JP2023540305A - 試料を取り扱うためのシステム、キット、方法、およびプロセス - Google Patents
試料を取り扱うためのシステム、キット、方法、およびプロセス Download PDFInfo
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Abstract
強磁性粒子(FP)に結合した粒子(CE)を含む試料を取り扱うためのシステムおよび方法であって、粒子(CE)が容器(3)の側壁(4)に引き寄せられるように、試料(TS)が内部に配置された容器(3)内に磁場が生成され、試料(TS)の一部は、側壁(4)に接触したままの粒子(CE)を除去せずに(4)、容器(3)の側壁(4)と接触しないように位置合わせ装置(10)によって定位置に保持されたカニューレ(8)を通して吸引される。
Description
関連出願の相互参照
本特許出願は、その全体の開示が参照により本明細書に組み込まれる2020年9月2日に出願されたイタリア特許出願第102020000020890号の優先権を主張する。
本特許出願は、その全体の開示が参照により本明細書に組み込まれる2020年9月2日に出願されたイタリア特許出願第102020000020890号の優先権を主張する。
本発明は、試料を取り扱うためのシステム、キット、方法およびプロセスに関する。
粒子(特に細胞)を含む試料の取り扱いの分野では、1つまたは複数のタイプの粒子が豊富な試料を取得する必要性が感じられる。
これに関連して、現在使用されている方法の1つは、生物学的物質の試料(例えば、血液または血漿の少なくとも一部が除去された血液)を含む試験管に、試料の特定の粒子が選択的にマークされるように上記粒子に特異的なリガンドで機能化された強磁性粒子を含む特定の試薬を手動で挿入する必要がある。
続いて、マーキングされた粒子が試験管壁に集中するように磁場が適用される。この時点で、操作者はピペットを試験管に挿入し、壁に近くない試料の部分を手動で吸い出す。このようにして、マークされた粒子が豊富な試料が(試験管内に)得られ、(その後)適切な試薬を使用して強磁性粒子から分離することができる。
本方法の特に興味深い例は、米国特許第6620627号および論文「Optimization of ferrofluids and protocols for enrichment of breast tumor cells in blood」、Paul A. Liberti, Chandra G. Rao, Leon W. M. M. Terstappen, Journal of Magnetism and Magnetic Materials 225 (2001)、301～307頁に記載されている。
しかし、上記の方法は複雑で、長く、面倒で、不正確であることに留意されたい。実際、必要な作業には時間がかかり、ピペットが試験管の壁に触れないように、試験管を振りすぎないように、試料をすばやく吸い出さないように注意する必要がある。
これらの側面の1つまたは複数のエラーにより、マークされた粒子の一部(またはすべて)も吸い出すリスクが高まる。
さらに、最も高度な訓練を受けた操作者でさえ、ピペット(および特にその先端)が壁から十分な距離に保たれ、正しい吸引速度が適用されることを保証することはできない。
これらの欠点を改善するために、操作者の活動をより迅速かつ再現可能な方法で再現する完全に自動化されたシステムの使用が提案されている。
ただし、これらのシステムは非常に複雑でコストがかかる。
「Optimization of ferrofluids and protocols for enrichment of breast tumor cells in blood」、Paul A. Liberti, Chandra G. Rao, Leon W. M. M. Terstappen, Journal of Magnetism and Magnetic Materials 225 (2001)、301～307頁
本発明の目的は、既知の技術の欠点を少なくとも部分的に克服し、同時に製造が容易で安価な、試料を取り扱うためのシステム、キット、方法、およびプロセスを提供することである。
本発明によれば、以下の独立請求項、好ましくは、独立請求項に直接的または間接的に従属する請求項のいずれか1つで請求されるように、試料を取り扱うためのシステム、キット、方法およびプロセスが提供される。
いくつかの非限定的な実施形態によれば、(特許請求の範囲に記載されている)第1のタイプの粒子は、CTC、CEC(Circulating Endothelial Cells: 循環内皮細胞)、CMC(Circulating Melanoma Cells: 循環メラノーマ細胞)、CMMC(Circulating Multiple Myeloma Cells: 循環多発性骨髄腫細胞)、tdEV(tumor derived Extra Vescicles: 腫瘍由来外胞)、エキソソーム、胎児細胞、幹細胞、その他の希少細胞、ウイルス、細菌、FFPE(Formalin-Fixed Paraffin-Embedded: ホルマリン固定パラフィン包埋)、精子、血液細胞、上皮細胞、DNA、RNA、ミクロスフェア、からなる群から選択される。
特に、(特許請求の範囲に記載されている)第1のタイプの粒子は細胞である。
一部の非限定的な場合では、第1のタイプの粒子は、CTC、CEC(循環内皮細胞)、CMC(循環メラノーマ細胞)、CMMC(循環多発性骨髄腫細胞)、tdEV(腫瘍由来外胞)、エキソソーム、胎児細胞、幹細胞、その他の希少細胞、ウイルス、細菌、FFPE(ホルマリン固定パラフィン包埋)、精子、血液細胞、上皮細胞、DNAおよびRNA、からなる群から選択される。
例えば、(特許請求の範囲に記載されている)第1のタイプの粒子は、腫瘍細胞、白血球(WBC)、間質細胞、精子、循環腫瘍細胞(CTC: circulating tumor cells)、胞子、胎児細胞、リポソーム、エキソソーム、上皮細胞、赤芽球、栄養膜、ウイルス、細菌、赤血球(およびそれらの組み合わせ)、からなる群から選択される。一部の特定の非限定的な場合では、第1のタイプの粒子は循環腫瘍細胞(CTC)である。
細胞は生きていても固定されていてもよい。
そうでない旨が明示的に指定されていない限り、本明細書では、次の用語は以下に示す意味を有する。
強磁性粒子とは、最大寸法が約10μm未満(有利には、約1μm未満、特に約100nm)の粒子を意味する。いくつかの好ましいが非限定的な実施形態によれば、強磁性粒子の最大寸法は、少なくとも約40nm(特に、約200nmまで)である。
粒子の寸法は、標準モードで目盛付きの顕微鏡または目盛付きのスライド(粒子が沈着する)を使用する通常の顕微鏡で測定され得る。
本明細書において、粒子の寸法とは、粒子の長さ、幅、および厚さを意味する。
本発明は、その非限定的な実施形態例を示す添付の図面を参照して以下に説明される。
図1において、本発明の第1の態様によれば、符号1は、第1のタイプの粒子CEと、前記第1のタイプの粒子CEに結合した少なくとも1つの強磁性粒子FPとをそれぞれが含む処理済み粒子TPを含む処理済み試料TS(treated sample: 特に生物学的起源の。図15を参照)を処理するためのシステム全体を示す。
システム1は、処理チャンバ2(特に図4および図6を参照)と、処理済み試料TSを収容するように構成され(設計され)、(少なくとも部分的に)処理チャンバ2内に配置され、少なくとも1つの側壁4を有する(図7および図8も参照)容器3(特に試験管)と、底部5(特に底壁5)および底部5の反対側の(端部)開口部6と、処理済み粒子TPの少なくとも一部を容器3の側壁4上に移動(特に、接触し、接触を維持するために)させるために、処理チャンバ2の少なくとも一部に少なくとも磁場を生成するように構成された(設計された)磁気装置7と、を備えている。
必ずしもそうではないがより正確には、処理チャンバ2は、いくつかの非限定的な実施形態によれば、磁気四重極を含む磁気装置7の一部である。
いくつかの非限定的な実施形態によれば、磁気装置7は、少なくとも1つの電磁石(特に、4つの電磁石)を備えている。
代替的に(または追加的に)、磁気装置7は、少なくとも1つの永久磁石(特に、4つの永久磁石)を備えている。
必須ではないが有利なことに、磁気装置7(特に、各電磁石および/または永久磁石)は、少なくとも3000ガウス(特に、少なくとも4000ガウス、特に最大7000ガウス、より具体的には、磁場は、ホール効果磁力計を使用して測定でき、例えば、Hirst Magnetic Instruments Ltd.(Tesla House, Tregoniggie, Falmouth, Cornwall)の装置GM07を使用する)の磁場を(その表面上に、特に軸対称点において)生成するように構成される。
いくつかの非限定的な実施形態によれば、容器3(特に図6から図8を参照)は、開口部6が配置される第1の端部と、第1の端部の反対側にあり、底部5が配置される第2の端部とを有する。特に、側壁4は、第2の端部に向かって(特に、底部5に向かって)先細になっている。
一部の非限定的な場合では、底部5と側壁4との間に中断がない。
いくつかの非限定的な実施形態によれば、容器3は、実質的に円形(内側)の断面を有する(特に、側壁4は、容器3の長手方向延長軸Aの周りに円形に延在する)。
システム1は、容器3の内部に配置された開放端部9を有するカニューレ8と、容器3の領域に実質的に固定式に配置され、カニューレ8が貫通する貫通孔11(特に図9を参照)を有する位置合わせ装置10と、処理済み試料TSの一部がカニューレ8を通って容器3の外に(および処理チャンバ2の外に)運ばれるように、カニューレ8の内側に窪みを作るように構成された(設計された)吸引装置12(図1および図2)と、をさらに備えている。
特に、カニューレ8は容器3の開口部6を通って延在している。
カニューレ8および位置合わせ装置10(特に、貫通孔11)は、(カニューレ8が少なくとも部分的に容器3の内側に延在し、)開放端部9が容器3の内側に配置されるように容器3の側壁4から離れて(離間して)構成される。
このようにして、処理済み粒子TPがカニューレ8を通して吸引される可能性が減少することが実験的に観察されたことに留意すべきである。より正確には、この結果は、位置合わせ装置10およびカニューレ8の構造のおかげで得られることが観察された。これらの場合、複雑なロボット装置は必要なく、操作者は、位置合わせ装置10を通して(特に、貫通孔11を通して)カニューレ8を適切な速度で、カニューレが側壁4に接触するリスクを軽減しながら処理チャンバ2内(より正確には容器3内)に挿入することができ、したがって、処理済み粒子TPの移動を引き起こし、その後、カニューレ8を通して吸引することができる。
換言すれば、位置合わせ装置10(特に、貫通孔11)は驚くべきことにカニューレ8を処理チャンバ2に挿入するためのガイドとして働き、操作者の活動をより迅速かつ正確にする。
いくつかの非限定的な実施形態によれば、カニューレ8および位置合わせ装置10(特に、貫通孔11)は、カニューレ8が容器3の長手方向延長軸A(特に軸A)に実質的に平行に延在するように構成されている。
必須ではないが有利なことに、開放端部9は底部5と接触している。このようにして、カニューレ8の垂直位置は底部5の支持によって保証される。
特に(例えば、図2、図4および図8を参照)、開放端部9は、カニューレ8の長手方向延在範囲に対して斜めに延在する(より具体的には、端部9は、軸Aに対して斜めに延在する)。
このように、端部9が底部5と接触しているときも、流体は端部9を通過することができる。
必須ではないが有利なことに、カニューレ8は、取り外し可能に貫通孔11を通って延在する。すなわち、カニューレ8は、貫通孔11を通過させることにより、位置合わせ装置10(より正確には、容器3)に挿脱することができる。
特に、貫通孔11は、使用中、カニューレ8が貫通孔11を通して挿入されている間、カニューレ8の開放端部9(特に、すべてのカニューレ8)が側壁4から間隔をあけて維持されるように構成されている。
必須ではないが有利なことに、貫通孔9は、特にカニューレ8の長手方向延在範囲(より具体的には、軸Aに平行)の少なくとも約0.5cmにわたって、カニューレ8の周りに(特にカニューレ8の外面と接触して)延びる内面を有する。
追加的または代替的に、貫通孔の内面は、カニューレ8の幅(より正確には、直径)の少なくとも2.5倍にわたってカニューレ8の周りに延在する。
非限定的な実施形態によれば、貫通孔11は、カニューレ8の幅(外径)より約1mm未満(特に、約0.5mm未満、より具体的には、約0.3mm未満、さらにより具体的には、少なくとも約0.1mm)大きい幅(内径)を有する。
一部の非限定的な場合において、貫通孔11は、実質的に円形(特に、実質的に一定)の断面を有する。
特に、カニューレ8は、貫通孔11の内面とカニューレ8の外面との間の接触のおかげで、実質的に適所に保持される。特に、上でよりよく説明されているように、カニューレ8は、底部5との接触のおかげで、実質的に垂直な位置に保たれる。
必須ではないが有利なことに、カニューレ8は実質的に剛性である(言い換えると、使用中(以下に説明する方法を参照)、および/または貫通孔11を通して挿入されるときに著しく変形しない)。
いくつかの好ましい非限定的な実施形態によれば、カニューレ8は実質的に真っ直ぐである。追加的にまたは代替的に、貫通孔11は実質的に真っ直ぐである。
特に、カニューレ8および貫通孔11は、容器3の長手方向延在方向に(特に軸Aに平行に、より具体的には軸Aに沿って)延在する。
必須ではないが有利なことに、位置合わせ装置10は容器3の開口部6に配置される。このようにして、位置合わせ装置10(特に、その貫通孔11)は、カニューレ8によってより容易にアクセスされ得る(したがって、操作者による容器3へのカニューレ8の挿入が容易になる)。
特に、位置合わせ装置10は、開口部6を(空気が通過できないように)部分的に閉鎖する。
必須ではないが有利なことに、位置合わせ装置10は容器3に(特に開口部6に)取り外し可能に配置される。このようにして、処理済み試料TS(または処理される試料)は、より容易に容器3に挿入され、そこから取り出されることが可能である。
いくつかの非限定的な実施形態によれば、位置合わせ装置10(特に貫通孔11)およびカニューレ8は、カニューレ8が側壁4から離れて(離間して)配置されるように構成される。
必須ではないが有利なことに、システム1(特に、吸引装置12)はまた、流体搬送式にカニューレ8に接続された収集チャンバ13であって、処理チャンバ2(および容器3)の外側に配置された収集チャンバ13(特に、図1および図2を参照)を備えている。吸引装置12は、処理済み試料TSの上記の部分がカニューレ8を通って収集チャンバ13に運ばれるように、カニューレ8の内側に窪みを作るように構成(設計)されている。
いくつかの非限定的な実施形態によれば、(生物学的起源の)処理済み試料TSは、任意の生物学的液体を含む(特に、それらである)。
必須ではないが有利なことに、処理済み試料TSは、血液、血漿、唾液、尿、液体細胞診、細胞(特に組織の)を懸濁液(再懸濁)に含むスワブおよび/または細胞(特に組織の)を懸濁液(再懸濁)に含む培地、を含む(特に、それである)。
いくつかの非限定的な実施形態によれば、処理済み試料TSは、血液、血漿、唾液、尿、およびそれらの組み合わせを含む(特に、それらである)。
いくつかの特定の非限定的な場合では、処理済み試料TSは、血液および/または血漿(特に、血液)を含む(特に、それらである)。
いくつかの非限定的な実施形態によれば、システム1(特に、吸引装置12)は、カニューレ8を収集チャンバ13に流体搬送式に接続するダクト14も備えている。
必須ではないが有利なことに、吸引装置12およびカニューレ8(および、必要に応じてダクト)は、(開放端部9が水に浸されたときに)開放端部9を通る(カニューレ8を通る)、約30mL/分まで(より正確には、未満)、特に、約15mL/分まで(より正確には、未満)、特に、約13mL/分まで(より正確には、未満)の水流速度を得るように構成される。
このようにして、容器3から処理済み粒子TPを引き出すリスクがさらに低減される。
いくつかの非限定的な実施形態によれば、吸引装置12およびカニューレ8(および、特に前記ダクト14)は、(開放端が水に浸されたときに)開放端部9を通る(カニューレ8を通る)、少なくとも約1mL/分、より具体的には少なくとも約3mL/分、さらにより具体的には少なくとも約4mL/分の水流速度を得るように構成される。
流速は常温(および外圧1気圧)で10mLの水を吸引したときの平均流速として算出される。
必須ではないが有利なことに、吸引装置12(および、特にカニューレ8、さらに、特にダクト14)は、開放端部9を通して(カニューレ8を通して)約50mLまで(特に約30mLまで、さらに、特に約15mLまで)の液体を吸引するように構成(設計)されている。
追加的にまたは代替的に、吸引装置12(および、特に収集チャンバ13)は、開放端部9を通して(カニューレ8を通して)少なくとも約20μL(特に、少なくとも約1mL;より具体的には、少なくとも約3mL)の液体を吸引するように構成されている(設計されている)。
いくつかの非限定的な実施形態によれば、吸引装置12は、蠕動ポンプ、真空ポンプ、注射器ポンプ、予荷重ばねによって作動する注射器、または重力によって作動する注射器からなる群から選択される装置を含む(特に、それである)。
場合によっては(図1および図2に示されているように)、吸引装置12は、予め負荷をかけられたばねによって作動する注射器を含む(特に、それである)。
特に(これらの場合、図2によりよく示されているように)、吸引装置12は、収集チャンバ13およびピストン16(収集チャンバ13内で摺動する)を備える注射器15と、ピストン16に動きを与え、その結果、収集チャンバ13内に窪みを作り出すように構成された(設計された)ばね17とを備えている。前記窪みは、容器3から処理済み試料TSの上述の部分を吸引するために、(特に、ダクト14を通して)カニューレ8に移される。
いくつかの具体的であるが非限定的な実施形態によれば、ばね17(円形である)は、約28～34mm(特に、約31mm)の内径と、約31～37mm(特に約34mm)の外径と、直径約1.2～1.7mm(特に約1.5mm)のワイヤと、約100～115mm(特に約107mm)の長さとを有する。
特に、ばね17はステンレス鋼で作られている。
ばね17は、弾性定数が220N/m～250N/m程度(特に234N/m程度)である場合がある。
特に、ばね17は、収集チャンバ13の第1の端部18から離れる動きをピストン16に与えるように構成される(ように設計される)。
特に、ダクト14は、第1の端部18から延在する。
必須ではないが有利なことに、吸引装置12は、ばね17の端部の支持を画定するように第1の端部18とは反対側の収集チャンバ13の第2の端部20に配置された収集チャンバ13のフランジと一体的に取り付けられた隣接要素19をさらに備えている。特に、吸引装置12はまた、収集チャンバ13の外部のピストン16の一端と一体的に取り付けられ、ばね17の他端に対する支持を画定する第2の隣接要素21を備えている。
隣接要素19および21には、互いに連結された隣接要素19および21を維持するように互いに連結可能な溝22およびピン31が設けられている。
特に、使用中、操作者は、ピン31がそれぞれの溝22に入るまで、ピストン16を第1の端部18に向かって押すことができる。この時点で、隣接要素21を回転させることにより、隣接要素19と21との間の結合が安定し、ばね17の予荷重が得られる。
このようにして、必要に応じて、操作者は、隣接要素19を回転させることによって、上述のようにピストン16を動かすばね17を作動させる。
いくつかの非限定的な実施形態によれば、容器3は、約55mLまで(特に、約30mLまで、特に、約17mLまで、特に、約13mLまで、特に、少なくとも約100μLの、より具体的には、少なくとも約1.5mLの、特に、少なくとも約8mLの)の内容積を有する。
いくつかの非限定的な実施形態によれば、カニューレ8は、約12mmまで(特に、約10mmまで;特に、約1mmまで;より具体的には、約0.9mmまで)の内径を有する。特に、カニューレ8は、少なくとも約0.3mm、より具体的には、少なくとも約0.5mmの内径を有する。
追加的または代替的に、ダクト14は、約12mmまで(特に、約10mmまで;特に、約1mmまで;より具体的には、約0.9mmまで)の内径を有する。特に、ダクト14は、少なくとも約0.3mm、より具体的には、少なくとも0.5mmの内径を有する。
いくつかの非限定的な実施形態によれば、少なくとも1つの(各)強磁性粒子FP(各処理済み粒子TPの)は、(少なくとも)(その粒子に特異的な)抗体によって第1のタイプの(それぞれの)粒子CEに結合される。例えば、第1のタイプの粒子CEがCTCである場合、抗体は(特に、選択的に)EPCAM(Epithelial Cell Adhesion Molecule: 上皮細胞接着分子)に結合する。
特に図15を参照すると、必須ではないが有利なことに、処理済み粒子TPにおいて、数個の強磁性粒子FPが互いに結合して、磁場に対する前記処理済み粒子TPの応答を増大させる。例えば、この目的のために、デスチオビオチンDTBとストレプトアビジンSTRの間の相互作用を利用できる。
本発明のさらなる態様によれば、(特に、上で定義したように)処理済み試料TSを取り扱うためのキットが提供される。
特に、キットは、上述のシステム1を提供するように構成(設計)されている。
キットは、処理チャンバ2を有し、処理チャンバ2内に磁場を生成するように構成された(設計された)磁気装置7と、処理済み試料TSを収容し、処理チャンバ2内に収容されるように構成され(設計され)、少なくとも側壁4、底部5、および底部5の反対側の(端)開口部6を有する容器3と、開放端部9を有するカニューレ8と、を含む。
キットはさらに、容器3に実質的に固定される(しかし、特に操作者によって取り外し可能である)方法で取り付けられるように構成された(設計された)位置合わせ装置10であって、カニューレ8が側壁4から離間されるようにカニューレ8によって係合され、カニューレ8を実質的に固定された位置および向きで維持する貫通孔11を有するように構成された(設計された)、位置合わせ装置10と、処理済み試料TSの一部がカニューレ8を通って容器3および処理チャンバ2の外に運ばれるように、カニューレ8の内側に窪みを形成するように構成された(設計された)吸引装置12と、を含む。
いくつかの非限定的な実施形態によれば、キットは、カニューレ8と吸引装置12を流体搬送式に接続するように構成された(設計された)ダクト14を備えている。
いくつかの非限定的な実施形態によれば、位置合わせ装置10は、容器3の開口部6の領域に配置されるように構成される(設計される)。
特に、ダクト14は、カニューレ8と結合するように構成された(設計された)第1の端部と、吸引装置12と結合するように構成された(設計された)第2の端部とを有する。
特に、ダクト8は柔軟である。
必須ではないが有利なことに、キットは、第1のタイプの粒子CEと(特に、選択的に)結合するように設計された(構成された)強磁性粒子FPを含む。
特に、強磁性粒子には、第1のタイプの粒子CEと(より具体的には、選択的に)結合するように構成された(設計された)少なくとも1つの抗体が提供される。例えば、第1のタイプの粒子CEがCTCである場合、抗体は、EPCAM(上皮細胞接着分子)と(特に、選択的に)結合するように設計される。
いくつかの非限定的な実施形態によれば、キットは、いくつかの粒子(特に、第1のタイプの粒子CE)を(特に、実質的に選択的に)マーキングするためのマーカーをさらに含む。
必須ではないがより正確に言えば、マーカー(特に蛍光性である)は1つまたは複数の特定の波長(特に紫外線)で発光する。
必須ではないが有利なことに、マーカーは、腫瘍細胞(特に、CTC)のマーカー、白血球(WBC)のマーカー、細胞の核のマーカー、およびそれらの組み合わせ(すなわち、それらの混合物)からなる群より選択される。
いくつかの非限定的な例によれば、マーカーは、(特に、腫瘍細胞のマーキング用、より具体的にはCTCのマーキング用の)サイトケラチン、特に白血球(WBC)のマーキング用のCD45(PTPRC-タンパク質チロシンホスファターゼ、C型受容体)、特に細胞の核をマーキングするためのDAPI(4',6-diamidino-2-phenylindole)、およびそれらの組み合わせ(すなわち、それらの混合物)、からなる群から選択される。
必須ではないが有利なことに、上記のキットの様々な構成要素は、システム1に関して上記で定義したとおりである。
本発明のさらなる態様によれば、処理済み試料TSを取り扱うための取り扱い方法が提供される。
本方法は、第1のタイプの粒子CEおよび第1のタイプの粒子CEに結合した少なくとも1つの強磁性粒子FPをそれぞれが含む処理済み粒子TPを含む(生物学的起源の)処理済み試料TSが、少なくとも1つの側壁4、底部5、および底部5の反対側の(端部)開口部6を有する容器3内にある予備ステップと、容器3が磁気装置7の処理チャンバ2内に挿入される挿入ステップと、予備ステップに続き、貫通孔11を有する位置合わせ装置10を容器3に安定的に結合するステップである結合ステップと、を含む。
必須ではないが有利なことに、挿入ステップは予備ステップの後にある。
必須ではないが有利なことに、予備ステップ、挿入ステップ、および結合ステップは、操作者によって(特に手作業で)実行される。
本方法は、結合ステップに続き、開放端部9を有するカニューレ8が、開放端部9が、側壁4から分離された(離間した)容器3の内側に配置される所定の位置に到達するまで側壁4に接触することなく(特に、底部5に接触するように)貫通孔11を通ってスライドさせられる位置決めステップと、挿入ステップに続き、処理済み粒子TPの少なくとも一部を側壁4と接触させる磁場を磁気装置7が生成する(特に、生成するように操作される)活性化ステップと、位置決めステップおよび操作ステップに続く吸引ステップであって、吸引装置12がカニューレ8の内側に窪みを作り、処理済み試料TSの一部がカニューレ8を通って容器3の外に(そして前記処理チャンバ2の外に)運ばれ、処理済み粒子TPの少なくとも一部(の少なくとも一部)を容器3の内部に(特に、側壁4と接触して)残す、吸引ステップと、をさらに含む。
必須ではないが有利なことに、位置決めステップ(操作ステップ)および吸引ステップは、操作者によって(特に、手で)実行される。特に、吸引ステップ中、操作者は吸引装置12を作動させる。
必須ではないが有利なことに、本方法は、上記のキットによって実施される。
いくつかの非限定的な実施形態によれば、処理済み試料TSは、その少なくとも大部分が吸引ステップ中にカニューレ8を通して容器3の外に運ばれる第2のタイプの粒子(図示せず)を含む。
特に、強磁性粒子FPは、第2のタイプの粒子ではなく、第1のタイプの粒子CEに選択的に結合される。
いくつかの非限定的な場合において、第1のタイプの粒子CEが対象とされる(特に、それらはさらに処理および/または分析される)。これらの場合、特に、第2のタイプの粒子は単に破棄される。
代替的に、第2のタイプの粒子が対象とされる(特に、それらはさらに処理および/または分析される)。これらの場合、特に、第1のタイプの粒子CEは単に破棄される。
いくつかの非限定的な実施形態によれば、少なくとも1つの(それぞれの)強磁性粒子FP(1つの、それぞれ処理済み粒子TPの)は、(少なくとも)1つの抗体(その粒子に特異的な)によって第1のタイプの(それぞれの)粒子CEに結合される。
いくつかの非限定的な実施形態によれば、本方法は、強磁性粒子FPの少なくとも一部が第1のタイプの粒子CEから分離される分離ステップも含む。これらの場合、例えば、デスチオビオチンDTBとストレプトアビジンSTRとの間の相互作用が利用されている場合、ビオチンを使用できる。
必須ではないが有利なことに、処理済み試料TSは、第1のタイプの粒子CEとは異なる別のタイプの粒子を含む。これらの場合、特に、本方法は、マーカーが実質的に選択的に(特に、別のタイプの粒子に対して)第1のタイプの粒子CEと結合する、または実質的に選択的に(特に、第1のタイプの粒子CEに対して)別のタイプの粒子と結合する、マーキングステップを含む。マーカーにより、第1のタイプの粒子CEと別のタイプの粒子との区別が改善される。
例えば、マーカーは、1つまたは複数の所与の波長(特に紫外線)を有する蛍光分子を含む。
特に、マーカーは、第1のタイプの粒子CEまたは別のタイプの粒子と選択的に結合するように設計された抗体を含む。より具体的には、マーカーは、(少なくとも)抗体(第1のタイプの粒子CEまたは別のタイプの粒子と選択的に結合するように設計されている)および(少なくとも)フルオロフォアから(それぞれ)なる分子を含む(である)。
必須ではないが有利なことに、マーカーは、腫瘍細胞(特に、CTC)のマーカー、白血球(WBC)のマーカー、細胞の核のマーカー、およびそれらの組み合わせ(すなわち、それらの混合物)からなる群から選択される。
いくつかの非限定的な例によれば、マーカーは、(特に、腫瘍細胞のマーキング用の)サイトケラチン、特に白血球(WBC: white blood cells)のマーキング用のCD45(PTPRC-タンパク質チロシンホスファターゼ、C型受容体)、特に核を持つ細胞のマーキング用のDAPI(4',6-diamidino-2-phenylindole)、およびそれらの組み合わせ、からなる群から選択される。
必須ではないが有利なことに、マーキングステップは吸引ステップの後にある。
特に、マーキングステップ中、マーカーを含む溶液が容器3(内部に処理済み粒子TPが配置され、より正確には、処理済み試料TSが配置される)に入れられる。
必須ではないが有利なことに、マーカーを含む溶液が容器3に入れられている間、処理済み粒子TPは、磁気装置7によって生成された磁場のおかげで側壁4と接触したままに保たれる。
いくつかの非限定的な実施形態によれば、マーキングステップ中に、上述のマーカーは、実質的に選択的に(特に、別のタイプの粒子に対して)第1のタイプの粒子CEと結合し、別のマーカー(上記のマーカーとは異なる)は、実質的に選択的に(特に、第1のタイプの粒子CEに対して)、別のタイプの粒子と結合する。
これらの場合、特に、別のマーカーは、第1のタイプの粒子CEと選択的に結合するように設計された抗体を含む。より具体的には、別のマーカーは、(少なくとも)抗体(第1のタイプの粒子CEと選択的に結合するように設計されている)および(少なくとも)フルオロフォアから(それぞれ)なる分子を含む(である)。さらに、別のマーカーは、別のタイプの粒子と選択的に結合するように設計された抗体を含む。より具体的には、別のマーカーは、(少なくとも)抗体(別のタイプの粒子と選択的に結合するように設計されている)および(少なくとも)さらなるフルオロフォアからなる分子を含む(である)。
いくつかの非限定的な例によれば、別のマーカーは、(特に、腫瘍細胞のマーキング用の)サイトケラチン、特に白血球(WBC)のマーキング用のCD45(PTPRC-タンパク質チロシンホスファターゼ、C型受容体)、特に核で細胞をマーキングするためのDAPI(4',6-diamidino-2-phenylindole)、およびそれらの組み合わせ、からなる群から選択される。
いくつかの非限定的な実施形態によれば、マーキングステップは、マーカー(または別のマーカー)が第1のタイプ(または別のタイプ)の粒子CEの内部に入ることを可能にするように第1のタイプ(または別のタイプ)の粒子CEの外部(細胞)膜の透過性が増加する透過処理のサブステップを含む。
いくつかの非限定的な変形例によれば、膜の透過性の増加は、適切な試薬を使用することによって得られる。
必須ではないが有利なことに、本方法はまた、マーキングステップの後または前(または同時)に(特に、活性化ステップの前に)定着ステップを含む。通常、固定ステップは予備ステップの後に行われるが、必須ではない。
いくつかの非限定的な変形例によれば、固定は、適切な試薬を使用することによって得られる。
必須ではないが有利なことに、本方法はまた、(少なくとも部分的に)マーキングステップに続き、その間にマーカーを含む溶液の少なくとも一部が容器3から除去される除去ステップを含む。
特に、除去ステップの間、処理済み粒子TPは、磁気装置7によって生成された磁場のおかげで、側壁4と接触したままに保たれる。
いくつかの非限定的な実施形態によれば、この方法はまた、(少なくとも部分的に)除去ステップに続き、その間に緩衝液が容器3に挿入され、続いて少なくとも部分的に除去される洗浄ステップを含む。
特に、洗浄ステップの間、処理済み粒子TPは、磁気装置7によって生成された磁場のおかげで、側壁4と接触したままに保たれる。
いくつかの非限定的な変形例によれば、別のタイプの粒子は、第2のタイプの粒子の一部である(例えば、吸引ステップ後に容器3内に残される)。代替的に、別のタイプの粒子は、第2のタイプの粒子とは異なる。
本発明のさらなる態様によれば、第1のタイプの粒子CE(例えば、CTC)を含む初期試料(生物学的起源の)を取り扱うためのプロセスが提供される。本プロセスは、第1のタイプの粒子CEと選択的に結合することができる強磁性粒子FPが第1のタイプの粒子CEと組み合わされて、その各々が、第1のタイプの粒子CEと、第1のタイプの粒子CEに結合した少なくとも1つの強磁性粒子FPとを含む処理済み粒子TPを含む処理済み試料TSが得られる処理ステップと、上記の取り扱い方法と、を含む。
いくつかの非限定的な実施形態によれば、強磁性粒子FPには、第1のタイプの粒子CEと(特に、選択的に)結合するように構成された(設計された)少なくとも1つの抗体が提供される。特に、処理ステップ中、強磁性粒子FPは、引用された抗体によって第1のタイプのそれぞれの粒子CEと結合する。
必須ではないが有利なことに、処理ステップは予備ステップに先行する。特に、処理ステップ中、強磁性粒子FPは容器3の内部に挿入され、その中に粒子CEが配置される(特に初期試料が配置される)。
いくつかの非限定的な実施形態によれば、(生物学的起源の)初期試料は、任意の生物学的液体を含む(特に、それである)。
必須ではないが有利なことに、初期試料は、血液、血漿、唾液、尿、リキッドバイオプシー、細胞(特に組織の)を懸濁液(再懸濁)に含む緩衝液および/または細胞(特に組織の)を懸濁液(再懸濁)に含む培養液、を含む。
いくつかの非限定的な実施形態によれば、初期試料は、血液、血漿、唾液、尿、およびそれらの組み合わせを含む(特に、それである)。
いくつかの特定の非限定的な場合において、初期試料は、血液および/または血漿(特に、血液)を含む(特に、それである)。
必須ではないが有利なことに、本プロセスはまた、処理ステップの前に(特に予備ステップの前に)、初期試料(に含まれる血漿の)の少なくとも大部分が除去され、(容器3からの)第1のタイプの粒子CEから分離される除去ステップを含む。特に、0.5～1mLの血漿が容器3内に残る。
図11は、緩衝液を加えた初期試料(血液)を遠心分離し(血漿を分離するため)(A)、希釈された血漿が除去され(B)、処理済み粒子TPを含む処理済み試料TSを得るために、強磁性粒子FP(およびさらなる緩衝液)が添加され(C)、処理済み粒子を容器3の側壁4上に運ぶために磁場(D)が印加され、処理済み試料TS(マークされていない細胞を含む)の一部が除去され(F)、処理済み粒子TPが洗浄され(G)、色素試薬が処理済み粒子TPに添加され(I)、磁場の新たな印加後に再び洗浄され(H)、処理済み粒子TPが少量(L)に再懸濁され、分析および/または計数装置にロードされる、上述のプロセスの非限定的な例を概略的に示している。
上記に従い、本発明の主題は、対象の粒子(特に細胞)の濃縮(およびマーキング)を簡単、迅速かつ安価な方法で可能にし、また負の粒子(特に細胞)の除去を可能にする(対象の粒子を含む正の試料画分と負の画分の両方を負の粒子と共に使用することが可能である)。
得られた結果は、分析/選別システム/デバイス(例えば、同じ出願人によって製造されたDEPArray(商標)デバイスの前に)、または細胞培養、遺伝子分析、計数、サイトメトリーなどの目的で材料を準備するために使用できる。
特に断りのない限り、本明細書で引用されている参考文献(記事、書籍、特許出願など)の内容は、本明細書で完全に参照されている。特に、言及された参考文献は、参照のために本明細書に組み込まれている。
本発明のさらなる特徴は、単に例示的で非限定的な例に関する以下の説明から明らかになるであろう。
本実施例では、実施されたいくつかの実験的試験の結果について説明する。
本発明の主題を試験し、現在市販されている完全に自動化されたシステム(CellSearch(商標)と呼ばれるシステム)で得られた結果を用いて比較試験を行った。
特に図12を参照すると、試験は、緩衝液に懸濁された上皮細胞の試料から開始して実施された。結果を以下のTable 1(表1)に示す。
上記のTable 1(表1)において、CMは、本発明によるシステム1で得られた結果を示し、CS1およびCS2は、現在市販されている完全に自動化されたシステム(CellSearch(商標))の2つの異なるバージョンで得られた結果を示し、SDは標準偏差を示すことに留意されたい。
図12において、参照番号23は、細胞計数機(特に、Celltracks Analyzer II(登録商標))を示す。
図13を特に参照すると、健康なドナーから採取した血液(BL)から得た試料から開始して、これに腫瘍細胞(PC3～9)が添加された試験が実施された。結果を以下のTable 2(表2)に示す。
上記のTable 2(表2)において、CMは、本発明によるシステム1で得られた結果を示すことに留意されたい。
図13において、参照番号23は、細胞計数機(特に、Celltracks Analyzer II(登録商標))を示し、参照番号24は、現在市販されている上記の完全に自動化されたシステム(CELLTRACKS(登録商標)AUTOPREP(登録商標)システム)を示す。
特に図14を参照すると、健康なドナーから採取された血液(BL)から得られた試料から開始して、これに腫瘍細胞(SKBr3)が添加された試験が実施された。結果を以下のTable 3(表3)に示す。
上記のTable 3(表3)において、CMは、本発明によるシステム1で得られた結果を示し、CS1は、現在市販されている完全に自動化されたシステム(CellSearch(商標))で得られた結果を示し、S.D.は標準偏差を示すことに留意されたい。
上記のTable 1(表1)およびTable 3(表3)に示されている事象は、単一のSKBr3またはSKBr3のクラスター(凝集する傾向がある)を示している。
図13および図14において、参照番号23は、細胞計数機(特に、Celltracks Analyzer II(登録商標))を示し、参照番号24は、現在市販されている上記の完全に自動化されたシステムを示し、参照番号25は、洗浄システム(特に、15ml試験管および1.5mlPCR試験管用の遠心機:任意の供給業者)を示し、参照番号26は、体積を減少させるためのシステムを示し(特に、Menarini Silicon BiosystemsによるVRNxT(商標)が使用された)、番号27は、商品名DEPArray(商標)で知られる選別装置を示す。
上記の実験データから容易に分かるように、本発明の主題は、コストと複雑さが明らかに低いにもかかわらず、同等の精度を有し、場合によっては、現在市販されている自動化システムの精度よりも高かった。
実行されたテストでは、
0.03%のウシ血清アルブミン(BSA: bovine serum albumin)を含み、ProClin300を0.05%に保存した緩衝液中の上皮細胞に存在する細胞表面マーカーEpCAMに特異的なマウスモノクローナル抗体に結合した磁性粒子の0.022%懸濁液を含む抗EpCAM磁性流体、が使用された。
0.03%のウシ血清アルブミン(BSA: bovine serum albumin)を含み、ProClin300を0.05%に保存した緩衝液中の上皮細胞に存在する細胞表面マーカーEpCAMに特異的なマウスモノクローナル抗体に結合した磁性粒子の0.022%懸濁液を含む抗EpCAM磁性流体、が使用された。
0.1%アジ化ナトリウムを含む緩衝液を含む希釈緩衝液。
以下の手順(方法の非限定的な例を示す)に従った。7.5mlの血液を試験管に移し、6.5mlの緩衝液で希釈した後、攪拌し、約10分間遠心分離した(約800g)。血漿(上清)をピペットで除去し、約0.5～1mlを残し、約6mlの希釈緩衝液を加えた。
試験管を短時間撹拌した後、150μlの試薬を添加して捕捉を改善し(制御された磁性流体凝集のための0.02%試薬、0.5%BSA、緩衝液中0.1%アジ化ナトリウム)、および上記の磁性流体(150μl)を加えた。
短時間撹拌した後、試験管を磁気装置7(図１～図１０)の処理チャンバ2に10分間配置した。
(チャンバから試験管を取り出して)さらに撹拌し、処理チャンバ2内に約20分間固定した後、負画分を吸引するために、吸引装置12が取り付けられ、操作された(磁気装置7内に試験管を維持する)。
次に、得られた試料を、同様の方法に従って磁気装置7を使用して希釈緩衝液で洗浄した。
蛍光画像による標的細胞の認識を可能にするために、試料を透過処理試薬、色素試薬(フィコエリトリン(PE)に結合したサイトケラチンに特異的なマウスモノクローナル抗体およびアロフィコシアニン(APC)に結合した抗CD45マウスモノクローナル抗体を含む)および核酸用色素(4'6-ジアミジノ-2-フェニルインドール二塩酸塩(DAPI)を含む)でさらに処理し、試料を再懸濁して試薬を混合し、暗所において周囲温度で20分間インキュベートした。
次いで、試料を2mlの希釈緩衝液で希釈することによって洗浄し、吸引装置12によって行われる吸引の前に試験管を磁気装置7内に約15分間保持した。最後に、試料を細胞固定剤で固定し、最終容量に再懸濁した。
DEPArray(商標)とCellSearch(商標)は、それぞれの製造元の指示に従って使用された。
DEPArray(商標)で処理済み試料は、最終容量に再懸濁する前に追加の緩衝液で洗浄された。
1 システム
2 処理チャンバ
3 容器
4 側壁
5 底部
6 開口部
7 磁気装置
8 カニューレ
9 開放端部
10 位置合わせ装置
11 貫通孔
12 吸引装置
13 収集チャンバ
14 ダクト
15 注射器
16 ピストン
17 ばね
18 第1の端部
19、21 隣接要素
20 第2の端部
22 溝
31 ピン
CE 第1のタイプの粒子
FP 強磁性粒子
TP 処理済み粒子
TS 処理済み試料
2 処理チャンバ
3 容器
4 側壁
5 底部
6 開口部
7 磁気装置
8 カニューレ
9 開放端部
10 位置合わせ装置
11 貫通孔
12 吸引装置
13 収集チャンバ
14 ダクト
15 注射器
16 ピストン
17 ばね
18 第1の端部
19、21 隣接要素
20 第2の端部
22 溝
31 ピン
CE 第1のタイプの粒子
FP 強磁性粒子
TP 処理済み粒子
TS 処理済み試料
Claims (18)
- 第1のタイプの粒子(CE)および第1のタイプの前記粒子(CE)に結合した少なくとも1つの強磁性粒子(FP)をそれぞれが含む、処理済み粒子(TP)を含む処理済み試料(TS)を取り扱うためのシステムであって、
前記システム(1)は、処理チャンバ(2)と、前記処理済み試料(TS)を収容するように構成された容器(3)であって、少なくとも部分的に前記処理チャンバ(2)内に配置され、少なくとも側壁(4)、底部(5)、および前記底部(5)の反対側の開口部(6)、を含む、容器(3)と、前記処理済み粒子(TP)の少なくとも一部を前記容器(3)の前記側壁(4)上に移動させるために、前記処理チャンバ(2)の少なくとも一部に少なくとも1つの磁場を生成するように構成された磁気装置(7)と、前記容器(3)内に配置された開放端(9)を有するカニューレ(8)と、前記容器(3)の領域に実質的に固定式に配置され、前記カニューレ(8)が貫通する貫通孔(11)を有する位置合わせ装置(10)と、前記処理済み試料(TS)の一部が前記カニューレ(8)を通して前記容器(3)の外に運ばれるように、前記カニューレ(8)の内側に窪みを作るように構成された吸引装置(12)と、を含み、
前記カニューレ(8)および前記位置合わせ装置(10)(特に前記貫通孔)は、前記開放端部(9)が前記容器(3)の前記側壁(4)から間隔をあけて前記容器(3)の内側に配置されるように構成されている、システム。 - 前記位置合わせ装置(10)は、前記容器(3)の前記開口部(6)の領域に配置されており、前記位置合わせ装置(10)(特に、前記貫通孔)および前記カニューレ(8)は、前記カニューレ(8)が前記側壁(4)から離間されるように構成されている、請求項1に記載のシステム。
- 前記位置合わせ装置(10)は、前記容器(3)の領域(特に、容器の前記開口部(6)の領域)に取り外し可能に配置されており、前記カニューレ(8)は、取り外し可能に前記貫通孔(11)を通って延在し、前記貫通孔(11)は、使用中、前記カニューレ(8)が前記貫通孔(11)を通して挿入されている間、前記カニューレ(8)の前記開放端部(9)(特に、前記カニューレ)が、前記側壁(4)から一定の距離を保つように構成されており、特に、前記カニューレ(8)が実質的に剛性である、請求項1または2に記載のシステム。
- 流体搬送式に前記カニューレ(8)に接続され、前記処理チャンバ(2)の外側に配置される収集チャンバ(13)を備え、前記吸引装置(12)は、前記処理済み試料(TS)の前記一部が、前記カニューレ(8)を通して前記収集チャンバ(13)に運ばれるように、前記カニューレ(8)の内側に窪みを作るように構成されており、特に、前記システム(1)は、流体搬送式に前記カニューレ(8)を前記収集チャンバ(13)に接続するダクト(14)も備える、請求項1から3のいずれか一項に記載のシステム。
- 前記吸引装置(12)および前記カニューレ(8)(および特に前記ダクト)は、最大約30mL/分、特に最大約15mL/分の、前記開放端部(9)を通る水の流速を得るように構成されており、特に、前記吸引装置(12)および前記カニューレ(8)(および特に前記ダクト)は、少なくとも約1mL/分、より具体的には、少なくとも約4mL/分の、前記開放端部(9)を通る水の流速を得るように構成されている、請求項1から4のいずれか一項に記載のシステム。
- 前記吸引装置(12)(および、特に前記収集チャンバ(13)、より詳細には、前記カニューレ(8)、および、より詳細には前記ダクト)は、最大約50mL(特に、最大約30mL)の液体を前記開放端部(9)を通して吸引するように構成されており、特に、前記処理チャンバ(2)および前記容器(3)はそれぞれ、最大約55mL(特に、最大約13mL)の内容積を有する、請求項1から5のいずれか一項に記載のシステム。
- 前記貫通穴(11)が、前記カニューレ(8)の長手方向延在範囲の少なくとも約0.5cmに沿って前記カニューレ(8)の周りに延在する内面を有する、請求項1から6のいずれか一項に記載のシステム。
- 前記カニューレ(8)は実質的に真っ直ぐであり、前記貫通孔(11)は実質的に真っ直ぐである、請求項1から7のいずれか一項に記載のシステム。
- 処理済み試料(TS)を取り扱うためのキットであって、前記キットは、請求項1から8のいずれか一項に記載のシステム(1)を得るように構成されており、前記キットは、
処理チャンバ(2)を有し、前記処理チャンバ(2)内に磁場を生成するように構成された磁気装置(7)と、
前記処理済み試料(TS)を収容し、前記処理チャンバ(2)内に収容されるように構成され、少なくとも側壁(4)、底部(5)、および前記底部(5)の反対側の開口部(6)を有する容器(3)と、
開放端部(9)を有するカニューレ(8)と、
前記容器(3)の領域に実質的に固定式に取り付けられるように構成された位置合わせ装置(10)であって、前記カニューレ(8)によって係合され、前記カニューレ(8)が前記容器(3)の前記側壁(4)から離間されるように、前記カニューレ(8)を実質的に固定された位置および実質的に固定された向きに保つように構成された貫通孔(11)を有する、位置合わせ装置(10)と、
前記処理済み試料(TS)の一部が前記カニューレ(8)を通して前記容器(3)の外に運ばれるように、前記カニューレ(8)の内側に窪みを作るように構成された吸引装置(12)と、
を備える、キット。 - 前記カニューレ(8)と前記吸引装置(12)とを流体搬送式に接続するように構成されたダクト(14)を備え、前記位置合わせ装置(10)は、前記容器(3)の前記開口部(6)の領域に配置されるように構成されており、特に、前記ダクト(14)は、前記カニューレ(8)に連結されるように構成された第1の端部と、前記吸引装置(12)に連結されるように構成された第2の端部とを有し、特に、前記ダクト(14)が柔軟である、請求項9に記載のキット。
- 前記カニューレ(8)は、最大約12mm、特に最大約1cmの内径を有し、特に、前記カニューレ(8)は、少なくとも約0.3mm、より具体的には、少なくとも約0.5mmの内径を有する。請求項9または10に記載のキット。
- 前記第1のタイプの粒子(CE)に結合するように構成された少なくとも1つの抗体を備える強磁性粒子(FP)を含み、
前記キットは、腫瘍細胞(特に、CTC)のマーカー、白血球(WBC)のマーカー、細胞の核のマーカー、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも1つのマーカーをさらに含み、特に、前記マーカーは、サイトケラチン、CD45(PTPRC-タンパク質チロシンホスファターゼ、受容体タイプC)、DAPI(4',6-ジアミジノ-2-フェニルインドール)、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項9から11のいずれか一項に記載のキット。 - 処理済み試料(TS)を取り扱うための方法であって、前記方法は、
予備ステップであって、第1のタイプの粒子(CE)および前記第1のタイプの前記粒子(CE)に結合した少なくとも1つの強磁性粒子(FP)をそれぞれが含む、処理済み粒子(TP)を含む処理済み試料(TS)が、少なくとも側壁(4)、底部(5)、および底部(5)の反対側の開口部(6)を有する容器(3)内にある、予備ステップと、
前記容器(3)が磁気装置(7)の処理チャンバ(2)に挿入される挿入ステップと、
前記予備ステップに続き、貫通孔(11)を有する位置合わせ装置(10)が前記容器(3)に安定的に結合される結合ステップと、
前記結合ステップに続く位置決めステップであって、開放端(9)を有するカニューレ(8)を、前記開放端部(9)が前記容器(3)の前記側壁(4)から離れて前記容器(3)内に配置される所定の位置に到達するまで前記側壁(4)に触れずに前記貫通孔(11)を通過させる、位置決めステップと、
前記挿入ステップに続き、前記磁気装置(7)が磁場を生成し、これにより、前記処理済み粒子(TP)の少なくとも一部が前記側壁(4)と接触するようになる、活性化ステップと、
前記位置決めステップおよび前記活性化ステップに続く吸引ステップであって、前記処理済み試料(TS)の一部が、前記カニューレ(8)を通して前記容器(3)の外に運ばれ、前記処理済み粒子(PT)の少なくとも一部の少なくとも一部が前記容器内に残るように、吸引装置(12)が前記カニューレ(8)の内側に窪みを作る、吸引ステップと、
を含む、方法。 - 請求項9から12のいずれか一項に記載のキットによって実施される請求項13に記載の方法であって、特に、前記処理済み試料(TS)は、少なくともその大部分が吸引ステップ中に前記カニューレ(8)を通して前記容器(3)の外に運ばれる第2のタイプの粒子を含み、特に、前記第1のタイプの粒子(CE)は循環腫瘍細胞である、方法。
- 前記第1のタイプの粒子(CE)が、CTC、CEC(循環内皮細胞)、CMC(循環メラノーマ細胞)、CMMC(循環多発性骨髄腫細胞)、tdEV(腫瘍由来のエクストラベシクル)、エキソソーム、胎児細胞、幹細胞、その他の希少細胞、ウイルス、細菌、FFPE(ホルマリン固定パラフィン包埋)、精子、血液細胞、上皮細胞、DNA、RNA、マイクロスフェア、からなる群から選択される、請求項13または14に記載の方法。
- 前記処理済み試料(TS)が、前記第1のタイプの前記粒子(CE)とは異なる別のタイプの粒子を含み、前記方法は、マーキングステップであって、マーカーが、選択的に(特に、前記別のタイプの粒子に対して)前記第1のタイプの粒子(CE)に結合され、または、(特に、前記第1のタイプの粒子(CE)に対して)選択的に前記別のタイプの粒子に結合され、例えば、前記マーカーは、1つまたは複数の所与の波長を有する蛍光分子を含む、マーキングステップ、を含む、請求項13から15のいずれか一項に記載の方法。
- 第1のタイプの粒子(CE)を含む初期試料を取り扱うプロセスであって、前記プロセスは、処理ステップであって、第1のタイプの粒子(CE)および前記第1のタイプの前記粒子(CE)に結合した少なくとも1つの強磁性粒子(FP)をそれぞれが含む、処理済み粒子(TP)を含む処理済み試料(TS)を得るために、前記第1のタイプの粒子(CE)に選択的に結合することができる強磁性粒子(FP)が前記第1のタイプの粒子(CE)と混合される、処理ステップと、請求項13から16のいずれか一項に記載の方法と、を含む、プロセス。
- 前記初期試料は、血液、血漿、唾液、尿、液体細胞診、懸濁液中の細胞を含むスワブ、懸濁液中の細胞を含む培地、およびそれらの組み合わせ、からなる群から選択される生物学的液体を含み、特に、前記プロセスはまた、前記処理ステップの前にある除去ステップであって、前記初期試料の少なくとも大部分が除去され、前記第1のタイプの粒子(CE)から分離される、除去ステップ、を含む、請求項17に記載のプロセス。
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