JP2024512394A - Ｈｓｖを処置するためのワクチン組成物及び方法 - Google Patents
Ｈｓｖを処置するためのワクチン組成物及び方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2024512394A JP2024512394A JP2023555311A JP2023555311A JP2024512394A JP 2024512394 A JP2024512394 A JP 2024512394A JP 2023555311 A JP2023555311 A JP 2023555311A JP 2023555311 A JP2023555311 A JP 2023555311A JP 2024512394 A JP2024512394 A JP 2024512394A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- hsv
- amino acid
- seq
- acid sequence
- mrna
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims abstract description 111
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 106
- 238000000034 method Methods 0.000 title description 18
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 claims abstract description 173
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 claims abstract description 110
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims abstract description 69
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 claims abstract description 26
- 101710172711 Structural protein Proteins 0.000 claims abstract description 10
- 241000701074 Human alphaherpesvirus 2 Species 0.000 claims description 373
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 231
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 164
- 101150004685 UL48 gene Proteins 0.000 claims description 83
- 101150042088 UL16 gene Proteins 0.000 claims description 80
- 101150087840 UL11 gene Proteins 0.000 claims description 77
- 101150105144 UL21 gene Proteins 0.000 claims description 76
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 76
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 75
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 75
- 101150098384 NEC2 gene Proteins 0.000 claims description 46
- 101150087430 UL34 gene Proteins 0.000 claims description 46
- 101150066971 UL49 gene Proteins 0.000 claims description 46
- 101150027427 ICP4 gene Proteins 0.000 claims description 32
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 claims description 27
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 claims description 27
- 230000028993 immune response Effects 0.000 claims description 24
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 24
- 208000009889 Herpes Simplex Diseases 0.000 claims description 23
- UVBYMVOUBXYSFV-XUTVFYLZSA-N 1-methylpseudouridine Chemical compound O=C1NC(=O)N(C)C=C1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 UVBYMVOUBXYSFV-XUTVFYLZSA-N 0.000 claims description 20
- UVBYMVOUBXYSFV-UHFFFAOYSA-N 1-methylpseudouridine Natural products O=C1NC(=O)N(C)C=C1C1C(O)C(O)C(CO)O1 UVBYMVOUBXYSFV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- 241000700588 Human alphaherpesvirus 1 Species 0.000 claims description 16
- PTJWIQPHWPFNBW-GBNDHIKLSA-N pseudouridine Chemical group O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1C1=CNC(=O)NC1=O PTJWIQPHWPFNBW-GBNDHIKLSA-N 0.000 claims description 15
- 229930185560 Pseudouridine Natural products 0.000 claims description 10
- PTJWIQPHWPFNBW-UHFFFAOYSA-N Pseudouridine C Natural products OC1C(O)C(CO)OC1C1=CNC(=O)NC1=O PTJWIQPHWPFNBW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 10
- WGDUUQDYDIIBKT-UHFFFAOYSA-N beta-Pseudouridine Natural products OC1OC(CN2C=CC(=O)NC2=O)C(O)C1O WGDUUQDYDIIBKT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 claims description 10
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 9
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 claims description 8
- 230000007420 reactivation Effects 0.000 claims description 8
- 238000013519 translation Methods 0.000 claims description 7
- 210000004392 genitalia Anatomy 0.000 claims description 6
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 claims description 6
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims description 5
- 102100022717 Atypical chemokine receptor 1 Human genes 0.000 claims description 4
- 101000678879 Homo sapiens Atypical chemokine receptor 1 Proteins 0.000 claims description 4
- 101000807236 Human cytomegalovirus (strain AD169) Membrane glycoprotein US3 Proteins 0.000 claims description 4
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 claims description 4
- BTFXIEGOSDSOGN-KWCDMSRLSA-N 1-[(2r,3r,4s,5r)-3,4-dihydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]-5-methyl-1,3-diazinane-2,4-dione Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 BTFXIEGOSDSOGN-KWCDMSRLSA-N 0.000 claims description 3
- DXEJZRDJXRVUPN-XUTVFYLZSA-N 3-Methylpseudouridine Chemical compound O=C1N(C)C(=O)NC=C1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 DXEJZRDJXRVUPN-XUTVFYLZSA-N 0.000 claims description 3
- 208000037952 HSV-1 infection Diseases 0.000 claims description 3
- 208000000903 Herpes simplex encephalitis Diseases 0.000 claims description 3
- 208000037018 Herpes simplex virus encephalitis Diseases 0.000 claims description 3
- 206010061308 Neonatal infection Diseases 0.000 claims description 3
- 208000007287 cheilitis Diseases 0.000 claims description 3
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 claims description 3
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 claims description 3
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 claims description 3
- 102000020313 Cell-Penetrating Peptides Human genes 0.000 claims description 2
- 108010051109 Cell-Penetrating Peptides Proteins 0.000 claims description 2
- 241000701068 Human herpesvirus 2 strain 333 Species 0.000 claims description 2
- 108091036066 Three prime untranslated region Proteins 0.000 claims description 2
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 claims description 2
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 claims description 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 21
- 101150041636 NEC1 gene Proteins 0.000 claims 3
- 101150019585 UL31 gene Proteins 0.000 claims 3
- 108091026898 Leader sequence (mRNA) Proteins 0.000 claims 1
- 238000011282 treatment Methods 0.000 abstract description 9
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 abstract description 4
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 71
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 71
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 67
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 67
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 58
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 30
- 210000005220 cytoplasmic tail Anatomy 0.000 description 30
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 24
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 18
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 16
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 15
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 15
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 15
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 14
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 14
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 14
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 14
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 14
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 13
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 12
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 11
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 11
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 11
- 239000013638 trimer Substances 0.000 description 11
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 10
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 10
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 9
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 8
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 8
- 238000003114 enzyme-linked immunosorbent spot assay Methods 0.000 description 7
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 7
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 7
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- DRTQHJPVMGBUCF-XVFCMESISA-N Uridine Chemical group O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-XVFCMESISA-N 0.000 description 6
- 229960004150 aciclovir Drugs 0.000 description 6
- -1 acyclic purine-nucleoside analog Chemical class 0.000 description 6
- 230000001064 anti-interferon Effects 0.000 description 6
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 6
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 description 6
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 6
- RMLUKZWYIKEASN-UHFFFAOYSA-M sodium;2-amino-9-(2-hydroxyethoxymethyl)purin-6-olate Chemical compound [Na+].O=C1[N-]C(N)=NC2=C1N=CN2COCCO RMLUKZWYIKEASN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 6
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 5
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 5
- 102000006601 Thymidine Kinase Human genes 0.000 description 5
- 108020004440 Thymidine kinase Proteins 0.000 description 5
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 5
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 5
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 5
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 5
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 5
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- 239000012096 transfection reagent Substances 0.000 description 5
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 4
- 208000001688 Herpes Genitalis Diseases 0.000 description 4
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 4
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 4
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 4
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 4
- 201000004946 genital herpes Diseases 0.000 description 4
- 230000028996 humoral immune response Effects 0.000 description 4
- 230000021633 leukocyte mediated immunity Effects 0.000 description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 4
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 description 4
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 4
- 206010048461 Genital infection Diseases 0.000 description 3
- 208000031886 HIV Infections Diseases 0.000 description 3
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 3
- 101710186352 Probable membrane antigen 3 Proteins 0.000 description 3
- 101710181078 Probable membrane antigen 75 Proteins 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101710178472 Tegument protein Proteins 0.000 description 3
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 3
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 3
- 150000003833 nucleoside derivatives Chemical class 0.000 description 3
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 3
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 3
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 3
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 3
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 3
- 230000037452 priming Effects 0.000 description 3
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 description 3
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 3
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- 241000700199 Cavia porcellus Species 0.000 description 2
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 2
- 229940046168 CpG oligodeoxynucleotide Drugs 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 2
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 2
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000037357 HIV infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 101000669447 Homo sapiens Toll-like receptor 4 Proteins 0.000 description 2
- LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N L-norleucine Chemical compound CCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- 241000289581 Macropus sp. Species 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- JNTOCHDNEULJHD-UHFFFAOYSA-N Penciclovir Chemical compound N1C(N)=NC(=O)C2=C1N(CCC(CO)CO)C=N2 JNTOCHDNEULJHD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000035415 Reinfection Diseases 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 102100039360 Toll-like receptor 4 Human genes 0.000 description 2
- 101710166903 Virion release protein Proteins 0.000 description 2
- DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N acridine Chemical compound C1=CC=CC2=CC3=CC=CC=C3N=C21 DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 2
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 2
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 2
- 239000002518 antifoaming agent Substances 0.000 description 2
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 2
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 2
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 2
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 208000033519 human immunodeficiency virus infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 2
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 2
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 2
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 2
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 2
- 239000000693 micelle Substances 0.000 description 2
- 239000002159 nanocrystal Substances 0.000 description 2
- 229960001179 penciclovir Drugs 0.000 description 2
- 230000000737 periodic effect Effects 0.000 description 2
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 208000037920 primary disease Diseases 0.000 description 2
- 229940021993 prophylactic vaccine Drugs 0.000 description 2
- ZCCUUQDIBDJBTK-UHFFFAOYSA-N psoralen Chemical compound C1=C2OC(=O)C=CC2=CC2=C1OC=C2 ZCCUUQDIBDJBTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 2
- 239000002047 solid lipid nanoparticle Substances 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 2
- 235000010356 sorbitol Nutrition 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 2
- 239000000277 virosome Substances 0.000 description 2
- YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N (6E,10E,14E,18E)-2,6,10,15,19,23-hexamethyltetracosa-2,6,10,14,18,22-hexaene Chemical compound CC(C)=CCCC(C)=CCCC(C)=CCCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)C YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UKAUYVFTDYCKQA-UHFFFAOYSA-N -2-Amino-4-hydroxybutanoic acid Natural products OC(=O)C(N)CCO UKAUYVFTDYCKQA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ASJSAQIRZKANQN-CRCLSJGQSA-N 2-deoxy-D-ribose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)CC=O ASJSAQIRZKANQN-CRCLSJGQSA-N 0.000 description 1
- 108020005345 3' Untranslated Regions Proteins 0.000 description 1
- VXGRJERITKFWPL-UHFFFAOYSA-N 4',5'-Dihydropsoralen Natural products C1=C2OC(=O)C=CC2=CC2=C1OCC2 VXGRJERITKFWPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020003589 5' Untranslated Regions Proteins 0.000 description 1
- LHEJDBBHZGISGW-UHFFFAOYSA-N 5-fluoro-3-(3-oxo-1h-2-benzofuran-1-yl)-1h-pyrimidine-2,4-dione Chemical compound O=C1C(F)=CNC(=O)N1C1C2=CC=CC=C2C(=O)O1 LHEJDBBHZGISGW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000030090 Acute Disease Diseases 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 108010011485 Aspartame Proteins 0.000 description 1
- 241001492313 Ateline alphaherpesvirus 1 Species 0.000 description 1
- 241000588832 Bordetella pertussis Species 0.000 description 1
- 241000700585 Bovine alphaherpesvirus 2 Species 0.000 description 1
- 210000001266 CD8-positive T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- 229920002785 Croscarmellose sodium Polymers 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-M D-gluconate Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-M 0.000 description 1
- HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N D-ribofuranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H]1O HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N 0.000 description 1
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 1
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 206010013710 Drug interaction Diseases 0.000 description 1
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 206010061978 Genital lesion Diseases 0.000 description 1
- 101710088172 HTH-type transcriptional regulator RipA Proteins 0.000 description 1
- 208000004898 Herpes Labialis Diseases 0.000 description 1
- 241000700586 Herpesviridae Species 0.000 description 1
- 101000599940 Homo sapiens Interferon gamma Proteins 0.000 description 1
- 239000004354 Hydroxyethyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920000663 Hydroxyethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N Hydroxyproline Chemical compound O[C@H]1CN[C@H](C(O)=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N 0.000 description 1
- XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N IDUR Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(I)=C1 XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 1
- 102000000589 Interleukin-1 Human genes 0.000 description 1
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 1
- 102000003814 Interleukin-10 Human genes 0.000 description 1
- 108090000174 Interleukin-10 Proteins 0.000 description 1
- 102000013462 Interleukin-12 Human genes 0.000 description 1
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 description 1
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 1
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- UKAUYVFTDYCKQA-VKHMYHEASA-N L-homoserine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCO UKAUYVFTDYCKQA-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- QEFRNWWLZKMPFJ-ZXPFJRLXSA-N L-methionine (R)-S-oxide Chemical compound C[S@@](=O)CC[C@H]([NH3+])C([O-])=O QEFRNWWLZKMPFJ-ZXPFJRLXSA-N 0.000 description 1
- QEFRNWWLZKMPFJ-UHFFFAOYSA-N L-methionine sulphoxide Natural products CS(=O)CCC(N)C(O)=O QEFRNWWLZKMPFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M Lactate Chemical compound CC(O)C([O-])=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 208000032420 Latent Infection Diseases 0.000 description 1
- 235000019501 Lemon oil Nutrition 0.000 description 1
- 101710128346 Major viral transcription factor Proteins 0.000 description 1
- 244000246386 Mentha pulegium Species 0.000 description 1
- 235000016257 Mentha pulegium Nutrition 0.000 description 1
- 235000004357 Mentha x piperita Nutrition 0.000 description 1
- 229920000168 Microcrystalline cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000004909 Moisturizer Substances 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 241000186366 Mycobacterium bovis Species 0.000 description 1
- 206010060860 Neurological symptom Diseases 0.000 description 1
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 1
- 206010067152 Oral herpes Diseases 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002033 PVDF binder Substances 0.000 description 1
- 206010033733 Papule Diseases 0.000 description 1
- 239000005662 Paraffin oil Substances 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 241000009328 Perro Species 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- 229940124158 Protease/peptidase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 239000012083 RIPA buffer Substances 0.000 description 1
- 239000012979 RPMI medium Substances 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108091028664 Ribonucleotide Proteins 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N Ribose Natural products OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 1
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 1
- 241000701026 Saimiriine alphaherpesvirus 1 Species 0.000 description 1
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 1
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 1
- 101710192321 Tegument protein VP16 Proteins 0.000 description 1
- 101710192266 Tegument protein VP22 Proteins 0.000 description 1
- BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N Tetramethylsqualene Natural products CC(=C)C(C)CCC(=C)C(C)CCC(C)=CCCC=C(C)CCC(C)C(=C)CCC(C)C(C)=C BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-N Thiophosphoric acid Chemical class OP(O)(S)=O RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000009523 Transcription Factor 4 Human genes 0.000 description 1
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 1
- 108091023045 Untranslated Region Proteins 0.000 description 1
- HDOVUKNUBWVHOX-QMMMGPOBSA-N Valacyclovir Chemical compound N1C(N)=NC(=O)C2=C1N(COCCOC(=O)[C@@H](N)C(C)C)C=N2 HDOVUKNUBWVHOX-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 108700005077 Viral Genes Proteins 0.000 description 1
- UZQJVUCHXGYFLQ-AYDHOLPZSA-N [(2s,3r,4s,5r,6r)-4-[(2s,3r,4s,5r,6r)-4-[(2r,3r,4s,5r,6r)-4-[(2s,3r,4s,5r,6r)-3,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)-4-[(2s,3r,4s,5s,6r)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxyoxan-2-yl]oxy-3,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-3,5-dihydroxy-6-(hy Chemical compound O([C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]([C@@H]1O)O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]([C@@H]1O)O[C@H]1CC[C@]2(C)[C@H]3CC=C4[C@@]([C@@]3(CC[C@H]2[C@@]1(C=O)C)C)(C)CC(O)[C@]1(CCC(CC14)(C)C)C(=O)O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O[C@H]4[C@@H]([C@@H](O[C@H]5[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O5)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O4)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O UZQJVUCHXGYFLQ-AYDHOLPZSA-N 0.000 description 1
- YGCFIWIQZPHFLU-UHFFFAOYSA-N acesulfame Chemical compound CC1=CC(=O)NS(=O)(=O)O1 YGCFIWIQZPHFLU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005164 acesulfame Drugs 0.000 description 1
- DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N acetic acid;2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal;sodium Chemical compound [Na].CC(O)=O.OCC(O)C(O)C(O)C(O)C=O DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000002168 alkylating agent Substances 0.000 description 1
- 229940100198 alkylating agent Drugs 0.000 description 1
- HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N alpha-D-Furanose-Ribose Natural products OCC1OC(O)C(O)C1O HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940037003 alum Drugs 0.000 description 1
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K aluminium phosphate Chemical compound O1[Al]2OP1(=O)O2 ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 239000004599 antimicrobial Substances 0.000 description 1
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 1
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 239000000605 aspartame Substances 0.000 description 1
- IAOZJIPTCAWIRG-QWRGUYRKSA-N aspartame Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)OC)CC1=CC=CC=C1 IAOZJIPTCAWIRG-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- 235000010357 aspartame Nutrition 0.000 description 1
- 229960003438 aspartame Drugs 0.000 description 1
- 210000002453 autonomic neuron Anatomy 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DRTQHJPVMGBUCF-PSQAKQOGSA-N beta-L-uridine Natural products O[C@H]1[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-PSQAKQOGSA-N 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 229920002988 biodegradable polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000004621 biodegradable polymer Substances 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- OWMVSZAMULFTJU-UHFFFAOYSA-N bis-tris Chemical compound OCCN(CCO)C(CO)(CO)CO OWMVSZAMULFTJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006931 brain damage Effects 0.000 description 1
- 231100000874 brain damage Toxicity 0.000 description 1
- 208000029028 brain injury Diseases 0.000 description 1
- 239000004067 bulking agent Substances 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 150000004657 carbamic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 210000005056 cell body Anatomy 0.000 description 1
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 1
- 239000000919 ceramic Substances 0.000 description 1
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 1
- 230000035606 childbirth Effects 0.000 description 1
- 229910052681 coesite Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 208000030499 combat disease Diseases 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 229910052906 cristobalite Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960001681 croscarmellose sodium Drugs 0.000 description 1
- 235000010947 crosslinked sodium carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000412 dendrimer Substances 0.000 description 1
- 229920000736 dendritic polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- CGMRCMMOCQYHAD-UHFFFAOYSA-J dicalcium hydroxide phosphate Chemical compound [OH-].[Ca++].[Ca++].[O-]P([O-])([O-])=O CGMRCMMOCQYHAD-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- AMTWCFIAVKBGOD-UHFFFAOYSA-N dioxosilane;methoxy-dimethyl-trimethylsilyloxysilane Chemical compound O=[Si]=O.CO[Si](C)(C)O[Si](C)(C)C AMTWCFIAVKBGOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000037771 disease arising from reactivation of latent virus Diseases 0.000 description 1
- 239000007884 disintegrant Substances 0.000 description 1
- NAGJZTKCGNOGPW-UHFFFAOYSA-N dithiophosphoric acid Chemical class OP(O)(S)=S NAGJZTKCGNOGPW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N dl-hydroxyproline Natural products OC1C[NH2+]C(C([O-])=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N dodecahydrosqualene Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 230000035622 drinking Effects 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000001667 episodic effect Effects 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000011536 extraction buffer Substances 0.000 description 1
- 229960004396 famciclovir Drugs 0.000 description 1
- GGXKWVWZWMLJEH-UHFFFAOYSA-N famcyclovir Chemical compound N1=C(N)N=C2N(CCC(COC(=O)C)COC(C)=O)C=NC2=C1 GGXKWVWZWMLJEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 235000013355 food flavoring agent Nutrition 0.000 description 1
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- UHBYWPGGCSDKFX-VKHMYHEASA-N gamma-carboxy-L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(C(O)=O)C(O)=O UHBYWPGGCSDKFX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 229940050410 gluconate Drugs 0.000 description 1
- 238000011554 guinea pig model Methods 0.000 description 1
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 1
- 235000001050 hortel pimenta Nutrition 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003906 humectant Substances 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 239000000017 hydrogel Substances 0.000 description 1
- 125000004435 hydrogen atom Chemical class [H]* 0.000 description 1
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019447 hydroxyethyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229960002591 hydroxyproline Drugs 0.000 description 1
- 235000010979 hydroxypropyl methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229920003088 hydroxypropyl methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 229940088592 immunologic factor Drugs 0.000 description 1
- 230000006054 immunological memory Effects 0.000 description 1
- 230000015788 innate immune response Effects 0.000 description 1
- 150000002484 inorganic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 229910010272 inorganic material Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 239000010501 lemon oil Substances 0.000 description 1
- 239000002960 lipid emulsion Substances 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 230000011987 methylation Effects 0.000 description 1
- 238000007069 methylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 1
- YACKEPLHDIMKIO-UHFFFAOYSA-N methylphosphonic acid Chemical class CP(O)(O)=O YACKEPLHDIMKIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LSDPWZHWYPCBBB-UHFFFAOYSA-O methylsulfide anion Chemical compound [SH2+]C LSDPWZHWYPCBBB-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 239000004530 micro-emulsion Substances 0.000 description 1
- 229940016286 microcrystalline cellulose Drugs 0.000 description 1
- 235000019813 microcrystalline cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008108 microcrystalline cellulose Substances 0.000 description 1
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 108091005601 modified peptides Proteins 0.000 description 1
- 230000001333 moisturizer Effects 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 239000002088 nanocapsule Substances 0.000 description 1
- 239000002539 nanocarrier Substances 0.000 description 1
- 239000002121 nanofiber Substances 0.000 description 1
- 239000002077 nanosphere Substances 0.000 description 1
- 239000006070 nanosuspension Substances 0.000 description 1
- 239000002071 nanotube Substances 0.000 description 1
- 239000002070 nanowire Substances 0.000 description 1
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 1
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 1
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 1
- 239000002353 niosome Substances 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 125000003835 nucleoside group Chemical group 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 210000002640 perineum Anatomy 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 150000008298 phosphoramidates Chemical class 0.000 description 1
- BZQFBWGGLXLEPQ-REOHCLBHSA-N phosphoserine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)COP(O)(O)=O BZQFBWGGLXLEPQ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 1
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 229940068965 polysorbates Drugs 0.000 description 1
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 description 1
- 238000012809 post-inoculation Methods 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- QQONPFPTGQHPMA-UHFFFAOYSA-N propylene Natural products CC=C QQONPFPTGQHPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004805 propylene group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([*:1])C([H])([H])[*:2] 0.000 description 1
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 description 1
- 238000010814 radioimmunoprecipitation assay Methods 0.000 description 1
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 description 1
- 210000005000 reproductive tract Anatomy 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000007441 retrograde transport Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 239000002336 ribonucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000002652 ribonucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 229920002477 rna polymer Polymers 0.000 description 1
- CVHZOJJKTDOEJC-UHFFFAOYSA-N saccharin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)NS(=O)(=O)C2=C1 CVHZOJJKTDOEJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019204 saccharin Nutrition 0.000 description 1
- 229940081974 saccharin Drugs 0.000 description 1
- 239000000901 saccharin and its Na,K and Ca salt Substances 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 230000001953 sensory effect Effects 0.000 description 1
- 210000000413 sensory ganglia Anatomy 0.000 description 1
- 210000001044 sensory neuron Anatomy 0.000 description 1
- 230000001568 sexual effect Effects 0.000 description 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 1
- 235000012239 silicon dioxide Nutrition 0.000 description 1
- 229940083037 simethicone Drugs 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000008109 sodium starch glycolate Substances 0.000 description 1
- 229940079832 sodium starch glycolate Drugs 0.000 description 1
- 229920003109 sodium starch glycolate Polymers 0.000 description 1
- 229960002920 sorbitol Drugs 0.000 description 1
- 210000000278 spinal cord Anatomy 0.000 description 1
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 229940031439 squalene Drugs 0.000 description 1
- TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N squalene Natural products CC(=CCCC(=CCCC(=CCCC=C(/C)CCC=C(/C)CC=C(C)C)C)C)C TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 238000011272 standard treatment Methods 0.000 description 1
- 229910052682 stishovite Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 1
- 229920001059 synthetic polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 229940021747 therapeutic vaccine Drugs 0.000 description 1
- 239000002562 thickening agent Substances 0.000 description 1
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940033663 thimerosal Drugs 0.000 description 1
- 229940044655 toll-like receptor 9 agonist Drugs 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 description 1
- FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N trans-L-hydroxy-proline Natural products ON1CCCC1C(O)=O FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 229910052905 tridymite Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000036269 ulceration Effects 0.000 description 1
- DRTQHJPVMGBUCF-UHFFFAOYSA-N uracil arabinoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940045145 uridine Drugs 0.000 description 1
- 229940125575 vaccine candidate Drugs 0.000 description 1
- 229940093257 valacyclovir Drugs 0.000 description 1
- 230000007419 viral reactivation Effects 0.000 description 1
- 230000007485 viral shedding Effects 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 208000010484 vulvovaginitis Diseases 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/245—Herpetoviridae, e.g. herpes simplex virus
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
- A61P31/22—Antivirals for DNA viruses for herpes viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/53—DNA (RNA) vaccination
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/16011—Herpesviridae
- C12N2710/16611—Simplexvirus, e.g. human herpesvirus 1, 2
- C12N2710/16622—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/16011—Herpesviridae
- C12N2710/16611—Simplexvirus, e.g. human herpesvirus 1, 2
- C12N2710/16634—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Mycology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
本発明は、ＨＳＶの処置又はＨＳＶに対するワクチン接種のための、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）構造タンパク質又はその免疫原性フラグメントをコードする１種以上のｍＲＮＡを含む、ワクチン組成物に関する。
Description
関連出願の相互参照
本出願は、２０２１年３月１１日に欧州特許庁に出願された欧州特許出願第２１１６２１７０号の優先権を主張する。同出願の全内容は、あらゆる目的で本明細書に組み入れられる。
本出願は、２０２１年３月１１日に欧州特許庁に出願された欧州特許出願第２１１６２１７０号の優先権を主張する。同出願の全内容は、あらゆる目的で本明細書に組み入れられる。
配列表
本出願は、コンピュータ可読形式の配列表を含有する。同配列表は、参照により本明細書に組み入れられる。
本出願は、コンピュータ可読形式の配列表を含有する。同配列表は、参照により本明細書に組み入れられる。
発明の分野
本発明は、ＨＳＶの処置又はＨＳＶに対するワクチン接種のための、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）構造タンパク質又はその免疫原性フラグメントをコードする１種以上のｍＲＮＡを含む、ワクチン組成物に関する。
本発明は、ＨＳＶの処置又はＨＳＶに対するワクチン接種のための、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）構造タンパク質又はその免疫原性フラグメントをコードする１種以上のｍＲＮＡを含む、ワクチン組成物に関する。
背景
単純ヘルペスウイルスは、ヘルペスウイルス科として公知のウイルス科のウイルス属である。ヒトに感染する種は、一般的には、単純ヘルペスウイルス１（ＨＳＶ－１）及び単純ヘルペスウイルス２（ＨＳＶ－２）として公知である。ここで、それらの正式名称はそれぞれ、ヒトヘルペスウイルス１（ＨＨＶ－１）及びヒトヘルペスウイルス２（ＨＨＶ－２）である。ＨＳＶ－１の初感染は、典型的には、小児期又は青年期に起こり、生涯持続する。ＨＳＶ－１の感染率は、全世界で４０％～８０％であり、社会経済的地位の低い人ほど高い。多くの場合、ＨＳＶ－１に暴露された人は、無症候性の血清転換を示す。ただし、初感染が重症化する場合もあり、１～２mmの水疱が広範囲に生じ、脱水に至るほど飲食に支障をきたす重度の不快感を伴い、それが１０～１４日間持続し、接種後１～２６日で発症する。再発性口唇ヘルペスには、米国人口の約３分の１が罹患し、これらの患者は、典型的には、１年に１～６回のエピソードを経験する。紅斑上の丘疹は、数時間以内に小水疱になり、その後、７２～９６時間以内に潰瘍化、痂皮化、治癒の段階を経て進行する（Cernik et al., 2008, Arch Intern Med., vol. 168, pp. 1137-1144）。２００３年の世界推定では、人口の１６．２％がＨＳＶ－２に感染しており、性器ヘルペスの主な原因となっている。ウイルスは、潜伏期として公知の非複製状態に入ることにより、免疫系によるクリアランスをうまく回避することができるため、生涯感染することになる。潜伏期からの周期的な再活性化が可能であり、初感染部位からがウイルスが放出される。ヘルペスによる性器病変は、多くの場合、非常に痛みを伴い、相当な精神的罹患をもたらす場合がある。ウイルスは、出産時に母子感染する場合もある。処置しなければ、播種性疾患の乳児の８０％が死亡し、生存している乳児は、多くの場合、脳に障害を受ける。加えて、性器ヘルペスは、ＨＩＶ感染リスクを２～３倍、性行為ごとのＨＩＶ感染リスクを最大５倍増加させ、ＨＳＶ－２有病率の高い集団では、新たなＨＩＶ感染の４０～６０％を占める場合がある（Looker et al., 2008, Bulletin of the World Health Organization, vol. 86, pp. 805-812）。
単純ヘルペスウイルスは、ヘルペスウイルス科として公知のウイルス科のウイルス属である。ヒトに感染する種は、一般的には、単純ヘルペスウイルス１（ＨＳＶ－１）及び単純ヘルペスウイルス２（ＨＳＶ－２）として公知である。ここで、それらの正式名称はそれぞれ、ヒトヘルペスウイルス１（ＨＨＶ－１）及びヒトヘルペスウイルス２（ＨＨＶ－２）である。ＨＳＶ－１の初感染は、典型的には、小児期又は青年期に起こり、生涯持続する。ＨＳＶ－１の感染率は、全世界で４０％～８０％であり、社会経済的地位の低い人ほど高い。多くの場合、ＨＳＶ－１に暴露された人は、無症候性の血清転換を示す。ただし、初感染が重症化する場合もあり、１～２mmの水疱が広範囲に生じ、脱水に至るほど飲食に支障をきたす重度の不快感を伴い、それが１０～１４日間持続し、接種後１～２６日で発症する。再発性口唇ヘルペスには、米国人口の約３分の１が罹患し、これらの患者は、典型的には、１年に１～６回のエピソードを経験する。紅斑上の丘疹は、数時間以内に小水疱になり、その後、７２～９６時間以内に潰瘍化、痂皮化、治癒の段階を経て進行する（Cernik et al., 2008, Arch Intern Med., vol. 168, pp. 1137-1144）。２００３年の世界推定では、人口の１６．２％がＨＳＶ－２に感染しており、性器ヘルペスの主な原因となっている。ウイルスは、潜伏期として公知の非複製状態に入ることにより、免疫系によるクリアランスをうまく回避することができるため、生涯感染することになる。潜伏期からの周期的な再活性化が可能であり、初感染部位からがウイルスが放出される。ヘルペスによる性器病変は、多くの場合、非常に痛みを伴い、相当な精神的罹患をもたらす場合がある。ウイルスは、出産時に母子感染する場合もある。処置しなければ、播種性疾患の乳児の８０％が死亡し、生存している乳児は、多くの場合、脳に障害を受ける。加えて、性器ヘルペスは、ＨＩＶ感染リスクを２～３倍、性行為ごとのＨＩＶ感染リスクを最大５倍増加させ、ＨＳＶ－２有病率の高い集団では、新たなＨＩＶ感染の４０～６０％を占める場合がある（Looker et al., 2008, Bulletin of the World Health Organization, vol. 86, pp. 805-812）。
現在、合成非環式プリン－ヌクレオシドアナログであるアシクロビルが、ＨＳＶ感染のための標準治療剤であり、症状の抑制に大いに役立っている。前駆体薬剤であるバラシクロビル（アシクロビルに変換される）及びファムシクロビル（ペンシクロビルに変換される）が認可されており、それぞれ、アシクロビル及びペンシクロビルより経口バイオアベイラビリティが良好である。利用可能な薬剤は、安全性に優れている。これらは、ウイルスのチミジンキナーゼにより、ウイルス感染細胞内でのみ活性薬剤に変換されるためである。しかしながら、ＨＳＶは、チミジンキナーゼをコードするウイルス遺伝子における突然変異により、チミジンキナーゼ欠損変異型が発生し又はアシクロビルをリン酸化することができないチミジンキナーゼを有する変異型を選択することにより、アシクロビルに対する耐性を獲得する場合がある。アシクロビルに耐性を示す臨床分離ＨＳＶはほとんど、チミジンキナーゼを欠損しているが、ＤＮＡポリメラーゼの変化も一部に検出されている。ＨＳＶは、活性化する前に、数か月から数年間神経細胞内に潜伏する場合があるため、このような治療法をＨＳＶにより引き起こされる症状の処置に使用することができるが、ウイルスの周期的な再活性化を避けることはできない。
したがって、ＨＳＶと闘う最も効果的で経済的な方法は、ウイルスの初感染及び／又は周期的な再活性化を予防するワクチンであろう。過去数十年間、このようなワクチンの開発に多大な努力が費やされてきた。しかしながら、これまでのところ、強力なＨＳＶワクチンを開発しようとする試みは、限られた数の抗原に焦点を当てている。これらは、臨床試験において成績が芳しくなかった。したがって、ＨＳＶに対するワクチンが急務となっている。近年、ＨＳＶ糖タンパク質のヌクレオシド修飾ｍＲＮＡに基づくＨＳＶワクチンを開発する試みがなされているが（ＵＳ第２０２０／０２７６３００号）。しかしながら、これらは未だに、開発の初期段階にある。更なるＨＳＶワクチン接種の必要性が残されている。
発明の概要
本発明は、この必要性に対処し、１種以上のｍＲＮＡを含み、ここで、前記ｍＲＮＡがそれぞれ、ＵＬ４８；ＵＬ４８及びＵＬ４９；ＵＬ１１、ＵＬ１６及びＵＬ２１又はＵＬ３１及びＵＬ３４からなる群より選択される単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）構造タンパク質又はその免疫原性フラグメントをコードする、新規なワクチン組成物を提供する。具体的には、本発明のワクチン組成物において、ｍＲＮＡは、配列番号：６のアミノ酸配列と８０％以上同一なアミノ酸配列を有するＵＬ４８、配列番号：７のアミノ酸配列と６２％以上同一なアミノ酸配列を有するＵＬ４９、配列番号：１のアミノ酸配列と７５％以上同一なアミノ酸配列を有するＵＬ１１、配列番号：２のアミノ酸配列と７２％以上同一なアミノ酸配列を有するＵＬ１６、配列番号：３のアミノ酸配列と８０％以上同一なアミノ酸配列を有するＵＬ２１、配列番号：８のアミノ酸配列と８５％以上同一なアミノ酸配列を有するＵＬ３１及び配列番号：８のアミノ酸配列と７０％以上同一なアミノ酸配列を有するＵＬ３４をコードする。
本発明は、この必要性に対処し、１種以上のｍＲＮＡを含み、ここで、前記ｍＲＮＡがそれぞれ、ＵＬ４８；ＵＬ４８及びＵＬ４９；ＵＬ１１、ＵＬ１６及びＵＬ２１又はＵＬ３１及びＵＬ３４からなる群より選択される単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）構造タンパク質又はその免疫原性フラグメントをコードする、新規なワクチン組成物を提供する。具体的には、本発明のワクチン組成物において、ｍＲＮＡは、配列番号：６のアミノ酸配列と８０％以上同一なアミノ酸配列を有するＵＬ４８、配列番号：７のアミノ酸配列と６２％以上同一なアミノ酸配列を有するＵＬ４９、配列番号：１のアミノ酸配列と７５％以上同一なアミノ酸配列を有するＵＬ１１、配列番号：２のアミノ酸配列と７２％以上同一なアミノ酸配列を有するＵＬ１６、配列番号：３のアミノ酸配列と８０％以上同一なアミノ酸配列を有するＵＬ２１、配列番号：８のアミノ酸配列と８５％以上同一なアミノ酸配列を有するＵＬ３１及び配列番号：８のアミノ酸配列と７０％以上同一なアミノ酸配列を有するＵＬ３４をコードする。
好ましくは、本発明のワクチン組成物におけるＨＳＶ ｍＲＮＡはそれぞれ、ワクチン組成物の形態で対象に投与された場合、免疫応答を誘発可能である。
加えて、本発明のワクチン組成物は、ａ）ＨＳＶ糖タンパク質Ｄ（ｇＤ）又は配列番号：１１のアミノ酸配列と７０％以上同一なアミノ酸配列を有するその免疫原性フラグメント、ｂ）ＨＳＶ糖タンパク質Ｂ（ｇＢ）又は配列番号：１０のアミノ酸配列と７０％以上同一なアミノ酸配列を有するその免疫原性フラグメント及びｃ）ＨＳＶ糖タンパク質Ｅ（ｇＥ）又は配列番号：４のアミノ酸配列と７０％以上同一なもしくは配列番号：５のアミノ酸配列と８０％以上同一なアミノ酸配列を有するその免疫原性フラグメント又はそれら任意の組み合わせからなる群より選択される単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）糖タンパク質をコードする１種以上のｍＲＮＡをさらに含むことができる。
具体的な好ましいワクチン組成物は、糖タンパク質ｇＤ及び／又はｇＢを伴う構造タンパク質ＵＬ４８、糖タンパク質ｇＥを伴う構造タンパク質ＵＬ４８及びＵＬ４９、糖タンパク質ｇＥ、ｇＤ及び／又はｇＢを伴う構造タンパク質ＵＬ１１、ＵＬ１６及びＵＬ２１並びに糖タンパク質ｇＤ及び／又はｇＢを伴う構造タンパク質ＵＬ３１及びＵＬ３４を含む。
本発明のワクチン組成物は、場合により、１つ以上のプソイドウリジン残基を含むヌクレオシド修飾ｍＲＮＡである単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）糖タンパク質をコードするｍＲＮＡを含むことができ、好ましくは、ここで、１つ以上のプソイドウリジン残基は、ｍ１Ψ（１－メチルプソイドウリジン）、ｍ１ａｃｐ３Ψ（１－メチル－３－（３－アミノ－５－カルボキシプロピル）プソイドウリジン）、Ψｍ（２’－０－メチルプソイドウリジン）、ｍ５Ｄ（５－メチルジヒドロウリジン）、ｍ３Ψ（３－メチルプソイドウリジン）又はそれらの任意の組み合わせを含む。
ワクチン組成物のこれらの具体的な実施態様では、糖タンパク質の前記免疫原性フラグメントをコードするヌクレオシド修飾ｍＲＮＡは、
（ｉ）ＨＳＶ－２系統３３３由来のアミノ酸２６～３３１又は別のＨＳＶ系統由来の相同配列を含むＨＳＶ ｇＤの前記免疫原性フラグメントをコードするヌクレオシド修飾ｍＲＮＡ（好ましくは、ここで、前記ヌクレオシド修飾ｍＲＮＡの核酸配列は、配列番号：１２に記載されているとおりである）及び
（ｉｉ）ＨＳＶ－２系統２．１２由来のアミノ酸２４～４０５又は別のＨＳＶ系統由来の相同配列を含むＨＳＶ ｇＥの前記免疫原性フラグメントをコードする前記ヌクレオシド修飾ｍＲＮＡ（好ましくは、ここで、前記ヌクレオシド修飾ｍＲＮＡの核酸配列は、配列番号：１３に記載されているとおりである）
からなる群より選択される。
（ｉ）ＨＳＶ－２系統３３３由来のアミノ酸２６～３３１又は別のＨＳＶ系統由来の相同配列を含むＨＳＶ ｇＤの前記免疫原性フラグメントをコードするヌクレオシド修飾ｍＲＮＡ（好ましくは、ここで、前記ヌクレオシド修飾ｍＲＮＡの核酸配列は、配列番号：１２に記載されているとおりである）及び
（ｉｉ）ＨＳＶ－２系統２．１２由来のアミノ酸２４～４０５又は別のＨＳＶ系統由来の相同配列を含むＨＳＶ ｇＥの前記免疫原性フラグメントをコードする前記ヌクレオシド修飾ｍＲＮＡ（好ましくは、ここで、前記ヌクレオシド修飾ｍＲＮＡの核酸配列は、配列番号：１３に記載されているとおりである）
からなる群より選択される。
さらに、本発明のワクチン組成物におけるｍＲＮＡは、ＨＳＶ－１ポリペプチド、ＨＳＶ－２ポリペプチド又はそれらの混合物をコードすることができる。
加えて、ワクチン組成物におけるｍＲＮＡはそれぞれ、ポリＡテイル、ｍ７ＧｐｐｐＧキャップ、３’－０－メチル－ｍ７ＧｐｐｐＧキャップもしくはアンチリバースキャップアナログ、キャップ非依存性翻訳エンハンサー及び／又は翻訳を亢進する５’及び３’非翻訳領域をさらに含むことができかつ／又はコドン最適化されている（例えば、配列番号：２５～３０）。
さらに、本発明のワクチン組成物において、ｍＲＮＡは、ナノ粒子、脂質、ポリマー、コレステロール又は細胞浸透性ペプチド、好ましくは、リポソームナノ粒子にカプセル化されている場合がある。
本発明のワクチン組成物を対象における単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）感染を治療し又は予防するのに使用することができる。前記ＨＳＶ感染をＨＳＶ－１感染、ＨＳＶ－２感染、一次ＨＳＶ感染、一次ＨＳＶ感染後の再燃、再発もしくはＨＳＶ口唇炎、潜伏ＨＳＶ感染の再活性化、ＨＳＶ脳炎、ＨＳＶ新生児感染、性器ＨＳＶ感染又は口内ＨＳＶ感染からなる群より選択することができる。
本発明のワクチン組成物を筋肉内投与、皮下投与、皮内投与、鼻腔内投与、膣内投与、直腸内投与又は局所投与用に製剤化することができ、好ましくは、ここで、該組成物は、注射用ワクチンであり、場合により、薬学的に許容し得る注射用担体又はアジュバントを含む。
本発明のワクチン組成物を医薬品としてかつ／又は治療に使用することができる。
本発明のワクチン組成物を単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）感染を治療しかつ／又は予防するための方法に使用することができる。
配列表の概要
配列番号：１は、ＨＳＶ－２のＵＬ１１タンパク質の例示的なアミノ酸配列である。
配列番号：１は、ＨＳＶ－２のＵＬ１１タンパク質の例示的なアミノ酸配列である。
配列番号：２は、ＨＳＶ－２のＵＬ１６タンパク質の例示的なアミノ酸配列である。
配列番号：３は、ＨＳＶ－２のＵＬ２１タンパク質の例示的なアミノ酸配列である。
配列番号：４は、ＨＳＶ－２のｇＥタンパク質の例示的なアミノ酸配列である。
配列番号：５は、ＨＳＶ－２のｇＥタンパク質の細胞質テイルの例示的なアミノ酸配列である。
配列番号：６は、ＨＳＶ－２のＵＬ４８タンパク質の例示的なアミノ酸配列である。
配列番号：７は、ＨＳＶ－２のＵＬ４９タンパク質の例示的なアミノ酸配列である。
配列番号：８は、ＨＳＶ－２のＵＬ３１タンパク質の例示的なアミノ酸配列である。
配列番号：９は、ＨＳＶ－２のＵＬ３４タンパク質の例示的なアミノ酸配列である。
配列番号：１０は、ＨＳＶ－２のｇＢタンパク質の例示的なアミノ酸配列である。
配列番号：１１は、ＨＳＶ－２のｇＤタンパク質の例示的なアミノ酸配列である。
配列番号：１２は、ＨＳＶ－２ヌクレオシド修飾された（全てのウリジン残基が、１－メチル－プソイドウリジンである）例示的なｇＤ ＲＮＡヌクレオチド配列フラグメントである。
配列番号：１３は、ＨＳＶ－２ヌクレオシド修飾された（全てのウリジン残基が、１－メチル－プソイドウリジンである）例示的なｇＥ ＲＮＡヌクレオチド配列フラグメントである。
配列番号：１４は、ＨＳＶ－２のＵＬ４８の例示的なＲＮＡ配列である。
配列番号：１５は、ＨＳＶ－２のＵＬ４９の例示的なＲＮＡ配列である。
配列番号：１６は、ＨＳＶ－２のＵＬ１１の例示的なＲＮＡ配列である。
配列番号：１７は、ＨＳＶ－２のＵＬ１６の例示的なＲＮＡ配列である。
配列番号：１８は、ＨＳＶ－２のＵＬ２１の例示的なＲＮＡ配列である。
配列番号：１９は、ＨＳＶ－２のＵＬ３１の例示的なＲＮＡ配列である。
配列番号：２０は、ＨＳＶ－２のＵＬ３４の例示的なＲＮＡ配列である。
配列番号：２１は、ＨＳＶ－２のｇＥタンパク質の細胞質テイルの例示的なＲＮＡ配列である。
配列番号：２２は、ＨＳＶ－２のｇＤの例示的なＲＮＡ配列である。
配列番号：２３は、ＨＳＶ－２のｇＢの例示的なＲＮＡ配列である。
配列番号：２４は、ＨＳＶ－２のｇＥの例示的なＲＮＡ配列である。
配列番号：２５は、例示的なＵＴＲ及び例示的なポリＡテイルを含む、ＨＳＶ－２のＵＬ４８の例示的なコドン最適化ＲＮＡ配列であり、全てのウリジン残基が、１－メチル－プソイドウリジンである。
配列番号：２６は、例示的なＵＴＲ及び例示的なポリＡテイルを含む、ＨＳＶ－２のＵＬ１１の例示的なコドン最適化ＲＮＡ配列であり、全てのウリジン残基が、１－メチル－プソイドウリジンである。
配列番号：２７は、例示的なＵＴＲ及び例示的なポリＡテイルを含む、ＨＳＶ－２のＵＬ１６の例示的なコドン最適化された修飾（１－メチル－プソイドウリジン）ＲＮＡ配列であり、全てのウリジン残基が、１－メチル－プソイドウリジンである。
配列番号：２８は、例示的なＵＴＲ及び例示的なポリＡテイルを含む、ＨＳＶ－２のＵＬ１６の例示的なコドン最適化された修飾（１－メチル－プソイドウリジン）ＲＮＡ配列であり、全てのウリジン残基が、１－メチル－プソイドウリジンである。
配列番号：２９は、例示的なＵＴＲ及び例示的なポリＡテイルを含む、ＨＳＶ－２のｇＤの例示的なコドン最適化された修飾（１－メチル－プソイドウリジン）ＲＮＡ配列であり、全てのウリジン残基が、１－メチル－プソイドウリジンである。
配列番号：３０は、例示的なＵＴＲ及び例示的なポリＡテイルを含む、ＨＳＶ－２のＩＣＰ４の例示的なコドン最適化された修飾（１－メチル－プソイドウリジン）ＲＮＡ配列であり、全てのウリジン残基が、１－メチル－プソイドウリジンである。
配列番号：３１は、ＨＳＶ－２のＩＣＰ４タンパク質の例示的なアミノ酸配列である（GenBankアクセッション番号QIH12398.1）。
詳細な説明
上記言及されたように、本発明は、１種以上のｍＲＮＡを含み、ここで、前記ｍＲＮＡがそれぞれ、ＵＬ４８；ＵＬ４８及びＵＬ４９；ＵＬ１１、ＵＬ１６及びＵＬ２１又はＵＬ３１及びＵＬ３４からなる群より選択される単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）構造タンパク質又はその免疫原性フラグメントをコードする、新規なワクチン組成物を提供する。糖タンパク質、例えば、ｇＥ、ｇＣ及びｇＤを抗原として使用することに研究の焦点が当てられてきたが（ＵＳ第２０２０／０２７６３００号を参照のこと、例えば、同文献における配列番号：４及び１６は、本明細書における配列番号：１２及び１３に相当する）、本発明者らは、構造ＨＳＶタンパク質をコードするｍＲＮＡに対する免疫反応が比較的強いことを驚くべきことに見出した。加えて、構造タンパク質は、一般的には、グリコシル化されていないため、使用されたｍＲＮＡ中のヌクレオシドを修飾する必要がなかった。
上記言及されたように、本発明は、１種以上のｍＲＮＡを含み、ここで、前記ｍＲＮＡがそれぞれ、ＵＬ４８；ＵＬ４８及びＵＬ４９；ＵＬ１１、ＵＬ１６及びＵＬ２１又はＵＬ３１及びＵＬ３４からなる群より選択される単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）構造タンパク質又はその免疫原性フラグメントをコードする、新規なワクチン組成物を提供する。糖タンパク質、例えば、ｇＥ、ｇＣ及びｇＤを抗原として使用することに研究の焦点が当てられてきたが（ＵＳ第２０２０／０２７６３００号を参照のこと、例えば、同文献における配列番号：４及び１６は、本明細書における配列番号：１２及び１３に相当する）、本発明者らは、構造ＨＳＶタンパク質をコードするｍＲＮＡに対する免疫反応が比較的強いことを驚くべきことに見出した。加えて、構造タンパク質は、一般的には、グリコシル化されていないため、使用されたｍＲＮＡ中のヌクレオシドを修飾する必要がなかった。
「ｍＲＮＡ」という用語は、メッセンジャーリボ核酸を指す。一般的には、このようなｍＲＮＡは、ポリペプチドをコードし、ターゲット細胞内でそれがコードするタンパク質に翻訳される。このような翻訳を亢進するために、ｍＲＮＡは、ポリＡテイル、ｍ７ＧｐｐｐＧキャップ、３’－０－メチル－ｍ７ＧｐｐｐＧキャップ又はアンチリバースキャップアナログ、キャップ非依存性翻訳エンハンサー並びに／又は翻訳を亢進する５’及び３’非翻訳領域（例えば、本明細書において配列番号：２５～３０に示されている）をさらに含む場合がある。
「ポリペプチド」は、ペプチド結合により互いに連結されたアミノ酸のポリマーを含む分子を指す。本明細書において、前記用語は、分子の特定の長さを指すことを意味するものではなく、したがって、本明細書において、「タンパク質」という用語と互換的に使用される。本明細書で使用する場合、「ポリペプチド」又は「タンパク質」という用語は、発現カセットもしくはベクターにより発現され又は本発明のホスト細胞から単離することができる「目的のポリペプチド」又は「目的のタンパク質」も含む。ポリペプチドは、アミノ酸配列を含み、このため、アミノ酸配列を含むポリペプチドは、本明細書において、「ポリペプチド配列を含むポリペプチド」と呼ばれる場合もある。このため、本明細書において、「ポリペプチド配列」という用語は、「アミノ酸配列」という用語と互換的に使用される。
「アミノ酸」又は「ａａ」という用語は、天然のアミノ酸及び合成アミノ酸並びに天然のアミノ酸と同様の働きをするアミノ酸アナログ及びアミノ酸模倣物を指す。天然のアミノ酸は、遺伝子コードによりコードされるアミノ酸並びに後に修飾されるようなアミノ酸、例えば、ヒドロキシプロリン、γ－カルボキシグルタミン酸及びＯ－ホスホセリンである。アミノ酸アナログは、天然のアミノ酸と同じ基本化学構造、すなわち、水素、カルボキシル基、アミノ基及びＲ基に結合した炭素を有する化合物、例えば、ホモセリン、ノルロイシン、メチオニンスルホキシド、メチオニンメチルスルホニウムを指す。このようなアナログは、修飾されたＲ基（例えば、ノルロイシン）又は修飾されたペプチド骨格を有するが、天然のアミノ酸と同じ基本化学構造を保持している。アミノ酸模倣物は、アミノ酸の一般的な化学構造とは異なる構造を有するが、天然のアミノ酸と同様の働きをする化合物を指す。
「単純ヘルペスウイルス」及び「ＨＳＶ」という用語は、本明細書において互換的に使用され、一般的には、ヘルペスウイルス属シンプレックスウイルスのウイルス、すなわち、クモザルヘルペスウイルス１、ウシヘルペスウイルス２、オナガザルヘルペスウイルス１、オナガザルヘルペスウイルス２、オナガザルヘルペスウイルス１６、ヒトヘルペスウイルス１、ヒトヘルペスウイルス２、カンガルーヘルペスウイルス１、カンガルーヘルペスウイルス２、リスザルヘルペスウイルス１を指す。シンプレックスウイルス属の好ましいウイルス種は、ヒトに感染するウイルスである。さらにより好ましいウイルス種は、単純ヘルペスウイルス１（ＨＳＶ－１）及び単純ヘルペスウイルス２（ＨＳＶ－２）であり、これらはそれぞれ、ヒトヘルペスウイルス１及び２（ＨＨＶ－１及びＨＨＶ－２）としても公知である。
本明細書で使用する場合、「ワクチン組成物」という用語は、対象においてＨＳＶに関連する病的状態を予防し又は治療するのに使用することができる、本発明のｍＲＮＡを含む組成物に関する。「ワクチン組成物」は、有効成分の免疫学的活性を増強する１種以上の追加成分又は、例えば、バッファー、還元剤、安定化剤、キレート剤、増量剤、浸透圧平衡剤（等張化剤）、界面活性剤、ポリオール、抗酸化剤、リオプロテクタント、消泡剤、保存剤及び着色剤、洗浄剤、ナトリウム塩及び／又は抗菌剤等を含む場合があり又は含まない場合がある。ワクチン組成物は、医薬組成物に典型的な更なる成分をさらに含む場合がある。本発明のワクチンは、好ましくは、ヒト用及び／又は動物用である。ワクチン組成物は、無菌及び／又は発熱物質を含まないことができる。ワクチン組成物は、ヒトに対して等張であることができる。
ワクチン組成物は、好ましくは、治療上有効量の本発明のｍＲＮＡを含む。
ＨＳＶポリペプチドＵＬ４８をコードする本発明のワクチン組成物のｍＲＮＡは、好ましくは、配列番号：６のアミノ酸配列と８０％以上同一なアミノ酸配列をコードし、ここで、前記ＨＳＶ ＵＬ４８ ｍＲＮＡは、対象にワクチン組成物の形態で投与された場合、免疫応答を誘発可能である。好ましくは、該ｍＲＮＡは、配列番号：１４又は少なくとも２００ヌクレオチド長のそのフラグメントと少なくとも８０％同一である。
本明細書で使用する場合、「ＵＬ４８」という用語は、ＨＳＶのテグメントタンパク質ＶＰ１６に関する。配列番号：６は、ＨＳＶ－２ ＵＬ４８のアミノ酸配列を例示的に示しており、また、NCBI GenBankにアクセッション番号AHG54712.1で寄託されている。ただし、「ＵＬ４８」という用語は、配列番号：６に示されるアミノ酸配列とある程度の同一性を共有するアミノ酸配列を有するＵＬ４８ポリペプチドも包含し、また、本明細書に記載されたように、配列番号：６に示される参照配列に対して突然変異を有するポリペプチドも包含する。したがって、「ＵＬ４８」という用語は、配列番号：６のアミノ酸配列と比較して、９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９４％、９３％、９２％、９１％、９０％、８９％、８８％、８７％、８６％、８５％、８４％、８３％、８２％、８１％、７９％、７８％、７７％、７６％、７５％もしくは好ましくは、８０％以上のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチド又は配列番号：６のアミノ酸配列と比較して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３個までもしくは好ましくは、９８個のアミノ酸置換、挿入及び／もしくは欠失を有するポリペプチドを包含する。本発明のｍＲＮＡから翻訳された好ましいＵＬ４８タンパク質は、ＵＬ４９と二量体を形成することができ又はＵＬ４９及びｇＥもしくはｇＥの細胞質テイルと三量体を形成している場合がある。
ＨＳＶポリペプチドＵＬ４９をコードする本発明のワクチン組成物のｍＲＮＡは、好ましくは、配列番号：７のアミノ酸配列と６２％以上同一なアミノ酸配列をコードし、ここで、前記ＨＳＶポリペプチドＵＬ４９をコードするｍＲＮＡは、対象にワクチン組成物の形態で投与された場合、免疫応答を誘発可能である。好ましくは、該ｍＲＮＡは、配列番号：１５又は少なくとも２００ヌクレオチド長のそのフラグメントと少なくとも８０％同一である。
本明細書で使用する場合、「ＵＬ４９」という用語は、ＨＳＶのテグメントタンパク質ＶＰ２２に関する。配列番号：７は、ＨＳＶ－２ ＵＬ４９のアミノ酸配列を例示的に示しており、また、NCBI GenBankにアクセッション番号AKC42813.1で寄託されている。ただし、「ＵＬ４９」という用語は、配列番号：７に示されるアミノ酸配列とある程度の同一性を共有するアミノ酸配列を有するＵＬ４９ポリペプチドも包含し、また、本明細書に記載されたように、配列番号：７に示される参照配列に対して突然変異を有するポリペプチドも包含する。したがって、「ＵＬ４９」という用語は、配列番号：２のアミノ酸配列と比較して、９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９４％、９３％、９２％、９１％、９０％、８９％、８８％、８７％、８６％、８５％、８４％、８３％、８２％、８１％、８０％、７９％、７８％、７７％、７６％、７４％、７３％、７２％、７１％、６９％、６８％、６７％、６６％、６５％、６４％、６３％、６１％、６０％、５９％、５８％、５７％もしくは好ましくは、６２％以上のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチド又は配列番号：７のアミノ酸配列と比較して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０個までもしくは好ましくは、１１５個のアミノ酸置換、挿入及び／もしくは欠失を有するポリペプチドを包含する。本発明のｍＲＮＡから翻訳された好ましいＵＬ４９タンパク質は、ＵＬ４８及び／又はｇＥもしくはｇＥの細胞質テイルと複合体を形成することができる。したがって、好ましいＵＬ４９タンパク質は、ＵＬ４８又はｇＥもしくはｇＥの細胞質テイルと二量体を形成することができ又はＵＬ４８及びｇＥもしくはｇＥの細胞質テイルと三量体を形成することができる。
本発明のさらに好ましい実施態様では、ＨＳＶポリペプチドＵＬ４８、ＵＬ４９を含む多量体複合体のタンパク質をコードするｍＲＮが、本発明のワクチン組成物に含まれる。また、これらは、ＨＳＶポリペプチドｇＥの細胞質ドメインを含む三量体をコードすることができる。この場合、本発明のｍＲＮＡから翻訳される多量体複合体は、ＨＳＶポリペプチドＵＬ４８、ＵＬ４９及びｇＥの細胞質ドメインを含む。
「配列同一性」又は「％ 同一性」は、標準化されたアルゴリズムを使用してアライメントされた少なくとも２つのポリペプチド配列間の残基の一致率を指す。このようなアルゴリズムでは、２つの配列間のアラインメントを最適化するために、標準化されかつ再現可能な方法で、比較される配列にギャップを挿入することができ、したがって、２つの配列のより意味のある比較を達成することができる。本発明の目的で、２つのアミノ酸配列間の配列同一性は、NCBI BLASTプログラムバージョン２．３．０（Ｊａｎ－１３－２０１６）（Altschul et al., Nucleic Acids Res. (1997) 25:3389-3402）を使用して決定される。２つのアミノ酸配列の配列同一性を、blastpを下記パラメータ：Ｍａｔｒｉｘ：ＢＬＯＳＵＭ６２、ワードサイズ：３、期待値：１０、ギャップコスト：Ｅｘｉｓｔｅｎｃｅ＝１１、Ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ＝１、組成調整：条件的組成スコアマトリックス調整に設定して決定することができる。
「免疫応答」という用語は、体液性免疫応答及び／又は細胞媒介性免疫応答を誘引する能力を指し、ただし、好ましくは、ｉｎ ｖｉｖｏにおいてのみではない。体液性免疫応答は、Ｂ細胞媒介性抗体応答を含む。細胞媒介性免疫は、ＣＤ４＋ Ｔ細胞及びＣＤ８＋ Ｔ細胞を含む（がこれらに限定されない）、Ｔ細胞媒介性免疫応答を含む。免疫応答を誘発する抗原の能力は、免疫原性と呼ばれ、この免疫応答は、体液性免疫応答及び／又は細胞媒介性免疫応答である場合がある。本発明の免疫応答は、好ましくは、ＨＳＶに対する免疫応答であり、さらにより好ましくは、対象におけるＨＳＶ感染に対する免疫応答である。
ｉｎ ｖｉｖｏにおける体液性免疫応答及び／又は細胞媒介免疫応答を誘引する能力を、性器ＨＳＶ－２感染のモルモットモデルを使用して決定することができる。このモデルは、ヒトにおける疾患を正確に反映し、病因並びに候補抗ウイルス化合物及びワクチンの治療有効性を調べるための系を示す。また、性器常在免疫記憶と神経組織常在免疫記憶との両方の性質に対処するのに理想的な系としても役立つ。モルモットの性器感染では、ヒトの疾患に見出されるようなものを反映する神経学的症状を伴う自己限定性の外陰膣炎が生じる。メスのモルモットにおける一次疾患は、性器上皮細胞におけるウイルス複製を伴い、この複製は、一般的には、８日間に限られる。この間に、ウイルスは、感覚神経終末に達し、逆行性輸送により脊髄における感覚神経節及び自律神経ニューロンの細胞体に輸送される。この部位での短期間での急性複製後、免疫系は、通常、接種後１５日目までに急性ウイルス複製を解決し、ウイルスは、生涯、感覚ニューロンの潜伏感染として維持される。ＨＳＶ－２の一次性器感染から回復した後、モルモットは、エピソード的な自然再発感染及び疾患を経験する。ＨＳＶ－２の再発は、会陰部の紅斑及び／もしくは小水疱性病変を伴う臨床的に明らかな疾患として又は生殖器からのウイルス放出を特徴とする無症候性の再発として現れる場合がある。ワクチンの有効性を例えば、モルモットの性器感染モデルを使用して評価することができる。動物に５×１０１PFU、５×１０２PFU、５×１０３PFU、５×１０４PFU、５×１０６PFU、５×１０７PFU、５×１０８PFU又は５×１０９PFU、好ましくは、５×１０５PFU ＨＳＶ－２（例えば、ＭＳ系統）を膣内に感染させることができる。動物を感染前又は感染後に、１回、２回、３回、４回、５回又はそれ以上の回数、免疫化することができる。好ましくは、感染後１５日目に、動物を１５日間隔で２回免疫化した。一般的には、任意の適切な投与経路を免疫化に使用することができる。ただし、好ましくは、動物は、筋肉内に免疫化される。可能性のある対照群は、アジュバントのみ（例えば、１００μg ＣｐＧ／１５０μg ニョウバン）もしくはＰＢＳで模擬免疫化された群（両方とも陰性対照）又はＨＳＶ－２ ｄＩ５－２９突然変異ウイルス株で免疫化された群（陽性対照）のいずれかである。アジュバントと組み合わせられたワクチン候補で免疫される群には、各免疫ラウンドにおいて、０．１μg、０．５μg、１μg、２μg、３μg、４μg、５μg、１０μg、１５μg、２５μg、３０μg、３５μg、４０μg、５０μg、６０μg、７０μg、８０μg、９０μg、１００μg、１５０μg、２００μg、好ましくは、２０μg 各ｍＲＮＡの用量を受けさせることができる。読み取りとして、膣スワブを例えば、感染後０日目から２００日目まで、感染後１日目から１８０日目まで、感染後３日目から１６０日目まで、感染後５日目から１４０日目まで、感染後７日目から１２０日目まで、感染後１０日目から１００日目まで、感染後１２日目から９０日目までの再発性ウイルス放出の頻度及び大きさを評価するために収集することができる。膣スワブを１日ごと、２日ごと、３日ごと、４日ごと、５日ごと、６日ごと、７日ごと、８日ごと、９日ごと又は１０日ごとに収集することができる。好ましくは、膣スワブは、感染後１５日目から８５日目まで毎日収集される。同じ時間間隔で、再発性器ヘルペス病変の重症度（スコア０～４）及び期間は、毎日スコア化される。好ましくは、試験終了時に、抗体応答並びにＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞応答が決定される。
本発明のワクチン組成物の投与には、経口、局所、経皮、皮下、静脈内、腹腔内、筋肉内又は眼内を含む（が、これらに限定されない）各種の経路が適用可能である。ただし、必要に応じて、当業者であれば、任意の他の経路を容易に選択することができる。
対象に投与される本発明のワクチン組成物の正確な用量は、処置の目的（例えば、急性疾患の治療対予防的なワクチン接種）、投与経路、年齢、体重、一般的な健康状態、性別、食事、投与時間、薬剤相互作用及び症状の重症度により決まる場合があり、当業者による日常的な試行錯誤により確認可能であろう。投与される用量は、好ましくは、有効量、すなわち、免疫応答を誘発するのに有効な量である。好ましい実施態様では、ワクチン組成物は、５０～１５０μg、好ましくは、１００μgをそれぞれ１４～４２日間隔、好ましくは、２８日間隔で２回投与される。
本発明のワクチン組成物を対象に１回以上、例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０回以上投与することができる。
本明細書で使用する場合、「対象」は、動物、好ましくは、ほ乳類に関する。ほ乳類は、例えば、マウス、ラット、モルモット、ハムスター、ウサギ、イヌ、ネコ又は霊長類であることができる。好ましくは、対象は、ヒトである。ただし、「対象」という用語は、細胞、好ましくは、ほ乳類の細胞、さらにより好ましくは、ヒトの細胞も含む。このような細胞は、免疫細胞、好ましくはリンパ球であることができる。
ＨＳＶポリペプチドＵＬ１１をコードする本発明のワクチン組成物のｍＲＮＡは、好ましくは、配列番号：１のアミノ酸配列と７５％以上同一なアミノ酸配列をコードし、ここで、前記ＨＳＶ ＵＬ１１ ｍＲＮＡは、対象にワクチン組成物の形態で投与された場合、免疫応答を誘発可能である。好ましくは、該ｍＲＮＡは、配列番号：１６又は少なくとも２００ヌクレオチド長のそのフラグメントと少なくとも８０％同一である。
本明細書で使用する場合、「ＵＬ１１」という用語は、ＨＳＶのテグメントタンパク質に関する。配列番号：１は、ＨＳＶ－２ ＵＬ１１のアミノ酸配列を例示的に示しており、また、NCBI GenBankにアクセッション番号AHG54674.1で寄託されている。ただし、「ＵＬ１１」という用語は、配列番号：１に示されるアミノ酸配列とある程度の同一性を共有するアミノ酸配列を有するＵＬ１１ポリペプチドも包含し、また、本明細書に記載されたように、配列番号：１に示される参照配列に対して突然変異を有するポリペプチドも包含する。したがって、「ＵＬ１１」という用語は、配列番号：１のアミノ酸配列と比較して、９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９４％、９３％、９２％、９１％、９０％、８９％、８８％、８７％、８６％、８５％、８４％、８３％、８２％、８１％、８０％、７９％、７８％、７７％、７６％、７４％、７３％、７２％、７１％、７０％もしくは好ましくは、７５％以上のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチド又は配列番号：１のアミノ酸配列と比較して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２５、２６、２７、２８、２９個までもしくは好ましくは、２４個のアミノ酸置換、挿入及び／もしくは欠失を有するポリペプチドを包含する。本発明のｍＲＮＡから翻訳された好ましいＵＬ１１タンパク質は、ＵＬ１６、ＵＬ２１及び／又はｇＥもしくはｇＥの細胞質テイルと複合体を形成することができる。したがって、本発明のｍＲＮＡから翻訳された好ましいＵＬ１１タンパク質は、ＵＬ１６又はｇＥもしくはｇＥの細胞質テイルと二量体を形成することができ、ＵＬ１６及びＵＬ２１もしくはＵＬ１６及びｇＥもしくはｇＥの細胞質テイルと三量体を形成することができかつ／又はＵＬ１６、ＵＬ２１及びｇＥもしくはｇＥの細胞質テイルと四量体を形成することができる。
ＨＳＶポリペプチドＵＬ１６をコードする本発明のワクチン組成物のｍＲＮＡは、好ましくは、配列番号：２のアミノ酸配列と７５％以上同一なアミノ酸配列をコードし、ここで、ＨＳＶポリペプチドＵＬ１６をコードする前記ｍＲＮＡは、対象にワクチン組成物の形態で投与された場合、免疫応答を誘発可能である。好ましくは、該ｍＲＮＡは、配列番号：１７又は少なくとも２００ヌクレオチド長のそのフラグメントと少なくとも８０％同一である。
本明細書で使用する場合、「ＵＬ１６」という用語は、ＨＳＶのテグメントタンパク質に関する。配列番号：２は、ＨＳＶ－２ ＵＬ１６のアミノ酸配列を例示的に示しており、また、NCBI GenBankにアクセッション番号AHG54679.1で寄託されている。ただし、「ＵＬ１６」という用語は、配列番号：２に示されるアミノ酸配列とある程度の同一性を共有するアミノ酸配列を有するＵＬ１６ポリペプチドも包含し、また、本明細書に記載されたように、配列番号：２に示される参照配列に対して突然変異を有するポリペプチドも包含する。したがって、「ＵＬ１６」という用語は、配列番号：２のアミノ酸配列と比較して、９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９４％、９３％、９２％、９１％、９０％、８９％、８８％、８７％、８６％、８５％、８４％、８３％、８２％、８１％、８０％、７９％、７８％、７７％、７６％、７５％、７４％、７３％、７２％、７１％、７０％、６９％、６８％、６７％もしくは好ましくは、７２％以上のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチド又は配列番号：２のアミノ酸配列と比較して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３個までもしくは好ましくは、１０４個のアミノ酸置換、挿入及び／もしくは欠失を有するポリペプチドを包含する。本発明のｍＲＮＡから翻訳された好ましいＵＬ１６タンパク質は、ＵＬ１１、ＵＬ２１及び／又はｇＥもしくはｇＥの細胞質テイルと複合体を形成することができる。したがって、本発明のｍＲＮＡから翻訳された好ましいＵＬ１６タンパク質は、ＵＬ２１もしくはＵＬ１１と二量体を形成することができ、ＵＬ１１及びＵＬ２１と三量体を形成することができかつ／又はＵＬ１１、ＵＬ２１及びｇＥもしくはｇＥの細胞質テイルと四量体を形成することができる。
ＨＳＶポリペプチドＵＬ２１をコードする本発明のワクチン組成物のｍＲＮＡは、好ましくは、配列番号：３のアミノ酸配列と８０％以上同一なアミノ酸配列をコードし、ここで、ＨＳＶポリペプチドＵＬ２１をコードする前記ｍＲＮＡは、対象にワクチン組成物の形態で投与された場合、免疫応答を誘発可能である。好ましくは、該ｍＲＮＡは、配列番号：１８又は少なくとも２００ヌクレオチド長のそのフラグメントと少なくとも８０％同一である。
本明細書で使用する場合、「ＵＬ２１」という用語は、ＨＳＶのテグメントタンパク質に関する。配列番号：３は、ＨＳＶ－２ ＵＬ２１のアミノ酸配列を例示的に示しており、また、NCBI GenBankにアクセッション番号AHG54684.1で寄託されている。ただし、「ＵＬ２１」という用語は、配列番号：３に示されるアミノ酸配列とある程度の同一性を共有するアミノ酸配列を有するＵＬ２１ポリペプチドも包含し、また、本明細書に記載されたように、配列番号：３に示される参照配列に対して突然変異を有するポリペプチドも包含する。したがって、「ＵＬ２１」という用語は、配列番号：３のアミノ酸配列と比較して、９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９４％、９３％、９２％、９１％、９０％、８９％、８８％、８７％、８６％、８５％、８４％、８３％、８２％、８１％、７９％、７８％、７７％、７６％、７５％もしくは好ましくは、８０％以上のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチド又は配列番号：３のアミノ酸配列と比較して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６個までもしくは好ましくは、１３４個のアミノ酸置換、挿入及び／もしくは欠失を有するポリペプチドを包含する。本発明のｍＲＮＡから翻訳された好ましいＵＬ２１タンパク質は、ＵＬ１１、ＵＬ１６及び／又はｇＥもしくはｇＥの細胞質テイルと複合体を形成することができる。したがって、好ましいＵＬ２１タンパク質は、ＵＬ１６と二量体を形成することができ、ＵＬ１１及びＵＬ１６と三量体を形成することができかつ／又はＵＬ１１、ＵＬ１６及びｇＥもしくはｇＥの細胞質テイルと四量体を形成することができる。
本明細書で言及されたように、ＨＳＶポリペプチドＵＬ１１、ＵＬ１６、ＵＬ２１を含む多量体複合体のタンパク質をコードするｍＲＮＡは、ＨＳＶ糖タンパク質ｇＥをコードするｍＲＮＡをさらに含むことができる。この場合、本発明のｍＲＮＡから翻訳された多量体複合体は、ＨＳＶポリペプチドＵＬ１１、ＵＬ１６、ＵＬ２１及びｇＥを含む。
本発明のワクチン組成物のｍＲＮＡによりコードされるＨＳＶポリペプチドＵＬ３１は、好ましくは、配列番号：８のアミノ酸配列と８５％以上同一であるアミノ酸配列を含み、ここで、ＨＳＶポリペプチドＵＬ３１をコードする前記ｍＲＮＡは、対象にワクチン組成物の形態で投与された場合、免疫応答を誘発可能である。好ましくは、該ｍＲＮＡは、配列番号：１９又は少なくとも２００ヌクレオチド長のそのフラグメントと少なくとも８０％同一である。
本明細書で使用する場合、「ＵＬ３１」という用語は、ＨＳＶのビリオン放出タンパク質に関する。配列番号：８は、ＨＳＶ－２ ＵＬ３１のアミノ酸配列を例示的に示しており、また、NCBI GenBankにアクセッション番号AHG54695.1で寄託されている。ただし、「ＵＬ３１」という用語は、配列番号：８に示されるアミノ酸配列とある程度の同一性を共有するアミノ酸配列を有するＵＬ３１ポリペプチドも包含し、また、本明細書に記載されたように、配列番号：８に示される参照配列に対して突然変異を有するポリペプチドも包含する。したがって、「ＵＬ３１」という用語は、配列番号：１のアミノ酸配列と比較して、９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９４％、９３％、９２％、９１％、９０％、８９％、８８％、８７％、８６％、８４％、８３％、８２％、８１％、８０％もしくは好ましくは、８５％以上のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチド又は配列番号：８のアミノ酸配列と比較して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５６、５７、５８、５９、６０、６１個までもしくは好ましくは、４６個のアミノ酸置換、挿入及び／もしくは欠失を有するポリペプチドを包含する。本発明のｍＲＮＡから翻訳された好ましいＵＬ３１タンパク質は、ＵＬ３４と二量体を形成することができる。
本発明のワクチン組成物のｍＲＮＡによりコードされるＨＳＶポリペプチドＵＬ３４は、好ましくは、配列番号：９のアミノ酸配列と７０％以上同一であるアミノ酸配列を含み、ここで、ＨＳＶポリペプチドＵＬ３４をコードする前記ＨＳＶ ｍＲＮＡは、対象にワクチン組成物の形態で投与された場合、免疫応答を誘発可能である。好ましくは、該ｍＲＮＡは、配列番号：２０又は少なくとも２００ヌクレオチド長のそのフラグメントと少なくとも８０％同一である。
本明細書で使用する場合、「ＵＬ３４」という用語は、ＨＳＶのビリオン放出タンパク質に関する。配列番号：９は、ＨＳＶ－２ ＵＬ３４のアミノ酸配列を例示的に示しており、また、NCBI GenBankにアクセッション番号AHG54698.1で寄託されている。ただし、「ＵＬ３４」という用語は、配列番号：９に示されるアミノ酸配列とある程度の同一性を共有するアミノ酸配列を有するＵＬ３４ポリペプチドも包含し、また、本明細書に記載されたように、配列番号：９に示される参照配列に対して突然変異を有するポリペプチドも包含する。したがって、「ＵＬ３４」という用語は、配列番号：２のアミノ酸配列と比較して、９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９４％、９３％、９２％、９１％、９０％、８９％、８８％、８７％、８６％、８５％、８４％、８３％、８２％、８１％、８０％、７９％、７８％、７７％、７６％、７５％、７４％、７３％、７２％、７１％、６９％、６８％、６７％、６６％、６５％もしくは好ましくは、７０％以上のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチド又は配列番号：９のアミノ酸配列と比較して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８個までもしくは好ましくは、７５個のアミノ酸置換、挿入及び／もしくは欠失を有するポリペプチドを包含する。本発明のｍＲＮＡから翻訳された好ましいＵＬ３４タンパク質は、ＵＬ３１と二量体を形成することができる。
記述されたように、本発明の各ｍＲＮＡは、配列番号：１（ＵＬ１１）、配列番号：２（ＵＬ１６）、配列番号：３（ＵＬ２１）、配列番号：４（ｇＥ）、配列番号：５（ｇＥの細胞質ドメイン）、配列番号：６（ＵＬ４８）、配列番号：７（ＵＬ４９）、配列番号：８（ＵＬ３１）及び配列番号：９（ＵＬ３４）に示される参照配列に対して突然変異、例えば、挿入、欠失及び置換を含有するタンパク質をコードすることができる。
本発明のさらに好ましい実施態様では、上記された構造ＨＳＶポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むワクチン組成物は、１種又は複数種のＨＳＶ糖タンパク質もコードすることができる。好ましい糖タンパク質は、ｇＥ、ｇＢ及びｇＤである。
本発明のワクチン組成物のＨＳＶ糖タンパク質ｇＥをコードするｍＲＮＡは、好ましくは、配列番号：４のアミノ酸配列と７０％以上同一であるアミノ酸又はその免疫原性フラグメントをコードする。好ましくは、該ｍＲＮＡは、配列番号：２４又は少なくとも２００ヌクレオチド長のそのフラグメントと少なくとも８０％同一である。
本明細書で使用する場合、「ＩＣＰ４」という用語は、ＨＳＶの主要なウイルス転写因子４を指す場合があり、例えば、NCBI GenBankにアクセッション番号QIH12398.1（バージョン０８ ２０２０年３月）で寄託されており、本明細書において、配列番号：３１を有する。ただし、「ＩＣＰ４」という用語は、配列番号：３１に示されるアミノ酸配列とある程度の同一性を共有するアミノ酸配列を有するＩＣＰ４ポリペプチドも包含し、また、本明細書に記載されたように、配列番号：３１に示される参照配列に対して突然変異を有するポリペプチドも包含する。したがって、「ＩＣＰ４」という用語は、配列番号：３１のアミノ酸配列と比較して、９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９４％、９３％、９２％、９１％、９０％、８９％、８８％、８７％、８６％、８５％、８４％、８３％、８２％、８１％、８０％、７９％、７８％、７７％、７６％、７５％、７４％、７３％、７２％、７１％、６９％、６８％、６７％、６６％、６５％もしくは好ましくは、７０％以上のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチド又は配列番号：３１のアミノ酸配列と比較して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０個までもしくは好ましくは、１６５個のアミノ酸置換、挿入及び／もしくは欠失を有するポリペプチドを包含する。好ましいＩＣＰ４タンパク質は、ＩＣＰ４ ｍＲＮＡ（例えば、配列番号：３０）から翻訳される。ＩＣＰ４をコードするｍＲＮＡは、配列番号：３０であることができる。好ましくは、ＩＣＰ４ ｍＲＮＡは、配列番号：３０又は少なくとも２００ヌクレオチド長のそのフラグメントと少なくとも８０％同一である。一部の態様では、本発明のワクチン組成物は、ａ）ＨＳＶ糖タンパク質Ｄ（ｇＤ）又は配列番号：１１のアミノ酸配列と７０％以上同一なアミノ酸配列を有するその免疫原性フラグメント、ｂ）ＨＳＶ糖タンパク質Ｂ（ｇＢ）又は配列番号：１０のアミノ酸配列と７０％以上同一なアミノ酸配列を有するその免疫原性フラグメント及びｃ）ＨＳＶ糖タンパク質Ｅ（ｇＥ）又は配列番号：４のアミノ酸配列と７０％以上同一なもしくは配列番号：５のアミノ酸配列と８０％以上同一なアミノ酸配列を有するその免疫原性フラグメント又はそれら任意の組み合わせ、場合により、ｄ）ＨＳＶ ＩＣＰ４又は配列番号：３１のアミノ酸配列と７０％以上同一なアミノ酸配列を有するその免疫原性フラグメント又はそれら任意の組み合わせからなる群より選択される単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）糖タンパク質をコードする少なくとも１種のｍＲＮＡを含む。一部の更なる態様では、本発明のワクチン組成物は、（ｉ）ＵＬ４８並びにｇＤ及び／もしくはｇＢ、場合により、ＩＣＰ４（例えば、上記されたとおり）；（ｉｉ）ｇＥを伴うＵＬ４８及びＵＬ４９；（ｉｉｉ）ｇＥ、ｇＤ及び／もしくはｇＢを伴うＵＬ１１、ＵＬ１６及びＵＬ２１又は（ｉｖ）ｇＤ及び／もしくはｇＢを伴うＵＬ３１及びＵＬ３４を含む。
本明細書で使用する場合、「ｇＥ」という用語は、「糖タンパク質Ｅ」と呼ばれる場合もある。配列番号：４は、ＨＳＶ－２ ｇＥのアミノ酸配列を例示的に示しており、また、NCBI GenBankにアクセッション番号AHG54732.1で寄託されている。ただし、「ｇＥ」という用語は、配列番号：４に示されるアミノ酸配列とある程度の同一性を共有するアミノ酸配列を有するｇＥポリペプチドも包含し、また、本明細書に記載されたように、配列番号：４に示される参照配列に対して突然変異を有するポリペプチドも包含する。したがって、「ｇＥ」という用語は、配列番号：４のアミノ酸配列と比較して、９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９４％、９３％、９２％、９１％、９０％、８９％、８８％、８７％、８６％、８５％、８４％、８３％、８２％、８１％、８０％、７９％、７８％、７７％、７６％、７５％、７４％、７３％、７２％、７１％、６９％、６８％、６７％、６６％、６５％もしくは好ましくは、７０％以上のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチド又は配列番号：４のアミノ酸配列と比較して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０個までもしくは好ましくは、１６５個のアミノ酸置換、挿入及び／もしくは欠失を有するポリペプチドを包含する。本発明のｍＲＮＡから翻訳された好ましいｇＥタンパク質は、ＵＬ４８と二量体を形成することができ、ＵＬ３１及びＵＬ３４と三量体を形成することができ、ＵＬ１１、ＵＬ１６及びＵＬ２１と四量体を形成することができる。
また、ｇＥをコードするｍＲＮＡは、ＨＳＶポリペプチドｇＥの細胞質ドメインからなる場合もある。好ましくは、ｇＥ ｍＲＮＡは、配列番号：２１又は少なくとも２００ヌクレオチド長のそのフラグメントと少なくとも８０％同一である。好ましくは、該ｍＲＮＡは、配列番号：２１又は少なくとも２００ヌクレオチド長のそのフラグメントと少なくとも８０％同一である。
本発明のワクチン組成物のｍＲＮＡによりコードされるｇＥの細胞質ドメインは、好ましくは、配列番号：５に記載されたアミノ酸配列を含む。ただし、本明細書において、ｇＥの細胞質ドメインは、配列番号：５のアミノ酸配列と比較して、９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９４％、９３％、９２％、９１％、９０％、８９％、８８％、８７％、８６％、８５％、８４％、８３％、８２％、８１％、７９％、７８％、７７％、７６％、７５％もしくは好ましくは、８０％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列又は配列番号：５のアミノ酸配列と比較して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７個までもしくは好ましくは、２３個のアミノ酸置換、挿入及び／もしくは欠失を有するポリペプチドを含むことも想定される。本発明のｍＲＮＡから翻訳された好ましいｇＥの細胞質ドメインは、ＵＬ４８と二量体を形成することができ、ＵＬ３１及びＵＬ３４と三量体を形成することができ、ＵＬ１１、ＵＬ１６及びＵＬ２１と四量体を形成することができる。
本発明のワクチン組成物のＨＳＶ糖タンパク質ｇＤをコードするｍＲＮＡは、好ましくは、配列番号：１１のアミノ酸配列と７０％以上同一であるアミノ酸又はその免疫原性フラグメントをコードする。好ましくは、ｍＲＮＡは、配列番号：２２又は少なくとも２００ヌクレオチド長のそのフラグメントと少なくとも８０％同一である。
本明細書で使用する場合、「ｇＤ」という用語は、「糖タンパク質Ｄ」と呼ばれる場合もある。配列番号：１１は、ＨＳＶ－２ ｇＤのアミノ酸配列を例示的に示している。ただし、「ｇＤ」という用語は、配列番号：１１に示されるアミノ酸配列とある程度の同一性を共有するアミノ酸配列を有するｇＤポリペプチドも包含し、また、本明細書に記載されたように、配列番号：１１に示される参照配列に対して突然変異を有するポリペプチドも包含する。したがって、「ｇＤ」という用語は、配列番号：１１のアミノ酸配列と比較して、９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９４％、９３％、９２％、９１％、９０％、８９％、８８％、８７％、８６％、８５％、８４％、８３％、８２％、８１％、８０％、７９％、７８％、７７％、７６％、７５％、７４％、７３％、７２％、７１％、６９％、６８％、６７％、６６％、６５％もしくは好ましくは、７０％以上のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチド又は配列番号：１１のアミノ酸配列と比較して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０個までもしくは好ましくは、１６５個のアミノ酸置換、挿入及び／もしくは欠失を有するポリペプチドを包含する。本発明のｍＲＮＡから翻訳された好ましいｇＤタンパク質は、該ワクチン組成物のｍＲＮＡから翻訳されたＵＬ１１、ＵＬ１６及びＵＬ２１タンパク質と複合体を形成することができる。得られた好ましいｇＤタンパク質は、ＵＬ４８と二量体を形成することができ、ＵＬ３１及びＵＬ３４と三量体を形成することができ、ＵＬ１１、ＵＬ１６及びＵＬ２１と四量体を形成することができる。
本発明のワクチン組成物のＨＳＶ糖タンパク質ｇＢをコードするｍＲＮＡは、好ましくは、配列番号：１０のアミノ酸配列と７０％以上同一であるアミノ酸又はその免疫原性フラグメントをコードする。好ましくは、該ｍＲＮＡは、配列番号：２３又は少なくとも２００ヌクレオチド長のそのフラグメントと少なくとも８０％同一である。
本明細書で使用する場合、「ｇＢ」という用語は、「糖タンパク質Ｂ」と呼ばれる場合もある。配列番号：１０は、ＨＳＶ－２ ｇＢのアミノ酸配列を例示的に示している。ただし、「ｇＢ」という用語は、配列番号：１０に示されるアミノ酸配列とある程度の同一性を共有するアミノ酸配列を有するｇＢポリペプチドも包含し、また、本明細書に記載されたように、配列番号：１０に示される参照配列に対して突然変異を有するポリペプチドも包含する。したがって、「ｇＢ」という用語は、配列番号：１０のアミノ酸配列と比較して、９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９４％、９３％、９２％、９１％、９０％、８９％、８８％、８７％、８６％、８５％、８４％、８３％、８２％、８１％、８０％、７９％、７８％、７７％、７６％、７５％、７４％、７３％、７２％、７１％、６９％、６８％、６７％、６６％、６５％もしくは好ましくは、７０％以上のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチド又は配列番号：１０のアミノ酸配列と比較して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０個までもしくは好ましくは、１６５個のアミノ酸置換、挿入及び／もしくは欠失を有するポリペプチドを包含する。該ワクチン組成物のｍＲＮＡから翻訳された好ましいｇＢタンパク質は、該ワクチン組成物のｍＲＮＡから翻訳されたＵＬ１１、ＵＬ１６及びＵＬ２１タンパク質と複合体を形成することができる。得られた好ましいｇＢタンパク質は、ＵＬ４８と二量体を形成することができ、ＵＬ３１及びＵＬ３４と三量体を形成することができ、ＵＬ１１、ＵＬ１６及びＵＬ２１と四量体を形成することができる。
また、ｇＥ、ｇＢもしくはｇＤ又はその免疫原性フラグメントをコードするヌクレオシド修飾ｍＲＮＡも好ましい。好ましいフラグメントは、ＵＳ第２０２０／０２７６３００号に記載されており、プソイドウリジン残基、好ましくは、ｍ１Ψ（１－メチルプソイドウリジン）、ｍ１ａｃｐ３Ψ（１－メチル－３－（３－アミノ－５－カルボキシプロピル）プソイドウリジン）、Ψｍ（２’－０－メチルプソイドウリジン）、ｍ５Ｄ（５－メチルジヒドロウリジン）、ｍ３Ψ（３－メチルプソイドウリジン）又はそれらの任意の組み合わせを包含する。具体的には、配列番号：１２及び１３のｍＲＮＡはそれぞれ、このようなヌクレオシド修飾ｇＤ及びｇＥ ｍＲＮＡそれぞれである。プソイドウリジン修飾配列の更なる例は、配列番号：２５～３０に示される。
記述されたように、本発明の各ｍＲＮＡは、配列番号：１（ＵＬ１１）、配列番号：２（ＵＬ１６）、配列番号：３（ＵＬ２１）、配列番号：６（ＵＬ４８）、配列番号：７（ＵＬ４９）、配列番号：８（ＵＬ３１）、配列番号：９（ＵＬ３４）、配列番号：４（ｇＥ）、配列番号：５（ｇＥの細胞質ドメイン）、配列番号：１０（ｇＢ）及び配列番号：１１（ｇＤ）に示される参照配列に対して、突然変異、例えば、挿入、欠失及び置換を含有するタンパク質をコードすることができる。
一態様では、本発明のｍＲＮＡは、ＵＬ４８タンパク質を単独で又はｇＤもしくはｇＢの群から選択される糖タンパク質をコードするｍＲＮＡとの組み合わせでコードする。
本発明のさらに好ましい実施態様では、ワクチン組成物中のｍＲＮＡは、翻訳後に、多量体複合体を形成する２つ又は３つの構造ポリペプチドをコードする。さらに、糖タンパク質ｇＥ、ｇＢ及び／もしくはｇＤ又はそれらの免疫原性フラグメントをコードする１種以上のｍＲＮＡが、該ワクチン組成物に含まれる場合がある。
具体的には、本発明のワクチン組成物は、ＵＬ４８及びＵＬ４９をコードするｍＲＮＡを含むことができる。これらは、翻訳されると、複合体を形成することができる。代替的には、本発明のワクチン組成物は、ＵＬ４８、ＵＬ４９及び糖タンパク質ｇＥをコードするｍＲＮＡを含むことができる。これらは全て、翻訳されると、複合体を形成することができる。
別の実施態様では、本発明のワクチン組成物は、ＵＬ１１、ＵＬ１６及びＵＬ２１をコードするｍＲＮＡを含むことができる。これらは、翻訳されると、複合体を形成することができる。ＵＬ１１、ＵＬ１６及びＵＬ２１をコードするｍＲＮＡを含む本発明のワクチン組成物は、糖タンパク質ｇＥ、ｇＢ又はｇＤをコードする１種以上のｍＲＮＡをさらに含むことができる。
代替的には、本発明のワクチン組成物は、ＵＬ３１及びＵＬ３４をコードするｍＲＮＡを含むことができる。これらは、翻訳されると、複合体を形成することができる。ＵＬ３１及びＵＬ３４をコードするｍＲＮＡを含む本発明のワクチン組成物は、糖タンパク質ｇＢ又はｇＤをコードする１種以上のｍＲＮＡをさらに含むことができる。
該ワクチン組成物中のｍＲＮＡは、ＨＳＶ－１ポリペプチド、ＨＳＶ－２ポリペプチド又はそれらの混合物をコードすることができる。
本発明のワクチン組成物は、薬学的に許容し得る担体又はアジュバントをさらに含むことができる。
「担体」及び「賦形剤」という用語は、本明細書において互換的に使用される。薬学的に許容し得る担体は、希釈剤（充填剤、増量剤、例えば、ラクトース、微結晶セルロース）、崩壊剤（例えば、デンプングリコール酸ナトリウム、クロスカルメロースナトリウム）、バインダー（例えば、ＰＶＰ、ＨＰＭＣ）、潤滑剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム）、滑沢剤（例えば、コロイド状ＳｉＯ２）、溶媒／共溶媒（例えば、水性媒体、プロピレングリコール、グリセロール）、緩衝剤（例えば、シトラート、グルコナート、ラクタート）、保存剤（例えば、安息香酸Ｎａ、パラベン（Ｍｅ、Ｐｒ及びＢｕ）、ＢＫＣ）、酸化防止剤（例えば、ＢＨＴ、ＢＨＡ、アスコルビン酸）、湿潤剤（例えば、ポリソルベート、ソルビタンエステル）、消泡剤（例えば、シメチコン）、増粘剤（例えば、メチルセルロース又はヒドロキシエチルセルロース）、甘味剤（例えば、ソルビトール、サッカリン、アスパルテーム、アセスルファム）、着香剤（例えば、ペパーミント、レモンオイル、バタースコッチ等）、保湿剤（例えば、プロピレン、グリコール、グリセロール、ソルビトール）を含むが、これらに限定されない。更なる薬学的に許容し得る担体は、（生分解性）リポソーム；生分解性ポリマーであるポリ（Ｄ，Ｌ）－乳酸－コグリコール酸（ＰＬＧＡ）製のミクロスフェア；アルブミンミクロスフェア；合成ポリマー（可溶性）；ナノファイバー；タンパク質－ＤＮＡ複合体；タンパク質コンジュゲート；赤血球又はビロソームである。種々の担体系剤形は、固体脂質ナノ粒子（ＳＬＮ）、ポリマーナノ粒子、セラミックスナノ粒子、ヒドロゲルナノ粒子、共重合ペプチドナノ粒子、ナノ結晶及びナノ懸濁液、ナノ結晶、ナノチューブ及びナノワイヤー、機能化ナノ担体、ナノスフェア、ナノカプセル、リポソーム、脂質エマルジョン、脂質マイクロチューブ／マイクロシリンダー、脂質マイクロバブル、リポスフェア、リポポリプレックス、逆脂質ミセル、デンドリマー、エトソーム、マルチコンポジット超薄型カプセル、アクアソーム、ファーマコソーム、コロイドソーム、ニオソーム、ディスコーム、プロニオソーム、マイクロスフェア、マイクロエマルジョン及びポリマーミセルを含む。他の適切な薬学的に許容し得る賦形剤は、特に、Remington's Pharmaceutical Sciences, 15th Ed., Mack Publishing Co., New Jersey (1991)及びBauer et al., Pharmazeutische Technologie, 5th Ed., Govi-Verlag Frankfurt (1997)に記載されている。当業者であれば、例えば、医薬組成物の配合及び投与経路に応じて、適切な薬学的に許容し得る担体を容易に選択することが可能であろう。
本明細書で使用する場合、「アジュバント」という用語は、抗原又はそのフラグメントに対するホストの免疫応答（抗体及び／又は細胞媒介性）を向上させ、増強し又は増す物質を指す。本発明に従って使用するための例示的なアジュバントは、無機化合物、例えば、ミョウバン、水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム、水酸化リン酸カルシウム、ＴＬＲ９アゴニストであるＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド、ＴＬＲ４アゴニストであるモノホスホリル脂質（ＭＰＬ）、ＴＬＲ４アゴニストであるグルコピラノシル脂質（ＧＬＡ）、油中水型エマルジョンであるMontanide ISA 51及び720、鉱物油、例えば、パラフィン油、ビロソーム、細菌産物、例えば、死滅細菌であるBordetella pertussis、Mycobacterium bovis、トキソイド、非細菌性有機物、例えば、スクアレン、チメロサール、洗浄剤（Quil A）、サイトカイン、例えば、ＩＬ－１、ＩＬ－２、ＩＬ－１０及びＩＬ－１２並びに複合組成物、例えば、フロイント完全アジュバント及びフロイント不完全アジュバントを含む。一般的には、本発明に従って使用されるアジュバントは、好ましくは、本発明の多量体複合体に対する免疫応答を増しかつ／又は所望の免疫応答に向けてモデュレーションする。
「薬学的に許容し得る」という用語は、本発明の多量体複合体の生体活性の有効性を妨害しない非毒性物質を意味する。
ワクチン組成物の使用
また、本発明は、対象においてＨＳＶに対する免疫応答を誘引する方法におけるワクチン組成物の使用に関する。
また、本発明は、対象においてＨＳＶに対する免疫応答を誘引する方法におけるワクチン組成物の使用に関する。
本発明の好ましい実施態様では、該ワクチン組成物は、ＨＳＶ感染の治療、予防もしくは改善又はＨＳＶの再活性化の予防に使用される。ＨＳＶ感染をＨＳＶ－１感染、ＨＳＶ－２感染、一次ＨＳＶ感染、一次ＨＳＶ感染後の再燃、再発又はＨＳＶ口唇炎、潜伏ＨＳＶ感染の再活性化、ＨＳＶ脳炎、ＨＳＶ新生児感染、性器ＨＳＶ感染及び口内ＨＳＶ感染からなる群より選択することができる。
したがって、該ワクチン組成物をＨＳＶにより引き起こされる疾患及び／又は関連する症状と闘うのに使用することができる。また、本発明のワクチン組成物を対象におけるウイルスを除去する、すなわち、処置後に、ＨＳＶを、当業者に公知の適切な方法、例えば、ＰＣＲ、ＥＬＩＳＡ等を使用して、対象から得られる適切なサンプル中に検出することができなくなるように使用することができることも想定される。このため、本発明のワクチン組成物を、一次感染を阻止し、一次疾患を停止させ、ウイルスの再活性化及び再感染を阻止し、潜伏期を阻止するのに使用することができる。
性器ヘルペスの機会を減少させるためには、母親のＨＳＶ初感染を予防するための予防ワクチンが望ましい。一方、母親が活動性ＨＳＶ感染と診断された場合には、有効な治療が必要である。本発明の多量体複合体を例えば、妊産婦もしくは小児のための予防ワクチンとして又は血清陽性の女性において分娩時の不顕性再活性化を予防するための治療ワクチンとして適用することができる。
本発明のさらに好ましい実施態様では、該ワクチン組成物は、対象においてＨＳＶ－１又はＨＳＶ－２に対する免疫応答を誘引するための方法に使用される。
「ポリヌクレオチド」、「ヌクレオチド配列」又は「核酸分子」という用語は、本明細書において互換的に使用され、通常、１つのデオキシリボース又はリボースから別のものに連結されているヌクレオチドの重合体を指す。「ポリヌクレオチド」という用語は、好ましくは、ＤＮＡ又はＲＮＡの一本鎖及び二本鎖形態を含む。本発明の核酸分子は、ＲＮＡ（リボヌクレオチドを含有する）のセンス鎖とアンチセンス鎖との両方、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ並びに上記の合成形態及び混合ポリマーを含むことができる。これらは、当業者に容易に理解されるであろうように、化学的もしくは生化学的に修飾されていることができ又は非天然もしくは誘導体化されたヌクレオチド塩基を含有することができる。このような修飾は、例えば、ラベル、メチル化、天然のヌクレオチドのうちの１つ以上のアナログによる置換、ヌクレオチド間修飾、例えば、非荷電連結（例えば、メチルホスホナート、ホスホトリエステル、ホスホラミダート、カルバマート等）、荷電連結（例えば、ホスホロチオアート、ホスホロジチオアート等）、ペンダント部分（例えば、ポリペプチド）、インターカレーター（例えば、アクリジン、ソラレン等）、キレート剤、アルキル化剤及び修飾連結（例えば、アルファアノマー核酸等）を含む。また、水素結合及び他の化学的相互作用を介して指定された配列に結合する能力においてポリヌクレオチドを模倣する合成分子も含まれる。このような分子は、当技術分野において公知であり、例えば、ペプチド結合が分子の骨格中のリン酸結合の代わりになっているものを含む。
本発明のワクチン組成物をプライムブースト計画に使用することができる。プライムブースト計画において、一次免疫化（プライム又はプライミング）に使用されるワクチン及びブースター免疫化（ブースト又はブースティング）に使用されるワクチンを含む２種類以上のワクチンから構成されるプライム／ブーストワクチンが使用される。一次免疫化に使用されるワクチン及びブースター免疫化に使用されるワクチンは、互いに異なる場合がある。一次免疫化及びブースティング免疫化を連続して行うことができるが、これは強制ではない。プライム／ブースト計画は、例えば、ｍＲＮＡプライム／タンパク質ブーストを含むが、これには限定されない。一方、ブースティング組成物をプライミング組成物として使用することもでき、前記プライミング組成物は、ブースティング組成物として使用される。
本明細書で使用する場合、単数形「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、特に断らない限り、複数の言及を含むことに留意しなければならない。このため、例えば、「発現カセット」への言及は、本明細書に開示された発現カセットのうちの１種以上を含み、「方法」への言及は、本明細書に記載された方法を修正し又は置換することができる、当業者に公知の同等の工程及び方法への言及を含む。
本明細書及びそれに続く特許請求の範囲をとおして、特に断らない限り、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」という語及び変形例、例えば、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、「含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、記述された整数もしくは工程又は整数もしくは工程の群を含むことを意味するが、任意の他の整数もしくは工程又は整数もしくは工程の群を排除することを意味しないと理解されるであろう。本明細書で使用する場合、「含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語を用語「含有すること（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」と置き換えることができ又は本明細書で使用する場合、「有すること（ｈａｖｉｎｇ）」と置き換えることができる。
本明細書で使用する場合、「からなること（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ）」は、特許請求の範囲の構成要素に明記されていない任意の構成要素、工程又は成分を除外する。本明細書で使用する場合、「から本質的になること（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」は、特許請求の範囲の基本的かつ新規な特性に実質的に影響を及ぼさない材料又は工程を除外しない。本明細書における各例において、「含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「から本質的になること（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」及び「からなること（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ）」という用語のいずれかを、他の２つの用語のいずれかと置き換えることができる。
本明細書で使用する場合、「約」又は「およそ」という用語は、所定の値又は範囲の２０％以内、好ましくは、１０％以内、より好ましくは、５％以内を意味する。また、具体的な数値も含み、例えば、約２０は、２０を含む。
本明細書において特に断らない限り、本発明に関連して使用される科学用語及び技術用語は、当業者により一般的に理解される意味を有するものとする。さらに、特に断らない限り、単数形の用語は、複数形を含み、複数形の用語は、単数形を含むものとする。本発明の方法及び技術は、一般的には、当技術分野において周知の従来法に従って実施される。一般的には、本明細書に記載された生化学、酵素学、分子生物学及び細胞生物学、微生物学、遺伝学並びにタンパク質及び核酸化学及びハイブリダイゼーションの技術に関連して使用される命名法は、当該技術分野において周知かつ一般的に使用されるものである。
本発明の方法及び技術は、一般的には、当該技術分野において周知の従来法に従って実施され、特に断らない限り、本明細書をとおして引用され、検討されている種々の一般的な文献及びより具体的な文献に記載されているとおりに実施される。例えば、Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 3rd ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N. Y. (2001)；Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, J, Greene Publishing Associates (1992, and Supplements to 2002)；Handbook of Biochemistry: Section A Proteins, Vol I 1976 CRC Press；Handbook of Biochemistry: Section A Proteins, Vol II 1976 CRC Pressを参照のこと。本明細書に記載された分子生物学及び細胞生物学、タンパク質生化学、酵素学並びに医薬化学及び製薬化学に関連して使用される命名法並びにこれらの実験手法及び技術は、当技術分野において周知かつ一般的に使用されるものである。
実施例
下記仮説的な実施例は、本発明を例証するものであるが、本発明の範囲を限定するものとして解釈されるものではない。
下記仮説的な実施例は、本発明を例証するものであるが、本発明の範囲を限定するものとして解釈されるものではない。
実施例１
４名のＨＳＶ－２感染者及び２名の非感染者からのＰＢＭＣを融解させ、一晩静置した。細胞を５×１０５個/ウェルでプレート上に播種し、続けて、５μg/mLＨＳＶ－２ ＵＬ４８ ｍＲＮＡ単独で又は５μg/mL ＵＬ４９ ｍＲＮＡと共に４８時間刺激した。その後、上清を回収し、Luminex装置により、ＩＦＮ－γの分泌を分析した。バックグラウンドシグナル（バッファーで刺激された細胞から発生）を各ウェルから差し引き、結果をpg/mlとして表わした。
４名のＨＳＶ－２感染者及び２名の非感染者からのＰＢＭＣを融解させ、一晩静置した。細胞を５×１０５個/ウェルでプレート上に播種し、続けて、５μg/mLＨＳＶ－２ ＵＬ４８ ｍＲＮＡ単独で又は５μg/mL ＵＬ４９ ｍＲＮＡと共に４８時間刺激した。その後、上清を回収し、Luminex装置により、ＩＦＮ－γの分泌を分析した。バックグラウンドシグナル（バッファーで刺激された細胞から発生）を各ウェルから差し引き、結果をpg/mlとして表わした。
実施例２
ＨＳＶ－２感染モルモット及び対照モルモットからの脾臓細胞（１×１０５個）を１０μg/mL ＨＳＶ－２ ＵＬ３１ ｍＲＮＡ及び１０μg/mL ＵＬ３４ ｍＲＮＡと混合した。ついで、細胞をELISPOT 抗インターフェロンガンマ（ＩＦＮ－γ）抗体被覆プレート（Multiscreen HTSプレート；Millipore）に移し、２０時間インキュベーションした。その後、プレートを標準的なELISPOTプロトコールに従って現像し、ＩＦＮ－γ分泌細胞をスポットとして、自動読み取り機により定量した。非刺激細胞及び２０μg/mLＰＨＡをそれぞれ、陰性対照及び陽性対照として使用した。
ＨＳＶ－２感染モルモット及び対照モルモットからの脾臓細胞（１×１０５個）を１０μg/mL ＨＳＶ－２ ＵＬ３１ ｍＲＮＡ及び１０μg/mL ＵＬ３４ ｍＲＮＡと混合した。ついで、細胞をELISPOT 抗インターフェロンガンマ（ＩＦＮ－γ）抗体被覆プレート（Multiscreen HTSプレート；Millipore）に移し、２０時間インキュベーションした。その後、プレートを標準的なELISPOTプロトコールに従って現像し、ＩＦＮ－γ分泌細胞をスポットとして、自動読み取り機により定量した。非刺激細胞及び２０μg/mLＰＨＡをそれぞれ、陰性対照及び陽性対照として使用した。
実施例３
１４名のＨＳＶ－２感染者及び６名の非感染者からのＰＢＭＣを融解させ、一晩静置した。細胞を２×１０５個/ウェルでELISPOT抗インターフェロンガンマ（ＩＦＮ－γ）抗体被覆プレート上に播種した。続けて、細胞を５μg/mLＨＳＶ－２ ＵＬ３１ ｍＲＮＡ及び５μg/mL ＨＳＶ－２ ＵＬ３４ ｍＲＮＡで４８時間刺激した。その後、プレートを製造業者の説明書に従って現像し、ＩＦＮ－γ分泌細胞をスポットとして、自動読み取り機によりカウントした。バックグラウンドシグナル（バッファーで刺激された細胞から発生）を各ウェルから差し引き、結果を２×１０５個 ＰＢＭＣ当たりのＳＦＵ（スポット形成単位）として表わした。
１４名のＨＳＶ－２感染者及び６名の非感染者からのＰＢＭＣを融解させ、一晩静置した。細胞を２×１０５個/ウェルでELISPOT抗インターフェロンガンマ（ＩＦＮ－γ）抗体被覆プレート上に播種した。続けて、細胞を５μg/mLＨＳＶ－２ ＵＬ３１ ｍＲＮＡ及び５μg/mL ＨＳＶ－２ ＵＬ３４ ｍＲＮＡで４８時間刺激した。その後、プレートを製造業者の説明書に従って現像し、ＩＦＮ－γ分泌細胞をスポットとして、自動読み取り機によりカウントした。バックグラウンドシグナル（バッファーで刺激された細胞から発生）を各ウェルから差し引き、結果を２×１０５個 ＰＢＭＣ当たりのＳＦＵ（スポット形成単位）として表わした。
実施例４
４名のＨＳＶ－２感染者及び２名の非感染者からのＰＢＭＣを融解させ、一晩静置した。細胞を２×１０５個/ウェルでELISPOT抗インターフェロンガンマ（ＩＦＮ－γ）抗体被覆プレート上に播種した。続けて、細胞を５μg/mLＨＳＶ－２ ＵＬ４８ ｍＲＮＡ単独で又は５μg/mL ＵＬ４９ ｍＲＮＡと共に４８時間刺激した。その後、プレートを製造業者の説明書に従って現像し、ＩＦＮ－γ分泌細胞をスポットとして、自動読み取り機によりカウントした。バックグラウンドシグナル（バッファーで刺激された細胞から発生）を各ウェルから差し引き、結果を２×１０５個 ＰＢＭＣ当たりのＳＦＵ（スポット形成単位）として表わした。
４名のＨＳＶ－２感染者及び２名の非感染者からのＰＢＭＣを融解させ、一晩静置した。細胞を２×１０５個/ウェルでELISPOT抗インターフェロンガンマ（ＩＦＮ－γ）抗体被覆プレート上に播種した。続けて、細胞を５μg/mLＨＳＶ－２ ＵＬ４８ ｍＲＮＡ単独で又は５μg/mL ＵＬ４９ ｍＲＮＡと共に４８時間刺激した。その後、プレートを製造業者の説明書に従って現像し、ＩＦＮ－γ分泌細胞をスポットとして、自動読み取り機によりカウントした。バックグラウンドシグナル（バッファーで刺激された細胞から発生）を各ウェルから差し引き、結果を２×１０５個 ＰＢＭＣ当たりのＳＦＵ（スポット形成単位）として表わした。
実施例５
１４名のＨＳＶ－２感染者及び６名の非感染者からのＰＢＭＣを融解させ、一晩静置した。細胞を２×１０５個/ウェルでELISPOT抗インターフェロンガンマ（ＩＦＮ－γ）抗体被覆プレート上に播種した。続けて、細胞を５μg/mLＨＳＶ－２ ＵＬ４８ ｍＲＮＡ単独で又は５μg/mL ＵＬ４９ ｍＲＮＡと組み合わせて４８時間刺激した。その後、プレートを製造業者の説明書に従って現像し、ＩＦＮ－γ分泌細胞をスポットとして、自動読み取り機によりカウントした。バックグラウンドシグナル（バッファーで刺激された細胞から発生）を各ウェルから差し引き、結果を２×１０５個 ＰＢＭＣ当たりのＳＦＵ（スポット形成単位）として表わした。
１４名のＨＳＶ－２感染者及び６名の非感染者からのＰＢＭＣを融解させ、一晩静置した。細胞を２×１０５個/ウェルでELISPOT抗インターフェロンガンマ（ＩＦＮ－γ）抗体被覆プレート上に播種した。続けて、細胞を５μg/mLＨＳＶ－２ ＵＬ４８ ｍＲＮＡ単独で又は５μg/mL ＵＬ４９ ｍＲＮＡと組み合わせて４８時間刺激した。その後、プレートを製造業者の説明書に従って現像し、ＩＦＮ－γ分泌細胞をスポットとして、自動読み取り機によりカウントした。バックグラウンドシグナル（バッファーで刺激された細胞から発生）を各ウェルから差し引き、結果を２×１０５個 ＰＢＭＣ当たりのＳＦＵ（スポット形成単位）として表わした。
実施例６
４名のＨＳＶ－２感染者及び２名の非感染者からのＰＢＭＣを融解させ、一晩静置した。細胞を２×１０５個/ウェルでELISPOT抗インターフェロンガンマ（ＩＦＮ－γ）抗体被覆プレート上に播種した。続けて、細胞を５μg/mLＨＳＶ－２ ＵＬ１１ ｍＲＮＡ、５μg/mL ＨＳＶ－２ ＵＬ１６ ｍＲＮＡ及び５μg/mLＵＬ２１ ｍＲＮＡ又は組み合わせにおける単独のタンパク質の量に正規化されたＵＬ１１、ＵＬ１６もしくはＵＬ２１をコードする各ｍＲＮＡで４８時間刺激した。その後、プレートを製造業者の説明書に従って現像し、ＩＦＮ－γ分泌細胞をスポットとして、自動読み取り機によりカウントした。バックグラウンドシグナル（バッファーで刺激された細胞から発生）を各ウェルから差し引き、結果を２×１０５個 ＰＢＭＣ当たりのＳＦＵ（スポット形成単位）として表わした。
４名のＨＳＶ－２感染者及び２名の非感染者からのＰＢＭＣを融解させ、一晩静置した。細胞を２×１０５個/ウェルでELISPOT抗インターフェロンガンマ（ＩＦＮ－γ）抗体被覆プレート上に播種した。続けて、細胞を５μg/mLＨＳＶ－２ ＵＬ１１ ｍＲＮＡ、５μg/mL ＨＳＶ－２ ＵＬ１６ ｍＲＮＡ及び５μg/mLＵＬ２１ ｍＲＮＡ又は組み合わせにおける単独のタンパク質の量に正規化されたＵＬ１１、ＵＬ１６もしくはＵＬ２１をコードする各ｍＲＮＡで４８時間刺激した。その後、プレートを製造業者の説明書に従って現像し、ＩＦＮ－γ分泌細胞をスポットとして、自動読み取り機によりカウントした。バックグラウンドシグナル（バッファーで刺激された細胞から発生）を各ウェルから差し引き、結果を２×１０５個 ＰＢＭＣ当たりのＳＦＵ（スポット形成単位）として表わした。
実施例７
１４名のＨＳＶ－２感染者及び６名の非感染者からのＰＢＭＣを融解させ、一晩静置した。細胞を２×１０５個/ウェルでELISPOT抗インターフェロンガンマ（ＩＦＮ－γ）抗体被覆プレート上に播種した。続けて、細胞を５μg/mLＨＳＶ－２ ＵＬ１１ ｍＲＮＡ、５μg/mL ＨＳＶ－２ ＵＬ１６ ｍＲＮＡ及び５μg/mLＵＬ２１ ｍＲＮＡで４８時間刺激した。その後、プレートを製造業者の説明書に従って現像し、ＩＦＮ－γ分泌細胞をスポットとして、自動読み取り機によりカウントした。バックグラウンドシグナル（バッファーで刺激された細胞から発生）を各ウェルから差し引き、結果を２×１０５個 ＰＢＭＣ当たりのＳＦＵ（スポット形成単位）として表わした。
１４名のＨＳＶ－２感染者及び６名の非感染者からのＰＢＭＣを融解させ、一晩静置した。細胞を２×１０５個/ウェルでELISPOT抗インターフェロンガンマ（ＩＦＮ－γ）抗体被覆プレート上に播種した。続けて、細胞を５μg/mLＨＳＶ－２ ＵＬ１１ ｍＲＮＡ、５μg/mL ＨＳＶ－２ ＵＬ１６ ｍＲＮＡ及び５μg/mLＵＬ２１ ｍＲＮＡで４８時間刺激した。その後、プレートを製造業者の説明書に従って現像し、ＩＦＮ－γ分泌細胞をスポットとして、自動読み取り機によりカウントした。バックグラウンドシグナル（バッファーで刺激された細胞から発生）を各ウェルから差し引き、結果を２×１０５個 ＰＢＭＣ当たりのＳＦＵ（スポット形成単位）として表わした。
実施例８
４名のＨＳＶ－２感染者及び２名の非感染者からのＰＢＭＣを融解させ、一晩静置した。細胞を５×１０５個/ウェルでプレート上に播種し、続けて、５μg/mLＨＳＶ－２ ＵＬ３１ ｍＲＮＡ及び５μg/mL ＨＳＶ－２ ＵＬ３４ ｍＲＮＡで４８時間刺激した。その後、上清を回収し、Luminex装置により、ＩＦＮ－γの分泌を分析した。バックグラウンドシグナル（バッファーで刺激された細胞から発生）を各ウェルから差し引き、結果をpg/mlとして表わした。
４名のＨＳＶ－２感染者及び２名の非感染者からのＰＢＭＣを融解させ、一晩静置した。細胞を５×１０５個/ウェルでプレート上に播種し、続けて、５μg/mLＨＳＶ－２ ＵＬ３１ ｍＲＮＡ及び５μg/mL ＨＳＶ－２ ＵＬ３４ ｍＲＮＡで４８時間刺激した。その後、上清を回収し、Luminex装置により、ＩＦＮ－γの分泌を分析した。バックグラウンドシグナル（バッファーで刺激された細胞から発生）を各ウェルから差し引き、結果をpg/mlとして表わした。
実施例９
４名のＨＳＶ－２感染者及び２名の非感染者からのＰＢＭＣを融解させ、一晩静置した。細胞を５×１０５個/ウェルでプレート上に播種し、続けて、５μg/mLＨＳＶ－２ ＵＬ１１ ｍＲＮＡ、５μg/mL ＨＳＶ－２ ＵＬ１６ ｍＲＮＡ及び５μg/mLＨＳＶ－２ ＵＬ２１ ｍＲＮＡで４８時間刺激した。その後、上清を回収し、Luminex装置により、ＩＦＮ－γの分泌を分析した。バックグラウンドシグナル（バッファーで刺激された細胞から発生）を各ウェルから差し引き、結果をpg/mlとして表わした。
４名のＨＳＶ－２感染者及び２名の非感染者からのＰＢＭＣを融解させ、一晩静置した。細胞を５×１０５個/ウェルでプレート上に播種し、続けて、５μg/mLＨＳＶ－２ ＵＬ１１ ｍＲＮＡ、５μg/mL ＨＳＶ－２ ＵＬ１６ ｍＲＮＡ及び５μg/mLＨＳＶ－２ ＵＬ２１ ｍＲＮＡで４８時間刺激した。その後、上清を回収し、Luminex装置により、ＩＦＮ－γの分泌を分析した。バックグラウンドシグナル（バッファーで刺激された細胞から発生）を各ウェルから差し引き、結果をpg/mlとして表わした。
実施例１０：ｍＲＮＡトランスフェクション及びウエスタンブロット
方法
ＨＥＫ２９３Ｔ細胞を、ＲＰＭＩ培地及び１０％ ＦＢＳを含有する１２ウェルプレートに、０．４×１０６個/mlの濃度で播種し、３７℃及び５％ ＣＯ２でインキュベーションした。翌日、細胞を、Invitrogen Lipofectamine MessengerMAXトランスフェクションキットを使用してトランスフェクションした。ウェル当たりに１μg/μl ｍＲＮＡ（配列番号：２５並びに配列番号：２６、２７及び２８） ２～４．５μlを加えた。空のトランスフェクションウェルには、トランスフェクション試薬のみを加え、陰性対照ウェルには何も加えなかった。
方法
ＨＥＫ２９３Ｔ細胞を、ＲＰＭＩ培地及び１０％ ＦＢＳを含有する１２ウェルプレートに、０．４×１０６個/mlの濃度で播種し、３７℃及び５％ ＣＯ２でインキュベーションした。翌日、細胞を、Invitrogen Lipofectamine MessengerMAXトランスフェクションキットを使用してトランスフェクションした。ウェル当たりに１μg/μl ｍＲＮＡ（配列番号：２５並びに配列番号：２６、２７及び２８） ２～４．５μlを加えた。空のトランスフェクションウェルには、トランスフェクション試薬のみを加え、陰性対照ウェルには何も加えなかった。
細胞を翌日にかけて回収した。これを行うために、培地をウェルから除去し、冷やしたThermo Scientific RIPA溶解及び抽出バッファー ７０μlを７×cOmplete（ＥＤＴＡフリーのプロテアーゼインヒビターカクテル） １０μlと共に、各ウェルに加えた。プレートを４℃で、２～３分間インキュベーションし、ついで、細胞を、セルスクレーパーを使用して剥離した。細胞－バッファー混合物を１．５mlのエッペンドルフチューブに移し、氷上でインキュベーションした。５０mM ＤＴＴを含有する２×Biorad Laemliバッファー ７０μlを各チューブに加え、サンプルを９０℃で５分間煮沸した。陽性対照のために、リコンビナントタンパク質のサンプルをRIPAバッファー及びプロテイナーゼに加え、他のサンプルと同一の方法で処理した。
サンプルをゲルにロードする前に、細胞溶解用のThermo Scientific Pierce Universalヌクレアーゼ １μlをそれぞれに加えた。ついで、各サンプル ２０μlをInvitrogen Bolt ４～１２％ Bis-Tris Plusゲルにロードし、９０Ｖで４０分間ランさせた。この後、サンプルを、iBlot 2システム及びiBlot 2 mini PVDF Transfer Stacksを使用してトランスファーした。使用された設定は、以下のとおりとした：２０Ｖで１分間、２３Ｖで４分間及び２５Ｖで９０秒間。
ついで、メンブレンを０．１％ Tween-20を含有する５％ ＢＳＡ ＴＢＳ中において、４℃で一晩ブロッキングした。市販されているか又は自社で製造されたかのいずれかの一次抗体を１：１０００の濃度で、ブロッキングバッファーに加え、室温で穏やかに振とうしながら、１時間インキュベーションした。ついで、メンブレンを、０．１％ Tween-20を含有するＴＢＳで３回洗浄した。この後、二次抗体を１：５０００の濃度でブロッキングバッファーに加え、室温で穏やかに振とうしながら、１時間インキュベーションした。メンブレンを再度、０．１％ Tween-20を含有するＴＢＳで３回洗浄した。
撮像を行うために、SuperSignal West Femto Maximum Sensitivity Substrate ３００μlをメンブレンに適用し、１００mm Ｆ／２．８レンズを備えたフルフレームカメラ及び暗箱を使用して撮像した。
結果
図３（ｍＲＮＡ ＵＬ４８－配列番号：２５に由来するタンパク質のウエスタンブロット）に、ｍＲＮＡ構築物のトランスフェクション後のＵＬ４８タンパク質の発現が明確に示されている。最も高い発現は、トランスフェクションの１日後に明らかであり、ついで、時間とともに低下する。これは、本発明者らのＵＬ４８ ｍＲＮＡ構築物（例えば、配列番号：２５）の適用の結果として、タンパク質が堅牢に発現されたことを示している。
図３（ｍＲＮＡ ＵＬ４８－配列番号：２５に由来するタンパク質のウエスタンブロット）に、ｍＲＮＡ構築物のトランスフェクション後のＵＬ４８タンパク質の発現が明確に示されている。最も高い発現は、トランスフェクションの１日後に明らかであり、ついで、時間とともに低下する。これは、本発明者らのＵＬ４８ ｍＲＮＡ構築物（例えば、配列番号：２５）の適用の結果として、タンパク質が堅牢に発現されたことを示している。
図４（ｍＲＮＡ ＵＬ１１、ＵＬ１６及びＵＬ２１－配列番号：２６、２７及び２８に由来するタンパク質のウエスタンブロット）に、本発明者らのｍＲＮＡ構築物のトランスフェクション後のＵＬ１１、ＵＬ１６及びＵＬ２１の発現が明確に示されている。ＵＬ４８について観察されたのと同様に、発現は、トランスフェクションの１日後に最も高くなる。
実施例１１：ＰＢＭＣを使用した免疫原性データ
方法
ＰＢＭＣの増殖プロトコール及びＩＦＮγ ＥＬＩＳＡプロトコール
ＨＳＶ－２＋ドナーから収集したＰＢＭＣを融解させ、１０％ ＦＢＳを含有するＲＰＭＩ中において、１２ウェルプレートに１×１０６個/mlの濃度で一晩増殖させた。翌日、細胞を、Invitrogen Lipofectamine MessengerMAXトランスフェクションキットを使用してトランスフェクションした。ウェル当たりに１μg/μl ｍＲＮＡ（配列番号：２５、配列番号：２及び配列番号：３０） １～２μlを加えた。空のトランスフェクションウェルには、トランスフェクション試薬のみを加え、陰性対照ウェルには何も加えなかった。
方法
ＰＢＭＣの増殖プロトコール及びＩＦＮγ ＥＬＩＳＡプロトコール
ＨＳＶ－２＋ドナーから収集したＰＢＭＣを融解させ、１０％ ＦＢＳを含有するＲＰＭＩ中において、１２ウェルプレートに１×１０６個/mlの濃度で一晩増殖させた。翌日、細胞を、Invitrogen Lipofectamine MessengerMAXトランスフェクションキットを使用してトランスフェクションした。ウェル当たりに１μg/μl ｍＲＮＡ（配列番号：２５、配列番号：２及び配列番号：３０） １～２μlを加えた。空のトランスフェクションウェルには、トランスフェクション試薬のみを加え、陰性対照ウェルには何も加えなかった。
サンプルをトランスフェクションの３日後に収集した。上清を５００RCFで６分間遠心分離した。その後、ＩＦＮγレベルを、Invitrogen Human IFN Gamma非被覆ＥＬＩＳＡキット及びF96 Maxisorp Nunc-Immunoプレートを使用して評価した。ＯＤ４５０測定をTecan Infinite M Plexプレートリーダーで行った。
結果
ＥＬＩＳＡの結果から、プソイドウリジンＵＬ４８、ｇＤ及びＩＣＰ４ ｍＲＮＡにより誘発されたＨＳＶ２＋ドナーからのＰＢＭＣにおけるＩＦＮγの分泌が示される。これらのデータは、特異的免疫応答が適用されたＨＳＶ－２ ｍＲＮＡの発現により誘発されることを示している。陰性対照ウェルには、ｍＲＮＡ又はトランスフェクション試薬を加えなかった。ブランクウェルには、生体サンプルをＥＬＩＳＡ中に加えなかった。
ＥＬＩＳＡの結果から、プソイドウリジンＵＬ４８、ｇＤ及びＩＣＰ４ ｍＲＮＡにより誘発されたＨＳＶ２＋ドナーからのＰＢＭＣにおけるＩＦＮγの分泌が示される。これらのデータは、特異的免疫応答が適用されたＨＳＶ－２ ｍＲＮＡの発現により誘発されることを示している。陰性対照ウェルには、ｍＲＮＡ又はトランスフェクション試薬を加えなかった。ブランクウェルには、生体サンプルをＥＬＩＳＡ中に加えなかった。
図５に、ＵＬ４８修飾ｍＲＮＡとインキュベーションした際のＥＬＩＳＡを使用したＩＦＮγ放出の測定を示す。陰性対照ウェルには、ｍＲＮＡ又はトランスフェクション試薬を加えず、ブランクウェルには、生体サンプルをＥＬＩＳＡ中に加えなかった。
図６に、ＩＣＰ４及びｇＤ修飾ｍＲＮＡとインキュベーションした際のＥＬＩＳＡを使用したＩＦＮγ放出の測定を示す。空のトランスフェクションウェルには、トランスフェクション試薬のみを加え、陰性対照ウェルには、何も加えなかった。ブランクウェルには、生体サンプルをＥＬＩＳＡ中に加えなかった。
結論
ウエスタンブロット及びＰＢＭＣ実験を行って、本ｍＲＮＡ構築物の安定性及び機能性を評価した。ワクチン組成物に使用されるｍＲＮＡの設計は極めて重要であるため、それを評価した。安定性に関して、本ワクチンｍＲＮＡは、最適化された５’キャップ、５’及び３’ＵＴＲ並びにポリＡテイルを含む。ウエスタンブロット分析（図３及び図４）には、ＵＬ４８、ＵＬ１１、ＵＬ１６及びＵＬ２１ ｍＲＮＡの堅牢な発現が明らかに示されており、該構築物が安定であることが示されている。これは、前記ｍＲＮＡで構成されるワクチンの有効性に必須である。
ウエスタンブロット及びＰＢＭＣ実験を行って、本ｍＲＮＡ構築物の安定性及び機能性を評価した。ワクチン組成物に使用されるｍＲＮＡの設計は極めて重要であるため、それを評価した。安定性に関して、本ワクチンｍＲＮＡは、最適化された５’キャップ、５’及び３’ＵＴＲ並びにポリＡテイルを含む。ウエスタンブロット分析（図３及び図４）には、ＵＬ４８、ＵＬ１１、ＵＬ１６及びＵＬ２１ ｍＲＮＡの堅牢な発現が明らかに示されており、該構築物が安定であることが示されている。これは、前記ｍＲＮＡで構成されるワクチンの有効性に必須である。
安定性に加えて、免疫応答をワクチン成分により誘発することができることも確認されている。その意味で、ワクチンｍＲＮＡを、１－メチル－プソイドウリジンで修飾された残基を使用して最適化して、生得的な非特異的免疫応答を低減した。実際に、ＩＦＮγ ＥＬＩＳＡの結果から、機能的なＵＬ４８、ｇＤ及びＩＣＰ４ ｍＲＮＡとのインキュベーションにより、この免疫因子が特異的に放出されることを示されている（図５及び図６）。
当業者であれば、本発明が、目的を遂行し、言及された目標及び利点並びにそれらに固有のものを得るのによく適合していることを容易に理解するであろう。さらに、当業者であれば、本発明の範囲及び精神から逸脱することなく、本明細書に開示された本発明に対して、種々の置換及び修飾を行うことができることが容易に明らかであろう。本明細書に記載された組成物、方法、手法、処理、分子及び特定の化合物は、現在のところ、特定の実施態様の代表的なものであり、例示的なものであり、本発明の範囲を限定することを意図するものではない。本発明の精神の範囲内に包含される当業者には、特許請求の範囲により定義されるそこでの変更及び他の使用が生じるであろう。本明細書における既発表文献の列記又は検討は、必ずしも、その文献が技術水準の一部であること又は一般知識であることを認めるものとして解釈されるべきではない。
本明細書に例示的に記載された発明を本明細書に具体的に開示されていない任意の１つ以上の要素、１つ以上の限定がない場合でも、適切に実施することができる。このため、例えば、「含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含むこと（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「含有すること（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」等の用語は、限定することなく拡大的に読まれるものとする。さらに、本明細書で利用された用語及び表現は、説明の用語として使用されたものであり、限定の用語として使用されたものではなく、このような用語及び表現の使用において、示され、記載された特徴又はその一部の任意の均等物を排除する意図はないが、特許請求された本発明の範囲内で、種々の修飾が可能であることが認識される。このため、本発明は、例示的な実施態様及び任意の特徴により具体的に開示されているが、本明細書で具体化される発明の修飾及び変形を当業者に頼ることができ、このような修飾及び変形は、本発明の範囲内であると考えられると理解されるべきである。
本発明は、本明細書において広範かつ一般的に記載されている。一般的な開示に含まれる狭義の種及び亜属の各グループも、本発明の一部を構成する。これは、切り取られる情報が本明細書に具体的に言及されているか否かにかかわらず、上位概念（ｇｅｎｕｓ）から任意の主題を除去する但し書き又は否定的限定を伴う本発明の一般的記載を含む。本明細書で言及された特許出願及び科学刊行物を含む全ての文書は、あらゆる目的のために参照により本明細書に組み入れられる。
他の実施態様は、下記特許請求の範囲に含まれる。加えて、本発明の特徴又は態様が、マーカッシュ群の観点から記載されている場合、当業者であれば、本発明が、それによりマーカッシュ群の任意の個々のメンバー又はメンバーのサブグループの観点からも記載されていることを認識するであろう。
Claims (15)
- １種以上のｍＲＮＡを含むワクチン組成物であって、
前記ｍＲＮＡはそれぞれ、
（ｉ）ＵＬ４８、
（ｉｉ）ＵＬ４８及びＵＬ４９、
（ｉｉｉ）ＵＬ１１、ＵＬ１６及びＵＬ２１又は
（ｉｖ）ＵＬ３１及びＵＬ３４
からなる群より選択される単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）構造タンパク質又はその免疫原性フラグメントをコードする、
ワクチン組成物。 - ＵＬ４８が、配列番号：６のアミノ酸配列と８０％以上同一なアミノ酸配列を有し、ＵＬ４９が、配列番号：７のアミノ酸配列と６２％以上同一なアミノ酸配列を有し、ＵＬ１１が、配列番号：１のアミノ酸配列と７５％以上同一なアミノ酸配列を有し、ＵＬ１６が、配列番号：２のアミノ酸配列と７２％以上同一なアミノ酸配列を有し、ＵＬ２１が、配列番号：３のアミノ酸配列と８０％以上同一なアミノ酸配列を有し、ＵＬ３１が、配列番号：８のアミノ酸配列と８５％以上同一なアミノ酸配列を有し、ＵＬ３４が、配列番号：８のアミノ酸配列と７０％以上同一なアミノ酸配列を有する、請求項１記載のワクチン組成物。
- 前記ＨＳＶ ｍＲＮＡがそれぞれ、該ワクチン組成物の形態で対象に投与された場合、免疫応答を誘発可能である、請求項１又は２記載のワクチン組成物。
- ａ）ＨＳＶ糖タンパク質Ｄ（ｇＤ）又は配列番号：１１のアミノ酸配列と７０％以上同一なアミノ酸配列を有するその免疫原性フラグメント、ｂ）ＨＳＶ糖タンパク質Ｂ（ｇＢ）又は配列番号：１０のアミノ酸配列と７０％以上同一なアミノ酸配列を有するその免疫原性フラグメント及びｃ）ＨＳＶ糖タンパク質Ｅ（ｇＥ）又は配列番号：４のアミノ酸配列と７０％以上同一なもしくは配列番号：５のアミノ酸配列と８０％以上同一なアミノ酸配列を有するその免疫原性フラグメント又はそれら任意の組み合わせからなる群より選択される単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）糖タンパク質をコードする少なくとも１種のｍＲＮＡをさらに含む、請求項１～３のいずれか一項記載のワクチン組成物。
- 以下：
（ｉ）ＵＬ４８並びにｇＤ及び／もしくはｇＢ、場合により、ＩＣＰ４、
（ｉｉ）ｇＥを伴うＵＬ４８及びＵＬ４９、
（ｉｉｉ）ｇＥ、ｇＤ及び／もしくはｇＢを伴うＵＬ１１、ＵＬ１６及びＵＬ２１又は
（ｉｖ）ｇＤ及び／もしくはｇＢを伴うＵＬ３１及びＵＬ３４
を含む、請求項４記載のワクチン組成物。 - 単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）糖タンパク質をコードする前記少なくとも１種のｍＲＮＡが、１つ以上のプソイドウリジン残基を含むヌクレオシド修飾ｍＲＮＡであり、好ましくは、ここで、１つ以上のプソイドウリジン残基が、ｍ１Ψ（１－メチルプソイドウリジン）、ｍ１ａｃｐ３Ψ（１－メチル－３－（３－アミノ－５－カルボキシプロピル）プソイドウリジン）、Ψｍ（２’－０－メチルプソイドウリジン）、ｍ５Ｄ（５－メチルジヒドロウリジン）、ｍ３Ψ（３－メチルプソイドウリジン）又はそれらの任意の組み合わせを含む、請求項４又は５記載のワクチン組成物。
- 前記少なくとも１種のｍＲＮＡが、ＨＳＶ－１ポリペプチドをコードする、請求項１～６のいずれか一項記載のワクチン組成物。
- 前記少なくとも１種のｍＲＮＡが、ＨＳＶ－２ポリペプチドをコードする、請求項１～７のいずれか一項記載のワクチン組成物。
- （ｉ）ＨＳＶ－２系統３３３由来のアミノ酸２６～３３１もしくは別のＨＳＶ系統由来の相同配列を含むＨＳＶ ｇＤの前記免疫原性フラグメントをコードする前記ヌクレオシド修飾ｍＲＮＡであり、好ましくは、ここで、前記ヌクレオシド修飾ｍＲＮＡの核酸配列が、配列番号：１２に記載されているとおりでありかつ／又は
（ｉｉ）ＨＳＶ－２系統２．１２由来のアミノ酸２４～４０５もしくは別のＨＳＶ系統由来の相同配列を含むＨＳＶ ｇＥの前記免疫原性フラグメントをコードする前記ヌクレオシド修飾ｍＲＮＡであり、好ましくは、ここで、前記ヌクレオシド修飾ｍＲＮＡの核酸配列が、配列番号：１３に記載されているとおりである、請求項６記載のワクチン組成物。 - 前記ｍＲＮＡのうちの１種以上が、
（ｉ）好ましくは、配列番号：２５～３０のうちの１種以上に係るポリＡテイル、
（ｉｉ）ｍ７ＧｐｐｐＧキャップ、３’－０－メチル－ｍ７ＧｐｐｐＧキャップもしくはアンチリバースキャップアナログ、
（ｉｉｉ）キャップ非依存性翻訳エンハンサー並びに／又は
（ｉｖ）好ましくは、配列番号：２５～３０のうちの１種以上に係る、翻訳を亢進する５’及び３’非翻訳領域
をさらに含む、請求項１～９のいずれか一項記載のワクチン組成物。 - 前記ｍＲＮＡのうちの１種以上が、ナノ粒子、脂質、ポリマー、コレステロール又は細胞浸透性ペプチド、好ましくは、リポソームナノ粒子にカプセル化されている、請求項１～１０のいずれか一項記載のワクチン組成物。
- 対象における単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）感染を治療し又は予防するのに使用するための、請求項１～１１のいずれか一項記載のワクチン組成物。
- 前記ＨＳＶ感染が、ＨＳＶ－１感染、ＨＳＶ－２感染、一次ＨＳＶ感染、一次ＨＳＶ感染後の再燃、再発もしくはＨＳＶ口唇炎、潜伏ＨＳＶ感染の再活性化、ＨＳＶ脳炎、ＨＳＶ新生児感染、性器ＨＳＶ感染又は口内ＨＳＶ感染からなる群より選択される、請求項１２記載の使用のためのワクチン組成物。
- 該ワクチン組成物が、筋肉内投与、皮下投与、皮内投与、鼻腔内投与、膣内投与、直腸内投与又は局所投与用であり、好ましくは、ここで、該組成物が、注射用ワクチンである、請求項１３又は１４記載の使用のためのワクチン組成物。
- 薬学的に許容し得る注射用担体又はアジュバントをさらに含む、請求項１～１４のいずれか一項記載のワクチン組成物。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP21162170 | 2021-03-11 | ||
| EP21162170.1 | 2021-03-11 | ||
| PCT/EP2022/056345 WO2022189634A1 (en) | 2021-03-11 | 2022-03-11 | Vaccine compositions and methods for treating hsv |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2024512394A true JP2024512394A (ja) | 2024-03-19 |
Family
ID=74873497
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2023555311A Pending JP2024512394A (ja) | 2021-03-11 | 2022-03-11 | Ｈｓｖを処置するためのワクチン組成物及び方法 |
Country Status (9)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20240156951A1 (ja) |
| EP (1) | EP4304641A1 (ja) |
| JP (1) | JP2024512394A (ja) |
| KR (1) | KR20230156744A (ja) |
| CN (1) | CN117295516A (ja) |
| AU (1) | AU2022233957A1 (ja) |
| BR (1) | BR112023018282A2 (ja) |
| CA (1) | CA3211277A1 (ja) |
| WO (1) | WO2022189634A1 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2024131664A1 (zh) * | 2022-12-19 | 2024-06-27 | 南京奥罗生物科技有限公司 | 单纯疱疹病毒疫苗及其应用 |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| BR112018008090A2 (pt) * | 2015-10-22 | 2018-11-13 | Modernatx Inc | vacina de vírus do herpes simplex. |
| JP2019512501A (ja) * | 2016-03-14 | 2019-05-16 | レッドバイオテック・アーゲーＲｅｄｂｉｏｔｅｃ Ａｇ | Ｈｓｖを処置するための手段及び方法 |
| EP4242223A3 (en) * | 2017-08-17 | 2024-03-13 | The Trustees of The University of Pennsylvania | Modified mrna vaccines encoding herpes simplex virus glycoproteins and uses thereof |
| CA3121430A1 (en) * | 2018-12-14 | 2020-06-18 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Heterologous prime boost vaccine compositions and methods |
-
2022
- 2022-03-11 WO PCT/EP2022/056345 patent/WO2022189634A1/en active Application Filing
- 2022-03-11 BR BR112023018282A patent/BR112023018282A2/pt unknown
- 2022-03-11 CN CN202280034408.3A patent/CN117295516A/zh active Pending
- 2022-03-11 JP JP2023555311A patent/JP2024512394A/ja active Pending
- 2022-03-11 US US18/280,908 patent/US20240156951A1/en active Pending
- 2022-03-11 KR KR1020237034532A patent/KR20230156744A/ko unknown
- 2022-03-11 EP EP22714389.8A patent/EP4304641A1/en active Pending
- 2022-03-11 CA CA3211277A patent/CA3211277A1/en active Pending
- 2022-03-11 AU AU2022233957A patent/AU2022233957A1/en active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN117295516A (zh) | 2023-12-26 |
| AU2022233957A1 (en) | 2023-10-12 |
| CA3211277A1 (en) | 2022-09-15 |
| EP4304641A1 (en) | 2024-01-17 |
| BR112023018282A2 (pt) | 2023-12-12 |
| AU2022233957A9 (en) | 2023-10-26 |
| US20240156951A1 (en) | 2024-05-16 |
| KR20230156744A (ko) | 2023-11-14 |
| WO2022189634A1 (en) | 2022-09-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US11998596B2 (en) | Immunogenic compositions and vaccines comprising African swine fever virus peptides and proteins and uses thereof | |
| US10653771B2 (en) | Vaccines against herpes simplex virus type 2: compositions and methods for eliciting an immune response | |
| US20070196389A1 (en) | Viral gene products and methods for vaccination to prevent viral associated diseases | |
| DK2516629T3 (en) | Herpes simplex virus vaccines | |
| US9782474B2 (en) | Vaccines against herpes simplex virus type 2: compositions and methods for eliciting an immune response | |
| Wachsman et al. | A growth and latency compromised herpes simplex virus type 2 mutant (ICP10ΔPK) has prophylactic and therapeutic protective activity in guinea pigs | |
| JP2024512394A (ja) | Ｈｓｖを処置するためのワクチン組成物及び方法 | |
| AU2017235361B2 (en) | Means and methods for treating HSV | |
| KR20070050465A (ko) | 경구 투여 백신 | |
| EP2782597B1 (en) | Nucleic acid vaccines against herpes simplex virus type 2: compositions and methods for eliciting an immune response | |
| WO2006004878A1 (en) | Attenuated herpes simplex virus type-2, vectors thereof and immunogenic compositions thereof | |
| US20240156954A1 (en) | Vaccine compositions and methods for treating hsv | |
| WO2024152845A1 (zh) | 抗SARS-CoV-2或突变体mRNA疫苗和重组蛋白亚单位疫苗制备及应用 | |
| LU92997B1 (en) | Means and methods for treating HSV | |
| CN118217388A (zh) | 单纯疱疹病毒疫苗及其应用 | |
| EP4366769A1 (en) | Vaccines for intracellular pathogens and methods of production | |
| Nagamine | Characterization of a novel gammaherpesvirus isolated from a black-tailed prairie dog (Cynomys ludovicianus) |