JP2569414B2 - 海産魚混合ワクチン - Google Patents
海産魚混合ワクチンInfo
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- JP2569414B2 JP2569414B2 JP3303096A JP30309691A JP2569414B2 JP 2569414 B2 JP2569414 B2 JP 2569414B2 JP 3303096 A JP3303096 A JP 3303096A JP 30309691 A JP30309691 A JP 30309691A JP 2569414 B2 JP2569414 B2 JP 2569414B2
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、海産魚混合ワクチンに
関するものである。詳しく述べると、本発明は、ブリの
養殖時に発生する類結節症の感染防御に特に有効なワク
チンに関するものである。
関するものである。詳しく述べると、本発明は、ブリの
養殖時に発生する類結節症の感染防御に特に有効なワク
チンに関するものである。
【０００２】
【従来の技術】天然魚のみでは不可能である魚の収穫量
を確保、供給し、また、漁業家に安定した利潤を上げさ
せるため、さらには、最近問題となっている二百海里問
題により、沿岸養殖への期待が益々高まっている。特に
その代表であるブリの養殖は、近年盛んになり、昭和５
５年にはブリの養殖の生産量が１５万トンにまで達して
いる。しかし、この養殖も魚病と無縁ではなく、魚病
は、魚の成育を妨げ、養殖業の効率を落とすばかりでな
く、養殖魚群の減耗をもたらし、養殖業の利潤を落とす
ため、養殖魚家にとっては無視できない問題である。こ
れら魚病のなかでも特に、ブリの類結節症は、昭和４４
年初夏、九州、瀬戸内海さらに紀伊半島沿岸各地の養殖
場で一斉に発生し、それ以来毎年、全国のほとんどすべ
ての養殖場で発生して、甚大な被害が生じており、現
在、連鎖球菌症と共に養殖ブリの主要な病気となってい
る。この類結節症はまた、外観ですぐ分かるような患部
ができないため、病気の発生に気がつくのが遅れがちに
なり、さらに病死魚が生簀底で放置されて病原体を排出
し、病気の広がりを起こしやすいという問題点をも有す
るものである。
を確保、供給し、また、漁業家に安定した利潤を上げさ
せるため、さらには、最近問題となっている二百海里問
題により、沿岸養殖への期待が益々高まっている。特に
その代表であるブリの養殖は、近年盛んになり、昭和５
５年にはブリの養殖の生産量が１５万トンにまで達して
いる。しかし、この養殖も魚病と無縁ではなく、魚病
は、魚の成育を妨げ、養殖業の効率を落とすばかりでな
く、養殖魚群の減耗をもたらし、養殖業の利潤を落とす
ため、養殖魚家にとっては無視できない問題である。こ
れら魚病のなかでも特に、ブリの類結節症は、昭和４４
年初夏、九州、瀬戸内海さらに紀伊半島沿岸各地の養殖
場で一斉に発生し、それ以来毎年、全国のほとんどすべ
ての養殖場で発生して、甚大な被害が生じており、現
在、連鎖球菌症と共に養殖ブリの主要な病気となってい
る。この類結節症はまた、外観ですぐ分かるような患部
ができないため、病気の発生に気がつくのが遅れがちに
なり、さらに病死魚が生簀底で放置されて病原体を排出
し、病気の広がりを起こしやすいという問題点をも有す
るものである。
【０００３】このため、ブリの類結節症に対する有効な
治療方法や感染予防方法を開発することは、ブリを養殖
する上で重要な課題となっている。従来、ブリの類結節
症の治療法としては、チアンフェニコール、オキソリン
酸、アンピシリン等の抗菌剤、およびニフルスチレン酸
ナトリウム、アモキシシリン等の製剤を飼料に混合して
魚群に投薬する方法が挙げられる。しかし、抗生剤等の
使用は、抗生剤等がブリの体内に残留すること、耐性菌
の出現、さらには生態系の攪乱等の問題を有するため、
これらの抗生剤は使用が制限されている。また、上記製
剤を混合した飼料を魚に与える方法もあるが、この方法
は、固体差が大きく、このため効果のばらつきが生じや
すいという欠点を有する。
治療方法や感染予防方法を開発することは、ブリを養殖
する上で重要な課題となっている。従来、ブリの類結節
症の治療法としては、チアンフェニコール、オキソリン
酸、アンピシリン等の抗菌剤、およびニフルスチレン酸
ナトリウム、アモキシシリン等の製剤を飼料に混合して
魚群に投薬する方法が挙げられる。しかし、抗生剤等の
使用は、抗生剤等がブリの体内に残留すること、耐性菌
の出現、さらには生態系の攪乱等の問題を有するため、
これらの抗生剤は使用が制限されている。また、上記製
剤を混合した飼料を魚に与える方法もあるが、この方法
は、固体差が大きく、このため効果のばらつきが生じや
すいという欠点を有する。
【０００４】また、ブリの類結節症への感染予防方法と
しては、従来、ホルマリン不活化ワクチン、弱毒生菌ワ
クチン、フェノール−ＬＰＳワクチンによる処理が提案
されている。これらのうちホルマリン不活化ワクチン
は、菌（パスツレラ・ピッシシダ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌ
ｌａ ｐｉｓｃｉｃｉｄａ））を増殖させ、これにホル
マリンを所定量加えて増殖を止め不活性化したものであ
り、アユのビブリオ症では有効性が認められ、実用化さ
れているものである。しかし、ブリの類結節症では、ホ
ルマリン不活化ワクチンを単独処理した場合、感染予防
効果の安定性および再現性が欠けており、有効性も認め
られないため、実用化にまでは至っていない。
しては、従来、ホルマリン不活化ワクチン、弱毒生菌ワ
クチン、フェノール−ＬＰＳワクチンによる処理が提案
されている。これらのうちホルマリン不活化ワクチン
は、菌（パスツレラ・ピッシシダ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌ
ｌａ ｐｉｓｃｉｃｉｄａ））を増殖させ、これにホル
マリンを所定量加えて増殖を止め不活性化したものであ
り、アユのビブリオ症では有効性が認められ、実用化さ
れているものである。しかし、ブリの類結節症では、ホ
ルマリン不活化ワクチンを単独処理した場合、感染予防
効果の安定性および再現性が欠けており、有効性も認め
られないため、実用化にまでは至っていない。
【０００５】また、弱毒生菌ワクチンは、病魚から分離
した菌（病原体）を培地で継代培養することによってそ
の病原性が低下（弱毒化）することを利用して作製され
た弱毒株（ワクチン）である。この弱毒生菌ワクチン
は、一般的に腹腔内投与によって接種されるが、この方
法は、非常に手間および時間を要し、また、魚を取り上
げいじるので、魚を傷つけたり、ストレスを与えること
になり、かえって病勢を悪化させる恐れがあり、さら
に、弱毒生菌ワクチンによる免疫の有効性も十分ではな
いという欠点がある。
した菌（病原体）を培地で継代培養することによってそ
の病原性が低下（弱毒化）することを利用して作製され
た弱毒株（ワクチン）である。この弱毒生菌ワクチン
は、一般的に腹腔内投与によって接種されるが、この方
法は、非常に手間および時間を要し、また、魚を取り上
げいじるので、魚を傷つけたり、ストレスを与えること
になり、かえって病勢を悪化させる恐れがあり、さら
に、弱毒生菌ワクチンによる免疫の有効性も十分ではな
いという欠点がある。
【０００６】さらに、フェノール−ＬＰＳワクチンは、
グラム陰性菌の細胞外のリポ多糖体（ＬＰＳ）がマクロ
ファージ活性化、リンパ球の分裂増殖促進、およびアジ
ュバント作用などの多彩な生物活性を有することを利用
して作製された感染防御能のあるワクチンであり、培養
したパスツレラ・ピッシシダ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ
ｐｉｓｃｉｃｉｄａ）をフェノール−水抽出法によっ
て抽出したものである。このフェノール−ＬＰＳワクチ
ンは、腹腔内接種による接種ではある程度有効である
が、腹腔内接種は上記したような問題点があり、また、
浸漬処理による接種ではワクチンの取り込み量に供試魚
の固体差または実験条件のばらつきが生じやすく、この
ため再現性が悪いという問題点を有する。
グラム陰性菌の細胞外のリポ多糖体（ＬＰＳ）がマクロ
ファージ活性化、リンパ球の分裂増殖促進、およびアジ
ュバント作用などの多彩な生物活性を有することを利用
して作製された感染防御能のあるワクチンであり、培養
したパスツレラ・ピッシシダ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ
ｐｉｓｃｉｃｉｄａ）をフェノール−水抽出法によっ
て抽出したものである。このフェノール−ＬＰＳワクチ
ンは、腹腔内接種による接種ではある程度有効である
が、腹腔内接種は上記したような問題点があり、また、
浸漬処理による接種ではワクチンの取り込み量に供試魚
の固体差または実験条件のばらつきが生じやすく、この
ため再現性が悪いという問題点を有する。
【０００７】以上述べたように、現状では、ブリの類結
節症に対して十分な感染防御能を有するワクチンは未だ
開発されていない。
節症に対して十分な感染防御能を有するワクチンは未だ
開発されていない。
【０００８】
【発明が解決しようとする課題】したがって、本発明
は、ブリの類結節症の感染防御に再現性よく有効であ
り、また、接種が容易に行えるワクチンを提供すること
を目的とするものである。
は、ブリの類結節症の感染防御に再現性よく有効であ
り、また、接種が容易に行えるワクチンを提供すること
を目的とするものである。
【０００９】
【課題を解決するための手段】上記諸目的は、パスツレ
ラ・ピッシシダ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ ｐｉｓｃｉ
ｃｉｄａ）のフェノール−ＬＰＳワクチン、パスツレラ
・ピッシシダ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ ｐｉｓｃｉｃ
ｉｄａ）のホルマリン不活化ワクチン、パスツレラ・ピ
ッシシダ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ ｐｉｓｃｉｃｉｄ
ａ）の弱毒生菌ワクチンのうちの少なくとも２種類のワ
クチンを組み合わせることによりなる類結節症の感染防
御に対して使用する海産魚混合ワクチンによって達成さ
れる。
ラ・ピッシシダ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ ｐｉｓｃｉ
ｃｉｄａ）のフェノール−ＬＰＳワクチン、パスツレラ
・ピッシシダ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ ｐｉｓｃｉｃ
ｉｄａ）のホルマリン不活化ワクチン、パスツレラ・ピ
ッシシダ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ ｐｉｓｃｉｃｉｄ
ａ）の弱毒生菌ワクチンのうちの少なくとも２種類のワ
クチンを組み合わせることによりなる類結節症の感染防
御に対して使用する海産魚混合ワクチンによって達成さ
れる。
【００１０】本発明はまた、パスツレラ・ピッシシダ
（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ ｐｉｓｃｉｃｉｄａ）のフ
ェノール−ＬＰＳワクチン、パスツレラ・ピッシシダ
（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ ｐｉｓｃｉｃｉｄａ）のホ
ルマリン不活化ワクチン、パスツレラ・ピッシシダ（Ｐ
ａｓｔｅｕｒｅｌｌａ ｐｉｓｃｉｃｉｄａ）の弱毒生
菌ワクチンのうちのいずれか２種類のワクチンを組み合
わせることによりなる類結節症の感染防御に対して使用
する海産魚混合ワクチンによって達成される。
（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ ｐｉｓｃｉｃｉｄａ）のフ
ェノール−ＬＰＳワクチン、パスツレラ・ピッシシダ
（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ ｐｉｓｃｉｃｉｄａ）のホ
ルマリン不活化ワクチン、パスツレラ・ピッシシダ（Ｐ
ａｓｔｅｕｒｅｌｌａ ｐｉｓｃｉｃｉｄａ）の弱毒生
菌ワクチンのうちのいずれか２種類のワクチンを組み合
わせることによりなる類結節症の感染防御に対して使用
する海産魚混合ワクチンによって達成される。
【００１１】本発明は、前記フェノール−ＬＰＳワクチ
ンが、パスツレラ・ピッシシダ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌ
ａ ｐｉｓｃｉｃｉｄａ）ＳＰ７１３３株を用いてフェ
ノール−水抽出法により抽出されたものである海産魚混
合ワクチンを示すものである。本発明はまた、前記ホル
マリン不活化ワクチンが、パスツレラ・ピッシシダ（Ｐ
ａｓｔｅｕｒｅｌｌａ ｐｉｓｃｉｃｉｄａ）ＫＢ７７
０３株により調製されたものであるである海産魚混合ワ
クチンを示すものである。本発明はさらに、前記弱毒生
菌ワクチンが、パスツレラ・ピッシシダ（Ｐａｓｔｅｕ
ｒｅｌｌａ ｐｉｓｃｉｃｉｄａ）ＳＰ７１３３株の継
代株より調製されたものである海産魚混合ワクチンを示
すものである。本発明はさらに、ブリの類結節症の感染
防御に対して使用する海産魚混合ワクチンを示すもので
ある。
ンが、パスツレラ・ピッシシダ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌ
ａ ｐｉｓｃｉｃｉｄａ）ＳＰ７１３３株を用いてフェ
ノール−水抽出法により抽出されたものである海産魚混
合ワクチンを示すものである。本発明はまた、前記ホル
マリン不活化ワクチンが、パスツレラ・ピッシシダ（Ｐ
ａｓｔｅｕｒｅｌｌａ ｐｉｓｃｉｃｉｄａ）ＫＢ７７
０３株により調製されたものであるである海産魚混合ワ
クチンを示すものである。本発明はさらに、前記弱毒生
菌ワクチンが、パスツレラ・ピッシシダ（Ｐａｓｔｅｕ
ｒｅｌｌａ ｐｉｓｃｉｃｉｄａ）ＳＰ７１３３株の継
代株より調製されたものである海産魚混合ワクチンを示
すものである。本発明はさらに、ブリの類結節症の感染
防御に対して使用する海産魚混合ワクチンを示すもので
ある。
【００１２】
【作用】本発明の海産魚混合ワクチンは、パスツレラ・
ピッシシダ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ ｐｉｓｃｉｃｉ
ｄａ）のフェノール−ＬＰＳワクチン（以下、フェノー
ル−ＬＰＳワクチンと称する）、パスツレラ・ピッシシ
ダ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ ｐｉｓｃｉｃｉｄａ）の
ホルマリン不活化ワクチン（以下、ホルマリン不活化ワ
クチンと称する）、パスツレラ・ピッシシダ（Ｐａｓｔ
ｅｕｒｅｌｌａｐｉｓｃｉｃｉｄａ）の弱毒生菌ワクチ
ン（以下、弱毒生菌ワクチンと称する）のうちの少なく
とも２種類のワクチンを組み合わせることによりなるこ
とを特徴とするものである。
ピッシシダ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ ｐｉｓｃｉｃｉ
ｄａ）のフェノール−ＬＰＳワクチン（以下、フェノー
ル−ＬＰＳワクチンと称する）、パスツレラ・ピッシシ
ダ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ ｐｉｓｃｉｃｉｄａ）の
ホルマリン不活化ワクチン（以下、ホルマリン不活化ワ
クチンと称する）、パスツレラ・ピッシシダ（Ｐａｓｔ
ｅｕｒｅｌｌａｐｉｓｃｉｃｉｄａ）の弱毒生菌ワクチ
ン（以下、弱毒生菌ワクチンと称する）のうちの少なく
とも２種類のワクチンを組み合わせることによりなるこ
とを特徴とするものである。
【００１３】本発明において使用されるフェノール−Ｌ
ＰＳワクチンとは、パスツレラ・ピッシシダ（Ｐａｓｔ
ｅｕｒｅｌｌａ ｐｉｓｃｉｃｉｄａ）を用いてフェノ
ール−水抽出法により分画したものをワクチンとして使
用するものである。これらの菌体うち、特に、パスツレ
ラ・ピッシシダ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａｐｉｓｃｉｃ
ｉｄａ）（ＳＰ７１３３株）（微工研菌寄第１２２７１
号）（ＦＥＲＭ Ｐ−１２２７１）を用いることが好ま
しい。本発明において使用されるフェノール−ＬＰＳワ
クチンは、例えば、以下のようにして調製される。すな
わち、パスツレラ・ピッシシダ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌ
ａ ｐｉｓｃｉｃｉｄａ）（ＳＰ７１３３株）を２％塩
化ナトリウム加ＢＨＩＡ培地で２５℃、４８時間培養し
た後、このようにして培養した菌を遠心分離（８，００
０ｒｐｍ、３０分）を用いて集菌し、集菌した菌に９０
℃に加熱したフェノールを１〜２ｍｌ加え、この状態で
６８℃、２０分間加熱し続ける。この後、この溶液を、
７，５００ｒｐｍ、２０分間遠心分離し、上清を分取す
る。次に、この上清からフェノールおよび不純物を除去
するため、上清をセロファンチューブに入れ、蒸留水を
用いた透析を４〜５℃、５〜２４時間行い、ポリエチレ
ングリコール（ＰＥＧ＃６０００）を用いて濃縮するこ
とによって、フェノール−ＬＰＳワクチンを調製する。
ＰＳワクチンとは、パスツレラ・ピッシシダ（Ｐａｓｔ
ｅｕｒｅｌｌａ ｐｉｓｃｉｃｉｄａ）を用いてフェノ
ール−水抽出法により分画したものをワクチンとして使
用するものである。これらの菌体うち、特に、パスツレ
ラ・ピッシシダ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａｐｉｓｃｉｃ
ｉｄａ）（ＳＰ７１３３株）（微工研菌寄第１２２７１
号）（ＦＥＲＭ Ｐ−１２２７１）を用いることが好ま
しい。本発明において使用されるフェノール−ＬＰＳワ
クチンは、例えば、以下のようにして調製される。すな
わち、パスツレラ・ピッシシダ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌ
ａ ｐｉｓｃｉｃｉｄａ）（ＳＰ７１３３株）を２％塩
化ナトリウム加ＢＨＩＡ培地で２５℃、４８時間培養し
た後、このようにして培養した菌を遠心分離（８，００
０ｒｐｍ、３０分）を用いて集菌し、集菌した菌に９０
℃に加熱したフェノールを１〜２ｍｌ加え、この状態で
６８℃、２０分間加熱し続ける。この後、この溶液を、
７，５００ｒｐｍ、２０分間遠心分離し、上清を分取す
る。次に、この上清からフェノールおよび不純物を除去
するため、上清をセロファンチューブに入れ、蒸留水を
用いた透析を４〜５℃、５〜２４時間行い、ポリエチレ
ングリコール（ＰＥＧ＃６０００）を用いて濃縮するこ
とによって、フェノール−ＬＰＳワクチンを調製する。
【００１４】本発明において使用されるホルマリン不活
化ワクチンは、一般的に以下のようにして調製される。
パスツレラ・ピッシシダ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ ｐ
ｉｓｃｉｃｉｄａ）を１．５％塩化ナトリウム加ＢＨＩ
寒天培地で２５℃、４８時間前培養した後、１．５％塩
化ナトリウム加ＢＨＩブロス培地で２４℃、２０時間本
培養する。このようにして培養した菌を遠心分離（８，
０００ｒｐｍ、３０分）により集菌し、０．１％ホルマ
リンを２ｍｌ加え、ホルマリン不活化ワクチンを調製す
る。この際、使用される菌体としては、パスツレラ・ピ
ッシシダ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ ｐｉｓｃｉｃｉｄ
ａ）（ＫＢ７７０３株）（微工研菌寄第１２２７２号）
（ＦＥＲＭ Ｐ−１２２７２）であることが好ましい。
化ワクチンは、一般的に以下のようにして調製される。
パスツレラ・ピッシシダ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ ｐ
ｉｓｃｉｃｉｄａ）を１．５％塩化ナトリウム加ＢＨＩ
寒天培地で２５℃、４８時間前培養した後、１．５％塩
化ナトリウム加ＢＨＩブロス培地で２４℃、２０時間本
培養する。このようにして培養した菌を遠心分離（８，
０００ｒｐｍ、３０分）により集菌し、０．１％ホルマ
リンを２ｍｌ加え、ホルマリン不活化ワクチンを調製す
る。この際、使用される菌体としては、パスツレラ・ピ
ッシシダ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ ｐｉｓｃｉｃｉｄ
ａ）（ＫＢ７７０３株）（微工研菌寄第１２２７２号）
（ＦＥＲＭ Ｐ−１２２７２）であることが好ましい。
【００１５】本発明において使用される弱毒生菌ワクチ
ンは、パスツレラ・ピッシシダ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌ
ａ ｐｉｓｃｉｃｉｄａ）を継代培養することによって
その病原性が低下（弱毒化）することを利用して作製さ
れたワクチンであり、具体的には以下のようにして調製
される。パスツレラ・ピッシシダ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌ
ｌａ ｐｉｓｃｉｃｉｄａ）の継代株を２％塩化ナトリ
ウム加ＢＨＩブロス培地（日水製）で２５℃、４８時間
前培養した後、２％塩化ナトリウム加ＢＨＩ寒天培地
（日水製）で２５℃、２４時間本培養する。このように
して培養した菌を遠心分離（８，０００ｒｐｍ、３０
分）により集菌し、培養菌体を２％塩化ナトリウム加１
％カザミノ酸（ディフコ(Difco) 製）溶液に１０8 CFU/
mlになるように懸濁し、生菌数を測定し、弱毒生菌ワク
チンを調製する。なお、この際、上記継代株とは、パス
ツレラ・ピッシシダ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ ｐｉｓ
ｃｉｃｉｄａ）、好ましくはパスツレラ・ピッシシダ
（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ ｐｉｓｃｉｃｉｄａ）ＳＰ
７１３３株（微工研菌寄第１２２７１号）（ＦＥＲＭ
Ｐ−１２２７１）を２％塩化ナトリウム加トリプトソイ
寒天培地（日水製）で３０〜５０代、より好ましくは５
０〜７０代継代し、２０％スキムミルクに懸濁させたも
のを−８０℃で保存したものであることが好ましい。な
お、パスツレラ・ピッシシダ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ
ｐｉｓｃｉｃｉｄａ）（ＳＰ７１３３株）を２％塩化ナ
トリウム加トリプトソイ寒天培地（日水製）で５０代継
代したものを、１０5 CFU/尾腹腔内接種したところ、体
重１２ｋｇのブリに発病や死亡は認められなかった。
ンは、パスツレラ・ピッシシダ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌ
ａ ｐｉｓｃｉｃｉｄａ）を継代培養することによって
その病原性が低下（弱毒化）することを利用して作製さ
れたワクチンであり、具体的には以下のようにして調製
される。パスツレラ・ピッシシダ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌ
ｌａ ｐｉｓｃｉｃｉｄａ）の継代株を２％塩化ナトリ
ウム加ＢＨＩブロス培地（日水製）で２５℃、４８時間
前培養した後、２％塩化ナトリウム加ＢＨＩ寒天培地
（日水製）で２５℃、２４時間本培養する。このように
して培養した菌を遠心分離（８，０００ｒｐｍ、３０
分）により集菌し、培養菌体を２％塩化ナトリウム加１
％カザミノ酸（ディフコ(Difco) 製）溶液に１０8 CFU/
mlになるように懸濁し、生菌数を測定し、弱毒生菌ワク
チンを調製する。なお、この際、上記継代株とは、パス
ツレラ・ピッシシダ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ ｐｉｓ
ｃｉｃｉｄａ）、好ましくはパスツレラ・ピッシシダ
（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ ｐｉｓｃｉｃｉｄａ）ＳＰ
７１３３株（微工研菌寄第１２２７１号）（ＦＥＲＭ
Ｐ−１２２７１）を２％塩化ナトリウム加トリプトソイ
寒天培地（日水製）で３０〜５０代、より好ましくは５
０〜７０代継代し、２０％スキムミルクに懸濁させたも
のを−８０℃で保存したものであることが好ましい。な
お、パスツレラ・ピッシシダ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ
ｐｉｓｃｉｃｉｄａ）（ＳＰ７１３３株）を２％塩化ナ
トリウム加トリプトソイ寒天培地（日水製）で５０代継
代したものを、１０5 CFU/尾腹腔内接種したところ、体
重１２ｋｇのブリに発病や死亡は認められなかった。
【００１６】本発明の混合ワクチンは、フェノール−Ｌ
ＰＳワクチン、ホルマリン不活化ワクチン、および弱毒
生菌ワクチンのいずれかの少なくとも２種類のワクチン
を組み合わせて使用するものであるが、これらのうちで
は、フェノール−ＬＰＳワクチンと弱毒生菌ワクチンの
組み合わせが好ましい。
ＰＳワクチン、ホルマリン不活化ワクチン、および弱毒
生菌ワクチンのいずれかの少なくとも２種類のワクチン
を組み合わせて使用するものであるが、これらのうちで
は、フェノール−ＬＰＳワクチンと弱毒生菌ワクチンの
組み合わせが好ましい。
【００１７】本発明において、上記３種類のワクチンの
うち少なくとも２種類を組み合わせた混合ワクチンの供
試魚への投与方法としては、経口投与、腹腔内投与、混
合浸漬処理、経口投与による経日接種、混合浸漬による
経日接種、腹腔内投与による経日接種等の方法が具体的
に挙げられるが、これらのうちで、混合浸漬処理が容易
にかつ一度に大量の魚が処理できるという点で特に好ま
しい。
うち少なくとも２種類を組み合わせた混合ワクチンの供
試魚への投与方法としては、経口投与、腹腔内投与、混
合浸漬処理、経口投与による経日接種、混合浸漬による
経日接種、腹腔内投与による経日接種等の方法が具体的
に挙げられるが、これらのうちで、混合浸漬処理が容易
にかつ一度に大量の魚が処理できるという点で特に好ま
しい。
【００１８】本発明においてフェノール−ＬＰＳワクチ
ンおよびホルマリン不活化ワクチンを組み合わせた混合
ワクチンを混合浸漬処理によって接種する際の前記混合
ワクチンの濃度は、それぞれ、４〜４００ｍｃｇ／ｍ
ｌ、より好ましくは２０〜２００ｍｃｇ／ｍｌ、および
２×１０4 〜２×１０6ＣＦＵ／ｍｌ、より好ましくは
１０5 〜１０6 ＣＦＵ／ｍｌであり、また、浸漬時間
は、５〜３００分、より好ましくは１０〜５０分であ
る。
ンおよびホルマリン不活化ワクチンを組み合わせた混合
ワクチンを混合浸漬処理によって接種する際の前記混合
ワクチンの濃度は、それぞれ、４〜４００ｍｃｇ／ｍ
ｌ、より好ましくは２０〜２００ｍｃｇ／ｍｌ、および
２×１０4 〜２×１０6ＣＦＵ／ｍｌ、より好ましくは
１０5 〜１０6 ＣＦＵ／ｍｌであり、また、浸漬時間
は、５〜３００分、より好ましくは１０〜５０分であ
る。
【００１９】また、本発明においてフェノール−ＬＰＳ
ワクチンおよび弱毒生菌ワクチンを組み合わせた混合ワ
クチンを混合浸漬処理によって接種する際の前記混合ワ
クチンの濃度は、それぞれ、４〜４００ｍｃｇ／ｍｌ、
より好ましくは２０〜２００ｍｃｇ／ｍｌ、および２×
１０3 〜２×１０5 ＣＦＵ／ｍｌ、より好ましくは１０
4 〜１０5 ＣＦＵ／ｍｌであり、また、浸漬時間は、５
〜３００分、より好ましくは１０〜５０分である。
ワクチンおよび弱毒生菌ワクチンを組み合わせた混合ワ
クチンを混合浸漬処理によって接種する際の前記混合ワ
クチンの濃度は、それぞれ、４〜４００ｍｃｇ／ｍｌ、
より好ましくは２０〜２００ｍｃｇ／ｍｌ、および２×
１０3 〜２×１０5 ＣＦＵ／ｍｌ、より好ましくは１０
4 〜１０5 ＣＦＵ／ｍｌであり、また、浸漬時間は、５
〜３００分、より好ましくは１０〜５０分である。
【００２０】また、本発明においてホルマリン不活化ワ
クチンおよび弱毒生菌ワクチンを組み合わせた混合ワク
チンを混合浸漬処理によって接種する際の前記混合ワク
チンの濃度は、それぞれ、２×１０4 〜２×１０6 ＣＦ
Ｕ／ｍｌ、より好ましくは１０5 〜１０6 ＣＦＵ／ｍ
ｌ、および２×１０3 〜２×１０5 ＣＦＵ／ｍｌ、より
好ましくは１０4 〜１０5 ＣＦＵ／ｍｌであり、また、
浸漬時間は、５〜３００分、より好ましくは１０〜５０
分である。
クチンおよび弱毒生菌ワクチンを組み合わせた混合ワク
チンを混合浸漬処理によって接種する際の前記混合ワク
チンの濃度は、それぞれ、２×１０4 〜２×１０6 ＣＦ
Ｕ／ｍｌ、より好ましくは１０5 〜１０6 ＣＦＵ／ｍ
ｌ、および２×１０3 〜２×１０5 ＣＦＵ／ｍｌ、より
好ましくは１０4 〜１０5 ＣＦＵ／ｍｌであり、また、
浸漬時間は、５〜３００分、より好ましくは１０〜５０
分である。
【００２１】本発明において使用されるパスツレラ・ピ
ッシシダ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａｐｉｓｃｉｃｉｄ
ａ）の病原性が低下しない保存方法としては、凍結法お
よび凍結乾燥法が挙げられる。この際、凍結法は、１０
％ジメチルスルフォキシドを分散媒に用いた場合、５２
ヵ月間保存後も病原性が維持されるが、１０％スクムミ
ルクに、塩化ナトリウム０．５％、グルタミン酸ナトリ
ウム１％、シュークロース５％を加えた分散媒を用いた
凍結乾燥法の方が、生残性および病原性の維持の上で優
れており、より好ましい。
ッシシダ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａｐｉｓｃｉｃｉｄ
ａ）の病原性が低下しない保存方法としては、凍結法お
よび凍結乾燥法が挙げられる。この際、凍結法は、１０
％ジメチルスルフォキシドを分散媒に用いた場合、５２
ヵ月間保存後も病原性が維持されるが、１０％スクムミ
ルクに、塩化ナトリウム０．５％、グルタミン酸ナトリ
ウム１％、シュークロース５％を加えた分散媒を用いた
凍結乾燥法の方が、生残性および病原性の維持の上で優
れており、より好ましい。
【００２２】また、本発明において使用されるパスツレ
ラ・ピッシシダ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ ｐｉｓｃｉ
ｃｉｄａ）の病原性が低下した場合の病原性の回復方法
としては、病原性が１０4 CFU/尾腹腔内程度であれば、
動脈球接種を用いた魚体通過により速やかに回復する。
ラ・ピッシシダ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ ｐｉｓｃｉ
ｃｉｄａ）の病原性が低下した場合の病原性の回復方法
としては、病原性が１０4 CFU/尾腹腔内程度であれば、
動脈球接種を用いた魚体通過により速やかに回復する。
【００２３】本発明において有効な感染防御能を示す攻
撃菌株としては、パスツレラ・ピッシシダ（Ｐａｓｔｅ
ｕｒｅｌｌａ ｐｉｓｃｉｃｉｄａ）（ＳＰ９０７４
株）、パスツレラ・ピッシシダ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌ
ａ ｐｉｓｃｉｃｉｄａ）（ＳＰ７１３３株）、パスツ
レラ・ピッシシダ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａｐｉｓｃｉ
ｃｉｄａ）（ＨＴ８４３７株）等が具体的に挙げられ
る。これらのうちで、特に、パスツレラ・ピッシシダ
（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ ｐｉｓｃｉｃｉｄａ）（Ｓ
Ｐ９０７４株）に対しては、本発明の混合ワクチンは良
好な感染防御能を示す。
撃菌株としては、パスツレラ・ピッシシダ（Ｐａｓｔｅ
ｕｒｅｌｌａ ｐｉｓｃｉｃｉｄａ）（ＳＰ９０７４
株）、パスツレラ・ピッシシダ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌ
ａ ｐｉｓｃｉｃｉｄａ）（ＳＰ７１３３株）、パスツ
レラ・ピッシシダ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａｐｉｓｃｉ
ｃｉｄａ）（ＨＴ８４３７株）等が具体的に挙げられ
る。これらのうちで、特に、パスツレラ・ピッシシダ
（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ ｐｉｓｃｉｃｉｄａ）（Ｓ
Ｐ９０７４株）に対しては、本発明の混合ワクチンは良
好な感染防御能を示す。
【００２４】
【実施例】以下、実施例および比較例によって本発明を
さらに具体的に説明する。
さらに具体的に説明する。
【００２５】実施例１、２、比較例１〜３ （１）材料および方法 供試魚 類結節症未発病のブリ稚魚を搬入した後、これらの魚に
総合ビタミン剤（ハマチエードｆ）を２〜３％添加した
イカナゴ切餌を８〜１０％／魚体重ｋｇ／日給餌して試
験に供するまで予備飼育したものを使用した。
総合ビタミン剤（ハマチエードｆ）を２〜３％添加した
イカナゴ切餌を８〜１０％／魚体重ｋｇ／日給餌して試
験に供するまで予備飼育したものを使用した。
【００２６】ＬＰＳワクチンの調製 パスツレラ・ピッシシダ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ ｐ
ｉｓｃｉｃｉｄａ）（ＳＰ７１３３株）を２％塩化ナト
リウム加ＢＨＩＡ培地で２５℃、４８時間培養した後、
このようにして培養した菌を遠心分離を用いて集菌し、
集菌した菌に９０℃に加熱したフェノールを２ｍｌ加
え、この状態で６８℃、２０分間加熱し続ける。この
後、この溶液を、７，５００ｒｐｍ、２０分間遠心分離
し、上清を分取する。この上清からフェノールおよび不
純物を除去するため、上清をセロファンチューブに入
れ、蒸留水を用いた透析を４℃、２４時間行い、ポリエ
チレングリコール（ＰＥＧ＃６０００）を用いて濃縮す
ることによって調製した。
ｉｓｃｉｃｉｄａ）（ＳＰ７１３３株）を２％塩化ナト
リウム加ＢＨＩＡ培地で２５℃、４８時間培養した後、
このようにして培養した菌を遠心分離を用いて集菌し、
集菌した菌に９０℃に加熱したフェノールを２ｍｌ加
え、この状態で６８℃、２０分間加熱し続ける。この
後、この溶液を、７，５００ｒｐｍ、２０分間遠心分離
し、上清を分取する。この上清からフェノールおよび不
純物を除去するため、上清をセロファンチューブに入
れ、蒸留水を用いた透析を４℃、２４時間行い、ポリエ
チレングリコール（ＰＥＧ＃６０００）を用いて濃縮す
ることによって調製した。
【００２７】この際の湿菌重量１，０００ｍｇ／ｍｌ相
当量のワクチンに含まれるＬＰＳワクチン濃度は、１０
ｍｇ／ｍｌであった。
当量のワクチンに含まれるＬＰＳワクチン濃度は、１０
ｍｇ／ｍｌであった。
【００２８】ホルマリン不活化（以下、ＦＫＣと称す
る）ワクチン ＦＫＣワクチンは、作用において記載したものと同様の
ものを使用した。
る）ワクチン ＦＫＣワクチンは、作用において記載したものと同様の
ものを使用した。
【００２９】弱毒生菌ワクチン 弱毒生菌ワクチンは、パスツレラ・ピッシシダ（Ｐａｓ
ｔｅｕｒｅｌｌａ ｐｉｓｃｉｃｉｄａ）（ＳＰ７１３
３株）を２％塩化ナトリウム加トリプトソイ寒天培地
（日水製）で５０代継代したものを、上記方法と同様に
して調製した。
ｔｅｕｒｅｌｌａ ｐｉｓｃｉｃｉｄａ）（ＳＰ７１３
３株）を２％塩化ナトリウム加トリプトソイ寒天培地
（日水製）で５０代継代したものを、上記方法と同様に
して調製した。
【００３０】ワクチン処理 各ワクチンを瀘過海水により表１に示す濃度に調製し、
供試魚をエアレーションを行いながら１０分間浸漬し
た。なお、対照魚として、ＰＢＳを０．１ｍｌ／魚腹腔
内接種したものを使用した。
供試魚をエアレーションを行いながら１０分間浸漬し
た。なお、対照魚として、ＰＢＳを０．１ｍｌ／魚腹腔
内接種したものを使用した。
【００３１】安全性試験 ワクチン接種後、供試魚を３０リットルのアクリル水槽
に１水槽当たり１９〜２０尾収容し、１４日間飼育観察
を行い、安全性を確認した。飼育期間中は上記餌料を１
日１回飽食量給餌した。
に１水槽当たり１９〜２０尾収容し、１４日間飼育観察
を行い、安全性を確認した。飼育期間中は上記餌料を１
日１回飽食量給餌した。
【００３２】有効性の判定 ワクチン処理後１４日目に攻撃し、有効性を判定した。
攻撃菌株にはパスツレラ・ピッシシダ（Ｐａｓｔｅｕｒ
ｅｌｌａ ｐｉｓｃｉｃｉｄａ）ＳＰ９０７４株を用
い、１０2 、１０3 、１０4 ＣＦＵ／ｍｌの濃度で５分
間浸漬攻撃を行った。攻撃終了後の魚は直ちにアクリル
水槽に収容し、安全性試験と同様に１０日間飼育観察し
た。攻撃試験結果の有効性は致死時間、プロビット図解
法によるＬＤ50、アユビブリオ病ワクチンにおける有効
性の計算法［（１−ワクチン区の死亡率／対照区の死亡
率）×１００％］（以下、有効率と略す）、およびχ2
試験により検討した。
攻撃菌株にはパスツレラ・ピッシシダ（Ｐａｓｔｅｕｒ
ｅｌｌａ ｐｉｓｃｉｃｉｄａ）ＳＰ９０７４株を用
い、１０2 、１０3 、１０4 ＣＦＵ／ｍｌの濃度で５分
間浸漬攻撃を行った。攻撃終了後の魚は直ちにアクリル
水槽に収容し、安全性試験と同様に１０日間飼育観察し
た。攻撃試験結果の有効性は致死時間、プロビット図解
法によるＬＤ50、アユビブリオ病ワクチンにおける有効
性の計算法［（１−ワクチン区の死亡率／対照区の死亡
率）×１００％］（以下、有効率と略す）、およびχ2
試験により検討した。
【００３３】（２）実験結果 ＬＰＳワクチン２０ｍｃｇ／ｍｌおよびＳＰ７１３３株
弱毒生菌ワクチン１０5 ＣＦＵ／ｍｌの混合浸漬（実施
例１）、ＬＰＳワクチン２０ｍｃｇ／ｍｌおよびＦＫＣ
ワクチン１０6 ＣＦＵ／ｍｌの混合浸漬（実施例２）、
およびＳＰ７１３３株弱毒生菌ワクチン１０5 ＣＦＵ／
ｍｌ浸漬（比較例１）、ＦＫＣワクチン１０6 ＣＦＵ／
ｍｌ浸漬（比較例２）における処理条件および安全性試
験結果を表１に示した。この結果、ワクチン接種時およ
び飼育期間中にワクチンに起因する異常は認められなか
ったが、ＬＰＳワクチンおよび弱毒生菌ワクチン区で３
尾、ＬＰＳワクチンおよびＦＫＣワクチン区で６尾、弱
毒生菌ワクチン区で４尾、対照区で５尾それぞれ飛び出
しによる死亡があった。
弱毒生菌ワクチン１０5 ＣＦＵ／ｍｌの混合浸漬（実施
例１）、ＬＰＳワクチン２０ｍｃｇ／ｍｌおよびＦＫＣ
ワクチン１０6 ＣＦＵ／ｍｌの混合浸漬（実施例２）、
およびＳＰ７１３３株弱毒生菌ワクチン１０5 ＣＦＵ／
ｍｌ浸漬（比較例１）、ＦＫＣワクチン１０6 ＣＦＵ／
ｍｌ浸漬（比較例２）における処理条件および安全性試
験結果を表１に示した。この結果、ワクチン接種時およ
び飼育期間中にワクチンに起因する異常は認められなか
ったが、ＬＰＳワクチンおよび弱毒生菌ワクチン区で３
尾、ＬＰＳワクチンおよびＦＫＣワクチン区で６尾、弱
毒生菌ワクチン区で４尾、対照区で５尾それぞれ飛び出
しによる死亡があった。
【００３４】
【表１】
【００３５】有効性試験結果を表２および図１（ａ）、
（ｂ）に示した。この結果、ＬＰＳワクチンおよび弱毒
生菌ワクチン混合浸漬処理の有効性は１０3 、１０4 Ｃ
ＦＵ／ｍｌ攻撃区で認められ、有効率はそれぞれ８４、
３９％、直接確立計算値は０．０００６、０．０１４で
あった。また、χ2 試験では１０3 ＣＦＵ／ｍｌ攻撃区
で１％以下、１０4 ＣＦＵ／ｍｌ攻撃区で５％以下の危
険率で有意差が認められた。
（ｂ）に示した。この結果、ＬＰＳワクチンおよび弱毒
生菌ワクチン混合浸漬処理の有効性は１０3 、１０4 Ｃ
ＦＵ／ｍｌ攻撃区で認められ、有効率はそれぞれ８４、
３９％、直接確立計算値は０．０００６、０．０１４で
あった。また、χ2 試験では１０3 ＣＦＵ／ｍｌ攻撃区
で１％以下、１０4 ＣＦＵ／ｍｌ攻撃区で５％以下の危
険率で有意差が認められた。
【００３６】また、ＬＰＳワクチンおよびＦＫＣワクチ
ン混合浸漬処理においては、１０3 、１０4 ＣＦＵ／ｍ
ｌ攻撃区で有効性が認められ、有効率はそれぞれ７５、
２４％、直接確立計算値は０．００３、０．０８４であ
った。また、χ2 試験では１０3 ＣＦＵ／ｍｌ攻撃区で
１％以下の危険率で有意差が認められた。
ン混合浸漬処理においては、１０3 、１０4 ＣＦＵ／ｍ
ｌ攻撃区で有効性が認められ、有効率はそれぞれ７５、
２４％、直接確立計算値は０．００３、０．０８４であ
った。また、χ2 試験では１０3 ＣＦＵ／ｍｌ攻撃区で
１％以下の危険率で有意差が認められた。
【００３７】さらに、弱毒生菌ワクチン浸漬処理におい
ては、有効性は１０3 、１０4 ＣＦＵ／ｍｌ攻撃区で認
められ、有効率がそれぞれ６８、３３％、直接確立計算
値は０．００６、０．０２８であった。また、χ2 試験
では１０3 ＣＦＵ／ｍｌ攻撃区で１％以下、１０4 ＣＦ
Ｕ／ｍｌ攻撃区で５％以下の危険率で有意差が認められ
た。
ては、有効性は１０3 、１０4 ＣＦＵ／ｍｌ攻撃区で認
められ、有効率がそれぞれ６８、３３％、直接確立計算
値は０．００６、０．０２８であった。また、χ2 試験
では１０3 ＣＦＵ／ｍｌ攻撃区で１％以下、１０4 ＣＦ
Ｕ／ｍｌ攻撃区で５％以下の危険率で有意差が認められ
た。
【００３８】以上より、ＬＰＳワクチンおよび弱毒生菌
ワクチン混合浸漬処理は、弱毒生菌ワクチンの単独浸漬
処理に比べて有効であり、また、ＬＰＳワクチンおよび
ＦＫＣワクチン混合浸漬処理は、ＦＫＣワクチンの単独
浸漬処理に比べてかなり有効であることがわかった。
ワクチン混合浸漬処理は、弱毒生菌ワクチンの単独浸漬
処理に比べて有効であり、また、ＬＰＳワクチンおよび
ＦＫＣワクチン混合浸漬処理は、ＦＫＣワクチンの単独
浸漬処理に比べてかなり有効であることがわかった。
【００３９】
【表２】
【００４０】実施例３、比較例４〜６ （１）材料および方法 供試魚 類結節症未発病のブリ稚魚を搬入した後、これらの魚に
イカナゴ切餌を１０％／魚体重ｋｇ／日給餌して試験に
供するまで５日以上予備飼育した。
イカナゴ切餌を１０％／魚体重ｋｇ／日給餌して試験に
供するまで５日以上予備飼育した。
【００４１】ＬＰＳワクチンの調製 実施例１と同様にして行った。
【００４２】この際の湿菌重量６ｇ／３０リットル相当
量のワクチンに含まれるＬＰＳワクチン濃度は、２００
ｍｃｇ／ｍｌであった。
量のワクチンに含まれるＬＰＳワクチン濃度は、２００
ｍｃｇ／ｍｌであった。
【００４３】ＦＫＣワクチン 実施例１と同様のものを使用した。
【００４４】また、この際のワクチン濃度を１０9 CFU/
mlとした。
mlとした。
【００４５】ワクチン処理 各ワクチンを瀘過海水（全海水量：３０リットル）によ
り所定濃度に調製し、１試験系当たりの供試魚数を６０
尾（体重：１５〜５０ｇ）とし、流水（エアレーショ
ン）を行いながら供試魚を１０分間浸漬した。
り所定濃度に調製し、１試験系当たりの供試魚数を６０
尾（体重：１５〜５０ｇ）とし、流水（エアレーショ
ン）を行いながら供試魚を１０分間浸漬した。
【００４６】安全性試験 ワクチン接種後、供試魚を３０リットルのアクリル水槽
に１水槽当たり２０尾収容し、流水（エアレーション）
を行いながら１３日間飼育観察を行い、安全性を確認し
た。飼育期間中は上記餌料を１日１回飽食量給餌した。
に１水槽当たり２０尾収容し、流水（エアレーション）
を行いながら１３日間飼育観察を行い、安全性を確認し
た。飼育期間中は上記餌料を１日１回飽食量給餌した。
【００４７】有効性の判定 ワクチン処理後１３日目に攻撃し、有効性を判定した。
攻撃菌として、１．５％塩化ナトリウム加ＢＨＩＡ平板
で２５℃、２４時間培養したパスツレラ・ピッシシダ
（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ ｐｉｓｃｉｃｉｄａ）ＨＴ
８４３７株を海水で希釈し、２×１０4 ＣＦＵ／ｍｌの
菌液を調製したものを用い、１０2 、１０3 、１０4 Ｃ
ＦＵ／ｍｌの濃度で各区２０尾づつ５分間浸漬攻撃（海
水量：２〜４リットル）を行った。攻撃終了後の魚は直
ちにアクリル水槽に収容し、安全性試験と同様に１０日
間飼育観察した。攻撃試験結果の有効性は致死時間、プ
ロビット図解法によるＬＤ50、アユビブリオ病ワクチン
における有効性の計算法［（１−ワクチン区の死亡率／
対照区の死亡率）×１００％］（以下、有効率と略
す）、Ｆｉｓｈｅｒの直接確立計算により検討した。
攻撃菌として、１．５％塩化ナトリウム加ＢＨＩＡ平板
で２５℃、２４時間培養したパスツレラ・ピッシシダ
（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ ｐｉｓｃｉｃｉｄａ）ＨＴ
８４３７株を海水で希釈し、２×１０4 ＣＦＵ／ｍｌの
菌液を調製したものを用い、１０2 、１０3 、１０4 Ｃ
ＦＵ／ｍｌの濃度で各区２０尾づつ５分間浸漬攻撃（海
水量：２〜４リットル）を行った。攻撃終了後の魚は直
ちにアクリル水槽に収容し、安全性試験と同様に１０日
間飼育観察した。攻撃試験結果の有効性は致死時間、プ
ロビット図解法によるＬＤ50、アユビブリオ病ワクチン
における有効性の計算法［（１−ワクチン区の死亡率／
対照区の死亡率）×１００％］（以下、有効率と略
す）、Ｆｉｓｈｅｒの直接確立計算により検討した。
【００４８】（２）実験結果 ＬＰＳワクチン２００ｍｃｇ／ｍｌおよびＦＫＣワクチ
ン１０6 ＣＦＵ／ｍｌを混合浸漬（実施例３）、ＬＰＳ
ワクチン２００ｍｃｇ／ｍｌを浸漬（比較例４）および
ＦＫＣワクチン１０6 ＣＦＵ／ｍｌを浸漬（比較例５）
したものにおける処理条件および安全性試験結果を表３
に示した。この結果、ワクチン接種時および飼育期間中
にワクチンに起因する異常は認められなかった。
ン１０6 ＣＦＵ／ｍｌを混合浸漬（実施例３）、ＬＰＳ
ワクチン２００ｍｃｇ／ｍｌを浸漬（比較例４）および
ＦＫＣワクチン１０6 ＣＦＵ／ｍｌを浸漬（比較例５）
したものにおける処理条件および安全性試験結果を表３
に示した。この結果、ワクチン接種時および飼育期間中
にワクチンに起因する異常は認められなかった。
【００４９】
【表３】
【００５０】有効試験結果を表４に示した。この結果、
ＬＰＳワクチンおよびＦＫＣワクチンの混合浸漬処理の
有効性は１０2 、１０3 、１０4 ＣＦＵ／ｍｌ攻撃区で
認められ、有効率はそれぞれ５１、２８、５％、直接確
立計算値は０．１５６、０．０５４、０．５０２であっ
た。
ＬＰＳワクチンおよびＦＫＣワクチンの混合浸漬処理の
有効性は１０2 、１０3 、１０4 ＣＦＵ／ｍｌ攻撃区で
認められ、有効率はそれぞれ５１、２８、５％、直接確
立計算値は０．１５６、０．０５４、０．５０２であっ
た。
【００５１】また、ＬＰＳワクチン浸漬処理において
は、１０2 ＣＦＵ／ｍｌ攻撃区で有効性が認められ、有
効率は５１％、直接確立計算値は０．１５６であった。
は、１０2 ＣＦＵ／ｍｌ攻撃区で有効性が認められ、有
効率は５１％、直接確立計算値は０．１５６であった。
【００５２】さらに、ＦＫＣワクチン浸漬処理において
は、有効性は１０2 、１０3 ＣＦＵ／ｍｌ攻撃区で認め
られ、有効率がそれぞれ５１、１１％、直接確立計算値
は０．１５６、０．２４０であった。
は、有効性は１０2 、１０3 ＣＦＵ／ｍｌ攻撃区で認め
られ、有効率がそれぞれ５１、１１％、直接確立計算値
は０．１５６、０．２４０であった。
【００５３】以上より、ＬＰＳワクチンおよびＦＫＣワ
クチン混合浸漬処理は、ＬＰＳワクチンまたはＦＫＣワ
クチンの単独浸漬処理に比べて有効であることがわかっ
た。
クチン混合浸漬処理は、ＬＰＳワクチンまたはＦＫＣワ
クチンの単独浸漬処理に比べて有効であることがわかっ
た。
【００５４】
【表４】
【００５５】実施例４、５、比較例７、８ （１）材料および方法 供試魚、ＬＰＳワクチン、ＦＫＣワクチンおよび弱毒生
菌ワクチンは、実施例１および２で用いたものと同様の
ものを使用した。
菌ワクチンは、実施例１および２で用いたものと同様の
ものを使用した。
【００５６】ワクチン処理 ＬＰＳワクチンを瀘過海水により２０ｍｃｇ／ｍｌに調
製し、供試魚にこのＬＰＳワクチンを１０分間浸漬処理
し、３日（７２時間）後にＦＫＣワクチン（実施例５）
または弱毒生菌ワクチン（実施例４）を浸漬処理により
接種した。また、ＬＰＳワクチン２０ｍｃｇ／魚を腹腔
内接種により予め接種し、３日（７２時間）後にＦＫＣ
ワクチンを浸漬処理（比較例７）した。対照魚として、
ＰＢＳを０．１ｍｌ／魚腹腔内接種したものを使用し
た。
製し、供試魚にこのＬＰＳワクチンを１０分間浸漬処理
し、３日（７２時間）後にＦＫＣワクチン（実施例５）
または弱毒生菌ワクチン（実施例４）を浸漬処理により
接種した。また、ＬＰＳワクチン２０ｍｃｇ／魚を腹腔
内接種により予め接種し、３日（７２時間）後にＦＫＣ
ワクチンを浸漬処理（比較例７）した。対照魚として、
ＰＢＳを０．１ｍｌ／魚腹腔内接種したものを使用し
た。
【００５７】安全性試験および有効性の判定について
は、実施例１および２と同様にして行った。
は、実施例１および２と同様にして行った。
【００５８】（２）実験結果 ＬＰＳワクチン２０ｍｃｇ／ｍｌおよび弱毒生菌ワクチ
ン１０5 ＣＦＵ／ｍｌを経日接種（実施例４）、ＬＰＳ
ワクチン２０ｍｃｇ／ｍｌおよびＦＫＣワクチン１０6
ＣＦＵ／ｍｌを経日接種（実施例５）、およびＬＰＳワ
クチン２０ｍｃｇ／魚およびＦＫＣワクチン１０6 ＣＦ
Ｕ／ｍｌを経日接種（比較例７）における処理条件およ
び安全性試験結果を表５に示した。この結果、ワクチン
接種時および飼育期間中にワクチンに起因する異常は認
められなかったが、ＦＫＣワクチン浸漬時にワクチンが
凝固する現象が観察された。
ン１０5 ＣＦＵ／ｍｌを経日接種（実施例４）、ＬＰＳ
ワクチン２０ｍｃｇ／ｍｌおよびＦＫＣワクチン１０6
ＣＦＵ／ｍｌを経日接種（実施例５）、およびＬＰＳワ
クチン２０ｍｃｇ／魚およびＦＫＣワクチン１０6 ＣＦ
Ｕ／ｍｌを経日接種（比較例７）における処理条件およ
び安全性試験結果を表５に示した。この結果、ワクチン
接種時および飼育期間中にワクチンに起因する異常は認
められなかったが、ＦＫＣワクチン浸漬時にワクチンが
凝固する現象が観察された。
【００５９】
【表５】
【００６０】有効試験結果を表６および図２に示した。
この結果、ＬＰＳワクチンおよび弱毒生菌ワクチンの混
合浸漬処理（経日処理）の有効性は１０2、１０3 ＣＦ
Ｕ／ｍｌ攻撃区で認められ、有効率はそれぞれ５０、５
３％、直接確立計算値は０．３８５、０．００３５であ
った。また、χ2 試験では１０3 攻撃区で１％以下の危
険率で有意差が認められた。
この結果、ＬＰＳワクチンおよび弱毒生菌ワクチンの混
合浸漬処理（経日処理）の有効性は１０2、１０3 ＣＦ
Ｕ／ｍｌ攻撃区で認められ、有効率はそれぞれ５０、５
３％、直接確立計算値は０．３８５、０．００３５であ
った。また、χ2 試験では１０3 攻撃区で１％以下の危
険率で有意差が認められた。
【００６１】また、ＬＰＳワクチンおよびＦＫＣワクチ
ンの混合浸漬処理（経日処理）においては１０3 ＣＦＵ
／ｍｌ攻撃区で有効性が認められ、有効率は３５％、直
接確立計算値は０．０３４３であった。また、χ2 試験
では１０3 ＣＦＵ／ｍｌ攻撃区で５％以下の危険率で有
意差が認められた。
ンの混合浸漬処理（経日処理）においては１０3 ＣＦＵ
／ｍｌ攻撃区で有効性が認められ、有効率は３５％、直
接確立計算値は０．０３４３であった。また、χ2 試験
では１０3 ＣＦＵ／ｍｌ攻撃区で５％以下の危険率で有
意差が認められた。
【００６２】さらに、ＬＰＳワクチン腹腔内接種および
ＦＫＣワクチン浸漬処理での有効性は１０3 ＣＦＵ／ｍ
ｌ攻撃区で認められ、有効率は３５％、直接確立計算値
は０．０３４３であった。また、χ2 試験では１０3 Ｃ
ＦＵ／ｍｌ攻撃区で５％以下の危険率で有意差が認めら
れた。
ＦＫＣワクチン浸漬処理での有効性は１０3 ＣＦＵ／ｍ
ｌ攻撃区で認められ、有効率は３５％、直接確立計算値
は０．０３４３であった。また、χ2 試験では１０3 Ｃ
ＦＵ／ｍｌ攻撃区で５％以下の危険率で有意差が認めら
れた。
【００６３】以上より、ＬＰＳワクチンおよび弱毒生菌
ワクチンの経日浸漬処理、ＬＰＳワクチンおよびＦＫＣ
ワクチンの経日浸漬処理、および経日でのＬＰＳワクチ
ン腹腔内接種およびＦＫＣワクチン浸漬処理は、それぞ
れブリの類結節症の感染予防に有効であった。
ワクチンの経日浸漬処理、ＬＰＳワクチンおよびＦＫＣ
ワクチンの経日浸漬処理、および経日でのＬＰＳワクチ
ン腹腔内接種およびＦＫＣワクチン浸漬処理は、それぞ
れブリの類結節症の感染予防に有効であった。
【００６４】
【表６】
【００６５】実施例６、７、比較例９〜１１ （１）材料および方法 供試魚、ＬＰＳワクチンは、実施例１および２で用いた
ものと同様のものを使用した。
ものと同様のものを使用した。
【００６６】ＦＫＣワクチン パスツレラ・ピッシシダ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ ｐ
ｉｓｃｉｃｉｄａ）（ＫＢ７７０３株）を１．５％塩化
ナトリウム加ＢＨＩ寒天培地で２５℃、４８時間前培養
した後、１．５％塩化ナトリウム加ＢＨＩブロス培地で
２４℃、２０時間本培養する。このようにして培養した
菌を遠心分離（８，０００ｒｐｍ、３０分）により集菌
し、０．１％ホルマリンを２ｍｌ加え、ホルマリン不活
化ワクチンを調製する。
ｉｓｃｉｃｉｄａ）（ＫＢ７７０３株）を１．５％塩化
ナトリウム加ＢＨＩ寒天培地で２５℃、４８時間前培養
した後、１．５％塩化ナトリウム加ＢＨＩブロス培地で
２４℃、２０時間本培養する。このようにして培養した
菌を遠心分離（８，０００ｒｐｍ、３０分）により集菌
し、０．１％ホルマリンを２ｍｌ加え、ホルマリン不活
化ワクチンを調製する。
【００６７】弱毒生菌ワクチン 弱毒生菌ワクチンは、パスツレラ・ピッシシダ（Ｐａｓ
ｔｅｕｒｅｌｌａ ｐｉｓｃｉｃｉｄａ）（ＳＰ７１３
３株）を２％塩化ナトリウム加トリプトソイ寒天培地
（日水製）で５３代継代したものを上記方法によって調
製した。
ｔｅｕｒｅｌｌａ ｐｉｓｃｉｃｉｄａ）（ＳＰ７１３
３株）を２％塩化ナトリウム加トリプトソイ寒天培地
（日水製）で５３代継代したものを上記方法によって調
製した。
【００６８】ワクチン処理 各ワクチンを瀘過海水により表７に示す濃度に調製し、
供試魚をエアレーションを行いながら１０分間浸漬し
た。なお、対照魚として、ＰＢＳを０．１ｍｌ／魚腹腔
内接種したものを使用した。
供試魚をエアレーションを行いながら１０分間浸漬し
た。なお、対照魚として、ＰＢＳを０．１ｍｌ／魚腹腔
内接種したものを使用した。
【００６９】なお、安全性試験および有効性の判定につ
いては、実施例１、２と同様にして行った。
いては、実施例１、２と同様にして行った。
【００７０】（２）実験結果 ＬＰＳワクチン２００μｇ／ｍｌおよびＳＰ７１３３株
弱毒生菌ワクチン１０ 5 ＣＦＵ／ｍｌの混合浸漬（実施
例６）、ＦＫＣワクチン１０6 ＣＦＵ／ｍｌおよびＳＰ
７１３３株弱毒生菌ワクチン１０5 ＣＦＵ／ｍｌの混合
浸漬（実施例７）、およびＳＰ７１３３株弱毒生菌ワク
チン１０5 ＣＦＵ／ｍｌ浸漬（比較例９）、ＦＫＣワク
チン１０6 ＣＦＵ／ｍｌ浸漬（比較例１０）における安
全性および有効性試験結果を表７に示した。この結果、
ＬＰＳワクチンおよび弱毒生菌ワクチンの混合浸漬処
理、およびＦＫＣワクチンおよび弱毒生菌ワクチンの混
合浸漬処理では、それぞれ８４％および７５％の有効率
が確認された。
弱毒生菌ワクチン１０ 5 ＣＦＵ／ｍｌの混合浸漬（実施
例６）、ＦＫＣワクチン１０6 ＣＦＵ／ｍｌおよびＳＰ
７１３３株弱毒生菌ワクチン１０5 ＣＦＵ／ｍｌの混合
浸漬（実施例７）、およびＳＰ７１３３株弱毒生菌ワク
チン１０5 ＣＦＵ／ｍｌ浸漬（比較例９）、ＦＫＣワク
チン１０6 ＣＦＵ／ｍｌ浸漬（比較例１０）における安
全性および有効性試験結果を表７に示した。この結果、
ＬＰＳワクチンおよび弱毒生菌ワクチンの混合浸漬処
理、およびＦＫＣワクチンおよび弱毒生菌ワクチンの混
合浸漬処理では、それぞれ８４％および７５％の有効率
が確認された。
【００７１】
【表７】
【００７２】比較例１２、１３ 供試魚、ＬＰＳワクチンは、実施例１および２で用いた
ものと同様のものを使用した。
ものと同様のものを使用した。
【００７３】ワクチン処理 ＬＰＳワクチンを瀘過海水により５０ｍｃｇ／ｍｌの濃
度に調製し、供試魚をエアレーションを行いながら１０
分間浸漬した。対照魚として、ＰＢＳを０．１ｍｌ／魚
腹腔内接種したものを使用した。
度に調製し、供試魚をエアレーションを行いながら１０
分間浸漬した。対照魚として、ＰＢＳを０．１ｍｌ／魚
腹腔内接種したものを使用した。
【００７４】安全性試験および有効性の判定について
は、実施例１、２と同様にして行った。
は、実施例１、２と同様にして行った。
【００７５】（２）実験結果 ＬＰＳワクチン５０ｍｃｇ／ｍｌ、１０分間浸漬におけ
る処理時間および安全性試験結果を表８に示した。この
結果、ワクチン接種時および飼育期間中に異常は認めら
れなかった。
る処理時間および安全性試験結果を表８に示した。この
結果、ワクチン接種時および飼育期間中に異常は認めら
れなかった。
【００７６】
【表８】
【００７７】有効試験結果を表９および図３に示した。
この結果、１０2、１０3 、１０4 ＣＦＵ／ｍｌ攻撃区
で有効性が認められ、有効率はそれぞれ２７、３７、１
０％、直接確立計算値は０．２１４、０．０４３、０．
２４３であったが、χ2 試験ではいずれも有意差は認め
られなかった。
この結果、１０2、１０3 、１０4 ＣＦＵ／ｍｌ攻撃区
で有効性が認められ、有効率はそれぞれ２７、３７、１
０％、直接確立計算値は０．２１４、０．０４３、０．
２４３であったが、χ2 試験ではいずれも有意差は認め
られなかった。
【００７８】
【表９】
【００７９】比較例１４、１５ 供試魚、ＬＰＳワクチンは、実施例１および２で用いた
ものと同様のものを使用した。
ものと同様のものを使用した。
【００８０】ワクチン処理 ワクチンを蒸留水により２００ｍｃｇ／ｍｌの濃度に希
釈し、その０．１ｍｌを供試魚の腹腔内に接種した。対
照魚として、ＰＢＳを０．１ｍｌ／魚腹腔内接種したも
のを使用した。
釈し、その０．１ｍｌを供試魚の腹腔内に接種した。対
照魚として、ＰＢＳを０．１ｍｌ／魚腹腔内接種したも
のを使用した。
【００８１】安全性試験および有効性の判定について
は、実施例１、２と同様にして行った。
は、実施例１、２と同様にして行った。
【００８２】（２）実験結果 ＬＰＳワクチン２０ｍｃｇ／魚腹腔内接種時および飼育
期間中に異常は認められなかった。
期間中に異常は認められなかった。
【００８３】有効試験結果を表１０に示した。この結
果、２０ｍｃｇ／魚接種においては１０2 、１０3 ＣＦ
Ｕ／ｍｌ攻撃区で有効性が認められ、有効率は５８、５
０％、直接確立計算値は０．１０５、０．０１２とな
り、χ2 試験より１０3 ＣＦＵ／ｍｌ攻撃区で５％以下
の危険率で有意差が認められたが、ＬＰＳワクチンおよ
び弱毒生菌ワクチン混合浸漬処理（実施例１）、および
ＬＰＳワクチンおよびＦＫＣワクチン混合浸漬処理（実
施例２）ほど有効ではなかった。
果、２０ｍｃｇ／魚接種においては１０2 、１０3 ＣＦ
Ｕ／ｍｌ攻撃区で有効性が認められ、有効率は５８、５
０％、直接確立計算値は０．１０５、０．０１２とな
り、χ2 試験より１０3 ＣＦＵ／ｍｌ攻撃区で５％以下
の危険率で有意差が認められたが、ＬＰＳワクチンおよ
び弱毒生菌ワクチン混合浸漬処理（実施例１）、および
ＬＰＳワクチンおよびＦＫＣワクチン混合浸漬処理（実
施例２）ほど有効ではなかった。
【００８４】
【表１０】
【００８５】
【発明の効果】以上述べたように、本発明の海産魚混合
ワクチンは、パスツレラ・ピッシシダ（Ｐａｓｔｅｕｒ
ｅｌｌａ ｐｉｓｃｉｃｉｄａ）のフェノール−ＬＰＳ
ワクチン、パスツレラ・ピッシシダ（Ｐａｓｔｅｕｒｅ
ｌｌａ ｐｉｓｃｉｃｉｄａ）のホルマリン不活化ワク
チン、パスツレラ・ピッシシダ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌ
ａ ｐｉｓｃｉｃｉｄａ）の弱毒生菌ワクチンのうちの
少なくとも２種類のワクチンを組み合わせることにより
なるものであり、ブリの養殖時に発生する類結節症に対
して十分有効な感染防御能を有するものである。また、
本発明の混合ワクチンを用いることによって、浸漬処理
による接種が可能であるため、魚に対してワクチンの接
種が容易、かつ一括して大量に行うことができる。
ワクチンは、パスツレラ・ピッシシダ（Ｐａｓｔｅｕｒ
ｅｌｌａ ｐｉｓｃｉｃｉｄａ）のフェノール−ＬＰＳ
ワクチン、パスツレラ・ピッシシダ（Ｐａｓｔｅｕｒｅ
ｌｌａ ｐｉｓｃｉｃｉｄａ）のホルマリン不活化ワク
チン、パスツレラ・ピッシシダ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌ
ａ ｐｉｓｃｉｃｉｄａ）の弱毒生菌ワクチンのうちの
少なくとも２種類のワクチンを組み合わせることにより
なるものであり、ブリの養殖時に発生する類結節症に対
して十分有効な感染防御能を有するものである。また、
本発明の混合ワクチンを用いることによって、浸漬処理
による接種が可能であるため、魚に対してワクチンの接
種が容易、かつ一括して大量に行うことができる。
【図１】 図１（ａ）は、ＬＰＳワクチンおよび弱毒生
菌ワクチン、ＬＰＳワクチンおよびＦＫＣワクチンの混
合浸漬処理における攻撃後の生残率の変化を示すグラフ
であり、図１（ｂ）は、ＬＰＳワクチンの浸漬処理およ
びＰＢＳの腹腔内接種（コントロール）における攻撃後
の生残率の変化を示すグラフである。
菌ワクチン、ＬＰＳワクチンおよびＦＫＣワクチンの混
合浸漬処理における攻撃後の生残率の変化を示すグラフ
であり、図１（ｂ）は、ＬＰＳワクチンの浸漬処理およ
びＰＢＳの腹腔内接種（コントロール）における攻撃後
の生残率の変化を示すグラフである。
【図２】 図２は、ＬＰＳワクチンおよび弱毒生菌ワク
チン、ＬＰＳワクチンおよびＦＫＣワクチンの混合浸漬
処理（経日）における攻撃後の生残率の変化を示すグラ
フである。
チン、ＬＰＳワクチンおよびＦＫＣワクチンの混合浸漬
処理（経日）における攻撃後の生残率の変化を示すグラ
フである。
【図３】 図３は、ＬＰＳワクチンの浸漬処理における
攻撃後の生残率の変化を示すグラフである。
攻撃後の生残率の変化を示すグラフである。
Claims (6)
- 【請求項１】 パスツレラ・ピッシシダ（Ｐａｓｔｅｕ
ｒｅｌｌａ ｐｉｓｃｉｃｉｄａ）のフェノール−ＬＰ
Ｓワクチン、パスツレラ・ピッシシダ（Ｐａｓｔｅｕｒ
ｅｌｌａ ｐｉｓｃｉｃｉｄａ）のホルマリン不活化ワ
クチン、パスツレラ・ピッシシダ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌ
ｌａ ｐｉｓｃｉｃｉｄａ）の弱毒生菌ワクチンのうち
の少なくとも２種類のワクチンを組み合わせることによ
りなる類結節症の感染防御に対して使用する海産魚混合
ワクチン。 - 【請求項２】 パスツレラ・ピッシシダ（Ｐａｓｔｅｕ
ｒｅｌｌａ ｐｉｓｃｉｃｉｄａ）のフェノール−ＬＰ
Ｓワクチン、パスツレラ・ピッシシダ（Ｐａｓｔｅｕｒ
ｅｌｌａ ｐｉｓｃｉｃｉｄａ）のホルマリン不活化ワ
クチン、パスツレラ・ピッシシダ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌ
ｌａ ｐｉｓｃｉｃｉｄａ）の弱毒生菌ワクチンのうち
のいずれか２種類のワクチンを組み合わせることにより
なる類結節症の感染防御に対して使用する海産魚混合ワ
クチン。 - 【請求項３】 前記フェノール−ＬＰＳワクチンが、パ
スツレラ・ピッシシダ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ ｐｉ
ｓｃｉｃｉｄａ）ＳＰ７１３３株を用いてフェノール−
水抽出法により抽出されたものである請求項１または２
記載の海産魚混合ワクチン。 - 【請求項４】 前記ホルマリン不活化ワクチンが、パス
ツレラ・ピッシシダ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ ｐｉｓ
ｃｉｃｉｄａ）ＫＢ７７０３株により調製されたもので
あるである請求項１から３のいずれかに記載の海産魚混
合ワクチン。 - 【請求項５】 前記弱毒生菌ワクチンが、パスツレラ・
ピッシシダ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ ｐｉｓｃｉｃｉ
ｄａ）ＳＰ７１３３株の継代株より調製されたものであ
る請求項１から４のいずれかに記載の海産魚混合ワクチ
ン。 - 【請求項６】 ブリの類結節症の感染防御に対して使用
する請求項１から５のいずれかに記載の海産魚混合ワク
チン。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3303096A JP2569414B2 (ja) | 1991-11-19 | 1991-11-19 | 海産魚混合ワクチン |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3303096A JP2569414B2 (ja) | 1991-11-19 | 1991-11-19 | 海産魚混合ワクチン |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH05139994A JPH05139994A (ja) | 1993-06-08 |
| JP2569414B2 true JP2569414B2 (ja) | 1997-01-08 |
Family
ID=17916847
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3303096A Expired - Lifetime JP2569414B2 (ja) | 1991-11-19 | 1991-11-19 | 海産魚混合ワクチン |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2569414B2 (ja) |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ES2115550B1 (es) * | 1996-10-14 | 1999-02-16 | Univ Santiago De Compostela Y | Vacuna anti-pasteurella piscicida (di)para la prevencion de la enfermedad pasteurelosis en dorada y lubina y procedimiento de obtencion. . |
| US6350454B1 (en) * | 1997-04-11 | 2002-02-26 | Board Of Supervisors Of Louisiana State University And Agricultural And Mechanical College | Attenuated Pasteurella piscicida vaccine for fish |
| GB0317733D0 (en) * | 2003-07-29 | 2003-09-03 | Novartis Ag | Organic compounds |
| JP5240811B2 (ja) * | 2006-09-22 | 2013-07-17 | 学校法人近畿大学 | マダイ滑走細菌症ワクチン及びマダイ滑走細菌症ワクチン組成物並びにマダイ滑走細菌症の予防法 |
| TWI353845B (en) * | 2008-03-19 | 2011-12-11 | Food Industry Res & Dev Inst | Process for preparing peptide products for promoti |
| JP5863839B2 (ja) * | 2014-01-22 | 2016-02-17 | 國立台湾海洋大學ＮａｔｉｏｎａｌＴａｉｗａｎ Ｏｃｅａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ | エビにおけるビブリオ感染に対するワクチン及びその作製方法 |
-
1991
- 1991-11-19 JP JP3303096A patent/JP2569414B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH05139994A (ja) | 1993-06-08 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| EXPY | Cancellation because of completion of term |