JP2023545178A - Ｓｔｉｎｇアゴニストと、細胞透過性ペプチド、カーゴ、及びｔｌｒペプチドアゴニストを含む複合体との組合せ - Google Patents

Ｓｔｉｎｇアゴニストと、細胞透過性ペプチド、カーゴ、及びｔｌｒペプチドアゴニストを含む複合体との組合せ Download PDF

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Abstract

本発明は、インターフェロン応答ｃＧＡＭＰ相互作用因子（１）（ＳＴＩＮＧ）のアゴニストと、特定の抗原又は抗原エピトープを含むワクチン、即ち、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体の組合せを提供する。そのような組合せは、医薬、特に癌の予防及び／又は治療において特に有用である。更に、本発明は、例えば癌の予防及び／又は治療において有用である医薬組成物及びワクチンの等の組成物も提供する。

Description

本発明は、ワクチン接種及び免疫療法の分野、特に癌免疫療法に関する。
免疫系は、腫瘍細胞を認識し、ある程度排除することができるが、この抗腫瘍応答は、しばしば十分ではなく、非効率的である。治療的ワクチン接種によってこの弱い抗腫瘍応答を促進することは、癌治療の長年の目標であった。このように、免疫系を調整して免疫応答を高めることは、標準治療と組み合せることができるため、腫瘍学における有望な治療アプローチとなっている。
癌ワクチンは、個別化（自家）ワクチンと標準化ワクチンの２つの主要なカテゴリーに分けることができ、更に技術プラットフォームに応じて分類されることができる。現在の個別化ワクチンには、腫瘍溶解液ワクチンのほか、樹状細胞系ワクチン（以下、細胞系）が挙げられる。後者では、腫瘍溶解液を使用したパルス療法、又は腫瘍から抽出したＲＮＡによるトランスフェクションのいずれかで抗原ローディング（ｌｏａｄｉｎｇ）が起こることがである。この場合、抗原は、腫瘍特異的である、又は関連しているが、明確に定義されていない。ペプチドパルス又はＰｒｏｖｅｎｇｅ（登録商標）ワクチンの製造に使用される前立腺酸性ホスファターゼ（ＰＡＰ）等のタンパク質を用いて、樹状細胞には、特定された抗原で搭載（ロード；ｌｏａｄ）されることもできる。しかしながら、これらの細胞系の治療法の製造プロセスには時間と労力がかかり、一方で品質基準に到達し維持することは困難である。免疫モニタリングは更なる合併症を引き起こす。更に、大多数の自家癌ワクチンは、特定され標準化されたワクチンとは異なり、使用される抗原の同一性や量を制御することができない。
細胞系治療法（抗原提示細胞（ＡＰＣ）、Ｔ細胞、ＣＡＲ、溶解物等）とは対照的に、サブユニットワクチン（タンパク質又はペプチド）は、生産が容易で、広範囲の患者に投与できるバッチからバッチへの再現性が著しく優れた標準化されたワクチンの開発を可能にする。更に、抗原は完全に特定されており、より良い免疫モニタリングを可能にし、ワクチン成分の望ましくない影響のリスクを低減する。
前臨床及び臨床開発で評価された異なるアプローチは、短鎖ペプチドワクチン（非特許文献１）、長鎖ペプチドワクチン（非特許文献２）、及びタンパク質が挙げられる。長鎖ペプチドやタンパク質ワクチンとは対照的に、短鎖ペプチドワクチンは半減期が非常に短く、免疫応答に悪影響を及ぼす可能性がある。
一般的に、癌ワクチンは癌患者に投与され、免疫系が腫瘍細胞を認識して死滅させる能力を強化する。治療用癌ワクチンの主な目的は、腫瘍細胞に特異的なキラーＴ細胞（細胞傷害性Ｔリンパ球とも呼ばれる）を産生することである。この目的のために、また強力な免疫応答を達成するために、ワクチンは、通常、抗原又は抗原エピトープを含み、抗原又は抗原エピトープは、腫瘍にも存在し、抗原提示細胞（ＡＰＣ）、特に樹状細胞（ＤＣ）に送達される必要があり、癌免疫を開始させることを可能にする。ＤＣは、これらの腫瘍抗原を小さなペプチドに加工し、ＭＨＣクラスＩ又はＭＨＣクラスＩＩ分子をＴ細胞に発現させた細胞表面に提示される。その後Ｔ細胞に認識され、それによって刺激を誘導するペプチドは、エピトープと呼ばれる。ＭＨＣクラスＩ分子とＭＨＣクラスＩＩ分子による提示は、それぞれＣＤ８＋細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬｓ）及びＣＤ４＋ヘルパーＴ（Ｔｈ）細胞という２つのクラスのＴ細胞の活性化を可能にする。更に、完全に活性化されるためには、抗原認識Ｔ細胞の他に、抗原非特異的でＡＰＣの表面に発現している共刺激分子とＴ細胞との相互作用によって提供される共刺激シグナルという第２のシグナルが必要である。したがって、効率的な治療用癌ワクチンの２つの主要な要件は、腫瘍抗原の特異性と、それらをＤＣに効率的に送達する能力である。
まとめると、腫瘍特異的免疫応答の誘導には、以下の３つの主要なステップが必要である：（ｉ）抗原は、エピトープに加工される樹状細胞に送達される；（ｉｉ）樹状細胞は適切な活性化シグナルを受け取らなくてはならない；（ｉｉｉ）活性化された腫瘍抗原を搭載した樹状細胞は、リンパ器官においてＴ細胞を介した免疫応答を生成しなければならない。
腫瘍細胞は、個々の抗原の発現をダウンレギュレーションすることによって免疫系から逃れることができるため（受動免疫逃避）、マルチエピトープ抗原送達は利点をもたらす。実際、タンパク質系ワクチンは、単一のＭＨＣ対立遺伝子に制限されることなく、樹状細胞（ＤＣ）等の抗原提示細胞（ＡＰＣ）へのマルチエピトープ抗原送達を可能にする。別の強みは、タンパク質で搭載された樹状細胞における、最近報告された長時間持続するエピトープ提示である（非特許文献３）。更に、タンパク質は、構成エピトープのＭＨＣ制限提示を達成するためにＤＣによる取り込みとプロセシングを必要とする。これは、そのようなストリンジェントなプロセシング要件を持たない短鎖ペプチドによるワクチン接種の後示されたように、末梢性トレランスを誘発するリスクを減らす（非特許文献４）。
しかしながら、殆どの可溶性タンパク質は、一般にエンドリソソームで分解され、ＭＨＣクラスＩ分子上で交差提示されにくいため、ＣＤ８＋Ｔ細胞応答に対する免疫原性が低い（非特許文献５）。更に、成熟ＤＣは、未熟ＤＣよりもＴ細胞応答のプライミング及び誘発において、より強力であるが（非特許文献６）、外因性抗原、特にＭＨＣクラスＩＩ制限抗原を効率的に取り込む能力を失う（非特許文献７）。その結果、ワクチンとしてのペプチドパルスＤＣは、幾つかの制限を有する。例えば、ペプチドの分解、迅速なＭＨＣクラスＩのターンオーバー、及びＤＣ／ペプチドの調製及び注入中のＭＨＣクラスＩ分子からのペプチドの解離は、ＤＣ表面上のＭＨＣクラスＩ／ペプチド複合体の短い半減期をもたらし、弱いＴ細胞応答につながることがある。
タンパク質系のワクチン送達の有効性を改善するために、ＤＣへの癌ペプチドの細胞内送達のための細胞透過性ペプチドの使用が提案されている（非特許文献８）。細胞透過性ペプチド（ＣＰＰ）は、細胞膜を通過し、殆どの種類の細胞に入る能力を有するペプチドである（非特許文献９）（非特許文献１０））。或いは、天然のタンパク質に存在するという起源を反映するタンパク質形質導入ドメイン（ＰＴＤ）とも呼ばれる。幾つかの強力なＣＰＰは、ヒト免疫不全ウイルスのＴａｔタンパク質、単純ヘルペスウイルスのＶＰ２２タンパク質、及び線維芽細胞増殖因子を含むタンパク質から同定されてきた（非特許文献１１、非特許文献１２、非特許文献１３、非特許文献１４、非特許文献１５）。ＤＣ／ＴＡＴ－ＴＲＰ２によって誘導されるＴ細胞活性は、ＤＣ／ＴＲＰ２によって誘導されるＴ細胞活性よりも３倍～１０倍高いことが分かった（非特許文献１６）。
ＤＣ上の共刺激分子のレベルを増加させ、標的抗原に対する免疫系の応答を増強するために、アジュバントが使用されることがある。アジュバントは、免疫系によって自然に認識される保存された微生物成分を模倣することによって、このタスクを達成することができる。例えば、リポ多糖類（ＬＰＳ）、細菌の細胞壁の成分、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、一本鎖ＤＮＡ（ｓｓＤＮＡ）、非メチル化ＣｐＧジヌクレオチド含有ＤＮＡ等の核酸が挙げられる。これらの存在は、抗原に対する自然免疫応答を増加させることができる。更に、このアジュバントは、抗体産生をもたらす液性免疫応答ではなく、ＣＴＬと型分極Ｔｈ１（ｔｙｐｅ ｐｏｌａｒｉｚｅｄ Ｔｈ１）による適応免疫応答を促進するはずである。様々なアジュバントが評価されているが、ヒトへの使用について規制当局の承認を得たものは限られている。これらには、米国では、Ａｌｕｍ、ＭＰＬ（モノホスホリルリピドＡ）、及びＡＳＯ４（Ａｌｕｍ及びＭＰＬ）、欧州ではＭＦ５９（水中油型乳剤）、ＡＳＯ４、リポソームが挙げられる（非特許文献１７）。
最近では、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）リガンドが有望なクラスのアジュバントとして現れている（非特許文献１８）。したがって、癌ワクチン研究の重要な発展は、ＴＬＲ－３（ｐｏｌｙ Ｉ：Ｃ）、ＴＬＲ－４（モノホスホリルリピドＡ；ＭＰＬ）、ＴＬＲ－５（フラゲリン）、ＴＬＲ－７（イミキモド）、及びＴＬＲ－９（ＣｐＧ）を含む、様々なＴＬＲアゴニストからワクチン製剤までを含むことである（非特許文献１９）。ＴＬＲ刺激後に免疫細胞によって産生されるシグナル伝達とサイトカインの種類は、ＣＤ４＋Ｔ細胞のＴｈ１、Ｔｈ２、Ｔｈ１７、Ｔｒｅｇ細胞への分化を制御する。殆どのＴＬＲ系アジュバントによるＤＣ及びＴ細胞等の免疫細胞の刺激は、炎症誘発性サイトカインを産生し、Ｔｈ１及びＣＤ８＋Ｔ応答を促進する（非特許文献２０）。
ワクチンをＴＬＲリガンドに結合させることは、（ｉ）ＴＬＲを発現する免疫細胞による優先的な取り込み、（ｉｉ）より高い免疫応答、（ｉｉｉ）末梢性トレランスを誘導するリスクの低減等、非結合型ワクチンよりも幾つかの利点を提供する魅力的なアプローチである。実際、抗原を搭載した全ての抗原提示細胞が同時に活性化される。様々なグループがこのアプローチを検討し、様々なＴＬＲリガンドが主にペプチド又はタンパク質ワクチンに化学的に結合された（非特許文献２１）。ペプチドへの化学的結合は容易に行われるため、結合型ワクチンについて最もよく研究されているＴＬＲリガンドは、ＴＬＲ２アゴニストＰａｍ２Ｃｙｓ及びＰａｍ３Ｃｙｓである（非特許文献２２）。
最近では、細胞透過性ペプチド、抗原性カーゴ、自己アジュバント性を付与するＴＬＲアゴニストの３つの要素からなる複合体を提供する、キメラタンパク質ワクチンプラットフォームが記述された（非特許文献２３）。このワクチンプラットフォームは、前臨床腫瘍モデルにおいてＣＤ８及びＣＤ４の両方の抗原特異的免疫応答を誘発し、増加した腫瘍内白血球浸潤と共に、免疫記憶及び高いワクチン効率をもたらすことを示した（非特許文献２４、非特許文献２５）。
もう１つの非常に有望な戦略は、インターフェロン遺伝子の刺激因子／インターフェロン応答ｃＧＡＭＰ相互作用因子１の刺激因子（ＳＴＩＮＧ）経路の標的化である。ＳＴＩＮＧは、細胞質ＤＮＡセンサーによるウイルス又は細菌のＤＮＡ分解の副産物である環状ＧＡＭＰに結合することによって活性化されるアダプタータンパク質であり（非特許文献２６、非特許文献２７）、活性化されると、高レベルのＩ型インターフェロン、及びＩＬ－６及びＴＮＦ等の他の炎症誘発性サイトカインの分泌を誘導する（非特許文献２６、非特許文献２８、非特許文献２９）。更に、ＳＴＩＮＧシグナル伝達は、ＮＫ細胞の動員と活性化を増強し（非特許文献３０）、ＣＤ４及びＣＤ８ Ｔ細胞の走化性を促進することが示された（非特許文献３１）。更に、ＳＴＩＮＧシグナル伝達は、患者由来の結腸直腸腺癌細胞で阻害されることが見出され、その抗腫瘍的役割を裏付けた（非特許文献３２）。これらの性質により、合成ＳＴＩＮＧアゴニストは、腫瘍を炎症させて抗腫瘍免疫応答を誘発することを目的とした臨床研究及び前臨床腫瘍モデルで試験されてきた。ＳＴＩＮＧアゴニストの腫瘍内注射は、様々なマウス腫瘍モデルの退行を誘導する一方で、腫瘍除去したマウスの再誘発（ｒｅ－ｃｈａｌｌｅｎｇｅ）に対する抵抗によって強調されるように、全身性腫瘍特異的免疫応答も誘発することが示された（非特許文献３３）。更に、ＧＭ－ＣＳＦ産生癌細胞ワクチン内に製剤化されたＳＴＩＮＧアゴニストは、幾つかのマウス腫瘍モデルの進行を遅らせることが示され、腫瘍内投与が唯一の有効な経路ではないことが示された。現在、複数の第１／２相臨床試験で、様々な固形腫瘍及びリンパ腫患者に対するＳＴＩＮＧアゴニストの使用が調査されている。
Ｓｌｉｎｇｌｕｆｆ ＣＬ， Ｊｒ． Ｔｈｅ ｐｒｅｓｅｎｔ ａｎｄ ｆｕｔｕｒｅ ｏｆ ｐｅｐｔｉｄｅ ｖａｃｃｉｎｅｓ ｆｏｒ ｃａｎｃｅｒ： ｓｉｎｇｌｅ ｏｒ ｍｕｌｔｉｐｌｅ， ｌｏｎｇ ｏｒ ｓｈｏｒｔ， ａｌｏｎｅ ｏｒ ｉｎ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ？ Ｃａｎｃｅｒ ｊｏｕｒｎａｌ ２０１１；１７（５）：３４３－５０ Ｍｅｌｉｅｆ ＣＪ， ｖａｎ ｄｅｒ Ｂｕｒｇ ＳＨ． Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ （ｐｒｅ）ｍａｌｉｇｎａｎｔ ｄｉｓｅａｓｅ ｂｙ ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ ｌｏｎｇ ｐｅｐｔｉｄｅ ｖａｃｃｉｎｅｓ． Ｎａｔｕｒｅ ｒｅｖｉｅｗｓ Ｃａｎｃｅｒ ２００８；８（５）：３５１－６０ ｖａｎ Ｍｏｎｔｆｏｏｒｔ Ｎ，Ｃａｍｐｓ ＭＧ，Ｋｈａｎ Ｓ，Ｆｉｌｉｐｐｏｖ ＤＶ，Ｗｅｔｅｒｉｎｇｓ ＪＪ，Ｇｒｉｆｆｉｔｈ ＪＭ， ｅｔ ａｌ．Ａｎｔｉｇｅｎ ｓｔｏｒａｇｅ ｃｏｍｐａｒｔｍｅｎｔｓ ｉｎ ｍａｔｕｒｅ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ ｆａｃｉｌｉｔａｔｅ ｐｒｏｌｏｎｇｅｄ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ｔ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ｃｒｏｓｓ－ｐｒｉｍｉｎｇ ｃａｐａｃｉｔｙ．Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａ ２００９；１０６（１６）：６７３０－５ Ｔｏｅｓ ＲＥ， Ｏｆｆｒｉｎｇａ Ｒ， Ｂｌｏｍ ＲＪ， Ｍｅｌｉｅｆ ＣＪ， Ｋａｓｔ ＷＭ． Ｐｅｐｔｉｄｅ ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ ｃａｎ ｌｅａｄ ｔｏ ｅｎｈａｎｃｅｄ ｔｕｍｏｒ ｇｒｏｗｔｈ ｔｈｒｏｕｇｈ ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｔ－ｃｅｌｌ ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ． Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａ １９９６；９３（１５）：７８５５－６０ Ｒｏｓａｌｉａ ＲＡ， Ｑｕａｋｋｅｌａａｒ ＥＤ， Ｒｅｄｅｋｅｒ Ａ， Ｋｈａｎ Ｓ， Ｃａｍｐｓ Ｍ， Ｄｒｉｊｆｈｏｕｔ ＪＷ， ｅｔ ａｌ． Ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ ｐｒｏｃｅｓｓ ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ ｌｏｎｇ ｐｅｐｔｉｄｅｓ ｂｅｔｔｅｒ ｔｈａｎ ｗｈｏｌｅ ｐｒｏｔｅｉｎ， ｉｍｐｒｏｖｉｎｇ ａｎｔｉｇｅｎ ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｔ－ｃｅｌｌ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ． Ｅｕｒｏｐｅａｎ ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ２０１３；４３（１０）：２５５４－６５ Ａｐｅｔｏｈ Ｌ，Ｌｏｃｈｅｒ Ｃ，Ｇｈｉｒｉｎｇｈｅｌｌｉ Ｆ，Ｋｒｏｅｍｅｒ Ｇ，Ｚｉｔｖｏｇｅｌ Ｌ．Ｈａｒｎｅｓｓｉｎｇ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｃａｎｃｅｒ．Ｓｅｍｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１１；２３：４２－４９ Ｂａｎｃｈｅｒｅａｕ Ｊ，Ｓｔｅｉｎｍａｎ ＲＭ．Ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ ｉｍｍｕｎｉｔｙ．Ｎａｔｕｒｅ．１９９８；３９２：２４５－２５２ Ｗａｎｇ ＲＦ， Ｗａｎｇ ＨＹ． Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ ｏｆ ａｎｔｉｔｕｍｏｒ ｉｍｍｕｎｉｔｙ ｂｙ ｐｒｏｌｏｎｇｉｎｇ ａｎｔｉｇｅｎ ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ ｏｎ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ． Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． ２００２； ２０：１４９－１５６ Ｃｏｐｏｌｏｖｉｃｉ ＤＭ，Ｌａｎｇｅｌ Ｋ，Ｅｒｉｓｔｅ Ｅ，Ｌａｎｇｅｌ Ｕ．Ｃｅｌｌ－ｐｅｎｅｔｒａｔｉｎｇ ｐｅｐｔｉｄｅｓ：ｄｅｓｉｇｎ，ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，ａｎｄ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ．ＡＣＳ ｎａｎｏ ２０１４；８（３）：１９７２－９４ Ｍｉｌｌｅｔｔｉ Ｆ．Ｃｅｌｌ－ｐｅｎｅｔｒａｔｉｎｇ ｐｅｐｔｉｄｅｓ：ｃｌａｓｓｅｓ，ｏｒｉｇｉｎ，ａｎｄ ｃｕｒｒｅｎｔ ｌａｎｄｓｃａｐｅ．Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ Ｔｏｄａｙ ２０１２ Ｂｅｒｒｙ ＣＣ． Ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ ｖｉａ ｔｈｅ ＨＩＶ－１ ｔａｔ ｐｅｐｔｉｄｅ． Ｎａｎｏｍｅｄｉｃｉｎｅ． ２００８； ３：３５７－３６５ Ｄｅｓｈａｙｅｓ Ｓ， Ｍｏｒｒｉｓ ＭＣ， Ｄｉｖｉｔａ Ｇ， Ｈｅｉｔｚ Ｆ． Ｃｅｌｌ－ｐｅｎｅｔｒａｔｉｎｇ ｐｅｐｔｉｄｅｓ： Ｔｏｏｌｓ ｆｏｒ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ． Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ． ２００５； ６２：１８３９－１８４９ Ｅｄｅｎｈｏｆｅｒ Ｆ． Ｐｒｏｔｅｉｎ ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ ｒｅｖｉｓｉｔｅｄ： Ｎｏｖｅｌ ｉｎｓｉｇｈｔｓ ｉｎｔｏ ｔｈｅ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｕｎｄｅｒｌｙｉｎｇ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎｓ． Ｃｕｒｒ Ｐｈａｒｍ Ｄｅｓ． ２００８； １４：３６２８－３６３６ Ｇｕｐｔａ Ｂ， Ｌｅｖｃｈｅｎｋｏ ＴＳ， Ｔｏｒｃｈｉｌｉｎ ＶＰ． Ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ ｌａｒｇｅ ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ａｎｄ ｓｍａｌｌ ｐａｒｔｉｃｌｅｓ ｂｙ ｃｅｌｌ－ｐｅｎｅｔｒａｔｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ａｎｄ ｐｅｐｔｉｄｅｓ． Ａｄｖ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ Ｒｅｖ． ２００５； ５７：６３７－６５１ Ｔｏｒｃｈｉｌｉｎ ＶＰ． Ｒｅｃｅｎｔ ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ ｔｏ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ ｄｒｕｇｓ ａｎｄ ＤＮＡ ａｎｄ ｏｒｇａｎｅｌｌｅ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ． Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｂｉｏｍｅｄ Ｅｎｇ． ２００６； ８：３４３－３７５ Ｗａｎｇ ＨＹ， Ｆｕ Ｔ， Ｗａｎｇ Ｇ， Ｇａｎｇ Ｚ， Ｄｏｎｎａ ＭＰＬ， Ｙａｎｇ ＪＣ， Ｒｅｓｔｉｆｏ ＮＰ， Ｈｗｕ Ｐ， Ｗａｎｇ ＲＦ． Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ＣＤ４＋ Ｔ ｃｅｌｌ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ａｎｔｉｔｕｍｏｒ ｉｍｍｕｎｉｔｙ ｂｙ ＴＡＴ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｔｕｍｏｒ ａｎｔｉｇｅｎ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｉｎｔｏ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ． Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ． ２００２ａ； １０９：１４６３－１４７０ Ｌｉｍ， Ｙ．Ｔ．， Ｖａｃｃｉｎｅ ａｄｊｕｖａｎｔ ｍａｔｅｒｉａｌｓ ｆｏｒ ｃａｎｃｅｒ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ ａｎｄ ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ ｄｉｓｅａｓｅ． Ｃｌｉｎ Ｅｘｐ Ｖａｃｃｉｎｅ Ｒｅｓ， ２０１５． ４（１）： ｐ． ５４－８ Ｂａｘｅｖａｎｉｓ， Ｃ．Ｎ．， Ｉ．Ｆ． Ｖｏｕｔｓａｓ， ａｎｄ Ｏ．Ｅ． Ｔｓｉｔｓｉｌｏｎｉｓ， Ｔｏｌｌ－ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｇｏｎｉｓｔｓ： ｃｕｒｒｅｎｔ ｓｔａｔｕｓ ａｎｄ ｆｕｔｕｒｅ ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅ ｏｎ ｔｈｅｉｒ ｕｔｉｌｉｔｙ ａｓ ａｄｊｕｖａｎｔｓ ｉｎ ｉｍｐｒｏｖｉｎｇ ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ． Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ， ２０１３． ５（５）： ｐ． ４９７－５１１ Ｄｕｔｈｉｅ ＭＳ， Ｗｉｎｄｉｓｈ ＨＰ， Ｆｏｘ ＣＢ， Ｒｅｅｄ ＳＧ． Ｕｓｅ ｏｆ ｄｅｆｉｎｅｄ ＴＬＲ ｌｉｇａｎｄｓ ａｓ ａｄｊｕｖａｎｔｓ ｗｉｔｈｉｎ ｈｕｍａｎ ｖａｃｃｉｎｅｓ． Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｖ． ２０１１； ２３９：１７８－１９６ Ｍａｎｉｃａｓｓａｍｙ Ｓ， Ｐｕｌｅｎｄｒａｎ Ｂ． Ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ａｄａｐｔｉｖｅ ｉｍｍｕｎｉｔｙ ｗｉｔｈ Ｔｏｌｌ－ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ． Ｓｅｍｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ． ２００９； ２１：１８５－１９３ Ｚｏｍ ＧＧ， Ｋｈａｎ Ｓ， Ｆｉｌｉｐｐｏｖ ＤＶ， Ｏｓｓｅｎｄｏｒｐ Ｆ． ＴＬＲ ｌｉｇａｎｄ－ｐｅｐｔｉｄｅ ｃｏｎｊｕｇａｔｅ ｖａｃｃｉｎｅｓ： ｔｏｗａｒｄ ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ． Ａｄｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ． ２０１２；１１４：１７７－２０１ Ｆｕｊｉｔａ， Ｙ． ａｎｄ Ｈ． Ｔａｇｕｃｈｉ， Ｏｖｅｒｖｉｅｗ ａｎｄ ｏｕｔｌｏｏｋ ｏｆ Ｔｏｌｌ－ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｌｉｇａｎｄ－ａｎｔｉｇｅｎ ｃｏｎｊｕｇａｔｅ ｖａｃｃｉｎｅｓ． Ｔｈｅｒ Ｄｅｌｉｖ， ２０１２． ３（６）： ｐ． ７４９－６０ Ｂｅｌｎｏｕｅ， Ｅ．， ｅｔ ａｌ． （２０１６）． "Ｅｎｈａｎｃｉｎｇ Ａｎｔｉｔｕｍｏｒ Ｉｍｍｕｎｅ Ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｂｙ Ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｅｌｌ－ｐｅｎｅｔｒａｔｉｎｇ Ｐｅｐｔｉｄｅ－ｂａｓｅｄ Ｖａｃｃｉｎｅｓ ａｎｄ Ａｄｊｕｖａｎｔｓ．" Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ ２４（９）： １６７５－１６８５ Ｄｅｒｏｕａｚｉ， Ｍ．， ｅｔ ａｌ． （２０１５）． "Ｎｏｖｅｌ Ｃｅｌｌ－Ｐｅｎｅｔｒａｔｉｎｇ Ｐｅｐｔｉｄｅ－Ｂａｓｅｄ Ｖａｃｃｉｎｅ Ｉｎｄｕｃｅｓ Ｒｏｂｕｓｔ ＣＤ４＋ ａｎｄ ＣＤ８＋ Ｔ Ｃｅｌｌ－Ｍｅｄｉａｔｅｄ Ａｎｔｉｔｕｍｏｒ Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．" Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ７５（１５）： ３０２０－３０３１ Ｂｅｌｎｏｕｅ， Ｅ．， ｅｔ ａｌ． （２０１９）． "Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｓｅｌｆ ａｎｄ ｎｅｏ－ｅｐｉｔｏｐｅｓ ｗｉｔｈ ａ ｍｏｄｕｌａｒ ｓｅｌｆ－ａｄｊｕｖａｎｔｉｎｇ ｃａｎｃｅｒ ｖａｃｃｉｎｅ．" ＪＣＩ Ｉｎｓｉｇｈｔ ５ Ｉｓｈｉｋａｗａ， Ｈ． ａｎｄ Ｇ． Ｎ． Ｂａｒｂｅｒ （２００８）． "ＳＴＩＮＧ ｉｓ ａｎ ｅｎｄｏｐｌａｓｍｉｃ ｒｅｔｉｃｕｌｕｍ ａｄａｐｔｏｒ ｔｈａｔ ｆａｃｉｌｉｔａｔｅｓ ｉｎｎａｔｅ ｉｍｍｕｎｅ ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ．" Ｎａｔｕｒｅ ４５５（７２１３）： ６７４－６７８ Ａｂｌａｓｓｅｒ， Ａ．， ｅｔ ａｌ． （２０１３）． "ｃＧＡＳ ｐｒｏｄｕｃｅｓ ａ ２’－５’－ｌｉｎｋｅｄ ｃｙｃｌｉｃ ｄｉｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｓｅｃｏｎｄ ｍｅｓｓｅｎｇｅｒ ｔｈａｔ ａｃｔｉｖａｔｅｓ ＳＴＩＮＧ．" Ｎａｔｕｒｅ ４９８（７４５４）： ３８０－３８４ Ｓａｉｔｏｈ， Ｔ．， ｅｔ ａｌ． （２００９）． "Ａｔｇ９ａ ｃｏｎｔｒｏｌｓ ｄｓＤＮＡ－ｄｒｉｖｅｎ ｄｙｎａｍｉｃ ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ ｏｆ ＳＴＩＮＧ ａｎｄ ｔｈｅ ｉｎｎａｔｅ ｉｍｍｕｎｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ．" Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ １０６（４９）： ２０８４２－２０８４６ Ｓｏｋｏｌｏｗｓｋａ， Ｏ． ａｎｄ Ｄ． Ｎｏｗｉｓ （２０１８）． "ＳＴＩＮＧ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌｓ： Ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｏｒ Ｎｏｔ？" Ａｒｃｈ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｔｈｅｒ Ｅｘｐ （Ｗａｒｓｚ） ６６（２）： １２５－１３２ Ｔａｋａｓｈｉｍａ，Ｋ．，ｅｔ ａｌ．（２０１６）．"ＳＴＩＮＧ ｉｎ ｔｕｍｏｒ ａｎｄ ｈｏｓｔ ｃｅｌｌｓ ｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｅｌｙ ｗｏｒｋ ｆｏｒ ＮＫ ｃｅｌｌ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｔｕｍｏｒ ｇｒｏｗｔｈ ｒｅｔａｒｄａｔｉｏｎ．"Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ ４７８（４）：１７６４－１７７１ Ｐａｒｋｅｓ， Ｅ． Ｅ．， ｅｔ ａｌ． （２０１７）． "Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ＳＴＩＮＧ－Ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ Ｉｎｎａｔｅ Ｉｍｍｕｎｅ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｂｙ Ｓ－Ｐｈａｓｅ－Ｓｐｅｃｉｆｉｃ ＤＮＡ Ｄａｍａｇｅ ｉｎ Ｂｒｅａｓｔ Ｃａｎｃｅｒ．" Ｊ Ｎａｔｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ １０９（１） Ｘｉａ， Ｘ．， ｅｔ ａｌ． （２０１５）． "Ｐｏｒｏｕｓ ｓｉｌｉｃｏｎ ｍｉｃｒｏｐａｒｔｉｃｌｅ ｐｏｔｅｎｔｉａｔｅｓ ａｎｔｉ－ｔｕｍｏｒ ｉｍｍｕｎｉｔｙ ｂｙ ｅｎｈａｎｃｉｎｇ ｃｒｏｓｓ－ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｎｄｕｃｉｎｇ ｔｙｐｅ Ｉ ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ｒｅｓｐｏｎｓｅ．" Ｃｅｌｌ Ｒｅｐ １１（６）： ９５７－９６６ Ｃｏｒｒａｌｅｓ， Ｌ．， ｅｔ ａｌ． （２０１５）． "Ｄｉｒｅｃｔ Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ＳＴＩＮＧ ｉｎ ｔｈｅ Ｔｕｍｏｒ Ｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ Ｌｅａｄｓ ｔｏ Ｐｏｔｅｎｔ ａｎｄ Ｓｙｓｔｅｍｉｃ Ｔｕｍｏｒ Ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．" Ｃｅｌｌ Ｒｅｐ １１（７）： １０１８－１０３０
上記の観点から、本発明の目的は、上記で概説した現在の癌ワクチンの欠点を克服することである。特に、特定の腫瘍に対する特異性を提供する、抗原又は抗原エピトープを含むワクチンとＳＴＩＮＧアゴニストの組合せを提供することが、本発明の目的である。また、各成分（例えば、単独療法として投与する場合）の抗腫瘍効果を増強又は延長するワクチンを提供することも、本発明の目的である。従って、このような組合せは、特に改善された抗腫瘍活性を有する、癌免疫療法用途のより強力なワクチンを表す。したがって、本発明は、抗腫瘍免疫応答を開始、可能、増強、及び／又は改善するための併用療法に関する。
本目的は、下記及び添付の請求項に記載されている主題によって達成される。
以下に本発明を詳細に説明するが、異なることもあるため、本発明は、本明細書に記載されている特定の方法論、プロトコル、及び試薬に限定されないことを理解すべきである。また、本明細書で使用されている用語は、添付の請求項によってのみ限定される本発明の範囲を限定することを意図していないことも理解すべきである。特に定義されていない限り、本明細書で使用されている全ての技術用語及び科学用語は、当業者が一般的に理解しているもののと同じ意味を有する。
以下では、本発明の要素について説明する。これらの要素は、特定の実施形態と共に列挙されているが、これらは、追加の実施形態を作成するために、任意の方法で、任意の数で組み合わせることができることを理解すべきである。様々に記述された実施例及び好ましい実施形態は、本発明を明示的に記述された実施形態のみに限定するように解釈されるべきではない。この記載は、明示的に記述された実施形態と任意の数の開示された及び／又は好ましい要素を組み合わせた実施形態を裏付けし、包含するように理解されるべきである。更に、本出願に記載された全ての要素の任意の順列及び／又は組合せは、文脈が別段の指示をしない限り、本出願の記載によって開示されたものとみなされるべきである。
本明細書及びそれに続く請求項を通して、文脈が別に要求しない限り、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」という用語、並びに「ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ」及び「ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ」のようなバリエーションは、指定された部材、整数、又は工程を含むことを意味するが、他の指定されていない部材、整数、又は工程を除外することを意味しないと理解される。「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔ ｏｆ）」という用語は、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」という用語の特定の具体化であり、他の指定されていない部材、整数、又は工程は除外される。本発明の文脈において、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」という用語は、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔ ｏｆ）」という用語を含む。したがって、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語は、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」及び「なる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ）」も含む。例えば、Ｘを「含む」（“ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ”Ｘ）組成物は、Ｘのみからなることもできれば、例えば、Ｘ＋Ｙのように追加的なものを含むこともできる。
「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」という用語、並びに発明を記述する文脈（特にクレームの文脈）で使用される類似の言及は、本明細書で別段の指示がない限り、又は文脈によって明確に矛盾しない限り、単数形と複数形の両方を含むものと解釈される。本明細書での値の範囲の引用は、範囲内にあるそれぞれ別々の値を個別に参照するための簡略化された方法として機能することを単に意図している。本明細書で別段の指示がない限り、それぞれ個々の値は、本明細書で個別に引用されたかのように明細書に組み込まれている。明細書のいかなる文言も、発明の実施に不可欠な特許請求されていない要素を示すものと解釈されるべきではない。
「実質的に」という用語は、「完全に」を除外するものではない。例えば、Ｙを「実質的に含まない」組成物は、Ｙを完全に含まなくてもよい。必要に応じて、「実質的に」という用語を発明の定義から省略してもよい。
数値ｘに対する「約」という用語は、ｘ±１０％を意味する。
ＳＴＩＮＧアゴニストと、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体との組合せ
第1の態様では、本発明は、
（ｉ）ＳＴＩＮＧアゴニストと；
（ｉｉ）以下ａ）～ｃ）：

ａ）細胞透過性ペプチド；
ｂ）少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ；及び
ｃ）ＴＬＲペプチドアゴニスト
を含む複合体と、
を含む組合せであって、成分ａ）～ｃ）（即ち、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニスト）が共有結合される組合せを提供する。
驚くべきことに、本発明者は、（ｉ）ＳＴＩＮＧアゴニストと、（ｉｉ）細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体との組合せが、抗原特異的ＣＤ８ Ｔ細胞を促進するＣＤ４及びＣＤ８ Ｔ細胞の両方の応答を改善し、腫瘍内免疫原性を増加させ、生存率の大幅な増加及び腫瘍増殖の減少をもたらすことを見出した。これは、ＳＴＩＮＧアゴニストと複合体が共に作用する相乗効果を示し、単独療法として投与されるその各成分の抗腫瘍効果を大幅に増加させる。
本明細書で使用される「組合せ」という用語は、その成分の任意の種類の組合せを指し、特に、（ｉ）ＳＴＩＮＧアゴニストと（ｉｉ）本明細書に記載される複合体、並びに、任意で、更なる成分の任意の種類の組合せを指す。特に、組合せの成分は、一緒に提供される（即ち、組み合わせた方法で）。幾つかの実施形態では、組合せは、キット（例えば、（少なくとも部分的に）分離された方法で成分を含む）であることができる。他の実施形態では、組合せは、組成物（例えば、成分が１つの組成物に含まれていることができる）であることができる。
したがって、組合せの成分（ｉ）（ＳＴＩＮＧアゴニスト）及び（ｉｉ）（複合体）（及び任意の更なる成分）のそれぞれは、別々の組成物に含まれることができる。他の実施形態では、組合せの成分（ｉ）（ＳＴＩＮＧアゴニスト）及び（ｉｉ）（複合体）（及び任意の更なる成分）の幾つか（全てではない）は、同じ組成物に含まれることができる。或いは、組合せの全ての成分（ｉ）（ＳＴＩＮＧアゴニスト）及び（ｉｉ）（複合体）（及び任意の更なる成分）は、同じ組成物に含まれることができる。したがって、組合せの成分（ｉ）（ＳＴＩＮＧアゴニスト）及び（ｉｉ）（複合体）（及び任意の更なる成分）のそれぞれは、別々の容器（例えば、シリンジ）に含まれることができる。他の実施形態では、組合せの成分（ｉ）（ＳＴＩＮＧアゴニスト）及び（ｉｉ）（複合体）（及び任意の更なる成分）の幾つか（全てではない）は、同じ容器（例えば、シリンジ）に含まれることができる。或いは、組合せの全ての成分（ｉ）（ＳＴＩＮＧアゴニスト）及び（ｉｉ）（複合体）（及び任意の更なる成分）は、同じ容器（例えば、シリンジ）に含まれることができる。
より具体的には、（ｉ）ＳＴＩＮＧアゴニスト及び（ｉｉ）複合体は、同じ組成物及び／又は同じ容器（例えば、シリンジ）に含まれることができる。幾つかの実施形態では、（ｉ）ＳＴＩＮＧアゴニスト及び（ｉｉｉ）任意の第３の成分（複合体及びＳＴＩＮＧアゴニスト以外）は、同じ組成物及び／又は同じ容器（例えば、シリンジ）に含まれることができる。幾つかの実施形態では、（ｉｉ）複合体及び（ｉｉｉ）任意の第３の成分（複合体及びＳＴＩＮＧアゴニスト以外）は、同じ組成物及び／又は同じ容器（例えば、シリンジ）に含まれることができる。例えば、、（ｉ）ＳＴＩＮＧアゴニスト；（ｉｉ）複合体；及び（ｉｉｉ）任意の第３の成分（複合体及びＳＴＩＮＧアゴニスト以外）は、同じ組成物及び／又は同じ容器（例えば、シリンジ）に含まれることができる。
幾つかの実施形態では、（ｉ）ＳＴＩＮＧアゴニスト及び（ｉｉ）複合体は、別々の組成物及び／又は別々の容器（例えば、別々のシリンジ）に提供されることができる。幾つかの実施形態では、（ｉ）ＳＴＩＮＧアゴニスト及び（ｉｉｉ）任意の第３の成分（複合体及びＳＴＩＮＧアゴニスト以外）は、別々の組成物及び／又は別々の容器（例えば、別々のシリンジ）に提供されることができる。幾つかの実施形態では、（ｉｉ）複合体及び（ｉｉｉ）任意の第３の成分（複合体及びＳＴＩＮＧアゴニスト以外）は、別々の組成物及び／又は別々の容器（例えば、別々のシリンジ）に提供されることができる。例えば、（ｉ）ＳＴＩＮＧアゴニスト；（ｉｉ）複合体；及び（ｉｉｉ）任意の第３の成分（複合体及びＳＴＩＮＧアゴニスト以外）は、別々の組成物及び／又は別々の容器（例えば、別々のシリンジ）に提供されることができる。
以下で、本発明の組合せの成分、即ち、ＳＴＩＮＧアゴニスト、及び細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及び少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体、並びにこれらの実施形態は、詳細に記載される。以下（ｉ）～（ｉｉｉ）が理解される。（ｉ）本発明の組合せの好ましい実施形態は、ＳＴＩＮＧアゴニストの好ましい実施形態を含む；（ｉｉ）本発明の組合せの好ましい実施形態は、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及び少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体の好ましい実施形態を含む；及び（ｉｉｉ）本発明の組合せのより好ましい実施形態は、ＳＴＩＮＧアゴニストの好ましい実施形態と、細胞透過性ペプチド，少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及び少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体の好ましい実施形態とを含む。
幾つかの実施形態では、本発明の組合せ、即ち、ＳＴＩＮＧアゴニスト、並びに細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及び少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体は、更に追加の活性化合物と組み合わせて、投与されることができる（例えば、腫瘍／癌治療の文脈で）。他の実施形態では、本発明の組合せ、即ち、ＳＴＩＮＧアゴニスト、並びに細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及び少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体は、更に追加の活性化合物と組み合わせて、投与されない（例えば、腫瘍／癌治療の文脈で）。言い換えれば、本発明の組合せは、「単独」療法としても有用であることができる。
細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープを含む複合体
本発明の組合せは、以下ａ）～ｃ）：
ａ）細胞透過性ペプチド；
ｂ）少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ；及び
ｃ）少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニスト
を含む複合体を含み、
成分ａ）～ｃ）、即ち細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及び少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニストは、共有結合される。以下において、「複合体」又は「本発明の組合せに含まれる複合体」という用語を用いて、共有結合される細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及び少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体を指すこともある。
本発明の組合せに含まれるそのような複合体は、（ｉ）多エピトープ細胞傷害性Ｔ細胞媒介免疫の刺激、（ｉｉ）Ｔｈ細胞の誘導、及び（ｉｉｉ）免疫記憶の促進、を同時に提供する。これにより、本発明の組合せに含まれる複合体は、特に改善された抗腫瘍活性を有する強力なワクチンを提供する。
好ましくは、本発明の組合せに含まれる複合体は、ポリペプチド又はタンパク質、特に、組換えポリペプチド又は組換えタンパク質であり、好ましくは、組換え融合タンパク質又は組換え融合ポリペプチドである。
本明細書で使用される（即ち明細書を通して）「組換え」という用語は、それが（本明細書では、ポリペプチド又はタンパク質）自然に発生しないことを意味する。したがって、組換えポリペプチド又は組換えタンパク質である発明の組合せに含まれる複合体は、典型的には、成分ａ）～ｃを含み、成分ａ）～成分ｃ）は異なる起源のものであることができ、即ち、この組合せにおいて自然に発生しない。幾つかの実施形態では、「組換え」という用語は、半合成又は合成起源である、ペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質を指す。組換えペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質は、組換えＤＮＡ技術を使用して結合されることができる異なる起源のＤＮＡ分子の組合せの発現から生じることがある。幾つかの例では、組換えペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質は、その起源又は操作によって、自然界で関連しているタンパク質の全部又は一部と関連しないことがある。更に、組換えペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質は、自然界で結合されるもの以外のポリペプチドと結合されることができる。組換えペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質は、当技術分野で知られた方法、例えば、十分に確立されたプロトコルを用いた、原核生物及び真核生物の発現系によって、製造されることができる（例えば、ＬａＶａｌｌｉｅ，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ （１９９５）５．１．１－５．１．８；Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９９８）５．１０．１－５．１０．４１参照）。例えば、本発明の組合せに含まれる複合体において、成分ａ）～ｃ）は、異なる起源のものであることができ、即ち、複合体の成分ａ）～ｃ）は通常、自然界で共に発生しない（その成分ａ）～ｃ）の組合せにより、複合体は、「組換え」であることができる）。
本発明の文脈では、即ち本出願を通して、「ペプチド」、「ポリペプチド」、「タンパク質」、及びこれらの用語のバリエーションは、それぞれ、融合タンパク質を含むペプチド、オリゴペプチド、オリゴマー又はタンパク質を指し、好ましくは通常のペプチド結合によって、又は、代わりに、例えば、等価性（ｉｓｏｓｔｅｒｉｃ）ペプチドの場合のように、修飾されたペプチド結合によって互いに結合された少なくとも２つのアミノ酸を含む。ペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質は、Ｌ－アミノ酸及び／又はＤ－アミノ酸からなることができる。好ましくは、ペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質は、Ｌ－アミノ酸から（完全に）構成されるか、又はＤ－アミノ酸から（完全に）構成され、それによって「レトロインベルソペプチド配列」を形成する。「レトロインベルソ（ペプチド）配列」という用語は、配列の方向が反転し、各アミノ酸残基のキラリティーが反転した、線状ペプチド配列の異性体を指す（例えば、Ｊａｍｅｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３６８，７４４－７４６（１９９４）；Ｂｒａｄｙ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３６８，６９２－６９３（１９９４）参照）。特に、「ペプチド」、「ポリペプチド」、「タンパク質」という用語は、非ペプチド構造要素を含むペプチド類似体として定義される「ペプチド模倣体」も含み、そのペプチドは、天然の親ペプチドの生物学的作用を模倣又は拮抗することができる。ペプチド模倣体は、酵素的に切断しやすいペプチド結合等の古典的なペプチド特性がない。特に、ペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質は、これらのアミノ酸に加えて遺伝暗号で定義された２０個のアミノ酸以外のアミノ酸を含むこともでき、遺伝暗号で定義された２０のアミノ酸以外のアミノ酸から構成されることもできる。特に、本発明の文脈におけるペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質は、当業者にはよく知られている、翻訳後の成熟過程等の自然の過程、又は化学的過程によって修飾されたアミノ酸から等しく構成されることができ、そのような修飾については文献に詳しく記載されている。これらの修飾は、ポリペプチドにおいて：ペプチド骨格において、アミノ酸鎖において、更にはカルボキシ末端又はアミノ末端のどこにでも現れる。特に、ペプチド又はポリペプチドは、ユビキチン化に後に分岐したり、分岐の有無にかかわらず環状になったりすることができる。このタイプの修飾は、当業者にはよく知られている天然又は合成の翻訳後プロセスの結果であることができる。特に本発明の文脈における「ペプチド」、「ポリペプチド」、「タンパク質」という用語は、修飾されたペプチド、ポリペプチド、及びタンパク質も含む。例えば、ペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質の修飾は、アセチル化、アシル化、ＡＤＰリボシル化、アミド化、ヌクレオチド又はヌクレオチド誘導体の共有結合固定、脂質又は脂質誘導体の共有結合固定、ホスファチジルイノシトールの共有結合固定、共有結合性又は非共有結合性の架橋、環化、ジスルフィド結合形成、脱メチル化、ペグ化を含むグリコシル化、ヒドロキシル化、ヨウ化、メチル化、ミリストイル化、酸化、タンパク質分解プロセス、リン酸化、プレニル化、ラセミ化、セネロイル化（ｓｅｎｅｌｏｙｌａｔｉｏｎ）、硫酸化、アルギニル化又はユビキチン化等のアミノ酸付加を含むことができる。そのような修飾は、文献に完全に記載されている（Ｓｅｉｆｔｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ａｎａｌｙｓｉｓ ｆｏｒ ｐｒｏｔｅｉｎ ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ ａｎｄ ｎｏｎｐｒｏｔｅｉｎ ｃｏｆａｃｔｏｒｓ，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．１８２：６２６－６４６ ａｎｄ Ｒａｔｔａｎ ｅｔ ａｌ．，（１９９２）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：Ｐｏｓｔ－ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ ａｎｄ Ａｇｉｎｇ，Ａｎｎ ＮＹ Ａｃａｄ Ｓｃｉ，６６３：４８－６２）。したがって、「ペプチド」、「ポリペプチド」、「タンパク質」という用語は、例えば、リポペプチド、リポタンパク質、糖ペプチド、糖タンパク質等を含むことが好ましい。
しかしながら、特に好ましい実施形態では、本明細書に記載される複合体は、「古典的な」ペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質であり、それにより、「古典的な」ペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質は、通常、通常のペプチド結合によって互いに結合される、遺伝暗号によって定義される２０のアミノ酸から選択されたアミノ酸で構成される。
本発明の組合せに含まれる複合体がポリペプチド又はタンパク質である場合、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、好ましくは少なくとも８０、少なくとも９０、より好ましくは少なくとも１００、少なくとも１１０、更により好ましくは少なくとも１２０、少なくとも１３０、特に好ましくは少なくとも１４０、又は最も好ましくは少なくとも１５０のアミノ酸残基を含むことが好ましい。
本明細書で使用されるように（即ち、本出願を通して）、「配列変異体」という用語は、参照配列におけるあらゆる変更を指す。「配列変異体」という用語は、ヌクレオチド配列変異体及びアミノ酸配列変異体を含む。好ましくは、参照配列は、「配列及び配列番号の表」（配列表）に記載されている配列、即ち配列番号１～配列番号５５のいずれかである。特に、配列変異体は、参照配列に対して、（配列の全長にわたって）少なくとも７０％又は少なくとも７５％、好ましくは少なくとも８０％又は少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％又は少なくとも９５％、更により好ましくは少なくとも９７％又は少なくとも９８％、特に好ましくは少なくとも９９％の配列同一性を共有する。配列同一性は、以下に記載されるように計算されることができる。特に、配列変異体は、参照配列の特定の機能を保持する。特に、アミノ酸配列変異体は、参照配列内のアミノ酸の１以上が削除又は置換されたり、１以上のアミノ酸が参照アミノ酸配列の配列に挿入されたりする、変更された配列を有する。変更の結果、アミノ酸配列変異体は、参照配列に対して、少なくとも７０％又は少なくとも７５％、好ましくは少なくとも８０％又は少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％又は少なくとも９５％、更により好ましくは少なくとも９７％又は少なくとも９８％、特に好ましくは少なくとも９９％同一である、アミノ酸配列を有する。例えば、少なくとも９０％同一である変異体配列は、参照配列の１００のアミノ酸当たり、１０以下の変更、即ち、削除、挿入、又は置換の任意の組み合わせを有する。
本発明の文脈では、本発明のクエリアミノ酸配列に対して、少なくとも、例えば９５％の「配列同一性を共有する」アミノ酸配列は、対象アミノ酸配列が、クエリアミノ酸配列の各１００のアミノ酸配列当たり５個までのアミノ酸の変更を含むことができる以外は、対象アミノ酸配列が、クエリ配列に対して同一であることを意味することを意図している。言い換えれば、クエリアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性の配列を有するアミノ酸配列を得るために、対象配列のアミノ酸残基の最大５％（１００のうちの５）が、好ましくは、上記の変異体又は断片の画定内で、別のアミノ酸で挿入又は置換されたり、削除されたりすることができる。当然、核酸配列でも同様に適用される。
正確な対応のない（アミノ酸又は核酸）配列については、第１の配列の「同一性（％）」は、第２の配列に関して決定されることができる。一般に、比較されるこれらの２つの配列は、配列間で最大の相関を与えるようにアライメントされることができる。これは、アライメントの程度を高めるために、一方又は両方の配列に「ギャップ」を挿入することが含むことができる。同一性（％）は、比較される各配列の長さ全体にわたって決定されることができ（いわゆるグローバルアラインメント）、同じ又は類似の長さの配列、又はより短く画定された長さ（いわゆるローカルアラインメント）の配列に特に好適であり、これは不等長の配列により適している。
２つ以上の配列の同一性と相同性を比較する方法は、当技術分野でよく知られている。２つの配列が同一である割合は、例えば数学的アルゴリズムを使用して決定されることができる。使用されることができる数学的アルゴリズムの好ましいが限定ではない例としては、Ｋａｒｌｉｎ ｅｔ ａｌ．（１９９３），ＰＮＡＳ ＵＳＡ，９０：５８７３－５８７７のアルゴリズムである。そのようなアルゴリズムは、ＢＬＡＳＴ ｆａｍｉｌｙのプログラム、例えば、ＢＬＡＳＴ又はＮＢＬＡＳＴプログラムに組み込まれ（Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，１９９０，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５，４０３－４１０、又はＡｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．（１９９７），Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ，２５：３３８９－３４０２も参照）、ワールドワイドウェブサイト（ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ）のＮＣＢＩのホームページ及びＦＡＳＴＡ（Ｐｅａｒｓｏｎ（１９９０），Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．１８３，６３－９８；Ｐｅａｒｓｏｎ ａｎｄ Ｌｉｐｍａｎ（１９８８），Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ ８５，２４４４－２４４８．）を介して入手しやすい。ある程度まで他の配列に対して同一である配列は、これらのプログラムによって特定されることができる。更に、Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｐａｃｋａｇｅ， ｖｅｒｓｉｏｎ ９．１（Ｄｅｖｅｒｅｕｘ ｅｔ ａｌ．，１９８４，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，３８７－３９５）で利用可能なプログラム、例えば、特にプログラム（ＢＥＳＴＦＩＴ及びＧＡＰ）を使用して、２つのポリヌクレオチド間の同一性（％）、並びに２つのポリペプチド配列間の同一性（％）及び相同性（％）又は同一性であることを決定することができる。ＢＥＳＴＦＩＴは、（Ｓｍｉｔｈ ａｎｄ Ｗａｔｅｒｍａｎ（１９８１），Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ． １４７，１９５－１９７．）の「局所的相同性」アルゴリズムを使用し、２つの配列間の類似性の最も良い単一の領域を見つける。
一般に、参照されたアミノ酸配列に存在する１つ以上のアミノ酸の置換は、保存的に行われることが好ましい。保存的置換の例としては、Ｉｌｅ、ＶａＩ、Ｌｅｕ、又はＡｌａ等、１つの脂肪族残基を別のものに置換する場合や、ＬｙｓとＡｒｇとの間、ＧｌｕとＡｓｐとの間、又はＧｌｎとＡｓｎとの間等、１つの極性残基を別のものに置換する場合等がある。他のこのような保存的置換、例えば、同様の疎水性特性を有する領域全体の置換がよく知られている（Ｋｙｔｅ ａｎｄ Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅ，１９８２，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５７（１）：１０５－１３２）。本発明の文脈では、１以上のＬ－アミノ酸と１以上のＤ－アミノ酸との置換は、保存的置換とみなされる。アミノ酸置換の例を以下の表１に示す：
Figure 2023545178000001
成分ａ）－細胞透過性ペプチド
細胞透過性ペプチド（ＣＰＰ）は、効率的な送達、即ち、抗原提示細胞（ＡＰＣ）、特に樹状細胞（ＤＣ）、ひいては樹状細胞の抗原処理機構への、特に少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープの輸送及び搭載を可能にする。
「細胞透過性ペプチド」（「ＣＰＰ」）という用語は、一般的に、異なる種類のカーゴ分子を細胞膜を介して輸送することができ、それによって、様々な分子カーゴ（ナノサイズの粒子から小さな化学分子及びＤＮＡの大きな断片まで）の細胞取り込みを促進する短いペプチドを示すために使用される。細胞透過性ペプチドに結合したカーゴ分子の「細胞移行」とは、一般的に、細胞膜を通過したカーゴ分子の輸送、及びそれによって細胞内へのカーゴ分子の侵入を意味する。特定の場合に応じて、カーゴ分子はその後、細胞質内で放出されたり、細胞内小器官に向けられたり、更に細胞表面に提示されることができる。本発明の組合せに含まれる、細胞透過性ペプチド又は複合体（前記細胞透過性ペプチドを含む）の細胞透過能、又はインターナリゼーションは、生きた細胞及び固定された細胞のフローサイトメトリー又は蛍光顕微鏡観察、当該ペプチド又は複合体を形質導入した細胞の免疫細胞化学、及びウェスタンブロットを含む、当業者に知られている標準的な方法によって確認することができる。
細胞透過性ペプチドは、典型的には、高い相対的存在量の、リジン又はアルギニン等の正電荷を帯びたアミノ酸を含むアミノ酸組成物、又は極性／電荷を帯びたアミノ酸及び非極性の疎水性アミノ酸の交互パターンを含む配列を有するアミノ酸組成物を有する。これら２種類の構造は、それぞれポリカチオン性又は両親媒性と呼ばれる。細胞透過性ペプチドは、サイズ、アミノ酸配列、及び電荷が異なるが、全てのＣＰＰには、細胞膜を転座し（ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｅ）、細胞の小器官又は細胞質への様々な分子カーゴの送達を促進する能力という共通の特徴を有する。現在、ＣＰＰ転座の理論は、３つの主要な侵入メカニズム：膜における直接浸透；エンドサイトーシスを介した侵入；及び移行構造の形成を介した転座、を区別する。ＣＰＰの導入は現在進行中の研究分野である。細胞透過性ペプチドは、癌やウイルス阻害剤を含む様々な疾患の治療における薬物送達剤として、また細胞の標識化や画像化のための造影剤として、医学において多くの応用が見出されている。
典型的には、細胞透過性ペプチド（ＣＰＰ）は、８から５０残基のペプチドであり、細胞膜を通過して殆どの細胞型に入る能力を有する。或いは、天然のタンパク質に存在するという起源を反映して、タンパク質形質導入ドメイン（ＰＴＤ）とも呼ばれる。Ｆｒａｎｋｅｌ及びＰａｂｏは同時に、Ｇｒｅｅｎ及びＬｏｗｅｎｓｔｅｉｎに、ヒト免疫不全ウイルス１（ＨＩＶ－ＴＡＴ）由来のトランス活性化転写活性化因子が細胞に浸透する能力について説明した（Ｆｒａｎｋｅｌ，Ａ．Ｄ．ａｎｄ Ｃ．Ｏ． Ｐａｂｏ，Ｃｅｌｌｕｌａｒ ｕｐｔａｋｅ ｏｆ ｔｈｅ ｔａｔ ｐｒｏｔｅｉｎ ｆｒｏｍ ｈｕｍａｎ ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ｖｉｒｕｓ．Ｃｅｌｌ，１９８８．５５（６）：ｐ．１１８９－９３）。１９９１年、キイロショウジョウバエからのアンテナペディアホメオドメイン（ＤＮＡ結合ドメイン）の神経細胞への形質導入が記載された（Ｊｏｌｉｏｔ，Ａ．，ｅｔ ａｌ．，アンテナペディアｈｏｍｅｏｂｏｘ ｐｅｐｔｉｄｅ ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ｎｅｕｒａｌ ｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｓｉｓ． Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ， １９９１． ８８（５）： ｐ． １８６４－８）。１９９４年に、アミノ酸配列ＲＱＩＫＩＹＦＱＮＲＲＭＫＷＫＫ（配列番号１）を有するペネトラチンと呼ばれる最初の１６量体ペプチドＣＰＰが、アンテナペディアのホメオドメインの３番目のヘリックスから特徴づけられ（Ｄｅｒｏｓｓｉ，Ｄ．，ｅｔａｌ．，Ｔｈｅ ｔｈｉｒｄ ｈｅｌｉｘ ｏｆ ｔｈｅ Ａｎｔｅｎｎａｐｅｄｉａ ｈｏｍｅｏドメイン ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｅｓ ｔｈｒｏｕｇｈ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｍｅｍｂｒａｎｅｓ．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ，１９９４．２６９（１４）：ｐ．１０４４４－５０）、その後１９９８年に、タンパク質の形質導入に必要なアミノ酸配列ＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ（配列番号２）を有するＴＡＴの最小ドメインが同定された（Ｖｉｖｅｓ，Ｅ．，Ｐ．Ｂｒｏｄｉｎ，ａｎｄ Ｂ．Ｌｅｂｌｅｕ，Ａ ｔｒｕｎｃａｔｅｄ ＨＩＶ－１ Ｔａｔ ｐｒｏｔｅｉｎ ｂａｓｉｃ ドメイン ｒａｐｉｄｌｙ ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｅｓ ｔｈｒｏｕｇｈ ｔｈｅ ｐｌａｓｍａ ｍｅｍｂｒａｎｅ ａｎｄ ａｃｃｕｍｕｌａｔｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｃｅｌｌ ｎｕｃｌｅｕｓ．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ，１９９７．２７２（２５）：ｐ．１６０１０－７）。過去２０年にわたって、数十のペプチドが、ウイルスタンパク質（例えばＶＰ２２（Ｅｌｌｉｏｔｔ，Ｇ．ａｎｄ Ｐ．Ｏ’Ｈａｒｅ，Ｉｎｔｅｒｃｅｌｌｕｌａｒ ｔｒａｆｆｉｃｋｉｎｇ ａｎｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｂｙ ａ ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓ ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ｐｒｏｔｅｉｎ．Ｃｅｌｌ，１９９７．８８（２）：ｐ．２２３－３３）及びＺＥＢＲＡ（Ｒｏｔｈｅ，Ｒ．，ｅｔ ａｌ．，Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｃｅｌｌ－ｐｅｎｅｔｒａｔｉｎｇ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒ ｖｉｒｕｓ ＺＥＢＲＡ ｔｒａｎｓ－ａｃｔｉｖａｔｏｒ．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ，２０１０．２８５（２６）：ｐ．２０２２４－３３））、又は毒液（例えば、メリチン（Ｄｅｍｐｓｅｙ，Ｃ．Ｅ．，Ｔｈｅ ａｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ｍｅｌｉｔｔｉｎ ｏｎ ｍｅｍｂｒａｎｅｓ．Ｂｉｏｃｈｉｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔａ，１９９０．１０３１（２）：ｐ．１４３－６１）、マストパラン（Ｋｏｎｎｏ，Ｋ．，ｅｔ ａｌ．，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｏｆ ｅｕｍｅｎｉｎｅ ｍａｓｔｏｐａｒａｎ－ＡＦ（ＥＭＰ－ＡＦ），ａ ｎｅｗ ｍａｓｔ ｃｅｌｌ ｄｅｇｒａｎｕｌａｔｉｎｇ ｐｅｐｔｉｄｅ ｉｎ ｔｈｅ ｖｅｎｏｍ ｏｆ ｔｈｅ ｓｏｌｉｔａｒｙ ｗａｓｐ（Ａｎｔｅｒｈｙｎｃｈｉｕｍ ｆｌａｖｏｍａｒｇｉｎａｔｕｍ ｍｉｃａｄｏ）．Ｔｏｘｉｃｏｎ，２０００．３８（１１）：ｐ．１５０５－１５）、マウロカルシン（ｍａｕｒｏｃａｌｃｉｎ）（Ｅｓｔｅｖｅ，Ｅ．，ｅｔ ａｌ．，Ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｓｃｏｒｐｉｏｎ ｔｏｘｉｎ ｍａｕｒｏｃａｌｃｉｎｅ ｉｎｔｏ ｃｅｌｌｓ．Ｅｖｉｄｅｎｃｅ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｔｏｘｉｎ ｃｒｏｓｓｅｓ ｔｈｅ ｐｌａｓｍａ ｍｅｍｂｒａｎｅ．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ，２００５．２８０（１３）：ｐ．１２８３３－９）、クロタミン（Ｎａｓｃｉｍｅｎｔｏ，Ｆ．Ｄ．，ｅｔ ａｌ．，Ｃｒｏｔａｍｉｎｅ ｍｅｄｉａｔｅｓ ｇｅｎｅ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｉｎｔｏ ｃｅｌｌｓ ｔｈｒｏｕｇｈ ｔｈｅ ｂｉｎｄｉｎｇ ｔｏ ｈｅｐａｒａｎ ｓｕｌｆａｔｅ ｐｒｏｔｅｏｇｌｙｃａｎｓ．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ，２００７．２８２（２９）：ｐ．２１３４９－６０）又はブフォリン（ｂｕｆｏｒｉｎ）（Ｋｏｂａｙａｓｈｉ，Ｓ．，ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｍｂｒａｎｅ ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ ｔｈｅ ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｐｅｐｔｉｄｅ ｂｕｆｏｒｉｎ ２．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００４．４３（４９）：ｐ．１５６１０－６）を含む様々な起源から記載された。ポリアルギニン（Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、及びＲ１２）（Ｆｕｔａｋｉ， Ｓ．， ｅｔ ａｌ．， Ａｒｇｉｎｉｎｅ－ｒｉｃｈ ｐｅｐｔｉｄｅｓ． Ａｎ ａｂｕｎｄａｎｔ ｓｏｕｒｃｅ ｏｆ ｍｅｍｂｒａｎｅ－ｐｅｒｍｅａｂｌｅ ｐｅｐｔｉｄｅｓ ｈａｖｉｎｇ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ａｓ ｃａｒｒｉｅｒｓ ｆｏｒ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｐｒｏｔｅｉｎ ｄｅｌｉｖｅｒｙ． Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ， ２００１． ２７６（８）： ｐ． ５８３６－４０）又はトランスポータン（Ｐｏｏｇａ，Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ ｐｅｎｅｔｒａｔｉｏｎ ｂｙ ｔｒａｎｓｐｏｒｔａｎ．ＦＡＳＥＢ Ｊ，１９９８．１２（１）：ｐ．６７－７７）を含む合成ＣＰＰも設計された。上記に記載されるＣＰＰのいずれも、本発明の組合せに含まれる複合体における細胞透過性ペプチド、即ち成分ａ）として、使用されることができる。特に、本発明の組合せに含まれる複合体における成分ａ）、即ちＣＰＰは、アミノ酸配列ＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ（配列番号２）を有するＴＡＴの最小ドメインを含むことができる。幾つかの実施形態では、本発明の組合せに含まれる複合体における成分ａ）、即ちＣＰＰは、アミノ酸配列ＲＱＩＫＩＹＦＱＮＲＲＭＫＷＫＫ（配列番号１）を有するペネトラチンを含むことができる。
本発明の組成物に含まれる複合体において細胞透過性ペプチド、即ち成分ａ）として使用されることができる様々なＣＰＰは、以下の概説（Ｍｉｌｌｅｔｔｉ，Ｆ．，Ｃｅｌｌ－ｐｅｎｅｔｒａｔｉｎｇ ｐｅｐｔｉｄｅｓ：ｃｌａｓｓｅｓ，ｏｒｉｇｉｎ，ａｎｄ ｃｕｒｒｅｎｔ ｌａｎｄｓｃａｐｅ．Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ Ｔｏｄａｙ １７（１５－１６）：８５０－６０，２０１２）にも開示される。言い換えれば、Ｍｉｌｌｅｔｔｉ，Ｆ．，２０１２，Ｃｅｌｌ－ｐｅｎｅｔｒａｔｉｎｇ ｐｅｐｔｉｄｅｓ：ｃｌａｓｓｅｓ，ｏｒｉｇｉｎ，ａｎｄ ｃｕｒｒｅｎｔ ｌａｎｄｓｃａｐｅ．Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ Ｔｏｄａｙ １７（１５－１６）：８５０－６０において開示されるＣＰＰは、本発明の組合せに含まれる複合体において、細胞透過性ペプチド、即ち成分ａ）として使用されることができる。これは、特に、カチオン性ＣＰＰ、両親媒性ＣＰＰ、疎水性ＣＰＰのほか、ヘパラン結合タンパク質、ＲＮＡ結合タンパク質、及びＤＮＡ結合タンパク質に由来するＣＰＰ（Ｍｉｌｌｅｔｔｉ，Ｆ．，Ｃｅｌｌ－ｐｅｎｅｔｒａｔｉｎｇ ｐｅｐｔｉｄｅｓ：ｃｌａｓｓｅｓ，ｏｒｉｇｉｎ，ａｎｄ ｃｕｒｒｅｎｔ ｌａｎｄｓｃａｐｅ．Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ Ｔｏｄａｙ １７（１５－１６）：８５０－６０，２０１２の表１を参照）、シグナルペプチドに由来するＣＰＰ（Ｍｉｌｌｅｔｔｉ，Ｆ．，Ｃｅｌｌ－ｐｅｎｅｔｒａｔｉｎｇ ｐｅｐｔｉｄｅｓ：ｃｌａｓｓｅｓ，ｏｒｉｇｉｎ，ａｎｄ ｃｕｒｒｅｎｔ ｌａｎｄｓｃａｐｅ．Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ Ｔｏｄａｙ １７（１５－１６）：８５０－６０，２０１２の表２を参照）、抗菌ペプチドに由来するＣＰＰ（Ｍｉｌｌｅｔｔｉ，Ｆ．，Ｃｅｌｌ－ｐｅｎｅｔｒａｔｉｎｇ ｐｅｐｔｉｄｅｓ：ｃｌａｓｓｅｓ，ｏｒｉｇｉｎ，ａｎｄ ｃｕｒｒｅｎｔ ｌａｎｄｓｃａｐｅ．Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ Ｔｏｄａｙ １７（１５－１６）：８５０－６０，２０１２の表３を参照）、ウイルスタンパク質に由来するＣＰＰ（Ｍｉｌｌｅｔｔｉ，Ｆ．，Ｃｅｌｌ－ｐｅｎｅｔｒａｔｉｎｇ ｐｅｐｔｉｄｅｓ：ｃｌａｓｓｅｓ，ｏｒｉｇｉｎ，ａｎｄ ｃｕｒｒｅｎｔ ｌａｎｄｓｃａｐｅ．Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ Ｔｏｄａｙ １７（１５－１６）：８５０－６０，２０１２の表４を参照）、天然のタンパク質に由来するＣＰＰ（Ｍｉｌｌｅｔｔｉ，Ｆ．，Ｃｅｌｌ－ｐｅｎｅｔｒａｔｉｎｇ ｐｅｐｔｉｄｅｓ：ｃｌａｓｓｅｓ，ｏｒｉｇｉｎ，ａｎｄ ｃｕｒｒｅｎｔ ｌａｎｄｓｃａｐｅ．Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ Ｔｏｄａｙ １７（１５－１６）：８５０－６０，２０１２の表５を参照）、及び設計されたＣＰＰ及びペプチドライブラリーに由来するＣＰＰ（Ｍｉｌｌｅｔｔｉ，Ｆ．，Ｃｅｌｌ－ｐｅｎｅｔｒａｔｉｎｇ ｐｅｐｔｉｄｅｓ：ｃｌａｓｓｅｓ，ｏｒｉｇｉｎ，ａｎｄ ｃｕｒｒｅｎｔ ｌａｎｄｓｃａｐｅ．Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ Ｔｏｄａｙ １７（１５－１６）：８５０－６０，２０１２の表６を参照）が挙げられる。
細胞透過性ペプチドは、エプスタイン・バール・ウイルス（ＥＢＶ）の「ＺＥＢＲＡ」タンパク質に由来することが好ましい。「ＺＥＢＲＡ」（Ｚｔａ、Ｚ、ＥＢ１、又はＢＺＬＦ１としても知られる）は、一般的に、エプスタイン・バール・ウイルス（ＥＢＶ）の塩基性ロイシンジッパー（ｂＺＩＰ）転写活性化因子を指す。細胞透過性を示す、ＺＥＢＲＡの最小ドメインは、ＺＥＢＲＡの１７０残基から２２０残基に及ぶことが確認されている。ＺＥＢＲＡのアミノ酸配列は、ＮＣＢＩ受入番号ＹＰ＿４０１６７３で開示され、以下の配列番号３で示される２４５のアミノ酸を含む。
Figure 2023545178000002
 （配列番号３－ＺＥＢＲＡアミノ酸配列（エプスタイン・バール・ウイルスからの天然配列）（ＹＰ＿４０１６７３））
前記細胞透過性ペプチドが、以下を有することが好ましい。
ｉ）合計で５～５０のアミノ酸、好ましくは合計で１０～４５のアミノ酸、より好ましくは合計で１５～４５のアミノ酸の、前記ペプチドのアミノ酸配列の長さ；及び／又は
ｉｉ）ＺＥＢＲＡの最小ドメインの断片又はそのような断片の配列変異体を含むアミノ酸配列であって、前記最小ドメインは、配列番号３のＺＥＢＲＡアミノ酸配列の残基１７０～残基２２０に及び、任意に、１、２、３、４、又は５のアミノ酸が、前記ペプチドの細胞透過能を損なうことなく、置換、削除、及び／又は追加される。
したがって、細胞透過性ペプチドは、以下を有することが好ましい。
ｉ）合計で５～５０のアミノ酸、好ましくは合計で１０～４５のアミノ酸、より好ましくは合計で１５～４５のアミノ酸の、前記ペプチドのアミノ酸配列の長さ；及び
ｉｉ）ＺＥＢＲＡの最小ドメインの断片又はそのような断片の配列変異体を含むアミノ酸配列であって、前記最小ドメインは、配列番号３のＺＥＢＲＡアミノ酸配列の残基１７０～残基２２０に及び、任意に、１、２、３、４、又は５のアミノ酸が、前記ペプチドの細胞透過能を損なうことなく、置換、削除、及び／又は追加される。
このような好ましいＣＰＰは、例えば、国際公開第ＷＯ２０１４／０４１５０５号に開示される。
最近では、ウイルスタンパク質ＺＥＢＲＡに由来するＣＰＰが、（ｉ）直接転座及び（ｉｉ）脂質ラフト媒介エンドサイトーシスの両方によって、生体膜を通ってタンパク質カーゴを伝達することが記載された（Ｒｏｔｈｅ Ｒ，Ｌｉｇｕｏｒｉ Ｌ，Ｖｉｌｌｅｇａｓ－Ｍｅｎｄｅｚ Ａ，Ｍａｒｑｕｅｓ Ｂ，Ｇｒｕｎｗａｌｄ Ｄ，Ｄｒｏｕｅｔ Ｅ，ｅｔ ａｌ．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｃｅｌｌ－ｐｅｎｅｔｒａｔｉｎｇ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒ ｖｉｒｕｓ ＺＥＢＲＡ ｔｒａｎｓ－ａｃｔｉｖａｔｏｒ．Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２０１０；２８５（２６）：２０２２４－３３）。本発明者らは、これらの２つの侵入メカニズムが、それぞれＣＤ８＋及びＣＤ４＋Ｔ細胞へのカーゴ抗原のＭＨＣクラスＩ及びＩＩ制限提示の両方を促進するはずであると仮定している。したがって、このようなＣＰＰは、樹状細胞（ＤＣ）にマルチエピトープペプチドを送達し、その後、ＣＴＬ及びＴｈ細胞の活性化及び抗腫瘍機能を促進することができる。したがって、このようなＣＰＰは、本発明の組合せに含まれる複合体を抗原提示細胞（ＡＰＣ）に効率的に送達し、マルチエピトープＭＨＣクラスＩ及びＩＩ制限提示を導くことができる。
本発明の文脈において、「ＭＨＣクラスＩ」という用語は、主要組織適合性複合体分子の２つの主要クラスのうちの１つを示す。ＭＨＣクラスＩ（「ＭＨＣＩ」とも記される）分子は、体の全ての有核細胞上に存在する。ＭＨＣクラスＩの機能は、細胞傷害性細胞（ＣＴＬ）に対するエピトープを表示することである。ヒトでは、ＭＨＣクラスＩ分子は、α－とβ２－ミクログロブリン（ｂ２ｍ）の２つのポリペプチド鎖からなる。α鎖のみが多型でＨＬＡ遺伝子にコードされているが、ｂ２ｍサブユニットは多型ではなくβ－２ミクログロブリン遺伝子にコードされている。本発明の文脈では、「ＭＨＣクラスＩＩ」という用語は、腫瘍組織適合性複合体分子の他の一次クラスを示す。ＭＨＣクラスＩＩ（「ＭＨＣＩＩ」とも記される）分子は、マクロファージ、樹状細胞、Ｂ細胞等の少数の特殊な細胞型にのみ存在し、これらは全て専用の抗原提示細胞（ＡＰＣ）である。
上述されるように、ＺＥＢＲＡの最小ドメインの断片の配列変異体は、特に全長に亘って、ＺＥＢＲＡの最小ドメインの断片（配列番号３の残基１７０から残基２２０）に対して、少なくとも７０％又は少なくとも７５％、好ましくは少なくとも８０％又は少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％又は少なくとも９５％、更により好ましくは少なくとも９７％又は少なくとも９８％、特に好ましくは少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を、細胞透過性ペプチドの細胞透過能を損なうことなく、共有することが好ましい。特に、上記で定義されたＺＥＢＲＡの最小ドメインの「断片」は、その切断された配列、即ち、天然配列のアミノ酸配列と比較してＮ末端、Ｃ末端、及び／又は配列内（ｉｎｔｒａｓｅｑｕｅｎｔｉａｌｌｙ）で切断されたアミノ酸配列として理解されることが好ましい。更に、ＺＥＢＲＡの最小ドメインのそのような「断片」は、合計で５～５０のアミノ酸、好ましくは合計で１０～４５のアミノ酸、より好ましくは合計で１５～４５のアミノ酸の長さを有することが好ましい。
より好ましくは、上述されるように、細胞透過性ペプチドの断片又はその変異体は、ＭＨＣクラスＩ及び／又はＭＨＣクラスＩＩ分子の文脈において、抗原又は抗原エピトープ等のカーゴ分子を抗原提示細胞等の細胞表面に提示する当該ペプチドの能力を更に保持する。ＭＨＣクラスＩ及び／又はＭＨＣクラスＩＩ分子の文脈において、細胞透過性ペプチド又は当該細胞透過性ペプチドを含む複合体が抗原又は抗原エピトープ等のカーゴ分子を細胞表面に提示する能力は、これらのエピトープに特異的なＭＨＣ制限ＣＤ４＋又はＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖及び／又は機能を刺激する能力を含む、当業者に知られた標準的な方法によって確認することができる。
以下：
ｉ）合計で５～５０のアミノ酸、好ましくは合計で１０～４５のアミノ酸、より好ましくは合計で１５～４５のアミノ酸の、前記ペプチドのアミノ酸配列の長さ；及び/又は
ｉｉ）ＺＥＢＲＡの最小ドメインの断片又はそのような断片の変異体を含むアミノ酸配列であって、前記最小ドメインは、配列番号３のＺＥＢＲＡアミノ酸配列の残基１７０～残基２２０に及び、任意に、１、２、３、４、又は５のアミノ酸が、前記ペプチドの細胞透過能を損なうことなく、置換、削除、及び／又は追加される；
を含む、好ましい細胞透過性ペプチドは、参照された配列と比較して、少なくとも１つの保存的に置換されたアミノ酸を有するアミノ酸配列を含むことが好ましく、所定のアミノ酸残基が同様の物理化学的特性を有する残基によって置換されることを意味する。
特に好ましくは、以下：
ｉ）合計で５～５０のアミノ酸、好ましくは合計で１０～４５のアミノ酸、より好ましくは合計で１５～４５のアミノ酸の、前記ペプチドのアミノ酸配列の長さ；及び／又は
ｉｉ）ＺＥＢＲＡの最小ドメインの断片又はそのような断片の変異体を含むアミノ酸配列であって、前記最小ドメインは、配列番号３のＺＥＢＲＡアミノ酸配列の残基１７０～残基２２０に及び、任意に、１、２、３、４、又は５のアミノ酸が、前記ペプチドの細胞透過能を損なうことなく、置換、削除、及び／又は追加される；
を含む好ましい細胞透過性ペプチドは、配列番号３のＺＥＢＲＡアミノ酸配列に対する位置１８９に相当する位置で、Ｓｅｒ（Ｓ）に置換されたＣｙｓ（Ｃ）を含む。
したがって、そのような好ましい細胞透過性ペプチドは、以下一般式（Ａ）：
Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９Ｘ１０Ｘ１１ＳＸ１３Ｘ１４Ｘ１５Ｘ１６Ｘ１７
の配列を含み、前記ペプチドの細胞透過能を損なうことなく、置換、削除、及び／又は追加される０、１、２、３、４、又は５のアミノ酸を含むアミノ酸配列を有することが好ましい。
式中、Ｘ１はＫ、Ｒ、又はＨであり、Ｘ１はＫ又はＲであることが好ましく；
Ｘ２はＲ、Ｋ、又はＨであり、Ｘ２はＲ又はＫであることが好ましく；
Ｘ３はＹ、Ｗ、又はＦであり、Ｘ３はＹ、Ｗ、又はＦであることが好ましく；
Ｘ４はＫ、Ｒ、又はＨであり、Ｘ４はＫ又はＲであることが好ましく；
Ｘ５はＮ又はＱであり；
Ｘ６はＲ、Ｋ、又はＨであり、Ｘ６はＲ又はＫであることが好ましく；
Ｘ７はＶ、Ｉ、Ｍ、Ｌ、Ｆ、又はＡであり、Ｘ７はＶ、Ｉ、Ｍ、又はＬであることが好ましく；
Ｘ８はＡ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、又はＧであり、Ｘ８はＡ又はＧであることが好ましく；
Ｘ９はＳ又はＴであり；
Ｘ１０はＲ、Ｋ、又はＨであり、Ｘ１０はＲ又はＫであることが好ましく；
Ｘ１１はＫ、Ｒ、又はＨであり、Ｘ１１はＫ又はＲであることが好ましく；
Ｘ１３はＲ、Ｋ、又はＨであり、Ｘ１３はＲ又はＫであることが好ましく；
Ｘ１４はＡ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、又はＧであり、Ｘ１４はＡ又はＧであることが好ましく；
Ｘ１５はＫ、Ｒ、又はＨであり、Ｘ１５はＫ又はＲであることが好ましく；
Ｘ１６はＦ、Ｌ、Ｖ、Ｉ、Ｙ、Ｗ、又はＭであり、Ｘ１６はＦ、Ｙ、又はＷであることが好ましく；
Ｘ１７はＫ、Ｒ、又はＨであり、Ｘ１７はＫ又はＲであることが好ましい。
好ましくは、このようなペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質は、Ｌ－アミノ酸から（完全に）構成されるか、又はＤ－アミノ酸から（完全に）構成され、それによって「レトロインベルソペプチド配列」を形成する。「レトロインベルソ（ペプチド）配列」という用語は、配列の方向が反転し、各アミノ酸残基のキラリティーが反転した、線状ペプチド配列の異性体を指す（例えば、Ｊａｍｅｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３６８，７４４－７４６（１９９４）；Ｂｒａｄｙ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３６８，６９２－６９３（１９９４）参照）。
特定の実施形態では、細胞透過性ペプチドは、一般的に、一般式（Ａ）によって上記で定義され、式中Ｘ１はＫである。
特定の実施形態では、細胞透過性ペプチドは、一般的に、一般式（Ａ）によって上記で定義され、式中Ｘ２はＲである。
特定の実施形態では、細胞透過性ペプチドは、一般的に、一般式（Ａ）によって上記で定義され、式中Ｘ３はＹである。
特定の実施形態では、細胞透過性ペプチドは、一般的に、一般式（Ａ）によって上記で定義され、式中Ｘ４はＫである。
特定の実施形態では、細胞透過性ペプチドは、一般的に、一般式（Ａ）によって上記で定義され、式中Ｘ５はＮである。
特定の実施形態では、細胞透過性ペプチドは、一般的に、一般式（Ａ）によって上記で定義され、式中Ｘ６はＲである。
特定の実施形態では、細胞透過性ペプチドは、一般的に、一般式（Ａ）によって上記で定義され、式中Ｘ７はＶである。
特定の実施形態では、細胞透過性ペプチドは、一般的に、一般式（Ａ）によって上記で定義され、式中Ｘ８はＡである。
特定の実施形態では、細胞透過性ペプチドは、一般的に、一般式（Ａ）によって上記で定義され、式中Ｘ９はＳである。
特定の実施形態では、細胞透過性ペプチドは、一般的に、一般式（Ａ）によって上記で定義され、式中Ｘ１０はＲである。
特定の実施形態では、細胞透過性ペプチドは、一般的に、一般式（Ａ）によって上記で定義され、式中Ｘ１１はＫである。
特定の実施形態では、細胞透過性ペプチドは、一般的に、一般式（Ａ）によって上記で定義され、式中Ｘ１３はＲである。
特定の実施形態では、細胞透過性ペプチドは、一般的に、一般式（Ａ）によって上記で定義され、式中Ｘ１４はＡである。
特定の実施形態では、細胞透過性ペプチドは、一般的に、一般式（Ａ）によって上記で定義され、式中Ｘ１５はＫである。
特定の実施形態では、細胞透過性ペプチドは、一般的に、一般式（Ａ）によって上記で定義され、式中Ｘ１６はＦである。
特定の実施形態では、細胞透過性ペプチドは、一般的に、一般式（Ａ）によって上記で定義され、式中Ｘ１７はＫである。
特定の実施形態では、細胞透過性ペプチドは、一般的に、一般式（Ａ）によって上記で定義され、一般式（Ａ）に対する位置１２に相当する位置のアミノ酸は、Ｓｅｒ（Ｓ）である。
以下：
ｉ）合計で５～５０のアミノ酸、好ましくは合計で１０～４５のアミノ酸、より好ましくは合計で１５～４５のアミノ酸の、前記ペプチドのアミノ酸配列の長さ；及び／又は
ｉｉ）ＺＥＢＲＡの最小ドメインの断片、又はそのような断片の変異体を含むアミノ酸配列であって、前記最小ドメインは、配列番号３のＺＥＢＲＡアミノ酸配列の残基１７０～残基２２０に及び、任意に、１、２、３、４、又は５のアミノ酸が、前記ペプチドの細胞透過能を損なうことなく、置換、削除、及び／又は追加される、
を有する好ましい細胞透過性ペプチドが、配列番号４～１３のアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列、又は前記ペプチドの細胞透過能を損なわく、その配列変異体、好ましくは前記ペプチドの細胞透過能を損なうことなく、置換、削除、及び／又は追加された０、１、２、３、４、又は５のアミノ酸を有する配列変異体を含む又はからなることも特に好ましい。
Figure 2023545178000003
 （配列番号４）
Figure 2023545178000004
 （配列番号５）
Figure 2023545178000005
 （配列番号６）
Figure 2023545178000006
Figure 2023545178000007
 （配列番号７）
Figure 2023545178000008
 （配列番号８）
Figure 2023545178000009
 （配列番号９）
Figure 2023545178000010
 （配列番号１０）
Figure 2023545178000011
 （配列番号１１）
Figure 2023545178000012
 （配列番号１２）
Figure 2023545178000013
 （配列番号１３）
それによって、特に好ましい細胞透過性ペプチドは、配列番号６（ＣＰＰ３／Ｚ１３）、配列番号７（ＣＰＰ４／Ｚ１４）、配列番号８（ＣＰＰ５／Ｚ１５）、又は配列番号１１（ＣＰＰ８／Ｚ１８）のアミノ酸配列、又は前記ペプチドの細胞透過能を損なうことなくその配列変異体を含む又はからなるアミノ酸配列を有し、好ましくは、前記ペプチドの細胞透過能を損なうことなく、置換、削除、及び／又は追加された０、１、２、３、４、又は５のアミノ酸を有する配列変異体を有することが好ましい。更に、より好ましい細胞透過性ペプチドは、配列番号６（ＣＰＰ３／Ｚ１３）又は配列番号７（ＣＰＰ４／Ｚ１４）のアミノ酸配列、又は前記ペプチドの細胞透過能を損なわないその配列変異体を含む又はからなるアミノ酸配列を有し、前記ペプチドの細胞透過能を損なうことなく、置換、削除、及び／又は追加された０、１、２、３、４、又は５のアミノ酸を有する配列変異体を有することが好ましい。更に、最も好ましい細胞透過性ペプチドは、配列番号６（ＣＰＰ３／Ｚ１３）のアミノ酸配列、又は前記ペプチドの細胞透過能を損なわないその配列変異体を含む又はからなるアミノ酸配列を有し、前記ペプチドの細胞透過能を損なうことなく、置換、削除、及び／又は追加された０、１、２、３、４、又は５のアミノ酸を有する配列変異体を有することが好ましい。
好ましい一実施形態では、本発明の細胞透過性ペプチドは、配列番号６（ＣＰＰ３／Ｚ１３）を含む又はからなるアミノ酸配列を有する。
他の好ましい実施形態では、本発明の細胞透過性ペプチドは、配列番号７（ＣＰＰ４／Ｚ１４）を含む又はからなるアミノ酸配列を有する。
他の好ましい実施形態では、本発明の細胞透過性ペプチドは、配列番号８（ＣＰＰ５／Ｚ１５）を含む又はからなるアミノ酸配列を有する。
他の好ましい実施形態では、本発明の細胞透過性ペプチドは、配列番号１１（ＣＰＰ８／Ｚ１８）を含む又はからなるアミノ酸配列を有する。
細胞透過性ペプチドの一次アミノ酸配列は、本発明から逸脱することなく、グリコシル化又はリン酸化等によって更に翻訳後修飾され得ることは、当業者であれば理解するであろう。
特定の実施形態では、細胞透過性ペプチドは、上述されるアミノ酸配列に加えて、以下のいずれか、又は以下の任意の組合せを更に含んでもよい。
（ｉ）核局在化シグナル（ＮＬＳ）。そのようなシグナルは、当業者にはよく知られており、Ｎａｉｒ ｅｔ ａｌ．（２００３，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．３１（１）：３９７-３９９）に記載される。
（ｉｉ）Ｋａｐｏｏｒ ｅｔ ａｌ．（２０１２，ＰＬｏＳ ＯＮＥ ７（４）：ｅ３５１８７）に記載されているもの、及びｈｔｔｐ：／／ｃｒｄｄ．ｏｓｄｄ．ｎｅｔ／ｒａｇｈａｖａ／ｔｕｍｏｒｈｏｐｅ／ｇｅｎｅｒａｌ．ｐｈｐ？に列挙されているもの等、腫瘍ホーミングペプチドを含むターゲティングペプチド
好ましくは、細胞透過性ペプチドは、抗原又は抗原エピトープに結合し、当該抗原又は抗原エピトープの細胞移行を促進する。
本発明の組合せに含まれる複合体は、１つの単一の（ｓｉｎｇｌｅ）細胞透過性ペプチド又は１超の細胞透過性ペプチドを含むことができる。本発明の組合せに含まれる複合体は、５個以下の細胞透過性ペプチドを含むことが好ましく、発明の組合せに含まれる複合体は、４個以下の細胞透過性ペプチドを含むことがより好ましく、本発明の組合せに含まれる複合体は、３個以下の細胞透過性ペプチドを含むことが更により好ましく、本発明の組合せに含まれる複合体は、２個以下の細胞透過性ペプチドを含むことが特に好ましく、本発明の組合せに含まれる複合体は、１個（ｓｉｎｇｌｅ）の細胞透過性ペプチドを含むことが最も好ましい。
成分ｂ）－抗原／抗原エピトープ
本発明の組合せに含まれる複合体は、成分ｂ）として、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープを含む。
一般に、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープは、どのような性質のものであってもよく、例えば、（ｉ）ペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質、（ｉｉ）多糖類、（ｉｉｉ）脂質、（ｉｖ）リポタンパク質又はリポペプチド、（ｖ）糖脂質、（ｖｉ）核酸、及び（ｖｉｉ）低分子薬物又は毒素からなる群から選択されることができる。したがって、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープは、ペプチド、タンパク質、多糖類、脂質、リポタンパク質及び糖脂質を含むこれらの組合せ、核酸（例えば、ＤＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、アンチセンスオリゴヌクレオチド、デコイＤＮＡ、プラスミド）、又は低分子薬物（例えば、シクロスポリンＡ、パクリタキセル、ドキソルビシン、メトトレキサート、５－アミノレブリン酸）、又はこれらの任意の組合せ（特に、１超の抗原又は抗原エピトープが本発明の組合せに含まれる複合体に含まれている場合）であることができる。複合体に含まれる少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープは、（ポリ）ペプチドであることが好ましい。
本明細書で使用されるように、「抗原」は、適応免疫応答の受容体の標的として、特に抗体、Ｔ細胞受容体、及び／又はＢ細胞受容体の標的として機能する任意の構造物質である。「エピトープ」は、「抗原決定因子」とも呼ばれ、免疫系、特に抗体、Ｔ細胞受容体、及び／又はＢ細胞受容体によって認識される抗原の部分（又は断片）である。したがって、１つの抗原が少なくとも１つのエピトープを有する、即ち、単一の抗原が１以上のエピトープを有する。本発明の文脈では、「エピトープ」という用語は主に、抗原提示細胞の表面に提示され、主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）に結合するＴ細胞エピトープを示すために使用される。ＭＨＣクラスＩ分子によって提示されるＴ細胞エピトープは、一般的には、８～１１のアミノ酸の長さのペプチドであるが、これに限定されない。ＭＨＣクラスＩＩ分子は、一般的には、１２～２５のアミノ酸の長さのより長いペプチドを提示するが、これに限定されない。
好ましくは、複合体は、抗原の少なくとも１つの断片を含み、当該断片は、当該抗原の少なくとも１つのエピトープを含む。本明細書で使用されるように、抗原の「断片」は、抗原の少なくとも１０の連続したアミノ酸、好ましくは抗原の少なくとも１５の連続したアミノ酸、より好ましくは抗原の少なくとも２０の連続したアミノ酸、更により好ましくは抗原の少なくとも２５の連続したアミノ酸、最も好ましくは抗原の少なくとも３０の連続したアミノ酸を含む。抗原又は抗原エピトープ（又は断片）の「配列変異体」は、上記に定義される通りであり、即ち、配列変異体は、参照配列に対して、少なくとも７０％又は少なくとも７５％、好ましくは少なくとも８０％又は少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％又は少なくとも９５％、更により好ましくは少なくとも９７％又は少なくとも９８％、特に好ましくは少なくとも９９％同一である、（アミノ酸）配列を有する。抗原／抗原断片／エピトープの文脈において、「機能的」配列変異体は、例えば抗原（断片）に含まれるエピトープの機能が損なわれていない、又は消失されていない、即ち、免疫原性があり、好ましくは全長抗原に含まれるエピトープと同じ免疫原性を有することを意味する。幾つかの実施形態では、明細書に記載されるように、例えば、癌／腫瘍抗原（断片）に含まれるエピトープのアミノ酸配列は、変異しないので、（天然起源の）参照エピトープ配列と同一である。
好ましくは、本発明の組合せに含まれる複合体は、１超の抗原又は抗原エピトープ、特に２、３、４、５、６、７、８、９、１０以上の抗原又は抗原エピトープを含み、より好ましくは、本発明の組合せに含まれる複合体は、（少なくとも）２又は３個の抗原又は抗原エピトープを含み、更により好ましくは、本発明の組合せに含まれる複合体は、（少なくとも）４又は５個の抗原又は抗原エピトープを含む。１超の抗原又は抗原エピトープが本発明の組合せに含まれる複合体に含まれる場合、当該抗原又は抗原エピトープは、特に本発明の組合せに含まれる複合体において、例えば、他の抗原又は抗原エピトープに、及び／又は成分ａ）、即ち細胞透過性ペプチドに、及び／又は成分ｃ）、即ちＴＬＲペプチドアゴニストに共有結合されることが理解される。
複合体に含まれる様々な抗原又は抗原エピトープは、同じであっても異なっていてもよい。複合体に含まれる様々な抗原又は抗原エピトープは、互いに異なっていることが好ましく、それによって多重抗原性及び／又はマルチエピトープ複合体を提供する。
更に、１超の抗原又は抗原エピトープ、特に２、３、４、５、６、７、８、９、１０以上の抗原又は抗原エピトープは、本発明の組合せに含まれる複合体に連続的に配置されることが好ましい。これは、特に、複合体に含まれる全ての抗原及び／又は抗原エピトープが、成分ａ）、即ち細胞透過性ペプチドによっても、成分ｃ）、即ちＴＬＲペプチドアゴニストによっても、遮られない並び（ｓｔｒｅｔｃｈ）で配置されることを意味する。むしろ、例えば、全ての抗原及び／又は抗原エピトープのこのような並びの前後に、複合体において、成分ａ）及び成分ｃ）は配置される。これによって、「多重抗原性ドメイン」は形成されることができる。本明細書で使用されるように、「多重抗原性ドメイン」という用語は、少なくとも２つの（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９以上）異なる抗原（の断片）、又は少なくとも２つの（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９以上）異なる抗原の抗原エピトープを含む（ポリ）ペプチド等のドメインを指す。好ましくは、「多重抗原性ドメイン」は、少なくとも２つの（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９以上）異なる抗原の断片を含み、各断片は、少なくとも１つの抗原エピトープを含む。より好ましくは、「多重抗原性ドメイン」は、２～５個の異なる抗原の断片を含み、各断片は、少なくとも１つの抗原エピトープを含む。より更に好ましくは、「多重抗原性ドメイン」は、（正確には）３又は４個の異なる抗原の断片を含み、各断片は、少なくとも１つの抗原エピトープを含む。
このような方法で連続的に配置された抗原及び／又は抗原エピトープは、任意に、例えば、成分ａ）、即ち細胞透過性ペプチドでも、成分ｃ）、即ちＴＬＲペプチドアゴニストでもない、スペーサー又はリンカー（例えば以下のように）によって互いに結合されることができる。
しかしながら、代わりに、様々な抗原及び／又は抗原エピトープは、本発明の組合せに含まれる複合体において、任意の他の方法でも配置されることができ、例えば、２以上の抗原及び／又は抗原エピトープの間に成分ａ）及び／又は成分ｃ）が配置され、即ち、成分ａ）と成分ｃ）（又はその逆）との間に１以上の抗原及び／又は抗原エピトープが配置され、任意に、成分ａ）及び／又は成分ｃ）のそれぞれの他端に１以上の抗原及び／又は抗原エピトープ配置される。
同じ種類の疾患、特に同じ種類の腫瘍に関連する多数の異なる抗原又は抗原エピトープが、単一の複合体によって有利に含まれることができることが理解される。或いは、同じ種類の疾患、特に同じ種類の腫瘍に関連する多数の異なる抗原又は抗原エピトープは、異なる複合体に含まれる、異なる抗原又は抗原エピトープのサブセット、特に特定の種類の疾患（例えば、腫瘍）の文脈において互いに補完するサブセットに分配されることができ、これにより、異なるサブセットを含むこのような異なる複合体が、例えば単一のワクチンで、それを必要とする対象に同時に投与されることが有利になることがある。
少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープは、ＭＨＣクラスＩ及び／又はＭＨＣクラスＩＩの文脈及び／又はＣＤ１の文脈における細胞表面で提示され、ＭＨＣクラスＩ及び／又はＭＨＣクラスＩＩの文脈における細胞表面での提示が好まれる。「ＭＨＣクラスＩの文脈（ｃｏｎｔｅｘｔ）におけるエピトープ提示」という用語は、特に、細胞の表面のＭＨＣクラスＩ分子の溝に存在するＣＤ８＋エピトープを指す。「ＭＨＣクラスＩＩの文脈（ｃｏｎｔｅｘｔ）におけるエピトープ提示」という用語は、特に、細胞の表面のＭＨＣクラスＩＩ分子の溝に存在するＣＤ４＋エピトープを指す。「ＣＤ１の文脈（ｃｏｎｔｅｘｔ）におけるエピトープ提示」という用語は、特に、細胞の表面の分化抗原群１分子の溝に存在する脂質エピトープを指す。
有利なことに、本発明の組合せに含まれる複合体は、細胞透過性ペプチドと、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープとを含み、ＭＨＣクラスＩ及びＭＨＣクラスＩＩコンテクストにおいて、抗原提示細胞の細胞表面における当該エピトープの輸送及び提示を可能にするので、ワクチン接種及び免疫療法において有用である。
本発明の組合せに含まれる複合体は、少なくとも１つのＣＤ４＋エピトープ及び／又は少なくとも１つのＣＤ８＋エピトープである、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープを含むことが好ましい。
本明細書で使用される「ＣＤ４＋エピトープ」又は「ＣＤ４＋制限エピトープ」は、ＣＤ４＋Ｔ細胞によって認識されるエピトープを示し、前記エピトープは、特に、ＭＨＣクラスＩＩ分子の溝に存在する抗原断片からなる。本発明の組合せに含まれる複合体に含まれる単一のＣＤ４＋エピトープは、約１２～２５のアミノ酸からなることが好ましい。また、例えば、約８～２５のアミノ酸又は約６～１００のアミノ酸からなることもできる。
本明細書で使用される「ＣＤ８＋エピトープ」又は「ＣＤ８＋制限エピトープ」という用語は、ＣＤ８＋Ｔ細胞によって認識されるエピトープを示し、前記エピトープは、特に、ＭＨＣクラスＩ分子の溝に存在する抗原断片からなる。本発明の組合せに含まれる複合体に含まれる単一のＣＤ８＋エピトープは、約８～１１のアミノ酸からなることが好ましい。また、例えば、約８～１５のアミノ酸又は約６～１００のアミノ酸からなることもできる。
好ましくは、少なくとも１つの抗原は、癌／腫瘍関連抗原、癌／腫瘍特異的抗原、又は病原体からの抗原性タンパク質の抗原性決定因子に対応するＣＤ４＋エピトープ及び／又はＣＤ８＋エピトープを含むことができる、又は少なくとも１つの抗原エピトープは、癌／腫瘍関連抗原、癌／腫瘍特異的抗原、又は病原体からの抗原性タンパク質の抗原性決定因子に対応するＣＤ４＋エピトープ及び／又はＣＤ８＋エピトープからなることができる。より好ましくは、少なくとも１つの抗原は、癌／腫瘍関連抗原又は癌／腫瘍特異的抗原の抗原性決定因子に対応するＣＤ４＋エピトープ及び／又はＣＤ８＋エピトープを含むことができる、又は少なくとも１つの抗原エピトープは、癌／腫瘍関連抗原又は癌／腫瘍特異的抗原の抗原性決定因子に対応するＣＤ４＋エピトープ及び／又はＣＤ８＋エピトープからなることができる。更により好ましくは、少なくとも１つの抗原は、腫瘍関連抗原又は腫瘍特異抗原の抗原性決定因子に対応するＣＤ４＋エピトープ及び／又はＣＤ８＋エピトープを含むことができる、又は少なくとも１つの抗原エピトープは、腫瘍関連抗原又は腫瘍特異抗原の抗原性決定因子に対応するＣＤ４＋エピトープ及び／又はＣＤ８＋エピトープからなることができる。
本発明の組合せに含まれる複合体は、少なくとも２つの抗原又は抗原エピトープを含み、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープは、ＣＤ４＋エピトープを含む又はからなり、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープは、ＣＤ８＋エピトープを含む又はからなる。現在では、Ｔｈ細胞（ＣＤ４＋）は、ＤＣライセンス化においても、腫瘍部位におけるＣＴＬ（ＣＤ８＋）の動員及び維持においても、抗腫瘍免疫応答において中心的な役割を果たすことが確立されている。したがって、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープがＣＤ４＋エピトープを含む又はからなり、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープがＣＤ８＋エピトープを含む又はからなる、少なくとも２つの抗原又は抗原エピトープを含む本発明の組合せに含まれる複合体は、ＣＴＬ及びＴｈ細胞の同時プライミングを可能にする統合免疫応答を提供するので、１つのＣＤ８＋エピトープのみ又は１つのＣＤ４＋エピトープのみに対する免疫よりも好ましい。
好ましくは、本発明の組合せに含まれる複合体は、少なくとも２つの抗原又は抗原エピトープを含み、少なくとも２つの抗原又は抗原エピトープは、少なくとも２つ、例えば、２、３、４、５、６、７、８、９以上のＣＤ４＋エピトープ、及び／又は少なくとも２つ、例えば、２、３、４、５、６、７、８、９以上のＣＤ８＋エピトープを含む又はからなる。それによって、少なくとも２つの抗原又は抗原エピトープは、好ましくは異なる抗原又は抗原エピトープであり、より好ましくは、少なくとも２つの抗原又は抗原エピトープは互いに異なるが、同じ種類の腫瘍に関連する。多重抗原性ワクチンは、（ｉ）抗原消失変異体の増殖を回避する、（ｉｉ）不均一な腫瘍塊内の異なる腫瘍細胞を標的とする、（ｉｉｉ）患者間の腫瘍のばらつきを回避する。したがって、本発明の組合せに含まれる複合体は、特に少なくとも４つの抗原又は抗原エピトープ、特に少なくとも２つのＣＤ８＋エピトープ及び少なくとも２つのＣＤ４＋エピトープを含むことが好ましい。本発明の組合せに含まれるそのような複合体は、マルチエピトープＣＤ８ ＣＴＬ及びＣＤ４ Ｔｈ細胞を誘導して、腫瘍細胞に対抗するために相乗的に機能させ、効率的な抗腫瘍免疫を促進する。Ｔｈ細胞は、ワクチン接種後に監視された長期的な細胞免疫の維持にも関与している。本発明の組合せに含まれるそのような複合体は、ポリクローナル、マルチエピトープ免疫応答、及び多機能的ＣＤ８＋及びＣＤ４＋Ｔ細胞を誘導するため、有効な抗腫瘍活性を示す
本発明の組合せに含まれる複合体は、少なくとも２つの抗原又は抗原エピトープを含むことが好ましく、本発明の組合せに含まれる複合体は、少なくとも３つの抗原又は抗原エピトープを含むことがより好ましく、本発明の組合せに含まれる複合体は、少なくとも４つの抗原又は抗原エピトープを含むことが更により好ましく、本発明の組合せに含まれる複合体は、少なくとも５つの抗原又は抗原エピトープを含むことが特に好ましく、本発明の組合せに含まれる複合体は、少なくとも６つの抗原又は抗原エピトープを含むことが最も好ましい。複合体に含まれる抗原又は抗原エピトープは、同じでも異なっていてもよく、複合体に含まれる抗原又は抗原エピトープは、互いに異なっていることが好ましい。複合体は、少なくとも１つのＣＤ４＋エピトープ及び少なくとも１つのＣＤ８＋エピトープを含むことが好ましい。
本発明の組合せに含まれる複合体は、１超のＣＤ４＋エピトープ、例えば、同じ抗原又は異なる抗原からの２以上のＣＤ４＋エピトープを含むことが好ましく、ＣＤ８＋エピトープを含まないことが好ましい。本発明の組合せに含まれる複合体は、１超のＣＤ８＋エピトープ、例えば、同じ抗原又は異なる抗原からの２以上のＣＤ８＋エピトープを含むことが好ましく、ＣＤ４＋エピトープを含まないことが好ましい。しかしながら、本発明の組合せに含まれる複合体は、（ｉ）少なくとも１つのＣＤ４＋エピトープ、例えば、同じ抗原又は異なる抗原からの２以上のＣＤ４＋エピトープ、及び（ｉｉ）１超のＣＤ８＋エピトープ、例えば、同じ抗原又は異なる抗原からの少なくとも１つのＣＤ８＋エピトープ、を含むことが最も好ましい。
少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープは、任意の種類の抗原又は抗原エピトープ、例えば、癌／腫瘍関連抗原、癌／腫瘍特異的抗原、及び／又はウイルス、細菌、真菌、原生動物、及び多細胞寄生抗原タンパク質を含む病原体からの抗原性タンパク質（から１つ以上のエピトープ）を含むことができるが、癌又は腫瘍エピトープが好ましい。
当業者であれば、通常、治療される疾患を考慮して抗原又は抗原エピトープを選択することを理解するであろう。したがって、抗原又は抗原エピトープは、通常、治療される疾患と関連している（又は関係している）。特定の疾患の文脈において、多数の抗原が当分野で知られている。例えば、腫瘍／癌を治療するために、当業者は、腫瘍／癌抗原（又は抗原エピトープ）、特に特定の種類の腫瘍／癌に有用である腫瘍／癌抗原（又は抗原エピトープ）を選択する。幾つかの実施形態では、患者は、議論されている特定の抗原が治療に有用であるかどうかを判断するために（又は治療に有用な抗原又は抗原エピトープを特定するために）、（例えば、分離されたサンプルを用いて、癌／腫瘍が特定の抗原を発現しているかどうかを特定することで）、特定の抗原について検査／スクリーニングを受けることができる。
少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープは、少なくとも１つの癌又は腫瘍エピトープを含む又はからなることが好ましい。より好ましくは、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープは、癌／腫瘍関連抗原又は癌／腫瘍特異的抗原の少なくとも１つのエピトープを含む又はからなることが更に好ましい。
本明細書で使用されるように「癌／腫瘍抗原／エピトープ」は、癌／腫瘍細胞によって産生される抗原／エピトープである。このようなエピトープは、典型的には、特定の種類の癌／腫瘍に特異的である（又は関連している）。例えば、癌／腫瘍エピトープは、神経膠腫エピトープを含む。特に、癌／腫瘍関連（ｃａｎｃｅｒ／ｔｕｍｏｒ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ）（癌／腫瘍関係（ｃａｎｃｅｒ／ｔｕｍｏｒ－ｒｅｌａｔｅｄ）とも）抗原（ＴＡＡ）は、癌／腫瘍細胞と正常細胞の両方によって発現される抗原である。例えば、ＴＡＡは、腫瘍細胞によって発現される１つ以上の表面タンパク質又はポリペプチド、核タンパク質又は糖タンパク質、又はそれらの断片であることができる。例えば、ヒト腫瘍関連抗原は、分化抗原（メラノサイト分化抗原等）、変異性抗原（ｐ５３等）、過剰発現した細胞抗原（ＨＥＲ２等）、ウイルス抗原（ヒトパピローマウイルスタンパク質等）、及び精巣と卵巣の生殖細胞で発現されるが、正常な体細胞では沈黙している癌／精巣（ＣＴ）抗原（ＭＡＧＥ及びＮＹ－ＥＳＯ－１等）を含む。多くのＴＡＡは、癌や腫瘍に特異的ではなく、正常な組織でも見つかることがある。したがって、これらの抗原は、出生時から（或いはそれ以前から）存在していることがある。そのため、免疫系がこれらの抗原に対して自己耐性を獲得した可能性がある。
対して、癌／腫瘍特異的抗原（ＴＳＡ）は抗原であり、癌／腫瘍細胞によって特異的に発現されるが、正常細胞では発現されない。ＴＳＡは、主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）分子の文脈で、新抗原特異的Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）によって特異的に認識されることができる。したがって、ＴＳＡは特に新抗原が含まれる。一般的に、新抗原はネオ抗原であり、以前は存在しなかったため、免疫系にとって「新しい」ものである。ネオ抗原は、典型的には体細胞変異によるものである。癌／腫瘍の文脈は、癌／腫瘍特異的ネオ抗原では、通常、癌／腫瘍が発生する前には存在せず、癌／腫瘍特異的ネオ抗原は、通常、癌細胞／腫瘍細胞の体細胞遺伝子変異によってコードされる。免疫学的観点からは、腫瘍ネオ抗原は、真に外来のタンパク質であり、正常なヒトの臓器／組織には全く存在しない。ウイルス性の病因を持たない殆どのヒト腫瘍では、腫瘍ネオ抗原は、例えば、一塩基変異（ＳＮＶ）、挿入及び欠失（インデル）、遺伝子融合、フレームシフト変異、及び構造的変異（ＳＶ）を含む様々な非同義の遺伝子変化に由来することができる。例えば、腫瘍ネオ抗原は、Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｎｏｖｅｍｂｅｒ ２０１９，９８０～９９２ページに開示されているように、当該分野で知られているインシリコの予測ツールを使用して同定することができる。ネオ抗原は免疫系にとって新しいものであるため、これらの抗原の自己耐性のリスクは、癌／腫瘍関連抗原と比較してかなり低い。しかしながら、全ての癌の腫瘍特異的変異のセットは独特であるようである。したがって、癌／腫瘍特異的抗原、特にネオ抗原は、当業者に知られている方法、例えば癌ゲノム配列決定によって、癌と診断された対象において同定されることができる。潜在的なネオ抗原は、（癌）ゲノムのタンパク質コード部分内の変異を特定する癌ゲノム配列決定又はディープシークエンシング技術等、当業者に知られている方法によって予測されることができる。同定後、それぞれの癌／腫瘍特異的ネオ抗原及び／又は癌／腫瘍特異的ネオ抗原エピトープは、本発明の組合せに含まれる複合体において使用されることができる。
幾つかの実施形態では、本発明の組合せに含まれる複合体は、１以上の癌／腫瘍関連エピトープ及び／又は１以上の癌／腫瘍関連抗原を含む（ただし、癌／腫瘍特異的エピトープを含まないことが好ましい）。他の実施形態では、本発明の組合せに含まれる複合体は、１以上の癌／腫瘍特異的エピトープ及び／又は１以上の癌／腫瘍特異的抗原を含む（ただし癌／腫瘍関連エピトープを含まないことが好ましい）。本発明の組合せに含まれる複合体は、（ｉ）１以上の癌／腫瘍関連エピトープ及び／又は１以上の癌／腫瘍関連抗原及び（ｉｉ）１以上の癌／腫瘍特異的エピトープ及び／又は１以上の癌／腫瘍特異的抗原の両方含むこともできる。
適切な癌／腫瘍エピトープは、例えば癌／腫瘍エピトープデータベース、例えば、ｖａｎ ｄｅｒ Ｂｒｕｇｇｅｎ Ｐ，Ｓｔｒｏｏｂａｎｔ Ｖ，Ｖｉｇｎｅｒｏｎ Ｎ，Ｖａｎ ｄｅｎ Ｅｙｎｄｅ Ｂ．Ｐｅｐｔｉｄｅ ｄａｔａｂａｓｅ：Ｔ ｃｅｌｌ－ｄｅｆｉｎｅｄ ｔｕｍｏｒ ａｎｔｉｇｅｎｓ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎ ２０１３；ＵＲＬ：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃａｎｃｅｒｉｍｍｕｎｉｔｙ．ｏｒｇ／ｐｅｐｔｉｄｅ／から検索することができ、ＣＤ４＋又はＣＤ８＋Ｔ細胞によって認識されるヒト腫瘍抗原は、その発現パターンに基づいて、又はデータベース「Ｔ抗原」（ＴＡＮＴＩＧＥＮ ｖｅｒｓｉｏｎ １．０，Ｄｅｃ １，２００９；ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ ｂｙ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ Ｃｏｒｅ ａｔ Ｃａｎｃｅｒ Ｖａｃｃｉｎｅ Ｃｅｎｔｅｒ，Ｄａｎａ－Ｆａｒｂｅｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ；ＵＲＬ：ｈｔｔｐ：／／ｃｖｃ．ｄｆｃｉ．ｈａｒｖａｒｄ．ｅｄｕ／ｔａｄｂ／）から、主に４つのグループに分類される。
本発明の組合せに含まれる複合体において有用な癌／腫瘍抗原の具体例としては、以下の抗原：前立腺：前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、ＰＡＰ、ＰＳＣＡ（ＰＮＡＳ ９５（４）１７３５－１７４０ １９９８）、前立腺ムチン（ＰＭＡ）（Ｂｅｃｋｅｔｔ ａｎｄ Ｗｒｉｇｈｔ，１９９５，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ６２：７０３－７１０）、プロスターゼ（Ｐｒｏｓｔａｓｅ）、Ｈｅｒ－２ｎｅｕ、ＳＰＡＳ－１；メラノーマ：ＴＲＰ－２、チロシナーゼ、Ｍｅｌａｎ Ａ／Ｍａｒｔ－１、ｇｐｌＯＯ、ＢＡＧＥ、ＧＡＧＥ、ＧＭ２ガングリオシド；胸：Ｈｅｒ２－ｎｅｕ、キネシン２、ＴＡＴＡ要素調節因子１、腫瘍タンパク質Ｄ５２、ＭＡＧＥＤ、ＩＮＧ２、ＨＩＰ－５５、ＴＧＦ－１抗アポトーシス因子、ＨＯＭ－Ｍｅｌ－４０／ＳＳＸ２、上皮抗原（ＬＥＡ １３５）、ＤＦ３１ＭＵＣ１抗原（Ａｐｏｓｔｏｌｏｐｏｕｌｏｓ ｅｔ ａｌ．，１９９６ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．７４：４５７－４６４；Ｐａｎｄｅｙ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５５：４０００－４００３）；精巣：ＭＡＧＥ－１，ＨＯＭ－Ｍｅｌ－４０／ＳＳＸ２、ＮＹ－ＥＳＯ－１；結腸直腸：ＥＧＦＲ、ＣＥＡ；肺：ＭＡＧＥ Ｄ、ＥＧＦＲ卵巣Ｈｅｒ－２ｎｅｕ；膀胱：移行細胞癌腫（ＴＣＣ）（Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１７：６８５－６８７）、幾つかの癌：Ｅｐｈａ２、Ｅｐｈａ４、ＰＣＤＧＦ、ＨＡＡＨ、メソセリン；ＥＰＣＡＭ；ＮＹ－ＥＳＯ－１、糖タンパク質ＭＵＣ１及びＮＩＵＣ１０ムチンｐ５（特に変異バージョン）、ＥＧＦＲ；種々雑多な腫瘍：癌関連血清抗原（ＣＡＳＡ）及び癌抗原１２５（ＣＡ１２５）（Ｋｉｅｒｋｅｇａａｒｄ ｅｔ ａｌ．， １９９５， Ｇｙｎｅｃｏｌ． Ｏｎｃｏｌ． ５９： ２５１－２５４）、上皮糖タンパク質４０（ＥＧＰ４０）（Ｋｉｅｖｉｔ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ７１：２３７－２４５）、扁平細胞癌腫抗原（ＳＣＣ）（Ｌｏｚｚａ ｅｔ ａｌ．，１９９７ Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１７：５２５－５２９）、カテプシンＥ（Ｍｏｔａ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ａｍ．Ｊ Ｐａｔｈｏｌ．１５０：１２２３－１２２９）、メラノーマ中チロシナーゼ（Ｆｉｓｈｍａｎ ｅｔ ａｌ．，１９９７ Ｃａｎｃｅｒ ７９：１４６１－１４６４）、脳海綿体の細胞核抗原（ＰＣＮＡ）（Ｎｏｔｅｌｅｔ ｅｔ ａｌ．，１９９７Ｓｕｒｇ．Ｎｅｕｒｏｌ．４７：３６４－３７０）、甲状腺乳頭癌における３５ｋＤの腫瘍関連自己抗原（Ｌｕｃａｓ ｅｔ ａｌ．，１９９６ Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１６：２４９３－２４９６）、ＣＤＣ２７（タンパク質の変異形態を含む）、抗原トリオースリン酸イソメラーゼ、７０７－ＡＰ、Ａ６０マイコバクテリア抗原（Ｍａｃｓ ｅｔ ａｌ．，１９９６，Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．１２２：２９６－３００）、アネキシンＩＩ、ＡＦＰ、ＡＲＴ－４、ＢＡＧＥ、β－カテニン／ｍ、ＢＣＬ－２、ｂｃｒ－ａｂｌ、ｂｃｒ－ａｂｌ ｐ１９０、ｂｃｒ－ａｂｌ ｐ２１０、ＢＲＣＡ－１、ＢＲＣＡ－２、ＣＡ１９－９（Ｔｏｌｌｉｖｅｒ ａｎｄ Ｏ’Ｂｒｉｅｎ，１９９７，Ｓｏｕｔｈ Ｍｅｄ．Ｊ．９０：８９－９０；Ｔｓｕｒｕｔａ ａｔ ａｌ．，１９９７ Ｕｒｏｌ．Ｉｎｔ．５８：２０－２４）、ＣＡＭＥＬ、ＣＡＰ－１、ＣＡＳＰ－８、ＣＤＣ２７／ｍ、ＣＤＫ－４／ｍ、ＣＥＡ（Ｈｕａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｅｘｐｅｒ Ｒｅｖ．ワクチン（２００２）１：４９－６３）、ＣＴ９、ＣＴ１０、Ｃｙｐ－Ｂ、Ｄｅｋ－ｃａｉｎ、ＤＡＭ－６（ＭＡＧＥ－Ｂ２）、ＤＡＭ－１０（ＭＡＧＥ－Ｂ１）、ＥｐｈＡ２（Ｚａｎｔｅｋ ｅｔ ａｌ．， Ｃｅｌｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｄｉｆｆｅｒ． （１９９９） １０：６２９－３８； Ｃａｒｌｅｓ－Ｋｉｎｃｈ ｅｔ ａｌ．， Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． （２００２） ６２：２８４０－７）、ＥｐｈＡ４（Ｃｈｅｎｇ ａｔ ａｌ．， ２００２， Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ Ｒｅｖ． １３：７５－８５）、腫瘍関連Ｔｈｏｍｓｅｎ－Ｆｒｉｅｄｅｎｒｅｉｃｈ抗原（Ｄａｈｌｅｎｂｏｒｇ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｉｎｔ．Ｊ Ｃａｎｃｅｒ ７０：６３－７１）、ＥＬＦ２Ｍ、ＥＴＶ６－ＡＭＬ１、Ｇ２５０、ＧＡＧＥ－１、ＧＡＧＥ－２、ＧＡＧＥ－３、ＧＡＧＥ－４、ＧＡＧＥ－５、ＧＡＧＥ－６、ＧＡＧＥ－７Ｂ、ＧＡＧＥ－８、ＧｎＴ－Ｖ、ｇｐ１００（Ｚａｊａｃ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｉｎｔ．Ｊ Ｃａｎｃｅｒ ７１：４９１－４９６）、ＨＡＧＥ、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＨＬＡ－Ａ＊０２０１－Ｒ１７０Ｉ、ＨＰＶ－Ｅ７、ＨＳＰ７０－２Ｍ、ＨＳＴ－２、ｈＴＥＲＴ、ｈＴＲＴ、ｉＣＥ、アポトーシス阻害剤（例えば、サバイビン）、ＫＨ－１腺癌抗原（Ｄｅｓｈｐａｎｄｅ ａｎｄ Ｄａｎｉｓｈｅｆｓｋｙ，１９９７，Ｎａｔｕｒｅ３８７：１６４－１６６）、ＫＩＡＡ０２０５、Ｋ－ｒａｓ、ＬＡＧＥ、ＬＡＧＥ－１、ＬＤＬＲ／ＦＵＴ、ＭＡＧＥ－１、ＭＡＧＥ－２、ＭＡＧＥ－３、ＭＡＧＥ－６、ＭＡＧＥ－Ａ１、ＭＡＧＥ－Ａ２、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＭＡＧＥ－Ａ４、ＭＡＧＥ－Ａ６、ＭＡＧＥ－Ａ１０、ＭＡＧＥ－Ａ１２、ＭＡＧＥ－Ｂ５、ＭＡＧＥ－Ｂ６、ＭＡＧＥ－Ｃ２、ＭＡＧＥ－Ｃ３、ＭＡＧＥ Ｄ、ＭＡＲＴ－１、ＭＡＲＴ－１／Ｍｅｌａｎ－Ａ（Ｋａｗａｋａｍｉ ａｎｄ Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ，１９９７，Ｉｎｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４：１７３－１９２）、ＭＣ１Ｒ、ＭＤＭ－２、ミオシン／ｍ、ＭＵＣ１、ＭＵＣ２、ＭＵＭ－１、ＭＵＭ－２、ＭＵＭ－３、ネオ－ポリＡポリメラーゼ、ＮＡ８８－Ａ、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＮＹ－ＥＳＯ－１ａ（ＣＡＧ－３）、ＰＡＧＥ－４、ＰＡＰ、プロテイナーゼ３（Ｍｏｌｌｄｒｅｍ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ（１９９６）８８：２４５０－７；Ｍｏｌｌｄｒｅｍ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ（１９９７）９０：２５２９－３４）、Ｐ１５、ｐ１９０、Ｐｍ１／ＲＡＲα、ＰＲＡＭＥ、ＰＳＡ、ＰＳＭ、ＰＳＭＡ、ＲＡＧＥ、ＲＡＳ、ＲＣＡＳ１、ＲＵ１、ＲＵ２、ＳＡＧＥ、ＳＡＲＴ－１、ＳＡＲＴ－２、ＳＡＲＴ－３、ＳＰ１７、ＳＰＡＳ－１、ＴＥＬ／ＡＭＬ１、ＴＰＩ／ｍ、チロシナーゼ、ＴＡＲＰ、ＴＲＰ－１（ｇｐ７５）、ＴＲＰ－２、ＴＲＰ－２／ＩＮＴ２、ＷＴ－１、及びＮＹ－ＥＳＯ－１及びＬＡＧＥ－１遺伝子に由来する、交互に翻訳されたＮＹ－ＥＳＯ－ＯＲＦ２及びＣＡＭＥＬタンパク質が挙げられるが、これらに限定されない。多数の他の癌抗原が本分野でよく知られている。
幾つかの実施形態では、癌／腫瘍抗原又は癌／腫瘍エピトープは、組換え癌／腫瘍抗原又は組換え癌／腫瘍エピトープであることができる。このような組換え癌／腫瘍抗原又は組換え癌／腫瘍エピトープは、天然の癌／腫瘍抗原又は天然の癌／腫瘍エピトープの全体的なアミノ酸配列の特定のアミノ酸を変化させる（追加、削除、置換）変異を導入することによって設計される。変異の導入は、癌／腫瘍抗原又は癌／腫瘍エピトープをあまり変化させないため、哺乳類の対象、好ましくはヒト又はイヌの対象に亘って普遍的に適用することはできないが、得られるアミノ酸配列が免疫応答を生成するために耐性を破壊するか、又は外来抗原と見なされるほど変化させる。別の方法は、その対応する天然の癌／腫瘍抗原又は天然の癌／腫瘍エピトープに対して、少なくとも８５％～９９％のアミノ酸配列同一性；好ましくは少なくとも９０％～９８％の配列同一性；より好ましくは少なくとも９３％～９８％の配列同一性；又は更に好ましくは少なくとも９５％～９８％の配列同一性を有する共通（ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ）組み換え癌／腫瘍抗原又は癌／腫瘍エピトープを作成することもできる。幾つかの例では、組換え癌／腫瘍抗原又は組換え癌／腫瘍エピトープは、その対応する天然の癌／腫瘍抗原又は天然の癌／腫瘍エピトープに対して、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％のアミノ酸配列同一性を有する。天然の癌／腫瘍抗原は、通常、特定の癌又は癌／腫瘍に関連する抗原である。癌／腫瘍抗原に応じて、癌／腫瘍抗原の共通配列は、哺乳類種間、種のサブタイプ内、ウイルス株又は血清型間で存在することができる。幾つかの癌／腫瘍抗原は、癌／腫瘍抗原の野生型アミノ酸配列と大きく異なることはない。前述のアプローチを組み合わせることで、最終的な組み換え癌／腫瘍抗原又は癌／腫瘍エピトープが、前述のように天然の癌抗原アミノ酸配列とパーセントの類似性を有する。前述のアプローチを組み合わせることで、最終的な組換え癌／腫瘍抗原又は癌／腫瘍エピトープが、前述のように天然の癌抗原アミノ酸配列とパーセントの類似性を有することができる。他の実施形態では、本明細書に記載される癌／腫瘍抗原のエピトープのアミノ酸配列は変異されないので、参照エピトープ配列と同一である。
好ましくは、前記少なくとも１つの癌／腫瘍抗原又はエピトープ（例えば、多重抗原性ドメインに含まれる）が、内分泌腫瘍、胃腸腫瘍、尿生殖器及び女性生殖器腫瘍、乳癌、頭頚部腫瘍、造血器腫瘍、皮膚腫瘍、胸部及び呼吸器腫瘍を含む腫瘍又は癌からなる群から選択される。好ましくは、本発明の多重抗原性ドメインの少なくとも１つの腫瘍エピトープ、少なくとも１つのＴＡＡ、又は少なくとも１つのＴＳＡは、トリプルネガティブ乳癌を含む乳癌、胆道癌；膀胱癌；神経膠芽腫及び髄芽腫を含む脳癌；子宮頸癌；絨毛癌；結腸癌；子宮内膜癌；食道癌；胃癌；消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、虫垂癌、胆管細胞癌、カルチノイド腫瘍、消化管結腸癌、肝外胆管癌、胆嚢癌、胃癌、消化管カルチノイド腫瘍、結腸直腸癌、又は転移性結腸直腸癌、急性リンパ性白血病及び骨髄性白血病を含む血液腫瘍；Ｔ細胞急性リンパ性白血病／リンパ腫；ヘアリーセル白血病；慢性骨髄性白血病、多発性骨髄腫；ＡＩＤＳ随伴性白血病及び成人Ｔ細胞白血病リンパ腫；ボーエン病及びパジェット病を含む上皮内腫瘍；肝臓癌；非小細胞肺癌を含む肺癌、ホジキン病及びリンパ球性リンパ腫を含むリンパ腫；神経芽細胞腫；神経膠芽腫、扁平細胞癌腫を含む口腔癌；上皮細胞、間質細胞、生殖細胞、及び間葉系細胞から生じるものを含む卵巣癌；膵臓癌；前立腺癌；直腸癌；平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、脂肪肉腫、線維肉腫、及び骨肉腫を含む肉腫；メラノーマ、メルケル細胞癌、カポジ肉腫、基底細胞癌、及び扁平細胞癌を含む皮膚癌；セミノーマ、非セミノーマ（奇形腫、絨毛癌）、間質腫瘍、及び生殖細胞腫瘍等の胚腫瘍を含む精巣癌；甲状腺癌腫及び髄様癌腫を含む甲状腺癌；及び腺癌及びウィルムス腫瘍を含む腎癌を含む腫瘍及び／又は癌からなる群から選択される。
特に、少なくとも１つの癌／腫瘍抗原又はエピトープ（例えば、多重抗原性ドメインに含まれる）は、結腸直腸癌、転移性結腸直腸癌、膵臓癌、又はトリプルネガティブ乳癌を含む乳癌（ＴＮＢＣ）を含む腫瘍又は癌からなる群から選択されることが好ましい。本明細書で使用される「トリプルネガティブ乳癌」という用語は、治療薬の分子標的であるエストロゲン受容体（ＥＲ）、プロゲステロン受容体（ＰｇＲ）、及びＨＥＲ２の全ての発現がない乳癌を指す。ＴＮＢＣは、浸潤性乳癌症例の１０-２０％を占め、１超の分子サブタイプを含む。典型的には、ＴＮＢＣに罹患した患者は、本質的に攻撃的な臨床挙動と治療のための認識される分子標的の欠如のために、他の乳癌サブタイプの患者と比較して比較的予後が悪い。トリプルネガティブ乳癌は、表現型であり、分子アッセイにおけるその主要な構成要素は、基底細胞（ｂａｓａｌ）様腫瘍、正常な乳房様腫瘍、及び最近認識された、一般的ではないが興味深いクローディン低分子サブタイプであり、ＢＲＣＡ１欠損サブタイプも含む。ＴＮＢＣによって発現されるＴＡＡとしては、例えば、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＭＵＣ－１、ＰＲＡＭＥ、ＡＳＣＬ２、及びＮＹ－ＥＳＯ－１が挙げられる。
本明細書で使用される「膵癌」又は「膵臓癌」という用語は、膵臓細胞に由来する癌に関する。好ましくは、本明細書で使用される膵臓癌は、例えば、扁平上皮癌腫、粘液／粘液性癌腫、未分化／低分化癌腫、印環細胞癌腫、髄質癌腫、肝様癌腫を含む、膵管腺癌及びその形態的変異形を指す。膵臓腺癌は、予後不良で発生率が増加している致死的な状態である。膵臓癌は、一般的に高齢者の疾患である。３０歳未満で診断される患者は極めて稀であり、新たに診断された患者の９０％は５５歳以上であり、その大多数は７０代及び８０代であり、女性と比較して男性の発生率が高い。膵臓癌は、メソセリン、サバイビン、及びＮＹ－ＥＳＯ－１を含む腫瘍関連抗原の発現によって特徴づけられる。
本明細書で使用されるように、結腸直腸癌（ＣＲＣ、「腸癌」とも知られる）は、結腸癌及び直腸癌（ＣＣ）を含む癌である。どちらの個々の癌にも多くの共通点があるが、癌の出発点が異なる。Ｓｉｅｇｅｌ， Ｒ．， Ｃ． Ｄｅｓａｎｔｉｓ， ａｎｄ Ａ． Ｊｅｍａｌ， Ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｃａｎｃｅｒ ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ， ２０１４． ＣＡ Ｃａｎｃｅｒ Ｊ Ｃｌｉｎ， ２０１４． ６４（２）： ｐ． １０４－１７によると、２００６年から２０１０年の米国では、腫瘍部位による発生率は、近位結腸（結腸の最初と中間部）で僅かにより重要である。１０万人に約１９件の症例があり、症例の４２％を占める。次いで直腸癌で２８％の症例、遠位結腸（結腸の下部）で１０万人に１０症例の発生率である。解剖学的に、「結腸直腸癌」という用語は、（ｉ）盲腸の癌（回盲弁の癌を含む）、虫垂、上行結腸、右結腸曲、横行結腸、脾弯曲部、下行結腸、Ｓ状結腸（Ｓ状（湾曲部）の癌を含む）等の結腸の癌、並びに結腸の重複部位の癌；（ｉｉ）結腸及び直腸の癌、Ｓ状結腸の癌等の直腸Ｓ状接合部の癌；及び（ｉｉｉ）直腸膨大部の癌等直腸の癌を含む。
結腸直腸癌は、盲腸の癌（回盲弁の癌を含む）、虫垂の癌、上行結腸の癌、右結腸曲の癌、横行結腸の癌、脾弯曲部の癌、下行結腸の癌、Ｓ状結腸の癌（Ｓ状（湾曲部）の癌を含む）、又はこれらの組合せ等の結腸の癌であることが好ましい。
結腸直腸癌は、（ｉ）結腸及び直腸の癌又は（ｉｉ）直腸Ｓ状部の癌等、直腸Ｓ状接合部の癌であることも好ましい。更に、結腸直腸癌は、直腸膨大部の癌等、直腸の癌であることも好ましい。
結腸直腸癌は、例えば、細胞型等様々な細胞型を含み、結腸直腸癌は、結腸直腸腺癌、結腸直腸間質腫瘍、原発性結腸直腸リンパ腫、結腸直腸平滑筋肉腫、結腸直腸メラノーマ、結腸直腸扁平細胞癌腫、及び例えば、盲腸、虫垂、上行結腸、横行結腸、下行結腸、Ｓ状結腸及び／又は直腸のカルチノイド腫瘍等の結腸直腸カルチノイド腫瘍を含む。したがって、結腸直腸癌の好ましい種類は、結腸直腸腺癌、結腸直腸間質腫瘍、原発性結腸直腸リンパ腫、結腸直腸平滑筋肉腫、結腸直腸メラノーマ、結腸直腸扁平細胞癌腫、及び例えば、盲腸、虫垂、上行結腸、横行結腸、下行結腸、Ｓ状結腸及び／又は直腸のカルチノイド腫瘍等の結腸直腸カルチノイド腫瘍を含む。より好ましくは、結腸直腸癌は、結腸直腸腺癌又は結腸直腸カルチノイド癌腫である。更により好ましくは、結腸直腸癌は、結腸直腸腺癌である。したがって、複合体の少なくとも１つの腫瘍又は癌エピトープは、上記で開示される結腸直腸癌細胞型のいずれかから選択されることができる。
結腸直腸癌は、ＴＭＮ病期分類システムに従った腫瘍の病気分類に応じて異なるＴＡＡ、又はＴＳＡを発現するため、複合体の（多重抗原性ドメインの）少なくとも１つの腫瘍又は癌エピトープは、例えば、原発腫瘍の下記ステージ（「Ｔ」ステージ）のＴＡＡ又はＴＳＡを含むことが好まし：ＴＸ－原発腫瘍を評価できない、Ｔ０－原発腫瘍の証拠がない、Ｔａ－非浸潤性乳頭状癌、Ｔｉｓ－上皮内癌：上皮内又は固有層への浸潤、Ｔ１－腫瘍が粘膜下層に浸潤、Ｔ２－腫瘍が筋層に浸潤、Ｔ３－腫瘍が筋層を通って結腸直腸周囲ｐｅｒｉｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ）組織に浸潤、Ｔ４ａ－腫瘍が内臓腹膜の表面に侵入する、Ｔ４ｂ－腫瘍が他の臓器や構造物に直接浸潤又は付着している；リンパ節の以下のステージ（「Ｎ」ステージ）：ＮＸ－所属リンパ節を評価できない、Ｎ０－領域リンパ節転移がない、Ｎ１－領域リンパ節に１～３個の転移（Ｎ１ａ－１つの領域リンパ節における転移、Ｎ１ｂ－２～３つの領域リンパ節における転移、Ｎ１ｃ－領域リンパ節転移のない、漿膜下層、腸間膜、又は腹膜に覆われていない結腸周囲組織又は直腸周囲組織における腫瘍病巣（ｔｕｍｏｒ ｄｅｐｏｓｉｔ）、Ｎ２－４以上のリンパ節における転移（Ｎ２ａ－４～６つの領域リンパ節における転移、Ｎ２ｂ－７つ以上の領域リンパ節における転移））；及び遠隔転移の下記のステージ（「Ｍ」ステージ）：Ｍ０－遠隔転移なし、Ｍ１－遠隔転移（Ｍ１ａ－１つの臓器又は部位（例えば、肝臓、肺、卵巣、非領域リンパ節）に限定された転移、Ｍ１ｂ－１超の臓器／部位又は腹膜における転移）。ステージは、結腸直腸癌の以下の数値的病期分類に統合されることができる：ステージ０：Ｔｉｓ、Ｎ０、Ｍ０；ステージＩ：Ｔ１、Ｎ０、Ｍ０又はＴ２、Ｎ０、Ｍ０；ステージＩＩＡ：Ｔ３、Ｎ０、Ｍ０；ステージＩＩＢ：Ｔ４ａ、Ｎ０、Ｍ０；ステージＩＩＣ：Ｔ４ｂ、Ｎ０、Ｍ０；ステージＩＩＩＡ：Ｔ１－Ｔ２、Ｎ１／Ｎ１ｃ、Ｍ０又はＴ１、Ｎ２ａ、Ｍ０；ステージＩＩＩＢ：Ｔ３－Ｔ４ａ、Ｎ１／Ｎ１ｃ、Ｍ０又はＴ２－Ｔ３、Ｎ２ａ、Ｍ０又はＴ１－Ｔ２、Ｎ２ｂ、Ｍ０；ステージＩＩＩＣ：Ｔ４ａ、Ｎ２ａ、Ｍ０又はＴ３－Ｔ４ａ、Ｎ２ｂ、Ｍ０又はＴ４ｂ、Ｎ１－Ｎ２、Ｍ０；ステージＩＶＡ：任意のＴ、任意のＮ、Ｍ１ａ及びステージＩＶＢ：任意のＴ、任意のＮ、Ｍ１ｂ。簡単に言えば、０期では、癌は結腸又は直腸の内層を越えて増殖していない；Ｉ期では、癌は粘膜から筋肉層に拡がっている；ＩＩ期では、癌は筋肉層を越えて付近の臓器の漿膜に拡がっている；ＩＩＩ期では、癌が付近のリンパ節に拡がっているか、癌細胞がリンパ節付近の組織に拡がっている；ＩＶ期では、癌が血液やリンパ節を介して体の他の部位に転移している。
上記の結腸直腸癌細胞型の様々な腫瘍関連抗原、及びステージが報告されており、例えば、ＣＥＡ、ＭＡＧＥ、ＭＵＣ１、サバイビン、ＷＴ１、ＲＮＦ４３、ＴＯＭＭ３４、ＶＥＧＦＲ－１、ＶＥＧＦＲ－２、ＫＯＣ１、ＡＲＴ４、ＫＲａｓ、ＥｐＣＡＭ、ＨＥＲ－２、ＣＯＡ－１ ＳＡＰ、ＴＧＦ－βＲＩＩ、ｐ５３、ＡＳＣＬ２、及びＳＡＲＴ １－３を含む（例えば、Ｗｏｒｌｄ Ｊ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ ２０１８ Ｄｅｃｅｍｂｅｒ ２８； ２４（４８）： ５４１８－５４３２を参照）。したがって、複合体の少なくとも１つの癌／腫瘍エピトープ／抗原は、ＥｐＣＡＭ、ＨＥＲ－２、ＭＵＣ－１、ＴＯＭＭ３４、ＲＮＦ４３、ＫＯＣ１、ＶＥＧＦＲ、βｈＣＧ、サバイビン、ＣＥＡ、ＡＳＣＬ２、ＴＧＦβＲ２、ｐ５３、ＫＲａｓ、ＯＧＴ、メソセリン、ＣＡＳＰ５、ＣＯＡ－１、ＭＡＧＥ、ＳＡＲＴ、ＩＬ１３Ｒα２、ＡＳＣＬ２、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＰＲＡＭＥ、ＷＴ１からなる群から選択される抗原（のエピトープ）であることが好ましい。
メラノーマ関連抗原（ＭＡＧＥ）
ＭＡＧＥ（メラノーマ関連抗原）遺伝子ファミリーの哺乳類メンバーは、本来、正常な成体組織では完全に無症状であると説明されていたが、例外として雄の生殖細胞と、一部は胎盤がある。対照的に、これらの遺伝子は様々な種類の腫瘍で発現していた。したがって、複合体は、ＭＡＧＥファミリーの抗原（「ＭＡＧＥ」抗原）又はそのエピトープを含むことが好ましい。ＭＡＧＥファミリーのうち、特にＭＡＧＥ－Ａ３及びＭＡＧＥ－Ｄ４が好ましく、ＭＡＧＥ－Ａ３が特に好ましい。健康な細胞におけるＭＡＧＥ－Ａ３の正常な機能は不明である。例えば、癌／精巣抗原１．３と呼ばれることもあるＭＡＧＥ－Ａ３は、腫瘍特異的なタンパク質であり、多くの腫瘍で同定されてきた。ＭＡＧＥ－Ａ３のアミノ酸配列を以下に示す。
Figure 2023545178000014
 ［配列番号１４］
したがって、本明細書に記載されるように、複合体は、配列番号１４のアミノ酸配列、又はその断片又はその変異体を含むことが好ましい。
メソセリン
メソセリンは当初、卵巣癌において「ｍＡｂ Ｋ１」と呼ばれる抗体に反応するタンパク質として同定されたが、悪性中皮腫や膵臓、卵巣、肺の腺癌を含む多くのヒトの癌で高発現している腫瘍抗原である。ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ Ｑ１３４２１によるメソセリンのアミノ酸配列を以下に示す。
Figure 2023545178000015
 ［配列番号１５］
したがって、本明細書に記載されるように、複合体は、配列番号１５のアミノ酸配列、又はその断片又はその変異体を含むことが好ましい。
サバイビン
サバイビンは、アポトーシスリピート含有５のバキュロウイルス阻害剤（ｂａｃｕｌｏｖｉｒａｌ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｏｆ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｒｅｐｅａｔ－ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ５）又はＢＩＲＣ５（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ Ｏ１５３９２）とも呼ばれ、アポトーシス阻害剤（ＩＡＰ）ファミリーの一員である。サバイビンタンパク質は、カスパーゼの活性化を阻害するように機能し、それによってアポトーシス又はプログラム細胞死の負の調節をもたらす。サバイビンのアミノ酸配列を以下に示す。
Figure 2023545178000016
 ［配列番号１６］
したがって、複合体は、本明細書に記載されるように、配列番号１６のアミノ酸配列、又はその断片、又はその変異体を含むことが好ましい。
サバイビンの幾つかのエピトープは、当業者にはよく知られている。好ましいサバイビンエピトープは、複合体に含まれることが好ましく、以下のエピトープを含む（以下に示されるエピトープ配列は、上記のサバイビン配列の断片である；以下のエピトープ配列は、１つのエピトープを指すこともあれば、１超の（重複する）エピトープを指すこともある）。
Figure 2023545178000017
 ［配列番号１７］
したがって、複合体は、配列番号１７のアミノ酸配列を含むことが好ましい。
したがって、複合体は、サバイビンのエピトープを含むことが好ましい。より好ましくは、複合体は、配列番号１６のアミノ酸配列を有するペプチド、又は少なくとも１０のアミノ酸の長さを有するその断片（好ましくは少なくとも１５のアミノ酸、より好ましくは少なくとも２０のアミノ酸、更により好ましくは少なくとも２５のアミノ酸、及び最も好ましくは少なくとも３０のアミノ酸）、又は少なくとも７０％又は少なくとも７５％、好ましくは少なくとも８０％又は少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％又は少なくとも９５％、更により好ましくは少なくとも９７％又は少なくとも９８％、特に好ましくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含む。更により好ましくは、複合体は、配列番号１７のアミノ酸配列を有するペプチドを含む。
複合体は、配列番号１８等の少なくとも１つのエピトープを含むサバイビンの断片も含むことができる。
Figure 2023545178000018
 ［配列番号１８］
特に好ましくは、複合体は、配列番号１８のアミノ酸配列を有するペプチド、又は少なくとも７０％又は少なくとも７５％、好ましくは少なくとも８０％又は少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％又は少なくとも９５％、更により好ましくは少なくとも９７％又は少なくとも９８％、特に好ましくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含む。
ＮＹ－ＥＳＯ－１
ＮＹ－ＥＳＯ－１（「癌／精巣抗原１」、「Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ食道性扁平細胞癌腫１（Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ ｅｓｏｐｈａｇｅａｌ ｓｑｕａｍｏｕｓ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ １）」、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ Ｐ７８３５８とも呼ばれる）は、多くの種類の癌で再発現するよく知られた癌精巣抗原（ＣＴＡ）である。ＮＹ－ＥＳＯ－１は、自発的な体液性及び細胞性の免疫応答を誘発し、制限された発現パターンによって特徴づけられているため、癌免疫応答の良い候補標的となる。ＮＹ－ＥＳＯ－１特異的免疫応答は、様々な種類の癌で観察されている。ＮＹ－ＥＳＯ－１のアミノ酸配列を以下に示す。
Figure 2023545178000019
 ［配列番号１９］
複合体の少なくとも１つの腫瘍エピトープは、メソセリン、サバイビン、及びＮＹ－ＥＳＯ－１からなる群から選択される抗原のエピトープであることが好ましい。例えば、複合体の少なくとも１つの腫瘍エピトープは、メソセリン、サバイビン、又はメソセリン及びＮＹ－ＥＳＯ－１、又はサバイビン及びＮＹ－ＥＳＯ－１から選択されるエピトープである。幾つかの実施形態では、複合体の少なくとも１つの腫瘍抗原／エピトープは、抗原メソセリンのエピトープ、又はＮＹ－ＥＳＯ－１、又はサバイビン、又はその断片、又はその配列変異体を含む。
例えば、上記で開示された、例えば、メソセリン、サバイビン、及びＮＹ－ＥＳＯ－１の少なくとも１つ、２つ、又はその全ての抗原から選択される、少なくとも１つ、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０以上のエピトープを含む多重抗原性ドメイン含む複合体は、膵臓癌の文脈において、特に有用であることがある。
ＰＲＡＭＥ
ＰＲＡＭＥ（腫瘍で優先的に発現されるメラノーマ抗原、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ Ｐ７８３９５）は、別名、癌／精巣抗原１３０（ＣＴ１３０）、ＭＡＰＥ（腫瘍で優先的に発現されるメラノーマ抗原）、及びＯＩＰ４（ＯＰＡ－相互作用タンパク質４）として知られており、癌精巣抗原（ＣＴＡ）ファミリーのメンバーである。正常な体細胞組織におけるＰＲＡＭＥの発現は、精巣、精巣上体、子宮内膜、卵巣、副腎において発現が低い成体生殖細胞に後成的に限定されている。ＣＴＡメンバーであるＮＹ－ＥＳＯ－１と同様に、ＰＲＡＭＥは、メラノーマにおける免疫原性腫瘍関連抗原として同定され、その発見以来、その発現は、トリプルネガティブ乳癌を含む様々な固形及び血液学的悪性腫瘍で実証されている。ＰＲＡＭＥのアミノ酸配列を以下に示す。
Figure 2023545178000020
 ［配列番号２０］
したがって、複合体は、本明細書に記載されるように、配列番号２０のアミノ酸配列、又はその断片、又はその変異体を含むことが好ましい。
ＡＳＣＬ２（Ａｃｈａｅｔｅ－ｓｃｕｔｅホモログ２）
ＡＳＣＬ２は、胎盤発生中の増殖栄養膜の維持に不可欠な塩基性ヘリックス・ループ・ヘリックス転写制御因子である。ＡＳＣＬ２は、腸腫瘍で過剰発現される増殖の推定制御因子であることが見出された。ＡＳＣＬ２のアミノ酸配列を以下に示す。
Figure 2023545178000021
 ［配列番号２１］
したがって、複合体は、本明細書に記載されるように、配列番号２１のアミノ酸配列、又はその断片、又はその変異体を含むことが好ましい。
ＡＳＣＬ２の幾つかのエピトープは当業者に知られている。好ましくは複合体に含まれている好ましいＡＳＣＬ２エピトープは、以下のエピトープ（以下に示されるエピトープ配列は、上記のＡＳＣＬ２配列の断片であるので、上記のＡＳＣＬ２配列に下線を引いて示す；以下のエピトープ配列のそれぞれは、１つのエピトープを指すこともあれば、１超の（重複する）エピトープを指すこともある）を含む。
Figure 2023545178000022
 ［配列番号２２］
Figure 2023545178000023
 ［配列番号２３］
したがって、複合体は、配列番号２２のアミノ酸配列及び／又は配列番号２３のアミノ酸配列を含むことが好ましい。
したがって、複合体は、ＡＳＣＬ２のエピトープを含むことが好ましい。複合体は、配列番号２１のアミノ酸配列を有するペプチド、又は少なくとも１０のアミノ酸（好ましくは少なくとも１５のアミノ酸、より好ましくは少なくとも２０のアミノ酸、更により好ましくは少なくとも２５のアミノ酸、及び最も好ましくは少なくとも３０のアミノ酸）の長さを有するその断片、又は少なくとも７０％又は少なくとも７５％、好ましくは少なくとも８０％又は少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％又は少なくとも９５％、更により好ましくは少なくとも９７％又は少なくとも９８％、特に好ましくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含むことがより好ましい。複合体は、配列番号２２のアミノ酸配列を有するペプチド及び／又は配列番号２３のアミノ酸配列を有するペプチドを含むことが更により好ましい。
複合体は、配列番号２４等の少なくとも１つのエピトープを含むＡＳＣＬ２の断片も含むことができる。
Figure 2023545178000024
 ［配列番号２４］
複合体は、配列番号２４のアミノ酸配列を有するペプチド、又は少なくとも７０％又は少なくとも７５％、好ましくは少なくとも８０％又は少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％又は少なくとも９５％、更により好ましくは少なくとも９７％又は少なくとも９８％、特に好ましくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含むことが特に好ましい。
ムチン－１（ＭＵＣ－１）
ＭＵＣ－１（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ Ｐ１５９４１）は、ヒト上皮性ムチンであり、細胞接着に作用する。ＭＵＣ－１のアミノ酸配列を以下に示す。
Figure 2023545178000025
 ［配列番号２５］
したがって、複合体は、本明細書に記載されるように、配列番号２５のアミノ酸配列、又はその断片、又はその変異体を含むことが好ましい。
ＭＵＣ－１の幾つかのエピトープは当業者に知られている。好ましくは複合体に含まれている好ましいＭＵＣ－１エピトープは、以下のエピトープ（以下に示されるエピトープ配列は、上記のＭＵＣ－１配列の断片であるので、上記のＭＵＣ－１配列に下線を引いて示す；以下のエピトープ配列のそれぞれは、１つのエピトープを指すこともあれば、１超の（重複する）エピトープを指すこともある）を含む。
Figure 2023545178000026
 ［配列番号２６］
Figure 2023545178000027
 ［配列番号２７］
したがって、複合体は、配列番号２６のアミノ酸配列及び／又は配列番号２７のアミノ酸配列を含むことが好ましい。
トランスフォーミング増殖因子β受容体２（ＴＧＦβＲ２）
ＴＧＦβ受容体は、単一パスセリン／スレオニンキナーゼ受容体である。それらは、幾つかの異なるアイソフォームで存在する。ＴＧＦβＲ２（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ Ｐ３７１３７）は、プロテインキナーゼドメインを有し、別の受容体タンパク質とヘテロ二量体複合体を形成し、ＴＧＦ－βと結合する膜貫通タンパク質である。この受容体／リガンド複合体は、タンパク質をリン酸化し、その後、核に入り、細胞増殖に関連する遺伝子のサブセットの転写を調節する。
Figure 2023545178000028
 ［配列番号２８］
したがって、複合体は、本明細書に記載されるように、配列番号２８のアミノ酸配列、又はその断片、又はその変異体を含むことが好ましい。
癌胎児性抗原（ＣＥＡ）
ＣＥＡは、細胞内接着糖タンパク質である。ＣＥＡは、通常、胎児の発育中に消化管組織で産生されるが、出生前に産生が停止する。したがって、ＣＥＡは、通常、健康な成人の血液中に非常に低いレベルでしか存在しない。ＣＥＡのアミノ酸配列を以下に示す。
Figure 2023545178000029
 ［配列番号２９］
したがって、複合体は、本明細書に記載されるように、配列番号２９のアミノ酸配列、又はその断片、又はその変異体を含むことが好ましい。
ＣＥＡの幾つかのエピトープは当業者に知られている。好ましくは複合体に含まれている好ましいＣＥＡエピトープは、以下のエピトープ（以下に示されるエピトープ配列は、上記のＣＥＡ配列の断片であるので、上記のＣＥＡ配列に下線を引いて示す；以下のエピトープ配列のそれぞれは、１つのエピトープを指すこともあれば、１超の（重複する）エピトープを指すこともある）を含む。
Figure 2023545178000030
 ［配列番号３０］
Figure 2023545178000031
 ［配列番号３１］
したがって、好ましい複合体は、配列番号３０のアミノ酸配列及び／又は配列番号３１のアミノ酸配列を含む。
したがって、複合体は、ＣＥＡのエピトープを含むことが好ましい。より好ましくは、複合体は、配列番号２９のアミノ酸配列を有するペプチド、又は少なくとも１０のアミノ酸（好ましくは少なくとも１５のアミノ酸、より好ましくは少なくとも２０のアミノ酸、更により好ましくは少なくとも２５のアミノ酸、及び最も好ましくは少なくとも３０のアミノ酸）の長さを有するその断片、又は少なくとも７０％又は少なくとも７５％、好ましくは少なくとも８０％又は少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％又は少なくとも９５％、更により好ましくは少なくとも９７％又は少なくとも９８％、特に好ましくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含む。更により好ましくは、複合体は、配列番号３０のアミノ酸配列を有するペプチド及び／又は配列番号３１のアミノ酸配列を有するペプチドを含む。
複合体は、配列番号３２等の少なくとも１つのエピトープを含むＣＥＡの断片も含むことができる。
Figure 2023545178000032
 ［配列番号３２］
特に好ましくは、複合体は、配列番号３２のアミノ酸配列を有するペプチド、又は少なくとも７０％又は少なくとも７５％、好ましくは少なくとも８０％又は少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％又は少なくとも９５％、更により好ましくは少なくとも９７％又は少なくとも９８％、特に好ましくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含む。
Ｐ５３
Ｐ５３（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ Ｐ０４６３７）は、ゲノム変異を防止する役割を有する腫瘍抑制タンパク質である。Ｐ５３は、多くの抗癌機能のメカニズムを有し、アポトーシス、ゲノムの安定性、血管新生の阻害等に役割を果たす。その抗癌の役割において、ｐ５３は、以下の幾つかのメカニズムを介して機能する：ＤＮＡが損傷を受けたときに、ＤＮＡ修復タンパク質を活性化する；ＤＮＡ損傷認識のＧ１／Ｓ制御点で細胞周期を維持することで増殖を停止できる；アポトーシスを開始できる。
Figure 2023545178000033
 ［配列番号３３］
したがって、複合体は、本明細書に記載されるように、配列番号３３のアミノ酸配列、又はその断片、又はその変異体を含むことが好ましい。
キルステンＲａｓ（ＫＲａｓ）
Ｖ－Ｋｉ－ｒａｓ２カーステンラット肉腫ウイルス癌遺伝子ホモログ及びＫＲＡＳとして知られるＧＴＰアーゼＫＲａｓは、正常な組織シグナル伝達に不可欠な機能を果たしており、ＫＲＡＳ遺伝子の変異は、多くの癌の発生に不可欠なステップである。他のｒａｓサブファミリーのメンバーと同様に、ＫＲＡＳタンパク質はＧＴＰアーゼであり、多くのシグナル伝達経路の初期のプレーヤーである。ＫＲＡＳは、通常、Ｃ末端にイソプレン基が存在するため、細胞膜に結合している。ＫＲａｓのアミノ酸配列を以下に示す。
Figure 2023545178000034
 ［配列番号３４］
したがって、複合体は、本明細書に記載されるように、配列番号３４のアミノ酸配列、又はその断片、又はその変異体を含むことが好ましい。
キルステンＲａｓの幾つかのエピトープは、当業者に知られる。好ましくは、複合体に含まれる好ましいキルステンＲａｓエピトープは、以下のエピトープを含む（以下に示されるエピトープ配列は、上記キルステンＲａｓ配列の断片であり、したがって、上記キルステンＲａｓ配列に下線で示される；以下のエピトープ配列は、１つのエピトープ又は１超の（重複する）エピトープを指すことがある）。
Figure 2023545178000035
 ［配列番号３５］
したがって、好ましい複合体は、配列番号３５のアミノ酸配列を含む。
Ｏ結合型Ｎ－アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）トランスフェラーゼ（ＯＧＴ）
ＯＧＴ（Ｏ結合型Ｎ－アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）トランスフェラーゼ、Ｏ－ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼ、ＯＧＴａｓｅ、Ｏ結合型Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ、ウリジンジホスホ－Ｎ－アセチルグルコサミン：ポリペプチドβ－Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ、タンパク質Ｏ結合型β－Ｎ－アセチルグルコサミントランスフェラーゼ、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ Ｏ１５２９４）は、系統名「ＵＤＰ－Ｎ－アセチル－Ｄ－グルコサミン：タンパク質－Ｏ－β－Ｎ－アセチル－Ｄ－グルコサミニルトランスフェラーゼ」を有する酵素である。ＯＧＴは、細胞内タンパク質のセリン残基又はスレオニン残基に、Ｏ－グリコシド結合で単一のＮ－アセチルグルコサミンの付加を触媒する。ＯＧＴは、人体内の多くの生物学的機能の一部である。ＯＧＴは、ＡＫＴ１のスレオニン３０８リン酸化を阻害し、ＩＲＳ１リン酸化の速度を増加させ（セリン３０７とセリン６３２／６３５で）、インスリンシグナル伝達を低下させ、インスリンシグナルの成分をグリコシル化することによって、筋細胞及び脂肪細胞におけるインスリンの抵抗性に関与する。更に、ＯＧＴは、Ｎ－アセチルグルコサミンの添加により、セリン残基及びスレオニン残基の細胞内グリコシル化を触媒する。研究によると、ＯＧＴ対立遺伝子は胚発生に不可欠であり、ＯＧＴは細胞内グリコシル化と胚性幹細胞の持続力に必要であることを示す。ＯＧＴは、転写制御因子及びＲＮＡポリメラーゼＩＩを修飾する翻訳後修飾も触媒するが、この修飾の具体的な機能は殆ど知られていない。ＯＧＴの配列を以下に示す。
Figure 2023545178000036
 ［配列番号３６］
したがって、複合体は、本明細書に記載されるように、配列番号３６のアミノ酸配列、又はその断片、又はその変異体を含むことが好ましい。
カスパーゼ５（ＣＡＳＰ５）
カスパーゼ５（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ Ｐ５１８７８）は、他のタンパク質をアスパラギン酸残基でタンパク質分解的に切断する酵素で、カスパーゼと呼ばれるシステインプロテアーゼのファミリーに属する。それは、カスパーゼ１、カスパーゼ４、マウスのカスパーゼ４ホモログであるカスパーゼ１１と共に、炎症性のカスパーゼであり、免疫系での役割を有する。ＣＡＳＰ５のアミノ酸配列を以下に示す。
Figure 2023545178000037
 ［配列番号３７］
したがって、複合体は、本明細書に記載されるように、配列番号３７のアミノ酸配列、又はその断片、又はその変異体を含むことが好ましい。
結腸直腸腫瘍関連抗原－１（ＣＯＡ－１）
ＣＯＡ－１は、結腸直腸及びメラノーマ細胞によって強く発現され、２００３年にＭａｃｃａｌｌｉらによって同定された（データは入手できず）（Ｍａｃｃａｌｌｉ，Ｃ．，ｅｔ ａｌ．，Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｔｕｍｏｒ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ａｎｔｉｇｅｎ（ＣＯＡ－１）ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ ｂｙ ＣＤ４（＋）Ｔ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ，２００３．６３（２０）：ｐ．６７３５－４３）。その変異は、腫瘍細胞及び正常細胞の分別認識を妨げることがある。ＣＯＡ－１（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ Ｑ５Ｔ１２４）のアミノ酸配列を以下に示す。
Figure 2023545178000038
 ［配列番号３８］
したがって、複合体は、本明細書に記載されるように、配列番号３８のアミノ酸配列、又はその断片、又はその変異体を含むことが好ましい。
Ｔ細胞により認識される扁平細胞癌腫抗原（ＳＡＲＴ）
ＳＡＲＴファミリー内では、ＳＡＲＴ－３が最も好ましい。したがって、複合体は、ＳＡＲＴファミリーの抗原（「ＳＡＲＴ」抗原）又はそのエピトープを含むことが好ましく；複合体は、ＳＡＲＴ－３又はそのエピトープを含むことがより好ましい。Ｔ細胞３によって認識される扁平細胞癌腫抗原は、癌患者においてＨＬＡ－Ａ２４拘束性（ＨＬＡ－Ａ２４－ｒｅｓｔｒｉｃｔｅｄ）及び腫瘍特異的細胞傷害性Ｔリンパ球を誘導することができる腫瘍エピトープを有する。ＳＡＲＴ－３は、ｍＲＮＡスプライシングの調節に関与していると考えられている。
ＩＬ１３Ｒα２
ＩＬ１３Ｒα２は、非常に高い親和性でインターロイキン１３（ＩＬ－１３）と結合する（それにより、それを留める（ｓｅｑｕｅｓｔｅｒ）ことができる）が、ＩＬ－４結合を可能にしない。ＩＬ－１３とＩＬ－４の両方の負の調節因子として作用するが、そのメカニズムはまだ解明されていない。ＩＬ１３Ｒα２のアミノ酸配列を以下に示す。
Figure 2023545178000039
 ［配列番号３９］
したがって、複合体は、本明細書に記載されるように、配列番号３９のアミノ酸配列、又はその断片、又はその変異体を含むことが好ましい。
ＩＬ１３Ｒα２の幾つかのエピトープは、当業者に知られている。好ましくは複合体によって含まれる好ましいＩＬ１３Ｒα２エピトープは、以下のエピトープを含む（以下に示されるエピトープ配列は、上記ＩＬ１３Ｒα２配列の断片であり、したがって、上記ＩＬ１３Ｒα２配列に下線で示される；以下のエピトープ配列は、１つのエピトープ又は１超の（重複する）エピトープを指すことがある）。
Figure 2023545178000040
 ［配列番号４０］
したがって、複合体は、配列番号４０のアミノ酸配列を含むことが好ましい。
ＫＯＣ１
インスリン様増殖因子２ ｍＲＮＡ結合タンパク質３（ＩＧＦ２ＢＰ３）、ＩＭＰ３、ＫＯＣ１、ＶＩＣＫＺ３として知られる、ＫＯＣ１（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ Ｏ００４２５）は、ｍＲＮＡ結合タンパク質である。しかながらし、発現データは入手できず、その配列は以下に示すとおりである。
Figure 2023545178000041
 ［配列番号４１］
したがって、複合体は、本明細書に記載されるように、配列番号４１のアミノ酸配列、又はその断片、又はその変異体を含むことが好ましい。
ＴＯＭＭ３４
ＴＯＭＭ３４（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ Ｑ１５７８５）は、ミトコンドリアへ前駆体タンパク質を取り込むことに関与している。その多くのエピトープは、当業者に知られ、以下に示されるアミノ酸配列から選択されることができる。
Figure 2023545178000042
 ［配列番号４２］
したがって、複合体は、本明細書に記載されるように、配列番号４２のアミノ酸配列、又はその断片、又はその変異体を含むことが好ましい。
ＲＮＦ４３
ＲＮＦ４３（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ Ｑ６８ＤＶ７）は、ＲＩＮＧ型Ｅ３ユビキチンリガーゼであり、膜貫通ドメイン、プロテアーゼ関連ドメイン、外部ドメイン、及び細胞質ＲＩＮＧドメインを含むと予測されている。ＲＮＦ４３は、Ｗｎｔシグナル伝達を負に調節すると考えられており、ＲＮＦ４３の発現は、Ｆｒｉｚｚｌｅｄ受容体のユビキチン化の増加、細胞内分布の変化をもたらし、これらの受容体の表面レベルの低下をもたらす。そのエピトープの多くは当業者に知られており、ＲＮＦ４３のアミノ酸配列を以下に示す。
Figure 2023545178000043
 ［配列番号４３］
したがって、複合体は、本明細書に記載されるように、配列番号４３のアミノ酸配列、又はその断片、又はその変異体を含むことが好ましい。
血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）／血管内皮増殖因子受容体（ＶＥＧＦＲ）
血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ Ｐ１５６９２）は、もともと血管透過性因子（ＶＰＦ）として知られており、脈管形成及び血管新生を刺激する細胞によって産生されるシグナルタンパク質である。血液循環が不十分な場合に、組織への酸素供給を回復するシステムの一部である。ＶＥＧＦの正常な機能は、胚発生中の新しい血管、損傷後の新しい血管、運動後の筋肉、そして閉塞した血管を迂回するための新しい血管（側副血行路）を作り出すことである。ＶＥＧＦ（ＶＥＧＦＲ）の受容体には、主に、ＶＥＧＦＲ１（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ Ｐ１７９４８）、ＶＥＧＦＲ２（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ Ｐ３５９６８）、及びＶＥＧＦＲ３（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ Ｐ３５９１６）の３つのサブタイプがある。ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ１、ＶＥＧＦＲ２、及びＶＥＧＦＲ３の配列は、参照により組み込まれる。したがって、複合体は、本明細書に記載されるように、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ１、ＶＥＧＦＲ２、及びＶＥＧＦＲ３のアミノ酸配列、又はその断片、又はその変異体を含むことが好ましい。
ヒト絨毛性ゴナドトロピンのβサブユニット（βｈＣＧ）
ヒト絨毛性ゴナドトロピンのβサブユニット（βｈＣＧ）は、着床後の胚によって産生されるホルモンである。一部の癌腫瘍はこのホルモンを産生する。そのため、患者が妊娠していないときに測定された濃度の上昇は、癌の診断につなげることができる。ｈＣＧは、黄体形成ホルモン（ＬＨ）、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）、及びｈＣＧに特有のβ（ベータ）サブユニットと同一のα（アルファ）サブユニットを有するヘテロ二量体である。ｈＣＧゴナドトロピンのβサブユニット（β－ｈＣＧ）は、１４５のアミノ酸を含み、６つの高度に相同な遺伝子によってコードされている。したがって、複合体は、本明細書に記載されるように、β－ｈＣＧのアミノ酸配列、又はその断片、又はその変異体を含むことが好ましい。
ＥｐＣＡＭ
ＥｐＣＡＭ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ Ｐ１６４２２）は、細胞接着を仲介する糖タンパク質である。ＥｐＣＡＭのアミノ酸配列を以下に示す。
Figure 2023545178000044
 ［配列番号４４］
したがって、複合体は、本明細書に記載されるように、配列番号４４のアミノ酸配列、又はその断片、又はその変異体を含むことが好ましい。
ＥｐＣＡＭの幾つかのエピトープは、当業者に知られている。好ましくは複合体によって含まれる好ましいＥｐＣＡＭエピトープは、以下のエピトープを含む（以下に示されるエピトープ配列は、上記ＥｐＣＡＭ配列の断片であり、したがって、上記ＥｐＣＡＭ配列に下線で示される；以下のエピトープ配列は、１つのエピトープ又は１超の（重複する）エピトープを指すことがある）。
Figure 2023545178000045
 ［配列番号４５］
したがって、複合体は、本明細書に記載されるように、配列番号４５のアミノ酸配列、又はその断片、又はその変異体を含むことが好ましい。
ＨＥＲ－２／ｎｅｕ
ＨＥＲ－２は、ＥＧＦＲ（上皮増殖因子受容体）のファミリーに属する。多くのＨＬＡ－Ａエピトープは、当業者に知られている。ＨＥＲ２のアミノ酸配列は、以下に示される。
Figure 2023545178000046
 ［配列番号４６］
したがって、複合体は、本明細書に記載されるように、配列番号４６のアミノ酸配列、又はその断片、又はその変異体を含むことが好ましい。
上述されるように、Ｈｅｒ－２の適切な癌／腫瘍エピトープは、文献から知られている、又は癌／腫瘍エピトープのデータベース（例えば、ｖａｎ ｄｅｒ Ｂｒｕｇｇｅｎ Ｐ，Ｓｔｒｏｏｂａｎｔ Ｖ，Ｖｉｇｎｅｒｏｎ Ｎ，Ｖａｎ ｄｅｎ Ｅｙｎｄｅ Ｂ．Ｐｅｐｔｉｄｅ ｄａｔａｂａｓｅ：Ｔ ｃｅｌｌ－ｄｅｆｉｎｅｄ ｔｕｍｏｒ ａｎｔｉｇｅｎｓ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎ ２０１３、ＵＲＬ：www.cancerimmunity.org/peptide/（ＣＤ４＋又はＣＤ８＋Ｔ細胞によって認識されるヒト腫瘍抗原は、その発現パターンに基づき、４つのグループに分類される）；又はデータベース「Ｔａｎｔｉｇｅｎ」（ＴＡＮＴＩＧＥＮ ｖｅｒｓｉｏｎ １．０，Ｄｅｃ １，２００９；Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ Ｃｏｒｅ ａｔ Ｃａｎｃｅｒ Ｖａｃｃｉｎｅ Ｃｅｎｔｅｒ，Ｄａｎａ－Ｆａｒｂｅｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅにより開発；ＵＲＬ：cvc.dfci.harvard.edu/tadb/）を用いることによって同定されることができる。
ＷＴ１
細胞の発生と細胞の生存に重要な役割を果たすＷＴ１（ウィルムス腫瘍タンパク質、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ Ｐ１９５４４）転写制御因子。ＷＴ１をコードする遺伝子は、複合体構造によって特徴づけられ、１１番染色体に位置する。細胞増殖及び分化に関与し、体の機能の連続した段階に強い影響を与える。ＷＴ１遺伝子は、例えば、多くの異なる変異を受けることがあり、また、変異なしに過剰発現することもある。ウィルムス腫瘍等の疾患の分子基盤は、先天性ＷＴ１変異であるが、この遺伝子の体細胞変異は、急性骨髄性白血病及び慢性骨髄性白血病、骨髄異形成症候群、及び急性リンパ性白血病として他の幾つかの血液腫瘍でも起こる。変異を伴わないこの遺伝子の発現増加は、白血病や固形腫瘍で観察される。ＷＴ１のアミノ酸配列を以下に示す。
Figure 2023545178000047
 ［配列番号４７］
したがって、複合体は、本明細書に記載されるように、配列番号４７のアミノ酸配列、又はその断片、又はその変異体を含むことが好ましい。
複合体は、ＥｐＣＡＭ、ＨＥＲ－２、ＭＵＣ－１、ＴＯＭＭ３４、ＲＮＦ４３、ＫＯＣ１、ＶＥＧＦＲ、βｈＣＧ、サバイビン、ＣＥＡ、ＴＧＦβＲ２、ｐ５３、ＫＲａｓ、ＯＧＴ、ＣＡＳＰ５、ＣＯＡ－１、ＭＡＧＥ、ＳＡＲＴ、及びＩＬ１３Ｒα２からなる群から選択される抗原のエピトープである、少なくとも１つの腫瘍エピトープを含むことが好ましい。複合体は、ＡＳＣＬ２、ＥｐＣＡＭ、ＨＥＲ－２、ＭＵＣ－１、ＴＯＭＭ３４、ＲＮＦ４３、ＫＯＣ１、ＶＥＧＦＲ、βｈＣＧ、サバイビン、ＣＥＡ、ＴＧＦβＲ２、ｐ５３、ＫＲａｓ、ＯＧＴ、ＣＡＳＰ５、ＣＯＡ－１、ＭＡＧＥ、ＳＡＲＴ、及びＩＬ１３Ｒα２からなる群から選択される抗原のエピトープである、少なくとも１つの腫瘍エピトープを含むことがより好ましい。これらの抗原は、結腸直腸癌の文脈において特に有用である。複合体は、ＥｐＣＡＭ、ＨＥＲ－２、ＭＵＣ－１、ＴＯＭＭ３４、ＲＮＦ４３、ＫＯＣ１、ＶＥＧＦＲ、βｈＣＧ、サバイビン、ＣＥＡ、ＴＧＦβＲ２、ｐ５３、ＫＲａｓ、ＯＧＴ、ＣＡＳＰ５、ＣＯＡ－１、ＭＡＧＥ、ＳＡＲＴ、及びＩＬ１３Ｒα２からなる群から選択される少なくとも１つの腫瘍抗原、又はその断片、又は腫瘍抗原の配列変異体、又はその断片の配列変異体を含むことも好ましい。複合体は、ＡＳＣＬ２、ＥｐＣＡＭ、ＨＥＲ－２、ＭＵＣ－１、ＴＯＭＭ３４、ＲＮＦ４３、ＫＯＣ１、ＶＥＧＦＲ、βｈＣＧ、サバイビン、ＣＥＡ、ＴＧＦβＲ２、ｐ５３、ＫＲａｓ、ＯＧＴ、ＣＡＳＰ５、ＣＯＡ－１、ＭＡＧＥ、ＳＡＲＴ、及びＩＬ１３Ｒα２からなる群から選択される少なくとも１つの腫瘍抗原、又はその断片、又は腫瘍抗原の配列変異体、又はその断片の配列変異体を含むことも好ましい。
複合体は、配列番号４５、２６、２７、１７、３０、３１、３５、４０、２２、及び２３のいずれかのエピトープ等、ＥｐＣＡＭ、ＭＵＣ－１、サバイビン、ＣＥＡ、ＫＲａｓ、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＩＬ１３Ｒα２、及びＡＳＣＬ２からなる群から選択される抗原のエピトープである、少なくとも１つの腫瘍エピトープを含むことが好ましく；配列番号４５、２６、２７、１７、３０、３１、３５、２２、及び２３のいずれかのエピトープ等、ＥｐＣＡＭ、ＭＵＣ－１、サバイビン、ＣＥＡ、ＫＲａｓ、ＭＡＧＥ－Ａ３、及びＡＳＣＬ２からなる群から選択される抗原のエピトープである、少なくとも１つの腫瘍エピトープを含むことがより好ましく；配列番号４５、２６、２７、１７、３０、３１、２２、及び２３のいずれかのエピトープ等、ＥｐＣＡＭ、ＭＵＣ－１、サバイビン、ＣＥＡ、及びＡＳＣＬ２からなる群から選択される抗原のエピトープである、少なくとも１つの腫瘍エピトープを含むことが更により好ましく、配列番号４５、１７、３０、３１、２２、及び２３のいずれかのエピトープ等、ＥｐＣＡＭ、サバイビン、ＣＥＡ、及びＡＳＣＬ２からなる群から選択される抗原のエピトープである、少なくとも１つの腫瘍エピトープを含むことが最も好ましい。
幾つかの実施形態では、複合体の少なくとも１つの腫瘍エピトープは、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＭＵＣ－１、ＰＲＡＭＥ、ＡＳＣＬ２、及びＮＹ－ＥＳＯ－１からなる群から選択される抗原のエピトープであり、少なくとも１つの腫瘍エピトープ複合体は、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＭＵＣ－１、ＰＲＡＭＥ、ＡＳＣＬ２からなる群から選択される抗原のエピトープであることが好ましく、少なくとも１つの腫瘍エピトープ複合体は、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＭＵＣ－１、ＰＲＡＭＥからなる群から選択される抗原のエピトープであることが好ましく、複合体の少なくとも１つの腫瘍エピトープは、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＭＵＣ－１、ＡＳＣＬ２からなる群から選択される抗原のエピトープであることが好ましく、複合体の少なくとも１つの腫瘍エピトープは、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＡＳＣＬ２、ＰＲＡＭＥからなる群から選択される抗原のエピトープであることが好ましく、複合体の少なくとも１つの腫瘍エピトープは、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＭＵＣ－１、ＮＹ－ＥＳＯ－１からなる群から選択される抗原のエピトープであることが好ましく、複合体の少なくとも１つの腫瘍エピトープは、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＡＳＣＬ２、ＮＹ－ＥＳＯ－１からなる群から選択される抗原のエピトープであることが好ましい。一実施形態では、複合体の多重抗原性ドメインは、抗原ＭＡＧＥ－Ａ３、又はＡＳＣＬ２、又はＭＵＣ１、又はＰＲＡＭＥ、又はＮＹ－ＥＳＯ－１の少なくとも１つのエピトープを含むことがより好ましい。
複合体は、
ｉ）ＥｐＣＡＭの１以上のエピトープ（配列番号４５のエピトープ等）又はその機能的配列変異体；
ｉｉ）ＭＵＣ－１の１以上のエピトープ（配列番号２６のエピトープ及び／又は配列番号２７のエピトープ等）又はその機能的配列変異体；
ｉｉｉ）サバイビンの１以上のエピトープ（配列番号１７のエピトープ等）又はその機能的配列変異体；
ｉｖ）ＣＥＡの１以上のエピトープ（配列番号３０のエピトープ及び／又は配列番号３１のエピトープ等）又はその機能的配列変異体；
ｖ）ＫＲａｓの１以上のエピトープ（配列番号３１のエピトープ等）又はその機能的配列変異体；及び／又は
ｖｉ）ＭＡＧＥ－Ａ３の１以上のエピトープ又はその機能的配列変異体
を含むことも好ましい。
複合体は、
ｉ）ＥｐＣＡＭの１以上のエピトープ（配列番号４５のエピトープ等）又はその機能的配列変異体；
ｉｉ）ＭＵＣ－１の１以上のエピトープ（配列番号２６のエピトープ及び／又は配列番号２７のエピトープ等）又はその機能的配列変異体；
ｉｉｉ）サバイビンの１以上のエピトープ（配列番号１７のエピトープ等）又はその機能的配列変異体；
ｉｖ）ＣＥＡの１以上のエピトープ（配列番号３０のエピトープ及び／又は配列番号３１のエピトープ等）又はその機能的配列変異体；
ｖ）ＫＲａｓの１以上のエピトープ（配列番号３５のエピトープ等）又はその機能的配列変異体；
ｖｉ）ＭＡＧＥ－Ａ３の１以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；及び／又は
ｖｉｉ）ＡＳＣＬ２の１以上のエピトープ（配列番号２２のエピトープ及び／又は配列番号２３のエピトープ等）又はその機能的配列変異体
を含むことも好ましい。
複合体は、
－１以上のエピトープを含むＥｐＣＡＭの断片又はその機能的配列変異体；
－１以上のエピトープを含むＭＵＣ－１の断片又はその機能的配列変異体；
－１以上のエピトープを含むサバイビンの断片又はその機能的配列変異体；
－１以上のエピトープを含むＣＥＡの断片又はその機能的配列変異体；
－１以上のエピトープを含むＫＲａｓの断片又はその機能的配列変異体；及び／又は
－１以上のエピトープを含むＭＡＧＥ－Ａ３の断片又はその機能的配列変異体
を含むことも好ましい。
複合体は、
－１以上のエピトープを含むＥｐＣＡＭの断片又はその機能的配列変異体；
－１以上のエピトープを含むＭＵＣ－１の断片又はその機能的配列変異体；
－１以上のエピトープを含むサバイビンの断片又はその機能的配列変異体；
－１以上のエピトープを含むＣＥＡの断片又はその機能的配列変異体；
－１以上のエピトープを含むＫＲａｓの断片又はその機能的配列変異体；
－１以上のエピトープを含むＭＡＧＥ－Ａ３の断片又はその機能的配列変異体；及び／又は
－１以上のエピトープを含むＡＳＣＬ２の断片又はその機能的配列変異体
を含むことも好ましい。
本明細書で使用されるように、抗原の「断片」は、抗原の少なくとも１０の連続したアミノ酸を含み、抗原の少なくとも１５の連続したアミノ酸を含むことが好ましく、抗原の少なくとも２０の連続したアミノ酸を含むことがより好ましく、抗原の少なくとも２５の連続したアミノ酸を含むことが更により好ましく、抗原の少なくとも３０の連続したアミノ酸を含むことが最も好ましい。したがって、ＥｐＣＡＭの断片は、ＥｐＣＡＭ（配列番号４４）の少なくとも１０の連続したアミノ酸を含み、ＥｐＣＡＭ（配列番号４４）の少なくとも１５の連続したアミノ酸を含むことが好ましく、ＥｐＣＡＭ（配列番号４４）の少なくとも２０の連続したアミノ酸を含むことがより好ましく、ＥｐＣＡＭ（配列番号４４）の少なくとも２５の連続したアミノ酸を含むことが更により好ましく、ＥｐＣＡＭ（配列番号４４）の少なくとも３０の連続したアミノ酸を含むことが最も好ましく；ＭＵＣ－１の断片は、ＭＵＣ－１（配列番号２５）の少なくとも１０の連続したアミノ酸を含み、ＭＵＣ－１（配列番号２５）の少なくとも１５の連続したアミノ酸を含むことが好ましく、ＭＵＣ－１（配列番号２５）の少なくとも２０の連続したアミノ酸を含むことがより好ましく、ＭＵＣ－１（配列番号２５）の少なくとも２５の連続したアミノ酸を含むことが更により好ましく、ＭＵＣ－１（配列番号２５）の少なくとも３０の連続したアミノ酸を含むことが最も好ましく；サバイビンの断片は、サバイビン（配列番号１６）の少なくとも１０の連続したアミノ酸を含み、サバイビン（配列番号１６）の少なくとも１５の連続したアミノ酸を含むことが好ましく、サバイビン（配列番号１６）の少なくとも２０の連続したアミノ酸を含むことが更に好ましく、サバイビン（配列番号１６）の少なくとも２５の連続したアミノ酸を含むことが更により好ましく、サバイビン（配列番号１６）の少なくとも３０の連続したアミノ酸を含むことが最も好ましく；ＣＥＡの断片は、ＣＥＡ（配列番号２９）の少なくとも１０の連続したアミノ酸を含み、ＣＥＡ（配列番号２９）の少なくとも１５の連続したアミノ酸を含むことが好ましく、ＣＥＡ（配列番号２９）の少なくとも２０の連続したアミノ酸を含むことがより好ましく、ＣＥＡ（配列番号２９）の少なくとも２５の連続したアミノ酸を含むことが更により好ましく、ＣＥＡ（配列番号２９）の少なくとも３０の連続したアミノ酸を含むことが最も好ましく；ＫＲａｓの断片は、ＫＲａｓ（配列番号３４）の少なくとも１０の連続したアミノ酸を含み、ＫＲａｓ（配列番号３４）の少なくとも１５の連続したアミノ酸を含むことが好ましく、ＫＲａｓ（配列番号３４）の少なくとも２０の連続したアミノ酸を含むことがより好ましく、ＫＲａｓ（配列番号３４）の少なくとも２５の連続したアミノ酸を含むことが更により好ましく、ＫＲａｓ（配列番号３４）の少なくとも３０の連続したアミノ酸を含むことが最も好ましく；ＭＡＧＥ－Ａ３の断片は、ＭＡＧＥ－Ａ３（配列番号１４）の少なくとも１０の連続したアミノ酸を含み、ＭＡＧＥ－Ａ３（配列番号１４）の少なくとも１５の連続したアミノ酸を含むことが好ましく、ＭＡＧＥ－Ａ３（配列番号１４）の少なくとも２０の連続したアミノ酸を含むことがより好ましく、ＭＡＧＥ－Ａ３（配列番号１４）の少なくとも２５の連続したアミノ酸を含むことが更により好ましく、ＭＡＧＥ－Ａ３（配列番号１４）の少なくとも３０の連続したアミノ酸を含むことが最も好ましい。更に、ＡＳＣＬ２の断片は、ＡＳＣＬ２（配列番号２１）の少なくとも１０の連続したアミノ酸を含み、ＡＳＣＬ２（配列番号２１）の少なくとも１５の連続したアミノ酸を含むことが好ましく、ＡＳＣＬ２（配列番号２１）の少なくとも２０の連続したアミノ酸を含むことがより好ましく、ＡＳＣＬ２（配列番号２１）の少なくとも２５の連続したアミノ酸を含むことが更に好ましく、ＡＳＣＬ２（配列番号２１）の少なくとも３０の連続したアミノ酸を含むことが最も好ましい。
そのような断片の機能的配列変異体は、少なくとも７０％又は少なくとも７５％、好ましくは、少なくとも８０％又は少なくとも８５％、より好ましくは、少なくとも９０％又は少なくとも９５％、更により好ましくは、少なくとも９７％又は少なくとも９８％、特に好ましくは、少なくとも９９％、参照配列に対して同一である、（アミノ酸）配列を有し、断片に含まれるエピトープの少なくとも１つ、好ましくは全てのエピトープのエピトープ機能が維持される。
好ましい実施形態では、複合体は、ＨＥＲ－２、ＭＵＣ－１、ＴＯＭＭ３４、ＲＮＦ４３、ＫＯＣ１、ＶＥＧＦＲ、βｈＣＧ、サバイビン、ＴＧＦβＲ２、ｐ５３、ＫＲａｓ、ＯＧＴ、ＣＡＳＰ５、ＣＯＡ－１、ＳＡＲＴ、又はＩＬ１３Ｒα２のいずれのエピトープも含まない。より好ましい実施形態では、そのような複合体は、ＡＳＣＬ２、ＨＥＲ－２、ＭＵＣ－１、ＴＯＭＭ３４、ＲＮＦ４３、ＫＯＣ１、ＶＥＧＦＲ、βｈＣＧ、サバイビン、ＴＧＦβＲ２、ｐ５３、ＫＲａｓ、ＯＧＴ、ＣＡＳＰ５、ＣＯＡ－１、ＳＡＲＴ、又はＩＬ１３Ｒα２のいずれのエピトープも含まない。
好ましい実施形態では、複合体は、
－ＥｐＣＡＭの１以上のエピトープ（配列番号４５のエピトープ等）又はその機能的配列変異体；
－ＭＵＣ－１の１以上のエピトープ（配列番号２６のエピトープ及び／又は配列番号２７のエピトープ等）又はその機能的配列変異体；
－ＣＥＡの１以上のエピトープ（配列番号３０のエピトープ及び／又は配列番号３１のエピトープ等）又はその機能的配列変異体；及び
－ＭＡＧＥ－Ａ３の１以上のエピトープ又はその機能的配列変異体
を含む。
この好ましい実施形態では、複合体は、ＨＥＲ－２、ＴＯＭＭ３４、ＲＮＦ４３、ＫＯＣ１、ＶＥＧＦＲ、βｈＣＧ、サバイビン、ＴＧＦβＲ２、ｐ５３、ＫＲａｓ、ＯＧＴ、ＣＡＳＰ５、ＣＯＡ－１、ＳＡＲＴ、又はＩＬ１３Ｒα２のいずれのエピトープも含まないことが好ましい。この好ましい実施形態では、複合体は、ＡＳＣＬ２、ＨＥＲ－２、ＴＯＭＭ３４、ＲＮＦ４３、ＫＯＣ１、ＶＥＧＦＲ、βｈＣＧ、サバイビン、ＴＧＦβＲ２、ｐ５３、ＫＲａｓ、ＯＧＴ、ＣＡＳＰ５、ＣＯＡ－１、ＳＡＲＴ、又はＩＬ１３Ｒα２のいずれのエピトープも含まないことがより好ましい。
他の好ましい実施形態では、複合体は、
－ＥｐＣＡＭの１以上のエピトープ（配列番号４５のエピトープ等）又はその機能的配列変異体；
－ＭＵＣ－１の１以上のエピトープ（配列番号２６のエピトープ及び／又は配列番号２７のエピトープ等）又はその機能的配列変異体；
－ＣＥＡの１以上のエピトープ（配列番号３０のエピトープ及び／又は配列番号３１のエピトープ等）又はその機能的配列変異体；及び
－ＫＲａｓの１以上のエピトープ（配列番号３５のエピトープ等）又はその機能的配列変異体
を含む。
この好ましい実施形態では、複合体は、ＨＥＲ－２、ＴＯＭＭ３４、ＲＮＦ４３、ＫＯＣ１、ＶＥＧＦＲ、βｈＣＧ、サバイビン、ＴＧＦβＲ２、ｐ５３、ＯＧＴ、ＣＡＳＰ５、ＣＯＡ－１、ＭＡＧＥ、ＳＡＲＴ、又はＩＬ１３Ｒα２のいずれのエピトープも含まないことが好ましい。この好ましい実施形態では、複合体は、ＡＳＣＬ２、ＨＥＲ－２、ＴＯＭＭ３４、ＲＮＦ４３、ＫＯＣ１、ＶＥＧＦＲ、βｈＣＧ、サバイビン、ＴＧＦβＲ２、ｐ５３、ＯＧＴ、ＣＡＳＰ５、ＣＯＡ－１、ＭＡＧＥ、ＳＡＲＴ、又はＩＬ１３Ｒα２のいずれのエピトープも含まないことがより好ましい。
異なる好ましい実施形態では、複合体は、
－ＥｐＣＡＭの１以上のエピトープ（配列番号４５のエピトープ等）又はその機能的配列変異体；
－サバイビンの１以上のエピトープ（配列番号１７のエピトープ等）又はその機能的配列変異体；
－ＣＥＡの１以上のエピトープ（配列番号３０のエピトープ及び／又は配列番号３１のエピトープ等）又はその機能的配列変異体；及び
－ＭＡＧＥ－Ａ３ ５の１以上のエピトープ又はその機能的配列変異体
を含む。
好ましい実施形態では、複合体は、ＨＥＲ－２、ＭＵＣ－１、ＴＯＭＭ３４、ＲＮＦ４３、ＫＯＣ１、ＶＥＧＦＲ、βｈＣＧ、ＴＧＦβＲ２、ｐ５３、ＫＲａｓ、ＯＧＴ、ＣＡＳＰ５、ＣＯＡ－１、ＳＡＲＴ、又はＩＬ１３Ｒα２のいずれのエピトープも含まないことが好ましい。この好ましい実施形態では、複合体は、ＡＳＣＬ２、ＨＥＲ－２、ＭＵＣ－１、ＴＯＭＭ３４、ＲＮＦ４３、ＫＯＣ１、ＶＥＧＦＲ、βｈＣＧ、ＴＧＦβＲ２、ｐ５３、ＫＲａｓ、ＯＧＴ、ＣＡＳＰ５、ＣＯＡ－１、ＳＡＲＴ、又はＩＬ１３Ｒα２のいずれのエピトープを含まないことがより好ましい。
好ましい実施形態では、複合体は、
－ＭＵＣ－１の１以上のエピトープ（配列番号２６のエピトープ及び／又は配列番号２７のエピトープ等）又はその機能的配列変異体；
－サバイビンの１以上のエピトープ（配列番号１７のエピトープ等）又はその機能的配列変異体；及び
－ＭＡＧＥ－Ａ３の１以上のエピトープ又はその機能的配列変異体
を含む。
そのような複合体は、ＥｐＣＡＭ、ＨＥＲ－２、ＴＯＭＭ３４、ＲＮＦ４３、ＫＯＣ１、ＶＥＧＦＲ、βｈＣＧ、ＣＥＡ、ＴＧＦβＲ２、ｐ５３、ＫＲａｓ、ＯＧＴ、ＣＡＳＰ５、ＣＯＡ－１、ＳＡＲＴ、又はＩＬ１３Ｒα２のいずれのエピトープも含まないことが好ましい。そのような複合体は、ＡＳＣＬ２、ＥｐＣＡＭ、ＨＥＲ－２、ＴＯＭＭ３４、ＲＮＦ４３、ＫＯＣ１、ＶＥＧＦＲ、βｈＣＧ、ＣＥＡ、ＴＧＦβＲ２、ｐ５３、ＫＲａｓ、ＯＧＴ、ＣＡＳＰ５、ＣＯＡ－１、ＳＡＲＴ、又はＩＬ１３Ｒα２のいずれのエピトープも含まないことがより好ましい。
複合体は、
－ＥｐＣＡＭの１以上のエピトープ（配列番号４５のエピトープ等）又はその機能的配列変異体；
－ＭＵＣ－１の１以上のエピトープ（配列番号２６のエピトープ及び／又は配列番号２７のエピトープ等）又はその機能的配列変異体；
－サバイビンの１以上のエピトープ（配列番号１７のエピトープ等）又はその機能的配列変異体；及び／又は
－ＣＥＡの１以上のエピトープ（配列番号３０のエピトープ及び／又は配列番号３１のエピトープ等）又はその機能的配列変異体
を含むことがより好ましい。
そのような複合体は、ＨＥＲ－２、ＴＯＭＭ３４、ＲＮＦ４３、ＫＯＣ１、ＶＥＧＦＲ、βｈＣＧ、ＴＧＦβＲ２、ｐ５３、ＫＲａｓ、ＯＧＴ、ＣＡＳＰ５、ＣＯＡ－１、ＭＡＧＥ、ＳＡＲＴ、又はＩＬ１３Ｒα２のいずれのエピトープも含まないことが好ましい。そのような複合体は、ＡＳＣＬ２、ＨＥＲ－２、ＴＯＭＭ３４、ＲＮＦ４３、ＫＯＣ１、ＶＥＧＦＲ、βｈＣＧ、ＴＧＦβＲ２、ｐ５３、ＫＲａｓ、ＯＧＴ、ＣＡＳＰ５、ＣＯＡ－１、ＭＡＧＥ、ＳＡＲＴ、又はＩＬ１３Ｒα２のいずれのエピトープも含まないことがより好ましい。
複合体は、
－ＥｐＣＡＭの１以上のエピトープ（配列番号４５のエピトープ等）又はその機能的配列変異体；
－ＭＵＣ－１の１以上のエピトープ（配列番号２６のエピトープ及び／又は配列番号２７のエピトープ等）又はその機能的配列変異体；
－サバイビンの１以上のエピトープ（配列番号１７のエピトープ等）又はその機能的配列変異体；
－ＡＳＣＬ２の１以上のエピトープ（配列番号２２のエピトープ及び／又は配列番号２３のエピトープ等）又はその機能的配列変異体；及び／又は
－ＣＥＡの１以上のエピトープ（配列番号３０のエピトープ及び／又は配列番号３１のエピトープ等）又はその機能的配列変異体
を含むことがより好ましい。
そのような複合体は、ＨＥＲ－２、ＴＯＭＭ３４、ＲＮＦ４３、ＫＯＣ１、ＶＥＧＦＲ、βｈＣＧ、ＴＧＦβＲ２、ｐ５３、ＫＲａｓ、ＯＧＴ、ＣＡＳＰ５、ＣＯＡ－１、ＭＡＧＥ、ＳＡＲＴ、又はＩＬ１３Ｒα２のいずれのエピトープも含まないことが好ましい。
複合体は、
－ＥｐＣＡＭの１以上のエピトープ（配列番号４５のエピトープ等）又はその機能的配列変異体；
－サバイビンの１以上のエピトープ（配列番号１７のエピトープ等）又はその機能的配列変異体；
－ＡＳＣＬ２の１以上のエピトープ（配列番号２２のエピトープ及び／又は配列番号２３のエピトープ等）又はその機能的配列変異体；及び／又は
－ＣＥＡの１以上のエピトープ（配列番号３０のエピトープ及び／又は配列番号３１のエピトープ等）又はその機能的配列変異体
を含むことがより好ましい。
そのような複合体は、ＨＥＲ－２、ＭＵＣ－１、ＴＯＭＭ３４、ＲＮＦ４３、ＫＯＣ１、ＶＥＧＦＲ、βｈＣＧ、ＴＧＦβＲ２、ｐ５３、ＫＲａｓ、ＯＧＴ、ＣＡＳＰ５、ＣＯＡ－１、ＭＡＧＥ、ＳＡＲＴ、又はＩＬ１３Ｒα２のいずれのエピトープも含まないことが好ましい。
複合体は、
－ＥｐＣＡＭの１以上のエピトープ（配列番号４５のエピトープ等）又はその機能的配列変異体；
－ＭＵＣ－１の１以上のエピトープ（配列番号２６のエピトープ及び／又は配列番号２７のエピトープ等）又はその機能的配列変異体；
－サバイビンの１以上のエピトープ（配列番号１７のエピトープ等）又はその機能的配列変異体；及び
－ＣＥＡの１以上のエピトープ（配列番号３０のエピトープ及び／又は配列番号３１のエピトープ等）又はその機能的配列変異体
を含むことが特に好ましい。
そのような複合体は、ＨＥＲ－２、ＴＯＭＭ３４、ＲＮＦ４３、ＫＯＣ１、ＶＥＧＦＲ、βｈＣＧ、ＴＧＦβＲ２、ｐ５３、ＫＲａｓ、ＯＧＴ、ＣＡＳＰ５、ＣＯＡ－１、ＭＡＧＥ、ＳＡＲＴ、又はＩＬ１３Ｒα２のいずれのエピトープも含まないことが好ましい。そのような複合体は、ＡＳＣＬ２、ＨＥＲ－２、ＴＯＭＭ３４、ＲＮＦ４３、ＫＯＣ１、ＶＥＧＦＲ、βｈＣＧ、ＴＧＦβＲ２、ｐ５３、ＫＲａｓ、ＯＧＴ、ＣＡＳＰ５、ＣＯＡ－１、ＭＡＧＥ、ＳＡＲＴ、又はＩＬ１３Ｒα２のいずれのエピトープも含まないことがより好ましい。
複合体は、
－ＥｐＣＡＭの１以上のエピトープ（配列番号４５のエピトープ等）又はその機能的配列変異体；
－ＭＵＣ－１の１以上のエピトープ（配列番号２６のエピトープ及び／又は配列番号２７のエピトープ等）又はその機能的配列変異体；及び
－ＣＥＡの１以上のエピトープ（配列番号３０のエピトープ及び／又は配列番号３１のエピトープ等）又はその機能的配列変異体
を含むことも特に好ましい。
そのような複合体は、ＨＥＲ－２、ＴＯＭＭ３４、ＲＮＦ４３、ＫＯＣ１、ＶＥＧＦＲ、βｈＣＧ、サバイビン、ＴＧＦβＲ２、ｐ５３、ＫＲａｓ、ＯＧＴ、ＣＡＳＰ５、ＣＯＡ－１、ＭＡＧＥ、ＳＡＲＴ、又はＩＬ１３Ｒα２のいずれのエピトープも含まないことが好ましい。そのような複合体は、ＡＳＣＬ２、ＨＥＲ－２、ＴＯＭＭ３４、ＲＮＦ４３、ＫＯＣ１、ＶＥＧＦＲ、βｈＣＧ、サバイビン、ＴＧＦβＲ２、ｐ５３、ＫＲａｓ、ＯＧＴ、ＣＡＳＰ５、ＣＯＡ－１、ＭＡＧＥ、ＳＡＲＴ、又はＩＬ１３Ｒα２のいずれのエピトープを含まないことがより好ましい。
最も好ましい実施形態では、複合体は、
－ＣＥＡの１以上のエピトープ（配列番号３０のエピトープ及び／又は配列番号３１のエピトープ等）又はその機能的配列変異体；
－サバイビンの１以上のエピトープ（配列番号１７のエピトープ等）又はその機能的配列変異体；
－ＥｐＣＡＭの１以上のエピトープ（配列番号４１のエピトープ等）又はその機能的配列変異体；及び
－ＡＳＣＬ２の１以上のエピトープ（配列番号２２のエピトープ及び／又は配列番号２３のエピトープ等）又はその機能的配列変異体
を含む。
そのような複合体は、ＨＥＲ－２、ＭＵＣ－１、ＴＯＭＭ３４、ＲＮＦ４３、ＫＯＣ１、ＶＥＧＦＲ、βｈＣＧ、ＴＧＦβＲ２、ｐ５３、ＫＲａｓ、ＯＧＴ、ＣＡＳＰ５、ＣＯＡ－１、ＭＡＧＥ、ＳＡＲＴ、又はＩＬ１３Ｒα２のいずれのエピトープも含まないことが好ましい。
更に最も好ましい実施形態では、複合体は、Ｎ末端からＣ末端方向に、
－ＣＥＡの１以上のエピトープ（配列番号３０のエピトープ及び／又は配列番号３１のエピトープ等）又はその機能的配列変異体；
－サバイビンの１以上のエピトープ（配列番号１７のエピトープ等）又はその機能的配列変異体；及び
－ＡＳＣＬ２の１以上のエピトープ（配列番号２２のエピトープ及び／又は配列番号２３のエピトープ等）又はその機能的配列変異体
を含む。
そのような複合体は、ＨＥＲ－２、ＥｐＣＡＭ、ＭＵＣ－１、ＴＯＭＭ３４、ＲＮＦ４３、ＫＯＣ１、ＶＥＧＦＲ、βｈＣＧ、ＴＧＦβＲ２、ｐ５３、ＫＲａｓ、ＯＧＴ、ＣＡＳＰ５、ＣＯＡ－１、ＭＡＧＥ、ＳＡＲＴ、又はＩＬ１３Ｒα２のいずれのエピトープも含まないことが好ましい。
複合体は、Ｎ末端からＣ末端方向に、
ｉ）配列番号２９のアミノ酸配列を有するペプチド、又は少なくとも１０のアミノ酸（好ましくは少なくとも１５のアミノ酸、より好ましくは少なくとも２０のアミノ酸、更により好ましくは少なくとも２５のアミノ酸、及び最も好ましくは少なくとも３０のアミノ酸）の長さを有するその断片、又は少なくとも７０％又は少なくとも７５％、好ましくは少なくとも８０％又は少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％又は少なくとも９５％、更により好ましくは少なくとも９７％又は少なくとも９８％、特に好ましくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；
ｉｉ）配列番号１６のアミノ酸配列を有するペプチド、又は少なくとも１０のアミノ酸（好ましくは少なくとも１５のアミノ酸、より好ましくは少なくとも２０のアミノ酸、更により好ましくは少なくとも２５のアミノ酸、及び最も好ましくは少なくとも３０のアミノ酸）の長さを有するその断片、又は少なくとも７０％又は少なくとも７５％、好ましくは少なくとも８０％又は少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％又は少なくとも９５％、更により好ましくは少なくとも９７％又は少なくとも９８％、特に好ましくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；及び
ｉｉｉ）配列番号２１のアミノ酸配列を有するペプチド、又は少なくとも１０のアミノ酸（好ましくは少なくとも１５のアミノ酸、より好ましくは少なくとも２０のアミノ酸、更により好ましくは少なくとも２５のアミノ酸、及び最も好ましくは少なくとも３０のアミノ酸）の長さを有するその断片、又は少なくとも７０％又は少なくとも７５％、好ましくは少なくとも８０％又は少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％又は少なくとも９５％、更により好ましくは少なくとも９７％又は少なくとも９８％、特に好ましくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体
を含むことが更により好ましい。
そのような複合体は、ＣＥＡ、サバイビン、ＡＳＣＬ２以外の更なる抗原又は更なる抗原のエピトープを含まないことが好ましく、そのような複合体は、他のいかなる（腫瘍）エピトープも含まないことがより好ましい。
好ましくは、そのような複合体では、（ｉ）配列番号２９のアミノ酸配列を有するペプチド、又はその断片又はその変異体のＣ末端は、（ｉｉ）配列番号１６のアミノ酸配列を有するペプチド、又はその断片又はその変異体のＮ末端に直接結合され、（ｉｉ）配列番号１６のアミノ酸配列を有するペプチド、又はその断片又はその変異体のＣ末端は、（ｉｉｉ）配列番号２１のアミノ酸配列を有するペプチド又はその断片又はその変異体のＮ末端に直接結合される。
更により好ましくは、複合体は、Ｎ末端からＣ末端方向に、
ｉ）配列番号３２のアミノ酸配列を有するペプチド、又は少なくとも７０％又は少なくとも７５％、好ましくは少なくとも８０％又は少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％又は少なくとも９５％、更により好ましくは少なくとも９７％又は少なくとも９８％、特に好ましくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体
ｉｉ）配列番号１８のアミノ酸配列を有するペプチド、又は少なくとも７０％又は少なくとも７５％、好ましくは少なくとも８０％又は少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％又は少なくとも９５％、更により好ましくは少なくとも９７％又は少なくとも９８％、特に好ましくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；及び
ｉｉｉ）配列番号２４のアミノ酸配列を有するペプチド、又は少なくとも７０％又は少なくとも７５％、好ましくは少なくとも８０％又は少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％又は少なくとも９５％、更により好ましくは少なくとも９７％又は少なくとも９８％、特に好ましくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体
を含む。
そのような複合体は、ＣＥＡ、サバイビン、及びＡＳＣＬ２以外の更なる抗原又は更なる抗原のエピトープを含まないことが好ましく、そのような複合体は、他のいかなる（腫瘍）エピトープも含まないことがより好ましい。
好ましくは、そのような複合体では、（ｉ）配列番号３２のアミノ酸配列を有するペプチド又はその変異体のＣ末端は、（ｉｉ）配列番号１８のアミノ酸配列を有するペプチド又はその変異体のＮ末端に直接結合され、（ｉｉ）配列番号１８のアミノ酸配列を有するペプチド又はその変異体のＣ末端は、（ｉｉｉ）配列番号２４のアミノ酸配列を有するペプチド又はその変異体のＮ末端に直接結合される。
最も好ましくは、複合体の多重抗原性ドメインは、配列番号４８のアミノ酸配列を有するペプチド、又は少なくとも７０％又は少なくとも７５％、好ましくは少なくとも８０％又は少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％又は少なくとも９５％、更により好ましくは少なくとも９７％又は少なくとも９８％、特に好ましくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその（機能的）配列変異体を含む又はからなる。最も好ましい実施形態では、複合体は、ＣＥＡ、サバイビン、及びＡＳＣＬ２以外の更なる抗原又は更なる抗原のエピトープを含まず、そのような複合体は、他のいかなる（腫瘍）エピトープも含まないことが更により好ましい。
成分ｃ）－ＴＬＲペプチドアゴニスト
本発明の組合せに含まれる複合体では、ＴＬＲペプチドアゴニストは、自己アジュバントと共に、樹状細胞に対するワクチンの標的化の増加を可能にする。本発明の組合せに含まれる複合体におけるＣＰＰ及び少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープへのＴＬＲペプチドアゴニストの物理的結合は、抗原を内在化し、代謝し、表示する、抗原提示細胞、特に樹状細胞の同時刺激によって強化された免疫応答を提供する。
本発明の文脈で使用されるように、「ＴＬＲペプチドアゴニスト」は、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）のアゴニストであり、即ち、ＴＬＲに結合し、ＴＬＲを活性化し、特に生物学的応答を生成する。更に、ＴＬＲペプチドアゴニストは、上記で定義されたペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質である。ＴＬＲペプチドアゴニストは、１０～１５０のアミノ酸を含むことが好ましく、１５～１３０のアミノ酸を含むことがより好ましく、２０～１２０のアミノ酸を含むことが更により好ましく、２５～１１０のアミノ酸を含むことが特に好ましく、３０～１００のアミノ酸を含むことが最も好ましい。
Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）は、細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及びサイトゾルドメインによって特徴づけられる膜貫通タンパク質である。馬蹄形のロイシンリッチリピート（ＬＲＲ）を含む細胞外ドメインは、多様な微生物に由来する共通の分子パターンの認識に関与している。Ｔｏｌｌ様受容体は、ＴＬＲ１～１０を含む。ＴＬＲ受容体及びその修飾体及び誘導体を活性化することができる化合物は、当該技術分野では十分に文書化されている。ＴＬＲ１は、細菌リポタンパク質及びそのアセチル化された形態によって活性化されることができ、ＴＬＲ２は、更に、細菌由来又は宿主由来の、グラム陽性細菌糖脂質、ＬＰＳ、ＬＰＡ、ＬＴＡ、線毛、外膜タンパク質、熱ショックタンパク質、及びマイコバクテリアリポアラビノマンナンによって活性化されることができる。ＴＬＲ３は、特にウイルス由来のｄｓＲＮＡ、又は化学化合物ｐｏｌｙ（ＬＣ）によって活性化されることができる。ＴＬＲ４は、宿主又は細菌由来のグラム陰性のＬＰＳ、ＬＴＡ、熱ショックタンパク質、ウイルスコートタンパク質、又はエンベロープタンパク質、タキソール又はその誘導体、ヒアルロナンを含むオリゴ糖、及びフィブロネクチンによって活性化されることができる。ＴＬＲ５は、細菌の鞭毛やフラゲリンで活性化されることができる。ＴＬＲ６は、マイコバクテリアリポタンパク質とＢ群連鎖球菌の熱不安定性溶解性因子（ｈｅａｔ ｌａｂｉｌｅ ｓｏｌｕｂｌｅ ｆａｃｔｏｒ）（ＧＢＳ－Ｆ）又はスタフィロコッカス・モジュリン（ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｍｏｄｕｌｉｎｓ）によって活性化されることができる。ＴＬＲ７は、イミダゾキノリンによって活性化されることができる。ＴＬＲ９は、非メチル化ＣｐＧ ＤＮＡ又はクロマチン－ＩｇＧ複合体によって活性化されることができる。
本発明の組合せに含まれる複合体に含まれるＴＬＲペプチドアゴニストは、ＴＬＲ１、２、４、５、６、及び／又は１０のアゴニストであることが好ましい。ＴＬＲは、細胞表面（ＴＬＲ１、２、４、５、６、及び１０）上、又はエンドソーム等の細胞内小器官の膜（ＴＬＲ３、４、７、８、及び９）上のいずれかに発現される。エンドソーム受容体のための天然リガンドは、核酸系の分子であることが判明した（ＴＬＲ４を除く）。細胞表面に発現したＴＬＲ１、２、４、５、６、及び１０は、細胞外微生物の分子パターンを認識する（Ｍｏｎｉｅ， Ｔ． Ｐ．， Ｂｒｙａｎｔ， Ｃ． Ｅ．， ｅｔ ａｌ． ２００９： Ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ ｉｍｍｕｎｉｔｙ： Ｌｅｓｓｏｎｓ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ＴＬＲｓ ａｎｄ ＮＬＲｓ． Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｓｃｉ． ３４（１１）， ５５３-５６１）。ＴＬＲは、幾つかの細胞型で発現されるが、実質的に全てのＴＬＲは、ＤＣで発現され、これらの特殊化した細胞があらゆる可能性のある病原体や危険信号を感知することを可能にする。
しかしながら、ＴＬＲ２、４、及び５は、ＤＣの表面で構成的に発現される。したがって、本発明の組合せに含まれる複合体に含まれるＴＬＲペプチドアゴニストは、ＴＬＲ２、ＴＬＲ４、及び／又はＴＬＲ５のペプチドアゴニストであることがより好ましい。ＴＬＲペプチドアゴニストは、ＴＬＲ２ペプチドアゴニスト及び／又はＴＬＲ４ペプチドアゴニストであることが更により好ましい。ＴＬＲペプチドアゴニストは、ＴＬＲ４ペプチドアゴニストであることが特に好ましい。ＴＬＲペプチドアゴニストは、ＴＬＲ２とＴＬＲ４アゴニストの両方である１つのＴＬＲペプチドアゴニストであることが最も好ましい。ＴＬＲ２は、細菌、ウイルス、寄生生物、真菌に由来する多種多様なリガンドを検出できる。リガンド特異性は、ＴＬＲ１、６、又は１０等の他のＴＬＲや、デクチン１、ＣＤ１４、ＣＤ３６等の非ＴＬＲ分子と、ＴＬＲ２との相互作用によって決定されることが多い。ＴＬＲ１とのヘテロ二量体の形成は、ＴＬＲ２がＰａｍ３ＣＳＫ４やペプチドグリカン等の（マイコ）バクテリア由来のトリアシルリポタンパク質又はリポペプチドを同定することを可能にする（ＰＧＡ； Ｇａｙ， Ｎ． Ｊ．， ａｎｄ Ｇａｎｇｌｏｆｆ， Ｍ． （２００７）： Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｔｏｌｌ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｌｉｇａｎｄｓ． Ａｎｎｕ． Ｒｅｖ． Ｂｉｏｃｈｅｍ． ７６， １４１－１６５； Ｓｐｏｈｎ， Ｒ．， Ｂｕｗｉｔｔ－Ｂｅｃｋｍａｎｎ， Ｕ．， ｅｔ ａｌ． （２００４）： Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ ｌｉｐｏｐｅｐｔｉｄｅ ａｄｊｕｖａｎｔｓ ａｎｄ Ｔｏｌｌ－ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ２－Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ－ａｃｔｉｖｉｔｙ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ． Ｖａｃｃｉｎｅ ２２（１９）， ２４９４－２４９９）。ＴＬＲ２及び６のヘテロ二量体化は、ジアシルリポペプチド及びザイモサンの検出を可能にする。リポ多糖類（ＬＰＳ）及びその誘導体は、ＴＬＲ４及びフラジェリンのためのリガンドである（Ｂｒｙａｎｔ， Ｃ． Ｅ．， Ｓｐｒｉｎｇ， Ｄ． Ｒ．， ｅｔ ａｌ． （２０１０） ｏｒ ｅｎｔｏｌｉｍｏｄ （ＣＢＬＢ５０２） ｆｏｒ ＴＬＲ５． Ｔｈｅ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｂａｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ｈｏｓｔ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｔｏ ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ． Ｎａｔ． Ｒｅｖ． Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ． ８（１）， ８－１４）。
ＴＬＲ２は、微生物及び真菌によって発現される分子を含む、広く構造的に多様な範囲のリガンドと相互作用する。天然及び合成リポペプチド（例えば、マイコプラズマ・ファーメンタンス（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｆｅｒｍｅｎｔａｓ）マクロファージ活性化リポペプチド（ＭＡＬＰ－２））、ペプチドグリカン（黄色ブドウ球菌からのもの等のＰＧ）、様々な細菌株からのリポ多糖類（ＬＰＳ）、多糖類（例えば、ザイモサン）、グラム陽性細菌からのグリコシルホスファチジル－イノシトール－アンカー構造（例えば、マイコバクテリアからのリポタイコ酸（ＬＴＡ）及びリポアラビノマンナン、及び結核菌からのリポマンナン（ｌｉｐｏｍａｎｎａｓ））を含む、多数のＴＬＲ２アゴニストが合成されてきた。特定のウイルス決定因子もＴＬＲ２を介して誘発することができる（Ｂａｒｂａｌａｔ Ｒ， Ｌａｕ Ｌ， Ｌｏｃｋｓｌｅｙ ＲＭ， Ｂａｒｔｏｎ ＧＭ． Ｔｏｌｌ－ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ２ ｏｎ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｍｏｎｏｃｙｔｅｓ ｉｎｄｕｃｅｓ ｔｙｐｅ Ｉ ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ｉｎ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｔｏ ｖｉｒａｌ ｂｕｔ ｎｏｔ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｌｉｇａｎｄｓ． Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ． ２００９： １０（１１）：１２００－７）。細菌のリポペプチドは、細胞壁の構造成分である。それらは、システイン残基を介してペプチドを結合させることができるアシル化されたｓ－グリセルシステイン部分からなる。細菌リポペプチドであるＴＬＲ２アゴニストの例としては、ＭＡＬＰ－２、及びその合成類似体であるジ－パルミトイル－Ｓ－グリセリルシステイン（Ｐａｍ２Ｃｙｓ）又はトリ－パルミトイル－Ｓ－グリセリルシステイン（Ｐａｍ３Ｃｙｓ）が挙げられる。
多様なリガンドは、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｍｉｎｎｅｓｏｔａ Ｒ５９５からのモノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬＡ）、リポ多糖類（ＬＰＳ）、マンナン（カンジダ・アルビカンス）、グリコイノシトールホスホリピッド（トリパノソーマ）、ウイルス外被タンパク質（ＲＳＶ及びＭＭＴＶ）、及びフィブリノゲン及び熱ショックタンパク質を含む内在性抗原を含む、ＴＬＲ４と相互作用する。ＴＬＲ４のそのようなアゴニストは、例えば、Ａｋｉｒａ Ｓ，Ｕｅｍａｔｓｕ Ｓ，Ｔａｋｅｕｃｈｉ Ｏ．Ｐａｔｈｏｇｅｎ ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｎｎａｔｅ ｉｍｍｕｎｉｔｙ．Ｃｅｌｌ．Ｆｅｂ ２４；２００６：１２４（４）：７８３－８０１、又はＫｕｍａｒ Ｈ，Ｋａｗａｉ Ｔ，Ａｋｉｒａ Ｓ．Ｔｏｌｌ－ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ａｎｄ ｉｎｎａｔｅ ｉｍｍｕｎｉｔｙ．Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ．Ｏｃｔ ３０；２００９ ３８８（４）：６２１－５．ＬＰＳに記載され、グラム陰性細菌の外膜に見られ、ＴＬＲリガンドの中で最も広く研究されている。適切なＬＰＳ由来のＴＬＲ４アゴニストペプチドは、例えば国際公開第ＷＯ２０１３／１２００７３（Ａ１）号に記載されている。
ＴＬＲ５は、（ｉ）ほぼ全ての運動性細菌によって発現されるフラゲリン分子の領域によって引き起こされる；又は（ｉｉ）エントリモド（ＣＢＬＢ５０２）によって引き起こされる。したがって、（ｉ）フラゲリン、又はフラゲリンに由来するペプチド又はタンパク質及び／又はフラゲリンの変異体又は断片；又は（ｉｉ）エントリモド（ＣＢＬＢ５０２）は、複合体に含まれるＴＬＲペプチドアゴニストとしても適している。
したがって、ＴＬＲペプチドアゴニストの例としては、ＴＬＲ２リポペプチドアゴニストＭＡＬＰ－２、Ｐａｍ２Ｃｙｓ、及びＰａｍ３Ｃｙｓ又はそれらを修飾したもの、異なる形態のＴＬＲ４アゴニストＬＰＳ（例えば、髄膜炎菌野生型Ｌ３－ＬＰＳ及び変異型ペンタアシル化ＬｐｘＬ１－ＬＰＳ）、及びＴＬＲ５アゴニストフラゲリンが挙げられる。
しかしながら、複合体に含まれるＴＬＲペプチドアゴニストは、リポペプチドでもリポタンパク質でもなく、糖ペプチドでも糖タンパク質でもないことが好ましく、複合体に含まれるＴＬＲペプチドアゴニストは、本明細書で定義される古典的なペプチド、ポリペプチド又はタンパク質であることがより好ましい。
幾つかの実施形態では、ＴＬＲペプチドアゴニストは、（天然起源の）タンパク質の断片、又は少なくとも７０％又は少なくとも７５％、好ましくは少なくとも８０％又は少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％又は少なくとも９５％、更により好ましくは少なくとも９７％又は少なくとも９８％、特に好ましくは少なくとも９９％の配列同一性を共有するその変異体である。そのような断片は、少なくとも２０又は２５、好ましくは少なくとも３０又は３５、より好ましくは少なくとも４０又は５０、更により好ましくは６０又は７０、更により好ましくは少なくとも８０又は９０、例えば少なくとも１００のアミノ酸の最小長さを有することができる。特に、断片は、ＴＬＲアゴニスト機能性を示す。タンパク質の断片は、タンパク質の「ＴＬＲアゴニストドメイン」を提供するように有利に選択されることができるが、タンパク質の他のドメイン（ＴＬＲアゴニストドメイン以外）を含まないことが好ましい。したがって、幾つかの実施形態では、ＴＬＲアゴニストは、別の免疫学的活性ドメイン（ＴＬＲアゴニストドメイン以外）を含まず、より好ましくは、ＴＬＲアゴニストは別の生物学的活性ドメイン（ＴＬＲアゴニストドメイン以外）含まない。例えば、幾つかの実施形態では、ＴＬＲアゴニストは、フラゲリン（ＴＬＲアゴニストの機能性に加えて、更なるドメインを含む）ではない。しかしながら、幾つかの実施形態では、ＴＬＲアゴニストは、フラゲリンのＴＬＲアゴニストドメインを含む（フラジェリンの他のドメインは含まない）フラジェリンの断片であることができる。
好ましいＴＬＲ２ペプチドアゴニストは、国際公開第２０１２／０４８１９０Ａ１号及び米国特許出願公開第１３／０３３１５４６号に詳細に記載される、アネキシンＩＩ又はその免疫調節性断片（ＴＬＲアゴニスト機能性を有する）であり、特に、国際公開第ＷＯ２０１２／０４８１９０Ａ１号の配列番号７のアミノ酸配列又はその断片又はその変異体を含むＴＬＲ２ペプチドアゴニストが好ましい。
したがって、配列番号４９のアミノ酸配列、又は配列番号４９に対して、少なくとも７０％又は少なくとも７５％、好ましくは少なくとも８０％又は少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％又は少なくとも９５％、更により好ましくは少なくとも９７％又は少なくとも９８％、特に好ましくは少なくとも９９％の同一性があるその配列変異体を含む又はからなるＴＬＲ２ペプチドアゴニストが、成分ｃ）、即ち複合体に含まれるＴＬＲペプチドアゴニストとして、好ましい。
配列番号４９（ＴＬＲ２ペプチドアゴニストＡｎａｘａ）
配列番号４９のＴＬＲペプチドアゴニストの特に好ましい機能的配列変異体は、配列番号５０のＴＬＲペプチドアゴニストである。
配列番号５０
したがって、配列番号５０のアミノ酸配列、又はその配列変異体を含む又はからなるＴＬＲ２ペプチドアゴニストが、上述されるように、複合体に含まれる成分ｃ）、即ち少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニストとして特に好ましい。
ＴＬＲ４に関して、ＴＬＲ４、特に（ｉ）天然のＬＰＳリガンドを模倣するペプチド（ＲＳ０１：Ｇｌｎ－Ｇｌｕ－Ｉｌｅ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ及びＲＳ０９：Ａｌａ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｈｉｓ－Ａｌａ－Ｌｅｕ－Ｓｅｒ）及び（ｉｉ）フィブロネクチン由来ペプチドに結合するモチーフに特に対応する、ＴＬＲペプチドアゴニストが特に好ましい。細胞糖タンパク質フィブロネクチン（ＦＮ）は、３つのエキソンの選択的スプライシングによって単一の遺伝子から生成された複数のアイソフォームを有する。これらのアイソフォームの１つは、ＴＬＲ４と相互作用するエクストラドメインＡ（ＥＤＡ）である。
更に適切なＴＬＲペプチドアゴニストは、フィブロネクチンＥＤＡドメイン又はその断片又はその変異体を含む。そのような適切なフィブロネクチンＥＤＡドメイン又はその断片又はその変異体は、欧州特許第１９１３９５４Ｂ１号明細書、欧州特許出願公開２４７６４４０Ａ１号明細書、米国特許出願公開２００９／０２２０５３２Ａ１号明細書、及び国際公開第ＷＯ２０１１／１０１３３２Ａ号に開示される。したがって、上述されるように、配列番号４０のアミノ酸配列、又はその配列変異体を含む又はからなるＴＬＲ４ペプチドアゴニストは、成分ｃ）、即ち本発明の組合せに含まれる複合体に含まれる少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニストとして、好ましい。
配列番号５２（ＴＬＲ４ペプチドアゴニストＥＤＡ）
他の適切なＴＬＲペプチドアゴニストは、本明細書に記載されるように、Ｈｐ９１又はその断片又はその変異体を含む又はからなる。Ｈｐ９１は、例えば、米国特許第９，５３９，３２１Ｂ２号明細書に記載されるＴＬＲ４－アゴニストであり、以下のアミノ酸配列を有する。
［配列番号５３］
更に、高移動度群ボックス１タンパク質（ＨＭＧＢ１）及びそのペプチド断片は、ＴＬＲ２アゴニストとして、特にＴＬＲ２を介した炎症活性のエンハンサーとして作用すると考えられている。そのようなＨＭＧＢ１由来ペプチドは、例えば、米国特許出願第２０１１／０２３６４０６Ａ１に開示される。したがって、上述されるように、ＴＬＲ２ペプチドアゴニストは、配列番号５１のアミノ酸配列又はその配列変異体を含む又はからなり、成分ｃ）、即ち本発明の組合せに含まれる複合体に含まれる少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニストとして、好ましい。
Figure 2023545178000052
 ［配列番号５１］
ＨＭＧＢ１及びそのペプチド断片は、単独のＴＬＲアゴニストとして、又は（他の）ＴＬＲ２／ＴＬＲ４ペプチドアゴニストと組み合わせてＴＬＲ２を介した炎症活性のエンハンサーとして使用されることができる。したがって、幾つかの実施形態では、複合体は、例えば、ＡＮＡＸＡ（配列番号４９）又はその配列変異体（配列番号５０等）等のＴＬＲ２／ＴＬＲ４ペプチドアゴニストと組み合わせて、国際公開第ＷＯ２００６／０８３３０１Ａ１号に記載されているもの等のＴＬＲアゴニストΔ３０ＨＭＧＢ１又はその免疫調節性断片の一部として、含むことができる。したがって、複合体は、上記に開示されるＴＬＲペプチドアゴニストに加えて、国際公開第ＷＯ２００６／０８３３０１Ａ１号に開示されるΔ３０ＨＭＧＢ１（配列番号５１）、その任意の免疫調節性断片、又はペプチドＨｐ－１～ＨＰ－１６６のいずれか、好ましくはＨｐ－３１、Ｈｐ－４６、Ｈｐ－１０６を含むことができる。例えば、複合体は、少なくともＴＬＲペプチドアゴニストＥＤＡ（配列番号５２）及びΔ３０ＨＭＧＢ１（配列番号５１）、又はＥＤＡ（配列番号５２）及びＨｐ－３１、又はＨｐ－４６、又はＨｐ－１０６を含むことができ、複合体は、少なくともＴＬＲペプチドアゴニストＡＮＡＸＡ（配列番号４９又は５０）及びΔ３０ＨＭＧＢ１（配列番号５１）、又はＡＮＡＸＡ（配列番号４９又は５０）及びＨｐ－３１、又はＨｐ－４６、又はＨｐ－１０６を含むことが好ましい。このような組合せの使用は、より強力な複合体の自己補助が好まれる場合に、有利であることがある。
本発明の組合せに含まれる複合体は、単一のＴＬＲアゴニストを含むことが好ましい。他の実施形態では、本発明の組合せに含まれる複合体は、１超のＴＬＲペプチドアゴニスト、特に２、３、４、５、６、７、８、９、１０個以上のＴＬＲペプチドアゴニストを含むことができ、本発明の組合せに含まれる複合体は、（少なくとも）２又は３個のＴＬＲペプチドアゴニストを含むことがより好ましく、本発明の組合せに含まれる複合体は、（少なくとも）４又は５個のＴＬＲペプチドアゴニストを含むことが更により好ましい。１超のＴＬＲペプチドアゴニストが複合体に含まれている場合、特に、本発明の組合せに含まれる複合体において、当該ＴＬＲペプチドアゴニストはまた、例えば他のＴＬＲペプチドアゴニストに対して、及び／又は成分ａ）、即ち細胞透過性ペプチドに対して、及び／又は成分ｂ）、即ち、抗原又は抗原エピトープに対して、共有結合されることが理解される。
特に好ましい実施形態では、本発明の組合せに含まれる複合体は、１つの単一のＴＬＲペプチドアゴニストを含む。特に、この特に好ましい実施形態では、本発明の組合せに含まれる複合体は、１つの単一のＴＬＲペプチドアゴニストを含み、記載された１つの単一のＴＬＲペプチドアゴニスト以外のＴＬＲアゴニストの特性を有する更なる成分を含まない。
複合体に含まれる様々なＴＬＲペプチドアゴニストは、同じでも異なっていてもよい。複合体に含まれる様々なＴＬＲペプチドアゴニストは、互いに異なっていることが好ましい。
更に、１超の抗原又は抗原エピトープ、特に２、３、４、５、６、７、８、９、１０個の抗原又は抗原エピトープ、又は更なるＴＬＲペプチドアゴニスト、特に２、３、４、５、６、７、８、９、１０個のＴＬＲアゴニストは、本発明の組合せに含まれる複合体において、連続して配置されることができる。これは、特に、複合体に含まれる全てＴＬＲペプチドアゴニストは、成分ａ）、即ち細胞透過性ペプチドによっても、成分ｂ）、即ち少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープによっても遮られない並びで配置されることを意味する。むしろ、複合体において、成分ａ）及び成分ｂ）は、例えば、全てのＴＬＲペプチドアゴニストのこのような並びの前後に配置される。しかしながら、このような方法で連続的に配置されたＴＬＲペプチドアゴニストは、例えば、成分ａ）、即ち細胞透過性ペプチドでも、成分ｂ）、即ち少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープでもない、以下に記載されるスペーサー又はリンカーによって、互いに結合されることができる。
若しくは、しかしながら、本発明の組合せに含まれる複合体において、様々なＴＬＲペプチドアゴニストは、他の方法で配置されることもでき、例えば、成分ａ）及び／又は成分ｂ）は、２以上のＴＬＲペプチドアゴニスト間に配置され；即ち、１以上のＴＬＲペプチドアゴニストは、成分ａ）と成分ｂ）との間（又はその逆）に配置され；任意に、１以上のＴＬＲペプチドアゴニストは、成分ａ）及び／又は成分ｂ）のそれぞれ他端に配置される。
同じ又は異なるＴＬＲ受容体を活性化する多数の異なるＴＬＲペプチドアゴニストは、単一の複合体に有利に含まれることができることが理解される。若しくは、同じ又は異なるＴＬＲ受容体を活性化する多数の異なるＴＬＲペプチドアゴニストは、異なる複合体に含まれる同じ又は異なるＴＬＲ受容体を活性化する異なるＴＬＲペプチドアゴニストのサブセットに分配されることができ、そのような異なるサブセットを含む異なる複合体は、例えば、単一のワクチンで、それを必要とする対象に対して有利に同時に投与されることができる。
複合体中の成分ａ）、ｂ）、及びｃ）の結合及び配置
本発明の組合せに含まれる複合体において、成分ａ）、成分ｂ）、成分ｃ）は共有結合しており、即ち、複合体の３つの成分ａ）、成分ｂ）、成分ｃ）のうちの２つの成分間の結合が共有結合である。好ましくは、複合体の３つの成分ａ）、ｂ）、ｃ）のうち２つが互いに（即ち、「第１の」成分及び「第２の」成分）共有結合し、３つの成分ａ）、ｂ）、ｃ）のうち第３の成分は、３つの成分ａ）、ｂ）、ｃ）のうち第１の成分又は３つの成分ａ）、ｂ）、ｃ）のうち第２の成分のいずれかと共有結合している。これにより、線状分子を形成することが好ましい。ただし、３つの成分ａ）、ｂ）、ｃ）のそれぞれが、３つの成分ａ）、ｂ）、ｃ）の他の成分の両方と共有結合していることも考えられる。
発明の文脈で使用される「共有結合（ｃｏｖａｌｅｎｔ ｌｉｎｋａｇｅ）」（共有結合（ｃｏｖａｌｅｎｔ ｂｏｎｄ）とも）は、原子間の電子対の共有を含む化学結合を指す。特に、共有結合（ｃｏｖａｌｅｎｔ ｌｉｎｋａｇｅ）」（共有結合（ｃｏｖａｌｅｎｔ ｂｏｎｄ）とも）は、原子が電子を共有するときの原子間の引力と反発力の安定したバランスを含む。多くの分子では、電子を共有することによって、各原子が安定な電子配置に対応する完全な外殻に相当するものを得ることができる。共有結合は、例えば、σ結合、π結合、金属間結合、アゴスティック相互作用、三中心二電子結合等、多くの種類の相互作用を含む。したがって、本発明の組合せに含まれる複合体は、「化合物」とも呼ばれ、特に「分子」と呼ばれることがある。
好ましくは、本発明の組合せに含まれる複合体では、成分ａ）、ｂ）、ｃ）は、架橋法等の当該技術分野で知られている任意の適切な方法で、化学的カップリングによって共有結合される。しかしながら、多くの既知の化学的架橋法は非特異的であるという事実、即ち、成分ａ）、ｂ）及びｃ）上の特定の部位にカップリングの点を向けないという事実に注意が向けられる。したがって、非特異的な架橋剤を使用すると、機能的部位を攻撃したり、活性部位を立体的にブロックしたりして、複合体の融合成分を生物学的に不活性にすることがある。適切な保護基を使用して潜在的に反応性のある基をブロックすることは、当業者の知識と呼ばれる。又は、成分ａ）、ｂ）、及びｃ）の架橋に適用できる化学選択的な実体である、強力で多用途のオキシム及びヒドラゾンライゲーション技術を使用することもできる。この結合技術は、例えば、Ｒｏｓｅ ｅｔ ａｌ． （１９９４）， ＪＡＣＳ １１６， ３０によって記載される。
本発明の組合せに含まれる複合体の３つの成分ａ）、ｂ）、及びｃ）のうちの２つの成分間の結合は、直接的又は間接的に、即ち、２つの成分が直接隣接していてもよく、或いは、スペーサーやリンカー等の複合体の付加的な成分によって結合されていてもよい。
本発明の組合せに含まれる複合体は、任意にスペーサー又はリンカーを含むことができ、これらは通常、非免疫性部分であり、切断可能であることが好ましく、成分ａ）とｂ）及び／又は成分ａ）とｃ）、及び／又は成分ｂ）とｃ）を結合する、及び／又は連続する抗原又は抗原エピトープを結合する、及び／又は連続するＴＬＲペプチドアゴニストを結合する、及び／又は連続する細胞透過性ペプチドを結合する、及び／又は成分ｂ）及び／又はｃ）のＣ末端部分に配置されることができる。リンカー又はスペーサーは、好ましくは、成分の結合に加えて更なる機能性を提供することができ、好ましくは切断可能であり、より好ましくは、例えば酵素による切断によって、標的細胞内で自然に切断可能である。しかしながら、そのような更なる機能性は、特に免疫学的機能性を含まない。更なる機能性の例、特に融合タンパク質のリンカーに関しては、例えば、インビボ切断可能なリンカーも開示される、Ｃｈｅｎ Ｘ．ｅｔ ａｌ．，２０１３：Ｆｕｓｉｏｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ ｌｉｎｋｅｒｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｙ，Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｔｙ．Ａｄｖ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ Ｒｅｖ．６５（１０）：１３５７－１３６９で見ることができる。更に、Ｃｈｅｎ Ｘ．ｅｔ ａｌ．，２０１３：Ｆｕｓｉｏｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ ｌｉｎｋｅｒｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｙ，Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｔｙ．Ａｄｖ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ Ｒｅｖ．６５（１０）：１３５７－１３６９は、本発明の組合せに含まれる複合体において又は複合体に使用されるリンカーを設計するのに有用であり得る様々なリンカー、例えば柔軟なリンカー及び強固なリンカー、並びにリンカー設計ツール及びデータベースも開示する。
前記スペーサーはペプチド性であっても非ペプチド性であってもよく、スペーサーはペプチド性であることが好ましい。好ましくは、ペプチド性スペーサーは、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０のアミノ酸からなり、より好ましくは約１、２、３、４、又は５のアミノ酸からなる。ペプチド性スペーサーのアミノ酸配列は、成分ａ）、ｂ）、又はｃ）のいずれかのＮ末端又はＣ末端フランキング領域のものと同一であることができる。或いは、ペプチド性スペーサーは、当該天然フランキング領域の保存的アミノ酸置換から生じるアミノ酸配列、又はプロテアーゼの既知の切断部位の配列等の非天然アミノ酸配列からなることができる。幾つかの実施形態では、ペプチド性スペーサーは、いかなるＣｙｓ（Ｃ）残基も含まない。幾つかの実施形態では、リンカー配列は、少なくとも２０％、より好ましくは少なくとも４０％、更により好ましくは少なくとも５０％のＧｌｙ又はβ－アラニン残基を含む。適切なリンカー配列は、当業者が容易に選択して調製されることができ、Ｄアミノ酸及び／又はＬアミノ酸から構成されることもできる。
幾つかの実施形態では、本発明の組合せに含まれる複合体は、スペーサー又はリンカー、特にペプチド性スペーサーを含み、成分ａ）とｂ）との間及び／又は成分ａ）とｃ）との間、及び／又は成分ｂ）とｃ）との間に配置されることができる。このペプチド性スペーサーは、細胞浸透性ペプチドとカーゴ分子を含む複合体がインターナリゼーションされた（ｉｎｔｅｒｎａｌｉｚｅ）後、細胞機械によって切断される等、当業者によって選択されることができる。
３つの成分ａ）、ｂ）、及びｃ）のうち２つを結合する技術は、文献に十分に記載されており、前記少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープの性質に依存することができる。例えば、３つの成分ａ）、ｂ）、及びｃ）のうち２つの間の結合は、全段階的固相合成又は溶液相又は固相断片カップリング、安定アミド、チアゾリジン、オキシム及びヒドラジン結合、ジスルフィド結合、安定なチオマレイミド結合、ペプチド結合（融合タンパク質のアミノ酸間のペプチド結合を含む）、又は静電的又は疎水的相互作用によって、切断可能なジスルフィド結合を介して達成されることができる。
複合体に含まれる少なくとも１つの複合体に含まれる抗原又は抗原エピトープ、並びに複合体に含まれる任意のスペーサー又はリンカーは、ペプチド性のものであることが好ましい。本発明の組合せに含まれる複合体において、本発明の組合せに含まれる複合体の全ての成分、例えば、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ（ペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質である）、少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニスト、及び任意のペプチド性リンカー又はスペーサーは、ペプチド結合によって結合されることがより好ましい。したがって、本発明の組合せに含まれる複合体は、ペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質（組換え融合タンパク質等の融合タンパク質等）であることが最も好ましい。
成分ａ）、ｂ）、及びｃ）は、本発明の組合せに含まれる複合体に、どのように配置されてもよい。
特に、１超の細胞透過性ペプチド及び／又は１超の抗原又は抗原エピトープ及び／又は１超のＴＬＲペプチドアゴニストが複合体に含まれる場合、１超の細胞透過性ペプチドは、非連続的に配置されることができる、即ち、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ（成分ｂ））及び／又は少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニスト（成分ｃ））は、連続して配置された細胞透過性ペプチドの並びを遮ることができる、及び／又は細胞透過性ペプチドは、成分ｂ）及び／又は成分ｃ）と、交互に配置されることができる。同様に、１超の抗原又は抗原エピトープは、非連続的に配置されることができる、即ち、少なくとも１つの細胞透過性ペプチド（成分ａ））及び／又は少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニスト（成分ｃ））は、連続して配置された抗原又は抗原エピトープの並びを遮ることができる、及び／又は抗原又は抗原エピトープは、成分ａ）及び／又は成分ｃ）と、交互に配置されることができる。同様に、１超のＴＬＲペプチドアゴニストは、非連続的に配置されることができる、即ち、少なくとも１つの細胞透過性ペプチド（成分ａ））及び／又は少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ（成分ｂ））は、連続して配置されたＴＬＲペプチドアゴニストの並びを遮ることができる、及び／又はＴＬＲペプチドアゴニストは、成分ａ）及び／又は成分ｂ）と、交互に配置されることができる。
しかしながら、好ましくは、１超の細胞透過性ペプチドは、本発明の組合せに含まれる複合体に連続的に配置される、及び／又は１超の抗原又は抗原エピトープは、本発明の組合せに含まれる複合体に連続的に配置される、及び／又は１超のＴＬＲペプチドアゴニストは、本発明の組合せに含まれる複合体に連続的に配置される。これは、特に、特定の成分の全ての単一ユニット、即ち、複合体に含まれる全ての細胞透過性ペプチド、全ての抗原又は抗原エピトープ、又は全てのＴＬＲペプチドアゴニストは、他の２つの成分のいずれかによっても遮られない並びで配置されることができる。むしろ、複合体において、他の２つの成分は、例えば、当該特定の成分の全ての単一ユニットのこのような並びの前後に配置される。ただし、このような方法で連続的に配置された当該特定の成分の単一ユニットは、例えば、他の２つの構成要素のものではない、本明細書に記載されるスペーサ又はリンカーによって互いに結合されることができる。
成分ａ）、ｂ）、及びｃ）のそれぞれが、連続的に配置されることが特に好ましい。
好ましくは、ａ）、ｂ）、及びｃ）の３つの成分全てが主鎖／主鎖結合を介して結合されているため、特に、１以上の細胞透過性ペプチドの主鎖、１以上の抗原又は抗原エピトープの主鎖、及び１以上のＴＬＲペプチドアゴニストの主鎖を含む、複合体の主鎖となる。言い換えれば、１以上の細胞透過性ペプチドの主鎖、１以上の抗原又は抗原エピトープの主鎖、及び１以上のＴＬＲペプチドアゴニストの主鎖は、任意に、更なる成分（例えば、リンカー、スペーサー等）と共に、複合体の主鎖を構成する。したがって、特に、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープが、ペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質である場合には、成分ａ）、ｂ）、及びｃ）の以下の配置が好ましく、当該好ましい配置は、複合体の主鎖のＮ末端→Ｃ末端方向に以下に示され、、３つの成分ａ）、ｂ）、及びｃ）の全てが主鎖／主鎖結合を介して結合され、任意に、リンカー、スペーサー、又は別の追加成分によって結合されることができる。
（α）成分ａ）（細胞透過性ペプチド）－成分ｂ）（少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ）－成分ｃ）（少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニスト）；
（β）成分ｃ）（少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニスト）－成分ａ）（細胞透過性ペプチド）－成分ｂ）（少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ）；
（γ）成分ａ）（細胞透過性ペプチド）－成分ｃ）（少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニスト）－成分ｂ）（少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ）；
（δ）成分ｃ）（少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニスト）－成分ｂ）（少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ）－成分ａ）（細胞透過性ペプチド）；
（ε）成分ｂ）（少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ）－成分ａ）（細胞透過性ペプチド）－成分ｃ）（少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニスト）；又は
（ζ）成分ｂ）（少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ）－成分ｃ）（少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニスト）－成分ａ）（細胞透過性ペプチド）
特に、全ての３つの成分ａ）、ｂ）、及びｃ）が主鎖／主鎖結合を介して結合される場合、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープが細胞透過性ペプチドのＣ末端に配置されることが好ましく、これにより、細胞透過性ペプチド及び少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープは、更なる成分（例えば、リンカー、スペーサー）又は少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニストによって任意に結合される。したがって、これは、上記配置からの配置（α）、（β）、及び（γ）に対応する、即ち上記の配置からの配置（α）、（β）、及び（γ）がより好ましい。
少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープが細胞透過性ペプチドのＣ末端に配置されることが更により好ましく、これにより、細胞透過性ペプチド及び少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープは、少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニストではなく、更なる成分（例えば、リンカー、スペーサー）によって任意に結合される。したがって、これは、上記配置からの配置（α）及び（β）に対応する、即ち上記の配置からの配置（α）及び（β）が更により好ましい。特に好ましくは、本発明の組合せに含まれる複合体は、組換えポリペプチド又は組換えタンパク質であり、成分ａ）～ｃ）は、以下の順で、当該複合体の主鎖のＮ末端→Ｃ末端方向（Ｎ末端→Ｃ末端方向）で配置される。
（α）成分ａ）－成分ｂ）－成分ｃ）；又は
（β）成分ｃ）－成分ａ）－成分ｂ）
成分は、更なる成分、特に、リンカー又はスペーサーによって結合されることができる。
幾つかの実施形態では、複合体の少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ（又は多重抗原性ドメイン）は、複合体の細胞透過性ペプチドのＣ末端に位置され、細胞透過性ペプチド及び少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ（又は多重抗原性ドメイン）は、任意に、更なる成分（例えば、リンカー、スペーサー）又は複合体のＴＬＲペプチドアゴニストによって結合される。
本発明の組合せの好ましい例示複合体は、ポリペプチド又はタンパク質である。
ａ）細胞透過性ペプチドは、配列番号６（ＣＰＰ３／Ｚ１３）、配列番号７（ＣＰＰ４／Ｚ１４）、配列番号８（ＣＰＰ５／Ｚ１５）、又は配列番号１１（ＣＰＰ８／Ｚ１８）のアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％の配列同一性を有するその（機能的）配列変異体（前記ペプチドの細胞透過能を損なうことなく）を含む又はからなるアミノ酸配列を有する；
ｂ）少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープが、ペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質であり、好ましくは、癌／腫瘍エピトープを含む又はからなる；
ｃ）ＴＬＲペプチドアゴニストは、ＴＬＲ２ペプチドアゴニスト及び／又はＴＬＲ４ペプチドアゴニストである。
本発明の組合せにおいて、複合体は、配列番号５４のアミノ酸配列、又は少なくとも７０％又は少なくとも７５％、好ましくは少なくとも８０％又は少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％又は少なくとも９５％、更により好ましくは少なくとも９７％又は少なくとも９８％、特に好ましくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその（機能的）配列変異体を含む又はからなることが特に好ましい。
Figure 2023545178000053
 ［配列番号５４］
幾つかの実施形態では、複合体は、配列番号５５のアミノ酸配列、又は少なくとも７０％又は少なくとも７５％、好ましくは少なくとも８０％又は少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％又は少なくとも９５％、更により好ましくは少なくとも９７％又は少なくとも９８％、特に好ましくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその（機能的）配列変異体を含む又はからなることができる。
Figure 2023545178000054
 ［配列番号５５］
ＳＴＩＮＧアゴニスト
インターフェロン（ＩＦＮ）の刺激因子遺伝子（ＳＴＩＮＧ）は、３７９アミノ酸タンパク質であり、核酸センサーのファミリーに属し、サイトゾルＤＮＡシグナル伝達のアダプターである。ＳＴＩＮＧは、Ｔ細胞、マクロファージ、樹状細胞（ＤＣ）等の造血細胞だけでなく、様々な内皮細胞型や上皮細胞型で発現される。ＳＴＩＮＧは、サイトゾル核酸に対する自然免疫応答の一部であり、ＤＮＡセンサー及びシグナル伝達分子として機能する。ＳＴＩＮＧは、細胞のサイトゾルで、環状ジヌクレオチド（ＣＤＮ）の認識に続いて、Ｉ型ＩＦＮやその他の炎症誘発性サイトカインを含む多数の宿主防御遺伝子の転写を制御するのに不可欠である。基本状態では、ＳＴＩＮＧは二量体として存在し、Ｎ末端ドメインは、小胞体（ＥＲ）に固定され、Ｃ末端ドメインはサイトゾルに存在する。タンパク質環状ＧＭＰ－ＡＭＰ合成酵素（ｃＧＡＳ）によって生成された環状ジヌクレオチド（ＣＤＮ）は、ＳＴＩＮＧの天然リガンドである（Ａｂｌａｓｓｅｒ ｅｔ ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ ４９８，３８０－３８４，２０１３）。ＣＤＮのＳＴＩＮＧへの結合は、立体構造の変化を誘導し、ＴＡＮＫ結合キナーゼ（ＴＢＫ１）とインターフェロン制御因子３（ＩＲＦ３）との結合及び活性化、並びにＥＲから核周囲エンドソームへの再局在化を可能にする（Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ３４７，Ｉｓｓｕｅ ６２２７，２６３０－１－２６３０－１４，２０１５）。ＴＢＫ１による転写制御因子ＩＲＦ３及びＮＦ－ｋＢのリン酸化は、Ｉ型ＩＦＮを含む複数のサイトカインの発現をもたらす。Ｉ型ＩＦＮの産生は、ＤＣの活性化、腫瘍抗原に対するＣＤ８＋Ｔ細胞の効果的な交差提示、及び腫瘍特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の腫瘍内への移動をもたらす。したがって、ＳＴＩＮＧ自然免疫感知経路を活性化し、Ｉ型ＩＦＮシグナル伝達を回復させる治療戦略は、代替療法に反応しない免疫応答に乏しい腫瘍（ｉｍｍｕｎｅ ｃｏｌｄ ｔｕｍｏｒｓ）を「高める（ｈｅａｔｉｎｇ ｕｐ）」という腫瘍免疫原性を高める可能性を有することがある。
本明細書で使用される「ＳＴＩＮＧアゴニスト」という用語は、ＳＴＩＮＧの活性を誘導、活性化、刺激、増強、又は延長する化合物を指す。概要は、例えば、Ｄｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０２０（Ｃ．Ｄｉｎｇ，Ｚ．Ｓｏｎｇ，Ａ．Ｓｈｅｎ，Ｔ．Ｃｈｅｎ，Ａ．Ｚｈａｎｇ．Ｓｍａｌｌ ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｔｈｅ ｉｎｎａｔｅ ｉｍｍｕｎｅ ｃＧＡＳ－ＳＴＩＮＧ－ＴＢＫ１ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙ．Ａｃｔａ Ｐｈａｒｍ．Ｓｉｎ．Ｂ（２０２０），１０．１０１６／ｊ．ａｐｓｂ．２０２０．０３．００１，ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ ｏｎｌｉｎｅ Ｍａｒｃｈ １３，２０２０）において提供される。特に、Ｄｉｎｇらによって２０２０年に記載された（参照により本明細書に組み込まれる）ＳＴＩＮＧアゴニストの具体例は、本発明の文脈におけるＳＴＩＮＧアゴニストとして有用であることができる。
幾つかの実施形態では、「ＳＴＩＮＧアゴニスト」という用語は、環状ＧＭＰ－ＡＭＰ合成酵素（ｃＧＡＳ）アゴニスト等の間接的に作用する（即ち、ＳＴＩＮＧと直接相互作用しない）化合物を含む。その後、活性化されたｃＧＡＳは、２’，３’－ｃＧＡＭＰを合成し、ＳＴＩＮＧのアゴニストとして作用する。ｃＧＡＳアゴニストの非限定的な例としては、以下が挙げられる。
高い表面密度でｄｓＤＮＡを提示する球状核酸（ＳＮＡ）、特に４５ｂｐのＩＦＮ模倣（ｓｉｍｕｌａｔｉｎｇ）ｄｓＤＮＡ オリゴヌクレオチドを運ぶＳＮＡナノ構造、参照により本明細書に組み込まれる、Ａｌｅｘａｎｄｅｒ Ｓｔｅｇｈ，ＤＤＩＳ－０３．ＤＥＶＥＬＯＰＭＥＮＴ ＯＦ Ａ ＮＯＶＥＬ ＣＬＡＳＳ ＯＦ ｃＧＡＳ ＡＧＯＮＩＳＴＳ ＴＯ ＴＲＩＧＧＥＲ ＳＴＩＮＧ ＰＡＴＨＷＡＹ－ＤＥＰＥＮＤＥＮＴ ＩＮＮＡＴＥ ＩＭＭＵＮＥ ＲＥＳＰＯＮＳＥＳ ＡＧＡＩＮＳＴ ＧＬＩＯＢＬＡＳＴＯＭＡ，Ｎｅｕｒｏ－Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌｕｍｅ ２１，Ｉｓｓｕｅ Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ＿６，Ｎｏｖｅｍｂｅｒ ２０１９，Ｐａｇｅ ｖｉ６５に記載されるもの等；及び
ＨＩＶ－１ＲＮＡゲノムに由来する２６－ｍｅｒのＤＮＡ配列であるＧ３－ＹＳＤ（Ｈｅｒｚｎｅｒ ＡＭ．ｅｔ ａｌ．，２０１５．Ｓｅｑｕｅｎｃｅ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ＤＮＡ ｓｅｎｓｏｒ ｃＧＡＳ ｂｙ Ｙ－ｆｏｒｍ ＤＮＡ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ａｓ ｆｏｕｎｄ ｉｎ ｐｒｉｍａｒｙ ＨＩＶ－１ ｃＤＮＡ．Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６（１０）：１０２５－３３）
他の実施形態では、「ＳＴＩＮＧアゴニスト」という用語は、ＳＴＩＮＧと直接相互作用する化合物のみを指す。
様々な（直接的な）ＳＴＩＮＧアゴニストが当技術分野で知られている。一般に、（直接的な）ＳＴＩＮＧアゴニストは、環状ジヌクレオチド（ＣＤＮ）及び非ＣＤＮ ＳＴＩＮＧアゴニストに分類される。ＣＤＮ ＳＴＩＮＧアゴニストは、ＳＴＩＮＧの天然リガンドである２’３’－ｃＧＡＭＰから着想を得ている。非ＣＤＮ ＳＴＩＮＧアゴニストの例は、小分子ＳＴＩＮＧアゴニストが挙げられ、Ｌ．Ｃｏｒｒａｌｅｓ ｅｔ ａｌ．（Ｌ．Ｃｏｒｒａｌｅｓ，Ｌ．Ｈ．Ｇｌｉｃｋｍａｎ，Ｓ．Ｍ．ＭｃＷｈｉｒｔｅｒ，Ｄ．Ｂ．Ｋａｎｎｅ，Ｋ．Ｅ．Ｓｉｖｉｃｋ，Ｇ．Ｅ．Ｋａｔｉｂａｈ，ｅｔ ａｌ．Ｄｉｒｅｃｔ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ＳＴＩＮＧ ｉｎ ｔｈｅ ｔｕｍｏｒ ｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ ｌｅａｄｓ ｔｏ ｐｏｔｅｎｔ ａｎｄ ｓｙｓｔｅｍｉｃ ｔｕｍｏｒ ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｉｍｍｕｎｉｔｙ，Ｃｅｌｌ Ｒｅｐ，１１（２０１５），ｐｐ．１０１８－１０３０）に記載される「化合物７」は、非ＣＤＮ小分子ＳＴＩＮＧアゴニストの開発のためのプロトタイプ構造モデルとして認識される。しかしながら、（直接的な）ＳＴＩＮＧアゴニストは、環状ジヌクレオチド（ＣＤＮ）系ＳＴＩＮＧアゴニストであることが好ましい。
本発明の文脈において有用なＳＴＩＮＧアゴニストの非限定的な例としては、以下のものが挙げられる。
国際公開第ＷＯ２０１４／０９３９３６Ａ１号、国際公開第２０１４／１８９８０５号、及び国際公開第２０１４／１８９８０６号に記載されるＳＴＩＮＧアゴニスト、特にＡＤＵ－Ｓ１００（Ａｄｕｒｏ）
国際公開第ＷＯ２０１７／０２７６４６Ａ１号及び国際公開第ＷＯ２０１８／１１８６６４Ａ１号に記載されるＳＴＩＮＧアゴニスト、特にＭＫ－１４５４（Ｍｅｒｃｋ）
国際公開第ＷＯ２０１８／１５２４５０Ａ１号、国際公開第ＷＯ２０１８／１５２４５３Ａ１号、及び国際公開第ＷＯ２０２０／０３６１９９Ａ１号に記載されるＳＴＩＮＧアゴニスト、特にＥ－７７６６（Ｅｉｓａｉ）
ＭＫ－２１１８（Ｍｅｒｃｋ）
ＢＭＳ－９８６３０１（Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）
ＩＭＳＡ－１０１（ＩｍｍｕｎｅＳｅｎｓｏｒ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ Ｉｎｃ．）、ｃＧＡＭＰの類似体
ＳＢ－１１２８５（Ｓｐｒｉｎｇ Ｂａｎｋ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、小分子核酸ハイブリッドＳＴＩＮＧアゴニスト
ＳＹＮＢ－１８９１（Ｓｙｎｌｏｇｉｃ）、ＳＴＩＮＧを発現するように遺伝子操作された大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）細菌の非病原性株
二量体ＡＢＺＩスキャフォールドを有する合成ＣＤＮ ＳＴＩＮＧアゴニストであると考えられているＧＳＫ－３７４５４１７（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）
非ＣＤＮ ＳＴＩＮＧアゴニストＴＡＫ－６７６（Ｔａｋｅｄａ）
非ＣＤＮ小分子ＳＴＩＮＧアゴニストＴＴＩ－１０００１（Ｔｒｉｌｌｉｕｍ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ Ｉｎｃ．）
したがって、ＳＴＩＮＧアゴニストは、ＡＤＵ－Ｓ１００、ＭＫ－１４５４、Ｅ－７７６６、ＭＫ－２１１８、ＢＭＳ－９８６３０１、ＩＭＳＡ－１０１、ＳＢ－１１２８５、ＳＹＮＢ－１８９１、ＧＳＫ－３７４５４１７、ＴＡＫ－６７６、及びＴＴＩ－１０００１からなる群から選択されることができる。これらのＳＴＩＮＧアゴニストの中でも、ＡＤＵ－Ｓ１００が好ましい。
ＳＴＩＮＧアゴニストは、参照により本明細書に組み込まれている国際公開第ＷＯ２０１８／０６０３２３Ａ１号に記載されている化合物、又は参照により本明細書に組み込まれている国際公開第ＷＯ２０１８／１７２２０６号に記載されている化合物であることが好ましい。
ＳＴＩＮＧアゴニストは、式Ｉの化合物、又はその溶媒和物、又はその水和物、又はその塩であることがより好ましい。
Figure 2023545178000055
 式中、Ｒ１は、Ｈ、Ｆ、－Ｏ－Ｃ１－３アルキル、及びＯＨからなる群から選択され、
Ｒ２はＨである、又は
Ｒ２は－ＣＨ２－であり、Ｒ１は－Ｏ－であり、－ＣＨ２－Ｏ－ブリッジを形成し、
Ｒ３は、Ｎ９窒素を介して結合された、プリン、アデニン、グアニン、キサンチン、ヒポキサンチンからなる群から選択されたプリン核酸塩基である。
ＳＴＩＮＧアゴニストは、式Ｉａの化合物、又はその溶媒和物、又はその水和物、又はその塩であることが更により好ましい。
Figure 2023545178000056
 式中、Ｒ１及びＲ２は、式Ｉに関連して開示されるものとして定義される。
ＳＴＩＮＧアゴニストは、式Ｉｂの化合物、又はその溶媒和物、又はその水和物、又はその塩であることも更により好ましい。
Figure 2023545178000057
ＳＴＩＮＧアゴニストは、式Ｉａ．１の化合物、又はその溶媒和物、又はその水和物であることも更により好ましい。
Figure 2023545178000058
ＳＴＩＮＧアゴニストは、式Ｉａ．２の化合物（ＳＴＩＮＧａ２）、又はその溶媒和物、又はその水和物であることも更により好ましい。
Figure 2023545178000059
更に、ＳＴＩＮＧアゴニストは、式Ｉａ．３の化合物、又はその溶媒和物、又はその水和物であることも更により好ましい。
Figure 2023545178000060
更に、ＳＴＩＮＧアゴニストは、式Ｉｂ．１の化合物、又はその溶媒和物、又はその水和物であることも更により好ましい。
Figure 2023545178000061
ＳＴＩＮＧアゴニストは、式（ＩＩ）の化合物、又はその塩であることも好ましい（国際公開第ＷＯ２０１８／１７２２０６号に記載される）。
Figure 2023545178000062
 式中、Ｂａｓｅ１及びＢａｓｅ２は、独立して、Ｎ９窒素原子を介して結合された、プリン、アデニン、グアニン、キサンチン、ヒポキサンチンからなる群から選択される。
より好ましくは、式（ＩＩ）の化合物において、Ｂａｓｅ１及びＢａｓｅ２はアデニンであり、それによってＳＴＩＮＧアゴニストは、式（ＩＩ－１）の構造を示す。
Figure 2023545178000063
式（ＩＩ）の化合物において、Ｂａｓｅ１はアデニンであり、Ｂａｓｅ２はグアニンであることもより好ましく、それによってＳＴＩＮＧアゴニストは、式（ＩＩ－２）の構造を示す。
Figure 2023545178000064
式（ＩＩ）の化合物において、Ｂａｓｅ１はグアニンであり、Ｂａｓｅ２はアデニンであることもより好ましく、それによってＳＴＩＮＧアゴニストは、式（ＩＩ－３）の構造を示す。
Figure 2023545178000065
式（ＩＩ）の化合物において、Ｂａｓｅ１はアデニンであり、Ｂａｓｅ２はヒポキサンチンであることもより好ましく、それによってＳＴＩＮＧアゴニストは、式（ＩＩ－４）の構造を示す。
Figure 2023545178000066
ＳＴＩＮＧアゴニストは、構造式Ｉ、Ｉａ、Ｉｂ、Ｉａ．１、Ｉａ．２、Ｉａ．３、Ｉｂ．１、ＩＩ、ＩＩ－１、ＩＩ－２、ＩＩ－３、及びＩＩ－４において上記のいずれかに示される化合物の実質的に純粋な（Ｓｐ，Ｓｐ）、（Ｒｐ，Ｒｐ）、（Ｓｐ，Ｒｐ）、又は（Ｒｐ，Ｓｐ）立体異性体、又はその塩であることもできる。ＳＴＩＮＧアゴニストは、構造式Ｉ、Ｉａ、Ｉｂ、Ｉａ．１、Ｉａ．２、Ｉａ．３、Ｉｂ．１、ＩＩ、ＩＩ－１、ＩＩ－２、ＩＩ－３、及びＩＩ－４において上記のいずれかに示される化合物の実質的に純粋な（Ｒｐ，Ｒｐ）立体異性体、又はその塩であることが好ましい。本明細書で使用される「実質的に純粋」という用語は、リン光体（ｐｈｏｓｐｈｏｒ）原子に関して、他の可能なジアステレオマーに対して、少なくとも７５％純水である、１つの（Ｒｐ，Ｒｐ）、（Ｒｐ，Ｓｐ）、（Ｓｐ，Ｒｐ）、又は（Ｓｐ，Ｓｐ）ジアステレオマーを指す。好ましい実施形態では、実質的に純粋な化合物は、少なくとも８５％純粋である、少なくとも９０％純粋である、少なくとも９５％純粋である、少なくとも９７％純粋である、少なくとも９９％純粋である。
幾つかの実施形態では、ＳＴＩＮＧアゴニストは、構造式Ｉ、Ｉａ、Ｉｂ、Ｉａ．１、Ｉａ．２、Ｉａ．３、Ｉｂ．１、ＩＩ、ＩＩ－１、ＩＩ－２、ＩＩ－３、及びＩＩ－４において上記のいずれかに示される化合物の薬学的に許容される塩である。本明細書で使用されるように、「薬学的に許容される」という表現は、健全な医学的判断の範囲内で、過剰な毒性、刺激、アレルギー反応、又はその他の問題や合併症がなく、ヒト及び動物の組織と接触して使用するのに適しており、合理的な利益／リスク比に見合った化合物、材料、組成物、及び／又は剤形を指すために使用される。本明細書で使用されるように「薬学的に許容される塩」とは、親化合物が塩基との塩を作ることによって修飾される開示された化合物の誘導体を指す。薬学的に許容される塩は、通常の化学的方法によって酸性部分を含む親化合物から合成されることができる。一般的に、このような塩は、これらの化合物の遊離酸形態を、水、又はエーテル、酢酸エチル、エタノール、イソプロパノール、アセトニトリルのような有機希釈剤、又はそれらの混合物中の十分な量の適切な塩基と反応させることによって調製されることができる。或いは、例えば、本発明の化合物（遊離酸又は塩形態））の水溶液を陽イオン交換体で処理することによって、イオン交換によって塩を調製することもできる。幾つかの実施形態では、ＳＴＩＮＧアゴニストは、構造式Ｉ、Ｉａ、Ｉｂ、Ｉａ．１、Ｉａ．２、Ｉａ．３、Ｉｂ．１、ＩＩ、ＩＩ－１、ＩＩ－２、ＩＩ－３、及びＩＩ－４において上記のいずれかに示される化合物のナトリウム塩である。
本発明の組合せでは、複合体は、配列番号５５のアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％の配列同一性を有するその（機能的）配列変異体を含む又はからなり、ＳＴＩＮＧアゴニストがＡＤＵ－Ｓ１００であることが好ましい。
本発明の組合せにおいて、複合体は、配列番号５５のアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％の配列同一性を有するその（機能的）配列変異体を含む又はからなり、ＳＴＩＮＧアゴニストが、式Ｉａ．１、Ｉａ．２、Ｉａ．３、Ｉｂ．１、ＩＩ－１、ＩＩ－２、ＩＩ－３、及びＩＩ－４によって表される化合物からなる群から選択される１つの化合物、又はその溶媒和物、又は水和物であることも好ましい（上述される）。
複合体は、配列番号５４のアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％の配列同一性を有するその（機能的）配列変異体を含む又はからなり、ＳＴＩＮＧアゴニストがＡＤＵ－Ｓ１００であることがより好ましい。
複合体は、配列番号５４のアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％の配列同一性を有するその（機能的）配列変異体を含む又はからなり、前記ＳＴＩＮＧアゴニストが、式Ｉａ．１、Ｉａ．２、Ｉａ．３、Ｉｂ．１、ＩＩ－１、ＩＩ－２、ＩＩ－３、及びＩＩ－４によって表される化合物からなる群から選択される１つの化合物、又はその溶媒和物、又は水和物であることが更により好ましい（上述される）。
一般に、配列変異体に関しては、同一性（％）が高いほど、配列変異体はより好まれる。したがって、例えば、配列番号５４又は配列番号５５のアミノ酸配列における１００％の同一性が最も好まれる。同様に、式Ｉａ．１、Ｉａ．２、Ｉａ．３、Ｉｂ．１、ＩＩ－１、ＩＩ－２、ＩＩ－３及びＩＩ－４の化合物は、一般的にその溶媒和物又は水和物よりもより好まれる。
したがって、本発明は、ＳＴＩＮＧアゴニストとの組合せでの使用のための（特に医薬における使用のための）上述される複合体も提供する。好ましくは、ＳＴＩＮＧアゴニストは、上述される通りである。癌の予防及び／又は治療等、好ましい医学的利用は、以下の通りである。
更に、本発明は、上述される複合体との組合せでの使用のための（特に医薬における使用のための）ＳＴＩＮＧアゴニストも提供する。好ましくは、ＳＴＩＮＧアゴニストは、上述される通りである。癌の予防及び／又は治療等、好ましい医学的利用は、以下の通りである。
医学的利用
上記で詳細に記載される、本発明における（ｉ）ＳＴＩＮＧアゴニスト及び（ｉｉ）複合体（及び任意の更なる成分）の組合せは、医学、特に薬（ｍｅｄｉｃａｍｅｎｔ）に用いられることができる。
本明細書に記載され、添付の実施例に示されているように、（ｉ）ＳＴＩＮＧアゴニストと、（ｉｉ）細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体との組合せは、抗原特異的ＣＤ８ Ｔ細胞を促進するＣＤ４及びＣＤ８ Ｔ細胞の両方の応答を改善し、腫瘍内免疫原性を増加させ、生存率の大幅な増加及び腫瘍増殖の減少をもたらす。これは、共に作用するＳＴＩＮＧアゴニスト及び複合体の相乗効果を示し、単独療法として投与されるその各成分の抗腫瘍効果を大幅に増加させることを示す。
本発明の組合せは、様々な疾患において有用であり得る。本明細書に記載される組合せは、癌、感染症、自己免疫障害、血液病、及び移植片拒絶を含む免疫療法によって治療可能なもの等、疾患又は障害の予防、治療、又は安定化のための（薬の調製のための）使用であることが好ましい。したがって、癌、感染症、自己免疫障害、血液病、及び移植片拒絶を含む免疫療法によって治療可能なもの等、疾患又は障害の予防、治療、又は安定化における使用のための、本明細書に記載される組合せが好ましい。
本発明の文脈では、本明細書に記載される本発明の組合せは、癌又は腫瘍の予防及び／又は治療に用いられることができることが特に好ましい。
したがって、本発明は、必要とする対象において、癌を治療する、又は抗腫瘍応答を開始、増強、又は延長する方法であって、前記方法が、前記対象に、有効量の上述の本発明の組合せ（即ち、有効量の（ｉ）ＳＴＩＮＧアゴニスト；及び有効量の（ｉｉ）細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体；並びに、任意に（ｉｉｉ）有効量の任意の更なる活性物質）を投与することを含む方法も提供する。更に、本発明は、患者において腫瘍抗原特異的Ｔ細胞による腫瘍の浸潤を増加させる方法であって、前記方法が、腫瘍又は癌に罹患している患者に、上述の本発明の組合せ（即ち、（ｉ）ＳＴＩＮＧアゴニスト；及び（ｉｉ）細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体；並びに、任意に（ｉｉｉ）任意の更なる活性物質）を投与することを含む方法も提供する。更に、本発明は、癌を予防及び／又は治療する併用療法であって、前記併用療法が、上述の本発明の組合せ（即ち、（ｉ）ＳＴＩＮＧアゴニスト；及び（ｉｉ）細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体；並びに、任意に（ｉｉｉ）任意の更なる活性物質）の投与を含む方法も提供する。
本発明の文脈で使用される「疾患」という用語は、全てが、ヒト又は動物の体又は正常な機能を損なう部分の１つの異常な（非生理学的又は病理学的な）状態を反映し、典型的には徴候と症状を区別することによって現れ、ヒト又は動物の生存期間又は生活の質の低下を引き起こすという点で、一般的に、「障害」及び「状態」（医学的状態で）という用語と同義であることを意図しており、「障害」及び「状態」（医学的状態で）という用語と交換可能に用いられる。
本明細書に記載される、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及び少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体の使用によって、治療及び／又は予防される疾患は、癌、血液学的障害、感染症、自己免疫障害、及び移植片拒絶を含むことが好ましい。そのため、癌及び感染症の治療及び／又は予防が好ましく、癌の治療及び／又は予防がより好ましい。癌については、内分泌腫瘍、胃腸腫瘍、尿生殖器又は女性生殖器腫瘍、乳癌、頭頚部腫瘍、造血器腫瘍、皮膚腫瘍、胸部又は呼吸器腫瘍、好ましくは転移性結腸直腸癌等の結腸直腸癌が好ましい。
好ましくは、本明細書に記載されるＳＴＩＮＧアゴニストと、本明細書に記載される細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及び少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体との組合せは、欠陥のあるアポトーシスによって引き起こされる疾患を含む、癌又は腫瘍疾患の予防、治療及び／又は寛解のために（薬剤の調製のために）使用されることができる。癌は、固形腫瘍、血液癌、又はリンパ性癌であることもある。癌は、良性の場合もあれば、転移性の場合もある。治療される癌の更に好ましい例としては、脳癌、前立腺癌、乳癌、卵巣癌、食道癌、肺癌、肝臓癌、腎癌、メラノーマ、腸癌腫、肺癌腫、頭頸部扁平細胞癌腫、慢性骨髄性白血病、結腸直腸癌腫、胃癌腫、子宮内膜癌腫、骨髄性白血病、肺扁平細胞癌腫、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、膀胱腫瘍、前骨髄球性白血病、非小細胞肺癌腫、及び肉腫が挙げられる。本明細書で記載される、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及び少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体は、結腸直腸癌を治療するために使用されることが特に好ましい。
幾つかの実施形態では、癌／腫瘍は、トリプルネガティブ乳癌を含む乳癌、胆道癌；膀胱癌；神経膠芽腫及び髄芽腫を含む脳癌；子宮頸癌；絨毛癌；結腸癌；子宮内膜癌；食道癌；胃癌；消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、虫垂癌、胆管細胞癌、カルチノイド腫瘍、消化管結腸癌、肝外胆管癌、胆嚢癌、胃癌、消化管カルチノイド腫瘍、結腸直腸癌、又は転移性結腸直腸癌、急性リンパ性白血病及び骨髄性白血病を含む血液腫瘍；Ｔ細胞急性リンパ性白血病／リンパ腫；ヘアリーセル白血病；慢性骨髄性白血病、多発性骨髄腫；ＡＩＤＳ随伴性白血病及び成人Ｔ細胞白血病リンパ腫；ボーエン病及びパジェット病を含む上皮内腫瘍；肝臓癌；非小細胞肺癌を含む肺癌、ホジキン病及びリンパ球性リンパ腫を含むリンパ腫；神経芽細胞腫；神経膠芽腫、扁平細胞癌腫を含む口腔癌；上皮細胞、間質細胞、生殖細胞、及び間葉系細胞から生じるものを含む卵巣癌；膵臓癌；前立腺癌；直腸癌；平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、脂肪肉腫、線維肉腫、及び骨肉腫を含む肉腫；メラノーマ、メルケル細胞癌、カポジ肉腫、基底細胞癌、及び扁平細胞癌を含む皮膚癌；セミノーマ、非セミノーマ（奇形腫、絨毛癌）、間質腫瘍、及び生殖細胞腫瘍等の胚腫瘍を含む精巣癌；甲状腺癌腫及び髄様癌腫を含む甲状腺癌；及び腺癌及びウィルムス腫瘍を含む腎癌から選択されることができる。
幾つかの実施形態では、癌／腫瘍は、聴神経神経鞘腫、肛門癌腫、星状細胞腫、基礎細胞腫、ベーチェット症候群、膀胱癌、芽細胞腫、骨癌、脳転移、脳腫瘍、脳癌（神経膠芽腫）、乳癌（乳房癌腫）、バーキットリンパ腫、カルチノイド、子宮頸癌、結腸癌腫、結腸直腸癌、子宮体癌（ｃｏｒｐｕｓ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、頭蓋咽頭腫（ｃｒａｎｉｏｐｈａｒｙｎｇｅｏｍａｓ）、ＣＵＰ症候群、子宮内膜癌腫、胆嚢癌、生殖器の腫瘍（尿生殖器管の癌を含む）、神経膠芽腫、神経膠腫、頭頸部腫瘍、肝細胞腫、組織球性リンパ腫（ｈｉｓｔｏｃｙｔｉｃ ｌｙｍｐｈｏｍａ）、ホジキン症候群又はリンパ腫及び非ホジキンリンパ腫、脳下垂体腫瘍、腸癌（小腸の腫瘍及び胃腸腫瘍を含む）、カポジ肉腫、腎癌、腎臓癌腫、喉頭癌（ｌａｒｙｎｇｅａｌ ｃａｎｃｅｒ）又は喉頭癌（ｌａｒｙｎｘ ｃａｎｃｅｒ）、白血病（急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、赤白血病、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、及び慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）を含む）、眼瞼腫瘍、肝臓癌、肝転移、肺癌腫（＝肺癌＝気管支癌）、小細胞肺癌及び非小細胞肺癌、及び肺腺癌、リンパ腫、リンパ性癌、悪性メラノーマ、乳房癌腫（＝乳癌）、髄芽腫、メラノーマ、髄膜腫、菌状息肉症、腫瘍性疾患神経鞘腫、食道癌、食道性癌腫（＝食道癌）、乏突起神経膠腫、卵巣癌（＝卵巣癌腫）、卵巣癌腫、膵臓癌腫（＝膵臓癌）、陰茎癌（ｐｅｎｉｌｅ ｃａｎｃｅｒ）、陰茎癌（ｐｅｎｉｓ ｃａｎｃｅｒ）、咽頭癌、下垂体腫瘍、形質細胞腫、前立腺癌（＝前立腺腫瘍）、直腸癌腫、直腸腫瘍、腎癌、腎臓癌腫、網膜芽細胞腫、肉腫、シュネーベルガー（Ｓｃｈｎｅｅｂｅｒｇｅｒ）疾患、皮膚癌（例えば、メラノーマ又は非メラノーマ皮膚癌、基底細胞及び扁平細胞癌腫、並びに乾癬、尋常性天疱瘡、軟部腫瘍、棘細胞腫を含む）、胃癌、精巣癌、咽頭癌、胸腺腫、甲状腺癌、舌癌、尿道癌、子宮癌、膣癌、様々なウイルス誘導腫瘍（例えば、パピローマウイルス誘導癌）（例えば、子宮頚部癌腫＝子宮頸癌）、腺癌、ヘルペスウイルス誘導腫瘍（例えば、バーキットリンパ腫、ＥＢＶ誘発性Ｂ細胞リンパ腫、頸部癌腫）、Ｂ型肝炎誘導腫瘍（肝細胞癌腫）、ＨＴＬＶ－１－及びＨＴＬＶ－２－誘導リンパ腫、及び外陰癌から選択されることができる。
好ましくは、発明の組合せで治療される患者は、結腸直腸癌（ＣＲＣ）、特に後期結腸直腸癌（ＣＲＣ）又は後期転移性結腸直腸癌（ｍＣＲＣ）に罹患し、「後期」ＣＲＣ、ｍＣＲＣという用語は、ステージＩＩＩＣ：Ｔ４ａ、Ｎ２ａ、Ｍ０又はＴ３－Ｔ４ａ、Ｎ２ｂ、Ｍ０又はＴ４ｂ、Ｎ１－Ｎ２、Ｍ０；ステージＩＶＡ：任意のＴ、任意のＮ、Ｍ１ａ、及びステージＩＶＢ：任意のＴ、任意のＮ、Ｍ１ｂ（ＴＮＭ病気分類）を含み、ＣＲＣ又はｍＣＲＣ腫瘍は、例えば、“マイクロサテライト安定（Ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅ Ｓｔａｂｌｅ）”（ＭＳＳ）、又は“マイクロサテライト不安定（ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅ ｉｎｓｔａｂｌｅ）”（ＭＳＩ）であることができ、ＣＲＣ又はｍＣＲＣ腫瘍は、ＭＳＳであることが好ましい。
現在の文脈では、「治療」及び「治療的」という用語は、生体に投与される際に少なくとも何らかの最小の生理学的効果を有することを意味することが好ましい。例えば、「治療的」抗腫瘍化合物を投与する際の生理的効果は、腫瘍増殖の阻害、腫瘍サイズの減少、又は腫瘍の再発の防止であることができる。好ましくは、癌又は腫瘍性疾患の治療において、腫瘍の増殖を阻害する、又は腫瘍サイズを減少させる、又は腫瘍の再発を防止する化合物は、治療的に有効であると考えられる。したがって、「抗腫瘍薬物」という用語は、腫瘍、腫瘍性疾患又は癌に対して治療的効果を有する治療薬を意味することが好ましい。
本明細書に記載される本発明の組合せの成分、即ち、（ｉ）ＳＴＩＮＧアゴニスト及び（ｉｉ）細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニスト（及び任意の更なる成分）を含む複合体は、通常、併用療法として投与される。これは、１つの成分（ＳＴＩＮＧアゴニスト又は複合体）が、例えば他の成分（ＳＴＩＮＧアゴニスト又は複合体のもう一方）と同じ日に投与されなかったとしても、それらの治療スケジュールが一般的に絡み合っている（ｉｎｔｅｒｔｗｉｎｅ）ことを意味する。これは、本発明の文脈における「組合せ」が、１つの成分（ＳＴＩＮＧアゴニスト又は複合体）による治療の開始を、他の成分（ＳＴＩＮＧアゴニスト又は複合体のもう一方）による治療が終了した後に、特に含まないことを意味する。したがって、「終了した」治療とは、特に、活性成分がもうその効果を発揮しないことを意味する。即ち、活性成分がその効果をどのくらい発揮するかに応じて、「治療」は特に、活性成分の最後の投与から数分後、数時間後、又は数日後に終了することがある。より一般的には、ＳＴＩＮＧアゴニスト及び複合体の「絡み合った」治療スケジュール、即ちＳＴＩＮＧアゴニスト及び複合体の複合体は、以下を意味する。
（ｉ）複合体の最初の投与が開始する前（したがって、複合体による完全な治療）に、ＳＴＩＮＧアゴニストの全ての投与（したがって、完全なＳＴＩＮＧアゴニスト治療）は、１週間を超えて（好ましくは３日を超えて、より好ましくは２日を超えて、更により好ましくは１日を超えて）完了しない；又は
（ｉｉ）ＳＴＩＮＧアゴニストの最初の投与（したがって、完全なＳＴＩＮＧアゴニスト治療）が開始する前に、複合体の全ての投与（したがって、複合体による完全な治療）は、１週間を超えて（好ましくは３日を超えて、より好ましくは２日を超えて、更により好ましくは１日を超えて）完了しない。
例えば、本明細書に記載されるＳＴＩＮＧアゴニストと、本明細書に記載される細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及び少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体との組合せにおいて、１つの成分（ＳＴＩＮＧアゴニスト又は複合体）は、１週間に一度投与されることができ、一方の成分（ＳＴＩＮＧアゴニスト又は複合体のもう一方）は、１か月に一度投与されることができる。この例において、本発明の意味における「組合せ」を達成するために、月に１回投与される成分は、同じ週に少なくとも１回投与され、そこでは、週に１回投与される他の成分も投与される。
上記で概説したように、本発明の組合せに含まれるＳＴＩＮＧアゴニスト及び／又は複合体の投与は、複数回の連続投与、例えば複数回の注射を必要とすることがある。したがって、投与は、例えば一次免疫注射として１回、後に追加免疫注射として、少なくとも２回繰り返される場合がある。
特に、本発明の組合せに含まれるＳＴＩＮＧアゴニスト及び／又は複合体は、繰り返し（又は連続して）投与されることができる。本発明の組合せに含まれるＳＴＩＮＧアゴニスト及び／又は複合体は、繰り返し又は連続して、少なくとも１週間、２週間、３週間、又は４週間；２か月間、３か月間、４か月間、５か月間、６か月間、８か月間、１０か月間、又は１２か月間；又は２年間、３年間、４年間、又は５年間の期間投与されることができる。例えば、本発明の組合せに含まれるＳＴＩＮＧアゴニストは、１日２回、１日１回、２日毎、３日毎、週１回、２週間毎、３週間毎、１ヶ月に１回、又は２ヶ月毎に投与されることができる。例えば、本発明の組合せに含まれる複合体は、１日２回、１日１回、２日毎、３日毎、週１回、２週間毎、３週間毎、１ヶ月に１回、又は２ヶ月毎に投与されることができる。好ましくは、本発明の組合せに含まれる複合体及び／又はＳＴＩＮＧアゴニストは、例えば１週間に一回又は２週間毎（に１回）、繰り返し投与されることができる。
好ましくは、本発明の組合せに含まれるＳＴＩＮＧアゴニスト及び／又は複合体は、同じ日に投与されることができる。例えば、本発明の組合せに含まれるＳＴＩＮＧアゴニスト及び／又は複合体は、繰り返し（上述されるように、例えば、一週間毎）投与されることができ、複合体が投与される日に、ＳＴＩＮＧアゴニストも投与される。更に、このような組合せ投与の日に、任意の第３の成分も投与されることができる。
本発明において、本明細書に記載されるＳＴＩＮＧアゴニストと、本明細書に記載される細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及び少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体との組合せにおいて、ＳＴＩＮＧアゴニスト及び複合体は、ほぼ同時に投与されることが好ましい。
本明細書で使用される「ほぼ同時に」とは、特に同時投与を意味する、又はＳＴＩＮＧアゴニストの投与の直後に複合体が投与される、又は複合体の投与の直後にＳＴＩＮＧアゴニストが投与されることを意味する。当業者であれば、「直後」は、２回目の投与の準備に必要な時間、特に２回目の投与の場所の暴露と消毒、並びに「投与装置」（例えば、シリンジ、ポンプ等）の適切な準備に必要な時間を含むことを理解する。同時投与は、ＳＴＩＮＧアゴニストと複合体の投与期間が重複する場合、又は、例えば、３０分、１時間、２時間、又はそれ以上といったより長い期間にわたって、１つの成分（ＳＴＩＮＧアゴニスト又は複合体）を例えば点滴（ｉｎｆｕｓｉｏｎ）により投与し、一方の成分（ＳＴＩＮＧアゴニスト又は複合体）をそのような長い期間のある時点で投与する場合も含む。異なる製剤、異なる投与経路、及び／又は異なる投与部位が使用される場合、ほぼ同時のＳＴＩＮＧアゴニスト及び複合体の投与は、特に好ましい。
好ましくは、本発明の組合せに含まれるＳＴＩＮＧアゴニスト及び本発明の組合せに含まれる複合体（並びに任意の更なる活性化合物）は、治療的有効量で投与される。本明細書で使用される「治療的有効量」は、治療される疾患又は状態の症状の緩和及び／又は予防される疾患又は状態の症状の予防に十分な量である。言い換えれば、「治療的有効量」とは、疾患又は障害の積極的な修飾を顕著に誘発するのに十分な複合体及び／又はＳＴＩＮＧアゴニストの量、即ち求められている組織、系、動物、又はヒトにおいて生物学的又は医学的応答を誘発する複合体及び／又はＳＴＩＮＧアゴニストの量を意味する。この用語は、疾患の進行を減少させる、特に腫瘍増殖又は感染を減少又は抑制し、それによって求められている応答を誘発するのに十分な複合体及び／又はＳＴＩＮＧアゴニストの量も含み、特にそのような応答は、複合体（即ち「阻害有効量」）に含まれる抗原又は抗原エピトープに対して向けられる免疫応答であろう。しかしながら、同時に、「治療的有効量」は、重篤な副作用を回避する、即ち、利点とリスクとの間の賢明な関係を許容するのに十分小さいことが好ましい。これらの限界の決定は、通常、賢明な医学的判断の範囲内にある。複合体及び／又はＳＴＩＮＧアゴニストの「治療的有効量」は、更に、治療される特定の状態と関連して、また、治療される患者の年齢及び身体状態、体重、全般の健康状態（ｇｅｎｅｒａｌ ｈｅａｌｔｈ）、性別、食事、投与時間、排泄速度、薬物の組合せ、特定の成分（ＳＴＩＮＧアゴニスト及び複合体）の活性、状態の重症度、治療期間、付随する治療の性質、使用される特定の薬学的に許容される担体の性質、及び担当医の知識及び経験の範囲内における同様の要因と関連して変化する。
したがって、個人に単回又は複数回投与される用量は、薬物動態学的特性、対象の状態及び特性（性別、年齢、体重、健康、サイズ）、症状の程度、同時治療、治療の頻度、及び望ましい効果を含む様々な要因によって変化する。
本発明の組合せに含まれる複合体及び本発明の組合せに含まれるＳＴＩＮＧアゴニスト（並びに任意の更なる活性化合物）は、様々な投与経路、例えば、全身的又は局所的（例えば、腫瘍内に）によって投与されることができる。全身投与の経路は、一般的に、例えば、経皮的経路、静脈内経路、筋肉内経路、動脈内経路、皮内経路、及び腹腔内経路、及び／又は鼻腔内投与経路を含む、経皮経路、経口慶雄、及び非経口経路を含む。局所投与の経路には、例えば、腫瘍内投与等、罹患部位での投与を含む。
好ましくは、本発明の組合せに含まれる複合体及び本発明の組合せに含まれるＳＴＩＮＧアゴニストは、全身に投与される。幾つかの実施形態では、ＳＴＩＮＧアゴニストは、腫瘍内に投与され、複合体は、全身に投与される。
全身投与においては、非経口的投与経路が好ましい。本発明の組合せに含まれる複合体及び本発明の組合せに含まれるＳＴＩＮＧアゴニストは、静脈内、皮内、皮下、筋肉内、鼻腔内、又は節内経路を介して投与されることがより好ましい。本発明の組合せに含まれる複合体及び本発明の組合せに含まれるＳＴＩＮＧアゴニストは、静脈内又は皮下投与されることが更により好ましい。幾つかの実施形態では、本発明の組合せに含まれる複合体及び本発明の組合せに含まれるＳＴＩＮＧアゴニストは、筋肉内投与される。
好ましくは、本発明の組合せに含まれる複合体及び本発明の組合せに含まれるＳＴＩＮＧアゴニストは、同じ投与経路を介して、好ましくは同じ全身投与経路を介して、より好ましくは同じ非経口投与経路を介して、更に好ましくは静脈内又は皮下に投与される。
幾つかの実施形態では、本発明の組合せに含まれる複合体及び本発明の組合せに含まれるＳＴＩＮＧアゴニストは、異なる投与経路を介して投与される。例えば、ＳＴＩＮＧアゴニストは腫瘍内に投与され、複合体は、例えば筋肉内又は皮下に全身に投与される。幾つかの実施形態では、本発明の組合せに含まれる複合体及び本発明の組合せに含まれるＳＴＩＮＧアゴニストは、異なる全身投与経路を介して投与される。例えば、ＳＴＩＮＧアゴニストは静脈内に投与され、複合体は筋肉内又は皮下等の全身に投与される。
組成物
上述されるように、（ｉ）ＳＴＩＮＧアゴニスト及び（ｉｉ）複合体は、別々の組成物で提供されることができる。幾つかの実施形態では、（ｉ）ＳＴＩＮＧアゴニスト及び（ｉｉｉ）任意の第３の成分（複合体及びＳＴＩＮＧアゴニスト以外）は、別々の組成物で提供されることができる。幾つかの実施形態では、（ｉｉ）複合体及び（ｉｉｉ）任意の第３の成分（複合体及びＳＴＩＮＧアゴニスト以外）は、別々の組成物で提供されることができる。例えば、、（ｉ）ＳＴＩＮＧアゴニスト；（ｉｉ）複合体；及び（ｉｉｉ）任意の第３の成分（複合体及びＳＴＩＮＧアゴニスト以外）は、別々の組成物で提供されることができる。
幾つかの実施形態では、（ｉ）ＳＴＩＮＧアゴニスト及び（ｉｉ）複合体は、同じ組成物に含まれることができる。幾つかの実施形態では、（ｉ）ＳＴＩＮＧアゴニスト及び（ｉｉｉ）任意の第３の成分（複合体及びＳＴＩＮＧアゴニスト以外）は、同じ組成物に含まれることができる。幾つかの実施形態では、（ｉｉ）複合体及び（ｉｉｉ）任意の第３の成分（複合体及びＳＴＩＮＧアゴニスト以外）は、同じ組成物に含まれることができる。例えば、、（ｉ）ＳＴＩＮＧアゴニスト；（ｉｉ）複合体；及び（ｉｉｉ）任意の第３の成分（複合体及びＳＴＩＮＧアゴニスト以外）は、同じ組成物に含まれることができる。
したがって、本発明はまた、組成物の組合せを提供し、第１の組成物は、上述されるＳＴＩＮＧアゴニストを含み（ただし、上述される複合体でないことが好ましい）；第２の組成物は、上述される複合体を含む（ただし、上述されるＳＴＩＮＧアゴニストでないことが好ましい）。これらの組成物のそれぞれは、任意の第３の成分（複合体及びＳＴＩＮＧアゴニスト以外）を含むことができる。しかし、幾つかの実施形態では、ＳＴＩＮＧアゴニストを含む組成物も、複合体を含む組成物も、任意の第３の成分（複合体及びＳＴＩＮＧアゴニスト以外）を更に含まない。このような場合、任意の第３の成分（複合体及びＳＴＩＮＧアゴニスト以外）が、更に異なる組成物に含まれることができる。
更に、本発明は、上述されるＳＴＩＮＧアゴニスト及び上述される複合体を含む組成物も提供する。このような組成物は、任意に、任意の第３の成分（複合体及びＳＴＩＮＧアゴニスト以外）を更に含むことができる。しかしながら、幾つかの実施形態では、任意の第３の成分（複合体及びＳＴＩＮＧアゴニスト以外）は、更に異なる組成物に含まれることができる。
したがって、更なる態様では、本発明は、下記組成物も提供する。前記組成物は、
（ｉ）ＳＴＩＮＧアゴニストと；
（ｉｉ）以下ａ）～ｃ）：

ａ）細胞透過性ペプチド；
ｂ）少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ；及び
ｃ）ＴＬＲペプチドアゴニスト
を含む複合体と、
を含む。前記複合体に含まれる成分ａ）～ｃ）は、共有結合される。
特に、本発明によるこのような組成物は、（ｉ）上述されるＳＴＩＮＧアゴニスト及び（ｉｉ）上述される複合体を含む。言い換えれば、上述されるＳＴＩＮＧアゴニストの好ましい実施形態（本発明の組合せの文脈）は、本発明による組成物においても好ましい。したがって、上述される複合体の好ましい実施形態（本発明の組合せの文脈）は、本発明の組成物においても好ましい。
一般に、組成物は、医薬組成物及び／又はワクチン組成物であることができる。特に、そのような組成物は、当業者によく知られた薬学的に許容される担体及び／又はビヒクル、又は任意の賦形剤、緩衝剤、安定剤、又は他の材料を任意に含む（医薬）組成物であることが好ましい。本発明の文脈で使用されるように「医薬製剤」及び「医薬組成物」という用語は、特に、有効成分の生物活性が明白に有効であることを可能にするような形態である製剤であり、かつ、その製剤が投与されるであろう対象に対して毒性であるような追加の成分を含まない製剤を指す。幾つかの実施形態では、（医薬）組成物は、ＳＴＩＮＧアゴニスト及び／又は複合体（及び／又は任意の第３の成分（複合体及びＳＴＩＮＧアゴニスト以外））に加えて、更なる活性成分（例えば、癌治療に関して「活性」である）を含まない。
更なる成分として、（医薬）組成物は、薬学的に許容される担体及び／又はビヒクルを特に含むことができる。本発明の文脈では、薬学的に許容される担体は、典型的には、（医薬）組成物の液体成分（ｂａｓｉｓ）又は非液体成分を含む。（医薬）組成物が液体の形態で提供される場合、担体は、典型的には、パイロジェンフリーの水、等張生理食塩水、緩衝（水溶液）溶液（例えば、リン酸塩、クエン酸塩）等、緩衝溶液である。特に、（医薬品）組成物の注射は、水、又は好ましくは緩衝剤、より好ましくは水性緩衝剤を使用することができ、これらは、ナトリウム塩、好ましくは、少なくとも３０ｍＭのナトリウム塩、カルシウム塩、好ましくは、少なくとも０．０５ｍＭのカルシウム塩、任意に、カリウム塩、好ましくは少なくとも１ｍＭのカリウム塩を含む。好ましい実施形態によれば、ナトリウム塩、カルシウム塩、及び任意のカリウム塩は、ハロゲン化物（例えば塩化物、ヨウ化物、又は臭化物）の形態で、それらの水酸化物、炭酸塩、炭酸水素塩、又は硫酸塩等の形態で生じることができる。ナトリウム塩の例としては、例えば、ＮａＣｌ、ＮａＩ、ＮａＢｒ、Ｎａ２ＣＯ３、ＮａＨＣＯ３、Ｎａ２ＳＯ４が挙げられ、任意のカリウム塩の例としては、例えば、ＫＣｌ、ＫＩ、ＫＢｒ、Ｋ２ＣＯ３、ＫＨＣＯ３、Ｋ２ＳＯ４が挙げられ、カルシウム塩の例としては、例えば、ＣａＣｌ２、ＣａＩ２、ＣａＢｒ２、ＣａＣＯ３、ＣａＳＯ４、Ｃａ（ＯＨ）２が挙げられるが、これらに限定されない。更に、緩衝剤中に前述のカチオンの有機アニオンが含まれていることができる。より好ましい実施形態によれば、上記で定義された注射目的に適した緩衝剤は、塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）、塩化カルシウム（ＣａＣｌ２）、及び任意に塩化カリウム（ＫＣｌ）から選択される塩を含むことができ、更なるアニオンが塩化物に加えられて存在することができる。ＣａＣｌ２は、ＫＣｌのような別の塩で置き換えられることもできる。通常、注射緩衝剤中の塩は、少なくとも３０ｍＭ塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）、少なくとも１ｍＭ塩化カリウム（ＫＣｌ）、及び少なくとも０．０５ｍＭ塩化カルシウム（ＣａＣｌ２）の濃度で存在する。注射緩衝剤は、特定の参照媒体を基準として、高張性、等張、又は低張性であることができ、即ち、緩衝剤は、特定の参照媒体を基準として、より高い、同一の、又はより低い塩の含有量を有することができ、そのような濃度の前述の塩を用いることができ、浸透圧又は他の濃度効果による細胞の損傷をもたらさない。参照媒体は、例えば、血液、リンパ、サイトゾル液体、又は他の体液のような「インビボ」方法で発生する液体）、又は例えば、「インビトロ」方法で参照媒体として使用できる液体（一般的な緩衝剤又は液体）である。このような一般的な緩衝剤又は液体は、当業者には知られている。液体成分としては、生理食塩水（０．９％ＮａＣｌ）及び乳酸リンゲル溶液が特に好ましい。幾つかの実施形態では、（医薬）組成物は、Ｌ－アルギニン等のアルギニンを更に含むことができる。
しかしながら、１つ以上の適合性のある固体又は液体の充填剤又は希釈剤又はカプセル化化合物を、治療される対象への投与に適した（医薬品）組成物にも使用されることができる。本明細書で使用される「適合性のある」という用語は、（医薬品）組成物のこれらの構成成分が、典型的な使用条件下で、（医薬品）組成物の医薬有効性を実質的に低下させるような相互作用が起こらないような方法で、上記で定義された複合体と混合することができることを意味する。薬学的に許容される担体、充填剤、及び希釈剤は、当然ながら、治療される対象への投与に適したものとするために、十分に高い純度及び十分に低い毒性を有していなければならない。薬学的に許容される担体、充填剤、又はその構成成分として使用できる化合物の幾つかの例は、糖（例えば、ラクトース、グルコース、及びスクロース等）；デンプン（例えば、コーンスターチ又はジャガイモデンプン等）；セルロース及びその誘導体（例えば、カルボキシルメチルセルロースナトリウム、エチルセルロース、酢酸セルロース等）；トラガント末；麦芽；ゼラチン；獣脂；固体流動化助剤（ｓｏｌｉｄ ｇｌｉｄａｎｔ）（例えば、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム等）；硫酸カルシウム；植物油（例えば、落花生油、綿実油、ごま油、オリーブ油、コーン油、及びカカオからの油等）；ポリオール（例えば、ポリプロピレングリコール、グリセロール、ソルビトール、マンニトール、及びポリエチレングリコール等）；アルギン酸である。
幾つかの実施形態では、（医薬品）組成物は、注射又は注入技術を介して投与されることができる。（医薬品）組成物の滅菌注射可能な形態は、水性又は油性懸濁液であることができる。これらの懸濁液は、適切な分散剤又は湿潤剤及び懸濁剤を使用して、当該分野で知られている技術に従って製剤化されることができる。滅菌注射可能な製剤（ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ）は、例えば、１，３－ブタンジオール中の溶液のように、無毒の非経口的に許容される希釈剤又は溶媒中の滅菌注射可能な溶液又は懸濁液であることができる。使用されることができる許容されるビヒクル及び溶媒には、水、リンゲル溶液及び等張塩化ナトリウム溶液がある。更に、溶媒又は懸濁媒体として、滅菌された固定油が通常使用される。この目的のために、合成モノグリセリド－又は合成ジグリセリドを含む、あらゆる無刺激の（ｂｌａｎｄ）固定油を使用することができる。オレイン酸やそのグリセリド誘導体等の脂肪酸は、オリーブ油やひまし油等の天然の薬学的に許容される油、特にそれらのポリオキシエチル化されたバージョンと同様に、注射剤の製剤に有用である。これらの油溶液又は懸濁液は、乳剤及び懸濁液を含む薬学的に許容される剤形の製剤に一般的に使用されるカルボキシメチルセルロース又は類似の分散剤等の長鎖アルコールの希釈剤又は分散剤も含むことができる。薬学的に許容される固体、液体、又はその他の剤形の製造に一般的に使用される他の一般的な界面活性剤（Ｔｗｅｅｎｓ、Ｓｐａｎｓ、及びその他の乳化剤等）又はバイオアベイラビリティ増強剤も、（医薬品）組成物の製剤化の目的で使用されることができる。
非経口注射の場合、有効成分は、パイロジェンフリーで、適切なｐＨ、等張性、及び安定性を有する非経口的に許容される水溶液の形態であることが好ましい。当業者であれば、例えば、塩化ナトリウム注射液、リンゲル液、乳酸リンゲル液等の等張性ビヒクルを使用して、適切な溶液を調製することができる。必要に応じて、防腐剤、安定剤、緩衝剤、酸化防止剤、及び／又はその他の添加剤を含めることができる。
本明細書に記載される（医薬品）組成物は、カプセル、錠剤、水性懸濁液又は溶液を含むがこれらに限定されない任意の経口的に許容される剤形で経口投与されることもできる。経口使用のための錠剤の場合、一般的に使用される担体は、ラクトース及びコーンスターチを含む。ステアリン酸マグネシウム等の潤滑剤も、一般的に添加される。カプセル形態における経口投与において、有用な希釈剤は、ラクトース及び乾燥コーンスターチが挙げられる。経口使用のために水性懸濁液が必要とされる場合、有効成分は乳化剤や懸濁剤と組み合わされる。必要に応じて、特定の甘味料、香料、着色料を添加することもできる。
特に、治療の対象が、例えば、皮膚又はその他の到達しやすい上皮組織の疾患を含む、局所的な適用によって容易に到達しやすい領域又は臓器を含む場合に、（医薬）組成物は、局所的に投与されることもできる。これらの部位又は臓器のそれぞれに適切な局所製剤は、容易に調製される。局所投与のために、（医薬）組成物は、有効成分が１以上の担体に懸濁又は溶解された適切な軟膏で製剤化されることができる。局所投与のための担体は、鉱油、流動パラフィン、白色ワセリン、プロピレングリコール、ポリオキシエチレン、ポリオキシプロピレン化合物、乳化ワックス、及び水が挙げられるが、これらに限定されない。或いは、（医薬）組成物を適切なローション又はクリームに配合されることもできる。本発明の文脈では、適切な担体は、鉱油、ソルビタンモノステアレート、ポリソルベート６０、セチルエステルワックス、セトステアリルアルコール（ｃｅｔｅａｒｙｌ ａｌｃｏｈｏｌ）、２－オクチルドデカノール、ベンジルアルコール、及び水が挙げられるが、これらに限定されない。
この文脈において、治療の処方、例えば上記（医薬）組成物を使用する際の用量等の決定は、一般医師（ｐｒａｃｔｉｔｉｏｎｅｒ）及び他の医師の責任の範囲内であり、一般的には、治療されるべき障害、個々の患者の状態、送達場所、投与方法、及び一般医師に知られている他の要因を考慮する。
したがって、（医薬）組成物は、一般的に、治療的有効量の、（医薬）組成物の成分、特に、複合体及び／又はＳＴＩＮＧアゴニストを含む。（医薬）組成物は、ヒトのために、また動物の医療目的のために、好ましくはヒトの医療目的のために、一般に（医薬品）組成物として、又はワクチンとして使用されることができる。
（医薬）組成物、特にワクチン組成物又は製剤は、本明細書に記載される複合体及び／又は本明細書に記載されるＳＴＩＮＧアゴニストを、本明細書に記載される任意の形態で含有することができる医薬品製剤として投与されることができる。例えば、（医薬）組成物、特にワクチン組成物又は製剤は、本明細書に記載される任意の形態で、本明細書に記載される複合体がロードされた抗原提示細胞（例えば、樹状細胞）を含むことができる、医薬製剤として投与されることもできる。
ワクチン及び／又は組成物は、（医薬）組成物及びその単位用量として、特に上述及び後述の従来から採用されているアジュバント、免疫調節性材料、担体、希釈剤、又は賦形剤と共に製剤化されることもでき、そのような形態では、いずれも経口使用である、錠剤又は充填カプセル等の固体、溶液、懸濁液、乳剤、エリキシル剤、又はこれらを充填したカプセル等の液体として、又は注射や持続点滴による非経口用（皮下、皮内を含む）の滅菌注射可能な溶液の形態で用いられることができる。
本発明の文脈で、特に、（医薬）組成物及びワクチンの文脈で、注射可能な組成物は、注射可能な滅菌生理食塩水又はリン酸緩衝食塩水又は当技術分野で知られる注射可能な担体に基づくことができる。そのような（医薬）組成物及びその単位剤形は、追加の活性化合物又は原理の有無にかかわらず、従来の比率で成分を含むことができ、そのような単位剤形は、使用される意図された１日の用量範囲に見合った任意の有効量の有効成分を含むことができる。
本発明の文脈における適切なアジュバント及び／又は免疫調節性材料の例としては、ＭＰＬ（登録商標）（Ｃｏｒｉｘａ）、アルミニウム系鉱物含有アルミニウム化合物（一般的に、Ａｌｕｍと呼ばれる）、ＡＳＯ１－４、ＭＦ５９、リン酸カルシウム、リポソーム、イスコム、その安定化形態ｐｏｌｙ－ＩＣＬＣ（Ｈｉｌｔｏｎｏｌ）を含むポリイノシン・ポリシチジン酸（ｐｏｌｙＩＣ）、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド、顆粒球－マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）、リポ多糖類（ＬＰＳ）、モンタニド（Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ）、ポリラクチドコグリコリド（ＰＬＧ）、フラゲリン、シャボンノキのサポニン（ＱＳ２１）、アミノアルキルグルコサミド化合物（例えば、ＲＣ５２９）、合成オリゴデオキシヌクレオチドを含む２成分抗細菌性ペプチド（例えば、ＩＣ３１）、イミキモド、レシキモド、免疫賦活性配列（ＩＳＳ）、モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬＡ）、及び線維芽細胞刺激性リポペプチド（ＦＳＬ１）等が挙げられる。
組成物、特に医薬組成物及びワクチンは、水性又は油性懸濁液、溶液、乳剤、シロップ、及びエリキシル剤を含むが、これらに限定されない液体製剤であることができる。組成物は、使用前に水又は他の適切なビヒクルで、再構成するための乾燥製品として製剤化されることもできる。このような液体製剤としては、懸濁剤、乳化剤、非水性ビヒクル、及び防腐剤を含むが、これらに限定されない添加物を含むことができる。懸濁剤としては、ソルビトールシロップ、メチルセルロース、グルコース／糖シロップ、ゼラチン、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ステアリン酸アルミニウムゲル、及び水素化食用油脂が挙げられるが、これらに限定されない。乳化剤としては、レシチン、ソルビタンモノオレアート、及びアカシアが挙げられるが、これらに限定されない。防腐剤としては、ｐ－ヒドロキシ安息香酸メチル又はｐ－ヒドロキシ安息香酸プロピル、及びソルビン酸が挙げられるが、これらに限定されない。分散剤又は湿潤剤は、ポリ（エチレングリコール）、グリセロール、ウシ血清アルブミン、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）、Ｓｐａｎ（登録商標）が挙げられるが、これらに限定されない。
組成物、特に医薬組成物及びワクチンは、デポ製剤として製剤化されることもでき、注入（ｉｍｐｌａｎｔａｔｉｏｎ）によって又は筋肉内注射によって、投与されることができる。
組成物、特に医薬組成物及びワクチンは、固体組成物であることもでき、従来の方法で製剤化された錠剤又はロゼンジの形態であることができる。例えば、経口投与のための錠剤及びカプセルは、結合剤、充填剤、潤滑剤、崩壊剤、及び湿潤剤を含むが、これらに限定されない従来の賦形剤を含むことができる。結合剤は、シロップ、アカシア、ゼラチン、ソルビトール、トラガント、スターチの粘液、及びポリビニルピロリドンが挙げられるが、これらに限定されない。充填剤は、ラクトース、糖、結晶セルロース、トウモロコシデンプン、リン酸カルシウム、及びソルビトールが挙げられるが、これらに限定されない。潤滑剤は、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、タルク、ポリエチレングリコール、及びシリカが挙げられるが、これらに限定されない。崩壊剤としては、ジャガイモデンプン及びデンプングリコール酸ナトリウムが挙げられるが、これらに限定されない。湿潤剤としては、ラウリル硫酸ナトリウムが挙げられるが、これらに限定されない。錠剤は、当該技術分野でよく知られた方法に従ってコーティングされることができる。
組成物、特に医薬組成物及びワクチンは、徐放性形態で、又は徐放性ドラッグデリバリーシステムから投与されることもできる。
更に、組成物、特に医薬組成物及びワクチンは、反復投与によって送達用に適応させることができる。
組成物、特に医薬組成物及びワクチンの文脈において、又はそれらの製剤の文脈において有用である、更なる材料及び製剤処理技術等は、当業者に知られている。
組成物はワクチンであることが好ましい。本発明の文脈で使用されるように、「ワクチン」という用語は、自然免疫及び／又は適応免疫を、典型的には特定の疾患、好ましくは癌に提供する生物学的製剤を指す。したがって、ワクチンは、特に、治療される対象の免疫系の自然免疫応答及び／又は適応免疫応答を支持する。例えば、本明細書に記載されている複合体の抗原又は抗原エピトープは、典型的には、治療される患者の適応免疫応答をもたらすか支持し、本明細書に記載される複合体のＴＬＲペプチドアゴニストは、自然免疫応答をもたらすか支持することができる。
ワクチンは、（医薬）組成物について上記で定義されている、薬学的に許容される担体、アジュバント、及び／又はビヒクルを含むこともできる。ワクチンの特定の文脈において、薬学的に許容される担体の選択は、原則としてワクチンの投与方法によって決定される。ワクチンは、例えば、上記のように全身的に又は局所的に投与されることができる。より好ましくは、ワクチンは、静脈内経路，腫瘍内経路、皮内経路、皮下経路、又は筋肉内経路で投与されることができる。したがって、ワクチンは、液体（又は、場合によっては固体）の形態で製剤化されることが好ましい。投与されるワクチンの適切な量は、動物モデルを用いた通例の実験によって決定されることができる。そのようなモデルとしては、いかなる制限も意味することなく、ウサギ、ヒツジ、マウス、ラット、イヌ、及び非ヒト霊長類モデルが挙げられる。注射のための好ましい単位用量形態には、水、生理食塩水、又はそれらの混合物の滅菌溶液が含まれる。そのような溶液のｐＨは、約７．４に調整されるべきである。注射に対して適切な担体としては、ヒドロゲル、放出を制御又は遅延させる装置、ポリ乳酸、及びコラーゲンマトリックスが挙げられる。局所投与ための適切な薬学的に許容される担体は、ローション、クリーム、ゲル等における使用に適切なものが挙げられる。ワクチンを経口投与する場合は、錠剤、カプセル等が好ましい単位用量形態である。経口投与に使用されることができる単位用量形態の調製のための薬学的に許容される担体は、当技術分野ではよく知られている。その選択は、味、コスト、及び貯蔵性等の本発明の目的にとって重要ではない二次的な考慮事項に依存し、当業者によって困難なく行われることができる。
ワクチンは、その免疫原性を更に増加させるために、１つ以上の補助物質を追加で含むことができる。それによって、上記で定義されたＳＴＩＮＧアゴニスト及び／又は複合体と、上記のようにワクチンに任意に含まれることができる補助物質との相乗作用は、達成されることが好ましい。様々な種類の補助物質に応じて、この点で様々なメカニズムが考慮される。例えば、樹状細胞（ＤＣ）の成熟を可能にする化合物、例えばリポ多糖類やＴＮＦ－αは、第一級の適切な補助物質を形成する。一般に、標的化された方法で、増強及び影響をされるＳＴＩＮＧアゴニスト又は複合体によって産生される免疫応答を可能にするＧＭ－ＣＳＦ等のサイトカイン、又は「危険信号」（ＬＰＳ、ＧＰ９６等）の方法で、補助物質として、免疫系に影響を与える薬剤を使用することができる。特に好ましい補助物質は、自然免疫応答を更に促進する、モノカイン、リンホカイン、インターロイキン、又はケモカイン等のサイトカインであり、ＩＬ－１、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－８、ＩＬ－９、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－１４、ＩＬ－１５、ＩＬ－１６、ＩＬ－１７、ＩＬ－１８、ＩＬ－１９、ＩＬ－２０、ＩＬ－２１、ＩＬ－２２、ＩＬ－２３、ＩＬ－２４、ＩＬ－２５、ＩＬ－２６、ＩＬ－２７、ＩＬ－２８、ＩＬ－２９、ＩＬ－３０、ＩＬ－３１、ＩＬ－３２、ＩＬ－３３、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ＩＦＮ－γ、ＧＭ－ＣＳＦ、Ｇ－ＣＳＦ、Ｍ－ＣＳＦ、ＬＴ－β又はＴＮＦ－α、増殖因子（ｈＧＨ等）が挙げられる。
一般に、本明細書に記載される（医薬）組成物、特にワクチンは、上記の医学的利用に記載されているように、医療において使用されることができる。特に、上述されるように、例えば、癌、血液学的障害、感染症、自己免疫障害、及び移植片拒絶を含む（癌が好ましい）疾患又は障害の予防及び／又は治療に使用されることができる。
キット
更なる態様では、本発明は、キット、特に部品のキットも提供する。前記キットは、
（ｉ）ＳＴＩＮＧアゴニストと；
（ｉｉ）以下ａ）～ｃ）：
ａ）細胞透過性ペプチド；
ｂ）少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ；及び
ｃ）ＴＬＲペプチドアゴニスト
を含む複合体と、
を含む。前記複合体に含まれる成分ａ）～ｃ）は、共有結合される。
特に、本発明のそのようなキットは、（ｉ）（本発明の組合せの文脈において）上述されるＳＴＩＮＧアゴニスト及び（ｉｉ）（本発明の組合せの文脈において）上述される複合体を含む。言い換えれば、（本発明の組合せの文脈において）上述されるＳＴＩＮＧアゴニストの好ましい実施形態も、本発明のキットにおいて好ましい。したがって、（本発明の組合せの文脈において）上述される複合体の好ましい実施形態も、本発明のキットにおいて好ましい。
キットの様々な成分は、１つ以上の容器に入れられることができる。上記の成分は、凍結乾燥又は乾燥された形で提供されるか、適切な緩衝液に溶解されることができる。例えば、キットは、例えば、各組成物が別々の容器に入れられた、上述されるＳＴＩＮＧアゴニストを含む（医薬）組成物及び上述される複合体を含む医薬組成物を含むことができる。
上述されるように、（ｉ）ＳＴＩＮＧアゴニスト及び（ｉｉ）複合体は、同じ容器（例えば、シリンジ）に含まれることができる。幾つかの実施形態では、（ｉ）ＳＴＩＮＧアゴニスト及び（ｉｉｉ）任意の第３の成分（複合体及びＳＴＩＮＧアゴニスト以外）は、同じ容器（例えば、シリンジ）に含まれることができる。幾つかの実施形態では、（ｉｉ）複合体及び（ｉｉｉ）任意の第３の成分（複合体及びＳＴＩＮＧアゴニスト以外）は、同じ容器（例えば、シリンジ）に含まれることができる。例えば、、（ｉ）ＳＴＩＮＧアゴニスト；（ｉｉ）複合体；及び（ｉｉｉ）任意の第３の成分（複合体及びＳＴＩＮＧアゴニスト以外）は、同じ容器（例えば、シリンジ）に含まれることができる。
幾つかの実施形態では、（ｉ）ＳＴＩＮＧアゴニスト及び（ｉｉ）複合体は、別々の容器（例えば、別々のシリンジ）で提供されることができる。幾つかの実施形態では、（ｉ）ＳＴＩＮＧアゴニスト及び（ｉｉｉ）任意の第３の成分（複合体及びＳＴＩＮＧアゴニスト以外）は、別々の容器（例えば、別々のシリンジ）で提供されることができる。幾つかの実施形態では、（ｉｉ）複合体及び（ｉｉｉ）任意の第３の成分（複合体及びＳＴＩＮＧアゴニスト以外）は、別々の容器（例えば、別々のシリンジ）で提供されることができる。例えば、、（ｉ）ＳＴＩＮＧアゴニスト；（ｉｉ）複合体；及び（ｉｉｉ）任意の第３の成分（複合体及びＳＴＩＮＧアゴニスト以外）は、別々の容器（例えば、別々のシリンジ）で提供されることができる。
また、本キットは、例えば、防腐剤、成長培地、及び／又は上記成分の保存及び／又は再構成のための緩衝液、洗浄溶液等を含む追加の試薬を含むことができる。
更に、本発明のキットパーツ（ｋｉｔ－ｏｆ－ｐａｒｔｓ）は、任意に、使用説明書を含むことができる。キットは、本明細書に記載されているような疾患、例えば癌を治療するための説明書を添付文書又はラベルとして更に含むことが好ましい。
このようなキットは、本明細書に記載されるように医薬における使用、特に本明細書に記載されるように癌の予防及び／又は治療での使用が好ましい。
以下に、添付された図面の簡単な説明を提供する。これらの図は、本発明をより詳細に説明するためのものである。ただし、これらの図は、発明の主題を何らかの方法で制限するために意図したものではない。
図面の説明文を通して、文字「Ｋ」は、それぞれの実施例セクションに示されているように、Ｚ１３Ｍａｄ２５Ａｎａｘａ（配列番号５５）又はＡＴＰ１２８（配列番号５４）等、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体を表す。
図１Ａ－Ｅは、実施例１において、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体（Ｋ）と、ＳＴＩＮＧアゴニスト（ＳＴＩＮＧａ）との組合せ投与が、腫瘍がないマウスにおいて、ＣＤ４ Ｔ細胞及びＣＤ８ Ｔ細胞の両方の末梢応答を調節することを示す。２週間間隔で、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体（Ｋ）、ＳＴＩＮＧアゴニスト（ＳＴＩＮＧａ）、又は上記２つの組合せの２回の投与により、Ｃ５７ＢＬ／６マウスを処置した。（Ａ）ワクチン接種スケジュール。（Ｂ）最初のワクチン接種の４時間後及び２４時間後に測定された血清ＩＦＮ－αレベル。（Ｃ）２回目のワクチン接種の１週間後に、多量体染色により測定された循環（ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ）ＨＰＶ－Ｅ７特異的ＣＤ８ Ｔ細胞。３回目のワクチン接種後の１週間後に、マウスを殺処分し、ＣＤ８ Ｔ細胞（Ｄ～Ｅ）又はＣＤ４ Ｔ細胞（Ｆ～Ｋ）応答をフローサイトメトリーにより分析した。（Ｄ）脾細胞内のＣＤ８ Ｔ細胞の頻度（Ｅ）サイトカイン産生ＰＭＡ再刺激ＣＤ８ Ｔ細胞の割合。（Ｆ）脾細胞内のＣＤ４ Ｔ細胞の頻度。（Ｇ）脾臓のＣＤ４ Ｔ細胞のうちのＴｒｅｇの頻度。（Ｈ）脾臓のＣＤ４ Ｔ細胞のうちのＴｈ１７の頻度。（Ｉ）脾臓のＣＤ４ Ｔ細胞のうちのＴｈ１の頻度。（Ｊ）脾臓のＣＤ４ Ｔ細胞のうちのＴｈ２の頻度。（Ｋ）脾臓のＣＤ４ Ｔ細胞のうちのＴｈ１／Ｔｈ２の比。（Ｌ）ＲＡＨＹＮＩＶＴＦペプチドをロードした脾細胞の移植により測定されたＲＡＨＹＮＩＶＴＦ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞のインビボ細胞傷害性。（Ｍ）エクスビボＥＬＩｓｐｏｔによって測定されたＲＡＨＹＮＩＶＴＦ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞ＴＣＲ結合活性。 図１Ｆ－Ｋは、実施例１において、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体（Ｋ）と、ＳＴＩＮＧアゴニスト（ＳＴＩＮＧａ）との組合せ投与が、腫瘍がないマウスにおいて、ＣＤ４ Ｔ細胞及びＣＤ８ Ｔ細胞の両方の末梢応答を調節することを示す。２週間間隔で、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体（Ｋ）、ＳＴＩＮＧアゴニスト（ＳＴＩＮＧａ）、又は上記２つの組合せの２回の投与により、Ｃ５７ＢＬ／６マウスを処置した。（Ａ）ワクチン接種スケジュール。（Ｂ）最初のワクチン接種の４時間後及び２４時間後に測定された血清ＩＦＮ－αレベル。（Ｃ）２回目のワクチン接種の１週間後に、多量体染色により測定された循環（ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ）ＨＰＶ－Ｅ７特異的ＣＤ８ Ｔ細胞。３回目のワクチン接種後の１週間後に、マウスを殺処分し、ＣＤ８ Ｔ細胞（Ｄ～Ｅ）又はＣＤ４ Ｔ細胞（Ｆ～Ｋ）応答をフローサイトメトリーにより分析した。（Ｄ）脾細胞内のＣＤ８ Ｔ細胞の頻度（Ｅ）サイトカイン産生ＰＭＡ再刺激ＣＤ８ Ｔ細胞の割合。（Ｆ）脾細胞内のＣＤ４ Ｔ細胞の頻度。（Ｇ）脾臓のＣＤ４ Ｔ細胞のうちのＴｒｅｇの頻度。（Ｈ）脾臓のＣＤ４ Ｔ細胞のうちのＴｈ１７の頻度。（Ｉ）脾臓のＣＤ４ Ｔ細胞のうちのＴｈ１の頻度。（Ｊ）脾臓のＣＤ４ Ｔ細胞のうちのＴｈ２の頻度。（Ｋ）脾臓のＣＤ４ Ｔ細胞のうちのＴｈ１／Ｔｈ２の比。（Ｌ）ＲＡＨＹＮＩＶＴＦペプチドをロードした脾細胞の移植により測定されたＲＡＨＹＮＩＶＴＦ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞のインビボ細胞傷害性。（Ｍ）エクスビボＥＬＩｓｐｏｔによって測定されたＲＡＨＹＮＩＶＴＦ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞ＴＣＲ結合活性。 図１Ｌ－Ｍは、実施例１において、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体（Ｋ）と、ＳＴＩＮＧアゴニスト（ＳＴＩＮＧａ）との組合せ投与が、腫瘍がないマウスにおいて、ＣＤ４ Ｔ細胞及びＣＤ８ Ｔ細胞の両方の末梢応答を調節することを示す。２週間間隔で、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体（Ｋ）、ＳＴＩＮＧアゴニスト（ＳＴＩＮＧａ）、又は上記２つの組合せの２回の投与により、Ｃ５７ＢＬ／６マウスを処置した。（Ａ）ワクチン接種スケジュール。（Ｂ）最初のワクチン接種の４時間後及び２４時間後に測定された血清ＩＦＮ－αレベル。（Ｃ）２回目のワクチン接種の１週間後に、多量体染色により測定された循環（ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ）ＨＰＶ－Ｅ７特異的ＣＤ８ Ｔ細胞。３回目のワクチン接種後の１週間後に、マウスを殺処分し、ＣＤ８ Ｔ細胞（Ｄ～Ｅ）又はＣＤ４ Ｔ細胞（Ｆ～Ｋ）応答をフローサイトメトリーにより分析した。（Ｄ）脾細胞内のＣＤ８ Ｔ細胞の頻度（Ｅ）サイトカイン産生ＰＭＡ再刺激ＣＤ８ Ｔ細胞の割合。（Ｆ）脾細胞内のＣＤ４ Ｔ細胞の頻度。（Ｇ）脾臓のＣＤ４ Ｔ細胞のうちのＴｒｅｇの頻度。（Ｈ）脾臓のＣＤ４ Ｔ細胞のうちのＴｈ１７の頻度。（Ｉ）脾臓のＣＤ４ Ｔ細胞のうちのＴｈ１の頻度。（Ｊ）脾臓のＣＤ４ Ｔ細胞のうちのＴｈ２の頻度。（Ｋ）脾臓のＣＤ４ Ｔ細胞のうちのＴｈ１／Ｔｈ２の比。（Ｌ）ＲＡＨＹＮＩＶＴＦペプチドをロードした脾細胞の移植により測定されたＲＡＨＹＮＩＶＴＦ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞のインビボ細胞傷害性。（Ｍ）エクスビボＥＬＩｓｐｏｔによって測定されたＲＡＨＹＮＩＶＴＦ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞ＴＣＲ結合活性。 図２は、実施例２において、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体（Ｋ）と、ＳＴＩＮＧアゴニスト（ＳＴＩＮＧａ）との組合せ投与が、担癌マウスによって、より忍容性があることを示す。（Ａ～Ｂ）Ｃ５７ＢＬ／６マウスの背中に、１０５個のＴＣ－１細胞を移植した。腫瘍が可視化された場合、１週間間隔で、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体（Ｋ）、ＳＴＩＮＧアゴニスト（ＳＴＩＮＧａ）、又はそれらの組合せの２回の投与により、マウスを処置した。マウスの体温（Ａ）及び体重（Ｂ）を指示された時点で測定した。 図３は、実施例３において、ＴＣ－１担癌マウスにおける循環ＨＰＶ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞の表現型を示す。Ｃ５７ＢＬ／６マウスの背中に、１０５個のＴＣ－１細胞を移植した。腫瘍が可視化された場合、１週間間隔で、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体（Ｋ）、ＳＴＩＮＧアゴニスト（ＳＴＩＮＧａ）、又は上記２つの組合せの２回の投与により、マウスを処置した。最後の処置の１週間後に、マウスの血液中のＨＰＶ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞応答を分析した。（Ａ）フローサイトメトリーで測定した循環ＨＰＶ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞の頻度。（Ｂ）フローサイトメトリーで測定した循環ＨＰＶ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞の数。 図４は、実施例３において、ＣＤ８ Ｔ細胞における細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体（Ｋ）と、ＳＴＩＮＧアゴニスト（ＳＴＩＮＧａ）との組合せ投与の効果を示す。Ｃ５７ＢＬ／６マウスの背中に、１０５個のＴＣ－１細胞を移植した。腫瘍が可視化された場合、１週間間隔で、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体（Ｋ）、ＳＴＩＮＧアゴニスト（ＳＴＩＮＧａ）、又は上記２つの組合せの２回の投与により、マウスを処置した。最後の処置の１週間後、マウスを殺処分し、腫瘍を採取し、ＣＤ８ Ｔ細胞の存在と表現型をＦＡＣＳ染色によって分析した。（Ａ）腫瘍浸潤性白血球間の全ＣＤ８ Ｔ細胞の頻度、（Ｂ）腫瘍浸潤性白血球間の全ＣＤ８ Ｔ細胞の数、（Ｃ）ＨＰＶ特異性ＣＤ８ Ｔ細胞の頻度、（Ｄ）ＨＰＶ特異性ＣＤ８ Ｔ細胞の数は、示される。 図５は、実施例３において、ＨＰＶペプチドをロードした骨髄由来樹状細胞（ＢＭＤＣ）によるエクスビボ刺激後に、ＩＦＮγ、ＴＮＦa、及び脱顆粒マーカーＣＤ１０７aの発現を測定することによって監視された、腫瘍浸潤性ＨＰＶ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞の機能性を示す。腫瘍浸潤性ＣＤ４５＋細胞を、ＨＰＶペプチドをロードしたＢＭＤＣと共に６時間エクスビボで共培養した。抗原特異的サイトカイン産生を細胞内染色により測定した。代表的なＦＡＣＳプロット及びＣＤ８ Ｔ細胞内のサイトカイン産生の頻度を示す。 図６は、実施例３において、Ｇｏｌｇｉ阻害剤の存在下で簡潔なエクスビボＴＩＬ培養後、グランザイムＢ（ＧｚＢ）の細胞内産生を示す。ＣＤ４５＋腫瘍浸潤性細胞をＧｏｌｇｉ阻害剤と共にエクスビボで４時間培養した。グランザイムＢ産生を細胞内染色によって監視し、（Ａ）グランザイムＢ産生合計（ｔｏｔａｌ）の頻度、（Ｂ）グランザイムＢ産生合計の総数、（Ｃ）ＨＰＶ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞の頻度、及び（Ｄ）ＨＰＶ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞の総数を示す。 図７は、実施例３において、ＴＣ－１担癌マウスにおける循環ＨＰＶ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞の表現型について示し、即ち、非常に低い頻度のサイトカイン又はＧｚＢ産生脾臓のＨＰＶ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞が、全ての様々な処置で観察されたことを示す。この目的のために、エクスビボで、ＨＰＶ由来ペプチドによって脾細胞を再刺激した。（Ａ）サイトカイン産生ＨＰＶ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞及び（Ｂ）グランザイムＢ分泌ＨＰＶ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞の頻度を示す。 図８Ａは、実施例３において、（Ａ）ＣＤ８ Ｔ細胞の総数に対する、及び（Ｂ）ＨＰＶ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞に対する、活性マーカー及び疲弊マーカーの発現をフローサイトメトリーによって測定した。（Ｃ）ＣＤ８ Ｔ細胞総数に対するＣＤ３８発現の頻度。（Ｄ）ＨＰＶ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞に対するＣＤ３８発現の頻度。（Ｅ）ＣＤ８ Ｔ細胞総数に対するＮＫｇ２Ｄａ発現の頻度。（Ｆ）ＨＰＶ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞に対するＮＫｇ２Ｄａ発現の頻度。（Ｇ）ＣＤ８ Ｔ細胞総数に対するＴＣＦ－１発現の頻度。（Ｈ）ＨＰＶ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞に対するＴＣＦ－１発現の頻度。（Ｉ）ＨＰＶ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞におけるＰＤ－１、グランザイムＢ、及びＴＣＦ－１の共発現。 図８Ｂ－Ｄは、実施例３において、（Ａ）ＣＤ８ Ｔ細胞の総数に対する、及び（Ｂ）ＨＰＶ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞に対する、活性マーカー及び疲弊マーカーの発現をフローサイトメトリーによって測定した。（Ｃ）ＣＤ８ Ｔ細胞総数に対するＣＤ３８発現の頻度。（Ｄ）ＨＰＶ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞に対するＣＤ３８発現の頻度。（Ｅ）ＣＤ８ Ｔ細胞総数に対するＮＫｇ２Ｄａ発現の頻度。（Ｆ）ＨＰＶ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞に対するＮＫｇ２Ｄａ発現の頻度。（Ｇ）ＣＤ８ Ｔ細胞総数に対するＴＣＦ－１発現の頻度。（Ｈ）ＨＰＶ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞に対するＴＣＦ－１発現の頻度。（Ｉ）ＨＰＶ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞におけるＰＤ－１、グランザイムＢ、及びＴＣＦ－１の共発現。 図８Ｅ－Ｈは、実施例３において、（Ａ）ＣＤ８ Ｔ細胞の総数に対する、及び（Ｂ）ＨＰＶ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞に対する、活性マーカー及び疲弊マーカーの発現をフローサイトメトリーによって測定した。（Ｃ）ＣＤ８ Ｔ細胞総数に対するＣＤ３８発現の頻度。（Ｄ）ＨＰＶ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞に対するＣＤ３８発現の頻度。（Ｅ）ＣＤ８ Ｔ細胞総数に対するＮＫｇ２Ｄａ発現の頻度。（Ｆ）ＨＰＶ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞に対するＮＫｇ２Ｄａ発現の頻度。（Ｇ）ＣＤ８ Ｔ細胞総数に対するＴＣＦ－１発現の頻度。（Ｈ）ＨＰＶ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞に対するＴＣＦ－１発現の頻度。（Ｉ）ＨＰＶ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞におけるＰＤ－１、グランザイムＢ、及びＴＣＦ－１の共発現。 図８Ｉは、実施例３において、（Ａ）ＣＤ８ Ｔ細胞の総数に対する、及び（Ｂ）ＨＰＶ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞に対する、活性マーカー及び疲弊マーカーの発現をフローサイトメトリーによって測定した。（Ｃ）ＣＤ８ Ｔ細胞総数に対するＣＤ３８発現の頻度。（Ｄ）ＨＰＶ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞に対するＣＤ３８発現の頻度。（Ｅ）ＣＤ８ Ｔ細胞総数に対するＮＫｇ２Ｄａ発現の頻度。（Ｆ）ＨＰＶ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞に対するＮＫｇ２Ｄａ発現の頻度。（Ｇ）ＣＤ８ Ｔ細胞総数に対するＴＣＦ－１発現の頻度。（Ｈ）ＨＰＶ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞に対するＴＣＦ－１発現の頻度。（Ｉ）ＨＰＶ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞におけるＰＤ－１、グランザイムＢ、及びＴＣＦ－１の共発現。 図９は、実施例３において、ＴＣ－１担癌マウスにおける循環ＨＰＶ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞の表現型、即ち、フローサイトメトリーで測定された、循環ＨＰＶ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞に対する活性／疲弊マーカーを示す。 図１０Ａ－Ｆは、実施例４において、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体（Ｋ）と、ＳＴＩＮＧアゴニスト（ＳＴＩＮＧａ）との組合せ投与が、ＴＣ－１モデルにおける腫瘍内ＣＤ４ Ｔ細胞を調節することを示す。Ｃ５７ＢＬ／６マウスの背中に、１０５個のＴＣ－１細胞を移植した。腫瘍が可視化された場合、１週間間隔で、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体（Ｋ）、ＳＴＩＮＧアゴニスト（ＳＴＩＮＧａ）、又は上記２つの組合せの２回の投与により、マウスを処置した。最後の処置から１週間後、マウスを殺処分し、血液及び腫瘍を採取し、ＣＤ４ Ｔ細胞の存在及び表現型をＦＡＣＳ染色で分析した。（Ａ）腫瘍浸潤性白血球中の全ＣＤ４ Ｔ細胞の頻度。（Ｂ）全ＣＤ４ Ｔ細胞の総数。（Ｃ）腫瘍浸潤性白血球中のＴｒｅｇ ＣＤ４ Ｔ細胞のの頻度。（Ｄ）Ｔｒｅｇ ＣＤ４ Ｔ細胞の総数。（Ｅ）腫瘍浸潤性ＣＤ８ Ｔ細胞とＣＤ４ Ｔ細胞総数との比。（Ｆ）腫瘍浸潤性ＣＤ８ Ｔ細胞とＴｒｅｇ ＣＤ４ Ｔ細胞との比。（Ｇ）腫瘍浸潤性ＣＤ４ Ｔ細胞中のＴｒｅｇ及び非Ｔｒｅｇの頻度。（Ｈ）腫瘍浸潤性ＣＤ４ Ｔ細胞中のＴｈ１の頻度。（Ｉ）腫瘍浸潤性ＣＤ４ Ｔ細胞中のＴｈ２の頻度。（Ｊ）腫瘍浸潤性ＣＤ４ Ｔ細胞中のＴｈ１とＴｈ２との比。（Ｋ）腫瘍浸潤性ＣＤ４ Ｔ細胞中のＴｈ１７の頻度。（Ｌ）腫瘍浸潤性ＣＤ４５＋細胞をＨＰＶペプチドをロードしたＢＭＤＣと共にエクスビボで６時間共培養した。抗原特異的サイトカイン産生を細胞内染色で測定し、ＣＤ４ Ｔ細胞内のサイトカイン産生の頻度を示す。 図１０Ｇ－Ｉは、実施例４において、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体（Ｋ）と、ＳＴＩＮＧアゴニスト（ＳＴＩＮＧａ）との組合せ投与が、ＴＣ－１モデルにおける腫瘍内ＣＤ４ Ｔ細胞を調節することを示す。Ｃ５７ＢＬ／６マウスの背中に、１０５個のＴＣ－１細胞を移植した。腫瘍が可視化された場合、１週間間隔で、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体（Ｋ）、ＳＴＩＮＧアゴニスト（ＳＴＩＮＧａ）、又は上記２つの組合せの２回の投与により、マウスを処置した。最後の処置から１週間後、マウスを殺処分し、血液及び腫瘍を採取し、ＣＤ４ Ｔ細胞の存在及び表現型をＦＡＣＳ染色で分析した。（Ａ）腫瘍浸潤性白血球中の全ＣＤ４ Ｔ細胞の頻度。（Ｂ）全ＣＤ４ Ｔ細胞の総数。（Ｃ）腫瘍浸潤性白血球中のＴｒｅｇ ＣＤ４ Ｔ細胞のの頻度。（Ｄ）Ｔｒｅｇ ＣＤ４ Ｔ細胞の総数。（Ｅ）腫瘍浸潤性ＣＤ８ Ｔ細胞とＣＤ４ Ｔ細胞総数との比。（Ｆ）腫瘍浸潤性ＣＤ８ Ｔ細胞とＴｒｅｇ ＣＤ４ Ｔ細胞との比。（Ｇ）腫瘍浸潤性ＣＤ４ Ｔ細胞中のＴｒｅｇ及び非Ｔｒｅｇの頻度。（Ｈ）腫瘍浸潤性ＣＤ４ Ｔ細胞中のＴｈ１の頻度。（Ｉ）腫瘍浸潤性ＣＤ４ Ｔ細胞中のＴｈ２の頻度。（Ｊ）腫瘍浸潤性ＣＤ４ Ｔ細胞中のＴｈ１とＴｈ２との比。（Ｋ）腫瘍浸潤性ＣＤ４ Ｔ細胞中のＴｈ１７の頻度。（Ｌ）腫瘍浸潤性ＣＤ４５＋細胞をＨＰＶペプチドをロードしたＢＭＤＣと共にエクスビボで６時間共培養した。抗原特異的サイトカイン産生を細胞内染色で測定し、ＣＤ４ Ｔ細胞内のサイトカイン産生の頻度を示す。 図１０Ｊ－Ｌは、実施例４において、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体（Ｋ）と、ＳＴＩＮＧアゴニスト（ＳＴＩＮＧａ）との組合せ投与が、ＴＣ－１モデルにおける腫瘍内ＣＤ４ Ｔ細胞を調節することを示す。Ｃ５７ＢＬ／６マウスの背中に、１０５個のＴＣ－１細胞を移植した。腫瘍が可視化された場合、１週間間隔で、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体（Ｋ）、ＳＴＩＮＧアゴニスト（ＳＴＩＮＧａ）、又は上記２つの組合せの２回の投与により、マウスを処置した。最後の処置から１週間後、マウスを殺処分し、血液及び腫瘍を採取し、ＣＤ４ Ｔ細胞の存在及び表現型をＦＡＣＳ染色で分析した。（Ａ）腫瘍浸潤性白血球中の全ＣＤ４ Ｔ細胞の頻度。（Ｂ）全ＣＤ４ Ｔ細胞の総数。（Ｃ）腫瘍浸潤性白血球中のＴｒｅｇ ＣＤ４ Ｔ細胞のの頻度。（Ｄ）Ｔｒｅｇ ＣＤ４ Ｔ細胞の総数。（Ｅ）腫瘍浸潤性ＣＤ８ Ｔ細胞とＣＤ４ Ｔ細胞総数との比。（Ｆ）腫瘍浸潤性ＣＤ８ Ｔ細胞とＴｒｅｇ ＣＤ４ Ｔ細胞との比。（Ｇ）腫瘍浸潤性ＣＤ４ Ｔ細胞中のＴｒｅｇ及び非Ｔｒｅｇの頻度。（Ｈ）腫瘍浸潤性ＣＤ４ Ｔ細胞中のＴｈ１の頻度。（Ｉ）腫瘍浸潤性ＣＤ４ Ｔ細胞中のＴｈ２の頻度。（Ｊ）腫瘍浸潤性ＣＤ４ Ｔ細胞中のＴｈ１とＴｈ２との比。（Ｋ）腫瘍浸潤性ＣＤ４ Ｔ細胞中のＴｈ１７の頻度。（Ｌ）腫瘍浸潤性ＣＤ４５＋細胞をＨＰＶペプチドをロードしたＢＭＤＣと共にエクスビボで６時間共培養した。抗原特異的サイトカイン産生を細胞内染色で測定し、ＣＤ４ Ｔ細胞内のサイトカイン産生の頻度を示す。 図１１Ａは、実施例５において、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体（Ｋ）と、ＳＴＩＮＧアゴニスト（ＳＴＩＮＧａ）との組合せ投与が、腫瘍微小環境（ＴＭＥ）を調節することを示す。Ｃ５７ＢＬ／６マウスの背中に、１０５個のＴＣ－１細胞を移植した。腫瘍が可視化された場合、１週間間隔で、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体（Ｋ）、ＳＴＩＮＧアゴニスト（ＳＴＩＮＧａ）、又は上記２つの組合せの２回の投与により、マウスを処置した。最後の処置から１週間後、マウスを殺処分し、腫瘍を採取し、腫瘍微小環境をＦＡＣＳ染色により分析した。（Ａ）ＣＤ４５＋腫瘍浸潤性細胞中の様々な細胞集団の割合。各丸は、ＣＤ４５＋集団の１％を示す。（Ｂ）様々な樹状細胞集団の割合。（Ｃ）ＣＤ４５＋腫瘍浸潤性細胞中の１型腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）の割合。（Ｄ）ＣＤ４５＋腫瘍浸潤性細胞中の２型腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）の割合。（Ｅ）ＴＡＭ１とＴＡＭ２との比。（Ｆ）ＣＤ４５＋腫瘍浸潤性細胞中の単球性骨髄由来サプレッサー細胞の割合。（Ｇ）ＣＤ４５＋腫瘍浸潤性細胞中の顆粒球性ＭＤＳＣの割合。（Ｈ）ＣＤ４５＋腫瘍浸潤性細胞中の好中球の割合。 図１１Ｂ－Ｄは、実施例５において、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体（Ｋ）と、ＳＴＩＮＧアゴニスト（ＳＴＩＮＧａ）との組合せ投与が、腫瘍微小環境（ＴＭＥ）を調節することを示す。Ｃ５７ＢＬ／６マウスの背中に、１０５個のＴＣ－１細胞を移植した。腫瘍が可視化された場合、１週間間隔で、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体（Ｋ）、ＳＴＩＮＧアゴニスト（ＳＴＩＮＧａ）、又は上記２つの組合せの２回の投与により、マウスを処置した。最後の処置から１週間後、マウスを殺処分し、腫瘍を採取し、腫瘍微小環境をＦＡＣＳ染色により分析した。（Ａ）ＣＤ４５＋腫瘍浸潤性細胞中の様々な細胞集団の割合。各丸は、ＣＤ４５＋集団の１％を示す。（Ｂ）様々な樹状細胞集団の割合。（Ｃ）ＣＤ４５＋腫瘍浸潤性細胞中の１型腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）の割合。（Ｄ）ＣＤ４５＋腫瘍浸潤性細胞中の２型腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）の割合。（Ｅ）ＴＡＭ１とＴＡＭ２との比。（Ｆ）ＣＤ４５＋腫瘍浸潤性細胞中の単球性骨髄由来サプレッサー細胞の割合。（Ｇ）ＣＤ４５＋腫瘍浸潤性細胞中の顆粒球性ＭＤＳＣの割合。（Ｈ）ＣＤ４５＋腫瘍浸潤性細胞中の好中球の割合。 図１１Ｅ－Ｈは、実施例５において、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体（Ｋ）と、ＳＴＩＮＧアゴニスト（ＳＴＩＮＧａ）との組合せ投与が、腫瘍微小環境（ＴＭＥ）を調節することを示す。Ｃ５７ＢＬ／６マウスの背中に、１０５個のＴＣ－１細胞を移植した。腫瘍が可視化された場合、１週間間隔で、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体（Ｋ）、ＳＴＩＮＧアゴニスト（ＳＴＩＮＧａ）、又は上記２つの組合せの２回の投与により、マウスを処置した。最後の処置から１週間後、マウスを殺処分し、腫瘍を採取し、腫瘍微小環境をＦＡＣＳ染色により分析した。（Ａ）ＣＤ４５＋腫瘍浸潤性細胞中の様々な細胞集団の割合。各丸は、ＣＤ４５＋集団の１％を示す。（Ｂ）様々な樹状細胞集団の割合。（Ｃ）ＣＤ４５＋腫瘍浸潤性細胞中の１型腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）の割合。（Ｄ）ＣＤ４５＋腫瘍浸潤性細胞中の２型腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）の割合。（Ｅ）ＴＡＭ１とＴＡＭ２との比。（Ｆ）ＣＤ４５＋腫瘍浸潤性細胞中の単球性骨髄由来サプレッサー細胞の割合。（Ｇ）ＣＤ４５＋腫瘍浸潤性細胞中の顆粒球性ＭＤＳＣの割合。（Ｈ）ＣＤ４５＋腫瘍浸潤性細胞中の好中球の割合。 図１２Ａ－Ｆは、実施例６において、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体（Ｋ）と、ＳＴＩＮＧアゴニスト（ＳＴＩＮＧａ）との組合せ投与が、ＰＤ－Ｌ１及びＭＨＣ－Ｉの腫瘍内発現を調節することを示す。Ｃ５７ＢＬ／６マウスの背中に、１０５個のＴＣ－１細胞を移植した。腫瘍が可視化された場合、１週間間隔で、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体（Ｋ）、ＳＴＩＮＧアゴニスト（ＳＴＩＮＧａ）、又は上記２つの組合せの２回の投与により、マウスを処置した。最後の処置から１週間後、マウスを殺処分し、腫瘍を採取し、腫瘍微小環境をＦＡＣＳ染色により分析した。（Ａ）ＣＤ４５－におけるＰＤ－Ｌ１の発現レベル（平均ＭＦＩ）。（Ｂ）ＣＤ４５＋におけるＰＤ－Ｌ１の発現レベル（平均ＭＦＩ）。（Ｃ）浸潤性ＴＡＭ１中のＰＤ－Ｌ１（％）。（Ｄ）浸潤性ＴＡＭ２中のＰＤ－Ｌ１（％）。（Ｅ）ＣＤ４５－腫瘍浸潤性細胞におけるＨ２－Ｋｂの発現レベル。（Ｆ）Ｄ４５－腫瘍浸潤性細胞におけるＨ２－Ｄｂの発現レベル。（Ｇ）ＣＤ１１ｂ＋細胞中のＭＨＣ－ＩＩｈｉの発現レベル。（Ｈ）ＣＤ１１ｂ＋細胞中のＭＨＣ－ＩＩｈｉの頻度。２つの独立した実験のプールを示す（ｎ＝７）。マン・ホイットニーの検定＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１ 図１２Ｇ－Ｈは、実施例６において、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体（Ｋ）と、ＳＴＩＮＧアゴニスト（ＳＴＩＮＧａ）との組合せ投与が、ＰＤ－Ｌ１及びＭＨＣ－Ｉの腫瘍内発現を調節することを示す。Ｃ５７ＢＬ／６マウスの背中に、１０５個のＴＣ－１細胞を移植した。腫瘍が可視化された場合、１週間間隔で、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体（Ｋ）、ＳＴＩＮＧアゴニスト（ＳＴＩＮＧａ）、又は上記２つの組合せの２回の投与により、マウスを処置した。最後の処置から１週間後、マウスを殺処分し、腫瘍を採取し、腫瘍微小環境をＦＡＣＳ染色により分析した。（Ａ）ＣＤ４５－におけるＰＤ－Ｌ１の発現レベル（平均ＭＦＩ）。（Ｂ）ＣＤ４５＋におけるＰＤ－Ｌ１の発現レベル（平均ＭＦＩ）。（Ｃ）浸潤性ＴＡＭ１中のＰＤ－Ｌ１（％）。（Ｄ）浸潤性ＴＡＭ２中のＰＤ－Ｌ１（％）。（Ｅ）ＣＤ４５－腫瘍浸潤性細胞におけるＨ２－Ｋｂの発現レベル。（Ｆ）Ｄ４５－腫瘍浸潤性細胞におけるＨ２－Ｄｂの発現レベル。（Ｇ）ＣＤ１１ｂ＋細胞中のＭＨＣ－ＩＩｈｉの発現レベル。（Ｈ）ＣＤ１１ｂ＋細胞中のＭＨＣ－ＩＩｈｉの頻度。２つの独立した実験のプールを示す（ｎ＝７）。マン・ホイットニーの検定＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１ 図１３は、実施例７において、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体（Ｋ）と、ＳＴＩＮＧアゴニスト（ＳＴＩＮＧａ）との組合せ投与の抗腫瘍効果を示す。１０５個のＴＣ－１細胞（Ａ～Ｂ）をＣ５７ＢＬ／６マウスの背中に移植した。腫瘍が可視化された場合、一週間間隔でマウスを２回処置し、腫瘍増殖（Ａ）及びマウス生存率（Ｂ）を監視した。 図１４は、実施例８において、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体（Ｋ）と、ＳＴＩＮＧアゴニスト（ＳＴＩＮＧａ２）との組合せ投与の抗腫瘍効果を示す。Ｃ５７ＢＬ／６マウスの背中に、１０５個のＴＣ－１細胞を移植した。腫瘍が可視化された場合、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体（Ｋ）を用いて、一週間間隔で２回マウスを処置した、及び／又は６日目、１０日目、１３日目、１７日目に、ＳＴＩＮＧアゴニスト（ＳＴＩＮＧａ２）を全身投与してマウスを処置した。腫瘍増殖（Ａ）及びマウス生存率（Ｂ）を監視した。 図１５は、実施例８において、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体（Ｋ）と、ＳＴＩＮＧアゴニスト（ＳＴＩＮＧａ２）との組合せ投与が、ＣＤ８ Ｔ細胞末梢応答を調節することを示す。２回目のワクチン接種の１週間後に、多量体染色によって測定された循環ＨＰＶ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞は、（Ａ）ＣＤ８＋Ｔ細胞内（％）及び（Ｂ）ＨＰＶ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞の数／血液（ｍｌ）として、示される。 図１６Ａは、実施例９において、マウスモデルにおいて試験されたＡＴＰ１２８免疫原性を示し、ＳＴＩＮＧａとＡＴＰ１２８（Ｋ）との組合せは、ＣＥＡ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞応答を誘発することを示す。雌Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスの背面に、５×１０５個のＭＣ３８－ＣＥＡ腫瘍細胞を皮下移植した。腫瘍移植後６日目と１３日目に、１０ｎｍｏｌのＡＴＰ１２８、２５μｇのＳＴＩＮＧアゴニスト（ＡＤＵ－Ｓ１００）、又は上記２つの組合せをマウスにワクチン接種した。ＡＴＰ１２８ワクチン及びＳＴＩＮＧアゴニストの両方を尾の付け根に皮下注射した。２回目のワクチン接種の１週間後に、マウスの血液を尾静脈から回収し、カスタム設計された多量体を使用して、ＣＥＡ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞の頻度と総数をフローサイトメトリーで分析した。Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおけるＣＥＡからの特異的エピトープを予測して設計した。ＡＴＰ１２８ワクチン接種は、ＣＥＡ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞を誘発し、カスタムのデキストラマー染色により監視した（Ａ）。２回目のワクチン接種から１週間後に、カスタムのデキストラマー染色を行った。ＳＴＩＮＧａとＡＴＰ１２８との組合せは、ＣＥＡ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞応答を誘発する（Ｂ、Ｃ）。 図１６Ｂは、実施例９において、マウスモデルにおいて試験されたＡＴＰ１２８免疫原性を示し、ＳＴＩＮＧａとＡＴＰ１２８（Ｋ）との組合せは、ＣＥＡ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞応答を誘発することを示す。雌Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスの背面に、５×１０５個のＭＣ３８－ＣＥＡ腫瘍細胞を皮下移植した。腫瘍移植後６日目と１３日目に、１０ｎｍｏｌのＡＴＰ１２８、２５μｇのＳＴＩＮＧアゴニスト（ＡＤＵ－Ｓ１００）、又は上記２つの組合せをマウスにワクチン接種した。ＡＴＰ１２８ワクチン及びＳＴＩＮＧアゴニストの両方を尾の付け根に皮下注射した。２回目のワクチン接種の１週間後に、マウスの血液を尾静脈から回収し、カスタム設計された多量体を使用して、ＣＥＡ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞の頻度と総数をフローサイトメトリーで分析した。Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおけるＣＥＡからの特異的エピトープを予測して設計した。ＡＴＰ１２８ワクチン接種は、ＣＥＡ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞を誘発し、カスタムのデキストラマー染色により監視した（Ａ）。２回目のワクチン接種から１週間後に、カスタムのデキストラマー染色を行った。ＳＴＩＮＧａとＡＴＰ１２８との組合せは、ＣＥＡ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞応答を誘発する（Ｂ、Ｃ）。 図１６Ｃは、実施例９において、マウスモデルにおいて試験されたＡＴＰ１２８免疫原性を示し、ＳＴＩＮＧａとＡＴＰ１２８（Ｋ）との組合せは、ＣＥＡ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞応答を誘発することを示す。雌Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスの背面に、５×１０５個のＭＣ３８－ＣＥＡ腫瘍細胞を皮下移植した。腫瘍移植後６日目と１３日目に、１０ｎｍｏｌのＡＴＰ１２８、２５μｇのＳＴＩＮＧアゴニスト（ＡＤＵ－Ｓ１００）、又は上記２つの組合せをマウスにワクチン接種した。ＡＴＰ１２８ワクチン及びＳＴＩＮＧアゴニストの両方を尾の付け根に皮下注射した。２回目のワクチン接種の１週間後に、マウスの血液を尾静脈から回収し、カスタム設計された多量体を使用して、ＣＥＡ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞の頻度と総数をフローサイトメトリーで分析した。Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおけるＣＥＡからの特異的エピトープを予測して設計した。ＡＴＰ１２８ワクチン接種は、ＣＥＡ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞を誘発し、カスタムのデキストラマー染色により監視した（Ａ）。２回目のワクチン接種から１週間後に、カスタムのデキストラマー染色を行った。ＳＴＩＮＧａとＡＴＰ１２８との組合せは、ＣＥＡ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞応答を誘発する（Ｂ、Ｃ）。 図１７Ａ－Ｂは、実施例１０において、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体（Ｋ）と、ＳＴＩＮＧアゴニスト（ＳＴＩＮＧａ）との組合せ投与が、腫瘍がないマウスにおいてＣＤ８ Ｔ細胞末梢応答及びＣＤ４ Ｔ細胞末梢応答の機能性を強化することを示す。（Ａ）２週間間隔で、Ｚ１３Ｍａｄ３９Ａｎａｘａワクチン、ＳＴＩＮＧアゴニスト、又は上記２つの組合せの２回の投与で、Ｃ５７ＢＬ／６マウスを処置した。２回目のワクチン接種の１週間後に、循環ＳＩＩＮＦＥＫＬ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞（左）及び脾臓のＳＩＩＮＦＥＫＬ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞（右）を多量体染色により測定した。（Ｂ）ＳＩＩＮＦＥＫＬ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞のＴＣＲ結合活性をエクスビボＥＬＩｓｐｏｔにより測定した（上部グラフ）。ＳＩＩＮＦＥＫＬペプチドによるエクスビボ刺激後、細胞内染色によってＣＤ８ Ｔ細胞による抗原特異的サイトカイン産生を測定した（下部グラフ）。（Ｃ）２回目のワクチン接種の１週間後に、脾臓のＣＤ４ Ｔ細胞間のＴｒｅｇ（ＦｏｘＰ３＋）、Ｔｈ１（Ｔ－ｂｅｔ＋）、Ｔｈ２（ＧＡＴＡ－３＋）の頻度、及びＴｈ１／Ｔｈ２比をフローサイトメトリーで測定した。ＩＳＱＡＶＨＡＡＨＡＥＩＮＥＡＧＲ（ＯＶＡ－ＣＤ４）ペプチドによるエクスビボ刺激後、細胞内染色によってＣＤ４ Ｔ細胞による抗原特異的サイトカイン産生を測定した。１つの代表的な実験を示す（ｎ＝５）、マン・ホイットニーの検定又は２元配置分散分析（Ｔｗｏ－ｗａｙ ＡＮＯＶＡ）＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１ 図１７Ｃは、実施例１０において、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体（Ｋ）と、ＳＴＩＮＧアゴニスト（ＳＴＩＮＧａ）との組合せ投与が、腫瘍がないマウスにおいてＣＤ８ Ｔ細胞末梢応答及びＣＤ４ Ｔ細胞末梢応答の機能性を強化することを示す。（Ａ）２週間間隔で、Ｚ１３Ｍａｄ３９Ａｎａｘａワクチン、ＳＴＩＮＧアゴニスト、又は上記２つの組合せの２回の投与で、Ｃ５７ＢＬ／６マウスを処置した。２回目のワクチン接種の１週間後に、循環ＳＩＩＮＦＥＫＬ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞（左）及び脾臓のＳＩＩＮＦＥＫＬ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞（右）を多量体染色により測定した。（Ｂ）ＳＩＩＮＦＥＫＬ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞のＴＣＲ結合活性をエクスビボＥＬＩｓｐｏｔにより測定した（上部グラフ）。ＳＩＩＮＦＥＫＬペプチドによるエクスビボ刺激後、細胞内染色によってＣＤ８ Ｔ細胞による抗原特異的サイトカイン産生を測定した（下部グラフ）。（Ｃ）２回目のワクチン接種の１週間後に、脾臓のＣＤ４ Ｔ細胞間のＴｒｅｇ（ＦｏｘＰ３＋）、Ｔｈ１（Ｔ－ｂｅｔ＋）、Ｔｈ２（ＧＡＴＡ－３＋）の頻度、及びＴｈ１／Ｔｈ２比をフローサイトメトリーで測定した。ＩＳＱＡＶＨＡＡＨＡＥＩＮＥＡＧＲ（ＯＶＡ－ＣＤ４）ペプチドによるエクスビボ刺激後、細胞内染色によってＣＤ４ Ｔ細胞による抗原特異的サイトカイン産生を測定した。１つの代表的な実験を示す（ｎ＝５）、マン・ホイットニーの検定又は２元配置分散分析（Ｔｗｏ－ｗａｙ ＡＮＯＶＡ）＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１ 図１８Ａ－Ｂは、実施例１１において、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体（Ｋ）とＳＴＩＮＧアゴニスト（ＳＴＩＮＧａ）との組合せが、Ｂ１６－ＯＶＡ腫瘍増殖を阻害することを示す。Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、１０５個のＢ１６－ＯＶＡ細胞を静脈内注射をした。腫瘍注射後の３日後及び１０日後に、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体（Ｋ）、ＳＴＩＮＧアゴニスト（ＳＴＩＮＧａ）、又は上記２つの組合せの２回の投与で、マウスを処置した。２０日目に、肺を灌流して血液を除去し、腫瘍転移の数をカウントし、肺浸潤リンパ球（ＬＩＬ）を分析した。（Ａ）ワクチン接種スケジュール。（Ｂ）肺当たりの転移性結節の数及び代表的な写真。（Ｃ）腫瘍浸潤性白血球間のＳＩＩＮＦＥＫＬ（ＯＶＡ）特異的ＣＤ８ Ｔ細胞の頻度、グランザイムＢの発現をフローサイトメトリーで測定した。Ｇｏｌｇｉ阻害剤の存在下で、ＳＩＩＮＦＥＫＬペプチド（配列番号５７）によるエクスビボ刺激後、ＣＤ８ Ｔ細胞による抗原特異的サイトカイン産生を細胞内染色により測定した。抗原特異的サイトカイン産生を細胞内染色によって測定し、ＣＤ８ Ｔ細胞内のサイトカイン産生の頻度を示す。（Ｄ）Ｔｒｅｇ（ＦｏｘＰ３＋）の頻度及びＴｈ１／Ｔｈ２比をフローサイトメトリーで測定した。Ｇｏｌｇｉ阻害剤の存在下で、ＩＳＱＡＶＨＡＡＨＡＥＩＮＥＡＧＲ（ＯＶＡ－ＣＤ４）ペプチド（配列番号５９）によるエクスビボ刺激後、ＣＤ４ Ｔ細胞による抗原特異的サイトカイン産生を細胞内染色によって測定した。抗原特異的サイトカイン産生を細胞内染色で測定し、ＣＤ４ Ｔ細胞内のサイトカイン産生の頻度を示す。２つの独立した実験のプール（Ｂ）又は１つの代表的な実験（Ｃ～Ｄ）を示す（ｎ≧７）。マン・ホイットニーの検定＊ｐ＜０．０５，＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１ 図１８Ｃは、実施例１１において、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体（Ｋ）とＳＴＩＮＧアゴニスト（ＳＴＩＮＧａ）との組合せが、Ｂ１６－ＯＶＡ腫瘍増殖を阻害することを示す。Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、１０５個のＢ１６－ＯＶＡ細胞を静脈内注射をした。腫瘍注射後の３日後及び１０日後に、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体（Ｋ）、ＳＴＩＮＧアゴニスト（ＳＴＩＮＧａ）、又は上記２つの組合せの２回の投与で、マウスを処置した。２０日目に、肺を灌流して血液を除去し、腫瘍転移の数をカウントし、肺浸潤リンパ球（ＬＩＬ）を分析した。（Ａ）ワクチン接種スケジュール。（Ｂ）肺当たりの転移性結節の数及び代表的な写真。（Ｃ）腫瘍浸潤性白血球間のＳＩＩＮＦＥＫＬ（ＯＶＡ）特異的ＣＤ８ Ｔ細胞の頻度、グランザイムＢの発現をフローサイトメトリーで測定した。Ｇｏｌｇｉ阻害剤の存在下で、ＳＩＩＮＦＥＫＬペプチド（配列番号５７）によるエクスビボ刺激後、ＣＤ８ Ｔ細胞による抗原特異的サイトカイン産生を細胞内染色により測定した。抗原特異的サイトカイン産生を細胞内染色によって測定し、ＣＤ８ Ｔ細胞内のサイトカイン産生の頻度を示す。（Ｄ）Ｔｒｅｇ（ＦｏｘＰ３＋）の頻度及びＴｈ１／Ｔｈ２比をフローサイトメトリーで測定した。Ｇｏｌｇｉ阻害剤の存在下で、ＩＳＱＡＶＨＡＡＨＡＥＩＮＥＡＧＲ（ＯＶＡ－ＣＤ４）ペプチド（配列番号５９）によるエクスビボ刺激後、ＣＤ４ Ｔ細胞による抗原特異的サイトカイン産生を細胞内染色によって測定した。抗原特異的サイトカイン産生を細胞内染色で測定し、ＣＤ４ Ｔ細胞内のサイトカイン産生の頻度を示す。２つの独立した実験のプール（Ｂ）又は１つの代表的な実験（Ｃ～Ｄ）を示す（ｎ≧７）。マン・ホイットニーの検定＊ｐ＜０．０５，＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１ 図１８Ｄは、実施例１１において、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体（Ｋ）とＳＴＩＮＧアゴニスト（ＳＴＩＮＧａ）との組合せが、Ｂ１６－ＯＶＡ腫瘍増殖を阻害することを示す。Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、１０５個のＢ１６－ＯＶＡ細胞を静脈内注射をした。腫瘍注射後の３日後及び１０日後に、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体（Ｋ）、ＳＴＩＮＧアゴニスト（ＳＴＩＮＧａ）、又は上記２つの組合せの２回の投与で、マウスを処置した。２０日目に、肺を灌流して血液を除去し、腫瘍転移の数をカウントし、肺浸潤リンパ球（ＬＩＬ）を分析した。（Ａ）ワクチン接種スケジュール。（Ｂ）肺当たりの転移性結節の数及び代表的な写真。（Ｃ）腫瘍浸潤性白血球間のＳＩＩＮＦＥＫＬ（ＯＶＡ）特異的ＣＤ８ Ｔ細胞の頻度、グランザイムＢの発現をフローサイトメトリーで測定した。Ｇｏｌｇｉ阻害剤の存在下で、ＳＩＩＮＦＥＫＬペプチド（配列番号５７）によるエクスビボ刺激後、ＣＤ８ Ｔ細胞による抗原特異的サイトカイン産生を細胞内染色により測定した。抗原特異的サイトカイン産生を細胞内染色によって測定し、ＣＤ８ Ｔ細胞内のサイトカイン産生の頻度を示す。（Ｄ）Ｔｒｅｇ（ＦｏｘＰ３＋）の頻度及びＴｈ１／Ｔｈ２比をフローサイトメトリーで測定した。Ｇｏｌｇｉ阻害剤の存在下で、ＩＳＱＡＶＨＡＡＨＡＥＩＮＥＡＧＲ（ＯＶＡ－ＣＤ４）ペプチド（配列番号５９）によるエクスビボ刺激後、ＣＤ４ Ｔ細胞による抗原特異的サイトカイン産生を細胞内染色によって測定した。抗原特異的サイトカイン産生を細胞内染色で測定し、ＣＤ４ Ｔ細胞内のサイトカイン産生の頻度を示す。２つの独立した実験のプール（Ｂ）又は１つの代表的な実験（Ｃ～Ｄ）を示す（ｎ≧７）。マン・ホイットニーの検定＊ｐ＜０．０５，＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１ 図１９Ａ－Ｂは、実施例１１において、Ｂ１６－ＯＶＡ担癌マウスにおける末梢性抗原特異的Ｔ細胞の表現型及び機能性を示す。最後の処置の１週間後、マウスの血液及び脾臓における抗原特異的ＣＤ８ Ｔ細胞応答を分析した。（Ａ）循環ＳＩＩＮＦＥＫＬ（ＯＶＡ）特異的ＣＤ８ Ｔ細胞の頻度及び数をフローサイトメトリーで測定した。（Ｂ）ＳＩＩＮＦＥＫＬ（ＯＶＡ）ペプチド（配列番号５７）を用いて（グランザイムＢでは用いない）、脾細胞をエクスビボで刺激し、ＣＤ８ Ｔ細胞によるサイトカイン及びグランザイムＢ産生を細胞内染色で測定した。（Ｃ）ＩＳＱＡＶＨＡＡＨＡＥＩＮＥＡＧＲ（ＯＶＡ－ＣＤ４）ペプチド（配列番号５９）を用いて、脾細胞をエクスビボで刺激し、抗原特異的サイトカイン産生を細胞内染色で測定した。１つの代表的な実験を示す（ｎ＝７）。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１ 図１９Ｃは、実施例１１において、Ｂ１６－ＯＶＡ担癌マウスにおける末梢性抗原特異的Ｔ細胞の表現型及び機能性を示す。最後の処置の１週間後、マウスの血液及び脾臓における抗原特異的ＣＤ８ Ｔ細胞応答を分析した。（Ａ）循環ＳＩＩＮＦＥＫＬ（ＯＶＡ）特異的ＣＤ８ Ｔ細胞の頻度及び数をフローサイトメトリーで測定した。（Ｂ）ＳＩＩＮＦＥＫＬ（ＯＶＡ）ペプチド（配列番号５７）を用いて（グランザイムＢでは用いない）、脾細胞をエクスビボで刺激し、ＣＤ８ Ｔ細胞によるサイトカイン及びグランザイムＢ産生を細胞内染色で測定した。（Ｃ）ＩＳＱＡＶＨＡＡＨＡＥＩＮＥＡＧＲ（ＯＶＡ－ＣＤ４）ペプチド（配列番号５９）を用いて、脾細胞をエクスビボで刺激し、抗原特異的サイトカイン産生を細胞内染色で測定した。１つの代表的な実験を示す（ｎ＝７）。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１
以下では、本発明の様々な実施形態と態様を例示する具体例を示す。しかしながら、本発明は、本明細書に記載された特定の実施形態によって範囲が限定されるものではない。当業者が本発明をより明確に理解し実践できるように、以下の準備及び実施例を示す。しかしながら、本発明は、本発明の単一の態様の例示のみとして目的とする例示された実施形態によって範囲が限定されるものではなく、機能的に同等な方法は本発明の範囲内である。実際、本明細書に記載されたものに加えて本発明の様々な修正は、前述の説明、添付の図面、及び以下の実施例により、当業者に容易に明らかになるであろう。このような修正はいずれも、添付の特許請求の範囲に含まれる。
方法
マウス
雌のＣ５７ＢＬ／６ＪマウスをＣｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｌ’ａｒｂｒｅｓｌｅｓ、フランス）から購入した。使用された全ての動物は、実験時に生後６週～１０週であった。これらの研究は、動物保護に関するスイス連邦法に従って、機関及び州の獣医当局によって審査され、承認されている。
ワクチン
ワクチンコンストラクトは、Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔによって、社内で設計され大腸菌で産生された。ワクチンは、ワクチン緩衝剤で希釈して調製され、１００μｌの容量において１０ｎｍｏｌを皮下注射することによって投与された。Ｚ１３Ｍａｄ２５Ａｎａｘａ（配列番号５５）は、ＨＰＶ－１６に由来するＣＤ４及びＣＤ８エピトープを含み、ＴＣ－１腫瘍モデルで利用された。ＡＴＰ１２８（配列番号５４）は、ＣＥＡ、サバイビン、及びＡＳＣＬ２エピトープを含み、ＭＣ－３８ ＣＥＡ腫瘍モデルで利用された。
ＳＴＩＮＧアゴニスト
下記のＳＴＩＮＧアゴニスト：ＡＤＵ－Ｓ１００（Ａｄｕｒｏ；「ＳＴＩＮＧａ」とも呼ばれる）（実施例１～７、及び９）；及び異なるＳＴＩＮＧアゴニスト（「ＳＴＩＮＧａ２」とも呼ばれる）（実施例８）を使用した。
ＳＴＩＮＧａ（ＡＤＵ－Ｓ１００）は、以下の構造式（ＩＩＩ）を有する。
Figure 2023545178000067
ＳＴＩＮＧａ２は、以下の構造式Ｉａ．２を有する。
Figure 2023545178000068
ＡＤＵ－Ｓ１００（Ａｄｕｒｏ）をＤＭＳＯに再懸濁し、１×リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ、Ｇｉｂｃｏ）で希釈してから注射した。ＳＴＩＮＧａ２を１×リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ、Ｇｉｂｃｏ）に再懸濁してから注射した。
細胞株
ＨＰＶ１６ Ｅ６／Ｅ７及びｃ－Ｈ－ｒａｓ癌遺伝子をトランスフェクトした、肺上皮細胞由来の細胞株である、ＴＣ－１細胞を、１０％熱不活化ウシ胎仔血清（ＦＣＳ）、１００Ｕ／ｍｌペニシリン／ストレプトマイシン（Ｐ／Ｓ）、１ｍＭピルビン酸ナトリウム、ＭＥＭ ＮＥＡＡ、及び０．４ｍｇ／ｍｌジェネティシン（ｇｅｎｅｔｉｃｉｎ）Ｇ４１８を補充したＲＰＭＩ１６４０Ｇｌｕｔａｍａｘ（商標）で維持した。
ＭＣ－３８ Ｃ５７ＢＬ／６マウス結腸腺癌細胞株に、ヒト癌胎児性抗原（ＣＥＡ）遺伝子をコードするｃＤＮＡを含むレトロウイルスコンストラクトを形質導入した。ＭＣ－３８－ｃｅａ－１クローンによって発現されたＣＥＡは、天然ＣＥＡと同様の１８０ｋＤａの分子量を有していた。本明細書で使用される、このＭＣ－３８－ｃｅａ－１クローンは、細胞表面に高レベルのＣＥＡを発現する（Ｈａｎｄ ｅｔ ａｌ．１９９３，Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．３６：６５－７５）。ＭＣ－３８－ＣＥＡ－１細胞は、標準的な実験室技術を使用して、１０％高不活化ウシ胎児血清（Ｌｉｆｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を含むＤＭＥＭ培地１６４０Ｇｌｕｔａｍａｘ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）で培養された（ＭＣ－３８－ＣＥＡ－１腫瘍移植のための培養＿１９０１１５）。
Ｂ１６－ＯＶＡ細胞株は、Ｂｅｒｔｒａｎｄ Ｈｕａｒｄ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｇｒｅｎｏｂｌｅ－Ａｌｐｅｓ（フランス）より提供された。ＯＶＡをトランスフェクトした、マウスメラノーマ細胞由来の細胞株を、１０％熱不活化ウシ胎仔血清（ＦＣＳ）、１００Ｕ／ｍｌペニシリン／ストレプトマイシン（Ｐ／Ｓ）、１ｍＭピルビン酸ナトリウム、ＭＥＭ ＮＥＡＡ、及び１ｍｇ／ｍｌジェネティシンＧ４１８を補充したＲＰＭＩ １６４０Ｇｌｕｔａｍａｘ（商標）で維持した。
インビボ腫瘍実験
Ｃ５７ＢＬ／６マウスの背中に、１×１０５個のＴＣ－１腫瘍細胞を皮下移植し、腫瘍移植６日目に腫瘍サイズに応じてマウスを層別化した。又は、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスに１×１０５個のＢ１６－ＯＶＡ細胞を静脈内注射した。尾の付け根に、１０ｎｍｏｌのワクチンを皮下注射することにより、マウスを２回ワクチン接種した（腫瘍移植後６日目及び１３日目に）。

ワクチン接種と同時に、背下部の両側に、２５μｇのＳＴＩＮＧアゴニストを２×５０μｌの皮下注射で、マウスに投与した。又は、ワクチン接種と同時に、背下部の両側に、１０μｇのＳＴＩＮＧアゴニスト２を２×１００μｌの皮下注射で、マウスに投与した。
又は、雌のＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスの背中に、５×１０５個のＭＣ３８－ＣＥＡ 腫瘍細胞を皮下に移植し、尾の付け根で、１０ｎｍｏｌのワクチン、２５μｇのＳＴＩＮＧａ（ＡＤＵ－Ｓ１００）、又は上記２つの組合せの皮下注射により、２回（腫瘍移植後６日目及び１３日目に）ワクチン接種をした。
腫瘍の大きさはカリパスで測定し、腫瘍が１０００ｍｍ３の体積に達した時点でマウスを安楽死させた。腫瘍体積は、以下の式で計算された。
Ｖ＝長さ×長さ×幅×Ｐｉ／６
Ｂ１６－ＯＶＡ担癌マウスを２０日目に殺処分し、肺を生理食塩水で灌流し、肺転移の数をカウントした。
細胞調製
頸骨及び大腿骨から骨髄を抽出し、ＢＭＤＣ培地（１０％ＦＣＳ、１００Ｕ／ｍｌ Ｐ／Ｓ、５０μＭ β－メルカプトエタノール、１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、０．１１６ｍｇ／ｍｌのＬ－アルギニン、ＭＥＭ ＮＥＡＡ、及び１０ｎｇ／ｍｌのＧＭ－ＣＳＦで補充したＤＭＥＭ Ｇｌｕｔａｍａｘ）でＤＣを培養することにより、骨髄由来のＤＣ（ＢＭＤＣ）をＣ５７ＢＬ／６マウスから調製した。３７℃、５％ＣＯ２で３日後、半量の新鮮培地を添加した。６日目に浮遊細胞を回収し、ＢＭＤＣ培地に再懸濁し、別々に培養した。ＢＭＤＣは、９日目に回収し、エクスビボＴ細胞刺激に使用した。
移植後２０日目にＴＣ－１腫瘍を採取し、メーカーの指示に従ってＭｉｌｔｅｎｙｉ腫瘍単離キットを用いて腫瘍浸潤性白血球（ＴＩＬ）を精製した。簡単に説明すると、腫瘍組織を小さく切断し、腫瘍単離酵素（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）を含むＤＭＥＭ培地に再懸濁した。固形腫瘍プログラムを使用して加熱システム（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）を備えたＧｅｎｔｌｅ ＭＡＣＳで、腫瘍を消化した。冷たいＰＢＳ０．５％ＢＳＡ溶液を添加し、氷上で細胞を保持することにより、酵素による消化を止めた。消化された腫瘍は、残りの未消化組織を除去するために７０μｍに通した。製造業者のプロトコルに従って、ＣＤ４５ＴＩＬマイクロビーズ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）を使用して、ＣＤ４５＋細胞を精製した。精製したＣＤ４５＋細胞は、フローサイトメトリー染色又はエクスビボＴ細胞刺激に使用した。
Ｂ１６－ＯＶＡ担癌マウスを生理食塩水で灌流し、採取前に肺から血液を排除した。製造業者の指示に従い、Ｍｉｌｔｅｎｙｉのマウス腫瘍単離キットを使用して肺浸潤白血球（ＬＩＬ）を精製した。
フローサイトメトリー分析、エクスビボ刺激、又はＴＣＲ結合活性アッセイの前に、Ｆｉｃｏｌｌ－Ｐａｑｕｅ ｇｒａｄｉｅｎｔ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して、マウスから末梢血及び脾臓単核細胞懸濁液を単離した。
エクスビボＴ細胞再活性化
ＴＩＬ、ＬＩＬ、又は脾細胞を数え、条件ごとにそれぞれ１×１０５個の細胞又は２×１０６個の細胞をプレーティングした。Ｇｏｌｇｉ ｓｔｏｐ（ＢＤ ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）及び抗ＣＤ１０７ａの存在下で、ポジティブコントロールとしてＰＭＡ／イオノマイシン、又はネガティブコントロールとして刺激剤なしで、細胞をＨＰＶ－ＣＤ４、ＨＰＶ－ＣＤ８、ＯＶＡ－ＣＤ８、又はＯＶＡ－ＣＤ４エピトープペプチドと共に６時間培養した。洗浄後、細胞表面抗原のため及びｆｉｘａｂｌｅ ｖｉａｂｉｌｉｔｙ色素の染色をし、製造業者（ＢＤ ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）の指示に従って固定処理及び透過処理した後、細胞内サイトカインにおける細胞を染色した。
インビボ細胞傷害性アッセイ
未処置の脾細胞を採取し、ＨＰＶ－Ｅ７ ＣＤ８エピトープペプチド（配列番号５６）とともに、及びＨＰＶ－Ｅ７ ＣＤ８エピトープペプチド（配列番号５６）なしに、３７℃のＤＭＥＭ完全培地で、１．５時間培養した。その後、メーカーの指示に従って、ロードされた脾細胞及びロードされていない脾細胞をそれぞれｃｅｌｌ ｔｒａｃｅｒ ｖｉｏｌｅｔ（ＣＴＶ）又はＣＦＳＥ（いずれもＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃから）で染色した。次に、脾細胞を１：１の比率で混合し、合計５×１０６個の細胞を、予めワクチン接種されたマウスに静脈内注射によって移植した。細胞移植の２０時間後に、脾細胞を採取し、ＣＴＶ又はＣＦＳＥ染色細胞の生存をフローサイトメトリーによって評価した。抗原特異的死滅の割合は、以下の式で算出した。抗原特異的死滅（％）＝（１－（ワクチン接種のペプチド＋：ペプチド－比率／未処置のペプチド＋：ペプチド－比率））＊１００
エクスビボＴＣＲ結合活性アッセイ
２回目のワクチン接種の１週間後、脾臓を採取し、脾細胞を単離した（上記参照）。１×１０６細胞／ウェルをＦＮ－γＥＬＩｓｐｏｔプレートに播種し、ＲＡＨＹＮＩＶＴＦ（配列番号５６）又はＳＩＩＮＦＥＫＬ（配列番号５７）ペプチドの濃度を下げて一晩（Ｏ／Ｎ）刺激した。その後、製造業者の指示及び刺激ペプチドの最高濃度に対して計算された最大応答の割合に従って、ＥＬＩｓｐｏプレートを明らかにした。
抗体及びフローサイトメトリー
以下の抗体を使用した。ＣＤ４５（３０－Ｆ１１）、ＣＤ１１ｂ（Ｍ１／７０）、ＫＬＲＧ１（２Ｆ１）、ＣＤ１０３（Ｍ２９０）、ＮＫｇ２ａ（２０ｄ５）、Ｌｙ６Ｃ（ＡＬ－２１）、Ｌｙ６Ｇ（１Ａ８）、ＰＤ－Ｌ１（ＭＩＨ５）、Ｉ－Ａ／Ｉ－Ｅ（Ｍ５／１１４）、ＣＤ１１ｃ（ＨＬ３）、ＰＤＣＡ１（９２７）、ＣＤ６４（Ｘ５４－５／７．１）、Ｂ２２０（ＲＡ３－６Ｂ２）、ＣＤ２４（Ｍ１／６９）、ＣＤ４（ＧＫ１．５）、ＣＤ２５（３Ｃ７）、ＣＤ３（５００Ａ２）、ＮＫｐ４６（２９Ａ１．４）、ＴＮＦ－α（ＭＰ６－ＸＴ２２）、ＩＦＮ－γ（ＸＭＧ１．２）、Ｈ２－Ｋｂ（ＡＦ６－８８．５）、及びＨ２－Ｄｂ（２８－１４－８）は、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓから得た。Ｔｉｍ３（ＲＭＴ３－２３）、ＰＤ－１（２９Ｆ．１Ａ１２）、ＣＤ３８（９０）、Ｇｒ－１（ＲＢ６－８Ｃ５）、ＣＤ２０６（Ｃ０６８Ｃ２）、ＣＤ６８（ＦＡ－１１）は、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄから得た。Ｋｉ６７（ｓｏｌＡ１５）、ＦｏｘＰ３（ＦＪＫ－１６ｓ）、Ｔ－ｂｅｔ（４Ｂ１０）、ＧＡＴＡ－３（ＴＷＡＪ）、及びＲＯＲγｔ（ＡＦＫＪＳ－９）は、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃから得た。グランザイムＢ（ＲＥＡ２２６）は、Ｍｉｌｔｅｎｙｉから得た。ＣＤ８（ＫＴ１５）は、ＭＢＬから得た。死滅細胞は、ＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ Ｙｅｌｌｏｗ又はＡｑｕａ蛍光反応性染料（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で染色され、分析から除外した。マウスのＭＨＣ－ペプチド多量体は、Ｉｍｍｕｄｅｘ（コペンハーゲン、デンマーク）から得た。Ａｔｔｕｎｅ ＮｘＴフローサイトメーター（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）Ｋａｌｕｚａ（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）ソフトウェアを使用して、細胞を分析した。
血清インターフェロンαの定量
マウス尾静脈から血液を採取し、Ｓｔａｒｓｔｅｄｔ管を用いた遠心分離により血清を単離した。製造業者の推奨（ＰＢＬ Ａｓｓａｙ Ｓｃｉｅｎｃｅ）に従い、市販のＥＬＩＳＡキットを用いて、ＩＦＮ－αサイトカイン濃度を測定した。
統計分析
Ｐｒｉｓｍソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ）を用いて統計分析を行い、ｐ＜０．０５であれば統計的に有意であるとみなした。
実施例１：ＳＴＩＮＧアゴニストとワクチン複合体との組合せはＴ細胞応答を調節する
前臨床腫瘍モデルや進行中の臨床試験では、腫瘍微小環境（ＴＭＥ）を炎症させるために、通常、腫瘍内（ｉ．ｔ．）注射によって、ＳＴＩＮＧアゴニストを投与する。これに対して、本実験では、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及び少なくとも１つのＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体を組み合わせたＳＴＩＮＧアゴニストの全身投与を調査した。
組合せの免疫原性を評価するために、２週間間隔（０日目と１４日目）で２回、１０ｎｍｏｌのＺ１３Ｍａｄ２５Ａｎａｘａ（例示された細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）由来のＣＤ４及びＣＤ８エピトープ含有）の皮下注射によって、腫瘍がないＣ５７ＢＬ／６マウスにワクチン接種した。ワクチン接種とほぼ同時に、背下部の両側に、２×５０μｌ皮下注射によって、２５μｇのＳＴＩＮＧアゴニストＡＤＵ－Ｓ１００をマウスに投与した。最初のワクチン接種の４時間後と２４時間後に血清を回収し、ＥＬＩＳＡでＩＦＮ－α濃度を測定した。２１日目に全血を回収し、多量体フローサイトメトリー染色による抗原特異的ＣＤ８ Ｔ細胞の測定に使用した。同時に、脾臓を採取し、エクスビボ刺激及び細胞内サイトカイン産生に使用した脾細胞をフローサイトメトリーで分析した。又は、ＴＣＲ結合活性アッセイに脾細胞を使用した。
時系列及び結果を図１に示す。図１Ａは、実験の時系列を示す。局所的な炎症のみを誘発する、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体を用いたワクチン接種とは異なり、ＳＴＩＮＧａを用いた全身治療は、強力ではあるが短期間の全身性Ｉ型インターフェロン応答を誘発し、高いＩＦＮ－α血清レベルが注射後４時間でピークに達し、２４時間後にはすでに減少するという特徴があった（図１Ｂ）。この全身性応答は、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体を同時に注射しても影響を受けなかった。Ｚ１３Ｍａｄ２５Ａｎａｘａのワクチン接種は、循環ＨＰＶ－Ｅ７特異的ＣＤ８ Ｔ細胞を誘発することができるが、データは、ＳＴＩＮＧａ治療との組合せが、抗原特異的ＣＤ８ Ｔ細胞の頻度を更に増加させることを示す（図１Ｃ）。更に、ＳＴＩＮＧａ治療は、エクスビボＰＭＡ／イオノマイシン再刺激後のサイトカイン分泌を増加させ、脾臓のＣＤ８ Ｔ細胞の割合を高くし、より良好な細胞機能性を示す（図１Ｄ～Ｅ）。更に、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体と、ＳＴＩＮＧアゴニストとの組合せは、ＣＤ４ Ｔ細胞応答も調節し、脾臓の割合を僅かに増加させ、その分極（ｐｏｌａｒｉｚａｔｉｏｎ）を大きく変化させた。実際、組合せ治療マウスでは、Ｔヘルパー１（Ｔｈ１）及びＴｈ１７の割合が有意に高く、Ｔｒｅｇ及びＴｈ２のＣＤ４ Ｔ細胞の割合が低いことが分かり、プラスのＴｈ１／Ｔｈ２比及びＴｈ１７／Ｔｈ２比となった（図１Ｆ～Ｋ）。まとめると、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体と、ＳＴＩＮＧアゴニストとの組合せは、抗原特異的ＣＤ８ Ｔ細胞を促進するＣＤ４及びＣＤ８ Ｔ細胞の両方の応答を改善する。それらの頻度に加えて、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体とＳＴＩＮＧａとの組合せ治療は、抗原特異的ＣＤ８ Ｔ細胞のエフェクター機能も高く強化した。ワクチン接種の１週間後に実施されたインビボ死滅（ｋｉｌｌｉｎｇ）アッセイは、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体とＳＴＩＮＧａとの組合せによって治療したマウスにおいて、抗原特異的細胞傷害性が有意に２．５倍増加したことを明らかにした（図１Ｌ）。更に、ＨＰＶ－ＣＤ８ペプチドの濃度を低下させたエクスビボ刺激は、複合体－ＳＴＩＮＧａで刺激したＴ細胞で有意に高いＴＣＲ活性を示した（図１Ｍ）。
実施例２：ＳＴＩＮＧアゴニストとワクチン複合体との組合せ投与の安全性及び忍容性
ＳＴＩＮＧアゴニストの全身注射は、強力な全身性Ｉ型インターフェロン応答をもたらす。これは望ましくない副作用をもたらす可能性があるため、ＳＴＩＮＧアゴニストとワクチン複合体との組合せ投与の安全性及び忍容性を調査した。
この目的のために、１０５個のＴＣ－１腫瘍細胞をＣ５７ＢＬ／６マウスの背面に移植した。腫瘍が可視化された場合、基本的に実施例１に記載されるように、１週間間隔で、（ｉ）細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体（Ｚ１３Ｍａｄ２５Ａｎａｘａ）；（ｉｉ）ＳＴＩＮＧアゴニスト；又は（ｉｉｉ）両方の組合せを２回投与して、マウスを処置した。図２に示される時点で、マウスの体温と体重を測定した。
結果を図２に示す。単剤治療でも組合せ治療でも、ＴＣ－１担癌マウスへの投与直後に体温（図２Ａ）又は体重（図２Ｂ）の有意な変動は認められず、ＳＴＩＮＧアゴニストと、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体との組合せ投与の安全性と忍容性が確認された。
実施例３：ＳＴＩＮＧアゴニストとワクチン複合体との組合せは、ＴＣ－１担癌マウスにおける抗原－特異的ＣＤ８ Ｔ細胞応答を改善する
ＴＣ－１はよく知られた非炎症性（コールド、ｃｏｌｄ）腫瘍モデルであり、非常に低いＣＤ４及びＣＤ８ Ｔ細胞の浸潤によって特徴づけられる。ＳＴＩＮＧアゴニストと、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体（Ｚ１３Ｍａｄ２５Ａｎａｘａ）との組合せ投与の効果を調査するために、ＴＣ－１非炎症性腫瘍モデルにおいて抗原特異的ＣＤ８ Ｔ細胞応答を評価した。
この目的のために、１０５個のＴＣ－１腫瘍細胞をＣ５７ＢＬ／６の背面に移植した。腫瘍が可視化された場合、基本的に実施例１に記載されるように、１週間間隔で、（ｉ）細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体（Ｚ１３Ｍａｄ２５Ａｎａｘａ）；（ｉｉ）ＳＴＩＮＧアゴニスト；又は（ｉｉｉ）その組合せを２回投与して、マウスを処置した。最後の処置の１週間後、マウスを殺処分し、腫瘍を採取し、ＣＤ８ Ｔ細胞の存在と表現型をＦＡＣＳ染色によって分析した。
ＴＣ－１腫瘍細胞は免疫原性が低く、循環ＨＰＶ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞の割合と数が非常に低いことが、ビヒクル処理マウスで認められた（図３）。腫瘍がないマウスでの観察と同様に、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体を含むワクチン接種は、末梢のＨＰＶ特異的応答を有意に増加させ、ＳＴＩＮＧａ単独療法は効果がなかったが、組合せ治療は抗原特異的ＣＤ８ Ｔ細胞数を増加させる。
次に、ＴＣ－１腫瘍に浸潤するＨＰＶ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞の能力を調査した。ＴＣ－１は、よく知られた非炎症性腫瘍モデルであるため、割合（腫瘍浸潤性白血球の１％未満を示す）又は総数を考慮しても、対照腫瘍内では、合計ＣＤ８ Ｔ細胞又はＨＰＶ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞は、殆ど検出されなかった（図４Ａ～Ｄ）。細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体を用いたワクチン接種は、ＣＤ８ Ｔ細胞腫瘍浸潤の有意な増加を誘発し、そのうち５０％以上がＨＰＶ特異的であった。注目すべきことに、血中に占める割合がかなり低いにもかかわらず、ＨＰＶ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞は、腫瘍内に大量に存在しており、末梢反応の測定が腫瘍内の結果を部分的にしか予測できないことを示唆する（図３Ａ～Ｂ）。ＳＴＩＮＧａ単独療法は、ＣＤ８ Ｔ細胞の腫瘍浸潤やＨＰＶ特異性の割合を調節しなかったため、腫瘍がないマウスの脾臓での観察とは異なっていた（図１）。興味深いことに、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体と、ＳＴＩＮＧアゴニストとの組合せは、相乗効果を示し、ＣＤ８ Ｔ細胞浸潤及びＨＰＶ特異的割合の両方を増加させた。これにより、ＳＴＩＮＧアゴニストの全身投与は、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体の腫瘍内効果を調節できることが確認された。
また、ＨＰＶペプチドをロードした骨髄由来樹状細胞（ＢＭＤＣ）によるエクスビボ刺激後に、ＩＦＮγ、ＴＮＦa、及び脱顆粒マーカーＣＤ１０７aの発現を測定することによって、腫瘍浸潤性のＨＰＶ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞の機能を監視し、対照群又はＳＴＩＮＧａ単独療法と比較して、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体で処置したマウスで、ＨＰＶ特異的サイトカイン産生及び脱顆粒ＣＤ８ Ｔ細胞の有意な増加が認められた（図５）。興味深いことに、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体を用いたワクチン接種は、特に多機能ＣＤ８ Ｔ細胞の割合を増加させ、ＩＦＮγ、ＴＮＦa及び／又はＣＤ１０７αを同時に産生することができた。ＳＴＩＮＧａとの組合せは、ＣＤ８ Ｔ細胞機能性を更に増加させ、重要なことに多機能細胞の頻度を増加させた。
腫瘍浸潤性Ｔ細胞機能性を更に特徴づけるために、ＧｚＢは、ＣＤ８ Ｔ細胞が癌細胞を排除するために使用する主要な武器の１つであるため、Ｇｏｌｇｉ阻害剤の存在下で簡潔なエクスビボＴＩＬ培養後、グランザイムＢ（ＧｚＢ）の細胞内産生も測定された。ビヒクル又はＳＴＩＮＧａを投与したマウスと比較して、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体をワクチン接種したマウスでは、ＧｚＢを生産する総ＣＤ８ Ｔ細胞又はＨＰＶ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞の頻度と数が有意に高かった（図６）。ＨＰＶ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞内のＧｚＢ陽性の頻度は変化しなかったにもかかわらず、ＳＴＩＮＧａとの組合せは、総数を更に増加させた。重要なことは、腫瘍内コンパートメントとは逆に、サイトカイン又はＧｚＢを産生する脾臓のＨＰＶ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞の頻度が、全ての異なる処理で非常に低いことが観察され（図７）、ＣＤ８ Ｔ細胞が全身的に活性化されていないことを実証する。
癌特異的Ｔ細胞の有効性は、腫瘍が誘導する疲弊によって制限されることが多い。したがって、次に腫瘍内ＣＤ８ Ｔ細胞及び末梢ＣＤ８ Ｔ細胞における活性化マーカー及び疲弊マーカーの発現を解析した。Ｔ細胞の疲弊は、段階的な過程であり、最終的には細胞の機能が失われるが、これは疲弊マーカーの漸進的な発現によって監視されることができる。対照及びＳＴＩＮＧａ単回処理マウスの腫瘍浸潤性ＣＤ８ Ｔ細胞の大部分は、ＰＤ－１のみを発現するか、疲弊マーカーを全く発現しなかったが、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体をワクチン接種したマウス、又は組合せ治療マウスでは、ＣＤ８ Ｔ細胞の大部分、特にＨＰＶ特異的細胞が、疲弊マーカーＰＤ－１及びＴｉｍ－３を発現した（図８Ａ～Ｂ）。興味深いことに、組合せ群では、低い割合のＣＤ８ Ｔ細胞がＰＤ－１及びＴｉｍ－３を共発現し、疲弊の少ない表現型が示唆され、サイトカイン分泌細胞の割合が高いことと相関する。更に、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体をワクチン接種したマウスの高い割合は、ＣＤ３８（図８Ｃ～Ｄ）、ＮＫｇ２ａ（図８Ｅ～Ｆ）、及びＴＣＦ－１（図８Ｇ～Ｈ）も発現するＣＤ８Ｔ細胞を示し、これらは減少したＴ細胞機能性に関連する他のマーカーである。図８Ｉは、ＨＰＶ特異的ＣＤ８Ｔ細胞におけるＰＤ１、グランザイムＢ、及びＴＣＦ－１の共発現を示す。
機能性解析と同様に、末梢ＣＤ８ Ｔ細胞は、疲弊の少ない表現型を示し、ＰＤ－１のみを発現する細胞が大多数を占め、一部の細胞は、まだ初期活性化マーカーＫＬＲＧ１を発現し（図９）、ＴＭＥ内で疲弊が獲得されることを示唆する。
要約すると、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体によるワクチン接種は、ＨＰＶ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞の腫瘍浸潤及び機能性を高度に増加させるが、ＳＴＩＮＧａ単独療法は、効果がなく、組合せ治療は、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体の有効性を更に高める。それにもかかわらず、腫瘍内ＣＤ８ Ｔ細胞は、部分的に疲弊した表現型を有し、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニストのみを含む複合体でワクチン接種したマウスと比較して、組合せ治療マウスでは進行が遅い。
実施例４：ＳＴＩＮＧアゴニストとワクチン複合体との組合せは、腫瘍内ＣＤ４ Ｔ細胞応答を調節する
免疫療法の研究は、ＣＤ８ Ｔ細胞に広く焦点を当てており、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）による免疫抑制剤としか考えられないことが多いＣＤ４ Ｔ細胞を軽視している。しかしながら、最近の研究は、適切な抗腫瘍ＣＤ８ Ｔ細胞応答の発達における、ＣＤ４ Ｔ細胞、特に分極されたＴｈ１及びＴｈ１７の重要性を強調する（Ｍｅｌｓｓｅｎ，Ｍ．ａｎｄ Ｃ．Ｌ．Ｓｌｉｎｇｌｕｆｆ，Ｊｒ．（２０１７）．“Ｖａｃｃｉｎｅｓ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｈｅｌｐｅｒ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｆｏｒ ｃａｎｃｅｒ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ．”Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ ４７：８５－９２；Ｍｕｒａｎｓｋｉ，Ｐ．，ｅｔ ａｌ．（２００８）．“Ｔｕｍｏｒ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｔｈ１７－ｐｏｌａｒｉｚｅｄ ｃｅｌｌｓ ｅｒａｄｉｃａｔｅ ｌａｒｇｅ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ ｍｅｌａｎｏｍａ．”Ｂｌｏｏｄ １１２（２）：３６２－３７３）。
その観点から、次に腫瘍内ＣＤ４ Ｔ細胞を監視した。そのために、実施例３で記載されたＴＣ－１腫瘍モデルを使用した。
結果を図１０に示す。データは、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体（Ｚ１３Ｍａｄ２５Ａｎａｘａ）と、ＳＴＩＮＧアゴニスト（ＳＴＩＮＧａ）との組合せで処置されたマウスにおいて、他の全ての群と比較して、ＣＤ４ Ｔ細胞による有意に増加した腫瘍浸潤を示す（図１０Ａ～Ｂ）。脾臓での観察とは異なり、ＳＴＩＮＧａ単独療法は、腫瘍内ＣＤ４ Ｔ細胞の動員に影響を及ぼさなかった。興味深いことに、この増加したＣＤ４ Ｔ細胞浸潤は、Ｔｒｅｇによって主導されたものではなく、組合せ治療マウスではその割合が大幅に低下していたので、エフェクターＣＤ４ Ｔ細胞によるものであった（図１０Ｃ、Ｄ、Ｇ）。腫瘍内ＣＤ８と総ＣＤ４ Ｔ細胞又は制御性ＣＤ４ Ｔ細胞との比は、ＴＭＥの免疫学的状態の予測値としてしばしば用いられる。細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体によるワクチン接種は、ビヒクル又はＳＴＩＮＧａ処理群と比較して、高いＣＤ８／ＣＤ４ Ｔ細胞比を誘導した（図１０Ｅ）。組合せ治療は、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体によるワクチン接種と同様のＣＤ８／ＣＤ４ Ｔ細胞比をもたらしたが、有意に高いＣＤ８／Ｔｒｅｇ比を誘導し（図１０Ｆ）、免疫抑制性の低いＴＭＥを強調する。更なる分析は、組合せ治療マウスでは、腫瘍内ＣＤ４ Ｔ細胞の大部分がＴ－ｂｅｔ＋Ｔｈ１であるのに対し、ＧＡＴＡ－３＋Ｔｈ２細胞はごく一部であり、Ｔｈ１／Ｔｈ２比が陽性になることが明らかになった（図１０Ｈ－Ｊ）。一方、脾臓では、組合せ治療マウスで腫瘍内Ｔｈ１７ＣＤ４ Ｔ細胞の僅かな減少が観察された（図１０Ｋ）。Ｔｈ１ ＣＤ４ Ｔ細胞は通常、ＩＦＮ－γ及びＴＮＦ－αの産生によって特徴付けられるため、ＨＰＶペプチドをロードしたＢＭＤＣによるエクスビボ再刺激後にフローサイトメトリーによって、サイトカインの産生を測定した。しかしながら、ＣＤ８ Ｔ細胞とは逆に、腫瘍内ＣＤ４ Ｔ細胞によるＩＦＮ－γ及びＴＮＦ－αの産生は検出されなかった（図１０Ｌ）。
実施例５：ＳＴＩＮＧアゴニストとワクチン複合体との組合せは、腫瘍微小環境（ＴＭＥ）を調節する
癌細胞を直接殺す能力のため、Ｔ細胞は免疫療法の主要な標的であるが、ＴＭＥは、癌の増殖を促進又は阻害することができる異なる免疫細胞の種類によって構成される非常に複雑なネットワークである。その観点から、その免疫学的状態の完全な概要を得るために、ＴＭＥの組成を深く解剖した。この目的のために、上述されるＴＣ－１腫瘍モデルを使用した。
結果を図１１に示す。前述のように、ＴＣ－１は非炎症性腫瘍モデルであり、非常に低いＣＤ４及びＣＤ８ Ｔ細胞の浸潤によって特徴づけられ、合計で、ビヒクル処置マウスの腫瘍浸潤性ＣＤ４５＋細胞の２％未満を示す（図１１Ａ）。最も顕著な細胞型は、浸潤の最大７５％を占める腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）であり、特に免疫抑制性のＴＡＭ２は、様々な種類の癌における腫瘍増殖の促進と関連してきた。役割があまり明確ではなく、癌の種類に応じて腫瘍の促進又は制御と関連する、骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）は、更に１５％を占め、単球型（ｍＭＤＳＣ）が優勢である。頻度の低い他の細胞型は、樹状細胞（ＤＣ、７％）、Ｂ細胞（２％）、ＮＫ細胞及びＮＫＴ細胞（１．５％）、好中球（ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌｓ）（１％）であった。細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体によるワクチン接種は、ＣＤ８ Ｔ細胞及びＤＣ頻度の強い増加及び非Ｔｒｅｇ ＣＤ４ Ｔ細胞の出現によって特徴づけられる、ＴＭＥの大幅な修飾を誘導した。興味深いことに、ＤＣ浸潤の増加は、単球性ＤＣ（ｍｏＤＣ）の割合の増加によっても特徴づけられ（図１１Ｂ）、この特定のＤＣ表現型は、炎症性状態においてのみ分化し、抗腫瘍Ｔ細胞応答を活性化することが示されている（Ｋｕｈｎ，Ｓ．，ｅｔ ａｌ．（２０１５）．“Ｍｏｎｏｃｙｔｅ－Ｄｅｒｉｖｅｄ Ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ Ｃｅｌｌｓ Ａｒｅ Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｆｏｒ ＣＤ８（＋）Ｔ Ｃｅｌｌ Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ａｎｄ Ａｎｔｉｔｕｍｏｒ Ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ Ａｆｔｅｒ Ｌｏｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ．”Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ ６：５８４）。ＴＡＭ１コンパートメントは、殆ど変化しないままであるが、ＴＡＭ２頻度は強く減少し、結果としてより高いＴＡＭ１／ＴＡＭ２比をもたらす（図１１Ｃ～Ｅ）。逆に、ｍＭＤＳＣの頻度は、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体によるワクチン接種によって増加されるが、顆粒球性ＭＤＳＣは、殆ど変化しないままである（図１１Ｆ～Ｇ）。ＴＡＭ２とｍＭＤＳＣに対する逆効果は、単球起源の両方の集団が環境に応じてその可塑性と分化状態を変化させる能力で知られているため、細胞の再分極の可能性を示唆する。
ＣＤ８ Ｔ細胞の浸潤及び表現型に関する観察と同様に、ＳＴＩＮＧａ単独の全身投与は、ＴＭＥの組成に影響を及ぼさず、これは基本的にビヒクル処置マウスと同様である。しかしながら、組合せ治療において、ＳＴＩＮＧアゴニストは、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体によるワクチン接種との相乗効果を示し、ＣＤ８及び非Ｔｒｅｇ
ＣＤ４ Ｔ細胞の浸潤を２．５倍に拡大する一方で、ＴＡＭ２の頻度を減少させ、更なる炎症性の環境をもたらした。
実施例６：ＳＴＩＮＧアゴニストとワクチン複合体との組合せはＰＤ－Ｌ１及びＭＨＣの腫瘍内発現を調節する
ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１軸は、Ｔ細胞の疲弊につながる主要な経路であるため、抗原特異的ＣＤ８ Ｔ細胞の抗腫瘍効果を阻害し、ＰＤ－Ｌ１の発現は、ＳＴＩＮＧアゴニストによる腫瘍内治療によって腫瘍細胞上でアップレギュレートされることが示されている。更に、腫瘍細胞上のＭＨＣ－Ｉ発現のダウンレギュレーションは、免疫回避の主要なメカニズムの１つである。そのため、上述されるように、ＴＣ－１腫瘍モデルでは、ＭＨＣ－ＩＩだけでなくＰＤ－Ｌ１及びＭＨＣ－Ｉの腫瘍内発現も監視された。
結果を図１２に示す。ビヒクル又はＳＴＩＮＧａ皮下注射単独療法と比較して、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニスト単独を含む複合体（Ｚ１３Ｍａｄ２５Ａｎａｘａ）による治療、又はＳＴＩＮＧａとの組合せによる治療の下で、増加したＰＤ－Ｌ１発現が見られた（図１２Ａ～Ｂ）。ＰＤ－Ｌ１の発現は、ＣＤ４５－細胞とＣＤ４５＋細胞の両方のコンパートメントで増加し、腫瘍細胞と免疫細胞の両方がＴ細胞の疲弊を促進する可能性があることを強調した。ＰＤ－Ｌ１を発現する主な免疫細胞集団は、両方のタイプのＴＡＭとして同定された（図１２Ｃ～Ｄ）。更に、腫瘍細胞でのＭＨＣ－Ｉ発現に関しては、Ｈ２－ＫｂとＨ２－Ｄｂの両方の対立遺伝子発現が、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体を単独又はＳＴＩＮＧａと組み合わせて処置した場合、ビヒクル及びＳＴＩＮＧａの単独療法と比較して、腫瘍細胞によってアップレギュレートされたが（図１２Ｅ～Ｆ）、この免疫回避のメカニズムは除外され、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体によるワクチン接種が、腫瘍細胞によるエピトープの提示を促進することさえできることが示唆された。同時に、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体を単独又はＳＴＩＮＧａと組み合わせたワクチン接種は、ビヒクルとＳＴＩＮＧＡの両方の単剤療法と比較して、ＣＤ１１ｂ＋細胞でのＭＨＣ－ＩＩ発現が増加したため（図１２Ｇ～Ｈ）、ＣＤ４ Ｔ細胞へのエピトープの提示が促進された。
全体として、これらの結果は、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体によるワクチン接種によって誘発される、非炎症性（ｃｏｌｄ）腫瘍を炎症性（ｈｏｔ）にすることがあるＴＭＥの大幅な調節、及びＳＴＩＮＧアゴニスト単独療法では効果が観察されなかったが、腫瘍内免疫原性を更に増加させるＳＴＩＮＧアゴニスト処置とワクチン複合体の組合せによる相乗効果を強調している。
実施例７：ＳＴＩＮＧアゴニストとワクチン複合体との組合せの抗腫瘍効果
次に、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体と、ＳＴＩＮＧアゴニストとの組合せの治療の抗腫瘍効果をＴＣ－１腫瘍モデルで評価した。
１０５個のＴＣ－１細胞をＣ５７ＢＬ／６マウスの背面に移植した。腫瘍が可視化された場合、上述されるように、１週間間隔で、ＴＣ－１腫瘍モデルの治療環境において、（ｉ）細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体（Ｚ１３Ｍａｄ２５Ａｎａｘａ）；（ｉｉ）ＳＴＩＮＧアゴニスト；又は（ｉｉｉ）その組合せを２回投与して、マウスを処置した。
結果を図１３に示す。ＴＣ－１モデルにおいて、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体を用いた二回のワクチン接種は、腫瘍の発生の有意な遅延、及び増加した生存期間中央値をもたらした（図１３Ａ～Ｂ）。ＳＴＩＮＧａ単独療法は、腫瘍増殖に僅かな効果しか示さなかったが、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体との組合せは、この効果を大幅に高め、それによって腫瘍の発生を有意に遅らせ、生存期間中央値を向上させた。
実施例８：異なるＳＴＩＮＧアゴニストとのワクチン複合体の組合せの抗腫瘍効果
次に、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体（Ｚ１３Ｍａｄ２５Ａｎａｘａ）と、異なるＳＴＩＮＧアゴニストとの組合せの治療の抗腫瘍効果をＴＣ－１腫瘍モデルで評価した。上記の実験で使用されたＳＴＩＮＧアゴニストＡＤＵ－Ｓ１００（Ａｄｕｒｏ）の代わりに、ＳＴＩＮＧアゴニストＳＴＩＮＧａ２を使用した。
上記と同様に、１０５個のＴＣ－１細胞をＣ５７ＢＬ／６マウスの背面に移植し、異なる群（対照（無処置）；細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体（Ｚ１３Ｍａｄ２５Ａｎａｘａ）；ＳＴＩＮＧアゴニスト ＳＴＩＮＧａ２；及びその組合せ）に割り当てた。細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体（Ｚ１３Ｍａｄ２５Ａｎａｘａ）による処置では、腫瘍移植後６日目（腫瘍が可視化された場合）及び１３日目に、１０ｎｍｏｌの細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体（Ｚ１３Ｍａｄ２５Ａｎａｘａ）を、皮下注射によりマウスに接種した。ＳＴＩＮＧアゴニストＳＴＩＮＧａ２による治療の場合、６日目、１０日目、１３日目、及び１７日目に、マウスは、１０μｇのＳＴＩＮＧアゴニストＳＴＩＮＧａ２を全身投与（皮下注射）された。２０日目に全血を回収し、多量体フローサイトメトリー染色による抗原特異的ＣＤ８ Ｔ細胞の測定に使用した。
図１４に示されるように、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体を用いた単剤療法は、生存率を増加させ、腫瘍増殖を減少させたが、ＳＴＩＮＧアゴニスト単独療法は、僅かな改善しかもたらさなかった。しかしながら、両者の組合せは、生存率を大幅に増加させ、腫瘍増殖を減少させる相乗効果を示した。これは、上記の実施例７で記載された結果を、異なるＳＴＩＮＧアゴニストの全身投与で確認する。
図１５に示されるように、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体によるワクチン接種は、循環ＨＰＶ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞を誘発することができる。しかしながら、ＳＴＩＮＧアゴニスト処置との組合せは、抗原特異的ＣＤ８ Ｔ細胞の頻度を更に増加させ、それによって、異なるＳＴＩＮＧアゴニストについての実施例１で記載された結果を確認した。
実施例９：マウスにおけるＡＴＰ１２８免疫原性；ＳＴＩＮＧａとＡＴＰ１２８との組合せはＣＥＡ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞応答を誘発する
雌Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスの背面に、５×１０５個のＭＣ３８－ＣＥＡ腫瘍細胞を皮下移植した。腫瘍移植後６日目と１３日目に、１０ｎｍｏｌのＡＴＰ１２８、２５μｇのＳＴＩＮＧアゴニスト（ＡＤＵ－Ｓ１００）、又は上記２つの組合せをマウスにワクチン接種した。ＡＴＰ１２８ワクチン及びＳＴＩＮＧアゴニストの両方を尾の付け根に皮下注射した。２回目のワクチン接種の１週間後に、マウスの血液を尾静脈から回収しカスタム設計された多量体を使用して、ＣＥＡ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞の頻度と総数をフローサイトメトリーで分析した。
結果を図１６に示す。ＡＴＰ１２８による３回目のワクチン接種の１週間後に、ＩＦＮ－ｇ Ｅｌｉｓｐｏｔアッセイを実施した。ＡＴＰ１２８ワクチン接種は、ＣＥＡ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞を誘発し、多量体染色によって監視されることができる（図１６Ａ）。多量体染色は、２回目のワクチン接種の１週間後に実施した。データは、ＡＴＰ１２８へのＳＴＩＮＧアゴニストの追加が、ＣＥＡ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞応答を増強することを示す（図１６Ｂ、Ｃ）。
実施例１０：ＳＴＩＮＧアゴニストとワクチン複合体との組合せは、腫瘍がないマウスにおけるＣＤ８ Ｔ及びＣＤ４ Ｔ細胞末梢応答の機能性を増強させる
実施例１と同様に、腫瘍がないＣ５７ＢＬ／６マウスで、異なる複合体（Ｚ１３Ｍａｄ３９Ａｎａｘａ；配列番号５８）を用いて、組合せの免疫原性を評価した。簡単に説明すると、１週間間隔（０日目及び７日目）で、皮下注射で、１０ｎｍｏｌのＺ１３Ｍａｄ３９Ａｎａｘａ（配列番号５８；例示された細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体、卵白アルブミン由来のＣＤ４エピトープ及びＣＤ８エピトープ（ＯＶＡ；それぞれ、配列番号５９及び配列番号５７）含有）の注射を腫瘍がないＣ５７ＢＬ／６マウスにワクチン接種した。ワクチン接種とほぼ同時に、背下部の両側に、２×５０μｌ皮下注射によって、２５μｇのＳＴＩＮＧアゴニストＡＤＵ－Ｓ１００をマウスに投与した。最初のワクチン接種の４時間後と２４時間後に血清を回収し、ＥＬＩＳＡでＩＦＮ－α濃度を測定した。１４日目に全血を回収し、多量体フローサイトメトリー染色による抗原特異的ＣＤ８ Ｔ細胞の測定に使用した。同時に、脾臓を採取し、エクスビボ刺激及び細胞内サイトカイン産生に使用した脾細胞をフローサイトメトリーで分析した。又は、ＴＣＲ結合活性アッセイに脾細胞を使用した。
結果を図１７に示す。図１７Ａに示されるように、２回目のワクチン接種の１週間後に、循環ＳＩＩＮＦＥＫＬ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞（左）及び脾臓のＳＩＩＮＦＥＫＬ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞（右）を多量体染色により測定した。図１７Ｂは、エクスビボＥＬＩｓｐｏｔにより測定されたＳＩＩＮＦＥＫＬ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞ＴＣＲ結合活性（上図）、及びＳＩＩＮＦＥＫＬペプチドによるエクスビボ刺激後の、細胞内染色により測定されたＣＤ８ Ｔ細胞による抗原特異的サイトカイン産生（下図）を示す。図１７Ｃは、脾臓のＣＤ４ Ｔ細胞内のＴｒｅｇ（ＦｏｘＰ３＋）、Ｔｈ１（Ｔ－ｂｅｔ＋）、及びＴｈ２（ＧＡＴＡ－３＋）の頻度、並びにＴｈ１／Ｔｈ２比（２回目のワクチン接種の１週間後にフローサイトメトリーにより測定）を示す。更に、ＣＤ４ Ｔ細胞による抗原特異的サイトカイン産生が示され、ＩＳＱＡＶＨＡＡＨＡＥＩＮＥＡＧＲ（ＯＶＡ－ＣＤ４）ペプチド（配列番号５９）によるエクスビボ刺激後の細胞内染色によって測定された。
要約すると、異なる複合体（本件における、卵白アルブミン（ＯＶＡ）由来のＣＤ４及びＣＤ８エピトープを含有するＺ１３Ｍａｄ３９Ａｎａｘａ対実施例１におけるＨＰＶ－Ｅ７エピトープ含有Ｚ１３Ｍａｄ２５Ａｎａｘａ）を用いた実施例１と同様に、ＣＤ８及びＣＤ４のＴ細胞応答の同様の調節が観察された。これにより、Ｔ細胞応答の調節が抗原性カーゴに依存しないことを確認する。Ｚ１３Ｍａｄ３９Ａｎａｘａワクチン接種は、多機能性ＣＤ８及びＣＤ４抗原特異的Ｔ細胞を誘発し、特異的ペプチドによるエクスビボ刺激後にＩＦＮγ及びＴＮＦαを産生した（図１７）。全体として、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体にＳＴＩＮＧアゴニストを加えることは、Ｔｈ１に対するＣＤ４ Ｔ細胞の分極と共に、ＣＤ８ Ｔ細胞応答の頻度と質に大きな影響を与える。
実施例１１：ＳＴＩＮＧアゴニストとワクチン複合体との組合せは、Ｂ１６－ＯＶＡ腫瘍増殖を阻害する
その後、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体（Ｚ１３Ｍａｄ３９Ａｎａｘａ）と、ＳＴＩＮＧアゴニスト（ＳＴＩＮＧａ）との組合せの抗腫瘍効果をＢ１６－ＯＶＡ肺転移腫瘍モデルで評価した。
簡単に説明すると、Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、１０５個のＢ１６－ＯＶＡ細胞を静脈内注射した。腫瘍細胞静脈内注射の３日後から、１週間間隔で、例示された細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体（Ｚ１３Ｍａｄ３９Ａｎａｘａ；配列番号５８）、ＳＴＩＮＧアゴニスト（ＳＴＩＮＧａ）、又は上記２つの組合せをマウスに２回ワクチン接種した。２０日目（最後のワクチン接種から１０日後）に、肺を灌流して血液を除去し、肺転移の数をカウントし、肺浸潤リンパ球（ＬＩＬ）を分析した。
結果を図１８及び図１９に示す。実験スケジュールを図１８Ａに示す。図１８Ｂに示される、肺当たりの転移性結節の数は、Ｚ１３Ｍａｄ３９Ａｎａｘａによるワクチン接種が、転移の数の有意な減少をもたらし、ＳＴＩＮＧａ単独療法では、効果がなかったが、ＫＩＳＩＭＡとの組合せでは、転移の数を優位に更に減少したことを実証する。更に、また、フローサイトメトリーにより、肺浸潤リンパ球（ＬＩＬ）の存在及び機能を分析した。ワクチン接種は、グランザイムＢ（ＧｚＢ）、ＩＦＮγ、及びＴＮＦαの発現によって特徴づけられる多機能ＯＶＡ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞浸潤を誘発し、ＳＴＩＮＧａの組合せにより有意に増加した（図１８Ｃ）。同様のＴ細胞の表現型及び機能性の増加が末梢（血液及び脾臓）でより低い程度で観察されたことから、図１９Ａ及びＢに示されるように、抗原特異的Ｔ細胞が腫瘍部位に広く動員されることが示唆された。腫瘍がないマウス（実施例１０）で観察されたように、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体（Ｚ１３Ｍａｄ３９Ａｎａｘａ；配列番号５８）とＳＴＩＮＧアゴニスト（ＳＴＩＮＧａ）との組合せは、腫瘍内ＣＤ４ Ｔ細胞の分極を調節し、Ｔｒｅｇｓの存在を減少させる一方で、Ｔｈ１／Ｔｈ２比を増加させた（図１８Ｄ）。ＯＶＡペプチドによるエクスビボ刺激は、脾臓では機能的抗原特異的ＣＤ４ Ｔ細胞の存在を強調したが、肺ではそうではなかったことから、ＣＤ８ Ｔ細胞応答を助けることが二次リンパ器官で広く生じていることが示唆された（図１８Ｄ及び図１９Ｃ）。
これらの結果を総合すると、細胞透過性ペプチド、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、及びＴＬＲペプチドアゴニストを含む複合体とＳＴＩＮＧアゴニストとの組合せ治療は、抗原特異的エフェクターＣＤ８ Ｔ細胞の腫瘍内浸潤及び末梢性ＣＤ４ Ｔ細胞の機能性の両方を促進し、Ｂ１６－ＯＶＡ腫瘍増殖の抑制をもたらすことを示す。
配列及び配列番号の表（配列表）：
Figure 2023545178000069
Figure 2023545178000070
Figure 2023545178000071
Figure 2023545178000072
Figure 2023545178000073
Figure 2023545178000074
Figure 2023545178000075
Figure 2023545178000076
Figure 2023545178000077
Figure 2023545178000078
Figure 2023545178000079
Figure 2023545178000080

Claims (118)

  1. （ｉ）ＳＴＩＮＧアゴニストと；
    （ｉｉ）以下ａ）～ｃ）：

    ａ）細胞透過性ペプチド；
    ｂ）少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ；及び
    ｃ）ＴＬＲペプチドアゴニスト；
    を含む複合体と、
    を含む組合せであって、前記複合体に含まれる成分ａ）～ｃ）が共有結合されることを特徴とする組合せ。
  2. 前記複合体が（組換え）ポリペプチド又は（組換え）タンパク質である、請求項１に記載の組合せ。
  3. 前記細胞透過性ペプチドが、以下を有する請求項１から２のいずれかに記載の組合せ。
    （１）合計で５～５０のアミノ酸、好ましくは合計で１０～４５のアミノ酸、より好ましくは合計で１５～４５のアミノ酸、の前記ペプチドのアミノ酸配列の長さ；及び／又は
    （２）ＺＥＢＲＡの最小ドメインの断片を含むアミノ酸配列又はその変異体であって、
    前記最小ドメインは、配列番号３のＺＥＢＲＡアミノ酸配列の残基１７０～残基２２０に及び、任意に、１、２、３、４、又は５のアミノ酸が、前記ペプチドの細胞透過能を損なうことなく、置換、削除、及び／又は追加される。
  4. 前記細胞透過性ペプチドが、配列番号３のＺＥＢＲＡアミノ酸配列の位置１８９に相当する位置で、Ｓｅｒ（Ｓ）を含むアミノ酸配列を有する、請求項３に記載の組合せ。
  5. 前記細胞透過性ペプチドが、以下一般式（Ａ）：
    Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９Ｘ１０Ｘ１１ＳＸ１３Ｘ１４Ｘ１５Ｘ１６Ｘ１７
    の配列を含み、前記配列が前記ペプチドの細胞透過能を損なうことなく、置換、削除、及び／又は追加される０、１、２、３、４、又は５のアミノ酸を含むアミノ酸配列を含む、請求項３から４のいずれかに記載の組合せ。
    （式中、Ｘ１はＫ、Ｒ、又はＨであり、Ｘ１はＫ又はＲであることが好ましく；
    Ｘ２はＲ、Ｋ、又はＨであり、Ｘ２はＲ又はＫであることが好ましく；
    Ｘ３はＹ、Ｗ、又はＦであり、Ｘ３はＹ、Ｗ、又はＦであることが好ましく；
    Ｘ４はＫ、Ｒ、又はＨであり、Ｘ４はＫ又はＲであることが好ましく；
    Ｘ５はＮ又はＱであり；
    Ｘ６はＲ、Ｋ、又はＨであり、Ｘ６はＲ又はＫであることが好ましく；
    Ｘ７はＶ、Ｉ、Ｍ、Ｌ、Ｆ、又はＡであり、Ｘ７はＶ、Ｉ、Ｍ、又はＬであることが好ましく；
    Ｘ８はＡ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、又はＧであり、Ｘ８はＡ又はＧであることが好ましく；
    Ｘ９はＳ又はＴであり；
    Ｘ１０はＲ、Ｋ、又はＨであり、Ｘ１０はＲ又はＫであることが好ましく；
    Ｘ１１はＫ、Ｒ、又はＨであり、Ｘ１１はＫ又はＲであることが好ましく；
    Ｘ１３はＲ、Ｋ、又はＨであり、Ｘ１３はＲ又はＫであることが好ましく；
    Ｘ１４はＡ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、又はＧであり、Ｘ１４はＡ又はＧであることが好ましく；
    Ｘ１５はＫ、Ｒ、又はＨであり、Ｘ１５はＫ又はＲであることが好ましく；
    Ｘ１６はＦ、Ｌ、Ｖ、Ｉ、Ｙ、Ｗ、又はＭであり、Ｘ１６はＦ、Ｙ、又はＷであることが好ましく；
    Ｘ１７はＫ、Ｒ、又はＨであり、Ｘ１７はＫ又はＲであることが好ましい。）
  6. 前記細胞透過性ペプチドが、配列番号４～１３のアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列、又は前記ペプチドの細胞透過能を損なうことなく、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％の配列同一性を有するその配列変異体を含むアミノ酸配列を有する、請求項３から５のいずれかに記載の組合せ。
  7. 前記細胞透過性ペプチドが、配列番号６（ＣＰＰ３／Ｚ１３）、配列番号７（ＣＰＰ４／Ｚ１４）、配列番号８（ＣＰＰ５／Ｚ１５）、又は配列番号1１（ＣＰＰ８／Ｚ１８）のアミノ酸配列、又は前記ペプチドの細胞透過能を損なうことなく、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％の配列同一性を有するその配列変異体を含む又はからなるアミノ酸配列を有し；

    好ましくは、前記細胞透過性ペプチドが、配列番号６（ＣＰＰ３／Ｚ１３）のアミノ酸配列、又は前記ペプチドの細胞透過能を損なうことなく、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％の配列同一性を有するその配列変異体を含む又はからなるアミノ酸配列を有する、請求項６に記載の組合せ。
  8. 前記少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープが、ペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質である、請求項１から７のいずれかに記載の組合せ。
  9. 前記複合体が、１超の抗原又は抗原エピトープ、特に２、３、４、５、６、７、８、９、１０以上の抗原又は抗原エピトープを含む、請求項１から８のいずれかに記載の組合せ。
  10. 前記１超の抗原又は抗原エピトープ、特に２、３、４、５、６、７、８、９、１０以上の抗原又は抗原エピトープが、前記複合体の多重抗原性ドメインに連続的に配置される請求項９に記載の組合せ。
  11. 前記少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープが、少なくとも１つのＣＤ４＋エピトープ及び／又は少なくとも１つのＣＤ８＋エピトープである、請求項１から１０のいずれかに記載の組合せ。
  12. 前記少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープが、少なくとも１つの腫瘍又は癌エピトープを含む又はからなる請求項１から１１のいずれかに記載の組合せ。
  13. 前記少なくとも１つの腫瘍エピトープが、内分泌腫瘍、胃腸腫瘍、尿生殖器及び女性生殖器腫瘍、乳癌、頭頚部腫瘍、造血器腫瘍、皮膚腫瘍、胸部及び呼吸器腫瘍を含む腫瘍からなる群から選択される請求項１２に記載の組合せ。
  14. 前記少なくとも１つの腫瘍又は癌エピトープが、肛門癌、虫垂癌、胆管細胞癌、カルチノイド腫瘍、消化管結腸癌、肝外胆管癌、胆嚢癌、胃癌、消化管カルチノイド腫瘍、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、肝細胞癌、膵臓癌、直腸癌、結腸直腸癌、又は転移性結腸直腸癌を含む、胃腸腫瘍の腫瘍又は癌の群から選択される請求項１２から１３のいずれかに記載の組合せ。
  15. 前記少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープが、腫瘍関連抗原、腫瘍特異抗原、又は腫瘍ネオ抗原から選択され、
    好ましくは、前記少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープが、結腸直腸癌又は転移性結腸直腸癌の腫瘍関連抗原、腫瘍特異抗原、又は腫瘍ネオ抗原からなる群から選択される請求項１から１４のいずれかに記載の組合せ。
  16. 前記少なくとも１つの腫瘍又は癌エピトープが、ＥｐＣＡＭ、ＨＥＲ－２、ＭＵＣ－１、ＴＯＭＭ３４、ＲＮＦ４３、ＫＯＣ１、ＶＥＧＦＲ、βｈＣＧ、サバイビン、ＣＥＡ、ＴＧＦβＲ２、ｐ５３、ＫＲａｓ、ＯＧＴ、ＣＡＳＰ５、ＣＯＡ－１、ＭＡＧＥ、ＳＡＲＴ、ＩＬ１３Ｒα２、ＡＳＣＬ２、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＰＲＡＭＥ、ＷＴ１からなる群から選択される抗原のエピトープである、請求項１２から１５のいずれかに記載の組合せ。
  17. 前記少なくとも１つの腫瘍又は癌エピトープが、ＡＳＣＬ２、ＥｐＣＡＭ、ＭＵＣ－１、サバイビン、ＣＥＡ、ＫＲａｓ、ＭＡＧＥ－Ａ３、及びＩＬ１３Ｒα２からなる群から選択される抗原の抗原のエピトープであり、
    好ましくは、前記少なくとも１つの腫瘍エピトープが、ＡＳＣＬ２、ＥｐＣＡＭ、ＭＵＣ－１、サバイビン、ＣＥＡ、ＫＲａｓ、及びＭＡＧＥ－Ａ３からなる群から選択される抗原のエピトープであり、
    より好ましくは、前記少なくとも１つの腫瘍エピトープが、ＡＳＣＬ２、ＥｐＣＡＭ、ＭＵＣ－１、サバイビン、及びＣＥＡからなる群から選択される抗原のエピトープであり、
    更により好ましくは、前記少なくとも１つの腫瘍エピトープが、ＡＳＣＬ２、ＥｐＣＡＭ、サバイビン、及びＣＥＡからなる群から選択される抗原のエピトープである、請求項１２から１６のいずれかに記載の組合せ。
  18. 前記複合体が、少なくとも２つの異なる抗原のエピトープを含む多重抗原性ドメインを含む、請求項１から１７のいずれかに記載の組合せ。
  19. 前記複合体の前記多重抗原性ドメインが、サバイビンの少なくとも１つのエピトープを含む請求項１８に記載の組合せ。
  20. 前記複合体の前記多重抗原性ドメインが、配列番号１６のアミノ酸配列からなるペプチド、又は少なくとも１０のアミノ酸の長さを有するその断片、又は少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％の配列同一性を有するその（機能的）配列変異体を含む、請求項１８から１９のいずれかに記載の組合せ。
  21. 前記複合体の前記多重抗原性ドメインが、配列番号１８のアミノ酸配列を有するペプチド、又は少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％の配列同一性を有するその（機能的）配列変異体を含む、請求項１８から２０のいずれかに記載の組合せ。
  22. 前記複合体の前記多重抗原性ドメインが、配列番号１７のアミノ酸配列からなるペプチド、又は少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％の配列同一性を有するその（機能的）配列変異体を含む、請求項１８から２１のいずれかに記載の組合せ。
  23. 前記複合体の前記多重抗原性ドメインが、ＣＥＡの少なくとも１つのエピトープを含む、請求項１８から２２のいずれかに記載の組合せ。
  24. 前記複合体の前記多重抗原性ドメインが、配列番号２９のアミノ酸配列を有するペプチド、又は少なくとも１０のアミノ酸の長さを有するその断片、又は少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％の配列同一性を有するその（機能的）配列変異体を含む、請求項１８から２３のいずれかに記載の組合せ。
  25. 前記複合体の前記多重抗原性ドメインが、配列番号３２のアミノ酸配列を有するペプチド、又は少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％の配列同一性を有するその（機能的）配列変異体を含む、請求項１８から２４のいずれかに記載の組合せ。
  26. 前記複合体の前記多重抗原性ドメインが、配列番号３０のアミノ酸配列を有するペプチド及び／又は配列番号３１のアミノ酸配列を有するペプチドを含む、請求項１８から２５のいずれかに記載の組合せ。
  27. 前記複合体の前記多重抗原性ドメインが、ＡＳＣＬ２の少なくとも１つのエピトープを含む、請求項１８から２６のいずれかに記載の組合せ。
  28. 前記複合体の前記多重抗原性ドメインが、配列番号２１のアミノ酸配列を有するペプチド、又は少なくとも１０のアミノ酸の長さを有するその断片、又は少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％の配列同一性を有するその（機能的）配列変異体を含む、請求項１８から２７のいずれかに記載の組合せ。
  29. 前記複合体の前記多重抗原性ドメインが、配列番号２４のアミノ酸配列からなるペプチド又は少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％の配列同一性を有するその（機能的）配列変異体を含む、請求項１８から２８のいずれかに記載の組合せ。
  30. 前記多重抗原性ドメインが、配列番号２２のアミノ酸配列からなるペプチド及び／又は配列番号２３のアミノ酸配列を有するペプチドを含む、請求項１８から２９のいずれかに記載の組合せ。
  31. 前記多重抗原性ドメインが、
    ａ）ＥｐＣＡＭの１以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；
    ｂ）ＭＵＣ－１の１以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；
    ｃ）サバイビンの１以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；
    ｄ）ＣＥＡの１以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；
    ｅ）ＫＲａｓの１以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；及び／又は
    ｆ）ＭＡＧＥ－Ａ３の１以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；
    ｇ）ＡＳＣＬ２の１以上のエピトープ又はその機能的配列変異体、
    を含む、請求項１８から３０のいずれかに記載の組合せ。
  32. 前記多重抗原性ドメインが、
    ａ）ＥｐＣＡＭの１以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；
    ｂ）ＭＵＣ－１の１以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；
    ｄ）ＣＥＡの１以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；及び
    ｆ）ＭＡＧＥ－Ａ３の１以上のエピトープ又はその機能的配列変異体
    を含む、請求項１８から３１のいずれかに記載の組合せ。
  33. 前記多重抗原性ドメインが、
    ａ）ＥｐＣＡＭの１以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；
    ｂ）ＭＵＣ－１の１以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；
    ｄ）ＣＥＡの１以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；及び
    ｅ）ＫＲａｓの１以上のエピトープ又はその機能的配列変異体．
    を含む、請求項１８から３２のいずれかに記載の組合せ。
  34. 前記多重抗原性ドメインが、
    ａ）ＥｐＣＡＭの１以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；
    ｃ）サバイビンの１以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；
    ｄ）ＣＥＡの１以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；及び
    ｆ）ＭＡＧＥ－Ａ３の１以上のエピトープ又はその機能的配列変異体
    を含む、請求項１８から３３のいずれかに記載の組合せ。
  35. 前記多重抗原性ドメインが、
    ａ）ＥｐＣＡＭの１以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；
    ｄ）ＣＥＡの１以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；及び
    ｆ）ＭＡＧＥ－Ａ３の１以上のエピトープ又はその機能的配列変異体
    を含む、請求項１８から３４のいずれかに記載の組合せ。
  36. 前記多重抗原性ドメインが、
    ｂ）ＭＵＣ－１の１以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；
    ｃ）サバイビンの１以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；及び／又は
    ｆ）ＭＡＧＥ－Ａ３の１以上のエピトープ又はその機能的配列変異体
    を含む、請求項１８から３５のいずれかに記載の組合せ。
  37. 前記多重抗原性ドメインが、
    ａ）ＥｐＣＡＭの１以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；
    ｂ）ＭＵＣ－１の１以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；
    ｃ）サバイビンの１以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；及び／又は
    ｄ）ＣＥＡの１以上のエピトープ又はその機能的配列変異体
    を含む、請求項１８から３６のいずれかに記載の組合せ。
  38. 前記多重抗原性ドメインが、
    ａ）ＥｐＣＡＭの１以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；
    ｂ）ＭＵＣ－１の１以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；及び／又は
    ｄ）ＣＥＡの１以上のエピトープ又はその機能的配列変異体
    を含む、請求項１８から３７のいずれかに記載の組合せ。
  39. 前記多重抗原性ドメインが、
    ａ）ＥｐＣＡＭの１以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；及び／又は
    ｄ）ＣＥＡの１以上のエピトープ又はその機能的配列変異体
    を含む、請求項１８から３８のいずれかに記載の組合せ。
  40. 前記多重抗原性ドメインが、
    ａ）ＥｐＣＡＭの１以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；
    ｃ）サバイビンの１以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；
    ｄ）ＣＥＡの１以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；及び／又は
    ｇ）ＡＳＣＬ２の１以上のエピトープ又はその機能的配列変異体
    を含む、請求項１８から３９のいずれかに記載の組合せ。
  41. 前記多重抗原性ドメインが、
    －サバイビンの１以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；及び
    －ＣＥＡの１以上のエピトープ又はその機能的配列変異体
    を含む、請求項１８から３０のいずれかに記載の組合せ。
  42. 前記多重抗原性ドメインが、
    －サバイビンの１以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；及び
    －ＡＳＣＬ２の１以上のエピトープ又はその機能的配列変異体
    を含む、請求項１８から３０のいずれかに記載の組合せ。
  43. 前記多重抗原性ドメインが、
    －ＣＥＡの１以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；及び
    －ＡＳＣＬ２の１以上のエピトープ又はその機能的配列変異体
    を含む、請求項１８から３０のいずれかに記載の組合せ。
  44. 前記多重抗原性ドメインが、
    －サバイビンの１以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；
    －ＣＥＡの１以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；及び
    －ＡＳＣＬ２の１以上のエピトープ又はその機能的配列変異体
    を含む、請求項１８から３０のいずれかに記載の組合せ。
  45. 前記多重抗原性ドメインが、Ｎ末端からＣ末端方向に、
    －ＣＥＡの１以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；
    －サバイビンの１以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；及び
    －ＡＳＣＬ２の１以上のエピトープ又はその機能的配列変異体
    を含む、請求項１８から３０及び４４のいずれかに記載の組合せ。
  46. 前記多重抗原性ドメインが、Ｎ末端からＣ末端方向に、
    －配列番号２９のアミノ酸配列を有するペプチド、又は少なくとも１０のアミノ酸の長さを有するその断片、又は少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％の配列同一性を有するその（機能的）配列変異体；
    －配列番号１６のアミノ酸配列を有するペプチド、又は少なくとも１０のアミノ酸の長さを有するその断片、又は少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％の配列同一性を有するその（機能的）配列変異体；及び
    配列番号２１のアミノ酸配列を有するペプチド、又は少なくとも１０のアミノ酸の長さを有するその断片、又は少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％の配列同一性を有するその（機能的）配列変異体
    を含む、請求項１８から３０、４４、及び４５のいずれかに記載の組合せ。
  47. 配列番号２９のアミノ酸配列からなるペプチド又はその断片又はその変異体のＣ末端が、配列番号１６のアミノ酸配列からなるペプチド又はその断片又はその変異体のＮ末端に直接結合され；
    配列番号１６のアミノ酸配列からなるペプチド又はその断片又はその変異体のＣ末端が、配列番号２１のアミノ酸配列を有するペプチド又はその断片又はその変異体のＮ末端に直接結合される、請求項１８から３０、及び４４から４６のいずれかに記載の組合せ。
  48. 前記多重抗原性ドメインが、配列番号３２のアミノ酸配列からなるペプチド、又は少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％の配列同一性を有するその（機能的）配列変異体；配列番号１８のアミノ酸配列からなるペプチド、又は少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％の配列同一性を有するその（機能的）配列変異体；及び配列番号２４のアミノ酸配列からなるペプチド、又は少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％の配列同一性を有するその（機能的）配列変異体を含む、請求項１８から３０、及び４４から４７のいずれかに記載の組合せ。
  49. 前記複合体の前記多重抗原性ドメインが、配列番号４８のアミノ酸配列からなるペプチド、又は少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％の配列同一性を有するその（機能的）配列変異体を含む、請求項１８から３０、及び４４から４８のいずれかに記載の組合せ。
  50. 前記ＴＬＲペプチドアゴニストが、ＴＬＲ２、ＴＬＲ４、及び／又はＴＬＲ５ペプチドアゴニストである、請求項１から４９のいずれかに記載の組合せ。
  51. 前記ＴＬＲペプチドアゴニストが、ＴＬＲ２ペプチドアゴニスト及び／又はＴＬＲ４ペプチドアゴニストである、請求項１から５０のいずれかに記載の組合せ。
  52. 前記ＴＬＲペプチドアゴニストが、アネキシンＩＩ又はその免疫調節性断片である、請求項１から５１のいずれかに記載の組合せ。
  53. 前記ＴＬＲペプチドアゴニストが、配列番号４９又は５０のアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％の配列同一性を有するその（機能的）配列変異体を含む又はからなる、請求項１から５２のいずれかに記載の組合せ。
  54. 前記ＴＬＲアゴニストが、国際公開第ＷＯ２０１２／０４８１９０Ａ１号の配列番号７のアミノ酸配列、又はその断片又はその変異体を含む又はからなる、請求項１から５３のいずれかに記載の組合せ。
  55. 前記ＴＬＲアゴニストが、配列番号５２のアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％の配列同一性を有するその（機能的）配列変異体を含む又はからなる、請求項１から５４のいずれかに記載の組合せ。
  56. 前記ＴＬＲアゴニストが、配列番号５３のアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％の配列同一性を有するその（機能的）配列変異体を含む又はからなる請求項１から５５のいずれかに記載の組合せ。
  57. 前記ＴＬＲアゴニストが、配列番号５１のアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％の配列同一性を有するその免疫調節性断片又は（機能的）配列変異体を含む、請求項１から５６のいずれかに記載の組合せ。
  58. 前記複合体が、１超のＴＬＲペプチドアゴニスト、特に２、３、４、５、６、７、８、９、１０以上のＴＬＲペプチドアゴニストを含む、請求項１から５７のいずれかに記載の組合せ。
  59. 前記複合体の前記少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ（又は前記多重抗原性ドメイン）が、前記複合体の前記細胞透過性ペプチドのＣ末端に配置され、前記細胞透過性ペプチドと前記少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ（又は前記多重抗原性ドメイン）とが、任意に、更なる成分、例えば、リンカー、スペーサー、又は前記複合体の前記ＴＬＲペプチドアゴニストによって結合される、請求項１から５８のいずれかに記載の組合せ。
  60. 前記複合体が、ポリペプチド又はタンパク質であり、
    ａ）前記細胞透過性ペプチドが、配列番号６（ＣＰＰ３／Ｚ１３）、配列番号７（ＣＰＰ４／Ｚ１４）、配列番号８（ＣＰＰ５／Ｚ１５）、又は配列番号１１（ＣＰＰ８／Ｚ１８）のアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％の配列同一性を有するその（機能的）配列変異体（前記ペプチドの細胞透過能を損なうことなく）を含む又はからなるアミノ酸配列を有し；
    ｂ）前記少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープが、ペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質であり、好ましくは少なくとも１つの癌エピトープを含む又はからなり；
    ｃ）前記ＴＬＲペプチドアゴニストが、ＴＬＲ２ペプチドアゴニスト及び／又はＴＬＲ４ペプチドアゴニストである、
    請求項１から５９のいずれかに記載の組合せ。
  61. 前記複合体が、組換えポリペプチド又は組換えタンパク質であり、前記複合体の主鎖のＮ末端からＣ末端方向に、成分ａ）～ｃ）が以下の順番：
    （α）成分ａ）－成分ｂ）－成分ｃ）；又は
    （β）成分ｃ）－成分ａ）－成分ｂ）
    で配置され、
    成分は、更なる成分、特に、リンカー又はスペーサーによって結合されることができる請求項１から６０のいずれかに記載の組合せ。
  62. 前記複合体が、配列番号５４のアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％の配列同一性を有するその（機能的）配列変異体を含む又はからなる請求項１から６１のいずれかに記載の組合せ。
  63. 前記ＳＴＩＮＧアゴニストが環状ジヌクレオチド（ＣＤＮ）系ＳＴＩＮＧアゴニストである、請求項１から６２のいずれかに記載の組合せ。
  64. 前記ＳＴＩＮＧアゴニストが、ＡＤＵ－Ｓ１００、ＭＫ－１４５４、Ｅ－７７６６、ＭＫ－２１１８、ＢＭＳ－９８６３０１、ＩＭＳＡ－１０１、ＳＢ－１１２８５、ＳＹＮＢ－１８９１、ＧＳＫ－３７４５４１７、ＴＡＫ－６７６、及びＴＴＩ－１０００１からなる群から選択される請求項１から６３のいずれかに記載の組合せ。
  65. 前記ＳＴＩＮＧアゴニストが、式Ｉの化合物、又はその溶媒和物、又はその水和物、又はその塩である、請求項１から６３のいずれかに記載の組合せ。
    Figure 2023545178000081
     （式中、Ｒ１は、Ｈ、Ｆ、－Ｏ－Ｃ１－３アルキル、及びＯＨからなる群から選択され、
    Ｒ２はＨである、又は
    Ｒ２は－ＣＨ２－であり、Ｒ１は－Ｏ－であり、－ＣＨ２－Ｏ－ブリッジを形成し、
    Ｒ３は、Ｎ９窒素を介して結合された、プリン、アデニン、グアニン、キサンチン、ヒポキサンチンからなる群から選択されたプリン核酸塩基である。）
  66. 前記ＳＴＩＮＧアゴニストが、式Ｉａの化合物、又はその溶媒和物、又はその水和物、又はその塩である、請求項６５に記載の組合せ。
    Figure 2023545178000082
  67. 前記ＳＴＩＮＧアゴニストが、式Ｉｂの化合物、又はその溶媒和物、又はその水和物、又はその塩である、請求項６５に記載の組合せ。
    Figure 2023545178000083
  68. 前記ＳＴＩＮＧアゴニストが、式Ｉａ．１の化合物、又はその溶媒和物、又はその水和物である、請求項６６に記載の組合せ。
    Figure 2023545178000084
  69. 前記ＳＴＩＮＧアゴニストが、式Ｉａ．２の化合物、又はその溶媒和物、又はその水和物である、請求項６６に記載の組合せ。
    Figure 2023545178000085
  70. 前記ＳＴＩＮＧアゴニストが、式Ｉａ．３の化合物、又はその溶媒和物、又はその水和物である、請求項６６に記載の組合せ。
    Figure 2023545178000086
  71. 前記ＳＴＩＮＧアゴニストが、式Ｉｂ．１の化合物、又はその溶媒和物、又はその水和物である、請求項６７に記載の組合せ。
    Figure 2023545178000087
  72. 前記ＳＴＩＮＧアゴニストが、式IIの化合物、又はその塩である、請求項１から６３のいずれかに記載の組合せ。
    Figure 2023545178000088
     （式中、Ｂａｓｅ１及びＢａｓｅ２は、独立して、Ｎ９窒素原子を介して結合された、プリン、アデニン、グアニン、キサンチン、ヒポキサンチンからなる群から選択される。）
  73. 前記ＳＴＩＮＧアゴニストが、式ＩＩ－１の化合物、又はその溶媒和物、又は水和物である、請求項７２に記載の組合せ。
    Figure 2023545178000089
  74. 前記ＳＴＩＮＧアゴニストが、式ＩＩ－２の化合物、又はその溶媒和物、又は水和物である、請求項７２に記載の組合せ。
    Figure 2023545178000090
  75. 前記ＳＴＩＮＧアゴニストが、式ＩＩ－３の化合物、又はその溶媒和物、又は水和物である、請求項７２に記載の組合せ。
    Figure 2023545178000091
  76. 前記ＳＴＩＮＧアゴニストが、式ＩＩ－４の化合物、又はその溶媒和物、又は水和物である、請求項７２に記載の組合せ。
    Figure 2023545178000092
  77. 前記ＳＴＩＮＧアゴニストが、請求項６５から７６のいずれかで定義される化合物の実質的に純粋な（Ｓｐ，Ｓｐ）、（Ｒｐ，Ｒｐ）、（Ｓｐ，Ｒｐ）、又は（Ｒｐ，Ｓｐ）立体異性体、又はその塩であって、他の可能なジアステレオマーに対して少なくとも９０％純粋である、請求項１から６３のいずれかに記載の組合せ。
  78. 前記ＳＴＩＮＧアゴニストが、請求項６５から７６のいずれかで定義される化合物の実質的に純粋な（Ｒｐ，Ｒｐ）立体異性体、又はその塩であって、他の可能なジアステレオマーに対して少なくとも９０％純粋である、請求項１から６３のいずれかに記載の組合せ。
  79. 前記ＳＴＩＮＧアゴニストが、請求項６５から７８のいずれかで定義される化合物の薬学的に許容される塩である、請求項１から６３のいずれかに記載の組合せ。
  80. 前記ＳＴＩＮＧアゴニストが、請求項６８から７１又は７３から７６のいずれかで定義される化合物のナトリウム塩である、請求項１から６３のいずれかに記載の組合せ。
  81. 前記ＳＴＩＮＧアゴニスト及び前記複合体が、同じ組成物に含まれる、請求項１から８０のいずれかに記載の組合せ。
  82. 前記ＳＴＩＮＧアゴニスト及び前記複合体が、別々の組成物に提供される、請求項１から８０のいずれかに記載の組合せ。
  83. 前記複合体が、配列番号５５のアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％の配列同一性を有するその（機能的）配列変異体を含む又はからなり、
    前記ＳＴＩＮＧアゴニストがＡＤＵ－Ｓ１００である、請求項１から６４、８０、及び８１のいずれかに記載の組合せ。
  84. 前記複合体が、配列番号５５のアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％の配列同一性を有するその（機能的）配列変異体を含む又はからなり、
    前記ＳＴＩＮＧアゴニストが、式Ｉａ．１、Ｉａ．２、Ｉａ．３、Ｉｂ．１、ＩＩ－１、ＩＩ－２、ＩＩ－３、及びＩＩ－４によって表される化合物からなる群から選択される１つの化合物、又はその溶媒和物、又は水和物である、請求項１から６３、６８から７１、７３から７６、８０、及び８１のいずれかに記載の組合せ。
  85. 前記複合体が、配列番号５４のアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％の配列同一性を有するその（機能的）配列変異体を含む又はからなり、前記ＳＴＩＮＧがＡＤＵ－Ｓ１００である、請求項１から６４，８０、又は８１のいずれかに記載の組合せ。
  86. 前記複合体は、配列番号５４のアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％の配列同一性を有するその（機能的）配列変異体を含む又はからなり、
    前記ＳＴＩＮＧアゴニストが、式Ｉａ．１、Ｉａ．２、Ｉａ．３、Ｉｂ．１、ＩＩ－１、ＩＩ－２、ＩＩ－３、及びＩＩ－４によって表される化合物からなる群から選択される１つの化合物、又はその溶媒和物、又は水和物である、請求項１から６３、６８から７１、７３から７６、８０、及び８１のいずれかに記載の組合せ。
  87. 医薬における使用のための、請求項１から８６のいずれかに記載の組合せ。
  88. 癌の予防及び／又は治療における使用のための請求項１から８７のいずれかに記載の組合せ。
  89. ＳＴＩＮＧアゴニスト及び前記複合体が、ほぼ同時に投与される、請求項８７から８８のいずれかに記載の使用のための組合せ。
  90. 前記ＳＴＩＮＧアゴニスト及び前記複合体が、投与の同じ経路を介して投与される、請求項８７から８９のいずれかに記載の使用のための組合せ。
  91. 前記ＳＴＩＮＧアゴニスト及び前記複合体が、投与の異なる経路を介して投与される、請求項９５から９９のいずれかに記載の化合物。
  92. 前記ＳＴＩＮＧアゴニストが、全身に投与される、請求項８７から９１のいずれかに記載の使用のための組合せ。
  93. 前記複合体が、全身に投与される、請求項８７から９２のいずれかに記載の使用のための組合せ。
  94. 前記複合体が、繰り返して投与される、請求項８７から９３のいずれかに記載の使用のための組合せ。
  95. 前記ＳＴＩＮＧアゴニストが、繰り返して投与される、請求項８７から９４のいずれかに記載の使用のための組合せ。
  96. 前記ＳＴＩＮＧアゴニスト及び前記複合体が同じ日に投与される、請求項８７から９５のいずれかに記載の使用のための組合せ。
  97. （ｉ）ＳＴＩＮＧアゴニストと；
    （ｉｉ）以下ａ）～ｃ）：

    ａ）細胞透過性ペプチド；
    ｂ）少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ；及び
    ｃ）ＴＬＲペプチドアゴニスト
    を含む複合体と、
    を含むキットであって、成分ａ）～ｃ）が共有結合されることを特徴とするキット。
  98. 前記ＳＴＩＮＧアゴニストが、請求項６３から８０及び８３から８６のいずれかで定義される、請求項９７に記載のキット。
  99. 前記複合体が、請求項２から６２及び８３から８６のいずれかで定義される、請求項９７から９８のいずれかに記載のキット。
  100. 特に、前記ＳＴＩＮＧアゴニストと前記複合体との組合せを使用することにより、例えば、癌を治療する説明書を含む添付文書又はラベルを更に含む、請求項９７から９９のいずれかに記載のキット。
  101. 医薬における使用のための請求項９７から１００のいずれかに記載のキット。
  102. 癌の予防及び／又は治療における使用のための請求項９７から１０１のいずれかに記載のキット。
  103. （ｉ）ＳＴＩＮＧアゴニストと；
    （ｉｉ）以下ａ）～ｃ）：

    ａ）細胞透過性ペプチド；
    ｂ）少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ；及び
    ｃ）ＴＬＲペプチドアゴニスト
    を含む複合体と、
    を含む組成物であって、成分ａ）～ｃ）が共有結合されることを特徴とする組成物。
  104. 前記ＳＴＩＮＧアゴニストが、請求項６３から８０及び８３から８６のいずれかで定義される、請求項１０３に記載の組成物。
  105. 前記複合体が、請求項２から６２及び８３から８６のいずれかで定義される、請求項１０３から１０４のいずれかに記載の組成物。
  106. 前記組成物が、薬学的に許容される担体を含む、請求項１０３から１０５のいずれかに記載の組成物。
  107. 前記組成物がワクチンである、請求項１０３から１０６のいずれかに記載の組成物。
  108. 医薬における使用のための、請求項１０３から１０７のいずれかに記載の組成物。
  109. 癌の予防及び／又は治療における使用のための、請求項１０３から１０８のいずれかに記載の組成物。
  110. 必要とする対象において、癌を治療する、又は抗腫瘍応答を開始、増強、又は延長する方法であって、前記方法が、前記対象に、有効量の以下：
    （ｉ）ＳＴＩＮＧアゴニストと；
    （ｉｉ）以下ａ）～ｃ）：
    ａ）細胞透過性ペプチド；
    ｂ）少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ；及び
    ｃ）ＴＬＲペプチドアゴニスト
    を含む複合体と、
    を投与することを含む方法であって、成分ａ）～ｃ）が共有結合されることを特徴とする方法。
  111. 患者において腫瘍抗原特異的Ｔ細胞による腫瘍の浸潤を増加させる方法であって、前記方法は、腫瘍又は癌に罹患している患者に、以下：
    （ｉ）ＳＴＩＮＧアゴニストと；
    （ｉｉ）以下ａ）～ｃ）：
    ａ）細胞透過性ペプチド；
    ｂ）少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ；及び
    ｃ）ＴＬＲペプチドアゴニスト
    を含む複合体と、

    を投与することを含み、成分ａ）～ｃ）が共有結合されることを特徴とする方法。
  112. 癌を予防及び／又は治療する併用療法であって、前記併用療法は、以下：
    （ｉ）ＳＴＩＮＧアゴニストと；
    （ｉｉ）以下ａ）～ｃ）：
    ａ）細胞透過性ペプチド；
    ｂ）少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ；及び
    ｃ）ＴＬＲペプチドアゴニスト
    を含む複合体との投与を含み、成分ａ）～ｃ）が共有結合されることを特徴とする併用療法。
  113. 前記対象が癌又は腫瘍を罹患している、請求項１１０又は１１１に記載の方法、又は請求項１１２に記載の併用療法。
  114. 前記対象が、内分泌腫瘍、胃腸腫瘍、尿生殖器又は女性生殖器腫瘍、乳癌、頭頚部腫瘍、造血器腫瘍、皮膚腫瘍、胸部又は呼吸器腫瘍、好ましくは転移性結腸直腸癌等の結腸直腸癌を罹患している、請求項１１３に記載の方法又は併用療法。
  115. ＳＴＩＮＧアゴニストとの組合せにおける使用のための、請求項１から６２のいずれかに定義される複合体。
  116. 前記ＳＴＩＮＧアゴニストが、請求項６３から８０のいずれかに定義されるＳＴＩＮＧアゴニストである、請求項１１４に記載の使用のための複合体。
  117. 請求項１から６２のいずれかに定義される複合体との組合せにおける使用のための、ＳＴＩＮＧアゴニスト。
  118. 前記ＳＴＩＮＧアゴニストが、請求項６３から８０のいずれかに定義されるＳＴＩＮＧアゴニストである、請求項１１６に記載の使用のためのＳＴＩＮＧアゴニスト。
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