(II)
で表わされる1価アルコール、例えばメタノール、エタ
ノール、n−プロパノール、n−ブタノール、ベンジル
アルコール、もしくは後記の式(III)で表わされる2価
アルコール、例えばエチレングリコール、プロピレング
リコール、ブチレングリコールまたはカテコールを有機
溶媒、例えばジオキサン、ジメチルホルムアミド中で酸
性条件下に、例えばカンフアー・スルホン酸又は塩化水
素の存在下に室温で又は加熱下に反応させると、後記の
式(I″)で表わされるアルデカルマイシンのアセター
ル誘導体が製造できることが本発明者らにより知見され
た。On the other hand, in general, the aldehydes of the formula (I)
The aldehyde group (-CHO) of mycin is replaced by the following formula (II)
A monohydric alcohol represented by the following formula, for example, methanol, ethanol, n-propanol, n-butanol, benzyl alcohol, or a dihydric alcohol represented by the following formula (III), such as ethylene glycol, propylene glycol, butylene glycol or catechol, solvents, such as dioxane, under acidic conditions in dimethylformamide, for example, is reacted at room temperature or with heating in the presence of Kanfua sulfonic acid or hydrogen chloride, the aldehyde duocarmycin represented by below formula (I ") The present inventors have found that an acetal derivative can be produced.
【0067】従って、第3の本発明によると、次式
(I′) 〔式中、R′は次式 (但し2個のRa は夫々に任意の炭素数の脂肪族または
芳香族の基、例えば低級アルキル基またはアラルキル
基、特にベンジル基であるか、あるいは2個のRaは連
結して任意の炭素数の脂肪族または芳香族の基1個、例
えば低級アルキレン基をなす)で示される基である〕で
表わされるアルデカルマイシンのアセタール誘導体が提
供される。Therefore, according to the third aspect of the present invention, the following formula (I ') [Wherein R 'is (Although the two R a is optionally in each aliphatic or aromatic group of carbon numbers, for example, a lower alkyl group or an aralkyl group, or, alternatively the two R a is an arbitrary linked in particular benzyl group one group of aliphatic or aromatic carbon atoms, an acetal derivative of aldehyde duocarmycin is provided represented by a group] represented by example form a lower alkylene group).
【0068】さらにまた、第4の本発明によると、前記
の式(I)のアルデカルマイシンのアルデヒド基(−C
HO)に次式 Rb −OH (II) 〔式中、Rb は任意の炭素数の脂肪族または芳香族の
基、例えばアルキル基である〕の1価アルコール、もし
くは次式 HO−Rc −OH (III) 〔式中、Rc は任意の炭素数の脂肪族または芳香族の
基、例えば低級アルキレン基である〕の2価アルコール
を反応させることから成る、次式(I″) 〔式中、R″は次式 (但しRb は前記の意味をもつ)示される基であるか、
もしくは次式 (但しRc は前記の意味をもつ)で示される基である〕
で表わされるアルデカルマイシンのアセタール誘導体の
製造方法が提供される。[0068] Furthermore, according to the fourth invention, the aldehyde group of the aldehyde duocarmycin of the formula (I) (-C
HO) is a monohydric alcohol represented by the following formula: Rb- OH (II) wherein Rb is an aliphatic or aromatic group having an arbitrary carbon number, for example, an alkyl group, or HO- Rc -OH (III) wherein R c is an aliphatic or aromatic group having an arbitrary number of carbon atoms, for example, a lower alkylene group. [Where R ″ is the following equation Wherein R b is as defined above, or
Or: (Where R c is as defined above)
A method for producing an acetal derivative of aldecarmycin represented by the formula:
【0069】さらに、第5の本発明では前記の式(I)
のアルデカルマイシンを生産する特性を持つストレプト
ミセス MJ147−72F6株が提供される。Further, in the fifth invention, the above-mentioned formula (I)
Streptomyces MJ147-72F6 strain is provided having the ability of producing the aldehyde duocarmycin.
【0070】また、第6の本発明では、式(I)のアル
デカルマイシン又は式(I′)のアルデカルマイシンの
アセタール誘導体を有効成分とする抗菌剤が提供され
る。[0070] In the present invention the sixth, Al of the formula (I)
Antibacterial agent comprising as an active ingredient <br/> acetal derivative of aldehyde duocarmycin decal mycin or formula (I ') is provided.
【0071】この抗菌剤においては、有効成分化合物は
製薬学的に許容できる常用の固体又は液状担体、例えば
エタノール、水、デンプン等と混和できる。In this antibacterial agent, the active ingredient compound can be mixed with a conventional pharmaceutically acceptable solid or liquid carrier such as ethanol, water, starch and the like.
【0072】以下に実施例により本発明をさらに詳細に
説明する。Hereinafter, the present invention will be described in more detail by way of examples.
【0073】実施例1 抗生物質アルデカルマイシンの製造 寒天斜面培地に培養したストレプトミセス MJ147
−72F6株(微工研菌寄第12174号)を、ガラク
トース2%、デキストリン2%、ソイペプトン1%、コ
ーン・スティープ・リカー0.5%、硫酸アンモニウム
0.2%、炭酸カルシウム0.2%、シリコン1滴を含
む液体培地(pH7.4に調整)を三角フラスコ(50
0ml容)に110mlずつ分注し、常法により120
℃で20分滅菌したものに接種し、その後27℃で3日
間振とう培養した。これにより、種母培養液を得た。[0073] Streptomyces were cultured prepared agar slant medium of Example 1 Antibiotic aldehyde duocarmycin MJ147
-72F6 strain (Microtechnical Laboratories No. 12174) was prepared using galactose 2%, dextrin 2%, soypeptone 1%, corn steep liquor 0.5%, ammonium sulfate 0.2%, calcium carbonate 0.2%, A liquid medium containing 1 drop of silicon (adjusted to pH 7.4) was placed in an Erlenmeyer flask (50
0 ml) and dispensed in an amount of 110 ml by a conventional method.
The mixture was inoculated at 20 ° C. for 20 minutes and then cultured with shaking at 27 ° C. for 3 days. Thereby, a seed culture was obtained.
【0074】この種母培養液を、同様に三角フラスコに
分注し滅菌したグルコース2.0%、肉エキス3.0
%、硫酸アンモニウム0.6%、硫酸マグネシウム0.
3%、リン酸二カリウム0.6%、炭酸カルシウム0.
2%、シリコン1滴を含む液体培地(pH無修正)6l
に2%量を接種し、27℃で4日間振とう培養した。The seed culture was dispensed into an Erlenmeyer flask and sterilized with 2.0% glucose and 3.0% meat extract.
%, Ammonium sulfate 0.6%, magnesium sulfate 0.
3%, dipotassium phosphate 0.6%, calcium carbonate 0.1%
6 liters of liquid medium (pH uncorrected) containing 2% silicon and 1 drop
Was inoculated with a 2% amount and cultured with shaking at 27 ° C. for 4 days.
【0075】このようにして得られた培養液を遠心分離
機にかけ菌体を分離した。この菌体にメタノール1lを
加え、撹はんしろ過した。このろ液はメタノールを減圧
下にて濃縮したあと、先の遠心上澄液と合わせてpH
2.0に調整後、酢酸ブチル6.5lでアルデカルマイ
シンを抽出した。この抽出液を減圧下において濃縮し、
得られた残さ6.4gをシリカゲルカラムクロマトグラ
フィー(50g)を行い、クロロホルム−メタノール
(10:1)で溶出した。この溶出活性画分を集め、減
圧下において濃縮して得られた粗粉末を遠心液液クロマ
トグラフィーによりクロロホルム−メタノール−水
(5:6:4)の溶媒系を用いて溶出した。The culture thus obtained was centrifuged to separate the cells. One liter of methanol was added to the cells, stirred and filtered. After concentrating the methanol under reduced pressure, the filtrate is combined with the centrifuged supernatant to obtain a pH.
After adjusting to 2.0, aldecarmide with 6.5 l of butyl acetate
Syn was extracted. The extract is concentrated under reduced pressure,
The obtained residue (6.4 g) was subjected to silica gel column chromatography (50 g), and eluted with chloroform-methanol (10: 1). The eluted active fractions were collected and concentrated under reduced pressure, and the resulting crude powder was eluted by centrifugal liquid chromatography using a solvent system of chloroform-methanol-water (5: 6: 4).
【0076】アルデカルマイシンを含む活性画分は減圧
濃縮後、セファデックスLH−20カラムクロマトグラ
フィー(500ml)を行い、メタノールで展開して精
製した。この粗精製物は、シリカゲルプレートでクロロ
ホルム−メタノール−水(4:1:0.1)で展開し活
性画分をシリカゲルプレートからかきとり、メタノール
で抽出した。次にメタノールを減圧除去した残渣の活性
物質をセファデックスLH−20カラムクロマトグラフ
ィー(300ml)を行いメタノールで展開した。この
活性画分から、減圧下で濃縮して154mgのアルデカ
ルマイシンを白色粉末として得た。The active fraction containing aldecarmycin was concentrated under reduced pressure, purified by Sephadex LH-20 column chromatography (500 ml), and developed with methanol. The crude product was developed on a silica gel plate with chloroform-methanol-water (4: 1: 0.1), the active fraction was scraped off the silica gel plate, and extracted with methanol. Next, the residual active substance from which methanol was removed under reduced pressure was subjected to Sephadex LH-20 column chromatography (300 ml) and developed with methanol. The active fraction was concentrated under reduced pressure to give 154 mg of Aldeca.
Lumycin was obtained as a white powder.
【0077】さらに純度を上げるために、ここで得られ
たアルデカルマイシンの一部(約100mg)を逆相の
シリカゲルの高速液体クロマトグラフィーを用いて75
%アセトニトリル水溶液で展開した。アルデカルマイシ
ンの単一の画分を集めて濃縮し、再び遠心液液クロマト
グラフィーによりヘキサン−メタノールの溶媒系を用い
て精製し、高純度の式(I)のアルデカルマイシンの白
色粉末48.4mgを得た。To further increase the purity, a part (about 100 mg) of the aldecarmycin obtained here was purified by high-performance liquid chromatography on reversed-phase silica gel.
The solution was developed with a% acetonitrile aqueous solution. Ardekarmashi
Collected and concentrated to a single fraction of emissions, again hexane by centrifugation liquid-liquid chromatography - purified using a solvent system of methanol, a white powder 48.4mg of aldehyde duocarmycin high purity of the formula (I) Obtained.
【0078】実施例2 抗生物質アルデカルマイシンのアセタール誘導体の製造アルデカルマイシン から、それのアセタール誘導体の製
造は、公知の手法に基づいて行った。すなわち実施例1
によって得られたアルデカルマイシン58.0mgを1
mg/mlのカンファー・スルホン酸含有のジオキサン
溶液5.8mlに溶解し、これに2価アルコールとして
エチレングリコール145μlを加えて室温で2日間反
応させた。Example 2 Production of Acetal Derivative of Antibiotic Aldecarmycin The production of an acetal derivative of aldecarmycin was carried out by a known method. That is, Embodiment 1
The aldehyde duocarmycin 58.0mg obtained by 1
The resultant was dissolved in 5.8 ml of a dioxane solution containing camphor sulfonic acid at a concentration of mg / ml, and 145 μl of ethylene glycol as a dihydric alcohol was added thereto, followed by reaction at room temperature for 2 days.
【0079】この反応液に飽和の炭酸水素ナトリウム水
溶液20mlを加え中和し酢酸エチル40mlで抽出し
た。この抽出液は、無水硫酸ナトリウムで脱水した後、
減圧下で乾固し55.3mgの粗粉末を得た。これをシ
リカゲルカラムクロマトグラフィー(5g)にかけて、
酢酸エチル−メタノール(15:1)で展開し、アル デ
カルマイシンのアセタール誘導体を含む画分を集めて濃
縮乾固した(24.6mg)。The reaction mixture was neutralized with 20 ml of a saturated aqueous solution of sodium hydrogen carbonate and extracted with 40 ml of ethyl acetate. This extract is dehydrated with anhydrous sodium sulfate,
The residue was dried under reduced pressure to obtain 55.3 mg of a coarse powder. This was subjected to silica gel column chromatography (5 g),
Ethyl acetate - methanol: developed with (15 1), Al de
The fractions containing the acetal derivative of carmycin were collected and concentrated to dryness (24.6 mg).
【0080】さらに精製するためにセファデックスLH
−20カラムクロマトグラフィー(200ml)により
メタノールで溶出してアルデカルマイシンのアセタール
誘導体の単一画分を集め、21.2mgの白色粉末を得
た。最後に遠心液液クロマトグラフィーをヘキサン−メ
タノール系を用いて行い、前記の式(I′−a)で表わ
されるアルデカルマイシンのアセタール誘導体の15.
9mgを白色粉末として得た。For further purification, Sephadex LH
The -20 column chromatography (200ml) and eluted with methanol collected single fraction acetal derivative of aldehyde duocarmycin to give a white powder 21.2 mg. Finally, centrifugal liquid chromatography is performed using a hexane-methanol system, and the acetal derivative of aldecarmycin represented by the above formula (I'-a) is used.
9 mg was obtained as a white powder.
【図1】図1はアルデカルマイシンのメタノール溶液中
の紫外線吸収スペクトルである。FIG. 1 is an ultraviolet absorption spectrum of ardecarmycin in a methanol solution.
【図2】図2はアルデカルマイシンのKBr錠剤法で測
定した赤外線吸収スペクトルである。Figure 2 is an infrared absorption spectrum measured by KBr tablet method of aldehyde duocarmycin.
【図3】図3はアルデカルマイシンの重メタノール溶液
中にて室温で測定した400MHzにおけるプロトン核
磁気共鳴スペクトルである。FIG. 3 is a proton nuclear magnetic resonance spectrum at 400 MHz measured in a deuterated methanol solution of aldecarmycin at room temperature.
【図4】図4はアルデカルマイシンの重メタノール溶液
中にて室温で測定した100MHzにおける炭素13核
磁気共鳴スペクトルである。FIG. 4 is a carbon-13 nuclear magnetic resonance spectrum at 100 MHz measured in a deuterated methanol solution of aldecarmycin at room temperature.
【図5】図5はアルデカルマイシンのアセタール誘導体
のKBr錠剤法で測定した赤外線吸収スペクトルであ
る。Figure 5 is an infrared absorption spectrum measured by KBr tablet method acetal derivatives of aldehyde duocarmycin.
【図6】図6はアルデカルマイシンのアセタール誘導体
の重メタノール溶液中にて室温で測定した400MHz
におけるプロトン核磁気共鳴スペクトルである。FIG. 6 shows 400 MHz measured at room temperature in a heavy methanol solution of an acetal derivative of aldecarmycin .
3 is a proton nuclear magnetic resonance spectrum of the sample.
【図7】図7はアルデカルマイシンのアセタール誘導体
の重メタノール溶液中にて室温で測定した100MHz
における炭素13核磁気共鳴スペクトルである。FIG. 7 shows 100 MHz measured at room temperature in a deuterated methanol solution of an acetal derivative of aldecarmycin .
13 is a carbon-13 nuclear magnetic resonance spectrum of the sample.
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 FI C12R 1:465) (C12P 19/44 C12R 1:465) (72)発明者 澤 竜一 神奈川県綾瀬市綾西4丁目6番7号 (72)発明者 浜田 雅 東京都新宿区内藤町1番26号 (58)調査した分野(Int.Cl.7,DB名) C07H 1/00 - 23/00 A61P 31/04 C12N 1/00 - 1/38 C12P 19/00 - 19/64 BIOSIS(DIALOG) CA(STN) REGISTRY(STN) WPI(DIALOG)──────────────────────────────────────────────────の Continuation of the front page (51) Int.Cl. 7 Identification symbol FI C12R 1: 465) (C12P 19/44 C12R 1: 465) (72) Inventor Ryuichi Sawa 4-6-7-1 Ayanishi, Ayase-shi, Kanagawa Prefecture No. (72) Inventor Masaru Hamada 1-26 Naitocho, Shinjuku-ku, Tokyo (58) Field surveyed (Int.Cl. 7 , DB name) C07H 1/00-23/00 A61P 31/04 C12N 1/00 -1/38 C12P 19/00-19/64 BIOSIS (DIALOG) CA (STN) REGISTRY (STN) WPI (DIALOG)
Claims (6)
る抗生物質アルデカルマイシンもしくはその水和物。1. The following formula (I) [Wherein R is an aldehyde group -CHO] an antibiotic aldecarmycin or a hydrate thereof.
記載の式(I)のアルデカルマイシンの生産菌を培養
し、培養物からアルデカルマイシンを採取することを特
徴とする抗生物質アルデカルマイシンの製造方法。Wherein culturing the producing strain of aldehyde duocarmycin of formula (I) according to claim 1 belonging to the genus Streptomyces, antibiotics aldehyde duocarmycin for and collecting the aldehyde duocarmycin from the culture Manufacturing method.
芳香族の基であるか、あるいは2個のRa は連結して任
意の炭素数の脂肪族または芳香族の基をなす)で示され
る基である〕で表わされるアルデカルマイシンのアセタ
ール誘導体。3. The following formula (I ′) [Wherein R 'is (However, two R a are each an aliphatic or aromatic group having an arbitrary number of carbons, or two R a are linked to form an aliphatic or aromatic group having an arbitrary number of carbons. ) Is an acetal derivative of aldecarmycin .
ルマイシンのアルデヒド基(−CHO)に次式 Rb −OH (II) 〔式中、Rb は任意の炭素数の脂肪族または芳香族の基
である〕の1価アルコール、もしくは次式 HO−Rc −OH (III ) 〔式中、Rc は任意の炭素数の脂肪族または芳香族の基
である〕の2価アルコールを反応させることから成る、
次式(I″) 〔式中、R″は次式 (但しRb は前記の意味をもつ)で示される基である
か、もしくは次式 (但しRc は前記の意味をもつ)で示される基である〕
で表わされるアルデカルマイシンのアセタール誘導体の
製造方法。4. Aldeca of the formula (I) according to claim 1.
A monohydric alcohol represented by the following formula R b —OH (II) wherein R b is an aliphatic or aromatic group having an arbitrary number of carbon atoms, or the following formula HO— Reacting a dihydric alcohol of R c —OH (III) wherein R c is an aliphatic or aromatic group having any number of carbon atoms.
The following formula (I ″) [Where R ″ is the following equation (Where R b has the above-mentioned meaning) or a group represented by the following formula: (Where R c is as defined above)
A method for producing an acetal derivative of aldecarmycin represented by the formula :
マイシンを生産する特性を持つストレプトミセス MJ
147−72F6株。5. Ardecal of formula (I) according to claim 1.
Streptomyces MJ with mycin- producing properties
147-72F6 strain.
アルデカルマイシンあるいは請求項2に記載の式
(I′)で表わされるアルデカルマイシンのアセタール
誘導体を有効成分とする抗菌剤。6. A compound represented by the formula (I) according to claim 1.
Antimicrobial agent containing as an active ingredient an acetal derivative of aldehyde duocarmycin of formula (I ') according to aldehyde duocarmycin or claim 2.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP15371391A JP3055973B2 (en) | 1991-05-21 | 1991-05-30 | Antibiotic aldecarmycin and its production method, and its derivative and its production method |
Applications Claiming Priority (3)
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JP3-144179 | 1991-05-21 | ||
JP14417991 | 1991-05-21 | ||
JP15371391A JP3055973B2 (en) | 1991-05-21 | 1991-05-30 | Antibiotic aldecarmycin and its production method, and its derivative and its production method |
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---|---|---|---|---|
AU2003277572A1 (en) * | 2002-11-06 | 2004-06-07 | Nissan Chemical Industries, Ltd. | Process for producing quinolinecarbaldehyde |
-
1991
- 1991-05-30 JP JP15371391A patent/JP3055973B2/en not_active Expired - Lifetime
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JPH05222086A (en) | 1993-08-31 |
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