JP2024512394A - Hsvを処置するためのワクチン組成物及び方法 - Google Patents

Hsvを処置するためのワクチン組成物及び方法 Download PDF

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Abstract

本発明は、HSVの処置又はHSVに対するワクチン接種のための、単純ヘルペスウイルス(HSV)構造タンパク質又はその免疫原性フラグメントをコードする1種以上のmRNAを含む、ワクチン組成物に関する。

Description

関連出願の相互参照
本出願は、2021年3月11日に欧州特許庁に出願された欧州特許出願第21162170号の優先権を主張する。同出願の全内容は、あらゆる目的で本明細書に組み入れられる。
配列表
本出願は、コンピュータ可読形式の配列表を含有する。同配列表は、参照により本明細書に組み入れられる。
発明の分野
本発明は、HSVの処置又はHSVに対するワクチン接種のための、単純ヘルペスウイルス(HSV)構造タンパク質又はその免疫原性フラグメントをコードする1種以上のmRNAを含む、ワクチン組成物に関する。
背景
単純ヘルペスウイルスは、ヘルペスウイルス科として公知のウイルス科のウイルス属である。ヒトに感染する種は、一般的には、単純ヘルペスウイルス1(HSV-1)及び単純ヘルペスウイルス2(HSV-2)として公知である。ここで、それらの正式名称はそれぞれ、ヒトヘルペスウイルス1(HHV-1)及びヒトヘルペスウイルス2(HHV-2)である。HSV-1の初感染は、典型的には、小児期又は青年期に起こり、生涯持続する。HSV-1の感染率は、全世界で40%~80%であり、社会経済的地位の低い人ほど高い。多くの場合、HSV-1に暴露された人は、無症候性の血清転換を示す。ただし、初感染が重症化する場合もあり、1~2mmの水疱が広範囲に生じ、脱水に至るほど飲食に支障をきたす重度の不快感を伴い、それが10~14日間持続し、接種後1~26日で発症する。再発性口唇ヘルペスには、米国人口の約3分の1が罹患し、これらの患者は、典型的には、1年に1~6回のエピソードを経験する。紅斑上の丘疹は、数時間以内に小水疱になり、その後、72~96時間以内に潰瘍化、痂皮化、治癒の段階を経て進行する(Cernik et al., 2008, Arch Intern Med., vol. 168, pp. 1137-1144)。2003年の世界推定では、人口の16.2%がHSV-2に感染しており、性器ヘルペスの主な原因となっている。ウイルスは、潜伏期として公知の非複製状態に入ることにより、免疫系によるクリアランスをうまく回避することができるため、生涯感染することになる。潜伏期からの周期的な再活性化が可能であり、初感染部位からがウイルスが放出される。ヘルペスによる性器病変は、多くの場合、非常に痛みを伴い、相当な精神的罹患をもたらす場合がある。ウイルスは、出産時に母子感染する場合もある。処置しなければ、播種性疾患の乳児の80%が死亡し、生存している乳児は、多くの場合、脳に障害を受ける。加えて、性器ヘルペスは、HIV感染リスクを2~3倍、性行為ごとのHIV感染リスクを最大5倍増加させ、HSV-2有病率の高い集団では、新たなHIV感染の40~60%を占める場合がある(Looker et al., 2008, Bulletin of the World Health Organization, vol. 86, pp. 805-812)。
現在、合成非環式プリン-ヌクレオシドアナログであるアシクロビルが、HSV感染のための標準治療剤であり、症状の抑制に大いに役立っている。前駆体薬剤であるバラシクロビル(アシクロビルに変換される)及びファムシクロビル(ペンシクロビルに変換される)が認可されており、それぞれ、アシクロビル及びペンシクロビルより経口バイオアベイラビリティが良好である。利用可能な薬剤は、安全性に優れている。これらは、ウイルスのチミジンキナーゼにより、ウイルス感染細胞内でのみ活性薬剤に変換されるためである。しかしながら、HSVは、チミジンキナーゼをコードするウイルス遺伝子における突然変異により、チミジンキナーゼ欠損変異型が発生し又はアシクロビルをリン酸化することができないチミジンキナーゼを有する変異型を選択することにより、アシクロビルに対する耐性を獲得する場合がある。アシクロビルに耐性を示す臨床分離HSVはほとんど、チミジンキナーゼを欠損しているが、DNAポリメラーゼの変化も一部に検出されている。HSVは、活性化する前に、数か月から数年間神経細胞内に潜伏する場合があるため、このような治療法をHSVにより引き起こされる症状の処置に使用することができるが、ウイルスの周期的な再活性化を避けることはできない。
したがって、HSVと闘う最も効果的で経済的な方法は、ウイルスの初感染及び/又は周期的な再活性化を予防するワクチンであろう。過去数十年間、このようなワクチンの開発に多大な努力が費やされてきた。しかしながら、これまでのところ、強力なHSVワクチンを開発しようとする試みは、限られた数の抗原に焦点を当てている。これらは、臨床試験において成績が芳しくなかった。したがって、HSVに対するワクチンが急務となっている。近年、HSV糖タンパク質のヌクレオシド修飾mRNAに基づくHSVワクチンを開発する試みがなされているが(US第2020/0276300号)。しかしながら、これらは未だに、開発の初期段階にある。更なるHSVワクチン接種の必要性が残されている。
発明の概要
本発明は、この必要性に対処し、1種以上のmRNAを含み、ここで、前記mRNAがそれぞれ、UL48;UL48及びUL49;UL11、UL16及びUL21又はUL31及びUL34からなる群より選択される単純ヘルペスウイルス(HSV)構造タンパク質又はその免疫原性フラグメントをコードする、新規なワクチン組成物を提供する。具体的には、本発明のワクチン組成物において、mRNAは、配列番号:6のアミノ酸配列と80%以上同一なアミノ酸配列を有するUL48、配列番号:7のアミノ酸配列と62%以上同一なアミノ酸配列を有するUL49、配列番号:1のアミノ酸配列と75%以上同一なアミノ酸配列を有するUL11、配列番号:2のアミノ酸配列と72%以上同一なアミノ酸配列を有するUL16、配列番号:3のアミノ酸配列と80%以上同一なアミノ酸配列を有するUL21、配列番号:8のアミノ酸配列と85%以上同一なアミノ酸配列を有するUL31及び配列番号:8のアミノ酸配列と70%以上同一なアミノ酸配列を有するUL34をコードする。
好ましくは、本発明のワクチン組成物におけるHSV mRNAはそれぞれ、ワクチン組成物の形態で対象に投与された場合、免疫応答を誘発可能である。
加えて、本発明のワクチン組成物は、a)HSV糖タンパク質D(gD)又は配列番号:11のアミノ酸配列と70%以上同一なアミノ酸配列を有するその免疫原性フラグメント、b)HSV糖タンパク質B(gB)又は配列番号:10のアミノ酸配列と70%以上同一なアミノ酸配列を有するその免疫原性フラグメント及びc)HSV糖タンパク質E(gE)又は配列番号:4のアミノ酸配列と70%以上同一なもしくは配列番号:5のアミノ酸配列と80%以上同一なアミノ酸配列を有するその免疫原性フラグメント又はそれら任意の組み合わせからなる群より選択される単純ヘルペスウイルス(HSV)糖タンパク質をコードする1種以上のmRNAをさらに含むことができる。
具体的な好ましいワクチン組成物は、糖タンパク質gD及び/又はgBを伴う構造タンパク質UL48、糖タンパク質gEを伴う構造タンパク質UL48及びUL49、糖タンパク質gE、gD及び/又はgBを伴う構造タンパク質UL11、UL16及びUL21並びに糖タンパク質gD及び/又はgBを伴う構造タンパク質UL31及びUL34を含む。
本発明のワクチン組成物は、場合により、1つ以上のプソイドウリジン残基を含むヌクレオシド修飾mRNAである単純ヘルペスウイルス(HSV)糖タンパク質をコードするmRNAを含むことができ、好ましくは、ここで、1つ以上のプソイドウリジン残基は、mΨ(1-メチルプソイドウリジン)、macpΨ(1-メチル-3-(3-アミノ-5-カルボキシプロピル)プソイドウリジン)、Ψm(2’-0-メチルプソイドウリジン)、mD(5-メチルジヒドロウリジン)、mΨ(3-メチルプソイドウリジン)又はそれらの任意の組み合わせを含む。
ワクチン組成物のこれらの具体的な実施態様では、糖タンパク質の前記免疫原性フラグメントをコードするヌクレオシド修飾mRNAは、
(i)HSV-2系統333由来のアミノ酸26~331又は別のHSV系統由来の相同配列を含むHSV gDの前記免疫原性フラグメントをコードするヌクレオシド修飾mRNA(好ましくは、ここで、前記ヌクレオシド修飾mRNAの核酸配列は、配列番号:12に記載されているとおりである)及び
(ii)HSV-2系統2.12由来のアミノ酸24~405又は別のHSV系統由来の相同配列を含むHSV gEの前記免疫原性フラグメントをコードする前記ヌクレオシド修飾mRNA(好ましくは、ここで、前記ヌクレオシド修飾mRNAの核酸配列は、配列番号:13に記載されているとおりである)
からなる群より選択される。
さらに、本発明のワクチン組成物におけるmRNAは、HSV-1ポリペプチド、HSV-2ポリペプチド又はそれらの混合物をコードすることができる。
加えて、ワクチン組成物におけるmRNAはそれぞれ、ポリAテイル、m7GpppGキャップ、3’-0-メチル-m7GpppGキャップもしくはアンチリバースキャップアナログ、キャップ非依存性翻訳エンハンサー及び/又は翻訳を亢進する5’及び3’非翻訳領域をさらに含むことができかつ/又はコドン最適化されている(例えば、配列番号:25~30)。
さらに、本発明のワクチン組成物において、mRNAは、ナノ粒子、脂質、ポリマー、コレステロール又は細胞浸透性ペプチド、好ましくは、リポソームナノ粒子にカプセル化されている場合がある。
本発明のワクチン組成物を対象における単純ヘルペスウイルス(HSV)感染を治療し又は予防するのに使用することができる。前記HSV感染をHSV-1感染、HSV-2感染、一次HSV感染、一次HSV感染後の再燃、再発もしくはHSV口唇炎、潜伏HSV感染の再活性化、HSV脳炎、HSV新生児感染、性器HSV感染又は口内HSV感染からなる群より選択することができる。
本発明のワクチン組成物を筋肉内投与、皮下投与、皮内投与、鼻腔内投与、膣内投与、直腸内投与又は局所投与用に製剤化することができ、好ましくは、ここで、該組成物は、注射用ワクチンであり、場合により、薬学的に許容し得る注射用担体又はアジュバントを含む。
本発明のワクチン組成物を医薬品としてかつ/又は治療に使用することができる。
本発明のワクチン組成物を単純ヘルペスウイルス(HSV)感染を治療しかつ/又は予防するための方法に使用することができる。
配列表の概要
配列番号:1は、HSV-2のUL11タンパク質の例示的なアミノ酸配列である。
配列番号:2は、HSV-2のUL16タンパク質の例示的なアミノ酸配列である。
配列番号:3は、HSV-2のUL21タンパク質の例示的なアミノ酸配列である。
配列番号:4は、HSV-2のgEタンパク質の例示的なアミノ酸配列である。
配列番号:5は、HSV-2のgEタンパク質の細胞質テイルの例示的なアミノ酸配列である。
配列番号:6は、HSV-2のUL48タンパク質の例示的なアミノ酸配列である。
配列番号:7は、HSV-2のUL49タンパク質の例示的なアミノ酸配列である。
配列番号:8は、HSV-2のUL31タンパク質の例示的なアミノ酸配列である。
配列番号:9は、HSV-2のUL34タンパク質の例示的なアミノ酸配列である。
配列番号:10は、HSV-2のgBタンパク質の例示的なアミノ酸配列である。
配列番号:11は、HSV-2のgDタンパク質の例示的なアミノ酸配列である。
配列番号:12は、HSV-2ヌクレオシド修飾された(全てのウリジン残基が、1-メチル-プソイドウリジンである)例示的なgD RNAヌクレオチド配列フラグメントである。
配列番号:13は、HSV-2ヌクレオシド修飾された(全てのウリジン残基が、1-メチル-プソイドウリジンである)例示的なgE RNAヌクレオチド配列フラグメントである。
配列番号:14は、HSV-2のUL48の例示的なRNA配列である。
配列番号:15は、HSV-2のUL49の例示的なRNA配列である。
配列番号:16は、HSV-2のUL11の例示的なRNA配列である。
配列番号:17は、HSV-2のUL16の例示的なRNA配列である。
配列番号:18は、HSV-2のUL21の例示的なRNA配列である。
配列番号:19は、HSV-2のUL31の例示的なRNA配列である。
配列番号:20は、HSV-2のUL34の例示的なRNA配列である。
配列番号:21は、HSV-2のgEタンパク質の細胞質テイルの例示的なRNA配列である。
配列番号:22は、HSV-2のgDの例示的なRNA配列である。
配列番号:23は、HSV-2のgBの例示的なRNA配列である。
配列番号:24は、HSV-2のgEの例示的なRNA配列である。
配列番号:25は、例示的なUTR及び例示的なポリAテイルを含む、HSV-2のUL48の例示的なコドン最適化RNA配列であり、全てのウリジン残基が、1-メチル-プソイドウリジンである。
配列番号:26は、例示的なUTR及び例示的なポリAテイルを含む、HSV-2のUL11の例示的なコドン最適化RNA配列であり、全てのウリジン残基が、1-メチル-プソイドウリジンである。
配列番号:27は、例示的なUTR及び例示的なポリAテイルを含む、HSV-2のUL16の例示的なコドン最適化された修飾(1-メチル-プソイドウリジン)RNA配列であり、全てのウリジン残基が、1-メチル-プソイドウリジンである。
配列番号:28は、例示的なUTR及び例示的なポリAテイルを含む、HSV-2のUL16の例示的なコドン最適化された修飾(1-メチル-プソイドウリジン)RNA配列であり、全てのウリジン残基が、1-メチル-プソイドウリジンである。
配列番号:29は、例示的なUTR及び例示的なポリAテイルを含む、HSV-2のgDの例示的なコドン最適化された修飾(1-メチル-プソイドウリジン)RNA配列であり、全てのウリジン残基が、1-メチル-プソイドウリジンである。
配列番号:30は、例示的なUTR及び例示的なポリAテイルを含む、HSV-2のICP4の例示的なコドン最適化された修飾(1-メチル-プソイドウリジン)RNA配列であり、全てのウリジン残基が、1-メチル-プソイドウリジンである。
配列番号:31は、HSV-2のICP4タンパク質の例示的なアミノ酸配列である(GenBankアクセッション番号QIH12398.1)。
図1は、下記タンパク質:HSV-2のUL11タンパク質、HSV-2のUL16タンパク質、HSV-2のUL21タンパク質、HSV-2のgEタンパク質、HSV-2のgEタンパク質の細胞質テイル、HSV-2のUL48タンパク質、HSV-2のUL49タンパク質、HSV-2のUL31タンパク質、HSV-2のUL34タンパク質、HSV-2のgBタンパク質、HSV-2のgDタンパク質の対応する配列番号を有する例示的なアミノ酸配列を示す。 図1は、下記タンパク質:HSV-2のUL11タンパク質、HSV-2のUL16タンパク質、HSV-2のUL21タンパク質、HSV-2のgEタンパク質、HSV-2のgEタンパク質の細胞質テイル、HSV-2のUL48タンパク質、HSV-2のUL49タンパク質、HSV-2のUL31タンパク質、HSV-2のUL34タンパク質、HSV-2のgBタンパク質、HSV-2のgDタンパク質の対応する配列番号を有する例示的なアミノ酸配列を示す。 図1は、下記タンパク質:HSV-2のUL11タンパク質、HSV-2のUL16タンパク質、HSV-2のUL21タンパク質、HSV-2のgEタンパク質、HSV-2のgEタンパク質の細胞質テイル、HSV-2のUL48タンパク質、HSV-2のUL49タンパク質、HSV-2のUL31タンパク質、HSV-2のUL34タンパク質、HSV-2のgBタンパク質、HSV-2のgDタンパク質の対応する配列番号を有する例示的なアミノ酸配列を示す。 図2は、下記ヌクレオチド:HSV-2のヌクレオシド修飾されたgD RNAヌクレオチド配列フラグメント、HSV-2のヌクレオシド修飾されたgE RNAヌクレオチド配列フラグメント、HSV-2のUL48 RNA配列、HSV-2のUL49 RNA配列、HSV-2のUL11 RNA配列、HSV-2のUL16 RNA配列、HSV-2のUL21 RNA配列、HSV-2のUL31 RNA配列、HSV-2のUL34 RNA配列、HSV-2のgEタンパク質の細胞質テイル RNA配列、HSV-2のgD RNA配列、HSV-2のgB RNA配列、HSV-2のgE RNA配列、HSV-2のUL48 UTR及びポリAを含むコドン最適化RNA配列、HSV-2のUL11 UTR及びポリAを含むコドン最適化RNA配列、HSV-2のUL16 UTR及びポリAを含むコドン最適化RNA配列、HSV-2のUL21 UTR及びポリAを含むコドン最適化RNA配列、HSV-2のgD UTR及びポリAを含むコドン最適化RNA配列、HSV-2のICP4 UTR及びポリAを含むコドン最適化RNA配列の対応する配列番号を有する例示的なヌクレオチド配列を示す。 図2は、下記ヌクレオチド:HSV-2のヌクレオシド修飾されたgD RNAヌクレオチド配列フラグメント、HSV-2のヌクレオシド修飾されたgE RNAヌクレオチド配列フラグメント、HSV-2のUL48 RNA配列、HSV-2のUL49 RNA配列、HSV-2のUL11 RNA配列、HSV-2のUL16 RNA配列、HSV-2のUL21 RNA配列、HSV-2のUL31 RNA配列、HSV-2のUL34 RNA配列、HSV-2のgEタンパク質の細胞質テイル RNA配列、HSV-2のgD RNA配列、HSV-2のgB RNA配列、HSV-2のgE RNA配列、HSV-2のUL48 UTR及びポリAを含むコドン最適化RNA配列、HSV-2のUL11 UTR及びポリAを含むコドン最適化RNA配列、HSV-2のUL16 UTR及びポリAを含むコドン最適化RNA配列、HSV-2のUL21 UTR及びポリAを含むコドン最適化RNA配列、HSV-2のgD UTR及びポリAを含むコドン最適化RNA配列、HSV-2のICP4 UTR及びポリAを含むコドン最適化RNA配列の対応する配列番号を有する例示的なヌクレオチド配列を示す。 図2は、下記ヌクレオチド:HSV-2のヌクレオシド修飾されたgD RNAヌクレオチド配列フラグメント、HSV-2のヌクレオシド修飾されたgE RNAヌクレオチド配列フラグメント、HSV-2のUL48 RNA配列、HSV-2のUL49 RNA配列、HSV-2のUL11 RNA配列、HSV-2のUL16 RNA配列、HSV-2のUL21 RNA配列、HSV-2のUL31 RNA配列、HSV-2のUL34 RNA配列、HSV-2のgEタンパク質の細胞質テイル RNA配列、HSV-2のgD RNA配列、HSV-2のgB RNA配列、HSV-2のgE RNA配列、HSV-2のUL48 UTR及びポリAを含むコドン最適化RNA配列、HSV-2のUL11 UTR及びポリAを含むコドン最適化RNA配列、HSV-2のUL16 UTR及びポリAを含むコドン最適化RNA配列、HSV-2のUL21 UTR及びポリAを含むコドン最適化RNA配列、HSV-2のgD UTR及びポリAを含むコドン最適化RNA配列、HSV-2のICP4 UTR及びポリAを含むコドン最適化RNA配列の対応する配列番号を有する例示的なヌクレオチド配列を示す。 図2は、下記ヌクレオチド:HSV-2のヌクレオシド修飾されたgD RNAヌクレオチド配列フラグメント、HSV-2のヌクレオシド修飾されたgE RNAヌクレオチド配列フラグメント、HSV-2のUL48 RNA配列、HSV-2のUL49 RNA配列、HSV-2のUL11 RNA配列、HSV-2のUL16 RNA配列、HSV-2のUL21 RNA配列、HSV-2のUL31 RNA配列、HSV-2のUL34 RNA配列、HSV-2のgEタンパク質の細胞質テイル RNA配列、HSV-2のgD RNA配列、HSV-2のgB RNA配列、HSV-2のgE RNA配列、HSV-2のUL48 UTR及びポリAを含むコドン最適化RNA配列、HSV-2のUL11 UTR及びポリAを含むコドン最適化RNA配列、HSV-2のUL16 UTR及びポリAを含むコドン最適化RNA配列、HSV-2のUL21 UTR及びポリAを含むコドン最適化RNA配列、HSV-2のgD UTR及びポリAを含むコドン最適化RNA配列、HSV-2のICP4 UTR及びポリAを含むコドン最適化RNA配列の対応する配列番号を有する例示的なヌクレオチド配列を示す。 図2は、下記ヌクレオチド:HSV-2のヌクレオシド修飾されたgD RNAヌクレオチド配列フラグメント、HSV-2のヌクレオシド修飾されたgE RNAヌクレオチド配列フラグメント、HSV-2のUL48 RNA配列、HSV-2のUL49 RNA配列、HSV-2のUL11 RNA配列、HSV-2のUL16 RNA配列、HSV-2のUL21 RNA配列、HSV-2のUL31 RNA配列、HSV-2のUL34 RNA配列、HSV-2のgEタンパク質の細胞質テイル RNA配列、HSV-2のgD RNA配列、HSV-2のgB RNA配列、HSV-2のgE RNA配列、HSV-2のUL48 UTR及びポリAを含むコドン最適化RNA配列、HSV-2のUL11 UTR及びポリAを含むコドン最適化RNA配列、HSV-2のUL16 UTR及びポリAを含むコドン最適化RNA配列、HSV-2のUL21 UTR及びポリAを含むコドン最適化RNA配列、HSV-2のgD UTR及びポリAを含むコドン最適化RNA配列、HSV-2のICP4 UTR及びポリAを含むコドン最適化RNA配列の対応する配列番号を有する例示的なヌクレオチド配列を示す。 図2は、下記ヌクレオチド:HSV-2のヌクレオシド修飾されたgD RNAヌクレオチド配列フラグメント、HSV-2のヌクレオシド修飾されたgE RNAヌクレオチド配列フラグメント、HSV-2のUL48 RNA配列、HSV-2のUL49 RNA配列、HSV-2のUL11 RNA配列、HSV-2のUL16 RNA配列、HSV-2のUL21 RNA配列、HSV-2のUL31 RNA配列、HSV-2のUL34 RNA配列、HSV-2のgEタンパク質の細胞質テイル RNA配列、HSV-2のgD RNA配列、HSV-2のgB RNA配列、HSV-2のgE RNA配列、HSV-2のUL48 UTR及びポリAを含むコドン最適化RNA配列、HSV-2のUL11 UTR及びポリAを含むコドン最適化RNA配列、HSV-2のUL16 UTR及びポリAを含むコドン最適化RNA配列、HSV-2のUL21 UTR及びポリAを含むコドン最適化RNA配列、HSV-2のgD UTR及びポリAを含むコドン最適化RNA配列、HSV-2のICP4 UTR及びポリAを含むコドン最適化RNA配列の対応する配列番号を有する例示的なヌクレオチド配列を示す。 図2は、下記ヌクレオチド:HSV-2のヌクレオシド修飾されたgD RNAヌクレオチド配列フラグメント、HSV-2のヌクレオシド修飾されたgE RNAヌクレオチド配列フラグメント、HSV-2のUL48 RNA配列、HSV-2のUL49 RNA配列、HSV-2のUL11 RNA配列、HSV-2のUL16 RNA配列、HSV-2のUL21 RNA配列、HSV-2のUL31 RNA配列、HSV-2のUL34 RNA配列、HSV-2のgEタンパク質の細胞質テイル RNA配列、HSV-2のgD RNA配列、HSV-2のgB RNA配列、HSV-2のgE RNA配列、HSV-2のUL48 UTR及びポリAを含むコドン最適化RNA配列、HSV-2のUL11 UTR及びポリAを含むコドン最適化RNA配列、HSV-2のUL16 UTR及びポリAを含むコドン最適化RNA配列、HSV-2のUL21 UTR及びポリAを含むコドン最適化RNA配列、HSV-2のgD UTR及びポリAを含むコドン最適化RNA配列、HSV-2のICP4 UTR及びポリAを含むコドン最適化RNA配列の対応する配列番号を有する例示的なヌクレオチド配列を示す。 図2は、下記ヌクレオチド:HSV-2のヌクレオシド修飾されたgD RNAヌクレオチド配列フラグメント、HSV-2のヌクレオシド修飾されたgE RNAヌクレオチド配列フラグメント、HSV-2のUL48 RNA配列、HSV-2のUL49 RNA配列、HSV-2のUL11 RNA配列、HSV-2のUL16 RNA配列、HSV-2のUL21 RNA配列、HSV-2のUL31 RNA配列、HSV-2のUL34 RNA配列、HSV-2のgEタンパク質の細胞質テイル RNA配列、HSV-2のgD RNA配列、HSV-2のgB RNA配列、HSV-2のgE RNA配列、HSV-2のUL48 UTR及びポリAを含むコドン最適化RNA配列、HSV-2のUL11 UTR及びポリAを含むコドン最適化RNA配列、HSV-2のUL16 UTR及びポリAを含むコドン最適化RNA配列、HSV-2のUL21 UTR及びポリAを含むコドン最適化RNA配列、HSV-2のgD UTR及びポリAを含むコドン最適化RNA配列、HSV-2のICP4 UTR及びポリAを含むコドン最適化RNA配列の対応する配列番号を有する例示的なヌクレオチド配列を示す。 図2は、下記ヌクレオチド:HSV-2のヌクレオシド修飾されたgD RNAヌクレオチド配列フラグメント、HSV-2のヌクレオシド修飾されたgE RNAヌクレオチド配列フラグメント、HSV-2のUL48 RNA配列、HSV-2のUL49 RNA配列、HSV-2のUL11 RNA配列、HSV-2のUL16 RNA配列、HSV-2のUL21 RNA配列、HSV-2のUL31 RNA配列、HSV-2のUL34 RNA配列、HSV-2のgEタンパク質の細胞質テイル RNA配列、HSV-2のgD RNA配列、HSV-2のgB RNA配列、HSV-2のgE RNA配列、HSV-2のUL48 UTR及びポリAを含むコドン最適化RNA配列、HSV-2のUL11 UTR及びポリAを含むコドン最適化RNA配列、HSV-2のUL16 UTR及びポリAを含むコドン最適化RNA配列、HSV-2のUL21 UTR及びポリAを含むコドン最適化RNA配列、HSV-2のgD UTR及びポリAを含むコドン最適化RNA配列、HSV-2のICP4 UTR及びポリAを含むコドン最適化RNA配列の対応する配列番号を有する例示的なヌクレオチド配列を示す。 図2は、下記ヌクレオチド:HSV-2のヌクレオシド修飾されたgD RNAヌクレオチド配列フラグメント、HSV-2のヌクレオシド修飾されたgE RNAヌクレオチド配列フラグメント、HSV-2のUL48 RNA配列、HSV-2のUL49 RNA配列、HSV-2のUL11 RNA配列、HSV-2のUL16 RNA配列、HSV-2のUL21 RNA配列、HSV-2のUL31 RNA配列、HSV-2のUL34 RNA配列、HSV-2のgEタンパク質の細胞質テイル RNA配列、HSV-2のgD RNA配列、HSV-2のgB RNA配列、HSV-2のgE RNA配列、HSV-2のUL48 UTR及びポリAを含むコドン最適化RNA配列、HSV-2のUL11 UTR及びポリAを含むコドン最適化RNA配列、HSV-2のUL16 UTR及びポリAを含むコドン最適化RNA配列、HSV-2のUL21 UTR及びポリAを含むコドン最適化RNA配列、HSV-2のgD UTR及びポリAを含むコドン最適化RNA配列、HSV-2のICP4 UTR及びポリAを含むコドン最適化RNA配列の対応する配列番号を有する例示的なヌクレオチド配列を示す。 図2は、下記ヌクレオチド:HSV-2のヌクレオシド修飾されたgD RNAヌクレオチド配列フラグメント、HSV-2のヌクレオシド修飾されたgE RNAヌクレオチド配列フラグメント、HSV-2のUL48 RNA配列、HSV-2のUL49 RNA配列、HSV-2のUL11 RNA配列、HSV-2のUL16 RNA配列、HSV-2のUL21 RNA配列、HSV-2のUL31 RNA配列、HSV-2のUL34 RNA配列、HSV-2のgEタンパク質の細胞質テイル RNA配列、HSV-2のgD RNA配列、HSV-2のgB RNA配列、HSV-2のgE RNA配列、HSV-2のUL48 UTR及びポリAを含むコドン最適化RNA配列、HSV-2のUL11 UTR及びポリAを含むコドン最適化RNA配列、HSV-2のUL16 UTR及びポリAを含むコドン最適化RNA配列、HSV-2のUL21 UTR及びポリAを含むコドン最適化RNA配列、HSV-2のgD UTR及びポリAを含むコドン最適化RNA配列、HSV-2のICP4 UTR及びポリAを含むコドン最適化RNA配列の対応する配列番号を有する例示的なヌクレオチド配列を示す。 図2は、下記ヌクレオチド:HSV-2のヌクレオシド修飾されたgD RNAヌクレオチド配列フラグメント、HSV-2のヌクレオシド修飾されたgE RNAヌクレオチド配列フラグメント、HSV-2のUL48 RNA配列、HSV-2のUL49 RNA配列、HSV-2のUL11 RNA配列、HSV-2のUL16 RNA配列、HSV-2のUL21 RNA配列、HSV-2のUL31 RNA配列、HSV-2のUL34 RNA配列、HSV-2のgEタンパク質の細胞質テイル RNA配列、HSV-2のgD RNA配列、HSV-2のgB RNA配列、HSV-2のgE RNA配列、HSV-2のUL48 UTR及びポリAを含むコドン最適化RNA配列、HSV-2のUL11 UTR及びポリAを含むコドン最適化RNA配列、HSV-2のUL16 UTR及びポリAを含むコドン最適化RNA配列、HSV-2のUL21 UTR及びポリAを含むコドン最適化RNA配列、HSV-2のgD UTR及びポリAを含むコドン最適化RNA配列、HSV-2のICP4 UTR及びポリAを含むコドン最適化RNA配列の対応する配列番号を有する例示的なヌクレオチド配列を示す。 図2は、下記ヌクレオチド:HSV-2のヌクレオシド修飾されたgD RNAヌクレオチド配列フラグメント、HSV-2のヌクレオシド修飾されたgE RNAヌクレオチド配列フラグメント、HSV-2のUL48 RNA配列、HSV-2のUL49 RNA配列、HSV-2のUL11 RNA配列、HSV-2のUL16 RNA配列、HSV-2のUL21 RNA配列、HSV-2のUL31 RNA配列、HSV-2のUL34 RNA配列、HSV-2のgEタンパク質の細胞質テイル RNA配列、HSV-2のgD RNA配列、HSV-2のgB RNA配列、HSV-2のgE RNA配列、HSV-2のUL48 UTR及びポリAを含むコドン最適化RNA配列、HSV-2のUL11 UTR及びポリAを含むコドン最適化RNA配列、HSV-2のUL16 UTR及びポリAを含むコドン最適化RNA配列、HSV-2のUL21 UTR及びポリAを含むコドン最適化RNA配列、HSV-2のgD UTR及びポリAを含むコドン最適化RNA配列、HSV-2のICP4 UTR及びポリAを含むコドン最適化RNA配列の対応する配列番号を有する例示的なヌクレオチド配列を示す。 図3は、UL48のmRNA(配列番号:25)に由来する例示的タンパク質のウエスタンブロット分析を示す。ウエスタンブロットのレイアウト(L-R):ラダー、陽性対照、陰性対照(2日目及び6日目に収集)、UL48プソイドウリジン(1-メチル-プソイドウリジン)のmRNAでトランスフェクションされた細胞からのサンプル(1日目、2日目及び6日目に収集)、UL48ウリジンのmRNAでトランスフェクションされた細胞からのサンプル(1日目、2日目及び6日目に収集)。 図4は、UL11、UL16及びUL21のmRNA(配列番号:26、27及び28)に由来する例示的なタンパク質のウエスタンブロット分析を示す。ウエスタンブロットのレイアウト(L-R):陽性対照、陰性対照(2日目及び6日目に収集)、UL11、UL16及びUL21プソイドウリジン(1-メチル-プソイドウリジン)のmRNAでトランスフェクションされた細胞からのサンプル(1日目及び2日目に収集)。 図5は、例示的なUL48修飾mRNA(配列番号:25)とのインキュベーションに基づくELISAを使用したIFNγ放出の測定を示す。IFNγ ELISAからのOD450読み取り値。グラフレイアウト(上-下):サンプルなしでのELISAからのブランク読み取り値、陰性対照サンプル(非トランスフェクションPBMC)、UL48プソイドウリジン(1-メチル-プソイドウリジン)のmRNAでトランスフェクションされたPBMCからのサンプル(3日目に収集)。エラーバーは、標準偏差を示す。 図6は、例示的なICP4及びgD修飾mRNA(配列番号:30及び29)とのインキュベーションに基づくELISAを使用したIFNγ放出の測定を示す。IFNγ ELISAからのOD450読み取り値。グラフレイアウト(上-下):サンプルなしでのELISAからのブランク読み取り値、陰性対照サンプル(非トランスフェクションPBMC)、空のトランスフェクション(mRANなしでトランスフェクションされたPBMC)、ICP4プソイドウリジンのmRNAでトランスフェクションされたPBMCからのサンプル(3日目に収集)、ICP4プソイドウリジン(1-メチル-プソイドウリジン)のmRNAでトランスフェクションされたPBMCからのサンプル(3日目に収集)。エラーバーは、標準偏差を示す。
詳細な説明
上記言及されたように、本発明は、1種以上のmRNAを含み、ここで、前記mRNAがそれぞれ、UL48;UL48及びUL49;UL11、UL16及びUL21又はUL31及びUL34からなる群より選択される単純ヘルペスウイルス(HSV)構造タンパク質又はその免疫原性フラグメントをコードする、新規なワクチン組成物を提供する。糖タンパク質、例えば、gE、gC及びgDを抗原として使用することに研究の焦点が当てられてきたが(US第2020/0276300号を参照のこと、例えば、同文献における配列番号:4及び16は、本明細書における配列番号:12及び13に相当する)、本発明者らは、構造HSVタンパク質をコードするmRNAに対する免疫反応が比較的強いことを驚くべきことに見出した。加えて、構造タンパク質は、一般的には、グリコシル化されていないため、使用されたmRNA中のヌクレオシドを修飾する必要がなかった。
「mRNA」という用語は、メッセンジャーリボ核酸を指す。一般的には、このようなmRNAは、ポリペプチドをコードし、ターゲット細胞内でそれがコードするタンパク質に翻訳される。このような翻訳を亢進するために、mRNAは、ポリAテイル、m7GpppGキャップ、3’-0-メチル-m7GpppGキャップ又はアンチリバースキャップアナログ、キャップ非依存性翻訳エンハンサー並びに/又は翻訳を亢進する5’及び3’非翻訳領域(例えば、本明細書において配列番号:25~30に示されている)をさらに含む場合がある。
「ポリペプチド」は、ペプチド結合により互いに連結されたアミノ酸のポリマーを含む分子を指す。本明細書において、前記用語は、分子の特定の長さを指すことを意味するものではなく、したがって、本明細書において、「タンパク質」という用語と互換的に使用される。本明細書で使用する場合、「ポリペプチド」又は「タンパク質」という用語は、発現カセットもしくはベクターにより発現され又は本発明のホスト細胞から単離することができる「目的のポリペプチド」又は「目的のタンパク質」も含む。ポリペプチドは、アミノ酸配列を含み、このため、アミノ酸配列を含むポリペプチドは、本明細書において、「ポリペプチド配列を含むポリペプチド」と呼ばれる場合もある。このため、本明細書において、「ポリペプチド配列」という用語は、「アミノ酸配列」という用語と互換的に使用される。
「アミノ酸」又は「aa」という用語は、天然のアミノ酸及び合成アミノ酸並びに天然のアミノ酸と同様の働きをするアミノ酸アナログ及びアミノ酸模倣物を指す。天然のアミノ酸は、遺伝子コードによりコードされるアミノ酸並びに後に修飾されるようなアミノ酸、例えば、ヒドロキシプロリン、γ-カルボキシグルタミン酸及びO-ホスホセリンである。アミノ酸アナログは、天然のアミノ酸と同じ基本化学構造、すなわち、水素、カルボキシル基、アミノ基及びR基に結合した炭素を有する化合物、例えば、ホモセリン、ノルロイシン、メチオニンスルホキシド、メチオニンメチルスルホニウムを指す。このようなアナログは、修飾されたR基(例えば、ノルロイシン)又は修飾されたペプチド骨格を有するが、天然のアミノ酸と同じ基本化学構造を保持している。アミノ酸模倣物は、アミノ酸の一般的な化学構造とは異なる構造を有するが、天然のアミノ酸と同様の働きをする化合物を指す。
「単純ヘルペスウイルス」及び「HSV」という用語は、本明細書において互換的に使用され、一般的には、ヘルペスウイルス属シンプレックスウイルスのウイルス、すなわち、クモザルヘルペスウイルス1、ウシヘルペスウイルス2、オナガザルヘルペスウイルス1、オナガザルヘルペスウイルス2、オナガザルヘルペスウイルス16、ヒトヘルペスウイルス1、ヒトヘルペスウイルス2、カンガルーヘルペスウイルス1、カンガルーヘルペスウイルス2、リスザルヘルペスウイルス1を指す。シンプレックスウイルス属の好ましいウイルス種は、ヒトに感染するウイルスである。さらにより好ましいウイルス種は、単純ヘルペスウイルス1(HSV-1)及び単純ヘルペスウイルス2(HSV-2)であり、これらはそれぞれ、ヒトヘルペスウイルス1及び2(HHV-1及びHHV-2)としても公知である。
本明細書で使用する場合、「ワクチン組成物」という用語は、対象においてHSVに関連する病的状態を予防し又は治療するのに使用することができる、本発明のmRNAを含む組成物に関する。「ワクチン組成物」は、有効成分の免疫学的活性を増強する1種以上の追加成分又は、例えば、バッファー、還元剤、安定化剤、キレート剤、増量剤、浸透圧平衡剤(等張化剤)、界面活性剤、ポリオール、抗酸化剤、リオプロテクタント、消泡剤、保存剤及び着色剤、洗浄剤、ナトリウム塩及び/又は抗菌剤等を含む場合があり又は含まない場合がある。ワクチン組成物は、医薬組成物に典型的な更なる成分をさらに含む場合がある。本発明のワクチンは、好ましくは、ヒト用及び/又は動物用である。ワクチン組成物は、無菌及び/又は発熱物質を含まないことができる。ワクチン組成物は、ヒトに対して等張であることができる。
ワクチン組成物は、好ましくは、治療上有効量の本発明のmRNAを含む。
HSVポリペプチドUL48をコードする本発明のワクチン組成物のmRNAは、好ましくは、配列番号:6のアミノ酸配列と80%以上同一なアミノ酸配列をコードし、ここで、前記HSV UL48 mRNAは、対象にワクチン組成物の形態で投与された場合、免疫応答を誘発可能である。好ましくは、該mRNAは、配列番号:14又は少なくとも200ヌクレオチド長のそのフラグメントと少なくとも80%同一である。
本明細書で使用する場合、「UL48」という用語は、HSVのテグメントタンパク質VP16に関する。配列番号:6は、HSV-2 UL48のアミノ酸配列を例示的に示しており、また、NCBI GenBankにアクセッション番号AHG54712.1で寄託されている。ただし、「UL48」という用語は、配列番号:6に示されるアミノ酸配列とある程度の同一性を共有するアミノ酸配列を有するUL48ポリペプチドも包含し、また、本明細書に記載されたように、配列番号:6に示される参照配列に対して突然変異を有するポリペプチドも包含する。したがって、「UL48」という用語は、配列番号:6のアミノ酸配列と比較して、99%、98%、97%、96%、95%、94%、93%、92%、91%、90%、89%、88%、87%、86%、85%、84%、83%、82%、81%、79%、78%、77%、76%、75%もしくは好ましくは、80%以上のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチド又は配列番号:6のアミノ酸配列と比較して、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123個までもしくは好ましくは、98個のアミノ酸置換、挿入及び/もしくは欠失を有するポリペプチドを包含する。本発明のmRNAから翻訳された好ましいUL48タンパク質は、UL49と二量体を形成することができ又はUL49及びgEもしくはgEの細胞質テイルと三量体を形成している場合がある。
HSVポリペプチドUL49をコードする本発明のワクチン組成物のmRNAは、好ましくは、配列番号:7のアミノ酸配列と62%以上同一なアミノ酸配列をコードし、ここで、前記HSVポリペプチドUL49をコードするmRNAは、対象にワクチン組成物の形態で投与された場合、免疫応答を誘発可能である。好ましくは、該mRNAは、配列番号:15又は少なくとも200ヌクレオチド長のそのフラグメントと少なくとも80%同一である。
本明細書で使用する場合、「UL49」という用語は、HSVのテグメントタンパク質VP22に関する。配列番号:7は、HSV-2 UL49のアミノ酸配列を例示的に示しており、また、NCBI GenBankにアクセッション番号AKC42813.1で寄託されている。ただし、「UL49」という用語は、配列番号:7に示されるアミノ酸配列とある程度の同一性を共有するアミノ酸配列を有するUL49ポリペプチドも包含し、また、本明細書に記載されたように、配列番号:7に示される参照配列に対して突然変異を有するポリペプチドも包含する。したがって、「UL49」という用語は、配列番号:2のアミノ酸配列と比較して、99%、98%、97%、96%、95%、94%、93%、92%、91%、90%、89%、88%、87%、86%、85%、84%、83%、82%、81%、80%、79%、78%、77%、76%、74%、73%、72%、71%、69%、68%、67%、66%、65%、64%、63%、61%、60%、59%、58%、57%もしくは好ましくは、62%以上のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチド又は配列番号:7のアミノ酸配列と比較して、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130個までもしくは好ましくは、115個のアミノ酸置換、挿入及び/もしくは欠失を有するポリペプチドを包含する。本発明のmRNAから翻訳された好ましいUL49タンパク質は、UL48及び/又はgEもしくはgEの細胞質テイルと複合体を形成することができる。したがって、好ましいUL49タンパク質は、UL48又はgEもしくはgEの細胞質テイルと二量体を形成することができ又はUL48及びgEもしくはgEの細胞質テイルと三量体を形成することができる。
本発明のさらに好ましい実施態様では、HSVポリペプチドUL48、UL49を含む多量体複合体のタンパク質をコードするmRNが、本発明のワクチン組成物に含まれる。また、これらは、HSVポリペプチドgEの細胞質ドメインを含む三量体をコードすることができる。この場合、本発明のmRNAから翻訳される多量体複合体は、HSVポリペプチドUL48、UL49及びgEの細胞質ドメインを含む。
「配列同一性」又は「% 同一性」は、標準化されたアルゴリズムを使用してアライメントされた少なくとも2つのポリペプチド配列間の残基の一致率を指す。このようなアルゴリズムでは、2つの配列間のアラインメントを最適化するために、標準化されかつ再現可能な方法で、比較される配列にギャップを挿入することができ、したがって、2つの配列のより意味のある比較を達成することができる。本発明の目的で、2つのアミノ酸配列間の配列同一性は、NCBI BLASTプログラムバージョン2.3.0(Jan-13-2016)(Altschul et al., Nucleic Acids Res. (1997) 25:3389-3402)を使用して決定される。2つのアミノ酸配列の配列同一性を、blastpを下記パラメータ:Matrix:BLOSUM62、ワードサイズ:3、期待値:10、ギャップコスト:Existence=11、Extension=1、組成調整:条件的組成スコアマトリックス調整に設定して決定することができる。
「免疫応答」という用語は、体液性免疫応答及び/又は細胞媒介性免疫応答を誘引する能力を指し、ただし、好ましくは、in vivoにおいてのみではない。体液性免疫応答は、B細胞媒介性抗体応答を含む。細胞媒介性免疫は、CD4+ T細胞及びCD8+ T細胞を含む(がこれらに限定されない)、T細胞媒介性免疫応答を含む。免疫応答を誘発する抗原の能力は、免疫原性と呼ばれ、この免疫応答は、体液性免疫応答及び/又は細胞媒介性免疫応答である場合がある。本発明の免疫応答は、好ましくは、HSVに対する免疫応答であり、さらにより好ましくは、対象におけるHSV感染に対する免疫応答である。
in vivoにおける体液性免疫応答及び/又は細胞媒介免疫応答を誘引する能力を、性器HSV-2感染のモルモットモデルを使用して決定することができる。このモデルは、ヒトにおける疾患を正確に反映し、病因並びに候補抗ウイルス化合物及びワクチンの治療有効性を調べるための系を示す。また、性器常在免疫記憶と神経組織常在免疫記憶との両方の性質に対処するのに理想的な系としても役立つ。モルモットの性器感染では、ヒトの疾患に見出されるようなものを反映する神経学的症状を伴う自己限定性の外陰膣炎が生じる。メスのモルモットにおける一次疾患は、性器上皮細胞におけるウイルス複製を伴い、この複製は、一般的には、8日間に限られる。この間に、ウイルスは、感覚神経終末に達し、逆行性輸送により脊髄における感覚神経節及び自律神経ニューロンの細胞体に輸送される。この部位での短期間での急性複製後、免疫系は、通常、接種後15日目までに急性ウイルス複製を解決し、ウイルスは、生涯、感覚ニューロンの潜伏感染として維持される。HSV-2の一次性器感染から回復した後、モルモットは、エピソード的な自然再発感染及び疾患を経験する。HSV-2の再発は、会陰部の紅斑及び/もしくは小水疱性病変を伴う臨床的に明らかな疾患として又は生殖器からのウイルス放出を特徴とする無症候性の再発として現れる場合がある。ワクチンの有効性を例えば、モルモットの性器感染モデルを使用して評価することができる。動物に5×10PFU、5×10PFU、5×10PFU、5×10PFU、5×10PFU、5×10PFU、5×10PFU又は5×10PFU、好ましくは、5×10PFU HSV-2(例えば、MS系統)を膣内に感染させることができる。動物を感染前又は感染後に、1回、2回、3回、4回、5回又はそれ以上の回数、免疫化することができる。好ましくは、感染後15日目に、動物を15日間隔で2回免疫化した。一般的には、任意の適切な投与経路を免疫化に使用することができる。ただし、好ましくは、動物は、筋肉内に免疫化される。可能性のある対照群は、アジュバントのみ(例えば、100μg CpG/150μg ニョウバン)もしくはPBSで模擬免疫化された群(両方とも陰性対照)又はHSV-2 dI5-29突然変異ウイルス株で免疫化された群(陽性対照)のいずれかである。アジュバントと組み合わせられたワクチン候補で免疫される群には、各免疫ラウンドにおいて、0.1μg、0.5μg、1μg、2μg、3μg、4μg、5μg、10μg、15μg、25μg、30μg、35μg、40μg、50μg、60μg、70μg、80μg、90μg、100μg、150μg、200μg、好ましくは、20μg 各mRNAの用量を受けさせることができる。読み取りとして、膣スワブを例えば、感染後0日目から200日目まで、感染後1日目から180日目まで、感染後3日目から160日目まで、感染後5日目から140日目まで、感染後7日目から120日目まで、感染後10日目から100日目まで、感染後12日目から90日目までの再発性ウイルス放出の頻度及び大きさを評価するために収集することができる。膣スワブを1日ごと、2日ごと、3日ごと、4日ごと、5日ごと、6日ごと、7日ごと、8日ごと、9日ごと又は10日ごとに収集することができる。好ましくは、膣スワブは、感染後15日目から85日目まで毎日収集される。同じ時間間隔で、再発性器ヘルペス病変の重症度(スコア0~4)及び期間は、毎日スコア化される。好ましくは、試験終了時に、抗体応答並びにCD4+及びCD8+T細胞応答が決定される。
本発明のワクチン組成物の投与には、経口、局所、経皮、皮下、静脈内、腹腔内、筋肉内又は眼内を含む(が、これらに限定されない)各種の経路が適用可能である。ただし、必要に応じて、当業者であれば、任意の他の経路を容易に選択することができる。
対象に投与される本発明のワクチン組成物の正確な用量は、処置の目的(例えば、急性疾患の治療対予防的なワクチン接種)、投与経路、年齢、体重、一般的な健康状態、性別、食事、投与時間、薬剤相互作用及び症状の重症度により決まる場合があり、当業者による日常的な試行錯誤により確認可能であろう。投与される用量は、好ましくは、有効量、すなわち、免疫応答を誘発するのに有効な量である。好ましい実施態様では、ワクチン組成物は、50~150μg、好ましくは、100μgをそれぞれ14~42日間隔、好ましくは、28日間隔で2回投与される。
本発明のワクチン組成物を対象に1回以上、例えば、2、3、4、5、6、7、8、9、10回以上投与することができる。
本明細書で使用する場合、「対象」は、動物、好ましくは、ほ乳類に関する。ほ乳類は、例えば、マウス、ラット、モルモット、ハムスター、ウサギ、イヌ、ネコ又は霊長類であることができる。好ましくは、対象は、ヒトである。ただし、「対象」という用語は、細胞、好ましくは、ほ乳類の細胞、さらにより好ましくは、ヒトの細胞も含む。このような細胞は、免疫細胞、好ましくはリンパ球であることができる。
HSVポリペプチドUL11をコードする本発明のワクチン組成物のmRNAは、好ましくは、配列番号:1のアミノ酸配列と75%以上同一なアミノ酸配列をコードし、ここで、前記HSV UL11 mRNAは、対象にワクチン組成物の形態で投与された場合、免疫応答を誘発可能である。好ましくは、該mRNAは、配列番号:16又は少なくとも200ヌクレオチド長のそのフラグメントと少なくとも80%同一である。
本明細書で使用する場合、「UL11」という用語は、HSVのテグメントタンパク質に関する。配列番号:1は、HSV-2 UL11のアミノ酸配列を例示的に示しており、また、NCBI GenBankにアクセッション番号AHG54674.1で寄託されている。ただし、「UL11」という用語は、配列番号:1に示されるアミノ酸配列とある程度の同一性を共有するアミノ酸配列を有するUL11ポリペプチドも包含し、また、本明細書に記載されたように、配列番号:1に示される参照配列に対して突然変異を有するポリペプチドも包含する。したがって、「UL11」という用語は、配列番号:1のアミノ酸配列と比較して、99%、98%、97%、96%、95%、94%、93%、92%、91%、90%、89%、88%、87%、86%、85%、84%、83%、82%、81%、80%、79%、78%、77%、76%、74%、73%、72%、71%、70%もしくは好ましくは、75%以上のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチド又は配列番号:1のアミノ酸配列と比較して、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、25、26、27、28、29個までもしくは好ましくは、24個のアミノ酸置換、挿入及び/もしくは欠失を有するポリペプチドを包含する。本発明のmRNAから翻訳された好ましいUL11タンパク質は、UL16、UL21及び/又はgEもしくはgEの細胞質テイルと複合体を形成することができる。したがって、本発明のmRNAから翻訳された好ましいUL11タンパク質は、UL16又はgEもしくはgEの細胞質テイルと二量体を形成することができ、UL16及びUL21もしくはUL16及びgEもしくはgEの細胞質テイルと三量体を形成することができかつ/又はUL16、UL21及びgEもしくはgEの細胞質テイルと四量体を形成することができる。
HSVポリペプチドUL16をコードする本発明のワクチン組成物のmRNAは、好ましくは、配列番号:2のアミノ酸配列と75%以上同一なアミノ酸配列をコードし、ここで、HSVポリペプチドUL16をコードする前記mRNAは、対象にワクチン組成物の形態で投与された場合、免疫応答を誘発可能である。好ましくは、該mRNAは、配列番号:17又は少なくとも200ヌクレオチド長のそのフラグメントと少なくとも80%同一である。
本明細書で使用する場合、「UL16」という用語は、HSVのテグメントタンパク質に関する。配列番号:2は、HSV-2 UL16のアミノ酸配列を例示的に示しており、また、NCBI GenBankにアクセッション番号AHG54679.1で寄託されている。ただし、「UL16」という用語は、配列番号:2に示されるアミノ酸配列とある程度の同一性を共有するアミノ酸配列を有するUL16ポリペプチドも包含し、また、本明細書に記載されたように、配列番号:2に示される参照配列に対して突然変異を有するポリペプチドも包含する。したがって、「UL16」という用語は、配列番号:2のアミノ酸配列と比較して、99%、98%、97%、96%、95%、94%、93%、92%、91%、90%、89%、88%、87%、86%、85%、84%、83%、82%、81%、80%、79%、78%、77%、76%、75%、74%、73%、72%、71%、70%、69%、68%、67%もしくは好ましくは、72%以上のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチド又は配列番号:2のアミノ酸配列と比較して、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123個までもしくは好ましくは、104個のアミノ酸置換、挿入及び/もしくは欠失を有するポリペプチドを包含する。本発明のmRNAから翻訳された好ましいUL16タンパク質は、UL11、UL21及び/又はgEもしくはgEの細胞質テイルと複合体を形成することができる。したがって、本発明のmRNAから翻訳された好ましいUL16タンパク質は、UL21もしくはUL11と二量体を形成することができ、UL11及びUL21と三量体を形成することができかつ/又はUL11、UL21及びgEもしくはgEの細胞質テイルと四量体を形成することができる。
HSVポリペプチドUL21をコードする本発明のワクチン組成物のmRNAは、好ましくは、配列番号:3のアミノ酸配列と80%以上同一なアミノ酸配列をコードし、ここで、HSVポリペプチドUL21をコードする前記mRNAは、対象にワクチン組成物の形態で投与された場合、免疫応答を誘発可能である。好ましくは、該mRNAは、配列番号:18又は少なくとも200ヌクレオチド長のそのフラグメントと少なくとも80%同一である。
本明細書で使用する場合、「UL21」という用語は、HSVのテグメントタンパク質に関する。配列番号:3は、HSV-2 UL21のアミノ酸配列を例示的に示しており、また、NCBI GenBankにアクセッション番号AHG54684.1で寄託されている。ただし、「UL21」という用語は、配列番号:3に示されるアミノ酸配列とある程度の同一性を共有するアミノ酸配列を有するUL21ポリペプチドも包含し、また、本明細書に記載されたように、配列番号:3に示される参照配列に対して突然変異を有するポリペプチドも包含する。したがって、「UL21」という用語は、配列番号:3のアミノ酸配列と比較して、99%、98%、97%、96%、95%、94%、93%、92%、91%、90%、89%、88%、87%、86%、85%、84%、83%、82%、81%、79%、78%、77%、76%、75%もしくは好ましくは、80%以上のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチド又は配列番号:3のアミノ酸配列と比較して、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166個までもしくは好ましくは、134個のアミノ酸置換、挿入及び/もしくは欠失を有するポリペプチドを包含する。本発明のmRNAから翻訳された好ましいUL21タンパク質は、UL11、UL16及び/又はgEもしくはgEの細胞質テイルと複合体を形成することができる。したがって、好ましいUL21タンパク質は、UL16と二量体を形成することができ、UL11及びUL16と三量体を形成することができかつ/又はUL11、UL16及びgEもしくはgEの細胞質テイルと四量体を形成することができる。
本明細書で言及されたように、HSVポリペプチドUL11、UL16、UL21を含む多量体複合体のタンパク質をコードするmRNAは、HSV糖タンパク質gEをコードするmRNAをさらに含むことができる。この場合、本発明のmRNAから翻訳された多量体複合体は、HSVポリペプチドUL11、UL16、UL21及びgEを含む。
本発明のワクチン組成物のmRNAによりコードされるHSVポリペプチドUL31は、好ましくは、配列番号:8のアミノ酸配列と85%以上同一であるアミノ酸配列を含み、ここで、HSVポリペプチドUL31をコードする前記mRNAは、対象にワクチン組成物の形態で投与された場合、免疫応答を誘発可能である。好ましくは、該mRNAは、配列番号:19又は少なくとも200ヌクレオチド長のそのフラグメントと少なくとも80%同一である。
本明細書で使用する場合、「UL31」という用語は、HSVのビリオン放出タンパク質に関する。配列番号:8は、HSV-2 UL31のアミノ酸配列を例示的に示しており、また、NCBI GenBankにアクセッション番号AHG54695.1で寄託されている。ただし、「UL31」という用語は、配列番号:8に示されるアミノ酸配列とある程度の同一性を共有するアミノ酸配列を有するUL31ポリペプチドも包含し、また、本明細書に記載されたように、配列番号:8に示される参照配列に対して突然変異を有するポリペプチドも包含する。したがって、「UL31」という用語は、配列番号:1のアミノ酸配列と比較して、99%、98%、97%、96%、95%、94%、93%、92%、91%、90%、89%、88%、87%、86%、84%、83%、82%、81%、80%もしくは好ましくは、85%以上のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチド又は配列番号:8のアミノ酸配列と比較して、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、56、57、58、59、60、61個までもしくは好ましくは、46個のアミノ酸置換、挿入及び/もしくは欠失を有するポリペプチドを包含する。本発明のmRNAから翻訳された好ましいUL31タンパク質は、UL34と二量体を形成することができる。
本発明のワクチン組成物のmRNAによりコードされるHSVポリペプチドUL34は、好ましくは、配列番号:9のアミノ酸配列と70%以上同一であるアミノ酸配列を含み、ここで、HSVポリペプチドUL34をコードする前記HSV mRNAは、対象にワクチン組成物の形態で投与された場合、免疫応答を誘発可能である。好ましくは、該mRNAは、配列番号:20又は少なくとも200ヌクレオチド長のそのフラグメントと少なくとも80%同一である。
本明細書で使用する場合、「UL34」という用語は、HSVのビリオン放出タンパク質に関する。配列番号:9は、HSV-2 UL34のアミノ酸配列を例示的に示しており、また、NCBI GenBankにアクセッション番号AHG54698.1で寄託されている。ただし、「UL34」という用語は、配列番号:9に示されるアミノ酸配列とある程度の同一性を共有するアミノ酸配列を有するUL34ポリペプチドも包含し、また、本明細書に記載されたように、配列番号:9に示される参照配列に対して突然変異を有するポリペプチドも包含する。したがって、「UL34」という用語は、配列番号:2のアミノ酸配列と比較して、99%、98%、97%、96%、95%、94%、93%、92%、91%、90%、89%、88%、87%、86%、85%、84%、83%、82%、81%、80%、79%、78%、77%、76%、75%、74%、73%、72%、71%、69%、68%、67%、66%、65%もしくは好ましくは、70%以上のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチド又は配列番号:9のアミノ酸配列と比較して、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88個までもしくは好ましくは、75個のアミノ酸置換、挿入及び/もしくは欠失を有するポリペプチドを包含する。本発明のmRNAから翻訳された好ましいUL34タンパク質は、UL31と二量体を形成することができる。
記述されたように、本発明の各mRNAは、配列番号:1(UL11)、配列番号:2(UL16)、配列番号:3(UL21)、配列番号:4(gE)、配列番号:5(gEの細胞質ドメイン)、配列番号:6(UL48)、配列番号:7(UL49)、配列番号:8(UL31)及び配列番号:9(UL34)に示される参照配列に対して突然変異、例えば、挿入、欠失及び置換を含有するタンパク質をコードすることができる。
本発明のさらに好ましい実施態様では、上記された構造HSVポリペプチドをコードするmRNAを含むワクチン組成物は、1種又は複数種のHSV糖タンパク質もコードすることができる。好ましい糖タンパク質は、gE、gB及びgDである。
本発明のワクチン組成物のHSV糖タンパク質gEをコードするmRNAは、好ましくは、配列番号:4のアミノ酸配列と70%以上同一であるアミノ酸又はその免疫原性フラグメントをコードする。好ましくは、該mRNAは、配列番号:24又は少なくとも200ヌクレオチド長のそのフラグメントと少なくとも80%同一である。
本明細書で使用する場合、「ICP4」という用語は、HSVの主要なウイルス転写因子4を指す場合があり、例えば、NCBI GenBankにアクセッション番号QIH12398.1(バージョン08 2020年3月)で寄託されており、本明細書において、配列番号:31を有する。ただし、「ICP4」という用語は、配列番号:31に示されるアミノ酸配列とある程度の同一性を共有するアミノ酸配列を有するICP4ポリペプチドも包含し、また、本明細書に記載されたように、配列番号:31に示される参照配列に対して突然変異を有するポリペプチドも包含する。したがって、「ICP4」という用語は、配列番号:31のアミノ酸配列と比較して、99%、98%、97%、96%、95%、94%、93%、92%、91%、90%、89%、88%、87%、86%、85%、84%、83%、82%、81%、80%、79%、78%、77%、76%、75%、74%、73%、72%、71%、69%、68%、67%、66%、65%もしくは好ましくは、70%以上のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチド又は配列番号:31のアミノ酸配列と比較して、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180個までもしくは好ましくは、165個のアミノ酸置換、挿入及び/もしくは欠失を有するポリペプチドを包含する。好ましいICP4タンパク質は、ICP4 mRNA(例えば、配列番号:30)から翻訳される。ICP4をコードするmRNAは、配列番号:30であることができる。好ましくは、ICP4 mRNAは、配列番号:30又は少なくとも200ヌクレオチド長のそのフラグメントと少なくとも80%同一である。一部の態様では、本発明のワクチン組成物は、a)HSV糖タンパク質D(gD)又は配列番号:11のアミノ酸配列と70%以上同一なアミノ酸配列を有するその免疫原性フラグメント、b)HSV糖タンパク質B(gB)又は配列番号:10のアミノ酸配列と70%以上同一なアミノ酸配列を有するその免疫原性フラグメント及びc)HSV糖タンパク質E(gE)又は配列番号:4のアミノ酸配列と70%以上同一なもしくは配列番号:5のアミノ酸配列と80%以上同一なアミノ酸配列を有するその免疫原性フラグメント又はそれら任意の組み合わせ、場合により、d)HSV ICP4又は配列番号:31のアミノ酸配列と70%以上同一なアミノ酸配列を有するその免疫原性フラグメント又はそれら任意の組み合わせからなる群より選択される単純ヘルペスウイルス(HSV)糖タンパク質をコードする少なくとも1種のmRNAを含む。一部の更なる態様では、本発明のワクチン組成物は、(i)UL48並びにgD及び/もしくはgB、場合により、ICP4(例えば、上記されたとおり);(ii)gEを伴うUL48及びUL49;(iii)gE、gD及び/もしくはgBを伴うUL11、UL16及びUL21又は(iv)gD及び/もしくはgBを伴うUL31及びUL34を含む。
本明細書で使用する場合、「gE」という用語は、「糖タンパク質E」と呼ばれる場合もある。配列番号:4は、HSV-2 gEのアミノ酸配列を例示的に示しており、また、NCBI GenBankにアクセッション番号AHG54732.1で寄託されている。ただし、「gE」という用語は、配列番号:4に示されるアミノ酸配列とある程度の同一性を共有するアミノ酸配列を有するgEポリペプチドも包含し、また、本明細書に記載されたように、配列番号:4に示される参照配列に対して突然変異を有するポリペプチドも包含する。したがって、「gE」という用語は、配列番号:4のアミノ酸配列と比較して、99%、98%、97%、96%、95%、94%、93%、92%、91%、90%、89%、88%、87%、86%、85%、84%、83%、82%、81%、80%、79%、78%、77%、76%、75%、74%、73%、72%、71%、69%、68%、67%、66%、65%もしくは好ましくは、70%以上のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチド又は配列番号:4のアミノ酸配列と比較して、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180個までもしくは好ましくは、165個のアミノ酸置換、挿入及び/もしくは欠失を有するポリペプチドを包含する。本発明のmRNAから翻訳された好ましいgEタンパク質は、UL48と二量体を形成することができ、UL31及びUL34と三量体を形成することができ、UL11、UL16及びUL21と四量体を形成することができる。
また、gEをコードするmRNAは、HSVポリペプチドgEの細胞質ドメインからなる場合もある。好ましくは、gE mRNAは、配列番号:21又は少なくとも200ヌクレオチド長のそのフラグメントと少なくとも80%同一である。好ましくは、該mRNAは、配列番号:21又は少なくとも200ヌクレオチド長のそのフラグメントと少なくとも80%同一である。
本発明のワクチン組成物のmRNAによりコードされるgEの細胞質ドメインは、好ましくは、配列番号:5に記載されたアミノ酸配列を含む。ただし、本明細書において、gEの細胞質ドメインは、配列番号:5のアミノ酸配列と比較して、99%、98%、97%、96%、95%、94%、93%、92%、91%、90%、89%、88%、87%、86%、85%、84%、83%、82%、81%、79%、78%、77%、76%、75%もしくは好ましくは、80%以上の配列同一性を有するアミノ酸配列又は配列番号:5のアミノ酸配列と比較して、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27個までもしくは好ましくは、23個のアミノ酸置換、挿入及び/もしくは欠失を有するポリペプチドを含むことも想定される。本発明のmRNAから翻訳された好ましいgEの細胞質ドメインは、UL48と二量体を形成することができ、UL31及びUL34と三量体を形成することができ、UL11、UL16及びUL21と四量体を形成することができる。
本発明のワクチン組成物のHSV糖タンパク質gDをコードするmRNAは、好ましくは、配列番号:11のアミノ酸配列と70%以上同一であるアミノ酸又はその免疫原性フラグメントをコードする。好ましくは、mRNAは、配列番号:22又は少なくとも200ヌクレオチド長のそのフラグメントと少なくとも80%同一である。
本明細書で使用する場合、「gD」という用語は、「糖タンパク質D」と呼ばれる場合もある。配列番号:11は、HSV-2 gDのアミノ酸配列を例示的に示している。ただし、「gD」という用語は、配列番号:11に示されるアミノ酸配列とある程度の同一性を共有するアミノ酸配列を有するgDポリペプチドも包含し、また、本明細書に記載されたように、配列番号:11に示される参照配列に対して突然変異を有するポリペプチドも包含する。したがって、「gD」という用語は、配列番号:11のアミノ酸配列と比較して、99%、98%、97%、96%、95%、94%、93%、92%、91%、90%、89%、88%、87%、86%、85%、84%、83%、82%、81%、80%、79%、78%、77%、76%、75%、74%、73%、72%、71%、69%、68%、67%、66%、65%もしくは好ましくは、70%以上のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチド又は配列番号:11のアミノ酸配列と比較して、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180個までもしくは好ましくは、165個のアミノ酸置換、挿入及び/もしくは欠失を有するポリペプチドを包含する。本発明のmRNAから翻訳された好ましいgDタンパク質は、該ワクチン組成物のmRNAから翻訳されたUL11、UL16及びUL21タンパク質と複合体を形成することができる。得られた好ましいgDタンパク質は、UL48と二量体を形成することができ、UL31及びUL34と三量体を形成することができ、UL11、UL16及びUL21と四量体を形成することができる。
本発明のワクチン組成物のHSV糖タンパク質gBをコードするmRNAは、好ましくは、配列番号:10のアミノ酸配列と70%以上同一であるアミノ酸又はその免疫原性フラグメントをコードする。好ましくは、該mRNAは、配列番号:23又は少なくとも200ヌクレオチド長のそのフラグメントと少なくとも80%同一である。
本明細書で使用する場合、「gB」という用語は、「糖タンパク質B」と呼ばれる場合もある。配列番号:10は、HSV-2 gBのアミノ酸配列を例示的に示している。ただし、「gB」という用語は、配列番号:10に示されるアミノ酸配列とある程度の同一性を共有するアミノ酸配列を有するgBポリペプチドも包含し、また、本明細書に記載されたように、配列番号:10に示される参照配列に対して突然変異を有するポリペプチドも包含する。したがって、「gB」という用語は、配列番号:10のアミノ酸配列と比較して、99%、98%、97%、96%、95%、94%、93%、92%、91%、90%、89%、88%、87%、86%、85%、84%、83%、82%、81%、80%、79%、78%、77%、76%、75%、74%、73%、72%、71%、69%、68%、67%、66%、65%もしくは好ましくは、70%以上のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチド又は配列番号:10のアミノ酸配列と比較して、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180個までもしくは好ましくは、165個のアミノ酸置換、挿入及び/もしくは欠失を有するポリペプチドを包含する。該ワクチン組成物のmRNAから翻訳された好ましいgBタンパク質は、該ワクチン組成物のmRNAから翻訳されたUL11、UL16及びUL21タンパク質と複合体を形成することができる。得られた好ましいgBタンパク質は、UL48と二量体を形成することができ、UL31及びUL34と三量体を形成することができ、UL11、UL16及びUL21と四量体を形成することができる。
また、gE、gBもしくはgD又はその免疫原性フラグメントをコードするヌクレオシド修飾mRNAも好ましい。好ましいフラグメントは、US第2020/0276300号に記載されており、プソイドウリジン残基、好ましくは、mΨ(1-メチルプソイドウリジン)、macpΨ(1-メチル-3-(3-アミノ-5-カルボキシプロピル)プソイドウリジン)、Ψm(2’-0-メチルプソイドウリジン)、mD(5-メチルジヒドロウリジン)、mΨ(3-メチルプソイドウリジン)又はそれらの任意の組み合わせを包含する。具体的には、配列番号:12及び13のmRNAはそれぞれ、このようなヌクレオシド修飾gD及びgE mRNAそれぞれである。プソイドウリジン修飾配列の更なる例は、配列番号:25~30に示される。
記述されたように、本発明の各mRNAは、配列番号:1(UL11)、配列番号:2(UL16)、配列番号:3(UL21)、配列番号:6(UL48)、配列番号:7(UL49)、配列番号:8(UL31)、配列番号:9(UL34)、配列番号:4(gE)、配列番号:5(gEの細胞質ドメイン)、配列番号:10(gB)及び配列番号:11(gD)に示される参照配列に対して、突然変異、例えば、挿入、欠失及び置換を含有するタンパク質をコードすることができる。
一態様では、本発明のmRNAは、UL48タンパク質を単独で又はgDもしくはgBの群から選択される糖タンパク質をコードするmRNAとの組み合わせでコードする。
本発明のさらに好ましい実施態様では、ワクチン組成物中のmRNAは、翻訳後に、多量体複合体を形成する2つ又は3つの構造ポリペプチドをコードする。さらに、糖タンパク質gE、gB及び/もしくはgD又はそれらの免疫原性フラグメントをコードする1種以上のmRNAが、該ワクチン組成物に含まれる場合がある。
具体的には、本発明のワクチン組成物は、UL48及びUL49をコードするmRNAを含むことができる。これらは、翻訳されると、複合体を形成することができる。代替的には、本発明のワクチン組成物は、UL48、UL49及び糖タンパク質gEをコードするmRNAを含むことができる。これらは全て、翻訳されると、複合体を形成することができる。
別の実施態様では、本発明のワクチン組成物は、UL11、UL16及びUL21をコードするmRNAを含むことができる。これらは、翻訳されると、複合体を形成することができる。UL11、UL16及びUL21をコードするmRNAを含む本発明のワクチン組成物は、糖タンパク質gE、gB又はgDをコードする1種以上のmRNAをさらに含むことができる。
代替的には、本発明のワクチン組成物は、UL31及びUL34をコードするmRNAを含むことができる。これらは、翻訳されると、複合体を形成することができる。UL31及びUL34をコードするmRNAを含む本発明のワクチン組成物は、糖タンパク質gB又はgDをコードする1種以上のmRNAをさらに含むことができる。
該ワクチン組成物中のmRNAは、HSV-1ポリペプチド、HSV-2ポリペプチド又はそれらの混合物をコードすることができる。
本発明のワクチン組成物は、薬学的に許容し得る担体又はアジュバントをさらに含むことができる。
「担体」及び「賦形剤」という用語は、本明細書において互換的に使用される。薬学的に許容し得る担体は、希釈剤(充填剤、増量剤、例えば、ラクトース、微結晶セルロース)、崩壊剤(例えば、デンプングリコール酸ナトリウム、クロスカルメロースナトリウム)、バインダー(例えば、PVP、HPMC)、潤滑剤(例えば、ステアリン酸マグネシウム)、滑沢剤(例えば、コロイド状SiO)、溶媒/共溶媒(例えば、水性媒体、プロピレングリコール、グリセロール)、緩衝剤(例えば、シトラート、グルコナート、ラクタート)、保存剤(例えば、安息香酸Na、パラベン(Me、Pr及びBu)、BKC)、酸化防止剤(例えば、BHT、BHA、アスコルビン酸)、湿潤剤(例えば、ポリソルベート、ソルビタンエステル)、消泡剤(例えば、シメチコン)、増粘剤(例えば、メチルセルロース又はヒドロキシエチルセルロース)、甘味剤(例えば、ソルビトール、サッカリン、アスパルテーム、アセスルファム)、着香剤(例えば、ペパーミント、レモンオイル、バタースコッチ等)、保湿剤(例えば、プロピレン、グリコール、グリセロール、ソルビトール)を含むが、これらに限定されない。更なる薬学的に許容し得る担体は、(生分解性)リポソーム;生分解性ポリマーであるポリ(D,L)-乳酸-コグリコール酸(PLGA)製のミクロスフェア;アルブミンミクロスフェア;合成ポリマー(可溶性);ナノファイバー;タンパク質-DNA複合体;タンパク質コンジュゲート;赤血球又はビロソームである。種々の担体系剤形は、固体脂質ナノ粒子(SLN)、ポリマーナノ粒子、セラミックスナノ粒子、ヒドロゲルナノ粒子、共重合ペプチドナノ粒子、ナノ結晶及びナノ懸濁液、ナノ結晶、ナノチューブ及びナノワイヤー、機能化ナノ担体、ナノスフェア、ナノカプセル、リポソーム、脂質エマルジョン、脂質マイクロチューブ/マイクロシリンダー、脂質マイクロバブル、リポスフェア、リポポリプレックス、逆脂質ミセル、デンドリマー、エトソーム、マルチコンポジット超薄型カプセル、アクアソーム、ファーマコソーム、コロイドソーム、ニオソーム、ディスコーム、プロニオソーム、マイクロスフェア、マイクロエマルジョン及びポリマーミセルを含む。他の適切な薬学的に許容し得る賦形剤は、特に、Remington's Pharmaceutical Sciences, 15th Ed., Mack Publishing Co., New Jersey (1991)及びBauer et al., Pharmazeutische Technologie, 5th Ed., Govi-Verlag Frankfurt (1997)に記載されている。当業者であれば、例えば、医薬組成物の配合及び投与経路に応じて、適切な薬学的に許容し得る担体を容易に選択することが可能であろう。
本明細書で使用する場合、「アジュバント」という用語は、抗原又はそのフラグメントに対するホストの免疫応答(抗体及び/又は細胞媒介性)を向上させ、増強し又は増す物質を指す。本発明に従って使用するための例示的なアジュバントは、無機化合物、例えば、ミョウバン、水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム、水酸化リン酸カルシウム、TLR9アゴニストであるCpGオリゴデオキシヌクレオチド、TLR4アゴニストであるモノホスホリル脂質(MPL)、TLR4アゴニストであるグルコピラノシル脂質(GLA)、油中水型エマルジョンであるMontanide ISA 51及び720、鉱物油、例えば、パラフィン油、ビロソーム、細菌産物、例えば、死滅細菌であるBordetella pertussis、Mycobacterium bovis、トキソイド、非細菌性有機物、例えば、スクアレン、チメロサール、洗浄剤(Quil A)、サイトカイン、例えば、IL-1、IL-2、IL-10及びIL-12並びに複合組成物、例えば、フロイント完全アジュバント及びフロイント不完全アジュバントを含む。一般的には、本発明に従って使用されるアジュバントは、好ましくは、本発明の多量体複合体に対する免疫応答を増しかつ/又は所望の免疫応答に向けてモデュレーションする。
「薬学的に許容し得る」という用語は、本発明の多量体複合体の生体活性の有効性を妨害しない非毒性物質を意味する。
ワクチン組成物の使用
また、本発明は、対象においてHSVに対する免疫応答を誘引する方法におけるワクチン組成物の使用に関する。
本発明の好ましい実施態様では、該ワクチン組成物は、HSV感染の治療、予防もしくは改善又はHSVの再活性化の予防に使用される。HSV感染をHSV-1感染、HSV-2感染、一次HSV感染、一次HSV感染後の再燃、再発又はHSV口唇炎、潜伏HSV感染の再活性化、HSV脳炎、HSV新生児感染、性器HSV感染及び口内HSV感染からなる群より選択することができる。
したがって、該ワクチン組成物をHSVにより引き起こされる疾患及び/又は関連する症状と闘うのに使用することができる。また、本発明のワクチン組成物を対象におけるウイルスを除去する、すなわち、処置後に、HSVを、当業者に公知の適切な方法、例えば、PCR、ELISA等を使用して、対象から得られる適切なサンプル中に検出することができなくなるように使用することができることも想定される。このため、本発明のワクチン組成物を、一次感染を阻止し、一次疾患を停止させ、ウイルスの再活性化及び再感染を阻止し、潜伏期を阻止するのに使用することができる。
性器ヘルペスの機会を減少させるためには、母親のHSV初感染を予防するための予防ワクチンが望ましい。一方、母親が活動性HSV感染と診断された場合には、有効な治療が必要である。本発明の多量体複合体を例えば、妊産婦もしくは小児のための予防ワクチンとして又は血清陽性の女性において分娩時の不顕性再活性化を予防するための治療ワクチンとして適用することができる。
本発明のさらに好ましい実施態様では、該ワクチン組成物は、対象においてHSV-1又はHSV-2に対する免疫応答を誘引するための方法に使用される。
「ポリヌクレオチド」、「ヌクレオチド配列」又は「核酸分子」という用語は、本明細書において互換的に使用され、通常、1つのデオキシリボース又はリボースから別のものに連結されているヌクレオチドの重合体を指す。「ポリヌクレオチド」という用語は、好ましくは、DNA又はRNAの一本鎖及び二本鎖形態を含む。本発明の核酸分子は、RNA(リボヌクレオチドを含有する)のセンス鎖とアンチセンス鎖との両方、cDNA、ゲノムDNA並びに上記の合成形態及び混合ポリマーを含むことができる。これらは、当業者に容易に理解されるであろうように、化学的もしくは生化学的に修飾されていることができ又は非天然もしくは誘導体化されたヌクレオチド塩基を含有することができる。このような修飾は、例えば、ラベル、メチル化、天然のヌクレオチドのうちの1つ以上のアナログによる置換、ヌクレオチド間修飾、例えば、非荷電連結(例えば、メチルホスホナート、ホスホトリエステル、ホスホラミダート、カルバマート等)、荷電連結(例えば、ホスホロチオアート、ホスホロジチオアート等)、ペンダント部分(例えば、ポリペプチド)、インターカレーター(例えば、アクリジン、ソラレン等)、キレート剤、アルキル化剤及び修飾連結(例えば、アルファアノマー核酸等)を含む。また、水素結合及び他の化学的相互作用を介して指定された配列に結合する能力においてポリヌクレオチドを模倣する合成分子も含まれる。このような分子は、当技術分野において公知であり、例えば、ペプチド結合が分子の骨格中のリン酸結合の代わりになっているものを含む。
本発明のワクチン組成物をプライムブースト計画に使用することができる。プライムブースト計画において、一次免疫化(プライム又はプライミング)に使用されるワクチン及びブースター免疫化(ブースト又はブースティング)に使用されるワクチンを含む2種類以上のワクチンから構成されるプライム/ブーストワクチンが使用される。一次免疫化に使用されるワクチン及びブースター免疫化に使用されるワクチンは、互いに異なる場合がある。一次免疫化及びブースティング免疫化を連続して行うことができるが、これは強制ではない。プライム/ブースト計画は、例えば、mRNAプライム/タンパク質ブーストを含むが、これには限定されない。一方、ブースティング組成物をプライミング組成物として使用することもでき、前記プライミング組成物は、ブースティング組成物として使用される。
本明細書で使用する場合、単数形「a」、「an」及び「the」は、特に断らない限り、複数の言及を含むことに留意しなければならない。このため、例えば、「発現カセット」への言及は、本明細書に開示された発現カセットのうちの1種以上を含み、「方法」への言及は、本明細書に記載された方法を修正し又は置換することができる、当業者に公知の同等の工程及び方法への言及を含む。
本明細書及びそれに続く特許請求の範囲をとおして、特に断らない限り、「含む(comprise)」という語及び変形例、例えば、「含む(comprises)」、「含むこと(comprising)」は、記述された整数もしくは工程又は整数もしくは工程の群を含むことを意味するが、任意の他の整数もしくは工程又は整数もしくは工程の群を排除することを意味しないと理解されるであろう。本明細書で使用する場合、「含むこと(comprising)」という用語を用語「含有すること(containing)」と置き換えることができ又は本明細書で使用する場合、「有すること(having)」と置き換えることができる。
本明細書で使用する場合、「からなること(consisting)」は、特許請求の範囲の構成要素に明記されていない任意の構成要素、工程又は成分を除外する。本明細書で使用する場合、「から本質的になること(consisting essentially of)」は、特許請求の範囲の基本的かつ新規な特性に実質的に影響を及ぼさない材料又は工程を除外しない。本明細書における各例において、「含むこと(comprising)」、「から本質的になること(consisting essentially of)」及び「からなること(consisting)」という用語のいずれかを、他の2つの用語のいずれかと置き換えることができる。
本明細書で使用する場合、「約」又は「およそ」という用語は、所定の値又は範囲の20%以内、好ましくは、10%以内、より好ましくは、5%以内を意味する。また、具体的な数値も含み、例えば、約20は、20を含む。
本明細書において特に断らない限り、本発明に関連して使用される科学用語及び技術用語は、当業者により一般的に理解される意味を有するものとする。さらに、特に断らない限り、単数形の用語は、複数形を含み、複数形の用語は、単数形を含むものとする。本発明の方法及び技術は、一般的には、当技術分野において周知の従来法に従って実施される。一般的には、本明細書に記載された生化学、酵素学、分子生物学及び細胞生物学、微生物学、遺伝学並びにタンパク質及び核酸化学及びハイブリダイゼーションの技術に関連して使用される命名法は、当該技術分野において周知かつ一般的に使用されるものである。
本発明の方法及び技術は、一般的には、当該技術分野において周知の従来法に従って実施され、特に断らない限り、本明細書をとおして引用され、検討されている種々の一般的な文献及びより具体的な文献に記載されているとおりに実施される。例えば、Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 3rd ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N. Y. (2001);Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, J, Greene Publishing Associates (1992, and Supplements to 2002);Handbook of Biochemistry: Section A Proteins, Vol I 1976 CRC Press;Handbook of Biochemistry: Section A Proteins, Vol II 1976 CRC Pressを参照のこと。本明細書に記載された分子生物学及び細胞生物学、タンパク質生化学、酵素学並びに医薬化学及び製薬化学に関連して使用される命名法並びにこれらの実験手法及び技術は、当技術分野において周知かつ一般的に使用されるものである。
実施例
下記仮説的な実施例は、本発明を例証するものであるが、本発明の範囲を限定するものとして解釈されるものではない。
実施例1
4名のHSV-2感染者及び2名の非感染者からのPBMCを融解させ、一晩静置した。細胞を5×10個/ウェルでプレート上に播種し、続けて、5μg/mLHSV-2 UL48 mRNA単独で又は5μg/mL UL49 mRNAと共に48時間刺激した。その後、上清を回収し、Luminex装置により、IFN-γの分泌を分析した。バックグラウンドシグナル(バッファーで刺激された細胞から発生)を各ウェルから差し引き、結果をpg/mlとして表わした。
実施例2
HSV-2感染モルモット及び対照モルモットからの脾臓細胞(1×10個)を10μg/mL HSV-2 UL31 mRNA及び10μg/mL UL34 mRNAと混合した。ついで、細胞をELISPOT 抗インターフェロンガンマ(IFN-γ)抗体被覆プレート(Multiscreen HTSプレート;Millipore)に移し、20時間インキュベーションした。その後、プレートを標準的なELISPOTプロトコールに従って現像し、IFN-γ分泌細胞をスポットとして、自動読み取り機により定量した。非刺激細胞及び20μg/mLPHAをそれぞれ、陰性対照及び陽性対照として使用した。
実施例3
14名のHSV-2感染者及び6名の非感染者からのPBMCを融解させ、一晩静置した。細胞を2×10個/ウェルでELISPOT抗インターフェロンガンマ(IFN-γ)抗体被覆プレート上に播種した。続けて、細胞を5μg/mLHSV-2 UL31 mRNA及び5μg/mL HSV-2 UL34 mRNAで48時間刺激した。その後、プレートを製造業者の説明書に従って現像し、IFN-γ分泌細胞をスポットとして、自動読み取り機によりカウントした。バックグラウンドシグナル(バッファーで刺激された細胞から発生)を各ウェルから差し引き、結果を2×10個 PBMC当たりのSFU(スポット形成単位)として表わした。
実施例4
4名のHSV-2感染者及び2名の非感染者からのPBMCを融解させ、一晩静置した。細胞を2×10個/ウェルでELISPOT抗インターフェロンガンマ(IFN-γ)抗体被覆プレート上に播種した。続けて、細胞を5μg/mLHSV-2 UL48 mRNA単独で又は5μg/mL UL49 mRNAと共に48時間刺激した。その後、プレートを製造業者の説明書に従って現像し、IFN-γ分泌細胞をスポットとして、自動読み取り機によりカウントした。バックグラウンドシグナル(バッファーで刺激された細胞から発生)を各ウェルから差し引き、結果を2×10個 PBMC当たりのSFU(スポット形成単位)として表わした。
実施例5
14名のHSV-2感染者及び6名の非感染者からのPBMCを融解させ、一晩静置した。細胞を2×10個/ウェルでELISPOT抗インターフェロンガンマ(IFN-γ)抗体被覆プレート上に播種した。続けて、細胞を5μg/mLHSV-2 UL48 mRNA単独で又は5μg/mL UL49 mRNAと組み合わせて48時間刺激した。その後、プレートを製造業者の説明書に従って現像し、IFN-γ分泌細胞をスポットとして、自動読み取り機によりカウントした。バックグラウンドシグナル(バッファーで刺激された細胞から発生)を各ウェルから差し引き、結果を2×10個 PBMC当たりのSFU(スポット形成単位)として表わした。
実施例6
4名のHSV-2感染者及び2名の非感染者からのPBMCを融解させ、一晩静置した。細胞を2×10個/ウェルでELISPOT抗インターフェロンガンマ(IFN-γ)抗体被覆プレート上に播種した。続けて、細胞を5μg/mLHSV-2 UL11 mRNA、5μg/mL HSV-2 UL16 mRNA及び5μg/mLUL21 mRNA又は組み合わせにおける単独のタンパク質の量に正規化されたUL11、UL16もしくはUL21をコードする各mRNAで48時間刺激した。その後、プレートを製造業者の説明書に従って現像し、IFN-γ分泌細胞をスポットとして、自動読み取り機によりカウントした。バックグラウンドシグナル(バッファーで刺激された細胞から発生)を各ウェルから差し引き、結果を2×10個 PBMC当たりのSFU(スポット形成単位)として表わした。
実施例7
14名のHSV-2感染者及び6名の非感染者からのPBMCを融解させ、一晩静置した。細胞を2×10個/ウェルでELISPOT抗インターフェロンガンマ(IFN-γ)抗体被覆プレート上に播種した。続けて、細胞を5μg/mLHSV-2 UL11 mRNA、5μg/mL HSV-2 UL16 mRNA及び5μg/mLUL21 mRNAで48時間刺激した。その後、プレートを製造業者の説明書に従って現像し、IFN-γ分泌細胞をスポットとして、自動読み取り機によりカウントした。バックグラウンドシグナル(バッファーで刺激された細胞から発生)を各ウェルから差し引き、結果を2×10個 PBMC当たりのSFU(スポット形成単位)として表わした。
実施例8
4名のHSV-2感染者及び2名の非感染者からのPBMCを融解させ、一晩静置した。細胞を5×10個/ウェルでプレート上に播種し、続けて、5μg/mLHSV-2 UL31 mRNA及び5μg/mL HSV-2 UL34 mRNAで48時間刺激した。その後、上清を回収し、Luminex装置により、IFN-γの分泌を分析した。バックグラウンドシグナル(バッファーで刺激された細胞から発生)を各ウェルから差し引き、結果をpg/mlとして表わした。
実施例9
4名のHSV-2感染者及び2名の非感染者からのPBMCを融解させ、一晩静置した。細胞を5×10個/ウェルでプレート上に播種し、続けて、5μg/mLHSV-2 UL11 mRNA、5μg/mL HSV-2 UL16 mRNA及び5μg/mLHSV-2 UL21 mRNAで48時間刺激した。その後、上清を回収し、Luminex装置により、IFN-γの分泌を分析した。バックグラウンドシグナル(バッファーで刺激された細胞から発生)を各ウェルから差し引き、結果をpg/mlとして表わした。
実施例10:mRNAトランスフェクション及びウエスタンブロット
方法
HEK293T細胞を、RPMI培地及び10% FBSを含有する12ウェルプレートに、0.4×10個/mlの濃度で播種し、37℃及び5% CO2でインキュベーションした。翌日、細胞を、Invitrogen Lipofectamine MessengerMAXトランスフェクションキットを使用してトランスフェクションした。ウェル当たりに1μg/μl mRNA(配列番号:25並びに配列番号:26、27及び28) 2~4.5μlを加えた。空のトランスフェクションウェルには、トランスフェクション試薬のみを加え、陰性対照ウェルには何も加えなかった。
細胞を翌日にかけて回収した。これを行うために、培地をウェルから除去し、冷やしたThermo Scientific RIPA溶解及び抽出バッファー 70μlを7×cOmplete(EDTAフリーのプロテアーゼインヒビターカクテル) 10μlと共に、各ウェルに加えた。プレートを4℃で、2~3分間インキュベーションし、ついで、細胞を、セルスクレーパーを使用して剥離した。細胞-バッファー混合物を1.5mlのエッペンドルフチューブに移し、氷上でインキュベーションした。50mM DTTを含有する2×Biorad Laemliバッファー 70μlを各チューブに加え、サンプルを90℃で5分間煮沸した。陽性対照のために、リコンビナントタンパク質のサンプルをRIPAバッファー及びプロテイナーゼに加え、他のサンプルと同一の方法で処理した。
サンプルをゲルにロードする前に、細胞溶解用のThermo Scientific Pierce Universalヌクレアーゼ 1μlをそれぞれに加えた。ついで、各サンプル 20μlをInvitrogen Bolt 4~12% Bis-Tris Plusゲルにロードし、90Vで40分間ランさせた。この後、サンプルを、iBlot 2システム及びiBlot 2 mini PVDF Transfer Stacksを使用してトランスファーした。使用された設定は、以下のとおりとした:20Vで1分間、23Vで4分間及び25Vで90秒間。
ついで、メンブレンを0.1% Tween-20を含有する5% BSA TBS中において、4℃で一晩ブロッキングした。市販されているか又は自社で製造されたかのいずれかの一次抗体を1:1000の濃度で、ブロッキングバッファーに加え、室温で穏やかに振とうしながら、1時間インキュベーションした。ついで、メンブレンを、0.1% Tween-20を含有するTBSで3回洗浄した。この後、二次抗体を1:5000の濃度でブロッキングバッファーに加え、室温で穏やかに振とうしながら、1時間インキュベーションした。メンブレンを再度、0.1% Tween-20を含有するTBSで3回洗浄した。
撮像を行うために、SuperSignal West Femto Maximum Sensitivity Substrate 300μlをメンブレンに適用し、100mm F/2.8レンズを備えたフルフレームカメラ及び暗箱を使用して撮像した。
結果
図3(mRNA UL48-配列番号:25に由来するタンパク質のウエスタンブロット)に、mRNA構築物のトランスフェクション後のUL48タンパク質の発現が明確に示されている。最も高い発現は、トランスフェクションの1日後に明らかであり、ついで、時間とともに低下する。これは、本発明者らのUL48 mRNA構築物(例えば、配列番号:25)の適用の結果として、タンパク質が堅牢に発現されたことを示している。
図4(mRNA UL11、UL16及びUL21-配列番号:26、27及び28に由来するタンパク質のウエスタンブロット)に、本発明者らのmRNA構築物のトランスフェクション後のUL11、UL16及びUL21の発現が明確に示されている。UL48について観察されたのと同様に、発現は、トランスフェクションの1日後に最も高くなる。
実施例11:PBMCを使用した免疫原性データ
方法
PBMCの増殖プロトコール及びIFNγ ELISAプロトコール
HSV-2+ドナーから収集したPBMCを融解させ、10% FBSを含有するRPMI中において、12ウェルプレートに1×10個/mlの濃度で一晩増殖させた。翌日、細胞を、Invitrogen Lipofectamine MessengerMAXトランスフェクションキットを使用してトランスフェクションした。ウェル当たりに1μg/μl mRNA(配列番号:25、配列番号:2及び配列番号:30) 1~2μlを加えた。空のトランスフェクションウェルには、トランスフェクション試薬のみを加え、陰性対照ウェルには何も加えなかった。
サンプルをトランスフェクションの3日後に収集した。上清を500RCFで6分間遠心分離した。その後、IFNγレベルを、Invitrogen Human IFN Gamma非被覆ELISAキット及びF96 Maxisorp Nunc-Immunoプレートを使用して評価した。OD450測定をTecan Infinite M Plexプレートリーダーで行った。
結果
ELISAの結果から、プソイドウリジンUL48、gD及びICP4 mRNAにより誘発されたHSV2+ドナーからのPBMCにおけるIFNγの分泌が示される。これらのデータは、特異的免疫応答が適用されたHSV-2 mRNAの発現により誘発されることを示している。陰性対照ウェルには、mRNA又はトランスフェクション試薬を加えなかった。ブランクウェルには、生体サンプルをELISA中に加えなかった。
図5に、UL48修飾mRNAとインキュベーションした際のELISAを使用したIFNγ放出の測定を示す。陰性対照ウェルには、mRNA又はトランスフェクション試薬を加えず、ブランクウェルには、生体サンプルをELISA中に加えなかった。
図6に、ICP4及びgD修飾mRNAとインキュベーションした際のELISAを使用したIFNγ放出の測定を示す。空のトランスフェクションウェルには、トランスフェクション試薬のみを加え、陰性対照ウェルには、何も加えなかった。ブランクウェルには、生体サンプルをELISA中に加えなかった。
結論
ウエスタンブロット及びPBMC実験を行って、本mRNA構築物の安定性及び機能性を評価した。ワクチン組成物に使用されるmRNAの設計は極めて重要であるため、それを評価した。安定性に関して、本ワクチンmRNAは、最適化された5’キャップ、5’及び3’UTR並びにポリAテイルを含む。ウエスタンブロット分析(図3及び図4)には、UL48、UL11、UL16及びUL21 mRNAの堅牢な発現が明らかに示されており、該構築物が安定であることが示されている。これは、前記mRNAで構成されるワクチンの有効性に必須である。
安定性に加えて、免疫応答をワクチン成分により誘発することができることも確認されている。その意味で、ワクチンmRNAを、1-メチル-プソイドウリジンで修飾された残基を使用して最適化して、生得的な非特異的免疫応答を低減した。実際に、IFNγ ELISAの結果から、機能的なUL48、gD及びICP4 mRNAとのインキュベーションにより、この免疫因子が特異的に放出されることを示されている(図5及び図6)。
当業者であれば、本発明が、目的を遂行し、言及された目標及び利点並びにそれらに固有のものを得るのによく適合していることを容易に理解するであろう。さらに、当業者であれば、本発明の範囲及び精神から逸脱することなく、本明細書に開示された本発明に対して、種々の置換及び修飾を行うことができることが容易に明らかであろう。本明細書に記載された組成物、方法、手法、処理、分子及び特定の化合物は、現在のところ、特定の実施態様の代表的なものであり、例示的なものであり、本発明の範囲を限定することを意図するものではない。本発明の精神の範囲内に包含される当業者には、特許請求の範囲により定義されるそこでの変更及び他の使用が生じるであろう。本明細書における既発表文献の列記又は検討は、必ずしも、その文献が技術水準の一部であること又は一般知識であることを認めるものとして解釈されるべきではない。
本明細書に例示的に記載された発明を本明細書に具体的に開示されていない任意の1つ以上の要素、1つ以上の限定がない場合でも、適切に実施することができる。このため、例えば、「含むこと(comprising)」、「含むこと(including)」、「含有すること(containing)」等の用語は、限定することなく拡大的に読まれるものとする。さらに、本明細書で利用された用語及び表現は、説明の用語として使用されたものであり、限定の用語として使用されたものではなく、このような用語及び表現の使用において、示され、記載された特徴又はその一部の任意の均等物を排除する意図はないが、特許請求された本発明の範囲内で、種々の修飾が可能であることが認識される。このため、本発明は、例示的な実施態様及び任意の特徴により具体的に開示されているが、本明細書で具体化される発明の修飾及び変形を当業者に頼ることができ、このような修飾及び変形は、本発明の範囲内であると考えられると理解されるべきである。
本発明は、本明細書において広範かつ一般的に記載されている。一般的な開示に含まれる狭義の種及び亜属の各グループも、本発明の一部を構成する。これは、切り取られる情報が本明細書に具体的に言及されているか否かにかかわらず、上位概念(genus)から任意の主題を除去する但し書き又は否定的限定を伴う本発明の一般的記載を含む。本明細書で言及された特許出願及び科学刊行物を含む全ての文書は、あらゆる目的のために参照により本明細書に組み入れられる。
他の実施態様は、下記特許請求の範囲に含まれる。加えて、本発明の特徴又は態様が、マーカッシュ群の観点から記載されている場合、当業者であれば、本発明が、それによりマーカッシュ群の任意の個々のメンバー又はメンバーのサブグループの観点からも記載されていることを認識するであろう。

Claims (15)

  1. 1種以上のmRNAを含むワクチン組成物であって、
    前記mRNAはそれぞれ、
    (i)UL48、
    (ii)UL48及びUL49、
    (iii)UL11、UL16及びUL21又は
    (iv)UL31及びUL34
    からなる群より選択される単純ヘルペスウイルス(HSV)構造タンパク質又はその免疫原性フラグメントをコードする、
    ワクチン組成物。
  2. UL48が、配列番号:6のアミノ酸配列と80%以上同一なアミノ酸配列を有し、UL49が、配列番号:7のアミノ酸配列と62%以上同一なアミノ酸配列を有し、UL11が、配列番号:1のアミノ酸配列と75%以上同一なアミノ酸配列を有し、UL16が、配列番号:2のアミノ酸配列と72%以上同一なアミノ酸配列を有し、UL21が、配列番号:3のアミノ酸配列と80%以上同一なアミノ酸配列を有し、UL31が、配列番号:8のアミノ酸配列と85%以上同一なアミノ酸配列を有し、UL34が、配列番号:8のアミノ酸配列と70%以上同一なアミノ酸配列を有する、請求項1記載のワクチン組成物。
  3. 前記HSV mRNAがそれぞれ、該ワクチン組成物の形態で対象に投与された場合、免疫応答を誘発可能である、請求項1又は2記載のワクチン組成物。
  4. a)HSV糖タンパク質D(gD)又は配列番号:11のアミノ酸配列と70%以上同一なアミノ酸配列を有するその免疫原性フラグメント、b)HSV糖タンパク質B(gB)又は配列番号:10のアミノ酸配列と70%以上同一なアミノ酸配列を有するその免疫原性フラグメント及びc)HSV糖タンパク質E(gE)又は配列番号:4のアミノ酸配列と70%以上同一なもしくは配列番号:5のアミノ酸配列と80%以上同一なアミノ酸配列を有するその免疫原性フラグメント又はそれら任意の組み合わせからなる群より選択される単純ヘルペスウイルス(HSV)糖タンパク質をコードする少なくとも1種のmRNAをさらに含む、請求項1~3のいずれか一項記載のワクチン組成物。
  5. 以下:
    (i)UL48並びにgD及び/もしくはgB、場合により、ICP4、
    (ii)gEを伴うUL48及びUL49、
    (iii)gE、gD及び/もしくはgBを伴うUL11、UL16及びUL21又は
    (iv)gD及び/もしくはgBを伴うUL31及びUL34
    を含む、請求項4記載のワクチン組成物。
  6. 単純ヘルペスウイルス(HSV)糖タンパク質をコードする前記少なくとも1種のmRNAが、1つ以上のプソイドウリジン残基を含むヌクレオシド修飾mRNAであり、好ましくは、ここで、1つ以上のプソイドウリジン残基が、mΨ(1-メチルプソイドウリジン)、macpΨ(1-メチル-3-(3-アミノ-5-カルボキシプロピル)プソイドウリジン)、Ψm(2’-0-メチルプソイドウリジン)、mD(5-メチルジヒドロウリジン)、mΨ(3-メチルプソイドウリジン)又はそれらの任意の組み合わせを含む、請求項4又は5記載のワクチン組成物。
  7. 前記少なくとも1種のmRNAが、HSV-1ポリペプチドをコードする、請求項1~6のいずれか一項記載のワクチン組成物。
  8. 前記少なくとも1種のmRNAが、HSV-2ポリペプチドをコードする、請求項1~7のいずれか一項記載のワクチン組成物。
  9. (i)HSV-2系統333由来のアミノ酸26~331もしくは別のHSV系統由来の相同配列を含むHSV gDの前記免疫原性フラグメントをコードする前記ヌクレオシド修飾mRNAであり、好ましくは、ここで、前記ヌクレオシド修飾mRNAの核酸配列が、配列番号:12に記載されているとおりでありかつ/又は
    (ii)HSV-2系統2.12由来のアミノ酸24~405もしくは別のHSV系統由来の相同配列を含むHSV gEの前記免疫原性フラグメントをコードする前記ヌクレオシド修飾mRNAであり、好ましくは、ここで、前記ヌクレオシド修飾mRNAの核酸配列が、配列番号:13に記載されているとおりである、請求項6記載のワクチン組成物。
  10. 前記mRNAのうちの1種以上が、
    (i)好ましくは、配列番号:25~30のうちの1種以上に係るポリAテイル、
    (ii)m7GpppGキャップ、3’-0-メチル-m7GpppGキャップもしくはアンチリバースキャップアナログ、
    (iii)キャップ非依存性翻訳エンハンサー並びに/又は
    (iv)好ましくは、配列番号:25~30のうちの1種以上に係る、翻訳を亢進する5’及び3’非翻訳領域
    をさらに含む、請求項1~9のいずれか一項記載のワクチン組成物。
  11. 前記mRNAのうちの1種以上が、ナノ粒子、脂質、ポリマー、コレステロール又は細胞浸透性ペプチド、好ましくは、リポソームナノ粒子にカプセル化されている、請求項1~10のいずれか一項記載のワクチン組成物。
  12. 対象における単純ヘルペスウイルス(HSV)感染を治療し又は予防するのに使用するための、請求項1~11のいずれか一項記載のワクチン組成物。
  13. 前記HSV感染が、HSV-1感染、HSV-2感染、一次HSV感染、一次HSV感染後の再燃、再発もしくはHSV口唇炎、潜伏HSV感染の再活性化、HSV脳炎、HSV新生児感染、性器HSV感染又は口内HSV感染からなる群より選択される、請求項12記載の使用のためのワクチン組成物。
  14. 該ワクチン組成物が、筋肉内投与、皮下投与、皮内投与、鼻腔内投与、膣内投与、直腸内投与又は局所投与用であり、好ましくは、ここで、該組成物が、注射用ワクチンである、請求項13又は14記載の使用のためのワクチン組成物。
  15. 薬学的に許容し得る注射用担体又はアジュバントをさらに含む、請求項1~14のいずれか一項記載のワクチン組成物。
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