JP2678605C - - Google Patents
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Description
【発明の詳細な説明】
「技術分野」
本発明は、腸内の有害菌であるウェルシュ菌(クロストリディウム・パーフリ
ンゲンス、Clostridium perfringens)の生育を選択的に抑えて腸内細菌叢を改善
する効果を有する腸内細菌叢改善剤に関する。
「従来技術およびその問題点」
近年、腸内における細菌叢(フローラ)が人間の健康と係わりをもっているこ
とが知られ、腸内細菌に対する関心が高まっている。例えばビフィズス菌は、人
間の腸内細菌叢を構成する主要な菌種のひとつであり、人や動物に対して種々の
有益な生理的役割をはたすことが知られている。このビフィズス菌は、各種の疾
患や加齢に伴ない減少または消失するため、腸内のビフィズス菌を増加させる試
みが臨床面で行なわれ、その有効性が実証されている。このため、ビフィズス菌
入りのヨーグルト、ビフィズス菌末、ビフィズス菌増殖性オリゴ糖などが、通常
の食生活にも積極的に取り入れられるようになってきた。これらの中で、ビフィ
ズス菌増殖性オリゴ糖が最近脚光を浴びており、ビフィズス菌増殖効果を有する
ものとしてフラクトオリゴ糖、大豆オリゴ糖、コンニャクオリゴ糖、イソマルト
オリゴ糖、ガラクトオリゴ糖などが次々と紹介され、その一部は健康食品素材と
して市販されている。
一方、ウェルシュ菌も腸内細菌叢を構成する菌種の一つであるが、ビフィズス
菌とは反対に有害な生理活性をもっており、その一部のものは食中毒の原因にな
ることも知られている。また、ウェルシュ菌は、加齢とともに増加し、老人にな
ると検出率、菌数が増す傾向があり、このため老化との関係が示唆されている。
すなわち、ウェルシュ菌が増加すると、腸内の腐敗が高まり、アンモニア、硫化
水素、アミン、フェノール、インドール等の有害物質が多量に生成されるように
なり、これらが宿主に吸収されてますます老化を早めることになると考えられて
いる。また、ウェルシュ菌が増えると、ビフィズス菌が減少して腸内pHがアルカ
リ側に傾くため、腸内で生成されたアンモニアの吸収が促進されたり、またアミ
ノ酸脱炭酸酵素の活性が高まり、アミンの生成が増加するなどの種々の有害な現
象が起ると考えられている。
ウェルシュ菌は、このような有害な作用を有しているにもかかわらず、積極的
にウェルシュ菌を抑制する研究は殆どなされていないのが現状であった。
「発明の目的」
本発明の目的は、有用菌であるビフィズス菌の生育を抑えることなく、ウェル
シュ菌の生育を選択的に抑えて、腸内細菌叢を改善できるようにした腸内細菌叢
改善剤を提供することにある。
「発明の構成」
本発明者らは、ブドウ糖が直鎖状に連なったオリゴ糖の腸内細菌叢に及ぼす影
響について長年研究を続けてきたが、その過程で三糖類〜七糖類のオリゴ糖が、
腸内有用菌であるビフィズス菌の生育を抑えることなく、有害菌であるウェルシ
ュ菌の生育を抑制して腸内細菌叢を改善できることを見出し、本発明を完成する
に至った。
すなわち、本発明は、マルトトリオース、マルトテトラオース、マルトペンタ
オース、マルトヘキサオース、マルトヘプタオースから選ばれた一種または二種
以上の混合物を主成分として含有することを特徴とするウェルシュ菌の生育を選
択的に抑える腸内細菌叢改善剤である。
上記オリゴ糖は、後述するような人体投与試験の結果、ビフィズス菌の生育を
抑えることなく、ウェルシュ菌の生育を選択的に抑える効果を有することが確認
された。したがって、これらのオリゴ糖を摂取することにより、腸内細菌叢を改
善することができる。
本発明の腸内細菌叢改善剤は、マルトトリオース、マルトテトラオース、マル
トペンタオース、マルトヘキサオース、マルトヘプタオースから選ばれたG3〜G7
のオリゴ糖のうち、いずれか一種を主成分とするものであってもよく、二種以上
の混合物を主成分とするものであってもよい。ただし、本発明者らの研究によれ
ば、これらのオリゴ糖の中でも特にマルトテトラオース(G4)が優れた腸内細菌叢
改善効果を有していた。
本発明で用いる上記オリゴ糖の製造方法については、特に限定されず、公知の
いずれの方法も採用可能である。
例えばマルトトリオース(G3)は、プルランをプルラナーゼで加水分解する方法
、澱粉にストレプトマイセス・グリセウス(Streptomyces griseus)の生産するア
ミラーゼを作用させる方法などにより得られる。また、マルトトリオース(G3)は
、分画法によるマルトース(G2)生産時の副産物として得ることもでき、生産コス
トの点ではこれが有利であり、マルトリオース(G3)含量45%のものが市販されて
いる。
また、マルトテトラオース(G4)は、澱粉に、シュードモナス・スツュツェリ(P
seudomonas stuzeri)や、シュードモナス・サッカロフィラ(Pseudomonas sacch
arophila)の生産するマルトテトラオース生成酵素を作用させて得ることができ
る。より具体的には、本出願人が既に提案した特願昭62-171608 号に示すような
方法が採用できる。すなわち、澱粉液化液に、マルトテトラオース生成酵素と必
要に応じて枝切り酵素とを作用させて糖化反応を行なった後または糖化反応を行
ないながら、分画・精製する方法である。この方法では、マルトテトラオースの
含量が70〜95重量%、マルトペンタオース、マルトヘキサオースなどの五糖類以
上の糖の含量が12重量%以下、グルコース、マルトースおよびマルトトリオース
からなる三糖類以下の糖の含量が18重量%以下の混合物が得られる。本発明では
、この混合物をそのまま用いてもよいし、この混合物からそれぞれのオリゴ糖
をさらに精製して用いてもよい。
また、マルトペンタオース(G5)、マルトヘキサオース(G6)は、例えば澱粉に、
バチルス・リチニフォルミス(B.licheniformis)、エアロバクター・エアロゲネ
ス(Aerobacter aerogenes)等が特異的に生産するアミラーゼを作用させて得られ
る。なお、マルトヘプタオース(G7)は、前述した特願昭62-171608 号に示す方法
で他のオリゴ等と共に得ることができ、必要に応じてこれを精製して用いること
ができる。
上記オリゴ糖からなる本発明の腸内細菌叢改善剤は、例えばそのまま摂取した
り、またはパン、ケーキ、クッキー、キャンディ、クリーム、佃煮などに添加し
て摂取することにより、腸内細菌叢を改善する効果をもたらすことができる。ま
た、オリゴ糖は、重合度が高くなるほど甘味が低下するので低甘味剤として有効
であり、また、マルトトリオースは、吸湿性が高いので保湿剤としても有効であ
り、マルトテトラオースは、食品の老化防止、砂糖の結晶防止、食品の表面のつ
や出し等に有効である。したがって、本発明の腸内細菌叢改善剤は、各種食品中
に添加することにより、上記のような味覚や物性の改善効果などをもたらすこと
もできる。
なお、前記オリゴ糖からなる本発明の腸内細菌叢改善剤は、例えばビフィズス
増殖効果を有するフラクトオリゴ糖、大豆オリゴ糖、コンニャクオリゴ糖、イソ
マルトオリゴ糖、ガラクトオリゴ糖などと組合せて使用することにより、本発明
の効果、すなわち腸内の有害菌であるウェルシュ菌の生育を抑えると共に、有用
菌であるビフィズス菌を増殖する効果を併せもつことができる。
「発明の実施例」
実施例
馬鈴薯澱粉を常法に従って液化し、DEが1 以下、濃度10重量%の澱粉液化液を
得た。これに、マルトテトラオース生成酵素を基質固形分1g当り2 単位添加し、
pH6.5 に調製し、55℃で10時間反応させた後、ケイソウ土ろ過を行ない、夾雑物
を除去した。ここで1 単位とは、還元した可溶性澱粉を基質として、pH7 、温度
40℃で酵素反応を行ない、1 分間に1 μmol のグルコシド結合を切断する酵素量
である。次いで、平板状膜UF装置(DDS社製、商品名「ラボモジュール」)に、分
子量カット2000、膜面積0.36m2の限外ろ過膜を取付け、上記反応液を55℃で10
時間循環させて、糖化反応と共に膜処理を行なった。こうして得られた透過液の
糖組成を液体クロマトグラフィーで分析した結果、G1;1.0、G2;4.6、G3;9.3、G4
;54.1、G5;1.2、G6;0.8、G7以上の糖;29.0(いずれも重量%)であった。この透
過液を粉末化して、本発明による腸内細菌叢改善剤を得た。
試験例
上記実施例で得られたマルトテトラオースを54%含有するオリゴ糖粉末を用い
て、人体投与試験を行ない、腸内細菌叢に及ぼす影響を調べた。
すなわち、健康な男性7 名から、通常の食生活をしているコントロール期間中
に2 回サンプリングし、その後、上記オリゴ糖粉末を1 日30g ずつ10日間摂取さ
せ、その7 日目、10日目の2 回サンプリングした。その後、上記オリゴ糖粉末の
投与を中止し、中止してから7 日目、10日目の2 回サンプリングした。
以上合計6 回のサンプリング時に、光岡の方法(「腸内菌の世界」、嫌気性菌
の分離と同定、光岡知足著、叢文社、1984)で、腸内細菌叢を検索し、ビフィズ
ス菌、ウェルシュ菌の菌数、検出率、総菌数に対する割合を調べた。この結果を
第1 表に示す。なお、第1 表は、オリゴ糖粉末の投与前、投与中、投与後の3 つ
の期間に分けて結果が示されている。また、各期間において2 回ずつサンプリン
グを行なったので、菌数は合計14のサンプリングの平均を示しており、検出率は
14のサンプリングのうちいくつに検出されたかを示している。
第1 表に示すように、オリゴ糖粉末を摂取することにより、ビフィズス菌(Bif
idobacterium)に変化は認められなかったが、ウェルシュ菌(C.Perfringens)は
全く検出されなくなった。
「発明の効果」
以上説明したように、本発明の腸内細菌叢改善剤は、ビフィズス菌の生育を抑
えることなく、ウェルシュ菌の生育を阻止するので、腸内細菌叢の改善をはかる
ことができ、人の健康維持に寄与することができる。BACKGROUND OF THE INVENTION "Technical Field" The present invention is a harmful bacteria in the intestine Clostridium perfringens (Clostridium perfringens, Clostridium perfringens) selectively suppressed by intestinal flora growth of The present invention relates to an intestinal flora improving agent having an improving effect. “Prior art and its problems” In recent years, it has been known that bacterial flora (flora) in the intestine is related to human health, and interest in intestinal bacteria has been increasing. For example, Bifidobacterium is one of the main bacterial species constituting the human intestinal flora, and is known to play various beneficial physiological roles on humans and animals. Since this Bifidobacterium decreases or disappears with various diseases and aging, attempts to increase the amount of Bifidobacterium in the intestine have been made clinically, and its effectiveness has been demonstrated. For this reason, yogurt containing bifidobacteria, powdered bifidobacteria, oligosaccharides proliferating on bifidobacteria, and the like have come to be actively incorporated into normal eating habits. Among these, bifidobacteria-proliferating oligosaccharides have recently been in the spotlight, and fructooligosaccharides, soybean oligosaccharides, konjac oligosaccharides, isomaltoligosaccharides, galacto-oligosaccharides, and the like are successively introduced as those having a bifidobacterial growth effect. Some of them are commercially available as health food materials. On the other hand, C. perfringens is also one of the bacterial species that make up the intestinal flora, but has a harmful physiological activity contrary to Bifidobacterium, and some of them are also known to cause food poisoning. I have. Also, the number of C. perfringens increases with aging, and the detection rate and the number of bacteria tend to increase with age, suggesting a relationship with aging.
In other words, as the number of C. perfringens increases, intestinal spoilage increases, and a large amount of harmful substances such as ammonia, hydrogen sulfide, amines, phenols, and indole are produced, and these are absorbed by the host, leading to aging. It is thought that it will haveten. In addition, when the number of C. perfringens increases, the number of bifidobacteria decreases and the intestinal pH shifts to the alkaline side, so that the absorption of ammonia generated in the intestine is promoted, and the activity of amino acid decarboxylase is increased. It is believed that various deleterious phenomena occur, such as increased production. Despite the fact that C. perfringens has such a harmful effect, there has been little research on actively suppressing C. perfringens at present. [Object of the invention] An object of the present invention is to improve the intestinal flora by suppressing the growth of Bifidobacterium, which is a useful bacterium, by selectively suppressing the growth of B. perfringens and improving the intestinal flora. To provide an agent. "Constitution of the Invention" The present inventors have been studying the effects of glucose on the intestinal microflora of linearly linked oligosaccharides for many years, and in the process, oligosaccharides of trisaccharide to heptasaccharide are converted. ,
The present inventors have found that it is possible to improve the intestinal flora by suppressing the growth of harmful bacteria, C. perfringens, without suppressing the growth of bifidobacteria, which is a useful intestinal bacterium, and completed the present invention. That is, the present onset Ming, C. perfringens, characterized in that it contains maltotriose, maltotetraose, maltopentaose, maltohexaose, selected from maltoheptaose one or two or more thereof as the main component Choose the growth of
It is an intestinal flora improving agent that can be selectively suppressed. As a result of a human body administration test as described later, it was confirmed that the oligosaccharide had an effect of selectively suppressing the growth of Bacillus cerevisiae without suppressing the growth of Bifidobacterium. Therefore, the intestinal flora can be improved by taking these oligosaccharides. The intestinal flora improving agent of the present invention is selected from maltotriose, maltotetraose, maltopentaose, maltohexaose, and maltoheptaose.
Of the above-mentioned oligosaccharides, any one may be used as a main component, or a mixture containing two or more types as a main component may be used. However, according to the study of the present inventors, among these oligosaccharides, maltotetraose (G4) was particularly effective in improving the intestinal bacterial flora. The method for producing the oligosaccharide used in the present invention is not particularly limited, and any known method can be employed. For example, maltotriose (G3) can be obtained by a method of hydrolyzing pullulan with pullulanase, a method of reacting starch with amylase produced by Streptomyces griseus, or the like. In addition, maltotriose (G3) can be obtained as a by-product during the production of maltose (G2) by the fractionation method, which is advantageous in terms of production cost, and those having a maltriose (G3) content of 45% are commercially available. ing. In addition, maltotetraose (G4) is added to starch by Pseudomonas stutzeri (P
seudomonas stuzeri) and Pseudomonas sacchophila (Pseudomonas sacch
arophila) to produce maltotetraose-producing enzyme. More specifically, a method as disclosed in Japanese Patent Application No. 62-171608 already proposed by the present applicant can be employed. That is, this is a method in which malttetraose-forming enzyme and, if necessary, a debranching enzyme are allowed to act on a liquefied starch solution to carry out a saccharification reaction, or to fractionate and purify the saccharification reaction. In this method, the content of maltotetraose is 70 to 95% by weight, the content of sugars such as maltopentaose and maltohexaose is not less than 12% by weight, and the content of glucose, maltose and maltotriose is not more than 12% by weight. A mixture having a sugar content of 18% by weight or less is obtained. In the present invention, this mixture may be used as it is, or each oligosaccharide may be further purified from this mixture and used. Also, maltopentaose (G5) and maltohexaose (G6) are, for example, starch,
Bacillus Richiniforumisu (B. licheniformis), Aero Arthrobacter Earogene <br/> scan (Aerobacter aerogenes) or the like is obtained by operating the amylase specifically produced. Maltoheptaose (G7) can be obtained together with other oligos and the like by the method described in the aforementioned Japanese Patent Application No. 62-171608, and can be purified and used as necessary. The intestinal flora-improving agent of the present invention comprising the above oligosaccharide improves the intestinal flora by, for example, ingesting as it is or by adding it to bread, cake, cookie, candy, cream, boiled down, etc. Effect can be obtained. Oligosaccharides are also effective as a low-potency sweetener because the sweetness decreases as the degree of polymerization increases, and maltotriose is also effective as a humectant because of its high hygroscopicity. It is effective in preventing aging of sugar, preventing crystallization of sugar, and polishing the surface of food. Therefore, the intestinal flora improving agent of the present invention can also provide the above-described effects of improving taste and physical properties by being added to various foods. Incidentally, the intestinal flora improving agent of the present invention comprising the oligosaccharide, for example, fructooligosaccharides having a bifidobacterial growth effect, soybean oligosaccharides, konjac oligosaccharides, isomaltoligosaccharides, by using in combination with galacto-oligosaccharides, The effect of the present invention, that is, the effect of suppressing the growth of C. perfringens, which is a harmful bacterium in the intestine, and the effect of multiplying the useful bacterium Bifidobacterium can be obtained. "Examples of the Invention" Example Potato starch was liquefied according to a conventional method to obtain a liquefied starch solution having a DE of 1 or less and a concentration of 10% by weight. To this, add 2 units of maltotetraose producing enzyme per 1 g of solid substrate,
After adjusting to pH 6.5 and reacting at 55 ° C. for 10 hours, diatomaceous earth filtration was performed to remove impurities. Here, one unit is defined as pH 7, temperature, using reduced soluble starch as a substrate.
This is the amount of enzyme that cuts 1 μmol of glucosidic bonds per minute by performing an enzyme reaction at 40 ° C. Then, flat membrane UF device (DDS's trade name "Lab module"), molecular weight cut-2000, fitted with ultrafiltration membrane with a membrane area 0.36 m 2, the above-described reaction solution at 55 ° C. 10
After circulating for a time, the membrane treatment was performed together with the saccharification reaction. As a result of analyzing the sugar composition of the permeated liquid thus obtained by liquid chromatography, G1; 1.0, G2; 4.6, G3; 9.3, G4
; 54.1, G5; 1.2, G6; 0.8, G7 or higher sugars; 29.0 (all by weight). This permeated solution was powdered to obtain an intestinal flora improving agent according to the present invention. Test Example Using the oligosaccharide powder containing 54% of maltotetraose obtained in the above example, a human body administration test was conducted to examine the effect on the intestinal flora. That is, seven healthy men sampled twice during the control period of normal eating habits, and then ingested the above oligosaccharide powder at a rate of 30 g / day for 10 days. Was sampled twice. Thereafter, administration of the oligosaccharide powder was stopped, and sampling was performed twice on the seventh and tenth days after the stop. At a total of six samplings, the intestinal flora was searched using Mitsuoka's method ("The World of Intestinal Bacteria", Separation and Identification of Anaerobic Bacteria, Toshimitsu Mitsuoka, Horabunsha, 1984), and bifidobacteria and Welsh The number of bacteria, the detection rate, and the ratio to the total number of bacteria were examined. Table 1 shows the results. Table 1 shows the results divided into three periods before, during and after administration of the oligosaccharide powder. In addition, since sampling was performed twice in each period, the number of bacteria shows the average of a total of 14 samplings, and the detection rate was
It shows how many of the 14 samplings were detected. As shown in Table 1, the ingestion of the oligosaccharide powder resulted in
Although no change was observed in C. perfringens, no change was detected in C. perfringens. [Effect of the Invention] As described above, the intestinal flora improving agent of the present invention inhibits the growth of Bifidobacterium without inhibiting the growth of Bifidobacterium, so that the intestinal flora can be improved. And contribute to maintaining human health.
Claims (1)
ヘキサオース、マルトヘプタオースから選ばれた一種または二種以上の混合物を
主成分として含有することを特徴とするウェルシュ菌の生育を選択的に抑える腸
内細菌叢改善剤。 (2)マルトトリオース、マルトテトラオース、マルトペンタオース、マルト
ヘキサオース、マルトヘプタオースから選ばれた一種または二種以上と、フラク
トオリゴ糖、大豆オリゴ糖、コンニャクオリゴ糖、イソマルトオリゴ糖、ガラク
トオリゴ糖から選ばれた一種または二種以上とを含有する請求項1記載の腸内細
菌叢改善剤。Claims (1) It is characterized by containing, as a main component, one or a mixture of two or more selected from maltotriose, maltotetraose, maltopentaose, maltohexaose, and maltoheptaose. An intestinal flora improving agent that selectively suppresses the growth of C. perfringens . (2) One or more selected from maltotriose, maltotetraose, maltopentaose, maltohexaose, and maltoheptaose, and fructooligosaccharides, soybean oligosaccharides, konjac oligosaccharides, isomaltoligosaccharides, and galactooligosaccharides The intestinal flora improving agent according to claim 1, comprising one or more selected from the group consisting of:
Family
ID=
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