JP2024506718A - 工学作成二量体タンパク質の安定性を高めるための水溶液組成物 - Google Patents

Abstract

本出願は、ヒト免疫グロブリンＦｃポリペプチド又は免疫グロブリンＦｃポリペプチド由来のポリペプチドに作動可能に連結された少なくとも１つのヒトセルピンポリペプチドを含む単量体を含む工学作成二量体タンパク質の、低緩衝液濃度及び低イオン強度の及び中性アミノ酸を含む、水溶液組成物に関する。前記水溶液組成物は、水溶液組成物中のＦｃドメインの安定性を上昇させ、特に工学作成二量体タンパク質の安定性を上昇させる。

Description

関連出願
本出願は、２０２１年２月１７日にイギリスで出願された特許出願第２１０２２５８．７号の利益を主張し、その内容全体が参照により本明細書に組み込まれる。

配列表の参照による組み込み
２０２２年２月１６日に作成され、サイズが１４８キロバイトであるＩＮＨＩ－７０２＿００１ＷＯ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ＿Ｌｉｓｔｉｎｇ．ｔｘｔという名前のテキストファイルの内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

共同研究契約に基づく共有所有権
請求された発明の有効出願日又はそれ以前に有効であった共同研究契約の複数の当事者によって又はその当事者に代わって、本出願で開示された主題が展開され、及び請求された発明が作成された。共同研究契約の当事者は以下の通りである：Ａｒｅｃｏｒ Ｌｉｍｉｔｅｄ ａｎｄ Ｉｎｈｉｂｒｘ， Ｉｎｃ．。

発明の分野
本発明は、低緩衝液濃度及び低イオン強度の及び中性アミノ酸を含有する、Ｆｃドメインを含む工学作成された二量体タンパク質（ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ ｄｉｍｅｒｉｃ ｐｒｏｔｅｉｎ）の水溶液組成物に関する。

背景
Ｆｃドメインを含む工学作成タンパク質は、治療において広く使用されている。Ｆｃドメインは、Ｆｃ受容体と呼ばれる細胞表面受容体及び補体系の一部のタンパク質と相互作用し、それによって免疫系を活性化する抗体のＣ末端領域である。ＩｇＧ、ＩｇＡ、及びＩｇＤ抗体アイソタイプでは、Ｆｃドメインは２つの同一のタンパク質鎖断片で構成されており、その各々は抗体重鎖の２番目と３番目の定常ドメインに由来している。ＩｇＭ及びＩｇＥ抗体のアイソタイプでは、Ｆｃドメインは２つの同一のタンパク質鎖断片で構成されており、それらの各々が抗体重鎖の２番目、３番目、及び４番目の定常ドメインに由来している。Ｆｃドメインの分子量は、典型的には２５～４０ｋＤａの範囲であり、グリコシル化が存在する場合にはより大きくなり得る。肥満細胞、好塩基球、好酸球の細胞溶解や脱顆粒などの、抗体のＦｃドメイン結合を介する免疫系の活性化により、幅広い生理学的効果が生じる。

二重特異性抗体及び三重特異性抗体を含む広範囲の工学作成抗体タンパク質が開発されている。抗体分子のＦａｂ部分（抗原結合特異性を与える部分）から分離されたＦｃが、その生理学的目的、特に工学作成タンパク質の生体内半減期を拡張する目的とは異なる目的を果たすことができる、多くの工学作成タンパク質も開発されている。国際公開第２０１３／００３６４１Ａ２号及び国際公開第２０１６／０６９５７４Ａ１号（ＩＮＨＩＢＲＸ）は、セルピン（ｓｅｒｐｉｎ）ポリペプチド又はセルピンに由来するアミノ酸配列を含む工学作成二量体タンパク質を開示している。

水溶液として配合された場合、保存中に、タンパク質は分解され、その結果として生物学的活性が失われやすい。分解は本質的に物理的な性質であり、凝集、沈殿、ゲル形成を含み得る。分解はまた本質的に化学的な性質でもあり、加水分解による切断、脱アミド化、環状イミド形成、アスパラギン酸／グルタミン酸の異性化又は酸化などを含み得る。

分解プロセスの速度は温度の上昇とともに上昇し、タンパク質治療用分子は一般に、温度が低いほうが安定である。しかし、たとえ冷蔵下であっても、意図された保存期間（通常は２４か月）の間、液体の状態で安定した治療用タンパク質生成物を開発することは多くの場合困難である。さらに、患者の利便性を確保するために、特定の期間又は貯蔵寿命全体にわたって、最高２５℃又は最高３０℃などの高温でも安定した生成物を開発する必要がある。

タンパク質治療薬の安定性を制御するための最も重要なパラメータの１つはｐＨである。従って、ｐＨの最適化は製剤開発における重要な工程である。多くの治療用タンパク質は、４．０～８．５の間の選択されたｐＨで配合される。ｐＨを選択した値に維持し、ｐＨの変動を最小限に抑えることが重要であると考えられる。従って、製剤にはある程度の緩衝能が必要であると理解されている。より大きなタンパク質分子は、ポリペプチド主鎖のアミノ酸側鎖の間にイオン化可能な基が存在するため、通常、ある程度の自己緩衝能力を備えている。

本発明は、水溶液組成物中にＦｃドメインを含む工学作成タンパク質の安定性を上昇させる組成物、及び特に、工学作成二量体タンパク質の安定性を上昇させる組成物を提供し、ここで、二量体タンパク質の各単量体は、ヒト免疫グロブリンＦｃポリペプチド又は免疫グロブリンＦｃ由来のポリペプチドに作動可能に連結された少なくとも１つのヒトセルピンポリペプチドを含む（「本発明の工学作成二量体タンパク質」）。

本開示は、以下を含む、ｐＨ６．０～８．０の範囲の水溶液組成物であって、二量体タンパク質の各単量体が、ヒト免疫グロブリンＦｃポリペプチド又は免疫グロブリンＦｃポリペプチド由来のポリペプチドに作動可能に連結された、少なくとも１つのヒトセルピンポリペプチドを含む工学作成二量体タンパク質と、任意選択的に、４．０～１０．０の範囲のｐＫａを有し、そのｐＫａが組成物のｐＨの２ｐＨ単位以内である、少なくとも１つのイオン化基を有する物質である１つ又はそれ以上の緩衝液と、中性アミノ酸と、及び非荷電張性修飾剤とを含む、上記組成物を提供し、ここで、緩衝液は組成物中に０～１０ｍＭの総濃度で存在し、及びここで、工学作成二量体タンパク質の寄与を除いた組成物の総イオン強度は３０ｍＭ未満である。

本明細書に開示される水溶液組成物のいくつかの実施態様において、ヒトセルピンポリペプチドは、ヒトアルファ１アンチトリプシン（ＡＡＴ）ポリペプチドであるか又はヒトＡＡＴポリペプチドに由来する。本明細書に開示される水溶液組成物のいくつかの実施態様において、二量体タンパク質の各単量体は１つのヒトセルピンポリペプチドを含む。本明細書に開示される水溶液組成物のいくつかの実施態様において、ヒトセルピンポリペプチドは配列番号１又は２の配列を有する。本明細書に開示される水溶液組成物のいくつかの実施態様において、ヒト免疫グロブリンＦｃポリペプチド又は免疫グロブリンＦｃポリペプチド由来のポリペプチドは、修飾ヒトＩｇＧ４Ｆｃポリペプチドである。本明細書に開示される水溶液組成物のいくつかの実施態様において、ヒト免疫グロブリンＦｃポリペプチド又は免疫グロブリンＦｃポリペプチド由来のポリペプチドは、修飾ヒトＩｇＧ４Ｆｃポリペプチドであり、配列番号２８～４３のいずれか１つの配列を有する。本明細書に開示される水溶液組成物のいくつかの実施態様において、二量体タンパク質の各単量体は、配列番号５６の配列を有する。

本明細書に開示される水溶液組成物のいくつかの実施態様において、タンパク質は、１～４００ｍｇ／ｍｌ、例えば１０～２００ｍｇ／ｍｌ、例えば２０～１００ｍｇ／ｍｌ、例えば３０～６０ｍｇ／ｍｌ、例えば約３５ｍｇ／ｍｌ又は約５０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。

本明細書に開示される水溶液組成物のいくつかの実施態様において、緩衝液は、０．１～１０ｍＭの総濃度、例えば０．５～１０ｍＭ、例えば１～１０ｍＭ、例えば１～８ｍＭ、例えば１～６ｍＭ、例えば２～６ｍＭ、例えば２～５ｍＭ、例えば３～５ｍＭで存在する。いくつかの実施態様において、本明細書に開示される水溶液組成物は実質的に緩衝液を含まない。

本明細書に開示される水溶液組成物のいくつかの実施態様において、緩衝液は、組成物のｐＨの１単位以内のｐＫａを有するイオン化基を含む。

本明細書に開示される水溶液組成物のいくつかの実施態様において、１つ又はそれ以上緩衝液は、クエン酸塩、ヒスチジン、マレイン酸塩、亜硫酸塩、アスパルテーム、アスパラギン酸塩、グルタミン酸塩、酒石酸塩、アデニン、コハク酸塩、アスコルビン酸塩、安息香酸塩、酢酸フェニル、没食子酸塩、シトシン、ｐ－アミノ安息香酸、ソルビン酸塩、酢酸塩、プロピオン酸塩、アルギン酸塩、尿酸塩、２－（Ｎ－モルホリノ）エタンスルホン酸、重炭酸塩、ビス（２－ヒドロキシエチル）イミノトリス（ヒドロキシメチル）メタン、Ｎ－（２－アセトアミド）－２－イミノ二酢酸、２－［（２－アミノ－２－オキソエチル）アミノ］エタンスルホン酸、ピペラジン、Ｎ，Ｎ’－ビス（２－エタンスルホン酸）、リン酸塩、Ｎ，Ｎ－ビス（２－ヒドロキシエチル）－２－アミノエタンスルホン酸、３－［Ｎ，Ｎ－ビス（２－ヒドロキシエチル）アミノ］－２－ヒドロキシプロパンスルホン酸、トリエタノールアミン、ピペラジン－Ｎ，Ｎ’－ビス（２－ヒドロキシプロパンスルホン酸）、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（トリス）、Ｎ－トリス（ヒドロキシメチル）グリシン、及びＮ－トリス（ヒドロキシメチル）メチル－３－アミノプロパンスルホン酸、及びこれらの塩、並びにこれらの組み合わせからなる群から選択される。本明細書に開示される水溶液組成物のいくつかの実施態様において、緩衝液は、クエン酸塩、ヒスチジン、マレイン酸塩、酒石酸塩、安息香酸塩、酢酸塩、重炭酸塩、リン酸塩、及びトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（トリス）から、例えばリン酸塩及びトリスから選択される。

本明細書に開示される水溶液組成物のいくつかの実施態様において、非荷電張性修飾剤は、ポリオール、糖類（例えば、単糖類及び二糖類）、及び糖アルコールからなる群から選択される。本明細書に開示される水溶液組成物のいくつかの実施態様において、非荷電張性修飾剤は、グリセロール、１，２－プロパンジオール、マンニトール、ソルビトール、グルコース、スクロース、トレハロース、ＰＥＧ３００、及びＰＥＧ４００からなる群から選択され、特にグリセロール、マンニトール、スクロース、及びトレハロースからなる群から選択される。いくつかの実施態様において本明細書に開示される水溶液組成物は、非荷電張性修飾剤として二糖を含む。いくつかの実施態様において本明細書に開示される水溶液組成物は、非荷電張性修飾剤としてスクロース及び／又はトレハロースを、特にトレハロースを含む。

本明細書に開示される水溶液組成物のいくつかの実施態様において、非荷電張性修飾剤、又は複数の張性修飾剤の組み合わせの総濃度は、５０～１０００ｍＭ、例えば２００～６００ｍＭ、２００～５００ｍＭであるか、又はここで、非荷電張性修飾剤若しくは複数の張性修飾剤の組み合わせの総濃度は、５０～５００ｍＭ、例えば１００～４００ｍＭ、１５０～３５０ｍＭ、２００～３００ｍＭ、又は約２５０ｍＭである。

本明細書に開示される水溶液組成物のいくつかの実施態様において、組成物のオスモル濃度は、２００～５００ｍＯｓｍ／Ｌ、例えば約３００ｍＯｓｍ／Ｌであるか、又はここで組成物のオスモル濃度は３００～５００ｍＯｓｍ／Ｌ、例えば約４００～４６０ｍＯｓｍ／Ｌである。

いくつかの実施態様において本明細書に開示される水溶液組成物は、グリシン、メチオニン、プロリン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、セリン、スレオニン、アスパラギン、及びグルタミンから選択される中性アミノ酸を含む。いくつかの実施態様において、中性アミノ酸は、グリシン、メチオニン、及びプロリンから選択される。いくつかの実施態様において本明細書に開示される水溶液組成物は、中性アミノ酸としてプロリンを含む。いくつかの実施態様において本明細書に開示される水溶液組成物は、中性アミノ酸としてグリシンを含む。いくつかの実施態様において本明細書に開示される水溶液組成物は、中性アミノ酸としてプロリン及びメチオニンを含む。いくつかの実施態様において本明細書に開示される水溶液組成物は、中性アミノ酸としてグリシン及びメチオニンを含む。

本明細書に開示される水溶液組成物のいくつかの実施態様において、組成物中の１つ又はそれ以上の中性アミノ酸の総濃度は、２０～６００ｍＭ、例えば２０～５００ｍＭ、例えば２０～４００ｍＭ、例えば２０～３００ｍＭ、例えば５０～３００ｍＭである。本明細書に開示される水溶液組成物のいくつかの実施態様において、組成物中の１つ又はそれ以上の中性アミノ酸の総濃度は、５０～２００ｍＭ、１００～２００ｍＭ、又は１００～１５０ｍＭである。

本明細書に開示される水溶液組成物のいくつかの実施態様において、工学作成二量体タンパク質の寄与を除いた組成物の総イオン強度は２０ｍＭ未満である。本明細書に開示される水溶液組成物のいくつかの実施態様において、工学作成二量体タンパク質の寄与を除いた組成物の総イオン強度は１０ｍＭ未満である。

本明細書に開示される水溶液組成物のいくつかの実施態様において、ｐＨは６．８と７．８の間、例えば７．０と７．８の間、７．１と７．６の間、７．１と７．５の間、７．２と７．５の間、７．１と７．４の間、７．２と７．３であるか；又は約７．２若しくは約７．３である。

いくつかの実施態様において本明細書に開示される水溶液組成物は、非イオン性界面活性剤を含む。いくつかの実施態様において、非イオン性界面活性剤は、アルキルグリコシド、ポリソルベート、ポリエチレングリコールのアルキルエーテル、ポリエチレングリコールとポリプロピレングリコールのブロックコポリマー（ポロキサマー）、及びポリエチレングリコールのアルキルフェニルエーテルからなる群から選択される。いくつかの実施態様において非イオン性界面活性剤は、ポリソルベート２０又はポリソルベート８０などのポリソルベートである。いくつかの実施態様において非イオン性界面活性剤は、ポロキサマー１８８などの、ポリエチレングリコールとポリプロピレングリコールとのブロックコポリマー（ポロキサマー）である。

本明細書に開示される水溶液組成物のいくつかの実施態様において、非イオン性界面活性剤は、１０～２０００μｇ／ｍｌの濃度、例えば５０～１０００μｇ／ｍｌ、例えば５０～５００μｇ／ｍｌ、例えば約２００μｇ／ｍｌの濃度で存在するか、又は非イオン性界面活性剤は、２５０～１５００μｇ／ｍｌの濃度、例えば７５０～１２５０μｇ／ｍｌなどの、例えば約１０００μｇ／ｍｌで存在する。いくつかの実施態様において本明細書に開示される水溶液組成物は、フェノール系又はベンジル系防腐剤などの防腐剤を含む。いくつかの実施態様において、フェノール系又はベンジル系防腐剤は、フェノール、ｍ－クレゾール、クロロクレゾール、ベンジルアルコール、プロピルパラベン、及びメチルパラベンからなる群から選択される。

本明細書に開示される水溶液組成物のいくつかの実施態様において、防腐剤は、１０～１００ｍＭの濃度、例えば２０～８０ｍＭ、例えば２５～５０ｍＭで存在する。

いくつかの実施態様において本明細書に開示される水溶液組成物は、治療に使用するための組成物である。

いくつかの実施態様において本明細書に開示される水溶液組成物は医薬組成物である。

本開示はまた、それを必要とする被験体において、異常なセリンプロテアーゼの発現又は活性に関連する疾患又は障害の症状を治療又は緩和する方法であって、本明細書に開示される水溶液組成物を投与することを含む方法も提供する。

本開示はまた、感染のリスクを低減しながら、それを必要とする被験体において炎症又は炎症性疾患若しくは障害の症状を治療又は緩和する方法であって、前記被験体に本明細書に開示される水溶液組成物を投与することを含む方法を提供する。

本開示はまた、それを必要とする被験体において感染のリスクを低減する方法であって、前記被験体に本明細書に開示される水溶液組成物を投与することを含む方法を提供する。

本開示はまた、それを必要とする被験体においてＡＡＴ欠損症の症状を治療又は緩和する方法であって、前記被験体に本開示の水溶液組成物を投与する方法を提供し、ここで、ヒトセルピンポリペプチドは、ヒトアルファ－１アンチトリプシン（ＡＡＴ）ポリペプチドであるか又はヒトＡＡＴポリペプチドに由来する。

また本明細書では、感染のリスクを低減しながら、それを必要とする被験体において異常なセリンプロテアーゼの発現又は活性に関連する疾患又は障害の症状を治療又はｗｌｖする方法で使用するための、本開示の水溶液組成物が提供される。

また本明細書ではまた、感染のリスクを低減しながら、それを必要とする被験体において炎症又は炎症性疾患若しくは障害の症状を治療又は緩和する方法で使用するための、本開示の水溶液組成物も提供される。

また本明細書では、それを必要とする被験体において感染のリスクを低減する方法で使用するための、本開示の水溶液組成物も提供される。

また本明細書では、それを必要とする被験体において、ＡＡＴ欠損症の症状を治療又は緩和する方法において使用するための本開示の水溶液組成物も提供され、ここで、ヒトセルピンポリペプチドは、ヒトアルファ－１アンチトリプシン（ＡＡＴ）ポリペプチドであるか又はヒトＡＡＴポリペプチドに由来する。

本開示はまた、必それを要とする被験体において、異常なセリンプロテアーゼの発現又は活性に関連する疾患又は障害の症状を治療又は緩和する薬剤の製造のための本開示の水溶液組成物の使用を提供する。

本開示はまた、それを必要とする被験体において、感染のリスクを低減しながら、炎症又は炎症性疾患若しくは障害の症状を治療又は緩和する薬剤の製造のための本開示の水溶液組成物の使用を提供する。

本開示はまた、それを必要とする被験体において、感染のリスクを低減する薬剤の製造のための本開示の水溶液組成物の使用を提供する。

本開示はまた、それを必要とする被験体において、ＡＡＴ欠損症の症状を治療又は緩和する薬剤の製造のための本開示の水溶液組成物の使用を提供し、ここで、ヒトセルピンポリペプチドは、ヒトアルファ－１アンチトリプシン（ＡＡＴ）ポリペプチドであるか又はヒトＡＡＴポリペプチドに由来する。

本開示の方法のいずれかによる使用のための本開示の水溶液組成物又は使用のいくつかの実施態様において、炎症性疾患又は障害は以下から選択される：アルファ－１アンチトリプシン（ＡＡＴ）欠損症、肺気腫、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、アレルギー性喘息、嚢胞性線維症、肺癌、虚血－再灌流傷害、心臓移植後の虚血／再灌流傷害、心筋梗塞、関節リウマチ、敗血症性関節炎、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、クローン病、乾癬、Ｉ型及び／又はＩＩ型糖尿病、肺炎、敗血症、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、創傷治癒、全身性エリテマトーデス、及び多発性硬化症。

本開示の方法のいずれかによる使用のための本開示の水溶液組成物又は使用のいくつかの実施態様において、感染症は、細菌感染症、真菌感染症、及びウイルス感染症から選択される。

本開示の方法のいずれかによる使用のための本開示の水溶液組成物又は使用のいくつかの実施態様において、被験体はヒトである。

別段の定義がない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語及び科学用語は、本発明が関連する当業者によって一般に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書に記載のものと類似又は同等の方法及び材料を本発明の実施に使用することができるが、適切な方法及び材料は以下に記載される。本明細書で言及されるすべての刊行物、特許出願、特許、及びその他の参考文献は、その全体が参照により明示的に組み込まれる。矛盾がある場合には、定義を含む本明細書が優先される。さらに、本明細書に記載される材料、方法、及び実施例は、例示のみを目的とするものであり、限定することを意図したものではない。

本発明の他の特徴及び利点は、以下の詳細な説明及び特許請求の範囲から明らかとなり、それらに包含されるであろう。

発明の詳細な説明
本明細書には、緩衝液が存在しないか又は低濃度く及びイオン強度が低い、本発明の工学作成二量体タンパク質の安定な水溶液組成物が記載される。

本明細書における「ｐＨ」への言及はすべて、２５℃で評価された組成物のｐＨを指すことに留意されたい。「ｐＫ_ａ」へのすべての言及は、２５℃で評価されたイオン化基のｐＫ_ａを指す（ＣＲＣ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｐｈｙｓｉｃｓ， ７９ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ， １９９８， Ｄ． Ｒ． Ｌｉｄｅを参照）。必要に応じて、ポリペプチドに存在するアミノ酸側鎖のｐＫ_ａ値は、適切な計算機を使用して推定することができる。

本発明者らは、緩衝液が本発明の工学作成二量体タンパク質に有害な影響を与えると信じている。従って、組成物中の緩衝液の濃度は可能な限り制限されるべきである。

緩衝液は、存在する場合、組成物のｐＨにおいて緩衝能力を有するであろう。緩衝液は、典型的には組成物のｐＨの１ｐＨ単位以内のｐＫ_ａを有するイオン化基を含むが、組成物のｐＨより１ｐＨ単位大きいか又は小さいｐＫ_ａを有するイオン化基を有する部分もまた、十分な量で存在する場合、ある程度の緩衝効果を提供し得る。１つの実施態様において、その（又はある緩衝液）は、組成物のｐＨの１ｐＨ単位以内のｐＫ_ａを有するイオン化基を含む。別の実施態様において、その（又はある）緩衝液は、組成物のｐＨの１．５ｐＨ単位（例えば、組成物のｐＨの１～１．５ｐＨ単位の間）以内のｐＫ_ａを有するイオン化基を含む。さらなる実施態様において、その（又はある）緩衝液は、組成物のｐＨの２ｐＨ単位（例えば、組成物のｐＨの１．５～２ｐＨ単位）以内のｐＫ_ａを有するイオン化基を含む。

ある実施態様において、組成物は緩衝液を実質的に含まない。本明細書で使用される「実質的に含まない」とは、水溶液組成物が０．１ｍＭ未満の緩衝液を含むこと、例えば緩衝液を含まないことを意味する。より好ましくは、望ましくないｐＨ変動を回避又は制限するために、少量の緩衝液が存在する。ある実施態様において、組成物は単一の緩衝液を含む。ある実施態様において、組成物は２つの緩衝液を含む。適切には、１つ又はそれ以上の緩衝液が存在する。

組成物中の緩衝液の総濃度は０～１０ｍＭである。１つの実施態様において組成物中の緩衝液の総濃度は、９．５ｍＭ以下、例えば９ｍＭ以下、例えば８ｍＭ以下、例えば７ｍＭ以下、例えば６ｍＭ以下、例えば５．５ｍＭ以下、例えば５ｍＭ以下、例えば４．５ｍＭ以下、例えば４ｍＭ以下、例えば３ｍＭ以下、例えば２ｍＭ以下、例えば１ｍＭ以下、例えば０．５ｍＭ以下、例えば０．４ｍＭ以下、例えば０．３ｍＭ以下、例えば０．２ｍＭ以下である。１つの実施態様において緩衝液の総濃度は、０．１ｍＭ以上、例えば０．２ｍＭ以上、例えば０．３ｍＭ以上、例えば０．４ｍＭ以上、例えば０．５ｍＭ以上、例えば１ｍＭ以上である。好適には緩衝液の総濃度は、０．１～１０ｍＭ、例えば０．５～１０ｍＭ、例えば１～１０ｍＭ、例えば１～８ｍＭ、例えば１～６ｍＭ、例えば２～６ｍＭ、例えば２～５ｍＭ、例えば３～５ｍＭである。

溶液中の緩衝溶液の濃度を考慮すると、本発明の工学作成二量体タンパク質自体の緩衝能力は除外されるべきである。

水溶液のｐＨは、酸が添加されると低下し、塩基が添加されると上昇する。所定の温度及び大気圧において、酸の添加によるｐＨ低下の大きさ、又は塩基の添加によるｐＨ上昇の大きさは、（１）添加される酸又は塩基の量、（２）水溶液の開始（すなわち、酸又は塩基の添加前の）ｐＨ、及び（３）緩衝液の存在に依存する。従って（１）所定のｐＨから開始して、より多くの量の酸又は塩基を追加すると、より大きなｐＨ変化が生じ、（２）一定量の酸又は塩基を添加すると、中性ｐＨ（つまりｐＨ７．０）で最大のｐＨ変化が生じ、ｐＨ変化の大きさは開始ｐＨがｐＨ７．０から遠ざかるにつれて低下し、（３）所定のｐＨから開始して、ｐＨ変化の大きさは、緩衝液の存在下では緩衝液の非存在下よりも小さくなる。従って、酸又は塩基が溶液に添加された場合に、緩衝液はｐＨの変化を低減する能力がある。

適切には、強酸又は強塩基のいずれかを添加されたときに溶液中の酸又は塩基が０．１ｍＭ増加する場合、物質が、緩衝液を含まない同一の溶液と比較して、溶液のｐＨ変化の大きさを７５％、好ましくは５０％、最も好ましくは２５％に減少させることができるなら、その物質は緩衝液であるとみなされる。

逆に、適切には強酸又は強塩基のいずれかが添加されて溶液中の酸又は塩基が０．１ｍＭ上昇するときに、ある物質が、その物質を含まない同一の溶液と比較して、溶液のｐＨ変化の大きさを７５％、好ましくは５０％、最も好ましくは２５％に低下させることができないなら、その物質は緩衝液であるとみなされない。

１つの実施態様において、その又はある緩衝液はアミノ酸である。別の実施態様において、その又はある緩衝液はアミノ酸ではない。ある実施態様において、組成物は、アミノ酸のリジン、アルギニン、ヒスチジン、グルタミン酸塩、及びアスパラギン酸塩を含まない。１つの実施態様において、組成物はシステインを含まない。

適切な緩衝液は、存在する場合、特に限定されるものではないが、以下を含む：クエン酸塩、ヒスチジン、マレイン酸塩、亜硫酸塩、アスパルテーム、アスパラギン酸塩、グルタミン酸塩、酒石酸塩、アデニン、コハク酸塩、アスコルビン酸塩、安息香酸塩、酢酸フェニル、没食子酸塩、シトシン、ｐ－アミノ安息香酸、ソルビン酸塩、酢酸塩、プロピオン酸塩、アルギン酸塩、尿酸塩、２－（Ｎ－モルホリノ）エタンスルホン酸、重炭酸塩、ビス（２－ヒドロキシエチル）イミノトリス（ヒドロキシメチル）メタン、Ｎ－（２－アセトアミド）－２－イミノ二酢酸、２－［（２－アミノ－２－オキソエチル）アミノ］エタンスルホン酸、ピペラジン、Ｎ，Ｎ’－ビス（２－エタンスルホン酸）、リン酸塩、Ｎ，Ｎ－ビス（２－ヒドロキシエチル）－２－アミノエタンスルホン酸、３－［Ｎ，Ｎ－ビス（２－ヒドロキシエチル）アミノ］－２－ヒドロキシプロパンスルホン酸、トリエタノールアミン、ピペラジン－Ｎ，Ｎ’－ビス（２－ヒドロキシプロパンスルホン酸）、トリス（ヒドロキシメチル））アミノメタン（トリス）、Ｎ－トリス（ヒドロキシメチル）グリシン、及びＮ－トリス（ヒドロキシメチル）メチル－３－アミノプロパンスルホン酸、及びこれらの塩、並びにこれらの組み合わせ。

１つの実施態様において、緩衝液は、クエン酸塩、ヒスチジン、マレイン酸塩、酒石酸塩、安息香酸塩、酢酸塩、重炭酸塩、リン酸塩、及びトリスからなる群から選択され、例えばヒスチジン、マレイン酸塩、酒石酸塩、安息香酸塩、酢酸塩、重炭酸塩、リン酸塩、及びトリスからなる群から選択され、例えばヒスチジン、酢酸塩、リン酸塩、及びトリスからなる群から選択される。

１つの実施態様において、緩衝液はリン酸塩（例えば、リン酸ナトリウム）又はトリスである。１つの実施態様において、緩衝液はリン酸塩（例えば、リン酸ナトリウム）である。適切には、緩衝液はトリスである。

１つの実施態様において、組成物はリン酸ナトリウムを含まない。

本発明の組成物の主要な溶媒は、注射用水などの水である。組成物の他の成分（例えば、ポリオール）は、工学作成二量体タンパク質の可溶化に寄与し得る。

組成物は、ポリオール、糖、例えば単糖類、二糖類、又は糖アルコールなどの非荷電張性修飾剤を含む。１つの実施態様において、組成物は、グリセロール、１，２－プロパンジオール、マンニトール、ソルビトール、グルコース、スクロース、トレハロース、ＰＥＧ３００、及びＰＥＧ４００からなる群から選択される等張性修飾剤を含み、例えばグリセロール、１，２－プロパンジオール、マンニトール、ソルビトール、スクロース、トレハロース、ＰＥＧ３００、及びＰＥＧ４００からなる群から選択される。トレハロースとスクロース、又はトレハロースとマンニトールなどの非荷電張性修飾剤の混合物が企図される。１つの実施態様において、非荷電張性修飾剤は、グリセロール、マンニトール、スクロース、及びトレハロースから選択される。適切には、非荷電張性修飾剤は二糖である。従って別の実施態様において、非荷電張性修飾剤はスクロース及び／又はトレハロースであり、及び特にトレハロースである。非荷電張性修飾剤（又は複数の張性修飾剤の組み合わせ）は、含まれる場合、典型的には総濃度５０～１０００ｍＭ、例えば２００～６００ｍＭ、例えば約２００～５００ｍＭで組成物中で使用される。１つの実施態様において、非荷電張性修飾剤（又は複数の張性修飾剤の組み合わせ）の総濃度は、５０～５００ｍＭ、例えば、１００～４００ｍＭ、１５０～３５０ｍＭ、２００～３００ｍＭ、又は約２５０ｍＭである。目的の別の濃度は約１５０ｍＭである。

ある実施態様において、トレハロースが非荷電張性修飾剤である場合、単独であっても又は１つ又はそれ以上の他の非荷電張性修飾剤と組み合わせても、組成物中のトレハロースの濃度は５０～１８０ｍＭ、例えば５０～１５０ｍＭである。

組成物は適切には、生理学的に許容され、従って非経口投与に適したオスモル濃度を有する。従って組成物のオスモル濃度は、適切には２００～５００ｍＯｓｍ／Ｌ、例えば約３００ｍＯｓｍ／Ｌである。この組成物は、例えばヒト血漿と等張である。別の実施態様において、組成物の浸透圧は３００～５００ｍＯｓｍ／Ｌ、例えば４００～４６０ｍＯｓｍ／Ｌである。組成物はまた、低張性でも又は高張性であってもよく、例えば投与前に希釈することを目的としたものでもよい。

組成物は中性アミノ酸を含む。本明細書で使用される中性アミノ酸は、その側鎖が、組成物のｐＨで著しくイオン化されている（例えば、側鎖の２０％超、特に５０％超がマイナス又はプラスの電荷を有する）イオン化基を含まないアミノ酸である。中性アミノ酸の例は、グリシン、メチオニン、プロリン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、セリン、スレオニン、アスパラギン、及びグルタミン、並びに特にこれらのＬ異性体である。

１つの実施態様において、組成物は、グリシン、メチオニン、及びプロリンからなる群から選択される中性アミノ酸を含む。１つの実施態様において、組成物はプロリンを中性アミノ酸として含む。１つの実施態様において、組成物はグリシンを中性アミノ酸として含む。中性アミノ酸の混合物が考えられる。１つの実施態様において、組成物はプロリン及びメチオニンを中性アミノ酸として含む。１つの実施態様において、組成物は、グリシン及びメチオニンを中性アミノ酸として含む。実施例から分かるように、中性アミノ酸の存在は組成物の安定性を高めることが見出された。

１つの実施態様において、中性アミノ酸、例えばプロリン又はグリシンの濃度は、２０～６００ｍＭ、例えば２０～５００ｍＭ、例えば２０～４００ｍＭ、例えば２０～３００ｍＭ、又は５０ｍＭ～３００ｍＭである。１つの実施態様において、中性アミノ酸、例えばプロリン又はグリシンの濃度は、５０～２００ｍＭ、１００～２００ｍＭ、又は１００～１５０ｍＭである。

１つの実施態様において、中性アミノ酸としてのメチオニンは、組成物中に存在する場合、２～１０ｍＭの濃度、例えば約２ｍＭで存在する。

１つの実施態様において、組成物中のすべての中性アミノ酸、例えばプロリン又はグリシン及びメチオニンの濃度（すなわち、総濃度）は、２０～６００ｍＭ、例えば２０～５００ｍＭ、例えば２０ｍＭ～４００ｍＭ、例えば２０～３００ｍＭ、又は５０～３００ｍＭである。１つの実施態様において、組成物中のすべての中性アミノ酸、例えばプロリン又はグリシン及びメチオニンの濃度は、５０～２００ｍＭ、１００～２００ｍＭ、又は１００～１５０ｍＭである。

組成物は、非イオン性界面活性剤を含んでもよい。非イオン性界面活性剤は、例えばポリソルベート、アルキルグリコシド、ポリエチレングリコールのアルキルエーテル、ポリエチレングリコールとポリプロピレングリコールのブロックコポリマー、及びポリエチレングリコールのアルキルフェニルエーテルからなる群から選択され得る。

特に適切な種類の非イオン性界面活性剤は、ポリソルベート類（エトキシル化ソルビタンの脂肪酸エステル）、例えばポリソルベート２０又はポリソルベート８０である。ポリソルベート２０は、ラウリン酸とポリオキシエチレン（２０）ソルビタンから形成されるモノエステルであり、ここで２０という数は分子内のオキシエチレン基の数を示す。ポリソルベート８０は、オレイン酸とポリオキシエチレン（２０）ソルビタンから形成されるモノエステルであり、ここで、２０という数字は分子内のオキシエチレン基の数を示す。ポリソルベート２０は、特にツイーン２０、またＡｌｋｅｓｔ ＴＷ２０を含む様々なブランド名でも知られている。ポリソルベート８０は、特にツイーン８０、またＡｌｋｅｓｔ ＴＷ８０を含む様々なブランド名で知られている。他の適切なポリソルベートとしては、ポリソルベート４０及びポリソルベート６０が含まれる。

別の適切なクラスの非イオン性界面活性剤は、アルキルグリコシド、特にドデシルマルトシドである。他のアルキルグリコシドには、ドデシルグルコシド、オクチルグルコシド、オクチルマルトシド、デシルグルコシド、デシルマルトシド、トリデシルグルコシド、トリデシルマルトシド、テトラデシルグルコシド、テトラデシルマルトシド、ヘキサデシルグルコシド、ヘキサデシルマルトシド、スクロースモノオクタノエート、スクロースモノデカノエート、スクロースモノドデカノエート、スクロースモノトリデカノエート、スクロースモノテトラデカノエート、及びスクロースモノヘキサデカノエートが含まれる。

別の適切なクラスの非イオン性界面活性剤は、ポリエチレングリコールのアルキルエーテル、特に商品名Ｂｒｉｊで知られるもの、例えばポリエチレングリコール（２）ヘキサデシルエーテル（Ｂｒｉｊ５２）、ポリエチレングリコール（２）オレイルエーテル（Ｂｒｉ９３）、及びポリエチレングリコール（２）ドデシルエーテル（ＢｒｉｊＬ４）から選択されるものである。他の適切なＢｒｉｊ界面活性剤には、ポリエチレングリコール（４）ラウリルエーテル（Ｂｒｉｊ３０）、ポリエチレングリコール（１０）ラウリルエーテル（Ｂｒｉｊ３５）、ポリエチレングリコール（２０）ヘキサデシルエーテル（Ｂｒｉｊ５８）、及びポリエチレングリコール（１０）ステアリルエーテル（Ｂｒｉｊ７８）が含まれる。

別の適切なクラスの非イオン性界面活性剤は、ポリエチレングリコールとポリプロピレングリコールのブロックコポリマー（ポロキサマーとしても知られている）、特にポロキサマー１８８、ポロキサマー４０７、ポロキサマー１７１、及びポロキサマー１８５である。ポロキサマーはまた、ブランド名Ｐｌｕｒｏｎｉｃｓ 又は Ｋｏｌｉｐｈｏｒｓ でも知られている。例えば、ポロキサマー１８８はＰｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標） Ｆ－６８として販売されている。

別の適切なクラスの非イオン性界面活性剤は、ポリエチレングリコールのアルキルフェニルエーテル、特に４－（１，１，３，３－テトラメチルブチル）フェニル－ポリエチレングリコール（商品名トリトンＸ－１００としても知られている）である。

１つの実施態様において、非イオン性界面活性剤はポリソルベート又はポロキサマーである。１つの実施態様において、非イオン性界面活性剤はポリソルベート、例えばポリソルベート８０又はポリソルベート２０である。１つの実施態様において、非イオン性界面活性剤はポロキサマー１８８などのポロキサマーである。組成物中の非イオン性界面活性剤の濃度は、通常は１０～２０００μｇ／ｍｌの範囲であろう。例えばポリソルベート界面活性剤の場合、例示的な濃度は、５０～１０００μｇ／ｍｌ、例えば１００～５００μｇ／ｍｌ、例えば約２００μｇ／ｍｌである。例えばポロキサマー界面活性剤の場合、例示的な濃度は、２５０～１５００μｇ／ｍｌ、例えば７５０～１２５０μｇ／ｍｌ、例えば約１０００μｇ／ｍｌである。

いくつかの実施態様において、ポロキサマー界面活性剤の濃度は、組成物の容量あたり０．０２５～０．１５重量％（ｗ／ｖ）、例えば組成物の容量あたり０．０７５～０．１２５重量％（ｗ／ｖ）、例えば組成物の容量あたり０．１重量％（ｗ／ｖ）である。

本発明の組成物は、フェノール系又はベンジル系防腐剤などの防腐剤をさらに含んでもよい。防腐剤は適切には、フェノール、ｍ－クレゾール、クロロクレゾール、ベンジルアルコール、プロピルパラベン、及びメチルパラベンからなる群から選択され、特にフェノール、ｍ－クレゾール、及びベンジルアルコールからなる群から選択される。防腐剤の濃度は、典型的には１０～１００ｍＭ、例えば２０～８０ｍＭ、例えば２５～５０ｍＭである。組成物中の防腐剤の最適濃度は、組成物が薬局方抗菌効果試験（Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｎｅｓｓ Ｔｅｓｔ）（ＵＳＰ＜５１＞、Ｖｏｌ．３２）に確実に合格するように選択される。

本発明者らは、イオンの存在が本発明の工学作成二量体タンパク質の安定性に悪影響を及ぼすと信じている。従って、組成物のイオン強度は可能な限り制限されるべきである。

本発明の工学作成二量体タンパク質の寄与を除いた組成物の総イオン強度は、３０ｍＭ未満、適切には２５ｍＭ未満、適切には２０ｍＭ未満、適切には１５ｍＭ未満、適切には１０ｍＭ未満、例えば５ｍＭ未満である。「総イオン強度」という用語は、本明細書では、溶液中のすべてのイオンの濃度の以下の関数として使用される：
ここで、ｃ_ｘはイオンｘのモル濃度（ｍｏｌＬ^－１）であり、ｚ_ｘはイオンｃ_ｘの正味電荷である。この合計は、本発明の工学作成二量体タンパク質の寄与を除いて、溶液中に存在するすべてのイオン（ｎ）をカバーする。任意選択的な中性アミノ酸が、本発明の組成物中では正味電荷がゼロであり、総イオン強度に寄与しないことは理解されるであろう。いずれにしても、中性アミノ酸の寄与は含まれない。

組成物のｐＨは、６．０と８．０の間、例えば６．８と７．８の間、例えば７．０と７．８の間、７．１と７．６の間、７．１と７．５の間、７．２と７．５の間、７．１と７．４の間、７．２と７．３の間であるか、又は約７．２若しくは約７．３である。

特定の実施態様において、本発明の工学作成二量体タンパク質は実質的に純粋であり、すなわち、組成物は単一のタンパク質を含み、実質的な量の追加のタンパク質を含まない。好適な実施態様において、本発明の工学作成二量体タンパク質は、組成物の総タンパク質含有量の少なくとも９９％、好ましくは少なくとも９９．５％、より好ましくは少なくとも約９９．９％を含む。好適な実施態様において、本発明の工学作成二量体タンパク質は、医薬組成物で使用するのに十分に純粋である。

本発明の工学作成二量体タンパク質は、組成物中に約１～４００ｍｇ／ｍｌ、適切には１０～２００ｍｇ／ｍｌ、より適切には２０～１００ｍｇ／ｍｌ、例えば３０～６０ｍｇ／ｍｌ、例えば約３５ｍｇ／ｍｌ、又は約５０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。

１つの実施態様において、本発明は、ｐＨが６．８～７．８、例えば７．０～７．８、例えば７．１～７．６、例えば７．１～７．５の範囲、例えば約７．２又は約７．３であって、以下を含む水溶液組成物を提供する：二量体タンパク質の各単量体が、ヒト免疫グロブリンＦｃポリペプチド又は免疫グロブリンＦｃポリペプチド由来のポリペプチドに作動可能に連結された、少なくとも１つのヒトセルピンポリペプチドを含む、工学作成二量体タンパク質；リン酸塩（例えば、リン酸ナトリウム）又はトリスから選択される緩衝液、例えばトリス；グリシン、メチオニン、及びプロリン、例えばグリシンとメチオニン、又はプロリンとメチオニンからなる群から選択される中性アミノ酸；及び非荷電張性修飾剤、例えば二糖、例えばトレハロース、スクロース、又はトレハロースとスクロースの混合物；ポリソルベート及びポロキサマーから選択される非イオン性界面活性剤、例えばポロキサマー１８８などのポロキサマー；ここで、緩衝液は組成物中に、１～８ｍＭ、例えば２～６ｍＭの総濃度で存在し；及びここで、工学作成二量体タンパク質の寄与を除いた組成物の総イオン強度は２０ｍＭ未満、例えば１０ｍＭ未満、例えば５ｍＭ未満である。

適切には、本発明の組成物は、２～８℃で長期間、例えば少なくとも４週間、８週間、１２週間、１２か月、１８か月、又は２４か月保存した後に、透明な溶液のままである。

適切には、本発明の組成物は、２５℃で長期間、例えば少なくとも４週間、８週間、１２週間、１２か月、１８か月、又は２４か月保存した後に、透明な溶液のままである。

適切には、本発明の組成物は、３０℃で長期間、例えば少なくとも４週間、８週間、１２週間、１２か月、１８か月、又は２４か月保存した後に、透明な溶液のままである。

適切には、本発明の組成物は、４０℃（すなわち、加速安定性試験に適した温度）で、少なくとも１日、３日、１週間、２週間、又は４週間保存した後に、透明な溶液のままである。

適切には、本発明の組成物は、より高濃度の同じ１つ又は複数の緩衝液を含む同等の組成物と比較して、２～８℃又はより高温のいずれかで保存安定性が上昇している。

適切には、本発明の組成物は、より高い総イオン強度を有する同等の組成物と比較して、２～８℃又はより高温のいずれかで保存安定性が上昇している。

１つの実施態様において、本発明の組成物は、２～８℃で少なくとも４週間、８週間、１２週間、１２か月、１８か月、又は２４か月保存した後に、８％以下の高分子量種、例えば７％以下、例えば６％以下、例えば５％以下、例えば２％以下、例えば１％以下、例えば０．５％以下、例えば０．３％以下の高分子量種（サイズ排除クロマトグラフィー又は同様の適切な技術によって測定した、組成物中の本発明の工学作成二量体タンパク質の総重量による）を含む。

１つの実施態様において、本発明の組成物は、２５℃で少なくとも４週間、８週間、１２週間、１２か月、１８か月、又は２４か月保存した後に、１８％以下の高分子量種、例えば１７％以下、例えば１６％以下、例えば１５％以下、例えば１０％以下、例えば８％以下、例えば５％以下、例えば４％以下、例えば３％以下、例えば１％以下の高分子量種（サイズ排除クロマトグラフィー又は同様の適切な技術によって測定した、組成物中の本発明の工学作成二量体タンパク質の総重量による）を含む。

１つの実施態様において、本発明の組成物は、３０℃で少なくとも４週間、保存した後に、２５％以下の高分子量種、例えば２０％以下、例えば１８％以下、例えば１７％以下、例えば１６％以下、例えば１５％以下、例えば１０％以下、例えば８％以下、例えば５％以下、例えば４％以下、例えば３％以下、例えば１％以下の高分子量種（サイズ排除クロマトグラフィー又は同様の適切な技術によって測定した、組成物中の本発明の工学作成二量体タンパク質の総重量による）を含む。

１つの実施態様において、本発明の組成物は、４０℃で少なくとも１日、３日、１週間、２週間、又は４週間保存した後、３０％以下の高分子量種、例えば２５％以下、例えば２０％以下、例えば１８％以下、例えば１７％以下、例えば１６％以下、例えば１５％以下、例えば１０％以下、例えば８％以下、例えば６％以下、例えば４％以下の高分子量種（サイズ排除クロマトグラフィー又は同様の適切な技術によって測定した、組成物中の本発明の工学作成二量体タンパク質の総重量による）を含む。

本明細書で使用される高分子量種は、二量体タンパク質よりも大きな見かけの分子量を有するタンパク質の凝集から生じる種である。

１つの実施態様において、本発明の組成物は、治療に使用するための組成物である。１つの実施態様において、本発明の組成物は医薬組成物である。

１つの実施態様において、それを必要とする被験体において、異常なセリンプロテアーゼの発現又は活性を阻害又はダウンレギュレートする方法が提供され、この方法は、前記被験体に、本明細書に記載の水溶液組成物を投与することを含む。いくつかの実施態様において、異常なセリンプロテアーゼの発現又は活性は、炎症性疾患若しくは障害又は感染のリスクと関連している。いくつかの実施態様において、炎症性疾患又は障害は以下から選択される：アルファ－１アンチトリプシン（ＡＡＴ）欠損症、肺気腫、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、アレルギー性喘息、嚢胞性線維症、肺癌、虚血－再灌流傷害、心臓移植後の虚血／再灌流傷害、心筋梗塞、関節リウマチ、敗血症性関節炎、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、クローン病、乾癬、Ｉ型及び／又はＩＩ型糖尿病、肺炎、敗血症、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、創傷治癒、全身性エリテマトーデス、及び多発性硬化症。

１つの実施態様において、感染のリスクは、細菌感染、真菌感染、及びウイルス感染から選択される感染のリスクである。

１つの実施態様において、それを必要とする被験体において、異常なセリンプロテアーゼの発現又は活性に関連する疾患又は障害の症状を治療又は緩和する方法が提供され、この方法は、前記被験体に本明細書に記載の水溶液組成物を投与することを含む。別の実施態様において、それを必要とする被験体において、感染のリスクを低減しながら、炎症又は炎症性疾患若しくは障害の症状を治療又は緩和する方法が提供され、この方法は、前記被験体に本明細書に記載の水溶液組成物を投与することを含む。別の実施態様において、それを必要とする被験体において、感染のリスクを低減する方法が提供され、この方法は、前記糖に本明細書に記載の水溶液組成物を投与することを含む。

１つの実施態様において、ヒトセルピンポリペプチドがヒトアルファ－１アンチトリプシン（ＡＡＴ）ポリペプチドであるか又はヒトＡＡＴポリペプチドに由来する場合、それを必要とする被験体に本明細書に記載の水溶液組成物を投与することを含む、細胞のＡＡＴ欠損症の症状を治療又は緩和する方法が提供される。

１つの実施態様において、それを必要とする被験体において、異常なセリンプロテアーゼの発現又は活性に関連する疾患又は障害の症状を治療又は緩和する方法で使用するための、本明細書に記載の水溶液組成物が提供される。別の実施態様において、それを必要とする被験体において、感染のリスクを低減しながら、炎症又は炎症性疾患若しくは障害の症状を治療又は緩和する方法で使用するための、本明細書に記載の水溶液組成物が提供される。別の実施態様において、それを必要とする被験体において、感染のリスクを軽減する方法で使用するための、本明細書に記載の水溶液組成物が提供される。

ある実施態様において、ヒトセルピンポリペプチドがヒトアルファ－１アンチトリプシン（ＡＡＴ）ポリペプチドであるか又はヒトＡＡＴポリペプチドに由来する場合、それを必要とする被験体において、ＡＡＴ欠損症の症状を治療又は緩和する方法に使用するための本明細書に記載の水溶液組成物が提供される。

１つの実施態様において、それを必要とする被験体において、異常なセリンプロテアーゼの発現又は活性に関連する疾患又は障害の症状を治療又は緩和する薬剤の製造のための、本明細書に記載の水溶液組成物の使用が提供される。別の実施態様において、それを必要とする被験体において、感染のリスクを低減しながら、炎症又は炎症性疾患若しくは障害の症状を治療又は緩和する薬剤の製造のための、本明細書に記載の水溶液組成物の使用が提供される。別の実施態様において、それを必要とする被験体において、感染のリスクを低減する薬剤の製造のための、本明細書に記載の水溶液組成物の使用が提供される。

１つの実施態様において、ヒトセルピンポリペプチドがヒトアルファ－１アンチトリプシン（ＡＡＴ）ポリペプチドであるか又はヒトＡＡＴポリペプチドに由来する場合、それを必要とする被験体において、ＡＡＴ欠損症の症状を治療又は緩和する薬剤の製造のための、本明細書に記載の水溶液組成物の使用が提供される。

適切には、被験体はヒトである。

適切には、炎症性疾患又は障害は以下から選択される：アルファ－１アンチトリプシン（ＡＡＴ）欠損症、肺気腫、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、アレルギー性喘息、嚢胞性線維症、肺癌、虚血－再灌流傷害、心臓移植後の虚血／再灌流傷害、心筋梗塞、関節リウマチ、敗血症性関節炎、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、クローン病、乾癬、Ｉ型及び／又はＩＩ型糖尿病、肺炎、敗血症、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、創傷治癒、全身性エリテマトーデス、及び多発性硬化症。

適切には、感染症は、細菌感染症、真菌感染症、及びウイルス感染症から選択される。

組成物、例えば静脈内投与を目的としたものは、投与前に希釈するための濃縮物として調製することができる。

水溶液組成物に関して上述したすべての実施態様は、本発明の方法及び使用に等しく適用される。

本明細書に記載の組成物の１回用量又は複数回用量を収容する、例えばプラスチック又はガラス製の容器も提供される。容器は、例えばバイアル、充填済みシリンジ、充填済み輸液バッグ、又は注射器具とともに使用するための交換可能な物として設計されたカートリッジであり得る。

本発明の組成物は、注入又は注射用に、特に静脈内注入、静脈内注射、皮下注射、又は筋肉内注射用に適切に包装され得る。

本発明の組成物は、静脈内注入用の濃縮物としてバイアルに適切に充填され得る。使用前に、濃縮物はバイアルから取り出され、適切な希釈剤、例えば生理食塩水、ブドウ糖溶液、又は注射用水を含む輸液バッグ中に希釈される。次に、希釈された組成物は特定の注入速度（例えば８～１６ｍＬ／分）で静脈内注入によって投与される。

本発明の１つの態様は、注射又は注入器具、特に本発明の組成物の１回用量又は複数回用量を注射針と共に含有する容器を含む単回又は複数回使用のための、皮下又は筋肉内注射又は注入に適合した器具である。ある実施態様において、容器は、複数回用量を含む交換可能なカートリッジである。１つの実施態様において、注射器具はペンの形態である。１つの実施態様において、注射器具は充填済みシリンジの形態である。１つの実施態様において、注射又は注入器具は、ポンプ又は別の装着可能な注射又は注入器具の形態である。

本発明による組成物は、本明細書に記載の良好な物理的及び化学的安定性を有することが期待される。

配列表の説明

配列番号１は、全長ヒトＡＡＴポリペプチド配列である。

配列番号２は、全長ヒトＡＡＴポリペプチド配列である。

配列番号３は、ＡＡＴタンパク質の反応性部位ループ部分である。

配列番号４は、ＡＡＴタンパク質の反応性部位ループ部分である。

配列番号５は、ＡＡＴタンパク質の反応性部位ループ部分である。

配列番号６は、ヒトＩｇＧ１Ｆｃポリペプチド配列である。

配列番号７は、Ｎ末端にヒンジ領域を含むヒトＩｇＧ１Ｆｃポリペプチド配列である。

配列番号８は、残基Ｍ２５２、Ｔ２５６、及びＭ４２８に変異を有する修飾ＩｇＧ１Ｆｃポリペプチド配列である。

配列番号９は、残基Ｍ２５２、Ｔ２５６、及びＭ４２８に変異を有する、Ｎ末端にヒンジ領域を含む修飾ＩｇＧ１Ｆｃポリペプチド配列である。

配列番号１０は、残基Ｇ２３６が欠失している修飾ＩｇＧ１Ｆｃポリペプチド配列である。

配列番号１１は、残基Ｇ２３６が欠失している、Ｎ末端にヒンジ領域を含む修飾ＩｇＧ１Ｆｃポリペプチド配列である。

配列番号１２は、残基Ｌ２３４及びＬ２３５に変異を有する修飾ＩｇＧ１Ｆｃポリペプチド配列である。

配列番号１３は、残基Ｌ２３４及びＬ２３５に変異を有する、Ｎ末端にヒンジ領域を含む修飾ＩｇＧ１Ｆｃポリペプチド配列である。

配列番号１４は、残基Ｇ２３６に欠失を並びに残基Ｌ２３４及びＬ２３５に変異を有する修飾ＩｇＧ１Ｆｃポリペプチド配列である。

配列番号１５は、残基Ｇ２３６に欠失を並びに残基Ｌ２３４及びＬ２３５に変異を有する、Ｎ末端にヒンジ領域を含む修飾ＩｇＧ１Ｆｃポリペプチド配列である。

配列番号１６は、残基Ｇ２３６に欠失を並びに残基Ｌ２３４、Ｌ２３５、Ｍ２５２、Ｔ２５６、及びＭ４２８に変異を有する修飾ＩｇＧ１Ｆｃポリペプチド配列である。

配列番号１７は、残基Ｇ２３６に欠失を並びに残基Ｌ２３４、Ｌ２３５、Ｍ２５２、Ｔ２５６、及びＭ４２８に変異を有する、Ｎ末端にヒンジ領域を含む修飾ＩｇＧ１Ｆｃポリペプチド配列である。

配列番号１８は、ヒトＩｇＧ２Ｆｃポリペプチド配列である。

配列番号１９は、残基Ｇ２３６に欠失を並びに残基Ｍ２５２、Ｔ２５６、及びＭ４２８に変異を有する修飾ＩｇＧ２Ｆｃポリペプチド配列である。

配列番号２０は、ヒトＩｇＧ３Ｆｃポリペプチド配列である。

配列番号２１は、残基Ｍ２５２、Ｔ２５６、及びＭ４２８に変異を有する修飾ＩｇＧ３Ｆｃポリペプチド配列である。

配列番号２２は、残基Ｇ２３６に欠失を有する修飾ＩｇＧ３Ｆｃポリペプチド配列である。

配列番号２３は、残基Ｌ２３４及びＬ２３５に変異を有する修飾ＩｇＧ３Ｆｃポリペプチド配列である。

配列番号２４は、残基Ｇ２３６に欠失を並びに残基Ｌ２３４及びＬ２３５に変異を有する修飾ＩｇＧ３Ｆｃポリペプチド配列である。

配列番号２５は、残基Ｇ２３６に欠失を並びに残基Ｌ２３４、Ｌ２３５、Ｍ２５２、Ｔ２５６、及びＭ４２８に変異を有する修飾ＩｇＧ３Ｆｃポリペプチド配列である。

配列番号２６は、ヒトＩｇＧ４Ｆｃポリペプチド配列である。

配列番号２７は、Ｎ末端にヒンジ領域を含むヒトＩｇＧ４Ｆｃポリペプチド配列である。

配列番号２８は、残基Ｍ２５２、Ｔ２５６、及びＭ４２８に変異を有する修飾ＩｇＧ４Ｆｃポリペプチド配列である。

配列番号２９は、残基Ｍ２５２、Ｔ２５６、及びＭ４２８に変異を有する、Ｎ末端にヒンジ領域を含む修飾ＩｇＧ４Ｆｃポリペプチド配列である。

配列番号３０は、残基Ｇ２３６に欠失を有する修飾ＩｇＧ４Ｆｃポリペプチド配列である。

配列番号３１は、残基Ｇ２３６に欠失を有する、Ｎ末端にヒンジ領域を含む修飾ＩｇＧ４Ｆｃポリペプチド配列である。

配列番号３２は、残基Ｌ２３５に変異を有する修飾ＩｇＧ４Ｆｃポリペプチド配列である。

配列番号３３は、残基Ｌ２３５に変異を有する、Ｎ末端にヒンジ領域を含む修飾ＩｇＧ４Ｆｃポリペプチド配列である。

配列番号３４は、残基Ｌ２３４及びＬ２３５に変異を有する修飾ＩｇＧ４Ｆｃポリペプチド配列である。

配列番号３５は、残基Ｌ２３４及びＬ２３５に変異を有する、Ｎ末端にヒンジ領域を含む修飾ＩｇＧ４Ｆｃポリペプチド配列である。

配列番号３６は、残基Ｓ２２８に変異を有する修飾ＩｇＧ４Ｆｃポリペプチド配列である。

配列番号３７は、残基Ｓ２２８及びＬ２３５に変異を有する、Ｎ末端にヒンジ領域を含む修飾ＩｇＧ４Ｆｃポリペプチド配列である。

配列番号３８は、残基Ｓ２２８、Ｌ２３５、及びＭ２５２に変異を有する、Ｎ末端にヒンジ領域を含む修飾ＩｇＧ４Ｆｃポリペプチド配列である。

配列番号３９は、残基Ｓ２２８、Ｌ２３５、及びＭ４２８に変異を有する、Ｎ末端にヒンジ領域を含む修飾ＩｇＧ４Ｆｃポリペプチド配列である。

配列番号４０は、残基Ｓ２２８、Ｌ２３５、Ｍ２５２、及びＭ４２８に変異を有する、Ｎ末端にヒンジ領域を含む修飾ＩｇＧ４Ｆｃポリペプチド配列である。

配列番号４１は、残基Ｌ２３５、Ｍ２５２、Ｔ２５６、及びＭ４２８に変異を有する修飾ＩｇＧ４Ｆｃポリペプチド配列である。

配列番号４２は、残基Ｌ２３５、Ｍ２５２、Ｔ２５６、及びＭ４２８に変異を有する、Ｎ末端にヒンジ領域を含む修飾ＩｇＧ４Ｆｃポリペプチド配列である。

配列番号４３は、残基Ｓ２２８、Ｌ２３５、Ｍ２５２、Ｔ２５６、及びＭ４２８に変異を有する、Ｎ末端にヒンジ領域を含む修飾ＩｇＧ４Ｆｃポリペプチド配列である。

配列番号４４は、ヒトＩｇＭＦｃポリペプチドである。

配列番号４５は、配列番号１及び配列番号６を含むＡＡＴポリペプチド－ＩｇＧ－Ｆｃポリペプチド融合タンパク質である。

配列番号４６は、配列番号１及び配列番号１８を含むＡＡＴポリペプチド－ＩｇＧ－Ｆｃポリペプチド融合タンパク質である。

配列番号４７は、配列番号４８及び配列番号６を含むＡＡＴポリペプチド－ＩｇＧ－Ｆｃポリペプチド融合タンパク質である。

配列番号４８は、ＡＡＴポリペプチドである。

配列番号４９は、配列番号４８及び配列番号１８を含むＡＡＴポリペプチド－ＩｇＧ－Ｆｃポリペプチド融合タンパク質である。

配列番号５０は、配列番号５１及び配列番号１８を含むＡＡＴポリペプチド－ＩｇＧ－Ｆｃポリペプチド融合タンパク質である。

配列番号５１は、ＡＡＴポリペプチドである。

配列番号５２は、配列番号１及び配列番号６を含むＡＡＴポリペプチド－ＩｇＧ－Ｆｃポリペプチド融合タンパク質である。

配列番号５３は、配列番号２及び配列番号１７を含むＡＡＴポリペプチド－ＩｇＧ－Ｆｃポリペプチド融合タンパク質である。

配列番号５４は、配列番号２及び配列番号４３を含むＡＡＴポリペプチド－ＩｇＧ－Ｆｃポリペプチド融合タンパク質である。

配列番号５５は、配列番号５１及び配列番号７を含むＡＡＴポリペプチド－ＩｇＧ－Ｆｃポリペプチド融合タンパク質である。

配列番号５６は、配列番号４８及び配列番号４０を含むＡＡＴポリペプチド－ＩｇＧ４－Ｆｃポリペプチド融合タンパク質である。

本発明の工学作成二量体タンパク質の各単量体は、ヒト免疫グロブリンＦｃポリペプチド又は免疫グロブリンＦｃポリペプチド由来のポリペプチドに作動可能に連結された少なくとも１つ（例えば、１つ又は２つ）のヒトセルピンポリペプチドを含む。

本明細書で使用される「作動可能に連結された」とは、連続ポリペプチド鎖の一部として、すなわち融合タンパク質として連結されていることを意味する。このような工学作成タンパク質は、組換え工学技術によって調製することができる。本明細書で使用される「作動可能に連結された」とはまた、免疫グロブリンＦｃポリペプチドと融合した少なくとも１つのヒトセルピンポリペプチドが、セリンプロテアーゼ活性の阻害に関して機能的であることも意味する。

ある実施態様において、ヒトセルピンポリペプチドは、ヒトアルファ－１アンチトリプシン（ＡＡＴ）ポリペプチドであるか又はヒトＡＡＴポリペプチドに由来する。

ある実施態様において、二量体タンパク質の各単量体は、１つのヒトセルピンポリペプチドを含む。

１つの実施態様において、工学作成二量体タンパク質の各単量体は、ヒトアルファ－１アンチトリプシン（ＡＡＴ）ポリペプチド及びヒトＡＡＴポリペプチド由来のポリペプチドから選択される少なくとも１つ（例えば、１つ）のポリペプチドを含み、ここで、前記少なくとも１つのポリペプチドは、ヒト免疫グロブリンＦｃポリペプチド又は免疫グロブリンＦｃポリペプチド由来のポリペプチドのＮ末端に作動可能に連結されている。

例えば、ヒトアルファ－１アンチトリプシン（ＡＡＴ）ポリペプチドであるか、又は配列番号１若しくは２の配列を有するヒトＡＡＴポリペプチドに由来するその又は各ポリペプチド。

例えば、ヒトアルファ－１アンチトリプシン（ＡＡＴ）であるか又はヒトＡＡＴポリペプチドに由来するその又は各ポリペプチドは、配列番号１の配列を有する。例えば、ヒトアルファ－１アンチトリプシン（ＡＡＴ）であるか又はヒトＡＡＴポリペプチド由来のポリペプチド又は各ポリペプチドは、配列番号１のアミノ酸配列と、少なくとも５０％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一である配列を有する。

いくつかの実施態様において、全長ヒトＡＡＴポリペプチド配列は、以下のアミノ酸配列を有する：
（配列番号１）

例えば、ヒトアルファ－１アンチトリプシン（ＡＡＴ）であるか又はヒトＡＡＴポリペプチドに由来するその又は各ポリペプチドは、配列番号２の配列を有する。例えば、ヒトアルファ－１アンチトリプシン（ＡＡＴ）であるか又はヒトＡＡＴポリペプチドに由来するその又は各ポリペプチドは、配列番号２のアミノ酸配列と、少なくとも５０％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一である配列を有する。

いくつかの実施態様において、全長ヒトＡＡＴポリペプチド配列は、以下のアミノ酸配列を有する：
（配列番号２）

例えば、ヒトアルファ－１アンチトリプシン（ＡＡＴ）であるか又はヒトＡＡＴポリペプチド配列に由来するその又は各ポリペプチドは、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＡＡＢ５９４９５．１、ＣＡＪ１５１６１．１、Ｐ０１００９．３、ＡＡＢ５９３７５．１、ＡＡＡ５１５４６．１、ＣＡＡ２５８３８．１、ＮＰ＿００１００２２３５．１、ＣＡＡ３４９８２．１、ＮＰ＿００１００２２３６．１、ＮＰ＿０００２８６．３、ＮＰ＿００１１２１１７９．１、ＮＰ＿００１１２１１７８．１、ＮＰ＿００１１２１１７７．１、ＮＰ＿００１１２１１７６．１６、ＮＰ＿００１１２１１７５．１、ＮＰ＿００１１２１１７４．１、ＮＰ＿００１１２１１７２．１、及び／又はＡＡＡ５１５４７．１に示される配列を有する。

例えば、ヒトアルファ－１アンチトリプシン（ＡＡＴ）ポリペプチドであるその又は各ポリペプチドは、配列番号３、４、及び５の配列のいずれか１つによる反応性ループ配列を含む。

いくつかの実施態様において、ＡＡＴタンパク質の反応性部位ループ部分は、少なくともアミノ酸配列：ＧＴＥＡＡＧＡＭＦＬＥＡＩＰＭＳＩＰＰＥＶＫＦＮＫ（配列番号３）を含む。いくつかの実施態様において、ＡＡＴタンパク質の反応性部位ループ部分は、少なくともアミノ酸配列：ＧＴＥＡＡＧＡＥＦＬＥＡＩＰＬＳＩＰＰＥＶＫＦＮＫ（配列番号４）を含む。いくつかの実施態様において、ＡＡＴタンパク質の反応性部位ループ部分は、少なくともアミノ酸配列：ＧＴＥＡＡＧＡＬＦＬＥＡＩＰＬＳＩＰＰＥＶＫＦＮＫ（配列番号５）を含む。

ある実施態様において、ポリペプチドは、ヒト免疫グロブリンＦｃポリペプチドを含むか、又は免疫グロブリンＦｃポリペプチド由来のポリペプチドはヒトＩｇＧ１Ｆｃポリペプチドである。いくつかの実施態様において、ヒトＩｇＧ１Ｆｃポリペプチド配列は以下のアミノ酸配列を有する：
（配列番号６）

いくつかの実施態様において、ポリペプチドは、ポリペプチドのＦｃポリペプチドのＮ末端に結合したヒンジ領域を含み、ここでＦｃポリペプチドは、以下のアミノ酸配列を有するヒトＩｇＧ１Ｆｃポリペプチド配列を含む：
（配列番号７）

本発明のポリペプチドがＦｃポリペプチドを含むいくつかの実施態様において、ポリペプチドのＦｃポリペプチドは、配列番号６又は７のアミノ酸配列と、少なくとも５０％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一であるヒトＩｇＧ１Ｆｃポリペプチド配列を含む。

いくつかの実施態様において、本発明のポリペプチドは、修飾ＩｇＧ１Ｆｃポリペプチドを含み、融合タンパク質の修飾ＩｇＧ１Ｆｃポリペプチドは、上述した配列番号６の残基２２、２６、及び１９８、又は配列番号７の残基３２、３６、及び２０８に対応する残基Ｍ２５２、Ｔ２５６、及びＭ４２８に変異を含み、そして以下のアミノ酸配列を有し、ここで変異アミノ酸残基は四角で囲まれている：
（配列番号８）

いくつかの実施態様において、本発明のポリペプチドは、修飾ＩｇＧ１ＦｃポリペプチドのＮ末端に結合したヒンジ領域を含み、融合タンパク質の修飾ＩｇＧ１Ｆｃポリペプチドは、上述した配列番号６の残基２２、２６、及び１９８、又は配列番号７の残基３２、３６、及び２０８に対応する残基Ｍ２５２、Ｔ２５６、及びＭ４２８に変異を含み、そして融合タンパク質は、少なくとも以下のアミノ酸配列を含み、ここで変異アミノ酸残差は四角で囲まれている：
（配列番号９）

いくつかの実施態様において、本発明のポリペプチドは修飾ＩｇＧ１Ｆｃポリペプチドを含み、ここで融合タンパク質の修飾ＩｇＧ１Ｆｃポリペプチドは、上述した配列番号６の残基６又は配列番号７の残基１６に対応する残基Ｇ２３６が欠失している修飾ヒトＩｇＧ１Ｆｃポリペプチド配列を含み、以下のアミノ酸配列を有する：
（配列番号１０）

いくつかの実施態様において、本発明のポリペプチドは修飾ＩｇＧ１ＦｃポリペプチドのＮ末端に結合したヒンジ領域を含み、融合タンパク質の修飾ＩｇＧ１Ｆｃポリペプチドは、上述した配列番号６の残基６又は配列番号７の残基１６に対応する残基Ｇ２３６が欠失している修飾ヒトＩｇＧ１Ｆｃポリペプチド配列を含み、そして融合タンパク質は、少なくとも以下のアミノ酸配列を含む：
（配列番号１１）

いくつかの実施態様において、本発明のポリペプチドは修飾ＩｇＧ１Ｆｃポリペプチドを含み、ここで融合タンパク質の修飾ＩｇＧ１Ｆｃポリペプチドは、上述した配列番号６の残基４及び５又は配列番号７の残基１４及び１５に対応する残基Ｌ２３４及びＬ２３５に変異を含み、そして以下のアミノ酸配列を有し、ここで変異アミノ酸残基は四角で囲まれている：
（配列番号１２）

いくつかの実施態様において、本発明のポリペプチドは、修飾ＩｇＧ１ＦｃポリペプチドのＮ末端に結合したヒンジ領域を含み、ポリペプチドの修飾ＩｇＧ１Ｆｃポリペプチドは、上述した配列番号６の残基４及び５又は配列番号７の残基１４及び１５に対応する残基Ｌ２３４及びＬ２３５に変異を含み、そして融合タンパク質は少なくとも以下のアミノ酸配列を含み、ここで変異アミノ酸残差は四角で囲まれている：
（配列番号１３）

いくつかの実施態様において、本発明のポリペプチドは、修飾ＩｇＧ１Ｆｃポリペプチドを含み、融合タンパク質の修飾ＩｇＧ１Ｆｃポリペプチドは、残基Ｇ２３６に欠失を並びに残基Ｌ２３４及びＬ２３５に変異を含み、そして融合タンパク質は、少なくとも以下のアミノ酸配列を含み、ここで変異アミノ酸残差は四角で囲まれている：
（配列番号１４）

いくつかの実施態様において、本発明のポリペプチドは、修飾ＩｇＧ１ＦｃポリペプチドのＮ末端に結合したヒンジ領域を含み、融合タンパク質の修飾ＩｇＧ１Ｆｃポリペプチドは、残基Ｇ２３６に欠失を並びに残基Ｌ２３４及びＬ２３５に変異を含み、そして以下のアミノ酸配列を有し、ここで変異アミノ酸残差は四角で囲まれている：
（配列番号１５）

いくつかの実施態様において、本発明のポリペプチドは修飾ＩｇＧ１Ｆｃポリペプチドを含み、融合タンパク質の修飾ＩｇＧ１Ｆｃポリペプチドは、残基Ｇ２３６に欠失を並びに残基Ｌ２３４、Ｌ２３５、Ｍ２５２、Ｔ２５６、及びＭ４２８に変異を含み、そして融合タンパク質は少なくとも以下のアミノ酸配列を含み、ここで変異アミノ酸残差は四角で囲まれている：
（配列番号１６）

いくつかの実施態様において、本発明のポリペプチドは、修飾ＩｇＧ１ＦｃポリペプチドのＮ末端に結合したヒンジ領域を含み、融合タンパク質の修飾ＩｇＧ１Ｆｃポリペプチドは、残基Ｇ２３６に欠失を並びに残基Ｌ２３４、Ｌ２３５、Ｍ２５２、Ｔ２５６、及びＭ４２８に変異を含み、そして以下のアミノ酸配列を有し、ここで変異アミノ酸残基は四角で囲まれている：
（配列番号１７）

いくつかの実施態様において、本発明のポリペプチドは修飾ＩｇＧ１Ｆｃポリペプチドを含み、融合タンパク質の修飾ＩｇＧ１Ｆｃポリペプチドは、配列番号８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、又は１７のアミノ酸配列と、少なくとも５０％、６０％、６５％、７０％％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一である修飾ヒトＩｇＧ１Ｆｃポリペプチド配列を含む。

いくつかの実施態様において、本発明のポリペプチドはＦｃポリペプチドを含み、融合タンパク質のＦｃポリペプチドは、以下のアミノ酸配列を有するヒトＩｇＧ２Ｆｃポリペプチド配列を含む：
（配列番号１８）

本発明の融合タンパク質がＦｃポリペプチドを含むいくつかの実施態様において、融合タンパク質のＦｃポリペプチドは、配列番号１８のアミノ酸配列と、少なくとも５０％、６０％、６５％、７０％％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％ 又は９９％同一である修飾ヒトＩｇＧ２Ｆｃポリペプチド配列を含む。

いくつかの実施態様において、本発明のポリペプチドは修飾ＩｇＧ２Ｆｃポリペプチドを含み、融合タンパク質の修飾ＩｇＧ２Ｆｃポリペプチドは、残基Ｇ２３６に欠失を並びに残基Ｍ２５２、Ｔ２５６、及びＭ４２８に変異を含み、そして以下のアミノ酸配列を有し、ここで変異アミノ酸残差は四角で囲まれている：
（配列番号１９）

いくつかの実施態様において、本発明のポリペプチドはＦｃポリペプチドを含み、融合タンパク質のＦｃポリペプチドは、以下のアミノ酸配列を有するヒトＩｇＧ３Ｆｃポリペプチド配列を含む：
（配列番号２０）

いくつかの実施態様において、本発明のポリペプチドはＦｃポリペプチドを含み、融合タンパク質のＦｃポリペプチドは、配列番号２０のアミノ酸配列と、少なくとも５０％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一であるヒトＩｇＧ３Ｆｃポリペプチド配列を含む。

いくつかの実施態様において、本発明のポリペプチドは修飾ＩｇＧ３Ｆｃポリペプチドを含み、融合タンパク質の修飾ＩｇＧ３Ｆｃポリペプチドは、残基Ｍ２５２、Ｔ２５６、及びＭ４２８に変異を含み、そして以下のアミノ酸配列を有し、ここで変異アミノ酸残差は四角で囲まれている：
（配列番号２１）

いくつかの実施態様において、本発明のポリペプチドは修飾ＩｇＧ３Ｆｃポリペプチドを含み、融合タンパク質の修飾ＩｇＧ３Ｆｃポリペプチドは、上述した配列番号２０の残基６に対応する残基Ｇ２３６が欠失している修飾ヒトＩｇＧ３Ｆｃポリペプチド配列を含み、そして以下のアミノ酸配列を有する：
（配列番号２２）

いくつかの実施態様において、本発明のポリペプチドは修飾ＩｇＧ３Ｆｃポリペプチドを含み、融合タンパク質の修飾ＩｇＧ３Ｆｃポリペプチドは、上述した配列番号２０の残基４及び５に対応する残基Ｌ２３４及びＬ２３５に変異を含み、そして以下のアミノ酸配列を有し、ここで変異アミノ酸残基は四角で囲まれている：
（配列番号２３）

本発明の融合タンパク質が修飾ＩｇＧ３Ｆｃポリペプチドを含むいくつかの実施態様において、融合タンパク質の修飾ＩｇＧ３Ｆｃポリペプチドは、残基Ｇ２３６に欠失を並びに残基Ｌ２３４及びＬ２３５に変異を含み、そして以下のアミノ酸配列を有する：
（配列番号２４）

いくつかの実施態様において、本発明のポリペプチドは修飾ＩｇＧ３Ｆｃポリペプチドを含み、融合タンパク質の修飾ＩｇＧ３Ｆｃポリペプチドは、残基Ｇ２３６に欠失を並びに残基Ｌ２３４、Ｌ２３５、Ｍ２５２、Ｔ２５６、及びＭ４２８に変異を含み、そして以下のアミノ酸配列を有する：
（配列番号２５）

いくつかの実施態様において、本発明のポリペプチドは、修飾ＩｇＧ３Ｆｃポリペプチドを含み、融合タンパク質の修飾ＩｇＧ３Ｆｃポリペプチドは、配列番号２１、２２、２３、２４、又は２５のアミノ酸配列と、少なくとも５０％、６０％、６５％、７０％％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一である修飾ヒトＩｇＧ３Ｆｃポリペプチド配列を含む。

いくつかの実施態様において、本発明のポリペプチドはＦｃポリペプチドを含み、融合タンパク質のＦｃポリペプチドは、以下のアミノ酸配列を有するヒトＩｇＧ４Ｆｃポリペプチド配列を含む：
（配列番号２６）

いくつかの実施態様において、本発明のポリペプチドはＦｃポリペプチドを含み、融合タンパク質のＦｃポリペプチドは、融合タンパク質のＦｃポリペプチドのＮ末端に結合したヒンジ領域を含み、ここでＦｃポリペプチドは、以下のアミノ酸配列を有するヒトＩｇＧ４Ｆｃポリペプチド配列を含む：
（配列番号２７）

いくつかの実施態様において、本発明の融合タンパク質がＦｃポリペプチドを含む場合、融合タンパク質のＦｃポリペプチドは、配列番号２６又は２７のアミノ酸配列と、少なくとも５０％、６０％、６５％、７０％％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一であるヒトＩｇＧ４Ｆｃポリペプチド配列を含む。

本発明の融合タンパク質が修飾ＩｇＧ４Ｆｃポリペプチドを含むいくつかの実施態様において、融合タンパク質の修飾ＩｇＧ４Ｆｃポリペプチドは、上述した配列番号２６の残基２２、２６、及び１９又は配列番号２７の残基３４、３８、及び２１０に対応する残基Ｍ２５２、Ｔ２５６、及びＭ４２８に変異を含み、そして以下のアミノ酸配列を有し、ここで変異アミノ酸残基は四角で囲まれている：
（配列番号２８）

いくつかの実施態様において、本発明のポリペプチドは、修飾ＩｇＧ４ＦｃポリペプチドのＮ末端に結合したヒンジ領域を含み、融合タンパク質の修飾ＩｇＧ４Ｆｃポリペプチドは、上述した配列番号２６の残基２２、２６、及び１９又は配列番号２７の残基３４、３８、及び２１０に対応する残基Ｍ２５２、Ｔ２５６、及びＭ４２８に変異を含み、そして融合タンパク質は、少なくとも以下のアミノ酸配列を含み、ここで変異アミノ酸残基は四角で囲まれている：
（配列番号２９）

いくつかの実施態様において、本発明のポリペプチドは修飾ＩｇＧ４Ｆｃポリペプチドを含み、融合タンパク質の修飾ＩｇＧ４Ｆｃポリペプチドは、上述した配列番号２６の残基６又は配列番号２７の残基１９に対応する残基Ｇ２３６が欠失している修飾ヒトＩｇＧ４Ｆｃポリペプチド配列を含み、そして以下のアミノ酸配列を有する：
（配列番号３０）

いくつかの実施態様において、本発明のポリペプチドは修飾ＩｇＧ４ＦｃポリペプチドのＮ末端に結合したヒンジ領域を含み、融合タンパク質の修飾ＩｇＧ４Ｆｃポリペプチドは、上述した配列番号２６の残基６又は配列番号２７の残基１９に対応する残基Ｇ２３６が欠失している修飾ヒトＩｇＧ４Ｆｃポリペプチドを含み、そして融合タンパク質は少なくとも以下のアミノ酸配列を有する：
（配列番号３１）

いくつかの実施態様において、本発明のポリペプチドは修飾ＩｇＧ４Ｆｃポリペプチドを含み、融合タンパク質の修飾ＩｇＧ４Ｆｃポリペプチドは、上述した配列番号２６の残基５又は配列番号２７の残基１７に対応する残基Ｌ２３５に変異を含み、そして以下のアミノ酸配列を有し、ここで変異アミノ酸残基は四角で囲まれている：
（配列番号３２）

いくつかの実施態様において、本発明のポリペプチドは、修飾ＩｇＧ４ＦｃポリペプチドのＮ末端に結合したヒンジ領域を含み、融合タンパク質の修飾ＩｇＧ４Ｆｃポリペプチドは、上述した配列番号２６の残基５又は配列番号２７の残基１７に対応する残基Ｌ２３５に変異を含み、そして以下のアミノ酸配列を有し、ここで変異アミノ酸残基は四角で囲まれている：
（配列番号３３）

いくつかの実施態様において、本発明のポリペプチドは修飾ＩｇＧ４Ｆｃポリペプチドを含み、融合タンパク質の修飾ＩｇＧ４Ｆｃポリペプチドは、上述した配列番号２６の残基４及び５又は配列番号２７の残基１６及び１７に対応する残基Ｌ２３４及びＬ２３５に変異を含み、そして以下のアミノ酸配列を有し、ここで変異アミノ酸残基は四角で囲まれている：
（配列番号３４）

いくつかの実施態様において、本発明のポリペプチドは、修飾ＩｇＧ４ＦｃポリペプチドのＮ末端に結合したヒンジ領域を含み、融合タンパク質の修飾ＩｇＧ４Ｆｃポリペプチドは、上述した配列番号２６の残基４及び５又は配列番号２７の残基１６及び１７に対応する残基Ｌ２３４及びＬ２３５に変異を含み、そして融合タンパク質は、少なくとも以下のアミノ酸配列を含み、ここで変異アミノ酸残基は四角で囲まれている：
（配列番号３５）

いくつかの実施態様において、本発明のポリペプチドは修飾ＩｇＧ４Ｆｃポリペプチドを含み、融合タンパク質の修飾ＩｇＧ４Ｆｃポリペプチドは、上述した配列番号２７の残基１０に対応する残基Ｓ２２８に変異を含み、そしては以下のアミノ酸配列を有し、ここで変異アミノ酸残基は四角で囲まれている：
（配列番号３６）

いくつかの実施態様において、本発明のポリペプチドは、修飾ＩｇＧ４ＦｃポリペプチドのＮ末端に結合したヒンジ領域を含み、融合タンパク質の修飾ＩｇＧ４Ｆｃポリペプチドは、上述した配列番号２７の残基１０及び１７に対応する残基Ｓ２２８及びＬ２３５に変異を含み、そして融合タンパク質は少なくとも以下のアミノ酸配列を含み、ここで変異アミノ酸残基は四角で囲まれている：
（配列番号３７）

いくつかの実施態様において、本発明のポリペプチドは修飾ＩｇＧ４ＦｃポリペプチドのＮ末端に結合したヒンジ領域を含み、融合タンパク質の修飾ＩｇＧ４Ｆｃポリペプチドは、上述した配列番号２７の残基１０、１７、及び３４に対応する残基Ｓ２２８、Ｌ２３５、及びＭ２５２に変異を含み、そして融合タンパク質は少なくとも以下のアミノ酸配列を含み、ここで変異アミノ酸残基は四角で囲まれている：
（配列番号３８）

いくつかの実施態様において、本発明のポリペプチドは修飾ＩｇＧ４ＦｃポリペプチドのＮ末端に結合したヒンジ領域を含み、融合タンパク質の修飾ＩｇＧ４Ｆｃポリペプチドは、上述した配列番号２７の残基１０、１７、及び３４に対応する残基Ｓ２２８、Ｌ２３５、及びＭ４２８に変異を含み、そして融合タンパク質は少なくとも以下のアミノ酸配列を含み、ここで変異アミノ酸残基は四角で囲まれている：
（配列番号３９）

いくつかの実施態様において、本発明のポリペプチドは修飾ＩｇＧ４ＦｃポリペプチドのＮ末端に結合したヒンジ領域を含み、融合タンパク質の修飾ＩｇＧ４Ｆｃポリペプチドは、上述した配列番号２７の残基１０、１７、３４、及び２１０に対応する残基Ｓ２２８、Ｌ２３５、Ｍ２５２、及びＭ４２８に変異を含み、そして融合タンパク質は少なくとも以下のアミノ酸配列を含み、ここで変異アミノ酸残基は四角で囲まれている：
（配列番号４０）

いくつかの実施態様において、本発明のポリペプチドは修飾ＩｇＧ４Ｆｃポリペプチドを含み、融合タンパク質の修飾ＩｇＧ４Ｆｃポリペプチドは、上述した配列番号２６の残基５、２２、２６、及び１９７又は配列番号２７の残基１７、３４、３８、及び２１０に対応する残基Ｌ２３５、Ｍ２５２、Ｍ２５６、及びＭ４２８に変異を含み、そして以下のアミノ酸配列を含み、ここで変異アミノ酸残基は四角で囲まれている：
（配列番号４１）

いくつかの実施態様において、本発明のポリペプチドは修飾ＩｇＧ４ＦｃポリペプチドのＮ末端に結合したヒンジ領域を含み、融合タンパク質の修飾ＩｇＧ４Ｆｃポリペプチドは、上述した配列番号２６の残基５、２２、２６、及び１９７又は配列番号２７の残基１７、３４、３８、及び２１０に対応する残基Ｌ２３５、Ｍ２５２、Ｍ２５６、及びＭ４２８に変異を含み、そして融合タンパク質は少なくとも以下のアミノ酸配列を含み、ここで変異アミノ酸残基は四角で囲まれている：
（配列番号４２）

いくつかの実施態様において、本発明のポリペプチドは修飾ＩｇＧ４ＦｃポリペプチドのＮ末端に結合したヒンジ領域を含み、融合タンパク質の修飾ＩｇＧ４Ｆｃポリペプチドは、上述した配列番号２７の残基１０、１７、３４、３８、及び２１０に対応する残基Ｓ２２８、Ｌ２３５、Ｍ２５２、Ｔ２５６、及びＭ４２８に変異を含み、そして融合タンパク質は少なくとも以下のアミノ酸配列を含み、変異アミノ酸残基は四角で囲まれている：
（配列番号４３）

本発明の融合タンパク質が修飾ＩｇＧ４Ｆｃポリペプチドを含むいくつかの実施態様において、融合タンパク質の修飾ＩｇＧ４Ｆｃポリペプチドは、配列番号２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、又は４３のアミノ酸配列と少なくとも５０％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一である修飾ヒトＩｇＧ４Ｆｃポリペプチド配列を含む。

例えば、ヒト免疫グロブリンＦｃポリペプチド又は免疫グロブリンＦｃポリペプチド由来のポリペプチドは、配列番号２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、又は４３の配列を有する修飾ヒトＩｇＧ４Ｆｃポリペプチドである。

いくつかの実施態様において、本発明のポリペプチドは修飾ヒトＩｇＧ４Ｆｃポリペプチドに由来するＦｃポリペプチドを含み、ここで修飾ヒトＩｇＧ４Ｆｃポリペプチドは、位置Ｓ２２８、Ｌ２３５、Ｍ２５２、Ｔ２５６、及びＭ４２８に変異を含む。

いくつかの実施態様において、本発明のポリペプチドは修飾ヒトＩｇＧ４Ｆｃポリペプチドを含み、ここで、修飾ヒトＩｇＧ４Ｆｃポリペプチドは配列番号２７、３６、又は３７のアミノ酸配列を含み、ここで、修飾ヒトＩｇＧ４Ｆｃポリペプチドは、位置Ｍ２５２（配列番号２７の残基３４）及び／又は位置Ｍ４２８（配列番号２７の残基２１０）に変異を含む。

ある実施態様において、修飾ヒトＩｇＧ４Ｆｃポリペプチドはさらに、位置Ｔ２５６（配列番号２７の残基３８）に変異を含む。

いくつかの実施態様において、本発明のポリペプチドはＦｃポリペプチドを含み、融合タンパク質のＦｃポリペプチドは、以下のアミノ酸配列を有するヒトＩｇＭＦｃポリペプチド配列を含む：
（配列番号４４）

ある実施態様において、ヒト免疫グロブリンＦｃポリペプチド又は免疫グロブリンＦｃポリペプチド由来のポリペプチドは、修飾ヒトＩｇＧ４Ｆｃポリペプチドである。

ある実施態様において、二量体タンパク質の各単量体は配列番号４５の配列を有する。以下に示されるように、融合タンパク質のＡＡＴポリペプチド部分は下線が引かれており（配列番号１）、そして融合タンパク質のＩｇＧ－Ｆｃポリペプチド部分は斜体で示されている（配列番号６）。
（配列番号４５）

ある実施態様において、二量体タンパク質の各単量体は配列番号４６の配列を有する。以下に示されるように、融合タンパク質のＡＡＴポリペプチド部分は下線が引かれており（配列番号１）、そして融合タンパク質のＩｇＧ－Ｆｃポリペプチド部分は斜体で示されている（配列番号１８）。
（配列番号４６）

ある実施態様において、二量体タンパク質の各単量体は配列番号４７の配列を有する。以下に示されるように、融合タンパク質のＡＡＴポリペプチド部分は下線が引かれており（配列番号４８）、融合タンパク質のＩｇＧ－Ｆｃポリペプチド部分は斜体で示されており（配列番号６）、そしてＭｅｔ３５１Ｇｌｕ変異は四角で囲まれ、Ｍｅｔ３５８Ｌｅｕ変異は灰色で陰影が付けられている。
（配列番号４７）

ある実施態様において、二量体タンパク質の各単量体は配列番号４９の配列を有する。以下に示されるように、融合タンパク質のＡＡＴポリペプチド部分は下線が引かれており（配列番号４８）、融合タンパク質のＩｇＧ－Ｆｃポリペプチド部分は斜体で示されており（配列番号１８）、Ｍｅｔ３５１Ｇｌｕ変異は四角で囲まれ、及びＭｅｔ３５８Ｌｅｕ変異は灰色で陰影が付けられている。
（配列番号４９）

ある実施態様において、二量体タンパク質の各単量体は配列番号５０の配列を有する。以下に示されるように、融合タンパク質のＡＡＴポリペプチド部分は下線が引かれており（配列番号５１）、融合タンパク質のＩｇＧ－Ｆｃポリペプチド部分は斜体で示されており（配列番号１８）、Ｍｅｔ３５１Ｇｌｕ変異は黒色で陰影が付けられ、及びＭｅｔ３５８Ｌｅｕ変異は灰色で陰影が付けられている。
（配列番号５０）

ある実施態様において、二量体タンパク質の各単量体は配列番号５２の配列を有する。以下に示されるように、融合タンパク質のＡＡＴポリペプチド部分は下線が引かれており（配列番号１）、融合タンパク質のＩｇＧ－Ｆｃポリペプチド部分は斜体で示されている（配列番号６）。
（配列番号５２）

ある実施態様において、二量体タンパク質の各単量体は配列番号５３の配列を有する。以下に示されるように、融合タンパク質のＡＡＴポリペプチド部分は下線が引かれており、Ｍｅｔ３５１Ｇｌｕ及びＭｅｔ３５８Ｌｅｕ変異は四角で囲まれている（配列番号２）。融合タンパク質のＩｇＧ１－Ｆｃポリペプチド部分は斜体で示されており（配列番号１７）、Ｇｌｙ２３６が欠失しており、及び変異Ｍｅｔ２５２Ｉｌｅ、Ｔｈｒ２５６Ａｓｐ、及びＭｅｔ４２８Ｌｅｕは四角で囲まれている。
（配列番号５３）

ある実施態様において、二量体タンパク質の各単量体は列番号５４の配列を有する。以下に示されるように、融合タンパク質のＡＡＴポリペプチド部分は下線が引かれており、Ｍｅｔ３５１Ｇｌｕ及びＭｅｔ３５８Ｌｅｕ変異は四角で囲まれている（配列番号２）。融合タンパク質のＩｇＧ１－Ｆｃポリペプチド部分は斜体で示されており（配列番号４３）、変異Ｓｅｒ２２８Ｐｒｏ、Ｌｅｕ２３５Ｇｌｕ、Ｍｅｔ２５２Ｉｌｅ、Ｔｈｒ２５６Ａｓｐ、及びＭｅｔ４２８Ｌｅｕ変異は四角で囲まれている。
（配列番号５４）

ある実施態様において、二量体タンパク質の各単量体は配列番号５５の配列を有する。以下に示されるように、融合タンパク質のＡＡＴポリペプチド部分は下線が引かれており、配列番号５１のＡＡＴ反応性ループ配列があり、Ｍｅｔ３５１Ｌｅｕ変異は黒色で陰影が付けられ、及びＭｅｔ３５８Ｌｅｕ変異は灰色で陰影が付けられ、及び融合タンパク質のＩｇＧ１－Ｆｃポリペプチド部分は斜体で示されている（配列番号７）。
（配列番号５５）

ある実施態様において、二量体タンパク質の各単量体は配列番号５６の配列を有する。以下に示されるように、融合タンパク質のＡＡＴポリプチド部分は下線が引かれており、Ｍｅｔ３５１Ｌｅｕ変異は黒色で陰影が付けられており、及びＭｅｔ３５８Ｌｅｕ変異は灰色で陰影が付けられており（配列番号４８）：並びに融合タンパク質のＩｇＧ４－Ｆｃポリペプチド部分は斜体で示され、変異Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３５Ｅ、Ｍ２５２Ｙ、及びＭ４２８Ｌは四角で囲まれ、及びＧＳリンカーは太字で示されている（配列番号４０）。
（配列番号５６）

本開示の二量体タンパク質の単量体のいくつかの実施態様において、単量体のＩｇＧポリペプチド部分は、ＧＳリンカーなしでＡＡＴポリペプチド部分に接続され得る。いくつかの実施態様において、本開示の二量体タンパク質の単量体のＩｇＧポリペプチド部分は、共有結合によってＡＡＴポリペプチド部分に接続され得る。

二量体タンパク質の単量体は、ジスルフィド架橋によって互いに結合され得る。特に、ヒト免疫グロブリンＦｃポリペプチド、又は免疫グロブリンＦｃポリペプチド由来のポリペプチドの対は、連結されて機能的Ｆｃドメインを形成する。
他の実施態様

本発明をその詳細な説明と併せて説明してきたが、上記の説明は例示を目的としたものであり、添付の特許請求の範囲によって定義される本発明の範囲を限定するものではない。他の態様、利点、及び修正は、後述の特許請求の範囲に含まれる。
実施例

一般的方法

工学作成二量体タンパク質の安定性を評価する方法

ａ）視覚評価

可視粒子は、２９．９．２０ 欧州薬局方モノグラフ（Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ Ｍｏｎｏｇｒａｐｈ）（粒子汚染：可視粒子）を使用して適切に検出される。必要な装置は、以下を備えた観察ステーションで構成される：
・ 垂直位置に保持された適切なサイズのマットブラックパネル
・ 黒パネルの隣に垂直に配置された適切なサイズのノングレア白パネル
・ 適切な遮光された白色光源と適切な光拡散器を取り付けた調整可能なランプホルダー（それぞれ長さ５２５ｍｍの２本の１３Ｗ蛍光管を含む観察用照明装置が適している）。視点の照度は２０００ルクス～３７５０ルクスに維持される。

付着したラベルは容器から剥がし、外側を洗浄して乾燥させる。容器を静かに回し又は反転させて気泡が入らないようにして、白いパネルの前で約５秒間観察する。この手順を黒いパネルの前で繰り返す。粒子の存在を記録する。

視覚スコアは次のようにランク付けされる。
視覚スコア１：目に見える粒子のない透明な溶液
視覚スコア２：わずかな粒子形成（最大２０個の非常に小さな粒子）
視覚的スコア３：より顕著な沈殿（２０個を超える粒子、より大きな粒子を含む）

視覚スコア３の試料中の粒子は、通常の光の下で簡単な視覚評価では明らかに検出可能であるが、視覚スコア１及び２の試料は通常、同じ評価では透明な溶液に見える。視覚スコア１及び２の試料は「合格」とみなされ、視覚スコア３の試料は「不合格」とみなされる。

（ｂ）サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）

方法１

高分子量種の量は、３００×７．８ｍｍのＴＳＫＧｅｌＧ３０００ＳＷＸＬ（又は同等の）サイズ排除カラムを使用して測定される。移動相は２５０ｍＭ塩化カリウム及び２００ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ６．２）であり、流速０．５ｍｌ／分、注入量４μｌ（タンパク質２００μｇに相当）で、２８０ｎｍで検出される。実行時間は３０分である。結果は、％高分子種（ＨＭＷＳ）、すなわち、クロマトグラム上のすべてのタンパク質関連ピークの合計に対する凝集タンパク質に対応するすべてのピーク面積の合計として表される。

方法２

高分子量種の量は、３００×７．８ｍｍのＴＳＫＧｅｌＧ３０００ＳＷＸＬ（又は同等の）サイズ排除カラムを使用して測定される。移動相は２５０ｍＭ塩化カリウム及び２００ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ６．２）であり、流速０．５ｍｌ／分、注入量１０μｌ（タンパク質５００μｇに相当）、２８０ｎｍで検出される。実行時間は３０分である。結果は、％高分子種（ＨＭＷＳ）、すなわち、クロマトグラム上のすべてのタンパク質関連ピークの合計に対する凝集タンパク質に対応するすべてのピーク面積の合計として表される。

どちらの方法でも、％ＨＭＷＳの増加は、時間ゼロ（すなわち、保存温度でインキュベーションの直前）における％ＨＭＷＳ値と比較した、所定の時点での％ＨＭＷＳで観察された変化を意味する。

（ｃ）目に見えない粒子の評価（ＳＶＰ）

液体試料中の容器あたりの目に見えない粒子（ｓｕｂ ｖｉｓｉｂｌｅ ｐａｒｔｉｃｌｅ）の数は、ＨＩＡＣ９７０３＋液体粒子カウンターを使用して評価される。システムの適合性のために、ブランク検体と粒子数セットが使用される。試料は測定前に７５ｔｏｒｒで１０分間脱気され、希釈せずに試験される。結果は、各５ｍＬの３回の測定の平均として報告される。

実施例１－配合物の例

以下の配合物例を調製することができる。

例Ａ：
本発明の工学作成二量体タンパク質 ５０ｍｇ／ｍｌ
トリス ３ｍＭ
トレハロース ３００ｍＭ
プロリン １００ｍＭ
ポリソルベート２０ ０．１ｍｇ／ｍｌ
注射用水 適量
塩酸又は水酸化ナトリウムを使用してｐＨを７．３に調整
イオン強度 ２．６ｍＭ

例Ｂ：
本発明の工学作成二量体タンパク質 ５０ｍｇ／ｍｌ
トリス ３ｍＭ
トレハロース ３００ｍＭ
メチオニン ２ｍＭ
ポリソルベート２０ ０．１ｍｇ／ｍｌ
注射用水 適量
塩酸又は水酸化ナトリウムを使用してｐＨを７．３に調整
イオン強度 ２．６ｍＭ

例Ｃ：
本発明の工学作成二量体タンパク質 ５０ｍｇ／ｍｌ
トリス ３ｍＭ
トレハロース ３００ｍＭ
プロリン １００ｍＭ
メチオニン ２ｍＭ
ポリソルベート２０ ０．１ｍｇ／ｍｌ
注射用水 適量
塩酸又は水酸化ナトリウムを使用してｐＨを７．３に調整
イオン強度 ２．６ｍＭ

例Ｄ：
本発明の工学作成二量体タンパク質 ５０ｍｇ／ｍｌ
トリス ５ｍＭ
トレハロース ３００ｍＭ
プロリン １００ｍＭ
ポリソルベート２０ ０．１ｍｇ／ｍｌ
注射用水 適量
塩酸又は水酸化ナトリウムを使用してｐＨを７．３に調整
イオン強度 ４．３ｍＭ

例Ｅ：
本発明の工学作成二量体タンパク質 ５０ｍｇ／ｍｌ
トリス ３ｍＭ
トレハロース ３００ｍＭ
プロリン １００ｍＭ
ポロキサマー１８８ １ｍｇ／ｍｌ
注射用水 適量
塩酸又は水酸化ナトリウムを使用してｐＨを７．３に調整
イオン強度 ２．６ｍＭ

例Ｆ：
本発明の工学作成二量体タンパク質 ５０ｍｇ／ｍｌ
トリス ５ｍＭ
トレハロース ３００ｍＭ
プロリン １００ｍＭ
ポロキサマー１８８ １ｍｇ／ｍｌ
注射用水 適量
塩酸又は水酸化ナトリウムを使用してｐＨを７．３に調整
イオン強度 ４．３ｍＭ

例Ｇ：
本発明の工学作成二量体タンパク質 ５０ｍｇ／ｍｌ
トリス ５ｍＭ
トレハロース １５０ｍＭ
スクロース １００ｍＭ
プロリン １００ｍＭ
ポリソルベート２０ ０．１ｍｇ／ｍｌ
注射用水 適量
塩酸又は水酸化ナトリウムを使用してｐＨを７．３に調整
イオン強度 ４．３ｍＭ

例Ｈ：
本発明の工学作成二量体タンパク質 ５０ｍｇ／ｍｌ
トリス ５ｍＭ
トレハロース １５０ｍＭ
スクロース １００ｍＭ
プロリン １００ｍＭ
メチオニン ２ｍＭ
ポロキサマー１８８ １ｍｇ／ｍｌ
注射用水 適量
塩酸又は水酸化ナトリウムを使用してｐＨを７．３に調整
イオン強度 ４．３ｍＭ

例Ｉ：
本発明の工学作成二量体タンパク質 ５０ｍｇ／ｍｌ
トリス ５ｍＭ
トレハロース １５０ｍＭ
スクロース １００ｍＭ
グリシン １００ｍＭ
メチオニン ２ｍＭ
ポロキサマー１８８ １ｍｇ／ｍｌ
注射用水 適量
塩酸又は水酸化ナトリウムを使用してｐＨを７．３に調整
イオン強度 ４．３ｍＭ

例Ｊ：
本発明の工学作成二量体タンパク質 ５０ｍｇ／ｍｌ
トリス ５ｍＭ
トレハロース １５０ｍＭ
スクロース １００ｍＭ
グリシン １００ｍＭ
ポロキサマー１８８ １ｍｇ／ｍｌ
注射用水 適量
塩酸又は水酸化ナトリウムを使用してｐＨを７．３に調整
イオン強度 ４．３ｍＭ

例Ｋ：
本発明の工学作成二量体タンパク質 ５０ｍｇ／ｍｌ
リン酸ナトリウム ５ｍＭ
トレハロース １５０ｍＭ
スクロース １００ｍＭ
プロリン １００ｍＭ
メチオニン ２ｍＭ
ポリソルベート ０．１ｍｇ／ｍｌ
注射用水 適量
塩酸又は水酸化ナトリウムを使用してｐＨを７．３に調整
イオン強度 １１．１ｍＭ

例Ｌ：
本発明の工学作成二量体タンパク質 ５０ｍｇ／ｍｌ
リン酸ナトリウム ５ｍＭ
トレハロース １５０ｍＭ
スクロース １００ｍＭ
プロリン １００ｍＭ
メチオニン ２ｍＭ
ポロキサマー１８８ １ｍｇ／ｍｌ
注射用水 適量
塩酸又は水酸化ナトリウムを使用してｐＨを７．３に調整
イオン強度 １１．１ｍＭ

配合物の安定性は、４０℃で２、４、及び８週間インキュベートした後に、視覚評価及びＳＥＣ（一般的方法を参照）を使用して決定することができる。

配合物の安定性は、２５℃で２、４、８、１２、及び２６週間インキュベートした後に、視覚評価及びＳＥＣ（一般的方法を参照）を使用して決定することができる。

配合物の安定性は、２～８℃で２、４、８、１２、及び２６週間インキュベートした後に、視覚評価及びＳＥＣ（一般的方法を参照）を使用して決定することができる。

以下の実施例では、単量体配列として配列番号５６を有する工学作成二量体タンパク質（「ＰＲＯＴＥＩＮ－１」）を使用した。

実施例２－ＰＲＯＴＥＩＮ－１の保存安定性に対するイオン強度の効果

ＰＲＯＴＥＩＮ－１（５０ｍｇ／ｍｌ）の安定性に対するイオン強度の効果は、荷電張性修飾剤（塩化ナトリウム、１５０ｍＭ）と非荷電張性修飾剤（グリセロール、３００ｍＭ）を比較することによって調査された。

すべての配合物には、ポリソルベート２０（０．１ｍｇ／ｍＬ）及び緩衝液としてトリス（２ｍＭ）又はリン酸ナトリウム（２ｍＭ）のいずれかが含まれていた。トリスを含む配合物はｐＨ８．０に調整され、リン酸ナトリウムを含む配合物はｐＨ７．０に調整された。表１は、試験した配合物をまとめたものである。

すべての配合物は２５℃で７週間保存された。ＰＲＯＴＥＩＮ－１の安定性は、一般的方法に記載されているように、ＳＥＣ（方法１）を使用して高分子量種の生成比率を追跡することによって、及び視覚評価によって評価された。

配合物１－０１～１－０４におけるＨＭＷＳ生成比率が表２に示され、ここでＨＭＷＳ生成比率が、非荷電張性修飾剤であるグリセロールを含む低イオン強度の配合物で最も低いことが分かる（配合物１－０１と１－０３を比較して、及び配合物１－０２と１－０４を比較して）。ＨＭＷＳ生成比率は、トリス緩衝液を使用したｐＨ８．０の配合物と比較して、リン酸ナトリウム緩衝液を使用したｐＨ７．０の同等の配合物の方が高いことが観察された（配合物１－０１と１－０２を比較して、及び配合物１－０３と１－０４を比較して）。

実施例３－ＰＲＯＴＥＩＮ－１の保存安定性のための最適なｐＨ

ＰＲＯＴＥＩＮ－１（５０ｍｇ／ｍｌ）の安定性に対するｐＨの影響を調べた。全ての配合物には、ポリソルベート２０（０．１ｍｇ／ｍｌ）、緩衝液としてトリス（１ｍＭ）、及び非荷電張性修飾剤としてトレハロース（３００ｍＭ）とトレハロース（１５０ｍＭ）とマンニトール（２５０ｍＭ）の混合物のいずれかが含まれていた。一部の配合物にはメチオニン（２ｍＭ）が含まれていた。表３は、試験された配合物を要約する。

配合物は２５℃で２６週間、又は２～８℃で２６週間保存された。ＰＲＯＴＥＩＮ－１の安定性は、一般的方法に記載されているように、ＳＥＣ（方法１）を使用して高分子量種の形成速度を追跡することによって、及び視覚評価によって評価された。

配合物２－０１～２－０６におけるＨＭＷＳ生成比率が表４に示され、ここで２５℃では、ＨＭＷＳ生成比率が、２５℃と２～８℃の両方で、ｐＨ７．０の配合物と比較してｐＨ７．５の配合物の方が低かったことが分かる（非荷電張性修飾剤としてトレハロースを使用して、配合物２－０１と２－０２を比較）。配合物２－０３と２－０６を比較すると（非荷電張性修飾剤としてトレハロースとマンニトールの混合物を使用）、ＨＭＷＳ生成比率は、ｐＨ７．０と比較してｐＨ７．５でより遅い（２５℃と２～８℃の両方で）ことが分かるが、ＨＭＷＳ生成の最低速度はｐＨ７．２で観察された。

要約すると、ｐＨ７．２～７．５はＨＭＷＳの生成を防ぐのに特に適しているようである。

実施例４－ＰＲＯＴＥＩＮ－１の保存安定性に対する緩衝液濃度の効果

ＰＲＯＴＥＩＮ－１（５０ｍｇ／ｍｌ）の安定性に対する緩衝液濃度の効果を調べた。すべての配合物にはポリソルベート２０（０．１ｍｇ／ｍｌ）が含まれていた。表５は、試験された配合物を要約する。

配合物は、２５℃で７週間及び２７週間、又は２～８℃で２７週間保存された。ＰＲＯＴＥＩＮ－１の安定性は、一般的方法に記載されているように、ＳＥＣ（方法１）を使用して高分子量種の生成比率を追跡することによって、及び視覚評価によって評価された。

配合物３－０１～３－０７におけるＨＭＷＳ生成比率が表６に示され、ここで２５℃で７週間後、ＨＭＷＳ生成比率は、５０ｍＭトリス緩衝液を含有する対応する配合物と比較して、２ｍＭトリス緩衝液を含有する配合物の方が低かった（配合物３－０１と３－０２をｐＨ８で比較）ことが分かる。同じ傾向がｐＨ７．０で観察された：ＨＭＷＳの速度は、５０ｍＭトリス緩衝液を含有する対応する配合物と比較して、トリス緩衝液を含まない配合物の方が低かった（どちらも非荷電張性修飾剤としてグリセロールを含有する配合物３－０４と３－０３をｐＨ７．０で比較）。２７週間後に同じ傾向が２５℃と２～８℃の両方で観察され、ここでトリス緩衝液の濃度を５ｍＭから２ｍＭ、さらに１ｍＭに下げると、ＨＭＷＳの生成速度が低下した（いずれも非荷電張性修飾剤としてトレハロースとマンニトールの混合物を含有する配合物３－０５～３－０７をｐＨ７．５で比較）。

要約すると、ｐＨ範囲７．０～７．５の緩衝液としてトリスを使用する場合、濃度は５０ｍＭ未満であるべきであり、ＨＭＷＳの生成を低減させるために可能な限り低くするのが適切である。

実施例５－ＰＲＯＴＥＩＮ－１の保存安定性に対する非荷電張性修飾剤の効果

ＰＲＯＴＥＩＮ－１（５０ｍｇ／ｍｌ）の保存安定性に対する、異なる非荷電張性修飾剤の効果を調べた。すべての配合物にはポリソルベート２０（０．１ｍｇ／ｍｌ）が含まれていた。表７は、試験された配合物を要約する。

配合物は、２５℃で１２週間、２５℃で２６週間、２～８℃で１６週間、又は２～８℃で２６週間保存された。ＰＲＯＴＥＩＮ－１の安定性は、一般的方法に記載されているように、ＳＥＣ（方法１）を使用して高分子量種の生成比率を追跡することによって、及び視覚評価によって評価された。

配合物４－０１～４－０７におけるＨＭＷＳの生成比率が表８に示され、ここで、２５℃で１２週間後と２～８℃で１６週間後に、非荷電張性修飾剤としてグリセロール、トレハロース、及びスクロースの使用を比較すると、ＨＭＷＳの生成比率はトレハロースを含む配合物で最も低かったことが分かる（ｐＨ７で２ｍＭトリス緩衝液を含む配合物４－０１～４－０３を比較）。同じことが、より長い２６週間の保存期間でも観察され、非荷電張性修飾剤としてトレハロースとスクロースの使用を比較すると、トレハロースを含む配合物の方がＨＭＷＳの比率が低かった（ｐＨ７．５で１ｍＭトリス緩衝液を有する配合物４－０４～４－０７で比較）。試験された２つのトレハロース濃度（２００ｍＭと３００ｍＭ）のうち、より高い濃度の３００ｍＭで、より低いＨＭＷＳ生成比率が観察された（配合物４－０４と４－０５の比較）。しかし、場合によっては、特に組成物の投与量が多い場合には、薬理学的に許容される限界（例えば約１５０ｍＭ）によりトレハロースの濃度は限定的となり得る。このような場合、トレハロースと別の非荷電張性修飾剤、例えばスクロースとの混合物が最適となり得る。

要約すると、非荷電張性修飾剤としてトレハロースを使用すると、試験された濃度及び張性修飾剤に対して最良の安定性プロフィールが得られた。

実施例６－ＰＲＯＴＥＩＮ－１の保存安定性に対する中性アミノ酸の効果

ＰＲＯＴＥＩＮ－１（５０ｍｇ／ｍｌ）の安定性に対するさまざまな中性アミノ酸の効果を調べた。すべての配合物には、非荷電張性修飾剤としてポリソルベート２０（０．１ｍｇ／ｍｌ）、トリス緩衝液（２ｍＭ）、及びグリセロール（３００ｍＭ）が含まれていた。表９は、試験された配合物を要約する。

配合物は２５℃で１６週間保存された。ＰＲＯＴＥＩＮ－１の安定性は、一般的方法に記載されているように、ＳＥＣ（方法１）を使用して高分子量種の生成比率を追跡することによって、及び視覚評価によって評価された。

配合物５－０１～５－０６におけるＨＭＷＳ生成比率が表１０に示され、ここで、２５℃で１６週間後、グリシン（３００ｍＭ）とプロリン（試験されたすべての濃度で）の両方を添加すると、ＨＭＷＳの生成比率が低下したことが分かる（配合物５－０１～５－０５と対照配合物５－０６を比較）。グリシンとプロリンを直接比較すると、中性アミノ酸の所定の濃度において、ＨＭＷＳ生成比率はプロリンを含む配合物の方が低かった（配合物５－０１と配合物５－０３を比較、及び配合物５－０２と配合物５－０４を比較）。試験された３つのプロリン濃度（１００ｍＭ、２００ｍＭ、及び５００ｍＭ）のうち、最も低いＨＭＷＳの生成比率は最高濃度の５００ｍＭで観察された（配合物５－０３、５－０４、及び５－０５を比較）。しかし、実際には、市販の治療用製剤で使用されるプロリンの濃度は、オスモル濃度の制限により理想的にはこれより低くなる（たとえば、約１００～１５０ｍＭ）。

要約すると、中性アミノ酸（例えば、プロリン又はグリシン、特にプロリン）の添加により、より安定な配合物が得られた。

実施例７－ＰＲＯＴＥＩＮ－１の保存安定性に対するメチオニンと別の中性アミノ酸の組み合わせの効果

ＰＲＯＴＥＩＮ－１（５０ｍｇ／ｍｌ）の安定性に対する、中性アミノ酸のグリシン又はプロリンのいずれかと組み合わせたメチオニンの効果を調べた。すべての配合物には、ポリソルベート２０（０．１ｍｇ／ｍｌ）、トリス緩衝液（２ｍＭ又は１ｍＭ）、及び非荷電張性修飾剤としてグリセロール（３００ｍＭ）又はトレハロース（３００ｍＭ）が含まれていた。表１１は、試験された配合物を要約する。

配合物は、２５℃で１６週間、２５℃で２６週間、又は２～８℃で２６週間保存された。ＰＲＯＴＥＩＮ－１の安定性は、一般的方法に記載されているように、ＳＥＣ（方法１）を使用して高分子量種の生成比率を追跡することによって、及び視覚評価によって評価された。

配合物６－０１～６－０４におけるＨＭＷＳの生成比率は表１２に示され、ここで、２５℃で１６週間後、グリシンを含有する配合物にメチオニンを添加すると、ＨＭＷＳ生成比率が低下したことが分かる（配合物６－０１と６－０２の比較）。プロリンを含む配合物へのメチオニンの添加もまた、２５℃で２６週間後、又は２～８℃で２６週間後に、ＨＭＷＳの生成比率を低下させた（配合物６－０３と６－０４を比較）。

実施例８－ポロキサマー界面活性剤を含むＰＲＯＴＥＩＮ－１の配合物の保存安定性試験

ＰＲＯＴＥＩＮ－１（５０ｍｇ／ｍｌ）の安定性に対するポロキサマー界面活性剤の影響を調べた。この実施例で使用したＰＲＯＴＥＩＮ－１のバッチは、実施例２～７で使用したバッチとは異なるものであった。表１３は、試験された配合物を要約する。

配合物は、２５℃及び２～８℃で６か月、９か月、１２か月、及び２４か月間保存された。ＰＲＯＴＥＩＮ－１の安定性は、一般的方法に記載されているように、ＳＥＣ（方法１）を使用して高分子量種の生成比率を追跡することによって、及び視覚評価によって評価された。

表１４Ａ及び１４Ｂから分かるように、保存条件下で配合物はＨＭＷＳ生成比率が低かった。

表１５Ａ及び１５Ｂに示されるように、試験された配合物は、２５℃及び２～８℃での保存後の視覚試験に合格した。

実施例９－ＰＲＯＴＥＩＮ－１配合物の目に見えない粒子のサイズ限界の評価

表１６Ａに記載のＰＲＯＴＥＩＮ－１配合物の安定性は、２５℃で６か月間保存した後に、視覚評価によって、及び目に見えない粒子（ＳＶＰ）の数を測定することによって評価された（いずれも一般的方法に記載されているように）。

２５℃で６か月間保存した後、配合物９－０１は目に見える粒子をほとんど含んでいなかった。目に見えない粒子の数が表１６Ｂに示される。

ＵＳＰ＜７８８＞「注射剤中の粒子状物質」１１（Ｐｈ．Ｅｕｒ．２．９．１９と調和）では、１００ｍＬ未満の調製物が、光遮蔽（一般的方法のＨＩＡＣ法など）によって測定して、１０μｍ以上の粒子が容器あたり６０００個以下、及び２５μｍ以上の粒子が容器あたり６００個以下含まれることが求められている。従って、長期保存後の配合物９－０１は、目に見えない粒子に必要な上限を大幅に下回っていて、優れた保存安定性を示している。

実施例１０－ＰＲＯＴＥＩＮ－１の安定性に関する配合物成分の濃度を評価する実験計画（ＤＯＥ）研究

ＰＲＯＴＥＩＮ－１の安定性に対するタンパク質、緩衝液、及びポロキサマー界面活性剤の濃度変化の影響は、一般的方法に記載されているように、ＳＥＣ（方法２）を使用して、配合物中の高分子量種の生成比率を追跡することによって評価された。５℃で１２か月後のさまざまな配合物におけるＨＭＷＳ生成比率が表１７に示される

試験されたすべての配合物は、良好な保存安定性を示した。配合物ＲＦ０８とＲＦ０２、ＲＦ０１とＲＦ１１、ＲＦ１５とＲＦ０９、及びＲＦ１６とＲＦ０５を比較すると、タンパク質濃度を下げると安定性がわずかに改善されることが分かる。配合物ＲＦ０８及びＲＦ０１をＲＦ１５及びＲＦ１６と比較し、配合物ＲＦ０２及びＲＦ１１をＲＦ０９及びＲＦ０５と比較すると、緩衝液（トリス）濃度が低いと安定性がわずかに改善するが、より高い１０ｍＭの緩衝液（トリス）濃度でも、良好な安定性を有する配合物が得られることが分かる。最後に、ポロキサマー濃度を０．０３％から０．１７％に上昇させた場合の保存安定性への影響は最小限であった。

比較例１１－３０℃での免疫グロブリンＧ１（ＩｇＧ１）の保存安定性に対する緩衝液濃度、張性修飾剤の電荷、及び中性アミノ酸の効果

ＩｇＧ１（１００ｍｇ／ｍｌ）の安定性に対する緩衝液濃度及び張性修飾剤の電荷の効果を調べた。クエン酸緩衝液を試験した。塩化ナトリウム（１５０ｍＭ）を荷電張性修飾剤として使用し、グリセロール（３００ｍＭ）を非荷電張性修飾剤として使用した。１ｍＭ緩衝液及びグリセロール（３００ｍＭ）の存在下で、ＩｇＧ１の安定性に対するプロリン及びグリシン（５０ｍＭ）の効果も調べた。試験されたすべての配合物にはポリソルベート８０（０．２ｍｇ／ｍｌ）が含まれており、ｐＨ６．０に調整された。表１８は、試験された配合物を要約する。すべての配合物に３０℃で８週間ストレスを与えた。ＩｇＧ１の安定性は、ＳＥＣ（方法１）を使用して高分子量種の生成比率を追跡することによって追跡された。

試験されたすべての配合物は、３０℃で保存後の視覚試験に合格した。３０℃で保存後の配合物８－０１～８－０８のＨＭＷＳ生成比率が表１９に示される。ＨＭＷＳ生成比率は、塩化ナトリウムの存在下とグリセロールの存在下の両方で緩衝液濃度の増加とともに低下した（配合物８－０１と８－０３を比較、及び配合物８－０４と８－０６を比較）。クエン酸濃度が低い場合（１又は５ｍＭ）、配合物のより高いイオン強度で安定性がわずかに高くなる傾向があった（配合物８－０１と配合物８－０４を比較、及び配合物８－０２と配合物８－０５を比較））。この順序は、クエン酸濃度が高い（２０ｍＭ）場合には逆転した（配合物８－０３と配合物８－０６を比較）が、この場合、両方の配合物のイオン強度は７０ｍＭを超えていた。中性アミノ酸（プロリン又はグリシン）の存在により、ＨＭＷＳ生成比率がごくわずかに増加した（配合物８－０４と配合物８－０７及び８－０８を比較）。

実施例の概要

実施例２～１０のデータは、ＰＲＯＴＥＩＮ－１などの本明細書で定義される本発明の工学作成二量体タンパク質の組成物が、中性アミノ酸を用いて低イオン強度で配合された場合に安定であることを示す。組成物のイオン強度は、低い緩衝液濃度を使用することによって（又は緩衝液をまったく使用しないことによって）、及び荷電張性修飾剤の代わりに非荷電張性修飾剤を使用することによって、適切に低く保たれる。

これらのデータを比較例１１と比較すると、この挙動は試験した４本鎖抗体（ＩｇＧ１型）によって示される挙動とは大きく異なることが分かる。後者は、より高い緩衝液濃度、場合によってはより高いイオン強度でより安定であることが判明し、また、中性アミノ酸の存在下で不安定化することも判明した。

本発明は、理論に制限されるものではないが、不自然な疎水性パッチをスクリーニングするために協調して機能し、並びに不自然に露出した不安定部位でのプロトン交換の速度を最小限に抑えると考えられる組成の特徴を組み合わせており、その結果、ＰＲＯＴＥＩＮ－１などの本発明の工学作成された二量体タンパク質の安定性をもたらす。

本明細書及び以下の特許請求の範囲全体を通じて、文脈上別段の定めがない限り、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」という単語、並びに「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」及び「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」などの変形は、記載された整数、工程、整数の群、又は工程の群を包含することを意味すると理解されるが、その他の整数、工程、整数の群、又は工程の群を除外するものではない。

本発明の明細書全体を通じて言及されるすべての特許、特許出願、及び参考文献は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

本発明は、好適な群及びより好適な群と、適切な基及びより適切な群と、上述した群の実施態様とのすべての組み合わせを包含する。

Claims (55)

1. 以下を含む、ｐＨが６．０～８．０の範囲にある水溶液組成物：
   ・ 二量体タンパク質の各単量体が、ヒト免疫グロブリンＦｃポリペプチド又は免疫グロブリンＦｃポリペプチド由来のポリペプチドに作動可能に連結された、少なくとも１つのヒトセルピンポリペプチドを含む、工学作成二量体タンパク質；
   ・ 任意選択的に、４．０～１０．０の範囲のｐＫａを有する少なくとも１つのイオン化基を有する物質であり、そのｐＫａが前記組成物のｐＨの２ｐＨ単位以内である、１つ又はそれ以上の緩衝液；
   ・ 中性アミノ酸；及び
   ・ 非荷電張性修飾剤、
   ここで、前記緩衝液は前記組成物中に０～１０ｍＭの総濃度で存在し、及びここで、前記工学作成二量体タンパク質の寄与を除いた前記組成物の総イオン強度は３０ｍＭ未満である。
2. 前記ヒトセルピンポリペプチドが、ヒトアルファ－１アンチトリプシン（ＡＡＴ）ポリペプチドであるか、又はヒトＡＡＴポリペプチドに由来する、請求項１に記載の水溶液組成物。
3. 前記二量体タンパク質の各単量体が１つのヒトセルピンポリペプチドを含む、請求項１又は２に記載の水溶液組成物。
4. 前記ヒトセルピンポリペプチドが配列番号１又は２の配列を有する、請求項２又は３に記載の水溶液組成物。
5. 前記ヒト免疫グロブリンＦｃポリペプチド又は免疫グロブリンＦｃポリペプチド由来のポリペプチドが修飾ヒトＩｇＧ４Ｆｃポリペプチドである、請求項１～４のいずれか１項に記載の水溶液組成物。
6. 前記ヒト免疫グロブリンＦｃポリペプチド又は免疫グロブリンＦｃポリペプチド由来のポリペプチドが、修飾ヒトＩｇＧ４Ｆｃポリペプチドであり、かつ配列番号２８～４３のいずれか１つに記載の配列を有する、請求項５に記載の水溶液組成物。
7. 前記二量体タンパク質の各単量体が配列番号５６の配列を有する、請求項１～６のいずれか１項に記載の水溶液組成物。
8. 前記タンパク質が、１～４００ｍｇ／ｍｌ、例えば１０～２００ｍｇ／ｍｌ、例えば２０～１００ｍｇ／ｍｌ、例えば３０～６０ｍｇ／ｍｌ、例えば約３５ｍｇ／ｍｌ、又は約５０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する、請求項１～７のいずれか１項に記載の水溶液組成物。
9. 緩衝液が、０．１～１０ｍＭの総濃度、例えば０．５～１０ｍＭ、例えば１～１０ｍＭ、例えば１～８ｍＭ、例えば１～６ｍＭ、例えば２～６ｍＭ、例えば２～５ｍＭ、例えば３～５ｍＭで存在する、請求項１～８のいずれか１項に記載の水溶液組成物。
10. 実質的に緩衝液を含まない、請求項１～８のいずれか１項に記載の水溶液組成物。
11. 前記緩衝液が、組成物のｐＨの１単位以内のｐＫ_ａを有するイオン化基を含む、請求項１～９のいずれか１項に記載の水溶液組成物。
12. 前記緩衝液が、クエン酸塩、ヒスチジン、マレイン酸塩、亜硫酸塩、アスパルテーム、アスパラギン酸塩、グルタミン酸塩、酒石酸塩、アデニン、コハク酸塩、アスコルビン酸塩、安息香酸塩、酢酸フェニル、没食子酸塩、シトシン、ｐ－アミノ安息香酸、ソルビン酸塩、酢酸塩、プロピオン酸塩、アルギン酸塩、尿酸塩、２－（Ｎ－モルホリノ）エタンスルホン酸、重炭酸塩、ビス（２－ヒドロキシエチル）イミノトリス（ヒドロキシメチル）メタン、Ｎ－（２－アセトアミド）－２－イミノ二酢酸、２－［（２－アミノ－２－オキソエチル）アミノ］エタンスルホン酸、ピペラジン、Ｎ，Ｎ’－ビス（２－エタンスルホン酸）、リン酸塩、Ｎ，Ｎ－ビス（２－ヒドロキシエチル）－２－アミノエタンスルホン酸、３－［Ｎ，Ｎ－ビス（２－ヒドロキシエチル）アミノ］－２－ヒドロキシプロパンスルホン酸、トリエタノールアミン、ピペラジン－Ｎ，Ｎ’－ビス（２－ヒドロキシプロパンスルホン酸）、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（トリス）、Ｎ－トリス（ヒドロキシメチル）グリシン、及びＮ－トリス（ヒドロキシメチル）メチル－３－アミノプロパンスルホン酸、及びこれらの塩、並びにこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１～９及び１１のいずれか１項に記載の水溶液組成物。
13. 前記緩衝液が、クエン酸塩、ヒスチジン、マレイン酸塩、酒石酸塩、安息香酸塩、酢酸塩、重炭酸塩、リン酸塩、及びトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（トリス）からなる群から選択される、例えばリン酸塩とトリスから選択される、請求項１２に記載の水溶液組成物。
14. 前記非荷電張性修飾剤が、ポリオール、糖類（例えば、単糖類及び二糖類）、及び糖アルコールからなる群から選択される、請求項１～１３のいずれか１項に記載の水溶液組成物。
15. 前記非荷電張性修飾剤が、グリセロール、１，２－プロパンジオール、マンニトール、ソルビトール、グルコース、スクロース、トレハロース、ＰＥＧ３００、及びＰＥＧ４００からなる群から選択され、特に、グリセロール、マンニトール、スクロース、及びトレハロースから選択される、請求項１４に記載の水溶液組成物。
16. 非荷電張性修飾剤として二糖を含む、請求項１４又は１５に記載の水溶液組成物。
17. 非荷電張性修飾剤としてスクロース及び／又はトレハロース、特にトレハロースを含む、請求項１６に記載の水溶液組成物。
18. 前記非荷電張性修飾剤、又は複数の張性修飾剤の組み合わせの総濃度が、５０～１０００ｍＭ、例えば２００～６００ｍＭ、２００～５００ｍＭであるか、又は前記非荷電張性修飾剤、又は複数の張性修飾剤の組み合わせの総濃度が、５０～５００ｍＭ、例えば１００～４００ｍＭ、１５０～３５０ｍＭ、２００～３００ｍＭ、又は約２５０ｍＭである、請求項１～１７のいずれか１項に記載の水溶液組成物。
19. 前記組成物のオスモル濃度が、２００～５００ｍＯｓｍ／Ｌ、例えば約３００ｍＯｓｍ／Ｌであるか、又は前記組成物のオスモル濃度が、３００～５００ｍＯｓｍ／Ｌ、例えば約４００～４６０ｍＯｓｍ／Ｌである、請求項１～１７のいずれか１項に記載の水溶液組成物。
20. グリシン、メチオニン、プロリン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、セリン、スレオニン、アスパラギン、及びグルタミンから選択される中性アミノ酸を含む、請求項１～１９のいずれか１項に記載の水溶液組成物。
21. 前記中性アミノ酸が、グリシン、メチオニン、及びプロリンから選択される、請求項２０に記載の水溶液組成物。
22. 中性アミノ酸としてプロリンを含む、請求項２０に記載の水溶液組成物。
23. 中性アミノ酸としてグリシンを含む、請求項２０に記載の水溶液組成物。
24. 中性アミノ酸としてプロリン及びメチオニンを含む、請求項２０に記載の水溶液組成物。
25. 中性アミノ酸としてグリシン及びメチオニンを含む、請求項２０に記載の水溶液組成物。
26. 前記組成物中の１つ又はそれ以上の中性アミノ酸の総濃度が、２０～６００ｍＭ、例えば２０～５００ｍＭ、例えば２０～４００ｍＭ、例えば２０～３００ｍＭ、例えば５０～３００ｍＭである、請求項１～２５のいずれか１項に記載の水溶液組成物。
27. 前記組成物中の１つ又はそれ以上の中性アミノ酸の総濃度が、５０～２００ｍＭ、１００～２００ｍＭ、又は１００～１５０ｍＭである、請求項１～２５のいずれか１項に記載の水溶液組成物。
28. 前記工学作成二量体タンパク質の寄与を除いた前記組成物の総イオン強度が２０ｍＭ未満である、請求項１～２７のいずれか１項に記載の水溶液組成物。
29. 前記工学作成二量体タンパク質の寄与を除いた前記組成物の総イオン強度が１０ｍＭ未満である、請求項２８に記載の水溶液組成物。
30. 前記ｐＨが６．８～７．８、例えば７．０～７．８、７．１～７．６、７．１～７．５、７．２～７．５、７．１～７．４、７．２～７．３であるか、又は約７．２若しくは約７．３である、請求項１～２９のいずれか１項に記載の水溶液組成物。
31. 非イオン界面活性剤を含む、請求項１～３０のいずれか１項に記載の水溶液組成物。
32. 前記非イオン性界面活性剤が、アルキルグリコシド、ポリソルベート、ポリエチレングリコールのアルキルエーテル、ポリエチレングリコールとポリプロピレングリコールのブロックコポリマー（ポロキサマー）、及びポリエチレングリコールのアルキルフェニルエーテルからなる群から選択される、請求項３１に記載の水溶液組成物。
33. 前記非イオン性界面活性剤が、ポリソルベート２０又はポリソルベート８０などのポリソルベートである、請求項３２に記載の水溶液組成物。
34. 前記非イオン性界面活性剤が、ポリエチレングリコールとポリプロピレングリコールのブロックコポリマー（ポロキサマー）、例えばポロキサマー１８８である、請求項３２に記載の水溶液組成物。
35. 前記非イオン性界面活性剤が、１０～２０００μｇ／ｍｌの濃度、例えば５０～１０００μｇ／ｍｌ、例えば１００～５００μｇ／ｍｌ、例えば約２００μｇ／ｍｌで存在するか、又は前記非イオン性界面活性剤が、２５０～１５００μｇ／ｍｌの濃度、例えば７５０～１２５０μｇ／ｍｌ、例えば約１０００μｇ／ｍｌで存在する、請求項３１～３４のいずれか１項に記載の水溶液組成物。
36. フェノール系又はベンジル系防腐剤等の防腐剤を含有する、請求項１～３５のいずれか１項に記載の水溶液組成物。
37. 前記フェノール系又はベンジル系防腐剤が、フェノール、ｍ－クレゾール、クロロクレゾール、ベンジルアルコール、プロピルパラベン、及びメチルパラベンからなる群から選択される、請求項３６に記載の水溶液組成物。
38. 前記防腐剤が、１０～１００ｍＭの濃度、例えば２０～８０ｍＭ、例えば２５～５０ｍＭで存在する、請求項３６又は３７に記載の水溶液組成物。
39. 治療に使用される組成物である、請求項１～３８のいずれか１項に記載の水溶液組成物。
40. 医薬組成物である、請求項１～３８のいずれか１項に記載の水溶液組成物。
41. 請求項１～４０のいずれか１項に記載の水溶液組成物を投与することを含む、それを必要とする被験体において、異常なセリンプロテアーゼの発現又は活性に関連する疾患又は障害の症状を治療又は緩和する方法。
42. 前記被験体に請求項１～４０のいずれか１項に記載の水溶液組成物を投与することを含む、それを必要とする被験体において、感染のリスクを低減しながら、炎症又は炎症性疾患若しくは障害の症状を治療又は緩和する方法。
43. 前記被験体に請求項１～４０のいずれか１項に記載の水溶液組成物を投与することを含む、それを必要とする前記被験体において、感染のリスクを低減する方法。
44. それを必要とする被験体に請求項１～４０のいずれか１項に記載の水溶液組成物を投与することを含む、前記被験体のＡＡＴ欠損症の症状を治療又は緩和する方法であって、前記ヒトセルピンポリペプチドが、ヒトアルファ－１アンチトリプシン（ＡＡＴ）ポリペプチドであるか又はヒトＡＡＴポリペプチドに由来する、方法。
45. それを必要とする被験体において、異常なセリンプロテアーゼの発現又は活性に関連する疾患又は障害の症状を治療又は緩和する方法において使用するための、請求項１～４０のいずれか１項に記載の水溶液組成物。
46. それを必要とする被験体において、感染のリスクを低減しながら、炎症又は炎症性疾患若しくは障害の症状を治療又は緩和する方法において使用するための、請求項１～４０のいずれか１項に記載の水溶液組成物。
47. それを必要とする被験体において、感染のリスクを低減する方法において使用するための、請求項１～４０のいずれか１項に記載の水溶液組成物。
48. それを必要とする被験体において、ＡＡＴ欠損症の症状を治療又は緩和する方法において使用するための、請求項１～４０のいずれか１項に記載の水溶液組成物であって、前記ヒトセルピンポリペプチドが、ヒトアルファ－１アンチトリプシン（ＡＡＴ）ポリペプチドであるか又はヒトＡＡＴポリペプチドに由来する、上記組成物。
49. それを必要とする被験体において、異常なセリンプロテアーゼの発現又は活性に関連する疾患又は障害の症状を治療又は緩和する薬剤の製造のための、請求項１～４０のいずれか１項に記載の水溶液組成物の使用。
50. それを必要とする被験体において、感染のリスクを低減しながら、炎症又は炎症性疾患若しくは障害の症状を治療又は緩和する薬剤の製造のための、請求項１～４０のいずれか１項に記載の水溶液組成物の使用。
51. それを必要とする被験体において感染のリスクを低減する薬剤の製造のための、請求項１～４０のいずれか１項に記載の水溶液組成物の使用。
52. それを必要とする被験体において、ＡＡＴ欠損症の症状を治療又は緩和する薬剤の製造のための、請求項１～４０のいずれか１項に記載の水溶液組成物の使用であって、前記ヒトセルピンポリペプチドが、ヒトアルファ－１アンチトリプシン（ＡＡＴ）ポリペプチドであるか又はヒトＡＡＴポリペプチドに由来する、使用。
53. 前記炎症性疾患又は障害が、以下から選択される、請求項４２、４６及び５０のいずれか１項に記載の方法、使用のための水溶液組成物、又は使用：アルファ－１アンチトリプシン（ＡＡＴ）欠損症、肺気腫、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、アレルギー性喘息、嚢胞性線維症、肺癌、虚血－再灌流傷害、心臓移植後の虚血／再灌流傷害、心筋梗塞、関節リウマチ、敗血症性関節炎、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、クローン病、乾癬、Ｉ型及び／又はＩＩ型糖尿病、肺炎、敗血症、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、創傷治癒、全身性エリテマトーデス、及び多発性硬化症。
54. 前記感染症が、細菌感染症、真菌感染症、及びウイルス感染症から選択される、請求項４２、４３、４６、４７、５０及び５１のいずれか１項に記載の方法、使用のための水溶液組成物、又は使用。
55. 前記被験体がヒトである、請求項４１～５４のいずれか１項に記載の方法、使用のための水溶液組成物、又は使用。