JP2023537470A - ウイルス治療における多方向バイオ輸送のための材料及び方法 - Google Patents

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ズォラック，アダム
ホワイト，イアン
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ビー． ハルヴィッラ，ポール
ドッダレディ，ラジシャ
シン，サンジャヤ
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Abstract

本明細書では、高分子免疫グロブリン受容体（ｐＩｇＲ）に特異的に結合する第１の結合ドメインと、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）に特異的に結合する第２の結合ドメインと、を含む、多重特異性分子、及びＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に感染した患者を治療するための関連する方法が提供される。

Description

（関連出願の相互参照）
本出願は、２０２１年７月１５日に出願された米国特許出願第６３／２２２，３３２号、２０２１年２月４日に出願された米国特許出願第６３／１４５，８９６号、２０２１年２月４日に出願された米国特許出願第６３／１４５，８９３号、２０２１年２月４日に出願された米国特許出願第６３／１４５，８９０号、２０２１年２月４日に出願された米国特許出願第６３／１４５，８８８号、２０２１年２月４日に出願された米国特許出願第６３／１４５，８８７号、２０２１年２月４日に出願された米国特許出願第６３／１４５，８８３号、２０２１年２月４日に出願された米国特許出願第６３／１４５，８８０号、２０２１年２月４日に出願された米国特許出願第６３／１４５，８７７号、２０２１年２月４日に出願された米国特許出願第６３／１４５，８７６号、２０２１年２月４日に出願された米国特許出願第６３／１４５，８７５号、２０２１年２月４日に出願された米国特許出願第６３／１４５，８７３号、２０２０年９月８日に出願された米国特許出願第６３／０７５，６８７号、２０２０年９月８日に出願された米国特許出願第６３／０７５，６７７号、２０２０年９月８日に出願された米国特許出願第６３／０７５，６７３号、２０２０年９月８日に出願された米国特許出願第６３／０７５，６６４号、２０２０年９月８日に出願された米国特許出願第６３／０７５，６４７号、２０２０年９月８日に出願された米国特許出願第６３／０７５，６２８号、２０２０年９月８日に出願された米国特許出願第６３／０７５，６０６号、２０２０年９月８日に出願された米国特許出願第６３／０７５，５８０号、２０２０年９月８日に出願された米国特許出願第６３／０７５，５６８号、２０２０年９月８日に出願された米国特許出願第６３／０７５，５３９号、２０２０年９月８日に出願された米国特許出願第６３／０７５，５０４号、２０２０年８月３日に出願された米国特許出願第６３／０６０，５５２号、２０２０年８月３日に出願された米国特許出願第６３／０６０，４４４号、２０２０年８月３日に出願された米国特許出願第６３／０６０，４３５号、２０２０年８月３日に出願された米国特許出願第６３／０６０，４２１号、２０２０年８月３日に出願された米国特許出願第６３／０６０，４０９号、２０２０年８月３日に出願された米国特許出願第６３／０６０，３８５号、２０２０年８月３日に出願された米国特許出願第６３／０６０，３７２号、２０２０年８月３日に出願された米国特許出願第６３／０６０，３５９号、２０２０年８月３日に出願された米国特許出願第６３／０６０，３５４号、２０２０年８月３日に出願された米国特許出願第６３／０６０，３０７号、及び２０２０年８月３日に出願された米国特許出願第６３／０６０，２９３号の利益を主張するものであり、これらの各々の開示は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
（発明の分野）
本明細書では、高分子免疫グロブリン受容体（polymeric immunoglobulin receptor、ｐＩｇＲ）に特異的に結合する１つ又は２つ以上の結合ドメインと、任意選択で、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）などの目的の標的に特異的に結合する１つ又は２つ以上の結合ドメインと、を含む、多重特異性分子、及びＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に感染した患者を治療するための関連する方法が提供される。
（電子的に提出された配列表の参照）
本出願は、ファイル名「１４６２０－３８５－２２８＿ＳＥＱ＿ＬＩＳＴＩＮＧ．ｔｘｔ」及び２０２１年７月２８日の作成日で、２６２，５０７バイトのサイズを有するＡＳＣＩＩ形式の配列表としてＥＦＳ－Ｗｅｂを介して電子的に提出された、配列表を含む。ＥＦＳ－Ｗｅｂを介して提出された配列表は、本明細書の一部であり、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
ウイルス感染は、封じ込め及び治療が困難である。重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）によって引き起こされる新型コロナウイルス感染症（Coronavirus Disease 2019、ＣＯＶＩＤ－１９）のパンデミックは、１億７８００万を超える感染及び３８０万を超える死亡をもたらした（２０２１年７月１３日現在）。ＣＯＶＩＤ－１９による世界的な健康及び経済への打撃は、ワクチン並びに治療介入を含む一連の治療戦略の不足を実証している。今日まで、承認された治療薬はほとんど存在せず、治癒可能性を有するものはない。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク糖タンパク質に対する中和抗体が同定されているが、治療の選択肢は限られたままである。感染が起こる肺粘膜空間への生物製剤の送達を含む、治療薬の標的化はほとんど開発されていない。選択肢の不足が、重大な課題となっている。
したがって、この背景に対して、ＣＯＶＩＤ－１９を治療するために、特定の組織及び細胞、例えば、肺粘膜を標的とする抗体の全身投与を可能にする治療薬が必要である。一態様では、（ａ）高分子免疫グロブリン受容体（ｐＩｇＲ）に特異的に結合する第１の結合ドメインと、（ｂ）ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に特異的に結合する第２の結合ドメインと、を含む、多重特異性分子が本明細書で提供される。特定の態様では、分子は、二重特異性分子である。
一態様では、本明細書で提供される多重特異性分子の第２の結合ドメインは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の表面に特異的に結合する。別の態様では、第２の結合ドメインは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の表面上のスパイク糖タンパク質に特異的に結合する。特定の態様では、第２の結合ドメインは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の表面上のスパイク糖タンパク質のＳ１サブユニットに特異的に結合する。
別の態様では、本明細書で提供される多重特異性分子の第２の結合ドメインは、アンジオテンシン変換酵素２（angiotensin-converting enzyme 2、ＡＣＥ２）を含む。一態様では、ＡＣＥ２は、配列番号１９４を含む。いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、ＡＣＥ２の細胞外ドメインを含む。一態様では、ＡＣＥ２の細胞外ドメインは、配列番号１３４を含む。他の実施形態では、第２の結合ドメインは、ＡＣＥ２の短縮型細胞外ドメインを含む。一態様では、ＡＣＥ２の短縮型細胞外ドメインは、配列番号１２０又は配列番号１２１を含む。
一態様では、本明細書で提供される多重特異性分子の第１の結合ドメインは、単一ドメイン抗体（ＶＨＨ）を含む。
一実施形態では、ＶＨＨは、配列番号１のアミノ酸配列を有する相補性決定領域１（complementarity determining region 1、ＣＤＲ１）、配列番号２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、配列番号１６のアミノ酸配列を含む。
一実施形態では、ＶＨＨは、配列番号１７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号１８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び配列番号１９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、配列番号３２のアミノ酸配列を含む。
本明細書で提供される多重特異性分子の一態様では、第１の結合ドメインは、粘膜内皮上に存在するｐＩｇＲに特異的に結合する。一実施形態では、第１の結合ドメインは、肺粘膜内皮上に存在するｐＩｇＲに特異的に結合する
本明細書で提供される多重特異性分子の別の態様では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２は、本明細書で提供される分子がｐＩｇＲに、及びＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に特異的に結合すると、中和される。一実施形態では、分子は、約４ｎＭ未満のＥＣ５０でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を中和する。特定の実施形態では、分子は、約３ｎＭ未満のＥＣ５０でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を中和する。別の実施形態では、分子は、約１ｎＭ未満のＥＣ５０でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を中和する。別の実施形態では、分子は、約５００ｐＭ未満のＥＣ５０でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を中和する。特定の実施形態では、分子は、約１００ｐＭ未満のＥＣ５０でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を中和する。
一態様では、（ａ）高分子免疫グロブリン受容体（ｐＩｇＲ）に特異的に結合する第１の結合ドメインと、（ｂ）ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に特異的に結合する第２の結合ドメインと、を含む、医薬組成物が本明細書で提供される。本明細書で提供される医薬組成物の特定の態様では、分子は、二重特異性分子である。
一態様では、（ａ）高分子免疫グロブリン受容体（ｐＩｇＲ）に特異的に結合する第１の結合ドメイン及び（ｂ）ｐＩｇＲではない第２の標的に特異的に結合する第２の結合ドメインを含む多重特性分子と、医薬的に許容される担体と、を含む、医薬組成物が本明細書で提供される。本明細書で提供される医薬組成物の特定の態様では、分子は、二重特異性分子である。
本明細書で提供される医薬組成物の一態様では、本明細書で提供される多重特異性分子の第２の結合ドメインは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の表面に特異的に結合する。本明細書で提供される医薬組成物の別の態様では、第２の結合ドメインは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の表面上のスパイク糖タンパク質に特異的に結合する。本明細書で提供される医薬組成物の特定の態様では、第２の結合ドメインは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の表面上のスパイク糖タンパク質のＳ１サブユニットに特異的に結合する。
本明細書で提供される医薬組成物の別の態様では、本明細書で提供される多重特異性分子の第２の結合ドメインは、アンジオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ２）を含む。本明細書で提供される医薬組成物の一態様では、ＡＣＥ２は、配列番号１９４を含む。本明細書で提供される医薬組成物のいくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、ＡＣＥ２の細胞外ドメインを含む。本明細書で提供される医薬組成物の一態様では、ＡＣＥ２の細胞外ドメインは、配列番号１３４を含む。本明細書で提供される医薬組成物の他の実施形態では、第２の結合ドメインは、ＡＣＥ２の短縮型細胞外ドメインを含む。本明細書で提供される医薬組成物の一態様では、ＡＣＥ２の短縮型細胞外ドメインは、配列番号１２０又は配列番号１２１を含む。
本明細書で提供される医薬組成物の一態様では、本明細書で提供される多重特異性分子の第１の結合ドメインは、単一ドメイン抗体（ＶＨＨ）を含む。
本明細書で提供される医薬組成物の一実施形態では、ＶＨＨは、配列番号１のアミノ酸配列を有する相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む。本明細書で提供される医薬組成物のいくつかの実施形態では、ＶＨＨは、配列番号１６のアミノ酸配列を含む。
本明細書で提供される医薬組成物の一実施形態では、ＶＨＨは、配列番号１７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号１８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び配列番号１９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む。本明細書で提供される医薬組成物のいくつかの実施形態では、ＶＨＨは、配列番号３２のアミノ酸配列を含む。
本明細書で提供される医薬組成物の一態様では、第１の結合ドメインは、粘膜内皮上に存在するｐＩｇＲに特異的に結合する。本明細書で提供される医薬組成物の一実施形態では、第１の結合ドメインは、肺粘膜内皮上に存在するｐＩｇＲに特異的に結合する
本明細書で提供される医薬組成物の別の態様では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２は、本明細書で提供される分子がｐＩｇＲに、及びＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に特異的に結合すると、中和される。本明細書で提供される医薬組成物の一実施形態では、分子は、約４ｎＭ未満のＥＣ５０でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を中和する。本明細書で提供される医薬組成物の特定の実施形態では、分子は、約３ｎＭ未満のＥＣ５０でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を中和する。本明細書で提供される医薬組成物の別の実施形態では、分子は、約１ｎＭ未満のＥＣ５０でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を中和する。本明細書で提供される医薬組成物の別の実施形態では、分子は、約５００ｐＭ未満のＥＣ５０でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を中和する。本明細書で提供される医薬組成物の特定の実施形態では、分子は、約１００ｐＭ未満のＥＣ５０でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を中和する。
また、医薬組成物を製造する方法であって、先の実施形態の分子を医薬的に許容される担体と組み合わせて、医薬組成物を得ることを含む、方法も提供される。
一態様では、宿主細胞へのウイルス侵入を阻害するか、又はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の増殖を阻害する方法であって、当該方法が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を、（ａ）高分子免疫グロブリン受容体（ｐＩｇＲ）に特異的に結合する第１の結合ドメイン及び（ｂ）ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に特異的に結合する第２の結合ドメインを含む多重特異性分子と接触させることを含み、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を分子と接触させることにより、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の宿主細胞侵入又は増殖が阻害される、方法が本明細書で提供される。別の態様では、第２の標的を発現する標的細胞の宿主細胞侵入又は増殖を阻害する方法であって、当該方法が、標的細胞を、（ａ）高分子免疫グロブリン受容体（ｐＩｇＲ）に特異的に結合する第１の結合ドメイン及び（ｂ）ｐＩｇＲではない第２の標的に特異的に結合する第２の結合ドメインを含む多重特異性分子と接触させることを含み、標的細胞を分子と接触させることにより、標的細胞の宿主細胞侵入又は増殖が阻害される、方法が本明細書で提供される。
一態様では、対象においてＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を排除するための方法であって、（ａ）高分子免疫グロブリン受容体（ｐＩｇＲ）に特異的に結合する第１の結合ドメイン及び（ｂ）ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に特異的に結合する第２の結合ドメインを含む有効量の多重特異性分子を対象に投与する、方法が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、対象は、ＣＯＶＩＤ－１９を有する。
一態様では、対象においてＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２によって全て又は一部が引き起こされる疾患を治療する方法であって、（ａ）高分子免疫グロブリン受容体（ｐＩｇＲ）に特異的に結合する第１の結合ドメイン及び（ｂ）ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に特異的に結合する第２の結合ドメインを含む有効量の多重特異性分子を投与することを含む、方法が本明細書で提供される。一実施形態では、疾患は、ＣＯＶＩＤ－１９である。
本明細書で提供される方法の特定の態様では、分子は、二重特異性分子である。本明細書で提供される方法の一態様では、本明細書で提供される多重特異性分子の第２の結合ドメインは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の表面に特異的に結合する。本明細書で提供される方法の別の態様では、第２の結合ドメインは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の表面上のスパイク糖タンパク質に特異的に結合する。本明細書で提供される方法の特定の態様では、第２の結合ドメインは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の表面上のスパイク糖タンパク質のＳ１サブユニットに特異的に結合する。
本明細書で提供される方法の別の態様では、本明細書で提供される多重特異性分子の第２の結合ドメインは、アンジオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ２）を含む。本明細書で提供される方法の一態様では、ＡＣＥ２は、配列番号１９４を含む。本明細書で提供される方法のいくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、ＡＣＥ２の細胞外ドメインを含む。本明細書で提供される方法の一態様では、ＡＣＥ２の細胞外ドメインは、配列番号１３４を含む。本明細書で提供される方法の他の実施形態では、第２の結合ドメインは、ＡＣＥ２の短縮型細胞外ドメインを含む。本明細書で提供される方法の一態様では、ＡＣＥ２の短縮型細胞外ドメインは、配列番号１２０又は配列番号１２１を含む。
本明細書で提供される方法の一態様では、本明細書で提供される多重特異性分子の第１の結合ドメインは、単一ドメイン抗体（ＶＨＨ）を含む。
本明細書で提供される方法の一実施形態では、ＶＨＨは、配列番号１のアミノ酸配列を有する相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む。本明細書で提供される方法のいくつかの実施形態では、ＶＨＨは、配列番号１６のアミノ酸配列を含む。
本明細書で提供される方法の一実施形態では、ＶＨＨは、配列番号１７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号１８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び配列番号１９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む。本明細書で提供される方法のいくつかの実施形態では、ＶＨＨは、配列番号３２のアミノ酸配列を含む。
本明細書で提供される方法の一態様では、第１の結合ドメインは、粘膜内皮上に存在するｐＩｇＲに特異的に結合する。本明細書で提供される方法の一実施形態では、第１の結合ドメインは、肺粘膜内皮上に存在するｐＩｇＲに特異的に結合する
本明細書で提供される方法の別の態様では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２は、本明細書で提供される分子がｐＩｇＲに、及びＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に特異的に結合すると、中和される。本明細書で提供される方法の一実施形態では、分子は、約４ｎＭ未満のＥＣ５０でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を中和する。本明細書で提供される方法の特定の実施形態では、分子は、約３ｎＭ未満のＥＣ５０でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を中和する。本明細書で提供される方法の別の実施形態では、分子は、約１ｎＭ未満のＥＣ５０でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を中和する。本明細書で提供される方法の別の実施形態では、分子は、約５００ｐＭ未満のＥＣ５０でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を中和する。本明細書で提供される方法の特定の実施形態では、分子は、約１００ｐＭ未満のＥＣ５０でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を中和する。
本明細書で提供される方法のいくつかの実施形態では、対象は、その治療を必要としている対象である。本明細書で提供される方法のいくつかの実施形態では、対象は、ヒトである。
一態様では、高分子免疫グロブリン受容体（ｐＩｇＲ）に特異的に結合する第１の結合ドメイン及びｐＩｇＲではない第２の標的に特異的に結合する第２の結合ドメインを提供するための手段を含む、システムが本明細書で提供される。
別の態様では、高分子免疫グロブリン受容体（ｐＩｇＲ）に特異的に結合する第１の結合ドメイン及びＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の表面に特異的に結合する第２の結合ドメインを提供するための手段を含む、システムが本明細書で提供される。
本明細書で提供されるシステムの特定の態様では、分子は、二重特異性分子である。本明細書で提供されるシステムの一態様では、本明細書で提供される多重特異性分子の第２の結合ドメインは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の表面に特異的に結合する。本明細書で提供されるシステムの別の態様では、第２の結合ドメインは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の表面上のスパイク糖タンパク質に特異的に結合する。本明細書で提供されるシステムの特定の態様では、第２の結合ドメインは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の表面上のスパイク糖タンパク質のＳ１サブユニットに特異的に結合する。
本明細書で提供されるシステムの別の態様では、本明細書で提供される多重特異性分子の第２の結合ドメインは、アンジオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ２）を含む。本明細書で提供されるシステムの一態様では、ＡＣＥ２は、配列番号１９４を含む。本明細書で提供されるシステムのいくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、ＡＣＥ２の細胞外ドメインを含む。本明細書で提供されるシステムの一態様では、ＡＣＥ２の細胞外ドメインは、配列番号１３４を含む。本明細書で提供されるシステムの他の実施形態では、第２の結合ドメインは、ＡＣＥ２の短縮型細胞外ドメインを含む。本明細書で提供されるシステムの一態様では、ＡＣＥ２の短縮型細胞外ドメインは、配列番号１２０又は配列番号１２１を含む。
本明細書で提供されるシステムの一態様では、本明細書で提供される多重特異性分子の第１の結合ドメインは、単一ドメイン抗体（ＶＨＨ）を含む。
本明細書で提供されるシステムの一実施形態では、ＶＨＨは、配列番号１のアミノ酸配列を有する相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む。本明細書で提供されるシステムのいくつかの実施形態では、ＶＨＨは、配列番号１６のアミノ酸配列を含む。
本明細書で提供されるシステムの一実施形態では、ＶＨＨは、配列番号１７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号１８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び配列番号１９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む。本明細書で提供されるシステムのいくつかの実施形態では、ＶＨＨは、配列番号３２のアミノ酸配列を含む。
本明細書で提供されるシステムの一態様では、第１の結合ドメインは、粘膜内皮上に存在するｐＩｇＲに特異的に結合する。本明細書で提供されるシステムの一実施形態では、第１の結合ドメインは、肺粘膜内皮上に存在するｐＩｇＲに特異的に結合する
本明細書で提供されるシステムの別の態様では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２は、本明細書で提供される分子がｐＩｇＲに、及びＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に特異的に結合すると、中和される。本明細書で提供されるシステムの一実施形態では、分子は、約４ｎＭ未満のＥＣ５０でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を中和する。本明細書で提供されるシステムの特定の実施形態では、分子は、約３ｎＭ未満のＥＣ５０でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を中和する。本明細書で提供されるシステムの別の実施形態では、分子は、約１ｎＭ未満のＥＣ５０でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を中和する。本明細書で提供されるシステムの別の実施形態では、分子は、約５００ｐＭ未満のＥＣ５０でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を中和する。本明細書で提供されるシステムの特定の実施形態では、分子は、約１００ｐＭ未満のＥＣ５０でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を中和する。
別の態様では、（ａ）高分子免疫グロブリン受容体（ｐＩｇＲ）に特異的に結合する第１の結合ドメインと、（ｂ）ｐＩｇＲではない第２の標的に特異的に結合する第２の結合ドメインと、を含む、多重特異性分子が本明細書で提供される。別の態様では、分子は、二重特異性分子である。一態様では、本明細書で提供される多重特異性分子の第１の結合ドメインは、単一ドメイン抗体（ＶＨＨ）を含む。一実施形態では、ＶＨＨは、配列番号１のアミノ酸配列を有する相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、配列番号１６のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ＶＨＨは、配列番号１７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号１８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び配列番号１９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、配列番号３２のアミノ酸配列を含む。本明細書で提供される多重特異性分子の一態様では、第１の結合ドメインは、粘膜内皮上に存在するｐＩｇＲに特異的に結合する。一実施形態では、第１の結合ドメインは、肺粘膜内皮上に存在するｐＩｇＲに特異的に結合する。
一実施形態では、本明細書で提供される多重特異性分子は、ＩｇＧ抗体由来のＦｃ領域を含む。一態様では、ＩｇＧ分子は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４抗体である。
本明細書で提供される多重特異性分子の一実施形態では、第１の結合ドメインは、ｐＩｇＲ抗原に特異的に結合する。別の実施形態では、第１の結合ドメインは、細胞外ｐＩｇＲエピトープを特異的に結合する。本明細書で提供される多重特異性分子の一実施形態では、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３は、ｐＩｇＲの抗原に対する結合部位を形成する。別の実施形態では、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３は、ｐＩｇＲのエピトープに対する結合部位を形成する。
一態様では、本明細書で提供される多重特異性分子の第２の標的は、第２の細胞の表面上にある。別の態様では、第２の標的は、ウイルスの表面上にある。一態様では、ウイルスは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２である。一態様では、第２の標的は、スパイク糖タンパク質である。別の態様では、第２の標的は、スパイク糖タンパク質のＳ１サブユニットである。
別の態様では、本明細書で提供される多重特異性分子の第２の結合ドメインは、アンジオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ２）を含む。一態様では、ＡＣＥ２は、配列番号１９４を含む。いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、ＡＣＥ２の細胞外ドメインを含む。一態様では、ＡＣＥ２の細胞外ドメインは、配列番号１３４を含む。他の実施形態では、第２の結合ドメインは、ＡＣＥ２の短縮型細胞外ドメインを含む。一態様では、ＡＣＥ２の短縮型細胞外ドメインは、配列番号１２０又は配列番号１２１を含む。
一態様では、本明細書で提供される多重特異性分子が、ｐＩｇＲに、及び第２の細胞又はウイルスの表面上の第２の標的に特異的に結合すると、第２の細胞又はウイルスが中和される。一実施形態では、分子は、約４ｎＭ未満のＥＣ５０で第２の細胞を中和する。一実施形態では、分子は、約３ｎＭ未満のＥＣ５０で第２の細胞又はウイルスを中和する。一実施形態では、分子は、約１ｎＭ未満のＥＣ５０で第２の細胞又はウイルスを中和する。一実施形態では、分子は、約５００ｐＭ未満のＥＣ５０で第２の細胞又はウイルスを中和する。一実施形態では、分子は、約１００ｐＭ未満のＥＣ５０で第２の細胞又はウイルスを中和する。
一態様では、粘膜内皮上のｐＩｇＲを結合することができる第１の手段と、ｐＩｇＲではない第２の標的を結合することができる第２の手段と、を含む、分子が本明細書で提供される。一態様では、第２の標的は、第２の細胞の表面上にある。
一実施態様では、粘膜内皮上のｐＩｇＲを結合することができる第１の手段と、第２の細胞の表面上又はウイルスの表面上の第２の標的を結合することができる第２の手段と、を含む、分子が本明細書で提供される。一実施形態では、ウイルスは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２である。
一態様では、（ａ）高分子免疫グロブリン受容体（ｐＩｇＲ）に特異的に結合する第１の結合ドメインと、（ｂ）ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に特異的に結合する第２の結合ドメインと、を含む多重特異性分子をコードする、核酸が本明細書で提供される。本明細書で提供される核酸の特定の態様では、分子は、二重特異性分子である。
本明細書で提供される核酸の一態様では、本明細書で提供される多重特異性分子の第２の結合ドメインは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の表面に特異的に結合する。本明細書で提供される核酸の別の態様では、第２の結合ドメインは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の表面上のスパイク糖タンパク質に特異的に結合する。本明細書で提供される核酸の特定の態様では、第２の結合ドメインは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の表面上のスパイク糖タンパク質のＳ１サブユニットに特異的に結合する。
本明細書で提供される核酸の別の態様では、本明細書で提供される多重特異性分子の第２の結合ドメインは、アンジオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ２）を含む。本明細書で提供される核酸の一態様では、ＡＣＥ２は、配列番号１９４を含む。本明細書で提供される核酸のいくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、ＡＣＥ２の細胞外ドメインを含む。本明細書で提供される核酸の一態様では、ＡＣＥ２の細胞外ドメインは、配列番号１３４を含む。本明細書で提供される核酸の他の実施形態では、第２の結合ドメインは、ＡＣＥ２の短縮型細胞外ドメインを含む。本明細書で提供される核酸の一態様では、ＡＣＥ２の短縮型細胞外ドメインは、配列番号１２０又は配列番号１２１を含む。
本明細書で提供される核酸の一態様では、本明細書で提供される多重特異性分子の第１の結合ドメインは、単一ドメイン抗体（ＶＨＨ）を含む。
本明細書で提供される核酸の一実施形態では、ＶＨＨは、配列番号１のアミノ酸配列を有する相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む。本明細書で提供される核酸のいくつかの実施形態では、ＶＨＨは、配列番号１６のアミノ酸配列を含む。
本明細書で提供される核酸の一実施形態では、ＶＨＨは、配列番号１７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号１８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び配列番号１９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む。本明細書で提供される核酸のいくつかの実施形態では、ＶＨＨは、配列番号３２のアミノ酸配列を含む。
本明細書で提供される核酸の一態様では、第１の結合ドメインは、粘膜内皮上に存在するｐＩｇＲに特異的に結合する。本明細書で提供される核酸の一実施形態では、第１の結合ドメインは、肺粘膜内皮上に存在するｐＩｇＲに特異的に結合する
本明細書で提供される核酸の別の態様では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２は、本明細書で提供される分子がｐＩｇＲに、及びＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に特異的に結合すると、中和される。本明細書で提供される核酸の一実施形態では、分子は、約４ｎＭ未満のＥＣ５０でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を中和する。本明細書で提供される核酸の特定の実施形態では、分子は、約３ｎＭ未満のＥＣ５０でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を中和する。本明細書で提供される核酸の別の実施形態では、分子は、約１ｎＭ未満のＥＣ５０でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を中和する。本明細書で提供される核酸の別の実施形態では、分子は、約５００ｐＭ未満のＥＣ５０でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を中和する。本明細書で提供される核酸の特定の実施形態では、分子は、約１００ｐＭ未満のＥＣ５０でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を中和する。
また、本明細書に記載される核酸を含む、ベクターも提供される。一態様では、本明細書で提供されるベクターを含む、宿主細胞も提供される。別の態様では、ベクターと、そのためのパッケージと、を含む、キットが本明細書で提供される。
一態様では、先の実施形態のいずれか１つの分子と、医薬的に許容される担体と、を含む、医薬組成物が本明細書で提供される。別の態様では、先の実施形態のいずれか１つの分子を送達するための手段と、医薬的に許容される担体と、を含む、医薬組成物が本明細書で提供される。また、医薬組成物を製造する方法であって、分子を薬学的に許容される担体と組み合わせて、医薬組成物を得ることを含む、方法も提供される。
一態様では、第２の標的を発現する標的細胞の宿主細胞侵入又は増殖を阻害する方法であって、当該方法が、標的細胞を先の実施形態のいずれかの分子と接触させることを含み、標的細胞を分子と接触させることにより、標的細胞の宿主細胞侵入又は増殖が阻害される、方法が本明細書で提供される。
別の態様では、対象において第２の標的を発現する標的細胞を排除するための方法であって、有効量の、先の実施形態のいずれかの分子を対象に投与することを含む、方法が本明細書で提供される。一態様では、対象は、ＣＯＶＩＤ－１９を有する。一態様では、対象は、その治療を必要としている対象である。別の態様では、対象は、ヒトである。
一態様では、対象において第２の標的を発現する細胞によって全て又は一部が引き起こされる疾患を治療する方法であって、有効量の、先の実施形態のいずれかの分子を対象に投与することを含む、方法が本明細書で提供される。一態様では、疾患は、ＣＯＶＩＤ－１９である。一態様では、対象は、その治療を必要としている対象である。別の態様では、対象は、ヒトである。
一態様では、高分子免疫グロブリン受容体（ｐＩｇＲ）に特異的に結合する第１の結合ドメイン及びｐＩｇＲではない第２の標的に特異的に結合する第２の結合ドメインを提供するための手段を含む、システムが本明細書で提供される。
別の態様では、２つ以上の標的分子に特異的に結合する分子を作製するためのプロセスであって、当該プロセスが、粘膜内皮上のｐＩｇＲに結合することができる結合ドメインを得る機能を実行するためのステップと、第２の細胞上又はウイルス上の第２の標的に結合することができる結合ドメインを得る機能を実行するためのステップと、粘膜内皮上のｐＩｇＲ抗原及び第２の細胞又はウイルス上の第２の標的に結合することができる分子を提供する機能を実行するためのステップと、を含む、プロセスが本明細書で提供される。本プロセスのいくつかの実施形態では、第２の標的に結合することができる結合ドメインを得る機能を実行するためのステップは、ｎ回繰り返され、粘膜内皮上のｐＩｇＲ及びｎ個の標的分子に結合することができる結合ドメインを提供する機能を実行するためのｎ個のステップを更に含み、ｎは、少なくとも２である。本プロセスのいくつかの実施形態では、第２の標的は、第２の細胞の表面上にある。本プロセスのいくつかの実施形態では、第２の標的は、ウイルスの表面上にある。本プロセスのいくつかの実施形態では、ウイルスは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２である。
本プロセスのいくつかの実施形態では、ｐＩｇＲに結合することができる結合ドメインは、ｐＩｇＲ抗原を特異的に結合する。本プロセスの他の実施形態では、ｐＩｇＲに結合することができる結合ドメインは、ｐＩｇＲエピトープを特異的に結合する。本プロセスのいくつかの実施形態では、第２の標的に結合することができる結合ドメインは、抗原である。本プロセスのいくつかの実施形態では、第２の標的に結合することができる結合ドメインは、第２の標的のエピトープである。
前述の発明の概要、並びに本出願の特定の実施形態の以下の詳細な説明は、添付図面とともに読んだときにより深く理解されるであろう。しかしながら、本出願は、図面に示される実施形態そのものに限定されないことを理解するべきである。
ｐＩｇＲに基づく標的輸送機構の概要を示す。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルス侵入は、そのスパイク糖タンパク質のＲＢＤドメインが標的細胞上のＡＣＥ２受容体に結合すると起こる。二重特異性分子は、ｐＩｇＲ媒介性輸送を介して肺粘膜へのアクセスを獲得し、立体的機構においてそれらのＡＣＥ２ ＥＣＤ部分を介してＲＢＤドメインを結合することによってＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を結合／中和する。 ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク糖タンパク質及びＡＣＥ２の説明を提供する。図２Ａは、Ｓ１及びＳ２フーリン切断産物を示すスパイク糖タンパク質のドメイン構造を示す：ＳＰ－シグナルペプチド、ＮＴＤ－Ｎ末端ドメイン、ＲＢＤ－受容体結合ドメイン、ＦＰ－融合ペプチド、ＨＲ１－７アミノ酸繰り返し１、ＨＲ２－７アミノ酸繰り返し２、ＴＭ－膜貫通ドメイン、ＩＣ－細胞内ドメイン。ドメイン境界は付番されている。 ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク糖タンパク質及びＡＣＥ２の説明を提供する。図２Ｂは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２及びＳＡＲＳ－ＣｏＶのＲＢＤドメインの配列アラインメントを示す。相互作用する残基（ＰＤＢ ＩＤ ６Ｍ０Ｊからの５Åカットオフに基づく）には下線を付している。 ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク糖タンパク質及びＡＣＥ２の説明を提供する。図２Ｃは、ＡＣＥ２酵素のドメイン構造を示す。二重特異性分子を生成するために使用した構築物を以下に示す。 ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク糖タンパク質及びＡＣＥ２の説明を提供する。図２Ｄは、ヒトＡＣＥ２ ＥＣＤの配列を示す。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク糖タンパク質と相互作用する残基には下線を付している。 ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク糖タンパク質及びＡＣＥ２の説明を提供する。図２Ｅは、ＡＣＥ２（ＰＢＤ ＩＤ ６Ｍ０Ｊ）に結合したＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク糖タンパク質ＲＢＤの結晶構造の模式図を示す。 ＶＨＨ２／６及びＡＣＥ２由来の細胞外ドメイン（ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｄｏｍａｉｎ、ＥＣＤ）を用いて生成された二重特異性分子を示す。 スパイク糖タンパク質及びｐＩｇＲへの二重特異性分子の表面バイオレイヤー干渉法に基づく結合を示す。抗体及び抗原をグラフに示す。グラフは、経時的な応答の大きさ（ｎｍ）を表す。会合及び解離を、適合させた曲線とともに示す。図４Ａは、ｐＩｇＲ及び野生型スパイク糖タンパク質への二重特異性分子の結合を説明する。 図４Ｂ－１及び図４Ｂ－２は、スパイク糖タンパク質及びｐＩｇＲへの二重特異性分子の表面バイオレイヤー干渉法に基づく結合を示す。抗体及び抗原をグラフに示す。グラフは、経時的な応答の大きさ（ｎｍ）を表す。会合及び解離を、適合させた曲線とともに示す。スパイク糖タンパク質バリアントＹ４３５Ｆ、Ｎ４３９Ｋ、Ｎ５０１Ｙ及びＤ６１４Ｇへの結合を説明する。 （上記の通り）。 二重特異性分子がＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対して特異的な機能活性を示すことを示す。図５Ａでは、中和能力を分子濃度に対してプロットしている。分子をグラフに示す。 二重特異性分子がＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対して特異的な機能活性を示すことを示す。図５Ｂは、ＭＤＣＫ－ｐＩｇＲ細胞のＰＢＭＣ媒介性ＡＤＣＣを、ウェル当たりの緑色面積（０時間に正規化）対二重特異性分子の濃度（ｎＭ）としてプロットしていることを示す。分子を凡例に示す。 ＰＢＭＣ効果細胞成分を特徴付けるためのフローサイトメトリーゲーティング基準を示す。生細胞をＦＳＣ対ＳＳＣによって選択した（図６Ａ）。 ＰＢＭＣ効果細胞成分を特徴付けるためのフローサイトメトリーゲーティング基準を示す。Ｂ細胞をＣＤ１９発現によって選択し、Ｔ細胞をＣＤ３発現によって選択した（図６Ｂ）。 ＰＢＭＣ効果細胞成分を特徴付けるためのフローサイトメトリーゲーティング基準を示す。ＮＫ細胞をＣＤ５６及びＣＤ１６発現によって選択した（図６Ｃ）。 試薬としてＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２三量体スパイク及びＡＣＥ２タンパク質を使用することによる競合的かつ阻害的非細胞ベースの代理中和イムノアッセイによって中和抗体を同定するために使用されるアッセイのグラフ表示を示す。 抗ｐＩｇＲ ＶＨＨ－Ｆｃ分子の薬物動態分析を示す。血清濃度（μｇ／ｍＬ）を、注射後の時間（時間）に対してプロットしている。抗体を、ヘテロ二量体Ｆｃを有するＶＨＨ－Ｆｃ融合体として構成した。各ＶＨＨ－Ｆｃを、同じＶＨＨ又はヌルＶＨＨ（ＥＧＦＷ５５）のいずれかを有するその相補性ＶＨＨ－Ｆｃ融合体と共発現させた。 肺微小組織におけるトランスサイトーシスを示す。図９Ａは、適用後２４時間でのＥｐｉＡｉｒｗａｙ組織モデルにおける二重特異性融合分子のトランスサイトーシスを示す。各試料について、２０μｇのタンパク質を基底ウェルに添加し、２４時間後、粘膜表面を洗浄し、トランスサイトーシスされた分子のレベルを定量した。レベルは、２４時間でトランスサイトーシスされた総マイクログラムで示される。エラーバーは、標準誤差を表し、少なくとも２回の独立した実験の代表である。 肺微小組織におけるトランスサイトーシスを示す。図９Ｂは、ＣＶ１９Ｂ３０７についてのヒト気道上皮（epiairway）微小組織を示す共焦点画像を示す。染色は、以下を示す：青（核）、緑（抗ＶＨＨ）、及び赤（ｐＩｇＲ）。スケールバーは、５０μｍ（インセット）及び１００μｍ（主画像）を示す。 肺微小組織におけるトランスサイトーシスを示す。図９Ｃは、ＣＶ１９Ｂ２９０についてのヒト気道上皮微小組織を示す共焦点画像を示す。染色は、以下を示す：青（核）、緑（抗ＶＨＨ）、及び赤（ｐＩｇＲ）。スケールバーは、５０μｍ（インセット）及び１００μｍ（主画像）を示す。
本開示は、高分子免疫グロブリン受容体（ｐＩｇＲ）に結合する第１の結合ドメインと、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に結合する第２の結合ドメインと、を含む、多重特異性分子が、肺上皮全体にわたって効率的にトランスサイトーシスすることができ、そこでＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に結合して中和することができるという驚くべき発見に部分的に基づく。したがって、本発明の組成物及び方法は、ＣＯＶＩＤ－１９を治療するために、肺粘膜を標的としたタンパク質の全身投与のための手段を提供する。
本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用するとき、単数形「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、特に文脈上明らかでない限り、複数の指示対象物を含むことに留意する必要がある。
特に明記しない限り、本明細書に記載される濃度又は濃度範囲などのあらゆる数値は、全ての場合において、用語「約」によって修飾されているものとして理解されるべきである。したがって、数値は、典型的には、記載される値の±１０％を含む。例えば、１ｍｇ／ｍＬの濃度は０．９ｍｇ／ｍＬ～１．１ｍｇ／ｍＬを含む。同様に、１％～１０％（ｗ／ｖ）の濃度範囲は０．９％（ｗ／ｖ）～１１％（ｗ／ｖ）を含む。本明細書で使用するとき、数値範囲の使用は、文脈上そうでない旨が明確に示されない限り、その範囲内の整数及び値の分数を含む、全ての可能な部分範囲、その範囲内の全ての個々の数値を明示的に含む。
別途記載のない限り、一連の要素に先行する用語「少なくとも」は、一連の全ての要素を指すと理解されるべきである。当業者であれば、単なる通常の実験手順を使用するだけで、本明細書に記載した本発明の特定の実施形態に対して多くの均等物を認識するか、又は確認することができよう。かかる均等物は、本発明によって包含されることが意図される。
本明細書で使用するとき、用語「備える（comprises）、「備える（comprising）」、「含む（includes）」、「含む（including）」、「有する（has）」、「有する（having）」、「含有する（contains）」、若しくは「含有する（containing）」、又はこれらの任意の他の変形形態は、述べられている整数又は整数群を含むことが意図されるが、これら以外の他の整数又は整数群を除外するものではなく、非排他的又は非制限的であることが意図されることが理解されよう。例えば、一連の要素を含む組成物、混合物、プロセス、方法、物品、又は装置は、必ずしもそれらの要素のみに限定されるものではなく、明示的に列挙されない、又はそのような組成物、混合物、プロセス、方法、物品、若しくは装置に本来存在しない他の要素を含んでもよい。更に、明示的に反対に明記されない限り、「又は」は包括的な「又は」を指すものであり、排他的な「又は」を指すものではない。例えば、条件Ａ又はＢは、Ａが真であり（又は存在する）かつＢが偽である（又は存在しない）場合、Ａが偽であり（又は存在しない）かつＢが真である（又は存在する）場合、並びにＡ及びＢの両方が真である（又は存在する）場合、のいずれか１つによって満たされる。
本明細書で使用するとき、複数の列挙された要素間の「及び／又は」という接続的な用語は、個々の及び組み合わされた選択肢の両方を包含するものとして理解される。例えば、２つの要素が「及び／又は」によって接続される場合、第１の選択肢は、第２の要素なしに第１の要素が適用可能であることを指す。第２の選択肢は、第１の要素なしに第２の要素が適用可能であることを指す。第３の選択肢は、第１及び第２の要素が一緒に適用可能であることを指す。これらの選択肢のうちのいずれか１つは、意味に含まれ、したがって、本明細書で使用するとき、用語「及び／又は」の要件を満たすことが理解される。選択肢のうちの２つ以上の同時適用性もまた、意味に含まれ、したがって、用語「及び／又は」の要件を満たすことが理解される。
本明細書で使用するとき、用語「からなる（consists of）」、又は「からなる（consist of）」若しくは「からなる（consisting of）」などの変形は、明細書及び特許請求の範囲全体にわたって使用するとき、任意の列挙された整数又は整数群を包含するが、追加の整数又は整数群が、指定の方法、構造、又は組成物に追加されることはないことを示す。
本明細書で使用するとき、用語「から本質的になる（consists essentially of）」、又は「から本質的になる（consist essentially of）」若しくは「から本質的になる（consisting essentially of）」などの変形は、明細書及び特許請求の範囲全体にわたって使用するとき、任意の列挙された整数又は整数群を包含し、任意選択で、指定の方法、構造、又は組成物の基本的又は新規の特性を実質的に変化させない任意の列挙された整数又は整数群も包含することを示す。Ｍ．Ｐ．Ｅ．Ｐ．§２１１１．０３を参照されたい。
本明細書で使用するとき、「対象」は、任意の動物、好ましくは哺乳動物、最も好ましくはヒトを意味する。本明細書で使用するとき、用語「哺乳動物」は、あらゆる哺乳動物を包含する。哺乳動物の例としては、これらに限定されるものではないが、ウシ、ウマ、ヒツジ、ブタ、ネコ、イヌ、マウス、ラット、ウサギ、モルモット、サル、ヒトなど、より好ましくはヒトが挙げられる。
好ましい本発明の構成要素の寸法又は特徴を指すときに本明細書で使用される「約」、「およそ」、「概ね」、「実質的に」などの用語は、当業者には理解されるように、記載の寸法／特徴が厳密な境界又はパラメータではなく、機能的に同じ又は類似する、それらからのわずかな相違を除外するものではないことを示すことも理解すべきである。最小値では、数値パラメータを含むこのような参照は、当該技術分野において受け入れられている数学的及び工業的原理（例えば、四捨五入、測定、又は他の系統誤差、製作公差など）を使用すると、最下位の桁は変化しない変形形態を含むであろう。
２つ若しくは３つ以上の核酸又はポリペプチド配列の文脈における用語「同一である」又はパーセント「同一性」は、以下の配列比較アルゴリズムのうちの１つを使用して又は目視検査によって測定したとき、一致が最大になるように比較及び位置合わせさせた場合に同じである、又は特定のパーセント分の同じであるアミノ酸残基若しくはヌクレオチドを有する、２つ若しくは３つ以上の配列又はサブ配列を指す。
配列比較のために、典型的には１つの配列は、試験配列がそれに対して比較される参照配列として作用する。配列比較アルゴリズムを使用する場合、試験及び参照配列がコンピュータに入力され、必要に応じて、サブ配列座標が指定され、配列アルゴリズムプログラムパラメータが指定される。次いで、配列比較アルゴリズムは、指定されたプログラムパラメータに基づいて、参照配列に対する試験配列の配列同一性パーセントを計算する。
比較のための配列の最適なアラインメントは、例えば、Ｓｍｉｔｈ＆Ｗａｔｅｒｍａｎ，Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２（１９８１）のローカルホモロジーアルゴリズム、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ＆Ｗｕｎｓｃｈ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３（１９７０）のホモロジーアラインメントアルゴリズム、Ｐｅａｒｓｏｎ＆Ｌｉｐｍａｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８５：２４４４（１９８８）の類似性検索方法、これらのアルゴリズムのコンピュータ化された実装（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｐａｃｋａｇｅ，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ、５７５ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄｒ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩにおけるＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、及びＴＦＡＳＴＡ）、又は目視検査（全般的には、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，ａ ｊｏｉｎｔ ｖｅｎｔｕｒｅ ｂｅｔｗｅｅｎ Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｉｎｃ．ａｎｄ Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，（１９９５ Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ）（Ａｕｓｕｂｅｌ）を参照されたい）によって行うことができる。
配列同一性パーセント及び配列類似性を求めるのに好適なアルゴリズムの例は、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３－４１０及びＡｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，（１９９７）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３３８９－３４０２にそれぞれ記載されているＢＬＡＳＴ及びＢＬＡＳＴ２．０アルゴリズムである。ＢＬＡＳＴ分析を行うソフトウェアは、国立生物工学情報センター（National Center for Biotechnology Information）を通じて公的に入手可能である。このアルゴリズムは、最初に、データベース配列における同じ長さのワードと位置合わせしたときに一致するか、又はいくつかの正の値の閾値スコアＴを満たすかのいずれかの、クエリー配列における長さＷの短いワードを同定することによって、高スコア配列対（ＨＳＰ）を同定することを含む。Ｔは、隣接ワードスコア閾値（Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．、上記）と称される。これらの初期隣接ワードヒットは、それを含有するより長いＨＳＰを見つけるために検索を開始するためのシードとして機能する。次いで、累積位置合わせスコアを増加させることができる限り、各配列に沿ってワードヒットを両方向に延長する。
ヌクレオチド配列については、パラメータＭ（一致する残基の対についてのリワードスコア、常に０より大きい値である）及びパラメータＮ（不一致の残基についてのペナルティスコア、常に０より小さい値である）を使用して累積スコアを計算する。アミノ酸配列については、スコアリングマトリックスを使用して累積スコアを計算する。累積位置合わせスコアがその最大獲得値から量Ｘだけ低下したとき、１つ又は２つ以上の負のスコアリング残基の位置合わせの蓄積により、累積スコアがゼロ以下になったとき、又はいずれかの配列の末端に達したときに、各方向におけるワードヒットの延長を停止する。ＢＬＡＳＴアルゴリズムのパラメータＷ、Ｔ、及びＸが、位置合わせの感度及び速度を決定する。ＢＬＡＳＴＮプログラム（ヌクレオチド配列について）は、デフォルトとして、ワード長（Ｗ）１１、期待値１０、Ｍ＝５、Ｎ＝－４、及び両方の鎖の比較を使用する。アミノ酸配列については、ＢＬＡＳＴＰプログラムは、デフォルトとして、ワード長（Ｗ）３、期待値（Ｅ）１０、及びＢＬＯＳＵＭ６２スコアリングマトリックスを使用する（Ｈｅｎｉｋｏｆｆ＆Ｈｅｎｉｋｏｆｆ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：１０９１５（１９８９）を参照されたい）。
配列同一性パーセントを計算することに加えて、ＢＬＡＳＴアルゴリズムは、２つの配列間の類似性の統計解析も行う（例えば、Ｋａｒｌｉｎ＆Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：５８７３－５７８７（１９９３）を参照されたい）。ＢＬＡＳＴアルゴリズムによって提供される類似性の１つの尺度は、最小合計確率（Ｐ（Ｎ））であり、これは、２つのヌクレオチド配列間又は２つのアミノ酸配列間の一致が偶然に生じる確率の指標を提供する。例えば、核酸は、試験核酸と参照核酸との比較における最小合計確率が、約０．１未満、より好ましくは約０．０１未満、最も好ましくは約０．００１未満である場合、参照配列に類似しているとみなされる。
２つの核酸配列又はポリペプチドが実質的に同一であることの更なる指標は、以下に記載されるように、第１核酸によりコード化されるポリペプチドが、第２核酸によりコード化されるポリペプチドと免疫学的に交差反応性であることである。したがって、ポリペプチドは、典型的には、第２ポリペプチドと実質的に同一であり、例えば、２つのペプチドは保存的置換によってのみ異なる。２つの核酸配列が実質的に同一である別の指標は、２つの分子がストリンジェントな条件下で互いにハイブリダイズすることである。
本明細書で使用するとき、用語「ポリヌクレオチド」は、同義的に「核酸分子」、「ヌクレオチド」、又は「核酸」とも称され、非修飾ＲＮＡ若しくはＤＮＡ又は修飾ＲＮＡ若しくはＤＮＡであってよい、任意のポリリボヌクレオチド又はポリデオキシリボヌクレオチドを指す。「ポリヌクレオチド」としては、一本鎖及び二本鎖ＤＮＡ、一本鎖及び二本鎖の領域の混合物であるＤＮＡ、一本鎖及び二本鎖ＲＮＡ、並びに一本鎖及び二本鎖の領域の混合物であるＲＮＡ、一本鎖又はより典型的には二本鎖又は一本鎖及び二本鎖の領域の混合物であってよいＤＮＡ及びＲＮＡを含むハイブリッド分子が挙げられるが、これらに限定されない。加えて、「ポリヌクレオチド」は、ＲＮＡ若しくはＤＮＡ又はＲＮＡ及びＤＮＡの両方を含む三本鎖領域を指す。ポリヌクレオチドという用語には、１つ又は２つ以上の修飾された塩基を含有するＤＮＡ又はＲＮＡ、及び安定性又は他の理由により修飾された骨格を有するＤＮＡ又はＲＮＡも含まれる。「修飾された」塩基は、例えば、トリチル化塩基及び異常な塩基、例えば、イノシンを含む。様々な修飾をＤＮＡ及びＲＮＡに行うことができる。したがって、「ポリヌクレオチド」は、典型的には天然に認められるポリヌクレオチドの化学的、酵素的又は代謝的に修飾された形態、並びにウイルス及び細胞のＤＮＡ及びＲＮＡの特徴を有する化学的形態を包含する。「ポリヌクレオチド」はまた、比較的短い核酸鎖（多くの場合、オリゴヌクレオチドと称される）も包含する。
本明細書で使用するとき、用語「ベクター」は、別の核酸セグメントを機能的に挿入することによってそのセグメントの複製又は発現を行うことができるレプリコンのことである。
本明細書で使用するとき、用語「宿主細胞」は、本発明の核酸分子を含む細胞を指す。「宿主細胞」は、例えば、初代細胞、培養中の細胞、又は細胞株由来の細胞のいずれの種類の細胞であってもよい。一実施形態では、「宿主細胞」は、本明細書に開示される核酸分子をトランスフェクトした細胞である。別の実施形態では、「宿主細胞」は、かかるトランスフェクトされた細胞の子孫又は潜在的な子孫である。細胞の後代は、例えば、後続の世代で生じる可能性のある変異若しくは環境の影響、又は宿主細胞ゲノムへの核酸分子の組み込みによって、親細胞と同一である場合もあり、同一ではない場合もある。
本明細書で使用するとき、用語「発現」は、遺伝子産物の生合成を指す。この用語は、遺伝子のＲＮＡへの転写を包含する。この用語はまた、ＲＮＡの１つ又は２つ以上のポリペプチドへの翻訳も包含し、全ての天然に生じる、転写後及び翻訳後修飾も更に含まれる。発現される二重特異性分子は、宿主細胞の細胞質内、細胞培養の成長培地などの細胞外環境中に存在し得るか、又は細胞膜に固定され得る。
本明細書で使用するとき、用語「ペプチド」、「ポリペプチド」、又は「タンパク質」は、アミノ酸から構成される分子を指すことができ、当業者によってタンパク質として認識され得る。本明細書では、アミノ酸残基の従来の１文字又は３文字コードが使用される。用語「ペプチド」、「ポリペプチド」、及び「タンパク質」は、任意の長さのアミノ酸のポリマーを指すために、本明細書において互換的に使用することができる。ポリマーは、直鎖又は分枝鎖であってよく、修飾されたアミノ酸を含むことができ、かつ非アミノ酸により中断されてもよい。この用語はまた、天然に修飾されているか、又は介入によって修飾されているアミノ酸ポリマーを包含する。介入の例としては、例えば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化、又は任意の他の操作若しくは修飾、例えば、標識成分とのコンジュゲートが挙げられる。また、例えば、アミノ酸の１つ又は２つ以上の類似体（例えば、非天然アミノ酸などを含む）を含有するポリペプチド、並びに当該技術分野において既知である他の修飾も定義に含まれる。
本明細書に記載のペプチド配列は、通常の慣習に従って記載され、ペプチドのＮ末端領域は左側にあり、Ｃ末端領域は右側にある。アミノ酸の異性体形態は既知であるが、別途明示的に示されない限り、示されるのはアミノ酸のＬ型である。
本明細書で使用するとき、用語「抗体」は、広義で使用され、かつヒト、ヒト化、複合、及びキメラ抗体を含む、免疫グロブリン又は抗体分子、並びにモノクローナル又はポリクローナルである抗体フラグメントを含む。一般に、抗体は、特定の抗原に対する結合特異性を示すタンパク質又はペプチド鎖である。抗体の構造は、周知である。免疫グロブリンは、重鎖定常ドメインのアミノ酸配列に応じて５つの主なクラス（すなわち、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭ）に割り当てることができる。ＩｇＡ及びＩｇＧは、アイソタイプのＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４として更に細分類される。したがって、本明細書に提供される抗体は、５つの主要なクラス又は対応する下位クラスのいずれかのものであることができる。特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４である。脊椎動物種の抗体軽鎖は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて２つの明確に異なるタイプ、すなわちκ及びλのうちの一方に割り当てることができる。したがって、本明細書に提供される抗体は、カッパ又はラムダ軽鎖定常ドメインを含有することができる。特定の実施形態によれば、本明細書に開示される抗体は、ラット又はヒト抗体由来の重鎖及び／又は軽鎖定常領域を含む。
重鎖及び軽鎖定常ドメインに加えて、抗体は、軽鎖可変領域（ＶＬ）及び重鎖可変領域（ＶＨ）で構成される抗原結合領域を含有し、これらの領域の各々が、３つのドメイン（すなわち、相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）を含有する。「ＣＤＲ」は、免疫グロブリン（Ｉｇ又は抗体）ＶＨ β－シートフレームワークの非フレームワーク領域内の３つの超可変領域のうちの１つ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、若しくはＨＣＤＲ３）、又は抗体ＶＬ β－シートフレームワークの非フレームワーク領域内の３つの超可変領域のうちの１つ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、若しくはＬＣＤＲ３）を指す。したがって、ＣＤＲは、フレームワーク領域配列内に散在する可変領域配列である。ＣＤＲ領域は、当業者に周知であり、例えば、Ｋａｂａｔによって、抗体可変（Ｖ）ドメイン内の最も可変性の高い領域として定義されている（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５２：６６０９－６６１６（１９７７）、Ｋａｂａｔ，Ａｄｖ．Ｐｒｏｔ．Ｃｈｅｍ．３２：１－７５（１９７８））。ＣＤＲ領域配列はまた、保存されたβ－シートフレームワークの一部ではないので、様々な高次構造に適応することができる残基として、Ｃｈｏｔｈｉａによって構造的に定義されている（Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７（１９８７））。両方の用語は、当該技術分野において十分に認識されている。ＣＤＲ領域配列はまた、ＡｂＭ、Ｃｏｎｔａｃｔ、及びＩＭＧＴによって定義されている。例示的なＣＤＲ領域配列は、本明細書に、例えば、配列表、及び以下の実施例に提供される表に例示される。標準的な抗体可変領域内のＣＤＲの位置は、多数の構造の比較によって決定されている（Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２７３：９２７－９４８（１９９７）、Ｍｏｒｅａ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ２０：２６７－２７９（２０００））。超可変領域内の残基の数は異なる抗体では変化するため、標準的な位置に対する追加の残基には、従来、標準的な可変領域付番スキーム（Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ ｅｔ ａｌ．、上記（１９９７））における残基番号の次に、ａ、ｂ、ｃなどを付けて付番される。そのような命名法は、当業者には周知である。
軽鎖可変領域ＣＤＲ１ドメインは、本明細書において、ＬＣＤＲ１又はＶＬ ＣＤＲ１と互換的に称される。軽鎖可変領域ＣＤＲ２ドメインは、本明細書において、ＬＣＤＲ２又はＶＬ ＣＤＲ２と互換的に称される。軽鎖可変領域ＣＤＲ３ドメインは、本明細書において、ＬＣＤＲ３又はＶＬ ＣＤＲ３と互換的に称される。重鎖可変領域ＣＤＲ１ドメインは、本明細書において、ＨＣＤＲ１又はＶＨ ＣＤＲ１と互換的に称される。重鎖可変領域ＣＤＲ２ドメインは、本明細書において、ＨＣＤＲ２又はＶＨ ＣＤＲ２と互換的に称される。重鎖可変領域ＣＤＲ１ドメインは、本明細書において、ＨＣＤＲ３又はＶＨ ＣＤＲ３と互換的に称される。
本明細書で使用するとき、ＶＨ又はＶＬなどの用語「超可変領域」は、配列において超可変である、及び／又は構造的に定義されるループを形成する、抗体可変領域の領域を指す。概して、抗体は、６つの超可変領域、すなわちＶＨ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）の３つ、及びＶＬ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）の３つを含む。多数の超可変領域の描写が使用されており、本明細書に包含される。「Ｋａｂａｔ」ＣＤＲは、配列可変性に基づくものであり、最も一般的に使用されている（例えば、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ．（１９９１）を参照されたい）。「Ｃｈｏｔｈｉａ」は、それに代えて、構造ループの位置を指す（例えば、Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７（１９８７）を参照されたい）。Ｋａｂａｔ付番規則を使用して付番されたときのＣｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ－ＨＣＤＲ１ループの末端は、ループの長さに応じてＨ３２からＨ３４まで変化する（これは、Ｋａｂａｔ付番スキームが、Ｈ３５Ａ及びＨ３５Ｂに挿入を配置するためであり、３５Ａも３５Ｂも存在しない場合、ループは３２で終わり、３５Ａのみが存在する場合、ループは３３で終わり、３５Ａ及び３５Ｂの両方が存在する場合、ループは３４で終わる）。「ＡｂＭ」超可変領域は、Ｋａｂａｔ ＣＤＲとＣｈｏｔｈｉａ構造ループとの間の妥協案を表し、Ｏｘｆｏｒｄ ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデリングソフトウェアによって使用されている（例えば、Ｍａｒｔｉｎ，ｉｎ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｖｏｌ．２，Ｃｈａｐｔｅｒ ３，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｖｅｒｌａｇを参照されたい）。「Ｃｏｎｔａｃｔ」超可変領域は、利用可能な複合結晶構造の分析に基づく。
最近、ユニバーサル付番システムが開発され、広く採用されている、ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ（ＩＭＧＴ）Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ（登録商標）（Ｌａｆｒａｎｃ ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２７（１）：５５－７７（２００３））。ＩＭＧＴは、免疫グロブリン（immunoglobulin、ＩＧ）、Ｔ細胞受容体（T cell receptor、ＴＲ）、並びにヒト及び他の脊椎動物の主要組織適合複合体（major histocompatibility complex、ＭＨＣ）専門の統合情報システムである。本明細書において、ＣＤＲは、アミノ酸配列と、軽鎖又は重鎖内の位置との両方の観点において言及される。免疫グロブリン可変部ドメインの構造内のＣＤＲの「位置」は、種の間で保存され、ループと称される構造で存在するため、可変部ドメイン配列を構造的特徴に従って整合する付番システムを使用することにより、ＣＤＲ及びフレームワーク残基は容易に同定される。この情報は、１つの種の免疫グロブリンからのＣＤＲ残基を、典型的にはヒト抗体からのアクセプターフレームワーク内に移植及び置き換えることに使用され得る。Ｈｏｎｅｇｇｅｒ ａｎｄ Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３０９：６５７－６７０（２００１）によって、更なる付番システム（ＡＨｏｎ）が開発されている。例えば、Ｋａｂａｔ付番及びＩＭＧＴ固有の付番システムを含む付番システム間の対応関係は、当業者に周知である（例えば、Ｋａｂａｔ、上記；Ｃｈｏｔｈｉａ及びＬｅｓｋ、上記；Ｍａｒｔｉｎ、上記；Ｌｅｆｒａｎｃ ｅｔ ａｌ．、上記を参照されたい）。本明細書に示される例示的なシステムは、Ｋａｂａｔ及びＣｈｏｔｈｉａを組み合わせている。
超可変領域は、次のような「拡張超可変領域」を含んでもよい：ＶＬ内の２４～３６又は２４～３４（ＬＣＤＲ１）、４６～５６又は５０～５６（ＬＣＤＲ２）、及び８９～９７又は８９～９６（ＬＣＤＲ３）、並びにＶＨ内の２６～３５又は２６～３５Ａ（ＨＣＤＲ１）、５０～６５又は４９～６５（ＨＣＤＲ２）、及び９３～１０２、９４～１０２、又は９５～１０２（ＨＣＤＲ３）。配列表に含まれる、上記の付番スキームの各々を反映するＣＤＲ配列が、本明細書に提供される。
用語「定常領域」又は「定常ドメイン」は、抗原に対する抗体の結合に直接関与しないが、Ｆｃ受容体との相互作用などの様々なエフェクター機能を示す軽鎖及び重鎖のカルボキシ末端部分を指す。この用語は、抗原結合部位を含有する可変領域である免疫グロブリンの他の部分と比較してより保存されたアミノ酸配列を有する免疫グロブリン分子の部分を指す。定常領域は、重鎖のＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３領域、並びに軽鎖のＣＬ領域を含有してもよい。
用語「フレームワーク」又は「ＦＲ」残基は、ＣＤＲに隣接する可変領域残基である。ＦＲ残基は、例えば、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、ドメイン抗体、ダイアボディ、直鎖抗体、及び二重特異性抗体中に存在する。ＦＲ残基は、超可変領域残基又はＣＤＲ残基以外の可変ドメイン残基である。
本明細書で使用するとき、用語「単離された抗体」は、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まない抗体を指す（例えば、標的抗原に特異的に結合する単離された抗体は、標的抗原に結合しない抗体を実質的に含まない）。第２の標的抗原に特異的に結合する単離された抗は、第２の標的抗原に結合しない抗体を実質的に含まない）。更に、単離抗体は、他の細胞物質及び／又は化学物質を実質的に含まない。
本明細書で使用するとき、用語「モノクローナル抗体」は、実質的に均質な抗体の集団から得られる抗体を指し、すなわち、集団を構成する個々の抗体は、微量に存在し得る自然発生変異を除いて同一である。本明細書に開示されるモノクローナル抗体は、ハイブリドーマ法、ファージディスプレイ技術、単一リンパ球遺伝子クローニング技術、又は組換えＤＮＡ法によって作製することができる。例えば、モノクローナル抗体は、トランスジェニック非ヒト動物、例えば、トランスジェニックマウス又はラットから得られるＢ細胞を含むハイブリドーマによって生成され得、ヒト重鎖導入遺伝子及び軽鎖導入遺伝子を含むゲノムを有する。
本明細書で使用するとき、用語「抗原結合フラグメント」は、例えば、ダイアボディ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖフラグメント、ジスルフィド安定化Ｆｖフラグメント（disulfide stabilized Fv、ｄｓＦｖ）、（ｄｓＦｖ）２、二重特異性ｄｓＦｖ（ｄｓＦｖ－ｄｓＦｖ’）、ジスルフィド安定化ダイアボディ（ｄｓダイアボディ）、単鎖抗体分子（ｓｃＦｖ）、単一ドメイン抗体（single domain antibody、ｓｄＡｂ）ｓｃＦｖ二量体（二価ダイアボディ）、１つ若しくは２つ以上のＣＤＲを含む抗体の部分から形成される多重特異性抗体、ラクダ化単一ドメイン抗体、ナノボディ、ドメイン抗体、二価ドメイン抗体、又は抗原に結合するが完全な抗体構造を含まない任意の他の抗体フラグメントなどの抗体フラグメントを指す。抗原結合フラグメントは、親抗体又は親抗体フラグメントが結合する同じ抗原に結合することができる。特定の実施形態によれば、抗原結合フラグメントは、軽鎖可変領域、軽鎖定常領域、及び重鎖のＦｄフラグメントを含む。他の特定の実施形態によれば、抗原結合フラグメントはＦａｂ及びＦ（ａｂ’）を含む。
本明細書で使用するとき、用語「単鎖抗体」は、約１５～約２０個のアミノ酸の短いペプチドによって接続される重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む、この分野において従来既知の単鎖抗体を指す。
本明細書で使用されるとき、用語「単一ドメイン抗体」又は「ｓｄＡｂ」は、単一の単量体可変抗体ドメインを指し、抗原結合が可能である（例えば、ｐＩｇＲに結合する単一ドメイン抗体）。単一ドメイン抗体には、本明細書に記載のＶＨＨドメインが含まれる。本明細書で提供される単一ドメイン抗体は、頂端表面から基底表面へ（逆トランスサイトーシス）、並びに基底側から頂端側へ（トランスサイトーシス）輸送される。単一ドメイン抗体の例としては、Ｃａｍｅｌｉｄａｅ種（例えば、ラマ）由来のものなどの軽鎖を自然に欠く抗体、従来の４本鎖抗体に由来する単一ドメイン抗体、操作された抗体、及び抗体に由来するもの以外の単一ドメイン足場が挙げられるが、これらに限定されない。単一ドメイン抗体は、マウス、ヒト、ラクダ、ラマ、ヤギ、ウサギ、及びウシを含むがこれらに限定されない任意の種に由来し得る。例えば、単一ドメイン抗体は、本明細書に記載されているように、ラクダ科種、例えばラクダ、ラマ、ヒトコブラクダ、アルパカ、及びグアナコで産生された抗体に由来し得る。ラクダ科以外の他の種でも、天然に軽鎖を持たない重鎖抗体を産生することがある。そのような他の種に由来するＶＨＨは、本開示の範囲内である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される単一ドメイン抗体（例えば、ＶＨＨ）は、ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４の構造を有する。単一ドメイン抗体は、本明細書に記載されているように、別の分子（例えば、薬剤）と遺伝的に融合したり、化学的にコンジュゲートしたりすることができる。
本明細書で使用するとき、用語「ヒト抗体」は、ヒトによって産生される抗体、又は当該技術分野において既知である任意の技術を用いて作製される、ヒトによって産生される抗体に対応するアミノ酸配列を有する抗体を指す。ヒト抗体のこの定義は、インタクトな若しくは完全長の抗体、そのフラグメント、並びに／又は少なくとも１つのヒト重鎖及び／若しくは軽鎖ポリペプチドを含む抗体を含む。
本明細書で使用するとき、用語「ヒト化抗体」とは、抗体の抗原結合特性が保持されるが、人体における抗原の抗原性が低下するように、改変によりヒト抗体への配列相同性を増加させた非ヒト抗体を意味する。
本明細書で使用するとき、用語「キメラ抗体」は、免疫グロブリン分子のアミノ酸配列が２つ又は３つ以上の種に由来する抗体を指す。軽鎖及び重鎖の両方の可変領域は、多くの場合、所望の特異性、親和性、及び能力を有する１つの種の哺乳動物（例えば、マウス、ラット、ウサギなど）に由来する抗体の可変領域に対応するが、定常領域は、その種における免疫応答の惹起を回避するために、別の種の哺乳動物（例えば、ヒト）に由来する抗体の配列に対応する。
本明細書で使用するとき、用語「多重特異性分子」は、各々が標的分子、リガンド又はその断片を特異的に結合することができる複数の結合ドメインを含む分子を指す。したがって、多重特異性分子は多重特異性抗体であり得るが、その結合ドメインは、抗体、その断片、又は抗体成分から構成される任意の他の抗体関連分子（すなわち、ｓｃＦｖ）に限定されず、別のタンパク質、その断片のリガンドを特異的に結合することができる組換え抗原を含む、非抗体タンパク質及びその断片である結合ドメインを含む。一実施形態では、多重特異性分子は、第１のエピトープ（例えば、ｐＩｇＲ上のエピトープ）に対する結合特異性を有する免疫グロブリン可変ドメイン配列を含む第１の結合ドメインと、目的の標的タンパク質又はその断片（例えば、アンジオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ２）の細胞外ドメイン）に特異的に結合する第２の結合ドメインと、を含み得る。
用語「二重特異性分子」は、各々が標的タンパク質、リガンド又はそれらの断片を特異的に結合することができる２つの結合ドメインを有する分子を指す。したがって、二重特異性分子は二重特異性抗体であり得るが、その結合ドメインは、抗体、その断片、又は抗体成分から構成される任意の他の抗体関連分子（すなわち、ｓｃＦｖ）に限定されず、別のタンパク質を特異的に結合することができる組換え抗原を含む、非抗体タンパク質、リガンド及びその断片である結合ドメインを含む。一実施形態では、二重特異性分子は、第１のエピトープ（例えば、ｐＩｇＲ上のエピトープ）に対する結合特異性を有する免疫グロブリン可変ドメイン配列を含む第１の結合ドメインと、目的の標的タンパク質又はその断片（例えば、アンジオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ２）の細胞外ドメイン）に特異的に結合する第２の結合ドメインと、を含み得る。
本明細書で使用するとき、用語「多重特異性抗体」は、複数の免疫グロブリン可変ドメイン配列を含む抗体を指し、複数のうちの第１の免疫グロブリン可変ドメイン配列は、第１のエピトープに対する結合特異性を有し、複数のうちの第２の免疫グロブリン可変ドメイン配列は、第２のエピトープに対する結合特異性を有する。ある実施形態では、第１及び第２のエピトープは、重複しないか、又は実質的に重複しない。一実施形態では、第１及び第２のエピトープは、異なる抗原上、例えば、異なるタンパク質（又は多量体タンパク質の異なるサブユニット）上にある。一実施形態では、多重特異性抗体は、第３、第４、又は第５の免疫グロブリン可変ドメインを含む。一実施形態では、多重特異性抗体は、二重特異性抗体分子、三重特異性抗体分子、又は四重特異性抗体分子である。
本明細書で使用するとき、用語「二重特異性抗体」は、２つ以下のエピトープ又は２つ以下の抗原に結合する多重特異性抗体を指す。二重特異性抗体は、第１のエピトープ（例えば、ｐＩｇＲ上のエピトープ）に対する結合特異性を有する第１の免疫グロブリン可変ドメイン配列、及び第２のエピトープに対する結合特異性を有する第２の免疫グロブリン可変ドメイン配列によって特徴付けられる。一実施形態では、第１及び第２のエピトープは、異なる抗原上、例えば、異なるタンパク質（又は多量体タンパク質の異なるサブユニット）上にある。ある実施形態では、二重特異性抗体は、第１のエピトープに対する結合特異性を有する重鎖可変ドメイン配列及び軽鎖可変ドメイン配列と、第２のエピトープに対する結合特異性を有する重鎖可変ドメイン配列及び軽鎖可変ドメイン配列とを含む。ある実施形態では、二重特異性抗体は、第１のエピトープに対する結合特異性を有する単一ドメイン抗体又はその断片と、第２のエピトープに対する結合特異性を有する抗体又はその任意の断片と、を含む。ある実施形態では、二重特異性抗体は、第１のエピトープに対する結合特異性を有するｓｃＦｖ又はそのフラグメントと、第２のエピトープに対する結合特異性を有するｓｃＦｖ又はそのフラグメントとを含む。
用語「結合する（binds）」又は「結合すること（binding）」は、例えば、複合体を形成することを含む分子間の相互作用を指す。用語「結合ドメイン」は、別の分子又はリガンドとの特異的結合相互作用に関与する多重特異性又は二重特異性分子の一部分を指す。相互作用は、例えば、水素結合、イオン結合、疎水性相互作用、及び／又はファンデルワールス相互作用を含む非共有相互作用であり得る。複合体には、共有結合若しくは非共有結合、相互作用、又は力によって一緒に保持された２つ又は３つ以上の分子の結合も含まれ得る。抗体の単一の抗原結合部位と、抗原などの標的分子の単一のエピトープとの間の非共有相互作用全体の強さが、そのエピトープに対する抗体又は機能的フラグメントの親和性である。一価の抗原に対する結合分子（例えば、抗体）の解離速度（ｋｏｆｆ）と会合速度（ｋｏｎ）との比（ｋｏｆｆ／ｋｏｎ）は、解離定数ＫＤであり、親和性とは逆の関係にある。ＫＤ値が低いほど、抗体の親和性は高くなる。ＫＤの値は、結合分子及びそれらのリガンド（すなわち、抗体及び抗原）の異なる複合体によって様々であり、ｋｏｎ及びｋｏｆｆの両方に依存する。ＫＤが１×１０－７Ｍ以下、例えば、１×１０－８Ｍ以下、５×１０－９Ｍ以下、１×１０－９Ｍ以下、５×１０－１０Ｍ以下、又は１×１０－１０Ｍ以下で標的を特異的に結合することができる結合ドメイン。本明細書において提供される抗体の解離定数ＫＤは、本明細書で提供されている任意の方法、又は当業者に周知である任意の他の方法を使用して決定することができる。１つの結合部位での親和性は、必ずしも抗体と抗原との間の相互作用の真の強さを反映するものではない。多価抗原などの複数の繰り返し抗原決定基を含む複雑な抗原が、複数の結合部位を含む抗体と接触した場合、ある部位での抗体の抗原との相互作用は、第２部位での反応の確率を増加させるであろう。そのような多価抗体と抗原との間の複数の相互作用の強さは、親和力と呼ばれる。
本明細書に記載されている結合分子に関連して、「に結合する」、「に特異的に結合する」などの用語、及び類似の用語も本明細書では互換的に使用され、ポリペプチドなどの抗原に特異的に結合する抗原結合ドメインの結合分子を指す。抗原に結合する、又は抗原に特異的に結合する結合分子又は抗原結合ドメインは、関連する抗原と交差反応することがある。特定の実施形態では、抗原に結合する、又は抗原に特異的に結合する結合分子又は抗原結合ドメインは、他の抗原と交差反応しない。抗原に結合するか、又は抗原に特異的に結合する結合分子又は抗原結合ドメインは、例えば、イムノアッセイ、Ｏｃｔｅｔ（登録商標）、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）、又は当業者に既知である他の技術によって同定することができる。いくつかの実施形態では、結合分子又は抗原結合ドメインは、ラジオイムノアッセイ（radioimmunoassay、ＲＩＡ）及び酵素結合免疫吸着アッセイ（enzyme linked immunosorbent assay、ＥＬＩＳＡ）などの実験技術を用いて決定された任意の交差反応性抗原よりも高い親和性で抗原に結合する場合、抗原に結合する又は抗原に特異的に結合する。典型的には、特異的又は選択的な反応は、バックグラウンドのシグナル又はノイズの少なくとも２倍であり、バックグラウンドの１０倍を超える場合がある。結合特異性に関する考察については、例えば、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ３３２－３６（Ｐａｕｌ ｅｄ．，２ｄ ｅｄ．１９８９）を参照されたい。特定の実施形態では、「非標的」タンパク質に対する結合分子又は抗原結合ドメインの結合の程度は、例えば、蛍光活性化細胞選別（fluorescence activated cell sorting、ＦＡＣＳ）分析又はＲＩＡによって決定されたとき、その特定の標的抗原に対する結合分子又は抗原結合ドメインの結合の約１０％未満である。「特異的結合」、「に特異的に結合する」、又は「に特異的な」などの用語は、非特異的な相互作用とは測定可能なほど異なる結合を意味する。特異的結合は、例えば、概ね結合活性を有していない類似構造の分子である対照分子の結合と比較して、分子の結合を決定することによって測定することができる。例えば、特異的結合は、標的に類似した対照分子、例えば、過剰な非標識標的との競合によって決定することができる。この場合、標識標的のプローブへの結合が、過剰な非標識標的によって競合的に阻害される場合、特異的結合が示される。抗原に結合する結合分子又は抗原結合ドメインには、その結合分子が、例えば、抗原を標的とした診断薬として有用であるように、十分な親和性で抗原に結合可能なものが含まれる。特定の実施形態では、抗原に結合する結合分子又は抗原結合ドメインは、８００ｎＭ、６００ｎＭ、５５０ｎＭ、５００ｎＭ、３００ｎＭ、２５０ｎＭ、１００ｎＭ、５０ｎＭ、１０ｎＭ、５ｎＭ、４ｎＭ、３ｎＭ、２ｎＭ、１ｎＭ、０．９ｎＭ、０．８ｎＭ、０．７ｎＭ、０．６ｎＭ、０．５ｎＭ、０．４ｎＭ、０．３ｎＭ、０．２ｎＭ、又は０．１ｎＭ以下の平衡解離定数（ＫＤ）を有する。特定の実施形態では、結合分子又は抗原結合ドメインは、異なる種に由来する抗原間（例えば、ヒトとオナガザル（cyno）種との間）で保存されている抗原のエピトープに結合する。
「結合親和性」とは、概して、分子の単一の結合部位（例えば、抗体などの結合タンパク質）と、その結合パートナー（例えば、抗原）との間の非共有相互作用の総和の強さを指す。別段の記載がない限り、本明細書で使用するとき、「結合親和性」は、結合対（例えば、抗体及び抗原）のメンバー間の１：１の相互作用を反映する固有の結合親和性を指す。結合分子Ｘのその結合パートナーＹに対する親和性は、概ね平衡解離定数（ＫＤ）で表すことができる。親和性は、本明細書に記載されているものを含む、当該技術分野において既知である一般的な方法で測定することができる。低親和性抗体は、概ね抗原とゆっくり結合し、容易に解離する傾向があるが、高親和性抗体は、概ね抗原とより速く結合し、より長く結合を維持する傾向がある。結合親和性を測定する様々な方法が当該技術分野において既知であり、そのいずれもが本開示の目的のために使用することができる。具体的な例示的実施形態としては、以下のものが挙げられる。一実施形態では、「ＫＤ」又は「ＫＤ値」は、当該技術分野において既知であるアッセイによって、例えば、結合アッセイによって測定することができる。ＫＤは、例えば、目的の抗体のＦａｂバージョン及びその抗原を用いて行われるＲＩＡで測定され得る（Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｊ．Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２９３：８６５－８１）。また、バイオレイヤー干渉法（biolayer interferometry、ＢＬＩ）又は表面プラズモン共鳴法（surface plasmon resonance、ＳＰＲ）を用いて、Ｏｃｔｅｔ（登録商標）（Ｏｃｔｅｔ（登録商標）Ｒｅｄ９６系など）又はＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）（Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）ＴＭ－２０００やＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）ＴＭ－３０００など）で、ＫＤ又はＫＤ値を測定することができる。また、「オンレート」又は「会合の速度」又は「会合速度」又は「ｋｏｎ」は、例えば、Ｏｃｔｅｔ（登録商標）Ｒｅｄ９６、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）ＴＭ－２０００、又はＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）ＴＭ－３０００のシステムを用いて、上述したバイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）又は表面プラズモン共鳴法（ＳＰＲ）という同じ手法で測定することができる。
特定の実施形態では、結合分子又は抗原結合ドメインは、重鎖及び／又は軽鎖の一部が、特定の種に由来する、又は特定の抗体クラス若しくはサブクラスに属する抗体の対応する配列と同一又は相同である一方、鎖の残りの部分が、別の種に由来する、又は別の抗体クラス若しくはサブクラスに属する抗体の対応する配列と同一又は相同である「キメラ」配列、並びに所望の生物活性を示す限り、かかる抗体の断片を含み得る（米国特許第４，８１６，５６７号、及びＭｏｒｒｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９８４，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８１：６８５１－５５を参照されたい）。キメラ配列は、ヒト化配列を含み得る。
特定の実施形態では、結合分子又は抗原結合ドメインは、ネイティブＣＤＲ残基が、所望の特異性、親和性、及び能力を有するマウス、ラット、ウサギ、又は非ヒト霊長類などの非ヒト種（例えば、ドナー抗体）の対応するＣＤＲからの残基に置き換えられている、ヒト免疫グロブリン由来の配列を含む非ヒト（例えば、ラクダ、ネズミ、非ヒト霊長類）抗体（例えば、レシピエント抗体）の「ヒト化」形態の部分を含み得る。いくつかの例では、ヒト免疫グロブリン配列の１つ又は２つ以上のＦＲ領域残基が、対応する非ヒト残基に置き換えられる。更に、ヒト化抗体は、レシピエント抗体又はドナー抗体で見出されない残基を含むことができる。これらの修飾は、抗体の性能を更に改良するために行われる。ヒト化抗体の重鎖又は軽鎖は、少なくとも１つ又は２つ以上の可変領域の実質的に全てを含むことができ、その場合、ＣＤＲの全て又は実質的に全てが非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、ＦＲの全て又は実質的に全てがヒト免疫グロブリン配列のものである。特定の実施形態では、ヒト化抗体は、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、典型的には、ヒト免疫グロブリンの少なくとも一部分を含む。更なる詳細については、Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，１９８６，Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２－２５、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３－２９、Ｐｒｅｓｔａ，１９９２，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：５９３－９６、Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：４２８５－８９、米国特許第６，８００，７３８号、同第６，７１９，９７１号、同第６，６３９，０５５号、同第６，４０７，２１３号、及び同第６，０５４，２９７号を参照されたい。
本明細書で使用するとき、用語「ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２」は、新型コロナウイルス感染症２０１９（ＣＯＶＩＤ－１９）の原因となるウイルスを指す。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ゲノムは、構造タンパク質及び非構造タンパク質をコードする特定の遺伝子に組織化された約３０，０００ヌクレオチドを含む。参照ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の完全長ウイルスヌクレオチド配列は、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＭＮ９０８９４７によって提供される。構造タンパク質としては、スパイク（spike、Ｓ）、エンベロープ（envelope、Ｅ）、膜（membrane、Ｍ）、及びヌクレオカプシド（nucleocapsid、Ｎ）タンパク質が挙げられる。表面Ｓ糖タンパク質は、宿主のアンジオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ２）受容体との相互作用に関与し、ヒトからヒトへの迅速な伝達において重要な役割を果たす。Ｓ上の定義された受容体結合ドメイン（receptor-binding domain、ＲＢＤ）は、この相互作用を媒介する。オープンリーディングフレーム１ａｂ（ＯＲＦ１ａｂ）ウイルスポリタンパク質の切断産物として生成される非構造タンパク質は、ウイルスの複製及び転写を容易にするように集合する。Ｎｓｐ１２としても既知であるＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼは、Ｎｓｐ７及びＮｓｐ８の助けを借りてウイルスＲＮＡ合成を調節する重要な成分である。更に、５つの補助タンパク質が、ＯＲＦ３ａ、ＯＲＦ６、ＯＲＦ７ａ、ＯＲＦ８、及びＯＲＦ１０遺伝子によってコードされる。参照完全長ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２アミノ酸配列は、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＱＨＤ４３４１５～ＱＨＤ４３４２３、ＱＨＩ４２１９９によって提供される。
本明細書で使用するとき、用語「アンジオテンシン変換酵素２」及び「ＡＣＥ２」は、その３つの機能：レニン・アンジオテンシン系の負の調節因子、アミノ酸輸送促進剤、並びに重症急性呼吸器症候群－コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ）及びＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２受容体を中心に展開する多数の生理的役割を有するタンパクを指す。ＡＣＥ２は、肺、心血管系、腸、腎臓、中枢神経系、及び脂肪組織を含めて広く発現される。ＡＣＥ２は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２受容体として同定されており、免疫、炎症、ＡＣＥ２、及び心血管疾患の間の重要な関連を提供する。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のウイルススパイク（Ｓ）タンパク質は、細胞受容体としてのＡＣＥ２に結合し、宿主細胞プロテアーゼＴＭＰＲＳＳ２によるＳタンパク質プライミングと協調して、ウイルスの宿主細胞侵入をもたらす。
用語「ＫＤ」は、ｋｄとｋａとの比（すなわち、ｋｄ／ｋａ）から得られ、モル濃度（Ｍ）として表される解離定数を指す。抗体のＫＤ値は、本開示を考慮して当該技術分野における方法を用いて決定することができる。例えば、タンパク質、例えば、抗体のＫＤは、表面プラズモン共鳴を使用することによって、例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）系などのバイオセンサー系を使用することによって、又はＯｃｔｅｔ ＲＥＤ９６系などのバイオレイヤーインターフェロメトリー技術を使用することによって求めることができる。
抗体のＫＤの値が小さいほど、タンパク質がリガンドに結合する親和性が高い。
本明細書に記載又は参照されている技術及び手順には、当業者が概ねよく理解しているもの、及び／又は当業者が従来の手法を用いて通常採用しているもの、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（３ｄ ｅｄ．２００１）、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．ｅｄｓ．，２００３）、Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｆｒｏｍ Ｂｅｎｃｈ ｔｏ Ｃｌｉｎｉｃ（Ａｎ ｅｄ．２００９）、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ（Ａｌｂｉｔａｒ，ｅｄ．２０１０）、及びＡｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｖｏｌｓ １ ａｎｄ ２（Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ ａｎｄ Ｄｕｂｅｌ ｅｄｓ．，２ｄ ｅｄ．２０１０）に記載されている広く利用されている手法などが含まれる。
本明細書中で特に定義されていない限り、本明細書で使用されている技術用語及び科学用語は、当業者によって通常理解される意味を有する。この明細書を解釈するために、以下の用語の説明が適用され、必要に応じて、単数形で使用される用語は複数形も含まれ、その逆もまた同様である。記載された用語の任意の説明が、参照により本明細書に組み込まれる任意の文書と矛盾する場合、以下に記載された用語の説明が優先するものとする。
（ａ）高分子免疫グロブリン受容体（ｐＩｇＲ）に特異的に結合する第１の結合ドメインと、（ｂ）ｐＩｇＲではない第２の標的に特異的に結合する第２の結合ドメインと、を含む、多重特異性分子が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、分子は、二重特異性分子である。
いくつかの実施形態では、多重特異性分子は、（ａ）高分子免疫グロブリン受容体（ｐＩｇＲ）に特異的に結合する第１の結合ドメインと、（ｂ）ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に特異的に結合する第２の結合ドメインと、を含む。
本明細書で提供されるように、多重特異性分子は、ＩｇＧ抗体由来のＦｃ領域を含み得る。いくつかの実施形態では、多重特異性分子は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４抗体由来のＦｃ領域を含み得る。いくつかの実施形態では、多重特異性分子は、Ｆｃ受容体の結合を無効にし、かつ抗体指向性細胞傷害（antibody-dependent cellular cytotoxicity、ＡＤＣＣ）エフェクター機能を無効にする重要な変異を有する遺伝子操作を受けたＦｃドメインを有するサイレントＦｃ領域又は修飾Ｆｃ領域であるＦｃ領域を含み得る。
いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、Ｆｃ領域のＣ末端に遺伝的に融合されているか、又は化学的にコンジュゲートされている。いくつかの実施形態では、ＡＣＥ２細胞外結合ドメインは、Ｆｃ領域のＣ末端に遺伝的に融合されているか、又は化学的にコンジュゲートされている。いくつかの実施形態では、短縮型ＡＣＥ２細胞外結合ドメインは、Ｆｃ領域のＣ末端に遺伝的に融合されているか、又は化学的にコンジュゲートされている。他の実施形態では、第２の結合ドメインは、Ｆｃ領域のＮ末端に遺伝的に融合されているか、又は化学的にコンジュゲートされている。いくつかの実施形態では、ＡＣＥ２細胞外結合ドメインは、Ｆｃ領域のＮ末端に遺伝的に融合されているか、又は化学的にコンジュゲートされている。いくつかの実施形態では、短縮型ＡＣＥ２細胞外結合ドメインは、Ｆｃ領域のＮ末端に遺伝的に融合されているか、又は化学的にコンジュゲートされている。
様々な実施形態では、第１の結合ドメインは、第２の結合ドメインに遺伝的に融合されているか、又は化学的にコンジュゲートされている。遺伝的融合は、第１の結合ドメインと第２の結合ドメインとの間にリンカー（例えば、ポリペプチド）を配置することによって達成され得る。様々な実施形態では、第１の結合ドメインは、Ｆｃ領域に遺伝的に融合されているか、又は化学的にコンジュゲートされている。遺伝的融合は、第１の結合ドメインとＦｃ領域との間にリンカー（例えば、ポリペプチド）を配置することによって達成され得る。様々な実施形態では、第２の結合ドメインは、Ｆｃ領域に遺伝的に融合されているか、又は化学的にコンジュゲートされている。遺伝的融合は、第２の結合ドメインとＦｃ領域との間にリンカー（例えば、ポリペプチド）を配置することによって達成され得る。
一態様では、ヒンジ領域は、ＥＰＫＴＰＫＰＱＰＱＰＱＬＱＰＱＰＮＰＴＴＥＳＫＳＰＫ（配列番号１９５）、（ＥＡＡＡＫ）ｎ（配列番号１９６）、（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１９７）及び（ＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１９８）からなる群から選択される配列を含む可撓性リンカーであり得、式中、ｎは、１～２０の整数である。一態様では、可撓性リンカーは、配列番号１１９を含む。
いくつかの実施形態では、ヒンジ領域は、配列ＥＰＫＴＰＫＰＱＰＱＰＱＬＱＰＱＰＮＰＴＴＥＳＫＳＰＫ（配列番号１９５）を含む。いくつかの実施形態では、ヒンジ領域は、ＥＰＫＴＰＫＰＱＰＱＰＱＬＱＰＱＰＮＰＴＴＥＳＫＳＰＫ（配列番号１９５）と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９５、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ヒンジ領域は、ＥＰＫＴＰＫＰＱＰＱＰＱＬＱＰＱＰＮＰＴＴＥＳＫＳＰＫ（配列番号１９５）と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸を含む。一実施形態では、ヒンジ領域は、ＥＰＫＴＰＫＰＱＰＱＰＱＬＱＰＱＰＮＰＴＴＥＳＫＳＰＫ（配列番号１９５）と少なくとも５５％の配列同一性を有するアミノ酸を含む。一実施形態では、ヒンジ領域は、ＥＰＫＴＰＫＰＱＰＱＰＱＬＱＰＱＰＮＰＴＴＥＳＫＳＰＫ（配列番号１９５）と少なくとも６０％の配列同一性を有するアミノ酸を含む。一実施形態では、ヒンジ領域は、ＥＰＫＴＰＫＰＱＰＱＰＱＬＱＰＱＰＮＰＴＴＥＳＫＳＰＫ（配列番号１９５）と少なくとも６５％の配列同一性を有するアミノ酸を含む。一実施形態では、ヒンジ領域は、ＥＰＫＴＰＫＰＱＰＱＰＱＬＱＰＱＰＮＰＴＴＥＳＫＳＰＫ（配列番号１９５）と少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸を含む。一実施形態では、ヒンジ領域は、ＥＰＫＴＰＫＰＱＰＱＰＱＬＱＰＱＰＮＰＴＴＥＳＫＳＰＫ（配列番号１９５）と少なくとも７５％の配列同一性を有するアミノ酸を含む。一実施形態では、ヒンジ領域は、ＥＰＫＴＰＫＰＱＰＱＰＱＬＱＰＱＰＮＰＴＴＥＳＫＳＰＫ（配列番号１９５）と少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸を含む。一実施形態では、ヒンジ領域は、ＥＰＫＴＰＫＰＱＰＱＰＱＬＱＰＱＰＮＰＴＴＥＳＫＳＰＫ（配列番号１９５）と少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸を含む。一実施形態では、ヒンジ領域は、ＥＰＫＴＰＫＰＱＰＱＰＱＬＱＰＱＰＮＰＴＴＥＳＫＳＰＫ（配列番号１９５）と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸を含む。一実施形態では、ヒンジ領域は、ＥＰＫＴＰＫＰＱＰＱＰＱＬＱＰＱＰＮＰＴＴＥＳＫＳＰＫ（配列番号１９５）と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸を含む。一実施形態では、ヒンジ領域は、ＥＰＫＴＰＫＰＱＰＱＰＱＬＱＰＱＰＮＰＴＴＥＳＫＳＰＫ（配列番号１９５）と少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸を含む。一実施形態では、ヒンジ領域は、ＥＰＫＴＰＫＰＱＰＱＰＱＬＱＰＱＰＮＰＴＴＥＳＫＳＰＫ（配列番号１９５）と少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸を含む。
いくつかの実施形態では、ヒンジ領域は、配列ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ（配列番号１００）を含む。いくつかの実施形態では、ヒンジ領域は、ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ（配列番号１００）と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９５、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ヒンジ領域は、ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ（配列番号１００）と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸を含む。一実施形態では、ヒンジ領域は、ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ（配列番号１００）と少なくとも５５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ヒンジ領域は、ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ（配列番号１００）と少なくとも６０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ヒンジ領域は、ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ（配列番号１００）と少なくとも６５％の配列同一性を有するアミノ酸を含む。一実施形態では、ヒンジ領域は、ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ（配列番号１００）と少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ヒンジ領域は、ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ（配列番号１００）と少なくとも７５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ヒンジ領域は、ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ（配列番号１００）と少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ヒンジ領域は、ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ（配列番号１００）と少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ヒンジ領域は、ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ（配列番号１００）と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ヒンジ領域は、ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ（配列番号１００）と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ヒンジ領域は、ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ（配列番号１００）と少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ヒンジ領域は、ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ（配列番号１００）と少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ヒンジ領域は、配列ＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰ（配列番号１９９）を含む。一実施形態では、ヒンジ領域は、ＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰ（配列番号１９９）と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９５、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ヒンジ領域は、ＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰ（配列番号１９９）と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸を含む。一実施形態では、ヒンジ領域は、ＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰ（配列番号１９９）と少なくとも５５％の配列同一性を有するアミノ酸を含む。一実施形態では、ヒンジ領域は、ＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰ（配列番号１９９）と少なくとも６０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ヒンジ領域は、ＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰ（配列番号１９９）と少なくとも６５％の配列同一性を有するアミノ酸を含む。一実施形態では、ヒンジ領域は、ＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰ（配列番号１９９）と少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸を含む。一実施形態では、ヒンジ領域は、ＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰ（配列番号１９９）と少なくとも７５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ヒンジ領域は、ＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰ（配列番号１９９）と少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ヒンジ領域は、ＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰ（配列番号１９９）と少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ヒンジ領域は、ＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰ（配列番号１９９）と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ヒンジ領域は、ＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰ（配列番号１９９）と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ヒンジ領域は、ＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰ（配列番号１９９）と少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ヒンジ領域は、ＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰ（配列番号１９９）と少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ヒンジ領域は、配列ＥＬＫＴＰＬＧＤＴＴＨＴＣＰＲＣＰ（ＥＰＫＳＣＤＴＰＰＰＣＰＲＣＰ）３（配列番号２００）を含む。いくつかの実施形態では、ヒンジ領域は、ＥＬＫＴＰＬＧＤＴＴＨＴＣＰＲＣＰ（ＥＰＫＳＣＤＴＰＰＰＣＰＲＣＰ）３（配列番号２００）と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９５、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ヒンジ領域は、ＥＬＫＴＰＬＧＤＴＴＨＴＣＰＲＣＰ（ＥＰＫＳＣＤＴＰＰＰＣＰＲＣＰ）３（配列番号２００）と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ヒンジ領域は、ＥＬＫＴＰＬＧＤＴＴＨＴＣＰＲＣＰ（ＥＰＫＳＣＤＴＰＰＰＣＰＲＣＰ）３（配列番号２００）と少なくとも５５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ヒンジ領域は、ＥＬＫＴＰＬＧＤＴＴＨＴＣＰＲＣＰ（ＥＰＫＳＣＤＴＰＰＰＣＰＲＣＰ）３（配列番号２００）と少なくとも６０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ヒンジ領域は、ＥＬＫＴＰＬＧＤＴＴＨＴＣＰＲＣＰ（ＥＰＫＳＣＤＴＰＰＰＣＰＲＣＰ）３（配列番号２００）と少なくとも６５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ヒンジ領域は、ＥＬＫＴＰＬＧＤＴＴＨＴＣＰＲＣＰ（ＥＰＫＳＣＤＴＰＰＰＣＰＲＣＰ）３（配列番号２００）と少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ヒンジ領域は、ＥＬＫＴＰＬＧＤＴＴＨＴＣＰＲＣＰ（ＥＰＫＳＣＤＴＰＰＰＣＰＲＣＰ）３（配列番号２００）と少なくとも７５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ヒンジ領域は、ＥＬＫＴＰＬＧＤＴＴＨＴＣＰＲＣＰ（ＥＰＫＳＣＤＴＰＰＰＣＰＲＣＰ）３（配列番号２００）と少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ヒンジ領域は、ＥＬＫＴＰＬＧＤＴＴＨＴＣＰＲＣＰ（ＥＰＫＳＣＤＴＰＰＰＣＰＲＣＰ）３（配列番号２００）と少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ヒンジ領域は、ＥＬＫＴＰＬＧＤＴＴＨＴＣＰＲＣＰ（ＥＰＫＳＣＤＴＰＰＰＣＰＲＣＰ）３（配列番号２００）と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ヒンジ領域は、ＥＬＫＴＰＬＧＤＴＴＨＴＣＰＲＣＰ（ＥＰＫＳＣＤＴＰＰＰＣＰＲＣＰ）３（配列番号２００）と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ヒンジ領域は、ＥＬＫＴＰＬＧＤＴＴＨＴＣＰＲＣＰ（ＥＰＫＳＣＤＴＰＰＰＣＰＲＣＰ）３（配列番号２００）と少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ヒンジ領域は、ＥＬＫＴＰＬＧＤＴＴＨＴＣＰＲＣＰ（ＥＰＫＳＣＤＴＰＰＰＣＰＲＣＰ）３（配列番号２００）と少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ヒンジ領域は、配列ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＳＣＰ（配列番号２０１）を含む。いくつかの実施形態では、ヒンジ領域は、ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＳＣＰ（配列番号２０１）と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９５、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ヒンジ領域は、ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＳＣＰ（配列番号２０１）と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸を含む。一実施形態では、ヒンジ領域は、ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＳＣＰ（配列番号２０１）と少なくとも５５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ヒンジ領域は、ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＳＣＰ（配列番号２０１）と少なくとも６０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ヒンジ領域は、ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＳＣＰ（配列番号２０１）と少なくとも６５％の配列同一性を有するアミノ酸を含む。一実施形態では、ヒンジ領域は、ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＳＣＰ（配列番号２０１）と少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ヒンジ領域は、ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＳＣＰ（配列番号２０１）と少なくとも７５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ヒンジ領域は、ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＳＣＰ（配列番号２０１）と少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ヒンジ領域は、ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＳＣＰ（配列番号２０１）と少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ヒンジ領域は、ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＳＣＰ（配列番号２０１）と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ヒンジ領域は、ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＳＣＰ（配列番号２０１）と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ヒンジ領域は、ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＳＣＰ（配列番号２０１）と少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ヒンジ領域は、ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＳＣＰ（配列番号２０１）と少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
一態様では、ヒンジ領域は、配列番号１００を含む。一態様では、ヒンジ領域は、配列番号１０１を含む。一態様では、ヒンジ領域は、配列番号１０２を含む。一態様では、ヒンジ領域は、配列番号１０３を含む。一態様では、ヒンジ領域は、配列番号１０４を含む。別の態様では、ヒンジ領域は、配列番号１０５を含む。
いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の表面に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の表面上の構造タンパク質、例えば、スパイクタンパク質Ｓ、小エンベロープタンパク質Ｅ、マトリックスタンパク質Ｍ又は露出していないヌクレオカプシドタンパク質Ｎに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイクタンパク質Ｓに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の小エンベロープタンパク質Ｅに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のマトリックスタンパク質Ｍに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の露出していないヌクレオカプシドタンパク質Ｎに特異的に結合する。更なる実施形態では、第２の結合ドメインは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の表面上のスパイク糖タンパク質に特異的に結合する。更なる実施形態では、第２の結合ドメインは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の表面上のスパイク糖タンパク質のＳ１サブユニットに特異的に結合する。
いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の表面に特異的に結合するタンパク質又はその断片を含む。いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の表面上の構造タンパク質、例えば、スパイクタンパク質Ｓ、小エンベロープタンパク質Ｅ、マトリックスタンパク質Ｍ又は露出していないヌクレオカプシドタンパク質Ｎに特異的に結合するタンパク質又はその断片を含む。いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイクタンパク質Ｓに特異的に結合するタンパク質又はその断片を含む。いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の小エンベロープタンパク質Ｅに特異的に結合するタンパク質又はその断片を含む。いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のマトリックスタンパク質Ｍに特異的に結合するタンパク質又はその断片を含む。いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の露出していないヌクレオカプシドタンパク質Ｎに特異的に結合するタンパク質又はその断片を含む。更なる実施形態では、第２の結合ドメインは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の表面上のスパイク糖タンパク質に特異的に結合するタンパク質又はその断片を含む。更なる実施形態では、第２の結合ドメインは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の表面上のスパイク糖タンパク質のＳ１サブユニットに特異的に結合するタンパク質又はその断片を含む。更なる実施形態では、第２の結合ドメインは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の表面上のスパイク糖タンパク質に特異的に結合するタンパク質又はその断片を含む。更なる実施形態では、第２の結合ドメインは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の表面上のスパイク糖タンパク質のＳ１サブユニットに特異的に結合するタンパク質又はその断片を含む。いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、タンパク質を含む。いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、タンパク質の断片を含む。
いくつかの実施形態では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の表面上のスパイク糖タンパク質に特異的に結合するタンパク質又はその断片を含む第２の結合ドメインは、アンジオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ２）又はその断片を含む。いくつかの実施形態では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の表面上のスパイク糖タンパク質に特異的に結合するタンパク質又はその断片を含む第２の結合ドメインは、配列番号１３４と称されるＡＣＥ２の細胞外ドメイン又はその断片を含む。いくつかの実施形態では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の表面上のスパイク糖タンパク質に特異的に結合するタンパク質又はその断片を含む第２の結合ドメインは、配列番号１２０又は配列番号１２１と称されたＡＣＥ２の短縮型細胞外ドメインを含む。いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、タンパク質を含む。いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、タンパク質の断片を含む。
いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の表面に特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片を含む。いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の表面上の構造抗体、例えば、スパイクタンパク質Ｓ、小エンベロープタンパク質Ｅ、マトリックスタンパク質Ｍ、又は露出していないヌクレオカプシドタンパク質Ｎに特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片を含む。いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイクタンパク質Ｓに特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片を含む。いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の小エンベロープタンパク質Ｅに特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片を含む。いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のマトリックスタンパク質Ｍに特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片を含む。いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の露出していないヌクレオカプシドタンパク質Ｎに特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片を含む。更なる実施形態では、第２の結合ドメインは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の表面上のスパイク糖タンパク質に特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片を含む。更なる実施形態では、第２の結合ドメインは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の表面上のスパイク糖タンパク質のＳ１サブユニットに特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片を含む。一実施形態では、第２の結合ドメインは、抗体を含む。別の実施形態では、第２の結合ドメインは、抗体の抗原結合断片を含む。
いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、直前に記載したＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の表面に特異的に結合する抗原結合断片を含む。いくつかの実施形態では、抗原結合フラグメントは、ダイアボディである。いくつかの実施形態では、抗原結合フラグメントは、Ｆａｂである。いくつかの実施形態では、抗原結合フラグメントは、Ｆａｂ’である。いくつかの実施形態では、抗原結合フラグメントは、Ｆ（ａｂ’）２である。いくつかの実施形態では、抗原結合フラグメントは、Ｆｖフラグメントである。いくつかの実施形態では、抗原結合フラグメントは、ジスルフィド安定化Ｆｖフラグメント（ｄｓＦｖ）である。いくつかの実施形態では、抗原結合フラグメントは、（ｄｓＦｖ）２である。いくつかの実施形態では、抗原結合フラグメントは、二重特異性ｄｓＦｖ（ｄｓＦｖ－ｄｓＦｖ’）である。いくつかの実施形態では、抗原結合フラグメントは、ジスルフィド安定化ダイアボディ（ｄｓダイアボディ）である。いくつかの実施形態では、抗原結合フラグメントは、単鎖抗体分子（ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、抗原結合フラグメントは、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）である。いくつかの実施形態では、抗原結合フラグメントは、ｓｃＦｖ二量体（二価ダイアボディ）である。いくつかの実施形態では、抗原結合フラグメントは、１つ又は２つ以上のＣＤＲを含む抗体の一部分から形成される多重特異性抗体である。いくつかの実施形態では、抗原結合フラグメントは、ラクダ化単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態では、抗原結合フラグメントは、ナノボディである。いくつかの実施形態では、抗原結合フラグメントは、ドメイン抗体である。いくつかの実施形態では、抗原結合フラグメントは、二価ドメイン抗体である。いくつかの実施形態では、抗原結合フラグメントは、抗原に結合するが、完全な抗体構造を含まない抗体フラグメントである。
いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、治療剤のための送達ドメインとして作用することができる、高分子免疫グロブリン受容体（ｐＩｇＲ）に結合することができる単一ドメイン抗体（ＶＨＨ）を含む。様々な実施形態では、本明細書で提供されるＶＨＨドメインは、ヒトｐＩｇＲ（Ｇｅｎｂａｎｋ ＩＤ：ＣＲ７４９５３３）に結合する（Ｔｕｒｕｌａ，Ｈ．＆Ｗｏｂｕｓ，Ｃ．Ｅ．Ｔｈｅ Ｒｏｌｅ ｏｆ ｔｈｅ Ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｎｄ Ｓｅｃｒｅｔｏｒｙ Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ ｄｕｒｉｎｇ Ｍｕｃｏｓａｌ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．Ｖｉｒｕｓｅｓ １０（２０１８）を参照されたい）。ヒトｐＩｇＲ（ｈｐＩｇＲ）は、６２０残基の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）、２３残基の膜貫通ドメイン、及び１０３残基の細胞内ドメインを含む、８２ｋＤａのシングルパス膜貫通受容体である。
ｐＩｇＲは、可溶性高分子型のＩｇＡ及びＩｇＭを上皮の基底側から頂端粘膜組織に輸送する。高分子免疫グロブリンが基底側から頂端側に輸送されるプロセスがトランスサイトーシスである。トランスサイトーシスの後、５つのドメインを含むｐＩｇＲ ＥＣＤ（分泌成分）がタンパク質分解により切断され、ＩｇＡの有無にかかわらず粘液中に放出される。トランスサイトーシスに加えて、ｐＩｇＲは、ＩｇＡの安定性、免疫排除、抗炎症作用、粘膜免疫系における共生生物の恒常性の付与を含むがこれらに限定されない、いくつかの異なる機能を有している。
１日の総抗体産生量（約３～５ｇ）の約７５％が、ＩｇＡ分子に向けられている。ヒトでは、ＩｇＡサブクラス、すなわち、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２（ＩｇＡ２ｍ（１）及び（２）アロタイプ）をコードする２つのＣα遺伝子がある。ＩｇＡ１は、いくつかのＯ－グリカン部位を含むＩｇＡ２にはない細長いヒンジ領域を有し、タンパク質分解切断の影響を受けやすい。内因性ＩｇＡは、区画依存的に様々な形で存在している。単量体ＩｇＡ（ｍＩｇＡ）は、主に骨髄で産生されるＩｇＡ１（約９０％）として、血清中（１～３ｍｇ／ｍＬの濃度）の主な形態である。二量体ＩｇＡ（ｄＩｇＡ）は、Ｃ末端のＦｃ尾部とＪ鎖のＳ－Ｓ架橋によって形成される。ｄＩｇＡは、作用の標的部位で局所的に産生され、粘膜表面を通過して呼吸器、消化管、及び泌尿生殖器管の分泌物に輸送される。分泌型ＩｇＡ（Ｓ－ＩｇＡ）は、高分子Ｉｇ受容体（ｐＩｇＲ）の細胞外ドメインとのｄＩｇＡ複合体を介して形成される。上皮細胞の粘膜表面で分泌成分（secretory component、ＳＣ）が切断されると、Ｓ－ＩｇＡが放出される。
高分子免疫グロブリン受容体（ｐＩｇＲ）は、Ｆｃ鎖とＪ鎖を介した相互作用で可溶性の二量体ＩｇＡと結合する。ｐＩｇＲは、粘膜上皮を通過してＩｇＧ分子に結合したりそれを輸送したりしない。ＩｇＧ分子は管腔を標的とした能動的な輸送メカニズムを持たないが、ＩｇＧにｐＩｇＲ結合能力を付与することで、ＩｇＧ抗体の粘膜管腔への選択的輸送を媒介することができる。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される単一ドメイン抗体（例えば、ＶＨＨドメイン）は、ｐＩｇＲに結合するＩｇＡと競合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される単一ドメイン抗体（例えば、ＶＨＨドメイン）は、ｐＩｇＲへのＩｇＡの結合を促進する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される単一ドメイン抗体（例えば、ＶＨＨドメイン）のｐＩｇＲへの結合のＫＤは、４～５２５ｎＭである。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される単一ドメイン抗体（例えば、ＶＨＨドメイン）のｐＩｇＲへの結合のＫＤは、５２５ｎＭ未満である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される単一ドメイン抗体（例えば、ＶＨＨドメイン）のｐＩｇＲへの結合のＫＤは、４００ｎＭ未満である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される単一ドメイン抗体（例えば、ＶＨＨドメイン）のｐＩｇＲへの結合のＫＤは、３５０ｎＭ未満である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される単一ドメイン抗体（例えば、ＶＨＨドメイン）のｐＩｇＲへの結合のＫＤは、３００ｎＭ未満である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される単一ドメイン抗体（例えば、ＶＨＨドメイン）のｐＩｇＲへの結合のＫＤは、２５０ｎＭ未満である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される単一ドメイン抗体（例えば、ＶＨＨドメイン）のｐＩｇＲへの結合のＫＤは、２００ｎＭ未満である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される単一ドメイン抗体（例えば、ＶＨＨドメイン）のｐＩｇＲへの結合のＫＤは、１５０ｎＭ未満である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される単一ドメイン抗体（例えば、ＶＨＨドメイン）のｐＩｇＲへの結合のＫＤは、１００ｎＭ未満である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される単一ドメイン抗体（例えば、ＶＨＨドメイン）のｐＩｇＲへの結合のＫＤは、５０ｎＭ未満である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される単一ドメイン抗体（例えば、ＶＨＨドメイン）のｐＩｇＲへの結合のＫＤは、４～５２５ｎＭである。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される単一ドメイン抗体（例えば、ＶＨＨドメイン）のｐＩｇＲへの結合のＫＤは、４～３４ｎＭである。中間範囲も企図される。例えば、いくつかの実施形態では、本明細書で提供される単一ドメイン抗体（例えば、ＶＨＨドメイン）のｐＩｇＲへの結合のＫＤは、４～５０ｎＭである。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される単一ドメイン抗体（例えば、ＶＨＨドメイン）のｐＩｇＲへの結合のＫＤは、４～１００ｎＭである。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される単一ドメイン抗体（例えば、ＶＨＨドメイン）のｐＩｇＲへの結合のＫＤは、４～２００ｎＭである。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される単一ドメイン抗体（例えば、ＶＨＨドメイン）のｐＩｇＲへの結合のＫＤは、４～３００ｎＭである。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される単一ドメイン抗体（例えば、ＶＨＨドメイン）のｐＩｇＲへの結合のＫＤは、４～４００ｎＭである。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される単一ドメイン抗体（例えば、ＶＨＨドメイン）のｐＩｇＲへの結合のＫＤは、５０～１００ｎＭである。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される単一ドメイン抗体（例えば、ＶＨＨドメイン）のｐＩｇＲへの結合のＫＤは、５０～２００ｎＭである。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される単一ドメイン抗体（例えば、ＶＨＨドメイン）のｐＩｇＲへの結合のＫＤは、５０～３００ｎＭである。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される単一ドメイン抗体（例えば、ＶＨＨドメイン）のｐＩｇＲへの結合のＫＤは、５０～４００ｎＭである。
いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体（例えば、ＶＨＨドメイン）のＴｍは、５３～７７℃である。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体（例えば、ＶＨＨドメイン）のＴｍは、５３．９～７６．４℃である。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体（例えば、ＶＨＨドメイン）のＴｍは、６１～７７℃である。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体（例えば、ＶＨＨドメイン）のＴｍは、６１～７１℃である。
特定の実施形態では、単一ドメイン抗体は、ＶＨＨドメインである。
一態様では、ｐＩｇＲのドメイン１に結合するＶＨＨを含む第１の結合ドメインを含む多重特異性抗体であって、ＶＨＨドメインが、ＶＨＨ２のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及び／又はＣＤＲ３配列を含む、多重特異性抗体が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、配列番号１のアミノ酸配列を有する相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び／又は配列番号３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、配列番号４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び／又は配列番号６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、配列番号７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び／又は配列番号９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、配列番号１０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号１１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び／又は配列番号１２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、配列番号１３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号１４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び／又は配列番号１５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、配列番号７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び／又は配列番号１９１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、配列番号１６のアミノ酸配列を含む。
一態様では、ｐＩｇＲのドメイン２に結合するＶＨＨドメインを含む第１の結合ドメインを含む多重特異性抗体であって、ＶＨＨドメインが、ＶＨＨ６のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及び／又はＣＤＲ３配列を含む、多重特異性抗体が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、配列番号１７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号１８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び／又は配列番号１９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、配列番号２０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号２１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び／又は配列番号２２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、配列番号２３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号２４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び／又は配列番号２５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、配列番号２６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号２７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び／又は配列番号２８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、配列番号２９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号３０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び／又は配列番号３１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、配列番号２３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号１９２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び／又は配列番号１９３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、配列番号３２のアミノ酸配列を含む。
一態様では、ｐＩｇＲのドメイン１に結合するＶＨＨを含む第１の結合ドメインを含む多重特異性抗体であって、ＶＨＨドメインが、ＶＨＨ２のＣＤＲ１、ＣＤＲ２又はＣＤＲ３配列を含む、多重特異性抗体が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、配列番号１のアミノ酸配列を有する相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、又は配列番号３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、配列番号４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、又は配列番号６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、配列番号７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、又は配列番号９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、配列番号１０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号１１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、又は配列番号１２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、配列番号１３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号１４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、又は配列番号１５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、配列番号７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、又は配列番号１９１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、配列番号１６のアミノ酸配列を含む。
一態様では、ｐＩｇＲのドメイン２に結合するＶＨＨドメインを含む第１の結合ドメインを含む多重特異性抗体であって、ＶＨＨドメインが、ＶＨＨ６のＣＤＲ１、ＣＤＲ２又はＣＤＲ３配列を含む、多重特異性抗体が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、配列番号１７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号１８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、又は配列番号１９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、配列番号２０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号２１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、又は配列番号２２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、配列番号２３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号２４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、又は配列番号２５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、配列番号２６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号２７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、又は配列番号２８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、配列番号２９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号３０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、又は配列番号３１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、配列番号２３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号１９２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、又は配列番号１９３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、配列番号３２のアミノ酸配列を含む。
一態様では、ｐＩｇＲのドメイン１に結合するＶＨＨを含む第１の結合ドメインを含む多重特異性抗体であって、ＶＨＨドメインが、ＶＨＨ２のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列を含む、多重特異性抗体が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、配列番号１のアミノ酸配列を有する相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、配列番号４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び配列番号６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、配列番号７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び配列番号９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、配列番号１０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号１１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び配列番号１２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、配列番号１３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号１４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び配列番号１５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、配列番号７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び配列番号１９１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、配列番号１６のアミノ酸配列を含む。
一態様では、ｐＩｇＲのドメイン２に結合するＶＨＨドメインを含む第１の結合ドメインを含む多重特異性抗体であって、ＶＨＨドメインが、ＶＨＨ６のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列を含む、多重特異性抗体が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、配列番号１７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号１８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び配列番号１９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、配列番号２０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号２１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び配列番号２２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、配列番号２３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号２４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び配列番号２５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、配列番号２６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号２７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び配列番号２８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、配列番号２９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号３０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び配列番号３１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、配列番号２３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号１９２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び配列番号１９３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、配列番号３２のアミノ酸配列を含む。
一態様では、ｐＩｇＲのドメイン１に結合するＶＨＨを含む第１の結合ドメインを含む多重特異性抗体であって、ＶＨＨドメインが、ＶＨＨ２のＣＤＲ１、ＣＤＲ２又はＣＤＲ３配列を含む、多重特異性抗体が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、又は配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、又は配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号８のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、又は配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、配列番号１０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号１１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、又は配列番号１２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、配列番号１３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号１４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、又は配列番号１５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号８のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、又は配列番号１９１のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、配列番号１６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
一態様では、ｐＩｇＲのドメイン２に結合するＶＨＨドメインを含む第１の結合ドメインを含む多重特異性抗体であって、ＶＨＨドメインが、ＶＨＨ６のＣＤＲ１、ＣＤＲ２又はＣＤＲ３配列を含む、多重特異性抗体が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、配列番号１７のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号１８のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、又は配列番号１９のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、配列番号２０のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号２１のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、又は配列番号２２のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、配列番号２３のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号２４のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、又は配列番号２５のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、配列番号２６のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号２７のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、又は配列番号２８のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、配列番号２９のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号３０のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、又は配列番号３１のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、配列番号２３のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号１９２のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、又は配列番号１９３のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、配列番号３２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
一態様では、ｐＩｇＲのドメイン１に結合するＶＨＨを含む第１の結合ドメインを含む多重特異性抗体であって、ＶＨＨドメインが、ＶＨＨ２のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列を含む、多重特異性抗体が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有する相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、配列番号４のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び配列番号６のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号８のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、配列番号１０のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号１１のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び配列番号１２のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、配列番号１３のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号１４のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号８のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び配列番号１９１のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、配列番号１６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
一態様では、ｐＩｇＲのドメイン２に結合するＶＨＨドメインを含む第１の結合ドメインを含む多重特異性抗体であって、ＶＨＨドメインが、ＶＨＨ６のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列を含む、多重特異性抗体が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、配列番号１７のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号１８のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び配列番号１９のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、配列番号２０のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号２１のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び配列番号２２のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、配列番号２３のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号２４のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び配列番号２５のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、配列番号２６のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号２７のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び配列番号２８のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、配列番号２９のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号３０のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び配列番号３１のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、配列番号２３のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号１９２のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び配列番号１９３のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、配列番号３２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３配列は、Ｋａｂａｔ付番システムに従う。いくつかの実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３配列は、Ｃｈｏｔｈｉａ付番システムに従う。いくつかの実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３配列は、例示的な付番システムに従う。いくつかの実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３配列は、Ｃｏｎｔａｃｔ付番システムに従う。いくつかの実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３配列は、ＩＭＧＴ付番システムに従う。いくつかの実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３配列は、ＡｂＭ付番システムに従う。特定の抗体実施形態の６つのＣＤＲ（ＶＨ ＣＤＲ１～３及びＶＬ ＣＤＲ１～３）の例示的なセットが本明細書に提供される。他のＣＤＲセットも企図され、本明細書に提供される抗体実施形態の範囲内である。
いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、細胞外ｐＩｇＲエピトープを特異的に結合するＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＶＨＨドメインのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３は、ｐＩｇＲの抗原に対する結合部位を形成する。いくつかの実施形態では、ＶＨＨドメインのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３は、ｐＩｇＲのエピトープに対する結合部位を形成する。
いくつかの実施形態では、本発明の多重特異性分子のＶＨＨドメインは、粘膜内皮上に存在するｐＩｇＲに結合する。更なる実施形態では、本発明の多重特異性分子のＶＨＨドメインは、呼吸組織上に存在するｐＩｇＲに結合する。更なる実施形態では、本発明の多重特異性分子のＶＨＨドメインは、肺内皮上に存在するｐＩｇＲに結合する。
一態様では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２は、多重特異性分子がｐＩｇＲに、及びＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に特異的に結合すると、中和される。いくつかの実施形態では、多重特異性分子は、約４ｎＭ未満のＥＣ５０でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を中和する。いくつかの実施形態では、多重特異性分子は、約３ｎＭ未満のＥＣ５０でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を中和する。いくつかの実施形態では、多重特異性分子は、約１ｎＭ未満のＥＣ５０でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を中和する。いくつかの実施形態では、多重特異性分子は、約５００ｐＭ未満のＥＣ５０でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を中和する。いくつかの実施形態では、多重特異性分子は、約１００ｐＭ未満のＥＣ５０でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を中和する。
特定の実施形態では、ＥＣ５０は、約１ｎＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．９ｎＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．８ｎＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．７ｎＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．６ｎＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．５ｎＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．４ｎＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．３００ｎＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．２ｎＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．１９ｎＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．１８ｎＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．１７ｎＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．１６ｎＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．１５ｎＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．１４ｎＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．１３ｎＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．１２ｎＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．１１ｎＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．１ｎＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．０９ｎＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．０８ｎＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．０７ｎＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．０６ｎＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．０５ｎＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．０４ｎＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．０３ｎＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．０２ｎＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．０１ｎＭ未満である。
特定の実施形態では、ＥＣ５０は、約１ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．９ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．８ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．７ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．６ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．５ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．４ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．３００ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．２ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．１９ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．１８ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．１７ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．１６ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．１５ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．１４ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．１３ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．１２ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．１１ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．１ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．０９ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．０８ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．０７ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．０６ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．０５ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．０４ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．０３ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．０２ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．０１ｐＭ未満である。特定の実施形態では、ＥＣ５０は、約１０００ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約９００ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約８００ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約７００ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約６００ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約５００ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約４００ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約３００ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約２００ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約１９０ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約１８０ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約１７０ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約１６０ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約１５０ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約１４０ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約１３０ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約１２０ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約１１０ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約１００ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約９０ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約８０ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約７０ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約６０ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約５０ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約４０ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約３０ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約２０ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約１０ｐＭ未満である。
また、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の宿主細胞侵入又は増殖を阻害する方法であって、当該方法が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を本明細書に記載の多重特異性分子と接触させることを含み、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を多重特異性分子と接触させることにより、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の宿主細胞侵入又は増殖が阻害される、方法も提供される。一実施形態では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の宿主細胞侵入を阻害する方法であって、当該方法が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を本明細書に記載の多重特異性分子と接触させることを含み、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を多重特異性分子と接触させることにより、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の宿主細胞侵入が阻害される、方法が提供される。一実施形態では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の増殖を阻害する方法であって、当該方法が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を本明細書に記載の多重特異性分子と接触させることを含み、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を多重特異性分子と接触させることにより、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の増殖が阻害される、方法が提供される。
また、対象においてＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を排除するための方法であって、有効量の本明細書に記載の多重特異性分子を対象に投与することを含む、方法も提供される。いくつかの実施形態では、対象は、ＣＯＶＩＤ－１９を有する。
また、対象においてＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２によって全て又は一部が引き起こされる疾患を治療する方法であって、有効量の本明細書に記載の多重特異性分子を対象に投与することを含む、方法も提供される。いくつかの実施形態では、疾患は、ＣＯＶＩＤ－１９である。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の多重特異性分子は、その治療を必要としている対象に投与される。いくつかの実施形態では、対象は、ヒトである。更に他の実施形態では、多重特異性分子は、経口送達、口腔送達、経鼻送達、又は吸入送達を介して対象に投与される。一実施形態では、多重特異性分子は、経口送達を介して対象に投与される。一実施形態では、多重特異性分子は、口腔送達を介して対象に投与される。一実施形態では、多重特異性分子は、経鼻送達を介して対象に投与される。一実施形態では、多重特異性分子は、吸入送達を介して対象に投与される。
更に他の実施形態では、対象における疾患又は障害を治療するための、本明細書で提供される多重特異性分子の使用であって、任意選択で、治療用分子が、経口送達、口腔送達、経鼻送達、又は吸入送達を介して対象に投与される、使用が本明細書で提供される。一実施形態では、多重特異性分子は、経口送達を介して対象に投与される。一実施形態では、多重特異性分子は、口腔送達を介して対象に投与される。一実施形態では、多重特異性分子は、経鼻送達を介して対象に投与される。一実施形態では、多重特異性分子は、吸入送達を介して対象に投与される。
また、高分子免疫グロブリン受容体（ｐＩｇＲ）に特異的に結合する第１の結合ドメイン及びＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の表面に特異的に結合する第２の結合ドメインを提供するための手段を含む、システムも提供される。いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の表面上の構造タンパク質、例えば、スパイクタンパク質Ｓ、小エンベロープタンパク質Ｅ、マトリックスタンパク質Ｍ又は露出していないヌクレオカプシドタンパク質Ｎに特異的に結合する。一実施形態では、第２の結合ドメインは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイクタンパク質Ｓに特異的に結合する。一実施形態では、第２の結合ドメインは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の小エンベロープタンパク質Ｅに特異的に結合する。一実施形態では、第２の結合ドメインは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のマトリックスタンパク質Ｍに特異的に結合する。一実施形態では、第２の結合ドメインは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の露出していないヌクレオカプシドタンパク質Ｎに特異的に結合する。更なる実施形態では、第２の結合ドメインは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の表面上のスパイク糖タンパク質に特異的に結合する。更なる実施形態では、第２の結合ドメインは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の表面上のスパイク糖タンパク質のＳ１サブユニットに特異的に結合する。
また、粘膜内皮上のｐＩｇＲを結合することができる第１の手段と、ｐＩｇＲではない第２の標的を結合することができる第２の手段と、を含む、多重特異性分子も提供される。
また、粘膜内皮上のｐＩｇＲを結合することができる第１の手段と、第２の細胞の表面上又はウイルス上の第２の標的を結合することができる第２の手段と、を含む、分子も提供される。一実施形態では、第２の標的は、第２の細胞の表面上にある。一実施形態では、第２の標的は、ウイルスの表面上にある。いくつかの実施形態では、ウイルスは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２である。
また、本明細書に記載される多重特異性結合分子をコードする、核酸分子も提供される。また、本明細書に記載される多重特異性結合分子をコードする、ベクター核酸分子も提供される。また、当該ベクターと、そのためのパッケージと、を含む、キットも提供される。また、本明細書に記載される多重特異性分子をコードする核酸分子を含有するベクターを含む、宿主細胞も提供される。
また、２つ以上の標的分子に特異的に結合する分子を作製するためのプロセスであって、当該プロセスが、粘膜内皮上のｐＩｇＲに結合することができる結合ドメインを得る機能を実行するためのステップと、第２の細胞上又はウイルス上の第２の標的に結合することができる結合ドメインを得る機能を実行するためのステップと、肺内皮上のｐＩｇＲ抗原及び第２の細胞又はウイルス上の第２の標的に結合することができる分子を提供する機能を実行するためのステップと、を含む、プロセスも提供される。いくつかの実施形態では、第２の標的に結合することができる結合ドメインを得る機能を実行するためのステップは、ｎ回繰り返され、粘膜内皮上のｐＩｇＲ及びｎ個の標的分子に結合することができる結合ドメインを提供する機能を実行するためのｎ個のステップを更に含み、ｎは、少なくとも２である。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される多重特異性分子は、目的のリガンドに特異的に結合するタンパク質又はその断片を含む結合ドメインを含み得る。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される多重特異性分子は、本発明に記載されるものなどの、制御されたＦａｂアーム交換を介して得られたダイアボディ、クロスボディ、又は二重特異性抗体を含む結合ドメインを含み得る。
いくつかの実施形態では、多重特異性分子は、ヘテロ二量体形成を促進する相補性ＣＨ３ドメインを有するＩｇＧ様分子；組換えＩｇＧ様二重標的化分子（この分子の２つの側面は各々、少なくとも２つの異なる抗体のＦａｂフラグメント又はＦａｂフラグメントの一部を含む）；ＩｇＧ融合分子（完全長ＩｇＧ抗体が、余分のＦａｂ断片又はＦａｂ断片の一部に融合されている）；Ｆｃ融合分子（一本鎖Ｆｖ分子又は安定化されたダイアボディが、重鎖定常ドメイン、Ｆｃ領域、又はその一部に融合されている）；Ｆａｂ融合分子（異なるＦａｂ断片が一緒に融合されている）；異なる一本鎖Ｆｖ分子又は異なるダイアボディ又は異なる重鎖抗体（例えば、ドメイン抗体、ナノボディ）が互いに、又は別のタンパク質若しくは担体分子に融合されている、ｓｃＦｖ及びダイアボディベースの並びに重鎖抗体（例えば、ドメイン抗体、ナノボディ）を含む。
いくつかの実施形態では、相補性ＣＨ３ドメイン分子を有するＩｇＧ様分子には、Ｔｒｉｏｍａｂ／Ｑｕａｄｒｏｍａ（Ｔｒｉｏｎ Ｐｈａｒｍａ／Ｆｒｅｓｅｎｉｕｓ Ｂｉｏｔｅｃｈ）、Ｋｎｏｂｓ－ｉｎｔｏ－Ｈｏｌｅｓ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ＣｒｏｓｓＭＡｂｓ（Ｒｏｃｈｅ）及び静電的に調整されたもの（Ａｍｇｅｎ）、ＬＵＺ－Ｙ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ストランドを交換し操作したドメインボディ（ＳＥＥＤｂｏｄｙ）（ＥＭＤ Ｓｅｒｏｎｏ）、Ｂｉｃｌｏｎｉｃ（Ｍｅｒｕｓ）、Ａｚｙｍｅｔｒｉｃ（商標）プラットフォーム（Ｚｙｍｅｗｏｒｋｓ）、並びにＤｕｏＢｏｄｙ（Ｇｅｎｍａｂ Ａ／Ｓ）が挙げられる。
いくつかの実施形態において、組換えＩｇＧ様二重標的化分子としては、Ｄｕａｌ Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ（ＤＴ）－Ｉｇ（ＧＳＫ／Ｄｏｍａｎｔｉｓ）、Ｔｗｏ－ｉｎ－ｏｎｅ Ａｎｔｉｂｏｄｙ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、Ｃｒｏｓｓ－ｌｉｎｋｅｄ Ｍａｂｓ（Ｋａｒｍａｎｏｓ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｎｔｅｒ）、ｍＡｂ２（Ｆ－Ｓｔａｒ）、及びＣｏｖＸ－ｂｏｄｙ（ＣｏｖＸ／Ｐｆｉｚｅｒ）が挙げられる。
いくつかの実施形態において、ＩｇＧ融合分子としては、Ｄｕａｌ Ｖａｒｉａｂｌｅ Ｄｏｍａｉｎ（ＤＶＤ）－Ｉｇ（Ａｂｂｏｔｔ）、ＩｇＧ－ｌｉｋｅ Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ（ＩｎｎＣｌｏｎｅ／Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ）、Ｔｓ２Ａｂ（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ／ＡＺ）、及びＢｓＡｂ（Ｚｙｍｏｇｅｎｅｔｉｃｓ）、ＨＥＲＣＵＬＥＳ（Ｂｉｏｇｅｎ Ｉｄｅｃ）、並びにＴｖＡｂ（Ｒｏｃｈｅ）が挙げられる。
いくつかの実施形態では、Ｆｃ融合分子には、ＳｃＦｖ／Ｆｃ融合体（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎ）、ＳＣＯＲＰＩＯＮ（Ｅｍｅｒｇｅｎｔ ＢｉｏＳｏｌｕｔｉｏｎｓ／Ｔｒｕｂｉｏｎ，Ｚｙｍｏｇｅｎｅｔｉｃｓ／ＢＭＳ）、二重親和性リターゲティング技術（Ｆｃ－ＤＡＲＴ）（ＭａｃｒｏＧｅｎｉｃｓ）、及び二重（ＳｃＦｖ）２－Ｆａｂ（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ－－Ｃｈｉｎａ）が含まれ得る。
いくつかの実施形態では、Ｆａｂ融合二重特異性抗体としては、Ｆ（ａｂ）２（Ｍｅｄａｒｅｘ／ＡＭＧＥＮ）、Ｄｕａｌ－Ａｃｔｉｏｎ又はＢｉｓ－Ｆａｂ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、Ｄｏｃｋ－ａｎｄ－Ｌｏｃｋ（ＤＮＬ）（ＩｍｍｕｎｏＭｅｄｉｃｓ）、Ｂｉｖａｌｅｎｔ Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ（Ｂｉｏｔｅｃｎｏｌ）、及びＦａｂ－Ｆｖ（ＵＣＢ－Ｃｅｌｌｔｅｃｈ）が挙げられる。ＳｃＦｖ抗体、ダイアボディに基づく抗体、及びドメイン抗体には、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャ（Bispecific T Cell Engager、ＢｉＴＥ）（Ｍｉｃｒｏｍｅｔ）、タンデムダイアボディ（Tandem Diabody、Ｔａｎｄａｂ）（Ａｆｆｉｍｅｄ）、二重親和性再標的技術（Dual Affinity Retargeting Technology、ＤＡＲＴ）（ＭａｃｒｏＧｅｎｉｃｓ）、一本鎖ダイアボディ（Ａｃａｄｅｍｉｃ）、ＴＣＲ様抗体（ＡＩＴ、ＲｅｃｅｐｔｏｒＬｏｇｉｃｓ）、ヒト血清アルブミンＳｃＦｖ融合体（Ｍｅｒｒｉｍａｃｋ）、及びＣＯＭＢＯＤＹ（Ｅｐｉｇｅｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ）、二重標的ナノボディ（Ａｂｌｙｎｘ）、二重標的重鎖のみドメイン抗体が含まれるが、これらに限定されない。
本明細書に提供される完全長二重特異性抗体は、無細胞環境でインビトロにおいて又は共発現を使用して異なる特異性を有する２つの抗体半分子のヘテロ二量体を形成するのに好都合になるように、各半分子において重鎖ＣＨ３界面に置換を導入することによって、例えば、２つの単一特異性二価抗体間でのＦａｂアーム交換（又は半分子交換）を用いて生成することができる。Ｆａｂアーム交換反応は、ジスルフィド結合異性化反応及びＣＨ３ドメインの解離－会合の結果である。単一特異性親抗体のヒンジ領域における重鎖ジスルフィド結合は、低減される。単一特異性親抗体のうち１つについて生じる遊離システインは、第２の単一特異性親抗体分子のシステイン残基と重鎖内ジスルフィド結合を形成し、同時に、親抗体のＣＨ３ドメインは、解離－会合により開放及び再形成する。ＦａｂアームのＣＨ３ドメインは、ホモ二量体形成よりもヘテロ二量体形成に有利に働くように操作することができ、その結果、各々が別個のエピトープを結合する２つのＦａｂアーム又は半分子を有する二重特異性抗体が得られる。
本明細書で使用するとき、「ホモ二量体形成」は、同一のＣＨ３アミノ酸配列を有する２本の重鎖の相互作用を意味する。本明細書で使用するとき、「ホモ二量体」は、同一のＣＨ３アミノ酸配列を有する２本の重鎖を有する抗体を意味する。
本明細書で使用するとき、「ヘテロ二量体形成」は、同一でないＣＨ３アミノ酸配列を有する２本の重鎖の相互作用を意味する。本明細書で使用するとき、「ヘテロ二量体」は、同一でないＣＨ３アミノ酸配列を有する２本の重鎖を有する抗体を意味する。
「ノブインホール」ストラテジ（例えば、国際公開第２００６／０２８９３６号を参照されたい）を使用して、完全長二重特異性抗体を生成することができる。簡潔に述べると、ヒトＩｇＧにおけるＣＨ３ドメインの界面を形成する選択されたアミノ酸は、ヘテロ二量体形成を促進するように、ＣＨ３ドメイン相互作用に影響を及ぼす位置において変異され得る。小さな側鎖を有するアミノ酸（ホール）が、第１の抗原に特異的に結合する抗体の重鎖内に導入され、大きな側鎖を有するアミノ酸（ノブ）が、第２の抗原に特異的に結合する抗体の重鎖内に導入される。２つの抗体の共発現後に、ヘテロ二量体が、「ホール」を有する重鎖と「ノブ」を有する重鎖との優先的な相互作用の結果として形成される。ノブ及びホールを形成する例示的なＣＨ３置換の対は、Ｔ３６６Ｙ／Ｆ４０５Ａ、Ｔ３６６Ｗ／Ｆ４０５Ｗ、Ｆ４０５Ｗ／Ｙ４０７Ａ、Ｔ３９４Ｗ／Ｙ４０７Ｔ、Ｔ３９４Ｓ／Ｙ４０７Ａ、Ｔ３６６Ｗ／Ｔ３９４Ｓ、Ｆ４０５Ｗ／Ｔ３９４Ｓ、及びＴ３６６Ｗ／Ｔ３６６Ｓ＿Ｌ３６８Ａ＿Ｙ４０７Ｖである（第１の重鎖の第１のＣＨ３ドメインにおける改変位置／第２の重鎖の第２のＣＨ３ドメインにおける改変位置として表現）。
他の戦略、例えば、１つのＣＨ３表面における正に荷電した残基及び第２のＣＨ３表面における負に荷電した残基を置換することによる静電的相互作用を使用する重鎖ヘテロ二量体形成の促進が、米国特許出願公開第２０１０／００１５１３３号、米国特許出願公開第２００９／０１８２１２７号、米国特許出願公開第２０１０／０２８６３７号、又は米国特許出願公開第２０１１／０１２３５３２号に記載されるように使用され得る。他の戦略では、ヘテロ二量体形成は、米国特許出願公開第２０１２／０１４９８７６号又は米国特許出願公開第２０１３／０１９５８４９号に記載されるように、下記置換：Ｌ３５１Ｙ＿Ｆ４０５ＡＹ４０７Ｖ／Ｔ３９４Ｗ、Ｔ３６６Ｉ＿Ｋ３９２Ｍ＿Ｔ３９４Ｗ／Ｆ４０５Ａ＿Ｙ４０７Ｖ、Ｔ３６６Ｌ＿Ｋ３９２Ｍ＿Ｔ３９４Ｗ／Ｆ４０５Ａ＿Ｙ４０７Ｖ、Ｌ３５１Ｙ＿Ｙ４０７Ａ／Ｔ３６６Ａ＿Ｋ４０９Ｆ、Ｌ３５１Ｙ＿Ｙ４０７Ａ／Ｔ３６６Ｖ Ｋ４０９Ｆ Ｙ４０７Ａ／Ｔ３６６Ａ＿Ｋ４０９Ｆ、又はＴ３５０Ｖ＿Ｌ３５１Ｙ＿Ｆ４０５Ａ Ｙ４０７Ｖ／Ｔ３５０Ｖ＿Ｔ３６６Ｌ＿Ｋ３９２Ｌ＿Ｔ３９４Ｗ（第１の重鎖の第１のＣＨ３ドメインにおける改変位置／第２の重鎖の第２のＣＨ３ドメインにおける改変位置として表現）により促進され得る。
上記の方法に加えて、本明細書に提供される二重特異性抗体は、国際公開第２０１１／１３１７４６号に記載の方法に従って、２つの単一特異性ホモ二量体抗体のＣＨ３領域に非対称な変異を導入し、ジスルフィド結合を異性化させるための還元条件下において２つの親単一特異性ホモ二量体抗体から二重特異性ヘテロ二量体抗体を形成することによって、無細胞環境でインビトロにおいて生成することができる。この方法において、第１の単一特異性二価抗体及び第２の単一特異性二価抗体は、ヘテロ二量体の安定性を促進するＣＨ３ドメインにおいてある特定の置換を有するように操作されるが、これらの抗体は、ヒンジ領域におけるシステインがジスルフィド結合を異性化させるために十分な還元条件下においてともにインキュベーションされ、それにより、Ｆａｂアーム交換により二重特異性抗体が生成される。インキュベート条件は、最適には、非還元条件に戻され得る。使用され得る例示的な還元剤は、２－メルカプトエチルアミン（２－ＭＥＡ）、ジチオスレイトール（ＤＴＴ）、ジチオエリスリトール（ＤＴＥ）、グルタチオン、トリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）、Ｌ－システイン、及びベータ－メルカプトエタノールであり、好ましくは、２－メルカプトエチルアミン、ジチオスレイトール、及びトリス（２－カルボキシエチル）ホスフィンからなる群から選択される還元剤である。例えば、少なくとも２０℃の温度で、少なくとも２５ｍＭの２－ＭＥＡの存在下又は少なくとも０．５ｍＭのジチオスレイトールの存在下で、ｐＨ５～８、例えばｐＨ７．０又はｐＨ７．４で、少なくとも９０分間のインキュベートが使用され得る。
特定の実施形態では、ＥＣ５０は、約１ｐＭ未満、約０．９ｐＭ未満、約０．８ｐＭ未満、約０．７ｐＭ未満、約０．６ｐＭ未満、約０．５ｐＭ未満、約０．４ｐＭ未満、約０．３００ｐＭ未満、約０．２ｐＭ未満、約０．１９ｐＭ未満、約０．１８ｐＭ未満、約０．１７ｐＭ未満、約０．１６ｐＭ未満、約０．１５ｐＭ未満、約０．１４ｐＭ未満、約０．１３ｐＭ未満、約０．１２ｐＭ未満、約０．１１ｐＭ未満、約０．１ｐＭ未満、約０．０９ｐＭ未満、約０．０８ｐＭ未満、約０．０７ｐＭ未満、約０．０６ｐＭ未満、約０．０５ｐＭ未満、約０．０４ｐＭ未満、約０．０３ｐＭ未満、約０．０２ｐＭ未満、又は約０．０１ｐＭ未満である。特定の実施形態では、ＥＣ５０は、約１０００ｐＭ未満、約９００ｐＭ未満、約８００ｐＭ未満、約７００ｐＭ未満、約６００ｐＭ未満、約５００ｐＭ未満、約４００ｐＭ未満、約３００ｐＭ未満、約２００ｐＭ未満、約１９０ｐＭ未満、約１８０ｐＭ未満、約１７０ｐＭ未満、約１６０ｐＭ未満、約１５０ｐＭ未満、約１４０ｐＭ未満、約１３０ｐＭ未満、約１２０ｐＭ未満、約１１０ｐＭ未満、約１００ｐＭ未満、約９０ｐＭ未満、約８０ｐＭ未満、約７０ｐＭ未満、約６０ｐＭ未満、約５０ｐＭ未満、約４０ｐＭ未満、約３０ｐＭ未満、約２０ｐＭ未満、又は約１０ｐＭ未満である。
特定の実施形態では、二重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントの濃度は、約０．０００００５ｎｇ／ｍＬ、約０．００００５ｎｇ／ｍＬ、約０．０００５、約０．００５ｎｇ／ｍＬ、約０．０１ｎｇ／ｍＬ、約０．０２ｎｇ／ｍＬ、約０．０３ｎｇ／ｍＬ、約０．０４ｎｇ／ｍＬ、約０．０５ｎｇ／ｍＬ、約０．０６ｎｇ／ｍＬ、約０．０７ｎｇ／ｍＬ、約０．０８ｎｇ／ｍＬ、約０．０９ｎｇ／ｍＬ、約０．１ｎｇ／ｍＬ、約０．５ｎｇ／ｍＬ、約１．０ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ、約２０ｎｇ／ｍＬ、約約３０ｎｇ／ｍＬ、約４０ｎｇ／ｍＬ、約５０ｎｇ／ｍＬ、約６０ｎｇ／ｍＬ、約７０ｎｇ／ｍＬ、約８０ｎｇ／ｍＬ、約９０ｎｇ／ｍＬ、約１００ｎｇ／ｍＬ、又は約１０００ｎｇ／ｍＬである。
いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、ヒトである。いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、ヒトである。他の実施形態では、第１の結合ドメイン及び第２の結合ドメインの両方が、ヒトである。いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、ヒト化されている。いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、ヒト化されている。他の実施形態では、第１の結合ドメイン及び第２の結合ドメインの両方が、ヒト化されている。他の実施形態では、第１の結合ドメインがヒトであり、かつ第２の結合ドメインがヒト化されている。他の実施形態では、第１の結合ドメインがヒト化されており、かつ第２の結合ドメインがヒトである。
いくつかの実施形態では、二重特異性分子は、ＩｇＧ抗体である。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ抗体は、ＩｇＧ１抗体である。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ抗体は、ＩｇＧ２抗体である。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ抗体は、ＩｇＧ３抗体である。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ抗体は、ＩｇＧ４抗体である。
いくつかの実施形態では、二重特異性分子は、多価である。いくつかの実施形態では、二重特異性抗体は、少なくとも３つの抗原に結合することができる。いくつかの実施形態では、二重特異性抗体は、少なくとも５つの抗原に結合することができる。
別の一般的な態様では、本明細書で開示される多重特異性分子又はその断片をコードする単離核酸を含む、ベクターが本明細書で提供される。別の一般的な態様では、本明細書で開示される二重特異性分子又はその断片をコードする単離核酸を含む、ベクターが提供される。
タンパク質のアミノ酸配列を変えることなく、タンパク質のコード配列を変更する（例えば、置換する、欠失させる、挿入するなど）ことができることが、当業者には理解されるであろう。したがって、タンパク質のアミノ酸配列を変化させることなく、本明細書で提供される抗体をコードする核酸配列を変化させることができることが、当業者には理解されるであろう。
本開示を考慮して、当業者に既知である任意のベクター、例えばプラスミド、コスミド、ファージベクター、又はウイルスベクターなどを使用することができる。いくつかの実施形態では、ベクターは、例えばプラスミドなどの組換え発現ベクターである。ベクターは、例えば、プロモータ、リボソーム結合エレメント、ターミネータ、エンハンサ、選択マーカー、及び複製起点という、発現ベクターの従来の機能を確立するための任意のエレメントを含むことができる。プロモータは、常時発現型、誘導型、又は再形成可能なプロモータであり得る。細胞に核酸を送達することができる多数の発現ベクターが当該技術分野において既知であり、細胞内で抗体又はその抗原結合断片を生成するために、本明細書で使用することができる。従来のクローニング技術又は人工遺伝子合成を使用して、本明細書に提供される実施形態による組換え発現ベクターを生成することができる。このような技術は、本開示の観点から、当業者に周知である。
別の一般的な態様では、本明細書で提供されるモノクローナル抗体及び／若しくは二重特異性抗体又はその抗原結合断片をコードする単離核酸を含む、宿主細胞が、提供される。本開示の観点から、当業者に既知である任意の宿主細胞を、本明細書に提供される抗体又はその抗原結合フラグメントの組換え発現に使用することができる。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、大腸菌ＴＧ１若しくはＢＬ２１細胞（例えば、ｓｃＦｖ又はＦａｂ抗体の発現の場合）、ＣＨＯ－ＤＧ４４若しくはＣＨＯ－Ｋ１細胞、又はＨＥＫ２９３細胞（例えば、完全長ＩｇＧ抗体の発現の場合）である。特定の実施形態によれば、組換え発現ベクターは、組換え核酸が効果的に発現するように宿主細胞ゲノムに安定的に組み込まれる、化学的トランスフェクション、熱ショック、又はエレクトロポレーションなどの従来の方法によって宿主細胞に形質転換される。
別の一般的な態様では、本明細書に開示される多重特異性分子又はその断片を産生する方法が、提供される。当該方法は、多重特異性分子又はその断片をコードする核酸を含む細胞を、本明細書に開示される多重特異性分子又はその断片を産生する条件下で培養することと、細胞又は細胞培養物から（例えば、上清から）多重特異性分子又はその断片を回収することと、を含む。発現した多重特異性分子又はその断片を細胞から収集し、当該技術分野において既知である従来の技術に従って、そして、本明細書に記載されるように精製することができる。
別の一般的な態様では、本明細書に開示される二重特異性分子又はその断片を産生する方法が、提供される。当該方法は、二重特異性分子又はその断片をコードする核酸を含む細胞を、本明細書に開示される二重特異性分子又はその断片を産生する条件下で培養することと、細胞又は細胞培養物から（例えば、上清から）二重特異性分子又はその断片を回収することと、を含む。発現した二重特異性分子又はその断片を細胞から収集し、当該技術分野において既知である従来の技術に従って、そして、本明細書に記載されるように精製することができる。
医薬組成物
別の態様では、また、本明細書に記載の多重特異性分子と、医薬的に許容される担体と、を含む、医薬組成物も提供される。
別の態様では、また、本明細書に記載の多重特異性分子を送達するための手段と、医薬的に許容される担体と、を含む、医薬組成物も提供される。
また、医薬組成物を製造する方法であって、本明細書に記載の多重特異性分子を医薬的に許容される担体と組み合わせて、医薬組成物を得ることを含む、方法が提供される。本明細書で使用するとき、用語「医薬組成物」は、医薬的に許容される担体と一緒に本明細書で提供される多重特異性分子を含む製造物を意味する。したがって、医薬組成物は、（ａ）高分子免疫グロブリン受容体（ｐＩｇＲ）に特異的に結合する第１の結合ドメインと、（ｂ）ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に特異的に結合する第２の結合ドメインと、を含む、多重特異性分子を含み得る。別の態様では、医薬組成物は、（ａ）高分子免疫グロブリン受容体（ｐＩｇＲ）に特異的に結合する第１の結合ドメインと、（ｂ）ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に特異的に結合する第２の結合ドメインと、を含む、多重特異性分子を含み得る。本明細書で提供される多重特異性分子及びそれを含む組成物は、本明細書で言及される治療用途のための医薬の製造においても有用である。
本明細書で使用するとき、用語「担体」は、任意の賦形剤、希釈剤、充填剤、塩、緩衝液、安定剤、可溶化剤、油、脂質、脂質含有小胞、ミクロスフェア、リポソーム封入体、又は医薬製剤で使用するための当該技術分野において周知である他の材料を指す。担体、賦形剤又は希釈剤の特性は、特定の用途の投与経路によって決まる点は理解されよう。本明細書で使用するとき、用語「医薬的に許容される担体」は、本発明による組成物の効果にも本明細書で提供される組成物の生物活性にも干渉しない無毒性材料を指す。特定の実施形態によれば、本開示を考慮して、抗体の医薬組成物での使用に好適ないずれの医薬的に許容される担体も、本明細書で使用され得る。
薬学的に許容される担体を有する医薬的活性成分の製剤は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ（例えば２１ｓｔ ｅｄｉｔｉｏｎ（２００５）及びそれ以降の任意の改訂版）にあるように、当該技術分野において既知である。追加成分の非限定的な例としては、緩衝剤、希釈剤、溶媒、張度調節剤、防腐剤、安定剤、及びキレート剤が挙げられる。１つ又は２つ以上の医薬的に許容される担体が、本明細書に提供される医薬組成物の製剤化において使用され得る。
本発明の一実施形態では、医薬組成物は液体製剤である。液体製剤の好ましい例は、水性製剤、すなわち、水を含む製剤である。液体製剤は、溶液、懸濁液、エマルジョン、マイクロエマルジョン、ゲルなどを含んでいてよい。水性製剤は、典型的には、少なくとも５０重量％の水、又は少なくとも６０重量％、７０重量％、７５重量％、８０重量％、８５重量％、９０重量％、又は少なくとも９５重量％の水を含む。
一実施形態では、医薬組成物は、例えば、注射デバイス（例えば、シリンジ又は注入ポンプ）を介して注射することができる注射液として製剤化され得る。注射は、例えば、皮下に、筋肉内に、腹腔内に、硝子体内に、又は静脈内に送達され得る。
別の実施形態では、医薬組成物は、そのまま使用することができるか、又は医師若しくは患者が使用前に溶媒及び／若しくは希釈剤を加える固体製剤、例えば、凍結乾燥又は噴霧乾燥組成物である。固体剤形としては、圧縮錠剤及び／又はコーティング錠剤などの錠剤、並びにカプセル剤（例えば、硬又は軟ゼラチンカプセル）を挙げることができる。医薬組成物はまた、例えば、サッシェ、糖衣錠、粉末、顆粒、トローチ、又は再構成用の粉末の形態であってもよい。
剤形は即時放出であってもよく、その場合、水溶性若しくは水分散性担体を含んでいてよく、又は剤形は遅延放出、持続放出、若しくは調節放出であってもよく、その場合、胃腸管若しくは皮下における剤形の溶解速度を制御する非水溶性ポリマーを含んでいてよい。
他の実施形態では、医薬組成物は、鼻腔内に、口内に、又は舌下に送達され得る。
水性製剤のｐＨは、ｐＨ３～ｐＨ１０であり得る。本明細書で提供される一実施形態では、製剤のｐＨは、約７．０～約９．５である。本明細書で提供される別の実施形態では、製剤のｐＨは、約３．０～約７．０である。
本明細書で提供される別の実施形態では、医薬組成物は、緩衝剤を含む。緩衝剤の非限定的な例としては、アルギニン、アスパラギン酸、ビシン、シトレート、リン酸一水素二ナトリウム、フマル酸、グリシン、グリシルグリシン、ヒスチジン、リジン、マレイン酸、リンゴ酸、酢酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム、リン酸ナトリウム、コハク酸塩、酒石酸、トリシン、及びトリス（ヒドロキシメチル）－アミノメタン、及びこれらの混合物が挙げられる。緩衝剤は、個々に又は全体に、約０．０１ｍｇ／ｍＬ～約５０ｍｇ／ｍＬ、例えば、約０．１ｍｇ／ｍＬ～約２０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在し得る。これら特定の緩衝剤の各１つを含む医薬組成物は、本明細書で提供される代替実施形態を構成する。
本明細書で提供される別の実施形態では、医薬組成物は、防腐剤を含む。防腐剤の非限定的な例としては、塩化ベンゼトニウム、安息香酸、ベンジルアルコール、ブロノポール、ブチル４－ヒドロキシベンゾエート、クロロブタノール、クロロクレゾール、クロロヘキシジン、クロルフェネシン、ｏ－クレゾール、ｍ－クレゾール、ｐ－クレゾール、エチル４－ヒドロキシベンゾエート、イミド尿素、メチル４－ヒドロキシベンゾエート、フェノール、２－フェノキシエタノール、２－フェニルエタノール、プロピル４－ヒドロキシベンゾエート、デヒドロ酢酸ナトリウム、チオメロサール、及びこれらの混合物が挙げられる。防腐剤は、個々に又は全体に、約０．０１ｍｇ／ｍＬ～約５０ｍｇ／ｍＬ、例えば約０．１ｍｇ／ｍＬ～約２０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在し得る。これら特定の防腐剤の各１つを含む医薬組成物は、本明細書で提供される代替実施形態を構成する。
本明細書で提供される別の実施形態では、医薬組成物は、等張剤を含む。等張剤の非限定的な例としては、塩（塩化ナトリウムなど）、アミノ酸（グリシン、ヒスチジン、アルギニン、リジン、イソロイシン、アスパラギン酸、トリプトファン、及びスレオニンなど）、アルジトール（グリセロール、１，２－プロパンジオールプロピレングリコールなど）、１，３－プロパンジオール、及び１，３－ブタンジオール）、ポリエチレングリコール（例えば、ＰＥＧ４００）、並びにこれらの混合物が挙げられる。等張剤の別の例としては、糖が挙げられる。糖の非限定的な例は、例えば、フルクトース、グルコース、マンノース、ソルボース、キシロース、マルトース、ラクトース、スクロース、トレハロース、デキストラン、プルラン、デキストリン、シクロデキストリン、アルファ及びベータ－ＨＰＣＤ、可溶性デンプン、ヒドロキシエチルデンプン、並びにカルボキシメチルセルロースナトリウムを含む、単糖類、二糖類、若しくは多糖類、又は水溶性グルカンを含み得る。等張剤の別の例は、糖アルコールであり、用語「糖アルコール」は、少なくとも１つの－ＯＨ基を有するＣ（４～８）炭化水素として定義される。糖アルコールの非限定的な例としては、マンニトール、ソルビトール、イノシトール、ガラクチトール、ズルシトール、キシリトール、及びアラビトールが挙げられる。等張剤は、個々に又は全体に、約０．０１ｍｇ／ｍＬ～約５０ｍｇ／ｍＬ、例えば約０．１ｍｇ／ｍＬ～約２０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在し得る。これら特定の等張剤の各１つを含む医薬組成物は、本明細書で提供される代替を構成する。
本明細書で提供される別の実施形態では、医薬組成物は、キレート剤を含む。キレート剤の非限定的な例としては、クエン酸、アスパラギン酸、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）の塩、及びこれらの混合物が挙げられる。キレート剤は、個々に又は全体に、約０．０１ｍｇ／ｍＬ～約５０ｍｇ／ｍＬ、例えば約０．１ｍｇ／ｍＬ～約２０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在し得る。これらの具体的なキレート剤の各１つを含む医薬組成物は、本発明の代替実施形態を構成する。
本明細書で提供される別の実施形態では、医薬組成物は、安定剤を含む。安定剤の非限定的な例としては、１つ若しくは２つ以上の凝集阻害剤、１つ若しくは２つ以上の酸化阻害剤、１つ若しくは２つ以上の界面活性剤、及び／又は、１つ若しくは２つ以上のプロテアーゼ阻害剤が挙げられる。
本明細書で提供される別の実施形態では、医薬組成物は、安定剤を含み、当該安定剤は、カルボキシ／ヒドロキシセルロース及びその誘導体（ＨＰＣ、ＨＰＣ－ＳＬ、ＨＰＣ－Ｌ、及びＨＰＭＣなど）、シクロデキストリン、２－メチルチオエタノール、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ３３５０など）、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリビニルピロリドン、塩（塩化ナトリウムなど）、硫黄含有物質（例えばモノチオグリセロール）、又はチオグリコール酸である。安定剤は、個々に又は全体に、約０．０１ｍｇ／ｍＬ～約５０ｍｇ／ｍＬ、例えば約０．１ｍｇ／ｍＬ～約２０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在し得る。これら特定の安定剤の各１つを含む医薬組成物は、本明細書で提供される代替実施形態を構成する。
本明細書で提供される更なる実施形態では、医薬組成物は、１つ若しくは２つ以上の界面活性剤、好ましくは１つの界面活性剤、少なくとも１つの界面活性剤、又は２つの異なる界面活性剤を含む。用語「界面活性剤」は、水溶性（親水性）部分及び脂溶性（親油性）部分から構成される任意の分子又はイオンを指す。界面活性剤は、例えば、アニオン性界面活性剤、カチオン性界面活性剤、非イオン性界面活性剤、及び／又は双性界面活性剤からなる群から選択され得る。界面活性剤は、個々に又は全体に、約０．１ｍｇ／ｍＬ～約２０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在し得る。これら特定の界面活性剤の各１つを含む医薬組成物は、本明細書で提供される代替実施形態を構成する。
本明細書で提供される更なる実施形態では、医薬組成物は、１つ又は２つ以上のプロテアーゼ阻害剤、例えば、ＥＤＴＡ、及び／又はベンズアミジン塩酸（ＨＣｌ）などを含む。プロテアーゼ阻害剤は、個々に又は全体に、約０．１ｍｇ／ｍＬ～約２０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在し得る。これら特定のプロテアーゼ阻害剤の各１つを含む医薬組成物は、本明細書で提供される代替実施形態を構成する。
別の一般的な態様では、本明細書に開示される多重特異性分子、抗体又はその抗原結合断片を含む医薬組成物を製造する方法であって、多重特異性分子、抗体又はその抗原結合断片を医薬的に許容される担体と組み合わせて、医薬組成物を得ることを含む、方法が提供される。
使用方法
いくつかの実施形態によれば、記載される多重特異性分子は、保存又は使用のための緩衝組成物中に提供され得る。記載された多重特異性分子の保存に好適な緩衝剤は、保存中の劣化を最小限に抑えることによって、分子の凝集を促進しないことによって、又は保存容器への接着を最小限に抑えることによって、分子の安定性を維持するのに役立つ。
一態様では、対象においてＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を排除するための方法であって、有効量の本明細書で提供される多重特異性分子を対象に投与することを含む、方法が提供される。一態様では、対象においてＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２によって全て又は一部が引き起こされる疾患を治療する方法であって、有効量の本明細書で提供される多重特異性分子を対象に投与することを含む、方法が提供される。一実施形態では、疾患は、ＣＯＶＩＤ－１９である。
一態様では、対象においてＳＡＲＳ－ＣｏＶ－１を排除するための方法であって、有効量の本明細書で提供される多重特異性分子を対象に投与することを含む、方法が提供される。一態様では、対象においてＳＡＲＳ－ＣｏＶ－１によって全て又は一部が引き起こされる疾患を治療する方法であって、有効量の本明細書で提供される多重特異性分子を対象に投与することを含む、方法が提供される。一実施形態では、疾患は、ＳＡＲＳである。
一態様では、疾患を治療する方法であって、宿主細胞侵入がウイルス表面タンパク質のＡＣＥ２への結合によって促進され、当該方法が、有効量の本明細書で提供される多重特異性分子を対象に投与することを含む、方法が本明細書で提供される。別の態様では、疾患を治療する方法であって、宿主細胞侵入がＳＡＲＳ－ＣｏＶ－１表面タンパク質のＡＣＥ２への結合によって促進され、当該方法が、有効量の本明細書で提供される多重特異性分子を対象に投与することを含む、方法が本明細書で提供される。別の態様では、疾患を治療する方法であって、宿主細胞侵入がＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２表面タンパク質のＡＣＥ２への結合によって促進され、当該方法が、有効量の本明細書で提供される多重特異性分子を対象に投与することを含む、方法が本明細書で提供される。
別の態様では、対象において第２の標的を発現する標的細胞を排除するための方法であって、有効量の、本明細書で提供される多重特異性分子を対象に投与することを含む、方法が本明細書で提供される。一態様では、対象において第２の標的を発現する細胞によって全て又は一部が引き起こされる疾患を治療する方法であって、有効量の本明細書で提供される多重特異性分子を対象に投与することを含む、方法が本明細書で提供される。
いくつかの実施形態、疾患は、がん、炎症性疾患、炎症性腸疾患、肺炎、嚢胞性線維症、肺感染症、喘息、結核、慢性閉塞性肺疾患（chronic obstructive pulmonary disease、ＣＯＰＤ）、気管支炎及び肺気腫、クローン病、潰瘍性大腸炎、膀胱炎、過活動性膀胱疾患、副鼻腔感染症、胃腸潰瘍、腺筋症、子宮炎症、肝胆道疾患、又は肝炎である。一実施形態では、疾患は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２媒介疾患である。一態様では、疾患は、ＣＯＶＩＤ－１９である。
一態様では、対象は、その治療を必要としている対象である。別の態様では、対象は、ヒトである。
本明細書で使用するとき、用語「有効量」は、対象において所望の生物学的又は医薬的応答を惹起する活性成分又は構成成分の量を指す。
特定の実施形態によれば、有効量は、次の効果のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、又はそれ以上を達成するのに十分な治療の量を指す：（ｉ）治療される疾患、障害若しくは病態又はそれに関連する症状の重症度を軽減又は改善すること、（ｉｉ）治療される疾患、障害若しくは状態、又はそれに関連する症状の期間を短縮すること、（ｉｉｉ）治療される疾患、障害若しくは状態、又はそれに関連する症状の進行を予防すること、（ｉｖ）治療される疾患、障害若しくは状態、又はそれに関連する症状の退縮を生じさせること、（ｖ）治療される疾患、障害若しくは状態、又はそれに関連する症状の進行又は発症を予防すること、（ｖｉ）治療される疾患、障害若しくは状態、又はそれに関連する症状の再発を予防すること、（ｖｉｉ）治療される疾患、障害、若しくは状態、又はそれに関連する症状を有する対象の入院を減少させること、（ｖｉｉｉ）治療される疾患、障害若しくは状態、又はそれに関連する症状を有する対象の入院期間を短縮させること、（ｉｘ）治療される疾患、障害若しくは状態、又はそれに関連する症状を有する対象の生存率を高めること、（ｘｉ）治療される対象の疾患、障害若しくは状態、又はそれに関連する症状を阻害又は軽減すること、及び／あるいは（ｘｉｉ）別の治療の予防又は治療効果を強化又は改善すること。
有効量又は薬用量は、治療される疾患、障害、又は病態、投与手段、標的部位、対象の生理学的状態（例えば、年齢、体重、健康状態を含む）、対象がヒトであるか動物であるか、投与される他の医薬、及び処置が予防的なものであるか治療的なものであるか、などの様々な要因に従って異なり得る。治療用量は、安全性及び有効性を最適化するために最適に漸増される。
特定の実施形態によれば、本明細書に記載される組成物は、対象への想定される投与経路に好適であるように製剤化される。例えば、本明細書に記載される組成物は、静脈内投与、皮下投与、又は筋肉内投与に好適であるように製剤化することができる。
本明細書で使用するとき、用語「治療する（treat）」、「治療する（treating）」、及び「治療（treatment）」は全て、がんに関連する少なくとも１つの測定可能な身体的パラメータの改善又は回復を指し、これは対象において必ずしも認識されるとは限らないが、対象において認識可能な場合もある。用語「治療する」、「治療すること」、及び「治療」はまた、疾患、障害、又は病態を退縮させる、その進行を防止する、又は少なくともその進行を遅らせることを指す場合もある。特定の実施形態では、「治療する（treat）」、「治療する（treating）」、及び「治療（treatment）」は、腫瘍若しくはより好ましくはがんなどの疾患、障害、若しくは病態に関連する１つ又は２つ以上の症状の緩和、進行若しくは発症の予防、又はその期間の短縮を指す。特定の実施形態では、「治療する」、「治療すること」、及び「治療」は、疾患、障害、又は病態の再発の防止を指す。特定の実施形態では、「治療する」、「治療すること」、及び「治療」は、疾患、障害、又は病態を有する対象の生存率の向上を指す。特定の実施形態では、「治療する」、「治療すること」、及び「治療」は、対象における疾患、障害、又は病態の消失を指す。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される多重特異性分子は、補足療法と組み合わせて使用される。
本明細書で使用するとき、対象への２種類又は３種類以上の治療薬の投与の文脈における用語「併用」は、２種類以上の治療薬の使用を指す。用語「併用」の使用は、治療薬を対象に投与する順序について限定しない。例えば、第１の治療薬（例えば、本明細書に記載される組成物）は、対象に第２の治療薬を投与する前（例えば、５分、１５分、３０分、４５分、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、１６時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、８週間、又は１２週間前）に、同時に、又は後（例えば、５分、１５分、３０分、４５分、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、１６時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、８週間、又は１２週間後）に投与してよい。
実施形態
本発明は、以下の非限定的な実施形態を提供する。
１組の実施形態では、以下が提供される。
Ａ１．（ａ）高分子免疫グロブリン受容体（ｐＩｇＲ）に特異的に結合する第１の結合ドメインと、（ｂ）ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に特異的に結合する第２の結合ドメインと、を含む、多重特異性分子。
Ａ２．分子が、二重特異性分子である、実施形態Ａ１に記載の分子。
Ａ３．第２の結合ドメインが、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の表面に特異的に結合する、実施形態Ａ１又はＡ２に記載の分子。
Ａ４．第２の結合ドメインが、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の表面上のスパイク糖タンパク質に特異的に結合する、実施形態Ａ１～Ａ３のいずれか１つに記載の分子。
Ａ５．第２の結合ドメインが、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の表面上のスパイク糖タンパク質のＳ１サブユニットに特異的に結合する、実施形態Ａ１～Ａ４のいずれか１つに記載の分子。
Ａ６．第２の結合ドメインが、アンジオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ２）を含む、実施形態Ａ１～Ａ５のいずれか１つに記載の分子。
Ａ７．第２の結合ドメインが、ＡＣＥ２の細胞外ドメインを含む、実施形態Ａ１～Ａ５のいずれか１つに記載の分子。
Ａ８．第２の結合ドメインが、ＡＣＥ２の短縮型細胞外ドメインを含む、実施形態Ａ１～Ａ５のいずれか１つに記載の分子。
Ａ９．ＡＣＥ２が、配列番号１９４を含む、実施形態Ａ６に記載の分子。
Ａ１０．ＡＣＥ２の細胞外ドメインが、配列番号１３４を含む、実施形態Ａ７に記載の分子。
Ａ１１．ＡＣＥ２の短縮型細胞外ドメインが、配列番号１２０又は配列番号１２１を含む、実施形態Ａ８に記載の分子。
Ａ１２．第１の結合ドメインが、単一ドメイン分子（ＶＨＨ）を含む、実施形態Ａ１～Ａ１１のいずれか１つに記載の分子。
Ａ１３．ＶＨＨが、配列番号１のアミノ酸配列を有する相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、実施形態Ａ１２に記載の分子。
Ａ１４．ＶＨＨが、配列番号１６のアミノ酸配列を含む、実施形態Ａ１３に記載の分子。
Ａ１５．ＶＨＨが、配列番号１７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号１８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び配列番号１９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、実施形態Ａ１２に記載の分子。
Ａ１６．ＶＨＨが、配列番号３２のアミノ酸配列を含む、実施形態Ａ１５に記載の分子。
Ａ１７．第１の結合ドメインが、粘膜内皮上に存在するｐＩｇＲに特異的に結合する、実施形態Ａ１～Ａ１６のいずれか１つに記載の分子。
Ａ１８．第１の結合ドメインが、肺粘膜内皮上に存在するｐＩｇＲに特異的に結合する、実施形態Ａ１７に記載の分子。
Ａ１９．分子がｐＩｇＲに、及びＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に特異的に結合すると、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２が中和される、実施形態Ａ１～Ａ１８のいずれか１つに記載の分子。
Ａ２０．分子が、約４ｎＭ未満のＥＣ５０でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を中和した、実施形態Ａ１９に記載の分子。
Ａ２１．分子が、約３ｎＭ未満のＥＣ５０でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を中和した、実施形態Ａ１９に記載の分子。
Ａ２２．分子が、約１ｎＭ未満のＥＣ５０でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を中和した、実施形態Ａ１９に記載の分子。
Ａ２３．分子が、約５００ｐＭ未満のＥＣ５０でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を中和した、実施形態Ａ１９に記載の分子。
Ａ２４．分子が、約１００ｐＭ未満のＥＣ５０でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を中和した、実施形態Ａ１９に記載の分子。
Ａ２５．分子が、ＩｇＧ抗体由来のＦｃ領域を含む、実施形態Ａ１～Ａ２４のいずれか１つに記載の分子。
Ａ２６．ＩｇＧ分子が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４抗体である、実施形態Ａ２５に記載の分子。
Ａ２７．第１の結合ドメインが、ｐＩｇＲ抗原を特異的に結合する、実施形態Ａ１～Ａ２６のいずれか１つに記載の分子。
Ａ２８．第１の結合ドメインが、細胞外ｐＩｇＲエピトープを特異的に結合する、実施形態Ａ１～Ａ２６のいずれか１つに記載の分子。
Ａ２９．ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３が、ｐＩｇＲの抗原に対する結合部位を形成する、実施形態Ａ１～Ａ２６のいずれか１つに記載の分子。
Ａ３０．ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３が、ｐＩｇＲのエピトープに対する結合部位を形成する、実施形態Ａ１～Ａ２６のいずれか１つに記載の分子。
第２の組の実施形態では、以下が提供される。
Ｂ１．（ａ）高分子免疫グロブリン受容体（ｐＩｇＲ）に特異的に結合する第１の結合ドメイン及び（ｂ）ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に特異的に結合する第２の結合ドメインを含む多重特異性分子と、医薬的に許容される担体と、を含む、医薬組成物。
Ｂ２．分子が、二重特異性分子である、実施形態Ｂ１に記載の医薬組成物。
Ｂ３．第２の結合ドメインが、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の表面に特異的に結合する、実施形態Ｂ１又はＢ２に記載の医薬組成物。
Ｂ４．第２の結合ドメインが、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の表面上のスパイク糖タンパク質に特異的に結合する、実施形態Ｂ１～Ｂ３のいずれか１つに記載の医薬組成物。
Ｂ５．第２の結合ドメインが、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の表面上のスパイク糖タンパク質のＳ１サブユニットに特異的に結合する、実施形態Ｂ１～Ｂ４のいずれか１つに記載の医薬組成物。
Ｂ６．第２の結合ドメインが、アンジオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ２）を含む、実施形態Ｂ１～Ｂ５のいずれか１つに記載の医薬組成物。
Ｂ７．第２の結合ドメインが、ＡＣＥ２の細胞外ドメインを含む、実施形態Ｂ１～Ｂ５のいずれか１つに記載の医薬組成物。
Ｂ８．第２の結合ドメインが、ＡＣＥ２の短縮型細胞外ドメインを含む、実施形態Ｂ１～Ｂ５のいずれか１つに記載の医薬組成物。
Ｂ９．ＡＣＥ２が、配列番号１９４を含む、実施形態Ｂ６に記載の医薬組成物。
Ｂ１０．ＡＣＥ２の細胞外ドメインが、配列番号１３４を含む、実施形態Ｂ７に記載の医薬組成物。
Ｂ１１．ＡＣＥ２の短縮型細胞外ドメインが、配列番号１２０又は配列番号１２１を含む、実施形態Ｂ８に記載の医薬組成物。
Ｂ１２．第１の結合ドメインが、単一ドメイン分子（ＶＨＨ）を含む、実施形態Ｂ１～Ｂ１１のいずれか１つに記載の医薬組成物。
Ｂ１３．ＶＨＨが、配列番号１のアミノ酸配列を有する相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、実施形態Ｂ１２に記載の医薬組成物。
Ｂ１４．ＶＨＨが、配列番号１６のアミノ酸配列を含む、実施形態Ｂ１３に記載の医薬組成物。
Ｂ１５．ＶＨＨが、配列番号１７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号１８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び配列番号１９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、実施形態Ｂ１２に記載の医薬組成物。
Ｂ１６．ＶＨＨが、配列番号３２のアミノ酸配列を含む、実施形態Ｂ１５に記載の医薬組成物。
Ｂ１７．第１の結合ドメインが、粘膜内皮上に存在するｐＩｇＲに特異的に結合する、実施形態Ｂ１～Ｂ１６のいずれか１つに記載の医薬組成物。
Ｂ１８．第１の結合ドメインが、肺粘膜内皮上に存在するｐＩｇＲに特異的に結合する、実施形態Ｂ１７に記載の医薬組成物。
Ｂ１９．分子がｐＩｇＲに、及びＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に特異的に結合すると、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２が中和される、実施形態Ｂ１～Ｂ１８のいずれか１つに記載の医薬組成物。
Ｂ２０．分子が、約４ｎＭ未満のＥＣ５０でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を中和した、実施形態Ｂ１９に記載の医薬組成物。
Ｂ２１．分子が、約３ｎＭ未満のＥＣ５０でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を中和した、実施形態Ｂ１９に記載の医薬組成物。
Ｂ２２．分子が、約１ｎＭ未満のＥＣ５０でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を中和した、実施形態Ｂ１９に記載の医薬組成物。
Ｂ２３．分子が、約５００ｐＭ未満のＥＣ５０でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を中和した、実施形態Ｂ１９に記載の医薬組成物。
Ｂ２４．分子が、約１００ｐＭ未満のＥＣ５０でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を中和した、実施形態Ｂ１９に記載の医薬組成物。
Ｂ２５．実施形態Ｂ１～Ｂ２４のいずれか１つに記載の分子を送達するための手段と、医薬的に許容される担体と、を含む、医薬組成物。
Ｂ２６．実施形態Ｂ２５に記載の医薬組成物を製造する方法であって、分子を医薬的に許容される担体と組み合わせて、医薬組成物を得ることを含む、方法。
第３の組の実施形態では、以下が提供される。
Ｃ１．ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の宿主細胞侵入又は増殖を阻害する方法であって、当該方法が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を、（ａ）高分子免疫グロブリン受容体（ｐＩｇＲ）に特異的に結合する第１の結合ドメイン及び（ｂ）ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に特異的に結合する第２の結合ドメインを含む多重特異性分子と接触させることを含み、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を分子と接触させることにより、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の宿主細胞侵入又は増殖が阻害される、方法。
Ｃ２．分子が、二重特異性分子である、実施形態Ｃ１に記載の方法。
Ｃ３．第２の結合ドメインが、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の表面に特異的に結合する、実施形態Ｃ１又はＣ２に記載の方法。
Ｃ４．第２の結合ドメインが、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の表面上のスパイク糖タンパク質に特異的に結合する、実施形態Ｃ１～Ｃ３のいずれか１つに記載の方法。
Ｃ５．第２の結合ドメインが、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の表面上のスパイク糖タンパク質のＳ１サブユニットに特異的に結合する、実施形態Ｃ１～Ｃ４のいずれか１つに記載の方法。
Ｃ６．第２の結合ドメインが、アンジオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ２）を含む、実施形態Ｃ１～Ｃ５のいずれか１つに記載の方法。
Ｃ７．第２の結合ドメインが、ＡＣＥ２の細胞外ドメインを含む、実施形態Ｃ１～Ｃ５のいずれか１つに記載の方法。
Ｃ８．第２の結合ドメインが、ＡＣＥ２の短縮型細胞外ドメインを含む、実施形態Ｃ１～Ｃ５のいずれか１つに記載の方法。
Ｃ９．ＡＣＥ２が、配列番号１９４を含む、実施形態Ｃ６に記載の方法。
Ｃ１０．ＡＣＥ２の細胞外ドメインが、配列番号１３４を含む、実施形態Ｃ７に記載の方法。
Ｃ１１．ＡＣＥ２の短縮型細胞外ドメインが、配列番号１２０又は配列番号１２１を含む、実施形態Ｃ８に記載の方法。
Ｃ１２．第１の結合ドメインが、単一ドメイン分子（ＶＨＨ）を含む、実施形態Ｃ１～Ｃ１１のいずれか１つに記載の方法。
Ｃ１３．ＶＨＨが、配列番号１のアミノ酸配列を有する相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、実施形態Ｃ１２に記載の方法。
Ｃ１４．ＶＨＨが、配列番号１６のアミノ酸配列を含む、実施形態Ｃ１３に記載の方法。
Ｃ１５．ＶＨＨが、配列番号１７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号１８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び配列番号１９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、実施形態Ｃ１２に記載の方法。
Ｃ１６．ＶＨＨが、配列番号３２のアミノ酸配列を含む、実施形態Ｃ１５に記載の方法。
Ｃ１７．第１の結合ドメインが、粘膜内皮上に存在するｐＩｇＲに特異的に結合する、実施形態Ｃ１～Ｃ１６のいずれか１つに記載の方法。
Ｃ１８．第１の結合ドメインが、肺粘膜内皮上に存在するｐＩｇＲに特異的に結合する、実施形態Ｃ１７に記載の方法。
Ｃ１９．分子がｐＩｇＲに、及びＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に特異的に結合すると、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２が中和される、実施形態Ｃ１～Ｃ１８のいずれか１つに記載の方法。
Ｃ２０．分子が、約４ｎＭ未満のＥＣ５０でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を中和した、実施形態Ｃ１９に記載の方法。
Ｃ２１．分子が、約３ｎＭ未満のＥＣ５０でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を中和した、実施形態Ｃ１９に記載の方法。
Ｃ２２．分子が、約１ｎＭ未満のＥＣ５０でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を中和した、実施形態Ｃ１９に記載の方法。
Ｃ２３．分子が、約５００ｐＭ未満のＥＣ５０でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を中和した、実施形態Ｃ１９に記載の方法。
Ｃ２４．分子が、約１００ｐＭ未満のＥＣ５０でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を中和した、実施形態Ｃ１９に記載の方法。
Ｃ２５．対象が、ＣＯＶＩＤ－１９を有する、実施形態Ｃ１～Ｃ２４のいずれか１つに記載の方法。
Ｃ２６．対象においてＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を排除するための方法であって、（ａ）高分子免疫グロブリン受容体（ｐＩｇＲ）に特異的に結合する第１の結合ドメイン及び（ｂ）ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に特異的に結合する第２の結合ドメインを含む有効量の多重特異性分子を対象に投与することを含む、方法。
Ｃ２７．分子が、二重特異性分子である、実施形態Ｃ２６に記載の方法。
Ｃ２８．第２の結合ドメインが、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の表面に特異的に結合する、実施形態Ｃ２６又はＣ２７に記載の方法。
Ｃ２９．第２の結合ドメインが、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の表面上のスパイク糖タンパク質に特異的に結合する、実施形態Ｃ２６～Ｃ２８のいずれか１つに記載の方法。
Ｃ３０．第２の結合ドメインが、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の表面上のスパイク糖タンパク質のＳ１サブユニットに特異的に結合する、実施形態Ｃ２６～Ｃ２９のいずれか１つに記載の方法。
Ｃ３１．第２の結合ドメインが、アンジオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ２）を含む、実施形態Ｃ２６～Ｃ３０のいずれか１つに記載の方法。
Ｃ３２．第２の結合ドメインが、ＡＣＥ２の細胞外ドメインを含む、実施形態Ｃ２６～Ｃ３０のいずれか１つに記載の方法。
Ｃ３３．第２の結合ドメインが、ＡＣＥ２の短縮型細胞外ドメインを含む、実施形態Ｃ２６～Ｃ３０のいずれか１つに記載の方法。
Ｃ３４．ＡＣＥ２が、配列番号１９４を含む、実施形態Ｃ３１に記載の方法。
Ｃ３５．ＡＣＥ２の細胞外ドメインが、配列番号１３４を含む、実施形態Ｃ３２に記載の方法。
Ｃ３６．ＡＣＥ２の短縮型細胞外ドメインが、配列番号１２０又は配列番号１２１を含む、実施形態Ｃ３３に記載の方法。
Ｃ３７．第１の結合ドメインが、単一ドメイン分子（ＶＨＨ）を含む、実施形態Ｃ２６～Ｃ３６のいずれか１つに記載の方法。
Ｃ３８．ＶＨＨが、配列番号１のアミノ酸配列を有する相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、実施形態Ｃ３７に記載の方法。
Ｃ３９．ＶＨＨが、配列番号１６のアミノ酸配列を含む、実施形態Ｃ３８に記載の方法。
Ｃ４０．ＶＨＨが、配列番号１７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号１８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び配列番号１９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、実施形態Ｃ３７に記載の方法。
Ｃ４１．ＶＨＨが、配列番号３２のアミノ酸配列を含む、実施形態Ｃ４０に記載の方法。
Ｃ４２．第１の結合ドメインが、粘膜内皮上に存在するｐＩｇＲに特異的に結合する、実施形態Ｃ３７～Ｃ４１のいずれか１つに記載の方法。
Ｃ４３．第１の結合ドメインが、肺粘膜内皮上に存在するｐＩｇＲに特異的に結合する、実施形態Ｃ４２に記載の方法。
Ｃ４４．分子がｐＩｇＲに、及びＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に特異的に結合すると、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２が中和される、実施形態Ｃ２６～Ｃ４３のいずれか１つに記載の方法。
Ｃ４５．分子が、約４ｎＭ未満のＥＣ５０でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を中和した、実施形態Ｃ４４に記載の方法。
Ｃ４６．分子が、約３ｎＭ未満のＥＣ５０でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を中和した、実施形態Ｃ４４に記載の方法。
Ｃ４７．分子が、約１ｎＭ未満のＥＣ５０でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を中和した、実施形態Ｃ４４に記載の方法。
Ｃ４８．分子が、約５００ｐＭ未満のＥＣ５０でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を中和した、実施形態Ｃ４４に記載の方法。
Ｃ４９．分子が、約１００ｐＭ未満のＥＣ５０でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を中和した、実施形態Ｃ４４に記載の方法。
Ｃ５０．対象が、ＣＯＶＩＤ－１９を有する、実施形態Ｃ２６～Ｃ４４のいずれか１つに記載の方法。
第４の組の実施形態では、以下が提供される。
Ｄ１．対象においてＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２によって全て又は一部が引き起こされる疾患を治療する方法であって、（ａ）高分子免疫グロブリン受容体（ｐＩｇＲ）に特異的に結合する第１の結合ドメイン及び（ｂ）ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に特異的に結合する第２の結合ドメインを含む有効量の多重特異性分子を対象に投与することを含む、方法。
Ｄ２．分子が、二重特異性分子である、実施形態Ｄ１に記載の方法。
Ｄ３．第２の結合ドメインが、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の表面に特異的に結合する、実施形態Ｄ１又はＤ２に記載の方法。
Ｄ４．第２の結合ドメインが、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の表面上のスパイク糖タンパク質に特異的に結合する、実施形態Ｄ１～Ｄ３のいずれか１つに記載の方法。
Ｄ５．第２の結合ドメインが、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の表面上のスパイク糖タンパク質のＳ１サブユニットに特異的に結合する、実施形態Ｄ１～Ｄ４のいずれか１つに記載の方法。
Ｄ６．第２の結合ドメインが、アンジオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ２）を含む、実施形態Ｄ１～Ｄ５のいずれか１つに記載の方法。
Ｄ７．第２の結合ドメインが、ＡＣＥ２の細胞外ドメインを含む、実施形態Ｄ１～Ｄ５のいずれか１つに記載の方法。
Ｄ８．第２の結合ドメインが、ＡＣＥ２の短縮型細胞外ドメインを含む、実施形態Ｄ１～Ｄ５のいずれか１つに記載の方法。
Ｄ９．ＡＣＥ２が、配列番号１９４を含む、実施形態Ｄ６に記載の方法。
Ｄ１０．ＡＣＥ２の細胞外ドメインが、配列番号１３４を含む、実施形態Ｄ７に記載の方法。
Ｄ１１．ＡＣＥ２の短縮型細胞外ドメインが、配列番号１２０又は配列番号１２１を含む、実施形態Ｄ８に記載の方法。
Ｄ１２．第１の結合ドメインが、単一ドメイン分子（ＶＨＨ）を含む、実施形態Ｄ１～Ｄ１１のいずれか１つに記載の方法。
Ｄ１３．ＶＨＨが、配列番号１のアミノ酸配列を有する相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、実施形態Ｄ１２に記載の方法。
Ｄ１４．ＶＨＨが、配列番号１６のアミノ酸配列を含む、実施形態Ｄ１３に記載の方法。
Ｄ１５．ＶＨＨが、配列番号１７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号１８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び配列番号１９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、実施形態Ｄ１２に記載の方法。
Ｄ１６．ＶＨＨが、配列番号３２のアミノ酸配列を含む、実施形態Ｄ１５に記載の方法。
Ｄ１７．第１の結合ドメインが、粘膜内皮上に存在するｐＩｇＲに特異的に結合する、実施形態Ｄ１～Ｄ１６のいずれか１つに記載の方法。
Ｄ１８．第１の結合ドメインが、肺粘膜内皮上に存在するｐＩｇＲに特異的に結合する、実施形態Ｄ１７に記載の方法。
Ｄ１９．分子がｐＩｇＲに、及びＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に特異的に結合すると、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２が中和される、実施形態Ｄ１～Ｄ１８のいずれか１つに記載の方法。
Ｄ２０．分子が、約４ｎＭ未満のＥＣ５０でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を中和した、実施形態Ｄ１９に記載の方法。
Ｄ２１．分子が、約３ｎＭ未満のＥＣ５０でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を中和した、実施形態Ｄ１９に記載の方法。
Ｄ２２．分子が、約１ｎＭ未満のＥＣ５０でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を中和した、実施形態Ｄ１９に記載の方法。
Ｄ２３．分子が、約５００ｐＭ未満のＥＣ５０でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を中和した、実施形態Ｄ１９に記載の方法。
Ｄ２４．分子が、約１００ｐＭ未満のＥＣ５０でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を中和した、実施形態Ｄ１９に記載の方法。
Ｄ２５．疾患が、ＣＯＶＩＤ－１９である、実施形態Ｄ１～Ｄ２４のいずれか１つに記載の方法。
Ｄ２６．対象が、その治療を必要としている対象である、実施形態Ｄ１～Ｄ２５のいずれか１つに記載の方法。
Ｄ２７．対象が、ヒトである、実施形態Ｄ１～Ｄ２６のいずれか１つに記載の方法。
第５の組の実施形態では、以下が提供される。
Ｅ１．高分子免疫グロブリン受容体（ｐＩｇＲ）に特異的に結合する第１の結合ドメイン及びＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の表面に特異的に結合する第２の結合ドメインを提供するための手段を含む、システム。
Ｅ２．手段が、二重特異性分子を含む、実施形態Ｅ１に記載のシステム。
Ｅ３．第２の結合ドメインが、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の表面に特異的に結合する、実施形態Ｅ１又はＥ２に記載のシステム。
Ｅ４．第２の結合ドメインが、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の表面上のスパイク糖タンパク質に特異的に結合する、実施形態Ｅ１～Ｅ３のいずれか１つに記載のシステム。
Ｅ５．第２の結合ドメインが、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の表面上のスパイク糖タンパク質のＳ１サブユニットに特異的に結合する、実施形態Ｅ１～Ｅ４のいずれか１つに記載のシステム。
Ｅ６．第２の結合ドメインが、アンジオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ２）を含む、実施形態Ｅ１～Ｅ５のいずれか１つに記載のシステム。
Ｅ７．第２の結合ドメインが、ＡＣＥ２の細胞外ドメインを含む、実施形態Ｅ１～Ｅ５のいずれか１つに記載のシステム。
Ｅ８．第２の結合ドメインが、ＡＣＥ２の短縮型細胞外ドメインを含む、実施形態Ｅ１～Ｅ５のいずれか１つに記載のシステム。
Ｅ９．ＡＣＥ２が、配列番号１９４を含む、実施形態Ｅ６に記載のシステム。
Ｅ１０．ＡＣＥ２の細胞外ドメインが、配列番号１３４を含む、実施形態Ｅ７に記載のシステム。
Ｅ１１．ＡＣＥ２の短縮型細胞外ドメインが、配列番号１２０又は配列番号１２１を含む、実施形態Ｅ８に記載のシステム。
Ｅ１２．第１の結合ドメインが、単一ドメイン分子（ＶＨＨ）を含む、実施形態Ｅ１～Ｅ１１のいずれか１つに記載のシステム。
Ｅ１３．ＶＨＨが、配列番号１のアミノ酸配列を有する相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、実施形態Ｅ１２に記載のシステム。
Ｅ１４．ＶＨＨが、配列番号１６のアミノ酸配列を含む、実施形態Ｅ１３に記載のシステム。
Ｅ１５．ＶＨＨが、配列番号１７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号１８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び配列番号１９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、実施形態Ｅ１２に記載のシステム。
Ｅ１６．ＶＨＨが、配列番号３２のアミノ酸配列を含む、実施形態Ｅ１５に記載のシステム。
Ｅ１７．第１の結合ドメインが、粘膜内皮上に存在するｐＩｇＲに特異的に結合する、実施形態Ｅ１～Ｅ１６のいずれか１つに記載のシステム。
Ｅ１８．第１の結合ドメインが、肺粘膜内皮上に存在するｐＩｇＲに特異的に結合する、実施形態Ｅ１７に記載のシステム。
Ｅ１９．分子がｐＩｇＲに、及びＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に特異的に結合すると、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２が中和される、実施形態Ｅ１～Ｅ１８のいずれか１つに記載のシステム。
Ｅ２０．分子が、約４ｎＭ未満のＥＣ５０でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を中和した、実施形態Ｅ１９に記載のシステム。
Ｅ２１．分子が、約３ｎＭ未満のＥＣ５０でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を中和した、実施形態Ｅ１９に記載のシステム。
Ｅ２２．分子が、約１ｎＭ未満のＥＣ５０でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を中和した、実施形態Ｅ１９に記載のシステム。
Ｅ２３．分子が、約５００ｐＭ未満のＥＣ５０でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を中和した、実施形態Ｅ１９に記載のシステム。
Ｅ２４．分子が、約１００ｐＭ未満のＥＣ５０でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を中和した、実施形態Ｅ１９に記載のシステム。
Ｅ２５．ｐＩｇＲに特異的に結合する第１の結合ドメイン及びｐＩｇＲではない第２の標的に特異的に結合する第２の結合ドメインを提供するための手段を含む、システム。
Ｅ２６．手段が、二重特異性分子を含む、実施形態Ｅ２５に記載のシステム。
Ｅ２７．第１の結合ドメインが、単一ドメイン分子（ＶＨＨ）を含む、実施形態Ｅ２５又はＥ２６に記載の分子。
Ｅ２８．ＶＨＨが、配列番号１のアミノ酸配列を有する相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、実施形態Ｅ２７に記載のシステム。
Ｅ２９．ＶＨＨが、配列番号１６のアミノ酸配列を含む、実施形態Ｅ２８に記載のシステム。
Ｅ３０．ＶＨＨが、配列番号１７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号１８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び配列番号１９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、実施形態Ｅ２７に記載のシステム。
Ｅ３１．ＶＨＨが、配列番号３２のアミノ酸配列を含む、実施形態Ｅ３０に記載のシステム。
Ｅ３２．第１の結合ドメインが、粘膜内皮上に存在するｐＩｇＲに特異的に結合する、実施形態Ｅ２５～Ｅ３１のいずれか１つに記載のシステム。
Ｅ３３．第１の結合ドメインが、肺粘膜内皮上に存在するｐＩｇＲに特異的に結合する、実施形態Ｅ３２に記載のシステム。
Ｅ３４．分子が、ＩｇＧ抗体由来のＦｃ領域を含む、実施形態Ｅ１～Ｅ１８及びＥ２５～Ｅ３２のいずれか１つに記載のシステム。
Ｅ３５．ＩｇＧ分子が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４抗体である、実施形態Ｅ３４に記載のシステム。
Ｅ３６．第１の結合ドメインが、ｐＩｇＲ抗原を特異的に結合する、実施形態Ｅ１～Ｅ１８及びＥ２５～Ｅ３５のいずれか１つに記載のシステム。
Ｅ３７．第１の結合ドメインが、細胞外ｐＩｇＲエピトープを特異的に結合する、実施形態Ｅ１～Ｅ１８及びＥ２５～Ｅ３５のいずれか１つに記載のシステム。
Ｅ３８．ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３が、ｐＩｇＲの抗原に対する結合部位を形成する、実施形態Ｅ１～Ｅ１８及びＥ２５～Ｅ３５のいずれか１つに記載のシステム。
Ｅ３９．ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３が、ｐＩｇＲのエピトープに対する結合部位を形成する、実施形態Ｅ１～Ｅ１８及びＥ２５～Ｅ３５のいずれか１つに記載のシステム。
Ｅ４０．第２の標的が、第２の細胞の表面上にある、実施形態Ｅ２５～Ｅ３９のいずれか１つに記載のシステム。
Ｅ４１．第２の標的が、ウイルスの表面上にある、実施形態Ｅ２５～Ｅ４０のいずれか１つに記載のシステム。
Ｅ４２．第２の標的が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の表面上にある、実施形態Ｅ２５～Ｅ４１のいずれか１つに記載のシステム。
Ｅ４３．第２の標的が、スパイク糖タンパク質である、実施形態Ｅ２５～Ｅ４２のいずれか１つに記載のシステム。
Ｅ４４．第２の標的が、スパイク糖タンパク質のＳ１サブユニットである、実施形態Ｅ４３に記載のシステム。
Ｅ４５．第２の結合ドメインが、アンジオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ２）を含む、実施形態Ｅ２５～Ｅ４４のいずれか１つに記載のシステム。
Ｅ４６．第２の結合ドメインが、ＡＣＥ２の細胞外ドメインを含む、実施形態Ｅ２５～Ｅ４４のいずれか１つに記載のシステム。
Ｅ４７．第２の結合ドメインが、ＡＣＥ２の短縮型細胞外ドメインを含む、実施形態Ｅ２５～Ｅ４４のいずれか１つに記載のシステム。
Ｅ４８．ＡＣＥ２が、配列番号１９４を含む、実施形態Ｅ４５に記載のシステム。
Ｅ４９．ＡＣＥ２の細胞外ドメインが、配列番号１３４を含む、実施形態Ｅ４６に記載のシステム。
Ｅ５０．ＡＣＥ２の短縮型細胞外ドメインが、配列番号１２０又は配列番号１２１を含む、実施形態Ｅ４７に記載のシステム。
Ｅ５１．分子がｐＩｇＲに、及び第２の細胞又はウイルスの表面上の第２の標的に特異的に結合すると、第２の細胞又はウイルスが中和される、実施形態Ｅ４０～Ｅ５０のいずれか１つに記載のシステム。
Ｅ５２．分子が、約４ｎＭ未満のＥＣ５０で第２の細胞又はウイルスを中和した、実施形態Ｅ５１に記載のシステム。
Ｅ５３．分子が、約３ｎＭ未満のＥＣ５０で第２の細胞又はウイルスを中和した、実施形態Ｅ５１に記載のシステム。
Ｅ５４．分子が、約１ｎＭ未満のＥＣ５０で第２の細胞又はウイルスを中和した、実施形態Ｅ５１に記載のシステム。
Ｅ５５．分子が、約５００ｐＭ未満のＥＣ５０で第２の細胞又はウイルスを中和した、実施形態Ｅ５１に記載のシステム。
Ｅ５６．分子が、約１００ｐＭ未満のＥＣ５０で第２の細胞又はウイルスを中和した、実施形態Ｅ５１に記載のシステム。
第６の組の実施形態では、以下が提供される。
Ｆ１．第２の標的を発現する標的細胞の宿主細胞侵入又は増殖を阻害する方法であって、当該方法が、標的細胞を、（ａ）高分子免疫グロブリン受容体（ｐＩｇＲ）に特異的に結合する第１の結合ドメイン及び（ｂ）ｐＩｇＲではない第２の標的に特異的に結合する第２の結合ドメインを含む多重特異性分子と接触させることを含み、標的細胞を分子と接触させることにより、標的細胞の宿主細胞侵入又は増殖が阻害される、方法。
Ｆ２．分子が、二重特異性分子である、実施形態Ｆ１に記載の分子。
Ｆ３．第１の結合ドメインが、単一ドメイン分子（ＶＨＨ）を含む、実施形態Ｆ１又はＦ２に記載の分子。
Ｆ４．ＶＨＨが、配列番号１のアミノ酸配列を有する相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、実施形態Ｆ３に記載の分子。
Ｆ５．ＶＨＨが、配列番号１６のアミノ酸配列を含む、実施形態Ｆ４に記載の分子。
Ｆ６．ＶＨＨが、配列番号１７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号１８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び配列番号１９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、実施形態Ｆ３に記載の分子。
Ｆ７．ＶＨＨが、配列番号３２のアミノ酸配列を含む、実施形態Ｆ６に記載の分子。
Ｆ８．第１の結合ドメインが、粘膜内皮上に存在するｐＩｇＲに特異的に結合する、実施形態Ｆ１～Ｆ７のいずれか１つに記載の分子。
Ｆ９．第１の結合ドメインが、肺粘膜内皮上に存在するｐＩｇＲに特異的に結合する、実施形態Ｆ８に記載の分子。
Ｆ１０．分子が、ＩｇＧ抗体由来のＦｃ領域を含む、実施形態Ｆ１～Ｆ９のいずれか１つに記載の分子。
Ｆ１１．ＩｇＧ分子が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４抗体である、実施形態Ｆ１０に記載の分子。
Ｆ１２．第１の結合ドメインが、ｐＩｇＲ抗原を特異的に結合する、実施形態Ｆ１～Ｆ１１のいずれか１つに記載の分子。
Ｆ１３．第１の結合ドメインが、細胞外ｐＩｇＲエピトープを特異的に結合する、実施形態Ｆ１～Ｆ１１のいずれか１つに記載の分子。
Ｆ１４．ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３が、ｐＩｇＲの抗原に対する結合部位を形成する、実施形態Ｆ１～Ｆ１１のいずれか１つに記載の分子。
Ｆ１５．ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３が、ｐＩｇＲのエピトープに対する結合部位を形成する、実施形態Ｆ１～Ｆ１１のいずれか１つに記載の分子。
Ｆ１６．第２の標的が、第２の細胞の表面上にある、実施形態Ｆ１～Ｆ１５のいずれか１つに記載の分子。
Ｆ１７．第２の標的が、ウイルスの表面上にある、実施形態Ｆ１～Ｆ１６のいずれか１つに記載の分子。
Ｆ１８．第２の標的が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の表面上にある、実施形態Ｆ１～Ｆ１７のいずれか１つに記載の分子。
Ｆ１９．第２の標的が、スパイク糖タンパク質である、実施形態Ｆ１～Ｆ１８のいずれか１つに記載の分子。
Ｆ２０．第２の標的が、スパイク糖タンパク質のＳ１サブユニットである、実施形態Ｆ１９に記載の分子。
Ｆ２１．第２の結合ドメインが、アンジオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ２）を含む、実施形態Ｆ１～Ｆ２０のいずれか１つに記載の分子。
Ｆ２２．第２の結合ドメインが、ＡＣＥ２の細胞外ドメインを含む、実施形態Ｆ１～Ｆ２０のいずれか１つに記載の分子。
Ｆ２３．第２の結合ドメインが、ＡＣＥ２の短縮型細胞外ドメインを含む、実施形態Ｆ１～Ｆ２０のいずれか１つに記載の分子。
Ｆ２４．ＡＣＥ２が、配列番号１９４を含む、実施形態Ｆ２１に記載の分子。
Ｆ２５．ＡＣＥ２の細胞外ドメインが、配列番号１３４を含む、実施形態Ｆ２２に記載の分子。
Ｆ２６．ＡＣＥ２の短縮型細胞外ドメインが、配列番号１２０又は配列番号１２１を含む、実施形態Ｆ２３に記載の分子。
Ｆ２７．分子がｐＩｇＲに、及び第２の細胞又はウイルスの表面上の第２の標的に特異的に結合すると、第２の細胞又はウイルスが中和される、実施形態Ｆ１６～Ｆ２６のいずれか１つに記載の分子。
Ｆ２８．分子が、約４ｎＭ未満のＥＣ５０で第２の細胞又はウイルスを中和した、実施形態Ｆ２７に記載の分子。
Ｆ２９．分子が、約３ｎＭ未満のＥＣ５０で第２の細胞又はウイルスを中和した、実施形態Ｆ２７に記載の分子。
Ｆ３０．分子が、約１ｎＭ未満のＥＣ５０で第２の細胞又はウイルスを中和した、実施形態Ｆ２７に記載の分子。
Ｆ３１．分子が、約５００ｐＭ未満のＥＣ５０で第２の細胞又はウイルスを中和した、実施形態Ｆ２７に記載の分子。
Ｆ３２．分子が、約１００ｐＭ未満のＥＣ５０で第２の細胞又はウイルスを中和した、実施形態Ｆ２７に記載の分子。
第７の組の実施形態では、以下が提供される。
Ｇ１．粘膜内皮上のｐＩｇＲを結合することができる第１の手段と、ｐＩｇＲではない第２の標的を結合することができる第２の手段と、を含む、分子。
Ｇ２．分子が、二重特異性分子である、実施形態Ｇ１に記載の分子。
Ｇ３．第２の手段が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の表面に特異的に結合する、実施形態Ｇ１又はＧ２に記載の分子。
Ｇ４．第２の手段が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の表面上のスパイク糖タンパク質に特異的に結合する、実施形態Ｇ１～Ｇ３のいずれか１つに記載の分子。
Ｇ５．第２の手段が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の表面上のスパイク糖タンパク質のＳ１サブユニットに特異的に結合する、実施形態Ｇ１～Ｇ４のいずれか１つに記載の分子。
Ｇ６．第２の手段が、アンジオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ２）を含む、実施形態Ｇ１～Ｇ５のいずれか１つに記載の分子。
Ｇ７．第２の手段が、ＡＣＥ２の細胞外ドメインを含む、実施形態Ｇ１～Ｇ５のいずれか１つに記載の分子。
Ｇ８．第２の手段が、ＡＣＥ２の短縮型細胞外ドメインを含む、実施形態Ｇ１～Ｇ５のいずれか１つに記載の分子。
Ｇ９．ＡＣＥ２が、配列番号１９４を含む、実施形態Ｇ６に記載の分子。
Ｇ１０．ＡＣＥ２の細胞外ドメインが、配列番号１３４を含む、実施形態Ｇ７に記載の分子。
Ｇ１１．ＡＣＥ２の短縮型細胞外ドメインが、配列番号１２０又は配列番号１２１を含む、実施形態Ｇ８に記載の分子。
Ｇ１２．第１の手段が、単一ドメイン分子（ＶＨＨ）を含む、実施形態Ｇ１～Ｇ１１のいずれか１つに記載の分子。
Ｇ１３．ＶＨＨが、配列番号１のアミノ酸配列を有する相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、実施形態Ｇ１２に記載の分子。
Ｇ１４．ＶＨＨが、配列番号１６のアミノ酸配列を含む、実施形態Ｇ１３に記載の分子。
Ｇ１５．ＶＨＨが、配列番号１７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号１８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び配列番号１９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、実施形態Ｇ１２に記載の分子。
Ｇ１６．ＶＨＨが、配列番号３２のアミノ酸配列を含む、実施形態Ｇ１５に記載の分子。
Ｇ１７．第１の結合ドメインが、粘膜内皮上に存在するｐＩｇＲに特異的に結合する、実施形態Ｇ１～Ｇ１６のいずれか１つに記載の分子。
Ｇ１８．第１の結合ドメインが、肺粘膜内皮上に存在するｐＩｇＲに特異的に結合する、実施形態Ｇ１７に記載の分子。
Ｇ１９．分子がｐＩｇＲに、及びＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に特異的に結合すると、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２が中和される、実施形態Ｇ３～Ｇ１８のいずれか１つに記載の分子。
Ｇ２０．分子が、約４ｎＭ未満のＥＣ５０でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を中和した、実施形態Ｇ１９に記載の分子。
Ｇ２１．分子が、約３ｎＭ未満のＥＣ５０でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を中和した、実施形態Ｇ１９に記載の分子。
Ｇ２２．分子が、約１ｎＭ未満のＥＣ５０でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を中和した、実施形態Ｇ１９に記載の分子。
Ｇ２３．分子が、約５００ｐＭ未満のＥＣ５０でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を中和した、実施形態Ｇ１９に記載の分子。
Ｇ２４．分子が、約１００ｐＭ未満のＥＣ５０でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を中和した、実施形態Ｇ１９に記載の分子。
Ｇ２５．粘膜内皮上のｐＩｇＲを結合することができる第１の手段と、第２の細胞の表面上又はウイルスの表面上の第２の標的を結合することができる第２の手段と、を含む、分子。
Ｇ２６．第２の手段が、ウイルスの表面上の第２の標的を結合することができる、実施形態Ｇ２５に記載の分子。
Ｇ２７．ウイルスが、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２である、実施形態Ｇ２６に記載の分子。
Ｇ２８．分子が、二重特異性分子である、実施形態Ｇ２５に記載の分子。
Ｇ２９．第２の手段が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の表面に特異的に結合する、実施形態Ｇ２５～Ｇ２７のいずれか１つに記載の分子。
Ｇ３０．第２の手段が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の表面上のスパイク糖タンパク質に特異的に結合する、実施形態Ｇ２５～Ｇ２９のいずれか１つに記載の分子。
Ｇ３１．第２の手段が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の表面上のスパイク糖タンパク質のＳ１サブユニットに特異的に結合する、実施形態Ｇ２５～Ｇ３０のいずれか１つに記載の分子。
Ｇ３２．第２の手段が、アンジオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ２）を含む、実施形態Ｇ２５～Ｇ３１のいずれか１つに記載の分子。
Ｇ３３．第２の手段が、ＡＣＥ２の細胞外ドメインを含む、実施形態Ｇ２５～Ｇ３１のいずれか１つに記載の分子。
Ｇ３４．第２の手段が、ＡＣＥ２の短縮型細胞外ドメインを含む、実施形態Ｇ２５～Ｇ３１のいずれか１つに記載の分子。
Ｇ３５．ＡＣＥ２が、配列番号１９４を含む、実施形態Ｇ３２に記載の分子。
Ｇ３６．ＡＣＥ２の細胞外ドメインが、配列番号１３４を含む、実施形態Ｇ３３に記載の分子。
Ｇ３７．ＡＣＥ２の短縮型細胞外ドメインが、配列番号１２０又は配列番号１２１を含む、実施形態Ｇ３４に記載の分子。
Ｇ３８．第１の手段が、単一ドメイン分子（ＶＨＨ）を含む、実施形態Ｇ２５～Ｇ３７のいずれか１つに記載の分子。
Ｇ３９．ＶＨＨが、配列番号１のアミノ酸配列を有する相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、実施形態Ｇ３８に記載の分子。
Ｇ４０．ＶＨＨが、配列番号１６のアミノ酸配列を含む、実施形態Ｇ３９に記載の分子。
Ｇ４１．ＶＨＨが、配列番号１７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号１８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び配列番号１９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、実施形態Ｇ３８に記載の分子。
Ｇ４２．ＶＨＨが、配列番号３２のアミノ酸配列を含む、実施形態Ｇ４１に記載の分子。
Ｇ４３．第１の結合ドメインが、粘膜内皮上に存在するｐＩｇＲに特異的に結合する、実施形態Ｇ２５～Ｇ４２のいずれか１つに記載の分子。
Ｇ４４．第１の結合ドメインが、肺粘膜内皮上に存在するｐＩｇＲに特異的に結合する、実施形態Ｇ４３に記載の分子。
Ｇ４５．分子がｐＩｇＲに、及びＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に特異的に結合すると、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２が中和される、実施形態Ｇ２７～Ｇ４４のいずれか１つに記載の分子。
Ｇ４６．分子が、約４ｎＭ未満のＥＣ５０でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を中和した、実施形態Ｇ４５に記載の分子。
Ｇ４７．分子が、約３ｎＭ未満のＥＣ５０でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を中和した、実施形態Ｇ４５に記載の分子。
Ｇ４８．分子が、約１ｎＭ未満のＥＣ５０でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を中和した、実施形態Ｇ４５に記載の分子。
Ｇ４９．分子が、約５００ｐＭ未満のＥＣ５０でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を中和した、実施形態Ｇ４５に記載の分子。
Ｇ５０．分子が、約１００ｐＭ未満のＥＣ５０でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を中和した、実施形態Ｇ４５に記載の分子。
第８の組の実施形態では、以下が提供される。
Ｈ１．（ａ）高分子免疫グロブリン受容体（ｐＩｇＲ）に特異的に結合する第１の結合ドメインと、（ｂ）ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に特異的に結合する第２の結合ドメインと、を含む多重特異性分子をコードする、核酸。
Ｈ２．分子が、二重特異性分子である、実施形態Ｈ１に記載の核酸。
Ｈ３．第２の結合ドメインが、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の表面に特異的に結合する、実施形態Ｈ１又はＨ２に記載の核酸。
Ｈ４．第２の結合ドメインが、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の表面上のスパイク糖タンパク質に特異的に結合する、実施形態Ｈ１～Ｈ３のいずれか１つに記載の核酸。
Ｈ５．第２の結合ドメインが、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の表面上のスパイク糖タンパク質のＳ１サブユニットに特異的に結合する、実施形態Ｈ１～Ｈ４のいずれか１つに記載の核酸。
Ｈ６．第２の結合ドメインが、アンジオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ２）を含む、実施形態Ｈ１～Ｈ５のいずれか１つに記載の核酸。
Ｈ７．第２の結合ドメインが、ＡＣＥ２の細胞外ドメインを含む、実施形態Ｈ１～Ｈ５のいずれか１つに記載の核酸。
Ｈ８．第２の結合ドメインが、ＡＣＥ２の短縮型細胞外ドメインを含む、実施形態Ｈ１～Ｈ５のいずれか１つに記載の核酸。
Ｈ９．ＡＣＥ２が、配列番号１９４を含む、実施形態Ｈ６に記載の核酸。
Ｈ１０．ＡＣＥ２の細胞外ドメインが、配列番号１３４を含む、実施形態Ｈ７に記載の核酸。
Ｈ１１．ＡＣＥ２の短縮型細胞外ドメインが、配列番号１２０又は配列番号１２１を含む、実施形態Ｈ８に記載の核酸。
Ｈ１２．第１の結合ドメインが、単一ドメイン分子（ＶＨＨ）を含む、実施形態Ｈ１～Ｈ１１のいずれか１つに記載の核酸。
Ｈ１３．ＶＨＨが、配列番号１のアミノ酸配列を有する相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、実施形態Ｈ１２に記載の核酸。
Ｈ１４．ＶＨＨが、配列番号１６のアミノ酸配列を含む、実施形態Ｈ１３に記載の核酸。
Ｈ１５．ＶＨＨが、配列番号１７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号１８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び配列番号１９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、実施形態Ｈ１２に記載の核酸。
Ｈ１６．ＶＨＨが、配列番号３２のアミノ酸配列を含む、実施形態Ｈ１５に記載の核酸。
Ｈ１７．第１の結合ドメインが、粘膜内皮上に存在するｐＩｇＲに特異的に結合する、実施形態Ｈ１～Ｈ１６のいずれか１つに記載の核酸。
Ｈ１８．第１の結合ドメインが、肺粘膜内皮上に存在するｐＩｇＲに特異的に結合する、実施形態Ｈ１７に記載の核酸。
Ｈ１９．分子がｐＩｇＲに、及びＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に特異的に結合すると、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２が中和される、実施形態Ｈ１～Ｈ１８のいずれか１つに記載の核酸。
Ｈ２０．分子が、約４ｎＭ未満のＥＣ５０でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を中和した、実施形態Ｈ１９に記載の核酸。
Ｈ２１．分子が、約３ｎＭ未満のＥＣ５０でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を中和した、実施形態Ｈ１９に記載の核酸。
Ｈ２２．分子が、約１ｎＭ未満のＥＣ５０でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を中和した、実施形態Ｈ１９に記載の核酸。
Ｈ２３．分子が、約５００ｐＭ未満のＥＣ５０でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を中和した、実施形態Ｈ１９に記載の核酸。
Ｈ２４．分子が、約１００ｐＭ未満のＥＣ５０でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を中和した、実施形態Ｈ１９に記載の核酸。
Ｈ２５．実施形態Ｈ１～Ｈ２４のいずれか１つに記載の核酸を含む、ベクター。
Ｈ２６．実施形態Ｈ２５に記載のベクターを含む、宿主細胞。
Ｈ２７．実施形態Ｈ２５に記載のベクターと、そのためのパッケージと、を含む、キット。
第９の組の実施形態では、以下が提供される。
Ｉ１．（ａ）高分子免疫グロブリン受容体（ｐＩｇＲ）に特異的に結合する第１の結合ドメイン及び（ｂ）ｐＩｇＲではない第２の標的に特異的に結合する第２の結合ドメインを含む多重特性分子と、医薬的に許容される担体と、を含む、医薬組成物。
Ｉ２．分子が、二重特異性分子である、実施形態Ｉ１に記載の医薬組成物。
Ｉ３．第１の結合ドメインが、単一ドメイン分子（ＶＨＨ）を含む、実施形態Ｉ１又はＩ２に記載の医薬組成物。
Ｉ４．ＶＨＨが、配列番号１のアミノ酸配列を有する相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、実施形態Ｉ３に記載の医薬組成物。
Ｉ５．ＶＨＨが、配列番号１６のアミノ酸配列を含む、実施形態Ｉ４に記載の医薬組成物。
Ｉ６．ＶＨＨが、配列番号１７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号１８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び配列番号１９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、実施形態Ｉ３に記載の医薬組成物。
Ｉ７．ＶＨＨが、配列番号３２のアミノ酸配列を含む、実施形態Ｉ６に記載の医薬組成物。
Ｉ８．第１の結合ドメインが、粘膜内皮上に存在するｐＩｇＲに特異的に結合する、実施形態Ｉ１～Ｉ７のいずれか１つに記載の医薬組成物。
Ｉ９．第１の結合ドメインが、肺粘膜内皮上に存在するｐＩｇＲに特異的に結合する、実施形態Ｉ８に記載の医薬組成物。
Ｉ１０．分子が、ＩｇＧ抗体由来のＦｃ領域を含む、実施形態Ｉ１～Ｉ９のいずれか１つに記載の医薬組成物。
Ｉ１１．ＩｇＧ分子が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４抗体である、実施形態Ｉ１０に記載の医薬組成物。
Ｉ１２．第１の結合ドメインが、ｐＩｇＲ抗原を特異的に結合する、実施形態Ｉ１～Ｉ１１のいずれか１つに記載の医薬組成物。
Ｉ１３．第１の結合ドメインが、細胞外ｐＩｇＲエピトープを特異的に結合する、実施形態Ｉ１～Ｉ１１のいずれか１つに記載の医薬組成物。
Ｉ１４．ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３が、ｐＩｇＲの抗原に対する結合部位を形成する、実施形態Ｉ１～Ｉ１１のいずれか１つに記載の医薬組成物。
Ｉ１５．ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３が、ｐＩｇＲのエピトープに対する結合部位を形成する、実施形態Ｉ１～Ｉ１１のいずれか１つに記載の医薬組成物。
Ｉ１６．第２の標的が、第２の細胞の表面上にある、実施形態Ｉ１～Ｉ１５のいずれか１つに記載の医薬組成物。
Ｉ１７．第２の標的が、ウイルスの表面上にある、実施形態Ｉ１～Ｉ１６のいずれか１つに記載の医薬組成物。
Ｉ１８．第２の標的が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の表面上にある、実施形態Ｉ１～Ｉ１７のいずれか１つに記載の医薬組成物。
Ｉ１９．第２の標的が、スパイク糖タンパク質である、実施形態Ｉ１～Ｉ１８のいずれか１つに記載の医薬組成物。
Ｉ２０．第２の標的が、スパイク糖タンパク質のＳ１サブユニットである、実施形態Ｉ１９に記載の医薬組成物。
Ｉ２１．第２の結合ドメインが、アンジオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ２）を含む、実施形態Ｉ１～Ｉ２０のいずれか１つに記載の医薬組成物。
Ｉ２２．第２の結合ドメインが、ＡＣＥ２の細胞外ドメインを含む、実施形態Ｉ１～Ｉ２０のいずれか１つに記載の医薬組成物。
Ｉ２３．第２の結合ドメインが、ＡＣＥ２の短縮型細胞外ドメインを含む、実施形態Ｉ１～Ｉ２０のいずれか１つに記載の医薬組成物。
Ｉ２４．ＡＣＥ２が、配列番号１９４を含む、実施形態Ｉ２１に記載の医薬組成物。
Ｉ２５．ＡＣＥ２の細胞外ドメインが、配列番号１３４を含む、実施形態Ｉ２２に記載の医薬組成物。
Ｉ２６．ＡＣＥ２の短縮型細胞外ドメインが、配列番号１２０又は配列番号１２１を含む、実施形態Ｉ２３に記載の医薬組成物。
Ｉ２７．分子がｐＩｇＲに、及び第２の細胞又はウイルスの表面上の第２の標的に特異的に結合すると、第２の細胞又はウイルスが中和される、実施形態Ｉ１６～Ｉ２６のいずれか１つに記載の医薬組成物。
Ｉ２８．分子が、約４ｎＭ未満のＥＣ５０で第２の細胞又はウイルスを中和した、実施形態Ｉ２７に記載の医薬組成物。
Ｉ２９．分子が、約３ｎＭ未満のＥＣ５０で第２の細胞又はウイルスを中和した、実施形態Ｉ２７に記載の医薬組成物。
Ｉ３０．分子が、約１ｎＭ未満のＥＣ５０で第２の細胞又はウイルスを中和した、実施形態Ｉ２７に記載の医薬組成物。
Ｉ３１．分子が、約５００ｐＭ未満のＥＣ５０で第２の細胞又はウイルスを中和した、実施形態Ｉ２７に記載の医薬組成物。
Ｉ３２．分子が、約１００ｐＭ未満のＥＣ５０で第２の細胞又はウイルスを中和した、実施形態Ｉ２７に記載の医薬組成物。
Ｉ３３．実施形態Ｉ１～Ｉ３２のいずれか１つに記載の分子を送達するための手段と、医薬的に許容される担体と、を含む、医薬組成物。
Ｉ３４．実施形態Ｉ１～Ｉ３３のいずれか１つに記載の医薬組成物を製造する方法であって、分子を医薬的に許容される担体と組み合わせて、医薬組成物を得ることを含む、方法。
第１０の組の実施形態では、以下が提供される。
Ｊ１．第２の標的を発現する標的細胞の宿主細胞侵入又は増殖を阻害する方法であって、当該方法が、標的細胞を、（ａ）高分子免疫グロブリン受容体（ｐＩｇＲ）に特異的に結合する第１の結合ドメイン及び（ｂ）ｐＩｇＲではない第２の標的に特異的に結合する第２の結合ドメインを含む多重特異性分子と接触させることを含み、標的細胞を分子と接触させることにより、標的細胞の宿主細胞侵入又は増殖が阻害される、方法。
Ｊ２．分子が、二重特異性分子である、実施形態Ｊ１に記載の分子。
Ｊ３．第１の結合ドメインが、単一ドメイン分子（ＶＨＨ）を含む、実施形態Ｊ１又はＪ２に記載の分子。
Ｊ４．ＶＨＨが、配列番号１のアミノ酸配列を有する相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、実施形態Ｊ３に記載の分子。
Ｊ５．ＶＨＨが、配列番号１６のアミノ酸配列を含む、実施形態Ｊ４に記載の分子。
Ｊ６．ＶＨＨが、配列番号１７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号１８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び配列番号１９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、実施形態Ｊ３に記載の分子。
Ｊ７．ＶＨＨが、配列番号３２のアミノ酸配列を含む、実施形態Ｊ６に記載の分子。
Ｊ８．第１の結合ドメインが、粘膜内皮上に存在するｐＩｇＲに特異的に結合する、実施形態Ｊ１～Ｊ７のいずれか１つに記載の分子。
Ｊ９．第１の結合ドメインが、肺粘膜内皮上に存在するｐＩｇＲに特異的に結合する、実施形態Ｊ８に記載の分子。
Ｊ１０．分子が、ＩｇＧ抗体由来のＦｃ領域を含む、実施形態Ｊ１～Ｊ９のいずれか１つに記載の分子。
Ｊ１１．ＩｇＧ分子が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４抗体である、実施形態Ｊ１０に記載の分子。
Ｊ１２．第１の結合ドメインが、ｐＩｇＲ抗原を特異的に結合する、実施形態Ｊ１～Ｊ１１のいずれか１つに記載の分子。
Ｊ１３．第１の結合ドメインが、細胞外ｐＩｇＲエピトープを特異的に結合する、実施形態Ｊ１～Ｊ１１のいずれか１つに記載の分子。
Ｊ１４．ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３が、ｐＩｇＲの抗原に対する結合部位を形成する、実施形態Ｊ１～Ｊ１１のいずれか１つに記載の分子。
Ｊ１５．ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３が、ｐＩｇＲのエピトープに対する結合部位を形成する、実施形態Ｊ１～Ｊ１１のいずれか１つに記載の分子。
Ｊ１６．第２の標的が、第２の細胞の表面上にある、実施形態Ｊ１～Ｊ１５のいずれか１つに記載の分子。
Ｊ１７．第２の標的が、ウイルスの表面上にある、実施形態Ｊ１～Ｊ１６のいずれか１つに記載の分子。
Ｊ１８．第２の標的が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の表面上にある、実施形態Ｊ１～Ｊ１７のいずれか１つに記載の分子。
Ｊ１９．第２の標的が、スパイク糖タンパク質である、実施形態Ｊ１～Ｊ１８のいずれか１つに記載の分子。
Ｊ２０．第２の標的が、スパイク糖タンパク質のＳ１サブユニットである、実施形態Ｊ１９に記載の分子。
Ｊ２１．第２の結合ドメインが、アンジオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ２）を含む、実施形態Ｊ１～Ｊ２０のいずれか１つに記載の分子。
Ｊ２２．第２の結合ドメインが、ＡＣＥ２の細胞外ドメインを含む、実施形態Ｊ１～Ｊ２０のいずれか１つに記載の分子。
Ｊ２３．第２の結合ドメインが、ＡＣＥ２の短縮型細胞外ドメインを含む、実施形態Ｊ１～Ｊ２０のいずれか１つに記載の分子。
Ｊ２４．ＡＣＥ２が、配列番号１９４を含む、実施形態Ｊ２１に記載の分子。
Ｊ２５．ＡＣＥ２の細胞外ドメインが、配列番号１３４を含む、実施形態Ｊ２２に記載の分子。
Ｊ２６．ＡＣＥ２の短縮型細胞外ドメインが、配列番号１２０又は配列番号１２１を含む、実施形態Ｊ２３に記載の分子。
Ｊ２７．分子がｐＩｇＲに、及び第２の細胞又はウイルスの表面上の第２の標的に特異的に結合すると、第２の細胞又はウイルスが中和される、実施形態Ｊ１６～Ｊ２６のいずれか１つに記載の分子。
Ｊ２８．分子が、約４ｎＭ未満のＥＣ５０で第２の細胞又はウイルスを中和した、実施形態Ｊ２７に記載の分子。
Ｊ２９．分子が、約３ｎＭ未満のＥＣ５０で第２の細胞又はウイルスを中和した、実施形態Ｊ２７に記載の分子。
Ｊ３０．分子が、約１ｎＭ未満のＥＣ５０で第２の細胞又はウイルスを中和した、実施形態Ｊ２７に記載の分子。
Ｊ３１．分子が、約５００ｐＭ未満のＥＣ５０で第２の細胞又はウイルスを中和した、実施形態Ｊ２７に記載の分子。
Ｊ３２．分子が、約１００ｐＭ未満のＥＣ５０で第２の細胞又はウイルスを中和した、実施形態Ｊ２７に記載の分子。
第１１の組の実施形態では、以下が提供される。
Ｋ１．２つ以上の標的分子に特異的に結合する分子を作製するためのプロセスであって、
粘膜内皮上のｐＩｇＲに結合することができる結合ドメインを得る機能を実行するためのステップと、
第２の細胞又はウイルス上の第２の標的に結合することができる結合ドメインを得る機能を実行するためのステップと、
粘膜内皮上のｐＩｇＲ抗原及び第２の細胞又はウイルス上の第２の標的に結合することができる分子を提供する機能を実行するためのステップと、を含む、プロセス。
Ｋ２．第２の標的に結合することができる結合ドメインを得る機能を実行するためのステップが、ｎ回繰り返され、粘膜内皮上のｐＩｇＲ及びｎ個の標的分子に結合することができる結合ドメインを提供する機能を実行するためのｎ個のステップを更に含み、ｎが、少なくとも２である、実施形態Ｋ１に記載のプロセス。
Ｋ３．第２の標的が、第２の細胞の表面上又はウイルスの表面上にある、実施形態Ｋ１又はＫ２に記載のプロセス。
Ｋ４．第２の標的が、ウイルスの表面上にある、実施形態Ｋ１～Ｋ３のいずれか１つに記載のプロセス。
Ｋ５．ウイルスが、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２である、実施形態Ｋ１～Ｋ４のいずれか１つに記載のプロセス。
Ｋ６．ｐＩｇＲに結合することができる結合ドメインが、ｐＩｇＲ抗原を特異的に結合する、実施形態Ｋ１～Ｋ５のいずれか１つに記載のプロセス。
Ｋ７．ｐＩｇＲに結合することができる結合ドメインが、ｐＩｇＲエピトープを特異的に結合する、実施形態Ｋ１～Ｋ５のいずれか１つに記載のプロセス。
Ｋ８．第２の標的に結合することができる結合ドメインが、抗原である、実施形態Ｋ１～Ｋ７のいずれか１つに記載のプロセス。
Ｋ９．第２の標的に結合することができる結合ドメインが、第２の標的のエピトープである、実施形態Ｋ１～Ｋ７のいずれか１つに記載のプロセス。
本発明の特定の実施形態が本明細書に記載される。前述の説明を読むと、開示された実施形態の変形形態は、当業者に明らかになり得、必要に応じてそのような変形形態を採用し得ることが予想される。したがって、本発明が、本明細書に具体的に記載されるもの以外の方法で実施されること、並びに本発明が、適用法によって許可されるように、本明細書に添付の特許請求の範囲に列挙される主題の全ての修正物及び同等物を含むことが意図される。また、全ての可能性のあるこれらの変形形態における上記要素の任意の組み合わせは、本明細書において別途記載のない限り、又は文脈が明らかに矛盾しない限り、本明細書に包含される。本発明の多くの実施形態が説明されてきた。しかしながら、様々な修正が、本発明の趣旨及び範囲から逸脱することなく実行され得ることが、理解されるであろう。したがって、実施例のセクションにおける説明は、特許請求の範囲に記載される本発明の範囲を限定するのではなく、例示することを意図するものである。
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２中和剤のｐＩｇＲ媒介性輸送の作用機序は、図１に概説される概略図に記載される。
実施例１：方法及び材料
構築物の設計
各ｍＡｂの重鎖のＮ末端に抗ｐＩｇＲ ＶＨＨを２（Ｇ４Ｓ）リンカーで融合する構築物を設計した。ＩｇＧ１ ｍＡｂ、及びヌルＶＨＨ結合剤を有するＮ末端ＶＨＨ融合物において、ヌル対照を設計した。更に、抗ｐＩｇＲ ＶＨＨとともにヒトＡＣＥ２を用いて構築物を設計した。ヒトＡＣＥ２ ＥＣＤ（１８－７２５ ＡＡ）及び短縮型バリアント（１８－６１１ ＡＡ）を設計した。これらの分子は、２つの形式：ＶＨＨ－２（Ｇ４Ｓ）－ＡＣＥ２－Ｆｃ及びＶＨＨ－Ｆｃ－２（Ｇ４Ｓ）－ＡＣＥ２からなっていた。可変領域及びＡＣＥ２のＤＮＡ配列を、ＣＨＯ発現のためにコドン最適化し、Ｌｏｎｚａ－ｐＥＥ６．４（重鎖）又はＬｏｎｚａ－ｐＥＥ１２．４（軽鎖）にクローニングした。
二重特異性分子の発現及び精製
二重特異性分子をコードする発現プラスミドを、製造業者の説明書に従ってＥＸＰＩＣＨＯ細胞にトランスフェクトした。細胞上清を６～７日後に遠心分離（４，０００ｇ、１５分）によって回収し、０．４５μｍフィルターに通し、ランニング緩衝剤としてリン酸緩衝生理食塩水（phosphate-buffered saline、ＰＢＳ）及び溶出緩衝剤として０．１Ｍ酢酸ナトリウム（ｐＨ３．５）を使用して、ＡＫＴＡ発現系上でＭＡＢＳＥＬＥＣＴ（商標）ＳＵＲＥ（商標）（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）クロマトグラフィーによって精製した。溶出画分を、２５％（ｖ／ｖ）の２Ｍ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ７．０）を使用して直ちに中和し、ＰＢＳに透析し、０．２２μｍ濾過によって滅菌し、４℃で保存した。タンパク質濃度をＵＶ－可視分光法によって決定した。最終収量は、３５ｍＬの発現後に７ｍｇ～２２ｍｇタンパク質の範囲であった。
バイオレイヤー干渉法
ｈｉｓタグ付きｐＩｇＲ又はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＲＢＤを抗Ｈｉｓ（ＨＩＳ２）バイオセンサーに固定化することによって、分子とｐＩｇＲ又はスパイク糖タンパク質との間の結合動態を測定した。次いで、抗原でコーティングされたチップを、９０秒間の会合ステップ、続いて９０秒間の解離ステップの間、各タンパク質に曝露した。会合及び解離速度は、波長（ｎｍ）のシフトによって測定した。全てのタンパク質及び抗原を、２５℃で１×ＰＢＳ中１０μｇ／ｍＬの濃度に希釈した。データをＯｃｔｅｔ Ｄａｔａ Ａｃｑｕｉｓｉｔｉｏｎ（ＦｏｒｔｅＢｉｏ）で収集し、Ｏｃｔｅｔ Ｄａｔａ Ａｎａｌｙｓｉｓ（ＦｏｒｔｅＢｉｏ）を使用して分析した。データは、ＧＲＡＰＨＰＡＤ Ｐｒｉｓｍソフトウェアを使用して処理した。
機能的代理中和アッセイ分析
二重特異性分子を、アッセイ緩衝剤（３％ＢＳＡ＋ＰＢＳ）中での連続希釈によって調製した。試料を、０．１μｇ／ｍＬのビオチン化スパイク糖タンパク質とともに１：１（ｖ／ｖ）で、振盪しながら１時間インキュベートした。インキュベーション後、２５ｍＬの混合物をＳｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ Ｇｏｌｄマルチアレイ９６ウェルプレート（ＭＥＳＯ ＳＣＡＬＥ ＤＩＳＣＯＶＥＲＹ）に添加し、振盪しながら１時間インキュベートした。インキュベーション後、２５μＬの２μｇ／ｍＬルテニウム標識ＡＣＥ２を添加し、振盪しながら１時間インキュベートした。プレートをＰＢＳで洗浄した後、１５０μＬの２×ＭＳＤ読み取り緩衝剤を添加して、Ｍｅｓｏｓｃａｌｅ Ｓｅｃｔｏｒ Ｓ ６００リーダーでプレートを読み取った。ＭＳＤデータを分析し、ＧＲＡＰＨＰＡＤ Ｐｒｉｓｍソフトウェアを使用してＩＣ５０値を計算した。
ＡＤＣＣ分析
ＭＤＣＫ細胞（ＡＴＣＣ）をヒトｐＩｇＲ及びＮｕｃｌｉｇｈｔ ｇｒｅｅｎでトランスフェクトし、標的細胞として使用した。ＭＤＣＫ細胞を、１０％ＦＢＳ、１×ＮＥＡＡ、及び５μｇ／ｍｌピューロマイシンを補充したＥＭＥＭ中で培養した。ＰＢＭＣ効果細胞は、Ｈｅｍａｃａｒｅから入手した。Ｔ細胞（ＣＤ３＋）、Ｂ細胞（ＣＤ１９＋）、及びＮＫ細胞（ＣＤ５６＋１６＋）の百分率をフローサイトメトリーによって数えた（図５Ａ～図５Ｃ）。ＰＢＭＣを、１０％ＦＢＳ及び１×ＮＥＡＡを補充したＲＰＭＩ－１６４０中で、１×１０６細胞／ｍＬの密度で一晩インキュベートした。ＭＤＣＫ細胞を１００μＬのアッセイ培地中に１０，０００細胞／ウェルで播種し、５％ＣＯ２を用いて３７℃で１時間インキュベートした。二重特異性抗体を１０μｇ／ｍＬで添加し、ウェル当たり１０倍に希釈した。次いで、等量のＰＢＭＣ及びＭＤＣＫ細胞を、ＩＮＣＵＣＹＴＥ内で、３７℃、５％ＣＯ２で７２時間、抗体とともにインキュベートした。細胞溶解を、インキュベーション後のウェル当たりの総緑色面積によって測定した。
薬物動態分析
雌Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、ＶＨＨ－Ｆｃ試験抗体を５ｍｇ／ｋｇの用量で１群当たり５匹の動物に尾静脈を介して静脈内注射した。時点は、０．０２、０．０４、０．０８、０．２５、１、２、３、７、及び１４日とした。各時点で、２０μｌの全血を尾部切断によりマイクロＥＤＴＡチューブ中に得た。採取した血液を、ＬＯＷＣＲＯＳＳ緩衝剤（Ｃａｎｄｏｒ；カタログ番号１００５００）で１０倍に希釈し、逆さにして混合し、収集の間、湿った氷上に保持した。全ての試料を特定の時点で収集した直後に、希釈した試料を１５００×ｇで２分間遠心分離し、上清を収集し、分析まで凍結した。ＰＫ研究は、Ｊａｎｓｓｅｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ＆Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，ＬＬＣにおける動物実験委員会により認可された。全ての実験は、委員会のガイドラインに従って実行した。
マウス希釈全血中のＶＨＨ－Ｆｃ試験抗体の検出のために、電気化学発光イムノアッセイ（ＥＣＬＩＡ）を使用した。Ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ Ｇｏｌｄマルチアレイ９６ウェルプレート（ＭＥＳＯＳＣＡＬＥ ＤＩＳＣＯＶＥＲＹ（登録商標））を、１×ｄＰＢＳ中の１％ＢＳＡで３０分間ブロッキングした。捕捉試薬、ビオチン化ウサギ抗ラクダＶＨＨ ｍＡｂ（ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ（登録商標）；カタログ番号Ａ０１９９５）を０．５μｇ／ｍＬに希釈し、４０μＬを１０μＬの希釈標準、対照、及び試料とアッセイプレートにおいて６０分間混合した。プレートをＴｗｅｅｎ ２０を含むＰＢＳ緩衝生理食塩水（ＰＢＳＴ）で洗浄し、０．５μｇ／ｍＬに希釈した５０μＬ／ウェルのルテニウム標識抗ヒトＦｃ ｍＡｂ（Ｊａｎｓｓｅｎ Ｒ＆Ｄ）を添加し、６０分間インキュベートした。別の洗浄ステップの後、１５０μＬ／ウェルの１×Ｒｅａｄ Ｂｕｆｆｅｒ Ｔ（ＭＳＤ；カタログ番号Ｒ９２ＴＤ）を添加し、プレートをＭＳＤ Ｓｅｃｔｏｒ Ｉｍａｇｅｒ ６００プレートリーダーで読み取った。ＶＨＨ－Ｆｃ抗体の最終試料濃度を、Ｗａｔｓｏｎ ＬＩＭＳ ７．６分析ソフトウェアにおいて１／ｙ２重み付けを伴う５パラメータ非線形回帰を使用して、代表的な標準曲線から逆算した。
自然対数濃度対時間の非線形回帰により適合させた一相指数関数的減衰モデルを用い、Ｐｒｉｓｍバージョン８．０ソフトウェアを使用して、ＰＫ試験の排出期（β期）の終末相半減期（Ｔ１／２）の計算値を求めた。最小二乗非線形減衰モデルを、適合された濃度の逆数により重み付けした。式Ｔ１／２＝ｌｎ２／β（式中、βは、１回目の投与後に始まる最小二乗回帰分析により適合された直線の傾斜である）を使用して、排出期（β期）の半減期の計算値を求めた。試験群内の各動物について算出されたＴ１／２値の平均をとることにより、抗体の終末相半減期値を求めた。
ＥｐｉＡｉｒｗａｙ組織系におけるトランスサイトーシス活性
組織モデルはＭａｔｔｅｋ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎから入手し、製造元の説明書に従って維持した。試験及び対照ＶＨＨ－ｍＦｃ分子４０μｇを基底チャンバ内の２ｍＬのＥＰＩＡＩＲＷＡＹ培地に加え、０及び２４時間目に基底チャンバ及び頂端チャンバから１００μＬの試料を収集した。ＥｐｉＡｉｒｗａｙ ＴＥＥＲ緩衝剤（１２０μｌ）を使用して、頂端チャンバから粘液を収集した。基底培地及び頂端粘液に存在するＶＨＨの量を電気化学発光法で定量した。ストレプトアビジンでコーティングされたＭＳＤプレートをビオチン化抗ＶＨＨ抗体（Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ Ａ０１９９５）（ＰＢＳ中２μｇ／ｍＬ）で、１０００ｒｐｍでＲＴにて２時間コーティングし、ＰＢＴで３回洗浄し、ブロッキング緩衝剤を用いてＲＴにて１時間インキュベートし、ＶＨＨ－ｍＦｃ含有培地／粘液（異なる希釈率）で、１０００ｒｐｍでＲＴにて１時間インキュベートし、ＰＢＴで３回洗浄し、ルテニル化抗ヒトＦｃ抗体（Ｃｌｏｎｅ Ｒ１０Ｚ８Ｅ９、社内で標識）（ＰＢＳ中２μｇ／ｍＬ）で、１０００ｒｐｍでＲＴにて１時間インキュベートし、ＰＢＴで３回洗浄し、ＭＳＤイメージャを用いて１５０μＬのリーディング緩衝剤中でプレートを読み取った。基底チャンバ及び頂端チャンバ内のＶＨＨの量を、Ｐｒｉｓｍ（ＧＲＡＰＨＰＡＤ）のＶＨＨ－ｍＦｃ標準曲線に対するＥＣＬＵをプロットすることによって計算した。
共焦点撮像
免疫蛍光及び共焦点顕微鏡を使用して、処理後２４時間のＥｐｉＡｉｒｗａｙ微小組織全体にわたって保持されたｐＩｇＲ及びＶＨＨの量を追跡した。組織試料をリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で３回リンスした後、固定して未結合の抗体及び粘液を除去した。１０％ホルマリン溶液を０．４ｍＬの最終体積まで頂端チャンバに添加し、試料を室温で２０分間固定した。固定試薬を吸引によって除去し、チャンバを室温で１％Ｔｒｉｔｏｎ－Ｘ１００（ｖ／ｖ）（ＰＢＳＴ）を補充した２ｍＬのＰＢＳで３回洗浄した。ｐＩｇＲ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、ＭＡＢ２７１７１）及びＶＨＨドメイン（Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ、Ａ０１９９５）に対する一次抗体を、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）を補充したＰＢＳＴ中で最終濃度５μｇ／ｍＬに希釈し、５００μＬを頂端チャンバ及び基底チャンバに室温で２時間適用した。両方のチャンバを室温で２ｍＬのＰＢＳＴで２回洗浄し、ＰＢＳＴで希釈した二次抗体（頂端：１００μＬ、基底：５００μＬ）とともに２時間インキュベートした。二次抗体混合物は、１０％ＦＢＳを含むＰＢＳＴで希釈したＡｌｅｘａ－Ｆｌｕｏｒ ６４７標識抗マウス抗体（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ａ２８１８１、１：１，０００希釈）、Ａｌｅｘａ－Ｆｌｏｕｒ ４８８標識ストレプトアビジン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｓ３２３５７、１：１００希釈）及びＤＡＰＩ（ＧＥＮＥＴＥＸ ＧＴＸ１６２０６、１：１，０００希釈）を含有した。トランスウェルをＰＢＳＴで２回洗浄し、撮像のために６ウェルガラス底プレートに入れ、試料の乾燥を防ぐために各チャンバにＰＢＳを添加した。固定し、透過処理し、かつ染色した組織を、ＯＰＥＲＡ ＰＨＥＮＩＸ共焦点レーザー顕微鏡を用いて、２０倍の解像度（４０平面、１．６μｍのｚスライス）で撮像した。ＨＡＲＭＯＮＹスイートを使用して画像分析を実行し、蛍光読み出しを膜自己蛍光について補正し、各色チャネルについて平均蛍光強度によって正規化した。条件ごとに合計３回の別々の実験からの代表的な画像を報告した。
実施例２．抗ＰＩＧＲベースの二重特異性分子の調製
ｐＩｇＲ、及びＡＣＥ２への結合に必要な全ての残基を含むＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク糖タンパク質の受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）の両方に会合する二重特異性分子を生成するために（図２Ａ及び図２Ｂ）、以前に同定された約４～５００ｎＭの範囲の親和性でヒトｐＩｇＲを結合することができる重鎖のみ（ＶＨＨ）の抗体のパネルを使用した（Ｍａｒｕｔｈａｃｈａｌａｍ ｅｔ ａｌ．ＭＡｂｓ １２，１７０８０３０（２０２０））。これらのうち、ＶＨＨ２及びＶＨＨ６は、ＶＨＨ２がマウスｐＩｇＲに対して交差反応性を示し、両方ともＭＤＣＫ単層ベースのアッセイ及びヒト上皮気道モデルの両方において強いトランスサイトーシスを示したので、この分析に含めた。得られた配列を表１、２及び３に示す。
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク糖タンパク質への結合を媒介するために、中和活性を示すことが報告された２つの抗体－Ｄ００１（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌカタログ番号４０１５０－Ｄ００１）及びＳＡＤ－Ｓ３５（Ａｃｒｏ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓカタログ番号ＳＡＤ－Ｓ３５）を同定した。ＣＲ３０２２を結合についての陽性対照として含めたが、この抗体はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を中和しない。二重特異性分子を、ＶＨＨ２／６及びＡＣＥ２由来の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）を用いて生成した（図２Ａ～図２Ｅ、図３）。
ＡＣＥ２ ＥＣＤの２つのトランケーションを使用した。残基１８－６１１及び１８－７２５は、天然シグナルペプチドの直後から始まる（図２Ｃ及び図２Ｄ）。短い短縮は、ＡＣＥ２（ＰＤＢ ＩＤ １Ｒ４２）の結晶構造の分析に基づいており、これは、両方の構築物が安定な分子を形成することができることを示唆した（Ｔｏｗｌｅｒ，Ｐ．ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７９，１７９９６－１８００７（２００４））。ＡＣＥ２ ＥＣＤはＦｃのＮ又はＣ末端のいずれかに結合されたが、抗ｐＩｇＲ ＶＨＨ部分は、ヒト血清中の予め形成された抗体との結合を回避するために、二官能性分子のＮ末端上でのみ構成された（Ｒｏｓｓｏｔｔｉ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．ＦＥＢＳ Ｊ，１５８０９（２０２１））。全ての分子は、ヒトＩｇＧ１ベースの定常領域を特徴とした。
実施例３．抗ｐＩｇＲ／抗ＡＣＥ２二重特異性分子のｐＩｇＲ及びスパイク糖タンパク質への結合特性
ＡＣＥ２１８－６１１、ＡＣＥ２１８－７２５の結合部分を有する全ての分子は、ＣＲ３０２２、Ｄ００１及びＳＡＤ－Ｓ３５を含めて、ＣＯＶＩＤ－１９ ＲＢＤへの結合を示した（Ｔａｎ，Ｘ．ｅｔ ａｌ．ｂｉｏＲｘｉｖ，（２０２０））（図４Ａ～図４Ｂ）。ＣＲ３０２２は、ＫＤ＝１１５ｎＭでＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク糖タンパク質を結合することが報告された（Ｙｕａｎ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ ３６８，６３０－６３３，（２０２０））。表面バイオレイヤー干渉法に基づく相対ＫＤ値を本明細書で報告する（表４）。
ＣＲ３０２２は、スパイク糖タンパク質に対して最も高い見かけの親和性で結合し、２つの中和ｍＡｂ（Ｄ００１及びＳＡＤ－Ｓ３５）は、約１２倍弱く結合した（表４）。
ＶＨＨ－ＡＣＥ２－Ｆｃ構造を特徴とする二重特異性分子（ＣＶ１９Ｂ２６５、ＣＶ１９Ｂ２７７、ＣＶ１９Ｂ２８３、及びＣＶ１９Ｂ２８９）は、各々Ｄ００１及びＳＡＤ－Ｓ３５よりも約２～３倍弱い同様の親和性でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク糖タンパク質に結合した。マウスＥＧＦＲに対して標的化された陰性対照ＶＨＨを特徴とする２つの分子（ＣＶ１９Ｂ２６５及びＣＶ１９Ｂ２８９）は、ｍＡｂ及びＶＨＨ２を特徴とする二官能性分子（ＣＶ１９Ｂ２７７及びＣＶ１９Ｂ２８３）よりも約５倍速い結合オフ速度を示した。ＦｃのＣ末端に結合したＡＣＥ２ ＥＣＤを特徴とする二重特異性分子（ＣＶ１９Ｂ２９０、ＣＶ１９Ｂ３０１、ＣＶ１９Ｂ３０７、及びＣＶ１９Ｂ３０８）は、スパイク糖タンパク質に対して広範囲の親和性を示した。ＣＶ１９Ｂ２９０は、ＡＣＥ２の短い短縮を特徴とし、最も弱い結合を示した。
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２バリアントの出現により、中和モノクローナル抗体が活性を保持するか否かという疑問が生じたが（Ｋｏｒｂｅｒ，Ｂ．ｅｔ ａｌ．Ｌａｎｃｅｔ Ｒｅｓｐｉｒ Ｍｅｄ ８，１１５４－１１５８，（２０２０）、Ｓｔａｒｒ，Ｔ．Ｎ．ｅｔ ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ ３７１，８５０－８５４，（２０２１））、一方、組換えＡＣＥ２は、ＡＣＥ２がＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の天然受容体であるため、全てのバリアントを効果的に中和すると予想される。したがって、ＡＣＥ２二官能性分子がＹ４３５Ｆ、Ｎ４３９Ｋ、Ｎ５０１Ｙ、及びＤ６１４Ｇバリアントに結合する能力を試験したが、これはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の感染性の増加に関連し、いくつかのモノクローナル抗体による中和を防止することができる（Ｓｔａｒｒ，Ｔ．Ｎ．ｅｔ ａｌ．ｂｉｏＲｘｉｖ，（２０２０））。例えば、Ｎ４３９における変異は、ＲＥＧＮ－ＣＯＶ２との相互作用を調節することが示されており、したがって、中和のための重要なエピトープの一部を表す可能性が高い（Ｓｔａｒｒ，Ｔ．Ｎ．ｅｔ ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ ３７１，８５０－８５４，（２０２１））。ここで試験した全ての分子は、野生型スパイク糖タンパク質と同様の、スパイク糖タンパク質バリアントＹ４３５Ｆ、Ｎ４３９Ｋ、及びＮ５０１Ｙへの定性的に類似した結合を示した。（図４Ａ～図４Ｂ）。Ｄ６１４Ｇ変異は、スパイク糖タンパクの「閉じた」構造を安定化し、ＡＣＥ２のスパイク糖タンパクへの結合能力を低下させることが示された（Ｊｕｒａｓｚｅｋ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ Ｃｏｍｍｕｎ １２，２４４，（２０２１））。一貫して、ＡＣＥ２二官能性分子及びｍＡｂはいずれも、Ｄ６１４Ｇバリアントへの結合において中程度の減少を示した。興味深いことに、１つの二官能性分子であるＣＶ１９Ｂ３０７は、Ｄ６１４Ｇバリアントを含む全てのバリアントを結合する同様の能力を示した。
ヌルＶＨＨを特徴とする全てのｍＡｂ及び二重特異性分子（ＣＶ１９Ｂ２６５、ＣＶ１９Ｂ２８９、及びＣＶ１９Ｂ２９０）は、予想通り、ｐＩｇＲを結合しなかった（図４Ａ～図４Ｂ及び表４）。ＶＨＨ２を含有する二重特異性分子（ＣＶ１９Ｂ２８３、ＣＶ１９Ｂ３０７、及びＣＶ１９Ｂ３０８）は、約５ｎＭのＫＤ値でｐＩｇＲに結合し、これは本発明者らの以前の知見と一致した（Ｍａｒｕｔｈａｃｈａｌａｍ ｅｔ ａｌ．ＭＡｂｓ １２，１７０８０３０，（２０２０））。ＶＨＨ６を含有する二重特異性分子（ＣＶ１９Ｂ２７７及びＣＶ１９Ｂ３０１）は、それぞれＫｄ約０．２μＭ及び２６５ｎＭで結合した。
実施例４．抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２活性及び設計依存性ＡＤＣＣ活性を示す抗ｐＩｇＲ／抗ＡＣＥ２二重特異性分子
分子を、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質とＡＣＥ２との間の結合と競合するそれらの能力について、以前の報告から改変されたＭＳＤベースの代理中和アッセイを使用して試験した（図５Ａ、図７及び表５）（Ｔａｎ，Ｃ．Ｗ．ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ ３８，１０７３－１０７８，（２０２０））。このイムノアッセイに基づく代理中和アッセイは、感染性に基づく中和アッセイとの良好な相関を示した。Ｄ００１は、ＩＣ５０＝０．２ｎＭで阻害活性を示したが、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を中和する能力を欠くことが既知である抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ抗体であるＣＲ３０２２（Ｈｕｏ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．Ｃｅｌｌ Ｈｏｓｔ Ｍｉｃｒｏｂｅ，（２０２０）、ｔｅｒ Ｍｅｕｌｅｎ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．ＰＬｏＳ Ｍｅｄ ３，（２００６））は、競合できなかった。ＡＣＥ２ ＥＣＤを特徴とする全ての二重特異性分子は、１～３ｎＭの範囲のＩＣ５０を有し、Ｄ００１の活性の４～１０倍以内の最大活性を有する代理中和能力を示した。
したがって、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質との競合は、ＡＣＥ２部分を特徴とする全ての二重特異性分子に普遍的であるようであった。二重特異性分子は、粘膜上皮細胞上のｐＩｇＲを標的とし、上皮層全体にわたって同時にトランスサイトーシスするように設計した。しかしながら、活性Ｆｃ領域を特徴とする抗体によるｐＩｇＲの標的化により、上皮細胞に対する抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を誘導するリスクが生じ、結果として、潜在的な望ましくない毒性をもたらした。ｐＩｇＲ発現ＭＤＣＫ細胞に対する、ＰＢＭＣによりＡＤＣＣを媒介する二重特異性分子の能力を評価した（図５Ｂ）。ＰＢＭＣ試料は、約７％のＣＤ１９＋Ｂ細胞、６０％のＣＤ３＋Ｔ細胞、及び６％のＣＤ５６＋、ＣＤ１６＋ＮＫ細胞から構成された（図６Ａ～図６Ｃ）。各二重特異性分子は、Ｆｃγ受容体との相互作用を破壊するためにＦｃをＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＤ２６５Ｓで変異させた、活性Ｆｃ領域及び「サイレント」Ｆｃ領域の両方上で構成した（Ｓａｕｎｄｅｒｓ，Ｋ．Ｏ．Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ １０，１２９６，（２０１９））。ＡＣＥ２ ＥＣＤ及び非結合対照ＶＨＨを有する２つの対照分子は、ＡＤＣＣを媒介することができなかった。サイレントＦｃ上の抗ｐＩｇＲ ＶＨＨ部分を特徴とする二重特異性分子もまた、ＮＫ細胞上のＦｃγ受容体を結合できないため、ＡＤＣＣを媒介できなかった。興味深いことに、活性Ｆｃを有する二重特異性分子のうち、ＶＨＨがＦｃのＮ末端上のＡＣＥ２ ＥＣＤとタンデムに融合したもののみが弱いＡＤＣＣ活性を示した（ＣＶ１９Ｂ２７７及びＣＶ１９Ｂ２８３）。抗ｐＩｇＲ ＶＨＨをＦｃのＮ末端上に、ＦｃのＡＣＥ２ ＥＣＤ Ｃ末端と融合させた他の二重特異性分子（ＣＶ１９Ｂ３０１及びＣＶ１９Ｂ３０７）は、ＭＤＣＫ細胞上のｐＩｇＲを結合し、活性Ｆｃを有するにもかかわらず、ＡＤＣＣを媒介することができなかった。これは、Ｃ末端ＡＣＥ２ ＥＣＤの存在がＡＤＣＣを阻害すること、又はこの構造によりトランスサイトーシス速度がＦｃγ受容体会合の結合速度を超えることができることを示唆した。
実施例５．血清クリアランス及び粘膜濃縮をもたらすｐＩｇＲ会合
抗ｐＩｇＲ ＶＨＨモジュールは、両ＭＤＣＫ細胞二重層全体にわたるトランスサイトーシス及びヒト上皮微小組織モデルにおけるトランスサイトーシスを媒介することができ（Ｍａｒｕｔｈａｃｈａｌａｍ ｅｔ ａｌ．ＭＡｂｓ １２，１７０８０３０（２０２０））、したがって、このｐＩｇＲ媒介トランスサイトーシスがインビボで起こり得るかどうかを評価した。ＶＨＨ２、ＶＨＨ３及びＶＨＨ６を、Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおける一価又は二価形式のいずれかでの薬物動態分析のために選択した（図８及び表６）。
ＶＨＨ２及びＶＨＨ６を二重特異性分子において使用したが、マウスｐＩｇＲと交差反応する能力があるため、ＶＨＨ２及びＶＨＨ３をマウス研究用に選択した。予想通り、一価ＶＨＨ６は、ヌルＶＨＨ－Ｆｃの血清半減期（Ｔ１／２：約８．２日）と一致する約８．２日の血清半減期を示した。逆に、マウスｐＩｇＲ交差反応性ＶＨＨ２及びＶＨＨ３モジュールの単一コピーを有する分子は、迅速な血清クリアランスを示し、Ｔ１／２はそれぞれ約３．２日及び６日であった。これらのモジュールの二価バージョンは、更により速い血清クリアランスを示し、Ｔ１／２値はそれぞれ０．５５日及び３．６日であった。ＶＨＨ２ベースの分子は、ｐＩｇＲに対して類似の親和性を有するにもかかわらず、ＶＨＨ３ベースの分子よりも迅速に除去された。
ＥＰＩＡＩＲＷＡＹ ３Ｄモデル（ＭａｔＴＥＫ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）、初代ヒト気管・気管支細胞から操作された、確立された肺組織モデルを使用して、抗ｐＩｇＲ ＶＨＨ－Ｆｃ分子の粘膜内腔へのトランスサイトーシス活性を試験した（図９Ａ）。予想通り、ｐＩｇＲを結合しないヌルＶＨＨを特徴とする二重特異性分子は、効果的にトランスサイトーシスしなかった（ＣＶ１９Ｂ２８９、ＣＶ１９Ｂ２９０、及びＣＶ１９Ｂ２６５）。逆に、ｐＩｇＲを結合することができる二重特異性分子は、より高い内腔ＭＳＤシグナルを示し、より高いトランスサイトーシスを示した。実際、粘膜抽出物からのタンパク質回収は、共焦点撮像によって示されるように、活発な交差組織輸送を介して生じるようであった（図９Ｂ及び図９Ｃ）。２４時間目でのｐＩｇＲ及び抗ＶＨＨの両方についての染色は、ＣＶ１９Ｂ３０７（ＶＨＨ２）が組織全体に局在化したのに対し、ＣＶ１９Ｂ２９０（ヌルＶＨＨ）は組織を通してトランスサイトーシスすることが全くできなかったことを示した。
興味深いことに、抗ｐＩｇＲ ＶＨＨドメインがＦｃのＮ末端に直接融合した二重特異性分子（ＣＶ１９Ｂ３０１、ＣＶ１９Ｂ３０７、及びＣＶ１９Ｂ３０８）は、抗ｐＩｇＲ ＶＨＨがＦｃのＮ末端上のＡＣＥ２ ＥＣＤとタンデムに融合した二重特異性分子（ＣＶ１９Ｂ２７７及びＣＶ１９Ｂ２８３）よりも効果的にトランスサイトーシスするようであった。ＣＶ１９Ｂ３０１及びＣＶ１９Ｂ３０７の場合、ヌルＶＨＨを特徴とする二重特異性分子についての約０．３％、又は粘膜における約１６倍の濃縮と比較して、総タンパク質の約６％が粘膜毛様体環境において回収された。基底チャンバに保持されたタンパク質の量は測定されなかったが、大量の二重特異性分子が組織空間内に保持され、粘膜抽出物から回収することができず、この分子は最終的には粘膜分泌の運命にあった（図９Ｂ）。より短いＡＣＥ２断片（ＣＶ１９Ｂ３０８）を特徴とする二重特異性分子はいくらか弱いトランスサイトーシスを示したが、抗ｐＩｇＲ ＶＨＨの結合親和性がトランスサイトーシスに及ぼす影響はより少なかった。トランスサイトーシス能力に基づいて、２つの最も最適な二重特異性分子は、ＣＤ１９Ｂ２６５（ヌルＶＨＨ）と比較して＞１６倍の粘膜濃縮を有するＣＶ１９Ｂ３０１及びＣＶ１９Ｂ３０７であった。
当業者は、広い発明概念から逸脱することなく、上で説明される実施形態に変更を行うことができることを理解するであろう。したがって、本発明は、開示された特定の実施形態に制限されず、本説明によって定義されるように本発明の趣旨及び範囲内の修正を包含することを意図するものと理解される。
「背景技術」において、また、本明細書全体を通じて各種刊行物、論文及び特許を引用又は記載し、これら参照文献の各々はその全容が参照により本明細書に組み込まれる。本明細書に含まれる文書、操作、材料、デバイス、物品などの考察は、本発明のコンテキストを与えるためのものである。かかる考察は、これらの事物のいずれか又は全てが、開示又は特許請求されるいずれかの発明に対する先行技術の一部を構成することを容認するものではない。

Claims (36)

  1. （ａ）高分子免疫グロブリン受容体（ｐＩｇＲ）に特異的に結合する第１の結合ドメインと、（ｂ）ｐＩｇＲではない第２の標的に特異的に結合する第２の結合ドメインと、を含む、多重特異性分子であって、
    任意選択で、前記第２の標的が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２である、
    前記多重特異性分子。
  2. 前記分子が、二重特異性分子である、請求項１に記載の分子。
  3. 前記第２の結合ドメインが、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の表面に特異的に結合し、
    任意選択で、前記第２の結合ドメインが、前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の表面上のスパイク糖タンパク質に特異的に結合し、
    任意選択で、前記第２の結合ドメインが、前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の表面上の前記スパイク糖タンパク質のＳ１サブユニットに特異的に結合する、
    請求項１又は２に記載の分子。
  4. 前記第２の結合ドメインが、
    （ａ）アンジオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ２）であって、
    任意選択で、配列番号１９４のアミノ酸配列を含む、前記アンジオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ２）、
    （ｂ）ＡＣＥ２の細胞外ドメインであって、
    任意選択で、配列番号１３４のアミノ酸配列を含む、前記ＡＣＥ２の細胞外ドメイン、又は
    （ｃ）ＡＣＥ２の短縮型細胞外ドメインであって、
    任意選択で、配列番号１２０のアミノ酸配列を含むか、若しくは、配列番号１２１のアミノ酸配列を含む、前記ＡＣＥ２の短縮型細胞外ドメイン
    を含む、請求項１～３のいずれか一項に記載の分子。
  5. 前記第１の結合ドメインが、単一ドメイン分子（ＶＨＨ）を含む、請求項１～４のいずれか一項に記載の分子。
  6. 前記ＶＨＨが、
    （ａ）配列番号１のアミノ酸配列を有する相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含み、更に、配列番号１６のアミノ酸配列を含むか、又は
    （ｂ）配列番号１７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号１８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び配列番号１９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含み、更に、配列番号３２のアミノ酸配列を含む、
    請求項５に記載の分子。
  7. 前記第１の結合ドメインが、粘膜内皮上に存在するｐＩｇＲに特異的に結合し、
    任意選択で、前記第１の結合ドメインが、肺粘膜内皮上に存在するｐＩｇＲに特異的に結合する、
    請求項１～６のいずれか一項に記載の分子。
  8. 前記分子が前記ｐＩｇＲに、及びＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に特異的に結合すると、前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２が中和される、請求項１～７のいずれか一項に記載の分子。
  9. 前記分子が、（ａ）約４ｎＭ未満、（ｂ）約３ｎＭ未満、（ｃ）約１ｎＭ未満、（ｄ）約５００ｐＭ未満、又は（ｅ）約１００ｐＭ未満のＥＣ５０でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を中和した、請求項８に記載の分子。
  10. 粘膜内皮上のｐＩｇＲを結合することができる第１の手段と、ｐＩｇＲではない第２の標的を結合することができる第２の手段とを含む、分子。
  11. 前記第２の標的が、第２の細胞の表面上又はウイルスの表面上にある、請求項１０に記載の分子。
  12. 粘膜内皮上のｐＩｇＲを結合することができる第１の手段と、第２の細胞の表面上又はウイルスの表面上の第２の標的を結合することができる第２の手段とを含む、分子。
  13. 前記第２の手段が、前記ウイルスの表面上の第２の標的を結合することができる、請求項１２に記載の分子。
  14. 前記ウイルスが、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２である、請求項１３に記載の分子。
  15. 請求項１～１４のいずれか一項に記載の分子をコードする、核酸。
  16. 請求項１５に記載の核酸を含む、ベクター。
  17. 請求項１６に記載のベクターを含む、宿主細胞。
  18. 請求項１６に記載のベクターと、そのためのパッケージとを含む、キット。
  19. 請求項１～１４のいずれか一項に記載の分子と、医薬的に許容される担体とを含む、医薬組成物。
  20. 請求項１～１４のいずれか一項に記載の分子を送達するための手段と、医薬的に許容される担体とを含む、医薬組成物。
  21. 請求項１９又は２０に記載の医薬組成物を製造する方法であって、前記分子を医薬的に許容される担体と組み合わせて、前記医薬組成物を得ることを含む、前記方法。
  22. 第２の標的を発現する標的細胞の宿主細胞侵入又は増殖を阻害する方法であって、前記方法が、前記標的細胞を請求項１～１４のいずれか一項に記載の分子と接触させることを含み、前記標的細胞を前記分子と接触させることにより、前記標的細胞の宿主細胞侵入又は増殖が阻害され、
    任意選択で、前記第２の標的が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２である、
    前記方法。
  23. 対象において第２の標的を発現する標的細胞を排除するための方法であって、有効量の請求項１～１４のいずれか一項に記載の分子を前記対象に投与することを含み、
    任意選択で、前記第２の標的が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２である、
    前記方法。
  24. 前記対象が、ＣＯＶＩＤ－１９を有する、請求項２３に記載の方法。
  25. 対象において第２の標的を発現する細胞によって全て又は一部が引き起こされる疾患を治療する方法であって、有効量の請求項１～１４のいずれか一項に記載の分子を前記対象に投与することを含み、
    任意選択で、前記第２の標的が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２である、
    前記方法。
  26. 前記疾患が、ＣＯＶＩＤ－１９である、請求項２５に記載の方法。
  27. 前記対象が、その治療を必要としている対象であり、
    任意選択で、前記対象が、ヒトである、
    請求項２３～２６のいずれか一項に記載の方法。
  28. ｐＩｇＲに特異的に結合する第１の結合ドメイン及びｐＩｇＲではない第２の標的に特異的に結合する第２の結合ドメインを提供するための手段を含む、システムであって、任意選択で、前記第２の標的が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２である、前記システム。
  29. ２つ以上の標的分子に特異的に結合する分子を作製するためのプロセスであって、
    粘膜内皮上のｐＩｇＲに結合することができる結合ドメインを得る機能を実行するためのステップと、
    第２の細胞又はウイルス上の第２の標的に結合することができる結合ドメインを得る機能を実行するためのステップと、
    粘膜内皮上のｐＩｇＲ抗原及び第２の細胞又はウイルス上の第２の標的に結合することができる分子を提供する機能を実行するためのステップと
    を含む、前記プロセス。
  30. 前記第２の標的に結合することができる結合ドメインを得る機能を実行するためのステップが、ｎ回繰り返され、粘膜内皮上のｐＩｇＲ及びｎ個の標的分子に結合することができる結合ドメインを提供する機能を実行するためのｎ個のステップを更に含み、ｎが、少なくとも２である、請求項２９に記載のプロセス。
  31. 前記第２の標的が、前記第２の細胞の表面上にある、請求項２９又は３０に記載のプロセス。
  32. 前記第２の標的が、ウイルスの表面上にある、請求項２９又は３０に記載のプロセス。
  33. 前記ウイルスが、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２である、請求項３２に記載のプロセス。
  34. 前記第１の結合ドメインが、（ａ）ｐＩｇＲ抗原、又は（ｂ）ｐＩｇＲエピトープを特異的に結合する、請求項２９～３３のいずれか一項に記載のプロセス。
  35. 前記第２の結合ドメインが、（ａ）前記第２の標的の抗原、又は（ｂ）前記第２の標的のエピトープを特異的に結合する、請求項２９～３４のいずれか一項に記載のプロセス。
  36. 本明細書に実質的に記載されるとおりの、分子、組成物、調製物、方法、使用、プロセス、又はシステム。
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