JP2024516575A - 最適化されたｔｌｒ７リガンド及びその使用 - Google Patents

最適化されたｔｌｒ７リガンド及びその使用 Download PDF

Info

Publication number
JP2024516575A
JP2024516575A JP2023562827A JP2023562827A JP2024516575A JP 2024516575 A JP2024516575 A JP 2024516575A JP 2023562827 A JP2023562827 A JP 2023562827A JP 2023562827 A JP2023562827 A JP 2023562827A JP 2024516575 A JP2024516575 A JP 2024516575A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
tlr7
nucleotide sequence
seq
motif
immunomodulatory composition
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
JP2023562827A
Other languages
English (en)
Inventor
エミリー クレイン フロイント，
アンナ－マリア ヘルツナー，
レベッカ レイレッキ，
アン－ジェイ トン，
サラ ウィッチナー，
レリア イヴォンヌ ドゥラマーレ，
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Genentech Inc
Original Assignee
Genentech Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Genentech Inc filed Critical Genentech Inc
Publication of JP2024516575A publication Critical patent/JP2024516575A/ja
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/117—Nucleic acids having immunomodulatory properties, e.g. containing CpG-motifs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • C12N15/1138—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing against receptors or cell surface proteins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/17—Immunomodulatory nucleic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/31—Chemical structure of the backbone
    • C12N2310/315—Phosphorothioates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
    • C12N2310/321—2'-O-R Modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
    • C12N2310/322—2'-R Modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/34—Spatial arrangement of the modifications
    • C12N2310/346—Spatial arrangement of the modifications having a combination of backbone and sugar modifications
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/50—Physical structure
    • C12N2310/53—Physical structure partially self-complementary or closed
    • C12N2310/531—Stem-loop; Hairpin

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

本開示は、ＲＮＡリガンド及び薬学的に許容される担体を含む、ＴＬＲ７を選択的に活性化する免疫調節組成物、並びにそのような免疫調節組成物のｉｎ ｖｉｔｒｏ及び治療的使用に関する。【選択図】図８

Description

関連出願の相互参照
［０００１］本出願は、２０２１年４月１６日に出願された米国仮出願第６３／１７６，１２８号の利益を主張し、その内容全体が参照により本明細書に組み込まれる。
ＡＳＣＩＩテキストファイルでの配列表の提出
［０００２］ＡＳＣＩＩテキストファイルでの以下の提出内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる：コンピュータ可読形態（ｃｏｍｐｕｔｅｒ ｒｅａｄａｂｌｅ ｆｏｒｍ：ＣＲＦ）の配列表（ファイル名：１４６３９２０５３２４０ＳＥＱＬＩＳＴ．ＴＸＴ、記録日：２０２２年４月２１５日、サイズ：２８，７８６バイト）。
技術分野
［０００３］本開示は、免疫調節組成物及びその使用に関する。
［０００４］自然免疫系の核酸受容体は、ウイルス感染からヒト宿主を守る重要なセンチネルである。サイトゾルとエンドソームは、ウイルスＲＮＡの感知において主要な役割を果たす細胞の２つの主要なコンパートメントである。サイトゾルでは、ＲＩＧ－Ｉ様受容体はほとんどすべての細胞型で発現しており、複製副産物として生成される二本鎖ＲＮＡを感知する。エンドソームでは、ＴＬＲ７やＴＬＲ８などのＴｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）が、主に抗原提示細胞（形質細胞様樹状細胞（ｐＤＣ）、通常型樹状細胞（ｃＤＣ）、骨髄系細胞、Ｂ細胞）と呼ばれる特殊な免疫細胞型によって発現され、一本鎖ＲＮＡ（ｓｓＲＮＡ）の分解産物を検出する。このようなＲＮＡ分解産物は、ウイルス、ウイルス感染細胞、壊死細胞、がん性組織、ＲＮＡ含有抗体複合体、又は化学合成若しくはｉｎ ｖｉｔｒｏ転写されたＲＮＡのリポソーム製剤の食作用に由来し得る。
［０００５］自然免疫細胞上のＴＬＲ７やＴＬＲ８などのＴｏｌｌ様受容体の活性化は、炎症を誘発し、適応免疫応答を開始するために重要である。ＴＬＲ７活性化のためのＲＮＡ分解に関与する酵素についてはほとんど知られていないが、ＴＬＲ８活性化にはエンドソームＲＮａｓｅ Ｔ２及びＲＮａｓｅ ２が必要である。
［０００６］ＴＬＲ７とＴＬＲ８の発現パターンは異なる。ＴＬＲ７はマウスとヒトの両方で発現し機能しているが、ＴＬＲ８はヒトとマウスの両方で発現しているものの、ヒト細胞でのみ機能している。ＴＬＲ７は、マウスでは骨髄系細胞を含むすべての抗原提示細胞によって発現されるが、ヒトではその発現はｐＤＣとＢ細胞に限定されている。対照的に、ＴＬＲ８はヒトではｃＤＣ、単球及びマクロファージを含む骨髄系細胞に発現している。
［０００７］発現パターンの違いに加えて、ＴＬＲ７及びＴＬＲ８は、活性化時に異なるサイトカインプロファイルを誘導する。ヒト単球又はｃＤＣ上のＴＬＲ８の刺激は、ＮＦ－κＢ依存的にＴＮＦαやＩＬ－６などの広範囲の炎症性サイトカインの活性化を引き起こす。一方、ＴＬＲ７を介したヒトｐＤＣの刺激は、限られたＮＦ－κＢ依存性炎症性サイトカイン及び大量のＩＦＮαなどのＩ型ＩＦＮを誘導する。
［０００８］Ｉ型ＩＦＮは、抗ウイルス免疫、適応免疫の促進、及び抗腫瘍免疫における役割を持つ重要なサイトカインファミリーである。特に、抗腫瘍免疫におけるＩ型ＩＦＮの役割は、ｃＤＣの活性化によって達成され、その結果、ＩＬ－１２分泌、抗原提示の増加、及び抗原特異的ＣＤ８ Ｔ細胞応答の増強が生じる。さらに、ＴＬＲ７アゴニストは、マウスの免疫抑制腫瘍環境においてｃＤＣを活性化してＴ細胞プライミングを開始及び増加させることにより、ＰＤ－Ｌ１標的療法などのがん免疫療法と相乗作用することが示されている。
［０００９］ＴＬＲ７の活性化によって誘導される特有のサイトカインプロファイル、及びＴＬＲ８と比較してヒト（つまり、ｐＤＣ及びＢ細胞）におけるＴＬＲ７の限定的な発現は、ＴＬＲ７選択的リガンドが、ＲＮＡベースの治療薬を含むデュアルＴＬＲ７／８アゴニストに関連している毒性の一部を回避し得ることを示唆している。しかし、複数のＴＬＲ８選択的リガンドが報告されている一方で、治療用のＴＬＲ７選択的ＲＮＡリガンドは非常に稀である。
［００１０］したがって、当技術分野では、ＴＬＲ７を選択的に活性化する増強された能力を有するＲＮＡリガンドが必要とされている。
［００１１］特許出願及び公報を含む本明細書で引用されるすべての参考文献は、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。
［００１２］いくつかの態様では、本明細書で提供されるのは、ＲＮＡリガンド及び薬学的に許容される担体を含む、ＴＬＲ７を選択的に活性化する免疫調節組成物であり、ここで、ＲＮＡリガンドは、（ａ）式ＩＩ：Ｃ１ ＊Ｕ２－Ｕ３ ＊Ｕ４－Ｕ５ ＊Ｃ６（式ＩＩ）（式中、Ｃ１及びＣ６はシチジンヌクレオシドであり、Ｕ２、Ｕ３、Ｕ４、及びＵ５はウリジンヌクレオシドであり、Ｕ２は、２’Ｏ－メチル修飾（ｍＵ）、２’－フルオロ修飾（ｆＵ）、２’－アミノ修飾、２’－デオキシ修飾、又は２’－メトキシエトキシ修飾を有し、Ｕ４は、２’Ｏ－メチル修飾（ｍＵ）、２’－フルオロ修飾（ｆＵ）、２’－アミノ修飾、２’－デオキシ修飾、又は２’－メトキシエトキシ修飾を有し、「＊」はホスホロチオエート結合を表し、「－」はホスホジエステル結合を表す）を含むＴＬＲ７選択的モチーフ；（ｂ）ＴＬＲ７選択的モチーフの５’末端に連結された第１のヌクレオチド配列；及び（ｃ）ＴＬＲ７選択的モチーフの３’末端に連結された第２のヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施態様では、ＴＬＲ７選択的モチーフのＵ２は、２’Ｏ－メチル修飾（ｍＵ）を有する。いくつかの実施態様では、ＴＬＲ７選択的モチーフのＵ４は、２’Ｏ－メチル修飾（ｍＵ）を有する。いくつかの実施態様では、ＴＬＲ７選択的モチーフのＵ２は、２’－フルオロ修飾（ｆＵ）を有する。いくつかの実施態様では、ＴＬＲ７選択的モチーフのＵ４は、２’－フルオロ修飾（ｆＵ）を有する。いくつかの実施態様では、ＴＬＲ７選択的モチーフのＵ２及びＵ４は、２’Ｏ－メチル修飾（ｍＵ）を有する。いくつかの実施態様では、ＴＬＲ７選択的モチーフのＵ２及びＵ４は、２’－フルオロ修飾（ｆＵ）を有する。いくつかの実施態様では、ＴＬＲ７選択的モチーフのＵ２は２’Ｏ－メチル修飾（ｍＵ）を有し、ＴＬＲ７選択的モチーフのＵ４は２’－フルオロ修飾（ｆＵ）を有する。いくつかの実施態様では、ＴＬＲ７選択的モチーフのＵ２は２’－フルオロ修飾（ｆＵ）を有し、ＴＬＲ７選択的モチーフのＵ４は２’Ｏ－メチル修飾（ｍＵ）を有する。いくつかの実施態様では、ＴＬＲ７選択的モチーフは、配列番号４４のヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施態様では、ＴＬＲ７選択的モチーフは、配列番号４５のヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施態様では、ＴＬＲ７選択的モチーフは、配列番号４６のヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施態様では、ＴＬＲ７選択的モチーフは、配列番号４７のヌクレオチド配列を含む。
［００１３］別の態様では、本明細書で提供されるのは、ＲＮＡリガンド及び薬学的に許容される担体を含む、ＴＬＲ７を選択的に活性化する免疫調節組成物であり、ここでＲＮＡリガンドは、（ａ）配列番号４４、４５、４６、又は４７から選択されるヌクレオチド配列を含むＴＬＲ７選択的モチーフ、（ｂ）ＴＬＲ７選択的モチーフの５’末端に連結された第１のヌクレオチド配列、及び（ｃ）ＴＬＲ７選択的モチーフの３’末端に連結された第２のヌクレオチド配列を含む。
［００１４］前述の態様又は実施態様のいずれかと組み合わせることができるいくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列は、１つのヌクレオシド、又はホスホロチオエート結合によって連結された少なくとも２つのヌクレオシドを含み、第１のヌクレオチド配列はウリジンヌクレオシドを含まず、第１のヌクレオチド配列はホスホロチオエート結合によってＴＬＲ７選択的モチーフに連結されている。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列は、ホスホロチオエート結合によって連結された８つのヌクレオシドを含む。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列は、ヌクレオチド配列Ｃ＊Ｃ＊Ｇ＊Ａ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｃ＊Ｇ（配列番号５８）、又は配列番号５８に対して少なくとも約８５％の同一性を有するヌクレオチド配列を含み、ここで、「＊」はホスホロチオエート結合を表し、第１のヌクレオチド配列はホスホロチオエート結合によってＴＬＲ７選択的モチーフに連結されている。
［００１５］前述の態様又は実施態様のいずれかと組み合わせることができるいくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列は、１つのヌクレオシド、又はホスホロチオエート結合によって連結された少なくとも２つのヌクレオシドを含み、第２のヌクレオチド配列はウリジンヌクレオシドを含まず、第２のヌクレオチド配列はホスホロチオエート結合によってＴＬＲ７選択的モチーフに連結されている。いくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列は、ホスホロチオエート結合によって連結された２つのヌクレオシドを含む。いくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列は、ヌクレオチド配列Ｃ＊Ｃ（配列番号５９）を含み、ここで、「＊」はホスホロチオエート結合を表し、第２のヌクレオチド配列はホスホロチオエート結合によってＴＬＲ７選択的モチーフに連結されている。
［００１６］前述の態様又は実施態様のいずれかと組み合わせることができるいくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは、配列番号１２のヌクレオチド配列、又は配列番号１２に対して少なくとも約８５％の同一性を有し、且つ配列番号４４のＴＬＲ７選択的モチーフを含むヌクレオチド配列を含む。前述の態様又は実施態様のいずれかと組み合わせることができるいくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは、配列番号１３のヌクレオチド配列、又は配列番号１３に対して少なくとも約８５％の同一性を有し、且つ配列番号４５のＴＬＲ７選択的モチーフを含むヌクレオチド配列を含む。前述の態様又は実施態様のいずれかと組み合わせることができるいくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは、配列番号１４のヌクレオチド配列、又は配列番号１４に対して少なくとも約８５％の同一性を有し、且つ配列番号４６のＴＬＲ７選択的モチーフを含むヌクレオチド配列を含む。前述の態様又は実施態様のいずれかと組み合わせることができるいくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは、配列番号１５のヌクレオチド配列、又は配列番号１５に対して少なくとも約８５％の同一性を有し、且つ配列番号４７のＴＬＲ７選択的モチーフを含むヌクレオチド配列を含む。
［００１７］別の態様では、本明細書で提供されるのは、ＲＮＡリガンド及び薬学的に許容される担体を含む、ＴＬＲ７を選択的に活性化する免疫調節組成物であり、ここで、ＲＮＡリガンドは、（ａ）配列番号１２、１３、１４、又は１５から選択されるヌクレオチド配列；（ｂ）配列番号１２に対して少なくとも約８５％の同一性を有し、且つ配列番号４４のＴＬＲ７選択的モチーフを含むヌクレオチド配列；（ｃ）配列番号１３に対して少なくとも約８５％の同一性を有し、且つ配列番号４５のＴＬＲ７選択的モチーフを含むヌクレオチド配列；（ｄ）配列番号１４に対して少なくとも約８５％の同一性を有し、且つ配列番号４６のＴＬＲ７選択的モチーフを含むヌクレオチド配列；又は（ｅ）配列番号１５に対して少なくとも約８５％の同一性を有し、且つ配列番号４７のＴＬＲ７選択的モチーフを含むヌクレオチド配列を含む。
［００１８］別の態様では、本明細書で提供されるのは、ＲＮＡリガンド及び薬学的に許容される担体を含む、ＴＬＲ７を選択的に活性化する免疫調節組成物であり、ここで、ＲＮＡリガンドは、（ａ）式ＩＩＩ：Ｃ１－Ｕ２－Ｃ３（式ＩＩＩ）（式中、Ｃ１及びＣ３はシチジンヌクレオシドであり、Ｕ２はウリジンヌクレオシドであり、Ｃ１は２’Ｏ－メチル修飾（ｍＵ）、２’－フルオロ修飾（ｆＵ）、２’－アミノ修飾、２’－デオキシ修飾、又は２’－メトキシエトキシ修飾を有し、「－」はホスホジエステル結合を表す）を含むＴＬＲ７選択的モチーフ；（ｂ）ＴＬＲ７選択的モチーフの５’末端に連結された第１のヌクレオチド配列；並びに（ｃ）ＴＬＲ７選択的モチーフの３’末端に連結された第２のヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施態様では、ＴＬＲ７選択的モチーフのＣ１は、２’－フルオロ修飾（ｆＵ）を有する。いくつかの実施態様では、ＴＬＲ７選択的モチーフのＣ１は、２’Ｏ－メチル修飾（ｍＣ）を有する。いくつかの実施態様では、ＴＬＲ７選択的モチーフは、配列番号４２のヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施態様では、ＴＬＲ７選択的モチーフは、配列番号４３のヌクレオチド配列を含む。
［００１９］別の態様では、本明細書で提供されるのは、ＲＮＡリガンド及び薬学的に許容される担体を含む、ＴＬＲ７を選択的に活性化する免疫調節組成物であり、ここでＲＮＡリガンドは、（ａ）配列番号４２又は４３のヌクレオチド配列を含むＴＬＲ７選択的モチーフ、（ｂ）ＴＬＲ７選択的モチーフの５’末端に連結された第１のヌクレオチド配列、及び（ｃ）ＴＬＲ７選択的モチーフの３’末端に連結された第２のヌクレオチド配列を含む。
［００２０］前述の態様又は実施態様のいずれかと組み合わせることができるいくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは二本鎖ＲＮＡヘアピン構造をとることができる。前述の態様又は実施態様のいずれかと組み合わせることができるいくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは、Ｇ：Ｕウォブル塩基対を含む。
［００２１］前述の態様又は実施態様のいずれかと組み合わせることができるいくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列はウリジンヌクレオシドを含まず、第１のヌクレオチド配列はホスホジエステル結合によってＴＬＲ７選択的モチーフに連結されている。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列は３つのヌクレオシドを含む。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列内のヌクレオシドは、ホスホジエステル結合によって連結されている。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列はヌクレオチド配列Ｃ－Ｇ－Ｇ（配列番号６０）を含み、ここで「－」はホスホジエステル結合を表す。
［００２２］前述の態様又は実施態様のいずれかと組み合わせることができるいくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列はウリジンヌクレオシドを含まず、ここで第２のヌクレオチド配列はヌクレオチド配列Ｇ－Ｇ－Ｇ（配列番号６９）を含み、ヌクレオチド配列Ｇ－Ｇ－Ｇ（配列番号６９）はＴＬＲ７選択的モチーフと塩基対形成することができ、第２のヌクレオチド配列は、ホスホジエステル結合によってＴＬＲ７選択的モチーフに連結されている。いくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列は約１５個のヌクレオシドを含む。いくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列内のヌクレオシドは、ホスホジエステル結合によって連結されている。いくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列は、（ａ）ヌクレオチド配列Ｇ－Ｇ－Ｃ－Ａ－Ｇ－Ａ－Ａ－Ｇ－Ｃ－Ｃ－Ｇ－Ｇ－Ｇ－Ｃ－Ｃ（配列番号６１）、又は（ｂ）配列番号６１に対して少なくとも約８５％の同一性を有し、ヌクレオチド配列Ｇ－Ｇ－Ｇ（配列番号６９）を含むヌクレオチド配列を含み、ここでヌクレオチド配列Ｇ－Ｇ－Ｇ（配列番号６９）は、ＴＬＲ７選択的モチーフと塩基対形成することができ、「－」はホスホジエステル結合を表す。
［００２３］前述の態様又は実施態様のいずれかと組み合わせることができるいくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは、（ａ）配列番号２３のヌクレオチド配列、又は（ｂ）配列番号２３に対して少なくとも約８５％の同一性を有し、且つ配列番号４２のＴＬＲ７選択的モチーフ及びヌクレオチド配列Ｇ－Ｇ－Ｇ（配列番号６９）を含むヌクレオチド配列であって、ヌクレオチド配列Ｇ－Ｇ－Ｇ（配列番号６９）が、ＴＬＲ７選択的モチーフと塩基対形成することができる、前記ヌクレオチド配列を含む。前述の態様又は実施態様のいずれかと組み合わせることができるいくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは、（ａ）配列番号２４のヌクレオチド配列、又は（ｂ）配列番号２４に対して少なくとも約８５％の同一性を有し、且つ配列番号４３のＴＬＲ７選択的モチーフ及びヌクレオチド配列Ｇ－Ｇ－Ｇ（配列番号６９）を含むヌクレオチド配列であって、ヌクレオチド配列Ｇ－Ｇ－Ｇ（配列番号６９）が、ＴＬＲ７選択的モチーフと塩基対形成することができる、前記ヌクレオチド配列を含む。
［００２４］別の態様では、本明細書で提供されるのは、ＲＮＡリガンド及び薬学的に許容される担体を含む、ＴＬＲ７を選択的に活性化する免疫調節組成物であり、ここで、ＲＮＡリガンドは、（ａ）配列番号２３又は２４のヌクレオチド配列；（ｂ）配列番号２３に対して少なくとも約８５％の同一性を有し、且つ配列番号４２のＴＬＲ７選択的モチーフ及びヌクレオチド配列Ｇ－Ｇ－Ｇ（配列番号６９）を含むヌクレオチド配列であって、ヌクレオチド配列Ｇ－Ｇ－Ｇ（配列番号６９）が、ＴＬＲ７選択的モチーフと塩基対形成することができる、前記ヌクレオチド配列；又は（ｃ）配列番号２４に対して少なくとも約８５％の同一性を有し、且つ配列番号４３のＴＬＲ７選択的モチーフ及びヌクレオチド配列Ｇ－Ｇ－Ｇ（配列番号６９）を含むヌクレオチド配列であって、ヌクレオチド配列Ｇ－Ｇ－Ｇ（配列番号６９）が、ＴＬＲ７選択的モチーフと塩基対形成することができる、前記ヌクレオチド配列を含む。
［００２５］別の態様では、本明細書で提供されるのは、ＲＮＡリガンド及び薬学的に許容される担体を含む、ＴＬＲ７を選択的に活性化する免疫調節組成物であり、ここで、ＲＮＡリガンドは、（ａ）式ＩＶ：Ｃ１－Ｕ２－Ｕ３－Ｃ４（式ＩＶ）（式中、Ｃ１及びＣ４はシチジンヌクレオシドであり、Ｕ２及びＵ３はウリジンヌクレオシドであり、Ｕ２は、２’Ｏ－メチル修飾（ｍＵ）、２’－フルオロ修飾（ｆＵ）、２’－アミノ修飾、２’－デオキシ修飾、又は２’－メトキシエトキシ修飾を有し、「－」はホスホジエステル結合を表す）を含む第１及び第２のＴＬＲ７選択的モチーフ；（ｂ）第１のＴＬＲ７選択的モチーフの５’末端に連結された第１のヌクレオチド配列；並びに（ｃ）第１のＴＬＲ７選択的モチーフの３’末端及び第２のＴＬＲ７選択的モチーフの５’末端に連結された第２のヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施態様では、第１のＴＬＲ７選択的モチーフのＵ２は、２’Ｏ－メチル修飾（ｍＵ）を有する。いくつかの実施態様では、第２のＴＬＲ７選択的モチーフのＵ２は、２’Ｏ－メチル修飾（ｍＵ）を有する。いくつかの実施態様では、第１のＴＬＲ７選択的モチーフのＵ２は、２’－フルオロ修飾（ｆＵ）を有する。いくつかの実施態様では、第２のＴＬＲ７選択的モチーフのＵ２は、２’－フルオロ修飾（ｆＵ）を有する。いくつかの実施態様では、第１のＴＬＲ７選択的モチーフは、配列番号３６のヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施態様では、第２のＴＬＲ７選択的モチーフは、配列番号３６のヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施態様では、第１のＴＬＲ７選択的モチーフは、配列番号３７のヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施態様では、第２のＴＬＲ７選択的モチーフは、配列番号３７のヌクレオチド配列を含む。
［００２６］別の態様では、本明細書で提供されるのは、ＲＮＡリガンド及び薬学的に許容される担体を含む、ＴＬＲ７を選択的に活性化する免疫調節組成物であり、ここでＲＮＡリガンドは、（ａ）配列番号３６又は３７のヌクレオチド配列を含む第１のＴＬＲ７選択的モチーフ；（ｂ）配列番号３６又は３７のヌクレオチド配列を含む第２のＴＬＲ７選択的モチーフ；（ｃ）第１のＴＬＲ７選択的モチーフの５’末端に連結された第１のヌクレオチド配列；並びに（ｄ）第１のＴＬＲ７選択的モチーフの３’末端及び第２のＴＬＲ７選択的モチーフの５’末端に連結された第２のヌクレオチド配列を含む。
［００２７］前述の態様又は実施態様のいずれかと組み合わせることができるいくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列は、１つのヌクレオシド、又はホスホジエステル結合によって連結された少なくとも２つのヌクレオシドを含み、第１のヌクレオチド配列はウリジンヌクレオシドを含まず、第１のヌクレオチド配列はホスホジエステル結合によって第１のＴＬＲ７選択的モチーフに連結されている。前述の態様又は実施態様のいずれかと組み合わせることができるいくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列は、１つのヌクレオシド、又はホスホジエステル結合によって連結された少なくとも２つのヌクレオシドを含み、第２のヌクレオチド配列はウリジンヌクレオシドを含まず、第２のヌクレオチド配列は、ホスホジエステル結合によって第１のＴＬＲ７選択的モチーフ及び／又は第２のＴＬＲ７選択的モチーフに連結されている。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列及び／又は第２のヌクレオチド配列は、ホスホジエステル結合によって連結された５つのヌクレオシドを含む。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列及び／又は第２のヌクレオチド配列は、ヌクレオチド配列Ｃ－Ａ－Ｇ－Ａ－Ｃ（配列番号６７）、又は配列番号６７に対して少なくとも約８５％の同一性を有するヌクレオチド配列を含み、ここで「－」はホスホジエステル結合を表す。
［００２８］前述の態様又は実施態様のいずれかと組み合わせることができるいくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは、配列番号３３のヌクレオチド配列、又は配列番号３３に対して少なくとも約８５％の同一性を有し、且つ配列番号３６の第１のＴＬＲ７選択的モチーフ及び／又は配列番号３６の第２のＴＬＲ７選択的モチーフを含むヌクレオチド配列を含む。前述の態様又は実施態様のいずれかと組み合わせることができるいくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは、配列番号３４のヌクレオチド配列、又は配列番号３４に対して少なくとも約８５％の同一性を有し、且つ配列番号３７の第１のＴＬＲ７選択的モチーフ及び／又は配列番号３７の第２のＴＬＲ７選択的モチーフを含むヌクレオチド配列を含む。
［００２９］別の態様では、本明細書で提供されるのは、ＲＮＡリガンド及び薬学的に許容される担体を含む、ＴＬＲ７を選択的に活性化する免疫調節組成物であり、ここで、ＲＮＡリガンドは、（ａ）配列番号３３又は３４のヌクレオチド配列、（ｂ）配列番号３３に対して少なくとも約８５％の同一性を有し、且つ配列番号３６の第１及び第２のＴＬＲ７選択的モチーフを含むヌクレオチド配列；又は（ｃ）配列番号３４に対して少なくとも約８５％の同一性を有し、且つ配列番号３７の第１及び第２のＴＬＲ７選択的モチーフを含むヌクレオチド配列を含む。
［００３０］別の態様では、本明細書で提供されるのは、ＲＮＡリガンド及び薬学的に許容される担体を含む、ＴＬＲ７を選択的に活性化する免疫調節組成物であり、ここで、ＲＮＡリガンドは、（ａ）式Ｖ：Ｕ１－Ｕ２－Ｃ３（式Ｖ）（式中、Ｕ１及びＵ２はウリジンヌクレオシドであり、Ｃ３はシチジンヌクレオシドであり、Ｕ１は、２’Ｏ－メチル修飾（ｍＵ）、２’－フルオロ修飾（ｆＵ）、２’－アミノ修飾、２’－デオキシ修飾、又は２’－メトキシエトキシ修飾を有し、「－」はホスホジエステル結合を表す）を含む第１のＴＬＲ７選択的モチーフ及び１つ又は複数の追加のＴＬＲ７選択的モチーフ；並びに（ｂ）第１のＴＬＲ７選択的モチーフの５’末端に連結された第１のヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の追加のＴＬＲ７選択的モチーフは、式Ｖを含む１つ、２つ、３つ、４つ、５つ又はそれ以上の追加のＴＬＲ７選択的モチーフを含む。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の追加のＴＬＲ７選択的モチーフは、式Ｖを含む５つの追加のＴＬＲ７選択的モチーフを含む。いくつかの実施態様では、第１のＴＬＲ７選択的モチーフのＵ１は、２’Ｏ－メチル修飾（ｍＵ）を有する。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の追加のＴＬＲ７選択的モチーフのうちの少なくとも１つのＵ１、又は１つ若しくは複数の追加のＴＬＲ７選択的モチーフのすべてのＵ１は、２’Ｏ－メチル修飾（ｍＵ）を有する。いくつかの実施態様では、第１のＴＬＲ７選択的モチーフのＵ１は、２’－フルオロ修飾を有する。いくつかの実施態様では、１つ若しくは複数の追加のＴＬＲ７選択的モチーフのうちの少なくとも１つのＵ１、又は１つ若しくは複数の追加のＴＬＲ７選択的モチーフのすべてのＵ１は、２’－フルオロ修飾を有する。いくつかの実施態様では、第１のＴＬＲ７選択的モチーフは、配列番号４０のヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施態様では、１つ若しくは複数の追加のＴＬＲ７選択的モチーフの少なくとも１つ、又は１つ若しくは複数の追加のＴＬＲ７選択的モチーフのすべてが、配列番号４０のヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施態様では、第１のＴＬＲ７選択的モチーフは、配列番号４１のヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施態様では、１つ若しくは複数の追加のＴＬＲ７選択的モチーフの少なくとも１つ、又は１つ若しくは複数の追加のＴＬＲ７選択的モチーフのすべてが、配列番号４１のヌクレオチド配列を含む。
［００３１］別の態様では、本明細書で提供されるのは、ＲＮＡリガンド及び薬学的に許容される担体を含む、ＴＬＲ７を選択的に活性化する免疫調節組成物であり、ここで、ＲＮＡリガンドは、（ａ）配列番号４０又は４１のヌクレオチド配列を含む第１のＴＬＲ７選択的モチーフ；（ｂ）１つ又は複数の追加のＴＬＲ７選択的モチーフであって、１つ若しくは複数の追加のＴＬＲ７選択的モチーフの少なくとも１つ、又は１つ若しくは複数の追加のＴＬＲ７選択的モチーフのすべてが、配列番号４０のヌクレオチド配列を含む、１つ又は複数の追加のＴＬＲ７選択的モチーフ；及び（ｃ）第１のＴＬＲ７選択的モチーフの５’末端に連結された第１のヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の追加のＴＬＲ７選択的モチーフは、配列番号４０又は４１のヌクレオチド配列を含む１つ、２つ、３つ、４つ、５つ又はそれ以上の追加のＴＬＲ７選択的モチーフを含む。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の追加のＴＬＲ７選択的モチーフは、配列番号４０又は４１のヌクレオチド配列を含む５つの追加のＴＬＲ７選択的モチーフを含む。
［００３２］前述の態様又は実施態様のいずれかと組み合わせることができるいくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列は、１つのヌクレオシド、又はホスホジエステル結合によって連結された少なくとも２つのヌクレオシドを含み、第１のヌクレオチド配列はウリジンヌクレオシドを含まず、第１のヌクレオチド配列はホスホジエステル結合によって第１のＴＬＲ７選択的モチーフに連結されている。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列は、ホスホジエステル結合によって連結された２つのヌクレオシドを含む。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列は、ホスホジエステル結合によって連結された２つのシチジンヌクレオシドを含む。
［００３３］前述の態様又は実施態様のいずれかと組み合わせることができるいくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは、配列番号２９のヌクレオチド配列、又は配列番号２９に対して少なくとも約８５％の同一性を有し、且つ配列番号４０の第１のＴＬＲ７選択的モチーフ及び配列番号４０の５つの追加のＴＬＲ７選択的モチーフを含むヌクレオチド配列を含む。前述の態様又は実施態様のいずれかと組み合わせることができるいくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは、配列番号３０のヌクレオチド配列、又は配列番号３０に対して少なくとも約８５％の同一性を有し、且つ配列番号４１の第１のＴＬＲ７選択的モチーフ及び配列番号４１の５つの追加のＴＬＲ７選択的モチーフを含むヌクレオチド配列を含む。
［００３４］別の態様では、本明細書で提供されるのは、ＲＮＡリガンド及び薬学的に許容される担体を含む、ＴＬＲ７を選択的に活性化する免疫調節組成物であり、ここで、ＲＮＡリガンドは、（ａ）配列番号２９又は３０のヌクレオチド配列；（ｂ）配列番号２９に対して少なくとも約８５％の同一性を有し、且つ配列番号４０の６つのＴＬＲ７選択的モチーフを含むヌクレオチド配列；又は（ｃ）配列番号３０に対して少なくとも約８５％の同一性を有し、且つ配列番号４１の６つのＴＬＲ７選択的モチーフを含むヌクレオチド配列を含む。
［００３５］別の態様では、本明細書で提供されるのは、ＲＮＡリガンド及び薬学的に許容される担体を含む、ＴＬＲ７を選択的に活性化する免疫調節組成物であり、ここで、ＲＮＡリガンドは、（ａ）式ＶＩ：Ｃ１－Ｕ２－Ｕ３ ＊Ｕ４－Ｕ５ ＊Ｃ６（式ＶＩ）（式中、Ｃ１及びＣ６はシチジンヌクレオシドであり、Ｕ２、Ｕ３、Ｕ４、及びＵ５はウリジンヌクレオシドであり、Ｕ２は、２’Ｏ－メチル修飾（ｍＵ）、２’－フルオロ修飾（ｆＵ）、２’－アミノ修飾、２’－デオキシ修飾、又は２’－メトキシエトキシ修飾を有し、Ｕ４は、２’Ｏ－メチル修飾（ｍＵ）、２’－フルオロ修飾（ｆＵ）、２’－アミノ修飾、２’－デオキシ修飾、又は２’－メトキシエトキシ修飾を有し、「＊」はホスホロチオエート結合を表し、「－」はホスホジエステル結合を表す）を含むＴＬＲ７選択的モチーフ；（ｂ）ＴＬＲ７選択的モチーフの５’末端に連結された第１のヌクレオチド配列；及び（ｃ）ＴＬＲ７選択的モチーフの３’末端に連結された第２のヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施態様では、ＴＬＲ７選択的モチーフのＵ２は、２’Ｏ－メチル修飾（ｍＵ）を有する。いくつかの実施態様では、ＴＬＲ７選択的モチーフのＵ４は、２’Ｏ－メチル修飾（ｍＵ）を有する。いくつかの実施態様では、ＴＬＲ７選択的モチーフのＵ２は、２’－フルオロ修飾（ｆＵ）を有する。いくつかの実施態様では、ＴＬＲ７選択的モチーフのＵ４は、２’－フルオロ修飾（ｆＵ）を有する。いくつかの実施態様では、ＴＬＲ７選択的モチーフのＵ２及びＵ４は、２’Ｏ－メチル修飾（ｍＵ）を有する。いくつかの実施態様では、ＴＬＲ７選択的モチーフのＵ２及びＵ４は、２’－フルオロ修飾（ｆＵ）を有する。いくつかの実施態様では、ＴＬＲ７選択的モチーフのＵ２は２’Ｏ－メチル修飾（ｍＵ）を有し、ＴＬＲ７選択的モチーフのＵ４は２’－フルオロ修飾（ｆＵ）を有する。いくつかの実施態様では、ＴＬＲ７選択的モチーフのＵ２は２’－フルオロ修飾（ｆＵ）を有し、ＴＬＲ７選択的モチーフのＵ４は２’Ｏ－メチル修飾（ｍＵ）を有する。いくつかの実施態様では、ＴＬＲ７選択的モチーフは、配列番号４８のヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施態様では、ＴＬＲ７選択的モチーフは、配列番号４９のヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施態様では、ＴＬＲ７選択的モチーフは、配列番号５０のヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施態様では、ＴＬＲ７選択的モチーフは、配列番号５１のヌクレオチド配列を含む。
［００３６］別の態様では、本明細書で提供されるのは、ＲＮＡリガンド及び薬学的に許容される担体を含む、ＴＬＲ７を選択的に活性化する免疫調節組成物であり、ここでＲＮＡリガンドは、（ａ）配列番号４８、４９、５０、又は５１から選択されるヌクレオチド配列を含むＴＬＲ７選択的モチーフ；（ｂ）ＴＬＲ７選択的モチーフの５’末端に連結された第１のヌクレオチド配列；及び（ｃ）ＴＬＲ７選択的モチーフの３’末端に連結された第２のヌクレオチド配列を含む。
［００３７］前述の態様又は実施態様のいずれかと組み合わせることができるいくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列は、１つのヌクレオシド、又はホスホジエステル結合によって連結された少なくとも２つのヌクレオシドを含み、第１のヌクレオチド配列はウリジンヌクレオシドを含まず、第１のヌクレオチド配列はホスホジエステル結合によってＴＬＲ７選択的モチーフに連結されている。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列は、ホスホジエステル結合によって連結された８つのヌクレオシドを含む。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列は、ヌクレオチド配列Ｃ－Ｃ－Ｇ－Ａ－Ｇ－Ｃ－Ｃ－Ｇ（配列番号６８）、又は配列番号６８に対して少なくとも約８５％の同一性を有するヌクレオチド配列を含み、ここで、「－」はホスホジエステル結合を表し、第１のヌクレオチド配列はホスホジエステル結合によってＴＬＲ７選択的モチーフに連結されている。
［００３８］前述の態様又は実施態様のいずれかと組み合わせることができるいくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列は、１つのヌクレオシド、又はホスホジエステル結合によって連結された少なくとも２つのヌクレオシドを含み、第２のヌクレオチド配列はウリジンヌクレオシドを含まず、第２のヌクレオチド配列はホスホジエステル結合によってＴＬＲ７選択的モチーフに連結されている。いくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列は、ホスホジエステル結合によって連結された２つのヌクレオシドを含む。いくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列は、ホスホジエステル結合によって連結された２つのシチジンヌクレオシドを含む。
［００３９］前述の態様又は実施態様のいずれかと組み合わせることができるいくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは、配列番号１７のヌクレオチド配列、又は配列番号１７に対して少なくとも約８５％の同一性を有し、且つ配列番号４８のＴＬＲ７選択的モチーフを含むヌクレオチド配列を含む。前述の態様又は実施態様のいずれかと組み合わせることができるいくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは、配列番号１８のヌクレオチド配列、又は配列番号１８に対して少なくとも約８５％の同一性を有し、且つ配列番号４９のＴＬＲ７選択的モチーフを含むヌクレオチド配列を含む。前述の態様又は実施態様のいずれかと組み合わせることができるいくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは、配列番号１９のヌクレオチド配列、又は配列番号１９に対して少なくとも約８５％の同一性を有し、且つ配列番号５０のＴＬＲ７選択的モチーフを含むヌクレオチド配列を含む。前述の態様又は実施態様のいずれかと組み合わせることができるいくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは、配列番号２０のヌクレオチド配列、又は配列番号２０に対して少なくとも約８５％の同一性を有し、且つ配列番号５１のＴＬＲ７選択的モチーフを含むヌクレオチド配列を含む。
［００４０］別の態様では、本明細書で提供されるのは、ＲＮＡリガンド及び薬学的に許容される担体を含む、ＴＬＲ７を選択的に活性化する免疫調節組成物であり、ここで、ＲＮＡリガンドは、（ａ）配列番号１７、１８、１９、又は２０から選択されるヌクレオチド配列；（ｂ）配列番号１７に対して少なくとも約８５％の同一性を有し、且つ配列番号４８のＴＬＲ７選択的モチーフを含むヌクレオチド配列；（ｃ）配列番号１８に対して少なくとも約８５％の同一性を有し、且つ配列番号４９のＴＬＲ７選択的モチーフを含むヌクレオチド配列；（ｄ）配列番号１９に対して少なくとも約８５％の同一性を有し、且つ配列番号５０のＴＬＲ７選択的モチーフを含むヌクレオチド配列；又は（ｅ）配列番号２０に対して少なくとも約８５％の同一性を有し、且つ配列番号５１のＴＬＲ７選択的モチーフを含むヌクレオチド配列を含む。
［００４１］前述の態様又は実施態様のいずれかと組み合わせることができるいくつかの実施態様では、薬学的に許容される担体は脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）である。いくつかの実施態様では、ＬＮＰはカチオン性脂質を含む。いくつかの実施態様では、ＬＮＰはイオン化可能な脂質を含む。
［００４２］前述の態様又は実施態様のいずれかと組み合わせることができるいくつかの実施態様では、薬学的に許容される担体は、ポリ－Ｌ－アルギニン若しくは１，２－ジオレオイル－３－トリメチルアンモニウムプロパン（ＤＯＴＡＰ）であるか、又はそれを含む。
［００４３］前述の態様又は実施態様のいずれかと組み合わせることができるいくつかの実施態様では、免疫調節組成物は、免疫調節組成物と接触させた１つ又は複数の細胞においてＴＬＲ７を選択的に活性化する。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の細胞はＴＬＲ７を発現する。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の細胞は末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を含む。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の細胞は、１つ又は複数の形質細胞様樹状細胞を含む。いくつかの実施態様では、免疫調節組成物は、免疫調節組成物と接触していない対応する１つ又は複数の細胞と比較して、免疫調節組成物と接触させた１つ又は複数の細胞におけるＴＬＲ７活性を増加させる。いくつかの実施態様では、免疫調節組成物は、免疫調節組成物と接触していない対応する１つ又は複数の細胞と比較して、免疫調節組成物と接触させた１つ又は複数の細胞によるＩＦＮ－αの分泌を増加させる。いくつかの実施態様では、免疫調節組成物と接触させた１つ又は複数の細胞におけるＴＬＲ７活性の増加は、免疫調節組成物と接触していない対応する１つ又は複数の細胞と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約１００％、又はそれ以上の増加である。いくつかの実施態様では、免疫調節組成物と接触させた１つ又は複数の細胞によるＩＦＮ－αの分泌の増加は、免疫調節組成物と接触していない対応する１つ又は複数の細胞と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約１００％、又はそれ以上の増加である。いくつかの実施態様では、免疫調節組成物は、免疫調節組成物と接触していない対応する１つ又は複数の細胞と比較して、免疫調節組成物と接触させた１つ又は複数の細胞におけるＴＬＲ８活性を約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、約５％未満、又は約１％未満だけ増加させる。いくつかの実施態様では、免疫調節組成物は、免疫調節組成物と接触していない対応する１つ又は複数の細胞と比較して、免疫調節組成物と接触させた１つ又は複数の細胞によるＴＮＦ－αの分泌を約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、約５％未満、又は約１％未満増加させる。いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは、免疫調節組成物と接触させた１つ又は複数の細胞内に導入される。いくつかの実施態様では、免疫調節組成物と接触させた１つ又は複数の細胞をさらにグアノシン又はグアノシン誘導体と接触させ、場合によってはグアノシン誘導体は２’３’環状ＧＭＰである。
［００４４］別の態様では、本明細書で提供されるのは、本明細書に記載の免疫調節組成物のいずれかのＲＮＡリガンドを含む単離核酸である。いくつかの実施態様では、核酸は、ＤＮＡ、ＲＮＡ、又はＤＮＡ／ＲＮＡ分子である。
［００４５］別の態様では、本明細書で提供されるのは、本明細書に記載の免疫調節組成物のいずれかのＲＮＡリガンド、又は本明細書に記載の核酸のいずれかを含むベクターである。
［００４６］別の態様では、本明細書で提供されるのは、本明細書に記載の免疫調節組成物のいずれかを含む薬学的組成物である。
［００４７］別の態様では、本明細書で提供されるのは、本明細書に記載の免疫調節組成物のいずれかのＲＮＡリガンド、本明細書に記載の核酸のいずれか、又は本明細書に記載のベクターのいずれかを含む宿主細胞である。
［００４８］別の態様では、本明細書で提供されるのは、本明細書に記載の免疫調節組成物のいずれか、又は本明細書に記載の薬学的組成物のいずれかを含むワクチン組成物である。
［００４９］別の態様では、本明細書で提供されるのは、１つ又は複数の細胞においてＴＬＲ７を選択的に活性化するための方法であり、該方法は、１つ又は複数の細胞を、本明細書に記載の免疫調節組成物のいずれか、又は本明細書に記載の薬学的組成物のいずれかと接触させることを含む。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の細胞はＴＬＲ７を発現する。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の細胞は末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を含む。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の細胞は、１つ又は複数の形質細胞様樹状細胞を含む。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の細胞を免疫調節組成物又は薬学的組成物と接触させると、免疫調節組成物又は薬学的組成物と接触していない対応する１つ又は複数の細胞と比較して、１つ又は複数の細胞におけるＴＬＲ７活性の増加をもたらす。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の細胞を免疫調節組成物又は薬学的組成物と接触させると、免疫調節組成物又は薬学的組成物と接触していない対応する１つ又は複数の細胞と比較して、１つ又は複数の細胞によるＩＦＮ－αの分泌の増加をもたらす。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の細胞におけるＴＬＲ７活性の増加は、免疫調節組成物又は薬学的組成物と接触していない対応する１つ又は複数の細胞と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約１００％、又はそれ以上の増加である。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の細胞によるＩＦＮ－αの分泌の増加は、免疫調節組成物又は薬学的組成物と接触していない対応する１つ又は複数の細胞と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約１００％、又はそれ以上の増加である。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の細胞を免疫調節組成物又は薬学的組成物と接触させると、免疫調節組成物又は薬学的組成物と接触していない対応する１つ又は複数の細胞と比較して、１つ又は複数の細胞におけるＴＬＲ８活性の約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、約５％未満、又は約１％未満の増加をもたらす。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の細胞を免疫調節組成物又は薬学的組成物と接触させると、免疫調節組成物又は薬学的組成物と接触していない対応する１つ又は複数の細胞と比較して、約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、約５％未満、又は約１％未満の、１つ又は複数の細胞によるＴＮＦ－αの分泌の増加をもたらす。いくつかの実施態様では、方法は、１つ又は複数の細胞をグアノシン又はグアノシン誘導体と接触させることをさらに含み、場合によっては、グアノシン誘導体は２’３’環状ＧＭＰである。いくつかの実施態様では、方法は、酵素結合免疫吸着法（ＥＬＩＳＡ）、イムノブロッティング、イムノアッセイ、フローサイトメトリー、電気化学発光に基づく方法、質量分析法、若しくはｑＰＣＲによってＩＦＮ－α及び／若しくはＴＮＦ－αの分泌を測定すること；並びに／又はインターフェロン刺激遺伝子（ＩＳＧ）の発現レベルを測定することをさらに含む。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の細胞を免疫調節組成物又は薬学的組成物と接触させることは、ＲＮＡリガンドを１つ又は複数の細胞に導入することを含む。
［００５０］別の態様では、本明細書で提供されるのは、個体においてＴＬＲ７を選択的に活性化する方法であり、該方法は、有効量の本明細書に記載の免疫調節組成物のいずれか、本明細書に記載の薬学的組成物のいずれか、又は本明細書に記載のワクチン組成物のいずれかを個体に投与することを含む。いくつかの実施態様では、有効量の免疫調節組成物、薬学的組成物、又はワクチン組成物を個体に投与すると、免疫調節組成物、薬学的組成物、又はワクチン組成物を投与されなかった対応する個体と比較して、個体におけるＴＬＲ７活性の増加をもたらす。いくつかの実施態様では、有効量の免疫調節組成物、薬学的組成物、又はワクチン組成物を個体に投与すると、免疫調節組成物、薬学的組成物、又はワクチン組成物を投与されなかった対応する個体と比較して、個体におけるＩＦＮ－αのレベルの増加をもたらす。いくつかの実施態様では、ＴＬＲ７活性の増加は、免疫調節組成物、薬学的組成物、又はワクチン組成物を投与されなかった対応する個体と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約１００％、又はそれ以上の増加である。いくつかの実施態様では、ＩＦＮ－αレベルの増加は、免疫調節組成物、薬学的組成物、又はワクチン組成物を投与されなかった対応する個体と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約１００％、又はそれ以上の増加である。いくつかの実施態様では、有効量の免疫調節組成物、薬学的組成物、又はワクチン組成物を個体に投与すると、免疫調節組成物、薬学的組成物、又はワクチン組成物を投与されなかった対応する個体と比較して、約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、約５％未満、又は約１％未満の、個体におけるＴＬＲ８活性の増加をもたらす。いくつかの実施態様では、有効量の免疫調節組成物、薬学的組成物、又はワクチン組成物を個体に投与すると、免疫調節組成物、薬学的組成物、又はワクチン組成物を投与されなかった対応する個体と比較して、約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、約５％未満、又は約１％未満の、個体におけるＴＮＦ－αのレベルの増加をもたらす。
［００５１］別の態様では、本明細書で提供されるのは、個体における免疫応答を刺激するための方法であり、該方法は、有効量の本明細書に記載の免疫調節組成物のいずれか、本明細書に記載の薬学的組成物のいずれか、又は本明細書に記載のワクチン組成物のいずれかを個体に投与することを含む。いくつかの実施態様では、有効量の免疫調節組成物、薬学的組成物、又はワクチン組成物を個体に投与すると、免疫調節組成物、薬学的組成物、又はワクチン組成物を投与されなかった対応する個体と比較して、個体におけるＴＬＲ７活性の増加をもたらす。いくつかの実施態様では、有効量の免疫調節組成物、薬学的組成物、又はワクチン組成物を個体に投与すると、免疫調節組成物、薬学的組成物、又はワクチン組成物を投与されなかった対応する個体と比較して、個体におけるＩＦＮ－αのレベルの増加をもたらす。いくつかの実施態様では、ＴＬＲ７活性の増加は、免疫調節組成物、薬学的組成物、又はワクチン組成物を投与されなかった対応する個体と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約１００％、又はそれ以上の増加である。いくつかの実施態様では、ＩＦＮ－αレベルの増加は、免疫調節組成物、薬学的組成物、又はワクチン組成物を投与されなかった対応する個体と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約１００％、又はそれ以上の増加である。いくつかの実施態様では、有効量の免疫調節組成物、薬学的組成物、又はワクチン組成物を個体に投与すると、免疫調節組成物、薬学的組成物、又はワクチン組成物を投与されなかった対応する個体と比較して、約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、約５％未満、又は約１％未満の、個体におけるＴＬＲ８活性の増加をもたらす。いくつかの実施態様では、有効量の免疫調節組成物、薬学的組成物、又はワクチン組成物を個体に投与すると、免疫調節組成物、薬学的組成物、又はワクチン組成物を投与されなかった対応する個体と比較して、約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、約５％未満、又は約１％未満の、個体におけるＴＮＦ－αのレベルの増加をもたらす。
［００５２］別の態様では、本明細書で提供されるのは、個体においてＴＬＲ７を活性化するための医薬の製造における使用のためのアジュバントであり、ここで、アジュバントは、本明細書に記載の免疫調節組成物のいずれか、本明細書に記載の薬学的組成物のいずれか、又は本明細書に記載のワクチン組成物のいずれかを含む。
［００５３］別の態様では、本明細書で提供されるのは、個体においてＴＬＲ７を活性化するための方法における使用のためのアジュバントであり、該方法は、有効量の本明細書に記載の免疫調節組成物のいずれか、本明細書に記載の薬学的組成物のいずれか、又は本明細書に記載のワクチン組成物のいずれかを個体に投与することを含む。
［００５４］別の態様では、本明細書で提供されるのは、本明細書に記載の免疫調節組成物のいずれか、本明細書に記載の核酸のいずれか、本明細書に記載のベクターのいずれか、本明細書に記載の薬学的組成物のいずれか、又は本明細書に記載のワクチン組成物のいずれかを含むキットである。
［００５５］本明細書に記載される種々の実施態様の特性の１つ、いくつか、又はすべてを組み合わせて、本発明の他の実施態様を形成することができることを理解されたい。本発明のこれら及び他の態様は、当業者に明らかであろう。本発明のこれら及び他の実施態様は、以下の発明を実施するための形態によってさらに説明される。
［００５６］特許又は出願ファイルは、カラーで作成された少なくとも１つの図面を含む。カラー図面を含む本特許又は特許出願公開のコピーは、要請及び必要な手数料の支払いに応じて特許庁から提供される。
［００５７］図１Ａ～１Ｂは、活性化二量体としてのカニクイザルＴＬＲ７及びヒトＴＬＲ８エンドソームロイシンリッチリピートドメインの結晶構造を、結合部位＃１及び＃２において例示的なリガンドとともに示す。図１Ａに示すように、ＴＬＲ７の結合部位＃１はグアノシン（Ｇ）に結合するが、結合部位＃２は少なくとも２つのヌクレオチド、好ましくはピリミジンが隣接するウリジン（Ｕ）に結合する。図１Ｂに示すように、ＴＬＲ８の結合部位＃１はウリジン（Ｕ）に結合するのに対し、結合部位＃２はＵＧ二量体に結合し、ＵＡ若しくはＵＵ二量体、あるいは潜在的にＣＧ二量体によって占有されることもある。アスタリスクは、ＴＬＲ７又はＴＬＲ８ホモ二量体の第２のサブユニットを示す。Ｍｉｙａｋｅ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（２０１８）３０（２）：４３－５１を参照。また、Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ（２０１６）４５：７３７；及びＴａｎｊｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ＆Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（２０１５）２２：１０９－１１５を参照。 図１Ａ～１Ｂは、活性化二量体としてのカニクイザルＴＬＲ７及びヒトＴＬＲ８エンドソームロイシンリッチリピートドメインの結晶構造を、結合部位＃１及び＃２において例示的なリガンドとともに示す。図１Ａに示すように、ＴＬＲ７の結合部位＃１はグアノシン（Ｇ）に結合するが、結合部位＃２は少なくとも２つのヌクレオチド、好ましくはピリミジンが隣接するウリジン（Ｕ）に結合する。図１Ｂに示すように、ＴＬＲ８の結合部位＃１はウリジン（Ｕ）に結合するのに対し、結合部位＃２はＵＧ二量体に結合し、ＵＡ若しくはＵＵ二量体、あるいは潜在的にＣＧ二量体によって占有されることもある。アスタリスクは、ＴＬＲ７又はＴＬＲ８ホモ二量体の第２のサブユニットを示す。Ｍｉｙａｋｅ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（２０１８）３０（２）：４３－５１を参照。また、Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ（２０１６）４５：７３７；及びＴａｎｊｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ＆Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（２０１５）２２：１０９－１１５を参照。 ［００５８］図２は、ＲＮａｓｅ酵素によって触媒される反応を示す。ＲＮａｓｅは３’リン（上部）での求核攻撃を触媒し、５’ＯＨを持つ３’ヌクレオチドの放出を引き起こす。３’末端は２’３’シクロホスフェートによって特徴づけられる。 ［００５９］図３は、２’－Ｏ－メチル、２’－フルオロ、２’－デオキシ、２’－アミノ、２’－メトキシエトキシ、及びホスホロチオエート（ｐｔｏ）修飾の化学構造を示す。１’位の「Ｕ」又は「Ｎ」は、考えられるあらゆる核酸塩基を表す。 ［００６０］図４は、ヌクレオチド配列Ｃ－Ｇ－Ｇ－Ｃ－Ｕ－Ｃ－Ｇ－Ｇ－Ｃ－Ａ－Ｇ－Ａ－Ａ－Ｇ－Ｃ－Ｃ－Ｇ－Ｇ－Ｇ－Ｃ－Ｃ（配列番号２；「－」はホスホジエステル結合を表す）を有するＯＲＮ７０２３（国際公開第２０１０／１０５８１９号に由来）がとる二次構造を示す。ＯＲＮ７０２３は、ボックスで示されるＧ：Ｕウォブル塩基対を含む、短い標準ＲＮＡヘアピンを形成する。ＯＲＮ７０２３の二次構造は、ＲＮＡフォールドを使用して得られた（例えば、Ｇｒｕｂｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ（２００８）３６：２ｓ：Ｗ７０－Ｗ７４；Ｌｏｒｅｎｚ ｅｔ ａｌ．，Ａｌｇｏｒｉｔｈｍｓ ｆｏｒ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（２０１１）６：１：２６；及びｒｎａ．ｔｂｉ．ｕｎｉｖｉｅ．ａｃ．ａｔ／ｃｇｉ－ｂｉｎ／ＲＮＡＷｅｂＳｕｉｔｅ／ＲＮＡｆｏｌｄ．ｃｇｉを参照）。 ［００６１］図５は、ＴＬＲ７二量体内のＴＬＲ７の結合部位＃２を示す。Ｕ３三量体は結合部位＃２内で結合する。Ｕ１、Ｕ２、及びＵ３は５’から３’方向のヌクレオチドを表す。黒の三角形は、３つのヌクレオチド（Ｕ１、Ｕ２、及びＵ３）の２’ＯＨ部分を標識する。各ＴＬＲ７サブユニットは、水色又はピンク色の陰影で示される。アスタリスクは、ＴＬＲ７ホモ二量体の第２のサブユニットを示す。Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ Ｒｅｐｏｒｔｓ（２０１８）２５：３３７１－３３８１を参照。 ［００６２］図６は、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）による核酸受容体の発現及びサイトカイン分泌を示す。ＰＢＭＣの主な細胞型を図６の上部に示す（ｃＤＣ＝従来の樹状細胞；ｐＤＣ＝形質細胞様樹状細胞；ＮＫ＝ナチュラルキラー）。ｐＤＣ及び単球によって発現されるサイトカイン誘導核酸受容体を図６の下部に示す。 ［００６３］図７は、実施例１に記載のＲＮＡリガンドに応答したＰＢＭＣによるＴＮＦ－α又はＩＦＮ－α分泌のレベルを測定した実験の結果を示す。ヒトＰＢＭＣは、ポリ－Ｌ－アルギニン（ｐ－Ｌ－アルギニン）複合体化ＲＮＡリガンド（ｘ軸に表示）を単独で、又はグアノシンと組み合わせて刺激された（凡例で示されているように、「ｎｏＧ」はＰＢＭＣがｐ－Ｌ－アルギニン複合体化ＲＮＡリガンドのみで刺激されたことを示し、「Ｇ」はＰＢＭＣがｐ－Ｌ－アルギニン複合体化ＲＮＡリガンド及びグアノシンで共刺激されたことを示す）。Ｙ軸（ｐｇ／ｍｌ）に示すように、ＴＮＦ－α及びＩＦＮ－α分泌のレベルを、ＲＮＡリガンドのｐ－Ｌ－アルギニン送達の１６時間後に測定した。「培地」は、陰性対照（ｐ－Ｌ－アルギニン複合体化ＲＮＡリガンド又はグアノシンのいずれかによるＰＢＭＣの刺激なし）を指す。「Ｒ８４８」は陽性対照であり、１μｇ／ｍｌの濃度のＲ８４８、レシキモドとも呼ばれる低分子ＴＬＲ７／８リガンドで刺激されたＰＢＭＣを指す。 ［００６４］図８は、実施例１に記載の特定のＲＮＡリガンドに応答したＰＢＭＣ又はｐＤＣ枯渇ＰＢＭＣによるＴＮＦ－α及びＩＦＮ－α分泌のレベルを測定した実験の結果を示す。ヒトＰＢＭＣ又はｐＤＣ枯渇ＰＢＭＣは、ｘ軸に示されているように、ｐ－Ｌ－アルギニン複合体化ＲＮＡリガンドで刺激された。Ｙ軸（ｐｇ／ｍｌ）に示すように、ＴＮＦ－α及びＩＦＮ－α分泌のレベルを、ＲＮＡリガンドのｐ－Ｌ－アルギニン送達の１６時間後に測定した。「培地」は、陰性対照（ｐ－Ｌ－アルギニン複合体化ＲＮＡリガンドによるＰＢＭＣの刺激なし）を指す。９．２ＳＲＮＡ試料は、９．２ＳＲＮＡを活性化するＴＬＲ７／８と複合体を形成したｐ－Ｌ－アルギニンで刺激されたヒトＰＢＭＣ又はｐＤＣ枯渇ＰＢＭＣである。９．２Ｓ ＲＮＡは、ヌクレオチド配列Ａ－Ｇ－Ｃ－Ｕ－Ｕ－Ａ－Ａ－Ｃ－Ｃ－Ｕ－Ｇ－Ｕ－Ｃ－Ｃ－Ｕ－Ｕ－Ｃ－Ａ－Ａ（配列番号５６；「－」はホスホジエステル結合を表す）を有する陽性対照である。「ＩＶＴ４」は、ヌクレオチド配列Ｇ－Ｇ－Ｇ－Ａ－Ｃ－Ｇ－Ｃ－Ｕ－Ｇ－Ａ－Ｃ－Ｃ－Ｃ－Ａ－Ｇ－Ａ－Ａ－Ｇ－Ａ－Ｕ－Ｃ－Ａ－Ｃ－Ｕ－Ａ－Ｇ－Ａ－Ａ－Ａ－Ｕ－Ａ－Ｇ－Ｕ－Ａ－Ｇ－Ａ－Ｕ－Ｃ－Ｕ－Ｕ－Ｃ－Ｕ－Ｇ－Ｇ－Ｇ－Ｕ－Ｃ－Ａ－Ｇ－Ｃ－Ｇ－Ｕ－Ｃ－Ｃ－Ｃを有するリポフェクタミン複合体対照で刺激されたヒトＰＢＭＣ又はｐＤＣ枯渇ＰＢＭＣを指す。ＩＶＴ４対照はｉｎ ｖｉｔｒｏ転写によって生成され、クロロキン耐性があり、ＲＩＧ－Ｉを活性化するが、ＴＬＲ７／８は活性化しない。 ［００６５］図９は、ｐ－Ｌ－アルギニン（ｐＬＡ）と複合体を形成した示されたＲＮＡリガンドによって形成されたナノ粒子のサイズを特徴づける実験の結果を示す。 ［００６６］図１０Ａ～１０Ｂは、ＤＯＴＡＰで送達された実施例１に記載の示されたＲＮＡリガンドに応答したＰＢＭＣによるＴＮＦ－α又はＩＦＮ－α分泌のレベルを測定した実験の結果を示す。ヒトＰＢＭＣを、０．６μｇ／ｍｌ（図１０Ａ）又は２μｇ／ｍｌ（図１０Ｂ）の濃度のＤＯＴＡＰ複合体化ＲＮＡリガンド（ｘ軸に示す）で刺激した。Ｙ軸（ｐｇ／ｍｌ）に示すように、ＴＮＦ－α及びＩＦＮ－α分泌のレベルを、ＲＮＡリガンドのＤＯＴＡＰ送達の１６時間後に測定した。ｐＣＡ、ｐＣＡ－２、及びｐＣＡ－３試料は、サイトカイン応答を誘導しない陰性対照ＲＮＡオリゴヌクレオチドである。ｐＣＡ、ｐＣＡ－２、及びｐＣＡ－３は、ヌクレオチド配列Ｃ－Ａ－Ｃ－Ａ－Ｃ－Ａ－Ｃ－Ａ－Ｃ－Ａ－Ｃ－Ａ－Ｃ－Ａ－Ｃ－Ａ－Ｃ－Ａ－Ｃ－Ａ（配列番号７０）を含み、ここで「－」はホスホジエステル結合を示す。ｐＵ２Ｇ試料は、ＴＬＲ７とＴＬＲ８の両方を誘導する陽性対照ＲＮＡオリゴヌクレオチドである。ｐＵ２Ｇはヌクレオチド配列Ｇ－Ｇ－Ｕ－Ｕ－Ｇ－Ｕ－Ｕ－Ｇ－Ｕ－Ｕ－Ｇ－Ｕ－Ｕ－Ｇ－Ｕ－Ｕ－Ｇ－Ｕ－Ｕ－Ｇ（配列番号７１）を含み、ここで「－」はホスホジエステル結合を示す。 図１０Ａ～１０Ｂは、ＤＯＴＡＰで送達された実施例１に記載の示されたＲＮＡリガンドに応答したＰＢＭＣによるＴＮＦ－α又はＩＦＮ－α分泌のレベルを測定した実験の結果を示す。ヒトＰＢＭＣを、０．６μｇ／ｍｌ（図１０Ａ）又は２μｇ／ｍｌ（図１０Ｂ）の濃度のＤＯＴＡＰ複合体化ＲＮＡリガンド（ｘ軸に示す）で刺激した。Ｙ軸（ｐｇ／ｍｌ）に示すように、ＴＮＦ－α及びＩＦＮ－α分泌のレベルを、ＲＮＡリガンドのＤＯＴＡＰ送達の１６時間後に測定した。ｐＣＡ、ｐＣＡ－２、及びｐＣＡ－３試料は、サイトカイン応答を誘導しない陰性対照ＲＮＡオリゴヌクレオチドである。ｐＣＡ、ｐＣＡ－２、及びｐＣＡ－３は、ヌクレオチド配列Ｃ－Ａ－Ｃ－Ａ－Ｃ－Ａ－Ｃ－Ａ－Ｃ－Ａ－Ｃ－Ａ－Ｃ－Ａ－Ｃ－Ａ－Ｃ－Ａ－Ｃ－Ａ（配列番号７０）を含み、ここで「－」はホスホジエステル結合を示す。ｐＵ２Ｇ試料は、ＴＬＲ７とＴＬＲ８の両方を誘導する陽性対照ＲＮＡオリゴヌクレオチドである。ｐＵ２Ｇはヌクレオチド配列Ｇ－Ｇ－Ｕ－Ｕ－Ｇ－Ｕ－Ｕ－Ｇ－Ｕ－Ｕ－Ｇ－Ｕ－Ｕ－Ｇ－Ｕ－Ｕ－Ｇ－Ｕ－Ｕ－Ｇ（配列番号７１）を含み、ここで「－」はホスホジエステル結合を示す。 ［００６７］図１１は、担体なしで送達された実施例１に記載の示されたＲＮＡリガンド（すなわち、遊離ＲＮＡリガンド）に応答したＰＢＭＣによるＴＮＦ－α又はＩＦＮ－α分泌のレベルを測定した実験の結果を示す。ヒトＰＢＭＣは遊離ＲＮＡリガンド（ｘ軸に表示）のみで刺激された。ｙ軸（ｐｇ／ｍｌ）に示すように、ＴＮＦ－α及びＩＦＮ－αの分泌レベルを送達後１６時間に測定した。ｐＣＡ及びｐＣＡ－２試料は、サイトカイン応答を誘導しない陰性対照ＲＮＡオリゴヌクレオチドである（配列番号７０）。ｐＵ２Ｇ＿ｐｔｏ試料は、ＴＬＲ７とＴＬＲ８の両方を誘導する陽性対照ＲＮＡオリゴヌクレオチドである。ｐＵ２Ｇ＿ｐｔｏはヌクレオチド配列Ｇ＊Ｇ＊Ｕ＊Ｕ＊Ｇ＊Ｕ＊Ｕ＊Ｇ＊Ｕ＊Ｕ＊Ｇ＊Ｕ＊Ｕ＊Ｇ＊Ｕ＊Ｕ＊Ｇ＊Ｕ＊Ｕ＊Ｇ（配列番号７２）を含み、ここで「＊」はホスホロチオエート結合を示す。 ［００６８］図１２は、ＯＲＮ７００５～７０１２が、ｐ－Ｌ－アルギニン単独（「２’３’ｃＧＭＰなし」）と、又はｐ－Ｌ－アルギニン及び２’３’環状ＧＭＰ（「２’３’ｃＧＭＰ」）複合体とともにヒトＰＢＭＣに送達された実験の結果を示す。２’３’環状ＧＭＰの最終濃度は５μｇ／ｍｌで、ＯＲＮはすべて０．６μｇ／ｍｌの濃度で使用された。サイトカイン分泌は図７のように測定された。ＰＢＭＣは６人のヒトドナーから得られた。示された結果は２つの独立した実験を表している。 ［００６９］図１３は、すべての条件において、ＲＮＡリガンドが２’３’環状ＧＭＰ（「２’３’ｃＧＭＰ」）と複合体を形成したことを除いて、図８と同様に行った実験の結果を示す。２’３’環状ＧＭＰの最終濃度は５μｇ／ｍｌで、ＲＮＡリガンド（ＯＲＮ７００５～７０１２）は０．６μｇ／ｍｌの濃度で使用された。ヒトＰＢＭＣは３人のドナーから得られた。示された結果は１つの実験を表している。 ［００７０］図１４は、図８で実施した実験の結果を示すが、３人の新たなドナーから得たヒトＰＢＭＣを使用した。 ［００７１］図１５Ａ～１５Ｂは、ＲＮＡｓｅ切断活性に対する２’位でのＲＮＡ修飾の影響を評価した実験の結果を示す。図１５Ａは、ＯＲＮ７００９及びＯＲＮ７０１３に対応する未修飾配列を示し、潜在的なＲＮＡｓｅ Ｔ２切断部位を矢印で示している。矢印のサイズは、ＲＮａｓｅ Ｔ２切断のコンセンサス配列の強度、つまり切断イベントの可能性を示す。切断部位は文献に基づいている（Ｏｓｔｅｎｄｏｒｆ ｅｔ ａｌ．，（２０２０）５２（４）：５９１－６０５）。図１５Ｂは、ＲＮａｓｅ Ｔ２及び非修飾ＲＮＡリガンド（ＯＲＮ７００９及びＯＲＮ７０１３）を含む各反応物６μｌ、又はＲＮａｓｅ Ｔ２及び修飾ＲＮＡリガンド（ＯＲＮ７０１４～７０１７及びＯＲＮ７０１０～７０１２）を含む各反応物３μｌを負荷したＴＢＥ－尿素ＰＡＧＥゲルを示す。「ＲＮＡｓｅなし」対照の場合、各ＲＮＡリガンド３μｌを、ＲＮａｓｅ Ｔ２を除いた同じ反応条件で１２分間インキュベートした。図１５Ｂの上のゲルは、０．２μｇ／ｍｌのＲＮａｓｅ Ｔ２とともに３、６、９又は１２分間インキュベートしたＲＮＡリガンドＯＲＮ７００９～７０１２を示す。図１５Ｂの下のゲルは、０．５μｇ／ｍｌのＲＮａｓｅ Ｔ２とともに３、６、９又は１２分間インキュベートしたＲＮＡリガンドＯＲＮ７０１３～７０１７を示す。 図１５Ａ～１５Ｂは、ＲＮＡｓｅ切断活性に対する２’位でのＲＮＡ修飾の影響を評価した実験の結果を示す。図１５Ａは、ＯＲＮ７００９及びＯＲＮ７０１３に対応する未修飾配列を示し、潜在的なＲＮＡｓｅ Ｔ２切断部位を矢印で示している。矢印のサイズは、ＲＮａｓｅ Ｔ２切断のコンセンサス配列の強度、つまり切断イベントの可能性を示す。切断部位は文献に基づいている（Ｏｓｔｅｎｄｏｒｆ ｅｔ ａｌ．，（２０２０）５２（４）：５９１－６０５）。図１５Ｂは、ＲＮａｓｅ Ｔ２及び非修飾ＲＮＡリガンド（ＯＲＮ７００９及びＯＲＮ７０１３）を含む各反応物６μｌ、又はＲＮａｓｅ Ｔ２及び修飾ＲＮＡリガンド（ＯＲＮ７０１４～７０１７及びＯＲＮ７０１０～７０１２）を含む各反応物３μｌを負荷したＴＢＥ－尿素ＰＡＧＥゲルを示す。「ＲＮＡｓｅなし」対照の場合、各ＲＮＡリガンド３μｌを、ＲＮａｓｅ Ｔ２を除いた同じ反応条件で１２分間インキュベートした。図１５Ｂの上のゲルは、０．２μｇ／ｍｌのＲＮａｓｅ Ｔ２とともに３、６、９又は１２分間インキュベートしたＲＮＡリガンドＯＲＮ７００９～７０１２を示す。図１５Ｂの下のゲルは、０．５μｇ／ｍｌのＲＮａｓｅ Ｔ２とともに３、６、９又は１２分間インキュベートしたＲＮＡリガンドＯＲＮ７０１３～７０１７を示す。 ［００７２］図１６Ａ～１６Ｂは、図１２にプロットされたＩＦＮ－αデータを、２つの別々の実験にわたる固有のヒトＰＢＭＣドナーを示す個々のデータ点で示したものである。図１６Ａ及び図１６Ｂは、ドナー及び実験間の再現性を示すことにより、図１２に見られる任意の変動に背景を与える。 図１６Ａ～１６Ｂは、図１２にプロットされたＩＦＮ－αデータを、２つの別々の実験にわたる固有のヒトＰＢＭＣドナーを示す個々のデータ点で示したものである。図１６Ａ及び図１６Ｂは、ドナー及び実験間の再現性を示すことにより、図１２に見られる任意の変動に背景を与える。
定義
［００７３］本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用される、単数形「ａ（１つの）」、「ｏｒ（又は）」、及び「ｔｈｅ（その）」は、文脈が別途明確に指示しない限り、複数の指示対象を含む。本明細書で使用される場合、「約」は、当技術分野の当業者に容易に知られる、それぞれの値又はパラメータの通常の誤差範囲を指す。本明細書における「約」に続く値又はパラメータへの言及は、その値又はパラメータ自体を対象とする実施態様を含む（且つ説明する）。本明細書に記載される本開示の態様及び実施態様は、態様及び実施態様を「含む」、態様及び実施態様「からなる」、並びに態様及び実施態様「から本質的になる」を含むことを理解されたい。
［００７４］本明細書で使用される場合、「免疫調節性」という用語は、本開示の組成物又はＲＮＡリガンドなどの薬剤が、宿主（例えば、本明細書に記載されるような個体）の免疫系を調節する能力を指す。このような調節には、限定されないが、抗体産生（例えば、抗原特異抗体産生）の増加；Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー細胞、樹状細胞、マクロファージなどの免疫系細胞の活性化又は増殖；免疫刺激性サイトカインの産生又は放出（例えば、分泌）の増加；あるいは適応性、自然免疫性、細胞性又は体液性免疫応答の直接的又は間接的な増強など、１つ又は複数の免疫応答を増加させることが含まれ得る。このような調節には、限定されないが、抗原特異抗体産生の減少；免疫抑制活性を有するリンパ球又は他の細胞集団の活性化；特定の細胞機能に対して抑制作用を有するサイトカインの合成の増加；あるいは特定の適応性、自然免疫性、細胞性又は体液性免疫応答の直接的又は間接的な減少など、１つ又は複数の免疫応答を減少させることも含まれ得る。
［００７５］本明細書で使用される場合、ＴＬＲ７活性に関して「選択的」、「選択性」、及び「選択的に」という用語は、本開示の免疫調節組成物又はＲＮＡリガンドなどの薬剤が、ＴＬＲ７の活性を、例えば、１つ又は複数の細胞において、別のＴｏｌｌ様受容体、例えば、ＴＬＲ８などの別の分子の活性よりも高い程度で増加させる能力を指す。したがって、本開示のＴＬＲ７選択的ＲＮＡリガンド又は免疫調節組成物は、ＴＬＲ７の活性を増加させる可能性があり、また別のＴｏｌｌ様受容体、例えばＴＬＲ８などの別の分子の活性を増加させる可能性があるが、ＴＬＲ７の活性の増加は、別の分子（例えばＴＬＲ８）の活性の増加よりも大きい程度になるであろう。
［００７６］本明細書で使用される場合、「ＲＮＡリガンド」は、任意の長さのヌクレオチドポリマーを指す。ヌクレオチドは、リボヌクレオチド、修飾されたリボヌクレオチド若しくは塩基、及び／若しくはそれらの類縁体であっても、又はＲＮＡポリメラーゼによって若しくは合成反応によってポリマーに組み込まれ得る任意の基質であってもよい。ポリヌクレオチドは修飾ヌクレオチドを含んでいてもよい。存在する場合には、ヌクレオチド構造に対する修飾は、ポリマーのアセンブリの前に付与されても、又は後に付与されてもよい。ヌクレオチドの配列は、非ヌクレオチド成分によって中断され得る。
［００７７］本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される担体」とは、個体に対して無毒である、活性成分以外の組成物中の成分を指す。
［００７８］本明細書で使用される場合、特定の対象配列又はその特定部分に関する「パーセント（％）同一性」とは、配列を整列させ、最大配列同一性パーセントを達成するために必要であればギャップを導入した後の、対象配列（又はその特定部分）中のヌクレオチドと同一な同定配列中のヌクレオチドの割合として定義される。
［００７９］「単離された」核酸は、その天然環境の構成要素から分離された核酸分子を指す。単離された核酸には、通常は核酸分子を含む細胞に含まれる核酸分子が含まれるが、核酸分子は染色体外に、又は天然の染色体位置とは異なる染色体位置に存在する。
［００８０］「ベクター」という用語は、本明細書で使用される場合、連結している別の核酸を輸送することができる核酸分子を指す。ベクターの１つの種類は「プラスミド」であり、これは環状二本鎖ＤＮＡを指し、これに追加のＤＮＡセグメントがライゲーションされ得る。別の種類のベクターは、ファージベクターである。別の種類のベクターは、ウイルスベクターであり、追加のＤＮＡセグメントがウイルスゲノムにライゲーションされ得る。ある特定のベクターは、それらが導入される宿主細胞内で自己複製することができる（例えば、細菌複製起点を有する細菌ベクター及びエピソーム哺乳類ベクター）。他のベクター（例えば、非エピソーム哺乳動物ベクター）は、宿主細胞への導入時に宿主細胞のゲノムに組み込まれ得、それにより、宿主ゲノムとともに複製される。さらに、特定のベクターは、それらが作動可能に連結されている遺伝子の発現を指示することができる。
［００８１］「宿主細胞」という用語は、外因性核酸が導入された細胞を指し、そのような細胞の子孫も含まれる。宿主細胞には、「形質転換体」及び「形質転換細胞」が含まれ、これには初代形質転換細胞及び継代数に関係なくそれに由来する子孫が含まれる。子孫は親細胞と核酸含量が完全に同一でなくてもよく、突異を含んでいてもよい。元の形質転換細胞においてスクリーニング又は選択されたのと同じ機能又は生物学的活性を有する変異子孫が本明細書に含まれる。
［００８２］「個体」は哺乳動物である。哺乳動物としては、家畜動物（例えば、ウシ、ヒツジ、ネコ、イヌ及びウマ）、霊長類（例えば、ヒト及び非ヒト霊長類、例えば、サル）、ウサギ及びげっ歯類（例えば、マウス及びラット）が挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施態様では、個体はヒトである。
［００８３］「有効量」は、所望の治療結果又は予防結果を達成するために必要な投薬量及び期間において少なくとも有効な量を指す。有効量は、１回以上の投与で提供され得る。本明細書における有効量は、個体の疾患状態、年齢、性別、及び体重、並びに個体における所望の応答を誘発する治療の能力等の要因に応じて異なり得る。有効量は、治療上有益な作用が治療の任意の毒性作用又は有害作用を上回る量でもある。予防的使用の場合、有益な又は所望の結果としては、疾患の生化学的、組織学的、及び／又は挙動的症候、その合併症、並びに疾患の発症中に現れる中間病理学的表現型を含む、疾患のリスクの排除又は低減、疾患の重症度の軽減、又は疾患の発生の遅延等の結果が挙げられる。治療的使用の場合、有益な又は所望の結果には、疾患に起因する１つ又は複数の症状の減少、疾患に罹患している者の生活の質の向上、疾患の治療に必要な他の薬剤の用量の減少、別の薬剤の効果の増強、疾患の進行の遅延、及び／又は生存期間の延長などの臨床結果が挙げられる。薬物、化合物、又は組成物の有効量は、予防的又は治療的処置を直接又は間接的に達成する十分な量である。臨床の文脈で理解されるように、有効量の薬物、化合物、又は組成物は、別の薬物、化合物、又は薬学的組成物と併用して達成される場合もあれば、達成されない場合もある。したがって、「有効量」は、１つ又は複数の治療剤の投与との関連で考慮され得、１つ又は複数の他の薬剤と併用して望ましい結果が達成され得るか、又は達成されれば、単一の薬剤は有効量で与えられると考えられ得る。
概要
［００８４］本開示の特定の態様は、ＴＬＲ７を選択的に活性化するＲＮＡリガンドを含む免疫調節組成物に関する。
ＴＬＲ７選択的リガンド開発の困難さ
［００８５］複数のＴＬＲ８選択的リガンドが報告されているが、ＴＬＲ７選択的ＲＮＡリガンドは非常に稀である。ＴＬＲ７選択的リガンドを生成するために、いくつかの手法が試みられてきた。例えば、短い二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）配列内のヘアピンやＧ：Ｕウォブル塩基対などの二次構造は、ＴＬＲ７を選択的に活性化すると記載されている。しかし、ＴＬＲ７選択性をもたらすメカニズムは依然として不明であり、ＴＬＲ７／８認識モチーフだけでは説明できない。例えば、国際公開第２０１０／１０５８１９号を参照。ただし、そのような二次構造は、ＴＬＲ８の活性化には不利なＲＮａｓｅ分解パターンに有利に作用する可能性がある。しかし、出願人らは、ヘアピン構造及び／又はＧ：Ｕウォブル塩基対のみに依存するリガンドは、固定二次構造としてそのような構造を必要とし、異なる送達方法によって活性が変動する可能性があることを認識していた。
［００８６］出願人らは、ＴＬＲ７選択的リガンドの欠如の考えられる理由は、結合部位＃１及び結合部位＃２と呼ばれるＴＬＲ７及びＴＬＲ８の２つのヌクレオチド結合部位の特異性である可能性があることを認識した（図１Ａ～１Ｂ）。理論に束縛されることを望まないが、出願人らは、本開示のＴＬＲ７選択的リガンドを設計する際にこの特性を考慮した。
［００８７］結合部位＃１はより重要であり、ＲＮａｓｅ分解の典型的な生成物である単量体ヌクレオシド又は潜在的に３’２’シクロホスホヌクレオシドに結合する。図１Ａ～１Ｂに示すように、ＴＬＲ７結合部位＃１はグアノシンに結合するが（図１Ａ）、一方、ＴＬＲ８結合部位＃１はウリジンに結合する（図１Ｂ）。結合部位＃１は、レシキモド、ガージキモド、又はイミキモドなどのある範囲の合成低分子活性化剤によっても結合される。親和性が高いため、結合部位＃１に合成低分子が結合するだけでも活性化には十分である。しかし、ＲＮＡリガンドによる完全な活性化には、結合部位＃２での結合も必要である。
［００８８］結合部位＃２は、ＴＬＲ７とＴＬＲ８では質的にも空間的にも異なっている（図１Ａ－１Ｂ）。ＴＬＲ７結合部位＃２は、より長いＲＮＡオリゴリボヌクレオチドに埋め込まれ得る２つのヌクレオチド、優先的にはピリミジンが隣接するウリジンを厳密に必要とするようである（図１Ａ）。一方、ＴＬＲ８は結合部位＃２でＵＧ二量体に結合するが、より無差別的でもあり、ＵＡ若しくはＵＵ二量体、又は潜在的にＣＧ二量体によって占有される可能性がある（図１Ｂ）。３’末端は３’２’環状リン酸によって定義されるが、５’末端はあまり明確に定義されておらず、三量体の一部又はさらに長いオリゴの場合もある。
［００８９］したがって、ＴＬＲ７選択的リガンドの生成が困難なのは、少なくとも部分的には、ＴＬＲ７が活性化のためにグアノシン（結合部位＃１について）とウリジン（結合部位＃２について）の両方を厳密に必要とするのに対し、ＴＬＲ８はウリジンのみを必要とするという事実に起因している可能性がある。したがって、Ｕ又はＵＡ制限配列はいずれもＴＬＲ８を活性化するが、ＴＬＲ７は活性化しない可能性があるが、ＴＬＲ７結合部位＃２にウリジンが必要であるということは、選択性のための配列のみに依存する場合、ＴＬＲ７を活性化する配列はＴＬＲ８リガンドを生成する可能性を持つことを意味する。
ＲＮＡ修飾を使用したＴＬＲ７選択的リガンドの開発
［００９０］ＲＮａｓｅはＲＮＡを切断し、ＴＬＲ７及び／又はＴＬＲ８活性化のリガンドとして機能するＲＮＡ分解産物を生成する酵素である。図２に示すように、ＲＮａｓｅは、３’リンにおける２’酸素の求核攻撃によってヌクレオチドの３’ＲＮＡ分子を切断し、その結果、５’ＯＨを有する３’ヌクレオチドが遊離し、ＲＮａｓｅ活性のマーカーとして広く使用されている２’－３’シクロホスフェートが生成される。
［００９１］特定のＲＮＡ修飾はＲＮａｓｅの活性を妨げる。例えば、ホスホロチオエート修飾は、骨格のリン酸にキラリティーを導入し、ＲＮＡ分解を遅らせ、ＴＬＲ活性化を促進することが示されている。さらに、リボース上の２’位置の修飾により、ＲＮＡ骨格からＲＮａｓｅ活性に必要な２’ＯＨを奪い、且つ／又はヌクレアーゼの結合をブロックする可能性がある。
［００９２］出願人らは、オリゴリボヌクレオチド配列内の特定の部位に特定のＲＮＡ修飾を導入することにより、ＲＮａｓｅ活性に干渉し、ＴＬＲ８を活性化するＲＮＡ分解産物の形成を防止することができる一方で、ＴＬＲ７を活性化するリガンドの放出を可能にすることができることを認識した。
［００９３］したがって、本開示の特定の態様は、少なくとも部分的には、ＴＬＲ７選択性を増強し（例えば、実施例１を参照）、高レベルのＴＬＲ７活性をもたらし（例えば、実施例２を参照）、それによってＴＬＲ７選択的リガンドを生成する際の困難を克服する、特定の部位に特定のＲＮＡ修飾を有するＲＮＡリガンドの発見に基づいている。
開示の組成物
［００９４］いくつかの態様では、本明細書で提供されるのは、ＴＬＲ７を選択的に活性化する免疫調節組成物である。いくつかの実施態様では、本開示の免疫調節組成物は、ＲＮＡリガンド、例えば、本明細書に記載のＲＮＡリガンドを含む。いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは、１つ又は複数のＲＮＡ修飾、例えば、本明細書に記載される１つ又は複数のＲＮＡ修飾を含む、本明細書に記載のＴＬＲ７選択的モチーフなどの１つ又は複数のＴＬＲ７選択的モチーフを含む。いくつかの実施態様では、本開示の免疫調節組成物は、例えば本明細書に記載されるような薬学的に許容される担体などの担体をさらに含む。
ＲＮＡリガンド
［００９５］いくつかの態様では、本明細書で提供されるのは、１つ又は複数のＴＬＲ７選択的モチーフを含むＲＮＡリガンドであり、ＴＬＲ７選択的モチーフは、本明細書に記載のＲＮＡ修飾の１つ又は複数を含む。
式ＩのＴＬＲ７選択的モチーフを含むＲＮＡリガンド
［００９６］一態様では、本明細書で提供されるのは、式Ｉを含むＴＬＲ７選択的モチーフを含むＲＮＡリガンドであり：
Ｎ－／＊Ｕ（式Ｉ）、
式中、Ｎはリボースの２’位に修飾を含む任意のヌクレオシドであり、Ｕはウリジンヌクレオシドであり、「－／＊」はホスホジエステル結合又はホスホロチオエート結合を表す。
［００９７］いくつかの実施態様では、Ｎはリボースの２’位に修飾を含む。いくつかの実施態様では、修飾は、当技術分野で知られているか、又は本明細書に記載されているリボースの２’位における任意の修飾である。いくつかの実施態様では、修飾は、当技術分野で知られているか、又は本明細書に記載されているＲＮａｓｅ活性を阻害又はブロックする、リボースの２’位における任意の修飾である。いくつかの実施態様では、修飾は、２’Ｏ－メチル修飾、２’－フルオロ修飾、２’－アミノ修飾、２’デオキシ修飾、又は２’メトキシエトキシ修飾である。いくつかの実施態様では、修飾は２’Ｏ－メチル修飾である。いくつかの実施態様では、修飾は２’－フルオロ修飾である。いくつかの実施態様では、修飾は２’－アミノ修飾である。いくつかの実施態様では、修飾は２’デオキシ修飾である。いくつかの実施態様では、修飾は２’メトキシエトキシ修飾である。
［００９８］いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは、ＴＬＲ７選択的モチーフの５’末端、ＴＬＲ７選択的モチーフの３’末端、又はその両方に隣接する追加のヌクレオチド配列をさらに含む。いくつかの実施態様では、追加のヌクレオチド配列はウリジンヌクレオシドを含まない。
［００９９］いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは、ＴＬＲ７選択的モチーフの５’末端に連結された第１のヌクレオチド配列をさらに含む。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列は少なくとも１つのヌクレオシドを含む。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列は少なくとも２つのヌクレオシドを含む。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列のヌクレオシドは、ホスホジエステル結合又はホスホロチオエート結合によって連結されている。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９４、９６、９７、９８、９９、１００、若しくはそれ以上のヌクレオシド、又は１００～１２５ヌクレオシド、１２５～１５０ヌクレオシド、１５０～１７５ヌクレオシド、１７５～２００ヌクレオシド、２００～２２５ヌクレオシド、２２５～２５０ヌクレオシド、２５０～２７５ヌクレオシド、若しくは２７５～３００ヌクレオシドのいずれかを含む。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列は、ホスホジエステル結合又はホスホロチオエート結合によってＴＬＲ７選択的モチーフの５’末端に連結されている。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列はウリジンヌクレオシドを含まない。
［０１００］いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは、ＴＬＲ７選択的モチーフの３’末端に連結された第２のヌクレオチド配列をさらに含む。いくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列は少なくとも１つのヌクレオシドを含む。いくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列は少なくとも２つのヌクレオシドを含む。いくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列のヌクレオシドは、ホスホジエステル結合又はホスホロチオエート結合によって連結されている。いくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９４、９６、９７、９８、９９、１００、若しくはそれ以上のヌクレオシド、又は１００～１２５ヌクレオシド、１２５～１５０ヌクレオシド、１５０～１７５ヌクレオシド、１７５～２００ヌクレオシド、２００～２２５ヌクレオシド、２２５～２５０ヌクレオシド、２５０～２７５ヌクレオシド、若しくは２７５～３００ヌクレオシドのいずれかを含む。いくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列は、ホスホジエステル結合又はホスホロチオエート結合によってＴＬＲ７選択的モチーフの３’末端に連結されている。いくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列はウリジンヌクレオシドを含まない。
［０１０１］いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列の配列は、第２のヌクレオチド配列の配列と同一である。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列の配列は、第２のヌクレオチド配列の配列とは異なる。
［０１０２］いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは、式Ｉを含む２つ以上のＴＬＲ７選択的モチーフを含む。いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは、式Ｉを含む２つ以上のＴＬＲ７選択的モチーフ及び少なくとも２つの追加のヌクレオチド配列を含み、追加のヌクレオチド配列は少なくとも１つのヌクレオシドを含む。ＴＬＲ７選択的モチーフ及び少なくとも２つの追加のヌクレオチド配列は、ＲＮＡリガンド上に任意の順序で配置され得る。１つの非限定的な例では、ＲＮＡリガンドは、５’から３’方向に、第１のヌクレオチド配列、式ＩのＴＬＲ７選択的モチーフ、式Ｉの１つ又は複数の追加のＴＬＲ７選択的モチーフ（例えば、タンデムで）、第２のヌクレオチド配列、式Ｉの１つ又は複数の追加のＴＬＲ７選択的モチーフ（例えば、タンデムで）、及び第３のヌクレオチド配列を含み得る。いくつかの実施態様では、第１、第２、及び／又は第３のヌクレオチド配列は、少なくとも１つのヌクレオシドを含む。いくつかの実施態様では、第１、第２、及び／又は第３のヌクレオチド配列は、少なくとも２つのヌクレオシドを含む。いくつかの実施態様では、第１、第２、及び／又は第３のヌクレオチド配列のヌクレオシドは、ホスホジエステル結合又はホスホロチオエート結合によって連結されている。いくつかの実施態様では、第１、第２、及び／又は第３のヌクレオチド配列は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９４、９６、９７、９８、９９、１００、若しくはそれ以上のヌクレオシド、又は１００～１２５ヌクレオシド、１２５～１５０ヌクレオシド、１５０～１７５ヌクレオシド、１７５～２００ヌクレオシド、２００～２２５ヌクレオシド、２２５～２５０ヌクレオシド、２５０～２７５ヌクレオシド、若しくは２７５～３００ヌクレオシドのいずれかを含む。いくつかの実施態様では、第１、第２、及び／又は第３のヌクレオチド配列は、ホスホジエステル結合又はホスホロチオエート結合によって、隣接するＴＬＲ７選択的モチーフに連結されている。いくつかの実施態様では、第１、第２、及び／又は第３のヌクレオチド配列はウリジンヌクレオシドを含まない。当業者であれば、式Ｉを含む２つ以上のＴＬＲ７選択的モチーフ及び少なくとも２つの追加のヌクレオチド配列（例えば、上記のような）を含む他のＲＮＡリガンドに到達することができ、ここで、ＴＬＲ７選択的モチーフ及び少なくとも２つの追加のヌクレオチド配列は、ＲＮＡリガンド上で任意の順序で配置される。
式ＩＩのＴＬＲ７選択的モチーフを含むＲＮＡリガンド
［０１０３］一態様では、本明細書で提供されるのは、式ＩＩを含むＴＬＲ７選択的モチーフを含むＲＮＡリガンドであり：
Ｃ１ ＊Ｕ２－Ｕ３ ＊Ｕ４－Ｕ５ ＊Ｃ６（式ＩＩ）、
式中、Ｃ１及びＣ６はシチジンヌクレオシド、Ｕ２、Ｕ３、Ｕ４及びＵ５はウリジンヌクレオシドであり、「＊」はホスホロチオエート結合を表し、「－」はホスホジエステル結合を表す。
［０１０４］いくつかの実施態様では、Ｕ２はリボースの２’位に修飾を含む。いくつかの実施態様では、修飾は、当技術分野で知られているか、又は本明細書に記載されているリボースの２’位における任意の修飾である。いくつかの実施態様では、修飾は、当技術分野で知られているか、又は本明細書に記載されているＲＮａｓｅ活性を阻害又はブロックする、リボースの２’位における任意の修飾である。いくつかの実施態様では、修飾は、２’Ｏ－メチル修飾、２’－フルオロ修飾、２’－アミノ修飾、２’－デオキシ修飾、又は２’－メトキシエトキシ修飾である。いくつかの実施態様では、修飾は２’Ｏ－メチル修飾である。いくつかの実施態様では、修飾は２’－フルオロ修飾である。いくつかの実施態様では、修飾は２’－アミノ修飾である。いくつかの実施態様では、修飾は２’－デオキシ修飾である。いくつかの実施態様では、修飾は２’－メトキシエトキシ修飾である。
［０１０５］いくつかの実施態様では、Ｕ４はリボースの２’位に修飾を含む。いくつかの実施態様では、修飾は、当技術分野で知られているか、又は本明細書に記載されているリボースの２’位における任意の修飾である。いくつかの実施態様では、修飾は、当技術分野で知られているか、又は本明細書に記載されているＲＮａｓｅ活性を阻害又はブロックする、リボースの２’位における任意の修飾である。いくつかの実施態様では、修飾は、２’Ｏ－メチル修飾、２’－フルオロ修飾、２’－アミノ修飾、２’－デオキシ修飾、又は２’－メトキシエトキシ修飾である。いくつかの実施態様では、修飾は２’Ｏ－メチル修飾である。いくつかの実施態様では、修飾は２’－フルオロ修飾である。いくつかの実施態様では、修飾は２’－アミノ修飾である。いくつかの実施態様では、修飾は２’－デオキシ修飾である。いくつかの実施態様では、修飾は２’－メトキシエトキシ修飾である。
［０１０６］いくつかの実施態様では、Ｕ２のリボース修飾は２’Ｏ－メチル修飾であり、Ｕ４のリボース修飾は２’Ｏ－メチル修飾である。いくつかの実施態様では、Ｕ２のリボース修飾は２’Ｏ－メチル修飾であり、Ｕ４のリボース修飾は２’－フルオロ修飾である。いくつかの実施態様では、Ｕ２のリボース修飾は２’Ｏ－メチル修飾であり、Ｕ４のリボース修飾は２’－アミノ修飾である。いくつかの実施態様では、Ｕ２のリボース修飾は２’Ｏ－メチル修飾であり、Ｕ４のリボース修飾は２’－デオキシ修飾である。いくつかの実施態様では、Ｕ２のリボース修飾は２’Ｏ－メチル修飾であり、Ｕ４のリボース修飾は２’－メトキシエトキシ修飾である。いくつかの実施態様では、Ｕ２のリボース修飾は２’－フルオロ修飾であり、Ｕ４のリボース修飾は２’Ｏ－メチル修飾である。いくつかの実施態様では、Ｕ２のリボース修飾は２’－フルオロ修飾であり、Ｕ４のリボース修飾は２’－フルオロ修飾である。いくつかの実施態様では、Ｕ２のリボース修飾は２’Ｏ－フルオロ修飾であり、Ｕ４のリボース修飾は２’－アミノ修飾である。いくつかの実施態様では、Ｕ２のリボース修飾は２’－フルオロ修飾であり、Ｕ４のリボース修飾は２’－デオキシ修飾である。いくつかの実施態様では、Ｕ２のリボース修飾は２’－フルオロ修飾であり、Ｕ４のリボース修飾は２’－メトキシエトキシ修飾である。いくつかの実施態様では、Ｕ２のリボース修飾は２’－アミノ修飾であり、Ｕ４のリボース修飾は２’Ｏ－メチル修飾である。いくつかの実施態様では、Ｕ２のリボース修飾は２’－アミノ修飾であり、Ｕ４のリボース修飾は２’－フルオロ修飾である。いくつかの実施態様では、Ｕ２のリボース修飾は２’－アミノ修飾であり、Ｕ４のリボース修飾は２’－アミノ修飾である。いくつかの実施態様では、Ｕ２のリボース修飾は２’－アミノ修飾であり、Ｕ４のリボース修飾は２’－デオキシ修飾である。いくつかの実施態様では、Ｕ２のリボース修飾は２’－アミノ修飾であり、Ｕ４のリボース修飾は２’－メトキシエトキシ修飾である。いくつかの実施態様では、Ｕ２のリボース修飾は２’－デオキシ修飾であり、Ｕ４のリボース修飾は２’Ｏ－メチル修飾である。いくつかの実施態様では、Ｕ２のリボース修飾は２’－デオキシ修飾であり、Ｕ４のリボース修飾は２’－フルオロ修飾である。いくつかの実施態様では、Ｕ２のリボース修飾は２’－デオキシ修飾であり、Ｕ４のリボース修飾は２’－アミノ修飾である。いくつかの実施態様では、Ｕ２のリボース修飾は２’－デオキシ修飾であり、Ｕ４のリボース修飾は２’－デオキシ修飾である。いくつかの実施態様では、Ｕ２のリボース修飾は２’－デオキシ修飾であり、Ｕ４のリボース修飾は２’－メトキシエトキシ修飾である。いくつかの実施態様では、Ｕ２のリボース修飾は２’－メトキシエトキシ修飾であり、Ｕ４のリボース修飾は２’Ｏ－メチル修飾である。いくつかの実施態様では、Ｕ２のリボース修飾は２’－メトキシエトキシ修飾であり、Ｕ４のリボース修飾は２’－フルオロ修飾である。いくつかの実施態様では、Ｕ２のリボース修飾は２’－メトキシエトキシ修飾であり、Ｕ４のリボース修飾は２’－アミノ修飾である。いくつかの実施態様では、Ｕ２のリボース修飾は２’－メトキシエトキシ修飾であり、Ｕ４のリボース修飾は２’－デオキシ修飾である。いくつかの実施態様では、Ｕ２のリボース修飾は２’－メトキシエトキシ修飾であり、Ｕ４のリボース修飾は２’－メトキシエトキシ修飾である。
［０１０７］いくつかの実施態様では、ＴＬＲ７選択的モチーフは、配列番号４４のヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施態様では、ＴＬＲ７選択的モチーフは、配列番号４５のヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施態様では、ＴＬＲ７選択的モチーフは、配列番号４６のヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施態様では、ＴＬＲ７選択的モチーフは、配列番号４７のヌクレオチド配列を含む。
［０１０８］いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは、ＴＬＲ７選択的モチーフの５’末端、ＴＬＲ７選択的モチーフの３’末端、又はその両方に隣接する追加のヌクレオチド配列をさらに含む。いくつかの実施態様では、追加のヌクレオチド配列はウリジンヌクレオシドを含まない。
［０１０９］いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは、ＴＬＲ７選択的モチーフの５’末端に連結された第１のヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列は少なくとも１つのヌクレオシドを含む。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列は少なくとも２つのヌクレオシドを含む。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列のヌクレオシドは、ホスホジエステル結合又はホスホロチオエート結合によって連結されている。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列のヌクレオシドは、ホスホロチオエート結合によって連結されている。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９４、９６、９７、９８、９９、１００、若しくはそれ以上のヌクレオシド、又は１００～１２５ヌクレオシド、１２５～１５０ヌクレオシド、１５０～１７５ヌクレオシド、１７５～２００ヌクレオシド、２００～２２５ヌクレオシド、２２５～２５０ヌクレオシド、２５０～２７５ヌクレオシド、若しくは２７５～３００ヌクレオシドのいずれかを含む。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列は８つのヌクレオシドを含む。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列は、配列番号５８のヌクレオチド配列、又は配列番号５８に対して少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％若しくは１００％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列は、ホスホジエステル結合又はホスホロチオエート結合によってＴＬＲ７選択的モチーフの５’末端に連結されている。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列はホスホロチオエート結合によってＴＬＲ７選択的モチーフの５’末端に連結されている。
［０１１０］いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは、ＴＬＲ７選択的モチーフの３’末端に連結された第２のヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列は少なくとも１つのヌクレオシドを含む。いくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列は少なくとも２つのヌクレオシドを含む。いくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列のヌクレオシドは、ホスホジエステル結合又はホスホロチオエート結合によって連結されている。いくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列のヌクレオシドは、ホスホロチオエート結合によって連結されている。いくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９４、９６、９７、９８、９９、１００、若しくはそれ以上のヌクレオシド、又は１００～１２５ヌクレオシド、１２５～１５０ヌクレオシド、１５０～１７５ヌクレオシド、１７５～２００ヌクレオシド、２００～２２５ヌクレオシド、２２５～２５０ヌクレオシド、２５０～２７５ヌクレオシド、若しくは２７５～３００ヌクレオシドのいずれかを含む。いくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列は２つのヌクレオシドを含む。いくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列は、配列番号５９のヌクレオチド配列、又は配列番号５９に対して少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％若しくは１００％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列は、ホスホジエステル結合又はホスホロチオエート結合によってＴＬＲ７選択的モチーフの３’末端に連結されている。いくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列はホスホロチオエート結合によってＴＬＲ７選択的モチーフの３’末端に連結されている。
［０１１１］別の態様では、本明細書で提供されるのは、配列番号４４、４５、４６、及び４７のヌクレオチド配列を含むＴＬＲ７選択的モチーフを含むＲＮＡリガンドである。いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは、配列番号４４のヌクレオチド配列を含むＴＬＲ７選択的モチーフを含む。いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは、配列番号４５のヌクレオチド配列を含むＴＬＲ７選択的モチーフを含む。いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは、配列番号４６のヌクレオチド配列を含むＴＬＲ７選択的モチーフを含む。いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは、配列番号４７のヌクレオチド配列を含むＴＬＲ７選択的モチーフを含む。いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは、ＴＬＲ７選択的モチーフの５’末端、ＴＬＲ７選択的モチーフの３’末端、又はその両方に隣接する追加のヌクレオチド配列をさらに含む。いくつかの実施態様では、追加のヌクレオチド配列はウリジンヌクレオシドを含まない。いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは、ＴＬＲ７選択的モチーフの５’末端に連結された第１のヌクレオチド配列をさらに含む。いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは、ＴＬＲ７選択的モチーフの３’末端に連結された第２のヌクレオチド配列をさらに含む。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列は少なくとも１つのヌクレオシドを含む。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列は少なくとも２つのヌクレオシドを含む。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列のヌクレオシドは、ホスホジエステル結合又はホスホロチオエート結合によって連結されている。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列のヌクレオシドは、ホスホロチオエート結合によって連結されている。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９４、９６、９７、９８、９９、１００、若しくはそれ以上のヌクレオシド、又は１００～１２５ヌクレオシド、１２５～１５０ヌクレオシド、１５０～１７５ヌクレオシド、１７５～２００ヌクレオシド、２００～２２５ヌクレオシド、２２５～２５０ヌクレオシド、２５０～２７５ヌクレオシド、若しくは２７５～３００ヌクレオシドのいずれかを含む。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列は８つのヌクレオシドを含む。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列は、配列番号５８のヌクレオチド配列、又は配列番号５８に対して少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％若しくは１００％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列は、ホスホジエステル結合又はホスホロチオエート結合によってＴＬＲ７選択的モチーフの５’末端に連結されている。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列はホスホロチオエート結合によってＴＬＲ７選択的モチーフの５’末端に連結されている。いくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列は少なくとも１つのヌクレオシドを含む。いくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列は少なくとも２つのヌクレオシドを含む。いくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列のヌクレオシドは、ホスホジエステル結合又はホスホロチオエート結合によって連結されている。いくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列のヌクレオシドは、ホスホロチオエート結合によって連結されている。いくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９４、９６、９７、９８、９９、１００、若しくはそれ以上のヌクレオシド、又は１００～１２５ヌクレオシド、１２５～１５０ヌクレオシド、１５０～１７５ヌクレオシド、１７５～２００ヌクレオシド、２００～２２５ヌクレオシド、２２５～２５０ヌクレオシド、２５０～２７５ヌクレオシド、若しくは２７５～３００ヌクレオシドのいずれかを含む。いくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列は２つのヌクレオシドを含む。いくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列は、配列番号５９のヌクレオチド配列、又は配列番号５９に対して少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％若しくは１００％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列は、ホスホジエステル結合又はホスホロチオエート結合によってＴＬＲ７選択的モチーフの３’末端に連結されている。いくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列はホスホロチオエート結合によってＴＬＲ７選択的モチーフの３’末端に連結されている。
［０１１２］別の態様では、本明細書で提供されるのは、配列番号１２に対して少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％又は１００％の同一性を有し、且つ配列番号４４のＴＬＲ７選択的モチーフを含むヌクレオチド配列を含むＲＮＡリガンドである。いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは配列番号１２のヌクレオチド配列を含む。
［０１１３］別の態様では、本明細書で提供されるのは、配列番号１３に対して少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％又は１００％の同一性を有し、且つ配列番号４５のＴＬＲ７選択的モチーフを含むヌクレオチド配列を含むＲＮＡリガンドである。いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは配列番号１３のヌクレオチド配列を含む。
［０１１４］別の態様では、本明細書で提供されるのは、配列番号１４に対して少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％又は１００％の同一性を有し、且つ配列番号４６のＴＬＲ７選択的モチーフを含むヌクレオチド配列を含むＲＮＡリガンドである。いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは配列番号１４のヌクレオチド配列を含む。
［０１１５］別の態様では、本明細書で提供されるのは、配列番号１５に対して少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％又は１００％の同一性を有し、且つ配列番号４７のＴＬＲ７選択的モチーフを含むヌクレオチド配列を含むＲＮＡリガンドである。いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは配列番号１５のヌクレオチド配列を含む。
式ＩＩＩのＴＬＲ７選択的モチーフを含むＲＮＡリガンド
［０１１６］一態様では、本明細書で提供されるのは、式ＩＩＩを含むＴＬＲ７選択的モチーフを含むＲＮＡリガンドであり：
Ｃ１－Ｕ２－Ｃ３（式ＩＩＩ）、
式中、Ｃ１及びＣ３はシチジンヌクレオシドであり、Ｕ２はウリジンヌクレオシドであり、「－」はホスホジエステル結合を表す。
［０１１７］いくつかの実施態様では、Ｃ１はリボースの２’位に修飾を含む。いくつかの実施態様では、修飾は、当技術分野で知られているか、又は本明細書に記載されているリボースの２’位における任意の修飾である。いくつかの実施態様では、修飾は、当技術分野で知られているか、又は本明細書に記載されているＲＮａｓｅ活性を阻害又はブロックする、リボースの２’位における任意の修飾である。いくつかの実施態様では、修飾は、２’Ｏ－メチル修飾、２’－フルオロ修飾、２’－アミノ修飾、２’－デオキシ修飾、又は２’－メトキシエトキシ修飾である。いくつかの実施態様では、修飾は２’Ｏ－メチル修飾である。いくつかの実施態様では、修飾は２’－フルオロ修飾である。いくつかの実施態様では、修飾は２’－アミノ修飾である。いくつかの実施態様では、修飾は２’－デオキシ修飾である。いくつかの実施態様では、修飾は２’－メトキシエトキシ修飾である。
［０１１８］いくつかの実施態様では、ＴＬＲ７選択的モチーフは、配列番号４２のヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施態様では、ＴＬＲ７選択的モチーフは、配列番号４３のヌクレオチド配列を含む。
［０１１９］いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは、ＴＬＲ７選択的モチーフの５’末端、ＴＬＲ７選択的モチーフの３’末端、又はその両方に隣接する追加のヌクレオチド配列をさらに含む。いくつかの実施態様では、追加のヌクレオチド配列はウリジンヌクレオシドを含まない。
［０１２０］いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは、ＴＬＲ７選択的モチーフの５’末端に連結された第１のヌクレオチド配列をさらに含む。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列はウリジンヌクレオシドを含まない。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列は、ホスホジエステル結合によってＴＬＲ７選択的モチーフに連結されている。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列は少なくとも１つのヌクレオシドを含む。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列は少なくとも２つのヌクレオシドを含む。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９４、９６、９７、９８、９９、１００、若しくはそれ以上のヌクレオシド、又は１００～１２５ヌクレオシド、１２５～１５０ヌクレオシド、１５０～１７５ヌクレオシド、１７５～２００ヌクレオシド、２００～２２５ヌクレオシド、２２５～２５０ヌクレオシド、２５０～２７５ヌクレオシド、若しくは２７５～３００ヌクレオシドのいずれかを含む。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列は３つのヌクレオシドを含む。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列内のヌクレオシドは、ホスホジエステル結合又はホスホロチオエート結合によって連結されている。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列内のヌクレオシドは、ホスホジエステル結合によって連結されている。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列はヌクレオチド配列Ｃ－Ｇ－Ｇ（配列番号６０）を含み、ここで「－」はホスホジエステル結合を表す。
［０１２１］いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは、ＴＬＲ７選択的モチーフの３’末端に連結された第２のヌクレオチド配列をさらに含む。いくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列はウリジンヌクレオシドを含まない。いくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列は、第１のヌクレオチド配列の全部若しくは一部、及び／又はＴＬＲ７選択的モチーフの全部若しくは一部にハイブリダイズすることができるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列は、第１のヌクレオチド配列の全部若しくは一部、及び／又はＴＬＲ７選択的モチーフの全部若しくは一部にハイブリダイズすることができるヌクレオチド配列を含み、ハイブリダイズした配列はＧ：Ｕウォブル塩基対を形成する。いくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列は、ヌクレオチド配列Ｇ－Ｇ－Ｇ（配列番号６９）を含む。いくつかの実施態様では、ヌクレオチド配列Ｇ－Ｇ－Ｇ（配列番号６９）は、ＴＬＲ７選択的モチーフと塩基対形成することができる。いくつかの実施態様では、ヌクレオチド配列Ｇ－Ｇ－Ｇ（配列番号６９）は、ＴＬＲ７選択的モチーフにハイブリダイズし、Ｇ：Ｕウォブル塩基対を形成する。いくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列は、ホスホジエステル結合によってＴＬＲ７選択的モチーフに連結されている。いくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列は少なくとも３つのヌクレオシドを含む。いくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列は、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９４、９６、９７、９８、９９、１００、若しくはそれ以上のヌクレオシド、又は１００～１２５ヌクレオシド、１２５～１５０ヌクレオシド、１５０～１７５ヌクレオシド、１７５～２００ヌクレオシド、２００～２２５ヌクレオシド、２２５～２５０ヌクレオシド、２５０～２７５ヌクレオシド、若しくは２７５～３００ヌクレオシドのいずれかを含む。いくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列は１５個のヌクレオシドを含む。いくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列内のヌクレオシドは、ホスホジエステル結合又はホスホロチオエート結合によって連結されている。いくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列内のヌクレオシドは、ホスホジエステル結合によって連結されている。いくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列は、配列番号６１に対して少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は１００％の同一性を有し、且つ配列番号６９のヌクレオチド配列を含むヌクレオチド配列を含むヌクレオチド配列を含み、ここで、配列番号６９のヌクレオチド配列は、ＴＬＲ７選択的モチーフと塩基対形成することができる。いくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列は、配列番号６１のヌクレオチド配列を含む。
［０１２２］いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは、二本鎖ＲＮＡヘアピン構造をとることができる。いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは、Ｇ：Ｕウォブル塩基対を含む。
［０１２３］いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは配列番号２３のヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは、配列番号２３に対して少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は１００％の同一性を有し、且つ配列番号４２のＴＬＲ７選択的モチーフ及び配列番号６９のヌクレオチド配列を含むヌクレオチド配列を含み、ここで、配列番号６９のヌクレオチド配列は、ＴＬＲ７選択的モチーフと塩基対形成することができる。
［０１２４］いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは配列番号２４のヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは、配列番号２４に対して少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は１００％の同一性を有し、且つ配列番号４３のＴＬＲ７選択的モチーフ及び配列番号６９のヌクレオチド配列を含むヌクレオチド配列を含み、ここで、配列番号６９のヌクレオチド配列は、ＴＬＲ７選択的モチーフと塩基対形成することができる。
［０１２５］別の態様では、本明細書で提供されるのは、配列番号４２又は４３のヌクレオチド配列を含むＴＬＲ７選択的モチーフを含むＲＮＡリガンドである。いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは、ＴＬＲ７選択的モチーフの５’末端に連結された第１のヌクレオチド配列をさらに含む。いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは、ＴＬＲ７選択的モチーフの３’末端に連結された第２のヌクレオチド配列をさらに含む。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列はウリジンヌクレオシドを含まない。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列は、ホスホジエステル結合によってＴＬＲ７選択的モチーフに連結されている。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列は少なくとも１つのヌクレオシドを含む。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列は少なくとも２つのヌクレオシドを含む。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９４、９６、９７、９８、９９、１００、若しくはそれ以上のヌクレオシド、又は１００～１２５ヌクレオシド、１２５～１５０ヌクレオシド、１５０～１７５ヌクレオシド、１７５～２００ヌクレオシド、２００～２２５ヌクレオシド、２２５～２５０ヌクレオシド、２５０～２７５ヌクレオシド、若しくは２７５～３００ヌクレオシドのいずれかを含む。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列は３つのヌクレオシドを含む。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列内のヌクレオシドは、ホスホジエステル結合又はホスホロチオエート結合によって連結されている。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列内のヌクレオシドは、ホスホジエステル結合によって連結されている。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列はヌクレオチド配列Ｃ－Ｇ－Ｇ（配列番号６０）を含み、ここで「－」はホスホジエステル結合を表す。いくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列はウリジンヌクレオシドを含まない。いくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列は、第１のヌクレオチド配列の全部若しくは一部、及び／又はＴＬＲ７選択的モチーフの全部若しくは一部にハイブリダイズすることができるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列は、第１のヌクレオチド配列の全部若しくは一部、及び／又はＴＬＲ７選択的モチーフの全部若しくは一部にハイブリダイズすることができるヌクレオチド配列を含み、ハイブリダイズした配列はＧ：Ｕウォブル塩基対を形成する。いくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列は、ヌクレオチド配列Ｇ－Ｇ－Ｇ（配列番号６９）を含む。いくつかの実施態様では、ヌクレオチド配列Ｇ－Ｇ－Ｇ（配列番号６９）は、ＴＬＲ７選択的モチーフと塩基対形成することができる。いくつかの実施態様では、ヌクレオチド配列Ｇ－Ｇ－Ｇ（配列番号６９）は、ＴＬＲ７選択的モチーフにハイブリダイズし、Ｇ：Ｕウォブル塩基対を形成する。いくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列は、ホスホジエステル結合によってＴＬＲ７選択的モチーフに連結されている。いくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列は少なくとも３つのヌクレオシドを含む。いくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列は、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９４、９６、９７、９８、９９、１００、若しくはそれ以上のヌクレオシド、又は１００～１２５ヌクレオシド、１２５～１５０ヌクレオシド、１５０～１７５ヌクレオシド、１７５～２００ヌクレオシド、２００～２２５ヌクレオシド、２２５～２５０ヌクレオシド、２５０～２７５ヌクレオシド、若しくは２７５～３００ヌクレオシドのいずれかを含む。いくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列は１５個のヌクレオシドを含む。いくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列内のヌクレオシドは、ホスホジエステル結合又はホスホロチオエート結合によって連結されている。いくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列内のヌクレオシドは、ホスホジエステル結合によって連結されている。いくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列は、配列番号６１に対して少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は１００％の同一性を有し、且つ配列番号６９のヌクレオチド配列を含むヌクレオチド配列を含むヌクレオチド配列を含み、ここで、配列番号６９のヌクレオチド配列は、ＴＬＲ７選択的モチーフと塩基対形成することができる。いくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列は、配列番号６１のヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは、二本鎖ＲＮＡヘアピン構造をとることができる。いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは、Ｇ：Ｕウォブル塩基対を含む。
別の態様では、本明細書で提供されるのは、配列番号２３に対して少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は１００％の同一性を有し、且つ配列番号４２のＴＬＲ７選択的モチーフ及び配列番号６９のヌクレオチド配列を含むヌクレオチド配列を含むＲＮＡリガンドであり、ここで、配列番号６９のヌクレオチド配列は、ＴＬＲ７選択的モチーフと塩基対形成することができる。いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは、二本鎖ＲＮＡヘアピン構造をとることができる。いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは、Ｇ：Ｕウォブル塩基対を含む。
別の態様では、本明細書で提供されるのは、配列番号２４に対して少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は１００％の同一性を有し、且つ配列番号４３のＴＬＲ７選択的モチーフ及び配列番号６９のヌクレオチド配列を含むヌクレオチド配列を含むＲＮＡリガンドであり、ここで、配列番号６９のヌクレオチド配列は、ＴＬＲ７選択的モチーフと塩基対形成することができる。いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは、二本鎖ＲＮＡヘアピン構造をとることができる。いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは、Ｇ：Ｕウォブル塩基対を含む。
［０１２８］別の態様では、本明細書で提供されるのは、配列番号２３又は２４のヌクレオチド配列を含むＲＮＡリガンドである。いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは、二本鎖ＲＮＡヘアピン構造をとることができる。いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは、Ｇ：Ｕウォブル塩基対を含む。
式ＩＶのＴＬＲ７選択的モチーフを含むＲＮＡリガンド
［０１２９］一態様では、本明細書で提供されるのは、式ＩＶを含む１つ又は複数のＴＬＲ７選択的モチーフを含むＲＮＡリガンドであり：
Ｃ１－Ｕ２－Ｕ３－Ｃ４（式ＩＶ）、
式中、Ｃ１及びＣ４はシチジンヌクレオシド、Ｕ２及びＵ３はウリジンヌクレオシドであり、「－」はホスホジエステル結合を表す。
［０１３０］いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは、式ＩＶを含む第１及び第２のＴＬＲ７選択的モチーフを含む。
［０１３１］いくつかの実施態様では、第１のＴＬＲ７選択的モチーフのＵ２は、リボースの２’位に修飾を含む。いくつかの実施態様では、修飾は、当技術分野で知られているか、又は本明細書に記載されているリボースの２’位における任意の修飾である。いくつかの実施態様では、修飾は、当技術分野で知られているか、又は本明細書に記載されているＲＮａｓｅ活性を阻害又はブロックする、リボースの２’位における任意の修飾である。いくつかの実施態様では、修飾は、２’Ｏ－メチル修飾、２’－フルオロ修飾、２’－アミノ修飾、２’－デオキシ修飾、又は２’－メトキシエトキシ修飾である。いくつかの実施態様では、修飾は２’Ｏ－メチル修飾である。いくつかの実施態様では、修飾は２’－フルオロ修飾である。いくつかの実施態様では、修飾は２’－アミノ修飾である。いくつかの実施態様では、修飾は２’－デオキシ修飾である。いくつかの実施態様では、修飾は２’－メトキシエトキシ修飾である。
［０１３２］いくつかの実施態様では、第２のＴＬＲ７選択的モチーフのＵ２は、リボースの２’位に修飾を含む。いくつかの実施態様では、修飾は、当技術分野で知られているか、又は本明細書に記載されているリボースの２’位における任意の修飾である。いくつかの実施態様では、修飾は、当技術分野で知られているか、又は本明細書に記載されているＲＮａｓｅ活性を阻害又はブロックする、リボースの２’位における任意の修飾である。いくつかの実施態様では、修飾は、２’Ｏ－メチル修飾、２’－フルオロ修飾、２’－アミノ修飾、２’－デオキシ修飾、又は２’－メトキシエトキシ修飾である。いくつかの実施態様では、修飾は２’Ｏ－メチル修飾である。いくつかの実施態様では、修飾は２’－フルオロ修飾である。いくつかの実施態様では、修飾は２’－アミノ修飾である。いくつかの実施態様では、修飾は２’－デオキシ修飾である。いくつかの実施態様では、修飾は２’－メトキシエトキシ修飾である。
［０１３３］いくつかの実施態様では、第１のＴＬＲ７選択的モチーフのＵ２は２’Ｏ－メチル修飾を含み、第２のＴＬＲ７選択的モチーフのＵ２は２’Ｏ－メチル修飾を含む。いくつかの実施態様では、第１のＴＬＲ７選択的モチーフのＵ２は２’Ｏ－メチル修飾を含み、第２のＴＬＲ７選択的モチーフのＵ２は２’－フルオロ修飾を含む。いくつかの実施態様では、第１のＴＬＲ７選択的モチーフのＵ２は２’Ｏ－メチル修飾を含み、第２のＴＬＲ７選択的モチーフのＵ２は２’－アミノ修飾を含む。いくつかの実施態様では、第１のＴＬＲ７選択的モチーフのＵ２は２’Ｏ－メチル修飾を含み、第２のＴＬＲ７選択的モチーフのＵ２は２’－デオキシ修飾を含む。いくつかの実施態様では、第１のＴＬＲ７選択的モチーフのＵ２は２’Ｏ－メチル修飾を含み、第２のＴＬＲ７選択的モチーフのＵ２は２’－メトキシエトキシ修飾を含む。いくつかの実施態様では、第１のＴＬＲ７選択的モチーフのＵ２は２’－フルオロ修飾を含み、第２のＴＬＲ７選択的モチーフのＵ２は２’Ｏ－メチル修飾を含む。いくつかの実施態様では、第１のＴＬＲ７選択的モチーフのＵ２は２’－フルオロ修飾を含み、第２のＴＬＲ７選択的モチーフのＵ２は２’－フルオロ修飾を含む。いくつかの実施態様では、第１のＴＬＲ７選択的モチーフのＵ２は２’－フルオロ修飾を含み、第２のＴＬＲ７選択的モチーフのＵ２は２’－アミノ修飾を含む。いくつかの実施態様では、第１のＴＬＲ７選択的モチーフのＵ２は２’－フルオロ修飾を含み、第２のＴＬＲ７選択的モチーフのＵ２は２’－デオキシ修飾を含む。いくつかの実施態様では、第１のＴＬＲ７選択的モチーフのＵ２は２’－フルオロ修飾を含み、第２のＴＬＲ７選択的モチーフのＵ２は２’－メトキシエトキシ修飾を含む。いくつかの実施態様では、第１のＴＬＲ７選択的モチーフのＵ２は２’－アミノ修飾を含み、第２のＴＬＲ７選択的モチーフのＵ２は２’Ｏ－メチル修飾を含む。いくつかの実施態様では、第１のＴＬＲ７選択的モチーフのＵ２は２’－アミノ修飾を含み、第２のＴＬＲ７選択的モチーフのＵ２は２’－フルオロ修飾を含む。いくつかの実施態様では、第１のＴＬＲ７選択的モチーフのＵ２は２’－アミノ修飾を含み、第２のＴＬＲ７選択的モチーフのＵ２は２’－アミノ修飾を含む。いくつかの実施態様では、第１のＴＬＲ７選択的モチーフのＵ２は２’－アミノ修飾を含み、第２のＴＬＲ７選択的モチーフのＵ２は２’－デオキシ修飾を含む。いくつかの実施態様では、第１のＴＬＲ７選択的モチーフのＵ２は２’－アミノ修飾を含み、第２のＴＬＲ７選択的モチーフのＵ２は２’－メトキシエトキシ修飾を含む。いくつかの実施態様では、第１のＴＬＲ７選択的モチーフのＵ２は２’－デオキシ修飾を含み、第２のＴＬＲ７選択的モチーフのＵ２は２’Ｏ－メチル修飾を含む。いくつかの実施態様では、第１のＴＬＲ７選択的モチーフのＵ２は２’－デオキシ修飾を含み、第２のＴＬＲ７選択的モチーフのＵ２は２’－フルオロ修飾を含む。いくつかの実施態様では、第１のＴＬＲ７選択的モチーフのＵ２は２’－デオキシ修飾を含み、第２のＴＬＲ７選択的モチーフのＵ２は２’－アミノ修飾を含む。いくつかの実施態様では、第１のＴＬＲ７選択的モチーフのＵ２は２’－デオキシ修飾を含み、第２のＴＬＲ７選択的モチーフのＵ２は２’－デオキシ修飾を含む。いくつかの実施態様では、第１のＴＬＲ７選択的モチーフのＵ２は２’－デオキシ修飾を含み、第２のＴＬＲ７選択的モチーフのＵ２は２’－メトキシエトキシ修飾を含む。いくつかの実施態様では、第１のＴＬＲ７選択的モチーフのＵ２は２’－メトキシエトキシ修飾を含み、第２のＴＬＲ７選択的モチーフのＵ２は２’Ｏ－メチル修飾を含む。いくつかの実施態様では、第１のＴＬＲ７選択的モチーフのＵ２は２’－メトキシエトキシ修飾を含み、第２のＴＬＲ７選択的モチーフのＵ２は２’－フルオロ修飾を含む。いくつかの実施態様では、第１のＴＬＲ７選択的モチーフのＵ２は２’－メトキシエトキシ修飾を含み、第２のＴＬＲ７選択的モチーフのＵ２は２’－アミノ修飾を含む。いくつかの実施態様では、第１のＴＬＲ７選択的モチーフのＵ２は２’－メトキシエトキシ修飾を含み、第２のＴＬＲ７選択的モチーフのＵ２は２’－デオキシ修飾を含む。いくつかの実施態様では、第１のＴＬＲ７選択的モチーフのＵ２は２’－メトキシエトキシ修飾を含み、第２のＴＬＲ７選択的モチーフのＵ２は２’－メトキシエトキシ修飾を含む。
［０１３４］いくつかの実施態様では、第１のＴＬＲ７選択的モチーフは、配列番号３６のヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施態様では、第２のＴＬＲ７選択的モチーフは、配列番号３６のヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施態様では、第１のＴＬＲ７選択的モチーフは、配列番号３７のヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施態様では、第２のＴＬＲ７選択的モチーフは、配列番号３７のヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施態様では、第１のＴＬＲ７選択的モチーフは配列番号３６のヌクレオチド配列を含み、第２のＴＬＲ７選択的モチーフは配列番号３７のヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施態様では、第１のＴＬＲ７選択的モチーフは配列番号３７のヌクレオチド配列を含み、第２のＴＬＲ７選択的モチーフは配列番号３６のヌクレオチド配列を含む。
［０１３５］いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは、ＴＬＲ７選択的モチーフの５’末端、ＴＬＲ７選択的モチーフの３’末端、又はその両方に隣接する１つ若しくは複数の追加のヌクレオチド配列をさらに含む。いくつかの実施態様では、追加のヌクレオチド配列はウリジンヌクレオシドを含まない。
［０１３６］いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは、第１のＴＬＲ７選択的モチーフの５’末端に連結された第１のヌクレオチド配列をさらに含む。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列は少なくとも１つのヌクレオシドを含む。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列は少なくとも２つのヌクレオシドを含む。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９４、９６、９７、９８、９９、１００、若しくはそれ以上のヌクレオシド、又は１００～１２５ヌクレオシド、１２５～１５０ヌクレオシド、１５０～１７５ヌクレオシド、１７５～２００ヌクレオシド、２００～２２５ヌクレオシド、２２５～２５０ヌクレオシド、２５０～２７５ヌクレオシド、若しくは２７５～３００ヌクレオシドのいずれかを含む。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列は５つのヌクレオシドを含む。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列はウリジンヌクレオシドを含まない。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列は、ホスホジエステル結合によって第１のＴＬＲ７選択的モチーフに連結されている。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列内のヌクレオシドは、ホスホジエステル結合又はホスホロチオエート結合によって連結されている。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列内のヌクレオシドは、ホスホジエステル結合によって連結されている。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列は、ヌクレオチド配列Ｃ－Ａ－Ｇ－Ａ－Ｃ（配列番号６７）、又は配列番号６７に対して少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％若しくは１００％の同一性を有するヌクレオチド配列を含み、ここで、「－」はホスホジエステル結合を表す。
［０１３７］いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは、第１のＴＬＲ７選択的モチーフの３’末端及び第２のＴＬＲ７選択的モチーフの５’末端に連結された第２のヌクレオチド配列をさらに含む。いくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列は少なくとも１つのヌクレオシドを含む。いくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列は少なくとも２つのヌクレオシドを含む。いくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９４、９６、９７、９８、９９、１００、若しくはそれ以上のヌクレオシド、又は１００～１２５ヌクレオシド、１２５～１５０ヌクレオシド、１５０～１７５ヌクレオシド、１７５～２００ヌクレオシド、２００～２２５ヌクレオシド、２２５～２５０ヌクレオシド、２５０～２７５ヌクレオシド、若しくは２７５～３００ヌクレオシドのいずれかを含む。いくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列は５つのヌクレオシドを含む。いくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列はウリジンヌクレオシドを含まない。いくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列は、ホスホジエステル結合によって第１及び／又は第２のＴＬＲ７選択的モチーフに連結されている。いくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列内のヌクレオシドは、ホスホジエステル結合又はホスホロチオエート結合によって連結されている。いくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列内のヌクレオシドは、ホスホジエステル結合によって連結されている。いくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列は、配列番号６７に対して少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％若しくは１００％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列は、配列番号６７のヌクレオチド配列を含む。
［０１３８］いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは、配列番号３３に対して少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％又は１００％の同一性を有し、且つ配列番号３６の第１のＴＬＲ７選択的モチーフ及び／又は配列番号３６の第２のＴＬＲ７選択的モチーフを含むヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは配列番号３３のヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは、配列番号３４に対して少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％又は１００％の同一性を有し、且つ配列番号３７の第１のＴＬＲ７選択的モチーフ及び／又は配列番号３７の第２のＴＬＲ７選択的モチーフを含むヌクレオチド配列を含む。
［０１３９］別の態様では、本明細書で提供されるのは、配列番号３６又は３７のヌクレオチド配列を含む第１のＴＬＲ７選択的モチーフを含むＲＮＡリガンドである。いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは、配列番号３６又は３７のヌクレオチド配列を含む第２のＴＬＲ７選択的モチーフをさらに含む。いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは、第１のＴＬＲ７選択的モチーフの５’末端に連結された第１のヌクレオチド配列をさらに含む。いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは、第１のＴＬＲ７選択的モチーフの３’末端及び第２のＴＬＲ７選択的モチーフの５’末端に連結された第２のヌクレオチド配列をさらに含む。いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは、配列番号３６のヌクレオチド配列を含む第１のＴＬＲ７選択的モチーフ及び配列番号３６のヌクレオチド配列を含む第２のＴＬＲ７選択的モチーフを含む。いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは、配列番号３６のヌクレオチド配列を含む第１のＴＬＲ７選択的モチーフ及び配列番号３７のヌクレオチド配列を含む第２のＴＬＲ７選択的モチーフを含む。いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは、配列番号３７のヌクレオチド配列を含む第１のＴＬＲ７選択的モチーフ及び配列番号３７のヌクレオチド配列を含む第２のＴＬＲ７選択的モチーフを含む。いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは、配列番号３７のヌクレオチド配列を含む第１のＴＬＲ７選択的モチーフ及び配列番号３６のヌクレオチド配列を含む第２のＴＬＲ７選択的モチーフを含む。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列は少なくとも１つのヌクレオシドを含む。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列は少なくとも２つのヌクレオシドを含む。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９４、９６、９７、９８、９９、１００、若しくはそれ以上のヌクレオシド、又は１００～１２５ヌクレオシド、１２５～１５０ヌクレオシド、１５０～１７５ヌクレオシド、１７５～２００ヌクレオシド、２００～２２５ヌクレオシド、２２５～２５０ヌクレオシド、２５０～２７５ヌクレオシド、若しくは２７５～３００ヌクレオシドのいずれかを含む。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列は５つのヌクレオシドを含む。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列はウリジンヌクレオシドを含まない。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列は、ホスホジエステル結合によって第１のＴＬＲ７選択的モチーフに連結されている。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列内のヌクレオシドは、ホスホジエステル結合又はホスホロチオエート結合によって連結されている。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列内のヌクレオシドは、ホスホジエステル結合によって連結されている。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列は、ヌクレオチド配列Ｃ－Ａ－Ｇ－Ａ－Ｃ（配列番号６７）、又は配列番号６７に対して少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％若しくは１００％の同一性を有するヌクレオチド配列を含み、ここで、「－」はホスホジエステル結合を表す。いくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列は少なくとも１つのヌクレオシドを含む。いくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列は少なくとも２つのヌクレオシドを含む。いくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９４、９６、９７、９８、９９、１００、若しくはそれ以上のヌクレオシド、又は１００～１２５ヌクレオシド、１２５～１５０ヌクレオシド、１５０～１７５ヌクレオシド、１７５～２００ヌクレオシド、２００～２２５ヌクレオシド、２２５～２５０ヌクレオシド、２５０～２７５ヌクレオシド、若しくは２７５～３００ヌクレオシドのいずれかを含む。いくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列は５つのヌクレオシドを含む。いくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列はウリジンヌクレオシドを含まない。いくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列は、ホスホジエステル結合によって第１及び／又は第２のＴＬＲ７選択的モチーフに連結されている。いくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列内のヌクレオシドは、ホスホジエステル結合又はホスホロチオエート結合によって連結されている。いくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列内のヌクレオシドは、ホスホジエステル結合によって連結されている。いくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列は、配列番号６７に対して少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％若しくは１００％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列は、配列番号６７のヌクレオチド配列を含む。
［０１４０］別の態様では、本明細書で提供されるのは、配列番号３３に対して少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％又は１００％の同一性を有し、且つ配列番号３６の第１及び第２のＴＬＲ７選択的モチーフを含むヌクレオチド配列を含むＲＮＡリガンドである。
［０１４１］別の態様では、本明細書で提供されるのは、配列番号３４に対して少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％又は１００％の同一性を有し、且つ配列番号３７の第１及び第２のＴＬＲ７選択的モチーフを含むヌクレオチド配列を含むＲＮＡリガンドである。
［０１４２］別の態様では、本明細書で提供されるのは、配列番号３３のヌクレオチド配列を含むＲＮＡリガンドである。別の態様では、本明細書で提供されるのは、配列番号３４のヌクレオチド配列を含むＲＮＡリガンドである。
式ＶのＴＬＲ７選択的モチーフを含むＲＮＡリガンド
［０１４３］一態様では、本明細書で提供されるのは、式Ｖを含む１つ又は複数のＴＬＲ７選択的モチーフを含むＲＮＡリガンドであり：
Ｕ１－Ｕ２－Ｃ３（式Ｖ）、
式中、Ｕ１及びＵ２はウリジンヌクレオシドであり、Ｃ３はシチジンヌクレオシドであり、「－」はホスホジエステル結合を表す。
［０１４４］いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは、式Ｖを含む第１のＴＬＲ７選択的モチーフと、式Ｖを含む１つ又は複数の追加のＴＬＲ７選択的モチーフとを含む。いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは、式Ｖを含む第１のＴＬＲ７選択的モチーフと、式Ｖを含む１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０又はそれ以上の追加のＴＬＲ７選択的モチーフとを含む。いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは、式Ｖを含む第１のＴＬＲ７選択的モチーフと、式Ｖを含む５つの追加のＴＬＲ７選択的モチーフとを含む。
［０１４５］いくつかの実施態様では、第１のＴＬＲ７選択的モチーフの３’末端は、第２のＴＬＲ７選択的モチーフの５’末端に連結されており；第２のＴＬＲ７選択的モチーフの３’は第３のＴＬＲ７選択的モチーフの５’末端に連結されており；第３のＴＬＲ７選択的モチーフの３’は第４のＴＬＲ７選択的モチーフの５’末端に連結されており；第４のＴＬＲ７選択的モチーフの３’は第５のＴＬＲ７選択的モチーフの５’末端に連結されており；第５のＴＬＲ７選択的モチーフの３’は第６のＴＬＲ７選択的モチーフの５’末端に連結されている。
［０１４６］いくつかの実施態様では、式Ｖを含む１つ又は複数のＴＬＲ７選択的モチーフのＵ１は、リボースの２’位に修飾を含む。いくつかの実施態様では、修飾は、当技術分野で知られているか、又は本明細書に記載されているリボースの２’位における任意の修飾である。いくつかの実施態様では、修飾は、当技術分野で知られているか、又は本明細書に記載されているＲＮａｓｅ活性を阻害又はブロックする、リボースの２’位における任意の修飾である。いくつかの実施態様では、修飾は、２’Ｏ－メチル修飾、２’－フルオロ修飾、２’－アミノ修飾、２’－デオキシ修飾、又は２’－メトキシエトキシ修飾である。いくつかの実施態様では、修飾は２’Ｏ－メチル修飾である。いくつかの実施態様では、修飾は２’－フルオロ修飾である。いくつかの実施態様では、修飾は２’－アミノ修飾である。いくつかの実施態様では、修飾は２’－デオキシ修飾である。いくつかの実施態様では、修飾は２’－メトキシエトキシ修飾である。いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンド内の式Ｖを含む各ＴＬＲ７選択的モチーフは、リボースの２’位に同じ修飾を含む。いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンド内の式Ｖを含む各ＴＬＲ７選択的モチーフは、本明細書に記載される、又は当技術分野で知られているリボースの２’位における修飾のいずれかを任意の組み合わせで含み得る。いくつかの実施態様では、第１のＴＬＲ７選択的モチーフのＵ１は、当技術分野で知られている、又は本明細書に記載されているリボースの２’位における任意の修飾を含む。いくつかの実施態様では、第１のＴＬＲ７選択的モチーフのＵ１は、２’Ｏ－メチル修飾、２’－フルオロ修飾、２’－アミノ修飾、２’－デオキシ修飾、又は２’－メトキシエトキシ修飾を含む。いくつかの実施態様では、第２のＴＬＲ７選択的モチーフ及びＲＮＡリガンド内の任意の１つ又は複数の追加のＴＬＲ７選択的モチーフのＵ１は、当技術分野で知られている、又は本明細書に記載されているリボースの２’位における任意の修飾を含む。いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンド内の第２のＴＬＲ７選択的モチーフ及び任意の１つ又は複数の追加のＴＬＲ７選択的モチーフのＵ１は、２’Ｏ－メチル修飾、２’－フルオロ修飾、２’－アミノ修飾、２’－デオキシ修飾、又は２’－メトキシエトキシ修飾を含む。
［０１４７］いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは、式Ｖを含む６つのＴＬＲ７選択的モチーフを含む。いくつかの実施態様では、第１のＴＬＲ７選択的モチーフのＵ１は、当技術分野で知られている、又は本明細書に記載されているリボースの２’位における任意の修飾を含む。いくつかの実施態様では、第１のＴＬＲ７選択的モチーフのＵ１は、２’Ｏ－メチル修飾、２’－フルオロ修飾、２’－アミノ修飾、２’－デオキシ修飾、又は２’－メトキシエトキシ修飾を含む。いくつかの実施態様では、第２のＴＬＲ７選択的モチーフのＵ１は、当技術分野で知られている、又は本明細書に記載されているリボースの２’位における任意の修飾を含む。いくつかの実施態様では、第２のＴＬＲ７選択的モチーフのＵ１は、２’Ｏ－メチル修飾、２’－フルオロ修飾、２’－アミノ修飾、２’－デオキシ修飾、又は２’－メトキシエトキシ修飾を含む。いくつかの実施態様では、第３のＴＬＲ７選択的モチーフのＵ１は、当技術分野で知られている、又は本明細書に記載されているリボースの２’位における任意の修飾を含む。いくつかの実施態様では、第３のＴＬＲ７選択的モチーフのＵ１は、２’Ｏ－メチル修飾、２’－フルオロ修飾、２’－アミノ修飾、２’－デオキシ修飾、又は２’－メトキシエトキシ修飾を含む。いくつかの実施態様では、第４のＴＬＲ７選択的モチーフのＵ１は、当技術分野で知られている、又は本明細書に記載されているリボースの２’位における任意の修飾を含む。いくつかの実施態様では、第４のＴＬＲ７選択的モチーフのＵ１は、２’Ｏ－メチル修飾、２’－フルオロ修飾、２’－アミノ修飾、２’－デオキシ修飾、又は２’－メトキシエトキシ修飾を含む。いくつかの実施態様では、第５のＴＬＲ７選択的モチーフのＵ１は、当技術分野で知られている、又は本明細書に記載されているリボースの２’位における任意の修飾を含む。いくつかの実施態様では、第５のＴＬＲ７選択的モチーフのＵ１は、２’Ｏ－メチル修飾、２’－フルオロ修飾、２’－アミノ修飾、２’－デオキシ修飾、又は２’－メトキシエトキシ修飾を含む。いくつかの実施態様では、第６のＴＬＲ７選択的モチーフのＵ１は、当技術分野で知られている、又は本明細書に記載されているリボースの２’位における任意の修飾を含む。いくつかの実施態様では、第６のＴＬＲ７選択的モチーフのＵ１は、２’Ｏ－メチル修飾、２’－フルオロ修飾、２’－アミノ修飾、２’－デオキシ修飾、又は２’－メトキシエトキシ修飾を含む。
［０１４８］いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは、式Ｖを含む６つのＴＬＲ７選択的モチーフを含む。いくつかの実施態様では、第１のＴＬＲ７選択的モチーフのＵ１は２’Ｏ－メチル修飾を含み、第２のＴＬＲ７選択的モチーフのＵ１は２’Ｏ－メチル修飾を含み、第３のＴＬＲ７選択的モチーフのＵ１は２’Ｏ－メチル修飾を含み、第４のＴＬＲ７選択的モチーフのＵ１は２’Ｏ－メチル修飾を含み、第５のＴＬＲ７選択的モチーフのＵ１は２’Ｏ－メチル修飾を含み、第６のＴＬＲ７選択的モチーフのＵ１は２’Ｏ－メチル修飾を含む。
［０１４９］いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは、式Ｖを含む６つのＴＬＲ７選択的モチーフを含む。いくつかの実施態様では、第１のＴＬＲ７選択的モチーフのＵ１は２’－フルオロ修飾を含み、第２のＴＬＲ７選択的モチーフのＵ１は２’－フルオロ修飾を含み、第３のＴＬＲ７選択的モチーフのＵ１は２’－フルオロ修飾を含み、第４のＴＬＲ７選択的モチーフのＵ１は２’－フルオロ修飾を含み、第５のＴＬＲ７選択的モチーフのＵ１は２’－フルオロ修飾を含み、第６のＴＬＲ７選択的モチーフのＵ１は２’－フルオロ修飾を含む。
［０１５０］いくつかの実施態様では、第１のＴＬＲ７選択的モチーフは、配列番号４０のヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施態様では、１つ若しくは複数の追加のＴＬＲ７選択的モチーフ（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０若しくはそれ以上の追加のＴＬＲ７選択的モチーフのいずれか）のうちの少なくとも１つ、又は１つ若しくは複数の追加のＴＬＲ７選択的モチーフのすべて（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０若しくはそれ以上の追加のＴＬＲ７選択的モチーフのいずれか）は、配列番号４０のヌクレオチド配列を含む。
［０１５１］いくつかの実施態様では、第１のＴＬＲ７選択的モチーフは、配列番号４１のヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施態様では、１つ若しくは複数の追加のＴＬＲ７選択的モチーフ（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０若しくはそれ以上の追加のＴＬＲ７選択的モチーフのいずれか）のうちの少なくとも１つ、又は１つ若しくは複数の追加のＴＬＲ７選択的モチーフのすべて（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０若しくはそれ以上の追加のＴＬＲ７選択的モチーフのいずれか）は、配列番号４１のヌクレオチド配列を含む。
［０１５２］いくつかの実施態様では、第１のＴＬＲ７選択的モチーフは、配列番号４０のヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは、配列番号４０及び配列番号４１のヌクレオチド配列の任意の組み合わせを含む１つ又は複数の追加のＴＬＲ７選択的モチーフ（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０又はそれ以上の追加のＴＬＲ７選択的モチーフのいずれか）を含む。
［０１５３］いくつかの実施態様では、第１のＴＬＲ７選択的モチーフは、配列番号４１のヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは、配列番号４０及び配列番号４１のヌクレオチド配列の任意の組み合わせを含む１つ又は複数の追加のＴＬＲ７選択的モチーフ（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０又はそれ以上の追加のＴＬＲ７選択的モチーフのいずれか）を含む。
［０１５４］いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは、１つ若しくは複数のＴＬＲ７選択的モチーフの５’末端、１つ若しくは複数ＴＬＲ７選択的モチーフの３’末端、又はその両方に隣接する１つ若しくは複数の追加のヌクレオチド配列をさらに含む。いくつかの実施態様では、追加のヌクレオチド配列はウリジンヌクレオシドを含まない。
［０１５５］いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは、第１のＴＬＲ７選択的モチーフの５’末端に連結された第１のヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列は少なくとも１つのヌクレオシドを含む。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列は少なくとも２つのヌクレオシドを含む。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９４、９６、９７、９８、９９、１００、若しくはそれ以上のヌクレオシド、又は１００～１２５ヌクレオシド、１２５～１５０ヌクレオシド、１５０～１７５ヌクレオシド、１７５～２００ヌクレオシド、２００～２２５ヌクレオシド、２２５～２５０ヌクレオシド、２５０～２７５ヌクレオシド、若しくは２７５～３００ヌクレオシドのいずれかを含む。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列は２つのヌクレオシドを含む。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列はウリジンヌクレオシドを含まない。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列は、ホスホジエステル結合によって第１のＴＬＲ７選択的モチーフに連結されている。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列内のヌクレオシドは、ホスホジエステル結合又はホスホロチオエート結合によって連結されている。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列内のヌクレオシドは、ホスホジエステル結合によって連結されている。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列は２つのシチジンヌクレオシドを含む。
［０１５６］いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは、配列番号２９に対して少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％又は１００％の同一性を有し、且つ配列番号４０の第１のＴＬＲ７選択的モチーフ及び配列番号４０の５つの追加のＴＬＲ７選択的モチーフを含むヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは配列番号２９のヌクレオチド配列を含む。
［０１５７］いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは、配列番号３０に対して少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％又は１００％の同一性を有し、且つ配列番号４１の第１のＴＬＲ７選択的モチーフ及び配列番号４１の５つの追加のＴＬＲ７選択的モチーフを含むヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは配列番号３０のヌクレオチド配列を含む。
［０１５８］別の態様では、本明細書で提供されるのは、配列番号４０又は４１のヌクレオチド配列を含む第１のＴＬＲ７選択的モチーフを含むＲＮＡリガンドである。いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは、１つ又は複数の追加のＴＬＲ７選択的モチーフを含み、ここで１つ若しくは複数の追加のＴＬＲ７選択的モチーフのうちの少なくとも１つ、又は１つ若しくは複数の追加のＴＬＲ７選択的モチーフのすべては、配列番号４０又は４１のヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは、第１のＴＬＲ７選択的モチーフの５’末端に連結された第１のヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは、第１のＴＬＲ７選択的モチーフ及び１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０又はそれ以上の追加のＴＬＲ７選択的モチーフを含む。いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは、第１のＴＬＲ７選択的モチーフ及び５つの追加のＴＬＲ７選択的モチーフを含む。いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンド内のＴＬＲ７選択的モチーフは、配列番号４０及び配列番号４１のヌクレオチド配列の任意の組み合わせを含む。いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンド内のＴＬＲ７選択的モチーフは、配列番号４０のヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンド内のＴＬＲ７選択的モチーフは、配列番号４１のヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列は少なくとも１つのヌクレオシドを含む。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列は少なくとも２つのヌクレオシドを含む。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９４、９６、９７、９８、９９、１００、若しくはそれ以上のヌクレオシド、又は１００～１２５ヌクレオシド、１２５～１５０ヌクレオシド、１５０～１７５ヌクレオシド、１７５～２００ヌクレオシド、２００～２２５ヌクレオシド、２２５～２５０ヌクレオシド、２５０～２７５ヌクレオシド、若しくは２７５～３００ヌクレオシドのいずれかを含む。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列は２つのヌクレオシドを含む。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列はウリジンヌクレオシドを含まない。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列は、ホスホジエステル結合によって第１のＴＬＲ７選択的モチーフに連結されている。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列内のヌクレオシドは、ホスホジエステル結合又はホスホロチオエート結合によって連結されている。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列内のヌクレオシドは、ホスホジエステル結合によって連結されている。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列は２つのシチジンヌクレオシドを含む。
［０１５９］別の態様では、本明細書で提供されるのは、配列番号２９に対して少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％又は１００％の同一性を有し、且つ配列番号４０の６つのＴＬＲ７選択的モチーフを含むヌクレオチド配列を含むＲＮＡリガンドである。
［０１６０］別の態様では、本明細書で提供されるのは、配列番号３０に対して少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％又は１００％の同一性を有し、且つ配列番号４１の６つのＴＬＲ７選択的モチーフを含むヌクレオチド配列を含むＲＮＡリガンドである。
［０１６１］別の態様では、本明細書で提供されるのは、配列番号２９又は３０のヌクレオチド配列を含むＲＮＡリガンドである。いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは配列番号２９のヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは配列番号３０のヌクレオチド配列を含む。
式ＶＩのＴＬＲ７選択的モチーフを含むＲＮＡリガンド
［０１６２］一態様では、本明細書で提供されるのは、式ＶＩを含むＴＬＲ７選択的モチーフを含むＲＮＡリガンドであり：
Ｃ１－Ｕ２－Ｕ３ ＊Ｕ４－Ｕ５ ＊Ｃ６（式ＶＩ）、
式中、Ｃ１及びＣ６はシチジンヌクレオシド、Ｕ２、Ｕ３、Ｕ４及びＵ５はウリジンヌクレオシドであり、「＊」はホスホロチオエート結合を表し、「－」はホスホジエステル結合を表す。
［０１６３］いくつかの実施態様では、Ｕ２はリボースの２’位に修飾を含む。いくつかの実施態様では、修飾は、当技術分野で知られているか、又は本明細書に記載されているリボースの２’位における任意の修飾である。いくつかの実施態様では、修飾は、当技術分野で知られているか、又は本明細書に記載されているＲＮａｓｅ活性を阻害又はブロックする、リボースの２’位における任意の修飾である。いくつかの実施態様では、修飾は、２’Ｏ－メチル修飾、２’－フルオロ修飾、２’－アミノ修飾、２’－デオキシ修飾、又は２’－メトキシエトキシ修飾である。いくつかの実施態様では、修飾は２’Ｏ－メチル修飾である。いくつかの実施態様では、修飾は２’－フルオロ修飾である。いくつかの実施態様では、修飾は２’－アミノ修飾である。いくつかの実施態様では、修飾は２’－デオキシ修飾である。いくつかの実施態様では、修飾は２’メトキシエトキシ修飾である。
［０１６４］いくつかの実施態様では、Ｕ４はリボースの２’位に修飾を含む。いくつかの実施態様では、修飾は、当技術分野で知られているか、又は本明細書に記載されているリボースの２’位における任意の修飾である。いくつかの実施態様では、修飾は、当技術分野で知られているか、又は本明細書に記載されているＲＮａｓｅ活性を阻害又はブロックする、リボースの２’位における任意の修飾である。いくつかの実施態様では、修飾は、２’Ｏ－メチル修飾、２’－フルオロ修飾、２’－アミノ修飾、２’－デオキシ修飾、又は２’－メトキシエトキシ修飾である。いくつかの実施態様では、修飾は２’Ｏ－メチル修飾である。いくつかの実施態様では、修飾は２’－フルオロ修飾である。いくつかの実施態様では、修飾は２’－アミノ修飾である。いくつかの実施態様では、修飾は２’－デオキシ修飾である。いくつかの実施態様では、修飾は２’メトキシエトキシ修飾である。
［０１６５］いくつかの実施態様では、Ｕ２のリボース修飾は２’Ｏ－メチル修飾であり、Ｕ４のリボース修飾は２’Ｏ－メチル修飾である。いくつかの実施態様では、Ｕ２のリボース修飾は２’Ｏ－メチル修飾であり、Ｕ４のリボース修飾は２’－フルオロ修飾である。いくつかの実施態様では、Ｕ２のリボース修飾は２’Ｏ－メチル修飾であり、Ｕ４のリボース修飾は２’－アミノ修飾である。いくつかの実施態様では、Ｕ２のリボース修飾は２’Ｏ－メチル修飾であり、Ｕ４のリボース修飾は２’－デオキシ修飾である。いくつかの実施態様では、Ｕ２のリボース修飾は２’Ｏ－メチル修飾であり、Ｕ４のリボース修飾は２’－メトキシエトキシ修飾である。いくつかの実施態様では、Ｕ２のリボース修飾は２’－フルオロ修飾であり、Ｕ４のリボース修飾は２’Ｏ－メチル修飾である。いくつかの実施態様では、Ｕ２のリボース修飾は２’－フルオロ修飾であり、Ｕ４のリボース修飾は２’－フルオロ修飾である。いくつかの実施態様では、Ｕ２のリボース修飾は２’Ｏ－フルオロ修飾であり、Ｕ４のリボース修飾は２’－アミノ修飾である。いくつかの実施態様では、Ｕ２のリボース修飾は２’－フルオロ修飾であり、Ｕ４のリボース修飾は２’－デオキシ修飾である。いくつかの実施態様では、Ｕ２のリボース修飾は２’－フルオロ修飾であり、Ｕ４のリボース修飾は２’－メトキシエトキシ修飾である。いくつかの実施態様では、Ｕ２のリボース修飾は２’－アミノ修飾であり、Ｕ４のリボース修飾は２’Ｏ－メチル修飾である。いくつかの実施態様では、Ｕ２のリボース修飾は２’－アミノ修飾であり、Ｕ４のリボース修飾は２’－フルオロ修飾である。いくつかの実施態様では、Ｕ２のリボース修飾は２’－アミノ修飾であり、Ｕ４のリボース修飾は２’－アミノ修飾である。いくつかの実施態様では、Ｕ２のリボース修飾は２’－アミノ修飾であり、Ｕ４のリボース修飾は２’－デオキシ修飾である。いくつかの実施態様では、Ｕ２のリボース修飾は２’－アミノ修飾であり、Ｕ４のリボース修飾は２’－メトキシエトキシ修飾である。いくつかの実施態様では、Ｕ２のリボース修飾は２’－デオキシ修飾であり、Ｕ４のリボース修飾は２’Ｏ－メチル修飾である。いくつかの実施態様では、Ｕ２のリボース修飾は２’－デオキシ修飾であり、Ｕ４のリボース修飾は２’－フルオロ修飾である。いくつかの実施態様では、Ｕ２のリボース修飾は２’－デオキシ修飾であり、Ｕ４のリボース修飾は２’－アミノ修飾である。いくつかの実施態様では、Ｕ２のリボース修飾は２’－デオキシ修飾であり、Ｕ４のリボース修飾は２’－デオキシ修飾である。いくつかの実施態様では、Ｕ２のリボース修飾は２’－デオキシ修飾であり、Ｕ４のリボース修飾は２’－メトキシエトキシ修飾である。いくつかの実施態様では、Ｕ２のリボース修飾は２’－メトキシエトキシ修飾であり、Ｕ４のリボース修飾は２’Ｏ－メチル修飾である。いくつかの実施態様では、Ｕ２のリボース修飾は２’－メトキシエトキシ修飾であり、Ｕ４のリボース修飾は２’－フルオロ修飾である。いくつかの実施態様では、Ｕ２のリボース修飾は２’－メトキシエトキシ修飾であり、Ｕ４のリボース修飾は２’－アミノ修飾である。いくつかの実施態様では、Ｕ２のリボース修飾は２’－メトキシエトキシ修飾であり、Ｕ４のリボース修飾は２’－デオキシ修飾である。いくつかの実施態様では、Ｕ２のリボース修飾は２’－メトキシエトキシ修飾であり、Ｕ４のリボース修飾は２’－メトキシエトキシ修飾である。
［０１６６］いくつかの実施態様では、ＴＬＲ７選択的モチーフは、配列番号４８のヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施態様では、ＴＬＲ７選択的モチーフは、配列番号４９のヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施態様では、ＴＬＲ７選択的モチーフは、配列番号５０のヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施態様では、ＴＬＲ７選択的モチーフは、配列番号５１のヌクレオチド配列を含む。
［０１６７］いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは、ＴＬＲ７選択的モチーフの５’末端、ＴＬＲ７選択的モチーフの３’末端、又はその両方に隣接する追加のヌクレオチド配列をさらに含む。いくつかの実施態様では、追加のヌクレオチド配列はウリジンヌクレオシドを含まない。
［０１６８］いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは、ＴＬＲ７選択的モチーフの５’末端に連結された第１のヌクレオチド配列をさらに含む。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列は少なくとも１つのヌクレオシドを含む。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列は少なくとも２つのヌクレオシドを含む。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列のヌクレオシドは、ホスホジエステル結合又はホスホロチオエート結合によって連結されている。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列のヌクレオシドは、ホスホジエステル結合によって連結されている。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列はウリジンヌクレオシドを含まない。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９４、９６、９７、９８、９９、１００、若しくはそれ以上のヌクレオシド、又は１００～１２５ヌクレオシド、１２５～１５０ヌクレオシド、１５０～１７５ヌクレオシド、１７５～２００ヌクレオシド、２００～２２５ヌクレオシド、２２５～２５０ヌクレオシド、２５０～２７５ヌクレオシド、若しくは２７５～３００ヌクレオシドのいずれかを含む。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列は８つのヌクレオシドを含む。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列は、配列番号６８に対して少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％若しくは１００％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列は、配列番号６８のヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列は、ホスホジエステル結合又はホスホロチオエート結合によってＴＬＲ７選択的モチーフの５’末端に連結されている。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列はホスホジエステル結合によってＴＬＲ７選択的モチーフの５’末端に連結されている。
［０１６９］いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは、ＴＬＲ７選択的モチーフの３’末端に連結された第２のヌクレオチド配列をさらに含む。いくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列は少なくとも１つのヌクレオシドを含む。いくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列は少なくとも２つのヌクレオシドを含む。いくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列のヌクレオシドは、ホスホジエステル結合又はホスホロチオエート結合によって連結されている。いくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列のヌクレオシドは、ホスホジエステル結合によって連結されている。いくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９４、９６、９７、９８、９９、１００、若しくはそれ以上のヌクレオシド、又は１００～１２５ヌクレオシド、１２５～１５０ヌクレオシド、１５０～１７５ヌクレオシド、１７５～２００ヌクレオシド、２００～２２５ヌクレオシド、２２５～２５０ヌクレオシド、２５０～２７５ヌクレオシド、若しくは２７５～３００ヌクレオシドのいずれかを含む。いくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列は２つのヌクレオシドを含む。いくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列はウリジンヌクレオシドを含まない。いくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列は２つのシチジンヌクレオシドを含む。いくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列は、ホスホジエステル結合又はホスホロチオエート結合によってＴＬＲ７選択的モチーフの３’末端に連結されている。いくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列は、ホスホジエステル結合によってＴＬＲ７選択的モチーフの３’末端に連結されている。
［０１７０］いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは、配列番号１７に対して少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％又は１００％の同一性を有し、且つ配列番号４８のＴＬＲ７選択的モチーフを含むヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは配列番号１７のヌクレオチド配列を含む。
［０１７１］いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは、配列番号１８に対して少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％又は１００％の同一性を有し、且つ配列番号４９のＴＬＲ７選択的モチーフを含むヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは配列番号１８のヌクレオチド配列を含む。
［０１７２］いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは、配列番号１９に対して少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％又は１００％の同一性を有し、且つ配列番号５０のＴＬＲ７選択的モチーフを含むヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは配列番号１９のヌクレオチド配列を含む。
［０１７３］いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは、配列番号２０に対して少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％又は１００％の同一性を有し、且つ配列番号５１のＴＬＲ７選択的モチーフを含むヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは配列番号２０のヌクレオチド配列を含む。
［０１７４］別の態様では、本明細書で提供されるのは、配列番号４８、４９、５０、及び５１のヌクレオチド配列を含むＴＬＲ７選択的モチーフを含むＲＮＡリガンドである。いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは、ＴＬＲ７選択的モチーフの５’末端に連結された第１のヌクレオチド配列をさらに含む。いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは、ＴＬＲ７選択的モチーフの３’末端に連結された第２のヌクレオチド配列をさらに含む。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列は少なくとも１つのヌクレオシドを含む。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列は少なくとも２つのヌクレオシドを含む。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列のヌクレオシドは、ホスホジエステル結合又はホスホロチオエート結合によって連結されている。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列のヌクレオシドは、ホスホジエステル結合によって連結されている。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列はウリジンヌクレオシドを含まない。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９４、９６、９７、９８、９９、１００、若しくはそれ以上のヌクレオシド、又は１００～１２５ヌクレオシド、１２５～１５０ヌクレオシド、１５０～１７５ヌクレオシド、１７５～２００ヌクレオシド、２００～２２５ヌクレオシド、２２５～２５０ヌクレオシド、２５０～２７５ヌクレオシド、若しくは２７５～３００ヌクレオシドのいずれかを含む。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列は８つのヌクレオシドを含む。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列は、配列番号６８に対して少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％若しくは１００％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列は、配列番号６８のヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列は、ホスホジエステル結合又はホスホロチオエート結合によってＴＬＲ７選択的モチーフの５’末端に連結されている。いくつかの実施態様では、第１のヌクレオチド配列はホスホジエステル結合によってＴＬＲ７選択的モチーフの５’末端に連結されている。いくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列は少なくとも１つのヌクレオシドを含む。いくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列は少なくとも２つのヌクレオシドを含む。いくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列のヌクレオシドは、ホスホジエステル結合又はホスホロチオエート結合によって連結されている。いくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列のヌクレオシドは、ホスホジエステル結合によって連結されている。いくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９４、９６、９７、９８、９９、１００、若しくはそれ以上のヌクレオシド、又は１００～１２５ヌクレオシド、１２５～１５０ヌクレオシド、１５０～１７５ヌクレオシド、１７５～２００ヌクレオシド、２００～２２５ヌクレオシド、２２５～２５０ヌクレオシド、２５０～２７５ヌクレオシド、若しくは２７５～３００ヌクレオシドのいずれかを含む。いくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列は２つのヌクレオシドを含む。いくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列はウリジンヌクレオシドを含まない。いくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列は２つのシチジンヌクレオシドを含む。いくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列は、ホスホジエステル結合又はホスホロチオエート結合によってＴＬＲ７選択的モチーフの３’末端に連結されている。いくつかの実施態様では、第２のヌクレオチド配列は、ホスホジエステル結合によってＴＬＲ７選択的モチーフの３’末端に連結されている。
［０１７５］別の態様では、本明細書で提供されるのは、配列番号１７に対して少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％又は１００％の同一性を有し、且つ配列番号４８のＴＬＲ７選択的モチーフを含むヌクレオチド配列を含むＲＮＡリガンドである。いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは配列番号１７のヌクレオチド配列を含む。
［０１７６］別の態様では、本明細書で提供されるのは、配列番号１８に対して少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％又は１００％の同一性を有し、且つ配列番号４９のＴＬＲ７選択的モチーフを含むヌクレオチド配列を含むＲＮＡリガンドである。いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは配列番号１８のヌクレオチド配列を含む。
［０１７７］別の態様では、本明細書で提供されるのは、配列番号１９に対して少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％又は１００％の同一性を有し、且つ配列番号５０のＴＬＲ７選択的モチーフを含むヌクレオチド配列を含むＲＮＡリガンドである。いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは配列番号１９のヌクレオチド配列を含む。
［０１７８］別の態様では、本明細書で提供されるのは、配列番号２０に対して少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％又は１００％の同一性を有し、且つ配列番号５１のＴＬＲ７選択的モチーフを含むヌクレオチド配列を含むＲＮＡリガンドである。いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは配列番号２０のヌクレオチド配列を含む。
ＲＮＡ修飾
［０１７９］いくつかの態様では、本明細書で提供されるのは、少なくとも１つのヌクレオチドの１つ又は複数の修飾を含むＴＬＲ７選択的モチーフを含むＲＮＡリガンドである。１つ又は複数のヌクレオチド修飾は、修飾された塩基、修飾された糖、及び／又は修飾されたリン酸であり得る。いくつかの実施態様では、１つ又は複数のヌクレオチド修飾は、リン酸修飾された結合であり得る。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の修飾は、ＲＮａｓｅ活性、例えば、エンドリボヌクレアーゼ又はエキソリボヌクレアーゼ活性を妨害する。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の修飾は、ＲＮａｓｅ活性又はＲＮａｓｅのＲＮＡリガンドへの結合を阻害又はブロックする。
核酸塩基修飾
［０１８０］いくつかの実施態様では、本開示のＲＮＡリガンドは、少なくとも１つの修飾塩基を含むＴＬＲ７選択的モチーフを含む。
［０１８１］いくつかの実施態様では、修飾塩基は修飾プリン又は修飾ピリミジンである。いくつかの実施態様では、修飾塩基は、２―アミノアデノシン、２，６－ジアミノプリン、イノシン、ピリジン－４－オン、ピリジン－２－オン、フェニル、シュードウラシル、２，４，６－トリメトキシベンゼン、３－メチルウラシル、ジヒドロウリジン、ナフチル、アミノフェニル、５－アルキルシチジン（例えば、５－メチルシチジン）、５－アルキルウリジン（例えば、リボチミジン）、５－ハロウリジン（例えば、５－ブロモウリジン）、６－アザピリミジン、６－アルキルピリミジン（例えば、６－メチルウリジン）、プロピン、キューソシン（ｑｕｅｓｏｓｉｎｅ）、２－チオウリジン、４－チオウリジン、ウィブトシン、ウィブトキソシン、４－アセチルシチジン、５－（カルボキシヒドロキシメチル）ウリジン、５’－カルボキシメチルアミノメチル－２－チオウリジン、５－カルボキシメチルアミノメチルウリジン、β－Ｄ－ガラクトシルキューオシン、１－メチルアデノシン、１－メチルイノシン、２，２－ジメチルグアノシン、３－メチルシチジン、２－メチルアデノシン、２－メチルグアノシン、Ｎ６－メチルアデノシン、７－メチルグアノシン、５－メトキシアミノメチル－２－チオウリジン、５－メチルアミノメチルウリジン、５－メチルカルボニルメチルウリジン、５－メチルオキシウリジン、５－メチル－２－チオウリジン、２－メチルチオ－Ｎ６－イソペンテニルアデノシン、β－Ｄ－マンノシルキューオシン、ウリジン－５－オキシ酢酸、及び２－チオシチジンから選択される。
［０１８２］いくつかの実施態様では、本開示のＲＮＡリガンドは、少なくとも１つの脱塩基ヌクレオチドを含むＴＬＲ７選択的モチーフを含む。いくつかの実施態様では、脱塩基ヌクレオチドは、１’位に塩基以外の化学基、例えば、３’，３’結合又は５’，５’結合デオキシ脱塩基リボース誘導体を含む。
糖部分の修飾
［０１８３］いくつかの実施態様では、本開示のＲＮＡリガンドは、修飾された糖部分を有する少なくとも１つのヌクレオチドを含むＴＬＲ７選択的モチーフを含む。いくつかの実施態様では、修飾糖部分は修飾リボース部分である。
［０１８４］いくつかの実施態様では、本開示のＲＮＡリガンドは、当技術分野で一般に知られているリボースの類似形態、例えば、限定されないが、炭素環式糖類似体、α－アノマー糖、アラビノース、キシロース又はリキソースなどのエピマー糖、ピラノース糖、フラノース糖、セドヘプツロース、非環式類似体、及びメチルリボシドなどの塩基性ヌクレオシド類似体を含み得る。
［０１８５］いくつかの実施態様では、修飾リボース部分は２’位に修飾を含む。いくつかの実施態様では、リボースの２’－ＯＨは、別の部分、例えば、アルキル、置換アルキル、アルカリル－、アリールアルキル－、－Ｆ、－Ｃｌ、－Ｂｒ、－ＣＮ、－ＣＦ３、－ＯＣＦ３、－ＯＣＮ、－Ｏ－アルキル、－Ｓ－アルキル、ＨＳ－アルキル－Ｏ、－Ｏ－アルケニル、－Ｓ－アルケニル、－Ｎ－アルケニル、－ＳＯ－アルキル、－アルキル－ＯＳＨ、－アルキル－ＯＨ、－Ｏ－アルキル－ＯＨ、－Ｏ－アルキル－ＳＨ、－Ｓ－アルキル－ＯＨ、－Ｓ－アルキル－ＳＨ、－アルキル－Ｓ－アルキル、－アルキル－Ｏ－アルキル、－ＯＮＯ２、－ＮＯ２、－Ｎ３、－ＮＨ２、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ－、アミノアルキル－、アミノアルコキシ、アミノ酸、アミノアシル－、－ＯＮＨ２、－Ｏ－アミノアルキル、－Ｏ－アミノ酸、－Ｏ－アミノアシル、ヘテロシクロアルキル－、ヘテロシクロアルカリル－、アミノアルキルアミノ－、ポリアルアルキルアミノ－、置換シリル－、メトキシエチル－（ＭＯＥ）、アルケニル又はアルキニルなどで置換されている。他の例示的な２’リボース修飾には、Ｃ１～Ｃｉ０低級アルキル、置換低級アラルキル、Ｏ－アルカリル又はＯ－アラルキル、ＳＨ１、ＳＣＨ３、ＳＯＣＨ３、ＳＯ２ＣＨ３、ポリアルキルアミノ、置換シリル、レポーター基、又はインターカレーターが含まれる。いくつかの実施態様では、リボースの２’位の修飾は、２’Ｏ－メチル修飾、２’－Ｏ－アリル修飾、２’－アジド－リボース修飾、２’－フルオロ修飾、２’－アミノ修飾、２’－デオキシ修飾、又は２’－メトキシエトキシ修飾である。いくつかの実施態様では、リボースの２’位の修飾は、２’Ｏ－メチル修飾、２’－フルオロ修飾、２’－アミノ修飾、２’－デオキシ修飾、又は２’－メトキシエトキシ修飾である。いくつかの実施態様では、リボースの２’位の修飾は、２’Ｏ－メチル修飾又は２’－フルオロ修飾である。
リン酸塩及び結合修飾
［０１８６］いくつかの実施態様では、１つ又は複数のヌクレオチド修飾は、リン酸修飾を含む。
［０１８７］いくつかの実施態様では、リン酸修飾は修飾されたホスホジエステル結合修飾である。例えば、１つ又は複数のホスホジエステル結合は、限定されないが、Ｐ（Ｏ）Ｓ（「チオエート」）、Ｐ（Ｓ）Ｓ（「ジチオエート」）、（Ｏ）ＮＲ２（「アミデート」）、Ｐ（Ｏ）Ｒ、Ｐ（Ｏ）ＯＲ’、ＣＯ又はＣＨ２（「ホルムアセタール」）などの代替の結合基によって置き換えられてもよく、ここで、各Ｒ又はＲ’は、独立して、Ｈであるか、又はエーテル（－Ｏ－）結合、アリール、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、又はアラルジルを含んでいてもよい置換若しくは非置換アルキル（１～２０個のＣ）である。他の例示的なリン酸修飾としては、メチルホスホネート、ホスホロチオエート、ホスホアミデート、カルバメート、ホスホルアミデート、ホスホトリエステル、又はホスホロジチオエートが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施態様では、ヌクレオチド修飾はホスホロチオエート結合修飾である。
［０１８８］いくつかの実施態様では、リン酸修飾は、３’末端ヌクレオチド間ホスホジエステル結合修飾、例えば、アルキル若しくはアリールホスホトリエステル、アルキル若しくはアリールホスホネート、ホスホン酸水素、ホスホルアミデート、及び／又はホスホロセレネート結合修飾である。いくつかの実施態様では、３’末端ヌクレオチド間ホスホジエステル結合修飾はホスホルアミデート修飾である。
［０１８９］本開示のＲＮＡリガンドにおけるすべての結合が同一である必要はない。例えば、本開示のＲＮＡリガンドは、ホスホジエステル、メチルホスホネート、ホスホロチオエート、ホスホアミデート、カルバメート、ホスホロアミデート、ホスホトリエステル、又はホスホロジチオエート結合の任意の組み合わせを含み得る。いくつかの実施態様では、本開示のＲＮＡリガンドは、ホスホジエステル結合とホスホロチオエート結合の任意の組み合わせを含む。いくつかの実施態様では、本開示のＲＮＡリガンドは、ホスホジエステル結合のみを含む。いくつかの実施態様では、本開示のＲＮＡリガンドは、ホスホロチオエート結合のみを含む。
追加のＲＮＡ修飾
［０１９０］いくつかの実施態様では、本開示のＲＮＡリガンドは、ＲＮＡキャップ（例えば、７－メチルグアノシン（ｍ７Ｇ）キャップ、ｍ７Ｇｐｐｐ５’Ｎ、２’Ｏメチル化ｍ７Ｇキャップ、ｍ７Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）Ｇ、ｍ７Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）Ａ、Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）Ａ、Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）Ｇ、３’－０－Ｍｅ－ｍ７Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）Ｇ、ＡＲＣＡ、又は当技術分野で知られている他の適切なＲＮＡキャップ）、及び／又はテール（例えば、ポリ（Ａ）テール）；ペンダント部分、例えばタンパク質（例えば、ヌクレアーゼ、毒素、抗体、シグナルペプチド、ポリ－Ｌ－リジンなど）；インターカレーター（例えば、アクリジン、ソラレンなど）；キレート剤（例えば、金属、放射性金属、ホウ素、酸化性金属など）；アルキル化剤、及び修飾された結合（例えば、アルファアノマー核酸など）などの修飾を含み得る。いくつかの実施態様では、本開示のＲＮＡリガンドは、固体又は半固体支持体にコンジュゲートされ得る。いくつかの実施態様では、５’及び３’末端ＯＨは、リン酸化され得るか又はアミン若しくは１～２０個の炭素原子の有機キャッピング基部分で置換され得る。他のヒドロキシルもまた、標準的な保護基に誘導体化されてもよい。
ＲＮＡリガンドの調製
［０１９１］例えば、本明細書に記載される１つ又は複数のＲＮＡ修飾を含む、本開示のＲＮＡリガンドは、当技術分野で知られている任意の適切な方法を使用して調製され得る。
［０１９２］いくつかの実施態様では、適切な保護基を使用する化学合成を含むがこれに限定されない、ＲＮＡ合成のためのデノボ方法が使用され得る（例えば、Ｍａｓｕｄａ ｅｔ ａｌ．，（２００７）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ Ｓｅｒｉｅｓ ５７：３－４）；ｔｈｅ ｂ－ｃｙａｎｏｅｔｈｙｌ ｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄｉｔｅ ｍｅｔｈｏｄ（Ｂｅａｕｃａｇｅ Ｓ Ｌ ｅｔ ａｌ．（１９８１）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ ２２：１８５９）；ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ Ｈ－ｐｈｏｓｐｈｏｎａｔｅ ｍｅｔｈｏｄ（Ｇａｒｅｇｇ Ｐ ｅｔ ａｌ．（１９８６）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ ２７：４０５１－４；Ｆｒｏｅｈｌｅｒ Ｂ Ｃ ｅｔ ａｌ．（１９８６）Ｎｕｃｌ Ａｃｉｄ Ｒｅｓ １４：５３９９－４０７；Ｇａｒｅｇｇ Ｐ ｅｔ ａｌ．（１９８６）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎｒ Ｌｅｔｔ ２７：４０５５－８；Ｇａｆｆｎｅｙ Ｂ Ｌ ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ ２９：２６１９－２２）；又はＵｈｌｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｃｈｅｍ Ｒｅｖ ９０：５４４－８４、及びＧｏｏｄｃｈｉｌｄ Ｊ（１９９０）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ １：１６５に開示されている合成方法を参照。これらの方法及び他の方法は、市販されている自動核酸合成装置での使用のために実施又は適合させることができる。
［０１９３］本開示のＲＮＡリガンドはまた、例えば本明細書に記載されるように、宿主細胞におけるポリヌクレオチドのクローニング、プロセシング、及び／又は発現など、当技術分野で周知であり且つ慣用的な適切な組換え法を使用して調製することもできる。部位特異的突然変異誘発は、例えば、新しい制限部位を挿入したり、突然変異を導入したりするなど、核酸を変更するために使用することができる。核酸配列の転写に適した方法は公知であり、当技術分野で慣用されている。（一般的には、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２，Ｅｄ．Ａｕｓｕｂｅｌ，ｅｔ ａｌ．，Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈ．Ａｓｓｏｃ．＆Ｗｉｌｅｙ Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｃｈ．１３，１９８８；Ｇｌｏｖｅｒ，ＤＮＡ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ｖｏｌ．ＩＩ，ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ，Ｗａｓｈ．，Ｄ．Ｃ．，Ｃｈ．３，１９８６；Ｂｉｔｔｅｒ，ｅｔ ａｌ．，ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ １５３：５１６－５４４（１９８７）；Ｔｈｅ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｙｅａｓｔ Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ，Ｅｄｓ．Ｓｔｒａｔｈｅｒｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ，ＶｏＩｓ．Ｉ ａｎｄ ＩＩ，１９８２；及びＳａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ，１９８９を参照。）
［０１９４］いくつかの実施態様では、本開示のＲＮＡリガンドは、ｉｎ ｖｉｔｒｏ転写法を使用して調製することもできる。当技術分野で認識されているように、典型的なｉｎ ｖｉｔｒｏ ＲＮＡ転写反応には、ＲＮＡポリメラーゼ、例えば、Ｔ７ ＲＮＡポリメラーゼ；ＤＮＡテンプレート；ヌクレオチド（ＮＴＰ）；マグネシウムなどのイオン、例えば酢酸マグネシウム；例えば適切なｐＨ、例えば７～８．５の、例えばＨＥＰＥＳ又はＴｒｉｓなどの緩衝液が含まれる。いくつかの実施態様では、ジチオスレイトール（ＤＴＴ）及び／又はスペルミジンなどの追加の化合物が含まれ得る。いくつかの実施態様では、転写反応中にＲＮａｓｅ誘導分解が起こらないことを保証するために、ＲＮａｓｅ阻害剤がｉｎ ｖｉｔｒｏＲＮＡ転写反応に含まれる。いくつかの実施態様では、ピロホスファターゼが反応に含まれ、各ヌクレオチドの組込みに続いて生成する無機ピロリン酸を２単位の無機リン酸に切断する。これにより、マグネシウムが溶液中に残り、ピロリン酸マグネシウムとして沈殿することはない。ｉｎ ｖｉｔｒｏ ＲＮＡ転写反応の生成物は、例えば以下に記載するような、当技術分野で知られている任意の適切な方法に従って精製することができる。
［０１９５］本開示のＲＮＡリガンドの調製には、ＲＮＡリガンドを（例えば、反応混合物、細胞成分などから）精製又は単離する１つ又は複数の工程が含まれ得る。このような精製は、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、カラムベースの方法（例えば、ｍｉｎｉ Ｑｕｉｃｋ Ｓｐｉｎ ＤＮＡ Ｃｏｌｕｍｎｓ（Ｒｏｃｈｅ））、ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＰＡＧＥ）、及び／又はＲＮａｓｅ－Ｆｒｅｅ ＨＰＬＣ精製など、当技術分野で知られている任意の適切な方法を使用して達成することができる。
［０１９６］本開示のＲＮＡリガンドにおける１つ又は複数のＲＮＡ修飾の存在及び／又は量は、任意の適切な方法を使用して決定され得る。例えば、本開示のＲＮＡリガンドは、一リン酸に消化され（例えば、ヌクレアーゼＰ１を使用して）、脱リン酸化され（例えば、ＣＩＡＰなどの適切なホスファターゼを使用して）、得られたヌクレオシドを逆相ＨＰＬＣによって分析することができる。使用され得る他の方法には、質量分析（ＭＳ）、例えば、マトリックス支援レーザー脱離／イオン化（ＭＡＬＤＩ）、タンデムＭＳ（ＭＳ／ＭＳ）、エレクトロスプレーイオン化質量分析法（ＥＳＩ－ＭＳ）、又は液体クロマトグラフィー質量分析法（ＬＣ－ＭＳ）；クロマトグラフィー法、例えば、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）、又は液体クロマトグラフィー（ＬＣ）；逆転写ベースの方法；ＲＮａｓｅ Ｈ切断ベースの方法；ライゲーションベースの方法；ノーザンブロッティング；脱メチラーゼ促進ＲＮＡ－シークエンシング；ＭＣ１リボヌクレアーゼ切断；直接ＲＮＡシークエンシング；増幅ベースのシークエンシング；及びバイサルファイトシーケンシングが挙げられる。
担体
［０１９７］いくつかの実施態様では、本開示の免疫調節組成物は、例えば薬学的に許容される担体などの担体をさらに含む。
［０１９８］いくつかの実施態様では、担体は、ＲＮＡリガンドの１つ又は複数の細胞への細胞内輸送を促進する。いくつかの実施態様では、担体は、カチオン性化合物又はポリカチオン性化合物などのカチオン性薬剤である。いくつかの実施態様では、担体は、本開示のＲＮＡリガンドを１つ又は複数の細胞に送達するのに適した任意の担体である。本開示の組成物において使用され得る担体の例としては、限定されないが、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）；ポリアルキレンイミン；ポリアルギニン、例えば、ポリ－Ｌ－アリギニン；ポリアミン；プロタミン；ポリリジン、例えば、ポリ－Ｌ－リジン又はＰＯＬＬ；ヌクレオリン；融合ペプチド；ポリアミドアミンデンドリマー（ＰＡＭＡＭ、Ｄｅｎｄｒｉｔｅｃｈ Ｉｎｃ．）；ＰＥＧ化カチオンポリマー；カチオン性ポリマーコンジュゲート（例えば、ＰＥＩコレステロール、ポリリシンコレステロールなど）；スペルミン又はスペルミジン；キトサン；カチオン性デキストラン；塩基性ポリペプチド；細胞透過ペプチド（ＣＰＰ）、例えば、ＨＩＶ結合ペプチド、ＨＩＶ－１ Ｔａｔ（ＨＩＶ）、Ｔａｔ由来ペプチド、ペネトラチン、ＶＰ２２由来又は類似ペプチド、ペスチウイルス Ｅｒｎｓ、ＨＳＶ、ＶＰ２２（単純ヘルペス）、ＭＡＰ、ＫＡＬＡ又はタンパク質伝達ドメイン（ＰＴＤ）、ＰｐＴ６２０、プロリンリッチペプチド、アルギニンリッチペプチド、リジンリッチペプチド、ＭＰＧペプチド、Ｐｅｐ－１、Ｌ－オリゴマー、カルシトニンペプチド、アンテナペディア由来ペプチド（特にショウジョウバエアンテナペディア由来）、ｐＡｎｔｐ、ｐＩｓｌ、ＦＧＦ、ラクトフェリン、トランスポータン、ブフォリン－２、Ｂａｃ７１５－２４、ＳｙｎＢ、ＳｙｎＢ（１）、ｐＶＥＣ、ｈＣＴ由来ペプチド、ＳＡＰ、又はヒストン；カチオン性多糖類、例えば、キトサン；カチオン性シクロデキストリン；ポリブレン；カチオン性又はポリカチオン性ポリマー、例えばポリアミノ酸（例えば、ポリ－Ｌ－アルギニン、ポリ－Ｌ－リジン、ポリ－Ｌ－オルニチン）など；修飾ポリアミノ酸、例えばβ－アミノ酸ポリマー又は逆ポリアミドなど；修飾ポリエチレン、例えばＰＶＰ（ポリ（Ｎ－エチル－４－ビニルピリジニウムブロミド））など；修飾アクリレート、例えばｐＤＭＡＥＭＡ（ポリ（ジメチルアミノエチルメチルアクリレート））など；修飾アミドアミン、例えばｐＡＭＡＭ（ポリ（アミドアミン））など；修飾ポリベータアミノエステル（ＰＢＡＥ）、例えばジアミン末端修飾１，４ブタンジオールジアクリレート－ｃｏ－５－アミノ－１－ペンタノールポリマー；デンドリマー、例えばポリプロピレンアミンデンドリマー又はｐＡＭＡＭ系デンドリマーなど；ポリイミン、例えば、ＰＥＩ、ポリ（プロピレンイミン）；ポリアリルアミン；糖骨格系ポリマー、例えば、シクロデキストリン系ポリマー、デキストラン系ポリマー、キトサンなど；シラン骨格系ポリマー、例えばＰＭＯＸＡ－ＰＤＭＳコポリマーなど；１つ以上のカチオン性ブロック（例えば、上記のカチオン性ポリマーから選択される）と、１つ以上の親水性又は疎水性ブロック（例えば、ポリエチレングリコール）との組み合わせを含むブロックポリマーが挙げられる。
［０１９９］いくつかの実施態様では、担体は脂質である。
［０２００］いくつかの実施態様では、担体はカチオン性脂質である。担体として使用され得るカチオン性脂質の例としては、限定されないが、ジオレオイルトリメチルアンモニウムプロパン（ＤＯＴＡＰ）、Ｎ－［１（－２，３－ジオレオイルオキシ）プロピル］－Ｎ，Ｎ，Ｎ－トリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＭＡ）、Ｎ，Ｎ－ジオレイル－Ｎ，Ｎ－ジメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＤＡＣ）、リポフェクタミンＴＭ、ジーンポーターＴＭ、ＤＭＲＩＥ（１，２－ジミリスチルオキシプロピル－３－ジメチルヒドロキシエチルアンモニウムブロミド）、ジ－Ｃ１４－アミジン、ＤＯＴＩＭ（１－［２－（オレオイルオキシ）エチル］－２－オレイル－３－（２－ヒドロキシエチル）イミダゾリニウムクロリド）、ジメチルジオクタデシルアンモニウムブロミド（ＤＤＡＢ）、ＤＯＧＳ、１，２－ジオレオイルオキシプロピル－３－ジメチル－ヒドロキシエチルアンモニウムブロミド（ＤＯＲＩ）、Ｎ－（３－アミノプロピル）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－２，３－ビス（ドデシルオキシ）－１－プロパンアンモニウムブロミド（ＧＡＰ－ＤＬＲＩＥ）、ＳＡＩＮＴ、ＤＣ－Ｃｈｏｌ、ビス－グアニジニウム－トレン－コレステロール（ＢＧＴＣ）、ＣＴＡＰ、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＯＰＣ）、１，２－ジオレオイル－３－ジメチルアンモニウム－プロパン（ＤＯＤＡＰ）、ジオレイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、２，３－ジオレイルオキシ－Ｎ－［２（スペルミンカルボキサミド）エチル］－Ｎ，Ｎ－ジメチル－１－プロパンアミニウムトリフルオロアセテート（ＤＯＳＰＡ）、ジオクタデシルジメチルアンモニウムブロミド（ＤＯＤＡＢ）、ＤＯＩＣ、ＤＭＥＰＣ、ジミリストオキシプロピルジメチルヒドロキシエチルアンモニウムブロミド（ＤＩＭＲＩ）、Ｏ，Ｏ－ジテトラデカノイル－Ｎ－α－トリメチルアンモニオアセチル）ジエタノールアミンクロリド（ＤＣ－６－１４）、ｒａｃ－［（２，３－ジオクタデシルオキシプロピル）（２－ヒドロキシエチル）］－ジメチルアンモニウムクロリド（ＣＬＩＰ１）、ｒａｃ－［２（２，３－ジヘキサデシルオキシプロピルオキシメチルオキシ）エチル］－トリメチルアンモニウム（ＣＬＩＰ６）、ｒａｃ－［２（２，３－ジヘキサデシルオキシプロピルオキシスクシニルオキシ）エチル］－トリメチルアンモニウム（ＣＬＩＰ９）、ＳＭ－１０２、又はオリゴフェクタミンが挙げられる。担体として使用され得る他の脂質としては、限定されないが、米国特許出願公開第２００８／００８５８７０号及び米国特許出願公開第２００８／００５７０８０号に記載されているものが挙げられ、これらは参照により本明細書に組み込まれる。
［０２０１］いくつかの実施態様では、担体はｊｅｔＰＥＩである（例えば、Ａｍｉ Ｓｉｄｉ ｅｔ ａｌ．，Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｕｒｏｌｏｇｙ（２００８）１８０（６）：２３７９－２３８３を参照）。
［０２０２］いくつかの実施態様では、担体はイオン化可能な脂質である。担体として使用され得るイオン化可能な脂質の例としては、限定されないが、ＡＬＣ－０３１５（［（４－ヒドロキシブチル）アザンジイル］ジ（ヘキサン－６，１－ジイル）ビス（２－ヘキシルデカノエート））（例えば、ウェブサイト：ａｓｓｅｔｓ．ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ．ｓｅｒｖｉｃｅ．ｇｏｖ．ｕｋ／ｇｏｖｅｒｎｍｅｎｔ／ｕｐｌｏａｄｓ／ｓｙｓｔｅｍ／ｕｐｌｏａｄｓ／ａｔｔａｃｈｍｅｎｔ＿ｄａｔａ／ｆｉｌｅ／９４４５４４／ＣＯＶＩＤ－１９＿ｍＲＮＡ＿Ｖａｃｃｉｎｅ＿ＢＮＴ１６２ｂ２＿ＵＫＰＡＲ＿ＰＦＩＺＥＲ＿ＢＩＯＮＴＥＣＨ＿１５Ｄｅｃ２０２０．ｐｄｆを参照）、ＳＭ－１０２（ヘプタデカン－９－イル ８－（（２－ヒドロキシエチル）（６－オキソ－６－（ウンデシルオキシ）ヘキシル）アミノ）オクタノエート）（例えば、ウェブサイト：ｗｗｗ．ｍｏｄｅｒｎａｔｘ．ｃｏｍ／ｓｉｔｅｓ／ｄｅｆａｕｌｔ／ｆｉｌｅｓ／ｍＲＮＡ－１２７３－Ｐ３０１－Ｐｒｏｔｏｃｏｌ．ｐｄｆを参照）、イミダゾールコレステロールエステル（例えば、米国特許出願公開第２０２００１５５６９１Ａ１号を参照）、システイン系イオン化脂質（例えば、システイン系イオン化脂質の開示に関して参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２０２０２１４９４６Ａ１号に開示されている）、脂質２，２（８，８）４Ｃ ＣＨ３（例えば、米国特許第９６７０１５２Ｂ２号を参照）、Ｇｅｎｅｖａｎｔ ＣＬ１（例えば、国際公開第２０２０２１９９４１Ａ１号を参照）、Ａｃｕｉｔａｓ（Ａ９）（例えば、Ｃｏｎｗａｙ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ（２０１９）２７（４）：８６６－８７７を参照）、ＤＬｉｎ－ＭＣ３－ＤＭＡ（例えば、Ｊａｙａｒａｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｇｅｗ Ｃｈｅｍ Ｉｎｔ Ｅｄ Ｅｎｇｌ（２０１２）５１（３４）：８５２９－８５３３を参照）、Ｌｉｐｉｄ ５（例えば、Ｓａｂｎｉｓ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ（２０１８）２６（６）：１５０９－１５１９；及びウェブサイト：ｉｎｖｅｓｔｏｒｓ．ｍｏｄｅｒｎａｔｘ．ｃｏｍ／ｎｅｗｓ－ｒｅｌｅａｓｅｓ／ｎｅｗｓ－ｒｅｌｅａｓｅ－ｄｅｔａｉｌｓ／ｍｏｄｅｒｎａ－ａｎｎｏｕｎｃｅｓ－ｐｏｓｉｔｉｖｅ－ｐｈａｓｅ－１－ｒｅｓｕｌｔｓ－ｆｉｒｓｔ－ｓｙｓｔｅｍｉｃを参照）、Ｃ１２－２００（例えば、Ｌｏｖｅ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ（２０１０）１０７（５）：１８６４－１８６９を参照）、５Ａ２－ＳＣ８（例えば、Ｃｈｅｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｍａｔｅｒｉａｌｓ（２０１８）３０（５２）：１８０５３０８を参照）、ＤＬｉｎ－ＫＣ２－ＤＭＡ（例えば、Ｓｅｍｐｌｅ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（２０１０）２８：１７２－１７６を参照）、ＯＦ－０２（例えば、Ｆｅｎｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｍａｔｅｒｉａｌｓ（２０１６）２８（１５）：２９３９－２９４３を参照）、３０６Ｏｉ１０（例えば、Ｈａｊｊ ｅｔ ａｌ．，Ｓｍａｌｌ（２０１９）１５（６）：１８０５０９７を参照）、ｃＫＫ－Ｅ１２（例えば、Ｄｏｎｇ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ（２０１４）１１１（１１）：３９５５－３９６０を参照）、ＳＳ－ＥＣ、日油株式会社（例えば、ウェブサイト：ｗｗｗ．ｎｏｆａｍｅｒｉｃａ．ｃｏｍ／ｓｔｏｒｅ／ｉｎｄｅｘ．ｐｈｐ？ｄｉｓｐａｔｃｈ＝ｐｒｏｄｕｃｔｓ．ｖｉｅｗ＆ｐｒｏｄｕｃｔ＿ｉｄ＝７７１を参照）、ＴＴ３（例えば、Ｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｎｏ Ｌｅｔｔ（２０１５）１５（１２）：８０９９－８１０７を参照）、ＯＦ－Ｄｅｇ－Ｌｉｎ（例えば、Ｆｅｎｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｇｅｗ Ｃｈｅｍ Ｉｎｔ Ｅｄ Ｅｎｇｌ（２０１８）５７（４１）：１３５８２－１３５８６を参照）、ｓｓＰａｌｍＥ（例えば、Ａｋｉｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ（２０１５）２００：９７－１０５を参照）、又はＬ３１９（Ｍａｉｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ（２０１３）２１（８）：１５７０－１５７８）が挙げられる。
［０２０３］いくつかの実施態様では、担体は脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）である。特定の実施態様では、ＬＮＰは、カチオン性脂質、例えば本明細書に記載の、又は当技術分野で知られている１つ又は複数のカチオン性脂質を含む。特定の実施態様では、ＬＮＰはイオン化可能な脂質、例えば本明細書に記載の、又は当技術分野で知られている１つ又は複数のイオン化可能脂質を含む。いくつかの実施態様では、担体はポリ－Ｌ－アルギニンである。いくつかの実施態様では、担体はＤＯＴＡＰである。
本開示の組成物の活性
［０２０４］本明細書に記載の免疫調節組成物のいずれかのいくつかの実施態様では、免疫調節組成物は、免疫調節組成物と接触及び／又は免疫調節組成物でトランスフェクトされた１つ又は複数の細胞においてＴＬＲ７を選択的に活性化する。
［０２０５］いくつかの実施態様では、本開示の免疫調節組成物は、免疫調節組成物と接触した１つ以上の細胞による１つ以上のＩ型インターフェロン（ＩＦＮ）の発現又は分泌を誘導又は増加させる。Ｉ型ＩＦＮは、免疫系を制御するインターフェロンタンパク質の大きなグループである。Ｉ型ＩＦＮには、限定されないが、ＩＦＮ－α（アルファ）、ＩＦＮ－β（ベータ）、ＩＦＮ－κ（カッパ）、ＩＦＮ－δ（デルタ）、ＩＦＮ－ε（イプシロン）、ＩＦＮ－τ（タウ）、ＩＦＮ－ω（オメガ）、及びＩＦＮ－ζ（ゼータ、リミチンとしても知られる）が含まれる。
［０２０６］いくつかの実施態様では、本開示の免疫調節組成物は、本開示の免疫調節組成物と接触及び／又は免疫調節組成物でトランスフェクトされた１つ又は複数の細胞による１つ又は複数のＩ型ＩＦＮ（例えば、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ＩＦＮ－κ、ＩＦＮ－δ、ＩＦＮ－ε、ＩＦＮ－τ、ＩＦＮ－ω、又はＩＦＮ－ζのうちの１つ又は複数）の発現又は分泌を、例えば、免疫調節組成物と接触及び／又は免疫調節組成物でトランスフェクトされていない対応する１つ又は複数の細胞と比較して（例えば、陰性対照又は細胞培養培地のみで処置された対応する１つ又は複数の細胞と比較して）、誘導又は増加させる。いくつかの実施態様では、誘導又は増加は、少なくとも約１％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１５０％、２００％、３００％、３５０％、４００％、４５０％、５００％、５５０％、６００％、６５０％、７００％、７５０％、８００％、８５０％、９００％、９５０％、１０００％又はそれ以上のいずれかである。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の細胞はヒト細胞である。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の細胞はヒト末梢血単核球である。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の細胞は、形質細胞様樹状細胞である。
［０２０７］いくつかの実施態様では、本開示の免疫調節組成物は、本開示の免疫調節組成物と接触及び／又は免疫調節組成物でトランスフェクトされた１つ又は複数の細胞によるＩＦＮ－αの発現又は分泌を、例えば、免疫調節組成物と接触及び／又は免疫調節組成物でトランスフェクトされていない対応する１つ又は複数の細胞と比較して（例えば、陰性対照又は細胞培養培地のみで処置された対応する１つ又は複数の細胞と比較して）、誘導又は増加させる。いくつかの実施態様では、誘導又は増加は、少なくとも約１％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１５０％、２００％、３００％、３５０％、４００％、４５０％、５００％、５５０％、６００％、６５０％、７００％、７５０％、８００％、８５０％、９００％、９５０％、１０００％又はそれ以上のいずれかである。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の細胞はヒト細胞である。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の細胞はヒト末梢血単核球である。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の細胞は、形質細胞様樹状細胞である。
［０２０８］いくつかの実施態様では、本開示の免疫調節組成物は、本開示の免疫調節組成物と接触及び／又は免疫調節組成物でトランスフェクトされた１つ又は複数の細胞によるＩＦＮ－βの発現又は分泌を、例えば、免疫調節組成物と接触及び／又は免疫調節組成物でトランスフェクトされていない対応する１つ又は複数の細胞と比較して（例えば、陰性対照又は細胞培養培地のみで処置された対応する１つ又は複数の細胞と比較して）、誘導又は増加させる。いくつかの実施態様では、誘導又は増加は、少なくとも約１％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１５０％、２００％、３００％、３５０％、４００％、４５０％、５００％、５５０％、６００％、６５０％、７００％、７５０％、８００％、８５０％、９００％、９５０％、１０００％又はそれ以上のいずれかである。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の細胞はヒト細胞である。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の細胞はヒト末梢血単核球である。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の細胞は、形質細胞様樹状細胞である。
［０２０９］いくつかの実施態様では、本開示の免疫調節組成物は、本開示の免疫調節組成物と接触及び／又は免疫調節組成物でトランスフェクトされた１つ又は複数の細胞によるＩＦＮ－κの発現又は分泌を、例えば、免疫調節組成物と接触及び／又は免疫調節組成物でトランスフェクトされていない対応する１つ又は複数の細胞と比較して（例えば、陰性対照又は細胞培養培地のみで処置された対応する１つ又は複数の細胞と比較して）、誘導又は増加させる。いくつかの実施態様では、誘導又は増加は、少なくとも約１％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１５０％、２００％、３００％、３５０％、４００％、４５０％、５００％、５５０％、６００％、６５０％、７００％、７５０％、８００％、８５０％、９００％、９５０％、１０００％又はそれ以上のいずれかである。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の細胞はヒト細胞である。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の細胞はヒト末梢血単核球である。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の細胞は、形質細胞様樹状細胞である。
［０２１０］いくつかの実施態様では、本開示の免疫調節組成物は、本開示の免疫調節組成物と接触及び／又は免疫調節組成物でトランスフェクトされた１つ又は複数の細胞によるＩＦＮ－δの発現又は分泌を、例えば、免疫調節組成物と接触及び／又は免疫調節組成物でトランスフェクトされていない対応する１つ又は複数の細胞と比較して（例えば、陰性対照又は細胞培養培地のみで処置された対応する１つ又は複数の細胞と比較して）、誘導又は増加させる。いくつかの実施態様では、誘導又は増加は、少なくとも約１％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１５０％、２００％、３００％、３５０％、４００％、４５０％、５００％、５５０％、６００％、６５０％、７００％、７５０％、８００％、８５０％、９００％、９５０％、１０００％又はそれ以上のいずれかである。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の細胞はヒト細胞である。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の細胞はヒト末梢血単核球である。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の細胞は、形質細胞様樹状細胞である。
［０２１１］いくつかの実施態様では、本開示の免疫調節組成物は、本開示の免疫調節組成物と接触及び／又は免疫調節組成物でトランスフェクトされた１つ又は複数の細胞によるＩＦＮ－εの発現又は分泌を、例えば、免疫調節組成物と接触及び／又は免疫調節組成物でトランスフェクトされていない対応する１つ又は複数の細胞と比較して（例えば、陰性対照又は細胞培養培地のみで処置された対応する１つ又は複数の細胞と比較して）、誘導又は増加させる。いくつかの実施態様では、誘導又は増加は、少なくとも約１％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１５０％、２００％、３００％、３５０％、４００％、４５０％、５００％、５５０％、６００％、６５０％、７００％、７５０％、８００％、８５０％、９００％、９５０％、１０００％又はそれ以上のいずれかである。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の細胞はヒト細胞である。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の細胞はヒト末梢血単核球である。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の細胞は、形質細胞様樹状細胞である。
［０２１２］いくつかの実施態様では、本開示の免疫調節組成物は、本開示の免疫調節組成物と接触及び／又は免疫調節組成物でトランスフェクトされた１つ又は複数の細胞によるＩＦＮ－τの発現又は分泌を、例えば、免疫調節組成物と接触及び／又は免疫調節組成物でトランスフェクトされていない対応する１つ又は複数の細胞と比較して（例えば、陰性対照又は細胞培養培地のみで処置された対応する１つ又は複数の細胞と比較して）、誘導又は増加させる。いくつかの実施態様では、誘導又は増加は、少なくとも約１％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１５０％、２００％、３００％、３５０％、４００％、４５０％、５００％、５５０％、６００％、６５０％、７００％、７５０％、８００％、８５０％、９００％、９５０％、１０００％又はそれ以上のいずれかである。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の細胞はヒト細胞である。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の細胞はヒト末梢血単核球である。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の細胞は、形質細胞様樹状細胞である。
［０２１３］いくつかの実施態様では、本開示の免疫調節組成物は、本開示の免疫調節組成物と接触及び／又は免疫調節組成物でトランスフェクトされた１つ又は複数の細胞によるＩＦＮ－ωの発現又は分泌を、例えば、免疫調節組成物と接触及び／又は免疫調節組成物でトランスフェクトされていない対応する１つ又は複数の細胞と比較して（例えば、陰性対照又は細胞培養培地のみで処置された対応する１つ又は複数の細胞と比較して）、誘導又は増加させる。いくつかの実施態様では、誘導又は増加は、少なくとも約１％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１５０％、２００％、３００％、３５０％、４００％、４５０％、５００％、５５０％、６００％、６５０％、７００％、７５０％、８００％、８５０％、９００％、９５０％、１０００％又はそれ以上のいずれかである。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の細胞はヒト細胞である。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の細胞はヒト末梢血単核球である。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の細胞は、形質細胞様樹状細胞である。
［０２１４］いくつかの実施態様では、本開示の免疫調節組成物は、本開示の免疫調節組成物と接触及び／又は免疫調節組成物でトランスフェクトされた１つ又は複数の細胞によるＩＦＮ－ζの発現又は分泌を、例えば、免疫調節組成物と接触及び／又は免疫調節組成物でトランスフェクトされていない対応する１つ又は複数の細胞と比較して（例えば、陰性対照又は細胞培養培地のみで処置された対応する１つ又は複数の細胞と比較して）、誘導又は増加させる。いくつかの実施態様では、誘導又は増加は、少なくとも約１％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１５０％、２００％、３００％、３５０％、４００％、４５０％、５００％、５５０％、６００％、６５０％、７００％、７５０％、８００％、８５０％、９００％、９５０％、１０００％又はそれ以上のいずれかである。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の細胞はヒト細胞である。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の細胞はヒト末梢血単核球である。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の細胞は、形質細胞様樹状細胞である。
［０２１５］いくつかの実施態様では、本開示の免疫調節組成物は、本開示の免疫調節組成物と接触及び／又は免疫調節組成物でトランスフェクトされた１つ又は複数の細胞におけるＴＬＲ８の活性を、例えば、免疫調節組成物と接触及び／又は免疫調節組成物でトランスフェクトされていない対応する１つ又は複数の細胞と比較して（例えば、陰性対照又は細胞培養培地のみで処置された対応する１つ又は複数の細胞と比較して）、約５０％未満、約４０％未満、約３０％未満、約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、約５％未満、約２％未満、又は約１％未満、増加させる。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の細胞はヒト細胞である。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の細胞はヒト末梢血単核球である。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の細胞は単球である。
［０２１６］いくつかの実施態様では、本開示の免疫調節組成物は、本開示の免疫調節組成物と接触及び／又は免疫調節組成物でトランスフェクトされた１つ又は複数の細胞によるＴＮＦαなどの炎症性サイトカインの発現又は分泌を、例えば、免疫調節組成物と接触及び／又は免疫調節組成物でトランスフェクトされていない対応する１つ又は複数の細胞と比較して（例えば、陰性対照又は細胞培養培地のみで処置された対応する１つ又は複数の細胞と比較して）、約５０％未満、約４０％未満、約３０％未満、約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、約５％未満、約２％未満、又は約１％未満、増加させる。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の細胞はヒト細胞である。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の細胞はヒト末梢血単核球である。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の細胞は単球である。
［０２１７］いくつかの実施態様では、本開示の免疫調節組成物は、本開示の免疫調節組成物と接触及び／又は免疫調節組成物でトランスフェクトされた１つ又は複数の細胞によるＮＦｋ－Ｂ依存性サイトカインの発現又は分泌を、例えば、免疫調節組成物と接触及び／又は免疫調節組成物でトランスフェクトされていない対応する１つ又は複数の細胞と比較して（例えば、陰性対照又は細胞培養培地のみで処置された対応する１つ又は複数の細胞と比較して）、約５０％未満、約４０％未満、約３０％未満、約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、約５％未満、約２％未満、又は約１％未満、誘導又は増加させる。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の細胞はヒト細胞である。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の細胞はヒト末梢血単核球である。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の細胞は単球である。
［０２１８］いくつかの実施態様では、１つ又は複数の細胞によるＩ型ＩＦＮ、炎症性サイトカイン、及び／又はＮＦｋ－Ｂ依存性サイトカインの発現又は分泌は、酵素結合免疫吸着法（ＥＬＩＳＡ）、イムノブロッティング、Ｌｕｍｉｎｅｘアッセイ（例えば、ｗｗｗ．ｒｎｄｓｙｓｔｅｍｓ．ｃｏｍ／ｗｈａｔ－ｌｕｍｉｎｅｘ－ａｓｓａｙを参照）、ビーズベースのイムノアッセイなどのイムノアッセイ、Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ）などの電気化学発光ベースの方法、フローサイトメトリーにより分析されるサイトカインの細胞内染色、又は質量分析法などの当技術分野で知られている任意の適切な方法を使用して測定することができる。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の細胞によるＩ型ＩＦＮ、炎症性サイトカイン、及び／又はＮＦｋ－Ｂ依存性サイトカインの発現又は分泌は、例えば、ｑＰＣＲ、ＲＮＡ配列決定、マイクロアレイベースの方法、又は当技術分野で知られているｍＲＮＡを測定するための他の任意の適切な方法を使用して、Ｉ型ＩＦＮ、炎症性サイトカイン、及び／又はＮＦｋ－Ｂ依存性サイトカインのｍＲＮＡレベルに基づいて評価され得る。
［０２１９］いくつかの実施態様では、本開示の免疫調節組成物は、１つ又は複数のＢ細胞、例えば、１つ又は複数のナイーブＢ細胞、活性化Ｂ細胞、及び／又はメモリーＢ細胞の活性を調節する。いくつかの実施態様では、本開示の免疫調節組成物は、例えば、ＣＤ６９、ＣＤ８０、又はＣＤ８６などのＢ細胞活性化マーカーの発現に基づいて評価される、１つ又は複数のＢ細胞の活性化を増加又は増強する。いくつかの実施態様では、本開示の免疫調節組成物は、Ｂ細胞の増殖を増加又は増強する。いくつかの実施態様では、本開示の免疫調節組成物は、クラススイッチ組換えを増加又は増強する。いくつかの実施態様では、本開示の免疫調節組成物は、抗体分泌を増加又は増強する。いくつかの実施態様では、本開示の免疫調節組成物は、Ｂ細胞の発現又はサイトカインの分泌を増加又は増強する。いくつかの実施態様では、Ｂ細胞活性化マーカー及び／又はサイトカインは、酵素結合免疫吸着法（ＥＬＩＳＡ）、イムノブロッティング、Ｌｕｍｉｎｅｘアッセイ（例えば、ｗｗｗ．ｒｎｄｓｙｓｔｅｍｓ．ｃｏｍ／ｗｈａｔ－ｌｕｍｉｎｅｘ－ａｓｓａｙを参照）、ビーズベースのイムノアッセイなどのイムノアッセイ、Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ）などの電気化学発光ベースの方法、フローサイトメトリーにより分析されるサイトカインの細胞内染色、又は質量分析法などの当技術分野で知られている任意の適切な方法を使用して測定することができる。いくつかの実施態様では、１つ又は複数のＢ細胞によるＢ細胞活性化マーカー及び／又はサイトカインの発現又は分泌は、例えば、ｑＰＣＲ、ＲＮＡ配列決定、マイクロアレイベースの方法、又は当技術分野で知られているｍＲＮＡを測定するための他の任意の適切な方法を使用して、マーカー又はサイトカインのｍＲＮＡレベルに基づいて評価され得る。
［０２２０］いくつかの実施態様では、本開示の免疫調節組成物は、１つ又は複数のインターフェロン刺激遺伝子（ＩＳＧ）のレベルを調節する。いくつかの実施態様では、１つ又は複数のＩＳＧは、当技術分野で知られている任意のＩＳＧを含む。いくつかの実施態様では、１つ又は複数のＩＳＧは、Ｓｈａｍｉｔｈ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ（２００９）３７，ｓｕｐｐｌ＿１；Ｓｃｈｏｇｇｉｎｓ ａｎｄ Ｒｉｃｅ，ＣｕｒｒＯｐｉｎ Ｖｉｒｏｌ（２０１１）１（６）：５１９－５２５；Ｆｏｒｓｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ（２０１３）（データベース発行）：Ｄ１０４０－Ｄ１０４６；及びＬｉｕ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ（２０１２）１０９（１１）：４２３９－４２４４に記載されている。評価され得るＩＳＧの例としては、限定されるものではないが、ＩＦＩＴ１、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＩＳＧ１５、ＣＣＬ８、２’５’ＯＡＳ、ＡＰＯＢＥＣ３Ｇ、ＡＰＯＢＥＣ３Ａ、ＰＫＲ、ＩＳＧ５６、Ｍｘ２、ＭＤＡ５、ＩＦＩ４４、ＩＲＦ７、ＯＡＳＬ１、ＩＳＧ２０ ＩＦＩＴ２、ＩＦＩＴ３、ＩＦＩＴＭ３、ＯＡＳ２、ＯＡＳ３、ＩＦＩ１６、ＩＲＦ１、ＭＸ１、又はＩＤＯが挙げられる。
［０２２１］いくつかの実施態様では、１つ又は複数のＩＳＧのレベルは、酵素結合免疫吸着法（ＥＬＩＳＡ）、イムノブロッティング、Ｌｕｍｉｎｅｘアッセイ（例えば、ｗｗｗ．ｒｎｄｓｙｓｔｅｍｓ．ｃｏｍ／ｗｈａｔ－ｌｕｍｉｎｅｘ－ａｓｓａｙを参照）、ビーズベースのイムノアッセイなどのイムノアッセイ、Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ）などの電気化学発光ベースの方法、フローサイトメトリーにより分析されるサイトカインの細胞内染色、又は質量分析法などの当技術分野で知られている任意の適切な方法を使用して評価され得る。いくつかの実施態様では、１つ又は複数のＩＳＧのレベルは、例えば、ｑＰＣＲ、ＲＮＡ配列決定、マイクロアレイベースの方法、又は当技術分野で知られているｍＲＮＡを測定するための他の任意の適切な方法を使用して、１つ又は複数のＩＳＧのｍＲＮＡレベルに基づいて評価され得る。
ｉｎ ｖｉｔｒｏでの使用
［０２２２］いくつかの態様では、本明細書で提供されるのは、１つ又は複数の細胞においてＴＬＲ７を選択的に活性化するための方法である。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の細胞はヒト細胞である。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の細胞はヒト末梢血単核球である。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の細胞は、形質細胞様樹状細胞である。
［０２２３］いくつかの実施態様では、本方法は、１つ又は複数の細胞を本開示の免疫調節組成物と接触及び／又は免疫調節組成物でトランスフェクトすることを含む。いくつかの実施態様では、方法は、１つ又は複数の細胞をグアノシン又はグアノシン誘導体と接触させることをさらに含む。いくつかの実施態様では、グアノシン誘導体は、２’３’環状ＧＭＰ、７－チア－８－オキソグアノシン、７－デアザグアノシン、７－アリル－８－オキソグアノシン、７－デアザ－ｄＧ，９－ヘキシルグアニン、又はそれらの任意の組み合わせである。
［０２２４］いくつかの実施態様では、本開示のＲＮＡリガンドと、当技術分野で知られている、又は本明細書（例えば、「担体」のセクション）に記載されている任意の適切な担体などの担体とを含む、本開示の免疫調節組成物は、直接注入、マイクロインジェクション、エレクトロポレーション、リポフェクション、微粒子銃などの当技術分野で知られている任意の適切な方法を使用して、１つ又は複数の細胞に導入され得る。いくつかの実施態様では、担体は脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）である。特定の実施態様では、ＬＮＰはカチオン性脂質を含む。特定の実施態様では、ＬＮＰはイオン化可能な脂質を含む。いくつかの実施態様では、担体はポリ－Ｌ－アルギニンである。いくつかの実施態様では、担体はＤＯＴＡＰである。
ＴＬＲ７活性化
［０２２５］いくつかの態様では、本開示の免疫調節組成物は、１つ又は複数の細胞においてＴＬＲ７を選択的に活性化する。
［０２２６］いくつかの実施態様では、本開示の免疫調節組成物は、１つ以上の細胞による１つ以上のＩ型インターフェロン（ＩＦＮ）の発現又は分泌を誘導又は増加させる。
［０２２７］いくつかの実施態様では、本開示の免疫調節組成物は、本開示の免疫調節組成物と接触及び／又は免疫調節組成物でトランスフェクトされた１つ又は複数の細胞による１つ又は複数のＩ型ＩＦＮ（例えば、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ＩＦＮ－κ、ＩＦＮ－δ、ＩＦＮ－ε、ＩＦＮ－τ、ＩＦＮ－ω、又はＩＦＮ－ζのうちの１つ又は複数）の発現又は分泌を、例えば、免疫調節組成物と接触及び／又は免疫調節組成物でトランスフェクトされていない対応する１つ又は複数の細胞と比較して（例えば、陰性対照又は細胞培養培地のみで処置された対応する１つ又は複数の細胞と比較して）、誘導又は増加させる。いくつかの実施態様では、誘導又は増加は、少なくとも約１％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１５０％、２００％、３００％、３５０％、４００％、４５０％、５００％、５５０％、６００％、６５０％、７００％、７５０％、８００％、８５０％、９００％、９５０％、１０００％又はそれ以上のいずれかである。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の細胞はヒト細胞である。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の細胞はヒト末梢血単核球である。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の細胞は、形質細胞様樹状細胞である。
［０２２８］いくつかの実施態様では、本開示の免疫調節組成物は、本開示の免疫調節組成物と接触及び／又は免疫調節組成物でトランスフェクトされた１つ又は複数の細胞によるＩＦＮ－αの発現又は分泌を、例えば、免疫調節組成物と接触及び／又は免疫調節組成物でトランスフェクトされていない対応する１つ又は複数の細胞と比較して（例えば、陰性対照又は細胞培養培地のみで処置された対応する１つ又は複数の細胞と比較して）、誘導又は増加させる。いくつかの実施態様では、誘導又は増加は、少なくとも約１％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１５０％、２００％、３００％、３５０％、４００％、４５０％、５００％、５５０％、６００％、６５０％、７００％、７５０％、８００％、８５０％、９００％、９５０％、１０００％又はそれ以上のいずれかである。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の細胞はヒト細胞である。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の細胞はヒト末梢血単核球である。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の細胞は、形質細胞様樹状細胞である。
［０２２９］いくつかの実施態様では、本開示の免疫調節組成物は、本開示の免疫調節組成物と接触及び／又は免疫調節組成物でトランスフェクトされた１つ又は複数の細胞によるＩＦＮ－βの発現又は分泌を、例えば、免疫調節組成物と接触及び／又は免疫調節組成物でトランスフェクトされていない対応する１つ又は複数の細胞と比較して（例えば、陰性対照又は細胞培養培地のみで処置された対応する１つ又は複数の細胞と比較して）、誘導又は増加させる。いくつかの実施態様では、誘導又は増加は、少なくとも約１％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１５０％、２００％、３００％、３５０％、４００％、４５０％、５００％、５５０％、６００％、６５０％、７００％、７５０％、８００％、８５０％、９００％、９５０％、１０００％又はそれ以上のいずれかである。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の細胞はヒト細胞である。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の細胞はヒト末梢血単核球である。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の細胞は、形質細胞様樹状細胞である。
［０２３０］いくつかの実施態様では、本開示の免疫調節組成物は、本開示の免疫調節組成物と接触及び／又は免疫調節組成物でトランスフェクトされた１つ又は複数の細胞によるＩＦＮ－κの発現又は分泌を、例えば、免疫調節組成物と接触及び／又は免疫調節組成物でトランスフェクトされていない対応する１つ又は複数の細胞と比較して（例えば、陰性対照又は細胞培養培地のみで処置された対応する１つ又は複数の細胞と比較して）、誘導又は増加させる。いくつかの実施態様では、誘導又は増加は、少なくとも約１％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１５０％、２００％、３００％、３５０％、４００％、４５０％、５００％、５５０％、６００％、６５０％、７００％、７５０％、８００％、８５０％、９００％、９５０％、１０００％又はそれ以上のいずれかである。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の細胞はヒト細胞である。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の細胞はヒト末梢血単核球である。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の細胞は、形質細胞様樹状細胞である。
［０２３１］いくつかの実施態様では、本開示の免疫調節組成物は、本開示の免疫調節組成物と接触及び／又は免疫調節組成物でトランスフェクトされた１つ又は複数の細胞によるＩＦＮ－δの発現又は分泌を、例えば、免疫調節組成物と接触及び／又は免疫調節組成物でトランスフェクトされていない対応する１つ又は複数の細胞と比較して（例えば、陰性対照又は細胞培養培地のみで処置された対応する１つ又は複数の細胞と比較して）、誘導又は増加させる。いくつかの実施態様では、誘導又は増加は、少なくとも約１％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１５０％、２００％、３００％、３５０％、４００％、４５０％、５００％、５５０％、６００％、６５０％、７００％、７５０％、８００％、８５０％、９００％、９５０％、１０００％又はそれ以上のいずれかである。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の細胞はヒト細胞である。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の細胞はヒト末梢血単核球である。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の細胞は、形質細胞様樹状細胞である。
［０２３２］いくつかの実施態様では、本開示の免疫調節組成物は、本開示の免疫調節組成物と接触及び／又は免疫調節組成物でトランスフェクトされた１つ又は複数の細胞によるＩＦＮ－εの発現又は分泌を、例えば、免疫調節組成物と接触及び／又は免疫調節組成物でトランスフェクトされていない対応する１つ又は複数の細胞と比較して（例えば、陰性対照又は細胞培養培地のみで処置された対応する１つ又は複数の細胞と比較して）、誘導又は増加させる。いくつかの実施態様では、誘導又は増加は、少なくとも約１％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１５０％、２００％、３００％、３５０％、４００％、４５０％、５００％、５５０％、６００％、６５０％、７００％、７５０％、８００％、８５０％、９００％、９５０％、１０００％又はそれ以上のいずれかである。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の細胞はヒト細胞である。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の細胞はヒト末梢血単核球である。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の細胞は、形質細胞様樹状細胞である。
［０２３３］いくつかの実施態様では、本開示の免疫調節組成物は、本開示の免疫調節組成物と接触及び／又は免疫調節組成物でトランスフェクトされた１つ又は複数の細胞によるＩＦＮ－τの発現又は分泌を、例えば、免疫調節組成物と接触及び／又は免疫調節組成物でトランスフェクトされていない対応する１つ又は複数の細胞と比較して（例えば、陰性対照又は細胞培養培地のみで処置された対応する１つ又は複数の細胞と比較して）、誘導又は増加させる。いくつかの実施態様では、誘導又は増加は、少なくとも約１％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１５０％、２００％、３００％、３５０％、４００％、４５０％、５００％、５５０％、６００％、６５０％、７００％、７５０％、８００％、８５０％、９００％、９５０％、１０００％又はそれ以上のいずれかである。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の細胞はヒト細胞である。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の細胞はヒト末梢血単核球である。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の細胞は、形質細胞様樹状細胞である。
［０２３４］いくつかの実施態様では、本開示の免疫調節組成物は、本開示の免疫調節組成物と接触及び／又は免疫調節組成物でトランスフェクトされた１つ又は複数の細胞によるＩＦＮ－ωの発現又は分泌を、例えば、免疫調節組成物と接触及び／又は免疫調節組成物でトランスフェクトされていない対応する１つ又は複数の細胞と比較して（例えば、陰性対照又は細胞培養培地のみで処置された対応する１つ又は複数の細胞と比較して）、誘導又は増加させる。いくつかの実施態様では、誘導又は増加は、少なくとも約１％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１５０％、２００％、３００％、３５０％、４００％、４５０％、５００％、５５０％、６００％、６５０％、７００％、７５０％、８００％、８５０％、９００％、９５０％、１０００％又はそれ以上のいずれかである。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の細胞はヒト細胞である。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の細胞はヒト末梢血単核球である。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の細胞は、形質細胞様樹状細胞である。
［０２３５］いくつかの実施態様では、本開示の免疫調節組成物は、本開示の免疫調節組成物と接触及び／又は免疫調節組成物でトランスフェクトされた１つ又は複数の細胞によるＩＦＮ－ζの発現又は分泌を、例えば、免疫調節組成物と接触及び／又は免疫調節組成物でトランスフェクトされていない対応する１つ又は複数の細胞と比較して（例えば、陰性対照又は細胞培養培地のみで処置された対応する１つ又は複数の細胞と比較して）、誘導又は増加させる。いくつかの実施態様では、誘導又は増加は、少なくとも約１％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１５０％、２００％、３００％、３５０％、４００％、４５０％、５００％、５５０％、６００％、６５０％、７００％、７５０％、８００％、８５０％、９００％、９５０％、１０００％又はそれ以上のいずれかである。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の細胞はヒト細胞である。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の細胞はヒト末梢血単核球である。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の細胞は、形質細胞様樹状細胞である。
［０２３６］いくつかの実施態様では、本開示の免疫調節組成物は、本開示の免疫調節組成物と接触及び／又は免疫調節組成物でトランスフェクトされた１つ又は複数の細胞におけるＴＬＲ８の活性を、例えば、免疫調節組成物と接触及び／又は免疫調節組成物でトランスフェクトされていない対応する１つ又は複数の細胞と比較して（例えば、陰性対照又は細胞培養培地のみで処置された対応する１つ又は複数の細胞と比較して）、約５０％未満、約４０％未満、約３０％未満、約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、約５％未満、約２％未満、又は約１％未満、増加させる。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の細胞はヒト細胞である。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の細胞はヒト末梢血単核球である。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の細胞は単球である。
［０２３７］いくつかの実施態様では、本開示の免疫調節組成物は、本開示の免疫調節組成物と接触及び／又は免疫調節組成物でトランスフェクトされた１つ又は複数の細胞によるＴＮＦαなどの炎症性サイトカインの発現又は分泌を、例えば、免疫調節組成物と接触及び／又は免疫調節組成物でトランスフェクトされていない対応する１つ又は複数の細胞と比較して（例えば、陰性対照又は細胞培養培地のみで処置された対応する１つ又は複数の細胞と比較して）、約５０％未満、約４０％未満、約３０％未満、約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、約５％未満、約２％未満、又は約１％未満、増加させる。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の細胞はヒト細胞である。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の細胞はヒト末梢血単核球である。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の細胞は単球である。
［０２３８］いくつかの実施態様では、本開示の免疫調節組成物は、本開示の免疫調節組成物と接触及び／又は免疫調節組成物でトランスフェクトされた１つ又は複数の細胞によるＮＦｋ－Ｂ依存性サイトカインの発現又は分泌を、例えば、免疫調節組成物と接触及び／又は免疫調節組成物でトランスフェクトされていない対応する１つ又は複数の細胞と比較して（例えば、陰性対照又は細胞培養培地のみで処置された対応する１つ又は複数の細胞と比較して）、約５０％未満、約４０％未満、約３０％未満、約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、約５％未満、約２％未満、又は約１％未満、誘導又は増加させる。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の細胞はヒト細胞である。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の細胞はヒト末梢血単核球である。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の細胞は単球である。
［０２３９］いくつかの実施態様では、１つ又は複数の細胞によるＩ型ＩＦＮ、炎症性サイトカイン、及び／又はＮＦｋ－Ｂ依存性サイトカインの発現又は分泌は、酵素結合免疫吸着法（ＥＬＩＳＡ）、イムノブロッティング、Ｌｕｍｉｎｅｘアッセイ（例えば、ｗｗｗ．ｒｎｄｓｙｓｔｅｍｓ．ｃｏｍ／ｗｈａｔ－ｌｕｍｉｎｅｘ－ａｓｓａｙを参照）、ビーズベースのイムノアッセイなどのイムノアッセイ、Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ）などの電気化学発光ベースの方法、フローサイトメトリーにより分析されるサイトカインの細胞内染色、又は質量分析法などの当技術分野で知られている任意の適切な方法を使用して測定することができる。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の細胞によるＩ型ＩＦＮ、炎症性サイトカイン、及び／又はＮＦｋ－Ｂ依存性サイトカインの発現又は分泌は、例えば、ｑＰＣＲ、ＲＮＡ配列決定、マイクロアレイベースの方法、又は当技術分野で知られているｍＲＮＡを測定するための他の任意の適切な方法を使用して、Ｉ型ＩＦＮ、炎症性サイトカイン、及び／又はＮＦｋ－Ｂ依存性サイトカインのｍＲＮＡレベルに基づいて評価され得る。
［０２４０］いくつかの実施態様では、本開示の免疫調節組成物は、１つ又は複数のＢ細胞、例えば、１つ又は複数のナイーブＢ細胞、活性化Ｂ細胞、及び／又はメモリーＢ細胞の活性を調節する。いくつかの実施態様では、本開示の免疫調節組成物は、例えば、ＣＤ６９、ＣＤ８０、又はＣＤ８６などのＢ細胞活性化マーカーの発現に基づいて評価される、１つ又は複数のＢ細胞の活性化を増加又は増強する。いくつかの実施態様では、本開示の免疫調節組成物は、Ｂ細胞の増殖を増加又は増強する。いくつかの実施態様では、本開示の免疫調節組成物は、クラススイッチ組換えを増加又は増強する。いくつかの実施態様では、本開示の免疫調節組成物は、抗体分泌を増加又は増強する。いくつかの実施態様では、本開示の免疫調節組成物は、Ｂ細胞の発現又はサイトカインの分泌を増加又は増強する。いくつかの実施態様では、Ｂ細胞活性化マーカー及び／又はサイトカインは、酵素結合免疫吸着法（ＥＬＩＳＡ）、イムノブロッティング、Ｌｕｍｉｎｅｘアッセイ（例えば、ｗｗｗ．ｒｎｄｓｙｓｔｅｍｓ．ｃｏｍ／ｗｈａｔ－ｌｕｍｉｎｅｘ－ａｓｓａｙを参照）、ビーズベースのイムノアッセイなどのイムノアッセイ、Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ）などの電気化学発光ベースの方法、フローサイトメトリーにより分析されるサイトカインの細胞内染色、又は質量分析法などの当技術分野で知られている任意の適切な方法を使用して測定することができる。いくつかの実施態様では、１つ又は複数のＢ細胞によるＢ細胞活性化マーカー及び／又はサイトカインの発現又は分泌は、例えば、ｑＰＣＲ、ＲＮＡ配列決定、マイクロアレイベースの方法、又は当技術分野で知られているｍＲＮＡを測定するための他の任意の適切な方法を使用して、マーカー又はサイトカインのｍＲＮＡレベルに基づいて評価され得る。
［０２４１］いくつかの実施態様では、本開示の免疫調節組成物は、１つ又は複数のインターフェロン刺激遺伝子（ＩＳＧ）のレベルを調節する。いくつかの実施態様では、１つ又は複数のＩＳＧは、当技術分野で知られている任意のＩＳＧを含む。いくつかの実施態様では、１つ又は複数のＩＳＧは、Ｓｈａｍｉｔｈ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ（２００９）３７，ｓｕｐｐｌ＿１；Ｓｃｈｏｇｇｉｎｓ Ｒｉｃｅ，ＣｕｒｒＯｐｉｎ Ｖｉｒｏｌ（２０１１）１（６）：５１９－５２５；Ｆｏｒｓｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ（２０１３）（データベース発行）：Ｄ１０４０－Ｄ１０４６；Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ（２０１２）１０９（１１）：４２３９－４２４４に記載されている。評価され得るＩＳＧの例としては、限定されるものではないが、ＩＦＩＴ１、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＩＳＧ１５、ＣＣＬ８、２’５’ＯＡＳ、ＡＰＯＢＥＣ３Ｇ、ＡＰＯＢＥＣ３Ａ、ＰＫＲ、ＩＳＧ５６、Ｍｘ２、ＭＤＡ５、ＩＦＩ４４、ＩＲＦ７、ＯＡＳＬ１、ＩＳＧ２０ ＩＦＩＴ２、ＩＦＩＴ３、ＩＦＩＴＭ３、ＯＡＳ２、ＯＡＳ３、ＩＦＩ１６、ＩＲＦ１、ＭＸ１、又はＩＤＯが挙げられる。
［０２４２］いくつかの実施態様では、１つ又は複数のＩＳＧのレベルは、酵素結合免疫吸着法（ＥＬＩＳＡ）、イムノブロッティング、Ｌｕｍｉｎｅｘアッセイ（例えば、ｗｗｗ．ｒｎｄｓｙｓｔｅｍｓ．ｃｏｍ／ｗｈａｔ－ｌｕｍｉｎｅｘ－ａｓｓａｙを参照）、ビーズベースのイムノアッセイなどのイムノアッセイ、Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ）などの電気化学発光ベースの方法、フローサイトメトリーにより分析されるサイトカインの細胞内染色、又は質量分析法などの当技術分野で知られている任意の適切な方法を使用して評価され得る。いくつかの実施態様では、１つ又は複数のＩＳＧのレベルは、例えば、ｑＰＣＲ、ＲＮＡ配列決定、マイクロアレイベースの方法、又は当技術分野で知られているｍＲＮＡを測定するための他の任意の適切な方法を使用して、１つ又は複数のＩＳＧのｍＲＮＡレベルに基づいて評価され得る。
薬学的組成物
［０２４３］いくつかの態様では、本明細書で提供されるのは、本発明の免疫調節組成物を含む薬学的組成物である。このような薬学的組成物は、１つ又は複数の任意の薬学的に許容される添加物（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ 第１６版、Ｏｓｏｌ、Ａ．Ｅｄ．（１９８０））を含んでもよく、凍結乾燥製剤又は水溶液の形態であってもよい。
［０２４４］薬学的に許容される添加物は、一般に、使用される用量及び濃度ではレシピエントに対して無毒である。本開示の薬学的組成物に使用され得る例示的な薬学的に許容される添加物は、リン酸塩、クエン酸塩及び他の有機酸等の１つ又は複数の緩衝液；アスコルビン酸及びメチオニンを含む抗酸化剤；防腐剤（例えばオクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド；ヘキサメトニウムクロリド；塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、フェノール、ブチル又はベンジルアルコール；アルキルパラベン類、例えばメチル又はプロピルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３－ペンタノール；及びｍ－クレゾール）；低分子量（約１０残基未満）のポリペプチド；タンパク質、例えば血清アルブミン、ゼラチン又は免疫グロブリン；親水性ポリマー類、例えばポリビニルピロリドン；アミノ酸、例えばグリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン又はリジン；単糖類、二糖類、及びグルコース、マンノース又はデキストリンを含む他の炭水化物；キレート剤、例えばＥＤＴＡ；糖、例えばスクロース、マンニトール、トレハロース又はソルビトール；塩形成対イオン、例えばナトリウム；金属錯体（例えばＺｎ－タンパク質錯体）；及び／又は界面活性剤が挙げられる。
［０２４５］本開示の薬学的組成物に使用され得る例示的な薬学的に許容される添加物は、さらに、１つ又は複数の間質性薬物分散剤、例えば、可溶性中性活性ヒアルロニダーゼ糖タンパク質（ｓＨＡＳＥＧＰ）、例えば、ヒト可溶性ＰＨ－２０ヒアルロニダーゼ糖タンパク質、例えば、ｒＨｕＰＨ２０（ＨＹＬＥＮＥＸ（登録商標）、Ｂａｘｔｅｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．）を含む。ｒＨｕＰＨ２０を含む特定の例示的なｓＨＡＳＥＧＰ及び使用方法は、米国特許出願公開第２００５／０２６０１８６号及び第２００６／０１０４９６８号に記載されている。一態様では、ｓＨＡＳＥＧＰは、コンドロイチナーゼなどの１つ又は複数の追加のグリコサミノグリカナーゼと組み合わされる。
［０２４６］本開示の薬学的組成物の有効成分は、コロイド薬物送達系（例えば、リポソーム、アルブミンマイクロスフェア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子及びナノカプセル）又はマクロエマルジョンにおいて、例えば、コアセルベーション法又は界面重合によって調製されたマイクロカプセル、例えば、それぞれ、ヒドロキシメチルセルロース又はゼラチンマイクロカプセル及びポリ－（メチルメタクリレート）マイクロカプセルに封入され得る。このような技法は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ １６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０）に開示されている。
［０２４７］徐放性製剤を調製してもよい。徐放性製剤の好適な例としては、固体疎水性ポリマーの半透過性マトリックスが挙げられ、このマトリックスは、例えば、フィルム又はマイクロカプセル等の成型物品の形態である。
［０２４８］いくつかの実施態様では、本開示の薬学的組成物は、グアノシン又はグアノシン誘導体を含む。いくつかの実施態様では、グアノシン誘導体は、２’３’環状ＧＭＰ、７－チア－８－オキソグアノシン、７－デアザグアノシン、７－アリル－８－オキソグアノシン、７－デアザ－ｄＧ，９－ヘキシルグアニン、又はそれらの任意の組み合わせである。
［０２４９］ｉｎ ｖｉｖｏ投与に使用される製剤は、一般に無菌である。無菌性は、例えば、無菌濾過膜を通した濾過によって容易に達成され得る。
［０２５０］いくつかの実施態様では、本開示の薬学的組成物はワクチン組成物である。ワクチン組成物は、投与すると、病原体又はがん細胞などの罹患細胞を認識して攻撃する細胞性免疫応答などの免疫応答を誘導する薬学的組成物を指す。ワクチンは、疾患の予防や治療のために使用されることがある。本開示のワクチン組成物は、本開示のＲＮＡリガンド、薬学的に許容される担体、例えばポリ－Ｌ－アルギニン又はＤＯＴＡＰ、並びに薬学的に許容される添加物、本明細書に記載される任意の追加の薬剤、化合物、分子又は成分、及び／又は当技術分野で知られている任意の適切な追加の薬剤のうちの１つ又は複数を含み得る。
［０２５１］いくつかの実施態様では、本開示の薬学的組成物はアジュバント組成物である。アジュバント組成物は、投与すると、病原体又はがん細胞などの罹患細胞を認識して攻撃する細胞性免疫応答などの免疫応答を増強する任意の物質又は物質の組み合わせを指す。アジュバントは、疾患の予防や治療のために使用されることがある。本開示のアジュバント組成物は、本開示のＲＮＡリガンド、薬学的に許容される担体、例えばポリ－Ｌ－アルギニン又はＤＯＴＡＰ、並びに薬学的に許容される添加物、本明細書に記載される任意の追加の薬剤、化合物、分子又は成分、及び／又は当技術分野で知られている任意の適切な追加の薬剤のうちの１つ又は複数を含み得る。いくつかの実施態様では、本開示の免疫調節組成物、又は本開示の薬学的組成物は、ワクチン、例えば、抗ウイルスワクチン、抗細菌ワクチン、又は抗がんワクチンなどの別の治療のためのアジュバントとして使用され得る。
追加の治療剤
［０２５２］いくつかの実施態様では、本開示の薬学的組成物は、治療される特定の適応症に必要とされる複数の有効成分、好ましくは互いに悪影響を及ぼさない相補的活性を有する活性成分を含有し得る。例えば、本開示の免疫調節組成物（すなわち、本開示のＲＮＡリガンドを含む）に加えて、薬学的組成物中に、追加の薬剤、例えば別の免疫調節組成物、核酸、タンパク質又はポリペプチド（例えば、抗体又はその断片）、ワクチン又はワクチン組成物、アジュバント、及び／又は１つ若しくは複数の薬物、例えば、化学療法剤、細胞傷害性剤、サイトカイン、成長阻害剤、抗ホルモン剤、及び／又は心臓保護剤を含めることが望ましい場合がある。いくつかの実施態様では、本開示の薬学的組成物は、本開示の免疫調節組成物と、免疫賦活性剤、抗ウイルス剤、抗生物質、抗真菌剤、抗寄生虫剤、抗菌剤、抗腫瘍剤、ケモカイン、成長因子、抗血管新生因子、化学療法剤、抗体、遺伝子サイレンシング剤、又はサイトカイン（例えば、ＩＦＮ－α及び／又はＩＦＮ－βなどのＩ型ＩＦＮ）のうちの１つ又は複数とを含む。そのような分子又は薬剤は、意図される目的に有効な量で組み合わせて適切に存在する。
核酸、ベクター及び宿主細胞
［０２５３］いくつかの実施態様では、本開示のＲＮＡリガンドのいずれかを含むヌクレオチド配列を有する単離された核酸が提供される。いくつかの実施態様では、かかる核酸を含む１つ又は複数のベクター（例えば、発現ベクター）が提供される。いくつかの実施態様では、かかる核酸又はベクターを含む宿主細胞も提供される。いくつかの実施態様では、宿主細胞は真核細胞又は原核細胞である。本開示の宿主細胞には、単離された細胞、ｉｎ ｖｉｔｒｏ培養細胞、及びｅｘ ｖｉｖｏ培養細胞も含まれるが、これらに限定されない。
［０２５４］いくつかの実施態様では、本開示のＲＮＡリガンドを作製する方法が提供される。いくつかの実施態様では、本方法は、ＲＮＡリガンドの発現に適した条件下で、ＲＮＡリガンドを含む核酸又はベクターを含む本開示の宿主細胞を培養することを含む。いくつかの実施態様では、ＲＮＡリガンドは、続いて宿主細胞（又は宿主細胞培養培地）から回収される。本開示のＲＮＡリガンドの組換え産生のために、ＲＮＡリガンドを含む核酸が単離され、さらなるクローニング及び／又は宿主細胞での発現のために１つ又は複数のベクターに挿入される。このような核酸は、従来の手順を使用して容易に単離及び配列決定され得る。
［０２５５］本開示のＲＮＡリガンドを含む核酸配列を含む適切なベクターとしては、限定されないが、クローニングベクター及び発現ベクターが挙げられる。適切なクローニングベクターは、標準的な技術に従って構築することができ、あるいは当技術分野で利用可能な多数のクローニングベクターから選択することができる。選択されるクローニングベクターは使用する宿主細胞に応じて異なるが、有用なクローニングベクターは一般に自己複製能力を有し、特定の制限エンドヌクレアーゼに対する単一の標的を保有することができ、且つ／又はベクターを含むクローンを選択する際に使用できるマーカーの遺伝子を保有することができる。適切な例としては、プラスミド及び細菌ウイルス、例えば、ｐＵＣ１８、ｐＵＣ１９、Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔ（例えば、ｐＢＳ ＳＫ＋）及びその誘導体、ｍｐ１８、ｍｐ１９、ｐＢＲ３２２、ｐＭＢ９、ＣｏｌＥ１、ｐＣＲ１、ＲＰ４、ファージＤＮＡ、並びにｐＳＡ３及びｐＡＴ２８などのシャトルベクターが挙げられる。これら及び他の多くのクローニングベクターは、ＢｉｏＲａｄ、Ｓｔｒａｔｅｇｅｎｅ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎなどの市販ベンダーから入手可能である。
［０２５６］本開示のＲＮＡリガンド、核酸又はベクターのクローニング又は発現に適した宿主細胞には、原核細胞又は真核細胞が含まれる。例えば、糸状菌又は酵母などの真核微生物を使用することができる。植物及び昆虫からの細胞も宿主細胞として使用され得る。昆虫細胞と組み合わせて使用できるバキュロウイルス株が数多く同定されている。植物細胞培養物も宿主として利用することができる。脊椎動物細胞も、宿主として使用され得る。例えば、懸濁液中で増殖するように適合されている哺乳動物細胞株が有用であり得る。有用な哺乳動物宿主細胞株の他の例は、ＳＶ４０（ＣＯＳ－７）により形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株；ヒト胚性腎臓株（例えば、Ｇｒａｈａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ．３６：５９（１９７７））に記載される２９３又は２９３細胞）；ベビーハムスター腎細胞（ＢＨＫ）；マウスセルトリ細胞（例えば、Ｍａｔｈｅｒ，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．２３：２４３－２５１（１９８０）に記載されるＴＭ４細胞）；サル腎臓細胞（ＣＶ１）；アフリカ緑猿腎臓細胞（ＶＥＲＯ－７６）；ヒト子宮頸がん細胞（ＨＥＬＡ）；イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ）；水牛ラット肝臓細胞（ＢＲＬ ３Ａ）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８）；ヒト肝細胞（Ｈｅｐ Ｇ２）；マウス乳腺腫瘍（ＭＭＴ０６０５６２）；例えば、Ｍａｔｈｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎａｌｓ Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．３８３：４４－６８（１９８２）に記載されるＴＲＩ細胞；ＭＲＣ５細胞；及びＦＳ４細胞である。他の有用な哺乳動物宿主細胞株には、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞及び骨髄腫細胞株が含まれる。
治療方法
［０２５７］本明細書で提供されるのは、本開示の免疫調節組成物及び／又は薬学的組成物のｉｎ ｖｉｖｏ治療的使用である。
［０２５８］いくつかの態様では、本明細書で提供されるのは、本開示の免疫調節組成物及び／又は薬学的組成物を使用して、個体においてＴＬＲ７を選択的に活性化するための方法である。いくつかの実施態様では、本方法は、治療的有効量の本開示の免疫調節組成物及び／又は薬学的組成物を個体に投与することを含む。いくつかの実施態様では、本開示の免疫調節組成物及び／又は薬学的組成物は、例えば本明細書に記載されるように、単剤として、又は１つ若しくは複数の追加の治療剤と組み合わせて投与される。本明細書で提供される個体においてＴＬＲ７を選択的に活性化するための方法は、感染症、免疫障害、がんなどの特定の疾患、障害、又は症状の予防又は治療、及び／又は個体における免疫系の調節において用途を見出すことができる。
［０２５９］本明細書で使用される場合、「予防する（ｐｒｅｖｅｎｔｉｎｇ）」、「予防（ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ）」、「予防する（ｐｒｅｖｅｎｔ）」などには、個体における特定の疾患、障害、又は状態の発生又は再発に関して予防を提供することが含まれる。個体は、特定の疾患、障害、又は状態にかかりやすい、あるいはかかる疾患、障害、又は状態を発症する危険性があるが、まだその疾患、障害、又は状態と診断されていない場合がある。疾患、障害、又は状態を発症する「危険性のある」個体は、検出可能な疾患又は疾患の症状を有している場合もあれば、有していない場合もあり、本明細書に記載される治療方法の前に検出可能な疾患又は疾患の症状を示していた場合もあれば、示していない場合もある。「危険性がある」とは、個体が１つ以上の危険因子を有していることを示し、この危険因子は、当該技術分野で知られているように、特定の疾患、障害、又は状態の発症と相関する測定可能なパラメータである。これらの危険因子を１つ以上持つ個体は、これらの危険因子を１つ以上持たない個体よりも、特定の疾患、障害、又は状態を発症する確率が高くなる。
［０２６０］本明細書で使用される場合、「治療する（ｔｒｅａｔ）」、「治療する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」、「治療（ｔｒｅａｔ）」などは、臨床病理の経過中に治療される個体の自然な経過を変えるように設計された臨床的介入を指す。治療の望ましい効果としては、進行速度の低下、病理学的状態の改善又は緩和、及び特定の疾患、障害、又は状態の寛解又は予後の改善が挙げられる。例えば、特定の疾患、障害、又は状態に関連する１つ又は複数の症状が緩和又は除去された場合、その個体は首尾よく「治療」されたことになる。
［０２６１］本明細書で使用される場合、「治療的有効量」とは、特定の疾患、障害、又は状態の測定可能な改善をもたらすのに必要な、本開示の免疫調節組成物又は薬学的組成物などの薬剤の少なくとも最小量である。本明細書における治療的有効量は、患者の疾患状態、年齢、性別、及び体重、並びに個体における所望の応答を誘発する薬剤の能力などの要因に応じて異なり得る。治療的有効量はまた、薬剤の任意の毒性又は有害効果が治療上有益な効果によって上回る量である。
感染
［０２６２］ＴＬＲ７などのＴｏｌｌ様受容体やＩ型ＩＦＮは、ウイルス、細菌、寄生虫、真菌などの病原体による感染に対する自然免疫系及び適応免疫系の応答の制御におけるいくつかの既知の役割を有する。例えば、Ｌｅｓｔｅｒ ａｎｄ Ｌｉ，Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ（２０１４）４２６（６）：１２４６－１２６４；ＭａｃＮａｂ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ（２０２０）１５（２）：８７－１０３を参照。したがって、ＴＬＲ７を選択的に活性化する本開示の免疫調節組成物及び／又は薬学的組成物は、ウイルス感染症、細菌感染症、寄生虫感染症、及び／又は真菌感染症の予防又は治療において用途を見出すことができる。
［０２６３］いくつかの態様では、本明細書で提供されるのは、個体におけるウイルス感染症を予防又は治療するための方法である。いくつかの実施態様では、本方法は、治療的有効量の本開示の免疫調節組成物若しくは薬学的組成物；又は治療的有効量の本開示の免疫調節組成物若しくは薬学的組成物を、ウイルス感染症を予防又は治療するための１つ又は複数の追加の薬剤と組み合わせて、個体に投与することを含む。本開示の免疫調節組成物及び／又は薬学的組成物を使用して予防又は治療され得るウイルス感染症の例としては、限定されないが、呼吸器ウイルス、例えば、アデノウイルス、インフルエンザウイルス、パラインフルエンザウイルス、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、コロナウイルス、及びライノウイルスなど；おたふく風邪、麻疹、及びその他の小児期ウイルス、例えば、パラミクソウイルス、風疹ウイルス、風疹、パルボウイルス、及び水痘など；天然痘（痘瘡）などのポックスウイルス；エンテロウイルス、例えば、ポリオウイルス、コクサッキーウイルスＡ及びＢ、エコーウイルス、エコーウイルス、及びＡ型肝炎など；肝炎ウイルス、例えば、Ａ型、Ｂ型、Ｃ型、Ｄ型、及びＥ型肝炎ウイルスなど；ヘルペスウイルス、例えば、ヒト単純ヘルペスウイルス１（ＨＨＳＶ１、ＨＳＶ－１）、ヒト単純ヘルペスウイルス２（ＨＨＳＶ２、ＨＳＶ－２）、ヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）、水痘・帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）、ヒトヘルペスウイルス６型（ＨＨＶ６）、ヒトヘルペスウイルス７型（ＨＨＳＶ７、ＨＨＶ７）、及びヒトヘルペスウイルス８型（ＨＨＳＶ８、ＨＨＶ８）など；リッサウイルスなどのラブドウイルス；パポバウイルス、例えば、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、及びＪＣウイルス、ＢＫウイルスなど；レトロウイルス、例えば、ＨＩＶ－１、ＨＩＶ－２、及びヒトＴリンパ球ウイルス（ＨＴＬＶ）など；アルボウイルス、例えば、デングウイルス、黄熱病、日本脳炎ウイルス、西ナイルウイルス、ダニ媒介性脳炎、ベシクロウイルス、ロスリバーウイルス、シンドビスウイルス、及びフレボウイルスなど；プリオン；並びに限定されないが、エボラウイルス、マールブルグウイルス、ラッサウイルス、アフリカ豚コレラウイルス、モルビリウイルス、ハンタウイルス、リッサウイルス、及び重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）を含む他のウイルス感染症が挙げられる。
［０２６４］いくつかの態様では、本明細書で提供されるのは、個体における細菌感染症を予防又は治療するための方法である。いくつかの実施態様では、本方法は、治療的有効量の本開示の免疫調節組成物若しくは薬学的組成物；又は治療的有効量の本開示の免疫調節組成物若しくは薬学的組成物を、細菌感染症を予防又は治療するための１つ又は複数の追加の薬剤と組み合わせて、個体に投与することを含む。本開示の免疫調節組成物及び／又は薬学的組成物を使用して予防又は治療され得る細菌感染症の例としては、限定されないが、ストレプトコッカス・アガラクチア、大腸菌、リステリア菌、肺炎球菌、インフルエンザ菌、髄膜炎菌、クレブシエラ属、黄色ブドウ球菌、肺炎球菌、結核菌、クリプトコッカス・ネオフォルマンス、又は破傷風菌が挙げられる。本開示の免疫調節組成物及び／又は薬学的組成物を使用して予防又は治療され得る細菌感染症の他の例としては、限定されないが、皮膚感染症、例えば、黄色ブドウ球菌、化膿性連鎖球菌、又はプロピオニバクテリウム・アクネスなど；耳感染症、例えば、肺炎球菌、カタル球菌、インフルエンザ菌、緑膿菌、黄色ブドウ球菌など；眼感染症、例えば、黄色ブドウ球菌、肺炎球菌、化膿性連鎖球菌、インフルエンザ菌、腸球菌、腸内細菌科、緑膿菌、カタル球菌、ペプトストレプトコッカス、緑色連鎖球菌、ジフテリア菌、プロテウス・ミラビリス、肺炎桿菌、セラチア・マルセセンス、大腸菌、エロモナス・ハイドロフィラ、モラクセラ菌、パスツレラ・マルトシダ、アシネトバクター、バチルス、クラミジア・トラコマチス、クロストリジウム、淋菌、髄膜炎菌、又は表皮ブドウ球菌など；気道感染症、例えば、肺炎球菌、黄色ブドウ球菌、マイコプラズマ肺炎、クラミドフィラ・ニューモニエ、化膿連鎖球菌、大腸菌、ストレプトコッカス・アガラクチア、クラミジア・トラコマチス、マイコプラズマ肺炎、又はヘモフィルス・インフルエンザエなど；あるいは、胃腸感染症、例えば、ミュータンス連鎖球菌、ストレプトコッカス・ソブリナス、連鎖球菌属、ラクトバチルス・カゼイ、放線菌属、フソバクテリウム属、プレボテラ・インターメディア、トレポネーマ・デンティコラ、又はビフィドバクテリウム属などが挙げられる。
［０２６５］いくつかの態様では、本明細書で提供されるのは、個体における真菌感染症を予防又は治療するための方法である。いくつかの実施態様では、本方法は、治療的有効量の本開示の免疫調節組成物若しくは薬学的組成物；又は治療的有効量の本開示の免疫調節組成物若しくは薬学的組成物を、真菌感染症を予防又は治療するための１つ又は複数の追加の薬剤と組み合わせて、個体に投与することを含む。本開示の免疫調節組成物及び／又は薬学的組成物を使用して予防又は治療され得る真菌感染症の例としては、限定されないがアブシジア・コリムビフェラ（Ａｂｓｉｄｉａ ｃｏｒｙｍｂｉｆｅｒａ）、アクレモニウム・ファルシフォルメ（Ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍｆａｌｃｉｆｏｒｍｅ）、Ａ．キリエンセ（Ａ．ｋｉｌｉｅｎｓｅ）、Ａ．レシフェイ（Ａ．ｒｅｃｉｆｅｉ）、Ａ．デルマチチジス（Ａｊｅｌｌｏｍｙｃｅｓ ｄｅｒｍａｔｉｔｉｄｉｓ）、Ａ．カプスラータ（Ａ．ｃａｐｓｕｌａｔａ）、アスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｓｐｐ．）、（例えば、Ａ．フラーブス（Ａ．ｆｌａｖｕｓ）、Ａ．フミガーツス（Ａ．ｆｕｍｉｇａｔｕｓ）、Ａ・ニデュランス（Ａ．ｎｉｄｕｌａｎｓ）、Ａ・ニガー（Ａ．ｎｉｇｅｒ）、Ａ．テレウス（Ａ．ｔｅｒｒｅｕｓ）），カンジダ属菌（Ｃａｎｄｉｄａ ｓｐｐ．）（例えば、Ｃ．アルビカンス（Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓ）、Ｃ．グラブラタ（Ｃ．ｇｌａｂｒａｔａ）、Ｃ．ｇｕｉｌｌｅｒｍｏｎｄｉｉ、Ｃ．クルーセイ（Ｃ．ｋｒｕｓｅｉ）、Ｃ．パラプシローシス（Ｃ．ｐａｒａｐｓｉｌｏｓｉｓ）、Ｃ．ｋｅ ｙｒ、Ｃ．トロピカリス（Ｃ．ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ）），Ｃ．ネオフォルマンス（Ｃ．ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）、カニンガメラ・エレガンス（Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍｅｌｌａ ｅｌｅｇａｎｓ）、エモンシア・パルヴァ（Ｅｍｍｏｎｓｉａ ｐａｒｖａ）、エピデルモフィトン・フロッコッサム（Ｅｐｉｄｅｒｍｏｐｈｙｔｏｎ ｆｌｏｃｃｏｓｕｍ）、エクソフィアリア・デルミティディス（Ｅｘｏｐｈｉａｌｉａ ｄｅｒｍｉｔｉｄｉｓ）、Ｅ．ウェルネッキー（Ｅ．ｗｅｒｎｅｃｋｉｉ）、Ｅ．ジェアンセルメイ（Ｅ．ｊｅａｎｓｅｌｍｅｉ）、Ｅ．スピニフェラ（Ｅ．ｓｐｉｎｉｆｅｒａ）、Ｅ．・リチャードシエ（Ｅ．ｒｉｃｈａｒｄｓｉａｅ）、フィロバシディエラ・ネオフォルマンス（Ｆｉｌｏｂａｓｉｄｉｅｌｌａ ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）、フォンセカイア・コンパクタ（Ｆｏｎｓｅｃａｅａ ｃｏｍｐａｃｔａ）、フォンセケア・ペドロソイ（Ｆ．ｐｅｄｒｏｓｏｉ）、ヒストプラスマ・カプスラツム（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ）、レプトスフェリア・セネガレンシス（Ｌｅｐｔｏｓｈａｅｒｉａ ｓｅｎｅｇａｒｌｅｎｓｉｓ）、マズレラ・マイセトマティス（Ｍａｄｕｒｅｌｌａ ｍｙｃｅｔｏｍａｔｉｓ）、Ｍ．グリセア（Ｍ．ｇｒｉｓｅａ）、マラセジア・フルフル（Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ ｆｕｒｆｕｒ）、ミクロスポルム属（Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｕｍ ｓｐｐ）、ネオテスツジナ・ロサチイ（Ｎｅｏｔｅｓｔｕｄｉｎａ ｒｏｓａｔｉｉ）、パラコクシジオイデス・ブラジリエンシス（Ｐａｒａｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ）、ペニシリウム・マルネッフェイ（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｍａｒｎｅｆｆｅｉ）、フィアロフォラ・ヴェルコーサ（Ｐｈｉａｌｏｐｈｏｒａ ｖｅｒｒｕｃｏｓａ）、Ｐｉｅｄｒａｉａ ｈｏｒｔａｅ、ニューモシスチス・カリニ（Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ ｃａｒｉｎｉｉ）、シュードアレシェリア・ボイジイ（Ｐｓｅｕｄａｌｌｅｓｃｈｅｒｉａ ｂｏｙｄｉｉ）、ピレノケータ・ロメロイ（Ｐｙｒｅｎｏｃｈａｅｔａ ｒｏｍｅｒｏｉ）、リゾムコール・プシルス（Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒ ｐｕｓｉｌｌｕｓ）、スポロトリックス・シェンキイ（Ｓｐｏｒｏｔｈｒｉｘ ｓｃｈｅｎｃｋｉｉ）、トリコフィトン属（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｓｐｐ）、トリコスポロン・ベゲリイ（Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｏｎ ｂｅｉｇｅｌｉｉ）、又はキシロヒョウファ・バンティアナ（Ｘｙｌｏｈｙｐｈａ ｂａｎｔｉａｎａ）が挙げられる。
［０２６６］いくつかの態様では、本明細書で提供されるのは、個体における寄生虫感染症を予防又は治療するための方法である。いくつかの実施態様では、本方法は、治療的有効量の本開示の免疫調節組成物若しくは薬学的組成物；又は治療的有効量の本開示の免疫調節組成物若しくは薬学的組成物を、寄生虫感染症を予防又は治療するための１つ又は複数の追加の薬剤と組み合わせて、個体に投与することを含む。本開示の免疫調節組成物及び／又は薬学的組成物を使用して予防又は治療され得る寄生虫感染症の例としては、腸内寄生虫感染症などの寄生虫感染症が挙げられるが、これらに限定されない。本開示の免疫調節組成物及び／又は薬学的組成物を使用して予防又は治療され得る寄生虫感染症の他の例としては、限定されないが、アカントアメーバ、アフリカ睡眠病（アフリカトリパノソーマ症）、肺胞性エキノコックス症（エキノコックス症、包虫症）、アメーバ症（赤痢アメーバ）、アメリカトリパノソーマ症（シャーガス病）、鉤虫症（鉤虫）、住血線虫症（住血線虫属）、アニサキス症（アニサキス、偽テラノバ）、回虫症（回虫、腸回虫）、バベシア症（バベシア）、バランティディア症（バランティジウム）、バラムチア、ベイリサスカリア症（ベイリサスカリス、アライグマ回虫）、ビルハルジア（住血吸虫症）、ヒトブラストシスチス感染症、毛細血管症（キャピラリア）、セカリア皮膚炎（水泳者かゆみ症）、シャーガス病（アメリカトリパノソーマ症）、メニール鞭毛虫、肝吸虫症（肝吸虫）、皮膚幼虫移行症、鉤虫症、クリプトスポリジウム症（クリプトスポリジウム）、シクロスポリジウム症（シクロスポラ）、嚢虫症（神経嚢虫症）、シストイソスポーラ（シストイソスポーラ症）、イソスポラ症、二核アメーバ、裂頭条虫症（裂頭条虫）、瓜実条虫感染症、イヌ糸状虫症（イヌ糸状虫）、ＤＰＤｘ、メジナ虫症（ギニアワーム病）、瓜実条虫、エキノコックス症（嚢胞性、肺胞胞状疾患）、象皮病（フィラリア症、リンパ性フィラリア症）、小形アメーバ、大腸アメーバ、エントアメーバ・ディスパー、エンタメーバ・ハルトマン、赤痢アメーバ（アメーバ症）、エンタメーバ・ポレッキ、腸蟯虫症（蟯虫）、肝蛭症（肝蛭属）、肥大吸虫症（肥大吸虫）、フィラリア症、ジアルジア症（ジアルジア属）、顎口虫症（顎口虫）、異形吸虫症（異形吸虫）、包虫症、膜様条虫症（膜様条虫）、腸回虫（回虫症、回虫感染症）、ヨードアメーバ、イソスポーラ属、カラアザール（リーシュマニア症、リーシュマニア）、角膜炎（アカントアメーバ）、肝吸虫症（肝吸虫症、オピストルキス症、肝蛭症）、ロア症（ロアロア）、リンパ性フィラリア症、マラリア（マラリア原虫）、微胞子虫症（微胞子虫）、ダニ、シラミ、ハエ幼虫症、ネグレリア、神経嚢虫症（嚢虫症）、眼幼虫移行症（トキソカリア症、トキソカラ症、内臓幼虫移行症）、オンコセルカ症（河川盲目症）、オピストルキス症（オピストルキス）、肺吸虫症（肺吸虫）、ペディキュラ症、ケジラミ症、腸蟯虫症、ニューモシスティスジロベシ肺炎、シュードテラノバ症（アニサキス症、アニサキス）、ベイリサスカリス症（ベイリサスカリス）、サッピニア、肉胞子虫症（肉胞子虫症）、住血吸虫症（ビルハルツ症）、睡眠病（トリパノソーマ症）、土壌伝染性蠕虫症、糞線虫症（糞線虫類）、条虫症（条虫）、トキソプラズマ症（トキソプラズマ）、旋毛虫症（旋毛虫症）、旋毛虫症（旋毛虫症）、トリコモナス症（トリコモナス）、又は鞭虫症（鞭虫、鞭虫属）が挙げられる。
免疫疾患
［０２６７ＴＬＲ７などのＴｏｌｌ様受容体、及びＩ型ＩＦＮは、免疫不全、自己免疫疾患、アレルギーなどの免疫疾患の免疫病理学におけるいくつかの既知の役割を有する。例えば、Ｕｅｍａｔｓｕ ａｎｄ Ａｋｉｒａ，Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ Ｂｉｏｌ Ｔｈｅｒ（２００６）６（３）：２０３－１４；Ｃｒｏｗ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎｕａｌ Ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ：Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｏｆ Ｄｉｓｅａｓｅ-Ｔｙｐｅ Ｉ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎｓ ｉｎ Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ Ｄｉｓｅａｓｅ（２０１９）１４：３６９－３９３；及びＷａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ（２０１７）８：１４３１を参照。したがって、ＴＬＲ７を選択的に活性化する本開示の免疫調節組成物及び／又は薬学的組成物は、免疫不全、自己免疫疾患又はアレルギーなどの免疫疾患の予防又は治療において用途を見出すことができる。
［０２６８］いくつかの態様では、本明細書で提供されるのは、個体における免疫疾患を予防又は治療するための方法である。いくつかの実施態様では、本方法は、治療的有効量の本開示の免疫調節組成物若しくは薬学的組成物；又は治療的有効量の本開示の免疫調節組成物若しくは薬学的組成物を、免疫疾患を予防又は治療するための１つ又は複数の追加の薬剤と組み合わせて、個体に投与することを含む。本開示の免疫調節組成物及び／又は薬学的組成物を使用して予防又は治療され得る免疫疾患の例には、限定されないが、自己免疫疾患、免疫不全症、及びアレルギーが含まれる。
［０２６９］本開示の免疫調節組成物及び／又は薬学的組成物を使用して予防又は治療され得るアレルギーの非限定的な例としては、季節性アレルギー、肥満細胞症、通年性アレルギー、アナフィラキシー、食物アレルギー、アレルギー性鼻炎、又はアトピー性皮膚炎が挙げられる。
［０２７０］本開示の免疫調節組成物及び／又は薬学的組成物を使用して予防又は治療され得る免疫不全の非限定的な例には、原発性免疫不全症、例えば、重症複合免疫不全症（ＳＣＩＤ）、ディジョージ症候群、高免疫グロブリンＥ症候群（ジョブ症候群としても知られる）、共通可変免疫不全症（ＣＶＩＤ）、慢性肉芽腫性疾患（ＣＧＤ）、ウィスコット・アルドリッチ症候群（ＷＡＳ）、自己免疫リンパ増殖性症候群（ＡＬＰＳ）、高ＩｇＭ症候群、白血球粘着不全症（ＬＡＤ）、ＮＦ－κＢ必須修飾因子（ＮＥＭＯ）変異、選択的免疫グロブリンＡ欠損症、Ｘ連鎖無ガンマグロブリン血症、Ｘ連鎖リンパ増殖性疾患（ＸＬＰ）、及び運動失調・毛細血管拡張症など；続発性免疫不全症、例えば、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）；薬物誘発性の免疫不全又は免疫抑制；又は慢性血液透析、外傷若しくは外科的処置によって引き起こされる免疫抑制が挙げられる。
［０２７１］本開示の免疫調節組成物及び／又は薬学的組成物を使用して予防又は治療され得る自己免疫障害の非限定的な例には、狼瘡、強皮症、溶血性貧血、血管炎、１型糖尿病、バセドウ病、関節炎（関節リウマチ、若年性関節リウマチ、変形性関節症、乾癬性関節炎を含む）、多発性硬化症、糖尿病、グッドパスチャー症候群、悪性貧血、ミオパチー、セリアック病、炎症性腸疾患、再生不良性貧血、ライム病、脳脊髄炎、重症筋無力症、全身性エリテマトーデス、自己免疫性甲状腺炎、皮膚炎（アトピー性皮膚炎、湿疹性皮膚炎を含む）、乾癬、シェーグレン症候群、クローン病、アフタ性潰瘍、虹彩炎、結膜炎、角結膜炎、潰瘍性大腸炎、喘息、アレルギー性喘息、皮膚エリテマトーデス、膣炎、直腸炎、薬疹、ハンセン病好転反応、ハンセン病結節性紅斑、自己免疫性ブドウ膜炎、アレルギー性脳脊髄炎、急性壊死性出血性脳症、特発性両側性進行性感音性難聴、純赤血球貧血、特発性血小板減少症、多発性軟骨炎、ウェゲナー肉芽腫症、慢性活動性肝炎、スティーブンス・ジョンソン症候群、特発性スプルー、扁平苔癬、サルコイドーシス、原発性胆汁性肝硬変、後部ぶどう膜炎、及び間質性肺線維症が挙げられる。
がん
［０２７２］ＴＬＲ７などのＴｏｌｌ様受容体、及びＩ型ＩＦＮは、抗腫瘍免疫応答の制御におけるいくつかの既知の役割を有する。例えば、Ｕｒｂａｎ－Ｗｏｊｃｉｕｋ ｅｔ ａｌ．，Ｆｒｏｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ（２０１９）１０：２３８８；Ｍｕｓｅｌｌａ ｅｔ ａｌ．，（２０１７）６（５）：ｅ１３１４４２４；及びＺｉｔｖｏｇｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（２０１５）１５：４０５－４１４を参照。したがって、ＴＬＲ７を選択的に活性化する本開示の免疫調節組成物及び／又は薬学的組成物は、がんの予防又は治療において用途を見出すことができる。
［０２７３］いくつかの態様では、本明細書で提供されるのは、個体におけるがんを予防又は治療するための方法である。いくつかの実施態様では、本方法は、治療的有効量の本開示の免疫調節組成物若しくは薬学的組成物；又は治療的有効量の本開示の免疫調節組成物若しくは薬学的組成物を、がんを予防又は治療するための１つ又は複数の追加の薬剤と組み合わせて、個体に投与することを含む。本開示の免疫調節組成物及び／又は薬学的組成物を使用して予防又は治療され得るがんの例には、限定されないが、癌腫、肉腫、リンパ腫、白血病、胚細胞腫瘍、及び芽細胞腫が挙げられる。本開示の免疫調節組成物及び／又は薬学的組成物を使用して予防又は治療され得るがんの具体例としては、限定されないが、骨肉腫、筋肉肉腫、例えば、軟骨肉腫、ユーイング肉腫、骨悪性線維性組織球腫／骨肉腫、骨肉腫、横紋筋肉腫、及び心臓がんなど；脳及び神経系のがん、例えば、星状細胞腫、脳幹神経膠腫、毛様細胞性星状細胞腫、上衣腫、原始神経外胚葉腫瘍、小脳星状細胞腫、大脳星状細胞腫、神経膠芽腫、神経膠腫、髄芽腫、神経芽腫、希突起膠腫、松果体星状細胞腫、下垂体腺腫、視覚路、及び視床下部神経膠腫など；乳がん、例えば、浸潤性小葉がん、管状がん、浸潤性篩状がん、髄様がん、男性乳がん、葉状腫瘍、及び炎症性乳がんなど；内分泌系がん、例えば、副腎皮質がん、島細胞がん（膵内分泌）、多発性内分泌、腫瘍形成症候群、副甲状腺がん、褐色細胞腫、甲状腺がん、及びメルケル細胞がんなど；眼のがん、例えば、ブドウ膜黒色腫及び網膜芽細胞腫など；消化器がん、例えば、肛門がん、虫垂がん、胆管がん、カルチノイド腫瘍、胃腸がん、結腸がん、
肝外胆管がん、胆嚢がん、胃（ｇａｓｔｒｉｃ）（胃（ｓｔｏｍａｃｈ））がん、消化管カルチノイド腫瘍、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、肝細胞がん、膵臓がん、島細胞がん、及び直腸がんなど；泌尿生殖器がん及び婦人科がん、例えば、膀胱がん、子宮頸がん、子宮内膜がん、性腺外胚細胞腫瘍、卵巣がん、卵巣上皮がん（表面上皮間質腫瘍）、卵巣胚細胞腫瘍、陰茎がん、腎細胞がん、腎盂及び尿管、移行上皮がん、前立腺がん、精巣がん、妊娠性絨毛腫瘍、尿管及び腎盂、移行上皮がん、尿道がん、子宮肉腫、膣がん、外陰がん、及びウィルムス腫瘍など；頭頸部がん、例えば、食道がん、頭頸部がん、上咽頭がん、口腔がん、中咽頭がん、副鼻腔及び鼻腔がん、咽頭がん、唾液腺がん、及び下咽頭がんなど；造血がん、例えば、急性混合白血病、急性好酸球性白血病、急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、急性骨髄性樹状細胞白血病、エイズ関連リンパ腫、未分化大細胞リンパ腫、血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫、Ｂ細胞性前リンパ球性白血病、バーキットリンパ腫、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、ヘアリー細胞白血病、肝脾Ｔ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、ヘアリー細胞白血病、血管内大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、大顆粒リンパ球性白血病、リンパ形質細胞性リンパ腫、リンパ腫様肉芽腫症、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、マスト細胞白血病、縦隔大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、多発性骨髄腫／形質細胞腫瘍、骨髄異形成症候群、粘膜関連リンパ組織リンパ腫、菌状息肉症、結節性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、前駆体Ｂリンパ芽球性白血病、原発性中枢神経系リンパ腫、原発性皮膚濾胞性リンパ腫、原発性皮膚免疫細胞腫、原発性滲出性リンパ腫、形質芽球性リンパ腫、セザリー症候群、脾臓辺縁帯リンパ腫、Ｔ細胞前リンパ球性白血病など；皮膚がん、例えば、基底細胞癌、扁平上皮癌、皮膚付属器腫瘍（脂腺癌など）、黒色腫、メルケル細胞癌、皮膚原発肉腫（隆起性皮膚線維肉腫など）、皮膚原発リンパ腫（菌状息肉腫など）；胸部がん及び呼吸器がん、気管支腺腫／カルチノイド、小細胞肺がん、中皮腫、非小細胞肺がん、胸膜肺芽腫、喉頭がん、胸腺腫、胸腺癌など；エイズ関連がん；カポジ肉腫；
類上皮血管内皮腫（ＥＨＥ）；線維形成性小円形細胞腫瘍及び脂肪肉腫が挙げられる。
免疫応答の増強
［０２７４］ＴＬＲ７などのＴｏｌｌ様受容体及びＩ型ＩＦＮは、体液性免疫、適応免疫、抗原特異的Ｔ細胞応答の制御を含むがこれらに限定されない、免疫系の制御におけるいくつかの既知の役割を有する。例えば、Ｌｅ Ｂｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ（２００１）１４（４）：４６１－４７０；Ｆｉｔｚｇｅｒａｌｄ ａｎｄ Ｋａｇａｎ，Ｃｅｌｌ（２０２０）１８０（６）：１０４４－１０６６；及びＬｉ ｅｔ ａｌ．，Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ（２０１９）１０：２１９１を参照。したがって、ＴＬＲ７を選択的に活性化する本開示の免疫調節組成物及び／又は薬学的組成物は、個体における体液性免疫、適応免疫、Ｂ細胞応答、及び／又は抗原特異的Ｔ細胞応答を増加、誘導、又は増強することに用途を見出すことができる。
［０２７５］いくつかの態様では、本明細書で提供されるのは、個体における体液性免疫を増加、誘導、又は増強するための方法である。いくつかの実施態様では、本方法は、治療的有効量の本開示の免疫調節組成物若しくは薬学的組成物を；又は１つ若しくは複数の追加の薬剤と組み合わせた、治療的有効量の本開示の免疫調節組成物若しくは薬学的組成物を、個体に投与することを含む。
［０２７６］いくつかの態様では、本明細書で提供されるのは、個体における適応免疫を増加、誘導、又は増強するための方法である。いくつかの実施態様では、本方法は、治療的有効量の本開示の免疫調節組成物若しくは薬学的組成物を；又は１つ若しくは複数の追加の薬剤と組み合わせた、治療的有効量の本開示の免疫調節組成物若しくは薬学的組成物を、個体に投与することを含む。
［０２７７］いくつかの態様では、本明細書で提供されるのは、個体における抗原特異的Ｔ細胞応答（例えば、ＣＤ８＋Ｔ細胞）を増加、誘導、又は増強するための方法である。いくつかの実施態様では、本方法は、治療的有効量の本開示の免疫調節組成物若しくは薬学的組成物を；又は１つ若しくは複数の追加の薬剤と組み合わせた、治療的有効量の本開示の免疫調節組成物若しくは薬学的組成物を、個体に投与することを含む。
［０２７８］いくつかの態様では、本明細書で提供されるのは、個体におけるＢ細胞の活性化及び／又は増殖を増加、誘導、又は増強するための方法である。いくつかの実施態様では、本方法は、治療的有効量の本開示の免疫調節組成物若しくは薬学的組成物を；又は１つ若しくは複数の追加の薬剤と組み合わせた、治療的有効量の本開示の免疫調節組成物若しくは薬学的組成物を、個体に投与することを含む。
［０２７９］いくつかの態様では、本明細書で提供されるのは、個体における樹状細胞（例えば、ｃＤＣ、形質細胞様樹状細胞）の活性化及び／又は増殖を増加、誘導、又は増強するための方法である。いくつかの実施態様では、本方法は、治療的有効量の本開示の免疫調節組成物若しくは薬学的組成物を；又は１つ若しくは複数の追加の薬剤と組み合わせた、治療的有効量の本開示の免疫調節組成物若しくは薬学的組成物を、個体に投与することを含む。
［０２８０］いくつかの態様では、本明細書で提供されるのは、個体におけるＩＬ－１２産生を増加、誘導、又は増強するための方法である。いくつかの実施態様では、本方法は、治療的有効量の本開示の免疫調節組成物若しくは薬学的組成物を；又は１つ若しくは複数の追加の薬剤と組み合わせた、治療的有効量の本開示の免疫調節組成物若しくは薬学的組成物を、個体に投与することを含む。
［０２８１］いくつかの態様では、本明細書で提供されるのは、個体におけるＴ細胞プライミングを増加、誘導、又は増強するための方法である。いくつかの実施態様では、本方法は、治療的有効量の本開示の免疫調節組成物若しくは薬学的組成物を；又は１つ若しくは複数の追加の薬剤と組み合わせた、治療的有効量の本開示の免疫調節組成物若しくは薬学的組成物を、個体に投与することを含む。
［０２８２］いくつかの態様では、本明細書で提供されるのは、個体におけるＢ細胞クラススイッチ組換えを増加、誘導、又は増強するための方法である。いくつかの実施態様では、本方法は、治療的有効量の本開示の免疫調節組成物若しくは薬学的組成物を；又は１つ若しくは複数の追加の薬剤と組み合わせた、治療的有効量の本開示の免疫調節組成物若しくは薬学的組成物を、個体に投与することを含む。
［０２８３］いくつかの態様では、本明細書で提供されるのは、個体におけるＢ細胞抗体分泌を増加、誘導、又は増強するための方法である。いくつかの実施態様では、本方法は、治療的有効量の本開示の免疫調節組成物若しくは薬学的組成物を；又は１つ若しくは複数の追加の薬剤と組み合わせた、治療的有効量の本開示の免疫調節組成物若しくは薬学的組成物を、個体に投与することを含む。
［０２８４］いくつかの態様では、本明細書で提供されるのは、個体におけるＢ細胞サイトカイン分泌を増加、誘導、又は増強するための方法である。いくつかの実施態様では、本方法は、治療的有効量の本開示の免疫調節組成物若しくは薬学的組成物を；又は１つ若しくは複数の追加の薬剤と組み合わせた、治療的有効量の本開示の免疫調節組成物若しくは薬学的組成物を、個体に投与することを含む。
［０２８５］本明細書に記載されるいずれかの治療方法のいくつかの実施態様では、本方法は、個体が本開示の免疫調節組成物及び／又は薬学的組成物の１つ又は複数の用量を受ける前及び／又は後に、個体から得られた試料においてＴＬＲ７活性のレベルを測定することをさらに含む。いくつかの実施態様では、方法は、個体が本開示の免疫調節組成物及び／又は薬学的組成物の１つ又は複数の用量を受ける前及び／又は後に、個体から得られた試料において１つ又は複数のＩ型ＩＦＮ（例えば、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ＩＦＮ－κ、ＩＦＮ－δ、ＩＦＮ－ε、ＩＦＮ－τ、ＩＦＮ－ω、又はＩＦＮ－ζのうちの１つ又は複数）のレベルを測定することをさらに含む。いくつかの実施態様では、方法は、個体が本開示の免疫調節組成物及び／又は薬学的組成物の１つ又は複数の用量を受ける前及び／又は後に、個体から得られた試料においてＩＦＮ－αのレベルを測定することをさらに含む。［０２８５］いくつかの実施態様では、方法は、個体が本開示の免疫調節組成物及び／又は薬学的組成物の１つ又は複数の用量を受ける前及び／又は後に、個体から得られた試料において１つ又は複数のインターフェロン刺激遺伝子（ＩＳＧ）のレベルを測定することをさらに含む。いくつかの実施態様では、１つ又は複数のＩＳＧは、当技術分野で知られている任意のＩＳＧ、例えば、Ｓｈａｍｉｔｈ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ（２００９）３７，ｓｕｐｐｌ＿１；Ｓｃｈｏｇｇｉｎｓ ａｎｄ Ｒｉｃｅ，ＣｕｒｒＯｐｉｎ Ｖｉｒｏｌ（２０１１）１（６）：５１９－５２５；Ｆｏｒｓｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ（２０１３）（ｄａｔａｂａｓｅ ｉｓｓｕｅ）：Ｄ１０４０－Ｄ１０４６；Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ（２０１２）１０９（１１）：４２３９－４２４４に記載されている１つ又は複数のＩＳＧを含む。評価され得るＩＳＧの例としては、限定されるものではないが、ＩＦＩＴ１、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＩＳＧ１５、ＣＣＬ８、２’５’ＯＡＳ、ＡＰＯＢＥＣ３Ｇ、ＡＰＯＢＥＣ３Ａ、ＰＫＲ、ＩＳＧ５６、Ｍｘ２、ＭＤＡ５、ＩＦＩ４４、ＩＲＦ７、ＯＡＳＬ１、ＩＳＧ２０ ＩＦＩＴ２、ＩＦＩＴ３、ＩＦＩＴＭ３、ＯＡＳ２、ＯＡＳ３、ＩＦＩ１６、ＩＲＦ１、ＭＸ１、又はＩＤＯが挙げられる。
［０２８６］いくつかの実施態様では、試料は血液試料、血漿試料、又は血清試料である。いくつかの実施態様では、試料は、例えば脾臓、１つ若しくは複数のリンパ節、又は腫瘍からの組織生検である。いくつかの実施態様では、Ｉ型ＩＦＮのレベルは、酵素結合免疫吸着法、イムノブロッティング、Ｌｕｍｉｎｅｘアッセイ（例えば、ｗｗｗ．ｒｎｄｓｙｓｔｅｍｓ．ｃｏｍ／ｗｈａｔ－ｌｕｍｉｎｅｘ－ａｓｓａｙを参照）、ビーズベースのイムノアッセイなどのイムノアッセイ、Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ）などの電気化学発光ベースの方法、フローサイトメトリーにより分析されるサイトカインの細胞内染色、又は質量分析法などの当技術分野で知られている任意の適切な方法を使用して測定され得る。いくつかの実施態様では、Ｉ型ＩＦＮのレベルは、例えば、ｑＰＣＲ、ＲＮＡ配列決定、マイクロアレイベースの方法、又は当技術分野で知られているｍＲＮＡを測定するための他の任意の適切な方法を使用して、Ｉ型ＩＦＮのｍＲＮＡレベルに基づいて評価され得る。いくつかの実施態様では、Ｉ型ＩＦＮのレベルは、蛍光ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）、ｑＰＣＲ、又は組織試料中のＲＮＡレベルを測定するための当技術分野で知られている他の任意の適切な方法によって評価され得る。いくつかの実施態様では、１つ又は複数のＩＳＧのレベルは、酵素結合免疫吸着法（ＥＬＩＳＡ）、イムノブロッティング、Ｌｕｍｉｎｅｘアッセイ（例えば、ｗｗｗ．ｒｎｄｓｙｓｔｅｍｓ．ｃｏｍ／ｗｈａｔ－ｌｕｍｉｎｅｘ－ａｓｓａｙを参照）、ビーズベースのイムノアッセイなどのイムノアッセイ、Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ）などの電気化学発光ベースの方法、フローサイトメトリーにより分析されるサイトカインの細胞内染色、又は質量分析法などの当技術分野で知られている任意の適切な方法を使用して評価され得る。いくつかの実施態様では、１つ又は複数のＩＳＧのレベルは、１つ又は複数のＩＳＧのｍＲＮＡレベルに基づいて、例えば、ｑＰＣＲ、ＲＮＡ配列決定、マイクロアレイベースの方法、又は当技術分野で知られているｍＲＮＡを測定するための他の任意の適切な方法を使用して評価され得る。
投与量及び投与
投与量
［０２８７］本開示の免疫調節組成物及び／又は薬学的組成物の用量及び所望の濃度は、想定される特定の使用、例えば、本明細書に記載される治療方法のいずれかに応じて変化し得る。適切な投与量又は投与経路の決定は、十分に当業者の技術の範囲内である。動物実験は、ヒトの治療に有効な投与量を決定するための信頼できる指針を提供する。有効用量の種間スケーリングは、Ｍｏｒｄｅｎｔｉ，Ｊ．ａｎｄ Ｃｈａｐｐｅｌｌ，Ｗ．“Ｔｈｅ Ｕｓｅ ｏｆ Ｉｎｔｅｒｓｐｅｃｉｅｓ Ｓｃａｌｉｎｇ ｉｎ Ｔｏｘｉｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ，”Ｉｎ Ｔｏｘｉｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ Ｎｅｗ Ｄｒｕｇ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，Ｙａｃｏｂｉ ｅｔ ａｌ．，Ｅｄｓ，Ｐｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ １９８９，ｐｐ．４２－４６に記載されている原則に従って行うことができる。
［０２８８］本開示の免疫調節組成物及び／又は薬学的組成物のいずれかのｉｎ ｖｉｖｏ投与については、通常の投与量は、個体の体重及び投与経路に基づいて変動し得る。治療すべき疾患、障害、又は状態の重症度に応じて、数日以上にわたる反復投与の場合、所望の症状抑制が達成されるまで治療が継続される。
［０２８９］本開示の特定の免疫調節組成物及び／又は薬学的組成物の用量は、本開示の免疫調節組成物及び／又は薬学的組成物の１つ又は複数の投与を受けた個体において経験的に決定され得る。いくつかの実施態様では、個体は、本開示の免疫調節組成物又は薬学的組成物の増分用量が与えられる。
［０２９０］いくつかの実施態様では、本開示の免疫調節組成物又は薬学的組成物の有効性を評価するために、本開示の疾患、障害、又は状態のいずれかの臨床症状をモニターすることができる。いくつかの実施態様では、本開示の免疫調節組成物又は薬学的組成物の有効性を評価するために、個体が本開示の免疫調節組成物及び／又は薬学的組成物の１つ又は複数の用量を受ける前及び／又は後に、ＴＬＲ７活性のレベルが、個体から得られた試料において測定され得る。いくつかの実施態様では、本開示の免疫調節組成物又は薬学的組成物の有効性を評価するために、個体が本開示の免疫調節組成物及び／又は薬学的組成物の１つ又は複数の用量を受ける前及び／又は後に、１つ又は複数のＩ型ＩＦＮ（例えば、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ＩＦＮ－κ、ＩＦＮ－δ、ＩＦＮ－ε、ＩＦＮ－τ、ＩＦＮ－ω、又はＩＦＮ－ζ）が、個体から得られた試料において測定され得る。いくつかの実施態様では、本開示の免疫調節組成物又は薬学的組成物の有効性を評価するために、ＩＦＮ－αのレベルが、個体が本開示の免疫調節組成物及び／又は薬学的組成物の１つ又は複数の用量を受ける前及び／又は後に、個体から得られた試料においてＩＦＮ－αのレベルが測定され得る。いくつかの実施態様では、１つ又は複数のインターフェロン刺激遺伝子（ＩＳＧ）のレベルが、個体が本開示の免疫調節組成物及び／又は薬学的組成物の１つ又は複数の用量を受ける前及び／又は後に、個体から得られた試料において測定され得る。いくつかの実施態様では、１つ又は複数のＩＳＧは、当技術分野で知られている任意のＩＳＧ、例えば、Ｓｈａｍｉｔｈ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ（２００９）３７，ｓｕｐｐｌ＿１；Ｓｃｈｏｇｇｉｎｓ ａｎｄ Ｒｉｃｅ，ＣｕｒｒＯｐｉｎ Ｖｉｒｏｌ（２０１１）１（６）：５１９－５２５；Ｆｏｒｓｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ（２０１３）（ｄａｔａｂａｓｅ ｉｓｓｕｅ）：Ｄ１０４０－Ｄ１０４６；Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ（２０１２）１０９（１１）：４２３９－４２４４に記載されている１つ又は複数のＩＳＧを含む。評価され得るＩＳＧの例としては、限定されるものではないが、ＩＦＩＴ１、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＩＳＧ１５、ＣＣＬ８、２’５’ＯＡＳ、ＡＰＯＢＥＣ３Ｇ、ＡＰＯＢＥＣ３Ａ、ＰＫＲ、ＩＳＧ５６、Ｍｘ２、ＭＤＡ５、ＩＦＩ４４、ＩＲＦ７、ＯＡＳＬ１、ＩＳＧ２０ ＩＦＩＴ２、ＩＦＩＴ３、ＩＦＩＴＭ３、ＯＡＳ２、ＯＡＳ３、ＩＦＩ１６、ＩＲＦ１、ＭＸ１、又はＩＤＯが挙げられる。
［０２９１］いくつかの実施態様では、試料は血液試料、血漿試料、又は血清試料である。いくつかの実施態様では、試料は、例えば脾臓、１つ若しくは複数のリンパ節、又は腫瘍からの組織生検である。いくつかの実施態様では、Ｉ型ＩＦＮのレベルは、酵素結合免疫吸着法、イムノブロッティング、Ｌｕｍｉｎｅｘアッセイ（例えば、ｗｗｗ．ｒｎｄｓｙｓｔｅｍｓ．ｃｏｍ／ｗｈａｔ－ｌｕｍｉｎｅｘ－ａｓｓａｙを参照）、ビーズベースのイムノアッセイなどのイムノアッセイ、Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ）などの電気化学発光ベースの方法、フローサイトメトリーにより分析されるサイトカインの細胞内染色、又は質量分析法などの当技術分野で知られている任意の適切な方法を使用して測定され得る。いくつかの実施態様では、Ｉ型ＩＦＮのレベルは、例えば、ｑＰＣＲ、ＲＮＡ配列決定、マイクロアレイベースの方法、又は当技術分野で知られているｍＲＮＡを測定するための他の任意の適切な方法を使用して、Ｉ型ＩＦＮのｍＲＮＡレベルに基づいて評価され得る。いくつかの実施態様では、Ｉ型ＩＦＮのレベルは、蛍光ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）、ｑＰＣＲ、又は組織試料中のＲＮＡレベルを測定するための当技術分野で知られている他の任意の適切な方法によって評価され得る。いくつかの実施態様では、１つ又は複数のＩＳＧのレベルは、１つ又は複数のＩＳＧのｍＲＮＡレベルに基づいて、例えば、ｑＰＣＲ、ＲＮＡ配列決定、マイクロアレイベースの方法、又は当技術分野で知られているｍＲＮＡを測定するための他の任意の適切な方法を使用して評価され得る。
［０２９２］本開示の免疫調節組成物又は薬学的組成物の投与は、例えば、レシピエントの生理学的状態、投与の目的が治療的であるか予防的であるか、及び当業者に知られている他の要因に依存して、連続的又は断続的であり得る。本開示の免疫調節組成物又は薬学的組成物の投与は、事前に選択された期間にわたって本質的に連続的であり得るか、又は一連の間隔をあけた投与であり得る。
［０２９３］異なる製剤が異なる治療及び異なる疾患、障害、又は症状に対して有効であること、及び、特定の器官又は組織を治療することを意図とした投与では、別の器官又は組織への送達とは異なる方法での送達が必要であり得ることは、本開示の範囲内である。さらに、投与量は、１回若しくは複数回の別々の投与によって、又は連続的注入によって投与され得る。病態に応じて数日間以上にわたる反復投与の場合、治療は、疾患症状の所望される抑制が生じるまで持続される。しかしながら、他の投与レジメンが有用であってもよい。この治療法の進行は、従来の技術及びアッセイによって容易にモニターされる。
投与
［０２９４］本開示のＲＮＡリガンドを含む本開示の免疫調節組成及び／又は薬学的組成物は、既知の方法、例えば、ボーラスとしての静脈内投与又は一定期間にわたる連続的注入による投与、筋肉内、腹腔内、脳脊髄内、頭蓋内、脊髄内、皮下、関節内、滑膜内、静脈内、動脈内、くも膜下腔内、経口、局所、又は吸入経路による投与などに従って、それを必要とする個体に投与され得る。いくつかの実施態様では、本開示の免疫調節組成物及び／又は薬学的組成物は、静脈内注入によって投与される。いくつかの実施態様では、本開示の免疫調節組成物及び／又は薬学的組成物は、局所注射によって、例えば組織内又は器官内に投与される。本開示の免疫調節組成物又は組成物の投与は、例えば、免疫調節組成物又は薬学的組成物を標的器官又は組織に送達するためにカテーテル、注射器、又は同様の装置を使用するなど、当技術分野で知られている任意の適切な方法を使用して実施することができる。
［０２９５］本開示の免疫調節組成物又は薬学的組成物は、当技術分野で知られている任意の適切な形態で投与され得る。例えば、本開示の免疫調節組成物又は薬学的組成物は、リポソーム、ポリマー微粒子、又はエマルジョンとして投与するために製剤化され得る。
［０２９６］いくつかの実施態様では、本開示の免疫調節組成物又は薬学的組成物は、リポソームとして投与するために製剤される。様々な両親媒性脂質が水性環境下で二重層を形成し、ＲＮＡリガンドを含む水性コアをリポソームとして封入することができる。これらの脂質は、アニオン性、カチオン性又は双性イオン性の親水性頭部基を有することができる。使用され得る脂質には、本明細書、例えば「担体」セクションに記載される、又は当技術分野で知られている任意の脂質が含まれる。いくつかの実施態様では、本開示のリポソームは、限定されないが、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルコリン、ホスファチジルセリン、及びホスファチジルグリセロールなどの１つ又は複数のリン脂質を含む。いくつかの実施態様では、本開示のリポソームは、限定されないが、ＤＯＴＡＰ、１，２－ジステアリルオキシ－Ｎ，Ｎ－ジメチル－３－アミノプロパン（ＤＳＤＭＡ）、１，２－ジオレイルオキシ－Ｎ，Ｎジメチル－３－アミノプロパン（ＤＯＤＭＡ）、１，２－ジリノレイルオキシ－Ｎ，Ｎ－ジメチル－３－アミノプロパン（ＤＬｉｎＤＭＡ）、ＤＯＴＭＡ、又は１，２－ジリノレニルオキシ－Ｎ，Ｎ－ジメチル－３－アミノプロパン（ＤＬｅｎＤＭＡ）などの１つ又は複数のカチオン性脂質が挙げられる。いくつかの実施態様では、本開示のリポソームは、アシル双性イオン脂質、エーテル双性イオン脂質、ＤＰＰＣ、ＤＯＰＣ、又はドデシルホスホコリンなどの１つ又は複数の双性イオン脂質を含むが、これらに限定されない。いくつかの実施態様では、本開示のリポソームは、飽和及び／又は不飽和脂質を含む。いくつかの実施態様では、本開示のリポソームは、単一の脂質又は脂質の混合物を含む。いくつかの実施態様では、混合物は、（ｉ）アニオン性脂質の混合物、（ｉｉ）カチオン性脂質の混合物、（ｉｉｉ）双性イオン性脂質の混合物、（ｉｖ）アニオン性脂質とカチオン性脂質の混合物、（ｖ）アニオン性脂質と双性イオン性脂質の混合物、（ｖｉ）双性イオン性脂質とカチオン性脂質の混合物、又は（ｖｉｉ）アニオン性脂質、カチオン性脂質及び双性イオン性脂質の混合物を含み得る。いくつかの実施態様では、本開示のリポソームは、コレステロールなどの非両親媒性脂質を含む。いくつかの実施態様では、本開示のリポソーム内の脂質は、ポリエチレングリコールの共有結合によって修飾され得る（すなわち、ペグ化）。例えば、Ｈｅｙｅｓ ｅｔ ａｌ．（２００５）Ｊ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ １０７：２７６－８７を参照。いくつかの実施態様では、本開示のリポソームは、多重層小胞（ＭＬＶ）、小型単層小胞（ＳＵＶ）、大型単層小胞（ＬＵＶ）、又はそれらの混合物である。ＭＬＶは各小胞内に複数の二重層を持ち、複数の別々の水性コンパートメントを形成する。ＳＵＶとＬＵＶは、水性コアをカプセル化した単一の二重層を有する。ＳＵＶは通常、５０ｎｍ未満の直径を有し、ＬＵＶは５０ｎｍ超の直径を有する。リポソームの調製には、例えば、Ｗｅｉｓｓｉｎｇ Ｖ（ｅｄ．）．Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ：Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，Ｖｏｌ．１，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，１２，２９－５０（２０１０）；ａｎｄ Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｃｏｌｌｏｉｄｓ ａｎｄ Ｍｉｃｒｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ ｖｏｌｕｍｅ ４（Ｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅｓ，ｍｉｃｒｏｃａｐｓｕｌｅｓ＆ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ）（ｅｄｓ．Ａｒｓｈａｄｙ＆Ｇｕｙｏｔ）．Ｃｉｔｕｓ Ｂｏｏｋｓ，２００２に記載されているような任意の適切な方法を使用することができる。
［０２９７］いくつかの実施態様では、本開示の免疫調節組成物又は薬学的組成物は、ポリマー微粒子として投与するために製剤される。様々なポリマーが微粒子を形成し、ＲＮＡをカプセル化したり吸着したりすることができる。使用され得るポリマーには、本明細書、例えば「担体」セクションに記載される、又は当技術分野で知られている任意のポリマー若しくはポリマー分子若しくは薬剤が含まれる。本開示の微粒子において使用され得るポリマーの例としては、限定されないが、ポリ（α－ヒドロキシ酸）、ポリヒドロキシ酪酸、ポリラクトン（ポリカプロラクトンを含む）、ポリジオキサノン、ポリバレロラクトン、ポリオルトエステル、ポリ酸無水物、ポリシアノアクリレート、チロシン由来のポリカーボネート、ポリビニルピロリジノン、ポリエステルアミド、ポリアミノ酸（例えば、ポリ－Ｌ－アルギニン、ポリ－Ｌ－リジン、ポリ－Ｌ－オルニチン）、及びそれらの組み合わせが挙げられる。適切な微粒子を調製する技術は当技術分野でよく知られている。ＲＮＡの吸着を促進するために、微粒子にはカチオン性界面活性剤及び／又は脂質が含まれていてもよい。ポリマー微粒子を作製する別の方法は、例えば国際公開第２００９／１３２２０６号に開示されているように、成形及び硬化によるものである。
［０２９８］いくつかの実施態様では、本開示の免疫調節組成物又は薬学的組成物は、エマルジョンとして投与するために製剤される。本開示のエマルジョンは、限定されないが、動物、植物、又は合成源からの油などの１つ又は複数の油を含んでもよい。エマルジョンは、油の組み合わせからなることもある。エマルジョンの水性成分は水、例えば注射用水であってもよく、さらなる成分、例えば溶質を含んでいてもよい。例えば、緩衝液を形成するための塩、例えば、ナトリウム塩などのクエン酸塩又はリン酸塩を含んでもよい。典型的な緩衝液には、リン酸緩衝液；トリス緩衝液；ホウ酸緩衝液；コハク酸緩衝液；ヒスチジン緩衝液；又はクエン酸緩衝液が含まれる。いくつかの実施態様では、エマルジョンは、本明細書に記載されるか当技術分野で知られている任意のカチオン性脂質などのカチオン性脂質を含む。いくつかの実施態様では、エマルジョンは、非イオン性界面活性剤及び／又は双性イオン性界面活性剤を含む。そのような界面活性剤としては、限定されないが、ポリオキシエチレンソルビタンエステル界面活性剤（一般にＴｗｅｅｎｓと呼ばれる）、例えば、ポリソルベート２０及びポリソルベート８０；エチレンオキシド（ＥＯ）、プロピレンオキシド（ＰＯ）、及び／又はブチレンオキシド（ＢＯ）の共重合体、例えば線状ＥＯ／ＰＯブロック共重合体；オクトキシノール－９（Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００、又はｔ－オクチルフェノキシポリエトキシエタノール）などのオクトキシノール；（オクチルフェノキシ）ポリエトキシエタノール（ＩＧＥＰＡＬ ＣＡ－６３０／ＮＰ－４０）；ホスファチジルコリン（レシチン）などのリン脂質；ラウリル、セチル、ステアリル及びオレイルアルコールから誘導されるポリオキシエチレン脂肪酸エーテル（Ｂｒｉｊ界面活性剤として知られている）、例えばトリエチレングリコールモノラウリルエーテル（Ｂｒｉｊ ３０）；ポリオキシエチレン－９－ラウリルエーテル；及びソルビタンエステル（一般にＳｐａｎとして知られている）、例えばソルビタントリオレエート（Ｓｐａｎ ８５）及びソルビタンモノラウレートが挙げられる。いくつかの実施態様では、エマルジョンは、本明細書に記載される、及び／又は当技術分野で知られている任意の適切な界面活性剤の混合物を含む。油と界面活性剤の絶対量とその比率は、エマルジョンを形成しながらも広い範囲内で変えることができる。当業者であれば、所望のエマルジョンを得るために成分の相対比率を変えることができる。液滴サイズは、動的光散乱及び／又は単一粒子光学センシングなどの当技術分野で知られている任意の方法、例えば、Ｐａｒｔｉｃｌｅ Ｓｉｚｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍｓ（米国サンタバーバラ）から入手可能なＡｃｃｕｓｉｚｅｒＴＭ及びＮｉｃｏｍｐＴＭシリーズの装置、Ｍａｌｖｅｒｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ（英国）のＺｅｔａｓｉｚｅｒＴＭ装置、又は堀場製作所（日本、京都）の粒度分布分析装置を使用して評価することができる。本開示のエマルジョンは、顕微溶液化法又は熱法などの当技術分野で知られている任意の適切な方法を使用して調製することができる。
［０２９９］本開示の免疫調節組成物及び／又は薬学的組成物の投与は、別の化合物、組成物、若しくは薬剤と組み合わせて、又は併用して実施することができる。このような投与には、同時投与及び／又は異なる時間での投与が含まれる。併用又は組み合わせての投与はまた、異なる投与頻度又は間隔での投与、及び同じ投与経路又は異なる投与経路を用いた投与を含む、共製剤としての投与又は別個の組成物としての投与を包含する。
キット
［０３００］本開示は、本開示の免疫調節組成物、核酸、ベクター、薬学的組成物、又はワクチン組成物を含むキットも提供する。本開示のキットは、本開示の免疫調節組成物、核酸、ベクター、薬学的組成物、又はワクチン組成物を含む１つ又は複数の容器を含み得る。いくつかの実施態様では、キットは、本開示の方法に従って使用するための説明書をさらに含む。いくつかの実施態様では、これらの説明書は、本開示の任意の方法に従って、本明細書に記載される疾患、障害、又は状態を有する個体を予防し、リスクを低減し、又は治療するための、本開示の免疫調節組成物、核酸、ベクター、薬学的組成物、又はワクチン組成物の投与又は使用の説明を含む。説明書には通常、目的の治療のための投与量、投与スケジュール、投与経路に関する情報が含まれている。
［０３０１］いくつかの実施態様では、キットは、（例えば、同じ容器内又は１つ若しくは複数の追加の容器内に）追加の薬剤、例えば別の免疫調節組成物、核酸、タンパク質又はポリペプチド（例えば、抗体又はその断片）、ワクチン又はワクチン組成物、アジュバント、及び／又は１つ若しくは複数の薬物、例えば、化学療法剤、細胞傷害性剤、サイトカイン、成長阻害剤、抗ホルモン剤、及び／又は心臓保護剤をさらに含んでもよい。いくつかの実施態様では、キットは、（例えば、同じ容器内又は１つ若しくは複数の追加の容器内に）免疫賦活性剤、抗ウイルス剤、抗生物質、抗真菌剤、抗寄生虫剤、抗菌剤、抗腫瘍剤、ケモカイン、成長因子、抗血管新生因子、化学療法剤、抗体、遺伝子サイレンシング剤、又はサイトカイン（例えば、ＩＦＮ－α及び／又はＩＦＮ－βなどのＩ型ＩＦＮ）のうちの１つ又は複数をさらに含んでもよい。いくつかの実施態様では、キットは、本開示の免疫調節組成物、核酸、ベクター、薬学的組成物、又はワクチン組成物を、本開示の任意の方法に従って、追加の薬剤、例えば、別の免疫調節組成物、核酸、タンパク質又はポリペプチド（例えば、抗体又はその断片）、ワクチン又はワクチン組成物、アジュバント、１つ又は複数の薬物、例えば、化学療法剤、細胞傷害性剤、サイトカイン、成長阻害剤、抗ホルモン剤、心臓保護剤、免疫刺激剤、抗ウイルス剤、抗生物質、抗真菌剤、抗寄生虫剤、抗細菌剤、抗腫瘍剤、ケモカイン、成長因子、抗血管新生因子、化学療法剤、抗体、遺伝子サイレンシング剤、又はサイトカイン（例えば、ＩＦＮ－α及び／又はＩＦＮ－βなどのＩ型ＩＦＮ）と組み合わせて使用するための説明書をさらに含んでもよい。説明書には通常、目的の治療のための投与量、投与スケジュール、投与経路に関する情報が含まれている。
［０３０２］キット内の容器は、単位用量、バルクパッケージ（例えば、複数回用量パッケージ）、又はサブユニット用量であり得る。
［０３０３］本開示のキットに提供される説明書は、典型的には、ラベル又は添付文書（例えば、キットに含まれる紙シート）に書かれた説明書であるが、機械読み取り可能な説明書（例えば、磁気又は光学記憶ディスクに記録された説明書）も本開示内容に含まれる。ラベル又は添付文書は、免疫調節組成物、核酸、ベクター、薬学的組成物、又はワクチン組成物、及び任意の追加の薬剤が、例えば、本開示の疾患、障害、又は状態を治療又は予防するために使用されることを示す。本明細書に記載されている方法のいずれかを実践するための説明書が提供され得る。
［０３０４］本開示のキットは、適切な包装に入っている。適切な包装には、バイアル、ボトル、瓶、柔軟な包装（例えば、密封されたマイラー又はビニール袋）などが含まれるが、これらに限定されない。また、吸入器、鼻腔投与装置（例えば、噴霧器）、又はミニポンプなどの注入装置などの特定の装置と組み合わせて使用するためのパッケージも企図される。キットは、滅菌アクセスポートを有し得る（例えば、容器は、皮下注射針によって穿刺可能なストッパーを有する静脈用溶液袋又はバイアルであり得る）。容器は、滅菌アクセスポートを有し得る（例えば、容器は、皮下注射針によって穿刺可能なストッパーを有する静脈用溶液袋又はバイアルであり得る）。
［０３０５］キットは任意で、緩衝液や解釈情報などの追加コンポーネントを提供する場合がある。通常、キットは、容器と、容器上の、又は容器に付随するラベル若しくは添付文書とを含む。
［０３０６］本開示全体にわたるすべての引用は、参照により明示的に本明細書に組み込まれる。
実施例
［０３０７］本開示は、以下の実施例を参照することによってより完全に理解されるであろう。しかしながら、それらは、本開示の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。本明細書に記載の実施例及び実施態様が、例示を目的とするものに過ぎないこと、並びにそれを考慮に入れた様々な改変又は変更が当業者に提案され、本出願の趣旨及び範囲内並びに添付の特許請求の範囲内に含まれるべきであることを理解されたい。
［０３０８］以下の実施例に示す塩基配列において、アスタリスク（＊）はホスホロチオエート結合を示し、「－」はホスホジエステル結合を示す。
実施例１：ＴＬＲ７選択的ＲＮＡリガンドの設計。
［０３０９］この実施例は、ＴＬＲ８を活性化する可能性のあるウリジン単量体の生成を回避するために、特定のヌクレオチドでＲＮａｓｅ切断をブロックするＲＮＡ修飾を有するＴＬＲ７選択的リガンドの設計について説明する。
Ａ．ＲＮａｓｅ切断をブロックするＲＮＡ修飾を伴うＴＬＲ７選択的リガンドを生成するための初期ＲＮＡ配列の選択
［０３１０］最大のＴＬＲ７選択性を達成するために、ＴＬＲ８よりもＴＬＲ７に対してある程度の選択性を有することが知られているＲＮＡ配列を選択して、ＴＬＲ７選択性リガンドを生成した。
ＯＲＮ７０１３
［０３１１］最初に選択されたＲＮＡ配列は、オリゴリボヌクレオチド７０１３（ＯＲＮ７０１３）と呼ばれ、ヌクレオチド配列Ｃ＊Ｃ＊Ｇ＊Ａ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｕ＊Ｕ＊Ｕ＊Ｕ＊Ｃ＊Ｃ＊Ｃ（配列番号１）を有し、Ｆｏｒｓｂａｃｈｅｔａｌ．，ＪＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（２００８）１８０：３７２９－３７３８に由来している。ＯＲＮ７０１３は非刺激性配列が隣接する４つのウリジンを含み、完全にホスホロチオエート修飾されている。
ＯＲＮ７０２３
［０３１２］第２の選択されたＲＮＡ配列は、Ｈａｒｔｍａｎｎらによって国際公開第２０１０／１０５８１９号に記載されているように、Ｒ２１５３に由来し、本明細書ではＯＲＮ７０２３と呼ばれる。ＯＲＮ７０２３は、ヌクレオチド配列Ｃ－Ｇ－Ｇ－Ｃ－Ｕ－Ｃ－Ｇ－Ｇ－Ｃ－Ａ－Ｇ－Ａ－Ａ－Ｇ－Ｃ－Ｃ－Ｇ－Ｇ－Ｇ－Ｃ－Ｃ（配列番号２）を有し、Ｇ：Ｕウォブル塩基対を含む、下線を引いた配列の対形成によって短い標準ＲＮＡヘアピンを形成する（図４）。
ＯＲＮ７００５及びＯＲＮ７００９
［０３１３］追加の選択されたＲＮＡ配列には、ヌクレオチド配列Ｕ－Ｃ－Ｕ－Ｃ－Ｕ－Ｃ－Ｕ－Ｃ－Ｕ－Ｃ－Ｕ－Ｃ－Ｕ－Ｃ－Ｕ－Ｃ－Ｕ－Ｃ－Ｕ－Ｃ（配列番号３）を有するＯＲＮ７００５、及びヌクレオチド配列Ｃ－Ｃ－Ｕ－Ｕ－Ｃ－Ｕ－Ｕ－Ｃ－Ｕ－Ｕ－Ｃ－Ｕ－Ｕ－Ｃ－Ｕ－Ｕ－Ｃ－Ｕ－Ｕ－Ｃ（配列番号４）を有するＯＲＮ７００９が含まれていた。ＯＲＮ７００５及びＯＲＮ７００９は、それぞれｐＵ１Ｃ及びｐＵ２Ｃに由来した（例えば、Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０１８，Ｃｅｌｌ Ｒｅｐｏｒｔｓ ２５，３３７１－３３８１を参照）。ＯＲＮ７００５及びＯＲＮ７００９は、ホスホジエステル（ＰＤＥ）骨格に基づいている。ＯＲＮ７００５及びＯＲＮ７００９は、ＴＬＲ８結合部位＃２で最も活性であるＵＧモチーフを含まず（例えば、Ｔａｎｊｉ ｅｔ ａｌ Ｎａｔ Ｓｔｒｕｃｔ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．２０１５ ｅｂ；２２（２）：１０９－１５を参照）、ＴＬＲ７の活性化を達成するには、別個の薬剤としてのグアノシンの投与が必要である可能性がある。
ＯＲＮ７００１
［０３１４］最後に、ＴＬＲ７結合部位＃１のグアノシン供給源として機能し、結合部位＃２のＴＬＲ８結合を回避するために、アデノシンが隣接するグアノシンを含むタンデム配列を含む追加のリガンドを新規に設計した。ＯＲＮ７００１と呼ばれるこの新規に設計されたリガンドは、ヌクレオチド配列Ｃ－Ａ－Ｇ－Ａ－Ｃ－Ｃ－Ｕ－Ｕ－Ｃ－Ｃ－Ａ－Ｇ－Ａ－Ｃ－Ｃ－Ｕ－Ｕ－Ｃ（配列番号５）を有する。ＯＲＮ７００１の配列はまた、ＴＬＲ７結合部位＃２に対する２つの潜在的なモチーフ：Ｃ－Ｕ－Ｕ（配列番号５４）及びＵ－Ｕ－Ｃ（配列番号５５）を有する、Ｃ／ＵリッチＣ－Ｕ－Ｕ－Ｃモチーフ（配列番号３２）を含む。
［０３１５］ＴＬＲ７選択的リガンドを生成するために選択された最初のＲＮＡ配列の概要を表１に示す。
表１．ＴＬＲ７選択的リガンドの生成のために選択されたＲＮＡ配列。
Figure 2024516575000002
Ｂ．ＴＬＲ７選択的リガンドを生成するための骨格修飾に適した、選択されたＲＮＡ配列内の位置の選択
［０３１６］図５に示すように、結合部位＃２でＴＬＲ７によって結合されるＲＮＡ三量体（Ｕ１－Ｕ２－Ｕ３）の中央のウリジンは、２’ＯＨ（２’ＯＨ２）を含む結合ポケットに深く埋め込まれている。この２’ＯＨの修飾はＴＬＲ７活性に影響を与える可能性があり、そのため修飾できない可能性が高いことを示唆している。対照的に、隣接するヌクレオチドの２’ＯＨ部分（２’ＯＨ１及び２’ＯＨ３）は、結合ポケットのより開いた部分に位置しているように見える（図５）。そこで、ウリジン単量体となり得るすべてのウリジンの５’直下のヌクレオチドの修飾が追求された。
［０３１７］ＲＮａｓｅ耐性を達成するために、嵩高ではないがヌクレアーゼ耐性の低い２’－フルオロ修飾と、ヌクレアーゼ耐性だが嵩高な２’－Ｏ－メチル修飾の両方が追求された。２’－フルオロ修飾は、ＲＮＡ骨格からＲＮａｓｅ活性に必要な２’ＯＨを奪うが、依然としてエキソヌクレアーゼの標的となる可能性がある。対照的に、２’－Ｏ－メチル化は、任意のヌクレアーゼの結合をブロックする嵩高い修飾を導入する。例えば、図３を参照。
Ｃ．ＲＴＬＲ７選択的リガンドを生成するためのＲＮＡ修飾の導入
［０３１８］特定のヌクレオチドでのＲＮａｓｅ媒介切断を特異的にブロックするＲＮＡ修飾を、上記の選択されたＲＮＡ配列に導入した。修飾の目的は、ＴＬＲ７結合部位＃２（すなわち、配列Ｎ－Ｕ－Ｎ（配列番号６）、Ｎ＊Ｕ＊Ｎ（配列番号６３）、又はＮ－Ｕ＊Ｎ（配列番号６４）を有し、ここでＮは任意のリボヌクレオチドを表す）に結合し、ＴＬＲ８結合部位＃１のリガンドである単量体Ｕに分解されないＲＮＡ三量体分解産物の生成を可能にすることであった。
ＯＲＮ７０１３修飾
［０３１９］以下に示すように、Ｆｏｒｓｂａｃｈ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（２００８）１８０：３７２９－３７３８に由来するＯＲＮ７０１３のヌクレオチド配列（配列番号１）は、ＴＬＲ７及びＴＬＲ８を活性化し得る下線が引かれたモチーフＣ＊Ｕ＊Ｕ＊Ｕ＊Ｕ＊Ｃ（配列番号７）を含む。
Ｃ＊Ｃ＊Ｇ＊Ａ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｃ＊Ｇ＊ Ｃ ＊ Ｕ ＊ Ｕ ＊ Ｕ ＊ Ｕ ＊ Ｃ ＊Ｃ＊Ｃ（配列番号１）
［０３２０］Ｃ＊Ｕ＊Ｕ＊Ｕ＊Ｃモチーフ（配列番号７）は、ＴＬＲ７結合部位＃２モチーフであるＣ＊Ｕ＊Ｕ（配列番号８）、Ｕ＊Ｕ＊Ｕ（配列番号９）、又はＵ＊Ｕ＊Ｃ（配列番号１０）に分解することができ、さらにＴＬＲ８結合部位＃１リガンドである単量体Ｕに分解することができる。
［０３２１］ＴＬＲ７選択的リガンドを生成するために、Ｃ＊Ｕ＊Ｕ＊Ｕ＊Ｕ＊Ｃモチーフ（配列番号７）のＵ２及びＵ４を修飾した。これにより、ＴＬＲ７結合部位＃２モチーフ内の中央のＵを通常の（すなわち、未修飾の）リボヌクレオチドとして保存することが可能になった（例えば、図５を参照）。Ｃ＊Ｕ＊Ｕ＊Ｕ＊Ｕ＊Ｃモチーフ（配列番号７）のＵ２及びＵ４の修飾により、Ｕ２とＵ３、及びＵ４とＵ５の間の結合が生じ、ＲＮａｓｅ分解から保護されるため、単量体Ｕの生成が防止される。このＲＮａｓｅ分解からの保護により、Ｕ２とＵ３の間、及びＵ４とＵ５の間のホスホロチオエート結合のホスホジエステル結合への交換も可能になった。これにより、特に２つのそれぞれのヌクレオチド間の既に修飾された空間の修飾が減少した。
［０３２２］上述のＣ＊Ｕ＊Ｕ＊Ｕ＊Ｕ＊Ｃモチーフ（配列番号７）の修飾により、新しいモチーフＣ＊Ｘ－Ｕ＊Ｘ－Ｕ＊Ｃ（配列番号１１）がもたらされ、Ｘは２’－フルオロ－Ｕ又は２’Ｏ－メチル－Ｕを表す。未修飾のＵがＴＬＲ７結合部位＃２モチーフの中央のＵであると仮定すると、残りのモチーフはＸ２－Ｕ３ ＊Ｘ４（配列番号５３）及びＸ４－Ｕ５ ＊Ｃ６（配列番号５２）となるであろう。表２に示すように、２つの異なる修飾を有する２つの修飾部位の組み合わせにより、ＯＲＮ７０１４～７０１７（配列番号１２～１５に対応）と呼ばれる、個々のモチーフを有する４つのＯＲＮが得られた。
表２．ＴＬＲ７選択的リガンドを生成するためのＯＲＮ７０１３の修飾。
Figure 2024516575000003
［０３２３］Ｆｏｒｓｂａｃｈ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（２００８）１８０：３７２９－３７３８に由来するＯＲＮ７０１３も、ホスホロチオエート修飾を減らすために修飾された。具体的には、Ｃ＊Ｕ＊Ｕ＊Ｕ＊Ｕ＊Ｃモチーフ（配列番号７）のヌクレオチドを除くすべてのヌクレオチドは、ホスホロチオエート修飾骨格ではなくホスホジエステル骨格によって連結されていた。これにより、ヌクレオチド配列Ｃ－Ｃ－Ｇ－Ａ－Ｇ－Ｃ－Ｃ－Ｇ－Ｃ ＊ Ｕ ＊ Ｕ ＊ Ｕ ＊ Ｕ ＊ Ｃ－Ｃ－Ｃ（配列番号１６）を有するＯＲＮ７０２２が得られた。ＯＲＮ７０１４～７０１７に相当する修飾ＯＲＮは、ＯＲＮ７０２２に基づいて設計され、配列番号１７～２０に対応するＯＲＮ７０１８～ＯＲＮ７０２１が得られた（表３）。
表３．ＴＬＲ７選択的リガンドを生成するための、ホスホロチオエート結合を減少させたＯＲＮ７０１３の追加修飾。
Figure 2024516575000004
ＯＲＮ７０２３修飾
［０３２４］以下に示すように、国際公開第２０１０／１０５８１９号（Ｈａｒｔｍａｎｎら）に由来するＯＲＮ７０２３のヌクレオチド配列（配列番号２）は、ＯＲＮ７０２３のヌクレオチド４～６：Ｃ－Ｕ－Ｃ（配列番号２１）からなるＴＬＲ７結合部位＃２モチーフを１つだけ含む（下線）：
Ｃ－Ｇ－Ｇ－Ｃ－Ｕ－Ｃ－Ｇ－Ｇ－Ｃ－Ａ－Ｇ－Ａ－Ａ－Ｇ－Ｃ－Ｃ－Ｇ－Ｇ－Ｇ－Ｃ－Ｃ（配列番号２）
［０３２５］Ｃ１－Ｕ２－Ｃ３モチーフ（配列番号２１）の中央のＵ２は未修飾のままである必要があると仮定されていたため（例えば、図５を参照）、モチーフ内のＣ１は２’フルオロ－又は２’－Ｏ－メチル修飾で修飾され、修飾されたモチーフ：Ｄ－Ｕ－Ｃ（配列番号２２）（Ｄは２’－フルオロ－Ｃ又は２’Ｏ－メチル－Ｃのいずれかを表す）をもたらした。これにより、モチーフｆＣ－Ｕ－Ｃ（配列番号４２）を有する２’－フルオロ－Ｃ修飾ＯＲＮ７０２３Ｆ（配列番号２３）、及びモチーフｍＣ－Ｕ－Ｃ（配列番号４３）を有する２’Ｏ－メチル－Ｃ－修飾ＯＲＮ７０２３Ｏｍｅ（配列番号２４）が得られた。
［０３２６］２’未修飾配列及びホスホジエステル結合からホスホロチオエート結合に変換された骨格を含む、ＯＲＮ７０２３の追加バージョンが生成された（ＯＲＮ７０２４；配列番号２５）。
［０３２７］ＯＲＮ７０２３に由来する修飾ＯＲＮを表４にまとめた。
表４．ＴＬＲ７選択的リガンドを生成するためのＯＲＮ７０２３の修飾。
Figure 2024516575000005
ＯＲＮ７００５修飾
［０３２８］ｐＵ１Ｃに由来するＯＲＮ７００５（Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０１８，Ｃｅｌｌ Ｒｅｐｏｒｔｓ ２５，３３７１－３３８１を参照）は、次のヌクレオチド配列を有する：
Ｕ－Ｃ－Ｕ－Ｃ－Ｕ－Ｃ－Ｕ－Ｃ－Ｕ－Ｃ－Ｕ－Ｃ－Ｕ－Ｃ－Ｕ－Ｃ－Ｕ－Ｃ－Ｕ－Ｃ（配列番号３）
［０３２９］ＯＲＮ７００５のヌクレオチド配列（配列番号３）では、切断を回避し未修飾のＵ残基を保存するために、すべてのＣ残基が２’Ｏ－メチル修飾又は２’－フルオロ修飾のいずれかで修飾されていた。これにより、２’Ｏ－メチル修飾ＯＲＮ７００６（配列番号２６）、及び２’－フルオロ修飾ＯＲＮ７００７（配列番号２７）が得られた。さらに、ホスホロチオエート修飾によって与えられる制限されたＲＮａｓｅ耐性が活性を増加させることができるかどうかを試験するために、ＯＲＮ７００５の完全ホスホロチオエート修飾バージョンが生成され、ＯＲＮ７００８（配列番号２８）が得られた。
［０３３０］ＯＲＮ７００５に由来する修飾ＯＲＮを表５にまとめた。
表５．ＴＬＲ７選択的リガンドを生成するためのＯＲＮ７００５の修飾。
Figure 2024516575000006
ＯＲＮ７００９修飾
［０３３１］ｐＵ２Ｃに由来するＯＲＮ７００９（Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０１８，Ｃｅｌｌ Ｒｅｐｏｒｔｓ ２５，３３７１－３３８１を参照）は、次のヌクレオチド配列を有する：
Ｃ－Ｃ－Ｕ－Ｕ－Ｃ－Ｕ－Ｕ－Ｃ－Ｕ－Ｕ－Ｃ－Ｕ－Ｕ－Ｃ－Ｕ－Ｕ－Ｃ－Ｕ－Ｕ－Ｃ（配列番号４）
［０３３２］ＯＲＮ７００９のヌクレオチド配列（配列番号４）は、複数のＵ－Ｕ－Ｃリピート（配列番号３９）を含む。ＯＲＮ７００９の各Ｕ－Ｕ－Ｃリピート（配列番号３９）の最初のＵは、２’Ｏ－メチル修飾又は２’－フルオロ修飾のいずれかで修飾された。これにより、修飾されたｍＵ－Ｕ－Ｃリピート（配列番号４０）を有する２’Ｏ－メチル修飾ＯＲＮ７０１０（配列番号２９）、及び修飾されたｆＵ－Ｕ－Ｃリピート（配列番号４１）を有する２’－フルオロ修飾ＯＲＮ７０１１（配列番号３０）が得られた。さらに、ホスホロチオエート修飾によって与えられる制限されたＲＮａｓｅ耐性が活性を増加させることができるかどうかを試験するために、ＯＲＮ７００９の完全ホスホロチオエート修飾バージョンが生成され、ＯＲＮ７０１２（配列番号３１）が得られた。
［０３３３］ＯＲＮ７００９に由来する修飾ＯＲＮを表６にまとめた。
表６．ＴＬＲ７選択的リガンドを生成するためのＯＲＮ７００９の修飾。
Figure 2024516575000007
ＯＲＮ７００１修飾
［０３３４］上述のように新規に設計されたＯＲＮ７００１のヌクレオチド配列（配列番号５）は、２つのＣ－Ｕ－Ｕ－Ｃモチーフ（配列番号３２）を含む：
Ｃ－Ａ－Ｇ－Ａ－Ｃ－Ｃ－Ｕ－Ｕ－Ｃ－Ｃ－Ａ－Ｇ－Ａ－Ｃ－Ｃ－Ｕ－Ｕ－Ｃ（配列番号５）
［０３３５］ＯＲＮ７００１のＣ－Ｕ－Ｕ－Ｃモチーフ（配列番号３２）の最初のＵは、２－フルオロ又は２’－Ｏ－メチル修飾で修飾され、その結果、修飾されたモチーフＣ－ｍＵ－Ｕ－Ｃ（配列番号３６）を有するＯＲＮ７００２（配列番号３３）及び修飾されたモチーフＣ－ｆＵ－Ｕ－Ｃ（配列番号３７）を有するＯＲＮ７００３（配列番号３４）が得られた。さらに、Ｃ－Ｕ－Ｕ－Ｃモチーフ全体（配列番号３２）がホスホロチオエートで修飾された修飾ＯＲＮがＯＲＮ７００１から生成され、その結果、修飾モチーフＣ＊Ｕ＊Ｕ＊Ｃ（配列番号３８）を有するＯＲＮ７００４（配列番号３５）が得られた。
［０３３６］ＯＲＮ７００１に由来する修飾ＯＲＮを表７にまとめた。
表７．ＴＬＲ７選択的リガンドを生成するためのＯＲＮ７００１の修飾。
Figure 2024516575000008
実施例２：ＴＬＲ７選択的ＲＮＡリガンドの生成と機能的特徴づけ。
［０３３７］本実施例は、実施例１に記載されたＲＮＡリガンドのＴＬＲ７選択性及び活性を評価した実験について記載する。これらの実験の結果は、ＯＲＮ７０１３（Ｆｏｒｓｂａｃｈ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（２００８）１８０：３７２９－３７３８に由来）及びＯＲＮ７０２３（国際公開第２０１０／１０５８１９号に由来）に由来する特定の修飾ＲＮＡリガンドが、ＴＬＲ７選択性及び活性を増強したことを示した。
材料及び方法
ＲＮＡ生産
［０３３８］ＲＮＡオリゴマーは、Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ ＤＮＡ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社（ＩＤＴ）によって合成され、ＨＰＬＣで精製された。
［０３３９］ＩＶＴ４の生産のために、ＤＮＡオリゴヌクレオチドＩＶＴ４－ｆｗｄ（５’Ｔ－Ｔ－Ｇ－Ｔ－Ａ－Ａ－Ｔ－Ａ－Ｃ－Ｇ－Ａ－Ｃ－Ｔ－Ｃ－Ａ－Ｃ－Ｔ－Ａ－Ｔ－Ａ－Ｇ－Ｇ－Ｇ－Ａ－Ｃ－Ｇ－Ｃ－Ｔ－Ｇ－Ａ－Ｃ－Ｃ－Ｃ－Ａ－Ｇ－Ａ－Ａ－Ｇ－Ａ－Ｔ－Ｃ－Ｔ－Ａ－Ｃ－Ｔ－Ａ－Ｇ－Ａ－Ａ－Ａ－Ｔ－Ａ－Ｇ－Ｔ－Ａ－Ｇ－Ａ－Ｔ－Ｃ－Ｔ－Ｔ－Ｃ－Ｔ－Ｇ－Ｇ－Ｇ－Ｔ－Ｃ－Ａ－Ｇ－Ｃ－Ｇ－Ｔ－Ｃ－Ｃ－Ｃ３’；配列番号６５）及びＩＶＴ４－ｒｅｖ（５’Ｇ－Ｇ－Ｇ－Ａ－Ｃ－Ｇ－Ｃ－Ｔ－Ｇ－Ａ－Ｃ－Ｃ－Ｃ－Ａ－Ｇ－Ａ－Ａ－Ｇ－Ａ－Ｔ－Ｃ－Ｔ－Ａ－Ｃ－Ｔ－Ａ－Ｔ－Ｔ－Ｔ－Ｃ－Ｔ－Ａ－Ｇ－Ｔ－Ａ－Ｇ－Ａ－Ｔ－Ｃ－Ｔ－Ｔ－Ｃ－Ｔ－Ｇ－Ｇ－Ｇ－Ｔ－Ｃ－Ａ－Ｇ－Ｃ－Ｇ－Ｔ－Ｃ－Ｃ－Ｃ－Ｔ－Ａ－Ｔ－Ａ－Ｇ－Ｔ－Ｇ－Ａ－Ｇ－Ｔ－Ｃ－Ｇ－Ｔ－Ａ－Ｔ－Ｔ－Ａ－Ｃ－Ａ－Ａ３’；配列番号６６）を、アニーリング緩衝液（２５ｍＭトリス－ＨＣｌ、２５ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ７．４）中で、９５℃まで３分間加熱し、１５分間かけて室温まで冷却することによりアニーリングした。次いで、このテンプレートを、マニュアルに従ってＴｒａｎｓｃｒｉｐｔＡｉｄ Ｔ７ Ｈｉｇｈ Ｙｉｅｌｄ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ Ｋｉｔを使用してｉｎ ｖｉｔｒｏ転写に使用した。次いで、ｍｉｎｉ Ｑｕｉｃｋ Ｓｐｉｎ ＤＮＡ Ｃｏｌｕｍｎｓ（Ｒｏｃｈｅ）を使用してＲＮＡを精製した。
ＰＢＭＣ単離
末梢血単核球（ＰＢＭＣ）は、健康な成人ドナーからのバフィーコートから得られた。最初に、バフィーコート試料を等量のリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で希釈した。次に、ＰＢＭＣを、Ｌｙｍｐｈｏｐｒｅｐ密度勾配培地（ＳＴＥＭＣＥＬＬ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）及びＳｅｐＭａｔｅ－５０チューブ（ＳＴＥＭＣＥＬＬ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用した密度勾配遠心分離によって単離した。試料を１０００ｇで１５分間遠心分離した。遠心分離後、上層を新しいチューブに注いで集め、ＰＢＳで希釈し、４５０ｘｇで５分間遠心分離した。赤血球を溶解するために、細胞ペレットを１０ｍＬの塩化アンモニウム－カリウム（ＡＣＫ）溶解緩衝液で再懸濁し、室温で８分間インキュベートした。溶解後、細胞をＰＢＳで洗浄し、２つの７０μｍセルストレーナーに通した。生細胞数は、Ｖｉ－ＣＥＬＬ細胞計数器（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）を用いて測定した。ＰＢＭＣを、１０％熱不活化ウシ胎児血清、１％Ｌ－グルタミン、及び１ＸＰｅｎ／Ｓｔｒｅｐを含むＲＰＭＩ培地中で１ウェルあたり４ｘ１０５細胞の濃度で９６ウェル丸底プレートに播種した。
ｐＤＣの枯渇
［０３４１］形質細胞様樹状細胞（ｐＤＣ）枯渇実験のために、ＰＢＭＣを上記のように単離した。ｐＤＣは、ＣＤ３０３ Ｍｉｃｒｏｂｅａｄ Ｋｉｔ、ヒト（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）を使用して枯渇させた。
ＰＢＭＣの刺激
［０３４２］グアノシンは、ポリ－Ｌ－アルギニン（ｐ－Ｌ－アルギニン）複合体化ＲＮＡの添加前の約２０分～約３０分の間に加えた。
［０３４３］ｐ－Ｌ－アルギニン－ＲＮＡ複合体を生成するために、０．２μｇのＲＮＡを１５μｌのＰＢＳに添加し、０．３８μｇのｐ－Ｌ－アルギニン（＞７００００ｋＤａ、Ｓｉｇｍａ ＃Ｐ３８９２）を加えた（ウェルあたり）。上下にピペッティングして混合した後、反応液を１０分間インキュベートし、再度上下にピペッティングし、細胞に加えた。いくつかの実験では、ＲＮＡリガンドを最終濃度０．６μｇ／ｍｌで使用した。「＋２’３’ｃＧＭＰ」と示されている場合、ｅＭｏｌｅｃｕｌｅｓから購入した２’３’環状ＧＭＰをＲＮＡリガンドと一緒に複合体化させた。２’３’環状ＧＭＰの最終濃度は５μｇ／ｍｌであった。ｐ－Ｌ－アルギニンは、核酸：ｐ－Ｌ－アルギニンの質量比を一定に保つように調整された。
［０３４４］ＩＶＴ４のリポフェクタミン２０００トランスフェクションでは、反応ごとに０．５μｌのリポフェクタミン２０００（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を２５μｌのＯｐｔｉ－ＭＥＭに加えた。混合物をよく混合し、室温で５分間インキュベートした。インキュベーション中に、２ｎｇのＩＶＴ４を２５μｌのＯｐｔｉ－ＭＥＭに加えた。リポフェクタミン／Ｏｐｔｉ－ＭＥＭ混合物を希釈したＩＶＴ４に加え、ピペッティングで上下に混合した。混合物を室温で２０分間インキュベートし、次いで細胞に加えた。
［０３４５］ＤＯＴＡＰ－ＲＮＡ複合体を生成するために、ＤＯＴＡＰとＯｐｔｉ－ＭＥＭ、又はＲＮＡとＯｐｔｉ－ＭＥＭを含むマスターミックスを作成し、室温で５分間インキュベートした。次いで、２つのマスターミックスを、最終的なＲＮＡ：ＤＯＴＡＰ質量比１：５で混合した。次いで、細胞に添加する前に、混合物を室温で２０分間インキュベートした。
サイトカイン検出
［０３４６］細胞培養上清は、刺激の１５～１８時間後に回収し、－８０℃で保存した。細胞培養上清中のサイトカインは、ＢＤ ＯｐｔＥＩＡヒトＴＮＦ ＥＬＩＳＡセット（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、及びＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ ＩＦＮアルファヒトマッチ抗体ペアキット（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）又はヒトＩＦＮアルファマルチサブタイプＥＬＩＳＡキット（ＰＢＬ Ａｓｓａｙ Ｓｃｉｅｎｃｅ）を用いて検出した。
粒子分布
［０３４７］粒子サイズは、動的光散乱法（Ｗｙａｔｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）によって測定された。試料を３８４ウェルプレートの複数のウェルに配置し、各ウェルを５秒間１０回測定した。Ｚ平均が報告された。
ＲＮａｓｅ切断
［０３４８］切断アッセイは、以下の修正を加えて、Ｏｓｔｅｎｄｏｒｆ ｅｔ ａｌ．，（２０２０）５２（４）：５９１－６０５に記載されているように実施した。０．５μｇの各ＲＮＡリガンドを１５μｌの反応液中で組換えＲＮａｓｅ Ｔ２（Ｏｒｉｇｅｎｅ）とともにインキュベートした。反応物を３、６、９、及び１２分間インキュベートする４点の時間コースを実行した。反応は１００ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣＬ（ｐＨ７．５）で停止させた。２ＸＴＢＥ－尿素試料緩衝液（Ｔｈｅｒｍｏ ＬＣ６８７６）を加え、反応物を７０℃で３分間インキュベートした。次いで、反応物を１５％ＴＢＥ－尿素ＰＡＧＥゲルにロードし、１５０Ｖで１．５時間実行した。ゲルは、ＳＹＢＲ Ｇｏｌｄ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて１：１０Ｋで染色された。
結果
特定の修飾ＲＮＡリガンドはＰＢＭＣにおけるＴＬＲ７選択性と活性を増強する
［０３４９］ＴＬＲ７及びＴＬＲ８の活性化に対する実施例１に記載のＲＮＡリガンドの効果を試験するために、ｐ－Ｌ－アルギニン複合体送達、ＤＯＴＡＰを用いた送達、又は担体を用いない送達を使用して、ＰＢＭＣをＲＮＡリガンドで刺激した。ＴＬＲ７及びＴＬＲ８の活性は、酵素結合免疫吸着法（ＥＬＩＳＡ）によるＩＦＮ－α又はＴＮＦ－αの測定に基づいて評価された。
［０３５０］この設定において、図６に示すように、低分子ＲＮＡによって誘導されるＩＦＮ－αは、ｐＤＣによって発現されるＴＬＲ７、又は単球によって発現されるＲＩＧ－Ｉに由来する。対照的に、ＴＮＦ－α分泌は単球に由来し、ＴＬＲ８活性化の指標として機能する。この図に示されるように、ｐ－Ｌ－アルギニンの送達により、活性化のほとんどがＴＬＲに限定される。
ｐ－Ｌ－アルギニン送達
［０３５１］最初に、ｐ－Ｌ－アルギニン複合体送達を使用したＴＬＲ７及びＴＬＲ８活性化に対するＲＮＡリガンドの効果を試験した。
［０３５２］図７に示すように、ＯＲＮ７００５（Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０１８のｐＵ１Ｃに由来）、ＯＲＮ７００９（Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０１８のｐＵ２Ｃに由来）、及びＯＲＮ７００１（新規に設計されたリガンド）は、ＩＦＮ－α分泌を誘導しないか、又はわずかなＩＦＮ－α分泌しか誘導せず、ＴＬＲ７活性が限定的であることを示している。さらに、ＯＲＮ７００５、ＯＲＮ７００９、及びＯＲＮ７００１に由来するいくつかの修飾ＯＲＮは、ＴＮＦ－α分泌によって証明されるように、顕著なＴＬＲ８活性を示した。ＯＲＮ７００５－７００８及びＯＲＮ７００９－７０１２は、外因性グアノシンがＴＬＲ７結合部位＃１のリガンドとして提供された場合に、ＴＬＲ７活性を示すことが予測された。この状態において観察されたＩＦＮ－α分泌の欠如は予想外であった。技術的なエラーを排除するために、ＯＲＮ７００５～７００８及びＯＲＮ７００９～７０１２の実験が次の変更を加えて繰り返された：（１）グアノシンは、ＲＮＡ分解産物を模倣したグアノシン誘導体２’３’環状ＧＭＰ（２’３’ｃＧＭＰ）に置き換えられた；（２）２’３’ｃＧＭＰは、細胞培養培地に直接添加されるのではなく、ｐ－Ｌ－アルギニン複合体に含有させた；及び（３）ＩＦＮ－αの検出には、より感度の高いＥＬＩＳＡキットが使用された。図１２に示すように、ＯＲＮ７００５～７００８及びＯＲＮ７００９～７０１２では、ＴＬＲ７結合部位＃１のリガンドとして２’３’ｃＧＭＰと同時送達すると、ＴＬＲ７を活性化してＩＦＮ－α分泌を誘導する能力が著しく増強された。注目すべきことに、ドナーや実験ごとにばらつきがあった；具体的には、１人のドナーは、ＯＲＮ７００５単独に対して予想外に高いＩＦＮ－α応答を示した（図１６Ａ～１６Ｂ）。しかし、データ全体を総合すると、ＲＮＡリガンドがグアノシン類似体と対になった場合にＩＦＮ－α産生が増加する傾向は依然として一貫している。２’－フルオロ及び２’Ｏ－メチル修飾バージョン（すなわち、ＯＲＮ７００６、ＯＲＮ７００７、ＯＲＮ７０１０、ＯＲＮ７０１１）は、２’３’ＧＭＰと同時送達された場合、測定可能なＴＮＦ－αがほとんど又は全くなく、強力なＩＦＮ－α誘導を実証し、ＴＬＲ７選択性を示している。
［０３５３］対照的に、図７に示すように、ＯＲＮ７０１３（Ｆｏｒｓｂａｃｈ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（２００８）１８０：３７２９－３７３８に由来）の限定されたＴＬＲ７選択性及び活性が確認された。さらに、ＯＲＮ７０１４～７０１７（ＯＲＮ７０１３の修飾バージョン）に導入された修飾は、ＯＲＮ７０１３と比較して、維持された（又はより低い）ＩＦＮ－α分泌レベル及び大幅に減少したＴＮＦ－α分泌レベルによって示されるように、ＯＲＮ７０１３と比較してＴＬＲ７選択性をさらに高めることが判明した。ＯＲＮ７０１３に由来するホスホジエステル結合ＯＲＮ（ＯＲＮ７０２２及びＯＲＮ７０１８～７０２１）は、ポリ－Ｌ－アルギニンを使用して送達された場合、ＴＬＲ７活性を欠いていた。
［０３５４］同様に、図７に示すように、ＯＲＮ７０２３（国際公開第２０１０／１０５８１９号に由来）への修飾の導入は、活性をさらに増加させながら、ＴＬＲ７選択性を維持した（図７のＯＲＮ７０２３Ｆ及びＯＲＮ７０２３Ｏｍｅを参照）。しかし、ＯＲＮ７０２３由来のホスホロチオエート修飾ＲＮＡリガンドであるＯＲＮ７０２４は活性が低下していた。
ＤＯＴＡＰ送達
［０３５５］次に、ＤＯＴＡＰ送達を使用したＴＬＲ７及びＴＬＲ８の活性化に対するＲＮＡリガンドの効果を、２つの異なる濃度のＲＮＡリガンド、０．６μｇ／ｍｌ及び２μｇ／ｍｌで試験した。
［０３５６］図１０Ａ～１０Ｂに示すように、ＯＲＮ７００１（新規に設計されたリガンド）は、それぞれＩＦＮ－α及びＴＮＦ－αの分泌によって示される、ＴＬＲ７及びＴＬＲ８活性を誘導した。ＯＲＮ７００１の２’Ｏ－メチル修飾バージョンであるＯＲＮ７００２は活性が低下していた。対照的に、ＯＲＮ７００１の２’－フルオロ修飾バージョンであるＯＲＮ７００３は、ＯＲＮ７００１と比較してＴＬＲ７活性を維持したが、ＴＬＲ８活性は消失した。ＯＲＮ７００１のホスホロチオエート結合バージョンであるＯＲＮ７００４は、ＴＬＲ７活性をわずかに増加させ、ＴＬＲ８活性を顕著に増加させた。
［０３５７］ＯＲＮ７００５（Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０１８のｐＵ１Ｃに由来）及びＯＲＮ７００９（Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０１８のｐＵ２Ｃに由来）は、ＴＬＲ７ではなくＴＬＲ８を活性化した。ＯＲＮ７００５とＯＲＮ７００９のホスホロチオエート修飾（すなわち、それぞれＯＲＮ７００８とＯＲＮ７０１２）は、ＴＬＲ８の活性化をさらに増加させた。ＯＲＮ７００５とＯＲＮ７００９の２’Ｏ－メチル修飾バージョン（すなわち、それぞれＯＲＮ７００６とＯＲＮ７０１０）は、ＴＬＲ８とＴＬＲ７の両方の活性化を低下させた。さらに、ＯＲＮ７００５の２’フルオロ修飾バージョン（すなわちＯＲＮ７００７）も活性を低下させた。ＯＲＮ７００９の２’－フルオロ修飾バージョンであるＯＲＮ７０１１は、２μｇ／ｍｌという高濃度でＴＬＲ７活性を有していたが（図１０Ｂ）、ＴＬＲ８活性はなかった。重要なことは、これらのＲＮＡリガンド（すなわち、ＯＲＮ７００５～ＯＲＮ７０１２）のＴＬＲ７活性は、ＴＬＲ７結合部位＃１のリガンドとして働くグアノシン又はグアノシン誘導体が存在しないため、この設定では最適でない可能性があるということである。したがって、グアノシン又はグアノシン誘導体とＲＮＡリガンド－ＤＯＴＡＰ複合体との同時送達は、ｐ－Ｌ－アルギニン複合体送達の設定において観察されたように、ＴＬＲ７活性を増強する可能性がある（図１２）。
［０３５８］ＯＲＮ７０１３（Ｆｏｒｓｂａｃｈ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（２００８）１８０：３７２９－３７３８に由来）及びその修飾バージョンＯＲＮ７０１４～ＯＲＮ７０１７は、ＴＬＲ８を活性化し、ＴＬＲ７を活性化しないか、又は活性を有しなかった。ＯＲＮ７０１３の２’－フルオロ修飾及びホスホジエステル結合バージョンであるＯＲＮ７０１９は、０．６μｇ／ｍｌの濃度で選択的なＴＬＲ７活性化を示した（図１０Ａ）。しかしながら、ＯＲＮ７０１９はまた、２μｇ／ｍｌの濃度でＴＬＲ８活性を有していた（図１０Ｂ）。ＯＲＮ７０１３のホスホジエステル結合バージョンであるＯＲＮ７０２２は、０．６μｇ／ｍｌ及び２μｇ／ｍｌの濃度の両方でＴＬＲ７及びＴＬＲ８の両方を活性化した（図１０Ａ～１０Ｂ）。ＯＲＮ７０１３（Ｆｏｒｓｂａｃｈ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（２００８）１８０：３７２９－３７３８に由来）に基づく他のすべてのＲＮＡリガンドは、ＤＯＴＡＰを使用して送達された場合、ＴＬＲ７活性化が低かったか、又はまったく活性化されなかった。
［０３５９］したがって、これらの結果は、ＤＯＴＡＰを用いて送達した場合、ポリ－Ｌ－アルギニンを用いた送達と比較して、異なるスペクトルのＲＮＡリガンドが最も高い活性を示したことを示している。
担体なしの送達
［０３６０］最後に、担体なしの送達を使用したＴＬＲ７及びＴＬＲ８の活性化に対するＲＮＡリガンドの効果を、ＲＮＡリガンドの濃度１０μｇ／ｍｌで試験した。図１１に示すように、ＲＮＡリガンドはいずれも、担体なしで送達された場合、再現性のあるＴＬＲ７又はＴＬＲ８の活性化を示さなかった。
修飾ＲＮＡリガンドの活性はｐＤＣにおいて発現されるＴＬＲ７に特異的である
［０３６１］ＰＢＭＣにおいて、ＴＬＲ７活性化に伴うＩＦＮ－α分泌は専らｐＤＣに由来し、一方、ＲＩＧ－Ｉ（短い二本鎖５’三リン酸ＲＮＡのセンサー）の活性化に伴うＩＦＮ－α分泌は単球に依存する。そこで、上記のＲＮＡリガンドのＴＬＲ７対ＲＩＧ－Ｉ特異性を確認するために、ＲＮＡリガンドのトランスフェクション前にｐＤＣをＰＢＭＣから枯渇させた。
［０３６２］図８及び１３～１４に示すように、ＩＦＮ－αの分泌はｐＤＣ枯渇によって抑制され、ＲＩＧ－ＩではなくＲＮＡリガンドによるＴＬＲ７の活性化がＩＦＮ－αの分泌の原因であることが示された。ＲＩＧ－Ｉは主に単球によって発現されるため、ＲＩＧ－Ｉリガンド３Ｐ－ＲＮＡ（ＩＶＴ４）のリポフェクタミン媒介トランスフェクション後のＩＦＮ－α分泌は、ｐＤＣ枯渇後も維持された。
修飾ＲＮＡリガンドの活性はナノ粒子の構造の違いによって引き起こされるものではない
［０３６３］ポリ－Ｌ－アルギニンと複合体化したオリゴヌクレオチドによる刺激後のＩＦＮ－α対ＩＬ－１２ｐ７０の生成は、おそらく粒子サイズの変化に起因して、時間依存性であることが以前に報告されており、例えば、Ｗｉｍｍｅｎａｕｅｒ Ｖ．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｋａｔｉｏｎ ｉｍｍｕｎｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｉｓｃｈｅｒ Ｎｕｋｌｅｉｎｓａｅｕｒｅｌｉｇａｎｄｅｎ ｚｕｒ Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ ｖｏｎ Ｒｅｚｅｐｔｏｒｅｎ ｄｅｒ ａｎｇｅｂｏｒｅｎｅｎ Ｉｍｍｕｎａｎｔｗｏｒｔ．２００９．ボン・ライニッシュ・フリードリヒ・ヴィルヘルムス大学博士論文を参照。オンライン版は次のＷｅｂサイトで入手できる：ｎｂｎ－ｒｅｓｏｌｖｅ．ｏｒｇ／ｕｒｎ：ｎｂｎ：ｄｅ：ｈｂｚ：５Ｎ－１７３１２（特に６２及び６６ページを参照）。
［０３６４］特定の配列によって誘導されるＩＦＮ－α又はＴＮＦ－αの生成が粒子サイズの違いによるものかどうかを決定するために、動的光散乱法を使用して様々なＲＮＡ－ポリ－Ｌ－アルギニン複合体の粒子サイズを分析した。図９に示すように、ＴＬＲ７選択的で高活性なＯＲＮ７０２３Ｏｍｅを含む粒子は、ＴＬＲ８活性なＯＲＮ７０１２、ＴＬＲ７選択性が低く活性なＯＲＮ７０１３、中程度に選択的で活性なＯＲＮ７０１５、ＴＬＲ７選択的だが活性が弱いＯＲＮ７０１６、及び陰性対照のｐＣＡを含む粒子と同様の挙動を示した。インキュベーション時間はすべてのオリゴリボヌクレオチドで同じ（１０分）であり、１０分の時点では直径が同程度であったことから、図９に示す結果は、異なるオリゴリボヌクレオチド間で見られるＴＬＲ７選択性と活性の範囲は、粒子サイズの違いによるものではないことを示唆している。
修飾ＲＮＡリガンドのＲＮａｓｅ媒介分解は２’フルオロ及び２’－Ｏ－メチル修飾によって阻害される
［０３６５］２’位のＲＮＡ修飾がＲＮＡｓｅ切断活性を妨げるかどうかを評価するために、組換えＲＮａｓｅ Ｔ２を様々なＲＮＡリガンドとインキュベートすることにより、一連のｉｎ ｖｉｔｒｏ切断アッセイを実行した。ＲＮＡｓｅ Ｔ２は遍在的に発現しており、重要なことは、それがＴＬＲ７を発現する細胞型において活性であることである。さらに、ＲＮＡｓｅ Ｔ２はＴＬＲ８の活性化に重要であることが確認されている（Ｏｓｔｅｎｄｏｒｆ ｅｔ ａｌ，（２０２０）５２（４）：５９１－６０５）。
［０３６６］各ＲＮＡリガンドを最適量のＲＮａｓｅ Ｔ２とインキュベートする時間経過を実行し、各反応からの分解生成物をＴＢＥ－尿素ＰＡＧＥゲル上で視覚化した。ＯＲＮ７０１３－７０１７と７００９－７０１２が試験された。
［０３６７］それぞれの場合において、ゲル上の完全なＲＮＡリガンドレベルの減少によって見られるように、非修飾ＲＮＡリガンド（すなわち、ＯＲＮ７０１３及びＯＲＮ７００９）はより速く分解された（図１５Ａ～１５Ｂ）。注目すべきことに、ＯＲＮ７０１０～７０１２は、ＲＮａｓｅ活性に対してより強力な保護を示した。これは、おそらく、それらが、ＯＲＮ７０１４～７０１７と比較して、それらの配列により、より高い割合の２’－修飾ウリジンを有するという事実によるものである（図１５Ｂ）。
配列
表８
Figure 2024516575000009
Figure 2024516575000010
Figure 2024516575000011
Figure 2024516575000012

Claims (152)

  1. ＲＮＡリガンド及び薬学的に許容される担体を含む、ＴＬＲ７を選択的に活性化する免疫調節組成物であって、ここでＲＮＡリガンドは：
    （ａ）式ＩＩを含むＴＬＲ７選択的モチーフ：
    Ｃ１ ＊Ｕ２－Ｕ３ ＊Ｕ４－Ｕ５ ＊Ｃ６（式ＩＩ）、
    （式中、Ｃ１及びＣ６はシチジンヌクレオシドであり、Ｕ２、Ｕ３、Ｕ４、及びＵ５はウリジンヌクレオシドであり、
    Ｕ２は、２’Ｏ－メチル修飾（ｍＵ）、２’－フルオロ修飾（ｆＵ）、２’－アミノ修飾、２’－デオキシ修飾、又は２’－メトキシエトキシ修飾を有し、
    Ｕ４は、２’Ｏ－メチル修飾（ｍＵ）、２’－フルオロ修飾（ｆＵ）、２’－アミノ修飾、２’－デオキシ修飾、又は２’－メトキシエトキシ修飾を有し、
    「＊」はホスホロチオエート結合を表し、「－」はホスホジエステル結合を表す）；
    （ｂ）ＴＬＲ７選択的モチーフの５’末端に連結された第１のヌクレオチド配列；及び
    （ｃ）ＴＬＲ７選択的モチーフの３’末端に連結された第２のヌクレオチド配列
    を含む、ＴＬＲ７を選択的に活性化する免疫調節組成物。
  2. ＴＬＲ７選択的モチーフのＵ２が、２’Ｏ－メチル修飾（ｍＵ）を有する、請求項１に記載の免疫調節組成物。
  3. ＴＬＲ７選択的モチーフのＵ４が、２’Ｏ－メチル修飾（ｍＵ）を有する、請求項１に記載の免疫調節組成物。
  4. ＴＬＲ７選択的モチーフのＵ２が、２’－フルオロ修飾（ｆＵ）を有する、請求項１に記載の免疫調節組成物。
  5. ＴＬＲ７選択的モチーフのＵ４が、２’－フルオロ修飾（ｆＵ）を有する、請求項１に記載の免疫調節組成物。
  6. ＴＬＲ７選択的モチーフのＵ２及びＵ４が、２’Ｏ－メチル修飾（ｍＵ）を有する、請求項１～３のいずれか一項に記載の免疫調節組成物。
  7. ＴＬＲ７選択的モチーフのＵ２及びＵ４が、２’－フルオロ修飾（ｆＵ）を有する、請求項１及び４～５のいずれか一項に記載の免疫調節組成物。
  8. ＴＬＲ７選択的モチーフのＵ２が２’Ｏ－メチル修飾（ｍＵ）を有し、ＴＬＲ７選択的モチーフのＵ４が２’－フルオロ修飾（ｆＵ）を有する、請求項１～２及び５のいずれか一項に記載の免疫調節組成物。
  9. ＴＬＲ７選択的モチーフのＵ２が２’－フルオロ修飾（ｆＵ）を有し、ＴＬＲ７選択的モチーフのＵ４が２’Ｏ－メチル修飾（ｍＵ）を有する、請求項１及び３～４のいずれか一項に記載の免疫調節組成物。
  10. ＴＬＲ７選択的モチーフが、配列番号４４のヌクレオチド配列を含む、請求項１～３のいずれか一項に記載の免疫調節組成物。
  11. ＴＬＲ７選択的モチーフが、配列番号４５のヌクレオチド配列を含む、請求項１及び４～５のいずれか一項に記載の免疫調節組成物。
  12. ＴＬＲ７選択的モチーフが、配列番号４６のヌクレオチド配列を含む、請求項１～２及び５のいずれか一項に記載の免疫調節組成物。
  13. ＴＬＲ７選択的モチーフが、配列番号４７のヌクレオチド配列を含む、請求項１及び３～４のいずれか一項に記載の免疫調節組成物。
  14. ＲＮＡリガンド及び薬学的に許容される担体を含む、ＴＬＲ７を選択的に活性化する免疫調節組成物であって、ここでＲＮＡリガンドが、
    （ａ）配列番号４４、４５、４６、及び４７からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含むＴＬＲ７選択的モチーフ、
    （ｂ）ＴＬＲ７選択的モチーフの５’末端に連結された第１のヌクレオチド配列；及び
    （ｃ）ＴＬＲ７選択的モチーフの３’末端に連結された第２のヌクレオチド配列
    を含む、ＴＬＲ７を選択的に活性化する免疫調節組成物。
  15. 第１のヌクレオチド配列が、１つのヌクレオシド、又はホスホロチオエート結合によって連結された少なくとも２つのヌクレオシドを含み、
    第１のヌクレオチド配列がウリジンヌクレオシドを含まず、
    第１のヌクレオチド配列がホスホロチオエート結合によってＴＬＲ７選択的モチーフに連結されている、
    請求項１～１４のいずれか一項に記載の免疫調節組成物。
  16. 第１のヌクレオチド配列が、ホスホロチオエート結合によって連結された８つのヌクレオシドを含む、請求項１５に記載の免疫調節組成物。
  17. 第１のヌクレオチド配列が、ヌクレオチド配列Ｃ＊Ｃ＊Ｇ＊Ａ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｃ＊Ｇ（配列番号５８）、又は配列番号５８に対して少なくとも約８５％の同一性を有するヌクレオチド配列を含み、
    ここで、「＊」はホスホロチオエート結合を表し、
    第１のヌクレオチド配列はホスホロチオエート結合によってＴＬＲ７選択的モチーフに連結されている、
    請求項１～１６のいずれか一項に記載の免疫調節組成物。
  18. 第２のヌクレオチド配列が、１つのヌクレオシド、又はホスホロチオエート結合によって連結された少なくとも２つのヌクレオシドを含み、
    第２のヌクレオチド配列がウリジンヌクレオシドを含まず、
    第２のヌクレオチド配列がホスホロチオエート結合によってＴＬＲ７選択的モチーフに連結されている、
    請求項１～１７のいずれか一項に記載の免疫調節組成物。
  19. 第２のヌクレオチド配列が、ホスホロチオエート結合によって連結された２つのヌクレオシドを含む、請求項１８に記載の免疫調節組成物。
  20. 第２のヌクレオチド配列が、ヌクレオチド配列Ｃ＊Ｃ（配列番号５９）を含み、
    ここで、「＊」はホスホロチオエート結合を表し、
    第２のヌクレオチド配列がホスホロチオエート結合によってＴＬＲ７選択的モチーフに連結されている、
    請求項１～１９のいずれか一項に記載の免疫調節組成物。
  21. ＲＮＡリガンドが、配列番号１２のヌクレオチド配列、又は配列番号１２に対して少なくとも約８５％の同一性を有し、且つ配列番号４４のＴＬＲ７選択的モチーフを含むヌクレオチド配列を含む、請求項１～３、６、１０、及び１４～２０のいずれか一項に記載の免疫調節組成物。
  22. ＲＮＡリガンドが、配列番号１３のヌクレオチド配列、又は配列番号１３に対して少なくとも約８５％の同一性を有し、且つ配列番号４５のＴＬＲ７選択的モチーフを含むヌクレオチド配列を含む、請求項１、４～５、７、１１及び１４～２０のいずれか一項に記載の免疫調節組成物。
  23. ＲＮＡリガンドが、配列番号１４のヌクレオチド配列、又は配列番号１４に対して少なくとも約８５％の同一性を有し、且つ配列番号４６のＴＬＲ７選択的モチーフを含むヌクレオチド配列を含む、請求項１、２、５、８、１２、及び１４～２０のいずれか一項に記載の免疫調節組成物。
  24. ＲＮＡリガンドが、配列番号１５のヌクレオチド配列、又は配列番号１５に対して少なくとも約８５％の同一性を有し、且つ配列番号４７のＴＬＲ７選択的モチーフを含むヌクレオチド配列を含む、請求項１、３～４、９、及び１３～２０のいずれか一項に記載の免疫調節組成物。
  25. ＲＮＡリガンド及び薬学的に許容される担体を含む、ＴＬＲ７を選択的に活性化する免疫調節組成物であって、ここでＲＮＡリガンドが、
    （ａ）配列番号１２、１３、１４、又は１５からなる群から選択されるヌクレオチド配列；
    （ｂ）配列番号１２に対して少なくとも約８５％の同一性を有し、且つ配列番号４４のＴＬＲ７選択的モチーフを含むヌクレオチド配列；
    （ｃ）配列番号１３に対して少なくとも約８５％の同一性を有し、且つ配列番号４５のＴＬＲ７選択的モチーフを含むヌクレオチド配列；
    （ｄ）配列番号１４に対して少なくとも約８５％の同一性を有し、且つ配列番号４６のＴＬＲ７選択的モチーフを含むヌクレオチド配列；又は
    （ｅ）配列番号１５に対して少なくとも約８５％の同一性を有し、且つ配列番号４７のＴＬＲ７選択的モチーフを含むヌクレオチド配列
    を含む、ＴＬＲ７を選択的に活性化する免疫調節組成物。
  26. ＲＮＡリガンド及び薬学的に許容される担体を含む、ＴＬＲ７を選択的に活性化する免疫調節組成物であって、ここでＲＮＡリガンドが、
    （ａ）式ＩＩＩを含むＴＬＲ７選択的モチーフ：
    Ｃ１－Ｕ２－Ｃ３（式ＩＩＩ）、
    （式中、Ｃ１及びＣ３はシチジンヌクレオシドであり、Ｕ２はウリジンヌクレオシドであり、
    Ｃ１は２’Ｏ－メチル修飾（ｍＵ）、２’－フルオロ修飾（ｆＵ）、２’－アミノ修飾、２’－デオキシ修飾、又は２’－メトキシエトキシ修飾を有し、
    「－」はホスホジエステル結合を表す）；
    （ｂ）ＴＬＲ７選択的モチーフの５’末端に連結された第１のヌクレオチド配列；並びに
    （ｃ）ＴＬＲ７選択的モチーフの３’末端に連結された第２のヌクレオチド配列
    を含む、ＴＬＲ７を選択的に活性化する免疫調節組成物。
  27. ＴＬＲ７選択的モチーフのＣ１が、２’－フルオロ修飾（ｆＵ）を有する、請求項２６に記載の免疫調節組成物。
  28. ＴＬＲ７選択的モチーフのＣ１が、２’Ｏ－メチル修飾（ｍＵ）を有する、請求項２６に記載の免疫調節組成物。
  29. ＴＬＲ７選択的モチーフが、配列番号４２のヌクレオチド配列を含む、請求項２６に記載の免疫調節組成物。
  30. ＴＬＲ７選択的モチーフが、配列番号４３のヌクレオチド配列を含む、請求項２６に記載の免疫調節組成物。
  31. ＲＮＡリガンド及び薬学的に許容される担体を含む、ＴＬＲ７を選択的に活性化する免疫調節組成物であって、ここでＲＮＡリガンドが、
    （ａ）配列番号４２又は４３のヌクレオチド配列を含むＴＬＲ７選択的モチーフ、
    （ｂ）ＴＬＲ７選択的モチーフの５’末端に連結された第１のヌクレオチド配列；及び
    （ｃ）ＴＬＲ７選択的モチーフの３’末端に連結された第２のヌクレオチド配列
    を含む、ＴＬＲ７を選択的に活性化する免疫調節組成物。
  32. ＲＮＡリガンドが二本鎖ＲＮＡヘアピン構造をとることができる、請求項２６～３１のいずれか一項に記載の免疫調節組成物。
  33. 前記ＲＮＡリガンドがＧ：Ｕウォブル塩基対を含む、請求項２６～３２のいずれか一項に記載の免疫調節組成物。
  34. 第１のヌクレオチド配列がウリジンヌクレオシドを含まず、第１のヌクレオチド配列が、ホスホジエステル結合によってＴＬＲ７選択的モチーフに連結されている、請求項２６～３３のいずれか一項に記載の免疫調節組成物。
  35. 第１のヌクレオチド配列が３つのヌクレオシドを含む、請求項３４に記載の免疫調節組成物。
  36. 第１のヌクレオチド配列内のヌクレオシドがホスホジエステル結合によって連結されている、請求項３４又は請求項３５に記載の免疫調節組成物。
  37. 第１のヌクレオチド配列がヌクレオチド配列Ｃ－Ｇ－Ｇ（配列番号６０）を含み、「－」がホスホジエステル結合を表す、請求項２６～３６のいずれか一項に記載の免疫調節組成物。
  38. 第２のヌクレオチド配列がウリジンヌクレオシドを含まず、
    ここで第２のヌクレオチド配列がヌクレオチド配列Ｇ－Ｇ－Ｇ（配列番号６９）を含み、
    ヌクレオチド配列Ｇ－Ｇ－Ｇ（配列番号６９）はＴＬＲ７選択的モチーフと塩基対形成することができ、
    第２のヌクレオチド配列は、ホスホジエステル結合によってＴＬＲ７選択的モチーフに連結されている、
    請求項２６～３７のいずれか一項に記載の免疫調節組成物。
  39. 第２のヌクレオチド配列が約１５個のヌクレオシドを含む、請求項３８に記載の免疫調節組成物。
  40. 第２のヌクレオチド配列内のヌクレオシドがホスホジエステル結合によって連結されている、請求項３８又は請求項３９に記載の免疫調節組成物。
  41. 第２のヌクレオチド配列が、
    （ａ）ヌクレオチド配列Ｇ－Ｇ－Ｃ－Ａ－Ｇ－Ａ－Ａ－Ｇ－Ｃ－Ｃ－Ｇ－Ｇ－Ｇ－Ｃ－Ｃ（配列番号６１）、又は
    （ｂ）配列番号６１に対して少なくとも約８５％の同一性を有し、ヌクレオチド配列Ｇ－Ｇ－Ｇ（配列番号６９）を含むヌクレオチド配列であって、ヌクレオチド配列Ｇ－Ｇ－Ｇ（配列番号６９）が、ＴＬＲ７選択的モチーフと塩基対形成することができる、前記ヌクレオチド配列を含み、
    「－」はホスホジエステル結合を表す、
    請求項２６～４０のいずれか一項に記載の免疫調節組成物。
  42. ＲＮＡリガンドが、
    （ａ）配列番号２３のヌクレオチド配列、又は
    （ｂ）配列番号２３に対して少なくとも約８５％の同一性を有し、且つ配列番号４２のＴＬＲ７選択的モチーフ及びヌクレオチド配列Ｇ－Ｇ－Ｇ（配列番号６９）を含むヌクレオチド配列であって、ヌクレオチド配列Ｇ－Ｇ－Ｇ（配列番号６９）が、ＴＬＲ７選択的モチーフと塩基対形成することができる、前記ヌクレオチド配列
    を含む、請求項２６～２７、２９、及び３１～４１のいずれか一項に記載の免疫調節組成物。
  43. ＲＮＡリガンドが、
    （ａ）配列番号２４のヌクレオチド配列、又は
    （ｂ）配列番号２４に対して少なくとも約８５％の同一性を有し、且つ配列番号４３のＴＬＲ７選択的モチーフ及びヌクレオチド配列Ｇ－Ｇ－Ｇ（配列番号６９）を含むヌクレオチド配列であって、ヌクレオチド配列Ｇ－Ｇ－Ｇ（配列番号６９）が、ＴＬＲ７選択的モチーフと塩基対形成することができる、前記ヌクレオチド配列
    を含む、請求項２６、２８、及び３０～４１のいずれか一項に記載の免疫調節組成物。
  44. ＲＮＡリガンド及び薬学的に許容される担体を含む、ＴＬＲ７を選択的に活性化する免疫調節組成物であって、ここでＲＮＡリガンドが、
    （ａ）配列番号２３又は２４のヌクレオチド配列；
    （ｂ）配列番号２３に対して少なくとも約８５％の同一性を有し、且つ配列番号４２のＴＬＲ７選択的モチーフ及びヌクレオチド配列Ｇ－Ｇ－Ｇ（配列番号６９）を含むヌクレオチド配列であって、ヌクレオチド配列Ｇ－Ｇ－Ｇ（配列番号６９）が、ＴＬＲ７選択的モチーフと塩基対形成することができる、前記ヌクレオチド配列；又は
    （ｃ）配列番号２４に対して少なくとも約８５％の同一性を有し、且つ配列番号４３のＴＬＲ７選択的モチーフ及びヌクレオチド配列Ｇ－Ｇ－Ｇ（配列番号６９）を含むヌクレオチド配列であって、ヌクレオチド配列Ｇ－Ｇ－Ｇ（配列番号６９）が、ＴＬＲ７選択的モチーフと塩基対形成することができる、前記ヌクレオチド配列
    を含む、ＴＬＲ７を選択的に活性化する免疫調節組成物。
  45. ＲＮＡリガンド及び薬学的に許容される担体を含む、ＴＬＲ７を選択的に活性化する免疫調節組成物であって、ここでＲＮＡリガンドが、
    （ａ）式ＩＶを含む第１及び第２のＴＬＲ７選択的モチーフ：
    Ｃ１－Ｕ２－Ｕ３－Ｃ４（式ＩＶ）、
    （式中、Ｃ１及びＣ４はシチジンヌクレオシドであり、Ｕ２及びＵ３はウリジンヌクレオシドであり、Ｕ２は、２’Ｏ－メチル修飾（ｍＵ）、２’－フルオロ修飾（ｆＵ）、２’－アミノ修飾、２’－デオキシ修飾、又は２’－メトキシエトキシ修飾を有し、「－」はホスホジエステル結合を表す）；
    （ｂ）第１のＴＬＲ７選択的モチーフの５’末端に連結された第１のヌクレオチド配列；並びに
    （ｃ）第１のＴＬＲ７選択的モチーフの３’末端及び第２のＴＬＲ７選択的モチーフの５’末端に連結された第２のヌクレオチド配列
    を含む、ＴＬＲ７を選択的に活性化する免疫調節組成物。
  46. 第１のＴＬＲ７選択的モチーフのＵ２が、２’Ｏ－メチル修飾（ｍＵ）を有する、請求項４５に記載の免疫調節組成物。
  47. 第２のＴＬＲ７選択的モチーフのＵ２が、２’Ｏ－メチル修飾（ｍＵ）を有する、請求項４５又は請求項４６に記載の免疫調節組成物。
  48. 第１のＴＬＲ７選択的モチーフのＵ２が、２’－フルオロ修飾（ｆＵ）を有する、請求項４５に記載の免疫調節組成物。
  49. 第２のＴＬＲ７選択的モチーフのＵ２が、２’－フルオロ修飾（ｆＵ）を有する、請求項４５又は請求項４８に記載の免疫調節組成物。
  50. 第１のＴＬＲ７選択的モチーフが、配列番号３６のヌクレオチド配列を含む、請求項４５に記載の免疫調節組成物。
  51. 第２のＴＬＲ７選択的モチーフが、配列番号３６のヌクレオチド配列を含む、請求項４５又は請求項５０に記載の免疫調節組成物。
  52. 第１のＴＬＲ７選択的モチーフが、配列番号３７のヌクレオチド配列を含む、請求項４５に記載の免疫調節組成物。
  53. 第２のＴＬＲ７選択的モチーフが、配列番号３７のヌクレオチド配列を含む、請求項４５又は請求項５２に記載の免疫調節組成物。
  54. ＲＮＡリガンド及び薬学的に許容される担体を含む、ＴＬＲ７を選択的に活性化する免疫調節組成物であって、ここでＲＮＡリガンドが、
    （ａ）配列番号３６又は３７のヌクレオチド配列を含む第１のＴＬＲ７選択的モチーフ；
    （ｂ）配列番号３６又は３７のヌクレオチド配列を含む第２のＴＬＲ７選択的モチーフ；
    （ｃ）第１のＴＬＲ７選択的モチーフの５’末端に連結された第１のヌクレオチド配列；並びに
    （ｄ）第１のＴＬＲ７選択的モチーフの３’末端及び第２のＴＬＲ７選択的モチーフの５’末端に連結された第２のヌクレオチド配列
    を含む、ＴＬＲ７を選択的に活性化する免疫調節組成物。
  55. 第１のヌクレオチド配列が、１つのヌクレオシド、又はホスホジエステル結合によって連結された少なくとも２つのヌクレオシドを含み、
    第１のヌクレオチド配列がウリジンヌクレオシドを含まず、
    第１のヌクレオチド配列がホスホジエステル結合によって第１のＴＬＲ７選択的モチーフに連結されている、
    請求項４５～５４のいずれか一項に記載の免疫調節組成物。
  56. 第２のヌクレオチド配列が、１つのヌクレオシド、又はホスホジエステル結合によって連結された少なくとも２つのヌクレオシドを含み、
    第２のヌクレオチド配列がウリジンヌクレオシドを含まず、
    第２のヌクレオチド配列がホスホジエステル結合によって第１のＴＬＲ７選択的モチーフ及び／又は第２のＴＬＲ７選択的モチーフに連結されている、
    請求項４５～５５のいずれか一項に記載の免疫調節組成物。
  57. 第１のヌクレオチド配列及び／又は第２のヌクレオチド配列が、ホスホジエステル結合によって連結された５つのヌクレオシドを含む、請求項５５又は請求項５６に記載の免疫調節組成物。
  58. 第１のヌクレオチド配列及び／又は第２のヌクレオチド配列が、ヌクレオチド配列Ｃ－Ａ－Ｇ－Ａ－Ｃ（配列番号６７）、又は配列番号６７に対して少なくとも約８５％の同一性を有するヌクレオチド配列を含み、ここで「－」はホスホジエステル結合を表す、請求項４５～５７のいずれか一項に記載の免疫調節組成物。
  59. ＲＮＡリガンドが、配列番号３３のヌクレオチド配列、又は配列番号３３に対して少なくとも約８５％の同一性を有し、且つ配列番号３６の第１のＴＬＲ７選択的モチーフ及び／又は配列番号３６の第２のＴＬＲ７選択的モチーフを含むヌクレオチド配列を含む、請求項４５～４７、５０～５１、及び５４～５８のいずれか一項に記載の免疫調節組成物。
  60. ＲＮＡリガンドが、配列番号３４のヌクレオチド配列、又は配列番号３４に対して少なくとも約８５％の同一性を有し、且つ配列番号３７の第１のＴＬＲ７選択的モチーフ及び／又は配列番号３７の第２のＴＬＲ７選択的モチーフを含むヌクレオチド配列を含む、請求項４５、４８～４９、及び５２～５８のいずれか一項に記載の免疫調節組成物。
  61. ＲＮＡリガンド及び薬学的に許容される担体を含む、ＴＬＲ７を選択的に活性化する免疫調節組成物であって、ここでＲＮＡリガンドが、
    （ａ）配列番号３３又は３４のヌクレオチド配列；
    （ｂ）配列番号３３に対して少なくとも約８５％の同一性を有し、且つ配列番号３６の第１及び第２のＴＬＲ７選択的モチーフを含むヌクレオチド配列；又は
    （ｃ）配列番号３４に対して少なくとも約８５％の同一性を有し、且つ配列番号３７の第１及び第２のＴＬＲ７選択的モチーフを含むヌクレオチド配列
    を含む、ＴＬＲ７を選択的に活性化する免疫調節組成物。
  62. ＲＮＡリガンド及び薬学的に許容される担体を含む、ＴＬＲ７を選択的に活性化する免疫調節組成物であって、ここでＲＮＡリガンドが、
    （ａ）式Ｖ：Ｕ１－Ｕ２－Ｃ３（式Ｖ）
    （式中、Ｕ１及びＵ２はウリジンヌクレオシドであり、Ｃ３はシチジンヌクレオシドであり、
    Ｕ１は、２’Ｏ－メチル修飾（ｍＵ）、２’－フルオロ修飾（ｆＵ）、２’－アミノ修飾、２’－デオキシ修飾、又は２’－メトキシエトキシ修飾を有し、
    「－」はホスホジエステル結合を表す）
    を含む第１のＴＬＲ７選択的モチーフ及び１つ又は複数の追加のＴＬＲ７選択的モチーフ；並びに
    （ｂ）第１のＴＬＲ７選択的モチーフの５’末端に連結された第１のヌクレオチド配列
    を含む、ＴＬＲ７を選択的に活性化する免疫調節組成物。
  63. １つ又は複数の追加のＴＬＲ７選択的モチーフが、式Ｖを含む１つ、２つ、３つ、４つ、５つ又はそれ以上の追加のＴＬＲ７選択的モチーフを含む、請求項６２に記載の免疫調節組成物。
  64. １つ又は複数の追加のＴＬＲ７選択的モチーフが、式Ｖを含む５つの追加のＴＬＲ７選択的モチーフを含む、請求項６２又は請求項６３に記載の免疫調節組成物。
  65. 第１のＴＬＲ７選択的モチーフのＵ１が、２’Ｏ－メチル修飾（ｍＵ）を有する、請求項６２～６４のいずれか一項に記載の免疫調節組成物。
  66. １つ又は複数の追加のＴＬＲ７選択的モチーフのうちの少なくとも１つのＵ１、又は１つ若しくは複数の追加のＴＬＲ７選択的モチーフのすべてのＵ１が、２’Ｏ－メチル修飾（ｍＵ）を有する、請求項６２～６５のいずれか一項に記載の免疫調節組成物。
  67. 第１のＴＬＲ７選択的モチーフのＵ１が、２’－フルオロ修飾を有する、請求項６２～６４のいずれか一項に記載の免疫調節組成物。
  68. １つ若しくは複数の追加のＴＬＲ７選択的モチーフのうちの少なくとも１つのＵ１、又は１つ若しくは複数の追加のＴＬＲ７選択的モチーフのすべてのＵ１が、２’－フルオロ修飾を有する、請求項６２～６４及び６７のいずれか一項に記載の免疫調節組成物。
  69. 第１のＴＬＲ７選択的モチーフが、配列番号４０のヌクレオチド配列を含む、請求項６２～６４のいずれか一項に記載の免疫調節組成物。
  70. １つ若しくは複数の追加のＴＬＲ７選択的モチーフのうちの少なくとも１つ、又は１つ若しくは複数の追加のＴＬＲ７選択的モチーフのすべてが、配列番号４０のヌクレオチド配列を含む、請求項６２～６４及び６９のいずれか一項に記載の免疫調節組成物。
  71. 第１のＴＬＲ７選択的モチーフが、配列番号４１のヌクレオチド配列を含む、請求項６２～６４のいずれか一項に記載の免疫調節組成物。
  72. １つ若しくは複数の追加のＴＬＲ７選択的モチーフのうちの少なくとも１つ、又は１つ若しくは複数の追加のＴＬＲ７選択的モチーフのすべてが、配列番号４１のヌクレオチド配列を含む、請求項６２～６４及び７１のいずれか一項に記載の免疫調節組成物。
  73. ＲＮＡリガンド及び薬学的に許容される担体を含む、ＴＬＲ７を選択的に活性化する免疫調節組成物であって、ここでＲＮＡリガンドが、
    （ａ）配列番号４０又は４１のヌクレオチド配列を含む第１のＴＬＲ７選択的モチーフ；
    （ｂ）１つ又は複数の追加のＴＬＲ７選択的モチーフであって、１つ若しくは複数の追加のＴＬＲ７選択的モチーフの少なくとも１つ、又は１つ若しくは複数の追加のＴＬＲ７選択的モチーフのすべてが、配列番号４０又は４１のヌクレオチド配列を含む、１つ又は複数の追加のＴＬＲ７選択的モチーフ；及び
    （ｃ）第１のＴＬＲ７選択的モチーフの５’末端に連結された第１のヌクレオチド配列
    を含む、ＴＬＲ７を選択的に活性化する免疫調節組成物。
  74. １つ又は複数の追加のＴＬＲ７選択的モチーフが、配列番号４０又は４１のヌクレオチド配列を含む１つ、２つ、３つ、４つ、５つ又はそれ以上の追加のＴＬＲ７選択的モチーフを含む、請求項７３に記載の免疫調節組成物。
  75. １つ又は複数の追加のＴＬＲ７選択的モチーフが、配列番号４０又は４１のヌクレオチド配列を含む５つの追加のＴＬＲ７選択的モチーフを含む、請求項７３又は請求項７４に記載の免疫調節組成物。
  76. 第１のヌクレオチド配列が、１つのヌクレオシド、又はホスホジエステル結合によって連結された少なくとも２つのヌクレオシドを含み、
    第１のヌクレオチド配列がウリジンヌクレオシドを含まず、
    第１のヌクレオチド配列がホスホジエステル結合によって第１のＴＬＲ７選択的モチーフに連結されている、
    請求項６２～７５のいずれか一項に記載の免疫調節組成物。
  77. 第１のヌクレオチド配列が、ホスホジエステル結合によって連結された２つのヌクレオシドを含む、請求項７６に記載の免疫調節組成物。
  78. 第１のヌクレオチド配列が、ホスホジエステル結合によって連結された２つのシチジンヌクレオシドを含む、請求項７６又は請求項７７に記載の免疫調節組成物。
  79. ＲＮＡリガンドが、配列番号２９のヌクレオチド配列、又は配列番号２９に対して少なくとも約８５％の同一性を有し、且つ配列番号４０の第１のＴＬＲ７選択的モチーフ及び配列番号４０の５つの追加のＴＬＲ７選択的モチーフを含むヌクレオチド配列を含む、請求項６２～６６、６９～７０、及び７３～７８のいずれか一項に記載の免疫調節組成物。
  80. ＲＮＡリガンドが、配列番号３０のヌクレオチド配列、又は配列番号３０に対して少なくとも約８５％の同一性を有し、且つ配列番号４１の第１のＴＬＲ７選択的モチーフ及び配列番号４１の５つの追加のＴＬＲ７選択的モチーフを含むヌクレオチド配列を含む、請求項６２～６４、６７～６８、及び７１～７８のいずれか一項に記載の免疫調節組成物。
  81. ＲＮＡリガンド及び薬学的に許容される担体を含む、ＴＬＲ７を選択的に活性化する免疫調節組成物であって、ここでＲＮＡリガンドが、
    （ａ）配列番号２９又は３０のヌクレオチド配列；
    （ｂ）配列番号２９に対して少なくとも約８５％の同一性を有し、且つ配列番号４０の６つのＴＬＲ７選択的モチーフを含むヌクレオチド配列；又は
    （ｃ）配列番号３０に対して少なくとも約８５％の同一性を有し、且つ配列番号４１の６つのＴＬＲ７選択的モチーフを含むヌクレオチド配列
    を含む、ＴＬＲ７を選択的に活性化する免疫調節組成物。
  82. ＲＮＡリガンド及び薬学的に許容される担体を含む、ＴＬＲ７を選択的に活性化する免疫調節組成物であって、ここでＲＮＡリガンドが、
    （ａ）式ＶＩを含むＴＬＲ７選択的モチーフ：
    Ｃ１－Ｕ２－Ｕ３ ＊Ｕ４－Ｕ５ ＊Ｃ６（式ＶＩ）、
    （式中、Ｃ１及びＣ６はシチジンヌクレオシドであり、Ｕ２、Ｕ３、Ｕ４、及びＵ５はウリジンヌクレオシドであり、
    Ｕ２は、２’Ｏ－メチル修飾（ｍＵ）、２’－フルオロ修飾（ｆＵ）、２’－アミノ修飾、２’－デオキシ修飾、又は２’－メトキシエトキシ修飾を有し、
    Ｕ４は、２’Ｏ－メチル修飾（ｍＵ）、２’－フルオロ修飾（ｆＵ）、２’－アミノ修飾、２’－デオキシ修飾、又は２’－メトキシエトキシ修飾を有し、
    「＊」はホスホロチオエート結合を表し、「－」はホスホジエステル結合を表す）；
    （ｂ）ＴＬＲ７選択的モチーフの５’末端に連結された第１のヌクレオチド配列；及び
    （ｃ）ＴＬＲ７選択的モチーフの３’末端に連結された第２のヌクレオチド配列
    を含む、ＴＬＲ７を選択的に活性化する免疫調節組成物。
  83. ＴＬＲ７選択的モチーフのＵ２が、２’Ｏ－メチル修飾（ｍＵ）を有する、請求項８２に記載の免疫調節組成物。
  84. ＴＬＲ７選択的モチーフのＵ４が、２’Ｏ－メチル修飾（ｍＵ）を有する、請求項８２に記載の免疫調節組成物。
  85. ＴＬＲ７選択的モチーフのＵ２が、２’－フルオロ修飾（ｆＵ）を有する、請求項８２に記載の免疫調節組成物。
  86. ＴＬＲ７選択的モチーフのＵ４が、２’－フルオロ修飾（ｆＵ）を有する、請求項８２に記載の免疫調節組成物。
  87. ＴＬＲ７選択的モチーフのＵ２及びＵ４が、２’Ｏ－メチル修飾（ｍＵ）を有する、請求項８２～８４のいずれか一項に記載の免疫調節組成物。
  88. ＴＬＲ７選択的モチーフのＵ２及びＵ４が、２’－フルオロ修飾（ｆＵ）を有する、請求項８２及び８５～８６のいずれか一項に記載の免疫調節組成物。
  89. ＴＬＲ７選択的モチーフのＵ２が２’Ｏ－メチル修飾（ｍＵ）を有し、ＴＬＲ７選択的モチーフのＵ４が２’－フルオロ修飾（ｆＵ）を有する、請求項８２～８３及び８６のいずれか一項に記載の免疫調節組成物。
  90. ＴＬＲ７選択的モチーフのＵ２が２’－フルオロ修飾（ｆＵ）を有し、ＴＬＲ７選択的モチーフのＵ４が２’Ｏ－メチル修飾（ｍＵ）を有する、請求項８２及び８４～８５のいずれか一項に記載の免疫調節組成物。
  91. ＴＬＲ７選択的モチーフが、配列番号４８のヌクレオチド配列を含む、請求項８２～８４のいずれか一項に記載の免疫調節組成物。
  92. ＴＬＲ７選択的モチーフが、配列番号４９のヌクレオチド配列を含む、請求項８２及び８５～８６のいずれか一項に記載の免疫調節組成物。
  93. ＴＬＲ７選択的モチーフが、配列番号５０のヌクレオチド配列を含む、請求項８２～８３及び８６のいずれか一項に記載の免疫調節組成物。
  94. ＴＬＲ７選択的モチーフが、配列番号５１のヌクレオチド配列を含む、請求項８２及び８４～８５のいずれか一項に記載の免疫調節組成物。
  95. ＲＮＡリガンド及び薬学的に許容される担体を含む、ＴＬＲ７を選択的に活性化する免疫調節組成物であって、ここでＲＮＡリガンドが、
    （ａ）配列番号４８、４９、５０、及び５１からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含むＴＬＲ７選択的モチーフ、
    （ｂ）ＴＬＲ７選択的モチーフの５’末端に連結された第１のヌクレオチド配列；及び
    （ｃ）ＴＬＲ７選択的モチーフの３’末端に連結された第２のヌクレオチド配列
    を含む、ＴＬＲ７を選択的に活性化する免疫調節組成物。
  96. 第１のヌクレオチド配列が、１つのヌクレオシド、又はホスホジエステル結合によって連結された少なくとも２つのヌクレオシドを含み、
    第１のヌクレオチド配列がウリジンヌクレオシドを含まず、
    第１のヌクレオチド配列がホスホジエステル結合によってＴＬＲ７選択的モチーフに連結されている、
    請求項８２～９５のいずれか一項に記載の免疫調節組成物。
  97. 第１のヌクレオチド配列が、ホスホジエステル結合によって連結された８つのヌクレオシドを含む、請求項９６に記載の免疫調節組成物。
  98. 第１のヌクレオチド配列が、ヌクレオチド配列Ｃ－Ｃ－Ｇ－Ａ－Ｇ－Ｃ－Ｃ－Ｇ（配列番号６８）、又は配列番号６８に対して少なくとも約８５％の同一性を有するヌクレオチド配列を含み、
    ここで、「－」はホスホジエステル結合を表し、
    第１のヌクレオチド配列はホスホジエステル結合によってＴＬＲ７選択的モチーフに連結されている、
    請求項８２～９７のいずれか一項に記載の免疫調節組成物。
  99. 第２のヌクレオチド配列が、１つのヌクレオシド、又はホスホジエステル結合によって連結された少なくとも２つのヌクレオシドを含み、
    第２のヌクレオチド配列がウリジンヌクレオシドを含まず、
    第２のヌクレオチド配列がホスホジエステル結合によってＴＬＲ７選択的モチーフに連結されている、
    請求項８２～９８のいずれか一項に記載の免疫調節組成物。
  100. 第２のヌクレオチド配列が、ホスホジエステル結合によって連結された２つのヌクレオシドを含む、請求項９９に記載の免疫調節組成物。
  101. 第２のヌクレオチド配列が、ホスホジエステル結合によって連結された２つのシチジンヌクレオシドを含む、請求項１００に記載の免疫調節組成物。
  102. ＲＮＡリガンドが、配列番号１７のヌクレオチド配列、又は配列番号１７に対して少なくとも約８５％の同一性を有し、且つ配列番号４８のＴＬＲ７選択的モチーフを含むヌクレオチド配列を含む、請求項８２～８４、８７、９１、及び９５～１０１のいずれか一項に記載の免疫調節組成物。
  103. ＲＮＡリガンドが、配列番号１８のヌクレオチド配列、又は配列番号１８に対して少なくとも約８５％の同一性を有し、且つ配列番号４９のＴＬＲ７選択的モチーフを含むヌクレオチド配列を含む、請求項８２、８５～８６、８８、９２、及び９５～１０１のいずれか一項に記載の免疫調節組成物。
  104. ＲＮＡリガンドが、配列番号１９のヌクレオチド配列、又は配列番号１９に対して少なくとも約８５％の同一性を有し、且つ配列番号５０のＴＬＲ７選択的モチーフを含むヌクレオチド配列を含む、請求項８２、８３、８６、８９、９３、及び９５～１０１のいずれか一項に記載の免疫調節組成物。
  105. ＲＮＡリガンドが、配列番号２０のヌクレオチド配列、又は配列番号２０に対して少なくとも約８５％の同一性を有し、且つ配列番号５１のＴＬＲ７選択的モチーフを含むヌクレオチド配列を含む、請求項８２、８４～８５、９０、及び９４～１０１のいずれか一項に記載の免疫調節組成物。
  106. ＲＮＡリガンド及び薬学的に許容される担体を含む、ＴＬＲ７を選択的に活性化する免疫調節組成物であって、ここでＲＮＡリガンドが、
    （ａ）配列番号１７、１８、１９、又は２０からなる群から選択されるヌクレオチド配列；
    （ｂ）配列番号１７に対して少なくとも約８５％の同一性を有し、且つ配列番号４８のＴＬＲ７選択的モチーフを含むヌクレオチド配列；
    （ｃ）配列番号１８に対して少なくとも約８５％の同一性を有し、且つ配列番号４９のＴＬＲ７選択的モチーフを含むヌクレオチド配列；
    （ｄ）配列番号１９に対して少なくとも約８５％の同一性を有し、且つ配列番号５０のＴＬＲ７選択的モチーフを含むヌクレオチド配列；又は
    （ｅ）配列番号２０に対して少なくとも約８５％の同一性を有し、且つ配列番号５１のＴＬＲ７選択的モチーフを含むヌクレオチド配列
    を含む、ＴＬＲ７を選択的に活性化する免疫調節組成物。
  107. 薬学的に許容される担体が脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）である、請求項１～１０６のいずれか一項に記載の免疫調節組成物。
  108. ＬＮＰがカチオン性脂質を含む、請求項１０７に記載の免疫調節組成物。
  109. ＬＮＰがイオン化可能な脂質を含む、請求項１０７又は請求項１０８に記載の免疫調節組成物。
  110. 薬学的に許容される担体が、ポリ－Ｌ－アルギニン若しくは１，２－ジオレオイル－３－トリメチルアンモニウムプロパン（ＤＯＴＡＰ）であるか、又はそれを含む、請求項１～１０９のいずれか一項に記載の免疫調節組成物。
  111. 免疫調節組成物が、免疫調節組成物と接触させた１つ又は複数の細胞においてＴＬＲ７を選択的に活性化する、請求項１～１１０のいずれか一項に記載の免疫調節組成物。
  112. １つ又は複数の細胞がＴＬＲ７を発現する、請求項１１１に記載の免疫調節組成物。
  113. １つ又は複数の細胞が末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を含む、請求項１１１又は請求項１１２に記載の免疫調節組成物。
  114. １つ又は複数の細胞が、１つ又は複数の形質細胞様樹状細胞を含む、請求項１１１～１１３のいずれか一項に記載の免疫調節組成物。
  115. 免疫調節組成物が、免疫調節組成物と接触していない対応する１つ又は複数の細胞と比較して、免疫調節組成物と接触させた１つ又は複数の細胞におけるＴＬＲ７活性を増加させる、請求項１～１１４のいずれか一項に記載の免疫調節組成物。
  116. 免疫調節組成物が、免疫調節組成物と接触していない対応する１つ又は複数の細胞と比較して、免疫調節組成物と接触させた１つ又は複数の細胞によるＩＦＮ－αの分泌を増加させる、請求項１～１１５のいずれか一項に記載の免疫調節組成物。
  117. 免疫調節組成物と接触させた１つ又は複数の細胞におけるＴＬＲ７活性の増加は、免疫調節組成物と接触していない対応する１つ又は複数の細胞と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約１００％、又はそれ以上の増加である、請求項１１５に記載の免疫調節組成物。
  118. 免疫調節組成物と接触させた１つ又は複数の細胞によるＩＦＮ－αの分泌の増加は、免疫調節組成物と接触していない対応する１つ又は複数の細胞と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約１００％、又はそれ以上の増加である、請求項１１６に記載の免疫調節組成物。
  119. 免疫調節組成物は、免疫調節組成物と接触していない対応する１つ又は複数の細胞と比較して、免疫調節組成物と接触させた１つ又は複数の細胞におけるＴＬＲ８活性を約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、約５％未満、又は約１％未満だけ増加させる、請求項１～１１８のいずれか一項に記載の免疫調節組成物。
  120. 免疫調節組成物は、免疫調節組成物と接触していない対応する１つ又は複数の細胞と比較して、免疫調節組成物と接触させた１つ又は複数の細胞によるＴＮＦ－αの分泌を約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、約５％未満、又は約１％未満増加させる、請求項１～１１９のいずれか一項に記載の免疫調節組成物。
  121. ＲＮＡリガンドが、免疫調節組成物と接触させた１つ又は複数の細胞内に導入される、請求項１１１～１２０のいずれか一項に記載の免疫調節組成物。
  122. 免疫調節組成物と接触させた１つ又は複数の細胞をさらにグアノシン又はグアノシン誘導体と接触させ、場合によってはグアノシン誘導体は２’３’環状ＧＭＰである、請求項１１１～１２１のいずれか一項に記載の免疫調節組成物。
  123. 請求項１～１２２のいずれか一項に記載の免疫調節組成物のＲＮＡリガンドを含む、単離された核酸。
  124. 核酸が、ＤＮＡ、ＲＮＡ、又はＤＮＡ／ＲＮＡ分子である、請求項１２３に記載の免疫調節組成物。
  125. 請求項１～１２２のいずれか一項に記載の免疫調節組成物のＲＮＡリガンド、又は請求項１２３若しくは請求項１２４に記載の核酸を含むベクター。
  126. 請求項１～１２２のいずれか一項に記載の免疫調節組成物を含む薬学的組成物。
  127. 請求項１～１２２のいずれか一項に記載の免疫調節組成物のＲＮＡリガンド、請求項１２３若しくは請求項１２４に記載の核酸、又は請求項１２５に記載のベクターを含む宿主細胞。
  128. 請求項１～１２２のいずれか一項に記載の免疫調節組成物又は請求項１２６に記載の薬学的組成物を含むワクチン組成物。
  129. １つ又は複数の細胞においてＴＬＲ７を選択的に活性化するための方法であって、１つ又は複数の細胞を、請求項１～１２２のいずれか一項に記載の免疫調節組成物、又は請求項１２６に記載の薬学的組成物と接触させることを含む、方法。
  130. １つ又は複数の細胞がＴＬＲ７を発現する、請求項１２９に記載の方法。
  131. １つ又は複数の細胞が末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を含む、請求項１２９又は請求項１３０に記載の方法。
  132. １つ又は複数の細胞が、１つ又は複数の形質細胞様樹状細胞を含む、請求項１２９～１３１のいずれか一項に記載の方法。
  133. １つ又は複数の細胞を、請求項１～１２２のいずれか一項に記載の免疫調節組成物又は請求項１２６に記載の薬学的組成物と接触させると、免疫調節組成物又は薬学的組成物と接触していない対応する１つ又は複数の細胞と比較して、１つ又は複数の細胞におけるＴＬＲ７活性の増加をもたらす、請求項１２９～１３２のいずれか一項に記載の方法。
  134. １つ又は複数の細胞を、請求項１～１２２のいずれか一項に記載の免疫調節組成物又は請求項１２６に記載の薬学的組成物と接触させると、免疫調節組成物又は薬学的組成物と接触していない対応する１つ又は複数の細胞と比較して、１つ又は複数の細胞によるＩＦＮ－αの分泌の増加をもたらす、請求項１２９～１３３のいずれか一項に記載の方法。
  135. １つ又は複数の細胞におけるＴＬＲ７活性の増加が、免疫調節組成物又は薬学的組成物と接触していない対応する１つ又は複数の細胞と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約１００％、又はそれ以上の増加である、請求項１３３に記載の方法。
  136. １つ又は複数の細胞によるＩＦＮ－αの分泌の増加が、免疫調節組成物又は薬学的組成物と接触していない対応する１つ又は複数の細胞と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約１００％、又はそれ以上の増加である、請求項１３４に記載の方法。
  137. １つ又は複数の細胞を、請求項１～１２２のいずれか一項に記載の免疫調節組成物又は請求項１２６に記載の薬学的組成物と接触させると、免疫調節組成物又は薬学的組成物と接触していない対応する１つ又は複数の細胞と比較して、１つ又は複数の細胞におけるＴＬＲ８活性の約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、約５％未満、又は約１％未満の増加をもたらす、請求項１２９～１３６のいずれか一項に記載の方法。
  138. １つ又は複数の細胞を、請求項１～１２２のいずれか一項に記載の免疫調節組成物又は請求項１２６に記載の薬学的組成物と接触させると、免疫調節組成物又は薬学的組成物と接触していない対応する１つ又は複数の細胞と比較して、約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、約５％未満、又は約１％未満の、１つ又は複数の細胞によるＴＮＦ－αの分泌の増加をもたらす、請求項１２９～１３７のいずれか一項に記載の方法。
  139. １つ又は複数の細胞をグアノシン又はグアノシン誘導体と接触させることをさらに含み、場合によっては、グアノシン誘導体は２’３’環状ＧＭＰである、請求項１２９～１３８のいずれか一項に記載の方法。
  140. 酵素結合免疫吸着法（ＥＬＩＳＡ）、イムノブロッティング、イムノアッセイ、フローサイトメトリー、電気化学発光に基づく方法、質量分析法、若しくはｑＰＣＲによってＩＦＮ－α及び／若しくはＴＮＦ－αの分泌を測定すること；並びに／又はインターフェロン刺激遺伝子（ＩＳＧ）の発現レベルを測定することをさらに含む、請求項１３４～１３９のいずれか一項に記載の方法。
  141. １つ又は複数の細胞を、請求項１～１２２のいずれか一項に記載の免疫調節組成物又は請求項１２６に記載の薬学的組成物と接触させることが、ＲＮＡリガンドを１つ又は複数の細胞に導入することを含む、請求項１２９～１４０のいずれか一項に記載の方法。
  142. 個体においてＴＬＲ７を選択的に活性化するための方法であって、有効量の、請求項１～１２２のいずれか一項に記載の免疫調節組成物、請求項１２６に記載の薬学的組成物、又は請求項１２８に記載のワクチン組成物を個体に投与することを含む、個体においてＴＬＲ７を選択的に活性化するための方法。
  143. 個体において免疫応答を刺激するための方法であって、有効量の、請求項１～１２２のいずれか一項に記載の免疫調節組成物、請求項１２６に記載の薬学的組成物、又は請求項１２８に記載のワクチン組成物を個体に投与することを含む、個体において免疫応答を刺激するための方法。
  144. 有効量の、請求項１～１２２のいずれか一項に記載の免疫調節組成物、請求項１２６に記載の薬学的組成物、又は請求項１２８に記載のワクチン組成物を個体に投与すると、免疫調節組成物、薬学的組成物、又はワクチン組成物を投与されなかった対応する個体と比較して、個体においてＴＬＲ７活性の増加をもたらす、請求項１４２又は請求項１４３に記載の方法。
  145. 有効量の、請求項１～１２２のいずれか一項に記載の免疫調節組成物、請求項１２６に記載の薬学的組成物、又は請求項１２８に記載のワクチン組成物を個体に投与すると、免疫調節組成物、薬学的組成物、又はワクチン組成物を投与されなかった対応する個体と比較して、個体におけるＩＦＮ－αのレベルの増加をもたらす、請求項１４２～１４４のいずれか一項に記載の方法。
  146. ＴＬＲ７活性の増加が、免疫調節組成物、薬学的組成物、又はワクチン組成物を投与されなかった対応する個体と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約１００％、又はそれ以上の増加である、請求項１４４に記載の方法。
  147. ＩＦＮ－αレベルの増加が、免疫調節組成物、薬学的組成物、又はワクチン組成物を投与されなかった対応する個体と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約１００％、又はそれ以上の増加である、請求項１４５に記載の方法。
  148. 有効量の、請求項１～１２２のいずれか一項に記載の免疫調節組成物、請求項１２６に記載の薬学的組成物、又は請求項１２８に記載のワクチン組成物を個体に投与すると、免疫調節組成物、薬学的組成物、又はワクチン組成物を投与されなかった対応する個体と比較して、約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、約５％未満、又は約１％未満の、個体におけるＴＬＲ８活性の増加をもたらす、請求項１４２～１４７のいずれか一項に記載の方法。
  149. 有効量の、請求項１～１２２のいずれか一項に記載の免疫調節組成物、請求項１２６に記載の薬学的組成物、又は請求項１２８に記載のワクチン組成物を個体に投与すると、免疫調節組成物、薬学的組成物、又はワクチン組成物を投与されなかった対応する個体と比較して、約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、約５％未満、又は約１％未満の、個体におけるＴＮＦ－αのレベルの増加をもたらす、請求項１４２～１４８のいずれか一項に記載の方法。
  150. 個体においてＴＬＲ７を活性化するための医薬の製造における使用のためのアジュバントであって、請求項１～１２２のいずれか一項に記載の免疫調節組成物、請求項１２６に記載の薬学的組成物、又は請求項１２８に記載のワクチン組成物を含む、個体においてＴＬＲ７を活性化するための医薬の製造における使用のためのアジュバント。
  151. 個体においてＴＬＲ７を選択的に活性化するための方法における使用のためのアジュバントであって、該方法が、有効量の、請求項１～１２２のいずれか一項に記載の免疫調節組成物、請求項１２６に記載の薬学的組成物、又は請求項１２８に記載のワクチン組成物を個体に投与することを含む、個体においてＴＬＲ７を選択的に活性化するための方法における使用のためのアジュバント。
  152. 請求項１～１２２のいずれか一項に記載の免疫調節組成物、請求項１２３若しくは請求項１２４に記載の核酸、請求項１２５に記載のベクター、請求項１２６に記載の薬学的組成物、又は請求項１２８に記載のワクチン組成物を含むキット。
JP2023562827A 2021-04-16 2022-04-15 最適化されたｔｌｒ７リガンド及びその使用 Pending JP2024516575A (ja)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US202163176128P 2021-04-16 2021-04-16
US63/176,128 2021-04-16
PCT/US2022/025128 WO2022221736A2 (en) 2021-04-16 2022-04-15 Optimized tlr7 ligands and uses thereof

Publications (1)

Publication Number Publication Date
JP2024516575A true JP2024516575A (ja) 2024-04-16

Family

ID=81940670

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2023562827A Pending JP2024516575A (ja) 2021-04-16 2022-04-15 最適化されたｔｌｒ７リガンド及びその使用

Country Status (5)

Country Link
US (1) US20240042019A1 (ja)
EP (1) EP4323525A2 (ja)
JP (1) JP2024516575A (ja)
CN (1) CN117203340A (ja)
WO (1) WO2022221736A2 (ja)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2024077351A1 (en) * 2022-10-12 2024-04-18 Pharmorage Pty Limited Modified oligonucleotides

Family Cites Families (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
PT2311848E (pt) 2002-12-23 2013-10-03 Vical Inc Vacinas à base de polinucleótido optimizadas por codão contra a infecção do citomegalovírus humano
US7871607B2 (en) 2003-03-05 2011-01-18 Halozyme, Inc. Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminoglycanases
TW200533750A (en) * 2004-02-19 2005-10-16 Coley Pharm Group Inc Immunostimulatory viral RNA oligonucleotides
US20060024670A1 (en) 2004-05-18 2006-02-02 Luke Catherine J Influenza virus vaccine composition and methods of use
WO2006063252A2 (en) * 2004-12-09 2006-06-15 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inducing an immune response in a mammal and methods of avoiding an immune response to oligonucleotide agents such as short interfering rnas
EP1924284A1 (en) * 2005-09-14 2008-05-28 Hartmann, Gunther Compositions comprising immunostimulatory rna oligonucleotides and methods for producing said rna oligonucleotides
EP2357231A2 (en) * 2007-07-09 2011-08-17 Idera Pharmaceuticals, Inc. Stabilized immune modulatory RNA (SIMRA) compounds
WO2009132206A1 (en) 2008-04-25 2009-10-29 Liquidia Technologies, Inc. Compositions and methods for intracellular delivery and release of cargo
JP2012517226A (ja) * 2009-02-10 2012-08-02 イデラ ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド Ｔｌｒ７の合成ｒｎａベースのアゴニスト
AU2010225129A1 (en) 2009-03-17 2010-09-23 Gunther Hartmann TLR7 ligand and uses thereof
WO2011038031A1 (en) * 2009-09-22 2011-03-31 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Dual targeting sirna agents
US9593077B2 (en) 2013-11-18 2017-03-14 Arcturus Therapeutics, Inc. Ionizable cationic lipid for RNA delivery
EP3538068A1 (en) 2016-11-10 2019-09-18 Translate Bio, Inc. Improved ice-based lipid nanoparticle formulation for delivery of mrna
US20220177423A1 (en) 2019-04-18 2022-06-09 Translate Bio, Inc. Cystine cationic lipids
MA55766A (fr) 2019-04-26 2022-03-02 Genevant Sciences Gmbh Nanoparticules lipidiques

Also Published As

Publication number Publication date
EP4323525A2 (en) 2024-02-21
WO2022221736A3 (en) 2023-01-05
US20240042019A1 (en) 2024-02-08
CN117203340A (zh) 2023-12-08
WO2022221736A2 (en) 2022-10-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11344504B1 (en) Combinations of mRNAs encoding immune modulating polypeptides and uses thereof
US11660341B2 (en) mRNA combination therapy for the treatment of cancer
US11000573B2 (en) Polynucleotides encoding interleukin-12 (IL12) and uses thereof
JP7285220B2 (ja) 連結したインターロイキン－１２（ｉｌ１２）ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む脂質ナノ粒子
US20210128721A1 (en) Immunomodulatory therapeutic mrna compositions encoding activating oncogene mutation peptides
CA3144902A1 (en) Rna combinations and compositions with decreased immunostimulatory properties
KR20190133699A (ko) Crispr-연관 단백질을 암호화하는 핵산 및 이의 용도
EP3468537A1 (en) Stabilized formulations of lipid nanoparticles
US20240042019A1 (en) Optimized tlr7 ligands and uses thereof
CN112567032A (zh) 基因组编辑的方法和组合物
CN112543650A (zh) 基因组编辑的方法和组合物
JP2023512072A (ja) 代謝リプログラミングポリペプチドをコードするｍＲＮＡ及びその使用
JP2023527875A (ja) フェニルアラニンヒドロキシラーゼバリアント及びその使用
US11802146B2 (en) Polynucleotides encoding anti-chikungunya virus antibodies
CA3058018A1 (en) P-ethoxy nucleic acids for stat3 inhibition
JP2019533663A (ja) 核酸アジュバントを送達するための細菌ミニ細胞およびその使用方法
US8883989B2 (en) Fractalkine binding polynucleotides and methods of use
WO2023077170A1 (en) Polynucleotides encoding integrin beta-6 and methods of use thereof