JP2024510839A - 悪性末梢神経鞘腫の鑑別診断のための組成物 - Google Patents

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Abstract

本発明は、悪性末梢神経鞘腫（Ｍａｌｉｇｎａｎｔ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｎｅｒｖｅ ｓｈｅａｔｈ ｔｕｍｏｒ，ＭＰＮＳＴ）の鑑別診断用組成物、それを含む鑑別診断用キット、それを用いた悪性末梢神経鞘腫の鑑別診断に必要な情報を提供する方法、悪性末梢神経鞘腫の予防、改善及び治療用物質のスクリーニング方法などに関する。本発明のタンパク質マーカーを検出できる組成物を用いると、神経線維腫症１型の患者において悪性腫瘍の発生有無を予測及び診断し得るという効果がある。【選択図】図１０ａ

Description

本発明は、悪性末梢神経鞘腫（Ｍａｌｉｇｎａｎｔ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｎｅｒｖｅ ｓｈｅａｔｈ ｔｕｍｏｒ，ＭＰＮＳＴ）の鑑別診断用組成物、それを含む鑑別診断用キット、それを用いた悪性末梢神経鞘腫の鑑別診断に必要な情報を提供する方法、悪性末梢神経鞘腫の予防、改善及び治療用物質のスクリーニング方法などに関する。
本発明は、２０２１年３月２４日付で出願された韓国特許出願第１０－２０２１－００３７９１２号及び２０２２年３月１８日付で出願された韓国特許出願第１０－２０２２－００３４２９５号に基づく優先権を主張し、前記出願の明細書及び図面に開示されたすべての内容は、本出願に援用される。
神経線維腫症１型（Ｎｅｕｒｏｆｉｂｒｏｍａｔｏｓｉｓ ｔｙｐｅ Ｉ、以下、「ＮＦ－１」という）は、１８８２年にフリードリヒ・フォン・レクリングハウゼン（Ｆｒｅｄｒｉｃｈ ｖｏｎ Ｒｅｃｋｌｉｎｇｈａｕｓｅｎ）によって初めて記述されており、最も一般的な遺伝性疾患の１つである。ＮＦ－１は、常染色体優性遺伝を介して遺伝し、全世界的に１：３，０００人の人々に影響を及ぼす。ＮＦ－１は、皮膚の多発性カフェオレスポットと皮膚の神経繊維腫を特徴とする。また、様々なレベルの神経系、骨格系発現と新生物性発現が患者に影響を及ぼすことがある。ＮＦ－１患者は、叢状神経線維腫（Ｐｌｅｘｉｆｏｒｍ ｎｅｕｒｏｆｉｂｒｏｍａｓ，ＰＮ；２７％）、視神経膠腫（Ｏｐｔｉｃ ｎｅｒｖｅ ｇｌｉｏｍａ；１５－２０％）、クロム親和性細胞腫（ｐｈｅｏｃｈｒｏｍｏｃｙｔｏｍａ；１％）、悪性末梢神経鞘腫（ｍａｌｉｇｎａｎｔ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｎｅｒｖｅ ｓｈｅｅｔｈ ｔｕｍｏｒ，ＭＰＮＳＴ；８－１３％）を含む中枢及び末梢神経系腫瘍が発生するおそれがある。これは一般人に比べて約１，０００倍高い割合である。
悪性末梢神経鞘腫（以下、「ＭＰＮＳＴ」という）は、ＮＦ－１患者の生存率に最も大きな影響を及ぼす合併症の１つである。これは良性神経髓鞘腫瘍である叢状神経線維腫の悪性変形によって生じることが知られており、激しい痛み、急激な線維腫の大きさの増加、神経学的症状を伴う場合、疑わなければならない。
現在まで、１８Ｆ－ＦＤＧ－ＰＥＴ（１８Ｆ－ｆｌｕｏｒｏｄｅｏｘｙｇｌｕｃｏｓｅ ｐｏｓｉｔｒｏｎ ｅｍｉｓｓｉｏｎ ｃｏｍｐｕｔｅｒｉｚｅｄ ｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ）が良性腫瘍とＭＰＮＳＴを区別するのに活用されており、悪性が疑われる場合、組織学的所見によりＭＰＮＳＴを診断することになる。
殆どのＭＰＮＳＴは、組織学的に紡錘状細胞（ｓｐｉｎｄｌｅ ｃｅｌｌ）が束をなす様相であり、核分化が進行した細胞が観察され、周辺組織に浸透する様相を呈する。ＭＰＮＳＴの診断のためにＳ１００タンパク質染色が用いられているが、ＭＰＮＳＴの５０～９０％で染色良性を示し、その他にＬｅｕ－７タンパク質とミエリン塩基性タンパク質（ｍｙｅｌｉｎ ｂａｓｉｃ ｐｒｏｔｅｉｎ）は、ＭＰＮＳＴの約５０％で良性を示す。ビメンチン（ｖｉｍｅｎｔｉｎ）もＭＰＮＳＴの診断に使用される病理学的マーカーであるが、紡錘状細胞に特異的であり、ＭＰＮＳＴの特異的診断には制限的である。したがって、ＮＦ－１においてＭＰＮＳＴの進行を明確に判断できる病理学的指標が必要なのが実状である。
ＭＰＮＳＴは、診断後に手術的切除を要する疾患である。手術後にも約５０％は再発のリスクがあり、手術で完全切除が行われていない場合、抗がん療法と放射線治療が必要になる場合がある。それにもかかわらず、ＭＰＮＳＴ患者の５年間の生存率は、２０～５０％にとどまる。
現在まで、ＭＰＮＳＴを標的とする治療法がない状況で、ＭＰＮＳＴを血液や尿から早期診断し得るバイオマーカーを探し出すと、患者の生存率の向上に寄与できるものと考えられる。
そこで、本発明者らは、悪性末梢神経鞘腫（Ｍａｌｉｇｎａｎｔ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｎｅｒｖｅ ｓｈｅａｔｈ ｔｕｍｏｒ，ＭＰＮＳＴ）及び良性神経繊維腫組織を用いて広範な定量的、定性的プロテオーム分析を行った結果、ＭＰＮＳＴ組織において特異的に発現されるタンパク質を同定して本発明を完成した。
したがって、本発明の目的は、悪性末梢神経鞘腫（ＭＰＮＳＴ）の鑑別診断用組成物を提供することである。
本発明の他の目的は、本発明による組成物を含む悪性末梢神経鞘腫の鑑別診断用キットを提供することである。
本発明のさらに他の目的は、悪性末梢神経鞘腫の鑑別診断に必要な情報を提供する方法を提供することである。
本発明のさらに他の目的は、悪性末梢神経鞘腫の予防、改善または治療用組成物を提供することである。
本発明のさらに他の目的は、悪性末梢神経鞘腫の予防、改善または治療用物質のスクリーニング方法を提供することである。
しかし、本発明が達成しようとする技術的課題は、以上で言及した課題に制限されず、言及されていないさらに他の課題は、以下の記載から当業者が明確に理解できるだろう。
本発明の目的を達成するために、本発明は、エンドシアリン（ｅｎｄｏｓｉａｌｉｎ）、ＳＰＡＲＣ－類似タンパク質１（ＳＰＡＲＣ－ｌｉｋｅ ｐｒｏｔｅｉｎ １）及びニュートロフィルコラゲナーゼ（ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ ｃｏｌｌａｇｅｎａｓｅ）からなる群から選ばれる少なくとも１つのタンパク質またはそのｍＲＮＡ発現レベルを測定する製剤を有効成分として含む、悪性末梢神経鞘腫（Ｍａｌｉｇｎａｎｔ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｎｅｒｖｅ ｓｈｅａｔｈ ｔｕｍｏｒ，ＭＰＮＳＴ）の鑑別診断用組成物を提供する。
本発明の一具現例において、前記組成物は、神経線維腫症Ｉ型から悪性末梢神経鞘腫を区別して診断してもよい。
本発明の他の具現例において、前記タンパク質の発現レベルを測定する製剤は、前記タンパク質に特異的な抗体またはアプタマーであってもよいが、これに制限されるものではない。
本発明のさらに他の具現例において、前記ｍＲＮＡの発現レベルを測定する製剤は、前記ｍＲＮＡに特異的に結合するプライマーセットまたはプローブであってもよいが、これに制限されるものではない。
また、本発明は、本発明による前記組成物を含む悪性末梢神経鞘腫の鑑別診断用キットを提供する。
本発明の一具現例において、前記キットは、エンドシアリン（ｅｎｄｏｓｉａｌｉｎ）、ＳＰＡＲＣ－類似タンパク質１（ＳＰＡＲＣ－ｌｉｋｅ ｐｒｏｔｅｉｎ １）及びニュートロフィルコラゲナーゼ（ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ ｃｏｌｌａｇｅｎａｓｅ）からなる群から選ばれる少なくとも１つのタンパク質またはそのｍＲＮＡ発現レベルが検出されるか、またはそれらの発現レベルが良性神経線維腫試料の発現レベルに比べてより高い場合、悪性末梢神経鞘腫であると決定することを指示する説明書を含んでもよい。
また、本発明は、被検体から分離した生物学的試料においてエンドシアリン（ｅｎｄｏｓｉａｌｉｎ）、ＳＰＡＲＣ－類似タンパク質１（ＳＰＡＲＣ－ｌｉｋｅ ｐｒｏｔｅｉｎ １）及びニュートロフィルコラゲナーゼ（ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ ｃｏｌｌａｇｅｎａｓｅ）からなる群から選ばれる少なくとも１つのタンパク質またはそのｍＲＮＡ発現レベルを測定する段階を含む、悪性末梢神経鞘腫の鑑別診断に必要な情報を提供する方法を提供する。
また、本発明は、被検体から分離した生物学的試料においてエンドシアリン（ｅｎｄｏｓｉａｌｉｎ）、ＳＰＡＲＣ－類似タンパク質１（ＳＰＡＲＣ－ｌｉｋｅ ｐｒｏｔｅｉｎ １）及びニュートロフィルコラゲナーゼ（ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ ｃｏｌｌａｇｅｎａｓｅ）からなる群から選ばれる少なくとも１つのタンパク質またはそのｍＲＮＡ発現レベルを測定する段階を含む、悪性末梢神経鞘腫の鑑別診断方法を提供する。
本発明の一具現例において、前記方法は、エンドシアリン（ｅｎｄｏｓｉａｌｉｎ）、ＳＰＡＲＣ－類似タンパク質１（ＳＰＡＲＣ－ｌｉｋｅ ｐｒｏｔｅｉｎ １）及びニュートロフィルコラゲナーゼ（ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ ｃｏｌｌａｇｅｎａｓｅ）からなる群から選ばれる少なくとも１つのタンパク質またはそのｍＲＮＡの発現が検出されるか、またはそれらの発現レベルが神経線維腫症Ｉ型患者から分離した生物学的試料における発現レベルに比べてより高い場合、悪性末梢神経鞘腫であると診断する段階をさらに含んでもよい。
本発明の他の具現例において、前記被検体は、悪性末梢神経鞘腫が疑われる患者であるか、または神経線維腫症Ｉ型であると診断された患者であってもよい。
本発明のさらに他の具現例において、前記生物学的試料は、血液、全血、血漿、尿、組織、細胞、器官、骨髄、微細針吸引検体、微細針洗浄液、コア針生検（ｃｏｒｅ ｎｅｅｄｌｅ ｂｉｏｐｓｙ）検体及び唾液からなる群から選ばれる少なくとも１つであってもよいが、これに制限されるものではない。
本発明のさらに他の具現例において、前記タンパク質発現レベルは、ウェスタンブロット、ＥＬＩＳＡ、放射線免疫分析、放射線免疫拡散法、オクタロニー免疫拡散法（Ｏｕｃｈｔｅｒｌｏｎｙ ｉｍｍｕｎｏｄｉｆｆｕｓｉｏｎ）、ロケット免疫電気泳動（Ｒｏｃｋｅｔ ｉｍｍｕｎｏｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ）、免疫染色法、免疫沈降分析法、補体固定分析法、質量分析法（Ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ）、ＦＡＣＳ及びタンパク質チップからなる群から選ばれる少なくとも１つの方法で測定されてもよいが、これに制限されるものではない。
本発明のさらに他の具現例において、前記ｍＲＮＡ発現レベルは、ＰＣＲ、ＲＮａｓｅ保護分析法、ノーザンブロッティング（ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ）、サザンブロッティング（ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ）、Ｉｎ ｓｉｔｕ交雑法及びＤＮＡチップからなる群から選ばれる少なくとも１つの方法で測定されてもよいが、これに制限されるものではない。
また、本発明は、ＴＧＦ－βシグナル伝達系、ＩＬＫシグナル伝達系、アクチン－サイトスケルトン（ａｃｔｉｎ－ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔｏｎ）シグナル伝達系及びＲｈｏＧＤＩシグナル伝達系からなる群から選ばれる少なくとも１つのシグナル伝達系タンパク質の活性阻害剤または前記タンパク質をコードする遺伝子の発現阻害剤を有効成分として含む、悪性末梢神経鞘腫の予防または治療用薬学的組成物を提供する。
さらに、本発明は、ＴＧＦ－βシグナル伝達系、ＩＬＫシグナル伝達系、アクチン－サイトスケルトン（ａｃｔｉｎ－ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔｏｎ）シグナル伝達系及びＲｈｏＧＤＩシグナル伝達系からなる群から選ばれる少なくとも１つのシグナル伝達系タンパク質の活性阻害剤または前記タンパク質をコードする遺伝子発現阻害剤を、それを必要とする個体に投与する段階を含む、悪性末梢神経鞘腫の予防または治療方法を提供する。
それだけでなく、本発明は、ＴＧＦ－βシグナル伝達系、ＩＬＫシグナル伝達系、アクチン－サイトスケルトン（ａｃｔｉｎ－ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔｏｎ）シグナル伝達系及びＲｈｏＧＤＩシグナル伝達系からなる群から選ばれる少なくとも１つのシグナル伝達系タンパク質の活性阻害剤または前記タンパク質をコードする遺伝子の発現阻害剤の悪性末梢神経鞘腫に対する予防または治療用途を提供する。
また、本発明は、ＴＧＦ－βシグナル伝達系、ＩＬＫシグナル伝達系、アクチン－サイトスケルトン（ａｃｔｉｎ－ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔｏｎ）シグナル伝達系及びＲｈｏＧＤＩシグナル伝達系からなる群から選ばれる少なくとも１つのシグナル伝達系タンパク質の活性阻害剤または前記タンパク質をコードする遺伝子の発現阻害剤を有効成分として含む、悪性末梢神経鞘腫の予防または改善用健康機能食品組成物を提供する。
本発明の一具現例において、前記シグナル伝達系タンパク質は、キナーゼ（ｋｉｎａｓｅ）であってもよいが、これに制限されるものではない。
本発明の他の具現例において、前記キナーゼは、ＣＤＫ４、ＳＴＫ１０、ＣＤＫ５、ＭＡＰ２Ｋ１、ＡＬＰＫ３、ＰＮＫＰ、ＰＤＫ３、ＰＨＫＧ１、ＣＦＬ１、及びＰＡＣＳＩＮ３からなる群から選ばれる少なくとも１つの遺伝子によってコードされるキナーゼであってもよいが、これに制限されるものではない。
本発明のさらに他の具現例において、前記タンパク質の活性阻害剤は、前記タンパク質に特異的に結合するペプチド、抗体、アプタマー及び化合物からなる群から選ばれる少なくとも１つであってもよいが、これに制限されるものではない。
本発明のさらに他の具現例において、前記シグナル伝達系タンパク質の活性阻害剤は、セルメチニブ（ｓｅｌｕｍｅｔｉｎｉｂ）、アルボシジブ（ａｌｖｏｃｉｄｉｂ）、プルバラノール（ｐｕｒｖａｌａｎｏｌ）、パルボシクリブ（ｐａｌｂｏｃｉｃｌｉｂ）、リボシクリブ（ｒｉｂｏｃｉｃｌｉｂ））、アベマシクリプ（ａｂｅｍａｃｉｃｌｉｂ）、フォスタマチニブ（ｆｏｓｔａｍａｔｉｎｉｂ）、ビニメチニブ（ｂｉｎｉｍｅｔｉｎｉｂ）、ラジシコール（ｒａｄｉｃｉｃｏｌ）、ＡＺＤ－８３３０、ジヒドロリポ酸（ｄｉｈｙｄｒｏｌｉｐｏｉｃ ａｃｉｄ）、アルスターパウロン（ａｌｓｔｅｒｐａｕｌｌｏｎｅ）、ヒメニアルジシン（ｈｙｍｅｎｉａｌｄｉｓｉｎｅ）、インジルビン－３’－モノオキシム（ｉｎｄｉｒｕｂｉｎ－３’－ｍｏｎｏｘｉｍｅ）、オロモウシン（ｏｌｏｍｏｕｃｉｎｅ）、ＳＵ９５１６、及び６－フェニル［５Ｈ］ピロロ［２，３－Ｂ］ピラジンからなる群から選ばれる少なくとも１つであってもよいが、これに制限されるものではない。
本発明のさらに他の具現例において、前記遺伝子の発現阻害剤は、前記遺伝子のｍＲＮＡに相補的に結合するｍｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、リボザイム（ｒｉｂｏｚｙｍｅ）、ＤＮＡｚｙｍｅ、ＰＮＡ（ｐｅｐｔｉｄｅ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ）及びアンチセンスオリゴヌクレオチドからなる群から選ばれる少なくとも１つであってもよいが、これに制限されるものではない。
また、本発明は、（ａ）分離された細胞または組織に候補物質を接触させる段階、（ｂ）前記細胞または組織においてＴＧＦ－βシグナル伝達系、ＩＬＫシグナル伝達系、アクチン－サイトスケルトン（ａｃｔｉｎ－ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔｏｎ）シグナル伝達系及びＲｈｏＧＤＩシグナル伝達系からなる群から選ばれる少なくとも１つのシグナル伝達系タンパク質の活性または前記タンパク質をコードする遺伝子の発現レベルを測定する段階、（ｃ）前記候補物質と接触した細胞または組織において前記タンパク質の活性または前記タンパク質をコードする遺伝子の発現レベルが候補物質接触前のレベルに比べて減少される場合、前記候補物質を悪性末梢神経鞘腫の予防、改善または治療用物質であると判定する段階を含む悪性末梢神経鞘腫の予防、改善または治療用物質のスクリーニング方法を提供する。
本発明の一具現例において、前記シグナル伝達系タンパク質は、キナーゼ（ｋｉｎａｓｅ）であってもよいが、これに制限されるものではない。
本発明の他の具現例において、前記キナーゼは、ＣＤＫ４、ＳＴＫ１０、ＣＤＫ５、ＭＡＰ２Ｋ１、ＡＬＰＫ３、ＰＮＫＰ、ＰＤＫ３、ＰＨＫＧ１、ＣＦＬ１、及びＰＡＣＳＩＮ３からなる群から選ばれる少なくとも１つの遺伝子によってコードされるキナーゼであってもよいが、これに制限されるものではない。
本発明のさらに他の具現例において、前記分離された細胞または組織は、神経細胞または神経組織であってもよいが、これに制限されるものではない。
本発明は、悪性末梢神経鞘腫（Ｍａｌｉｇｎａｎｔ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｎｅｒｖｅ ｓｈｅａｔｈ ｔｕｍｏｒ，ＭＰＮＳＴ）の鑑別診断用組成物などに関し、本発明のタンパク質マーカーを検出できる組成物を用いて、神経線維腫症Ｉ型患者において悪性腫瘍の発生有無を予測及び診断し、治療標的として活用し得る。
図１ａ及び図１ｂは、良性神経線維腫（ＮＦ）及び悪性末梢神経鞘腫（ＭＰＮＳＴ）組織を用いた定量的プロテオーム分析の時系列フローチャートである。 図２は、プロテオームデータ分析方法を図式化した図である。 図３は、良性神経線維腫（ＮＦ）及び悪性末梢神経鞘腫（ＭＰＮＳＴ）組織に対するタンパク質の定量結果を示すタンパク質豊富度分布（ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ａｂｕｎｄａｎｃｅ）グラフである。 図４は、ベンダイアグラム分析を用いて神経線維腫（ＮＦ）及び悪性末梢神経鞘腫（ＭＰＮＳＴ）の２つのグループに対する定性的プロテオーム分析結果を示す図である。 図５ａ及び図５ｂは、良性神経線維腫（ＮＦ）と悪性末梢神経鞘腫（ＭＰＮＳＴ）組織において１０倍以上発現増加が示されたタンパク質調査結果を示す図であり、図５ａは、細胞外エクソソームで発現されるタンパク質を、図５ｂは、細胞外基質を分解するタンパク質を選別した結果である。 図６ａ～図６ｊは、良性神経線維腫（ＮＦ）と悪性末梢神経鞘腫（ＭＰＮＳＴ）組織においてＳ－１００同型タンパク質及びビメンチンの発現様相を調査した結果を示すグラフであり、図６ａは、Ｓ１００－Ａ１タンパク質、図６ｂは、Ｓ１００－Ａ４タンパク質、図６ｃは、Ｓ１００－Ａ６タンパク質、図６ｄは、Ｓ１００－Ａ７タンパク質、図６ｅは、Ｓ１００－Ａ８タンパク質、図６ｆは、Ｓ１００－Ａ９タンパク質、図６ｇは、Ｓ１００－Ａ１０タンパク質、図６ｈは、Ｓ１００－Ａ１３タンパク質、図６ｉは、Ｓ１００－Ｂタンパク質、図６ｊは、ビメンチン（Ｖｉｍｅｎｔｉｎ）に対する結果を示す図である。（Ｆ１～Ｆ１０は、患者のＭＰＮＳＴ部位試料、Ｆ１１～Ｆ２０は、患者の良性ＮＦ部位試料を意味する。具体的には、Ｆ１、Ｆ２は、患者１のＭＰＮＳＴ部位試料、Ｆ３、Ｆ４は、患者２のＭＰＮＳＴ部位試料、Ｆ５、Ｆ６は、患者３のＭＰＮＳＴ部位試料、Ｆ７、Ｆ８は、患者４のＭＰＮＳＴ部位試料、Ｆ９、Ｆ１０は、患者５のＭＰＮＳＴ部位試料、Ｆ１１、Ｆ１２は、患者１の良性ＮＦ部位試料、Ｆ１３、Ｆ１４は、患者２の良性ＮＦ部位試料、Ｆ１５、Ｆ１６は、患者３の良性ＮＦ部位試料、Ｆ１７、Ｆ１８は、患者４の良性ＮＦ部位試料、Ｆ１９、Ｆ２０は、患者５の良性ＮＦ試料を意味する。（表３参照）） 図７は、良性神経線維腫（ＮＦ）と悪性末梢神経鞘腫（ＭＰＮＳＴ）組織においてエンドシアリン（ｅｎｄｏｓｉａｌｉｎ）の発現様相を調査した結果を示すグラフである。 図８は、良性神経線維腫（ＮＦ）と悪性末梢神経鞘腫（ＭＰＮＳＴ）組織においてＳＰＡＲＣ－類似タンパク質１の発現様相を調査した結果を示すグラフである。 図９は、良性神経線維腫（ＮＦ）と悪性末梢神経鞘腫（ＭＰＮＳＴ）組織においてニュートロフィルコラゲナーゼ（ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ ｃｏｌｌａｇｅｎａｓｅ）の発現様相を調査した結果を示すグラフである。 図１０ａ～図１０ｃは、良性神経線維腫（ＮＦ）と悪性末梢神経鞘腫（ＭＰＮＳＴ）組織において発現が変化したプロテオームを階層型クラスター分析（ｈｉｅｒａｒｃｈｉｃａｌ ｃｌｕｓｔｅｒ ａｎａｌｙｓｉｓ）した結果を示す図であり、図１０ａは、全体の結果を視覚化した図であり、図１０ｂは、ＭＰＮＳＴにおいて発現が増加したタンパク質のクラスターを、図１０ｃは、ＭＰＮＳＴにおいて発現が減少したタンパク質のクラスターを示す図である。 図１１は、悪性末梢神経鞘腫（ＭＰＮＳＴ）特異的タンパク質に対するｇｅｎｅ ｏｎｔｏｌｏｇｙ分析結果を示す図である。 図１２は、悪性末梢神経鞘腫（ＭＰＮＳＴ）特異的タンパク質に対するＩＰＡ（ｉｎｇｅｎｕｉｔｙ ｐａｔｈｗａｙ ａｎａｌｙｓｉｓ）結果を示す図である。 図１３～図２１は、良性神経線維腫（ＮＦ）に比べて悪性末梢神経鞘腫（ＭＰＮＳＴ）において特異的に発現または活性が増加したキナーゼのａｂｕｎｄａｎｃｅを比較分析したグラフであり、図１３は、ＣＤＫ４、図１４は、ＭＡＰ２Ｋ１、図１５は、ＰＤＫ３、図１６は、ＳＴＫ１０、図１７は、ＡＬＰＫ３、図１８は、ＰＨＫＧ１、図１９は、ＣＤＫ５、図２０は、ＰＮＫＰ、図２１は、ＰＡＣＳＩＮ３のａｂｕｎｄａｎｃｅに対する結果を示すものである。 図２２は、良性神経線維腫（ＮＦ）と悪性末梢神経鞘腫（ＭＰＮＳＴ）組織においてＭＭＰ８タンパク質（ニュートロフィルコラゲナーゼ）に対するＩＨＣ（Ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）結果を示す図である（Ａ１及びＢ１は、ＮＦ組織、Ａ２及びＢ２は、ＭＰＮＳＴ組織）。 図２３は、悪性末梢神経鞘腫（ＭＰＮＳＴ）患者の血液を用いて腫瘍除去の有無によるＭＭＰ８タンパク質（ニュートロフィルコラゲナーゼ）発現差をＥＬＩＳＡ（ｅｎｚｙｍｅ－ｌｉｎｋｅｄ ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ ａｓｓａｙ）で分析した結果を示す図である。 図２４は、良性神経線維腫（ＮＦ）に比べて悪性末梢神経鞘腫（ＭＰＮＳＴ）において特異的に発現または活性が増加したＩＬＫシグナル伝達系、アクチン－サイトスケルトン（ａｃｔｉｎ－ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔｏｎ）シグナル伝達系、及びキナーゼに対するＩＨＣ（Ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）結果を示す図である（Ａ１～Ｊ１は、ＮＦ組織、Ａ２～Ｊ２は、ＭＰＮＳＴ組織）。
本発明は、神経線維腫症１型（Ｎｅｕｒｏｆｉｂｒｏｍａｔｏｓｉｓ ｔｙｐｅ Ｉ）から悪性末梢神経鞘腫（Ｍａｌｉｇｎａｎｔ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｎｅｒｖｅ ｓｈｅａｔｈ ｔｕｍｏｒ，ＭＰＮＳＴ）に移行する場合を鑑別診断するための複数のバイオマーカー及びＭＰＮＳＴ特異的に亢進されるシグナル伝達経路または発現が増加するキナーゼ（ｋｉｎａｓｅ）を標的とするＭＰＮＳＴ治療剤のスクリーニング方法などに関し、本発明者らは、ＭＰＮＳＴ特異的診断マーカー及び新たな治療標的を発掘するため鋭意研究した結果、本明細書に開示される複数のタンパク質及び信号伝達経路を発見し、本発明を完成するに至った。
以下、本発明について詳細に説明する。
本発明は、下記表１に記載のタンパク質からなる群から選ばれる少なくとも１つのタンパク質またはそのｍＲＮＡ発現レベルを測定する製剤を有効成分として含む、悪性末梢神経鞘腫（Ｍａｌｉｇｎａｎｔ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｎｅｒｖｅ ｓｈｅａｔｈ ｔｕｍｏｒ，ＭＰＮＳＴ）の鑑別診断用組成物に関する。
本発明の一実施例では、悪性末梢神経鞘腫（ＭＰＮＳＴ）及び良性神経線維腫（ＮＦ）及び組織を用いたプロテオーム分析を通じて、ＭＰＮＳＴに特異的なタンパク質を同定し、これらのうち、血液や尿から検出される３種のタンパク質－エンドシアリン、ＳＰＡＲＣ－類似タンパク質１及びニュートロフィルコラゲナーゼ－を選別してＭＰＮＳＴに対するバイオマーカーとして使用できることを示した（実施例２～４及び実施例６参照）。
前記エンドシアリンは、ＣＤ２４８遺伝子によってコードされ、配列番号１のアミノ酸配列からなるものであってもよく、配列番号１のアミノ酸配列において１番～３２４番のアミノ酸が消失した同型タンパク質を含む。前記ＳＰＡＲＣ－類似タンパク質１は、ＳＰＡＲＣＬ１遺伝子によってコードされ、配列番号２のアミノ酸配列からなるものであってもよく、配列番号２のアミノ酸配列において１番～１２５番のアミノ酸が消失した同型タンパク質を含む。また、前記ニュートロフィルコラゲナーゼは、ＭＭＰ８遺伝子によってコードされ、配列番号３のアミノ酸配列からなるものであってもよい。
本明細書で使用される用語の「タンパク質」とは、ポリペプチド（ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ）またはペプチド（ｐｅｐｔｉｄｅ）と互換的に使用され、例えば、天然のタンパク質から一般的に発見されるようにアミノ酸残基のポリマーを指す。「ｍＲＮＡ」とは、タンパク質合成の過程で特定の遺伝子からアミノ酸配列を特定するリボソームに遺伝情報（遺伝子特異的塩基配列）を伝達するＲＮＡを意味する。
本明細書で使用される用語の「発現（ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ）」とは、細胞でタンパク質または核酸が生成されることを意味する。
本明細書で使用される用語の「鑑別診断（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ）」とは、特定の疾患または状態を類似の症状を示す他のものと区別することを指す。鑑別診断方法は、複数の代案が可能な状態の存在を確認するために使用される体系的診断方法である。そのような方法は、本質的に候補状態の確率を無視できる程度に縮小させる除去プロセスまたは情報取得プロセスである。当該用語は、さらに良性神経線維腫症（ｎｅｕｒｏｆｉｂｒｏｍａｔｏｓｉｓ）から悪性末梢神経鞘腫への移行の有無を決定することを言及するために使用される。
本発明において、前記組成物は、神経線維腫症１型（ＮＦ－１）から悪性末梢神経鞘腫（ＭＰＮＳＴ）を区別して診断してもよい。
本明細書で使用される用語の「神経線維腫症Ｉ型（Ｎｅｕｒｏｆｉｂｒｏｍａｔｏｓｉｓ ｔｙｐｅ Ｉ）」または「良性神経線維腫」は、皮膚、骨格系、神経系などに様々な臨床症状を示す遺伝疾患で、１８８２年にフリードリヒ・フォン・レクリングハウゼン（Ｆｒｅｄｒｉｃｈ ｖｏｎ Ｒｅｃｋｌｉｎｇｈａｕｓ）によって最初に報告された疾患を意味する。神経線維腫症１型は、皮膚のカフェオレスポット（ｃａｆｅ－ａｕ－ｌａｉｔ－ｓｐｏｔ）、腋窩色素斑（ａｘｉｌｌａｒｙ ｆｒｅｃｋｌｉｎｇ）、鼠径部色素斑（ｉｎｇｕｉｎａｌ ｆｒｅｃｋｌｉｎｇ）、多発性神経線維腫（ｎｅｕｒｏｆｉｂｒｏｍａ）、虹彩に小さな色合いを帯びた過誤腫であるリッシュ結節（Ｌｉｓｃｈ ｎｏｄｕｌｅ）、視神経膠腫（ｏｐｔｉｃ ｇｌｉｏｍａ）、骨形成障害の特徴的な症状を示す。その他に低身長、脊椎側弯症、学習障害が現れることがある。神経線維腫症１型の患者に現れるほとんどの腫瘍は良性であるが、まれな場合には悪性に進行することがあり、神経のある身体のすべての部位に発生することがある。研究によると、６７％のケースで生後１歳以前に発見され、２５～９０％で特徴的な皮膚病変であるカフェオレスポットを伴い、最高１６％で悪性化することが報告されている。
本明細書で使用される用語の「悪性末梢神経鞘腫（Ｍａｌｉｇｎａｎｔ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｎｅｒｖｅ ｓｈｅａｔｈ ｔｕｍｏｒ， ＭＰＮＳＴ）」は、「悪性末梢神経鞘腫瘍」と互換的に使用され、一般に四肢及び頭頸部に発生し、腹腔、骨盤、泌尿生殖器系などでもまれに発生する。主に神経線維腫症１型に関連しており、神経線維腫症患者のうち一生の間に悪性末梢神経鞘腫が発生する危険性は、約１０％前後であることが知られており、予後が非常に不良で悪性度の高い難病の一つである。
本発明の組成物がタンパク質の発現レベルを測定するためのものである場合、タンパク質の発現レベルを測定する製剤は、前記タンパク質に特異的な抗体またはアプタマーであってもよいが、これに制限されるものではない。
本明細書で使用される用語の「抗体」とは、抗原性部位に対して指示される特異的なタンパク質分子を意味する。本発明の目的のために、抗体はマーカータンパク質に対して特異的に結合する抗体を意味し、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体及び組換え抗体をすべて含む。また、抗原－抗体結合性を有するものであれば、全体の抗体の一部も本発明の抗体に含まれ、本発明の前記タンパク質に特異的に結合するあらゆる種類の免疫グロブリン抗体が含まれる。例えば、２つの全長の軽鎖及び２つの全長の重鎖を有する完全な形態の抗体だけでなく、抗体分子の機能的断片、すなわち、抗原結合機能を有するＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）、Ｆ（ａｂ’）２及びＦｖなどを含む。さらに、本発明の抗体には、前記タンパク質に特異的に結合できるものであれば、ヒト化抗体、キメリック抗体などの特殊抗体と組換え抗体も含まれる。
本明細書で使用される用語の「アプタマー（ａｐｔａｍｅｒ）」とは、試料内の検出しようとする分析物質と特異的に結合できる物質であり、それ自体で安定した三次構造を有する一本鎖核酸（ＤＮＡ、ＲＮＡ、または変形核酸）を意味するもので、特異的に試料内の標的タンパク質の存在を確認しうる。アプタマーの製造は、一般的なアプタマーの製造方法により、確認しようとする標的タンパク質に対して選択的かつ高い結合力を有するオリゴヌクレオチドの配列を決定して合成した後、オリゴヌクレオチドの５’末端や３’末端をアプタマーチップの官能基に結合できるように、－ＳＨ、－ＣＯＯＨ、－ＯＨまたはＮＨ２に変形させることによって行われてもよいが、これに制限されるものではない。
前記表１に記載のタンパク質に特異的な抗体を含む本発明の組成物は、公知のタンパク質を感知する方法に必要な製剤をさらに含んでもよく、本組成物を用いて公知のタンパク質を感知する方法を制限なく使用し、被検体（本発明では、被検体から得られた生物学的試料）においてタンパク質の発現レベルを測定しうる。
また、本発明の組成物がｍＲＮＡの発現レベルを測定するためのものである場合、前記ｍＲＮＡの発現レベルを測定する製剤は、前記ｍＲＮＡに特異的に結合するプライマーセットまたはプローブであってもよいが、これに制限されるものではない。
本明細書で使用される用語の「プライマー」とは、短い遊離３末端水酸化基を有する核酸配列であって、相補的な鋳型（ｔｅｍｐｌａｔｅ）と塩基対を形成することができ、鋳型鎖コピーのための開始点として機能する短い核酸配列を意味する。プライマーは、適切な緩衝溶液及び温度で重合反応（すなわち、ＤＮＡポリメラーゼまたは逆転写酵素）のための試薬及び異なる４つのヌクレオシドトリホスフェートの存在下でＤＮＡ合成を開始しうる。
本明細書で使用される用語の「プローブ」とは、ｍＲＮＡと特異的に結合できる短くは数塩基ないし長くは数百塩基に対応するＲＮＡまたはＤＮＡなどの核酸断片を意味し、標識（ｌａｂｅｌｌｉｎｇ）されていて特定ｍＲＮＡの存在の有無を確認し得る。プローブは、オリゴヌクレオチドプローブ、単鎖ＤＮＡ（ｓｉｎｇｌｅ ｓｔｒａｎｄｅｄ ＤＮＡ）プローブ、二重鎖ＤＮＡ（ｄｏｕｂｌｅ ｓｔｒａｎｄｅｄ ＤＮＡ）プローブ、ＲＮＡプローブなどの形態で作製されてもよい。適切なプローブの選択及び混成化条件は、当業界で公知のものに基づいて変形してもよい。
前記「プライマー」または「プローブ」は、ホスホロアミダイト（ｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄｉｔｅ）固体支持体合成法やその他の公知の方法を用いて化学的に合成してもよい。また、プライマーまたはプローブは、ｍＲＮＡとの混成化を妨げない範囲で、当技術分野で公知の方法によって様々に変形させることができる。そのような変形の例としては、メチル化、キャップ化、天然ヌクレオチドの１つ以上の同族体への置換及びヌクレオチド間の変形、例えば、荷電していない連結体（例：メチルホスホネート、ホスホトリエステル、ホスホロアミデート、カルバメートなど）または荷電した連結体（例：ホスホロチオエート、ホスホロジチオエートなど）、及び蛍光または酵素を用いた標識物質（ｌａｂｅｌｉｎｇ ｍａｔｅｒｉａｌ）の結合などがある。
前記表１に記載のタンパク質のｍＲＮＡに特異的なプライマーセットまたはプローブを含む本発明の組成物は、公知のＲＮＡを感知する方法に必要な薬剤をさらに含んでもよい。本発明の組成物を用いて公知のＲＮＡを感知する方法を制限なく使用することにより、被検体において前記タンパク質マーカーのｍＲＮＡのレベルを測定しうる。
また、本発明において、前記タンパク質のｍＲＮＡをコードする遺伝子は、その核酸配列が遺伝子銀行に登録されているので、当業者は、前記配列に基づいてこれらの遺伝子の特定領域を特異的に増幅するアンチセンスオリゴヌクレオチド、プライマー対またはプローブをデザインできる。
前記アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ホスホロアミダイト固体支持体法、またはその他の公知の方法を使用して化学的に合成してもよく、すべての機能的等価物を含む。また、前述した「プライマー」または「プローブ」に関する内容が同様に適用されてもよい。
前記「機能的等価物」という用語は、例えば、基準（ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ）配列から１つまたはそれ以上の置換、欠失または付加、基準（ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ）配列と実験（ｓｕｂｊｅｃｔ）配列との間の様々な機能的非類似性を生じさせない実際の効果（ｎｅｔ ｅｆｆｅｃｔ）など、変化した突然変異配列のヌクレオチドと核酸配列をすべて意味する。通常、そのような実質的等価物である配列は、約３５％（すなわち、実質的に等価な配列における各残基の置換、付加及び欠失の数字は、相応する基準配列と比較し、実質的に等価な配列における残りの全体の数字で割ったとき、約０．３５以下またはそれ以下である）程度で、本明細書に列挙されたものから多様である。そのような配列は、列挙された配列と６５％の配列の同一性を有する。本発明による実質的等価物である、例えば、突然変異、アミノ酸配列は、列挙されたアミノ酸配列と好ましくは、少なくとも８０％の配列同一性、より好ましくは、少なくとも９０％の配列同一性を有する。実質的等価物である本発明のヌクレオチド配列は、例えば、遺伝子暗号の重複（ｒｅｄｕｎｄａｎｃｙ）または縮退（ｄｅｇｅｎｅｒａｃｙ）を考慮すると、より低い百分率の配列同一性を有してもよい。好ましくは、ヌクレオチド配列は、少なくとも約６５％の同一性、より好ましくは、少なくとも約７５％の同一性、最も好ましくは、約９５％の同一性を有するべきである。本発明の目的のためには、実質的に等価な生物学的活性と実質的に等価な合成特徴を有する配列は、実質的等価物として扱われる。等価物を決定するために、成熟配列（例えば、偽（ｓｐｕｒｉｏｕｓ）終止コドン（ｓｔｏｐ ｃｏｄｏｎ）を製造する突然変異による）の切断（ｔｒｕｎｃａｔｉｏｎ）は、無視されなければならない。
本発明の他の態様として、本発明は、本発明による前記組成物を含む悪性末梢神経鞘腫の鑑別診断用キットを提供しうる。
本発明において、前記キットは、エンドシアリン（ｅｎｄｏｓｉａｌｉｎ）、ＳＰＡＲＣ－類似タンパク質１（ＳＰＡＲＣ－ｌｉｋｅ ｐｒｏｔｅｉｎ １）及びニュートロフィルコラゲナーゼ（ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ ｃｏｌｌａｇｅｎａｓｅ）からなる群から選ばれる少なくとも１つのタンパク質またはそのｍＲＮＡの発現が検出されるか、またはそれらの発現レベルが良性神経線維腫試料の発現レベルに比べてより高い場合、悪性末梢神経鞘腫であると決定することを指示する説明書を含んでもよい。
前記本発明のキットには、標的タンパク質をマーカーとして認識する抗体またはｍＲＮＡをマーカーとして認識するプライマーセット、プローブだけでなく、分析方法に適した１種類またはそれ以上の他の構成成分組成物、溶液または装置が含まれてもよい。
具体的な態様として、前記診断キットは、逆転写ポリメラーゼ反応を行うために必要な必須要素を含むことを特徴とする診断用キットであってもよい。逆転写ポリメラーゼ反応キットは、マーカー遺伝子に対する特異的なそれぞれのプライマーセットを含む。プライマーは、各マーカー遺伝子の核酸配列に特異的な配列を有するヌクレオチドであり、約７ｂｐ～５０ｂｐの長さ、より好ましくは、約１０ｂｐ～３０ｂｐの長さである。また、対照群遺伝子の核酸配列に特異的なプライマーを含んでもよい。その他の逆転写ポリメラーゼ反応キットは、テストチューブまたは他の適切なコンテナ、反応緩衝液（ｐＨ及びマグネシウム濃度は、多様である）、デオキシヌクレオチド（ｄＮＴＰｓ）、Ｔａｑ－ポリメラーゼ及び逆転写酵素などの酵素、ＤＮＡｓｅ、ＲＮａｓｅ阻害剤ＤＥＰＣ－水（ＤＥＰＣ－ｗａｔｅｒ）、滅菌水などを含んでもよい。
他の具体的な態様としては、ＤＮＡチップを行うために必要な必須要素を含むことを特徴とする診断キットであってもよい。ＤＮＡチップキットは、遺伝子またはその断片に該当するｃＤＮＡまたはオリゴヌクレオチド（ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ）が付着している基板、及び蛍光標識プローブを作製するための試薬、製剤、酵素などを含んでもよい。また、基板は、対照群遺伝子またはその断片に該当するｃＤＮＡまたはオリゴヌクレオチドを含んでもよい。
本発明のさらに他の態様として、本発明は、被検体から分離した生物学的試料においてエンドシアリン（ｅｎｄｏｓｉａｌｉｎ）、ＳＰＡＲＣ－類似タンパク質１（ＳＰＡＲＣ－ｌｉｋｅ ｐｒｏｔｅｉｎ １）及びニュートロフィルコラゲナーゼ（ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ ｃｏｌｌａｇｅｎａｓｅ）からなる群から選ばれる少なくとも１つのタンパク質またはそのｍＲＮＡ発現レベルを測定する段階を含む、悪性末梢神経鞘腫の鑑別診断に必要な情報を提供する方法を提供しうる。
本発明のさらに他の態様として、本発明は、被検体から分離した生物学的試料においてエンドシアリン（ｅｎｄｏｓｉａｌｉｎ）、ＳＰＡＲＣ－類似タンパク質１（ＳＰＡＲＣ－ｌｉｋｅ ｐｒｏｔｅｉｎ １）及びニュートロフィルコラゲナーゼ（ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ ｃｏｌｌａｇｅｎａｓｅ）からなる群から選ばれる少なくとも１つのタンパク質またはそのｍＲＮＡ発現レベルを測定する段階を含む、悪性末梢神経鞘腫の鑑別診断方法を提供する。
本発明による悪性末梢神経鞘腫の鑑別診断方法は、複数のバイオマーカーを用いて発生した病変組織の他にも、体液試料（一例として、尿または血漿）を通じて神経線維腫症Ｉ型（Ｎｅｕｒｏｆｉｂｒｏｍａｔｏｓｉｓ ｔｙｐｅ Ｉ）から悪性末梢神経鞘腫（Ｍａｌｉｇｎａｎｔ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｎｅｒｖｅ ｓｈｅａｔｈ ｔｕｍｏｒ，ＭＰＮＳＴ）に移行する場合を迅速かつ便利に診断でき、これにより悪性末梢神経鞘腫に対する即時対応が可能である。
そこで、本発明による悪性末梢神経鞘腫の鑑別診断方法は、神経線維腫症１型などの治療に効果的に使用されてもよい。
本発明において、前記方法は、エンドシアリン（ｅｎｄｏｓｉａｌｉｎ）、ＳＰＡＲＣ－類似タンパク質１（ＳＰＡＲＣ－ｌｉｋｅ ｐｒｏｔｅｉｎ １）及びニュートロフィルコラゲナーゼ（ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ ｃｏｌｌａｇｅｎａｓｅ）からなる群から選ばれる少なくとも１つのタンパク質またはそのｍＲＮＡの発現が検出されるか、またはそれらの発現レベルが、神経線維腫症Ｉ型患者から分離した生物学的試料における発現レベルに比べてより高い場合、悪性末梢神経鞘腫であると診断する段階をさらに含んでもよい。
本発明のさらに他の態様として、本発明は、以下の段階を含む、悪性末梢神経鞘腫の治療方法を提供しうる。
（ａ）被検体から分離した生物学的試料においてエンドシアリン（ｅｎｄｏｓｉａｌｉｎ）、ＳＰＡＲＣ－類似タンパク質１（ＳＰＡＲＣ－ｌｉｋｅ ｐｒｏｔｅｉｎ １）及びニュートロフィルコラゲナーゼ（ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ ｃｏｌｌａｇｅｎａｓｅ）からなる群から選ばれる少なくとも１つのタンパク質またはそのｍＲＮＡ発現レベルを測定する段階、
（ｂ）エンドシアリン（ｅｎｄｏｓｉａｌｉｎ）、ＳＰＡＲＣ－類似タンパク質１（ＳＰＡＲＣ－ｌｉｋｅ ｐｒｏｔｅｉｎ １）及びニュートロフィルコラゲナーゼ（ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ ｃｏｌｌａｇｅｎａｓｅ）からなる群から選ばれる少なくとも１つのタンパク質またはそのｍＲＮＡの発現が検出されるか、またはそれらの発現レベルが神経線維腫症Ｉ型患者から分離した生物学的試料における発現レベルに比べてより高い場合、悪性末梢神経鞘腫であると診断する段階、及び
（ｃ）前記（ｂ）段階で診断された悪性末梢神経鞘腫を治療する段階。
本発明において、前記悪性末梢神経鞘腫を治療する段階は、化学療法、放射線療法、外科的手術、または生物学的療法などの方法を使用してもよい。
本発明において、前記化学療法（Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ）は、特定の疾患の治療のために化学物質を使用する行為とそのときに使用される薬物の全体を意味する。
本発明において、前記薬物は、例えば、パクリタキセル（ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）、ドキソルビシン（ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ）、５－フルオロウラシル（５－ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ）、シスプラチン（ｃｉｓｐｌａｔｉｎ）、イマチニブ（Ｉｍａｔｉｎｉｂ）、カルボプラチン（ｃａｒｂｏｐｌａｔｉｎ）、オキサリプラチン（ｏｘａｌｉｐｌａｔｉｎ）、テガフール（ｔｅｇａｆｕｒ）、イリノテカン（ｉｒｉｎｏｔｅｃａｎ）、ドセタキセル（ｄｏｃｅｔａｘｅｌ）、シクロホスファミド（ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、セムシタビン（ｃｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ）、イホスファミド（ｉｆｏｓｆａｍｉｄｅ）、マイトマイシンＣ（ｍｉｔｏｍｙｃｉｎ Ｃ）、ビンクリスチン（ｖｉｎｃｒｉｓｔｉｎｅ）、エトポシド（ｅｔｏｐｏｓｉｄｅ）、メトトレキサート（ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ）、トポテカン（ｔｏｐｏｔｅｃａｎ）、タモキシフェン（ｔａｍｏｘｉｆｅｎ）、ビノレルビン（ｖｉｎｏｒｅｌｂｉｎｅ）、カンプトテシン（ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ）、ダウノルビシン（ｄａｎｕｏｒｕｂｉｃｉｎ）、クロラムブシル（ｃｈｌｏｒａｍｂｕｃｉｌ）、ブリオスタチン－１（ｂｒｙｏｓｔａｔｉｎ－１）、カリケアミシン（ｃａｌｉｃｈｅａｍｉｃｉｎ）、メイタンシン（ｍａｙａｔａｎｓｉｎｅ）、レバミソール（ｌｅｖａｍｉｓｏｌｅ）、ＤＮＡ組換えインターフェロンα－２ａ（ＤＮＡ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ａｌｆａ－２ａ）、ミトザントロン（ｍｉｔｏｘａｎｔｒｏｎｅ）、ニムスチン（ｎｉｍｕｓｔｉｎｅ）、インターフェロンα－２ａ（ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ａｌｆａ－２ａ）、ドキシフルリジン（ｄｏｘｉｆｌｕｒｉｄｉｎｅ）、フォルメスタン（ｆｏｒｍｅｓｔａｎｅ）、ロイプロリドアセテート（ｌｅｕｐｒｏｌｉｄｅ ａｃｅｔａｔｅ）、メゲストロールアセテート（ｍｅｇｅｓｔｒｏｌ ａｃｅｔａｔｅ）、カルモフール（ｃａｒｍｏｆｕｒ）、テニポシド（ｔｅｎｉｐｏｓｉｄｅ）、ブレオマイシン（ｂｌｅｏｍｙｃｉｎ）、カルムスチン（ｃａｒｍｕｓｔｉｎｅ）、ヘプタプラチン（ｈｅｐｔａｐｌａｔｉｎ）、エキセメスタン（ｅｘｅｍｅｓｔａｎｅ）、アナストロゾール（ａｎａｓｔｒｏｚｏｌｅ）、エストラムスチン（ｅｓｔｒａｍｕｓｔｉｎｅ）、カペシタビン（ｃａｐｅｃｉｔａｂｉｎｅ）、ゴセレリンアセテート（ｇｏｓｅｒｅｌｉｎ ａｃｅｔａｔｅ）、ポリサッカライドカリウム（ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｐｏｔａｓｓｕｉｍ）、メドロキシプロゲステロンアセテート（ｍｅｄｒｏｘｙｐｏｇｅｓｔｅｒｏｎｅ ａｃｅｔａｔｅ）、エピルビシン（ｅｐｉｒｕｂｉｃｉｎ）、レトロゾール（ｌｅｔｒｏｚｏｌｅ）、ピラルビシン（ｐｉｒａｒｕｂｉｃｉｎ）、トポテカン（ｔｏｐｏｔｅｃａｎ）、アルトレタミン（ａｌｔｒｅｔａｍｉｎｅ）、トレミフェンクエン酸塩（ｔｏｒｅｍｉｆｅｎｅ ｃｉｔｒａｔｅ）、ＢＣＮＵ、タキソテール（ｔａｘｏｔｅｒｅ）、アクチノマイシンＤ（ａｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎ Ｄ）、及びそれらの合成アナログ、及び変形されるか、または同じ薬効を示す物質からなる群から選ばれる少なくとも１つの抗がん剤であってもよいが、これに制限されるものではない。
本発明において、前記薬物は、下記表２に記載のタンパク質に対する拮抗薬（ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ）であってもよく、例えば、前記表２に記載のシグナル伝達系タンパク質の活性阻害剤であるセルメチニブ（ｓｅｌｕｍｅｔｉｎｉｂ）、アルボシジブ（ａｌｖｏｃｉｄｉｂ）、プルバラノール（ｐｕｒｖａｌａｎｏｌ）、パルボシクリブ（ｐａｌｂｏｃｉｃｌｉｂ）、リボシクリブ（ｒｉｂｏｃｉｃｌｉｂ））、アベマシクリプ（ａｂｅｍａｃｉｃｌｉｂ）、フォスタマチニブ（ｆｏｓｔａｍａｔｉｎｉｂ）、ビニメチニブ（ｂｉｎｉｍｅｔｉｎｉｂ）、ラジシコール（ｒａｄｉｃｉｃｏｌ）、ＡＺＤ－８３３０、ジヒドロリポ酸（ｄｉｈｙｄｒｏｌｉｐｏｉｃ ａｃｉｄ）、アルスターパウロン（ａｌｓｔｅｒｐａｕｌｌｏｎｅ）、ヒメニアルジシン（ｈｙｍｅｎｉａｌｄｉｓｉｎｅ）、インジルビン－３’－モノオキシム（ｉｎｄｉｒｕｂｉｎ－３’－ｍｏｎｏｘｉｍｅ）、オロモウシン（ｏｌｏｍｏｕｃｉｎｅ）、ＳＵ９５１６、及び６－フェニル［５Ｈ］ピロロ［２，３－Ｂ］ピラジンからなる群から選ばれる少なくとも１つであってもよいが、これに制限されるものではない。
本発明において、前記放射線療法は、Ｘ線、ガンマ線及び中性子を含むが、これらに制限されない高エネルギー放射線を患者に当てることを意味する。このようなタイプの療法としては、外部光線療法、内部放射線療法、挿入放射線、近接療法、及び全身放射線療法が挙げられるが、これに制限されるものではない。
本発明において、前記外科的手術は、治癒、治療または診断効果を得るために個体の身体に対して手（ｈａｎｄ）や機器とともに手の方法的作用を含むいかなる治療上または診断処置をすべて含む。
本発明において、前記生物学的療法は、生物体由来の物質や生物体を用いて生成させた物質を含有する生物学的製剤を用いて直・間接的に人体の免疫体系を用いる治療法を意味し、前記生物学的製剤は、物理的、化学的試験だけではその力価と安定性を評価できないワクチン、アレルゲン、抗原、ホルモン、サイトカイン、酵素、血液及び血漿、免疫血清、モノクローナル抗体、発酵製品、抗毒素、及び実験室診断剤などを含む。
本発明において、前記生物学的製剤は、例えば、アダリムマブ（Ａｄａｌｉｍｕｍａｂ）、アレムツズマブ（Ａｌｅｍｔｕｚｕｍａｂ）、ベバシズマブ（Ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ）、セツキシマブ（Ｃｅｔｕｘｉｍａｂ）、ダラツムマブ（Ｄａｒａｔｕｍｕｍａｂｕｍ）、パニツムマブ（Ｐａｎｉｔｕｍｕｍａｂ）、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘｉｍａｂ）、トラスツズマブ（Ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ）、パーツズマブ（Ｐｅｒｔｕｚｕｍａｂ）、イピリムマブ（Ｉｐｉｌｉｍｕｍａｂ）、ニボルマブ（Ｎｉｖｏｌｕｍａｂ）、ペムブロリズマブ（Ｐｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂ）、アテゾリズマブ（Ａｔｅｚｏｌｉｚｕｍａｂ）、デュルバルマブ（Ｄｕｒｖａｌｕｍａｂ）、アベルマブ（Ａｖｅｌｕｍａｂ）、トシリズマブ（ｔｏｃｉｌｉｚｕｍａｂ）、サリルマブ（ｓａｒｉｌｕｍａｂ）、サトラリズマブ（ｓａｔｒａｌｉｚｕｍａｂ）、及びシルツキシマブ（ｓｉｌｔｕｘｉｍａｂ）からなる群から選ばれる少なくとも１つであってもよい。これに制限されるものではない。
本明細書で使用される用語の「検出」とは、所望の物質（本発明におけるマーカータンパク質）の存在（発現）の有無を測定及び確認すること、または所望の物質の存在レベル（発現レベル）の変化を測定及び確認することをすべて含む意味である。同じ脈絡で、前記タンパク質の発現レベルを測定することは、発現の有無を測定すること（すなわち、発現の有無を測定すること）、または前記タンパク質の質的、量的変化レベルを測定することを意味する。前記測定は、定性的方法（分析）と定量的方法の両方を含めて制限なく行われてもよい。タンパク質レベルの測定において定性的方法及び定量的方法の種類は、当業界でよく知られており、本明細書に記載の実験法がこれに含まれる。各方法別に具体的なタンパク質レベル比較方式は、当業界でよく知られている。したがって、前記目的タンパク質検出とは、前記表１に記載のタンパク質の存在有無の検出、またはタンパク質発現量の増加（上向き調節）または減少（下向き調節）を確認することを含む意味である。
また、前記用語の「鑑別診断」は、前述した意味のほか、特定の疾病または疾患に対する対象（ｓｕｂｊｅｃｔ）の感受性（ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ）を判定すること、対象が特定の疾病または疾患を現在有しているか否かを判定すること、特定の疾病または疾患にかかった対象の予後（ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ）を判定すること、またはテラメトリクス（ｔｈｅｒａｍｅｔｒｉｃｓ）（例えば、治療効能に対する情報を提供するため、オブジェクトの状態をモニタリングすること）を含む。
本発明において、前記被検体は、悪性末梢神経鞘腫が疑われる患者であってもよく、神経線維腫症１型であると診断された患者であってもよい。
本発明において、前記生物学的試料は、悪性末梢神経鞘腫の鑑別診断を行おうとする被検体から採取されたものであれば、制限なく使用されてもよく、例えば、生検などで得られた組織、細胞、血液、血漿、血清、唾液、鼻液、喀痰、関節嚢液、羊水、腹水、子宮頸部分泌物、膣分泌物、尿、脳脊髄液などの生体試料だけでなく、微細針吸引検体及び微細針洗浄液も含む。好ましくは、生物学的液体試料、例えば、血液、全血、血漿、尿、組織、細胞、器官、骨髄、微細針吸引検体、微細針洗浄液、コア針生検（ｃｏｒｅ ｎｅｅｄｌｅ ｂｉｏｐｓｙ）検体及び唾液からなる群から選ばれる少なくとも１つで測定されてもよい。本発明は、悪性末梢神経鞘腫が発生した病変組織の他にも、体液試料（一例として、尿または血漿）を通じて診断が可能であり、診断の効用性、迅速性、便宜性及び安全性などが増加するという点で技術的意義が大きい。
前記生物学的試料は、検出または診断に使用する前に前処理してもよい。例えば、均質化（ｈｏｍｏｇｅｎｉｚａｔｉｏｎ）、ろ過、蒸留、抽出、濃縮、妨害成分の不活性化、試薬の添加などを含んでもよい。前記試料は、タンパク質マーカーの探知感度を増加させるように準備できるが、例えば、患者から得られた血清試料は、アニオン交換クロマトグラフィー、親和性クロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー（ｓｉｚｅ ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）、液体クロマトグラフィー、連続抽出（ｓｅｑｕｅｎｔｉａｌ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ）またはゲル電気泳動などの方法を用いて前処理されてもよい。
前記タンパク質発現レベルの測定は、当業界で公知のタンパク質発現測定方法によるものであれば、測定方法が特に制限されないが、例えば、ウェスタンブロット、ＥＬＩＳＡ、放射線免疫分析、放射線免疫拡散法、オクタロニー免疫拡散法（Ｏｕｃｈｔｅｒｌｏｎｙ ｉｍｍｕｎｏｄｉｆｆｕｓｉｏｎ）、ロケット免疫電気泳動（Ｒｏｃｋｅｔｉｍｍｕｎｏｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ）、免疫染色法、免疫沈降分析法、補体固定分析法、質量分析法（Ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ）、ＦＡＣＳ及びタンパク質チップからなる群から選ばれる少なくとも１つであってもよい。
前記ｍＲＮＡ発現レベル測定は、当業界で公知の遺伝子発現測定方法によるＰＣＲ、ＲＮａｓｅ保護分析法、ノーザンブロッティング（ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ）、サザンブロッティング（ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ）、Ｉｎ ｓｉｔｕ交雑法及びＤＮＡチップからなる群から選ばれる少なくとも１つであってもよいが、これに制限されるものではない。
本明細書で使用される用語の「分析」は、好ましくは、「測定」を意味するものであってもよく、前記定性分析は、所望の物質の存在有無を測定及び確認することを意味するものであってもよく、前記定量分析は、所望の物質の存在レベル（発現レベル）または量の変化を測定及び確認することを意味するものであってもよい。本発明において分析または測定は、定性的方法と定量的方法の両方を含めて制限なく行われてもよく、好ましくは、定量的測定が行われるものであってもよい。
一方、ＮＦ－１においてＭＰＮＳＴの発生メカニズムは、腫瘍内ＮＦ－１の完全消失、ＲＡＳ－ＭＡＰＴシグナルの過度な活性化、ＣＤＫＮ２Ａ遺伝子の消失、ＰＲＣ２（ｐｏｌｙｃｏｍｂ ｒｅｐｒｅｓｓｉｖｅ ｃｏｍｐｌｅｘ ２）の構成遺伝子ＳＵＺ１２とＥＥＤの消失、腫瘍抑制遺伝子ＴＰ５３の消失、ＰＩ３Ｋ－ＡＫＴ－ｍＴＯＲシグナル系の異常亢進、ＥＧＦＲ（ｅｐｉｄｅｒｍａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｒｅｃｅｐｔｏｒ）、ＰＤＧＦ－Ｒ（ｐｌａｔｅｌｅｔ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｒｅｃｅｐｔｏｒ）、ＶＥＧＦＲ（ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｒｅｃｅｐｔｏｒ）などの異常活性化が関与することが知られてきた。これに基づいてＭＰＮＳＴにおいて様々な臨床研究が行われてきたが、明確な治療効果を出す研究はなかった。したがって、新しいアプローチを用いた新しい治療標的及び候補物質を探索する必要性があった。
本発明は、このような要求に応じて悪性末梢神経鞘腫（ＭＰＮＳＴ）において特異的に亢進される４種のシグナル伝達系－ＩＬＫシグナル伝達系、アクチン－サイトスケルトン（ａｃｔｉｎ－ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔｏｎ）シグナル伝達系、ＲｈｏＧＤＩ信号伝達系、ＴＧＦ－βシグナル伝達系及びＭＰＮＳＴにおいて特異的に発現または活性が増加した１０種のキナーゼ－ＣＤＫ４、ＭＡＰ２Ｋ１、ＰＤＫ３、ＳＴＫ１０、ＡＬＰＫ３、ＰＨＫＧ１、ＣＤＫ５、ＰＮＫＰ、ＣＦＬ１、及びＰＡＣＳＩＮ３遺伝子によって発現されるキナーゼ－を発掘し、それらがＭＰＮＳＴの新しい治療標的として活用できることを確認した（実施例５及び実施例７参照）。
したがって、本発明のさらに他の態様として、本発明は、ＴＧＦ－βシグナル伝達系、ＩＬＫシグナル伝達系、アクチン－サイトスケルトン（ａｃｔｉｎ－ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔｏｎ）シグナル伝達系及びＲｈｏＧＤＩシグナル伝達系からなる群から選ばれる少なくとも１つのシグナル伝達系タンパク質の活性阻害剤または前記タンパク質をコードする遺伝子の発現阻害剤を有効成分として含む、悪性末梢神経鞘腫の予防または治療用薬学的組成物を提供しうる。
本発明のさらに他の態様として、本発明は、ＴＧＦ－βシグナル伝達系、ＩＬＫシグナル伝達系、アクチン－サイトスケルトン（ａｃｔｉｎ－ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔｏｎ）シグナル伝達系及びＲｈｏＧＤＩシグナル伝達系からなる群から選ばれる少なくとも１つのシグナル伝達系タンパク質の活性阻害剤または前記タンパク質をコードする遺伝子の発現阻害剤を有効成分として含む、悪性末梢神経鞘腫の予防または改善用健康機能食品組成物を提供しうる。
前記「ＴＧＦ－βシグナル伝達系（ＴＧＦ ｂｅｔａ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）タンパク質」は、ＴＧＦ－βシグナル伝達に直・間接的に関与するタンパク質をすべて含む。例えば、ＳＭＡＤ１、ＳＭＡＤ２、ＳＭＡＤ３、ＳＭＡＤ５、ＳＭＡＤ９、Ｔｈｒｏｍｂｏｓｐｏｎｄｉｎ－１、Ｒｏｃｋ、Ｃｄｃ４２／ＲＡＣ、ＰＡＫ、ＬＩＭＫ、ＰＩ３Ｋ、Ｒａｓ、Ｒａｆ、ＭＥＫ１／２、ＥＲＫ１／２、ＪＮＫ、Ｐ３８、Ｃｏｆｉｌｉｎ、ｍＴＯＲ、ＡＫＴがある。
前記「ＩＬＫシグナル伝達系（Ｉｎｔｅｇｒｉｎ－ｌｉｎｋｅｄ ｋｉｎａｓｅ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）タンパク質」は、ＩＬＫシグナル伝達に直・間接的に関与するタンパク質をすべて含む。例えば、ｍＴＯＲ、ＡＫＴ、ＶＥＧＦ、ＮＦ－κＧＳＫ３β、ＳＮＡＩＬ、ＡＰ－１、ＭＭＰ９、ＪＡＫ２、Ｃｄｃ４２／ＲＡＣ、ＳＮＡＩ１、ＪＮＫ、ＰＩ３Ｋ、ＡＰ－１、Ｃ－Ｊｕｎ、ＨＩＦ１α、ＣＯＸ２、β－Ｃａｔｅｎｉｎがある。
前記アクチン－サイトスケルトンシグナル伝達系（ａｃｔｉｎ－ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔｏｎ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）タンパク質は、アクチン－サイトスケルトンシグナル伝達に直・間接的に関与するタンパク質をすべて含む。例えば、ＰＩ３Ｋ、ＣａＭ、ＰＫＡ、Ｒｈｏ、ＲＯＣＫ、Ｒａｓ、Ｒａｃ、Ｐａｘｉｌｌｉｎ、ＦＡＫ、Ｃｏｆｉｌｉｎ、Ｃｏｒｔａｃｔｉｎ、ＷＡＶＥ、ＰＩＸ、ＴＩＡＭ１、Ｖａｖ、ＰＡＫ１、ＧＥＦ、ＶＡＳＰ、ＭＥＫＫ、ＭＥＫ、ＭＬＣＫ、ＭＬＣ、ＬＩＭＫ、ＡＤＦ、ＣａｐＺ、Ｈｓｐ９０、Ｇｅｌｓｏｌｉｎ、ＡＤＦ、Ｆｉｌａｍｉｎ、Ｐｒｏｆｉｌｉｎ、ＲｈｏＧＥＦ、Ｍｙｏｓｉｎ、ＡＣＴＮ、Ｖｉｎｃｕｌｉｎ、ＡＣＴＮ、ＰＦＮ、ＭＥＫ１／２、ＥＲＫ１／２がある。
前記「ＲｈｏＧＤＩシグナル伝達系（Ｒｈｏ ＧＤＰ－ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）タンパク質」は、ＲｈｏＧＤＩシグナル伝達に直・間接的に関与するタンパク質をすべて含む。例えば、ＭＫＫ４／７、ＪＮＫ、Ｃ－Ｊｕｎ、ＰＡＲＰ、ＲＯＣＫ１、ＲＯＣＫ２、Ｃｄｃ４２、ｅＮＯＳ、Ｔａｕ、ＭＬＣＰ、ＭＬＣ、ＣＲＭＰ２、Ａｄｄｕｃｉｎ、ＬＩＭＫ、ＰＫＮ、ＢＯＲＧｓ、Ｃｉｔｒｏｎ、ＷＡＳＰ、ＭＲＣＫ、ＰＩ３Ｋ、ＰＡＫ、ＰＡＲ６、ＰＡＲ３がある。
本発明において、前記シグナル伝達系タンパク質は、キナーゼ（ｋｉｎａｓｅ）であってもよく、前記キナーゼは、下記表２に記載のタンパク質からなる群から選ばれる少なくとも１つのキナーゼであってもよいが、これに制限されるものではない。
本発明において、下記表２のキナーゼは、「ＣＤＫ４」、「ＳＴＬＫ１０」及び「ＰＨＫＧ１」は、ＩＬＫシグナル伝達系、「ＣＤＫ５」は、アクチン－サイトスケルトン（ａｃｔｉｎ－ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔｏｎ）シグナル伝達系及びＲｈｏＧＤＩシグナル伝達系、「ＭＡＰ２Ｋ１」及び「ＣＦＬ１」は、アクチン－サイトスケルトン（ａｃｔｉｎ－ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔｏｎ）シグナル伝達系及びＴＧＦ－β信号伝達系、「ＡＬＰＫ３」は、Ｈｅａｒｔ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ、ＰＮＫＰは、ＤＮＡ ｄａｍａｇｅ ＆ ｒｅｐａｉｒ、「ＰＤＫ３」は、Ｐｙｒｕｖａｔｅ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ、ｃｉｔｒｉｃ ａｃｉｄ（ＴＣＡ）ｃｙｃｌｅ、「ＰＡＣＳＩＮ３」は、アクチン－サイトスケルトン（ａｃｔｉｎ－ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔｏｎ）シグナル伝達系に属してもよいが、これに制限されるものではない。
本発明では、前記表２に記載のタンパク質が（ｐ－ＭＥＫを含む）ＭＰＮＳＴにおいて特異的に上向き調節されていることを確認したところ、これらの抑制可能な物質、例えば、前記タンパク質に対する拮抗薬（ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ）は、ＭＰＮＳＴ治療剤として使用されてもよい。
本発明において、前記タンパク質の活性阻害剤は、前記タンパク質に特異的に結合するペプチド、抗体、アプタマー及び化合物からなる群から選ばれる少なくとも１つであってもよいが、これに制限されるものではない。
本明細書で使用される用語の「抗体」と「アプタマー」の定義は、前述のとおりである。
本発明において、前記シグナル伝達系タンパク質の活性阻害剤は、セルメチニブ（ｓｅｌｕｍｅｔｉｎｉｂ）、アルボシジブ（ａｌｖｏｃｉｄｉｂ）、プルバラノール（ｐｕｒｖａｌａｎｏｌ）、パルボシクリブ（ｐａｌｂｏｃｉｃｌｉｂ）、リボシクリブ（ｒｉｂｏｃｉｃｌｉｂ）、アベマシクリプ（ａｂｅｍａｃｉｃｌｉｂ）、フォスタマチニブ（ｆｏｓｔａｍａｔｉｎｉｂ）、ビニメチニブ（ｂｉｎｉｍｅｔｉｎｉｂ）、ラジシコール（ｒａｄｉｃｉｃｏｌ）、ＡＺＤ－８３３０、ジヒドロリポ酸（ｄｉｈｙｄｒｏｌｉｐｏｉｃ ａｃｉｄ）、アルスターパウロン（ａｌｓｔｅｒｐａｕｌｌｏｎｅ）、ヒメニアルジシン（ｈｙｍｅｎｉａｌｄｉｓｉｎｅ）、インジルビン－３’－モノオキシム（ｉｎｄｉｒｕｂｉｎ－３’－ｍｏｎｏｘｉｍｅ）、オロモウシン（ｏｌｏｍｏｕｃｉｎｅ）、ＳＵ９５１６、及び６－フェニル［５Ｈ］ピロロ［２，３－Ｂ］ピラジンからなる群から選ばれる少なくとも１つであってもよいが、これに制限されるものではない。
本発明において、前記遺伝子の発現阻害剤は、前記遺伝子のｍＲＮＡに相補的に結合するｍｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、リボザイム（ｒｉｂｏｚｙｍｅ）、ＤＮＡｚｙｍｅ、ＰＮＡ（ｐｅｐｔｉｄｅ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ）及びアンチセンスオリゴヌクレオチドからなる群から選ばれる少なくとも１つであってもよいが、これに制限されるものではない。
本明細書で使用される用語の「アンチセンスオリゴヌクレオチド」は、ターゲットとするｍＲＮＡ、特にｍＲＮＡのシード（ｓｅｅｄ）配列に対する相補的な配列を有しており、ｍＲＮＡと二量体（ｄｕｐｌｅｘ）を形成することができる核酸－基盤分子を包括する。したがって、本明細書で用語の「アンチセンスオリゴヌクレオチド」は、「相補的核酸－基盤阻害剤」と記載されてもよい。
本明細書でアンチセンスオリゴヌクレオチドを言及しながら使用される用語の「相補的」とは、所定の混成化またはアニーリング（ａｎｎｅａｌｉｎｇ）条件、好ましくは、生理学的条件下でアンチセンスオリゴヌクレオチドが前記ｍＲＮＡターゲットに選択的に混成化するほど十分に相補的であることを意味し、実質的に相補的（ｓｕｂｓｔａｎｔｉａｌｌｙ ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｙ）及び完全に相補的（ｐｅｒｆｅｃｔｌｙ ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｙ）であることをすべて包含する意味を有し、好ましくは、完全に相補的であることを意味する。
本発明においてアンチセンスオリゴヌクレオチドは、様々な分子を含む。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＤＮＡまたはＲＮＡ分子であり、より好ましくは、ＲＮＡ分子である。選択的に、本発明で用いられるアンチセンスオリゴヌクレオチドは、リボヌクレオチド（ＲＮＡ）、デオキシリボヌクレオチド（ＤＮＡ）、２’－Ｏ－修飾オリゴヌクレオチド、ホスホロチオエート－バックボーンデオキシリボヌクレオチド、ＰＮＡ（ｐｅｐｔｉｄｅ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ）またはＬＮＡ（ｌｏｃｋｅｄ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ）である。２’－Ｏ－修飾オリゴヌクレオチドは、例えば、２’－Ｏ－アルキルオリゴヌクレオチド、２’－Ｏ－Ｃ１－３アルキルオリゴヌクレオチドまたは２’－Ｏ－Ｃ１－３メチルオリゴヌクレオチドなどであってもよい。
本明細書で使用される用語の「ｍｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ及びｓｈＲＮＡ」は、ＲＮＡ妨害または遺伝子サイレンシング（ｓｉｌｅｎｃｉｎｇ）を媒介するために主に目的遺伝子から転写されたｍＲＮＡに結合し、前記ｍＲＮＡの解毒を阻害する核酸分子を意味する。前記ｍｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ及びｓｈＲＮＡは、標的遺伝子の発現を解毒レベルで抑制できるため、効率的な遺伝子ノックダウン（ｋｎｏｃｋｄｏｗｎ）法または遺伝子治療法に使用されてもよい。
本明細書で使用される用語の「リボザイム」とは、標的ＲＮＡ分子内の特定のヌクレオチド配列を認識して部位特異的に切断させることにより、標的遺伝子のタンパク質発現を抑制し得る。
本明細書で使用される用語の「ＰＮＡ」とは、核酸模倣体、例えば、ＤＮＡ模倣体を意味し、ここで、デオキシリボースホスフェイトバックボーンは、シュードペプチドバックボーンに置き換えられ、ただ、もともと４つのヌクレオ塩基が保持される。ＰＮＡの中性のバックボーンは、低いイオン性強度の条件下でＤＮＡ及びＲＮＡに特異的なハイブリッドを提供することが知られており、転写または翻訳抑制を誘導するか、または複製を阻抑制して遺伝子発現の配列－特異的調節に対するアンチセンスまたは抗原製剤として使用されてもよい。
一方、本発明の組成物内の前記シグナル伝達系タンパク質の活性阻害剤または前記タンパク質をコードする遺伝子の発現阻害剤の含量は、疾患の症状、症状の進行度、患者の状態などに応じて適切に調節可能であり、例えば、全組成物重量を基準として０．０００１～９９．９重量％、または０．００１～５０重量％であってもよいが、これに限定されるものではない。前記含量比は、溶媒を除去した乾燥量を基準とした値である。
本発明による薬学的組成物は、薬学的組成物の製造に通常使用される適切な担体、賦形剤及び希釈剤をさらに含んでもよい。前記賦形剤は、例えば、希釈剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、吸着剤、保湿剤、フィルムコーティング物質、及び制御放出添加剤からなる群から選ばれる少なくとも一つであってもよい。
本発明による薬学的組成物は、それぞれ通常の方法により散剤、顆粒剤、徐放性顆粒剤、腸溶性顆粒剤、液剤、点眼剤、エルシリック剤、乳剤、懸濁液剤、酒精剤、トローチ剤、芳香水剤、リモナーデ剤、錠剤、徐放性錠剤、腸溶性錠剤、舌下錠、硬質カプセル剤、軟質カプセル剤、徐放性カプセル剤、腸溶性カプセル剤、丸剤、チンキ剤、軟調エキス剤、乾燥エキス剤、流動エキス剤、注射剤、カプセル剤、灌流液、硬膏剤、ローション剤、パスタ剤、噴霧剤、吸入剤、パッチ剤、滅菌注射液、またはエアロゾルなどの外用剤などの形態で剤形化して使用されてもよく、前記外用剤は、クリーム、ジェル、パッチ、噴霧剤、軟膏剤、硬膏剤、ローション剤、リニメント剤、パスタ剤またはカタプラズマ剤などの剤形を有してもよい。
本発明による薬学的組成物に含まれてもよい担体、賦形剤及び希釈剤としては、ラクトース、デキストロース、スクロース、オリゴ糖、ソルビトール、マンニトール、キシリトール、エリスリトール、マルチトール、デンプン、アカシアゴム、アルギネート、ゼラチン、カルシウムホスフェイト、カルシウムシリケート、セルロース、メチルセルロース、非晶質セルロース、ポリビニルピロリドン、水、メチルヒドロキシベンゾエート、プロピルヒドロキシベンゾエート、タルク、マグネシウムステアレート及び鉱物油が挙げられる。
製剤化する場合は、通常、使用する充填剤、増量剤、結合剤、湿潤剤、崩壊剤、界面活性剤などの希釈剤または賦形剤を使用して調製される。
本発明による錠剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤、丸剤、トローチ剤の添加剤として、トウモロコシデンプン、ジャガイモデンプン、小麦デンプン、乳糖、白糖、ブドウ糖、果糖、Ｄ－マンニトール、沈降炭酸カルシウム、合成ケイ酸アルミニウム、リン酸一水素カルシウム、硫酸カルシウム、塩化ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、精製ラノリン、微結晶セルロース、デキストリン、アルギン酸ナトリウム、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、カオリン、尿素、コロイド状シリカゲル、ヒドロキシプロピルスターチ、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）１９２８、ＨＰＭＣ２２０８、ＨＰＭＣ２９０６、ＨＰＭＣ２９１０、プロピレングリコール、カゼイン、乳酸カルシウム、プリモゼルなどの賦形剤、ゼラチン、アラビアゴム、エタノール、寒天粉、酢酸フタル酸セルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム、ブドウ糖、精製水、カゼインナトリウム、グリセリン、ステアリン酸、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、微結晶セルロース、デキストリン、ヒドロキシセルロース、ヒドロキシプロピルスターチ、ヒドロキシメチルセルロース、精製シェラック、デンプン糊、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドンなどの結合剤が使用されてもよく、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、トウモロコシデンプン、寒天粉、メチルセルロース、ベントナイト、ヒドロキシプロピルスターチ、カルボキシメチルセルロースナトリウム、アルギン酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロースカルシウム、クエン酸カルシウム、ラウリル硫酸ナトリウム、無水ケイ酸、１－ヒドロキシプロピルセルロース、デキストラン、イオン交換樹脂、酢酸ポリビニル、ホルムアルデヒド処理カゼイン及びゼラチン、アルギン酸、アミロース、グアルゴム（Ｇｕａｒ ｇｕｍ）、重曹、ポリビニルピロリドン、リン酸カルシウム、ゲル化澱粉、アラビアゴム、アミロペクチン、ペクチン、ポリリン酸ナトリウム、エチルセルロース、白糖、ケイ酸マグネシウムアルミニウム、Ｄ－ソルビトール液、硬質無水ケイ酸などの崩壊剤、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、水素化植物油（Ｈｙｄｒｏｇｅｎａｔｅｄ ｖｅｇｅｔａｂｌｅ ｏｉｌ）、タルク、石松子、カオリン、ワセリン、ステアリン酸ナトリウム、カカオ脂、サリチル酸ナトリウム、サリチル酸マグネシウム、ポリチレングリコール（ＰＥＧ）４０００、ＰＥＧ６０００、流動パラフィン、水素添加大豆油（Ｌｕｂｒｉ ｗａｘ）、ステアリン酸アルミニウム、ステアリン酸亜鉛、ラウリル硫酸ナトリウム、酸化マグネシウム、マクロゴール（Ｍａｃｒｏｇｏｌ）、合成ケイ酸アルミニウム、無水ケイ酸、高級脂肪酸、高級アルコール、シリコーン油、パラフィン油、ポリエチレングリコール脂肪酸エーテル、デンプン、塩化ナトリウム、酢酸ナトリウム、オレイン酸ナトリウム、ｄｌ－ロイシン、硬質無水ケイ酸などの滑沢剤が使用されてもよい。
本発明による液剤の添加剤としては、水、希塩酸、希硫酸、クエン酸ナトリウム、モノステアリン酸スクロース類、ポリオキシエチレンソルビトール脂肪酸エステル類（ツインエステル）、ポリオキシエチレンモノアルキルエーテル類、ラノリンエーテル類、ラノリンエステル類、酢酸、塩酸、アンモニア水、炭酸アンモニウム、水酸化カリウム、水酸化ナトリウム、プロルアミン、ポリビニルピロリドン、エチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウムなどが使用されてもよい。
本発明によるシロップ剤には白糖の溶液、他の糖類または甘味剤などが使用されてもよく、必要に応じて芳香剤、着色剤、保存剤、安定剤、懸濁化剤、乳化剤、粘稠剤などが使用されてもよい。
本発明の乳剤には精製水が使用されてもよく、必要に応じて乳化剤、保存剤、安定剤、芳香剤などが使用されてもよい。
本発明による懸濁剤には、アカシア、トラガカンタ、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、微結晶セルロース、アルギン酸ナトリウム、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、ＨＰＭＣ１８２８、ＨＰＭＣ２９０６、ＨＰＭＣ２９１０など懸濁化剤が使用されてもよく、必要に応じて界面活性剤、保存剤、安定剤、着色剤、芳香剤が使用されてもよい。
本発明による注射剤には、注射用蒸留水、０．９％塩化ナトリウム注射液、リンゲル注射液、デキストロース注射液、デキストロース＋塩化ナトリウム注射液、ピーイージー（ＰＥＧ）、ラクトリンゲル注射液、エタノール、プロピレングリコール、不揮発性油－ごま油、綿実油、落花生油、大豆油、トウモロコシ油、オレイン酸エチル、ミリスチン酸イソプロピル、安息香酸ベンゼンなどの溶剤、安息香酸ナトリウム、サリチル酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、尿素、ウレタン、モノエチルアセトアミド、ブタゾリジン、プロピレングリコール、ツイン類、ニジョンチン酸アミド、ヘキサミン、ジメチルアセトアミドなどの溶解補助剤、弱酸及びその塩（酢酸と酢酸ナトリウム）、弱塩基及びその塩（アンモニア及び酢酸アンモニウム）、有機化合物、タンパク質、アルブミン、ペプトン、ガム類などの緩衝剤、塩化ナトリウムなどの等張化剤、亜硫酸水素ナトリウム（ＮａＨＳＯ３）二酸化炭素ガス、メタ重亜硫酸ナトリウム（Ｎａ２Ｓ２Ｏ５）、亜硫酸ナトリウム（Ｎａ２ＳＯ３）、窒素ガス（Ｎ２）、エチレンジアミンテトラ酢酸などの安定剤、ソジウムビスルフィド０．１％、ソジウムホルムアルデヒドスルホキシレート、チオウレア、エチレンジアミンテトラ酢酸ジナトリウム、アセトンソジウムビスルファイトなどの硫酸化剤、ベンジルアルコール、クロロブタノール、塩酸プロカイン、ブドウ糖、グルコン酸カルシウムなどの無痛化剤、ＣＭＣナトリウム、アルギン酸ナトリウム、ツイン８０、モノステアリン酸アルミニウムなどの懸濁化剤を含んでもよい。
本発明による坐剤には、カカオ脂、ラノリン、ウイテプゾール、ポリエチレングリコール、グリセロゼラチン、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ステアリン酸とオレイン酸の混合物、スバナル（Ｓｕｂａｎａｌ）、綿実油、落花生油、ヤシ油、カカオバター＋コレステロール、レシチン、ラネットワックス、モノステアリン酸グリセロール、ツインまたはスパン、イムハウゼン（Ｉｍｈａｕｓｅｎ）、モノレン（モノステアリン酸プロピレングリコール）、グリセリン、アデプスソリダス（Ａｄｅｐｓ ｓｏｌｉｄｕｓ）、ブチラムテゴ－Ｇ（Ｂｕｙｔｙｒｕｍ Ｔｅｇｏ－Ｇ）、セベスパマ１６（Ｃｅｂｅｓ Ｐｈａｒｍａ １６）、ヘキサライドベース９５、コトマ（Ｃｏｔｏｍａｒ）、ヒドロコートＳＰ、Ｓ－７０－ＸＸＡ、Ｓ－７０－ＸＸ７５（Ｓ－７０－ＸＸ９５）、ヒドロコート（Ｈｙｄｒｏｋｏｔｅ）２５、ヒドロコート７１１、イドロポスタール（Ｉｄｒｏｐｏｓｔａｌ）、マサエストラリウム（Ｍａｓｓａ ｅｓｔｒａｒｉｕｍ、Ａ、ＡＳ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｉ、Ｔ）、マサ－ＭＦ、マスポール、マスポール－１５、ネオスポスタル－エン、パラマウンド－Ｂ、スポシロ（ＯＳＩ、ＯＳＩＸ、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｈ、Ｌ）、坐剤基剤ＩＶタイプ（ＡＢ、Ｂ、Ａ、ＢＣ、ＢＢＧ、Ｅ、ＢＧＦ、Ｃ、Ｄ、２９９）、スポスタル（Ｎ、Ｅｓ）、ウェコビ（Ｗ、Ｒ、Ｓ、Ｍ、Ｆｓ）、テゼスタートリグリセリド基剤（ＴＧ－９５、ＭＡ、５７）などの基剤が使用されてもよい。
経口投与用固形製剤には、錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤などが含まれ、このような固形製剤は、前記抽出物に少なくとも一つ以上の賦形剤、例えば、デンプン、カルシウムカーボネート（ｃａｌｃｉｕｍ ｃａｒｂｏｎａｔｅ）、スクロース（ｓｕｃｒｏｓｅ）またはラクトース（ｌａｃｔｏｓｅ）、ゼラチンなどを混合して調製される。また、単純な賦形剤の他に、マグネシウムスチレートタルクなどの潤滑剤も使用される。
経口投与用液状製剤としては、懸濁剤、内容液剤、乳剤、シロップ剤などが該当するが、よく使用される単純希釈剤である水、リキドパラフィンの他に様々な賦形剤、例えば、湿潤剤、甘味剤、芳香剤、保存剤などが含まれてもよい。非経口投与用製剤には、滅菌水溶液、非水性溶剤、懸濁剤、乳剤、凍結乾燥製剤、坐剤が含まれる。非水性溶剤、懸濁溶剤としては、プロピレングリコール（ｐｒｏｐｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ）、ポリエチレングリコール、オリーブ油などの植物油、エチルオレートなどの注射可能なエステルなどが使用されてもよい。
本発明による薬学的組成物は、薬学的に有効な量で投与する。本発明において、「薬学的に有効な量」とは、医学的治療に適用可能な合理的な受恵／リスク比で疾患を治療するのに十分な量を意味し、有効用量レベルは、患者疾患の種類、重症度、薬物の活性、薬物に対する敏感度、投与時間、投与経路及び排出比率、治療期間、同時に使用される薬物を含む要素及びその他の医学分野においてよく知られている要素によって決定されてもよい。
本発明による薬学的組成物は、個別治療剤として投与するか、または他の治療剤と併用して投与されてもよく、従来の治療剤とは順次的または同時に投与されてもよく、単一または多重投与されてもよい。前記要素をすべて考慮し、副作用なしに最小限の量で最大の効果が得られる量を投与することが重要であり、これは本発明が属する技術分野において通常の技術者によって容易に決定されてもよい。
本発明の薬学的組成物は、個体に様々な経路で投与されてもよい。投与のすべての方式は、予想できるが、例えば、経口服用、皮下注射、腹腔投与、静脈注射、筋肉注射、脊髄周囲空間（硬膜内）注射、舌下投与、頬粘膜投与、直腸内挿入、膣内挿入、眼球投与、耳投与、鼻腔投与、吸入、口または鼻を通じての噴霧、皮膚投与、経皮投与などによって投与されてもよい。
本発明の薬学的組成物は、治療する疾患、投与経路、患者の年齢、性別、体重及び疾患の重症度などの様々な関連因子とともに、活性成分である薬物の種類によって決定される。
本発明において、「個体」とは、疾患の治療を必要とする対象を意味し、より具体的には、ヒトまたは非－ヒトの霊長類、マウス（ｍｏｕｓｅ）、ラット（ｒａｔ）、イヌ、ネコ、ウマ、及びウシなどの哺乳類を意味する。
本発明において「投与」とは、任意の適切な方法で個体に所定の本発明の組成物を提供することを意味する。
本発明において、「予防」とは、所望の疾患の発症を抑制するか、または遅延させるすべての行為を意味し、「治療」とは、本発明による薬学的組成物の投与により所望の疾患とそれによる代謝異常の症状が好転するか、または有利に変更されるすべての行為を意味する。
本明細書で使用される用語の「健康機能食品」とは、健康機能食品に関する法律第６７２７号による人体に有用な機能性を有する原料や成分を使用して製造及び加工した食品をいい、人体の構造及び機能について栄養素を調節するか、または生理学的作用などの健康用途に有用な効果を得る目的で摂取することを意味する。本発明の健康機能食品は、通常の食品添加物を含んでもよく、食品添加物としての適合可否は、他に規定のない限り、食品医薬品安全処が承認した食品添加物公典の総則及び一般試験法などにより当該品目に関する規格及び基準により判定する。
本発明のさらに他の態様として、本発明は、（ａ）分離された細胞または組織に候補物質を接触させる段階、（ｂ）前記細胞または組織においてＴＧＦ－βシグナル伝達系、ＩＬＫシグナル伝達系、アクチン－サイトスケルトン（ａｃｔｉｎ－ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔｏｎ）シグナル伝達系及びＲｈｏＧＤＩシグナル伝達系からなる群から選ばれる少なくとも１つのシグナル伝達系タンパク質の活性または前記タンパク質をコードする遺伝子の発現レベルを測定する段階、及び（ｃ）前記候補物質と接触した細胞または組織において前記タンパク質の活性または前記タンパク質をコードする遺伝子の発現レベルが候補物質接触前のレベルに比べて減少する場合、前記候補物質を悪性末梢神経鞘腫の予防、改善または治療用物質であると判定する段階を含む悪性末梢神経鞘腫の予防、改善または治療用物質のスクリーニング方法を提供しうる。
本発明において、前記候補物質は、低分子量化合物、高分子量化合物、微生物培養液または抽出物、天然物抽出物、核酸、タンパク質、糖、及び脂質などを含んでもよいが、これに制限されず、ＴＧＦ－β信号伝達系、ＩＬＫシグナル伝達系、アクチン－サイトスケルトン（ａｃｔｉｎ－ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔｏｎ）シグナル伝達系、及びＲｈｏＧＤＩシグナル伝達系からなる群から選ばれる少なくとも１つのシグナル伝達系タンパク質の活性または前記タンパク質をコードする遺伝子の発現レベルを減少させることができる物質であれば、すべて含んでもよい。
前記核酸は、ｍｉｃｒｏＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、アプタマー（ａｐｔａｍｅｒ）、ＬＮＡ（ｌｏｃｋｅｄ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ）、ＰＮＡ（ｐｅｐｔｉｄｅ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ）、及びモルホリノ（ｍｏｒｐｈｏｌｉｎｏ）からなる群から選ばれるものであってもよいが、これに制限されるものではない。
本発明において、前記シグナル伝達系タンパク質は、キナーゼ（ｋｉｎａｓｅ）であってもよく、前記キナーゼは、ＣＤＫ４、ＳＴＫ１０、ＣＤＫ５、ＭＡＰ２Ｋ１、ＡＬＰＫ３、ＰＮＫＰ、ＰＤＫ３、ＰＨＫＧ１、ＣＦＬ１、及びＰＡＣＳＩＮ３からなる群から選ばれる少なくとも１つの遺伝子によってコードされるキナーゼであってもよいが、これに制限されるものではない。
本発明において、前記分離された細胞または組織は、神経細胞または神経組織であってもよいが、これに制限されるものではない。
本発明で使用される用語は、本発明における機能を考慮しながら、可能な限り現在広く使用されている一般的な用語を選択したが、これは当分野に従事している技術者の意図や判例、新技術の出現などによって変わり得る。また、特定の場合は出願人が任意に選定した用語もあり、この場合、該当する発明の説明部分で詳細にその意味を記載する。したがって、本発明で使用される用語は、単なる用語の名称ではなく、その用語が有する意味と本発明の全般にわたる内容に基づいて定義されるべきである。
本発明の明細書全体において、ある部分がある構成要素を「含む」とするとき、これは特に反対の記載がない限り、他の構成要素を除外するのではなく、他の構成要素をさらに含んでもよいことを意味する。本発明の明細書の全体で使用される程度の用語の「約」、「実質的に」などは、言及された意味に固有の製造及び物質許容誤差が提示されるとき、その数値またはその数値に近い意味として使用され、本発明の理解を助けるために正確かつ絶対的な数値が言及された開示内容を非良心的な侵害者が不当に利用することを防止するために使用される。
本発明の明細書全体において、マルクーシュ形式の表現に含まれる「これらの組み合わせ」という用語は、マルクーシュ形式の表現に記載された構成要素からなる群から選ばれる１つ以上の混合または組み合わせを意味するもので、前記構成要素からなる群から選ばれる一つ以上を含むことを意味する。
以下、本発明の理解を助けるために好ましい実施例を提示する。しかし、下記の実施例は本発明をより容易に理解するために提供されるものであり、下記の実施例によって本発明の内容が限定されるものではない。
［実施例］
実施例１．試料準備及びプロテオーム分析
１．１．試料準備
神経線維腫症１型と診断された５人の患者から悪性末梢神経鞘腫（ＭＰＮＳＴ）組織が得られ、対照群としては５人の患者から得られた良性神経線維腫組織を使用した。ＭＰＮＳＴ患者に対する情報を以下の表３に示した。
得られた組織試料は、ホルマリンで固定した後、パラフィンで包埋した。プロテオーム分離のために、図１ａ及び図１ｂのフローチャートに示されるように、前記ＦＦＰＥ（ｆｏｒｍａｌｉｎ－ｆｉｘｅｄ ｐａｒａｆｆｉｎ－ｅｍｂｅｄｄｅｄ）組織スライドをカミソリで分離してチューブに入れ、２００μｌのヘプタン（ｈｅｐｔａｎｅ）で１時間２５℃で脱パラフィン化した。次に、試料の破砕、抽出及び均質化のために、ＡＦＡ（ａｄａｐｔｉｖｅ ｆｏｃｕｓｅｄ ａｃｏｕｓｔｉｃｓ）超音波粉砕機を使用して５％ＳＤＳ、５０ｍＭ Ｔｒｉｅｔｈｙｌａｍｍｏｎｉｕｍ ｂｉｏｃａｒｂｏｎａｔｅ ｂｕｆｆｅｒ １００ｕｌを加えた後、試料を溶解（ｌｙｓｉｓ）した。その後、Ｔｒｙｐｓｉｎ／ＬｙｓＣ ｐｒｏｔｅａｓｅを用いて試料を消化（ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ）させてｐｅｐｔｉｄｅを製造した後、ＬＣ－ＭＳを用いてプロテオームを分析した。
１．２．プロテオーム分析
プロテオーム分析は、ＬＣ－ＭＳを用いて行った。質量分析（Ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ，以下、「ＭＳ」という）装備は、Ｑ－Ｅｘａｃｔｉｖｅ Ｐｌｕｓ ＢｉｏＰｈａｒｍ ｖｅｒｓｉｏｎ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ，米国）を、液体クロマトグラフィー（ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，以下、「ＬＣ」という）は、ＵｌｔｉＭａｔｅＴＭ３０００ ＲＳＬＣｎａｎｏ Ｓｙｓｔｅｍ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ，米国）を使用した。試料は、５．０μｌずつ自動試料注入装置を用いて注入し、２５０ｎｌ／ｍｉｎの流速でＮａｎｏＬＣと連動したイオントラップ質量分析器（ｉｏｎ ｔｒａｐ ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒ）で分析を行った。
ＬＣに使用したカラムは、内径７５μｍ、外径３６０μｍの溶融シリカ毛細管カラム（ｆｕｓｅｄ ｓｉｌｉｃａ ｃａｐｉｌｌａｒｙ ｃｏｌｕｍｎ）Ｃ１８を使用した。試料は２００分間、２５０ｎｌ／ｍｉｎの流速で分析し、濃度勾配は５％ソリューションＢから５０％ソリューションＢ（８０％ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ、０．１％ｆｏｒｍｉｃ ａｃｉｄ、５％ＤＭＳＯ）に９０分間分離した。
ＭＳのためのパラメータは、ＭＳ１解像度（ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ）７００００、ＭＳ１最大充電時間（ｍａｘｉｍｕｍ ｆｉｌｌ ｔｉｍｅ）２０ｍｓｅｃ、ＤＤＡ（ｄａｔａ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ａｃｑｕｉｓｉｔｉｏｎ）法（上位１０）を使用し、ＭＳ２解像度１７５００、ＭＳ２最大充電時間１００ｍｓｅｃ、ＡＧＣ（ａｕｔｏ ｇａｉｎ ｃｏｎｔｒｏｌ）１ｅ６で行った。
実施例２．プロテオームデータの分析及びそれによる悪性末梢神経鞘腫（ＭＰＮＳＴ）特異的タンパク質の同定
前記実施例１で得られた悪性末梢神経鞘腫（ＭＰＮＳＴ）及び良性神経線維腫（ＮＦ）組織試料に対するプロテオームデータ分析を行った。
まず、図２に示すように、それぞれｒａｗデータをプロテオームディスカバリー２．２ソフトウェア（Ｔｈｅｒｍｏ，米国）を使用した。Ｕｎｉｐｒｏｔで提供するヒトプロテオームｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｄａｔａｂａｓｅを用いて、ラベルフリー定量（Ｌａｂｅｌ ｆｒｅｅ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎ）アルゴリズムでタンパク質の定性情報と定量情報を抽出した。定性分析のためにｐｅｐｔｉｄｅ ｓｅａｒｃｈ条件のうち、ｆｉｘｅｄ ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ条件は、ｃｙｓｔｅｉｎｅにｃａｒｂａｍｉｄｏｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎを使用し、ｖａｒｉａｂｌｅ ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ条件としてｎ－ｔｅｒｍｉｎａｌ ａｃｅｔｙｌａｔｉｏｎとｍｅｔｈｉｏｎｉｎｅ ｏｘｉｄａｔｉｏｎを適用した。ｐｒｅｃｕｒｓｏｒイオンの初期質量誤差は、１０ｐｐｍであり、ｆｒａｇｍｅｎｔイオンに対する質量誤差は、２０ｐｐｍに調整し、ｐｅｐｔｉｄｅをタンパク質でｍａｐｐｉｎｇするとき、ｕｎｉｑｕｅ ｐｅｐｔｉｄｅとｒａｚｏｒ ｐｅｐｔｉｄｅをすべて使用した。ラベルフリー定量のために、ｕｎｉｑｕｅ ｐｅｐｔｉｄｅの ｐｅａｋ ｉｎｔｅｎｓｉｔｙを用いた。
その結果、図３に示すように、各試料から得られたタンパク質定量値分布が均一であることを確認した。
また、前記試料のプロテオーム定量情報を用いて主成分分析（Ｐｒｉｎｃｉｐａｌ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ ａｎａｌｙｓｉｓ，ＰＣＡ）を行った。その結果、図４に示すように、ＭＰＮＳＴとＮＦの２つのグループ間のプロテオームの定量、定性的な差によって２つのグループを区別できることを確認した。より具体的には、図４の右グラフを参照すると、良性ＮＦ組織では３，４８３個のタンパク質が、ＭＰＮＳＴ組織では３，６０１個のタンパク質が同定され、良性ＮＦ組織では同定されなかったが、ＭＰＮＳＴ組織のみで同定されたタンパク質は１４１個、逆の場合は２３個となった。
実施例３．悪性末梢神経鞘腫（ＭＰＮＳＴ）において発現が増加したタンパク質の導出
ボルケーノプロット（ｖｏｌｃａｎｏ ｐｌｏｔ）分析を用いたプロテオームの定量的分析を通じて図５ａに示すように良性ＮＦに比べてＭＰＮＳＴにおいて１０倍以上発現増加が現れ、細胞外エクソソーム（ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｅｘｏｓｏｍｅ）において主に発現されるタンパク質を調査した（赤色のボックスで表示）。エクソソームに排出されるタンパク質は血液や尿から検出されることがあるので、診断のための検体採取に有利であるからである。
その結果、図５ａの右側に示すように、ＣＤ２４８、ＤＮＡＪＢ４、ＰＯＴＥＥ、ＳＰＡＲＣＬ１、ＴＢＣ１Ｄ４など２４種のタンパク質が選別された。
また、図５ｂに示すように、細胞外基質を分解するタンパク質（タンパク性細胞外基質；ｐｒｏｔｅｉｎａｃｅｏｕｓ ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｍａｔｒｉｘ）を調査した（赤色のボックスで表示）。細胞外基質で発現されるタンパク質も血液や尿から検出されることがあるためである。また、基質分解は、がん細胞の周辺組織に浸透時に発生する現象であるため、細胞の悪性化に基づくタンパク質である。
その結果、図５ｂの右側に示すように、ＣＤ２４８、ＳＰＡＲＣＬ１、ＣＩＬＰ２、ＭＭＰ８、ＳＰＯＮ１タンパク質が選別された。
比較例１．悪性末梢神経鞘腫（ＭＰＮＳＴ）と良性神経線維腫（ＮＦ）においてＳ－１００タンパク質の発現様相の調査
従来、良性ＮＦとＭＰＮＳＴの区別に重要な病理学的指標として使用されてきたＳ－１００タンパク質の発現様相を調査した。
合計９つのＳ－１００同型タンパク質（ｉｓｏｆｏｒｍ）を調査したところ、図６ａ～６ｉに示すように、個々の患者に応じて良性ＮＦとＭＰＮＳＴ間の発現様相に差が示された。これらの結果は、Ｓ－１００タンパク質の良性ＮＦとＭＰＮＳＴの区分のための特異的マーカーとしての限界点が明確になったものである。
また、良性ＮＦとＭＰＮＳＴを区別するさらに他の指標としてビメンチン（ｖｉｍｅｎｔｉｎ）を調査したところ、良性ＮＦとＭＰＮＳＴ間の発現様相の差は見られなかった。
前記結果をまとめると、従来使用されているマーカーであるＳ－１００及びビメンチンは、ＭＰＮＳＴ特異的バイオマーカーとして臨床に適用するには明確な限界を有することを示唆する。
実施例４．悪性末梢神経鞘腫（ＭＰＮＳＴ）の診断的マーカー選定
４．１．エンドシアリン（ＣＤ２４８）
ＣＤ２４８遺伝子がコードするタンパク質であるエンドシアリン（ｅｎｄｏｓｉａｌｉｎ）は、腫瘍の血管再生に関与する分子で、細胞外基質に分泌され、エクソソームからも発見される。
図７から確認できるように、エンドシアリンは、５人の患者から得られたすべてのＭＰＮＳＴ組織において特異的に見出された。特にエンドシアリンは、エクソソームから発見されるので、血液及び尿試料から検出できると予想されるという点で、ＭＰＮＳＴ診断マーカーとしての活用度が高いものと期待される。
４．２．ＳＰＡＲＣ－類似タンパク質１（ＳＰＡＲＣＬ１）
ＳＰＡＲＣＬ１遺伝子によってコードされるＳＰＡＲＣ－類似タンパク質１は、主に細胞外に分泌され、カルシウム、細胞外基質、コラゲンなどに結合するタンパク質である。
図８に示すように、ＳＰＡＲＣ－類似タンパク質１は、良性ＮＦでは検出されず、ＭＰＮＳＴで特異的に発現されることを確認した。このタンパク質も細胞外で発見され、エクソソームにも存在するため、血液及び尿試料から検出できるものと予想され、したがって、ＭＰＮＳＴ診断マーカーとしての利用率が高いものと予想される。
４．３．ニュートロフィルコラゲナーゼ（ＭＭＰ８）
ＭＭＰ８遺伝子によってコードされるニュートロフィルコラゲナーゼ（ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ ｃｏｌｌａｇｅｎａｓｅ）は、細胞外基質を分解するプロテアーゼ（ｐｒｏｔｅａｓｅ）であり、がんの転移及び様々な炎症反応に関与することが知られている。
図９に示すように、ニュートロフィルコラゲナーゼは、５人の患者から得られたすべてのＭＰＮＳＴ組織において特異的に発現されることを確認した。特に、ニュートロフィルコラゲナーゼは細胞外基質に分泌されるため、血液及び尿試料から検出できるものと予想されるという点で、ＭＰＮＳＴ診断マーカーとしての利用率が高いものと期待される。
実施例５．悪性末梢神経鞘腫（ＭＰＮＳＴ）の新しい治療標的の発掘
５．１．階層型クラスター分析（ｈｉｅｒａｒｃｈｉｃａｌ ｃｌｕｓｔｅｒ ａｎａｌｙｓｉｓ）
ＭＰＮＳＴにおいて特異的に発現が増加するプロテオームを階層型クラスター分析を通じて２つのクラスター（ｃｌｕｓｔｅｒ）に区分した。より具体的には、図１０ａに示すように、２つのグループで同定された合計３，６２４個のタンパク質のうち、各グループあたり８０％以上の試料から同定されたタンパク質３，４５５個を抽出し、２つのグループについてＳｔｕｄｅｎｔ’ｓ Ｔ ｔｅｓｔを行ってＢｅｎｊａｍｉｎｉ－Ｈｏｃｈｂｅｒｇ ＦＤＲ＜０．０１を満たす２９２個のタンパク質を選別した。当該タンパク質の定量情報に対するＺ ｓｃｏｒｅを算出し、Ｋ－ｍｅａｎｓ ｃｌｕｓｔｅｒｉｎｇ分析を行った結果、２つのクラスターが形成されることを確認した。各クラスターに該当するタンパク質は、ｇ：Ｐｒｏｆｉｌｅｒ（ｈｔｔｐｓ：／／ｂｉｉｔ．ｃｓ．ｕｔ．ｅｅ／ｇｐｒｏｆｉｌｅｒ／）を行い、Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｐｒｏｃｅｓｓ，Ｃｅｌｌｕｌａｒ ｃｏｍｐａｒｔｍｅｎｔ及びＭｏｌｅｃｕｌａｒ ｆｕｎｃｔｉｏｎを調査した。
図１０ｂを参照すると、クラスター１はＭＰＮＳＴで発現が増加したタンパク質であり、機能的アクチン（ａｃｔｉｎ）、筋骨格系タンパク質のように細胞外基質に結合して機能するタンパク質が発見された。
図１０ｃを参照すると、クラスター２は、ＭＰＮＳＴで発現が減少したタンパク質であり、主に細胞外基質に分泌されるか、またはエクソソームに存在するタンパク質が発見された。
５．２．ＧＯ分析及びＩＰＡ（ｉｎｇｅｎｕｉｔｙ ｐａｔｈｗａｙ ａｎａｌｙｓｉｓ）による標的シグナル伝達系の発掘
１４４種のＭＰＮＳＴ特異的タンパク質についてＧｅｎｅ ｏｎｔｏｌｏｇｙ分析及びＱＩＡＧＥＮ Ｉｎｇｅｎｕｉｔｙ Ｐａｔｈｗａｙ Ａｎａｌｙｓｉｓを行い、ＭＰＮＳＴで特異的に発現が変化するタンパク質が関与するｐａｔｈｗａｙを確認した。１４４種のＭＰＮＳＴ特異的タンパク質ａｃｃｅｓｓｉｏｎ ｎｕｍｂｅｒをＳｈｙｎｙＧＯ及びＩＰＡ ｓｅｒｖｅｒに入力し、１４４種のＭＰＮＳＴ特異的タンパク質に関連するＢｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｐｒｏｃｅｓｓ，Ｃｅｌｌｕｌａｒ ｃｏｍｐａｒｔｍｅｎｔ及びＭｏｌｅｃｕｌａｒ ｆｕｎｃｔｉｏｎを調査した。
その結果、図１１及び図１２に示すように、ＩＬＫシグナル伝達系、ａｃｔｉｎ－ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔｏｎシグナル伝達系及びＲｈｏＧＤＩ信号伝達系がＭＰＮＳＴで特異的に亢進されることを確認した。また、前記シグナル伝達系の上位シグナル伝達を類推してみると、ＴＧＦ－βの亢進が基底であるものと予測された。
５．３．新しい治療標的としてのキナーゼ（ｋｉｎａｓｅ）の発掘
前記実施例５．２で発掘したシグナル伝達系に関連してＭＰＮＳＴで特異的に発現または活性が増加したキナーゼは治療標的として活用されてもよい。そこで、本発明者らはＭＰＮＳＴで増加しているキナーゼを発掘した。
その結果、図１３～図２１に示すように、ＣＤＫ４、ＭＡＰ２Ｋ１、ＰＤＫ３、ＳＴＫ１０、ＡＬＰＫ３、ＰＨＫＧ１、ＣＤＫ５、ＰＮＫＰ及びＰＡＣＳＩＮ３などのキナーゼがＭＰＮＳＴにおいて増加していることを確認した。したがって、これらのキナーゼに対する阻害剤、例えば、前記キナーゼに対する拮抗薬（ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ）がＭＰＮＳＴの治療に使用されてもよい。
特に、フォスタマチニブ（ｆｏｓｔａｍａｔｉｎｉｂ）は、ＣＤＫ４、ＭＡＰ２ｋ１、ＳＴＫ１及びＰＨＫＧ１に多発的な拮抗作用を示すので、ＭＰＮＳＴ治療剤として活用できるものと予想される。
実施例６．悪性末梢神経鞘腫（ＭＰＮＳＴ）の診断マーカーに対する検証
前記実施例４で発掘したＭＰＮＳＴ診断マーカーのうち、ＭＭＰ８タンパク質発現の検証のために、ＭＰＮＳＴ患者の組織にＩＨＣ染色を行った。
その結果、下記表４及び図２２に示すように、ＮＦ組織に比べてＭＰＮＳＴ組織においてＭＭＰ８タンパク質（ニュートロフィルコラゲナーゼ）が過剰発現されたことが確認できた。
また、患者の試料を得るのに容易な血中でのＭＭＰ８タンパク質発現の差をＥＬＩＳＡ分析法により確認した。具体的には、正常群（ＷＴ００）、ＮＦ１患者（ＳＥＬ００）、ＭＰＮＳＴ患者のうち手術後（ｐｏｓｔ－ＯＰ）の腫瘍部位を完全に除去した患者（ｃｌｅａｒ）、腫瘍除去の様相によって完全に除去されず、腫瘍が存在する可能性のある患者（ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ）、全く除去されていないか、または転移を有する患者（ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ）の血漿を対象にＥＬＩＳＡ分析法で分析した。
その結果、以下の表５及び図２３に示すように、腫瘍が完全に除去されていないか（ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ）、転移もしくは全く除去されていない（ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ）患者の血漿でＭＭＰ８タンパク質の発現が増加したことが確認できた。腫瘍除去の有無によってＭＭＰ８タンパク質の発現差を確認した前記結果から、ＭＭＰ８がＭＰＮＳＴ診断マーカーとして活用できることが確認できた。
実施例７．悪性末梢神経鞘腫（ＭＰＮＳＴ）の治療標的に対する検証
前記実施例５で発掘されたＭＰＮＳＴ治療標的であるＩＬＫシグナル伝達系、アクチン－サイトスケルトン（ａｃｔｉｎ－ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔｏｎ）シグナル伝達系、及び様々なキナーゼの異常活性度を提示するために、ＭＰＮＳＴ患者組織においてＩＬＫ、Ｃｏｆｉｌｉｎ、ＭＥＫ、ｐ－ＭＥＫ、及びＰＡＣＳＩＮ３タンパク質のＩＨＣ染色を行った。
その結果、下記表６及び図２４に示すように、ＭＰＮＳＴ組織においてＮＦ組織に比べてＩＬＫ、Ｃｏｆｉｌｉｎ、ＭＥＫ、ｐ－ＭＥＫ、及びＰＡＣＳＩＮ３プロテオームの発現が増加していることが確認できた。
前述した本発明の説明は、例示のためのものであり、本発明が属する技術分野の通常の知識を有する者は、本発明の技術的思想や必須の特徴を変更することなく、他の具体的な形態に容易に変形が可能であることが理解できるだろう。したがって、前述した実施例は、すべての点で例示的なものであり、限定的なものではないと理解しなければならない。
本発明は、悪性末梢神経鞘腫（Ｍａｌｉｇｎａｎｔ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｎｅｒｖｅ ｓｈｅａｔｈ ｔｕｍｏｒ，ＭＰＮＳＴ）の鑑別診断用組成物などに関し、本発明のタンパク質マーカーを検出できる組成物を用いて、神経線維腫症Ｉ型患者において悪性腫瘍の発生有無を迅速に予測及び診断するのに有用に利用されることが期待されるので、産業上利用可能性がある。

Claims (16)

  1. エンドシアリン（ｅｎｄｏｓｉａｌｉｎ）、ＳＰＡＲＣ－類似タンパク質１（ＳＰＡＲＣ－ｌｉｋｅ ｐｒｏｔｅｉｎ １）及びニュートロフィルコラゲナーゼ（ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ ｃｏｌｌａｇｅｎａｓｅ）からなる群から選ばれる少なくとも１つのタンパク質またはそのｍＲＮＡ発現レベルを測定する製剤を有効成分として含む、悪性末梢神経鞘腫（Ｍａｌｉｇｎａｎｔ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｎｅｒｖｅ ｓｈｅａｔｈ ｔｕｍｏｒ，ＭＰＮＳＴ）の鑑別診断用組成物。
  2. 前記組成物は、神経線維腫症Ｉ型から悪性末梢神経鞘腫を区別して診断し得ることを特徴とする、請求項１に記載の悪性末梢神経鞘腫の鑑別診断用組成物。
  3. 前記タンパク質の発現レベルを測定する製剤は、前記タンパク質に特異的な抗体またはアプタマーであることを特徴とする、請求項１に記載の悪性末梢神経鞘腫の鑑別診断用組成物。
  4. 前記ｍＲＮＡの発現レベルを測定する製剤は、前記ｍＲＮＡに特異的に結合するプライマーセットまたはプローブであることを特徴とする、請求項１に記載の悪性末梢神経鞘腫の鑑別診断用組成物。
  5. 請求項１～４のいずれか一項に記載の組成物を含む、悪性末梢神経鞘腫の鑑別診断用キット。
  6. 前記キットは、エンドシアリン（ｅｎｄｏｓｉａｌｉｎ）、ＳＰＡＲＣ－類似タンパク質１（ＳＰＡＲＣ－ｌｉｋｅ ｐｒｏｔｅｉｎ １）及びニュートロフィルコラゲナーゼ（ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ ｃｏｌｌａｇｅｎａｓｅ）からなる群から選ばれる少なくとも１つのタンパク質またはそのｍＲＮＡの発現レベルが検出されるか、またはそれらの発現レベルが良性神経線維腫試料の発現レベルに比べてより高い場合、悪性末梢神経鞘腫であると決定することを指示する説明書を含むことを特徴とする、請求項５に記載の悪性末梢神経鞘腫の鑑別診断用キット。
  7. 被検体から分離した生物学的試料においてエンドシアリン（ｅｎｄｏｓｉａｌｉｎ）、ＳＰＡＲＣ－類似タンパク質１（ＳＰＡＲＣ－ｌｉｋｅ ｐｒｏｔｅｉｎ １）及びニュートロフィルコラゲナーゼ（ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ ｃｏｌｌａｇｅｎａｓｅ）からなる群から選ばれる少なくとも１つのタンパク質またはそのｍＲＮＡ発現レベルを測定する段階を含む、悪性末梢神経鞘腫の鑑別診断に必要な情報を提供する方法。
  8. 前記方法は、エンドシアリン（ｅｎｄｏｓｉａｌｉｎ）、ＳＰＡＲＣ－類似タンパク質１（ＳＰＡＲＣ－ｌｉｋｅ ｐｒｏｔｅｉｎ １）及びニュートロフィルコラゲナーゼ（ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ ｃｏｌｌａｇｅｎａｓｅ）からなる群から選ばれる少なくとも１つのタンパク質またはそのｍＲＮＡの発現が検出されるか、またはそれらの発現レベルが神経線維腫症Ｉ型患者から分離した生物学的試料における発現レベルに比べてより高い場合、悪性末梢神経鞘腫であると診断する段階をさらに含むことを特徴とする、請求項７に記載の悪性末梢神経鞘腫の鑑別診断に必要な情報を提供する方法。
  9. 前記被検体は、悪性末梢神経鞘腫が疑われる患者であるか、または神経線維腫症Ｉ型であると診断された患者であることを特徴とする、請求項７に記載の悪性末梢神経鞘腫の鑑別診断に必要な情報を提供する方法。
  10. 前記生物学的試料は、血液、全血、血漿、尿、組織、細胞、器官、骨髄、微細針吸引検体、微細針洗浄液、コア針生検（ｃｏｒｅ ｎｅｅｄｌｅ ｂｉｏｐｓｙ）検体及び唾液からなる群から選ばれる少なくとも１つであることを特徴とする、請求項７に記載の悪性末梢神経鞘腫の鑑別診断に必要な情報を提供する方法。
  11. 前記タンパク質発現レベルは、ウェスタンブロット、ＥＬＩＳＡ、放射線免疫分析、放射線免疫拡散法、オクタロニー免疫拡散法（Ｏｕｃｈｔｅｒｌｏｎｙ ｉｍｍｕｎｏｄｉｆｆｕｓｉｏｎ）、ロケット免疫電気泳動（Ｒｏｃｋｅｔ ｉｍｍｕｎｏｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ）、免疫染色法、免疫沈降分析法、補体固定分析法、質量分析法（Ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ）、ＦＡＣＳ及びタンパク質チップからなる群から選ばれる少なくとも１つの方法で測定されることを特徴とする、請求項７に記載の悪性末梢神経鞘腫の鑑別診断に必要な情報を提供する方法。
  12. 前記ｍＲＮＡ発現レベルは、ＰＣＲ、ＲＮａｓｅ保護分析法、ノーザンブロッティング（ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ）、サザンブロッティング（ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ）、Ｉｎ ｓｉｔｕ交雑法及びＤＮＡチップからなる群から選ばれる少なくとも１つの方法で測定されることを特徴とする、請求項７に記載の悪性末梢神経鞘腫の鑑別診断に必要な情報を提供する方法。
  13. 下記段階を含む悪性末梢神経鞘腫の予防、改善または治療用物質のスクリーニング方法。
    （ａ）分離された細胞または組織に候補物質を接触させる段階、
    （ｂ）前記細胞または組織においてＴＧＦ－βシグナル伝達系、ＩＬＫシグナル伝達系、アクチン－サイトスケルトン（ａｃｔｉｎ－ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔｏｎ）シグナル伝達系及びＲｈｏＧＤＩシグナル伝達系からなる群から選ばれる少なくとも１つのシグナル伝達系タンパク質の活性または前記タンパク質をコードする遺伝子の発現レベルを測定する段階、及び
    （ｃ）前記候補物質と接触した細胞または組織において前記タンパク質の活性または前記タンパク質をコードする遺伝子の発現レベルが候補物質接触前のレベルに比べて減少する場合、前記候補物質を悪性末梢神経鞘腫の予防、改善または治療用物質であると判定する段階。
  14. 前記シグナル伝達系タンパク質は、キナーゼ（ｋｉｎａｓｅ）であることを特徴とする、請求項１３に記載の悪性末梢神経鞘腫の予防、改善または治療用物質のスクリーニング方法。
  15. 前記キナーゼは、ＣＤＫ４、ＳＴＫ１０、ＣＤＫ５、ＭＡＰ２Ｋ１、ＡＬＰＫ３、ＰＮＫＰ、ＰＤＫ３、ＰＨＫＧ１、ＣＦＬ１及びＰＡＣＳＩＮ３からなる群から選ばれる少なくとも１つの遺伝子によってコードされるキナーゼであることを特徴とする、請求項１４に記載の悪性末梢神経鞘腫の予防、改善または治療用物質のスクリーニング方法。
  16. 前記分離された細胞または組織は、神経細胞または神経組織であることを特徴とする、請求項１３に記載の悪性末梢神経鞘腫の予防、改善または治療用物質のスクリーニング方法。
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