JP2023520514A - マスク型ｉｌ－１５サイトカインおよびその切断産物 - Google Patents

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Abstract

本発明は、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片と、マスキング部分と、タンパク質分解的に切断可能なリンカーとを含む、マスク型ＩＬ－１５サイトカインに関する。マスキング部分は、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片をマスクし、それによって、ＩＬ－サイトカインまたはその機能的断片のその同族受容体への結合を低減または防止するが、標的部位における切断可能なリンカーのタンパク質分解切断時に、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、活性化され、その同族受容体への結合が可能またはより可能なものになる。【選択図】図２

Description

関連出願の相互参照
本出願は、それぞれが参照によりその全体で本明細書に組み込まれる、２０２０年４月１日に出願された米国仮出願第６３／００３，８４５号、２０２０年１１月１３日に出願された第６３／１１３，７５１号、および２０２０年１１月２５日に出願された第６３／１１８，５８２号の優先権の利益を主張する。
ＡＳＣＩＩテキストファイル上の配列表の提出
ＡＳＣＩＩテキストファイル上の以下の提出の内容は、参照によりその全体で本明細書に組み込まれる：配列表のコンピュータ可読形態（ＣＲＦ）（ファイル名：７３７７６２００２９４０ＳＥＱＬＩＳＴ．ＴＸＴ、記録日：２０２１年３月２５日、サイズ：２，０００ＫＢ）。
本発明は、マスク型ＩＬ－１５サイトカイン、ならびにその使用および製造に関連する方法に関する。本発明はまた、該マスク型ＩＬ－１５サイトカインの切断産物、およびその使用に関連する方法に関する。
がんは、米国で第２の主要な死因であり、次の５つの主要な原因（慢性呼吸器疾患、脳卒中、事故、アルツハイマー病、および糖尿病）よりも多くの死因を占めている。特に標的療法では大きな進歩が遂げられているが、この分野ではまだ多くの研究が残されている。免疫療法およびこの分野の分科である免疫腫瘍学は、悪性腫瘍を治療するための実行可能で刺激的な治療選択肢を生み出している。特に、がんの１つの特徴は免疫回避であり、顕著な努力が、がんを認識および治療するために免疫系を再活性化するための標的を識別し、これらの標的に対する療法を開発してきたことが現在では認識されている。
サイトカイン療法は、免疫系を刺激して抗腫瘍細胞傷害を誘発するための有効な方略である。特に、インターロイキン－２（ＩＬ－２）の組換え形態であるアルデスロイキンは、転移性腎細胞がんおよび黒色腫の治療のためにＦＤＡによって承認されている。残念ながら、患者に投与されるサイトカインは、一般的に非常に短い半減期を有し、それによって、頻繁な投与を必要とする。例えば、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎというブランド名で市販されているアルデスロイキンの製品ラベルは、薬剤が５分間の静脈内（ＩＶ）投与を受けた患者では８５分の半減期を有することが示されたと記載している。加えて、高用量のサイトカインの投与は、全身免疫活性化を通して血管漏出などの有害な健康転帰を引き起こし得る。これらの所見は、全身免疫活性化に関連する副作用を伴わずに腫瘍を効果的に標的化するサイトカイン治療薬を開発する必要性を例証している。本明細書では、この必要性に対処するために、マスクＩＬ－１５サイトカイン、該マスクＩＬ－１５サイトカインの切断産物、およびその組成物、ならびにその使用方法が提供される。
開示される発明は、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片の１つ以上の受容体結合部位においてマスキング部分によってマスクされるように操作される、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片に関する。ＩＬ－１５サイトカインは、タンパク質分解的に切断可能なリンカーを含むことによって、腫瘍微小環境内などの標的部位においてプロテアーゼによって活性化可能であるように操作される。マスク型サイトカイン構築物では、マスキング部分は、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片のその同族受容体への結合を低減または防止する。標的部位における切断可能なリンカーのタンパク質分解切断時に、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、活性化され、その同族受容体への結合が可能またはより可能なものになる。
本明細書に提供されるものは、マスク型ＩＬ－１５サイトカインであって、第１のポリペプチド鎖であって、
Ｎ’ＨＬ１ Ｃ’を含む、第１のポリペプチド鎖と、
第２のポリペプチド鎖であって、
Ｎ’ＨＬ２－非切断可能Ｌ２－ＭＭ－切断可能Ｌ１－Ｃ Ｃ’を含む、第２のポリペプチド鎖と、を含み、
ＨＬが、半減期延長ドメインであり、Ｌ１が、第１のリンカーであり、ＭＭが、マスキング部分であり、Ｌ２が、第２のリンカーであり、Ｃが、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片であり、第１のリンカーが、タンパク質分解的に切断可能なペプチド（ＣＰ）を含み、第２のリンカーが、タンパク質分解的に切断可能なペプチドを含まない、マスク型ＩＬ－１５サイトカインである。
いくつかの実施形態では、マスク型サイトカインは、第１のポリペプチド鎖であって、
Ｎ’ＨＬ１ Ｃ’を含む、第１のポリペプチド鎖と、
第２のポリペプチド鎖であって、
Ｎ’ＨＬ２－非切断可能Ｌ２－ＭＭ－ＳＤ１－ＣＰ－ＳＤ２－Ｃ Ｃ’を含む、第２のポリペプチド鎖と、を含み、
ＣＰが、切断可能なペプチドであり、ＳＤ１が、第１のスペーサードメインであり、ＳＤ２が、第２のスペーサードメインである。
いくつかの実施形態では、スペーサードメインは、アミノ酸残基Ｇ、ＳおよびＰが豊富である。
いくつかの実施形態では、第１のスペーサードメイン（ＳＤ１）は、長さで３～１８個のアミノ酸である。
いくつかの実施形態では、ＳＤ１は、配列番号２４～３２のうちの１つを含むアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、第２のスペーサードメイン（ＳＤ２）は、長さで２～１０個のアミノ酸である。
いくつかの実施形態では、ＳＤ２は、配列番号３５～４０のうちの１つを含むアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、マスク型サイトカインは、第１のポリペプチド鎖であって、
Ｎ’ＨＬ１ Ｃ’を含む、第１のポリペプチド鎖と、
第２のポリペプチド鎖であって、
Ｎ’ＨＬ２－非切断可能Ｌ２－ＭＭ－［’ＩＬ－１５Ｒαドメイン’］－ＳＤ１－ＣＰ－ＳＤ２－Ｃ Ｃ’を含む、第２のポリペプチド鎖と、を含み、
「ＩＬ－１５Ｒαドメイン」は、ＩＬ－１５Ｒαサブユニットまたはその断片を含むドメインである。
いくつかの実施形態では、マスク型サイトカインは、第１のポリペプチド鎖であって、
Ｎ’ＨＬ１ Ｃ’を含む、第１のポリペプチド鎖と、
第２のポリペプチド鎖であって、
Ｎ’ＨＬ２－非切断可能Ｌ２－ＭＭ－ＳＤ１－ＣＰ－ＳＤ２－［’ＩＬ－１５Ｒαドメイン’］－Ｃ Ｃ’を含む、第２のポリペプチド鎖と、を含み、
“ＩＬ－１５Ｒαドメイン”が、ＩＬ－１５Ｒαサブユニットまたはその断片を含むドメインである、請求項２～７のいずれか一項に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
いくつかの実施形態では、「ＩＬ－１５Ｒαドメイン」は、野生型ｓｕｓｈｉドメインｓＩＬ－１５ＲαまたはｓＩＬ－１５Ｒαバリアントを含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαサブユニットまたはその断片は、配列番号５５、５６、５７、および５８のうちの１つを含むアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、「ＩＬ－１５Ｒαドメイン」は、配列番号５６のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、位置Ｒ２６にアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、アミノ酸置換Ｒ２６Ｎを含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、アミノ酸置換Ｒ２６Ｓを含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、位置Ｒ３５にアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、アミノ酸置換Ｒ３５Ｑを含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、アミノ酸置換Ｒ３５Ｓを含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、位置Ｒ２６およびＲ３５にアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、アミノ酸置換Ｒ２６ＳまたはＲ２６Ｎ、およびＲ３５ＱまたはＲ３５Ｓを含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、アミノ酸置換Ｒ２６ＮおよびＲ３５Ｑを含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、位置Ｒ２６に追加のアミノ酸置換を伴う配列番号５５、５６、５７、または５８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、追加のアミノ酸置換Ｒ２６Ｎを伴う配列番号５５、５６、５７、または５８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、追加のアミノ酸置換Ｒ２６Ｓを伴う配列番号５５、５６、５７、または５８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、位置Ｒ３５に追加のアミノ酸置換を伴う配列番号５５、５６、５７、または５８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、追加のアミノ酸置換Ｒ３５Ｑを伴う配列番号５５、５６、５７、または５８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、追加のアミノ酸置換Ｒ３５Ｓを伴う配列番号５５、５６、５７、または５８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、位置Ｒ２６およびＲ３５に追加のアミノ酸置換を伴う配列番号５５、５６、５７、または５８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、追加のアミノ酸置換Ｒ２６ＳまたはＲ２６Ｎ、およびＲ３５ＱまたはＲ３５Ｓを伴う配列番号５５、５６、５７、または５８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、追加のアミノ酸置換Ｒ２６ＮおよびＲ３５Ｑを伴う配列番号５５、５６、５７、または５８のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、位置Ｒ２６に追加のアミノ酸置換を伴う配列番号５６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、追加のアミノ酸置換Ｒ２６Ｎを伴う配列番号５６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、追加のアミノ酸置換Ｒ２６Ｓを伴う配列番号５６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、位置Ｒ３５に追加のアミノ酸置換を伴う配列番号５６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、追加のアミノ酸置換Ｒ３５Ｑを伴う配列番号５６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、追加のアミノ酸置換Ｒ３５Ｓを伴う配列番号５６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、位置Ｒ２６およびＲ３５に追加のアミノ酸置換を伴う配列番号５６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、追加のアミノ酸置換Ｒ２６ＳまたはＲ２６Ｎ、およびＲ３５ＱまたはＲ３５Ｓを伴う配列番号５６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、追加のアミノ酸置換Ｒ２６ＮおよびＲ３５Ｑを伴う配列番号５６のアミノ酸配列を含む。（配列番号１７２、１７３、１７４、１７５、および１７６を参照されたい。）
本明細書で提供されるものは、マスク型ＩＬ－１５サイトカインであって、第１のポリペプチド鎖であって、
Ｎ’ＨＬ１－非切断可能Ｌ１－ＭＭ Ｃ’を含む、第１のポリペプチドと、
第２のポリペプチド鎖であって、
Ｎ’ＨＬ２－切断可能Ｌ２－Ｃ Ｃ’を含む、第２のポリペプチドと、を含み、
ＨＬ１が、第１の半減期延長ドメインであり、Ｌ１が、第１のリンカーであり、ＭＭが、マスキング部分であり、ＨＬ２が、第２の半減期延長ドメインであり、Ｌ２が、第２のリンカーであり、Ｃが、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片であり、第２のリンカーが、タンパク質分解的に切断可能なペプチド（ＣＰ）を含み、第１のリンカーが、タンパク質分解的に切断可能なペプチドを含まない、マスク型ＩＬ－１５サイトカインである。
いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、
Ｎ’ＨＬ１－非切断可能Ｌ１－ＭＭ Ｃ’を含み、
第２のポリペプチド鎖は、
Ｎ’ＨＬ２－ＳＤ１－ＣＰ－ＳＤ２－Ｃ Ｃ’を含み、
ＣＰは、切断可能なペプチドであり、ＳＤ１は、第１のスペーサードメインであり、ＳＤ２は、第２のスペーサードメインである。
いくつかの実施形態では、スペーサードメインは、アミノ酸残基Ｇ、Ｓ、およびＰが豊富である。
いくつかの実施形態では、第１のスペーサードメイン（ＳＤ１）は、長さで３～１８個のアミノ酸である。
いくつかの実施形態では、ＳＤ１は、配列番号２４～３２のうちの１つを含むアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、第２のスペーサードメイン（ＳＤ２）は、長さで２～１０個のアミノ酸である。
いくつかの実施形態では、ＳＤ２は、配列番号３５～４０のうちの１つを含むアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、マスク型サイトカインは、
Ｎ’ＩＬ－１５ＲαドメインＣ’を含む、第３のポリペプチド鎖をさらに含み、
「ＩＬ－１５Ｒαドメイン」は、ＩＬ－１５Ｒαサブユニットまたはその断片を含むドメインであり、「ＩＬ－１５Ｒαドメイン」は、ＩＬ－１５サイトカイン（Ｃ）に非共有結合される。
いくつかの実施形態では、第２のポリペプチド鎖は、ＩＬ－１５サイトカインまたはその断片のＣ’末端に共有結合しているＩＬ－１５Ｒαサブユニットまたはその断片を含むドメインをさらに含むため、第１のポリペプチド鎖は、
Ｎ’ＨＬ１－非切断可能Ｌ１－ＭＭ Ｃ’を含み、
第２のポリペプチド鎖は、
Ｎ’ＨＬ２－ＳＤ１－ＣＰ－ＳＤ２ －Ｃ－［’ＩＬ－１５Ｒαドメイン’］ Ｃ’を含み、
ＩＬ－１５Ｒαドメインは、ＩＬ－１５Ｒαサブユニットまたはその断片を含む。
いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、
Ｎ’ＨＬ１－非切断可能Ｌ１－ＭＭ Ｃ’を含み、
第２のポリペプチド鎖は、
Ｎ’ＨＬ２－［’ＩＬ－１５Ｒαドメイン’］－ＳＤ１－ＣＰ－ＳＤ２－Ｃ Ｃ’を含み、
ＩＬ－１５Ｒαドメインは、ＩＬ－１５Ｒαサブユニットまたはその断片を含む。
いくつかの実施形態では、「ＩＬ－１５Ｒαドメイン」は、野生型ｓｕｓｈｉドメインｓＩＬ－１５ＲαまたはｓＩＬ－１５Ｒαバリアントを含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαサブユニットまたはその断片は、配列番号５５、５６、５７、および５８のうちの１つを含むアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、「ＩＬ－１５Ｒαドメイン」は、配列番号５６のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、位置Ｒ２６にアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、アミノ酸置換Ｒ２６Ｎを含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、アミノ酸置換Ｒ２６Ｓを含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、位置Ｒ３５にアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、アミノ酸置換Ｒ３５Ｑを含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、アミノ酸置換Ｒ３５Ｓを含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、位置Ｒ２６およびＲ３５にアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、アミノ酸置換Ｒ２６ＳまたはＲ２６Ｎ、およびＲ３５ＱまたはＲ３５Ｓを含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、アミノ酸置換Ｒ２６ＮおよびＲ３５Ｑを含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、位置Ｒ２６に追加のアミノ酸置換を伴う配列番号５５、５６、５７、または５８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、追加のアミノ酸置換Ｒ２６Ｎを伴う配列番号５５、５６、５７、または５８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、追加のアミノ酸置換Ｒ２６Ｓを伴う配列番号５５、５６、５７、または５８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、位置Ｒ３５に追加のアミノ酸置換を伴う配列番号５５、５６、５７、または５８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、追加のアミノ酸置換Ｒ３５Ｑを伴う配列番号５５、５６、５７、または５８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、追加のアミノ酸置換Ｒ３５Ｓを伴う配列番号５５、５６、５７、または５８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、位置Ｒ２６およびＲ３５に追加のアミノ酸置換を伴う配列番号５５、５６、５７、または５８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、追加のアミノ酸置換Ｒ２６ＳまたはＲ２６Ｎ、およびＲ３５ＱまたはＲ３５Ｓを伴う配列番号５５、５６、５７、または５８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、追加のアミノ酸置換Ｒ２６ＮおよびＲ３５Ｑを伴う配列番号５５、５６、５７、または５８のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、位置Ｒ２６に追加のアミノ酸置換を伴う配列番号５６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、追加のアミノ酸置換Ｒ２６Ｎを伴う配列番号５６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、追加のアミノ酸置換Ｒ２６Ｓを伴う配列番号５６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、位置Ｒ３５に追加のアミノ酸置換を伴う配列番号５６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、追加のアミノ酸置換Ｒ３５Ｑを伴う配列番号５６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、追加のアミノ酸置換Ｒ３５Ｓを伴う配列番号５６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、位置Ｒ２６およびＲ３５に追加のアミノ酸置換を伴う配列番号５６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、追加のアミノ酸置換Ｒ２６ＳまたはＲ２６Ｎ、およびＲ３５ＱまたはＲ３５Ｓを伴う配列番号５６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、追加のアミノ酸置換Ｒ２６ＮおよびＲ３５Ｑを伴う配列番号５６のアミノ酸配列を含む。（配列番号１７２、１７３、１７４、１７５、および１７６を参照されたい。）
いくつかの実施形態では、非切断可能なリンカーは、長さで４～６個のアミノ酸である。
いくつかの実施形態では、非切断可能なリンカーは、「ＧＳ」反復を含む。
いくつかの実施形態では、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
本明細書で提供されるものは、マスク型ＩＬ－１５サイトカインであって、第１のポリペプチド鎖であって、
Ｎ’ＨＬ１－切断可能Ｌ１－ＭＭ Ｃ’を含む、第１のポリペプチド鎖と、
第２のポリペプチド鎖であって、
Ｎ’ＨＬ２－非切断可能Ｌ２－Ｃ Ｃ’を含む、第２のポリペプチド鎖と、
ＨＬ１が、第１の半減期延長ドメインであり、Ｌ１が、第１のリンカーであり、ＭＭが、マスキング部分であり、ＨＬ２が、第２の半減期延長ドメインであり、Ｌ２が、第２のリンカーであり、Ｃが、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片であり、第１のリンカーが、タンパク質分解的に切断可能なペプチド（ＣＰ）を含み、第２のリンカーが、タンパク質分解的に切断可能なペプチドを含まない、マスク型ＩＬ－１５サイトカインである。
いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、
Ｎ’ＨＬ１－ＳＤ１－ＣＰ－ＳＤ２ －ＭＭ Ｃ’を含み、
第２のポリペプチド鎖は、
Ｎ’ＨＬ２－非切断可能Ｌ２－Ｃ Ｃ’を含み、
ＣＰは、切断可能なペプチドであり、ＳＤ１は、第１のスペーサードメインであり、ＳＤ２は、第２のスペーサードメインである。
いくつかの実施形態では、マスク型サイトカインは、
Ｎ’ＩＬ－１５ＲαドメインＣ’を含む、第３のポリペプチド鎖を含み、
「ＩＬ－１５Ｒαドメイン」は、ＩＬ－１５Ｒαサブユニットまたはその断片を含むドメインであり、「ＩＬ－１５Ｒαドメイン」は、ＩＬ－１５サイトカイン（Ｃ）に非共有結合される。
いくつかの実施形態では、スペーサードメインは、アミノ酸残基Ｇ、Ｓ、およびＰが豊富である。
いくつかの実施形態では、第１のスペーサードメイン（ＳＤ１）は、長さで３～１８個のアミノ酸である。
いくつかの実施形態では、ＳＤ１は、配列番号２４～３２のうちの１つを含むアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、第２のスペーサードメイン（ＳＤ２）は、長さで２～１０個のアミノ酸である。
いくつかの実施形態では、ＳＤ２は、配列番号３５～４０のうちの１つを含むアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、非切断可能なリンカーは、長さで１８～２２個のアミノ酸である。
いくつかの実施形態では、非切断可能なリンカーは、アミノ酸残基Ｇ、Ｓ、およびＰが豊富である。
いくつかの実施形態では、非切断可能なリンカーは、配列番号２１に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその断片は、配列番号２またはその機能的断片を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号２のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号２のアミノ酸配列と比較して、少なくとも１つのアミノ酸修飾を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号２のアミノ酸配列と比較して、位置Ｄ２２、Ｅ４６、Ｅ５３に１つ以上のアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号２のアミノ酸配列と比較して、位置Ｄ２２、Ｅ４６、Ｅ５３、Ｎ７１、Ｎ７９、またはＮ１１２に１つ以上のアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号２のアミノ酸配列と比較して、位置Ｎ７１およびＮ７９にアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号２のアミノ酸配列と比較して、位置Ｎ７１およびＮ１１２にアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号２のアミノ酸配列と比較して、位置Ｎ７９およびＮ１１２にアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号２のアミノ酸配列と比較して、位置Ｎ７１、Ｎ７９、およびＮ１１２にアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号３のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号４のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号５のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号６のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号７のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号８のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２７のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２８のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３１のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３３のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、位置Ｎ７１に追加の変異を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、位置Ｓ７３に追加の変異を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、アミノ酸位置Ｎ７２、Ｎ７９、Ｖ８０、Ｔ８１、およびＮ１１２のうちの１つ以上に追加の変異を含む。
いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、
Ｎ’ＨＬ１－非切断可能Ｌ１－ＭＭ Ｃ’を含み、
第２のポリペプチド鎖は、
Ｎ’ＨＬ２－ＳＤ１－ＣＰ－ＳＤ２－［ＣのＮ’末端ドメイン］－［’ＩＬ－１５Ｒαドメイン’］－［Ｃ’末端ドメイン］Ｃ’を含み、
ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、Ｎ’末端ドメインと、Ｃ’末端ドメインとを含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、非切断可能な「αサブユニットリンカー」が両側に配置されたＩＬ－１５Ｒαサブユニットまたはその断片を含む。
いくつかの実施形態では、非切断可能なリンカーは、長さで４～６個のアミノ酸である。
いくつかの実施形態では、非切断可能なリンカーは、「ＧＳ」反復を含む。
いくつかの実施形態では、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、スペーサードメインは、アミノ酸残基Ｇ、Ｓ、およびＰが豊富である。
いくつかの実施形態では、第１のスペーサードメイン（ＳＤ１）は、長さで３～１８個のアミノ酸である。
いくつかの実施形態では、ＳＤ１は、配列番号２４～３２のうちの１つを含むアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、第２のスペーサードメイン（ＳＤ２）は、長さで２～１０個のアミノ酸である。
いくつかの実施形態では、ＳＤ２は、配列番号３５～４０のうちの１つを含むアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、「ＩＬ－１５Ｒαドメイン」は、野生型ｓｕｓｈｉドメインｓＩＬ－１５ＲαまたはｓＩＬ－１５Ｒαバリアントを含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαサブユニットまたはその断片は、配列番号５５、５６、５７、および５８のうちの１つを含むアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、「ＩＬ－１５Ｒαドメイン」は、配列番号５６のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、位置Ｒ２６にアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、アミノ酸置換Ｒ２６Ｎを含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、アミノ酸置換Ｒ２６Ｓを含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、位置Ｒ３５にアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、アミノ酸置換Ｒ３５Ｑを含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、アミノ酸置換Ｒ３５Ｓを含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、位置Ｒ２６およびＲ３５にアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、アミノ酸置換Ｒ２６ＳまたはＲ２６Ｎ、およびＲ３５ＱまたはＲ３５Ｓを含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、アミノ酸置換Ｒ２６ＮおよびＲ３５Ｑを含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、位置Ｒ２６に追加のアミノ酸置換を伴う配列番号５５、５６、５７、または５８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、追加のアミノ酸置換Ｒ２６Ｎを伴う配列番号５５、５６、５７、または５８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、追加のアミノ酸置換Ｒ２６Ｓを伴う配列番号５５、５６、５７、または５８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、位置Ｒ３５に追加のアミノ酸置換を伴う配列番号５５、５６、５７、または５８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、追加のアミノ酸置換Ｒ３５Ｑを伴う配列番号５５、５６、５７、または５８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、追加のアミノ酸置換Ｒ３５Ｓを伴う配列番号５５、５６、５７、または５８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、位置Ｒ２６およびＲ３５に追加のアミノ酸置換を伴う配列番号５５、５６、５７、または５８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、追加のアミノ酸置換Ｒ２６ＳまたはＲ２６Ｎ、およびＲ３５ＱまたはＲ３５Ｓを伴う配列番号５５、５６、５７、または５８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、追加のアミノ酸置換Ｒ２６ＮおよびＲ３５Ｑを伴う配列番号５５、５６、５７、または５８のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、位置Ｒ２６に追加のアミノ酸置換を伴う配列番号５６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、追加のアミノ酸置換Ｒ２６Ｎを伴う配列番号５６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、追加のアミノ酸置換Ｒ２６Ｓを伴う配列番号５６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、位置Ｒ３５に追加のアミノ酸置換を伴う配列番号５６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、追加のアミノ酸置換Ｒ３５Ｑを伴う配列番号５６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、追加のアミノ酸置換Ｒ３５Ｓを伴う配列番号５６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、位置Ｒ２６およびＲ３５に追加のアミノ酸置換を伴う配列番号５６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、追加のアミノ酸置換Ｒ２６ＳまたはＲ２６Ｎ、およびＲ３５ＱまたはＲ３５Ｓを伴う配列番号５６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、追加のアミノ酸置換Ｒ２６ＮおよびＲ３５Ｑを伴う配列番号５６のアミノ酸配列を含む。（配列番号１７２、１７３、１７４、１７５、および１７６を参照されたい。）
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片のＮ’末端ドメインおよびＣ’末端ドメインは、配列番号２のアミノ酸配列と比較して、位置Ｄ２２、Ｅ４６、Ｅ５３に１つ以上のアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片のＮ’末端ドメインおよびＣ’末端ドメインは、位置Ｎ７１に追加の変異を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片のＮ’末端ドメインおよびＣ’末端ドメインは、位置Ｓ７３に追加の変異を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片のＮ’末端ドメインおよびＣ’末端ドメインは、アミノ酸位置Ｎ７２、Ｎ７９、Ｖ８０、Ｔ８１、およびＮ１１２のうちの１つ以上に追加の変異を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片のＮ’末端ドメインは、配列番号９のアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１１５サイトカインまたはその機能的断片のＣ’末端ドメインは、配列番号１０のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、切断可能なペプチドは、配列番号３３のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、切断可能なペプチドは、配列番号３４のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、タンパク質分解的に切断可能なリンカー内の切断可能なペプチドは、配列番号１５５を含む。
いくつかの実施形態では、タンパク質分解的に切断可能なリンカー内の切断可能なペプチドは、配列番号１５６を含む。
いくつかの実施形態では、タンパク質分解的に切断可能なリンカーは、ＳＤ１－ＣＰ－ＳＤ２を含み、ＳＤ１は、第１のスペーサードメインであり、ＣＰは、切断可能なペプチドであり、ＳＤ２は、第２のスペーサードメインであり、ＣＰは、配列番号１５５に示されるアミノ酸配列を有する。
いくつかの実施形態では、タンパク質分解的に切断可能なリンカーは、ＳＤ１－ＣＰ－ＳＤ２を含み、ＳＤ１は、第１のスペーサードメインであり、ＣＰは、切断可能なペプチドであり、ＳＤ２は、第２のスペーサードメインであり、ＣＰは、配列番号１５６に示されるアミノ酸配列を有する。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号４１～５４、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、または１６７のうちの１つを含むアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号４１～５４、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、または１７１のうちの１つを含むアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、第１の半減期延長ドメインは、第１の抗体Ｆｃドメインまたはその断片を含み、第２の半減期延長ドメインは、第２の抗体Ｆｃドメインまたはその断片を含む。
いくつかの実施形態では、第１のＦｃドメインは、ＣＨ３ドメインまたはその断片を含み、第２のＦｃドメインは、ＣＨ３ドメインまたはその断片を含む。
いくつかの実施形態では、第１および／または第２のＦｃドメインは各々、第１および第２の半減期延長ドメインの非共有結合性会合を促進する１つ以上の修飾を含有する。
いくつかの実施形態では、第１および第２の半減期延長ドメインは各々、ＩｇＧ１ Ｆｃドメインまたはその断片である。
いくつかの実施形態では、第１の半減期延長ドメインは、Ｋａｂａｔ ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされる、変異Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、およびＹ４０７Ｖを含む、ＩｇＧ１ Ｆｃドメインまたはその断片を含み、第１の半減期延長ドメインに「ホール」を形成し、第２の半減期延長ドメインは、変異Ｓ３５４ＣおよびＴ３６６Ｗを含む、ＩｇＧ１ Ｆｃドメインまたはその断片を含み、第２の半減期延長ドメインに「ノブ」を形成する。
いくつかの実施形態では、第１および第２の半減期延長ドメインは各々、ＩｇＧ１ Ｆｃドメインまたはその断片であり、各々、Ｋａｂａｔ ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされたアミノ置換Ｎ２９７Ａを含む。
いくつかの実施形態では、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３のアミノ酸配列を含み、その第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、第１および第２の半減期延長ドメインは各々、ＩｇＧ１ Ｆｃドメインまたはその断片であり、各々、Ｋａｂａｔ ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされたアミノ置換Ｉ２５３Ａを含む。
いくつかの実施形態では、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５のアミノ酸配列を含み、その第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、マスキング部分は、ＩＬ－１５Ｒβまたはその断片もしくはバリアントを含む。
いくつかの実施形態では、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸を含む。
いくつかの実施形態では、マスキング部分は、位置Ｃ１２２にアミノ酸置換を有するＩＬ－１５Ｒβバリアントまたはその断片を含む。
いくつかの実施形態では、マスキング部分は、位置Ｃ１２２Ｓにアミノ酸置換を有するＩＬ－１５Ｒβバリアントまたはその断片を含む。
いくつかの実施形態では、マスキング部分は、位置Ｃ１６８にアミノ酸置換を有するＩＬ－１５Ｒβバリアントまたはその断片を含む。
いくつかの実施形態では、マスキング部分は、位置Ｃ１６８Ｓにアミノ酸置換を有するＩＬ－１５Ｒβバリアントまたはその断片を含む。
いくつかの実施形態では、マスキング部分は、位置Ｃ１２２およびＣ１６８にアミノ酸置換を有するＩＬ－１５Ｒβバリアントまたはその断片を含む。
いくつかの実施形態では、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸を含む。
本明細書で提供されるものは、マスク型ＩＬ－１５サイトカインであって、第１のポリペプチド鎖であって、
Ｎ’ＨＬ１－非切断可能Ｌ１－ＭＭ Ｃ’を含む、第１のポリペプチド鎖と、
第２のポリペプチド鎖であって、
Ｎ’ＨＬ２－切断可能Ｌ２－Ｃ Ｃ’を含む、第２のポリペプチド鎖と、
第３のポリペプチド鎖であって、
Ｎ’ＩＬ－１５ＲαドメインＣ’を含む、第３のポリペプチド鎖と、を含み、
ＨＬ１が、第１の半減期延長ドメインであり、Ｌ１が、第１のリンカーであり、ＭＭが、マスキング部分であり、ＨＬ２が、第２の半減期延長ドメインであり、Ｌ２が、第２のリンカーであり、Ｃが、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片であり、第２のリンカーが、タンパク質分解的に切断可能なペプチド（ＣＰ）を含み、第１のリンカーが、タンパク質分解的に切断可能なペプチドを含まず、
「ＩＬ－１５Ｒαドメイン」が、ＩＬ－１５Ｒαサブユニットまたはその断片を含むドメインであり、「ＩＬ－１５Ｒαドメイン」が、第２のポリペプチド鎖内のＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片（Ｃ）に非共有結合される、マスク型ＩＬ－１５サイトカインである。
いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、
Ｎ’ＨＬ１－非切断可能Ｌ１－ＭＭ Ｃ’を含み、
第２のポリペプチド鎖は、
Ｎ’ＨＬ２－ＳＤ１－ＣＰ－ＳＤ２－Ｃ Ｃ’を含み、
前記第３のポリペプチド鎖が、
Ｎ’ＩＬ－１５ＲαドメインＣ’を含み、
ＣＰは、切断可能なペプチドであり、ＳＤ１は、第１のスペーサードメインであり、ＳＤ２は、第２のスペーサードメインであり、「ＩＬ－１５Ｒαドメイン」は、第２のポリペプチド鎖内のＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片（Ｃ）に非共有結合される。
本明細書で提供されるものは、マスク型ＩＬ－１５サイトカインであって、第１のポリペプチド鎖であって、
Ｎ’ＨＬ１－切断可能Ｌ１－ＭＭ Ｃ’を含む、第１のポリペプチド鎖と、
第２のポリペプチド鎖であって、
Ｎ’ＨＬ２－非切断可能Ｌ２－Ｃ Ｃ’を含む、第２のポリペプチド鎖と、
第３のポリペプチド鎖であって、
Ｎ’ＩＬ－１５ＲαドメインＣ’を含む、第３のポリペプチド鎖と、を含み、
ＨＬ１が、第１の半減期延長ドメインであり、Ｌ１が、第１のリンカーであり、ＭＭが、マスキング部分であり、ＨＬ２が、第２の半減期延長ドメインであり、Ｌ２が、第２のリンカーであり、Ｃが、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片であり、第１のリンカーが、タンパク質分解的に切断可能なペプチド（ＣＰ）を含み、第２のリンカーが、タンパク質分解的に切断可能なペプチドを含まず、
「ＩＬ－１５Ｒαドメイン」が、ＩＬ－１５Ｒαサブユニットまたはその断片を含むドメインであり、「ＩＬ－１５Ｒαドメイン」が、第２のポリペプチド鎖内のＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片（Ｃ）に非共有結合される、マスク型ＩＬ－１５サイトカインである。
いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、
Ｎ’ＨＬ１－ＳＤ１－ＣＰ－ＳＤ２ －ＭＭ Ｃ’を含み、
第２のポリペプチド鎖は、
Ｎ’ＨＬ２－非切断可能Ｌ２－Ｃ Ｃ’を含み、
第３のポリペプチド鎖は、
Ｎ’ＩＬ－１５ＲαドメインＣ’を含み、
ＣＰは、切断可能なペプチドであり、ＳＤ１は、第１のスペーサードメインであり、ＳＤ２は、第２のスペーサードメインであり、「ＩＬ－１５Ｒαドメイン」は、第２のポリペプチド鎖内のＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片（Ｃ）に非共有結合される。
いくつかの実施形態では、「ＩＬ－１５Ｒαドメイン」は、ＩＬ－１５サイトカインのみに非共有結合され、すなわち、第２のポリペプチド鎖と第３のポリペプチド鎖との間に共有結合が存在しない。
いくつかの実施形態では、第１の半減期延長ドメインは、第１の抗体Ｆｃドメインまたはその断片を含み、第２の半減期延長ドメインは、第２の抗体Ｆｃドメインまたはその断片を含む。
いくつかの実施形態では、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３のアミノ酸配列を含み、その第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、マスキング部分は、ＩＬ－１５Ｒβまたはその断片もしくはバリアントを含む。
いくつかの実施形態では、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸を含む。
いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号１７７のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、第２のポリペプチド鎖は、配列番号１８３のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号２のアミノ酸配列と比較して、位置Ｎ７１ＱおよびＮ７９Ｑにアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３０のアミノ酸配列に対して約または少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、「ＩＬ－１５Ｒαドメイン」は、野生型ｓｕｓｈｉドメインｓＩＬ－１５Ｒαまたはそのバリアントを含む。
いくつかの実施形態では、「ＩＬ－１５Ｒαドメイン」は、配列番号５６のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、第１のペプチド鎖は、配列番号６８のアミノ酸配列を含み、第２のペプチド鎖は、配列番号８３のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、第１のペプチド鎖は、配列番号１７７のアミノ酸配列を含み、第２のペプチド鎖は、配列番号１９３のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、第１のペプチド鎖は、配列番号１７７のアミノ酸配列を含み、第２のペプチド鎖は、配列番号１９４のアミノ酸配列を含む。
本明細書で提供されるものは、マスク型ＩＬ－１５サイトカインの切断産物であり、該切断産物は、その同族受容体に結合することが可能であり、切断産物は、本明細書に記載されるようにマスク型ＩＬ－１５サイトカイン中の切断可能なペプチドのタンパク質分解切断によって調製可能である、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片を含む。
本明細書で提供されるものは、マスク型ＩＬ－１５サイトカインの切断産物であり、切断産物は、その同族受容体に結合することが可能であり、切断産物は、
ＰＣＰ－ＳＤ－Ｃを含む、ポリペプチドを含み、
ＰＣＰは、タンパク質分解的に切断可能なペプチドの一部であり、ＳＤは、スペーサードメインであり、Ｃは、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片である。
いくつかの実施形態では、ＳＤは、本明細書に記載されるＳＤ２である。
いくつかの実施形態では、タンパク質分解的に切断可能なペプチドは、本明細書に記載される。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその断片は、本明細書に記載される。
いくつかの実施形態では、切断産物は、ＩＬ－１５Ｒαサブユニットまたはその断片を含むドメインをさらに含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαサブユニットまたはその断片は、ＩＬ－１５サイトカイン（Ｃ）に非共有結合される。
いくつかの実施形態では、切断産物は、
ＰＣＰ－ＳＤ－［’ＩＬ－１５Ｒαドメイン’］－Ｃを含む。
いくつかの実施形態では、切断産物は、
ＰＣＰ－ＳＤ－Ｃ－［’ＩＬ－１５Ｒαドメイン’］を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαサブユニットまたはその断片は、配列番号５５、５６、５７、および５８のうちの１つを含むアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、位置Ｒ２６にアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、アミノ酸置換Ｒ２６Ｎを含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、アミノ酸置換Ｒ２６Ｓを含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、位置Ｒ３５にアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、アミノ酸置換Ｒ３５Ｑを含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、アミノ酸置換Ｒ３５Ｓを含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、位置Ｒ２６およびＲ３５にアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、アミノ酸置換Ｒ２６ＳまたはＲ２６Ｎ、およびＲ３５ＱまたはＲ３５Ｓを含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、アミノ酸置換Ｒ２６ＮおよびＲ３５Ｑを含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、位置Ｒ２６に追加のアミノ酸置換を伴う配列番号５５、５６、５７、または５８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、追加のアミノ酸置換Ｒ２６Ｎを伴う配列番号５５、５６、５７、または５８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、追加のアミノ酸置換Ｒ２６Ｓを伴う配列番号５５、５６、５７、または５８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、位置Ｒ３５に追加のアミノ酸置換を伴う配列番号５５、５６、５７、または５８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、追加のアミノ酸置換Ｒ３５Ｑを有する配列番号５５、５６、５７、または５８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、追加のアミノ酸置換Ｒ３５Ｓを伴う配列番号５５、５６、５７、または５８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、位置Ｒ２６およびＲ３５に追加のアミノ酸置換を伴う配列番号５５、５６、５７、または５８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、追加のアミノ酸置換Ｒ２６ＳまたはＲ２６Ｎ、およびＲ３５ＱまたはＲ３５Ｓを伴う配列番号５５、５６、５７、または５８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、追加のアミノ酸置換Ｒ２６ＮおよびＲ３５Ｑを伴う配列番号５５、５６、５７、または５８のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、位置Ｒ２６に追加のアミノ酸置換を伴う配列番号５６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、追加のアミノ酸置換Ｒ２６Ｎを伴う配列番号５６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、追加のアミノ酸置換Ｒ２６Ｓを伴う配列番号５６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、位置Ｒ３５に追加のアミノ酸置換を伴う配列番号５６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、追加のアミノ酸置換Ｒ３５Ｑを伴う配列番号５６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、追加のアミノ酸置換Ｒ３５Ｓを伴う配列番号５６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、位置Ｒ２６およびＲ３５に追加のアミノ酸置換を伴う配列番号５６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、追加のアミノ酸置換Ｒ２６ＳまたはＲ２６Ｎ、およびＲ３５ＱまたはＲ３５Ｓを伴う配列番号５６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、追加のアミノ酸置換Ｒ２６ＮおよびＲ３５Ｑを伴う配列番号５６のアミノ酸配列を含む。（配列番号１７２、１７３、１７４、１７５、および１７６を参照されたい。）
本明細書で提供されるものは、マスク型ＩＬ－１５サイトカインの切断産物であり、切断産物は、その同族受容体に結合することが可能であり、切断産物は、
ＰＣＰ－ＳＤ２－［ＣのＮ’末端ドメイン］－［’ＩＬ－１５Ｒαドメイン’］－［ＣのＣ’末端ドメイン］を含み、
ＩＬ－１５Ｒαドメインは、非切断可能な「αサブユニットリンカー」が両側に配置されたＩＬ－１５Ｒαサブユニットまたはその断片を含む。
本明細書で提供されるものは、マスク型ＩＬ－１５サイトカインの切断産物であり、切断産物は、その同族受容体に結合することが可能であり、切断産物は、
第１のポリペプチド鎖であって、
ＨＬ１－ＳＤ－ＰＣＰを含み、
ＨＬ１が、第１の半減期延長ドメインであり、ＳＤが、スペーサードメインであり、ＰＣＰが、タンパク質分解的に切断可能なペプチドの一部である、第１のポリペプチド鎖と、
第２のポリペプチド鎖であって、
ＨＬ２－Ｌ２－Ｃを含む、ポリペプチドを含み、
ＨＬ２が、第２の半減期延長ドメインであり、Ｌ２が、リンカーであり、Ｃが、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片である、第２のポリペプチド鎖とを含む、タンパク質ヘテロ二量体を含み、
第１の半減期延長ドメインは、第２の半減期延長ドメインと会合する。
いくつかの実施形態では、ＳＤは、本明細書に記載されるＳＤ１である。
いくつかの実施形態では、タンパク質分解的に切断可能なペプチドは、本明細書に記載される。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその断片は、本明細書に記載される。
いくつかの実施形態では、第１および第２の半減期延長ドメインは、本明細書に記載される。
いくつかの実施形態では、非切断可能なリンカーＬ２は、本明細書に記載される。
いくつかの実施形態では、切断産物は、ＩＬ－１５サイトカイン（Ｃ）に非共有結合されたＩＬ－１５Ｒαサブユニットまたはその断片をさらに含む。
本明細書で提供されるものは、配列番号１０４，１０５，１０６，１０７，１０８，１０９，１１０，１１１，１１２，１１３，１１４，１１５，１１６，１１７，１１８，１１９，１２０，１２１，１２２，１２３，１２４，１２５，１２６，１３６，１３７，１３８，１３９，１４０，１４１，１４２および１４３、ならびに１４４～１４７、および１９９～２２８、および３０７から選択されるアミノ酸配列を含む切断産物である。
本明細書で提供されるものは、本明細書に記載されるマスク型ＩＬ－１５サイトカインをコードする核酸である。
本明細書で提供されるものは、本明細書に記載されるマスク型ＩＬ－１５サイトカインの鎖のうちの１つをコードする核酸である。
本明細書で提供されるものは、本明細書に記載される核酸を含む、ベクターである。
本明細書で提供されるものは、本明細書に記載されるマスク型ＩＬ－１５サイトカインをコードする核酸を含む、ベクターである。
本明細書で提供されるものは、本明細書に記載されるマスク型ＩＬ－１５サイトカインの鎖のうちの１つをコードする核酸を含む、ベクターである。
本明細書で提供されるものは、本明細書に記載される核酸を含む宿主細胞である。
一実施形態では、宿主細胞は、ＨＥＫ細胞である。別の実施形態では、宿主細胞は、ＣＨＯ細胞である。
本明細書で提供されるものは、本明細書に記載されるマスク型ＩＬ－１５サイトカインを含む組成物である。
本明細書で提供されるものは、本明細書に記載されるマスク型ＩＬ－１５サイトカインと、薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物である。
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、単一単位剤形である。
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、静脈内投与のために製剤化され、単一単位剤形である。
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、注射のために製剤化され、単一単位剤形である。
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、液体であり、単一単位剤形である。
本明細書で提供されるものは、本明細書に記載されるマスク型ＩＬ－１５サイトカイン、または本明細書に記載される組成物、もしく本明細書に記載される医薬組成物を含む、キットである。
本明細書で提供されるものは、マスク型ＩＬ－１５サイトカインを産生する条件下で、本明細書に記載される宿主細胞を培養することを含む、本明細書に記載されるマスク型ＩＬ－１５サイトカインを産生する方法である。
本明細書で提供されるものは、本明細書に記載される切断産物をコードする核酸である。
本明細書で提供されるものは、本明細書に記載される切断産物を含む組成物である。
本明細書で提供されるものは、本明細書に記載される切断産物と、薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物である。
本明細書で提供されるものは、薬物に使用するための、本明細書に記載されるマスク型ＩＬ－１５サイトカインである。
本明細書で提供されるものは、薬物に使用するための、本明細書に記載される切断産物である。
本明細書で提供されるものは、対象においてがんを治療または予防する方法であって、有効量の本明細書に記載されるマスク型ＩＬ－１５サイトカインを対象に投与することを含む、方法である。
本明細書で提供されるものは、対象においてがんを治療または予防する方法であって、有効量の本明細書に記載される組成物を対象に投与することを含む、方法である。
本明細書で提供されるものは、対象においてがんを治療または予防する方法であって、夕刻量の本明細書に記載される医薬組成物を対象に投与することを含む、方法である。
本明細書で提供されるものは、対象においてがんを治療または予防する方法であって、有効量の本明細書に記載されるマスク型ＩＬ－１５サイトカインを対象に投与することを含み、それによって、マスク型サイトカインが、インビボでタンパク質分解的に切断され、本明細書に記載される切断産物を産生する、方法である。
本明細書で提供されるものは、対象においてがんを治療または予防する方法であって、その同族受容体に結合することが可能である切断産物をインビボで産生するステップを含み、切断産物が、本明細書に記載される、方法である。
いくつかの実施形態では、がんは、固形腫瘍である。
本明細書で提供されるものは、がんの治療または予防に使用するための、本明細書に記載されるマスク型ＩＬ－１５サイトカインである。
本明細書で提供されるものは、がんを治療または予防する方法に使用するためのマスク型ＩＬ－１５サイトカインであって、方法が、有効量のマスク型ＩＬ－１５サイトカインを対象に投与することを含み、それによって、マスク型サイトカインが、インビボでタンパク質分解的に切断され、本明細書に記載される切断産物を産生する、マスク型ＩＬ－１５サイトカインである。
いくつかの実施形態では、がんは、固形腫瘍である。
本明細書で提供されるものは、がんの治療または予防に使用するための、本明細書に記載される切断産物である。
本明細書で提供されるものは、がんの治療または予防に使用するための、本明細書に記載される切断産物であって、方法が、本明細書に記載されるマスク型サイトカインを患者に投与し、それによって、インビボでマスク型サイトカインのタンパク質分解切断によって切断産物を産生するステップを含む、切断産物である。
本明細書で提供されるものは、対象においてがんを治療または予防する方法に使用するための、本明細書に記載される切断産物であって、方法が、対象に投与された本明細書に記載されるマスク型サイトカインからインビボのタンパク質分解切断によって切断産物を産生するステップを含む、切断産物である。
いくつかの実施形態では、がんは、固形腫瘍である。
マスキング部分と、サイトカインまたはその機能的断片（「サイトカイン」）と、半減期延長ドメインと、第１の切断可能なペプチド（「１ＣＰ」）、第１のＮ末端スペーサードメイン（「１ＮＳＤ」）、および第１のＣ末端スペーサードメイン（「１ＣＳＤ」）を含む、第１のリンカーとを含む、マスク型サイトカインの例示的実施形態の構造を示す。これらの例示的実施形態はまた、第２の切断可能なペプチド（「２ＣＰ」）、第２のＮ末端スペーサードメイン（「２ＮＳＤ」）、および第２のＣ末端スペーサードメイン（「２ＣＳＤ」）を含む、第２のリンカーも含む。矢印によって示されるように、例示的実施形態は、第１のリンカーに連結されたマスキング部分を示し、サイトカインまたはその機能的断片は、第１のリンカーおよび第２のリンカーに連結され、マスキング部分およびサイトカインまたはその機能的断片は、サイトカインまたはその機能的断片が第１のリンカーに連結され、マスキング部分が第１のリンカーおよび第２のリンカーに連結されるように、交換され得る。図１は、単量体としてのマスク型サイトカインの例示的実施形態の構造を示す。 マスキング部分と、サイトカインまたはその機能的断片（「サイトカイン」）と、第１の半減期延長ドメインと、第２の半減期延長ドメインとを含む、マスク型サイトカインの例示的実施形態の構造を示す。図２に示される例示的実施形態はまた、第１の切断可能なペプチド（「１ＣＰ」）、第１のＮ末端スペーサードメイン（「１ＮＳＤ」）、および第１のＣ末端スペーサードメイン（「１ＣＳＤ」）を含む、第１のリンカーと、第２の切断可能なペプチド（「２ＣＰ」）、第２のＮ末端スペーサードメイン（「２ＮＳＤ」）、および第２のＣ末端スペーサードメイン（「２ＣＳＤ」）を含む、第２のリンカーとを含む。例示的な第１および第２の半減期延長ドメインは、第１の半減期延長ドメイン内の「ホール」および第２の半減期延長ドメイン内の「ノブ」によって示されるように、第２の半減期延長ドメインとの第１の半減期延長ドメインの会合を促進する「ノブ・イントゥ・ホール（ｋｎｏｂｓ ｉｎｔｏ ｈｏｌｅｓ）」修飾を含む。第１の半減期延長ドメインおよび第２の半減期延長ドメインはまた、ジスルフィド結合の形成により、少なくとも部分的に会合するものとして示される。「ホール」は、（マスキング部分に連結された）第１の半減期延長ドメインの一部としては描写され、「ノブ」は、（サイトカインに連結された）第２の半減期延長ドメインの一部として描写され、「ホール」および「ノブ」は、代替的に、「ホール」が（サイトカインに連結された）第２の半減期延長ドメインの一部であり、「ノブ」が（マスキング部分に連結された）第１の半減期延長ドメインの一部であるように、それぞれ、第２の半減期延長ドメインおよび第１の半減期延長ドメインに含まれ得ることを理解されたい。 腫瘍微小環境などにおけるプロテアーゼによる切断の前（左）および後（右）のマスク型サイトカインの例示的実施形態を示す。図３Ａ－Ｂは、マスク型ＩＬ－２サイトカインの例示的実施形態を示す。プロテアーゼによる切断は、マスキング部分（例えば、図３Ｂに示されるようなＩＬ－２Ｒβ）を放出するか、またはＩＬ－２（図３Ａ）を放出する。 ＩＬ－２構築物（ＡＫ３０４、ＡＫ３０５、ＡＫ３０７、ＡＫ３０８、ＡＫ３０９、ＡＫ３１０、ＡＫ３１１、ＡＫ３１２、ＡＫ３１３、ＡＫ３１４、およびＫ３１５）の産生および精製後の、フロースルー（ＦＴ）サンプル（すなわち、プロテインＡカラムに結合しなかったタンパク質）および溶出（Ｅ）サンプル（すなわち、プロテインＡカラムに結合し、そこから溶出されたタンパク質）についてのＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析を示す。 ＣＤ２５－Ｆｃへの例示的マスク型ＩＬ－２ポリペプチド構築物（ＡＫ１６８）またはｒｈＩＬ－２対照の結合を試験したＳＰＲ分析からの結果を示す。図５Ａは、ＡＫ１６８とＣＤ２５－Ｆｃとの間の相互作用を示す。図５Ｂは、ＭＭＰで活性化されたＡＫ１６８とＣＤ２５－Ｆｃとの間の相互作用を示し、図５Ｃは、組換えヒトＩＬ－２（ｒｈＩＬ２）対照とＣＤ２５－Ｆｃとの間の相互作用を示す。図５Ｄは、会合定数（ｋａ）、解離定数（ｋｄ）、平衡解離定数（ＫＤ）、ならびに各相互作用のＣｈｉ２値およびＵ値について取得されたデータを要約する表を提供する。 ＣＤ１２２－Ｆｃへの例示的マスク型ＩＬ－２ポリペプチド構築物（ＡＫ１１１）またはｒｈＩＬ２対照の結合を試験したＳＰＲ分析からの結果を示す。図６Ａは、ＡＫ１１１とＣＤ１２２－Ｆｃとの間の相互作用を示す。図６Ｂは、プロテアーゼで活性化されたＡＫ１１１とＣＤ１２２－Ｆｃとの間の相互作用を示し、図６Ｃは、組換えヒトＩＬ－２（ｒｈＩＬ－２）対照とＣＤ１２２－Ｆｃとの間の相互作用を示す。図６Ｄは、会合定数（ｋａ）、解離定数（ｋｄ）、平衡解離定数（ＫＤ）、ならびに各相互作用のＣｈｉ２値およびＵ値について取得されたデータを要約する表を提供する。 腫瘍微小環境などにおけるプロテアーゼによる切断の前（左）および後（右）のマスク型サイトカインの例示的実施形態を示す。 Ｆｃ部分からのＩＬ－２の放出を実証する、ＭＭＰ１０プロテアーゼの非存在下（左レーン）または存在下（右レーン）でインキュベートされた例示的マスク型ＩＬ－２ポリペプチド構築物のＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析を示す。 対照として構築物ＡＫ０３２、ＡＫ０３５、ＡＫ０４１、またはｒｈＩＬ－２で治療されたＰＢＭＣにおけるＳＴＡＴ５活性化（％）を示す。ＳＴＡＴ５活性化のレベル（％）は、ｒｈＩＬ－２（図８Ａ）、ＡＫ０３２（図８Ｂ）、ＡＫ０３５（図８Ｃ）、またはＡＫ０４１（図８Ｄ）を用いたインキュベーション後に決定される、ＮＫ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、エフェクターＴ細胞（Ｔｅｆｆ）、および調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）について示される。 構築物ＡＫ０８１またはＡＫ０３２で治療されたＰＢＭＣにおけるＳＴＡＴ５活性化（％）を示す。ＭＭＰ１０への事前曝露の有無を問わないＡＫ０８１構築が試験された。アイソタイプ対照ならびにＩＬ－２陰性対照も試験された。ＳＴＡＴ５活性化のレベル（％）は、ＮＫ細胞（図９Ａ）、ＣＤ８＋Ｔ細胞（図９Ｃ）、およびＣＤ４＋Ｔ細胞（図９Ｂ）について示される。 構築物ＡＫ０８１およびＡＫ１１１、ならびにｒｈＩＬ－２および抗ＲＳＶ抗体を含んだ対照を使用した、ＰＢＭＣにおけるＳＴＡＴ５活性化研究からの結果を示す。無治療対照も試験された。ＥＣ５０（ｐＭ）もまた、ｒｈＩＬ－２、ＡＫ０８１、およびＡＫ１１１治療について示される。ＳＴＡＴ５活性化（％）が、ＣＤ４＋ＦｏｘＰ３＋ＣＤ２５＋細胞（図１０Ａ）、ＣＤ８＋細胞（図１０Ｂ）、およびＣＤ４＋ＦｏｘＰ３－ＣＤ２５－細胞（図１０Ｃ）について示される。図１０Ｄは、ＡＫ０８１、ＡＫ１１１構築物、ならびにｒｈＩＬ－２対照のＥＣ５０（ｐＭ）および倍率変化データを提供する。 構築物ＡＫ１６７およびＡＫ１６８、ならびにｒｈＩＬ－２および抗ＲＳＶ抗体を含む対照を使用したＰＢＭＣにおけるＳＴＡＴ５活性化研究の結果を示す。無治療対照も試験された。ＥＣ５０（ｐＭ）もまた、ｒｈＩＬ－２、ＡＫ１６７、およびＡＫ１６８治療について示される。ＳＴＡＴ５活性化（％）が、ＣＤ４＋ＦｏｘＰ３＋ＣＤ２５＋細胞（図１１Ａ）、ＣＤ８＋細胞（図１１Ｂ）、およびＣＤ４＋ＦｏｘＰ３－ＣＤ２５－細胞（図１１Ｃ）について示される。図１１Ｄは、ＡＫ１６７およびＡＫ１６８構築物、ならびにｒｈＩＬ－２対照についてＥＣ５０（ｐＭ）および倍率変化データを提供する。 （＋ＭＭＰ１０）であったか、または以前にＭＭＰ１０プロテアーゼに曝露されなかった、構築物ＡＫ１６５もしくはＡＫ１６６、またはアイソタイプ対照もしくはＩＬ－２－Ｆｃ対照で治療されたＰＢＭＣにおけるＳＴＡＴ５活性化（％）を示す。図１２Ａに示されるような凡例は、図１２Ｂにも適用され、図１２Ｃに示されるような凡例は、図１２Ｄにも適用される。ＳＴＡＴ５活性化（％）が、ＣＤ４＋ＦｏｘＰ３＋Ｔ調節性細胞（図１２Ａ）、ＣＤ４＋ＦｏｘＰ３－Ｔヘルパー細胞（図１２Ｂ）、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞（図１２Ｃ）、およびＣＤ５６＋ＮＫ細胞（図１２Ｄ）について示される。 （＋ＭＭＰ１０）であったか、または以前にＭＭＰ１０プロテアーゼに曝露されなかった、構築物ＡＫ１０９もしくはＡＫ１１０、またはアイソタイプ対照もしくはＩＬ－２－Ｆｃ対照で治療されたＰＢＭＣにおけるＳＴＡＴ５活性化（％）を示す。図１２Ｂに示されるような凡例は、図１３Ａにも適用される。ＳＴＡＴ５活性化（％）が、ＮＫ細胞（図１３Ａ）、ＣＤ８細胞（図１３Ｂ）、およびＣＤ４細胞（図１３Ｃ）について示される。 構築物ＡＫ２１１、ＡＫ２３５、ＡＫ２５３、ＡＫ３０６、ＡＫ３１０、ＡＫ３１４、およびＡＫ３１６、ならびにｒｈＩＬ－２対照を使用したＰＢＭＣにおけるＳＴＡＴ５活性化試験からの結果を示す。ＳＴＡＴ５活性化（％）が、ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＦｏｘＰ３＋細胞（図１４Ａ）、ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＦｏｘＰ３－細胞（図１４Ｂ）、およびＣＤ３＋ＣＤ８＋細胞（図１４Ｃ）について示される。図１４Ｄは、試験された構築物の各々ならびにｒｈＩＬ－２対照のＥＣ５０データを提供する。 プロテアーゼによって活性化された構築物ＡＫ０８１、ＡＫ１６７、ＡＫ２１６、ＡＫ２１８、ＡＫ２１９、ＡＫ２２０、およびＡＫ２２３、ならびにｒｈＩＬ－２対照を使用したＰＢＭＣにおけるＳＴＡＴ５活性化試験からの結果を示す。ＳＴＡＴ５活性化（％）が、ＣＤ４＋ＦｏｘＰ３＋ＣＤ２５＋調節性Ｔ細胞（図１５Ａ）、ＣＤ４＋ＦｏｘＰ３－ＣＤ２５－細胞（図１５Ｂ）、およびＣＤ８＋細胞（図１５Ｃ）について示される。図１５Ｄは、試験された構築物の各々ならびにｒｈＩＬ－２対照のＥＣ５０データを提供する。 構築物ＡＫ０８１、ＡＫ１８９、ＡＫ１９０、もしくはＡＫ２１０、または抗ＲＳＶ対照で治療されたＰＢＭＣにおけるＳＴＡＴ５活性化（％）を示す。図１６Ａに示されるような凡例は、図１６Ｂおよび１６Ｃにも適用される。ＳＴＡＴ５活性化（％）が、調節性Ｔ細胞（図１６Ａ）、ＣＤ４ヘルパーＴ細胞（図１６Ｂ）、およびＣＤ８細胞（図１６Ｃ）について示される。 構築物ＡＫ１６７、ＡＫ１９１、ＡＫ１９２、もしくはＡＫ１９３、または抗ＲＳＶ対照で治療されたＰＢＭＣにおけるＳＴＡＴ５活性化に（％）を示す。図１７Ａに示されるような凡例は、図１７Ｂおよび１７Ｃにも適用される。ＳＴＡＴ５活性化（％）は、調節性Ｔ細胞（図１７Ａ）、ＣＤ４ヘルパーＴ細胞（図１７Ｂ）、およびＣＤ８細胞（図１７Ｃ）について示される。 構築物ＡＫ０３２、ＡＫ０８１、ＡＫ１１１、ＡＫ１６７、もしくはＡＫ１６８、または抗ＲＳＶ対照を使用して担腫瘍マウスで実行された薬物動態研究からの結果を示す。図１８Ａは、試験された構築物の各々の構造の単純な描写を提供する。図１８Ｂは、ヒトＩｇＧを検出することによって血漿中のＦｃレベル（μｇ／ｍＬ）を示し、図１８Ｃは、ヒトＣＤ１２２を検出することによって血漿中のＦｃ－ＣＤ１２２レベル（μｇ／ｍＬ）を示し、図１８Ｄは、ヒトＩＬ－２を検出することによって血漿中のＦｃ－ＩＬ２レベル（μｇ／ｍＬ）を示す。検出ステップの前に、抗ヒトＩＧが、捕捉抗体として使用された。 構築物ＡＫ１６７、ＡＫ１９１、ＡＫ１９７、ＡＫ２０３、ＡＫ２０９、もしくはＡＫ２１１、または抗ＲＳＶ対照を使用して担腫瘍マウスで実行された薬物動態研究からの結果を示す。図１９Ａは、試験された構築物の各々の構造の単純な描写を提供する。図１９Ｂは、ヒトＩｇＧを検出することによって血漿中のＦｃレベル（μｇ／ｍＬ）を示し、図１９Ｃは、ヒトＩＬ－２を検出することによって血漿中のＦｃ－ＩＬ－２レベル（μｇ／ｍＬ）を示し、図１９Ｄは、ヒトＣＤ１２２を検出することによって血漿中のＦｃ－ＣＤ１２２レベル（μｇ／ｍＬ）を示す。検出ステップの前に、抗ヒトＩＧが、捕捉抗体として使用された。 ＡＫ０３２、ＡＫ０８１、ＡＫ１１１、ＡＫ１６７、もしくはＡＫ１６８構築物、または抗ＲＳＶ ＩｇＧ対照を使用して、脾臓、血液、および腫瘍中のＣＤ４、ＣＤ８、ＮＫ、およびＴｒｅｇのインビボ応答率を試験した研究からの結果を示す。脾臓組織については、ＣＤ３細胞のＣＤ８細胞％（図２０Ａ）、ＣＤ３細胞のＣＤ４％（図２０Ｂ）、ＣＤ３－細胞のＮＫ細胞％（図２０Ｃ）、およびＣＤ４細胞のＦｏｘＰ３％（図２０Ｄ）が示される。血液については、ＣＤ３細胞のＣＤ８細胞％（図２０Ｅ）、ＣＤ３細胞のＣＤ４％（図２０Ｆ）、ＣＤ３－細胞のＮＫ細胞％（図２０Ｇ）、およびＣＤ４細胞のＦｏｘＰ３％（図２０Ｈ）が示される。腫瘍組織については、ＣＤ３細胞のＣＤ８細胞％（図２０Ｉ）、ＣＤ３細胞のＣＤ４％（図２０Ｊ）、ＣＤ３－細胞のＮＫ細胞％（図２０Ｋ）、およびＣＤ４細胞のＦｏｘＰ３％（図２０Ｌ）が示される。 ＡＫ１６７、ＡＫ１６８、ＡＫ１９１、ＡＫ１９７、ＡＫ２０３、ＡＫ２０９、もしくはＡＫ２１１構築物、または抗ＲＳＶ ＩｇＧ対照を使用して、脾臓、血液、および腫瘍中のＣＤ４、ＣＤ８、ＮＫ、およびＴｒｅｇのインビボ応答率を試験した研究からの結果を示す。脾臓組織については、ＣＤ３細胞のＣＤ８細胞％（図２１Ａ）、ＣＤ３細胞のＣＤ４％（図２１Ｂ）、ＣＤ３－細胞のＮＫ細胞％（図２１Ｃ）、およびＣＤ４細胞のＦｏｘＰ３％（図２１Ｄ）が示される。血液については、ＣＤ３細胞のＣＤ８細胞％（図２１Ｅ）、ＣＤ３細胞のＣＤ４％（図２１Ｆ）、ＣＤ３－細胞のＮＫ細胞％（図２１Ｇ）、およびＣＤ４細胞のＦｏｘＰ３％（図２１Ｈ）が示される。腫瘍組織については、ＣＤ３細胞のＣＤ８細胞％（図２１Ｉ）、ＣＤ３細胞のＣＤ４％（図２１Ｊ）、ＣＤ３－細胞のＮＫ細胞％（図２１Ｋ）、およびＣＤ４細胞のＦｏｘＰ３％（図２１Ｌ）が示される。 ＡＫ２３５、ＡＫ１９１、ＡＫ１９２、ＡＫ１９３、ＡＫ２１０、ＡＫ１８９、ＡＫ１９０、もしくはＡＫ２１１構築物、または抗ＲＳＶ ＩｇＧ対照を使用して、脾臓、血液、および腫瘍中のＣＤ４、ＣＤ８、ＮＫ、およびＴｒｅｇのインビボ応答率を試験した研究からの結果を示す。脾臓組織については、ＣＤ３細胞のＣＤ８細胞％（図２２Ａ）、ＣＤ３細胞のＣＤ４％（図２２Ｂ）、ＣＤ３－細胞のＮＫ細胞％（図２２Ｃ）、およびＣＤ４細胞のＦｏｘＰ３％（図２２Ｄ）が示される。血液については、ＣＤ３細胞のＣＤ８細胞％（図２２Ｅ）、ＣＤ３細胞のＣＤ４％（図２２Ｆ）、ＣＤ３－細胞のＮＫ細胞％（図２２Ｇ）、およびＣＤ４細胞のＦｏｘＰ３％（図２２Ｈ）が示される。脾臓組織については、ＣＤ３細胞のＣＤ８細胞％（図２２Ｉ）、ＣＤ３細胞のＣＤ４％（図２２Ｊ）、ＣＤ３－細胞のＮＫ細胞％（図２２Ｋ）、およびＣＤ４細胞のＦｏｘＰ３％（図２２Ｌ）が示される。 ＡＫ２３５、ＡＫ１９１、ＡＫ１９２、ＡＫ１９３、ＡＫ２１０、ＡＫ１８９、ＡＫ１９０、またはＡＫ２１１構築物を使用した、脾臓、血液、および腫瘍におけるインビボＴ細胞活性化からの結果を示す。Ｔ細胞活性化が、脾臓、血液、および腫瘍中のＣＤ８＋Ｔ細胞（図２３Ａ、図２３Ｄ、図２３Ｇ）、ＣＤ４＋Ｔ細胞（図２３Ｂ、図２３Ｅ、図２３Ｈ）、またはＦｏｘｐ３＋細胞（図２３Ｃ、図２３Ｆ、図２３Ｉ）におけるＣＤ２５の平均蛍光強度（ＭＦＩ）として測定された。統計分析が、非切断可能なＡＫ２１１構築物と比較して、一元配置分散分析を使用して実施された。 例示的マスク型ＩＬ－２ポリペプチド構築物ＡＫ１６８（切断可能なペプチド配列：ＭＰＹＤＬＹＨＰ、配列番号２４）およびＡＫ２０９（切断可能なペプチド配列：ＶＰＬＳＬＹ、配列番号２８）のインビボ切断を試験した研究からの結果を示す。図２４Ｅは、ＡＫ１６７、ＡＫ１６８、およびＡＫ２０９構築物の合計レベル、ならびに各構築物の非切断形態のレベルについて、総血漿中ＩｇＧ濃度（μｇ／ｍＬ）の薬物動態研究からの結果を示す。 例示的マスク型ＩＬ－２ポリペプチド構築物ＡＫ１１１もしくはＡＫ１６８、または非マスク型ＩＬ－２ポリペプチド構築物ＡＫ０８１もしくはＡＫ１６７、または抗ＲＳＶ対照を使用して血管漏出を評価したインビボ研究からの結果を示す。図２５Ａは、体重減少の割合（％）を示し、図２５Ｂ、２５Ｃ、および２５Ｄは、それぞれ、各々について肝臓、肺、および脾臓の重量をグラムで示す。 ＡＫ０８１、ＡＫ１１１、ＡＫ１６７、もしくはＡＫ１６８構築物、または抗ＲＳＶ対照の投与後の肝臓および肺組織内への染料漏出の程度を測定することによって示される血管漏出を評価したインビボ研究からの結果を示す。肝臓（図２６Ａ）および肺（図２６Ｂ）内への染料漏出の程度が、６５０ｎｍにおける吸光度に基づいて測定された。 ＡＫ０８１、ＡＫ１１１、ＡＫ１６７、もしくはＡＫ１６８構築物、または抗ＲＳＶ対照の投与後の肝臓および肺組織内への単核細胞血管周囲浸潤の程度を測定することによって示される血管漏出を評価したインビボ研究からの結果を示す。肝臓内の単核細胞の平均数（図２７Ａ）および肺内の単核細胞の平均数（図２７Ｂ）が、各々について描写される。 ＡＫ０３２、ＡＫ０８１、ＡＫ１１１、ＡＫ１６７、もしくはＡＫ１６８構築物、または抗ＲＳＶ対照を用いた治療過程にわたって腫瘍体積および体重を評価した同系腫瘍モデル研究からの結果を示す。図２８Ａは、治療過程にわたる腫瘍体積についてのデータを示し、図２８Ｂは、治療過程にわたる体重の変化率（％）についてのデータを示す。 Ｉ２５３Ａ ＦｃＲｎ変異を伴うＡＫ４７１が、ＴＭＥにおいて堅調なＣＤ８ Ｔ細胞の拡張を誘発した一方で、周辺では不活性のままであったことを示す。 ＡＫ４７１が、アグリコ－ｈＩｇＧ１と比較して、わずかに短い半減期を有することを示す。 血漿中のＡＫ４７１で切断または切除の証拠がないことを示す。 実施例５の結果を示す。 実施例５の結果を示す。 実施例６ｉの結果を示す。 実施例６ｉｉの結果を示す。 実施例６ｉｉｉの結果を示す。 実施例６ｉｖの結果を示す。 実施例６ｖの結果を示す。 実施例６ｖｉの結果を示す。 実施例６ｖｉｉの結果を示す。 実施例６ｖｉｉｉの結果を示す。 実施例６ｉｘの結果を示す。 実施例６ｘの結果を示す。 （＋ＭＭＰ）を伴う、もしくは活性化プロテアーゼへの事前の曝露を伴わない、例示的マスク型ＩＬ－１５ポリペプチド構築物ＡＫ２４８、または対照としてのｒｈＩＬ－１５についてのレポーターバイオアッセイからの結果を示す。図４４Ａは、ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ ＩＬ２レポーター細胞株を使用したレポーターバイオアッセイからの結果を示し、図４４Ｂは、マウスＣＴＬＬ２細胞株を用いたＩＬ－１５バイオアッセイを使用したレポーターバイオアッセイからの結果を示す。 実施例７の結果を示す。 実施例８の結果を示す。 実施例８の結果を示す。 実施例８の結果を示す。 実施例８の結果を示す。 実施例８の結果を示す。 実施例８の結果を示す。 ＡＫ２４４、ＡＫ５０７、またはＸＴＸ２００構築物を使用して、脾臓および腫瘍中のＢ１６Ｆ１０マウスモデルにおけるＣＤ８ Ｔ細胞およびＮＫ細胞のインビボ応答を試験した研究からの結果を示す。脾臓組織については、ＣＤ８ Ｔ細胞（図５２Ａ）、ＮＫ細胞（図５２Ｂ）が示される。腫瘍については、ＣＤ８ Ｔ細胞（図５２Ｃ）、ＮＫ細胞（図５２Ｄ）が示される。 ０．５ｍｐｋ、１．５ｍｐｋ、および５．０ｍｐｋの投与量において構築物ＡＫ２４４、ＡＫ５０７、およびＸＴＸ２００を使用して、担腫瘍マウスで実行された薬物動態研究からの結果を示す。図５３は、ヒトＩｇＧを検出することによって血漿中のＦｃレベル（μｇ／ｍＬ）を示す。 例示的構築物ＡＫ２４４、ＡＫ５０７、ＡＫ４４３、およびＸＴＸ２００を使用して、脾臓重量および肺重量を評価したインビボ研究の結果を示す。図５４Ａは、脾臓重量をグラム（ｇ）で示す。図５４Ｂは、肺重量をグラム（ｇ）で示す。 ＡＫ５０７、ＡＫ５６４、ＡＫ５９５、およびＡＫ５９６を使用して、例示的ＩＬ－１５構築物にマスキング部分を追加する効果を評価する研究からの結果を示す。ＡＫ２５３は、非マスク型陽性対照である、ＩＬ－２である。図５５Ａは、日数で測定された半減期に対する効果を示す。図５５Ｂは、１日μｇ／ｍｌで測定された薬剤曝露に対する効果を示す。 例示的な非切断可能なマスク型ＩＬ－１５構築物ＡＫ５６４およびＡＫ５９６、非マスク型ＩＬ－１５構築物ＡＫ５０７およびＡＫ５９５、ならびに対照としてのＸＴＸ２００およびビヒクルを使用して、体重減少の割合（％）を評価したインビボ研究からの結果を示す。図５６Ａは、野生型ＩＬ－１５ドメインを含む構築物ＡＫ５０７およびＡＫ５６４の体重減少の割合（％）を示す。図５６Ｂは、ＩＬ－１５ドメインに単一変異（Ｎ７１Ｑ）を含む、構築物ＡＫ５９５およびＡＫ５９６の体重減少の割合（％）を示す。 例示的な非切断可能なマスク型ＩＬ－１５構築物ＡＫ５６４およびＡＫ５９６、非マスク型ＩＬ－１５構築物ＡＫ５０７およびＡＫ５９５、ならびに対照としてＡＫ２５３およびビヒクルを使用して、腫瘍中の（ＣＤ４＋の）Ｔｒｅｇｓ％および（ＣＤ４５＋の）ＣＤ８＋％を評価したインビボ研究からの結果を示す。図５７Ａは、Ｔｒｅｇ％を示す。図５７Ｂは、ＣＤ８＋％を示す。 例示的な非切断可能なマスク型ＩＬ－１５構築物ＡＫ５６４またはＡＫ５９６、非マスク型ＩＬ－１５構築物ＡＫ５０７またはＡＫ５９５、ならびに対照としてのＡＫ２５３およびビヒクルを使用して、腫瘍中のＣＤ８：Ｔｒｅｇ比を評価したインビボ研究からの結果を示す。 例示的な非切断可能なマスク型ＩＬ－１５構築物ＡＫ５６４またはＡＫ５９６、非マスク型ＩＬ－１５構築物ＡＫ５０７またはＡＫ５９５、ならびに対照としてのＡＫ２５３およびビヒクルを使用して、腫瘍中の（ＣＤ４５＋の）ＮＫ細胞％を評価したインビボ研究からの結果を示す。 例示的な非切断可能なマスク型ＩＬ－１５構築物ＡＫ５６４またはＡＫ５９６、非マスク型ＩＬ－１５構築物ＡＫ５０７またはＡＫ５９５、ならびに対照としてのＡＫ２５３およびビヒクルを使用して、腫瘍中の％Ｋｉ－６７＋ＮＫ細胞および％ＩＣＯＳ＋ＮＫ細胞を評価したインビボ研究からの結果を示す。図６０Ａは、Ｋｉ－６７＋ＮＫ細胞％の結果を示す。図６０Ｂは、ＩＣＯＳ＋ＮＫ細胞％の結果を示す。 は、例示的な非切断可能なマスク型ＩＬ－１５構築物ＡＫ５６４またはＡＫ５９６、非マスク型ＩＬ－１５構築物ＡＫ５０７またはＡＫ５０７またはＡＫ５９５、ならびに対照としてのＡＫ２５３およびビヒクルを使用して、腫瘍中のＫｉ－６７＋Ｔｒｅｇ％、Ｋｉ－６７＋Ｔｃｏｎｖ％、Ｋｉ－６７＋ＣＤ８＋％、およびＫｉ－６７＋ＮＫ細胞％を評価したインビボ研究からの結果を示す。図６１Ａは、Ｋｉ－６７＋Ｔｒｅｇ％の結果を示す。図６１Ｂは、Ｋｉ－６７＋Ｔｃｏｎｖ％の結果を示す。図６１Ｃは、Ｋｉ－６７＋ＣＤ８＋％の結果を示す。図６１Ｄは、Ｋｉ－６７＋ＮＫ細胞％の結果を示す。 ＡＫ５６４、ＡＫ５９６、ＡＫ９０６、ＡＫ９０７、ＡＫ９０８、ＡＫ９０９、ＡＫ９１０、およびＡＫ９１１のＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析からのゲル画像結果を示す。 ＣＨＯ－Ｋ１細胞内のマスク型および非マスク型ＩＬ－１５構築物の活性化を試験するために使用されたＨＥＫ－Ｂｌｕｅ ＩＬ－２バイオアッセイの結果を示す。 ペプチド基質を含まない例示的ＩＬ－１５構築物ＡＫ９０４およびＡＫ９１０、ペプチド基質を含むＡＫ９２９、ＡＫ９３５、ＡＫ９３１、ＡＫ９３７、ＡＫ９３４、ＡＫ９３３、ＡＫ９３９、およびＡＫ９４０を使用した、ＳＤＳ－ＰＡＧＥおよびＨＥＫ－Ｂｌｕｅ ＩＬ－２バイオアッセイの結果を示す。図６４Ａ～６４Ｄは、ＳＤＳ－ＰＡＧＥゲルの結果を示す。図６５Ａ～６５Ｊは、ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ ＩＬ－２バイオアッセイの結果を示す。 ペプチド基質を含まない例示的ＩＬ－１５構築物ＡＫ９０４およびＡＫ９１０、ペプチド基質を含むＡＫ９２９、ＡＫ９３５、ＡＫ９３１、ＡＫ９３７、ＡＫ９３４、ＡＫ９３３、ＡＫ９３９、およびＡＫ９４０を使用した、ＳＤＳ－ＰＡＧＥおよびＨＥＫ－Ｂｌｕｅ ＩＬ－２バイオアッセイの結果を示す。図６４Ａ～６４Ｄは、ＳＤＳ－ＰＡＧＥゲルの結果を示す。図６５Ａ～６５Ｊは、ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ ＩＬ－２バイオアッセイの結果を示す。 ペプチド基質を含まない例示的ＩＬ－１５構築物ＡＫ９０４およびＡＫ９１０、ならびにペプチド基質を含む構築物ＡＫ９３２、ＡＫ９３８、ＡＫ９３０、およびＡＫ９３６を使用した、ＳＤＳ－ＰＡＧＥおよびＨＥＫ－Ｂｌｕｅ ＩＬ－２バイオアッセイの結果を示す。図６６Ａ～６６Ｄは、ＳＤＳ－ＰＡＧＥゲルの結果を示す。図６７Ａ～６７Ｆは、ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ ＩＬ－２バイオアッセイの結果を示す。 ペプチド基質を含まない例示的ＩＬ－１５構築物ＡＫ９０４およびＡＫ９１０、ならびにペプチド基質を含む構築物ＡＫ９３２、ＡＫ９３８、ＡＫ９３０、およびＡＫ９３６を使用した、ＳＤＳ－ＰＡＧＥおよびＨＥＫ－Ｂｌｕｅ ＩＬ－２バイオアッセイの結果を示す。図６６Ａ～６６Ｄは、ＳＤＳ－ＰＡＧＥゲルの結果を示す。図６７Ａ～６７Ｆは、ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ ＩＬ－２バイオアッセイの結果を示す。 例示的構築物ｒｈＩＬ－１５、ＡＫ５０７、ＡＫ５６４、およびＡＫ５６４を使用した、実施例１６のＳＰＲ研究の結果を示す。 例示的構築物ｒｈＩＬ－１５、ＡＫ５０７、ＡＫ５６４、およびＡＫ５６４を使用した、実施例１６のＳＰＲ研究の結果を示す。
マスキング部分を使用することにより、投与されたＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片の全身的副作用は、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片のその同族受容体への結合能力を妨害することによって低減され得る。
インターロイキン－１５受容体は、ＩＬ－１５に結合するＩ型サイトカイン受容体である。ＩＬ－１５Ｒαサブユニットからなり、ＩＬ－２受容体と共通のβおよびγサブユニットを共有する（ＩＬ－２Ｒβ鎖は、ＣＤ１２２とも呼ばれ、ＩＬ－２Ｒγ鎖は、ＣＤ１３２とも呼ばれる）。共有サブユニットは、ＩＬ－１５およびＩＬ－２の多くの重複生物学的効果の基礎を形成する。ＩＬ－１５Ｒαは、非常に高い親和性でＩＬ１５に特異的に結合し、βおよびγサブユニットから独立してＩＬ－１５に結合することが可能である。本明細書で使用される場合の「ＩＬ－１５Ｒ」という用語は、ＩＬ－１５Ｒα鎖、ＩＬ－２Ｒβ鎖、およびＩＬ－２Ｒγ鎖という３つの別個の非共有結合鎖を含む、高親和性ＩＬ－１５受容体複合体を指す。ＩＬ－１５は、ＩＬ－１５Ｒα鎖、ＩＬ－２Ｒβ鎖およびＩＬ－２Ｒγ鎖のヘテロ二量体、ならびにＩＬ－２Ｒβ鎖およびＩＬ－２Ｒγ鎖と組み合わせたＩＬ－１５Ｒα鎖に結合することが可能である。場合によっては、この用語はまた、ＩＬ－１５Ｒα鎖、ＩＬ－２Ｒβ鎖、またはＩＬ－２Ｒγ鎖、もしくはそれらの組み合わせを包含する。
したがって、いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５ＲαへのＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片の結合を低減または防止する、マスキング部分が採用される。全身的効果をさらに低減するために、いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５受容体のＩＬ－１５Ｒβおよび／またはＩＬ－１５ＲγサブユニットのＩＬ－１５サイトカインまたはその断片の結合もまた、マスク型サイトカイン中のマスキング部分によって低減または防止され得る。
タンパク質分解的に切断可能なペプチドを含むリンカーを使用して、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片をマスクすることにより、マスキング部分を使用することによって妨害される結合能力は、腫瘍微小環境における切断可能なペプチドの切断によって復元され得る。したがって、本明細書で提供されるＩＬ－１５サイトカインは、がんの特徴のうちの１つである、高局所濃度の活性プロテアーゼを活用することによって、腫瘍微小環境に薬理学的活性を正確に標的化するように操作される。腫瘍微小環境のこの特徴は、全身的に不活性な分子を、ＩＬ－１５切断産物の形態の局所的に活性なＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片に形質転換するために使用される。腫瘍微小環境におけるＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片の活性化は、活性形態で対象に投与される薬剤と関連付けられ得る全身毒性を有意に低減させる。したがって、本発明のマスク型ＩＬ－１５サイトカインは、プロドラッグとみなされ得る。
本明細書に記載されるマスク型ＩＬ－１５サイトカインは、様々な有利な特性を示すことが見出されている。本明細書のいずれかの場所に記載されるマスク型ＩＬ－１５サイトカインは、タンパク質分解切断時に、優先的に腫瘍微小環境内で、かつ周辺ではより低いレベルにおいて、免疫細胞を活性化すること（増殖および拡張）が可能であることが見出されている。本明細書のいずれかの場所に記載されるマスク型ＩＬ－１５サイトカインは、腫瘍の根絶の促進（すなわち、抗腫瘍活性を示す）およびタンパク質分解切断時の転移の阻害が可能であることが見出されている。本明細書のいずれかの場所に記載されるマスク型ＩＬ－１５サイトカインは、有利な長期薬剤曝露を実証することが見出されている。本明細書に記載されるマスク型ＩＬ－１５サイトカインは、有利な安定性を示すことが見出されている。本明細書に記載されるマスク型ＩＬ－１５サイトカインは、有利な忍容性を実証することが見出されている。さらに、本明細書に記載されるマスク型ＩＬ－１５サイトカインは、有利な効力を実証することが判明している。
１．マスク型サイトカイン
本明細書で提供されるものは、マスク型サイトカインである。
いくつかの実施形態では、マスキング部分と、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片とを含む、マスク型ＩＬ－１５サイトカインが提供され、マスキング部分は、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片をマスクし、それによって、ＩＬ－サイトカインまたはその機能的断片のその同族受容体への結合を低減または防止し、タンパク質分解的に切断可能なペプチドが、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片とマスキング部分との間に存在する。
１．１「線形」マスク型サイトカイン
いくつかの実施形態では、マスク型ＩＬ－１５サイトカインは、マスキング部分と、単一ポリペプチド鎖内に連結されたＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片とを含む。
いくつかの実施形態では、マスク型ＩＬ－１５サイトカインは、
Ｎ’ＨＬ－Ｌ２－Ｃ－Ｌ１－ＭＭ Ｃ’を含む、ポリペプチド鎖を含み、
ＨＬは、半減期延長ドメインであり、Ｌ１は、第１のリンカーであり、ＭＭは、マスキング部分であり、Ｌ２は、第２のリンカーであり、Ｃは、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片であり、少なくとも第１のリンカーは、タンパク質分解的に切断可能なペプチドを含む。
いくつかの実施形態では、マスク型ＩＬ－１５サイトカインは、
Ｎ’ＨＬ－Ｌ２－ＭＭ－Ｌ１－Ｃ Ｃ’を含む、ポリペプチド鎖を含み、
ＨＬは、半減期延長ドメインであり、Ｌ１は、第１のリンカーであり、ＭＭは、マスキング部分であり、Ｌ２は、第２のリンカーであり、Ｃは、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片であり、少なくとも第１のリンカーは、タンパク質分解的に切断可能なペプチドを含む。
いくつかの実施形態では、マスキング部分は、本明細書のいずれかの場所に記載のとおりである。
いくつかの実施形態において、第１のリンカーは、本明細書のいずれかの場所に記載されるような切断可能なリンカーである。
いくつかの実施形態では、第２のリンカーは、本明細書のいずれかの場所に記載されるような非切断可能なリンカーである。
いくつかの実施形態では、半減期延長ドメイン（ＨＬ）は、二量体化Ｆｃドメイン（ＨＬ１－ＨＬ２）を含む、抗体またはその断片のＦｃ領域（すなわち、イムノグロブリン重鎖のＣ末端領域）を含む。免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域の境界は変化し得るが、ヒトＩｇＧ重鎖のＦｃ領域は通常、位置Ｃｙｓ２２６におけるアミノ酸残基またはＰｒｏ２３０から、そのカルボキシル末端に及ぶように定義される。いくつかの実施形態では、抗体の二量体化Ｆｃドメイン（ＨＬ１－ＨＬ２）は、本明細書のいずれかの場所に記載されるように、第１の半減期延長ドメインと、第２の半減期延長ドメインとを含み、第１の半減期延長ドメインは、第１のＦｃドメインまたはその断片を含み、第２の半減期延長ドメインは、第２のＦｃドメインまたはその断片を含む。いくつかの実施形態では、ＨＬ２は、ポリペプチド鎖の成分であり、ＨＬ１は、それに二量体化されるため、
第１のポリペプチド鎖は、
Ｎ’ＨＬ１ Ｃ’を含み、
第２のポリペプチド鎖は、
Ｎ’ＨＬ２－Ｌ２－ＭＭ－Ｌ１－Ｃ Ｃ’を含む。
いくつかの実施形態では、ＨＬ２は、ポリペプチド鎖の成分であり、ＨＬ１は、それに二量体化されるため、
第１のポリペプチド鎖は、
Ｎ’ＨＬ１ Ｃ’を含む、第１のポリペプチド鎖と、
第２のポリペプチド鎖は、
Ｎ’ＨＬ２－非切断可能Ｌ２－ＭＭ－切断可能Ｌ１－Ｃ Ｃ’を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、本明細書のいずれかの場所に記載のとおりである。
１．２「ヘテロ二量体」マスク型サイトカイン
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるものは、第１のポリペプチド鎖内のマスキング部分と、第２のポリペプチド鎖内のＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片とを含む、マスク型サイトカインである。そのようなマスク型サイトカインは、「ヘテロ二量体」マスク型サイトカインと称され得る。
いくつかの実施形態では、マスク型サイトカインは、
ａ）第１のリンカーを介して第１の半減期延長ドメインに連結されたマスキング部分を含む、第１のポリペプチド鎖と、
ｂ）第２のリンカーを介して第２の半減期延長ドメインに連結されたＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片を含む、第２のポリペプチド鎖と、を含む、タンパク質ヘテロ二量体であり、
第１の半減期延長ドメインは、第２の半減期延長ドメインと関連付けられ、
第１のリンカーまたは第２のリンカーのうちの１つは、タンパク質分解的に切断可能なペプチドを含む。
マスキング部分、半減期延長ドメイン、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片、リンカー、および第１の半減期延長ドメインと第２の半減期延長ドメインとの間の会合のタイプは、本明細書に記載されるもののうちのいずれか１つ、および本明細書に記載されるものの任意の組み合わせであり得る。
いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖において、第１の半減期延長ドメインは、第１のリンカーのアミノ末端に連結され、第１のリンカーのカルボキシ末端は、マスキング部分のアミノ末端に連結され、第２のポリペプチド鎖では、第２の半減期延長ドメインは、第２のリンカーのアミノ末端に連結され、第２のリンカーのカルボキシ末端は、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片のアミノ末端に連結される。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、
Ｎ’ＨＬ１－Ｌ１－ＭＭ Ｃ’を含み、
第２のポリペプチド鎖は、
Ｎ’ＨＬ２－Ｌ２－Ｃ Ｃ’を含み、
ＨＬ１は、第１の半減期延長ドメインであり、Ｌ１は、第１のリンカーであり、ＭＭは、マスキング部分であり、ＨＬ２は、第２の半減期延長ドメインであり、Ｌ２は、第２のリンカーであり、Ｃは、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片である。
いくつかの実施形態では、第２のリンカーは、タンパク質分解的に切断可能なペプチドを含み（本明細書では「タンパク質分解的に切断可能なリンカー」と称されるリンカー）、第１のリンカーは、タンパク質分解的に切断可能なペプチドを含まない（本明細書では「非タンパク質分解的に切断可能なリンカー」と称されるリンカー）。この配置は、本明細書では「構造Ａ」として記載される。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、
Ｎ’ＨＬ１－非切断可能Ｌ１－ＭＭ Ｃ’を含み、
第２のポリペプチド鎖は、
Ｎ’ＨＬ２－切断可能Ｌ２－Ｃ Ｃ’を含む。
いくつかの実施形態では、第１のリンカーは、タンパク質分解的に切断可能なペプチドを含み（本明細書では「タンパク質分解的に切断可能なリンカー」と称されるリンカー）、第２のリンカーは、タンパク質分解的に切断可能なペプチドを含まない（本明細書では「非タンパク質分解的に切断可能なリンカー」と称されるリンカー）。この配置は、本明細書では「構造Ｂ」として記載される（かつ構造Ａの「逆転」バージョンを表す）。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、
Ｎ’ＨＬ１－切断可能Ｌ１－ＭＭ Ｃ’を含み、
第２のポリペプチド鎖は、
Ｎ’ＨＬ２－非切断可能Ｌ２－Ｃ Ｃ’を含む。
１．３ ＩＬ－１５サイトカイン
本明細書で提供されるものは、マスク型サイトカインまたはその切断産物で使用するためのＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片である。サイトカインは、特に免疫系の細胞内で、細胞シグナル伝達において役割を果たす。ＩＬ－１５は、白血球の活性を調節する免疫系内のサイトカインシグナル伝達分子の一種である、インターロイキンである。
真核細胞では、ＩＬ－１５は、１６２個のアミノ酸（配列番号１）の前駆体ポリペプチドとして合成され、これは次いで、アミノ酸残基１～４８の除去によって成熟ＩＬ－１５に処理される。これは、成熟した活性形態で分泌される１１４個のアミノ酸（アミノ酸残基４９～１６２）からなるＩＬ－１５の成熟形態をもたらす（配列番号２を参照）。
ＩＬ－１５前駆体ポリペプチド（配列番号１）：
ＭＲＩＳＫＰＨＬＲＳＩＳＩＱＣＹＬＣＬＬＬＮＳＨＦＬＴＥＡＧＩＨＶＦＩＬＧＣＦＳＡＧＬＰＫＴＥＡＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ
ＩＬ－１５成熟ポリペプチド（配列番号２）：
ＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ
本明細書で使用される場合の「ＩＬ－１５」または「ＩＬ－１５ポリペプチド」という用語は、任意のインターロイキン－１５（ＩＬ－１５）タンパク質、またはその機能的断片もしくはバリアントを指す。この用語は、霊長類（例えば、ヒト）およびげっ歯類（例えば、ラットおよびマウス）などの哺乳動物を含む、任意の脊椎動物源由来の任意の天然ＩＬ－１５を包含する。この用語は、未処理ＩＬ－１５（例えば、アミノ酸残基１～１６２からなるＩＬ－１５の完全長前駆体形態）、ならびに細胞内の処理から生じる任意の形態のＩＬ－１５（例えば、アミノ酸残基４９～１６２からなるＩＬ－１５の成熟形態）を包含する。したがって、この用語は、配列番号２のアミノ酸配列、ならびにその配列バリアントによってコードされる、タンパク質を包含する。この用語はまた、ＩＬ－１５の天然に存在するバリアントを包含する。この用語はまた、切断、欠失、ＩＬ－１５が別の分子に連結される形態、および（例えば、置換、付加、または欠失による）アミノ酸配列への少なくとも１つのアミノ酸変化によって引き起こされるバリアントなどのＩＬ－１５の天然に存在しないバリアントも包含する。いくつかの態様では、バリアントまたは相同体は、配列番号１または２のアミノ酸配列によってコードされるＩＬ－１５ポリペプチドなどの天然に存在するＩＬ－１５ポリペプチドと比較して、配列全体または配列の一部（例えば、５０、１００、または１１４連続アミノ酸部分）にわたって、少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％アミノ酸配列同一性を有する。したがって、「ＩＬ－１５」または「ＩＬ－１５ポリペプチド」という用語は、配列番号１または２のアミノ酸配列への１つ以上のアミノ酸置換によって作成されたバリアントなどのそのバリアントを含む、配列番号１または２のアミノ酸配列を含むＩＬ－１５タンパク質を含む。
ＩＬ－１５サイトカインの「機能的断片」は、（例えば、完全長サイトカインタンパク質と比較して、少なくとも５０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％活性以内で）サイトカイン受容体結合能を保持するか、または修飾している、完全長サイトカインタンパク質の一部を含む。サイトカイン受容体結合能は、例えば、サイトカインの同族受容体またはその成分（例えば、ヘテロ三量体受容体複合体の１つ以上の鎖）に結合するサイトカインの能力によって示されることができる。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、インターロイキン－２受容体、特にＩＬ－１５Ｒα鎖に結合することが可能な任意の天然に存在するインターロイキン－２（ＩＬ－１５）タンパク質またはその修飾バリアントである。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその断片は、配列番号２またはその機能的断片を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号２のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号２のアミノ酸配列と比較して、少なくとも１つのアミノ酸修飾を有するアミノ酸配列を含む。少なくとも１つのアミノ酸修飾の各々は、置換、挿入、または欠失などの任意のアミノ酸修飾であり得る。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号２のアミノ酸配列と比較して、少なくとも１個、少なくとも２個、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、または少なくとも１０個のアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号２のアミノ酸配列と比較して、少なくとも５つのアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号２のアミノ酸配列に対して約または少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号２のアミノ酸配列と比較して、１つ以上のアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号２のアミノ酸配列と比較して、位置Ｄ２２、Ｅ４６、Ｅ５３に１つ以上のアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号２のアミノ酸配列と比較して、位置Ｄ２２、Ｅ４６、Ｅ５３、Ｎ７１、Ｎ７９、Ｎ１１２に１つ以上のアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号２のアミノ酸配列と比較して、位置Ｄ２２にアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号２のアミノ酸配列と比較して、位置Ｅ４６にアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号２のアミノ酸配列と比較して、位置Ｅ５３にアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号２のアミノ酸配列と比較して、位置Ｎ７１にアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号２のアミノ酸配列と比較して、位置Ｎ７９にアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号２のアミノ酸配列と比較して、位置Ｎ１１２にアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号２のアミノ酸配列と比較して、位置Ｅ４６およびＥ５３にアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号２のアミノ酸配列と比較して、位置Ｎ７１およびＮ７９にアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号２のアミノ酸配列と比較して、位置Ｎ７１およびＮ１１２にアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号２のアミノ酸配列と比較して、位置Ｎ７９およびＮ１１２にアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号２のアミノ酸配列と比較して、位置Ｎ７１、Ｎ７９、およびＮ１１２にアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、位置Ｄ２２におけるアミノ酸置換は、Ｄ２２Ａである。
いくつかの実施形態では、位置Ｅ４６におけるアミノ酸置換は、Ｅ４６Ａである。
いくつかの実施形態では、位置Ｅ４６におけるアミノ酸置換は、Ｅ４６Ｒである。
いくつかの実施形態では、位置Ｅ４６におけるアミノ酸置換は、Ｅ４６Ｓである。
いくつかの実施形態では、位置Ｅ５３におけるアミノ酸置換は、Ｅ５３Ａである。
いくつかの実施形態では、位置Ｅ５３におけるアミノ酸置換は、Ｅ５３Ｒである。
いくつかの実施形態では、位置Ｅ５３におけるアミノ酸置換は、Ｅ５３Ｓである。
いくつかの実施形態では、位置Ｎ７１におけるアミノ酸置換は、Ｎ７１Ｑである。
いくつかの実施形態では、位置Ｎ７９におけるアミノ酸置換は、Ｎ７９Ｑである。
いくつかの実施形態では、位置Ｎ１１２におけるアミノ酸置換は、Ｎ１１２Ｑである。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号２のアミノ酸配列と比較して、アミノ酸置換Ｄ２２Ａを有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号３のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号３のアミノ酸配列に対して約または少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号２のアミノ酸配列と比較して、アミノ酸置換Ｅ４６Ａを有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号４のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号４のアミノ酸配列に対して約または少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号２のアミノ酸配列と比較して、アミノ酸置換Ｅ４６ＡおよびＥ５３Ａを有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号５のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号５のアミノ酸配列に対して約または少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号２のアミノ酸配列と比較して、アミノ酸置換Ｅ４６ＲおよびＥ５３Ｒを有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号６のアミノ酸配列に対して約または少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号２のアミノ酸配列と比較して、アミノ酸置換Ｅ４６ＳおよびＥ５３Ｓを有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号７のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号７のアミノ酸配列に対して約または少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号２のアミノ酸配列と比較して、位置Ｅ５３Ａにアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号８のアミノ酸配列に対して約または少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号９のアミノ酸配列と、配列番号１０のアミノ酸配列とを含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号９のアミノ酸配列に対して約または少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％配列同一性を有するアミノ酸配列と、配列番号１０のアミノ酸配列に対して約または少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％配列同一性を有するアミノ酸配列とを含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号２のアミノ酸配列と比較して、アミノ酸置換Ｎ７１Ｑを有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２７のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２７のアミノ酸配列に対して約または少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号２のアミノ酸配列と比較して、アミノ酸置換Ｎ７９Ｑを有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２８のアミノ酸配列に対して約または少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号２のアミノ酸配列と比較して、アミノ酸置換Ｎ１１２Ｑを有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２９のアミノ酸配列に対して約または少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号２のアミノ酸配列と比較して、アミノ酸置換Ｎ７１ＱおよびＮ７９Ｑを有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３０のアミノ酸配列に対して約または少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号２のアミノ酸配列と比較して、アミノ酸置換Ｎ７１ＱおよびＮ１１２Ｑを有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３１のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３１のアミノ酸配列に対して約または少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号２のアミノ酸配列と比較して、アミノ酸置換Ｎ７９ＱおよびＮ１１２Ｑを有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３２のアミノ酸配列に対して約または少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号２のアミノ酸配列と比較して、アミノ酸置換Ｎ７１Ｑ、Ｎ７９Ｑ、およびＮ１１２Ｑを有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３３のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３３のアミノ酸配列に対して約または少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
配列が、以下の表１に示される。
いくつかの実施形態では、追加の変異が、位置Ｎ７１において上記の配列のうちのいずれかに含まれ得る。いくつかの実施形態では、変異は、Ｎ７１Ａ、Ｎ７１Ｒ、Ｎ７１Ｗ、Ｎ７１Ｆ、Ｎ７１Ｐ、Ｎ７１Ｍ、Ｎ７１Ｌ、Ｎ７１Ｔ、Ｎ７１Ｓ、またはＮ７１Ｙである。
いくつかの実施形態では、追加の変異が、位置Ｓ７３において上記の配列のうちのいずれかに含まれ得る。いくつかの実施形態では、変異は、Ｓ７３Ａ、Ｓ７３Ｗ、Ｓ７３Ｖ、またはＳ７３Ｍである。
いくつかの実施形態では、追加の変異が、アミノ酸位置Ｎ７２、Ｎ７９、Ｖ８０、Ｔ８１、およびＮ１１２のうちの１つ以上において上記の配列のうちのいずれかに含まれ得る。いくつかの実施形態では、Ｎ７２Ａ、Ｎ７９Ａ、Ｖ８０Ａ、Ｔ８１Ａ、およびＮ１１２Ｒから選択される１つ以上の追加の変異が、上記の配列のうちのいずれかに含まれ得る。
いくつかの実施形態では、追加の変異が、アミノ酸位置Ｎ７２、Ｓ７３、Ｎ７９、Ｖ８０、Ｔ８１、およびＮ１１２のうちの１つ以上において上記の配列のうちのいずれかに含まれ得る。いくつかの実施形態では、１つ以上の追加の変異Ｎ７２Ａ、Ｓ７３Ａ、Ｎ７９Ａ、Ｖ８０Ａ、Ｔ８１Ａ、およびＮ１１２が、上記の配列のうちのいずれかに含まれ得る。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、Ｏ－グリコシル化部位を除去する目的で、配列番号２の成熟ＩＬ－１５のアミノ酸配列と比較して、１つ以上のアミノ酸残基、例えば、残基１～３を除去させる。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、Ｏ－グリコシル化部位を除去する目的で、配列番号２の成熟ＩＬ－１５のアミノ酸配列と比較して、１つ以上のアミノ酸残基を置換させる。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、Ｏ－グリコシル化部位を除去する目的で、配列番号２の成熟ＩＬ－１５のアミノ酸配列と比較して、例えば、残基１～３の領域内に、１つ以上のアミノ酸残基を挿入させる。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、残基１～３内にＯ－グリコシル化部位を有していない。
１．４ マスキング部分
本明細書で提供されるものは、マスク型サイトカインで使用するためのマスキング部分である。マスキング部分は、マスク型サイトカインから切断されて、その切断産物を形成することを理解されたい。マスキング部分は、マスク型サイトカイン中のＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片をマスクし、それによって、ＩＬ－サイトカインまたはその機能的断片のその同族受容体への結合を低減または防止する。いくつかの実施形態では、マスキング部分は、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片のＩＬ－１５Ｒαへの結合を低減または防止する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるマスキング部分は、抗ＩＬ－１５抗体もしくはＩＬ－１５同族受容体タンパク質などのＩＬ－１５サイトカインもしくはその機能的断片に結合すること、または別様にそれに対する親和性を示すことが可能な部分を指す。タンパク質（例えば、サイトカイン）の同族タンパク質（例えば、サイトカイン受容体）への結合の程度を決定するための方法は、当該技術分野で周知である。
いくつかの実施形態では、マスキング部分は、ＩＬ－１５サイトカイン受容体、またはそのサブユニットもしくは機能的断片を含む。
いくつかの実施形態では、マスキング部分は、ＩＬ－１５Ｒβ（ＣＤ１２２とも称される）、またはＩＬ－１５との親和性を保持するか、もしくは別様に実証するその断片、部分、もしくはバリアントを含む。
ＩＬ－１５Ｒβの野生型配列は、配列番号１１に示される。
いくつかの実施形態では、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、マスキングペプチドは、配列番号１１のアミノ酸配列に対して約または少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、マスキング部分は、１～４個のアミノ酸置換を伴う配列番号１１のアミノ酸配列を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、マスキング部分は、１つまたは２つのアミノ酸置換を伴う配列番号１１のアミノ酸配列を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、マスキング部分は、ＩＬ－１５Ｒβ（またはその機能的断片、部分、もしくはバリアント）を含み、ＩＬ－１５Ｒβは、位置Ｃ１２２にアミノ酸置換を有する。
いくつかの実施形態では、マスキング部分は、ＩＬ－１５Ｒβ（またはその機能的断片、部分、もしくはバリアント）を含み、ＩＬ－１５Ｒβは、位置Ｃ１２２Ｓにアミノ酸置換を有する。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒβ、またはその断片、部分、もしくはバリアントは、配列番号１１のＩＬ－１５Ｒβと比較して、位置Ｃ１２２にアミノ酸置換を有する。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒβ、またはその断片、部分、もしくはバリアントは、配列番号１１のＩＬ－１５Ｒβと比較して、アミノ酸位置１２２に変異Ｃ１２２Ｓを有する。
いくつかの実施形態では、マスキング部分は、Ｃ１２２変異を伴う配列番号１１のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、マスキング部分は、Ｃ１２２Ｓ変異を伴う配列番号１１のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、マスキング部分は、ＩＬ－１５Ｒβ（またはその機能的断片、部分、もしくはバリアント）を含み、ＩＬ－１５Ｒβは、位置Ｃ１６８にアミノ酸置換を有する。
いくつかの実施形態では、マスキング部分は、ＩＬ－１５Ｒβ（またはその機能的断片、部分、もしくはバリアント）を含み、ＩＬ－１５Ｒβは、アミノ酸置換Ｃ１６８Ｓを有する。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒβ、またはその断片、部分、もしくはバリアントは、配列番号１１のＩＬ－１５Ｒβと比較して、アミノ酸位置Ｃ１６８に変異を有する。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒβ、またはその断片、部分、もしくはバリアントは、配列番号１１のＩＬ－１５Ｒβと比較して、アミノ酸位置１６８に変異Ｃ１６８Ｓを有する。
いくつかの実施形態では、マスキング部分は、Ｃ１６８変異を伴う配列番号１１のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、マスキング部分は、Ｃ１６８Ｓ変異を伴う配列番号１１のアミノ酸配列を含む。
ＩＬ－１５Ｒβ、またはその断片、部分、もしくはバリアントが、配列番号１１のＩＬ－１５Ｒβと比較して、アミノ酸位置Ｃ１２２およびＣ１６８において変異を有する、請求項のいずれか一項に記載のマスク型サイトカイン。
ＩＬ－１５Ｒβ、またはその断片、部分、もしくはバリアントが、配列番号１１のＩＬ－１５Ｒβと比較して、変異Ｃ１２２ＳおよびＣ１６８Ｓを有する、請求項のいずれか一項に記載のマスク型サイトカイン。
いくつかの実施形態では、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸を含む。
配列が、表２に示される。
１．５ リンカー
本明細書で提供されるものは、マスク型サイトカインまたはその切断産物で使用するためのリンカーである。本明細書で提供されるリンカーは、本明細書に記載されるマスク型サイトカインにおいて２つの機能的成分をともに連結するために使用される、さらに２つのアミノ酸のペプチドを指す。
いくつかの実施形態の非切断可能なリンカーおよび切断可能なリンカーは、以下でより詳細に記載される。
１．５．１ 非タンパク質分解的に切断可能なリンカー
いくつかの実施形態では、非切断可能なリンカーは、長さで３～２５個のアミノ酸である。
いくつかの実施形態では、非切断可能なリンカーは、アミノ酸残基Ｇ、Ｓ、およびＰが豊富である。
いくつかの実施形態では、非切断可能なリンカーは、Ｇ、Ｓ、およびＰからなる群から選択されるアミノ酸残基タイプのみを含む。
構造Ａの「線形」マスク型サイトカインおよび「ヘテロ二量体」マスク型サイトカイン中の非タンパク質分解的に切断可能なリンカー
ヘテロ二量体マスク型サイトカインの構造Ａのいくつかの実施形態では、非切断可能なリンカーは、長さで３～８個のアミノ酸である。いくつかの実施形態では、非切断可能なリンカーは、長さで４～６個のアミノ酸である。いくつかの実施形態では、非切断可能なリンカーは、「ＧＳ」反復を含む。いくつかの実施形態では、非切断可能なリンカーは、Ｎ’末端「Ｐ」残基を含む。いくつかの実施形態では、非切断可能なリンカーは、配列番号２２（ＰＧＳＧＳ）に示されるアミノ酸配列を含む。
第２のリンカーがタンパク質分解的に切断可能なリンカーであるように、第２のリンカーがタンパク質分解的に切断可能なペプチドを含み、第１のリンカーが非タンパク質分解的に切断可能なリンカーであるように、第１のリンカーがタンパク質分解的に切断可能なペプチドを含まない、いくつかの実施形態では、非切断可能なリンカーは、長さで３～２５個のアミノ酸である。いくつかの実施形態では、非切断可能なリンカーは、長さで４～６個のアミノ酸である。いくつかの実施形態では、非切断可能なリンカーは、配列番号２２（ＰＧＳＧＳ）に示されるアミノ酸配列を含む。
配列が、表３に示される。
構造Ｂの「ヘテロ二量体」マスク型サイトカイン中の非タンパク質分解的に切断可能なリンカー
ヘテロ二量体マスク型サイトカインの構造Ｂのいくつかの実施形態では、非切断可能なリンカーは、長さで１５～２５個のアミノ酸である。いくつかの実施形態では、非切断可能なリンカーは、長さで１８～２２個のアミノ酸である。いくつかの実施形態では、非切断可能なリンカーは、配列番号２１（ＧＧＳＳＰＰＧＧＧＳＳＧＧＧＳＧＰＳＧＳＰＧ）に示されるアミノ酸配列を含む。
第１のリンカーがタンパク質分解的に切断可能なリンカーであるように、第１のリンカーがタンパク質分解的に切断可能なペプチドを含み、第２のリンカーが非タンパク質分解的に切断可能なリンカーであるように、第２のリンカーがタンパク質分解的に切断可能なペプチドを含まない、いくつかの実施形態では、非切断可能なリンカーは、長さで３～２５個のアミノ酸である。いくつかの実施形態では、非切断可能なリンカーは、配列番号２１（ＧＧＳＳＰＰＧＧＧＳＳＧＧＧＳＧＰ）に示されるアミノ酸配列を含む。
配列が、表３に示される。
いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖および第２のポリペプチド鎖は、第１の半減期延長ドメインが第２の半減期延長ドメインと会合すること、およびマスキング部分が集合構築物中のＩＬ－２サイトカインまたはその機能的断片をマスクすることを促進するために、同じまたは類似の長さであることが望ましい。したがって、マスキング部分が、ＩＬ－２サイトカインまたはその機能的断片よりも短いアミノ酸配列である場合、長さの差は、より長いリンカーＬ１を使用することによって完全または部分的に補償され得る。
１．５．２ タンパク質分解的に切断可能なリンカー
タンパク質分解的に切断可能なペプチド
切断可能なリンカーは、切断可能なペプチドを含む。
切断可能なペプチドは、切断可能なペプチドがタンパク質分解的に切断可能であるように、プロテアーゼ切断部位を含む。プロテアーゼは、標的基質タンパク質の２つの特異的アミノ酸残基間のペプチド結合を切断および加水分解する酵素である。本明細書で使用される場合の「切断部位」は、本明細書に記載される切断可能なペプチドを含むリンカーのいずれかで見出される、切断可能なペプチドの一部の切断のための認識可能な部位を指す。したがって、切断部位は、本明細書に記載される切断可能なペプチドの配列で見出され得る。いくつかの実施形態では、切断部位は、切断剤によって認識および切断されるアミノ酸配列である。
いくつかの実施形態では、プロテアーゼ切断部位は、腫瘍関連プロテアーゼ切断部位である。本明細書で提供される「腫瘍関連プロテアーゼ切断部位」は、プロテアーゼによって認識されるアミノ酸配列であり、その発現は、腫瘍細胞またはその腫瘍細胞環境に特異的であるか、または情報調節される。
腫瘍細胞環境は、複雑であり、複数の異なるプロテアーゼを含むことができる。したがって、所与の切断可能なペプチドが腫瘍細胞環境内で切断される正確な部位は、腫瘍型の間、同じ腫瘍型を有する患者の間、および特定の腫瘍細胞環境に依存する同じ腫瘍に形成された切断産物の間で変化し得る。さらに、切断後でさえも、例えば、１つまたは２つの末端アミノ酸の除去による、初期切断産物のさらなる修飾は、腫瘍細胞環境内のプロテアーゼのさらなる作用によって生じ得る。したがって、切断産物の分布は、本明細書に記載されるマスク型サイトカインの単一構造の投与後に、患者の腫瘍細胞環境内に形成されることが予期され得る。
本明細書で参照される切断部位は、腫瘍細胞環境と関連することが知られているプロテアーゼの標的である切断可能なペプチド内の２つの特異的アミノ酸残基の間の部位を指すことを理解されたい。この意味で、異なるプロテアーゼが、異なる切断部位において切断可能なペプチドを切断する、本明細書に記載される切断可能なペプチド内に１つを超える切断部位が存在し得る。また、１つを超えるプロテアーゼが、切断可能なペプチド内の同じ切断部位に作用し得る可能性もある。プロテアーゼ切断部位についての考察は、当該技術分野で見出され得る。
したがって、本明細書に開示される切断可能なペプチドは、１つ以上のプロテアーゼによって切断され得る。
いくつかの実施形態では、切断可能なペプチドは、ＩＬ－１５サイトカイン受容体、特に、ＩＬ－１５Ｒαを発現する領域または細胞内で共局在化される、プロテアーゼのための基質である。
いくつかの実施形態では、切断可能なペプチドは、５ｍｅｒ（すなわち、長さで５個のアミノ酸のペプチド）であり、６ｍｅｒ（すなわち、長さで６個のアミノ酸のペプチド）、７－ｍｅｒ（すなわち、長さで７個のアミノ酸のペプチド）、８ｍｅｒ（すなわち、長さで８個のアミノ酸のペプチド）、９ｍｅｒ（すなわち、長さで９個のアミノ酸のペプチド）、１０ｍｅｒ（すなわち、長さで１０個のアミノ酸のペプチド）、１１ｍｅｒ（すなわち、長さで１１個のアミノ酸のペプチド）、１２ｍｅｒ（すなわち、長さで１２個のアミノ酸のペプチド）、１３ｍｅｒ（すなわち、長さで１３個のアミノ酸のペプチド）、１４ｍｅｒ（すなわち、長さで１４個のアミノ酸のペプチド）、１５ｍｅｒ（すなわち、長さで１５個のアミノ酸のペプチド）、１６ｍｅｒ（すなわち、長さで１６個のアミノ酸のペプチド）、１７－ｍｅｒ（すなわち、長さで１７個のアミノ酸のペプチド）、または１８ｍｅｒ（すなわち、長さで１８個のアミノ酸のペプチド）である。
いくつかの実施形態では、切断可能なペプチドは、長さで５～１８個のアミノ酸である。いくつかの実施形態では、切断可能なペプチドは、長さで６～１０個のアミノ酸である。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカー内の切断可能なペプチドは、以下に示されるアミノ酸配列を含む。
Figure 2023520514000002
純粋に一例として、上記の表では、＊は、切断可能なペプチド内の既知のまたは観察されたプロテアーゼ切断部位を示す。
いくつかの実施形態では、切断可能なペプチドは、配列番号３３（ＭＰＹＤ＊ＬＹＨＰ）のアミノ酸を含む。
いくつかの実施形態では、切断可能なペプチドは、配列番号３４（ＶＰＬＳ＊ＬＹ）のアミノ酸配列を含み、例えば、切断可能なペプチドは、配列番号３２０（ＶＰＬＳＬＹＳＧ）のアミノ酸配列を含み得る。
いくつかの実施形態では、切断可能なペプチドは、配列番号２７（ＲＡＡＡ＊ＶＫＳＰ）のアミノ酸を含む。
いくつかの実施形態では、切断可能なペプチドは、配列番号１３４（ＤＳＧＧ＊ＦＭＬＴ）のアミノ酸を含む。
いくつかの実施形態では、切断可能なペプチドは、配列番号１３５（ＨＥＱ＊ＬＴＶ）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、切断可能なペプチドは、配列番号１５５（ＩＳＳＧＬＬ＊ＳＧ＊ＲＳ）のアミノ酸配列を含み、例えば、切断可能なペプチドは、配列番号３２１（ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＤＱＰ）のアミノ酸配列を含み得る。
いくつかの実施形態では、切断可能なペプチドは、配列番号１５６（ＤＬＬＡ＊ＶＶＡＡＳ）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、切断可能なペプチドは、配列番号３３（ＭＰＹＤ＊ＬＹＨＰ）のアミノ酸からなる。
いくつかの実施形態では、切断可能なペプチドは、配列番号３４（ＶＰＬＳ＊ＬＹ）のアミノ酸からなる。いくつかの実施形態では、切断可能なペプチドは、配列番号３２０（ＶＰＬＳＬＹＳＧ）のアミノ酸を含む。
いくつかの実施形態では、切断可能なペプチドは、配列番号２７（ＲＡＡＡ＊ＶＫＳＰ）のアミノ酸からなる。
いくつかの実施形態では、切断可能なペプチドは、配列番号１３４（ＤＳＧＧ＊ＦＭＬＴ）のアミノ酸からなる。
いくつかの実施形態では、切断可能なペプチドは、配列番号１３５（ＨＥＱ＊ＬＴＶ）のアミノ酸からなる。
いくつかの実施形態では、切断可能なペプチドは、配列番号１５５（ＩＳＳＧＬＬ＊ＳＧ＊ＲＳ）のアミノ酸からなる。いくつかの実施形態では、切断可能なペプチドは、配列番号３２１（ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＤＱＰ）のアミノ酸配列からなる。
いくつかの実施形態では、切断可能なペプチドは、配列番号１５６（ＤＬＬＡ＊ＶＶＡＡＳ）のアミノ酸からなる。
配列番号１５５または１５６に示されるアミノ酸配列を有する切断可能なペプチドは、非腫瘍細胞環境と比較して、腫瘍細胞環境内で非常に特異的な切断を実証することが見出されている。したがって、これらの切断可能なペプチドが、本明細書のいずれかの場所で開示されるようにマスク型ＩＬ－１５サイトカインに組み込まれるとき、投与されたＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片の任意の全身性副作用は、さらに低減され得る。
他のリンカードメイン
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、長さで１０～２５個のアミノ酸である。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、スペーサードメイン（ＳＤ）が両側に配置されたタンパク質分解的に切断可能なペプチド（ＣＰ）を含む。
ＳＤ－ＣＰ－ＳＤ
いくつかの実施形態では、リンカーは、切断可能なリンカーを含み、
Ｎ’ＳＤ１－ＣＰ－ＳＤ２ Ｃ’
ＳＤ１は、第１のスペーサードメインであり、ＳＤ２は、第２のスペーサードメインである。
いくつかの実施形態では、マスク型サイトカインは、ＩＬ－１５Ｒαサブユニットまたはその機能的断片（「ＩＬ－１５Ｒαドメイン」）を含む、ドメインをさらに含む。「ＩＬ－１５Ｒαドメイン」をマスク型サイトカイン構築物に組み込むことは、ＣＤ８ Ｔ細胞およびＮＫ細胞を活性化する当該サイトカインの効力を増加させることが実証されている。
ＩＬ－１５Ｒαサブユニット（ＣＤ２１５とも称される）は、ＩＬ－２Ｒαと構造的に類似し、ＩＬ－１５Ｒαの細胞外ドメインは、単一のタンパク質結合Ｓｕｓｈｉドメイン、膜近位プロリントレオニン豊富（ＰＴ）領域、およびｓｕｓｈｉドメインおよびＰＴ領域を接続するリンカー／ヒンジ領域からなる。ＩＬ－１５Ｒαサブユニットは、非常に高い親和性でＩＬ－１５に特異的に結合し、βおよびγサブユニットから独立してＩＬ－１５に結合することが可能である。
インターロイキン（ＩＬ）－１５は、広範囲の細胞型に作用するが、ＣＤ８ Ｔ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、およびＣＤ８αα上皮内リンパ球を含む免疫細胞の特定の群の発生、恒常性、および機能のために最も重要であるサイトカインである。ＩＬ－１５シグナルは、ＩＬ－２／１５Ｒβおよび共通γ（γＣ）鎖を介して伝達されるが、これは、極めて一意であるこれらのシグナル伝達成分へのＩＬ－１５の送達である。分泌される他のサイトカインとは対照的に、ＩＬ－１５は、主に高親和性ＩＬ－１５Ｒαに結合されて存在する。ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒα複合体が細胞表面にシャトル送達されるとき、それらは、β／γＣ受容体複合体を通して対向する細胞を刺激することができる。ＩＬ－１５送達のこの新規の機序は、トランスプレゼンテーションと呼ばれている（その内容が参照により本明細書に組み込まれる、Ｓ．Ｗ．Ｓｔｏｎｉｅｒ ａｎｄ Ｋ．Ｓ．Ｓｃｈｌｕｎｓ，’Ｔｒａｎｓ－ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ：ａ ｎｏｖｅｌ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ ＩＬ－１５ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ａｎｄ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ’，Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｌｅｔｔ Ｊａｎ ４ ２０１０；１２７（２）：８５－９２）。
ＩＬ－１５Ｒαサブユニットは、ｓｕｓｈｉドメインと呼ばれる保存されたタンパク質結合モチーフを含む。ＩＬ－１５Ｒαサブユニットのアミノ酸３１～９５を含む、ｓｕｓｈｉドメインｓＩＬ－１５Ｒαは、ＩＬ－１５と相互作用することに関与し、ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒα機能のために不可欠である（その内容が参照により本明細書に組み込まれる、’Ｔｈｅ Ｓｕｓｈｉ Ｄｏｍａｉｎ ｏｆ Ｓｏｌｕｂｌｅ ＩＬ－１５ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ α Ｉｓ Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｆｏｒ Ｂｉｎｄｉｎｇ ＩＬ－１５ ａｎｄ Ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ａｎｄ Ａｌｌｏｇｅｎｉｃ Ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ ａｎｄ Ｉｎ Ｖｉｖｏ’，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｊｕｌｙ １ ２００１；１６７（１）２７７－２８２）。
野生型ＩＬ－１５Ｒαサブユニットの配列が、主要ドメインの内訳とともに以下に示される。
Figure 2023520514000003
 ＞ｓｐ｜Ｑ１３２６１｜１～３０（シグナルペプチド）
ＭＡＰＲＲＡＲＧＣＲＴＬＧＬＰＡＬＬＬＬＬＬＬＲＰＰＡＴＲＧ
＞ｓｐ｜Ｑ１３２６１｜３１～２０５（細胞外ドメイン）［注：３１～９５は正準「Ｓｕｓｈｉドメイン」である］
ＩＴＣＰＰＰＭＳＶＥＨＡＤＩＷＶＫＳＹＳＬＹＳＲＥＲＹＩＣＮＳＧＦＫＲＫＡＧＴＳＳＬＴＥＣＶＬＮＫＡＴＮＶＡＨＷＴＴＰＳＬＫＣＩＲＤＰＡＬＶＨＱＲＰＡＰＰＳＴＶＴＴＡＧＶＴＰＱＰＥＳＬＳＰＳＧＫＥＰＡＡＳＳＰＳＳＮＮＴＡＡＴＴＡＡＩＶＰＧＳＱＬＭＰＳＫＳＰＳＴＧＴＴＥＩＳＳＨＥＳＳＨＧＴＰＳＱＴＴＡＫＮＷＥＬＴＡＳＡＳＨＱＰＰＧＶＹＰＱＧＨＳＤＴＴ
＞ｓｐ｜Ｑ１３２６１｜２０６～２２８（膜貫通ドメイン）
ＶＡＩＳＴＳＴＶＬＬＣＧＬＳＡＶＳＬＬＡＣＹＬ
＞ｓｐ｜Ｑ１３２６１｜２２９～２６７（細胞質ドメイン）
ＫＳＲＱＴＰＰＬＡＳＶＥＭＥＡＭＥＡＬＰＶＴＷＧＴＳＳＲＤＥＤＬＥＮＣＳＨＨＬ
本明細書の「ＩＬ－１５Ｒαドメイン」は、１つ以上、例えば、１つ、２つ、３つ、または４つのアミノ酸置換を伴う野生型ＩＬ－１５Ｒαサブユニットの細胞外ドメインの配列などの野生型ＩＬ－１５Ｒαサブユニットまたはそのバリアントの細胞外ドメインの配列を含むことができる。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαサブユニットは、配列番号５５のアミノ酸配列を含む。
本明細書の「ＩＬ－１５Ｒαドメイン」は、１つ以上、例えば、１つ、２つ、３つ、または４つのアミノ酸置換を伴う野生型ｓｕｓｈｉドメインｓＩＬ－１５Ｒαの配列などの野生型ｓｕｓｈｉドメインｓＩＬ－１５Ｒαまたはそのバリアントの配列を含むことができる。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαサブユニットは、配列番号５６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαサブユニットは、配列番号５７のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαサブユニットは、配列番号５８のアミノ酸配列を含む。
本明細書の「ＩＬ－１５Ｒαドメイン」は、１つ以上、例えば、１つ、２つ、３つ、または４つのアミノ酸置換を伴う野生型ｓｕｓｈｉドメインｓＩＬ－１５Ｒαの配列などの野生型ｓｕｓｈｉドメインｓＩＬ－１５Ｒαまたはそのバリアントの配列を含むことができる。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαサブユニットは、配列番号５６のアミノ酸配列からなる。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαサブユニットは、１つ、２つ、または３つの置換などの１つ以上のアミノ酸置換を伴う配列番号５６のアミノ酸配列からなる。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、位置Ｒ２６にアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、アミノ酸置換Ｒ２６Ｎを含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、アミノ酸置換Ｒ２６Ｓを含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、位置Ｒ３５にアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、アミノ酸置換Ｒ３５Ｑを含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、アミノ酸置換Ｒ３５Ｓを含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、位置Ｒ２６およびＲ３５にアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、アミノ酸置換Ｒ２６ＳまたはＲ２６Ｎ、およびＲ３５ＱまたはＲ３５Ｓを含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、アミノ酸置換Ｒ２６ＮおよびＲ３５Ｑを含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、位置Ｒ２６に追加のアミノ酸置換を伴う配列番号５５、５６、５７、または５８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、追加のアミノ酸置換Ｒ２６Ｎを伴う配列番号５５、５６、５７、または５８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、追加のアミノ酸置換Ｒ２６Ｓを伴う配列番号５５、５６、５７、または５８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、位置Ｒ３５に追加のアミノ酸置換を伴う配列番号５５、５６、５７、または５８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、追加のアミノ酸置換Ｒ３５Ｑを伴う配列番号５５、５６、５７、または５８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、追加のアミノ酸置換Ｒ３５Ｓを伴う配列番号５５、５６、５７、または５８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、位置Ｒ２６およびＲ３５に追加のアミノ酸置換を伴う配列番号５５、５６、５７、または５８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、追加のアミノ酸置換Ｒ２６ＳまたはＲ２６Ｎ、およびＲ３５ＱまたはＲ３５Ｓを伴う配列番号５５、５６、５７、または５８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、追加のアミノ酸置換Ｒ２６ＮおよびＲ３５Ｑを伴う配列番号５５、５６、５７、または５８のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、位置Ｒ２６に追加のアミノ酸置換を伴う配列番号５６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、追加のアミノ酸置換Ｒ２６Ｎを伴う配列番号５６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、追加のアミノ酸置換Ｒ２６Ｓを伴う配列番号５６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、位置Ｒ３５に追加のアミノ酸置換を伴う配列番号５６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、追加のアミノ酸置換Ｒ３５Ｑを伴う配列番号５６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、追加のアミノ酸置換Ｒ３５Ｓを伴う配列番号５６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、位置Ｒ２６およびＲ３５に追加のアミノ酸置換を伴う配列番号５６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、追加のアミノ酸置換Ｒ２６ＳまたはＲ２６Ｎ、およびＲ３５ＱまたはＲ３５Ｓを伴う配列番号５６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαは、追加のアミノ酸置換Ｒ２６ＮおよびＲ３５Ｑを伴う配列番号５６のアミノ酸配列を含む。（配列番号１７２、１７３、１７４、１７５、および１７６を参照されたい。）
一実施形態では、「ＩＬ－１５Ｒαドメイン」の配列は、野生型配列である。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、ＩＬ－１５Ｒαサブユニットまたはその断片と、「αサブユニットリンカー」とを含む。
配列が、表５に示される。
「線形」マスク型サイトカインのいくつかの実施形態では、マスク型サイトカインは、
Ｎ’ＨＬ－非切断可能Ｌ２－ＭＭ－ＳＤ１－ＣＰ－ＳＤ２－Ｃ Ｃ’を含む、ポリペプチド鎖を含む。
「線形」マスク型サイトカインのいくつかの実施形態では、マスク型サイトカインは、第１のポリペプチド鎖であって、
Ｎ’ＨＬ１ Ｃ’を含む、第１のポリペプチド鎖と、
第２のポリペプチド鎖であって、
Ｎ’ＨＬ２－非切断可能Ｌ２－ＭＭ－ＳＤ１－ＣＰ－ＳＤ２－Ｃ Ｃ’を含む、第２のポリペプチド鎖とを含む。
「線形」マスク型サイトカインのいくつかの実施形態では、マスク型サイトカインは、第１のポリペプチド鎖であって、
Ｎ’ＨＬ１ Ｃ’を含む、第１のポリペプチド鎖と、
第２のポリペプチド鎖であって、
Ｎ’ＨＬ２－非切断可能Ｌ２－ＭＭ－［’ＩＬ－１５Ｒαドメイン’］－ＳＤ１－ＣＰ－ＳＤ２－Ｃ Ｃ’を含む、第２のポリペプチド鎖とを含む。
これは、以下に概略的に示される。
Figure 2023520514000004
「線形」マスク型サイトカインのいくつかの実施形態では、マスク型サイトカインは、第１のポリペプチド鎖であって、
Ｎ’ＨＬ１ Ｃ’を含む、第１のポリペプチド鎖と、
第２のポリペプチド鎖であって、
Ｎ’ＨＬ２－非切断可能Ｌ２－ＭＭ－ＳＤ１－ＣＰ－ＳＤ２－［’ＩＬ－１５Ｒαドメイン’］－Ｃ Ｃ’を含む、第２のポリペプチド鎖とを含む。
これは、以下に概略的に示される。
Figure 2023520514000005
構造Ａの「ヘテロ二量体」マスク型サイトカインのいくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、
Ｎ’ＨＬ１－非切断可能Ｌ１－ＭＭ Ｃ’を含み、
第２のポリペプチド鎖は、
Ｎ’ＨＬ２－ＳＤ１－ＣＰ－ＳＤ２－Ｃ Ｃ’を含む。
これは、以下に概略的に示される。
Figure 2023520514000006
「ヘテロ二量体」マスク型サイトカインのいくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαサブユニットまたはその断片を含むドメインは、ＩＬ－１５サイトカインまたはその断片に共有結合しているため、
第１のポリペプチド鎖は、
Ｎ’ＨＬ１－非切断可能Ｌ１－ＭＭ Ｃ’を含み、
第２のポリペプチド鎖は、
Ｎ’ＨＬ２－ＳＤ１－ＣＰ－ＳＤ２－［Ｃ（－［’ＩＬ－１５Ｒαドメイン’］）］Ｃ’を含む。
構造Ａの「ヘテロ二量体」マスク型サイトカインのいくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαサブユニットまたはその断片を含むドメインは、ＩＬ－１５サイトカインまたはその断片に挿入されるため、
第１のポリペプチド鎖は、
Ｎ’ＨＬ１－非切断可能Ｌ１－ＭＭ Ｃ’を含み、
第２のポリペプチド鎖は、
Ｎ’ＨＬ２－ＳＤ１－ＣＰ－ＳＤ２－［ＣのＮ’末端ドメイン］－［’ＩＬ－１５Ｒαドメイン’］－［Ｃ’末端ドメイン］Ｃ’を含み、
ＩＬ－１５Ｒαドメインは、非切断可能な「αサブユニットリンカー」が両側に配置されたＩＬ－１５Ｒαサブユニットまたはその断片を含む。
これは、以下に概略的に示される。
Figure 2023520514000007
いくつかの実施形態では、ＣのＮ’末端ドメインは、配列番号９のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣのＣ’末端ドメインは、配列番号１０のアミノ酸配列を含む。
構造Ａの「ヘテロ二量体」マスク型サイトカインのいくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαサブユニットまたはその断片を含むドメインは、ＩＬ－１５サイトカインまたはその断片のＣ’末端に共有結合されているため、第１のポリペプチド鎖は、
Ｎ’ＨＬ１－非切断可能Ｌ１－ＭＭ Ｃ’を含み、
第２のポリペプチド鎖は、
Ｎ’ＨＬ２－ＳＤ１－ＣＰ－ＳＤ２－Ｃ－［’ＩＬ－１５Ｒαドメイン’］Ｃ’を含む。
これは、以下に概略的に示される。
Figure 2023520514000008
構造Ａの「ヘテロ二量体」マスク型サイトカインのいくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、
Ｎ’ＨＬ１－非切断可能Ｌ１－ＭＭ Ｃ’を含み、
第２のポリペプチド鎖は、
Ｎ’ＨＬ２－［’ＩＬ－１５Ｒαドメイン’］－ＳＤ１－ＣＰ－ＳＤ２－Ｃ Ｃ’を含む。
これは、以下に概略的に示される。
Figure 2023520514000009
構造Ｂの「ヘテロ二量体」マスク型サイトカインのいくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、
Ｎ’ＨＬ１－ＳＤ１－ＣＰ－ＳＤ２－ＭＭ Ｃ’を含み、
第２のポリペプチド鎖は、
Ｎ’ＨＬ２－非切断可能Ｌ２－Ｃ Ｃ’を含む。
これは、以下に概略的に示される。
Figure 2023520514000010
スペーサードメインは、１つ以上のアミノ酸からなり得る。スペーサードメインの機能は、存在する場合、タンパク質分解的に切断可能なペプチド（ＣＰ）を本明細書に記載される構築物中の他の機能的成分に連結することである。
スペーサードメインは、腫瘍細胞環境または非腫瘍細胞環境内のプロテアーゼとのタンパク質分解的に切断可能なペプチドの生物学的相互作用を改変しないことを理解されたい。言い換えれば、スペーサードメインの存在下でさえも、本明細書に開示される本発明のタンパク質分解的に切断可能なペプチドは、その有利な腫瘍特異性を保持する。
いくつかの実施形態では、タンパク質分解的に切断可能なペプチドに隣接するスペーサードメインは異なる。
いくつかの実施形態では、スペーサードメインは、アミノ酸残基Ｇ、Ｓ、およびＰが豊富である。
いくつかの実施形態ではスペーサードメインは、Ｇ、Ｓ、およびＰからなる群から選択されるアミノ酸残基タイプのみを含む。
いくつかの実施形態では、ＳＤ１のＮ末端は、グリシン（Ｇ）である。
いくつかの実施形態では、第１のスペーサードメイン（ＳＤ１）は、長さで３～１８個のアミノ酸である。いくつかの実施形態では、第１のスペーサードメイン（ＳＤ１）は、長さで６～１４個のアミノ酸である。いくつかの実施形態では、第１のスペーサードメイン（ＳＤ１）は、長さで６～９個のアミノ酸である。
いくつかの実施形態では、ＳＤ１は、配列番号２３を含む。
いくつかの実施形態では、ＳＤ１は、配列番号２４を含む。
いくつかの実施形態では、ＳＤ１は、配列番号２５を含む。
いくつかの実施形態では、ＳＤ１は、配列番号２６を含む。
いくつかの実施形態では、ＳＤ１は、配列番号１９７を含む。
いくつかの実施形態では、ＳＤ１は、配列番号２８を含む。
いくつかの実施形態では、ＳＤ１は、配列番号２９を含む。
いくつかの実施形態では、ＳＤ１は、配列番号３０を含む。
いくつかの実施形態では、ＳＤ１は、配列番号３１を含む。
いくつかの実施形態では、ＳＤ１は、配列番号３２を含む。
いくつかの実施形態では、ＳＤ１は、配列番号１４８を含む。
いくつかの実施形態では、ＳＤ１は、配列番号１４９を含む。
いくつかの実施形態では、ＳＤ１は、配列番号１５０を含む。
いくつかの実施形態では、ＳＤ１は、配列番号１５１を含む。
いくつかの実施形態では、ＳＤ１は、配列番号１５２を含む。
いくつかの実施形態では、ＳＤ１は、配列番号１５３を含む。
いくつかの実施形態では、ＳＤ１は、配列番号１５４を含む。
いくつかの実施形態では、ＳＤ１は、配列番号２３からなる。
いくつかの実施形態では、ＳＤ１は、配列番号２４からなる。
いくつかの実施形態では、ＳＤ１は、配列番号２５からなる。
いくつかの実施形態では、ＳＤ１は、配列番号２６からなる。
いくつかの実施形態では、ＳＤ１は、配列番号１９７からなる。
いくつかの実施形態では、ＳＤ１は、配列番号２８からなる。
いくつかの実施形態では、ＳＤ１は、配列番号２９からなる。
いくつかの実施形態では、ＳＤ１は、配列番号３０からなる。
いくつかの実施形態では、ＳＤ１は、配列番号３１からなる。
いくつかの実施形態では、ＳＤ１は、配列番号３２からなる。
いくつかの実施形態では、ＳＤ１は、配列番号１４８からなる。
いくつかの実施形態では、ＳＤ１は、配列番号１４９からなる。
いくつかの実施形態では、ＳＤ１は、配列番号１５０からなる。
いくつかの実施形態では、ＳＤ１は、配列番号１５１からなる。
いくつかの実施形態では、ＳＤ１は、配列番号１５２からなる。
いくつかの実施形態では、ＳＤ１は、配列番号１５３からなる。
いくつかの実施形態では、ＳＤ１は、配列番号１５４からなる。
いくつかの実施形態では、第２のスペーサードメイン（ＳＤ２）は、長さで２～１０個のアミノ酸である。いくつかの実施形態では、第２のスペーサードメイン（ＳＤ２）は、長さで３～８個のアミノ酸である。
いくつかの実施形態では、ＳＤ２は、配列番号３５を含む。
いくつかの実施形態では、ＳＤ２は、配列番号３６を含む。
いくつかの実施形態では、ＳＤ２は、配列番号３７を含む。
いくつかの実施形態では、ＳＤ２は、配列番号３８を含む。
いくつかの実施形態では、ＳＤ２は、配列番号３９を含む。
いくつかの実施形態では、ＳＤ２は、配列番号４０を含む。
いくつかの実施形態では、ＳＤ２は、配列番号１５７を含む。
いくつかの実施形態では、ＳＤ２は、配列番号１５８を含む。
いくつかの実施形態では、ＳＤ２は、配列番号１５９を含む。
いくつかの実施形態では、ＳＤ２は、配列番号１６０を含む。
いくつかの実施形態では、ＳＤ２は、配列番号１６１を含む。
いくつかの実施形態では、ＳＤ２は、配列番号３５からなる。
いくつかの実施形態では、ＳＤ２は、配列番号３６からなる。
いくつかの実施形態では、ＳＤ２は、配列番号３７からなる。
いくつかの実施形態では、ＳＤ２は、配列番号３８からなる。
いくつかの実施形態では、ＳＤ２は、配列番号３９からなる。
いくつかの実施形態では、ＳＤ２は、配列番号４０からなる。
いくつかの実施形態では、ＳＤ２は、配列番号１５７からなる。
いくつかの実施形態では、ＳＤ２は、配列番号１５８からなる。
いくつかの実施形態では、ＳＤ２は、配列番号１５９からなる。
いくつかの実施形態では、ＳＤ２は、配列番号１６０からなる。
いくつかの実施形態では、ＳＤ２は、配列番号１６１からなる。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＳＤ１と、配列番号３８のアミノ酸配列を含むＳＤ２とを含む。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号２４のアミノ酸配列を含むＳＤ１と、配列番号３６のアミノ酸配列を含むＳＤ２とを含む。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号２４のアミノ酸配列を含むＳＤ１と、配列番号４０のアミノ酸配列を含むＳＤ２とを含む。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号２４のアミノ酸配列を含むＳＤ１と、配列番号３９のアミノ酸配列を含むＳＤ２とを含む。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＳＤ１と、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＳＤ２とを含む。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＳＤ１と、配列番号３７のアミノ酸配列を含むＳＤ２とを含む。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＳＤ１と、配列番号３６のアミノ酸配列を含むＳＤ２とを含む。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号１９７のアミノ酸配列を含むＳＤ１と、配列番号３８のアミノ酸配列を含むＳＤ２とを含む。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号２８のアミノ酸配列を含むＳＤ１と、配列番号３８のアミノ酸配列を含むＳＤ２とを含む。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＳＤ１と、配列番号３６のアミノ酸配列を含むＳＤ２とを含む。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号３０のアミノ酸配列を含むＳＤ１と、配列番号３６のアミノ酸配列を含むＳＤ２とを含む。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号３１のアミノ酸配列を含むＳＤ１と、配列番号３６のアミノ酸配列を含むＳＤ２とを含む。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＳＤ１と、配列番号３６のアミノ酸配列を含むＳＤ２とを含む。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号１４８のアミノ酸配列を含むＳＤ１と、配列番号３９のアミノ酸配列を含むＳＤ２とを含む。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号１４９のアミノ酸配列を含むＳＤ１と、配列番号３９のアミノ酸配列を含むＳＤ２とを含む。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号１５０のアミノ酸配列を含むＳＤ１と、配列番号１５７のアミノ酸配列を含むＳＤ２とを含む。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号１５１のアミノ酸配列を含むＳＤ１と、配列番号１５９のアミノ酸配列を含むＳＤ２とを含む。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号１５０のアミノ酸配列を含むＳＤ１と、配列番号１５８のアミノ酸配列を含むＳＤ２とを含む。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号１５２のアミノ酸配列を含むＳＤ１と、配列番号３９のアミノ酸配列を含むＳＤ２とを含む。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号１５３のアミノ酸配列を含むＳＤ１と、配列番号１６０のアミノ酸配列を含むＳＤ２とを含む。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号１５４のアミノ酸配列を含むＳＤ１と、配列番号３７のアミノ酸配列を含むＳＤ２とを含む。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＳＤ１と、配列番号１６１のアミノ酸配列を含むＳＤ２とを含む。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号２３のアミノ酸配列からなるＳＤ１と、配列番号３８のアミノ酸配列からなるＳＤ２とを含む。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号２４のアミノ酸配列からなるＳＤ１と、配列番号３６のアミノ酸配列からなるＳＤ２とを含む。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号２４のアミノ酸配列からなるＳＤ１と、配列番号４０のアミノ酸配列からなるＳＤ２とを含む。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号２４のアミノ酸配列からなるＳＤ１と、配列番号３９のアミノ酸配列からなるＳＤ２とを含む。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号２５のアミノ酸配列からなるＳＤ１と、配列番号３５のアミノ酸配列からなるＳＤ２とを含む。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号２６のアミノ酸配列からなるＳＤ１と、配列番号３７のアミノ酸配列からなるＳＤ２とを含む。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号２６のアミノ酸配列からなるＳＤ１と、配列番号３６のアミノ酸配列からなるＳＤ２とを含む。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号１９７のアミノ酸配列からなるＳＤ１と、配列番号３８のアミノ酸配列からなるＳＤ２とを含む。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号２８のアミノ酸配列からなるＳＤ１と、配列番号３８のアミノ酸配列からなるＳＤ２とを含む。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号２９のアミノ酸配列からなるＳＤ１と、配列番号３６のアミノ酸配列からなるＳＤ２とを含む。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号３０のアミノ酸配列からなるＳＤ１と、配列番号３６のアミノ酸配列からなるＳＤ２とを含む。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号３１のアミノ酸配列からなるＳＤ１と、配列番号３６のアミノ酸配列からなるＳＤ２とを含む。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号３２のアミノ酸配列からなるＳＤ１と、配列番号３６のアミノ酸配列からなるＳＤ２とを含む。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号１４８のアミノ酸配列からなるＳＤ１と、配列番号３９のアミノ酸配列からなるＳＤ２とを含む。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号１４９のアミノ酸配列からなるＳＤ１と、配列番号３９のアミノ酸配列からなるＳＤ２とを含む。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号１５０のアミノ酸配列からなるＳＤ１と、配列番号１５７のアミノ酸配列からなるＳＤ２とを含む。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号１５１のアミノ酸配列からなるＳＤ１と、配列番号１５９のアミノ酸配列からなむＳＤ２とを含む。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号１５０のアミノ酸配列からなるＳＤ１と、配列番号１５８のアミノ酸配列からなるＳＤ２とを含む。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号１５２のアミノ酸配列からなるＳＤ１と、配列番号３９のアミノ酸配列からなるＳＤ２とを含む。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号１５３のアミノ酸配列からなるＳＤ１と、配列番号１６０のアミノ酸配列からなるＳＤ２とを含む。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号１５４のアミノ酸配列からなるＳＤ１と、配列番号３７のアミノ酸配列からなるＳＤ２とを含む。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号２６のアミノ酸配列からなるＳＤ１と、配列番号１６１のアミノ酸配列からなるＳＤ２とを含む。
いくつかの実施形態では、タンパク質分解的に切断可能なリンカーは、ＳＤ１－ＣＰ－ＳＤ２を含み、ＳＤ１は、第１のスペーサードメインであり、ＣＰは、切断可能なペプチドであり、ＳＤ２は、第２のスペーサードメインであり、ＣＰは、配列番号１５５に示されるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、スペーサードメインは、アミノ酸残基Ｇ、Ｓ、およびＰが豊富である。いくつかの実施形態では、スペーサードメインは、Ｇ、Ｓ、およびＰからなる群から選択されるアミノ酸残基タイプのみを含む。
いくつかの実施形態では、タンパク質分解的に切断可能なリンカーは、ＳＤ１－ＣＰ－ＳＤ２を含み、ＳＤ１は、第１のスペーサードメインであり、ＣＰは、切断可能なペプチドであり、ＳＤ２は、第２のスペーサードメインであり、ＣＰは、配列番号１５６に示されるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、スペーサードメインは、アミノ酸残基Ｇ、Ｓ、およびＰが豊富である。いくつかの実施形態では、スペーサードメインは、Ｇ、Ｓ、およびＰからなる群から選択されるアミノ酸残基タイプのみを含む。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号４１のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号４２のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号４３のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号４４のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号４５のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号４６のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号４７のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号４８のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号４９のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号５０のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号５１のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号５２のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号５３のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号５４のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号１６２のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号１６３のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号１６４のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号１６５のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号１６６のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号１６７のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号１６８のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号１６９のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号１７０のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号１７１のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号４１のアミノ酸配列からなる。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号４２のアミノ酸配列からなる。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号４３のアミノ酸配列からなる。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号４４のアミノ酸配列からなる。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号４５のアミノ酸配列からなる。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号４６のアミノ酸配列からなる。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号４７のアミノ酸配列からなる。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号４８のアミノ酸配列からなる。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号４９のアミノ酸配列からなる。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号５０のアミノ酸配列からなる。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号５１のアミノ酸配列からなる。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号５２のアミノ酸配列からなる。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号５３のアミノ酸配列からなる。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号５４のアミノ酸配列からなる。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号１６２のアミノ酸配列からなる。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号１６３のアミノ酸配列からなる。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号１６４のアミノ酸配列からなる。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号１６５のアミノ酸配列からなる。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号１６６のアミノ酸配列からなる。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号１６７のアミノ酸配列からなる。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号１６８のアミノ酸配列からなる。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号１６９のアミノ酸配列からなる。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号１７０のアミノ酸配列からなる。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号１７１のアミノ酸配列からなる。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号１６８を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２を含む。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号１６９を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２を含む。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号１７０を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２１を含む。
いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号１７１を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２１を含む。
第２のリンカーがタンパク質分解的に切断可能なリンカーであるように、第２のリンカーがタンパク質分解的に切断可能なペプチドを含み、第１のリンカーが非タンパク質分解的に切断可能なリンカーであるように、第１のリンカーがタンパク質分解的に切断可能なペプチドを含まない、いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号１６８を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２を含む。いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号１６９を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２を含む。
第１のリンカーがタンパク質分解的に切断可能なリンカーであるように、第１のリンカーがタンパク質分解的に切断可能なペプチドを含み、第２のリンカーが非タンパク質分解的に切断可能なリンカーであるように、第２のリンカーがタンパク質分解的に切断可能なペプチドを含まない、いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号１７０を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２１を含む。いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、配列番号１７１を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２１を含む。
いくつかの実施形態では、タンパク質分解的に切断可能なリンカーは、配列番号１５５のアミノ酸配列からなる切断可能なペプチドを含む。（ＩＳＳＧＬＬ＊ＳＧＲＳ）。
いくつかの実施形態では、タンパク質分解的に切断可能なリンカーは、配列番号１５６のアミノ酸配列からなる切断可能なペプチドを含む。（ＤＬＬＡ＊ＶＶＡＡＳ）。
１．５．３ 非切断可能な「αサブユニットリンカー」
いくつかの実施形態では、非切断可能なαサブユニットリンカーは、長さで８～３０個のアミノ酸である。いくつかの実施形態では、非切断可能なαサブユニットリンカーは、長さで１０～２５個のアミノ酸である。
いくつかの実施形態では、非切断可能なαサブユニットリンカーは、アミノ酸残基Ｇ、Ｓ、およびＰが豊富である。
いくつかの実施形態では、非切断可能なαサブユニットリンカーは、Ｇ、Ｓ、およびＰからなる群から選択されるアミノ酸残基タイプのみを含む。いくつかの実施形態では、非切断可能なαサブユニットリンカーは、ＧおよびＳからなる群から選択されるアミノ酸残基タイプのみを含む。
いくつかの実施形態では、非切断可能なαサブユニットリンカーは、配列番号１３に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、非切断可能なαサブユニットリンカーは、配列番号１４に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、非切断可能なαサブユニットリンカーは、配列番号１５に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、非切断可能なαサブユニットリンカーは、配列番号１６に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、非切断可能なαサブユニットリンカーは、配列番号１７に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、非切断可能なαサブユニットリンカーは、配列番号１８に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、非切断可能なαサブユニットリンカーは、配列番号１９に示されるアミノ酸配列を含む。
例示的な非切断可能なリンカー、切断ペプチド、スペーサードメイン、切断可能なリンカー、およびαサブユニットリンカーが、表３および４に示される。例示的ＡＫ分子で開示されるリンカーの組み合わせは、本明細書で開示される任意のＩＬ－１５サイトカインまたはその断片とともに使用され得る。例示的ＡＫ分子で開示されるリンカーの組み合わせは、本明細書で開示される任意のマスキング部分とともに使用され得る。例示的ＡＫ分子で開示されるリンカーの組み合わせは、本明細書で開示される任意の半減期延長ドメインとともに使用され得る。言い換えれば、例示的ＡＫ分子で開示されるリンカーの組み合わせは、本明細書に開示されるＩＬ－１５サイトカインもしくはその断片、本明細書に開示されるマスキング部分、および／または本明細書に開示される半減期延長ドメインの任意の組み合わせとともに使用され得る。
１．６ 三本鎖構築物
いくつかの実施形態では、マスク型ＩＬ－１５構築物は、第１のポリペプチド鎖と、第２のポリペプチド鎖と、第３のポリペプチド鎖とを含む。
いくつかの実施形態では、第３のポリペプチド鎖は、「ＩＬ－１５Ｒαドメイン」を含む。「ＩＬ－１５Ｒαドメイン」をマスク型サイトカイン構築物に組み込むことは、ＣＤ８ Ｔ細胞およびＮＫ細胞を活性化する当該サイトカインの効力を増加させることが実証されている。
いくつかの実施形態では、「ＩＬ－１５Ｒαドメイン」は、ＩＬ－１５サイトカインと会合している。
いくつかの実施形態では、「ＩＬ－１５Ｒαドメイン」は、ＩＬ－１５サイトカインに非共有結合される。
構造Ａの「ヘテロ二量体」マスク型サイトカインのいくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、
Ｎ’ＨＬ１－非切断可能Ｌ１－ＭＭ Ｃ’を含み、
第２のポリペプチド鎖は、
Ｎ’ＨＬ２－切断可能Ｌ２－Ｃ Ｃ’を含み、
マスク型サイトカインは、
Ｎ’ＩＬ－１５ＲαドメインＣ’を含む、第３のポリペプチド鎖をさらに含み、
「ＩＬ－１５Ｒαドメイン」は、第２のポリペプチド鎖内のＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片（Ｃ）に非共有結合される。
構造Ａの「ヘテロ二量体」マスク型サイトカインのいくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、
Ｎ’ＨＬ１－非切断可能Ｌ１－ＭＭ Ｃ’を含み、
第２のポリペプチド鎖は、
Ｎ’ＨＬ２－ＳＤ１－ＣＰ－ＳＤ２－Ｃ Ｃ’を含み、
マスク型サイトカインは、
Ｎ’ＩＬ－１５ＲαドメインＣ’を含む、第３のポリペプチド鎖をさらに含み、
「ＩＬ－１５Ｒαドメイン」は、第２のポリペプチド鎖内のＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片（Ｃ）に非共有結合される。
これは、以下に概略的に示される。
Figure 2023520514000011
構造Ｂの「ヘテロ二量体」マスク型サイトカインのいくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、
Ｎ’ＨＬ１－切断可能Ｌ１－ＭＭ Ｃ’を含み、
第２のポリペプチド鎖は、
Ｎ’ＨＬ２－非切断可能Ｌ２－Ｃ Ｃ’を含み、
マスク型サイトカインは、
Ｎ’ＩＬ－１５ＲαドメインＣ’を含む、第３のポリペプチド鎖をさらに含み、
「ＩＬ－１５Ｒαドメイン」は、第２のポリペプチド鎖内のＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片（Ｃ）に非共有結合される。
構造Ｂの「ヘテロ二量体」マスク型サイトカインのいくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、
Ｎ’ＨＬ１－ＳＤ１－ＣＰ－ＳＤ２－ＭＭ Ｃ’を含み、
第２のポリペプチド鎖は、
Ｎ’ＨＬ２－非切断可能Ｌ２－Ｃ Ｃ’を含み、
マスク型サイトカインは、
Ｎ’ＩＬ－１５ＲαドメインＣ’を含む、第３のポリペプチドをさらに含み、
「ＩＬ－１５Ｒαドメイン」は、第２のポリペプチド鎖内のＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片（Ｃ）に非共有結合される。
これは、以下に概略的に示される。
Figure 2023520514000012
ＩＬ－１５サイトカインと「ＩＬ－１５Ｒαドメイン」との間の非共有結合は、サイトカイン受容体複合体を形成する際に、これらのポリペプチド配列の生化学的サイトカイン受容体関係から生じることを理解されたい。２つの配列間のこの天然の相互作用は、本質的に純粋に非共有結合性である。したがって、いくつかの実施形態では、「ＩＬ－１５Ｒαドメイン」は、ＩＬ－１５サイトカインのみに非共有結合され、すなわち、第２のポリペプチド鎖と第３のポリペプチド鎖との間に共有結合が存在しない。
ＨＬ１、ＨＬ２、ＭＭ、Ｃ、Ｌ１、Ｌ２、および「ＩＬ－１５Ｒαドメイン」は、本明細書のいずれかの場所に定義されるとおりであり得る。
一実施形態では、「ＩＬ－１５Ｒαドメイン」の配列は、野生型配列である。
三本鎖構築物で使用され得る、ＨＬ１、ＨＬ２、ＭＭ、Ｃ、Ｌ１、Ｌ２、および「ＩＬ－１５Ｒαドメイン」の配列の例示的組み合わせは、以下の「例示的マスク型サイトカイン」の節で開示される。
三本鎖構築物のいくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号１３４に示されるアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
三本鎖構築物のいくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なリンカーは、配列番号５４ｂに示されるアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なリンカーは、配列番号１６６に示されるアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なリンカーは、配列番号４２に示されるアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なリンカーは、配列番号１６２に示されるアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
三本鎖構築物のいくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２１に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２１に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２１に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２１に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号１３４に示されるアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
三本鎖構築物のいくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２１に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号１６５に示されるアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２１に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なリンカーは、配列番号１６７に示されるアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２１に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なリンカーは、配列番号４７に示されるアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２１に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なリンカーは、配列番号１６３に示されるアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
三本鎖構築物のいくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号１７７のアミノ酸配列を含む。
三本鎖構築物のいくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号１７７のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、配列番号１８５のアミノ酸配列を含み、第３のポリペプチド鎖は、配列番号５６のアミノ酸配列を含む。
三本鎖構築物のいくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号１７７のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、配列番号１８６のアミノ酸配列を含み、第３のポリペプチド鎖は、配列番号５６のアミノ酸配列を含む。
三本鎖構築物のいくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号１７７のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、配列番号１８７のアミノ酸配列を含み、第３のポリペプチド鎖は、配列番号５６のアミノ酸配列を含む。
三本鎖構築物のいくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号１７７のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、配列番号１９１のアミノ酸配列を含み、第３のポリペプチド鎖は、配列番号５６のアミノ酸配列を含む。
三本構築物のいくつかの実施形態では、第２のポリペプチド鎖は、配列番号１８３のアミノ酸配列を含む。
三本鎖構築物のいくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号１８８のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、配列番号１８３のアミノ酸配列を含み、第３のポリペプチド鎖は、配列番号５６のアミノ酸配列を含む。
三本鎖構築物のいくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号１８９のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、配列番号１８３のアミノ酸配列を含み、第３のポリペプチド鎖は、配列番号５６のアミノ酸配列を含む。
三本鎖構築物のいくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号１９０ｎのアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、配列番号１８３のアミノ酸配列を含み、第３のポリペプチド鎖は、配列番号５６のアミノ酸配列を含む。
三本鎖構築物のいくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号１９２のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、配列番号１８３のアミノ酸配列を含み、第３のポリペプチド鎖は、配列番号５６のアミノ酸配列を含む。
１．７ 半減期延長ドメイン
本明細書で提供されるものは、マスク型サイトカインまたはその切断産物で使用するための半減期延長ドメインである。インビボでの長い半減期は、治療用タンパク質にとって重要である。残念ながら、対象に投与されるサイトカインは、通常、腎臓によるクリアランスおよびエンドサイトーシス分解を含む機序によって対象から急速に取り除かれるため、一般的に短い半減期を有する。したがって、本明細書で提供されるマスク型サイトカインでは、半減期延長ドメインは、インビボでのサイトカインの半減期を延長する目的で、マスク型サイトカインに連結される。
「半減期延長ドメイン」という用語は、血清中の標的成分の半減期を延長するドメインを指す。「半減期延長ドメイン」という用語は、例えば、抗体および抗体断片を包含する。
本明細書で提供されるマスク型サイトカインは、第２の半減期延長ドメインと会合する第１の半減期延長ドメインを含む。
いくつかの実施形態では、第１の半減期延長ドメインおよび第２の半減期延長ドメインは、非共有結合的に会合している。
いくつかの実施形態では、第１の半減期延長ドメインおよび第２の半減期延長ドメインは、共有結合される。
いくつかの実施形態では、第１の半減期延長ドメインは、１つ以上のジスルフィド結合を介して第２の半減期延長ドメインに連結される。
いくつかの実施形態では、第１の半減期延長ドメインは、半減期延長ドメインリンカー（ＨＬＤＬ）を介して第２の半減期延長ドメインに連結される。
いくつかの実施形態では、第１の半減期延長ドメインおよび第２の半減期延長ドメインは、非共有結合的に会合し、さらに、第１の半減期延長ドメインは、ジスルフィド結合を介して第２の半減期延長ドメインに連結される。
いくつかの実施形態では、第１の半減期延長ドメインは、第１の抗体またはその断片を含み、第２の半減期延長ドメインは、第２の抗体またはその断片を含む。
ＦｃＲｎ介在性再循環が可能である抗体またはその断片は、対象からのマスク型サイトカインのクリアランスを低減するか、または別様に遅延させ、それによって、投与されたマスク型サイトカインの半減期を延長し得る。いくつかの実施形態では、抗体またはその断片は、ＦｃＲｎ介在性再循環が可能である任意の重鎖ポリペプチドまたはその一部（例えば、Ｆｃドメインまたはその断片）などのＦｃＲｎ介在性再循環が可能である任意の抗体またはその断片である。
抗体またはその断片は、任意の抗体またはその断片であり得る。しかしながら、第１の半減期延長ドメインと、第２の半減期延長ドメインとを含む、マスク型サイトカインのいくつかの実施形態では、第１の半減期延長ドメインまたは第２の半減期延長ドメインのいずれかは、軽鎖ポリペプチドなどのＦｃＲｎ受容体に結合しない抗体またはその断片を含み得る。例えば、マスク型サイトカインのいくつかの実施形態では、第１の半減期延長ドメインは、ＦｃＲｎ受容体と直接相互作用しない軽鎖ポリペプチドまたはその一部を含む、抗体またはその断片を含むが、それにもかかわらず、マスキング型サイトカインは、重鎖ポリペプチドを含むことなどによって、ＦｃＲｎ受容体と相互作用することが可能である第２の半減期延長ドメインを含むことにより、延長した半減期を有する。ＦｃＲｎ介在性再循環は、抗体またはその断片のＦｃ領域へのＦｃＲｎ受容体の結合を必要とすることが、当該技術分野で認識されている。例えば、研究は、残基Ｉ２５３、Ｓ２５４、Ｈ４３５、およびＹ４３６（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックス番号付けシステムに従って番号付けされる）が、ヒトＦｃ領域とヒトＦｃＲｎ複合体との間の相互作用のために重要であることを示している。例えば、Ｆｉｒａｎ，Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３（２００１）９９３－１００２、Ｓｈｉｅｌｄｓ，Ｒ．Ｌ．，ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６（２００１）６５９１－６６０４）を参照されたい。残基２４８～２５９、３０１～３１７、３７６～３８２、および４２４～４３７（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックス番号付けシステムに従って番号付けされる）の様々な変異体も調査および報告されている。Ｙｅｕｎｇ，Ｙ．Ａ．，ｅｔ ａｌ．（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８２（２００９）７６６７－７６７１）。
いくつかの実施形態では、抗体またはその断片は、重鎖ポリペプチドまたは軽鎖ポリペプチドのいずれかを含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその断片は、重鎖ポリペプチドまたは軽鎖ポリペプチドのいずれかの一部を含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその断片は、Ｆｃドメインまたはその断片を含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその断片は、ＣＨ２およびＣＨ３ドメインまたはその断片を含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその断片は、重鎖ポリペプチドの定常ドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその断片は、軽鎖ポリペプチドの定常ドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその断片は、重鎖ポリペプチドまたはその断片（例えば、Ｆｃドメインまたはその断片）を含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその断片は、軽鎖ポリペプチドを含む。
いくつかの実施形態では、第１の半減期延長ドメインは、第１のＦｃドメインまたはその断片を含み、第２の半減期延長ドメインは、第２のＦｃドメインまたはその断片を含む。
いくつかの実施形態では、第１および／または第２のＦｃドメインは各々、第１および第２の半減期延長ドメインの非共有結合性会合を促進する１つ以上の修飾を含有する。いくつかの実施形態では、第１の半減期延長ドメインは、変異Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、およびＹ４０７Ｖを含む、ＩｇＧ１ Ｆｃドメインまたはその断片を含み、第１の半減期延長ドメインに「ホール」を形成し、第２の半減期延長ドメインは、変異Ｓ３５４ＣおよびＴ３６６Ｗを含む、ＩｇＧ１ Ｆｃドメインまたはその断片を含み、第２の半減期延長ドメインに「ノブ」を形成する。
いくつかの実施形態では、第１および第２の半減期延長ドメインは各々、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、もしくはＩｇＧ４ Ｆｃドメインまたはその断片である。いくつかの実施形態では、第１および第２の半減期延長ドメインは各々、ＩｇＧ１ Ｆｃドメインまたはその断片である。ヒトＩｇＧ１免疫グロブリン重鎖定常ガンマ１は、以下の配列を有する。
［配列表１］
Figure 2023520514000013
いくつかの実施形態では、第１および第２の半減期延長ドメインは、第１および第２の半減期延長ドメインが各々、１つ以上のアミノ酸修飾を伴う配列番号５９またはその断片を含むように、配列番号５９を有するヒトＩｇＧ１免疫グロブリン重鎖定常ガンマ１の配列（「親配列」）に由来する。
いくつかの実施形態では、第１および第２の半減期延長ドメインは各々、任意に１つ以上のアミノ酸修飾を伴って、上記に太字で示される配列番号５９の部分を含み、すなわち、以下である。
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ
（配列番号６０）
いくつかの実施形態では、第１および第２の半減期延長ドメインは、「ノブ・イントゥ・ホール（ｋｎｏｂ ｉｎｔｏ ｈｏｌｅｓ）」アプローチに従って第１および第２の半減期延長ドメインの会合を促進するために、アミノ置換を伴う配列番号６０を含む。いくつかの実施形態では、配列配列番号６０は、第１の半減期延長ドメインに「ホール」を形成するための変異Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、およびＹ４０７Ｖ（Ｋａｂａｔ ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされる）と、第２の半減期延長ドメインに「ノブ」を形成するための変異Ｓ３５４ＣおよびＴ３６６Ｗ（Ｋａｂａｔ ＥＵ番号付けシステムに従って番号付される）とを含有する。これらの修飾配列は、以下に示される配列番号６１および６２を有する。
第１の半減期延長ドメイン（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、およびＹ４０７Ｖ）配列番号６１：
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＣＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＳＣＡＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＶＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ
第２の半減期延長ドメイン（Ｓ３５４ＣおよびＴ３６６Ｗ）配列番号６２：
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＣＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＷＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ
いくつかの実施形態では、第１および第２の半減期延長ドメインは各々、Ｋａｂａｔ ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされたアミノ置換Ｎ２９７Ａをさらに含む。
第１の半減期延長ドメイン（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）配列番号６３：
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＡＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＣＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＳＣＡＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＶＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ
第２の半減期延長ドメイン（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）配列番号６４：
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＡＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＣＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＷＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ
いくつかの実施形態では、第１および第２の半減期延長ドメインは各々、Ｋａｂａｔ ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされたアミノ置換Ｉ２５３Ａをさらに含む。
いくつかの実施形態では、第１および第２の半減期延長ドメインは各々、Ｋａｂａｔ ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされた両方のアミノ置換Ｎ２９７ＡおよびＩ２５３Ａをさらに含む。
第１の半減期延長ドメイン（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｎ２９７Ａ、およびＩ２５３Ａ）配列番号６５：
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＡＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＡＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＣＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＳＣＡＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＶＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ
第２の半減期延長ドメイン（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｎ２９７Ａ、およびＩ２５３Ａ）配列番号６６：
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＡＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＡＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＣＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＷＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ
いくつかの実施形態では、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６０、６１、６３、および６５のアミノ酸配列に対して約または少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６０、６２、６４、および６６のアミノ酸配列に対して約または少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６０、６１、６３、および６５のうちのいずれか１つのアミノ酸配列と比較して、１つ以上のアミノ酸置換、付加、または欠失などの１つ以上の修飾を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６０、６２、６４、および６６のうちのいずれか１つのアミノ酸配列と比較して、１つ以上のアミノ酸置換、付加、または欠失などの１つ以上の修飾を有するアミノ酸配列を含む。１つ以上の修飾は、いくつかの実施形態では、ポリペプチド鎖のヘテロ二量体化を促進し、および／またはポリペプチド鎖のホモ二量体化を抑制するか、エフェクター機能を改変するか、もしくはエフェクター機能を強化する、任意の修飾または改変を含む、本明細書に記載される任意の修飾または改変であり得る。
いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインまたはその断片は、エフェクター機能を改変する１つ以上のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、半減期延長ドメインは、ＩｇＧ１ Ｆｃドメインまたはその断片であり、Ｋａｂａｔ ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされた、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｇ、Ｎ２９７Ｑ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｃ２２０Ｓ、Ｃ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ、Ｐ２３８Ｓ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｐ３３１Ｓ、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｆ、Ｄ２６５Ａ、およびＰ３２９Ｇからなる群から選択される１つ以上のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、半減期延長ドメインは、ＩｇＧ２ Ｆｃドメインまたはその断片であり、アミノ酸置換：Ｋａｂａｔ ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされた、Ｖ２３４ＡおよびＧ２３７Ａ、Ｈ２６８Ｑ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、およびＡ３３１Ｓ、ならびに／またはＶ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ｓ、Ｈ２６８Ａ、Ｖ３０９Ｌ、およびＡ３３０Ｓを含む。いくつかの実施形態では、半減期延長ドメインは、ＩｇＧ２ Ｆｃドメインまたはその断片であり、Ｋａｂａｔ ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされた、Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｈ２６８Ｑ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、Ａ３３１Ｓ、Ｐ２３８Ｓ、Ｈ２６８Ａ、およびＶ３０９Ｌからなる群から選択される１つ以上のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、半減期延長ドメインは、ＩｇＧ４ Ｆｃドメインまたはその断片であり、アミノ置換：Ｋａｂａｔ ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされた、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、およびＥ３１８Ａ、Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３４Ａ、およびＬ２３５Ａ、Ｈ２６８Ｑ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、およびＰ３３１Ｓ、ならびに／またはＳ２２８ＰおよびＬ２３５Ａを含む。いくつかの実施形態では、半減期延長ドメインは、ＩｇＧ２ Ｆｃドメインまたはその断片であり、Ｋａｂａｔ ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされた、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｅ３１８Ａ、Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３４Ａ、Ｈ２６８Ｑ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、およびＰ３３１Ｓからなる群から選択される１つ以上のアミノ酸置換を含む。
いくつかの実施形態では、半減期延長ドメインは、１つ以上のアミノ酸置換強化エフェクター機能を含む、Ｆｃドメインまたはその断片を含む。いくつかの実施形態では、半減期延長ドメインは、ＩｇＧ１ Ｆｃドメインまたはその断片であり、アミノ置換：Ｋａｂａｔ ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされた、Ｓ２９８Ａ、Ｅ３３３Ａ、およびＫ３３４Ａ；Ｓ２３９ＤおよびＩ３３２Ｅ；Ｓ２３９Ｄ、Ａ３３０Ｌ、およびＩ３３２Ｅ；Ｐ２４７ＩおよびＡ３３９ＤまたはＡ３３９Ｑ；Ｄ２８０ＨおよびＫ２９０Ｓ；Ｄ２８０Ｈ、Ｋ２９０Ｓ、およびＳ２９８ＤまたはＳ２９８Ｖのいずれか；Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、およびＹ３００Ｌ；Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００Ｌ、およびＰ３９６Ｌ；Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００Ｌ、Ｖ３０５Ｉ、およびＰ３９６Ｌ；Ｇ２３６Ａ、Ｓ２３９Ｄ、およびＩ３３２Ｅ；Ｋ３２６ＡおよびＥ３３３Ａ；Ｋ３２６ＷおよびＥ３３３Ｓ；Ｋ２９０Ｅ、Ｓ２９８Ｇ、およびＴ２９９Ａ；Ｋ２９０Ｅ、Ｓ２９８Ｇ、Ｔ２９９Ａ、およびＫ３２６Ｅ；Ｋ２９０Ｎ、Ｓ２９８Ｇ、およびＴ２９９Ａ、Ｋ２９０Ｎ、Ｓ２９８Ｇ、Ｔ２９９Ａ、およびＫ３２６Ｅ；Ｋ３３４Ｖ、Ｌ２３５Ｓ、Ｓ２３９Ｄ、およびＫ３３４Ｖ、Ｋ３３４ＶおよびＱ３３１Ｍ；Ｓ２３９Ｄ、Ｆ２４３Ｖ、Ｅ２９４Ｌ、またはＳ２９８Ｔ；Ｅ２３３Ｌ、Ｑ３１１Ｍ、およびＫ３３４Ｖ；Ｌ２３４Ｉ、Ｑ３１１Ｍ、およびＫ３３４Ｖ；Ｋ３３４ＶおよびＳ２９８Ｔ、Ａ３３０ＭまたはＡ３３０Ｆ；Ｋ３３４Ｖ、Ｑ３１１Ｍ、およびＡ３３０ＭまたはＡ３３０Ｆのいずれか；Ｋ３３４Ｖ、Ｓ２９８Ｔ、およびＡ３３０ＭまたはＡ３３０Ｆのいずれか；Ｋ３３４Ｖ、Ｓ２３９Ｄ、およびＡ３３０ＭまたはＳ２９８Ｔのいずれか；Ｌ２３４Ｙ、Ｙ２９６Ｗ、およびＫ２９０Ｙ、Ｆ２４３ＶまたはＥ２９４Ｌ；Ｙ２９６ＷおよびＬ２３４ＹまたはＫ２９０Ｙのいずれか；Ｓ２３９Ｄ、Ａ３３０Ｓ、およびＩ３３２Ｅ、Ｖ２６４Ｉ；Ｆ２４３ＬおよびＶ２６４Ｉ；Ｌ３２８Ｍ；Ｉ３３２Ｅ；Ｌ３２８ＭおよびＩ３３２Ｅ；Ｖ２６４ＩおよびＩ３３２Ｅ；Ｓ２３９ＥおよびＩ３３２Ｅ；Ｓ２３９ＱおよびＩ３３２Ｅ；Ｓ２３９Ｅ；Ａ３３０Ｙ；３３２Ｄ；Ｌ３２８ＩおよびＩ３３２Ｅ；Ｌ３２８ＱおよびＩ３３２Ｅ；Ｖ２６４Ｔ；Ｖ２４０Ｉ；Ｖ２６６Ｉ；Ｓ２３９Ｄ；Ｓ２３９ＤおよびＩ３３２Ｄ；Ｓ２３９ＤおよびＩ３３２Ｎ；Ｓ２３９ＤおよびＩ３３２Ｑ；Ｓ２３９ＥおよびＩ３３２Ｄ；Ｓ２３９ＥおよびＩ３３２Ｎ；Ｓ２３９ＥおよびＩ３３２Ｑ；Ｓ２３９ＮおよびＩ３３２Ｄ；Ｓ２３９ＮおよびＩ３３２Ｅ；Ｓ２３９ＱおよびＩ３３２Ｄ；Ａ３３０ＹおよびＩ３３２Ｅ；Ｖ２６４Ｉ、Ａ３３０ＹおよびＩ３３２Ｅ；Ａ３３０ＬおよびＩ３３２Ｅ；Ｖ２６４Ｉ、Ａ３３０Ｌ、およびＩ３３２Ｅ；Ｌ２３４Ｅ、Ｌ２３４Ｙ、またはＬ２３４Ｉ；Ｌ２３５Ｄ、Ｌ２３５Ｓ、Ｌ２３５Ｙ、またはＬ２３５Ｉ；Ｓ２３９Ｔ；Ｖ２４０Ｍ；Ｖ２６４Ｙ；Ａ３３０Ｉ；Ｎ３２５Ｔ；Ｉ３３２ＥおよびＬ３２８Ｄ；Ｌ３２８Ｖ、Ｌ３２８Ｔ、またはＬ３２８Ｉ；Ｖ２６４Ｉ、Ｉ３３２Ｅ、およびＳ２３９ＥまたはＳ２３９Ｑのいずれか；Ｓ２３９Ｅ、Ｖ２６４Ｉ、Ａ３３０Ｙ、およびＩ３３２Ｅ；Ａ３３０Ｙ、Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９ＤまたはＳ２３９Ｎのいずれか；Ａ３３０Ｌ、Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９ＤまたはＳ２３９Ｎのいずれか；２６４Ｉ、Ｓ２９８Ａ、およびＩ３３２Ｅ；Ｓ２９８Ａ、Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９ＤまたはＳ２３９Ｎのいずれか；Ｓ２３９Ｄ、Ｖ２６４Ｉ、およびＩ３３２Ｅ；Ｓ２３９Ｄ、Ｖ２６４Ｉ、Ｓ２９８Ａ、およびＩ３３２Ｅ；Ｓ２３９Ｄ、Ｖ２６４Ｉ、Ａ３３０Ｌ、およびＩ３３２Ｅ；Ｓ２３９Ｄ、Ｉ３３２Ｅ、およびＡ３３０Ｉ；Ｐ２３０Ａ、Ｐ２３０Ａ、Ｅ２３３Ｄ、およびＩ３３２Ｅ；Ｅ２７２Ｙ；Ｋ２７４Ｔ、Ｋ２７４Ｅ、Ｋ２７４Ｒ、Ｋ２７４Ｌ、またはＫ２７４Ｙ；Ｆ２７５Ｗ；Ｎ２７６Ｌ；Ｙ２７８Ｔ；Ｖ３０２Ｉ；Ｅ３１８Ｒ；Ｓ３２４Ｄ、Ｓ３２４ＩまたはＳ３２４Ｖ；Ｋ３２６ＩまたはＫ３２６Ｔ；Ｔ３３５Ｄ、Ｔ３３５Ｒ、またはＴ３３５Ｙ；Ｖ２４０ＩおよびＶ２６６Ｉ；Ｓ２３９Ｄ、Ａ３３０Ｙ、Ｉ３３２Ｅ、およびＬ２３４Ｉ；Ｓ２３９Ｄ、Ａ３３０Ｙ、Ｉ３３２Ｅ、およびＬ２３５Ｄ；Ｓ２３９Ｄ、Ａ３３０Ｙ、Ｉ３３２Ｅ、およびＶ２４０Ｉ；Ｓ２３９Ｄ、Ａ３３０Ｙ、Ｉ３３２Ｅ、およびＶ２６４Ｔ；ならびに／もしくはＳ２３９Ｄ、Ａ３３０Ｙ、Ｉ３３２Ｅ、およびＫ３２６ＥまたはＫ３２６Ｔのいずれかを含む。いくつかの実施形態では、半減期延長ドメインは、ＩｇＧ１ Ｆｃドメインまたはその断片であり、Ｐ２３０Ａ，Ｅ２３３Ｄ，Ｌ２３４Ｅ，Ｌ２３４Ｙ，Ｌ２３４Ｉ，Ｌ２３５Ｄ，Ｌ２３５Ｓ，Ｌ２３５Ｙ，Ｌ２３５Ｉ，Ｓ２３９Ｄ，Ｓ２３９Ｅ，Ｓ２３９Ｎ，Ｓ２３９Ｑ，Ｓ２３９Ｔ，Ｖ２４０Ｉ，Ｖ２４０Ｍ，Ｆ２４３Ｌ，Ｖ２６４Ｉ，Ｖ２６４Ｔ，Ｖ２６４Ｙ，Ｖ２６６Ｉ，Ｅ２７２Ｙ，Ｋ２７４Ｔ，Ｋ２７４Ｅ，Ｋ２７４Ｒ，Ｋ２７４Ｌ，Ｋ２７４Ｙ，Ｆ２７５Ｗ，Ｎ２７６Ｌ，Ｙ２７８Ｔ，Ｖ３０２Ｉ，Ｅ３１８Ｒ，Ｓ３２４Ｄ，Ｓ３２４Ｉ，Ｓ３２４Ｖ，Ｎ３２５Ｔ，Ｋ３２６Ｉ，Ｋ３２６Ｔ，Ｌ３２８Ｍ，Ｌ３２８Ｉ，Ｌ３２８Ｑ，Ｌ３２８Ｄ，Ｌ３２８Ｖ，Ｌ３２８Ｔ，Ａ３３０Ｙ，Ａ３３０Ｌ，Ａ３３０Ｉ，Ｉ３３２Ｄ，Ｉ３３２Ｅ，Ｉ３３２Ｎ，Ｉ３３２Ｑ，Ｔ３３５Ｄ，Ｔ３３５Ｒ，およびＴ３３５Ｙからなる群から選択される１つ以上のアミノ酸置換を含む。
いくつかの実施形態では、半減期延長ドメインは、ＦｃＲｎへの半減期延長ドメインの結合を強化する１つ以上のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のアミノ酸置換は、酸性ｐＨにおけるＦｃＲｎへのＦｃ含有ポリペプチド（例えば、重鎖ポリペプチドまたはそのＦｃドメインもしくは断片）の結合親和性を増加させる。いくつかの実施形態では、半減期延長ドメインは、Ｍ４２８Ｆ、Ｔ２５０ＱおよびＭ４２８Ｆ；Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、およびＴ２５６Ｅ；Ｐ２５７ＩおよびＮ４３４Ｈ；Ｄ３７６ＶおよびＮ４３４Ｈ；Ｐ２５７ＩおよびＱ３１１１；Ｎ４３４Ａ；Ｎ４３４Ｗ；Ｍ４２８ＦおよびＮ４３４Ｓ；Ｖ２５９ＩおよびＶ３０８Ｆ；Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、およびＴ２５６Ｅ；Ｖ２５９Ｉ、Ｖ３０８Ｆ、およびＭ４２８Ｆ；Ｔ３０７ＱおよびＮ４３４Ａ；Ｔ３０７ＱおよびＮ４３４Ｓ；Ｔ３０７Ｑ、Ｅ３８０Ａ、およびＮ４３４Ａ；Ｖ３０８ＰおよびＮ４３４Ａ；Ｎ４３４Ｈ；ならびにＶ３０８Ｐからなる群から選択される１つ以上のアミノ酸置換を含む。
製造目的で、シグナルペプチドは、タンパク質の分泌を改善するように半減期ドメインの上流で操作され得る。シグナルペプチドは、当該技術分野で公知であるような細胞株の要件に従って選択される。シグナルペプチドは、精製され、医薬品として製剤化されるタンパク質の一部として発現されないことを理解されたい。
１．７．１ ヘテロ二量体化修飾
本明細書に記載される半減期延長ドメインは、２つの異なる半減期延長ドメインのヘテロ二量体化を促進する１つ以上の修飾を含み得る。いくつかの実施形態では、その正しいヘテロ二量体形態でのマスク型サイトカインの産生が効率的に産生されるように、第１の半減期延長ドメインおよび第２の半減期延長ドメインのヘテロ二量体化を促進することが望ましい。したがって、Ｋｌｅｉｎ ｅｔ ａｌ．（２０１２），ＭＡｂｓ，４（６）：６５３－６６３に記載されているような任意の方略を含む、当該技術分野で利用可能な任意の方略を使用して、１つ以上のアミノ酸修飾が、第１の半減期延長ドメインに行われることができ、１つ以上のアミノ酸修飾が、第２の半減期延長ドメインに行われることができる。例示的方略および修飾が、以下で詳細に記載される。
ノブ・イントゥ・ホールアプローチ
２つの異なる半減期延長ドメインのヘテロ二量体化を促進するための１つの方略は、「ノブ・イントゥ・ホール（ｋｎｏｂｓ－ｉｎｔｏ－ｈｏｌｅｓ）」と呼ばれるアプローチである。
いくつかの実施形態では、マスク型サイトカインは、各々がＣＨ３ドメインを含む、第１の半減期延長ドメインと、第２の半減期延長ドメインとを含む。いくつかの実施形態では、ＣＨ３ドメインを含む半減期延長ドメインは、重鎖ポリペプチドまたはその断片（例えば、Ｆｃドメインまたはその断片）である。２つの半減期延長ドメインのＣＨ３ドメインは、例えば、「ノブ・イントゥ・ホール」技術によって改変されることができ、これは、例えば、ＷＯ １９９６／０２７０１１、Ｒｉｄｇｗａｙ，Ｊ．Ｂ．ｅｔ ａｌ，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．（１９９６）９（７）：６１７－６２１、Ｍｅｒｃｈａｎｔ，Ａ．Ｍ．，ｅｔ ａｌ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．（１９９８）１６（７）：６７７－６８１において、いくつかの実施例とともに詳細に記載されている。また、Ｋｌｅｉｎ ｅｔ ａｌ．（２０１２），ＭＡｂｓ，４（６）：６５３－６６３も参照されたい。ノブ・イントゥ・ホール法を使用して、２つのＣＨ３ドメインの相互作用表面は、改変され、２つの改変されたＣＨ３ドメインを含有する２つの半減期延長ドメインのヘテロ二量体化を増加させる。これは、「ノブ」として作用する、半減期延長ドメインのうちの１つのＣＨ３ドメインにバルク残基を導入することによって生じる。次いで、かさばる残基を収容するために、ノブを収容することができる「ホール」が、他の半減期延長ドメインに形成される。改変されたＣＨ３ドメインのいずれかが、「ノブ」であり得る一方で、他方は、「ホール」であり得る。ジスルフィド架橋の導入は、ヘテロ二量体をさらに安定化する（Ｍｅｒｃｈａｎｔ，Ａ．Ｍ．，ｅｔ ａｌ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．（１９９８）１６（７）、Ａｔｗｅｌｌ，Ｓ．，ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．（１９９７）２７０（１）：２６－３５）とともに、収率を増加させる。
９７％を超えるヘテロ二量体化収率は、重鎖にＳ３５４Ｃ変異およびＴ３６６Ｗ変異を導入して「ノブ」を作成し、重鎖にＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、およびＹ４０７Ｖ変異を導入して「ホール」を作成することによって（Ｋａｂａｔ ＥＵ番号付けシステムによる残基の番号付け）、達成され得ることが報告されている。Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．（２００１），Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，２４８：７－１５、Ｋｌｅｉｎ ｅｔ ａｌ．（２０１２），ＭＡｂｓ，４（６）：６５３－６６３．
第１の半減期延長ドメインと、第２の半減期延長ドメインとを含む、いくつかの実施形態では、第１の半減期延長ドメインは、アミノ酸変異Ｓ３５４ＣおよびＴ３６６Ｗ（Ｋａｂａｔ ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされる）を含む重鎖ポリペプチドまたはその一部（例えば、Ｆｃドメインまたはその断片）を含み、第２の半減期延長ドメインは、アミノ酸変異Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、およびＹ４０７Ｖ（Ｋａｂａｔ ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされる）重鎖ポリペプチドまたはその一部（例えば、Ｆｃドメインまたはその断片）を含む。第１の半減期延長ドメインと、第２の半減期延長ドメインとを含む、いくつかの実施形態では、第１の半減期延長ドメインは、アミノ酸変異Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、およびＹ４０７Ｖ（Ｋａｂａｔ ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされる）を含む重鎖ポリペプチドまたはその一部（例えば、Ｆｃドメインまたはその断片）を含み、第２の半減期延長ドメインは、アミノ酸変異Ｓ３５４ＣおよびＴ３６６Ｗ（Ｋａｂａｔ ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされる）重鎖ポリペプチドまたはその一部（例えば、Ｆｃドメインまたはその断片）を含む。
ノブおよびホールを形成するために作製され得る置換の追加的な例には、その内容が参照により本明細書に組み込まれる、ＵＳ２０１４０３０２０３７Ａ１に記載されるものが含まれる。例えば、いくつかの実施形態では、以下のアミノ酸置換のいずれかが、各々、Ｆｃドメインを含有する、第１の半減期延長ドメイン（「第１のドメイン」）および対になった第２の半減期延長ドメイン（「第２のドメイン」）に行われることができる：Ｋａｂａｔ ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされた、（ａ）第１のドメイン内のＹ４０７Ｔおよび第２のドメイン内のＴ３６６Ｙ、（ｂ）第１のドメイン内のＹ４０７Ａおよび第２のドメイン内のＴ３６６Ｗ、（ｃ）第１のドメイン内のＦ４０５Ａおよび第２のドメイン内のＴ３９４Ｗ、（ｄ）第１のドメイン内のＦ４０５Ｗおよび第２のドメイン内のＴ３９４Ｓ、（ｅ）第１のドメイン内のＹ４０７Ｔおよび第２のドメイン内のＴ３６６Ｙ、（ｆ）第１のドメイン内のＴ３６６ＹおよびＦ４０５Ａ、ならびに第２のドメイン内のＴ３９４ＷおよびＹ４０７Ｔ、（ｇ）第１のドメイン内のＴ３６６ＷおよびＦ４０５Ｗ、ならびに第２のドメイン内のＴ３９４ＳおよびＹ４０７Ａ、（ｈ）第１のドメイン内のＦ４０５ＷおよびＹ４０７Ａ、および第２のドメイン内のＴ３６６ＷおよびＴ３９４Ｓ、または（ｉ）第１のドメインのＴ３６６Ｗ、ならびに第２のドメイン内のＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、およびＹ４０７Ｖ。
いくつかの実施形態では、以下のアミノ酸置換のいずれかが、各々、Ｆｃドメインを含有する、第１の半減期延長ドメイン（「第１のドメイン」）および対になった第２の半減期延長ドメイン（「第２のドメイン」）に行われることができる：Ｋａｂａｔ ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされた、（ａ）第２のドメイン内のＹ４０７Ｔおよび第１のドメイン内のＴ３６６Ｙ、（ｂ）第２のドメイン内のＹ４０７Ａおよび第１のドメイン内のＴ３６６Ｗ、（ｃ）第２のドメイン内のＦ４０５Ａおよび第２のドメイン内のＴ３９４Ｗ、（ｄ）第２のドメイン内のＦ４０５Ｗおよび第１のドメイン内のＴ３９４Ｓ、（ｅ）第２のドメイン内のＹ４０７Ｔおよび第１のドメイン内のＴ３６６Ｙ、（ｆ）第２のドメイン内のＴ３６６ＹおよびＦ４０５Ａ、ならびに第１のドメイン内のＴ３９４ＷおよびＹ４０７Ｔ、（ｇ）第２のドメイン内のＴ３６６ＷおよびＦ４０５Ｗ、ならびに第１のドメイン内のＴ３９４ＳおよびＹ４０７Ａ、（ｈ）第２のドメイン内のＦ４０５ＷおよびＹ４０７Ａ、および第１のドメイン内のＴ３６６ＷおよびＴ３９４Ｓ、または（ｉ）第２のドメインのＴ３６６Ｗ、ならびに第１のドメイン内のＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、およびＹ４０７Ｖ。
各々、Ｆｃドメインを含む、第１の半減期延長ドメインと、第２の半減期延長ドメインとを含む、実施形態では、本明細書に記載されるヘテロ二量体化改変のうちのいずれかが、本明細書に記載されるマスク型サイトカインのうちのいずれかのヘテロ二量体形成を促進するためにＦｃドメインで使用されることができる。
１．８ 例示的マスク型サイトカイン
本開示によるマスク型サイトカインは、本明細書のいずれかの場所に記載されるＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片、本明細書のいずれかの場所に記載されるマスキング部分、本明細書のいずれかの場所に記載される第１および第２の半減期ドメイン、ならびに本明細書のいずれかの場所に記載される切断可能および非切断可能なリンカーを組み合わせることができる。
本開示によるマスク型サイトカインは、本明細書のいずれかの場所に記載されるＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片、本明細書のいずれかの場所に記載されるマスキング部分、本明細書のいずれかの場所に記載される第１および第２の半減期ドメイン、本明細書のいずれかの場所に記載される切断可能および非切断可能なリンカー、ならびに本明細書のいずれかの場所に記載されるＩＬ－１５Ｒαドメインを組み合わせることができる。
さらに、ある実施形態では、本明細書に開示される任意の特定の配列は、任意に、１つ、２つ、または３つの置換などのさらなるアミノ酸置換を含み得る。別の実施形態では、マスク型サイトカインのドメインについて本明細書に開示される任意の特定の配列に対して少なくとも９０％、好ましくは９５％、より好ましくは９９％の相同性を有する配列も、本発明によって包含される。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号２のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号２のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２７のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２８のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３１のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３３のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２７のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２８のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３１のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３３のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｎ２９７Ａ、およびＩ２５３Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｎ２９７Ａ、およびＩ２５３Ａ）を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号２のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２７のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２８のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３１のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３３のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号２のアミノ酸配列を含み、非切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号２のアミノ酸配列を含み、非切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号３のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号３のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号３のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号３のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｎ２９７Ａ、およびＩ２５３Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｎ２９７Ａ、およびＩ２５３Ａ）を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号３のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号３のアミノ酸配列を含み、非切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号３のアミノ酸配列を含み、非切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号４のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号４のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号４のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号４のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｎ２９７Ａ、およびＩ２５３Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｎ２９７Ａ、およびＩ２５３Ａ）を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号４のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号４のアミノ酸配列を含み、非切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号４のアミノ酸配列を含み、非切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号５のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号５のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号５のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号５のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｎ２９７Ａ、およびＩ２５３Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｎ２９７Ａ、およびＩ２５３Ａ）を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号５のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号５のアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号５のアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号６のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号６のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号６のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号６のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｎ２９７Ａ、およびＩ２５３Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｎ２９７Ａ、およびＩ２５３Ａ）を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号６のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号６のアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号６のアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号７のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号７のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号７のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号７のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｎ２９７Ａ、およびＩ２５３Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｎ２９７Ａ、およびＩ２５３Ａ）を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号７のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号７のアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号７のアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号８のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号８のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号８のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号８のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｎ２９７Ａ、およびＩ２５３Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｎ２９７Ａ、およびＩ２５３Ａ）を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号８のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号８のアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号８のアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２７のアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２７のアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２７のアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号１３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２８のアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２８のアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２８のアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号１３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号１３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号１３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３１のアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３１のアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３１のアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号１３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号１３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３３のアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３３のアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３３のアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号１３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含む。
いくつかの実施形態では、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｎ２９７Ａ、およびＩ２５３Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｎ２９７Ａ、およびＩ２５３Ａ）を含む。
いくつかの実施形態では、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、切断可能なリンカーは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、切断可能なリンカーは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含む。
いくつかの実施形態では、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｎ２９７Ａ、およびＩ２５３Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｎ２９７Ａ、およびＩ２５３Ａ）を含む。
いくつかの実施形態では、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、切断可能なリンカーは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、切断可能なリンカーは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、切断可能なリンカーは、配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、切断可能なリンカーは、配列番号１３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号１３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号１３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号２のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号２のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２７のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２８のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３１のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３３のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号２のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｎ２９７Ａ、およびＩ２５３Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｎ２９７Ａ、およびＩ２５３Ａ）を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号２のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｎ２９７Ａ、およびＩ２５３Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｎ２９７Ａ、およびＩ２５３Ａ）を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号２のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号２のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２７のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２８のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３１のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３３のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号２のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号２のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２７のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２８のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３１のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３３のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号２のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号２のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２７のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２８のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３１のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３３のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２７のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号１３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２８のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号１３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号１３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号１３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３１のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号１３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号１３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３３のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号１３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号３のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号３のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号３のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｎ２９７Ａ、およびＩ２５３Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｎ２９７Ａ、およびＩ２５３Ａ）を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号３のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｎ２９７Ａ、およびＩ２５３Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｎ２９７Ａ、およびＩ２５３Ａ）を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号３のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号３のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号４のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号４のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号４のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号４のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号４のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号４のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号４のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｎ２９７Ａ、およびＩ２５３Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｎ２９７Ａ、およびＩ２５３Ａ）を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号４のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｎ２９７Ａ、およびＩ２５３Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｎ２９７Ａ、およびＩ２５３Ａ）を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号４のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号４のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号４のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号４のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号４のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号４のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号５のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号５のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号５のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｎ２９７Ａ、およびＩ２５３Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｎ２９７Ａ、およびＩ２５３Ａ）を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号５のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｎ２９７Ａ、およびＩ２５３Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｎ２９７Ａ、およびＩ２５３Ａ）を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号５のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号５のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号５のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号５のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号５のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号５のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号６のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号６のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号６のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｎ２９７Ａ、およびＩ２５３Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｎ２９７Ａ、およびＩ２５３Ａ）を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号６のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｎ２９７Ａ、およびＩ２５３Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｎ２９７Ａ、およびＩ２５３Ａ）を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号６のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号６のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号６のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号６のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号６のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号７のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号７のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号７のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号７のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｎ２９７Ａ、およびＩ２５３Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｎ２９７Ａ、およびＩ２５３Ａ）を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号７のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｎ２９７Ａ、およびＩ２５３Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｎ２９７Ａ、およびＩ２５３Ａ）を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号７のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号７のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号７のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号７のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号７のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号７のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号８のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号８のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号８のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｎ２９７Ａ、およびＩ２５３Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｎ２９７Ａ、およびＩ２５３Ａ）を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号８のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｎ２９７Ａ、およびＩ２５３Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｎ２９７Ａ、およびＩ２５３Ａ）を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号８のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号８のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号８のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号８のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号８のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号８のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２７のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２８のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３１のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３３のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なリンカーは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なリンカーは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２７のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２８のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３１のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３３のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２７のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２８のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３１のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３３のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２７のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号１３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２８のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号１３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号１３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号１３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３１のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号１３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号１３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３３のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号１３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号３のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号３のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号３のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号３のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号３のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号３のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号４のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号４のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号４のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号４のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号４のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号４のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号５のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号５のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号５のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号５のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号５のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号５のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号６のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号６のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号６のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号６のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号６のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号６のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号７のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号７のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号７のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号７のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号７のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号７のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号８のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号８のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号８のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号８のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号８のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号８のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号２のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号２のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２７のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２８のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３１のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３３のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２７のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２８のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３１のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３３のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２７のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号１３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２８のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号１３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号１３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号１３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３１のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号１３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号１３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３３のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号１３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号３のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号３のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号４のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号４のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号５のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号５のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号６のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号６のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号７のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号７のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号８のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号８のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｎ２９７Ａ、およびＩ２５３Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｎ２９７Ａ、およびＩ２５３Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｎ２９７Ａ、およびＩ２５３Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｎ２９７Ａ、およびＩ２５３Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号１３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号１３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号２のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号２のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２７のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２８のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３１のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３３のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号２のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｎ２９７Ａ、およびＩ２５３Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｎ２９７Ａ、およびＩ２５３Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号２のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｎ２９７Ａ、およびＩ２５３Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｎ２９７Ａ、およびＩ２５３Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号２のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号２のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号２のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号２のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号２のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号２のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２７のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２８のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３３のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２７のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２８のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３１のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３３のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２７のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号１３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２８のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号１３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号１３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号１３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３１のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号１３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号１３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３３のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号１３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号２のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号２のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号２のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号２のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２７のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２８のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３１のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３３のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２７のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２８のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３１のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３３のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２７のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号１３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２８のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号１３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号１３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号１３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３１のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号１３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号１３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３３のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号１３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号２のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号２のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２７のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２８のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３１のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３３のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２７のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２７のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２８のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３３のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２７のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号１３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２８のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号１３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号１３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号１３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３１のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号１３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号１３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３３のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号１３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号３のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号３のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号３のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｎ２９７Ａ、およびＩ２５３Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｎ２９７Ａ、およびＩ２５３Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号３のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｎ２９７Ａ、およびＩ２５３Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｎ２９７Ａ、およびＩ２５３Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号３のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号３のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号３のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号３のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号３のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号３のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号３のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号３のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号３のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号３のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号３のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号３のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号３のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号３のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号３のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号３のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号４のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号４のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号４のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｎ２９７Ａ、およびＩ２５３Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｎ２９７Ａ、およびＩ２５３Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号４のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｎ２９７Ａ、およびＩ２５３Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｎ２９７Ａ、およびＩ２５３Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号４のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号４のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号４のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号４のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号４のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号４のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号４のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号４のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号４のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号４のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号４のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号４のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号４のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号４のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号４のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号４のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号５のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号５のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号５のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｎ２９７Ａ、およびＩ２５３Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｎ２９７Ａ、およびＩ２５３Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号５のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｎ２９７Ａ、およびＩ２５３Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｎ２９７Ａ、およびＩ２５３Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号５のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号５のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号５のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号５のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号５のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号５のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号５のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号５のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号５のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号５のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号５のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号５のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号５のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号５のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号５のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号５のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号６のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号６のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号６のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｎ２９７Ａ、およびＩ２５３Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｎ２９７Ａ、およびＩ２５３Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号６のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｎ２９７Ａ、およびＩ２５３Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｎ２９７Ａ、およびＩ２５３Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号６のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号６のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号６のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号６のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号６のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号６のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号６のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号６のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号６のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号６のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号６のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号６のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号６のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号６のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号６のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号６のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号７のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号７のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号７のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｎ２９７Ａ、およびＩ２５３Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｎ２９７Ａ、およびＩ２５３Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号７のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｎ２９７Ａ、およびＩ２５３Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｎ２９７Ａ、およびＩ２５３Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号７のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号７のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号７のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号７のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号７のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号７のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号７のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号７のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号７のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号７のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号７のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号７のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号７のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号７のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号７のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号７のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号８のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号８のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号８のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｎ２９７Ａ、およびＩ２５３Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｎ２９７Ａ、およびＩ２５３Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号８のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｎ２９７Ａ、およびＩ２５３Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｎ２９７Ａ、およびＩ２５３Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号８のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号８のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号８のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号８のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号８のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号８のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号８のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号８のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号８のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号８のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号８のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号８のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号８のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号８のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号８のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号８のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号２のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号２のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２７のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２８のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３１のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３３のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２７のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２８のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３１のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３３のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２７のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号１３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２８のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号１３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号１３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号１３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３１のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号１３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号１３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３３のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号１３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号２のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号２のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号２のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号２のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号２のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号２のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号３のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号３のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号３のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号３のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号３のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号３のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号３のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号３のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号４のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号４のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号４のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号４のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号４のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号４のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号４のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号４のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号５のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号５のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号５のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号５のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号５のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号５のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号５のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号５のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号６のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号６のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号６のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号６のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号６のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号６のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号６のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号６のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号７のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号７のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号７のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号７のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号７のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号７のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号７のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号７のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号８のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号８のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号８のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号８のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号８のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号８のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号８のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号８のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６５（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６６（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２７のアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２８のアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３１のアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３３のアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２７のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２８のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３１のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３３のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２７のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２８のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３１のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３３のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２７のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２８のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３１のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３３のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２７のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２８のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号１５５に示されるアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号１５６に示されるアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３１のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３３のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２７のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２８のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３１のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３３のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２７のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２８のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３１のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３３のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２７のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号１３４に示されるアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２８のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号１３４に示されるアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号１３４に示されるアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号１３４に示されるアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３１のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号１３４に示されるアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号１３４に示されるアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３３のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号１３４に示されるアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２７のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２１に示されるアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２８のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２１に示されるアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２１に示されるアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２１に示されるアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３１のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２１に示されるアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２１に示されるアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３３のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２１に示されるアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２７のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２１に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２７のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２１に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号１５５に示されるアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２７のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２１に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号１５６に示されるアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２８のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２１に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２１に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２１に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３１のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２１に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２１に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３３のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２１に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２７のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２１に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２８のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２１に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２１に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２１に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３１のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２１に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２１に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３３のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２１に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２７のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２１に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２８のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２１に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２１に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２１に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３１のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２１に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２１に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３３のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２１に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２７のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２１に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号１３４に示されるアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２８のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２１に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号１３４に示されるアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２１に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号１３４に示されるアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２１に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号１３４に示されるアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３１のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２１に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号１３４に示されるアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２１に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号１３４に示されるアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、配列番号１３３のアミノ酸配列を含み、マスキング部分は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインは、配列番号６３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＮ２９７Ａ）を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号６４（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＮ２９７Ａ）を含み、非切断可能なリンカーは、配列番号２１に示されるアミノ酸配列を含み、切断可能なペプチドは、配列番号１３４に示されるアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。
１．９ バリアントマスキング部分を伴うマスク型サイトカイン
ＩＬ－１５Ｒβポリペプチドまたはその機能的断片が本明細書で提供され、ＩＬ－１５Ｒβポリペプチドは、位置Ｃ１２２にアミノ酸置換を有する。
ＩＬ－１５Ｒβポリペプチドまたはその機能的断片が本明細書で提供され、ＩＬ－１５Ｒβポリペプチドは、位置Ｃ１２２Ｓにアミノ酸置換を有する。
ＩＬ－１５Ｒβポリペプチドまたはその機能的断片が本明細書で提供され、ＩＬ－１５Ｒβポリペプチドは、配列番号１１のＩＬ－１５Ｒβと比較して、位置Ｃ１２２にアミノ酸置換を有する。
ＩＬ－１５Ｒβポリペプチドまたはその機能的断片が本明細書で提供され、ＩＬ－１５Ｒβポリペプチドは、配列番号１１のＩＬ－１５Ｒβと比較して、位置Ｃ１２２Ｓにアミノ酸置換を有する。
Ｃ１２２変異を伴う配列番号１１のアミノ酸配列を含む、ＩＬ－１５Ｒβポリペプチドが本明細書で提供される。
Ｃ１２２Ｓ変異を伴う配列番号１１のアミノ酸配列を含む、ＩＬ－１５Ｒβポリペプチドが本明細書で提供される。
ＩＬ－１５Ｒβポリペプチドまたはその機能的断片が本明細書で提供され、ＩＬ－１５Ｒβポリペプチドは、位置Ｃ１６８にアミノ酸置換を有する。
ＩＬ－１５Ｒβポリペプチドまたはその機能的断片が本明細書で提供され、ＩＬ－１５Ｒβポリペプチドは、位置Ｃ１６８Ｓにアミノ酸置換を有する。
ＩＬ－１５Ｒβポリペプチドまたはその機能的断片が本明細書で提供され、ＩＬ－１５Ｒβポリペプチドは、配列番号１１のＩＬ－１５Ｒβと比較して、位置Ｃ１６８にアミノ酸置換を有する。
ＩＬ－１５Ｒβポリペプチドまたはその機能的断片が本明細書で提供され、ＩＬ－１５Ｒβポリペプチドは、配列番号１１のＩＬ－１５Ｒβと比較して、位置Ｃ１６８Ｓにアミノ酸置換を有する。
Ｃ１６８変異を伴う配列番号１１のアミノ酸配列を含む、ＩＬ－１５Ｒβポリペプチドが本明細書で提供される。
Ｃ６８Ｓ変異を伴う配列番号１１のアミノ酸配列を含む、ＩＬ－１５Ｒβポリペプチドが本明細書で提供される。
ＩＬ－１５Ｒβポリペプチドまたはその機能的断片が本明細書で提供され、ＩＬ－１５Ｒβポリペプチドは、位置Ｃ１２２およびＣ１６８にアミノ酸置換を有する。
ＩＬ－１５Ｒβポリペプチドまたはその機能的断片が本明細書で提供され、ＩＬ－１５Ｒβポリペプチドは、位置Ｃ１２２ＳおよびＣ１６８Ｓにアミノ酸置換を有する。
ＩＬ－１５Ｒβポリペプチドまたはその機能的断片が本明細書で提供され、ＩＬ－１５Ｒβポリペプチドは、配列番号１１のＩＬ－１５Ｒβと比較して、位置Ｃ１２２およびＣ１６８にアミノ酸置換を有する。
ＩＬ－１５Ｒβポリペプチドまたはその機能的断片が本明細書で提供され、ＩＬ－１５Ｒβポリペプチドは、配列番号１１のＩＬ－１５Ｒβと比較して、位置Ｃ１２２ＳおよびＣ１６８Ｓにアミノ酸置換を有する。
ＩＬ－１５Ｒβポリペプチドまたはその機能的断片が本明細書で提供され、ＩＬ－１５Ｒβポリペプチドは、配列番号１２のアミノ酸を含む。
マスキング部分と、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片とを含む、マスク型ＩＬ－１５サイトカインが提供され、マスキング部分は、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片をマスクし、それによって、ＩＬ－サイトカインまたはその機能的断片のその同族受容体への結合を低減または防止し、タンパク質分解的に切断可能なペプチドが、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片とマスキング部分との間に存在し、マスキング部分は、本明細書のいずれかの場所で定義されるＩＬ－１５Ｒβポリペプチドまたはその機能的断片である。
１．１０ バリアント半減期延長ドメインを伴うマスク型サイトカイン
Ｋａｂａｔ ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされたアミノ酸置換Ｉ２５３Ａを含む、ＩｇＧ１ Ｆｃドメインまたはその断片が本明細書で提供される。
Ｋａｂａｔ ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされたアミノ酸置換Ｎ２９７ＡおよびＩ２５３Ａを含む、ＩｇＧ１ Ｆｃドメインまたはその断片が本明細書で提供される。
アミノ酸置換Ｉ２５３Ａを含むＩｇＧ１ Ｆｃドメインまたはその断片を含む、第１のポリペプチド配列と、アミノ酸置換Ｉ２５３Ａを含むＩｇＧ１ Ｆｃドメインまたはその断片を含む、第２のポリペプチド配列とを含む、二量体が本明細書で提供される。
アミノ酸置換Ｎ２９７ＡおよびＩ２５３Ａを含むＩｇＧ１ Ｆｃドメインまたはその断片を含む、第１のポリペプチド配列と、アミノ酸置換Ｎ２９７Ａ およびＩ２５３Ａを含むＩｇＧ１ Ｆｃドメインまたはその断片を含む、第２のポリペプチド配列とを含む、二量体が本明細書で提供される。
配列番号６５を含む第１のポリペプチド配列と、配列番号６６を含む第２のポリペプチド配列とを含む、二量体が本明細書で提供される。
マスキング部分と、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片と、半減期延長ドメインとを含む、マスク型サイトカインが本明細書で提供され、マスキング部分は、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片をマスクし、それによって、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片のその同族受容体への結合を低減または防止し、タンパク質分解的に切断可能なペプチドが、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片とマスキング部分との間に存在し、半減期延長ドメインは、本明細書のいずれかの場所に定義される二量体化ＩｇＧ１ Ｆｃドメインを含む。
２．切断産物
本明細書で提供されるものは、本明細書に記載されるマスク型ＩＬ－１５サイトカインの切断産物である。
本明細書に記載されるマスク型ＩＬ－１５サイトカインは、切断可能なリンカーを含む。切断部位における切断可能なリンカーのタンパク質分解切断時に、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片を含む切断産物が形成される。切断産物中のＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、もはやマスキング部分によってマスクされなくなるため、活性化される。したがって、切断産物中のＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片は、標的タンパク質に結合することが可能である。
腫瘍細胞環境は、複雑であり、複数の異なるプロテアーゼを含むことができる。したがって、マスク型ＩＬ－１５サイトカイン内の所与の切断可能なペプチドが腫瘍細胞環境内で切断される正確な部位は、腫瘍型の間、同じ腫瘍型を有する患者の間、および同じ腫瘍に形成された切断産物の間でさえも変化し得る。さらに、切断後でさえも、例えば、１つまたは２つの末端アミノ酸の除去による、初期切断産物のさらなる修飾は、腫瘍細胞環境内のプロテアーゼのさらなる作用によって生じ得る。したがって、切断産物の分布は、本明細書に記載されるマスク型サイトカインの投与後に、患者の腫瘍細胞環境内に形成されることが予期され得る。
本明細書で提供されるものは、その同族受容体に結合することが可能なＩＬ－１５切断産物であって、本明細書に記載される記述または実施形態のうちのいずれか１つに定義されるマスク型ＩＬ－１５サイトカイン中の切断可能なペプチドのタンパク質分解切断によって調製可能である、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片を含む、切断産物である。
また、本明細書で提供されるものは、マスク型ＩＬ－１５サイトカインの切断産物であり、切断産物は、ＩＬ－１５Ｒに結合することが可能であり、切断産物は、本明細書のいずれかの場所に定義されるＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片を含む。また、本明細書で提供されるものは、マスク型ＩＬ－１５サイトカインの単一構造から取得されるか、または取得可能である切断産物の分布であり、切断産物の分布内の各切断産物は、（ｉ）ＩＬ－１５Ｒに結合することが可能であり、（ｉｉ）本明細書のいずれかの場所に定義されるＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片を含む。
本明細書で提供されるものは、本明細書に記載されるマスク型ＩＬ－１５サイトカインの切断産物であり、切断産物は、その同族受容体に結合することが可能であり、切断産物は、
ＰＣＰ－ＳＤ－Ｃを含む、ポリペプチドを含み、
ＰＣＰは、本明細書に記載されるタンパク質分解的に切断可能なペプチドの一部であり、ＳＤは、本明細書に記載されるスペーサードメインであり、Ｃは、本明細書に記載されるＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片である。
例えば、そのような切断産物は、マスク型サイトカインに由来し得る。
Figure 2023520514000014
いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号２の成熟ＩＬ－１５に対して少なくとも９０％の相同性を伴うアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号３の成熟ＩＬ－１５に対して少なくとも９０％の相同性を伴うアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号４の成熟ＩＬ－１５に対して少なくとも９０％の相同性を伴うアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号５の成熟ＩＬ－１５に対して少なくとも９０％の相同性を伴うアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号８の成熟ＩＬ－１５に対して少なくとも９０％の相同性を伴うアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号１２７の成熟ＩＬ－１５に対して少なくとも９０％の相同性を伴うアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号１２８の成熟ＩＬ－１５に対して少なくとも９０％の相同性を伴うアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号１２９の成熟ＩＬ－１５に対して少なくとも９０％の相同性を伴うアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号１３０の成熟ＩＬ－１５に対して少なくとも９０％の相同性を伴うアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号１３１の成熟ＩＬ－１５に対して少なくとも９０％の相同性を伴うアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号１３２の成熟ＩＬ－１５に対して少なくとも９０％の相同性を伴うアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号１３３の成熟ＩＬ－１５に対して少なくとも９０％の相同性を伴うアミノ酸配列を有する。
いくつかの実施形態では、切断産物は、本明細書に記載されるＩＬ－１５Ｒαサブユニットまたはその断片（「ＩＬ－１５Ｒαドメイン」）を含むドメインをさらに含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαドメインは、本明細書に記載されるＩＬ－１５Ｒαサブユニットまたはその断片と、「αサブユニットリンカー」とを含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαサブユニットまたはその断片を含むドメインは、本明細書に記載されるＩＬ－１５サイトカインまたはその断片に共有結合している。
いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号１０４のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号１０５のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号１０６のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号１０７のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号１１７のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号１１８のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号１１９のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号１２０のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号１２１のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号１２２のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号３０７のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号１０４のアミノ酸配列からなる。
いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号１０５のアミノ酸配列からなる。
いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号１０６のアミノ酸配列からなる。
いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号１０７のアミノ酸配列からなる。
いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号１１７のアミノ酸配列からなる。
いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号１１８のアミノ酸配列からなる。
いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号１１９のアミノ酸配列からなる。
いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号１２０のアミノ酸配列からなる。
いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号１２１のアミノ酸配列からなる。
いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号１２２のアミノ酸配列からなる。
いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号３０７のアミノ酸配列からなる。
いくつかの実施形態では、切断産物は、
ＰＣＰ－ＳＤ－［’ＩＬ－１５Ｒαドメイン’］－Ｃを含む。
例えば、そのような切断産物は、マスク型サイトカインに由来し得る。
Figure 2023520514000015
いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号１１６のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号１１６のアミノ酸配列からなる。
いくつかの実施形態では、切断産物は、
ＰＣＰ－ＳＤ－Ｃ－［’ＩＬ－１５Ｒαドメイン’］を含む。
例えば、そのような切断産物は、マスク型サイトカインに由来し得る。
Figure 2023520514000016
いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号１０８のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号１０９のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号１１０のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号１１１のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号１１２のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号１１３のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号１１４のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号１１５のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号１２６のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号１０８のアミノ酸配列からなる。
いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号１０９のアミノ酸配列からなる。
いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号１１０のアミノ酸配列からなる。
いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号１１１のアミノ酸配列からなる。
いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号１１２のアミノ酸配列からなる。
いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号１１３のアミノ酸配列からなる。
いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号１１４のアミノ酸配列からなる。
いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号１１５のアミノ酸配列からなる。
いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号１２６のアミノ酸配列からなる。
いくつかの実施形態では、切断産物は、
ＰＣＰ－ＳＤ－［Ｃ（－［’ＩＬ－１５Ｒαドメイン’］）］を含む。
いくつかの実施形態では、切断産物は、
ＰＣＰ－ＳＤ２－［ＣのＮ’末端ドメイン］－［’ＩＬ－１５Ｒαドメイン’］－［ＣのＣ’末端ドメイン］を含み、
本明細書に記載されるＩＬ－１５Ｒαドメインは、非切断可能な「αサブユニットリンカー」が両側に配置されたＩＬ－１５Ｒαサブユニットまたはその断片を含む。
例えば、そのような切断産物は、マスク型サイトカインに由来し得る。
Figure 2023520514000017
いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号１２３のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号１２４のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号１２３のアミノ酸配列からなる。
いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号１２４のアミノ酸配列からなる。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαサブユニットまたはその断片を含むドメインは、本明細書に記載されるＩＬ－１５サイトカインまたはその断片に非共有結合している。したがって、いくつかの実施形態では、切断産物は、
ＰＣＰ－ＳＤ－Ｃを含む、ポリペプチドであって、
ＰＣＰは、本明細書に記載されるタンパク質分解的に切断可能なペプチドの一部であり、ＳＤは、本明細書に記載されるスペーサードメインであり、Ｃは、本明細書に記載されるＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片である、ポリペプチドと、
ポリペプチド鎖であって、
ＩＬ－１５Ｒαドメインを含む、ポリペプチド鎖とを含む。
例えば、そのような切断産物は、マスク型サイトカインに由来し得る。
Figure 2023520514000018
いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号１３６のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号１３７のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号１３８のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号１４２のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号１４４のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号１４５のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号２００のアミノ酸配列を有する第１のポリペプチド鎖と、配列番号１９９のアミノ酸配列を有する第２のポリペプチド鎖とを含む。
いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号２０２のアミノ酸配列を有する第１のポリペプチド鎖と、配列番号２０１のアミノ酸配列を有する第２のポリペプチド鎖とを含む。
いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号２０４のアミノ酸配列を有する第１のポリペプチド鎖と、配列番号２０３のアミノ酸配列を有する第２のポリペプチド鎖とを含む。
いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号２１５のアミノ酸配列を有する第１のポリペプチド鎖と、配列番号２１４のアミノ酸配列を有する第２のポリペプチド鎖とを含む。
いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号２２０のアミノ酸配列を有する第１のポリペプチド鎖と、配列番号２１９のアミノ酸配列を有する第２のポリペプチド鎖とを含む。
いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号２２２のアミノ酸配列を有する第１のポリペプチド鎖と、配列番号２２１のアミノ酸配列を有する第２のポリペプチド鎖とを含む。
いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号１３６のアミノ酸配列からなる。
いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号１３７のアミノ酸配列からなる。
いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号１３８のアミノ酸配列からなる。
いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号１４２のアミノ酸配列からなる。
いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号１４４のアミノ酸配列からなる。
いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号１４５のアミノ酸配列からなる。
いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号２００のアミノ酸配列を有する第１のポリペプチド鎖と、配列番号１９９のアミノ酸配列を有する第２のポリペプチド鎖とからなる。
いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号２０２のアミノ酸配列を有する第１のポリペプチド鎖、および配列番号２０１のアミノ酸配列を有する第２のポリペプチド鎖からなる。
いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号２０４のアミノ酸配列を有する第１のポリペプチド鎖、および配列番号２０３のアミノ酸配列を有する第２のポリペプチド鎖からなる。
いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号２１５のアミノ酸配列を有する第１のポリペプチド鎖、および配列番号２１４のアミノ酸配列を有する第２のポリペプチド鎖からなる。
いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号２２０のアミノ酸配列を有する第１のポリペプチド鎖、および配列番号２１９のアミノ酸配列を有する第２のポリペプチド鎖からなる。
いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号２２２のアミノ酸配列を有する第１のポリペプチド鎖、および配列番号２２１のアミノ酸配列を有する第２のポリペプチド鎖からなる。
上記の実施形態については、切断産物の第１のポリペプチド鎖は、マスク型ＩＬ－１５サイトカインの第２のポリペプチド鎖から産生され、切断産物の第２のポリペプチド鎖は、マスク型ＩＬ－１５サイトカインの第３のポリペプチド鎖であることを理解されたい。
さらに、本明細書で提供されるものは、マスク型ＩＬ－１５サイトカインの切断産物であり、切断産物は、ＩＬ－１５Ｒに結合することが可能であり、切断産物は、
ａ）第１の半減期延長ドメインを含む、第１のポリペプチド鎖と、
ｂ）式５を含むポリペプチドを含む、第２のポリペプチド鎖とを含む、タンパク質ヘテロ二量体を含み、
ＨＬ２－Ｌ２－Ｃを含む、ポリペプチドを含み、
（５）
ＨＬ２は、第２の半減期延長ドメインであり、Ｌ２は、非切断可能なリンカーであり、Ｃは、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片であり、第１の半減期延長ドメインは、第２の半減期延長ドメインと会合している。また、本明細書で提供されるものは、マスク型ＩＬ－１５サイトカインの単一構造から取得されるか、または取得可能である切断産物の分布であり、切断産物の分布内の各切断産物は、（ｉ）ＩＬ－１５Ｒに結合することが可能であり、（ｉｉ）タンパク質ヘテロ二量体であって、
ａ）第１の半減期延長ドメインを含む、第１のポリペプチド鎖と、
ｂ）式５を含むポリペプチドを含む、第２のポリペプチド鎖とを含む、タンパク質ヘテロ二量体を含み、
ＨＬ２－Ｌ２－Ｃを含む、ポリペプチドを含み、
（５）
ＨＬ２は、第２の半減期延長ドメインであり、Ｌ２は、非切断可能なリンカーであり、Ｃは、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片であり、第１の半減期延長ドメインは、第２の半減期延長ドメインと会合している。
本明細書で提供されるものは、マスク型ＩＬ－１５サイトカインの切断産物であり、切断産物は、その同族受容体に結合することが可能であり、切断産物は、
第１のポリペプチド鎖であって、
ＨＬ１－ＳＤ－ＰＣＰを含み、
ＨＬ１が、本明細書に記載される第１の半減期延長ドメインであり、ＳＤが、本明細書に記載されるスペーサードメインであり、ＰＣＰが、本明細書に記載されるタンパク質分解的に切断可能なペプチドの一部である、第１のポリペプチド鎖と、第２のポリペプチド鎖であって、
ＨＬ２－Ｌ２－Ｃを含む、ポリペプチドを含み、
ＨＬ２が、本明細書に記載される第２の半減期延長ドメインであり、Ｌ２が、本明細書に記載される非切断可能なリンカーであり、Ｃが、本明細書に記載されるＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片であり、第１の半減期延長ドメインが、第２の半減期延長ドメインと会合している、第２のポリペプチド鎖とを含む、タンパク質ヘテロ二量体を含む。
例えば、そのような切断産物は、マスク型サイトカインに由来し得る。
Figure 2023520514000019
いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号１２５のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号１２５のアミノ酸配列からなる。
本明細書で提供されるものは、マスク型ＩＬ－１５サイトカインの切断産物であり、切断産物は、その同族受容体に結合することが可能であり、切断産物は、第１のポリペプチド鎖であって、
ＨＬ１－ＳＤ－ＰＣＰを含み、
ＨＬ１が、本明細書に記載される第１の半減期延長ドメインであり、ＳＤが、本明細書に記載されるスペーサードメインであり、ＰＣＰが、本明細書に記載されるタンパク質分解的に切断可能なペプチドの一部である、第１のポリペプチド鎖と、第２のポリペプチド鎖であって、
ＨＬ２－Ｌ２－Ｃを含む、ポリペプチドを含み、
ＨＬ２が、本明細書に記載される第２の半減期延長ドメインであり、Ｌ２が、本明細書に記載される非切断可能なリンカーであり、Ｃが、本明細書に記載されるＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片であり、第１の半減期延長ドメインが、第２の半減期延長ドメインと会合している、第２のポリペプチド鎖と、第３のポリペプチド鎖であって、
ＩＬ－１５Ｒαドメインを含む、第３のポリペプチド鎖とを含む。
例えば、そのような切断産物は、マスク型サイトカインに由来し得る。
Figure 2023520514000020
いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号１３９のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号１４０のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号１４１のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号１４３のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号１４６のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号１４７のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号２０７のアミノ酸配列を有する第１のポリペプチド鎖と、配列番号２０６のアミノ酸配列を有する第２のポリペプチド鎖と、配列番号２０５のアミノ酸配列を有する第３のポリペプチド鎖とを含む。
いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号２１０のアミノ酸配列を有する第１のポリペプチド鎖と、配列番号２０９のアミノ酸配列を有する第２のポリペプチド鎖と、配列番号２０８のアミノ酸配列を有する第３のポリペプチド鎖とを含む。
いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号２１３のアミノ酸配列を有する第１のポリペプチド鎖と、配列番号２１２のアミノ酸配列を有する第２のポリペプチド鎖と、配列番号２１１のアミノ酸配列を有する第３のポリペプチド鎖とを含む。
いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号２１８のアミノ酸配列を有する第１のポリペプチド鎖と、配列番号２１７のアミノ酸配列を有する第２のポリペプチド鎖と、配列番号２１６のアミノ酸配列を有する第３のポリペプチド鎖とを含む。
いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号２２５のアミノ酸配列を有する第１のポリペプチド鎖と、配列番号２２４のアミノ酸配列を有する第２のポリペプチド鎖と、配列番号２２３のアミノ酸配列を有する第３のポリペプチド鎖とを含む。
いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号２２８のアミノ酸配列を有する第１のポリペプチド鎖と、配列番号２２７のアミノ酸配列を有する第２のポリペプチド鎖と、配列番号２２６のアミノ酸配列を有する第３のポリペプチド鎖とを含む。
いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号１３９のアミノ酸配列からなる。
いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号１４０のアミノ酸配列からなる。
いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号１４１のアミノ酸配列からなる。
いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号１４３のアミノ酸配列からなる。
いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号１４６のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号１４７のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号２０７のアミノ酸配列を有する第１のポリペプチド鎖、配列番号２０６のアミノ酸配列を有する第２のポリペプチド鎖、および配列番号２０５のアミノ酸配列を有する第３のポリペプチド鎖からなる。
いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号２１０のアミノ酸配列を有する第１のポリペプチド鎖、配列番号２０９のアミノ酸配列を有する第２のポリペプチド鎖、および配列番号２０８のアミノ酸配列を有する第３のポリペプチド鎖からなる。
いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号２１３のアミノ酸配列を有する第１のポリペプチド鎖、配列番号２１２のアミノ酸配列を有する第２のポリペプチド鎖、および配列番号２１１のアミノ酸配列を有する第３のポリペプチド鎖からなる。
いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号２１８のアミノ酸配列を有する第１のポリペプチド鎖、配列番号２１７のアミノ酸配列を有する第２のポリペプチド鎖、および配列番号２１６のアミノ酸配列を有する第３のポリペプチド鎖からなる。
いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号２２５のアミノ酸配列を有する第１のポリペプチド鎖、配列番号２２４のアミノ酸配列を有する第２のポリペプチド鎖、および配列番号２２３のアミノ酸配列を有する第３のポリペプチド鎖からなる。
いくつかの実施形態では、切断産物は、配列番号２２８のアミノ酸配列を有する第１のポリペプチド鎖、配列番号２２７のアミノ酸配列を有する第２のポリペプチド鎖、および配列番号２２６のアミノ酸配列を有する第３のポリペプチド鎖からなる。
切断産物内で、マスキング部分、半減期延長ドメイン、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片、リンカー、スペーサードメイン、および第１の半減期延長ドメインと第２の半減期延長ドメインとの間の会合のタイプは、本明細書に記載されるもののうちのいずれか１つ、および本明細書に記載されるものの任意の組み合わせであり得る。
切断可能なペプチドの位置は、ＩＬ－１５サイトカインを含む、結果として生じる切断産物の構造を決定する。
「タンパク質分解的に切断可能なペプチドの一部」は、切断部位における切断が生じた後の元のタンパク質分解的に切断可能なペプチド配列の一部を指す。切断後に、例えば、１つまたは２つの末端アミノ酸の除去による、初期切断産物のさらなる修飾もまた、腫瘍細胞環境内のプロテアーゼのさらなる作用によって生じ得る。したがって、マスク型サイトカインの投与後に患者の腫瘍細胞環境に形成され得る切断産物の分布内の切断産物は、タンパク質分解的に切断可能なペプチドのいかなる部分も含有しない場合がある。
いくつかの実施形態では、「一部」は、元のタンパク質分解的に切断可能なペプチド配列の１つのアミノ酸、２つのアミノ酸、３つのアミノ酸、４つのアミノ酸、５つのアミノ酸、または６つのアミノ酸を指す。いくつかの実施形態では、「一部」は、元のタンパク質分解的に切断可能なペプチド配列の２つのアミノ酸を指す。いくつかの実施形態では、「一部」は、元のタンパク質分解的に切断可能なペプチド配列の３つのアミノ酸を指す。いくつかの実施形態では、「一部」は、元のタンパク質分解的に切断可能なペプチド配列の４つのアミノ酸を指す。
いくつかの実施形態では、タンパク質分解的に切断可能なペプチドの「一部」は、長さで３～６個のアミノ酸である。いくつかの実施形態では、タンパク質分解的に切断可能なペプチドの「一部」は、長さで３または４個のアミノ酸である。
本明細書に開示される切断可能なリンカーのための切断部位が、以下に開示される。
Figure 2023520514000021
純粋に一例として、上記の表では、＊は、切断可能なペプチド内の既知のまたは観察されたプロテアーゼ切断部位を示す。
したがって、本明細書に開示されるものは、本明細書に開示されるマスク型サイトカインのうちのいずれか１つの切断産物である。
３．結合アッセイ
サイトカインまたはその機能的断片が特異的である、サイトカインまたはその機能的断片と結合パートナー（例えば、サイトカイン受容体などの標的タンパク質）との間のなどの免疫学的結合相互作用の強度または親和性は、相互作用の解離定数（Ｋｄ）の観点から表されることができ、より小さいＫｄは、より大きい親和性を表す。ＩＬ－１５サイトカイン受容体（例えば、ＩＬ－１５Ｒ、またはＩＬ－１５Ｒα、ＩＬ－１５Ｒβ、ＩＬ－１５Ｒγ、もしくはそれらの組み合わせなどのその成分）へのＩＬ－１５サイトカインの結合は、Ｋｄの観点から表されることができる。いくつかの実施形態では、免疫学的結合相互作用は、マスク型サイトカイン（プロテアーゼの存在下または非存在下）と、サイトカイン受容体などの標的タンパク質との間のものである。ＩＬ－１５サイトカイン結合の文脈では、標的タンパク質は、ＩＬ－１５Ｒ（ＩＬ－１５Ｒα、ＩＬ－１５Ｒβ、およびＩＬ－１５Ｒγ鎖を含む）、ＩＬ－１５Ｒα鎖、ＩＬ－１５Ｒβ鎖、またはＩＬ－１５Ｒα／β二量体複合体であり得る。タンパク質の免疫学的結合特性は、当該技術分野で周知の方法を使用して定量化することができる。例えば、１つの方法は、サイトカイン受容体（例えば、ＩＬ－１５Ｒ）／サイトカイン（例えば、ＩＬ－１５）複合体形成および解離の速度を測定することを含み、これらの速度は、複合体パートナーの濃度、相互作用の親和性、および両方向の速度に等しく影響する幾何学的パラメータに依存する。「オンレート定数」（Ｋｏｎ）および「オフレート定数」（Ｋｏｆｆ）の両方は、濃度ならびに会合および解離の実際の速度の計算によって決定することができる。Ｋｏｆｆ／Ｋｏｎの比は、親和性に関連しないすべてのパラメータの削除を可能にし、解離定数Ｋｄと等しい。Ｄａｖｉｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎｕａｌ Ｒｅｖ Ｂｉｏｃｈｅｍ．５９：４３９－４７３，（１９９０）を参照されたい。
いくつかの態様では、本明細書に記載されるマスク型サイトカインは、マスキング部分を含むが切断可能なペプチドを含まない親サイトカインと比較して、プロテアーゼによる切断時に、ほぼ同じまたはより高い親和性を伴う標的タンパク質に結合する。標的タンパク質は、任意のサイトカイン受容体であり得る。いくつかの実施形態では、標的タンパク質は、ＩＬ－１５Ｒ（ＩＬ－１５Ｒα、ＩＬ－１５Ｒβ、およびＩＬ－１５Ｒγ鎖を含む）である。いくつかの実施形態では、標的タンパク質は、ＩＬ－１５Ｒαである。いくつかの実施形態では、標的タンパク質は、ＩＬ－１５Ｒβである。いくつかの実施形態では、標的タンパク質は、ＩＬ－１５Ｒα／β二量体複合体である。
いくつかの実施形態では、リンカー中に切断可能なペプチドを含まない本明細書に提供されるマスク型サイトカインは、標的タンパク質と≦１Ｍ、≦１５０ｎＭ、１００ｎＭ、≦５０ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、または≦０．００１ｎＭ（例えば、１０－８Ｍ以下、例えば、１０－８Ｍ～１０－１３Ｍ、例えば、１０～９Ｍ～１０～１３Ｍ）の解離定数（Ｋｄ）を有する。いくつかの実施形態では、リンカー中に切断可能なペプチドを含む、本明細書で提供されるマスク型サイトカインは、プロテアーゼによって切断可能である前の標的タンパク質と≦１Ｍ、≦１５０ｎＭ、≦１００ｎＭ、≦５０ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、または≦０．００１ｎＭ（例えば、１０－８Ｍ以下、例えば、１０－８Ｍ～１０－１３Ｍ、例えば、１０－９Ｍ～１０～１３Ｍ）の解離定数（Ｋｄ）を有する。いくつかの実施形態では、リンカー中に切断可能なペプチドを含む、本明細書で提供されるマスク型サイトカインは、プロテアーゼによる切断時の標的タンパク質と≦１Ｍ、≦１５０ｎＭ、１００ｎＭ、≦５０ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、または≦０．００１ｎＭ（例えば、１０－８Ｍ以下、例えば、１０－８Ｍ～１０－１３Ｍ、例えば、１０－９Ｍ～１０～１３Ｍ）の解離定数（Ｋｄ）を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるマスク型サイトカインのサイトカインまたはその機能的断片は、マスク型サイトカインのマスキング部分で≧５００Ｍ，≧２５０Ｍ，≧２００Ｍ，≧１５０Ｍ，≧１００Ｍ，≧５０Ｍ，≧１０Ｍ，≧１Ｍ，≧５００ｎＭ，≧２５０ｎＭ，≧１５０ｎＭ，≧１００ｎＭ，≧５０ ｎＭ，≧１０ｎＭ，≧１ｎＭ，≧０．１ｎＭ，≧０．０１ｎＭ、または≧０．００１ｎＭの解離定数（Ｋｄ）を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるマスク型サイトカインのサイトカインまたはその機能的断片は、約もしくは少なくとも約１７５Ｍ、約もしくは少なくとも約１５０Ｍ、約もしくは少なくとも約１２５Ｍ、約もしくは少なくとも約１００Ｍ、約もしくは少なくとも約７５Ｍ、約もしくは少なくとも約５０Ｍ、約もしくは少なくとも約２５Ｍ、約もしくは少なくとも約５Ｍ、約もしくは少なくとも約１Ｍ、約もしくは少なくとも約７５０ｎＭ、約もしくは少なくとも約５００ｎＭ、約もしくは少なくとも約２５０ｎＭ、約もしくは少なくとも約１５０ｎＭ、約もしくは少なくとも約１００ｎＭ、約もしくは少なくとも約７５ｎＭ、または約もしくは少なくとも約５０ｎＭなどの約２００Ｍ～約５０ｎＭである解離定数（Ｋｄ）を有する。結合親和性を評価するためのアッセイは、当該技術分野で周知である。
いくつかの態様では、所望の閉塞比を示すマスク型サイトカインが提供される。本明細書で使用される場合の「閉塞比」という用語は、（ａ）第１の条件セットの下でのパラメータの最大検出レベルと、（ｂ）第２の条件セットの下でのそのパラメータの最小検出値との比を指す。マスク型ＩＬ－１５ポリペプチドの文脈では、（ａ）マスク型ＩＬ－１５ポリペプチドの切断可能なペプチドを切断することが可能な少なくとも１つのプロテアーゼの存在下でマスク型ＩＬ－１５ポリペプチドに結合する標的タンパク質（例えば、ＩＬ－１５Ｒタンパク質）の最大検出レベルと、（ｂ）プロテアーゼの非存在下でマスク型ＩＬ－１５ポリペプチドに結合する標的タンパク質（例えば、ＩＬ－１５Ｒタンパク質）の最小検出値との比を指す。したがって、マスク型サイトカインの閉塞比は、切断前のマスク型サイトカインのＥＣ５０を切断後のマスク型サイトカインのＥＣ５０で割ることによって、計算されることができる。マスク型サイトカインの閉塞比はまた、プロテアーゼによる切断前のマスク型サイトカインの解離定数と、プロテアーゼによる切断後のマスク型サイトカインの解離定数との比として計算されることもできる。いくつかの実施形態では、マスク型サイトカインのより大きい閉塞比は、マスク型サイトカインによって結合された標的タンパク質が、マスク型サイトカインの切断可能なペプチドを切断することが可能なプロテアーゼの存在下で、プロテアーゼの非存在下よりも大きい程度に生じる（例えば、大部分が生じる）ことを示す。
いくつかの実施形態では、最適な閉塞比を伴うマスク型サイトカインが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、マスク型サイトカインの最適な閉塞比は、マスク型サイトカインが、本明細書に企図される方法または組成物に有用な望ましい特性を有することを示す。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるマスク型サイトカインは、約２対約１０，０００、例えば、約８０対約１００の最適な閉塞比を示す。本明細書で提供されるマスク型サイトカインのうちのいずれかのさらなる実施形態では、閉塞比は、約２対約７，５００、約２対約５，０００、約２対約２，５００、約２対約２，０００、約２対約１，０００、約２対約９００、約２対約８００、約２対約７００、約２対約６００、約２対約５００、約２対約４００、約２対約３００、約２対約２００、約２対約１００、約２対約５０、約２対約２５、約２対約１５、約２対約１０、約５対約１０、約５対約１５、約５対約２０、約１０対約１００、約２０対約１００、約３０対約１００、約４０対約１００、約５０対約１００、約６０対約１００、約７０対約１００、約８０対約１００、または約１００対約１，０００である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるマスク型サイトカインは、約２対約１，０００の最適な閉塞比を示す。プロテアーゼによる切断前および／または切断後の標的タンパク質へのマスク型ＩＬ－１５ポリペプチドの結合は、ＥＬＩＳＡによるものなどの当該技術分野で周知の技術を使用して決定されることができる。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるマスキング部分は、サイトカインまたはその機能的断片と標的タンパク質（例えば、サイトカイン受容体）との間の親和性よりも低い親和性で、本明細書に記載されるサイトカインまたはその機能的断片に結合する。ある特定の実施形態では、本明細書で提供されるマスキング部分は、≧５００Ｍ，≧２５０Ｍ，≧２００Ｍ，≧１５０Ｍ，≧１００Ｍ，≧５０Ｍ，≧１０Ｍ，≧１Ｍ，≧５００ｎＭ，≧２５０ｎＭ，≧１５０ｎＭ，≧１００ｎＭ，≧５０ｎＭ，≧１０ｎＭ，≧１ｎＭ，≧０．１ｎＭ，≧０．０１ｎＭ、または≧０．００１ｎＭの解離定数（Ｋｄ）で、本明細書に記載されるサイトカインまたはその機能的断片に結合する。
４．マスク型ＩＬ－１５サイトカイン産生
本明細書に記載されるマスク型サイトカインは、その例示的方法が記載される、当該技術分野で利用可能な技術を使用して調製される。
４．１ 抗体産生
マスク型ＩＬ－１５サイトカインのいくつかの実施形態は、抗体またはその断片を含む。以下の節は、本明細書で提供されるマスク型ＩＬ－１５サイトカインのいくつかの実施形態で使用され得る、抗体、ならびにその抗体断片、バリアント、および誘導体の産生についてさらなる詳細を提供する。いくつかの実施形態では、マスク型サイトカインは、ジスルフィド結合を通して会合しているマスク型ＩＬ－１５サイトカインの２つのコピーによって産生される二量体の形態である。
１．抗体断片
本発明は、いくつかの実施形態では、抗体断片を包含する。抗体断片は、Ｆｃドメイン、いくつかの断片の中でも、重鎖の一部、軽鎖の一部、Ｆａｂ、Ｆｖ、またはｓｃＦｖなどの任意の抗体断片であり得る。抗体断片は、酵素消化などの従来の手段によって、または組換え技術によって生成され得る。ある特定の状況では、抗体断片を全抗体ではなく本明明細書に記載のマスク型抗体断片に連結するという利点が存在する。ある特定の抗体断片の概説については、Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９－１３４を参照されたい。
抗体断片の産生のために様々な技術が開発されてきた。従来、これらの断片は、インタクトな抗体のタンパク質分解的消化を介して導出された（例えば、Ｍｏｒｉｍｏｔｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎｄ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ２４：１０７－１１７（１９９２）、およびＢｒｅｎｎａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２９：８１（１９８５）を参照されたい）。しかしながら、これらの断片は現在、組換え宿主細胞によって直接産生されることができる。Ｆａｂ、Ｆｖ、およびＳｃＦｖ抗体断片はすべて、Ｅ．ｃｏｌｉならびにＨＥＫ２９３およびＣＨＯ細胞などの他の細胞型で発現され、そこから分泌され、したがって、大量のこれらの断片の容易な産生を可能にすることができる。代替的に、Ｆａｂ－ＳＨ断片は、培養培地から直接回収され、Ｆ（ａｂ）２断片を形成するように化学的に結合されることができる（Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０：１６３－１６７（１９９２））。別のアプローチによると、Ｆ（ａｂ）２断片は、組換え宿主細胞培養物から直接単離されることができる。ＦｃＲＮ／サルベージ受容体結合エピトープ残基を含む、インビボ半減期の増加を伴うＦａｂおよびＦ（ａｂ）２断片は、米国特許 第５，８６９，０４６号に記載されている。マスク型サイトカインで使用するための抗体断片の産生のための他の技法が、当業者に明らかであろう。ある特定の実施形態では、マスク型抗体は、一本鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）を含む。ＷＯ９３／１６１８５、米国特許 第５，５７１，８９４号および第５，５８７，４５８号を参照されたい。ｓｃＦｖ融合タンパク質は、ｓｃＦｖのアミノまたはカルボキシ末端のいずれかにおいてエフェクタータンパク質の融合をもたらすように構築され得る。上記のＡｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ｅｄ．Ｂｏｒｒｅｂａｅｃｋを参照されたい。また、いくつかの実施形態では、ポリペプチドリンカーを介して連結された２つのｓｃＦｖを含むｂｉ－ｓｃＦｖが、マスク型サイトカインとともに使用されることができる。
本発明は、いくつかの実施形態では、線形抗体（例えば、米国特許第５，６４１，８７０号に記載されるような）、または適切なリンカーを介して連結された抗体の重鎖および軽鎖配列を含む一本鎖免疫グロブリンを含む。そのような線形抗体または免疫グロブリンは、単一特異性または二重特異性であり得る。そのような一本鎖免疫グロブリンは、二量体化され、それによって、元々四量体である抗体のものと類似する構造および活性を維持することができる。また、いくつかの実施形態では、抗体またはその断片は、単一の重鎖可変領域を有し、軽鎖の配列を有していない抗体であり得る。そのような抗体は、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）またはナノボディと呼ばれる。これらの抗体はまた、本発明による抗体の機能的断片の意味に包含される。抗体断片は、本明細書で提供される指導に従って、本明細書に記載されるマスク型サイトカインに連結されることができる。
２．ヒト化抗体
本発明は、いくつかの実施形態では、ヒト化抗体またはその抗体断片を包含する。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体は、任意の抗体断片を含む任意の抗体であり得る。非ヒト抗体をヒト化するための様々な方法が当該技術分野で既知である。例えば、ヒト化抗体は、非ヒトである源から導入される１つ以上のアミノ酸残基を有することができる。これらの非ヒトアミノ酸残基は、しばしば、典型的には「輸入」可変ドメインから取り込まれる「輸入」残基と称される。ヒト化は、ヒト抗体の対応する配列に超可変領域の配列を置換することによって、Ｗｉｎｔｅｒの方法（Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．（１９８６）Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２－５２５；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３－３２７、Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９：１５３４－１５３６）の後に本質的に行われ得る。したがって、そのような「ヒト化」抗体は、キメラ抗体であり（米国特許第４，８１６，５６７号）、より実質的に少ないインタクトなヒト可変ドメインが、非ヒト種からの対応する配列によって置換されている。実際には、ヒト化抗体は、典型的には、いくつかの超可変領域残基および場合によりいくつかのＦＲ残基が、げっ歯類抗体の類似部位からの残基によって置換されている、ヒト抗体である。ヒト化抗体は、本明細書で提供される指導に従って、本明細書に記載されるマスク型サイトカインに連結されることができる。
３．ヒト抗体
本発明のいくつかの実施形態のヒト抗体は、ヒト由来ファージディスプレイライブラリから選択されるＦｖクローン可変ドメイン配列を、既知のヒト定常ドメイン配列と組み合わせることによって、構築されることができる。代替的に、本発明のいくつかの実施形態のヒトモノクローナル抗体は、例えば、ヒトモノクローナル抗体を産生するために、例えば、マウス、ラット、ウシ（例えば、乳牛）、またはウサギ細胞を使用することによる、ハイブリドーマ法によって作製されることができる。いくつかの実施形態では、ヒト抗体およびヒトモノクローナル抗体は、任意の抗原に結合する抗体であり得る。いくつかの実施形態では、本発明のヒトモノクローナル抗体は、標的抗原でヒト免疫グロブリン座位を含む非ヒト動物を免疫化し、抗体を免疫動物または免疫動物に由来する細胞から単離することによって、作製されることができる。好適な非ヒト動物の例としては、ＨｕＭＡｂ Ｍｏｕｓｅ（登録商標）（Ｍｅｄａｒｅｘ，Ｉｎｃ．）、ＫＭ Ｍｏｕｓｅ（登録商標）、「ＴＣマウス」、およびＸｅｎｏｍｏｕｓｅ（商標）などのトランスジェニックまたはトランスクロモソミック動物が挙げられる。例えば、Ｌｏｎｂｅｒｇ，ｅｔ ａｌ．（１９９４）Ｎａｔｕｒｅ ３６８：８５６－８５９、Ｆｉｓｈｗｉｌｄ，Ｄ．ｅｔ ａｌ．（１９９６）Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １４：８４５－８５１、ＷＯ２００２／４３４７８、米国特許第 ５，９３９，５９８号、第６，０７５，１８１号、第６，１１４，５９８号、第６，１５０，５８４号、第６，１６２，９６３号、およびＴｏｍｉｚｕｋａ ｅｔ ａｌ．（２０００）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９７：７２２－７２７を参照されたい。
ヒトモノクローナル抗体の産生のためのヒト骨髄腫およびマウス－ヒトヘテロ骨髄腫細胞株は、例えば、Ｋｏｚｂｏｒ Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３３：３００１（１９８４）、Ｂｒｏｄｅｕｒ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐｐ．５１－６３（Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８７）、およびＢｏｅｒｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７：８６（１９９１）によって記載されている。ヒト抗体は、本明細書で提供される指導に従って、本明細書に記載されるマスク型サイトカインに連結されることができる。
４．二重特異性抗体
二重特異性抗体は、少なくとも２つの異なる抗原に対する結合特異性を有するモノクローナル抗体である。ある特定の実施形態では、二重特異性抗体は、ヒトまたはヒト化抗体である。いくつかの実施形態では、結合特異性のうちの１つは、第１の抗原に対するものであり、他方の結合特異性は、第２の抗原に対するものであり、これは、同じ標的タンパク質上の２つの異なるエピトープ、または２つの異なる標的タンパク質上の２つの異なるエピトープのいずれかであり得る。二重特異性抗体はまた、第１の抗原および／または第２の抗原を発現する細胞に細胞傷害性薬剤を局在化するために使用され得る。二重特異性抗体はまた、特定の細胞、例えば、がん細胞を死滅させるために、Ｔ細胞またはナチュラルキラー細胞などの細胞を動員するために使用され得る。二重特異性抗体は、完全長抗体または抗体断片（例えば、Ｆ（ａｂ’）２二重特異性抗体）として調製されることができる。二重特異性抗体は、本明細書で提供される指導に従って、本明細書に記載されるマスク型サイトカインに連結されることができる。
二重特異性抗体を作製するための方法は、当該技術分野で既知である。Ｍｉｌｓｔｅｉｎ ａｎｄ Ｃｕｅｌｌｏ，Ｎａｔｕｒｅ，３０５：５３７（１９８３）、１９９３年５月１３日に公開されたＷＯ９３／０８８２９、Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ．，１０：３６５５（１９９１）、Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ ａｎｄ Ｂｒｉｎｋｍａｎｎ，Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｔｏｄａｙ，２０（７）：８３８－８４７を参照されたい。二重特異性抗体の生成のさらなる詳細については、例えば、Ｓｕｒｅｓｈ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，１２１：２１０（１９８６）を参照されたい。二重特異性抗体には、架橋または「ヘテロ複合体」抗体が含まれる。例えば、ヘテロ複合体内の抗体の一方は、アビジンに結合され、他方はビオチンに結合され得る。ヘテロ複合体抗体は、任意の好都合な架橋方法を使用して作製され得る。好適な架橋剤は、いくつかの架橋技術とともに、当該技術分野で周知であり、米国特許 第４，６７６，９８０号に開示されている。
５．単一ドメイン抗体
いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、本明細書で提供される指導に従ってマスク型サイトカインに連結される。単一ドメイン抗体は、任意の抗体であり得る。単一ドメイン抗体は、抗体の重鎖可変ドメインのすべてもしくは一部、または軽鎖可変ドメインのすべてもしくは一部を含む、単一ポリペプチド鎖である。ある特定の実施形態では、単一ドメイン抗体は、ヒト単一ドメイン抗体である（Ｄｏｍａｎｔｉｓ，Ｉｎｃ．，Ｗａｌｔｈａｍ，Ｍａｓｓ．、例えば、米国特許第６，２４８，５１６Ｂ１を参照されたい）。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、抗体の重鎖可変ドメインのすべてまたは一部からなる。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、標的抗原によるラクダ科の免疫化によって得られたラクダ科由来抗体である。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、標的抗原によるサメの免疫化によって得られたサメ由来抗体である。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、ナノボディである（例えば、ＷＯ２００４０４１８６５Ａ２およびＵＳ２００７０２６９４２２Ａ１を参照されたい）。
６．抗体バリアント
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体またはその断片のアミノ酸配列修飾が企図される。例えば、抗体のＦｃＲｎ結合親和性および／またはｐＨ依存性ＦｃＲｎ結合親和性を改善することが望ましくあり得る。また、特定のアミノ酸修飾を導入することによって、抗体重鎖のヘテロ二量体化を促進することも望ましくあり得る。ヘテロ二量体化を促進するために行われ得る特定の修飾を含む、抗体鎖のヘテロ二量体化を促進するための方法は、Ｋｌｅｉｎ ｅｔ ａｌ．（２０１２），ＭＡｂｓ，４（６）：６５３－６６３によって記載されている。
抗体のアミノ酸配列バリアントは、抗体をコードするヌクレオチド配列に適切な変化を導入することによって、またはペプチド合成によって調製され得る。そのような修飾は、例えば、抗体のアミノ酸配列内の残基からの欠失、および／またはそれへの挿入、および／またはその置換を含む。欠失、挿入、および置換の任意の組み合わせを行い、最終構築物を得ることができるが、但し、最終構築物は、所望の特徴を保有していることを条件とする。アミノ酸改変は、配列が作製されるときに対象の抗体アミノ酸配列に導入され得る。
変異誘発のための好ましい位置である抗体のある特定の残基または領域の識別のための有用な方法は、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ ａｎｄ Ｗｅｌｌｓ（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４４：１０８１－１０８５により記載されるように、「アラニンスキャニング変異誘発」と呼ばれる。ここで、残基または標的残基の群が識別され（例えば、ａｒｇ、ａｓｐ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、およびｇｌｕなどの荷電残基）、中性または負に荷電したアミノ酸（例えば、アラニンまたはポリアラニン）によって置換されて、アミノ酸と抗原の相互作用に影響を及ぼす。次いで、置換に対する機能的感受性を示すそれらのアミノ酸位置は、置換部位に、または置換部位のために、さらなるまたは他のバリアントを導入することによって精製される。したがって、アミノ酸配列変異を導入するための部位は、予め決定されているが、変異自体の性質は、予め決定される必要はない。例えば、所与の部位での変異の性能を分析するために、ａｌａスキャニングまたはランダム変異誘発が標的コドンまたは領域において行われ、発現された免疫グロブリンが所望の活性についてスクリーニングされる。
アミノ酸配列挿入には、１つの残基から数百以上の残基を含有するポリペプチドの長さの範囲のアミノ末端融合および／またはカルボキシル末端融合を含み、ならびに単一または複数のアミノ酸残基の配列間挿入を含む。末端挿入の例としては、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体が挙げられる。抗体分子の他の挿入バリアントには、抗体の血清半減期を延長する、酵素またはポリペプチドに対する抗体のＮ末端またはＣ末端への融合が含まれる。
いくつかの実施形態では、マスク型サイトカインは、ヒンジ領域近くのプロテアーゼ切断を除去、低減、または別様に妨害するように修飾される。ＩｇＧの「ヒンジ領域」は、一般的に、Ｅ２１６を含み、ＫａｂａｔのようなＥＵインデックスに従ってヒトＩｇＧｌのＰ２３０で終端するものとして定義されるが、機能的には、鎖の可撓性部分は、Ｅ２１６～Ｇ２３７などの上部および下部ヒンジ領域と称される追加の残基を含むとみなされ得（Ｒｏｕｘ ｅｔ ａｌ．，１９９８ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １６１：４０８３）、下部ヒンジは、ＦｃｙＲ結合が一般的に起因したＦｃ領域の残基２３３～２３９と称されている。本明細書に記載されるマスク型サイトカインのうちのいずれかに対する修飾は、例えば、参照により本明細書に組み込まれるＵＳ ２０１５０１３９９８４Ａ１に記載される方法に従って、ならびに本明細書に記載される修飾のうちのいずれかを組み込むことによって、実施されることができる。
いくつかの実施形態では、薬物動態を改善するＦｃＲｎ変異としては、Ｍ４２８Ｌ，Ｔ２５０Ｑ／Ｍ４２８Ｌ，Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ，Ｐ２５７Ｉ／Ｎ４３４Ｈ，Ｄ３７６Ｖ／Ｎ４３４Ｈ，Ｐ２５７Ｉ／Ｑ３１１１，Ｎ４３４Ａ，Ｎ４３４Ｗ，Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ，Ｖ２５９Ｉ／Ｖ３０８Ｆ，Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ，Ｖ２５９Ｉ／Ｖ３０８Ｆ／Ｍ４２８Ｌ，Ｔ３０７Ｑ／Ｎ４３４Ａ，Ｔ３０７Ｑ／Ｎ４３４Ｓ，Ｔ３０７Ｑ／Ｅ３８０Ａ／Ｎ４３４Ａ，Ｖ３０８Ｐ／Ｎ４３４Ａ，Ｎ４３４Ｈ，Ｖ３０８Ｐが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、そのような変異は、低いｐＨでＦｃＲｎへの抗体結合を強化するが、中性ｐＨでは抗体親和性を変化させない。
ある特定の実施形態では、抗体またはその断片は、抗体がグリコシル化される程度を増加または減少させるように改変される。ポリペプチドのグリコシル化は、典型的には、Ｎ結合型またはＯ結合型のいずれかである。Ｎ結合型とは、アスパラギン残基の側鎖への炭水化物部分の付着を指す。Ｘがプロリン以外の任意のアミノ酸である、トリペプチド配列のアスパラギン－Ｘ－セリンおよびアスパラギン－Ｘ－スレオニンは、アスパラギン側鎖への炭水化物部分の酵素的付着のための認識配列である。したがって、ポリペプチド中のこれらのトリペプチド配列のいずれかの存在は、潜在的グリコシル化部位を作成する。Ｏ結合型グリコシル化とは、ヒドロキシアミノ酸、最も一般的にはセリンまたはスレオニンへの糖、すなわち、Ｎ－アセチルガラクトサミン、ガラクトース、またはキシロースのうちの１つの付着を指すが、５－ヒドロキシプロリンまたは５－ヒドロキシリシンも使用され得る。
マスク型サイトカインへのグリコシル化部位の付加または欠失は、（Ｎ結合型グリコシル化部位のための）上記に記載されるトリペプチド配列のうちの１つ以上が作成または除去されるように、アミノ酸配列を改変することによって、便宜的に達成される。改変はまた、（Ｏ結合型グリコシル化部位のための）元の抗体の配列への１つ以上のセリン残基またはスレオニン残基の付加、欠失、または置換によって行われ得る。
抗体またはその断片がＦｃ領域を含む場合、それに付着した炭水化物は、改変され得る。例えば、抗体のＦｃ領域に付着したフコースを欠く成熟炭水化物構造を有する抗体は、米国特許出願第ＵＳ２００３／０１５７１０８号（Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ．）に記載されている。ＵＳ２００４／００９３６２１（Ｋｙｏｗａ Ｈａｋｋｏ Ｋｏｇｙｏ Ｃｏ．，Ｌｔｄ）も参照されたい。抗体のＦｃ領域に付着した炭水化物中の二等分Ｎ－アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）を有する抗体は、ＷＯ ２００３／０１１８７８，Ｊｅａｎ－Ｍａｉｒｅｔ ｅｔ ａｌ．、および米国特許 第６，６０２，６８４号，Ｕｍａｎａ ｅｔ ａｌ．で参照されている。抗体のＦｃ領域に付着したオリゴ糖中に少なくとも１つのガラクトース残基を有する抗体は、ＷＯ １９９７／３００８７，Ｐａｔｅｌ ｅｔ ａｌ．に報告されている。また、そのＦｃ領域に付着した改変炭水化物を有する抗体に関するＷＯ１９９８／５８９６４（Ｒａｊｕ，Ｓ．）およびＷＯ１９９９／２２７６４（Ｒａｊｕ，Ｓ．）も参照されたい。修飾グリコシル化を有する抗原結合分子に関するＵＳ２００５／０１２３５４６（Ｕｍａｎａ ｅｔ ａｌ．）も参照されたい。
ある特定の実施形態では、グリコシル化バリアントは、Ｆｃ領域を含み、Ｆｃ領域に付着した炭水化物構造は、フコースを欠くか、または低減されたフコースを有する。そのようなバリアントは、改善されたＡＤＣＣ機能を有する。任意に、Ｆｃ領域は、その中に、ＡＤＣＣをさらに改善する１つ以上のアミノ酸置換、例えば、Ｆｃ領域の位置２９８、３３３、および／または３３４（残基のＥＵ番号付け）における置換をさらに含む。「脱フコシル化」抗体または「フコース欠損」抗体に関連する刊行物の例には、ＵＳ ２００３／０１５７１０８；ＷＯ ２０００／６１７３９；ＷＯ ２００１／２９２４６；ＵＳ ２００３／０１１５６１４；ＵＳ ２００２／０１６４３２８；ＵＳ ２００４／００９３６２１；ＵＳ ２００４／０１３２１４０；ＵＳ ２００４／０１１０７０４；ＵＳ ２００４／０１１０２８２；ＵＳ ２００４／０１０９８６５；ＷＯ ２００３／０８５１１９；ＷＯ ２００３／０８４５７０；ＷＯ ２００５／０３５５８６；ＷＯ ２００５／０３５７７８；Ｗ０２００５／０５３７４２；Ｏｋａｚａｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３６：１２３９－１２４９（２００４）、Ｙａｍａｎｅ－Ｏｈｎｕｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）が挙げられる。脱フコシル化抗体を産生する細胞株の例としては、タンパク質フコシル化を欠損したＬｅｅ １３ ＣＨＯ細胞（Ｒｉｐｋａ ｅｔ ａｌ．Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２４９：５３３－５４５（１９８６）、米国特許出願第ＵＳ２００３／０１５７１０８Ａ１号，Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ、およびＷＯ２００４／０５６３１２Ａ１，Ａｄａｍｓ ｅｔ ａｌ．、特に実施例１１）、およびアルファ－１，６－フコシルトランスフェラーゼ遺伝子、ＦＵＴ８、ノックアウトＣＨＯ細胞（Ｙａｍａｎｅ－Ｏｈｎｕｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４））などのノックアウト細胞株、ならびに３１，４－Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ（ＧｎＴ－ＩＩＩ）およびゴルジμ－マンノシダーゼＩＩ（ＭａｎＩＩ）を過剰発現する細胞が挙げられる。
本明細書の実施形態のうちのいずれかでは、マスク型サイトカインは、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を改善するように操作され得る。いくつかの実施形態では、マスク型サイトカインは、アルファ１，６－フコシルトランスフェラーゼ（Ｆｕｔ８）ノックアウトを有する細胞株で産生され得る。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、低減した内因性アルファ１，６－フコシル化活性を有するように修飾されている。哺乳動物宿主細胞内のフコシル化経路を修飾するための方法の例は、例えば、その内容が参照により本明細書に組み込まれる、Ｙａｍａｎｅ－Ｏｈｎｕｋｉ ａｎｄ Ｓａｔｏｈ，ＭＡｂｓ，１（３）：２３０－２３６（２００９）で見出され得る。ＦＵＴ８遺伝子の発現を部分的または完全に不活化するための方法および組成物の例は、例えば、米国公開 第２０１６０１９４６６５Ａ１号、ＷＯ２００６１３３１４８Ａ２に記載されており、その内容は参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、マスク型サイトカインは、ＣＨＯ細胞のＬｅｃｌ３バリアント（例えば、Ｓｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７７（３０）：２６７３３－４０（２００２）を参照されたい）、低減したＦＵＴ８活性を有するＹＢ２／０細胞株（例えば、Ｓｈｉｎｋａｗａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７８（５）：３４６６－７３（２００３）を参照されたい）で産生される。いくつかの実施形態では、アルファ１，６－フコシル化に関連する遺伝子に対する低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）が導入され得る（例えば、Ｍｏｒｉ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．８８（７）：９０１－９０８（２００４）、Ｉｍａｉ－Ｎｉｓｈｉｙａ ｅｔ ａｌ．，ＢＭＣ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．７：８４（２００７）、Ｏｍａｓａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｓｃｉ．Ｂｉｏｅｎｇ．，１０６（２）：１６８－１７３（２００８）を参照されたい）。いくつかのさらなる実施形態では、マスク型サイトカインは、３１，４－Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ（ＧｎＴ－ＩＩＩ）を過剰発現する細胞株で産生され得る。さらなる実施形態では、細胞株は、加えて、ゴルジμ－マンノシダーゼＩＩ（ＭａｎＩＩ）を過剰発現する。本明細書の実施形態のうちのいくつかでは、マスク型サイトカインは、ＡＤＣＣ活性を改善するＦｃ領域に少なくとも１つのアミノ酸置換を含み得る。
いくつかの実施形態では、マスク型サイトカインは、その血清半減期を改善するように改変される。抗体の血清半減期を増加させるために、例えば、米国特許第５，７３９，２７７号に記載されるように、連結された抗体（特に、抗体断片）にＦｃＲＮ／サルベージ受容体結合エピトープを組み込み得る。本明細書で使用される場合、「サルベージ受容体結合エピトープ」という用語は、ＩｇＧ分子のインビボ血清半減期を増加する要因となるＩｇＧ分子（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４）のＦｃ領域のエピトープを指す（ＵＳ２００３／０１９０３１１、米国特許第６，８２１，５０５号、米国特許第６，１６５，７４５号、米国特許第５，６２４，８２１号、米国特許第５，６４８，２６０号、米国特許第６，１６５，７４５号、米国特許第５，８３４，５９７号）。
バリアントの別のタイプは、アミノ酸置換バリアントである。これらのバリアントは、異なる残基により置き換えられた抗体分子中の少なくとも１つのアミノ酸残基を有する。置換変異誘発についての目的の部位としては、超可変領域が挙げられるが、ＦＲの改変もまた企図される。保存的置換は、「好ましい置換」の見出しで、表２に示されている。そのような置換により生物活性に望ましい変化が生じる場合、表２において「例示的置換」で表示されるか、またはアミノ酸のクラスに関して以下にさらに記載される、より大きな置換変化が導入され得、生成物がスクリーニングされ得る。
Figure 2023520514000022
抗体の生物学的特性における置換修飾は、（ａ）例えば、シートまたはヘリカル立体構造としての置換領域中のポリペプチド主鎖の構造、（ｂ）標的部位における分子の荷電もしくは疎水性、または（ｃ）側鎖の体積の維持に対する効果が有意に異なる置換を選択することにより実現される。アミノ酸は、それらの側鎖の特性の類似性に従ってグループ化され得る（Ａ．Ｌ．Ｌｅｈｎｉｎｇｅｒ，ｉｎ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，ｓｅｃｏｎｄ ｅｄ．，ｐｐ．７３－７５，Ｗｏｒｔｈ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９７５））：
（１）非極性：Ａｌａ（Ａ）、Ｖａｌ（Ｖ）、Ｌｅｕ（Ｌ）、Ｉｌｅ（Ｉ）、Ｐｒｏ（Ｐ）、Ｐｈｅ（Ｆ）、Ｔｒｐ（Ｗ）、Ｍｅｔ（Ｍ）
（２）非荷電極性：Ｇｌｙ（Ｇ）、Ｓｅｒ（Ｓ）、Ｔｈｒ（Ｔ）、Ｃｙｓ（Ｃ）、Ｔｙｒ（Ｙ）、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｇｉｎ（Ｑ）
（３）酸性：Ａｓｐ（Ｄ）、Ｇｌｕ（Ｅ）
（４）塩基性：Ｌｙｓ（Ｋ）、Ａｒｇ（Ｒ）、Ｈｉｓ（Ｈ）
代替として、天然に存在する残基は、以下の一般的な側鎖の特性に基づいてグループに分けられ得る：
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、ｈｅ、
（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｉｎ、
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ、
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、
（５）鎖の方向性に影響を与える残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。
非保存的置換は、これらのクラスのうちの１つのメンバーを別のクラスのものに交換することを伴う。そのような置換残基はまた、保存的置換部位、または残りの（非保存的）部位に導入され得る。
別のタイプの置換バリアントは、天然に存在するアミノ酸残基の天然に存在しないアミノ酸残基への置換を伴う。天然に存在しないアミノ酸残基は、例えば、ｔＲＮＡ再コードを通して、または例えば、参照により本明細書に組み込まれるＷＯ２０１６１５４６７５Ａ１に記載される方法のうちのいずれかを通して、組み込まれることができる。
置換バリアントの１つのタイプは、親抗体（例えば、ヒト化抗体またはヒト抗体）の１つ以上の超可変領域残基を置換することを伴う。概して、さらなる開発のために選択された結果として生じるバリアントは、それらが生成される親抗体に対して、修飾された（例えば、改善された）生物学的特性を有する。そのような置換バリアントを生成するための便宜的な方法は、ファージディスプレイ、酵母ディスプレイ、または哺乳動物ディスプレイを使用する親和性成熟を伴う。簡潔には、いくつかの超可変領域部位（例えば、６～７つの部位）が変異され、各部位ですべての可能なアミノ酸置換を生成する。このようにして生成された抗体は、各粒子内にパッケージングされたファージコートタンパク質（例えば、Ｍ１３の遺伝子ＩＩＩ生成物）の少なくとも一部への融合として、繊維状ファージ粒子からディスプレイされる。次いで、ファージディスプレイバリアントが、その生物学的活性（例えば、結合親和性）についてスクリーニングされる。修飾のための超可変領域部位候補を識別するために、スキャニング変異誘発（例えば、アラニンスキャニング）を実施し、抗原結合に有意に寄与する超可変領域残基を識別することができる。代替的に、または加えて、抗体と抗原との間の接触点を識別するために、抗原－抗体複合体の結晶構造を分析することが有益であり得る。そのような接触残基および隣接残基は、本明細書に詳述されるものを含む、当該技術分野で既知の技術による置換の候補である。そのようなバリアントが生成されると、バリアントのパネルは、本明細書に記載されるものを含む、当該技術分野で既知の技術を使用したスクリーニングを受け、１つ以上の関連アッセイにおいて優れた特性を有する抗体は、さらなる開発のために選択され得る。
マスク型抗体のアミノ酸配列バリアントをコードする核酸分子は、当該技術分野で既知の様々な方法によって調製される。これらの方法には、天然源からの単離（天然に存在するアミノ酸配列バリアントの場合）、または例えば、抗体の以前に調製されたバリアントもしくは非バリアントバージョンのオリゴヌクレオチド媒介性（もしくは部位指向型）変異誘発、ＰＣＲ変異誘発、およびカセット変異誘発による調製が含まれるが、これらに限定されない。
本発明の抗体のＦｃ領域に１つ以上のアミノ酸修飾を導入し、それによって、Ｆｃ領域バリアントを生成することが望ましくあり得る。Ｆｃ領域バリアントは、ヒンジシステインのアミノ酸位置を含む１つ以上のアミノ酸位置にアミノ酸修飾（例えば、置換）を含む、ヒトＦｃ領域配列（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４ Ｆｃ領域）を含み得る。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるマスク型サイトカインは、エフェクター機能が強化されたＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４アイソタイプを有する、抗体またはその断片を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるマスク型サイトカインは、エフェクター機能が強化されたＩｇＧ１アイソタイプを有する、抗体またはその断片を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるマスク型サイトカインは、エフェクター機能が強化されたＩｇＧ１アイソタイプを有する。いくつかの実施形態では、マスク型サイトカインは、脱フコシル化される。いくつかの実施形態では、マスク型サイトカインは、増加したレベルのマンノース部分を含む。いくつかの実施形態では、マスク型サイトカインは、増加したレベルの二等分グリカン部分を有する。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ１は、アミノ酸変異を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるマスク型サイトカインは、ＩｇＧ１アイソタイプ（例えば、ヒトＩｇＧ１アイソタイプ）を有する抗体を含む。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ１は、エフェクター機能を強化する１つ以上のアミノ酸置換を含む。一実施形態では、ＩｇＧ１は、アミノ酸置換Ｓ２９８Ａ、Ｅ３３３Ａ、およびＫ３３４Ａを含み、アミノ酸残基は、ＫａｂａｔのようなＥＵインデックスに従って番号付けされる。一実施形態では、ＩｇＧ１は、アミノ酸置換Ｓ２３９ＤおよびＩ３３２Ｅを含み、アミノ酸残基は、ＫａｂａｔのようなＥＵインデックスに従って番号付けされる。一実施形態では、ＩｇＧ１は、アミノ酸置換Ｓ２３９Ｄ、Ａ３３０Ｌ、およびＩ３３２Ｅを含み、アミノ酸残基は、ＫａｂａｔのようなＥＵインデックスに従って番号付けされる。一実施形態では、ＩｇＧ１は、アミノ酸置換Ｐ２４７ＩおよびＡ３３９ＤまたはＡ３３９Ｑを含み、アミノ酸残基は、ＫａｂａｔのようなＥＵインデックスに従って番号付けされる。一実施形態では、ＩｇＧ１は、アミノ酸置換Ｄ２８０Ｈ、Ｓ２９８Ｄの有無を問わないＫ２９０Ｓ、またはＳ２９８Ｖを含み、アミノ酸残基は、ＫａｂａｔのようなＥＵインデックスに従って番号付けされる。一実施形態では、ＩｇＧ１は、アミノ酸置換Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、およびＹ３００Ｌを含み、アミノ酸残基は、ＫａｂａｔのようなＥＵインデックスに従って番号付けされる。一実施形態では、ＩｇＧ１は、アミノ酸置換Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００Ｌ、およびＰ３９６Ｌを含み、アミノ酸残基は、ＫａｂａｔのようなＥＵインデックスに従って番号付けされる。一実施形態では、ＩｇＧ１は、アミノ酸置換Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００Ｌ、Ｖ３０５Ｉ、およびＰ３９６Ｌを含み、アミノ酸残基は、ＫａｂａｔのようなＥＵインデックスに従って番号付けされる。一実施形態では、ＩｇＧ１は、アミノ酸置換Ｇ２３６Ａ、Ｓ２３９Ｄ、およびＩ３３２Ｅを含み、アミノ酸残基は、ＫａｂａｔのようなＥＵインデックスに従って番号付けされる。一実施形態では、ＩｇＧ１は、アミノ酸置換Ｋ３２６ＡおよびＥ３３３Ａを含み、アミノ酸残基は、ＫａｂａｔのようなＥＵインデックスに従って番号付けされる。一実施形態では、ＩｇＧ１は、アミノ酸置換Ｋ３２６ＷおよびＥ３３３Ｓを含み、アミノ酸残基は、ＫａｂａｔのようなＥＵインデックスに従って番号付けされる。一実施形態では、ＩｇＧ１は、Ｋ３２６Ｅの有無を問わず、アミノ酸置換Ｋ２９０Ｅ、Ｓ２９８Ｇ、Ｔ２９９Ａを含み、アミノ酸残基は、ＫａｂａｔのようなＥＵインデックスに従って番号付けされる。一実施形態では、ＩｇＧ１は、Ｋ３２６Ｅの有無を問わず、アミノ酸置換Ｋ２９０Ｎ、Ｓ２９８Ｇ、Ｔ２９９Ａを含み、アミノ酸残基は、ＫａｂａｔのようなＥＵインデックスに従って番号付けされる。一実施形態では、ＩｇＧ１は、アミノ酸置換Ｋ３３４Ｖを含み、アミノ酸残基は、ＫａｂａｔのようなＥＵインデックスに従って番号付けされる。一実施形態では、ＩｇＧ１は、アミノ酸置換Ｌ２３５Ｓ、Ｓ２３９Ｄ、およびＫ３３４Ｖを含み、アミノ酸残基は、ＫａｂａｔのようなＥＵインデックスに従って番号付けされる。一実施形態では、ＩｇＧ１は、アミノ酸置換Ｋ３３４ＶおよびＱ３３１Ｍ、Ｓ２３９Ｄ、Ｆ２４３Ｖ、Ｅ２９４Ｌ、またはＳ２９８Ｔを含み、アミノ酸残基は、ＫａｂａｔのようなＥＵインデックスに従って番号付けされる。一実施形態では、ＩｇＧ１は、アミノ酸置換Ｅ２３３Ｌ、Ｑ３１１Ｍ、およびＫ３３４Ｖを含み、アミノ酸残基は、ＫａｂａｔのようなＥＵインデックスに従って番号付けされる。一実施形態では、ＩｇＧ１は、アミノ酸置換Ｌ２３４Ｉ、Ｑ３１１Ｍ、およびＫ３３４Ｖを含み、アミノ酸残基は、ＫａｂａｔのようなＥＵインデックスに従って番号付けされる。一実施形態では、ＩｇＧ１は、アミノ酸置換Ｋ３３４ＶおよびＳ２９８Ｔ、Ａ３３０Ｍ、またはＡ３３０Ｆを含み、アミノ酸残基は、ＫａｂａｔのようなＥＵインデックスに従って番号付けされる。一実施形態では、ＩｇＧ１は、アミノ酸置換Ｋ３３４Ｖ、Ｑ３１１Ｍ、およびＡ３３０ＭまたはＡ３３０Ｆのいずれかを含み、アミノ酸残基は、ＫａｂａｔのようなＥＵインデックスに従って番号付けされる。一実施形態では、ＩｇＧ１は、アミノ酸置換Ｋ３３４Ｖ、Ｓ２９８Ｔ、およびＡ３３０ＭまたはＡ３３０Ｆのいずれかを含み、アミノ酸残基は、ＫａｂａｔのようなＥＵインデックスに従って番号付けされる。一実施形態では、ＩｇＧ１は、アミノ酸置換Ｋ３３４Ｖ、Ｓ２３９Ｄ、およびＡ３３０ＭまたはＳ２９８Ｔのいずれかを含み、アミノ酸残基は、ＫａｂａｔのようなＥＵインデックスに従って番号付けされる。一実施形態では、ＩｇＧ１は、アミノ酸置換Ｌ２３４Ｙ、Ｙ２９６Ｗ、およびＫ２９０Ｙ、Ｆ２４３Ｖ、またはＥ２９４Ｌを含み、アミノ酸残基は、ＫａｂａｔのようなＥＵインデックスに従って番号付けされる。一実施形態では、ＩｇＧ１は、アミノ酸置換Ｙ２９６ＷおよびＬ２３４ＹまたはＫ２９０Ｙのいずれかを含み、アミノ酸残基は、ＫａｂａｔのようなＥＵインデックスに従って番号付けされる。一実施形態では、ＩｇＧ１は、アミノ酸置換Ｓ２３９Ｄ、Ａ３３０Ｓ、およびＩ３３２Ｅを含み、アミノ酸残基は、ＫａｂａｔのようなＥＵインデックスに従って番号付けされる。
いくつかの実施形態では、ＩｇＧ１は、エフェクター機能を減少させるか、または阻害する、１つ以上のアミノ酸置換を含む。一実施形態では、ＩｇＧ１は、アミノ酸置換Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｇ、またはＮ２９７Ｑを含み、アミノ酸残基は、ＫａｂａｔのようなＥＵインデックスに従って番号付けされる。一実施形態では、ＩｇＧ１は、アミノ酸置換Ｌ２３４ＡまたはＬ２３５Ａを含み、アミノ酸残基は、ＫａｂａｔのようなＥＵインデックスに従って番号付けされる。一実施形態では、ＩｇＧ１は、アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、Ｃ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ、およびＰ２３８Ｓを含み、アミノ酸残基は、ＫａｂａｔのようなＥＵインデックスに従って番号付けされる。一実施形態では、ＩｇＧ１は、アミノ酸置換Ｃ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、およびＬ２３５Ａを含み、アミノ酸残基は、ＫａｂａｔのようなＥＵインデックスに従って番号付けされる。一実施形態では、ＩｇＧ１は、アミノ酸置換Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、およびＰ３３１Ｓを含み、アミノ酸残基は、ＫａｂａｔのようなＥＵインデックスに従って番号付けされる。一実施形態では、ＩｇＧ１は、アミノ酸置換Ｓ２６７ＥおよびＬ３２８Ｆを含み、アミノ酸残基は、ＫａｂａｔのようなＥＵインデックスに従って番号付けされる。
この説明および当該技術分野の教示によれば、いくつかの実施形態では、マスク型サイトカインの抗体またはその断片は、例えば、Ｆｃ領域内に、野生型の対応する抗体と比較して、１つ以上の改変を含み得ることが企図される。例えば、例えば、ＷＯ９９／５１６４２に記載されるように、改変された（すなわち、改善されたか、または減少したかのいずれかである）Ｃ１ｑ結合および／または補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）をもたらすであろう、特定の改変がＦｃ領域に行われ得ることが考えられる。また、Ｆｃ領域バリアントの他の例に関して、Ｄｕｎｃａｎ ＆ Ｗｉｎｔｅｒ Ｎａｔｕｒｅ ３２２：７３８－４０（１９８８）、米国特許 第５，６４８，２６０号、米国特許 第５，６２４，８２１号、およびＷＯ９４／２９３５１も参照されたい。ＷＯ００／４２０７２（Ｐｒｅｓｔａ）およびＷＯ２００４／０５６３１２（Ｌｏｗｍａｎ）は、ＦｃＲへの結合が改善されたか、または減少した抗体バリアントを説明する。これらの特許刊行物の内容は、参照により本明細書に具体的に組み込まれる。また、Ｓｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．９（２）：６５９１－６６０４（２００１）も参照されたい。増加した半減期と、母体のＩｇＧの胎児への移入の要因となる新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への改善された結合とを有する抗体（Ｇｕｙｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１７：５８７（１９７６）ａｎｄ Ｋｉｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：２４９（１９９４））は、ＵＳ２００５／００１４９３４Ａ１（Ｈｉｎｔｏｎ ｅｔ ａｌ．）に記載されている。これらの抗体は、ＦｃＲｎへのＦｃ領域の結合を改善する、その中に１つ以上の置換を有するＦｃ領域を含む。改変Ｆｃ領域アミノ酸配列を有し、Ｃ１ｑ結合能が増加または減少したポリペプチドバリアントは、米国特許 第６，１９４，５５１Ｂ１号、ＷＯ９９／５１６４２に記載されている。これらの特許刊行物の内容は、参照により本明細書に具体的に組み込まれる。また、Ｉｄｕｓｏｇｉｅ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：４１７８－４１８４（２０００）も参照されたい。
４．２ マスク型ＩＬ－１５サイトカイン・薬剤複合体
本発明はまた、１つ以上の薬剤に複合体化された本明細書に開示される任意のＩＬ－１５マスク型サイトカインであり得る、本明細書で提供されるマスク型ＩＬ－１５サイトカインを含む、マスク型ＩＬ－１５サイトカイン－薬物複合体（ＭＣＤＣ）も提供する。いくつかの実施形態では、１つ以上の薬剤は、化学療法剤もしくは薬剤、成長阻害剤、毒素（例えば、タンパク質毒素、細菌、真菌、植物、もしくは動物起源の酵素的に活性な毒素、またはその断片）、または放射性同位元素を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の薬剤は、免疫刺激剤である。
いくつかの実施形態では、マスク型ＩＬ－１５サイトカインに複合体化された１つ以上の薬物には、メイタンシノイド（米国特許第５，２０８，０２０号、第５，４１６，０６４号、および欧州特許ＥＰ０４２５２３５Ｂ１を参照されたい）、モノメチルオーリスタチン薬物部分ＤＥおよびＤＦ（ＭＭＡＥおよびＭＭＡＦ）などのオーリスタチン（米国特許第５，６３５，４８３号および第５，７８０，５８８号、ならびに第７，４９８，２９８号を参照されたい）、ドラスタチン、カリチアマイシンまたはその誘導体（米国特許第５，７１２，３７４号、第５，７１４，５８６号、第５，７３９，１１６号、第５，７６７，２８５号、第５，７７０，７０１号、第５，７７０，７１０号、第５，７７３，００１号、および第５，８７７，２９６号、Ｈｉｎｍａｎ ｅｔ ａｋ，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５３：３３３６－３３４２（１９９３）、ならびにＬｏｄｅ ｅｔ ａｋ，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５８：２９２５－２９２８（１９９８）を参照されたい）、ダウノマイシンまたはドキソルビシンなどのアントラサイクリン（Ｋｒａｔｚ ｅｔ ａｋ，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１３：４７７－５２３（２００６）、Ｊｅｆｆｒｅｙ ｅｔ ａｋ，Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ ＆ Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔｅｒｓ １６：３５８－３６２（２００６）、Ｔｏｒｇｏｖ ｅｔ ａｋ，Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．１６：７１７－７２１（２００５）、Ｎａｇｙ ｅｔ ａｋ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９７：８２９－８３４（２０００）、Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋ ｅｔ ａｋ，Ｂｉｏｏｒｇ．＆ Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔｅｒｓ １２：１５２９－１５３２（２００２）、Ｋｉｎｇ ｅｔ ａｋ，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４５：４３３６－４３４３（２００２）、および米国特許第６，６３０，５７９号を参照されたい）、メトトレキサート、ビンデシン、ドセタキセル、パクリタキセル、ラロタキセル、テセタキセル、およびオルタタキセルなどのタキサン、トリコテセン、ならびにＣＣ１０６５が含まれるが、これらに限定されない。
別の実施形態では、マスク型ＩＬ－１５サイトカインに複合体化された１つ以上の薬物には、チューブリン重合の阻害剤（例えば、メイタンシノイドおよびオーリスタチン）、ＤＮＡ損傷剤（例えば、ピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）二量体、カリチアミシン、デュオカルマイシン、およびインド－リノベンゾジアゼピン二量体）、ならびにＤＮＡ合成阻害剤（例えば、エキサテカン誘導体Ｄｘｄ）が含まれるが、これらに限定されない。
別の実施形態では、マスク型ＩＬ－１５サイトカイン－薬物複合体は、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合活性断片、エキソトキシンＡ鎖（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ由来）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデクシンＡ鎖、アルファ－サルシン、Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ ｆｏｒｄｉｉタンパク質、ジアンチン（ｄｉａｎｔｈｉｎ）タンパク質、Ｐｈｙｔｏｌａｃａ ａｍｅｒｉｃａｎａタンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ、およびＰＡＰ－Ｓ）、ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａ阻害剤、クルシン、クロチン、ｓａｐａｏｎａｒｉａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ阻害剤、ジェロニン、ミトゲリン、レストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシン、およびトリコテセンを含むが、これらに限定されない、酵素的に活性な毒素またはその断片に複合体化された本明細書に記載されるマスク型ＩＬ－１５サイトカインをむ。
別の実施形態では、マスク型ＩＬ－１５サイトカイン－薬物複合体は、放射性原子に複合体化された本明細書に記載されるマスク型ＩＬ－１５サイトカインを含み、放射性複合体を形成する。様々な放射性同位体が、放射性複合体の産生に利用可能である。例としては、Ａｔ２１１、１１３１、１１２５、Ｙ９０、Ｒｅｌ８６、Ｒｅｌ８８、Ｓｍｌ５３、Ｂ１２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２、およびＬｕの放射性同位元素が挙げられる。放射性複合体が検出に使用されるとき、これは、例えば、ｔｃ９９ｍもしくは１１２３などのシンチグラフィー研究検査用の放射性原子、または再びヨウ素－１２３、ヨウ素－１３１、インジウム－１１１、フッ素－１９、炭素－１３、窒素－１５、酸素－１７、ガドリニウム、マンガン、もしくは鉄などの核磁気共鳴（ＮＭＲ）画像法（磁気共鳴画像法、ＭＲＩとしても知られる）用のスピン標識を含み得る。
いくつかの実施形態では、マスク型ＩＬ－１５サイトカイン・薬剤複合体は、１つ以上の免疫刺激剤に複合体化された本明細書に記載されるマスク型ＩＬ－１５サイトカインを含む。いくつかの実施形態では、免疫刺激剤は、インターフェロン遺伝子（ＳＴＩＮＧ）アゴニストまたはｔｏｌｌ様受容体（ＴＥＲ）アゴニストの刺激剤である。
ＳＴＩＮＧアゴニストは、ＳＴＩＮＧの任意のアゴニストであり得る。いくつかの実施形態では、ＳＴＩＮＧアゴニストは、環状ジヌクレオチド（ＣＤＮ）である。ＣＤＮは、任意のＣＤＮまたはその誘導体もしくはバリアントであり得る。いくつかの実施形態では、ＳＴＩＮＧアゴニストは、ｃＧＡＭＰ、ｃ－ｄｉ－ＡＭＰ、ｃ－ｄｉ－ＧＭＰ、ｃＡＩＭＰ、およびｃ－ｄｉ－ＩＭＰからなる群から選択されるＣＤＮである。いくつかの実施形態では、ＳＴＩＮＧアゴニストは、ｃＧＡＭＰ、ｃ－ｄｉ－ＡＭＰ、ｃ－ｄｉ－ＧＭＰ、ｃＡＩＭＰ、およびｃ－ｄｉ－ＩＭＰからなる群から選択されるＣＤＮの誘導体またはバリアントである。いくつかの実施形態では、ＳＴＩＮＧアゴニストは、４－（２－クロロ－６－フルオロベンジル）－Ｎ－（フラン－２－イルメチル）－３－オキソ－３，４－ジヒドロ－２Ｈ－ベンゾ［ｂ］［１，４］チアジン－６－カルボキサミド、またはその誘導体もしくはバリアントである。例えば、Ｓａｌｉ ｅｔ ａｌ．（２０１５）ＰｌｏＳ Ｐａｔｈｏｇ．，１１（１２）：ｅ！００５３２４を参照されたい。
ＴＬＲアゴニストは、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、またはＴＬＲ１０などの任意のＴＬＲのアゴニストであり得る。いくつかの実施形態では、ＴＬＲアゴニストは、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ４、またはＴＬＲ５などの細胞表面上で発現されるＴＬＲのアゴニストである。いくつかの実施形態では、ＴＬＲアゴニストは、ＴＬＲ３、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、またはＴＬＲ１０などの細胞内で発現されるＴＬＲのアゴニストである。
マスク型ＩＬ－１５サイトカインおよび細胞傷害性薬剤の複合体は、Ｎ－スクシンイミジル－３－（２－ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、スクシンイミジル－４－（Ｎ－マレイミドメチル）シクロヘキサン－１－カルボキシレート（ＳＭＣＣ）、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステルの二官能性誘導体（ジメチルアジピミジン酸塩ＨＣｌなど）、活性エステル（スベリン酸ジスクシンイミジルなど）、アルデヒド（グルタルアルデヒドなど）、ビス－アジド化合物（ビス（ｐ－アジドベンゾイル）ヘキサンジアミンなど）、ビス－ジアゾニウム誘導体（ビス－（ｐ－ジアゾニウムベンゾイル）－エチレンジアミンなど）、ジイソシアネート（トルエン２，６－ジイソシアネートなど）、およびビス－活性フッ素化合物（１，５－ジフルオロ－２，４－ジニトロベンゼンなど）などの様々な二官能性タンパク質結合剤を使用して作製され得る。例えば、リシンイムノトキシンは、Ｖｉｔｅｔｔａ ｅｔ ａｈ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３８：１０９８（１９８７）に記載されるように調製されることができる。炭素－１４－標識１－イソチオシアネートベンジル－３－メチルジエチレントリアミンペンタ酢酸（ＭＸ－ＤＴＰＡ）は、抗体への放射性ヌクレオチドの複合体化のための例示的キレート剤である。Ｗ０９４／１１０２６を参照されたい。リンカーは、細胞における細胞傷害性薬物の放出を促進する「切断可能なリンカー」であり得る。例えば、酸不安定リンカー、ペプチダーゼ感受性リンカー、光不安定リンカー、ジメチルリンカー、またはジスルフィド含有リンカー（Ｃｈａｒｉ ｅｔ ａｈ，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５２：１２７－１３１（１９９２）、米国特許第５，２０８，０２０号）が、使用され得る。
本明細書のＭＣＤＣは、ＢＭＰＳ、ＥＭＣＳ、ＧＭＢＳ、ＨＢＶＳ、ＬＣ－ＳＭＣＣ、
ＭＢＳ、ＭＰＢＨ、ＳＢＡＰ、ＳＩＡ、ＳＩＡＢ、ＳＭＣＣ、ＳＭＰＢ、ＳＭＰＨ、スルホ－ＥＭＣＳ、スルホ－ＧＭＢＳ、スルホ－ＫＭＵＳ、スルホ－ＭＢＳ、スルホ－ＳＩＡＢ、スルホ－ＳＭＣＣ、およびスルホ－ＳＭＰＢ、ならびにＳＶＳＢ（（例えば、Ｐｉｅｒｃｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ．，Ｕ．Ｓ．Ａ）から市販されているスクシンイミジル－（４－ビニルスルホン安息香酸））を含むが、これらに限定されない、架橋試薬を用いて調製されるそのような複合体を明示的に企図するが、これらに限定されない。
４．３ ベクター、宿主細胞、および組換え法
本発明のＩＬ－１５マスク型サイトカインの組換え産生については、それをコードする１つ以上の核酸は、さらなるクローニング（ＤＮＡの増幅）のため、
または発現のために、単離され、複製可能なベクターに挿入される。その成分を含む、マスク型ＩＬ－１５サイトカインをコードするＤＮＡは、従来の手順を使用して容易に単離および配列決定される。多くのベクターが利用可能である。ベクターの選択は、使用される宿主細胞に部分的に依存する。概して、宿主細胞は、原核細胞または真核細胞（概して哺乳動物）起源のいずれかである。適用可能であるときに、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、およびＩｇＥ定常領域を含む、抗体またはその断片の任意のアイソタイプの定常領域が、この目的で使用され得、そのような定常領域は、任意のヒトまたは動物種から取得され得ることを理解されたい。いくつかの実施形態では、１つのベクターが、ＩＬ－１５マスク型サイトカインをコードするために使用される。いくつかの実施形態では、１つを超えるベクターが、マスク型ＩＬ－１５サイトカインをコードするために使用される。
１．原核宿主細胞を使用したマスク型ＩＬ－１５サイトカインの生成
ａ．ベクター構築
本発明のマスク型サイトカインのポリペプチド成分をコードするポリヌクレオチド配列は、標準的な組換え技法を使用して取得されることができる。抗体またはその抗体断片の所望のポリヌクレオチド配列は、ハイブリドーマ細胞などの抗体産生細胞から単離され、配列決定され得る。代替的に、ポリヌクレオチドは、ヌクレオチド合成器もしくはＰＧＲ技法を使用して合成されるか、または他の供給源から取得されることができる。取得されると、マスク型サイトカインの成分をコードする配列は、原核宿主において異種ポリヌクレオチドを複製および発現することが可能な組換えベクターに挿入される。当該技術分野で利用可能かつ既知の多くのベクターが、本発明の目的で使用されることができる。適切なベクターの選択は、主に、ベクターに挿入される核酸のサイズ、およびベクターで形質転換される特定の宿主細胞に依存するであろう。各ベクターは、その機能（異種ポリヌクレオチドの増幅もしくは発現、またはその両方）、およびそれが常駐する特定の宿主細胞とのその適合性に応じて、様々な成分を含有する。ベクター成分には、一般的に、複製起点、選択マーカー遺伝子、プロモーター、リボソーム結合部位（ＲＢＳ）、シグナル配列、異種核酸挿入、および転写ターミネーター配列が含まれるが、これらに限定されない。
一般に、宿主細胞と適合する種に由来するレプリコンおよび対照配列を含有するプラスミドベクターが、これらの宿主に関連して使用される。ベクターは、通常、複製部位、ならびに形質転換細胞において表現型選択を提供することが可能なマーキング配列を担持する。例えば、Ｅ．ｃｏｌｉは、典型的には、Ｅ．ｃｏｌｉ種に由来するプラスミドであるｐＢＲ３２２を使用して形質転換される。ｐＢＲ３２２は、遺伝子コードアンピシリン（Ａｍｐ）およびテトラサイクリン（Ｔｅｔ）耐性を含有し、したがって、形質転換細胞を識別するための容易な手段を提供する。ｐＢＲ３２２、その誘導体、または他の微生物プラスミドもしくはバクテリオファージもまた、内因性タンパク質の発現のために微生物によって使用され得るプロモーターを含有し得るか、または含有するように修飾され得る。特定の抗体の発現に使用されるｐＢＲ３２２誘導体の例は、Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｈ，米国特許 第５，６４８，２３７号に記載されている。
加えて、宿主微生物と適合するレプリコンおよび制御配列を含有するファージベクターが、これらの宿主に関連して形質転換ベクターとして使用されることができる。例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ ＬＥ３９２などの感受性宿主細胞を形質転換するために使用され得る組換えベクターを作製する際に、７ＧＥＭ．ＴＭ．－１１などのバクテリオファージが利用され得る。
本発明の発現ベクターは、ポリペプチド成分の各々をコードする、２つ以上のプロモーター－シストロン対を含み得る。プロモーターは、その発現を調節するシストロンの上流（５’）に位置する非翻訳調節配列である。原核プロモーターは、典型的には、誘導性および恒常性の２つのクラスに分類される。誘導性プロモーターは、培養条件の変化、例えば、栄養素の有無または温度の変化に応答して、その制御下でシストロンの転写のレベルの増加を開始するプロモーターである。
様々な潜在的宿主細胞によって認識される多数のプロモーターが周知である。選択されたプロモーターは、制限酵素消化を介してプロモーターをソースＤＮＡから除去し、単離されたプロモーター配列を本発明のベクターに挿入することによって、マスク型サイトカインのいずれかの鎖をコードするシストロンＤＮＡに動作可能に連結されることができる。天然プロモーター配列および多くの異種プロモーターの両方が、標的遺伝子の増幅および／または発現を指示するために使用され得る。
いくつかの実施形態では、異種プロモーターは、それらが、天然標的ポリペプチドプロモーターと比較して、発現された標的遺伝子のより大きな転写量およびより高い収率を一般的に許容するため、利用される。
原核宿主とともに使用するために好適なプロモーターには、ＰｈｏＡプロモーター、３－ガラクタマーゼおよびラクトースプロモーター系、トリプトファン（ｔｒｐ）プロモーター系、およびｔａｃまたはｔｒｃプロモーターなどのハイブリッドプロモーターが挙げられる。しかしながら、細菌において機能する他のプロモーター（他の既知の細菌またはファージプロモーターなど）も同様に好適である。それらのヌクレオチド配列が公開されており、それによって、当業者が、任意の必要な制限部位を供給するためのリンカーまたはアダプターを使用して、例えば、軽鎖および重鎖を含むマスク型サイトカインのための標的軽鎖および重鎖をコードするシストロンにそれらを動作可能にライゲーションすることが可能にしている（Ｓｉｅｂｅｎｌｉｓｔ ｅｔ ａｌ．（１９８０）Ｃｅｌｌ ２０：２６９）。
本発明の一態様では、組換えベクター内の各シストロンは、膜にわたって発現ポリペプチドの転座を配向する分泌シグナル配列成分を含む。一般に、シグナル配列は、ベクターの成分であり得るか、またはベクターに挿入される標的ポリペプチドＤＮＡの一部であり得る。本発明の目的のために選択されるシグナル配列は、宿主細胞によって認識および処理される（すなわち、シグナルペプチダーゼによって切断される）ものであるべきである。異種ポリペプチドに対して天然のシグナル配列を認識および処理しない原核宿主細胞については、シグナル配列は、例えば、アルカリホスファターゼ、ペニシリナーゼ、Ｉｐｐ、または熱安定性エンテロトキシンＩＩ（ＳＴＩＩ）リーダー、ＬａｍＢ、ＰｈｏＥ、ＰｅｌＢ、ＯｍｐＡ、およびＭＢＰからなる群から選択される原核生物シグナル配列によって置換される。本発明の一実施形態では、発現系の両方のシストロンで使用されるシグナル配列は、ＳＴＩＩシグナル配列またはそのバリアントである。
別の態様では、本発明によるポリペプチド成分の産生は、宿主細胞の細胞質内で生じ得るため、各シストロン内の分泌シグナル配列の存在を必要としない。この点に関して、免疫グロブリン軽鎖および重鎖を含む実施形態については、例えば、軽鎖および重鎖は、マスキング部分、リンカー配列の有無を問わず発現され、例えば、フォールディングおよびアセンブリされて、細胞質内に機能的免疫グロブリンを形成する。ある特定の宿主株（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ ｔｒｘＢ株）は、ジスルフィド結合形成に好ましい細胞質条件を提供し、それによって、発現されたタンパク質サブユニットの適切なフォールディングおよびアセンブリを可能にする。Ｐｒｏｂａ ａｎｄ Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ Ｇｅｎｅ，１５９：２０３（１９９５）を参照されたい。
本発明のマスク型サイトカインはまた、本発明の分泌および適切にアセンブリされた抗体の収率を最大化するために、発現ポリペプチド成分の定量的比が調節され得る、発現系を使用することによって産生されることができる。そのような調節は、ポリペプチド成分の翻訳強度を同時に調節することによって少なくとも部分的に達成される。
本発明のマスク型サイトカインを発現するために好適な原核宿主細胞には、例えば、グラム陰性またはグラム陽性生物などの古細菌および真正細菌が含まれる。有用な細菌の例としては、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ）、Ｂａｃｉｌｌｉ（例えば、Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ種（例えば、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ、Ｓｅｒｒａｔｉａ ｍａｒｃｅｓｃａｎｓ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ、Ｐｒｏｔｅｕｓ、Ｓｈｉｇｅｌｌａ、Ｒｈｉｚｏｂｉａ、Ｖｉｔｒｅｏｓｃｉｌｌａ、またはＰａｒａｃｏｃｃｕｓが挙げられる。一実施形態では、グラム陰性細胞が使用される。一実施形態では、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞は、本発明の宿主として使用される。Ｅ．ｃｏｌｉ株の例としては、遺伝子型Ｗ３１１０ ＡｆｈｕＡ（ＡｔｏｎＡ）ｐｔｒ３ ｌａｃ Ｉｑ ｌａｃＬ８ ＡｏｍｐＴＡ（ｎｍｐｃ－ｆｅｐＥ）ｄｅｇＰ４１ ｋａｎＲ（米国特許第５，６３９，６３５号）を有する３３Ｄ３株を含む、Ｗ３１１０株（Ｂａｃｈｍａｎｎ，Ｃｅｌｌｕｌａｒ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，ｖｏｌ．２（Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．：Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｆｏｒ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，１９８７），ｐｐ．１１９０－１２１９；ＡＴＣＣ Ｄｅｐｏｓｉｔ Ｎｏ．２７，３２５）およびその誘導体が挙げられる。Ｅ．ｃｏｌｉ ２９４（ＡＴＣＣ ３１，４４６）、Ｅ．ｃｏｌｉ Ｂ、Ｅ．ｃｏｌｉ １７７６（ＡＴＣＣ ３１，５３７）、およびＥ．ｃｏｌｉ ＲＶ３０８（ＡＴＣＣ ３１，６０８）などの他の株およびその誘導体も好適である。これらの例は、限定するものではなく例示的なものである。定義された遺伝子型を有する上述の細菌のうちのいずれかの誘導体を構築するための方法は、当該技術分野で既知であり、例えば、Ｂａｓｓ ｅｔ ａｈ，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，８：３０９－３１４（１９９０）に記載されている。細菌の細胞内のレプリコンの複製可能性を考慮して、適切な細菌を選択することが一般的に必要である。例えば、ｐＢＲ３２２、ｐＢＲ３２５、ｐＡＣＹＣ１７７、またはｐＫＮ４１０などの周知のプラスミドを使用してレプリコンを供給する場合、Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｓｅｒｒａｔｉａ、またはＳａｌｍｏｎｅｌｌａ種を宿主として好適に使用することができる。典型的には、宿主細胞は、最小限の量のタンパク質分解酵素を分泌するべきであり、追加のプロテアーゼ阻害剤は、望ましくは、細胞培養に組み込まれ得る。
ｂ．マスク型サイトカイン産生
宿主細胞は、上記に説明される発現ベクターで形質転換され、プロモーターを誘導するか、形質転換体を選択するか、または所望の配列をコードする遺伝子を増幅するために、適宜に修飾された従来の栄養素培地中で培養される。
形質転換とは、ＤＮＡが、染色体外要素として、または染色体統合体によってのいずれかで複製可能であるように、原核宿主にＤＮＡを導入することを意味する。使用される宿主細胞に応じて、形質転換は、そのような細胞に適切な標準的な技術を使用して行われる。塩化カルシウムを用いるカルシウム処理は、実質的な細胞壁障壁を含有する細菌細胞に一般的に使用される。形質転換のための別の方法は、ポリエチレングリコール／ＤＭＳＯを用いる。使用されるさらに別の技法は、電気穿孔法である。
本発明のマスク型サイトカインを産生するために使用される原核細胞は、当該技術分野で既知の培地中で増殖され、選択された宿主細胞の培養に好適である。好適な培地の例としては、必要な栄養補助剤を加えたルリアブロス（ＬＢ）が挙げられる。いくつかの実施形態では、培地はまた、発現ベクターの構築に基づいて選択される選択剤を含有し、発現ベクターを含有する原核細胞の増殖を選択的に許容する。例えば、アンピシリン耐性遺伝子を発現する細胞の増殖のために、アンピシリンが培地に添加される。
炭素、窒素、および無機リン酸源以外の任意の必要な補助剤もまた、単独で、または別の補助剤もしくは複合窒素源などの培地との混合物として、適切な濃度で導入され得る。任意に、培養培地は、グルタチオン、システイン、シスタミン、チオグリコレート、ジチオエリスリトール、およびジチオスレイトールからなる群から選択される１つ以上の還元剤を含有し得る。
原核宿主細胞は、好適な温度で培養される。ある特定の実施形態では、Ｅ．ｃｏｌｉの増殖については、増殖温度は、約２０℃～約３９℃、約２５℃～約３７℃、または約３０℃の範囲である。培地のｐＨは、主に宿主生物に応じて、約５～約９の範囲の任意のｐＨであり得る。ある特定の実施形態では、Ｅ．ｃｏｌｉについては、ｐＨは、約６．８～約７．４、または約７．０である。
誘導性プロモーターが本発明の発現ベクターで使用される場合、タンパク質発現は、プロモーターの活性化に好適な条件下で誘導される。本発明の一態様では、ＰｈｏＡプロモーターは、ポリペプチドの転写を制御するために使用される。したがって、形質転換された宿主細胞は、誘導のためにリン酸制限培地中で培養される。ある特定の実施形態では、リン酸制限培地は、Ｃ．Ｒ．Ａ．Ｐ．培地である（例えば、Ｓｉｍｍｏｎｓ ｅｔ ａｈ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ（２００２），２６３：１３３－１４７を参照されたい）。当該技術分野で既知であるように、用いられるベクター構築物に従って、様々な他の誘導剤が使用され得る。
一実施形態では、本発明の発現されたマスク型サイトカインは、宿主細胞の周辺質に分泌され、そこから回収される。タンパク質回収は、典型的には、一般に浸透圧ショック、超音波処理、または溶解などの手段によって微生物を破壊することを伴う。細胞が破壊されると、細胞片または細胞全体が、遠心分離または濾過によって除去され得る。タンパク質は、
例えば、親和性樹脂クロマトグラフィーによってさらに精製され得る。代替的に、タンパク質は、培養培地に輸送され、その中で単離されることができる。細胞は、培養物から除去され得、培養上清は、産生されたタンパク質のさらなる精製のために濾過および濃縮される。発現されたポリペプチドは、ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＰＡＧＥ）およびウェスタンブロットアッセイなどの一般的に既知の方法を使用して、さらに単離および識別されることができる。
本発明の一態様では、マスク型サイトカイン産生は、発酵プロセスによって大量に行われる。組換えタンパク質の産生には、様々な大規模な流加発酵手順が利用可能である。大規模な発酵は、少なくとも１０００リットルの容量を有し、ある特定の実施形態では、約１，０００～１００，０００リットルの容量を有する。これらの発酵槽は、酸素および栄養素、特にグルコースを分配するために撹拌器インペラーを使用する。小規模の発酵とは、一般的に、体積容量が約１００リットル以下であり、かつ約１リットル～約１００リットルの範囲であり得る、発酵槽内の発酵を指す。
発酵プロセスでは、タンパク質発現の誘導は、典型的には、細胞が好適な条件下で、所望の密度、例えば、約１８０～２２０のＯＤ５５０まで増殖させられた後に開始され、その段階で、細胞は初期静止期にある。様々な誘導剤が、当該技術分野で既知であり、上記に記載されるように、用いられるベクター構築物に従って使用され得る。細胞は、誘導の前により短い期間にわたって成長し得る。細胞は通常、約１２～５０時間誘導されるが、より長いまたはより短い誘導時間が使用されてもよい。
本発明のポリペプチドの産生収率および品質を改善するために、様々な発酵条件が修正され得る。例えば、分泌抗体ポリペプチドの適切なアセンブリおよびフォールディングを改善するために、Ｄｓｂタンパク質（ＤｓｂＡ、ＤｓｂＢ、ＤｓｂＣ、ＤｓｂＤ、および／またはＤｓｂＧ）またはＦｋｐＡ（カペロン活性を有するペプチジルプロリルシス，トランス－イソメラーゼ）などのシャペロンタンパク質を過剰発現する追加のベクターが、宿主原核細胞を共形質転換するために使用されることができる。シャペロンタンパク質は、細菌宿主細胞中で産生される異種タンパク質の適切なフォールディングおよび溶解性を促進することが実証されている。Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．（１９９９）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７４：１９６０１－１９６０５、Ｇｅｏｒｇｉｏｕ ｅｔ ａｋ，米国特許 第６，０８３，７１５号、Ｇｅｏｒｇｉｏｕ ｅｔ ａｋ，米国特許 第６，０２７，８８８号、Ｂｏｔｈｍａｎｎ ａｎｄ Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ（２０００）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７５：１７１００－１７１０５、Ｒａｍｍ ａｎｄ Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ（２０００）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７５：１７１０６－１７１１３、Ａｒｉｅ ｅｔ ａｋ（２００１）Ｍｏｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．３９：１９９－２１０．
発現された異種タンパク質（特に、タンパク質分解感受性であるタンパク質）のタンパク質分解を最小化するために、タンパク質分解酵素を欠損したある特定の宿主株が、本発明に使用されることができる。例えば、宿主細胞株は、プロテアーゼＩＩＩ、ＯｍｐＴ、ＤｅｇＰ、Ｔｓｐ、プロテアーゼＩ、プロテアーゼＭｉ、プロテアーゼＶ、プロテアーゼＶＩ、およびそれらの組み合わせなどの既知の細菌プロテアーゼをコードする遺伝子内の遺伝的変異に影響するように修飾され得る。いくつかのＥ．ｃｏｌｉプロテアーゼ欠損株が、利用可能であり、例えば、上記のＪｏｌｙ ｅｔ ａｋ（１９９８）、Ｇｅｏｒｇｉｏｕ ｅｔ ａｋ，米国特許第５，２６４，３６５号、Ｇｅｏｒｇｉｏｕ ｅｔ ａｋ，米国特許 第５，５０８，１９２号、Ｋａｒａ ｅｔ ａｋ，Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｄｒｕｇ Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ，２：６３－７２（１９９６）に記載されている。
一実施形態では、タンパク質分解酵素を欠損し、かつ１つ以上のシャペロンタンパク質を過剰発現するプラスミドで形質転換されたＥ．ｃｏｌｉ株は、本発明の発現系において宿主細胞として使用される。
ｃ．マスク型サイトカイン精製
いくつかの実施形態では、本明細書で産生されるマスク型サイトカインは、さらなるアッセイおよび使用のために実質的に均質である調製物を取得するためにさらに精製される。当該技術分野で既知の標準的なタンパク質精製方法を用いることができる。以下の手順は、好適な精製手順の例である：免疫親和性カラムまたはイオン交換カラム上の分画、エタノール沈殿、逆相ＨＰＬＣ、シリカ上またはＤＥＡＥなどの陽イオン交換樹脂上のクロマトグラフィー、クロマトフォーカシング、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、硫酸アンモニウム沈殿、および例えば、Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－７５を使用するゲル濾過。
いくつかの実施形態では、固相上に固定化されたプロテインＡは、本発明のマスク型サイトカインの免疫親和性精製に使用される。プロテインＡは、抗体のＦｃ領域に高い親和性で結合する、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅａｓ由来の４１ｋＤ細胞壁タンパク質である。Ｌｉｎｄｍａｒｋ ｅｔ ａｌ（１９８３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．６２：１－１３。プロテインＡが固定化される固相は、ガラスもしくはシリカ表面を含むカラム、または制御された細孔ガラスカラムもしくはケイ酸カラムであり得る。いくつかの用途では、カラムは、グリセロールなどの試薬でコーティングされ、汚染物質の非特異的な付着を防止する可能性がある。
精製の第１のステップとして、上述の細胞培養に由来する調製物が、プロテインＡ固定化固相に適用され、プロテインＡへの目的の抗体の特異的結合を可能にすることができる。次いで、固相が洗浄され、固相に非特異的に結合された汚染物質を除去する。最後に、目的のマスク型サイトカインは、溶出によって固相から回収される。
マスク型サイトカインの成分への高い親和性結合を提供する精製の他の方法は、当技術分野で既知の標準的なタンパク質精製方法に従って用いられることができる。
２．真核宿主細胞を使用したマスク型サイトカインの生成
真核宿主細胞で使用するためのベクターには、概して、以下の非限定的な構成要素、すなわち、シグナル配列、複製起点、１つ以上のマーカー遺伝子、エンハンサー要素、プロモーター、および転写終結配列のうちの１つ以上が含まれる。
ａ．シグナル配列成分
真核宿主細胞で使用するためのベクターはまた、シグナル配列、または成熟タンパク質もしくは目的のポリペプチドのＮ末端に特定の切断部位を有する他のポリペプチドを含有し得る。選択される異種シグナル配列は、宿主細胞によって認識および処理される（すなわち、シグナルペプチダーゼによって切断される）ものであり得る。哺乳動物細胞発現では、哺乳動物シグナル配列ならびにウイルス分泌リーダー、例えば、単純ヘルペスｇＤシグナルが利用可能である。
そのような前駆体領域のＤＮＡは、リーディングフレーム内でマスク型サイトカインをコードするＤＮＡにライゲーションされる。
ｂ．複製起点
概して、複製起点成分は、哺乳動物発現ベクターに必要とされない。例えば、ＳＶ４０起点は、典型的には、早期プロモーターを含むためにのみ使用され得る。
ｃ．選択遺伝子成分
発現ベクターおよびクローニングベクターは、選択マーカーとも称される、選択遺伝子を含有し得る。典型的な選択遺伝子は、（ａ）抗生物質もしくは他の毒素、例えば、アンピシリン、ネオマイシン、メトトレキサート、もしくはテトラサイクリンに対する耐性を付与するタンパク質、（ｂ）関連する場合、栄養要求性欠損を相補するタンパク質、または（ｃ）複合培地から利用可能ではない重要な栄養素を供給するタンパク質をコードする。
選択スキームの１つの例は、宿主細胞の増殖を停止するために薬物を利用する。異種遺伝子で正常に形質転換することに成功したそれらの細胞は、薬物抵抗性を付与するタンパク質を産生し、したがって、選択レジメンを生き延びる。そのような優性の選択の例は、ネオマイシン、ミコフェノール酸、およびハイグロマイシンという薬物を使用する。
哺乳動物細胞のための好適な選択可能マーカーの別の例は、ＤＨＦＲ、チミジンキナーゼ、メタロチオネイン－Ｉおよび－ＩＩ、霊長類メタロチオネイン遺伝子、アデノシンデアミナーゼ、オルニチンデカルボキシラーゼなどの核酸をコードするマスク型サイトカインを取り込む細胞成分の識別を可能にするものである。
例えば、いくつかの実施形態では、ＤＨＦＲ選択遺伝子で形質転換された細胞は、最初に、ＤＨＦＲの競合的アンタゴニストであるメトトレキサート（Ｍｔｘ）を含有する培養培地中ですべての形質転換体を培養することによって識別される。いくつかの実施形態では、野生型ＤＨＦＲが用いられるときの適切な宿主細胞は、ＤＨＦＲ活性が欠損したチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞株（例えば、ＡＴＣＣ ＣＲＬ－９０９６）である。
代替的に、マスク型サイトカイン、野生型ＤＨＦＲタンパク質、およびアミノグリコシド３’－ホスホトランスフェラーゼ（ＡＰＨ）などの別の選択可能マーカーをコードするＤＮＡ配列で形質転換または共形質転換された宿主細胞（特に、内因性ＤＨＦＲを含有する野生型宿主）は、アミノグリコシド系抗生物質、例えば、カナマイシン、ネオマイシン、またＧ４１８などの選択可能マーカーの選択剤を含有する培地中の細胞増殖によって、選択されることができる。米国特許 第４，９６５，１９９号を参照されたい。宿主細胞は、グルタミン合成酵素（ＧＳ）を欠損した細胞株を含むＮＳ０を含んでもよい。哺乳動物細胞用の選択可能マーカーとしてのＧＳの使用のための方法は、米国特許 第５，１２２，４６４号および米国特許 第５，８９１，６９３号に記載されている。
ｄ．プロモーター成分
発現ベクターおよびクローニングベクターは、通常、宿主生物によって認識され、本明細書に記載される任意のマスク型サイトカインであり得る、目的のマスク型サイトカインをコードする核酸に動作可能に連結される、プロモーターを含有する。プロモーター配列は、真核生物について既知である。例えば、ほぼすべての真核遺伝子は、転写が開始される部位からおよそ２５～３０塩基上流に位置するＡＴ豊富領域を有する。多くの遺伝子の転写の開始から７０～８０塩基上流に見出される別の配列は、Ｎが任意のヌクレオチドであり得る、ＣＮＣＡＡＴ領域である。ほとんどの真核遺伝子の３’末端に、コード配列の３’末端へのポリＡテールの付加のためのシグナルであり得るＡＡＴＡＡＡ配列がある。ある特定の実施形態では、これらの配列のうちのいずれかまたはすべては、真核生物発現ベクターに好適に挿入され得る。
哺乳動物宿主細胞中のベクターからの転写は、例えば、ポリオーマウイルス、鶏痘ウイルス、アデノウイルス（アデノウイルス２など）、ウシパピローマウイルス、トリ肉腫ウイルス、サイトメガロウイルス、レトロウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、およびシミアンウイルス４０（ＳＶ４０）などのウイルスのゲノムから、異種哺乳動物プロモーター、例えば、アクチンプロモーターまたは免疫グロブリンプロモーターから、熱ショックプロモーターから取得されるプロモーターによって制御されるが、但し、そのようなプロモーターが宿主細胞系と適合性であることを条件とする。
ＳＶ４０ウイルスの初期プロモーターおよび後期プロモーターは、ＳＶ４０ウイルス複製起点も含有するＳＶ４０制限断片として便宜的に取得される。ヒトサイトメガロウイルスの即時早期プロモーターは、ＨｉｎｄＩＩＩ Ｅ制限断片として便宜的に取得される。ウシパピローマウイルスをベクターとして使用して哺乳動物宿主においてＤＮＡを発現するための系は、米国特許 第４，４１９，４４６号に開示されている。この系の修飾は、米国特許 第４，６０１，９７８号に記載されている。また、単純ヘルペスウイルス由来のチミジンキナーゼプロモーターの制御下でのマウス細胞におけるヒトβ－インターフェロンｃＤＮＡの発現を記載している、Ｒｅｙｅｓ ｅｔ ａｈ，Ｎａｔｕｒｅ ２９７：５９８－６０１（１９８２）も参照されたい。代替的に、ラウス肉腫ウイルス長末端反復をプロモーターとして使用することができる。
ｅ．エンハンサー要素成分
より高い真核生物による本発明のマスク型サイトカインをコードするＤＮＡの転写は、しばしば、エンハンサー配列をベクターに挿入することによって増加される。多くのエンハンサー配列は、現在、哺乳動物遺伝子（グロビン、エラスターゼ、アルブミン、α－フェトプロテイン、およびインスリン）から既知である。しかしながら、典型的には、真核細胞ウイルス由来のエンハンサーが使用されるであろう。例としては、複製起点の後期側のＳＶ４０エンハンサー（ｂｐ１００～２７０）、ヒトサイトメガロウイルス早期プロモーターエンハンサー、マウスサイトメガロウイルス早期プロモーターエンハンサー、複製起点の後期側のポリオーマエンハンサー、およびアデノウイルスエンハンサーが挙げられる。また、Ｙａｎｉｖ，Ｎａｔｕｒｅ ２９７：１７－１８（１９８２）（真核生物プロモーターの活性化のためのエンハンサー要素について記載している）も参照されたい。エンハンサーは、
マスク型サイトカインコード配列に対する位置５’または３’においてベクターにスプライスされ得るが、一般的に、プロモーターから５’の部位に位置する。
ｆ．転写終結成分
真核宿主細胞で使用される発現ベクターはまた、転写の終結のため、およびｍＲＮＡの安定化のために必要な配列を含有し得る。そのような配列は、真核またはウイルスＤＮＡまたはｃＤＮＡの５’および場合により３’の非翻訳領域から一般的に利用可能である。これらの領域は、マスク型サイトカインをコードするｍＲＮＡの非翻訳部分にポリアデニル化断片として転写されたヌクレオチドセグメントを含有する。１つの有用な転写終結成分は、ウシ成長ホルモンポリアデニル化領域である。ＷＯ９４／１１０２６およびその中に開示される発現ベクターを参照されたい。
ｇ．宿主細胞の選択および形質転換
本明細書のベクター中でＤＮＡをクローニングまたは発現するための好適な宿主細胞は、脊椎動物宿主細胞を含む、本明細書に記載される高等真核生物細胞を含む。培養（組織培養）における脊椎動物細胞の増殖は、日常的な手順となっている。有用な哺乳動物宿主細胞株の例としては、ＳＶ４０（ＣＯＳ－７、ＡＴＣＣ ＣＲＬ １６５１）によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株、ヒト胚腎臓株（懸濁培養での増殖用にサブクローニングされた２９３または２９３細胞、Ｇｒａｈａｍ ｅｔ ａｈ，Ｊ．Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ．３６：５９（１９７７））、ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ １０）、チャイニーズハムスター卵巣細胞／－ＤＨＦＲ（ＣＨＯ、Ｕｒｌａｕｂ ｅｔ ａｈ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：４２１６（１９８０））、マウスセルトリ細胞（ＴＭ４、Ｍａｔｈｅｒ，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．２３：２４３－２５１（１９８０））、サル腎臓細胞（ＣＶ１ ＡＴＣＣ ＣＣＬ ７０）、アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ－７６、ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１５８７）、ヒト子宮頸がん細胞（ＨＥＬＡ、ＡＡＴＣＣ ＣＣＬ ２）、イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ３４）、バッファローラット肝臓細胞（ＢＥＬ ３Ａ、ＡＴＣＣ ＣＲＬ １４４２）、ヒト肺細胞（Ｗ１３８、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ７５）、ヒト肝臓細胞（Ｈｅｐ Ｇ２、ＨＢ ８０６５）、マウス乳腺腫瘍（ＭＭＴ ０６０５６２、ＡＴＣＣ ＣＣＬ５１）、ＴＲＩ細胞（Ｍａｔｈｅｒ ｅｔ ａｈ，Ａｎｎａｌｓ Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．３８３：４４－６８（１９８２））、ＭＲＣ５細胞、ＦＳ４細胞、およびヒト肝がん株（Ｈｅｐ Ｇ２）が挙げられる。
宿主細胞は、マスク型サイトカイン産生のために上記に記載される発現またはクローニングベクターで形質転換され、プロモーターを誘導するために、形質転換体を選択するために、または所望の配列をコードする遺伝子を増幅するために、適宜に修飾された従来の栄養素培地中で培養される。
ｈ．宿主細胞の培養
本発明のマスク型サイトカインを産生するために使用される宿主細胞は、様々な培地中で培養され得る。Ｈａｍ’ｓ Ｆ１０（Ｓｉｇｍａ）、最小必須培地（（ＭＥＭ）、Ｓｉｇｍａ）、ＲＰＭＩ－１６４０（Ｓｉｇｍａ）、およびダルベッコ改変イーグル培地（（ＤＭＥＭ）、Ｓｉｇｍａ）などの市販の培地は、宿主細胞を培養するために好適である。加えて、Ｈａｍ ｅｔ ａｈ，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚ．５８：４４（１９７９）、Ｂａｒｎｅｓ ｅｔ ａｈ，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１０２：２５５（１９８０）、米国特許 第４，７６７，７０４号、第４，６５７，８６６号、
Ａ，９２１，１６２￥第４，５６０，６５５号、または第５，１２２，４６９号、ＷＯ ９０／０３４３０、ＷＯ ８７／００１９５、または米国特許 再発行第３０，９８５号に記載される培地のうちのいずれかが、宿主細胞の培養培地として使用され得る。これらの培地のうちのいずれかは、必要な場合、ホルモンおよび／または他の成長因子（インスリン、トランスフェリン、または上皮成長因子など）、塩（塩化ナトリウム、カルシウム、マグネシウム、およびリン酸塩など）、緩衝剤（ＨＥＰＥＳなど）、ヌクレオチド（アデノシンおよびチミジンなど）、抗生物質（ＧＥＮＴＡＭＹＣＩＮ（商標）薬物など）、微量元素（通常、マイクロモル範囲内の最終濃度で存在する無機化合物として定義される）、およびグルコースまたは同等のエネルギー源で補充され得る。任意の他の補助剤も、当業者に既知であろう適切な濃度で含まれ得る。温度、ｐＨ、および同等物などの培養条件は、発現のために選択された宿主細胞で以前に使用されたものであり、当業者には明らかであろう。
ｉ．マスク型サイトカインの精製
組換え技法を使用するとき、マスク型サイトカインは、細胞内で産生されるか、または培地中に直接分泌されることができる。マスク型サイトカインが第１のステップとして細胞内で産生される場合、宿主細胞または溶解断片のいずれかである微粒子状破片が、例えば、遠心分離または限外濾過によって除去され得る。マスク型サイトカインが培地中に分泌されるとき、そのような発現系由来の上清は、最初に、市販のタンパク質濃度フィルター、例えば、ＡｍｉｃｏｎまたはＭｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｐｅｌｌｉｃｏｎ限外濾過ユニットを使用して濃縮され得る。ＰＭＳＦなどのプロテアーゼ阻害剤が、タンパク質分解を阻害するための前述のステップのうちのいずれかに含まれ得、抗生物質が、外来性汚染物質の増殖を防止するために含まれ得る。
細胞から調製されたマスク型サイトカイン組成物は、例えば、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、および親和性クロマトグラフィーを使用して精製されることができ、親和性クロマトグラフィーが便宜的な技法である。親和性リガンドとしてのプロテインＡの好適性は、もしあれば、マスク型サイトカインに存在する任意の免疫グロブリンＦｃドメインの種およびアイソタイプに依存する。プロテインＡが、ヒトＩｇＧｌ、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ４重鎖に基づく抗体を精製するために使用されることができる（Ｌｉｎｄｍａｒｋ ｅｔ ａｋ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ６２：１－１３（１９８３））。プロテインＧが、すべてのマウスアイソタイプおよびヒトｙ３について推奨される（Ｇｕｓｓ ｅｔ ａｋ，ＥＭＢＯ Ｊ．５：１５６７１５７５（１９８６））。親和性リガンドが付着しているマトリックスは、アガロースであり得るが、他のマトリックスも利用可能である。制御細孔ガラスまたはポリ（スチレンジビニル）ベンゼンなどの機械的に安定したマトリックスは、アガロースで達成され得るよりも速い流量および短い処理時間を可能にする。マスク型サイトカインがＣＨ３ドメインを含む場合、Ｂａｋｅｒｂｏｎｄ ＡＢＸ（商標）樹脂（Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ，Ｐｈｉｌｌｉｐｓｂｕｒｇ，Ｎ．Ｊ．）が精製に有用である。
イオン交換カラム上の分画、エタノール沈殿、逆相ＨＰＬＣ、シリカ上のクロマトグラフィー、ヘパリンＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（商標）上のクロマトグラフィー、陰イオンまたは陽イオン交換樹脂（ポリアスパラギン酸カラムなど）上のクロマトグラフィー、クロマトフォーカシング、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、および硫酸アンモニウム沈殿などのタンパク質精製のための他の技法もまた、回収されるマスク型サイトカインに応じて利用可能である。
任意の予備的精製ステップに続いて、目的のマスク型サイトカインおよび汚染物質を含む混合物は、例えば、低塩濃度（例えば、約０～０．２５Ｍ塩）で実施される、約２．５～４．５のｐＨにおける溶出緩衝液を使用した低ｐＨ疎水性相互作用クロマトグラフィーによって、さらなる精製を受け得る。
一般に、研究、試験、および臨床用途における使用のためのマスク型サイトカインを調製するための様々な方法論は、上記に記載される方法論と一致し、および／または特定の目的のマスク型サイトカインについて当業者によって適切であるとみなされるように、当該技術分野で定着している。
５．組成物
いくつかの態様では、また、本明細書で供されるものは、本明細書に記載されるＩＬ－１５マスク型サイトカインのうちのいずれかを含む組成物である。いくつかの実施形態では、組成物は、本明細書に記載されるマスク型ＩＬ－１５サイトカインの例示的実施形態のうちのいずれかを含む。いくつかの実施形態では、組成物は、本明細書に記載されるマスク型ＩＬ－１５サイトカインのうちのいずれかの二量体を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、医薬組成物である。いくつかの実施形態では、組成物は、マスクＩＬ－１５サイトカインを含み、以下に詳細に記載される構成要素のうちの１つ以上をさらに含む。例えば、いくつかの実施形態では、組成物は、１つ以上の薬学的に許容される担体、賦形剤、安定剤、緩衝剤、防腐剤、等張剤、非イオン性界面活性剤もしくは洗剤、または他の治療剤もしくは活性化合物、またはそれらの組み合わせを含む。組成物の様々な実施形態は、本明細書では製剤と称されることもある。
治療用製剤は、所望の純度を有する活性成分を、任意選択的な薬学的に許容される担体、賦形剤、または安定剤と混合することによって、保管のために調製される（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２０ｔｈ Ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｋｌｉｎｓ，Ｐｕｂ．，Ｇｅｎｎａｒｏ Ｅｄ．，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，Ｐａ．２０００）。許容される担体、賦形剤、または安定剤は、用いられる投与量および濃度でレシピエントにとって非毒性であり、緩衝剤、アスコルビン酸、メチオニン、ビタミンＥ、メタ重亜硫酸ナトリウムを含む酸化防止剤、防腐剤、等張剤、安定剤、金属複合体（例えば、Ｚｎタンパク質複合体）、ＥＤＴＡおよび／または非イオン性界面活性剤などのキレート剤を含む。
緩衝剤を使用して、特に安定性がｐＨ依存性である場合に、治療有効性を最適化する範囲内でｐＨを調整することができる。緩衝剤は、約５０ｍＭ～約２５０ｍＭの範囲の濃度で存在し得る。本発明とともに使用するための好適な緩衝剤は、有機酸および無機酸の両方ならびにその塩を含む。例えば、クエン酸塩、リン酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、シュウ酸塩、乳酸塩、酢酸塩である。加えて、緩衝剤は、トリスなどのヒスチジン塩およびトリメチルアミン塩からなり得る。
防腐剤は、微生物の増殖を防止するために添加されることができ、典型的には、約０．２％～１．０％（ｗ／ｖ）の範囲内で存在する。治療剤とともに一般的に使用される好適な防腐剤の例としては、オクタデシルジメチルベンジル塩化アンモニウム、塩化ヘキサメトニウム、ベンザルコニウムハロゲン化物（例えば、塩化物、臭化物、ヨウ化物）、塩化ベンゼトニウム、チメロサール、フェノール、ブチルまたはベンジルアルコール、メチルまたはプロピルパラベンなどのアルキルパラベン、カテコール、レゾルシノール、シクロヘキサノール、３－ペンタノール、ｍ－クレゾール、ｏ－クレゾール、ｐ－クレゾール、ｐ－ヒドロキシ安息香酸メチル、ｐ－ヒドロキシ安息香酸プロピル、２－フェノキシエタノール、ｐ－ヒドロキシ安息香酸ブチル、２－フェニルエタノール、エタノール、クロロブタノール、チオメロサル、ブロノポール、安息香酸、イミド尿素、クロロヘキシジン、デヒドロ酢酸ナトリウム、クロロクレゾール、ｐ－ヒドロキシ安息香酸エチル、およびクロルフェネシン（３ｐ－クロルフェノキシプロパン－１，２－ジオール）が挙げられる。
「安定剤」として知られることもある等張剤は、組成物中の液体の等張性を調整または維持するために存在し得る。タンパク質および抗体などの大きな荷電生体分子とともに使用されたとき、それらはアミノ酸側鎖の荷電群と相互作用し、それによって、分子間および分子内相互作用の可能性を低減することができるため、しばしば「安定剤」と称される。
等張剤は、他の成分の相対量を考慮に入れて、約０．１重量％～約２５重量％または約１～約５重量％の任意の量で存在し得る。いくつかの実施形態では、等張剤としては、多価糖アルコール、グリセリン、エリスリトール、アラビトール、キシリトール、ソルビトール、およびマンニトールなどの三価または価数がより多い糖アルコールが挙げられる。
追加の賦形剤には、（１）増量剤、（２）溶解性エンハンサー、（３）安定剤、および（４）変性または容器壁への付着を防止する薬剤のうちの１つ以上として作用し得る薬剤が含まれる。そのような賦形剤には、多価糖アルコール（上記に列挙）、アラニン、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、リジン、オルニチン、ロイシン、２－フェニルアラニン、グルタミン酸、トレオニンなどのアミノ酸、スクロース、ラクトース、ラクチトール、トレハロース、スタキオース、マンノース、ソルボース、キシロース、リボース、リビトール、ミオイニシトース、ミオイニシトール、ガラクトース、ガラクチトール、グリセロール、シクリトール（例えば、イノシトール）、ポリエチレングリコールなどの有機糖または糖アルコール、尿素、グルタチオン、チオクト酸、チオグリコール酸ナトリウム、チオグリセロール、α－モノチオグリセロール、およびチオ硫酸ナトリウムなどの硫黄含有還元剤、ヒト血清アルブミン、ウシ血清アルブミン、ゼラチン、または他の免疫グロブリンなどの低分子量タンパク質、ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー、単糖類（例えば、キシロース、マンノース、フルクトース、グルコース）、二糖類（例えば、ラクトース、マルトース、スクロース）、ラフィノースなどの三糖類、ならびにデキストリンまたはデキストランなどの多糖類が含まれる。
非イオン性界面活性剤または洗剤（「湿潤剤」としても知られる）は、治療剤を可溶化すること、ならびに撹拌誘導凝集から治療用タンパク質を保護することを助けるために存在し得、これはまた、活性治療用タンパク質または抗体の変性を引き起こすことなく、製剤がせん断表面応力に曝露されることを可能にする。非イオン性界面活性剤は、約０．０５ｍｇ／ｍｌ～約１．０ｍｇ／ｍｌまたは約０．０７ｍｇ／ｍｌ～約０．２ｍｇ／ｍｌの範囲内で存在する。いくつかの実施形態では、非イオン性界面活性剤は、約０．００１％～約０．１％ｗ／ｖ、または約０．０１％～約０．１％ｗ／ｖ、もしくは約０．０１％～約０．０２５％ｗ／ｖの範囲内で存在する。
好適な非イオン性界面活性剤には、ポリソルベート（２０、４０、６０、６５、８０など）、ポリオキサマー（１８４、１８８など）、ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）ポリオール、ＴＲＩＴＯＮ（登録商標）、ポリオキシエチレンソルビタンモノエーテル（ＴＷＥＥＮ（登録商標）－２０、ＴＷＥＥＮ（登録商標）－８０など）、ラウロマクロゴール４００、ポリオキシル４０ステアリン酸、ポリオキシエチレン水素化ヒマシ油１０、５０および６０、グリセロールモノステアレート、スクロース脂肪酸エステル、メチルセルロースおよびカルボキシメチルセルロースを含む。使用され得る陰イオン性洗剤には、ラウリル硫酸ナトリウム、ジオクチルスルホコハク酸ナトリウム、およびジオクチルスルホン酸ナトリウムが含まれる。陽イオン性洗剤には、ベンザルコニウム塩化物またはベンゼトニウム塩化物が含まれる。
製剤をインビボでの投与に使用するためには、製剤は滅菌でなければならない。製剤は、滅菌濾過膜を通した濾過によって滅菌され得る。本明細書の治療用組成物は、概して、滅菌アクセスポートを有する容器、例えば、静注液バッグ、または皮下注射針により穿孔可能なストッパーを有するバイアルに入れられる。
投与経路は、例えば、皮下、静脈内、腹腔内、筋肉内、動脈内、病変内、もしくは関節内経路、局所投与、吸入による、または徐放性もしくは持続放出手段による、注射または注入などの好適な様式で、単回もしくは複数回のボーラス、または長期間にわたる注入によるものなどの既知の許容された方法に従う。
本明細書に記載されるマスク型ＩＬ－１５サイトカインのうちのいずれかは、単独で、または本明細書に記載される方法であるような他の治療剤と組み合わせて使用されることができる。「と組み合わせて」という用語は、同一または別個の製剤に含まれる２つ以上の治療剤（例えば、マスク型ＩＬ－１５サイトカイン）を包含する。いくつかの実施形態では、「と組み合わせて」とは、「同時」投与を指し、その場合、本発明のマスク型ＩＬ－１５サイトカインの投与は、１つ以上の追加の治療剤の投与に同時に（例えば、同じ時間に、またはマスク型ＩＬ－１５サイトカインの投与と１つ以上の追加の治療剤の投与との間で１時間以内に）生じる。いくつかの実施形態では、「と組み合わせて」とは、逐次的投与を指し、その場合、本発明のマスク型ＩＬ－１５サイトカインの投与は、１つ以上の追加の治療剤の投与の前および／または後に（例えば、マスク型ＩＬ－１５サイトカインの投与と１つ以上の追加の治療剤の投与との間で１時間を超えて）生じる。本明細書で企図される薬剤には、細胞傷害性薬剤、サイトカイン、免疫チェックポイント分子を標的とする薬剤、免疫刺激分子を標的とする薬剤、成長阻害剤、免疫刺激剤、または抗がん剤が含まれるが、これらに限定されない。
本明細書の製剤はまた、治療されている特定の適応症、好ましくは、互いに悪影響を及ぼさない相補的な活性を有する適応症のために必要に応じて、１つを超える活性化合物を含有し得る。代替として、または加えて、組成物は、細胞傷害性薬剤、サイトカイン、免疫チェックポイント分子もしくは刺激分子を標的とする薬剤、成長阻害剤、免疫刺激剤、抗炎症剤、または抗がん剤を含み得る。そのような分子は、意図される目的に有効な量で、組み合わせて好適に存在する。
製剤は、液体製剤、固体（凍結乾燥）製剤、または凍結製剤などの任意の好適な状態で提示され得る。治療使用のためのこれらのタイプの製剤の各々を調製するためのアプローチは、当該技術分野で周知である。
６．治療の方法
本明細書で提供されるものは、有効量の本明細書に記載される任意のマスク型ＩＬ－１５サイトカインまたはその組成物を対象に投与することを含む、対象における疾患を治療または予防するための方法である。いくつかの態様では、本明細書に記載される任意の組成物を対処に投与することを含む、対象における疾患を治療するために方法が提供される。いくつかの実施形態では、対象（例えば、ヒト患者）は、がんと診断されたか、またはそのような障害を発症するリスクがある。いくつかの実施形態では、有効量の本明細書に記載される任意のマスク型ＩＬ－１５サイトカインまたはその組成物を対象に投与することを含む、対象において疾患を治療または予防するために方法が提供され、マスク型ＩＬ－１５サイトカインは、酵素による切断時に活性化される。いくつかの実施形態では、マスク型ＩＬ－１５サイトカインは、腫瘍微小環境で活性化される。マスク型ＩＬ－１５サイトカインは、切断された後に治療的に活性である。したがって、いくつかの実施形態では、活性薬剤は、切断産物である。
疾患の予防または治療について、活性薬剤の適切な投与量は、上記に定義されるような治療される疾患のタイプ、疾患の重症度および経過、薬剤が予防または治療目的で投与されるかどうか、以前の治療法、対象の臨床歴および薬剤に対する応答、ならびに担当医師の裁量に依存する。薬剤は、一度に、または一連の治療にわたって、対象に好適に投与される。
本明細書に記載される方法のいくつかの実施形態では、本明細書に記載されるマスク型ＩＬ－１５サイトカインの投与の間の間隔は、約１週間以上である。本明細書に記載される方法のいくつかの実施形態では、本明細書に記載されるマスク型ＩＬ－１５サイトカインの投与間の間隔は、約２日以上、約３日以上、約４日以上、約５日以上、または約６日以上である。本明細書に記載の方法のいくつかの実施形態では、本明細書に記載されるマスク型ＩＬ－１５サイトカインの投与間の間隔は、約１週間以上、約２週間以上、約３週間以上、または約４週間以上である。本明細書に記載される方法のいくつかの実施形態では、本明細書に記載されるマスク型ＩＬ－１５サイトカインの投与間の間隔は、約１か月以上、約２か月以上、または約３か月以上である。本明細書で使用される場合、投与の間の間隔とは、マスク型ＩＬ－１５サイトカインの１回の投与とマスク型ＩＬ－１５サイトカインの次の投与との間の期間を指す。本明細書で使用される場合、約１か月の間隔は、４週間を含む。いくつかの実施形態では、治療は、マスク型ＩＬ－１５サイトカインの複数の投与を含み、投与の間の間隔は、変化し得る。例えば、いくつかの実施形態では、第１の投与と第２の投与との間の間隔は、約１か月であり、後続の投与の間の間隔は、約２週間である。いくつかの実施形態では、第１の投与と第２の投与との間の間隔は、約２日、３日、４日、または５日、もしくは６日であり、後続の投与の間の間隔は、約１週間である。
いくつかの実施形態では、マスク型ＩＬ－１５サイトカインは、ある期間にわたって複数回投与される。対象に複数回投与される投与量は、いくつかの実施形態では、各投与について同じ投与量であり得るか、またはいくつかの実施形態では、マスク型サイトカインは、２つ以上の異なる投与量で対象に投与されることができる。例えば、いくつかの実施形態では、マスク型ＩＬ－１５サイトカインは、最初に、１つの投与量で１回以上投与され、後に、以降の時点で開始して第２の投与量で１回以上投与される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるマスク型ＩＬ－１５ポリペプチドは、一律の用量で投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるマスク型ＩＬ－１５ポリペプチドは、１回用量当たり約２５ｍｇ～約５００ｍｇの投与量で対象に投与される。いくつかの実施形態では、マスク型ＩＬ－１５ポリペプチドは、１回用量当たり約２５ｍｇ～約５０ｍｇ、約５０ｍｇ～約７５ｍｇ、約７５ｍｇ～約１００ｍｇ、約１００ｍｇ～約１２５ｍｇ、約１２５ｍｇ～約１５０ｍｇ、約１５０ｍｇ～約１７５ｍｇ、約１７５ｍｇ～約２００ｍｇ、約２００ｍｇ～約２２５ｍｇ、約２２５ｍｇ～約２５０ｍｇ、約２５０ｍｇ～約２７５ｍｇ、約２７５ｍｇ～約３００ｍｇ、約３００ｍｇ～約３２５ｍｇ、約３２５ｍｇ～約３５０ｍｇ、約３５０ｍｇ～約３７５ｍｇ、約３７５ｍｇ～約４００ｍｇ、約４００ｍｇ～約４２５ｍｇ、約４２５ｍｇ～約４５０ｍｇ、約４５０ｍｇ～約４７５ｍｇ、または約４７５ｍｇ～約５００ｍｇの投与量で対象に投与される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるマスク型ＩＬ－１５ポリペプチドは、対象の体重または体表面積（ＢＳＡ）に基づく投与量で対象に投与される。疾患のタイプおよび重症度に応じて、約１μｇ／ｋｇ～１５ｍｇ／ｋｇ（例えば、０．１ｍｇ／ｋｇ～１０ｍｇ／ｋｇ）のマスク型ＩＬ－１５ポリペプチドが、
例えば、１回以上の別個の投与によるか、または連続注入によるかにかかわらず、患者への投与のための初期候補投与量であり得る。１つの典型的な１日投与量は、上述の要因に応じて、約１μｇ／ｋｇ～約１００ｍｇ／ｋｇ以上の範囲であり得る。数日以上にわたる反復投与については、状態に応じて、疾患症状の所望の抑制が生じるまで治療が概して維持されるであろう。したがって、約０．５ｍｇ／ｋｇ、約２．０ｍｇ／ｋｇ、約４．０ｍｇ／ｋｇ、または約１０ｍｇ／ｋｇ（もしくはそれらの任意の組み合わせ）のうちの１つ以上の用量が、患者に投与され得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるマスク型ＩＬ－１５ポリペプチドは、１回用量当たり約２５ｍｇ～約５００ｍｇの用量で対象に投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のマスク型ＩＬ－１５ポリペプチドは、約０．１ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇまたは約１．０ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇの用量で対象に投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるマスク型ＩＬ－１５ポリペプチドは、約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ、約１．０ｍｇ／ｋｇ、約１．５ｍｇ／ｋｇ、約２．０ｍｇ／ｋｇ、約２．５ｍｇ／ｋｇ、約３．０ｍｇ／ｋｇ、約３．５ｍｇ／／ｋｇ、約４．０ｍｇ／ｋｇ、約４．５ｍｇ／ｋｇ、約５．０ｍｇ／ｋｇ、約５．５ｍｇ／ｋｇ、約６．０ｍｇ／ｋｇ、約６．５ｍｇ／ｋｇ、約７．０ｍｇ／ｋｇ、約７．５ｍｇ／ｋｇ、約８．０ｍｇ／ｋｇ、約８．５ｍｇ／ｋｇ、約９．０ｍｇ／ｋｇ、約９．５ｍｇ／ｋｇ、または約１０．０ｍｇ／ｋｇのうちのいずれかの投与量で対象に投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるマスク型ＩＬ－１５ポリペプチドは、約または少なくとも約０．１ｍｇ／ｋｇ、約もしくは少なくとも約０．５ｍｇ／ｋｇ、約もしくは少なくとも約１．０ｍｇ／ｋｇ、約もしくは少なくとも約１．５ｍｇ／ｋｇ、約もしくは少なくとも約２．０ｍｇ／ｋｇ、約もしくは少なくとも約２．５ｍｇ／ｋｇ、約もしくは少なくとも約３．０ｍｇ／ｋｇ、約もしくは少なくとも約３．５ｍｇ／ｋｇ、約もしくは少なくとも約４．０ｍｇ／ｋｇ、約もしくは少なくとも約４．５ｍｇ／ｋｇ、約もしくは少なくとも約５．０ｍｇ／ｋｇ、約もしくは少なくとも約５．５ｍｇ／ｋｇ、約もしくは少なくとも約６．０ｍｇ／ｋｇ、約もしくは少なくとも約６．５ｍｇ／ｋｇ、約、または少なくとも約７．０ｍｇ／ｋｇ、約もしくは少なくとも約７．５ｍｇ／ｋｇ、約もしくは少なくとも約８．０ｍｇ／ｋｇ、約もしくは少なくとも約８．５ｍｇ／ｋｇ、約もしくは少なくとも約９．０ｍｇ／ｋｇ、約もしくは少なくとも約９．５ｍｇ／ｋｇ、約もしくは少なくとも約１０．０ｍｇ／ｋｇ、約もしくは少なくとも約１５．０ｍｇ／ｋｇ、約もしくは少なくとも約２０ｍｇ／ｋｇ、約もしくは少なくとも約３０ｍｇ／ｋｇ、約もしくは少なくとも約４０ｍｇ／ｋｇ、約もしくは少なくとも約５０ｍｇ／ｋｇ、約もしくは少なくとも約６０ｍｇ／ｋｇ、約もしくは少なくとも約７０ｍｇ／ｋｇ、約もしくは少なくとも約８０ｍｇ／ｋｇ、約もしくは少なくとも約９０ｍｇ／ｋｇ、または約もしくは少なくとも約１００ｍｇ／ｋｇの投与量で対象に投与される。上記に記載される投与頻度のうちのいずれかが、使用され得る。
本明細書で企図される治療の方法は、本明細書に記載されるマスク型サイトカインまたは組成物のうちのいずれかを用いた障害または疾患の治療である。いくつかの実施形態では、治療の方法は、本明細書に記載される任意のマスク型ＩＬ－２ポリペプチド、または本明細書に記載される任意のマスク型ＩＬ－１５ポリペプチド、もしくは本明細書に記載されるマスク型サイトカインを含む組成物のうちのいずれかを使用する。本発明の製剤を用いて治療可能である障害または疾患には、白血病、リンパ腫、頭頸部がん、結腸直腸がん、前立腺がん、膵臓がん、黒色腫、乳がん、神経芽細胞腫、肺がん、卵巣がん、骨肉腫、膀胱がん、子宮頸がん、肝臓がん、腎臓がん、皮膚がん（例えば、メルケル細胞がん）、または精巣がんが含まれる。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるものは、本明細書に記載される任意のマスク型サイトカインまたは組成物の投与による、がんの治療または予防の方法である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるものは、マスク型ＩＬポリペプチド、またはマスク型ＩＬ－１５ポリペプチド、もしくは本明細書に記載されるマスク型サイトカインを含む組成物のうちのいずれかの投与による、がんの治療または予防の方法である。本明細書で使用される場合、「がん」という用語は、白血病、リンパ腫、黒色腫、神経内分泌腫瘍、がん腫、および肉腫を含む、哺乳動物に見られるすべてのタイプのがん、新生物、または悪性腫瘍を指す。本明細書で提供されるマスク型サイトカイン、医薬組成物、または方法で治療され得る例示的ながんには、リンパ腫、肉腫、膀胱がん、骨がん、脳腫瘍、子宮頸がん、結腸がん、食道がん、胃がん、頭頸部がん、腎臓がん、骨髄腫、甲状腺がん、白血病、前立腺がん、乳がん（例えば、トリプルネガティブ、ＥＲ陽性、ＥＲ陰性、化学療法抵抗性、ハーセプチン耐性、ＨＥＲ２陽性、ドキソルビシン耐性、タモキシフェン耐性、腺管がん、小葉がん、原発性、転移性）、卵巣がん、膵臓がん、肝臓がん（例えば、肝細胞がん）、肺がん（例えば、非小細胞肺がん、肺扁平上皮がん、腺がん、肺大細胞がん、小細胞肺がん、カルチノイド、肉腫）、多形膠芽腫、神経膠腫、黒色腫、前立腺がん、去勢抵抗性前立腺がん、乳がん、トリプルネガティブ乳がん、膠芽腫、卵巣がん、肺がん、扁平上皮細胞がん（例えば、頭部、頸部、または食道）、結腸直腸がん、白血病、急性骨髄性白血病、リンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫、または多発性骨髄腫が含まれる。追加の例としては、甲状腺のがん、内分泌系のがん、脳のがん、乳房のがん、子宮頸部のがん、結腸のがん、頭頸部のがん、食道のがん、肝臓のがん、腎臓のがん、肺のがん、非小細胞肺がん、黒色腫、中皮腫、卵巣のがん、肉腫、胃のがん、子宮のがん、または髄芽腫、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、神経芽細胞腫、神経膠腫、多形性膠芽腫、卵巣がん、横紋筋肉腫、原発性血小板血症、原発性マクログロブリン血症、原発性脳腫瘍、がん、悪性膵臓インスリノーマ、悪性カルチノイド、膀胱がん、前がん性皮膚病変、精巣がん、リンパ腫、甲状腺がん、神経芽腫、食道がん、泌尿生殖器がん、悪性高カルシウム血症、子宮内膜がん、副腎皮質がん、内分泌または外分泌膵臓の新生物、甲状腺髄様がん、甲状腺髄様がん腫、黒色腫、結腸直腸がん、甲状腺乳頭がん、肝細胞がん、乳頭パジェット病、小葉がん、腺管がん、膵星細胞のがん、肝星細胞のがん、または前立腺がんが挙げられる。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるものは、本明細書に記載される任意のマスク型ＩＬ－１５サイトカインまたは組成物の投与による、がんの治療または予防の方法である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるものは、抗がん剤と組み合わせた本明細書に記載される任意のＩＬ－１５マスク型サイトカインまたは組成物の投与による、がんの治療または予防の方法である。抗がん剤は、がん増殖を低減すること、がん細胞複製を妨害すること、がん細胞を直接的もしくは間接的に死滅させること、転移を低減すること、腫瘍血液供給を低減すること、または細胞生存を低減することが可能な任意の薬剤であり得る。いくつかの実施形態では、抗がん剤は、ＰＤ－１阻害剤、ＥＧＦＲ阻害剤、ＨＥＲ２阻害剤、ＶＥＧＦＲ阻害剤、ＣＴＬＡ－４阻害剤、ＢＴＬＡ阻害剤、Ｂ７Ｈ４阻害剤、Ｂ７Ｈ３阻害剤、ＣＳＦＩＲ阻害剤、ＨＶＥＭ阻害剤、ＣＤ２７阻害剤、ＫＩＲ阻害剤、ＮＫＧ２Ａ阻害剤、ＮＫＧ２Ｄアゴニスト、ＴＷＥＡＫ阻害剤、ＡＬＫ阻害剤、ＣＤ５２標的化抗体、ＣＣＲ４標的化抗体、ＰＤ－Ｌ１阻害剤、ＫＩＴ阻害剤、ＰＤＧＦＲ阻害剤、ＢＡＦＦ阻害剤、ＨＤ ＡＣ阻害剤、ＶＥＧＦリガンド阻害剤、ＣＤ１９標的化分子、ＦＯＦＲ１標的化分子、ＤＦＦ３標的化分子、ＤＫＫ１標的化分子、ＭＵＣ１標的化分子、ＭＵＧ１６標的化分子、ＰＳＭＡ標的化分子、ＭＳＦＮ標的化分子、ＮＹ－ＥＳ０－１標的化分子、Ｂ７Ｈ３標的化分子、Ｂ７Ｈ４標的化分子、ＢＣＭＡ標的化分子、ＣＤ２９標的化分子と、ＣＤ１５１標的化分子、ＣＤ１２３標的化分子、ＣＤ３３標的化分子、ＣＤ３７標的化分子、ＣＤＨ１９標的化分子、ＣＥＡ標的化分子、クローディン１８．２標的化分子、ＣＦＥＣ１２Ａ標的化分子、ＥＧＦＲＶＩＩＩ標的化分子、ＥＰＣＡＭ標的化分子、ＥＰＨＡ２標的化分子、ＦＣＲＨ５標的化分子、ＦＬＴ３標的化分子、ＧＤ２標的化分子、グリピカン３標的化分子、ｇｐＡ３３標的化分子、ＧＰＲＣ５Ｄ標的化分子、ＩＬ－２３Ｒ標的化分子、ＩＬ－１ＲＡＰ標的化分子、ＭＣＳＰ標的化分子、ＲＯＮ標的化分子、ＲＯＲ１標的化分子、ＳＴＥＡＰ２標的化分子、ＴｆＲ標的化分子、ＣＤ１６６標的化分子、ＴＰＢＧ標的化分子、ＴＲＯＰ２標的化分子、プロテアソーム阻害剤、ＡＢＥ阻害剤、ＣＤ３０阻害剤、ＦＬＴ３阻害剤、ＭＥＴ阻害剤、ＲＥＴ阻害剤、ＩＬ－１（３－阻害剤、ＭＥＫ阻害剤、ＲＯＳ１阻害剤、ＢＲＡＥ阻害剤、ＣＤ３８阻害剤、ＲＡＮＫＥ阻害剤、Ｂ４ＧＡＬＮＴ１阻害剤、ＳＬＡＭＦ７阻害剤、ＩＤＨ２阻害剤、ｍＴＯＲ阻害剤、ＣＤ２０標的化抗体、ＢＴＫ阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤、ＦＬＴ３阻害剤、ＰＡＲＰ阻害剤、ＣＤＫ４阻害剤、ＣＤＫ６阻害剤、ＥＧＦＲ阻害剤、ＲＡＦ阻害剤、ＪＡＫ１阻害剤、ＪＡＫ２阻害剤、ＪＡＫ３阻害剤、ＩＬ－６阻害剤、ＩＬ－１７阻害剤、平滑化阻害剤、ＩＬ－６Ｒ阻害剤、ＢＣＬ２阻害剤、ＰＴＣＨ阻害剤、ＰＩＧＦ阻害剤、ＴＧＦＢ阻害剤、ＣＤ２８アゴニスト、ＣＤ３アゴニスト、ＣＤ４０アゴニスト、ＧＩＴＲアゴニスト、０Ｘ４０アゴニスト、ＶＩＳＴＡアゴニスト、ＣＤ１３７アゴニスト、ＬＡＧ３阻害剤、ＴＩＭ３阻害剤、ＴＩＧＩＴ阻害剤、およびＩＬ－２Ｒ阻害剤からなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるものは、抗炎症剤と組み合わせた本明細書に記載される任意のマスク型ＩＬ－１５サイトカインの投与による、がんの治療または予防の方法である。抗炎症剤は、炎症を予防、対抗、阻害、または別様に低減することが可能な任意の薬剤であり得る。
いくつかの実施形態では、抗炎症剤は、シクロオキシゲナーゼ（ＣＯＸ）阻害剤である。ＣＯＸ阻害剤は、ＣＯＸ－１および／またはＣＯＸ－２の活性を阻害する任意の薬剤であり得る。いくつかの実施形態では、ＣＯＸ阻害剤は、ＣＯＸ－１を選択的に阻害する（すなわち、ＣＯＸ阻害剤は、ＣＯＸ－２の活性を阻害するよりもＣＯＸ－１の活性を阻害する）。いくつかの実施形態では、ＣＯＸ阻害剤は、ＣＯＸ－２を選択的に阻害する（すなわち、ＣＯＸ阻害剤は、ＣＯＸ－１の活性を阻害するよりもＣＯＸ－２の活性を阻害する）。いくつかの実施形態では、ＣＯＸ阻害剤は、ＣＯＸ－１およびＣＯＸ－２の両方を阻害する。
いくつかの実施形態では、ＣＯＸ阻害剤は、選択的ＣＯＸ－１阻害剤であり、ＳＣ－５６０、ＦＲ１２２０４７、Ｐ６、モフェゾラク、ＴＦＡＰ、フルルビプロフェン、およびケトプロフェンからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ＣＯＸ阻害剤は、選択的ＣＯＸ－２阻害剤であり、セレコキシブ、ロフェコキシブ、メロキシカム、ピロキシカム、デラコキシブ、パレコキシブ、バルデコキシブ、エトリコキシブ、クロメン誘導体、クロマン誘導体、Ｎ－（２－シクロヘキシルオキシニトロフェニル）メタンスルホンアミド、パレコキシブ、ルミラコキシブ、ＲＳ ５７０６７、Ｔ－６１４、ＢＭＳ－３４７０７０、ＪＴＥ－５２２、Ｓ－２４７４、ＳＶＴ－２０１６、ＣＴ－３、ＡＢＴ－９６３、ＳＣ－５８１２５、ニメスリド、フロスリド、ＮＳ－３９８、Ｌ－７４５３３７、ＲＷＪ－６３５５６、Ｌ－７８４５１２、ダルブフェロン、ＣＳ－５０２、ＬＡＳ－３４４７５、ＬＡＳ－３４５５５、Ｓ－３３５１６、ジクロフェナク、メフェナム酸、およびＳＤ－８３８１からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ＣＯＸ阻害剤は、イブプロフェン、ナプロキセン、ケトロラク、インドメタシン、アスピリン、ナプロキセン、トルメチン、ピロキシカム、およびメクロフェナマートからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ＣＯＸ阻害剤は、ＳＣ－５６０、ＦＲ１２２０４７、Ｐ６、モフェゾラク、ＴＦＡＰ、ルルビプロフェン、ケトプロフェン、セレコキシブ、ロフェコキシブ、メロキシカム、ピロキシカム、デラコキシブ、パレコキシブ、バルデコキシブ、エトリコキシブ、クロメン誘導体、クロマン誘導体、Ｎ－（２－シクロヘキシルオキシニトロフェニル）メタンスルホンアミド、パレコキシブ、ルミラコキシブ、ＲＳ ５７０６７、Ｔ－６１４、ＢＭＳ－３４７０７０、ＪＴＥ－５２２、Ｓ－２４７４、ＳＶＴ－２０１６、ＣＴ－３、ＡＢＴ－９６３、ＳＣ－５８１２５、ニメスリド、フロスリド、ＮＳ－３９８、Ｌ－７４５３３７、ＲＷＪ－６３５５６、Ｌ－７８４５１２、ダルブフェロン、ＣＳ－５０２、ＬＡＳ－３４４７５、ＬＡＳ－３４５５５、Ｓ－３３５１６、ジクロフェナク、メフェナム酸、ＳＤ－８３８１、イブプロフェン、ナプロキセン、ケトロラク、インドメタシン、アスピリン、ナプロキセン、トルメチン、ピロキシカム、およびメクロフェナマートからなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、抗炎症剤は、ＮＦ－ｋＢ阻害剤である。ＮＦ－ｋＢ阻害剤は、ＮＦ－ｋＢ経路の活性を阻害する任意の薬剤であり得る。いくつかの実施形態では、ＮＦ－ｋＢ阻害剤は、ＩＫＫ複合体阻害剤、ＩｋＢ分解阻害剤、ＮＦ－ｋＢ核転座阻害剤、ｐ６５アセチル化阻害剤、ＮＦ－ｋＢ ＤＮＡ結合阻害剤、ＮＦ－ｋＢトランス活性化阻害剤、およびｐ５３誘導阻害剤からなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、ＩＫＫ複合体阻害剤は、ＴＰＣＡ－１、ＮＦ－ｋＢ活性化阻害剤ＶＩ（ＢＯＴ－６４）、ＢＭＳ－３４５５４１、アンレキサノクス、ＳＣ－５１４（ＧＫ－０１１４０）、ＩＭＤ－０３５４、およびＩＫＫ－１６からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ＩｋＢ分解阻害剤は、ＢＡＹ－１１－７０８２、ＭＧ－１１５、ＭＧ－１３２、ラクタシスチン、エポキソマイシン、パルテノリド、カルフィルゾミブ、およびＭＬＮ－４９２４（ペボネジスタット）からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ＮＦ－ｋＢ核内転座阻害剤は、ＪＳＨ－２３およびロリプラムからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ｐ６５アセチル化阻害剤は、ガリン酸およびアナカルデン酸からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ＮＦ－ｋＢ ＤＮＡ結合阻害剤は、ＧＹＹ－４１３７、ｐ－ＸＳＣ、ＣＶ－３９８８、およびプロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ＮＦ－ｋＢトランス活性化阻害剤は、ＬＹ－２９４００２、ウォルトマンニン、およびメサラミンからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ｐ５３誘導阻害剤は、キナクリンおよびフラボピリドールからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ＮＦ－ｋＢ阻害剤は、ＴＰＣＡ－１、ＮＦ－ｋＢ活性化阻害剤ＶＩ（ＢＯＴ－６４）、ＢＭＳ－３４５５４１、アムレキサノクス、ＳＣ－５１４（ＧＫ－０１１４０）、ＩＭＤ－０３５４、ＩＫＫ－１６、ＢＡＹ－１１－７０８２、ＭＧ－１１５、ＭＧ－１３２、ラクタシスチン、エポキシシン、パルテノリド、カルフィルゾミブ、ＭＬＮ－４９２４（ペボネジスタット）、ＪＳＨ－２３ロリプラム、没食子酸、アナカルド酸、ＧＹＹ－４１３７、ｐ－ＸＳＣ、ＣＶ－３９８８、プロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）、ＬＹ－２９４００２、ウォルトマンニン、メサラミン、キナクリン、およびフラボピリドールからなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるものは、抗がん治療用タンパク質と組み合わせた本明細書に記載される任意のマスク型ＩＬ－１５サイトカインまたは組成物の投与による、がんの治療または予防の方法である。抗がん治療用タンパク質は、がん増殖を低減すること、がん細胞複製を妨害すること、がん細胞を直接的もしくは間接的に死滅させること、転移を低減すること、腫瘍血液供給を低減すること、または細胞生存を低減することが可能な任意の治療用タンパク質であり得る。例示的抗がん治療用タンパク質は、抗体またはその断片、抗体誘導体、二重特異性抗体、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞、融合タンパク質、または二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー（ＢｉＴＥ）の形態で生じ得る。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるものは、ＣＡＲ－ＮＫ（ナチュラルキラー）細胞と組み合わせた本明細書に記載される任意のマスク型ＩＬ－１５サイトカインまたは組成物の投与による、がんの治療または予防の方法である。
７．製造物品またはキット
別の態様では、本明細書に記載される任意のマスク型ＩＬ－１５サイトカインを含む、製造品またはキットが提供される。製造物品またはキットは、本発明の方法におけるサイトカインの使用のための説明書をさらに含み得る。したがって、ある特定の実施形態では、製造品またはキットは、有効量のマスク型サイトカインを個体に投与することを含む、個体において障害（例えば、がん）を治療または予防するための方法におけるマスク型サイトカインの使用のための説明書を含み得る。例えば、ある特定の実施形態では、製造品またはキットは、有効量のマスク型ＩＬ－１５ポリペプチドを個体に投与することを含む、個体において障害（例えば、がん）を治療または予防する方法におけるマスク型ＩＬ－１５ポリペプチドの使用のための説明書を含む。ある特定の実施形態では、個体は、ヒトである。いくつかの実施形態では、個体は、白血病、リンパ腫、頭頸部がん、結腸直腸がん、前立腺がん、膵臓がん、黒色腫、乳がん、神経芽細胞腫、肺がん、卵巣がん、骨肉腫、膀胱がん、子宮頸がん、肝臓がん、腎臓がん、皮膚がん、または精巣がんからなる群から選択される疾患を有する。
製造物品またはキットは、容器をさらに含み得る。好適な容器としては、例えば、ボトル、バイアル（例えば、デュアルチャンバーバイアル）、シリンジ（シングルまたはデュアルチャンバーシリンジなど）、試験管、および静注（ＩＶ）バッグが挙げられる。容器は、ガラスまたはプラスチックなどの様々な材料から形成され得る。容器は、製剤を保持する。いくつかの実施形態では、製剤は、凍結乾燥製剤である。いくつかの実施形態では、製剤は、凍結製剤である。いくつかの実施形態では、製剤は、液体乾燥製剤である。
製造物品またはキットは、容器上にあるか、または容器と関連付けられる、ラベルまたは添付文書をさらに含み得、製剤の再構成および／または使用のための指示を示し得る。ラベルまたは添付文書は、製剤が、個体における障害（例えば、がん）を治療または予防するための皮下、静脈内、または他の投与様式に有用であるか、または意図されていることをさらに示し得る。製剤を保持する容器は、単回使用バイアルまたは複数回使用バイアルであってもよく、これは再構成された製剤の反復投与を可能にする。製造物品またはキットは、好適な希釈剤を含む第２の容器をさらに含み得る。製造物品またはキットは、他の緩衝剤、希釈剤、フィルター、針、シリンジ、および使用説明書を伴う添付文書を含む、商業的、治療的、およびユーザーの観点から望ましい他の材料をさらに含み得る。
具体的な実施形態では、本発明は、単回用量投与ユニット用のキットを提供する。そのようなキットは、治療用サイトカインの水性製剤の容器を含み、
シングルまたはマルチチャンバープレフィルドシリンジの両方を含む。例示的事前充填シリンジは、Ｖｅｔｔｅｒ ＧｍｂＨ（Ｒａｖｅｎｓｂｕｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）から入手可能である。
本明細書の製造物品またはキットは、任意に、第２の薬剤を含む容器をさらに含み、マスク型サイトカインは、第１の薬剤であり、その物品またはキットは、有効量における第２の薬剤で対象を治療するためのラベルまたは添付文書上の説明書をさらに含む。
別の実施形態では、本明細書で提供されるものは、自動注射器での投与のための本明細書に記載される製剤を含む、製造物品またはキットである。自動注射器は、起動時に、患者または投与者からの追加の必要な措置なしにその内容物を送達する、注射装置として説明され得る。これらは、送達速度が一定でなければならず、かつ送達時間が数瞬よりも長い場合、治療用製剤のセルフメディケーションに特に適している。
８．定義
別段に定義のない限り、本明細書で使用されるすべての専門用語、表記、ならびに他の技術用語および科学用語は、請求される主題が関連する技術分野の当業者によって一般的に理解されるものと同じ意味を有することを意図している。一場合によっては、一般的に理解される意味を伴う用語は、明確性および／または容易な参照のために本明細書で定義され、本明細書のそのような定義の包含は、当該技術分野で一般的に理解されるものに対する実質的な差異を表すと必ずしも解釈されるべきではない。
本発明は、当然のことながら変化し得る特定の組成物または生物学系に限定されないことを理解されたい。また、本明細書で使用される用語は、特定の実施形態を説明する目的のためのものであるに過ぎず、制限を意図するものではないことを理解されたい。本明細書および添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、内容が他に別様に明確に指示しない限り、複数の指示対象を含む。したがって、例えば、「ａｎ ＩＬ－１５ ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ（ＩＬ－１５ポリペプチド）」の言及は、任意に、２つ以上のそのようなポリペプチドおよび同等物の組み合わせを含む。
本明細書で使用される場合の「約」という用語は、この技術分野の当業者に容易に知られているそれぞれの値に対する通常の誤差範囲を指す。本明細書の「約」の値またはパラメータの言及は、その値またはパラメータを本質的に対象とする実施形態を含む（および記載する）。
本明細書に記載される本発明の態様および実施形態は、態様および実施形を「を含む」、「からなる」、および「から本質的になる」を含むことを理解されたい。
本明細書で使用される場合、「および／または」という用語は、項目のうちのいずれか１つ、項目の任意の組み合わせ、または用語が関連する項目のすべてを指す。例えば、「Ａ、Ｂ、および／またはＣ」という語句は、以下の実施形態の各々を包含することを意図している：Ａ、Ｂ、およびＣ、Ａ、Ｂ、またはＣ、ＡまたはＢ、ＡまたはＣ、ＢまたはＣ、ＡおよびＢ、ＡおよびＣ、ＢおよびＣ、ＡおよびＢまたはＣ、ＢおよびＡまたはＣ、ＣおよびＡまたはＢ、Ａ（単独）、Ｂ（単独）、ならびにＣ（単独）。
「抗体」という用語は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体（イムノグロブリンＦｃ領域を有する完全長抗体を含む）、ポリエピトープ特異性を有する抗体組成物、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体、ダイアボディ、および単鎖分子、ならびに抗体断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、およびＦｖ）を含む。「イムノグロブリン（Ｉｇ）」という用語は、本明細書では「抗体」と同義的に使用される。
「抗体」という用語は、当該部位は、同じポリペプチド鎖（ＶＨ－ＶＬ）中の軽鎖可変（ＶＬ）ドメインに接続された重鎖可変（ＶＨ）ドメインを含む、２つの抗原結合部位を伴う小さな抗体断片を指す。
塩基性４鎖抗体ユニットは、２つの同一の軽（Ｌ）鎖および２つの同一の重（Ｈ）鎖から構成されるヘテロ四量体糖タンパク質である。ＩｇＭ抗体は、Ｊ鎖と呼ばれる追加のポリペプチドとともに、５個の塩基性ヘテロ四量体ユニットからなり、１０個の抗原結合部位を含有するが、一方でＩｇＡ抗体は、Ｊ鎖と組み合わせて多価集合体を形成するように重合することができる、２～５個の塩基性４鎖ユニットを含む。ＩｇＧの場合、４鎖ユニットは、概して、約１５０，０００ダルトンである。各Ｌ鎖は、１つの共有結合ジスルフィド結合によってＨ鎖に連結されるが、一方で２つのＨ鎖は、Ｈ鎖アイソタイプに応じて、１つ以上のジスルフィド結合によって互いに連結される。各Ｈ鎖およびＬ鎖はまた、規則的な間隔を置いた鎖内ジスルフィド架橋を有する。各Ｈ鎖は、Ｎ末端に可変ドメイン（ＶＨ）を有し、続いてａ鎖およびｙ鎖の各々に対して３つの定常ドメイン（ＣＨ）、ならびにｐおよびｓアイソタイプに対して４つのＣＨドメインを有する。各Ｌ鎖は、Ｎ末端に可変ドメイン（ＶＬ）を有し、続いてその他方の末端に定常ドメインを有する。ＶＬは、ＶＨと整列し、ＣＬは、重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨＩ）と整列する。特定のアミノ酸残基は、軽鎖可変ドメインと重鎖可変ドメインとの間に界面を形成すると考えられる。ＶＨおよびＶＬの対合は、ともに単一の抗原結合部位を形成する。抗体の異なるクラスの構造および特性については、例えば、Ｂａｓｉｃ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，８ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｄａｎｉｅｌ Ｐ．Ｓｔｉｅｓ，Ａｂｂａ Ｉ．Ｔｅｒｒ ａｎｄ Ｔｒｉｓｔｒａｍ Ｇ．Ｐａｒｓｏｌｗ（ｅｄｓ），Ａｐｐｌｅｔｏｎ ＆ Ｌａｎｇｅ，Ｎｏｒｗａｌｋ，ＣＴ，１９９４，ｐａｇｅ ７１ ａｎｄ Ｃｈａｐｔｅｒ ６を参照されたい。
任意の脊椎動物種由来のＬ鎖は、それらの定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパおよびラムダと呼ばれる、２つの明確に異なるタイプのうちの１つに割り当てられることができる。その重鎖の定常ドメイン（ＣＨ）のアミノ酸配列に応じて、免疫グロブリンを異なるクラスまたはアイソタイプに割り当てることができる。免疫グロブリンの５つのクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭがあり、それぞれ、ａ、８、ｅ、ｙ、およびｐと指定された重鎖を有する。ｙおよびａクラスは、ＣＨ配列および機能における比較的軽微な差異に基づいてサブクラスにさらに分割され、例えば、ヒトは、以下のサブクラスを発現する：ＩｇＧｌ、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２。ＩｇＧ１抗体は、アロタイプと称される複数の複数の多型バリアント（Ｊｅｆｆｅｒｉｓ ａｎｄ Ｌｅｆｒａｎｃ ２００９．ｍＡｂｓ Ｖｏｌ １ Ｉｓｓｕｅ ４ １－７で論評される）で存在することができ、そのうちのいずれかが、本発明で使用するために好適である。ヒト集団における一般的なアロタイプバリアントは、ａ、ｆ、ｎ、ｚという文字で指定されるものである。
「単離された」抗体は、その産生環境（例えば、天然または組換え）の成分から識別、分離、および／または回収された抗体である。いくつかの実施形態では、単離されたポリペプチドは、その産生環境からの他のすべての成分と無関連である。組換えトランスフェクト細胞から生じるものなどのその産生環境の汚染成分は、抗体の研究、診断、または治療用途に典型的には干渉する材料であり、酵素、ホルモン、および他のタンパク質性もしくは非タンパク質性溶質を含み得る。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、（１）例えば、Ｌｏｗｒｙ法によって決定される抗体の９５重量％超まで、およびいくつかの実施形態では、９９重量％超まで、（１）回転カップシークエンサーの使用によってＮ末端もしくは内部アミノ酸配列の少なくとも１５個の残基を得るために十分な程度まで、または（３）クマシーブルーもしくはシルバー染色を使用した非還元もしくは還元条件下でのＳＤＳ－ＰＡＧＥによる均質性まで、精製される。抗体の天然環境の少なくとも１つの成分が存在しないため、単離された抗体は、組換え細胞内でインサイチュに抗体を含む。しかしながら、通常、単離されたポリペプチドまたは抗体は、少なくとも１つの精製ステップによって調製される。
本明細書で使用される場合、「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に均質な抗体の集団から得られる抗体を指し、すなわち、集団を構成する個々の抗体は、わずかな量で存在し得る可能な天然に存在する変異および／または翻訳後修飾（例えば、異性化、アミド化）を除き、同一である。いくつかの実施形態では、モノクローナル抗体は、重鎖および／または軽鎖にＣ末端切断を有する。例えば、１、２、３、４、または５個のアミノ酸残基は、重鎖および／または軽鎖のＣ末端で切断される。いくつかの実施形態では、Ｃ末端切断は、重鎖からＣ末端リジンを除去する。いくつかの実施形態では、モノクローナル抗体は、重鎖および／または軽鎖にＮ末端切断を有する。例えば、１、２、３、４、または５個のアミノ酸残基は、重鎖および／または軽鎖のＮ末端で切断される。いくつかの実施形態では、モノクローナル抗体の短縮型形態は、組換え技術によって作製され得る。いくつかの実施形態では、モノクローナル抗体は、高度に特異的であり、単一の抗原部位に配向されている。いくつかの実施形態では、モノクローナル抗体は、高度に特異的であり、複数の抗原部位（例えば、二重特異性抗体または多重特異性抗体など）に配向されている。「モノクローナル」という修飾語句は、実質的に均質な抗体群から取得されたときの抗体の特徴を示すが、任意の特定の方法による抗体の産生を必要とするとはみなされないものとする。例えば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は、例えば、ハイブリドーマ法、組換えＤＮＡ法、ファージディスプレイ技術、およびヒト免疫グロブリン遺伝子座の一部もしくはすべてまたはヒト免疫グロブリン配列をコードする遺伝子を有する動物においてヒトまたはヒト様抗体を産生するための技術を含む、様々な技法によって作製され得る。
「完全長抗体」、「インタクトな抗体」、または「全抗体」という用語は、抗体断片とは対照的に、その実質的にインタクトな形態の抗体を指すために同義的に使用される。具体的には、全抗体は、Ｆｃ領域を含む重鎖および軽鎖を有するものを含む。定常ドメインは、天然配列定常ドメイン（例えば、ヒト天然配列定常ドメイン）またはそのアミノ酸配列バリアントであってもよい。場合によっては、インタクトな抗体は、１つ以上のエフェクター機能を有し得る。
「抗体断片」は、インタクトな抗体の抗原結合領域および／または可変領域、ならびに／もしくはインタクトな抗体の定常領域などのインタクトな抗体の一部を含む。抗体断片の例としては、抗体のＦｃ領域、Ｆｃ領域の一部、またはＦｃ領域を含む抗体の一部が挙げられる。抗原結合抗体断片の例としては、ドメイン抗体（ｄＡｂｓ）、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、およびＦｖ断片、抗体、線形抗体（米国特許第５，６４１，８７０号、実施例２、Ｚａｐａｔａ ｅｔ ａｈ，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．８（１０）：１０５７－１０６２ ［１９９５］を参照されたい）、一本鎖抗体分子、および抗体断片から形成された多重特異性抗体が挙げられる。単一重鎖抗体もしくは単一軽鎖抗体は、操作されることができるか、または重鎖の場合には、単一重鎖分子を産生するように操作されたラクダ科、サメ、ライブラリ、もしくはマウスから単離されることができる。
抗体のパパイン消化は、「Ｆａｂ」断片と呼ばれる２つの同一の抗原結合断片と、容易に結晶化する能力を反映する名称である残留「Ｆｃ」断片とを産生した。Ｆａｂ断片は、Ｈ鎖の可変領域ドメイン（ＶＨ）、および１つの重鎖（ＶＨ）の第１の定常ドメイン（ＣＨＩ）とともに、Ｌ鎖全体からなる。各Ｆａｂ断片は、抗原結合に関して一価であり、すなわち、単一の抗原結合部位を有する。抗体のペプシン処理は、異なる抗原結合活性を有する２つのジスルフィド連結Ｆａｂ断片にほぼ対応し、依然として抗原を架橋することが可能である、単一の大きなＦ（ａｂ’）２断片を産出する。Ｆａｂ’断片は、抗体ヒンジ領域由来の１つ以上のシステインを含むＣＨＩドメインのカルボキシ末端に数個の追加の残基を有することによって、Ｆａｂ断片とは異なる。Ｆａｂ’－ＳＨは、定常ドメインのシステイン残基が遊離チオール基を持つ、Ｆａｂ’の本明細書における名称である。Ｆ（ａｂ’）２抗体断片は、元々、それらの間にヒンジシステインを有するＦａｂ’断片の対として産生された。抗体断片の他の化学結合も既知である。Ｆｃ断片は、ジスルフィドによって一緒に保持される両方のＨ鎖のカルボキシ末端部分を含む。抗体のエフェクター機能は、Ｆｃ領域内の配列およびグリカンによって決定され、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）によっても認識される領域は、ある特定の細胞型上に見られる。
参照ポリペプチド配列に対する「アミノ酸配列同一性率（％）」は、それらの配列を整列させ、必要であればギャップを導入して最大配列同一性率を達成した後の、参照ポリペプチド配列中のアミノ酸残基と同一である候補配列中のアミノ酸残基の割合として定義され、配列同一性の一部としての任意の保存的置換を考慮していない。アミノ酸配列同一性パーセントを決定するための整列は、当該技術分野の技術範囲内にある種々の方法、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、ＡＬＩＧＮ、Ｍｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの公開されている入手可能なコンピュータソフトウェアを使用して達成されることができる。当業者であれば、比較される配列の完全長にわたる最大整列を達成するために必要な任意のアルゴリズムを含む、配列を整列するための適切なパラメータを決定することができる。例えば、所与のアミノ酸配列Ｂに対する、所与のアミノ酸配列Ｂとの、または所与のアミノ酸配列Ｂに対した、所与のアミノ酸配列Ａのアミノ酸配列同一性％（所与のアミノ酸配列Ｂに対する、所与のアミノ酸配列Ｂとの、または所与のアミノ酸配列Ｂに対した、ある特定のアミノ酸配列同一性％を有するか、または含む、所与のアミノ酸配列Ａと代替的に称され得る）は、以下のように計算される。
１００×画分Ｘ／Ｙ
式中、Ｘは、そのプログラムのＡおよびＢの整列における配列によって同一の一致としてスコア付けされたアミノ酸残基の数であり、Ｙは、Ｂにおけるアミノ酸残基の総数である。アミノ酸配列Ａの長さがアミノ酸配列Ｂの長さと等しくない場合、Ａ対Ｂのアミノ酸配列同一性％は、Ｂ対Ａのアミノ酸配列同一性％と等しくないことを理解されたい。
抗体「エフェクター機能」は、抗体のＦｃ領域（天然配列のＦｃ領域またはアミノ酸配列バリアントのＦｃ領域）に起因する生物学的活性を指し、抗体アイソタイプによって変化する。抗体エフェクター機能の例としては、Ｃｌｑ結合および補体依存性細胞傷害、Ｆｃ受容体結合、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、貪食作用、細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）の下方調節、ならびにＢ細胞活性化が挙げられる。
本明細書で使用される場合の「結合親和性」は、分子（例えば、サイトカイン）の単一の結合部位とその結合パートナー（例えば、サイトカイン受容体）との間の非共有相互作用の強度を指す。いくつかの実施形態では、結合タンパク質（例えば、サイトカイン）の親和性は、概して、平衡解離定数（Ｋｄ）によって表されることができる。親和性は、本明細書に記載されるものを含む、当該技術分野で既知の一般的な方法によって測定されることができる。
本明細書に記載されるサイトカインポリペプチドをコードする「単離された」核酸分子は、それが産生された環境で通常関連する、少なくとも１つの汚染核酸分子から識別および分離される核酸分子である。いくつかの実施形態では、単離された核酸は、産生環境と関連付けられたすべての成分と無関連である。本明細書のポリペプチドおよびサイトカインポリペプチドをコードする単離された核酸分子は、それが天然に見出される形態または環境以外の形態である。したがって、単離された核酸分子は、細胞内に天然に存在する本明細書のポリペプチドおよびサイトカインポリペプチドをコードする核酸と区別される。
「薬学的製剤」という用語は、活性成分の生物学的活性が効果的であることを可能にするような形態であり、かつ製剤が投与される対象に対して許容できない毒性を有する追加の成分を含有しない、調製物を指す。
そのような製剤は、滅菌されている。
本明細書で使用される場合の「担体」は、用いられる投与量および濃度でそれに曝露される細胞または哺乳動物に非毒性である、薬学的に許容される担体、賦形剤、または安定剤を含む。生理学的に許容される担体は、水性ｐＨ緩衝溶液であることが多い。生理学的に許容される担体の例としては、リン酸塩、クエン酸塩、および他の有機酸などの緩衝液、アスコルビン酸を含む酸化防止剤、低分子量（約１０個未満の残基）ポリペプチド、血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免疫グロブリンなどのタンパク質、ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー、グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン、もしくはリジンなどのアミノ酸、単糖類、二糖類、およびグルコース、マンノース、もしくはデキストリンを含む他の炭水化物、ＥＤＴＡなどのキレート剤、マンニトールもしくはソルビトールなどの糖アルコール、ナトリウムなどの塩形成対イオン、ならびに／またはＴＷＥＥＮ（商標）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、およびＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）などの非イオン性界面活性剤が挙げられる。
本明細書で使用される場合、「治療」という用語は、臨床病理の経過中に治療されている個体または細胞の自然経過を改変するように設計された臨床介入を指す。治療の望ましい効果には、疾患進行の速度の低下、疾患状態の改善または緩和、ならびに寛解または予後の改善が含まれる。個体は、例えば、障害（例えば、新生物性疾患）に関連する１つ以上の症状が軽減または除去される場合、首尾よく「治療される」。例えば、治療が、疾患を患う個体の生活の質の向上、疾患の治療に必要な他の薬剤の用量の減少、疾患の再発頻度の低減、疾患の重症度の低減、疾患の発症もしくは進行の遅延、および／または個体の生存の延長をもたらす場合、個体は、首尾よく「治療される」。
本明細書で使用される場合、「と併用して」または「と組み合わせて」は、別の治療モダリティに加えて、１つの治療モダリティの投与を指す。したがって、「と併用して」または「と組み合わせて」は、個体への他の治療モダリティの投与の前、その間、またはその後の、１つの治療モダリティの投与を指す。
本明細書で使用される場合、「予防」という用語は、個体における疾患の発生または再発に関して予防を提供することを含む。個体は、障害の素因があるか、障害にかかりやすいか、または障害を発症するリスクがあり得るが、障害と診断されていない。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるマスク型サイトカインは、障害の発症を遅延させるために使用される。
本明細書で使用される場合、障害を発症する「リスクがある」個体は、検出可能な疾患もしくは疾患の症状を有し得るか、または有しない場合があり、本明細書に記載される治療方法の前に、検出可能な疾患もしくは疾患の症状を示している場合があるか、または示していない場合がある。「リスクがある」とは、当該技術分野で既知であるように、個体が、疾患の発症と相関する測定可能なパラメータである１つ以上のリスク因子を有することを示す。これらのリスク因子のうちの１つ以上を有する個体は、これらのリスク因子のうちの１つ以上がない個体よりも、障害を発症する確率が高い。
「有効量」は、少なくとも、治療結果または予防的結果を含む、所望のまたは指示された効果を達成するために必要な投与量および期間で有効な量を指す。
有効量は、１回以上の投与で提供されることができる。「治療的有効量」は、少なくとも、特定の障害の測定可能な改善に影響を与えるために必要な最小濃度である。本明細書における治療的有効量は、患者の疾患状態、年齢、性別、および体重などの因子、ならびに個体において所望の応答を誘発する抗体の能力に応じて変化し得る。治療的有効量はまた、治療的に有益な効果がマスク型サイトカインの任意の毒性または有害な効果を上回る量であり得る。「予防的有効量」は、所望の予防的結果を達成するために必要な投与量および期間で有効な量を指す。典型的には、必ずしもではないが、予防用量が、疾患の前に、または疾患の早期の段階で対象で使用されるため、予防的有効量は、治療的有効量よりも少なくあり得る。
「慢性」投与は、長期間にわたる初期治療効果（活性）を主流にするように、急性モードとは対照的な連続モードでの薬剤の投与を指す。「断続的」投与は、中断することなく連続的に行われるのではなく、むしろ本質的に周期的である治療である。
本明細書で使用される場合、「個体」または「対象」は、哺乳動物である。治療の目的のための「哺乳動物」には、ヒト、家畜および農場動物、ならびにイヌ、ウマ、ウサギ、ウシ、ブタ、ハムスター、スナネズミ、マウス、フェレット、ラット、ネコなどの動物園、スポーツ、またはペット動物が含まれる。いくつかの実施形態では、個体または対象は、ヒトである。
９．実施例
本発明は、以下の実施例を参照することにより、より十分に理解されるであろう。しかしながら、それらは、本発明の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。本明細書に記載される実施例および実施形態は、例示目的のためのみであり、それを考量したその様々な修飾または変更が当業者に提案され、本出願の趣旨および目的、ならびに添付の特許請求の範囲に含まれるべきであることを理解されたい。
いくつかの実施例は、ＩＬ－２ポリペプチド構築物またはＩＬ－１５ポリペプチド構築物の「マスク型」バージョンの操作、産生、および／または試験を記述するが、いくつかの実施例はまた、比較のためなどのＩＬ－２ポリペプチド構築物もしくはＩＬ－１５ポリペプチド構築物の親「非マスク型」バージョン、または比較のための対照として試験される本明細書に記載される成分のうちの１つ以上を含む他の構築物も採用する。したがって、例えば、マスク型ＩＬ－２ポリペプチド構築物に行われた試験の説明は、構築物の非マスク型バージョンも試験されなかったことを必ずしも意味するわけではない。
実施例１：マスク型ＩＬ－２ポリペプチドおよびマスク型ＩＬ－１５ポリペプチドの操作
マスク型ＩＬ－２ポリペプチドおよびマスク型ＩＬ－１５ポリペプチド構築物は、本明細書の教示に従って生成される。後続の実施例では、いくつかの実験は、単量体形態のマスク型ＩＬ－２ポリペプチド構築物の使用を伴い、いくつかの実験は、同じマスク型ポリペプチド構築物の２つのコピーを連結するジスルフィド結合を通して形成された二量体（ホモ二量体）、または２つの異なるポリペプチドによって形成されたヘテロ二量体などの二量体形態のマスク型ＩＬ－２構築物の使用を伴う（例えば、表５を参照されたい）。
ＩＬ－２ポリペプチドまたはその機能的断片、マスキング部分、および抗体またはその断片（例えば、Ｆｃ領域、重鎖、および／または軽鎖）などの半減期延長ドメインを含む、マスク型ＩＬ－２ポリペプチド構築物が生成される。マスキング部分も含むことなく、半減期延長ドメインに連結されたＩＬ－２ポリペプチドまたはその機能的断片を含む、いくつかのＩＬ－２ポリペプチド構築物も生成される。構築物のうちのいくつかはまた、切断可能なペプチドを含み、マスキング部分をＩＬ－２ポリペプチドまたはその機能的断片に連結し、それによって、活性化可能なマスク型ＩＬ－２ポリペプチド構築物をもたらす、リンカーも含む。構築物のうちのいくつかはまた、ＩＬ－２ポリペプチドまたはその機能的断片を半減期延長ドメインに連結するリンカーも含む。構築物のうちのいくつかはまた、ＩＬ－２ポリペプチドまたはその機能的断片をマスキング部分に連結するリンカーも含む。ＩＬ－２ポリペプチドまたはその機能的断片をマスキング部分に連結するリンカー内に切断可能なペプチドを含まないマスク型ＩＬ－２ポリペプチド構築物は、切断可能なペプチドを含まないため、非活性化可能なマスク型ＩＬ－２ポリペプチド構築物または非活性化可能なＩＬ－２ポリペプチド構築物とも称される。例示的ＩＬ－２ポリペプチド構築物の構造および組成物が、表３に提供される。
Figure 2023520514000023
また、ＩＬ－２ポリペプチドまたはその機能的断片、第１のマスキング部分、第２のマスキング部分、およびアルブミン、抗体もしくはその断片（例えば、Ｆｃ領域、重鎖、および／または軽鎖）、アルブミン結合ペプチド、ＩｇＧ結合ペプチド、またはポリアミノ酸配列などの半減期延長ドメインを含む、マスク型ＩＬ－２ポリペプチド構築物も生成される。構築物のうちのいくつかはまた、第１のマスキング部分をＩＬ－２ポリペプチドまたはその機能的断片に連結するリンカーも含む。構築物のうちのいくつかはまた、第２のマスキング部分をＩＬ－２ポリペプチドまたはその機能的断片に連結するリンカーも含む。構築物のうちのいくつかは、第１のマスキング部分をＩＬ－２ポリペプチドまたはその機能的断片に連結するリンカー、および／または第２のマスキング部分をＩＬ－２ポリペプチドまたはその機能的断片に連結するリンカー内に切断可能なペプチドを含み、それによって、活性化可能なマスキングＩＬ－２ポリペプチド構築物をもたらす。 構築物のうちのいくつかはまた、第２のマスキング部分を半減期延長ドメインに連結するリンカーも含む。ＩＬ－２ポリペプチドまたはその機能的断片を第１のマスキング部分または第２のマスキング部分に連結するリンカーのいずれかに切断可能なペプチドを含まないマスク型ＩＬ－２ポリペプチド構築物は、切断可能なペプチドを含まないため、非活性化可能なマスク型ＩＬ－２ポリペプチド構築物または非活性化可能なＩＬ－２ポリペプチド構築物とも称される。例示的ＩＬ－２ポリペプチド構築物の構造および組成物が、表４に提供される。
Figure 2023520514000024
また、ＩＬ－２ポリペプチドまたはその機能的断片、マスキング部分、第１の半減期延長ドメイン、および第２の半減期延長ドメイン、抗体またはその断片（例えば、Ｆｃ領域、重鎖、および／または軽鎖）を含む、マスク型ＩＬ－２ポリペプチド構築物も生成される。マスキング部分は、第１の半減期延長ドメインに連結され、ＩＬ－２ポリペプチドまたはその機能的断片は、第２の半減期延長ドメインに連結され、第１の半減期延長ドメインおよび第２の半減期延長ドメインは、第１および第２の半減期延長ドメインの会合を促進する修飾を含有する。１つの例示的実施形態では、マスキング部分は、第１の半減期延長ドメインに連結され、配列番号３８のアミノ酸配列を含み、ＩＬ－２ポリペプチドまたはその機能的断片は、第２の半減期延長ドメインに連結され、配列番号４８のアミノ酸配列を含み、第１の半減期延長ドメインおよび第２の半減期延長ドメインは、第１および第２の半減期延長ドメインの会合を促進する修飾を含有する。非マスク型ＩＬ－２ポリペプチド構築物の１つの例示的実施形態では、実施形態は、第１の半減期延長ドメインに連結されたＩＬ－２ポリペプチドまたはその機能的断片を含み、第２の半減期延長ドメインを含み、ＩＬ－２ポリペプチドまたはその機能的断片は、第１の半減期延長ドメインに連結され、配列番号４８のアミノ酸配列を含み、第２の半減期延長ドメインは、配列番号７９のアミノ酸配列を含む。構築物のうちのいくつかはまた、マスキング部分を第１の半減期延長ドメインに連結するリンカー、および／またはＩＬ－２ポリペプチドもしくはその機能的断片を第２の半減期延長ドメインに連結するリンカーを含む。構築物のうちのいくつかの第１および第２の半減期延長ドメインもまた、連結される。いくつかの構築物では、構築物のうちのいくつかの第１および第２の半減期延長ドメインは、リンカーによって連結される。構築物のうちのいくつかは、マスキング部分を第１の半減期延長ドメインに連結するリンカー、および／またはＩＬ－２ポリペプチドもしくはその機能的断片を第２の半減期延長ドメインに連結するリンカー内に切断可能なペプチドを含み、それによって、活性化可能なマスク型ＩＬ－２ポリペプチド構築物をもたらす。ＩＬ－２ポリペプチドもしくはその機能的断片を第２の半減期延長ドメインに連結するリンカー、またはマスキング部分を第１の半減期延長ドメインに連結するリンカーのいずれかに切断可能なペプチドを含まないマスク型ＩＬ－２ポリペプチド構築物は、切断可能なペプチドを含まないため、非活性化可能なマスク型ＩＬ－２ポリペプチド構築物または非活性化可能なＩＬ－２ポリペプチド構築物とも称される。例示的ＩＬ－２ポリペプチド構築物の構造および組成物が、表５に提供される。
また、ＩＬ－１５ポリペプチドまたはその機能的断片、マスキング部分、第１の半減期延長ドメイン、および第２の半減期延長ドメイン、抗体またはその断片（例えば、Ｆｃ領域、重鎖、および／または軽鎖）を含む、マスク型ＩＬ－１５ポリペプチド構築物も生成される。マスキング部分は、第１の半減期延長ドメインに連結され、ＩＬ－１５ポリペプチドまたはその機能的断片は、第２の半減期延長ドメインに連結され、第１の半減期延長ドメインおよび第２の半減期延長ドメインは、第１および第２の半減期延長ドメインの会合を促進する修飾を含有する。構築物のうちのいくつかはまた、マスキング部分を第１の半減期延長ドメインに連結するリンカー、および／またはＩＬ－１５ポリペプチドもしくはその機能的断片を第２の半減期延長ドメインに連結するリンカーも含む。構築物のうちのいくつかの第１および第２の半減期延長ドメインもまた、連結される。いくつかの構築物では、構築物のうちのいくつかの第１および第２の半減期延長ドメインは、リンカーによって連結される。構築物のうちのいくつかは、マスキング部分を第１の半減期延長ドメインに連結するリンカー、および／またはＩＬ－１５ポリペプチドもしくはその機能的断片を第２の半減期延長ドメインに連結するリンカー内に切断可能なペプチドを含み、それによって、活性化可能なマスク型ＩＬ－１５ポリペプチド構築物をもたらす。ＩＬ－１５ポリペプチドもしくはその機能的断片を第２の半減期延長ドメインに連結するリンカー、またはマスキング部分を第１の半減期延長ドメインに連結するリンカーのいずれかに切断可能なペプチドを含まないマスク型ＩＬ－１５ポリペプチド構築物は、切断可能なペプチドを含まないため、非活性化可能なマスク型ＩＬ－１５ポリペプチド構築物または非活性化可能なＩＬ－１５ポリペプチド構築物とも称される。例示的ＩＬ－１５ポリペプチド構築物の構造および組成物が、表５に提供される。
Figure 2023520514000025
Figure 2023520514000026
実施例２：マスク型ＩＬ－２およびＩＬ－１５ポリペプチドのインビトロ特性評価
実施例１で生成されたマスク型ＩＬ－２ポリペプチド構築物およびマスク型ＩＬ－１５ポリペプチド構築物は、インビトロでいくつかの細胞アッセイおよび機能的アッセイを使用して特性評価される。
産生
構築物（例えば、マスク型ＩＬ－２ポリペプチド構築物およびマスク型ＩＬ－１５ポリペプチド構築物）をコードするプラスミドを、Ｅｘｐｉ２９３細胞（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ａ１４５２７）またはＨＥＫ２９３－６Ｅ細胞（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｏｕｎｃｉｌ；ＮＲＣ）のいずれかにトランスフェクトした。トランスフェクションは、ＰＥＩｐｒｏ（Ｐｏｌｙｐｌｕｓ Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ、１１５－１００）を使用した１ｍｇの総ＤＮＡを使用して、総ＤＮＡと１：１の比率で実施された。ＤＮＡおよびＰＥＩを各々、５０ｍＬのＯｐｔｉＭｅｍ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ３１９８５０８８）培地に添加し、滅菌濾過した。ＤＮＡおよびＰＥＩを１０分間組み合わせ、それぞれ、ｅｘｐｉ２９３細胞またはＨＥＫ２９３細胞について、１．８～２．８×１０６細胞／ｍＬまたは０．８５～１．２０×１０６細胞／ｍの細胞密度、および少なくとも９５％の生存率でＥｘｐｉ２９３細胞に添加した。ＨＥＫ２９３－６Ｅトランスフェクションは、Ｅｘｐｉ２９３トランスフェクションに使用されたものと同じプロトコルに従って、細胞密度および少なくとも９５％の生存率で実施された。５～７日後、細胞を３０００×ｇで遠心分離することによってペレット化し、上清を０．２μｍの膜を通して濾過した。プロテインＡ樹脂（ＣａｐｔｉｖＡ、Ｒｅｐｌｉｇｅｎ ＣＡ－ＰＲＩ－０００５）を、濾過された上清に添加し、振とうしながら４°Ｃで少なくとも２時間インキュベートした。樹脂をカラムの中に充填し、１５カラム体積の２０ｍＭクエン酸塩（ｐＨ６．５）で洗浄し、次いで、１５カラム体積の２０ｍＭクエン酸塩、５００ｍＭ塩化ナトリウム（ｐＨ６．５）で洗浄した。結合タンパク質を、２０ｍＭのクエン酸塩、１００ｍＭのＮａＣｌ（ｐＨ２．９）でカラムから溶出した。
親（例えば、非マスク型）およびマスク型構築物を含む、産生された例示的構築物の力価（ｍｇ／Ｌ）が、以下の表６に提供される。
Figure 2023520514000027
ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析
ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析については、タンパク質サンプルを４ｘ Ｌａｅｍｍｌｉサンプル緩衝液（ＢｉｏＲａｄカタログ番号１６１０７４７）を用いて作製した。還元サンプルについては、０．１ＭのＢｏｎｄ Ｂｒｅａｋｅｒ ＴＣＥＰ溶液（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ７７７２０）を添加し、サンプルを６５°Ｃで５分間加熱した。タンパク質を１２ウェル ＮｕＰａｇｅ ４～１２％ Ｂｉｓ－Ｔｒｉｓ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｇｅｌ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ ＮＰ０３２２ＢＯＸ）に装填し、ウェル当たり４μｇのタンパク質を装填した。ＳｉｍｐｌｙＢｌｕｅ ＳａｆｅＳｔａｉｎ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ ＬＣ６０６５）を使用して、ゲルを染色した。
図４に描写されるように、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析は、例示的構築物（ＡＫ３０４、ＡＫ３０５、ＡＫ３０７、ＡＫ３０８、ＡＫ３０９、ＡＫ３１０、ＡＫ３１１、ＡＫ３１２、ＡＫ３１３、ＡＫ３１４、およびＡＫ３１５）の製造および精製後に、フロースルー（ＦＴ）サンプル（すなわち、プロテインＡカラムに結合しなかったタンパク質）および溶出（Ｅ）サンプル（すなわち、プロテインＡカラムに結合し、そこから溶出されたタンパク質）に実施された。この例示的データは、本明細書に記載される構築物が、正常に産生および精製され得ることを示す。
レポーターバイオアッセイ
レポーターバイオアッセイは、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ経路などの下流経路の活性化を監視するために、非マスク型親構築物または他の対照とともに、マスク型ＩＬ－２ポリペプチド構築物およびマスク型ＩＬ－１５ポリペプチド構築物に実施される。
いくつかの研究では、ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ ＩＬ－２レポーター細胞（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ）が、以下の方法に従ってＪＡＫ－ＳＴＡＴ経路の活性化を試験するために使用された。ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ ＩＬ－２細胞６代継代（ｐ６）（９７％生細胞）を、アッセイ培地（ＤＭＥＭ＋１０％熱不活化ＦＢＳ）で２回洗浄し、１５０μＬ中のアッセイ培地中に５ｅ４細胞／ウェルにおいて３つのプレート内で播種し、約２時間アッセイ培地中で静置して、プレートへの接着を可能にした。試験された各構築物をアッセイ媒体中で３００ｐＭに希釈し、次いで、プレートを１：２まで希釈した。７５ｐＭの最終開始濃度のために、５０μＬの各希釈を添加した。ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ ＩＬ－２細胞上清を２４時間後に採取し、３ウェル／プレートのアッセイ培地を加えたＱｕａｎｔｉｂｌｕｅ（１８０μＬ＋２０μＬ上清）と３７°Ｃで１時間インキュベートした。６２５ｎｍにおいてＢｉｏｔｅｋ Ｎｅｏ２を使用して、吸光度を読み取った。ある研究では、例示的マスク型ＩＬ－１５ポリペプチド構築物ＡＫ２４８が、ＭＭＰ１０プロテアーゼへの以前の曝露の有無別に、このプロトコルに従って、陽性対照としての組換えヒトＩＬ－１５（ｒｈＩＬ－１５）とともに試験された。図４５Ａおよび４５Ｂに示されるように、マスク型ＩＬ－１５ポリペプチド構築物ＡＫ２４８（プロテアーゼ切断を伴わない）を使用したときに、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ経路の検出可能な活性化はなかったが、活性化プロテアーゼによる切断後、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ経路の強いレベルの活性化が観察された。これは、例示的ＩＬ－１５ポリペプチドが効果的にマスクされ、また、プロテアーゼ切断を通して活性化され得ることを実証する。
いくつかの研究では、ＣＴＬＬ２細胞が、以下の方法に従ってＪＡＫ－ＳＴＡＴ経路の活性化を試験するために使用された。ＣＴＬＬ２細胞を、１０％のＦＢＳを伴うＲＰＭＩ中にウェル当たり４０，０００個の細胞で播種した。目的の構築物（例えば、ＭＭＰプロテアーゼへの曝露の有無別のマスク型ＩＬ－１５ポリペプチド構築物ＡＫ２４８、またはｒｈＩＬ－１５などの陽性対照）の希釈物を添加し、３７度でインキュベートした。６時間後、Ｂｉｏ－Ｇｌｏ試薬を添加し、ＢｉｏＴｅｋ Ｓｙｎｅｒｇｙ Ｎｅｏ２プレートリーダーを用いて発光を測定した。
受容体結合
実施例１で生成されたマスク型ＩＬ－２ポリペプチド構築物およびマスク型ＩＬ－１５ポリペプチド構築物の結合が評価される。マスク型ＩＬ－２ポリペプチド構築物については、いくつかの実験では、ＥＬＩＳＡプレートは、ＩＬ－２Ｒα（ＣＤ２５とも呼ばれる）、ＩＬ－２Ｒβ（ＣＤ１２２とも呼ばれる）、またはＩＬ－２Ｒγ（ＣＤ１３２とも呼ばれる）、もしくはそれらの組み合わせなどの受容体サブユニットでコーティングされる。マスク型ＩＬ－１５ポリペプチド構築物については、いくつかの実験では、ＥＬＩＳＡプレートは、ＩＬ－１５Ｒα、ＩＬ－２Ｒβ（ＣＤ１２２とも呼ばれる）、またはＩＬ－２Ｒγ（ＣＤ１３２とも呼ばれる）、もしくはそれらの組み合わせなどの受容体サブユニットでコーティングされる。マスク型ＩＬ－２ポリペプチド構築物またはマスク型ＩＬ－１５ポリペプチド構築物の希釈物は、受容体サブユニットに結合させられ、抗ｈｕＦｃ－ＨＲＰ検出抗体を使用して検出される。マスク型ＩＬ－２ポリペプチド構築物およびマスク型ＩＬ－１５ポリペプチド構築物の結合は、プロテアーゼ切断の有無別の条件で決定される。
細胞上受容体結合
実施例１で生成されたマスク型ＩＬ－２ポリペプチド構築物およびマスク型ＩＬ－１５ポリペプチド構築物の細胞上受容体結合が評価される。マスク型ＩＬ－２ポリペプチド構築物の希釈物は、ＣＴＬＬ２細胞などの末梢血リンパ球または組織培養細胞に結合させられ、抗ｈｕＦｃ－ＦＩＴＣまたは抗アルブミン－ＦＩＴＣ検出抗体を使用して蛍光活性化細胞分類（ＦＡＣＳ）によって検出される。マスク型ＩＬ－２ポリペプチド構築物およびマスク型ＩＬ－１５ポリペプチド構築物の結合は、プロテアーゼ切断の有無別の条件で決定される。
受容体結合親和性
実施例１で生成されたマスク型ＩＬ－２ポリペプチド構築物の結合親和性が評価される。マスク型ＩＬ－２ポリペプチド構築物の結合親和性は、プロテアーゼ切断の有無別の条件で決定される。
マスク型および非マスク型ＩＬ－２ポリペプチド構築物の結合を試験するＳＰＲ研究については、Ｒｅｉｃｈｅｒｔカルボキシメチルデキストランヒドロゲル表面センサチップが、ＥＤＣおよびＮＨＳとのアミン結合を介して、１０ｍＭ酢酸ナトリウム（ｐＨ５．０）中の３０μｇ／ｍｌにおいて目的の構築物（例えば、マスク型ＩＬ－２ポリペプチド構築物または非マスク型ＩＬ－２ポリペプチド構築物）でコーティングおよび固定化された。ＰＢＳＴ中のＣＤ２５－ＦｃまたはＦｃ－ＣＤ１２２の希釈物（ＣＤ２５：１６ｎＭ、８ｎＭ、４ｎＭ、２ｎＭ、１ｎＭおよびＣＤ１２２：５００ｎＭ、２５０ｎＭ、１２５ｎＭ、６２．５ｎＭ、３１．２５ｎＭ）を調製した。Ｒｅｉｃｈｅｒｔ ４Ｃｈａｎｎｅｌ ＳＰＲを使用して、ＣＤ２５またはＣＤ１２２の希釈物を、固定化構築物を伴うクリップ上に流し、２５°Ｃでのオンレートを決定した。平衡時（約３分）、流動緩衝液をＰＢＳＴに変更し、６分間にわたってオフレートを決定した。各実行の合間に、チップを１０ｍＭのグリシン（ｐＨ２．０）で再生した。
図５Ａ～５Ｄは、ＣＤ２５－Ｆｃへの例示的マスク型ＩＬ－２ポリペプチド構築物（ＡＫ１６８）の結合を試験したＳＰＲ分析を使用して、そのアルファ受容体への結合を防止するＩＬ－２上の変異の有効性を描写する。図５Ａは、ＡＫ１６８とＣＤ２５－Ｆｃとの間の相互作用を描写し、図５Ｂは、ＭＭＰで活性化されたＡＫ１６８とＣＤ２５－Ｆｃとの間の相互作用を描写し、図５Ｃは、組換えヒトＩＬ－２（ｒｈＩＬ－２）対照とＣＤ２５－Ｆｃとの間の相互作用を描写する。図５Ｄは、会合定数（ｋａ）、解離定数（ｋｄ）、平衡解離定数（ＫＤ）、ならびに各相互作用のＣｈｉ２値およびＵ値について取得されたデータを要約する表を提供する。これらの結果は、この例示的マスク型ＩＬ－２ポリペプチド構築物（ＡＫ１６８）が、ＣＤ２５－Ｆｃへの検出可能な結合を実証しなかった一方で、野生型ｒｈＩＬ－２対照は、検出可能な結合を実証しなったことを実証する。
図６Ａ～６Ｄは、ＣＤ１２２－Ｆｃへの例示的マスク型ＩＬ－２ポリペプチド構築物（ＡＫ１１１）の結合を試験したＳＰＲ分析を使用して、そのベータ受容体に向けたＩＬ－２のマスキング、ならびにプロテアーゼを用いた活性化後の結合の復元を描写する。図６Ａは、ＡＫ１１１とＣＤ１２２－Ｆｃとの間の相互作用を描写し、図６Ｂは、ＭＭＰで活性化されたＡＫ１１１とＣＤ１２２－Ｆｃとの間の相互作用を描写し、図６Ｃは、組換えヒトＩＬ－２（ｒｈＩＬ－２）対照とＣＤ１２２－Ｆｃとの間の相互作用を描写する。図６Ｄは、会合定数（ｋａ）、解離定数（ｋｄ）、平衡解離定数（ＫＤ）、ならびに各相互作用のＣｈｉ２値およびＵ値について取得されたデータを要約する表を提供する。これらの結果は、この例示的マスク型ＩＬ－２ポリペプチド構築物（ＡＫ１１１）が、プロテアーゼで活性化されていない限り、ＣＤ１２２－Ｆｃへの検出可能な結合を実証しなかった一方で、ｒｈＩＬ－２対照は、検出可能な結合を実証したことを実証する。追加の例示的ＳＰＲデータが、マスク型および非マスク型構築物を含む、試験された様々な構築物について、以下の表７に提供される。いくつかの構造については、適用可能である場合、ＫＤは、プロテアーゼによって以前に切断されていることの有無別に構築物について決定された。
Figure 2023520514000028
切断
マスク型ＩＬ－２ポリペプチド構築物の切断速度は、上記に記載されるように、プロテアーゼの存在下または非存在下で、マスク型ＩＬ－２ペプチド構築物のインキュベーション後に、受容体結合アッセイを行うことによって評価され、プロテアーゼが存在する場合、ＥＤＴＡの添加などによって、様々な時点で不活化される。マスク型ＩＬ－１５ポリペプチド構築物の切断速度は、上記に記載されるように、プロテアーゼの存在下または非存在下で、マスク型ＩＬ－１５ペプチド構築物のインキュベーション後に、受容体結合アッセイを行うことによって評価され、プロテアーゼが存在する場合、ＥＤＴＡの添加などによって、様々な時点で不活化される。切断速度はまた、還元および非還元ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＰＡＧＥ）を使用して、ならびに質量分析全質量およびペプチドマップ分析によって評価される。切断速度はまた、マスク型ＩＬ－２ポリペプチド構築物またはマスク型ＩＬ－１５ポリペプチド構築物が、ヒト、マウス、もしくはカニクイザル末梢血リンパ球、または正常なヒト組織もしくはヒト腫瘍組織に曝露される、エクスビボアッセイを使用して評価される。
いくつかのプロテアーゼ活性化研究については、ＭＭＰ１０をＭＭＰ切断緩衝液中で５０ｎｇ／μＬに希釈し、１ｍＭのＡＰＭＡで３７℃において２時間活性化した。５μＬ（合計２５０ｎｇ）の活性化プロテアーゼを、１μＭのマスク型サイトカイン構築物（例えば、マスク型ＩＬ－２ポリペプチド構築物）とインキュベートし、３７度で２時間インキュベートした。切断は、ＡｎｙｋＤ（商標）Ｃｒｉｔｅｒｉｏｎ（商標）ＴＧＸ Ｓｔａｉｎ－Ｆｒｅｅ（商標）タンパク質ゲルを使用してＳＤＳ－ＰＡＧＥによって評価された。類似アプローチが、他のプロテアーゼによる切断を試験するためにとられた。
図７Ａは、腫瘍環境に関連するプロテアーゼなどのプロテアーゼによる切断の前（左）および後（右）のマスク型ＩＬ－２ポリペプチドの例示的構造を描写する。図７Ｂは、ＭＭＰ１０プロテアーゼの非存在下（左レーン）または存在下（右レーン）でインキュベートされた例示的マスク型ＩＬ－２ポリペプチド構築物のＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析を描写する。
増殖
実施例１で生成されたマスク型ＩＬ－２ポリペプチド構築物またはマスク型ＩＬ－１５ポリペプチド構築物を用いた治療後のＣＴＬＬ２、ＹＴ、ＴＦ１Ｂ、ＬＧＬ、ＨＨ、およびＣＴ６などのＩＬ－２およびＩＬ－１５応答性組織培養細胞株の増殖が評価される。マスク型ＩＬ－２ポリペプチド構築物を伴う実験については、細胞が、ＩＬ－２を欠いた培地中で９６ウェル組織培養プレートに２～４時間播種され、次いで、様々な濃度においてマスク型ＩＬ－２ポリペプチド構築物で治療される。マスク型ＩＬ－１５ポリペプチド構築物を伴う実験については、細胞が、ＩＬ－１５を欠いた培地中で９６ウェル組織培養プレートに２～４時間播種され、次いで、様々な濃度におけるマスク型ＩＬ－１５ポリペプチド構築物で治療される。３７度における２４～４８時間のインキュベーション後、細胞数は、ＭＴＳ、アラマーブルー、ルシフェラーゼ、または類似の代謝検出試薬の添加、およびプレート分光光度計リーダーによって検出される比色、蛍光、またはルシフェラーゼの読み出しによって決定される。
実施例１で生成されたマスク型ＩＬ－２ポリペプチド構築物またはマスク型ＩＬ－１５ポリペプチド構築物を用いた治療後の免疫細胞の増殖も評価される。ヒト、マウス、またはカニクイザル末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）は、様々な濃度における構築物で治療され、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、および／またはＴｒｅｇ細胞などの細胞型の増殖は、特定の細胞型の染色および蛍光活性化細胞分類（ＦＡＣＳ）を通した分析によって決定される。いくつかの実験では、いくつかのＰＢＭＣは、比較のために対照で治療される。いくつかの実験では、いくつかのＰＢＭＣは、マスク型ＩＬ－２ポリペプチド治療のための対照としてのアルデスロイキンで治療される。いくつかの実験では、マスク型ＩＬ－２ポリペプチド構築物およびマスク型ＩＬ－１５ポリペプチド構築物は、プロテアーゼ切断（例えば、活性化）の有無別の条件で試験される。いくつかの実験では、ＮＫ細胞は、ＣＤ４５＋ＣＤ３－ＣＤ５６＋として染色され、ＣＤ８＋Ｔ細胞は、ＣＤ４５＋ＣＤ３＋ＣＤ８＋として染色され、ＣＤ４＋Ｔ細胞は、ＣＤ４５＋ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ２５－として染色され、Ｔｒｅｇ細胞は、ＣＤ４５＋ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＦＯＸＰ３＋として染色される。いくつかの実験では、ＰＢＭＣは、５日の期間にわたって治療される。いくつかの実験では、ＰＢＭＣはまた、細胞増殖のマーカーであるＫｉ６７で染色される。いくつかの実験では、ＰＢＭＣは、治療前にＣＦＳＥ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）で標識され、増殖は、ＣＦＳＥ希釈の程度を決定することによって測定される。いくつかの実験では、各構築物、ならびにアルデスロイキンおよび／または他の対照は、０．０００１ｎＭ～５００ｎＭの範囲の１つ以上の濃度などの１つ以上の濃度で投与される。
ＳＴＡＴ５活性化
実施例１で生成されたマスク型ＩＬ－２ポリペプチド構築物またはマスク型ＩＬ－１５ポリペプチド構築物を用いた治療後のシグナル伝達兼転写活性化因子５（ＳＴＡＴ５）の活性化も評価される。ＰＢＭＣは、指定された期間にわたって構築物で治療され、次いで、ＳＴＡＴ５などのタンパク質のリン酸化状態を維持するために即時に固定される。いくつかの実験では、いくつかのＰＢＭＣは、比較のために対照で治療される。いくつかの実験では、いくつかのＰＢＭＣは、マスク型ＩＬ－２ポリペプチド治療のための対照としてのアルデスロイキンで治療される。いくつかの実験では、マスク型ＩＬ－２ポリペプチド構築物およびマスク型ＩＬ－１５ポリペプチド構築物は、プロテアーゼ切断（例えば、活性化）の有無別の条件で試験される。いくつかの実験では、ＰＢＭＣは、１０分、１５分、２０分、または２５分間治療される。いくつかの実験では、各構築物、ならびにアルデスロイキンおよび／または他の対照は、０．０００１ｎＭ～５００ｎＭの範囲の１つ以上の濃度などの１つ以上の濃度で投与される。いくつかの実験では、固定および透過化ＰＢＭＣは、次いで、リン酸化ＳＴＡＴ５（ホスホ－ＳＴＡＴ５）に特異的な抗体で染色され、フローサイトメトリーによって分析される。いくつかの実験では、ＳＴＡＴ５の合計レベルおよびリン酸化レベルが測定される。ＮＫ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、および／またはＴｒｅｇ細胞などの特定の細胞型のホスホ－ＳＴＡＴ５状態は、特定の細胞型の染色によって決定される。いくつかの実験では、ＮＫ細胞は、ＣＤ４５＋ＣＤ３－ＣＤ５６＋として染色され、ＣＤ８＋Ｔ細胞は、ＣＤ４５＋ＣＤ３＋ＣＤ８＋として染色され、ＣＤ４＋Ｔ細胞は、ＣＤ４５＋ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ２５－として染色され、Ｔｒｅｇ細胞は、ＣＤ４５＋ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＦＯＸＰ３＋として染色される。
実施例１で生成されたマスク型ＩＬ－２ポリペプチド構築物またはマスク型ＩＬ－１５ポリペプチド構築物を用いた治療後のＣＴＬＬ－２細胞などのマウス細胞株内のＳＴＡＴ５の活性化も評価される。いくつかの実験では、いくつかのＣＴＬＬ－２細胞は、比較のために対照で治療される。いくつかの実験では、いくつかのＣＴＬＬ－２細胞は、マスク型ＩＬ－２ポリペプチド治療のための対照としてのアルデスロイキンで治療される。いくつかの実験では、マスク型ＩＬ－２ポリペプチド構築物およびマスク型ＩＬ－１５ポリペプチド構築物は、プロテアーゼ切断（例えば、活性化）の有無別の条件で試験される。いくつかの実験では、ＣＴＬＬ－２細胞は、１０分、１５分、２０分、または２５分間治療され、次いで、ＳＴＡＴ５などのタンパク質のリン酸化状態を維持するために固定される。いくつかの実験では、各構築物、ならびにアルデスロイキンおよび／または他の対照は、１つ以上の濃度で投与される。いくつかの実験では、ＳＴＡＴ５の合計レベルおよびリン酸化レベルが測定される。
いくつかの研究では、ＩＬ－２によって誘導された細胞内ＳＴＡＴ５活性化（ｐＳＴＡＴ５シグナル）のレベルは、以下の方法によって決定された。凍結されたヒトＰＢＭＣを、水浴中で解凍し、３９ｍＬの事前加温培地（１０％ＦＢＳ、１％Ｐ／Ｓ、１％ＮＥＡを加えたＲＰＭＩ１６４０培地）に添加し、１０Ｅ６細胞／ｍＬにおいて培地中で回転および再構成した。細胞を、９６ウェルプレート中にウェル当たり５Ｅ５細胞で播種した。培地中で希釈されたＩＬ－２（例えば、ｒｈＩＬ－２または例示的ＩＬ－２含有ポリペプチド構築物）を各ウェルに添加し、３７℃で２０分間インキュベートした。次いで、細胞を、２００μｌ／ウェルの固定緩衝液（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いて４度で一晩固定した。遠心分離後、固定細胞を、２００μｌの冷たいＢＤ Ｐｈｏｓｆｌｏｗ緩衝液中に再懸濁し、４℃で３０分間インキュベートした。細胞を２回洗浄した後、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ Ｈｕｍａｎ ＴｒｕＳｔａｉｎ ＦｃＸ（染色緩衝液中のサンプル当たり合計５０μＬで２．５μＬ）を用いて氷上で５分間治療した。染色抗体、すなわち、５μｌのｐＳＴＡＴ５－ＡＰＣ（ｐＹ６９４、ＢＤ）、１０μｌのＣＤ５６－ＢＶ４２１（５．１Ｈ１１、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、１０μｌのＣＤ４－ＰｅｒＣＰ／Ｃｙ５．５（Ａ１６１Ａ１、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、および１０μｌのＣＤ３－ＦＩＴＣ（ＵＣＨＴ１、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）を添加し、氷上で３０分間、光から保護してインキュベートした。細胞を２回洗浄し、再懸濁し、フローサイトメトリーによって分析した。
図８Ａ～８Ｄは、例示的構築物ＡＫ０３２、ＡＫ０３５、ＡＫ０４１、または対照としてのｒｈＩＬ－２を使用した、上記に記載されるＳＴＡＴ５活性化研究からの結果を描写する。ＳＴＡＴ５活性化のレベル（％）が、ＮＫ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、エフェクターＴ細胞（Ｔｅｆｆ）、および調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）について示される。ＡＫ０３２およびＡＫ０３５構築物は、Ｆｃドメインに連結されたＩＬ－２ポリペプチドを含み、ＡＫ０４１構築物は、ＣＤ２５ドメインおよびＣＤ１２２ドメインに連結されたＩＬ－２ポリペプチドを含む。示されるように、操作されたＩＬ－２ポリペプチド構築物は、いくつかの実施形態では、ＣＤ８＋Ｔ細胞およびＮＫ細胞の活性化を保持または強化しながら、Ｔｒｅｇ細胞の活性化を低減することができる。
図９Ａ～９Ｃは、例示的構築物ＡＫ０８１およびＡＫ０３２を使用した、上記に記載されるＳＴＡＴ５活性化研究からの結果を描写する。ＭＭＰ１０への以前の曝露の有無別のＡＫ０８１構築物を試験した。アイソタイプ対照ならびに無ＩＬ－２陰性対照も試験した。ＳＴＡＴ５活性化のレベル（％）は、ＮＫ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、およびＣＤ４＋Ｔ細胞について示される。ＡＫ０３２およびＡＫ０８１構築物は、Ｆｃドメインに連結されたＩＬ－２ポリペプチドを含み、ＡＫ０８１構築物は、ＩＬ－２ポリペプチドをＦｃドメインに接続するリンカー内に切断可能なペプチドを含む。示されるように、非マスク型単量体ＡＫ０８１ ＩＬ－２ポリペプチド構築物は、非マスク型二量体ＡＫ０３２ ＩＬ－２ポリペプチド構築物と同様に、プロテアーゼ活性化の有無別にＰＢＭＣのＳＴＡＴ５活性化を刺激する。
図１０Ａ～１０Ｄは、例示的構築物ＡＫ０８１およびＡＫ１１１、ならびにｒｈＩＬ－２および抗ＲＳＶ抗体を含んだ対照を使用した、上記に記載されるＳＴＡＴ５活性化研究からの結果を描写する。無治療対照も試験された。ＡＫ１１１構築物は、（Ｃ１２５Ａ変異を除く）ＩＬ－２ポリペプチドの野生型を含む、例示的マスク型ＩＬ－２ポリペプチド構築物である。図１０Ａ～１０Ｄに示されるように、マスク型ＩＬ－２ポリペプチド構築物ＡＫ１１１は、非マスク型ＩＬ－２ポリペプチド構築物ＡＫ０８１と比較して、ＳＴＡＴ５活性化の低減を実証した。図１０Ｄは、ＡＫ０８１、ＡＫ１１１構築物、およびｒｈＩＬ－２対照のＥＣ５０（ｐＭ）および倍率変化データを提供する。
図１１Ａ～１１Ｄは、例示的構築物ＡＫ１６７およびＡＫ１６８、ならびにｒｈＩＬ－２および抗ＲＳＶ抗体を含んだ対照を使用した、上記に記載されるＳＴＡＴ５活性化研究からの結果を描写する。無治療対照も試験された。ＡＫ１６８構築物は、ＣＤ２５結合を排除または低減するＩＬ－２ポリペプチドの変異形態を含む、例示的マスク型ＩＬ－２ポリペプチド構築物である。ＡＫ１６７構築物は、同じ変異ＩＬ－２ポリペプチドを含むＡＫ１６８構築物の親非マスク型形態である。図１１Ａ～１１Ｃに示されるように、非マスク型ＡＫ１６７構築物は、ｒｈＩＬ－２対照と比較してＳＴＡＴ５活性化の低減を実証し、マスク型ＩＬ－２ポリペプチド構築物ＡＫ１６８は、検出可能なＳＴＡＴ５活性化を誘導しなかった。図１１Ｄは、ＡＫ１６７、ＡＫ１６８構築物、ならびにｒｈＩＬ－２対照のＥＣ５０（ｐＭ）および倍率変化データを提供する。ＡＫ１６８構築物のＥＣ５０は、検出不能（ｎ．ｄ．）であった。
図１２Ａ～１２Ｄは、（＋ＭＭＰ１０）であったか、または以前にＭＭＰ１０プロテアーゼに曝露されなかった、例示的構築物ＡＫ１６５およびＡＫ１６６、ならびにアイソタイプ対照およびＩＬ－２－Ｆｃ対照を使用した、上記に記載されるＳＴＡＴ５活性化研究からの結果を描写する。ＡＫ１６６構築物は、（Ｃ１２５Ａ変異を除く）ＩＬ－２ポリペプチドの野生型を含む例示的マスク型ＩＬ－２ポリペプチド構築物である。ＡＫ１６５構築物は、同じＩＬ－２ポリペプチドを含むＡＫ１６６構築物の親非マスク型形態である。図１２Ａに示されるような凡例は、図１２Ｂにも適用され、図１２Ｃに示されるような凡例は、図１２Ｄにも適用される。図１２Ａ～１２Ｄに示されるように、ＳＴＡＴ５活性化は、マスク型ＡＫ１６６構築物（プロテアーゼ切断なし）について大幅に減少したが、活性化プロテアーゼＭＭＰ１０への曝露後にＩＬ２－Ｆｃ対照に類似するレベルに回復した。
図１３Ａ～１３Ｃは、（＋ＭＭＰ１０）であったか、または以前にＭＭＰ１０プロテアーゼに曝露されなかった、例示的構築物ＡＫ１０９およびＡＫ１１０、ならびにアイソタイプ対照およびＩＬ－２－Ｆｃ対照を使用した、上記に記載されるＳＴＡＴ５活性化研究からの結果を描写する。ＡＫ１０９およびＡＫ１１０構築物は、異なるヘテロ二量体形成変異を有する半減期延長ドメインを含む、例示的マスク型ＩＬ－２ポリペプチド構築物である。図１３Ｂに示されるような凡例は、図１３Ａにも適用される。図１３Ａ～１３Ｃに示されるように、ＳＴＡＴ５活性化は、マスク型ＡＫ１０９およびＡＫ１１０構築物（プロテアーゼ切断なし）について大幅に減少したが、活性化プロテアーゼＭＭＰ１０への曝露後にＩＬ２－Ｆｃ対照に類似するレベルまで大幅に増加した。
図１４Ａ～１４Ｄは、構築物ＡＫ２１１、ＡＫ２３５、ＡＫ２５３、ＡＫ３０６、ＡＫ３１０、ＡＫ３１４、およびＡＫ３１６、ならびにｒｈＩＬ－２対照を使用した、上記に記載されるＳＴＡＴ５活性化試験からの結果を描写する。これは、ＣＤ２５結合を調節する様々な変異を含む、親非マスク型構築物（ＡＫ２３５、ＡＫ２５３、ＡＫ３０６、ＡＫ３１０、ＡＫ３１４）である構築物を含む。図１４Ｄは、試験された構築物の各々ならびにｒｈＩＬ－２対照のＥＣ５０データを提供する。
図１５Ａ～１５Ｄは、プロテアーゼによって活性化された構築物ＡＫ０８１、ＡＫ１６７、ＡＫ２１６、ＡＫ２１８、ＡＫ２１９、ＡＫ２２０、およびＡＫ２２３、ならびにｒｈＩＬ－２対照を使用した、上記に記載されるＳＴＡＴ５活性化試験からの結果を描写する。無治療対照も試験された。これは、ＣＤ２５結合を調節する様々な変異を含む、マスク型ＩＬ－２ポリペプチド構築物（ＡＫ２１６、ＡＫ２１８、ＡＫ２１９、ＡＫ２２０、およびＡＫ２２３）を含む。構築物は、ＳＴＡＴ５を活性化する能力を試験する前に、活性化プロテアーゼに前もって曝露された。図１５Ｄは、試験された構築物の各々ならびにｒｈＩＬ－２対照のＥＣ５０データを提供する。
図１６Ａ～１６Ｃは、構築物ＡＫ０８１、ＡＫ１８９、ＡＫ１９０、およびＡＫ２１０、ならびに抗ＲＳＶ対照を使用した、上記に記載されるＳＴＡＴ５活性化研究からの結果を描写する。これは、Ｃ１２５Ａ変異を有するＩＬ－２ポリペプチドを含み、同じ切断可能なペプチド配列（ＲＡＡＡＶＫＳＰ、配列番号２７）を含むが、プロテアーゼ切断配列のＮ末端上のアミノ酸残基の差異により、異なるリンカー配列を有する、マスク型ＩＬ－２ポリペプチド構築物（ＡＫ１８９、ＡＫ１９０、ＡＫ２１０）を含む。図１６Ａに示されるような凡例は、図１６Ｂおよび１６Ｃにも適用される。
図１７Ａ～１７Ｃは、構築物ＡＫ１６７、ＡＫ１９１、ＡＫ１９２、およびＡＫ１９３、ならびに抗ＲＳＶ対照を使用した、上記に記載されるＳＴＡＴ５活性化試験からの結果を描写する。これは、Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ａ、Ｙ４５Ａ、Ｅ６２Ａ、およびＣ１２５Ａ変異を有するＩＬ－２ポリペプチドを含み、同じ切断可能なペプチド配列（ＲＡＡＡＶＫＳＰ、配列番号２７）を含むが、プロテアーゼ切断配列のＮ末端上のアミノ酸残基の差異により、異なるリンカー配列を有する、マスク型ＩＬ－２ポリペプチド構築物（ＡＫ１８９、ＡＫ１９０、ＡＫ２１０）を含む。図１７Ａに示されるような凡例は、図１７Ｂおよび１７Ｃにも適用される。
実施例３：マスク型ＩＬ－２およびＩＬ－１５ポリペプチドのインビボ特性評価
薬物動態
実施例１で生成されたマスク型ＩＬ－２ポリペプチド構築物およびマスク型ＩＬ－１５ポリペプチド構築物の薬物動態が、マウスモデルを使用してインビボで評価される。
マウスが、構築物を用いて静脈内または皮下で治療され、血漿中の構築物の濃度が、経時的に測定される。いくつかの実験では、数匹のマウスが、比較のために対照で治療される。いくつかの実験では、数匹のマウスが、マスク型ＩＬ－２ポリペプチド治療のための対照としてのアルデスロイキンで治療される。いくつかの実験では、治療されるマウスは、腫瘍を有する。いくつかの実験では、治療されるマウスは、腫瘍を含まない。いくつかの実験では、マウスが、構築物で治療され、血液が、治療過程にわたって様々な時点で採取され、これには、治療の開始前に血液を採血し、血漿を取得するためにそれを処理することが含まれ得る。いくつかの実験では、血液が、２週間、３週間、または４週間またはそれ以上の治療過程にわたって様々な時点で採取される。いくつかの実験では、投与された構築物ならびにアルデスロイキンおよび／または他の対照の平均血漿中濃度が測定される。マスク型ＩＬ－２ポリペプチド構築物は、ＩＬ－２およびヒトＦｃ特異的ＥＬＩＳＡを用いて、ＰＢＳ Ｔｗｅｅｎへの希釈後に血漿サンプル中で検出され、各構築物について生成された標準曲線を使用して定量化される。マスク型ＩＬ－１５ポリペプチド構築物は、ＩＬ－１５およびヒトＦｃ特異的ＥＬＩＳＡを用いて、ＰＢＳ Ｔｗｅｅｎへの希釈後に血漿サンプル中で検出され、各構築物について生成された標準曲線を使用して定量化される。完全長および切断構築物の割合は、抗ｈｕＦｃ－ＨＲＰおよびａｎｔｉ－ｈｕＩＬ－２－ＨＲＰを用いたウェスタンブロットによって、ならびに全質量およびペプチド質量分析によって決定される。
腫瘍におけるマスク型ＩＬ－２ポリペプチド構築物およびマスク型ＩＬ－１５ポリペプチド構築物の薬物動態も、マウスモデルを使用してインビボで評価される。腫瘍を有するマウスが、構築物を用いて静脈内または皮下で治療され、マウスの腫瘍内の構築物の濃度が、評価される。いくつかの実験では、数匹のマウスが、比較のために対照で治療される。いくつかの実験では、数匹のマウスが、マスク型ＩＬ－２ポリペプチド治療のための対照としてのアルデスロイキンで治療される。腫瘍は、構築物の存在、および特定のプロテアーゼの存在について分析される。いくつかの実験では、腫瘍は、完全長および切断構築物の存在および割合について分析される。
いくつかの薬物動態研究は、以下の方法に従って実行された。Ｃ５７ＢＬ／６メスマウスが、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから購入され、試験開始時に８～１０週齢であった。ＭＣ３８腫瘍細胞（マウス当たり５×１０５個の細胞）を、各マウスの右脇腹に皮下注射した。約１００ｍｍ３サイズの腫瘍に到達すると（０日目）、マウスは、ＰＢＳ中の目的の構築物（例えば、非マスク型親ＩＬ－２ポリペプチド構築物、マスク型ＩＬ－２ポリペプチド構築物、または非切断可能なマスク型ＩＬ－２ポリペプチド構築物）の単回の２ｍｇ／ｋｇ静脈内用量を受けた。試験された構築物としては、例えば、ＡＫ０３２、ＡＫ０８１、ＡＫ１１１、ＡＫ１６７、ＡＫ１６８、ＡＫ１９１、ＡＫ１９７、ＡＫ２０３、ＡＫ２０９、およびＡＫ２１１が挙げられる。投与後５分、１日目、２日目、および５日目に血漿を収集した。薬物レベルは、捕捉抗体および様々な検出抗体として抗ヒトＩｇＧ（クローンＭ１３１０Ｇ０５、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）を利用したＥＬＩＳＡを使用して、決定された。ヒトＩｇＧ（ａｂ９７２２５、Ａｂｃａｍ）またはＣＤ１２２（クローン９Ａ２、Ａｎｃｅｌｌ）およびＩＬ－２（Ｐｏｌｙ５１７６、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）に対するＨＲＰまたはビオチン複合検出抗体が、それぞれ、総薬剤レベルおよび非切断薬剤レベルを検出するために利用された。
図１８Ａ～１８Ｄは、構築物ＡＫ０３２、ＡＫ０８１、ＡＫ１１１、ＡＫ１６７、およびＡＫ１６８、ならびに抗ＲＳＶ対照を使用して、担腫瘍マウスで上記に記載されるように実行された薬物動態研究からの結果を描写する。図１８Ａは、試験された構築物の各々の構造の単純な描写を提供する。示されるように、ＡＫ１１１およびＡＫ１６８は、例示的マスク型ＩＬ－２ポリペプチド構築物である。ＡＫ１６７およびＡＫ１６８構築物は、ＣＤ２５への結合を排除または低減する変異（Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ａ、Ｙ４５Ａ、およびＥ６２Ａ）を含む。図１８Ａは、ヒトＩｇＧを検出することによって血漿中のＦｃレベル（μｇ／ｍＬ）を示し、図１８Ｃは、ヒトＣＤ１２２を検出することによって血漿中のＦｃ－ＣＤ１２２レベル（μｇ／ｍＬ）を示し、図１８Ｄは、ヒトＩＬ－２を検出することによって血漿中のＦｃ－ＩＬ２レベル（μｇ／ｍＬ）を示す。
図１９Ａ～１９Ｄは、構築物ＡＫ１６７、ＡＫ１９１、ＡＫ１９７、ＡＫ２０３、ＡＫ２０９、およびＡＫ２１１、ならびに抗ＲＳＶ対照を使用して、担腫瘍マウスで上記に記載されるように実行された薬物動態研究からの結果を記載する。図１９Ａは、試験された構築物の各々の構造の単純な描写を提供する。示されるように、ＡＫ１６８、ＡＫ１９１、ＡＫ１９７、ＡＫ２０３、およびＡＫ２０９は、各々、ＩＬ－２ポリペプチドを半減期延長ドメインに接続するリンカー中に異なる切断可能なペプチド配列を含む、例示的マスク型ＩＬ－２ポリペプチド構築物である。図１９Ｂは、ヒトＩｇＧを検出することによって血漿中のＦｃレベル（μｇ／ｍＬ）を示し、図１９Ｃは、ヒトＩＬ－２を検出することによって血漿中のＦｃ－ＩＬ２レベル（μｇ／ｍＬ）を示し、図１９Ｄは、ヒトＣＤ１２２を検出することによって血漿中のＦｃ－ＣＤ１２２レベル（μｇ／ｍＬ）を示す。図１９Ｂ、１９Ｃ、および１９Ｄに示されるように、血漿中のＦｃレベル、Ｆｃ－ＩＬ２レベル、およびＦｃ－ＣＤ１２２レベルは、試験されたマスク型ＩＬ－２ポリペプチド構築物の間で類似する。
マウスにおける生物活性
実施例１で生成されたマスク型ＩＬ－２ポリペプチド構築物およびマスク型ＩＬ－１５ポリペプチド構築物の薬物動態が、Ｃ５７ＢＬ／６マウスなどのマウスモデルを使用してインビボで評価される。マウスが構築物で治療され、インビボの生物活性が評価される。いくつかの実験では、数匹のマウスが、比較のために対照で治療される。いくつかの実験では、数匹のマウスが、マスク型ＩＬ－２ポリペプチド治療のための対照としてのアルデスロイキンで治療される。いくつかの実験では、治療されるマウスは、腫瘍を有する。いくつかの実験では、治療されるマウスは、腫瘍を含まない。いくつかの実験では、免疫細胞の用量依存性拡張が、マウスにおいて評価される。いくつかの実験では、マウスは、様々な用量の構築物、アルデスロイキン、または他の対照で治療される。いくつかの実験では、マウスは、２週間にわたって治療される。血液が、様々な時点でマウスから収集され、次いで、目的の免疫細胞マーカーに対する抗体を使用して染色される。いくつかの実験では、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＮＫ細胞、およびＴｒｅｇ細胞などの特定の循環細胞型の増殖および拡張の長軸方向動態、ならびにＣＤ８＋Ｔ細胞およびＮＫ細胞とＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＦｏｘＰ３＋Ｔｒｅｇ細胞との比率も決定される。いくつかの実験では、マウスは、器官湿潤重量および組織学によって決定される肺および肝臓のような特定の器官における浮腫およびリンパ球浸潤を評価することなどによって、血管漏出について評価される。
いくつかの研究では、以下の方法を実施することによって、ＩＬ－２ベースの療法によって媒介される潜在的な毒性関連効果を評価するために、血管漏出が評価された。反復用量毒性研究が、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから購入され、研究開始時に体重１８～２２グラムの８～１０週齢であったＣ５７ＢＬ／６メスマウスを使用して行われた。５匹のマウスの群が、ＰＢＳ中のマスク型および非マスクＩＬ－２構築物の腹腔内注射を４日または５日間にわたって毎日受けた。試験された構築物は、ＡＫ０８１、ＡＫ１１１、ＡＫ１６７、およびＡＫ１６８であった。対照抗体も、対照として投与された。最終用量の２時間後、すべてのマウスは、ＰＢＳ中の０．１ｍｌの１％エバンスブルー（Ｓｉｇｍａ、カタログ番号Ｅ２１２９）の静脈内注射を受けた。エバンスブルー投与の２時間後、マウスを麻酔し、ＰＢＳ中１０Ｕ／ｍｌのヘパリンで灌流した。エバンスブルーの血管漏出の指標としてＮａｎｏＤｒｏｐ ＯｎｅＣ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）を用いて６５０ｎｍにおける上清の吸光度を測定する前に、脾臓、肺、および肝臓を採取し、３ｍｌの４％ＰＦＡ中で４℃において２日間固定した。固定された器官をパラフィンに包埋し、切片化し、ヘマトキシリンおよびエオシンで染色した。病理組織学的研究および定量化が、ＮｏｖｏＶｉｔａ Ｈｉｓｔｏｐａｔｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，ＬＬＣ（Ａｌｌｓｔｏｎ，ＭＡ）によって標準手順に従って実行された。図２５Ａ～５０Ｄは、例示的マスク型ＩＬ－２ポリペプチド構築物ＡＫ１１１およびＡＫ１６８、ならびに非マスク型ＩＬ－２ポリペプチド構築物ＡＫ０８１およびＡＫ１６７、ならびに抗ＲＳＶ対照を使用して、血管漏出を評価するための上記に記載されるインビボ研究からの結果を描写する。図２５Ａは、体重減少の割合（％）を示し、図２５Ｂ、２５Ｃ、および２５Ｄは、それぞれ、各々について肝臓、肺、および脾臓の重量をグラムで示す。
組織への染料漏出の程度を測定することによって示されるような血管漏出も、抗ＲＳＶ対照とともに、ＡＫ０８１、ＡＫ１１１、ＡＫ１６７、およびＡＫ１６８構築物について評価され、結果が、それぞれ、肝臓および肺について図２６Ａおよび２６Ｂに示される。染料漏出の程度が、６５０ｎｍにおける吸光度に基づいて測定された。
肝臓および肺への単核細胞血管周辺浸潤の程度を測定することによって示されるような血管漏出も、抗ＲＳＶ対照とともに、ＡＫ０８１、ＡＫ１１１、ＡＫ１６７、およびＡＫ１６８構築物について評価され、結果が、それぞれ、肝臓および肺について図２７Ａおよび２７Ｂに示される。肝臓内の単核細胞の平均数（図２７Ａ）および肺内の単核細胞の平均数（図２７Ｂ）が、各々ついて描写される。図２７Ｂに示されるように、例えば、マスク型ＩＬ－２ポリペプチド構築物ＡＫ１１１およびＡＫ１６８は、非マスク型構築物ＡＫ０８１およびＡＫ１６７とは異なり、肺内の検出可能な数の単核細胞をもたらさなかった。
浸潤免疫細胞表現型
実施例１でマスク型ＩＬ－２ポリペプチド構築物またはマスク型ＩＬ－１５ポリペプチド構築物で治療されたマウスモデルにおいてインビボで腫瘍に浸潤する免疫細胞の表現型が評価される。マウスが構築物で治療され、腫瘍浸潤性免疫細胞の表現型が評価される。いくつかの実験では、数匹のマウスが、比較のために対照で治療される。いくつかの実験では、数匹のマウスが、マスク型ＩＬ－２ポリペプチド治療のための対照としてのアルデスロイキンで治療される。腫瘍を持つマウスが、構築物、アルデスロイキン、または別の対照で治療され、腫瘍、肝臓、肺、および脾臓などの組織、ならびに血液が、初回投与の５日後、７日後、または１０日後などの初回投与後の様々な時点で収集される。いくつかの実験では、免疫細胞が、腫瘍、組織、および血液から単離され、フローサイトメトリーを使用して表現型評価を受ける。いくつかの実験では、単離された免疫細胞は、ＣＤ８＋Ｔ細胞、メモリーＣＤ８＋Ｔ細胞、活性化ＮＫ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、およびＣＤ４＋Ｔｒｅｇ細胞のマーカーなどの目的のマーカーを使用して評価される。
いくつかの研究では、インビボで腫瘍に浸潤する免疫細胞の表現型が、以下の方法を使用して評価された。Ｃ５７ＢＬ／６メスマウスが、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから購入され、試験開始時に８～１０週齢であった。ＭＣ３８腫瘍細胞（マウス当たり５×１０５個の細胞）を、各マウスの右脇腹に皮下注射した。約１００ｍｍ３サイズの腫瘍に到達すると（０日目）、マウスは、ＰＢＳ中の目的の構築物（例えば、非マスク型親ＩＬ－２ポリペプチド構築物、マスク型ＩＬ－２ポリペプチド構築物、または非切断可能なマスク型ＩＬ－２ポリペプチド構築物）の単回の２ｍｇ／ｋｇ静脈内用量を受けた。５日目に、マウスがＣＯ２窒息によって安楽死させられ、腫瘍、肝臓、脾臓、および血液が採取された。細胞懸濁液が、機械的破損および４０μｍ細胞ストレーナーを通した通過によって脾臓から調製された。腫瘍組織が、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｔｕｍｏｒ Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ Ｋｉｔ試薬（Ｍｉｌｔｅｎｙｉカタログ番号１３０－０９６－７３０）を使用して酵素的に消化され、ｇｅｎｔｌｅＭＡＣＳ Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｏｒ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）が、機械的解離ステップに使用された。脾臓中の赤血球ならびに腫瘍細胞懸濁液および血液が、ＡＣＫ緩衝液（Ｇｉｂｃｏカタログ番号Ａ１０４９２）を使用して溶解された。細胞懸濁液は、以下の抗体で染色された：ＣＤ４５（クローン３０－Ｆ１１、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、ＣＤ３（クローン２Ｃ１１、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、ＣＤ８（クローン５３－６．７、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ＣＤ４（クローンＲＭ－４５、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ＦＯＸＰ３（ＭＦ－１４、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、ＣＤ２５（３Ｃ７、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、ＣＤ４４（クローンＩＭ７、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、およびＮＫｐ４６（２９Ａ１．４、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）。データ収集がＭＡＣＳＱｕａｎｔ Ａｎａｌｙｚｅｒフローサイトメーター（Ｍｉｌｅｎｙｉ）上で実行され、データがＦｌｏｗＪｏを使用して分析された。
ＡＫ０３２、ＡＫ０８１、ＡＫ１１１、ＡＫ１６７、およびＡＫ１６８構築物、ならびに抗ＲＳＶ ＩｇＧ対照を使用して上記に記載されるように実行された、脾臓、血液、および腫瘍中のＣＤ４、ＣＤ８、ＮＫ、およびＴｒｅｇのインビボ応答率を試験した研究からの結果が、図２０Ａ～２０Ｌに示される。ＡＫ１１１およびＡＫ１６８は、例示的マスク型ＩＬ－２ポリペプチド構築物である。
ＡＫ１６７、ＡＫ１６８、ＡＫ１９１、ＡＫ１９７、ＡＫ２０３、ＡＫ２０９、およびＡＫ２１１構築物、ならびに抗ＲＳＶ ＩｇＧ対照を使用して上記に記載されるように実行された、脾臓、血液、および腫瘍中のＣＤ４、ＣＤ８、ＮＫ、およびＴｒｅｇのインビボ応答率を試験した研究からの結果が、図２１Ａ～２１Ｌに示される。ＡＫ１６８、ＡＫ１９１、ＡＫ１９７、ＡＫ２０３、およびＡＫ２０９は、各々、ＩＬ－２ポリペプチドを半減期延長ドメインに接続するリンカー中に異なる切断可能なペプチド配列を含む、例示的マスク型ＩＬ－２ポリペプチド構築物である。統計分析が、非切断可能なＡＫ２１１構築物と比較して、一元配置分散分析を使用して実施された。
ＡＫ２３５、ＡＫ１９１、ＡＫ１９２、ＡＫ１９３、ＡＫ２１０、ＡＫ１８９、ＡＫ１９０、およびＡＫ２１１構築物を使用して上記に記載されるように実行された、脾臓、血液、および腫瘍中のＣＤ４、ＣＤ８、ＮＫ、およびＴｒｅｇのインビボ応答率を試験した研究からの結果が、図２２Ａ～２２Ｌに示される。ＡＫ１９１、ＡＫ１９２、ＡＫ１９３、ＡＫ２１０、ＡＫ１８９、およびＡＫ１９０は、各々、ＩＬ－２ポリペプチドを半減期延長ドメインに接続するリンカー中に異なる切断可能なペプチド配列を含む、例示的マスク型ＩＬ－２ポリペプチド構築物である。リンカー配列はまた、利用されるリンカー配列に応じて、これらの構築物間で異なる。ＡＫ１８９、ＡＫ１９０、およびＡＫ２１０は、Ｃ１２５Ａ変異を有するＩＬ－２ポリペプチドを含み、ＡＫ１９１、ＡＫ１９２、およびＡＫ１９３は、Ｃ１２５Ａ、Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ａ、Ｙ４５Ａ、およびＥ６２Ａ変異を有するＩＬ－２ポリペプチドを含む。ＡＫ２３５構築物は、非マスク型構築物であり、ＡＫ２１１構築物は、非切断可能なリンカー配列を含む。統計分析が、非切断可能なＡＫ２１１構築物と比較して、一元配置分散分析を使用して実施された。
ＡＫ２３５、ＡＫ１９１、ＡＫ１９２、ＡＫ１９３、ＡＫ２１０、ＡＫ１８９、ＡＫ１９０、およびＡＫ２１１構築物を使用して上記に記載されるように実行された、脾臓、血液、および腫瘍中のインビボＴ細胞活性を試験した研究からの結果が、図２３Ａ～２３Ｉに示される。Ｔ細胞活性化が、脾臓、血液、および腫瘍中のＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、またはＦｏｘｐ３＋細胞のＣＤ２５の平均蛍光強度（ＭＦＩ）として測定された。統計分析が、非切断可能なＡＫ２１１構築物と比較して、一元配置分散分析を使用して実施された。
インビボ切断
マスク型ＩＬ－２サイトカイン構築物（例えば、マスク型ＩＬ－２ポリペプチド構築物またはマスク型ＩＬ－１５ポリペプチド構築物）のインビボ切断が評価される。いくつかの研究では、対照抗体が比較のために投与される。いくつかの研究では、インビボ切断は、マウスにおいて目的の構築物を投与し、一定期間後、ヒトＩｇＧを捕捉し、次いで、例えば、ヒトＩｇＧ、ＣＤ１２２、およびＩＬ－２またはＩＬ－１５のレベルを測定することによって、評価される。
マスク型ＩＬ－２ポリペプチド構築物のインビボ切断を試験するいくつかの研究では、薬剤レベル（すなわち、切断副産物を含む、投与される構築物のレベル）が、捕捉抗体および様々な検出抗体として抗ヒトＩｇＧ（クローンＭ１３１０Ｇ０５、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）を利用するＥＬＩＳＡを使用して決定された。ヒトＩｇＧ（ａｂ９７２２５、Ａｂｃａｍ）またはＣＤ１２２（クローン９Ａ２、Ａｎｃｅｌｌ）およびＩＬ－２（Ｐｏｌｙ５１７６、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）に対するＨＲＰまたはビオチン複合検出抗体が、それぞれ、総薬剤レベルおよび非切断薬剤レベルを検出するために利用された。切断および放出されたＩＬ－２の濃度が、総薬剤濃度から非切断（すなわち、インタクト）を差し引くことによって計算される。図２４Ａ～２４Ｄは、例示的マスク型ＩＬ－２ポリペプチド構築物ＡＫ１６８（切断可能なペプチド配列：ＭＰＹＤＬＹＨＰ、配列番号２４）およびＡＫ２０９（切断可能なペプチド配列：ＶＰＬＳＬＹ、配列番号２８）のインビボ切断を試験した研究からの結果を描写する。ＡＫ１６７構築物は、マスク型ＡＫ１６８構築物と同じＩＬ－２ポリペプチドを含む、切断可能な非マスク型ＩＬ－２ポリペプチド構築物である。図２４Ａ～２４Ｄにしめされるように、マスク型（ＡＫ１６８およびＡＫ２０９）構築物ならびに非マスク型（ＡＫ１６７）構築物の両方が効果的に切断され、両方の切断可能なペプチド配列の両方が切断された。図２４Ｅは、ＡＫ１６７、ＡＫ１６８、およびＡＫ２０９構築物の合計レベル、ならびに各構築物の非切断形態のレベルについて、総血漿中ＩｇＧ濃度（μｇ／ｍＬ）の薬物動態研究からの結果を描写する。
腫瘍の根絶および転移の阻害
腫瘍根絶を促進し、転移を阻害する実施例１で生成されたマスク型ＩＬ－２ポリペプチド構築物およびＩＬ－１５ポリペプチド構築物の能力は、同系ＭＣ３８、ＣＴ２６、およびＢ１６Ｆ１０腫瘍モデルなどのマウスモデルを使用してインビボで評価される。
マウスが腫瘍細胞を皮下に移植され、腫瘍が触知可能なサイズまで成長させられる。担腫瘍マウスがマスク型ＩＬ－２構築物またはマスク型ＩＬ－１５ポリペプチド構築物で治療され、腫瘍体積が治療過程にわたって測定される。いくつかの実験では、数匹のマウスが、比較のために対照で治療される。いくつかの実験では、数匹のマウスが、マスク型ＩＬ－２ポリペプチド治療のための対照としてのアルデスロイキンで治療される。腫瘍体積が、治療過程にわたって定期的に測定される。いくつかの実験では、体重もまた、治療過程にわたって定期的に測定される。いくつかの実験では、血漿サンプルが治療過程にわたって生成され、薬物動態、薬力学、切断、ならびにＣＤ８＋Ｔ細胞、メモリーＣＤ８＋Ｔ細胞、活性化ＮＫ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、およびＣＤ４＋Ｔｒｅｇ細胞のマーカーなどの血液マーカーについて分析される。
転移を阻害するマスク型ＩＬ－２ポリペプチド構築物およびマスク型ＩＬ－１５ポリペプチド構築物の能力もまた、肺転移を評価するための同系ＣＴ２６腫瘍モデルなどの転移研究に好適なマウスモデルを使用してインビボで評価される。マウスは、腫瘍細胞を皮下に移植される。いくつかの実験では、腫瘍は、治療の前に触知可能なサイズまで成長させられる。いくつかの実験では、治療は、腫瘍が触知可能なサイズに成長する前に開始する。担腫瘍マウスは、マスク型ＩＬ－２構築物またはマスク型ＩＬ－１５ポリペプチド構築物で治療され、肺、肝臓、およびリンパ節などの組織への腫瘍細胞転移について評価される。
いくつかの研究では、同系腫瘍モデルが、以下の方法に従って、腫瘍体積を低減するマスク型ＩＬ－２ポリペプチド構築物の能力を評価するために使用された。Ｃ５７ＢＬ／６メスマウスが、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから購入され、試験開始時に８～１０週齢であった。ＭＣ３８腫瘍細胞（マウス当たり５×１０５個の細胞）を、各マウスの右脇腹に皮下注射した。約１２５ｍｍ３サイズの腫瘍に到達すると（０日目）、マウスは、ＰＢＳ中の２ｍｇ／ｋｇ用量のＡＫ０８１、ＡＫ１１１、ＡＫ１６７、もしくはＡＫ１６８、または対照としての抗ＲＳＶ抗体を受けるように無作為化された。マウスは、６回の投与のために週に３回腹腔内投与された。腫瘍体積がダイヤルキャリパーを使用して計算され（長さ＊（幅＾２）／２）、体重が週に２回記録された。図２８Ａおよび２８Ｂは、治療過程にわたって腫瘍体積および体重を評価した同系腫瘍モデル研究からの結果を示す。図２８Ａに示されるように、マスク型構築物ＡＫ１１１およびＡＫ１６８を含む例示的ＩＬ－２ポリペプチド構築物を使用した治療は、抗ＲＳＶ対照と比較して、経時的に腫瘍成長阻害をもたらした。図２８Ｂに示されるように、マウスがマスク型構築物ＡＫ１１１およびＡＫ１６８で治療されたときに観察された、体重減少の一般的な欠如があった。
カニクイザルにおける生物活性
実施例１で生成されたマスク型ＩＬ－２ポリペプチド構築物およびマスク型ＩＬ－１５ポリペプチド構築物のインビボ生物活性が、カニクイザルにおいてインビボで評価される。カニクイザルが構築物で治療され、インビボ生物活性、薬物動態、および切断が評価される。いくつかの実験では、数匹のサルが、比較のために対照で治療される。いくつかの実験では、数匹のサルが、マスク型ＩＬ－２ポリペプチド治療のための対照としてのアルデスロイキンで治療される。いくつかの実験では、サルは、様々な用量の構築物、アルデスロイキン、または他の対照で治療される。血液が、様々な時点でサルから収集され、次いで、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、活性化ＮＫ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、およびＣＤ４＋Ｔｒｅｇ細胞などの特定の細胞型、および／または総リンパ球の用量反応、Ｋｉ６７＋、ならびに可溶性ＣＤ２５などの目的のマーカーについて評価される。いくつかの実験では、特定の循環ＴおよびＮＫ細胞型の増殖および拡張の長軸方向動態が評価される。いくつかの実験では、マスク型ＩＬ－２ポリペプチド構築物およびマスク型ＩＬ－１５ポリペプチド構築物の薬物動態および切断が、ＥＬＩＳＡ、ＰＡＧＥ、および質量分析によって決定される。
非ヒト霊長類における例示的マスク型ＩＬ－２ポリペプチド構築物の安全性プロファイルを試験するために、用量範囲試験が以下の方法に従って実施される。３匹の健康なオスカニクイザル（Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）の群が、１００ｍＭのクエン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．５）中の１０、３０、および１００ｎｍｏｌ／ｋｇにおいて、２ｍＬ／ｋｇの活性化可能な（すなわち、切断可能な）マスク型ＩＬ－２ポリペプチドタンパク質または非切断可能なマスク型ＩＬ－２ポリペプチドタンパク質の単回静脈内ボーラス用量を受けるように無作為に割り当てられる。第３の群は、陽性対照として、３、１０、および３０ｎｍｏｌ／ｋｇにおいて親非マスク型切断可能タンパク質を受け取る。この第３の群は、親非マスク型分子のより高い効力を説明するために、より低い範囲で投与される。用量は、分子量の差を説明するためにモルで計算される。血液サンプルが、投与前、ならびに投与後１、２４、４８、７２、９６、１６８、２６４、および３３６時間で収集される。自動血液分析器が、リンパ球サブセットおよび血清化学の変化を監視するために使用される。総薬剤レベルおよびインタクトな（すなわち、非切断）薬剤レベルが、上記に記載されるカスタムＥＬＩＳＡを使用して血漿から測定される。可溶性ＣＤ２５レベルが、免疫刺激を監視するためにＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号ＤＲ２Ａ００）で測定される。炎症性サイトカインの血漿中レベルが、カスタム多重化電気化学発光アッセイ（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）を使用して定量化される。血圧が、血管漏出症候群の指標として監視される。ＰＫが、ＩＬ－２を捕捉し、ヒトＦｃを検出するＥＬＩＳＡ、およびヒトＦｃを捕捉し、ヒトＦｃを検出するＥＬＩＳＡを使用して分析される。
実施例４：
Ｃ５７ＢＬ／６メスマウスが、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから購入され、試験開始時に８～１０週齢であった。ＭＣ３８腫瘍細胞（マウス当たり５×１０５個の細胞）を、各マウスの右脇腹に皮下注射した。約１００ｍｍ３サイズの腫瘍に到達すると（０日目）、マウスは、ＰＢＳ中の様々なＦｃ－ＩＬ－２構築物の単回高用量腹腔内用量を受けた。血漿が、投与後５分、３日目、５日目、および７日目に収集された。
使用される構築物は、以下である：
Figure 2023520514000029
免疫表現型検査が、ＦＡＣＳベースの方法を使用して実施された。５日目に、マウスがＣＯ２窒息によって安楽死させられ、腫瘍、肝臓、脾臓、および血液が採取された。細胞懸濁液が、機械的破損および４０μｍ細胞ストレーナーを通した通過によって脾臓から調製された。腫瘍組織が、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｔｕｍｏｒ Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ Ｋｉｔ試薬（Ｍｉｌｔｅｎｙｉカタログ番号１３０－０９６－７３０）を使用して酵素的に消化され、ｇｅｎｔｌｅＭＡＣＳ Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｏｒ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）が、機械的解離ステップに使用された。脾臓中の赤血球ならびに腫瘍細胞懸濁液および血液が、ＡＣＫ緩衝液（Ｇｉｂｃｏカタログ番号Ａ１０４９２）を使用して溶解された。
細胞懸濁液は、以下の抗体で染色された：ＣＤ４５（クローン３０－Ｆ１１、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、ＣＤ３（クローン２Ｃ１１、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、ＣＤ８（クローン５３－６．７、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ＣＤ４（クローンＲＭ－４５、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）。データ収集がＭＡＣＳＱｕａｎｔ Ａｎａｌｙｚｅｒフローサイトメーター（Ｍｉｌｅｎｙｉ）上で実行され、データがＦｌｏｗＪｏを使用して分析された。
薬物レベルが、捕捉抗体および様々な検出抗体として抗ヒトＩｇＧ（クローンＭ１３１０Ｇ０５、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）を利用したＥＬＩＳＡを使用して、決定された。ヒトＩｇＧ（ａｂ９７２２５、Ａｂｃａｍ）またはＣＤ１２２（クローン９Ａ２、Ａｎｃｅｌｌ）およびＩＬ－２（Ｐｏｌｙ５１７６、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）に対するＨＲＰまたはビオチン複合検出抗体が、それぞれ、総薬剤レベルおよび非切断薬剤レベルを検出するために利用された。
Ｉ２５３Ａ ＦｃＲｎ変異を伴うＡＫ４７１は、図２９Ａおよび２９Ｂに示されるように、ＴＭＥにおいて堅調なＣＤ８ Ｔ細胞の拡張を誘発した一方で、周辺では不活性のままであった。
ＡＫ４７１は、図３０Ａ、ＢおよびＣに示されるように、アグリコ－ｈＩｇＧ１と比較して、わずかに短い半減期を有する。
血漿中のＡＫ４７１で切断または切除の証拠がない（図３１Ａ、Ｂ、およびＣ）。
実施例５
ＣＤ１２２上のＣｙｓ－Ｓｅｒ変異の概要
ＣＤ１２２マスキングドメイン上の２つの遊離システインは、セリンに変異され、タンパク質安定性を増加させ、限定されないが、理論、凝集、酸化、および免疫原性に関するものを含む、開発可能性のリスクを軽減した。変異体は、加速安定性試験で評価され、対照およびＣｙｓ－Ｓｅｒ変異体は、長時間（３週間）にわたって高温（４０℃）で複数のｐＨにおいてインキュベートされた。様々な分析が、システイン変異の影響を評価するために実施された。結果は、Ｃｙｓ－Ｓｅｒ変異体が、ストレス下での有意に低減した凝集によって証明されるように、タンパク質安定性を明確に強化したことを実証する。ｐＨ８．０における３週間のインキュベーション後、システインが変異した構築物は、ＳＥＣ－ＨＰＬＣによって測定されると５０パーセント超を有する、システイン変異を含有しない対照構築物と比較して、低いレベルの凝集を呈する。ＣＥ－ＳＤＳは、変異システインを伴う構築物がｐＨ６．０およびｐＨ８．０のインキュベーションについて非凝集のままである（＞９９％）ことを実証し、対照構築物は、最大１５パーセントの凝集のレベルを含有した。
加えて、ＣＤ１２２マスキングタンパク質中の変異システインを伴う構築物は、野生型ＣＤ１２２マスキングタンパク質を含有する（すなわち、システイン残基の変異を伴わない）対照構築物と同様の様式で、ＩＬ－２タンパク質と相互作用する。加えて、ＣＤ１２２マスキングタンパク質中の変異システインを伴う構築物は、システイン変異を伴わないＣＤ１２２マスキングタンパク質を含有する対照構築物と機能的アッセイおよび薬力学研究の両方において類似している。
実験プロトコル
安定性研究
サンプルが、４０℃に設定されたＧａｌａｘｙ １７０ Ｓ空気インキュベーター内でインキュベートされた。２０ｍＭのクエン酸塩（ｐＨ５．０）、２０ｍＭのヒスチジン（ｐＨ６．０）、および２０ｍＭのトリス（ｐＨ８．０）という３つの緩衝系が試験された。各々のｐＨが、室温（約２７℃）で較正され、緩衝液が、ＨＣｌ／ＮａＯＨを用いて０．０５ｐＨ単位以内に調整された。緩衝液が、０．２２μｍのボトルトップフィルターによって濾過された。サンプルが、スピン濃縮を介して開始緩衝液に約３０００倍で緩衝液交換された。サンプルアリコートが、０、１、３、７、１４、および２１日目に滅菌条件下で除去さ、れ、以下の分析試験で評価される前に－８０℃で保存された。
ＳＥＣ－ＨＰＬＣ
ＨＰＬＣシステムが、インキュベートされたサンプル中の凝集レベルを評価するために使用され、このシステムは、分子量標準とともに較正された。高分子量種（ＨＭＷＳ）のレベルが、各サンプルで測定された。ＨＭＷＳの増加は、増加する凝集のレベルを示した。
これらの研究の結果は、図３３Ａおよび３３Ｂに示される。凡例は、ＡＫ３４１がＣｙｓ－Ｓｅｒ変異体であり、ＡＫ２０９が対照である、「ＡＫ」分子数を表す。
ＣＥ－ＳＤＳ
ＣＥ－ＳＤＳが、ラボチップマシン上で実行された。一般に、還元剤が還元条件下での実験に使用された。サンプルが９６ウェルＰＣＲプレートの中に装填される前に、サンプルが高熱を受けた。組換えヒトＩＬ－２が、低分子量タンパク質対照として使用された。ＨＭＷＳのレベルが、各サンプルで測定された。ＨＭＷＳの増加は、増加する凝集のレベルを示した。
これらの研究の結果は、図３３Ａ～３３Ｄに示される。凡例は、ＡＫ３４１がＣｙｓ－Ｓｅｒ変異体であり、ＡＫ２０９が対照である、「ＡＫ」分子数を表す。
実施例６
使用される構築物は、以下のとおりである。
Figure 2023520514000030
ｉ．抗腫瘍活性－ＡＫ４３８およびＡＫ４４２
Ｃ５７ＢＬ／６メスマウスが、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから購入され、試験開始時に８～１０週齢であった。ＭＣ３８腫瘍細胞（マウス当たり５×１０５個の細胞）を、各マウスの右脇腹に皮下注射した。約１００ｍｍ３サイズの腫瘍に到達すると（０日目）、マウスは、ＰＢＳ中のＦｃ－ＩＬ－２構築物を受けるように無作為化された。マウスは、０日目、３日目、および６日目に静脈内投与された。腫瘍体積がダイヤルキャリパーを使用して計算され（長さ＊（幅＾２）／２）、体重が週に２回記録された。マウスは、腫瘍量の人道的終点（２０００ｍｍ３）または毒性による体重減少（２０％）に到達すると犠牲にされた。
結果が、図３４ＡおよびＢに示される。
ｉｉ．末梢（脾臓）対腫瘍ＣＤ８ Ｔ細胞拡張－ＡＫ４３８およびＡＫ４４２
Ｃ５７ＢＬ／６メスマウスが、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから購入され、試験開始時に８～１０週齢であった。ＭＣ３８腫瘍細胞（マウス当たり５×１０５個の細胞）を、各マウスの右脇腹に皮下注射した。約１００ｍｍ３のサイズの腫瘍に到達すると（０日目）、マウスは、ＰＢＳ中の低用量レベルにおけるＡＫ２５３および高用量レベルにおけるすべての他のＦｃ－ＩＬ－２構築物を受けるように無作為化された。マウスは、０日目、３日目、および６日目に静脈内投与された。
７日目の免疫表現型検査が、末梢血からＦＡＣＳベースの方法を使用して実施された。赤血球が、ＡＣＫ緩衝液（Ｇｉｂｃｏカタログ番号Ａ１０４９２）を使用して溶解された。細胞懸濁液は、以下の抗体で染色された：ＣＤ４５（クローン３０－Ｆ１１、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、ＣＤ３（クローン２Ｃ１１、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、ＣＤ８（クローン５３－６．７、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ＣＤ４（クローンＲＭ－４５、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、およびＫｉ－６７（クローンＳＯＬＡ１５、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）。データ収集がＭＡＣＳＱｕａｎｔ Ａｎａｌｙｚｅｒフローサイトメーター（Ｍｉｌｅｎｙｉ）上で実行され、データがＦｌｏｗＪｏを使用して分析された。Ｂｏｎｆｅｒｏｎｎｉの事後検定を用いた一元配置分散分析が、対照ＡＫ２１１と対比した治療の統計的有意性を決定するために実施された）（＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１、＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１）。
結果が、図３５ＡおよびＢに示される。
ｉｉｉ．抗腫瘍活性－ＡＫ２５２およびＡＫ４３８、ＡＫ２０９、ＡＫ４７１
Ｃ５７ＢＬ／６メスマウスが、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから購入され、試験開始時に８～１０週齢であった。ＭＣ３８腫瘍細胞（マウス当たり５×１０５細胞）を、各マウスの右脇腹に皮下注射した。約１００ｍｍ３サイズの腫瘍に到達すると（０日目）、マウスは、ＰＢＳ中の低用量レベルにおけるＡＫ２５３および高用量レベルにおけるすべての他のＦｃ－ＩＬ－２構築物を受けるように無作為化された。マウスは、０日目、３日目、および６日目に静脈内投与された。腫瘍体積がダイヤルキャリパーを使用して計算され（長さ＊（幅＾２）／２）、体重が週に２回記録された。マウスは、腫瘍量の人道的終点（２０００ｍｍ３）または毒性による体重減少（２０％）に到達すると犠牲にされた。
結果が、図３６ＡおよびＢに示される。
ｉｖ．末梢（脾臓）対腫瘍ＣＤ８ Ｔ細胞増殖－ＡＫ２５２およびＡＫ４３８、ＡＫ２０９、ＡＫ４７１
Ｃ５７ＢＬ／６メスマウスが、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから購入され、試験開始時に８～１０週齢であった。ＭＣ３８腫瘍細胞（マウス当たり５×１０５個の細胞）を、各マウスの右脇腹に皮下注射した。約１００ｍｍ３サイズの腫瘍に到達すると（０日目）、マウスは、ＰＢＳ中の低用量レベルにおけるＡＫ２５３および高用量レベルにおけるすべての他のＦｃ－ＩＬ－２構築物を受けるように無作為化された。マウスは、０日目、３日目、および６日目に静脈内投与された。
７日目の免疫表現型検査が、末梢血からＦＡＣＳベースの方法を使用して実施された。赤血球が、ＡＣＫ緩衝液（Ｇｉｂｃｏカタログ番号Ａ１０４９２）を使用して溶解された。細胞懸濁液は、以下の抗体で染色された：ＣＤ４５（クローン３０－Ｆ１１、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、ＣＤ３（クローン２Ｃ１１、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、ＣＤ８（クローン５３－６．７、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ＣＤ４（クローンＲＭ－４５、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、およびＫｉ－６７（クローンＳＯＬＡ１５、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）。データ収集がＭＡＣＳＱｕａｎｔ Ａｎａｌｙｚｅｒフローサイトメーター（Ｍｉｌｅｎｙｉ）上で実行され、データがＦｌｏｗＪｏを使用して分析された。Ｂｏｎｆｅｒｏｎｎｉの事後検定を用いた一元配置分散分析が、対照ＡＫ２１１と対比した治療の統計的有意性を決定するために実施された）（＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１、＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１）。
結果が、図３７ＡおよびＢに示される。
ｖ．抗腫瘍活性－ＡＫ２５２およびＡＫ４４２、ＡＫ２０３、ＡＫ５０８、ならびにＡＫ５１０
Ｃ５７ＢＬ／６メスマウスが、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから購入され、試験開始時に８～１０週齢であった。ＭＣ３８腫瘍細胞（マウス当たり５×１０５個の細胞）を、各マウスの右脇腹に皮下注射した。約１００ｍｍ３サイズの腫瘍に到達すると（０日目）、マウスは、ＰＢＳ中の低用量レベルにおけるＡＫ２５３および高用量レベルにおけるすべての他のＦｃ－ＩＬ－２構築物を受けるように無作為化された。マウスは、０日目、３日目、および６日目に静脈内投与された。腫瘍体積がダイヤルキャリパーを使用して計算され（長さ＊（幅＾２）／２）、体重が週に２回記録された。マウスは、腫瘍量の人道的終点（２０００ｍｍ３）または毒性による体重減少（２０％）に到達すると犠牲にされた。
結果が、図３８ＡおよびＢに示される。
ｖｉ．末梢（脾臓）対腫瘍ＣＤ８ Ｔ細胞増殖－ＡＫ２５２およびＡＫ４４２）、ＡＫ２０３、ＡＫ５０８およびＡＫ５１０
Ｃ５７ＢＬ／６メスマウスが、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから購入され、試験開始時に８～１０週齢であった。ＭＣ３８腫瘍細胞（マウス当たり５×１０５個の細胞）を、各マウスの右脇腹に皮下注射した。約１００ｍｍ３サイズの腫瘍に到達すると（０日目）、マウスは、ＰＢＳ中の低用量レベルにおけるＡＫ２５３および高用量レベルにおけるすべての他のＦｃ－ＩＬ－２構築物を受けるように無作為化された。マウスは、０日目、３日目、および６日目に静脈内投与された。
７日目の免疫表現型検査が、末梢血からＦＡＣＳベースの方法を使用して実施された。赤血球が、ＡＣＫ緩衝液（Ｇｉｂｃｏカタログ番号Ａ１０４９２）を使用して溶解された。細胞懸濁液は、以下の抗体で染色された：ＣＤ４５（クローン３０－Ｆ１１、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、ＣＤ３（クローン２Ｃ１１、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、ＣＤ８（クローン５３－６．７、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ＣＤ４（クローンＲＭ－４５、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、およびＫｉ－６７（クローンＳＯＬＡ１５、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）。データ収集がＭＡＣＳＱｕａｎｔ Ａｎａｌｙｚｅｒフローサイトメーター（Ｍｉｌｅｎｙｉ）上で実行され、データがＦｌｏｗＪｏを使用して分析された。Ｂｏｎｆｅｒｏｎｎｉの事後検定を用いた一元配置分散分析が、対照ＡＫ２１１と対比した治療の統計的有意性を決定するために実施された）（＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１、＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１）。
結果が、図３９ＡおよびＢに示される。
ｖｉｉ．抗腫瘍活性－ＡＫ２５２、ＡＫ５０８、ＡＫ５０９、ＡＫ５１０、およびＡＫ５１１
Ｃ５７ＢＬ／６メスマウスが、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから購入され、試験開始時に８～１０週齢であった。ＭＣ３８腫瘍細胞（マウス当たり５×１０５個の細胞）を、各マウスの右脇腹に皮下注射した。約１００ｍｍ３サイズの腫瘍に到達すると（０日目）、マウスは、ＰＢＳ中の低用量レベルにおけるＡＫ２５３および高用量レベルにおけるすべての他のＦｃ－ＩＬ－２構築物を受けるように無作為化された。マウスは、０日目、３日目、および６日目に静脈内投与された。腫瘍体積がダイヤルキャリパーを使用して計算され（長さ＊（幅＾２）／２）、体重が週に２回記録された。マウスは、腫瘍量の人道的終点（２０００ｍｍ３）または毒性による体重減少（２０％）に到達すると犠牲にされた。
結果が、図４０Ａ～４０Ｄに示される。
ｖｉｉｉ．末梢（脾臓）対腫瘍ＣＤ８ Ｔ細胞増殖－ＡＫ２５２、ＡＫ５０８、ＡＫ５０９、ＡＫ５１０、ＡＫ５１１
Ｃ５７ＢＬ／６メスマウスが、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから購入され、試験開始時に８～１０週齢であった。ＭＣ３８腫瘍細胞（マウス当たり５×１０５個の細胞）を、各マウスの右脇腹に皮下注射した。約１００ｍｍ３サイズの腫瘍に到達すると（０日目）、マウスは、ＰＢＳ中の低用量レベルにおけるＡＫ２５３および高用量レベルにおけるすべての他のＦｃ－ＩＬ－２構築物を受けるように無作為化された。マウスは、０日目、３日目、および６日目に静脈内投与された。
７日目の免疫表現型検査が、末梢血からＦＡＣＳベースの方法を使用して実施された。赤血球が、ＡＣＫ緩衝液（Ｇｉｂｃｏカタログ番号Ａ１０４９２）を使用して溶解された。細胞懸濁液は、以下の抗体で染色された：ＣＤ４５（クローン３０－Ｆ１１、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、ＣＤ３（クローン２Ｃ１１、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、ＣＤ８（クローン５３－６．７、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ＣＤ４（クローンＲＭ－４５、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、およびＫｉ－６７（クローンＳＯＬＡ１５、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）。データ収集がＭＡＣＳＱｕａｎｔ Ａｎａｌｙｚｅｒフローサイトメーター（Ｍｉｌｅｎｙｉ）上で実行され、データがＦｌｏｗＪｏを使用して分析された。Ｂｏｎｆｅｒｏｎｎｉの事後検定を用いた一元配置分散分析が、対照ＡＫ２１１と対比した治療の統計的有意性を決定するために実施された）（＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１、＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１）。
自社で生産されたロット番号ＡＫ２５２－０６ＢのＡＫ２５２＋＋、ＡＴＵＭによって生産されたロット番号ＡＫ２５２－Ａ－０１ＡのＡＫ２５２。
結果が、図４１ＡおよびＢに示される。
ｉｘ．抗腫瘍活性－ＡＫ２５２、ＡＫ４３８、ＡＫ４４２）、ＡＫ２０９、ＡＫ３４１
Ｃ５７ＢＬ／６メスマウスが、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから購入され、試験開始時に８～１０週齢であった。ＭＣ３８腫瘍細胞（マウス当たり５×１０５個の細胞）を、各マウスの右脇腹に皮下注射した。約１００ｍｍ３サイズの腫瘍に到達すると（０日目）、マウスは、ＰＢＳ中の低用量レベルにおけるＡＫ２５３および高用量レベルにおけるすべての他のＦｃ－ＩＬ－２構築物を受けるように無作為化された。マウスは、０日目、３日目、および６日目に静脈内投与された。腫瘍体積がダイヤルキャリパーを使用して計算され（長さ＊（幅＾２）／２）、体重が週に２回記録された。マウスは、腫瘍量の人道的終点（２０００ｍｍ３）または毒性による体重減少（２０％）に到達すると犠牲にされた。
結果が、図４２Ａおよび４２Ｂに示される。
ｘ．脾腫および肺浮腫－ＡＫ２５２、ＡＫ４３８、ＡＫ４４２、ＡＫ２０９、ＡＫ３４１
Ｃ５７ＢＬ／６メスマウスが、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから購入され、試験開始時に８～１０週齢であった。ＭＣ３８腫瘍細胞（マウス当たり５×１０５個の細胞）を、各マウスの右脇腹に皮下注射した。約１００ｍｍ３サイズの腫瘍に到達すると（０日目）、マウスは、ＰＢＳ中の低用量レベルにおけるＡＫ２５３および高用量レベルにおけるすべての他のＦｃ－ＩＬ－２構築物を受けるように無作為化された。マウスは、０日目、３日目、および６日目に静脈内投与された。組織が採取され、６日目に計量された。
結果が、図４３Ａおよび４３Ｂに示される。
実施例７：ＩＬ－１５ヘテロＡＫ化（Ｈｅｔｅｒｏａｋｌｕｓｉｏｎ）
以下の構築物が、この実施例で使用された：
Figure 2023520514000031
Figure 2023520514000032
ＩＬ－１５レポーターバイオアッセイ：インターロイキン－１５（ＩＬ－１５）は、単球、マクロファージ、樹状細胞、および上皮細胞を含む、様々な細胞型によって分泌される。ＩＬ－１５は、ナチュラルキラー（ＮＫ）、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）、およびＣＤ８＋メモリーＴ細胞の活性化および拡張を促進し、ＩＬ－２とは異なり、ＣＤ４＋調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）に影響を与えないか、または活性化誘導性細胞死（ＡＩＣＤ）を誘導しない。複数の経路が、ＩＬ－１５シグナル伝達によって活性化され、細胞増殖、抗アポトーシス生存、および細胞傷害性エフェクター機能に影響を及ぼすことができる。ＩＬ－１５生物発光細胞ベースアッセイが、サイトカインの作用機序経路を使用してＩＬ－１５を定量化するために使用された。アッセイは、製造業者の仕様書に従って実施された。簡潔に述べると、ＩＬ－１５バイオアッセイ細胞（Ｐｒｏｍｅｇａ）のバイアルが解凍され、温かいアッセイ緩衝液に添加された。細胞懸濁液が混合および播種された。ＩＬ－１５構築物の連続希釈物が、細胞上に播種され、６時間インキュベートされた。生体発光試薬がウェルに添加され、インキュベートされ、発光が測定された。背景が未加工データから差し引かれ、データが非線形に適合された：［アゴニスト］対応答－可変勾配（４つのパラメータ）。各構築物のＥＣ５０値が示される。
結果は、図４５Ａに示される。
ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ ＩＬ－２レポーター細胞を用いたＩＬ－１５分子の試験：Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎによって開発されたＨＥＫ－Ｂｌｕｅ ＩＬ－２レポーター細胞は、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ経路の活性化を監視するように特異的に設計されている。これらの細胞は、ヒトＪＡＫ３遺伝子およびＳＴＡＴ５遺伝子とともに、ヒトＩＬ－２Ｒα、ＩＬ－２Ｒβ、およびＩＬ－２Ｒγ遺伝子を用いたＨＥＫ２９３細胞の安定したトランスフェクションによって生成され、
完全に機能的なＩＬ－２シグナル伝達経路を取得した。加えて、ＳＴＡＴ５誘発性ＳＥＡＰレポーター遺伝子も導入された。刺激時に、ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ（商標）ＩＬ－２細胞は、ＳＴＡＴ５の活性化およびＳＥＡＰの後続の分泌を誘起する。ＳＴＡＴ５誘発性ＳＥＡＰのレベルは、ＱＵＡＮＴＩ－Ｂｌｕｅ（商標）を使用して容易に監視されることができる。ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ ＩＬ－２細胞は、ヒトまたはマウスＩＬ－２の機能性、毒性、および可変用量投与量効果を検証するために使用されることができる。ＨＥＫ Ｂｌｕｅ ＩＬ－２細胞を、約８０％の密集まで継代培地中で増殖させた。アッセイ培地中の洗浄された単一細胞懸濁液が播種され、アッセイ培地中のＩＬ－１５分子の連続希釈物が細胞に添加された。プレートが、３７℃で２４時間インキュベートされた。２４時間後、Ｑｕａｎｔｉ－Ｂｌｕｅ溶液（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ）が調製され、細胞上清がＱｕａｎｔｉ－Ｂｌｕｅ溶液に添加され、３７℃で１～２時間インキュベートされた。６２５ｎｍにおける吸光度が測定された。データ分析が、Ｇｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍのバージョン８．３で実施された。背景が未加工データから差し引かれ、データが非線形に適合された：［アゴニスト］対応答－可変勾配（４つのパラメータ）。各ＩＬ－１５構築物のＥＣ５０値が報告された。
結果は、図４５Ｂに示される。
実施例８：
ＩＬ－１５分子の切断ならびにＳＤＳ－ＰＡＧＥおよび抗ＩＬ－１５ ＷＢによる分析：
組換えＭＭＰを用いた切断
－ＩＬ－１５分子が、ＭＭＰ緩衝液（５０ｍＭのトリス（ｐＨ８．０）、１５０ｍＭのＮａＣｌ、１０ｍＭのＣａＣｌ２）に緩衝液交換された。濃度がＡ２８０吸光度によって測定された。
－各構築物が、１μＭに希釈され、２つの１００μＬアリコートに分割された。
－予め活性化された２００ｎｇのＭＭＰ９またはＭＭＰ１０が、構築物当たり１本の管に添加された。構築物当たりの他の管は、同じ量の緩衝液のみを添加させた（プロテアーゼサンプルなし）。
－サンプルが３７℃で１６～１８時間インキュベートされた。
ＳＤＳ－ＰＡＧＥによる分析
－サンプルが、ＳＤＳ－ＰＡＧＥによる分析のためにサンプル緩衝液中で調製された。
・１２μＬの構築物＋４μＬの４ｘラメリ緩衝液（還元サンプルにはＢＭＥがあり、非還元サンプルにはＢＭＥがない）。
・サンプルが９５℃で１０分間煮沸された。
－ウェル当たり１５μＬの各サンプルが、１８ウェル無染色ＳＤＳ－ＰＡＧＥ（ＢｉｏＲａｄ）に適用された。
－電流が２００Ｖで３５分間印加された。
－タンパク質が、ＢｉｏＲａｄ撮像機器を使用することによってゲル上で検出され、４５秒の活性化を伴う無染色検出であった。
抗ＩＬ－１５ウェスタンブロットによる分析
－上記のＳＤＳ－ＰＡＧＥが、半乾燥ブロッティングシステムを使用してニトロセルロース膜に移された。
・移入緩衝液：２００ｍＬの５ｘ移入緩衝液（ＢｉｏＲａｄ）、６００ｍＬのＨ２Ｏ、および２００ｍＬのエタノール。
・ターボ移入プログラム：７分間の２．５Ａ、２５Ｖ
－膜をブロッキング溶液（１×ＴＢＳ＋１％カゼインブロッカー、ＢｉｏＲａｄ）で１～２時間ブロックし、室温で振とうした。
－膜をブロッキング溶液中で１：５００に希釈されたウサギｐＡｂ抗ＩＬ－１５（ａｂ７２１３、Ａｂｃａｍ）で２時間プローブし、室温で振とうした。
－膜をＴＢＳ－Ｔｗｅｅｎで各洗浄に５分間、３回洗浄し、室温で振とうした。
－ブロッキング溶液中で１：２０００に希釈された二次ＨＲＰ複合抗ウサギＩｇＧ（ＣＳＴ ＃７０７４）を膜に２時間添加し、室温で振とうした。
－膜をＴＢＳ－Ｔｗｅｅｎで各洗浄に５分間、３回洗浄し、室温で振とうした。
－膜は、新たに調製された１２ｍＬの化学発光基質（Ｔｈｅｒｍｏ ＃３７０６９）を１分間添加し、室温で振とうすることによって開発された。
－化学発光シグナルが、ＢｉｏＲａｄ撮像機器、化学発光ブロット設定を使用して測定された。
－画像が、ＢｉｏＲａｄ Ｉｍａｇｅ Ｌａｂソフトウェアを使用して分析された。
ＭＰＹＤＬＹＰを含有する分子：
Figure 2023520514000033
ｉ）ＭＰＹＤＬＹＨＰを含有する分子がＭＭＰ１０によって切断される－ＮＣ対照ＡＫ２４４およびＡＫ２４９は切断されない
結果が、図４６Ａ（無染色ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）およびＢ（抗ＩＬ－１５ウェスタンブロット）に示される。
ｉｉ）ＡＫ２４５の効力がｒｈＩＬ－１５と比較して４０倍低減される－酵素活性化後に完全効力に戻らない
結果が、図４７Ａ、Ｂ、Ｃ、およびＤに示される。
ｉｉｉ）ＡＫ２４８の効力は現在の希釈系列を使用して計算されることができない－活性は酵素活性化後に完全に復元される
結果が、図４８Ａ、Ｂ、Ｃ、およびＤに示される。
ＶＰＬＳＬＹを含有する分子：
Figure 2023520514000034
 ｉ）ＶＰＬＳＬＹを含有する分子がＭＭＰ９によって部分的に切断される
結果が、図４９Ａ（無染色ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）およびＢ（抗ＩＬ－１５ウェスタンブロット）に示される。
ｉｉ）ＡＫ４５７の効力は現在の希釈系列を使用して計算されることができない－酵素活性化後に完全効力に戻らない
結果が、図５０Ａ、Ｂ、Ｃ、およびＤに示される。
ｉｉｉ）ＡＫ４５８、ＡＫ４５９、およびＡＫ４６１の効力は、現在の希釈系列を使用して計算されることができない
結果が、図５１Ａ、Ｂ、Ｃ、およびＤに示される。
本発明の結果は、例えば、本発明の様々な態様を例証するために提供される、特定の開示される実施形態の範囲で限定されることを意図していない。記載される組成物および方法への様々な修正は、本明細書の説明および教示から明白になるであろう。そのような変形例は、本開示の真の範囲および趣旨から逸脱することなく実践され得、本開示の範囲内に入ることを意図している。
実施例９：
以下の構築物が、この実施例で使用された：
Figure 2023520514000035
ＡＫ２４４は、非マスク型ＩＬ－１５構築物である。
ＡＫ５０７は、非共有結合Ｉｌ－１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインを含む、非マスク型ＩＬ－１５構築物である。
ＸＴＸ２００は、非マスク型ＩＬ－２構築物である。
ＡＫ４４３は、切断可能なマスク型ＩＬ－２死滅構築物である。
非共有結合Ｉｌ－１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインを含むＩＬ－１５構築物は、ｓｕｓｈｉドメインを伴わない構築物よりも強力である。
ＣＤ８ Ｔ細胞およびＮＫ細胞の用量依存性活性化が、末梢およびＴＭＥの両方でＡＫ２４４およびＡＫ５０７によって観察された。ＡＫ５０７は、ＣＤ８ Ｔ細胞活性化において、より低い用量レベル（０．５ｍｐｋ）でより高い効力を示した。ＡＫ５０７は、ＡＫ２４４よりもインビボで強力である。
結果が、図５２Ａ～Ｄに示される。
非共有結合Ｉｌ－１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインを含むＩＬ－１５構築物は、ｓｕｓｈｉドメインを伴わない構築物と比較して、類似するＰＫプロファイルを示す。
ＡＫ２４４およびＡＫ５０７の両方は、ＸＴＸ２００と比較して、類似する線形ＰＫプロファイルを有する。
結果が、図５３に示される。
非共有結合Ｉｌ－１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインを含むＩＬ－１５構築物は、ｓｕｓｈｉドメインを伴わない構築物と比較して、より重度の副作用、したがって、より高い効力を示す。
ＡＫ５０７は、ＡＫ２４４よりも重度の脾腫および肺毒性を示す。ＡＫ５０７は、５日目の１００％の致死性、および肺重量の用量依存性増加を示した。
Figure 2023520514000036
結果が、図５４ＡおよびＢに示される。
実施例１０
以下の研究設計が、この実施例で使用された：
Figure 2023520514000037
非共有結合ｓｕｓｈｉを含むＩＬ－１５構築物は、マスキング部分で効果的に「マスク」され、半減期および薬物曝露を増加させることができる。
ＡＫ５０７（非マスク型、ｓｕｓｈｉ）をＡＫ５６４（マスク型、非切断可能、ｓｕｓｈｉ）と比較し、ＡＫ５９５（非マスク型、ｓｕｓｈｉ＋単一ＩＬ－１５変異Ｎ７１Ｑ）をＡＫ５９６（マスク型、非切断可能、ｓｕｓｈｉ＋単一ＩＬ－１５変異Ｎ７１Ｑ）と比較すると、マスク型構築物は、非マスク型対応物と比較して、より長い半減期を有する。用量比例性もまた、マスク型構築物について達成される。
結果が、図５５ＡおよびＢに示される。
非共有結合ｓｕｓｈｉを含むマスク型ＩＬ－１５構築物は、非共有結合ｓｕｓｈｉを含む非マスク型ＩＬ－１５構築物と比較して、異なる臨床効果を有する。
ＡＫ５０７（非マスク型、ｓｕｓｈｉ）をＡＫ５６４（マスク型、非切断可能、ｓｕｓｈｉ）と比較し、ＡＫ５９５（非マスク型、ｓｕｓｈｉ＋単一ＩＬ－１５変異Ｎ７１Ｑ）をＡＫ５９６（マスク型、非切断可能、ｓｕｓｈｉ＋単一ＩＬ－１５変異Ｎ７１Ｑ）と比較すると、
ｉ）ＢＷ損失％が非マスク型構築物で観察されたが、マスク型構築物では観察されなかった。
結果が、図５６ＡおよびＢに示される。
ｉｉ）腫瘍中のＴｒｅｇの割合は、マスク型構築物と非マスク型構築物の間で一貫したままであった。腫瘍中のＣＤ８＋Ｔ細胞の割合は、非マスク型構築物とともに増加した。
結果が、図５７ＡおよびＢに示される。
ｉｉｉ）ＣＤ８：Ｔｒｅｇ比は、マスク型構築物では上昇しない。同等の容量においてＡＫ２５３と比べた改善がある。
結果が、図５８に示される。
ｉｖ）腫瘍中のＣＤ４５＋集団のＮＫ細胞の割合は、非マスク型構築物では上昇する。これは、他の白血球集団に対してＮＫの動員または増殖の増加を示す。
結果が、図５９に示される。
ｖ）腫瘍内の増殖および活性化ＮＫ細胞の割合の増加が、非マスク型構築物で観察された。
結果が、図６０ＡおよびＢに示される。
ｖｉ）マスク型構築物は、血液中のＫｉ－６７＋細胞およびＩＣＯＳ＋ＮＫ細胞のより低い割合を誘導した。用量の増加は、血液中のマスキングを克服することができる。
結果が、図６１Ａ～Ｄに示される。
実施例１１
以下の構築物が、この実施例で使用された：
Figure 2023520514000038
Figure 2023520514000039
単一変異、二重変異、または三重変異をＩＬ－１５ドメインに付加することが、分子のグリコシル化パターンを改変し、タンパク質のより均質な混合物を生成する。これは、構築物の製造プロセスにおける一貫性のために有用である。
ＳＤＳ－ＰＡＧＥ解析が、マスク型ＩＬ－１５構築物ＡＫ５６４、ＡＫ５９６、ＡＫ９０６、ＡＫ９０７、ＡＫ９０８、ＡＫ９０９、ＡＫ９１０、およびＡＫ９１１を使用して実行された。ＡＫ５６４（野生型ＩＬ－１５ドメイン）は、構築物の「ノブ」ドメインを示すバンドの倍加を示した（図６２の標識を参照）。この倍加は、それぞれ、ＩＬ－１５ドメインの二重変異および三重変異を含む、ＡＫ９１０およびＡＫ９１１で除去される。
結果は、図６２に示される。
単一変異、二重変異、または三重変異をＩＬ－１５ドメインに付加することは、構築物の効力またはマスキングを改変しない。
ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ ＩＬ－２バイオアッセイが、ＩＬ－２およびＩＬ－１５活性を監視するよう操作されたレポーター細胞株におけるＪＡＫ－ＳＴＡＴ経路を試験するために使用された。活性化の程度は、６５０ｎｍにおける吸光度によって基質溶液で定量化され得る、ＳＴＡＴ５－ＳＥＡＰレポーター遺伝子の誘導によって測定された。ＷＴ ＩＬ－１５（ＡＫ５０７）と比較して、グリコバリアント間で非マスク型ＥＣ５０の有意差は観察されなかった。マスキングＷＴ ＩＬ－１５（ＡＫ５６４）と比較して、グリコバリアント間のマスキング能力の有意な喪失は観察されなかった。マスク型三重変異体（ＡＫ９１１）は、マスク型ＷＴ ＩＬ－１５（ＡＫ５６４）よりも３．６倍多くマスクされる。
結果が、図６３に示される。
実施例１２
以下の構築物が、この実施例で使用された：
Figure 2023520514000040
各ＡＫ分子のドメイン特徴および配列の詳細は、第１０節内の配列表で見出され得る。
重要なことに、ＡＫ９２９、ＡＫ９３１、ＡＫ９３３、ＡＫ９３４、およびそれらの「逆転」（構造Ｂ）対応物ＡＫ９３５、ＡＫ９３７、ＡＫ９３９、およびＡＫ９４０は、ペプチド基質を含む（その配列は各分子の上方のボックスに描写される）。ＡＫ９０４は、非切断可能な非マスク型構築物であり、ＡＫ９１０は、非切断可能なマスク型構築物であり、両方とも陰性対照として作用する。
切断がペプチド基質を含むマスク型ＩＬ－１５構築物について達成された。
構築物が、ＭＭＰ７、９および１０とインキュベートされた。各構築物の切断が、ＳＤＳ－ＰＡＧＥによって分析され、ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ ＩＬ－２バイオアッセイによって確認された。
ＨＥＫ－Ｂｌｕｅアッセイは、以下のように実行された：
条件：細胞プレート：９６ウェルプレート。細胞密度：５０Ｋ細胞／ウェル。ＨＥＫ Ｂｌｕｅ検出の時点が試験された：１時間。構築物番号：試験された合計１４個の構築物。
アッセイのフローチャート：
Figure 2023520514000041
結果は、「Ｘ」が完全には切断されていないことを示し、「√」が切断を示す、以下の表に示される。
Figure 2023520514000042
ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ ＩＬ－２バイオアッセイからの具体的なＥＣ５０読み出し結果が、以下の表に示される。
Figure 2023520514000043
ＳＤＳ－ＰＡＧＥゲルの結果が、図６４Ａ～Ｄに示される。ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ ＩＬ－２バイオアッセイの結果が、図６５Ａ～Ｊに示される。
実施例１３
三本鎖構築物の産生
構築物（例えば、マスク型ＩＬ－２ポリペプチド構築物およびマスク型ＩＬ－１５ポリペプチド構築物）をコードするプラスミドが、Ｅｘｐｉ２９３細胞（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ａ１４５２７）にトランスフェクトされた。トランスフェクションは、ＰＥＩ ＭＡＸ（Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ、２４７６５－１）を使用した１リットルの培養当たり１ｍｇの総ＤＮＡを使用して、それぞれ、ＩＬ－２およびＩＬ－１５について１：４および１：３のＤＮＡ比で実施された。１：３：２のＤＮＡ比が、三本鎖ＩＬ－１５分子（Ｓｕｓｈｉドメインを伴うＩＬ－１５）に使用された。ＤＮＡおよびＰＥＩが、各々、５０ｍＬのＦｒｅｅＳｔｙｌｅ Ｆ１７発現培地（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ａ１３８３５０２）に添加された。ＤＮＡおよびＰＥＩ混合物が、５～１０分間インキュベートされ、４～６×１０６細胞／ｍＬの細胞密度および少なくとも９５％の生存率でＥｘｐｉ２９３細胞に添加された。５～７日後、細胞が４０００×ｇにおける遠心分離によってペレット化され、上清が０．４５μｍの膜を通して濾過された。濾過された上清が、ＨｉＴｒａｐ ＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅカラム（Ｃｙｔｉｖａ、１１００３４９４）を通過させられた。結合タンパク質が、２０ｍＭのクエン酸塩、１００ｍＭのＮａＣｌ（ｐＨ２．９）でカラムから溶出された。溶出タンパク質は、ＨｉＬｏａｄ １６／６００ Ｓｕｐｅｒｄｅｘ ２００ｐｇカラム（Ｃｙｔｉｖａ、２８９８９３３５）を通過することによってさらに精製された。
実施例１４
ｉ．ＮＡＴ対ＲＣＣ培養上清によるペプチドの切断
切断ペプチドを含む配列（以下に太字で示される）が、各ペプチドの切断の特異性を試験するために、「ＮＡＴ」（正常隣接組織）または「ＲＣＣ」（腎細胞がん）培養上清のいずれかでインキュベートされた。
この目的のために、質量分析法によるペプチド配列決定が、質量分析法（ＭＳＰ－ＭＳ）による多重化基質プロファイリングと呼ばれる公開された技法を使用して、以下の表に示される合成ペプチドについて産生された切断断片を識別するために使用された（Ｏ’Ｄｏｎｏｇｈｕｅ Ａ．Ｊ．ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ Ｍｅｔｈｏｄｓ．２０１２ Ｎｏｖ；９（１１）：１０９５－１００）。切断は、これらの反応において経時的に監視され、最も早い時点で切断されることが見出されたペプチドは、調節された培地サンプルにおいてタンパク質分解活性に対して最も感受性があるとみなされた。
結果は、以下のとおりである。
Figure 2023520514000044
切断ペプチドＤＬＬＡＶＶＡ＊ＡＳおよびＩＳＳＧＬＬ＊ＳＧ＊ＲＳが、最も特異的であると見出された。これらのペプチドを含む配列は、ＮＡＴ培養では切断されなかったが、ＲＣＣ培養では毎回切断された。
実施例１５
以下の構築物が、この実施例で使用された：
Figure 2023520514000045
各ＡＫ分子のドメイン特徴および配列の詳細は、以下のとおりである。
Figure 2023520514000046
Figure 2023520514000047
Figure 2023520514000048
Figure 2023520514000049
Figure 2023520514000050
重要なことに、ＡＫ９３２およびＡＫ９３０、ならびにそれらの「逆転」対応物ＡＫ９３８およびＡＫ９３６は、ペプチド基質を含む（その配列は各分子の上方のボックスに描写され、配列表内で太字である）。ＡＫ９０４は、非切断可能な非マスク型構築物であり、ＡＫ９１０は、非切断可能なマスク構築物であり、両方とも陰性対照として作用する。
上記のＡＫ分子は、ＩＬ－１５ドメインを含むが、このデータの結果および結論はＩＬ－２構築物についても同等に関連性があることを理解されたい。
切断がペプチド基質を含むマスク型構築物について達成された。
構築物が、ＭＭＰ７、９および１０とインキュベートされた。各構築物の切断が、ＳＤＳ－ＰＡＧＥによって分析され、ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ ＩＬ－２バイオアッセイによって確認された。
ＨＥＫ－Ｂｌｕｅアッセイは、以下のように実行された：
条件：細胞プレート：９６ウェルプレート。細胞密度：５０Ｋ細胞／ウェル。ＨＥＫ Ｂｌｕｅ検出の時点が試験された：１時間。構築物番号：試験された合計１４個の構築物。
アッセイのフローチャート：
Figure 2023520514000051
結果は、「Ｘ」が完全には切断されていないことを示し、「√」が切断を示す、以下の表に示される。
Figure 2023520514000052
ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ ＩＬ－２バイオアッセイからの具体的なＥＣ５０読み出し結果が、以下の表に示される。
Figure 2023520514000053
ＳＤＳ－ＰＡＧＥゲルの結果が、図６６Ａ～Ｄに示される。ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ ＩＬ－２バイオアッセイの結果が、図６７Ａ～Ｆに示される。
実施例１６
以下の分子が、この実施例で使用された：
ｒｈＩＬ－１５ 対照
ＡＫ５０７ 非マスク型、非共有結合ＩＬ－１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインを伴う
ＡＫ５６３ マスク型、ｓｕｓｈｉなし
ＡＫ５６４ マスク型、非共有結合ＩＬ－１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインを伴う
これらの分子の配列情報が、第１０節に記載される。
表面プラスミド共鳴（ＳＰＲ）研究が、ｉ）ＣＤ１２２に結合するＩＬ－１５のマスキング、およびｉｉ）ＩＬ－１５構築物へのｓｕｓｈｉドメイン付着を決定するために実行された。研究の詳細が、以下に記載される。
アッセイ原理：
表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）アッセイがＣＤ２１５およびＣＤ１２２に結合するＩＬ１５構築物の動態特性を試験するために実施される。マルチサイクル動態アッセイが、アミン結合法を使用して実施される。
Figure 2023520514000054
機器：ｂｉａｃｏｒｅ ８ｋ
手順：
固定化
１．固定化のために、タンパク質を１０ｍＭの酢酸ナトリウム中で２０μｇ／ｍＬにおいて希釈する。
２．実行の直前に－２０℃からＥＤＣおよびＮＨＳアリコートを解凍する。チャネルのチップ表面を活性化するための１：１の混合、１０μｌ／分の流量、４２０秒の接触時間を使用する。
３．所望の装填量が達成されるまで希釈タンパク質を注入する。
４．チップの表面は、エタノールアミン－ＨＣＬでブロックされ、接触時間は４２０秒、流量は１０μｌ／分であった。
Figure 2023520514000055
結合試験
－泳動緩衝液：２０ｍＭのＨＥＰＥＳ、３００ｍＭのＮａＣＬ、０．１％のＴｗｅｅｎ ２０、１ｍＭのＴＣＥＰ
－分析物を泳動緩衝液で最高用量まで希釈する
－泳動緩衝液中で最低８回の連続希釈（２倍）を行う
－サンプルを低濃度から高濃度に流動させる
－２５℃、流量６０μｌ／分で実験を実行する
－実行の終了時に中間濃度で１回の濃縮を繰り返した。
Figure 2023520514000056
データ分析：
データは、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｉｎｓｉｇｈｔ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ Ｓｏｆｔｗａｒｅ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して分析される。
結果が、図６８Ａ～Ｄ（ｉ）および図６９Ａ～Ｄ（ｉｉ）に示される。
ｉ）リガンドへの結合がマスキングの成功を示さない、ＣＤ１２２に結合するＩＬ－１５のマスキング（リガンド＝ヒトＣＤ１２２）
ｒｈＩＬ－１５は、ＣＤ１２２へのＩＬ－１５の結合を示した
ＡＫ５０７は、ＣＤ１２２へのＩＬ－１５の結合を示した
ＡＫ５６３は、ＣＤ１２２へのＩＬ－１５の結合を示さなかった
ＡＫ５６４は、ＣＤ１２２へのＩＬ－１５の結合を示さなかった
ｉｉ）リガンドへの結合がｓｕｓｈｉドメインの付着の成功を示さない、ＩＬ－１５構築物へのスシドメイン付着（リガンド＝ヒトＣＤ２１５）
ｒｈＩＬ－１５は、ＣＤ２１５へのＩＬ－１５の結合を示した
ＡＫ５０７は、ＣＤ２１５へのＩＬ－１５の結合を示さなかった
ＡＫ５６３は、ＣＤ２１５へのＩＬ－１５の結合を示した
ＡＫ５６４は、ＣＤ２１５へのＩＬ－１５の結合を示さなかった
１０．配列
Figure 2023520514000057
Figure 2023520514000058
Figure 2023520514000059
Figure 2023520514000060
Figure 2023520514000061
Figure 2023520514000062
Figure 2023520514000063
Figure 2023520514000064
Figure 2023520514000065
Figure 2023520514000066
Figure 2023520514000067
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Figure 2023520514000069
Figure 2023520514000070
Figure 2023520514000071
Figure 2023520514000072
Figure 2023520514000073
Figure 2023520514000074
Figure 2023520514000075
Figure 2023520514000076
Figure 2023520514000077
Figure 2023520514000078
Figure 2023520514000079
Figure 2023520514000080
Figure 2023520514000081
Figure 2023520514000082
Figure 2023520514000083
Figure 2023520514000084
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Figure 2023520514000087
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Figure 2023520514000090
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Figure 2023520514000100
Figure 2023520514000101
Figure 2023520514000102
Figure 2023520514000103
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Figure 2023520514000108
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Figure 2023520514000110
Figure 2023520514000111
Figure 2023520514000112
Figure 2023520514000113
Figure 2023520514000114
Figure 2023520514000115
Figure 2023520514000116
Figure 2023520514000117
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Figure 2023520514000119
Figure 2023520514000120
Figure 2023520514000121
Figure 2023520514000122
Figure 2023520514000123
１１．構築物のリスト
以下の表は、「ＡＫ」参照番号によって標識された分子の完全な配列を示す。配列の構成要素部分、ならびにそれらが分子の鎖内で組み立てられる順序も示される。個々の鎖は、「ＤＮＡ」参照番号によって標識される。
［配列表２］
Figure 2023520514000124
Figure 2023520514000125
Figure 2023520514000126
Figure 2023520514000127
Figure 2023520514000128
Figure 2023520514000129
Figure 2023520514000130
Figure 2023520514000131
Figure 2023520514000132
Figure 2023520514000133
Figure 2023520514000134
Figure 2023520514000135
Figure 2023520514000136
Figure 2023520514000137
Figure 2023520514000138
Figure 2023520514000139
Figure 2023520514000140
Figure 2023520514000141
Figure 2023520514000142
Figure 2023520514000143
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Figure 2023520514000145
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Figure 2023520514000162
Figure 2023520514000163
Figure 2023520514000164
Figure 2023520514000165
Figure 2023520514000166
Figure 2023520514000167
Figure 2023520514000168
Figure 2023520514000169
Figure 2023520514000170
Figure 2023520514000171
Figure 2023520514000172
Figure 2023520514000173
Figure 2023520514000174
Figure 2023520514000175
Figure 2023520514000176
Figure 2023520514000177
Figure 2023520514000178
Figure 2023520514000179
Figure 2023520514000180
Figure 2023520514000181
Figure 2023520514000182
Figure 2023520514000183
Figure 2023520514000184
Figure 2023520514000185
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Figure 2023520514000187
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Figure 2023520514000190
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Figure 2023520514000193
Figure 2023520514000194
Figure 2023520514000195
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Claims (168)

  1. マスク型ＩＬ－１５サイトカインであって、第１のポリペプチド鎖であって、
    Ｎ’ＨＬ１ Ｃ’を含む、第１のポリペプチド鎖と、
    第２のポリペプチド鎖であって、
    Ｎ’ＨＬ２－非切断可能Ｌ２－ＭＭ－切断可能Ｌ１－Ｃ Ｃ’を含む、第２のポリペプチド鎖と、を含み、
    ＨＬが、半減期延長ドメインであり、Ｌ１が、第１のリンカーであり、ＭＭが、マスキング部分であり、Ｌ２が、第２のリンカーであり、Ｃが、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片であり、前記第１のリンカーが、タンパク質分解的に切断可能なペプチド（ＣＰ）を含み、前記第２のリンカーが、タンパク質分解的に切断可能なペプチドを含まない、マスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  2. 前記マスク型サイトカインが、第１のポリペプチド鎖であって、
    Ｎ’ＨＬ１ Ｃ’を含む、第１のポリペプチド鎖と、
    第２のポリペプチド鎖であって、
    Ｎ’ＨＬ２－非断可能Ｌ２－ＭＭ－ＳＤ１－ＣＰ－ＳＤ２－Ｃ Ｃ’を含む、第２のポリペプチド鎖と、を含み、
    ＣＰが、前記切断可能なペプチドであり、ＳＤ１が、第１のスペーサードメインであり、ＳＤ２が、第２のスペーサードメインである、請求項１に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  3. 前記スペーサードメインが、アミノ酸残基Ｇ、Ｓ、およびＰが豊富である、請求項２に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  4. 前記第１のスペーサードメイン（ＳＤ１）が、長さで３～１８個のアミノ酸である、請求項２または３に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  5. ＳＤ１が、配列番号２４～３２のうちの１つを含むアミノ酸配列を含む、請求項２～４のいずれか一項に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  6. 前記第２のスペーサードメイン（ＳＤ２）が、長さで２～１０個のアミノ酸である、請求項２～５のいずれか一項に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  7. ＳＤ２が、配列番号３５～４０のうちの１つを含むアミノ酸配列を含む、請求項２～６のいずれか一項に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  8. マスク型サイトカインが、第１のポリペプチド鎖であって、
    Ｎ’ＨＬ１ Ｃ’を含む、第１のポリペプチド鎖と、
    第２のポリペプチド鎖であって、
    Ｎ’ＨＬ２－非切断可能Ｌ２－ＭＭ－［’ＩＬ－１５Ｒαドメイン’］－ＳＤ１－ＣＰ－ＳＤ２ －Ｃ Ｃ’を含む、第２のポリペプチド鎖と、を含み、
    「ＩＬ－１５Ｒαドメイン」が、ＩＬ－１５Ｒαサブユニットまたはその断片を含むドメインである、請求項２～７のいずれか一項に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
    Figure 2023520514000330
  9. 前記マスク型サイトカインが、第１のポリペプチド鎖であって、
    Ｎ’ＨＬ１ Ｃ’を含む、第１のポリペプチド鎖と、
    第２のポリペプチド鎖であって、
    Ｎ’ＨＬ２－非切断可能Ｌ２－ＭＭ－ＳＤ１－ＣＰ－ＳＤ２－［’ＩＬ－１５Ｒαドメイン’］－Ｃ Ｃ’を含む、第２のポリペプチド鎖と、を含み、
    “ＩＬ－１５Ｒαドメイン”が、ＩＬ－１５Ｒαサブユニットまたはその断片を含むドメインである、請求項２～７のいずれか一項に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
    Figure 2023520514000331
  10. 「ＩＬ－１５Ｒαドメイン」が、野生型ｓｕｓｈｉドメインｓＩＬ－１５ＲαまたはｓＩＬ－１５Ｒαバリアントを含む、請求項８または９に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  11. 前記ＩＬ－１５Ｒαサブユニットまたはその断片が、任意に位置Ｒ２６および／またはＲ３５に追加のアミノ酸置換を伴って、配列番号５５、５６、５７、および５８のうちの１つを含むアミノ酸配列を含む、請求項８または９に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  12. 「ＩＬ－１５Ｒαドメイン」が、配列番号５６のアミノ酸配列を含む、請求項８または９に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  13. マスク型ＩＬ－１５サイトカインであって、第１のポリペプチド鎖であって、
    Ｎ’ＨＬ１－非切断可能Ｌ１－ＭＭ Ｃ’を含む、第１のポリペプチド鎖と、
    第２のポリペプチド鎖であって、
    Ｎ’ＨＬ２－切断可能Ｌ２－Ｃ Ｃ’を含む、第２のポリペプチド鎖と、を含み、
    ＨＬ１が、第１の半減期延長ドメインであり、Ｌ１が、第１のリンカーであり、ＭＭが、マスキング部分であり、ＨＬ２が、第２の半減期延長ドメインであり、Ｌ２が、第２のリンカーであり、Ｃが、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片であり、前記第２のリンカーが、タンパク質分解的に切断可能なペプチド（ＣＰ）を含み、前記第１のリンカーが、タンパク質分解的に切断可能なペプチドを含まない、マスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  14. 前記第１のポリペプチド鎖が、
    Ｎ’ＨＬ１－非切断可能Ｌ１－ＭＭ Ｃ’を含み、
    前記第２のポリペプチド鎖が、
    Ｎ’ＨＬ２－ＳＤ１－ＣＰ－ＳＤ２－Ｃ Ｃ’を含み、
    ＣＰが、切断可能なペプチドであり、ＳＤ１が、第１のスペーサードメインであり、ＳＤ２が、第２のスペーサードメインである、請求項１３に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
    Figure 2023520514000332
  15. 前記スペーサードメインが、アミノ酸残基Ｇ、Ｓ、およびＰが豊富である、請求項１４に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  16. 前記第１のスペーサードメイン（ＳＤ１）が、長さで３～１８個のアミノ酸である、請求項１４または１５に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  17. ＳＤ１が、配列番号２４～３２のうちの１つを含むアミノ酸配列を含む、請求項１４～１６のいずれか一項に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  18. 前記第２のスペーサードメイン（ＳＤ２）が、長さで２～１０個のアミノ酸である、請求項１４～１７のいずれか一項に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  19. ＳＤ２が、配列番号３５～４０のうちの１つを含むアミノ酸配列を含む、請求項１４～１８のいずれか一項に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  20. 前記マスク型サイトカインが、
    Ｎ’ＩＬ－１５ＲαドメインＣ’を含む、第３のポリペプチド鎖をさらに含み、
    前記「ＩＬ－１５Ｒαドメイン」が、ＩＬ－１５Ｒαサブユニットまたはその断片を含むドメインであり、前記「ＩＬ－１５Ｒαドメイン」が、ＩＬ－１５サイトカイン（Ｃ）に非共有結合される、請求項１３～１９のいずれか一項に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  21. 前記第２のポリペプチドが、前記ＩＬ－１５サイトカインまたはその断片のＣ’末端に共有結合しているＩＬ－１５Ｒαサブユニットまたはその断片を含む、ドメインをさらに含むため、前記第１のポリペプチド鎖が、
    Ｎ’ＨＬ１－非切断可能Ｌ１－ＭＭ Ｃ’を含み、
    前記第２のポリペプチド鎖が、
    Ｎ’ＨＬ２－ＳＤ１－ＣＰ－ＳＤ２－Ｃ－［’ＩＬ－１５Ｒαドメイン’］ Ｃ’を含み、
    前記ＩＬ－１５Ｒαドメインが、前記ＩＬ－１５Ｒαサブユニットまたはその断片を含む、請求項１３～１９のいずれか一項に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
    Figure 2023520514000333
  22. 前記第１のポリペプチド鎖が、
    Ｎ’ＨＬ１－非切断可能Ｌ１－ＭＭ Ｃ’を含み、
    前記第２のポリペプチド鎖が、
    Ｎ’ＨＬ２－［’ＩＬ－１５Ｒαドメイン’］－ＳＤ１－ＣＰ－ＳＤ２－Ｃ Ｃ’を含み、
    前記ＩＬ－１５Ｒαドメインが、前記ＩＬ－１５Ｒαサブユニットまたはその断片を含む、請求項１３～１９のいずれか一項に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
    Figure 2023520514000334
  23. 前記「ＩＬ－１５Ｒαドメイン」が、野生型ｓｕｓｈｉドメインｓＩＬ－１５ＲαまたはｓＩＬ－１５Ｒαバリアントを含む、請求項２０～２２のいずれか一項に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  24. 前記ＩＬ－１５Ｒαサブユニットまたはその断片が、任意に位置Ｒ２６および／またはＲ３５に追加のアミノ酸置換を伴って、配列番号５５、５６、５７、および５８のうちの１つを含むアミノ酸配列を含む、請求項２０～２２のいずれか一項に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  25. 前記「ＩＬ－１５Ｒαドメイン」が、配列番号５６のアミノ酸配列を含む、請求項２０～２２のいずれか一項に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  26. 前記非切断可能なリンカーが、長さで４～６個のアミノ酸である、先行請求項のいずれか一項に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  27. 前記非切断可能なリンカーが、「ＧＳ」反復を含む、先行請求項のいずれか一項に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  28. 前記非切断可能なリンカーが、配列番号２２（ＰＧＳＧＳ）に示されるアミノ酸配列を含む、先行請求項のいずれか一項に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  29. マスク型ＩＬ－１５サイトカインであって、第１のポリペプチド鎖であって、
    Ｎ’ＨＬ１－切断可能Ｌ１－ＭＭ Ｃ’を含む、第１のポリペプチド鎖と、
    第２のポリペプチド鎖であって、
    Ｎ’ＨＬ２－非切断可能Ｌ２－Ｃ Ｃ’を含む、第２のポリペプチド鎖と、を含み、
    ＨＬ１が、第１の半減期延長ドメインであり、Ｌ１が、第１のリンカーであり、ＭＭが、マスキング部分であり、ＨＬ２が、第２の半減期延長ドメインであり、Ｌ２が、第２のリンカーであり、Ｃが、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片であり、前記第１のリンカーが、タンパク質分解的に切断可能なペプチド（ＣＰ）を含み、前記第２のリンカーが、タンパク質分解的に切断可能なペプチドを含まない、マスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  30. 前記第１のポリペプチド鎖が、
    Ｎ’ＨＬ１－ＳＤ１－ＣＰ－ＳＤ２－ＭＭ Ｃ’を含み、
    前記第２のポリペプチド鎖が、
    Ｎ’ＨＬ２－非切断可能Ｌ２－Ｃ Ｃ’を含み、
    ＣＰが、切断可能なペプチドであり、ＳＤ１が、第１のスペーサードメインであり、ＳＤ２が、第２のスペーサードメインである、請求項２９に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
    Figure 2023520514000335
  31. 前記マスク型サイトカインが、
    Ｎ’ＩＬ－１５ＲαドメインＣ’を含む、第３のポリペプチド鎖を含み、
    前記「ＩＬ－１５Ｒαドメイン」が、ＩＬ－１５Ｒαサブユニットまたはその断片を含むドメインであり、前記「ＩＬ－１５Ｒαドメイン」が、ＩＬ－１５サイトカイン（Ｃ）に非共有結合される、請求項２９または３０に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  32. 前記スペーサードメインが、アミノ酸残基Ｇ、Ｓ、およびＰが豊富である、請求項２９～３１のいずれか一項に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  33. 前記第１のスペーサードメイン（ＳＤ１）が、長さで３～１８個のアミノ酸である、請求項２９～３１のいずれか一項に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  34. ＳＤ１が、配列番号２４～３２のうちの１つを含むアミノ酸配列を含む、請求項２９～３１のいずれか一項に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  35. 前記第２のスペーサードメイン（ＳＤ２）が、長さで２～１０個のアミノ酸である、請求項２９～３４のいずれか一項に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  36. ＳＤ２が、配列番号３５～４０のうちの１つを含むアミノ酸配列を含む、請求項２９～３５のいずれか一項に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  37. 前記非切断可能なリンカーが、長さで１８～２２個のアミノ酸である、請求項２９～３６のいずれか一項に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  38. 前記非切断可能なリンカーが、アミノ酸残基Ｇ、Ｓ、およびＰが豊富である、請求項２９～３７のいずれか一項に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  39. 前記非切断可能なリンカーが、配列番号２１（ＧＧＳＳＰＰＧＧＧＳＳＧＧＧＳＧＰＳＧＳＰＧ）に示されるアミノ酸配列を含む、請求項２９～３８のいずれか一項に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  40. 前記ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片が、配列番号２のアミノ酸配列、または前記配列番号２のアミノ酸配列と比較して少なくとも１つのアミノ酸修飾を有するアミノ酸配列を含む、先行請求項のいずれか一項に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  41. 前記ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片が、前記配列番号２のアミノ酸配列と比較して、位置Ｄ２２、Ｅ４６、またはＥ５３に１つ以上のアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む、請求項４０に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  42. 前記ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片が、前記配列番号２のアミノ酸配列と比較して、位置Ｄ２２、Ｅ４６、Ｅ５３、Ｎ７１、Ｎ７９またはＮ１１２に１つ以上のアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む、請求項４０に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  43. 前記ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片が、前記配列番号２のアミノ酸配列と比較して、位置Ｎ７１およびＮ７９にアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む、請求項４０に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  44. 前記ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片が、前記配列番号２のアミノ酸配列と比較して、位置Ｎ７１およびＮ１１２位にアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む、請求項４０に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  45. 前記ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片が、前記配列番号２のアミノ酸配列と比較して、位置Ｎ７９およびＮ１１２にアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む、請求項４０に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  46. 前記ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片が、前記配列番号２のアミノ酸配列と比較して、位置Ｎ７１、Ｎ７９、およびＮ１１２にアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む、請求項４０に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  47. 前記ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片が、配列番号３のアミノ酸配列を含む、請求項４０に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  48. 前記ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片が、配列番号４のアミノ酸配列を含む、請求項４０に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  49. 前記ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片が、配列番号５のアミノ酸配列を含む、請求項４０に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  50. 前記ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片が、配列番号６のアミノ酸配列を含む、請求項４０に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  51. 前記ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片が、配列番号７のアミノ酸配列を含む、請求項４０に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  52. 前記ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片が、配列番号８のアミノ酸配列を含む、請求項４０に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  53. 前記ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片が、配列番号１２７のアミノ酸配列を含む、請求項４０に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  54. 前記ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片が、配列番号１２８のアミノ酸配列を含む、請求項４０に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  55. 前記ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片が、配列番号１２９のアミノ酸配列を含む、請求項４０に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  56. 前記ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片が、配列番号１３０のアミノ酸配列を含む、請求項４０に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  57. 前記ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片が、配列番号１３１のアミノ酸配列を含む、請求項４０に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  58. 前記ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片が、配列番号１３２のアミノ酸配列を含む、請求項４０に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  59. 前記ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片が、配列番号１３３のアミノ酸配列を含む、請求項４０に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  60. 前記ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片が、位置Ｎ７１に追加の変異を含む、請求項４０または４１に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  61. 前記ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片が、位置Ｓ７３に追加の変異を含む、請求項４０～６０のいずれか一項に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  62. 前記ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片が、アミノ酸位置Ｎ７２、Ｎ７９、Ｖ８０、Ｔ８１、およびＮ１１２のうちの１つ以上に追加の変異を含む、請求項４０、４１、または６１のいずれか一項に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  63. 前記第１のポリペプチド鎖が、
    Ｎ’ＨＬ１－非切断可能Ｌ１－ＭＭ Ｃ’を含み、
    前記第２のポリペプチド鎖が、
    Ｎ’ＨＬ２－ＳＤ１－ＣＰ－ＳＤ２－［ＣのＮ’末端ドメイン］－［’ＩＬ－１５Ｒαドメイン’］－［ＣのＣ’末端ドメイン］ Ｃ’を含み、
    前記ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片が、Ｎ’末端ドメインと、Ｃ’末端ドメインとを含み、前記 ＩＬ－１５Ｒαドメインが、非切断可能な「αサブユニットリンカー」が両側に配置された前記ＩＬ－１５Ｒαサブユニットまたはその断片を含む、請求項６２に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
    Figure 2023520514000336
  64. 前記非切断可能なリンカーが、長さで４～６個のアミノ酸である、請求項６３に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  65. 前記非切断可能なリンカーが、「ＧＳ」反復を含む、請求項６３または６４に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  66. 前記非切断可能なリンカーが、配列番号２２（ＰＧＳＧＳ）に示されるアミノ酸配列を含む、請求項６３～６５のいずれか一項に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  67. 前記スペーサードメインが、アミノ酸残基Ｇ、Ｓ、およびＰが豊富である、請求項６３～６６のいずれか一項に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  68. 前記第１のスペーサードメイン（ＳＤ１）が、長さで３～１８個のアミノ酸である、請求項６３～６７のいずれか一項に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  69. ＳＤ１が、配列番号２４～３２のうちの１つを含むアミノ酸配列を含む、請求項６３～６８のいずれか一項に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  70. 前記第２のスペーサードメイン（ＳＤ２）が、長さで２～１０個のアミノ酸である、請求項６３～６９のいずれか一項に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  71. ＳＤ２が、配列番号３５～４０のうちの１つを含むアミノ酸配列を含む、請求項６３～７０のいずれか一項に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  72. 前記「ＩＬ－１５Ｒαドメイン」が、前記野生型ｓｕｓｈｉドメインｓＩＬ－１５ＲαまたはｓＩＬ－１５Ｒαバリアントを含む、請求項６３～７１のいずれか一項に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  73. 前記ＩＬ－１５Ｒαサブユニットまたはその断片が、任意に位置Ｒ２６および／またはＲ３５に追加のアミノ酸置換を伴って、配列番号５５、５６、５７、および５８のうちの１つを含むアミノ酸配列を含む、請求項６３～７１のいずれか一項に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  74. 前記「ＩＬ－１５Ｒαドメイン」が、配列番号５６のアミノ酸配列を含む、請求項６３～７１のいずれか一項に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  75. 前記ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片の前記Ｎ’末端ドメインおよびＣ’末端ドメインが、前記配列番号２のアミノ酸配列と比較して、位置Ｄ２２、Ｅ４６、Ｅ５３に１つ以上のアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む、請求項６３～７４のいずれか一項に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  76. 前記ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片の前記Ｎ’末端ドメインおよびＣ’末端ドメインが、位置Ｎ７１に追加の変異を含む、請求項６３～７５のいずれか一項に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  77. 前記ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片の前記Ｎ’末端ドメインおよびＣ’末端ドメインが、位置Ｓ７３に追加の変異を含む、請求項６３～７６のいずれか一項に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  78. 前記ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片の前記Ｎ’末端ドメインおよびＣ’末端ドメインが、アミノ酸位置Ｎ７２、Ｎ７９、Ｖ８０、Ｔ８１、およびＮ１１２のうちの１つ以上に追加の変異を含む、請求項６３～７７のいずれか一項に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  79. 前記ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片の前記Ｎ’末端ドメインが、配列番号９のアミノ酸配列を含み、前記ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片の前記Ｃ’末端ドメインが、配列番号１０のアミノ酸配列を含む、請求項６３～７４のいずれか一項に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  80. 前記切断可能なペプチドが、配列番号３３（ＭＰＹＤ＊ＬＹＨＰ）のアミノ酸配列を含む、先行請求項のいずれか一項に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  81. 前記切断可能なペプチドが、配列番号３４（ＶＰＬＳ＊ＬＹ）のアミノ酸配列を含む、先行請求項のいずれか一項に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  82. 前記切断可能なペプチドが、配列番号１５５（ＩＳＳＧＬＬ＊ＳＧ＊ＲＳ）のアミノ酸配列を含む、先行請求項のいずれか一項に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  83. 前記切断可能なペプチドが、配列番号１５６（ＤＬＬＡ＊ＶＶＡＡＳ）のアミノ酸配列を含む、先行請求項のいずれか一項に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  84. 前記切断可能なリンカーが、配列番号４１～５４、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、または１６７のうちの１つを含むアミノ酸配列を含む、先行請求項のいずれか一項に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  85. 前記切断可能なリンカーが、配列番号４１～５４、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、または１７１のうちの１つを含むアミノ酸配列を含む、先行請求項のいずれか一項に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  86. 前記第１の半減期延長ドメインが、第１の抗体Ｆｃドメインまたはその断片を含み、前記第２の半減期延長ドメインが、第２の抗体Ｆｃドメインまたはその断片を含む、先行請求項のいずれか一項に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  87. 前記第１のＦｃドメインは、ＣＨ３ドメインまたはその断片を含み、前記第２のＦｃドメインは、ＣＨ３ドメインまたはその断片を含む、請求項８６に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  88. 前記第１および／または第２のＦｃドメインが各々、前記第１および第２の半減期延長ドメインの非共有結合性会合を促進する１つ以上の修飾を含有する、請求項８６または８７に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  89. 前記第１および第２の半減期延長ドメインが各々、ＩｇＧ１ Ｆｃドメインまたはその断片である、請求項８６～８８のいずれか一項に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  90. 前記第１の半減期延長ドメインが、Ｋａｂａｔ ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けられる、変異Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３８Ａ、およびＹ４０７Ｖを含む、ＩｇＧ１ Ｆｃドメインまたはその断片を含み、前記第１の半減期延長ドメインに「ホール」を形成し、前記第２の半減期延長ドメインが、変異Ｓ３５４ＣおよびＴ３６６Ｗを含む、ＩｇＧ１ Ｆｃドメインまたはその断片を含み、前記第２の半減期延長ドメインに「ノブ」を形成する、請求項８９に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  91. 前記第１および第２の半減期延長ドメインが各々、ＩｇＧ１ Ｆｃドメインまたはその断片であり、各々、Ｋａｂａｔ ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされたアミノ置換Ｎ２９７Ａを含む、請求項８９または９０に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  92. 前記第１の半減期延長ドメインが、配列番号６３のアミノ酸配列を含み、その前記第２の半減期延長ドメインが、配列番号６４のアミノ酸配列を含む、請求項８６に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  93. 前記第１および第２の半減期伸長ドメインが各々、ＩｇＧ１ Ｆｃドメインまたはその断片であり、各々、Ｋａｂａｔ ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされたアミノ酸置換Ｉ２５３Ａを含む、請求項８９～９１のいずれか一項に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  94. 前記第１の半減期延長ドメインが、配列番号６５のアミノ酸配列を含み、その前記第２の半減期延長ドメインが、配列番号６６のアミノ酸配列を含む、請求項９３に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  95. 前記マスキング部分が、ＩＬ－１５Ｒβまたはその断片もしくはバリアントを含む、先行請求項のいずれか一項に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  96. 前記マスキング部分が、配列番号１１のアミノ酸配列を含む、先行請求項のいずれか一項に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  97. 前記マスキング部分が、位置Ｃ１２２にアミノ酸置換を有するＩＬ－１５Ｒβバリアントまたはその断片を含む、先行請求項のいずれか一項に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  98. 前記マスキング部分が、アミノ酸置換Ｃ１２２Ｓを有するＩＬ－１５Ｒβバリアントまたはその断片を含む、先行請求項のいずれか一項に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  99. 前記マスキング部分が、位置Ｃ１６８にアミノ酸置換を有するＩＬ－１５Ｒβバリアントまたはその断片を含む、先行請求項のいずれか一項に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  100. 前記マスキング部分が、アミノ酸置換Ｃ１６８Ｓを有するＩＬ－１５Ｒβバリアントまたはその断片を含む、先行請求項のいずれか一項に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  101. 前記マスキング部分が、位置Ｃ１２２およびＣ１６８にアミノ酸置換を有するＩＬ－１５Ｒβバリアントまたはその断片を含む、先行請求項のいずれか一項に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  102. 前記マスキング部分が、配列番号１２のアミノ酸配列を含む、請求項９５に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  103. マスク型ＩＬ－１５サイトカインであって、第１のポリペプチド鎖であって、
    Ｎ’ＨＬ１－非切断可能Ｌ１－ＭＭ Ｃ’を含む、第１のポリペプチド鎖と、
    第２のポリペプチド鎖であって、
    Ｎ’ＨＬ２－切断可能Ｌ２－Ｃ Ｃ’を含む、第２のポリペプチド鎖と、
    第３のポリペプチド鎖であって、
    Ｎ’ＩＬ－１５Ｒα ドメインＣ’を含む、第３のポリペプチド鎖と、を含み、
    ＨＬ１が、第１の半減期延長ドメインであり、Ｌ１が、第１のリンカーであり、ＭＭが、マスキング部分であり、ＨＬ２が、第２の半減期延長ドメインであり、Ｌ２が、第２のリンカーであり、Ｃが、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片であり、前記第２のリンカーが、タンパク質分解的に切断可能なペプチド（ＣＰ）を含み、前記第１のリンカーが、タンパク質分解的に切断可能なペプチドを含まず、
    前記「ＩＬ－１５Ｒαドメイン」が、ＩＬ－１５Ｒαサブユニットまたはその断片を含むドメインであり、前記「ＩＬ－１５Ｒαドメイン」が、前記第２のポリペプチド鎖内の前記ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片（Ｃ）に非共有結合される、マスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  104. 前記第１のポリペプチド鎖が、
    Ｎ’ＨＬ１－非切断可能Ｌ１－ＭＭ Ｃ’を含み、
    前記第２のポリペプチド鎖が、
    Ｎ’ＨＬ２－ＳＤ１－ＣＰ－ＳＤ２－Ｃ Ｃ’を含み、
    前記第３のポリペプチド鎖が、
    Ｎ’ＩＬ－１５ＲαドメインＣ’を含み、
    ＣＰが、前記切断可能なペプチドであり、ＳＤ１が、第１のスペーサードメインであり、ＳＤ２が、第２のスペーサードメインである、請求項１０３に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  105. マスク型ＩＬ－１５サイトカインであって、第１のポリペプチド鎖であって、
    Ｎ’ＨＬ１－切断可能Ｌ１－ＭＭ Ｃ’を含む、第１のポリペプチド鎖と、
    第２のポリペプチド鎖であって、
    Ｎ’ＨＬ２－非切断可能Ｌ２－Ｃ Ｃ’を含む、第２のポリペプチド鎖と、
    第３のポリペプチド鎖であって、
    Ｎ’ＩＬ－１５ＲαドメインＣ’を含む、第３のポリペプチド鎖と、を含み、
    ＨＬ１が、第１の半減期延長ドメインであり、Ｌ１が、第１のリンカーであり、ＭＭが、マスキング部分であり、ＨＬ２が、第２の半減期延長ドメインであり、Ｌ２が、第２のリンカーであり、Ｃが、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片であり、前記第１のリンカーが、タンパク質分解的に切断可能なペプチド（ＣＰ）を含み、前記第２のリンカーが、タンパク質分解的に切断可能なペプチドを含まず、
    前記「ＩＬ－１５Ｒαドメイン」が、ＩＬ－１５Ｒαサブユニットまたはその断片を含むドメインであり、前記「ＩＬ－１５Ｒαドメイン」が、前記第２のポリペプチド鎖内の前記ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片（Ｃ）に非共有結合される、マスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  106. 前記第１のポリペプチド鎖が、
    Ｎ’ＨＬ１－ＳＤ１－ＣＰ－ＳＤ２－ＭＭ Ｃ’を含み、
    前記第２のポリペプチド鎖が、
    Ｎ’ＨＬ２－非切断可能Ｌ２－Ｃ Ｃ’を含み、
    前記第３のポリペプチド鎖が、
    Ｎ’ＩＬ－１５ＲαドメインＣ’を含み、
    ＣＰが、前記切断可能なペプチドであり、ＳＤ１が、第１のスペーサードメインであり、ＳＤ２が、第２のスペーサードメインである、請求項１０５に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  107. 前記第１の半減期延長ドメインが、第１の抗体Ｆｃドメインまたはその断片を含み、前記第２の半減期延長ドメインが、第２の抗体Ｆｃドメインまたはその断片を含む、請求項１０３～１０６のいずれか一項に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  108. 前記第１の半減期延長ドメインが、配列番号６３のアミノ酸配列を含み、前記第２の半減期延長ドメインが、配列番号６４のアミノ酸配列を含む、請求項１０３～１０７のいずれか一項に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  109. 前記マスキング部分が、ＩＬ－１５Ｒβサイトカインまたはその断片もしくはバリアントを含む、請求項１０３～１０８のいずれか一項に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  110. 前記マスキング部分が、配列番号１２のアミノ酸配列を含む、請求項１０３～１０９のいずれか一項に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  111. 前記第１のポリペプチド鎖が、配列番号１７７のアミノ酸配列を含む、請求項１０３または１０４に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  112. 前記第２のポリペプチド鎖が、配列番号１８３のアミノ酸配列を含む、請求項１０５または１０６に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  113. 前記ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片が、前記配列番号２のアミノ酸配列と比較して、アミノ酸置換Ｎ７１ＱおよびＮ７９Ｑを有するアミノ酸配列を含む、請求項１０３～１１２のいずれか一項に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  114. 前記ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片が、配列番号１３０のアミノ酸配列に対して約または少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１０３～１１３のいずれか一項に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  115. 前記ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片が、配列番号１３０のアミノ酸配列を含む、請求項１０３～１１４のいずれか一項に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  116. 前記「ＩＬ－１５Ｒαドメイン」が、野生型ｓｕｓｈｉドメインｓＩＬ－１５Ｒαまたはそのバリアントを含む、請求項１０３～１１５のいずれか一項に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  117. 前記「ＩＬ－１５Ｒαドメイン」が、配列番号５６のアミノ酸配列を含む、請求項１０３～１１６のいずれか一項に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  118. 前記第１のポリペプチド鎖が、配列番号６８のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチド鎖が、配列番号８３のアミノ酸配列を含む、請求項１３に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  119. 前記第１のポリペプチド鎖が、配列番号１７７のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチド鎖が、配列番号１９３のアミノ酸配列を含む、請求項１３に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  120. 前記第１のポリペプチド鎖が、配列番号１７７のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチド鎖が、配列番号１９４のアミノ酸配列を含む、請求項１３に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  121. マスク型ＩＬ－１５サイトカインの切断産物であって、前記切断産物が、その同族受容体に結合することが可能であり、前記切断産物が、請求項１～１１５のいずれか一項に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン中の前記切断可能なペプチドのタンパク質分解切断によって調製可能である、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片を含む、切断産物。
  122. マスク型ＩＬ－１５サイトカインの切断産物であって、前記切断産物が、その同族受容体に結合することが可能であり、前記切断産物が、
    ＰＣＰ－ＳＤ－Ｃを含む、ポリペプチドを含み、
    ＰＣＰが、タンパク質分解的に切断可能なペプチドの一部であり、ＳＤが、スペーサードメインであり、Ｃが、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片である、切断産物。
    Figure 2023520514000337
  123. ＳＤが、請求項１５、１８、または１９のいずれか一項に記載のＳＤ２である、請求項１２２に記載の切断産物。
  124. 前記タンパク質分解的に切断可能なペプチドが、請求項８０～８２のいずれか一項に記載のとおりである、請求項１２２または１２３に記載の切断産物。
  125. 前記ＩＬ－１５サイトカインまたはその断片が、請求項４０～６２のいずれか一項に記載のとおりである、請求項１２２～１２４のいずれか一項に記載の切断産物。
  126. 前記切断産物が、ＩＬ－１５Ｒαサブユニットまたはその断片を含むドメインをさらに含む、請求項１２２～１２５のいずれか一項に記載の切断産物。
  127. 前記ＩＬ－１５Ｒαサブユニットまたはその断片が、前記ＩＬ－１５サイトカイン（Ｃ）に非共有結合される、請求項１２６に記載の切断産物。
  128. 前記切断産物が、
    ＰＣＰ－ＳＤ－［’ＩＬ－１５Ｒαドメイン’］－Ｃを含む、請求項１２６に記載の切断産物。
    Figure 2023520514000338
  129. 前記切断産物が、
    ＰＣＰ－ＳＤ－Ｃ－［’ＩＬ－１５Ｒαドメイン’］を含む、請求項１２６に記載の切断産物。
    Figure 2023520514000339
  130. 前記ＩＬ－１５Ｒαサブユニットまたはその断片が、任意に位置Ｒ２６および／またはＲ３５に追加のアミノ酸置換を伴って、配列番号５５、５６、５７、および５８のうちの１つを含むアミノ酸配列を含む、請求項１２６～１２９のいずれか一項に記載の切断産物。
  131. マスク型ＩＬ－１５サイトカインの切断産物であって、前記切断産物が、その同族受容体に結合することが可能であり、前記切断産物が、
    ＰＣＰ－ＳＤ２－［ＣのＮ’末端ドメイン］－［’ＩＬ－１５Ｒαドメイン’］－［ＣのＣ’末端ドメイン］を含み、
    前記ＩＬ－１５Ｒαドメインが、非切断可能な「αサブユニットリンカー」が両側に配置されたＩＬ－１５Ｒαサブユニットまたはその断片を含む、切断産物。
    Figure 2023520514000340
  132. マスク型ＩＬ－１５サイトカインの切断産物であって、前記切断産物が、その同族受容体に結合することが可能であり、前記切断産物が、
    第１のポリペプチド鎖であって、
    ＨＬ１－ＳＤ－ＰＣＰを含み、
    ＨＬ１が、第１の半減期延長ドメインであり、ＳＤが、スペーサードメインであり、ＰＣＰが、タンパク質分解的に切断可能なペプチドの一部である、第１のポリペプチド鎖と、
    第２のポリペプチド鎖であって、
    ＨＬ２－Ｌ２－Ｃを含む、ポリペプチドを含み、
    ＨＬ２が、第２の半減期延長ドメインであり、Ｌ２が、リンカーであり、Ｃが、ＩＬ－１５サイトカインまたはその機能的断片である、第２のポリペプチド鎖とを含む、タンパク質ヘテロ二量体を含み、
    前記第１の半減期延長ドメインが、前記第２の半減期延長ドメインと会合している、切断産物。
    Figure 2023520514000341
  133. ＳＤが、請求項３２～３４のいずれか一項に記載のＳＤ１である、請求項１３２に記載の切断産物。
  134. 前記タンパク質分解的に切断可能なペプチドが、請求項８０～８５のいずれか一項に記載のとおりである、請求項１３２または１３３に記載の切断産物。
  135. 前記ＩＬ－１５サイトカインまたはその断片が、請求項４０～６２のいずれか一項に記載のとおりである、請求項１３２～１３４のいずれか一項に記載の切断産物。
  136. 前記第１および第２の半減期延長ドメインが、請求項８６～９４のいずれか一項に記載のとおりである、請求項１３２～１３５のいずれか一項に記載の切断産物。
  137. 前記非切断可能なリンカーＬ２が、請求項２６～２８のいずれか一項に記載のとおりである、請求項１３２～１３６のいずれか一項に記載の切断産物。
  138. 前記切断産物が、前記ＩＬ－１５サイトカイン（Ｃ）に非共有結合されたＩＬ－１５Ｒαサブユニットまたはその断片を含む、請求項１３２～１３７のいずれか一項に記載の切断産物。
  139. 配列番号１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、および１３６～１４３、１４４～１４７、および１９９～２２８、および３０７から選択されるアミノ酸配列を含む、切断産物。
  140. 請求項１～１２０のいずれか一項に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカインをコードするか、または前記マスク型ＩＬ－１５サイトカインの鎖のうちの１つをコードする、核酸。
  141. 請求項１４０に記載の核酸を含む、ベクター。
  142. 請求項１～１２０のいずれか一項に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカインをコードする核酸を含む、宿主細胞。
  143. 請求項１～１２０のいずれか一項に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカインを含む、組成物。
  144. 請求項１～１２０のいずれか一項に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカインと、薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物。
  145. 前記医薬組成物が、単一単位剤形である、請求項１４４に記載の医薬組成物。
  146. 前記医薬組成物が、静脈内投与のために製剤化され、単一単位剤形である、請求項１４４または１４５に記載の医薬組成物。
  147. 前記医薬組成物が、注射のために製剤化され、単一単位剤形である、請求項１４４または１４５に記載の医薬組成物。
  148. 前記医薬組成物が、液体であり、単一単位剤形である、請求項１４４または１４５に記載の医薬組成物。
  149. 請求項１～１２０のいずれか一項に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン、または請求項１４３に記載の組成物、もしくは請求項１４４～１４８のいずれか一項に記載の医薬組成物を含む、キット。
  150. 請求項１～１１５のいずれか一項に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカインを産生する方法であって、前記マスク型ＩＬ－１５サイトカインを産生する条件下で、請求項１４２に記載の宿主細胞を培養することを含む、方法。
  151. 請求項１２１～１３９のいずれか一項に記載の切断産物をコードする、核酸。
  152. 請求項１２１～１３９のいずれか一項に記載の切断産物を含む、組成物。
  153. 請求項１２１～１３９のいずれか一項に記載の切断産物と、薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物。
  154. 薬物に使用するための、請求項１～１２０のいずれか一項に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  155. 薬物に使用するための、請求項１２１～１３９のいずれか一項に記載の切断産物。
  156. 対象においてがんを治療または予防する方法であって、請求項１～１２０のいずれか一項に記載の有効量のマスク型ＩＬ－１５サイトカインを前記対象に投与することを含む、方法。
  157. 対象においてがんを治療または予防する方法であって、請求項１４３または１５２に記載の有効量の組成物を前記対象に投与することを含む、方法。
  158. 対象においてがんを治療または予防する方法であって、請求項１４４～１４８または１５３のいずれか一項に記載の有効量の組成物を前記対象に投与することを含む、方法。
  159. 対象においてがんを治療または予防する方法であって、請求項１～７８のいずれか一項に記載の有効量のマスク型ＩＬ－１５サイトカインを前記対象に投与することを含み、それによって、前記マスク型サイトカインが、インビボでタンパク質分解的に切断され、請求項１２１～１３９のいずれか一項に記載の切断産物を産生する、方法。
  160. 対象においてがんを治療または予防する方法であって、その同族受容体に結合することが可能である切断産物をインビボで産生するステップを含み、前記切断産物が、請求項１２１～１３９のいずれか一項に記載のとおりである、方法。
  161. 前記がんが、固形腫瘍である、請求項１５６～１６０のいずれか一項に記載の方法。
  162. がんの治療または予防に使用するための、請求項１～１２０のいずれか一項に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  163. がんの治療または予防に使用するための、請求項１～１２０のいずれか一項に記載のマスク型ＩＬ－１５サイトカインであって、前記方法が、有効量の前記マスク型ＩＬ－１５サイトカインを前記対象に投与することを含み、それによって、前記マスク型サイトカインが、インビボでタンパク質分解的に切断され、請求項１２１～１３９のいずれか一項に記載の切断産物を産生する、マスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  164. 前記がんが、固形腫瘍である、請求項１６２または１６３に記載の使用のためのマスク型ＩＬ－１５サイトカイン。
  165. がんの治療または予防に使用するための、請求項１２１～１３９のいずれか一項に記載の切断産物。
  166. がんの治療または予防に使用するための、請求項１２１～１３９のいずれか一項に記載の切断産物であって、前記方法が、請求項１～１２０のいずれか一項に記載のマスク型サイトカインを患者に投与し、それによって、インビボで前記マスク型サイトカインのタンパク質分解切断によって前記切断産物を産生するステップを含む、切断産物。
  167. 対象においてがんを治療または予防する方法に使用するための、請求項１２１～１３９のいずれか一項に記載の切断産物であって、前記方法が、前記対象に投与された請求項１～１２０のいずれか一項に記載のマスク型サイトカインからインビボのタンパク質分解切断によって前記切断産物を産生するステップを含む、切断産物。
  168. 前記がんが、固形腫瘍である、請求項１６５～１６７のいずれか一項に記載の使用のための切断産物。
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