JP2568612Y2 - Edman reactor - Google Patents
Edman reactorInfo
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- JP2568612Y2 JP2568612Y2 JP1992068232U JP6823292U JP2568612Y2 JP 2568612 Y2 JP2568612 Y2 JP 2568612Y2 JP 1992068232 U JP1992068232 U JP 1992068232U JP 6823292 U JP6823292 U JP 6823292U JP 2568612 Y2 JP2568612 Y2 JP 2568612Y2
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Description
【0001】[0001]
【産業上の利用分野】本考案は、エドマン反応装置、特
に、アミノ酸分析装置にエドマン反応後の試料を供給す
るためのエドマン反応装置に関する。BACKGROUND OF THE INVENTION 1. Field of the Invention The present invention relates to an Edman reactor, and more particularly to an Edman reactor for supplying a sample after the Edman reaction to an amino acid analyzer.
【0002】[0002]
【従来の技術】蛋白質のアミノ酸配列を決定するため
に、蛋白質一次構造分析装置が用いられる。蛋白質一次
構造分析装置は、エドマン反応を行うためのエドマン反
応装置部と、エドマン反応後の試料からアミノ酸を分析
するためのアミノ酸分析装置とから主に構成されてい
る。2. Description of the Related Art In order to determine the amino acid sequence of a protein, a protein primary structure analyzer is used. The protein primary structure analyzer mainly includes an Edman reaction unit for performing an Edman reaction, and an amino acid analyzer for analyzing amino acids from a sample after the Edman reaction.
【0003】エドマン反応は、蛋白質やペプチドの一次
構造、すなわちアミノ酸配列をN末端から逐次決定して
いく場合に用いられる。この反応では、まず、前処理が
施された試料をリアクションチャンバに配置しN末端に
フェニルイソチオシアネート(PITC)を反応させて
PTC−蛋白質を生成(カップリング反応)後、トリフ
ルオロ酢酸の蒸気で試料のN末端ペプチドを切断し、A
TZアミノ酸を形成する(切断反応)。次に遊離したA
TZ−アミノ酸をコンバージョンフラスコ等に抽出する
(抽出反応)。さらに、トリフルオロ酢酸水溶液でAT
Z−アミノ酸を安定なPTH−アミノ酸へ転換する(転
換反応)。転換されたPTH−アミノ酸は、コンバージ
ョンフラスコから分析処理部へ供給され、アミノ酸の分
離,検出が行われる。The Edman reaction is used when the primary structure of a protein or peptide, that is, the amino acid sequence is determined sequentially from the N-terminus. In this reaction, first, the pretreated sample is placed in the reaction chamber and placed at the N-terminal.
Reacting phenylisothiocyanate (PITC)
After producing PTC-protein (coupling reaction) , the N-terminal peptide of the sample was cleaved with trifluoroacetic acid vapor, and A
Form TZ amino acids (cleavage reaction). Next, released A
The TZ-amino acid is extracted into a conversion flask or the like (extraction reaction). Furthermore, AT with trifluoroacetic acid aqueous solution
The Z-amino acid is converted to a stable PTH-amino acid (conversion reaction). The converted PTH-amino acid is supplied from the conversion flask to the analysis processing section, where the amino acid is separated and detected.
【0004】前記転換反応では、形成されたATZ−ア
ミノ酸がコンバージョンフラスコに収納され、ここへ例
えば、25%トリフルオロ酢酸水溶液が不活性ガス等の
圧力により供給される。これにより、転換反応が修了す
る。なお、トリフルオロ酢酸水溶液は、通常、ガラス容
器に収納されている。[0004] In the above conversion reaction, the formed ATZ-amino acid is stored in a conversion flask, and for example, a 25% aqueous trifluoroacetic acid solution is supplied thereto under a pressure of an inert gas or the like. This completes the conversion reaction. The aqueous trifluoroacetic acid solution is usually stored in a glass container.
【0005】[0005]
【考案が解決しようとする課題】前記エドマン反応装置
では、転換反応に用いられる25%トリフルオロ酢酸水
溶液がガラス容器に収納されている。しかし、トリフル
オロ酢酸水溶液は容器であるガラスを経時的に溶かし出
し、この溶出物がコンバージョンフラスコの流路内に蓄
積される。このため、蓄積物が試料の流れを阻害し、長
期にわたって安定した性能を確保できない。したがっ
て、蓄積物を洗い出す溶液による洗浄が必要となる。In the Edman reactor, a 25% aqueous trifluoroacetic acid solution used for the conversion reaction is contained in a glass container. However, the aqueous solution of trifluoroacetic acid dissolves the glass serving as a container with time, and the eluate accumulates in the flow path of the conversion flask. For this reason, the accumulated matter hinders the flow of the sample, and stable performance cannot be ensured for a long period of time. Therefore, it is necessary to wash with a solution for washing out the accumulated matter.
【0006】本考案の目的は、流路内に容器からの溶出
物が蓄積するのをなくし、洗浄を不要にすることにあ
る。[0006] An object of the present invention is to eliminate accumulation of eluate from a container in a flow channel and to eliminate the need for washing.
【0007】[0007]
【課題を解決するための手段】本考案にかかるエドマン
反応装置は、アミノ酸分析装置にエドマン反応後の試料
を供給するためのエドマン反応装置であって、蛋白質試
料のN末端ペプチド結合を切断し、ATZ−アミノ酸を
形成するためのリアクション部と、トリフルオロ酢酸水
溶液を収納するポリエチレン樹脂製容器を有し、トリフ
ルオロ酢酸水溶液を用いてATZ−アミノ酸をPTH−
アミノ酸へ変換する変換部と、PTH−アミノ酸をアミ
ノ酸分析装置に供給する試料供給部とを備えている。The Edman reactor according to the present invention is an Edman reactor for supplying a sample after the Edman reaction to an amino acid analyzer, which cuts an N-terminal peptide bond of a protein sample, It has a reaction part for forming an ATZ-amino acid, and a polyethylene resin container for storing an aqueous solution of trifluoroacetic acid.
It has a conversion unit for converting to amino acids, and a sample supply unit for supplying PTH-amino acids to the amino acid analyzer.
【0008】[0008]
【作用】本考案に係るエドマン反応装置では、まず、リ
アクション部において蛋白質試料のN末端ペプチド結合
が切断され、ATZ−アミノ酸が形成される。次に、形
成されたATZ−アミノ酸にトリフルオロ酢酸水溶液が
供給され、PTH−アミノ酸へ転換される。In the Edman reaction apparatus according to the present invention, first, the N-terminal peptide bond of the protein sample is cleaved in the reaction section to form an ATZ-amino acid. Next, an aqueous solution of trifluoroacetic acid is supplied to the formed ATZ-amino acid to be converted to a PTH-amino acid.
【0009】トリフルオロ酢酸水溶液はポリエチレン樹
脂製容器に収納されているので、容器成分の溶出が生じ
ない。したがって、PTH−アミノ酸を供給する流路が
詰まることはない。また、安価なポリエチレン樹脂製容
器を用いており、経済的にも優れている。 The aqueous solution of trifluoroacetic acid is polyethylene
Since it is stored in a fat container , the components of the container do not elute. Therefore, the channel for supplying the PTH-amino acid is not clogged. Also, inexpensive polyethylene resin
Uses a vessel and is economically excellent.
【0010】[0010]
【実施例】図1及び図2は、本考案のエドマン反応装置
の一実施例が採用された蛋白質一次構造分析装置1を示
している。この蛋白質一次構造分析装置1は、第1試薬
供給部2、リアクションチャンバー3、コンバージョン
フラスコ4及び第2試薬供給部5からなるエドマン反応
装置6と、PTH−アミノ酸分析装置7とから主に構成
されている。1 and 2 show an apparatus 1 for analyzing the primary structure of a protein to which an embodiment of the Edman reaction apparatus according to the present invention is applied. The protein primary structure analyzer 1 mainly includes an Edman reaction device 6 including a first reagent supply unit 2, a reaction chamber 3, a conversion flask 4, and a second reagent supply unit 5, and a PTH-amino acid analysis device 7. ing.
【0011】第1試薬供給部2は、酢酸エチルの試薬ボ
トル11と、n−ヘプタンの試薬ボトル12と、トリメ
チルアミン水溶液の試薬ボトル13と、フェニルイソチ
オシアネートn−ヘプタン溶液の試薬ボトル14と、塩
化n−ブチルの試薬ボトル15と、トリフルオロ酢酸
(100%濃度)の試薬ボトル16とを備えている。試
薬ボトル11〜16はガラス製である。各試薬ボトル1
1〜16は、電磁弁17を有するガス供給路18の一端
に接続されている。各ガス供給路18の他端は、窒素や
アルゴン等の不活性ガスを供給する供給装置19に接続
されている。また、各試薬ボトル11〜16の上部に
は、電磁弁20aを有するガス排気路20の一端が接続
されている。さらに各試薬ボトル11,12,14,1
5には、その底部に試薬供給路21の一端が配置され
る。一方、トリメチルアミン及びトリフルオロ酢酸は、
通常、気体状態でリアクションチャンバー3内に供給さ
れるため、試薬供給路21の一端は試薬ボトル13,1
6の上部に配置されている。各試薬供給路21の他端
は、それぞれ電磁弁22に接続されている。各電磁弁2
2は、一列状態で相互に接続されている。そして、その
電磁弁群の一端(図1では上端)に位置する電磁弁22
aには、不活性ガス供給装置19からのガス供給路25
の一端が接続されている。一方、電磁弁群の他端(図1
では下端)に位置する電磁弁22bには、リアクション
チャンバー3に試薬を導入するための試薬導入路33の
一端が接続されている。この試薬導入路33は、液体検
知センサ34を有している。The first reagent supply unit 2 includes a reagent bottle 11 of ethyl acetate, a reagent bottle 12 of n-heptane, a reagent bottle 13 of an aqueous solution of trimethylamine, a reagent bottle 14 of an n-heptane solution of phenylisothiocyanate, A reagent bottle 15 of n-butyl and a reagent bottle 16 of trifluoroacetic acid (100% concentration) are provided. Reagent bottle 11-1 6 is made of glass. Each reagent bottle 1
1-16 is connected to one end of the gas supply passage 18 having an electric solenoid valve 17. The other end of each gas supply path 18 is connected to a supply device 19 that supplies an inert gas such as nitrogen or argon. An upper end of each of the reagent bottles 11 to 16 is connected to one end of a gas exhaust path 20 having an electromagnetic valve 20a. Further, each reagent bottle 11, 12, 14, 1
5, one end of a reagent supply path 21 is disposed at the bottom. On the other hand, trimethylamine and trifluoroacetic acid
Normally, the gas is supplied into the reaction chamber 3 in a gaseous state.
6 is located at the top. The other end of each reagent supply path 21 is connected to a solenoid valve 22. Each solenoid valve 2
2 are interconnected in a row. The solenoid valve 22 located at one end (the upper end in FIG. 1) of the solenoid valve group
a includes a gas supply passage 25 from the inert gas supply device 19.
Are connected at one end. On the other hand, the other end of the solenoid valve group (FIG. 1)
(The lower end in FIG. 2) is connected to one end of a reagent introduction passage 33 for introducing a reagent into the reaction chamber 3. This reagent introduction path 33 has a liquid detection sensor 34.
【0012】リアクションチャンバー3は、上部材3a
と下部材3bとからなり、これらの間には試料を保持す
るためのフィルタ3cが配置されている。リアクション
チャンバー3の下端には、コンバージョンフラスコ4に
連通する試料移動管35の上流端が結合され得るように
なっている。試料移動管35の上流側端部には、液体セ
ンサ36と流路切替えバルブ37とが設けられている。
流路切替えバルブ37には、ドレン流路37aが設けら
れている。The reaction chamber 3 includes an upper member 3a.
And a lower member 3b, between which a filter 3c for holding a sample is disposed. The lower end of the reaction chamber 3 can be connected to an upstream end of a sample moving tube 35 communicating with the conversion flask 4. At the upstream end of the sample moving tube 35, a liquid sensor 36 and a flow path switching valve 37 are provided.
The flow path switching valve 37 is provided with a drain flow path 37a.
【0013】図2に示すように、コンバージョンフラス
コ4には、試料移動管35に加えて第2試薬供給部5か
らの試薬を導入するための試薬導入管38と、電磁弁を
有するガス排気管39とが連結されている。試薬導入管
38には、1組の液体検知センサ30,31が設けられ
ている。また、コンバージョンフラスコ4の下端には、
アミノ酸分析装置7へ試料を導入するための試料導入管
40が接続されている。試料導入管40は、切替えバル
ブ41を有している。As shown in FIG. 2, the conversion flask 4 has a reagent introduction pipe 38 for introducing a reagent from the second reagent supply section 5 in addition to the sample moving pipe 35, and a gas exhaust pipe having an electromagnetic valve. 39 are connected. The reagent introduction pipe 38 is provided with a pair of liquid detection sensors 30 and 31. Also, at the lower end of the conversion flask 4,
A sample introduction tube 40 for introducing a sample into the amino acid analyzer 7 is connected. The sample introduction tube 40 has a switching valve 41.
【0014】第2試薬供給部5は、アセトニトリルと水
との混合液が収納されたガラス製の試薬ボトル50と、
25%トリフルオロ酢酸水溶液の試薬ボトル51とを有
している。試薬ボトル51は、図3に示すように、ポリ
エチレン製の容器であり、開口部51aを気密に封止す
るためのねじ部51bと、ねじ部51bに螺合する蓋5
1cとを有している。試薬ボトル50,51の上部に
は、電磁弁52を有するガス供給路53の一端が接続さ
れている。各ガス供給路53の他端は、不活性ガス供給
装置54に接続されている。また、各試薬ボトル50,
51の上部には、電磁弁55aを有するガス排気路55
が接続されている。さらに、各試薬ボトル50,51か
ら延びる各試薬供給路56の先端が、電磁弁57に接続
されている。各電磁弁57,57は、直線上に接続され
ており、片側(図2では下端)の電磁弁57には、試料
導入路38の他端が接続されている。他方の電磁弁57
には、圧力制御された不活性ガスを供給するためのガス
供給路58aが電磁弁58を介して接続されている。ま
た、電磁弁58には、流量制御された不活性ガスを供給
するためのガス供給路59aが電磁弁59を介して接続
されている。The second reagent supply unit 5 includes a glass reagent bottle 50 containing a mixed solution of acetonitrile and water,
And a reagent bottle 51 of a 25% aqueous trifluoroacetic acid solution. As shown in FIG. 3, the reagent bottle 51 is a polyethylene container, and has a screw portion 51b for hermetically sealing the opening portion 51a, and a lid 5 screwed to the screw portion 51b.
1c. One end of a gas supply path 53 having an electromagnetic valve 52 is connected to upper portions of the reagent bottles 50 and 51. The other end of each gas supply path 53 is connected to an inert gas supply device 54. In addition, each reagent bottle 50,
51, a gas exhaust passage 55 having an electromagnetic valve 55a
Is connected. Further, the tip of each reagent supply path 56 extending from each reagent bottle 50, 51 is connected to an electromagnetic valve 57. The solenoid valves 57, 57 are connected in a straight line, and the other end of the sample introduction path 38 is connected to one side (the lower end in FIG. 2) of the solenoid valve 57. The other solenoid valve 57
Is connected via a solenoid valve 58 to a gas supply passage 58a for supplying a pressure-controlled inert gas. Further, a gas supply path 59 a for supplying an inert gas whose flow rate is controlled is connected to the electromagnetic valve 58 via the electromagnetic valve 59.
【0015】PTH−アミノ酸分析装置7は、六方バル
ブ60を有している。六方バルブ60には、試料導入管
40の一端が接続されている。また、六方バルブ60に
は、高速液体クロマトグラフィーのポンプ61,カラム
62,検出器63やフラクションコレクタ64が接続さ
れている。さらに、検出器63は、データ処理装置65
に接続されている。The PTH-amino acid analyzer 7 has a six-way valve 60. One end of the sample introduction tube 40 is connected to the six-way valve 60. The six-way valve 60 is connected to a pump 61, a column 62, a detector 63, and a fraction collector 64 for high-performance liquid chromatography. Further, the detector 63 includes a data processing device 65.
It is connected to the.
【0016】なお、この蛋白質一次構造分析装置1は、
図示しない制御部により、電磁弁や流路切替えバルブが
自動制御されるように構成されている。次に、上述の実
施例の動作を説明する。準備段階として、第1試薬供給
部2及び第2試薬供給部5において各試薬ボトル11〜
16及び50に所定量の各試薬を供給する。試薬ボトル
51は、所定量の25%トリフルオロ酢酸水溶液が事前
に量り取られて収納されている。25%トリフルオロ酢
酸水溶液は揮発性を有するので、蓋51cにより気密状
態で移動及び保存される。試薬ボトル51を第2試薬供
給部5内に設置する場合には、蓋51cを外し、試薬供
給路53,55,56の各一端部を試薬ボトル51内に
配置する。The protein primary structure analyzing apparatus 1 comprises:
The control unit (not shown) is configured to automatically control the electromagnetic valve and the flow path switching valve. Next, the operation of the above embodiment will be described. As a preparation stage, each of the reagent bottles 11 to 11 in the first reagent supply unit 2 and the second reagent supply unit 5
A predetermined amount of each reagent is supplied to 16 and 50. The reagent bottle 51 contains a predetermined amount of a 25% aqueous trifluoroacetic acid solution that has been measured in advance. Since the 25% aqueous trifluoroacetic acid solution has volatility, it is moved and stored in an airtight state by the lid 51c. When installing the reagent bottle 51 in the second reagent supply section 5, the lid 51 c is removed, and one end of each of the reagent supply paths 53, 55, and 56 is arranged in the reagent bottle 51.
【0017】次に、リアクションチャンバー3の上部部
材3a,3bを分割してフィルタ3c上に前処理が施さ
れた試料を配置する。次に、分析動作に移る。まず、試
薬導入路33内に第1試薬供給部2の試薬ボトル14か
らフェニルイソチオシアネート(PITC)を充填す
る。試薬ボトル14は、ガス供給路18からの不活性ガ
スにより内圧が上昇し、この圧力により試薬供給路21
内にPITCを送り出す。試薬供給路21内に送り出さ
れたPITCは、電磁弁22を介して試薬導入路33内
に充填される。Next, the upper members 3a and 3b of the reaction chamber 3 are divided and a pretreated sample is placed on the filter 3c. Next, the operation moves to an analysis operation. First, the reagent introduction path 33 is filled with phenylisothiocyanate (PITC) from the reagent bottle 14 of the first reagent supply unit 2. The internal pressure of the reagent bottle 14 is increased by the inert gas from the gas supply path 18, and this pressure causes the reagent supply path 21
Send PITC in. The PITC sent into the reagent supply path 21 is filled into the reagent introduction path 33 via the electromagnetic valve 22.
【0018】充填が完了すれば、図1の上端に位置する
電磁弁22aを開けて、ガス供給路25からの不活性ガ
スを試薬導入路33に流す。試薬導入路33内に供給さ
れたPITCは、ガス供給路25からのガスによりフィ
ルタ3cに向けて噴射され、フィルタ3c上に配置され
た試料に供給される。フィルタ3cに配置された試料
は、トリメチルアミン(TMA)雰囲気で蛋白質の末端
アミノ基にPITCを反応させ、フェニルチオカルバミ
ル蛋白質(PTC蛋白質)が高収率で生成される。前記
トリメチルアミンは、試薬ボトル13から気体の状態で
リアクションチャンバー3内に供給される。When the filling is completed, the electromagnetic valve 22a located at the upper end of FIG. 1 is opened, and the inert gas from the gas supply passage 25 flows into the reagent introduction passage 33. The PITC supplied into the reagent introduction path 33 is jetted toward the filter 3c by the gas from the gas supply path 25, and is supplied to the sample arranged on the filter 3c. In the sample placed on the filter 3c, PITC is reacted with the terminal amino group of the protein in a trimethylamine (TMA) atmosphere, and phenylthiocarbamyl protein (PTC protein) is produced in high yield. The trimethylamine is supplied from the reagent bottle 13 into the reaction chamber 3 in a gaseous state.
【0019】PTC−蛋白質生成反応時の過剰試薬や副
生成物は、試薬ボトル11,12からそれぞれPITC
と同様に供給される酢酸エチル及びn−ヘプタンにより
洗浄される。ここでの洗浄液は、流路切替えバルブ37
を介してドレン流路37aから排出される。Excess reagents and by-products during the PTC-protein production reaction are removed from reagent bottles 11 and 12 by PITC
Washed with ethyl acetate and n-heptane supplied as above. The cleaning liquid here is supplied to the flow path switching valve 37.
Through the drain passage 37a.
【0020】洗浄後、リアクションチャンバー3には、
試薬ボトル16から蛋白質切断反応用試薬として100
%濃度のトリフルオロ酢酸(TFA)が気体状態で供給
される。電磁弁17,22bを開け、20aを閉じ、ガ
ス供給装置19からガス供給路18を介して試薬ボトル
16内に不活性ガスを供給する。これにより、試薬ボト
ル16内のTFAは、試薬供給路21及び電磁弁22b
を介して試薬導入路33からリアクションチャンバー3
に供給される。[0020] After washing, the reaction chamber 3,
100 from the reagent bottle 16 as a protein cleavage reaction reagent
% Trifluoroacetic acid (TFA) is supplied in gaseous state. The electromagnetic valves 17 and 22b are opened, 20a is closed, and an inert gas is supplied from the gas supply device 19 into the reagent bottle 16 via the gas supply path 18. Thus, the TFA in the reagent bottle 16 is supplied to the reagent supply path 21 and the solenoid valve 22b.
From the reagent introduction path 33 through the reaction chamber 3
Supplied to
【0021】リアクションチャンバー3にTFAが供給
されると、フィルタ3c上の試料は、PTC−アミノ酸
のN末端側のペプチド結合が切断され、2−アニリノ−
5−チアゾリノンアミン酸(ATZ−アミノ酸)が生成
する。ATZ−アミノ酸は、試薬ボトル15からの塩化
n−ブチルにより抽出され、抽出液は試料移動管35を
通ってコンバージョンフラスコ4内に導入される。When TFA is supplied to the reaction chamber 3, the sample on the filter 3c is cleaved at the N-terminal peptide bond of the PTC-amino acid to give 2-anilino-amino acid.
5-Thiazolinoneamine acid (ATZ-amino acid) is produced. The ATZ-amino acid is extracted by n-butyl chloride from the reagent bottle 15, and the extract is introduced into the conversion flask 4 through the sample transfer tube 35.
【0022】コンバージョンフラスコ4内のATZ−ア
ミノ酸抽出液には、第2試薬供給部5の試薬ボトル51
から25%TFA水溶液が供給される。この25%TF
A水溶液により、ATZ−アミノ酸は、安定な3−フェ
ニル−2−チオヒダントインアミノ酸(PTH−アミノ
酸)に転換される。これにより、エドマン反応は完結す
る。The ATZ-amino acid extract in the conversion flask 4 contains the reagent bottle 51 of the second reagent supply unit 5.
To supply a 25% aqueous TFA solution. This 25% TF
Aqueous A solution converts ATZ-amino acids to stable 3-phenyl-2-thiohydantoin amino acids (PTH-amino acids). This completes the Edman reaction.
【0023】コンバージョンフラスコ4内のPTH−ア
ミノ酸は、試薬ボトル50からのアセトニトリルと水と
の混合液により溶解される。そして、このアセトニトル
と水との混合液による溶解液は、試料導入管40を通っ
てアミノ酸分析装置7の六方バルブ60に接続されてい
る試料導出路66に導入される。六方バルブ60を切り
換えると、アセトニトリルと水との溶解液は高速液体ク
ロマトグラフのカラム62に注入される。そして、カラ
ム62で分離されたPTH−アミノ酸は、検出器63に
よって検出され、そのデータがデータ処理装置65によ
って処理される。これにより、試料中のN末端のアミノ
酸が同定される。試料導入路66に入り切らなかったP
TH−アミノ酸は、六方バルブ60及び回収路67を通
ってフラクションコレクタ64のサンプルチューブ64
aに回収される。The PTH-amino acid in the conversion flask 4 is dissolved by a mixture of acetonitrile and water from the reagent bottle 50. The solution with a mixture of this Acetonitrile and water is introduced into the sample outlet passage 66 which is connected through a sample introduction tube 40 into six-way valve 60 of the amino acid analyzer 7. When switching the six-way valve 60, solution of acetonitrile and water is injected into the column 62 of the high-performance liquid chromatography. Then, the PTH-amino acid separated in the column 62 is detected by the detector 63, and the data is processed by the data processing device 65. Thereby, the N-terminal amino acid in the sample is identified. P that did not enter the sample introduction path 66
The TH-amino acid is supplied to the sample tube 64 of the fraction collector 64 through the six-way valve 60 and the collection path 67.
a.
【0024】このような一連の分析操作を繰り返すこと
により、試料中のアミノ酸配列が順次解明され、アミノ
酸配列が決定される。ポリエチレンは、比較的安価に供
給されるので、ポリエチレン容器は使い捨てに適してお
り、25%TFA水溶液の試薬ボトルとして取扱いがさ
らに容易になる。By repeating such a series of analysis operations, the amino acid sequence in the sample is sequentially elucidated, and the amino acid sequence is determined. Since polyethylene is supplied relatively inexpensively, polyethylene containers are suitable for disposable use and are easier to handle as reagent bottles of 25% TFA aqueous solution .
【0025】(実験例) (a) 前記実施例において、ポリエチレン製とガラス
製の同一容量の容器に、25%トリフルオロ酢酸水溶液
を収納した状態での経過月数を表1〜表3のように設定
し、設定した経過月数後各容器につき繰り返し収率及び
PTH−アミノ酸の回収量を調べた。結果を表1〜表3
に示す。使用容器材質の項におけるPはポリエチレン,
Gはガラスを表す。(Experimental Examples) (a) In the above Examples, the number of months passed in a state where a 25% aqueous solution of trifluoroacetic acid was stored in a container made of polyethylene and glass having the same capacity as shown in Tables 1 to 3. After a set number of months, the yield and the amount of PTH-amino acid recovered were repeatedly examined for each container. Tables 1 to 3 show the results.
Shown in P in the section of the container material used is polyethylene,
G represents glass.
【0026】使用した25%トリフルオロ酢酸水溶液
は、調整したものをポリエチレン製容器とガラス製容器
に入れて4℃で保存する。次に、恒温室(24〜25
℃)において所定期間後の試薬を用いてテストを行っ
た。The 25% aqueous trifluoroacetic acid solution prepared is stored in a polyethylene container and a glass container at 4 ° C. Next, a constant temperature room (24-25
(° C.) using a reagent after a predetermined period.
【0027】[0027]
【表1】 [Table 1]
【0028】[0028]
【表2】 [Table 2]
【0029】[0029]
【表3】 [Table 3]
【0030】表1〜表3から、ポリエチレン容器入りを
使用した場合、全般的に収率及びPTH−アミノ酸回収
量にガラス容器との差がなく、従来のガラス容器をポリ
エチレン製容器に変更しても悪影響は出ないものと判断
される。 (b) 前記実験例のサンプル番号9,11,12のク
ロマトグラムを図4及び図5に示した。前記繰り返し分
析の第3回目の繰り返し時における転換反応を行った後
の結果を図4に表す。また、前記繰り返し反応における
初回の分析結果を図5に表す。From Tables 1 to 3, there is no difference in the yield and the amount of PTH-amino acid recovered from the glass container in general when the polyethylene container is used, and the conventional glass container is changed to a polyethylene container. It is judged that there is no adverse effect. (B) The chromatograms of the sample numbers 9, 11, and 12 of the experimental example are shown in FIGS. FIG. 4 shows the results after performing the conversion reaction during the third repetition of the repetitive analysis. FIG. 5 shows the results of the first analysis in the repeated reaction.
【0031】図4及び図5から、試料の保持時間及びピ
ークの形状より同一の分離が行われており、ポリエチレ
ン容器材料の溶出がクロマトグラム上に認められないこ
とがわかる。From FIGS. 4 and 5, it can be seen that the same separation was performed based on the retention time of the sample and the shape of the peak, and no elution of the polyethylene container material was observed on the chromatogram.
【0032】[0032]
【考案の効果】本考案に係るエドマン反応装置は、トリ
フルオロ酢酸水溶液を収納する樹脂製容器を有している
ので、従来のようにトリフルオロ酢酸水溶液を収納した
ガラス容器からのガラスの溶出がなく、溶出物がアミノ
酸分析装置に至るまでの流路を塞ぐことがない。[Effect of the Invention] Since the Edman reactor according to the present invention has a resin container for storing an aqueous solution of trifluoroacetic acid, the elution of glass from a glass container containing an aqueous solution of trifluoroacetic acid as in the prior art can be achieved. Also, the eluate does not block the flow path leading to the amino acid analyzer.
【図1】蛋白質一次構造分析装置の一例の概略構成分
図。FIG. 1 is a schematic structural diagram of an example of a protein primary structure analyzer.
【図2】その概略構成部分図。FIG. 2 is a schematic configuration partial view thereof.
【図3】試薬ボトルの斜視図。FIG. 3 is a perspective view of a reagent bottle.
【図4】表3記載のサンプルにおける3回目の分析結果
を示すクロマトグラム。FIG. 4 is a chromatogram showing the results of a third analysis of the samples described in Table 3.
【図5】図4に相当する初回の分析結果を示すクロマト
グラム。FIG. 5 is a chromatogram showing the results of the first analysis corresponding to FIG.
3 リアクションチャンバー 4 コンバージョンフラスコ 5 第2試薬供給部 7 PTH−アミノ酸分析装置 51 25%トリフルオロ酢酸水溶液試薬ボトル Reference Signs List 3 reaction chamber 4 conversion flask 5 second reagent supply section 7 PTH-amino acid analyzer 51 25% trifluoroacetic acid aqueous solution reagent bottle
Claims (1)
を供給するためのエドマン反応装置であって、 蛋白質試料のN末端ペプチド結合を切断し、ATZ−ア
ミノ酸を形成するためのリアクション部と、 トリフルオロ酢酸水溶液を収納するポリエチレン樹脂製
容器を有し、前記トリフルオロ酢酸水溶液を用いて前記
ATZ−アミノ酸をPTH−アミノ酸へ変換する変換部
と、 前記PTH−アミノ酸を前記アミノ酸分析装置に供給す
る試料供給部とを備えたエドマン反応装置。1. An Edman reaction device for supplying a sample after Edman reaction to an amino acid analyzer, comprising: a reaction portion for cleaving an N-terminal peptide bond of a protein sample to form an ATZ-amino acid; Made of polyethylene resin containing fluoroacetic acid aqueous solution
An Edman reactor having a container , a conversion unit for converting the ATZ-amino acid to a PTH-amino acid using the trifluoroacetic acid aqueous solution, and a sample supply unit for supplying the PTH-amino acid to the amino acid analyzer .
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Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
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JP1992068232U JP2568612Y2 (en) | 1992-09-30 | 1992-09-30 | Edman reactor |
Publications (2)
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JPH0633067U JPH0633067U (en) | 1994-04-28 |
JP2568612Y2 true JP2568612Y2 (en) | 1998-04-15 |
Family
ID=13367843
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1992
- 1992-09-30 JP JP1992068232U patent/JP2568612Y2/en not_active Expired - Fee Related
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