JP2024501627A - インヒビンサブユニットβＥ（ＩＮＨＢＥ）阻害剤による代謝障害及び心血管疾患の治療方法 - Google Patents

インヒビンサブユニットβＥ（ＩＮＨＢＥ）阻害剤による代謝障害及び心血管疾患の治療方法 Download PDF

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アクバリ、パーサ
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Abstract

本開示は、代謝障害及び／または心血管疾患を有する対象の治療方法、代謝障害及び／または心血管疾患を発症するリスクが高い対象の識別方法、ならびにヒトインヒビンサブユニットβＥバリアント核酸分子及びバリアントポリペプチドの検出方法を提供する。

Description

配列表の参照
本出願は、２０２１年１２月１１日に作製された、１８９２３８０５７０２ＳＥＱという名称で２８キロバイトのサイズのテキストファイルとして電子提出された配列表を含む。この配列表は、参照により本明細書に援用される。
本開示は、概して、インヒビンサブユニットβＥ阻害剤による、代謝障害及び／または心血管疾患を有する対象の治療、代謝障害及び／または心血管疾患を発症するリスクが増加している対象の識別方法、ならびにＩＮＨＢＥバリアント核酸分子及びバリアントポリペプチドの検出方法に関する。
体脂肪分布は、肥満とは無関係に、心血管疾患及び代謝疾患の重要なリスク因子である。腰周りの脂肪の蓄積が多い（腹部脂肪が大きい、腰囲が大きいなど）、及び／または臀部周りの脂肪が少ない（殿大腿脂肪の低下、臀囲が小さいなど）ことを特徴とする体脂肪分布は、ウエスト・ヒップ比（ＷＨＲ）が高くなり、これは、肥満度指数（ＢＭＩ）とは無関係に、より高い心臓代謝リスクと関連している。体脂肪分布に関連する代謝病態としては、２型糖尿病、高脂血症または脂質異常症（低密度リポタンパク質コレステロール（ＬＤＬ－Ｃ）、トリグリセリド、超低密度リポタンパク質コレステロール（ＶＬＤＬ－Ｃ）、アポリポタンパク質Ｂまたは他の脂質画分の循環レベルが高いまたは変化している）、肥満（特に腹部肥満）、脂肪異栄養症（脂肪蓄積における脂肪の蓄積不全（局所的（限局性脂肪異栄養症）または全身性（脂肪萎縮症））など）、インスリン抵抗性または空腹時もしくは代謝チャレンジ中のインスリンレベルの上昇もしくは変化、肝臓脂肪沈着または脂肪肝疾患及びそれらの合併症（例えば、肝硬変、線維症、または肝臓炎など）、非アルコール性脂肪性肝炎、他のタイプの肝臓炎、肝酵素レベルまたは肝臓の損傷の他のマーカーの上昇または増加または変化、肝臓における炎症または脂肪沈着、血圧上昇及び／または高血圧、血糖値もしくはグルコースの上昇または高血糖、メタボリックシンドローム、冠動脈疾患、及び他のアテローム性動脈硬化症、ならびに前述の各病態の合併症が挙げられるが、これらに限定されない。より好ましい脂肪分布（特にＢＭＩに合わせて調整した場合のＷＨＲの低下など）に関連する遺伝的バリアントを同定することは、これらの心血管代謝疾患において治療効果を得るために利用可能なメカニズムを特定するための道筋となり得る。
インヒビンサブユニットβＥ（ＩＮＨＢＥ）は、タンパク質のＴＧＦ－β（トランスフォーミング増殖因子－β）スーパーファミリーのメンバーである。インヒビンは、細胞増殖、アポトーシス、免疫応答、ホルモン分泌など、多数の細胞プロセスの調節に関与している。インヒビン及びアクチビンは、下垂体によるフォリトロピンの分泌をそれぞれ阻害及び活性化する。インヒビン／アクチビンは、それらのサブユニット構成に応じて、視床下部ホルモン及び下垂体ホルモンの分泌、性腺ホルモンの分泌、生殖細胞の発達及び成熟、赤血球分化、インスリン分泌、神経細胞の生存、胚の体軸発達または骨の成長など、様々な機能の調節に関与する。インヒビンは、アクチビンの機能に対抗すると思われる。さらに、ＩＮＨＢＥは、小胞体ストレス条件下でアップレギュレートされる可能性があり、このタンパク質は、膵臓及び肝臓における細胞増殖及び成長を阻害し得る。
本開示は、代謝障害を有するか、または代謝障害を発症するリスクのある対象の治療方法を提供し、この方法は、ＩＮＨＢＥ阻害剤を対象に投与することを含む。
本開示はまた、２型糖尿病を有するか、または２型糖尿病を発症するリスクのある対象の治療方法を提供し、この方法は、ＩＮＨＢＥ阻害剤を対象に投与することを含む。
本開示はまた、肥満を有するか、または肥満を発症するリスクのある対象の治療方法を提供し、この方法は、ＩＮＨＢＥ阻害剤を対象に投与することを含む。
本開示はまた、トリグリセリドレベルの上昇（高トリグリセリド血症）を有する対象、またはトリグリセリドレベルの上昇（高トリグリセリド血症）を発症するリスクのある対象の治療方法を提供し、この方法は、ＩＮＨＢＥ阻害剤を対象に投与することを含む。
本開示はまた、脂肪異栄養症を有するか、または脂肪異栄養症を発症するリスクのある対象の治療方法を提供し、この方法は、ＩＮＨＢＥ阻害剤を対象に投与することを含む。
本開示はまた、肝臓炎を有するか、または肝臓炎を発症するリスクのある対象の治療方法を提供し、この方法は、ＩＮＨＢＥ阻害剤を対象に投与することを含む。
本開示はまた、脂肪肝を有するか、または脂肪肝を発症するリスクのある対象の治療方法を提供し、この方法は、ＩＮＨＢＥ阻害剤を対象に投与することを含む。
本開示はまた、高コレステロール血症を有するか、または高コレステロール血症を発症するリスクのある対象の治療方法を提供し、この方法は、ＩＮＨＢＥ阻害剤を対象に投与することを含む。
本開示はまた、肝酵素（例えば、アラニントランスアミナーゼ（ＡＬＴ）及び／またはアスパラギン酸トランスアミナーゼ（ＡＳＴ）など）の上昇を有するか、または肝酵素（例えば、ＡＬＴ及び／またはＡＳＴなど）の上昇を発症するリスクのある対象の治療方法を提供し、この方法は、ＩＮＨＢＥ阻害剤を対象に投与することを含む。
本開示はまた、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）を有するか、またはＮＡＳＨを発症するリスクのある対象の治療方法を提供し、この方法は、ＩＮＨＢＥ阻害剤を対象に投与することを含む。
本開示はまた、心血管疾患を有するか、または心血管疾患を発症するリスクのある対象の治療方法を提供し、この方法は、ＩＮＨＢＥ阻害剤を対象に投与することを含む。
本開示はまた、心筋症を有するか、または心筋症を発症するリスクのある対象の治療方法を提供し、この方法は、ＩＮＨＢＥ阻害剤を対象に投与することを含む。
本開示はまた、心不全を有するか、または心不全を発症するリスクのある対象の治療方法を提供し、この方法は、ＩＮＨＢＥ阻害剤を対象に投与することを含む。
本開示はまた、高血圧を有するか、または高血圧を発症するリスクのある対象の治療方法を提供し、この方法は、ＩＮＨＢＥ阻害剤を対象に投与することを含む。
本開示はまた、代謝障害を治療または抑制する治療薬による対象の治療方法を提供し、対象は、代謝障害に罹患しており、この方法は、対象から生体試料を採取するか、または採取しており、生体試料に対して遺伝子型解析アッセイを実施するか、または実施しており、対象がＩＮＨＢＥバリアント核酸分子を含む遺伝子型を有するかどうかを判定することによって、対象が、ＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアント核酸分子を有するかどうかを判定し、対象がＩＮＨＢＥ参照である場合、代謝障害を治療または抑制する治療薬を標準用量で対象に投与するか、または投与し続け、かつＩＮＨＢＥ阻害剤を対象に投与し、対象がＩＮＨＢＥバリアント核酸分子についてヘテロ接合性である場合、代謝障害を治療または抑制する治療薬を標準用量と同じかそれより少ない量で対象に投与するか、または投与し続け、かつＩＮＨＢＥ阻害剤を対象に投与し、対象がＩＮＨＢＥバリアント核酸分子についてホモ接合性である場合、代謝障害を治療または抑制する治療薬を標準用量と同じかそれより少ない量で対象に投与するか、または投与し続けるステップを含み、ＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアント核酸分子を有する遺伝子型が存在する場合、それは対象が代謝障害を発症するリスクが低下していることを示している。
本開示はまた、心血管疾患を治療または抑制する治療薬による対象の治療方法を提供し、対象は、心血管疾患に罹患しており、この方法は、対象から生体試料を採取するか、または採取しており、生体試料に対して遺伝子型解析アッセイを実施するか、または実施しており、対象がＩＮＨＢＥバリアント核酸分子を含む遺伝子型を有するかどうかを判定することによって、対象が、ＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアント核酸分子を有するかどうかを判定し、対象がＩＮＨＢＥ参照である場合、心血管疾患を治療または抑制する治療薬を標準用量で対象に投与するか、または投与し続け、かつＩＮＨＢＥ阻害剤を対象に投与し、対象がＩＮＨＢＥバリアント核酸分子についてヘテロ接合性である場合、心血管疾患を治療または抑制する治療薬を標準用量と同じかそれより少ない量で対象に投与するか、または投与し続け、かつＩＮＨＢＥ阻害剤を対象に投与し、対象がＩＮＨＢＥバリアント核酸分子についてホモ接合性である場合、心血管疾患を治療または抑制する治療薬を標準用量と同じかそれより少ない量で対象に投与するか、または投与し続けるステップを含み、ＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアント核酸分子を有する遺伝子型が存在する場合、それは対象が心血管疾患を発症するリスクが低下していることを示している。
本開示はまた、代謝障害を発症するリスクが高い対象を識別する方法を提供し、本方法は、対象から採取した生体試料において、ＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアント核酸分子の有無を判定するか、または判定していることを含み、対象がＩＮＨＢＥ参照である場合、対象は代謝障害を発症するリスクが高く、対象がＩＮＨＢＥバリアント核酸分子についてヘテロ接合性であるか、またはＩＮＨＢＥバリアント核酸分子についてホモ接合性である場合、対象は代謝障害を発症するリスクが低い。
本開示はまた、心血管疾患を発症するリスクが高い対象を識別する方法を提供し、本方法は、対象から採取した生体試料において、ＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアント核酸分子の有無を判定するか、または判定していることを含み、対象がＩＮＨＢＥ参照である場合、対象は心血管疾患を発症するリスクが高く、対象がＩＮＨＢＥバリアント核酸分子についてヘテロ接合性であるか、またはＩＮＨＢＥバリアント核酸分子についてホモ接合性である場合、対象は心血管疾患を発症するリスクが低い。
本開示はまた、ＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアントゲノム核酸分子、ＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアントｍＲＮＡ分子、またはＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアントｃＤＮＡ分子を有する対象における代謝障害の治療において使用するための、代謝障害を治療または抑制する治療薬を提供する。
本開示はまた、ＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアントゲノム核酸分子、ＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアントｍＲＮＡ分子、またはＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアントｃＤＮＡ分子を有する対象における心血管疾患の治療において使用するための、心血管疾患を治療または抑制する治療薬を提供する。
本開示はまた、ＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアントゲノム核酸分子、ＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアントｍＲＮＡ分子、またはＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアントｃＤＮＡ分子を有する対象における代謝障害の治療において使用するための、代謝障害を治療または抑制するＩＮＨＢＥ阻害剤を提供する。
本開示はまた、ＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアントゲノム核酸分子、ＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアントｍＲＮＡ分子、またはＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアントｃＤＮＡ分子を有する対象における心血管疾患の治療において使用するための、心血管疾患を治療または抑制するＩＮＨＢＥ阻害剤を提供する。
添付の図面は、本明細書に援用され、かつ本明細書の一部を構成し、いくつかの態様を図示するとともに、説明と併せて、本開示の原理を説明する役割を果たす。
複数の研究からの５２５，０００人を超える人々のエクソーム配列解析における、ＩＮＨＢＥの予測される機能喪失（ｐＬＯＦ）型バリアントと好ましい脂肪分布（すなわち、ＢＭＩで調整されたＷＨＲの低下）との関連性を示す。ＲＥＧＥＮＩＥソフトウェアを使用して、関連性と人口層別化を説明する混合効果線形回帰モデルをフィッティングすることにより、関連分析を推定した。略語：信頼区間：ＣＩ、標準偏差：ＳＤ、肥満度指数：ＢＭＩ、ＢＭＩに合わせて調整されたウエスト・ヒップ比：ＷＨＲａｄｊＢＭＩ、参照－参照対立遺伝子：ＲＲ、参照代替対立遺伝子：ＲＡ、代替－代替対立遺伝子：ＡＡ、ＵＫ Ｂｉｏｂａｎｋコホート：ＵＫＢ、ヨーロッパ系：ＥＵＲ、Ｍｅｘｉｃｏ ｃｉｔｙ前向き研究コホート：ＭＣＰＳ、予測される機能喪失：ｐＬＯＦ。 ｐＬＯＦバリアントの位置（上のパネル）と、各バリアントの保因者におけるＢＭＩ調整済みＷＨＲの表現型分布を示すＩＮＨＢＥの遺伝子モデルを示しており、青いバーは非保因者のＢＭＩ調整済みＷＨＲの中央値を示し、赤いバーは保因者のＢＭＩ調整済みＷＨＲの中央値を示す。濃い赤で強調表示された２つのバリアントは、ＢＭＩ調整済みＷＨＲの低下と個別に関連していた。データは、ＵＫ Ｂｉｏｂａｎｋ（ＵＫＢ）及びＭｅｘｉｃｏ Ｃｉｔｙ前向き研究（ＭＣＰＳ）コホートに由来する。略語：肥満度指数：ＢＭＩ、ウエスト・ヒップ比：ＷＨＲ。 ＩＮＨＢＥ ｃ．２９９－１Ｇ：Ｃ（１２：５７４５６０９３：Ｇ：Ｃ）スプライスバリアントのｉｎ ｓｉｌｉｃｏで予測された機能的結果を示す。上段の配列＝元のエクソン２（配列番号２８）、下段の配列＝予測されたエクソン２（配列番号２９）。 野生型ＩＮＨＢＥタンパク質配列（上段、配列番号８）、及びｃ．２９９－１Ｇ：Ｃアクセプタースプライスバリアントのｉｎ ｓｉｌｉｃｏ予測タンパク質配列（下段、配列番号８、非ハイライト領域において変化を示す）を示す。 ｃ．２９９－１Ｇ＞Ｃバリアントについてのチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞実験を示す。このバリアントは、ＩＮＨＢＥ遺伝子の最初で唯一のスプライスジャンクションのスプライスアクセプター部位において生じる（パネルＡ）。ＣＨＯ細胞では、ｃ．２９９－１Ｇ＞Ｃバリアントによって、より低い分子量のバリアントの発現が生じ、これは細胞溶解物には存在するが、培地には存在せず、機能喪失と一致している（パネルＢ）。 ＩＮＨＢＥ ｐＬＯＦバリアントと、ＵＫＢ研究の４２３，４１８人の参加者の電気生体インピーダンスによって測定した、体脂肪量及び除脂肪量、割合、ならびに体表面調整指数との関連性を示す。 組織（左）及び肝細胞型（右）にわたるＩＮＨＢＥ発現パターンを示す。第１のパネルは、遺伝子型組織発現（ＧＴＥｘ）コンソーシアム（ＧＴＥｘ Ｐｏｒｔａｌ ２０２１．Ａｃｃｅｓｓｅｄ ２０２１，Ｊｕｎｅ １ｓｔ ｖｉａ ｗｏｒｌｄ ｗｉｄｅ ｗｅｂ ａｔ“ｇｔｅｘｐｏｒｔａｌ．ｏｒｇ／”）のデータを使用して、組織ごとにＩＮＨＢＥの正規化されたｍＲＮＡ発現値を百万分率（ＣＰＭ）で示している。第２のパネルは、ヒトタンパク質アトラス（ＨＰＡ）から得られた、肝臓内の正規化された細胞型特異的発現レベルを、１００万タンパク質コード遺伝子あたりの転写産物（ｐＴＰＭ）で示している（Ｕｈｌｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０１０，２８，１２４８－５０）。箱ひげ図は、中央値（太い黒い縦棒）、四分位範囲、及び組織あたりの個体にわたる最小及び最大ＣＰＭ値を示している。 同上。 ＩＮＨＢＥの肝臓ｍＲＮＡ発現が、ＧＨＳ由来の肥満手術患者における正常な肝臓を有する個体と比較して、脂肪症及び非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）を有する患者においてアップレギュレートされることを示す。上段のパネルでは、図は、正常な肝臓（対照）、肝臓の脂肪症（単純脂肪症）及び非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）の患者におけるＩＮＨＢＥの肝臓ｍＲＮＡ発現レベルを１００万あたりの転写産物（ＴＰＭ、特定の実験で検出された１００万分子ごとのＲＮＡ分子の正規化）で示している。下段のパネルは、群間の比較のための統計である。単純脂肪症群は、対照群よりも肝臓でのＩＮＨＢＥの発現が高かった。ＮＡＳＨ群は、対照と比較した場合、及び単純脂肪症群と比較した場合の両方において、より高い発現を示した。群間の発現のすべての差異は、統計的に有意であった。 同上。
本開示の態様に関連する様々な用語は、本明細書及び特許請求の範囲を通して使用される。そのような用語は、別段の指示がない限り、当技術分野における通常の意味を与えられるものとする。他の具体的に定義される用語は、本明細書において提供される定義と合致した様式で解釈されるものとする。
別段明確に述べられない限り、本明細書において説明される任意の方法または態様は、そのステップが特定の順序で遂行されることを要求するものとして解釈されるようには一切意図されない。したがって、方法クレームが、ステップが特定の順序に限定されるべきことを、特許請求の範囲または記載中で具体的に述べない場合には、いかなる点でも、順序が暗示されることは一切意図されない。これは、解釈のためのあらゆる可能性のある不明確な基準（ステップもしくは動作フローのアレンジに関する論理の問題、文法構成もしくは句読点に由来する平明な意味、または本明細書中に記載される態様の数もしくは型が挙げられる）についても当てはまる。
本明細書中で使用する場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、別段文脈による明瞭な定めがない限り、複数の指示物を包含する。
本明細書中で使用する場合、用語「約」とは、列挙された数値が近似値であり、小さな変動が、開示される実施形態の実践に有意に影響しないだろうことを意味する。数値が使用される場合に、別段文脈によって指示されない限り、用語「約」は、数値が±１０％変動し、開示される実施形態の範囲内にとどまり得ることを意味する。
本明細書中で使用する場合、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、特定の実施形態では、所望に応じて、「～からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ）」または「～から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」と置き換えられ得る。
本明細書中で使用する場合、核酸分子またはポリペプチドに関して、用語「単離された」とは、核酸分子またはポリペプチドが、その本来の環境以外の条件に（血液及び／または動物組織から離れて等）あることを意味する。いくつかの実施形態では、単離された核酸分子またはポリペプチドは、他の核酸分子または他のポリペプチド（特に動物起源の他の核酸分子またはポリペプチド）を実質的に含まない。いくつかの実施形態では、核酸分子またはポリペプチドは、高度に精製された形態（すなわち９５％超で純粋、または９９％超で純粋）であり得る。この文脈で使用される場合、用語「単離された」とは、同じ核酸分子またはポリペプチドが、二量体などの代替的物理的形態、または代替としてリン酸化形態もしくは誘導体化形態で存在することを除外するものではない。
本明細書中で使用する場合、用語「核酸」、「核酸分子」、「核酸配列」、「ポリヌクレオチド」、または「オリゴヌクレオチド」とは、任意の長さのヌクレオチドのポリマー形態を含み、ＤＮＡ及び／またはＲＮＡを含み、一本鎖、二本鎖、または多重鎖であり得る。核酸の一方の鎖は、その相補体も指す。
本明細書中で使用する場合、用語「対象」は、哺乳動物を含む任意の動物を包含する。哺乳動物としては、家畜（例えば、ウマ、ウシ、ブタなど）、伴侶動物（例えば、イヌ、ネコなど）、実験動物（例えば、マウス、ラット、ウサギなど）、及び非ヒト霊長類が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、対象はヒトである。いくつかの実施形態では、ヒトは、医師の管理下にある患者である。
本開示によれば、ＩＮＨＢＥの機能喪失型バリアント（特定の対象においてこれらの変異がホモ接合性であるかヘテロ接合性であるかにかかわらず）は、２型糖尿病、肥満、脂肪異栄養症、肝臓炎、脂肪肝疾患、高コレステロール血症、肝酵素（例えば、ＡＬＴ及び／またはＡＳＴなど）の上昇、ＮＡＳＨ、及び／またはトリグリセリドレベルの上昇などの代謝障害、及び／または心筋症、心不全、及び高血圧などの心血管疾患を発症するリスクの低下と関連していることが観察されている。ＩＮＨＢＥ遺伝子またはタンパク質における機能喪失型バリアントは、ゲノムワイドまたはエクソームワイドの関連研究において、代謝障害及び／または心血管疾患と関連していないと考えられている。したがって、参照ＩＮＨＢＥバリアント核酸分子についてホモ接合性またはヘテロ接合性である対象をＩＮＨＢＥ阻害剤で治療し、それにより、代謝障害及び／または心血管疾患を抑制し、その症状を軽減し、及び／または症状の発生を抑制してもよい。また、代謝障害及び／または心血管疾患を有するそのような対象を、２型糖尿病、肥満、高血圧、脂肪異栄養症、肝臓炎、脂肪肝疾患、高コレステロール血症、肝酵素（例えば、ＡＬＴ及び／またはＡＳＴなど）の上昇、ＮＡＳＨ、及び／またはトリグリセリドレベルの上昇などの代謝障害、及び／または心筋症、心不全、及び高血圧などの心血管疾患を治療または抑制する治療薬でさらに治療してもよいと考えられる。
本開示の目的のために、ヒトなどの任意の特定の対象を、３つのＩＮＨＢＥ遺伝子型、すなわち、ｉ）ＩＮＨＢＥ参照、ｉｉ）ＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアント核酸分子についてヘテロ接合性、またはｉｉｉ）ＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアント核酸分子についてホモ接合性、のうちの１つを有すると分類することができる。対象がＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアント核酸分子のコピーを有していない場合、対象はＩＮＨＢＥ参照である。対象がＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアント核酸分子の単一コピーを有する場合、対象は、ＩＮＨＢＥバリアント核酸分子についてヘテロ接合性である。ＩＮＨＢＥバリアント核酸分子は、部分的な機能喪失、完全な機能喪失、予測される部分的な機能喪失、または予測される完全な機能喪失を有するＩＮＨＢＥポリペプチドをコードする任意の核酸分子（例えば、ゲノム核酸分子、ｍＲＮＡ分子、またはｃＤＮＡ分子）である。部分的な機能喪失（または予測される部分的な機能喪失）を有するＩＮＨＢＥポリペプチドを有する対象は、ＩＮＨＢＥについて低形質性である。対象がＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアント核酸分子の（同じかまたは異なる）２つのコピーを有する場合、対象は、ＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアント核酸分子についてホモ接合性である。
ＩＮＨＢＥ参照であると遺伝子型決定または判定される対象の場合、そのような対象は、２型糖尿病、脂肪異栄養症、肝臓炎、脂肪肝疾患、高コレステロール血症、肝酵素（例えば、ＡＬＴ及び／またはＡＳＴ）の上昇、肥満、高血圧、及び／またはトリグリセリドレベルの上昇（高トリグリセリド血症）などの代謝障害、及び／または心筋症、心不全、及び高血圧などの心血管疾患を発症するリスクが高い。ＩＮＨＢＥ参照またはＩＮＨＢＥバリアント核酸分子についてヘテロ接合性であると遺伝子型決定または判定される対象について、そのような対象または対象を、ＩＮＨＢＥ阻害剤で治療することができる。
本明細書に記載されている実施形態のいずれかでは、ＩＮＨＢＥバリアント核酸分子は、部分的な機能喪失、完全な機能喪失、予測される部分的な機能喪失、または予測される完全な機能喪失を有するＩＮＨＢＥポリペプチドをコードする任意の核酸分子（例えば、ゲノム核酸分子、ｍＲＮＡ分子、またはｃＤＮＡ分子など）であり得る。いくつかの実施形態では、ＩＮＨＢＥバリアント核酸分子は、参照ＩＮＨＢＥと比較して、ＩＮＨＢＥリガンドに対するｉｎ ｖｉｔｒｏ応答の減少に関連する。いくつかの実施形態では、ＩＮＨＢＥバリアント核酸分子は、ヒト参照ゲノム配列と比較して、ＩＮＨＢＥポリペプチドの中途切断をもたらすか、またはもたらすと予測されるＩＮＨＢＥバリアントである。いくつかの実施形態では、ＩＮＨＢＥバリアント核酸分子は、Ｐｏｌｙｐｈｅｎ、ＳＩＦＴ、または同様のアルゴリズムなどのｉｎ ｖｉｔｒｏ予測アルゴリズムによって損傷を与えると予測されるバリアントである。いくつかの実施形態では、ＩＮＨＢＥバリアント核酸分子は、ＩＮＨＢＥにおいて非同義アミノ酸置換を引き起こす、または引き起こすと予測されるバリアントであり、その対立遺伝子の頻度は、対象が選択される母集団において１／１００より少ない対立遺伝子である。いくつかの実施形態では、ＩＮＨＢＥバリアント核酸分子は、任意のまれなミスセンスバリアント（対立遺伝子頻度＜０．１％、または１，０００対立遺伝子に１つ）、または任意のスプライス部位、ストップ－ゲイン、スタート－ロス、ストップ－ロス、フレームシフト、インフレームインデル、もしくはその他のフレームシフトＩＮＨＢＥバリアントである。
本明細書において記載される実施形態のうちの任意のものにおいて、ＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドは、部分的機能喪失、完全機能喪失、予測される部分的機能喪失、または予測される完全機能喪失を有する任意のＩＮＨＢＥポリペプチドであり得る。
本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、タンパク質配列において変異をコードするＩＮＨＢＥバリアント核酸分子は、参照配列としてＩＮＨＢＥ参照ゲノム核酸分子のヌクレオチド配列（配列番号１、ＧＲＣｈ３８／ｈｇ３８ヒトゲノムアセンブリ中のＥＮＳＴ０００００２６６６４６．３ ｃｈｒ１２：５７４５５３０７－５７４５８０２５）を使用して、第１２染色体の位置に変異を含み得る。
ＩＮＨＢＥには、Ｇｌｎ７ｆｓ、Ａｒｇ１８ＳＴＯＰ、Ｇｌｎ３７ＳＴＯＰ、Ａｒｇ４０ＳＴＯＰ、Ｌｅｕ５５ｆｓ、Ｃｙｓ１３９ｆｓ、Ａｒｇ１４４ＳＴＯＰ、Ｃｙｓ１９２ｆｓ、Ａｒｇ２２４ｆｓ、Ａｒｇ２２４ＳＴＯＰ、Ａｒｇ２３３ｆｓ、Ａｒｇ２５０ＳＴＯＰ、Ａｓｐ２５１ｆｓ、Ｔｙｒ２５３ＳＴＯＰ、Ｔｙｒ２７５ＳＴＯＰ、Ｓｅｒ２９３ｆｓ、Ｔｒｐ３０８ｆｓ、Ｐｒｏ３０９ｆｓ、Ａｒｇ３２０ＳＴＯＰ、Ｌｅｕ３２３ｆｓ、及びＴｅｒ３５１Ｔｙｒｅｘｔ＊？を含むがこれらに限定されない、多数の遺伝的バリアントが存在し、それらはＩＮＨＢＥポリペプチド配列にその後の変化を引き起こす。Ｃ２９８＋１Ｇ：Ｔ（１２：５７４５５８３５：Ｇ：Ｔ）、ｃ．２９９－２Ａ：Ｇ、ｃ．２９９－１Ｇ：Ｃ（１２：５７４５６０９３：Ｇ：Ｃ）、及び１２：５７２５９７９９：Ａ：Ｃ（ヒトゲノム参照ビルドＧＲｃｈ３８を使用）を含むがこれらに限定されない、ＩＮＨＢＥの追加のバリアントゲノム核酸分子が存在する。１位のメチオニンが除去されているＩＮＨＢＥポリペプチドを含むがこれに限定されない追加のバリアントＩＮＨＢＥポリペプチドが存在する。
ＩＮＨＢＥ ｐＬＯＦバリアントの任意の１つ以上（すなわち、任意の組合せ）を、本明細書に記載の任意の方法内で使用して、対象が代謝障害及び／または心血管疾患を発症するリスクが高いかどうかを判定することができる。特定のバリアントの組み合わせは、ＩＮＨＢＥと増加した２型糖尿病／ＢＭＩ及び／または心血管疾患のリスクとの特定の相関関係の統計分析に使用されるマスクを形成し得る。
本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、代謝障害は、２型糖尿病、肥満、ＮＡＳＨ、及び／またはトリグリセリドレベルの上昇である。本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、代謝障害は２型糖尿病である。本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、代謝障害は肥満である。本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、代謝障害はＮＡＳＨである。本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、代謝障害はトリグリセリドレベルの上昇である。本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、代謝障害は脂肪異栄養症である。本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、代謝障害は肝臓炎である。本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、代謝障害は脂肪肝疾患である。本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、代謝障害は高コレステロール血症である。本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、代謝障害は、肝酵素（例えば、ＡＬＴ及び／またはＡＳＴなど）の上昇である。
体脂肪分布に関連する代謝障害／病態としてはまた、２型糖尿病、高脂血症または脂質異常症（低密度リポタンパク質コレステロール（ＬＤＬ－Ｃ）、トリグリセリド、超低密度リポタンパク質コレステロール（ＶＬＤＬ－Ｃ）、アポリポタンパク質Ｂまたは他の脂質画分の循環レベルが高いまたは変化している）、肥満（特に腹部肥満）、脂肪異栄養症（脂肪蓄積における脂肪の蓄積不全（局所的（限局性脂肪異栄養症）または全身性（脂肪萎縮症））など）、インスリン抵抗性または空腹時もしくはグルコースまたはインスリンチャレンジ中のインスリンレベルの上昇もしくは変化、肝臓脂肪沈着または脂肪肝疾患及びそれらの合併症（例えば、肝硬変、線維症、または肝臓炎など）、肝酵素レベルまたは肝臓の損傷の他のマーカーの上昇または増加または変化、炎症または脂肪沈着、血圧上昇及び／または高血圧、血糖値もしくはグルコースの上昇または高血糖、メタボリックシンドローム、冠動脈疾患、及び他のアテローム性動脈硬化症、ならびに前述の各病態の合併症が挙げられるが、これらに限定されない。
本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、心血管疾患は、心筋症、心不全、または高血圧である。本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、心血管疾患は心筋症である。本明細書に記載の実施形態のいずれにおいて、心血管疾患は心不全である。本明細書に記載の実施形態のいずれにおいて、心血管疾患は高血圧である。
本開示は、代謝障害を有するか、または発症するリスクのある対象の治療方法を提供し、この方法は、ＩＮＨＢＥ阻害剤を対象に投与することを含む。
本開示はまた、２型糖尿病を有するか、または発症するリスクのある対象の治療方法を提供し、この方法は、ＩＮＨＢＥ阻害剤を対象に投与することを含む。
本開示はまた、肥満を有するか、または発症するリスクのある対象の治療方法を提供し、この方法は、ＩＮＨＢＥ阻害剤を対象に投与することを含む。
本開示はまた、トリグリセリドの上昇を有するか、または発症するリスクのある対象の治療方法を提供し、この方法は、ＩＮＨＢＥ阻害剤を対象に投与することを含む。
本開示はまた、ＮＡＳＨを有するか、または発症するリスクのある対象の治療方法を提供し、この方法は、ＩＮＨＢＥ阻害剤を対象に投与することを含む。
本開示はまた、脂肪異栄養症を有するか、または発症するリスクのある対象の治療方法を提供し、この方法は、ＩＮＨＢＥ阻害剤を対象に投与することを含む。
本開示はまた、肝臓炎を有するか、または発症するリスクのある対象の治療方法を提供し、この方法は、ＩＮＨＢＥ阻害剤を対象に投与することを含む。
本開示はまた、脂肪肝を有するか、または発症するリスクのある対象の治療方法を提供し、この方法は、ＩＮＨＢＥ阻害剤を対象に投与することを含む。
本開示はまた、高コレステロール血症を有するか、または発症するリスクのある対象の治療方法を提供し、この方法は、ＩＮＨＢＥ阻害剤を対象に投与することを含む。
本開示はまた、肝酵素（例えば、ＡＬＴ及び／またはＡＳＴ）の上昇を有するか、または発症するリスクのある対象の治療方法を提供し、この方法は、ＩＮＨＢＥ阻害剤を対象に投与することを含む。
本開示はまた、心血管疾患を有するか、または発症するリスクのある対象の治療方法を提供し、この方法は、ＩＮＨＢＥ阻害剤を対象に投与することを含む。
本開示はまた、心筋症を有するか、または発症するリスクのある対象の治療方法を提供し、この方法は、ＩＮＨＢＥ阻害剤を対象に投与することを含む。
本開示はまた、心不全を有するか、または発症するリスクのある対象の治療方法を提供し、この方法は、ＩＮＨＢＥ阻害剤を対象に投与することを含む。
本開示はまた、高血圧を有するか、または発症するリスクのある対象の治療方法を提供し、この方法は、ＩＮＨＢＥ阻害剤を対象に投与することを含む。
いくつかの実施形態では、ＩＮＨＢＥ阻害剤は、阻害性核酸分子を含む。阻害性核酸分子の例としては、アンチセンス核酸分子、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、及びショートヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）が挙げられるが、これらに限定されない。そのような阻害性核酸分子は、ＩＮＨＢＥ ｍＲＮＡの任意の領域を標的とするように設計され得る。いくつかの実施形態では、アンチセンスＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、またはｓｈＲＮＡは、ＩＮＨＢＥゲノム核酸分子またはｍＲＮＡ分子内の配列とハイブリダイズして、対象の細胞におけるＩＮＨＢＥポリペプチドの発現を低下させる。いくつかの実施形態では、ＩＮＨＢＥ阻害剤は、ＩＮＨＢＥゲノム核酸分子またはｍＲＮＡ分子とハイブリダイズして、対象の細胞におけるＩＮＨＢＥポリペプチドの発現を低下させるアンチセンスＲＮＡを含む。いくつかの実施形態では、ＩＮＨＢＥ阻害剤は、ＩＮＨＢＥゲノム核酸分子またはｍＲＮＡ分子とハイブリダイズして、対象の細胞におけるＩＮＨＢＥポリペプチドの発現を低下させるｓｉＲＮＡを含む。いくつかの実施形態では、ＩＮＨＢＥ阻害剤は、ＩＮＨＢＥゲノム核酸分子またはｍＲＮＡ分子とハイブリダイズして、対象の細胞におけるＩＮＨＢＥポリペプチドの発現を低下させるｓｈＲＮＡを含む。
いくつかの実施形態では、アンチセンス核酸分子は、表１に示すヌクレオチド配列を含むか、またはそれらからなる。
いくつかの実施形態では、アンチセンス核酸分子は、表２に示すヌクレオチド配列を含むか、またはそれらからなる。
いくつかの実施形態では、ｓｉＲＮＡ分子は、表３に示すヌクレオチド配列（センス鎖及びアンチセンス鎖）を含むか、またはそれらからなる。
いくつかの実施形態では、ｓｉＲＮＡ分子は、表４に示すヌクレオチド配列（センス鎖及びアンチセンス鎖）を含むか、またはそれらからなる。
本明細書に開示する阻害性核酸分子は、ＲＮＡ、ＤＮＡ、またはＲＮＡとＤＮＡの両方を含み得る。阻害性核酸分子を、例えばベクター中の異種核酸配列または異種標識に連結または融合させることもできる。例えば、本明細書に開示する阻害性核酸分子は、阻害性核酸分子及び異種核酸配列を含むベクター内にあり得るか、または阻害性核酸分子及び異種核酸配列を含む外来性ドナー配列としてあり得る。阻害性核酸分子を、異種標識へ連結または融合させることもできる。標識は、直接検出可能（例えばフルオロフォアなど）、または間接検出可能（例えばハプテン、酵素、またはフルオロフォアクエンチャーなど）であり得る。そのような標識は、分光学的、光化学的、生化学的、免疫化学的、または化学的な手段によって検出可能であり得る。そのような標識としては、例えば放射性同位体標識、色素、染料、クロモゲン、スピン標識、及び蛍光標識が挙げられる。標識は、例えば化学発光物質；金属含有物質；または酵素（その場合、酵素依存性のシグナルの二次的生成が起こる）でもあり得る。用語「標識」とは、コンジュゲートされた分子を続いて基質と一緒に添加して使用して、検出可能なシグナルを生成するように、コンジュゲートされた分子へ選択的に結合し得る、「タグ」またはハプテンも指し得る。例えば、ビオチンをタグとして使用して、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）のアビジンまたはストレプトアビジンのコンジュゲートと一緒にタグへ結合させ、比色基質（例えば、テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）など）または蛍光発生基質を使用して、ＨＲＰの存在の検出を調査することができる。精製を容易にするタグとして使用され得る例示的な標識としては、ｍｙｃ、ＨＡ、ＦＬＡＧもしくは３×ＦＬＡＧ、６×Ｈｉｓもしくはポリヒスチジン、グルタチオン－Ｓ－トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、マルトース結合タンパク質、エピトープタグ、または免疫グロブリンのＦｃ部分が挙げられるが、これらに限定されない。多数の標識としては、例えば粒子、フルオロフォア、ハプテン、酵素、及びそれらの比色基質、蛍光発生基質、及び化学発光基質、ならびに他の標識が挙げられる。
開示する阻害性核酸分子は、例えば、ヌクレオチド、またはヌクレオチド類似体もしくはヌクレオチド置換体などの非天然ヌクレオチドもしくは修飾ヌクレオチドを含み得る。そのようなヌクレオチドには、修飾塩基、糖、もしくはリン酸基を含有するヌクレオチド、またはその構造に非天然部分が組み込まれたヌクレオチドが含まれる。非天然ヌクレオチドの例としては、ジデオキシヌクレオチド、ビオチン化ヌクレオチド、アミノ化ヌクレオチド、脱アミノ化ヌクレオチド、アルキル化ヌクレオチド、ベンジル化ヌクレオチド、及びフルオロフォア標識されたヌクレオチドが挙げられるが、これらに限定されない。
本明細書に開示する阻害性核酸分子はまた、１つ以上のヌクレオチド類似体またはヌクレオチド置換を含み得る。ヌクレオチド類似体は、塩基部分、糖部分、またはリン酸部分のいずれかへの修飾を含有するヌクレオチドである。塩基部分に対する修飾としては、Ａ、Ｃ、Ｇ、及びＴ／Ｕ、ならびに様々なプリン塩基またはピリミジン塩基、例えば、シュードウリジン、ウラシル－５－イル、ヒポキサンチン－９－イル（Ｉ）、及び２－アミノアデニン－９－イルなどの、天然及び合成による修飾が挙げられるが、これらに限定されない。修飾塩基としては、５－メチルシトシン（５－ｍｅ－Ｃ）、５－ヒドロキシメチルシトシン、キサンチン、ヒポキサンチン、２－アミノアデニン、アデニン及びグアニンの６－メチル誘導体及び他のアルキル誘導体、アデニン及びグアニンの２－プロピル誘導体及び他のアルキル誘導体、２－チオウラシル、２－チオチミン及び２－チオシトシン、５－ハロウラシル及びシトシン、５－プロピニルウラシル及びシトシン、６－アゾウラシル、シトシン及びチミン、５－ウラシル（シュードウラシル）、４－チオウラシル、８－ハロ、８－アミノ、８－チオール、８－チオアルキル、８－ヒドロキシル及び他の８－置換アデニン及びグアニン、５－ハロ（例えば、５－ブロモなど）、５－トリフルオロメチル及び他の５－置換ウラシル及びシトシン、７－メチルグアニン、７－メチルアデニン、８－アザグアニン、８－アザアデニン、７－デアザグアニン、７－デアザアデニン、３－デアザグアニン、ならびに３－デアザアデニンが挙げられるが、これらに限定されない。
ヌクレオチド類似体は、糖部分の修飾も含み得る。糖部分への修飾には、リボース及びデオキシリボースの天然修飾、ならびに合成修飾が含まれるが、これらに限定されない。糖修飾には、２’位における以下の修飾：ＯＨ；Ｆ；Ｏ－、Ｓ－、もしくはＮ－アルキル；Ｏ－、Ｓ－、もしくはＮ－アルケニル；Ｏ－、Ｓ－もしくはＮ－アルキニル；たはＯ－アルキル－Ｏ－アルキルが含まれるが、これらに限定されず、その場合、アルキル、アルケニル、及びアルキニルは、置換または非置換のＣ１－１０アルキルもしくはＣ２－１０アルケニル、及びＣ２－１０アルキニルであってもよい。例示的な２’糖修飾としては、－Ｏ［（ＣＨ２）ｎＯ］ｍＣＨ３、－Ｏ（ＣＨ２）ｎＯＣＨ３、－Ｏ（ＣＨ２）ｎＮＨ２、－Ｏ（ＣＨ２）ｎＣＨ３、－Ｏ（ＣＨ２）ｎ－ＯＮＨ２、及び－Ｏ（ＣＨ２）ｎＯＮ［（ＣＨ２）ｎＣＨ３）］２が挙げられるが、これらに限定されず、式中、ｎ及びｍは、独立して１～約１０である。２’位の他の修飾としては、Ｃ１－１０アルキル、置換低級アルキル、アルカリール、アラルキル、Ｏ－アルカリールまたはＯ－アラルキル、ＳＨ、ＳＣＨ３、ＯＣＮ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＮ、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＳＯＣＨ３、ＳＯ２ＣＨ３、ＯＮＯ２、ＮＯ２、Ｎ３、ＮＨ２、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルカリール、アミノアルキルアミノ、ポリアルキルアミノ、置換シリル、ＲＮＡ切断基、レポーター基、インターカレーター、オリゴヌクレオチドの薬物動態学的特性を向上させるための基、またはオリゴヌクレオチドの薬力学的特性を向上させるための基、及び同様の特性を有する他の置換基が挙げられるが、これらに限定されない。類似する修飾が、糖上の他の位置、特に３’末端ヌクレオチド上または２’－５’結合オリゴヌクレオチド中の糖の３’位置、及び５’末端ヌクレオチドの５’位でも行われてよい。修飾糖には、架橋環酸素での修飾（ＣＨ２及びＳなど）を含有する糖も含まれ得る。ヌクレオチド糖類似体は、ペントフラノシル糖の代わりに糖模倣体（シクロブチル部分など）も有し得る。
ヌクレオチド類似体は、リン酸部分でも修飾され得る。修飾ホスフェート部分としては、２つのヌクレオチド間の結合に、ホスホロチオエート、キラルホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホトリエステル、アミノアルキルホスホトリエステル、メチル及びその他のアルキルホスホネート（３’－アルキレンホスホネート及びキラルホスホネートを含む）、ホスフィネート、ホスホルアミダート（３’－アミノホスホルアミダート及びアミノアルキルホスホルアミダートを含む）、チオノホスホルアミダート、チオノアルキルホスホネート、チオノアルキルホスホトリエステル、ならびにボラノホスフェートが含まれるように修飾され得る部分が挙げられるが、これらに限定されない。２つのヌクレオチド間のこれらのリン酸結合または修飾リン酸結合は、３’－５’結合または２’－５’結合を介することができ、結合は、例えば、３’－５’から５’－３’へ、または２’－５’から５’－２’への逆向きの極性を含有し得る。様々な塩、混合塩、及び遊離酸形態も含まれる。ヌクレオチド置換体にはペプチド核酸（ＰＮＡ）も含まれる。
いくつかの実施形態では、アンチセンス核酸分子はギャップマーであり、それにより、５’及び３’末端の最初の１～７個のヌクレオチドがそれぞれ２’－メトキシエチル（２’－ＭＯＥ）修飾を有する。いくつかの実施形態では、５’及び３’末端の最初の５つのヌクレオチドは、それぞれ２’－ＭＯＥ修飾を有する。いくつかの実施形態では、５’及び３’末端の最初の１～７個のヌクレオチドはＲＮＡヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、５’及び３’末端の最初の５つのヌクレオチドはＲＮＡヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、ヌクレオチド間の主鎖結合のそれぞれは、ホスホロチオエート結合である。
いくつかの実施形態では、ｓｉＲＮＡ分子は末端修飾を有する。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖の５’末端はリン酸化されている。いくつかの実施形態では、５’－（Ｅ）－ビニル－ホスホネートなどの加水分解することができない５’－ホスフェート類似体を使用する。
いくつかの実施形態では、ｓｉＲＮＡ分子は主鎖修飾を有する。いくつかの実施形態では、連続したリボースヌクレオシドを連結する修飾ホスホジエステル基は、ｓｉＲＮＡの安定性及びｉｎ ｖｉｖｏバイオアベイラビリティを増強することが示されている。ホスホジエステル結合の非エステル基（－ＯＨ、＝Ｏ）は、硫黄、ホウ素、またはアセテートで置換することができ、ホスホロチオエート、ボラノホスフェート、及びホスホノアセテート結合を生成する。さらに、ホスホジエステル基をホスホトリエステルで置換すると、負電荷が除去され、ｓｉＲＮＡの細胞への取り込みと血清成分への保持が容易になる。いくつかの実施形態では、ｓｉＲＮＡ分子は糖修飾を有する。いくつかの実施形態では、糖は脱プロトン化され（エキソヌクレアーゼ及びエンドヌクレアーゼによって触媒される反応）、それによって２’－ヒドロキシルが求核剤として作用し、ホスホジエステル結合における隣接するリンを攻撃することができる。そのような代替物として、２’－Ｏ－メチル、２’－Ｏ－メトキシエチル、及び２’－フルオロ修飾が挙げられる。
いくつかの実施形態では、ｓｉＲＮＡ分子は塩基修飾を有する。いくつかの実施形態では、塩基は、シュードウリジン、５’－メチルシチジン、Ｎ６－メチルアデノシン、イノシン、及びＮ７－メチルグアノシンなどの修飾塩基で置換することができる。
いくつかの実施形態では、ｓｉＲＮＡ分子を脂質にコンジュゲートする。脂質をｓｉＲＮＡの５’または３’末端にコンジュゲートして、血清リポタンパク質と結合可能にすることにより、ｉｎ ｖｉｖｏバイオアベイラビリティを向上させることができる。代表的な脂質としては、コレステロール及びビタミンＥ、ならびに脂肪酸、例えば、パルミチン酸及びトコフェロールが挙げられるが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態では、代表的なｓｉＲＮＡは、以下の式を有し：
センス：ｍＮ＊ｍＮ＊／ｉ２ＦＮ／ｍＮ／ｉ２ＦＮ／ｍＮ／ｉ２ＦＮ／ｍＮ／ｉ２ＦＮ／ｍＮ／ｉ２ＦＮ／ｍＮ／ｉ２ＦＮ／ｍＮ／ｉ２ＦＮ／ｍＮ／ｉ２ＦＮ／＊ｍＮ＊／３２ＦＮ／
アンチセンス：／５２ＦＮ／＊／ｉ２ＦＮ／＊ｍＮ／ｉ２ＦＮ／ｍＮ／ｉ２ＦＮ／ｍＮ／ｉ２ＦＮ／ｍＮ／ｉ２ＦＮ／ｍＮ／ｉ２ＦＮ／ｍＮ／ｉ２ＦＮ／ｍＮ／ｉ２ＦＮ／ｍＮ／ｉ２ＦＮ／ｍＮ＊Ｎ＊Ｎ
式中、「Ｎ」は塩基であり、「２Ｆ」は２’－Ｆ修飾であり、「ｍ」は２’－Ｏ－メチル修飾であり、「Ｉ」は内部塩基であり、「＊」はホスホロチオエート主鎖結合である。
本開示はまた、本明細書に開示する阻害性核酸分子のうちのいずれか１つ以上を含むベクターを提供する。いくつかの実施形態では、ベクターは、本明細書に開示する阻害性核酸分子のいずれか１つ以上及び異種核酸を含む。ベクターは、核酸分子を輸送することができるウイルスベクターまたは非ウイルスベクターであり得る。いくつかの実施形態では、ベクターは、プラスミドまたはコスミド（例えば追加のＤＮＡセグメントがライゲーションされ得る環状二本鎖ＤＮＡなど）である。いくつかの実施形態では、ベクターは、追加のＤＮＡセグメントがウイルスゲノムの中へライゲーションされ得る、ウイルスベクターである。発現ベクターとしては、プラスミド、コスミド、レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、植物ウイルス（カリフラワーモザイクウイルス及びタバコモザイクウイルスなど）、酵母人工染色体（ＹＡＣ）、エプスタイン－バー（ＥＢＶ）由来エピソーム、及び当技術分野において公知の他の発現ベクターが挙げられるが、これらに限定されない。
本開示はまた、本明細書に開示される阻害性核酸分子のうちのいずれか１つ以上を含む組成物も提供する。いくつかの実施形態では、組成物は、医薬組成物である。いくつかの実施形態では、組成物は、担体及び／または賦形剤を含む。担体の例としては、ポリ（乳酸）（ＰＬＡ）マイクロスフェア、ポリ（Ｄ，Ｌ－乳酸－グリコール酸コポリマー）（ＰＬＧＡ）マイクロスフェア、リポソーム、ミセル、逆ミセル、脂質コクリエート、及び脂質微小管が挙げられるが、これらに限定されない。担体には、ＰＢＳ、ＨＢＳＳなどの緩衝塩溶液が含まれ得る。
いくつかの実施形態では、ＩＮＨＢＥ阻害剤は、認識配列（複数可）において１つ以上のニックもしくは二本鎖切断を誘導するヌクレアーゼ剤、またはＩＮＨＢＥゲノム核酸分子内の認識配列に結合するＤＮＡ結合タンパク質を含む。認識配列は、ＩＮＨＢＥ遺伝子のコード領域内、または遺伝子の発現に影響を及ぼす調節領域内に位置し得る。ＤＮＡ結合タンパク質またはヌクレアーゼ剤の認識配列は、イントロン、エクソン、プロモーター、エンハンサー、調節領域、または任意の非タンパク質コード領域中に存在し得る。認識配列は、ＩＮＨＢＥ遺伝子の開始コドンを含み得るかまたはこれに近接し得る。例えば、認識配列は、開始コドンから約１０、約２０、約３０、約４０、約５０、約１００、約２００、約３００、約４００、約５００、または約１，０００ヌクレオチドに位置し得る。別の例として、各々が開始コドンを含むかまたは近接するヌクレアーゼ認識配列を標的とする、２つ以上のヌクレアーゼ剤を使用することができる。別の例として、２つのヌクレアーゼ剤を使用することができ（１つは、開始コドンを含むかまたは近接するヌクレアーゼ認識配列を標的とし、もう１つは、終止コドンを含むかまたは近接するヌクレアーゼ認識配列を標的とする）、ヌクレアーゼ剤による切断は、２つのヌクレアーゼ認識配列間のコード領域の欠失をもたらし得る。所望される認識配列の中へのニックまたは二本鎖切断を誘導する任意のヌクレアーゼ剤を、本明細書において開示される方法及び組成物において使用することができる。所望される認識配列へ結合する任意のＤＮＡ結合タンパク質を、本明細書において開示される方法及び組成物において使用することができる。
本明細書における使用に好適なヌクレアーゼ剤及びＤＮＡ結合タンパク質としては、ジンクフィンガータンパク質もしくはジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）ペア、転写活性化因子様エフェクター（ＴＡＬＥ）タンパク質もしくは転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、またはクラスター化規則的散在型短パリンドローム反復（ＣＲＩＳＰＲ）／ＣＲＩＳＰＲ関連（Ｃａｓ）系が挙げられるが、これらに限定されない。認識配列の長さは変動することができ、例えばジンクフィンガータンパク質もしくはＺＦＮペアについての約３０～３６ｂｐ、各々のＺＦＮについての約１５～１８ｂｐ、ＴＡＬＥタンパク質もしくはＴＡＬＥＮについての約３６ｂｐ、及びＣＲＩＳＰＲ／ＣａｓガイドＲＮＡについての約２０ｂｐである認識配列が挙げられる。
いくつかの実施形態では、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系は、細胞内のＩＮＨＢＥゲノム核酸分子を修飾するために使用することができる。本明細書で開示される方法及び組成物は、ＩＮＨＢＥ核酸分子の部位特異的切断のためにＣＲＩＳＰＲ複合体（Ｃａｓタンパク質と複合体化したガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）を含む）を利用することによってＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ系を用いることができる。
Ｃａｓタンパク質は、一般に、ｇＲＮＡと相互作用することができる少なくとも１つのＲＮＡ認識ドメインまたはＲＮＡ結合ドメインを含む。Ｃａｓタンパク質は、ヌクレアーゼドメイン（例えば、ＤＮａｓｅドメインまたはＲＮａｓｅドメインなど）、ＤＮＡ結合ドメイン、ヘリカーゼドメイン、タンパク質－タンパク質相互作用ドメイン、二量体化ドメイン、及び他のドメインも含み得る。好適なＣａｓタンパク質としては、例えば、野生型Ｃａｓ９タンパク質及び野生型Ｃｐｆ１タンパク質（例えば、ＦｎＣｐｆ１など）が挙げられる。Ｃａｓタンパク質は、ＩＮＨＢＥゲノム核酸分子に二本鎖切断を作り出すための完全な切断活性を有し得るか、またはＩＮＨＢＥゲノム核酸分子に一本鎖切断を作り出すニッカーゼであり得る。Ｃａｓタンパク質の追加の例としては、Ｃａｓ１、Ｃａｓ１Ｂ、Ｃａｓ２、Ｃａｓ３、Ｃａｓ４、Ｃａｓ５、Ｃａｓ５ｅ（ＣａｓＤ）、Ｃａｓ６、Ｃａｓ６ｅ、Ｃａｓ６ｆ、Ｃａｓ７、Ｃａｓ８ａ１、Ｃａｓ８ａ２、Ｃａｓ８ｂ、Ｃａｓ８ｃ、Ｃａｓ９（Ｃｓｎ１またはＣｓｘ１２）、Ｃａｓ１０、Ｃａｓ１０ｄ、ＣａｓＦ、ＣａｓＧ、ＣａｓＨ、Ｃｓｙ１、Ｃｓｙ２、Ｃｓｙ３、Ｃｓｅ１（ＣａｓＡ）、Ｃｓｅ２（ＣａｓＢ）、Ｃｓｅ３（ＣａｓＥ）、Ｃｓｅ４（ＣａｓＣ）、Ｃｓｃ１、Ｃｓｃ２、Ｃｓａ５、Ｃｓｎ２、Ｃｓｍ２、Ｃｓｍ３、Ｃｓｍ４、Ｃｓｍ５、Ｃｓｍ６、Ｃｍｒ１、Ｃｍｒ３、Ｃｍｒ４、Ｃｍｒ５、Ｃｍｒ６、Ｃｓｂ１、Ｃｓｂ２、Ｃｓｂ３、Ｃｓｘ１７、Ｃｓｘ１４、Ｃｓｘ１０、Ｃｓｘ１６、ＣｓａＸ、Ｃｓｘ３、Ｃｓｘ１、Ｃｓｘ１５、Ｃｓｆ１、Ｃｓｆ２、Ｃｓｆ３、Ｃｓｆ４、及びＣｕ１９６６、ならびにそれらのホモログまたは修飾バージョンが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、Ｃａｓ１２ａなどのＣａｓ系は、単一のｃｒＲＮＡにコードされた複数のｇＲＮＡを有し得る。Ｃａｓタンパク質を、融合タンパク質として異種ポリペプチドに作動可能に連結することもできる。例えば、Ｃａｓタンパク質を、切断ドメイン、後成的修飾ドメイン、転写活性化ドメイン、または転写リプレッサードメインへ融合させることができる。Ｃａｓタンパク質は、任意の形態で提供され得る。例えば、Ｃａｓタンパク質を、タンパク質、例えばｇＲＮＡと複合体化したＣａｓタンパク質の形態で提供することができる。あるいは、Ｃａｓタンパク質を、Ｃａｓタンパク質をコードする核酸分子、例えばＲＮＡまたはＤＮＡの形態で提供することができる。
いくつかの実施形態では、ＩＮＨＢＥゲノム核酸分子の標的化遺伝子修飾は、Ｃａｓタンパク質と、ＩＮＨＢＥゲノム核酸分子の標的ゲノム遺伝子座内の１つ以上のｇＲＮＡ認識配列とハイブリダイズする１つ以上のｇＲＮＡとに細胞を接触させることによって、生じさせることができる。例えば、ｇＲＮＡ認識配列は、配列番号１の領域内に位置し得る。ｇＲＮＡ認識配列は、ＩＮＨＢＥゲノム核酸分子の開始コドンまたはＩＮＨＢＥゲノム核酸分子の終止コドンを含むか、またはそれに近接し得る。例えば、ｇＲＮＡ認識配列は、開始コドンまたは終止コドンから約１０、約２０、約３０、約４０、約５０、約１００、約２００、約３００、約４００、約５００、または約１，０００ヌクレオチドに位置し得る。
ＩＮＨＢＥゲノム核酸分子における標的ゲノム遺伝子座内のｇＲＮＡ認識配列は、プロトスペーサー隣接モチーフ（ＰＡＭ）配列の近傍に位置し、これはＣａｓ９ヌクレアーゼが標的とするＤＮＡ配列の直後にある２～６塩基対のＤＮＡ配列である。カノニカルなＰＡＭは、配列５’－ＮＧＧ－３’（配列中、「Ｎ」は任意の核酸塩基であり、２つのグアニン（「Ｇ」）核酸塩基が後続する）である。ｇＲＮＡは、遺伝子編集のためにＣａｓ９をゲノム中の任意の場所に輸送し得るが、Ｃａｓ９がＰＡＭを認識する部位以外の任意の部位で編集は起こり得ない。加えて、５’－ＮＧＡ－３’は、ヒト細胞について高度に効率的な非カノニカルなＰＡＭであり得る。一般に、ＰＡＭは、ｇＲＮＡによって標的化されるＤＮＡ配列の約２～６ヌクレオチド下流である。ＰＡＭは、ｇＲＮＡ認識配列に隣接し得る。いくつかの実施形態では、ｇＲＮＡ認識配列は、３’末端にＰＡＭが隣接し得る。いくつかの実施形態では、ｇＲＮＡ認識配列は、５’末端にＰＡＭが隣接し得る。例えば、Ｃａｓタンパク質の切断部位は、ＰＡＭ配列の上流または下流の約１～約１０、約２～約５塩基対、または３塩基対であり得る。いくつかの実施形態では（Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ由来Ｃａｓ９または近縁のＣａｓ９を使用する場合など）、非相補鎖のＰＡＭ配列は、５’－ＮＧＧ－３’（式中、Ｎは任意のＤＮＡヌクレオチドであり、標的ＤＮＡの非相補鎖のｇＲＮＡ認識配列の３’に直接隣接する）であり得る。それゆえ、相補鎖のＰＡＭ配列は５’－ＣＣＮ－３’であり、式中、Ｎは、任意のＤＮＡヌクレオチドであり、標的ＤＮＡの非相補鎖のｇＲＮＡ認識配列の５’に直接隣接する。
ｇＲＮＡは、Ｃａｓタンパク質に結合してＣａｓタンパク質をＩＮＨＢＥゲノム核酸分子内の特定の位置に標的化するＲＮＡ分子である。例示的なｇＲＮＡは、ＩＮＨＢＥゲノム核酸分子に結合するまたはそれを切断するようにＣａｓ酵素を誘導するのに有効なｇＲＮＡであり、その際、ｇＲＮＡは、ＩＮＨＢＥゲノム核酸分子内のｇＲＮＡ認識配列とハイブリダイズするＤＮＡ標的化セグメントを含む。例示的なｇＲＮＡは、開始コドンまたは終止コドンを含むかそれに近接するＩＮＨＢＥゲノム核酸分子内に存在するｇＲＮＡ認識配列にハイブリダイズするＤＮＡ標的化セグメントを含む。例えば、ｇＲＮＡは、それが、開始コドンから約５、約１０、約１５、約２０、約２５、約３０、約３５、約４０、約４５、約５０、約１００、約２００、約３００、約４００、約５００、もしくは約１，０００ヌクレオチドに存在するか、または終止コドンから約５、約１０、約１５、約２０、約２５、約３０、約３５、約４０、約４５、約５０、約１００、約２００、約３００、約４００、約５００、もしくは約１，０００ヌクレオチドに存在するｇＲＮＡ認識配列へハイブリダイズするように選択され得る。好適なｇＲＮＡは、約１７～約２５ヌクレオチド、約１７～約２３ヌクレオチド、約１８～約２２ヌクレオチド、または約１９～約２１ヌクレオチドを含み得る。いくつかの実施形態では、ｇＲＮＡは、２０ヌクレオチドを含み得る。
ヒトＩＮＨＢＥ参照遺伝子内に位置する好適なｇＲＮＡ認識配列の例を、配列番号９～２７として表５に示す。
Ｃａｓタンパク質及びｇＲＮＡは、複合体を形成し、Ｃａｓタンパク質は、標的ＩＮＨＢＥゲノム核酸分子を切断する。Ｃａｓタンパク質は、ｇＲＮＡのＤＮＡ標的化セグメントが結合する標的ＩＮＨＢＥゲノム核酸分子に存在する核酸配列の内部または外側の部位で核酸分子を切断することができる。例えば、ＣＲＩＳＰＲ複合体（ｇＲＮＡ認識配列とハイブリダイズし、Ｃａｓタンパク質と複合体化しているｇＲＮＡを含む）の形成は、ｇＲＮＡのＤＮＡ標的化セグメントが結合するＩＮＨＢＥゲノム核酸分子に存在する核酸配列内またはその近傍（例えば、その核酸配列から１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、５０、もしくはそれ以上の塩基対内など）で一方または両方の鎖の切断をもたらし得る。
そのような方法は、例えば、配列番号１の領域が破壊されている、開始コドンが破壊されている、終止コドンが破壊されている、またはコード配列が破壊されているもしくは欠失している、ＩＮＨＢＥゲノム核酸分子をもたらし得る。任意選択で、ＩＮＨＢＥゲノム核酸分子の標的ゲノム遺伝子座内の追加のｇＲＮＡ認識配列とハイブリダイズする１つ以上の追加のｇＲＮＡに、細胞をさらに接触させることができる。１つ以上の追加のｇＲＮＡ（例えば、第２のｇＲＮＡ認識配列とハイブリダイズする第２のｇＲＮＡなど）に細胞を接触させることによって、Ｃａｓタンパク質による切断により、２箇所以上の二本鎖切断または２箇所以上の一本鎖切断を作り出すことができる。
本明細書に開示する方法及び組成物は、ＩＮＨＢＥ遺伝子を切断することなく、またはヌクレアーゼ剤によるＩＮＨＢＥ遺伝子の切断後に、外来性ドナー配列（例えば、標的化ベクターまたは修復テンプレート）を利用してＩＮＨＢＥ遺伝子を改変することができる。外来性ドナー配列とは、標的配列との部位特異的組換えを可能にするために必要なエレメントを含む任意の核酸またはベクターを指す。ヌクレアーゼ剤と組み合わせて外来性ドナー配列を使用することにより、相同組換え修復の促進によるＩＮＨＢＥ遺伝子内のより正確な改変がもたらされ得る。
そのような方法においては、ヌクレアーゼ剤がＩＮＨＢＥ遺伝子を切断して一本鎖切断（ニック）または二本鎖切断を生じさせ、外来性ドナー配列が非相同末端結合（ＮＨＥＪ）を介したライゲーション、または相同組換え修復事象によってＩＮＨＢＥ遺伝子と組み換わる。任意選択で、外来性ドナー配列による修復は、ヌクレアーゼ切断部位を除去または破壊し、それにより、標的化された対立遺伝子はヌクレアーゼ剤によって再標的化され得ない。
外来性ドナー配列には、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）またはリボ核酸（ＲＮＡ）を含ませることができ、それらは一本鎖または二本鎖とすることができ、それらは直鎖または環状形態とすることができる。例えば、外来性ドナー配列を、一本鎖オリゴデオキシヌクレオチド（ｓｓＯＤＮ）とすることができる。例えば、Ｙｏｓｈｉｍｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｃｏｍｍｕｎ．，２０１６，７，１０４３１を参照のこと。例示的な外来性ドナー配列は、長さが約５０ヌクレオチド～約５ｋｂ、長さが約５０ヌクレオチド～約３ｋｂ、または長さが約５０～約１，０００ヌクレオチドである。他の例示的な外来性ドナー配列は、長さが約４０～約２００ヌクレオチドである。例えば、外来性ドナー配列を、約５０～約６０、約６０～約７０、約７０～約８０、約８０～約９０、約９０～約１００、約１００～約１１０、約１１０～約１２０、約１２０～約１３０、約１３０～約１４０、約１４０～約１５０、約１５０～約１６０、約１６０～約１７０、約１７０～約１８０、約１８０～約１９０、または約１９０～約２００ヌクレオチド長とすることができる。あるいは、外来性ドナー配列を、約５０～約１００、約１００～約２００、約２００～約３００、約３００～約４００、約４００～約５００、約５００～約６００、約６００～約７００、約７００～約８００、約８００～約９００、または約９００～約１，０００ヌクレオチド長とすることができる。あるいは、外来性ドナー配列を、約１ｋｂ～約１．５ｋｂ、約１．５ｋｂ～約２ｋｂ、約２ｋｂ～約２．５ｋｂ、約２．５ｋｂ～約３ｋｂ、約３ｋｂ～約３．５ｋｂ、約３．５ｋｂ～約４ｋｂ、約４ｋｂ～約４．５ｋｂ、または約４．５ｋｂ～約５ｋｂ長とすることができる。あるいは、外来性ドナー配列を、例えば、５ｋｂ、４．５ｋｂ、４ｋｂ、３．５ｋｂ、３ｋｂ、２．５ｋｂ、２ｋｂ、１．５ｋｂ、１ｋｂ、９００ヌクレオチド、８００ヌクレオチド、７００ヌクレオチド、６００ヌクレオチド、５００ヌクレオチド、４００ヌクレオチド、３００ヌクレオチド、２００ヌクレオチド、１００ヌクレオチド、または５０ヌクレオチド以下の長さとすることができる。
いくつかの例では、外来性ドナー配列は、長さが約８０ヌクレオチド～約２００ヌクレオチド（例えば、長さが約１２０ヌクレオチド）のｓｓＯＤＮである。別の例では、外来性ドナー配列は、長さが約８０ヌクレオチド～約３ｋｂのｓｓＯＤＮである。そのようなｓｓＯＤＮには、例えば、それぞれ約４０ヌクレオチド～約６０ヌクレオチドの長さの相同性アームを含ませることができる。そのようなｓｓＯＤＮにはまた、例えば、それぞれ約３０ヌクレオチド～１００ヌクレオチドの長さの相同性アームを含ませることもできる。相同性アームは、対称的（例えば、それぞれ４０ヌクレオチド長またはそれぞれ６０ヌクレオチド長）または非対称的（例えば、長さが３６ヌクレオチドの１つの相同性アーム、及び長さが９１ヌクレオチドの１つの相同性アーム）とすることができる。
外来性ドナー配列には、追加の望ましい特徴（例えば、改変または調節された安定性、蛍光標識による追跡または検出、タンパク質またはタンパク質複合体に対する結合部位など）を提供する修飾または配列を含ませることができる。外来性ドナー配列には、１つ以上の蛍光標識、精製タグ、エピトープタグ、またはそれらの組み合わせを含ませることができる。例えば、外来性ドナー配列には、１つ以上の蛍光標識（例えば、蛍光タンパク質もしくは他のフルオロフォアまたは色素）、例えば、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、または少なくとも５つの蛍光標識を含ませることができる。例示的な蛍光標識として、フルオレセイン（例えば、６－カルボキシフルオレセイン（６－ＦＡＭ））、Ｔｅｘａｓ Ｒｅｄ、ＨＥＸ、Ｃｙ３、Ｃｙ５、Ｃｙ５．５、Ｐａｃｉｆｉｃ Ｂｌｕｅ、５－（及び－６）－カルボキシテトラメチルローダミン（ＴＡＭＲＡ）及びＣｙ７などのフルオロフォアが挙げられる。オリゴヌクレオチドを標識するために、幅広い蛍光色素が市販されている（例えば、Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ ＤＮＡ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ製）。そのような蛍光標識（例えば、内部蛍光標識）を使用して、例えば、外来性ドナー配列の末端と適合する突出末端を有する切断されたＩＮＨＢＥ遺伝子に直接組み込まれた外来性ドナー配列を検出することができる。標識またはタグは、５’末端、３’末端、または外来性ドナー配列の内部に配置することができる。例えば、外来性ドナー配列は、５’末端でＩｎｔｅｇｒａｔｅｄ ＤＮＡ ＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓのＩＲ７００フルオロフォア（５’ＩＲＤＹＥ（登録商標）７００）とコンジュゲートすることができる。
外来性ドナー配列にはまた、ＩＮＨＢＥ遺伝子に組み込ませるＤＮＡのセグメントを含む核酸インサートを含ませることができる。ＩＮＨＢＥ遺伝子に核酸インサートを組み込むことにより、ＩＮＨＢＥ遺伝子における目的の核酸配列の付加、ＩＮＨＢＥ遺伝子における目的の核酸配列の欠失、またはＩＮＨＢＥ遺伝子における目的の核酸配列の置換（すなわち、欠失及び挿入）をもたらすことができる。いくつかの外来性ドナー配列は、ＩＮＨＢＥ遺伝子の対応する欠失を伴わずにＩＮＨＢＥ遺伝子に核酸インサートを挿入するように設計される。他の外来性ドナー配列は、対応する核酸インサートの挿入を伴わずに、ＩＮＨＢＥ遺伝子内の目的の核酸配列を欠失させるように設計される。さらに他の外来性ドナー配列は、ＩＮＨＢＥ遺伝子内の目的の核酸配列を欠失させ、それを核酸インサートで置換するように設計される。
核酸インサート、またはＩＮＨＢＥ遺伝子内の欠失及び／または置換させる対応する核酸は、様々な長さであり得る。例示的な核酸インサート、または欠失及び／または置換させるＩＮＨＢＥ遺伝子内の対応する核酸は、約１ヌクレオチド～約５ｋｂの長さまたは約１ヌクレオチド～約１，０００ヌクレオチドの長さである。例えば、核酸インサート、またはＩＮＨＢＥ遺伝子内の欠失及び／または置換させる対応する核酸は、約１～約１０、約１０～約２０、約２０～約３０、約３０～約４０、約４０～約５０、約５０～約６０、約６０～約７０、約７０～約８０、約８０～約９０、約９０～約１００、約１００～約１１０、約１１０～約１２０、約１２０～約１３０、約１３０～約１４０、約１４０～約１５０、約１５０～約１６０、約１６０～約１７０、約１７０～約１８０、約１８０～約１９０、または約１９０～約２００ヌクレオチド長とすることができる。同様に、核酸インサート、またはＩＮＨＢＥ遺伝子中の欠失及び／または置換させる対応する核酸は、約１～約１００、約１００～約２００、約２００～約３００、約３００～約４００、約４００～約５００、約５００～約６００、約６００～約７００、約７００～約８００、約８００～約９００、または約９００～約１，０００ヌクレオチド長とすることができる。同様に、核酸インサート、またはＩＮＨＢＥ遺伝子内の欠失及び／または置換させる対応する核酸は、約１ｋｂ～約１．５ｋｂ、約１．５ｋｂ～約２ｋｂ、約２ｋｂ～約２．５ｋｂ、約２．５ｋｂ～約３ｋｂ、約３ｋｂ～約３．５ｋｂ、約３．５ｋｂ～約４ｋｂ、約４ｋｂ～約４．５ｋｂ、または約４．５ｋｂ～約５ｋｂ長とすることができる。
核酸インサートには、ゲノムＤＮＡまたは任意の他のタイプのＤＮＡを含ませることができる。例えば、核酸インサートにｃＤＮＡを含ませることができる。
核酸インサートには、ＩＮＨＢＥ遺伝子の全部または一部（例えば、ＩＮＨＢＥタンパク質の特定のモチーフまたは領域をコードする遺伝子の部分）に相同な配列を含ませることができる。例えば、核酸インサートに、ＩＮＨＢＥ遺伝子における置換のために標的化された配列と比較して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、またはそれ以上）の点変異または１つ以上のヌクレオチド挿入もしくは欠失を含む配列を含ませることができる。核酸インサート、またはＩＮＨＢＥ遺伝子内の欠失及び／または置換させる対応する核酸は、エクソンなどのコード領域、イントロン、非翻訳領域、もしくは調節領域などの非コード領域（例えば、プロモーター、エンハンサー、もしくは転写抑制因子結合エレメント）、またはその任意の組み合わせとすることができる。
核酸インサートにはまた、条件付き対立遺伝子を含ませることもできる。ＵＳ２０１１／０１０４７９９に記載されているように、条件付き対立遺伝子は多機能対立遺伝子であり得る。例えば、条件付き対立遺伝子は、ａ）標的遺伝子の転写に関してセンス方向にある作動配列、ｂ）センスまたはアンチセンス方向の薬物選択カセット（ＤＳＣ）、ｃ）アンチセンス方向の目的のヌクレオチド配列（ＮＳＩ）、及びｄ）逆方向の反転モジュール（エクソン分割イントロンと可逆遺伝子トラップ様モジュールを利用するＣＯＩＮ）による条件付きを含み得る。例えば、ＵＳ２０１１／０１０４７９９を参照のこと。条件付き対立遺伝子は、ｉ）作動配列及びＤＳＣを欠損しており、ｉｉ）ＮＳＩをセンス方向に、ＣＯＩＮをアンチセンス方向に含む、条件付き対立遺伝子を形成するために、第１のリコンビナーゼへの曝露時に組み換わる組換え可能な単位をさらに含み得る。例えば、ＵＳ２０１１／０１０４７９９を参照のこと。
核酸インサートにはまた、選択マーカーをコードするポリヌクレオチドを含ませることもできる。あるいは、核酸インサートには、選択マーカーをコードするポリヌクレオチドを含ませないこともできる。選択マーカーには、選択カセットを含ませることができる。任意選択で、選択カセットを自己欠失性カセットとすることができる。例えば、ＵＳ８，６９７，８５１及びＵＳ２０１３／０３１２１２９を参照のこと。一例として、自己欠失性カセットには、マウスＰｒｍ１プロモーターに作動可能に連結したＣｒｅ遺伝子（イントロンにより分断された、Ｃｒｅリコンビナーゼをコードする２つのエクソンを含む）、及びヒトユビキチンプロモーターに作動可能に連結したネオマイシン耐性遺伝子を含ませることができる。例示的な選択マーカーとして、ネオマイシンホスホトランスフェラーゼ（ｎｅｏｒ）、ハイグロマイシンＢホスホトランスフェラーゼ（ｈｙｇｒ）、ピューロマイシン－Ｎ－アセチルトランスフェラーゼ（ｐｕｒｏｒ）、ブラストサイジンＳデアミナーゼ（ｂｓｒｒ）、キサンチン／グアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ｇｐｔ）、または単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ（ＨＳＶ－ｋ）、またはその組み合わせが挙げられる。選択マーカーをコードするポリヌクレオチドを、標的とされている細胞内で活性なプロモーターに作動可能に連結することができる。プロモーターの例を、本明細書の他の場所に記載する。
核酸インサートにはまた、レポーター遺伝子を含ませることもできる。例示的なレポーター遺伝子として、ルシフェラーゼ、β－ガラクトシダーゼ、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、高感度緑色蛍光タンパク質（ｅＧＦＰ）、シアン蛍光タンパク質（ＣＦＰ）、黄色蛍光タンパク質（ＹＦＰ）、高感度黄色蛍光タンパク質（ｅＹＦＰ）、青色蛍光タンパク質（ＢＦＰ）、高感度青色蛍光タンパク質（ｅＢＦＰ）、ＤｓＲｅｄ、ＺｓＧｒｅｅｎ、ＭｍＧＦＰ、ｍＰｌｕｍ、ｍＣｈｅｒｒｙ、ｔｄＴｏｍａｔｏ、ｍＳｔｒａｗｂｅｒｒｙ、Ｊ－Ｒｅｄ、ｍＯｒａｎｇｅ、ｍＫＯ、ｍＣｉｔｒｉｎｅ、Ｖｅｎｕｓ、ＹＰｅｔ、Ｅｍｅｒａｌｄ、ＣｙＰｅｔ、Ｃｅｒｕｌｅａｎ、Ｔ－Ｓａｐｐｈｉｒｅ、及びアルカリホスファターゼが挙げられる。そのようなレポーター遺伝子を、標的とされている細胞内で活性なプロモーターに作動可能に連結することができる。プロモーターの例を、本明細書の他の場所に記載する。
核酸インサートにはまた、１つ以上の発現カセットまたは欠失カセットを含ませることができる。所与のカセットには、発現に影響を及ぼす様々な調節成分とともに、目的のヌクレオチド配列、選択マーカーをコードするポリヌクレオチド、及びレポーター遺伝子の１つ以上を含ませることができる。含ませることができる選択可能なマーカー及びレポーター遺伝子の例を、本明細書の他の場所で詳細に論じる。
核酸インサートには、部位特異的組換え標的配列に隣接する核酸を含ませることができる。あるいは、核酸インサートには、１つ以上の部位特異的組換え標的配列を含ませることができる。そのような部位特異的組換え標的配列は核酸インサート全体に隣接させることができるが、核酸インサート内の目的の任意の領域または個々のポリヌクレオチドも、そのような部位に隣接させることができる。核酸インサートまたは核酸インサート内の目的のポリヌクレオチドに隣接させることができる部位特異的組換え標的配列として、例えば、ｌｏｘＰ、ｌｏｘ５１１、ｌｏｘ２２７２、ｌｏｘ６６、ｌｏｘ７１、ｌｏｘＭ２、ｌｏｘ５１７１、ＦＲＴ、ＦＲＴ１１、ＦＲＴ７１、ａｔｔｐ、ａｔｔ、ＦＲＴ、ｒｏｘ、またはその組み合わせが挙げられる。いくつかの例では、部位特異的組換え部位を、核酸インサート内に含まれる選択マーカー及び／またはレポーター遺伝子をコードするポリヌクレオチドに隣接させる。ＩＮＨＢＥ遺伝子への核酸インサートの組み込みに続いて、部位特異的組換え部位間の配列を除去することができる。任意選択で、それぞれが部位特異的組換え部位を含む核酸インサートを含む２つの外来性ドナー配列を使用することができる。外来性ドナー配列は、目的の核酸に隣接する５’及び３’領域を標的とすることができる。標的ゲノム遺伝子座への２つの核酸インサートの組み込みに続いて、挿入された２つの部位特異的組換え部位の間の目的の核酸を除去することができる。
核酸インサートにはまた、Ｉ型、ＩＩ型、ＩＩＩ型、及びＩＶ型エンドヌクレアーゼを含む制限エンドヌクレアーゼ（すなわち、制限酵素）の１つ以上の制限部位を含ませることができる。Ｉ型及びＩＩＩ型の制限エンドヌクレアーゼは、特定の認識配列を認識するが、通常、ヌクレアーゼ結合部位からの様々な位置で切断し、これは、切断部位（認識配列）から数百塩基対離れている場合がある。ＩＩ型系では、制限活性はメチラーゼ活性とは無関係であり、通常、切断は結合部位内またはその近くの特定の部位で生じる。ほとんどのＩＩ型酵素はパリンドローム配列を切断するが、ＩＩａ型酵素は非パリンドローム認識配列を認識し、認識配列の外側を切断し、ＩＩｂ型酵素は、認識配列の外側の両方の部位で二重に配列を切断し、ＩＩｓ型酵素は、非対称の認識配列を認識し、認識配列から約１～２０ヌクレオチドの定義された距離で一方の側で切断する。ＩＶ型制限酵素は、メチル化ＤＮＡを標的とする。制限酵素は、例えば、ＲＥＢＡＳＥデータベース（ｒｅｂａｓｅ．ｎｅｂ．ｃｏｍのウェブページ；Ｒｏｂｅｒｔｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，２００３，３１，４１８－４２０；Ｒｏｂｅｒｔｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，２００３，３１，１８０５－１８１２；及びＢｅｌｆｏｒｔ ｅｔ ａｌ．，ｉｎ Ｍｏｂｉｌｅ ＤＮＡ ＩＩ，２００２，ｐｐ．７６１－７８３，Ｅｄｓ．Ｃｒａｉｇｉｅ ｅｔ ａｌ．，（ＡＳＭ Ｐｒｅｓｓ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，ＤＣ））にさらに記載され、分類されている。
いくつかの外来性ドナー配列は、５’末端及び／または３’末端に、標的ゲノム遺伝子座（例えば、ＩＮＨＢＥ遺伝子内）におけるヌクレアーゼを介した、またはＣａｓタンパク質を介した切断により生じる１つ以上のオーバーハングに相補的な短い一本鎖領域を有する。これらのオーバーハングは、５’及び３’相同性アームとも呼ばれる。例えば、いくつかの外来性ドナー配列は、５’末端及び／または３’末端に、標的ゲノム遺伝子座の５’及び／または３’標的配列におけるＣａｓタンパク質を介した切断によって作成される１つ以上のオーバーハングに相補的な短い一本鎖領域を有する。いくつかのそのような外来性ドナー配列は、５’末端のみまたは３’末端のみに相補的領域を有する。例えば、そのような外来性ドナー配列のいくつかは、標的ゲノム遺伝子座の５’標的配列に作成されるオーバーハングに相補的な５’末端にのみ、または標的ゲノム遺伝子座の３’標的配列に作成されるオーバーハングに相補的な３’末端にのみ相補的な領域を有する。他のそのような外来性ドナー配列は、５’及び３’末端の両方に相補的な領域を有する。例えば、他のそのような外来性ドナー配列は、５’及び３’末端の両方に、例えば、標的ゲノム遺伝子座におけるＣａｓを介した切断により生成される、それぞれ第１及び第２のオーバーハングに相補的な相補的領域を有する。例えば、外来性ドナー配列が二本鎖である場合、一本鎖相補領域は、ドナー配列の上側鎖の５’末端及びドナー配列の下側鎖の５’末端から延伸し、それぞれの末端に５’オーバーハングを形成することができる。あるいは、一本鎖相補領域は、ドナー配列の上側鎖の３’末端及び鋳型の下側鎖の３’末端から延伸し、３’オーバーハングを形成することができる。
相補的領域は、外来性ドナー配列とＩＮＨＢＥ遺伝子とのライゲーションを促進するのに十分な任意の長さとすることができる。例示的な相補的領域は、長さが約１～約５ヌクレオチド、長さが約１～約２５ヌクレオチド、または長さが約５～約１５０ヌクレオチドである。例えば、相補的領域は、少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５ヌクレオチド長とすることができる。あるいは、相補的領域は、約５～約１０、約１０～約２０、約２０～約３０、約３０～約４０、約４０～約５０、約５０～約６０、約６０～約７０、約７０～約８０、約８０～約９０、約９０～約１００、約１００～約１１０、約１１０～約１２０、約１２０～約１３０、約１３０～約１４０、約１４０～約１５０ヌクレオチド長、またはそれ以上とすることができる。
そのような相補的領域は、ニッカーゼの２つのペアによって作成されるオーバーハングに相補的にすることができる。ＤＮＡの正反対の側の鎖を切断する第１及び第２のニッカーゼを使用して第１の二重鎖切断を作成し、ＤＮＡの正反対の側の鎖を切断する第３及び第４のニッカーゼを使用して第２の二重鎖切断を作成することにより、付着末端を有する２つの二重鎖切断を作成することができる。例えば、Ｃａｓタンパク質を使用して、第１、第２、第３、及び第４のガイドＲＮＡに対応する第１、第２、第３、及び第４のガイドＲＮＡ認識配列にニックを導入することができる。ＤＮＡの第１及び第２の鎖上の第１及び第２のニッカーゼによって作成されるニックが二本鎖切断を作成するように第１及び第２のガイドＲＮＡ認識配列を配置して、第１の切断部位を作成することができる（すなわち、第１の切断部位には、第１及び第２のガイドＲＮＡ認識配列内のニックが含まれる）。同様に、ＤＮＡの第１及び第２の鎖上の第３及び第４のニッカーゼによって作成されるニックが二本鎖切断を作成するように第３及び第４のガイドＲＮＡ認識配列を配置して、第２の切断部位を作成することができる（すなわち、第２の切断部位には、第３及び第４のガイドＲＮＡ認識配列内のニックが含まれる）。好ましくは、第１及び第２のガイドＲＮＡ認識配列及び／または第３及び第４のガイドＲＮＡ認識配列内のニックは、オーバーハングを作成するオフセットニックとすることができる。オフセットウィンドウは、例えば、少なくとも約５ｂｐ、１０ｂｐ、２０ｂｐ、３０ｂｐ、４０ｂｐ、５０ｂｐ、６０ｂｐ、７０ｂｐ、８０ｂｐ、９０ｂｐ、１００ｂｐ以上とすることができる。Ｒａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ，２０１３，１５４，１３８０－１３８９、Ｍａｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．，２０１３，３１，８３３－８３８、及びＳｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，２０１４，１１，３９９－４０４を参照のこと。そのような場合では、二本鎖外来性ドナー配列を、第１及び第２のガイドＲＮＡ認識配列内のニックによって、及び第３及び第４のガイドＲＮＡ認識配列内のニックによって作成されるオーバーハングに相補的な一本鎖相補領域を用いて設計することができる。次いで、そのような外来性ドナー配列を、非相同末端結合を介したライゲーションにより挿入することができる。
いくつかの外来性ドナー配列（すなわち、標的化ベクター）は、相同性アームを含む。外来性ドナー配列が核酸インサートも含む場合、相同性アームを核酸インサートに隣接させることができる。参照を容易にするために、相同性アームを、本明細書では５’及び３’（すなわち、上流及び下流）相同性アームと呼ぶ。この用語は、外来性ドナー配列内の核酸インサートに対する相同性アームの相対的位置に関するものである。５’及び３’相同性アームは、ＩＮＨＢＥ遺伝子内の領域に対応し、本明細書ではそれぞれ「５’標的配列」及び「３’標的配列」と呼ぶ。
相同性アームと標的配列は、その２つの領域が相同組換え反応の基質として作用するのに十分なレベルの配列同一性を互いに対して共有している場合、互いに「対応する（ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄ）」または「対応している（ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ）」。用語「相同性」には、対応する配列と同一であるか、または配列同一性を共有するＤＮＡ配列が含まれる。所与の標的配列と、外来性ドナー配列に見出される対応する相同性アームとの間の配列同一性は、相同組換えの発生を可能にする任意の程度の配列同一性とすることができる。例えば、外来性ドナー配列の相同性アーム（またはその断片）及び標的配列（またはその断片）によって共有される配列同一性の量は、少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性とすることができ、その結果、配列は相同組換えを受ける。さらに、相同性アームと対応する標的配列との間の対応する相同性領域は、相同組換えを促進するのに十分な任意の長さとすることができる。例示的な相同性アームは、約２５ヌクレオチド～約２．５ｋｂの長さ、約２５ヌクレオチド～約１．５ｋｂの長さ、または約２５～約５００ヌクレオチドの長さである。例えば、所定の相同性アーム（または各相同性アーム）及び／または対応する標的配列には、約２５～約３０、約３０～約４０、約４０～約５０、約５０～約６０、約６０～約７０、約７０～約８０、約８０～約９０、約９０～約１００、約１００～約１５０、約１５０～約２００、約２００～約２５０、約２５０～約３００、約３００～約３５０、約３５０～約４００、約４００～約４５０、または約４５０～約５００ヌクレオチド長の対応する相同性領域を含ませることができ、それにより、相同性アームは、ＩＮＨＢＥ遺伝子内の対応する標的配列と相同組換えを行うのに十分な相同性を有する。あるいは、所与の相同性アーム（または各相同性アーム）及び／または対応する標的配列には、約０．５ｋｂ～約１ｋｂ、約１ｋｂ～約１．５ｋｂ、約１．５ｋｂ～約２ｋｂ、または約２ｋｂ～約２．５ｋｂの長さの対応する相同性領域を含ませることができる。例えば、相同性アームを、それぞれ約７５０ヌクレオチド長とすることができる。相同性アームは、対称（長さがほぼ同じサイズ）とすることも、非対称（一方が他方より長い）とすることもできる。
相同性アームは、細胞に固有の遺伝子座（例えば、標的遺伝子座）に対応させることができる。あるいは、例えば、それらを、例えば導入遺伝子、発現カセット、またはＤＮＡの異種または外来性領域を含む、細胞のゲノムに組み込んだＤＮＡの異種または外来性セグメントの領域に対応させることができる。あるいは、標的化ベクターの相同性アームは、酵母人工染色体（ＹＡＣ）、細菌人工染色体（ＢＡＣ）、ヒト人工染色体の領域、または適切な宿主細胞に含まれる他の改変した領域に対応させることができる。なおさらに、標的化ベクターの相同性アームは、ＢＡＣライブラリ、コスミドライブラリ、もしくはＰ１ファージライブラリの領域に対応するか、もしくはそれに由来するものとすることができ、または合成ＤＮＡに由来するものとすることができる。
外来性ドナー配列と組み合わせてヌクレアーゼ剤を使用する場合、５’及び３’標的配列は、好ましくは、ヌクレアーゼ切断部位に十分に近接して位置しており、それにより、ヌクレアーゼ切断部位での一本鎖切断（ニック）または二本鎖切断時の標的配列と相同性アームとの間の相同組換え事象の発生を促進する。用語「ヌクレアーゼ切断部位」には、ヌクレアーゼ剤（例えば、ガイドＲＮＡと複合体化したＣａｓ９タンパク質）によってニックまたは二本鎖切断が生じるＤＮＡ配列が含まれる。外来性ドナー配列の５’及び３’相同性アームに対応するＩＮＨＢＥ遺伝子内の標的配列は、距離が、ヌクレアーゼ切断部位での一本鎖切断または二本鎖切断時の５’及び３’標的配列と相同性アームとの間の相同組換え事象の発生を促進するようなものである場合、ヌクレアーゼ切断部位に「十分に近接して位置する」。したがって、外来性ドナー配列の５’及び／または３’相同性アームに対応する標的配列は、例えば、所与のヌクレアーゼ切断部位の少なくとも１ヌクレオチド以内、または所与のヌクレアーゼ切断部位の少なくとも１０ヌクレオチド～約１，０００ヌクレオチド以内とすることができる。一例として、ヌクレアーゼ切断部位を、標的配列の少なくとも一方または両方に直接隣接させることができる。
外来性ドナー配列の相同性アーム及びヌクレアーゼ切断部位に対応する標的配列の空間的関係は様々に異なり得る。例えば、標的配列をヌクレアーゼ切断部位の５’に位置させることができるか、標的配列をヌクレアーゼ切断部位の３’に位置させることができるか、または標的配列をヌクレアーゼ切断部位に隣接させることができる。
また、内在性ＩＮＨＢＥ遺伝子の発現を改変または変化させるための本明細書に開示する方法を用いた、疾患を有するかまたはリスクのある対象における代謝障害の治療方法及び処置または予防方法も提供する。また、ＩＮＨＢＥ ｍＲＮＡ転写産物の発現を低下させる方法を使用するか、または対象にＩＮＨＢＥタンパク質をコードする組換え核酸を提供するか、ＩＮＨＢＥタンパク質をコードするｍＲＮＡを提供するか、もしくはＩＮＨＢＥタンパク質を提供する方法を使用して、疾患を有するかまたはリスクのある対象における代謝障害の治療方法及び処置または予防方法を提供する。本方法は、１つ以上の核酸またはタンパク質を対象内に、対象の肝臓内に、または対象の細胞（例えば、肝臓細胞）内に（例えば、ｉｎ ｖｉｖｏまたはｅｘ ｖｉｖｏで）導入することを含み得る。
また、内在性ＩＮＨＢＥ遺伝子の発現を改変または変化させるための本明細書に開示する方法を用いた、心血管疾患を有するかまたはリスクのある対象における心血管疾患の治療方法及び処置または予防方法も提供する。また、ＩＮＨＢＥ ｍＲＮＡ転写産物の発現を低下させる方法を使用するか、または対象にＩＮＨＢＥタンパク質をコードする組換え核酸を提供するか、ＩＮＨＢＥタンパク質をコードするｍＲＮＡを提供するか、もしくはＩＮＨＢＥタンパク質を提供する方法を使用して、心血管疾患を有するかまたはリスクのある対象における心血管疾患の治療方法及び処置または予防方法を提供する。本方法は、１つ以上の核酸またはタンパク質を対象内に、対象の肝臓内に、または対象の細胞（例えば、肝臓細胞）内に（例えば、ｉｎ ｖｉｖｏまたはｅｘ ｖｉｖｏで）導入することを含み得る。
そのような方法は、ゲノム編集または遺伝子治療を含み得る。例えば、機能喪失型バリアントをコードしない内在性ＩＮＨＢＥ遺伝子を、本明細書に記載の機能喪失型バリアントのいずれかを含むように改変することができる。別の例として、機能喪失型バリアントをコードしない内在性ＩＮＨＢＥ遺伝子をノックアウトまたは不活性化することができる。同様に、機能喪失型バリアントをコードしない内在性ＩＮＨＢＥ遺伝子をノックアウトまたは不活化することができ、本明細書に記載のＩＮＨＢＥ機能喪失型バリアントのいずれか１つまたは任意の組み合わせを含むＩＮＨＢＥ遺伝子を導入し、発現させることができる。同様に、機能喪失型バリアントをコードしない内在性ＩＮＨＢＥ遺伝子をノックアウトまたは不活化することができ、また、本明細書に記載のＩＮＨＢＥ機能喪失型バリアントのいずれか１つまたは任意の組み合わせをコードする組換えＤＮＡを導入し、発現させることができるか、本明細書に記載のＩＮＨＢＥ機能喪失型バリアント（もしくはその断片）のいずれか１つまたは任意の組み合わせをコードするｍＲＮＡを導入し、発現させることができる（例えば、細胞内タンパク質補充療法）か、または本明細書に記載のＩＮＨＢＥ機能喪失型バリアント（もしくはその断片）のいずれか１つまたは任意の組み合わせをコードするｃＤＮＡを導入することができる（例えば、タンパク質補充療法）。
他のそのような方法は、本明細書に記載のＩＮＨＢＥ機能喪失型バリアント（例えば、完全なＩＮＨＢＥバリアントまたは改変を含むミニ遺伝子）のいずれか１つまたは任意の組み合わせを含む組換えＩＮＨＢＥ遺伝子を導入し、発現させること、本明細書に記載のＩＮＨＢＥ機能喪失型バリアントまたはその断片のいずれか１つまたは任意の組み合わせをコードする組換え核酸（例えば、ＤＮＡ）を導入し、発現させること、本明細書に記載のＩＮＨＢＥ機能喪失型バリアント、その断片のいずれか１つまたは任意の組み合わせをコードする１つ以上のｍＲＮＡを導入し、発現させること（例えば、細胞内タンパク質補充療法）、あるいは機能喪失型バリアントをコードしていない内在性ＩＮＨＢＥ遺伝子をノックアウトまたは不活化することなく、本明細書に記載のＩＮＨＢＥ機能喪失型バリアントのいずれか１つまたは任意の組み合わせを導入すること（例えば、タンパク質補充療法）を含み得る。
ＩＮＨＢＥ遺伝子もしくはミニ遺伝子もしくは本明細書に記載のＩＮＨＢＥ機能喪失型バリアントのいずれか１つまたは任意の組み合わせをコードするＤＮＡまたはその断片を、ゲノムを改変しない発現ベクターの形態で導入し、発現させることができ、標的化ベクターの形態で導入してＩＮＨＢＥ遺伝子座にゲノム組み込みすることができ、あるいは導入によってセーフハーバー遺伝子座などのＩＮＨＢＥ遺伝子座以外の遺伝子座にゲノム組み込みすることができる。ゲノムに組み込むＩＮＨＢＥ遺伝子は、ＩＮＨＢＥプロモーターに、または組み込み部位における内在性プロモーターなどの別のプロモーターに、作動可能に連結することができる。セーフハーバー遺伝子座は、遺伝子構造または発現に悪影響を与えることなく、目的のすべての組織で導入遺伝子を安定かつ確実に発現させることができる染色体部位である。セーフハーバー遺伝子座は、例えば、以下の特性の１つ以上、またはすべてを有し得る：任意の遺伝子の５’末端から５０ｋｂを超える距離、がん関連遺伝子から３００ｋｂを超える距離、マイクロＲＮＡから３００ｋｂを超える距離、遺伝子転写ユニットの外側、及び超保存領域の外側。好適なセーフハーバー遺伝子座の例としては、アデノ随伴ウイルス部位１（ＡＡＶＳ１）、ケモカイン（ＣＣモチーフ）受容体５（ＣＣＲ５）遺伝子座、及びマウスＲＯＳＡ２６遺伝子座のヒトオーソログが挙げられる。
導入し、発現させることができるＩＮＨＢＥタンパク質アイソフォームまたはＩＮＨＢＥタンパク質アイソフォームをコードする核酸の組み合わせには、本明細書に記載のタンパク質またはｍＲＮＡアイソフォームの任意の１つまたは任意の組み合わせが含まれる。例えば、ＩＮＨＢＥ、すなわち、本明細書に記載の機能喪失型バリアントの任意の１つまたは任意の組み合わせをコードするアイソフォーム１（配列番号２）を（単独でまたは他のアイソフォームと組み合わせて）コードする核酸を導入、または発現させる。これらのアイソフォーム及び転写産物のそれぞれの例示的な配列を、本明細書の別の場所で提供する。しかしながら、集団内の遺伝子配列、そのような遺伝子から転写されるｍＲＮＡ配列、及びそのようなｍＲＮＡから翻訳されるタンパク質は、一塩基多型などの多型により変化し得ることが理解される。各転写産物及びアイソフォームに関して本明細書に示されている配列は、例示的な配列に過ぎない。他の配列もまた可能である。
いくつかの実施形態では、方法は、本明細書に記載のいずれかのＩＮＨＢＥバリアント核酸分子の保因者でなく（または本明細書に記載のバリアント核酸分子のいずれか１つまたは任意の組み合わせのヘテロ接合保因者に過ぎず）、代謝障害及び／または心血管疾患を発症しているかまたは発症しやすい対象を治療することを含み、方法は、対象内へ、または対象の肝臓細胞内へ、ａ）ＩＮＨＢＥ遺伝子内のヌクレアーゼ認識配列に結合するヌクレアーゼ剤（またはそれをコードする核酸）を導入することを含み、その場合、ヌクレアーゼ認識配列は、本明細書に記載のＩＮＨＢＥバリアント核酸分子の１つの位置を含むかまたはそれに近接しており、ならびにｂ）本明細書に記載のＩＮＨＢＥバリアント核酸分子の１つの位置の５’側の標的配列にハイブリダイズする５’相同アームと、同じＩＮＨＢＥバリアント核酸分子の３’側の標的配列にハイブリダイズする３’相同アームと、５’相同性アームと３’相同性アームに隣接する１つ以上のバリアントヌクレオチドを含む核酸インサートとを含む外来性ドナー配列を導入することを含む。ヌクレアーゼ剤は、対象の肝臓細胞内でＩＮＨＢＥ遺伝子を切断することができ、外来性ドナー配列は、肝臓細胞内でＩＮＨＢＥ遺伝子と組み換わることができ、外来性ドナー配列とＩＮＨＢＥ遺伝子との組み換え時に、機能喪失型バリアントをコードする核酸インサートが導入され、野生型ヌクレオチドが置換される。そのような方法で使用することができるヌクレアーゼ剤（例えば、Ｃａｓ９タンパク質及びガイドＲＮＡ）の例を、本明細書の他の場所に開示する。好適なガイドＲＮＡ及びガイドＲＮＡ認識配列の例を、本明細書の他の場所に開示する。そのような方法で使用することができる外来性ドナー配列の例を、本明細書の他の場所に開示する。
別の例として、方法は、本明細書に記載のいずれかのＩＮＨＢＥバリアント核酸分子の保因者でなく（または本明細書に記載のバリアント核酸分子のいずれか１つまたは任意の組み合わせのヘテロ接合保因者に過ぎず）、代謝障害及び／または心血管疾患を発症しているかまたは発症しやすい対象を治療することを含み得、方法は、対象内へ、または対象の肝臓細胞内へ、本明細書に記載のＩＮＨＢＥバリアント核酸分子の１つの位置の５’側の標的配列にハイブリダイズする５’相同アームと、同じＩＮＨＢＥバリアント核酸分子の３’側の標的配列にハイブリダイズする３’相同アームと、５’相同性アームと３’相同性アームに隣接する１つ以上のバリアントヌクレオチドを含む核酸インサートとを含む外来性ドナー配列を導入することを含む。外来性ドナー配列は、肝臓細胞内でＩＮＨＢＥ遺伝子と組み換わることができ、外来性ドナー配列とＩＮＨＢＥ遺伝子との組み換え時に、機能喪失型バリアントをコードする核酸インサートが導入され、野生型ヌクレオチドが置換される。そのような方法で使用することができる外来性ドナー配列の例を、本明細書の他の場所に開示する。
いくつかの実施形態では、方法は、本明細書に記載のいずれかのＩＮＨＢＥバリアント核酸分子の保因者でなく（または本明細書に記載のバリアント核酸分子のいずれか１つまたは任意の組み合わせのヘテロ接合保因者に過ぎず）、代謝障害及び／または心血管疾患を発症しているかまたは発症しやすい対象を治療することを含み、方法は、対象内へ、または対象の肝臓細胞内へ、ａ）ＩＮＨＢＥ遺伝子内のヌクレアーゼ認識配列に結合するヌクレアーゼ剤（またはそれをコードする核酸）を導入することを含み、その場合、ヌクレアーゼ認識配列は、ＩＮＨＢＥ遺伝子の開始コドンを含むか、または開始コドンの約１０、２０、３０、４０、５０、１００、２００、３００、４００、５００もしくは１，０００ヌクレオチド以内にある。ヌクレアーゼ剤は、対象の肝臓細胞のＩＮＨＢＥ遺伝子を切断し、発現を破壊することができる。いくつかの実施形態では、方法は、本明細書に記載のいずれかのＩＮＨＢＥバリアント核酸分子の保因者でなく（または本明細書に記載のＩＮＨＢＥバリアント核酸分子のいずれか１つまたは任意の組み合わせのヘテロ接合保因者に過ぎず）、代謝障害及び／または心血管疾患を発症しているかまたは発症しやすい対象を治療することを含み、方法は、対象内へ、または対象の肝臓細胞内へ、ａ）ＩＮＨＢＥ遺伝子内のヌクレアーゼ認識配列に結合するヌクレアーゼ剤（またはそれをコードする核酸）を導入することを含み、その場合、ヌクレアーゼ認識配列は、ＩＮＨＢＥ遺伝子の開始コドンを含むか、または開始コドンの約１０、２０、３０、４０、５０、１００、２００、３００、４００、５００もしくは１，０００ヌクレオチド以内にあるか、または配列番号１～７から選択され、ｂ）本明細書に記載の機能喪失型バリアントのいずれか１つまたは任意の組み合わせを含む組換えＩＮＨＢＥ遺伝子を含む発現ベクターを導入することを含む。発現ベクターは、ゲノムに組み込まれないベクターとすることができる。あるいは、本明細書に記載の機能喪失型バリアントのいずれか１つまたは任意の組み合わせを含む組換えＩＮＨＢＥ遺伝子を含む標的化ベクター（すなわち、外来性ドナー配列）を導入することができる。ヌクレアーゼ剤は、対象の肝臓細胞内のＩＮＨＢＥ遺伝子を切断し、発現を破壊することができ、発現ベクターは、対象の肝臓細胞内で組換えＩＮＨＢＥ遺伝子を発現することができる。あるいは、ゲノムに組み込んだ組換えＩＮＨＢＥ遺伝子を、対象の肝臓細胞内で発現させることができる。そのような方法で使用することができるヌクレアーゼ剤（例えば、ヌクレアーゼ活性Ｃａｓ９タンパク質及びガイドＲＮＡ）の例を、本明細書の他の場所に開示する。好適なガイドＲＮＡ及びガイドＲＮＡ認識配列の例を、本明細書の他の場所に開示する。ステップｂ）は、代わりに、本明細書に記載の任意のＩＮＨＢＥアイソフォームまたはその断片と、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一である、ＩＮＨＢＥタンパク質をコードする核酸（例えば、ＤＮＡ）を含み、また、本明細書に記載のＩＮＨＢＥバリアント核酸分子のいずれか１つまたは任意の組み合わせを含む、発現ベクターまたは標的化ベクターを導入することを含み得る。同様に、ステップｂ）は、代わりに、本明細書に記載の任意のＩＮＨＢＥ ｍＲＮＡアイソフォームまたはその断片と、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一であり、ＩＮＨＢＥタンパク質をコードし、本明細書に記載のＩＮＨＢＥバリアント核酸分子のいずれか１つまたは任意の組み合わせを含むｍＲＮＡを導入することを含み得る。同様に、ステップｂ）は、代わりに、本明細書に記載の任意のＩＮＨＢＥタンパク質アイソフォームまたはその断片と、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一である配列を含み、本明細書に記載の機能喪失型バリアントポリペプチドのいずれか１つまたは任意の組み合わせを含むタンパク質を導入することを含み得る。
いくつかの実施形態では、さらに第２のヌクレアーゼ剤を対象へ、または対象の肝臓細胞内へ導入し、第２のヌクレアーゼ剤は、ＩＮＨＢＥ遺伝子内の第２のヌクレアーゼ認識配列に結合し、第２のヌクレアーゼ認識配列は、ＩＮＨＢＥ遺伝子の終止コドンを含むか、または終止コドンの、約１０、２０、３０、４０、５０、１００、２００、３００、４００、５００、または１，０００ヌクレオチド以内であり、その場合、ヌクレアーゼ剤は、肝臓細胞のＩＮＨＢＥ遺伝子を、第１のヌクレアーゼ認識配列及び第２のヌクレアーゼ認識配列の両方において切断し、その場合、第１のヌクレアーゼ認識配列と第２のヌクレアーゼ認識配列との間に欠失を含むように肝臓細胞が改変される。例えば、第２のヌクレアーゼ剤を、Ｃａｓ９タンパク質及びガイドＲＮＡとすることができる。終止コドンに近接した好適なガイドＲＮＡ及びガイドＲＮＡ認識配列を、本明細書の他の場所に開示する。
そのような方法はまた、本明細書に記載のいずれかのＩＮＨＢＥバリアント核酸分子の保因者でなく（または本明細書に記載のＩＮＨＢＥバリアント核酸分子のいずれか１つまたは任意の組み合わせのヘテロ接合保因者に過ぎず）、代謝障害及び／または心血管疾患を発症しているかまたは発症しやすい対象の治療方法を含み得、方法は、対象内へ、または対象の肝臓細胞内へ、ａ）ＩＮＨＢＥ遺伝子内のＤＮＡ結合タンパク質認識配列に結合するＤＮＡ結合タンパク質（またはそれをコードする核酸）を導入することを含み、その場合、ＤＮＡ結合タンパク質認識配列は、ＩＮＨＢＥ遺伝子の開始コドンを含むか、または開始コドンの約１０、２０、３０、４０、５０、１００、２００、３００、４００、５００もしくは１，０００ヌクレオチド以内にある。ＤＮＡ結合タンパク質は、対象の肝臓細胞におけるＩＮＨＢＥ遺伝子の発現を変化させる（例えば、減少させる）ことができる。そのような方法はまた、本明細書に記載のいずれかのＩＮＨＢＥバリアント核酸分子の保因者でなく（または本明細書に記載のＩＮＨＢＥバリアント核酸分子のいずれか１つまたは任意の組み合わせのヘテロ接合保因者に過ぎず）、代謝障害及び／または心血管疾患を発症しているかまたは発症しやすい対象の治療方法を含み得、方法は、対象内へ、または対象の肝臓細胞内へ、ａ）ＩＮＨＢＥ遺伝子内のＤＮＡ結合タンパク質認識配列に結合するＤＮＡ結合タンパク質（またはそれをコードする核酸）を導入することを含み、その場合、ＤＮＡ結合タンパク質認識配列は、ＩＮＨＢＥ遺伝子の開始コドンを含むか、または開始コドンの約１０、２０、３０、４０、５０、１００、２００、３００、４００、５００もしくは１，０００ヌクレオチド以内にあり、ｂ）本明細書に記載の機能喪失型バリアントのいずれか１つまたは任意の組み合わせを含む組換えＩＮＨＢＥ遺伝子を含む発現ベクターを導入することを含む。発現ベクターは、ゲノムに組み込まれないベクターとすることができる。あるいは、本明細書に記載のＩＮＨＢＥバリアント核酸分子のいずれか１つまたは任意の組み合わせを含む組換えＩＮＨＢＥ遺伝子を含む標的化ベクター（すなわち、外来性ドナー配列）を導入することができる。ＤＮＡ結合タンパク質は、対象の肝臓細胞内のＩＮＨＢＥ遺伝子の発現を変化させる（例えば、減少させる）ことができ、発現ベクターは、対象の肝臓細胞内で組換えＩＮＨＢＥ遺伝子を発現することができる。あるいは、ゲノムに組み込んだ組換えＩＮＨＢＥ遺伝子を、対象の肝臓細胞内で発現させることができる。そのような方法における使用に好適なＤＮＡ結合タンパク質の例を、本明細書の他の場所に開示する。そのようなＤＮＡ結合タンパク質（例えば、Ｃａｓ９タンパク質及びガイドＲＮＡ）を、転写リプレッサードメインに融合または作動可能に連結することができる。例えば、ＤＮＡ結合タンパク質は、転写抑制ドメインに融合した触媒的に不活性なＣａｓ９タンパク質であり得る。好適なガイドＲＮＡ及びガイドＲＮＡ認識配列の例を、本明細書の他の場所に開示する。ステップｂ）は、代わりに、本明細書に記載の任意のＩＮＨＢＥアイソフォームまたはその断片と、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一である、ＩＮＨＢＥタンパク質をコードする核酸（例えば、ＤＮＡ）を含み、また、本明細書に記載のＩＮＨＢＥバリアント核酸分子のいずれか１つまたは任意の組み合わせを含む、発現ベクターまたは標的化ベクターを導入することを含み得る。同様に、ステップｂ）は、代わりに、本明細書に記載の任意のＩＮＨＢＥ ｍＲＮＡアイソフォームまたはその断片と、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一であり、ＩＮＨＢＥタンパク質をコードし、本明細書に記載のＩＮＨＢＥバリアント核酸分子のいずれか１つまたは任意の組み合わせを含むｍＲＮＡを導入することを含み得る。同様に、ステップｂ）は、代わりに、本明細書に記載の任意のＩＮＨＢＥタンパク質アイソフォームまたはその断片と、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一である配列を含み、本明細書に記載の機能喪失型バリアントポリペプチドのいずれか１つまたは任意の組み合わせを含むタンパク質を導入することを含み得る。
他のそのような方法は、本明細書に記載のＩＮＨＢＥバリアント核酸分子のいずれかの保因者でなく（または、本明細書に記載のＩＮＨＢＥバリアント核酸分子のいずれか１つまたは任意の組み合わせのヘテロ接合保因者に過ぎず）、代謝障害及び／または心血管疾患を発症しているかまたは発症しやすい対象の治療方法を含み得、方法は、対象内へ、または対象の肝臓細胞内へ発現ベクターを導入することを含み、その場合、発現ベクターは、本明細書に記載の機能喪失型バリアントのいずれか１つまたは任意の組み合わせを含み、発現ベクターは、対象の肝臓細胞内で組換えＩＮＨＢＥ遺伝子を発現する。発現ベクターは、ゲノムに組み込まれないベクターとすることができる。あるいは、本明細書に記載のＩＮＨＢＥバリアント核酸分子のいずれか１つまたは任意の組み合わせを含む組換えＩＮＨＢＥ遺伝子を含む標的化ベクター（すなわち、外来性ドナー配列）を導入することができる。発現ベクターを使用する方法では、発現ベクターは、対象の肝臓細胞内で組換えＩＮＨＢＥ遺伝子を発現することができる。あるいは、組換えＩＮＨＢＥ遺伝子をゲノムに組み込む方法では、組換えＩＮＨＢＥ遺伝子を対象の肝臓細胞内で発現させることができる。そのような方法は、代わりに、本明細書に記載の任意のＩＮＨＢＥアイソフォームまたはその断片と、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一である、ＩＮＨＢＥタンパク質をコードする核酸（例えば、ＤＮＡ）を含み、また、本明細書に記載の機能喪失型バリアントのいずれか１つまたは任意の組み合わせを含む、発現ベクターまたは標的化ベクターを導入することを含み得る。同様に、そのような方法は、代わりに、本明細書に記載の任意のＩＮＨＢＥ ｍＲＮＡアイソフォームまたはその断片と、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一であり、ＩＮＨＢＥタンパク質をコードし、本明細書に記載のＩＮＨＢＥバリアント核酸分子のいずれか１つまたは任意の組み合わせを含むｍＲＮＡを導入することを含み得る。同様に、そのような方法は、代わりに、本明細書に記載の任意のＩＮＨＢＥタンパク質アイソフォームまたはその断片と、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一である配列を含み、本明細書に記載の機能喪失型バリアントポリペプチドのいずれか１つまたは任意の組み合わせを含むタンパク質を導入することを含み得る。
上記の方法のいずれかで使用するのに適した発現ベクター及び組換えＩＮＨＢＥ遺伝子を、本明細書の他の場所に開示する。例えば、組換えＩＮＨＢＥ遺伝子は、全長バリアント遺伝子であり得るか、または対応する野生型ＩＮＨＢＥ遺伝子に対して遺伝子の１つ以上の非必須セグメントが欠失しているＩＮＨＢＥミニ遺伝子であり得る。一例として、この欠失セグメントは、１つ以上のイントロン配列を含み得る。全長ＩＮＨＢＥ遺伝子の例は、配列番号１と最適にアラインメントした場合に、配列番号１と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一である遺伝子である。
いくつかの実施形態では、方法は、慢性肝疾患を発症しているかまたは発症しやすい対象において、細胞（例えば、肝臓細胞）を改変することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、心血管疾患を発症しているかまたは発症しやすい対象において、細胞（例えば、心細胞）を改変することを含む。そのような方法では、ヌクレアーゼ剤及び／または外来性ドナー配列及び／または組換え発現ベクターを、発症を遅らせ、重症度を軽減し、さらなる悪化を抑制し、及び／または治療中の疾患の少なくとも１つの徴候または症状を改善する用量、投与経路及び投与頻度を意味する有効なレジームでの投与を介して、細胞内に導入することができる。用語「症状」とは、対象によって知覚される疾患の主観的エビデンスを指し、「徴候」とは、医師によって観察される疾患の客観的エビデンスを指す。対象が既に疾患に罹患している場合、そのレジームは治療有効レジームと呼ばれ得る。対象が、一般的な集団に比べて疾患のリスクが高いが、まだ症状を経験していない場合、レジームは予防有効レジームと呼ばれ得る。いくつかの例では、治療または予防の有効性は、個々の患者において、既存対照または同じ対象の過去の経験と比較して、観察することができる。他の例では、治療または予防の有効性を、未治療の対象の対照集団に対する、治療対象の集団における前臨床試験または臨床試験において示すことができる。
送達は、本明細書の他の箇所で開示するように、任意の好適な方法とすることができる。例えば、ヌクレアーゼ剤または外来性ドナー配列または組換え発現ベクターは、ベクター送達、ウイルス送達、粒子を介した送達、ナノ粒子を介した送達、リポソームを介した送達、エキソソームを介した送達、脂質を介した送達、脂質ナノ粒子を介した送達、細胞透過性ペプチドを介した送達、または埋め込み可能装置を介した送達により送達することができる。いくつかの特定の例には、流体力学的送達、ウイルスを介した送達、及び脂質ナノ粒子を介した送達が含まれる。
投与は、例えば、非経口、静脈内、経口、皮下、動脈内、頭蓋内、くも膜下腔内、腹腔内、局所、鼻腔内、または筋肉内を含む任意の好適な経路によるものとすることができる。例えば、タンパク質補充療法によく使用される特定の例は、静脈内注入である。投与頻度及び投与回数は、数ある要因の中でも、ヌクレアーゼ剤または外来性ドナー配列または組換え発現ベクターの半減期、対象の病態、及び投与経路に依存し得る。投与のための医薬組成物は、好ましくは滅菌済みで実質的に等張であり、ＧＭＰ条件下で製造される。医薬組成物は、単位投薬形態（すなわち単回投与のための用量）で提供され得る。医薬組成物は、１つ以上の生理学的及び薬学的に許容される担体、希釈剤、賦形剤、または補助剤を使用して製剤化され得る。製剤化は、選択された投与経路に依存する。用語「薬学的に許容される」とは、担体、希釈剤、賦形剤、または補助剤が、製剤の他の成分と適合し、そのレシピエントに実質的に有害ではないことを意味する。
他のそのような方法は、慢性肝疾患及び／または心血管疾患を発症しているかまたは発症しやすい対象由来の細胞におけるｅｘ ｖｉｖｏ法を含む。標的化された遺伝子改変を施した細胞を、その後、対象に移植して戻すことができる。
いくつかの実施形態では、ＩＮＨＢＥ阻害剤は、小分子を含む。いくつかの実施形態では、ＩＮＨＢＥ阻害剤は、本明細書に記載の阻害性核酸分子のいずれかである。いくつかの実施形態では、ＩＮＨＢＥ阻害剤は、抗体を含む。
いくつかの実施形態では、治療方法は、対象由来の生体試料におけるＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアント核酸分子の存在もしくは非存在、または対応するＩＮＨＢＥポリペプチドの存在を検出すること、あるいはＩＮＨＢＥポリペプチドまたは核酸（ＲＮＡなど）を定量することをさらに含む。本開示の全体を通して使用する場合、「ＩＮＨＢＥバリアント核酸分子」は、部分的機能喪失、完全機能喪失、予測される部分的機能喪失、または予測される完全機能喪失を有するＩＮＨＢＥポリペプチドをコードする任意のＩＮＨＢＥ核酸分子（例えばゲノム核酸分子、ｍＲＮＡ分子、またはｃＤＮＡ分子など）である。
本開示はまた、代謝障害を治療または抑制する治療薬で対象を治療する方法を提供し、その場合、対象は、代謝障害に罹患している。いくつかの実施形態では、本方法は、対象から生体試料を採取するか、または採取しており、生体試料上で遺伝子型決定アッセイを実施するか、または実施しており、対象がＩＮＨＢＥバリアント核酸分子を含む遺伝子型を有するかどうかを判定することによって、対象が、ＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアント核酸分子を有するかどうかを判定することを含む。対象がＩＮＨＢＥ参照である場合、代謝障害を治療または抑制する治療薬を標準用量で対象に投与し、または投与し続け、かつＩＮＨＢＥ阻害剤を対象に投与する。対象がＩＮＨＢＥバリアント核酸分子についてヘテロ接合性である場合、代謝障害を治療または抑制する治療薬を標準用量と同じかそれより少ない量で対象に投与し、または投与し続け、かつＩＮＨＢＥ阻害剤を対象に投与する。対象がＩＮＨＢＥバリアント核酸分子についてホモ接合性である場合、代謝障害を治療または抑制する治療薬を標準用量と同じかそれより少ない量で対象に投与し、または投与し続ける。ＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアント核酸分子を有する遺伝子型の存在は、対象が代謝障害を発症するリスクが低いことを示している。いくつかの実施形態では、対象はＩＮＨＢＥ参照である。いくつかの実施形態では、対象は、ＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアント核酸分子についてヘテロ接合性である。
本明細書に記載するように、ＩＮＨＢＥ参照、またはＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアント核酸分子についてヘテロ接合性のいずれかであると遺伝子型決定されているかまたは判定されている対象については、そのような対象をＩＮＨＢＥ阻害剤で治療することができる。
本開示はまた、心血管疾患を治療または抑制する治療薬で対象を治療する方法を提供し、その場合、対象は、心血管疾患に罹患している。いくつかの実施形態では、本方法は、対象から生体試料を採取するか、または採取しており、生体試料上で遺伝子型決定アッセイを実施するか、または実施しており、対象がＩＮＨＢＥバリアント核酸分子を含む遺伝子型を有するかどうかを判定することによって、対象が、ＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアント核酸分子を有するかどうかを判定することを含む。対象がＩＮＨＢＥ参照である場合、心血管疾患を治療または抑制する治療薬を標準用量で対象に投与し、または投与し続け、かつＩＮＨＢＥ阻害剤を対象に投与する。対象がＩＮＨＢＥバリアント核酸分子についてヘテロ接合性である場合、心血管疾患を治療または抑制する治療薬を標準用量と同じかそれより少ない量で対象に投与し、または投与し続け、かつＩＮＨＢＥ阻害剤を対象に投与する。対象がＩＮＨＢＥバリアント核酸分子についてホモ接合性である場合、心血管疾患を治療または抑制する治療薬を標準用量と同じかそれより少ない量で対象に投与し、または投与し続ける。ＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアント核酸分子を有する遺伝子型の存在は、対象が心血管疾患を発症するリスクが低いことを示している。いくつかの実施形態では、対象はＩＮＨＢＥ参照である。いくつかの実施形態では、対象は、ＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアント核酸分子についてヘテロ接合性である。
本明細書に記載するように、ＩＮＨＢＥ参照、またはＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアント核酸分子についてヘテロ接合性のいずれかであると遺伝子型決定されているかまたは判定されている対象については、そのような対象をＩＮＨＢＥ阻害剤で治療することができる。
対象由来の生体試料におけるＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアント核酸分子の存在または非存在を検出すること、及び／または対象がＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアント核酸分子を有するかどうかを判定することは、本明細書に記載の方法のいずれかによって行うことができる。いくつかの実施形態では、これらの方法を、ｉｎ ｖｉｔｒｏで行うことができる。いくつかの実施形態では、これらの方法を、ｉｎ ｓｉｔｕで行うことができる。いくつかの実施形態では、これらの方法を、ｉｎ ｖｉｖｏで行うことができる。これらの実施形態のいずれかでは、核酸分子は、対象から得られた細胞内に存在し得る。
いくつかの実施形態では、対象がＩＮＨＢＥ参照である場合、代謝障害を治療もしくは抑制する治療薬も、対象に標準用量で投与する。いくつかの実施形態では、対象がＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアント核酸分子についてヘテロ接合性またはホモ接合性である場合、代謝障害を治療または抑制する治療薬も、標準用量と同じかそれより少ない用量で対象に投与する。
いくつかの実施形態では、対象がＩＮＨＢＥ参照である場合、心血管疾患を治療もしくは抑制する治療薬も、対象に標準用量で投与する。いくつかの実施形態では、対象がＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアント核酸分子についてヘテロ接合性またはホモ接合性である場合、心血管疾患を治療または抑制する治療薬も、標準用量と同じかそれより少ない用量で対象に投与する。
いくつかの実施形態では、治療方法は、対象由来の生体試料中のＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドの存在または非存在を検出することをさらに含む。いくつかの実施形態では、対象がＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドを有していない場合、代謝障害を治療もしくは抑制する治療薬も、標準用量で対象に投与する。いくつかの実施形態では、対象がＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドを有する場合、代謝障害を治療もしくは抑制する治療薬も、標準用量と同じかそれより少ない用量で対象に投与する。
いくつかの実施形態では、治療方法は、対象由来の生体試料中のＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドの存在または非存在を検出することをさらに含む。いくつかの実施形態では、対象がＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドを有していない場合、心血管疾患を治療もしくは抑制する治療薬も、標準用量で対象に投与する。いくつかの実施形態では、対象がＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドを有する場合、心血管疾患を治療もしくは抑制する治療薬も、標準用量と同じかそれより少ない用量で対象に投与する。
本開示はまた、代謝障害を治療または抑制する治療薬で対象を治療する方法を提供し、その場合、対象は、代謝障害に罹患している。いくつかの実施形態では、方法は、対象から生体試料を採取するか、または採取しており、生体試料でアッセイを実施するか、または実施しており、対象が、ＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドを有するかどうかを判定することによって、対象がＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドを有するかどうかを判定することを含む。対象がＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドを有しない場合、代謝障害を治療または抑制する治療薬を標準用量で対象に投与し、または投与し続け、かつＩＮＨＢＥ阻害剤を対象に投与する。対象がＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドを有する場合、代謝障害を治療または抑制する治療薬を標準用量と同じかそれより少ない量で対象に投与し、または投与し続け、かつＩＮＨＢＥ阻害剤を対象に投与する。ＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドの存在は、対象が代謝障害を発症するリスクが低いことを示している。いくつかの実施形態では、対象は、ＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドを有している。いくつかの実施形態では、対象は、ＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドを有していない。
本開示はまた、心血管疾患を治療または抑制する治療薬で対象を治療する方法を提供し、その場合、対象は、心血管疾患に罹患している。いくつかの実施形態では、方法は、対象から生体試料を採取するか、または採取しており、生体試料でアッセイを実施するか、または実施しており、対象が、ＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドを有するかどうかを判定することによって、対象がＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドを有するかどうかを判定することを含む。対象がＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドを有しない場合、心血管疾患を治療または抑制する治療薬を標準用量で対象に投与し、または投与し続け、かつＩＮＨＢＥ阻害剤を対象に投与する。対象がＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドを有する場合、心血管疾患を治療または抑制する治療薬を標準用量と同じかそれより少ない量で対象に投与し、または投与し続け、かつＩＮＨＢＥ阻害剤を対象に投与する。ＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドの存在は、対象が心血管疾患を発症するリスクが低いことを示している。いくつかの実施形態では、対象は、ＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドを有している。いくつかの実施形態では、対象は、ＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドを有していない。
対象由来の生体試料中のＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドの存在もしくは非存在を検出すること、及び／または対象がＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドを有するかどうかを判定することは、本明細書に記載の方法のいずれかによって実施することができる。いくつかの実施形態では、これらの方法を、ｉｎ ｖｉｔｒｏで行うことができる。いくつかの実施形態では、これらの方法を、ｉｎ ｓｉｔｕで行うことができる。いくつかの実施形態では、これらの方法を、ｉｎ ｖｉｖｏで行うことができる。これらの実施形態のいずれにおいても、ポリペプチドは、対象から採取される細胞もしくは血液試料中に存在し得るか、または対象もしくは対象の生物学的近親者由来の細胞もしくは血液試料の回収物から以前に生成された、対象に関する他の情報から取得され得る。これらの実施形態のいずれにおいても、ＩＮＨＢＥポリペプチドの量の実質的な不在または減少による機能喪失の決定として、ＩＮＨＢＥポリペプチドの量の定量化による決定を含めることができる。これらの実施形態のいずれにおいても、ＩＮＨＢＥ ＤＮＡ及びＲＮＡの検出、配列決定、及び／または定量化は、ＩＮＨＢＥの機能喪失またはＩＮＨＢＥの完全な欠失を判定するための方法として役立ち得る。
２型糖尿病を治療または抑制する治療薬の例としては、メトホルミン、インスリン、スルホニル尿素（グリブリド、グリピジド、及びグリメピリドなど）、メグリチニド（レパグリニド及びナテグリニドなど）、チアゾリジンジオン（ロシグリタゾン及びピオグリタゾンなど）、ＤＰＰ－４阻害剤（シタグリプチン、サクサグリプチン、及びリナグリプチンなど）、ＧＬＰ－１受容体作動薬（エクセナチド、リラグルチド、及びセマグルチドなど）、ならびにＳＧＬＴ２阻害剤（カナグリフロジン、ダパグリフロジン、及びエンパグリフロジンなど）が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、治療薬は、メトホルミン、インスリン、グリブリド、グリピジド、グリメピリド、レパグリニド、ナテグリニド、ロシグリタゾン、ピオグリタゾン、シタグリプチン、サクサグリプチン、リナグリプチン、エクセナチド、リラグルチド、セマグルチド、カナグリフロジン、ダパグリフロジン、またはエンパグリフロジンである。いくつかの実施形態では、治療薬はメトホルミンである。いくつかの実施形態では、治療薬はインスリンである。いくつかの実施形態では、治療薬はグリブリドである。いくつかの実施形態では、治療薬はグリピジドである。いくつかの実施形態では、治療薬はグリメピリドである。いくつかの実施形態では、治療薬はレパグリニドである。いくつかの実施形態では、治療薬はナテグリニドである。いくつかの実施形態では、治療薬はロシグリタゾンである。いくつかの実施形態では、治療薬はピオグリタゾンである。いくつかの実施形態では、治療薬はシタグリプチンである。いくつかの実施形態では、治療薬はサクサグリプチンである。いくつかの実施形態では、治療薬はリナグリプチンである。いくつかの実施形態では、治療薬はエクセナチドである。いくつかの実施形態では、治療薬はリラグルチドである。いくつかの実施形態では、治療薬はセマグルチドである。いくつかの実施形態では、治療薬はカナグリフロジンである。いくつかの実施形態では、治療薬はダパグリフロジンである。いくつかの実施形態では、治療薬はエンパグリフロジンである。
肥満を治療または抑制する治療薬の例としては、オルリスタット、フェンテルミン、トピラマート、ブプロピオン、ナルトレキソン、及びリラグルチドが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、治療薬はオルリスタットである。いくつかの実施形態では、治療薬はフェンテルミンである。いくつかの実施形態では、治療薬はトピラマートである。いくつかの実施形態では、治療薬はブプロピオンである。いくつかの実施形態では、治療薬はナルトレキソンである。いくつかの実施形態では、治療薬はリラグルチドである。
トリグリセリドの上昇を治療または抑制する治療薬の例としては、スタチン系薬剤（ロスバスタチン、シンバスタチン、及びアトルバスタチンなど）、フィブラート系薬剤（フェノフィブラート、ゲムフィブロジル、及びフェノフィブリン酸など）、ニコチン酸（ナイアシンなど）、及び脂肪酸（ω３脂肪酸など）が挙げられる。いくつかの実施形態では、治療薬はスタチン系薬剤である。
脂肪異栄養症を治療または抑制する治療薬の例としては、ＥＧＲＩＦＴＡ（登録商標）（テサモレリン）、ＧＬＵＣＯＰＨＡＧＥ（登録商標）（メトホルミン）、ＳＣＵＬＰＴＲＡ（登録商標）（ポリ－Ｌ－乳酸）、ＲＡＤＩＥＳＳＥ（登録商標）（カルシウムヒドロキシアパタイト）、ポリメチルメタクリレート（例えば、ＰＭＭＡ）、ＺＹＤＥＲＭ（商標）（ウシコラーゲン）、ＣＯＳＭＯＤＥＲＭ（登録商標）（ヒトコラーゲン）、シリコーン、グリタゾン、及びヒアルロン酸が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、脂肪異栄養症を治療または抑制する治療薬として、テサモレリン、メトホルミン、ポリ－Ｌ－乳酸、カルシウムヒドロキシアパタイト、ポリメチルメタクリレート、ウシコラーゲン、ヒトコラーゲン、シリコーン、及びヒアルロン酸が挙げられるが、これらに限定されない。
肝臓炎を治療または抑制する治療薬の例としては、肝炎治療薬及び肝炎ワクチンが挙げられるが、これらに限定されない。
脂肪肝疾患を治療または抑制する治療薬または処置の例としては、肥満手術及び／または食事介入が挙げられるが、これらに限定されない。
高コレステロール血症を治療または抑制する治療薬の例としては、スタチン系薬剤（例えば、ＬＩＰＩＴＯＲ（登録商標）（アトルバスタチン）、ＬＥＳＣＯＬ（商標）（フルバスタチン）、ロバスタチン、ＬＩＶＡＬＯ（登録商標）（ピタバスタチン）、ＰＲＡＶＡＣＨＯＬ（商標）（プラバスタチン）、ＣＲＥＳＴＯＲ（登録商標）（ロスバスタチンカルシウム）、及びＺＯＣＯＲ（商標）（シンバスタチン））、胆汁酸封鎖剤（例えば、ＰＲＥＶＡＬＩＴＥ（商標）（コレスチラミン）、ＷＥＬＣＨＯＬ（商標）（コレセベラム）、及びＣＯＬＥＳＴＩＤ（商標）（コレスチポール））、ＰＣＳＫ９阻害剤（例えば、ＰＲＡＬＵＥＮＴ（登録商標）（アリロクマブ）及びＲＥＰＡＴＨＡ（登録商標）（エボロクマブ）、ナイアシン（例えば、ｎｉａｓｐａｎ及びｎｉａｃｏｒ）、フィブラート系薬剤（例えば、フェノフィブラート及びＬＯＰＩＤ（商標）（ゲムフィブロジル））、ならびにＡＴＰクエン酸リアーゼ（ＡＣＬ）阻害剤（例えば、ＮＥＸＬＥＴＯＬ（登録商標）（ベンペド酸））が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、高コレステロール血症を治療または抑制する治療薬としては、スタチン系薬剤（例えば、アトルバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、ピタバスタチン、プラバスタチン、ロスバスタチンカルシウム、及びシンバスタチン）、胆汁酸封鎖剤（例えば、コレスチラミン、コレセベラム、及びコレスチポール）、ＰＣＳＫ９阻害剤（例えば、アリロクマブ及びエボロクマブ、ナイアシン（例えば、ｎｉａｓｐａｎ及びｎｉａｃｏｒ）、フィブラート系薬剤（例えば、フェノフィブラート及びゲムフィブロジル）、ならびにＡＣＬ阻害剤（例えば、ベンペド酸）が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、高コレステロール血症を治療または抑制する治療薬は、アリロクマブまたはエボロクマブである。いくつかの実施形態では、高コレステロール血症を治療または抑制する治療薬は、アリロクマブである。いくつかの実施形態では、高コレステロール血症を治療または抑制する治療薬は、エボロクマブである。
上昇した肝酵素（例えば、ＡＬＴ及び／またはＡＳＴなど）を治療または抑制する治療薬の例としては、コーヒー、葉酸、カリウム、ビタミンＢ６、スタチン、及び繊維またはそれらの任意の組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。
ＮＡＳＨを治療または抑制する治療薬の例としては、ＯＣＡＬＩＶＡ（登録商標）（オベチコール酸）、ピオグリタゾンまたは他のグリタゾン、セロンセルチブ、エラフィブラノール、セニクリビロック、ＧＲ＿ＭＤ＿０２、ＭＧＬ＿３１９６、ＩＭＭ１２４Ｅ、アラキジルアミドコラン酸（ＡＲＡＭＣＨＯＬ（登録商標））、ＧＳ０９７６、エムリカサン、ボリキシバット、ＮＧＭ２８２、ＧＳ９６７４、トロピフェクサー、ＭＮ＿００１、ＬＭＢ７６３、ＢＩ＿１４６７３３５、ＭＳＤＣ＿０６０２、ＰＦ＿０５２２１３０４、ＤＦ１０２、サログリタザル、ＢＭＳ９８６０３６、ラニフィブラノール、セマグルチド、ニタゾキサニド、ＧＲＩ＿０６２１、ＥＹＰ００１、ＶＫ２８０９、ナルメフェン、ＬＩＫ０６６、ＭＴ＿３９９５、エロビキシバット、ナモデノソン、フォラルマブ、ＳＡＲ４２５８９９、ソタグリフロジン、ＥＤＰ＿３０５、イコサブテート、ゲムカベン、ＴＥＲＮ＿１０１、ＫＢＰ＿０４２、ＰＦ＿０６８６５５７１、ＤＵＲ９２８、ＰＦ＿０６８３５９１９、ＮＧＭ３１３、ＢＭＳ＿９８６１７１、ナマシズマブ、ＣＥＲ＿２０９、ＮＤ＿Ｌ０２＿ｓ０２０１、ＲＴＵ＿１０９６、ＤＲＸ＿０６５、ＩＯＮＩＳ＿ＤＧＡＴ２Ｒｘ、ＩＮＴ＿７６７、ＮＣ＿００１、セラデルパル、ＰＸＬ７７０、ＴＥＲＮ＿２０１、ＮＶ５５６、ＡＺＤ２６９３、ＳＰ＿１３７３、ＶＫ０２１４、ヘパステム、ＴＧＦＴＸ４、ＲＬＢＮ１１２７、ＧＫＴ＿１３７８３１、ＲＹＩ＿０１８、ＣＢ４２０９－ＣＢ４２１１、及びＪＨ＿０９２０が挙げられるが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態では、代謝障害を治療する治療薬は、メラノコルチン４受容体（ＭＣ４Ｒ）作動薬である。いくつかの実施形態では、ＭＣ４Ｒ作動薬は、タンパク質、ペプチド、核酸分子、または小分子を含む。いくつかの実施形態では、タンパク質は、ＭＣ４Ｒのペプチド類似体である。いくつかの実施形態では、ペプチドはセトメラノチドである。いくつかの実施形態では、２型糖尿病を治療もしくは抑制し、及び／またはＢＭＩを減少させる治療薬は、セトメラノチドと、シブトラミン、オルリスタット、フェンテルミン、ロルカセリン、ナルトレキソン、リラグルチド、ジエチルプロピオン、ブプロピオン、メトホルミン、プラムリンチド、トピラメート、及びゾニサミドのうちの１つ以上との組み合わせである。いくつかの実施形態では、ＭＣ４Ｒ作動薬は、アミノ酸配列Ｈｉｓ－Ｐｈｅ－Ａｒｇ－Ｔｒｐを含むペプチドである。いくつかの実施形態では、小分子は、１，２，３Ｒ，４－テトラヒドロイソキノリン－３－カルボン酸である。いくつかの実施形態では、ＭＣ４Ｒ作動薬はＡＬＢ－１２７１５８（ａ）である。
心筋症を治療または抑制する治療薬の例としては、１）ＡＣＥ阻害剤、アンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬、β遮断薬、及びカルシウムチャネル遮断薬などの血圧降下剤、２）β遮断薬、カルシウムチャネル遮断薬、及びジゴキシンなどの心拍数を遅くする薬剤、３）抗不整脈薬などの心臓の鼓動を正常なリズムに保つ薬剤、４）アルドステロン遮断薬などの電解質のバランスをとる薬剤、５）利尿薬などの体から余分な水分とナトリウムを除去する薬剤、６）抗凝固剤や血液希釈剤などの血栓の形成を防ぐ薬剤、ならびに７）コルチコステロイドなどの炎症を軽減する薬剤が挙げられるが、これらに限定されない。
心不全を治療または抑制する治療薬の例としては、ＡＣＥ阻害薬、アンギオテンシン－２受容体遮断薬、β遮断薬、ミネラルコルチコイド受容体拮抗薬、利尿薬、イバブラジン、サクビトリルバルサルタン、硝酸塩を含むヒドララジン、及びジゴキシンが挙げられるが、これらに限定されない。
高血圧を治療または抑制する治療薬の例としては、利尿薬（クロルタリドン、クロロチアジド、ヒドロクロロチアジド、インダパミド、及びメトラゾンなど）、β遮断薬（アセブトロール、アテノロール、ベタキソロール、フマル酸ビソプロロール、塩酸カルテオロール、酒石酸メトプロロール、コハク酸メトプロロール、ナドロールなど）、ＡＣＥ阻害剤（塩酸ベナゼプリル、カプトプリル、マレイン酸エナラプリル、ホシノプリルナトリウム、リシノプリル、モエキシプリル、ペリンドプリル、塩酸キナプリル、ラミプリル、及びトランドラプリルなど）、アンギオテンシンＩＩ受容体遮断薬（カンデサルタン、メシル酸エプロサルタン、イルベサルタン、ロサルタンカリウム、テルミサルタン、及びバルサルタンなど）、カルシウムチャネル遮断薬（ベシル酸アムロジピン、ベプリジル、塩酸ジルチアゼム、フェロジピン、イスラジピン、ニカルジピン、ニフェジピン、ニソルジピン、及び塩酸ベラパミルなど）、α遮断薬（メシル酸ドキサゾシン、塩酸プラゾシン、及び塩酸テラゾシンなど）、α２受容体作動薬（メチルドパなど）、α遮断薬とβ遮断薬の組み合わせ（カルベジロール及び塩酸ラベタロールなど）、中枢作動薬（αメチルドパ、塩酸クロニジン、酢酸グアナベンズ、及び塩酸グアンファシン）、末梢アドレナリン阻害剤（グアナドレル、グアネチジン一硫酸塩、及びレセルピンなど）、ならびに血管拡張剤（塩酸ヒドララジン及びミノキシジルなど）が挙げられるが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態では、ＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型バリアントについてヘテロ接合性である対象については、ＩＮＨＢＥ参照である（標準用量を投与され得る）対象と比較して、代謝障害及び／または心血管疾患を治療または抑制する治療薬の用量を、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、または約９０％低減（すなわち、標準用量よりも低く）することができる。いくつかの実施形態では、代謝障害及び／または心血管疾患を治療または抑制する治療薬の用量を、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、または約５０％低減することができる。さらに、ＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型バリアントについてヘテロ接合性である対象では、ＩＮＨＢＥ参照である対象と比較して、投与頻度を低くすることができる。
いくつかの実施形態では、予測される機能喪失型バリアントＩＮＨＢＥ核酸分子についてホモ接合性である対象に対しては、予測される機能喪失型バリアントＩＮＨＢＥ核酸分子についてヘテロ接合性である対象と比較して、代謝障害及び／または心血管疾患を治療する治療薬の用量を、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％低減することができる。いくつかの実施形態では、代謝障害及び／または心血管疾患を治療または抑制する治療薬の用量を、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、または約５０％低減することができる。さらに、予測される機能喪失型バリアントＩＮＨＢＥ核酸分子についてホモ接合性である対象では、予測される機能喪失型バリアントＩＮＨＢＥ核酸分子についてヘテロ接合性である対象と比較して、代謝障害及び／または心血管疾患を治療または抑制する治療薬の用量の投与頻度を低くすることができる。
代謝障害及び／または心血管疾患を治療もしくは抑制する治療薬及び／またはＩＮＨＢＥ阻害剤の投与を、例えば、１日後、２日後、３日後、５日後、１週間後、２週間後、３週間後、１か月後、５週間後、６週間後、７週間後、８週間後、２か月後、または３か月後に反復することができる。反復投与は、同じ用量または異なる用量とすることができる。投与を、１回、２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回、１０回、またはそれ以上反復することができる。例えば、ある特定の用量レジメンに従って、対象は、例えば、６か月、１年、またはそれ以上などの長期間にわたって治療を受けることができる。
代謝障害及び／または心血管疾患を治療もしくは抑制する治療薬及び／またはＩＮＨＢＥ阻害剤の投与は、非経口、静脈内、経口、皮下、動脈内、頭蓋内、髄腔内、腹腔内、局所、鼻腔内、または筋肉内が含まれるがこれらに限定されない任意の好適な経路で行うことができる。投与用の医薬組成物は、望ましくは無菌であり、実質的に等張であり、ＧＭＰ条件下で製造される。医薬組成物は、単位投薬形態（すなわち単回投与のための用量）で提供され得る。医薬組成物は、１つ以上の生理学的及び薬学的に許容される担体、希釈剤、賦形剤、または補助剤を使用して製剤化され得る。製剤化は、選択された投与経路に依存する。用語「薬学的に許容される」とは、担体、希釈剤、賦形剤、または補助剤が、製剤の他の成分と適合性があり、それらのレシピエントに実質的に有害でないことを意味する。
本明細書で使用する場合、用語「治療する」、「治療すること」、及び「治療」ならびに「予防する」、「予防すること」、及び「予防」とは、それぞれ、治療効果及び予防効果などの所望の生物学的応答を引き出すことを指す。いくつかの実施形態では、治療効果には、薬剤または薬剤を含む組成物の投与後の、代謝障害及び／または心血管疾患の低減／軽減、代謝障害及び／または心血管疾患の重症度の低減／軽減（例えば、代謝障害及び／または心血管疾患の発症の軽減または抑制など）、症状ならびに代謝障害に関連する影響及び／または心血管疾患に関連する影響の低減／軽減、症状ならびに代謝障害に関連する影響及び／または心血管疾患に関連する影響の発症の遅延、代謝障害に関連する影響及び／または心血管疾患に関連する影響の症状の重症度の軽減、症状ならびに代謝障害に関連する影響及び／または心血管疾患に関連する影響の数の低減、症状ならびに代謝障害に関連する影響及び／または心血管疾患に関連する影響の潜伏の低減、症状ならびに代謝障害に関連する影響及び／または心血管疾患に関連する影響の改善、二次症状の軽減、二次感染の低減、代謝障害及び／または心血管疾患の再発の予防、再発エピソードの回数または頻度の低減、症候性エピソード間の潜伏期の延長、持続的進行までの時間の延長、迅速な回復、または代替治療法の有効性の増大または抵抗性の低下、及び／または罹患した宿主動物の生存期間の延長のうちの１つ以上が含まれる。予防効果には、治療プロトコルの投与後の、代謝障害及び／または心血管疾患の発症／進行の完全もしくは部分的な回避／抑制または遅延（例えば、完全もしくは部分的な回避／抑制または遅延など）、及び罹患した宿主動物の生存期間の延長が含まれ得る。代謝障害の治療には、任意の臨床病期または臨床症状で何らかの形態の代謝障害及び／または心血管疾患を有するとすでに診断された対象の治療、代謝障害及び／または心血管疾患の症状または徴候の発症または進展または増悪または悪化の遅延、及び／または代謝障害及び／または心血管疾患の重症度の予防及び／または低減が包含される。
本開示はまた、代謝障害を発症するリスクが高い対象の識別方法も提供する。いくつかの実施形態では、この方法は、対象から採取した生体試料中で、ＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアント核酸分子（例えば、ゲノム核酸分子、ｍＲＮＡ分子及び／またはｃＤＮＡ分子）の存在または非存在を判定すること、または判定していることを含む。対象がＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアント核酸分子を欠いている場合（すなわち、対象が遺伝子型決定でＩＮＨＢＥ参照として分類される場合）、その対象は、代謝障害を発症するリスクが高い。対象がＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアント核酸分子を有する場合（すなわち、対象がＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアント核酸分子についてヘテロ接合性またはホモ接合性である場合）、その対象は、代謝障害を発症するリスクが低い。いくつかの実施形態では、肝臓の発現定量的形質遺伝子座（ｅＱＴＬ）を分析することができる。
本開示はまた、心血管疾患を発症するリスクが高い対象の識別方法も提供する。いくつかの実施形態では、この方法は、対象から採取した生体試料中で、ＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアント核酸分子（例えば、ゲノム核酸分子、ｍＲＮＡ分子及び／またはｃＤＮＡ分子）の存在または非存在を判定すること、または判定していることを含む。対象がＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアント核酸分子を欠いている場合（すなわち、対象が遺伝子型決定でＩＮＨＢＥ参照として分類される場合）、その対象は、心血管疾患を発症するリスクが高い。対象がＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアント核酸分子を有する場合（すなわち、対象がＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアント核酸分子についてヘテロ接合性またはホモ接合性である場合）、その対象は、心血管疾患を発症するリスクが低い。いくつかの実施形態では、肝臓の発現定量的形質遺伝子座（ｅＱＴＬ）を分析することができる。
ＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアント核酸分子の単一コピーを有する場合、ＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアント核酸分子のコピーを有しない場合に比べて、対象は、代謝障害及び／または心血管疾患を発症することから、より保護される。いかなる特定の理論または作用機序に限定されることを意図するものではないが、対象は、ＩＮＨＢＥバリアント核酸分子の単一コピー（すなわち、ＩＮＨＢＥバリアント核酸分子についてヘテロ接合性であること）により、代謝障害及び／または心血管疾患の発症から保護されると考えられ、また、対象は、ＩＮＨＢＥバリアント核酸分子の２つのコピーを有すること（すなわち、ＩＮＨＢＥバリアント核酸分子についてホモ接合性であること）により、単一コピーを有する対象と比較して、代謝障害及び／または心血管疾患の発症からさらに保護され得るとも考えられる。したがって、いくつかの実施形態では、ＩＮＨＢＥバリアント核酸分子の単一コピーにより、対象は、代謝障害及び／または心血管疾患の発症から完全に保護され得るわけではないが、代わりに部分的または不完全に保護され得る。いかなる特定の理論にも束縛されることを望むものではないが、ＩＮＨＢＥバリアント核酸分子の単一コピーを有する対象には、代謝障害及び／または心血管疾患の発症に関与する別の因子または分子が依然として存在しており、そのために、代謝障害及び／または心血管疾患の発症の完全な保護に及ばない可能性がある。
対象が、対象由来の生体試料中にＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアント核酸分子を有するかどうかを判定すること、及び／または対象がＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアント核酸分子を有するかどうかを判定することは、本明細書に記載の方法のいずれかによって行うことができる。いくつかの実施形態では、これらの方法を、ｉｎ ｖｉｔｒｏで行うことができる。いくつかの実施形態では、これらの方法を、ｉｎ ｓｉｔｕで行うことができる。いくつかの実施形態では、これらの方法を、ｉｎ ｖｉｖｏで行うことができる。これらの実施形態のいずれかでは、核酸分子は、対象から得られた細胞内に存在し得る。
いくつかの実施形態では、対象が代謝障害を発症するリスクが高いと識別される場合、本明細書に記載されているように、代謝障害を治療または抑制する治療薬及び／またはＩＮＨＢＥ阻害剤で対象をさらに治療する。例えば、対象がＩＮＨＢＥ参照であり、それゆえに代謝障害を発症するリスクが高い場合、ＩＮＨＢＥ阻害剤を対象に投与する。いくつかの実施形態では、そのような対象に、代謝障害を治療または抑制する治療薬も投与する。いくつかの実施形態では、対象がＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアント核酸分子についてヘテロ接合性である場合、代謝障害を治療または抑制する治療薬を、標準用量と同じかそれより少ない用量で対象に投与し、また、ＩＮＨＢＥ阻害剤も投与する。いくつかの実施形態では、そのような対象に、代謝障害を治療または抑制する治療薬も投与する。いくつかの実施形態では、対象がＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアント核酸分子についてホモ接合性である場合、代謝障害を治療または抑制する治療薬を、標準用量と同じかそれより少ない用量で対象に投与する。いくつかの実施形態では、対象はＩＮＨＢＥ参照である。いくつかの実施形態では、対象は、ＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアント核酸分子についてヘテロ接合性である。いくつかの実施形態では、対象は、ＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアント核酸分子についてホモ接合性である。
いくつかの実施形態では、対象が心血管疾患を発症するリスクが高いと識別される場合、本明細書に記載されているように、心血管疾患を治療または抑制する治療薬及び／またはＩＮＨＢＥ阻害剤で対象をさらに治療する。例えば、対象がＩＮＨＢＥ参照であり、それゆえに心血管疾患を発症するリスクが高い場合、ＩＮＨＢＥ阻害剤を対象に投与する。いくつかの実施形態では、そのような対象に、心血管疾患を治療または抑制する治療薬も投与する。いくつかの実施形態では、対象がＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアント核酸分子についてヘテロ接合性である場合、心血管疾患を治療または抑制する治療薬を、標準用量と同じかそれより少ない用量で対象に投与し、また、ＩＮＨＢＥ阻害剤も投与する。いくつかの実施形態では、そのような対象に、心血管疾患を治療または抑制する治療薬も投与する。いくつかの実施形態では、対象がＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアント核酸分子についてホモ接合性である場合、心血管疾患を治療または抑制する治療薬を、標準用量と同じかそれより少ない用量で対象に投与する。いくつかの実施形態では、対象はＩＮＨＢＥ参照である。いくつかの実施形態では、対象は、ＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアント核酸分子についてヘテロ接合性である。いくつかの実施形態では、対象は、ＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアント核酸分子についてホモ接合性である。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法のいずれかは、代謝障害及び／または心血管疾患を発症するリスクの低下に関連する、ＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチド及び／またはＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型バリアントポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアント核酸分子を有する対象の遺伝子変異量を決定することをさらに含み得る。遺伝子変異量は、ＩＮＨＢＥ遺伝子のすべてのバリアントの集計であり、これは、代謝障害及び／または心血管疾患との関連性解析において実行することができる。いくつかの実施形態では、対象は、代謝障害及び／または心血管疾患を発症するリスクの低減に関連するＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドをコードする１つ以上のＩＮＨＢＥバリアント核酸分子についてホモ接合性である。いくつかの実施形態では、対象は、代謝障害及び／または心血管疾患を発症するリスクの低減に関連するＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドをコードする１つ以上のＩＮＨＢＥバリアント核酸分子についてヘテロ接合性である。関連解析の結果は、ＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアント核酸分子が、代謝障害及び／または心血管疾患を発症するリスクの低下と関連していることを示唆している。対象の遺伝子変異量が小さい場合、対象が代謝障害及び／または心血管疾患を発症するリスクは高く、代謝障害及び／または心血管疾患を治療、予防、または抑制する治療薬を標準用量で、及び／またはＩＮＨＢＥ阻害剤を、対象に投与するか、または投与し続ける。対象の遺伝子変異量が大きい場合、対象が代謝障害及び／または心血管疾患を発症するリスクは低く、代謝障害及び／または心血管疾患を治療、予防、または抑制する治療薬を、標準用量と同じかそれより少ない量で対象に投与するか、または投与し続ける。遺伝子変異量が大きいほど、代謝障害及び／または心血管疾患を発症するリスクは低くなる。
いくつかの実施形態では、ＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドをコードする任意の１つ以上のＩＮＨＢＥバリアント核酸分子を有する対象の遺伝子変異量は、ＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアント核酸分子のいずれかの複数の加重和を表す。いくつかの実施形態では、ＩＮＨＢＥ遺伝子内またはその周辺（最大１０Ｍｂ）に存在する少なくとも約２、少なくとも約３、少なくとも約４、少なくとも約５、少なくとも約１０、少なくとも約２０、少なくとも約３０、少なくとも約４０、少なくとも約５０、少なくとも約６０、少なくとも約７０、少なくとも約８０、少なくとも約１００、少なくとも約１２０、少なくとも約１５０、少なくとも約２００、少なくとも約２５０、少なくとも約３００、少なくとも約４００、少なくとも約５００、少なくとも約１，０００、少なくとも約１０，０００、少なくとも約１００，０００、または少なくとも約１，０００，０００もしくは１，０００，０００超の遺伝的バリアントを使用して遺伝子変異量を計算し、その場合、遺伝子変異量は、対立遺伝子の数に、それぞれの対立遺伝子についての代謝障害または関連する転帰との関連推定値（例えば、重み付けされた変異量スコア）を乗じたものである。これには、ゲノムアノテーションに関係なく、遺伝的関連分析における代謝障害関連形質及び／または心血管疾患関連形質とゼロでない関連性を示すＩＮＨＢＥ遺伝子に近接する（遺伝子の周囲の最大１０Ｍｂ）、任意の遺伝的バリアントを含めることができる。いくつかの実施形態では、対象が所望の閾値スコアを上回る遺伝子変異量を有する場合、対象が代謝障害及び／または心血管疾患を発症するリスクは低い。いくつかの実施形態では、対象が所望の閾値スコアを下回る遺伝子変異量を有する場合、対象が代謝障害及び／または心血管疾患を発症するリスクは高い。
いくつかの実施形態では、遺伝子変異量は、例えば、上位五分位数、中間五分位数、及び下位五分位数などの五分位に分けることができ、遺伝子変異量の上位五分位数は最低リスク群に対応し、遺伝子変異量の下位五分位数は最高リスク群に対応する。いくつかの実施形態では、より大きな遺伝子変異量を有する対象は、対象集団からの上位１０％、上位２０％、上位３０％、上位４０％、または上位５０％の遺伝子変異量を含むが、これに限定されない最高加重の遺伝子変異量を含む。いくつかの実施形態では、遺伝的バリアントは、代謝障害及び／または心血管疾患との関連性を、関連性のｐ値範囲の上位１０％、上位２０％、上位３０％、上位４０％、または上位５０％に有する遺伝的バリアントを含む。いくつかの実施形態では、同定された遺伝的バリアントのそれぞれは、約１０－２、約１０－３、約１０－４、約１０－５、約１０－６、約１０－７、約１０－８、約１０－９、約１０－１０、約１０－１１、約１０－１２、約１０－１３、約１０－１４、または約１０－１５以下のｐ値で代謝障害及び／または心血管疾患と関連性を有する遺伝的バリアントを含む。いくつかの実施形態では、同定された遺伝的バリアントは５×１０－８未満のｐ値で代謝障害及び／または心血管疾患と関連性を有する遺伝的バリアントを含む。いくつかの実施形態では、同定された遺伝的バリアントは、オッズ比（ＯＲ）約１．５以上、約１．７５以上、約２．０以上、もしくは約２．２５以上（分布の上位２０％について）；または約１．５以上、約１．７５以上、約２．０以上、約２．２５以上、約２．５以上、または約２．７５以上で、残りの参照集団と比較して、高リスク対象における代謝障害及び／または心血管疾患と関連する遺伝的バリアントを含む。いくつかの実施形態では、オッズ比（ＯＲ）は、約１．０～約１．５、約１．５～約２．０、約２．０～約２．５、約２．５～約３．０、約３．０～約３．５、約３．５～約４．０、約４．０～約４．５、約４．５～約５．０、約５．０～約５．５、約５．５～約６．０、約６．０～約６．５、約６．５～約７．０の範囲、または７．０を超えていてもよい。いくつかの実施形態では、高リスク対象は、参照母集団にて下位の十分位数、五分位数、または三分位数で遺伝子変異量を有する対象を含む。遺伝子変異量の閾値は、意図される実際の用途の性質と、その実際の用途にとって意味があると考えられるリスク差に基づいて決定される。
いくつかの実施形態では、対象が代謝障害を発症するリスクが高いと識別される場合、本明細書に記載されているように、代謝障害を治療、予防、または抑制する治療薬及び／またはＩＮＨＢＥ阻害剤を対象にさらに投与する。例えば、対象がＩＮＨＢＥ参照であり、それゆえに代謝障害を発症するリスクが高い場合、ＩＮＨＢＥ阻害剤を対象に投与する。いくつかの実施形態では、そのような対象に、代謝障害を治療、予防、または抑制する治療薬も投与する。いくつかの実施形態では、対象がＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアント核酸分子についてヘテロ接合性である場合、代謝障害を治療、予防、または抑制する治療薬を、標準用量と同じかそれより少ない用量で対象に投与し、また、ＩＮＨＢＥ阻害剤も投与する。いくつかの実施形態では、対象はＩＮＨＢＥ参照である。いくつかの実施形態では、対象は、ＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアント核酸分子についてヘテロ接合性である。さらに、対象が、ＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアント核酸分子を有するための低い遺伝子変異量を有し、したがって代謝障害を発症するリスクが高い場合、代謝障害を治療、予防、または抑制する治療薬を対象に投与する。いくつかの実施形態では、対象が、ＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアント核酸分子を有するための低い遺伝子変異量を有する場合、代謝障害を治療、予防、または抑制する治療薬を、ＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアント核酸分子を有するための高い遺伝子変異量を有する対象に投与する標準用量と同じかそれより多い用量で対象に投与する。
いくつかの実施形態では、対象が心血管疾患を発症するリスクが高いと識別される場合、本明細書に記載されているように、心血管疾患を治療、予防、または抑制する治療薬及び／またはＩＮＨＢＥ阻害剤を対象にさらに投与する。例えば、対象がＩＮＨＢＥ参照であり、それゆえに心血管疾患を発症するリスクが高い場合、ＩＮＨＢＥ阻害剤を対象に投与する。いくつかの実施形態では、そのような対象に、心血管疾患を治療、予防、または抑制する治療薬も投与する。いくつかの実施形態では、対象がＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアント核酸分子についてヘテロ接合性である場合、心血管疾患を治療、予防、または抑制する治療薬を、標準用量と同じかそれより少ない用量で対象に投与し、また、ＩＮＨＢＥ阻害剤も投与する。いくつかの実施形態では、対象はＩＮＨＢＥ参照である。いくつかの実施形態では、対象は、ＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアント核酸分子についてヘテロ接合性である。さらに、対象が、ＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアント核酸分子を有するための低い遺伝子変異量を有し、したがって心血管疾患を発症するリスクが高い場合、心血管疾患を治療、予防、または抑制する治療薬を対象に投与する。いくつかの実施形態では、対象が、ＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアント核酸分子を有するための低い遺伝子変異量を有する場合、心血管疾患を治療、予防、または抑制する治療薬を、ＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアント核酸分子を有するための高い遺伝子変異量を有する対象に投与する標準用量と同じかそれより多い用量で対象に投与する。
本開示は、対象における代謝障害の診断方法も提供する。この方法は、対象が、本明細書に記載のＩＮＨＢＥバリアント核酸分子またはそれらから産生されるポリペプチドのいずれか１つ以上を有するかどうかを判定すること、または判定していることを含む。対象がＩＮＨＢＥ参照であり、代謝障害の１つ以上の症状を有する場合、対象は代謝障害を有していると診断される。いくつかの実施形態では、対象は、参照ＩＮＨＢＥ核酸分子についてホモ接合性である。いくつかの実施形態では、対象は、予測される機能喪失型ＩＮＨＢＥポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアント核酸分子についてホモ接合性またはヘテロ接合性である。いくつかの実施形態では、対象が代謝障害を有すると識別される（例えば、代謝障害の１つ以上の症状を有しており、予測される機能喪失型ＩＮＨＢＥポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアント核酸分子についてホモ接合性またはヘテロ接合性である）場合、代謝障害を治療または抑制する治療薬、例えば、本明細書に記載されている治療薬のいずれかでさらに対象を治療する。
本開示は、対象における心血管疾患の診断方法も提供する。この方法は、対象が、本明細書に記載のＩＮＨＢＥバリアント核酸分子またはそれらから産生されるポリペプチドのいずれか１つ以上を有するかどうかを判定すること、または判定していることを含む。対象がＩＮＨＢＥ参照であり、心血管疾患の１つ以上の症状を有する場合、対象は心血管疾患を有していると診断される。いくつかの実施形態では、対象は、参照ＩＮＨＢＥ核酸分子についてホモ接合性である。いくつかの実施形態では、対象は、予測される機能喪失型ＩＮＨＢＥポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアント核酸分子についてホモ接合性またはヘテロ接合性である。いくつかの実施形態では、対象が心血管疾患を有すると識別される（例えば、心血管疾患の１つ以上の症状を有しており、予測される機能喪失型ＩＮＨＢＥポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアント核酸分子についてホモ接合性またはヘテロ接合性である）場合、心血管疾患を治療または抑制する治療薬、例えば、本明細書に記載されている治療薬のいずれかでさらに対象を治療する。
本開示はまた、代謝障害を発症するリスクが高い対象の識別方法を提供し、この方法は、対象から採取した生体試料中で、ＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドの存在または非存在を判定するか、または判定していることを含む。いくつかの実施形態では、この方法は、インヒビンＥを定量化するための体細胞アッセイなどの血液ベースの定量アッセイである。
本開示はまた、心血管疾患を発症するリスクが高い対象の識別方法を提供し、この方法は、対象から採取した生体試料中で、ＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドの存在または非存在を判定するか、または判定していることを含む。いくつかの実施形態では、この方法は、インヒビンＥを定量化するための体細胞アッセイなどの血液ベースの定量アッセイである。
ＩＮＨＢＥまたはＩＮＨＢＥ活性を測定するための多数の方法を使用してＩＮＨＢＥポリペプチドを検出することによって、血液、血漿、及び／または血清などの好適な液体試料中のＩＮＨＢＥポリペプチドの存在を判定することができる。例えば、ＩＮＨＢＥに特異的な抗体を使用するイムノアッセイによってＩＮＨＢＥポリペプチドを検出することができる。この抗体は、ＩＮＨＢＥポリペプチド及び／またはＣＥＡに選択的に結合することができる。この抗体を、例えば、一次元または二次元ゲルのウエスタンブロット、酵素結合イムノアッセイなどのハイスループット法、及び／または全細胞タンパク質または部分的に精製されたタンパク質のドットブロット（抗体サンドイッチ）アッセイに使用することができる。いくつかの実施形態では、好適な流体中のＩＮＨＢＥの濃度を、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）によって測定する。アッセイの一例では、血清試料を４００倍に希釈し、１つの動物由来のＩＮＨＢＥポリペプチド抗体（一次抗体）を結合させたプレートに添加する。血清中に十分なＩＮＨＢＥが存在する場合、ＩＮＨＢＥはこれらのＩＮＨＢＥ抗体に結合し得る。次いで、プレートを洗浄して、血清の他のすべての成分を除去する。特別に調製された「二次抗体」、例えば、一次抗体とは異なる動物に由来し、一次抗体に結合する抗体をプレートに添加し、その後もう一度洗浄する。この二次抗体は、あらかじめ、例えば酵素と化学結合させておく。したがって、プレートには、プレートに結合した二次抗体の量に比例した酵素が含まれることになる。酵素の基質を添加し、酵素による触媒作用により、色または蛍光が変化する。既知の健康な試料よりも強いシグナルを生成する試料は「陽性」である。既知の健康な試料よりも弱いシグナルを生成する試料は「陰性」である。
あるいは、好適な流体中のＩＮＨＢＥポリペプチドの濃度を、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ質量分析計、ＧＣＭＳ質量分析計、ＳＤＳ ＰＡＧＥ法（後でデンシトメトリー法もしくは質量分析法により定量化する）または任意の同様のタンパク質定量化法でＩＮＨＢＥポリペプチドを検出することによって測定することができる。ポリペプチドレベルを定量化する追加の方法としては、ＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）、ＳＥＣ（サイズ排除クロマトグラフィー）、改良型Ｌｏｗｒｙ法、分光光度法、ＳＥＣ－ＭＡＬＬＳ（サイズ排除クロマトグラフィー／多角度レーザー光散乱）、及びＮＭＲ（核磁気共鳴）が挙げられるが、これらに限定されない。
ＩＮＨＢＥポリペプチドに特異的なアプタマーも使用することができる。好適なアプタマーは、ＩＮＨＢＥポリペプチドの血液、血漿または血清濃度を測定するために、またはバリアントＩＮＨＢＥの存在を検出するために、ＩＮＨＢＥポリペプチドに選択的に結合することができる。融合タンパク質を含む、組換えまたは化学合成によって生成されるＩＮＨＢＥポリペプチド、及びその断片または他の誘導体もしくは類似体を免疫原として使用して、ＩＮＨＢＥポリペプチドを認識するアプタマーを生成してもよい。用語「アプタマー」とは、標的化合物（特定のエピトープ、治療薬マーカー、または代理マーカーなど）に対して特定の作用を有する非天然のオリゴヌクレオチド鎖またはペプチド分子を指す。特定の作用には、標的化合物の結合、標的化合物の触媒的変化、及び／または標的化合物もしくは標的化合物の機能活性を修飾／改変する方式での標的化合物との反応が含まれるが、これらに限定されない。アプタマーは、小分子などの様々な分子標的に結合するように、ｉｎ ｖｉｔｒｏ選択またはＳＥＬＥＸ（商標）（指数関数的濃縮によるリガンドの系統的進化）を繰り返し行うことにより、改変することができる。産生方法／合成方法は、例えば、Ｅｌｌｉｎｇｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，１９９０，３４６，８１８－８２２；及びＴｕｅｒｋ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９０，２４９，５０５－５１０に記載されている。「ＳＥＬＥＸ（商標）」法は、所望の作用、例えばタンパク質への結合において特定のエピトープと相互作用する選択された核酸リガンドと、それらの選択された核酸の増幅との組み合わせを含む。選択／増幅ステップの任意選択での反復サイクルにより、非常に多数の核酸を含有するプールから特定のエピトープと最も強く相互作用する１つまたは少数の核酸を選択することができる。選択した目標が達成されるまで、選択／増幅手順のサイクルを続ける。ＳＥＬＥＸ法は、以下の米国特許、すなわち、米国特許第５，４７５，０９６号及び第５，２７０，１６３号に記載されている。
本開示はまた、ＩＮＨＢＥ阻害剤または脂肪分布に影響を与える他の治療薬による治療に対して異なる反応を示し得る、代謝障害などの疾患を有する対象の識別方法を提供する。いくつかの実施形態では、この方法は、対象から採取した生体試料（肝臓、血漿、血清、及び／または全血）中で、ＩＮＨＢＥ ｐＬＯＦもしくはｐＧＯＦまたはＩＮＨＢＥの肝臓での発現に関連するものの存在もしくは非存在を判定すること、もしくは判定していること、または循環中のＩＮＨＢＥもしくはＩＮＨＢＥの肝臓での発現を測定することを含む。対象がそのようなＩＮＨＢＥバリアントを欠いている（すなわち、対象が遺伝子型的にＩＮＨＢＥ参照として分類される）場合、対象は代謝障害を発症するリスクが高く、ＩＮＨＢＥ阻害剤または脂肪分布に影響を与える他の治療薬による治療を受けやすい可能性がある。対象がそのようなＩＮＨＢＥバリアント核酸分子を有する（すなわち、対象がＩＮＨＢＥ ｐＬＯＦ／ｐＧＯＦについてヘテロ接合性であるか、またはＩＮＨＢＥ ｐＬＯＦ／ｐＧＯＦについてホモ接合性である）場合、対象は代謝障害を発症するリスクが低い。
本開示はまた、対象由来の生体試料中の、予測される機能喪失型ＩＮＨＢＥポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアント核酸分子（ゲノム、ｍＲＮＡ、またはｃＤＮＡ）の存在または非存在を検出する方法を提供する。集団内の遺伝子配列、及びそのような遺伝子によってコードされるｍＲＮＡ分子は、一塩基多型などの多型のために異なり得ることを理解されたい。
生体試料は、対象からの任意の細胞、組織、または生体液に由来し得る。この試料は、骨髄試料、腫瘍生検標本、細針吸引生検標本、または血液、歯肉溝滲出液、血漿、血清、リンパ、腹水、嚢胞液もしくは尿などの体液の試料のようないずれかの臨床的に適切な組織を含んでよい。いくつかの場合では、試料は、口腔スワブを含む。本明細書に開示する方法において使用する試料は、アッセイ形式、検出方法の性質、及び試料として使用する組織、細胞、または抽出物に基づいて様々に異なる。採用するアッセイに応じて、生体試料に異なる処理を行うことができる。例えば、任意の予測される機能喪失型バリアントＩＮＨＢＥ核酸分子を検出する場合、ゲノムＤＮＡについて試料を単離するかまたは濃縮するように設計された予備処理を採用することができる。この目的のために、様々な技法を使用してもよい。任意の予測される機能喪失型バリアントＩＮＨＢＥ ｍＲＮＡのレベルを検出する場合、様々な技法を使用して生体試料のｍＲＮＡを濃縮することができる。ｍＲＮＡの存在もしくはレベル、または特定のバリアントゲノムＤＮＡ遺伝子座の存在を検出するために、様々な方法を使用することができる。
いくつかの実施形態では、対象において予測される機能喪失型ＩＮＨＢＥポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアント核酸分子を検出することは、対象から得られた生体試料をアッセイまたは遺伝子型決定して、生体試料中のＩＮＨＢＥゲノム核酸分子、及び／または、生体試料中のＩＮＨＢＥ ｍＲＮＡ分子、及び／または生体試料中のｍＲＮＡ分子から生成されるＩＮＨＢＥ ｃＤＮＡ分子が、機能喪失（部分的なまたは完全な）を引き起こすか、または機能喪失（部分的なまたは完全な）を引き起こすと予測される１つ以上の変異、例えば、本明細書に記載の予測される機能喪失型ＩＮＨＢＥポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアント核酸分子のいずれかを含むかどうかを判定することを含む。
いくつかの実施形態では、対象におけるＩＮＨＢＥバリアント核酸分子（例えば、ゲノム核酸分子、ｍＲＮＡ分子、及び／またはｍＲＮＡ分子から生成されたｃＤＮＡ分子など）の存在または非存在の検出方法は、対象から得られた生体試料でアッセイを実施することを含む。アッセイでは、生体試料中の核酸分子が特定のヌクレオチド配列を含むかどうかを判定する。
いくつかの実施形態では、生体試料は、細胞または細胞溶解物を含む。そのような方法は、例えば、ＩＮＨＢＥゲノム核酸分子またはｍＲＮＡ分子を含む生体試料を対象から得ること、及びｍＲＮＡである場合、任意選択でｍＲＮＡをｃＤＮＡに逆転写することをさらに含み得る。そのようなアッセイは、例えば、特定のＩＮＨＢＥ核酸分子のこれらの位置の同一性を判定することを含み得る。いくつかの実施形態では、その方法は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ法である。
いくつかの実施形態では、判定するステップ、検出するステップ、または遺伝子型決定アッセイは、生体試料中のＩＮＨＢＥゲノム核酸分子、ＩＮＨＢＥ ｍＲＮＡ分子、またはＩＮＨＢＥ ｃＤＮＡ分子のヌクレオチド配列の少なくとも一部分を配列決定することを含み、配列決定された部分は、機能喪失（部分的もしくは完全）を引き起こすか、または機能喪失（部分的もしくは完全）を引き起こすと予測される１つ以上の変異、例えば、本明細書に記載の予測される機能喪失型バリアントＩＮＨＢＥ核酸分子のいずれかを含む。
いくつかの実施形態では、判定するステップ、検出するステップ、または遺伝子型決定アッセイは、生体試料中のＩＮＨＢＥゲノム核酸分子のヌクレオチド配列、生体試料中のＩＮＨＢＥ ｍＲＮＡ分子のヌクレオチド配列、または生体試料中のＩＮＨＢＥ ｍＲＮＡから産生されるＩＮＨＢＥ ｃＤＮＡ分子のヌクレオチド配列の、少なくとも一部分を配列決定することを含む。いくつかの実施形態では、判定するステップ、検出するステップ、または遺伝子型決定アッセイは、生体試料中のＩＮＨＢＥゲノム核酸分子のヌクレオチド配列の少なくとも一部を配列決定することを含む。いくつかの実施形態では、判定するステップ、検出するステップ、または遺伝子型決定アッセイは、生体試料中のＩＮＨＢＥ ｍＲＮＡ分子のヌクレオチド配列の少なくとも一部を配列決定することを含む。いくつかの実施形態では、判定するステップ、検出するステップ、または遺伝子型決定アッセイは、生体試料中のＩＮＨＢＥ ｍＲＮＡ分子から産生されるＩＮＨＢＥ ｃＤＮＡ分子のヌクレオチド配列の少なくとも一部を配列決定することを含む。
いくつかの実施形態では、アッセイは、核酸分子全体を配列決定することを含む。いくつかの実施形態では、ＩＮＨＢＥゲノム核酸分子のみを解析する。いくつかの実施形態では、ＩＮＨＢＥ ｍＲＮＡのみを解析する。いくつかの実施形態では、ＩＮＨＢＥ ｍＲＮＡから得られるＩＮＨＢＥ ｃＤＮＡのみを解析する。
いくつかの実施形態では、判定するステップ、検出するステップ、または遺伝子型決定アッセイは、ａ）ＩＮＨＢＥポリペプチドをコードする核酸分子の少なくとも一部を増幅し、ｂ）増幅された核酸分子を検出可能な標識で標識し、ｃ）標識された核酸分子を、改変特異的プローブを含む支持体と接触させ、ｄ）検出可能な標識を検出することを含む。
いくつかの実施形態では、核酸分子はｍＲＮＡであり、判定するステップは、増幅するステップの前にｍＲＮＡをｃＤＮＡに逆転写することをさらに含む。
いくつかの実施形態では、判定するステップ、検出するステップ、または遺伝子型決定アッセイは、生体試料中の核酸分子を検出可能な標識を含む改変特異的プローブと接触させ（改変特異的プローブは、増幅された核酸分子のヌクレオチド配列にストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸配列を含む）、検出可能な標識を検出することを含む。改変特異的ポリメラーゼ連鎖反応技術を使用して、核酸配列中のＳＮＰなどの変異を検出することができる。鋳型とのミスマッチが存在する場合、ＤＮＡポリメラーゼは伸長しないため、改変特異的プライマーを使用することができる。
いくつかの実施形態では、試料中の核酸分子はｍＲＮＡであり、増幅ステップの前にｍＲＮＡをｃＤＮＡへ逆転写する。いくつかの実施形態では、核酸分子は、対象から得られた細胞内に存在する。
いくつかの実施形態では、アッセイは、生体試料を、ストリンジェントな条件下でＩＮＨＢＥバリアント核酸分子（ゲノム、ｍＲＮＡ、またはｃＤＮＡ）に特異的にハイブリダイズし、対応するＩＮＨＢＥ参照配列にはハイブリダイズしない改変特異的プライマーまたは改変特異的プローブなどのプライマーまたはプローブと接触させ、ハイブリダイゼーションが生じているかどうかを判定することを含む。いくつかの実施形態では、アッセイは、ＲＮＡ配列決定（ＲＮＡ－Ｓｅｑ）を含む。いくつかの実施形態では、アッセイはまた、例えば逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ－ＰＣＲ）によって、ｍＲＮＡをｃＤＮＡに逆転写することも含む。
いくつかの実施形態では、本方法は、標的ヌクレオチド配列に結合し、予測される機能喪失型ＩＮＨＢＥポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアント核酸分子（ゲノム、ｍＲＮＡ、またはｃＤＮＡ）を含むポリヌクレオチドを特異的に検出及び／または識別するのに十分なヌクレオチド長のプローブ及びプライマーを利用する。この結果を達成するために、ハイブリダイゼーション条件または反応条件を、作業者が決定することができる。ヌクレオチド長は、本明細書において記載または例示される任意のアッセイを含めた選択した検出方法における使用のために十分な任意の長さであり得る。そのようなプローブ及びプライマーは、高ストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件下で標的ヌクレオチド配列に特異的にハイブリダイズすることができる。プローブ及びプライマーは、標的ヌクレオチド配列内の連続したヌクレオチドの完全なヌクレオチド配列同一性を有し得るが、標的ヌクレオチド配列とは異なり且つ標的ヌクレオチド配列を特異的に検出及び／または識別する能力を保持するプローブを、従来の方法によって設計してもよい。プローブ及びプライマーは、標的核酸分子のヌクレオチド配列と、約８０％、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または１００％の配列同一性または相補性を有し得る。
例示的な核酸配列決定技術の例としては、鎖ターミネーター（サンガー）配列決定及びダイターミネーター配列決定が挙げられるが、これらに限定されない。他の方法は、精製されたＤＮＡ、増幅されたＤＮＡ、及び固定された細胞調製物（蛍光ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ））に対する、標識されたプライマーまたはプローブを使用することを含む、配列決定以外の核酸ハイブリダイゼーション法を包含する。いくつかの方法では、標的核酸分子を、検出の前にまたは検出と同時に増幅してもよい。核酸増幅技法の例示的な例としては、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）、リガーゼ連鎖反応（ＬＣＲ）、鎖置換増幅（ＳＤＡ）、及び核酸配列ベース増幅（ＮＡＳＢＡ）が挙げられるが、これらに限定されない。他の方法としては、リガーゼ連鎖反応、鎖置換増幅、及び好熱性ＳＤＡ（ｔＳＤＡ）が挙げられるが、これらに限定されない。
ハイブリダイゼーション技法において、プローブまたはプライマーがその標的へ特異的にハイブリダイズするように、ストリンジェントな条件を用いることができる。いくつかの実施形態では、ストリンジェントな条件下のポリヌクレオチドプライマーまたはプローブは、他の非標的配列よりも検出可能に高い程度（バックグラウンドの少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、またはそれ以上、例えば、バックグラウンドの１０倍）で、その標的配列へハイブリダイズする。いくつかの実施形態では、ストリンジェントな条件下のポリヌクレオチドプライマーまたはプローブは、少なくとも２倍の、他のヌクレオチド配列よりも検出可能に高い程度で、その標的ヌクレオチド配列へハイブリダイズする。いくつかの実施形態では、ストリンジェントな条件下のポリヌクレオチドプライマーまたはプローブは、少なくとも３倍の、他のヌクレオチド配列よりも検出可能に高い程度で、その標的ヌクレオチド配列へハイブリダイズする。いくつかの実施形態では、ストリンジェントな条件下のポリヌクレオチドプライマーまたはプローブは、少なくとも４倍の、他のヌクレオチド配列よりも検出可能に高い程度で、その標的ヌクレオチド配列へハイブリダイズする。いくつかの実施形態では、ストリンジェントな条件下のポリヌクレオチドプライマーまたはプローブは、バックグランドの１０倍を超える、他のヌクレオチド配列よりも検出可能に高い程度で、その標的ヌクレオチド配列へハイブリダイズする。ストリンジェントな条件は配列依存性であり、異なる状況において異なるだろう。
ＤＮＡハイブリダイゼーションを促進する適切なストリンジェンシー条件（例えば約４５℃での６×塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム（ＳＳＣ）、続いて５０℃での２×ＳＳＣの洗浄）は、公知であるか、またはＣｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｎ．Ｙ．（１９８９），６．３．１－６．３．６中で見出され得る。典型的には、ハイブリダイゼーション及び検出のためのストリンジェントな条件は、塩濃度が、ｐＨ７．０～８．３で約１．５Ｍ未満のＮａ＋イオン、典型的には約０．０１～１．０ＭのＮａ＋イオン濃度（または他の塩）であり、温度が、短いプローブ（例えば１０～５０ヌクレオチド等）について少なくとも約３０℃及びより長プローブ（例えば５０ヌクレオチド超等）について少なくとも約６０℃である条件であるだろう。ストリンジェントな条件は、不安定化剤（ホルムアミドなど）の添加によって達成してもよい。任意選択で、洗浄緩衝液は、約０．１％～約１％のＳＤＳを含み得る。ハイブリダイゼーションの継続時間は、一般に約２４時間未満、通常約４～約１２時間である。洗浄時間の継続時間は、少なくとも平衡に達するのに十分な時間の長さである。
本開示はまた、対象から得られた試料でアッセイを実施して、対象におけるＩＮＨＢＥポリペプチドが、機能喪失（部分的もしくは完全）または予測される機能喪失（部分的もしくは完全）をそのポリペプチドにもたらす１つ以上の変異を含むかどうかを判定することを含む、ヒトＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドの存在の検出方法を提供する。
いくつかの実施形態では、検出するステップは、ポリペプチドの少なくとも一部を配列決定することを含む。いくつかの実施形態では、検出するステップは、ポリペプチドの存在を検出するためのイムノアッセイを含む。
いくつかの実施形態では、対象がＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドを有していない場合、代謝障害、または２型糖尿病、脂肪異栄養症、肝臓の炎症、脂肪肝疾患、高コレステロール血症、肝酵素の上昇（例えば、ＡＬＴ及び／またはＡＳＴなど）、肥満、高血圧、ＮＡＳＨ、及び／またはトリグリセリドレベルの上昇のいずれかを対象が発症するリスクは高い。いくつかの実施形態では、対象がＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドを有している場合、代謝障害、または２型糖尿病、肥満、脂肪異栄養症、肝臓の炎症、脂肪肝疾患、高コレステロール血症、肝酵素の上昇（例えば、ＡＬＴ及び／またはＡＳＴなど）、高血圧、ＮＡＳＨ、及び／またはトリグリセリドレベルの上昇のいずれかを対象が発症するリスクは低い。
いくつかの実施形態では、対象がＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドを有していない場合、心血管疾患または心筋症、心不全、及び高血圧のいずれかを対象が発症するリスクは高い。いくつかの実施形態では、対象がＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドを有している場合、心血管疾患または心筋症、心不全、及び高血圧のいずれかを対象が発症するリスクは低い。
本開示はまた、本明細書に記載の方法のいずれかにおける、ＩＮＨＢＥバリアントゲノム核酸分子、ＩＮＨＢＥバリアントｍＲＮＡ分子、及び／またはＩＮＨＢＥバリアントｃＤＮＡ分子（例えば、本明細書で開示するゲノムバリアント核酸分子、ｍＲＮＡバリアント分子、及びｃＤＮＡバリアント分子のいずれか）とハイブリダイズする単離された核酸分子の使用も提供する。
いくつかの実施形態では、そのような単離された核酸分子は、少なくとも約５、少なくとも約８、少なくとも約１０、少なくとも約１１、少なくとも約１２、少なくとも約１３、少なくとも約１４、少なくとも約１５、少なくとも約１６、少なくとも約１７、少なくとも約１８、少なくとも約１９、少なくとも約２０、少なくとも約２１、少なくとも約２２、少なくとも約２３、少なくとも約２４、少なくとも約２５、少なくとも約３０、少なくとも約３５、少なくとも約４０、少なくとも約４５、少なくとも約５０、少なくとも約５５、少なくとも約６０、少なくとも約６５、少なくとも約７０、少なくとも約７５、少なくとも約８０、少なくとも約８５、少なくとも約９０、少なくとも約９５、少なくとも約１００、少なくとも約２００、少なくとも約３００、少なくとも約４００、少なくとも約５００、少なくとも約６００、少なくとも約７００、少なくとも約８００、少なくとも約９００、少なくとも約１０００、少なくとも約２０００年、少なくとも約３０００、少なくとも約４０００、または少なくとも約５０００ヌクレオチドを含むかまたはそれらからなる。いくつかの実施形態では、そのような単離された核酸分子は、少なくとも約５、少なくとも約８、少なくとも約１０、少なくとも約１１、少なくとも約１２、少なくとも約１３、少なくとも約１４、少なくとも約１５、少なくとも約１６、少なくとも約１７、少なくとも約１８、少なくとも約１９、少なくとも約２０、少なくとも約２１、少なくとも約２２、少なくとも約２３、少なくとも約２４、または少なくとも約２５ヌクレオチドを含むかまたはそれらからなる。いくつかの実施形態では、単離された核酸分子は、少なくとも約１８ヌクレオチドを含むかまたはそれらからなる。いくつかの実施形態では、単離された核酸分子は、少なくとも約１５ヌクレオチドを含むかまたはそれらからなる。いくつかの実施形態では、単離された核酸分子は、約１０～３５、約１０～約３０、約１０～約２５、約１２～約３０、約１２～約２８、約１２～約２４、約１５～約３０、約１５～約２５、約１８～約３０、約１８～約２５、約１８～約２４、または約１８～約２２ヌクレオチドからなるかまたはそれらを含む。いくつかの実施形態では、単離された核酸分子は、約１８～３０ヌクレオチドからなるかまたはそれらを含む。いくつかの実施形態では、単離された核酸分子は、少なくとも約１５ヌクレオチド～少なくとも約３５ヌクレオチドを含むかまたはそれらからなる。
いくつかの実施形態では、そのような単離された核酸分子は、ストリンジェントな条件下でＩＮＨＢＥバリアント核酸分子（例えば、ゲノム核酸分子、ｍＲＮＡ分子、及び／またはｃＤＮＡ分子）とハイブリダイズする。そのような核酸分子は、例えば本明細書において記載または例証されるようなプローブ、プライマー、改変特異的プローブ、または改変特異的プライマーとして使用することができ、限定されないが、プライマー、プローブ、アンチセンスＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、及びｓｉＲＮＡが挙げられ、その各々は、本明細書の他の箇所でより詳細に記載され、本明細書において記載される方法のいずれかにおいて使用され得る。
いくつかの実施形態では、単離された核酸分子は、ＩＮＨＢＥバリアントゲノム核酸分子、ＩＮＨＢＥバリアントｍＲＮＡ分子、及び／またはＩＮＨＢＥバリアントｃＤＮＡ分子と少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％同一である核酸分子の少なくとも約１５連続ヌクレオチドにハイブリダイズする。いくつかの実施形態では、単離された核酸分子は、約１５～約１００ヌクレオチドまたは約１５～約３５ヌクレオチドからなるかまたはそれらを含む。いくつかの実施形態では、単離された核酸分子は、約１５～１００ヌクレオチドからなるかまたはそれらを含む。いくつかの実施形態では、単離された核酸分子は、約１５～約３５ヌクレオチドからなるかまたはそれらを含む。
いくつかの実施形態では、改変特異的プローブ及び改変特異的プライマーは、ＤＮＡを含む。いくつかの実施形態では、改変特異的プローブ及び改変特異的プライマーは、ＲＮＡを含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のプローブ及びプライマー（改変特異的プローブ及び改変特異的プライマーを含む）は、本明細書で開示する核酸分子のいずれか、またはその相補鎖へ特異的にハイブリダイズするヌクレオチド配列を有する。いくつかの実施形態では、プローブ及びプライマーは、本明細書で開示する核酸分子のいずれかにストリンジェントな条件下で特異的にハイブリダイズする。
いくつかの実施形態では、これらのプライマー（改変特異的プライマーを含む）を、第二世代シーケンシングまたはハイスループットシーケンシングに使用することができる。いくつかの例では、プライマー（改変特異的プライマーを含む）は修飾され得る。特に、プライマーは、例えば超並列シグネチャシーケンシング（ＭＰＳＳ）、ポロニーシーケンシング、及び４５４パイロシーケンシングの異なるステップで使用される、様々な修飾を含み得る。修飾プライマーは、プロセスの複数のステップで使用することができ、クローニングステップにおけるビオチン化プライマー、ならびにビーズローディングステップ及び検出ステップで使用される蛍光標識プライマーが挙げられる。ポロニーシーケンシングは、一般に、ＤＮＡ鋳型の各々の分子が約１３５ｂｐの長さであるペアエンドタグライブラリを使用して遂行される。ビオチン化プライマーは、ビーズローディングステップ及びエマルジョンＰＣＲで使用される。蛍光標識された縮重ノナマーオリゴヌクレオチドは、検出ステップで使用される。アダプターは、ストレプトアビジンコートビーズ上へＤＮＡライブラリを固定化するために、５’－ビオチンタグを含有し得る。
本明細書に記載のプローブ及びプライマーを使用して、本明細書で開示されるＩＮＨＢＥバリアントゲノム核酸分子、ＩＮＨＢＥバリアントｍＲＮＡ分子、及び／またはＩＮＨＢＥバリアントｃＤＮＡ分子のいずれかの範囲内でヌクレオチドの変異を検出することができる。本明細書に記載のプライマーを使用して、ＩＮＨＢＥバリアントゲノム核酸分子、ＩＮＨＢＥバリアントｍＲＮＡ分子、もしくはＩＮＨＢＥバリアントｃＤＮＡ分子、またはそれらの断片を増幅することができる。
本開示において、「特異的にハイブリダイズする」とは、プローブまたはプライマー（例えば、改変特異的プローブまたは改変特異的プライマーなど）は、ＩＮＨＢＥの参照ゲノム核酸分子、ＩＮＨＢＥの参照ｍＲＮＡ分子、及び／またはＩＮＨＢＥの参照ｃＤＮＡ分子をコードする核酸配列にはハイブリダイズしないことを意味する。
いくつかの実施形態では、プローブ（例えば、改変特異的プローブなど）は標識を含む。いくつかの実施形態では、標識は、蛍光標識、放射性同位体標識、またはビオチンである。
本開示は、本明細書で開示されるプローブのいずれか１つ以上が結合する基質を含む支持体も提供する。固体支持体は、分子（例えば、本明細書で開示されるプローブのいずれか）が会合することができる固相基質または支持体である。固体支持体の形態は、アレイである。固体支持体の別の形態は、アレイ検出器である。アレイ検出器は、複数の異なるプローブがアレイ、グリッド、または他の編制されたパターンでカップリングされた固体支持体である。固体状態の基質のための形態は、マイクロタイターディッシュ（標準的な９６ウェルタイプなど）である。いくつかの実施形態では、通常、ウェルあたり１つのアレイを含有するマルチウェルスライドガラスを用いることができる。
ＩＮＨＢＥ参照ゲノム核酸分子のヌクレオチド配列は、配列番号１（ＧＲＣｈ３８／ｈｇ３８ヒトゲノムアセンブリ中のｃｈｒ１２：５７４５５３０７～５７４５８０２５を包含するＥＮＳＴ０００００２６６６４６．３）に記載されている。
ＩＮＨＢＥ参照ｍＲＮＡ分子のヌクレオチド配列は、配列番号２に記載されている。別のＩＮＨＢＥ参照ｍＲＮＡ分子のヌクレオチド配列は、配列番号３に記載されている。別のＩＮＨＢＥ参照ｍＲＮＡ分子のヌクレオチド配列は、配列番号４に記載されている。
ＩＮＨＢＥ参照ｃＤＮＡ分子のヌクレオチド配列は、配列番号５に記載されている。別のＩＮＨＢＥ参照ｃＤＮＡ分子のヌクレオチド配列は、配列番号６に記載されている。別のＩＮＨＢＥ参照ｃＤＮＡ分子のヌクレオチド配列は、配列番号７に記載されている。
ＩＮＨＢＥ参照ポリペプチドのアミノ酸配列は、配列番号８に記載されている。配列番号８に示されるように、ＩＮＨＢＥ参照ポリペプチドは、３５０アミノ酸の長さである。
ゲノム核酸分子、ｍＲＮＡ分子、及びｃＤＮＡ分子は、任意の生物由来であり得る。例えば、ゲノム核酸分子、ｍＲＮＡ分子、及びｃＤＮＡ分子は、ヒト、または別の生物体、例えば、非ヒト哺乳動物、齧歯動物、マウス、またはラット由来のオーソログであり得る。集団内の遺伝子配列は、多型（一塩基多型など）に起因して変動し得ることは理解されたい。本明細書で提供する例は、例示的な配列に過ぎない。他の配列もまた可能である。
本明細書に開示する単離された核酸分子は、ＲＮＡ、ＤＮＡ、またはＲＮＡ及びＤＮＡの両方を含み得る。単離された核酸分子はまた、ベクター内などで異種核酸配列へ、または異種標識へ連結または融合され得る。例えば、本明細書で開示される単離された核酸分子は、単離された核酸分子及び異種核酸配列を含むベクター内に存在し得るか、または単離された核酸分子及び異種核酸配列を含む外来性ドナー配列として存在し得る。単離された核酸分子はまた、異種標識へ連結または融合され得る。標識は、直接検出可能（例えばフルオロフォアなど）、または間接検出可能（例えばハプテン、酵素、またはフルオロフォアクエンチャーなど）であり得る。そのような標識は、分光学的、光化学的、生化学的、免疫化学的、または化学的な手段によって検出可能であり得る。そのような標識としては、例えば放射性同位体標識、色素、染料、クロモゲン、スピン標識、及び蛍光標識が挙げられる。標識は、例えば化学発光物質；金属含有物質；または酵素（その場合、酵素依存性のシグナルの二次的生成が起こる）でもあり得る。用語「標識」とは、コンジュゲートされた分子を続いて基質と一緒に添加して使用して、検出可能なシグナルを生成するように、コンジュゲートされた分子へ選択的に結合し得る、「タグ」またはハプテンも指し得る。例えば、ビオチンをタグとして使用して、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）のアビジンまたはストレプトアビジンのコンジュゲートと一緒にタグへ結合させ、比色基質（例えば、テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）など）または蛍光発生基質を使用して、ＨＲＰの存在の検出を調査することができる。精製を容易にするタグとして使用され得る例示的な標識としては、ｍｙｃ、ＨＡ、ＦＬＡＧもしくは３×ＦＬＡＧ、６×Ｈｉｓもしくはポリヒスチジン、グルタチオン－Ｓ－トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、マルトース結合タンパク質、エピトープタグ、または免疫グロブリンのＦｃ部分が挙げられるが、これらに限定されない。多数の標識としては、例えば、粒子、フルオロフォア、ハプテン、酵素、ならびにそれらの比色基質、蛍光発生基質、及び化学発光基質、ならびに他の標識が挙げられる。
開示される核酸分子は、例えばヌクレオチド、または非天然ヌクレオチドもしくは修飾ヌクレオチド（ヌクレオチド類似体またはヌクレオチド置換体など）を含み得る。そのようなヌクレオチドには、修飾塩基、糖、もしくはリン酸基、またはその構造に非天然部分が組み込まれたヌクレオチドが含まれる。非天然ヌクレオチドの例としては、ジデオキシヌクレオチド、ビオチン化ヌクレオチド、アミノ化ヌクレオチド、脱アミノ化ヌクレオチド、アルキル化ヌクレオチド、ベンジル化ヌクレオチド、及びフルオロフォア標識されたヌクレオチドが挙げられるが、これらに限定されない。
本明細書で開示される核酸分子は、１つ以上のヌクレオチド類似体または置換体も含み得る。ヌクレオチド類似体は、塩基部分、糖部分、またはリン酸部分のいずれかへの修飾を含有するヌクレオチドである。塩基部分に対する修飾としては、Ａ、Ｃ、Ｇ、及びＴ／Ｕ、ならびに様々なプリン塩基またはピリミジン塩基、例えば、シュードウリジン、ウラシル－５－イル、ヒポキサンチン－９－イル（Ｉ）、及び２－アミノアデニン－９－イルなどの、天然及び合成による修飾が挙げられるが、これらに限定されない。修飾塩基としては、５－メチルシトシン（５－ｍｅ－Ｃ）、５－ヒドロキシメチルシトシン、キサンチン、ヒポキサンチン、２－アミノアデニン、アデニン及びグアニンの６－メチル誘導体及び他のアルキル誘導体、アデニン及びグアニンの２－プロピル誘導体及び他のアルキル誘導体、２－チオウラシル、２－チオチミン及び２－チオシトシン、５－ハロウラシル及びシトシン、５－プロピニルウラシル及びシトシン、６－アゾウラシル、シトシン及びチミン、５－ウラシル（シュードウラシル）、４－チオウラシル、８－ハロ、８－アミノ、８－チオール、８－チオアルキル、８－ヒドロキシル及び他の８－置換アデニン及びグアニン、５－ハロ（例えば、５－ブロモなど）、５－トリフルオロメチル及び他の５－置換ウラシル及びシトシン、７－メチルグアニン、７－メチルアデニン、８－アザグアニン、８－アザアデニン、７－デアザグアニン、７－デアザアデニン、３－デアザグアニン、ならびに３－デアザアデニンが挙げられるが、これらに限定されない。
ヌクレオチド類似体は、糖部分の修飾も含み得る。糖部分への修飾には、リボース及びデオキシリボースの天然修飾、ならびに合成修飾が含まれるが、これらに限定されない。糖修飾には、２’位における以下の修飾：ＯＨ；Ｆ；Ｏ－、Ｓ－、もしくはＮ－アルキル；Ｏ－、Ｓ－、もしくはＮ－アルケニル；Ｏ－、Ｓ－もしくはＮ－アルキニル；またはＯ－アルキル－Ｏ－アルキルが含まれるが、これらに限定されず、その場合、アルキル、アルケニル、及びアルキニルは、置換または非置換のＣ１－１０アルキルもしくはＣ２－１０アルケニル、及びＣ２－１０アルキニルであってもよい。例示的な２’糖修飾としては、－Ｏ［（ＣＨ２）ｎＯ］ｍＣＨ３、－Ｏ（ＣＨ２）ｎＯＣＨ３、－Ｏ（ＣＨ２）ｎＮＨ２、－Ｏ（ＣＨ２）ｎＣＨ３、－Ｏ（ＣＨ２）ｎ－ＯＮＨ２、及び－Ｏ（ＣＨ２）ｎＯＮ［（ＣＨ２）ｎＣＨ３）］２（式中、ｎ及びｍは１～約１０である）が挙げられるが、これらに限定されない。２’位における他の修飾としては、Ｃ１－１０アルキル、置換された低級のアルキル、アルカリール、アラルキル、Ｏ－アルカリールもしくはＯ－アラルキル、ＳＨ、ＳＣＨ３、ＯＣＮ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＮ、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＳＯＣＨ３、ＳＯ２ＣＨ３、ＯＮＯ２、ＮＯ２、Ｎ３、ＮＨ２、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルカリール、アミノアルキルアミノ、ポリアルキルアミノ、置換シリル、ＲＮＡ切断基、レポーター基、インターカレーター、オリゴヌクレオチドの薬物動態学的特性を向上させるための基、またはオリゴヌクレオチドの薬力学的特性を向上させるための基、及び同様の特性を有する他の置換基が挙げられるが、これらに限定されない。類似する修飾が、糖上の他の位置、特に３’末端ヌクレオチド上または２’－５’結合オリゴヌクレオチド中の糖の３’位置、及び５’末端ヌクレオチドの５’位でも行われてよい。修飾糖には、架橋環酸素での修飾（ＣＨ２及びＳなど）を含有する糖も含まれ得る。ヌクレオチド糖類似体は、ペントフラノシル糖の代わりに糖模倣体（シクロブチル部分など）も有し得る。
ヌクレオチド類似体は、リン酸部分でも修飾され得る。修飾ホスフェート部分としては、２つのヌクレオチド間の結合に、ホスホロチオエート、キラルホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホトリエステル、アミノアルキルホスホトリエステル、メチル及びその他のアルキルホスホネート（３’－アルキレンホスホネート及びキラルホスホネートを含む）、ホスフィネート、ホスホルアミダート（３’－アミノホスホルアミダート及びアミノアルキルホスホルアミダートを含む）、チオノホスホルアミダート、チオノアルキルホスホネート、チオノアルキルホスホトリエステル、ならびにボラノホスフェートが含まれるように修飾され得る部分が挙げられるが、これらに限定されない。２つのヌクレオチド間のこれらのリン酸結合または修飾リン酸結合は、３’－５’結合または２’－５’結合を介することができ、結合は、例えば、３’－５’から５’－３’へ、または２’－５’から５’－２’への逆向きの極性を含有し得る。様々な塩、混合塩、及び遊離酸形態も含まれる。ヌクレオチド置換体にはペプチド核酸（ＰＮＡ）も含まれる。
本開示はまた、予測される機能喪失型ＩＮＨＢＥポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアントゲノム核酸分子、予測される機能喪失型ＩＮＨＢＥポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアントｍＲＮＡ分子、または予測される機能喪失型ＩＮＨＢＥポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアントｃＤＮＡ分子を有する対象における代謝障害の治療において使用するための、代謝障害を治療または抑制する治療薬を提供する。
いくつかの実施形態では、代謝障害は２型糖尿病であり、治療薬は、メトホルミン、インスリン、グリブリド、グリピジド、グリメピリド、レパグリニド、ナテグリニド、チアゾリジンジオン、ロシグリタゾン、ピオグリタゾン、シタグリプチン、サクサグリプチン、リナグリプチン、エクセナチド、リラグルチド、セマグルチド、カナグリフロジン、ダパグリフロジン、及びエンパグリフロジンから選択される。
いくつかの実施形態では、代謝障害は肥満であり、治療薬は、オルリスタット、フェンテルミン、トピラマート、ブプロピオン、ナルトレキソン、及びリラグルチドから選択される。
いくつかの実施形態では、代謝障害は高血圧であり、治療薬は、クロルタリドン、クロロチアジド、ヒドロクロロチアジド、インダパミド、メトラゾン、アセブトロール、アテノロール、ベタキソロール、フマル酸ビソプロロール、塩酸カルテオロール、酒石酸メトプロロール、コハク酸メトプロロール、ナドロール、塩酸ベナゼプリル、カプトプリル、マレイン酸エナラプリル、ホシノプリルナトリウム、リシノプリル、モエキシプリル、ペリンドプリル、塩酸キナプリル、ラミプリル、トランドラプリル、カンデサルタン、メシル酸エプロサルタン、イルベサルタン、ロサルタンカリウム、テルミサルタン、バルサルタン、ベシル酸アムロジピン、ベプリジル、塩酸ジルチアゼム、フェロジピン、イスラジピン、ニカルジピン、ニフェジピン、ニソルジピン、塩酸ベラパミル、メシル酸ドキサゾシン、塩酸プラゾシン、塩酸テラゾシン、メチルドパ、カルベジロールラベタロール塩酸塩、αメチルドパ、塩酸クロニジン、酢酸グアナベンズ、塩酸グアンファシン、グアナドレル、グアネチジン一硫酸塩、レセルピン、塩酸ヒドララジン、及びミノキシジルから選択される。
いくつかの実施形態では、代謝障害はトリグリセリドの上昇であり、治療薬は、ロスバスタチン、シンバスタチン、アトルバスタチン、フェノフィブラート、ゲムフィブロジル、フェノフィブリン酸、ナイアシン、及びω３脂肪酸から選択される。
いくつかの実施形態では、代謝障害は脂肪異栄養症であり、治療薬は、ＥＧＲＩＦＴＡ（登録商標）（テサモレリン）、ＧＬＵＣＯＰＨＡＧＥ（登録商標）（メトホルミン）、ＳＣＵＬＰＴＲＡ（登録商標）（ポリ－Ｌ－乳酸）、ＲＡＤＩＥＳＳＥ（登録商標）（カルシウムヒドロキシアパタイト）、ポリメチルメタクリレート（例えば、ＰＭＭＡ）、ＺＹＤＥＲＭ（商標）（ウシコラーゲン）、ＣＯＳＭＯＤＥＲＭ（登録商標）（ヒトコラーゲン）、シリコーン、及びヒアルロン酸から選択される。いくつかの実施形態では、脂肪異栄養症を治療または抑制する治療薬として、テサモレリン、メトホルミン、ポリ－Ｌ－乳酸、カルシウムヒドロキシアパタイト、ポリメチルメタクリレート、ウシコラーゲン、ヒトコラーゲン、シリコーン、及びヒアルロン酸が挙げられるが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態では、代謝障害は肝臓の炎症であり、治療薬は、肝炎治療薬及び肝炎ワクチンから選択される。
いくつかの実施形態では、代謝障害は脂肪肝疾患であり、治療薬または処置は、肥満手術及び／または食事介入である。
いくつかの実施形態では、代謝障害は高コレステロール血症であり、治療薬は、スタチン系薬剤（例えば、ＬＩＰＩＴＯＲ（登録商標）（アトルバスタチン）、ＬＥＳＣＯＬ（商標）（フルバスタチン）、ロバスタチン、ＬＩＶＡＬＯ（登録商標）（ピタバスタチン）、ＰＲＡＶＡＣＨＯＬ（商標）（プラバスタチン）、ＣＲＥＳＴＯＲ（登録商標）（ロスバスタチンカルシウム）、及びＺＯＣＯＲ（商標）（シンバスタチン））、胆汁酸封鎖剤（例えば、ＰＲＥＶＡＬＩＴＥ（商標）（コレスチラミン）、ＷＥＬＣＨＯＬ（商標）（コレセベラム）、及びＣＯＬＥＳＴＩＤ（商標）（コレスチポール））、ＰＣＳＫ９阻害剤（例えば、ＰＲＡＬＵＥＮＴ（登録商標）（アリロクマブ）及びＲＥＰＡＴＨＡ（登録商標）（エボロクマブ）、ナイアシン（例えば、ｎｉａｓｐａｎ及びｎｉａｃｏｒ）、フィブラート系薬剤（例えば、フェノフィブラート及びＬＯＰＩＤ（商標）（ゲムフィブロジル））、ならびにＡＴＰクエン酸リアーゼ（ＡＣＬ）阻害剤（例えば、ＮＥＸＬＥＴＯＬ（登録商標）（ベンペド酸））から選択される。いくつかの実施形態では、高コレステロール血症を治療または抑制する治療薬としては、スタチン系薬剤（例えば、アトルバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、ピタバスタチン、プラバスタチン、ロスバスタチンカルシウム、及びシンバスタチン）、胆汁酸封鎖剤（例えば、コレスチラミン、コレセベラム、及びコレスチポール）、ＰＣＳＫ９阻害剤（例えば、アリロクマブ及びエボロクマブ、ナイアシン（例えば、ｎｉａｓｐａｎ及びｎｉａｃｏｒ）、フィブラート系薬剤（例えば、フェノフィブラート及びゲムフィブロジル）、ならびにＡＣＬ阻害剤（例えば、ベンペド酸）が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、高コレステロール血症を治療または抑制する治療薬は、アリロクマブまたはエボロクマブである。いくつかの実施形態では、高コレステロール血症を治療または抑制する治療薬は、アリロクマブである。いくつかの実施形態では、高コレステロール血症を治療または抑制する治療薬は、エボロクマブである。
いくつかの実施形態では、代謝障害は、肝酵素（例えば、ＡＬＴ及び／またはＡＳＴなど）の上昇であり、治療薬は、コーヒー、葉酸、カリウム、ビタミンＢ６、スタチン、及び繊維、またはそれらの任意の組み合わせから選択される。
いくつかの実施形態では、代謝障害はＮＡＳＨであり、治療薬は、オベチコール酸、セロンセルチブ、エラフィブラノール、セニクリビロック、ＧＲ＿ＭＤ＿０２、ＭＧＬ＿３１９６、ＩＭＭ１２４Ｅ、アラキジルアミドコラン酸、ＧＳ０９７６、エムリカサン、ボリキシバット、ＮＧＭ２８２、ＧＳ９６７４、トロピフェクサー、ＭＮ＿００１、ＬＭＢ７６３、ＢＩ＿１４６７３３５、ＭＳＤＣ＿０６０２、ＰＦ＿０５２２１３０４、ＤＦ１０２、サログリタザル、ＢＭＳ９８６０３６、ラニフィブラノール、セマグルチド、ニタゾキサニド、ＧＲＩ＿０６２１、ＥＹＰ００１、ＶＫ２８０９、ナルメフェン、ＬＩＫ０６６、ＭＴ＿３９９５、エロビキシバット、ナモデノソン、フォラルマブ、ＳＡＲ４２５８９９、ソタグリフロジン、ＥＤＰ＿３０５、イコサブテート、ゲムカベン、ＴＥＲＮ＿１０１、ＫＢＰ＿０４２、ＰＦ＿０６８６５５７１、ＤＵＲ９２８、ＰＦ＿０６８３５９１９、ＮＧＭ３１３、ＢＭＳ＿９８６１７１、ナマシズマブ、ＣＥＲ＿２０９、ＮＤ＿Ｌ０２＿ｓ０２０１、ＲＴＵ＿１０９６、ＤＲＸ＿０６５、ＩＯＮＩＳ＿ＤＧＡＴ２Ｒｘ、ＩＮＴ＿７６７、ＮＣ＿００１、セラデルパル、ＰＸＬ７７０、ＴＥＲＮ＿２０１、ＮＶ５５６、ＡＺＤ２６９３、ＳＰ＿１３７３、ＶＫ０２１４、ヘパステム、ＴＧＦＴＸ４、ＲＬＢＮ１１２７、ＧＫＴ＿１３７８３１、ＲＹＩ＿０１８、ＣＢ４２０９－ＣＢ４２１１、及びＪＨ＿０９２０である。
いくつかの実施形態では、代謝障害を治療または抑制する治療薬は、メラノコルチン４受容体（ＭＣ４Ｒ）作動薬である。いくつかの実施形態では、ＭＣ４Ｒ作動薬は、タンパク質、ペプチド、核酸分子、または小分子を含む。いくつかの実施形態では、タンパク質は、ＭＣ４Ｒのペプチド類似体である。いくつかの実施形態では、ペプチドはセトメラノチドである。いくつかの実施形態では、ＭＣ４Ｒ作動薬は、アミノ酸配列Ｈｉｓ－Ｐｈｅ－Ａｒｇ－Ｔｒｐを含むペプチドである。いくつかの実施形態では、小分子は、１，２，３Ｒ，４－テトラヒドロイソキノリン－３－カルボン酸である。いくつかの実施形態では、ＭＣ４Ｒ作動薬はＡＬＢ－１２７１５８（ａ）である。
本開示はまた、予測される機能喪失型ＩＮＨＢＥポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアントゲノム核酸分子、予測される機能喪失型ＩＮＨＢＥポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアントｍＲＮＡ分子、または予測される機能喪失型ＩＮＨＢＥポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアントｃＤＮＡ分子を有する対象における心血管疾患の治療において使用するための、心血管疾患を治療または抑制する治療薬を提供する。
いくつかの実施形態では、心血管疾患は高血圧であり、治療薬は、クロルタリドン、クロロチアジド、ヒドロクロロチアジド、インダパミド、メトラゾン、アセブトロール、アテノロール、ベタキソロール、フマル酸ビソプロロール、塩酸カルテオロール、酒石酸メトプロロール、コハク酸メトプロロール、ナドロール、塩酸ベナゼプリル、カプトプリル、マレイン酸エナラプリル、ホシノプリルナトリウム、リシノプリル、モエキシプリル、ペリンドプリル、塩酸キナプリル、ラミプリル、トランドラプリル、カンデサルタン、メシル酸エプロサルタン、イルベサルタン、ロサルタンカリウム、テルミサルタン、バルサルタン、ベシル酸アムロジピン、ベプリジル、塩酸ジルチアゼム、フェロジピン、イスラジピン、ニカルジピン、ニフェジピン、ニソルジピン、塩酸ベラパミル、メシル酸ドキサゾシン、塩酸プラゾシン、塩酸テラゾシン、メチルドパ、カルベジロールラベタロール塩酸塩、αメチルドパ、塩酸クロニジン、酢酸グアナベンズ、塩酸グアンファシン、グアナドレル、グアネチジン一硫酸塩、レセルピン、塩酸ヒドララジン、及びミノキシジルから選択される。
いくつかの実施形態では、心血管疾患は心筋症であり、治療薬は、１）ＡＣＥ阻害剤、アンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬、β遮断薬、及びカルシウムチャネル遮断薬などの血圧降下剤、２）β遮断薬、カルシウムチャネル遮断薬、及びジゴキシンなどの心拍数を遅くする薬剤、３）抗不整脈薬などの心臓の鼓動を正常なリズムに保つ薬剤、４）アルドステロン遮断薬などの電解質のバランスをとる薬剤、５）利尿薬などの体から余分な水分とナトリウムを除去する薬剤、６）抗凝固剤や血液希釈剤などの血栓の形成を防ぐ薬剤、ならびに７）コルチコステロイドなどの炎症を軽減する薬剤から選択される。
いくつかの実施形態では、心血管疾患は心不全であり、治療薬は、ＡＣＥ阻害薬、アンギオテンシン－２受容体遮断薬、β遮断薬、ミネラルコルチコイド受容体拮抗薬、利尿薬、イバブラジン、サクビトリルバルサルタン、硝酸塩を含むヒドララジン、及びジゴキシンから選択される。
本開示はまた、予測される機能喪失型ＩＮＨＢＥポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアントゲノム核酸分子、予測される機能喪失型ＩＮＨＢＥポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアントｍＲＮＡ分子、または予測される機能喪失型ＩＮＨＢＥポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアントｃＤＮＡ分子を有する対象における代謝障害の治療において使用するための、代謝障害を治療または抑制するＩＮＨＢＥ阻害剤を提供する。
本開示はまた、予測される機能喪失型ＩＮＨＢＥポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアントゲノム核酸分子、予測される機能喪失型ＩＮＨＢＥポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアントｍＲＮＡ分子、または予測される機能喪失型ＩＮＨＢＥポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアントｃＤＮＡ分子を有する対象における心血管疾患の治療において使用するための、心血管疾患を治療または抑制するＩＮＨＢＥ阻害剤を提供する。
いくつかの実施形態では、ＩＮＨＢＥ阻害剤は、ＩＮＨＢＥ ｍＲＮＡとハイブリダイズする、アンチセンス核酸分子、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、またはショートヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）を含む。いくつかの実施形態では、ＩＮＨＢＥ阻害剤は、Ｃａｓタンパク質及びＩＮＨＢＥゲノム核酸分子内のｇＲＮＡ認識配列へハイブリダイズするガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）を含む。いくつかの実施形態では、Ｃａｓタンパク質は、Ｃａｓ９またはＣｐｆ１である。いくつかの実施形態では、ｇＲＮＡ認識配列は、配列番号１内に位置する。いくつかの実施形態では、プロトスペーサー隣接モチーフ（ＰＡＭ）配列は、ｇＲＮＡ認識配列の約２～６ヌクレオチド下流にある。いくつかの実施形態では、ｇＲＮＡは、約１７～約２３ヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、ｇＲＮＡ認識配列は、配列番号９～２７のいずれか１つに記載のヌクレオチド配列を含む。
上記または下記で引用されている特許文献、ウェブサイト、他の刊行物、登録番号などはいずれも、個々の項目が参照により援用されるように具体的かつ個別に示されているのと同じ程度に、あらゆる目的のためにその全体が参照により援用される。異なるバージョンの配列が、異なる時点での登録番号と関連している場合、本出願の有効出願日での登録番号と関連したバージョンが意図される。有効出願日とは、実際の出願日、または、該当する場合、その登録番号を参照する優先権出願の出願日のうちの早いほうを意味する。同様に、刊行物、ウェブサイトなどの異なるバージョンが異なる時点で出版される場合、別段の指示がない限り、本出願の有効出願日での最新の出版バージョンが意図される。本開示の任意の特色、ステップ、要素、実施形態、または態様は、別段の具体的な指示がない限り、他の特色、ステップ、要素、実施形態、または態様と組み合わせて使用され得る。明瞭性及び理解を目的として、本開示を、例証及び実施例によってある程度詳細に記載してきたが、特定の変化及び修正を、添付の特許請求の範囲内で実践し得ることは明らかであろう。
以下の実施例は、実施形態をより詳細に記載するために提供される。これらは、請求される実施形態を例証することを意図しており、限定することを意図しない。以下の実施例は、本明細書に記載する化合物、組成物、物品、装置及び／または方法を、どのように作製及び評価するかについての開示及び記載を当業者に提供するものであり、純粋に例示的であることが意図され、任意の特許請求の範囲を限定することは意図されない。数値（例えば量、温度など）に関して正確性を確実にする取り組みがなされているが、ある程度の誤差及び偏差が考慮され得る。別段の指示がない限り、部は重量部であり、温度は℃であるかまたは周囲温度であり、圧力は大気圧または大気圧の近傍である。
実施例１：ＩＮＨＢＥの機能喪失は、ヒトにおけるより好ましい脂肪分布及び２型糖尿病に対する保護と関連する
肥満度指数で調整されたウエスト・ヒップ比（ＢＭＩ調整済みＷＨＲ）によって測定された、脂肪分布についてのエクソーム全体の関連分析を実施した。ＢＭＩ調整済みＷＨＲは、全体的な肥満とは無関係の体脂肪分布の尺度である。ゲノム内の各遺伝子について、まれな予測される機能喪失遺伝的バリアント（代替対立遺伝子頻度［ＡＡＦ］＜１％のｐＬＯＦバリアント）の変異量に対するＢＭＩ調整済みＷＨＲとの関連性を推定した。この分析では、ＩＮＨＢＥにおけるまれな（ＡＡＦ＜１％）予測される機能喪失型（ｐＬＯＦ）バリアントの変異量は、エクソーム全体レベルの統計的有意性（ｐ＜３．６×１０－７、試験数についてのボンフェローニ補正に対応する）で、より好ましい脂肪分布（すなわち、より低いＢＭＩ調整済みＷＨＲ、図１及び図２を参照のこと）と関連していた。表６は、ＵＫＢコホートの２８５，６０５人のヨーロッパ系参加者におけるＩＮＨＢＥのｐＬＯＦバリアントの脂肪分布との関連の結果を示している（ＢＭＩ調整済みＷＨＲとの関連性；遺伝的曝露は、ＡＡＦ＜１％のｐＬＯＦバリアントの変異量である）。ＩＮＨＢＥ ｐＬＯＦは、ＢＭＩ調整済みＷＨＲの低下と強く関連していた（表６を参照のこと）。この統計的に有意な関連性は、ＵＫＢデータの第２のトランシュ（１４０，０００人を超えるヨーロッパ系の参加者）及びＭＣＰＳ研究からの９５，０００人を超える混血のアメリカ人参加者を含む追加データのメタ解析においてさらに再現された（図１を参照のこと）。
略語：ＵＫＢ＝ＵＫ ｂｉｏｂａｎｋ対象母集団、ＡＡＦ＝遺伝子内のｐＬＯＦバリアント全体のｐＬＯＦ対立遺伝子の頻度、ＲＲ＝遺伝子内にｐＬＯＦバリアントのヘテロ接合性またはホモ接合性が観察されない個体のカウント数、ＲＡ＝遺伝子内に少なくとも１つのヘテロ接合性ｐＬＯＦを有し、ホモ接合性ｐＬＯＦバリアントを有しない個体のカウント数、ＡＡ＝遺伝子内に少なくとも１つのホモ接合性ｐＬＯＦバリアントを有する個体のカウント数、ＣＩ＝信頼区間、ｐＬＯＦ＝予測される機能喪失、ＳＤ＝標準偏差。
表６は、ＵＫ Ｂｉｏｂａｎｋ対象母集団のヨーロッパ系個体におけるＩＮＨＢＥ ｐＬＯＦとＢＭＩ調整済みＷＨＲとの関連性を示している。ＩＮＨＢＥ ｐＬＯＦバリアントの影響を、標準偏差（ＳＤ）単位及びＷＨＲの比率単位で推定した。表６は、共変量、祖先、及び関連性について調整した分析において、ＩＮＨＢＥ ｐＬＯＦ保因者は、これらの遺伝的変異を保有していない個体の平均と比較して、ＢＭＩ調整済みＷＨＲが低いことを示している。遺伝子型のカウント数は、ＩＮＨＢＥのｐＬＯＦをもたらすバリアントを保有していない（ＲＲ）か、単一のＩＮＨＢＥ対立遺伝子のｐＬＯＦをもたらす１つ以上のバリアントを保有している（ＲＡ）か、または両方のＩＮＨＢＥ対立遺伝子に１つ以上のｐＬＯＦバリアントを保有している（ＡＡ）集団の研究における個体数を示している。
より低いＢＭＩ調整済みＷＨＲとのＩＮＨＢＥ ｐＬＯＦバリアントのこの関連性は、ＵＫ Ｂｉｏｂａｎｋコホートの男性と女性で一貫していた（表７を参照のこと。遺伝的曝露は、ＡＡＦ＜１％のｐＬＯＦバリアントの変異量である）。
略語：ＵＫＢ＝ＵＫ ｂｉｏｂａｎｋ対象母集団、ＡＡＦ＝遺伝子内のｐＬＯＦバリアント全体のｐＬＯＦ対立遺伝子の頻度、ＲＲ＝遺伝子内にｐＬＯＦバリアントのヘテロ接合性またはホモ接合性が観察されない個体のカウント数、ＲＡ＝遺伝子内に少なくとも１つのヘテロ接合性ｐＬＯＦを有し、ホモ接合性ｐＬＯＦバリアントを有しない個体のカウント数、ＡＡ＝遺伝子内に少なくとも１つのホモ接合性ｐＬＯＦバリアントを有する個体のカウント数、ＣＩ＝信頼区間、ｐＬＯＦ＝予測される機能喪失、ＳＤ＝標準偏差。
表７は、性別によって層別化されたＵＫ Ｂｉｏｂａｎｋ研究由来のヨーロッパ系個体におけるＩＮＨＢＥ ｐＬＯＦとＢＭＩ調整済みＷＨＲとの関連性を示している。ＩＮＨＢＥ ｐＬＯＦバリアントの影響を、標準偏差（ＳＤ）単位及びＷＨＲの比率単位で推定した。遺伝子型のカウント数は、ＩＮＨＢＥのｐＬＯＦをもたらすバリアントを保有していない（ＲＲ）か、単一のＩＮＨＢＥ対立遺伝子のｐＬＯＦをもたらす１つ以上のバリアントを保有している（ＲＡ）か、または両方のＩＮＨＢＥ対立遺伝子に１つ以上のｐＬＯＦバリアントを保有している（ＡＡ）集団の研究における個体数を示している。ＩＮＨＢＥ ｐＬＯＦバリアントと低いＢＭＩ調整済みＷＨＲとの関連性は、この分析に含まれる男性と女性で同様に強かった。
ＩＮＨＢＥのｐＬＯＦバリアントの中で、ＢＭＩ調整済みＷＨＲと最も強い関連性を有するバリアントは、ｃ．２９９－１Ｇ＞Ｃ（ＧＲＣｈ３８／ｈｇ３８ヒトゲノムアセンブリ座標で１２：５７４５６０９３：Ｇ：Ｃ）変異であり、この変異は、イントロン１アクセプタースプライス部位に影響を及ぼし、エクソン２を５’末端で１２ヌクレオチド短縮させ（図３及び表８を参照のこと）、ＩＮＨＢＥタンパク質のプロドメイン内のインフレーム欠失をもたらす（図４を参照のこと）と予測される。
デルタスコア：０～１の値であり、ＩＮＨＢＥ遺伝子に対するスプライシング変化効果を有するバリアントの確率として解釈される。
表８は、ＩＮＨＢＥ遺伝子のスプライシングに対するバリアント１２：５７４５６０９３：Ｇ：Ｃの予測される影響を示している。
チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞では、ｃ．２９９－１Ｇ＞Ｃスプライスバリアントが発現し、機能喪失を示す細胞外に分泌されない低分子量タンパク質が生じることが判明した（図５を参照のこと）。
ＩＮＨＢＥのｐＬＯＦバリアントは、より大きなヒップ回り、腕及び脚でのより高い脂肪量と関連しており、末梢脂肪組織にカロリーを蓄える能力が高いことを示唆している（図６及び表９を参照のこと）。
略語：ＵＫＢ＝ＵＫ ｂｉｏｂａｎｋ対象母集団、ＧＨＳ＝Ｇｅｉｓｉｎｇｅｒ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｙｓｔｅｍ対象母集団、ＭＣＰＳ＝Ｍｅｘｉｃｏ Ｃｉｔｙ Ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ対象母集団、ＡＡＦ＝遺伝子内のｐＬＯＦバリアント全体のｐＬＯＦ対立遺伝子の頻度、ＲＲ＝遺伝子内にｐＬＯＦバリアントのヘテロ接合性またはホモ接合性が観察されない個体のカウント数、ＲＡ＝遺伝子内に少なくとも１つのヘテロ接合性ｐＬＯＦを有し、ホモ接合性ｐＬＯＦバリアントを有しない個体のカウント数、ＡＡ＝遺伝子内に少なくとも１つのホモ接合性ｐＬＯＦバリアントを有する個体のカウント数、ＣＩ＝信頼区間、ｐＬＯＦ＝予測される機能喪失、ＳＤ＝標準偏差、ｋｇ／ｍ２＝キログラム／メートル２乗、ｃｍ＝センチメートル。遺伝子型のカウント数は、ＩＮＨＢＥのｐＬＯＦをもたらすバリアントを保有していない（ＲＲ）か、単一のＩＮＨＢＥ対立遺伝子のｐＬＯＦをもたらす１つ以上のバリアントを保有している（ＲＡ）か、または両方のＩＮＨＢＥ対立遺伝子に１つ以上のｐＬＯＦバリアントを保有している（ＡＡ）集団の研究における個体数を示している。
表９は、ＩＮＨＢＥ ｐＬＯＦとＢＭＩ、ウエスト回り、及びヒップ回りとの関連性を示している。ＩＮＨＢＥ ｐＬＯＦの効果を、標準偏差の単位、または各人体測定変数のそれぞれの臨床単位で定量化する。
ＩＮＨＢＥのまれなｐＬＯＦバリアントは、ヒトの２型糖尿病に対する保護にも関連していた。また、ＩＮＨＢＥ ｐＬＯＦバリアントが２型糖尿病（Ｔ２Ｄ）のリスク低下と関連しており、ＩＮＨＢＥにおけるＬＯＦとヒトの２型糖尿病とを関連付ける最初のエビデンスが構成されたことも判明した（表１０を参照のこと。遺伝的曝露は、ＡＡＦ＜１％のｐＬＯＦバリアントの変異量である）。
略語：メタ解析＝列挙したすべての対象母集団の共同解析、ＡＡＦ＝遺伝子内のｐＬＯＦバリアント全体のｐＬＯＦ対立遺伝子の頻度、ＲＲ＝遺伝子内にｐＬＯＦバリアントのヘテロ接合性またはホモ接合性が観察されない個体のカウント数、ＲＡ＝遺伝子内に少なくとも１つのヘテロ接合性ｐＬＯＦを有し、ホモ接合性ｐＬＯＦバリアントを有しない個体のカウント数、ＡＡ＝遺伝子内に少なくとも１つのホモ接合性ｐＬＯＦバリアントを有する個体のカウント数、ＣＩ＝信頼区間、ｐＬＯＦ＝予測される機能喪失、ＳＤ＝標準偏差。遺伝子型のカウント数は、ＩＮＨＢＥのｐＬＯＦをもたらすバリアントを保有していない（ＲＲ）か、単一のＩＮＨＢＥ対立遺伝子のｐＬＯＦをもたらす１つ以上のバリアントを保有している（ＲＡ）か、または両方のＩＮＨＢＥ対立遺伝子に１つ以上のｐＬＯＦバリアントを保有している（ＡＡ）、Ｔ２Ｄの症例であるかまたはＴ２Ｄカテゴリーではないいずれかの集団の研究における個体数を示している。
表１０は、ＵＫ Ｂｉｏｂａｎｋ（ＵＫＢ）、Ｇｅｉｓｉｎｇｅｒ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｙｓｔｅｍ（ＧＨＳ）、及びＭｅｘｉｃｏ Ｃｉｔｙ Ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ対象（ＭＣＰＳ）母集団の分析に由来する、ＩＮＨＢＥにおけるｐＬＯＦバリアントとＴ２Ｄとの関連性を示している。結果は、各対象母集団内で、ＩＮＨＢＥ ｐＬＯＦバリアントがＴ２Ｄのリスク低下と関連していたことを示しており、これは３つの対象母集団すべての結果を組み合わせたメタ解析で確認された。
さらに、ＩＮＨＢＥ ｐＬＯＦバリアントは、複数のコホートにわたる解析で、低いＨｂＡ１ｃ、ＡＬＴ、トリグリセリド、及びＬＤＬ－Ｃ、ならびに高いＨＤＬ－Ｃを含む、好ましい代謝特性と関連していた（表１１を参照のこと。遺伝的曝露は、ＡＡＦ＜１％のＩＮＨＢＥ ｐＬＯＦバリアントの変異量である）。
略語：ＵＫＢ＝ＵＫ ｂｉｏｂａｎｋ対象母集団、ＧＨＳ＝Ｇｅｉｓｉｎｇｅｒ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｙｓｔｅｍ対象母集団、ＭＣＰＳ＝Ｍｅｘｉｃｏ Ｃｉｔｙ Ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ研究、ＡＡＦ＝遺伝子内のｐＬＯＦバリアント全体のｐＬＯＦ対立遺伝子の頻度、ＲＲ＝遺伝子内にｐＬＯＦバリアントのヘテロ接合性またはホモ接合性が観察されない個体のカウント数、ＲＡ＝遺伝子内に少なくとも１つのヘテロ接合性ｐＬＯＦを有し、ホモ接合性ｐＬＯＦバリアントを有しない個体のカウント数、ＡＡ＝遺伝子内に少なくとも１つのホモ接合性ｐＬＯＦバリアントを有する個体のカウント数、ＣＩ＝信頼区間、ｐＬＯＦ＝予測される機能喪失、ＳＤ＝標準偏差、ｍｇ／ｄＬ＝ミリグラム／デシリットル、Ｕ／Ｌ＝ユニット／リットル。遺伝子型のカウント数は、ＩＮＨＢＥのｐＬＯＦをもたらすバリアントを保有していない（ＲＲ）か、単一のＩＮＨＢＥ対立遺伝子のｐＬＯＦをもたらす１つ以上のバリアントを保有している（ＲＡ）か、または両方のＩＮＨＢＥ対立遺伝子に１つ以上のｐＬＯＦバリアントを保有している（ＡＡ）集団の研究における個体数を示している。
表１１は、ＵＫＢ、ＧＨＳ、及びＭＣＰＳ対象母集団のメタ解析で推定された、ＩＮＨＢＥ ｐＬＯＦバリアントと一連の代謝表現型との関連性を示している。結果を、標準偏差の単位、及び関連する代謝表現型の元の臨床単位の両方で示す。
さらに、ＩＮＨＢＥ ｐＬＯＦバリアントは、磁気共鳴画像法での肝臓の炎症指数の低下と関連していた（表１２を参照のこと。遺伝的曝露は、ＡＡＦ＜１％のＩＮＨＢＥ ｐＬＯＦバリアントの変異量である）。
略語：ＰＤＦＦ＝プロトン密度脂肪分率（脂肪（トリグリセリド）からの可動プロトンの密度と、可動トリグリセリド及び可動水からのプロトンの総密度の比として定義され、組織内の脂肪の濃度を反映する）、ＥＣＦ＝細胞外液、Ｔ１＝縦磁化の回復の時定数。これは、正味の磁化が基底状態に回復する速さを測定する緩和時間である。これは、磁場の強さと組織の組成によって大きく異なる。さらに、それは磁場の増加とともに増加し、一方、組織内の脂肪及び／または鉄の存在と共に減少する。ｃＴ１＝Ｔ１値が過小評価される肝臓の鉄含有量の影響について補正されたＴ１、ＵＫＢ＝ＵＫ ｂｉｏｂａｎｋ対象母集団、ＡＡＦ＝遺伝子内のｐＬＯＦバリアント全体のｐＬＯＦ対立遺伝子の頻度、ＲＲ＝遺伝子内にｐＬＯＦバリアントのヘテロ接合性またはホモ接合性が観察されない個体のカウント数、ＲＡ＝遺伝子内に少なくとも１つのヘテロ接合性ｐＬＯＦを有し、ホモ接合性ｐＬＯＦバリアントを有しない個体のカウント数、ＡＡ＝遺伝子内に少なくとも１つのホモ接合性ｐＬＯＦバリアントを有する個体のカウント数、ＣＩ＝信頼区間、ｐＬＯＦ＝予測される機能喪失、ＳＤ＝標準偏差。
表１２は、ＵＫ Ｂｉｏｂａｎｋ対象母集団由来のヨーロッパ系個体におけるＩＮＨＢＥ ｐＬＯＦバリアントと、ある範囲の肝臓画像表現型との関連性を示している。結果は、ＩＮＨＢＥ ｐＬＯＦバリアントが、磁気共鳴画像法によって定義されるように、肝臓の炎症の尺度であるＥＣＦ及びｃＴ１のレベルが低いことに関連していることを示している。
ＩＮＨＢＥ ｐＬＯＦバリアントが、エクソーム配列決定と周術期の肝臓の楔状生検を受けたＧＨＳコホートの３，５６５人の肥満手術患者の肝臓の組織病理学的表現型と関連しているかどうかをさらに調査した。そのセットのＩＮＨＢＥにはｐＬＯＦバリアントの保因者は３人しか存在していなかったが、保因者の状態は、脂肪変性症、小葉内炎症、及び風船様腫大を合計した、生検時の肝疾患の重症度の尺度（Ｋｌｅｉｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ，２００５，４１，１３１３－２１）である非アルコール性脂肪肝疾患の活動性スコアの低下と関連していた（表１３を参照のこと）。
ＩＮＨＢＥにおけるまれなｐＬＯＦバリアントとＮＡＦＬＤ活動スコア（転帰）との関連性が報告された。この関連性を、ＧＨＳの３，５６５人の肥満手術患者で推定した。
最後に、ＩＮＨＢＥ（１２：５７２５９７９９：Ａ：Ｃ；ｒｓ７９６６８４６；ＡＡＦ，０．２８）に近い一般的なバリアントは、ＩＮＨＢＥ ｍＲＮＡのより高い肝臓発現レベルと関連していることがわかった（対立遺伝子あたりのβ、肥満手術の一環として肝生検を受けたＧＨＳの２，０００人以上の参加者において、ＲＮＡＳｅｑによって定量化したＩＮＨＢＥ転写量で０．３ＳＤ）。また、１２：５７２５９７９９：Ａ：Ｃバリアントは、ＢＭＩ調整済みＷＨＲ、トリグリセリド、及び２型糖尿病のリスクが高いことと関連していることもわかった。対立遺伝子Ｃを上昇させる発現は、高いＢＭＩ調整済みＷＨＲ（ｐ値＝１．５×１０－４）、高いトリグリセリド（ｐ値＝２．０×１０－１１）、高いＴ２Ｄリスク（ｐ値＝０．０３）と関連していた（表１４を参照のこと）。これは、遺伝的に決定されたＩＮＨＢＥの過剰発現が代謝性疾患のリスクの上昇と関連しており、一方、機能の喪失は、好ましい代謝特性と糖尿病のリスクの低下に関連していることを示している（上記のｐＬＯＦバリアントの関連性から）。
略語：ＡＡＦ＝ＩＮＨＢＥ肝臓発現を上昇させる対立遺伝子（すなわち、代替対立遺伝子）の対立遺伝子頻度、ＣＩ＝信頼区間、ＳＤ＝標準偏差、ＲＲ＝参照－参照対立遺伝子、ＲＡ＝参照－代替対立遺伝子、ＡＡ＝代替－代替対立遺伝子、ｍｇ／ｄＬ＝ミリグラム／デシリットル。遺伝子型カウント数は、ＩＮＨＢＥ肝臓発現を上昇させる対立遺伝子のコピーを有しない（ＲＲ）、ＩＮＨＢＥ肝臓発現を上昇させる対立遺伝子のコピーを１つだけ有する（ＲＡ）、及びＩＮＨＢＥ肝臓発現を上昇させる対立遺伝子のコピーを２つ有する（ＡＡ）、集団研究における個体の数を示す。遺伝子型のカウント数は、対象母集団においてＴ２Ｄ症例として分類された個体内でさらに階層化される。
１２：５７２５９７９９：Ａ：Ｃとトリグリセリドレベル、ＷＨＲａｄｊＢＭＩ、及びＴ２Ｄリスクとの関連性を、ＵＫ Ｂｉｏｂａｎｋ及びＧｅｉｓｉｎｇｅｒ Ｈｅａｌｔｈ研究のすべてのヨーロッパ系参加者において試験した。結果は、１２：５７２５９７９９：Ａ：Ｃが、高いトリグリセリドレベル及び高いＢＭＩ調整済みＷＨＲと有意に関連していたことを示しており、さらに、Ｔ２Ｄリスクが高いことと関連していた。
実施例２：ＩＮＨＢＥはヒト肝臓細胞で高度に発現し、その発現は脂肪症及び非アルコール性脂肪性肝炎の患者でアップレギュレートされた
Ｇｅｎｏｔｙｐｅ Ｔｉｓｓｕｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｃｏｎｓｏｒｔｉｕｍ（ＧＴＥｘ）由来のヒトの組織全体でのＩＮＨＢＥのｍＲＮＡ発現を調べたところ、ＩＮＨＢＥは、ＧＴＥｘ組織の中でも肝臓において最も高度に発現していることがわかった（図７を参照のこと）。細胞型間のＩＮＨＢＥのｍＲＮＡ発現を、Ｈｕｍａｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａｔｌａｓ（ＨＰＡ）のデータでも調べたところ、肝臓細胞においてＩＮＨＢＥが最も高度に発現していることがわかった（図７を参照のこと）。肝臓ＲＮＡＳｅｑを受けたＧＨＳの２，０００人を超える肥満手術患者の肝臓におけるＩＮＨＢＥの発現レベルも推定した。ＩＮＨＢＥ発現は、正常な肝臓を有する個体と比較して肝臓の脂肪症を有する患者において、正常な肝臓を有する個体と比較して非アルコール性脂肪性肝炎を有する患者において、及び脂肪症を有する患者と比較して非アルコール性脂肪性肝炎を有する患者において、アップレギュレートされることが見出された（図８を参照のこと）。
実施例３：ＢＭＩ調整済みＷＨＲ探索分析において識別されるＩＮＨＢＥと、ＭＲＩによって測定される内臓脂肪対殿大腿脂肪比との関連性
Ｓｉｅｍｅｎｓ ＭＡＧＮＥＴＯＭ Ａｅｒａ １．５Ｔ臨床ＭＲＩ診断装置（Ｌｉｔｔｌｅｊｏｈｎｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｃｏｍｍｕｎ．，２０２０，１１，２６２４）を使用した２－ｐｏｉｎｔ Ｄｉｘｏｎ法（Ｄｉｘｏｎ，Ｒａｄｉｏｌｏｇｙ，１９８４，１５３，１８９－１９４）のＭＲＩを受けたＵＫＢの約４６，０００人の参加者のサブセットを、６つの異なる画像化シリーズに分割する。このサブセットには、利用可能なエクソーム配列決定結果を有する３８，８８０人が含まれていた。以前に実行されたもの（Ｂａｓｔｙ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍａｇｅ Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ ａｎｄ Ｑｕａｌｉｔｙ Ｃｏｎｔｒｏｌ ｆｏｒ Ａｂｄｏｍｉｎａｌ Ｍａｇｎｅｔｉｃ Ｒｅｓｏｎａｎｃｅ Ｉｍａｇｉｎｇ ｉｎ ｔｈｅ ＵＫ Ｂｉｏｂａｎｋ，２０２０，ＡｒＸｉｖ ａｂｓ／２００７．０１２５１）と同様に、重複切片、部分スキャン、繰り返しスキャン、脂肪－水スワップ、画像化シリーズ間のミスアラインメント、バイアスフィールド、人工的に暗い切片及び局所的ホットスポットに対して修正された６つの異なるスキャン位置のスティッチング。合計５２人の対象に対し、全身のＤｉｘｏｎ ＭＲＩで、上半身脂肪、腹部脂肪、内臓脂肪、縦隔脂肪、殿大腿脂肪、及び下腿脂肪の６つの異なるクラスの脂肪に手動で注釈を付けた。トレーニングデータセットを調整するために特別な注意を払い、ＰＰＡＲＧ（Ｌｕｄｔｋｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｇｅｎｅｔ．，２００７，４４，ｅ８８）、ＰＬＩＮ１（Ｇａｎｄｏｔｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．，２０１１，３６４，７４０－７４８）、ＬＭＮＡ（Ｊｅｒｕ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｇｅｎｅｔ．，２０１７，５４，４１３－４１６）、ＬＩＰＥ（Ｚｏｌｏｔｏｖ ｅｔ ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｇｅｎｅｔ．，２０１７，Ａ １７３，１９０－１９４）及びＭＣ４Ｒ（Ａｋｂａｒｉ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２０２１，３７３）などの異常な脂肪表現型や筋肉表現型になりやすい遺伝子変異を有するトレーニング対象者を特に含めることで、予想される表現型の多様性をカバーするように試みた。次いで、これらの注釈を使用して、ＵＮｅｔ（Ｗｅｎｇ ｅｔ ａｌ．，ＩＥＥＥ Ａｃｃｅｓｓ，２０２１，９，１６５９１－１６６０３）アーキテクチャを、ＲｅｓＮｅｔ３４（Ｈｅ ｅｔ ａｌ．，ｉｎ ２０１６ ＩＥＥＥ Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ ｏｎ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｖｉｓｉｏｎ ａｎｄ Ｐａｔｔｅｒｎ Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ（ＣＶＰＲ），２０１６，７７０－７７８）バックボーン、ならびにＪａｃｃａｒｄ係数及びｃａｔｅｇｏｒｉｃａｌ ｆｏｃａｌ ｌｏｓｓの合計の損失関数（Ｌｉｎ ｅｔ ａｌ．，ＩＥＥＥ Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ ｏｎ Ｐａｔｔｅｒｎ Ａｎａｌｙｓｉｓ ａｎｄ Ｍａｃｈｉｎｅ Ｉｎｔｅｌｌｉｇｅｎｃｅ，２０２０，４２，３１８－３２７）と共に使用するマルチクラスセグメンテーションのディープニューラルネットをトレーニングした。脂肪量の表現型は、対応する脂肪クラスごとにニューラルネットから得られたセグメンテーションマップを合計することによって計算した。次いで、内臓脂肪対臀大腿脂肪比を、所与の個体の内臓脂肪体積と臀大腿脂肪体積の比として計算した。
ＢＭＩ調整済みＷＨＲに関連するＩＮＨＢＥのまれなコードバリアントは、ＵＫＢにおいて全身ＭＲＩを受けた３８，８８０人のサブセット（すなわち、探索サンプルの約６％）において、脂肪分布の精密な尺度であるＭＲＩでの内臓脂肪対殿大腿脂肪比との非常に一貫した関連性を示した（表１５を参照のこと）。ＭＲＩデータを有するＵＫＢのサブセットのＩＮＨＢＥ ｐＬＯＦバリアントは、ＭＲＩで定義された内臓脂肪対殿大腿脂肪比が低いことと名目上有意な関連性があった（対立遺伝子あたりの脂肪比率のＳＤ単位でのβ、－０．２４；９５％ＣＩ、－０．４５～－０．０２；ｐ＝０．０３；表１５を参照のこと）。
表中の各遺伝子変異量の結果を、年齢、肥満度指数、及び身長が内臓脂肪対殿大腿脂肪比に及ぼす性別特異的影響を考慮したモデルで解析した。
略語：ｐＬＯＦ、予測される機能喪失；ＡＡＦ、代替対立遺伝子頻度；ＣＩ、信頼区間；ＳＤ、標準偏差；ＢＭＩ、肥満度指数；ｐ、Ｐ値；ＲＲ、参照ホモ接合性遺伝子型；ＲＡ、参照代替遺伝子型；ＡＡ、代替ホモ接合性遺伝子型。
実施例４：ＩＮＨＢＥの予測される機能喪失と、左心室駆出率の増加及び心筋症の保護との関連性
本実施例の症例は、心疾患を有していない任意の研究参加者であった。結果は、ＵＫＢ、ＧＨＳ、ＳＩＮＡＩ、ＵＰＥＮＮ－ＰＭＢＢ、ＭＤＣＳ、Ｉｎｄｉａｎａ－Ｃｈａｌａｓａｎｉのメタ解析に基づいている。左心室駆出率の増加及び心筋症の保護に関連するＩＮＨＢＥの予測される機能喪失を表１６に示す（ＩＮＨＢＥのまれなｐＬｏＦバリアントの変異量（Ｍ１．１））。
転帰１は左室駆出率＊である。
転帰２は非虚血性心筋症＊＊である。
＊ＵＫ Ｂｉｏｂａｎｋの参加者の心臓ＭＲＩによって得られた左心室駆出率。
＊＊非虚血性心筋症の症例は、以下のＩＣＤ１０コードの１つ以上を有する研究参加者として定義された：Ｉ４２０（拡張型心筋症）、Ｉ４２５（他の拘束型心筋症）、Ｉ４２８（他の非圧縮性心筋症）、Ｉ４２９（原発性心筋症｜詳細不明）、ならびに心筋梗塞（Ｉ２１｜Ｉ２２｜Ｉ２３｜Ｉ２５２｜Ｉ２５６）及び肥大型心筋症（Ｉ４２１、Ｉ４２２）を示す任意のＩＣＤ１０コードの１つ以上の欠如。
ｐＬＯＦバリアントと低血圧との関連性（表１７を参照のこと。ＩＮＨＢＥのまれなｐＬＯＦバリアントの変異量－Ｍ１．１）は、血行動態特性に対する薬効と一致している。
形質１は拡張期血圧（治療により修正）である。
形質２は収縮期血圧（治療により修正）である。
本明細書に記載されるものに加えて、記載されている主題の様々な改変形態が、前述の説明から当業者には明らかとなろう。そのような改変も添付の特許請求の範囲内に入ることが意図される。本出願において引用される各参考文献（学術論文、米国特許及び非米国特許、特許出願公開、国際特許出願公開、ｇｅｎｅ ｂａｎｋ登録番号などが挙げられるが、これらに限定されない）は、その全体を参照することによって、及びあらゆる目的のために本明細書に援用される。

Claims (160)

  1. 代謝障害を有するか、または発症するリスクがある対象の治療方法であって、前記方法が、インヒビンサブユニットβＥ（ＩＮＨＢＥ）阻害剤を前記対象に投与することを含む、前記方法。
  2. ２型糖尿病を有するか、または発症するリスクがある対象の治療方法であって、前記方法が、インヒビンサブユニットβＥ（ＩＮＨＢＥ）阻害剤を前記対象に投与することを含む、前記方法。
  3. 肥満を有するか、または発症するリスクがある対象の治療方法であって、前記方法が、インヒビンサブユニットβＥ（ＩＮＨＢＥ）阻害剤を前記対象に投与することを含む、前記方法。
  4. トリグリセリドレベルの上昇を有するか、または発症するリスクがある対象の治療方法であって、前記方法が、インヒビンサブユニットβＥ（ＩＮＨＢＥ）阻害剤を前記対象に投与することを含む、前記方法。
  5. 脂肪異栄養症を有するか、または発症するリスクがある対象の治療方法であって、前記方法が、インヒビンサブユニットβＥ（ＩＮＨＢＥ）を前記対象に投与することを含む、前記方法。
  6. 肝臓の炎症を有するか、または発症するリスクがある対象の治療方法であって、前記方法が、インヒビンサブユニットβＥ（ＩＮＨＢＥ）を前記対象に投与することを含む、前記方法。
  7. 脂肪肝疾患を有するか、または発症するリスクがある対象の治療方法であって、前記方法が、インヒビンサブユニットβＥ（ＩＮＨＢＥ）を前記対象に投与することを含む、前記方法。
  8. 高コレステロール血症を有するか、または発症するリスクがある対象の治療方法であって、前記方法が、インヒビンサブユニットβＥ（ＩＮＨＢＥ）を前記対象に投与することを含む、前記方法。
  9. 肝酵素の上昇を有するか、または発症するリスクがある対象の治療方法であって、前記方法が、インヒビンサブユニットβＥ（ＩＮＨＢＥ）を前記対象に投与することを含む、前記方法。
  10. 非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）を有するか、または発症するリスクがある対象の治療方法であって、前記方法が、インヒビンサブユニットβＥ（ＩＮＨＢＥ）を前記対象に投与することを含む、前記方法。
  11. 心血管疾患を有するか、または発症するリスクがある対象の治療方法であって、前記方法が、インヒビンサブユニットβＥ（ＩＮＨＢＥ）阻害剤を前記対象に投与することを含む、前記方法。
  12. 心筋症を有するか、または発症するリスクがある対象の治療方法であって、前記方法が、インヒビンサブユニットβＥ（ＩＮＨＢＥ）阻害剤を前記対象に投与することを含む、前記方法。
  13. 高血圧を有するか、または発症するリスクがある対象の治療方法であって、前記方法が、インヒビンサブユニットβＥ（ＩＮＨＢＥ）阻害剤を前記対象に投与することを含む、前記方法。
  14. 心不全を有するか、または発症するリスクがある対象の治療方法であって、前記方法が、インヒビンサブユニットβＥ（ＩＮＨＢＥ）阻害剤を前記対象に投与することを含む、前記方法。
  15. 前記ＩＮＨＢＥ阻害剤が、ＩＮＨＢＥ ｍＲＮＡとハイブリダイズするアンチセンス核酸分子、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、またはショートヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）を含む、請求項１～１４のいずれか１項に記載の方法。
  16. 前記ＩＮＨＢＥ阻害剤が、Ｃａｓタンパク質及びＩＮＨＢＥゲノム核酸分子内のガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）認識配列へハイブリダイズするｇＲＮＡを含む、請求項１～１４のいずれか１項に記載の方法。
  17. 前記Ｃａｓタンパク質が、Ｃａｓ９またはＣｐｆ１である、請求項１６に記載の方法。
  18. 前記ｇＲＮＡ認識配列が、配列番号１内に位置する、請求項１５または請求項１６に記載の方法。
  19. プロトスペーサー隣接モチーフ（ＰＡＭ）配列が前記ｇＲＮＡ認識配列の下流の約２～約６ヌクレオチドである、請求項１５または請求項１６に記載の方法。
  20. 前記ｇＲＮＡが、約１７～約２３ヌクレオチドを含む、請求項１６～１９のいずれか１項に記載の方法。
  21. 前記ｇＲＮＡ認識配列が、配列番号９～２７のいずれか１つに記載のヌクレオチド配列を含む、請求項１６～１９のいずれか１項に記載の方法。
  22. 前記対象由来の生体試料中の、ＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアント核酸分子の存在または非存在を検出することをさらに含む、請求項１～２１のいずれか１項に記載の方法。
  23. 前記対象がＩＮＨＢＥ参照である場合、代謝障害または心血管疾患を治療または抑制する治療薬も、標準用量で前記対象に投与する、請求項２２に記載の方法。
  24. 前記対象が、ＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアント核酸分子についてヘテロ接合性またはホモ接合性である場合、代謝障害または心血管疾患を治療または抑制する治療薬も、標準用量と同じかそれより少ない用量で前記対象に投与する、請求項２２に記載の方法。
  25. 前記ＩＮＨＢＥバリアント核酸分子が、ミスセンスバリアント、スプライス部位バリアント、ストップゲインバリアント、スタートロスバリアント、ストップロスバリアント、フレームシフトバリアント、もしくはインフレームインデルバリアント、または短縮型ＩＮＨＢＥポリペプチドをコードするバリアントである、請求項２２～２４のいずれか１項に記載の方法。
  26. 前記ＩＮＨＢＥバリアント核酸分子が、短縮型ＩＮＨＢＥポリペプチドをコードする、請求項２５に記載の方法。
  27. 前記ＩＮＨＢＥバリアント核酸分子がゲノム核酸分子である、請求項２２～２６のいずれか１項に記載の方法。
  28. 前記検出するステップが、前記生体試料中の前記ＩＮＨＢＥゲノム核酸分子のヌクレオチド配列の少なくとも一部を配列決定することを含む、請求項２７に記載の方法。
  29. 前記ＩＮＨＢＥバリアント核酸分子がｍＲＮＡ分子である、請求項２２～２６のいずれか１項に記載の方法。
  30. 前記検出するステップが、前記生体試料中の前記ＩＮＨＢＥ ｍＲＮＡ分子のヌクレオチド配列の少なくとも一部を配列決定することを含む、請求項２９に記載の方法。
  31. 前記ＩＮＨＢＥバリアント核酸分子が、ｍＲＮＡ分子から産生されるｃＤＮＡ分子である、請求項２２～２６のいずれか１項に記載の方法。
  32. 前記検出するステップが、前記生体試料中のｍＲＮＡ分子から産生される前記ＩＮＨＢＥ ｃＤＮＡ分子のヌクレオチド配列の少なくとも一部を配列決定することを含む、請求項３１に記載の方法。
  33. 前記検出するステップが、前記核酸分子全体を配列決定することを含む、請求項２２～３２のいずれか１項に記載の方法。
  34. 代謝障害を治療または抑制する治療薬による対象の治療方法であって、前記対象が、代謝障害に罹患しており、前記方法が、
    前記対象が、インヒビンサブユニットβＥ（ＩＮＨＢＥ）の予測される機能喪失型ポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアント核酸分子を有するかどうかを、
    前記対象から、生体試料を採取するか、または採取しており、
    前記生体試料に対して遺伝子型決定アッセイを実施するか、または実施しており、前記対象が、前記ＩＮＨＢＥバリアント核酸分子を含む遺伝子型を有するかどうかを判定する
    ことにより判定し、
    前記対象がＩＮＨＢＥ参照である場合、前記代謝障害を治療または抑制する前記治療薬を標準用量で前記対象に投与し、または投与し続け、かつ前記対象にＩＮＨＢＥ阻害剤を投与し、
    前記対象がＩＮＨＢＥバリアント核酸分子に関してヘテロ接合性である場合、前記代謝障害を治療または抑制する前記治療薬を標準用量と同じかそれより少ない量で前記対象に投与し、または投与し続け、かつ前記対象にＩＮＨＢＥ阻害剤を投与し、
    前記対象がＩＮＨＢＥバリアント核酸分子に関してホモ接合性である場合、前記代謝障害を治療または抑制する前記治療薬を標準用量と同じかそれより少ない量で前記対象に投与し、または投与し続ける
    ステップを含み、
    ＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドをコードする前記ＩＮＨＢＥバリアント核酸分子を有する遺伝子型の存在が、前記対象が前記代謝障害を発症するリスクが低いことを示す、
    前記方法。
  35. 前記対象がＩＮＨＢＥ参照であり、前記代謝障害を治療または抑制する前記治療薬を標準用量で前記対象に投与し、または投与し続け、かつＩＮＨＢＥ阻害剤を投与する、請求項３４に記載の方法。
  36. 前記対象が、ＩＮＨＢＥバリアント核酸分子についてヘテロ接合性であり、前記代謝障害を治療または抑制する前記治療薬を、標準用量と同じかそれより少ない量で前記対象に投与し、または投与し続け、かつＩＮＨＢＥ阻害剤を投与する、請求項３４に記載の方法。
  37. 心血管疾患を治療または抑制する治療薬による対象の治療方法であって、前記対象が、心血管疾患に罹患しており、前記方法が、
    前記対象が、インヒビンサブユニットβＥ（ＩＮＨＢＥ）の予測される機能喪失型ポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアント核酸分子を有するかどうかを、
    前記対象から、生体試料を採取するか、または採取しており、
    前記生体試料に対して遺伝子型決定アッセイを実施するか、または実施しており、前記対象が、前記ＩＮＨＢＥバリアント核酸分子を含む遺伝子型を有するかどうかを判定する
    ことにより判定し、
    前記対象がＩＮＨＢＥ参照である場合、前記心血管疾患を治療または抑制する前記治療薬を標準用量で前記対象に投与し、または投与し続け、かつ前記対象にＩＮＨＢＥ阻害剤を投与し、
    前記対象がＩＮＨＢＥバリアント核酸分子に関してヘテロ接合性である場合、前記心血管疾患を治療または抑制する前記治療薬を標準用量と同じかそれより少ない量で前記対象に投与し、または投与し続け、かつ前記対象にＩＮＨＢＥ阻害剤を投与し、
    前記対象がＩＮＨＢＥバリアント核酸分子に関してホモ接合性である場合、前記心血管疾患を治療または抑制する前記治療薬を標準用量と同じかそれより少ない量で前記対象に投与し、または投与し続ける
    ステップを含み、
    ＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドをコードする前記ＩＮＨＢＥバリアント核酸分子を有する遺伝子型の存在が、前記対象が前記心血管疾患を発症するリスクが低いことを示す、
    前記方法。
  38. 前記対象がＩＮＨＢＥ参照であり、前記心血管疾患を治療または抑制する前記治療薬を標準用量で前記対象に投与し、または投与し続け、かつＩＮＨＢＥ阻害剤を投与する、請求項３７に記載の方法。
  39. 前記対象が、ＩＮＨＢＥバリアント核酸分子についてヘテロ接合性であり、前記心血管疾患を治療または抑制する前記治療薬を、標準用量と同じかそれより少ない量で前記対象に投与し、または投与し続け、かつＩＮＨＢＥ阻害剤を投与する、請求項３７に記載の方法。
  40. 前記ＩＮＨＢＥバリアント核酸分子がゲノム核酸分子である、請求項３４または請求項３７に記載の方法。
  41. 前記遺伝子型決定アッセイが、前記生体試料中の前記ＩＮＨＢＥゲノム核酸分子のヌクレオチド配列の少なくとも一部を配列決定することを含む、請求項４０に記載の方法。
  42. 前記ＩＮＨＢＥバリアント核酸分子がｍＲＮＡ分子である、請求項３４または請求項３７に記載の方法。
  43. 前記遺伝子型決定アッセイが、前記生体試料中の前記ＩＮＨＢＥ ｍＲＮＡ分子のヌクレオチド配列の少なくとも一部を配列決定することを含む、請求項４２に記載の方法。
  44. 前記ＩＮＨＢＥバリアント核酸分子が、ｍＲＮＡ分子から産生されるｃＤＮＡ分子である、請求項３４または請求項３７に記載の方法。
  45. 前記遺伝子型決定アッセイが、前記生体試料中のｍＲＮＡ分子から産生される前記ＩＮＨＢＥ ｃＤＮＡ分子のヌクレオチド配列の少なくとも一部を配列決定することを含む、請求項４４に記載の方法。
  46. 前記ＩＮＨＢＥバリアント核酸分子が、ミスセンスバリアント、スプライス部位バリアント、ストップゲインバリアント、スタートロスバリアント、ストップロスバリアント、フレームシフトバリアント、もしくはインフレームインデルバリアント、または短縮型ＩＮＨＢＥポリペプチドをコードするバリアントである、請求項３４または請求項３７に記載の方法。
  47. 前記ＩＮＨＢＥバリアント核酸分子が、短縮型ＩＮＨＢＥポリペプチドをコードする、請求項３４または請求項３７に記載の方法。
  48. 前記遺伝子型決定アッセイが、前記生体試料中の前記核酸分子全体を配列決定することを含む、請求項３４～４７のいずれか１項に記載の方法。
  49. 前記遺伝子型決定アッセイが、
    ａ）前記ＩＮＨＢＥポリペプチドをコードする前記核酸分子の少なくとも一部を増幅し、
    ｂ）前記増幅された核酸分子を、検出可能な標識で標識し、
    ｃ）前記標識された核酸分子を、改変特異的プローブを含む支持体と接触させ、
    ｄ）前記検出可能な標識を検出する
    ことを含む、請求項３４～４８のいずれか１項に記載の方法。
  50. 前記試料中の前記核酸分子がｍＲＮＡであり、前記ｍＲＮＡを前記増幅ステップの前にｃＤＮＡに逆転写する、請求項４９に記載の方法。
  51. 前記遺伝子型決定アッセイが、
    前記生体試料中の前記核酸分子を、検出可能な標識を含む改変特異的プローブと接触させ、
    前記検出可能な標識を検出する
    ことを含む、請求項３４～４８のいずれか１項に記載の方法。
  52. 前記核酸分子が、前記対象から得られた細胞内に存在する、請求項３４～５１のいずれか１項に記載の方法。
  53. 前記ＩＮＨＢＥ阻害剤が、ＩＮＨＢＥ ｍＲＮＡとハイブリダイズするアンチセンス核酸分子、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、またはショートヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）を含む、請求項３４～５２のいずれか１項に記載の方法。
  54. 前記ＩＮＨＢＥ阻害剤が、Ｃａｓタンパク質及びＩＮＨＢＥゲノム核酸分子内のガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）認識配列へハイブリダイズするｇＲＮＡを含む、請求項３４～５２のいずれか１項に記載の方法。
  55. 前記Ｃａｓタンパク質が、Ｃａｓ９またはＣｐｆ１である、請求項５４に記載の方法。
  56. 前記ｇＲＮＡ認識配列が、配列番号１内に位置する、請求項５４または請求項５５に記載の方法。
  57. プロトスペーサー隣接モチーフ（ＰＡＭ）配列が、前記ｇＲＮＡ認識配列の下流の約２～６ヌクレオチドである、請求項５４または請求項５５に記載の方法。
  58. 前記ｇＲＮＡが、約１７～約２３ヌクレオチドを含む、請求項５４～５７のいずれか１項に記載の方法。
  59. 前記ｇＲＮＡ認識配列が、配列番号９～２７のいずれか１つに記載のヌクレオチド配列を含む、請求項５４～５７のいずれか１項に記載の方法。
  60. 前記代謝障害が２型糖尿病であり、前記治療薬が、メトホルミン、インスリン、グリブリド、グリピジド、グリメピリド、レパグリニド、ナテグリニド、チアゾリジンジオン、ロシグリタゾン、ピオグリタゾン、シタグリプチン、サクサグリプチン、リナグリプチン、エクセナチド、リラグルチド、セマグルチド、カナグリフロジン、ダパグリフロジン、及びエンパグリフロジン、またはそれらの任意の組み合わせから選択される、請求項３４～３６のいずれか１項に記載の方法。
  61. 前記代謝障害が肥満であり、前記治療薬が、オルリスタット、フェンテルミン、トピラマート、ブプロピオン、ナルトレキソン、及びリラグルチド、またはそれらの任意の組み合わせから選択される、請求項３４～３６のいずれか１項に記載の方法。
  62. 前記代謝障害がトリグリセリドの上昇であり、前記治療薬が、ロスバスタチン、シンバスタチン、アトルバスタチン、フェノフィブラート、ゲムフィブロジル、フェノフィブリン酸、ナイアシン、及びω３脂肪酸、またはそれらの任意の組み合わせから選択される、請求項３４～３６のいずれか１項に記載の方法。
  63. 前記代謝障害が脂肪異栄養症であり、前記治療薬が、テサモレリン、メトホルミン、ポリ－Ｌ－乳酸、カルシウムヒドロキシアパタイト、ポリメチルメタクリレート、ウシコラーゲン、ヒトコラーゲン、シリコーン、及びヒアルロン酸、またはそれらの任意の組み合わせから選択される、請求項３４～３６のいずれか１項に記載の方法。
  64. 前記代謝障害が肝臓の炎症であり、前記治療薬が、肝炎治療薬または肝炎ワクチンである、請求項３４～３６のいずれか１項に記載の方法。
  65. 前記代謝障害が脂肪肝疾患であり、前記対象に、肥満外科手術及び／または食事介入を行う、請求項３４～３６のいずれか１項に記載の方法。
  66. 前記代謝障害が高コレステロール血症であり、前記治療薬が、アトルバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、ピタバスタチン、プラバスタチン、ロスバスタチンカルシウム、シンバスタチン、コレスチラミン、コレセベラム、及びコレスチポール、アリロクマブ、エボロクマブ、ニアスパン、ニアコール、フェノフィブラート、ゲムフィブロジル、及びベンペドイック、またはそれらの任意の組み合わせから選択される、請求項３４～３６のいずれか１項に記載の方法。
  67. 前記代謝障害が肝酵素の上昇であり、前記治療薬が、コーヒー、葉酸、カリウム、ビタミンＢ６、スタチン、及び繊維、またはそれらの任意の組み合わせから選択される、請求項３４～３６のいずれか１項に記載の方法。
  68. 前記代謝障害が非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）であり、前記治療薬が、オベチコール酸、セロンセルチブ、エラフィブラノール、セニクリビロック、ＧＲ＿ＭＤ＿０２、ＭＧＬ＿３１９６、ＩＭＭ１２４Ｅ、アラキジルアミドコラン酸、ＧＳ０９７６、エムリカサン、ボリキシバット、ＮＧＭ２８２、ＧＳ９６７４、トロピフェクサー、ＭＮ＿００１、ＬＭＢ７６３、ＢＩ＿１４６７３３５、ＭＳＤＣ＿０６０２、ＰＦ＿０５２２１３０４、ＤＦ１０２、サログリタザル、ＢＭＳ９８６０３６、ラニフィブラノール、セマグルチド、ニタゾキサニド、ＧＲＩ＿０６２１、ＥＹＰ００１、ＶＫ２８０９、ナルメフェン、ＬＩＫ０６６、ＭＴ＿３９９５、エロビキシバット、ナモデノソン、フォラルマブ、ＳＡＲ４２５８９９、ソタグリフロジン、ＥＤＰ＿３０５、イコサブテート、ゲムカベン、ＴＥＲＮ＿１０１、ＫＢＰ＿０４２、ＰＦ＿０６８６５５７１、ＤＵＲ９２８、ＰＦ＿０６８３５９１９、ＮＧＭ３１３、ＢＭＳ＿９８６１７１、ナマシズマブ、ＣＥＲ＿２０９、ＮＤ＿Ｌ０２＿ｓ０２０１、ＲＴＵ＿１０９６、ＤＲＸ＿０６５、ＩＯＮＩＳ＿ＤＧＡＴ２Ｒｘ、ＩＮＴ＿７６７、ＮＣ＿００１、セラデルパル、ＰＸＬ７７０、ＴＥＲＮ＿２０１、ＮＶ５５６、ＡＺＤ２６９３、ＳＰ＿１３７３、ＶＫ０２１４、ヘパステム、ＴＧＦＴＸ４、ＲＬＢＮ１１２７、ＧＫＴ＿１３７８３１、ＲＹＩ＿０１８、ＣＢ４２０９－ＣＢ４２１１、及びＪＨ＿０９２０である、請求項３４～３６のいずれか１項に記載の方法。
  69. 前記代謝障害を治療または抑制する前記治療薬がメラノコルチン４受容体（ＭＣ４Ｒ）作動薬である、請求項３４～３６のいずれか１項に記載の方法。
  70. 前記ＭＣ４Ｒ作動薬が、タンパク質、ペプチド、核酸分子、または小分子を含む、請求項６９に記載の方法。
  71. 前記タンパク質が、ＭＣ４Ｒのペプチド類似体である、請求項６９に記載の方法。
  72. 前記ペプチドがセトメラノチドである、請求項７１に記載の方法。
  73. 前記ＭＣ４Ｒ作動薬が、アミノ酸配列Ｈｉｓ－Ｐｈｅ－Ａｒｇ－Ｔｒｐを含むペプチドである、請求項６９に記載の方法。
  74. 前記小分子が１，２，３Ｒ，４－テトラヒドロイソキノリン－３－カルボン酸である、請求項７０に記載の方法。
  75. 前記ＭＣ４Ｒ作動薬がＡＬＢ－１２７１５８（ａ）である、請求項６９に記載の方法。
  76. 前記心血管疾患が高血圧であり、前記治療薬が、クロルタリドン、クロロチアジド、ヒドロクロロチアジド、インダパミド、メトラゾン、アセブトロール、アテノロール、ベタキソロール、フマル酸ビソプロロール、塩酸カルテオロール、酒石酸メトプロロール、コハク酸メトプロロール、ナドロール、塩酸ベナゼプリル、カプトプリル、マレイン酸エナラプリル、ホシノプリルナトリウム、リシノプリル、モエキシプリル、ペリンドプリル、塩酸キナプリル、ラミプリル、トランドラプリル、カンデサルタン、メシル酸エプロサルタン、イルベサルタン、ロサルタンカリウム、テルミサルタン、バルサルタン、ベシル酸アムロジピン、ベプリジル、塩酸ジルチアゼム、フェロジピン、イスラジピン、ニカルジピン、ニフェジピン、ニソルジピン、塩酸ベラパミル、メシル酸ドキサゾシン、塩酸プラゾシン、塩酸テラゾシン、メチルドパ、カルベジロールラベタロール塩酸塩、αメチルドパ、塩酸クロニジン、酢酸グアナベンズ、塩酸グアンファシン、グアナドレル、グアネチジン一硫酸塩、レセルピン、塩酸ヒドララジン、及びミノキシジル、またはそれらの任意の組み合わせから選択される、請求項３７～３９のいずれか１項に記載の方法。
  77. 前記心血管疾患が心筋症であり、前記治療薬が、ＡＣＥ阻害薬、アンギオテンシンＩＩ受容体遮断薬、β遮断薬、カルシウムチャネル遮断薬、ジゴキシン、抗不整脈薬、アルドステロン遮断薬、利尿薬、抗凝固薬、血液希釈剤、及びコルチコステロイドである、請求項３７～３９のいずれか１項に記載の方法。
  78. 前記心血管疾患が心不全であり、前記治療薬が、ＡＣＥ阻害薬、アンギオテンシン－２受容体遮断薬、β遮断薬、ミネラルコルチコイド受容体拮抗薬、利尿薬、イバブラジン、サクビトリルバルサルタン、硝酸塩を含むヒドララジン、及びジゴキシンである、請求項３７～３９のいずれか１項に記載の方法。
  79. 代謝障害を発症するリスクが高い対象の識別方法であって、前記方法が、
    前記対象から得られた生体試料中の、インヒビンサブユニットβＥ（ＩＮＨＢＥ）の予測される機能喪失型ポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアント核酸分子の存在または非存在を判定するか、または判定していることを含み、
    前記対象がＩＮＨＢＥ参照である場合、前記対象が前記代謝障害を発症するリスクが高く、
    前記対象がＩＮＨＢＥバリアント核酸分子についてヘテロ接合性またはホモ接合性である場合、前記対象が前記代謝障害を発症するリスクが低い、
    前記方法。
  80. 心血管疾患を発症するリスクが高い対象の識別方法であって、前記方法が、
    前記対象から得られた生体試料中の、インヒビンサブユニットβＥ（ＩＮＨＢＥ）の予測される機能喪失型ポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアント核酸分子の存在または非存在を判定するか、または判定していることを含み、
    前記対象がＩＮＨＢＥ参照である場合、前記対象が前記心血管疾患を発症するリスクが高く、
    前記対象がＩＮＨＢＥバリアント核酸分子についてヘテロ接合性またはホモ接合性である場合、前記対象が前記心血管疾患を発症するリスクが低い、
    前記方法。
  81. 前記ＩＮＨＢＥバリアント核酸分子がゲノム核酸分子である、請求項７９または請求項８０に記載の方法。
  82. 前記判定するステップが、前記生体試料中の前記ＩＮＨＢＥゲノム核酸分子のヌクレオチド配列の少なくとも一部を配列決定することを含む、請求項８１に記載の方法。
  83. 前記ＩＮＨＢＥバリアント核酸分子がｍＲＮＡ分子である、請求項７９または請求項８０に記載の方法。
  84. 前記判定するステップが、前記生体試料中の前記ＩＮＨＢＥ ｍＲＮＡ分子のヌクレオチド配列の少なくとも一部を配列決定することを含む、請求項８３に記載の方法。
  85. 前記ＩＮＨＢＥバリアント核酸分子が、ｍＲＮＡ分子から産生されるｃＤＮＡ分子である、請求項７９または請求項８０に記載の方法。
  86. 前記判定するステップが、前記生体試料中のｍＲＮＡ分子から産生される前記ＩＮＨＢＥ ｃＤＮＡ分子のヌクレオチド配列の少なくとも一部を配列決定することを含む、請求項８５に記載の方法。
  87. 前記ＩＮＨＢＥバリアント核酸分子が、ミスセンスバリアント、スプライス部位バリアント、ストップゲインバリアント、スタートロスバリアント、ストップロスバリアント、フレームシフトバリアント、もしくはインフレームインデルバリアント、または短縮型ＩＮＨＢＥポリペプチドをコードするバリアントである、請求項７９または請求項８０に記載の方法。
  88. 前記ＩＮＨＢＥバリアント核酸分子が、短縮型ＩＮＨＢＥポリペプチドをコードする、請求項７９または請求項８０に記載の方法。
  89. 前記判定するステップが、前記生体試料中の前記核酸分子全体を配列決定することを含む、請求項７９～８８のいずれか１項に記載の方法。
  90. 前記判定するステップが、
    ａ）前記ＩＮＨＢＥポリペプチドをコードする前記核酸分子の少なくとも一部を増幅し、
    ｂ）前記増幅された核酸分子を、検出可能な標識で標識し、
    ｃ）前記標識された核酸分子を、改変特異的プローブを含む支持体と接触させ、
    ｄ）前記検出可能な標識を検出する
    ことを含む、請求項７９～８９のいずれか１項に記載の方法。
  91. 前記試料中の前記核酸分子がｍＲＮＡであり、前記ｍＲＮＡを前記増幅ステップの前にｃＤＮＡに逆転写する、請求項９０に記載の方法。
  92. 前記判定するステップが、
    前記生体試料中の前記核酸分子を、検出可能な標識を含む改変特異的プローブと接触させ、
    前記検出可能な標識を検出する
    ことを含む、請求項７９～８９のいずれか１項に記載の方法。
  93. 前記判定するステップを、ｉｎ ｖｉｔｒｏで実施する、請求項７９～９２のいずれか１項に記載の方法。
  94. 前記対象がＩＮＨＢＥ参照であり、前記代謝障害または心血管疾患を治療または抑制する治療薬を標準用量で前記対象に投与し、かつＩＮＨＢＥ阻害剤を投与する、請求項７９～９３のいずれか１項に記載の方法。
  95. 前記対象が、ＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアント核酸分子についてヘテロ接合性であり、前記代謝障害または心血管疾患を治療または抑制する治療薬を、標準用量と同じかそれより少ない量で前記対象に投与し、かつＩＮＨＢＥ阻害剤を投与する、請求項７９～９３のいずれか１項に記載の方法。
  96. 前記ＩＮＨＢＥ阻害剤が、ＩＮＨＢＥ ｍＲＮＡにハイブリダイズするアンチセンス核酸分子、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、またはショートヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）を含む、請求項９４または請求項９５に記載の方法。
  97. 前記ＩＮＨＢＥ阻害剤が、Ｃａｓタンパク質及びＩＮＨＢＥゲノム核酸分子内のガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）認識配列へハイブリダイズするｇＲＮＡを含む、請求項９４または請求項９５に記載の方法。
  98. 前記Ｃａｓタンパク質が、Ｃａｓ９またはＣｐｆ１である、請求項９７に記載の方法。
  99. 前記ｇＲＮＡ認識配列が、配列番号１内に位置する、請求項９７または請求項９８に記載の方法。
  100. プロトスペーサー隣接モチーフ（ＰＡＭ）配列が、前記ｇＲＮＡ認識配列の約２～６ヌクレオチド下流である、請求項９７または請求項９８に記載の方法。
  101. 前記ｇＲＮＡが、約１７～約２３ヌクレオチドを含む、請求項９７～１００のいずれか１項に記載の方法。
  102. 前記ｇＲＮＡ認識配列が、配列番号９～２７のいずれか１つに記載のヌクレオチド配列を含む、請求項９７～１００のいずれか１項に記載の方法。
  103. 前記代謝障害が２型糖尿病であり、前記治療薬が、メトホルミン、インスリン、グリブリド、グリピジド、グリメピリド、レパグリニド、ナテグリニド、チアゾリジンジオン、ロシグリタゾン、ピオグリタゾン、シタグリプチン、サクサグリプチン、リナグリプチン、エクセナチド、リラグルチド、セマグルチド、カナグリフロジン、ダパグリフロジン、及びエンパグリフロジン、またはそれらの任意の組み合わせから選択される、請求項９４または請求項９５に記載の方法。
  104. 前記代謝障害が肥満であり、前記治療薬が、オルリスタット、フェンテルミン、トピラマート、ブプロピオン、ナルトレキソン、及びリラグルチド、またはそれらの任意の組み合わせから選択される、請求項９４または請求項９５に記載の方法。
  105. 前記代謝障害がトリグリセリドの上昇であり、前記治療薬が、ロスバスタチン、シンバスタチン、アトルバスタチン、フェノフィブラート、ゲムフィブロジル、フェノフィブリン酸、ナイアシン、及びω３脂肪酸、またはそれらの任意の組み合わせから選択される、請求項９４または請求項９５に記載の方法。
  106. 前記代謝障害が脂肪異栄養症であり、前記治療薬が、テサモレリン、メトホルミン、ポリ－Ｌ－乳酸、カルシウムヒドロキシアパタイト、ポリメチルメタクリレート、ウシコラーゲン、ヒトコラーゲン、シリコーン、及びヒアルロン酸、またはそれらの任意の組み合わせから選択される、請求項９４または請求項９５に記載の方法。
  107. 前記代謝障害が肝臓の炎症であり、前記治療薬が、肝炎治療薬または肝炎ワクチンである、請求項９４または請求項９５に記載の方法。
  108. 前記代謝障害が脂肪肝疾患であり、前記対象に、肥満外科手術及び／または食事介入を行う、請求項９４または請求項９５に記載の方法。
  109. 前記代謝障害が高コレステロール血症であり、前記治療薬が、アトルバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、ピタバスタチン、プラバスタチン、ロスバスタチンカルシウム、シンバスタチン、コレスチラミン、コレセベラム、及びコレスチポール、アリロクマブ、エボロクマブ、ニアスパン、ニアコール、フェノフィブラート、ゲムフィブロジル、及びベンペドイック、またはそれらの任意の組み合わせから選択される、請求項９４または請求項９５に記載の方法。
  110. 前記代謝障害が肝酵素の上昇であり、前記治療薬が、コーヒー、葉酸、カリウム、ビタミンＢ６、スタチン、及び繊維、またはそれらの任意の組み合わせから選択される、請求項９４または請求項９５に記載の方法。
  111. 前記代謝障害が非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）であり、前記治療薬が、オベチコール酸、セロンセルチブ、エラフィブラノール、セニクリビロック、ＧＲ＿ＭＤ＿０２、ＭＧＬ＿３１９６、ＩＭＭ１２４Ｅ、アラキジルアミドコラン酸、ＧＳ０９７６、エムリカサン、ボリキシバット、ＮＧＭ２８２、ＧＳ９６７４、トロピフェクサー、ＭＮ＿００１、ＬＭＢ７６３、ＢＩ＿１４６７３３５、ＭＳＤＣ＿０６０２、ＰＦ＿０５２２１３０４、ＤＦ１０２、サログリタザル、ＢＭＳ９８６０３６、ラニフィブラノール、セマグルチド、ニタゾキサニド、ＧＲＩ＿０６２１、ＥＹＰ００１、ＶＫ２８０９、ナルメフェン、ＬＩＫ０６６、ＭＴ＿３９９５、エロビキシバット、ナモデノソン、フォラルマブ、ＳＡＲ４２５８９９、ソタグリフロジン、ＥＤＰ＿３０５、イコサブテート、ゲムカベン、ＴＥＲＮ＿１０１、ＫＢＰ＿０４２、ＰＦ＿０６８６５５７１、ＤＵＲ９２８、ＰＦ＿０６８３５９１９、ＮＧＭ３１３、ＢＭＳ＿９８６１７１、ナマシズマブ、ＣＥＲ＿２０９、ＮＤ＿Ｌ０２＿ｓ０２０１、ＲＴＵ＿１０９６、ＤＲＸ＿０６５、ＩＯＮＩＳ＿ＤＧＡＴ２Ｒｘ、ＩＮＴ＿７６７、ＮＣ＿００１、セラデルパル、ＰＸＬ７７０、ＴＥＲＮ＿２０１、ＮＶ５５６、ＡＺＤ２６９３、ＳＰ＿１３７３、ＶＫ０２１４、ヘパステム、ＴＧＦＴＸ４、ＲＬＢＮ１１２７、ＧＫＴ＿１３７８３１、ＲＹＩ＿０１８、ＣＢ４２０９－ＣＢ４２１１、及びＪＨ＿０９２０である、請求項９４または請求項９５に記載の方法。
  112. 前記代謝障害を治療または抑制する治療薬がメラノコルチン４受容体（ＭＣ４Ｒ）作動薬である、請求項９４または請求項９５に記載の方法。
  113. 前記ＭＣ４Ｒ作動薬が、タンパク質、ペプチド、核酸分子、または小分子を含む、請求項１１２に記載の方法。
  114. 前記タンパク質が、ＭＣ４Ｒのペプチド類似体である、請求項１１３に記載の方法。
  115. 前記ペプチドがセトメラノチドである、請求項１１３に記載の方法。
  116. 前記ＭＣ４Ｒ作動薬が、アミノ酸配列Ｈｉｓ－Ｐｈｅ－Ａｒｇ－Ｔｒｐを含むペプチドである、請求項１１２に記載の方法。
  117. 前記小分子が１，２，３Ｒ，４－テトラヒドロイソキノリン－３－カルボン酸である、請求項１１３に記載の方法。
  118. 前記ＭＣ４Ｒ作動薬がＡＬＢ－１２７１５８（ａ）である、請求項１１２に記載の方法。
  119. 前記心血管疾患が高血圧であり、前記治療薬が、クロルタリドン、クロロチアジド、ヒドロクロロチアジド、インダパミド、メトラゾン、アセブトロール、アテノロール、ベタキソロール、フマル酸ビソプロロール、塩酸カルテオロール、酒石酸メトプロロール、コハク酸メトプロロール、ナドロール、塩酸ベナゼプリル、カプトプリル、マレイン酸エナラプリル、ホシノプリルナトリウム、リシノプリル、モエキシプリル、ペリンドプリル、塩酸キナプリル、ラミプリル、トランドラプリル、カンデサルタン、メシル酸エプロサルタン、イルベサルタン、ロサルタンカリウム、テルミサルタン、バルサルタン、ベシル酸アムロジピン、ベプリジル、塩酸ジルチアゼム、フェロジピン、イスラジピン、ニカルジピン、ニフェジピン、ニソルジピン、塩酸ベラパミル、メシル酸ドキサゾシン、塩酸プラゾシン、塩酸テラゾシン、メチルドパ、カルベジロールラベタロール塩酸塩、αメチルドパ、塩酸クロニジン、酢酸グアナベンズ、塩酸グアンファシン、グアナドレル、グアネチジン一硫酸塩、レセルピン、塩酸ヒドララジン、及びミノキシジル、またはそれらの任意の組み合わせから選択される、請求項９４または請求項９５に記載の方法。
  120. 前記心血管疾患が心筋症であり、前記治療薬が、ＡＣＥ阻害薬、アンギオテンシンＩＩ受容体遮断薬、β遮断薬、カルシウムチャネル遮断薬、ジゴキシン、抗不整脈薬、アルドステロン遮断薬、利尿薬、抗凝固薬、血液希釈剤、及びコルチコステロイドである、請求項９４または請求項９５に記載の方法。
  121. 前記心血管疾患が心不全であり、前記治療薬が、ＡＣＥ阻害薬、アンギオテンシン－２受容体遮断薬、β遮断薬、ミネラルコルチコイド受容体拮抗薬、利尿薬、イバブラジン、サクビトリルバルサルタン、硝酸塩を含むヒドララジン、及びジゴキシンである、請求項９４または請求項９５に記載の方法。
  122. インヒビンサブユニットβＥ（ＩＮＨＢＥ）の予測される機能喪失型ポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアントゲノム核酸分子、
    ＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアントｍＲＮＡ分子、または
    ＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアントｃＤＮＡ分子
    を有する対象における代謝障害の治療に使用するための、前記代謝障害を治療または抑制する治療薬。
  123. 前記代謝障害が２型糖尿病であり、前記治療薬が、メトホルミン、インスリン、グリブリド、グリピジド、グリメピリド、レパグリニド、ナテグリニド、チアゾリジンジオン、ロシグリタゾン、ピオグリタゾン、シタグリプチン、サクサグリプチン、リナグリプチン、エクセナチド、リラグルチド、セマグルチド、カナグリフロジン、ダパグリフロジン、及びエンパグリフロジン、またはそれらの任意の組み合わせから選択される、請求項１２２に記載の治療薬。
  124. 前記代謝障害が肥満であり、前記治療薬が、オルリスタット、フェンテルミン、トピラマート、ブプロピオン、ナルトレキソン、及びリラグルチド、またはそれらの任意の組み合わせから選択される、請求項１２２に記載の治療薬。
  125. 前記代謝障害がトリグリセリドの上昇であり、前記治療薬が、ロスバスタチン、シンバスタチン、アトルバスタチン、フェノフィブラート、ゲムフィブロジル、フェノフィブリン酸、ナイアシン、及びω３脂肪酸、またはそれらの任意の組み合わせから選択される、請求項１２２に記載の治療薬。
  126. 前記代謝障害が脂肪異栄養症であり、前記治療薬が、テサモレリン、メトホルミン、ポリ－Ｌ－乳酸、カルシウムヒドロキシアパタイト、ポリメチルメタクリレート、ウシコラーゲン、ヒトコラーゲン、シリコーン、及びヒアルロン酸、またはそれらの任意の組み合わせから選択される、請求項１２２に記載の方法。
  127. 前記代謝障害が肝臓の炎症であり、前記治療薬が、肝炎治療薬または肝炎ワクチンである、請求項１２２に記載の方法。
  128. 前記代謝障害が脂肪肝疾患であり、前記対象に、肥満外科手術及び／または食事介入を行う、請求項１２２に記載の方法。
  129. 前記代謝障害が高コレステロール血症であり、前記治療薬が、アトルバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、ピタバスタチン、プラバスタチン、ロスバスタチンカルシウム、シンバスタチン、コレスチラミン、コレセベラム、及びコレスチポール、アリロクマブ、エボロクマブ、ニアスパン、ニアコール、フェノフィブラート、ゲムフィブロジル、及びベンペドイック、またはそれらの任意の組み合わせから選択される、請求項１２２に記載の方法。
  130. 前記代謝障害が肝酵素の上昇であり、前記治療薬が、コーヒー、葉酸、カリウム、ビタミンＢ６、スタチン、及び繊維、またはそれらの任意の組み合わせから選択される、請求項１２２に記載の方法。
  131. 前記代謝障害が非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）であり、前記治療薬が、オベチコール酸、セロンセルチブ、エラフィブラノール、セニクリビロック、ＧＲ＿ＭＤ＿０２、ＭＧＬ＿３１９６、ＩＭＭ１２４Ｅ、アラキジルアミドコラン酸、ＧＳ０９７６、エムリカサン、ボリキシバット、ＮＧＭ２８２、ＧＳ９６７４、トロピフェクサー、ＭＮ＿００１、ＬＭＢ７６３、ＢＩ＿１４６７３３５、ＭＳＤＣ＿０６０２、ＰＦ＿０５２２１３０４、ＤＦ１０２、サログリタザル、ＢＭＳ９８６０３６、ラニフィブラノール、セマグルチド、ニタゾキサニド、ＧＲＩ＿０６２１、ＥＹＰ００１、ＶＫ２８０９、ナルメフェン、ＬＩＫ０６６、ＭＴ＿３９９５、エロビキシバット、ナモデノソン、フォラルマブ、ＳＡＲ４２５８９９、ソタグリフロジン、ＥＤＰ＿３０５、イコサブテート、ゲムカベン、ＴＥＲＮ＿１０１、ＫＢＰ＿０４２、ＰＦ＿０６８６５５７１、ＤＵＲ９２８、ＰＦ＿０６８３５９１９、ＮＧＭ３１３、ＢＭＳ＿９８６１７１、ナマシズマブ、ＣＥＲ＿２０９、ＮＤ＿Ｌ０２＿ｓ０２０１、ＲＴＵ＿１０９６、ＤＲＸ＿０６５、ＩＯＮＩＳ＿ＤＧＡＴ２Ｒｘ、ＩＮＴ＿７６７、ＮＣ＿００１、セラデルパル、ＰＸＬ７７０、ＴＥＲＮ＿２０１、ＮＶ５５６、ＡＺＤ２６９３、ＳＰ＿１３７３、ＶＫ０２１４、ヘパステム、ＴＧＦＴＸ４、ＲＬＢＮ１１２７、ＧＫＴ＿１３７８３１、ＲＹＩ＿０１８、ＣＢ４２０９－ＣＢ４２１１、及びＪＨ＿０９２０である、請求項１２２に記載の方法。
  132. 前記代謝障害を治療または抑制する治療薬がメラノコルチン４受容体（ＭＣ４Ｒ）作動薬である、請求項１２２に記載の治療薬。
  133. 前記ＭＣ４Ｒ作動薬が、タンパク質、ペプチド、核酸分子、または小分子を含む、請求項１３２に記載の治療薬。
  134. 前記タンパク質が、ＭＣ４Ｒのペプチド類似体である、請求項１３３に記載の治療薬。
  135. 前記ペプチドがセトメラノチドである、請求項１３３に記載の治療薬。
  136. 前記ＭＣ４Ｒ作動薬が、アミノ酸配列Ｈｉｓ－Ｐｈｅ－Ａｒｇ－Ｔｒｐを含むペプチドである、請求項１３２に記載の治療薬。
  137. 前記小分子が１，２，３Ｒ，４－テトラヒドロイソキノリン－３－カルボン酸である、請求項１３３に記載の治療薬。
  138. 前記ＭＣ４Ｒ作動薬がＡＬＢ－１２７１５８（ａ）である、請求項１３２に記載の治療薬。
  139. インヒビンサブユニットβＥ（ＩＮＨＢＥ）の予測される機能喪失型ポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアントゲノム核酸分子、
    ＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアントｍＲＮＡ分子、または
    ＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアントｃＤＮＡ分子
    を有する対象における心血管疾患の治療に使用するための、前記心血管疾患を治療または抑制する治療薬。
  140. 前記心血管疾患が高血圧であり、前記治療薬が、クロルタリドン、クロロチアジド、ヒドロクロロチアジド、インダパミド、メトラゾン、アセブトロール、アテノロール、ベタキソロール、フマル酸ビソプロロール、塩酸カルテオロール、酒石酸メトプロロール、コハク酸メトプロロール、ナドロール、塩酸ベナゼプリル、カプトプリル、マレイン酸エナラプリル、ホシノプリルナトリウム、リシノプリル、モエキシプリル、ペリンドプリル、塩酸キナプリル、ラミプリル、トランドラプリル、カンデサルタン、メシル酸エプロサルタン、イルベサルタン、ロサルタンカリウム、テルミサルタン、バルサルタン、ベシル酸アムロジピン、ベプリジル、塩酸ジルチアゼム、フェロジピン、イスラジピン、ニカルジピン、ニフェジピン、ニソルジピン、塩酸ベラパミル、メシル酸ドキサゾシン、塩酸プラゾシン、塩酸テラゾシン、メチルドパ、カルベジロールラベタロール塩酸塩、αメチルドパ、塩酸クロニジン、酢酸グアナベンズ、塩酸グアンファシン、グアナドレル、グアネチジン一硫酸塩、レセルピン、塩酸ヒドララジン、及びミノキシジル、またはそれらの任意の組み合わせから選択される、請求項１３９に記載の治療薬。
  141. 前記心血管疾患が心筋症であり、前記治療薬が、ＡＣＥ阻害薬、アンギオテンシンＩＩ受容体遮断薬、β遮断薬、カルシウムチャネル遮断薬、ジゴキシン、抗不整脈薬、アルドステロン遮断薬、利尿薬、抗凝固薬、血液希釈剤、及びコルチコステロイドである、請求項１３９に記載の治療薬。
  142. 前記心血管疾患が心不全であり、前記治療薬が、ＡＣＥ阻害薬、アンギオテンシン－２受容体遮断薬、β遮断薬、ミネラルコルチコイド受容体拮抗薬、利尿薬、イバブラジン、サクビトリルバルサルタン、硝酸塩を含むヒドララジン、及びジゴキシンである、請求項１３９に記載の治療薬。
  143. インヒビンサブユニットβＥ（ＩＮＨＢＥ）の予測される機能喪失型ポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアントゲノム核酸分子、
    ＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアントｍＲＮＡ分子、または
    ＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアントｃＤＮＡ分子
    を有する対象における代謝障害の治療に使用するための、前記代謝障害を治療または抑制するＩＮＨＢＥ阻害剤。
  144. ａ）インヒビンサブユニットβＥ（ＩＮＨＢＥ）ゲノム核酸分子、ＩＮＨＢＥ ｍＲＮＡ分子、またはＩＮＨＢＥ ｃＤＮＡ分子の参照であるか、または
    ｂ）
    ｉ）ＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアントゲノム核酸分子、
    ｉｉ）ＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアントｍＲＮＡ分子、もしくは
    ｉｉｉ）ＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアントｃＤＮＡ分子
    に対してヘテロ接合性である
    対象における代謝障害の治療及び／または予防に使用するためのＩＮＨＢＥ阻害剤。
  145. 前記ＩＮＨＢＥ阻害剤が、ＩＮＨＢＥ ｍＲＮＡにハイブリダイズするアンチセンス核酸分子、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、またはショートヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）を含む、請求項１４４に記載のＩＮＨＢＥ阻害剤。
  146. 前記ＩＮＨＢＥ阻害剤が、Ｃａｓタンパク質及びＩＮＨＢＥゲノム核酸分子内のガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）認識配列へハイブリダイズするｇＲＮＡを含む、請求項１４４に記載のＩＮＨＢＥ阻害剤。
  147. 前記Ｃａｓタンパク質が、Ｃａｓ９またはＣｐｆ１である、請求項１４６に記載のＩＮＨＢＥ阻害剤。
  148. 前記ｇＲＮＡ認識配列が、配列番号１内に位置する、請求項１４６または請求項１４７に記載のＩＮＨＢＥ阻害剤。
  149. プロトスペーサー隣接モチーフ（ＰＡＭ）配列が、前記ｇＲＮＡ認識配列の下流の約２～６ヌクレオチドである、請求項１４６または請求項１４７に記載のＩＮＨＢＥ阻害剤。
  150. 前記ｇＲＮＡが、約１７～約２３ヌクレオチドを含む、請求項１４６～１４９のいずれか１項に記載のＩＮＨＢＥ阻害剤。
  151. 前記ｇＲＮＡ認識配列が、配列番号９～２７のいずれか１つに記載のヌクレオチド配列を含む、請求項１４６～１４９のいずれか１項に記載のＩＮＨＢＥ阻害剤。
  152. インヒビンサブユニットβＥ（ＩＮＨＢＥ）の予測される機能喪失型ポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアントゲノム核酸分子、
    ＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアントｍＲＮＡ分子、または
    ＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアントｃＤＮＡ分子
    を有する対象における心血管疾患の治療に使用するための、前記心血管疾患を治療または抑制するＩＮＨＢＥ阻害剤。
  153. ａ）インヒビンサブユニットβＥ（ＩＮＨＢＥ）ゲノム核酸分子、ＩＮＨＢＥ ｍＲＮＡ分子、またはＩＮＨＢＥ ｃＤＮＡ分子の参照であるか、または
    ｂ）
    ｉ）ＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアントゲノム核酸分子、
    ｉｉ）ＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアントｍＲＮＡ分子、もしくは
    ｉｉｉ）ＩＮＨＢＥの予測される機能喪失型ポリペプチドをコードするＩＮＨＢＥバリアントｃＤＮＡ分子
    に対してヘテロ接合性である
    対象における心血管疾患の治療及び／または予防に使用するためのＩＮＨＢＥ阻害剤。
  154. 前記ＩＮＨＢＥ阻害剤が、ＩＮＨＢＥ ｍＲＮＡにハイブリダイズするアンチセンス核酸分子、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、またはショートヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）を含む、請求項１５３に記載のＩＮＨＢＥ阻害剤。
  155. 前記ＩＮＨＢＥ阻害剤が、Ｃａｓタンパク質及びＩＮＨＢＥゲノム核酸分子内のガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）認識配列へハイブリダイズするｇＲＮＡを含む、請求項１５３に記載のＩＮＨＢＥ阻害剤。
  156. 前記Ｃａｓタンパク質が、Ｃａｓ９またはＣｐｆ１である、請求項１５５に記載のＩＮＨＢＥ阻害剤。
  157. 前記ｇＲＮＡ認識配列が、配列番号１内に位置する、請求項１５５または請求項１５６に記載のＩＮＨＢＥ阻害剤。
  158. プロトスペーサー隣接モチーフ（ＰＡＭ）配列が、前記ｇＲＮＡ認識配列の下流の約２～６ヌクレオチドである、請求項１５５または請求項１５６に記載のＩＮＨＢＥ阻害剤。
  159. 前記ｇＲＮＡが、約１７～約２３ヌクレオチドを含む、請求項１５５～１５８のいずれか１項に記載のＩＮＨＢＥ阻害剤。
  160. 前記ｇＲＮＡ認識配列が、配列番号９～２７のいずれか１つに記載のヌクレオチド配列を含む、請求項１５５～１５８のいずれか１項に記載のＩＮＨＢＥ阻害剤。
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