JP2024501659A - 急性呼吸窮迫症候群を治療又は防止するための方法 - Google Patents

急性呼吸窮迫症候群を治療又は防止するための方法 Download PDF

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Abstract

本開示は、ＣＤ１３１に結合しＩＬ－３、ＩＬ－５、及びＧＭ－ＣＳＦによるシグナル伝達を中和する化合物を使用して、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）を治療又は防止する方法に関する。本開示はまた、ＡＲＤＳの治療又は防止における使用のための化合物、及びＡＲＤＳの治療又は防止のための薬の製造におけるそのような化合物の使用に関する。【選択図】なし

Description

関連出願データ
本出願は、２０２０年１２月２１日に出願された「Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ ｔｒｅａｔｉｎｇ ｏｒ ｐｒｅｖｅｎｔｉｎｇ ａｃｕｔｅ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｄｉｓｔｒｅｓｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ」と題された豪国特許出願公開第２０２０／９０４７５５、及び２０２１年１０月２０日に出願された「Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ ｔｒｅａｔｉｎｇ ｏｒ ｐｒｅｖｅｎｔｉｎｇ ａｃｕｔｅ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｄｉｓｔｒｅｓｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ」と題された豪国特許出願公開第２０２１／９０３３６２号の優先権を主張する。両方の出願の全体の内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
配列表
本出願は、電子形態の配列表とともに出願される。配列表の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
本開示は、急性呼吸窮迫症候群を治療又は防止する方法に関する。
急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）は、いくつかの全身性障害及び肺への直接損傷の、しばしば生命を脅かす重症な合併症である。ＡＲＤＳは、主に多臓器不全の結果として、高い死亡率に関連する。流体が、肺の肺胞において蓄積して、血流に達する酸素が少なくなり、これにより、臓器が機能するために必要な酸素が臓器から奪われたときに、ＡＲＤＳは、発生する。ＡＲＤＳの症状は、重症な息切れ、努力性の異常に急速な呼吸、低血圧、並びに混乱及び極度な疲労を含み、これらは、通常、本来の疾患又は外傷の数時間から数日後以内に発症する。
医療技術における数十年にわたる研究及び進歩にもかかわらず、ＡＲＤＳ関連死亡率は、依然として高く、ＡＲＤＳの臨床経過を有効に改善する薬理学的療法がない。例えば、大きい治験において失敗した薬物候補は、少なくとも、グルココルチコイド、アルプロスタジル、界面活性剤、ケトコナゾール、Ｎ－アセチルシステイン、プロシステイン、リソフィリン、及び部位不活性化組換え因子ＶＩＩａを含む。現在の標準治療は、支持療法、例えば、酸素供給、機械的換気、流体管理、及び腹臥位に制限されている。
したがって、ＡＲＤＳを治療及び防止するための新しい介入の必要性が依然としてある。
本発明を成す際に、本発明者らは、ＣＤ１３１（β共通受容体）を、ＡＲＤＳにおける薬理学的介入のための潜在的標的として同定した。本発明者らは、ＣＤ１３１に結合しインターロイキン（ＩＬ）３、ＩＬ－５、及び顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）のシグナル伝達を阻害する抗体が、ＡＲＤＳの動物モデルにおいて、肺炎症のいくつかの尺度を低減することに成功したことを見出した。これらの知見は、ＣＤ１３１に結合しかつ／又はＩＬ－３、ＩＬ－５、及びＧＭ－ＣＳＦのシグナル伝達を阻害する化合物を投与することによって、対象のＡＲＤＳを治療又は防止する方法のための基礎を提供する。
したがって、一例では、本開示は、対象のＡＲＤＳを治療又は防止するための方法であって、対象に、ＩＬ－３、ＩＬ－５、及びＧＭ－ＣＳＦによるシグナル伝達を中和する１つ以上の化合物を投与することを含む、方法を提供する。同様に、本開示は、対象のＡＲＤＳの治療又は防止における使用のための、ＩＬ－３、ＩＬ－５、及びＧＭ－ＣＳＦによるシグナル伝達を中和する１つ以上の化合物を提供する。本開示はまた、ＡＲＤＳを治療又は防止するための薬の製造における、ＩＬ－３、ＩＬ－５、及びＧＭ－ＣＳＦによるシグナル伝達を中和する１つ以上の化合物の使用を提供する。
一例では、化合物は、
ＩＬ－５、
ＩＬ－３、
ＧＭ－ＣＳＦ、
ＩＬ－５受容体α（ＩＬ－５Ｒα）、
ＩＬ－３受容体α（ＩＬ－３Ｒα）、及び
ＧＭ－ＣＳＦ受容体α（ＧＭ－ＣＳＦＲα）のうちの１つ以上に結合する。
例えば、方法は、ＩＬ－３に結合しＩＬ－３によるシグナル伝達を中和する化合物、例えば、抗体、及びＧＭ－ＣＳＦに結合しＧＭ－ＣＳＦによるシグナル伝達を中和する化合物、例えば、抗体、及びＩＬ－５に結合しＩＬ－５によるシグナル伝達を中和する化合物、例えば、抗体を投与することを含み得る。同様に、方法は、ＩＬ－３Ｒαに結合しＩＬ－３によるシグナル伝達を中和する化合物、例えば、抗体、及びＧＭ－ＣＳＦＲαに結合しＧＭ－ＣＳＦによるシグナル伝達を中和する化合物、例えば、抗体、及びＩＬ－５Ｒαに結合しＩＬ－５によるシグナル伝達を中和する化合物、例えば、抗体を投与することを含み得る。あるいは、方法は、化合物の組み合わせを投与することであって、当該化合物のうちの１つ以上が、前述のサイトカインのうちの１つ以上に結合し、当該化合物のうちの１つ以上が、前述の受容体のうちの１つ以上に結合する、化合物の組み合わせを投与することを含み得る。
別の例では、方法は、多重特異性化合物、例えば、抗体を投与することを含む。例えば、多重特異性化合物は、三重特異性であり、ＩＬ－３又はＩＬ－３Ｒαに結合し、ＩＬ－３によるシグナル伝達を阻害し、ＧＭ－ＣＳＦ又はＧＭ－ＣＳＦＲαに結合し、ＧＭ－ＣＳＦによるシグナル伝達を阻害し、ＩＬ－５又はＩＬ－５Ｒαに結合し、ＩＬ－５によるシグナル伝達を阻害する。
別の例では、方法は、二重特異性分子、例えば、抗体、及び単一特異性化合物、例えば、抗体を投与することを含む。例えば、二重特異性分子は、ＩＬ－３又はＩＬ－３Ｒαに結合し、ＩＬ－３によるシグナル伝達を阻害し、ＧＭ－ＣＳＦ又はＧＭ－ＣＳＦＲαに結合し、ＧＭ－ＣＳＦによるシグナル伝達を阻害する。この場合、単一特異性化合物は、ＩＬ－５又はＩＬ－５Ｒαに結合し、ＩＬ－５によるシグナル伝達を阻害する。化合物の他の組み合わせは、当業者には明らかである。
別の例では、本開示は、対象のＡＲＤＳを防止又は治療するための方法であって、対象に、ＣＤ１３１に結合しＩＬ－３、ＩＬ－５、及びＧＭ－ＣＳＦによるシグナル伝達を中和する化合物を投与することを含む、方法を提供する。
本開示はまた、対象のＡＲＤＳの治療又は防止における使用のための、ＣＤ１３１に結合しＩＬ－３、ＩＬ－５、及びＧＭ－ＣＳＦによるシグナル伝達を中和する化合物を、対象に提供する。本開示はまた、対象のＡＲＤＳを治療又は防止するための薬の製造における、ＣＤ１３１に結合しＩＬ－３、ＩＬ－５、及びＧＭ－ＣＳＦによるシグナル伝達を中和する化合物の使用を提供する。
ＣＤ１３１に結合しＩＬ－３、ＩＬ－５、及びＧＭ－ＣＳＦシグナル伝達を阻害する化合物は、任意の基礎状態に関連するＡＲＤＳを治療又は防止するために、本開示の方法により使用され得る。いくつかの例では、ＡＲＤＳは、
ａ）感染、
ｂ）異物の吸入又は吸引、
ｃ）身体的外傷、及び
ｄ）炎症性疾患のうちの１つ以上に関連する。
一例では、ＡＲＤＳは、ウイルス感染に関連する。一例では、ＡＲＤＳは、細菌感染に関連する。一例では、ＡＲＤＳは、真菌感染に関連する。一例では、ＡＲＤＳは、敗血症に関連する。
一例では、ＡＲＤＳは、コロナウイルス感染に関連する。
一例では、ＡＲＤＳは、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣＯＶ）感染に関連する。一例では、ＡＲＤＳは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染に関連する。したがって、いくつかの例では、対象は、コロナウイルス疾患２０１９（ＣＯＶＩＤ－１９）を有する。特に、重症ＣＯＶＩＤ－１９は、しばしば、ＡＲＤＳをもたらす。本開示の方法は、重症ＣＯＶＩＤ－１９対象のＡＲＤＳを治療又は防止するために使用され得る。したがって、いくつかの例では、対象は、重症ＣＯＶＩＤ－１９を有する。
いくつかの例では、ＡＲＤＳは、異物の吸入又は吸引に関連する。例えば、高濃度の煙又は化学煙霧を呼吸することは、誤嚥又は溺水エピソードがもたらし得るように、ＡＲＤＳをもたらし得る。
いくつかの例では、ＡＲＤＳは、重症肺炎に関連する。肺炎の重症例は通常、肺の全ての５つの葉に影響し、ＡＲＤＳをもたらし得る。したがって、いくつかの例では、対象は、間質性肺炎を有する。
いくつかの例では、ＡＲＤＳは、身体的外傷に関連する。例えば、頭部、胸部、及び他の重症損傷は、ＡＲＤＳをもたらし得る。転倒又は自動車衝突などの事故は、肺又は呼吸を制御する脳の一部分を直接損傷し得、それによって、ＡＲＤＳをもたらす。いくつかの例では、ＡＲＤＳは、肺損傷に関連する。いくつかの例では、ＡＲＤＳは、脳損傷に関連する。いくつかの例では、ＡＲＤＳは、熱傷損傷に関連する。
いくつかの例では、ＡＲＤＳは、心臓手術などの手術に関連する。例えば、治療されている対象は、心臓手術、例えば、心肺バイパス手術を受けたことがある又は受けることになる。
いくつかの例では、ＡＲＤＳは、炎症性疾患に関連する。例えば、膵炎は、他の重症炎症性疾患がもたらし得るように、ＡＲＤＳをもたらし得る。いくつかの例では、ＡＲＤＳは、輸血に関連する。
いくつかの例では、対象は、ＡＲＤＳを有する。
いくつかの例では、対象は、ＡＲＤＳのベルリン定義を満たす。したがって、いくつかの例では、対象は、
ａ）臨床的発作又は初期呼吸器症状の１週間以内のＡＲＤＳの発症、
ｂ）少なくとも５ｃｍの持続的気道陽圧（ＣＰＡＰ）又は終末呼気陽圧（ＰＥＥＰ）において、３００ｍｍＨｇ以下の動脈血酸素分圧対吸入酸素濃度の比（ＰａＯ２／ＦｉＯ２比）によって判定された場合、急性低酸素性呼吸不全、
ｃ）胸部Ｘ線写真における両側性陰影が、浸出液、硬化、又は無気肺によって完全に説明されないこと、及び
ｄ）呼吸不全が、心不全又は流体過剰によって完全に説明されないことを有する。
本開示の方法のいくつかの例では、ＡＲＤＳは、軽症ＡＲＤＳである。いくつかの例では、ＡＲＤＳは、中等症ＡＲＤＳである。いくつかの例では、ＡＲＤＳは、重症ＡＲＤＳである。ＡＲＤＳの重症度は、ベルリン定義に従って、
（ｉ）軽症ＡＲＤＳ：少なくとも５ｃｍのＣＰＡＰ又はＰＥＥＰにおいて、２００～３００ｍｍＨｇのＰａＯ２／ＦｉＯ２、
（ｉｉ）中等症ＡＲＤＳ：少なくとも５ｃｍのＰＥＥＰにおいて、１００～２００ｍｍＨｇのＰａＯ２／ＦｉＯ２、及び
（ｉｉｉ）重症ＡＲＤＳ：少なくとも５ｃｍのＰＥＥＰにおいて、１００ｍｍＨｇ以下のＰａＯ２／ＦｉＯ２として分類され得る。
有利には、本開示の方法は、既存のＡＲＤＳの治療に加えて、ＡＲＤＳの発症を防止するために使用され得る。したがって、いくつかの例では、対象は、ＡＲＤＳを有さない。
いくつかの例では、対象は、ＡＲＤＳを発症するリスクがある。ＡＲＤＳを発症するリスクがある対象を同定する方法は、当業者に既知であり、本明細書に記載される方法を含む。
いくつかの例では、対象は、
ａ）１分当たり３０回超の呼吸の呼吸頻度、
ｂ）室内空気において９３％以下の酸素飽和度（ＳｐＯ２）、
ｃ）３００ｍｍＨｇ未満の動脈血酸素分圧対吸入酸素濃度の比（ＰａＯ２／ＦｉＯ２）、
ｄ）２１８未満のＳｐＯ２／ＦｉＯ２比、及び
ｅ）５０％超の量のＸ線写真肺浸潤のうちの１つ以上又は全てを有する。
いくつかの例では、上記の基準は、対象がＡＲＤＳを発症するリスクがあるかどうかを評価するために使用され得る。
いくつかの例では、対象は、ＣＤ１３１に結合する化合物を投与する時点で、高流量酸素療法（ＨＦＯＴ）又は非侵襲的換気（ＮＩＶ）を受け取っていない。
いくつかの例では、ＣＤ１３１に結合する化合物は、ＡＲＤＳの１つ以上の症状の重症度を低減する又はこれらの発症を防止するのに十分な量で投与される。
一例では、ＣＤ１３１に結合する化合物は、気管内挿管又は気管内挿管前の死を防止するのに十分な量で投与される。気管内挿管は、チューブ、すなわち気管内チューブを、対象の口を介して気道中に挿入して、これにより、対象を、機械的換気装置に配置することができるプロセスである。したがって、本開示の方法は加えて、ＡＲＤＳを有する対象の機械的換気を防止又は低減する方法であって、対象に、ＣＤ１３１に結合しＩＬ－３、ＩＬ－５、及びＧＭ－ＣＳＦによるシグナル伝達を中和する化合物を投与することを含む、方法を提供する。
いくつかの例では、ＣＤ１３１に結合する化合物は、
ａ）換気装置なしでの対象の生存日数を増加させること、
ｂ）対象の入院期間（ＬＯＳ）を減少させること、
ｃ）８点Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ａｌｌｅｒｇｙ ａｎｄ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅ（ＮＩＡＩＤ）順序尺度で評価された場合、対象の臨床状態を改善すること、
ｄ）持続的気道陽圧（ＣＰＡＰ）又はバイレベル気道陽圧（ＢｉＰＡＰ）の使用を低減又は防止すること、
ｅ）高流量鼻カニューレ（ＨＦＮＣ）の使用を低減又は防止すること、
ｆ）体外膜型酸素供給（ＥＣＭＯ）の使用を低減又は防止すること、及び
ｇ）対象の連続的臓器不全評価（ＳＯＦＡ）スコアを低減する又はこの増加を防止することのうちの１つ以上又は全てを達成するのに十分な量で投与される。
いくつかの例では、ＣＤ１３１に結合する化合物は、対象の肺における炎症を低減する又はこの増加を防止するのに十分な量で投与される。一例では、ＣＤ１３１に結合する化合物は、肺機能を増強するのに十分な量で投与される。
いくつかの例では、ＣＤ１３１に結合する化合物の投与は、
ａ）対象の血液中の好中球の量、
ｂ）対象の血液中の単球の量、
ｃ）対象の肺における好中球蓄積、
ｄ）対象の肺におけるマクロファージ蓄積、
ｅ）対象の肺の炎症、
ｆ）対象の肺の浮腫、
ｇ）対象の肺におけるネトーシス、
ｈ）対象の肺の気管支肺胞液（ＢＡＬＦ）中のミエロペルオキシダーゼ活性、
ｉ）対象の肺のＢＡＬＦ中のタンパク質の量、
ｊ）対象の肺のＢＡＬＦ中のｄｓＤＮＡの量、及び
ｋ）対象の肺損傷スコアのうちの１つ以上若しくは全てを低減する又はこれらのうちの１つ以上若しくは全ての増加を防止する。
いくつかの例では、ＣＤ１３１に結合する化合物の投与は、対象の肺におけるマクロファージ蓄積を低減する又はこの増加を防止する。例えば、マクロファージは、肺胞マクロファージ、単球由来の滲出性マクロファージ、及び／又は血中単球である。
いくつかの例では、ＣＤ１３１に結合する化合物の投与は、対象の肺における好酸球蓄積を低減する又はこの増加を防止する。
いくつかの例では、ＣＤ１３１に結合する化合物は、対象のＢＡＬＦ中の総細胞計数及び／若しくは総タンパク質を低減する又はこれらの増加を防止するのに十分な量で投与される。いくつかの例では、ＣＤ１３１に結合する化合物は、対象のＢＡＬＦ中に存在する好中球のレベルを低減する又はこの増加を防止するのに十分な量で投与される。
いくつかの例では、ＣＤ１３１に結合する化合物は、対象のＢＡＬＦ中の好中球エラスターゼ及び／又はミエロペルオキシダーゼ活性のレベルを低減する又はこの増加を防止するのに十分な量で投与される。
いくつかの例では、ＣＤ１３１に結合する化合物は、Ｇ－ＣＳＦ、プラスミノーゲン活性化因子阻害因子－１（ＰＡＩ－１）、Ｄ－ダイマー、好中球エラスターゼ、ＡＧＥ可溶性受容体（ｓＲＡＧＥ）、インターフェロンガンマ（ＩＦＮ－γ）、インターロイキン１β（ＩＬ－１β）、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２ｐ７０、ＩＬ－１３、及び腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ－α）のうちのいずれか１つ以上若しくは全てのレベルを低減する又はこれらのうちのいずれか１つ以上若しくは全てのレベルの増加を防止するのに十分な量で投与される。これらのバイオマーカーは、治療の効力を評価するために又はＡＲＤＳを発症するリスクがある対象の同定を支援するために、使用され得る。
いくつかの例では、上記のタンパク質のレベルは、対象の肺において低減される又は対象の肺において増加することが防止される。いくつかの例では、上記のタンパク質のレベルは、対象の血液中で低減される又は対象の血液中で増加することが防止される。
いくつかの例では、ＣＤ１３１に結合する化合物は、Ｃ－Ｃモチーフケモカインリガンド２（ＣＣＬ２）、ＣＣＬ２４、及びＩＬ－１αのうちのいずれか１つ以上若しくは全てのレベルを低減する又はこれらのうちのいずれか１つ以上若しくは全てのレベルの増加を防止するのに十分な量で投与される。
いくつかの例では、上記のタンパク質のレベルは、対象の肺において低減される又は対象の肺において増加することが防止される。いくつかの例では、上記のタンパク質のレベルは、対象の血液中で低減される又は対象の血液中で増加することが防止される。
いくつかの例では、ＣＤ１３１に結合する化合物は、対象のケモカイン遺伝子発現のレベルを低減する又はこの増加を防止するのに十分な量で投与される。例えば、ＣＤ１３１に結合する化合物は、対象の単球／マクロファージケモカインＣｃｌ２遺伝子及び／又は好酸球ケモカインＣｃ１２４遺伝子の発現のレベルを低減する又はこの増加を防止するのに十分な量で投与される。
いくつかの例では、ＣＤ１３１に結合する化合物は、対象の炎症性サイトカイン遺伝子の発現のレベルを低減する又はこの増加を防止するのに十分な量で投与される。例えば、ＣＤ１３１に結合する化合物は、対象の炎症性サイトカインＩｌ１α遺伝子の発現のレベルを低減する又はこの増加を防止するのに十分な量で投与される。
いくつかの例では、上記の遺伝子の発現のレベルは、対象の肺において低減される又は対象の肺において増加することが防止される。いくつかの例では、上記の遺伝子の発現のレベルは、対象の血液細胞中で低減される又は対象の血液細胞中で増加することが防止される。
更に、「低減する」及び「の増加を防止する」という用語は、ＣＤ１３１に結合する化合物の投与前の対象における量又は対応する対照対象における量のいずれかに対して、上記で列挙される項目のうちのいずれかのより低い量を指すために、本明細書で使用されることが、当業者には理解されよう。例えば、対照対象は、ＣＤ１３１に結合する化合物ではなく、プラセボ及び／又は標準治療療法を受け取る対象であり得る。
いくつかの例では、ＣＤ１３１に結合しＩＬ－３、ＩＬ－５、及びＧＭ－ＣＳＦによるシグナル伝達を中和する化合物は、対象の血中酸素百分率の減少を防止する。
いくつかの例では、ＣＤ１３１に結合しＩＬ－３、ＩＬ－５、及びＧＭ－ＣＳＦによるシグナル伝達を中和する化合物は、化合物が投与されていない対象において観察される血中酸素百分率の減少と比較して、対象の血中酸素百分率の減少を低減する。
一例では、ＣＤ１３１に結合しＩＬ－３、ＩＬ－５、及びＧＭ－ＣＳＦによるシグナル伝達を中和する化合物が投与された対象の血中酸素百分率は、ＣＤ１３１に結合しＩＬ－３、ＩＬ－５、及びＧＭ－ＣＳＦによるシグナル伝達を中和する化合物が投与されていない対象の血中酸素百分率よりも、少なくとも約５％、又は約６％、又は約７％、又は約８％、又は約９％、又は約１０％、又は約１１％、又は約１２％、又は約１３％、又は約１４％、又は約１５％高い。
一例では、ＣＤ１３１に結合しＩＬ－３、ＩＬ－５、及びＧＭ－ＣＳＦによるシグナル伝達を中和する化合物が投与された対象の血中酸素百分率は、約８５％、又は約８６％、又は約８７％、又は約８８％、又は約８９％、又は約９０％、又は約９１％、又は約９２％、又は約９３％、又は約９４％、約９５％、又は約９６％、又は約９７％、又は約９８％、又は約９９％、又は約１００％である。
一例では、ＣＤ１３１に結合しＩＬ－３、ＩＬ－５、及びＧＭ－ＣＳＦによるシグナル伝達を中和する化合物が投与された対象の血中酸素百分率は、約９０％である。
一例では、ＣＤ１３１に結合しＩＬ－３、ＩＬ－５、及びＧＭ－ＣＳＦによるシグナル伝達を中和する化合物が投与された対象の血中酸素百分率は、約９２％である。
前述のもののそれぞれを評価するための方法は、当該技術分野で既知であり、かつ／又は本明細書に記載される。
いくつかの例では、上記で列挙される項目の量の低減若しくはこの増加の防止、又は血中酸素百分率の減少の防止は、ＣＤ１３１に結合する化合物の最初の投与の３０日以内に評価される。いくつかの例では、上記で列挙される項目の量の低減又はこの増加の防止は、ＣＤ１３１に結合する化合物の最初の投与の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１４、１７、２１、２４、又は２８日後に評価される。
一例では、ＣＤ１３１に結合しＩＬ－３、ＩＬ－５、及びＧＭ－ＣＳＦによるシグナル伝達を中和する化合物は、対象の血中ヘモグロビン（ＨＧＢ）レベルの増加を防止する。
いくつかの例では、ＣＤ１３１に結合しＩＬ－３、ＩＬ－５、及びＧＭ－ＣＳＦによるシグナル伝達を中和する化合物は、化合物が投与されていない対象において観察される血中ヘモグロビン（ＨＧＢ）のレベルの増加と比較して、対象の血中ＨＧＢのレベルの増加を低減する。
一例では、ＣＤ１３１に結合する化合物は、ＴＦ－１細胞のＧＭ－ＣＳＦ誘導増殖を少なくとも６００ｎＭ又は５００ｎＭのＩＣ５０で、阻害する。例えば、ＩＣ５０は、少なくとも約４００ｎＭである。例えば、ＩＣ５０は、少なくとも約３００ｎＭ又は２００ｎＭ又は１００ｎＭである。例えば、ＩＣ５０は、少なくとも約５０ｎＭである。例えば、ＩＣ５０は、少なくとも約１０ｎＭ又は５ｎＭ又は１ｎＭである。一例では、ＩＣ５０は、少なくとも約１ｎＭである。例えば、ＩＣ５０は、少なくとも約０．９ｎＭ又は０．８ｎＭ又は０．６ｎＭである。一例では、ＩＣ５０は、少なくとも約０．５ｎＭである。一例では、ＩＣ５０は、少なくとも約０．４ｎＭである。一例では、ＩＣ５０は、少なくとも約０．３ｎＭである。
一例では、ＣＤ１３１に結合する化合物は、ＴＦ－１細胞のＩＬ－５誘導増殖を少なくとも６００ｎＭ又は５００ｎＭのＩＣ５０で、阻害する。例えば、ＩＣ５０は、少なくとも約４００ｎＭである。例えば、ＩＣ５０は、少なくとも約３００ｎＭ又は２００ｎＭ又は１００ｎＭである。例えば、ＩＣ５０は、少なくとも約５０ｎＭである。例えば、ＩＣ５０は、少なくとも約１０ｎＭ又は５ｎＭ又は１ｎＭである。一例では、ＩＣ５０は、少なくとも約５ｎＭである。例えば、ＩＣ５０は、少なくとも約４ｎＭである。一例では、ＩＣ５０は、少なくとも約４．５ｎＭ又は少なくとも約４．６ｎＭ又は少なくとも約４．７ｎＭである。一例では、ＩＣ５０は、少なくとも約４．６ｎＭである。
一例では、ＣＤ１３１に結合する化合物は、ＴＦ－１細胞のＩＬ－３誘導増殖を少なくとも６００ｎＭ又は５００ｎＭのＩＣ５０で、阻害する。例えば、ＩＣ５０は、少なくとも約４００ｎＭである。例えば、ＩＣ５０は、少なくとも約３００ｎＭ又は２００ｎＭ又は１００ｎＭである。例えば、ＩＣ５０は、少なくとも約５０ｎＭである。例えば、ＩＣ５０は、少なくとも約１０ｎＭ又は５ｎＭ又は１ｎＭである。一例では、ＩＣ５０は、少なくとも約１ｎＭである。例えば、ＩＣ５０は、少なくとも約０．９ｎＭ又は０．８ｎＭ又は０．６ｎＭである。一例では、ＩＣ５０は、少なくとも約０．５ｎＭである。一例では、ＩＣ５０は、少なくとも約０．２ｎＭ又は少なくとも約０．１ｎＭである。一例では、ＩＣ５０は、少なくとも約０．１５ｎＭである。
ＩＣ５０を判定するための方法は、本明細書に記載され、関連する増殖因子（ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－３、及び／又はＩＬ－５）を添加する前に、ＴＦ－１細胞（例えば、約１×１０４個のＴＦ－１細胞）を、ＣＤ１３１に結合する化合物の存在下で（例えば、少なくとも約３分間又は１時間、例えば、約３０分間）培養することと、細胞を（例えば、少なくとも約４８時間、又は少なくとも約７２時間、又は少なくとも約９６時間、例えば、約７２時間）更に培養することと、次いで、細胞増殖を判定することと、を含む。細胞増殖は、３［Ｈ］－チミジンの存在下で約６時間細胞を増殖させ、３［Ｈ］－チミジンの組み込みを判定することによって、例えば、液体シンチレーションカウントによって判定することができる。ＣＤ１３１に結合する化合物の様々な濃度における増殖を判定することによって、ＩＣ５０を決定することができる。
いくつかの例では、ＣＤ１３１に結合する化合物は、
ａ）ＴＦ－１細胞のＧＭ－ＣＳＦ誘導増殖を少なくとも１００ｎＭのＩＣ５０で、かつ／又は
ｂ）ＴＦ－１細胞のＩＬ－５誘導増殖を少なくとも１００ｎＭのＩＣ５０で、かつ／又は
ｃ）ＴＦ－１細胞のＩＬ－３誘導増殖を少なくとも１００ｎＭのＩＣ５０で、阻害する。
いくつかの例では、ＣＤ１３１に結合する化合物は、
ａ）ＴＦ－１細胞のＧＭ－ＣＳＦ誘導増殖を少なくとも５０ｎＭのＩＣ５０で、かつ／又は
ｂ）ＴＦ－１細胞のＩＬ－５誘導増殖を少なくとも５０ｎＭのＩＣ５０で、かつ／又は
ｃ）ＴＦ－１細胞のＩＬ－３誘導増殖を少なくとも５０ｎＭのＩＣ５０で、阻害する。
いくつかの例では、ＣＤ１３１に結合する化合物は、
ａ）ＴＦ－１細胞のＧＭ－ＣＳＦ誘導増殖を少なくとも１０ｎＭのＩＣ５０で、かつ／又は
ｂ）ＴＦ－１細胞のＩＬ－５誘導増殖を少なくとも１０ｎＭのＩＣ５０で、かつ／又は
ｃ）ＴＦ－１細胞のＩＬ－３誘導増殖を少なくとも１０ｎＭのＩＣ５０で、阻害する。
一例では、ＣＤ１３１に結合する化合物は、ＩＬ－３及び／又はＧＭ－ＣＳＦ誘導ＳＴＡＴ－５シグナル伝達を低減又は防止する。
一例では、ＣＤ１３１に結合する化合物は、約２０ｎＭ以下のＩＣ５０で、ＩＬ－３誘導ＳＴＡＴ－５シグナル伝達を低減又は防止する。一例では、ｐＳｔａｔ－５ ＩＣ５０ ＩＬ－３は、約１０ｎＭ以下、又は約９ｎＭ以下、又は約８ｎＭ以下である。一例では、ｐＳｔａｔ－５ ＩＣ５０ ＩＬ－３は、約７．５ｎＭ以下、例えば７．３ｎＭである。
一例では、ＣＤ１３１に結合する化合物は、約６０ｎＭ以下のＩＣ５０で、ＧＭ－ＣＳＦ誘導ＳＴＡＴ－５シグナル伝達を低減又は防止する。一例では、ｐＳｔａｔ－５ ＩＣ５０ ＧＭ－ＣＳＦは、約５０ｎＭ以下、又は約４５ｎＭ以下、又は約４０ｎＭ以下である。一例では、ＣＤ１３１に結合する化合物は、約４０ｎＭ以下のＩＣ５０で、ＧＭ－ＣＳＦ誘導ＳＴＡＴ－５シグナル伝達を低減又は防止する。
例えば、化合物は、ＩＬ－３及び／又はＧＭ－ＣＳＦの存在下で、インターフェロン調節因子１（ｉｒｆ１）応答エレメントの制御下でβ－ラクタマーゼレポーター遺伝子を含む細胞（例えば、ＴＦ－１細胞）に接触させることができる。細胞をまた、好適な基質（例えば、ＣＣＦ２又はＣＣＦ４などの負に帯電した蛍光β－ラクタマーゼ基質）と接触させ、シグナルの変化（例えば、蛍光）を判定する。陽性対照（すなわち、タンパク質又は抗体の非存在下でＩＬ－３及び／又はＧＭ－ＣＳＦと接触した細胞）におけるシグナルの変化の減少は、化合物がＩＬ－３及び／又はＧＭ－ＣＳＦ誘導ＳＴＡＴ－５シグナル伝達を低減又は防止することを示す。
一例では、ＣＤ１３１に結合する化合物は、以下の活性のうちの１つ以上を有する：
（ｉ）好中球細胞サイズのＧＭ－ＣＳＦ誘導増加を低減若しくは阻害することによって判定される、ＧＭ－ＣＳＦによる単離されたヒト好中球の活性化を低減若しくは阻害すること、
（ｉｉ）ヒト好塩基球によるＩＬ－３誘導ＩＬ－８分泌を低減若しくは阻害すること、
（ｉｉｉ）ＩＬ－３媒介性生存若しくは形質細胞様樹状細胞（ｐＤＣ）を低減若しくは予防すること、
（ｉｖ）フローサイトメトリーによって評価された前方散乱の変化を評価することによって判定される、ＩＬ－５によるヒト末梢血好酸球の活性化を低減若しくは防止すること、
（ｖ）ＩＬ－５及び／若しくはＧＭ－ＣＳＦ及び／若しくはＩＬ－３の存在下でのヒト末梢血好酸球の生存を低下させるか若しくは防止することと、
（ｖｉ）ヒト肥満細胞からのＩＬ－３誘導腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）αの放出を低減若しくは防止すること、
（ｖｉｉ）ヒト肥満細胞からのＩＬ－３誘導ＩＬ－１３放出を低減若しくは防止すること、
（ｖｉｉｉ）ＩＬ－３及び／若しくはＩＬ－５及び／若しくはＧＭ－ＣＳＦによるヒト肥満細胞からのＩｇＥ媒介性ＩＬ－８放出の増強を低減若しくは防止すること、
（ｉｘ）幹細胞因子（ＳＣＦ）、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－３及びＩＬ－５の存在下で培養したＣＤ３４＋ヒト骨髄細胞によるコロニー形成単位－顆粒球－マクロファージ（ＣＦＵ－ＧＭ）の形成を低減若しくは防止すること、
（ｘ）ヒト鼻ポリープ症のマウス異種移植片モデルにおけるポリープのサイズ若しくは重量を減少させること、並びに／又は
（ｘｉ）ヒト鼻ポリープ症のマウス異種移植片モデルにおけるポリープ中のＢ細胞の数を減少させること。
一例では、ＣＤ１３１に結合する化合物は、エリスロポエチン、ＩＬ－６、ＩＬ－４又は幹細胞因子のうちの１つ以上に応答して、ＴＦ－１細胞の増殖を実質的又は有意に阻害しない。ＣＤ１３１に結合して、サイトカイン又は増殖因子に関してＴＦ－１細胞の増殖を阻害する化合物の能力を判定するための方法が本明細書に記載され、本開示の本実施例に容易に適応可能である。
いくつかの例では、本開示において有用な化合物は、抗原結合部位を含むタンパク質、例えば、抗体の抗原結合部位又は単一ドメイン抗体を含むタンパク質である。例えば、化合物は、抗体又はその抗原結合ドメインである。
いくつかの例では、ＣＤ１３１に結合する化合物は、ＣＤ１３１に結合する抗原結合部位を含むタンパク質である。いくつかの例では、抗原結合部位は、抗体又は単一ドメイン抗体の抗原結合部位である。いくつかの例では、抗原結合部位は、１つ以上のＣＤＲを含む。
本明細書における、ＣＤ１３１に「結合する」化合物若しくはタンパク質又は抗体への言及は、ＣＤ１３１に「特異的に結合する（ｂｉｎｄｓ ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ）」又は「特異的に結合する（ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ ｂｉｎｄｓ ｔｏ）」化合物若しくはタンパク質又は抗体の文字どおりの支持体を提供する。
一例では、配列番号５に記載の配列を含むポリペプチドに対するタンパク質のＫＤは、ポリペプチドが固体表面上に固定化され、ＫＤが表面プラズモン共鳴によって判定されたとき、約１０ｎＭ以下である。
一例では、ＫＤは、１０ｎＭ以下、例えば、５ｎＭ以下若しくは４ｎＭ以下、又は３ｎＭ以下若しくは２ｎＭ以下である。一例では、ＫＤは、１ｎＭ以下である。一例では、ＫＤは、０．９ｎＭ以下又は０．７ｎＭ以下又は０．８ｎＭ以下又は０．７ｎＭ以下又は０．６ｎＭ以下である。一例では、ＫＤは、０．５ｎＭ以下である。一例では、ＫＤは、０．４ｎＭ以下である。一例では、ＫＤは、０．３ｎＭ以下である。一例では、ＫＤは、０．２ｎＭ以下である。
一例では、抗原結合部位を含むタンパク質は、例えば、標識及び非標識タンパク質又は抗体を用いた競合アッセイを使用して、約１０ｎＭ以下のＫＤでＣＤ１３１を発現する細胞（例えば、好中球、好酸球、又はＴＦ－１細胞）に結合する。一例では、ＫＤは、５ｎＭ以下若しくは４ｎＭ以下、又は３ｎＭ以下若しくは２ｎＭ以下である。一例では、ＫＤは、１ｎＭ以下である。一例では、ＫＤは、０．９ｎＭ以下又は０．７ｎＭ以下又は０．８ｎＭ以下又は０．７ｎＭ以下又は０．６ｎＭ以下である。
一例では、ＫＤは、好中球に関して約３００ｎＭ以下である。
一例では、ＫＤは、好酸球に関して約７００ｎＭ以下である。
一例では、ＫＤは、ＴＦ－１細胞に関して約４００ｎＭ以下である。
一例では、抗原結合部位を含むタンパク質は、１つ以上の抗体可変領域を含むタンパク質である。一例では、タンパク質は、重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。一例では、タンパク質は、軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。一例では、タンパク質は、ＶＨ及びＶＬを含む。いくつかの例では、ＶＨ及びＶＬは、同じポリペプチド鎖内にある。他の例では、ＶＨ及びＶＬは、別個のポリペプチド鎖内にある。
いくつかの例では、タンパク質は単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）である。
いくつかの例では、タンパク質はＦｖを含む。
いくつかの例では、タンパク質は、
（ｉ）一本鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）、
（ｉｉ）二量体ｓｃＦｖ（ｄｉ－ｓｃＦｖ）、又は
（ｉｉｉ）ダイアボディ、
（ｉｖ）トリアボディ、
（ｖ）テトラボディ、
（ｖｉ）Ｆａｂ、
（ｖｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２、
（ｖｉｉｉ）Ｆｖ、
（ｉｘ）抗体、Ｆｃ、又は重鎖定常ドメイン（ＣＨ）２及び／若しくはＣＨ３の定常領域に連結された（ｉ）～（ｖｉｉｉ）のうちの１つ、
（ｘ）アルブミン若しくはその機能的断片若しくは変異体、又はアルブミンに結合するタンパク質に連結された（ｉ）～（ｖｉｉｉ）のうちの１つ、あるいは
（ｘｉ）抗体を含む。
いくつかの例では、タンパク質は、
（ｉ）一本鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）、
（ｉｉ）二量体ｓｃＦｖ（ｄｉ－ｓｃＦｖ）、又は
（ｉｉｉ）ダイアボディ、
（ｉｖ）トリアボディ、
（ｖ）テトラボディ、
（ｖｉ）Ｆａｂ、
（ｖｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２、
（ｖｉｉｉ）Ｆｖ、
（ｉｘ）抗体、Ｆｃ、又は重鎖定常ドメイン（ＣＨ）２及び／若しくはＣＨ３の定常領域に連結された（ｉ）～（ｖｉｉｉ）のうちの１つ、
（ｘ）アルブミン、その機能的断片若しくは変異体、又はアルブミンに結合するタンパク質（例えば、抗体又はその抗原結合断片）に連結された（ｉ）～（ｖｉｉｉ）のうちの１つ、あるいは
（ｘｉ）抗体、からなる群から選択される。
一例で、タンパク質は、Ｆｃ領域を含む。
一例では、タンパク質は、タンパク質の半減期を増加させる１つ以上のアミノ酸置換を含む。一例では、抗体は、胎児性Ｆｃ受容体ＦｃＲｎ）に対するＦｃ領域の親和性を増加させる１つ以上のアミノ酸置換を含むＦｃ領域を含む。
一例では、タンパク質は、抗体、例えば、モノクローナル抗体である。一例では、抗体は、裸抗体である。
一例では、タンパク質（又は抗体）は、キメラ、非免疫化、ヒト化、ヒト又は霊長類化である。
一例では、タンパク質又は抗体は、ヒトである。
例示的な抗体としては、ＷＯ２０１７／０８８０２８に記載される９Ａ２－ＶＲ２４．２９（また、「ＣＳＬ３１１」とも称される）、及びＳｕｎ ｅｔ ａｌ．（１９９９）Ｂｌｏｏｄ９４：１９４３－１９５１に記載されるＢＩＯＮ－１が挙げられる。
一例では、タンパク質は、ヒト定常領域、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４定常領域、又はそれらの混合物などのＩｇＧ定常領域を含む。ＶＨ及びＶＬを含むタンパク質の場合、ＶＨは、重鎖定常領域に連結され得、ＶＬは、軽鎖定常領域に連結され得る。
全抗体の重鎖定常領域（又は定常領域若しくはＣＨ３を含むタンパク質）のＣ末端リジンは、例えば、タンパク質若しくは抗体の産生若しくは精製中に、又は重鎖をコードする核酸を組換えて操作することによって除去され得る。したがって、全抗体（又はＣＤ１３１結合化合物）は、全てのＣ末端リジン残基が除去された集団、Ｃ末端リジン残基が除去されていない集団、及び／又はＣ末端リジン残基を含むか又は含まないタンパク質の混合物を有する集団を含み得る。いくつかの例では、集団は、重鎖定常領域のうちの１つにおいてＣ末端リジン残基が除去されるタンパク質を更に含んでもよい。同様に、全抗体の組成物は、Ｃ末端リジン残基を含むか又は含まない抗体集団の同一又は類似の混合物を含んでもよい。
一例では、タンパク質は組成物中にある。例えば、組成物は、本明細書に記載の抗原結合部位又は抗体を含むタンパク質を含む。一例では、組成物は、タンパク質又は抗体の１つ以上の変異体を更に含む。例えば、コードされたＣ末端リジン残基を欠く変異体、脱アミド変異体及び／又はグリコシル化変異体及び／又はピログルタミン酸塩を含む変異体、例えば、タンパク質のＮ末端にある変異体及び／又はＮ末端残基を欠く変異体、例えば、抗体又はＶ領域におけるＮ末端グルタミン及び／又は分泌シグナルの全部若しくは一部を含む変異体を含む。コードされたアスパラギン残基の脱アミド変異体は、イソアスパラギン酸、及びアスパラギン酸アイソフォームが生成されるか、又は隣接するアミノ酸残基を伴うスクシンアミドをもたらし得る。コードされたグルタミン残基の脱アミド変異体は、グルタミン酸をもたらし得る。そのような配列と変異体との不均一な混合物を含む組成物は、特定のアミノ酸配列が参照されるときに含まれることが意図される。
一例では、本明細書に記載のタンパク質又は抗体は、ＩｇＧ４抗体の定常領域又はＩｇＧ４抗体の安定化定常領域を含む。一例では、タンパク質又は抗体は、２４１位にプロリンを有するＩｇＧ４定常領域を含む（Ｋａｂａｔの番号付けシステムによる（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ ＤＣ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，１９８７ａｎｄ／ｏｒ１９９１））。
一例では、重鎖定常領域は、配列番号１６に記載の配列を含む。一例では、タンパク質、又はタンパク質を含む組成物は、Ｃ末端リジン残基を含むか又は含まない、完全に又は部分的に配列の混合物を含む、安定化重鎖定常領域を含む重鎖定常領域を含む。
いくつかの例では、タンパク質は、ＣＤ１３１に結合し、配列番号６に記載の配列を含むＶＨと配列番号７に記載の配列を含むＶＬとを含む抗体９Ａ２－ＶＲ２４．２９のＣＤ１３１への結合を競合的に阻害する抗体可変領域を含む。
いくつかの例では、タンパク質は、ＣＤ１３１に結合し、配列番号６に記載の配列を含むＶＨと配列番号１８に記載の配列を含むＶＬとを含む抗体９Ａ２－ＶＲ２４．２９のＣＤ１３１への結合を競合的に阻害する抗体可変領域を含む。
いくつかの例では、タンパク質は、配列番号６に記載の配列を含むＶＨ、及び配列番号７に記載の配列を含むＶＬを含む、ＣＤ１３１に対する抗体９Ａ２－ＶＲ２４．２９と、ＣＤ１３１内の同じ又は重複エピトープに結合する。
いくつかの例では、タンパク質は、配列番号６に記載の配列を含むＶＨ、及び配列番号１８に記載の配列を含むＶＬを含む、ＣＤ１３１に対する抗体９Ａ２－ＶＲ２４．２９と、ＣＤ１３１内の同じ又は重複エピトープに結合する。
いくつかの例では、抗原結合部位は、ＣＤ１３１の部位２内のエピトープに結合する。この点に関して、当業者は、ＣＤ１３１の部位２が、二量体を形成する２つのＣＤ１３１ポリペプチドからの残基で構成され、例えば、部位２は、１つのＣＤ１３１ポリペプチドのドメイン１のループＡ－Ｂ及びＥ－Ｆ内の残基、並びに別のＣＤ１３１ポリペプチドのループＢ－Ｃ及びＦ－Ｇ内の残基を含むことを認識するであろう。
いくつかの例では、抗原結合部位は、２つのＣＤ１３１ポリペプチドの二量体化の際に形成されたエピトープに結合する。
いくつかの例では、抗原結合部位は、ＣＤ１３１ポリペプチドのドメイン１内の残基及び別のＣＤ１３１ポリペプチドのドメイン４内の残基に結合する。一例では、ＣＤ１３１のドメイン１内の残基は、配列番号１の１０１～１０７の領域内の残基を含み、かつ／又はＣＤ１３１のドメイン４内の残基は、配列番号１の３６４～３６７の領域内の残基を含む。
いくつかの例では、タンパク質は、
ａ）配列番号１の３９、１０１、１０２、１０４、１０５、１０６、及び１０７位の１つ以上又は全てに対応する１つのＣＤ１３１ポリペプチド鎖内のアミノ酸と、
ｂ）配列番号１の３６４、３６５、３６６、３６７、４２０、及び４２１位の１つ以上又は全てに対応する別のＣＤ１３１ポリペプチド鎖内のアミノ酸と、を含むエピトープに結合する。
いくつかの例では、タンパク質は、配列番号６に記載のアミノ酸配列を含むＶＨの３つのＣＤＲを含むＶＨと、配列番号７に記載のアミノ酸配列を含むＶＬの３つのＣＤＲを含むＶＬとを含む、抗体可変領域を含む。
いくつかの例では、タンパク質は、配列番号６に記載のアミノ酸配列を含むＶＨの３つのＣＤＲを含むＶＨと、配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含むＶＬの３つのＣＤＲを含むＶＬとを含む、抗体可変領域を含む。
いくつかの例では、タンパク質は、
ａ）配列番号８に記載のアミノ酸配列又は配列番号８に対して１、２、若しくは３個以下のアミノ酸置換を有する配列を含むか又はそれからなるＨＣＤＲ１、配列番号９に記載のアミノ酸配列又は配列番号９に対して１、２、若しくは３個以下のアミノ酸置換を有する配列を含むか又はそれからなるＨＣＤＲ２、及び配列番号１０に記載のアミノ酸配列又は配列番号１０に対して１、２、若しくは３個以下のアミノ酸置換を有する配列を含むか又はそれからなるＨＣＤＲ３を含むＶＨと、
ｂ）配列番号１１に記載のアミノ酸配列又は配列番号１１に対して１、２、若しくは３個以下のアミノ酸置換を有する配列を含むか又はそれからなるＬＣＤＲ１、配列番号１２に記載のアミノ酸配列又は配列番号１２に対して１、２、若しくは３個以下のアミノ酸置換を有する配列を含むか又はそれからなるＬＣＤＲ２、及び配列番号１３に記載のアミノ酸配列又は配列番号１３に対して１、２、若しくは３個以下のアミノ酸置換を有する配列を含むか又はそれからなるＬＣＤＲ３を含むＶＬと、を含む。
いくつかの例では、タンパク質は、
ａ）配列番号８に記載のアミノ酸配列を含むか又はそれからなるＨＣＤＲ１、配列番号９に記載のアミノ酸配列含むか又はそれからなるＨＣＤＲ２、及び配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含むか又はそれからなるＨＣＤＲ３を含むＶＨと、
ｂ）配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含むか又はそれからなるＬＣＤＲ１、配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含むか又はそれからなるＬＣＤＲ２、及び配列番号１３に記載のアミノ酸配列を含むか又はそれからなるＬＣＤＲ３を含むＶＬと、を含む。
いくつかの例では、タンパク質は、配列番号６に対して少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号７に対して少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬとを含む。
いくつかの例では、タンパク質は、配列番号６に対して少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号１８に対して少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬとを含む。
いくつかの例では、タンパク質は、配列番号６に記載のアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号７に記載のアミノ酸配列を含むＶＬとを含む。
いくつかの例では、タンパク質は、配列番号６に記載のアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含むＶＬとを含む。
いくつかの例では、タンパク質は、配列番号１４に対して少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号１５に対して少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。
いくつかの例では、タンパク質は、配列番号１４に記載のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号１５に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。
一例では、ＣＤ１３１に結合する化合物は、別の療法と組み合わせて投与される。
一例では、他の療法は、抗炎症化合物の投与を含む。一例では、他の療法は、免疫調節剤又は免疫抑制剤の投与を含む。
いくつかの例では、他の療法は、抗原結合部位を含むタンパク質の投与を含む。いくつかの例では、抗原結合部位を含むタンパク質は、抗体である。
いくつかの例では、ＣＤ１３１に結合する化合物は、細胞と組み合わせて投与される。いくつかの例では、細胞は、幹細胞、例えば、間葉系幹細胞である。
いくつかの例では、ＣＤ１３１に結合する化合物は、遺伝子療法と組み合わせて投与される。
一例では、ＣＤ１３１に結合する化合物は、他の療法と同時に投与される。一例では、ＣＤ１３１に結合する化合物は、他の療法前に投与される。一例では、ＣＤ１３１に結合する化合物は、他の療法後に投与される。
いくつかの例では、ＣＤ１３１に結合する化合物は、標準治療療法と組み合わせて投与される。標準治療療法は、ＡＲＤＳの基礎原因のための標準治療療法であってもよく、又はＡＲＤＳ自体のための標準治療療法であってもよい。
いくつかの例では、標準治療療法は、
ａ）腹臥位、
ｂ）流体管理、
ｃ）一酸化窒素の投与、
ｄ）神経筋遮断剤の投与、
ｅ）人工換気、
ｆ）体外膜型酸素供給、及び
ｇ）抗ウイルス剤又は抗生物質の投与のうちの１つ以上又は全てを含む。
一例では、標準治療療法は、抗ウイルス剤の投与を含む。一例では、標準治療療法は、レムデシビルの投与を含む。一例では、標準治療療法は、
ａ）ヒドロキシクロロキン、
ｂ）クロロキン、
ｃ）ロピナビル、
ｄ）リトナビル、
ｅ）アジスロマイシン、
ｆ）インターフェロンベータ、
ｇ）アナキンラ、
ｈ）トシリズマブ、
ｉ）サリルマブ、
ｊ）デキサメタゾン、
ｋ）アスピリン、
ｌ）ロサルタン、
ｍ）シンバスタチン、及び
ｎ）バリシチニブのうちの１つ以上の投与を含む。
一例では、対象は、ヒトである。一例では、対象は、成人、例えば１８歳を超える成人である。一例では、対象は、小児、例えば、１８歳未満の小児である。一例では、対象は、１８歳～９０歳である。一例では、対象は、５０～８０歳である。
一例では、対象は、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）を有さない。一例では、対象は、喘息を有さない。
配列表の鍵
配列番号１：ホモサピエンスＣＤ１３１のアミノ酸配列
配列番号２：ホモサピエンスＩＬ－３受容体αのアミノ酸配列
配列番号３：ホモサピエンスＧＭ－ＣＳＦ受容体のアミノ酸配列
配列番号４：ホモサピエンスＩＬ－５受容体のアミノ酸配列
配列番号５：Ｃ末端６×Ｈｉｓタグを含む可溶性ホモサピエンスＣＤ１３１のアミノ酸配列
配列番号６：９Ａ２－ＶＲ２４．２９のＶＨのアミノ酸配列
配列番号７：９Ａ２－ＶＲ２４．２９のＶＬのアミノ酸配列
配列番号８：９Ａ２－ＶＲ２４．２９のＨＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号９：９Ａ２－ＶＲ２４．２９のＨＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号１０：９Ａ２－ＶＲ２４．２９のＨＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号１１：９Ａ２－ＶＲ２４．２９のＬＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号１２：９Ａ２－ＶＲ２４．２９のＬＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号１３：９Ａ２－ＶＲ２４．２９のＬＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号１４：９Ａ２－ＶＲ２４．２９の重鎖のアミノ酸配列
配列番号１５：９Ａ２－ＶＲ２４．２９の軽鎖のアミノ酸配列
配列番号１６：安定化ＩｇＧ４重鎖定常領域のアミノ酸配列
配列番号１７：カッパ軽鎖定常領域のアミノ酸配列
配列番号１８：９Ａ２－ＶＲ２４．２９のＶＬのアミノ酸配列
キメラモノクローナル抗体が予防的に投与されたマウスの気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬＦ）中のリンパ球、好中球、及びマクロファージについての、積層カラム内の（Ａ）細胞数及び（Ｂ）１ｍｌ当たりの細胞分画（平均＋／－ＳＥＭ）の一連のグラフ表示である。実施例１に記載される３μｇのＬＰＳ又はＰＢＳでの挿管の２４時間前に、マウスに、５０ｍｇ／ｋｇのキメラモノクローナル抗体（キメラｍＡｂ）が静脈内投与されたか、又はアイソタイプ対照（ＢＭ４）が投与された。マウスのＢＡＬＦが、分析のために、挿管の２４時間後に収集された。キメラｍＡｂ群とＢＭ４群との間の細胞数の有意差が、観察された（通常の一元配置ＡＮＯＶＡダネット多重比較試験）（Ｐ＝０．０００４）；ｎ＝３（ＰＢＳ）、６（ＢＭ４＿ＬＰＳ）、及び６（キメラｍＡｂ＿ＬＰＳ）。 実施例１に記載されるキメラモノクローナル抗体が治療的に投与されたマウスの気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬＦ）中のリンパ球、好中球、及びマクロファージについての、積層カラム内の（Ａ）細胞数及び（Ｂ）１ｍｌ当たりの細胞分画（平均＋／－ＳＥＭ）の一連のグラフ表示である。３μｇのＬＰＳ又はＰＢＳでの挿管の６時間後に、マウスに、５０ｍｇ／ｋｇのキメラモノクローナル抗体（キメラｍＡｂ）が静脈内投与されたか、又はアイソタイプ対照（ＢＭ４）が投与された。マウスのＢＡＬＦが、分析のために、挿管の２４時間後に収集された。キメラｍＡｂ群とＢＭ４群との間の細胞数の有意差が、観察された（通常の一元配置ＡＮＯＶＡダネット多重比較試験）（Ｐ＝０．００１３）；ｎ＝３（ＰＢＳ）、５（ＢＭ４＿ＬＰＳ）、及び６（キメラｍＡｂ＿ＬＰＳ）。 実施例２に記載されるアイソタイプ対照モノクローナル抗体（アイソタイプ対照ｍＡｂ）と比較して、キメラモノクローナル抗体（キメラｍＡｂ）による、ＦＤＣＰ１細胞の（Ａ）ＧＭ－ＣＳＦ誘導増殖及び（Ｂ）ＩＬ－３誘導増殖の阻害を示す一連のグラフ表示である。 実施例３に記載されるＡＲＤＳのマウスモデルにおける肺白血球数及び肺損傷のマーカーを示す一連のグラフ表示である。（Ａ）ＬＰＳ－ＩＳＯ又はＣＳＬ３１１が投与されたｈβｃＴｇマウスの体重減少百分率、ＬＰＳ－ＩＳＯ又はＣＳＬ３１１が投与されたマウスの（Ｂ）血中顆粒球数、（Ｃ）血中単球数、及び（Ｄ）気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬＦ）中好中球数のグラフ。（Ｅ）ＬＰＳ－ＩＳＯ又はＣＳＬ３１１が投与されたｈβｃＴｇマウスからの肺の免疫組織化学的染色（Ｈ＆Ｅ）された切片。ＬＰＳ－ＩＳＯ又はＣＳＬ３１１が投与されたｈβｃＴｇマウスの（Ｆ）肺切片のＨ＆Ｅ染色に基づく肺損傷スコア、（Ｇ）肺ＭＰＯ活性、及び（Ｈ）ＢＡＬＦタンパク質を示すグラフ表示。Ｎ＝６～７、＊＜０．０５、ＡＮＯＶＡ対ＬＰＳ－ＩＳＯ群。 実施例３に記載されるＡＲＤＳのマウスモデルにおけるネトーシスを示す一連のグラフ表示である。（Ａ）ＬＰＳ－ＩＳＯ又はＣＳＬ３１１が投与されたｈβｃＴｇマウスの肺切片の免疫組織化学的染色。ＭＰＯ（緑色）及びヒストンＨ３（赤色）は、ＭＰＯ及びヒストンＨ３の共局在に基づいて、ネトーシスの領域を同定した。ＬＰＳ－ＩＳＯ又はＣＳＬ３１１が投与されたｈβｃＴｇマウスのＢＡＬＦ中の（Ｂ）ＭＰＯ活性、（Ｃ）ｄｓＤＮＡ、（Ｄ）ＭＰＯ活性、（Ｅ）ｄｓＤＮＡを定量するグラフ表示。Ｎ＝６～７、＊＜０．０５、ＡＮＯＶＡ対ＬＰＳ－ＩＳＯ群。 実施例３に記載されるＡＲＤＳのマウスモデルにおける血中酸素の百分率を示すグラフである。ＰＢＳ（及びＬＰＳなし）、ＬＰＳ－ＩＳＯ、又はＬＰＳ－ＣＳＬ３１１が投与されたｈβｃＴｇマウスの血中酸素が判定された。データは、％酸素飽和度＋／－ＳＥＭとして表され、ＬＰＳ－ＩＳＯ群及びＬＰＳ－ＣＳＬ３１１群を比較する統計分析は、二元配置ＡＮＯＶＡ及びボンフェローニ事後試験を多重比較のために使用して、行われた。＊＊＊は、ｐ＜０．００１を示し、＊＊は、ｐ＜０．０１を示し、＊は、ｐ＜０．０５を示す。１群当たりｎ＝５のマウス。 βｃサイトカイン及びβｃ受容体が、ＩＡＶ感染ｈβｃＴｇマウスにおいて過剰発現されることを示す一連のグラフ表示である。ｈβｃＴｇマウスに、ＩＡＶ（１０４ＰＦＵ、ＨＫｘ３１株）を感染させ、ｈβｃＴｇマウスは、感染後３日目及び６日目に選別された。βｃサイトカイン（Ａ）Ｇｍ－ｃｓｆ、（Ｂ）Ｉｌ３、（Ｃ）Ｉｌ５、及びβｃ受容体（Ｄ）ＣＳＦ２ＲＢについての遺伝子発現が、肺組織において、ＲＴｑＰＣＲによって分析された。ｎ＝６；データは、平均±ＳＥである；＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１ 一元配置ＡＮＯＶＡ。 ＣＳＬ３１１が、ＩＡＶ感染ｈβｃＴｇマウスにおいて、ウイルス排除を損なうことなく、肺炎症及び損傷を低減することを示す一連のグラフ表示である。ＣＳＬ３１１又はアイソタイプ対照（ＩＳＯ）が、ＩＡＶ感染ｈβｃＴｇマウスに、感染後４日目に投与された。７日目に、ＩＡＶは、（Ａ）体重減少を誘導したが、これは、ＣＳＬ３１１治療によって有意に改善されなかった。（Ｂ）肺ウイルス負荷が、ＲＴｑＰＣＲによって、ウイルスＰＡ遺伝子において測定され、差は、ＣＳＬ３１１治療されたＩＡＶ感染マウスとＩＳＯ治療されたＩＡＶ感染マウスとの間に検出されなかった。ＩＡＶ感染によって誘導された（Ｃ）血中単球、（Ｄ）血中好中球、及び（Ｅ）血中ヘモグロビン（ＨＧＢ）の高いレベルが、ＣＳＬ３１１によって有意に低減された。また、（Ｆ）ＢＡＬ好中球及び（Ｇ）ＢＡＬマクロファージが、ＣＳＬ３１１治療で低減された。ｎ＝６；データは、中央値±四分位範囲であるウイルス負荷を除いて、平均±ＳＥである；＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１ マンホイットニーＵ試験であるウイルス負荷を除いて、一元配置ＡＮＯＶＡ。 ＣＳＬ３１１が、ＩＡＶ感染ｈβｃＴｇマウスにおいて、肺骨髄細胞を遮断し、ＮＫ細胞及びＴ細胞を保つことを示す一連のグラフ表示である。（Ａ）骨髄細胞のためのゲーティング戦略を使用するフローサイトメトリー分析は、肺（Ｂ）好中球、（Ｃ）肺胞マクロファージ（ＡＭ）、（Ｄ）滲出性マクロファージ（ＥＭ）、（Ｅ）単球、及び（Ｆ）好酸球が、ｈβｃＴｇマウスにおいて、ＩＡＶ感染後６日目に高く増加し、ＣＳＬ３１１治療で有意に低減されたことを明らかにした。（Ｇ）リンパ系細胞を描写するためのゲーティング戦略を使用するフローサイトメトリー分析は、肺（Ｈ）ＮＫ細胞、（Ｉ）ＮＫＴ細胞、及び（Ｊ）制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）が、ＩＡＶ感染後に増加し、ＣＳＬ３１１治療によって影響されなかったことを実証した。（Ｋ）肺ＣＤ４細胞及び（Ｌ）肺におけるＣＤ８細胞数は、全ての群にわたって異ならなかった；ｎ＝６；データは、平均±ＳＥである；＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１ 一元配置ＡＮＯＶＡ。 ＣＳＬ３１１が、ＩＡＶ感染ｈβｃＴｇマウスにおいて、肺サイトカインストームを減弱し、インターフェロン発現を保つことを示す一連のグラフ表示である。好中球ケモカイン（Ａ）Ｃｘｃｌ１、単球／マクロファージケモカイン（Ｂ）Ｃｃｌ２、好酸球ケモカイン（Ｃ）Ｃｃｌ２４、Ｔ細胞／ＮＫ細胞ケモカイン（Ｄ）Ｃｘｃｌ１０の発現が、ＲＴｑＰＣＲによって、ＩＡＶ感染マウスの肺において検出され、ＣＳＬ３１１は、Ｃｃｌ２及びＣｃｌ２４レベルを有意に低下させた。また、炎症促進性遺伝子（Ｅ）Ｉｌ１ａ及び（Ｆ）Ｉｌ６の発現が、ＩＡＶ感染マウスにおいて増加し、ＣＳＬ３１１治療は、Ｉｌ１ａを有意に低減したが、Ｉｌ６発現を低減しなかった。また、（Ｇ）Ｉ型インターフェロン（Ｉｆｎｂ）、（Ｈ）ＩＩ型インターフェロン（Ｉｆｎｇ）、及び（Ｉ）ＩＩＩ型インターフェロン（Ｉｆｎｌ２／３）が、ＩＡＶ感染マウスの肺において、ＣＳＬ３１１治療によって有意に変化しない様式で著しく誘導された；ｎ＝６；＊ｐ＜０．０５、データは、平均±ＳＥである；＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１ 一元配置ＡＮＯＶＡ。
全般
本明細書全体を通して、特に別段の定めがない限り、又は文脈が別段の定めがない限り、単一のステップ、物質の組成物、ステップの群、又は物質の組成物の群への言及は、それらのステップ、物質の組成物、ステップの群、又は物質の組成物の群のうちの１つ及び複数（すなわち、１つ以上）を包含するようにとられなければならない。
当業者は、本開示が、具体的に記載されるもの以外の変形及び修正の影響を受けやすいことを理解するであろう。本開示は、そのような全ての変形及び修正を含むことが理解されるべきである。本開示はまた、本明細書で個別に又は集合的に言及又は示される全ての工程、特徴、組成物及び化合物、並びに上述の工程又は特徴のいずれか及び全ての組み合わせ又は任意の２つ以上を含む。
本開示は、例示のみを目的とする本明細書に記載の特定の実施例によって範囲が限定されるべきではない。機能的に等価な生成物、組成物、及び方法は、本開示の範囲内であることは明らかである。
本明細書における本開示の任意の例は、特に明記しない限り、本開示の任意の他の例に準用するものとする。
特に明確に定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有すると解釈されるものとする（例えば、免疫学、免疫組織化学、タンパク質化学、及び生化学）。
別段の指示がない限り、本開示で利用される組換えタンパク質、細胞培養、及び免疫学的技術は、当業者に周知の標準的な手順である。そのような技法は、Ｊ．Ｐｅｒｂａｌ，Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ（１９８４），Ｊ．Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｕｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ（１９８９），Ｔ．Ａ．Ｂｒｏｗｎ（ｅｄｉｔｏｒ），Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｖｏｌｕｍｅｓ１ａｎｄ２，ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ（１９９１），Ｄ．Ｍ．Ｇｌｏｖｅｒ ａｎｄ Ｂ．Ｄ．Ｈａｍｅｓ（ｅｄｉｔｏｒｓ），ＤＮＡ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｖｏｌｕｍｅｓ１－４，ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ（１９９５ａｎｄ１９９６），ａｎｄ Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｉｔｏｒｓ），Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂ．Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ－Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ（１９８８、現在までの全ての更新を含む），Ｅｄ Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｄａｖｉｄ Ｌａｎｅ（ｅｄｉｔｏｒｓ）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｕｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，（１９８８）、及びＪ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｉｔｏｒｓ）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ（現在までの全ての更新を含む）などのソースにおいて文献全体を通して記載され説明されている。
本明細書の可変領域及びその一部分、免疫グロブリン、抗体及びその断片の記載及び定義は、Ｋａｂａｔ Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．，１９８７及び１９９１、Ｂｏｒｋ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２４２，３０９－３２０，１９９４、Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ ＬｅｓｋＪ．Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７，１９８７、Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ３４２，８７７－８８３，１９８９、並びに／又は又はＡｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ２７３，９２７－９４８，１９９７における考察によって、更に明確にされ得る。
「及び／又は」という用語、例えば、「Ｘ及び／又はＹ」は、「Ｘ及びＹ」又は「Ｘ又はＹ」のいずれかを意味すると理解されなければならず、両方の意味又はいずれかの意味を明示的に支持すると解釈されるべきである。
本明細書全体を通して、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、又は「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」若しくは「含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」などの変化形は、定められた要素、整数若しくはステップ、又は要素、整数若しくはステップの群の包含を意味するが、任意の他の要素、整数若しくはステップ、又は要素、整数若しくはステップの群の除外を意味するものではないことが理解されるであろう。
選択した定義
命名のみを目的として、限定を目的とせず、ヒトＣＤ１３１（ｐｒｅ－ＣＤ１３１）の例示的な配列は、ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ＿０００３８６．１及びＮＣＢＩ Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号Ｐ３２９２７に記載される（また配列番号１に記載される）。成熟ヒトＣＤ１３１の配列は、配列番号１のアミノ酸１～１６を欠く。アミノ酸の位置は、多くの場合、ｐｒｅ－ＣＤ１３１を参照して本明細書で言及される。成熟ＣＤ１３１中の位置は、シグナル配列（配列番号１の場合、アミノ酸１～１６）を考慮することによって容易に判定される。他の種由来のＣＤ１３１の配列は、本明細書及び／又は公的に入手可能なデータベース内で提供される配列を使用して決定することができ、かつ／又は標準的な技術を使用して決定することができる（例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，（ｅｄｉｔｏｒｓ），Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂ．Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ－Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ（１９８８、現在までの全ての更新を含む）又はＳａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ（１９８９）に記載されるように）。ヒトＣＤ１３１への言及は、ｈＣＤ１３１と略され得る。可溶性ＣＤ１３１への言及は、ＣＤ１３１の細胞外領域、例えば、配列番号１のアミノ酸１７～４３８を含むポリペプチドを指す。
本明細書におけるＣＤ１３１への言及は、ＣＤ１３１（例えば、ｈＣＤ１３１）に結合し、シグナル伝達を誘導する能力を保持する、ＣＤ１３１の天然形態及びその変異型を含む。ＣＤ１３１は、「ＣＳＦ２ＲＢ」及び「サイトカイン受容体共通サブユニットβ」及び「β（ベータ）共通受容体」（「βＣＲ」又は「βｃ」と略される）としても知られている。
本開示によって企図される「化合物」は、天然化合物、化学的小分子化合物、又は生体化合物又は巨大分子を含む様々な形態のいずれかをとることができる。例示的な化合物には、抗体又は抗体の抗原結合断片、核酸、ポリペプチド、ペプチド、及び小分子を含むタンパク質が含まれる。
本明細書で使用される場合、「疾患」又は「状態」という用語は、正常な機能の破壊又は干渉を指し、任意の特定の状態、疾患又は障害に限定されるものではない。
本明細書で使用される場合、「治療すること」、「治療する」又は「治療」という用語は、指定された疾患又は状態の少なくとも１つの症状を軽減、予防、又は除去するために、本明細書に記載される化合物を投与することを含む。
本明細書で使用される場合、「予防すること（ｐｒｅｖｅｎｔｉｎｇ）」、「予防する（ｐｒｅｖｅｎｔ）」、又は「予防（ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ）」という用語は、本明細書に記載の化合物を投与して、それによって、例えば、その症状が対象において完全に発症する前に、状態の少なくとも１つの症状の発症を停止又は阻害することを含む。
本明細書で使用される場合、用語「対象」は、ヒト、例えば哺乳類を含む任意の動物を意味すると解釈される。例示的な対象として、ヒト及び非ヒト霊長類が挙げられるが、これらに限定されない。一例では、対象は、ヒトである。
「タンパク質」という用語は、単一のポリペプチド鎖、すなわち、ペプチド結合によって連結された一連の連続したアミノ酸、又は互いに共有結合又は非共有結合で連結された一連のポリペプチド鎖（すなわち、ポリペプチド複合体）を含むと解釈されなければならない。例えば、一連のポリペプチド鎖は、好適な化学的結合又はジスルフィド結合を使用して共有結合することができる。非共有結合の例としては、水素結合、イオン結合、ファンデルワールス力、及び疎水性相互作用が挙げられる。いくつかの例では、タンパク質は融合タンパク質である。本明細書で使用される場合、「融合タンパク質」は、それらが単一のタンパク質を産生する単一の単位として翻訳されるように結合された少なくとも２つのドメインを含むタンパク質である。
用語「ポリペプチド」又は「ポリペプチド鎖」は、前項から、ペプチド結合によって連結された一連の連続アミノ酸を意味すると理解される。
「単離されたタンパク質」又は「単離されたポリペプチド」という用語は、その起源又は誘導の供給源に基づいて、その天然状態でそれに付随する天然に関連する成分に関連付けられておらず、同じ供給源からの他のタンパク質を実質的に含まないタンパク質又はポリペプチドである。タンパク質は、当該技術分野で知られているタンパク質精製技法を使用して、天然に関連する成分を実質的に含まないか、又は単離によって実質的に精製され得る。「実質的に精製された」とは、タンパク質が、汚染物質を実質的に含まないこと、例えば、汚染物質を少なくとも約７０％又は７５％又は８０％又は８５％又は９０％又は９５％又は９６％又は９７％又は９８％又は９９％含まないことを意味する。
「組換え」という用語は、人工遺伝子組換えの産物を意味すると理解されなければならない。したがって、抗体抗原結合ドメインを含む組換えタンパク質の関連では、この用語は、Ｂ細胞成熟中に発生する天然組換え産物である、対象の体内に天然に存在する抗体を包含しない。しかしながら、かかる抗体が単離される場合、それは、抗体抗原結合ドメインを含む単離されたタンパク質とみなされるべきである。同様に、タンパク質をコードする核酸を単離し、組換え手段を使用して発現する場合、得られるタンパク質は、抗体抗原結合ドメインを含む組換えタンパク質である。組換えタンパク質はまた、例えば、それが発現する細胞、組織又は対象内にあるときに、人工組換え手段によって発現されるタンパク質を包含する。
本明細書で使用される場合、「抗原結合部位」という用語は、抗原に結合又は特異的に結合することができるタンパク質によって形成される構造を意味すると解釈される。抗原結合部位は、一連の連続したアミノ酸、又は単一のポリペプチド鎖内のアミノ酸である必要はない。例えば、２つの異なるポリペプチド鎖から産生されるＦｖでは、抗原結合部位は、抗原と相互作用するＶＬ及びＶＨの一連のアミノ酸で構成され、これらは、一般的にはあるが、必ずしも各可変領域の１つ以上のＣＤＲに存在するとは限らない。いくつかの例では、抗原結合部位は、ＶＨ若しくはＶＬ又はＦｖであるか、あるいはＶＨ若しくはＶＬ又はＦｖを含む。いくつかの例では、抗原結合部位は、抗体の１つ以上のＣＤＲを含む。
当業者は、「抗体」が、複数のポリペプチド鎖からなる可変領域、例えば、ＶＬを含むポリペプチド及びＶＨを含むポリペプチドを含むタンパク質であると一般的に考えられることを認識するであろう。抗体はまた、一般に、定常ドメインを含み、そのうちのいくつかは、重鎖の場合、定常断片又は断片結晶性（Ｆｃ）を含む定常領域に配置することができる。ＶＨ及びＶＬは相互作用して、１つ又はいくつかの密接に関連する抗原に特異的に結合することができる抗原結合領域を含むＦｖを形成する。一般に、哺乳類由来の軽鎖は、κ軽鎖又はλ軽鎖のいずれかであり、哺乳類由来の重鎖は、α、δ、ε、γ、又はμである。抗体は、任意のタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、及びＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２）、又はサブクラスであり得る。「抗体」という用語はまた、ヒト化抗体、霊長類化抗体、ヒト抗体及びキメラ抗体を包含する。
用語「完全長抗体」、「インタクト抗体」又は「全抗体」は、抗体の抗原結合断片とは対照的に、実質的にインタクトな形態の抗体を指すために互換的に使用される。具体的には、全抗体には、Ｆｃ領域を含む重鎖及び軽鎖を有するものが含まれる。定常ドメインは、野生型配列定常ドメイン（例えば、ヒト野生型配列定常ドメイン）又はそのアミノ酸配列変異体であり得る。
本明細書で使用される場合、「可変領域」は、抗原に特異的に結合することが可能であり、相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列、すなわち、ＣＤＲｌ、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、並びにフレームワーク領域（ＦＲ）を含む、本明細書で定義される抗体の軽鎖及び／又は重鎖の部分を指す。例示的な可変領域は、３つ又は４つのＦＲ（例えば、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及び任意選択的にＦＲ４）を、３つのＣＤＲとともに含む。ＩｇＮＡＲに由来するタンパク質の場合、タンパク質はＣＤＲ２を欠くことがある。ＶＨは、重鎖の可変領域を指す。ＶＬは、軽鎖の可変領域を指す。
本明細書で使用される場合、用語「相補性決定領域」（同義語ＣＤＲ；すなわち、ＣＤＲｌ、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）は、抗原結合に必要な抗体可変領域のアミノ酸残基を指す。各可変領域は、典型的には、ＣＤＲｌ、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３として特定された３つのＣＤＲ領域を有する。ＣＤＲ及びＦＲに割り当てられたアミノ酸位置は、Ｋａｂａｔ Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．，１９８７及び１９９１、あるいは本開示の実行における他の番号付けシステム、例えば、Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ ＬｅｓｋＪ．Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７，１９８７、Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ３４２，８７７－８８３，１９８９、及び／若しくはＡｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ２７３：９２７－９４８，１９９７の正規番号付けシステム、Ｌｅｆｒａｎｃ ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｖｅｌ．Ａｎｄ Ｃｏｍｐａｒ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２７：５５－７７，２００３のＩＭＧＴ番号付けシステム、又はＨｏｎｎｅｇｈｅｒ ａｎｄ Ｐｌｕｋｔｈｕｎ Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，３０９：６５７－６７０，２００１のＡＨＯ番号付けシステムに従って定義され得る。例えば、Ｋａｂａｔの番号付けシステムによれば、ＶＨフレームワーク領域（ＦＲ）及びＣＤＲは、残基１～３０（ＦＲｌ）、３１～３５（ＣＤＲ１）、３６～４９（ＦＲ２）、５０～６５（ＣＤＲ２）、６６～９４（ＦＲ３）、９５～１０２（ＣＤＲ３）、及び１０３～１１３（ＦＲ４）のように配置される。Ｋａｂａｔの番号付けシステムによれば、ＶＬＦＲ及びＣＤＲは、残基１～２３（ＦＲｌ）、２４～３４（ＣＤＲ１）、３５～４９（ＦＲ２）、５０～５６（ＣＤＲ２）、５７～８８（ＦＲ３）、８９～９７（ＣＤＲ３）、及び９８～１０７（ＦＲ４）のように配置される。本開示は、Ｋａｂａｔ番号付けシステムによって定義されるＦＲ及びＣＤＲに限定されないが、上記で論じられたものを含む全ての番号付けシステムを含む。一例では、本明細書におけるＣＤＲ（又はＦＲ）への言及は、Ｋａｂａｔ付番システムによるこれらの領域に関するものである。
「フレームワーク領域」（ＦＲ）は、ＣＤＲ残基以外の可変領域残基である。
本明細書で使用される場合、用語「Ｆｖ」は、複数のポリペプチド又は単一のポリペプチドからなるかどうかにかかわらず、ＶＬ及びＶＨが会合し、抗原結合部位を有する複合体を形成し、すなわち、抗原に特異的に結合することができる任意のタンパク質を意味すると解釈される。抗原結合部位を形成するＶＨ及びＶＬは、単一ポリペプチド鎖内又は異なるポリペプチド鎖内にあり得る。更に、本開示のＦｖ（並びに本開示の任意のタンパク質）は、同じ抗原に結合しても結合しなくてもよい複数の抗原結合部位を有してもよい。この用語は、抗体に直接由来する断片、並びに組換え手段を使用して産生されるそのような断片に対応するタンパク質を包含するものと理解されるべきである。いくつかの例では、ＶＨは、重鎖定常ドメイン（ＣＨ）１に連結されておらず、及び／又はＶＬは、軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）には連結されていない。ポリペプチド又はタンパク質を含有する例示的なＦｖは、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）断片、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ若しくは高次複合体、又は定常領域若しくはそのドメイン、例えば、ＣＨ２若しくはＣＨ３ドメイン、例えば、ミニボディに連結された前述のいずれかを含む。「Ｆａｂ断片」は、免疫グロブリンの一価の抗原結合断片からなり、抗体全体を酵素パパインで消化することによって産生し、インタクトな軽鎖及び重鎖の一部からなる断片を産生し、又は組換え手段を用いて産生し得る。抗体の「Ｆａｂ’断片」は、抗体全体をペプシンで処理し、続いて還元して、インタクトな軽鎖と、ＶＨ及び単一の定常ドメインを含む重鎖の一部とからなる分子を得ることによって得ることができる。２つのＦａｂ’断片が、この様式で処置された抗体ごとに得られる。Ｆａｂ’断片は、組換え手段によっても産生することができる。抗体の「Ｆ（ａｂ’）２断片」は、２つのジスルフィド結合によって一緒に保持される２つのＦａｂ’断片の二量体からなり、後続の還元なしに、抗体分子全体を酵素ペプシンで処理することによって得られる。「Ｆａｂ２」断片は、例えば、ロイシンジッパー又はＣＨ３ドメインを使用して連結された２つのＦａｂ断片を含む組換え断片である。「一本鎖Ｆｖ」又は「ｓｃＦｖ」は、抗体の可変領域断片（Ｆｖ）を含有する組換え分子であり、軽鎖の可変領域及び重鎖の可変領域は、好適な可撓性ポリペプチドリンカーによって共有結合されている。
本明細書で使用される場合、化合物又はその抗原結合部位と抗原との相互作用に関して「結合する」という用語は、相互作用が、抗原上の特定の構造（例えば、抗原決定基又はエピトープ）の存在に依存することを意味する。例えば、抗体は、一般的にタンパク質ではなく、特定のタンパク質構造を認識して結合する。抗体がエピトープ「Ａ」に結合する場合、「Ａ」と標識されたタンパク質を含有する反応において、エピトープ「Ａ」（又は遊離の、非標識の「Ａ」）を含有する分子の存在は、抗体に結合した標識された「Ａ」の量を減少させる。
本明細書で使用される場合、「特異的に結合する（ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ ｂｉｎｄｓ）」又は「特異的に結合する（ｂｉｎｄｓ ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ）」という用語は、本開示の化合物が、代替の抗原又は細胞と同じものを発現する特定の抗原又は細胞とより頻繁に、より迅速に、より長期間及び／又はより高い親和性で反応又は会合することを意味すると解釈されるべきである。例えば、化合物は、他のサイトカイン受容体又は多反応性天然抗体（すなわち、ヒトに天然に見出される様々な抗原に結合することが知られている天然に存在する抗体）によって一般的に認識される抗原に対して結合するよりも、実質的に高い親和性（例えば、２０倍又は４０倍又は６０倍又は８０倍から１００倍又は１５０倍又は２００倍）でＣＤ１３１に結合する。一般に、必ずしもそうではないが、結合への言及は、特異的結合を意味し、各用語は、他の用語に対して明示的な支持を提供するものと理解されなければならない。
タンパク質又は抗体は、別のポリペプチドについてタンパク質又は抗体のＫＤよりも小さい解離定数（ＫＤ）でそのポリペプチドに結合する場合、ポリペプチドに「優先的に結合する」と考えられ得る。一例では、タンパク質又は抗体は、別のポリペプチドについて、タンパク質又は抗体のＫＤよりも少なくとも約２０倍又は４０倍又は６０倍又は８０倍又は１００倍又は１２０倍又は１４０倍又は１６０倍多い親和性（すなわち、ＫＤ）でポリペプチドに結合する場合、ポリペプチドに優先的に結合するとみなされる。
明確化の目的のために、及び本明細書の例示的な主題に基づいて当業者に明白であろうように、本明細書における「親和性」への言及は、タンパク質又は抗体のＫＤへの言及である。
明確化の目的で、かつ本明細書の記載に基づいて当業者には明らかであるように、「ＸｎＭ以下のＫＤ」への言及は、ＫＤの数値が、ＸｎＭに等しい、又はより低い数値であることを意味すると理解される。当業者には理解されるように、ＫＤのより低い数値は、より高い（すなわち、より強い）親和性に対応し、すなわち、２ｎＭの親和性は、３ｎＭの親和性よりも強い。
「少なくとも約～のＩＣ５０」は、ＩＣ５０が、列挙された値以上（すなわち、ＩＣ５０が低いときに列挙された数値）であること、すなわち、２ｎＭのＩＣ５０が、３ｎＭのＩＣ５０よりも大きいことを意味すると理解されるであろう。別の言い方をすると、この用語は、「Ｘ以下のＩＣ５０」であり得、ここで、Ｘは、本明細書に列挙される値である。
本明細書で使用される場合、用語「エピトープ」（同義語「抗原決定基」）は、抗体の抗原結合部位を含むタンパク質が結合するＣＤ１３１の領域を意味すると理解されなければならない。この用語は、必ずしもタンパク質が接触する特定の残基又は構造に限定されない。例えば、この用語は、タンパク質及び／又は５～１０個又は２～５個又は１～３個のアミノ酸が接触する領域を含む。いくつかの例では、エピトープは、ＣＤ１３１が折り畳まれたときに互いに近くに配置される一連の不連続なアミノ酸、すなわち、「立体構造エピトープ（ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎａｌ ｅｐｉｔｏｐｅ）」を含む。当業者はまた、用語「エピトープ」がペプチド又はポリペプチドに限定されないことを認識するであろう。例えば、用語「エピトープ」は、糖側鎖、ホスホリル側鎖、又はスルホニル側鎖などの分子の化学的に活性な表面分類を含み、特定の例では、特定の三次元構造特性、及び／又は特異的電荷特性を有し得る。
「競合的に阻害する」という用語は、本開示のタンパク質（又はその抗原結合部位）が、列挙された抗体又はタンパク質のＣＤ１３１への結合を低減又は防止することを意味すると理解されなければならない。これは、タンパク質（又は抗原結合部位）及び同じ又は重複するエピトープへの抗体結合によるものであり得る。上記から、タンパク質が抗体の結合を完全に阻害する必要はなく、むしろ、統計的に有意な量、例えば、少なくとも約１０％又は２０％又は３０％又は４０％又は５０％又は６０％又は７０％又は８０％又は９０％又は９５％だけ結合を減少させる必要があることが明らかになる。好ましくは、タンパク質は、抗体の結合を少なくとも約３０％、より好ましくは少なくとも約５０％、より好ましくは少なくとも約７０％、なおより好ましくは少なくとも約７５％、更により好ましくは少なくとも約８０％又は８５％、更により好ましくは少なくとも約９０％低下させる。結合の競合的阻害を判定するための方法は、当該技術分野で既知である、及び／又は本明細書に記載される。例えば、抗体は、タンパク質の存在下又は非存在下のいずれかで、ＣＤ１３１に曝露される。タンパク質の不在下よりもタンパク質の存在下で結合する抗体が少ない場合、タンパク質は、抗体の結合を競合的に阻害すると考えられる。一例では、競合的阻害は、立体障害によるものではない。
２つのエピトープの文脈における「重複」とは、１つのエピトープに結合するタンパク質（又はその抗原結合部位）が他のエピトープに結合するタンパク質（又は抗原結合部位）の結合を競合的に阻害することを可能にするのに十分な数のアミノ酸残基を２つのエピトープが共有することを意味するものとする。例えば、「重複」エピトープは、少なくとも１又は２又は３又は４又は５又は６又は７又は８又は９又は２０個のアミノ酸を共有する。
急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）
本開示は、例えば、対象の急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）を治療又は防止するための方法を提供する。
ＡＲＤＳは、両側性肺浸潤、重症低酸素血症、及び非心原性肺水腫によって特徴付けられる、生命を脅かす状態である。ＡＲＤＳは、重症肺損傷及び３０～５０％の起因する死亡率をもたらす。今のところ、有効な薬理学的療法がない。（インフルエンザ及びコロナウイルス感染を含む）敗血症及び肺炎などの感染病因は、ＡＲＤＳの主な原因である。したがって、これらの基礎疾患又は障害（例えば、感染）の治療がまた、本開示の方法と組み合わせて企図される。
組織学的に、ヒトにおけるＡＲＤＳは、肺における重症急性炎症反応と、好中球性肺胞炎とによって特徴付けられる。内毒素（リポ多糖、ＬＰＳ）などの微生物病原体からの炎症刺激は、肺炎症を誘導するための当該微生物病原体の能力について十分に認識されており、全身及び気管内の両方でのＬＰＳの実験的投与は、本明細書に記載されるように、ＡＲＤＳの動物モデルにおいて肺炎症を誘導するために使用されている。ＬＰＳは、Ｔｏｌｌ様受容体４（ＴＬＲ４）を介して作用して、炎症性サイトカイン及びケモカインの発現を増加させ、白血球接着分子を上方制御して、内皮細胞活性化をもたらす。
ＡＲＤＳの生理学的特徴は、肺胞毛細管膜関門の破壊（すなわち、肺血管漏出）であり、これは、非心原性肺水腫の発症をもたらし、非心原性肺水腫において、タンパク質性滲出液が、肺胞空間にあふれ、ガス交換を損ない、呼吸不全を誘発する。肺胞上皮及び内皮細胞損傷及び／又は死の両方が、ＡＲＤＳの発病に関与している。ＡＲＤＳは、集中治療室（ＩＣＵ）における長期機械的換気の重要な誘因であり続け、ＡＲＤＳ関連死亡率は、最適なＩＣＵ支持治療にもかかわらず、依然として３０～５０％と高い。
ＡＲＤＳは、２０１２年に専門家の委員会（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｈｏｒａｃｉｃ Ｓｏｃｉｅｔｙ及びＳｏｃｉｅｔｙ ｏｆ Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｃａｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅによって支持されたＥｕｒｏｐｅａｎ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｏｆ Ｉｎｔｅｎｓｉｖｅ Ｃａｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅの主導）によって、ベルリン定義として定義された。現在、関連死亡率増加（それぞれ、２７％；９５％ＣＩ、２４％～３０％；３２％；９５％ＣＩ、２９％～３４％；及び４５％；９５％ＣＩ、４２％～４８％；Ｐ＜０．００１）、及び生存者における機械的換気の中央値持続時間増加（それぞれ、５日；四分位［ＩＱＲ］、２～１１；７日；ＩＱＲ、４～１４；及び９日；ＩＱＲ、５～１７；Ｐ＜０．００１）での、軽症、中等症、及び重症の３つの段階がある。定義は、生理学的情報を含有する、４つの多施設臨床データセットからの４１８８人のＡＲＤＳを有する患者、及び３つの単一施設データセットからの２６９人のＡＲＤＳを有する患者の患者レベルメタ分析を使用して、経験的に評価された。
ベルリンの定義によれば、ＡＲＤＳは、
（１）臨床的発作又は呼吸器症状の発症の１週間以内の症状、
（２）少なくとも５ｃｍの持続的気道陽圧（ＣＰＡＰ）又は終末呼気陽圧（ＰＥＥＰ）において、３００ｍｍＨｇ以下のＰａＯ２／ＦｉＯ２比であって、ＰａＯ２が、動脈血酸素分圧であり、ＦｉＯ２が、吸入酸素濃度である、３００ｍｍＨｇ以下のＰａＯ２／ＦｉＯ２比によって判定された場合、急性低酸素性呼吸不全、
（３）肺Ｘ線写真における両側性陰影が、浸出液、硬化、又は無気肺によって完全に説明されないこと、及び
（４）浮腫／呼吸不全が、心不全又は流体過剰によって完全に説明されないことによって定義される。
本開示の方法の一例では、対象は、ＡＲＤＳについての上記のベルリン基準を満たす。他の例では、対象は、ＡＲＤＳについてのベルリン基準を依然として満たしていなくてもよいが、ＡＲＤＳを発症するリスクがあるとして同定される。そのような対象に、ＡＲＤＳの発症を防止するために、ＣＤ１３１に結合する化合物が投与され得る。
本明細書で使用される場合、「リスクがある」という用語は、対象が、正常な個体と比較して、ＡＲＤＳを発症する確率が増加していることを意味する。対象は、当該技術分野で既知のいずれかの方法を使用して、ＡＲＤＳを発症するリスクがあるとして同定され得る。例えば、対象が、ＡＲＤＳの共通基礎原因（例えば、敗血症、肺炎、外傷など）を有し、呼吸器症状、例えば、速い呼吸及び／又は息切れを有する場合、当該対象は、ＡＲＤＳを発症するリスクがあると同定され得る。ＡＲＤＳを発症するリスクがある対象を同定するのに好適な他の方法は、例えば、ＷＯ２０１８／２０４５０９、Ｌｕｏ ｅｔ ａｌ．，２０１７，Ｊ Ｔｈｏｒａｃ Ｄｉｓ９，３９７９－３９９５、ｄｅ Ｈａｒｏ ｅｔ ａｌ．，２０１３，Ａｎｎａｌｓ ｏｆ Ｉｎｔｅｎｓｉｖｅ Ｃａｒｅ３，１１、Ｉｒｉｙａｍａ ｅｔ ａｌ．，２０２０，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｎｔｅｎｓｉｖｅ Ｃａｒｅ８，７、Ｇａｊｉｃ ｅｔ ａｌ．，２０１１，Ａｍ Ｊ Ｒｅｓｐｉｒ Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ Ｍｅｄ１８３，４６２－４７０、及びＹａｄａｖ ｅｔ ａｌ．，２０１７，Ａｍ Ｊ Ｒｅｓｐｉｒ Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ Ｍｅｄ１９５，７２５－７３６に記載されている方法を含む。
ＡＲＤＳの重症度は、
（１）軽症ＡＲＤＳ：２００～３００ｍｍＨｇのＰａＯ２／ＦｉＯ２、
（２）中等症ＡＲＤＳ：１００～２００ｍｍＨｇのＰａＯ２／ＦｉＯ２、及び
（３）重症ＡＲＤＳ：１００ｍｍＨｇ以下のＰａＯ２／ＦｉＯ２として分類され得る。
本開示の方法のいくつかの例では、ＡＲＤＳは、軽症ＡＲＤＳである。いくつかの例では、ＡＲＤＳは、中等症ＡＲＤＳである。いくつかの例では、ＡＲＤＳは、重症ＡＲＤＳである。
本開示の方法は、ＡＲＤＳの全ての原因に適する。ＡＲＤＳの最も共通する原因は、敗血症、有害物質の吸引、肺炎、重症外傷（両側性肺挫傷、長骨折後の脂肪塞栓症、重症外傷又は熱傷の数日後に発症する敗血症、及び広範囲な外傷性組織損傷）、大量輸血、輸血関連急性肺損傷、肺及び造血幹細胞移植、他の急性炎症性疾患、薬物及びアルコール、並びに肺サーファクタントタンパク質Ｂ（ＳＰ－Ｂ）遺伝子における変異などの遺伝的決定因子である。
より最近では、ＡＲＤＳは、重症コロナウイルス疾患２０１９（ＣＯＶＩＤ－１９）、すなわち、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２）感染からのウイルス性肺炎に起因することが示されている。本開示の方法は、重症ＣＯＶＩＤ－１９を患っている対象のＡＲＤＳを治療又は防止するために使用され得る。したがって、いくつかの例では、本開示は、対象のＣＯＶＩＤ－１９を治療する方法であって、対象に、ＣＤ１３１に結合しＩＬ－３、ＩＬ－５、及びＧＭ－ＣＳＦによるシグナル伝達を中和する化合物を投与することを含む、方法を提供する。。ＣＯＶＩＤ－１９の共通症状は、発熱、咳、疲労、息切れ、並びに嗅覚及び味覚の喪失を含む。症例の大部分は、軽症症状をもたらすが、いくつかは、ＡＲＤＳに進行する。過去における他のコロナウイルス感染は、ＳＡＲＳ及びＭＥＲＳを引き起こしており、ＳＡＲＳ及びＭＥＲＳもまた、ＡＲＤＳをもたらし得る。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染は、例えば、特定のＰＣＲ試験を使用する、鼻咽頭分泌物中のウイルスＲＮＡの陽性検出によって、確認され得る。ＣＯＶＩＤ－１９病は、一貫した臨床歴、疫学的接触、及び陽性ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２試験によって確認され得る。ＣＯＶＩＤ－１９感染が確認された対象が、上記のベルリンＡＲＤＳ診断基準を満たすときに、ＣＯＶＩＤ－１９に関連するＡＲＤＳは、診断され得る。
抗体
一例では、任意の例による本明細書に記載の化合物は、抗体の抗原結合部位を含むタンパク質である。いくつかの例では、化合物は、抗体である。
抗体を生成するための方法は、当該技術分野で既知であり、及び／又はＨａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ（ｅｄｉｔｏｒｓ）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，（１９８８）に記載されている。一般に、そのような方法では、任意選択で任意の好適又は所望の担体、アジュバント、又は薬学的に許容される賦形剤で製剤化されたＣＤ１３１又はその領域（例えば、細胞外ドメイン）若しくはその免疫原性断片若しくはエピトープ、又はそれを発現及び表示する細胞（すなわち、免疫原）が、非ヒト動物、例えば、マウス、ニワトリ、ラット、ウサギ、モルモット、イヌ、ウマ、ヤギ、又はブタに投与される。免疫原は、鼻腔内、筋肉内、皮下、静脈内、皮内、腹腔内、又は他の既知の経路によって投与し得る。
モノクローナル抗体は、本開示によって企図される抗体の１つの例示的形態である。用語「モノクローナル抗体」又は「ｍＡｂ」は、同じ抗原（複数可）に、例えば、抗原内の同じエピトープに結合することができる均一抗体集団を指す。この用語は、抗体の供給源又はそれが作製される方法に関して限定されることを意図するものではない。
ｍＡｂの産生には、例えば、ＵＳ４１９６２６５又はＨａｒｌｏｗ及びＬａｎｅ（１９８８）（上記）に例示される手順など、いくつかの既知の技法のうちのいずれか１つを使用してよい。
あるいは、ＡＢＬ－ＭＹＣ技術（ＮｅｏＣｌｏｎｅ、Ｍａｄｉｓｏｎ ＷＩ５３７１３，ＵＳＡ）が、（例えば、Ｌａｒｇａｅｓｐａｄａ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ．１９７：８５－９５，１９９６に記載されるように）ＭＡｂを分泌する細胞株を産生するために使用される。
抗体はまた、例えば、ＵＳ６３０００６４及び／又はＵＳ５８８５７９３に記載されるように、ディスプレイライブラリ、例えば、ファージディスプレイライブラリをスクリーニングすることによって、産生又は単離され得る。例えば、本発明者らは、ファージディスプレイライブラリから完全ヒト抗体を単離した。
本開示の抗体は、合成抗体であってもよい。例えば、抗体は、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、又は脱免疫化抗体である。
一例では、本明細書に記載の抗体は、キメラ抗体である。「キメラ抗体」という用語は、重鎖及び／又は軽鎖の一部が、特定の種（例えば、マウスなどのネズミ）に由来するか、又は特定の抗体クラス若しくはサブクラスに属する抗体中の対応する配列と同一であるか又は相同である一方で、鎖の残りの部分は、別の種（例えば、ヒトなどの霊長類）に由来するか、又は別の抗体クラス若しくはサブクラスに属する抗体中の対応する配列と同一であるか又は相同である抗体を指す。キメラ抗体の作製方法は、例えば、ＵＳ４８１６５６７及びＵＳ５８０７７１５に記載されている。
本開示の抗体は、ヒト化抗体であっても、ヒト抗体であってもよい。
「ヒト化抗体」という用語は、非ヒト種由来の抗体に由来する抗原結合部位又は可変領域を有し、ヒト抗体の構造及び／又は配列に基づいて残りの抗体構造を有するキメラ抗体のサブクラスを指すと理解されなければならない。ヒト化抗体において、抗原結合部位は、一般に、ヒト抗体の可変領域内の適切なＦＲに接合された非ヒト抗体からの相補性決定領域（ＣＤＲ）、及びヒト抗体からの残りの領域を含む。抗原結合部位は、野生型（すなわち、非ヒト抗体のものと同一である）であってもよく、１つ以上のアミノ酸置換によって改変されてもよい。場合によっては、ヒト抗体のＦＲ残基は、対応する非ヒト残基によって置き換えられる。
非ヒト抗体又はその部分（例えば、可変領域）をヒト化するための方法は、当該技術分野において既知である。ヒト化は、ＵＳ５２２５５３９、又はＵＳ５５８５０８９の方法に従って行うことができる。抗体をヒト化するための他の方法は、除外されないものとする。
本明細書で使用される「ヒト抗体」という用語は、可変領域（例えば、ＶＨ、ＶＬ）、及びヒト、例えば、ヒト生殖細胞又は体細胞に見出される配列に由来するか、又はそれに対応する任意選択で一定の領域を有する抗体を指す。
例示的なヒト抗体は本明細書に記載されており、ＷＯ２０１７／０８８０２８に記載される９Ａ２－ＶＲ２４．２９（また、「ＣＳＬ３１１」とも称される）、及びＳｕｎ ｅｔ ａｌ．（１９９９）Ｂｌｏｏｄ９４：１９４３－１９５１に記載されるＢＩＯＮ－１、並びに／又はその可変領域を含むタンパク質若しくはその誘導体が挙げられる。これらのヒト抗体は、非ヒト抗体と比較して、ヒトにおける免疫原性の低下という利点を提供する。
一例では、抗体は、多重特異性抗体である。例えば、ＣＤ１３１に結合する化合物は、ＣＤ１３１に結合する抗原結合部位と、異なる抗原に結合する更なる抗原結合部位とを含むタンパク質であり得る。したがって、いくつかの例では、抗体は二重特異性抗体である。
抗体結合ドメイン含有タンパク質
単一ドメイン抗体
いくつかの例では、本開示の化合物は、単一ドメイン抗体（「ドメイン抗体」又は「ｄＡｂ」又は「ナノボディ」という用語と互換的に使用される）であるか、又はそれを含むタンパク質である。単一ドメイン抗体は、単一のモノマー可変抗体ドメインからなる抗体断片である。抗体全体と同様に、これは特定の抗原に選択的に結合することができる。わずか１２～１５ｋＤａの分子量で、単一ドメイン抗体は、２本の重タンパク質鎖及び２本の軽鎖からなる一般的な抗体（１５０～１６０ｋＤａ）よりもはるかに小さく、Ｆａｂ断片（約５０ｋＤａ、１本の軽鎖と半分の重鎖）及び単鎖可変断片（約２５ｋＤａ、２つの可変ドメイン、１つは軽鎖から、もう１つは重鎖から）よりも更に小さい。ある特定の例では、単一ドメイン抗体は、ヒト単一ドメイン抗体である（Ｄｏｍａｎｔｉｓ，Ｉｎｃ．、Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ；例えば、ＵＳ６２４８５１６を参照されたい）。
いくつかの例では、単一ドメイン抗体は、ＶＨＨ断片である。ＶＨＨ断片は、以下に記載のラクダ科重鎖抗体の可変ドメイン（ＶＨ）からなる。
いくつかの例では、単一ドメイン抗体は、ＶＮＡＲ断片である。ＶＮＡＲ断片は、以下に記載の、軟骨魚類由来の重鎖抗体の可変ドメイン（ＶＨ）からなる。
ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ
いくつかの例では、本開示のタンパク質は、ＷＯ９８／０４４００１及び／又はＷＯ９４／００７９２１に記載されるものなどの、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ若しくはより高次元のタンパク質複合体であるか、又はそれらを含む。
一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）
当業者は、ｓｃＦｖが、単一のポリペプチド鎖内のＶＨ及びＶＬ領域、並びにＶＨ及びＶＬの間のポリペプチドリンカーを含み、これにより、ｓｃＦｖが抗原結合のための所望の構造を形成することを可能にすること（すなわち、単一のポリペプチド鎖のＶＨ及びＶＬが互いに会合してＦｖを形成すること）を認識するであろう。例えば、リンカーは、１２個を超えるアミノ酸残基を含み、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３は、ｓｃＦｖにとってより好ましいリンカーの１つである。
重鎖抗体
重鎖抗体は、重鎖を含むが、軽鎖を含まない限り、他の多くの形態の抗体と構造的に異なる。したがって、これらの抗体は、「重鎖のみ抗体」とも称される。重鎖抗体は、例えば、ラクダ科及び軟骨魚類（ＩｇＮＡＲとも呼ばれる）に見出される。
ラクダ科及びその可変領域由来の重鎖抗体及びそれらの産生及び／又は単離及び／又は使用方法の一般的な説明は、とりわけ、以下の参考文献ＷＯ９４／０４６７８、ＷＯ９７／４９８０５及びＷＯ９７／４９８０５に見出される。
軟骨魚類及びその可変領域由来の重鎖抗体並びにそれらの産生方法及び／又は単離方法及び／又は使用方法の一般的な説明は、とりわけ、ＷＯ２００５／１１８６２９に見出される。
他の抗体及び抗体断片
本開示は、他の抗体及び抗体断片、例えば、
（ｉ）ＵＳ５，７３１，１６８に記載の「鍵及び穴」二重特異性タンパク質、
（ｉｉ）例えば、ＵＳ４，６７６，９８０に記載のヘテロ共役タンパク質、
（ｉｉｉ）例えば、ＵＳ４，６７６，９８０に記載の化学架橋剤を使用して産生されるヘテロ共役タンパク質、及び
（ｉｖ）Ｆａｂ３（例えば、ＥＰ１９９３０３０２８９４に記載されているような）。
Ｖ様タンパク質
本開示の化合物の例は、Ｔ細胞受容体である。Ｔ細胞受容体は、抗体のＦｖモジュールと同様の構造に結合する２つのＶドメインを有する。Ｎｏｖｏｔｎｙ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ８８：８６４６－８６５０，１９９１は、Ｔ細胞受容体の２つのＶドメイン（α及びβと称される）が、どのように融合され、一本鎖ポリペプチドとして発現され得るか、更に、抗体ｓｃＦｖに直接類似する疎水性を低減するために表面残基をどのように変化させるかを記載している。２つのＶ－α及びＶ－βドメインを含む一本鎖Ｔ細胞受容体又は多量体Ｔ細胞受容体の産生を記載する他の刊行物としては、ＷＯ１９９９／０４５１１０又はＷＯ２０１１／１０７５９５が挙げられる。
抗原結合ドメインを含む他の非抗体タンパク質としては、一般に単量体であるＶ様ドメインを有するタンパク質が挙げられる。かかるＶ様ドメインを含むタンパク質の例としては、ＣＴＬＡ－４、ＣＤ２８、及びＩＣＯＳが挙げられる。かかるＶ様ドメインを含むタンパク質の更なる開示は、ＷＯ１９９９／０４５１１０に含まれる。
アドネクチン
一例では、本開示の化合物は、アドネクチンである。アドネクチンは、ループ領域が抗原結合を付与するように変更されるヒトフィブロネクチンの第１０のフィブロネクチンＩＩＩ型（１０Ｆｎ３）ドメインに基づく。例えば、１０Ｆｎ３ドメインのβサンドイッチの一端にある３つのループを操作して、アドネクチンが抗原を特異的に認識できるようにすることができる。更なる詳細については、ＵＳ２００８／０１３９７９１又はＷＯ２００５／０５６７６４を参照されたい。
アンチカリン
更なる例では、本開示の化合物は、アンチカリンである。アンチカリンは、ステロイド、ビリン、レチノイド及び脂質などの小さな疎水性分子を輸送する細胞外タンパク質のファミリーであるリポカリンに由来する。リポカリンは、抗原に結合するように操作することができる円錐構造の開放端に複数のループを有する剛性βシート二次構造を有する。そのような操作されたリポカリンは、アンチカリンとして知られている。アンチカリンの更なる説明については、ＵＳ７２５０２９７Ｂ１又はＵＳ２００７／０２２４６３３を参照されたい。
アフィボディ
更なる例では、本開示の化合物は、アフィボディである。アフィボディは、抗原に結合するように操作され得る黄色ブドウ球菌のプロテインＡのＺドメイン（抗原結合ドメイン）に由来する足場である。Ｚドメインは、約５８個のアミノ酸の３ヘリカルバンドルからなる。ライブラリは、表面残基のランダム化によって生成されてきた。詳細については、ＥＰ１６４１８１８を参照されたい。
アビマー
更なる例では、本開示の化合物は、アビマーである。アビマーは、Ａドメイン足場ファミリーに由来するマルチドメインタンパク質である。約３５個のアミノ酸の天然ドメインは、定義されたジスルフィド結合構造を採用する。多様性は、Ａドメインファミリーによって示される自然変動のシャッフルによって生成される。詳細については、ＷＯ２００２／０８８１７１を参照されたい。
ＤＡＲＰｉｎ
更なる例では、本開示の化合物は、設計されたアンキリンリピートタンパク質（ＤＡＲＰｉｎ）である。ＤＡＲＰｉｎは、細胞骨格への一体膜タンパク質の結合を媒介するタンパク質のファミリーであるアンキリンに由来する。単一のアンキリン反復は、２つのαヘリックスとβターンからなる３３残基モチーフである。それらは、第１のαヘリックス及び各反復のβターン内の残基をランダム化することによって、異なる標的抗原に結合するように操作することができる。それらの結合界面は、モジュールの数を増やすことによって増加させることができる（親和性成熟の方法）。詳細については、ＵＳ２００４０１３２０２８を参照されたい。
脱免疫化タンパク質
本開示はまた、脱免疫化抗体又はタンパク質を企図する。脱免疫化抗体及びタンパク質は、１つ以上のエピトープ、例えば、Ｂ細胞エピトープ又は除去された（すなわち、変異した）Ｔ細胞エピトープを有し、それによって、哺乳動物が抗体又はタンパク質に対する免疫応答を上昇させる可能性を低下させる。脱免疫化抗体及びタンパク質を産生するための方法は、当該技術分野において既知であり、例えば、ＷＯ２０００／３４３１７、ＷＯ２００４／１０８１５８及びＷＯ２００４／０６４７２４に記載されている。
好適な変異を導入し、得られたタンパク質を発現及びアッセイするための方法は、本明細書の説明に基づいて当業者には明白であろう。
タンパク質への突然変異
本開示はまた、本開示のタンパク質の変異型を企図する。例えば、かかる変異タンパク質は、本明細書に記載される配列と比較して、１つ以上の保存的アミノ酸置換を含む。いくつかの例では、タンパク質は、３０個以下又は２０個以下又は１０個以下、例えば、９個又は８個又は７個又は６個又は５個又は４個又は３個又は２個の保存的アミノ酸置換を含む。「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸残基が、類似の側鎖及び／又は親水性及び／又は親水性を有するアミノ酸残基で置き換えられるものである。
一例では、突然変異タンパク質は、天然に存在するタンパク質と比較して、１個又は２個又は３個又は４個又は５個又は６個の保存的アミノ酸変化のみを有するか、又はそれ以下である。保存的アミノ酸変化の詳細を以下に提供する。当業者は、例えば、本明細書の開示から認識するであろうように、そのようなわずかな変化は、タンパク質の活性を改変しないように合理的に予測され得る。
類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、β分岐側鎖（例えば、トレオニン、バリン、イソロイシン）、及び芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアニン、トリプトファン、ヒスチジン）を含み、当該技術分野において定義されている。
本開示はまた、本開示のタンパク質、例えば、ＣＤＲ３などのＣＤＲにおける非保存的アミノ酸変化（例えば、置換）を企図する。一例では、タンパク質は、例えば、ＣＤＲ３中、例えばＣＤＲ３中に、６個未満又は５個未満又は４個未満又は３個未満又は２個未満又は１個未満の非保存的アミノ酸置換を含む。
本開示はまた、本明細書に記載の配列と比較した１つ以上の挿入又は欠失を企図する。いくつかの例では、タンパク質は、１０個以下、例えば、９個又は８個又は７個又は６個又は５個又は４個又は３個又は２個の挿入及び／又は欠失を含む。
定常領域
本開示は、抗体の定常領域を含む、本明細書に記載のタンパク質及び／又は抗体を包含する。これには、Ｆｃに融合された抗体の抗原結合断片が含まれる。
本開示のタンパク質の産生に有用な定常領域の配列は、いくつかの異なる供給源から入手することができる。いくつかの例では、タンパク質の定常領域又はその一部は、ヒト抗体に由来する。定常領域又はその一部は、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、及びＩｇＥを含む任意の抗体クラス、並びにＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４を含む任意の抗体アイソタイプに由来し得る。一例では、定常領域は、ヒトアイソタイプＩｇＧ４又は安定化ＩｇＧ４定常領域である。
一例では、定常領域のＦｃ領域は、例えば、天然又は野生型ヒトＩｇＧ１又はＩｇＧ３ Ｆｃ領域と比較して、エフェクター機能を誘導する能力が低下している。一例では、エフェクター機能は、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）及び／又は抗体依存性細胞媒介性食作用（ＡＤＣＰ）及び／又は補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）である。タンパク質を含有するＦｃ領域のエフェクター機能のレベルを評価するための方法は、当該技術分野において既知であり、かつ／又は本明細書に記載される。
一例では、Ｆｃ領域は、ＩｇＧ４ Ｆｃ領域（すなわち、ＩｇＧ４定常領域からの）、例えば、ヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域である。好適なＩｇＧ４ Ｆｃ領域の配列は、当業者には明白であり、かつ／又は公的に入手可能なデータベースにおいて入手可能であろう（例えば、国立バイオテクノロジー情報センター（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ）から入手可能であろう）。
一例では、定常領域は、安定化ＩｇＧ４定常領域である。「安定化ＩｇＧ４定常領域」という用語は、Ｆａｂアーム交換、又はＦａｂアーム交換若しくは半抗体の形成を受ける傾向、又は半抗体を形成する傾向を低減するように改変されたＩｇＧ４定常領域を意味すると理解されるであろう。「Ｆａｂアーム交換」とは、ヒトＩｇＧ４のタンパク質修飾の種類を指し、ここで、ＩｇＧ４重鎖及び結合軽鎖（半分分子）は、別のＩｇＧ４分子からの重軽鎖対に交換される。したがって、ＩｇＧ４分子は、（二重特異性分子をもたらす）２つの異なる抗原を認識する２つの異なるＦａｂアームを獲得し得る。Ｆａｂアーム交換は、インビボで天然に生じ、精製された血液細胞又は還元されたグルタチオン等の還元剤によってインビトロで誘導され得る。「半抗体」は、ＩｇＧ４抗体が解離して、各々が単一の重鎖及び単一の軽鎖を含む２つの分子を形成するときに形成される。
一例では、安定化ＩｇＧ４定常領域は、Ｋａｂａｔのシステム（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ ＤＣ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，１９８７ａｎｄ／ｏｒ１９９１）に従うヒンジ領域の２４１位にプロリンを含む。この位置は、ＥＵ番号付けシステム（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ ＤＣ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，２００１及びＥｄｅｌｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．ＵＳＡ，６３，７８－８５，１９６９）に従うヒンジ領域の２２８位に対応する。ヒトＩｇＧ４において、この残基は、一般に、セリンである。プロリンに対するセリンの置換の後、ＩｇＧ４ヒンジ領域は、配列ＣＰＰＣを含む。この点において、当業者は、「ヒンジ領域」が、抗体の２つのＦａｂアームに可動性を付与するＦｃ及びＦａｂ領域を連結する抗体重鎖定常領域のプロリンが豊富な部分であることを認識するであろう。ヒンジ領域は、重鎖間ジスルフィド結合に関与するシステイン残基を含む。これは、一般に、Ｋａｂａｔの番号付けシステムに従って、ヒトＩｇＧ１のＧｌｕ２２６からＰｒｏ２４３まで伸張させることとして定義される。他のＩｇＧアイソタイプのヒンジ領域は、重鎖間ジスルフィド（Ｓ－Ｓ）結合を形成する第１及び最後のシステイン残基を同じ位置に配置することによって、ＩｇＧ１配列と整列され得る（例えば、ＷＯ２０１０／０８０５３８を参照されたい）。
安定化ＩｇＧ４抗体の更なる例は、ヒトＩｇＧ４の重鎖定常領域における４０９位のアルギニン（ＥＵ番号付けシステムによる）が、リジン、スレオニン、メチオニン、又はロイシン（例えば、ＷＯ２００６／０３３３８６に記載される）で置換される抗体である。定常領域のＦｃ領域は、追加的又は代替的に、アラニン、バリン、グリシン、イソロイシン、及びロイシンからなる群から選択される残基を、４０５に対応する位置（ＥＵ番号付けシステムによる）に含むことができる。任意選択で、ヒンジ領域は、位置２４１にプロリン（すなわち、ＣＰＰＣ配列）を含む（上記のように）。
別の例では、Ｆｃ領域は、低減されたエフェクター機能を有するように改変された領域、すなわち、「非免疫刺激性Ｆｃ領域」である。例えば、Ｆｃ領域は、２６８、３０９、３３０、及び３３１からなる群から選択される１つ以上の位置での置換を含むＩｇＧ１ Ｆｃ領域である。別の例では、Ｆｃ領域は、以下の変更、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、及びＧ２３６の欠失のうちの１つ以上、並びに／又は以下の変更、Ａ３２７Ｇ、Ａ３３０Ｓ、及びＰ３３１Ｓのうちの１つ以上を含むＩｇＧ１ Ｆｃ領域である（Ａｒｍｏｕｒ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２９：２６１３－２６２４，１９９９、Ｓｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ ＢｉｏｌＣｈｅｍ．２７６（９）：６５９１－６０４，２００１）。非免疫刺激性Ｆｃ領域の追加の例は、例えば、Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７７：１１２９－１１３８ ２００６、及び／又はＨｅｚａｒｅｈ Ｊ Ｖｉｒｏｌ；７５：１２１６１－１２１６８，２００１）に記載されている。
別の例では、Ｆｃ領域は、例えば、ＩｇＧ４抗体由来の少なくとも１つのＣＨ２ドメイン及びＩｇＧ１抗体由来の少なくとも１つのＣＨ３ドメインを含むキメラＦｃ領域であり、Ｆｃ領域は、２４０、２６２、２６４、２６６、２９７、２９９、３０７、３０９、３２３、３９９、４０９及び４２７（ＥＵ番号付け）からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸位置での置換を含む（例えば、ＷＯ２０１０／０８５６８２に記載される）。例示的な置換としては、２４０Ｆ、２６２Ｌ、２６４Ｔ、２６６Ｆ、２９７Ｑ、２９９Ａ、２９９Ｋ、３０７Ｐ、３０９Ｋ、３０９Ｍ、３０９Ｐ、３２３Ｆ、３９９Ｓ、及び４２７Ｆが挙げられる。
追加の改変
本開示はまた、本開示の抗体又はタンパク質への追加の改変を企図する。
例えば、抗体は、タンパク質の半減期を増加させる１つ以上のアミノ酸置換を含む。例えば、抗体は、胎児性Ｆｃ受容体ＦｃＲｎ）に対するＦｃ領域の親和性を増加させる１つ以上のアミノ酸置換を含むＦｃ領域を含む。例えば、Ｆｃ領域は、エンドソームにおけるＦｃ／ＦｃＲｎ結合を容易にするために、より低いｐＨ、例えば、約ｐＨ６．０でのＦｃＲｎに対する親和性を増加させた。一例では、Ｆｃ領域は、約ｐＨ７．４でのその親和性と比較して、約ｐＨ６でのＦｃＲｎに対する親和性を増加させており、これは細胞リサイクル後の血液中へのＦｃの再放出を促進する。これらのアミノ酸置換は、血液からのクリアランスを減少させることによって、タンパク質の半減期を延長するのに有用である。
例示的なアミノ酸置換としては、ＥＵ番号付けシステムによるＴ２５０Ｑ及び／又はＭ４２８Ｌ若しくはＴ２５２Ａ、Ｔ２５４Ｓ及びＴ２６６Ｆ又はＭ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ及びＴ２５６Ｅ又はＨ４３３Ｋ及びＮ４３４Ｆが挙げられる。追加の又は代替のアミノ酸置換は、例えば、ＵＳ２００７／０１３５６２０又はＵＳ７０８３７８４に記載されている。
タンパク質は、融合タンパク質であり得る。したがって、一例では、タンパク質は、アルブミン、その機能的断片又は変異型を更に含む。一例では、アルブミン、その機能的断片又は変異型は、ヒト血清アルブミンなどの血清アルブミンである。一例では、アルブミン、その機能的断片又は変異型は、１つ以上のアミノ酸置換、欠失、又は挿入、例えば、５個以下、４個以下、３個以下、２個以下、又は１個以下の置換を含む。本開示での使用に好適なアミノ酸置換は、当業者には明らかであり、天然に存在する置換及び例えば、ＷＯ２０１１／０５１４８９、ＷＯ２０１４／０７２４８１、ＷＯ２０１１／１０３０７６、ＷＯ２０１２／１１２１８８、ＷＯ２０１３／０７５０６６、ＷＯ２０１５／０６３６１１及びＷＯ２０１４／１７９６５７に記載されるものなどの操作された置換を含む。
一例では、本開示のタンパク質は、可溶性補体受容体又はその機能的断片若しくは変異型を更に含む。一例では、タンパク質は更に補体阻害剤を含む。
タンパク質産生
一例では、任意の例に従う本明細書に記載のタンパク質は、タンパク質を産生するのに十分な条件下で、例えば、本明細書に記載されるように、かつ／又は当該技術分野において既知であるように、ハイブリドーマを培養することによって産生される。
組換え発現
別の例では、任意の例による本明細書に記載されるタンパク質は、組換えである。
組換えタンパク質の場合、それをコードする核酸を発現構築物又はベクターにクローニングすることができ、その後、大腸菌細胞、酵母細胞、昆虫細胞、又は哺乳動物細胞、例えばサルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ヒト胚性腎臓（ＨＥＫ）細胞、又はそれ以外の場合にはタンパク質を産生しない骨髄腫細胞などの宿主細胞にトランスフェクトする。タンパク質を発現するために使用される例示的な細胞は、ＣＨＯ細胞、骨髄腫細胞又はＨＥＫ細胞である。これらの目的を達成するための分子クローニング技術が当該技術分野において既知であり、例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，（ｅｄｉｔｏｒｓ），Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂ．Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ－Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ（１９８８、現在までに更新されたものを含む）又はＳａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ（１９８９）に記載されている。多種多様なクローニング及びインビトロ増幅方法は、組換え核酸の構築に好適である。組換え抗体の産生方法もまた当該技術分野で既知であり、例えば、ＵＳ４８１６５６７又はＵＳ５５３０１０１を参照されたい。
単離後、核酸は、更なるクローニング（ＤＮＡの増幅）のために、又は無細胞系若しくは細胞内での発現のために、発現構築物若しくは発現ベクター中のプロモーターに作動可能に連結された挿入される。
本明細書で使用する場合、「プロモーター」という用語は、その最も広い文脈でとられるべきであり、核酸の発現を、例えば、発達及び／又は外部刺激に応答して、又は組織特異的な様式で変化させる追加の調節エレメント（例えば、上流活性化配列、転写因子結合部位、エンハンサー及びサイレンサー）を伴うか伴わない、正確な転写開始に必要なＴＡＴＡボックス又は開始剤エレメントを含む、ゲノム遺伝子の転写調節配列を含む。本文脈において、「プロモーター」という用語は、それが作動可能に連結した核酸の発現を付与、活性化又は増強する組換え、合成若しくは融合核酸、又は誘導体を説明するためにも使用される。例示的なプロモーターは、１つ以上の特定の調節エレメントの追加のコピーを含有して、発現を更に増強し、及び／又は前記核酸の空間的発現及び／又は時間的発現を変化させることができる。
本明細書で使用される場合、用語「に作動可能に連結される」は、核酸の発現がプロモーターによって制御されるように、核酸に対してプロモーターを配置することを意味する。
細胞内で発現するための多くのベクターが利用可能である。ベクター成分には、一般に、シグナル配列、タンパク質をコードする配列（例えば、本明細書に提供される情報に由来する）、エンハンサーエレメント、プロモーター、及び転写終結配列のうちの１つ以上が挙げられるが、これらに限定されない。当業者は、タンパク質を発現させるための好適な配列を認識するであろう。例示的なシグナル配列としては、原核分泌シグナル（例えば、ｐｅｌＢ、アルカリホスファターゼ、ペニシリナーゼ、Ｉｐｐ、又は熱安定性エンテロトキシンＩＩ）、酵母分泌シグナル（例えば、インバーターゼリーダー、α因子リーダー、又は酸ホスファターゼリーダー）、又は哺乳動物分泌シグナル（例えば、単純ヘルペスｇＤシグナル）が挙げられる。
哺乳類細胞において活性な例示的なプロモーターとしては、サイトメガロウイルス最初期プロモーター（ＣＭＶ－ＩＥ）、ヒト伸長因子１－αプロモーター（ＥＦ１）、小核ＲＮＡプロモーター（Ｕ１ａ及びＵ１ｂ）、α－ミオシン重鎖プロモーター、シミアンウイルス４０プロモーター（ＳＶ４０）、ラウス肉腫ウイルスプロモーター（ＲＳＶ）、アデノウイルス主要後期プロモーター、β－アクチンプロモーター、ＣＭＶエンハンサー／β－アクチンプロモーター又は免疫グロブリンプロモーター若しくはその活性断片を含むハイブリッド調節エレメントが挙げられる。有用な哺乳類宿主細胞株の例は、ＳＶ４０（ＣＯＳ－７、ＡＴＣＣ ＣＲＬ１６５１）によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株、ヒト胚性腎臓株（浮遊培養中での成長のためにサブクローニングされた２９３又は２９３細胞、ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ１０）、又はチャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）である。
例えば、ピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）、サッカロマイセス・セレヴィシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、及びシゾサッカロミセス・ポンベ（Ｓ．ｐｏｍｂｅ）を含む群から選択される酵母細胞などの酵母細胞における発現に好適な典型的なプロモーターとしては、ＡＤＨ１プロモーター、ＧＡＬ１プロモーター、ＧＡＬ４プロモーター、ＣＵＰ１プロモーター、ＰＨＯ５プロモーター、ｎｍｔプロモーター、ＲＰＲ１プロモーター、又はＴＥＦ１プロモーターが挙げられるが、これらに限定されない。
発現のために単離された核酸又はそれを含む発現構築物を細胞に導入するための手段は、当業者に既知である。所与の細胞に使用される技術は、既知の成功した技術に依存する。組換えＤＮＡを細胞内に導入するための手段としては、とりわけ、マイクロインジェクション、ＤＥＡＥ－デキストランによって媒介されるトランスフェクション、リポソームによって媒介されるトランスフェクション（例えば、リポフェクタミン（Ｇｉｂｃｏ、ＭＤ，ＵＳＡ）及び／又はセルフェクチン（Ｇｉｂｃｏ、ＭＤ，ＵＳＡ）を使用することによって）、ＰＥＧ媒介性ＤＮＡ取り込み、エレクトロポレーション、並びにＤＮＡコーティングされたタングステン又は金粒子（Ａｇｒａｃｅｔｕｓ Ｉｎｃ．、ＷＩ，ＵＳＡ）を使用することによってなどの微粒子衝突が挙げられる。
タンパク質を産生するために使用される宿主細胞は、使用される細胞型に応じて、様々な培地中で培養され得る。Ｈａｍ’ｓ Ｆｌ０（Ｓｉｇｍａ）、Ｍｉｎｉｍａｌ Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ Ｍｅｄｉｕｍ（（ＭＥＭ）、（Ｓｉｇｍａ）、ＲＰＭｌ－１６４０（Ｓｉｇｍａ）、及びＤｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ’ｓ Ｍｅｄｉｕｍ（（ＤＭＥＭ）、Ｓｉｇｍａ）などの市販の培地は、哺乳類細胞の培養に好適である。本明細書で考察される他の細胞型を培養するための培地は、当該技術分野で既知である。
タンパク質の単離
タンパク質を単離するための方法は、当該技術分野において既知であり、かつ／又は本明細書に記載される。
タンパク質が培地中に分泌される場合、かかる発現系からの上清は、まず、市販のタンパク質濃度フィルター、例えば、アミコン又はミリポアペリコン限外濾過ユニットを使用して濃縮され得る。ＰＭＳＦなどのプロテアーゼ阻害剤が、タンパク質分解を阻害するための前述のステップのうちのいずれかに含まれ得、抗生物質が、外来性混入物の増殖を防止するために含まれ得る。あるいは又は加えて、上清は、例えば、連続遠心分離を使用して、タンパク質を発現する細胞から濾過及び／又は分離され得る。
細胞から調製されたタンパク質は、例えば、イオン交換、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、親和性クロマトグラフィー（例えば、プロテインＡ親和性クロマトグラフィー又はプロテインＧクロマトグラフィー）、又は前述のもののいずれかの組み合わせを使用して、精製され得る。これらの方法は、当該技術分野で既知であり、例えば、ＷＯ１９９９／５７１３４又はＥｄ Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｄａｖｉｄ Ｌａｎｅ（ｅｄｉｔｏｒｓ）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，（１９８８）に記載されている。
当業者はまた、タンパク質が、精製又は検出を容易にするためのタグ、例えば、ポリヒスチジンタグ、例えば、ヘキサヒスチジンタグ、インフルエンザウイルスヘマグルチニン（ＨＡ）タグ、サルウイルス５（Ｖ５）タグ、フラッグタグ、又はグルタチオンＳ－トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）タグを含むように修飾することができることを認識するであろう。得られたタンパク質を、親和性精製などの当該技術分野で既知の方法を使用して精製する。例えば、ヘキサ－ｈｉｓタグを含むタンパク質は、タンパク質を含む試料を、固体又は半固体支持体上に固定化されたヘキサ－ｈｉｓタグに特異的に結合するニッケル－ニトリロ三酢酸（Ｎｉ－ＮＴＡ）と接触させ、試料を洗浄して非結合タンパク質を除去し、その後、結合タンパク質を溶出することによって精製される。代替的に、又は加えて、タグに結合するリガンド又は抗体が、親和性精製方法で使用される。
ＣＤ１３１に結合する核酸化合物
一例では、ＣＤ１３１に結合する化合物は、核酸アプタマー（適応性オリゴマー）である。アプタマーは、特定の標的分子、例えば、タンパク質又は小分子、例えば、ＣＤ１３１に結合する能力を提供する二次及び／又は三次構造を形成することができる一本鎖オリゴヌクレオチド又はオリゴヌクレオチド類似体である。したがって、アプタマーは、抗体に対するオリゴヌクレオチド類似体である。一般に、アプタマーは、約１５～約１００ヌクレオチド、例えば、約１５～約４０ヌクレオチド、例えば、約２０～約４０ヌクレオチドを含み、なぜなら、これらの範囲内にある長さのオリゴヌクレオチドは、従来の技術によって調製することができるからである。
アプタマーは、アプタマーのライブラリから単離され得るか、又はアプタマーのライブラリから同定され得る。アプタマーライブラリは、例えば、ランダムオリゴヌクレオチドをベクター（又はＲＮＡアプタマーの場合には発現ベクター）にクローニングすることによって産生され、ランダム配列は、ＰＣＲプライマーの結合部位を提供する既知の配列に隣接する。所望の生物活性を提供する（例えば、ＣＤ１３１に特異的に結合する）アプタマーが選択される。活性が増加したアプタマーは、例えば、ＳＥＬＥＸ（指数関数的増加によるリガンドの系統的展開）を使用して選択される。アプタマーライブラリの作製及び／又はスクリーニングのための好適な方法は、例えば、Ｅｌｌｏｉｎｇｔｏｎ ａｎｄ Ｓｚｏｓｔａｋ，Ｎａｔｕｒｅ３４６：８１８－２２，１９９０、ＵＳ５２７０１６３、及び／又はＵＳ５４７５０９６に記載されている。
化合物のアッセイ活性
ＣＤ１３１への結合
タンパク質（例えば、ＣＤ１３１）への候補化合物の結合を評価するための方法は、例えば、Ｓｃｏｐｅｓに（Ｐｒｏｔｅｉｎ ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ：ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ｔｈｉｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｖｅｒｌａｇ，１９９４）に記載されているように、当該技術分野で既知である。そのような方法は、一般に、タンパク質を標識し、固定化された化合物と接触させることを伴う。非特異的結合タンパク質を除去するために洗浄した後、標識の量、及び結果として、結合タンパク質が検出される。当然ながら、タンパク質は固定化され、化合物は標識されることができる。パンニングタイプアッセイもまた、使用され得る。あるいは又は加えて、表面プラズモン共鳴アッセイが、使用され得る。結合のレベルは、バイオセンサーを使用して好都合に判定することもできる。
任意選択で、ＣＤ１３１の化合物又はそのエピトープの解離定数（Ｋｄ）を決定する。ＣＤ１３１に結合する化合物の「Ｋｄ」又は「Ｋｄ値」は、一例では、放射性標識又は蛍光標識ＣＤ１３１結合アッセイによって測定される。このアッセイは、非標識ＣＤ１３１の滴定シリーズの存在下で、化合物を最小濃度の標識ＣＤ１３１で平衡化させる。非結合ＣＤ１３１を除去するために洗浄した後、標識の量が判定され、これは、タンパク質のＫｄを示す。
別の例によれば、Ｋｄ又はＫｄ値は、例えば、固定化ＣＤ１３１又はその領域を有するＢＩＡｃｏｒｅ表面プラズモン共鳴（ＢＩＡｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）を使用して、表面プラズモン共鳴アッセイを使用することによって測定される。
エピトープマッピング
別の例では、本明細書に記載されるタンパク質によって結合されるエピトープがマッピングされる。エピトープマッピング方法は、当業者には明らかである。例えば、目的のエピトープを含むＣＤ１３１配列又はその領域にまたがる一連の重複ペプチド、例えば、１０～１５個のアミノ酸を含むペプチドが作製される。次いで、タンパク質は、それぞれのペプチドに接触し、タンパク質が結合するペプチドが、判定される。これは、タンパク質が結合するエピトープを含むペプチドの判定を可能にする。タンパク質が、複数の非連続ペプチドに結合している場合、タンパク質は、立体構造エピトープに結合し得る。
代替的に、又は加えて、ＣＤ１３１内のアミノ酸残基は、例えば、アラニンスキャン突然変異誘発によって突然変異され、タンパク質結合を低減又は防止する突然変異を判定する。タンパク質の結合を低減又は防止するいずれかの変異が、タンパク質が結合したエピトープ中にある可能性がある。
更なる方法は本明細書に例示され、本開示の固定化タンパク質にＣＤ１３１又はその領域を結合させ、得られる複合体をプロテアーゼで消化することを含む。次いで、固定化タンパク質に依然として結合したペプチドは、単離され、例えば、質量分析を使用して、分析されて、ペプチドの配列が、判定される。
更なる方法は、ＣＤ１３１又はその領域の水素を重水素に変換し、得られたタンパク質を本開示の固定化タンパク質に結合することを含む。次いで、重水素を水素に変換し、ＣＤ１３１又はその領域を単離し、酵素で消化し、例えば、質量分析を用いて、本明細書に記載のタンパク質の結合によって水素への変換から保護されていたであろう重水素を含むそれらの領域を特定するために分析する。
代替的に、タンパク質が結合するエピトープは、Ｘ線結晶構造解析によって判定することができる。例えば、タンパク質とＣＤ１３１との間に複合体が形成され、次いで結晶化される。次いで、得られた結晶をＸ線回折分析に供して、複合体中のアミノ酸の原子座標を決定する。エピトープは、Ｘ線回折から決定された原子座標に従って、タンパク質と接触するＣＤ１３１中のアミノ酸を含む。
競合的結合の判定
抗体９Ａ２－ＶＲ２４．２９の結合を競合的に阻害するタンパク質を決定するためのアッセイは、当業者には明白であろう。例えば、９Ａ２－ＶＲ２４．２９は、検出可能な標識、例えば、蛍光標識又は放射性標識にコンジュゲートされる。次いで、標識された抗体及び試験タンパク質を混合し、ＣＤ１３１又はその領域（例えば、配列番号１又は５を含むポリペプチド）又はそれを発現する細胞と接触させる。次いで、標識された９Ａ２－ＶＲ２４．２９のレベルを判定し、標識された抗体がタンパク質の非存在下でＣＤ１３１、領域又は細胞と接触させられたときに判定されたレベルと比較する。標識された９Ａ２－ＶＲ２４．２９のレベルが、タンパク質の不在下と比較して試験タンパク質の存在下で低下する場合、タンパク質は、９Ａ２－ＶＲ２４．２９のＣＤ１３１への結合を競合的に阻害すると考えられる。
任意選択で、試験タンパク質は、９Ａ２－ＶＲ２４．２９に異なる標識にコンジュゲートされる。この代替標識は、ＣＤ１３１又はその領域若しくは細胞への試験タンパク質の結合のレベルの検出を可能にする。
別の例では、タンパク質は、ＣＤ１３１又はその領域（例えば、配列番号１又は５を含むポリペプチド）、又はＣＤ１３１、領域若しくは細胞を９Ａ２－ＶＲ２４．２９と接触させる前に、それを発現する細胞に結合することが許される。タンパク質の非存在下と比較して、タンパク質の存在下での結合した９Ａ２－ＶＲ２４．２９の量の減少は、タンパク質が、ＣＤ１３１への９Ａ２－ＶＲ２４．２９の結合を競合的に阻害することを示す。相互アッセイは、標識されたタンパク質を使用して行うこともでき、最初に９Ａ２－ＶＲ２４．２９がＣＤ１３１に結合することを可能にする。この場合、９Ａ２－ＶＲ２４．２９の不在下と比較して、９Ａ２－ＶＲ２４．２９の存在下でＣＤ１３１に結合した標識タンパク質の減少した量は、タンパク質が、９Ａ２－ＶＲ２４．２９のＣＤ１３１への結合を競合的に阻害することを示す。
前述のアッセイのうちのいずれも、例えば、本明細書に記載されるように、ＣＤ１３１及び／又は配列番号１又は５の変異型及び／又は９Ａ２－ＶＲ２４．２９が結合するＣＤ１３１のリガンド結合領域を用いて実行することができる。
中和の判定
一例では、ＣＤ１３１に結合する化合物は、ＩＬ－３、ＩＬ－５、及び／又はＧＭ－ＣＳＦのＣＤ１３１を含む受容体（例えば、それぞれ、ＩＬ－３Ｒ、ＩＬ－５Ｒ、及び／又はＧＭ－ＣＳＦ－Ｒ）への結合を低減又は防止する。これらのアッセイは、標識されたＩＬ－３／ＩＬ－５／ＧＭ－ＣＳＦ及び／又は標識された化合物を使用して、競合的結合アッセイとして行うことができる。例えば、関連する受容体を発現する細胞を、ＣＤ１３１結合化合物の存在下又は非存在下でＩＬ－３／ＩＬ－５／ＧＭ－ＣＳＦと接触させ、結合標識の量を検出する。化合物の非存在下と比較して、ＣＤ１３１結合化合物の存在下での結合標識の量の減少は、化合物が、ＣＤ１３１を含む受容体へのＩＬ－３／ＩＬ－５／ＧＭ－ＣＳＦの結合を低減又は防止することを示す。化合物の複数の濃度を試験することによって、ＩＣ５０を決定することができる。すなわち、ＣＤ１３１又はＥＣ５０を含む受容体に結合するＩＬ－３／ＩＬ－５／ＧＭ－ＣＳＦの量を減少させる化合物の濃度、すなわち、化合物によって達成されるＩＬ－３／ＩＬ－５／ＧＭ－ＣＳＦのＣＤ１３１への結合の最大阻害の５０％を達成するタンパク質の濃度を判定することができる。
更なる例では、ＣＤ１３１結合化合物は、白血病細胞株ＴＦ－１のＩＬ－３／ＩＬ－５／ＧＭ－ＣＳＦ媒介性増殖を低減又は防止する。例えば、ＴＦ－１細胞は、増殖を停止するのに十分な時間（例えば、２４～４８時間）、ＩＬ－３／ＩＬ－５／ＧＭ－ＣＳＦなしで培養される。次いで、細胞を、ＩＬ－３／ＩＬ－５／ＧＭ－ＣＳＦ及び様々な濃度のＣＤ１３１結合化合物の存在下で培養する。対照細胞は、化合物（陽性対照）又はＩＬ－３／ＩＬ－５／ＧＭ－ＣＳＦ（陰性対照）と接触しない。細胞増殖は、次いで、標準的な技法、例えば、３Ｈ－チミジンの組み込みを使用して評価される。ＩＬ－３の存在下で細胞増殖を陽性対照未満のレベルに減少又は防止するＣＤ１３１結合化合物は、ＩＬ－３シグナル伝達を中和すると考えられる。複数の濃度のＣＤ１３１結合化合物を試験することによって、ＩＣ５０を決定する。
別の例では、ＣＤ１３１結合化合物は、ＳＴＡＴ－５活性化を阻害又は防止する。例えば、ＩＬ－３及び／又はＧＭ－ＣＳＦの存在下でインターフェロン調節因子１（ｉｒｆ１）応答エレメントの制御下にあるβ－ラクタマーゼレポーター遺伝子を含む細胞（例えば、ＴＦ－１細胞）。好適な細胞は、Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎから入手可能である。細胞をまた、好適な基質（例えば、ＣＣＦ２又はＣＣＦ４などの負に帯電した蛍光β－ラクタマーゼ基質）と接触させ、シグナルの変化（例えば、蛍光）を判定する。陽性対照（すなわち、化合物の非存在下でＩＬ－３及び／又はＧＭ－ＣＳＦと接触した細胞）におけるシグナルの変化の低減は、化合物が、ＩＬ－３及び／又はＧＭ－ＣＳＦ誘導ＳＴＡＴ－５シグナル伝達を低減又は防止することを示す。
更なる例では、本開示のＣＤ１３１結合化合物は、免疫細胞である。例えば、ＣＤ１３１結合化合物は、好中球細胞サイズのＧＭ－ＣＳＦ誘導増加を低減又は阻害することによって判定される、ＧＭ－ＣＳＦによる単離されたヒト好中球の活性化を低減又は阻害する。例えば、好中球（例えば、約１×１０５細胞）を、ＣＤ－１３１結合タンパク質及びＧＭ－ＣＳＦの存在下で好適な時間（例えば、約２４時間）培養する。次いで、細胞を固定し（例えば、ホルムアルデヒドで）、フローサイトメトリーを使用して前方散乱について分析する。
一例では、ＣＤ１３１結合化合物は、ヒト好塩基球によるＩＬ－３誘導ＩＬ－８分泌を低減又は阻害する。例えば、好塩基球（例えば、約１×１０５細胞）を、ＣＤ１３１結合化合物及びＩＬ－３の存在下で、好適な時間（例えば、２４時間）培養する。ＩＬ－８分泌は、次いで、例えば、例えば、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓから入手可能であるように、ＥＬＩＳＡを使用して評価される。
更なる例では、ＣＤ１３１結合化合物は、ＩＬ－３媒介性生存又はｐＤＣを低減又は予防する。例えば、ｐＤＣを、ＣＤ１３１結合化合物及びＩＬ－３の存在下で、好適な時間（例えば、２４時間）培養する。次いで、細胞生存を、例えば、ＬｏｎｚａからのＶｉａＬｉｇｈｔ Ｐｌｕｓ Ｋｉｔなどの標準的な方法を使用して評価する。
更なる例では、ＣＤ１３１結合化合物は、フローサイトメトリーによって評価された前方散乱の変化を評価することによって判定される、ＩＬ－５によるヒト末梢血好酸球の活性化を低減又は防止する。例えば、好酸球（例えば、約１×１０５細胞）を、ＣＤ１３１結合化合物及びＩＬ－５の存在下で、好適な時間（例えば、約２４時間）培養する。次いで、細胞を固定し（例えば、ホルムアルデヒドで）、フローサイトメトリーを使用して前方散乱における変化について評価する。
更なる例では、本開示のＣＤ１３１結合化合物は、ＩＬ－５及び／又はＧＭ－ＣＳＦ及び／又はＩＬ－３の存在下でのヒト末梢血好酸球の生存を低下させるか又は防止する。例えば、好酸球（例えば、約１×１０４細胞）を、ＣＤ１３１結合化合物及びＩＬ－５及び／又はＧＭ－ＣＳＦ及び／又はＩＬ－３の存在下で、好適な時間（例えば、約５日間）、並びに標準方法（例えば、ＬｏｎｚａからのＶｉａＬｉｇｈｔ Ｐｌｕｓ Ｋｉｔ）を使用して評価された細胞数の存在下で培養する。
なおも更なる例では、本開示のＣＤ１３１結合化合物は、ヒト肥満細胞からのＩＬ－３誘導ＴＮＦα放出を低減又は防止する。例えば、ヒト培養肥満細胞（例えば、１０週齢の末梢血由来細胞）は、ＣＤ１３１結合化合物及びＩＬ－３の存在下で培養される。次いで、ＴＮＦα分泌のレベルを、例えば、ＥＬＩＳＡによって評価する。
更なる例では、本開示のＣＤ１３１結合化合物は、ヒト肥満細胞からのＩＬ－３誘導ＩＬ－１３放出を低減又は防止する。例えば、ヒト培養肥満細胞（例えば、１０週齢の末梢血由来細胞）は、ＣＤ１３１結合化合物及びＩＬ－３の存在下で培養される。次いで、ＩＬ－１３分泌のレベルを、例えば、ＥＬＩＳＡによって評価する。
更なる例では、本開示のＣＤ１３１結合化合物は、ＩＬ－３及び／又はＩＬ－５及び／又はＧＭ－ＣＳＦによるヒト肥満細胞からのＩｇＥ媒介性ＩＬ－８放出の増強を低減又は防止する。例えば、ヒト培養肥満細胞（例えば、１０週齢の末梢血由来細胞）は、ＣＤ１３１結合化合物及びＩＬ－３／ＩＬ－５／ＧＭ－ＣＳＦの存在下で培養される（例えば、約４８時間）。次いで、細胞を、ＩｇＥ（例えば、ヒト骨髄腫ＩｇＥ）とともに、好適な時間（例えば、約２４時間）培養し、ＩＬ－８分泌を、例えばＥＬＩＳＡによって評価する。
更なる例では、ＣＤ１３１結合化合物は、ＳＣＦ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－３、及びＩＬ－５の存在下で培養されたＣＤ３４＋ヒト骨髄細胞（又は臍帯血細胞）によるＣＦＵ－ＧＭの形成を低減又は防止する。例えば、ＣＤ３４＋細胞（例えば、約１×１０３細胞）を、ＣＤ１３１結合化合物の存在下で（例えば、ウシのウシ血清アルブミン、ＳＣＦ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－３、及びＩＬ－５を補充したメチルセルロース（例えば、１％メチルセルロース）上で）培養する。細胞を好適な時間（例えば、約１６日間）培養し、その後に形成されたコロニーの数を列挙する。
更なる例では、ＣＤ１３１結合化合物は、炎症性気道疾患又は鼻ポリープ症に罹患している対象からの痰又は鼻ポリープ組織からの免疫細胞（例えば、好酸球）の生存を低下させるか、又は死を誘導する。例えば、免疫細胞は、ＩＬ－３及び／又はＩＬ－５及び／又はＧＭ－ＣＳＦ及びタンパク質又は抗体の存在下で培養される。次いで、標準的な方法を用いて、例えば、アネキシン－Ｖ発現を検出することによって、例えば、蛍光活性化細胞選別を用いて、細胞死を評価する。
別の例では、ＣＤ１３１結合化合物は、好塩基球からのＩＬ－３媒介性ヒスタミン放出を低減又は防止する。例えば、好塩基球を含む低密度白血球を、ＩｇＥ、ＩＬ－３、及び様々な濃度の抗体又は抗原結合断片とインキュベートする。対照細胞は、免疫グロブリン（陽性対照）又はＩＬ－３（陰性対照）を含まない。次いで、放出されたヒスタミンのレベルを、標準的な技法、例えば、ＲＩＡを使用して評価する。ＩＬ－３シグナル伝達を中和するために、陽性対照よりも低いレベルにヒスタミン放出のレベルを低下させるＣＤ１３１結合化合物が考えられる。一例では、減少のレベルは、タンパク質濃度と相関する。ＩＬ－３媒介性ヒスタミン放出を評価するための例示的な方法は、例えば、Ｌｏｐｅｚ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．，１４５：６９，１９９０に記載されている。
ＩＬ－３シグナル伝達中和を評価するための別のアッセイは、ＣＤ１３１結合化合物が内皮細胞に対するＩＬ－３媒介作用を低減又は防止するか否かを判定することを含む。例えば、ヒト臍静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）は、ＩＬ－３（任意選択で、ＩＦＮ－γを用いて）及び様々な濃度のＣＤ１３１結合化合物の存在下で培養される。次いで、分泌されたＩＬ－６の量を、例えば、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）を使用して評価する。対照培養物は、ＣＤ１３１結合化合物（陽性対照）又はＩＬ－３（陰性対照）を含まない。ＩＬ－３の存在下でＩＬ－６産生を陽性対照未満のレベルに減少又は防止するＣＤ１３１結合化合物は、ＩＬ－３シグナル伝達を中和すると考えられる。
本開示では、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－５又はＩＬ－３シグナル伝達の中和を評価するための他の方法が企図される。
エフェクター機能の判定
本明細書で考察されるように、いくつかのＣＤ１３１結合化合物は、エフェクター機能が低減されているか、又はエフェクター機能（又はエフェクター機能が強化されている）を有する。ＡＤＣＣ活性を評価する方法は当該技術分野において既知である。
一例では、ＡＤＣＣ活性のレベルは、５１Ｃｒ放出アッセイ、ユーロピウム放出アッセイ、又は３５Ｓ放出アッセイを使用して評価される。これらのアッセイの各々において、ＣＤ１３１を発現する細胞を、列挙された化合物のうちの１つ以上とともに、かつ化合物が細胞に取り込まれるのに十分な条件下で培養する。３５Ｓ放出アッセイの場合、ＣＤ１３１を発現する細胞を、３５Ｓ標識メチオニン及び／又はシステインで、標識アミノ酸が新たに合成されたタンパク質に組み込まれるのに十分な時間培養することができる。次いで、細胞を、ＣＤ１３１結合化合物の存在下又は非存在下、並びに免疫エフェクター細胞、例えば、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）及び／又はＮＫ細胞の存在下で培養する。細胞培養培地中の５１Ｃｒ、ユーロピウム放出アッセイ、及び／又は３５Ｓ放出の量が、次いで検出され、ＣＤ１３１結合化合物の非存在下と比較して、ＣＤ１３１結合化合物の存在におけるほとんど又は全くの変化は、タンパク質が、エフェクター機能又は増強されたエフェクター機能を示すＣＤ１３１結合化合物の非存在下と比較して（又はＩｇＧ１ Ｆｃ領域を含むＣＤ１３１結合化合物の存在下と比較して増加して）、低減されたエフェクター機能及び増加した量を有することを示す。タンパク質によって誘導されたＡＤＣＣのレベルを評価するためのアッセイを開示する例示的な刊行物には、Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ，ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８３：７０５９－７０６３，１９８６、及びＢｒｕｇｇｅｍａｎｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６６：１３５１－１３６１，１９８７が挙げられる。
タンパク質によって誘導されるＡＤＣＣのレベルを評価するための他のアッセイとしては、フローサイトメトリーのためのＡＣＴＩ（商標）非放射性細胞傷害性アッセイ（ＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．ＣＡ，ＵＳＡ）又はＣｙｔｏＴｏｘ９６（登録商標）非放射性細胞傷害性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ、ＷＩ，ＵＳＡ）が挙げられる。
Ｃ１ｑ結合アッセイを実施して、ＣＤ１３１結合化合物がＣ１ｑに結合することができ、ＣＤＣを誘導し得ることを確認してもよい。補体活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイが実行され得る（例えば、Ｇａｚｚａｎｏ－Ｓａｎｔｏｒｏ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ２０２：１６３，１９９６を参照されたい）。
半減期の決定
本開示によって包含されるいくつかのタンパク質は、改善された半減期を有し、例えば、非改変タンパク質と比較して、その半減期を延長するように修飾される。改善された半減期を有するタンパク質を決定するための方法は、当業者には明白であろう。
本開示のタンパク質の半減期は、例えば、インビボ薬物動態研究によって、Ｋｉｍ ｅｔ ａｌ，Ｅｕｒ Ｊ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌ２４：５４２，１９９４に記載される方法に従って測定することができる。この方法によれば、放射性標識タンパク質をマウスに静脈内注射し、その血漿濃度を、時間の関数として、例えば注射後３分～７２時間で定期的に測定する。代替的に、又は追加的に、他の種、例えば、カニクイザル及びヒトを使用することができ、並びに／又は放射標識されていないタンパク質を注入し、その後、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）を使用して検出することができる。このようにして得られるクリアランス曲線は、二相性、すなわち、α相及びβ相であるべきである。タンパク質のインビボ半減期の決定のために、β相におけるクリアランス率を計算し、野生型又は非改変タンパク質のクリアランス率と比較する。
タンパク質の胎児性Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への結合の相対的親和性はまた、その相対的なインビボ半減期を示すことができる（例えば、Ｋｉｍ ｅｔ ａｌ，Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ２４：２４２９，１９９４を参照されたい）。
治療有効性
ＣＤ１３１に結合する化合物の治療有効性は、化合物を投与されていない対象と比較して、化合物を投与された対象における疾患又は症状の重症度を比較することによって評価することができる。代替的に、又は追加的に、候補化合物の治療有効性は、動物モデルで評価することができる。
気管内リポ多糖（ＬＰＳ）誘導肺炎症は、周知であり詳細に記載された、ＡＲＤＳについての動物モデルである（例えば、Ｍａｔｕｔｅ－Ｂｅｌｌｏ ｅｔ ａｌ．，２０１１，Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４４，７２５－７３８、Ｏｒｆａｎｏｓ ｅｔ ａｌ．，２００４，Ｉｎｔｅｎｓｉｖｅ Ｃａｒｅ Ｍｅｄ．３０，１７０２－１７１４、Ｔｓｕｓｈｉｍａ ｅｔ ａｌ．，２００９，Ｉｎｔｅｒｎ．Ｍｅｄ．４８，６２１－６３０を参照されたい）。
ＡＲＤＳのＬＰＳ誘導動物モデルにおいて、候補化合物は、好適な対照（すなわち、プラセボ）に対して、動物の肺における炎症の程度を測定することによって、効力について評価され得る。肺における炎症は、気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）からの細胞計数、並びにＢＡＬＦ及び肺実質ホモジネート中の総タンパク質又は炎症促進性サイトカインのレベルを測定することによって、評価され得る。また、肺におけるＬＰＳ誘導透過性（すなわち、急性肺損傷の程度）が測定され得る。
Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおけるインフルエンザＡウイルス（ＩＡＶ）肺感染は、ｈＡＣＥ２トランスジェニックマウスにおけるＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２感染の免疫病理学的特徴を、大きく再現することができる（例えば、Ｗｉｎｋｌｅｒ ＥＳ ｅｔ ａｌ．，２０２０，Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ２１（１１）：１３２７－１３３５を参照されたい）。
一例では、治療効力は、ＩＡＶ誘導ウイルス性肺炎動物モデルにおいて評価され得る。例えば、過剰炎症及びウイルス性肺炎を引き起こすＩＡＶモデル。ＩＡＶウイルス性肺炎モデルにおいて、候補化合物は、好適な対照（すなわち、プラセボ）に対して、動物の肺における炎症の程度を測定することによって、効力について評価され得る。肺における炎症は、ＢＡＬからの細胞計数、並びにＢＡＬＦ及び肺実質ホモジネート中の総タンパク質又は炎症促進性サイトカインのレベルを測定することによって、評価され得る。
いくつかの例では、化合物の治療効力を評価することは、対象におけるバイオマーカーの発現のレベルを検出及び／又は定量することを含む。ＡＲＤＳの治療の効力を評価するのに好適なバイオマーカーは、Ｇ－ＣＳＦ、プラスミノーゲン活性化因子阻害因子－１（ＰＡＩ－１）、Ｄ－ダイマー、好中球エラスターゼ、ＡＧＥ可溶性受容体（ｓＲＡＧＥ）、インターフェロンガンマ（ＩＦＮ－γ）、インターロイキン１β（ＩＬ－１β）、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２ｐ７０、ＩＬ－１３、及び腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ－α）を含む。
バイオマーカーを検出及び／又は定量することは、当該技術分野で既知のいずれかの方法によって、実行され得る。例えば、一例では、バイオマーカーのレベルは、質量分析を使用して評価される。質量分析は、例えば、超高性能液体クロマトグラフィー（ＵＰＬＣ）、高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、ガスクロマトグラフィー（ＧＣ）、ガスクロマトグラフィー／質量分析（ＧＣ／ＭＳ）、及びＵＰＬＣと合わせて、実行され得る。バイオマーカーのレベルを評価する他の方法は、生物学的方法、例えば、ＥＬＩＳＡアッセイ、ウエスタンブロット、及び多重免疫アッセイなどを含むが、これらに限定されない。他の技法は、定量アレイ、ＰＣＲ、ノーザンブロット分析の使用を含み得る。成分又は因子のレベルを判定するために、成分全体、例えば、全長タンパク質又はＲＮＡ転写物全体が、存在する又は完全に配列決定される必要はない。換言すれば、例えば、分析されているタンパク質の断片のレベルを判定することは、分析されているバイオマーカーのレベルが増加又は減少していると結論又は評価するのに十分であり得る。同様に、例えば、アレイ又はブロットが、成分レベルを判定するために使用される場合、検出可能なシグナルの存在／非存在／強度は、バイオマーカーのレベルを評価するのに十分であり得る。
バイオマーカーのレベルを評価するために、試料は、対象から採取され得る。試料は、バイオマーカープロファイルの成分のレベルをアッセイする前に、処理されてもよく又は処理されなくてもよい。例えば、全血は、個体から採取され得、血液試料は、血漿又は血清を血液から単離するために、処理され得る、例えば、遠心分離され得る。試料は、処理又は分析前に、貯蔵されてもよく又は貯蔵されなくてもよく、例えば、試料を凍結させてもよく又は凍結させなくてもよい。
本発明の方法において試験され得る生物学的試料は、全血、血清、血漿、気管吸引液、ＢＡＬＦ、尿、唾液、又は他の体液（便、涙液、滑液、痰）、呼気、例えば、凝縮された呼気、又はそれらからの抽出物若しくは精製物、又はそれらの希釈物を含む。生物学的試料はまた、生存する対象からの又は死後に採取された組織ホモジネート、組織切片、及び生検検体を含む。試料は、調製され得、例えば、必要に応じて、希釈又は濃縮され得、通常の様式で貯蔵され得る。
組成物
いくつかの例では、本明細書に記載のＣＤ１３１結合化合物は、経口、非経口、吸入スプレーによる、吸着、吸収、局所、直腸、経鼻、経口、膣、脳室内、従来の無毒の薬学的に許容される担体を含有する投与製剤中に埋め込まれたリザーバを介して、又は任意の他の好都合な投与形態によって投与され得る。本明細書で使用される「非経口」という用語は、皮下、静脈内、筋肉内、腹腔内、くも膜下腔内、心室内、胸骨内、ポリップ内、並びに頭蓋内注射又は輸注技術を含む。
ＣＤ１３１結合化合物を、対象に投与するための好適な形態（例えば、医薬組成物）に調製するための方法は、当該技術分野において既知であり、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１８ｔｈ ｅｄ．，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．，１９９０）及びＵ．Ｓ．Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ：Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｆｏｒｍｕｌａｒｙ（Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．，１９８４）に記載される方法などが挙げられる。
本開示の医薬組成物は、非経口投与、例えば、静脈内投与、又は臓器若しくは関節の体腔若しくは管腔への投与に特に有用である。投与用組成物は、一般に、薬学的に許容される担体、例えば水性担体中に溶解したＣＤ１３１結合化合物の溶液を含む。様々な水性担体、例えば、緩衝生理食塩水などを使用することができる。組成物は、ｐＨ調整剤及び緩衝剤、毒性調整剤などの生理学的条件、例えば、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、乳酸ナトリウムなどを近似するために必要に応じて、薬学的に許容される補助物質を含有し得る。これらの製剤中の本開示のＣＤ１３１結合化合物の濃度は、広範囲に変化し得、主に、選択される特定の投与様式及び患者のニーズに応じて、流体体積、粘度、体重などに基づいて選択される。例示的な担体として、水、食塩水、リンゲル液、デキストロース溶液、及び５％ヒト血清アルブミンが挙げられる。混合油及びエチルオレイン酸などの非水ビヒクルも使用し得る。リポソームはまた、担体として使用してもよい。ビヒクルは、等張性及び化学的安定性を向上させる少量の添加剤、例えば、緩衝剤及び防腐剤を含有し得る。
製剤化に際して、本開示のＣＤ１３１結合化合物は、投薬製剤に適合する方法で、治療／予防的に有効な量で投与される。製剤は、上述の注射用溶液の種類などの様々な剤形で容易に投与されるが、他の薬学的に許容される形態、例えば、経口投与のための錠剤、丸剤、カプセル剤又は他の固体、坐剤、ペッサリー、鼻液又はスプレー、エアロゾル、吸入剤、リポソーム形態なども企図される。医薬「徐放」カプセル又は組成物も使用してもよい。徐放製剤は、一般に、長期間にわたって一定の薬物レベルを与えるように設計されており、本開示のＣＤ１３１結合化合物を送達するために使用され得る。
ＷＯ２００２／０８０９６７には、呼吸器状態の治療のための抗体を含むエアロゾル化組成物を投与するための組成物及び方法が記載されており、これらは、本開示の方法による化合物の投与にも好適である。
併用療法
一例では、本開示の化合物は、ＡＲＤＳを治療又は防止するのに有用な別の療法と組み合わせて、併用若しくは追加の治療ステップ又は治療製剤の追加の成分のいずれかとして、投与される。
いくつかの例では、他の療法は、ＡＲＤＳを治療又は防止するために一般的に使用される療法である。本開示の方法と組み合わせての、ＡＲＤＳのための企図される療法は、肺炎症の減少、中隔浮腫の減少、肺胞及び／若しくは内皮炎症の減少、ＡＲＤＳの基礎原因の治療、並びに／又はＡＲＤＳの別の症状の緩和を含む治療を含む。他の療法は、化合物、細胞、若しくは他の分子の投与を含み得、かつ／又は他の療法は、物理的若しくは機械的形態の療法、例えば、人工換気及び腹臥位を含み得る。
いくつかの例では、他の療法は、腹臥位、流体管理、酸素供給、（高頻度振動換気を含むが、これに限定されない、より新しいモードの機械的換気を含む）人工換気、グルココルチコイド、界面活性剤、吸入一酸化窒素、抗酸化剤、プロテアーゼ阻害剤、組換えヒト活性化タンパク質Ｃ、β２アゴニスト、リソフィリン、スタチン、吸入ヘパリン、利尿剤、鎮静剤、鎮痛剤、筋弛緩剤、抗ウイルス剤、抗生物質、吸入プロスタサイクリン、吸入合成プロスタサイクリン類似体、ケトコナゾール、アルプロスタジル、ケラチノサイト増殖因子、ベータアゴニスト、ＴＳ因子７ａに対するヒトｍＡｂ、インターフェロン受容体アゴニスト、インスリン、パーフルオロカーボン、ブデソニド、組換えヒトＡＣＥ、組換えヒトＣＣ１０タンパク質、組織プラスミノーゲン活性化因子、ヒト間葉系幹細胞、又は食事療法を含む。併用療法の他の例では、他の療法は、グルココルチコイド、例えば、メチルプレドニゾロン、デキサメタゾン、プレドニゾン、プレドニゾロン、ベタメタゾン、トリアムシノロン、トリアムシノロンアセトニドブデソニド及びベクロメタゾン；ベータアゴニスト、例えば、アルブテロールなど；リソフィリン；ロスバスタチン、吸入ヘパリン；吸入一酸化窒素；組換えヒト活性化タンパク質Ｃ；ＮＳＡＩＤＳ、例えば、イブプロフェンなど；ナプロキセン及びアセトアミノフェン；ベシル酸シサトラクリウム；プロシステイン；アセチルシステイン；吸引プロスタサイクリン；キロセトナゾール；アルプロスタジル；ケラチノサイト増殖因子；ＴＳ因子７ａに対するヒトｍＡｂ；インスリン；パーフルオロカーボン；組換えヒトＡＣＥ；組換えヒトＣＣ１０タンパク質；組織プラスミノーゲン活性化因子；ヒト間葉系幹細胞；又は食事療法、例えば、オメガ３脂肪酸、抗酸化剤、及びγ－リノレン酸と等カロリー食物との組み合わせ、並びに体外膜型酸素供給（ＥＣＭＯ）を含む。
ＮＳＡＩＤＳは、アスピリン、アセトアミノフェン、ジフルニサール、サルサレート、イブプロフェン、デキシブプロフェン、ナプロキセン、フェノプロフェン、ケトプロフェン、デクスケトプロフェン、フルルビプロフェン、オキサプロジン、ロキソプロフェン、インドメタシン、トルメチン、スリンダク、エトドラック、ケトロラック、ナブメトン、ジクロフェナク、ピロキシカム、メロキシカム、テノキシカム、ドロキシカム、ロルノキシカム、イソキシカム、メフェナム酸、メクロフェナム酸、フルフェナム酸、トルフェナム酸、セレコキシブ、パレコキシブ、エトリコキシブ、ルミラコキシブ、及びフィロコキシブを含むが、これらに限定されない。
鎮痛剤は、ＮＳＡＩＤＳ及びオピオイド（麻薬）を含むが、これらに限定されない。オピオイドは、デキストロプロポキシフェン、コデイン、トラマドール、タペンタドール、アニレリジン、アルファプロジン、ペチジン、ヒドコドン、モルヒネ、オキシコドン、メタドン、ジアモルフィン、ヒドロモルホン、オキシモルホン、レボルファノール、７－ヒドロキシミトラギニン、ブプレノルフィン、フェンタニル、スフェンタニル、ブロマドール、エトルフィン、ジヒドロエトルフィン、及びカルフェンタニルを含むが、これらに限定されない。
グルココルチコイドは、ヒドロコルチゾン、コルチゾン、プレドニゾン、プレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、デキサメタゾン、ベタメタゾン、トリアムシノロン、ベクロメタゾン、又はフルドロコルチゾンを含むが、これらに限定されない。
いくつかの例では、他の療法は、標準治療療法である。ＡＲＤＳを治療又は防止するために一般的に使用される標準治療療法は、基礎状態（例えば、感染）の治療、機械的又は非侵襲的換気、輸血及び血行動態療法、腹臥位、日和見感染の治療、栄養法、並びに薬理学的療法を含む。例えば、Ｆａｃｕｌｔｙ ｏｆ Ｉｎｔｅｎｓｉｖｅ Ｃａｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ（ＦＩＣＭ）及びＩｎｔｅｎｓｉｖｅ Ｃａｒｅ Ｓｏｃｉｅｔｙ（ＩＣＳ）は最近、ＡＲＤＳを有する成人患者のための標準治療療法についてのガイドラインを発表した（Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ ｅｔ ａｌ．，２０１９，ＢＭＪ Ｏｐｅｎ Ｒｅｓｐ Ｒｅｓ６：ｅ０００４２０）。機械的換気が必要とされる場合、低い一回換気量（６ｍｌ／理想体重ｋｇ未満）及び気道内圧（３０ｃｍＨ２Ｏ未満の定常圧）の使用が推奨された。中等症／重症ＡＲＤＳ（１５０ｍｍＨｇ以下のＰａＯ２／ＦｉＯ２比）を有する患者について、１日当たり少なくとも１２時間の腹臥位が推奨された。保守的流体管理戦略の使用が、全ての患者について示唆されたが、高い終末呼気陽圧を有する機械的換気、及び神経筋遮断剤シサトラクリウムの４８時間の使用が、それぞれ、動脈血酸素分圧対吸入酸素濃度（ＰａＯ２／ＦｉＯ２）比が、２００ｍｍＨｇ以下及び１５０ｍｍＨｇ以下であるＡＲＤＳを有する患者について示唆された。体外膜型酸素供給が、保護的機械的換気の補助として、非常に重症なＡＲＤＳを有する患者について示唆された。本開示の方法は、ＡＲＤＳの治療又は防止のための上記の療法のうちのいずれかと組み合わせて、実行され得る。
いくつかの例では、他の療法は、ＡＲＤＳの基礎原因を治療するために使用される療法である。例えば、一例では、他の療法は、（例えば、ＡＲＤＳの基礎原因が、感染である場合）抗ウイルス剤又は抗生物質の投与を含む。一例では、他の療法は、レムデシビルの投与を含む。
一例では、ＣＤ１３１に結合する化合物は、他の療法と同時に投与される。一例では、ＣＤ１３１に結合する化合物は、他の療法前に投与される。一例では、ＣＤ１３１に結合する化合物は、他の療法後に投与される。
いくつかの例では、ＣＤ１３１に結合する化合物は、細胞と組み合わせて投与される。いくつかの例では、細胞は、幹細胞、例えば、間葉系幹細胞である。いくつかの例では、ＣＤ１３１に結合する化合物は、遺伝子療法と組み合わせて投与される。
投与量及び投与時期
本開示のＣＤ１３１結合化合物の好適な投与量は、特定のＣＤ１３１結合化合物、治療されるべき状態、及び／又は治療される対象に応じて変化する。例えば、準最適投与量から開始し、最適又は有用な投与量を決定するために投与量を漸増的に修正することによって、好適な投与量を決定することは、熟練した医師の能力の範囲内である。代替的に、治療／予防のための適切な投与量を決定するために、細胞培養アッセイ又は動物研究からのデータを使用し、好適な用量は、毒性がほとんど又はまったくない活性化合物のＥＤ５０を含む循環濃度の範囲内にある。投与量は、用いられる投与形態及び利用される投与経路に応じて、この範囲内で変化し得る。治療／予防有効用量は、初期に、細胞培養アッセイから推定され得る。用量は、細胞培養において決定されるＩＣ５０（すなわち、症状の最大阻害の半分を達成する化合物の濃度又は量）を含む循環血漿濃度範囲を達成するために、動物モデルにおいて製剤化されてもよい。そのような情報を使用して、ヒトにおいて有用な用量をより正確に決定することができる。血漿中のレベルは、例えば、高性能液体クロマトグラフィーによって測定され得る。
いくつかの例では、本開示の方法は、予防又は治療有効量の本明細書に記載のタンパク質を投与することを含む。
「治療有効量」という用語は、治療を必要とする対象に投与されると、対象の予後及び／又は状態を改善し、かつ／又は本明細書に記載の臨床状態の１つ以上の症状を、その状態の臨床診断又は臨床的特徴として観察され、受け入れられるレベルよりも低いレベルまで低減又は阻害する量である。対象に投与される量は、一般的な健康、他の疾患、年齢、性別、遺伝子型、及び体重などの、治療される状態の特定の特性、治療される状態の種類及び段階、投与方法、及び対象の特性に依存する。当業者であれば、これら及び他の因子に応じて適切な用量を決定することができるであろう。したがって、この用語は、本開示を特定の量、例えば、タンパク質の重量又は量に限定するものではなく、本開示は、対象において記載された結果を達成するのに十分な量のＣＤ１３１結合化合物を包含する。
本明細書で使用される場合、「予防有効量」という用語は、臨床状態の１つ以上の検出可能な症状の発症を予防又は阻害又は遅延させるのに十分な量のタンパク質を意味すると解釈される。当業者は、そのような量が、例えば、投与される特定のＣ１３１結合タンパク質及び／又は特定の対象及び／又は状態の種類若しくは重症度若しくは状態のレベル及び／又は状態に対する素因（遺伝的又はその他の場合）に応じて変化することを認識するであろう。したがって、この用語は、本開示を特定の量、例えば、ＣＤ１３１結合化合物の重量又は量に限定するものではなく、本開示は、対象において記載された結果を達成するのに十分な量のＣ１３１結合タンパク質を包含する。
本明細書に記載のＣＤ１３１結合化合物のインビボ投与について、通常の投薬量は、１日当たり固体の体重の約１０ｎｇ／ｋｇ～約１００ｍｇ／ｋｇ又はそれ以上であってもよい。治療する疾患又は障害の重症度に応じて、数日間以上にわたって繰り返し投与する場合、症状の所望の抑制が達成されるまで治療を維持することができる。
いくつかの例では、ＣＤ１３１結合化合物は、約１ｍｇ／ｋｇ～約３０ｍｇ／ｋｇ、例えば約１ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇ、又は約１ｍｇ／ｋｇ若しくは約２ｍｇ／ｋｇ若しくは５ｍｇ／ｋｇの初期（又は負荷）用量で投与される。次いで、ＣＤ１３１結合化合物は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約２ｍｇ／ｋｇ、例えば、約０．０５ｍｇ／ｋｇ～約１ｍｇ／ｋｇ、例えば、約０．１ｍｇ／ｋｇ～約１ｍｇ／ｋｇ、例えば、約０．１ｍｇ／ｋｇ又は０．５ｍｇ／ｋｇ又は１ｍｇ／ｋｇの低い維持用量で投与され得る。維持用量は、７～３０日ごと、例えば、１０～１５日ごと、例えば、１０日又は１１日又は１２日又は１３日又は１４日又は１５日ごとに投与されてもよい。
いくつかの例では、ＣＤ１３１結合化合物は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約５０ｍｇ／ｋｇ、例えば、約０．０５ｍｇ／ｋｇ～約３０ｍｇ／ｋｇ、例えば、約０．１ｍｇ／ｋｇ～約２０ｍｇ／ｋｇ、例えば、約０．１ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇ、例えば、約０．１ｍｇ／ｋｇ～約２ｍｇ／ｋｇの用量で投与され得る。例えば、ＣＤ１３１結合化合物は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約５ｍｇ／ｋｇ、例えば、約０．１ｍｇ／ｋｇ～約２ｍｇ／ｋｇ、例えば、約０．２ｍｇ／ｋｇ又は０．３ｍｇ／ｋｇ又は０．５ｍｇ／ｋｇ又は１ｍｇ／ｋｇ又は１．５ｍｇ／ｋｇの用量で（例えば、より高い負荷用量又はより低い維持用量なしで）投与される。いくつかの例では、多数の用量が、例えば、７～３０日ごと、例えば、１０～２２日ごと、例えば、１０～１５日ごと、例えば、１０日又は１１日又は１２日又は１３日又は１４日又は１５日又は１６日又は１７日又は１８日又は１９日又は２０日又は２１日又は２２日ごとに投与される。例えば、ＣＤ１３１結合化合物は、７日ごと、又は１４日ごと、又は２１日ごとに投与される。
いくつかの例では、治療を開始する時点で、哺乳動物に、連続７日以内、又は連続６日以内、又は連続５日以内、又は連続４日以内でＣＤ１３１結合化合物を投与する。
治療に適切に応答しない哺乳動物の場合、１週間に複数回投与してもよい。代替的に、又は加えて、増加する用量が投与され得る。
別の例では、有害反応を経験している哺乳類の場合、初期（又は負荷）用量は、１週間に数日にわたって、又は多数の連続した日にわたって分割され得る。
本開示の方法によるＣＤ１３１結合化合物の投与は、例えば、レシピエントの生理学的状態、投与の目的が治療的又は予防的であるかどうか、及び当業者に既知の他の要因に応じて、連続的又は断続的であり得る。ＣＤ１３１結合化合物の投与は、事前に選択された期間にわたって本質的に連続的であってもよく、又は一連の間隔をあけた用量であってもよく、例えば、状態の発症中又は発症後のいずれかであってもよい。
キット
本開示の別の例は、上記のような、ＡＲＤＳの治療又は防止に有用な化合物を収容するキットを提供する。
一例では、キットは、（ａ）本明細書に記載されるような、ＣＤ１３１に結合する化合物を、任意選択で、薬学的に許容される担体又は希釈剤中に含む容器と、（ｂ）対象のＡＲＤＳの効果を治療、防止、又は低減するための説明書を有する添付文書と、を含む。
本開示のこの例によれば、添付文書は、容器の上にある、又は容器に伴う。好適な容器は、例えば、ボトル、バイアル、シリンジなどを含む。容器は、ガラス又はプラスチックなどの様々な材料から形成され得る。容器は、ＡＲＤＳを治療又は防止するのに有効である組成物を保持又は収容し、滅菌アクセスポートを有し得る（例えば、容器は、皮下注射針によって貫通可能なストッパーを有する静脈内溶液バッグ又はバイアルであり得る）。組成物中の少なくとも１つの活性剤は、ＣＤ１３１に結合する化合物である。標識又は添付文書は、組成物が、治療に適する対象、例えば、ＡＲＤＳを発症している又はＡＲＤＳを発症するリスクがある対象に投与されることを示し、組成物及び任意の他の薬の投与量及び間隔に関する特定のガイダンスが、提供される。キットは、薬学的に許容される希釈剤緩衝液、例えば、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝生理食塩水、リンガー溶液、及び／又はデキストロース溶液を含む追加の容器を更に含んでもよい。キットは、他の緩衝液、希釈剤、フィルター、針、及び注射器を含む、商業的及び使用者の観点から望ましい他の材料を更に含み得る。
本開示は、以下の非限定的な実施例を含む。
実施例１：抗ＣＤ１３１／βｃ及びβＩＬ３キメラモノクローナル抗体は、肺における好中球及びマクロファージ蓄積を低減する
抗体
「キメラｍＡｂ」は、キメラマウスモノクローナル抗体であり、キメラマウスモノクローナル抗体は、ラットＦａｂ領域を含み、ラットＦａｂ領域は、マウスＣＤ１３１／βｃ及びβＩＬ３サイトカイン受容体サブユニットの細胞外領域を認識し、これらの受容体及びマウスＩｇＧ１ Ｆｃを介するシグナル伝達を阻害する。アイソタイプ対照抗体を、比較のために使用した（ｍｕＢＭ４－ｍｕＧＩＫ ＲＰ３２０４又は「ＢＭ４」）。
急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）モデル
野生型（８～１２週齢のｃ５７ＢＬ／６マウス）のマウスを使用した。マウスコロニーを、Ａｎｉｍａｌ Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ Ｃｅｎｔｒｅ（ＡＲＣ）（Ｃａｎｎｉｎｇ Ｖａｌｅ，Ｗｅｓｔｅｒｎ Ａｕｓｔｒａｌｉａ，Ａｕｓｔｒａｌｉａ）から得た。豪国のＮａｔｉｏｎａｌ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｏｕｎｃｉｌの倫理ガイドラインに準拠して実行された実験のために使用された８週齢～１２週齢の雌マウス。
ＡＲＤＳモデル：マウスを、麻酔し、口及び気管中への、５０ｍｌのハミルトン注射器に取り付けられたカニューレを使用する、肺中への３μｇのＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ＬＰＳ（ＬＰＳ；０１１１：Ｂ４、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）の気管内（ｉ．ｔ．）設置によって、挿管した。マウスを、ペントバルビタールの致死的注射によって、ＬＰＳ挿管の２４時間後に終了させた。
ＡＲＤＳモデルにおける評価：ＡＲＤＳモデルにおけるキメラｍＡｂの予防的及び治療的投与の効果を評価するために、マウスに、ＬＰＳの挿管の２４時間前（予防的）又は６時間後（治療的）のいずれかに、５０ｍｇ／ｋｇのキメラｍＡｂ又はＢＭ４を静脈内（ｉ．ｖ．）投与した。気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬＦ）を、２０Ｇのカテーテルで気管にカニューレ挿入することによって得た。両方の肺を、０．９～１．１ｍｌ／マウスのＢＡＬＦの平均リターンで、３回洗浄した（それぞれのアリコートについて０．４ｍｌのＰＢＳ）。
ＢＡＬＦの細胞分析
ＢＡＬＦ中の総細胞数を、血球計測器で計数することによって判定した。分画を、Ｇｅｉｍｓａ（Ｓｉｇｍａ）で固定及び染色された集細胞遠心分離調製物（ｃｙｔｏｓｉｎｅ４、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）によって行った。分画は、細胞を、好中球、マクロファージ、又はリンパ球として分類するための標準的な形態学的基準を使用して、２００個の細胞の計数に基づいた。計数を、治療群を目隠しされた単一の観察者によって実行した。
ＢＡＬＦ中の細胞数の有意な低減が、キメラｍＡｂが予防的又は治療的に投与されたＡＲＤＳモデルにおいて、ＢＭ４群と比較して、観察された（図１Ａ及び２Ａ）。この低減は、キメラｍＡｂの予防的又は治療的投与後にＢＡＬＦ中で観察されたマクロファージ及び好中球の低減と相関する（図１Ｂ及び２Ｂ）。
実施例２：抗ＣＤ１３１／βｃ及びβＩＬ３キメラモノクローナル抗体は、ＦＤＣＰ１細胞のＧＭ－ＣＳＦ及びＩＬ－３誘導増殖を阻害する
ＦＤＣＰ１マウス骨髄由来細胞株を、１０％のウシ胎仔血清（ＦＣＳ）中で、３時間、ｍＩＬ－３が欠乏した状態にし、実施例１で使用されたようなアイソタイプ対照モノクローナル抗体（アイソタイプ対照ｍＡｂ）又はキメラモノクローナル抗体（キメラｍＡｂ）のいずれかの用量応答において、２００μｌのＲＰＭＩ／１０％ＦＣＳ中に、１×１０４細胞／ウェルの密度で蒔いた。アイソタイプ対照ｍＡｂ又はキメラｍＡｂでの１時間の事前インキュベーション後に、ｍＩＬ３（０．５４ｎｇ／ｍｌ）又はｍＧＭ－ＣＳＦ（０．０２２ｎｇ／ｍｌ）のＥＤ５０用量を、それぞれのウェルに添加した。
増殖を、ｍＩＬ３又はｍＧＭ－ＣＳＦでのインキュベーションの４８時間後に測定した。ＦＤＣＰ１細胞を、３７℃／５％ＣＯ２で、２０μｌ／ウェルのＣｅｌｌ Ｔｉｔｒｅ９６ Ａｑｕｅｏｕｓ Ｏｎｅ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（Ｐｒｏｍｅｇａ）中で１時間インキュベートした。４９０ｎｍ～６９０ｎｍでの光学密度（ＯＤ）読み取りを実行し、データをＰｒｉｓｍに補完した。
図３は、キメラｍＡｂが、用量に依存した様式で、ＧＭ－ＣＳＦ及びＩＬ－３シグナル伝達を阻害することによって、ＦＤＣＰ１細胞の増殖を低減することを実証する。
実施例３：ＣＳＬ３１１は、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）のｈβｃＴｇマウスモデルにおいて、細胞炎症を低減し、組織病態を低減し、血中酸素を増加させる
抗体
ＣＳＬ３１１（ａｈｕ９Ａ２－Ｇ４ｐＫ－ＶＲ２４－２９）は、ヒトβｃ（ＣＤ１３１）ホモ二量体の共通サイトカイン結合部位（部位２）を標的とするヒト抗体である。重鎖アミノ酸配列は配列番号１４に提供され、軽鎖アミノ酸配列は配列番号１５に提供される。ヒトＩｇＧ４（ｃｈＢＭ４－Ｇ４ｐＫ）アイソタイプ対照抗体を、比較のために使用した。
急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）モデル
ＡＲＤＳの治療のためのＣＳＬ３１１の治療可能性を確立するために、肺白血球数及び肺損傷のマーカーを、ヒトβｃ受容体を発現するトランスジェニックマウスモデルにおいて検査した。「ｈβｃＴｇ」と称されるトランスジェニックマウスは、（ｉ）ヒトβｃ受容体導入遺伝子、及び（ｉｉ）両方の内因性ベータサブユニット（βｃ－／－／βＩＬ－３ －／－）についてのノックアウトについてのホモ接合であった。ＡＲＤＳを、ｈβｃＴｇマウスにおいて、１０μｇのＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ＬＰＳ（ＬＰＳ；０２６：Ｂ６、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）を２４時間鼻腔内滴下することによって誘導した。マウスを、ＬＰＳ曝露の３時間前に、静脈内ＣＳＬ３１１（５０ｍｇ／ｋｇ）又はアイソタイプ対照ｍＡｂで治療した。
ＬＰＳの直接肺滴下は、ＬＰＳに曝露されたｈβｃＴｇマウスにおいて、有意な体重低減をもらたし、これは、ＣＳＬ３１１の投与で有意に低減された（図４Ａ）。ＬＰＳ曝露は、ｈβｃＴｇマウスにおいて、血中好中球及び単球数を著しく増加させ、これは、ＣＳＬ３１１投与で、対照レベルまで低減された（図４Ｂ及び４Ｃ）。好中球は、ＬＰＳ曝露に応答して、気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）気道区画中に移動し、これは、ＣＳＬ３１１投与で、約７０％有意に低減された（図４Ｄ）。肺炎症の組織学的スコアは、ＣＳＬ３１１が、ｈβｃＴｇマウスにおいて、急性ＬＰＳ曝露によって引き起こされた肺損傷を有意に低減したことを明らかにした（図４Ｅ及び４Ｆ）。また、ピーク肺ミエオロペルオキシダーゼ（ＭＰＯ）レベルが、肺組織白血球浸潤の著しい低減と一致して、有意に減少した（図４Ｇ）。加えて、ＢＡＬＦ中の総タンパク質レベルを定量化することによって評価された場合、ＣＳＬ３１１は、ＬＰＳ曝露によって引き起こされたピーク浮腫を有意に低減した（図４Ｈ）。
ネトパチック（ＮＥＴｏｐａｔｈｉｃ）組織損傷に関連する好中球細胞外トラップ（ＮＥＴ）が、急性損傷又は感染に応答して放出されることが、ｈβｃＴｇマウスの急性ＬＰＳ曝露で観察された（図５Ａ）。図５Ａは、ＭＰＯ及びシトルリン化ヒストンＨ３に対する抗体での、ＬＰＳ曝露ｈβｃＴｇマウスの肺組織切片の染色を示す。ＮＥＴ形成が、ｈβｃＴｇマウスにおいて、より高い用量のＬＰＳ曝露（１０μｇ）で有意に増加した（図５Ａ）。また、ピークＭＰＯ及びｄｓＤＮＡレベルをＬＰＳ曝露（１０μｇ）の２４時間後に示したＬＰＳ曝露ｈβｃＴｇマウスのＢＡＬＦ中で、ＮＥＴを定量化した（図５Ｂ及び５Ｃ）。ピークＭＰＯ及びｄｓＤＮＡレベルは、ｈβｃＴｇマウスのＬＰＳ曝露前のＣＳＬ３１１の投与で有意に低減された（図５Ｄ及び５Ｅ）。
ＣＳＬ３１１が、ＡＲＤＳに応答して、肺機能を維持するのを支援することができるかどうかを判定するために、血中酸素を、ｈβｃＴｇマウスにおいて検査した。ＡＲＤＳを、ｈβｃＴｇマウスにおいて、２０μＬの５μｇ／ｍＬのＬＰＳの鼻腔内滴下によって誘導した。マウスを、ＬＰＳ曝露の３０分前に、静脈内ＣＳＬ３１１（５０ｍｇ／ｋｇ）又はアイソタイプ対照ｍＡｂ（５０ｍｇ／ｋｇ）で治療した。鼻腔内ＰＢＳで治療されたマウスを使用して、ＬＰＳ曝露の不在下での血中酸素を判定した。血中酸素の百分率を、ＭｏｕｓｅＳＴＡＴ（登録商標）Ｊｒ．Ｐｕｌｓｅ Ｏｘｉｍｅｔｅｒ＆Ｈｅａｒｔ Ｒａｔｅ Ｍｏｎｉｔｏｒ（Ｋｅｎｔ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して、ＬＰＳ又はＰＢＳ投与の１６時間、４８時間、及び７２時間後に監視した。
ｈβｃＴｇマウスへのＬＰＳ投与は、血中酸素の急性的低減をもたらし、これは、約１６時間でピークに達し、その後、解消し始めた（図６、ＬＰＳ－ＩＳＯ群）。ＣＳＬ３１１の投与は、アイソタイプ対照抗体と比較して、１６時間、４８時間、及び７２時間でのＬＰＳ誘導血中酸素低減に対して、ｈβｃＴｇマウスを有意に保護した（図６）。合わせて、これらのデータは、ＡＲＤＳの治療及び防止のためにβｃ受容体（ＣＤ１３１）を標的とする有効性を実証した。
実施例４：ＣＳＬ３１１は、ウイルス性肺炎の前臨床マウスモデルにおいて、免疫病理及び過剰炎症を低減する
ウイルス性肺炎モデル
ウイルス性肺炎を、トランスジェニックｈβｃＴｇマウスにおいて誘導した。簡潔には、ｈβｃＴｇマウスに、軽いイソフルラン麻酔下で、インフルエンザＡウイルス（ＩＡＶ、ＨＫｘ３１、Ｈ３Ｎ２株、１０４ＰＦＵ）を鼻腔内感染させた。
ｈβｃＴｇマウスにおいて、肺組織におけるＧｍ－ｃｓｆ発現は、ＩＡＶ感染の早期（３日目）中に有意に増加し、６日目に低下した（図７Ａ）。対照的に、Ｉｌ３及びＩｌ５発現は、後日の６日目の時点でピークに達した（図７Ｂ及び７Ｃ）。βｃ受容体転写物（ＣＳＦ２ＲＢ）の発現は、急性ウイルス感染中のβｃ受容体発現炎症細胞の持続性組織浸潤と一致して、ＩＡＶ感染後３日目及び６日目の両方で有意に増加した（図７Ｄ）。
ＩＡＶ感染の４日後に、マウスを、単回用量のＣＳＬ３１１（５０ｍｇ／ｋｇ）又はアイソタイプ対照ｍＡｂ（５０ｍｇ／ｋｇ）で、静脈内注射を介して治療した。６日目に、ＩＡＶ感染マウスは、体重の有意な低減を示し、これは、ＣＳＬ３１１治療によって変化しなかった（図８Ａ）。肺ウイルス負荷を、ＲＴｑＰＣＲによって、ウイルスポリメラーゼＡサブユニット（ＰＡ）遺伝子において判定し、高レベルのウイルスＲＮＡを、ＩＡＶ感染マウスにおいて検出した。レベルは、ＣＳＬ３１１治療マウスにおいて同一であった（図８Ｂ）。ＩＡＶ感染によって誘導された血中顆粒球増加及び単球増加は、ＣＳＬ３１１治療でのβｃ受容体遮断によって有意に低減された（図８Ｃ及び８Ｄ）。加えて、ＩＡＶ誘導低酸素血症に二次的である可能性がある、血中ヘモグロビン（ＨＧＢ）のレベルの増加は、ＣＳＬ３１１治療によって完全に防止された（図８Ｅ）。気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）区画中の好中球（図８Ｆ）及びマクロファージ（図８Ｇ）数は、ＩＡＶ感染マウスにおいて著しく増加し、ＣＳＬ３１１は、これらの骨髄細胞集団の両方を有意に低減した。加えて、ＩＡＶ感染は、生理食塩水治療マウスからの肺がピンク色であったこととは対照的に、プラム色である暗い肺葉の出現によって特徴付けられるように、肺葉全体にわたる著しい出血を引き起こした。ＣＳＬ３１１治療は、肺葉全体にわたる出血領域の低減に関連する。
ＩＡＶ感染ｈβｃＴｇマウスのＣＳＬ３１１治療後の肺の免疫学的変化を更に特徴付けるために、骨髄細胞（図９Ａ）及びリンパ系細胞（図９Ｇ）を、フローサイトメトリーによって分析した。簡潔には、ＢＡＬ後に、肺の上葉を、細かく刻み、Ｌｉｂｅｒａｓｅ（商標）（Ｓｉｇｍａ、ＵＳ）中で、３７℃で、一定に振盪しながら消化した。消化された組織を２５Ｇの針に通し、次いで、４０μｍのセルストレーナに通すことによって、単一細胞懸濁液を調製した。肺細胞をペレット状にし、赤血球をＡＣＫ溶解緩衝液で溶解させた。次いで、ＣＤ１６／ＣＤ３２抗体での遮断後に、細胞を、ＦＩＴＣ－ＣＤ４５、ＰＥ－Ｓｉｇｌｅｃ Ｆ、ＡＰＣ－Ｆ４／８０、ｅＦｌｕｏｒ４５０－ＣＤ１１ｂ、ＰＥ／Ｃｙ７－ＣＤ１１ｃ、ＰｅｒＣｐ／ｅＦｌｕｏｒ７１０－Ｌｙ６Ｇ、及びＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ（商標）Ｆｉｘａｂｌｅ Ｙｅｌｌｏｗ Ｄｅａｄ Ｃｅｌｌ Ｓｔａｉｎを含有する骨髄細胞抗体カクテル、又はＡＰＣ／ｅＦｌｕｏｒ７８０－ＣＤ４５、ＰｅｒＣＰ／Ｃｙａｎｉｎｅ５．５－ＣＤ３ｅ、ＰＥ／Ｃｙ７－ＮＫ－１．１（ＢＤ、ＵＳ）、ＰＥ－ＣＤ８ａ（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、ＵＳ）、ＰＥ／ｅＦｌｕｏｒ６１０－ＣＤ４、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ４８８－ＦＯＸＰ３（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、ＵＳ）、及びＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ（商標）Ｆｉｘａｂｌｅ Ｖｉｏｌｅｔ Ｄｅａｄ Ｃｅｌｌ Ｓｔａｉｎを含有するリンパ系細胞抗体カクテルで、２３、２６、２７先に記載されるように染色した。Ｆｏｘｐ３／Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ Ｆａｃｔｏｒ Ｓｔａｉｎｉｎｇ Ｂｕｆｆｅｒ Ｓｅｔを、Ｆｏｘｐ３染色前の細胞透過処理のために使用した。染色後に、細胞を、ＢＤ ＦＡＣＳＡｒｉａにおける分析の前に、ＩＣ Ｆｉｘａｔｉｏｎ Ｂｕｆｆｅｒで固定した。
肺好中球（図９Ｂ）及びマクロファージ（図９Ｃ～Ｅ）は、血液及びＢＡＬ中で観察された変化と一致して、ＣＳＬ３１１治療後のＩＡＶ感染マウスにおいて有意に低減された。マクロファージ数の低減は、肺胞マクロファージ（ＡＭ、図９Ｃ）の標準化、並びに肺に動員された、単球由来の滲出性マクロファージ（ＥＭ、図９Ｄ）及び血中単球（図９Ｅ）の抑制に起因した。また、ＩＡＶ感染マウスにおいて増加することが以前に報告されている肺好酸球数が、ＩＡＶ感染ｈβｃＴｇマウスにおいて増加し、ＣＳＬ３１１でのβｃ受容体拮抗作用が、この応答を著しく低減した（図９Ｆ）。骨髄細胞とは対照的に、ウイルス感染に対する重要な保護を付与するリンパ球サブセットは、βｃサイトカインに直接応答しない。ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞（図９Ｈ）及びＮＫＴ細胞（図９Ｉ）の著しい増殖が、ＩＡＶ感染後６日目に観察され、これは、ＣＳＬ３１１治療によって有意に変化しなかった。免疫抑制性制御性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞が、ＣＳＬ３１１治療によって影響されない様式で、ＩＡＶ感染によって増加した（図９Ｊ）。肺ＣＤ４及びＣＤ８＋Ｔ細胞は、ＩＡＶ感染後６日目に増加せず、ＣＳＬ３１１治療は、肺ＣＤ４及びＣＤ８＋Ｔ細胞のそれぞれの数を更に変化させなかった（図９Ｋ及び９Ｌ）。
分子レベルでは、好中球ケモカインＣｘｃｌ１遺伝子、単球／マクロファージケモカインＣｃｌ２遺伝子、及び好酸球ケモカインＣｃ１２４遺伝子の肺発現が、ＩＡＶ感染マウスにおいて有意に増加した（図１０Ａ～Ｃ）。ＣＳＬ３１１治療は、Ｃｘｃｌ１遺伝子発現を低減しなかったが、Ｃｃｌ２及びＣｃｌ２４遺伝子発現を有意に低減した。これらの低減は、ＣＳＬ３１１治療によって低減される、ＩＡＶ感染中のＣＣＬ２及びＣＣＬ２４の主要な細胞源である肺マクロファージと一致する。Ｃｘｃｌ１０及びＣｘｃｌ１遺伝子発現のレベルは、ＣＳＬ３１１処理によって変化しない様式で、ＩＡＶ感染マウスにおいて増加した（図１０Ｄ）。Ｃｘｃｌ１及びＣｘｃｌ１０は、βｃ拮抗作用についての標的でない線維芽細胞及び内皮細胞を含む様々な細胞型によって産生され得る。炎症性サイトカインＩｌ１αの遺伝子発現は、ＩＡＶ感染マウスの肺において増加し、βｃ受容体遮断は、Ｉｌ１α遺伝子レベルを完全に標準化した（図１０Ｅ）。ＩＬ－１Ｒシグナル伝達は、好中球接着分子の発現を制御することができ、ＩＬ－１αの低減は、肺における好中球炎症の低減に寄与し得る。また、ＩＬ６遺伝子発現は、ＩＡＶ感染マウスにおいて増加し、ＩＬ６遺伝子発現のレベルは、ＣＳＬ３１１治療マウスにおいて低減されなかった（図１０Ｆ）。インターフェロンは、抗ウイルス防御の最前線を構築するが、全ての３つの型のインターフェロンは、ＩＡＶ感染肺において上方制御された（図１０Ｇ－Ｉ）。ＩＩ型インターフェロン（Ｉｆｎｇ）遺伝子発現レベルは、細胞源（ＮＫ／ＮＫＴ細胞及び細胞傷害性Ｔ細胞）が、ＣＳＬ３１１治療によって変化しなかったことと一致して、ＣＳＬ３１１治療によって変化しなかった。また、Ｉ型（Ｉｆｎｂ）及びＩＩＩ型インターフェロン（Ｉｆｎｌ２／３）のＩＡＶ誘導遺伝子発現は、ＣＳＬ３１１治療マウス（図１０Ｇ及びＩ）において保たれ、これは、Ｉｆｎｂ及びＩｆｎｌ２／３の細胞源（形質細胞様樹状細胞（ｐＤＣ）及び肺上皮）が、βｃ受容体拮抗作用の背景において機能的に有能であることを示唆する。

Claims (27)

  1. 対象の急性呼吸器症候群（ＡＲＤＳ）を防止又は治療するための方法であって、前記対象に、ＣＤ１３１に結合しインターロイキン（ＩＬ）３、ＩＬ－５、及び顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）によるシグナル伝達を中和する化合物を投与することを含む、方法。
  2. 前記ＡＲＤＳが、
    ａ）感染、
    ｂ）異物の吸入又は吸引、
    ｃ）身体的外傷、及び
    ｄ）炎症性疾患のうちの１つ以上に関連する、請求項１に記載の方法。
  3. 前記ＡＲＤＳが、ウイルス感染に関連する、請求項１又は２に記載の方法。
  4. 前記ＡＲＤＳが、コロナウイルス感染に関連する、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。
  5. 前記ＡＲＤＳが、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣＯＶ）感染に関連する、請求項１～４のいずれか一項に記載の方法。
  6. 前記ＡＲＤＳが、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染に関連する、請求項１～５のいずれか一項に記載の方法。
  7. 前記ＡＲＤＳが、コロナウイルス疾患２０１９（ＣＯＶＩＤ－１９）に関連する、請求項１～６のいずれか一項に記載の方法。
  8. 前記対象が、間質性肺炎を有する、請求項１～７のいずれか一項に記載の方法。
  9. ＣＤ１３１に結合しＩＬ－３、ＩＬ－５、及びＧＭ－ＣＳＦによるシグナル伝達を中和する前記化合物の投与が、
    ａ）前記対象の血液中の好中球の量、
    ｂ）前記対象の血液中の単球の量、
    ｃ）前記対象の肺における好中球蓄積、
    ｄ）前記対象の肺におけるマクロファージ蓄積、
    ｅ）前記対象の肺の炎症、
    ｆ）前記対象の肺の浮腫、
    ｇ）前記対象の肺におけるネトーシス、
    ｈ）前記対象の肺の気管支肺胞液中のミエロペルオキシダーゼ活性、
    ｉ）前記対象の肺の気管支肺胞液中のタンパク質の量、
    ｊ）前記対象の肺の気管支肺胞液中のｄｓＤＮＡの量、及び
    ｋ）前記対象の肺損傷スコアのうちの１つ以上若しくは全てを低減する又はこれらのうちの１つ以上若しくは全ての増加を防止する、請求項１～８のいずれか一項に記載の方法。
  10. ＣＤ１３１に結合しＩＬ－３、ＩＬ－５、及びＧＭ－ＣＳＦによるシグナル伝達を中和する前記化合物の投与が、前記対象の血中酸素百分率の減少を防止する、請求項１～９のいずれか一項に記載の方法。
  11. ＣＤ１３１に結合しＩＬ－３、ＩＬ－５、及びＧＭ－ＣＳＦによるシグナル伝達を中和する前記化合物が、
    ａ）ＴＦ－１細胞のＧＭ－ＣＳＦ誘導増殖を少なくとも１００ｎＭのＩＣ５０で、かつ／又は
    ｂ）ＴＦ－１細胞のＩＬ－５誘導増殖を少なくとも１００ｎＭのＩＣ５０で、かつ／又は
    ｃ）ＴＦ－１細胞のＩＬ－３誘導増殖を少なくとも１００ｎＭのＩＣ５０で、阻害する、請求項１～１０のいずれか一項に記載の方法。
  12. ＣＤ１３１に結合しＩＬ－３、ＩＬ－５、及びＧＭ－ＣＳＦによるシグナル伝達を中和する前記化合物が、ＣＤ１３１に結合する抗原結合部位を含むタンパク質である、請求項１～１１のいずれか一項に記載の方法。
  13. 配列番号５に記載の配列を含むポリペプチドに対する前記タンパク質のＫＤが、前記ポリペプチドが固体表面上に固定化され、前記ＫＤが表面プラズモン共鳴によって決定される場合、約１０ｎＭ以下である、請求項１２に記載の方法。
  14. ＣＤ１３１に結合しＩＬ－３、ＩＬ－５、及びＧＭ－ＣＳＦによるシグナル伝達を中和する前記化合物が、Ｆｖを含むタンパク質である、請求項１～１３のいずれか一項に記載の方法。
  15. 前記タンパク質が、
    （ｉ）一本鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）、
    （ｉｉ）二量体ｓｃＦｖ（ｄｉ－ｓｃＦｖ）、又は
    （ｉｉｉ）ダイアボディ、
    （ｉｖ）トリアボディ、
    （ｖ）テトラボディ、
    （ｖｉ）Ｆａｂ、
    （ｖｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２、
    （ｖｉｉｉ）Ｆｖ、
    （ｉｘ）抗体、Ｆｃ、又は重鎖定常ドメイン（ＣＨ）２及び／若しくはＣＨ３の定常領域に連結された（ｉ）～（ｖｉｉｉ）のうちの１つ、
    （ｘ）アルブミン若しくはその機能的断片若しくは変異体、又はアルブミンに結合するタンパク質に連結された（ｉ）～（ｖｉｉｉ）のうちの１つ、あるいは
    （ｘｉ）抗体、を含む、請求項１４に記載の方法。
  16. 前記タンパク質が、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）である、請求項１２又は１３に記載の方法。
  17. 前記タンパク質が、抗体可変領域を含み、前記抗体可変領域が、ＣＤ１３１に結合し、ＣＤ１３１への、配列番号６に記載の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、及び配列番号１８に記載の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗体９Ａ２－ＶＲ２４．２９の結合を競合的に阻害する、請求項１２～１５のいずれか一項に記載の方法。
  18. 前記抗原結合部位が、ＣＤ１３１の部位２内のエピトープに結合する、請求項１２～１６７のいずれか一項に記載の方法。
  19. 前記抗原結合部位が、２つのＣＤ１３１ポリペプチドの二量体化の際に形成されたエピトープに結合する、請求項１２～１８のいずれか一項に記載の方法。
  20. 前記抗原結合部位が、ＣＤ１３１ポリペプチドのドメイン１内の残基及び別のＣＤ１３１ポリペプチドのドメイン４内の残基に結合する、請求項１９に記載の方法。
  21. 前記ＣＤ１３１のドメイン１内の残基が、配列番号１の１０１～１０７の領域内の残基を含み、かつ／又は前記ＣＤ１３１のドメイン４内の残基が、配列番号１の３６４～３６７の領域内の残基を含む、請求項２０に記載の方法。
  22. 前記タンパク質が、抗体可変領域を含み、前記抗体可変領域が、配列番号６に記載のアミノ酸配列を含むＶＨの３つのＣＤＲを含むＶＨ、及び配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含むＶＬの３つのＣＤＲを含むＶＬを含む、請求項１２～１５又は１７～２１のいずれか一項に記載の方法。
  23. 前記タンパク質が、配列番号６に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含むＶＬを含む、請求項１２～１５又は１７～２２のいずれか一項に記載の方法。
  24. 前記タンパク質が、配列番号８に記載のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号９に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項１２～１５又は１７～２３のいずれか一項に記載の方法。
  25. 前記ＣＤ１３１に結合する化合物が、標準治療療法と組み合わせて投与される、請求項１～２４のいずれか一項に記載の方法。
  26. 前記標準治療療法が、
    ａ）腹臥位、
    ｂ）流体管理、
    ｃ）一酸化窒素の投与、
    ｄ）神経筋遮断剤の投与、
    ｅ）人工換気、
    ｆ）体外膜型酸素供給、及び
    ｇ）抗ウイルス剤又は抗生物質の投与のうちの１つ以上又は全てを含む、請求項２５に記載の方法。
  27. 前記標準治療療法が、レムデシビルの投与を含む、請求項２５に記載の方法。
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