JP2023533452A - 動脈瘤を処置するための求電子化合物および求電子プロドラッグ - Google Patents

Abstract

治療有効量の（ｉ）ニトロアルケン脂肪酸、（ｉｉ）電子求引基、脱離基、および電子求引基と脱離基との間に配置された炭素－炭素二重結合を有する不飽和脂肪酸、（ｉｉｉ）チオール化ニトロ脂肪酸、（ｉｖ）電子求引基を含むジカルボン酸化合物、または（ｉ）～（ｉｖ）のうちの少なくとも２つの混合物から選択される化合物を、動脈瘤を有する、動脈瘤を有する疑いがある、または動脈瘤を発症するリスクがある対象に投与することを含む方法。

Description

関連出願の相互参照
本願は、参照により本明細書に組み込まれる、２０２０年６月２３日に出願された米国仮特許出願第６３／０４２，７０７号の利益を主張する。

政府支援の認定
本発明は、国立衛生研究所によって与えられた助成金番号ＨＬ０６８８７８；ＨＬ１３８１３９；ＨＬ０６４９３７；ＤＫ１１２８５４；ＧＭ１２５９４４；ＨＬ１３２５５０；およびＨＬ１０３４５５の下で政府支援を受けてなされた。政府は、本発明における一定の権利を有する。

背景
腹部大動脈瘤（ＡＡＡ）は、その標準的なサイズを超える（≧３０ｍｍまたは１．５倍）腹部大動脈の拡大を特徴としており、その広範な有病率、高い死亡率、および有効な処置の欠如のために、主要な医学的懸念事項である。６５歳～７５歳の間の高リスク男性において予防的スクリーニングを通してＡＡＡ関連死亡率を低下させることに成功したにもかかわらず、開腹手術および血管内手術が依然として利用可能な唯一の処置であり、外科的修復に適格なＡＡＡ患者の割合はごくわずかである。さらに、いずれかの手術を受けている患者のリスクがないわけではない。開腹手術は周術期死亡率の比較的高いリスクを伴うが、今日広く使用されている血管内修復もまた、術後漏出の可能性を高めており、代替治療戦略の緊急の必要性を残している。血管炎症、マクロファージ浸潤、酸化ストレス、および細胞外マトリックス分解がＡＡＡの病理学的特徴として広く受け入れられているが、それらの直接的な原因的役割および進行と後期疾患転帰の両方への寄与は明確に定義されていない。ＡＡＡのある特定の個々のファセットを標的とするいくつかの薬理学的薬剤は前臨床研究において有望であるように見えたが、おそらくＡＡＡの複雑な病態生理学的性質のために、ＡＡＡの臨床状況における有益な転帰への効力は現在のところ明らかではない。

概要
治療有効量の（ｉ）ニトロアルケン脂肪酸、（ｉｉ）電子求引基、脱離基、および電子求引基と脱離基との間に配置された炭素－炭素二重結合を有する不飽和脂肪酸、（ｉｉｉ）チオール化ニトロ脂肪酸、（ｉｖ）求電子性を誘導する二重結合上の電子求引基を含むジカルボン酸化合物、または（ｉ）～（ｉｖ）のうちの少なくとも２つの混合物から選択される化合物を、動脈瘤を有する、動脈瘤を有する疑いがある、または動脈瘤を発症するリスクがある対象に投与することを含む方法が本明細書に開示される。

上記のことは、添付の図面を参照して進行する以下の詳細な説明からより明らかになるであろう。

Ａｎｇ ＩＩ＋高コレステロール血症誘発ＡＡＡマウスモデルにおけるＮＯ_２－ＯＡ（１０－ニトロ－オクタデカ－９－エン酸）の保護効果の特性評価。（Ａ）インビボ実験設計の概略図。１０週齢の雄Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、ＰＣＳＫ９機能獲得型（Ｄ３７７Ｙ）変異を有するＡＡＶをＩＰ注射し、西洋型飼料を与えた。２週間後、各マウスに、１５００ｎｇ／ｋｇ／分の速度でＡｎｇＩＩを送達するポンプと５ｍｇ／ｋｇ／日の送達速度でＰＥＧ－４００（ビヒクル）、ＯＡまたはＮＯ_２－ＯＡのいずれかを含有する追加のポンプを埋め込み（１群当たりｎ＝２５～３０）、さらに４週間エンドポイントに運んだ。最初の１週間以内に大動脈が破裂したか、または総血漿コレステロールが２５０ｍｇ／ｄｌ未満であるマウスを試験から除外した。（Ｂ）腹部大動脈の代表的な形態学的差異。（Ｃ）（Ｄ）の点線によって示されるカットオフ直径として１．２ｍｍを使用することによって計算されたＡＡＡ発生率。（Ｄ）腎上大動脈領域の平均最大直径。（Ｅ）パラフィン包埋腎上大動脈断面（５μｍ）の代表的なＨ＆ＥおよびＶＶＧ染色。（Ｆ）大動脈における弾性線維分解のグレード（１～４）。（Ｃ）については、２×３のフィッシャーの正確確率検定、引き続いて事後検定を実施した。（Ｄ）および（Ｆ）については、クラスカル・ウォリス検定、引き続いてダンの多重比較を実施した。連続データを平均±ＳＥＭとして提供する。（Ｅ）についてのスケールバー＝２０μｍ。主検定と事後検定の両方についてｐ＜０．０５を統計学的に有意とみなした。 Ａｎｇ ＩＩ＋高コレステロール血症誘発ＡＡＡマウスモデルにおけるＮＯ_２－ＯＡ（１０－ニトロ－オクタデカ－９－エン酸）の保護効果の特性評価。（Ａ）インビボ実験設計の概略図。１０週齢の雄Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、ＰＣＳＫ９機能獲得型（Ｄ３７７Ｙ）変異を有するＡＡＶをＩＰ注射し、西洋型飼料を与えた。２週間後、各マウスに、１５００ｎｇ／ｋｇ／分の速度でＡｎｇＩＩを送達するポンプと５ｍｇ／ｋｇ／日の送達速度でＰＥＧ－４００（ビヒクル）、ＯＡまたはＮＯ_２－ＯＡのいずれかを含有する追加のポンプを埋め込み（１群当たりｎ＝２５～３０）、さらに４週間エンドポイントに運んだ。最初の１週間以内に大動脈が破裂したか、または総血漿コレステロールが２５０ｍｇ／ｄｌ未満であるマウスを試験から除外した。（Ｂ）腹部大動脈の代表的な形態学的差異。（Ｃ）（Ｄ）の点線によって示されるカットオフ直径として１．２ｍｍを使用することによって計算されたＡＡＡ発生率。（Ｄ）腎上大動脈領域の平均最大直径。（Ｅ）パラフィン包埋腎上大動脈断面（５μｍ）の代表的なＨ＆ＥおよびＶＶＧ染色。（Ｆ）大動脈における弾性線維分解のグレード（１～４）。（Ｃ）については、２×３のフィッシャーの正確確率検定、引き続いて事後検定を実施した。（Ｄ）および（Ｆ）については、クラスカル・ウォリス検定、引き続いてダンの多重比較を実施した。連続データを平均±ＳＥＭとして提供する。（Ｅ）についてのスケールバー＝２０μｍ。主検定と事後検定の両方についてｐ＜０．０５を統計学的に有意とみなした。 Ａｎｇ ＩＩ＋高コレステロール血症誘発ＡＡＡマウスモデルにおけるＮＯ_２－ＯＡ（１０－ニトロ－オクタデカ－９－エン酸）の保護効果の特性評価。（Ａ）インビボ実験設計の概略図。１０週齢の雄Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、ＰＣＳＫ９機能獲得型（Ｄ３７７Ｙ）変異を有するＡＡＶをＩＰ注射し、西洋型飼料を与えた。２週間後、各マウスに、１５００ｎｇ／ｋｇ／分の速度でＡｎｇＩＩを送達するポンプと５ｍｇ／ｋｇ／日の送達速度でＰＥＧ－４００（ビヒクル）、ＯＡまたはＮＯ_２－ＯＡのいずれかを含有する追加のポンプを埋め込み（１群当たりｎ＝２５～３０）、さらに４週間エンドポイントに運んだ。最初の１週間以内に大動脈が破裂したか、または総血漿コレステロールが２５０ｍｇ／ｄｌ未満であるマウスを試験から除外した。（Ｂ）腹部大動脈の代表的な形態学的差異。（Ｃ）（Ｄ）の点線によって示されるカットオフ直径として１．２ｍｍを使用することによって計算されたＡＡＡ発生率。（Ｄ）腎上大動脈領域の平均最大直径。（Ｅ）パラフィン包埋腎上大動脈断面（５μｍ）の代表的なＨ＆ＥおよびＶＶＧ染色。（Ｆ）大動脈における弾性線維分解のグレード（１～４）。（Ｃ）については、２×３のフィッシャーの正確確率検定、引き続いて事後検定を実施した。（Ｄ）および（Ｆ）については、クラスカル・ウォリス検定、引き続いてダンの多重比較を実施した。連続データを平均±ＳＥＭとして提供する。（Ｅ）についてのスケールバー＝２０μｍ。主検定と事後検定の両方についてｐ＜０．０５を統計学的に有意とみなした。

ＮＯ_２－ＯＡ処置は、脈管構造における白血球／マクロファージ浸潤を抑制した。（Ａ）リアルタイムＰＣＲによるマウス腎上大動脈領域における遺伝子発現レベルの定量化（ｎ＝３～４）。（Ｂ、Ｃ）ＥＬＩＳＡによって測定された血清サイトカインレベル（ｎ＝８～１１）。（Ｄ）マウス腎上大動脈領域から単離された単一細胞のＦＡＣＳ。各試料は、３匹のマウス由来の細胞のプールである（ｎ＝３）。（Ｅ、Ｆ）ＦＡＣＳ分析からの全細胞中のＣＤ４５＋白血球およびＣＤ６４＋、ＣＤ１１ｃ＋Ｍ１様マクロファージのパーセンテージの定量化。（Ａ）、（Ｅ）および（Ｆ）については、通常の一元配置ＡＮＯＶＡ、引き続いてテューキー検定を実施した。（Ｂ）および（Ｃ）のＥＬＩＳＡについては、非検出データ点の影響を回避するために、ノンパラメトリッククラスカル・ウォリス検定、引き続いてダンの多重比較を、欠落したデータ点に０を加えることによって実施した。データを平均±ＳＥＭとして提供する。主検定と事後検定の両方についてｐ＜０．０５を統計学的に有意とみなした。 ＮＯ_２－ＯＡ処置は、脈管構造における白血球／マクロファージ浸潤を抑制した。（Ａ）リアルタイムＰＣＲによるマウス腎上大動脈領域における遺伝子発現レベルの定量化（ｎ＝３～４）。（Ｂ、Ｃ）ＥＬＩＳＡによって測定された血清サイトカインレベル（ｎ＝８～１１）。（Ｄ）マウス腎上大動脈領域から単離された単一細胞のＦＡＣＳ。各試料は、３匹のマウス由来の細胞のプールである（ｎ＝３）。（Ｅ、Ｆ）ＦＡＣＳ分析からの全細胞中のＣＤ４５＋白血球およびＣＤ６４＋、ＣＤ１１ｃ＋Ｍ１様マクロファージのパーセンテージの定量化。（Ａ）、（Ｅ）および（Ｆ）については、通常の一元配置ＡＮＯＶＡ、引き続いてテューキー検定を実施した。（Ｂ）および（Ｃ）のＥＬＩＳＡについては、非検出データ点の影響を回避するために、ノンパラメトリッククラスカル・ウォリス検定、引き続いてダンの多重比較を、欠落したデータ点に０を加えることによって実施した。データを平均±ＳＥＭとして提供する。主検定と事後検定の両方についてｐ＜０．０５を統計学的に有意とみなした。 ＮＯ_２－ＯＡ処置は、脈管構造における白血球／マクロファージ浸潤を抑制した。（Ａ）リアルタイムＰＣＲによるマウス腎上大動脈領域における遺伝子発現レベルの定量化（ｎ＝３～４）。（Ｂ、Ｃ）ＥＬＩＳＡによって測定された血清サイトカインレベル（ｎ＝８～１１）。（Ｄ）マウス腎上大動脈領域から単離された単一細胞のＦＡＣＳ。各試料は、３匹のマウス由来の細胞のプールである（ｎ＝３）。（Ｅ、Ｆ）ＦＡＣＳ分析からの全細胞中のＣＤ４５＋白血球およびＣＤ６４＋、ＣＤ１１ｃ＋Ｍ１様マクロファージのパーセンテージの定量化。（Ａ）、（Ｅ）および（Ｆ）については、通常の一元配置ＡＮＯＶＡ、引き続いてテューキー検定を実施した。（Ｂ）および（Ｃ）のＥＬＩＳＡについては、非検出データ点の影響を回避するために、ノンパラメトリッククラスカル・ウォリス検定、引き続いてダンの多重比較を、欠落したデータ点に０を加えることによって実施した。データを平均±ＳＥＭとして提供する。主検定と事後検定の両方についてｐ＜０．０５を統計学的に有意とみなした。

ＮＯ_２－ＯＡは、ｏｘＬＤＬ誘導ＮＦｋＢ活性化および炎症誘発性サイトカイン産生を予防する。初代ＢＭＤＭをビヒクル、ＯＡ（２．５μＭ）またはＮＯ_２－ＯＡ（２．５μＭ）で１時間前処置し、引き続いてｏｘＬＤＬ（５０～１００μｇ／ｍｌ）で指示される時間処置した。（Ａ、Ｂ）核（Ａ）画分および細胞質タンパク質（Ｂ）画分をｏｘＬＤＬ処置の１時間後に単離し、ｐ６５、ラミンａ／ｃ（核マーカー）およびＧＡＰＤＨ（サイトゾルマーカー）に対する抗体を用いたウエスタンブロットに供した。３つの独立した実験の代表的なウエスタンブロット画像を示す。（Ｃ）ｉｍａｇｅ ｓｔｕｄｉｏによるｐ６５核対細胞質比の定量化（内部対照によって正規化、ｎ＝３）。（Ｄ～Ｆ）８時間のｏｘＬＤＬ処置後、細胞培地中のＩＬ６、ＭＣＰ１およびＴＮＦαのレベルをＥＬＩＳＡによって測定した（ｎ＝４）。（Ｇ）ＢＭＤＭから抽出された全ｍＲＮＡ中のＩＬ１ｂおよびＭｍｐ９の遺伝子発現レベルのリアルタイムＰＣＲ定量化。（Ｃ）通常の一元配置ＡＮＯＶＡ、引き続いてテューキー検定を実施した。（Ｄ～Ｆ）のように、基本レベルはいくつかの検出不能な値を含むので、通常の一元配置ＡＮＯＶＡ、引き続いてＦＤＲの補正をｏｘＬＤＬ処置群についてのみ実施した。（Ｇ）については、通常の一元配置ＡＮＯＶＡ、引き続いてテューキー検定を実施した。データを平均±ＳＥＭとして提供する。主検定と事後検定の両方についてｐ＜０．０５を統計学的に有意とみなした。 ＮＯ_２－ＯＡは、ｏｘＬＤＬ誘導ＮＦｋＢ活性化および炎症誘発性サイトカイン産生を予防する。初代ＢＭＤＭをビヒクル、ＯＡ（２．５μＭ）またはＮＯ_２－ＯＡ（２．５μＭ）で１時間前処置し、引き続いてｏｘＬＤＬ（５０～１００μｇ／ｍｌ）で指示される時間処置した。（Ａ、Ｂ）核（Ａ）画分および細胞質タンパク質（Ｂ）画分をｏｘＬＤＬ処置の１時間後に単離し、ｐ６５、ラミンａ／ｃ（核マーカー）およびＧＡＰＤＨ（サイトゾルマーカー）に対する抗体を用いたウエスタンブロットに供した。３つの独立した実験の代表的なウエスタンブロット画像を示す。（Ｃ）ｉｍａｇｅ ｓｔｕｄｉｏによるｐ６５核対細胞質比の定量化（内部対照によって正規化、ｎ＝３）。（Ｄ～Ｆ）８時間のｏｘＬＤＬ処置後、細胞培地中のＩＬ６、ＭＣＰ１およびＴＮＦαのレベルをＥＬＩＳＡによって測定した（ｎ＝４）。（Ｇ）ＢＭＤＭから抽出された全ｍＲＮＡ中のＩＬ１ｂおよびＭｍｐ９の遺伝子発現レベルのリアルタイムＰＣＲ定量化。（Ｃ）通常の一元配置ＡＮＯＶＡ、引き続いてテューキー検定を実施した。（Ｄ～Ｆ）のように、基本レベルはいくつかの検出不能な値を含むので、通常の一元配置ＡＮＯＶＡ、引き続いてＦＤＲの補正をｏｘＬＤＬ処置群についてのみ実施した。（Ｇ）については、通常の一元配置ＡＮＯＶＡ、引き続いてテューキー検定を実施した。データを平均±ＳＥＭとして提供する。主検定と事後検定の両方についてｐ＜０．０５を統計学的に有意とみなした。 ＮＯ_２－ＯＡは、ｏｘＬＤＬ誘導ＮＦｋＢ活性化および炎症誘発性サイトカイン産生を予防する。初代ＢＭＤＭをビヒクル、ＯＡ（２．５μＭ）またはＮＯ_２－ＯＡ（２．５μＭ）で１時間前処置し、引き続いてｏｘＬＤＬ（５０～１００μｇ／ｍｌ）で指示される時間処置した。（Ａ、Ｂ）核（Ａ）画分および細胞質タンパク質（Ｂ）画分をｏｘＬＤＬ処置の１時間後に単離し、ｐ６５、ラミンａ／ｃ（核マーカー）およびＧＡＰＤＨ（サイトゾルマーカー）に対する抗体を用いたウエスタンブロットに供した。３つの独立した実験の代表的なウエスタンブロット画像を示す。（Ｃ）ｉｍａｇｅ ｓｔｕｄｉｏによるｐ６５核対細胞質比の定量化（内部対照によって正規化、ｎ＝３）。（Ｄ～Ｆ）８時間のｏｘＬＤＬ処置後、細胞培地中のＩＬ６、ＭＣＰ１およびＴＮＦαのレベルをＥＬＩＳＡによって測定した（ｎ＝４）。（Ｇ）ＢＭＤＭから抽出された全ｍＲＮＡ中のＩＬ１ｂおよびＭｍｐ９の遺伝子発現レベルのリアルタイムＰＣＲ定量化。（Ｃ）通常の一元配置ＡＮＯＶＡ、引き続いてテューキー検定を実施した。（Ｄ～Ｆ）のように、基本レベルはいくつかの検出不能な値を含むので、通常の一元配置ＡＮＯＶＡ、引き続いてＦＤＲの補正をｏｘＬＤＬ処置群についてのみ実施した。（Ｇ）については、通常の一元配置ＡＮＯＶＡ、引き続いてテューキー検定を実施した。データを平均±ＳＥＭとして提供する。主検定と事後検定の両方についてｐ＜０．０５を統計学的に有意とみなした。

ＮＯ_２－ＯＡはＰＧＥ２依存性ＥＰ４ ｃＡＭＰ下流シグナル伝達を阻害する。（Ａ）ＥＰ４グローバルフィッティング用量反応曲線の３パラメータ非線形回帰。ＳＥＡＰ－ＥＰ４レポーターを２９３Ｔ細胞において過剰発現させ、ＮＯ_２－ＯＡ誘導ＥＣ５０シフトを、アゴニストとしてＰＧＥ２を使用して計算した。（Ｂ）ｃＡＭＰ－Ｇ共役受容体のＨＴＲＦアッセイ。ＥＰ４を過剰発現する２９３Ｔ細胞における様々な用量のＮＯ２－ＯＡによるＰＧＥ２誘導ｃＡＭＰ動員（ＩＣ９０ １０ｎＭ）の阻害。（Ｃ）最高ランクスコアを有するＥＰ４受容体へのＮＯ２－ＯＡおよびＰＧＥ２の予測結合部位のモデリング。（Ｄ）ＭＭＰ ２／９活性を示すゼラチンザイモグラフィーの代表的な図。ＢＭＤＭをＬ－９０２，６８８（１００ｎＭ）＋ビヒクル、ＯＡ（２．５μＭ）またはＮＯ_２－ＯＡ（２．５μＭ）と１２時間インキュベートし、ＭＭＰ２および９活性をゼラチンザイモグラフィーによって測定した。（Ａ）および（Ｂ）については、３または４パラメータ、グローバルフィッティングまたは別個のフィッティング、制約、およびＥＣ５０の有意性をＰｒｉｓｍで決定した。データを平均±ＳＥＭとして提供する。ｐ＜０．０５を統計学的に有意とみなした。 ＮＯ_２－ＯＡはＰＧＥ２依存性ＥＰ４ ｃＡＭＰ下流シグナル伝達を阻害する。（Ａ）ＥＰ４グローバルフィッティング用量反応曲線の３パラメータ非線形回帰。ＳＥＡＰ－ＥＰ４レポーターを２９３Ｔ細胞において過剰発現させ、ＮＯ_２－ＯＡ誘導ＥＣ５０シフトを、アゴニストとしてＰＧＥ２を使用して計算した。（Ｂ）ｃＡＭＰ－Ｇ共役受容体のＨＴＲＦアッセイ。ＥＰ４を過剰発現する２９３Ｔ細胞における様々な用量のＮＯ２－ＯＡによるＰＧＥ２誘導ｃＡＭＰ動員（ＩＣ９０ １０ｎＭ）の阻害。（Ｃ）最高ランクスコアを有するＥＰ４受容体へのＮＯ２－ＯＡおよびＰＧＥ２の予測結合部位のモデリング。（Ｄ）ＭＭＰ ２／９活性を示すゼラチンザイモグラフィーの代表的な図。ＢＭＤＭをＬ－９０２，６８８（１００ｎＭ）＋ビヒクル、ＯＡ（２．５μＭ）またはＮＯ_２－ＯＡ（２．５μＭ）と１２時間インキュベートし、ＭＭＰ２および９活性をゼラチンザイモグラフィーによって測定した。（Ａ）および（Ｂ）については、３または４パラメータ、グローバルフィッティングまたは別個のフィッティング、制約、およびＥＣ５０の有意性をＰｒｉｓｍで決定した。データを平均±ＳＥＭとして提供する。ｐ＜０．０５を統計学的に有意とみなした。

試験の図による概要。

詳細な説明
用語
用語および方法の以下の説明は、本化合物、組成物および方法をより良く説明するため、ならびに本開示の実施において当業者を導くために提供される。本開示で使用される用語は、特定の実施形態および例を説明するためのものにすぎず、限定することを意図するものではないことも理解すべきである。

本明細書で使用される「投与」は、対象への別の人による投与または対象による自己投与を含む。

「アルケニル」は、炭素および水素のみを含有し、共役していてもしていなくてもよい１またはそれを超える二重結合を含有する環状、分岐または直鎖基を指す。アルケニル基は、非置換であっても置換されていてもよい。「低級アルケニル」基は、１～６個の炭素原子を含有する。

「アルキル」という用語は、メチル、エチル、ｎ－プロピル、イソプロピル、ｎ－ブチル、イソブチル、ｔ－ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、デシル、テトラデシル、ヘキサデシル、エイコシル、テトラコシルなどの分岐または非分岐飽和炭化水素基を指す。アルキル基は、１またはそれを超える水素原子がハロゲン、シクロアルキル、アルコキシ、アミノ、ヒドロキシル、アリール、アルケニル、またはカルボキシルなどの置換基で置換されている「置換アルキル」であり得る。例えば、低級アルキルすなわち（Ｃ_１～Ｃ_６）アルキルは、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソ－ブチル、ｓｅｃ－ブチル、ペンチル、３－ペンチル、またはヘキシルであり得；（Ｃ_３～Ｃ_６）シクロアルキルは、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、またはシクロヘキシルであり得；（Ｃ_３～Ｃ_６）シクロアルキル（Ｃ_１～Ｃ_６）アルキルは、シクロプロピルメチル、シクロブチルメチル、シクロペンチルメチル、シクロヘキシルメチル、２－シクロプロピルエチル、２－シクロブチルエチル、２－シクロペンチルエチル、または２－シクロヘキシルエチルであり得；（Ｃ_１～Ｃ_６）アルコキシは、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、イソ－ブトキシ、ｓｅｃ－ブトキシ、ペントキシ、３－ペントキシ、またはヘキシルオキシであり得；（Ｃ_２～Ｃ_６）アルケニルは、ビニル、アリル、１－プロペニル、２－プロペニル、１－ブテニル、２－ブテニル、３－ブテニル、１－ペンテニル、２－ペンテニル、３－ペンテニル、４－ペンテニル、１－ヘキセニル、２－ヘキセニル、３－ヘキセニル、４－ヘキセニル、または５－ヘキセニルであり得；（Ｃ_２～Ｃ_６）アルキニルは、エチニル、１－プロピニル、２－プロピニル、１－ブチニル、２－ブチニル、３－ブチニル、１－ペンチニル、２－ペンチニル、３－ペンチニル、４－ペンチニル、１－ヘキシニル、２－ヘキシニル、３－ヘキシニル、４－ヘキシニル、または５－ヘキシニルであり得；（Ｃ_１～Ｃ_６）アルカノイルは、アセチル、プロパノイルまたはブタノイルであり得；ハロ（Ｃ_１～Ｃ_６）アルキルは、ヨードメチル、ブロモメチル、クロロメチル、フルオロメチル、トリフルオロメチル、２－クロロエチル、２－フルオロエチル、２，２，２－トリフルオロエチル、またはペンタフルオロエチルであり得；ヒドロキシ（Ｃ_１～Ｃ_６）アルキルは、ヒドロキシメチル、１－ヒドロキシエチル、２－ヒドロキシエチル、１－ヒドロキシプロピル、２－ヒドロキシプロピル、３－ヒドロキシプロピル、１－ヒドロキシブチル、４－ヒドロキシブチル、１－ヒドロキシペンチル、５－ヒドロキシペンチル、１－ヒドロキシヘキシル、または６－ヒドロキシヘキシルであり得；（Ｃ_１～Ｃ_６）アルコキシカルボニルは、メトキシカルボニル、エトキシカルボニル、プロポキシカルボニル、イソプロポキシカルボニル、ブトキシカルボニル、ペントキシカルボニル、またはヘキシルオキシカルボニルであり得；（Ｃ_１～Ｃ_６）アルキルチオは、メチルチオ、エチルチオ、プロピルチオ、イソプロピルチオ、ブチルチオ、イソブチルチオ、ペンチルチオ、またはヘキシルチオであり得；（Ｃ_２～Ｃ_６）アルカノイルオキシは、アセトキシ、プロパノイルオキシ、ブタノイルオキシ、イソブタノイルオキシ、ペンタノイルオキシ、またはヘキサノイルオキシであり得る。

「アルキニル」は、炭素および水素のみ、ならびに１またはそれを超える三重結合を含有する環状、分岐または直鎖基を指す。アルキニル基は、非置換であっても置換されていてもよい。

「アミン」または「アミノ」という用語は、式－ＮＲＲ’（式中、ＲおよびＲ’は、独立して、水素またはアルキル、アルケニル、アルキニル、アシル、アリール、アラルキル、シクロアルキル、ハロゲン化アルキルもしくはヘテロシクロアルキル基であり得る）の基を指す。例えば、「アルキルアミノ」または「アルキル化アミノ」は、ＲまたはＲ’のうちの少なくとも１つがアルキルである－ＮＲＲ’を指す。適切なアミン基またはアミノ基はアセトアミドである。

「動物」は、生きている多細胞脊椎生物、例えば哺乳動物および鳥類を含むカテゴリーを指す。哺乳動物という用語は、ヒトと非ヒト哺乳動物の両方を含む。同様に、「対象」という用語は、鳥類および非ヒト哺乳動物、例えば非ヒト霊長類、コンパニオンアニマル（イヌおよびネコなど）、家畜（ブタ、ヒツジ、ウシなど）、ならびに大型の猫科動物などの非飼育動物を含む、ヒト対象と非ヒト対象の両方を含む。対象という用語は、生物のライフサイクルの段階にかかわらず適用される。よって、対象という用語は、生物（すなわち、生物が哺乳動物であるか鳥類、例えば飼い慣らされた鳥または野鳥であるか）に応じて、子宮内または卵内の生物に適用される。

本明細書で使用される場合、「アリール」は、単環式または多環式芳香族基、好ましくは単環式または二環式芳香族基、例えばフェニルまたはナフチルを指す。特に指示しない限り、アリール基は、非置換であっても、例えばハロ、アルキル、アルケニル、ＯＣＦ_３、ＮＯ_２、ＣＮ、ＯＨ、アルコキシ、アミノ、ＣＯ_２Ｈ、ＣＯ_２アルキル、アリール、およびヘテロアリールから独立して選択される１またはそれを超える、特に１～４つの基で置換されていてもよい。例示的なアリール基には、それだけに限らないが、フェニル、ナフチル、テトラヒドロナフチル、クロロフェニル、メチルフェニル、メトキシフェニル、トリフルオロメチルフェニル、ニトロフェニル、および２，４－メトキシクロロフェニルが含まれる。

「生物学的試料」という用語は、組織、細胞、細胞抽出物、またはホモジナイズされた組織抽出物を指す。

「同時投与」または「同時投与する」という用語は、同じ一般的な期間内での本明細書に開示される化合物と少なくとも１つの他の治療剤または治療の投与を指し、全く同じ瞬間での投与を必要としない（同時投与は全く同じ瞬間での投与を含むが）。よって、同時投与は、同じ日もしくは異なる日に、または同じ週もしくは異なる週に行われ得る。いくつかの実施形態では、２またはそれを超える薬剤または治療の同時投与が同時発生的である。他の実施形態では、第１の薬剤／治療が、第２の薬剤／治療の前に投与される。当業者であれば、使用される様々な薬剤または治療の製剤および／または投与経路が異なり得ることを理解する。同時投与のための適切な投与量は、当業者によって容易に決定され得る。いくつかの実施形態では、薬剤または治療が同時投与される場合、それぞれの薬剤または治療が、それらの単独投与に適切であるよりも低い投与量で投与される。よって、薬剤または治療の同時投与が潜在的に有害な（例えば、毒性）薬剤の必要投与量を低下させる、および／または潜在的に有害な（例えば、毒性）薬剤の投与頻度を低下させる実施形態では、同時投与が特に望ましい。「同時投与」または「同時投与する」は、２またはそれを超える活性薬剤を、両活性薬剤および／またはそれらの代謝産物が同時に対象に存在するように、対象に投与することを包含する。同時投与には、別々の組成物での同時投与、別々の組成物での異なる時間での投与、または２もしくはそれを超える活性薬剤が存在する組成物での投与が含まれる。同時投与はまた、第１の投与経路を介した第１の薬剤の送達および第２の投与経路を介した第２の薬剤の送達を包含し、第１の投与経路および第２の投与経路は同じである（例えば、共に経口）か、または異なる（例えば、第１は経口、第２は局所）。

「誘導体」という用語は、類似の化合物に由来する化合物、または１もしくはそれを超える原子が別の原子もしくは原子群で置き換えられている場合には別の化合物から生じると推測され得る化合物を指す。

「ハロアルキル」という用語は、Ｃ_１～Ｃ_８アルキル基中の１またはそれを超える水素原子が、同じであっても異なっていてもよいハロゲン原子で置き換えられている、Ｃ_１～Ｃ_８アルキル基を指す。ハロアルキル基の例としては、それだけに限らないが、トリフルオロメチル、２，２，２－トリフルオロエチル、４－クロロブチル、３－ブロモプロピル、ペンタクロロエチル、および１，１，１－トリフルオロ－２－ブロモ－２－クロロエチルが挙げられる。

「ハロゲン」および「ハロ」という用語は、－Ｆ、－Ｃｌ、－Ｂｒまたは－Ｉを指す。

「ヘテロ原子」という用語は、酸素（Ｏ）、窒素（Ｎ）、および硫黄（Ｓ）を含むことを意図している。

「ヘテロアリール」という用語は、ここでは、１つまたは２つの芳香環を含有し、芳香環内に少なくとも１つの窒素、酸素、または硫黄原子を含有する単環式または二環式環系を指すために使用される。特に指示しない限り、ヘテロアリール基は、非置換であっても、例えばハロ、アルキル、アルケニル、ＯＣＦ_３、ＮＯ_２、ＣＮ、ＮＣ、ＯＨ、アルコキシ、アミノ、ＣＯ_２Ｈ、ＣＯ_２アルキル、アリール、およびヘテロアリールから選択される１またはそれを超える、好ましくは１～４つの置換基で置換されていてもよい。ヘテロアリール基の例としては、それだけに限らないが、チエニル、フリル、ピリジル、オキサゾリル、キノリル、チオフェニル、イソキノリル、インドリル、トリアジニル、トリアゾリル、イソチアゾリル、イソオキサゾリル、イミダゾリル、ベンゾチアゾリル、ピラジニル、ピリミジニル、チアゾリル、およびチアジアゾリルが挙げられる。

「複素環」という用語は、不飽和または芳香族のいずれかであり、窒素、酸素および硫黄から独立して選択される１～４個のヘテロ原子を含有する単環式、二環式、三環式または多環式系を指し、窒素および硫黄ヘテロ原子は必要に応じて酸化されており、窒素ヘテロ原子は必要に応じて四級化されており、二環式および三環式環系を含む。複素環は、いずれのヘテロ原子または炭素原子を介して結合していてもよい。複素環には、上に定義されるヘテロアリールが含まれる。複素環の代表的な例としては、それだけに限らないが、ベンゾオキサゾリル、ベンゾイソオキサゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾイミダゾリル、イソインドリル、インダゾリル、ベンゾジアゾリル、ベンゾトリアゾリル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾイソオキサゾリル、プリニル、インドリル、イソキノリニル、キノリニルおよびキナゾリニルが挙げられる。複素環基は、非置換であっても、必要に応じて１またはそれを超える置換基で置換されていてもよい。

「ヘテロシクロアルキル」は、１つまたは２つの飽和または不飽和環を含有し、環内に少なくとも１つの窒素、酸素、または硫黄原子を含有する単環式または二環式環系を示す。「シクロアルキル」という用語は、１つまたは２つの飽和または不飽和環を含有する単環式または二環式環系を指す。

「ヒドロキシアルキル」という用語は、アルキル基の水素原子のうちの１またはそれより多くが－ＯＨ基で置き換えられている、示される数の炭素原子を有するアルキル基を指す。ヒドロキシアルキル基の例としては、それだけに限らないが、－ＣＨ_２ＯＨ、－ＣＨ_２ＣＨ_２ＯＨ、－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＯＨ、－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＯＨ、－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＯＨ、－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＯＨ、およびそれらの分岐バージョンが挙げられる。

「オキソ」という用語は、飽和もしくは不飽和（Ｃ_３～Ｃ_８）環状部分または（Ｃ_１～Ｃ_８）非環状部分に結合した＝Ｏ原子を指す。＝Ｏ原子は、環状部分または非環状部分の一部である炭素、硫黄、および窒素原子に結合することができる。

「対象」という用語は、鳥類および非ヒト哺乳動物、例えば非ヒト霊長類、コンパニオンアニマル（イヌおよびネコなど）、家畜（ブタ、ヒツジ、ウシなど）、ならびに大型の猫科動物などの非飼育動物を含む、ヒト対象と非ヒト対象の両方を含む。対象という用語は、生物のライフサイクルの段階にかかわらず適用される。よって、対象という用語は、生物（すなわち、生物が哺乳動物であるか鳥類、例えば飼い慣らされた鳥または野鳥であるか）に応じて、子宮内または卵内の生物に適用される。

「治療有効量」は、特定の薬剤で処置されている対象において所望の効果を達成するのに十分なその薬剤の量を指す。理想的には、薬剤の治療有効量は、対象において実質的な細胞傷害効果を引き起こすことなく疾患または症状を阻害または処置するのに十分な量である。薬剤の治療有効量は、処置される対象、苦痛の重症度、および治療用組成物の投与様式に依存する。

「処置」は、疾患または病理学的症状が発症し始めた後にその徴候または症候を改善する治療的介入を指す。本明細書で使用される場合、疾患または病理学的症状に関する「改善する」という用語は、処置の任意の観察可能な有益な効果を指す。有益な効果は、例えば、感受性対象における疾患の臨床症候の発症の遅延、疾患の一部もしくは全部の臨床症候の重症度の低下、疾患の進行の遅延、対象の全体的な健康もしくは幸福の改善、または特定の疾患に特異的な当技術分野で周知の他のパラメータによって証明することができる。「疾患を処置する」という句は、例えば、疾患のリスクがある対象において、疾患の完全な発症を阻害することを指す。疾患または症状を「予防する」は、病状もしくは症状を発症するリスクを低下させるため、または病状もしくは症状の重症度を低下させるために、疾患の徴候を示さない、または初期の徴候のみを示す対象に組成物を予防的に投与することを指す。

「医薬組成物」は、ある量（例えば、単位投与量）の１またはそれを超える開示される化合物を、１またはそれを超える非毒性の薬学的に許容され得る添加剤（担体、希釈剤、および／またはアジュバントを含む）、および必要に応じて他の生物学的有効成分と共に含む組成物である。このような医薬組成物は、標準的な医薬製剤技術、例えばＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．、イーストン、ＰＡ（第１９版）に開示されるものによって調製することができる。

本発明の化合物は、立体配置異性体、幾何異性体、および配座異性体を含む様々な異性体形態で存在することができ、同様に様々な互変異性体形態、特に水素原子の結合点が異なるもので存在することができる。「異性体」という用語は、本発明の化合物の互変異性体形態を含む、化合物の全ての異性体形態を包含することを意図している。

本開示の化合物の特定の例は、１またはそれを超える不斉中心を含み得る；よって、これらの化合物は異なる立体異性体形態で存在することができる。したがって、化合物および組成物は、個々の純粋なエナンチオマーとして、またはラセミ混合物を含む立体異性体混合物として提供され得る。ある特定の実施形態では、本明細書に開示される化合物が、実質的にエナンチオピュアな形態で、例えば、エナンチオマー過剰率９０％、エナンチオマー過剰率９５％、エナンチオマー過剰率９７％、またはさらにはエナンチオマー過剰率９９％超で、例えばエナンチオピュアな形態で、合成されるか、またはそうなるように精製される。

本開示の化合物は、少なくとも１つの不斉中心または幾何学的中心、シス－トランス中心（Ｃ＝Ｃ、Ｃ＝Ｎ）を有することができる。特に明記しない限り、構造の全てのキラル異性体、ジアステレオマー異性体、ラセミ異性体、メソ異性体、回転異性体および幾何異性体が意図される。化合物は、単一異性体として、または異性体の混合物として単離することができる。化合物の全ての互変異性体も本開示の一部とみなされる。本開示の化合物はまた、化合物中に存在する原子の全ての同位体を含み、これらには、それだけに限らないが、重水素、トリチウム、^１８Ｆ等が含まれ得る。

「プロドラッグ」という用語は、生物学的条件下、インビトロまたはインビボで加水分解、酸化、または他の方法で反応して活性化合物、特に本発明の化合物を提供することができる化合物の誘導体を示す。プロドラッグの例としては、それだけに限らないが、生加水分解性（ｂｉｏｈｙｄｒｏｌｙｚａｂｌｅ）アミド、生加水分解性エステル、生加水分解性カルバメート、生加水分解性カーボネート、生加水分解性ウレイド、および生加水分解性ホスフェート類似体（例えば、モノホスフェート、ジホスフェートまたはトリホスフェート）などの生加水分解性基を含む本発明の化合物の誘導体および代謝産物が挙げられる。例えば、カルボキシル官能基を有する化合物のプロドラッグは、カルボン酸の低級アルキルエステルである。カルボン酸エステルは、分子上に存在するカルボン酸部分のいずれかをエステル化することによって好都合に形成される。プロドラッグは、典型的には、周知の方法、例えばＢＵＲＧＥＲ’Ｓ ＭＥＤＩＣＩＮＡＬ ＣＨＥＭＩＳＴＲＹ ＡＮＤ ＤＲＵＧ ＤＩＳＣＯＶＥＲＹ 第６版（Ｗｉｌｅｙ、２００１）およびＤＥＳＩＧＮ ＡＮＤ ＡＰＰＬＩＣＡＴＩＯＮ ＯＦ ＰＲＯＤＲＵＧＳ（Ｈａｒｗｏｏｄ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ Ｇｍｂｈ、１９８５）によって記載されているものを使用して調製することができる。

概要
本明細書に開示される一実施形態では、対象の動脈瘤を処置する方法であって、治療有効量の（ｉ）ニトロアルケン脂肪酸、（ｉｉ）電子求引基、脱離基、および電子求引基と脱離基との間に配置された炭素－炭素二重結合を有する不飽和脂肪酸、（ｉｉｉ）チオール化ニトロ脂肪酸、（ｉｖ）求電子性を誘導する二重結合上の電子求引基を含むジカルボン酸化合物、またはこれらの混合物から選択される化合物を対象に投与することを含む方法が提供される。動脈瘤は、大動脈瘤または血管瘤（ｖａｓｃｕｌａｒ ａｎｅｕｒｙｓｍ）（動脈瘤など）であり得る。ある特定の実施形態では、大動脈瘤が腹部大動脈瘤（ＡＡＡ）であり得る。ある特定の実施形態では、大動脈瘤が胸部大動脈瘤（ＴＡＡ）であり得る。ある特定の実施形態では、大動脈瘤が胸腹部大動脈瘤（ＴＡＡＡ）であり得る。他の例示的な動脈瘤には、頭蓋内動脈瘤、腹腔動脈瘤、腸間膜動脈瘤、腎動脈瘤、脾動脈瘤、肝動脈瘤、腸骨動脈瘤、大腿動脈瘤、膝窩動脈瘤および大動脈の任意の分岐部の動脈瘤が含まれる。

ニトロ脂肪酸は、モデル系およびヒトにおける炎症性および代謝調節因子として多面的機序を介して作用する、不飽和脂肪酸、窒素酸化物および求電子試薬媒介シグナル伝達の間の収束を表す。ナノモル濃度のニトロ脂肪酸は、局所炎症反応および酸化反応を介して生成された一酸化窒素および亜硝酸塩由来の二酸化窒素に応答して、ならびに低いｐＨが脂肪酸ニトロ化を促進する消化管において内因的に形成することができる。ニトロ脂肪酸は、細胞求核試薬との可逆的マイケル付加反応に参加するが、ほとんどの生物学的活性は、調節タンパク質に見られる重要なシステインの翻訳後修飾によって媒介される。例えば、ニトロ脂肪酸はＰＰＡＲγを活性化し、ｐ６５依存性核因子カッパＢ（ＮＦ－ｋＢ）活性化を阻害し、熱ショック応答を誘導し、核因子赤血球２関連因子２（Ｎｒｆ２）依存性抗酸化効果を促進する。さらに、ＣＸＡ－１０（本明細書でＮＯ_２－ＯＡとも呼ばれる１０－ニトロ－オレイン酸）の第１相ヒト試験の薬力学特性および薬物動態特性は、ＣＸＡ－１０が治療域（２５～４５０ｍｇ／日）内で安全であり、ヒトボランティアにおける全身性炎症を軽減することを示した。これは、循環単球走化性タンパク質１（ＭＣＰ１）およびインターロイキン６（ＩＬ６）レベルの低下によって反映された。並行して、様々な動物モデルにおいて経口経路または非経口経路のいずれかを介してニトロ脂肪酸を投与するインビボ試験は、アテローム性動脈硬化症、高血圧、血管炎症、心虚血／再灌流傷害、腎臓腎症および非アルコール性脂肪性肝疾患を含む複数の疾患モデルにおけるニトロ脂肪酸の保護効果を実証した。

ニトロ脂肪酸の輸送機序は、細胞および器官に明確かつ特異的な分布を提供し、標的組織および細胞シグナル伝達事象を定義する。例えば、全身循環中のニトロ脂肪酸はトリグリセリド（ＴＧ）にエステル化される。これらは、加水分解後、循環単球、血管内皮およびマクロファージによって（例えば、ＣＤ３６、ＦＡＢＰを通して）取り込まれて、細胞内シグナル伝達活性を発揮することができる。これに関して、単球－血管－マクロファージ軸は、ニトロ脂肪酸によって媒介される有益な血管効果において支配的な役割を果たし得る。これは、ヒトにおけるＣＸＡ－１０の投与が、末梢血単核細胞においてＮｒｆ２調節遺伝子および熱ショック応答を誘導するという所見によって裏付けられる。ニトロ脂肪酸が、コロニー刺激因子によって誘導される単球からマクロファージへの分化を減少させ、ＬＰＳによって誘導される白血球の血管内皮への接着を阻害し、炎症誘発性マクロファージの分極化を防止するという事実は、単球／マクロファージ生物学の調節におけるニトロ脂肪酸の重要性をさらに指摘する。

ＡＡＡの有効な医薬管理の緊急の満たされていない必要性にもかかわらず、血圧、血漿コレステロールレベル、血管炎症およびＥＣＭ分解などの個々の因子を標的とする小分子薬物候補を使用したＡＡＡ治療の最近の臨床試験は、満足のいく転帰を提供することができなかった。同時に、複数の研究および臨床試験が、免疫細胞の動員、炎症誘発／抗炎症反応の活性化および大動脈壁の分解を媒介する異なる機序を伴う、ＡＡＡ発症の全ての段階への単球／マクロファージの関与および能動的寄与を実証した。多様な炎症性および代謝性の細胞シグナル伝達および遺伝子発現応答の内因性メディエーターであるニトロ脂肪酸は、血管疾患および単球／マクロファージ活性化において様々な有益な効果を示している。ＣＸＡ－１０は、ＮＯ_２－ＯＡの１つの特定の位置異性体の合成ホモログであり、現在、慢性炎症関連腎障害（巣状分節性糸球体硬化症）および肺動脈高血圧症（ＮＣＴ０４０５３５４３、ＮＣＴ０３４２２５１０）を処置するために第ＩＩ相臨床試験で研究されている。

アンジオテンシンＩＩ（ＡｎｇＩＩ）および高コレステロール血症によって誘発され、血管壁への白血球浸潤の有意な減少が特定されたＡＡＡのマウスモデルにおけるＮＯ_２－ＯＡの保護効果が本明細書に開示される。酸化低密度リポタンパク質（ｏｘＬＤＬ）およびＡｎｇＩＩを使用して、本発明者らは、ＮＯ_２－ＯＡの抗炎症機能を再現し、これが培養ＲＡＷ２６４．７細胞および初代骨髄由来マクロファージ（ＢＭＤＭ）においてＰＰＡＲγガンマシグナル伝達の増強およびｐ６５依存性ＮＦｋＢ活性の低下によって部分的に説明できることを示した。さらに、本発明者らは、以前にヒト動脈瘤発症に関連付けられた経路である、マクロファージプロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）によって誘導されるプロスタグランジンＥ２受容体４（ＥＰ４）の活性化に対するＮＯ_２－ＯＡの偏った調節を報告する。

ＡｎｇＩＩ／ＰＣＳＫ９誘発ＡＡＡマウスモデルにおけるＮＯ_２－ＯＡがＡＡＡ形成を減弱させることが本明細書に開示される。病理学的評価により、腎上動脈瘤拡大が有意に抑制され、エラスチン分解が少ないことが明らかになり（図１）、ＡＡＡ発症におけるＮＯ_２－ＯＡおよび他の求電子脂肪酸の保護的役割が強調された。

必須の特徴であり、ＡＡＡ発症の寄与因子である、白血球およびマクロファージによる血管浸潤は、ＮＯ_２－ＯＡによって有意に下方調節された。この効果は、おそらく接着分子発現と化学誘引物質分泌の同時下方調節に起因する（図２）。さらに、生物学的に関連する刺激を使用したインビトロ試験は、ＡｎｇＩＩ誘発性内皮刺激時のマクロファージの遊走の減少を含む、ＮＯ_２－ＯＡの保護的役割を実証した。さらに、ＮＯ_２－ＯＡ処置によるｏｘＬＤＬ誘導ＮＦｋＢ活性化およびｐ６５転写因子の核移行の強力な阻害が観察された。この効果は、ＰＰＡＲγの活性化によって少なくとも部分的に媒介され、不可逆的ＰＰＡＲγ阻害剤ＧＷ９６６２によって阻害された（図３）。

親油性および求電子性化学構造の収束を表すＮＯ_２－ＦＡは、細胞内核受容体上で機能するだけでなく、Ｔｏｌｌ様受容体などの膜関連タンパク質も調節する。本明細書では、本発明者らはまた、ＮＯ_２－ＯＡによるＰＧＥ２誘導ＥＰ４活性化の阻害を明らかにする（図４）。マクロファージＣＯＸ２－ＰＧＥ２－ＥＰ４軸がヒトＡＡＡ疾患の病因に関与することが広く受け入れられている。異なるＥＰ４特異的アンタゴニストを使用した研究により、ＡｎｇＩＩ／ＡｐｏＥ－／－、ならびにマウスにおけるＣａＣｌ２誘発ＡＡＡ形成に対する保護が実証されており、共通の特徴としてＭＭＰ産生および活性の低下を有する。しかしながら、骨髄由来細胞におけるＥＰ４欠損は、炎症およびＡＡＡ発生率を増加させることが見出された。Ｇ共役ＥＰ４はｃＡＭＰ動員を促進するだけでなく、ＥＰＲＡＰ／ｐ１０５複合体の形成を通してＮＦｋＢ活性化を打ち消すので、これらの矛盾する所見は、下流シグナル伝達経路に対する差次的効果の結果であり得る。これに関して、本発明者らは、ＮＯ_２－ＯＡが、ＥＰＲＡＰ／ｐ１０５相互作用に干渉することなく炎症刺激によって誘導されたＰＧＥ２のＥＰ４依存性抗炎症効果を増加させることによって、ＥＰ４シグナル伝達応答の偏った調節因子として機能することを実証した。

マクロファージ活性化およびＡＡＡ発症に対する求電子ＮＯ_２－ＦＡの保護効果の実証が本明細書で明らかにされる（図５）。本発明者らの結果は、ＡＡＡの処置におけるニトロ脂肪酸、例えば本明細書で使用されるオレイン酸のニトロアルケン誘導体の潜在的な新しい臨床治療の機会を強調している。さらに、本発明者らの知見は、この病原的に多様で複雑な疾患を処置するために、多重標的化された多面的求電子化合物を使用する理論的根拠を提供する。

化合物（ｉ）－ニトロアルケン脂肪酸
ある特定の実施形態では、（ｉ）ニトロアルケン脂肪酸が、少なくとも１つの炭素－炭素二重結合および少なくとも１つのニトロ基を含む化合物である。ある特定のニトロアルケン脂肪酸は、例えば、米国特許第７，７７６，９１６号に記載されている。

ニトロアルケンの１つの例示的な実施形態は、式Ｉの構造：

（式中、Ｒ^１は、水素、Ｃ_１～Ｃ_２４アルキル、Ｃ_１～Ｃ_２４アルケニル、またはＣ_１～Ｃ_２４アルキニルであり；
Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^７、およびＲ^８は、それぞれ独立して、水素、酸素、Ｃ_１～Ｃ_２４アルキル、ＮＯ_２、ＯＨ、またはＯＯＨであり；
Ｒ^４は末端ＣＯＯＲ^６基（式中、Ｒ^６は水素、またはＣ_１～Ｃ_２４アルキルである）であり；
Ｒ^５は水素、Ｃ_１～Ｃ_２４アルキルであるか、またはＲ^４およびＲ^５は合わせて＝Ｃ（Ｒ^９）（Ｒ^１０）（式中、Ｒ^９は、Ｃ_１～Ｃ_２４アルキル、Ｃ_１～Ｃ_２４アルケニル、もしくはＣ_１～Ｃ_２４アルキニルを含むか、またはＲ^９は末端ＣＯＯＲ^６基であり、Ｒ^１０は水素、ＮＯ_２、ＯＨ、またはＯＯＨである）を形成し；
ｎは１～２４であり；
ニトロアルケン脂肪酸は少なくとも１つのＮＯ_２基を含む）
である。

式Ｉのある特定の実施形態では、Ｒ^１がＣ_１～Ｃ_２４アルキル、より詳細にはＣ_３～Ｃ_２０アルキルである。

式Ｉのある特定の実施形態では、Ｒ^２が水素である。

式Ｉのある特定の実施形態では、Ｒ^３またはＲ^８の一方がＮＯ_２であり、Ｒ^３またはＲ^８の他方が水素である。

式Ｉのある特定の実施形態では、ｎが３～２０である。

式Ｉのある特定の実施形態では、Ｒ^４が－ＣＯＯＨである。

式Ｉのある特定の実施形態では、Ｒ^５が水素である。

式Ｉのある特定の実施形態では、Ｒ^７が水素である。

式Ｉのある特定の実施形態では、Ｒ^４が－ＣＯＯＨであり；Ｒ^５がメチルであり；Ｒ^７がメチルである。

式Ｉのある特定の実施形態では、Ｒ^１がＣ_１～Ｃ_２４アルキル、より詳細にはＣ_３～Ｃ_２０アルキルであり；Ｒ^２が水素であり；Ｒ^３またはＲ^８の一方がＮＯ_２であり、Ｒ^３またはＲ^８の他方が水素であり；Ｒ^４が－ＣＯＯＨであり；Ｒ^５が水素であり；Ｒ^７が水素である。

ニトロアルケンの別の例示的な実施形態は、式ＩＩの構造：

（式中、Ｒ^１は、水素、Ｃ_１～Ｃ_２４アルキル、Ｃ_１～Ｃ_２４アルケニル、またはＣ_１～Ｃ_２４アルキニルであり；
Ｒ^２、Ｒ^４、Ｒ^５およびＲ^６はそれぞれ水素であり；
Ｒ^７は末端ＣＯＯＲ^９基（式中、Ｒ^９は水素またはＣ_１～Ｃ_２４アルキルである）であり；
Ｒ^３およびＲ^８は、それぞれ独立して、水素、酸素、Ｃ_１～Ｃ_２４アルキル、ＮＯ_２、ＯＨ、ＯＮＯ_２、ＮＯ、ＯＮＯまたはＯＯＨであり、但し、Ｒ^３またはＲ^８の少なくとも１つはＮＯ_２であり、Ｒ^３またはＲ^８の他方は水素、ＯＮＯまたはＯＮＯ_２である）
である。

式ＩＩのある特定の実施形態では、Ｒ^１がＣ_１～Ｃ_２４アルキル、より詳細にはＣ_３～Ｃ_２０アルキルであり；Ｒ^９が水素であり；Ｒ^３がＮＯ_２であり、Ｒ^８がＯＮＯ_２であるか、またはＲ^８がＮＯ_２であり、Ｒ^３がＯＮＯ_２である。

別のニトロ基含有化合物の追加の例示的な実施形態は、式ＩＩＩの構造：

（式中、Ｒ^１は、水素、Ｃ_１～Ｃ_２４アルキル、Ｃ_１～Ｃ_２４アルケニル、またはＣ_１～Ｃ_２４アルキニルであり；
Ｒ^２およびＲ^５はそれぞれ水素であり；
Ｒ^７は末端ＣＯＯＲ^６基（式中、Ｒ^６は水素またはＣ_１～Ｃ_２４アルキルである）であり；
Ｒ^３およびＲ^４は、それぞれ独立して、水素、酸素、Ｃ_１～Ｃ_２４アルキル、ＮＯ_２、ＯＨ、ＯＮＯ_２、ＮＯ、ＯＮＯまたはＯＯＨであり、但し、Ｒ^３またはＲ^４の少なくとも１つはＮＯ_２であり、Ｒ^３またはＲ^４の他方は水素、ＯＮＯまたはＯＮＯ_２である）
である。

式ＩＩＩのある特定の実施形態では、Ｒ^１がＣ_１～Ｃ_２４アルキル、より詳細にはＣ_３～Ｃ_２０アルキルであり；Ｒ^６が水素であり；Ｒ^３がＮＯ_２であり、Ｒ^４がＯＮＯ_２であるか、またはＲ^４がＮＯ_２であり、Ｒ^３がＯＮＯ_２である。

ある特定の実施形態では、ニトロアルケン脂肪酸が、１０－ニトロ－オクタデカ－９－エン酸（本明細書では「ＮＯ_２－ＯＡ」と呼ばれる）である。

ある特定の実施形態では、ニトロアルケン脂肪酸が、９－ニトロ－オクタデカ－９－エン酸である。

ある特定の実施形態では、ニトロアルケン脂肪酸が、８－ニトロ－ノナデカ－９－エン酸である。

ある特定の実施形態では、ニトロアルケン脂肪酸が、７－ＮＯ_２－ノナデカ－７－エン酸である。

ある特定の実施形態では、ニトロアルケン脂肪酸が、５－ＮＯ_２－エイコサ－５－エン酸または６－ＮＯ_２－エイコサ－５－エン酸である。

ある特定の実施形態では、ニトロアルケン脂肪酸が９－ニトロオクタデカ－９，１１－ジエン酸である。ある特定の実施形態では、ニトロアルケン脂肪酸が１２－ニトロオクタデカ－９，１１－ジエン酸である。

ある特定の実施形態では、ニトロアルケン脂肪酸が、９－ニトロ－１２－（ニトロオキシ）オクタデカ－１０－エン酸である。

ある特定の実施形態では、ニトロアルケン脂肪酸が、１２－ニトロ－９－（ニトロオキシ）オクタデカ－１０－エン酸である。

ある特定の実施形態では、ニトロアルケンが実質的に純粋である。この態様では、炭素－炭素二重結合の周りの立体化学が、実質的にシス（もしくはＺ）または実質的にトランス（もしくはＥ）である。

ある特定の実施形態では、ニトロアルケン脂肪酸がＺ配置を有する。

化合物（ｉｉ）－電子求引基、脱離基、および電子求引基と脱離基との間に配置された炭素－炭素二重結合を有する不飽和脂肪酸
ある特定の実施形態では、（ｉｉ）電子求引基、脱離基、および電子求引基と脱離基との間に配置された炭素－炭素二重結合を有する不飽和脂肪酸が、例えば、全体が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許出願公開第２０１８／０２８２５２８号に記載されている。いくつかの実施形態では、不飽和脂肪酸が、電子求引基がニトロ（－ＮＯ_２）である活性化脂肪酸の窒素酸化物であり得、特定の実施形態では、不飽和脂肪酸が、電子求引基がニトロ基（－ＮＯ_２）であり、脱離基が窒素酸化物、例えばニトレート（－ＯＮＯ_２）またはニトリト（－ＯＮＯ）であり得るニトロアルケンの窒素酸化物であり得る。ある特定の実施形態では、化合物（ａ）（ｉｉ）が、ニトリトまたはニトレート置換基が切断され、オレフィンが移動して活性化ニトロアルケン生成物を生じるプロドラッグである。本明細書で使用される場合、「活性化脂肪酸」は、脂肪酸の飽和または不飽和脂肪族鎖に共有結合した少なくとも１つの電子求引基を有する脂肪酸を指す。このような活性化脂肪酸は、任意の数の位置で任意の数の電子求引基によって置換された脂肪族鎖を含んでもよく、このような電子求引基は、炭素－炭素二重結合と関連していてもしていなくてもよい。同様に、ニトロアルケンの窒素酸化物誘導体は、電子求引基と関連していてもしていなくてもよい、任意の数の二重結合を有する脂肪族鎖を含んでいてもよい。ある特定の実施形態では、脱離基が、不飽和脂肪族鎖のベータ（β）炭素、ガンマ（γ）炭素、またはデルタ（δ）炭素に位置していてもよく、電子求引基がアルファ（α）炭素に結合している。

例えば、いくつかの実施形態の化合物は、一般式ＩＶ：

（式中、Ｒ^１は、それだけに限らないが、－ＣＯＨ、－ＣＯＲ、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＯＲ、－Ｃｌ、－Ｆ、－Ｂｒ、－Ｉ、－ＣＦ_３、－ＣＮ、－ＳＯ_３－、－ＳＯ_２Ｒ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＮＨ_３ ^＋、－ＮＨ_２Ｒ^＋、－ＮＨＲ_２ ^＋、－ＮＲ_３ ^＋および－ＮＯ_２を含む任意の電子求引基であり；Ｒ^２は、それだけに限らないが、－ＯＣ（Ｏ）（Ｃ_１～４）、－ＯＮＯ_２、－ＯＰＯ（ＯＨ）_２、－ＯＳＯ_３、および他の無機エステルを含む脱離基であり；Ｘ^１およびＸ^２は、－Ｈ、－ＣＯＨ、－ＣＯＲ、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＯＲ、－ＣＯＣＦ_３、および－ＣＦ_２Ｒであり；ｍおよびｎは、独立して、１～１０の整数である）
のものおよびこれを含有する組成物であり得る。

さらに他の実施形態の化合物は、一般式Ｖ：

（式中、Ｒ^１は、－Ｈ、またはそれだけに限らないが、－ＣＯＨ、－ＣＯＲ、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＯＲ、－Ｃｌ、－Ｆ、－Ｂｒ、－Ｉ、－ＣＦ_３、－ＣＮ、－ＳＯ_３－、－ＳＯ_２Ｒ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＮＨ_３ ^＋、－ＮＨ_２Ｒ^＋、－ＮＨＲ_２ ^＋、－ＮＲ_３ ^＋および－ＮＯ_２を含む任意の電子求引基であり；Ｒ^２は、それだけに限らないが、－ＯＣ（Ｏ）（Ｃ_１～４）、－ＯＮＯ_２、－ＯＰＯ（ＯＨ）_２、－ＯＳＯ_３、および他の無機エステルを含む脱離基であり；Ｘ^１およびＸ^２は、－Ｈ、－ＣＯＨ、－ＣＯＲ、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＯＲ、－ＣＯＣＦ_３、および－ＣＦ_２Ｒであり；ｍおよびｎは、独立して、１～１０の整数である）
のものおよびこれを含有する組成物であり得る。

ある特定の実施形態では、ニトロアルケンの窒素酸化物が、一般式ＶＩ：

（式中、Ｘ^１はＨであり、ｎは１～１０であり、ｍは１～１０である）
のものであり得る。

いくつかの実施形態では、ニトロアルケンの窒素酸化物が、式ＶＩＩ：

のものであり得る。

ある特定の実施形態では、式ＶＩのニトロアルケンの窒素酸化物が、（Ｅ）－９－ニトロ－１２－（ニトロオキシ）オクタデカ－１０－エン酸、共役リノール酸の窒素酸化物、またはＮＯ_２－ＮＯ_３－ＣＬＡである。

このような実施形態では、電子求引基が、元の二重結合のＥもしくはＺ配置のいずれか、またはｓｐ^３キラル／ステレオジェン中心（ｓｔｅｒｅｏｇｅｎｉｃ ｃｅｎｔｅｒ）のＲもしくはＳ絶対立体化学のいずれかに位置し得る。例えば、一実施形態では、ニトロアルケンのニトロキシド誘導体が、１つの電子求引基を有していてもよいが、別の実施形態では、ニトロアルケンのニトロキシド誘導体が、炭化水素鎖に沿った複数の位置で複数の電子求引基で置換されていてもよい。ニトロアルケンの可逆的ニトロキシド誘導体は、カルボキシ末端炭素と末端メチル（ω位）との間の脂肪族炭化水素鎖に沿った任意の炭素に位置する電子求引基を有していてもよく、いくつかの実施形態では、電子求引基が、カルボキシ末端炭素および／またはメチル末端炭素のいずれかの約３個の炭素内に位置していてもよく、他の実施形態では、電子求引基が、カルボキシ末端炭素および／またはメチル末端炭素のいずれかの５個の炭素内に位置していてもよい。さらに他の実施形態では、電子求引基が、カルボキシ末端炭素および／またはメチル末端炭素のいずれかの７個の炭素内に位置していてもよく、さらなる実施形態では、電子求引基が、カルボキシ末端炭素および／またはメチル末端炭素のいずれかの９個の炭素内に位置していてもよい。

ある特定の実施形態では、電子求引基が活性化脂肪酸の二重結合に由来する炭素上に位置して、「電子求引ビニル」基を形成してもよい。このようなビニル基の電子求引基は、二重結合のどちらの側にあってもよい。脂肪酸は、脂肪族炭化水素鎖上の任意の炭素に１または１を超える電子求引ビニル基を有していてもよく、不飽和脂肪酸が１つの電子求引基を有することができるいくつかの方法がある。一実施形態では、９番目の（９ｈ）（Ｃ－９）炭素と１０番目の（Ｃ－１０）炭素との間に１つの二重結合を有する１８炭素，ω－９脂肪酸（「１８：１」と示される）に由来するオレイン酸（オクタデカ－９－エン酸、ＯＡ）の可逆的窒素酸化物が、Ｃ－９またはＣ－１０のいずれかに電子求引基、および他方の位置に脱離基を有し得る。別の例示的な実施形態では、ω－６（Ｃ－１３）と－７（Ｃ－１２）炭素の間およびω－９（Ｃ－１０）と１０（Ｃ－９）炭素の間に２つの二重結合を有する１８炭素，ω－６脂肪酸（「１８：２」と示される）に由来するリノール酸（オクタデカ－９，１２，－ジエン酸）の窒素酸化物が、Ｃ－９もしくはＣ－１０、またはＣ－１２もしくはＣ－１３に電子求引基、対応する他方の隣接する位置に脱離基、および電子求引基と脱離基との間に位置する少なくとも１つの炭素－炭素二重結合を有し得る。別の実施形態では、リノール酸の可逆的窒素酸化物が、Ｃ－９もしくはＣ－１０、またはＣ－１２もしくはＣ－１３に電子求引基、対応する他方の隣接する位置に脱離基、および脱離基に隣接する少なくとも１つの炭素－炭素二重結合を有し得る。同様に、元々３つ、４つ、５つ、６つまたはそれを超える二重結合を有する他の多価不飽和脂肪酸は、元の二重結合炭素のいずれかの上のいずれかの位置に１つの電子求引基、および対応する他方の位置に脱離基を有することができ、電子求引基と脱離基との間の炭素－炭素単結合は、位置および電子求引基の全ての可能な順列を含む。

「電子求引基」という用語は当技術分野において認識されており、置換基が隣接原子から価電子を誘引する傾向、すなわち、置換基が隣接原子に対して電気陰性であることを示す。「求核試薬」または「電子供与基」という用語は当技術分野において認識されており、置換基が隣接原子から過剰な価電子を供与する傾向、すなわち、置換基が隣接原子に対して電気陽性であることを示す。電子求引能力レベルの定量化は、ハメットシグマ（σ）定数によって与えられる（例えば、Ｊ．Ｍａｒｃｈ、Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、ＭｃＧｒａｗ Ｈｉｌｌ Ｂｏｏｋ Ｃｏｍｐａｎｙ、ニューヨーク、（１９７７年編）２５１－２５９頁参照）。ハメット定数値は、一般に、電子供与基については負であり、電子求引基については正である。例えば、パラ置換ＮＨ_２のハメット定数（σ［Ｐ］）は約－０．７であり、ニトロ基のσ［Ｐ］は約＋０．８である。

実施形態は、任意の公知の電子求引基を包含する。例えば、電子求引基には、それだけに限らないが、アルデヒド（－ＣＯＨ）、アシル（－ＣＯＲ）、カルボン酸（－ＣＯＯＨ）、エステル（－ＣＯＯＲ）、ハライド（－Ｃｌ、Ｆ、－Ｂｒ等）、フルオロメチル（－ＣＦ_３）、フルオロアルキル（－ＣＦ_ｎＨ_２－ｎＲ）、シアノ（－ＣＮ）、スルホキシド（－ＳＯＲ）、スルホニル（－ＳＯ_２Ｒ）、スルホネート（ＳＯ_３Ｒ）、第一級、第二級および第三級アンモニウム（－ＮＲ_３ ^＋）、ならびにニトロ（－ＮＯ_２）（式中、各Ｒは、独立して、水素、メチル、またはＣ_２～Ｃ_６のアルキル、アルケニル、もしくはアルキニルであり得る）が含まれ得る。いくつかの実施形態では、電子求引基が、少なくとも約０．２のσを有する強電子求引基であり得、ある特定の実施形態では、電子求引基が双極子を形成し得る。例えば、特定の実施形態では、電子求引基が、ニトロ、アンモニウムまたはスルホニルであり得る。

「脱離基」という用語は当技術分野において認識されており、置換基が不均一結合開裂中に一対の電子を親分子に残す傾向を示す。包含される脱離基には、例えば、－ＯＣ（Ｏ）（Ｃ_１～４）、－ＯＮＯ_２、－ＯＰＯ（ＯＨ）_２、－ＯＳＯ_３、他の無機エステルなどが含まれる。

実施形態の脂肪酸は、当技術分野で公知の任意の不飽和および多価不飽和脂肪酸であり得る。「脂肪酸」という用語は、脂肪族モノカルボン酸を記載する。様々な実施形態は、特定された天然に存在する脂肪酸と同一または類似の脂肪族炭化水素鎖を有する活性化脂肪酸を含む。例えば、既知の天然に存在する脂肪酸の脂肪族炭化水素鎖は、一般に非分岐であり、約４～約２４個の偶数個の炭素を含有し、他のものには、脂肪族炭化水素鎖中に１２～１８個の炭素を有する脂肪酸が含まれる。さらに他の実施形態では、脂肪酸が、脂肪族炭化水素鎖に２４個を超える炭素を有し得る。実施形態は、このような天然に存在する脂肪酸ならびに奇数個の炭素および／またはヘテロ原子を含む天然に存在しないリンカーを含有し得る天然に存在しない脂肪酸を包含する。よって、いくつかの実施形態は、奇数個の炭素、例えば５～２３個の炭素、他の実施形態では１１～１７個の炭素を有する脂肪酸を含む。さらに他の実施形態では、実施形態の脂肪酸が、２３個を超える炭素を有し得る。天然に存在するおよび天然に存在しない脂肪酸はまた、炭化水素鎖に沿った１またはそれを超える位置で分岐していてもよく、様々な実施形態では、各分岐が、１～２４個の炭素、２～２０個の炭素または４～１８個の炭素の脂肪族炭化水素鎖を含んでいてもよく、各分岐が偶数個の炭素を有していても奇数個の炭素を有していてもよい。

様々な実施形態の脂肪酸の脂肪族炭化水素鎖は、不飽和または多価不飽和であり得る。「不飽和」という用語は、少なくとも１つの二重結合および／または置換基を含む脂肪族炭化水素鎖を有する脂肪酸を指す。対照的に、「飽和」炭化水素鎖は、二重結合も置換基も含まない。よって、炭化水素鎖の各炭素は「飽和」であり、最大数の水素を有する。「多価不飽和」は、一般に、１つを超える二重結合を有する炭化水素鎖を有する脂肪酸を指す。様々な実施形態の不飽和または多価不飽和脂肪酸の二重結合は、脂肪族炭化水素鎖に沿ったいずれの位置にあってもよく、シス配置またはトランス配置のいずれであってもよい。「シス」という用語は、二重結合に隣接する炭素が同じ側にある二重結合を指し、「トランス」という用語は、二重結合に隣接する炭素が反対側にある二重結合を指す。典型的には、「シス」はＺと同じであり、「トランス」はＥと同じであるが、化合物を命名するためのＩＵＰＡＣ規則が、ニトロアルケンの典型的な場合である非炭素置換基に対してこれとは反対のことを与えることがある。例えば、ニトロアルケンは２つの炭素基を「シス」で有することができるが、化合物の命名に関して優先する２つの基（アルケンの一方の炭素上のニトロ基およびアルケンの他方の炭素上の炭素基）が反対側にあり、よって、Ｅである。したがって、「シス」二重結合のニトロアルケン類似体は、Ｅニトロアルケンと呼ばれる。同様に、「トランス」二重結合のニトロアルケン類似体は、Ｚニトロアルケンと呼ばれる。理論に拘束されることを望むものではないが、炭素鎖に沿ったシス配置の二重結合（シス炭素鎖であるがＥニトロアルケン）は、炭化水素鎖の屈曲を誘導し得る。炭素鎖に沿った「トランス」配置の二重結合（トランス炭素鎖であるがＺニトロアルケン）は、炭化水素鎖を屈曲させないかもしれない。実施形態は、Ｅ配置またはＺ配置のいずれかの二重結合を有するニトロアルケンの可逆的ニトロキシド誘導体を含むことができ、ニトロアルケンのシスおよびトランス含有ニトロキシド誘導体と、ニトロアルケンのニトロキシド誘導体の位置異性体の組み合わせを含む組成物を包含し得る。

多くの不飽和および多価不飽和脂肪酸が同定されており、天然に存在することが知られている。このような不飽和または多価不飽和の天然に存在する脂肪酸は、一般に、それらの脂肪族炭化水素鎖に偶数個の炭素を含む。例えば、天然に存在する不飽和または多価不飽和脂肪酸は、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２個などの炭素を有し得、オメガ（ω）－３、ω－５、ω－６、ω－７、ω－９炭素－炭素二重結合を含み得る。いずれのこのような脂肪酸も、化合物において有用であり得る。「ω」という記号は、脂肪族炭化水素鎖の末端メチル炭素を指すために使用される。ω－Ｘ脂肪酸の二重結合の配置は、ω炭素からＸ番目の炭素の炭素－炭素結合である。例えば、ω－６脂肪酸は、ω－炭素から数えて６番目と７番目の炭素の間に二重結合を有し、ω－３脂肪酸は、ω－炭素から数えて３番目と４番目の炭素の間に二重結合を有する。様々な実施形態は、それだけに限らないが、リノレン酸、アルファリノレン酸、エイコサペンタン酸、ドコサペンタエン酸、ドコサヘキサン酸およびステアリドン酸を含むニトロ化ω－３脂肪酸；それだけに限らないが、ミリストレイン酸を含むニトロ化ω－５脂肪酸；それだけに限らないが、リノール酸、ガンマ－リノール酸、ジホモ－ガンマ－リノール酸およびアラキドン酸を含むニトロ化ω－６脂肪酸；それだけに限らないが、共役リノール酸およびパルミトレイン酸を含むニトロ化ω－７脂肪酸；ならびにそれだけに限らないが、オレイン酸およびエルカ酸を含むニトロ化ω－９脂肪酸を含む。当然、脂肪酸は、二重結合の配置がカルボン酸の炭素から数えることによって決定されるＩＵＰＡＣ命名法を使用して呼ばれてもよく、「Ｃ－Ｘ」は、ＩＵＰＡＣ命名法を使用した脂肪族炭化水素中の炭素を表し、Ｘはカルボン酸から数えた炭素の数（カルボニル炭素自体を含む）である。実施形態はまた、天然に存在する脂肪酸およびその誘導体の合成等価物を含む。

他の実施形態は、例えば、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１個などの奇数個の炭素を有し得る不飽和または多価不飽和の天然に存在しない脂肪酸を含む。天然に存在する脂肪酸の場合と同様に、天然に存在しない脂肪酸に関連する１またはそれを超える二重結合は、脂肪族炭化水素鎖に沿った任意の位置にあってよく、二重結合はシス配置またはトランス配置のいずれであってもよい。さらに他の実施形態では、天然に存在しない脂肪酸が、脂肪族炭化水素鎖を中断する１またはそれを超えるリンカー基を含み得る。例えば、いくつかの実施形態では、活性化脂肪酸が、脂肪族炭化水素鎖内の任意の位置に、例えばエステル、エーテル、ビニルエーテル、チオエーテル、アミノ、イミンなどの１またはそれを超える非炭素－炭素結合を有し得る。

さらに他の実施形態では、活性化脂肪酸の窒素酸化物のカルボキシ末端が修飾されていてもよい。例えば、いくつかの実施形態では、活性化脂肪酸の窒素酸化物が、脂肪酸のカルボキシ末端と関連してグリセロ脂質を作製しているグリセロールを含み得、このようなグリセロ脂質が、モノ－、ジ－またはトリ－グリセリドであり得、ジ－またはトリ－グリセリドの脂肪酸の少なくとも１つが活性化ニトレート脂肪酸であり得、任意の残りの脂肪酸が飽和または不飽和脂肪酸であり得る。同様に、他の実施形態では、炭水化物が、窒素酸化物活性化脂肪酸のカルボキシ末端と関連して糖脂質を形成し得る。このような実施形態では、当技術分野で公知の任意の炭水化物が糖脂質の炭水化物部分であり得、それだけに限らないが、ガラクトースおよびグルコースを含む。さらに他の実施形態では、炭水化物が、活性化ニトレート脂肪酸のカルボキシ末端と関連しているグリセリドと関連してグリセロ糖脂質を形成してもよく、グリセロ糖脂質は、グリセロ糖脂質のグリセロ部分と関連した１つまたは２つの活性化脂肪酸を有していてもよく、ただ１つの活性化脂肪酸のみがグリセロ糖脂質と関連している実施形態では、グリセロール上の残りの位置が、飽和もしくは不飽和脂肪酸または水素、アルキル、または例えば、アルコール、アミン、ホスフェート、ホスホン酸、チオール、スルホン酸などの官能基を含んでいてもよい。ある特定の実施形態では、活性化脂肪酸のカルボキシ末端が、ホスフェートと関連してリン脂質を形成し得る。このような実施形態では、ホスフェートが、カルボキシ末端を通して脂肪酸と直接関連していてもよく、またはホスフェートが、１つもしくは２つの活性化脂肪酸がグリセロール部分に結合しているジグリセリドと関連していてもよく、ただ１つの活性化ニトレート脂肪酸のみがグリセロールに結合している実施形態では、グリセロール上の残りの位置が、飽和もしくは不飽和脂肪酸または水素、アルキル、または例えばアルコール、アミン、ホスフェート、ホスホン酸、チオール、スルホン酸などの官能基を含んでいてもよい。さらなる実施形態では、活性化脂肪酸のカルボキシ末端が、コレステロールまたは他のステロール部分と関連していてもよい。さらに他の実施形態では、カルボキシ末端が、第２の活性剤の共有結合によって修飾されていてもよい。特定の実施形態では、グリセロールを含むカルボキシ末端修飾が、ニトロ基を含まなくてもよい。理論に拘束されることを望むものではないが、活性化ニトレート脂肪酸のカルボキシ末端の修飾は、投与後の活性化脂肪酸の分配を増強し得、投与後のミトコンドリアにおけるベータ酸化を阻害することによって活性化脂肪酸のレジリエンスも改善し得る。

化合物（ｉｉｉ）－チオール付加ニトロ脂肪酸（「チオール化脂肪酸」）
薬物候補としてのニトロ－オレイン酸の使用に対する潜在的な障壁は、肝初回通過におけるベータ酸化反応およびプロスタグランジンレダクターゼ１によるニトロアルケンの還元ならびにグルタチオンとの可逆的付加および排出の結果としての急速な代謝である。有効性を高めるために、薬物は初回通過代謝に耐えなければならない。活性薬物は腸マイクロバイオームおよび肝臓内で代謝されるので、有効量の活性薬物を循環中に適切に送達するために保護されなければならない。

ニトロアルケンの可逆的チオール化によるニトロアルケン脂肪酸の修飾は、その代謝不活性化を防止し、よって、ニトロアルケン脂肪酸の潜在的な求電子性を維持する。チオールまたはポリチオール置換基が解離すると、「活性化」ニトロアルケン生成物は、ＲＡＤ５１または他のＤＮＡ修復タンパク質中の機能的に重要な求核性残基を標的とする能力を有するようになる。

チオール化脂肪酸の例は、例えば、全体が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許出願公開第２０１９／０２８２５２７号に記載されている。

実施形態は、一般に、チオール化求電子不飽和活性化脂肪酸、特にチオール化不飽和ニトロ化脂肪酸に関する。本明細書で使用される場合、「活性化脂肪酸」は、脂肪酸の飽和または不飽和脂肪族鎖の不飽和炭素に共有結合した少なくとも１つの電子求引基を有する脂肪酸を指す。このような活性化脂肪酸は、炭化水素鎖上の任意の数の位置で任意の数の電子求引基によって置換された脂肪族鎖を含んでもよく、このような電子求引基は、炭素－炭素二重結合と関連していてもしていなくてもよい。同様に、本明細書に記載されるチオール化活性化脂肪酸は、電子求引基、および硫黄含有基、すなわちチオール基と関連していてもしていなくてもよい、任意の数の二重結合を有する脂肪族鎖を含んでいてもよい。ある特定の実施形態では、硫黄含有基が、不飽和脂肪族鎖のベータ（□）炭素、ガンマ（□）炭素、またはデルタ（□）炭素に位置していてもよく、電子求引基がアルファ（□）炭素に結合している。

ニトロアルケンの求電子二重結合は、Ｈ（Ｓ）_ｘＲによって可逆的に保護されて、チオール化活性化脂肪酸を形成する。このチオール化活性化脂肪酸はここではプロドラッグであり、初回通過中の代謝過程を回避する。求電子二重結合は、以下に示されるように、保護基の喪失後に再生される：

例えば、いくつかの実施形態のチオール化活性化脂肪酸は、一般式ＶＩＩＩ：

（式中、Ｒは、水素（－Ｈ）、メチル、またはＣ_２～Ｃ_６のアルキル、アルケニル、もしくはアルキニルであるか、または（Ｓ）ｘＲは、スルフィノ（－ＳＯＯＨ）、スルホ（－ＳＯＯＯＨ）、もしくはチオシアネート（－ＳＣＮ）などの硫黄含有官能基であってもよく、ｘは１～５の整数であり、ｑおよびｍは、それぞれ独立して、１～１０の整数である）
のものであり得る。式ＶＩＩＩの化合物は、□炭素に硫黄含有基を含む。

他のチオール化活性化脂肪酸は、一般式ＩＸの化合物：

（式中、Ｒは、水素（－Ｈ）、メチル、またはＣ_２～Ｃ_６のアルキル、アルケニル、もしくはアルキニルであるか、または（Ｓ）ｘＲは、スルフィノ（－ＳＯＯＨ）、スルホ（－ＳＯＯＯＨ）、もしくはチオシアネート（－ＳＣＮ）などの硫黄含有官能基であってもよく、ｘは１～５の整数であり、ｑおよびｍは、それぞれ独立して、１～１０の整数である）
を含む。式ＩＸの化合物は、□炭素に硫黄含有基を含む。

いくつかの実施形態では、式ＶＩＩＩまたはＩＸのＲが、活性化脂肪酸のカルボキシルに結合した二官能性アルキル、アルケニル、またはアルキニルであり得、架橋構造または環状構造を形成し得る。このような実施形態では、硫黄含有部分が、□、□または□炭素のいずれかに位置し得る。例えば、□炭素に環化二官能性硫黄含有部分を含む、一般式ＸａおよびＸｂの化合物：

（式中、各Ｙは、独立して、酸素（Ｏ）または窒素（Ｎ）であり、各ｘは、独立して、１～５の整数であり、ｑ、ｍ、ｐ、およびｔは、それぞれ独立して、１～１０の整数である）。

いくつかの実施形態では、硫黄含有基が、２つの活性化脂肪酸を結合し得る。例えば、本発明の様々な実施形態は、一般式ＸＩの化合物：

（式中、Ｒ_１およびＲ_２は、－Ｈ、ならびにそれだけに限らないが、－ＣＯＨ、－ＣＯＲ、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＯＲ、－Ｃｌ、－Ｆ、－Ｂｒ、－Ｉ、－ＣＦ_３、－ＣＮ、－ＳＯ_３－、－ＳＯ_２Ｒ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＮＨ_３ ^＋、－ＮＨ_２Ｒ^＋、－ＮＨＲ_２ ^＋、－ＮＲ_３ ^＋および－ＮＯ_２を含む任意の電子求引基から独立して選択され；Ｒ_１およびＲ_２の少なくとも１つは、電子求引基であり；Ｙ_１およびＹ_２は、－Ｈ、－ＣＯＨ、－ＣＯＲ、－ＣＯＯＨ、および－ＣＯＯＲから独立して選択され；Ｒ_１およびＲ_２の少なくとも１つは、電子求引基であり；ｘは１～５の整数であり、ｑ、ｍ、ｐ、およびｔは、独立して、１～１０の整数である）
および同化合物を含有する組成物に関する。

本発明の様々な実施形態は、一般式ＸＩＩａ、ＸＩＩｂ、およびＸＩＩｃの化合物：

（式中、ｘは１～５の整数であり、ｑ、ｍ、ｐ、およびｔは、独立して、１～１０の整数である）
および同化合物を含有する組成物に関する。

他の実施形態は、式ＸＩＩＩの化合物：

（式中、ｘは１～５の整数である）
および同化合物を含有する組成物を含む。

いくつかの実施形態では、化合物が、式ＸＩＶとして示されるチオール化ニトロ－オレイン酸（ＮＯ_２－ＯＡ－Ｓ_ｘ）種である：

電子求引基は、元の二重結合のシスもしくはトランス配置のいずれか、またはｓｐ^３キラル／ステレオジェン中心のＲもしくはＳ絶対立体化学のいずれかに位置し得る。例えば、一実施形態では、チオール化活性化脂肪酸が、１つの電子求引基を有していてもよいが、別の実施形態では、チオール化活性化脂肪酸が、炭化水素鎖に沿った複数の位置で複数の電子求引基で置換されてもよい。チオール化活性化脂肪酸は、カルボキシ末端炭素と末端メチル（ω位）との間の脂肪族炭化水素鎖に沿った任意の炭素に位置する電子求引基を有していてもよく、いくつかの実施形態では、電子求引基が、カルボキシ末端炭素および／またはメチル末端炭素のいずれかの約３個の炭素内に位置していてもよく、他の実施形態では、電子求引基が、カルボキシ末端炭素および／またはメチル末端炭素のいずれかの５個の炭素内に位置していてもよい。さらに他の実施形態では、電子求引基が、カルボキシ末端炭素および／またはメチル末端炭素のいずれかの７個の炭素内に位置していてもよく、さらなる実施形態では、電子求引基が、カルボキシ末端炭素および／またはメチル末端炭素のいずれかの９個の炭素内に位置していてもよい。

ある特定の実施形態では、電子求引基が活性化脂肪酸の二重結合に由来する炭素上に位置して、「電子求引ビニル」基を形成してもよい。このようなビニル基の電子求引基は、二重結合のどちらの側にあってもよい。脂肪酸は、脂肪族炭化水素鎖上の任意の炭素に１または１を超える電子求引ビニル基を有していてもよく、不飽和脂肪酸が１つの電子求引基を有することができるいくつかの方法がある。一実施形態では、９番目の（９ｈ）（Ｃ－９）炭素と１０番目の（Ｃ－１０）炭素との間に１つの二重結合を有する１８炭素，ω－９脂肪酸（「１８：１」と示される）に由来するチオール化活性化オレイン酸（オクタデカ－９－エン酸）が、Ｃ－９またはＣ－１０のいずれかに電子求引基、および他方の位置にチオール（－ＳＲ）を有し得る。別の例示的な実施形態では、ω－６（Ｃ－１３）と－７（Ｃ－１２）炭素の間およびω－９（Ｃ－１０）と１０（Ｃ－９）炭素の間に２つの二重結合を有する１８炭素，ω－６脂肪酸（「１８：２」と示される）に由来するチオール化活性化リノール酸（オクタデカ－９，１２，－ジエン酸）が、Ｃ－９もしくはＣ－１０、またはＣ－１２もしくはＣ－１３に電子求引基、および対応する他方の隣接する位置にチオール（－ＳＲ）を有し得る。同様に、元々３つ、４つ、５つ、６つまたはそれを超える二重結合を有する他の多価不飽和脂肪酸は、元の二重結合炭素のいずれかの上のいずれかの位置に１つの電子求引基、および対応する他方の隣接する位置にチオール（－ＳＲ）を有することができ、位置および電子求引基の全ての可能な順列を含む。

他の実施形態では、モノまたは多価不飽和脂肪酸が、２つの電子求引基を有していてもよく、不飽和脂肪酸が２つの電子求引基を有することができるいくつかの方法がある。例えば、一実施形態では、ω－６（Ｃ－１３）と－７（Ｃ－１２）炭素の間およびω－９（Ｃ－１０）と１０（Ｃ－９）炭素の間に２つの二重結合を有する１８炭素，ω－６脂肪酸（「１８：２」と示される）に由来するチオール化活性化リノール酸（オクタデカ－９，１２，－ジエン酸）が、以下の可能な順列：Ｃ－９およびＣ－１２、Ｃ－９およびＣ－１３、Ｃ－１０およびＣ－１２、またはＣ－１０およびＣ－１３で、Ｃ－９、Ｃ－１０、Ｃ－１２またはＣ－１３位のいずれか２つに電子求引基、および対応する他方の隣接する位置に１またはそれを超えるチオール（－ＳＲ）を有し得る。

１つの電子求引基または２つの電子求引基を有する化合物の前記説明と同様に、３つ、４つ、５つまたはそれを超える電子求引基を有することも可能である。上記と同じ論理に従って、１つの電子求引基または２つの電子求引基を有する化合物の前記説明では、共役または非共役の、３つ、４つ、５つ、６つまたはそれを超える二重結合を有する多価不飽和脂肪酸は、位置、求核置換基、および電子求引基の全ての可能な順列を含む、二重結合炭素のいずれかの上の任意の位置に複数の電子求引基（３つ、４つ、５つまたはそれを超える置換可能な位置）を有することができる。さらに、上記のような任意の実施形態では、任意の数の非電子求引基が活性化脂肪酸の脂肪族鎖の炭素に共有結合していてもよい。例えば、いくつかの実施形態では、チオール化活性化脂肪酸が、チオール化活性化脂肪酸の脂肪族鎖の１またはそれを超える炭素に共有結合した１またはそれを超えるメチル、Ｃ_２～Ｃ_６アルキル、アルケニル、もしくはアルキニルまたはアミノを含み得る。

「電子求引基」という用語は当技術分野において認識されており、置換基が隣接原子から価電子を誘引する傾向、すなわち、置換基が隣接原子に対して電気陰性であることを示す。「求核試薬」または「電子供与基」という用語は当技術分野において認識されており、置換基が隣接原子から過剰な価電子を供与する傾向、すなわち、置換基が隣接原子に対して電気陽性であることを示す。電子求引能力レベルの定量化は、ハメットシグマ（σ）定数によって与えられる（例えば、Ｊ．Ｍａｒｃｈ、Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、ＭｃＧｒａｗ Ｈｉｌｌ Ｂｏｏｋ Ｃｏｍｐａｎｙ、ニューヨーク、（１９７７年編）２５１－２５９頁参照）。ハメット定数値は、一般に、電子供与基については負であり、電子求引基については正である。例えば、パラ置換ＮＨ_２のハメット定数（σ［Ｐ］）は約－０．７であり、ニトロ基のσ［Ｐ］は約＋０．８である。

実施形態は、任意の公知の電子求引基を包含する。例えば、電子求引基には、それだけに限らないが、アルデヒド（－ＣＯＨ）、アシル（－ＣＯＲ）、カルボン酸（－ＣＯＯＨ）、エステル（－ＣＯＯＲ）、ハライド（－Ｃｌ、Ｆ、－Ｂｒ等）、フルオロメチル（－ＣＦ_３）、フルオロアルキル（－ＣＦ_ｎＨ_２－ｎＲ）、シアノ（－ＣＮ）、スルホキシド（－ＳＯＲ）、スルホニル（－ＳＯ_２Ｒ）、スルホネート（ＳＯ_３Ｒ）、第一級、第二級および第三級アンモニウム（－ＮＲ_３ ^＋）、ならびにニトロ（－ＮＯ_２）（式中、各Ｒは、独立して、水素、メチル、またはＣ_２～Ｃ_６のアルキル、アルケニル、もしくはアルキニルであり得る）が含まれ得る。いくつかの実施形態では、電子求引基が、少なくとも約０．２のσを有する強電子求引基であり得、ある特定の実施形態では、電子求引基が双極子を形成し得る。例えば、特定の実施形態では、電子求引基が、ニトロ、アンモニウムまたはスルホニルであり得る。他の実施形態では、チオール化活性化脂肪酸が、例えば、チオール（－ＳＲ）、アルコール（－ＯＨ）、逆エステル（－ＯＯＣＲ）、アルキル、アルケニル、アルキニル、第一級および第二級アミン（－ＮＲ_２）、Ｎ含有複素環（－Ｎ＝、－ＮＲ－）、ニトレート（－ＯＮＯ_２）、ニトリト（－ＯＮＯ）などを含む非電子求引基または電子供与基によってさらに置換されていてもよい。

実施形態の脂肪酸は、当技術分野で公知の任意の不飽和および多価不飽和脂肪酸であり得る。「脂肪酸」という用語は、脂肪族モノカルボン酸を記載する。様々な実施形態は、特定された天然に存在する脂肪酸と同一または類似の脂肪族炭化水素鎖を有する活性化脂肪酸を含む。例えば、既知の天然に存在する脂肪酸の脂肪族炭化水素鎖は、一般に非分岐であり、約４～約２４個の偶数個の炭素を含有し、他のものには、脂肪族炭化水素鎖中に１２～１８個の炭素を有する脂肪酸が含まれる。さらに他の実施形態では、脂肪酸が、脂肪族炭化水素鎖に２４個を超える炭素を有し得る。実施形態は、このような天然に存在する脂肪酸ならびに奇数個の炭素および／またはヘテロ原子を含む天然に存在しないリンカーを含有し得る天然に存在しない脂肪酸を包含する。よって、いくつかの実施形態は、奇数個の炭素、例えば５～２３個の炭素、他の実施形態では１１～１７個の炭素を有する脂肪酸を含む。さらに他の実施形態では、実施形態の脂肪酸が、２３個を超える炭素を有し得る。天然に存在するおよび天然に存在しない脂肪酸はまた、炭化水素鎖に沿った１またはそれを超える位置で分岐していてもよく、様々な実施形態では、各分岐が、１～２４個の炭素、２～２０個の炭素または４～１８個の炭素の脂肪族炭化水素鎖を含んでいてもよく、各分岐が偶数個の炭素を有していても奇数個の炭素を有していてもよい。

様々な実施形態の脂肪酸の脂肪族炭化水素鎖は、不飽和または多価不飽和であり得る。「不飽和」という用語は、少なくとも１つの二重結合および／または置換基を含む脂肪族炭化水素鎖を有する脂肪酸を指す。対照的に、「飽和」炭化水素鎖は、二重結合も置換基も含まない。よって、炭化水素鎖の各炭素は「飽和」であり、最大数の水素を有する。「多価不飽和」は、一般に、１つを超える二重結合を有する炭化水素鎖を有する脂肪酸を指す。様々な実施形態の不飽和または多価不飽和脂肪酸の二重結合は、脂肪族炭化水素鎖に沿ったいずれの位置にあってもよく、シス配置またはトランス配置のいずれであってもよい。「シス」という用語は、二重結合に隣接する炭素が同じ側にある二重結合を指し、「トランス」という用語は、二重結合に隣接する炭素が反対側にある二重結合を指す。典型的には、「シス」はＺと同じであり、「トランス」はＥと同じであるが、化合物を命名するためのＩＵＰＡＣ規則が、ニトロアルケンの典型的な場合である非炭素置換基に対してこれとは反対のことを与えることがある。例えば、ニトロアルケンは２つの炭素基を「シス」で有することができるが、化合物の命名に関して優先する２つの基（アルケンの一方の炭素上のニトロ基およびアルケンの他方の炭素上の炭素基）が反対側にあり、よって、Ｅである。したがって、「シス」二重結合のニトロアルケン類似体は、Ｅニトロアルケンと呼ばれる。同様に、「トランス」二重結合のニトロアルケン類似体は、Ｚニトロアルケンと呼ばれる。理論に拘束されることを望むものではないが、炭素鎖に沿ったシス配置の二重結合（シス炭素鎖であるがＥニトロアルケン）は、炭化水素鎖の屈曲を誘導し得る。炭素鎖に沿った「トランス」配置の二重結合（トランス炭素鎖であるがＺニトロアルケン）は、炭化水素鎖を屈曲させないかもしれない。実施形態は、シスまたはトランス配置のいずれかの二重結合を有するチオレート活性化脂肪酸を含み、シスおよびトランス含有チオール化活性化脂肪酸とチオール化活性化脂肪酸の位置異性体の組み合わせを含み得る組成物を包含する。

多くの不飽和および多価不飽和脂肪酸が同定されており、天然に存在することが知られている。このような不飽和または多価不飽和の天然に存在する脂肪酸は、一般に、それらの脂肪族炭化水素鎖に偶数個の炭素を含む。例えば、天然に存在する不飽和または多価不飽和脂肪酸は、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２個などの炭素を有し得、オメガ（ω）－３、ω－５、ω－６、ω－７、ω－９炭素－炭素二重結合を含み得る。いずれのこのような脂肪酸も、有用であり得る。「ω」という記号は、脂肪族炭化水素鎖の末端メチル炭素を指すために使用される。ω－Ｘ脂肪酸の二重結合の配置は、ω炭素からＸ番目の炭素の炭素－炭素結合である。例えば、ω－６脂肪酸は、ω－炭素から数えて６番目と７番目の炭素の間に二重結合を有し、ω－３脂肪酸は、ω－炭素から数えて３番目と４番目の炭素の間に二重結合を有する。様々な実施形態は、それだけに限らないが、リノレン酸、アルファリノレン酸、エイコサペンタン酸、ドコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸およびステアリドン酸を含むニトロ化ω－３脂肪酸；それだけに限らないが、ミリストレイン酸を含むニトロ化ω－５脂肪酸；それだけに限らないが、リノール酸、ガンマ－リノール酸、ジホモ－ガンマ－リノール酸およびアラキドン酸を含むニトロ化ω－６脂肪酸；それだけに限らないが、共役リノール酸およびパルミトレイン酸を含むニトロ化ω－７脂肪酸；ならびにそれだけに限らないが、オレイン酸およびエルカ酸を含むニトロ化ω－９脂肪酸を含む。当然、脂肪酸は、二重結合の配置がカルボン酸の炭素から数えることによって決定されるＩＵＰＡＣ命名法を使用して呼ばれてもよく、「Ｃ－Ｘ」は、ＩＵＰＡＣ命名法を使用した脂肪族炭化水素中の炭素を表し、Ｘはカルボン酸から数えた炭素の数（カルボニル炭素自体を含む）である。実施形態はまた、天然に存在する脂肪酸およびその誘導体の合成等価物を含む。

他の実施形態は、例えば、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２０、２１個などの奇数個の炭素を有し得る不飽和または多価不飽和の天然に存在しない脂肪酸を含む。天然に存在する脂肪酸の場合と同様に、天然に存在しない脂肪酸に関連する１またはそれを超える二重結合は、脂肪族炭化水素鎖に沿った任意の位置にあってよく、二重結合はシス配置またはトランス配置のいずれであってもよい。さらに他の実施形態では、天然に存在しない脂肪酸が、脂肪族炭化水素鎖を中断する１またはそれを超えるリンカー基を含み得る。例えば、いくつかの実施形態では、活性化脂肪酸が、脂肪族炭化水素鎖内の任意の位置に、例えばエステル、エーテル、ビニルエーテル、チオエーテル、アミノ、イミンなどの１またはそれを超える非炭素－炭素結合を有し得る。

様々な実施形態は、脂肪酸の脂肪族鎖のいずれか２つの炭素間に炭素－炭素二重結合を有し得る不飽和または多価不飽和脂肪酸を含み、任意の数の炭素－炭素二重結合がこのような多価不飽和脂肪酸中に存在し得る。例えば、いくつかの実施形態では、多価不飽和脂肪酸が、２つ、３つ、４つ、５つ、６つまたはそれを超える炭素－炭素二重結合を有し得る。このような実施形態では、１つを超える炭素－炭素二重結合の各々が、個々にシス配置またはトランス配置のいずれであってもよい。いくつかの実施形態では、チオール化活性化脂肪酸が、関連した電子求引基を有する多価不飽和脂肪酸の炭素－炭素二重結合の少なくとも１つとの反応から誘導され、他の実施形態では、このような多価不飽和脂肪酸の１つを超える炭素－炭素二重結合が、関連した電子求引基を有し得る。さらに、このような実施形態では、電子求引基が、元の炭素－炭素二重結合の炭素または炭素－炭素二重結合のいずれかの炭素に直接隣接する炭素のいずれと関連していてもよく、チオールが、元の炭素－炭素二重結合の他方の炭素または炭素－炭素二重結合のいずれかの炭素に直接隣接する炭素と関連していてもよい。例えば、いくつかの実施形態では、電子求引基が、前者の炭素－炭素二重結合のアルファ（α）炭素に結合していてもよく、他の実施形態では、電子求引基が、前者の炭素－炭素二重結合のベータ（β）炭素と関連していてもよい。これらの実施形態では、チオールが、前者の炭素－炭素二重結合のベータ（β）炭素にそれぞれ結合し、他の実施形態では、電子求引基が、前者の炭素－炭素二重結合のアルファ（α）炭素と関連していてもよい。

特定の実施形態では、少なくとも１つの電子求引基を有する不飽和脂肪酸が、共役脂肪酸であり得る。このような実施形態では、脂肪族鎖中の２つの炭素－炭素二重結合が、それらの間にメチレン基が存在しないように互いに隣接している。このような共役化合物は、一般に１，３－ジエンまたは共役脂肪酸と呼ばれる。このような１，３－ジエンは、１，３－ジエンの６つの位置、すなわち１、２、３、および／または４位、ならびにジエンに隣接する２つの炭素（１，３－ジエン中の炭素を特定する１，２，３，４法に関連して、０および５位）のいずれかに、１またはそれを超える電子求引基を含み得る。例えば、１つの関連した電子求引基は、上記で特定された６つの位置のいずれか、すなわちジエン上の１、２、３もしくは４位のいずれか、または１，３－ジエンに隣接する炭素のいずれか（０または５位置、上記）に結合していてよい。追加の実施形態では、２つの関連した電子求引基が６つの可能な位置のうちのいずれか２つに結合することができ、３つの関連した電子求引基が６つの可能な位置のうちのいずれか２つに結合することができ、４つの関連した電子求引基が６つの可能な位置のうちのいずれか２つに結合することができ、５つの関連した電子求引基が６つの可能な位置のうちのいずれか２つに結合することができ、６つの関連した電子求引基が６つの可能な位置のうちのいずれか２つに結合することができる。要約すると、１，３－ジエンの上記の６つの位置のいずれかに結合した電子求引基のいずれの配置も、化合物の実施形態に包含される。

ある特定の実施形態では、チオール化活性化脂肪酸が、調製後に異性化を受け得、二重結合のシス／トランス配置、炭素鎖中の二重結合の位置、またはその両方が変化し得る。例えば、いくつかの実施形態では、チオール化活性化脂肪酸が、炭素－炭素二重結合のガンマ炭素に結合した電子求引基を有する炭素－炭素二重結合から調製され得る。調製後、炭素－炭素二重結合は異性化を受け得、電子求引基がここで異性化後に炭素－炭素二重結合と共役し得る。このような異性化は、調製後いつでも自発的に起こり得、単一種のチオール化活性化脂肪酸を含むものとして最初には調製されたかもしれないが、その後、初めに生成された最初に調製された活性化脂肪酸の異性体の組み合わせを含む組成物をもたらし得る。

さらに他の実施形態では、チオール化活性化脂肪酸のカルボキシ末端が修飾されていてもよい。例えば、いくつかの実施形態では、チオール化活性化脂肪酸が、脂肪酸のカルボキシ末端と関連してグリセロ脂質を作製しているグリセロールを含み得、このようなグリセロ脂質が、モノ－、ジ－またはトリ－グリセリドであり得、ジ－またはトリ－グリセリドの脂肪酸の少なくとも１つがチオール化活性化脂肪酸であり得、任意の残りの脂肪酸が飽和または不飽和脂肪酸であり得る。同様に、他の実施形態では、炭水化物が、チオール化活性化脂肪酸のカルボキシ末端と関連して糖脂質を形成し得る。このような実施形態では、当技術分野で公知の任意の炭水化物が糖脂質の炭水化物部分であり得、それだけに限らないが、ガラクトースおよびグルコースを含む。さらに他の実施形態では、炭水化物が、チオール化活性化脂肪酸のカルボキシ末端と関連しているグリセリドと関連してグリセロ糖脂質を形成してもよく、グリセロ糖脂質は、グリセロ糖脂質のグリセロ部分と関連した１つまたは２つの活性化脂肪酸を有していてもよく、ただ１つの活性化脂肪酸のみがグリセロ糖脂質と関連している実施形態では、グリセロール上の残りの位置が、飽和もしくは不飽和脂肪酸または水素、アルキル、または例えば、アルコール、アミン、ホスフェート、ホスホン酸、チオール、スルホン酸などの官能基を含んでいてもよい。ある特定の実施形態では、活性化脂肪酸のカルボキシ末端が、ホスフェートと関連してリン脂質を形成し得る。このような実施形態では、ホスフェートが、カルボキシ末端を通して脂肪酸と直接関連していてもよく、またはホスフェートが、１つもしくは２つの活性化脂肪酸がグリセロール部分に結合しているジグリセリドと関連していてもよく、ただ１つのチオール化活性化脂肪酸のみがグリセロールに結合している実施形態では、グリセロール上の残りの位置が、飽和もしくは不飽和脂肪酸または水素、アルキル、または例えばアルコール、アミン、ホスフェート、ホスホン酸、チオール、スルホン酸などの官能基を含んでいてもよい。さらなる実施形態では、活性化脂肪酸のカルボキシ末端が、コレステロールまたは他のステロール部分と関連していてもよい。さらに他の実施形態では、カルボキシ末端が、第２の活性剤の共有結合によって修飾されていてもよい。特定の実施形態では、グリセロールを含むカルボキシ末端修飾が、ニトロ基を含まなくてもよい。理論に拘束されることを望むものではないが、チオール化活性化脂肪酸のカルボキシ末端の修飾は、投与後の活性化脂肪酸の分配を増強し得、投与後のミトコンドリアにおけるベータ酸化を阻害することによって活性化脂肪酸のレジリエンスも改善し得る。

化合物は、チオール化分子内の二量体として存在する活性化脂肪酸のバイオアベイラビリティを増加させる。求電子アルケンのチオール化は、腸管および肝臓の初回通過代謝を通して分子を保護する。この保護は、プロスタグランジンレダクターゼ１によるアルケンの還元を防止すること、およびグルタチオンとの付加を遅延させることによって起こる。さらに、ポリスルフィド鎖が長いほど分子の安定性が高くなり、循環中の活性化脂肪酸の持続放出がもたらされる。チオール化ニトロ脂肪酸がニトロ脂肪酸および硫化水素を放出する場合、追加の保護手段が提供される。

化合物（ｉｖ）－電子求引基を含むジカルボン酸化合物
化合物（ｉｖ）は、電子求引基を含むジカルボン酸化合物であり、いくつかの実施形態では、このような化合物が、電子求引基と関連したアルケンをさらに含有し得る。様々な実施形態は、電子求引基を含むジカルボン酸化合物のアルキルエステルに関し、いくつかの実施形態では、このような化合物が、電子求引基と関連したアルケンをさらに含有し得る。本発明の様々な実施形態は、式ＸＶ～ＸＸＩＶの化合物に関する。このような化合物は、例えば、全体が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許出願公開第２０１９／００９１１８６号に記載されている。これらの求電子ジカルボキシレートは、機能的に重要なチオールをアルキル化し、ＲＡＤ５１または他のＤＮＡ修復タンパク質を不活性化する能力を有する。

化合物は、一般式ＸＶまたはＸＶＩ：

（式中、Ｘは電子求引基であり、各

は、個別に、単結合または二重結合であることができ、各ｍおよびｎは、独立して、１～１０の整数である）
のものであり得る。特定の実施形態では、式ＸＶおよびＸＶＩに示される少なくとも１つの

が二重結合である。いくつかの実施形態では、式ＸＶおよびＸＶＩに示される両

が単結合であり得、他の実施形態では、式ＸＶおよびＸＶＩに示される両

が二重結合であり得る。他の実施形態では、化合物が、一般式ＸＶＩＩおよびＸＶＩＩＩ：

（式中、Ｘは電子求引基であり、各ｍおよびｎは、独立して、１～１０の整数である）
のものであり得る。

さらなる実施形態は、例えば、一般式ＸＩＸおよびＸＸの化合物：

（式中、Ｘは電子求引基であり、各ＹおよびＺは、個別に、水素またはＣ_１～Ｃ_１０アルキルであり、各

は、個別に、単結合または二重結合であり、各ｍおよびｎは、独立して、存在しないか、または１～１０の整数である）
などの、電子求引基を含むジカルボン酸化合物のアルキルエステルに関する。特定の実施形態では、式ＸＩＸおよびＸＸに示される少なくとも１つの

が二重結合である。いくつかの実施形態では、式ＸＩＸおよびＸＸに示される両

が単結合であり得、他の実施形態では、式ＸＩＸおよびＸＸに示される両

が二重結合であり得る。いくつかの実施形態では、電子求引基を含むジカルボン酸化合物のアルキルエステルが、式ＸＸＩおよびＸＸＩＩの化合物：

（式中、Ｘは電子求引基であり、各ＹおよびＺは、個別に、水素またはＣ_１～Ｃ_１０アルキルであり、各ｍおよびｎは、独立して、１～１０の整数である）
であり得る。ある特定の実施形態では、上に例示される式ＸＩＸ、ＸＸ、ＸＸＩ、およびＸＸＩＩの化合物の各ＹおよびＺが、メチル（Ｃ_１アルキル）またはエチル（Ｃ_２アルキル）であり得る。

上に例示される式ＸＶ～ＸＸＩＩの化合物の各々においてｍおよびｎによって生成されるアルキレンは、式ＸＶＩＩ、ＸＶＩＩＩ、ＸＸＩ、およびＸＸＩＩに示される二重結合に加えて、または必要に応じて、式ＸＶ、ＸＶＩ、ＸＩＸ、およびＸＸの

によって示されるように存在する炭素－炭素二重結合を含んでいてもよい。例えば、いくつかの実施形態の化合物は、式ＸＸＩＩＩおよびＸＸＩＶ：

（式中、Ｘは電子求引基であり、各ＹおよびＺは、個別に、水素またはＣ_１～Ｃ_１０アルキルであり、各ｐおよびｔは、独立して、１～１０の整数であり、各ｓは存在しないか、または１～１０の整数であり、各ｒは１～５の整数である）
のものであり得る。ある特定の実施形態では、上に例示される式ＸＸＩＩＩおよびＸＸＩＶの化合物の各ＹおよびＺが、メチル（Ｃ_１アルキル）またはエチル（Ｃ_２アルキル）であり得る。

追加の実施形態は、式ＸＶ、ＸＶＩＩ、ＸＩＸ、ＸＸＩおよびＸＸＩＩＩの電子求引基と関連した少なくとも１つのアルケンをさらに含有する電子求引基を含むジカルボン酸化合物に関し、電子求引基と関連した少なくとも１つのアルケンは、マイケル付加反応によって求核試薬「Ａ」の導入によって還元されて、式ＸＶＡ、ＸＶＩＩＡ、ＸＩＸＡ、ＸＩＸＢ、ＸＸＩＡおよびＸＸＩＩＩＡの化合物

（式中、Ｘは電子求引基であり、Ａは求核試薬であり、各ＹおよびＺは、個別に、水素またはＣ_１～Ｃ_１０アルキルであり、各ｍ、ｎ、ｐおよびｔは、独立して、１～１０の整数であり、各ｓは存在しないか、または１～１０の整数であり、各ｒは１～５の整数である）
をもたらす。ある特定の実施形態では、各ＹおよびＺが、メチル（Ｃ_１アルキル）またはエチル（Ｃ_２アルキル）であり得る。

式ＸＶＡ、ＸＶＩＩＡ、ＸＩＸＡ、ＸＩＸＢ、ＸＸＩＡおよびＸＸＩＩＩＡの化合物は、式ＸＶ、ＸＶＩＩ、ＸＩＸ、ＸＸＩおよびＸＸＩＩＩの化合物のいずれかのプロドラッグとして、または活性治療剤自体として有用であり得ることが想定される。プロドラッグとして使用される場合、式ＸＶＡ、ＸＶＩＩＡ、ＸＩＸＡ、ＸＩＸＢ、ＸＸＩＡおよびＸＸＩＩＩＡの化合物は、それを必要とする患者への投与後にインビボで代謝して、治療有効量の式ＸＶ、ＸＶＩＩ、ＸＩＸ、ＸＸＩおよびＸＸＩＩＩによる活性剤を提供することが想定される。

「求核試薬」という用語は、当技術分野で認識されており、電子対を求電子試薬に供与して反応に関連する化学結合を形成する化学種を示す。自由電子対または少なくとも１つのπ結合を有する全ての分子またはイオンが求電子試薬として作用することができる。求核試薬、すなわち、Ａには、それだけに限らないが、エノール、水酸化物アニオン、アルコール、アルコキシドアニオン、過酸化水素、炭酸アニオン、硫化水素、チオール、チオレートアニオン、チオカルボン酸のアニオン、ジチオ炭酸のアニオン、アンモニア、アジド、アミンおよびニトリルが含まれ得る。

「電子求引基」という用語は当技術分野において認識されており、置換基が隣接原子から価電子を誘引する傾向、すなわち、置換基が隣接原子に対して電気陰性であることを示す。電子求引能力レベルの定量化は、ハメットシグマ（σ）定数によって与えられる（例えば、Ｊ．Ｍａｒｃｈ、Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、ＭｃＧｒａｗ Ｈｉｌｌ Ｂｏｏｋ Ｃｏｍｐａｎｙ、ニューヨーク、（１９７７年編）２５１－２５９頁参照）。ハメット定数値は、一般に、電子供与基については負であり、電子求引基については正である。例えば、パラ置換ＮＨ_２のハメット定数（σ［Ｐ］）は約－０．７であり、ニトロ基のσ［Ｐ］は約０．８である。電子求引基には、それだけに限らないが、アルデヒド（－ＣＯＨ） アシル（－ＣＯＲ）、カルボニル（－ＣＯ）、カルボン酸（－ＣＯＯＨ）、エステル（－ＣＯＯＲ）、ハライド（－Ｃｌ、－Ｆ、－Ｂｒ等）、フルオロメチル（－ＣＦ_ｎ）、シアノ（－ＣＮ）、スルホニル（－ＳＯ_ｎ）、スルホン（－ＳＯ_２Ｒ）、スルホン酸（－ＳＯ_３Ｈ）、第一級、第二級、および第三級アンモニウム（－ＮＲ^３＋）、ならびにニトロ（－ＮＯ_２）が含まれ得る。いくつかの実施形態では、電子求引基が、少なくとも約０．２のσを有する強電子求引基であり得、ある特定の実施形態では、電子求引基が双極子を形成し得る。例えば、特定の実施形態では、電子求引基が、ニトロ、アンモニウム、またはスルホニルであり得る。

ある特定の実施形態では、ジカルボン酸化合物が、構造：

（式中、ｍは１～１０であり；
ｎは１～１０であり；
二重結合はシス～トランスであり；
Ｘは、－ＮＯ_２、－ＣＮ、ハライド、Ｃ_ｘＦ_２ｘ＋１（式中、ｘは１～５である）、ＳＯＲ（式中、ＲはＨまたはＣ_１～Ｃ_６アルキルである）、ＳＯ_２Ｒ（式中、ＲはＨまたはＣ_１～Ｃ_６アルキルである）、またはＳＯ_３Ｒ（式中、ＲはＨまたはＣ_１～Ｃ_６アルキルである）から選択される電子求引基である）
を有する。

ある特定の実施形態では、Ｘが－ＮＯ_２である。

ある特定の実施形態では、化合物が、

（式中、ｍは１～１０であり；
ｎは１～１０であり；
二重結合はシス～トランスであり；
ＹおよびＺは、それぞれ独立して、Ｃ_１～Ｃ_１０アルキル、アルケニルまたはアルキニルであり；
Ｘは、－ＮＯ_２、－ＣＮ、ハライド、Ｃ_ｘＦ_２ｘ＋１（式中、ｘは１～５である）、ＳＯＲ（式中、ＲはＨまたはＣ_１～Ｃ_６アルキルである）、ＳＯ_２Ｒ（式中、ＲはＨまたはＣ_１～Ｃ_６アルキルである）、またはＳＯ_３Ｒ（式中、ＲはＨまたはＣ_１～Ｃ_６アルキルである）から選択される電子求引基である）
の構造を有するジカルボン酸のアルキルエステルである。

ある特定の実施形態では、ｍが２であり、ｎが２である。

ある特定の実施形態では、ＹおよびＺが、それぞれ独立して、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル、より詳細にはメチルまたはエチルである。

ある特定の実施形態では、Ｘが－ＮＯ_２である。

ある特定の実施形態では、化合物が、

（式中、ｍは１～１０であり；
ｎは１～１０であり；
二重結合はシス～トランスであり；
ＹおよびＺは、それぞれ独立して、Ｃ_１～Ｃ_１０アルキル、アルケニルまたはアルキニルであり；
Ｘは、－ＮＯ_２、－ＣＮ、ハライド、Ｃ_ｘＦ_２ｘ＋１（式中、ｘは１～５である）、ＳＯＲ（式中、ＲはＨまたはＣ_１～Ｃ_６アルキルである）、ＳＯ_２Ｒ（式中、ＲはＨまたはＣ_１～Ｃ_６アルキルである）、またはＳＯ_３Ｒ（式中、ＲはＨまたはＣ_１～Ｃ_６アルキルである）から選択される電子求引基である）
の構造を有するジカルボン酸のアルキルエステルである。

ある特定の実施形態では、ｍが２であり、ｎが２である。

ある特定の実施形態では、ＹおよびＺが、それぞれ独立して、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル、より詳細にはメチルまたはエチルである。

ある特定の実施形態では、Ｘが－ＮＯ_２である。

ある特定の実施形態では、化合物が、

である。

いくつかの実施形態では、本明細書に開示される方法が、医薬組成物、例えば、薬学的に許容され得る担体および治療有効量の１またはそれを超える本明細書に開示される化合物を含む組成物を、処置を必要とする対象に投与することを含む。化合物は、経口、非経口（皮下注射（ＳＣもしくはデポーＳＣ）、静脈内（ＩＶ）、筋肉内（ＩＭもしくはデポーＩＭ）、胸骨内注射または注入技術を含む）、舌下、鼻腔内（吸入）、髄腔内、局所、眼、または直腸投与され得る。医薬組成物は、慣用的な非毒性の薬学的に許容され得る担体、アジュバント、および／またはビヒクルを含有する投与単位製剤で投与され得る。化合物は、好ましくは、経口投与用の錠剤、カプセル剤もしくはエリキシル剤、または非経口もしくは局所投与もしくは吸入用の無菌溶液、エマルジョンもしくは懸濁液などの、適切な医薬製剤に製剤化される。典型的には、上記の化合物は、当技術分野で周知の技術および手順を使用して医薬組成物に製剤化される。

いくつかの実施形態では、１またはそれを超える開示される化合物（検出可能な標識またはカーゴ部分に連結された化合物を含む）を適切な薬学的に許容され得る担体と混合するか、または合わせて医薬組成物を調製する。本明細書で提供される化合物の投与に適した医薬担体またはビヒクルは、特定の投与様式に適していることが知られている任意のこのような担体を含む。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ、Ｔｈｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ｉｎ Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、編者、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ、Ｗｉｌｌｉａｍｓ、およびＷｉｌｋｉｎｓ、フィラデルフィア、ＰＡ、第２１版（２００５）には、本明細書に開示される化合物の医薬送達に適した例示的な組成物および製剤が記載されている。さらに、化合物は、組成物中の唯一の医薬品有効成分として製剤化されてもよく、または他の有効成分と組み合わされてもよい。

薬学的に許容され得る担体に化合物（複数可）を混合または添加すると、得られる混合物は、溶液、懸濁液、エマルジョンなどであり得る。リポソーム懸濁液もまた、薬学的に許容され得る担体として適し得る。これらは、当業者に公知の方法に従って調製され得る。得られる混合物の形態は、意図した投与様式および選択された担体またはビヒクルへの化合物の溶解度を含むいくつかの因子に依存する。化合物が不十分な溶解度を示す場合、可溶化方法を使用してもよい。このような方法は公知であり、それだけに限らないが、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）などの共溶媒の使用、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）などの界面活性剤の使用、および重炭酸ナトリウム水溶液への溶解を含む。塩またはプロドラッグなどの化合物の誘導体もまた、有効な医薬組成物の製剤化に使用され得る。開示される化合物はまた、それらを身体からの急速な排出から保護する担体、例えば徐放性製剤またはコーティングを用いて調製され得る。このような担体には、それだけに限らないが、マイクロカプセル化送達系などの制御放出製剤が含まれる。製剤はまた、中鎖および長鎖天然油で溶解することによって得ることもできる。

開示される化合物および／または組成物は、複数回または単回投与容器に封入することができる。化合物および／または組成物は、例えば、使用のために組み立てることができる構成部分を含むキットで提供することもできる。例えば、１またはそれを超える開示される化合物は、凍結乾燥形態で提供されてもよく、適切な希釈剤が、使用前に合わせるための分離された成分として提供されてもよい。いくつかの例では、キットが、開示される化合物および同時投与のための第２の治療剤を含み得る。化合物および第２の治療剤は、別々の構成部分として提供され得る。キットは、各容器が１またはそれを超える単位用量の化合物を保持する、複数の容器を含み得る。容器は、好ましくは、それだけに限らないが、経口投与用の錠剤、ゲルカプセル、徐放カプセルなど；非経口投与用のデポー製品、充填済シリンジ、アンプル、バイアルなど；および局所投与用のパッチ、メディパッド（ｍｅｄｉｐａｄ）、クリームなどを含む所望の投与様式に適合される。

医薬組成物は、注射液、経口送達液（例えば、溶液もしくは懸濁液）、経鼻送達液（例えば、エアロゾルもしくは蒸気として送達するため）、半固体形態（例えば、局所クリーム）、または粉末、丸剤、錠剤、もしくはカプセル剤形態などの固体形態などの投与単位形態であり得る。

活性化合物は、処置される対象に対する望ましくない副作用の非存在下で、治療上有用な効果を発揮するのに十分な量で薬学的に許容され得る担体に含まれる。治療有効濃度は、処置される障害について既知のインビトロおよびインビボモデル系で化合物を試験することによって経験的に決定され得る。いくつかの例では、化合物の治療有効量は、化合物が投与される障害の少なくとも１つの症候を軽減または改善する量である。典型的には、組成物は単回投与量に製剤化される。薬物組成物中の活性化合物の濃度は、活性化合物の吸収、不活性化、および排出速度、投与スケジュール、および投与される量、ならびに当業者に公知の他の要因に依存する。

いくつかの例では、約１ｍｇ～２５００ｍｇの開示される化合物、このような化合物の混合物、またはその生理学的に許容され得る塩もしくはエステルが、単位剤形において、生理学的に許容され得るビヒクル、担体、賦形剤、結合剤、保存剤、安定剤、香味剤等と配合される。これらの組成物または調製物中の活性物質の量は、示される範囲の適切な投与量が得られるような量である。「単位剤形」という用語は、ヒト対象および他の哺乳動物のための単位投与量として適した物理的に別個の単位を指し、各単位は、適切な医薬賦形剤と合わせて、所望の治療効果をもたらすように計算された所定量の活性材料を含有する。いくつかの例では、組成物が単位剤形で製剤化され、各投与量が約１ｍｇ～約１０００ｍｇ（例えば、約２ｍｇ～約５００ｍｇ、約５ｍｇ～５０ｍｇ、約１０ｍｇ～１００ｍｇ、または約２５ｍｇ～７５ｍｇ）の１またはそれを超える化合物を含有する。他の例では、単位剤形が、約０．１ｍｇ、約１ｍｇ、約５ｍｇ、約１０ｍｇ、約２０ｍｇ、約３０ｍｇ、約４０ｍｇ、約５０ｍｇ、約６０ｍｇ、約７０ｍｇ、約８０ｍｇ、約９０ｍｇ、約１００ｍｇ、約１５０ｍｇ、約２００ｍｇ、約２５０ｍｇ、約３００ｍｇ、約４００ｍｇ、約５００ｍｇ、約６００ｍｇ、約７００ｍｇ、約８００ｍｇ、約９００ｍｇ、約１０００ｍｇ、またはそれを超える本開示の化合物（複数可）を含む。

開示される化合物または組成物は、単回用量として投与されてもよく、または時間間隔を置いて投与されるいくつかのより少ない用量に分割されてもよい。治療用組成物は、反復投与プロトコル（例えば、１日複数回、毎日、毎週、または毎月の反復投与プロトコルによる）で、長期間にわたる連続送達によって、単回用量送達で投与することができる。処置の正確な投与量、タイミング、および期間は、処置される疾患の関数であり、既知の試験プロトコルを使用して経験的に、またはインビボもしくはインビトロ試験データからの外挿によって決定され得ることが理解される。濃度および投与量の値は、緩和される症状の重症度によっても変化し得ることに留意されたい。さらに、特定の対象について、投与レジメンは、個々の必要性および組成物の投与を管理または監督する者の専門的判断に従って経時的に調整されてもよいこと、ならびに本明細書に示される濃度範囲は例示にすぎないことが理解される。

懸濁液として経口投与する場合、これらの組成物は、医薬製剤の分野で周知の技術に従って調製され得、バルクを付与するための微結晶セルロース、懸濁化剤としてのアルギン酸またはアルギン酸ナトリウム、増粘剤としてのメチルセルロース、および甘味剤／香味剤を含有し得る。即時放出錠剤として、これらの組成物は、微結晶セルロース、リン酸二カルシウム、デンプン、ステアリン酸マグネシウムおよびラクトースならびに／または他の賦形剤、結合剤、増量剤、崩壊剤、希釈剤および滑沢剤を含有し得る。経口投与が望まれる場合、化合物は、典型的には、胃の酸性環境から化合物を保護する組成物で提供される。例えば、組成物は、胃内でその完全性を維持し、腸内で活性化合物を放出する腸溶コーティング中に製剤化することができる。組成物はまた、制酸薬または他のこのような成分と合わせて製剤化され得る。

ある特定の実施形態では、本明細書に開示される活性化合物が、参照により本明細書に組み込まれる、２０２０年３月１９日に出願された米国仮特許出願公開第６２／９９２，０３６号に記載されるように、シクロデキストリンで安定化され得る。特に、水溶液中では、シクロデキストリンが、中心空洞に位置する水分子が活性化合物分子全体または活性化合物構造のある親油性部分のいずれかによって置き換えられるプロセスを通して、活性化合物と包接錯体を形成する。安定化された活性化合物／シクロデキストリン錯体を、好都合な温度（例えば、－８０～３０℃、より詳細には４～２２℃）で所望の期間固体として貯蔵して、次いで、水を使用して再溶解して、活性化合物を投与するために使用される溶液または懸濁液を得ることができる。ある特定の実施形態では、安定化された活性化合物／シクロデキストリン錯体が粉末の形態である。ある特定の実施形態では、粉末貯蔵のための期間は、少なくとも３６０日間、より詳細には少なくとも９０日間であり得、粉末貯蔵のための期間は、少なくとも１４日間、より詳細には少なくともまたは１０日間であり得る。

経口組成物は、一般に、不活性希釈剤または食用担体を含み、錠剤に圧縮されてもよく、またはゼラチンカプセルに封入されてもよい。経口治療投与の目的のために、１またはそれを超える活性化合物を賦形剤と組み込み、錠剤、カプセル剤、またはトローチの形態で使用することができる。薬学的に適合性の結合剤およびアジュバント材料を組成物の一部として含めることができる。錠剤、丸剤、カプセル剤、トローチ剤などは、以下の成分または同様の性質の化合物のいずれかを含有することができる：それだけに限らないが、トラガカントガム、アカシア、コーンスターチ、またはゼラチンなどの結合剤；微結晶セルロース、デンプン、またはラクトースなどの賦形剤；それだけに限らないが、アルギン酸およびコーンスターチなどの崩壊剤；それだけに限らないが、ステアリン酸マグネシウムなどの滑沢剤；それだけに限らないが、コロイド状二酸化ケイ素などの滑剤（ｇｉｌｄａｎｔ）；スクロースまたはサッカリンなどの甘味剤；ならびにペパーミント、サリチル酸メチル、または果実香料などの香味剤。

投与単位形態がカプセル剤である場合、これは、上記の種類の材料に加えて、脂肪油（例えば、ゴマ油、オリーブ油、またはトリオレインなどの純油）などの液体担体を含有することができる。さらに、投与単位形態は、投与単位の物理的形態を改変する様々な他の材料、例えば糖および他の腸溶剤のコーティングを含有することができる。化合物は、エリキシル剤、懸濁液、シロップ、ウエハー、チューインガムなどの成分として投与することもできる。シロップは、活性化合物に加えて、甘味剤としてのスクロースならびにある特定の保存剤、染料および着色料、ならびに香味剤を含有し得る。

経口投与される場合、化合物は、経口投与用の通常の剤形で投与することができる。これらの剤形には、錠剤およびカプセル剤の通常の固体単位剤形、ならびに溶液、懸濁液、およびエリキシルなどの液体剤形が含まれる。固体剤形を使用する場合、化合物を１日１回または２回だけ投与する必要があるように、これらが徐放型であることが好ましい。いくつかの例では、経口剤形が、対象に１日１回、２回、３回、４回またはそれを超える回数投与される。追加の例では、化合物を、１～１０００ｍｇ／ｋｇ体重の投与量範囲で、単回または分割用量でヒトに経口投与することができる。１つの例示的な投与量範囲は、単回または分割用量で経口的に０．１～４０ｍｇ／ｋｇ体重（経口的に０．５～２０ｍｇ／ｋｇ体重など）である。経口投与のために、組成物は、約１～２５００ミリグラムの有効成分、特に１、５、１０、１５、２０、２５、５０、７５、１００、１５０、２００、２５０、３００、４００、５００、６００、７５０、８００、９００、１０００、または２５００ミリグラムの有効成分を含有する錠剤の形態で提供され得る。しかしながら、任意の特定の患者に対する特定の用量レベルおよび投与頻度は変動し得、使用される特定の化合物の活性、その化合物の代謝安定性および作用の長さ、年齢、体重、健康全般、性別、食事、投与様式および投与時間、排出速度、薬物の組み合わせ、特定の症状の重症度、ならびに治療を受けている宿主を含む様々な要因に依存することが理解されよう。

注射用溶液または懸濁液はまた、適切な非毒性の非経口的に許容され得る希釈剤または溶媒、例えばマンニトール、１，３－ブタンジオール、水、リンガー液もしくは等張塩化ナトリウム溶液、または適切な分散剤もしくは湿潤剤および懸濁化剤、例えば合成モノ－、ジ－もしくはトリグリセリドを含む無菌、無刺激、不揮発油（例えば、トリオレイン）、およびオレイン酸を含む脂肪酸を使用して製剤化され得る。非経口、皮内、皮下、または局所施用に使用される溶液または懸濁液は、以下の成分のいずれかを含むことができる：注射用水、生理食塩水、不揮発性油、天然に存在する植物油、例えばゴマ油、ヤシ油、落花生油、綿実油など、または合成脂肪ビヒクル、例えばオレイン酸エチルなど、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール、または他の合成溶媒などの無菌希釈剤；ベンジルアルコールおよびメチルパラベンなどの抗微生物剤；アスコルビン酸および重亜硫酸ナトリウムなどの抗酸化剤；エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）などのキレート剤；酢酸塩、クエン酸塩、およびリン酸塩などの緩衝剤；ならびに塩化ナトリウムおよびデキストロースなどの張度を調整するための薬剤。非経口調製物は、ガラス、プラスチック、または他の適切な材料で作られたアンプル、使い捨てシリンジ、または複数回投与バイアルに封入することができる。緩衝剤、保存剤、抗酸化剤などを必要に応じて組み込むことができる。

静脈内投与される場合、適切な担体には、生理食塩水、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）、ならびにグルコース、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、およびそれらの混合物などの増粘剤および可溶化剤を含有する溶液が含まれる。組織標的化リポソームを含むリポソーム懸濁液もまた、薬学的に許容され得る担体として適し得る。

化合物は、非経口的に、例えば、ＩＶ、ＩＭ、デポーＩＭ、ＳＣ、またはデポーＳＣによって投与することができる。非経口投与される場合、約０．１～約５００ｍｇ／日（例えば、約１ｍｇ／日～約１００ｍｇ／日、または約５ｍｇ／日～約５０ｍｇ／日）の治療有効量が送達され得る。デポー製剤を１か月に１回または２週間に１回注射に使用する場合、用量は約０．１ｍｇ／日～約１００ｍｇ／日、または約３ｍｇ～約３０００ｍｇの毎月用量であり得る。

化合物は舌下投与することもできる。舌下投与される場合、化合物は、ＩＭ投与について上に記載された量で１日１～４回投与すべきである。

化合物は鼻腔内投与することもできる。この経路によって投与される場合、適切な剤形は、鼻内噴霧薬またはドライパウダーである。鼻腔内投与のための化合物の投与量は、ＩＭ投与について上に記載された量である。経鼻エアロゾルまたは吸入によって投与される場合、これらの組成物は、医薬製剤の分野で周知の技術に従って調製され得、ベンジルアルコールもしくは他の適切な保存剤、バイオアベイラビリティを増強するための吸収促進剤、フルオロカーボン、および／または他の可溶化剤もしくは分散剤を使用して、生理食塩水中溶液として調製され得る。

化合物は髄腔内投与することができる。この経路によって投与される場合、適切な剤形は非経口剤形であり得る。髄腔内投与のための化合物の投与量は、ＩＭ投与について上に記載された量である。

化合物は局所投与することができる。この経路によって投与される場合、適切な剤形はクリーム、軟膏、またはパッチである。局所投与される場合、例示的な投与量は、約０．５ｍｇ／日～約２００ｍｇ／日である。１つのパッチで送達することができる量は限られているため、２またはそれを超えるパッチが使用され得る。

化合物は、坐剤によって直腸投与することができる。坐剤によって投与される場合、例示的な治療有効量は、約０．５ｍｇ～約５００ｍｇの範囲であり得る。坐剤の形態で直腸投与される場合、これらの組成物は、薬物を、常温では固体であるが、直腸腔で液化および／または溶解して薬物を放出する、カカオ脂、ポリエチレングリコールの合成グリセリドエステルなどの適切な非刺激性賦形剤と混合することによって調製され得る。

正確な投与量および投与頻度は、投与する医師または他の臨床医に周知であるように、投与される特定の化合物、処置される特定の症状、処置される症状の重症度、特定の対象の年齢、体重、全身健康状態、および個体が服用している可能性がある他の薬物に依存することが当業者には明らかであるはずである。

材料および方法
抗体および試薬
ｐ６５（６９５６番）、ラミンＡ／Ｃ（４７７７番）、ＧＡＰＤＨ（５１７４番）、β－アクチン（４９７０番、および３７００番）に対する抗体は、Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（マサチューセッツ州ダンバーズのＣＳＴ）から購入した。Ｆｌｕｏｒ ４８８および５９４コンジュゲート二次抗体は、Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ（ペンシルバニア州ウエストグローブ）から入手した。細胞実験のために、Ａｎｇ ＩＩ（１７１５０番）、ＰＧＥ２（１４０１０番）、ＯＮＯ－ＡＥ３－２０８（１４５２２番）、ＧＷ９６６２（７０７８５番）およびオレイン酸（９０２６０番）を、Ｃａｙｍａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ（ミシガン州アンアーバー）から購入した。ｎＬＤＬ（１２－１６－１２０４１２－ＴＣ番）およびｏｘＬＤＬ（１２－１６１２０４１２－ＯＸ番）は、Ａｔｈｅｎｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ＆Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（ジョージア州アセンズ）から入手した。ｓｉＰｔｇｅｒ４プール（Ｍ－０４８７００－０１－０００５）およびｓｉＣｏｎｔｒｏｌプール２（Ｄ－００１２０６－１４－０５）は、Ｄｈａｒｍａｃｏｎ（コロラド州ラファイエット）から入手した。ＲＮＡｉＭＡＸ（１３７７８１５０番）およびリポフェクタミン２０００（１１６６８番）は、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（マサチューセッツ州ウォルサム）から入手した。ヒトＮ－ＨＡタグ付きＦＥＭ１Ａ（ＨＧ２１４８７－ＮＹ番）は、Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ（中国、北京）から購入した。ｐＣＭＶ４－ｐ１０５はＡｄｄｇｅｎｅ（プラスミド２３２８８番、マサチューセッツ州ウォータータウン）から入手した。ＮＯ_２－ＯＡは、以前記載されたように（Ｗｏｏｄｃｏｃｋ ＳＲ、Ｂｏｎａｃｃｉ Ｇ、Ｇｅｌｈａｕｓ ＳＬ、Ｓｃｈｏｐｆｅｒ ＦＪ．Ｎｉｔｒａｔｅｄ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄｓ：ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ．Ｆｒｅｅ Ｒａｄｉｃ Ｂｉｏｌ Ｍｅｄ．２０１３；５９：１４－１６）合成した。

細胞培養およびＢＭＤＭの単離
マウスＲＡＷ ２６４．７細胞系、２９３Ｔ／１７細胞系および初代臍帯静脈内皮細胞（ＰＣＳ－１００－０１０、ＨＵＶＥＣ）をＡＴＣＣ（バージニア州マナッサス）から購入し、１０％ ＦＢＳ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を含むＤＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏ）またはＨＵＶＥＣについては２０％ ＦＢＳを補充したＭ１９９（Ｇｉｂｃｏ）で培養した。１２～１６週齢のＣ５７ＢＬ／６野生型マウスから単離したＢＭＤＭを骨髄マクロファージ分化培地中で培養した。分化培地は、Ｌ細胞馴化培地（３０％）、非必須アミノ酸（１１１４０－０５０番、Ｇｉｂｃｏ）、ピルビン酸ナトリウム（１ｍＭ、１１３６０－０７０番、Ｇｉｂｃｏ）、２－メルカプトエタノール（５５μＭ）および１０％ ＦＢＳをイスコフ改変ダルベッコ培地（ＩＭＤＭ、Ｇｉｂｃｏ）に添加することによって調製した。

動物手順
１０週齢の雄Ｃ５７ＢＬ／６ＪマウスをＴｈｅ Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙから購入した。ＡｎｇＩＩ／ＰＣＳＫ９機能獲得型変異によって誘発されたマウスＡＡＡモデルは、十分に確立されている。１週間の馴化後、マウスに西洋型飼料（ＴＤ．８８１３７、Ｅｎｖｉｇｏ）を与え、２×１０１１ゲノムコピーのＡＡＶ－ＰＣＳＫ９．Ｄ３７７Ｙ（ＡＡＶ血清型８、Ｐｅｎｎ Ｖｅｃｔｏｒ Ｃｏｒｅ）を腹腔内注射した。２週間後、各マウスに２つの浸透圧ポンプ（モデル２００４番、Ａｌｚｅｔ）を皮下移植した。一方には、１５００ｎｇ／ｋｇ／分の速度で放出するＡｎｇＩＩ（Ｈ－１７０６番、Ｂａｃｈｅｍ）を充填し、他方にはＰＥＧ－４００、ＯＡまたはＮＯ_２－ＯＡを、ＯＡまたはＮＯ_２－ＯＡについては５ｍｇ／ｋｇ／日の送達速度で負荷した。４週間の注入後、マウスを安楽死させ、腎上大動脈の最大外径を、処置について盲検化した第三者によってデジタルキャリパーで評価した。最大直径が標準サイズよりも５０％以上大きい（１．２ｍｍ以上）腎上大動脈を腹部大動脈瘤とみなした。ポンプ埋め込みの最初の週以内に死亡したか、または血清総コレステロールレベルが２５０ｍｇ／ｄＬ未満であるマウスを試験から除外した。全ての動物手順は、ミシガン大学の施設内動物管理使用委員会（ＩＡＣＵＣ）によって承認されたプロトコルに従って実施した。

総コレステロール（ＴＣ）およびトリグリセリド測定
血清総ＴＣおよびＴＧレベルを酵素反応（日本、大阪のＷａｋｏ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）によって測定した。

組織染色
マウス腎上腹部大動脈のパラフィン切片または凍結切片のＨ＆ＥおよびＶｅｒｈｏｅｆｆ Ｖａｎ Ｇｉｅｓｏｎ染色を、ミシガン大学のインビボ動物コアによって実施した。エラスチン分解グレードを、本発明者らが以前に報告したように計算した。

ＲＮＡ抽出および定量化
マウス腎上大動脈を、それらの直径の測定後に回収した。ヒト大動脈瘤試料を、ミシガン大学の心臓外科学科から得た。ヒトおよびマウス由来の試料を、後の処理のために液体窒素中で急速凍結した。ＴＲＩｚｏｌ（１５５９６０１８番、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して組織からＲＮＡを抽出した。ＲＮｅａｓｙ Ｍｉｎｉ Ｋｉｔ（７４１０６番、ＱＩＡＧＥＮ）を用いて細胞からＲＮＡを単離した。ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ（商標）ＩＩＩ Ｆｉｒｓｔ－Ｓｔｒａｎｄ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ Ｓｙｓｔｅｍ（１８０８００５１番、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して、ｍＲＮＡをｃＤＮＡに逆転写した。示される遺伝子プライマーと共にＩＱ ＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ Ｓｕｐｅｒｍｉｘ（１７０８８８２番、Ｂｉｏ－Ｒａｄ）を使用した定量的リアルタイムＰＣＲ（ｑＰＣＲ）によって、遺伝子発現を３連で定量化した。

酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）
マウス血漿中のＭＣＰ１、ＴＮＦαおよびＩＬ６レベルを、ミシガン大学の癌センター免疫学コアによって実施されたＥＬＩＳＡによって測定した。

蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ）
安楽死させたマウスの腎上大動脈領域を、２％のヘパリンを含有するＰＢＳで完全に灌流した。組織を、４５０Ｕ／ｍＬコラゲナーゼＩ型（１７１００－０１７番、Ｇｉｂｃｏ）、１２５Ｕ／ｍＬコラゲナーゼＸＩ型（Ｃ７６５７番、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）、６０Ｕ／ｍＬヒアルロニダーゼＩ－ｓ型（Ｈ３６０６番、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）、および６０Ｕ／ｍＬ ＤＮａｓｅ－Ｉ（１０１０４１５９００１番、Ｒｏｃｈｅ）のカクテルを使用して３７℃で９０分間消化した。７０μｍセルストレーナーを通して濾過した単一細胞を、Ｆｃブロック（１４－０１６１－８５番、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）によって氷上で５分間ブロッキングした。ブロッキング後、細胞をＣＤ４５（４８－０４５１番、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、ＣＤ６４（５５８４５５番、ＢＤ）、およびＣＤ１１ｃ（４７－０１１４番、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）に対する蛍光色素コンジュゲート抗体と氷上で３０分間インキュベートし、洗浄し、２％ ＰＦＡで固定し、ミシガン大学のフローサイトメトリーコアによるＦＡＣＳ分析に供した。ＦｌｏｗＪｏ ｖ１０．６．１を使用してデータを分析した。

ボイデンチャンバートランスウェル遊走アッセイ
ＨＵＶＥＣをトランスウェル（ＣＬＳ３４６４番、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）の下部チャンバーに播種し、８０％コンフルエンスまで培養した後、ＯｐｔｉＭＥＭ Ｉ還元血清培地（３１９８５－０７０番、Ｇｉｂｃｏ）中でＡｎｇＩＩ（１００ｎＭ）を用いてまたは用いないで６時間処理した。ＯｐｔｉＭＥＭ Ｉで一晩飢餓状態にしたＲＡＷ ２６４．７細胞をトランスウェルの上部チャンバーに播種し（１ウェル当たり２×１０５個）、ビヒクル（エタノール）、ＯＡ（２．５μＭ）またはＮＯ_２－ＯＡ（２．５μＭ）でさらに１２時間処理した。次いで、上部チャンバー上の細胞を綿棒で穏やかに掻き取ることによって除去し、膜を４％ ＰＦＡで１５分間固定し、０．１％クリスタルバイオレットにより室温で１５分間染色した。画像は、ＡＭＧ Ｅｖｏｓ ＸＩ Ｃｏｒｅ Ｉｍａｇｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍによって取得した。Ｉｍａｇｅ Ｊ ｖ１．５２ｓを使用して陽性染色領域の定量化を実施した。

核／細胞質タンパク質抽出、共免疫沈降および免疫ブロット
ＮＥ－ＰＥＲ（商標）核および細胞質抽出試薬（７８８３５番、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を核および細胞質タンパク質抽出に使用した。Ｃｏ－ＩＰのために、ＰＭＳＦ（８５５３番、ＣＳＴ）を補充した細胞溶解緩衝液（９８０３番、ＣＳＴ）を使用して細胞を溶解し、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｇ Ｍａｇｎｅｔｉｃ Ｂｅａｄｓ（７０２４番、ＣＳＴ）およびＨＡに対する抗体（ＡＥ００８番、ＡＢｃｌｏｎａｌ）またはｐ５０／ｐ１０５に対する抗体（１３５８６番、ＣＳＴ）を使用して、製造者のプロトコルに従って免疫沈降させた。免疫ブロットのために、タンパク質抽出物をＳＤＳ－ＰＡＧＥゲルで分離し、ニトロセルロース膜に転写した。膜を５％ ＢＳＡによってブロッキングし、一次抗体と４℃で一晩インキュベートし、引き続いて蛍光コンジュゲート二次抗体と室温で１時間インキュベートした。バンド強度をＯｄｙｓｓｅｙ（登録商標）ＣＬｘイメージングシステムで収集し、Ｉｍａｇｅ Ｓｔｕｄｉｏ（商標）Ｌｉｔｅを使用して定量化した。

ＥＰ４受容体活性およびｃＡＭＰ均一時間分解蛍光（ＨＴＲＦ）アッセイ
ＰＧＥ２誘導ＥＰ４活性化に対するＮＯ_２－ＯＡの効果を、２９３Ｔ／１７細胞においてＥＰ４受容体（ヒト）レポーターアッセイキット（６０１３９０番、Ｃａｙｍａｎ）を使用して評価した。８０％の密度の細胞を、ヒトＥＰ４受容体およびｃＡＭＰ応答エレメント調節分泌型アルカリホスファターゼ（ＳＥＡＰ）レポーターを含有するトランスフェクション複合体でコーティングしたプレート上でインキュベートした。輝度ベースのアルカリホスファターゼ基質を添加することによってＥＰ４の活性化を定量化し、キットの標準と比較して化学発光プレートリーダーで読み取った。ＥＰ４阻害アッセイを、ｃＡＭＰ－Ｇｓ ＨｉＲａｎｇｅキット（６２ＡＭ６ＰＥＢ番、Ｃｉｓｂｉｏ）を製造者のプロトコルに従って使用して実施し、Ｎｅｏ２プレートリーダー（ＢｉｏＴｅｋ、バーモント州ウィヌースキー）によって測定した。ｃＡＭＰ標準を使用して、ＨＴＲＦ比（６６５／６２０）をｃＡＭＰ濃度に変換した。

マトリックスメタロペプチダーゼ（ＭＭＰ）ザイモグラフィ
新たに分化させたＢＭＤＭを骨髄マクロファージ分化培地中で８０％コンフルエンスまで培養した。細胞を２４時間飢餓状態にし、ＰＧＥ２（５００ｎＭ）＋ビヒクル、ＯＡ（２．５μＭ）またはＮＯ_２－ＯＡ（２．５μＭ）とさらに１２時間インキュベートした。次いで、上清を回収し、遠心分離して残留片を除去した。ＭＭＰ２およびＭＭＰ９活性の測定は、上清を（界面活性剤を含まないローディング緩衝液を使用して）１％ゼラチンゲルで泳動し、引き続いてクマシーブルーで染色することによって実施した。

インシリコリガンド－受容体ドッキングシミュレーション
３．２Å分解能でのヒトＥＰ４受容体の改変結晶構造を決定した。ＮＯ_２－ＯＡおよびＥＰ４のタンパク質－リガンドドッキングシミュレーションを、ＥＡＤｏｃｋ ＤＳＳベースのオンラインインターフェース、ＳｗｉｓｓＤｏｃｋを使用して実施した。結合エネルギーは、ＣＨＡＲＭＭに基づく関数を使用して決定した。

統計分析
統計分析を、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ８．３．０またはＲ－３．６．２を使用して実施した。シャピロ－ウィルク検定を使用してデータを正常性について試験し、対照に対して正規化した場合の「正規性対対数正規性」について試験した。正規性試験に合格したデータについては、残留プロットを使用して等分散性を確実にした。必要に応じて重み付けを実施した。Ｑを１％に設定したＲＯＵＴを使用して、生データの外れ値を特定した。対応のないスチューデントｔ検定を使用して２つの平均間の差を比較し、一元配置ＡＮＯＶＡを使用して２つを超える群からの平均を比較し、非線形回帰または二元配置ＡＮＯＶＡを２つの独立変数を有するデータに使用した。個々の平均を比較するために、テューキーまたはシダックの事後検定を加えた。正常性試験に不合格であったデータについては、マン・ホイットニーＵ検定またはクラスカル・ウォリス検定、引き続いてダンの比較を代替として使用した。マンテル・コックス検定を生存アッセイに使用した。非線形回帰のために、３または４パラメータ、グローバルフィッティングまたは別個のフィッティング、および制約をＰｒｉｓｍで比較した。発生率分析のために、事後検定後に２×３のフィッシャーの正確確率検定を、「ｒｃｏｍｐａｎｉｏｎ」パッケージを使用してＲで行った。試験は、対照よりも高い処置を選択した補足図３Ａを除いて、両側で実施した。特に明記しない限り、連続変数は全て平均±平均の標準誤差（ＳＥＭ）として提供した。主検定と事後検定の両方についてｐ＜０．０５を有する結果を統計学的に有意とみなした。全てのインビトロ結果は、少なくとも３つの独立した実験を表す。

検定力（ｐｏｗｅｒ）分析
検定力分析を使用して、α＝０．０５で０．８の検定力を達成するためのパイロット試験の効果量およびＳ／Ｎ比に基づいて、試験に必要なマウスの数を推定した（ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｓｔａｔ．ｕｂｃ．ｃａ／～ｒｏｌｌｉｎ／ｓｔａｔｓ／ｓｓｉｚｅ／ｎ２．ｈｔｍｌ）。

性因子の正当性
性別の違いの影響を最小限に抑えるために、雄からの試料および雌からの試料を本発明者らの試験で使用した。しかしながら、ＡｎｇＩＩおよび高コレステロール血症誘発ＡＡＡマウスモデルにおいて、以前の実験ではこのモデルで１０％未満の雌マウスしかＡＡＡを発症しなかったので（データは示さず）、本発明者らは雄マウスに限定された。

結果
ニトロ－オレイン酸はマウスモデルにおけるＡＡＡ形成を減弱させる
本発明者らはまず、ＮＯ_２－ＯＡがＣ５７ＢＬ／６野生型マウスにおけるＡＡＡのＡｎｇ ＩＩ＋高コレステロール血症モデルにおいてＡＡＡ発症から保護することができるかどうかを試験した。マウスの３つの群（１群当たりｎ＝２５～３０）に、ビヒクル対照（ＰＥＧ－４００）、ＯＡ、またはＮＯ_２－ＯＡのいずれかの慢性皮下注入を行った（図１Ａ）。４週間後、ビヒクル（２８．６％対６８．４％、ｐ＝０．０１１７）またはＯＡ（２８．６％対６９．６％、ｐ＝０．００７８）処置群と比較すると、ＮＯ_２－ＯＡ処置マウスでＡＡＡの発生率の有意な減少が観察された（図１Ｂ、図１Ｃ）。この効果は、ビヒクル（１．１６±０．０９ｍｍ対１．６５±０．１７ｍｍ、ｐ＝０．０２８９）またはＯＡ（１．１６±０．０９ｍｍ対１．７８±０．１８ｍｍ、ｐ＝０．０１２１）処置群と比較した場合に、ＮＯ_２－ＯＡ処置群における腎上大動脈領域の最大直径の有意な減少を伴った（図１Ｄ）。ＥＣＭ分解はビヒクル対照マウスおよびＯＡ処置マウスにおいて顕著であるが、ＮＯ_２－ＯＡ処置は保護的であり、血管の完全性を維持し、エラスチン線維分解を有意に減少させた（ビヒクルに対してｐ＝０．０２７４およびＯＡに対してｐ＝０．０３０４、図１Ｅ、図１Ｆ）。コレステロールの変化も体重の変化も観察されなかったので、代謝変化はＮＯ_２－ＯＡ保護効果を説明しなかった。ＮＯ_２－ＯＡは、ビヒクルと比較した場合、血清ＴＧレベルを有意に低下させたが（ｐ＝０．００４８）、この低下は、ＯＡ処置マウスのＴＧレベルがビヒクルよりも有意に低かったため特異的ではなく（ｐ＝０．０１３６）、ＮＯ_２－ＯＡ群とＯＡ群との間で血清ＴＧレベルの有意差は観察されなかった。全体として、これらの結果は、ＯＡによって共有されない効果である、インビボでのＡＡＡ発症に対するＮＯ_２－ＯＡによる特異的保護を示す。

ニトロ－オレイン酸は、脈管構造への白血球／マクロファージ浸潤を防止する
ＡＡＡ発症に対する脈管構造中の浸潤白血球／マクロファージの寄与が長い間実証されている。したがって、本発明者らは、単球／内皮細胞間相互作用に関連するいくつかの遺伝子の発現を評価することによって、インビボでの浸潤過程に対するＮＯ_２－ＯＡ処置の効果を試験した。ＮＯ_２－ＯＡで処置したマウスは、ビヒクル対照群と比較すると、血管細胞接着タンパク質１（Ｖｃａｍ１、ｐ＝０．０００８）およびＭＣＰ１遺伝子（ｐ＝０．０００３、図２Ａ）の発現が有意に減少していた。しかしながら、ＮＯ_２－ＯＡ群における細胞間接着分子１（Ｉｃａｍ１）の発現は統計学的に有意ではなかった（ビヒクルに対してｐ＝０．２６９８、図２Ａ）。これらの局所応答はまた全身的に観察され、循環ＭＣＰ１（ｐ＝０．０００６）とＩＬ６（ｐ＝０．０４５９）の両方のタンパク質レベルがＮＯ_２－ＯＡによって有意に低下した（図２Ｂ、図２Ｃ）。炎症反応における浸潤白血球およびマクロファージの役割を評価するために、腎上大動脈を単一細胞に消化し、白血球（ＣＤ４５＋）およびＭ１様マクロファージ（ＣＤ６４＋、ＣＤ１１ｃ＋）の数を計数した（図２Ｄ）。ビヒクル群と比較して、ＮＯ_２－ＯＡ処置時に脈管構造中に出現した白血球（ＣＤ４５＋）は有意に少なかった（１４．８７±３．２８％対ビヒクル対照の５０．０３±１３．０２％、ｐ＝０．０４８９、図２Ｅ）。注目すべきことに、炎症誘発性Ｍ１様マクロファージ（ＣＤ６４＋、ＣＤ１１ｃ＋）の存在量もＮＯ２－ＯＡ群で減少し（３．２７±０．４２％対ビヒクル対照の１１．４３±２．６５％、ｐ＝０．０３３８、図２Ｆ）、これはニトロ－ＦＡがマクロファージの分化、接着および分極化に影響を及ぼすという以前の所見と一致している。さらに、本発明者らは、ＨＵＶＥＣをＡｎｇ ＩＩで６時間処置し、馴化培地を使用してＲＡＷ ２６４．７細胞の遊走を誘導した。本発明者らは、ＮＯ_２－ＯＡが、Ａｎｇ ＩＩの存在下で内皮依存性マクロファージ遊走を有意に阻害するが、基本条件下では阻害しないことを観察した。これらのデータは、ＮＯ_２－ＯＡがＡＡＡ病変領域への内皮依存性白血球／マクロファージ遊走を制限するのに有効であることを示している。

ニトロ－オレイン酸は、部分的にＰＰＡＲγの活性化を介して、ｏｘ－ＬＤＬ誘導ＮＦκＢ活性化および炎症誘発性応答を阻害する
アテローム性動脈硬化症の開始および発症におけるｏｘＬＤＬの役割は十分に確立されているが、体系的なアプローチを利用した最近の研究は、ｏｘＬＤＬがまた、炎症応答の活性化を介してＡＡＡの形成および発症に関与することを示唆した。よって、本発明者らは、ＮＯ_２－ＯＡが、ｏｘＬＤＬによって誘導されるマクロファージ炎症活性化の阻害を通して保護的役割を発揮すると仮定した。

ここで、ＢＭＤＭをｏｘＬＤＬ（５０μｇ／ｍｌ）で処理し、ｏｘＬＤＬ誘導ｐ６５核移行を核画分および細胞質画分で評価した（図３Ａ、図３Ｂ）。本発明者らは、ＮＯ_２－ＯＡが、対照群の２７．９３±１．８９に対して１４．１０±１．９２の核対細胞質比で、ｏｘＬＤＬ誘導ｐ６５核移行を有意に阻害することを見出した（ｐ＝０．０２３８、図３Ｃ）。ｏｘＬＤＬ処理細胞培地中の炎症性サイトカインのさらなる分析は、ＩＬ６レベルの有意な低下（対照に対してｐ＝０．０３２７）およびＭＣＰ１レベルのわずかに有意な低下（対照に対してｐ＝０．０６６４）を示した。しかしながら、対照群と比較して、ＴＮＦαレベルに有意差は観察されなかった（ｐ＝０．３２９０、図３Ｄ～図３Ｆ）。単球／マクロファージにおけるＰＰＡＲγ発現はｏｘＬＤＬによって上方調節され、これはアテローム形成およびＡＡＡ発症の素因となるような疾患条件下でその役割を増幅し得る。本発明者らは、ＥＣＭ分解を担う炎症誘発性遺伝子Ｉｌ１ｂおよびＭｍｐ９のｏｘＬＤＬ誘導発現がＮＯ_２－ＯＡ処理によって有意に減少すること（対照に対してｐ＜０．０００１）、およびＮＯ_２－ＯＡの保護効果が、不可逆的ＰＰＡＲγアンタゴニスト、ＧＷ９６６２（Ｉｌ１ｂについてはｐ＝０．０３１０、Ｍｍｐ９についてはｐ＝０．０３２１、図３Ｇ）またはｓｉＰＰＡＲγを与えることによって部分的に阻止されることを示し、ＰＰＡＲγシグナル伝達が、ｏｘ－ＬＤＬ誘発炎症促進応答に対するＮＯ_２－ＯＡの保護効果を部分的に担うことを示した。

ニトロ－オレイン酸は、ＰＧＥ２依存性ＥＰ４シグナル伝達の偏った調節因子である
ＮＯ２－ＯＡ保護効果に潜在的に寄与する他の経路に対処するために、本発明者らはＰＧＥ２依存性ＥＰ４シグナル伝達を調査した。マクロファージシクロオキシゲナーゼ２（ＣＯＸ２）、プロスタグランジンＥシンターゼ１のミクロソームアイソフォーム（ｍＰＧＥＳ１）およびＥＰ４を伴うシグナル伝達軸がＡＡＡ発症に寄与することが報告されている。例えば、ＣＯＸ２、ｍＰＧＥＳ－１、およびＥＰ４レベルは、ヒト動脈瘤病変部位で上方調節される。同様の上方調節がヒト胸部大動脈瘤病変およびＡｎｇＩＩ＋高コレステロール血症誘発マウスＡＡＡモデルの腎上大動脈領域においても見られた。ＥＰ４受容体はマクロファージにおいて高度に発現され、ＭＭＰ分泌のＰＧＥ２依存上方調節を担う。２９３Ｔ細胞においてＥＰ４を過剰発現させることによって、本発明者らは、ＮＯ_２－ＯＡがＥＰ４アゴニストＰＧＥ２のある範囲の濃度にわたって用量反応曲線を有意に右方向にシフトさせ、ベストフィットＥＣ５０が対照群の１０９．５ｐＭに対して１．２ｎＭであることを実証した（ｐ＝０．００６９、図４Ａ）。さらに、ＮＯ_２－ＯＡは、ＰＧＥ２によって誘導される（ＩＣ９０ １０ｎＭ）ｃＡＭＰのＥＰ４ Ｇ共役受容体への動員を用量依存的に減少させ、ベストフィットＩＣ５０が２．８μＭであった（Ｒ２＝０．９１４２、図４Ｂ）。分子受容体ドッキング結果は、最高スコアを有するＮＯ_２－ＯＡの予測結合部位がＰＧＥ２のオルソステリック結合ポケットに近いことを示した（図４Ｃ）。ＭＭＰ、特にＭＭＰ２／９は、ＥＣＭ分解およびＡＡＡ発症において必須の役割を果たす。次いで、本発明者らは、ゼラチンザイモグラフィーを使用して、ＮＯ_２－ＯＡ処置時のマクロファージＭＭＰ２／９の活性を決定した。ＢＭＤＭでは、ＰＧＥ２がＭＭＰ９発現を上方調節し、この効果はＮＯ_２－ＯＡ処置によって有意に減少させることができるが、ＭＭＰ２活性については有意な変化は観察されなかった（図４Ｄ）。ＥＣＭ分解へのその正の寄与とは別に、ＥＰ４受容体のＰＧＥ２依存活性化は、ＥＰＲＡＰを動員することによって抗炎症作用を発揮し、これはｐ１０５への結合を通してＮＦκＢおよびＭＥＫの活性化を阻害し、そのリン酸化を防止する。本明細書において、本発明者らの結果は、Ｔｎｆ、Ｉｌ６、およびＣｃｌ４の発現によって反映されるように、ＮＯ_２－ＯＡがＬＰＳ誘導マクロファージ活性化に対するＰＧＥ２媒介保護効果を抑制しないことを実証した。さらに、ＨＡタグ付きＥＰＲＡＰ（ＦＥＭ１Ａ）およびｐ１０５を過剰発現する細胞におけるＣｏ－ＩＰアッセイは、最大５μＭのＮＯ_２－ＯＡがＥＲＲＡＰ／Ｐ１０５相互作用に有意な効果を及ぼさないことを示した。全体として、これらの結果は、ＮＯ_２－ＯＡがＥＰ４依存性ＰＧＥ２シグナル伝達の偏った調節因子として働くことを示している。

開示される発明の原理が適用され得る多くの可能な実施形態を考慮して、例示される実施形態は好ましい例にすぎず、本発明の範囲を限定するものとして解釈されるべきではないことが認識されるべきである。

Claims (16)

1. 治療有効量の（ｉ）ニトロアルケン脂肪酸、（ｉｉ）電子求引基、脱離基、および前記電子求引基と前記脱離基との間に配置された炭素－炭素二重結合を有する不飽和脂肪酸、（ｉｉｉ）チオール化ニトロ脂肪酸、（ｉｖ）求電子性を誘導する二重結合上の電子求引基を含むジカルボン酸化合物、または（ｉ）～（ｉｖ）のうちの少なくとも２つの混合物から選択される化合物を、動脈瘤を有する、動脈瘤を有する疑いがある、または動脈瘤を発症するリスクがある対象に投与することを含む方法。
2. 前記動脈瘤が大動脈瘤である、請求項１に記載の方法。
3. 前記動脈瘤が血管瘤である、請求項１に記載の方法。
4. 前記大動脈瘤が腹部大動脈瘤である、請求項２に記載の方法。
5. 前記大動脈瘤が胸部大動脈瘤または胸腹部大動脈瘤である、請求項２に記載の方法。
6. 前記動脈瘤が頭蓋内動脈瘤である、請求項１に記載の方法。
7. 前記動脈瘤が、腹腔動脈瘤、腸間膜動脈瘤、腎動脈瘤、脾動脈瘤、肝動脈瘤、腸骨動脈瘤、大腿動脈瘤、膝窩動脈瘤または大動脈の任意の分岐部の動脈瘤である、請求項１に記載の方法。
8. 前記動脈瘤が処置される、請求項１から７のいずれか１項に記載の方法。
9. 前記化合物がニトロアルケン脂肪酸である、請求項１から８のいずれか１項に記載の方法。
10. 前記化合物が、式Ｉの構造：
    

    

    ［式中、Ｒ^１は、水素、Ｃ_１～Ｃ_２４アルキル、Ｃ_１～Ｃ_２４アルケニル、またはＣ_１～Ｃ_２４アルキニルであり；
    Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^７、およびＲ^８は、それぞれ独立して、水素、酸素、Ｃ_１～Ｃ_２４アルキル、ＮＯ_２、ＯＨ、またはＯＯＨであり；
    Ｒ^４は末端ＣＯＯＲ^６基［式中、Ｒ^６は水素、またはＣ_１～Ｃ_２４アルキルである］であり；
    Ｒ^５は水素、Ｃ_１～Ｃ_２４アルキルであるか、またはＲ^４およびＲ^５は合わせて＝Ｃ（Ｒ^９）（Ｒ^１０）［式中、Ｒ^９は、Ｃ_１～Ｃ_２４アルキル、Ｃ_１～Ｃ_２４アルケニル、もしくはＣ_１～Ｃ_２４アルキニルを含むか、またはＲ^９は末端ＣＯＯＲ^６基であり、Ｒ^１０は水素、ＮＯ_２、ＯＨ、またはＯＯＨである］を形成し；
    ｎは１～２４であり；
    ニトロアルケン脂肪酸は少なくとも１つのＮＯ_２基を含む］；あるいは
    式ＩＩの構造：
    

    

    ［式中、Ｒ^１は、水素、Ｃ_１～Ｃ_２４アルキル、Ｃ_１～Ｃ_２４アルケニル、またはＣ_１～Ｃ_２４アルキニルであり；
    Ｒ^２、Ｒ^４、Ｒ^５およびＲ^６はそれぞれ水素であり；
    Ｒ^７は末端ＣＯＯＲ^９基［式中、Ｒ^９は水素またはＣ_１～Ｃ_２４アルキルである］であり；
    Ｒ^３およびＲ^８は、それぞれ独立して、水素、酸素、Ｃ_１～Ｃ_２４アルキル、ＮＯ_２、ＯＨ、ＯＮＯ_２、ＮＯ、ＯＮＯまたはＯＯＨであり、但し、Ｒ^３またはＲ^８の少なくとも１つはＮＯ_２であり、Ｒ^３またはＲ^８の他方は水素、ＯＮＯまたはＯＮＯ_２である］；あるいは
    式ＩＩＩの構造：
    

    

    ［式中、Ｒ^１は、水素、Ｃ_１～Ｃ_２４アルキル、Ｃ_１～Ｃ_２４アルケニル、またはＣ_１～Ｃ_２４アルキニルであり；
    Ｒ^２およびＲ^５はそれぞれ水素であり；
    Ｒ^７は末端ＣＯＯＲ^６基［式中、Ｒ^６は水素またはＣ_１～Ｃ_２４アルキルである］であり；
    Ｒ^３およびＲ^４は、それぞれ独立して、水素、酸素、Ｃ_１～Ｃ_２４アルキル、ＮＯ_２、ＯＨ、ＯＮＯ_２、ＮＯ、ＯＮＯまたはＯＯＨであり、但し、Ｒ^３またはＲ^４の少なくとも１つはＮＯ_２であり、Ｒ^３またはＲ^４の他方は水素、ＯＮＯまたはＯＮＯ_２である］
    から選択されるニトロアルケン脂肪酸である、請求項１から８のいずれか１項に記載の方法。
11. 前記化合物が１０－ニトロ－オクタデカ－９－エン酸である、請求項１から８のいずれか１項に記載の方法。
12. 前記化合物が式ＶＩの化合物：
    

    

    ［式中、Ｘ^１はＨであり、ｎは１～１０であり、ｍは１～１０である］
    である、請求項１から８のいずれか１項に記載の方法。
13. 前記化合物が式：
    

    

    ［式中、ｘは１～５であり；ｑ、ｍ、ｐおよびｔは、独立して、１～１０である］
    のチオール化ニトロ脂肪酸および薬学的に許容され得る賦形剤である、請求項１から８のいずれか１項に記載の方法。
14. 前記化合物が
    

    

    ［式中、Ｘは電子求引基であり、
    ｍは１～１０であり；
    ｎは１～１０である］
    である、請求項１から８のいずれか１項に記載の方法。
15. 前記化合物が
    

    

    ［式中、Ｘは電子求引基であり；
    ＹおよびＺは、それぞれ独立して、水素またはＣ_１～Ｃ_１０アルキルであり；
    ｍは１～１０であり；
    ｎは１～１０である］
    である、請求項１から８のいずれか１項に記載の方法。
16. 前記化合物が
    

    

    ［式中、Ｘは電子求引基であり；
    ＹおよびＺは、それぞれ独立して、水素またはＣ_１～Ｃ_１０アルキルであり；
    ｐおよびｔは、それぞれ独立して、１～１０であり；
    ｓは存在しないか、または１～１０であり；
    ｒは１である］
    である、請求項１から８のいずれか１項に記載の方法。