JP2023504141A

JP2023504141A - 骨髄破壊的傷害に曝露された患者を処置する際にアンジオクライン因子を含む医薬組成物を使用するための方法

Info

Publication number: JP2023504141A
Application number: JP2022532070A
Authority: JP
Inventors: ジェイソンエムバトラー
Original assignee: ハッケンサックメリディアンヘルスセンターフォーディスカバリーアンドイノベーション
Priority date: 2019-11-27
Filing date: 2020-11-25
Publication date: 2023-02-01
Also published as: EP4065142A4; US20230226150A1; WO2021108689A1; KR20230023601A; EP4065142A1; AU2020391495A1

Abstract

記載された発明は、骨髄（ＢＭ）炎症及びＨＳＣ機能障害を駆動する際の重要な構成要素として、血管周囲ニッチ内の内皮細胞を同定する。内皮内のＥＲＫ－ＭＡＰＫ及びＮＦ－κＢシグナル伝達経路間のクロストークが、慢性炎症の転帰を調節する上で重要な役割を果たすことを、本発明者らは示す。成体マウスの内皮内の選択的なＭＡＰＫ経路の活性化の持続は、生着能力及び骨髄バイアス産物の喪失を含む炎症誘導性ＨＳＣ機能障害をもたらす。内皮ＭＡＰＫ活性化によって引き起こされるＨＳＣ欠陥は、内皮ＮＦ－κＢシグナル伝達を同時に阻害する際に完全に解消される。記載された発明は、骨髄抑制損傷後のＢＭ炎症を抑制し且つ造血回復を高めるニッチ由来因子として幹細胞成長因子アルファ（ＳＣＧＦ）を同定する。【選択図】なし

Description

関連出願との相互参照
本出願は、「ＥｎｄｏｔｈｅｌｉａｌＭＰＡＫＡｃｔｉｖａｔｉｏｎＤｉｓｒｕｐｔｓＨｅｍａｔｏｐｏｉｅｓｉｓｂｙＩｎｄｕｃｉｎｇＮＦ－ｋＢ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔＩｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙＳｔｒｅｓｓ」と題された米国仮出願第６２／９４１，１９０号（２０１９年１１月２７日出願）及び「ＭｅｔｈｏｄｓｆｏｒＵｓｅｏｆａＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＣｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎＣｏｍｐｒｉｓｉｎｇａｎＡｎｇｉｏｃｒｉｎｅＦａｃｔｏｒｉｎＴｒｅａｔｉｎｇａＰａｔｉｅｎｔＥｘｐｏｓｅｄｔｏａＭｙｅｌｏａｂｌａｔｉｖｅＩｎｓｕｌｔ」と題された米国仮出願第６２／９８０，１０８号（２０２０年２月２１日出願）の優先権の利益を主張し、これらの内容は、全体が参照によりその本明細書に組み込まれる。

政府資金の記載
本発明は、ＮａｔｉｏｎａｌＩｎｓｔｉｔｕｔｅｓｏｆＨｅａｌｔｈによって授与された契約ＨＬ１３３０２１及び１Ｒ０１ＣＡ２０４３０８の下で政府の支援で行われた。政府は、本発明において一定の権利を有する。

配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出されている配列表を含有し、それにより、全体が参照により本明細書に組み込まれる。２０２０年１１月２５日に作成された該ＡＳＣＩＩコピーは、１２８５３３－０２５２０＿ＳＬ．ｔｘｔという名称であり、サイズが１３，４３１バイトである。

発明の分野
記載された発明は、骨髄抑制損傷後の造血回復に関する。

造血
多能性自己再生造血幹細胞（ＨＳＣ）は、移植後に成人の血液系を再生する。本明細書で使用される「造血」という用語は、造血幹細胞（ＨＳＣ）から、成熟した機能的な細胞型の血液系列に分化させることにより、血液の細胞成分が生物の寿命全体にわたって継続的に補充されるプロセスを指す。造血系列は、骨髄性アーム及びリンパ性アームの２つの主要な分岐に分けられる。骨髄系共通前駆細胞（ＣＭＰ）は、骨髄アームを生じさせ、これは、全ての骨髄細胞を生じさせ得る。リンパ系共通前駆細胞（ＣＬＰ）は、リンパ系アームを生じさせ、これは、全てのリンパ系細胞を生じさせ得る。

造血幹細胞（ＨＳＣ）は、骨髄に存在し、血液及び免疫系の全ての細胞を形成する能力を有する多能性幹細胞である。それは、自己複製し、複数の系列の子孫に分化する能力を有する。ヒトＨＳＣ活性はＣＤ３４Ｔｈｙ－１－集団にある。［Ｗｅｉｓｋｏｐｆ，Ｋ．ｅｔａｌ．，“Ｍｙｅｌｏｉｄｃｅｌｌｏｒｉｇｉｎｓ，ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ，ａｎｄｃｌｉｎｉｃａｌｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，”Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｓｐｅｃｔｒ．（２０１６）４（５）：１０．１１２８／ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｓｐｅｃ．ＭＣＨＤ－００３１－２０１６］。ＣＤ９０＋ＣＤ４５ＲＡ－集団は、真正のヒトの長期ＨＳＣを含有するが、ＣＤ９０－ＣＤ４５ＲＡ－集団は、中間の下流多能性前駆細胞（ＭＰＰ）を表す。［同上］。ヒト骨髄のｌｉｎ－ＣＤ３４＋ＣＤ３８＋集団は、自己複製する能力を制限しており、骨髄バイアス分化の割合が高いことを示す［同上、Ｍａｎｚ，ＭＧ，ｅｔａｌ，“Ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅｉｓｏｌａｔｉｏｎｏｆｈｕｍａｎｃｌｏｎｏｇｅｎｉｃｃｏｍｍｏｎｍｙｅｌｏｉｄｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒｓ．”Ｐｒｏｃ．ＮａｔｌＡｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（２００２）９９（１８）：１１８７２－７７を引用］。ＣＤ４５ＲＡ及びＩＬ－３Ｒαの発現により、この集団がさらに細分化され、ＩＬ－３ＲαｌｏＣＤ４５ＲＡ－、ＩＬ－３ＲαｌｏＣＤ４５ＲＡ＋、及びＩＬ－３Ｒα－ＣＤ４５ＲＡ－細胞の３つの異なる亜集団が得られた。Ｉｎｖｉｔｒｏで、ＩＬ－３ＲαｌｏＣＤ４５ＲＡ－集団は、混合コロニーを含む骨髄系列の全範囲を生じさせ、これにより、この集団がヒトの一般的な骨髄前駆細胞（ＣＭＰ）を提示することが示唆された［同上、Ｍａｎｚ，ＭＧ，ｅｔａｌ，“Ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅｉｓｏｌａｔｉｏｎｏｆｈｕｍａｎｃｌｏｎｏｇｅｎｉｃｃｏｍｍｏｎｍｙｅｌｏｉｄｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒｓ．”Ｐｒｏｃ．ＮａｔｌＡｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（２００２）９９（１８）：１１８７２－７７を引用］。一方、ＩＬ－３ＲαｌｏＣＤ４５ＲＡ＋集団は、顆粒球及びマクロファージ系列の細胞のみを生じ、ＩＬ－３Ｒα－ＣＤ４５ＲＡ－集団は、主に、赤血球及び巨核球系列の細胞を生じさせ、それにより、それぞれ、これらの集団がそれぞれ顆粒白血球／マクロファージ系列制限前駆細胞（ＧＭＰ）及び巨核球／赤血球系列制限前駆細胞（ＭＥＰ）を表すことを示した［同上、Ｍａｎｚ，ＭＧ，ｅｔａｌ，“Ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅｉｓｏｌａｔｉｏｎｏｆｈｕｍａｎｃｌｏｎｏｇｅｎｉｃｃｏｍｍｏｎｍｙｅｌｏｉｄｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒｓ．”Ｐｒｏｃ．ＮａｔｌＡｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（２００２）９９（１８）：１１８７２－７７を引用］。

ヒトＭＥＰ集団内で、分画研究は、分化単能ヒト赤血球前駆細胞（ＥＰ）をＣＤ７１^{中間体(int)/+}ＣＤ１０５＋として定義するのに役立ち、純化するために選別される時、巨核球の可能性がなく、ｉｎｖｉｔｒｏで赤血球のみを生じさせた［同上、Ｍｏｒｉ，Ｙ．ｅｔａｌ．，“Ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅｉｓｏｌａｔｉｏｎｏｆｈｕｍａｎｅｒｙｔｈｒｏｉｄｌｉｎｅａｇｅ－ｃｏｍｍｉｔｔｅｄｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒｓ，”Ｐｒｏｃ．ＮａｔｌＡｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（２０１５）１１２（３１）：９６３８－４３を引用］。さらに、赤血球バイアスＭＥＰ（Ｅ－ＭＥＰ）は、ＭＥＰとＥＰとの間の中間であったＣＤ７１＋ＣＤ１０５－として同定された［同上］。原始赤血球前駆細胞（バースト形成単位赤血球またはＢＦＵ－Ｅ）及び後期コロニー形成単位赤血球（ＣＦＵ－Ｅ）を含む、ヒト赤血球形成の下流段階も純粋に単離されている。これらの集団は、主に、それぞれ、ＩＬ－３Ｒ－ＣＤ３４＋ＣＤ３６－及びＩＬ－３Ｒ－ＣＤ３４－ＣＤ３６＋として区別された［同上、Ｌｉ，Ｊ．ｅｔａｌ，“Ｉｓｏｌａｔｉｏｎａｎｄｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｍｅａｎａｌｙｓｅｓｏｆｈｕｍａｎｅｒｙｔｈｒｏｉｄｐｒｏｇｒｅｎｉｔｏｒｓ：ＢＦＵ－ＥａｎｄＣＦＵ－Ｅ．”Ｂｌｏｏｄ（２０１４）１２４（２４）：３６３６－４５を引用］。

幹細胞ニッチ
体の組織及び臓器の効果的な機能は、適切な細胞数を維持し（恒常性）、損傷後に損傷した細胞を置き換える（修復）生来の再生プロセスに依存する。全てではないが多くの場合、再生能力は、幹細胞及び前駆細胞の専用集団の存在及び機能性によって決定され、これらは、細胞は、必要に応じて、置換細胞を生成するために、外因性の手がかりに応答する。（Ｗａｇｅｒｓ，Ａ．Ｊ．Ｔｈｅｓｔｅｍｃｅｌｌｎｉｃｈｅｉｎｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅｍｅｄｉｃｉｎｅ．Ｃｅｌｌｓｔｅｍｃｅｌｌ１０，３６２－３６９，ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｓｔｅｍ．２０１２．０２．０１８（２０１２））。これらの細胞は、「幹細胞ニッチ」と呼ばれる特殊な環境に存在し、これは、細胞置換及び修理のための生理学的手がかりへの適切な応答性を確保するために、周囲とのコミュニケーションを維持しながら損傷または喪失からこれらの細胞を保護するのに十分な空間的、時間的、及び構造的境界を提供する。（Ｗａｇｅｒｓ，Ａ．Ｊ．Ｔｈｅｓｔｅｍｃｅｌｌｎｉｃｈｅｉｎｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅｍｅｄｉｃｉｎｅ．Ｃｅｌｌｓｔｅｍｃｅｌｌ１０，３６２－３６９，ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｓｔｅｍ．２０１２．０２．０１８（２０１２））。

幹細胞ニッチは、生殖細胞系、骨髄系、消化器系、及び呼吸器系、骨格筋、皮膚、毛包、乳腺、ならびに中枢及び末梢神経系を含む多くの組織で同定及び特性決定されている。（Ｗａｇｅｒｓ，Ａ．Ｊ．Ｔｈｅｓｔｅｍｃｅｌｌｎｉｃｈｅｉｎｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅｍｅｄｉｃｉｎｅ．Ｃｅｌｌｓｔｅｍｃｅｌｌ１０，３６２－３６９，ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｓｔｅｍ．２０１２．０２．０１８（２０１２））。

幹細胞ニッチ環境は、それらの機能及び維持に重要な細胞及び環境構成要素で構成される。細胞間相互作用は、構造的サポートを提供し、接着性相互作用を調節し、幹細胞機能を制御する可溶性シグナルを生じる。環境構成要素は、物理的な力、例えば、圧力、構造、及び化学的シグナル、及び温度、ならびに生理学的パラメーター、例えば、細胞外マトリックス（ＥＣＭ）との相互作用を含む（同上）。

幹細胞ニッチにおける異種細胞間相互作用は、厳密な調節、及び、多くの場合、細胞間接触に依存する複雑な双方向のシグナル伝達を示す。幹細胞ニッチは、組織特異的及び一般的な細胞集団を含み、これらのそれぞれは、特殊な役割を有する。（Ｌａｎｅ，Ｓ．Ｗ．，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ｄ．Ａ．＆Ｗａｔｔ，Ｆ．Ｍ．Ｍｏｄｕｌａｔｉｎｇｔｈｅｓｔｅｍｃｅｌｌｎｉｃｈｅｆｏｒｔｉｓｓｕｅｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ．Ｎａｔｕｒｅｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ３２，７９５－８０３，ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｂｔ．２９７８（２０１４））。

造血微小環境は、成体の骨の骨髄空間に局在し、骨芽細胞、血管、及び神経細胞、巨核球、マクロファージ、ならびに免疫細胞などの造血幹細胞（ＨＳＣ）ニッチを明確に定義する幅広い種々の細胞型を含む。Ｗｎｔ、ＳＣＦ、Ｎｏｔｃｈ、及びケモカインなどの分泌型及び膜結合型因子は、幹細胞の表面受容体に直接結合して、細胞の運命、自己複製、及び極性を調節する。（Ｌａｎｅ，Ｓ．Ｗ．，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ｄ．Ａ．＆Ｗａｔｔ，Ｆ．Ｍ．Ｍｏｄｕｌａｔｉｎｇｔｈｅｓｔｅｍｃｅｌｌｎｉｃｈｅｆｏｒｔｉｓｓｕｅｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ．Ｎａｔｕｒｅｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ３２，７９５－８０３，ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｂｔ．２９７８（２０１４））。

血管系及び神経系との多くの幹細胞型の密接な関連は、代謝の手がかり及びサーカディアンリズムによる幹細胞応答の調節を可能にし、導管を提供し、これを通して、炎症細胞及び免疫細胞ならびに体液性因子は、ニッチに送達することができる。（Ｗａｇｅｒｓ，Ａ．Ｊ．Ｔｈｅｓｔｅｍｃｅｌｌｎｉｃｈｅｉｎｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅｍｅｄｉｃｉｎｅ．Ｃｅｌｌｓｔｅｍｃｅｌｌ１０，３６２－３６９，ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｓｔｅｍ．２０１２．０２．０１８（２０１２））。免疫細胞は、炎症及び組織損傷時にニッチを動的に調節し、これは、「免疫特権」（脳及び眼を含む特定の解剖学的部位に配置された組織移植片が、長期間生存し得るという観察結果を指す）の存在、ならびに、この特権からの回避によって厳密に調節される。（Ｌａｎｅ，Ｓ．Ｗ．，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ｄ．Ａ．＆Ｗａｔｔ，Ｆ．ＭＭｏｄｕｌａｔｉｎｇｔｈｅｓｔｅｍｃｅｌｌｎｉｃｈｅｆｏｒｔｉｓｓｕｅｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ．Ｎａｔｕｒｅｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ３２，７９５－８０３，ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｂｔ．２９７８（２０１４））。

細胞外マトリックス（ＥＣＭ）タンパク質及びＥＣＭとの幹細胞の相互作用は、基質の剛性に部分的に基づいて、保持の手がかり及び機械的シグナルを提供し、これは、幹細胞に、外部の物理的力に応答させる。ＥＣＭタンパク質は、ニッチの配向及び構造の維持に重要であり、幹細胞に発現されたインテグリンとのリガンドの相互作用を通じて有益なシグナルを提供する。（Ｌａｎｅ，Ｓ．Ｗ．，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ｄ．Ａ．＆Ｗａｔｔ，Ｆ．Ｍ．Ｍｏｄｕｌａｔｉｎｇｔｈｅｓｔｅｍｃｅｌｌｎｉｃｈｅｆｏｒｔｉｓｓｕｅｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ．Ｎａｔｕｒｅｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ３２，７９５－８０３，ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｂｔ．２９７８（２０１４））。加えて、ＥＣＭは、ニッチ内で局所的及び体系的に生成された因子の両方に結合することにより、成長因子、ケモカイン、及び他の幹細胞調節分子を分離または濃縮し得る。（Ｗａｇｅｒｓ，Ａ．Ｊ．Ｔｈｅｓｔｅｍｃｅｌｌｎｉｃｈｅｉｎｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅｍｅｄｉｃｉｎｅ．Ｃｅｌｌｓｔｅｍｃｅｌｌ１０，３６２－３６９，ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｓｔｅｍ．２０１２．０２．０１８（２０１２））。

トポグラフィー、剛性／弾性、剪断力、温度、酸素圧、及び血流などの物理的パラメーターは、幹細胞の維持及び分化を導く。さらに、多くの幹細胞ニッチは、環境特性を変化させており、幹細胞集団の長期の静止状態及び自己複製を維持する厳格な代謝調節を必要とする。（Ｌａｎｅ，Ｓ．Ｗ．，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ｄ．Ａ．＆Ｗａｔｔ，Ｆ．Ｍ．Ｍｏｄｕｌａｔｉｎｇｔｈｅｓｔｅｍｃｅｌｌｎｉｃｈｅｆｏｒｔｉｓｓｕｅｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ．Ｎａｔｕｒｅｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ３２，７９５－８０３，ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｂｔ．２９７８（２０１４））。

特定の幹細胞ニッチを構成する特定の構成成分は、異なる生理学的状況下で様々な組織では変化し得るが、全ての場合において、これらの細胞及び無細胞構成要素によって提供されたシグナルは、静止または増殖、自己複製または分化、移動または保持、及び細胞死または生存の選択を含む運命決定を知らせるために、幹細胞により取り込まれるように見える。（Ｗａｇｅｒｓ，Ａ．Ｊ．Ｔｈｅｓｔｅｍｃｅｌｌｎｉｃｈｅｉｎｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅｍｅｄｉｃｉｎｅ．Ｃｅｌｌｓｔｅｍｃｅｌｌ１０，３６２－３６９，ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｓｔｅｍ．２０１２．０２．０１８（２０１２））。

造血幹細胞ニッチ
造血系は、酸素輸送、免疫、及び組織リモデリングなどの機能を実行する、毎日１，０００億を超える成熟血液細胞をヒト身体に供給する。造血系は、酸素輸送及び免疫防御などの独自の機能を有する高度に特殊化された細胞の様々な集団で構成される。成人ヒトは、１日当たり約４～５×１０¹¹の造血細胞を生成すると推定される。多くの血球タイプを継続的に生成すると、高度に調節された、さらに高い応答性の系が必要とされる。哺乳類の造血組織内では、まれな造血幹細胞（ＨＳＣ）が、階層の上位に位置する。（Ｐｉｎｈｏ，Ｓ．，Ｆｒｅｎｅｔｔｅ，Ｐ．Ｓ．Ｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌａｃｔｉｖｉｔｙａｎｄｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓｗｉｔｈｔｈｅｎｉｃｈｅ．ＮａｔＲｅｖＭｏｌＣｅｌｌＢｉｏｌ２０，３０３－３２０（２０１９）ｄｏｉ：１０．１０３８／ｓ４１５８０－０１９－０１０３－９）。

ＨＳＣニッチの発生
発生中、造血を確立するために、ＨＳＣは、ニッチ間行き来する。未成熟前駆細胞が発生中の胚に酸素を供給する赤血球を生成する時、胚の約７．０日目（Ｅ７．０）に、卵黄嚢中で原始造血が生じる。移植時の造血系を完全に再構成することができることが既知の最初の決定的なＨＳＣの存在は、マウス及びヒトの大動脈－性腺－中腎に見られる。しかし、Ｅ９．０～Ｅ１０．０の卵黄嚢細胞が、成体マウスではなく新生児に移植する時、最終的なＨＳＣに成熟し得ることを、いくつかの研究は示唆している。さらに、胎盤は、発達中のＨＳＣの重要な貯蔵庫を表す。血管系が発達すると、ＨＳＣは、Ｅ１２．０またはその近くの胎児の肝臓に移動し、増殖して分化する。胎児の肝臓ＨＳＣは、対応する骨髄とは対照的に活発に循環しており、照射を受けたレシピエントに移植する時、成人の骨髄ＨＳＣに勝る可能性もある。胎児肝臓でのＨＳＣ増殖中に、軟骨細胞及び骨芽細胞が間葉凝縮内で生成され、軟骨及び骨が生成される。骨格のリモデリングは、骨の血管新生と関連しており、ＨＳＣのホーミング及びＥ１７．５による胎児骨髄のコロニー形成を可能にする。このプロセスは、骨髄間質細胞によるＣＸＣＬ１２産生によって媒介され、これは、ＣＸＣＲ４を発現するＨＳＣ及び骨髄内皮に発現される特定の接着分子を引き付ける。（Ｂｏｕｌａｉｓ，Ｐ．Ｅ．，＆Ｆｒｅｎｅｔｔｅ，Ｐ．Ｓ．（２０１５）．Ｍａｋｉｎｇｓｅｎｓｅｏｆｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌｎｉｃｈｅｓ．Ｂｌｏｏｄ，１２５（１７），２６２１－２６２９．ｄｏｉ：１０．１１８２／ｂｌｏｏｄ－２０１４－０９－５７０１９２）。

ＨＳＣニッチ及び骨髄微小環境
成人の骨では、ＨＳＣは、本質的に、代謝休眠または静止の段階で細胞周期のＧ０期に保たれ、これは、細胞複製に関連する損傷を制限することにより、その機能を維持する。しかし、静止状態のＨＳＣは、細胞周期に入って増殖することにより、広範囲のニッチまたは全身性シグナルに迅速に応答し得る。従って、これらの有益な手がかりは、ＨＳＣの分化を調整し、生物のニーズに合わせて血液産生を調整するために不可欠である。ＨＳＣは、また、末梢組織の免疫監視を確実にし、離れたＢＭ部位を生着させるために、集結シグナルを受けるとＢＭニッチを離れ、血流に入ることもできる。従って、ＨＳＣは、静止／増殖及び固定／集結の間のスイッチの動的な調節により、細胞周期及び輸送活性を含む生物の多くの態様についてＢＭニッチ由来の短期及び長期の有益な手がかりに決定的に依存する。

常在ニッチ細胞。ＨＳＣ幹細胞ニッチは、様々な種類の細胞を含有し、それぞれが、別個の機能で、例えば、骨芽細胞、血管、及び神経細胞、巨核球、マクロファージ、及び免疫細胞は、それぞれ、重要な役割を有し、個別のＨＳＣニッチを定義すると考えることができる。それは、さらに、他の特定のニッチ、例えば、骨芽細胞及び血管周囲のニッチを含む。これらの２つのニッチが異なる特異的役割を有するかどうか、または、ＨＳＣの調整された規制があるかどうかの研究は対立するが、それ故、機能が重複する。例えば、ＮＧ２＋細動脈周囲細胞は、長期ＨＳＣ内の静止状態を調節し、この静止状態は、ＨＳＣ機能に不可欠であるように見える。骨内膜マクロファージなどの他の細胞は、ニッチ内にＨＳＣを保持し、これらの細胞が失われると、支持的な微小環境からのＨＳＣの集結が引き起こされる。（Ｌａｎｅ，Ｓ．Ｗ．，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ｄ．Ａ．＆Ｗａｔｔ，Ｆ．Ｍ．Ｍｏｄｕｌａｔｉｎｇｔｈｅｓｔｅｍｃｅｌｌｎｉｃｈｅｆｏｒｔｉｓｓｕｅｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ．Ｎａｔｕｒｅｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ３２，７９５－８０３，ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｂｔ．２９７８（２０１４））。

直接細胞接触。直接的な細胞接触は、細胞間接着分子及び膜結合リガンドを有する受容体など、様々な受容体で媒介することができる。例えば、骨髄では、類洞細胞により発現されるＮｏｔｃｈリガンドは、骨髄破壊的損傷からの回復中のＨＳＣの自己複製に不可欠である。（Ｌａｎｅ，Ｓ．Ｗ．，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ｄ．Ａ．＆Ｗａｔｔ，Ｆ．Ｍ．Ｍｏｄｕｌａｔｉｎｇｔｈｅｓｔｅｍｃｅｌｌｎｉｃｈｅｆｏｒｔｉｓｓｕｅｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ．Ｎａｔｕｒｅｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ３２，７９５－８０３，ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｂｔ．２９７８（２０１４））。

分泌因子。幹細胞及びニッチ細胞の間の間接的なコミュニケーションは、分泌された因子により媒介される。例えば、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）または顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）などのサイトカインを使用することによる、ニッチからのＨＳＣの集結は、血液悪性腫瘍、骨髄不全、及びまれな遺伝性障害の処置をサポートするために幅広く使用される。ＨＳＣの増殖及びＨＳＣ－ニッチ接着の放出を促進することを含むこれらの要素は、様々な方法で作用する。（Ｌａｎｅ，Ｓ．Ｗ．，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ｄ．Ａ．＆Ｗａｔｔ，Ｆ．Ｍ．Ｍｏｄｕｌａｔｉｎｇｔｈｅｓｔｅｍｃｅｌｌｎｉｃｈｅｆｏｒｔｉｓｓｕｅｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ．Ｎａｔｕｒｅｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ３２，７９５－８０３，ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｂｔ．２９７８（２０１４））。具体的には、分泌因子様幹細胞因子（ＳＣＦ）、トランスフォーミング成長因子ベータ１（ＴＧＦ－ｂ１）、血小板第４因子（ＰＦ４またはＣＸＣＬ４）、アンジオポエチン１（ＡＮＧＰＴ１）、及びトロンボポエチン（ＴＰＯ）は、全てのＨＳＣ静止の重要な執行者である。必須のケモカイン間質由来因子１（ＳＤＦ１ａまたはＣＸＣＬ１２）及びそのＣ－Ｘ－Ｃケモカイン受容体型４（ＣＸＣＲ４）と共に、血管細胞接着タンパク質１（ＶＣＡＭ－１）などの接着分子、様々なセレクチン、及び細胞外マトリックス（ＥＣＭ）タンパク質様フィブロネクチンまたはヒアルロン酸は全て、ＨＳＣホーミング及びニッチでの固定の必須の調節因子である。

静止状態でそのままであるか、または活発に増殖している状態に入るかの判定は、細胞の内因性及び外因性の両方の機序を介した多くの要因により制御される。外因性の可溶性因子；炎症性サイトカイン、例えば、インターフェロン（ＩＦＮ）－α及びＩＦＮ－γ；成長因子、例えば、顆粒球コロニー刺激因子（ＧＣＳＦ）、幹細胞因子（ＳＣＦ）、及びトロンボポエチン（ＴＰＯ）；サイトカイン、例えば、トランスフォーミング成長因子（ＴＧＦ）－β及び腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）－α；ならびに、ケモカイン、例えば、間質細胞由来因子（ＳＤＦ）－１に応答して、ＨＳＣは、休眠または細胞周期のいずれかに入り得る。ＨＳＣの静止を調節する固有の要因は、細胞周期阻害剤、例えば、ｐ２１及びｐ５７、転写因子（ＴＦ）、例えば、Ｇｆｉ１、Ｅｇｒ１、ＦＯＸＯ、及びＰＢＸ１；ならびに、ユビキチンリガーゼ、例えば、ｃ－Ｃｂｌ、Ｉｔｃｈ、Ｆｂｘｗ７、及びＡ２０を含む。骨髄ニッチにおけるＨＳＣの適切な維持には、内因性因子及び外因性因子の調和が不可欠である。（Ｎａｋａｇａｗａ，Ｍ．Ｍ．，Ｃｈｅｎ，Ｈ．，＆Ｒａｔｈｉｎａｍ，Ｃ．Ｖ．（２０１８）．ＣｏｎｓｔｉｔｕｔｉｖｅＡｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆＮＦ－κＢＰａｔｈｗａｙｉｎＨｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃＳｔｅｍＣｅｌｌｓＣａｕｓｅｓＬｏｓｓｏｆＱｕｉｅｓｃｅｎｃｅａｎｄＤｅｒｅｇｕｌａｔｅｄＴｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎＦａｃｔｏｒＮｅｔｗｏｒｋｓ．Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓｉｎｃｅｌｌａｎｄｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌｂｉｏｌｏｇｙ，６，１４３）。

骨の微小環境。骨髄は、造血細胞区画、ならびに、主に、線維芽細胞、脂肪細胞、神経、及び骨髄の血管系で構成される間質に細分化することができる。（Ｋｏｐｐ，ｅｔ．ａｌ．“ＴｈｅＢｏｎｅＭａｒｒｏｗＶａｓｃｕｌａｒＮｉｃｈｅ：ＨｏｍｅｏｆＨＳＣＤｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎａｎｄＭｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ．“ＰＨＹＳＩＯＬＯＧＹ２０：３４９－３５６，２００５；１０．１１５２／ｐｈｙｓｉｏｌ．０００２５．２００５）。

動脈血管は、孔栄養を介して骨髄に入り、次に、いくつかの細動脈に分かれる。これらの血管の小さな細動脈及び毛細血管は、骨髄全体に及び、類洞間毛細血管により相互接続されている類洞を供給する。類洞は、流出する中央静脈洞の周りに放射状に分布し、これは、直径が約１００ｍである。骨髄類洞は、独特であり、通常の静脈と比較されるべきではない。類洞壁は、内皮細胞の単層で構成されており、支持細胞がない。内皮細胞は、結合組織の被覆はないが、むしろ、実質細胞と直接接触している。周囲の造血骨髄は、類洞微小循環の再構築及びリモデリングをサポートする主要な細胞部分である。

細胞傷害剤または放射線による骨髄低細胞性の急速な誘導に、類洞及び中心静脈洞の顕著な拡張及び崩壊が続く。類洞に通常の血管壁がないことは、高レベルの透過性に反映される。骨髄微小環境は、ＨＳＣ及び造血前駆細胞（ＨＰＣ）を収容し、隣接する間質細胞で構成される骨の微小解剖学的環境が幹細胞をサポートし、指導する。間質環境自体が造血の質を決定し得ることが仮定されている。（Ｋｏｐｐ，ｅｔ．ａｌ．“ＴｈｅＢｏｎｅＭａｒｒｏｗＶａｓｃｕｌａｒＮｉｃｈｅ：ＨｏｍｅｏｆＨＳＣＤｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎａｎｄＭｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ．“ＰＨＹＳＩＯＬＯＧＹ２０：３４９－３５６，２００５；１０．１１５２／ｐｈｙｓｉｏｌ．０００２５．２００５）。

ＨＳＣ及びＨＰＣは、骨髄にランダムに分布しないが、むしろ、骨の骨内膜の近く及び血管の周りに局在する。さらに、胚性骨髄は、骨内膜の隣に最初の造血コロニーを示す。研究者らは、骨髄における細胞発達の勾配を同定しており、未分化細胞が、骨内膜に沿って位置し、分化及び成熟が、高度に血管新生された骨髄腔への中心に向かう動きに関連している。（Ｋｏｐｐ，ｅｔ．ａｌ．“ＴｈｅＢｏｎｅＭａｒｒｏｗＶａｓｃｕｌａｒＮｉｃｈｅ：ＨｏｍｅｏｆＨＳＣＤｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎａｎｄＭｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ．“ＰＨＹＳＩＯＬＯＧＹ２０：３４９－３５６，２００５；１０．１１５２／ｐｈｙｓｉｏｌ．０００２５．２００５）。

骨髄微小環境は、ＨＳＣニッチだけでなく、骨芽細胞または骨内膜ニッチも収容し、それぞれの血管ニッチは、幹細胞の局在化において果たす役割によって定義される。骨髄の骨芽細胞ニッチは、未分化状態で再増殖する細胞を維持するためのシグナルを提供する。造血組織におけるこれらの空間的差異は、収容された幹細胞自体の特性に反映または変換しない。骨髄類洞血管のような間質構造が、造血細胞が存在し成熟し得る代替の細胞足場として役立ち得ることを、さらなる研究は示した。

骨内膜ゾーン由来の別々の解剖学的及び機能的実体として、骨髄の類洞及び細動脈ネットワークを正確に概説するために、「血管ニッチ」という名称が用いられる。未成熟ではなく分化した造血細胞が、血管ニッチの骨髄微小血管系と密接に関連していることを、超微細構造研究は示す。さらに、ほぼ全ての成熟巨核球が薄壁の類洞に隣接して位置していることが見出され、巨核球全体が無傷の内皮細胞を通って移動することができることが示された。この観察は、これらの系列が、骨髄内の定義されたニッチに存在することも報告されているので、血小板新生に限定されないが、赤血球及びＢリンパ球前駆細胞にも適用することができる。これらの知見は、前駆細胞－間質細胞の相互作用を示す。これは、成熟プロセスにおける重要な決定因子であり、さらに、幹細胞の維持及び分化を許容し、有益な微小解剖学的構造としての幹細胞ニッチの概念を強化するからである。さらに、骨髄内皮細胞（ＢＭＥＣ）は、接着特性、血管新生及び化学動態因子との相互作用、ならびにＨＳＣの自己複製及び分化のサポートへの寄与を有することが判明し、それによって骨髄実質及び血管ニッチの相互依存性を実証した。（Ｃｒａｎｅ，ＧＭ，ｅｔａｌ．，“Ａｄｕｌｔｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌｎｉｃｈｅｓ，”Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２０１７）１７（９）：５７３－９０；Ｒａｍａｌｉｎｇａｍ，Ｐ．ｅｔａｌ．，“Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌｌｌｉｆｅｃｙｃｌｅｂｙｔｈｅｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｎｉｃｈｅ，”Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｈｅｍａｔｏｌ．（２０１７）２４（４）：２８９－９９；Ｙｕ，ＶＷ，ａｎｄＳｃａｄｄｅｎ，ＤＴ，“Ｈｅｒｔｅｒｏｇｅｎｅｉｔｙｏｆｔｈｅｂｏｎｅｍａｒｒｏｗｎｉｃｈｅ，”Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｈｅｍａｔｏｌ．（２０１６）２３（４）：３３１－３８；Ｋｏｐｐ，ｅｔ．ａｌ．“ＴｈｅＢｏｎｅＭａｒｒｏｗＶａｓｃｕｌａｒＮｉｃｈｅ：ＨｏｍｅｏｆＨＳＣＤｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎａｎｄＭｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ．“ＰＨＹＳＩＯＬＯＧＹ２０：３４９－３５６，２００５；１０．１１５２／ｐｈｙｓｉｏｌ．０００２５．２００５）。

アンジオクライン因子
骨微小環境における骨組織細胞シグナル伝達に複数の役割を果たす多数のアンジオクライン成長因子がある。以下の表２は、そのようなアンジオクライン因子、及びそれらの骨の組織細胞とのクロストークについて記載する。（ＳｉｖａｎＵ，ＤｅＡｎｇｅｌｉｓＪ，ＫｕｓｕｍｂｅＡＰ．２０１９Ｒｏｌｅｏｆａｎｇｉｏｃｒｉｎｅｓｉｇｎａｌｓｉｎｂｏｎｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓａｎｄｄｉｓｅａｓｅ．ＯｐｅｎＢｉｏｌ．９：１９０１４４．ｈｔｔｐ：／／ｄｘ．ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０９８／ｒｓｏｂ．１９０１４４）。

造血細胞及び内皮細胞間の結合は、内皮細胞及び造血細胞の一般的な前駆体である血管芽細胞であることが判明した。ＨＳＣ／ＨＰＣ及び内皮細胞の胚学的に強い相互依存性があり、これは、成体にまで及ぶ。（Ｋｏｐｐ，ｅｔ．ａｌ．“ＴｈｅＢｏｎｅＭａｒｒｏｗＶａｓｃｕｌａｒＮｉｃｈｅ：ＨｏｍｅｏｆＨＳＣＤｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎａｎｄＭｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ．“ＰＨＹＳＩＯＬＯＧＹ２０：３４９－３５６，２００５；１０．１１５２／ｐｈｙｓｉｏｌ．０００２５．２００５）。

骨髄内皮細胞（ＢＭＥＣ）は、骨髄の血球産生能（すなわち、造血）を機械的に理解する鍵である。経内皮輸送が、炎症性サイトカインにより誘導可能な表面受容体または接着分子の発現に依存していることを、ヒト臍帯静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）のような他の内皮細胞型に関する研究は示した。従って、成熟した血液細胞の放出、ならびにＨＳＣ／ＨＰＣの集結及びホーミングは、同様の機序により調節される可能性が高いと考えられた。ＢＭＥＣは、様々なサイトカインの産生を介して、さらには、場合により、物理的接触を介して、ｉｎｖｉｔｒｏで造血前駆細胞の増殖及び分化をサポートすることが判明した。巨核球及びＢＭＥＣを共培養すると、ＢＭＥＣの生存期間の延長がもたらされた。これは、おそらく、巨核球が内皮細胞生存因子ＶＥＧＦ－Ａを分泌するからである。（Ｋｏｐｐ，ｅｔ．ａｌ．“ＴｈｅＢｏｎｅＭａｒｒｏｗＶａｓｃｕｌａｒＮｉｃｈｅ：ＨｏｍｅｏｆＨＳＣＤｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎａｎｄＭｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ．“ＰＨＹＳＩＯＬＯＧＹ２０：３４９－３５６，２００５；１０．１１５２／ｐｈｙｓｉｏｌ．０００２５．２００５）。

骨髄微小環境の血管系の十分性も造血の鍵となる。実に、ＢＭＥＣとの血管ニッチ相互作用の機能は、ＨＳＣサポートの助けとなる細胞プラットフォームを提供することであるが、内皮細胞の適切な構造的完全性がこの発達につながる分子機序は、依然として不明である。（Ｋｏｐｐ，ｅｔ．ａｌ．“ＴｈｅＢｏｎｅＭａｒｒｏｗＶａｓｃｕｌａｒＮｉｃｈｅ：ＨｏｍｅｏｆＨＳＣＤｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎａｎｄＭｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ．“ＰＨＹＳＩＯＬＯＧＹ２０：３４９－３５６，２００５；１０．１１５２／ｐｈｙｓｉｏｌ．０００２５．２００５）。

血管完全性
血管完全性は、血管恒常性に重要である。Ｍｕｒａｋａｍｉ，Ｍ．，ａｎｄＳｉｍｏｎｓ，Ｍ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．（Ｂｅｒｌ）（２００９）８７（６）：５７１－８２）。血管系の維持は、連続的な基礎細胞シグナル伝達を必要とする活発な生物学的プロセスである。この系の障害は、出血、浮腫、炎症、及び組織虚血などの深刻な結果をもたらす。

現在理解されているように、新しい血管形成のステップは、内皮細胞の増殖及び移動それに続く新しい血管構造への集合、管腔形成、及び最後に、新しく形成された内皮管の成熟を含む。同上。後半であるチューブの安定化及びバリア機能の回復は、新しく形成された血管の成熟にとって非常に重要である。同上。この安定化段階は、血管細胞増殖及び移動を開始するシグナル伝達経路とは異なる、別個の細胞シグナル伝達経路の活性化を必要とする。さらに、新しく形成された血管だけでなく、既存の血管も、それらの完全性及び組織の恒常性を維持するために積極的に維持される必要がある。同上。血流の機能的に意味のある改善を達成するために、単に新しい血管の成長を誘導することだけで十分ではなく、血管退行の防止及び血管成熟の促進が同様に重要であることを、様々な血管新生治療アプローチの経験は実証している。（同上、Ｓｉｍｏｎｓ，Ｍ．，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ（２００５）１１１：１５５６－６６を引用）。

様々な動物モデルでの研究、ならびにマウス及びヒトの遺伝学的研究により、胚性血管の発達中または成体の血管系における血管完全性の積極的な維持に重要な役割を果たす多くの要因が同定されている。これらの要因は、組織化された方法で血管の安定化及び維持の多くのステップにわたって協調的に作用する。血管形成のプロセス中、新生血管が構築された後、内皮細胞は、細胞間結合を発達させて効果的なバリアを確立する。これは、Ａｎｇ１－Ｔｉｅ２及びＦＧＦ系が極めて重要な役割を果たすプロセスである（同上、Ｆｉｅｄｌｅｒ，Ｕ，Ａｕｇｕｓｔｉｎ，ＨＧ，ＴｒｅｎｄｓＩｍｍｕｎｏｌ．（２００６）２７：５５２－５８；Ｍｕｒａｋａｍｉ，Ｍ．，Ｓｉｍｏｎｓ，Ｍ．；Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｈｅｍａｔｏｌ．（２００８）１５：２１５－２２０を引用）。付随して、間葉系前駆細胞は、ＴＧＦ－βの作用により、周皮細胞または平滑筋細胞に分化するが、内皮先端細胞に由来するＰＤＧＦ－ＢＢは、周皮細胞の動員及び増殖を促進する（同上、Ｐｅｐｐｅｒ，ＭＳ，ＣｙｔｏｋｉｎｅＧｒｏｗｔｈＦａｃｔｏｒＲｅｖ．（１９９７）８：２１－４３）；Ｂｅｔｓｈｏｌｔｚ，Ｃ．ＣｙｔｏｋｉｎｅＧｒｏｗｔｈＦａｃｔｏｒＲｅｖ．（２００４）１５：２１５－２２８；Ａｎｄｒｒａｅ，Ｊ．ｅｔａｌ．，ＧｅｎｅｓＤｅｖ．（２００８）２２：１２７６－１３１２を引用）。このプロセス全体にわたって、インテグリンは、細胞外マトリックス（ＥＣＭ）細胞のシグナル伝達を仲介し、さらに、これは、血管の安定化を指示する（同上、Ｈｙｎｅｓ，ＲＯ，Ｊ．Ｔｈｒｏｍｂ．Ｈａｅｍｏｓｔ．（２００７）５（Ｓｕｐｐｌ．１）：３２－４０を引用）。

血管完全性は、血管壁の様々な構成要素の適切な機能を確保する多くの要因によって厳密に調節される。血管完全性を悪化させる初期の特質の１つは、透過性の増加であり、これは、主に、内皮接合部の安定性により制御される。血管透過性の選択的調節は、傍細胞ギャップのサイズ及び状態の調節ならびに経細胞輸送の制御により達成される。正常な血管系は、ベッド毎に変動する一定レベルの基礎透過性を示す。初期の研究は、血管床のサブセットにおける構成的に開いた接合部を明らかにした（同上、Ｓｉｍｉｏｎｅｓｃｕ，Ｎ．ｅｔａｌ．，Ｊ．ＣｅｌｌＢｉｏｌ．（１９７８）７９：２７－４４を引用）。通常の条件下では、能動的な透過性調節が生じる後毛細血管細静脈の内皮細胞間結合の約３０％が開いており、約６０Åの分子に対して透過性がある（同上）。ヒスタミンまたは５－ＨＴ（５－ヒドロキシトリプタミン）のいずれかで刺激すると、後毛細血管細静脈の細胞結合が選択的に開き、より大きな分子の通過を可能にするが、細静脈接合部からの流出は、血管周囲の空間に限定され、制限される（（同上、Ｓｉｍｉｏｎｅｓｃｕ，Ｎ．ｅｔａｌ．，Ｊ．ＣｅｌｌＢｉｏｌ．（１９７８）７９：２７－４４）を引用（血管周囲組織に外部バリアが存在することを示唆））（同上）。

生理学的及び病理学的刺激により誘発される内皮透過性の増加は、通常、可逆的であり、血管完全性を恒久的に悪化させることない。しかし、内皮接合部構成要素への干渉は、血管完全性の深刻な機能障害につながり得る。このシナリオでは、接合部の破壊は、通常、血管壁からの最終的な内皮剥離とそれに続く血栓形成を伴う。このプロセスの一連のイベントは十分に理解されていないが、透過性誘導性刺激の持続時間が結果に影響を与え得る可能性がある。（同上）ＶＥ－カドヘリンベース接合部を再確立することにより、内皮細胞がバリア機能を迅速に回復し得る血管透過性の一時的な増加とは異なり、長期の刺激は、活性酸素種（ＲＯＳ）の蓄積などのより深刻な影響につながることがある。内皮機能に多くの悪影響を与えることが既知の過剰量のＲＯＳは、そのようなシナリオを媒介し得る。実際には、ＲＯＳは、活性部位のＣｙｓ残基を酸化し、それにより、チロシンリン酸化依存性シグナル伝達イベントに影響を与えることにより、タンパク質チロシンホスファターゼ（ＰＴＰ）を不可逆的に不活性化し得る（同上、Ｔｏｎｋｓ，ＮＫ，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｍｏｌ．ＣＶｅｌｌＢｉｏｌ．（２００６）７：８３３－８４６を引用）

内皮接合部－内皮細胞では、３タイプの細胞間接合部、すなわち、接着、密着、及びギャップ接合部のうち、接着及び密着接合部は、内皮の構造的完全性に寄与する（同上、Ｄｅｊａｎａ，Ｅ．，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｍｏｌ．ＣｅｌｌＢｉｏｌ．（２００４）５：２６１－２７０を引用）。これら２タイプの接合部の機能的差異を正確に概説することは困難であるが、密着接合部の組み立てが、接着接合部の事前形成に依存することが示されており、接着接合部が、主に、内皮透過性の制御に重要であるが、密着接合部が、細胞の頂端面と基底外側面の間の脂質と内在性膜タンパク質の動きをブロックすることに関与することが一般に考えられる。（分子柵）（同上、Ｄｅｊａｎａ，Ｅ．，ＮａｔｕｒｅＲｅｖ．Ｍｏｌ．ＣｅｌｌＢｉｏｌ．（２００４）５：２６１－２７０；Ｔａｄｄｅｉ，Ａ．，ｅｔａｌ．，Ｎａｔ．ＣｅｌｌＢｉｏｌ．（２００８）１０：９２３－３４を引用）。

各タイプの接合部は、異なるセットのタンパク質を有する。カドヘリンは、接着結合を構成し、トランスホモフィリック（ｔｒａｎｓ－ｈｏｍｏｐｈｉｌｉｃ）相互作用を介してカルシウム依存的な方法で、細胞間接触を媒介する膜貫通タンパク質のファミリーである。内皮細胞では、ＶＥ－カドヘリンは、細胞接触部位に局在し、これは、接着結合の形成を調節し、接合部位をアクチン細胞骨格に結合する。

カテニン、特に、ｐ１２０－カテニンへの結合によって制御される接着接合部でのＶＥ－カドヘリンの安定性は、内皮透過性及び完全性の維持に重要である。Ｓｒｃファミリーキナーゼは、ＶＥＧＦ誘導性内皮透過性の増加に重要な役割を果たすことが知られており、Ｓｒｃを介したＶＥ－カドヘリンリン酸化は、細胞間接触の破壊を引き起こし、ＶＥ－カドヘリンの内在化を引き起こす（同上、Ｗｅｉｓ，ＳＭ，Ｃｈｅｓｈ，ＤＡ，Ｎａｔｕｒｅ（２００５）４３７：４９７－５０４を引用）。このプロセスは、内皮の運動性及び「活性化された」内皮細胞の血管新生表現型の確立に重要であると考えられる。従って、内皮接合部は、静止状態の単層においてさえも能動的に組み立て、分解する動的構造であり、これは、正味のＶＥ－カドヘリン動態を制御する作用のバランスが、内皮の挙動を決定することを示唆する。

炎症及びニッチ
炎症性シグナルは、発達中の造血幹細胞（ＨＳＣ）の胚性特定、感染時の緊急顆粒球形成、及び移植後の造血再生を含む様々なプロセスで重要な役割を果たす。^4~8

全ての幹細胞ニッチが、動的であり、細胞ターンオーバーを示すが、『永続的な居住者』であるニッチ細胞（例えば、内皮細胞、神経細胞、及び結合組織線維芽細胞）と一時的にニッチを占める細胞（例えば、免疫細胞、及び、例えば、病原体から保護するか、または治癒を促進するために組織損傷に応答する細胞）を区別することは有用である。常在ニッチ細胞とは対照的に、自然及び適応免疫系の多くの細胞は、組織に出入りする。免疫細胞の機能は、幹細胞の機能を促進するように調節することができる。（Ｌａｎｅ，Ｓ．Ｗ．，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ｄ．Ａ．＆Ｗａｔｔ，Ｆ．Ｍ．Ｍｏｄｕｌａｔｉｎｇｔｈｅｓｔｅｍｃｅｌｌｎｉｃｈｅｆｏｒｔｉｓｓｕｅｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ．Ｎａｔｕｒｅｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ３２，７９５－８０３，ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｂｔ．２９７８（２０１４））。

ＨＳＣの発達を調節する前炎症性メディエーターは、トール様受容体（ＴＬＲ）、サイトカイン、及びエイコサノイドを含み、これらのそれぞれは、傷害と戦う免疫系を活性化する。傷害または病原体による組織破壊は、典型的な炎症を引き起こす前炎症性サイトカインの放出につながる。要約すると、骨髄細胞（例えば、マクロファージ及び好中球）は、トール様受容体（ＴＬＲ）及びヌクレオチド結合オリゴマー化ドメイン（ＮＯＤ）様受容体（ＮＬＲ）を備え、これは、ダメージ関連分子パターン（ＤＡＭＰ）及び病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）の認識時に、前炎症性サイトカイン及びエイコサノイドの増殖を誘導する。ＴＬＲは、マスター炎症／免疫転写因子核因子カッパＢ（ＮＦ－κＢ）を介して、遺伝子発現の誘導及び主要な前炎症性サイトカインであるインターロイキン（ＩＬ）－１β及びＩＬ－１８の細胞内蓄積を促進する。続いて、ＮＬＲによる細胞質区画内のＰＡＭＰ／ＤＡＭＰの認識は、カスパーゼ１媒介性タンパク質分解切断ならびに前炎症性サイトカイン及びサイトゾルホスホリパーゼＡ２媒介性エイコサノイド生合成の放出を促進する。次に、前炎症性サイトカイン及びエイコサノイドが免疫細胞を活性化して、感染の原因を取り除き、健康な組織を回復させる。（Ｅｓｐｉｎ－Ｐａｌａｚｏｎ，Ｒ．，Ｗｅｉｊｔｓ，Ｂ．，Ｍｕｌｅｒｏ，Ｖ．＆Ｔｒａｖｅｒ，Ｄ．ＰｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙＳｉｇｎａｌｓａｓＦｕｅｌｆｏｒｔｈｅＦｉｒｅｏｆＨｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃＳｔｅｍＣｅｌｌＥｍｅｒｇｅｎｃｅ．Ｔｒｅｎｄｓｉｎｃｅｌｌｂｉｏｌｏｇｙ２８，５８－６６，ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｔｃｂ．２０１７．０８．００３（２０１８））。

ＨＳＣは、細胞の内因性機序及び外因性機序の両方による免疫または組織の傷害を感知すると考えられる。ＨＳＣは、前炎症性サイトカイン、ケモカイン、及びＰＡＭＰＳを含む、局所的に産生されたサイトカイン（ニッチ／微小環境）及び末端（損傷または感染）で産生されたサイトカインに動的に応答する。ＨＳＣ及び造血幹細胞及び前駆細胞（ＨＳＰＣ）は、間接的に（前炎症性サイトカインもしくはＤＡＭＰを介して）または直接（ＰＡＭＰを介して）免疫または組織の傷害を感知する。通常、ＨＳＣは、多くの場合、リンパ球産生及び赤血球形成を犠牲して、正常な造血を骨髄造血に偏らせることにより、前炎症性シグナルに応答し、これは、既存の細胞が感染部位に動員されているので、骨髄細胞数を満たすように生じると考えられる。（Ｅｓｐｉｎ－Ｐａｌａｚｏｎ，Ｒ．，Ｗｅｉｊｔｓ，Ｂ．，Ｍｕｌｅｒｏ，Ｖ．＆Ｔｒａｖｅｒ，Ｄ．ＰｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙＳｉｇｎａｌｓａｓＦｕｅｌｆｏｒｔｈｅＦｉｒｅｏｆＨｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃＳｔｅｍＣｅｌｌＥｍｅｒｇｅｎｃｅ．Ｔｒｅｎｄｓｉｎｃｅｌｌｂｉｏｌｏｇｙ２８，５８－６６，ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｔｃｂ．２０１７．０８．００３（２０１８）。

分化した免疫細胞と同様に、ＨＳＣは、ＴＬＲの発現を通じて傷害を認識する。ＨＳＣにおけるＴＬＲシグナルのライゲーションは、増殖及び分化につながる。ＨＳＣによる組織または免疫傷害の細胞外因性認識モードは、前炎症性サイトカインの受容体を介したシグナル伝達を含む。（Ｎａｋａｇａｗａ，Ｍ．Ｍ．，Ｃｈｅｎ，Ｈ．，＆Ｒａｔｈｉｎａｍ，Ｃ．Ｖ．（２０１８）．ＣｏｎｓｔｉｔｕｔｉｖｅＡｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆＮＦ－κＢＰａｔｈｗａｙｉｎＨｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃＳｔｅｍＣｅｌｌｓＣａｕｓｅｓＬｏｓｓｏｆＱｕｉｅｓｃｅｎｃｅａｎｄＤｅｒｅｇｕｌａｔｅｄＴｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎＦａｃｔｏｒＮｅｔｗｏｒｋｓ．Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓｉｎｃｅｌｌａｎｄｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌｂｉｏｌｏｇｙ，６，１４３）。

ＩＬ１、ＩＬ６、ＩＬ８、ＴＮＦ、ＣＣ－ケモカインリガンド２（ＣＣＬ２）、ＩＦＮ－α、及びＩＦＮ－γを含む様々な前炎症性サイトカイン及びケモカインは、ＨＳＣに影響を与えることが示される。実に、ｉｎｖｉｔｒｏでのＴＬＲ２、ＴＬＲ７、及びＴＬＲ８のアゴニストの刺激は、サイトカイン産生、例えば、ＩＬ－１ｂ、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＴＮＦ－α、及びＧＭ－ＣＳＦ、ならびに骨髄系列の細胞分化を誘導することが示されている。ヒトＣＤ３４＋ＨＳＰＣをＩＦＮ－γに曝露すると、生細胞数の増加をもたらすプロアポトーシスプロセス、免疫応答、及び骨髄増殖に関与する遺伝子に劇的な転写変化を生じることが示されている。ＨＳＰＣに特異的である転写変化もあれば、一般にＩＦＮ－γと共にインキュベートされた間質細胞で生じる転写変化、例えば、細胞成長及びシグナル伝達もある。対照的に、ＩＦＮ－γ及びＴＮＦによるｉｎｖｉｔｒｏ刺激は、異種移植マウスで多系列再構成を受けるＨＳＰＣの能力を著しく損なうことを、研究は示している。（Ｋｏｖｔｏｎｙｕｋ，Ｌ．Ｖ．，Ｆｒｉｔｓｃｈ，Ｋ．，Ｆｅｎｇ，Ｘ．，Ｍａｎｚ，Ｍ．Ｇ．＆Ｔａｋｉｚａｗａ，Ｈ．Ｉｎｆｌａｍｍ－ＡｇｉｎｇｏｆＨｅｍａｔｏｐｏｉｅｓｉｓ，ＨｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃＳｔｅｍＣｅｌｌｓ，ａｎｄｔｈｅＢｏｎｅＭａｒｒｏｗＭｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ．Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓｉｎｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ７，５０２，ｄｏｉ：１０．３３８９／ｆｉｍｍｕ．２０１６．００５０２（２０１６））。膜固定型ＴＮＦ－αは、同種及び同系のレシピエントにおける精製ＨＳＣの生着を高めることが判明している。（Ｅｓｐｉｎ－Ｐａｌａｚｏｎ，Ｒ．，Ｗｅｉｊｔｓ，Ｂ．，Ｍｕｌｅｒｏ，Ｖ．＆Ｔｒａｖｅｒ，Ｄ．ＰｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙＳｉｇｎａｌｓａｓＦｕｅｌｆｏｒｔｈｅＦｉｒｅｏｆＨｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃＳｔｅｍＣｅｌｌＥｍｅｒｇｅｎｃｅ．Ｔｒｅｎｄｓｉｎｃｅｌｌｂｉｏｌｏｇｙ２８，５８－６６，ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｔｃｂ．２０１７．０８．００３（２０１８））。

前炎症性サイトカインへのＨＳＣの長期曝露は、自己複製及び静止の低下を引き起こす。この点に関しては、ＮＦ－κＢは、ＨＳＣにより産生及び分泌される前炎症性サイトカインがＮＦ－κＢ機能に依存するので、ＨＳＣの炎症制御のゲートキーパーと見なすことができる。要約すると、ＮＦ－κＢタンパク質は、転写因子として機能し、自然免疫及び適応免疫のマスターレギュレーターと見なされる。哺乳類には、このファミリーの５つの主要メンバーがある：ＲｅｌＡ（ｐ６５）、ＲｅｌＢ、ｃ－Ｒｅｌ、ｐ５０／ｐ１０５（ＮＦ－κＢ１としても既知）及びｐ１００／５２（ＮＦ－κＢ２としても既知）。ＮＦ－κＢシグナルは、様々な上流刺激に応答して活性化される。いかなる活性化シグナルもない場合、ＮＦ－κＢ（ＩκＢ）タンパク質の阻害剤は、不活性なＮＦ－κＢタンパク質と共に複合体を形成し、細胞質に留まる。活性化シグナルに続いて、２つのキナーゼＩＫＫ１（ＩＫＫα）、ＩＫＫ２（ＩＫＫβ）、及び調節サブユニットＮＥＭＯ（ＩＫＫγ）で構成されるＩκＢキナーゼ（ＩＫＫ）複合体は、ＩκＢをリン酸化し、これは、ユビキチン化及びそれに続くＩκＢの分解を引き起こす。これにより、ＮＦ－κＢ複合体が細胞質から核に放出され、それらは、標的遺伝子の発現を活性化する。それ故、ＩＫＫ複合体は、ＩＫＫ複合体の制御解除された活性化が有害な下流の結果につながり得るので、ＮＦ－κＢシグナルのカスケード全体で主要な役割を果たす。ＩＫＫ複合体は、２つのアミノ（Ｎ）末端調節セリン残基でＩκＢタンパク質をリン酸化する。標準的なＮＦ－κＢシグナル伝達経路の大部分では、ＩＫＫ２が必要であり、ＩκＢをリン酸化してＮＦ－κＢを活性化するのに十分である。（Ｎａｋａｇａｗａ，Ｍ．Ｍ．，Ｃｈｅｎ，Ｈ．，＆Ｒａｔｈｉｎａｍ，Ｃ．Ｖ．（２０１８）．ＣｏｎｓｔｉｔｕｔｉｖｅＡｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆＮＦ－κＢＰａｔｈｗａｙｉｎＨｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃＳｔｅｍＣｅｌｌｓＣａｕｓｅｓＬｏｓｓｏｆＱｕｉｅｓｃｅｎｃｅａｎｄＤｅｒｅｇｕｌａｔｅｄＴｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎＦａｃｔｏｒＮｅｔｗｏｒｋｓ．Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓｉｎｃｅｌｌａｎｄｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌｂｉｏｌｏｇｙ，６，１４３）。

ＨＳＣニッチにおけるＮＦ－κＢとの関連で、ＮＦ－κＢは、ＴＬＲ及び前炎症性サイトカインの両方により伝達されるシグナルの主要な下流エフェクターである。制御されていないＮＦ－κＢ活性は、ＴＮＦ、ＩＬ１、ＩＬ６、及びＩＦＮ－γを含む前炎症性サイトカインの発現の増加をもたらす。ＮＦ－κＢシグナル伝達の負の調節回路の欠陥は、静止状態の喪失及びＨＳＣの早期枯渇を引き起こす。これらの研究は、ＨＳＣ静止におけるＮＦ－κＢ経路の重要性を強調するが、ＮＦ－κＢシグナルの下流への影響及びＮＦ－κＢがＨＳＣを制御する正確な機序は、ほとんど知られていないままである。ＮＦ－κＢの構成的活性化は、骨髄性新生物を含む様々なタイプのヒト疾患で記述されている。例えば、ＮＦ－κＢは、白血病幹細胞（ＬＳＣ）で構成的に活性であることが示されている。（Ｎａｋａｇａｗａ，Ｍ．Ｍ．，Ｃｈｅｎ，Ｈ．，＆Ｒａｔｈｉｎａｍ，Ｃ．Ｖ．（２０１８）．ＣｏｎｓｔｉｔｕｔｉｖｅＡｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆＮＦ－κＢＰａｔｈｗａｙｉｎＨｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃＳｔｅｍＣｅｌｌｓＣａｕｓｅｓＬｏｓｓｏｆＱｕｉｅｓｃｅｎｃｅａｎｄＤｅｒｅｇｕｌａｔｅｄＴｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎＦａｃｔｏｒＮｅｔｗｏｒｋｓ．Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓｉｎｃｅｌｌａｎｄｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌｂｉｏｌｏｇｙ，６，１４３）。

前炎症性応答を生じるための静止状態のＥＣの活性化は、通常、転写因子核因子κＢ（ＮＦ－κΒ）により引き起こされ、これは、ＴＮＦ－α、インターロイキン－１（ＩＬ－１）、Ｅ－セレクチン、血管細胞接着分子１（ＶＣＡＭ－１）、及び細胞間接着分子１（ＩＣＡＭ－１）を含む前炎症性遺伝子の転写を活性化するだけでなく、ＥＣをアポトーシスに対してより感受性があるようにする（Ｊｉｎ，Ｚ．，ｅｔａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｓｃｉ．（２０１９）２０（１）：１７２；Ｐｏｂｅｒ，ＪＳ，Ｓｅｓｓａ，ＷＣ，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２００７）７：８０３－８１５；Ａｏｋｉ，Ｍ．ｅｔａｌ．，Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ（２００１）３８：４８－５５；Ｋｅｍｐｅ，Ｓ．ｅｔａｌ．，ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓ．（２００５）３３：５３０８－５３１９を引用）。

前炎症性免疫調節因子の役割は、成体ＨＳＣ機能に限定されない。研究によると、前炎症性経路、例えば、典型的な前炎症性転写因子ＮＦ－κＢは、脊椎動物及び無脊椎動物の両方で胚形成時の造血系の形成に関連することが判明している。他の免疫調節剤も、ＨＳＣ仕様（同一性）、造血系形成中の出現及び維持に影響を及ぼす。例えば、免疫細胞の機能、増殖、及び分化を調節するサイトカインであるＩＬ－３は、ＨＳＣ仕様の必須の転写因子であるＲｕｎｘ１の下流で作用することにより、ＨＳＣ仕様の部位であるマウス大動脈－性腺－中腎（ＡＧＭ）領域におけるＨＳＣの生存期間を促進することが判明している。別の例では、炎症の調節因子であるＩＬ－１が、ＨＳＣ増殖を促進することにより、ＨＳＣの発生に積極的な役割を果たす。炎症の主要な調節因子であるプロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）は、ｃＡＭＰ／ＰＫＡ媒介性安定化リン酸化イベントを介してベータ－カテニン分解のレベルで、ＨＳＣのＷｎｔを自律的に制御することにより、ＨＳＣの出現または増殖の強力な誘導因子であることも示されている。（Ｅｓｐｉｎ－Ｐａｌａｚｏｎ，Ｒ．，Ｗｅｉｊｔｓ，Ｂ．，Ｍｕｌｅｒｏ，Ｖ．＆Ｔｒａｖｅｒ，Ｄ．ＰｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙＳｉｇｎａｌｓａｓＦｕｅｌｆｏｒｔｈｅＦｉｒｅｏｆＨｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃＳｔｅｍＣｅｌｌＥｍｅｒｇｅｎｃｅ．Ｔｒｅｎｄｓｉｎｃｅｌｌｂｉｏｌｏｇｙ２８，５８－６６，ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｔｃｂ．２０１７．０８．００３（２０１８））。

ＨＳＣの運命決定は、前炎症性サイトカインＴＮＦα、ＩＦＮγ、及びＩＬ－１βに関連しており、ＴＬＲ４シグナル伝達に加えて、これらのサイトカインは、それぞれＨＳＣ仕様の重要な決定要因である。ＴＮＦαは、造血能を獲得し、例えば、胚外卵黄嚢及び胚性大動脈－性腺－中腎において、狭い発達ウィンドウの間に、多系列の造血幹細胞及び前駆細胞を生じさせ得る発達中の血管内皮細胞の特殊なサブセットである造血内皮細胞（ＨＥ）からＨＳＣを特定するために、ＴＮＦ受容体２（ＴＮＦＲ２）を介して作用する。（Ｇｒｉｚ，Ｅ．“Ｓｐｅｃｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄｆｕｎｃｔｉｏｎｏｆｈｅｍｏｇｅｎｉｃｅｎｄｏｔｈｅｌｉｕｍｄｕｒｉｎｇｅｍｂｒｙｏｇｅｎｅｓｉｓ，”ＣｅｌｌＭｏｌ．ＬｉｆｅＳｃｉ．（２０１６）７３：１５４７－６７）。ＴＮＦＲ２の作用は、背側大動脈のＨＳＣ仕様に不可欠なＮｏｔｃｈリガンドであるｊａｇ１ａの発現に必要とされる。Ｊａｇ１シグナルの発現は、ＨＳＣの運命を確立するのを助けるために、隣接する造血内皮細胞（すなわち、ＨＳＰＣが由来する特殊な内皮細胞）上のＮｏｔｃｈ１ａ受容体にシグナル伝達する。前炎症性転写因子ＮＦ－κＢは、新生ＨＳＣで活性があることが判明している。ＴＮＦＲ２、ＮＦ－κＢメンバーｐ６５、及びＴＬＲ４は全て、ＨＳＣで上方調節される。さらに、ＴＬＲ４、ＩＬ－１β、及びＴＮＦαは、ＮＦ－κＢ及びＮｏｔｃｈの上流で作用することにより、ＨＳＣ仕様に必要とされる。内皮細胞ではなくＨＳＣが、ＩＦＮに迅速に応答することが実証された。ＩＦＮ－α４及びＩＦＮ－γは、それぞれ、ＩＦＮαＲ１及びＩＦＮγＲ１を介した脊椎動物全体のＨＳＣ仕様にも必要とされる。ＴＮＦ－α及びＴＬＲ４シグナル伝達とは異なり、ＩＦＮ－γは、Ｓｔａｔ３を活性化することにより、Ｎｏｔｃｈシグナル伝達及び血流の下流で作用する。ＩＦＮ－γシグナル伝達は、ＨＥで自律的に作用する。（Ｅｓｐｉｎ－Ｐａｌａｚｏｎ，Ｒ．，Ｗｅｉｊｔｓ，Ｂ．，Ｍｕｌｅｒｏ，Ｖ．＆Ｔｒａｖｅｒ，Ｄ．ＰｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙＳｉｇｎａｌｓａｓＦｕｅｌｆｏｒｔｈｅＦｉｒｅｏｆＨｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃＳｔｅｍＣｅｌｌＥｍｅｒｇｅｎｃｅ．Ｔｒｅｎｄｓｉｎｃｅｌｌｂｉｏｌｏｇｙ２８，５８－６６，ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｔｃｂ．２０１７．０８．００３（２０１８））。

造血系形成中の前炎症性サイトカインの細胞源は周知でない。（Ｅｓｐｉｎ－Ｐａｌａｚｏｎ，Ｒ．，Ｗｅｉｊｔｓ，Ｂ．，Ｍｕｌｅｒｏ，Ｖ．＆Ｔｒａｖｅｒ，Ｄ．ＰｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙＳｉｇｎａｌｓａｓＦｕｅｌｆｏｒｔｈｅＦｉｒｅｏｆＨｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃＳｔｅｍＣｅｌｌＥｍｅｒｇｅｎｃｅ．Ｔｒｅｎｄｓｉｎｃｅｌｌｂｉｏｌｏｇｙ２８，５８－６６，ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｔｃｂ．２０１７．０８．００３（２０１８））。そのようなサイトカインは、ＨＳＣの分化に影響を与えることが既知である。定常状態では、血小板バイアスＨＳＣは、造血階層の最上位にあり、骨髄バイアスＨＳＣ及びリンパバイアスＨＳＣを生成することができる。骨髄バイアスＨＳＣは、平衡バイアスＨＳＣ及びリンパバイアスＨＳＣの両方を生成し得るが、リンパバイアスＨＳＣは、骨髄バイアス対応物を生成しない。血小板バイアスＨＳＣは、他のＨＳＣサブセットよりも速く血小板集団を再増殖させる可能性を有する。骨髄バイアスＨＳＣは、骨髄にコミットされた前駆細胞を介して骨髄系細胞を優先的に生じさせる。バランスＨＳＣは、骨髄系とリンパ系の両方に等しく貢献する。リンパ球バイアスＨＳＣは、主に、リンパ球にコミットされた前駆細胞を介して骨髄系細胞よりもリンパ球を生成する。炎症、特に、慢性炎症は、骨髄前駆細胞及び成熟骨髄細胞を含む骨髄系列の産生を増強し、これにより、造血における骨髄バイアスがもたらされる。（Ｋｏｖｔｏｎｙｕｋ，Ｌ．Ｖ．，Ｆｒｉｔｓｃｈ，Ｋ．，Ｆｅｎｇ，Ｘ．，Ｍａｎｚ，Ｍ．Ｇ．＆Ｔａｋｉｚａｗａ，Ｈ．Ｉｎｆｌａｍｍ－ＡｇｉｎｇｏｆＨｅｍａｔｏｐｏｉｅｓｉｓ，ＨｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃＳｔｅｍＣｅｌｌｓ，ａｎｄｔｈｅＢｏｎｅＭａｒｒｏｗＭｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ．Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓｉｎｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ７，５０２，ｄｏｉ：１０．３３８９／ｆｉｍｍｕ．２０１６．００５０２（２０１６））。

それ故、炎症は、造血の主要な駆動力であるが、持続性炎症は、ＨＳＣ自己複製能力の喪失、骨髄バイアス分化、及び白血病の素因を含む加齢関連造血障害の主要な駆動力として提案されている（Ｋｏｖｔｏｎｙｕｋ，Ｌ．Ｖ．，ｅｔａｌ．Ｉｎｆｌａｍｍ－ＡｇｉｎｇｏｆＨｅｍａｔｏｐｏｉｅｓｉｓ，ＨｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃＳｔｅｍＣｅｌｌｓ，ａｎｄｔｈｅＢｏｎｅＭａｒｒｏｗＭｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ．Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓｉｎｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（２０１６）７，５０２，ｄｏｉ：１０．３３８９／ｆｉｍｍｕ．２０１６．００５０）；Ｐｉｅｔｒａｓ，Ｅ．Ｍ．ｅｔａｌ．Ｃｈｒｏｎｉｃｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－１ｅｘｐｏｓｕｒｅｄｒｉｖｅｓｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌｓｔｏｗａｒｄｓｐｒｅｃｏｃｉｏｕｓｍｙｅｌｏｉｄｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎａｔｔｈｅｅｘｐｅｎｓｅｏｆｓｅｌｆ－ｒｅｎｅｗａｌ．Ｎａｔｕｒｅｃｅｌｌｂｉｏｌｏｇｙ（２０１６）１８，６０７－６１８，ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｃｂ３３４６；Ｌｕｓｓａｎａ，Ｆ．＆Ｒａｍｂａｌｄｉ，Ａ．Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎａｎｄｍｙｅｌｏｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅｎｅｏｐｌａｓｍｓ．Ｊｏｕｒｎａｌｏｆａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ（２０１７）８５，５８－６３，ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｊａｕｔ．２０１７．０６．０１０；Ｐｉｅｔｒａｓ，Ｅ．Ｍ．Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ：ａｋｅｙｒｅｇｕｌａｔｏｒｏｆｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌｆａｔｅｉｎｈｅａｌｔｈａｎｄｄｉｓｅａｓｅ．Ｂｌｏｏｄ（２０１７）１３０，１６９３－１６９８，ｄｏｉ：１０．１１８２／ｂｌｏｏｄ－２０１７－０６－７８０８８２）。

成長する証拠は、造血細胞及びニッチの間のクロストークが、骨髄（ＢＭ）内の慢性炎症を開始及び維持することを示すが、このプロセスにおけるそれらの正確な寄与は不明のままである。（Ｋｏｖｔｏｎｙｕｋ，Ｌ．Ｖ．，ｅｔａｌ．Ｉｎｆｌａｍｍ－ＡｇｉｎｇｏｆＨｅｍａｔｏｐｏｉｅｓｉｓ，ＨｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃＳｔｅｍＣｅｌｌｓ，ａｎｄｔｈｅＢｏｎｅＭａｒｒｏｗＭｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ．Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓｉｎｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（２０１６）７，５０２，ｄｏｉ：１０．３３８９／ｆｉｍｍｕ．２０１６．００５０）；Ｐｉｅｔｒａｓ，Ｅ．Ｍ．ｅｔａｌ．Ｃｈｒｏｎｉｃｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－１ｅｘｐｏｓｕｒｅｄｒｉｖｅｓｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌｓｔｏｗａｒｄｓｐｒｅｃｏｃｉｏｕｓｍｙｅｌｏｉｄｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎａｔｔｈｅｅｘｐｅｎｓｅｏｆｓｅｌｆ－ｒｅｎｅｗａｌ．Ｎａｔｕｒｅｃｅｌｌｂｉｏｌｏｇｙ（２０１６）１８，６０７－６１８，ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｃｂ３３４６；Ｌｕｓｓａｎａ，Ｆ．＆Ｒａｍｂａｌｄｉ，Ａ．Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎａｎｄｍｙｅｌｏｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅｎｅｏｐｌａｓｍｓ．Ｊｏｕｒｎａｌｏｆａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ（２０１７）８５，５８－６３，ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｊａｕｔ．２０１７．０６．０１０；Ｐｉｅｔｒａｓ，Ｅ．Ｍ．Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ：ａｋｅｙｒｅｇｕｌａｔｏｒｏｆｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌｆａｔｅｉｎｈｅａｌｔｈａｎｄｄｉｓｅａｓｅ．Ｂｌｏｏｄ（２０１７）１３０，１６９３－１６９８，ｄｏｉ：１０．１１８２／ｂｌｏｏｄ－２０１７－０６－７８０８８２）。

ＢＭ微小環境内では、内皮細胞（ＥＣ）は、ＨＳＣ調節パラクリン因子の多様な配列の発現により示されるように、ＨＳＣを支持する血管周囲ニッチの不可欠な構成要素として確立されている（Ｈｏｏｐｅｒ，Ａ．Ｔ．ｅｔａｌ．ＥｎｇｒａｆｔｍｅｎｔａｎｄｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎｏｆｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｓｉｓｉｓｄｅｐｅｎｄｅｎｔｏｎＶＥＧＦＲ２－ｍｅｄｉａｔｅｄｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｏｆｓｉｎｕｓｏｉｄａｌｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓ．Ｃｅｌｌｓｔｅｍｃｅｌｌ（２００９）４，２６３－２７４，ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｓｔｅｍ．２００９．０１．００６；Ｂｕｔｌｅｒ，Ｊ．Ｍ．ｅｔａｌ．Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓａｒｅｅｓｓｅｎｔｉａｌｆｏｒｔｈｅｓｅｌｆ－ｒｅｎｅｗａｌａｎｄｒｅｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｏｆＮｏｔｃｈｄｅｐｅｎｄｅｎｔｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌｓ．Ｃｅｌｌｓｔｅｍｃｅｌｌ（２０１０）６，２５１－２６４，ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｓｔｅｍ．２０１０．０２．００１；Ｋｏｂａｙａｓｈｉ，Ｈ．ｅｔａｌ．ＡｎｇｉｏｃｒｉｎｅｆａｃｔｏｒｓｆｒｏｍＡｋｔ－ａｃｔｉｖａｔｅｄｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓｂａｌａｎｃｅｓｅｌｆ－ｒｅｎｅｗａｌａｎｄｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｏｆｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌｓ．Ｎａｔｕｒｅｃｅｌｌｂｉｏｌｏｇｙ（２０１０）１２，１０４６－１０５６，ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｃｂ２１０８；Ｗｉｎｋｌｅｒ，Ｉ．Ｇ．ｅｔａｌ．ＶａｓｃｕｌａｒｎｉｃｈｅＥ－ｓｅｌｅｃｔｉｎｒｅｇｕｌａｔｅｓｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌｄｏｒｍａｎｃｙ，ｓｅｌｆｒｅｎｅｗａｌａｎｄｃｈｅｍｏｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ．Ｎａｔｕｒｅｍｅｄｉｃｉｎｅ（２０１２）１８，１６５１－１６５７，ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｍ．２９６９；Ｄｉｎｇ，Ｌ．，ｅｔａｌ．，Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌａｎｄｐｅｒｉｖａｓｃｕｌａｒｃｅｌｌｓｍａｉｎｔａｉｎｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌｓ．Ｎａｔｕｒｅ（２０１２）４８１，４５７－４６２，ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎａｔｕｒｅ１０７８３；Ｐｏｕｌｏｓ，Ｍ．Ｇ．ｅｔａｌ．Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｊａｇｇｅｄ－１ｉｓｎｅｃｅｓｓａｒｙｆｏｒｈｏｍｅｏｓｔａｔｉｃａｎｄｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅ９４７ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｓｉｓ．Ｃｅｌｌｒｅｐｏｒｔｓ（２０１３）４，１０２２－１０３４，ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｃｅｌｒｅｐ．２０１３．０７．０４８；Ｇｒｅｅｎｂａｕｍ，Ａ．ｅｔａｌ．ＣＸＣＬ１２ｉｎｅａｒｌｙｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒｓｉｓｒｅｑｕｉｒｅｄｆｏｒｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｓｔｅｍ－ｃｅｌｌｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅ．Ｎａｔｕｒｅ（２０１３）４９５，２２７－２３０，ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎａｔｕｒｅ１１９２６；Ｄｏａｎ，Ｐ．Ｌ．ｅｔａｌ．Ｅｐｉｄｅｒｍａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｒｅｇｕｌａｔｅｓｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎａｆｔｅｒｒａｄｉａｔｉｏｎｉｎｊｕｒｙ．Ｎａｔｕｒｅｍｅｄｉｃｉｎｅ（２０１３）１９，２９５－３０４，ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｍ．３０７０；Ｐｏｕｌｏｓ，Ｍ．Ｇ．ｅｔａｌ．Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ－ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆＮＦ－ｋａｐｐａＢｅｎｈａｎｃｅｓｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｓｉｓ．ＮａｔＣｏｍｍｕｎ（２０１６）７，１３８２９，ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｃｏｍｍｓ１３８２９；Ｋｕｓｕｍｂｅ，Ａ．Ｐ．ｅｔａｌ．Ａｇｅ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｍｏｄｕｌａｔｉｏｎｏｆｖａｓｃｕｌａｒｎｉｃｈｅｓｆｏｒｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌｓ．Ｎａｔｕｒｅ（２０１６）５３２，３８０－３８４，ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎａｔｕｒｅ１７６３８；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｓ．Ｊ．＆Ｓｃａｄｄｅｎ，Ｄ．Ｔ．Ｔｈｅｂｏｎｅｍａｒｒｏｗｎｉｃｈｅｆｏｒｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌｓ．Ｎａｔｕｒｅ（２０１４）５０５，３２７－３３４，ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎａｔｕｒｅ１２９８４；Ｒａｆｉｉ，Ｓ．，Ｂｕｔｌｅｒ，Ｊ．Ｍ．＆Ｄｉｎｇ，Ｂ．Ｓ．Ａｎｇｉｏｃｒｉｎｅｆｕｎｃｔｉｏｎｓｏｆｏｒｇａｎ－ｓｐｅｃｉｆｉｃｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓ．Ｎａｔｕｒｅ（２０１６）５２９，３１６－３２５，ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎａｔｕｒｅ１７０４０）．内皮内のシグナル伝達経路の調節はまた、ニッチ活性に直接影響を及ぼし、それによりＨＳＣ自己複製及び系列のコミットメントの決定を調節することが示されている（Ｋｏｂａｙａｓｈｉ，Ｈ．ｅｔａｌ．ＡｎｇｉｏｃｒｉｎｅｆａｃｔｏｒｓｆｒｏｍＡｋｔ－ａｃｔｉｖａｔｅｄｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓｂａｌａｎｃｅｓｅｌｆ－ｒｅｎｅｗａｌａｎｄｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｏｆｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌｓ．Ｎａｔｕｒｅｃｅｌｌｂｉｏｌｏｇｙ（２０１０）１２，１０４６－１０５６，ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｃｂ２１０８（２０１０）；Ｐｏｕｌｏｓ，Ｍ．Ｇ．ｅｔａｌ．Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ－ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆＮＦ－ｋａｐｐａＢｅｎｈａｎｃｅｓｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｓｉｓ．ＮａｔＣｏｍｍｕｎ（２０１６）７，１３８２９，ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｃｏｍｍｓ１３８２９；Ｋｕｓｕｍｂｅ，Ａ．Ｐ．ｅｔａｌ．Ａｇｅ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｍｏｄｕｌａｔｉｏｎｏｆｖａｓｃｕｌａｒｎｉｃｈｅｓｆｏｒｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌｓ．Ｎａｔｕｒｅ（２０１６）５３２，３８０－３８４，ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎａｔｕｒｅ１７６３８）。組織特異的なニッチ細胞として機能することに加えて、内皮は、慢性炎症の重要な決定因子であり（Ｒａｆｉｉ，Ｓ．，Ｂｕｔｌｅｒ，Ｊ．Ｍ．＆Ｄｉｎｇ，Ｂ．Ｓ．Ａｎｇｉｏｃｒｉｎｅｆｕｎｃｔｉｏｎｓｏｆｏｒｇａｎ－ｓｐｅｃｉｆｉｃｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓ．Ｎａｔｕｒｅ（２０１６）５２９，３１６－３２５，ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎａｔｕｒｅ１７０４０；Ｐｏｂｅｒ，Ｊ．Ｓ．＆Ｓｅｓｓａ，Ｗ．Ｃ．Ｅｖｏｌｖｉｎｇｆｕｎｃｔｉｏｎｓｏｆｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓｉｎｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ．Ｎａｔｕｒｅｒｅｖｉｅｗｓ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（２００７）７，８０３－８１５，ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｒｉ２１７１）、ＩＬ－１及びＧ－ＣＳＦを含むＢＭ内のニッチ由来の炎症シグナルの重要な源として現れ、これは、急な要求に応じて骨髄造血を促進する（Ｐｉｅｔｒａｓ，Ｅ．Ｍ．ｅｔａｌ．Ｃｈｒｏｎｉｃｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－１ｅｘｐｏｓｕｒｅｄｒｉｖｅｓｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌｓｔｏｗａｒｄｓｐｒｅｃｏｃｉｏｕｓｍｙｅｌｏｉｄｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎａｔｔｈｅｅｘｐｅｎｓｅｏｆｓｅｌｆ－ｒｅｎｅｗａｌ．Ｎａｔｕｒｅｃｅｌｌｂｉｏｌｏｇｙ（２０１６）１８，６０７－６１８，ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｃｂ３３４６；Ｂｏｅｔｔｃｈｅｒ，Ｓ．ｅｔａｌ．ＥｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓｔｒａｎｓｌａｔｅｐａｔｈｏｇｅｎｓｉｇｎａｌｓｉｎｔｏＧ－ＣＳＦ－ｄｒｉｖｅｎｅｍｅｒｇｅｎｃｙｇｒａｎｕｌｏｐｏｉｅｓｉｓ．Ｂｌｏｏｄ（２０１４）１２４，１３９３－１４０３，ｄｏｉ：１０．１１８２／ｂｌｏｏｄ－２０１４－０４－５７０７６２）。持続的な内皮炎症は、Ｇ－ＣＳＦ及びＴＮＦαの発現を介した骨髄増殖性疾患の開始に関係している（Ｗａｎｇ，Ｌ．ｅｔａｌ．Ｎｏｔｃｈ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｒｅｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｍｉＲ－１５５ｉｎｔｈｅｂｏｎｅｍａｒｒｏｗｎｉｃｈｅｒｅｇｕｌａｔｅｓｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｓｉｓｉｎａｎＮＦ－ｋａｐｐａＢ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｍａｎｎｅｒ．Ｃｅｌｌｓｔｅｍｃｅｌｌ（２０１４）１５，５１－６５，ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｓｔｅｍ．２０１４．０４．０２１）。しかし、ニッチ活性及びＨＳＣ機能に影響を与えるＢＭ微小環境内の慢性内皮炎症を媒介するシグナル伝達経路は、依然として、よく理解されていない。

ＮＦ－κＢ及びＭＡＰＫは、内皮細胞内の慢性炎症性応答を調節する主要なシグナル伝達経路である（Ｐｏｂｅｒ，Ｊ．Ｓ．＆Ｓｅｓｓａ，Ｗ．Ｃ．Ｅｖｏｌｖｉｎｇｆｕｎｃｔｉｏｎｓｏｆｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓｉｎｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ．Ｎａｔｕｒｅｒｅｖｉｅｗｓ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（２００７）７，８０３－８１５，ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｒｉ２１７１）。しかし、ＢＭ内皮ニッチ内の炎症の調節及びＨＳＣ機能への付随する影響におけるそれらの役割は、依然として、調査されていない。内皮内のＮＦ－κＢシグナル伝達の抑制が、部分的に、前炎症性サイトカインを減少させることにより、骨髄抑制後の定常状態の造血及び再生を促進することを、以前の研究は示している（Ｐｏｕｌｏｓ，Ｍ．Ｇ．ｅｔａｌ．Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ－ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆＮＦ－ｋａｐｐａＢｅｎｈａｎｃｅｓｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｓｉｓ．ＮａｔＣｏｍｍｕｎ（２０１６）７，１３８２９，ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｃｏｍｍｓ１３８２９）。内皮ＭＡＰＫが、ＬＰＳ誘導性顆粒球形成及びアテローム性動脈硬化症に関連する慢性血管炎症を含む炎症プロセスにおいて重要な役割を果たすことを、最近の報告は示唆する（Ｓａｎｃｈｅｚ，Ａ．ｅｔａｌ．Ｍａｐ３ｋ８ｃｏｎｔｒｏｌｓｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅｃｏｌｏｎｙ－ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇｆａｃｔｏｒｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎａｎｄｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌｐｒｅｃｕｒｓｏｒｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｉｎｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ－ｉｎｄｕｃｅｄｅｍｅｒｇｅｎｃｙｇｒａｎｕｌｏｐｏｉｅｓｉｓ．ＳｃｉＲｅｐ（２０１７）７，５０１０，ｄｏｉ：１０．１０３８／ｓ４１５９８－０１７－０４５３８－３；ＲｏｔｈＦｌａｃｈ，Ｒ．Ｊ．ｅｔａｌ．ＥｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅＭＡＰ４Ｋ４ｐｒｏｍｏｔｅｓｖａｓｃｕｌａｒｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎａｎｄａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ．ＮａｔＣｏｍｍｕｎ（２０１５）６，８９９５，ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｃｏｍｍｓ９９９５）。ｅｘｖｉｖｏニッチモデルシステムを利用して、内皮ＭＡＰＫ活性化が、炎症性ストレスを示唆する特徴である自己複製を犠牲にして、共培養されたＨＳＣの骨髄バイアス分化を引き起こすことが実証されている（Ｋｏｂａｙａｓｈｉ，Ｈ．ｅｔａｌ．ＡｎｇｉｏｃｒｉｎｅｆａｃｔｏｒｓｆｒｏｍＡｋｔ－ａｃｔｉｖａｔｅｄｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓｂａｌａｎｃｅｓｅｌｆ－ｒｅｎｅｗａｌａｎｄｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｏｆｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌｓ．Ｎａｔｕｒｅｃｅｌｌｂｉｏｌｏｇｙ（２０１０）１２，１０４６－１０５６，ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｃｂ２１０８）。

骨髄破壊的治療
造血系の再構成が必要な患者では、調製レジメンまたはコンディショニングレジメンは、２つの目標：宿主拒絶を防ぐのに十分な免疫切除の提供及び腫瘍細胞減少／疾患根絶の提供を達成するために、手順の一部として実施される。強度は、診断及び寛解状態などの疾患関連要因、ならびに年齢、ドナーの利用可能性、及び併発状態の存在などの患者関連要因に基づいて変動し得るので、コンディショニングレジメンには様々な変形形態がある。コンディショニングレジメンは、高用量（骨髄破壊的）、強度の低減、及び非骨髄破壊的療法に分類されている。（Ｇｙｕｒｋｏｃｚａ，Ｂｏｇｌａｒｋａ，ａｎｄＢｒｅｎｄａＭＳａｎｄｍａｉｅｒ．“Ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｉｎｇｒｅｇｉｍｅｎｓｆｏｒｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｃｅｌｌｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ：ｏｎｅｓｉｚｅｄｏｅｓｎｏｔｆｉｔａｌｌ．”Ｂｌｏｏｄ（２０１４）ｖｏｌ．１２４，３：３４４－５３）。骨髄破壊的治療（ＭＢＴ）は、免疫系及び造血系、ならびに体内の全ての悪性細胞を根絶するための、大量化学療法（ＨＤＣ）または全身照射（ＴＢＩ）を伴うＨＤＣでの患者の処置を指す。通常、ＭＢＴを受ける患者は、骨髄移植、幹細胞移植、または造血細胞移植（本明細書では「幹細胞レスキュー」または「ＳＣＲ」と呼ばれる）の調製としてそれを行っており；しかし、以下の表３に示されるように、ＭＢＴは、ＳＣＲが有益であることが示されていない様々なタイプの悪性腫瘍の処置タイプとしても使用することができる。（Ｒｉｌｅｙ，ｅｔａｌ．，“ＨｅｍａｔｏｌｏｇｉｃＡｓｐｅｃｔｓｏｆＭｙｅｌｏａｂｌａｔｉｖｅＴｈｅｒａｐｙａｎｄＢｏｎｅＭａｒｒｏｗＴｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ．“ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｌｉｎｉｃａｌＬａｂｏｒａｔｏｒｙＡｎａｌｙｓｉｓ（２００５）１９：４７－７９）。

一般に、ＭＢＴレジメンは、アルキル化剤（単剤タイプまたは複数）を含むＨＤＣで構成され、ＴＢＩの有無にかかわらず提供される。そのようなレジメンは、骨髄造血を切除し、それにより、自家血液学的回復を可能にしないことが予想される。（Ｇｙｕｒｋｏｃｚａ，Ｂｏｇｌａｒｋａ，ａｎｄＢｒｅｎｄａＭＳａｎｄｍａｉｅｒ．“Ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｉｎｇｒｅｇｉｍｅｎｓｆｏｒｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｃｅｌｌｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ：ｏｎｅｓｉｚｅｄｏｅｓｎｏｔｆｉｔａｌｌ．”Ｂｌｏｏｄ（２０１４）ｖｏｌ．１２４，３：３４４－５３）。特定のＭＢＴレジメンの例は、以下の表４に示され、部分的には、以下で再現することができる：Ａｔｉｌｌａ，Ｅ．，ＡｔａｃａＡｔｉｌｌａ，Ｐ．，＆Ｄｅｍｉｒｅｒ，Ｔ．ＡＲｅｖｉｅｗｏｆＭｙｅｌｏａｂｌａｔｉｖｅｖｓＲｅｄｕｃｅｄＩｎｔｅｎｓｉｔｙ／Ｎｏｎ－ＭｙｅｌｏａｂｌａｔｉｖｅＲｅｇｉｍｅｎｓｉｎＡｌｌｏｇｅｎｅｉｃＨｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃＳｔｅｍＣｅｌｌＴｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎｓ．Ｂａｌｋａｎｍｅｄｉｃａｌｊｏｕｒｎａｌ，（２０１７）３４（１），１－９。

全身照射（ＴＢＩ）。ＴＢＩ及び高線量ＴＢＩは、その免疫抑制特性、ほとんどの白血病及びリンパ腫に対する有効性、ならびに保護部位への透過能力により、コンディショニングレジメンの一部として広く使用される。レジメンの大部分は、通常分割される（放射線の総線量が数日間にわたっていくつかのより少ない線量に分割される場合を意味する）１２～１６ＧｙのＴＢＩを、他の化学療法剤、最も一般的には、シクロホスファミドと、その抗悪性腫瘍及び免疫調節特性に基づいて組み合わせた。一般に、高線量のＴＢＩは、再発リスクを低減するが、増加した、多くの場合、致命的な胃腸毒性、肝臓毒性、及び肺毒性、続発性悪性腫瘍、ならびに子供の成長及び発達の障害をもたらした。照射線量に加えて、線量率、分割、分割の間隔、及び放射線源（例えば、コバルト６０対線形加速器）などの他の要因は、また、ＴＢＩの抗腫瘍及び毒性作用の両方に影響を与え得る。分割は、白血病細胞とは対照的に、正常組織に保持される完全な修復機序の割合が高いことによる、臓器毒性の低下をもたらしたが、抗腫瘍効果も持続した。肺シールドを伴う過分割（１日当たり複数の分割）により、間質性肺炎の発病率が４％減少し、肺シールドを伴わない単回ＴＢＩで観察された５０％から減少した。現在使用されているＴＢＩスケジュールの大部分は、分割または過分割のいずれかである。シクロホスファミドに加えて、シタラビン（ＡｒａＣ）、エトポシド、メルファラン、及びブスルファンなどの様々な薬剤が、コンディショニングレジメンとして高線量ＴＢＩと組み合わされている。（Ｇｙｕｒｋｏｃｚａ，Ｂｏｇｌａｒｋａ，ａｎｄＢｒｅｎｄａＭＳａｎｄｍａｉｅｒ．“Ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｉｎｇｒｅｇｉｍｅｎｓｆｏｒｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｃｅｌｌｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ：ｏｎｅｓｉｚｅｄｏｅｓｎｏｔｆｉｔａｌｌ．”Ｂｌｏｏｄ（２０１４）ｖｏｌ．１２４，３：３４４－５３）。

高線量ＴＢＩの施行は、即時及び遅延毒性に関連するが、コンディショニングレジメンのどの構成要素が所与のあらゆる毒性の原因であるかを、必ずしも区別することができるわけではない。悪心、嘔吐、一過性の急性耳下腺炎、口内乾燥症、粘膜炎、及び下痢は、一般的に、観察される急性合併症である。間質性肺炎、特発性肺線維症、及び肺の肺機能の低下も、高線量のＴＢＩに関連し得る。さらに、高線量のＴＢＩ後に、腎障害が生じ得、遅延し得る（すなわち、最大約２年）。類洞閉塞症候群（ＳＯＳ；以前は肝臓の静脈閉塞症として既知）の発症は、以下に記載の化学療法ベースのレジメンでより一般的である。高線量ＴＢＩの長期的な副作用は、不妊症、白内障の形成、甲状腺機能亢進症及び甲状腺炎、ならびに続発性悪性腫瘍を含む。（Ｇｙｕｒｋｏｃｚａ，Ｂｏｇｌａｒｋａ，ａｎｄＢｒｅｎｄａＭＳａｎｄｍａｉｅｒ．“Ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｉｎｇｒｅｇｉｍｅｎｓｆｏｒｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｃｅｌｌｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ：ｏｎｅｓｉｚｅｄｏｅｓｎｏｔｆｉｔａｌｌ．”Ｂｌｏｏｄ（２０１４）ｖｏｌ．１２４，３：３４４－５３）。

大量化学療法（ＨＤＣ）。ＨＤＣの主要構成要素は、好ましい毒性プロファイル（用量制限毒性としての骨髄毒性）及び非分裂腫瘍または悪性細胞に対するそれらの効果による、アルキル化剤の送達である。使用することができる他の薬剤には、アントラサイクリン及びタキサンが挙げられる。特に、以前に放射線療法を受けた患者において、高用量のＴＢＩに関連する短期及び長期の毒性を回避するために、大量化学療法ベースのレジメンは、ＴＢＩが追加の化学療法剤に置き換えられる自家及び同種異系の設定の両方で開発されている。アルカリ化剤（Ａｌｋａｌｙａｔｉｎｇａｇｅｎｔｓ）は、多くの場合、免疫抑制剤と共に送達され、処置は、ブスルファン、シクロホスファミド、またはフルダラビン、メルファラン、チオテパ、エトポシド、及びトレオスルファンなど、ならびにそのような治療薬の組み合わせを含み得る。（Ｇｙｕｒｋｏｃｚａ，Ｂｏｇｌａｒｋａ，ａｎｄＢｒｅｎｄａＭＳａｎｄｍａｉｅｒ．“Ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｉｎｇｒｅｇｉｍｅｎｓｆｏｒｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｃｅｌｌｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ：ｏｎｅｓｉｚｅｄｏｅｓｎｏｔｆｉｔａｌｌ．”Ｂｌｏｏｄ（２０１４）ｖｏｌ．１２４，３：３４４－５３）。

ＭＢＴの形態学的影響。ＭＢＴを受けている患者の骨髄の形態学的特徴は、細胞死及び造血再構成の重複するプロセスにより決定される。積極的な化学療法は、単独でまたはＴＢＩと共に、数日間でほぼ全ての造血細胞及び免疫細胞の除去をもたらす。この期間の終わりに、骨髄は、非常に低細胞性であり、インタクトな間質は、フィブリノイド壊死に似た均質な過ヨウ素酸シッフ（ＰＡＳ）陽性のタンパク性漏出液を含有する。ごく少ない残存形質細胞及びマクロファージが通常存在し、血管の鬱血、非特異的出血の領域、小さな非乾酪性肉芽腫、間質浮腫、好酸球増加症、軽度のレチクリン線維症、副鼻腔拡張症、骨細胞壊死、及び他の異常が見られることがある。幹細胞レスキューの有無にかかわらず、ＭＢＴ後の赤血球、血小板、及び顆粒球の正常なレベルの回復に数週間の期間が必要とされるが、造血系の完全な機能的再構成が数年にわたって行われる。さらに、骨髄破壊的化学療法または骨髄移植後の、末梢血細胞数の相対的に急速な回復にもかかわらず、数ヶ月～数年間、連続する重度の細胞性及び体液性免疫不全がある。（Ｇｙｕｒｋｏｃｚａ，Ｂｏｇｌａｒｋａ，ａｎｄＢｒｅｎｄａＭＳａｎｄｍａｉｅｒ．“Ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｉｎｇｒｅｇｉｍｅｎｓｆｏｒｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｃｅｌｌｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ：ｏｎｅｓｉｚｅｄｏｅｓｎｏｔｆｉｔａｌｌ．”Ｂｌｏｏｄｖｏｌ．１２４，３（２０１４）：３４４－５３）。

骨髄から悪性前駆細胞をパージする骨髄破壊的及びコンディショニングレジメンはまた、非悪性の造血及び間質前駆細胞を除去または損傷する場合もあり、これにより、移植及び天然の幹細胞の再生能力の低下がもたらされる場合がある。この欠陥は、移植後の末梢血塗抹標本または骨髄生検の検査から、必ずしも明らかであるとは限らない。末梢血細胞数及び骨髄細胞性が移植前のレベルに達し得るものの、骨髄移植後も赤芽球及び巨核球の骨髄前駆細胞の重度の長期にわたる欠陥が、何年にわたり続き得る。骨形成系統の細胞の前駆間質区画であるコロニー形成単位－線維芽細胞（ＣＦＵ－ｆ）は、造血細胞の生存、増殖、及び分化に重要である。ＣＦＵ－ｆの再構成は、移植前の数に達するまでに１２年もかかることがあり、宿主由来のみである。

幹細胞レスキュー（ＳＣＲ）療法
幹細胞レスキュー（またはレスキュー移植）は、高用量の抗がん剤または放射線療法による処置により破壊された造血幹細胞を置き換える方法である。これは通常、処置前に保存された患者自身の幹細胞を使用して行われる。幹細胞は、骨髄が回復し、健康な血球を生成するのを助ける。幹細胞のレスキューはまた、より多くのがん細胞が死滅するように、より多くの化学療法または放射線療法を与えることを可能にし得る。

通常、ＭＢＴ後に、患者は、全身性悪性腫瘍、遺伝性代謝性疾患、または造血系もしくは免疫系の潜在的に致命的な疾患を治癒する目的で、骨髄または末梢血のいずれかから分離された造血幹細胞の注入を受けるであろう。骨髄不全、悪性腫瘍、ならびに先天性造血及び免疫不全状態の患者における骨髄移植の根本的理由は、罹患骨髄の除去後の骨髄再増殖のために正常な幹細胞を供給するためである。新しい骨髄の再生（「骨髄再構成」）は、幹細胞前駆細胞から、または、頻度は低いものの、残存宿主前駆細胞から、骨髄破壊的治療からの回復中に生じる。（Ｒｉｌｅｙ，ｅｔａｌ．，“ＨｅｍａｔｏｌｏｇｉｃＡｓｐｅｃｔｓｏｆＭｙｅｌｏａｂｌａｔｉｖｅＴｈｅｒａｐｙａｎｄＢｏｎｅＭａｒｒｏｗＴｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ．“ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｌｉｎｉｃａｌＬａｂｏｒａｔｏｒｙＡｎａｌｙｓｉｓ（２００５）１９：４７－７９）。

幹細胞レスキューの形態学的特徴。化学療法直後または移植後の期間に、通常、１～２週間の顕著な骨髄形成不全（発生の不完全、遅延、または欠陥を意味する）が続く。脂肪細胞の再生は、骨髄再生の最初の形態学的証拠を提供し、続いて、６～１４日目に、徐々に成熟して拡大する未成熟な単型造血細胞の微細なクラスターの出現が続く。これらのコロニーは、単一の造血系列（「単系」）の細胞、通常は、骨髄または赤血球で構成され、おそらく骨髄移植患者のコミットされた幹細胞から生じる。再生コロニーは、骨髄移植のみを受けている患者の傍小柱であり、幹細胞移植後に間質性である傾向がある。移植後の非常に初期の造血は、通常、ポリクローナルであるが、モノクローナルであってよい。初期の赤血球生成島は、通常、赤血球異形成の特徴を示し得る大きな好塩基性正赤芽球の影響を受ける。造血再構成が続くにつれて、骨髄中の造血細胞の分布は、多くの場合、非定型であり、その結果、骨髄前駆体のクラスターは、小柱間領域に異常に局在し、赤血球前駆体は、骨内膜の近くで生じる。巨核球は、通常、最後に生着する。それらは、通常、小柱間領域の中央部分に局在しており、通常の散乱分布ではなく、クラスターで現れることがある。マクロファージ、偽ゴーシェ細胞、及び再生中の前骨髄球のシートも現れることがある。（Ｒｉｌｅｙ，ｅｔａｌ．，“ＨｅｍａｔｏｌｏｇｉｃＡｓｐｅｃｔｓｏｆＭｙｅｌｏａｂｌａｔｉｖｅＴｈｅｒａｐｙａｎｄＢｏｎｅＭａｒｒｏｗＴｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ．“ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｌｉｎｉｃａｌＬａｂｏｒａｔｏｒｙＡｎａｌｙｓｉｓ（２００５）１９：４７－７９）。

正常な骨髄細胞性への段階的な回復は、浮腫の解消、レチクリン線維症（レチクリン染色の増加を意味する）、及びフィブリノイド壊死（ピンク色であり、フィブリン（従ってフィブリノイド）に似ている小動脈または動脈の壁に生ずる壊死の一種を意味する）を伴い；それは、細胞壁の実際の死または壊死を表す）。骨髄は、移植後３週目までに約５０％の正常細胞であり、８～１２週までに正常細胞でなければならない。初期の造血から正常な骨髄細胞性への進行の経時変化は、非常に変動的であり；わずか１４日で正常な細胞性を達成し得る患者もいれば、数ヶ月を要する患者もいる。しかし、２８日が典型的である。生着の動態は、ドナー細胞の供給源（例えば、末梢血幹細胞、臍帯血、骨髄）、注入されたＣＤ３４＋細胞の用量、外因性造血増殖因子の種類及び用量（すなわち、Ｇ－ＣＳＦ、ｒｈＧＭ－ＣＳＦ、エリスロポエチン）、ならびにＨＬＡクロスマッチングにより決まる。骨髄の回復率は、移植された細胞のホーミング効率及びクローン原性能により、ならびに、注入された細胞が、注入前にｉｎｖｉｔｒｏで増殖したかどうかにより、影響を受ける。（Ｒｉｌｅｙ，ｅｔａｌ．，“ＨｅｍａｔｏｌｏｇｉｃＡｓｐｅｃｔｓｏｆＭｙｅｌｏａｂｌａｔｉｖｅＴｈｅｒａｐｙａｎｄＢｏｎｅＭａｒｒｏｗＴｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ．“ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｌｉｎｉｃａｌＬａｂｏｒａｔｏｒｙＡｎａｌｙｓｉｓ（２００５）１９：４７－７９）。

末梢血では、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）及び顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）により、総白血球数、ならびに好中球、単球、及び好酸球の絶対数の増加を引き起こす。骨髄に対するそれらの影響は、好酸球過形成、及び細胞性及び骨髄：赤血球（Ｍ：Ｅ）比の増加を含む。さらに、顕著に顆粒化及び／または空胞化した好中球及び好中球前駆体が末梢血及び骨髄の両方に現れる。（Ｒｉｌｅｙ，ｅｔａｌ．，“ＨｅｍａｔｏｌｏｇｉｃＡｓｐｅｃｔｓｏｆＭｙｅｌｏａｂｌａｔｉｖｅＴｈｅｒａｐｙａｎｄＢｏｎｅＭａｒｒｏｗＴｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ．“ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｌｉｎｉｃａｌＬａｂｏｒａｔｏｒｙＡｎａｌｙｓｉｓ（２００５）１９：４７－７９）．

ＭＢＴ及びＳＣＲの血液学的影響
骨髄移植による幹細胞のレスキューは、多くの場合、固形臓器移植と比較されるが、いくつかの点で独特である。骨髄が、液体の「臓器」であるので、互換性のある臓器のサイズ、胆管、及び尿管の閉塞、及び他の外科的問題は見られない。骨髄が正常な個体によって急速に補充されるので、死体の臓器は必要とされず、生きているドナーは、永続的な臓器の機能不全を維持しない。患者は、後の輸血（自家ＳＣＲ）のために自らの骨髄を提供し得る。しかし、別の個体から骨髄提供を受けている移植レシピエント（同種異系ＳＣＲ）は、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）として既知の移植片拒絶反応及び移植片による宿主拒絶反応の問題に直面する。さらに、骨髄移植レシピエントは、骨髄再構成が生じるまで、非常に免疫抑制され、それらは、この期間中は日和見感染及び他の障害に極めてかかりやすい。それ故、骨髄移植によるＳＣＲは、非常に費用のかかる仕事であり、大きな罹患率及び死亡率を有する。従って、この手順の適応は、限られており、潜在的なレシピエントは、徹底的で、潜在的に長いスクリーニングプロセスを受ける。（Ｒｉｌｅｙ，ｅｔａｌ．，“ＨｅｍａｔｏｌｏｇｉｃＡｓｐｅｃｔｓｏｆＭｙｅｌｏａｂｌａｔｉｖｅＴｈｅｒａｐｙａｎｄＢｏｎｅＭａｒｒｏｗＴｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ．“ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｌｉｎｉｃａｌＬａｂｏｒａｔｏｒｙＡｎａｌｙｓｉｓ（２００５）１９：４７－７９）。以下の表は、ＭＢＴ及び／またはＳＣＲの有害な血液学的結果の概要を簡潔に示す。

生着不全、急性移植片拒絶、及び移植の遅延
多くの要因が、骨髄移植によるＳＣＲ後の転帰不良（「移植片不全」）または直近に生着した骨髄組織の喪失（「移植片拒絶」）を引き起こし得る。一般に、最初の生着の不全（一次移植片不全）は、ドナー及びレシピエント間の遺伝的差異、損傷した幹細胞または不十分な数の幹細胞、不十分な免疫抑制または移植前コンディショニング、以前の複数回の血液輸血による同種免疫処置、生着材料の過剰なＴ細胞枯渇、宿主の骨髄における異常な微小環境、異常なドナー骨髄、薬物毒性、またはウイルス感染によるものである。生着後の移植片不全（二次移植片不全）は、薬物毒性、感染症、線維症、または細胞媒介性免疫反応の結果として生じる。（Ｒｉｌｅｙ，ｅｔａｌ．，“ＨｅｍａｔｏｌｏｇｉｃＡｓｐｅｃｔｓｏｆＭｙｅｌｏａｂｌａｔｉｖｅＴｈｅｒａｐｙａｎｄＢｏｎｅＭａｒｒｏｗＴｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ．“ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｌｉｎｉｃａｌＬａｂｏｒａｔｏｒｙＡｎａｌｙｓｉｓ（２００５）１９：４７－７９）。

免疫学的に媒介された骨髄急性移植片拒絶反応は、３つの状況：１）多重輸血された無形成性貧血患者、２）主要な組織適合性不一致ドナー由来の骨髄を受けた患者、及び、３）Ｔ細胞枯渇骨髄を受けた患者で特に一般的である。急性拒絶反応の発生率は、兄弟から免疫学的に操作されていないＨＬＡ適合移植を受けた患者では、わずか約１％であるが、Ｔ細胞枯渇表現型適合移植を受けた患者では、８～１５％に増加する。

移植片拒絶反応は、主に、移植前のコンディショニングレジメンを生き残り、同種移植された骨髄で増殖し、次に、ドナー細胞の成長を抑制し、ドナー標的に対する細胞媒介性応答を開始する宿主Ｔリンパ球によって引き起こされる。拒絶のわずかに異なる機序は、異なる患者集団内で含まれる場合がある。これは、サプレッサーＴリンパ球（ＣＤ３＋ＣＤ８＋ＣＤ５７＋）が、同種移植片拒絶反応を受けているＨＬＡ適合兄弟で優勢であるが、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＤ３＋ＣＤ８＋ＣＤ５７－）は、無関係のドナーからＨＬＡ適合同種移植片を受ける骨髄移植患者の拒絶で判明するためである。（Ｒｉｌｅｙ，ｅｔａｌ．，“ＨｅｍａｔｏｌｏｇｉｃＡｓｐｅｃｔｓｏｆＭｙｅｌｏａｂｌａｔｉｖｅＴｈｅｒａｐｙａｎｄＢｏｎｅＭａｒｒｏｗＴｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ．“ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｌｉｎｉｃａｌＬａｂｏｒａｔｏｒｙＡｎａｌｙｓｉｓ（２００５）１９：４７－７９）。

血小板の一次移植後の回復後の重度の血小板減少症（「二次血小板回復不全」または「ＳＦＰＲ」）は、重篤な合併症、不十分な臨床転帰、またはさらに死に関連する。血小板減少症は、同種異系移植を受けた患者のうち２０％もの多くの患者に生じるが、自家移植では発病率がはるかに低く（８％）なる。サイトメガロウイルス感染は、いくつかの研究者群によりＳＦＰＲの発症の重大な危険因子として関係するとされている。（Ｒｉｌｅｙ，ｅｔａｌ．，“ＨｅｍａｔｏｌｏｇｉｃＡｓｐｅｃｔｓｏｆＭｙｅｌｏａｂｌａｔｉｖｅＴｈｅｒａｐｙａｎｄＢｏｎｅＭａｒｒｏｗＴｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ．“ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｌｉｎｉｃａｌＬａｂｏｒａｔｏｒｙＡｎａｌｙｓｉｓ（２００５）１９：４７－７９）。

形態学的には、生着不全または生着遅延患者由来の骨髄穿刺塗抹標本は、著しく低細胞性であり、間質細胞が優勢であるが、コア生検及び血餅切片は、多くの場合、組織球（結合組織に存在する定常食細胞）のびまん性増殖を示す。（Ｒｉｌｅｙ，ｅｔａｌ．，“ＨｅｍａｔｏｌｏｇｉｃＡｓｐｅｃｔｓｏｆＭｙｅｌｏａｂｌａｔｉｖｅＴｈｅｒａｐｙａｎｄＢｏｎｅＭａｒｒｏｗＴｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ．“ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｌｉｎｉｃａｌＬａｂｏｒａｔｏｒｙＡｎａｌｙｓｉｓ（２００５）１９：４７－７９）。

臨床的には、初期の移植片不全（移植の５０日後を超えて）は、宿主Ｔリンパ球増加症（ＣＤ３＋、ＣＤ８＋、ＤＲ＋）により現れるが、後期の移植片不全（移植の５０日以降）は、遅発性顆粒球形成再生、不明熱、及び腹部の総合的症状の症候群と関連する。移植片拒絶反応は、多くの場合、進行性リンパ球増加症（リンパ球数の増加）及び絶対好中球数の突然の低下の後に生じる。継続的に良好な生着の場合の予後は、リンパ球増加症が生じると不良となるが、ドナーリンパ球の注入は、少ない患者で良好であった。高リスク患者の予防療法は、プレコンディショニングレジメンに全身照射、全リンパ節照射、または免疫抑制剤の増加が含まれることに向けられる。（Ｒｉｌｅｙ，ｅｔａｌ．，“ＨｅｍａｔｏｌｏｇｉｃＡｓｐｅｃｔｓｏｆＭｙｅｌｏａｂｌａｔｉｖｅＴｈｅｒａｐｙａｎｄＢｏｎｅＭａｒｒｏｗＴｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ．“ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｌｉｎｉｃａｌＬａｂｏｒａｔｏｒｙＡｎａｌｙｓｉｓ（２００５）１９：４７－７９）。

微小残存病変（ＭＲＤ）
ＭＲＤは、寛解誘導療法（抗がん剤を用いる初期の処置を意味する）後の骨髄における白血病細胞の持続性であり、従来の形態学的評価による検出限界を下回る。これらの残存白血病細胞は、様々な形態の白血病からの「完全な」形態学的寛解を達成し、それにより、残存または再発骨髄疾患がもたらされる多くの患者において疾患再発の起こりうる原因であると考えられる。臨床的に適切なレベルのＭＲＤ検出の感度は確立されておらず、非常に少数の残存細胞を根絶する追加の治療法が、臨床及び形態学的寛解の患者の生存率を改善することも証明されていない。（Ｒｉｌｅｙ，ｅｔａｌ．，“ＨｅｍａｔｏｌｏｇｉｃＡｓｐｅｃｔｓｏｆＭｙｅｌｏａｂｌａｔｉｖｅＴｈｅｒａｐｙａｎｄＢｏｎｅＭａｒｒｏｗＴｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ．“ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｌｉｎｉｃａｌＬａｂｏｒａｔｏｒｙＡｎａｌｙｓｉｓ（２００５）１９：４７－７９）。

移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）
ＧＶＨＤは、同種骨髄移植後の罹患率及び死亡率の主な原因である。それは、組織適合性骨髄輸血の症例の約５０％で生じ、ＨＬＡ不適合骨髄を用いた骨髄移植のほぼ全ての症例で生じる。中等度～重度の場合、ＧＶＨＤは、大きな死亡率を有する（４０～８０％）。ＧＶＨＤは、十分に理解されない複雑な免疫学的現象であるが、それは、通常、リンパ球サブセットの不均衡、同種抗原提示、及びサイトカインに対する異常な産生または応答性の増加の環境で生じるＴ細胞媒介性プロセスである。ＧＶＨＤの急性型及び慢性型の両方が認識される。

急性ＧＶＨＤ（ａＧＶＨＤ）は、皮膚、胃腸管、及び肝臓の「マイナー」組織適合性抗原の不一致に対するリンパ球の反応性を追跡する。ＧＶＨＤの可能性の増加は、ドナー及びホスト間のＨＬＡ格差、ドナー及びホストの加齢、ドナーの同種感作、ドナー及びレシピエント間の性別の不一致、調製レジメンの強度の増加、ならびにドナーＴ細胞の用量に関連する。臨床症状は、軽度の皮膚発疹、胃腸（ＧＩ）障害（悪心、嘔吐、下痢）、及び肝機能検査の障害から、皮膚破壊、肝不全、血性下痢、及び重度の免疫抑制を伴う生命を脅かす疾患まで様々である。骨髄輸血患者の約５～１０％が、ＧＶＨＤで死亡する。（Ｒｉｌｅｙ，ｅｔａｌ．，“ＨｅｍａｔｏｌｏｇｉｃＡｓｐｅｃｔｓｏｆＭｙｅｌｏａｂｌａｔｉｖｅＴｈｅｒａｐｙａｎｄＢｏｎｅＭａｒｒｏｗＴｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ．“ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｌｉｎｉｃａｌＬａｂｏｒａｔｏｒｙＡｎａｌｙｓｉｓ（２００５）１９：４７－７９）。

慢性ＧＶＨＤ（ｃＧＶＨＤ）は、急性プロセスに従うことも、ｄｅｎｏｖｏ発症することもある。それは、骨髄移植レシピエントの２５～６５％に生じる。血小板数は、生存の予測因子であり；１００，０００／ｍＬ未満の血小板数は、５０％を超える全体的な死亡率に関連する。ｃＧＶＨＤは、自己免疫現象を特徴とする免疫調節不全状態を表すと考えられ、臨床像は、皮膚、ＧＩ管、及び肝臓が関与する自己免疫疾患に似ている。循環する自己抗体が存在し、補体及び免疫グロブリンの沈着物が真皮－表皮接合部で同定されている。ｃＧＶＨＤのリスク要因は、以前のａＧＶＨＤ、より高齢のドナーまたはレシピエントの年齢、ＨＬＡミスマッチ、無関係のドナーの使用、ウイルス感染、脾臓摘出、ドナーリンパ球注入（ＤＬＩ）、及びｃＧＶＨＤを処置するための末梢血幹細胞の使用を含む。（Ｒｉｌｅｙ，ｅｔａｌ．，“ＨｅｍａｔｏｌｏｇｉｃＡｓｐｅｃｔｓｏｆＭｙｅｌｏａｂｌａｔｉｖｅＴｈｅｒａｐｙａｎｄＢｏｎｅＭａｒｒｏｗＴｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ．“ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｌｉｎｉｃａｌＬａｂｏｒａｔｏｒｙＡｎａｌｙｓｉｓ（２００５）１９：４７－７９）。

骨髄線維症
軽度の一過性レチクリン線維症は、化学療法後では珍しくないが、重度のコラーゲン線維症は、慢性骨髄性白血病に特有である。骨髄線維症は、レチクリン線維密度の増加、重症の場合、ＣＤ６１＋巨核球形成の数の増加、ＣＤ６８＋マクロファージの増加、赤血球前駆体の数の減少、及び血小板数の増加を特徴とする。通常、移植後の骨髄線維症の初期退行があるが、それは、多くの場合、造血の再生領域で再発し、非定型の矮性巨核球の存在、重度の急性ＧＶＨＤ、及び輸血の独立を達成するための時間の大幅な遅延に関連する。（Ｒｉｌｅｙ，ｅｔａｌ．，“ＨｅｍａｔｏｌｏｇｉｃＡｓｐｅｃｔｓｏｆＭｙｅｌｏａｂｌａｔｉｖｅＴｈｅｒａｐｙａｎｄＢｏｎｅＭａｒｒｏｗＴｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ．“ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｌｉｎｉｃａｌＬａｂｏｒａｔｏｒｙＡｎａｌｙｓｉｓ（２００５）１９：４７－７９）。

治療関連の急性白血病
治療に関連する急性骨髄性白血病（ｔ－ＡＭＬ）は、細胞毒性化学療法及び／または放射線療法から生じる続発性白血病の一形態である。以前の悪性腫瘍に対する大量化学療法後のｔ－ＡＭＬの発病率は徐々に増加しており、ｔ－ＡＭＬは、小児及び成人の両方の集団で最も一般的な続発性悪性腫瘍の１つである。グルタチオンＳ－トランスフェラーゼＰ１、Ｍ１、及びＴ１の多型またはホモ接合型遺伝子欠損は、化学療法薬の解毒が不十分なために、ｔ－ＡＭＬの発生率の増加に関与することがある。ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、骨髄腫、多発性赤血球増加症、乳がん、卵巣がん、精巣がん、またはｄｅｎｏｖｏ急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）が処置された患者は、ｔ－ＡＭＬを発症するリスクが最も高くなり、続発性ＡＭＬ患者の５０％超が乳がん、ＮＨＬ、及びホジキンリンパ腫を有する。示されるように、ｔ－ＡＭＬとは対照的に、治療関連ＡＬＬの発病はまれであり、ＭＢＴで使用されるような以前の薬剤の使用の適応症は限られる。（Ｒｉｌｅｙ，ｅｔａｌ．，“ＨｅｍａｔｏｌｏｇｉｃＡｓｐｅｃｔｓｏｆＭｙｅｌｏａｂｌａｔｉｖｅＴｈｅｒａｐｙａｎｄＢｏｎｅＭａｒｒｏｗＴｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ．“ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｌｉｎｉｃａｌＬａｂｏｒａｔｏｒｙＡｎａｌｙｓｉｓ（２００５）１９：４７－７９）。

移植後のリンパ増殖性疾患（ＰＴＬＤ）
ＰＴＬＤは、骨髄または固形臓器移植を受けた患者の免疫抑制療法の結果として発症するリンパ系新生物である。移植後のリンパ増殖性疾患の範囲は、良性から悪性のモノクローナルまたはポリクローナルリンパ増殖までに及び、それは、固形臓器移植レシピエントの約２％、自家骨髄移植レシピエントの約１％、ならびにＨＬＡ不適合同種骨髄移植、ならびに抗ＣＤ３モノクローナルＯＫＴ３、シクロスポリンＡ、及びＦＫ５０６などのＧＶＨＤの免疫抑制療法を受けることを含む複数の危険因子を有する患者の最大２０％で生じる。エプスタイン・バールウイルスは、原発性または再活性化のいずれかで、ＰＴＬＤの発症と強く関連する。免疫監視の障害、同種移植片からの慢性的な抗原刺激、及び免疫抑制療法の発がん効果は、ＰＴＬＤをもたらす追加の要因である。ＰＴＬＤを伴う固形臓器移植レシピエントの典型的な結節外病変とは対照的に、ＰＴＬＤを伴う骨髄同種移植レシピエントは、多くの場合、結節及び結節外の両方の部位を含む広範な疾患を有する。（Ｒｉｌｅｙ，ｅｔａｌ．，“ＨｅｍａｔｏｌｏｇｉｃＡｓｐｅｃｔｓｏｆＭｙｅｌｏａｂｌａｔｉｖｅＴｈｅｒａｐｙａｎｄＢｏｎｅＭａｒｒｏｗＴｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ．“ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｌｉｎｉｃａｌＬａｂｏｒａｔｏｒｙＡｎａｌｙｓｉｓ（２００５）１９：４７－７９）。

有毒な脊髄症
有毒な脊髄症は、骨髄の間質及び間葉系構成要素への毒性損傷によって引き起こされるまれな骨髄病変である。持続性血球減少症は、中毒性脊髄症の臨床的特徴であり；骨髄は、浮腫、血管周囲形質細胞症、好中球顆粒球の壊死症、及び細胞破片を含む、顕著な間質損傷を伴う低細胞性である。有毒な脊髄症は、化学療法または放射線療法を受ける患者の１％未満で生ずる。（Ｒｉｌｅｙ，ｅｔａｌ．，“ＨｅｍａｔｏｌｏｇｉｃＡｓｐｅｃｔｓｏｆＭｙｅｌｏａｂｌａｔｉｖｅＴｈｅｒａｐｙａｎｄＢｏｎｅＭａｒｒｏｗＴｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ．“ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｌｉｎｉｃａｌＬａｂｏｒａｔｏｒｙＡｎａｌｙｓｉｓ（２００５）１９：４７－７９）。

これらの状態の、全てではないが、多くは、不十分なＭＢＴ療法を介した疾患／悪性細胞の不完全な除去、不適切な幹細胞レスキュー、ＭＢＴ後に通常必要とされる免疫抑制剤の使用、または骨髄環境の損傷から生ずる。良好なＳＣＲ及び／または関連状態の阻止は、ＭＢＴを受ける患者の造血システムとの関連することがある。組織特異的微小環境内の慢性炎症が、支持ニッチ細胞がそれらの同族幹細胞を適切に育成する能力を損ない、それにより、ＳＣＲ及び造血再構成を妨げると仮定されている。（Ｗａｇｅｒｓ，Ａ．Ｊ．Ｔｈｅｓｔｅｍｃｅｌｌｎｉｃｈｅｉｎｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅｍｅｄｉｃｉｎｅ．Ｃｅｌｌｓｔｅｍｃｅｌｌ（２０１２）１０，３６２－３６９，ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｓｔｅｍ．２０１２．０２．０１８；Ｌａｎｅ，Ｓ．Ｗ．，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ｄ．Ａ．＆Ｗａｔｔ，Ｆ．Ｍ．Ｍｏｄｕｌａｔｉｎｇｔｈｅｓｔｅｍｃｅｌｌｎｉｃｈｅｆｏｒｔｉｓｓｕｅｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ．Ｎａｔｕｒｅｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（２０１４）３２，７９５－８０３，ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｂｔ．２９７８；Ｓｃｈｅｐｅｒｓ，Ｋ．，Ｃａｍｐｂｅｌｌ，Ｔ．Ｂ．＆Ｐａｓｓｅｇｕｅ，Ｅ．Ｎｏｒｍａｌａｎｄｌｅｕｋｅｍｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌｎｉｃｈｅｓ：ｉｎｓｉｇｈｔｓａｎｄｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｏｐｐｏｒｔｕｎｉｔｉｅｓ．Ｃｅｌｌｓｔｅｍｃｅｌｌ（２０１５）１６，２５４－２６７，ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｓｔｅｍ．２０１５．０２．０１４９１１）。

骨髄抑制からの回復。
免疫再構築は、未成熟から成熟した免疫機能まで発達する一般的なパターンに従う。（ＣａｒｓｏｎＫ．ｅｔａｌ．，Ｃｈａｐｔｅｒ３５－Ｒｅｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎａｆｔｅｒｓｔｅｍｃｅｌｌｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，”ｉｎＨｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃＳｔｅｍＣｅｌｌＴｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎｉｎＣｌｉｎｉｃａｌＰｒａｃｔｉｃｅ（２００９）；（Ｂｕｔｌｅｒ，Ｊ．Ｍ．ｅｔａｌ．Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓａｒｅｅｓｓｅｎｔｉａｌｆｏｒｔｈｅｓｅｌｆ－ｒｅｎｅｗａｌａｎｄｒｅｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｏｆＮｏｔｃｈ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌｓ．Ｃｅｌｌｓｔｅｍｃｅｌｌ（２０１０）６，２５１－２６４，ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｓｔｅｍ．２０１０．０２．００１；Ｋｏｂａｙａｓｈｉ，Ｈ．ｅｔａｌ．ＡｎｇｉｏｃｒｉｎｅｆａｃｔｏｒｓｆｒｏｍＡｋｔ－ａｃｔｉｖａｔｅｄｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓｂａｌａｎｃｅｓｅｌｆ－ｒｅｎｅｗａｌａｎｄｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｏｆｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌｓ．Ｎａｔｕｒｅｃｅｌｌｂｉｏｌｏｇｙ（２０１０）１２，１０４６－１０５６，ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｃｂ２１０８；Ｗｉｎｋｌｅｒ，Ｉ．Ｇ．ｅｔａｌ．ＶａｓｃｕｌａｒｎｉｃｈｅＥ－ｓｅｌｅｃｔｉｎｒｅｇｕｌａｔｅｓｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌｄｏｒｍａｎｃｙ，ｓｅｌｆｒｅｎｅｗａｌａｎｄｃｈｅｍｏｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ．Ｎａｔｕｒｅｍｅｄｉｃｉｎｅ（２０１２）１８，１６５１－１６５７，ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｍ．２９６９；Ｄｉｎｇ，Ｌ．，ｅｔａｌ．，Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌａｎｄｐｅｒｉｖａｓｃｕｌａｒｃｅｌｌｓｍａｉｎｔａｉｎｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌｓ．Ｎａｔｕｒｅ（２０１２）４８１，４５７－４６２，ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎａｔｕｒｅ１０７８３；Ｐｏｕｌｏｓ，Ｍ．Ｇ．ｅｔａｌ．Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｊａｇｇｅｄ－１ｉｓｎｅｃｅｓｓａｒｙｆｏｒｈｏｍｅｏｓｔａｔｉｃａｎｄｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅ９４７ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｓｉｓ．Ｃｅｌｌｒｅｐｏｒｔｓ（２０１３）４，１０２２－１０３４，ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｃｅｌｒｅｐ．２０１３．０７．０４８；Ｇｒｅｅｎｂａｕｍ，Ａ．ｅｔａｌ．ＣＸＣＬ１２ｉｎｅａｒｌｙｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒｓｉｓｒｅｑｕｉｒｅｄｆｏｒｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｓｔｅｍ－ｃｅｌｌｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅ．Ｎａｔｕｒｅ（２０１３）４９５，２２７－２３０，ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎａｔｕｒｅ１１９２６；Ｄｏａｎ，Ｐ．Ｌ．ｅｔａｌ．Ｅｐｉｄｅｒｍａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｒｅｇｕｌａｔｅｓｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎａｆｔｅｒｒａｄｉａｔｉｏｎｉｎｊｕｒｙ．Ｎａｔｕｒｅｍｅｄｉｃｉｎｅ（２０１３）１９，２９５－３０４，ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｍ．３０７０）Ｉｍｍｕｎｅｒｅａｃｔｉｖｉｔｙｄｕｒｉｎｇｔｈｅｆｉｒｓｔｍｏｎｔｈｐｏｓｔｇｒａｆｔｉｓｅｘｔｒｅｍｅｌｙｌｏｗ．Ｉｄ．Ｉｎｎａｔｅｉｍｍｕｎｉｔｙｉｓｔｈｅｆｉｒｓｔｔｏｒｅｇａｉｎｆｕｎｃｔｉｏｎ．Ｏｇｏｎｅｋ，Ｊ．ｅｔａｌ．，“Ｉｍｍｕｎｅｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｆｔｅｒａｌｌｏｇｅｎｅｉｃｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ”Ｆｒｏｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２０１６）７：５０７．ｄｏｉ：１０．３３８９／ｆｉｍｍｕ．２０１６．００５０７）。造血系列の再現は、再現可能な順序に従い、単球様細胞が末梢血中で最初に出現し、続いて顆粒球、次にＮＫ細胞が続く。ＮＫ細胞の回復は、細胞数及び機能的成熟の両方に関して、Ｔ細胞及びＢ細胞よりも大幅に優先される（Ｇｒｚｙｗａｃｚ，Ｂ．ｅｔａｌ，ＮａｔｕｒａｌＫｉｌｌｅｒＣｅｌｌｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｂｙｍｙｅｌｏｉｄｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒｓ，Ｂｌｏｏｄ（２０１１）１１７（１３）：３５４８－５８）。細胞毒性及び食作用機能は、１００日目までに回復するが、Ｔリンパ球及びＢリンパ球のより特殊な機能は、依然として、１年以上にわたって損なわれたままである場合がある。ある期間後、ほとんどの健康な骨髄レシピエントの免疫系の様々な構成要素が、同期して作用し始めるが、慢性移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）の患者の免疫系は、依然として、抑制される。免疫再構築の遅延及び不完全性により、患者は、同種ＨＣＴ後の高い罹患率及び死亡率に関連する感染症にかかりやすくなる。

放射線曝露後の骨髄腔の造血再生及び血管再生は、時間的に関連し、骨髄の血管再構成なしには造血再生はないことが、長い間知られている。現在、細胞毒性薬または全身照射による骨髄抑制後の造血再生は、骨髄類洞ネットワーク及び造血細胞、ならびに巨核球の成熟に相互依存していることが認識される。（Ｋｏｐｐ，ｅｔ．ａｌ．“ＴｈｅＢｏｎｅＭａｒｒｏｗＶａｓｃｕｌａｒＮｉｃｈｅ：ＨｏｍｅｏｆＨＳＣＤｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎａｎｄＭｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ．“ＰＨＹＳＩＯＬＯＧＹ２０：３４９－３５６，２００５；１０．１１５２／ｐｈｙｓｉｏｌ．０００２５．２００５）。

骨髄抑制は、循環する造血細胞のアポトーシスだけでなく、骨髄血管系の破壊にもつながる。類洞の複雑なネットワークは規則的な血管壁がないので、特に、電離放射線の影響を受け、壊死、著しい拡張、ならびに血漿及び血球の漏出を伴う明白な破壊の超微細構造の兆候を示す。骨髄類洞は、隣接する造血細胞自体によりサポートされているようである。このサポートを失うことは、安定性を失うことを意味し、これにより、放射線療法または骨髄抑制化学療法後の骨髄腔内の出血がもたらされる。造血再生のプロセスでは、類洞が、再構築される。従って、造血及び血管新生のプロセスは、密接に関連する。（Ｋｏｐｐ，ｅｔ．ａｌ．“ＴｈｅＢｏｎｅＭａｒｒｏｗＶａｓｃｕｌａｒＮｉｃｈｅ：ＨｏｍｅｏｆＨＳＣＤｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎａｎｄＭｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ．“ＰＨＹＳＩＯＬＯＧＹ２０：３４９－３５６，２００５；１０．１１５２／ｐｈｙｓｉｏｌ．０００２５．２００５）。

血管系は、化学療法後のＨＳＣに保護ニッチを提供し、これにより、骨及び造血の再生が促進される。長期の静止状態のＨＳＣは、類洞及び動脈の両方に関連する。血管ニッチは、照射後にＨＳＣ集団を再生するために不可欠である。照射後の骨髄ＥＣの移植は、造血を促進し、放射線感受性組織を保護する。骨髄ＥＣ培養馴化培地を移植した照射マウスは、生存率の増加を示した。これにより、アンジオクライン因子が生存率を高め得るが、ＨＳＣの完全な喪失を補うことはないことが示される。ＮｏｔｃｈリガンドＪＡＧ－１の内皮特異的欠失は、ＨＳＣ再生の障害を引き起こし、照射後の致死率を増加させる。Ｎｏｔｃｈシグナル伝達に加えて、ＥＣは、Ｆｇｆ－２、Ｂｍｐ４、Ｉｇｆｂｐ２、及びアンジオポエチン１を上方調節して、造血幹前駆細胞（ＨＳＰＣ）を増殖させ、これにより、これらのアンジオクライン因子が照射後のＨＳＣの保護に有用であり得ることが示される。（ＳｉｖａｎＵ，ＤｅＡｎｇｅｌｉｓＪ，ＫｕｓｕｍｂｅＡＰ．２０１９Ｒｏｌｅｏｆａｎｇｉｏｃｒｉｎｅｓｉｇｎａｌｓｉｎｂｏｎｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓａｎｄｄｉｓｅａｓｅ．ＯｐｅｎＢｉｏｌ．９：１９０１４４．ｈｔｔｐ：／／ｄｘ．ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０９８／ｒｓｏｂ．１９０１４４）。

記載された発明は、治療量のアンジオクライン因子を含む医薬組成物を対象に投与することを含む、骨髄破壊的傷害に曝露された対象を処置する方法を提供する。この方法は、血管完全性を維持し、骨髄細胞性を増加させ、長期生着の可能性を高め、多系列の再構成を行い、血管炎症を抑制し、ＨＳＣ機能を維持するのに効果的である。

一態様によると、記載された発明は、骨髄抑制性傷害後の骨髄内皮細胞（ＢＭＥＣ）、造血幹細胞（ＨＳＣ）、及び骨髄間質細胞を含む造血骨髄微小環境内の血管炎症を低減するための方法であって、ＢＭＥＣ活性の低減は定常状態の造血及びＨＳＣ機能の欠陥をもたらし、当該方法は、組み換えまたは合成アンジオクライン因子及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を対象に投与することと、骨髄の造血微小環境における炎症を軽減すること、骨髄の造血微小環境において血管完全性を保持すること、造血幹細胞（ＨＳＣ）、造血幹及び前駆細胞（ＨＳＰＣ）、多能性前駆細胞（ＭＰＰ）、ならびに造血前駆細胞サブセットのうちの１つ以上を含む造血区画における細胞型の頻度及び数を増加させて、多系列の再構成を行うことのうちの１つ以上により、骨髄抑制性傷害後の造血骨髄微小環境における造血回復を増強することと、を含み、血管炎症が、血管拡張の増加、骨髄血管漏出の増加を含む血管完全性の減少、及び炎症性メディエーターのレベルの増加うちの１つ以上を含む、当該方法を提供する。

本方法の一実施形態によると、アンジオクライン因子は、Ｃｌｅｃ１１ａ、Ｈａｐｌｎ１、Ｈｓｐｄ１、Ｉｇｆｂｐ１、Ｂｇｎ、Ｗｎｔ７ａ、Ｓｐａｒｃ、ＲＰ５３、Ｂｍｐｒ１ａ、Ｉｇｈｍ、Ｔｈｂｓ４、Ｃａｍｋ２ｄ、Ｓｉｒｔ２、Ｃａｍｋ２ｂ、Ｓｌｉｔｒｋ５、Ｄｃｔｐｐ１、Ｈｎｒｎｐａ２ｂ、Ｅｒａｐ１からなる群より選択される１つ以上の組み換えまたは合成タンパク質である。別の実施形態によると、アンジオクライン因子は、組み換えまたは合成Ｃｌｅｃ１１α（幹細胞成長因子）である。別の実施形態によると、骨髄の造血微小環境における炎症は、血管炎症、ＢＭ間質細胞の炎症、及び造血細胞の炎症を含む。別の実施形態によると、ＨＳＣ機能の欠陥は、ＨＳＣ静止の障害及びＨＳＣアポトーシスの増加を含む。別の実施形態によると、血管の炎症を低減することは、骨髄内のＢＭＥＣにおいて下流のＮＦｋＢシグナル伝達を抑制すること、骨髄の内皮細胞において標的ＮＦｋＢ遺伝子を下方調節すること、またはその両方を含む。別の実施形態によると、骨髄抑制性傷害は、放射線、化学療法、またはその両方への曝露を含む。別の実施形態によると、放射線は、亜致死放射線、全身照射、全リンパ節照射である。別の実施形態によると、骨髄抑制性傷害は、化学療法を含む。別の実施形態によると、骨髄抑制性傷害は、骨髄破壊的である。別の実施形態によると、骨髄（ＢＭ）微小環境は、ＢＭＥＣ、ＢＭ間質細胞、ＢＭＬｅｐｒ＋細胞、及びＢＭ骨芽細胞を含む。別の実施形態によると、ＢＭＥＣは、類洞及び細動脈ＢＭＥＣである。別の実施形態によると、ＢＭＥＣの免疫表現型は、ＣＤ４５－Ｔｅｒ１１９－ＣＤ３１＋ＶＥカドヘリン＋である。別の実施形態によると、ＢＭ間質細胞の免疫表現型は、ＣＤ４５－Ｔｅｒ１１９－ＣＤ３１－ＶＥカドヘリン－である。別の実施形態によると、ＢＭ間質集団内のＢＭＬｅｐｒ＋細胞の免疫表現型は、ＣＤ４５－Ｔｅｒ１１９－ＣＤ３１－Ｌｅｐｒ＋である。別の実施形態によると、マウスＨＳＣの免疫表現型は、ｌｉｎ－Ｔｅｒ１１９－ＣＤ１１ｂ－ＧＲ１－Ｂ２２０－ＣＤ３－ＣＤ４１－ｃｋｉｔ＋ＳＣＡ１＋ＣＤ４８－ＣＤ１５０＋を含む。別の実施形態によると、ヒトＨＳＣの免疫表現型は、ＣＤ４５ＲＡ－ＣＤ３８－ＣＤ３４＋ＣＤ９０＋を含む。別の実施形態によると、骨髄破壊的傷害後のＢＭＥＣ活性の低減は、定常状態の造血及びＨＳＣ機能の欠陥をもたらす。

別の態様によると、記載された発明は、骨髄抑制性傷害後の造血ホーミング、生着、再構成、及び骨髄の再生の改善を、それを必要とする対象において行うための方法を提供し、方法は、組み換えまたは合成アンジオクライン因子及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を対象に投与することと、血液系を再生し、骨髄の造血再構成を促進するのに有効な治療量の多能性の自己再生造血幹細胞（ＨＳＣ）の移植を含む幹細胞併用療法を施行することと、血液系を再生し、骨髄の造血再構成を促進するのに有効な治療量のＢＭ内皮細胞（ＢＭＥＣ）の移植を含む血管内皮併用療法を施行することと、骨髄抑制性傷害後の骨髄内皮細胞（ＢＭＥＣ）、造血幹細胞（ＨＳＣ）、及び骨髄間質細胞を含む造血骨髄微小環境内の血管炎症を低減することであって、ＢＭＥＣ活性の低減が、定常状態の造血及びＨＳＣ機能の欠陥をもたらす、低減することと、骨髄の造血微小環境における炎症を低減すること、骨髄の造血微小環境における血管完全性を維持すること、造血幹細胞（ＨＳＣ）、造血幹及び前駆細胞（ＨＳＰＣ）、多能性前駆細胞（ＭＰＰ）、ならびに造血前駆細胞サブセットのうちの１つ以上を含む造血区画における細胞型の頻度及び数を増加させて、多系列の再構成を行うことのうちの１つ以上により、骨髄抑制性傷害後の造血骨髄微小環境における造血回復を増強することと、を含み、血管炎症が、血管拡張の増加、骨髄血管漏出の増加を含む血管完全性の減少、及び炎症性メディエーターのレベルの増加うちの１つ以上を含む。

本方法の一実施形態によると、アンジオクライン因子は、Ｃｌｅｃ１１ａ、Ｈａｐｌｎ１、Ｈｓｐｄ１、Ｉｇｆｂｐ１、Ｂｇｎ、Ｗｎｔ７ａ、Ｓｐａｒｃ、ＲＰ５３、Ｂｍｐｒ１ａ、Ｉｇｈｍ、Ｔｈｂｓ４、Ｃａｍｋ２ｄ、Ｓｉｒｔ２、Ｃａｍｋ２ｂ、Ｓｌｉｔｒｋ５、Ｄｃｔｐｐ１、Ｈｎｒｎｐａ２ｂ、Ｅｒａｐ１からなる群より選択される１つ以上の組み換えまたは合成タンパク質である。別の実施形態によると、アンジオクライン因子は、組み換えまたは合成Ｃｌｅｃ１１α（幹細胞成長因子）である。別の実施形態によると、ＨＳＣ機能の欠陥は、ＨＳＣ静止の障害及びＨＳＣアポトーシスの増加を含む。

別の実施形態によると、幹細胞併用療法は、組織源から単離された単核細胞の集団から造血幹細胞を単離すること、正または負の選択により造血幹細胞の単核細胞の単離集団を濃縮すること、及び対象に造血幹細胞の濃縮された単離集団を投与すること、を含む。

別の実施形態によると、血管内皮細胞併用療法は、ヒト臍帯から内皮細胞を単離すること、正または負の選択により血管内皮細胞について単離集団を濃縮すること、及び対象に血管内皮細胞の濃縮された単離集団を投与することを含む。

別の実施形態によると、組織源は、自家である。別の実施形態によると、組織源は、同種異系である。別の実施形態によると、血管の炎症を低減することは、骨髄内のＢＭＥＣにおいて下流のＮＦｋＢシグナル伝達を抑制すること、骨髄の内皮細胞において標的ＮＦｋＢ遺伝子を下方調節すること、またはその両方を含む。別の実施形態によると、骨髄抑制性傷害は、放射線、化学療法、またはその両方への曝露を含む。別の実施形態によると、放射線は、亜致死放射線、全身照射、全リンパ節照射である。別の実施形態によると、骨髄抑制性傷害は、化学療法である。別の実施形態によると、骨髄抑制性傷害は、骨髄破壊的である。別の実施形態によると、骨髄（ＢＭ）微小環境は、ＢＭＥＣ、ＢＭ間質細胞、ＢＭＬｅｐｒ＋細胞、及びＢＭ骨芽細胞を含む。別の実施形態によると、ＢＭＥＣは、類洞及び細動脈ＢＭＥＣである。別の実施形態によると、ＢＭＥＣの免疫表現型は、ＣＤ４５－Ｔｅｒ１１９－ＣＤ３１＋ＶＥカドヘリン＋である。別の実施形態によると、ＢＭ間質細胞の免疫表現型は、ＣＤ４５－Ｔｅｒ１１９－ＣＤ３１－ＶＥカドヘリン－である。別の実施形態によると、ＢＭ間質集団内のＢＭＬｅｐｒ＋細胞の免疫表現型は、ＣＤ４５－Ｔｅｒ１１９－ＣＤ３１－Ｌｅｐｒ＋である。別の実施形態によると、マウスＨＳＣの免疫表現型は、ｌｉｎ－Ｔｅｒ１１９－ＣＤ１１ｂ－ＧＲ１－Ｂ２２０－ＣＤ３－ＣＤ４１－ｃｋｉｔ＋ＳＣＡ１＋ＣＤ４８－ＣＤ１５０＋を含む。別の実施形態によると、ヒトＨＳＣの免疫表現型は、ＣＤ４５ＲＡ－ＣＤ３８－ＣＤ３４＋ＣＤ９０＋を含む。別の実施形態によると、方法は、骨髄の安定した長期生着、末梢血中の骨髄性バイアスの低減、またはその両方を高める。別の実施形態によると、医薬組成物は、幹細胞併用療法の施行前、施行後、または施行と同時に、投与される。別の実施形態によると、骨髄の造血微小環境における炎症は、血管炎症、ＢＭ間質細胞の炎症、及び造血細胞の炎症を含む。

特許または出願ファイルは、カラーで実行された少なくとも１つの図面を含む。カラー図面（複数可）を有する本特許または特許出願の出版物のコピーは、要求に応じて、必要な料金の支払い時に、官庁により提供されるであろう。

ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスが、ＨＳＣ及び造血障害を示すことを示す。大腿骨当たりの総細胞数（ｎ＝５マウス／コホート）。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスが、ＨＳＣ及び造血障害を示すことを示す。フローサイトメトリーにより評価された１０⁶の大腿骨細胞当たりの表現型ＨＳＣの頻度（ｎ＝５マウス／コホート）。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスが、ＨＳＣ及び造血障害を示すことを示す。フローサイトメトリーによるＢＭＨＳＣ及びＨＳＰＣ頻度の定量化のためのゲーティング方策を示す代表的な等高線図。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスが、ＨＳＣ及び造血障害を示すことを示す。フローサイトメトリーにより評価された１０６の大腿骨細胞当たりの表現型ＨＳＰＣの頻度（ｎ＝５マウス／コホート）。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスが、ＨＳＣ及び造血障害を示すことを示す。メチルセルロースベースの前駆細胞アッセイ。棒グラフは、１０⁵全骨髄（ＷＢＭ）当たりのＣＦＵの数を示す（ｎ＝３マウス／コホート）。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスが、ＨＳＣ及び造血障害を示すことを示す。４ヶ月にわたる総ＣＤ４５．２＋細胞生着及びＣＤ４５．２＋系列分布を評価する競合的再増殖アッセイを示す（ｎ＝１０レシピエント／コホート；ｎ＝５ドナー／コホート）。競合的再増殖を評価するために、５×１０⁵ドナーＷＢＭ細胞（ＣＤ４５．２）を、５×１０⁵競合ＷＢＭ細胞（ＣＤ４５．１）と共にプレコンディショニングされたＣＤ４５．１レシピエントマウスに移植した。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスが、ＨＳＣ及び造血障害を示すことを示す。４ヶ月にわたる総ＣＤ４５．２＋細胞生着及びＣＤ４５．２＋系列分布を評価する競合的再増殖アッセイを示す（ｎ＝１０レシピエント／コホート；ｎ＝５ドナー／コホート）。競合的再増殖を評価するために、５×１０⁵ドナーＷＢＭ細胞（ＣＤ４５．２）を、５×１０⁵競合ＷＢＭ細胞（ＣＤ４５．１）と共にプレコンディショニングされたＣＤ４５．１レシピエントマウスに移植した。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスが、ＨＳＣ及び造血障害を示すことを示す。全骨髄制限希釈移植アッセイ後の長期の複数の系列再構成（ＬＴＭＲ）に陽性であったレシピエントの数を表す表である（細胞の用量当たりのｎ＝１０レシピエント／コホート；ｎ＝５ドナー／コホート）。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスが、ＨＳＣ及び造血障害を示すことを示す。９５％の信頼区間を表す破線で示された遺伝子型のＨＳＣ頻度の推定値を表示する折れ線グラフである。ＥｘｔｒｅｍｅＬｉｍｉｔｉｎｇＤｉｌｕｔｉｏｎＡｎａｌｙｓｉｓ（ＥＬＤＡ）を使用して、幹細胞の頻度及び有意性を決定した。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスが、ＨＳＣ及び造血障害を示すことを示す。フローサイトメトリーにより示された遺伝子型のＨＳＣの細胞周期分析を示す（ｎ＝５マウス／コホート）。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスが、ＨＳＣ及び造血障害を示すことを示す。フローサイトメトリーにより示された遺伝子型のＨＳＣアポトーシスの定量化を示す（ｎ＝５マウス／コホート）。エラーバーは、試料平均±ＳＥＭを表す。両側の対応のないスチューデントのｔ検定を使用して、統計的有意性を決定した（＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１；及び＊＊＊Ｐ＜０．００１）。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスが、全身性及びＢＭ限局性炎症を示すことを示す。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの血管拡張を示す血管特異的ＣＤ１４４／ＶＥカドヘリン抗体（赤）で生体内標識された大腿骨の代表的な免疫蛍光画像を示す。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスが、全身性及びＢＭ限局性炎症を示すことを示す。Ｅｖａｎ’ｓＢｌｕｅＤｙｅ（ＥＢＤ）の血管外漏出の定量化を示す（ｎ＝５マウス／コホート）。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスが、全身性及びＢＭ限局性炎症を示すことを示す。ＥＢＤを注射されたマウスから単離された大腿骨の代表的な画像を示す。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスが、全身性及びＢＭ限局性炎症を示すことを示す。各試料の抽出されたＥＢＤの強度を示すマイクロタイタープレートを示す。注射されていない対照を使用して、ベースラインを決定した。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスが、全身性及びＢＭ限局性炎症を示すことを示す。プロテオミクス分析により同定されたＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウス（ｎ＝７対照及びｎ＝８ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウス）の血漿中で差次的に発現する２４２のタンパク質のヒートマップである。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスが、全身性及びＢＭ限局性炎症を示すことを示す。炎症反応がＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスで過剰に発現されることを示す、差次的に発現されるタンパク質の創意工夫経路分析（ＩｎｇｅｎｕｉｔｙＰａｔｈｗａｙＡｎａｌｙｓｉｓ）を示す。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスが、全身性及びＢＭ限局性炎症を示すことを示す。それぞれ、ＢＭＥＣでのＭＥＫ１ＤＤ発現が、ＥＲＫ１／２及びｐ６５リン酸化の増加をもたらすことを示す、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスから単離された骨髄内皮細胞（ＢＭＥＣ）のイムノブロット分析及び定量化を示す（遺伝子型毎にｎ＝３の生物学的複製）。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスが、全身性及びＢＭ限局性炎症を示すことを示す。それぞれ、ＢＭＥＣでのＭＥＫ１ＤＤ発現が、ＥＲＫ１／２及びｐ６５リン酸化の増加をもたらすことを示す、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスから単離された骨髄内皮細胞（ＢＭＥＣ）のイムノブロット分析及び定量化を示す（遺伝子型毎にｎ＝３の生物学的複製）。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスが、全身性及びＢＭ限局性炎症を示すことを示す。対照と比較した、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスに由来するＢＭＥＣにおける核ｐ６５のレベルの増加を実証する代表的な免疫蛍光画像及び定量化を示す。ＴＮＦα（１５分間、１０ｎｇ／ｍＬ）で処理された対照ＢＭＥＣを、アッセイの陽性対照として使用した。棒グラフ内の各ドットは、個々の細胞当たりの核ｐ６５染色強度を表す。エラーバーは、試料平均±ＳＥＭを表す。両側の対応のないスチューデントのｔ検定を使用して、統計的有意性を決定した（＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１；＊＊＊Ｐ＜０．００１）。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスが、全身性及びＢＭ限局性炎症を示すことを示す。対照と比較した、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスに由来するＢＭＥＣにおける核ｐ６５のレベルの増加を実証する代表的な免疫蛍光画像及び定量化を示す。ＴＮＦα（１５分間、１０ｎｇ／ｍＬ）で処理された対照ＢＭＥＣを、アッセイの陽性対照として使用した。棒グラフ内の各ドットは、個々の細胞当たりの核ｐ６５染色強度を表す。エラーバーは、試料平均±ＳＥＭを表す。両側の対応のないスチューデントのｔ検定を使用して、統計的有意性を決定した（＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１；＊＊＊Ｐ＜０．００１）。内皮ＮＦ－κＢ阻害が内皮炎症を解消し、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの血管完全性を回復することを示す。それぞれ、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスから単離されたＢＭＥＣにおけるＩｋＢ－ＳＳの発現が、ＥＲＫ１／２またはｐ６５リン酸化に影響を与えないことを示す、イムノブロット分析及び定量化を示す。黒の矢じりは、内因性ＩκＢαを表すが、赤の矢じりは、ＩｋＢ－ＳＳ導入遺伝子を表す。内皮ＮＦ－κＢ阻害が内皮炎症を解消し、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの血管完全性を回復することを示す。それぞれ、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスから単離されたＢＭＥＣにおけるＩｋＢ－ＳＳの発現が、ＥＲＫ１／２またはｐ６５リン酸化に影響を与えないことを示す、イムノブロット分析及び定量化を示す。黒の矢じりは、内因性ＩκＢαを表すが、赤の矢じりは、ＩｋＢ－ＳＳ導入遺伝子を表す。内皮ＮＦ－κＢ阻害が内皮炎症を解消し、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの血管完全性を回復することを示す。それぞれ、対照と比較した、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスに由来するＢＭＥＣにおける核ｐ６５のレベルの増加を実証する代表的な免疫蛍光画像及び定量化を示す。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウス（ＣＤＨ５－ＭＡＰＫ：：ＩｋＢ）から単離されたＢＭＥＣにおけるＩｋＢ－ＳＳの発現は、核ｐ６５レベルを減少させることに留意すべきである。棒グラフ内の各ドットは、個々の細胞当たりの核ｐ６５染色強度を表す。内皮ＮＦ－κＢ阻害が内皮炎症を解消し、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの血管完全性を回復することを示す。それぞれ、対照と比較した、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスに由来するＢＭＥＣにおける核ｐ６５のレベルの増加を実証する代表的な免疫蛍光画像及び定量化を示す。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウス（ＣＤＨ５－ＭＡＰＫ：：ＩｋＢ）から単離されたＢＭＥＣにおけるＩｋＢ－ＳＳの発現は、核ｐ６５レベルを減少させることに留意すべきである。棒グラフ内の各ドットは、個々の細胞当たりの核ｐ６５染色強度を表す。内皮ＮＦ－κＢ阻害が内皮炎症を解消し、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの血管完全性を回復することを示す。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスのＢＭＥＣ内でのＮＦ－κＢ依存性炎症遺伝子の発現の増加を示す、ヒートマップ（図３Ｅ）及び棒グラフ（図３Ｆ）を示す。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫを、Ｔｉｅ２．ＩｋＢ－ＳＳマウスと交配すると（ＣＤＨ５－ＭＡＰＫ：：ＩｋＢ）、ＮＦ－κＢ依存性標的遺伝子の発現の減少がもたらされた。ハウスキーピング遺伝子Ａｃｔｂの発現を正規化に使用した。樹状図は、データセット全体の教師なし階層的クラスタリングを表す（ｎ＝３マウス／コホート）。内皮ＮＦ－κＢ阻害が内皮炎症を解消し、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの血管完全性を回復することを示す。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスのＢＭＥＣ内でのＮＦ－κＢ依存性炎症遺伝子の発現の増加を示す、ヒートマップ（図３Ｅ）及び棒グラフ（図３Ｆ）を示す。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫを、Ｔｉｅ２．ＩｋＢ－ＳＳマウスと交配すると（ＣＤＨ５－ＭＡＰＫ：：ＩｋＢ）、ＮＦ－κＢ依存性標的遺伝子の発現の減少がもたらされた。ハウスキーピング遺伝子Ａｃｔｂの発現を正規化に使用した。樹状図は、データセット全体の教師なし階層的クラスタリングを表す（ｎ＝３マウス／コホート）。内皮ＮＦ－κＢ阻害が内皮炎症を解消し、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの血管完全性を回復することを示す。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの内皮細胞内のＮＦ－κＢシグナル伝達の抑制が血管拡張を解消することを示す、血管特異的ＣＤ１４４／ＶＥカドヘリン抗体（赤）で生体内標識された大腿骨の代表的な免疫蛍光画像を示す。エラーバーは、試料平均±ＳＥＭを表す。多重比較及びテューキー補正のための一元ＡＮＯＶＡを実施し、有意性を決定した（＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１；１２３３＊＊＊Ｐ＜０．００１）。内皮ＮＦ－κＢ阻害が，ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスのＨＳＣ活性を回復させることを示す。大腿骨当たりの総細胞数を示す（ｎ＝７～１０マウス／コホート）。内皮ＮＦ－κＢ阻害が，ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスのＨＳＣ活性を回復させることを示す。フローサイトメトリーにより評価された１０⁶の大腿骨細胞当たりの表現型ＨＳＣの頻度を示す（ｎ＝７～１０マウス／コホート）。内皮ＮＦ－κＢ阻害が，ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスのＨＳＣ活性を回復させることを示す。メチルセルロースベースの前駆体アッセイの結果を示す。棒グラフは、１０⁵ＷＢＭ当たりのＣＦＵの数を示す（ｎ＝４マウス／コホート）。内皮ＮＦ－κＢ阻害が，ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスのＨＳＣ活性を回復させることを示す。移植４ヶ月後の総ＣＤ４５．２＋細胞生着及びＣＤ４５．２＋系列分布を評価する競合的再増殖アッセイの結果を示す。競合的再増殖を評価するために、５×１０⁵ドナーＷＢＭ細胞（ＣＤ４５．２）を５×１０⁵競合ＷＢＭ細胞（ＣＤ４５．１）と共にプレコンディショニングされたＣＤ４５．１レシピエントマウスに移植した。（ｎ＝９～１０レシピエント／コホート；コホート当たりｎ＝５ドナー）。内皮ＮＦ－κＢ阻害が，ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスのＨＳＣ活性を回復させることを示す。移植４ヶ月後の総ＣＤ４５．２＋細胞生着及びＣＤ４５．２＋系列分布を評価する競合的再増殖アッセイの結果を示す。競合的再増殖を評価するために、５×１０⁵ドナーＷＢＭ細胞（ＣＤ４５．２）を５×１０⁵競合ＷＢＭ細胞（ＣＤ４５．１）と共にプレコンディショニングされたＣＤ４５．１レシピエントマウスに移植した。（ｎ＝９～１０レシピエント／コホート；コホート当たりｎ＝５ドナー）。内皮ＮＦ－κＢ阻害が，ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスのＨＳＣ活性を回復させることを示す。全骨髄限界希釈移植アッセイ後の長期の多系列再構成（ＬＴＭＲ）に陽性であったレシピエントの数を表す表である（細胞の用量当たりのｎ＝１０レシピエント／コホート；コホート当たりのｎ＝５ドナー）。内皮ＮＦ－κＢ阻害が，ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスのＨＳＣ活性を回復させることを示す。限界希釈分析のＬｏｇ分画プロットであり、これは、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫ：：ＩｋＢマウスが、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスと比較した場合のＬＴＭＲが可能なＨＳＣの頻度の増加を示すことを示す。破線は、９５％の信頼区間を示す。ＥｘｔｒｅｍｅＬｉｍｉｔｉｎｇＤｉｌｕｔｉｏｎＡｎａｌｙｓｉｓ（ＥＬＤＡ）を使用して、幹細胞の頻度及び有意性を決定した。内皮ＮＦ－κＢ阻害が，ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスのＨＳＣ活性を回復させることを示す。大腿骨の代表的なホールマウント免疫蛍光画像及び血管特異的ＣＤ１４４／ＶＥカドヘリン抗体（赤）で生体内標識されたマウスの血管からのＨＳＣ距離の定量化を示し、これは、内皮ＭＡＰＫ活性化が、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫ：：ＩｋＢマウスで回復される血管ニッチとのＨＳＣの相互作用（白）を妨害することを示す。ＣＤ４８＋及びＬｉｎｅａｇｅ＋細胞（青チャネル）は、血管系とのＨＳＣの相互作用をより適切に視覚化するために示されない。黄色の矢じりは、類洞血管に極めて接近して位置する代表的なＨＳＣ（ＬｉｎｅａｇｅｎｅｇＣＤ４８ｎｅｇＣＤ１５０ｂｒｉｇｈｔとして定義）を示す。黄色のアスタリスクは、巨核球を示す。棒グラフ内の各ドットは、最も近い血管からの個々のＨＳＣの距離を表す（ｎ＝３マウス／コホート）。内皮ＮＦ－κＢ阻害が，ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスのＨＳＣ活性を回復させることを示す。大腿骨の代表的なホールマウント免疫蛍光画像及び血管特異的ＣＤ１４４／ＶＥカドヘリン抗体（赤）で生体内標識されたマウスの血管からのＨＳＣ距離の定量化を示し、これは、内皮ＭＡＰＫ活性化が、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫ：：ＩｋＢマウスで回復される血管ニッチとのＨＳＣの相互作用（白）を妨害することを示す。ＣＤ４８＋及びＬｉｎｅａｇｅ＋細胞（青チャネル）は、血管系とのＨＳＣの相互作用をより適切に視覚化するために示されない。黄色の矢じりは、類洞血管に極めて接近して位置する代表的なＨＳＣ（ＬｉｎｅａｇｅｎｅｇＣＤ４８ｎｅｇＣＤ１５０ｂｒｉｇｈｔとして定義）を示す。黄色のアスタリスクは、巨核球を示す。棒グラフ内の各ドットは、最も近い血管からの個々のＨＳＣの距離を表す（ｎ＝３マウス／コホート）。内皮ＮＦ－κＢ阻害が，ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスのＨＳＣ活性を回復させることを示す。照射（６５０Ｒａｄ）後の末梢血回復の時間経過を示す（ｎ＝６～１０マウス／コホート）。重要なアスタリスクの色は、示された遺伝子型のＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスとの比較を表す。結果は、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫ：：ＩｋＢマウスにおける骨髄保護効果を示し、Ｔｉｅ２．ＩｋＢ－ＳＳマウスと区別がつかない。エラーバーは、試料平均±ＳＥＭを表す。有意性を決定するために、多重比較及びテューキー補正のための一元ＡＮＯＶＡを実施した。＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１；＊＊＊Ｐ＜０．００１．１。内皮ＮＦ－κＢ阻害が、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの造血前駆細胞活性を回復させることを示す。フローサイトメトリーで推定された、示された造血前駆細胞の大腿骨当たりの総細胞数を示す（ｎ＝４～５マウス／コホート）。内皮ＮＦ－κＢ阻害が、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの造血前駆細胞活性を回復させることを示す。フローサイトメトリーで推定された、示された造血前駆細胞の大腿骨当たりの総細胞数を示す（ｎ＝４～５マウス／コホート）。内皮ＮＦ－κＢ阻害が、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの造血前駆細胞活性を回復させることを示す。ＢＭ内のＣＤ４５＋細胞の系列組成を示す（ｎ＝４～５マウス／コホート）。内皮ＮＦ－κＢ阻害が、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの造血前駆細胞活性を回復させることを示す。定常状態の末梢血球数を示す（ｎ＝４～６マウス／コホート）。内皮ＮＦ－κＢ阻害が、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの造血前駆細胞活性を回復させることを示す。末梢血中のＣＤ４５＋細胞の系列組成を示す（ｎ＝５マウス／コホート）図５Ｆ）。内皮ＮＦ－κＢ阻害が、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの造血前駆細胞活性を回復させることを示す。末梢血中のＨＳＰＣ頻度を示す（ｎ＝５マウス／コホート）。内皮ＮＦ－κＢ阻害が、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの造血前駆細胞活性を回復させることを示す。示された遺伝子型の脾臓の全体の画像を示す。内皮ＮＦ－κＢ阻害が、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの造血前駆細胞活性を回復させることを示す。示された遺伝子型における脾臓の細胞性を示す（ｎ＝４～５マウス／コホート）。内皮ＮＦ－κＢ阻害が、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの造血前駆細胞活性を回復させることを示す。示された造血前駆細胞の脾臓当たりの総細胞数を示す（ｎ＝４～５マウス／コホート）。内皮ＮＦ－κＢ阻害が、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの造血前駆細胞活性を回復させることを示す。示された造血前駆細胞の脾臓当たりの総細胞数を示す（ｎ＝４～５マウス／コホート）。内皮ＮＦ－κＢ阻害が、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの造血前駆細胞活性を回復させることを示す。示された造血前駆細胞の脾臓当たりの総細胞数を示す（ｎ＝４～５マウス／コホート）。内皮ＮＦ－κＢ阻害が、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの造血前駆細胞活性を回復させることを示す。脾臓内のＣＤ４５＋細胞の系列組成を示す（ｎ＝４～５マウス／コホート）。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫをＴｉｅ２．ＩｋＢ－ＳＳマウスと交配すると（ＣＤＨ５－ＭＡＰＫ：：ＩｋＢ）、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの造血及びＨＳＰＣ属性が制御レベルに回復することに留意すべきである。エラーバーは、試料平均±ＳＥＭを表す。多重比較及びテューキー補正のための一元ＡＮＯＶＡを実施し、有意性を決定した（＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１；＊＊＊Ｐ＜０．００１．１）。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫ及びＴｉｅ２．ＩｋＢ－ＳＳマウスが、導入遺伝子の内皮特異的発現を示すことを示す。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスを作製するための繁殖方策を説明する概略図である。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫ及びＴｉｅ２．ＩｋＢ－ＳＳマウスが、導入遺伝子の内皮特異的発現を示すことを示す。実験分析前のタモキシフェンレジメンを説明する概略図である。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの全骨髄細胞におけるＧＦＰ発現を示す代表的なフローサイトメトリーの等高線図。数字は、示された象限内の細胞の平均頻度を、全ＢＭ細胞のパーセンテージ±ＳＥＭ（ｎ＝４－５マウス／コホート）として示す。ＧＦＰ発現は、全骨髄細胞のＣＤ４５－分画内の細胞で排他的に検出され、内皮マーカーの表面発現を示すことに留意すべきである。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫ及びＴｉｅ２．ＩｋＢ－ＳＳマウスが、導入遺伝子の内皮特異的発現を示すことを示す。フローサイトメトリーによるホスホ－ＥＲＫ１／２発現の分析では、タモキシフェン投与後のＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスのＢＭＥＣにおけるＭＡＰＫ経路のｉｎｖｉｖｏ活性化が確認されることを示す（ｎ＝３マウス／コホート）。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫ及びＴｉｅ２．ＩｋＢ－ＳＳマウスが、導入遺伝子の内皮特異的発現を示すことを示す。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウス内のＧＦＰ－ＢＭＥＣと比較したＧＦＰ＋ＢＭＥＣが、フローサイトメトリーによるホスホ－ＥＲＫ１／２発現の増加を示し、これにより、ｉｎｖｉｖｏでのｃｒｅ－媒介性組み換えを追跡するためのＧＦＰレポーターの忠実度が確認される。（ｎ＝３マウス／コホート）。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫ及びＴｉｅ２．ＩｋＢ－ＳＳマウスが、導入遺伝子の内皮特異的発現を示すことを示す。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウス（ＣＤ４５－Ｔｅｒ１１９－ＣＤ３１＋ＶＥカドヘリン＋として定義）のＢＭ内の内皮細胞が、ｃｒｅ－媒介性組み換えを示すが、間質細胞（ＣＤ４５－Ｔｅｒ１１９－ＣＤ３１－ＶＥカドヘリン－として定義）は示さないことを示す（ｎ＝４マウス／コホート）。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫ及びＴｉｅ２．ＩｋＢ－ＳＳマウスが、導入遺伝子の内皮特異的発現を示すことを示す。Ｔｉｅ２．ＩｋＢ－ＳＳマウスモデルを説明する概略図である。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫ及びＴｉｅ２．ＩｋＢ－ＳＳマウスが、導入遺伝子の内皮特異的発現を示すことを示す。示された遺伝子型のＦＡＣＳ選別内皮細胞及びＣＤ４５＋造血細胞から単離されたＲＮＡを使用した、示された遺伝子についてのＲＴ－ＰＣＲアンプリコンのアガロースゲル電気泳動画像を示す（ｎ＝３マウス／コホート）。ＩｋＢ－ＳＳ導入遺伝子は、内皮細胞で発現され、造血細胞で検出可能な発現を示さないことに留意すべきである。また、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの内皮細胞でのｃｒｅ導入遺伝子の発現があり、造血細胞で検出可能な発現がないことに留意すべきである。ＮＴＣは「テンプレート対照なし」を示す。選別純度は、Ｃｄｈ５（内皮細胞の場合）及びＰｔｐｒｃ（造血細胞の場合）の発現を使用して確認された。内皮ＮＦ－κＢ阻害が、ＨＳＰＣ及びＢＭニッチ細胞の低酸素傷害をレスキューすることを示す。フローサイトメトリーによるＨｙｐｏｘｙｐｒｏｂｅの定量化に基づくＢＭＨＳＰＣの酸素化状態の推定を示す（ｎ＝５マウス／コホート）。内皮ＮＦ－κＢ阻害が、ＨＳＰＣ及びＢＭニッチ細胞の低酸素傷害をレスキューすることを示す。ＣｅｌｌＲＯＸＯｒａｎｇｅのフローサイトメトリーベースの定量化によるＨＳＰＣのＲＯＳレベルの定量化を示す（ｎ＝５マウス／コホート）。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫＨＳＰＣは、Ｔｉｅ２．ＩｋＢ－ＳＳマウスと交配することにより解決される低酸素及びＲＯＳレベルの増加を示すことに留意すべきである。内皮ＮＦ－κＢ阻害が、ＨＳＰＣ及びＢＭニッチ細胞の低酸素傷害をレスキューすることを示す。フローサイトメトリーによるＫｉ６７－Ｈｏｅｃｈｓｔ染色に基づくＨＳＰＣの細胞周期分析を示す（ｎ＝５マウス／コホート）。内皮ＮＦ－κＢ阻害が、ＨＳＰＣ及びＢＭニッチ細胞の低酸素傷害をレスキューすることを示す。フローサイトメトリーによるＳｕｂ－Ｇ０／Ｇ１期の細胞のパーセンテージの定量化によるＨＳＰＣのアポトーシスの定量化を示す（ｎ＝５マウス／コホート）。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスのＨＳＰＣは、内皮ＮＦ－κＢシグナル伝達の抑制時に解消される、静止状態の喪失及びアポトーシスの増加を示す。内皮ＮＦ－κＢ阻害が、ＨＳＰＣ及びＢＭニッチ細胞の低酸素傷害をレスキューすることを示す。フローサイトメトリーによる、示されたＢＭニッチ細胞における、それぞれ、低酸素、ＲＯＳレベル、静止及びアポトーシスの定量化を示す（ｎ＝４～５マウス／コホート）。内皮ＮＦ－κＢ阻害が、ＨＳＰＣ及びＢＭニッチ細胞の低酸素傷害をレスキューすることを示す。フローサイトメトリーによる、示されたＢＭニッチ細胞における、それぞれ、低酸素、ＲＯＳレベル、静止及びアポトーシスの定量化を示す（ｎ＝４～５マウス／コホート）。内皮ＮＦ－κＢ阻害が、ＨＳＰＣ及びＢＭニッチ細胞の低酸素傷害をレスキューすることを示す。フローサイトメトリーによる、示されたＢＭニッチ細胞における、それぞれ、低酸素、ＲＯＳレベル、静止及びアポトーシスの定量化を示す（ｎ＝４～５マウス／コホート）。内皮ＮＦ－κＢ阻害が、ＨＳＰＣ及びＢＭニッチ細胞の低酸素傷害をレスキューすることを示す。フローサイトメトリーによる、示されたＢＭニッチ細胞における、それぞれ、低酸素、ＲＯＳレベル、静止及びアポトーシスの定量化を示す（ｎ＝４～５マウス／コホート）。内皮ＮＦ－κＢ阻害が、ＨＳＰＣ及びＢＭニッチ細胞の低酸素傷害をレスキューすることを示す。フローサイトメトリーによる大腿骨当たりのＢＭＥＣ及び間質細胞の推定を示す（ｎ＝４～５マウス／コホート）。内皮ＮＦ－κＢ阻害が、ＨＳＰＣ及びＢＭニッチ細胞の低酸素傷害をレスキューすることを示す。ＲＴ－ｑＰＣＲによる、ＦＡＣＳ選別ＢＭニッチ細胞における、ｐｒｏ－ＨＳＣパラクリン因子の発現を示す（ｎ＝３マウス／コホート）。正規化に、Ａｃｔｂを使用した。内皮ＮＦ－κＢ阻害が、ＨＳＰＣ及びＢＭニッチ細胞の低酸素傷害をレスキューすることを示す。フローサイトメトリーによる大腿骨当たりのＢＭＥＣ及び間質細胞の推定を示す（ｎ＝４～５マウス／コホート）。内皮ＮＦ－κＢ阻害が、ＨＳＰＣ及びＢＭニッチ細胞の低酸素傷害をレスキューすることを示す。ＲＴ－ｑＰＣＲによる、ＦＡＣＳ選別ＢＭニッチ細胞における、ｐｒｏ－ＨＳＣパラクリン因子の発現を示す（ｎ＝３マウス／コホート）。正規化に、Ａｃｔｂを使用した。内皮ＮＦ－κＢ阻害が、ＨＳＰＣ及びＢＭニッチ細胞の低酸素傷害をレスキューすることを示す。Ｖｅｎｎｙを使用したＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスのＢＭ間質細胞、造血細胞、及びＥＣにおける、ｑＰＣＲアレイデータからの一般的に上方調節されたＮＦ－κＢ標的遺伝子の同定を示す。内皮ＮＦ－κＢ阻害が、ＨＳＰＣ及びＢＭニッチ細胞の低酸素傷害をレスキューすることを示す。示された細胞型におけるＩｌ１ｂ及びＣｓｆ１発現のＲＴ－ｑＰＣＲ確認を示す（ｎ＝３マウス／コホート）。正規化に、Ａｃｔｂを使用した。内皮ＮＦ－κＢシグナル伝達の阻害は、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの全骨髄内でのＩｌ１ｂ及びＣｓｆ１の発現を大幅に抑制することに注意すべきである。エラーバーは、試料平均±ＳＥＭを表す。有意性を決定するために、多重比較及びテューキー補正のための一元ＡＮＯＶＡを実施した。＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１；＊＊＊Ｐ＜０．００１。内皮ＮＦ－κＢ阻害が、ＨＳＰＣ及びＢＭニッチ細胞の低酸素傷害をレスキューすることを示す。示された細胞型におけるＩｌ１ｂ及びＣｓｆ１発現のＲＴ－ｑＰＣＲ確認を示す（ｎ＝３マウス／コホート）。正規化に、Ａｃｔｂを使用した。内皮ＮＦ－κＢシグナル伝達の阻害は、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの全骨髄内でのＩｌ１ｂ及びＣｓｆ１の発現を大幅に抑制することに注意すべきである。エラーバーは、試料平均±ＳＥＭを表す。有意性を決定するために、多重比較及びテューキー補正のための一元ＡＮＯＶＡを実施した。＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１；＊＊＊Ｐ＜０．００１。内皮ＮＦ－κＢ阻害が、ＨＳＰＣ及びＢＭニッチ細胞の低酸素傷害をレスキューすることを示す。示された細胞型におけるＩｌ１ｂ及びＣｓｆ１発現のＲＴ－ｑＰＣＲ確認を示す（ｎ＝３マウス／コホート）。正規化に、Ａｃｔｂを使用した。内皮ＮＦ－κＢシグナル伝達の阻害は、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの全骨髄内でのＩｌ１ｂ及びＣｓｆ１の発現を大幅に抑制することに注意すべきである。エラーバーは、試料平均±ＳＥＭを表す。有意性を決定するために、多重比較及びテューキー補正のための一元ＡＮＯＶＡを実施した。＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１；＊＊＊Ｐ＜０．００１。内皮ＮＦ－κＢ阻害が、ＨＳＰＣ及びＢＭニッチ細胞の低酸素傷害をレスキューすることを示す。示された細胞型におけるＩｌ１ｂ及びＣｓｆ１発現のＲＴ－ｑＰＣＲ確認を示す（ｎ＝３マウス／コホート）。正規化に、Ａｃｔｂを使用した。内皮ＮＦ－κＢシグナル伝達の阻害は、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの全骨髄内でのＩｌ１ｂ及びＣｓｆ１の発現を大幅に抑制することに注意すべきである。エラーバーは、試料平均±ＳＥＭを表す。有意性を決定するために、多重比較及びテューキー補正のための一元ＡＮＯＶＡを実施した。＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１；＊＊＊Ｐ＜０．００１。ＳＣＧＦ注入が、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの造血及び血管の欠陥を解決することを示す。１０⁶ＷＢＭ当たりの表現型ＨＳＣの頻度を示す（ｎ＝９～１０マウス／コホート）。ＳＣＧＦ注入が、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの造血及び血管の欠陥を解決することを示す。ＳＣＧＦ注入がＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスで観察された表現型ＨＳＣ欠陥を回復することを示す代表的な等高線図を示す。ＳＣＧＦ注入が、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの造血及び血管の欠陥を解決することを示す。メチルセルロースベースの前駆細胞アッセイの結果を示す（ｎ＝５マウス／コホート）。ＳＣＧＦ注入が、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの造血及び血管の欠陥を解決することを示す。移植の４ヶ月後のＣＤ４５．２＋細胞生着及びＣＤ４５．２＋系列分布の合計を評価する競合的再増殖アッセイの結果を示す（ｎ＝５レシピエント／コホート；ｎ＝５ドナー／コホート）。競合的再増殖アッセイのために、５×１０⁵ドナーＷＢＭ細胞（ＣＤ４５．２）を５×１０⁵競合ＷＢＭ細胞（ＣＤ４５．１）と共に、プレコンディショニングされたＣＤ４５．１レシピエントマウスに移植した。ＳＣＧＦで処置されたＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスに由来するドナー細胞は、骨髄性バイアスの解消及びリンパ球産物の増加を伴う生着効率の大幅な増加を示したことに留意すべきである。また、ＳＣＧＦが、対照マウスの造血機能または表現型に大幅な影響を与えないことに留意すべきである。ＳＣＧＦ注入が、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの造血及び血管の欠陥を解決することを示す。移植の４ヶ月後のＣＤ４５．２＋細胞生着及びＣＤ４５．２＋系列分布の合計を評価する競合的再増殖アッセイの結果を示す（ｎ＝５レシピエント／コホート；ｎ＝５ドナー／コホート）。競合的再増殖アッセイのために、５×１０⁵ドナーＷＢＭ細胞（ＣＤ４５．２）を５×１０⁵競合ＷＢＭ細胞（ＣＤ４５．１）と共に、プレコンディショニングされたＣＤ４５．１レシピエントマウスに移植した。ＳＣＧＦで処置されたＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスに由来するドナー細胞は、骨髄性バイアスの解消及びリンパ球産物の増加を伴う生着効率の大幅な増加を示したことに留意すべきである。また、ＳＣＧＦが、対照マウスの造血機能または表現型に大幅な影響を与えないことに留意すべきである。ＳＣＧＦ注入が、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの造血及び血管の欠陥を解決することを示す。長期生着した一次レシピエント由来のＷＢＭ細胞を単離し、プレコンディショニングされたＣＤ４５．１レシピエントマウス（レシピエント当たり２×１０⁶ドナーＷＢＭ細胞）に移植した二次移植アッセイを示す。（ｎ＝５レシピエント／コホート；ｎ＝５ドナー／コホート）。ＳＣＧＦ注入が、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの造血及び血管の欠陥を解決することを示す。長期生着した一次レシピエント由来のＷＢＭ細胞を単離し、プレコンディショニングされたＣＤ４５．１レシピエントマウス（レシピエント当たり２×１０⁶ドナーＷＢＭ細胞）に移植した二次移植アッセイを示す。（ｎ＝５レシピエント／コホート；ｎ＝５ドナー／コホート）。ＳＣＧＦ注入が、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの造血及び血管の欠陥を解決することを示す。Ｅｖａｎ’ｓＢｌｕｅＤｙｅ（ＥＢＤ）血管外漏出によるＢＭ血管漏出の分析では、ＳＣＧＦ注入によりＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの血管漏出が大幅に低減することが明らかになることを示す（ｎ＝３～５マウス／コホート）。ＳＣＧＦ注入が、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの造血及び血管の欠陥を解決することを示す。ＳＣＧＦで処理されたＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスにおける血管拡張の逆転を示す血管特異的ＶＥＣＡＤ抗体（赤）で生体内標識された大腿骨の代表的な免疫蛍光画像を示す。ＳＣＧＦ注入が、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの造血及び血管の欠陥を解決することを示す。ＰＢＳ処置対照マウスと比較した、示された遺伝子型のＢＭ微小環境内でのＮＦ－κＢ標的遺伝子の正規化された遺伝子発現を示す。正規化に、Ｂ２ｍを使用した（ｎ＝３マウス／コホート）。ＳＣＧＦ注入が、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの造血及び血管の欠陥を解決することを示す。ＳＣＧＦで処理されたＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスに由来するＢＭＥＣにおける核ｐ６５のレベルの低下を示す代表的な免疫蛍光画像及び定量化を示す。エラーバーは、試料平均±ＳＥＭを表す。ペアワイズ比較には両側の対応のないスチューデントのｔ検定、多重比較には一元ＡＮＯＶＡを使用して、統計的有意性を決定した。＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１；＊＊＊Ｐ＜０．００１。ＳＣＧＦ注入が、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの造血及び血管の欠陥を解決することを示す。ＳＣＧＦで処理されたＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスに由来するＢＭＥＣにおける核ｐ６５のレベルの低下を示す代表的な免疫蛍光画像及び定量化を示す。エラーバーは、試料平均±ＳＥＭを表す。ペアワイズ比較には両側の対応のないスチューデントのｔ検定、多重比較には一元ＡＮＯＶＡを使用して、統計的有意性を決定した。＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１；＊＊＊Ｐ＜０．００１。ＳＣＧＦが骨髄抑制損傷後の造血再生を増強することを示す。６５０Ｒａｄの照射後の結果を示し、２μｇのＳＣＧＦを１日おきに対照及びＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスに注入し、＋１日目から合計７回注射し、造血回復を２８日にわたって評価した。ＳＣＧＦ注入は、ａ）対照マウス（ｎ＝６～７マウス／コホート）、及び、ｂ）ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウス（ｎ＝７～８マウス／コホート）において、示された時点での白血球、好中球、赤血球、及び血小板の回復の大幅な増加を促進した。ＳＣＧＦが骨髄抑制損傷後の造血再生を増強することを示す。６５０Ｒａｄの照射後の結果を示し、２μｇのＳＣＧＦを１日おきに対照及びＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスに注入し、＋１日目から合計７回注射し、造血回復を２８日にわたって評価した。ＳＣＧＦ注入は、ａ）対照マウス（ｎ＝６～７マウス／コホート）、及び、ｂ）ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウス（ｎ＝７～８マウス／コホート）において、示された時点での白血球、好中球、赤血球、及び血小板の回復の大幅な増加を促進した。ＳＣＧＦが骨髄抑制損傷後の造血再生を増強することを示す。照射の２８日後に血管特異的ＣＤ１４４／ＶＥカドヘリン抗体（赤）で生体内標識された大腿骨の代表的な免疫蛍光画像を示し、これにより、ＳＣＧＦ注入が、ｃ）対照マウス、及び、ｄ）ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの両方において血管回復を改善したことが示される。ＳＣＧＦが骨髄抑制損傷後の造血再生を増強することを示す。照射の２８日後に血管特異的ＣＤ１４４／ＶＥカドヘリン抗体（赤）で生体内標識された大腿骨の代表的な免疫蛍光画像を示し、これにより、ＳＣＧＦ注入が、ｃ）対照マウス、及び、ｄ）ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの両方において血管回復を改善したことが示される。ＳＣＧＦが骨髄抑制損傷後の造血再生を増強することを示す。大腿骨当たりの総細胞数を示す（ｎ＝４～７マウス／コホート）。ＳＣＧＦが骨髄抑制損傷後の造血再生を増強することを示す。フローサイトメトリーにより評価された１０⁶の大腿骨細胞当たりの表現型ＨＳＣの頻度を示す（ｎ＝４～７マウス／コホート）。ＳＣＧＦが骨髄抑制損傷後の造血再生を増強することを示す。ドナーＷＢＭ細胞の総ＣＤ４５．２＋細胞生着及びＣＤ４５．２＋系列分布を評価する競合的再増殖アッセイを示す。照射の２８日後に、ＰＢＳ／ＳＣＧＦで処置された対照及びＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスからドナー細胞を単離した。２．５×１０⁶のドナーＷＢＭ細胞（ＣＤ４５．２）を５×１０⁵の競合ＷＢＭ細胞（ＣＤ４５．１）と共に、プレコンディショニングされたＣＤ４５．１レシピエントマウスに移植した。（ｎ＝９～１０レシピエント／コホート；ｎ＝５ドナー／コホート）。ＳＣＧＦが骨髄抑制損傷後の造血再生を増強することを示す。ドナーＷＢＭ細胞の総ＣＤ４５．２＋細胞生着及びＣＤ４５．２＋系列分布を評価する競合的再増殖アッセイを示す。照射の２８日後に、ＰＢＳ／ＳＣＧＦで処置された対照及びＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスからドナー細胞を単離した。２．５×１０⁶のドナーＷＢＭ細胞（ＣＤ４５．２）を５×１０⁵の競合ＷＢＭ細胞（ＣＤ４５．１）と共に、プレコンディショニングされたＣＤ４５．１レシピエントマウスに移植した。（ｎ＝９～１０レシピエント／コホート；ｎ＝５ドナー／コホート）。ＳＣＧＦが骨髄抑制損傷後の造血再生を増強することを示す。長期生着した一次レシピエント由来のＷＢＭ細胞を単離し、プレコンディショニングされたＣＤ４５．１レシピエントマウスに移植した二次移植アッセイの結果を示す。二次レシピエント毎に２×１０⁶のドナーＷＢＭ細胞を移植した。（ｎ＝４～５レシピエント／コホート；ｎ＝５ドナー／コホート）。エラーバーは、試料平均±ＳＥＭを表す。両側の対応のないスチューデントのｔ検定を使用して、統計的有意性を決定した（＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１；＊＊＊Ｐ＜０．００１）。ＳＣＧＦが骨髄抑制損傷後の造血再生を増強することを示す。長期生着した一次レシピエント由来のＷＢＭ細胞を単離し、プレコンディショニングされたＣＤ４５．１レシピエントマウスに移植した二次移植アッセイの結果を示す。二次レシピエント毎に２×１０⁶のドナーＷＢＭ細胞を移植した。（ｎ＝４～５レシピエント／コホート；ｎ＝５ドナー／コホート）。エラーバーは、試料平均±ＳＥＭを表す。両側の対応のないスチューデントのｔ検定を使用して、統計的有意性を決定した（＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１；＊＊＊Ｐ＜０．００１）。ＢＭニッチ細胞及びＨＳＰＣに対する炎症の影響を説明する概略図である。内皮ＭＡＰＫ活性化は、骨髄内のＮＦ－ｋＢ依存性炎症性ストレス応答を引き起こし、これにより、血管ニッチ及びＨＳＰＣの機能的欠陥がもたらされる。内皮ＮＦ－ｋＢの阻害またはＳＣＧＦの注入による炎症の抑制は、血管完全性を回復し、ＨＳＰＣ及びニッチの欠陥を解消し、骨髄抑制後の造血回復を増強する。通常の生理学的条件下では、ＨＳＣは、骨芽細胞または血管のニッチに存在する。ＨＳＣ娘細胞の一部は、ＢＭ内のＳＤＦ－１のレベルの変化に応じて、ニッチを離れ、動員及び循環し始める。ＨＳＣホーミングは、集結の逆であり、ＢＭ内のより高いレベルのＳＤＦ－１に応答して発生する。骨芽細胞のニッチは、ＨＳＣの維持のための静止微小環境を提供する場合がある。対照的に、血管ニッチは、集結またはホーミング中のＨＳＣ経内皮移動を促進し、ＨＳＣ増殖及びさらなる分化を好むことがある。ＨＰＣを血管ニッチに動員するプロセスは、内皮由来のＦＧＦ－４及びＳＤＦ－１に依存することがある。細胞が骨芽細胞ニッチから血管ニッチに進むにつれて、より高いＦＧＦ－４及び酸素濃度勾配は、ＨＳＣ／ＨＰＣの動員、増殖、及び分化に役割を果たすことがある。血小板減少症などのストレス下で、ＳＤＦ－１及びＶＥＧＦは、ＭＭＰ－９を活性化し、これは、膜結合キットリガンドを可溶性キットリガンド（ｓＫｉｔＬ）に変換し、順次、ＨＳＣが細胞周期に入ること、血管ニッチへの集結、及び分化を促進する。（Ｙｉｎ，Ｔ．，＆Ｌｉ，Ｌ．（２００６）．Ｔｈｅｓｔｅｍｃｅｌｌｎｉｃｈｅｓｉｎｂｏｎｅ．ＴｈｅＪｏｕｒｎａｌｏｆｃｌｉｎｉｃａｌｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ，１１６（５），１１９５－１２０１．ｄｏｉ：１０．１１７２／ＪＣＩ２８５６８から引用）。図１２Ａ．定常状態では、血小板バイアスＨＳＣは、造血階層の最上位にあり、骨髄バイアスＨＳＣ及びリンパバイアスＨＳＣを生成することができる。順次、骨髄バイアスＨＳＣは、平衡バイアスＨＳＣ及びリンパバイアスＨＳＣの両方を生成し得るが、リンパバイアスＨＳＣは、骨髄バイアス対応物を生成しない。血小板バイアスＨＳＣは、他のＨＳＣサブセットよりも速く血小板集団を再増殖させる可能性を有する。骨髄バイアスＨＳＣは、骨髄にコミットされた前駆細胞を介して骨髄系細胞を優先的に生じさせる。バランスＨＳＣは、骨髄系とリンパ系の両方に等しく貢献する。リンパ球バイアスＨＳＣは、主に、リンパ球にコミットされた前駆細胞を介して骨髄系細胞よりもリンパ球を生成する。破線は、あるＨＳＣサブセットが別のＨＳＣサブセットを生成する可能性を表す。実線は、分化能を表す。図１２Ｂ．炎症は、骨髄前駆細胞及び成熟骨髄細胞を含む骨髄系列の産生を高め、これにより、造血における骨髄バイアスがもたらされる。図１２Ｃ．老化のプロセスで、骨髄バイアスＨＳＣが増加し、リンパ系細胞よりも多くの骨髄を生成する。赤い矢印は、支配的な分化経路を示す。破線は、潜在的な経路を表す。実線は、以前に示された分化能を表す。線の太さは、各系列のコミットメントへの相対的な貢献を反映する。（Ｋｏｖｔｏｎｙｕｋ，Ｌ．Ｖ．，Ｆｒｉｔｓｃｈ，Ｋ．，Ｆｅｎｇ，Ｘ．，Ｍａｎｚ，Ｍ．Ｇ．＆Ｔａｋｉｚａｗａ，Ｈ．Ｉｎｆｌａｍｍ－ＡｇｉｎｇｏｆＨｅｍａｔｏｐｏｉｅｓｉｓ，ＨｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃＳｔｅｍＣｅｌｌｓ，ａｎｄｔｈｅＢｏｎｅＭａｒｒｏｗＭｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ．Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓｉｎｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ７，５０２，ｄｏｉ：１０．３３８９／ｆｉｍｍｕ．２０１６．００５０２（２０１６）から引用）。マイトジェン活性化プロテインキナーゼシグナル伝達経路の概略図である。ＭＡＰＫシグナル伝達は、成長因子及び細胞ストレスなどの外部刺激で活性化され、ＭＡＰＫキナーゼキナーゼ（ＭＡＰ３Ｋ）で３層カスケードを活性化し、ＭＡＰＫキナーゼ（ＭＡＰ２Ｋ）を活性化し、最後にＭＡＰＫを活性化する。炎症性疾患に関与する主要なＭＡＰＫ経路は、ＥＲＫ（細胞外調節キナーゼ）、ｐ３８ＭＡＰＫ、及びＪＮＫ（ｃ－ＪｕｎＮＨ₂末端キナーゼ）である。ｐ３８ＭＡＰＫの下流は、ＭＡＰＫ活性化プロテインキナーゼ２（ＭＡＰＫＡＰＫ２またはＭＫ２）である。（Ｂａｒｎｅｓ，ＰＪ（２０１６）“ＫｉｎａｓｅｓａｓＮｏｖｅｌＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃＴａｒｇｅｔｓｉｎＡｓｔｈｍａａｎｄＣｈｒｏｎｉｃＯｂｓｔｒｕｃｔｉｖｅＰｕｌｍｏｎａｒｙＤｉｓｅａｓｅ“ＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌＲｅｖｓ．６８：７８８－８１５から引用）。核因子－κＢ（ＮＦ κＢ）シグナル伝達経路の概略図である。標準的な（古典的な）経路は、炎症性サイトカイン、例えば、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）－α、インターロイキン（ＩＬ）－１β、及びリポ多糖（ＬＰＳ）で活性化され、これにより、κＢキナーゼ（ＮＦ－κＢ必須調節因子（ＮＥＭＯ）と複合体を形成しているＩＫＫα、ＩＫＫβ）の阻害剤のリン酸化がもたらされ、これにより、κＢ（ＩκＢ－β）の阻害のリン酸化がもたらされ、これは、ユビキチン化され、ｐ６５及びｐ５０を放出するプロテアソームにより分解され、核に移行する。核で、それらは、κＢＤＮＡ認識配列に結合し、これにより、サイトカイン、ケモカイン、及びプロテアーゼ遺伝子の活性化がもたらされる。非標準経路は、ＣＤ４０及びリンホトキシン（ＬＴ）－βで活性化され、これは、ＮＦ－κＢ誘導キナーゼ（ＮＩＫ）を活性化し、これにより、ＩＫＫαホモ二量体の活性化がもたらされ、これは、ＲｅｌＢ／ｐ１００をリン酸化し、これにより、核に移行するＲｅｌＢ／ｐ５０複合体が生成され、免疫遺伝子のスイッチを入れる。（Ｂａｒｎｅｓ，ＰＪ（２０１６）“ＫｉｎａｓｅｓａｓＮｏｖｅｌＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃＴａｒｇｅｔｓｉｎＡｓｔｈｍａａｎｄＣｈｒｏｎｉｃＯｂｓｔｒｕｃｔｉｖｅＰｕｌｍｏｎａｒｙＤｉｓｅａｓｅ“ＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌＲｅｖｓ．６８：７８８－８１５から引用）。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスが、同腹仔対照と比較して、免疫表現型で定義されたＨＳＣ（ｃＫＩＴ＋ＬｉｎｅａｇｅＮｅｇＣＤ４１－ＳＣＡ１＋ＣＤ１５０＋ＣＤ４８Ｎｅｇとして定義）、ならびに、ＫＬＳ細胞（ｃＫＩＴ＋ＬｉｎｅａｇｅＮｅｇＳＣＡ１＋）を含む造血幹及び前駆細胞（ＨＳＰＣ）、多能性前駆細胞（ＭＰＰ；ｃＫＩＴ＋ＬｉｎｅａｇｅＮｅｇ、ＳＣＡ１＋ＣＤ１５０ＮｅｇＣＤ４８Ｎｅｇ）及び造血前駆細胞細胞サブセット（それぞれ、ｃＫＩＴ＋ＬｉｎｅａｇｅＮｅｇＳＣＡ１＋ＣＤ１５０ＮｅｇＣＤ４８＋及びｃＫＩＴ＋ＬｉｎｅａｇｅＮｅｇＳＣＡ１＋ＣＤ１５０＋ＣＤ４８＋と定義されるＨＰＣ－１及びＨＰＣ－２）の頻度及び絶対数において大幅な低下を示したことを示す（補足図１Ａ）。細胞周期分析は、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウス由来のＨＳＣ及びＨＳＰＣが、同腹仔対照と比較して、静止の喪失及びアポトーシスの増加を示したことを示した（補足図１Ｂ～１Ｆ）。総合すると、これらのデータは、内皮ＭＡＰＫの慢性的な活性化が、ニッチ活性に悪影響を及ぼし、これにより、定常状態の造血及びＨＳＣ機能の欠陥がもたらされることを示唆する。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスが、同腹仔対照と比較して、免疫表現型で定義されたＨＳＣ（ｃＫＩＴ＋ＬｉｎｅａｇｅＮｅｇＣＤ４１－ＳＣＡ１＋ＣＤ１５０＋ＣＤ４８Ｎｅｇとして定義）、ならびに、ＫＬＳ細胞（ｃＫＩＴ＋ＬｉｎｅａｇｅＮｅｇＳＣＡ１＋）を含む造血幹及び前駆細胞（ＨＳＰＣ）、多能性前駆細胞（ＭＰＰ；ｃＫＩＴ＋ＬｉｎｅａｇｅＮｅｇ、ＳＣＡ１＋ＣＤ１５０ＮｅｇＣＤ４８Ｎｅｇ）及び造血前駆細胞細胞サブセット（それぞれ、ｃＫＩＴ＋ＬｉｎｅａｇｅＮｅｇＳＣＡ１＋ＣＤ１５０ＮｅｇＣＤ４８＋及びｃＫＩＴ＋ＬｉｎｅａｇｅＮｅｇＳＣＡ１＋ＣＤ１５０＋ＣＤ４８＋と定義されるＨＰＣ－１及びＨＰＣ－２）の頻度及び絶対数において大幅な低下を示したことを示す（補足図１Ａ）。細胞周期分析は、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウス由来のＨＳＣ及びＨＳＰＣが、同腹仔対照と比較して、静止の喪失及びアポトーシスの増加を示したことを示した（補足図１Ｂ～１Ｆ）。総合すると、これらのデータは、内皮ＭＡＰＫの慢性的な活性化が、ニッチ活性に悪影響を及ぼし、これにより、定常状態の造血及びＨＳＣ機能の欠陥がもたらされることを示唆する。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスが、同腹仔対照と比較して、免疫表現型で定義されたＨＳＣ（ｃＫＩＴ＋ＬｉｎｅａｇｅＮｅｇＣＤ４１－ＳＣＡ１＋ＣＤ１５０＋ＣＤ４８Ｎｅｇとして定義）、ならびに、ＫＬＳ細胞（ｃＫＩＴ＋ＬｉｎｅａｇｅＮｅｇＳＣＡ１＋）を含む造血幹及び前駆細胞（ＨＳＰＣ）、多能性前駆細胞（ＭＰＰ；ｃＫＩＴ＋ＬｉｎｅａｇｅＮｅｇ、ＳＣＡ１＋ＣＤ１５０ＮｅｇＣＤ４８Ｎｅｇ）及び造血前駆細胞細胞サブセット（それぞれ、ｃＫＩＴ＋ＬｉｎｅａｇｅＮｅｇＳＣＡ１＋ＣＤ１５０ＮｅｇＣＤ４８＋及びｃＫＩＴ＋ＬｉｎｅａｇｅＮｅｇＳＣＡ１＋ＣＤ１５０＋ＣＤ４８＋と定義されるＨＰＣ－１及びＨＰＣ－２）の頻度及び絶対数において大幅な低下を示したことを示す（補足図１Ａ）。細胞周期分析は、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウス由来のＨＳＣ及びＨＳＰＣが、同腹仔対照と比較して、静止の喪失及びアポトーシスの増加を示したことを示した（補足図１Ｂ～１Ｆ）。総合すると、これらのデータは、内皮ＭＡＰＫの慢性的な活性化が、ニッチ活性に悪影響を及ぼし、これにより、定常状態の造血及びＨＳＣ機能の欠陥がもたらされることを示唆する。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスが、同腹仔対照と比較して、免疫表現型で定義されたＨＳＣ（ｃＫＩＴ＋ＬｉｎｅａｇｅＮｅｇＣＤ４１－ＳＣＡ１＋ＣＤ１５０＋ＣＤ４８Ｎｅｇとして定義）、ならびに、ＫＬＳ細胞（ｃＫＩＴ＋ＬｉｎｅａｇｅＮｅｇＳＣＡ１＋）を含む造血幹及び前駆細胞（ＨＳＰＣ）、多能性前駆細胞（ＭＰＰ；ｃＫＩＴ＋ＬｉｎｅａｇｅＮｅｇ、ＳＣＡ１＋ＣＤ１５０ＮｅｇＣＤ４８Ｎｅｇ）及び造血前駆細胞細胞サブセット（それぞれ、ｃＫＩＴ＋ＬｉｎｅａｇｅＮｅｇＳＣＡ１＋ＣＤ１５０ＮｅｇＣＤ４８＋及びｃＫＩＴ＋ＬｉｎｅａｇｅＮｅｇＳＣＡ１＋ＣＤ１５０＋ＣＤ４８＋と定義されるＨＰＣ－１及びＨＰＣ－２）の頻度及び絶対数において大幅な低下を示したことを示す（補足図１Ａ）。細胞周期分析は、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウス由来のＨＳＣ及びＨＳＰＣが、同腹仔対照と比較して、静止の喪失及びアポトーシスの増加を示したことを示した（補足図１Ｂ～１Ｆ）。総合すると、これらのデータは、内皮ＭＡＰＫの慢性的な活性化が、ニッチ活性に悪影響を及ぼし、これにより、定常状態の造血及びＨＳＣ機能の欠陥がもたらされることを示唆する。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスが、同腹仔対照と比較して、免疫表現型で定義されたＨＳＣ（ｃＫＩＴ＋ＬｉｎｅａｇｅＮｅｇＣＤ４１－ＳＣＡ１＋ＣＤ１５０＋ＣＤ４８Ｎｅｇとして定義）、ならびに、ＫＬＳ細胞（ｃＫＩＴ＋ＬｉｎｅａｇｅＮｅｇＳＣＡ１＋）を含む造血幹及び前駆細胞（ＨＳＰＣ）、多能性前駆細胞（ＭＰＰ；ｃＫＩＴ＋ＬｉｎｅａｇｅＮｅｇ、ＳＣＡ１＋ＣＤ１５０ＮｅｇＣＤ４８Ｎｅｇ）及び造血前駆細胞細胞サブセット（それぞれ、ｃＫＩＴ＋ＬｉｎｅａｇｅＮｅｇＳＣＡ１＋ＣＤ１５０ＮｅｇＣＤ４８＋及びｃＫＩＴ＋ＬｉｎｅａｇｅＮｅｇＳＣＡ１＋ＣＤ１５０＋ＣＤ４８＋と定義されるＨＰＣ－１及びＨＰＣ－２）の頻度及び絶対数において大幅な低下を示したことを示す（補足図１Ａ）。細胞周期分析は、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウス由来のＨＳＣ及びＨＳＰＣが、同腹仔対照と比較して、静止の喪失及びアポトーシスの増加を示したことを示した（補足図１Ｂ～１Ｆ）。総合すると、これらのデータは、内皮ＭＡＰＫの慢性的な活性化が、ニッチ活性に悪影響を及ぼし、これにより、定常状態の造血及びＨＳＣ機能の欠陥がもたらされることを示唆する。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスが、同腹仔対照と比較して、免疫表現型で定義されたＨＳＣ（ｃＫＩＴ＋ＬｉｎｅａｇｅＮｅｇＣＤ４１－ＳＣＡ１＋ＣＤ１５０＋ＣＤ４８Ｎｅｇとして定義）、ならびに、ＫＬＳ細胞（ｃＫＩＴ＋ＬｉｎｅａｇｅＮｅｇＳＣＡ１＋）を含む造血幹及び前駆細胞（ＨＳＰＣ）、多能性前駆細胞（ＭＰＰ；ｃＫＩＴ＋ＬｉｎｅａｇｅＮｅｇ、ＳＣＡ１＋ＣＤ１５０ＮｅｇＣＤ４８Ｎｅｇ）及び造血前駆細胞細胞サブセット（それぞれ、ｃＫＩＴ＋ＬｉｎｅａｇｅＮｅｇＳＣＡ１＋ＣＤ１５０ＮｅｇＣＤ４８＋及びｃＫＩＴ＋ＬｉｎｅａｇｅＮｅｇＳＣＡ１＋ＣＤ１５０＋ＣＤ４８＋と定義されるＨＰＣ－１及びＨＰＣ－２）の頻度及び絶対数において大幅な低下を示したことを示す（補足図１Ａ）。細胞周期分析は、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウス由来のＨＳＣ及びＨＳＰＣが、同腹仔対照と比較して、静止の喪失及びアポトーシスの増加を示したことを示した（補足図１Ｂ～１Ｆ）。総合すると、これらのデータは、内皮ＭＡＰＫの慢性的な活性化が、ニッチ活性に悪影響を及ぼし、これにより、定常状態の造血及びＨＳＣ機能の欠陥がもたらされることを示唆する。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫ：：ＩｋＢマウスの造血分析は、ＢＭ細胞性の回復ならびに表現型ＨＳＣ及びＨＳＰＣの頻度を示した（補足図２Ａ）。競合的ＢＭ移植によりアッセイされたＨＳＣ機能性は、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫ：：ＩｋＢマウスにおける長期生着能の完全な回復及び骨髄バイアス分化の逆転を示した（補足図２Ｂ）。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫ：：ＩｋＢマウスに由来するＷＢＭ細胞は、二次移植アッセイ中に連続再増殖１８０及び多系列再構成能を維持することもできた（補足図２Ｃ及び補足図２Ｄ）。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスは、免疫表現型で定義されたＢＭ多能性前駆細胞（ＭＰＰ）、一般的なリンパ系前駆細胞（ＣＬＰ）、一般的な骨髄系前駆細胞（ＣＭＰ）、顆粒球／マクロファージ前駆細胞（ＧＭＰ）、巨核球／赤血球系前駆細胞（ＭＥＰ）、及びＢ細胞前駆細胞サブセット（ｓＩｇＭ－Ｂ２２０＋Ｂ細胞、Ｐｒｅ－ＰｒｏＢ細胞、ＰｒｏＢ細胞、及びＰｒｅＢ細胞）において低下を示した。これは、末梢血数の減少に機能的に反映された。（補足図２Ｅ及び補足図２Ｆ）。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫ：：ＩｋＢマウスの造血分析は、ＢＭ細胞性の回復ならびに表現型ＨＳＣ及びＨＳＰＣの頻度を示した（補足図２Ａ）。競合的ＢＭ移植によりアッセイされたＨＳＣ機能は、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫ：：ＩｋＢマウスにおける長期生着能の完全な回復及び骨髄バイアス分化の逆転を示した（補足図２Ｂ）。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫ：：ＩｋＢマウスに由来するＷＢＭ細胞は、二次移植アッセイ中に連続再増殖１８０及び多系列再構成能を維持することもできた（補足図２Ｃ及び補足図２Ｄ）。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスは、免疫表現型で定義されたＢＭ多能性前駆細胞（ＭＰＰ）、一般的なリンパ系前駆細胞（ＣＬＰ）、一般的な骨髄系前駆細胞（ＣＭＰ）、顆粒球／マクロファージ前駆細胞（ＧＭＰ）、巨核球／赤血球系前駆細胞（ＭＥＰ）、及びＢ細胞前駆細胞サブセット（ｓＩｇＭ－Ｂ２２０＋Ｂ細胞、Ｐｒｅ－ＰｒｏＢ細胞、ＰｒｏＢ細胞、及びＰｒｅＢ細胞）において低下を示した。これは、末梢血数の減少に機能的に反映された。（補足図２Ｅ及び補足図２Ｆ）。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫ：：ＩｋＢマウスの造血分析は、ＢＭ細胞性の回復ならびに表現型ＨＳＣ及びＨＳＰＣの頻度を示した（補足図２Ａ）。競合的ＢＭ移植によりアッセイされたＨＳＣ機能は、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫ：：ＩｋＢマウスにおける長期生着能の完全な回復及び骨髄バイアス分化の逆転を示した（補足図２Ｂ）。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫ：：ＩｋＢマウスに由来するＷＢＭ細胞は、二次移植アッセイ中に連続再増殖１８０及び多系列再構成能を維持することもできた（補足図２Ｃ及び補足図２Ｄ）。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスは、免疫表現型で定義されたＢＭ多能性前駆細胞（ＭＰＰ）、一般的なリンパ系前駆細胞（ＣＬＰ）、一般的な骨髄系前駆細胞（ＣＭＰ）、顆粒球／マクロファージ前駆細胞（ＧＭＰ）、巨核球／赤血球系前駆細胞（ＭＥＰ）、及びＢ細胞前駆細胞サブセット（ｓＩｇＭ－Ｂ２２０＋Ｂ細胞、Ｐｒｅ－ＰｒｏＢ細胞、ＰｒｏＢ細胞、及びＰｒｅＢ細胞）において低下を示した。これは、末梢血数の減少に機能的に反映された。（補足図２Ｅ及び補足図２Ｆ）。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫ：：ＩｋＢマウスの造血分析は、ＢＭ細胞性の回復ならびに表現型ＨＳＣ及びＨＳＰＣの頻度を示した（補足図２Ａ）。競合的ＢＭ移植によりアッセイされたＨＳＣ機能は、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫ：：ＩｋＢマウスにおける長期生着能の完全な回復及び骨髄バイアス分化の逆転を示した（補足図２Ｂ）。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫ：：ＩｋＢマウスに由来するＷＢＭ細胞は、二次移植アッセイ中に連続再増殖１８０及び多系列再構成能を維持することもできた（補足図２Ｃ及び補足図２Ｄ）。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスは、免疫表現型で定義されたＢＭ多能性前駆細胞（ＭＰＰ）、一般的なリンパ系前駆細胞（ＣＬＰ）、一般的な骨髄系前駆細胞（ＣＭＰ）、顆粒球／マクロファージ前駆細胞（ＧＭＰ）、巨核球／赤血球系前駆細胞（ＭＥＰ）、及びＢ細胞前駆細胞サブセット（ｓＩｇＭ－Ｂ２２０＋Ｂ細胞、Ｐｒｅ－ＰｒｏＢ細胞、ＰｒｏＢ細胞、及びＰｒｅＢ細胞）において低下を示した。これは、末梢血数の減少に機能的に反映された。（補足図２Ｅ及び補足図２Ｆ）。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫ：：ＩｋＢマウスの造血分析は、ＢＭ細胞性の回復ならびに表現型ＨＳＣ及びＨＳＰＣの頻度を示した（補足図２Ａ）。競合的ＢＭ移植によりアッセイされたＨＳＣ機能は、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫ：：ＩｋＢマウスにおける長期生着能の完全な回復及び骨髄バイアス分化の逆転を示した（補足図２Ｂ）。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫ：：ＩｋＢマウスに由来するＷＢＭ細胞は、二次移植アッセイ中に連続再増殖１８０及び多系列再構成能を維持することもできた（補足図２Ｃ及び補足図２Ｄ）。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスは、免疫表現型で定義されたＢＭ多能性前駆細胞（ＭＰＰ）、一般的なリンパ系前駆細胞（ＣＬＰ）、一般的な骨髄系前駆細胞（ＣＭＰ）、顆粒球／マクロファージ前駆細胞（ＧＭＰ）、巨核球／赤血球系前駆細胞（ＭＥＰ）、及びＢ細胞前駆細胞サブセット（ｓＩｇＭ－Ｂ２２０＋Ｂ細胞、Ｐｒｅ－ＰｒｏＢ細胞、ＰｒｏＢ細胞、及びＰｒｅＢ細胞）において低下を示した。これは、末梢血数の減少に機能的に反映された。（補足図２Ｅ及び補足図２Ｆ）。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫ：：ＩｋＢマウスの造血分析は、ＢＭ細胞性の回復ならびに表現型ＨＳＣ及びＨＳＰＣの頻度を示した（補足図２Ａ）。競合的ＢＭ移植によりアッセイされたＨＳＣ機能は、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫ：：ＩｋＢマウスにおける長期生着能の完全な回復及び骨髄バイアス分化の逆転を示した（補足図２Ｂ）。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫ：：ＩｋＢマウスに由来するＷＢＭ細胞は、二次移植アッセイ中に連続再増殖１８０及び多系列再構成能を維持することもできた（補足図２Ｃ及び補足図２Ｄ）。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスは、免疫表現型で定義されたＢＭ多能性前駆細胞（ＭＰＰ）、一般的なリンパ系前駆細胞（ＣＬＰ）、一般的な骨髄系前駆細胞（ＣＭＰ）、顆粒球／マクロファージ前駆細胞（ＧＭＰ）、巨核球／赤血球系前駆細胞（ＭＥＰ）、及びＢ細胞前駆細胞サブセット（ｓＩｇＭ－Ｂ２２０＋Ｂ細胞、Ｐｒｅ－ＰｒｏＢ細胞、ＰｒｏＢ細胞、及びＰｒｅＢ細胞）において低下を示した。これは、末梢血数の減少に機能的に反映された。（補足図２Ｅ及び補足図２Ｆ）。ＲＴ－ｑＰＣＲ分析では、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの造血細胞（ＣＤ４５＋）、間質細胞（ＣＤ４５－Ｔｅｒ１１９－ＣＤ３１－ＶＥカドヘリン－）、及び未分画の全骨髄（ＷＢＭ）細胞におけるＮＦ－ｋＢ標的遺伝子の全体的な上方調節が明らかになった（補足図３Ａ～３Ｆ）。これにより、内皮ＭＡＰＫの活性化が、ＢＭ内の一般化された炎症性応答を引き起こすことが示された。ＲＴ－ｑＰＣＲ分析では、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの造血細胞（ＣＤ４５＋）、間質細胞（ＣＤ４５－Ｔｅｒ１１９－ＣＤ３１－ＶＥカドヘリン－）、及び未分画の全骨髄（ＷＢＭ）細胞におけるＮＦ－ｋＢ標的遺伝子の全体的な上方調節が明らかになった（補足図３Ａ～３Ｆ）。これにより、内皮ＭＡＰＫの活性化が、ＢＭ内の一般化された炎症性応答を引き起こすことが示された。ＲＴ－ｑＰＣＲ分析では、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの造血細胞（ＣＤ４５＋）、間質細胞（ＣＤ４５－Ｔｅｒ１１９－ＣＤ３１－ＶＥカドヘリン－）、及び未分画の全骨髄（ＷＢＭ）細胞におけるＮＦ－ｋＢ標的遺伝子の全体的な上方調節が明らかになった（補足図３Ａ～３Ｆ）。これにより、内皮ＭＡＰＫの活性化が、ＢＭ内の一般化された炎症性応答を引き起こすことが示された。ＲＴ－ｑＰＣＲ分析では、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの造血細胞（ＣＤ４５＋）、間質細胞（ＣＤ４５－Ｔｅｒ１１９－ＣＤ３１－ＶＥカドヘリン－）、及び未分画の全骨髄（ＷＢＭ）細胞におけるＮＦ－ｋＢ標的遺伝子の全体的な上方調節が明らかになった（補足図３Ａ～３Ｆ）。これにより、内皮ＭＡＰＫの活性化が、ＢＭ内の一般化された炎症性応答を引き起こすことが示された。ＲＴ－ｑＰＣＲ分析では、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの造血細胞（ＣＤ４５＋）、間質細胞（ＣＤ４５－Ｔｅｒ１１９－ＣＤ３１－ＶＥカドヘリン－）、及び未分画の全骨髄（ＷＢＭ）細胞におけるＮＦ－ｋＢ標的遺伝子の全体的な上方調節が明らかになった（補足図３Ａ～３Ｆ）。これにより、内皮ＭＡＰＫの活性化が、ＢＭ内の一般化された炎症性応答を引き起こすことが示された。ＲＴ－ｑＰＣＲ分析では、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの造血細胞（ＣＤ４５＋）、間質細胞（ＣＤ４５－Ｔｅｒ１１９－ＣＤ３１－ＶＥカドヘリン－）、及び未分画の全骨髄（ＷＢＭ）細胞におけるＮＦ－ｋＢ標的遺伝子の全体的な上方調節が明らかになった（補足図３Ａ～３Ｆ）。これにより、内皮ＭＡＰＫの活性化が、ＢＭ内の一般化された炎症性応答を引き起こすことが示された。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスにおける導入遺伝子発現の忠実度は、内因性のＲｏｓａ２６：ｅＧＦＰレポーターシステムを使用して、ｃｒｅ媒介性２４８組み換えを追跡することにより検証された。ＧＦＰの発現は、骨髄内の内皮細胞に厳密に限定され、ＨＳＣ、ならびに骨髄細胞、Ｂ細胞、及びＴ細胞を含む分析された造血サブセットのいずれにも検出可能な発現はなかった（補足図４Ａ及び補足図４Ｂ）。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスにおける導入遺伝子発現の忠実度は、内因性のＲｏｓａ２６：ｅＧＦＰレポーターシステムを使用して、ｃｒｅ媒介性２４８組み換えを追跡することにより検証された。ＧＦＰの発現は、骨髄内の内皮細胞に厳密に限定され、ＨＳＣ、ならびに骨髄細胞、Ｂ細胞、及びＴ細胞を含む分析された造血サブセットのいずれにも検出可能な発現はなかった（補足図４Ａ及び補足図４Ｂ）。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスのＨＳＰＣは、静止状態の喪失及びアポトーシスの増加と共に低酸素及びＲＯＳレベルの大幅な増加を示したことを示す。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスのＨＳＰＣは、静止状態の喪失及びアポトーシスの増加と共に低酸素及びＲＯＳレベルの大幅な増加を示したことを示す。ＢＭＬｅｐｒ＋細胞及び骨芽細胞のフローサイトメトリー分析は、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの細胞性またはＨＳＣ調節因子の発現において大幅な変化を明らかにしなかった（補足図６Ａ、６Ｅ、６Ｇ、及び６Ｈ）。しかし、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスのＬｅｐｒ＋細胞及び骨芽細胞の両方が、他のＢＭ細胞サブセットと同様にＮＦ－κＢ調節標的遺伝子の発現の増加を示し、これは、内皮ＮＦ－κＢシグナル伝達の阻害時に抑制された（補足図６Ｆ及び補足図６Ｉ）。ＢＭＬｅｐｒ＋細胞及び骨芽細胞のフローサイトメトリー分析は、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの細胞性またはＨＳＣ調節因子の発現において大幅な変化を明らかにしなかった（補足図６Ａ、６Ｅ、６Ｇ、及び６Ｈ）。しかし、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスのＬｅｐｒ＋細胞及び骨芽細胞の両方が、他のＢＭ細胞サブセットと同様にＮＦ－κＢ調節標的遺伝子の発現の増加を示し、これは、内皮ＮＦ－κＢシグナル伝達の阻害時に抑制された（補足図６Ｆ及び補足図６Ｉ）。ＢＭＬｅｐｒ＋細胞及び骨芽細胞のフローサイトメトリー分析は、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの細胞性またはＨＳＣ調節因子の発現において大幅な変化を明らかにしなかった（補足図６Ａ、６Ｅ、６Ｇ、及び６Ｈ）。しかし、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスのＬｅｐｒ＋細胞及び骨芽細胞の両方が、他のＢＭ細胞サブセットと同様にＮＦ－κＢ調節標的遺伝子の発現の増加を示し、これは、内皮ＮＦ－κＢシグナル伝達の阻害時に抑制された（補足図６Ｆ及び補足図６Ｉ）。ＢＭＬｅｐｒ＋細胞及び骨芽細胞のフローサイトメトリー分析は、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの細胞性またはＨＳＣ調節因子の発現において大幅な変化を明らかにしなかった（補足図６Ａ、６Ｅ、６Ｇ、及び６Ｈ）。しかし、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスのＬｅｐｒ＋細胞及び骨芽細胞の両方が、他のＢＭ細胞サブセットと同様にＮＦ－κＢ調節標的遺伝子の発現の増加を示し、これは、内皮ＮＦ－κＢシグナル伝達の阻害時に抑制された（補足図６Ｆ及び補足図６Ｉ）。ＢＭＬｅｐｒ＋細胞及び骨芽細胞のフローサイトメトリー分析は、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの細胞性またはＨＳＣ調節因子の発現において大幅な変化を明らかにしなかった（補足図６Ａ、６Ｅ、６Ｇ、及び６Ｈ）。しかし、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスのＬｅｐｒ＋細胞及び骨芽細胞の両方が、他のＢＭ細胞サブセットと同様にＮＦ－κＢ調節標的遺伝子の発現の増加を示し、これは、内皮ＮＦ－κＢシグナル伝達の阻害時に抑制された（補足図６Ｆ及び補足図６Ｉ）。ＢＭＬｅｐｒ＋細胞及び骨芽細胞のフローサイトメトリー分析は、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの細胞性またはＨＳＣ調節因子の発現において大幅な変化を明らかにしなかった（補足図６Ａ、６Ｅ、６Ｇ、及び６Ｈ）。しかし、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスのＬｅｐｒ＋細胞及び骨芽細胞の両方が、他のＢＭ細胞サブセットと同様にＮＦ－κＢ調節標的遺伝子の発現の増加を示し、これは、内皮ＮＦ－κＢシグナル伝達の阻害時に抑制された（補足図６Ｆ及び補足図６Ｉ）。ＢＭＬｅｐｒ＋細胞及び骨芽細胞のフローサイトメトリー分析は、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの細胞性またはＨＳＣ調節因子の発現において大幅な変化を明らかにしなかった（補足図６Ａ、６Ｅ、６Ｇ、及び６Ｈ）。しかし、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスのＬｅｐｒ＋細胞及び骨芽細胞の両方が、他のＢＭ細胞サブセットと同様にＮＦ－κＢ調節標的遺伝子の発現の増加を示し、これは、内皮ＮＦ－κＢシグナル伝達の阻害時に抑制された（補足図６Ｆ及び補足図６Ｉ）。ＢＭＬｅｐｒ＋細胞及び骨芽細胞のフローサイトメトリー分析は、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの細胞性またはＨＳＣ調節因子の発現において大幅な変化を明らかにしなかった（補足図６Ａ、６Ｅ、６Ｇ、及び６Ｈ）。しかし、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスのＬｅｐｒ＋細胞及び骨芽細胞の両方が、他のＢＭ細胞サブセットと同様にＮＦ－κＢ調節標的遺伝子の発現の増加を示し、これは、内皮ＮＦ－κＢシグナル伝達の阻害時に抑制された（補足図６Ｆ及び補足図６Ｉ）。ＢＭＬｅｐｒ＋細胞及び骨芽細胞のフローサイトメトリー分析は、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの細胞性またはＨＳＣ調節因子の発現において大幅な変化を明らかにしなかった（補足図６Ａ、６Ｅ、６Ｇ、及び６Ｈ）。しかし、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスのＬｅｐｒ＋細胞及び骨芽細胞の両方が、他のＢＭ細胞サブセットと同様にＮＦ－κＢ調節標的遺伝子の発現の増加を示し、これは、内皮ＮＦ－κＢシグナル伝達の阻害時に抑制された（補足図６Ｆ及び補足図６Ｉ）。炎症時にＨＳＣ機能を調節し得る新規候補タンパク質をスクリーニングするために、同腹仔対照と比較して差次的に発現された８２のタンパク質として同定されたＴｉｅ２．ＩｋＢ－ＳＳマウスに由来する血漿のプロテオミクス分析（ＳｏｍａＬｏｇｉｃ）を実施した。潜在的な造血促進タンパク質は、Ｔｉｅ２．ＩｋＢ－ＳＳマウスと比較して、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスでは反対の傾向を示すと仮定された。このアプローチを使用して、大幅に変化し、逆相関した１８の候補因子を同定した（すなわち、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスでは下、Ｔｉｅ２．ＩｋＢ－ＳＳでは上、及び逆もまた同様）（補足図７、図７Ａ、及び補足図７Ｂ）。これらの中で、Ｃｌｅｃ１１ａ／幹細胞成長因子α（ＳＣＧＦ）は、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスで最も大幅に下方調節されたタンパク質であった（補足図７Ｃ）。ＳＣＧＦアプタマーの特異性が確認され、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスで観察された血漿ＳＣＧＦの減少が検証された（補足図７Ｄ）。特に、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫ：：ＩｋＢマウスは、血漿ＳＣＧＦレベルの回復を示した。これにより、さらに、ＳＣＧＦが、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫ：：ＩｋＢマウスの回復を促進する潜在的な造血促進因子であり得ることが示される。（補足図７Ｅ及び補足図７Ｆ）。炎症時にＨＳＣ機能を調節し得る新規候補タンパク質をスクリーニングするために、同腹仔対照と比較して差次的に発現された８２のタンパク質として同定されたＴｉｅ２．ＩｋＢ－ＳＳマウスに由来する血漿のプロテオミクス分析（ＳｏｍａＬｏｇｉｃ）を実施した。潜在的な造血促進タンパク質は、Ｔｉｅ２．ＩｋＢ－ＳＳマウスと比較して、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスでは反対の傾向を示すと仮定された。このアプローチを使用して、大幅に変化し、逆相関した１８の候補因子を同定した（すなわち、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスでは下、Ｔｉｅ２．ＩｋＢ－ＳＳでは上、及び逆もまた同様）（補足図７、図７Ａ、及び補足図７Ｂ）。これらの中で、Ｃｌｅｃ１１ａ／幹細胞成長因子α（ＳＣＧＦ）は、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスで最も大幅に下方調節されたタンパク質であった（補足図７Ｃ）。ＳＣＧＦアプタマーの特異性が確認され、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスで観察された血漿ＳＣＧＦの減少が検証された（補足図７Ｄ）。特に、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫ：：ＩｋＢマウスは、血漿ＳＣＧＦレベルの回復を示した。これにより、さらに、ＳＣＧＦが、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫ：：ＩｋＢマウスの回復を促進する潜在的な造血促進因子であり得ることが示される。（補足図７Ｅ及び補足図７Ｆ）。炎症時にＨＳＣ機能を調節し得る新規候補タンパク質をスクリーニングするために、同腹仔対照と比較して差次的に発現された８２のタンパク質として同定されたＴｉｅ２．ＩｋＢ－ＳＳマウスに由来する血漿のプロテオミクス分析（ＳｏｍａＬｏｇｉｃ）を実施した。潜在的な造血促進タンパク質は、Ｔｉｅ２．ＩｋＢ－ＳＳマウスと比較して、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスでは反対の傾向を示すと仮定された。このアプローチを使用して、大幅に変化し、逆相関した１８の候補因子を同定した（すなわち、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスでは下、Ｔｉｅ２．ＩｋＢ－ＳＳでは上、及び逆もまた同様）（補足図７、図７Ａ、及び補足図７Ｂ）。これらの中で、Ｃｌｅｃ１１ａ／幹細胞成長因子α（ＳＣＧＦ）は、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスで最も大幅に下方調節されたタンパク質であった（補足図７Ｃ）。ＳＣＧＦアプタマーの特異性が確認され、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスで観察された血漿ＳＣＧＦの減少が検証された（補足図７Ｄ）。特に、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫ：：ＩｋＢマウスは、血漿ＳＣＧＦレベルの回復を示した。これにより、さらに、ＳＣＧＦが、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫ：：ＩｋＢマウスの回復を促進する潜在的な造血促進因子であり得ることが示される。（補足図７Ｅ及び補足図７Ｆ）。炎症時にＨＳＣ機能を調節し得る新規候補タンパク質をスクリーニングするために、同腹仔対照と比較して差次的に発現された８２のタンパク質として同定されたＴｉｅ２．ＩｋＢ－ＳＳマウスに由来する血漿のプロテオミクス分析（ＳｏｍａＬｏｇｉｃ）を実施した。潜在的な造血促進タンパク質は、Ｔｉｅ２．ＩｋＢ－ＳＳマウスと比較して、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスでは反対の傾向を示すと仮定された。このアプローチを使用して、大幅に変化し、逆相関した１８の候補因子を同定した（すなわち、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスでは下、Ｔｉｅ２．ＩｋＢ－ＳＳでは上、及び逆もまた同様）（補足図７、図７Ａ、及び補足図７Ｂ）。これらの中で、Ｃｌｅｃ１１ａ／幹細胞成長因子α（ＳＣＧＦ）は、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスで最も大幅に下方調節されたタンパク質であった（補足図７Ｃ）。ＳＣＧＦアプタマーの特異性が確認され、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスで観察された血漿ＳＣＧＦの減少が検証された（補足図７Ｄ）。特に、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫ：：ＩｋＢマウスは、血漿ＳＣＧＦレベルの回復を示した。これにより、さらに、ＳＣＧＦが、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫ：：ＩｋＢマウスの回復を促進する潜在的な造血促進因子であり得ることが示される。（補足図７Ｅ及び補足図７Ｆ）。炎症時にＨＳＣ機能を調節し得る新規候補タンパク質をスクリーニングするために、同腹仔対照と比較して差次的に発現された８２のタンパク質として同定されたＴｉｅ２．ＩｋＢ－ＳＳマウスに由来する血漿のプロテオミクス分析（ＳｏｍａＬｏｇｉｃ）を実施した。潜在的な造血促進タンパク質は、Ｔｉｅ２．ＩｋＢ－ＳＳマウスと比較して、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスでは反対の傾向を示すと仮定された。このアプローチを使用して、大幅に変化し、逆相関した１８の候補因子を同定した（すなわち、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスでは下、Ｔｉｅ２．ＩｋＢ－ＳＳでは上、及び逆もまた同様）（補足図７、図７Ａ、及び補足図７Ｂ）。これらの中で、Ｃｌｅｃ１１ａ／幹細胞成長因子α（ＳＣＧＦ）は、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスで最も大幅に下方調節されたタンパク質であった（補足図７Ｃ）。ＳＣＧＦアプタマーの特異性が確認され、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスで観察された血漿ＳＣＧＦの減少が検証された（補足図７Ｄ）。特に、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫ：：ＩｋＢマウスは、血漿ＳＣＧＦレベルの回復を示した。これにより、さらに、ＳＣＧＦが、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫ：：ＩｋＢマウスの回復を促進する潜在的な造血促進因子であり得ることが示される。（補足図７Ｅ及び補足図７Ｆ）。炎症時にＨＳＣ機能を調節し得る新規候補タンパク質をスクリーニングするために、同腹仔対照と比較して差次的に発現された８２のタンパク質として同定されたＴｉｅ２．ＩｋＢ－ＳＳマウスに由来する血漿のプロテオミクス分析（ＳｏｍａＬｏｇｉｃ）を実施した。潜在的な造血促進タンパク質は、Ｔｉｅ２．ＩｋＢ－ＳＳマウスと比較して、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスでは反対の傾向を示すと仮定された。このアプローチを使用して、大幅に変化し、逆相関した１８の候補因子を同定した（すなわち、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスでは下、Ｔｉｅ２．ＩｋＢ－ＳＳでは上、及び逆もまた同様）（補足図７、図７Ａ、及び補足図７Ｂ）。これらの中で、Ｃｌｅｃ１１ａ／幹細胞成長因子α（ＳＣＧＦ）は、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスで最も大幅に下方調節されたタンパク質であった（補足図７Ｃ）。ＳＣＧＦアプタマーの特異性が確認され、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスで観察された血漿ＳＣＧＦの減少が検証された（補足図７Ｄ）。特に、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫ：：ＩｋＢマウスは、血漿ＳＣＧＦレベルの回復を示した。これにより、さらに、ＳＣＧＦが、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫ：：ＩｋＢマウスの回復を促進する潜在的な造血促進因子であり得ることが示される。（補足図７Ｅ及び補足図７Ｆ）。ＳＣＧＦがＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの造血障害を回復し得るかどうかを判定するために、４μｇのＳＣＧＦを、５日間連続して皮下注入し、最後の注射から２４時間後に造血系の表現型及び機能属性を分析した（補足図８Ａ）。細胞の頻度及び絶対数に、有意性は見られなかった（補足図８Ｂ）。同腹仔対照マウスへのＳＣＧＦ注入は、ＳＣＧＦが、定常状態の造血に影響を及ぼさないことを確認したが、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスへのＳＣＧＦの注入は、造血に重大な影響を及ぼしていた（補足図８Ｃ～８Ｅ）。ＳＣＧＦ注入は、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの表現型ＨＳＣ及びＨＳＰＣの頻度を大幅に増加させた（補足図８Ｃ）。ＳＣＧＦ注入は、また、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの末梢血骨髄バイアスを解消し、血球数を回復させた（補足図８Ｄ及び補足図８Ｅ）。ＳＣＧＦがＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの造血障害を回復し得るかどうかを判定するために、４μｇのＳＣＧＦを、５日間連続して皮下注入し、最後の注射から２４時間後に造血系の表現型及び機能属性を分析した（補足図８Ａ）。細胞の頻度及び絶対数に、有意性は見られなかった（補足図８Ｂ）。同腹仔対照マウスへのＳＣＧＦ注入は、ＳＣＧＦが、定常状態の造血に影響を及ぼさないことを確認したが、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスへのＳＣＧＦの注入は、造血に重大な影響を及ぼしていた（補足図８Ｃ～８Ｅ）。ＳＣＧＦ注入は、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの表現型ＨＳＣ及びＨＳＰＣの頻度を大幅に増加させた（補足図８Ｃ）。ＳＣＧＦ注入は、また、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの末梢血骨髄バイアスを解消し、血球数を回復させた（補足図８Ｄ及び補足図８Ｅ）。ＳＣＧＦがＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの造血障害を回復し得るかどうかを判定するために、４μｇのＳＣＧＦを、５日間連続して皮下注入し、最後の注射から２４時間後に造血系の表現型及び機能属性を分析した（補足図８Ａ）。細胞の頻度及び絶対数に、有意性は見られなかった（補足図８Ｂ）。同腹仔対照マウスへのＳＣＧＦ注入は、ＳＣＧＦが、定常状態の造血に影響を及ぼさないことを確認したが、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスへのＳＣＧＦの注入は、造血に重大な影響を及ぼしていた（補足図８Ｃ～８Ｅ）。ＳＣＧＦ注入は、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの表現型ＨＳＣ及びＨＳＰＣの頻度を大幅に増加させた（補足図８Ｃ）。ＳＣＧＦ注入は、また、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの末梢血骨髄バイアスを解消し、血球数を回復させた（補足図８Ｄ及び補足図８Ｅ）。ＳＣＧＦがＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの造血障害を回復し得るかどうかを判定するために、４μｇのＳＣＧＦを、５日間連続して皮下注入し、最後の注射から２４時間後に造血系の表現型及び機能属性を分析した（補足図８Ａ）。細胞の頻度及び絶対数に、有意性は見られなかった（補足図８Ｂ）。同腹仔対照マウスへのＳＣＧＦ注入は、ＳＣＧＦが、定常状態の造血に影響を及ぼさないことを確認したが、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスへのＳＣＧＦの注入は、造血に重大な影響を及ぼしていた（補足図８Ｃ～８Ｅ）。ＳＣＧＦ注入は、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの表現型ＨＳＣ及びＨＳＰＣの頻度を大幅に増加させた（補足図８Ｃ）。ＳＣＧＦ注入は、また、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの末梢血骨髄バイアスを解消し、血球数を回復させた（補足図８Ｄ及び補足図８Ｅ）。ＳＣＧＦがＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの造血障害を回復し得るかどうかを判定するために、４μｇのＳＣＧＦを、５日間連続して皮下注入し、最後の注射から２４時間後に造血系の表現型及び機能属性を分析した（補足図８Ａ）。細胞の頻度及び絶対数に、有意性は見られなかった（補足図８Ｂ）。同腹仔対照マウスへのＳＣＧＦ注入は、ＳＣＧＦが、定常状態の造血に影響を及ぼさないことを確認したが、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスへのＳＣＧＦの注入は、造血に重大な影響を及ぼしていた（補足図８Ｃ～８Ｅ）。ＳＣＧＦ注入は、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの表現型ＨＳＣ及びＨＳＰＣの頻度を大幅に増加させた（補足図８Ｃ）。ＳＣＧＦ注入は、また、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの末梢血骨髄バイアスを解消し、血球数を回復させた（補足図８Ｄ及び補足図８Ｅ）。ＳＣＧＦが、骨形成を促進することが示されているので、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスで観察されたＢＭ炎症に伴う血漿ＳＣＧＦレベルの低下が骨減少症をもたらし得る可能性がある。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスは、実に、骨小柱の体積、骨小柱の数及び厚さの全体的な減少を示し、これにより、内皮ＭＡＰＫの活性化が骨の健康に有害な影響を与えたことが示された（補足図９Ａ～９Ｄ）。ＳＣＧＦは、対照マウスの骨形成に影響を与えなかったが、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの骨小柱の体積ならびに骨小柱の数及び厚さの有意な増加を引き起こし、これにより、骨形成の促進における役割が確認された（補足図９Ａ～９Ｄ）。特に、ＳＣＧＦの発現は、造血細胞及びＢＭＥＣには見られず、主に、ＢＭＬｅｐｒ＋及び骨芽細胞間質サブセットを含むＢＭ間質細胞で発現された（補足図９Ｅ）。しかし、Ｔｉｅ２－ＩｋＢ－ＳＳ、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫ、及びＣＤＨ５－ＭＡＰＫ：：ＩｋＢマウスのＢＭからの全間質細胞、Ｌｅｐｒ＋細胞、及び骨芽細胞におけるＳＣＧＦ発現の分析では、ｍＲＮＡ発現に大幅な変化が明らかにならなかった（補足図９Ｆ）。これにより、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスにおける血漿ＳＣＧＦの減少が転写変化によるものではないことが示される。ＳＣＧＦが、骨形成を促進することが示されているので、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスで観察されたＢＭ炎症に伴う血漿ＳＣＧＦレベルの低下が骨減少症をもたらし得る可能性がある。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスは、実に、骨小柱の体積、骨小柱の数及び厚さの全体的な減少を示し、これにより、内皮ＭＡＰＫの活性化が骨の健康に有害な影響を与えたことが示された（補足図９Ａ～９Ｄ）。ＳＣＧＦは、対照マウスの骨形成に影響を与えなかったが、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの骨小柱の体積ならびに骨小柱の数及び厚さの有意な増加を引き起こし、これにより、骨形成の促進における役割が確認された（補足図９Ａ～９Ｄ）。特に、ＳＣＧＦの発現は、造血細胞及びＢＭＥＣには見られず、主に、ＢＭＬｅｐｒ＋及び骨芽細胞間質サブセットを含むＢＭ間質細胞で発現された（補足図９Ｅ）。しかし、Ｔｉｅ２－ＩｋＢ－ＳＳ、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫ、及びＣＤＨ５－ＭＡＰＫ：：ＩｋＢマウスのＢＭからの全間質細胞、Ｌｅｐｒ＋細胞、及び骨芽細胞におけるＳＣＧＦ発現の分析では、ｍＲＮＡ発現に大幅な変化が明らかにならなかった（補足図９Ｆ）。これにより、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスにおける血漿ＳＣＧＦの減少が転写変化によるものではないことが示される。ＳＣＧＦが、骨形成を促進することが示されているので、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスで観察されたＢＭ炎症に伴う血漿ＳＣＧＦレベルの低下が骨減少症をもたらし得る可能性がある。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスは、実に、骨小柱の体積、骨小柱の数及び厚さの全体的な減少を示し、これにより、内皮ＭＡＰＫの活性化が骨の健康に有害な影響を与えたことが示された（補足図９Ａ～９Ｄ）。ＳＣＧＦは、対照マウスの骨形成に影響を与えなかったが、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの骨小柱の体積ならびに骨小柱の数及び厚さの有意な増加を引き起こし、これにより、骨形成の促進における役割が確認された（補足図９Ａ～９Ｄ）。特に、ＳＣＧＦの発現は、造血細胞及びＢＭＥＣには見られず、主に、ＢＭＬｅｐｒ＋及び骨芽細胞間質サブセットを含むＢＭ間質細胞で発現された（補足図９Ｅ）。しかし、Ｔｉｅ２－ＩｋＢ－ＳＳ、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫ、及びＣＤＨ５－ＭＡＰＫ：：ＩｋＢマウスのＢＭからの全間質細胞、Ｌｅｐｒ＋細胞、及び骨芽細胞におけるＳＣＧＦ発現の分析では、ｍＲＮＡ発現に大幅な変化が明らかにならなかった（補足図９Ｆ）。これにより、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスにおける血漿ＳＣＧＦの減少が転写変化によるものではないことが示される。ＳＣＧＦが、骨形成を促進することが示されているので、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスで観察されたＢＭ炎症に伴う血漿ＳＣＧＦレベルの低下が骨減少症をもたらし得る可能性がある。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスは、実に、骨小柱の体積、骨小柱の数及び厚さの全体的な減少を示し、これにより、内皮ＭＡＰＫの活性化が骨の健康に有害な影響を与えたことが示された（補足図９Ａ～９Ｄ）。ＳＣＧＦは、対照マウスの骨形成に影響を与えなかったが、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの骨小柱の体積ならびに骨小柱の数及び厚さの有意な増加を引き起こし、これにより、骨形成の促進における役割が確認された（補足図９Ａ～９Ｄ）。特に、ＳＣＧＦの発現は、造血細胞及びＢＭＥＣには見られず、主に、ＢＭＬｅｐｒ＋及び骨芽細胞間質サブセットを含むＢＭ間質細胞で発現された（補足図９Ｅ）。しかし、Ｔｉｅ２－ＩｋＢ－ＳＳ、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫ、及びＣＤＨ５－ＭＡＰＫ：：ＩｋＢマウスのＢＭからの全間質細胞、Ｌｅｐｒ＋細胞、及び骨芽細胞におけるＳＣＧＦ発現の分析では、ｍＲＮＡ発現に大幅な変化が明らかにならなかった（補足図９Ｆ）。これにより、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスにおける血漿ＳＣＧＦの減少が転写変化によるものではないことが示される。ＳＣＧＦが、骨形成を促進することが示されているので、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスで観察されたＢＭ炎症に伴う血漿ＳＣＧＦレベルの低下が骨減少症をもたらし得る可能性がある。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスは、実に、骨小柱の体積、骨小柱の数及び厚さの全体的な減少を示し、これにより、内皮ＭＡＰＫの活性化が骨の健康に有害な影響を与えたことが示された（補足図９Ａ～９Ｄ）。ＳＣＧＦは、対照マウスの骨形成に影響を与えなかったが、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの骨小柱の体積ならびに骨小柱の数及び厚さの有意な増加を引き起こし、これにより、骨形成の促進における役割が確認された（補足図９Ａ～９Ｄ）。特に、ＳＣＧＦの発現は、造血細胞及びＢＭＥＣには見られず、主に、ＢＭＬｅｐｒ＋及び骨芽細胞間質サブセットを含むＢＭ間質細胞で発現された（補足図９Ｅ）。しかし、Ｔｉｅ２－ＩｋＢ－ＳＳ、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫ、及びＣＤＨ５－ＭＡＰＫ：：ＩｋＢマウスのＢＭからの全間質細胞、Ｌｅｐｒ＋細胞、及び骨芽細胞におけるＳＣＧＦ発現の分析では、ｍＲＮＡ発現に大幅な変化が明らかにならなかった（補足図９Ｆ）。これにより、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスにおける血漿ＳＣＧＦの減少が転写変化によるものではないことが示される。ＳＣＧＦが、骨形成を促進することが示されているので、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスで観察されたＢＭ炎症に伴う血漿ＳＣＧＦレベルの低下が骨減少症をもたらし得る可能性がある。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスは、実に、骨小柱の体積、骨小柱の数及び厚さの全体的な減少を示し、これにより、内皮ＭＡＰＫの活性化が骨の健康に有害な影響を与えたことが示された（補足図９Ａ～９Ｄ）。ＳＣＧＦは、対照マウスの骨形成に影響を与えなかったが、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの骨小柱の体積ならびに骨小柱の数及び厚さの有意な増加を引き起こし、これにより、骨形成の促進における役割が確認された（補足図９Ａ～９Ｄ）。特に、ＳＣＧＦの発現は、造血細胞及びＢＭＥＣには見られず、主に、ＢＭＬｅｐｒ＋及び骨芽細胞間質サブセットを含むＢＭ間質細胞で発現された（補足図９Ｅ）。しかし、Ｔｉｅ２－ＩｋＢ－ＳＳ、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫ、及びＣＤＨ５－ＭＡＰＫ：：ＩｋＢマウスのＢＭからの全間質細胞、Ｌｅｐｒ＋細胞、及び骨芽細胞におけるＳＣＧＦ発現の分析では、ｍＲＮＡ発現に大幅な変化が明らかにならなかった（補足図９Ｆ）。これにより、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスにおける血漿ＳＣＧＦの減少が転写変化によるものではないことが示される。野生型マウスに骨髄抑制線量の照射（６５０Ｒａｄ）４１０を施行し、照射後＋１日目から合計７回の注射で、１日おきに０．５μｇ、１μｇ、または２μｇのいずれかのＳＣＧＦを注入し、造血回復を２１日間評価した（補足図１０Ａ）。用量応答実験は、２μｇのＳＣＧＦの注入が白血球、赤血球、及び血小板の大幅に増強された回復をもたらしたことを示し、これにより、ＳＣＧＦが骨髄抑制ストレス後の造血回復を高めることが確認された（補足図１０Ａ）。この方策を利用して、図ｂの概略図は、ＳＣＧＦが造血回復を改善し、対照マウス及びＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの両方でＨＳＰＣ活性を維持し得るかどうかを試験したプロトコルを示す（補足図１０Ｂ）。野生型マウスに骨髄抑制線量の照射（６５０Ｒａｄ）４１０を施行し、照射後＋１日目から合計７回の注射で、１日おきに０．５μｇ、１μｇ、または２μｇのいずれかのＳＣＧＦを注入し、造血回復を２１日間評価した（補足図１０Ａ）。用量応答実験は、２μｇのＳＣＧＦの注入が白血球、赤血球、及び血小板の大幅に増強された回復をもたらしたことを示し、これにより、ＳＣＧＦが骨髄抑制ストレス後の造血回復を高めることが確認された（補足図１０Ａ）。この方策を利用して、図ｂの概略図は、ＳＣＧＦが造血回復を改善し、対照マウス及びＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの両方でＨＳＰＣ活性を維持し得るかどうかを試験したプロトコルを示す（補足図１０Ｂ）。

定義
本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈に別途明示のない限り、複数形の指示対象を含む。従って、例えば、「ペプチド」への言及は、当業者に既知の１つ以上のペプチド及びその等価物への言及である。

本明細書で使用される場合、「約」という用語は、使用されている数の数値の±２０％を意味する。従って、約５０％は、４０％～６０％の範囲（両端を含む）を意味する。

本明細書で使用される「適応免疫」という用語は、Ｂ細胞及びＴ細胞により媒介され、免疫記憶により特徴付けられる病原体または毒素からの宿主生物の保護を指す。適応免疫は、所与の抗原に非常に特異的であり、非常に適応性がある。

治療手段と組み合わせて使用される場合の「投与」は、直接的に標的臓器、組織、もしくは細胞の中または上に、治療薬を与えるか、もしくは適用し、または対照に治療薬を投与し、それにより、治療薬が、標的とされる臓器、組織、細胞、または対象に正の影響を与えることを意味する。従って、本明細書で使用される場合、「投与すること」という用語は、アンジオクライン因子を含む組成物と組み合わせて使用される場合、標的臓器、組織、もしくは細胞内もしくは上に組成物を提供すること、または、治療薬が標的臓器、組織、もしくは細胞に到達するように、例えば、静脈内注射により患者に全身的に組成物を提供することを含み得るが、これらに限定されない。「投与すること」は、非経口、経口、または局所投与により、吸入により、または他の既知の手法と組み合わせたそのような方法により達成されてもよい。

本明細書で使用される「アゴニスト」という用語は、受容体を活性化して完全または部分的な薬理学的応答を誘導することが可能な化学物質を指す。受容体は、内因性または外因性のアゴニスト及びアンタゴニストのいずれかにより活性化または不活性化することができ、これにより、生物学的応答の刺激または阻害がもたらされる。生理学的アゴニストは、同じ身体的応答を生じる物質であるが、同じ受容体には結合しない。特定の受容体の内因性アゴニストは、その受容体に結合して活性化する、身体により自然に生成される化合物である。スーパーアゴニストは、標的受容体の内因性アゴニストよりも大きな最大応答を生じさせることが可能な化合物であり、従って、効率は１００％を超える。これは必ずしも内因性アゴニストよりも強力であることを意味するのではなく、むしろ、受容体結合後に細胞内で生成することができる最大の可能な応答の比較である。完全アゴニストは、受容体に結合して活性化し、これにより、その受容体で完全な有効性が示される。部分アゴニストもまた、所与の受容体に結合して活性化するが、完全アゴニストと比較して、受容体において部分的な有効性しか有さない。インバースアゴニストは、その受容体のアゴニストと同じ受容体結合部位に結合し、受容体の構成的活性を逆転させる薬剤である。インバースアゴニストは、受容体アゴニストとは逆の薬理効果を発揮する。不可逆的アゴニストは、受容体が恒久的に活性化されるような方法で、受容体に恒久的に結合するアゴニストの一種である。アゴニストの受容体への会合が可逆的であるが、不可逆的アゴニストの受容体への会合が不可逆的であると考えられるという点で、それは、単なるアゴニストとは異なる。これにより、化合物がアゴニスト活性の短いバーストを生じ、続いて、脱感作及び受容体の内在化が引き起こされ、これは、長期処置と共に、よりアンタゴニストのような効果を生じる。選択的アゴニストは、ある特定タイプの受容体に特異的である。本明細書で使用される「同種異系」という用語は、ドナー及びレシピエントが異なる遺伝子構成のものであるが、同じ種のものであることを意味する。Ｔ

本明細書で使用される「自家」という用語は、同じ個体に由来することを意味する。

「アミノ酸」という用語は、アミノ基及びカルボキシル基の両方を含有する有機分子を指すために使用される。天然に存在するタンパク質の構成単位として機能するものは、アルファアミノ酸であり、アミノ基及びカルボキシル基の両方が同じ炭素原子に結合している。「アミノ酸残基」または「残基」という用語は、限定されないが、天然に存在するアミノ酸及び天然に存在するアミノ酸と同じように機能し得る天然アミノ酸の既知のアナログを含む、タンパク質、ポリペプチド、またはペプチドに組み込まれるアミノ酸を指すために互換的に使用される。

本明細書で、アミノ酸に使用される略語は、従来使用される以下の略語である：Ａ＝Ａｌａ＝アラニン；Ｒ＝Ａｒｇ＝アルギニン；Ｎ＝Ａｓｎ＝アスパラギン；Ｄ＝Ａｓｐ＝アスパラギン酸；Ｃ＝Ｃｙｓ＝システイン；Ｑ＝Ｇ１ｎ＝グルタミン；Ｅ＝Ｇｌｕ＝グルタミン酸；Ｇ＝Ｇｌｙ＝グリシン；Ｈ＝Ｈｉｓ＝ヒスチジン；Ｉ＝Ｉｌｅ＝イソロイシン；Ｌ＝Ｌｅｕ＝ロイシン；Ｋ＝Ｌｙｓ＝リジン；Ｍ＝Ｍｅｔ＝メチオニン；Ｆ＝Ｐｈｅ＝フェニルアラニン；Ｐ＝Ｐｒｏ＝プロリン；Ｓ＝Ｓｅｒ＝セリン；Ｔ＝Ｔｈｒ＝スレオニン；Ｗ＝Ｔｒｐ＝トリプトファン；Ｙ＝Ｔｙｒ＝チロシン；Ｖ＝Ｖａｌ＝バリン。アミノ酸は、Ｌ－アミノ酸またはＤ－アミノ酸であってよい。アミノ酸は、ペプチドの半減期を増加させるために、またはペプチドの効力を増加させるために、またはペプチドの生物学的利用能を増加させるために、変更される合成アミノ酸により置き換えられてもよい。

以下は、互いに保存的に置換されているアミノ酸のグループを表す：
アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、スレオニン（Ｔ）、
アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、
アスパラギン（Ｎ）、グルタミン（Ｑ）、
アルギニン（Ｒ）、リジン（Ｋ）、
イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、バリン（Ｖ）、及び
フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、トリプトファン（Ｗ）。

本明細書で使用される「血管新生」という用語は、新しい血管が、内皮細胞の「発芽」により既存の血管から形成され、それにより、血管樹が増殖するプロセスを指す。

本明細書で使用される「アンジオクライン因子」という用語は、臓器の恒常性を維持し、幹細胞の自己複製及び分化のバランスをとり、臓器の再生及び腫瘍成長を調整する内皮細胞により産生された血管ニッチ由来のパラクリン因子を指す。アンジオクライン因子は、分泌型及び膜結合型の抑制性及び刺激性成長因子、トロフォゲン、ケモカイン、サイトカイン、細胞外マトリックス構成要素、エクソソーム、及びパラクリンまたはジャクスタクリン様式で恒常性及び再生プロセスの調節を助ける組織特異的ＥＣにより供給される他の細胞産物を含む。これらの要因は、適応治癒及び線維性リモデリングにも関与する。アンジオクライン因子のサブセットは、再生臓器の形状、構造、サイズ、及びパターンを決定するために、モルフォゲンとして機能し得る。ＥＣの各組織特異的ベッドのアンジオクラインプロファイルは異なり、臓器のＥＣに隣接して見られる細胞型の多様性を反映する。アンジオクライン因子のサブセットが、構成的に産生されるが、いくつかの血管新生因子は、他の組織特異的アンジオクライン因子の産生を調節し得る。例えば、ＶＥＧＦ－Ａは、ＶＥＧＦＲ－１及びＶＥＧＦＲ－２との相互作用を通じて、定義されたアンジオクライン因子の発現を誘導する（図１ｅ）。同様に、（ＦＧＦＲ－１の活性化を介する）ＦＧＦ－２及び（受容体Ｔｉｅ２との相互作用を介する）アンジオポエチンは、アンジオクライン因子の固有のクラスターの発現を引き起こす。ＴＳＰ－１は、複雑な方法で機能し、幹細胞及び前駆細胞の分化に直接影響を与えるだけでなく、抑制性血管新生因子として機能し得る。臓器特異的ＥＣからの文脈依存性アンジオクライン因子の産生を支配する分子プログラムは、未定義のままである。Ｒａｆｉｉ，Ｓ．，ｅｔａｌ，“Ａｎｇｉｏｃｒｉｎｅｆｕｎｃｔｉｏｎｓｏｆｏｒｇａｎ－ｓｐｅｃｉｆｉｃｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓ，”Ｎａｔｕｒｅ（２０１６）５２９（７５８６）：３１６－３２５）。

本明細書で使用される「動物」、「患者」、及び「対象」という用語は、ヒトならびに野生動物、飼育動物、及び家畜などの非ヒト脊椎動物を含むが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、「動物」、「患者」、及び「対象」という用語は、ヒトを含む哺乳類を指すことがある。

本明細書で使用される「抗体」という用語は、抗原の抗原決定基の特徴と相補的である内部表面形状及び電荷分布を有する３次元結合空間を有するポリペプチド鎖のフォールディングから形成される少なくとも１つの結合ドメインから構成されるポリペプチドまたはポリペプチドの群を指す。

抗体分子全体の基本的な構造単位は、４つのポリペプチド鎖、２つの同一の軽（Ｌ）鎖（それぞれ、約２２０アミノ酸を含有）及び２つの同一の重（Ｈ）鎖（それぞれ、通常、約４４０アミノ酸を含有）から構成される。２本の重鎖及び２本の軽鎖は、非共有結合及び共有（ジスルフィド）結合の組み合わせにより結合している。分子は、２つの同一の半分で構成され、それぞれが、軽鎖のＮ末端領域及び重鎖のＮ末端領域で構成される同一の抗原結合部位を有する。通常、軽鎖及び重鎖の両方が協働して、抗原結合表面を形成する。ヒト抗体は、κ及びλの２種類の軽鎖を示し、免疫グロブリンの個々の分子は、一般に、一方または他方のみである。

抗体は、単独で、または既知の手法により提供される他のアミノ酸配列と組み合わせたオリゴクローナル抗体、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ＣＤＲグラフト化抗体、多重特異性抗体、二重特異性抗体、触媒抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、完全ヒト抗体、抗イディオタイプ抗体、及び可溶性または結合形態で標識することができる抗体、ならびにそれらのフラグメント、バリアントまたは誘導体であってよい。モノクローナル抗体（ｍＡｂ）は、免疫されたドナー由来のマウス脾臓細胞をマウス骨髄腫細胞株と融合させて、選択培地で成長する確立されたマウスハイブリドーマクローンを得ることにより生成することができる。ハイブリドーマ細胞は、抗体分泌Ｂ細胞と骨髄腫細胞のｉｎｖｉｔｒｏ融合から生じる不死化ハイブリッド細胞である。培養中の抗原特異的Ｂ細胞の一次活性化を指すｉｎｖｉｔｒｏ免疫化は、マウスモノクローナル抗体を産生するもう１つの確立された手段である。末梢血リンパ球由来の免疫グロブリン重（ＶＨ）鎖及び軽（Ｖκ及びＶλ）鎖可変遺伝子の多様なライブラリーも、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）増幅により増幅することができる。重鎖及び軽鎖の可変ドメインがポリペプチドスペーサー（単鎖ＦｖまたはｓｃＦｖ）で連結されている単一ポリペプチド鎖をコードする遺伝子は、ＰＣＲを使用して重鎖及び軽鎖のＶ遺伝子をランダムに組み合わせることにより作成することができる。次に、コンビナトリアルライブラリーを、ファージの先端にあるマイナーコートタンパク質に融合させることにより、糸状バクテリオファージの表面にディスプレイするためにクローニングすることができる。ガイド選択の手法は、齧歯類の免疫グロブリンＶ遺伝子とのヒト免疫グロブリンＶ遺伝子のシャッフリングに基づく。方法は、（ｉ）目的の抗原と反応するマウスモノクローナル抗体の重鎖可変領域（ＶＨ）ドメインでヒトλ軽鎖のレパートリーをシャッフルすること；（ｉｉ）その抗原上の半ヒトＦａｂを選択すること；（ｉｉｉ）選択されたλ軽鎖遺伝子を２回目のシャッフリングでヒト重鎖のライブラリーの「ドッキングドメイン」として使用して、ヒト軽鎖遺伝子を有するクローンＦａｂフラグメントを単離すること；（ｖ）遺伝子を含有する哺乳類細胞発現ベクターを用いたエレクトロポレーションによるマウス骨髄腫細胞をトランスフェクトすること；及び（ｖｉ）マウス骨髄腫において完全なＩｇＧ１、λ抗体分子として抗原と反応するＦａｂのＶ遺伝子を発現させること、を必要とする。抗体は、いかなる種のものであってよい。抗体という用語はまた、本発明の抗体の結合フラグメントを含み；例示的なフラグメントには、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、一本鎖抗体（ｓｖＦＣ）、二量体可変領域（ダイアボディ）、及びジスルフィド安定化可変領域（ｄｓＦｖ）が挙げられる。構造的及び機能的ドメインは、ヌクレオチド及び／またはアミノ酸配列データを、公的または独自の配列データベースと比較することにより同定することができる。例えば、コンピューター化された比較方法は、既知の構造及び／または機能の他のタンパク質で発生する配列モチーフまたは予測されるタンパク質コンフォメーションドメインを同定するために使用することができる。既知の３次元構造にフォールディングされるタンパク質配列を同定する方法が、既知である。例えば、Ｂｏｗｉｅｅｔａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ２５３：１６４（１９９１）（全体が参照により組み込まれる）を参照のこと。

本明細書で使用される場合、「抗原」または「免疫原」という用語は、免疫応答を誘発する物質を指すために互換的に使用される。「抗原決定基」または「エピトープ」は、分子上の抗原部位である。連続的な抗原決定基／エピトープは、本質的に線状鎖である。らせん状のポリマーまたはタンパク質などの整然とした構造では、抗原決定基／エピトープは、本質的に、互いに接近し得る分子の異なる部分のアミノ酸側鎖を含む構造内または構造の表面上の限定された領域またはパッチであるであろう。これらは、立体配座決定因子である。

「アポトーシス」または「プログラムされた細胞死」という用語は、生物に損傷を与えることのない、ブレブ形成、細胞膜への変化、例えば、膜の非対称性及び付着の喪失、細胞の収縮、核の断片化、クロマチン凝縮、ならびに染色体ＤＮＡの断片化を含む、様々な形態学的変化をもたらす一連の生化学的イベントからなる生物学的恒常性に寄与する高度に調節された活発なプロセスを指す。

アポトーシス細胞死は、多くの異なる要因により誘導され、多くのシグナル伝達経路を含み、カスパーゼプロテアーゼ（システインプロテアーゼのクラス）に依存するものもあれば、カスパーゼ非依存性のものもある。それは、細胞表面受容体、ストレスに対するミトコンドリア応答、及び細胞傷害性Ｔ細胞を含む、多くの様々な細胞刺激によって引き起こすことができ、これにより、アポトーシスシグナル伝達経路の活性化がもたらされる。

アポトーシスに関与するカスパーゼは、タンパク質分解カスケードでアポトーシスシグナルを伝達し、カスパーゼが、他のカスパーゼを切断して活性化し、次に、細胞死を引き起こす他の細胞標的を分解する。カスケードの上端にあるカスパーゼは、カスパーゼ８及びカスパーゼ９を含む。カスパーゼ８は、Ｆａｓのようなデスドメイン（ＤＤ）を有する受容体に応答して関与する最初のカスパーゼである。

ＴＮＦ受容体ファミリーの受容体は、アポトーシスの誘導及び炎症性シグナル伝達に関連する。Ｆａｓ受容体（ＣＤ９５）は、他の細胞の表面に発現されるＦａｓリガンドによるアポトーシスシグナル伝達を媒介する。Ｆａｓ－ＦａｓＬ相互作用は、免疫系で重要な役割を果たし、このシステムの欠如は、自己免疫につながり、これにより、Ｆａｓ媒介性アポトーシスが自己反応性リンパ球を除去することが示される。Ｆａｓシグナル伝達は、形質転換細胞及びウイルス感染細胞を除去するための免疫監視にも関与する。別の細胞上のオリゴマー化ＦａｓＬへのＦａｓの結合は、ＦＡＦ、ＦＡＤＤ、及びＤＡＸを含むシグナル伝達アダプターと相互作用して、カスパーゼタンパク質分解カスケードを活性化するデスドメイン（ＤＤ）と呼ばれる細胞質ドメインを介してアポトーシスシグナル伝達を活性化する。カスパーゼ８及びカスパーゼ１０は、最初に活性化され、次に、下流のカスパーゼ及び細胞死につながる様々な細胞基質を切断して活性化する。

ミトコンドリアは、ミトコンドリアタンパク質の細胞質への放出を介してアポトーシスシグナル伝達経路に関与する。電子輸送の重要なタンパク質であるシトクロムｃは、アポトーシスシグナルに応答してミトコンドリアから放出され、ミトコンドリアから放出されるプロテアーゼであるＡｐａｆ－１を活性化する。活性化されたＡｐａｆ－１は、カスパーゼ９及び残りのカスパーゼ経路を活性化する。Ｓｍａｃ／ＤＩＡＢＬＯは、ミトコンドリアから放出され、通常は、カスパーゼ９と相互作用してアポトーシスを阻害するＩＡＰタンパク質を阻害する。Ｂｃｌ－２ファミリータンパク質によるアポトーシス調節は、ファミリーメンバーがミトコンドリア膜に入る複合体を形成する時に行われ、これにより、シトクロムｃ及び他のタンパク質の放出が調節される。アポトーシスを引き起こすＴＮＦファミリー受容体は、カスパーゼカスケードを直接活性化するが、ミトコンドリア媒介性アポトーシスを活性化するＢｃｌ－２ファミリーメンバーであるＢｉｄも活性化し得る。別のＢｃｌ－２ファミリーメンバーであるＢａｘは、この経路により活性化されて、ミトコンドリア膜に局在し、透過性を高め、これにより、シトクロムｃ及び他のミトコンドリアタンパク質が放出される。Ｂｃｌ－２及びＢｃｌ－ｘＬは、細孔形成を防ぎ、アポトーシスをブロックする。シトクロムｃと同様に、ＡＩＦ（アポトーシス誘導因子）は、ミトコンドリアに見られるタンパク質であり、これは、アポトーシス刺激によりミトコンドリアから放出される。シトクロムＣは、カスパーゼ依存性アポトーシスシグナル伝達に関連するが、ＡＩＦ放出は、カスパーゼ非依存性アポトーシスを刺激し、核に移動して、ＤＮＡに結合する。ＡＩＦによるＤＮＡ結合は、おそらく、ヌクレアーゼの動員を通じて、クロマチン凝縮及びＤＮＡ断片化を刺激する。

ミトコンドリアストレス経路は、ミトコンドリアからのシトクロムｃの放出から始まり、次に、シトクロムｃが、Ａｐａｆ－１と相互作用して、これにより、カスパーゼ９の自己切断及び活性化が引き起こされる。カスパーゼ３、６、及び７は、上流のプロテアーゼにより活性化され、細胞標的を切断するように作用する下流のカスパーゼである。

細胞傷害性Ｔ細胞により放出されるグランザイムＢ及びパーフォリンタンパク質は、標的細胞にアポトーシスを誘導し、これにより、膜貫通孔が形成され、おそらくカスパーゼの切断を介してアポトーシスが誘導されるが、グランザイムＢ媒介性アポトーシスのカスパーゼ非依存性機序が示唆されている。

アポトーシスシグナル伝達経路により活性化されて、ヌクレオソームラダーを作成する複数のヌクレアーゼによる核ゲノムの断片化は、アポトーシスに特徴的な細胞応答である。アポトーシスに関与する１つのヌクレアーゼは、カスパーゼ活性化ＤＮＡｓｅ（ＣＡＤ）であるＤＮＡフラグメント化因子（ＤＦＦ）である。ＤＦＦ／ＣＡＤは、アポトーシス中にカスパーゼプロテアーゼによる関連阻害剤ＩＣＡＤの切断により活性化される。ＤＦＦ／ＣＡＤは、トポイソメラーゼＩＩ及びヒストンＨ１などのクロマチン構成要素と相互作用して、クロマチン構造を凝縮し、おそらくＣＡＤをクロマチンに動員する。別のアポトーシス活性化プロテアーゼは、エンドヌクレアーゼＧ（ＥｎｄｏＧ）である。ＥｎｄｏＧは、核ゲノムにコードされるが、正常細胞のミトコンドリアに局在する。ＥｎｄｏＧは、ミトコンドリアゲノムの複製及びアポトーシスにおいて役割を果たすことがある。アポトーシスシグナル伝達は、ミトコンドリアからのＥｎｄｏＧの放出を引き起こす。ＥｎｄｏＧ経路が、依然として、ＤＦＦを欠く細胞で生じるので、ＥｎｄｏＧ及びＤＦＦ／ＣＡＤ経路は独立している。

低酸素症、及び低酸素症とそれに続く再酸素化は、シトクロムｃの放出及びアポトーシスを引き起こし得る。ほとんどの細胞型で遍在的に発現されるセリン－スレオニンキナーゼであるグリコーゲンシンターゼキナーゼ（ＧＳＫ－３）は、ミトコンドリアの細胞死経路を活性化する多くの刺激により、アポトーシスを媒介または増強するように見える。Ｌｏｂｅｒｇ，ＲＤ，ｅｔａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７（４４）：４１６６７－６７３（２００２）。カスパーゼ３の活性化を誘導し、アポトーシス促進性腫瘍抑制遺伝子ｐ５３を活性化することが実証されている。また、ＧＳＫ－３は、アポトーシス促進性のＢｃｌ－２ファミリーメンバーであるＢａｘの活性化及び転座を促進し、凝集及びミトコンドリアの局在化時に、シトクロムｃの放出を誘導することも示唆されている。Ａｋｔは、ＧＳＫ－３の重要な調節因子であり、ＧＳＫ－３のリン酸化及び不活性化は、Ａｋｔの抗アポトーシス効果の一部を媒介することがある。

本明細書で使用される「オートクリンシグナル伝達」という用語は、細胞が、それ自体または同じタイプの他の隣接する細胞に作用するシグナル分子を分泌する、細胞シグナル伝達のタイプを指す。

本明細書で互換的に使用される「自家」または「自己」という用語は、同じ生物に由来することを意味する。

本明細書で使用される「結合」という用語及び他の文法形式は、化学物質間の永続的な引力を意味する。

抗体の「結合フラグメント」は、組み換えＤＮＡ手法により、またはインタクトな抗体の酵素的もしくは化学的切断により生成することができる。結合フラグメントは、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）₂、Ｆｖ、及び一本鎖抗体を含む。

「二重特異性」または「二官能性抗体」は、結合部位のそれぞれが同一ではない抗体である。「二重特異性」または「二官能性」抗体以外の抗体は、その結合部位のそれぞれが同一であると理解される。

本明細書で使用される「結合特異性」という用語は、特定のパートナーに結合すること、及び他の分子に結合しないことの両方を含む。機能的に重要な結合は、低～高の親和性の範囲で生じ得、設計要素は、望ましくない相互作用を抑制し得る。翻訳後修飾も、相互作用の化学的性質及び構造も変更し得る。「無差別結合」は、ある程度の構造的可塑性を伴ってもよく、これにより、異なるパートナーへの結合に重要な残基の異なるサブセットが生じ得る。「相対的結合特異性」は、生化学的システムにおいて、分子がその標的またはパートナーと差次的に相互作用し、それにより、個々の標的またはパートナーの同定に応じて、それらに明確に影響を与えるという特徴である。

本明細書で使用される「バイオマーカー」（または「バイオシグネチャー」）という用語は、ペプチド、タンパク質、核酸、抗体、遺伝子、代謝産物、または生物学的状態の指標として使用される他の任意の物質を指す。これは、客観的に測定され、正常な生物学的プロセス、病原性プロセス、または治療的介入に対する薬理学的応答の細胞または分子の指標として評価される特性である。本明細書で使用される「指標」という用語は、時間の関数としての相対的変化；または、その実在もしくは存在が目に見えるか、もしくは証拠となるシグナル、サイン、マーク、ノート、もしくは徴候を明らかにし得る一連の観察された事実から導き出された任意の物質、数、または比率を指す。提案されたバイオマーカーが検証されていると、それは、個体における疾患リスク、疾患の存在を診断するために、または、個体の疾患の処置を調整（薬物処置または投与レジームの選択）するために、使用されてもよい。潜在的な薬物療法を評価する際に、バイオマーカーは、生存または不可逆的な罹患率などの自然な評価項目の代用物として使用されてもよい。処置によりバイオマーカーが変更され、その変更が健康の改善に直接関係する場合、バイオマーカーは、臨床的利益を評価するための代用評価項目として機能し得る。臨床評価項目は、患者がどのように感じるか、機能するか、または生存するかを測定するために使用することができる変数である。代用評価項目は、臨床評価項目の代わりとなることが意図されるバイオマーカーであり、これらのバイオマーカーは、規制当局及び臨床コミュニティに受け入れられる信頼水準で臨床評価項目を予測することが実証される。

骨細胞。骨の４つの細胞型が、その形成及び維持に関与する。これらは、１）骨前駆細胞、２）骨芽細胞、３）骨細胞、及び、４）破骨細胞である。

骨前駆細胞。骨前駆細胞は、間葉系細胞から生じ、骨膜の内部及び成熟した骨の骨内膜に生じる。それらは、骨形成が始まっている胚性間葉区画の領域、及び成長中の骨の表面近くの領域に見られる。構造的に、骨前駆細胞は、それらが生じた間葉系細胞とは異なる。それらは、薄い染色の細胞質及び薄い染色の核を有する不規則な形で細長い細胞である。有糸分裂により増殖する骨前駆細胞は、主に、それらの位置及び骨芽細胞との関連により同定される。いくつかの骨前駆細胞は、骨細胞に分化する。骨芽細胞及び骨細胞は、もはや有糸分裂ではないが、骨前駆細胞の集団は、寿命全体にわたって存続することが示されている。

骨芽細胞。類骨の継ぎ目の表面（まだミネラル化されていない新しく形成された有機マトリックスの骨の表面の狭い領域）に位置する骨芽細胞は、骨前駆細胞に由来する。それらは、コラーゲンを合成し、ミネラル化を制御する未成熟な単核の骨形成細胞である。骨芽細胞は、形態学的に骨前駆細胞と区別することができ、一般に、骨前駆細胞よりも大きく、より丸みを帯びた核、より顕著な核小体、及びはるかに好塩基性である細胞質を有する。骨芽細胞は、主にＩ型コラーゲンで構成され、類骨として知られるタンパク質混合物を生成する。これは、ミネラル化して骨になる。骨芽細胞は、プロスタグランジン、アルカリホスファターゼ、骨のミネラル化に関与する酵素、及びマトリックスタンパク質などのホルモンも製造する。

骨細胞。骨細胞は、骨芽細胞に由来する星型の成熟した骨細胞であり、緻密骨に見られる最も豊富な細胞であるが、骨の構造を維持する。骨芽細胞のような骨細胞は、有糸分裂ができない。それらは、骨基質の日常的なターンオーバーに積極的に関与し、小腔と呼ばれる骨基質の小さな空間、空洞、隙間、またはくぼみに存在する。骨細胞は、骨基質を維持し、カルシウム恒常性を調節し、最も必要とされる場所に骨が形成されるように指示する細胞フィードバック機序の一部であると考えられる。骨は、加えられた力に耐えるために強くなることにより、それに適応し、骨細胞は、機械的変形を検出し、骨芽細胞による骨形成を媒介し得る。

破骨細胞。破骨細胞は、単球幹細胞系列に由来し、マクロファージと同様の食作用様機序を有し、ハウシップ窩と呼ばれる骨のくぼみによく見られる。それらは、骨吸収に特化した大きな多核細胞である。吸収中、破骨細胞は、骨表面の領域を密封し、次に、活性化される時、水素イオンを排出して非常に酸性の環境を作り出し、これは、ヒドロキシアパタイト成分を溶解する。破骨細胞の数及び活性は、副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）の注射によりカルシウム吸収が刺激される時に増加するが、破骨細胞活性は、甲状腺濾胞傍細胞により産生されるホルモンであるカルシトニンの注射により抑制される。

骨基質。骨基質は、緻密骨の総重量の約９０％を占め、ヒドロキシアパタイト（６０％）及び繊維状Ｉ型コラーゲン（２７％）に似た微結晶性リン酸カルシウムで構成される。残りの３％は、マイナーなコラーゲンタイプと、他のタンパク質、例えば、オステオカルシン、オステオネクチン、オステオポンチン、骨シアロタンパク質、ならびにプロテオグリカン、グリコサミノグリカン、及び脂質で構成される。骨の細胞外マトリックス糖タンパク質及びプロテオグリカンは、様々な成長因子及びサイトカインに結合し、骨芽細胞及び破骨細胞に作用する保存されたシグナルのリポジトリとして機能する。骨基質に見られる成長因子及びサイトカインの例には、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）、表皮成長因子（ＥＧＦ）、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）、インスリン様成長因子１（ＩＧＦ－１）、トランスフォーミング成長因子（ＴＧＦ）、骨由来成長因子（ＢＤＧＦ）、軟骨由来成長因子（ＣＤＧＦ）、骨格成長因子（ｈＳＧＦ）、インターロイキン１（ＩＬ－１）、及びマクロファージ由来の因子が挙げられるが、これらに限定されない。細胞外マトリックス分子自体が調節の役割を果たし得、これにより、細胞への直接的な生物学的効果ならびに重要な空間及び文脈の情報の両方が提供されるという新たな理解がある。

骨膜及び骨内膜。骨膜は、骨の関節面を除いて、骨の線維性結合組織外層である。それの骨への接着は、場所及び年齢によって異なる。幼児の骨では、骨膜が簡単に剥がれる。成人の骨では、それは、特に、腱及び靭帯の挿入時に、よりしっかりと接着し、より多くの骨膜繊維が、シャーピーの穿孔繊維（骨の外周ラメラに入るコラーゲン繊維の束）として骨を貫いている。骨膜は、２つの層で構成され、この外側は、細胞はほとんど含有されず、血管及び神経が多数含有される粗い繊維状の結合組織で構成される。血管が少ないが、細胞が多い内層は、多くの弾性繊維を含有する。成長中、原始的な結合組織の骨形成層が、骨膜の内層を形成する。成人では、これは、骨に密接に適用された散在する平らな細胞の列によってのみ表される。骨膜は、骨に向かう血管及び神経、ならびに、腱及び靭帯の固定のための支持床として機能する。骨膜の一部と考えられる骨形成層は、成長及び修復のために骨芽細胞を供給することが知られており、骨形成の広がりを制御及び制限する重要な制限層として機能する。骨膜及びそれに含有される骨の両方は、結合組織区画の領域であるので、基底層状物質または基底膜で、互いにまたは他の結合組織から分離されていない。骨周囲幹細胞は、骨の再生及び修復に重要であることが示されている。（Ｚｈａｎｇｅｔａｌ．，２００５，Ｊ．Ｍｕｓｃｕｌｏｓｋｅｌｅｔ．Ｎｅｕｒｏｎａｌ．Ｉｎｔｅｒａｃｔ．５（４）：３６０－３６２）。

骨内膜は、骨内の空洞（骨髄腔及び中央管）の表面と、さらには、骨髄腔の小柱の表面を覆う。成長中の骨では、それは、骨髄性細網結合組織の繊細な線条体で構成され、その下には、骨芽細胞の層がある。成人では、骨形成細胞は、平らになり、別の層として区別できない。それらは、骨折後のように、骨形成への刺激がある時に、骨形成細胞に変化することができる。

骨の構成要素。骨は、細胞及び有機及び無機物質の細胞間マトリックスで構成される。有機分画は、コラーゲン、グリコサミノグリカン、プロテオグリカン、及び糖タンパク質で構成される。骨のタンパク質マトリックスは、主に、不溶性で剛性のある繊維を形成する能力を有する繊維状タンパク質のファミリーであるコラーゲンで構成される。骨の主なコラーゲンは、Ｉ型コラーゲンである。骨の無機構成成分は、剛性に関与し、無脂肪乾燥重量の最大３分の２を占め得るが、主に、ヒドロキシアパタイトカルシウムの形態の、少量の水酸化マグネシウム、フッ化マグネシウム、及び硫酸マグネシウムを含む、リン酸カルシウム及び炭酸カルシウムで構成される。組成は、年齢及び複数の食事の要因により変動する。骨のミネラルは、コラーゲン繊維に強度及び剛性を加える長い微細な結晶を形成し；それが置かれるプロセスは、ミネラル化と呼ばれる。

本明細書で使用される「骨髄」という用語は、骨の空洞を満たし、白血細胞、赤血球、及び血小板を含む脂肪及び未成熟及び成熟血液細胞を含有する軟造血組織を指す。骨髄は、様々な前駆細胞及び成熟細胞型、例えば、造血細胞を含有し、これらは、広範囲の結合組織細胞の前駆細胞である、成熟血液細胞及び間葉系幹細胞（別途間質細胞とも呼ばれる）の前駆細胞であり、これらの両方が、他の細胞型に分化することが可能である。骨髄の造血幹細胞（ＨＳＣ）は、２つの主要な型の細胞：骨髄系列（単球、マクロファージ、好中球、好塩基球、好酸球、赤血球、樹状細胞、及び巨核球または血小板を含む）、ならびに、リンパ系列（Ｔ細胞、Ｂ細胞、及びナチュラルキラー細胞を含む）を生じさせる。

骨リモデリング。骨は、常に、成人では、破骨細胞により分解され、骨芽細胞により再形成される。骨の剛性を維持する骨リモデリングとして既知の再生のプロセスを介して、毎年１８％もの骨がリサイクルされると報告されている。この動的なプロセスのバランスは、人々が老いるにつれて変化する。若年では、それは、骨の形成に有利に働くが、老年では、再吸収に有利に働く。新しい骨物質が骨膜の内面から末梢に加えられる時、骨髄腔を形成する内部領域の空洞化がある。この骨組織の破壊は、血管を通って骨に入る破骨細胞によるものである。破骨細胞は、骨基質の無機部分及びタンパク質部分の両方を溶解させる。各破骨細胞は、多数の細胞プロセスをマトリックスに拡張し、水素イオンを周囲の物質に送り出し、それにより、それを酸性化及び可溶化する。血管は、また、生物の寿命にわたって骨髄に存在する造血細胞を移入する。

破骨細胞の数及び活性は、厳しく調節されなければならない。活性破骨細胞が多すぎる場合、骨が溶けすぎて、骨粗鬆症がもたらされるであろう。逆に、破骨細胞が十分に生成されない場合、骨髄のために骨が空洞化せず、大理石骨病（骨が硬化して高密度になる障害である石のような骨疾患（ｓｔｏｎｅｂｏｎｅｄｉｓｅａｓｅ）として既知）がもたらされるであろう。

「骨髄移植」（ＢＭＴ）または「造血幹細胞移植」（ＨＳＣＴ）という用語は、骨髄幹細胞がある個体（ドナー）から採取され、別の個体（レシピエント）に投与される手順を指すために互換的に使用される。幹細胞は、骨髄から直接採取することも、白血球除去により血液から採取することができる。骨髄移植は、自家（骨髄から採取され、処置前に保存された患者自身の幹細胞を使用）、同種異系（一卵性双生児ではない者から提供された幹細胞を使用）、または同系（一卵性双生児により提供された幹細胞を使用）であってよい。

本明細書で使用される「ＣＤ３４」という用語は、骨髄幹細胞の表面に見られるマーカーである。

本明細書で使用される「ＣＤ４５」という用語は、リンパ球共通抗原を意味する。

「Ｃｌｅｃ１１ａ／幹細胞成長因子－α」または「ＳＣＧＦ」という用語は、骨の健康の重要な調節因子として機能し、原始造血前駆細胞の成長因子として示唆されている分泌型硫酸化糖タンパク質を指す。

「海綿骨組織」という用語は、骨小柱または海綿骨とも呼ばれる開いた細胞多孔性ネットワークを指し、これは、骨の内部を満たし、全体の構造を軽くする棒状及び板状要素のネットワークで構成され、血液供給が骨を取り囲むように、血管及び骨髄のための余地を与える。海綿骨は、総骨量の２０％を占めるが、皮質骨の表面積のほぼ１０倍である。それは、ハバース部位及びオステオンを含有せず、約３０％～約９０％の気孔率を有する。海綿骨では、骨髄腔は、比較的大きく、不規則に配置されており、骨物質は、細長い吻合する骨小柱及び尖った針状体の形態をとる。骨端と呼ばれる骨の頭は、海綿状の外観を有し、細長い不規則な骨梁または棒で構成され、これらは、格子状を形成するように吻合し、この隙間には骨髄が含有されるが、薄い外殻は密に見える。骨端の不規則な骨髄腔は、骨幹（ｄｉａｐｈｙｓｉｓ）と呼ばれる骨幹（ｂｏｎｅｓｈａｆｔ）の中央骨髄腔と連続的になり、その壁は、皮質骨の薄いプレートによって形成される。

「細胞周期」という用語は、Ｇ１（間期）、Ｓ（ＤＮＡ合成期）、Ｇ２（間期）、及びＭ（有糸分裂期）の４つの段階を経る細胞の進行を指す。Ｎａｋａｍｕｒａ－Ｉｓｈｉｚｕ，Ａ．，ｅｔａｌ．，Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ（２０１４）１４１：４６５６－４６６６；Ｓｉｓｋｅｎ，ＪＥａｎｄＭｏｒａｓｃａ，Ｌ．，Ｊ．ＣｅｌｌＢｉｏｌ．（１９６５）２５：１７９－１８９を引用）。Ｇ１期の制限点を超えて進行する細胞は、Ｓ期に入るが、制限点を超えない細胞は分割されないままである。これらの分割されていない細胞は、細胞周期から離脱し、細胞が静止状態または休止状態と呼ばれる状態であるＧ０期に入り得る。（同上、Ｐａｒｄｅｅ，ＡＢ，Ｐｒｏｃ．ＮａｔｌＡｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（１９７４）７１：１２８６－９０を引用）。Ｇ０期のそのような非周期細胞は、細胞周期に可逆的に再び入り、分割するか（同上、Ｃｈｅｕｎｇ，ＴＨａｎｄＲａｎｄｏ，ＴＡ，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｍｏｌ．ＣｅｌｌＢｉｏｌ．（２０１３）１４：３２９－３４０を引用）または休止のままであり、サイクリングの可能性を失い、いくつかの場合では、老化し得る（同上、Ｃａｍｐｉｓｉ，Ｊ．Ｃｅｌｌ（２００５）１２０：５１３－２２を引用）。

本明細書で使用される「細胞系列」または「系列」という用語は、それが生じる細胞にまで遡る場合の、分化した細胞の発生履歴を指す。

本明細書で使用される「ケモカイン」という用語は、保存されたシステイン残基の相対位置に基づいた４つのサブファミリー（Ｃ、ＣＣ、ＣＸＣ、及びＣＸ３Ｃ）（ＲｏｓｓｉＤ．ｅｔａｌ．ＡｎｎｕＲｅｖＩｍｍｕｎｏｌ．（２０００）１８：２１７－２４２）に分類することができる多様な免疫及び神経機能を有する低分子量（８～１１ｋＤａ）の構造的に関連するタンパク質のファミリー（ＭａｃｋａｙＣ．Ｒ．ＮａｔＩｍｍｕｎｏｌ．，Ｖｏｌ．２：９５－１０１，（２００１）；ＹｏｕｎＢ．ｅｔａｌ．ＩｍｍｕｎｏｌＲｅｖ．（２０００）Ｖｏｌ．１７７：１５０－１７４）を指す。ケモカインは、血液、リンパ節、及び組織の間で白血球の移動を誘導するのに不可欠な分子である。それらは、常に１つのタイプの受容体に制限されているわけではないので、複雑なシグナル伝達ネットワークを構成する（ＬｏｅｔｓｃｈｅｒＰ．ｅｔａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（２００１）．２７６：２９８６－２９９１）。ケモカインは、７回膜貫通型ドメインのＧタンパク質共役型受容体である表面受容体を活性化することにより細胞に影響を与える。特定のケモカインに対する白血球の応答は、ケモカイン受容体の発現により決定される。ケモカインの受容体への結合は、生物学的応答の活性化を達成するサイトカインの作用と同様に、様々なシグナル伝達カスケードを活性化する。ＣＣＲ５受容体のリガンドの分泌は、活性化時に、発現及び分泌された正常なＴ細胞（ＲＡＮＴＥＳ）、マクロファージ炎症性タンパク質（ＭＩＰ）－１α／及びＭＩＰ－１βを調節し（ＳｃｈｒｕｍＳ．ｅｔａｌ．ＪＩｍｍｕｎｏｌ．（１９９６）１５７：３５９８－３６０４）、ＣＸＣケモカイン受容体３（ＣＸＣＲ３）のリガンド、誘導タンパク質（ＩＰ）－１０（ＴａｕｂＤ．Ｄ．ｅｔａｌ．ＪＥｘｐＭｅｄ．（１９９３）１７７：１８０９－１８１４）は、望ましくない高められたＴ_H1応答に関連付けられている。さらに、ＩＬ－２及びＩＦＮ－γの有害な前炎症性サイトカインレベルの上昇は、１型糖尿病（Ｔ１Ｄ）と相関する（ＲａｂｉｎｏｖｉｔｃｈＡ．ｅｔａｌ．ＣｅｌｌＢｉｏｃｈｅｍＢｉｏｐｈｙｓ．（２００７）４８（２－３）：１５９－６３）。ケモカインは、Ｔ_H1膵臓浸潤及びＴ細胞浸潤を特徴とする他の炎症性病変で観察されている（ＢｒａｄｌｅｙＬ．Ｍ．ｅｔａｌ．ＪＩｍｍｕｎｏｌ．（１９９９）．１６２：２５１１－２５２０）。

本明細書で使用される「化学療法」という用語は、薬物を使用してがん細胞を破壊する処置を指すが、生着の成功を確実にするために、がんを有さない骨髄移植患者にも使用される。

本明細書で使用される「コンディショニング」という用語は、移植の数日前に与え、移植のために体を集合的に整える化学療法薬、及び場合により、放射線の組み合わせを指す。

本明細書で使用される「接触」という用語及びその様々な文法形式は、接触の状態もしくは状況、または即時もしくは局所的な近接の状態もしくは状況を指す。

「皮質骨組織」（緻密骨または緻密質とも呼ばれる）という用語は、いわゆる、隙間及び空間が最小のために、骨の硬い外層の組織を指す。この組織は、滑らかで白く、しっかりとした外観を骨に与える。皮質骨は、ハバース部位（血管及び結合組織が骨を通過する管）ならびにオステオン（ハバース管及びその同心円状に配置されたラメラを含む皮質骨の構造の基本単位）で構成され、従って、皮質骨では、骨が血液供給を囲んでいる。皮質骨は、気孔率約５％～約３０％（両端を含む）を有し、成体の骨格の総骨量の約８０％を占める。皮質骨では、空間またはチャネルが狭く、骨物質が密に詰まっている。

本明細書で使用される「サイトカイン」という用語は、細胞が分泌する小さな可溶性タンパク質物質を指し、これは、他の細胞に様々な影響を与える。サイトカインは、成長、発達、創傷治癒、及び免疫応答を含む多くの重要な生理学的機能を媒介する。それらは、細胞膜にある細胞特異的受容体に結合することにより作用する。これは、異なるシグナル伝達カスケードを細胞内で開始させ、これは、最終的には標的細胞の生化学的及び表現型の変化につながるであろう。一般的に、サイトカインは、局所的に作用する。それらは、多くのインターロイキンを包含するＩ型サイトカイン、ならびに、いくつかの造血成長因子；インターフェロン及びインターロイキン－１０を含むＩＩ型サイトカイン；ＴＮＦα及びリンホトキシンを含む腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）関連分子；インターロイキン１（ＩＬ－１）を含む免疫グロブリンスーパーファミリーのメンバー；ならびに、様々な免疫及び炎症の機能に重要な役割を果たす分子のファミリーであるケモカインを含む。同じサイトカインは、細胞の状態に応じて細胞に異なる影響を与え得る。サイトカインは、多くの場合、他のサイトカインの発現を調節し、そのカスケードを誘発する。

本明細書で使用される「ダメージ関連分子パターン」（ＤＡＭＰ）という用語は、パターン認識受容体（ＰＲＲ）と相互作用することにより自然免疫系を活性化する、損傷または瀕死の細胞から放出される内因性危険分子を指す。

本明細書で使用される場合、「由来する」という用語は、起源の供給源から何かを受け、それを得、またはそれを改変するための任意の方法を包含することを意味する。

本明細書で使用される場合、「検出すること」、「決定すること」という用語、及びそれらの他の文法形式は、バイオマーカーの同定または定量化、例えば、ｍｉＲＮＡの存在またはレベル、または生物学的試料の状態の有無について実施される方法を指すために使用される。試料で検出されたバイオマーカーの発現または活性の量は、アッセイまたは方法の検出レベルがないか、またはそれ未満であり得る。

本明細書で使用される「分化」という用語は、より特殊な機能を伴う、細胞または組織の組織化または複雑さのレベルの増加を伴う発達のプロセスを指す。

本明細書で使用される「疾患」または「障害」という用語は、健康の障害または異常な機能の状態を指す。

本明細書で使用される「内因性」という用語は、天然に存在するか、内に組み込まれるか、内に収容されるか、接着するか、付着するか、または内に存在するものを指す。

本明細書で使用される「生着」という用語は、移植された（ドナー）幹細胞の正常な成長及び患者（レシピエント）の骨髄空間における血液細胞の産生が移植後に再開するプロセスを指す。

本明細書で使用される場合、「濃縮する」という用語は、例えば、細胞集団におけるその自然の頻度と比較して、細胞または細胞構成要素のサブタイプの相対頻度を増加させるために、所望の物質の割合を増加させることを指すことを意味する。正の選択、負の選択、またはその両方は、一般に、あらゆる濃縮スキームに必要であると考えられる。選択方法には、磁気分離及び蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）を含むが、これらに限定されない。

本明細書で使用される「赤血球形成」という用語は、造血組織における赤血球の形成を指す。胎児の初期の発達では、赤血球形成は、卵黄嚢、脾臓、及び肝臓で生じる。出生後、全ての赤血球形成は、骨髄で生じる。骨髄及び脾臓の赤血球分化系統は、多能性幹細胞に由来する初期前駆細胞の前赤芽球で開始される。成人の骨髄では、ＨＳＣ由来の骨髄系共通前駆細胞（多能性幹細胞）が赤血球系列にコミットする場合、最終の赤血球形成が開始される。前赤芽球（ｐｒｏｎｏｒｍｏｂｌａｓｔ）（前赤芽球（ｐｒｏｅｒｙｔｈｒｏｂｌａｓｔ）または前赤芽球（ｒｉｂｒｉｂｌａｓｔ）とも呼ばれる）の出現は、最初の分化段階を示す。これに、初期、中期、及び後期の正常芽球（赤芽球）段階が続き、その時点で、核が排出され、細胞が網状赤血球になる。骨髄を出ると、網状赤血球は、血液循環に入り、完全に成熟したＲＢＣになる。

本明細書で使用される「外因性」という用語は、天然に存在しないもの、または特定の細胞、生物、もしくは種の外部で発生または生成するものを指す。

本明細書で使用される「増殖する」という用語及びその様々な文法的形態は、分散した生細胞が、生細胞の数または量の増加をもたらす培養培地中でｉｎｖｉｔｒｏで増殖するプロセスを指す。

本明細書で使用される場合、「発現」という用語及びその様々な文法的形態は、ポリヌクレオチドがＤＮＡテンプレートから（例えば、ｍＲＮＡもしくは他のＲＮＡ転写物に）転写されるプロセス、及び／または、転写されたｍＲＮＡが、その後、ペプチド、ポリヌクレオチド、またはタンパク質に翻訳されるプロセスを指す。転写物及びコードされたポリペプチドは、「遺伝子産物」と総称されることがある。ポリヌクレオチドがゲノムＤＮＡに由来する場合、発現には、真核細胞でのｍＲＮＡのスプライシングが含まれてもよい。発現は、また、ポリペプチドまたはタンパク質の翻訳後修飾を指すことがある。

本明細書で使用される「細胞外マトリックス」（または「ＥＣＭ」）という用語は、細胞が特定の細胞表面受容体を介して相互作用する細胞の外部環境における足場を指す。細胞外マトリックスは、限定されないが、細胞の支持及び固定を提供すること、ある組織を別の組織から分離すること、ならびに細胞内コミュニケーションを調節すること、を含む多くの機能に役立つ。細胞外マトリックスは、繊維状タンパク質及びグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）のインターロッキングメッシュで構成される。細胞外マトリックスに見られる繊維状タンパク質の例には、コラーゲン、エラスチン、フィブロネクチン、及びラミニンが挙げられる。細胞外マトリックスに見られるＧＡＧの例には、プロテオグリカン（例えば、ヘパリン硫酸）、コンドロイチン硫酸、ケラタン硫酸、及び非プロテオグリカン多糖（例えば、ヒアルロン酸）が挙げられる。「プロテオグリカン」という用語は、１つ以上のグリコサミノグリカンに結合しているコアタンパク質を含有する糖タンパク質の群を指す。

本明細書で使用される「フラグメント」または「ペプチドフラグメント」という用語は、より大きなペプチド、ポリペプチド、またはタンパク質から誘導、切断、または破壊された小さな部分を指し、これは、より大きなペプチド、ポリペプチドまたはタンパク質の所望の生物学的活性を保持する。

本明細書で使用される「移植片」という用語は、ドナーからレシピエントに注入または移植された組織または臓器を指す。それは、同じ個体のある身体部位から別の身体部位に移植された自己組織（「自家移植片」）、遺伝的に同一の個体間で移植された組織、または組織移植を可能にするのに十分に免疫学的に適合性のある組織（「同系移植片」）、同じ種の遺伝的に異なるメンバー間で移植された組織（「同種異系移植片」または「同種移植片」）、及び異なる種間で移植された組織（「異種移植片」）を含むが、これらに限定されない。

本明細書で使用される「成長因子」という用語は、例えば、合成速度を増加させるか、分解速度を減少させるか、またはその両方により、細胞表面受容体に結合して細胞内シグナル伝達経路を誘発し、タンパク質及び他の高分子の蓄積を刺激する増殖、分化、または他の細胞応答をもたらす細胞外ポリペプチド分子を指す。例示的な成長因子には、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）、インスリン様成長因子（ＩＧＦ－１）、トランスフォーミング成長因子－ベータ（ＴＧＦ－β）、及び血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）が挙げられる。

線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）。線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）ファミリーは、現在、１２を超える構造的に関連するメンバーを有する。ＦＧＦ１は、酸性ＦＧＦとしても既知であり；ＦＧＦ２は、場合により、塩基性ＦＧＦ（ｂＦＧＦ）と呼ばれ；ＦＧＦ７は、場合により、ケラチノサイト成長因子という名称で通っている。脊椎動物では、１２を超える異なるＦＧＦ遺伝子が既知であり；それらは、様々な組織でＲＮＡスプライシングまたは開始コドンを変動することにより、何百ものタンパク質アイソフォームを生成し得る。ＦＧＦは、線維芽細胞成長因子受容体（ＦＧＦＲ）と呼ばれる一連の受容体型チロシンキナーゼを活性化し得る。受容体型チロシンキナーゼは、細胞膜を通って伸びるタンパク質である。パラクリン因子に結合するタンパク質の部分は、細胞外側にあるが、休止状態のチロシンキナーゼ（すなわち、ＡＴＰを分離することにより別のタンパク質をリン酸化し得るタンパク質）は、細胞内側にある。ＦＧＦ受容体がＦＧＦに結合すると（かつＦＧＦに結合する場合のみ）、休止状態のキナーゼが活性化され、応答細胞内の特定のタンパク質をリン酸化して、それらのタンパク質を活性化する。

ＦＧＦは、血管新生（血管形成）、中胚葉形成、及び軸索伸長を含む、いくつかの発達機能に関連する。ＦＧＦが、多くの場合、互いに代用し得るが、それらの発現パターンは、それらに別々の機能を与える。例えば、ＦＧＦ２は、特に、血管新生に重要であるが、ＦＧＦ８は、中脳及び四肢の発達に関与する。

インスリン様成長因子（ＩＧＦ－１）。インスリンと分子構造が似ているホルモンであるＩＧＦ－１は、体のほぼ全ての細胞、特に、骨格筋、軟骨、骨、肝臓、腎臓、神経、皮膚、造血細胞、及び肺に成長促進効果を有する。それは、子供の成長に重要な役割を果たし、成人に同化作用を有し続ける。ＩＧＦ－１は、主に肝臓により内分泌ホルモンとして、及び標的組織でパラクリン／オートクリン方式で産生される。生成は、成長ホルモン（ＧＨ）により刺激され、栄養不足、成長ホルモン非感受性、成長ホルモン受容体の欠如、またはチロシンタンパク質ホスファターゼ非受容体１１型（ヒトのＰＴＰＮ１１遺伝子にコードされるＳＨＰ２としても既知）を含む下流のシグナル伝達分子の障害、及び転写因子のＳＴＡＴファミリーのメンバーであるシグナル伝達兼転写活性化因子５Ｂ（ＳＴＡＴ５Ｂ）により遅延することができる。その主な作用は、多くの組織の多くの細胞型に存在する、その特定の受容体であるインスリン様成長因子１受容体（ＩＧＦ１Ｒ）への結合により媒介される。受容体型チロシンキナーゼであるＩＧＦ１Ｒに結合すると、細胞内シグナル伝達が開始され；ＩＧＦ－１は、ＡＫＴシグナル伝達経路の最も強力な天然活性化因子、細胞の成長及び増殖の刺激因子、ならびにプログラム細胞死の強力な阻害因子のうちの１つである。ＩＧＦ－１は、成長ホルモン（ＧＨ）の効果の主要なメディエーターである。成長ホルモンは、下垂体で作られ、血流に放出され、続いて、肝臓を刺激してＩＧＦ－１を産生する。次に、ＩＧＦ－１は、全身の成長を刺激する。インスリン様効果に加えて、ＩＧＦ－１は、また、特に、神経細胞における、細胞の成長及び発達、ならびに細胞のＤＮＡ合成を調節し得る。

ＩＧＦ－１は、ケモカイン受容体ＣＸＣＲ４（間質細胞由来因子－１、ＳＤＦ－１の受容体）の発現レベルを増加させ、ＳＤＦ－１に対するＭＳＣの遊走応答を著しく増加させることが示された（Ｌｉ，Ｙ，ｅｔａｌ．２００７Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎｉｃ．３５６（３）：７８０－７８４）。ＳＤＦ－１に応答したＩＧＦ－１誘導性のＭＳＣ遊走の増加は、ＰＩ３キナーゼ阻害剤（ＬＹ２９４００２及びワートマニン）で減弱されたが、マイトジェン活性化プロテイン／ＥＲＫキナーゼ阻害剤ＰＤ９８０５９で減弱されなかった。特定の理論に制限されることなく、ＩＧＦ－１がＰＩ３／Ａｋｔ依存性であるＣＸＣＲ４ケモカイン受容体シグナル伝達を介してＭＳＣの遊走応答を増加させることを、データは示す。

トランスフォーミング成長因子β（ＴＧＦ－β）。ＴＧＦ－βスーパーファミリーには３０を超える構造的に関連するメンバーがあり、それらは、発達における最も重要な相互作用のいくつかを調節する。ＴＧＦ－βスーパーファミリー遺伝子にコードされるタンパク質は、カルボキシ末端領域が成熟ペプチドを含有するように処理される。これらのペプチドは、ホモ二量体（それ自体と）またはヘテロ二量体（他のＴＧＦ－βペプチドと）に二量体化され、細胞から分泌される。ＴＧＦ－βスーパーファミリーは、ＴＧＦ－βファミリー、アクチビンファミリー、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）、Ｖｇ－１ファミリー、ならびにグリア由来神経栄養因子（ＧＤＮＦ、腎臓及び腸内ニューロンの分化に必要）を含むその他のタンパク質、ならびに哺乳類の性決定に関与するミュラー阻害因子を含む。ＴＧＦ－βファミリーのメンバーであるＴＧＦ－β１、２、３、及び５は、細胞間の細胞外マトリックスの形成を調節することにおいて、及び細胞分裂を（正及び負の両方で）調節することにおいて重要である。ＴＧＦ－β１は、コラーゲン及びフィブロネクチンの合成を刺激すること、ならびにマトリックスの分解を阻害することにより、細胞外マトリックス上皮細胞が作る量を増加させる。ＴＧＦ－βは、上皮が、腎臓、肺、及び唾液腺の管を形成するために分岐し得る場所及び時期を制御する上で重要であり得る。

血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）。ＶＥＧＦは、増殖、遊走、浸潤、生存、及び透過性を含む内皮細胞の多くの機能を媒介する成長因子である。ＶＥＧＦ及びそれらの対応する受容体は、脈管形成、血管新生、またはリンパ血管系の形成のいずれかにより、最終的に血管系の発達につながる分子及び細胞イベントのカスケードにおける重要な調節因子である。ＶＥＧＦは、生理学的血管新生における重要な調節因子であり、骨格の成長及び修復においても重要な役割を果たす。

ＶＥＧＦの正常な機能は、胚発生中、損傷後、及び閉塞した血管を迂回するために新しい血管を作成する。確立された成熟血管系において、内皮は、必要に応じて要件に応答するために隣接する組織に通信ネットワークを提供することにより、周囲の組織の恒常性の維持において重要な役割を果たす。さらに、血管系は、周囲の組織が必要とする成長因子、ホルモン、サイトカイン、ケモカイン、及び代謝物などを提供し、分子及び細胞の動きを制限するバリアとして機能する。

本明細書で使用される「免疫再構成」または「再構成」という用語は、ＨＳＣＴ後に移植されたＨＳＣから免疫系を再構築するプロセスを指す。

「免疫応答」及び「免疫媒介性」という用語は、これらの反応の結果が対象に有益であるか、または有害であるかにかかわらず、外来または自己抗原のいずれかに対する対象の免疫系の任意の機能的発現を指すために本明細書で互換的に使用される。

本明細書で使用される「免疫系」という用語は、疾患に対する身体の防御システムを指す。自然免疫系は、病原体に対する非特異的な第一線の防御を提供する。それは、物理的なバリア（例えば、皮膚）、ならびに、細胞（顆粒球、ナチュラルキラー細胞）及び体液性（補体系）の両方の防御機構を含む。自然免疫系の反応は即時であるが、適応免疫系とは異なり、病原体に対する永続的な免疫を提供しない。

本明細書で使用される「自然免疫」という用語は、本明細書では、病原体に最初に遭遇した後、適応免疫が誘導される様々な自然耐性機構、例えば、解剖学的バリア、抗菌ペプチド、補体系、ならびに非特異的病原体認識受容体を含有するマクロファージ及び好中球を指す。自然免疫は、常に全ての個体に存在し、所与の病原体への曝露を繰り返しながら増加せず、特定の病原体に応答するよりもむしろ、類似の病原体の群間を区別する。

「免疫調節」、「免疫調節薬」、及び「免疫調節」という用語は、例えば、ケモカイン、サイトカイン、及び免疫応答の他のメディエーターを発現することにより、直接的または間接的に免疫応答を増強または低下させることを可能にする物質、薬剤、または細胞を指すために本明細書では互換的に使用される。

本明細書で使用される「免疫抑制剤」という用語は、体の免疫応答を減少させる薬剤を指す。

本明細書で使用される「免疫抑制」という用語は、免疫の減少または体の免疫応答の低下の状態を指す。本明細書で使用される「免疫抑制療法」という用語は、体の免疫系の活性を低下させる処置を指す。

本明細書で使用される「炎症」という用語は、血管新生された組織が損傷に応答する生理学的プロセスを指す。例えば、ＦＵＮＤＡＭＥＮＴＡＬＩＭＭＵＮＯＬＯＧＹ，４ｔｈＥｄ．，ＷｉｌｌｉａｍＥ．Ｐａｕｌ，ｅｄ．Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ－ＲａｖｅｎＰｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ（１９９９）ａｔ１０５１－１０５３（参照により本明細書に組み込まれる）を参照のこと。炎症プロセスの間に、解毒及び修復に関与する細胞は、炎症性メディエーターにより損なわれる部位に動員される。炎症は、多くの場合、炎症部位での白血球、特に、好中球（多形核細胞）の強い浸潤を特徴とする。これらの細胞は、血管壁または無傷の組織で有毒物質を放出することにより、組織の損傷を促進する。伝統的に、炎症は、急性応答及び慢性応答に分けられている。本明細書で使用される「急性炎症」という用語は、体液、血漿タンパク質、及び好中球白血球の蓄積を特徴とする急性損傷に応答する迅速で一時的な（数分～数日）比較的均一な応答を指す。本明細書で使用される「慢性炎症」という用語は、より長期的であり、曖昧で無期限の終結を有する炎症を指す。慢性炎症は、最初の炎症剤の不完全なクリアランスによって、または同じ場所で発生する複数の急性事象の結果として、急性炎症が持続する場合に、引き継がれる。リンパ球及びマクロファージの流入ならびに線維芽細胞の成長を含む慢性炎症は、炎症活動が長期化または繰り返される部位で組織の瘢痕化をもたらすことがある。

本明細書で使用される「炎症性メディエーター」または「炎症性サイトカイン」という用語は、炎症プロセスの分子メディエーターを指す。これらの可溶性で拡散性の分子は、組織の損傷及び感染の部位ならびにより離れた部位の両方で局所的に作用する。炎症プロセスによって活性化される炎症性メディエーターもあれば、急性炎症に応答して、または他の可溶性炎症性メディエーターによって合成及び／または細胞源から放出される炎症性メディエーターもある。炎症性応答の炎症性メディエーターの例には、限定されないが、ヒスタミン、セロトニン、及び神経ペプチド、限定されないが、インターロイキン－１－ベータ（ＩＬ－１β）、インターロイキン－４（ＩＬ－４）、インターロイキン－６（ＩＬ－６）、インターロイキン－８（ＩＬ－８）、腫瘍壊死因子－アルファ（ＴＮＦ－α）、インターフェロン－ガンマ（ＩＦ－γ）、及びインターロイキン－１２（ＩＬ－１２）を含む前炎症性サイトカインを含む、血漿プロテアーゼ、補体、キニン、凝固及び線維素溶解性タンパク質、脂質メディエーター、プロスタグランジン、ロイコトリエン、血小板活性化因子（ＰＡＦ）、ペプチド及びアミンが挙げられるが、これらに限定されない。

本明細書で使用される「注入」という用語及び他の文法的形態は、血液以外の流体の静脈への導入を指す。

「阻害すること」、「阻害する」、または「阻害する」という用語は、本明細書では、プロセスの量もしくは速度を低減すること、プロセスを完全に停止すること、またはその作用もしくは機能を減少、制限、もしくは遮断することを指すために使用される。阻害は、物質の量、速度、作用機能、またはプロセスの、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の低減または減少を含んでもよい。

本明細書で使用される「阻害剤」という用語は、第１の分子に結合するか、それに接触するか、または別の方法で、その活性を妨害し、それにより、第１の分子の活性を減少させる第２の分子を指す。

本明細書で使用される「傷害」という用語は、物理的もしくは化学的、または内部状態であり得る外部の作用物質または力により引き起こされる身体の構造または機能への損傷または危害を指す。

「単離された」という用語は、限定されないが、核酸、ペプチド、ポリペプチド、またはタンパク質などの材料を指すために本明細書で使用され、これらは、（１）天然に存在する環境で見られるように、通常は、付随するかまたは相互作用する構成成分を実質的または本質的に含まない。「実質的に含まない」または「本質的に含まない」という用語は、本明細書では、実質的もしくは有意に含まない、または約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％超含まないことを指すために使用される。分離された材料は、任意に、自然環境において材料と共に見出されない材料を含むか、あるいは、（２）材料がその自然環境にある場合、材料は、組成物への意図的なヒトの介入により合成的に（非自然に）変更されている、及び／またはその環境で見出された材料に固有ではない細胞内の場所（例えば、ゲノムもしくは細胞内小臓器）に配置されている。合成材料を生成するための変更は、自然状態の材料に対して実施されても、自然状態から除去されてもよい。

本明細書で使用される「Ｌｉｎｅａｇｅ陽性（Ｌｉｎ＋）」という用語は、成熟細胞系列マーカーを発現する全細胞の混合物を指す。残りの細胞は、系列陰性（Ｌｉｎ－）であり、これは、系列抗体で染色されないことを意味する。全てのステップ及び前駆細胞の活性は、Ｌｉｎ－集団内で同定された。

「リンパ球共通抗原」またはＣＤ４５という用語は、全ての白血球で発現する受容体結合タンパク質チロシンホスファターゼを意味する。

「主要組織適合遺伝子複合体」及び「ＭＨＣ」という用語は、本明細書では、エピトープまたは抗原として既知の分子分画を示し、他の白血球または体細胞との白血球の相互作用を媒介する細胞表面分子を指すために使用される。ＭＨＣは、大きな遺伝子群にコードされ、クラスＩ、クラスＩＩ、及びクラスＩＩＩの３つのサブグループに編成することができる。ヒトでは、ＭＨＣ遺伝子複合体は、ＨＬＡ（「ヒト白血球抗原」）と呼ばれ、マウスでは、Ｈ－２（「組織適合性」の場合）と呼ばれる。双方の種は、３つの主要なＭＨＣクラスＩ遺伝子を有し、これは、ヒトでは、ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、及びＨＬＡ－Ｃと呼ばれ、マウスでは、Ｈ２－Ｋ、Ｈ２－Ｄ、及びＨ２－Ｌと呼ばれる。これらは、それぞれのＭＨＣクラスＩタンパク質のα鎖をコードする。ＭＨＣクラスＩ分子の他のサブユニットは、β２－ミクログロブリンである。クラスＩＩ領域は、ヒトのＭＨＣクラスＩＩ分子ＨＬＡ－ＤＲ、ＨＬＡ－ＤＰ、及びＨＬＡ－ＤＱのα鎖及びβ鎖（Ａ及びＢと指定）の遺伝子を含む。また、ＭＨＣクラスＩＩ領域には、ＴＡＰ１：ＴＡＰ２ペプチドトランスポーターの遺伝子、プロテアソームサブユニットをコードするＰＳＭＢ（またはＬＭＰ）遺伝子、ＤＭα及びＢＭβ鎖（ＤＭＡ及びＤＭＢ）をコードする遺伝子、ＤＯ分子のα及びβ鎖（それぞれ、ＤＯＡ及びＤＯＢ）をコードする遺伝子、ならびにタパシンをコードする遺伝子（ＴＡＰＢＰ）がある。クラスＩＩ遺伝子は、免疫機能を持つ他の様々なタンパク質をコードする。ＭＨＣクラスＩＩ分子へのペプチド結合を触媒するＨＬＡ－ＤＭ分子のサブユニットをコードするＤＭＡ及びＤＭＢ遺伝子は、調節ＨＬＡ－ＤＯ分子のサブユニットをコードするＤＯＡ及びＤＯＢ遺伝子と同様に、ＭＨＣクラスＩＩ遺伝子に関連する。ＪａｎｅｗａｙｓＩｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ．９ｔｈｅｄ．，ＧＳ，ＧａｒｌａｎｄＳｃｉｅｎｃｅ，Ｔａｙｌｏｒ＆ＦｒａｎｃｉｓＧｒｏｕｐ，２０１７．ｐｐｓ．２３２－２３３。

本明細書で使用される「マトリックスメタロプロテイナーゼ」という用語は、細胞外マトリックス構成成分の分解及びリモデリングに関与する亜鉛依存性プロテアーゼのコレクションを指す（Ｇｕｉｏｔ，Ｊ．ｅｔａｌ．Ｌｕｎｇ（２０１７）１９５（３）：２７３－２８０，Ｏｉｋｏｎｏｍｉｄｉｅｔａｌ．ＣｕｒｒＭｅｄＣｈｅｍ．２００９；１６（１０）：１２１４－１２２８を引用）。例えば、ＭＭＰ２遺伝子は、マトリックスメタロペプチダーゼ２を作成するための指示を提供する。この酵素は、体全体の細胞で生成され、細胞間の空間に形成されるタンパク質及び他の分子の複雑な格子である細胞外マトリックスの一部になる。ＭＭＰ－２の主な既知の機能の１つは、基底膜の主要な構造成分であるＩＶ型コラーゲンを切断することである。基底膜は、細胞外マトリックスの一部として細胞を分離及び支持する薄いシート状の構造である。

本明細書で使用される「模倣物」という用語は、親化合物または物質に化学的に類似し、親化合物または物質の少なくともある程度の所望の機能を保持する化合物または物質を指す。「模倣物」という用語は、ペプチドの機能を模倣する化学部分を含有する化学物質を指す「模倣物」と互換的に使用される。例えば、ペプチドが機能的活性を有する２つの荷電化学部分を含有する場合、模倣物は、２つの荷電化学部分を空間配向及び拘束構造に配置し、従って、荷電化学機能が、３次元空間で維持される。

本明細書で使用される「改変する」または「調節する」という用語は、特定の尺度または比率に調節、変更、適応、または調整することを意味する。本明細書において細胞型の文脈で使用される「改変された」または「調節された」という用語は、細胞型の形態または特徴を変更することを指す。

「骨髄細胞」という用語は、骨髄の造血幹細胞に由来する一般的な前駆細胞から分化した子孫である顆粒球及び単球を総称して指す。骨髄細胞のいずれかの系列へのコミットメントは、特定のコロニー刺激因子に応答した、別個の転写因子とそれに続く最終分化及び血液循環への放出により調節される。［Ｋａｗａｍｏｔｏ，Ｈ．，Ｍｉｎａｔｏ，Ｎ．ＩｎｔｌＪ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．ＣｅｌｌＢｉｏｌ．（２００４）３６（８）：１３７４－７０］。

本明細書で使用される「骨髄破壊的療法」という用語は、がん細胞を含む、骨髄で生存する細胞を死滅させるために使用される治療レジメン（例えば、大量化学療法または高線量照射）を指し、これは、骨髄中の正常な造血細胞数を低下させ、これにより、赤血球、白血球、及び血小板の低下がもたらされる。本明細書で使用される「非骨髄破壊的」という用語は、レシピエントの骨髄を破壊することなく、ドナー骨髄幹細胞の拒絶を防ぐために限られた量の化学療法が施行される移植前のコンディショニングレジメンを指す。

本明細書で使用される「骨髄抑制」という用語は、骨髄活性が減少し、これにより、赤血球、白血球、及び血小板の低下がもたらされる状態を指す。骨髄抑制が重度の場合、それは、骨髄破壊と呼ばれる。

本明細書で使用される略語「ＭＡＰＫ」は、マイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＡＰＫ）シグナル伝達を指し、これは、ＭＡＰＫキナーゼキナーゼ（ＭＡＰ３Ｋ）で３層カスケードを活性化し、これにより、ＭＡＰＡＫキナーゼ（ＭＡＰ２Ｋ）が活性化され、最後にＭＡＰＫが活性化される。ＭＡＰＫは、細胞外刺激を広範囲の細胞応答に変換するタンパク質Ｓｅｒ／Ｔｈｒキナーゼである。（Ｃａｒｇｎｅｌｌｏ，Ｍ．ａｎｄＲｏｕｘ，ＰＰ，Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｒｅｖ．（２０１１）７５（１）：５０－８３）。炎症性疾患に関与する主要なＭＡＰＫ経路は、細胞外調節キナーゼ（ＥＲＫ）、ｐ３８ＭＡＰＫ、及びｃ－ＪｕｎＮＨ２末端キナーゼ（ＪＮＫ）である。上流のキナーゼは、ＴＧＦβ活性化キナーゼ１（ＴＡＫ１）及びアポトーシスシグナル調節キナーゼ１（ＡＳＫ１）を含む。ｐ３８ＭＡＰＫの下流は、ＭＡＰＫ活性化プロテインキナーゼ２（ＭＡＰＫＡＰＫ２またはＭＫ２）である。（Ｂａｒｎｅｓ，ＰＪ（２０１６）ＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌＲｅｖｓ．６８：７８８－８１５の図１１を参照のこと）。

マイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＡＰＫ）の下流に、ＭＡＰＫ活性化プロテインキナーゼ（ＭＡＰＫＡＰＫ）の様々な群が定義されている。これらの酵素は、ＭＡＰＫの直接的な基質ではない標的タンパク質にシグナルを伝達し、それ故、ＭＡＰＫカスケードによるリン酸化依存性シグナル伝達を多様な細胞機能に中継する役割を果たす。これらの群の１つは、ＭＫ２、ＭＫ３（３ｐＫとも呼ばれる）、及びＭＫ５（ＰＲＡＫとも呼ばれる）の３つのＭＡＰＫＡＰＫにより形成される。マイトジェン活性化プロテインキナーゼ活性化プロテインキナーゼ２（「ＭＡＰＫＡＰＫ２」、「ＭＡＰＫＡＰ－Ｋ２」、「ＭＫ２」とも呼ばれる）は、セリン／スレオニン（Ｓｅｒ／Ｔｈｒ）プロテインキナーゼファミリーのキナーゼである。ＭＫ２は、ＭＫ３と高い相同性（約７５％のアミノ酸同一性）がある。ＭＫ２及びＭＫ３のキナーゼドメインは、カルシウム／カルモジュリン依存性プロテインキナーゼ（ＣａＭＫ）、ホスホリラーゼｂキナーゼ、及びリボソームＳ６キナーゼ（ＲＳＫ）アイソフォームのＣ末端キナーゼドメイン（ＣＴＫＤ）に最も類似する（約３５％～４０％の同一性）。ＭＫ２遺伝子は、３７０アミノ酸（ＭＫ２Ａ）及び４００アミノ酸（ＭＫ２Ｂ）の２つの選択的スプライシングされた転写物をコードする。ＭＫ３遺伝子は、３８２アミノ酸の１つの転写物をコードする。ＭＫ２及びＭＫ３タンパク質は、高度に相同であるが、ＭＫ２Ａは、より短いＣ末端領域を有する。ＭＫ２ＢのＣ末端は、機能的な二分割核局在化配列（ＮＬＳ）（Ｌｙｓ－Ｌｙｓ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｌｙｓ－Ａｒｇ－Ａｒｇ－Ｌｙｓ－Ｌｙｓ；配列番号１）を含有し、これは、より短いＭＫ２Ａアイソフォームには存在せず、これにより、選択的スプライシングがＭＫ２アイソフォームの細胞局在を決定することが示される。ＭＫ３は、同様の核局在化配列を有する。ＭＫ２Ｂ及びＭＫ３の両方に見られる核局在化配列は、Ｄドメイン（Ｌｅｕ－Ｌｅｕ－Ｌｙｓ－Ａｒｇ－Ａｒｇ－Ｌｙｓ－Ｌｙｓ；配列番号２）を包含し、これは、ＭＫ２Ｂ及びＭＫ３のｐ３８α及びｐ３８βとの特異的相互作用を媒介することが示された。ＭＫ２Ｂ及びＭＫ３は、ＮＬＳ及びＤドメインのＮ末端に位置する機能的な核外輸送シグナル（ＮＥＳ）も有する。ＭＫ２ＢのＮＥＳは、レプトマイシンＢにより阻害され得るプロセスである、刺激後の核外輸送を誘発するのに十分である。ＭＫ２及びＭＫ３の触媒ドメインのＮ末端の配列は、（研究が示すように、ＭＫ２の場合）ｉｎｖｉｔｒｏでｃ－ＡｂｌのＳＨ３ドメインへの結合を媒介するために、プロリンが豊富で、１つ（ＭＫ３）または２つ（ＭＫ２）の推定Ｓｒｃ相同性３（ＳＨ３）ドメイン結合部位を含む。（Ｃａｒｇｎｅｌｌｏ，Ｍ．ａｎｄＲｏｕｘ，ＰＰ，Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｒｅｖ．（２０１１）７５（１）：５０－８３）。

ＭＫ２Ｂ及びＭＫ３は、主に静止細胞の核に位置するが、ＭＫ２Ａは、細胞質に存在する。ＭＫ２Ｂ及びＭＫ３は、双方ともに、ストレス刺激時に、染色体領域維持タンパク質（ＣＲＭ１）依存性機序を介して細胞質に急速に排出される。キナーゼの活性化ループ内の、Ｔｈｒ３３４のホスホミメティック変異が、ＭＫ２Ｂの細胞質局在化を増強するので、ＭＫ２Ｂの核外輸送はキナーゼ活性化によって媒介されるように見える。理論に制限されるものではないが、ＭＫ２Ｂ及びＭＫ３は、構成的に活性な核局在化シグナル（ＮＬＳ）及びリン酸化調節核外輸送シグナル（ＮＥＳ）を含み得ると考えられる（同上）。

ＭＫ２及びＭＫ３は、遍在的に発現し、心臓、肺、腎臓、生殖臓器（乳腺及び精巣）、皮膚及び骨格筋組織、ならびに白血球細胞／白血球及び樹状細胞などの免疫関連細胞で相対的発現が増加しているように見える。

ＭＫ２及びＭＫ３キナーゼ活性の活性化。ｐ３８α及びｐ３８βの様々な活性化因子は、ＭＫ２及びＭＫ３の活性を強力に刺激する。ｐ３８は、４つのプロリン指向部位：Ｔｈｒ２５、Ｔｈｒ２２２、Ｓｅｒ２７２、及びＴｈｒ３３４でのＭＫ２のｉｎｖｉｔｒｏ及びｉｎｖｉｖｏリン酸化を媒介する。これらの部位のうち、Ｔｈｒ２５のみが、ＭＫ３で保存されていない。理論に制限されるものではないが、リン酸化されたＴｈｒ２５の機能は不明であるが、２つのＳＨ３ドメイン結合部位間のそれの位置は、それがタンパク質間相互作用を調節し得ることを示唆する。ＭＫ２のＴｈｒ２２２（ＭＫ３のＴｈｒ２０１）は、キナーゼドメインの活性化ループに位置し、ＭＫ２及びＭＫ３キナーゼ活性に必須であることが示されている。ＭＫ２のＴｈｒ３３４（ＭＫ３のＴｈｒ３１３）は、触媒ドメインのＣ末端に位置し、キナーゼ活性に不可欠である。ＭＫ２の結晶構造は決定されており、理論に制限されるものではないが、Ｔｈｒ３３４のリン酸化がＭＫ２の核内輸送及び核外輸送のスイッチとして機能し得ることが示唆される。Ｔｈｒ３３４のリン酸化は、また、ＭＫ２のＣ末端の触媒ドメインへの結合、ＮＥＳの露出、及び核外輸送の促進を弱めるか、または妨げ得る。（同上）

ｐ３８が核内のＭＫ２及びＭＫ３を活性化することができるが、ＭＫ２及びＭＫ３の活性化及び核外輸送が、ｐ３８の安定化及び局在化も決定するリン酸化依存性立体配座スイッチにより結合され、ｐ３８自体の細胞の位置が、ＭＫ２及びおそらくＭＫ３により制御されることが実験的証拠により示唆されることを、研究は示している。核ｐ３８が、ＭＫ２のリン酸化及び活性化後に、ＭＫ２との複合体で細胞質に輸送されることを、さらなる研究は示している。ＭＫ２欠損細胞ではｐ３８レベルが低く、触媒的に不活性なＭＫ２タンパク質の発現によりｐ３８レベルが回復することが研究により示されるので、ｐ３８及びＭＫ２の相互作用は、ｐ３８の安定化に重要であり得る。（Ｍｅｎｏｎ，ＭＢ，ｅｔａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（２０１０）２８５：３３２４２－２５１Ｚ）。

ＭＫ２が、ｍＲＮＡの翻訳速度を増加させることにより、ＴＮＦ－α、ＩＬ－１、及びＩＬ－６を含む炎症性サイトカインの産生を増加させることを、ＭＫ２ノックアウトマウスまたはＭＫ２欠損細胞を使用した研究は示している。ＭＫ２欠損マウスでは、ＴＮＦ－αの転写、プロセシング、及びシェディングの有意な低減は、検出することができなかった。ｐ３８経路は、ｍＲＮＡの安定性を調節する上で重要な役割を果たすことが既知であり、ＭＫ２は、ｐ３８がこの機能を媒介する可能性のある標的を表す。ＭＫ２欠損マウスを利用した研究は、ＭＫ２の触媒活性が、サイトカインの産生及び遊走への影響に必要であることを示し、理論に制限されるものではないが、これにより、ＭＫ２がｍＲＮＡの安定性に関与する標的をリン酸化することが示唆される。これと一致して、ＭＫ２は、異種核リボ核タンパク質（ｈｎＲＮＰ）Ａ０、トリステトラプロリン（ＴＴＰ）、ポリ（Ａ）結合タンパク質ＰＡＢＰ１、及びＨｕＲ、ＲＮＡ結合タンパク質のＥＬＡＶ（キイロショウジョウバエの胚性－致死的異常視覚）ファミリーの遍在的に発現されたメンバーを結合及び／またはリン酸化することが示されている。これらの基質は、３’非翻訳領域にＡＵリッチエレメントを含むｍＲＮＡと結合または共精製することが知られており、これにより、ＭＫ２がＴＮＦ－αなどのＡＵリッチｍＲＮＡの安定性を調節し得ることが示唆される。ＭＫ３が同様の役割を果たすかどうかは現在不明であるが、ＭＫ２欠損線維芽細胞のＬＰＳ処置は、ｈｎＲＮＰＡ０リン酸化を完全に無効にし、これにより、ＭＫ３がＭＫ２の喪失を補うことができないことが示唆される。（（Ｃａｒｇｎｅｌｌｏ，Ｍ．ａｎｄＲｏｕｘ，ＰＰ，Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｒｅｖ．（２０１１）７５（１）：５０－８３））。

ＭＫ３は、真核生物伸長因子２（ｅＥＦ２）キナーゼのリン酸化にＭＫ２と共に関与する。ｅＥＦ２キナーゼは、ｅＥＦ２をリン酸化及び不活性化する。ｅＥＦ２活性は、翻訳中のｍＲＮＡの伸長に重要であり、Ｔｈｒ５６でのｅＥＦ２のリン酸化により、ｍＲＮＡ翻訳の終結がもたらされる。Ｓｅｒ３７７でのｅＥＦ２キナーゼのＭＫ２及びＭＫ３のリン酸化は、これらの酵素がｅＥＦ２キナーゼ活性を調節し、それにより、ｍＲＮＡ翻訳伸長を調節し得ることを示唆する。（Ｒｏｕｘ，ＰＰ，Ｂｌｅｎｎｉｓ，Ｊ．，Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．＆Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉｏｌ．Ｒｅｖｓ．（２００４）６８（２）：３２０－３４４）。

ＭＫ２及びＭＫ３による転写調節。核ＭＫ２は、多くのＭＫと同様に、ｃＡＭＰ応答エレメント結合（ＣＲＥＢ）、活性化転写因子１（ＡＴＦ－１）、血清応答因子（ＳＲＦ）、及び転写因子ＥＲ８１のリン酸化に寄与する。野生型及びＭＫ２欠損細胞を比較すると、ＭＫ２がストレスにより誘導される主要なＳＲＦキナーゼであることが明らかになり、これにより、ストレス媒介性の即時の初期応答におけるＭＫ２の役割が示唆される。ＭＫ２及びＭＫ３は双方ともに、ｉｎｖｉｖｏで塩基性ヘリックス－ループ－ヘリックス転写因子Ｅ４７と相互作用し、ｉｎｖｉｔｒｏでＥ４７をリン酸化する。Ｅ４７のＭＫ２媒介性リン酸化は、Ｅ４７の転写活性を抑制し、それにより、Ｅ４７依存性遺伝子発現を阻害することが判明し、これにより、ＭＫ２及びＭＫ３が組織特異的な遺伝子発現及び細胞分化を調節し得ることが示唆される（同上）。

ＭＫ２及びＭＫ３の他の標的。いくつかの他のＭＫ２及びＭＫ３基質はまた、同定されており、いくつかの生物学的プロセスにおけるＭＫ２及びＭＫ３の多様な機能を反映する。足場タンパク質１４－３－３ζは、生理学的ＭＫ２基質である。１４－３－３ζが、プロテインキナーゼ、ホスファターゼ、及び転写因子を含む細胞シグナル伝達経路の多くの構成要素と相互作用することを、研究は示す。Ｓｅｒ５８での１４－３－３ζのＭＫ２媒介性リン酸化が、結合活性を損ない、これにより、ＭＫ２が、１４－３－３ζにより通常調節されるいくつかのシグナル伝達分子の調節に影響を与え得ることが示唆されることを、さらなる研究は示している。（Ｃａｒｇｎｅｌｌｏ，Ｍ．ａｎｄＲｏｕｘ，ＰＰ，Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｒｅｖ．（２０１１）７５（１）：５０－８３））。

ＭＫ２がＳｅｒ７７上の７つのメンバーのＡｒｐ２及びＡｒｐ３複合体（ｐ１６－Ａｒｃ）のｐ１６サブユニットとも相互作用してリン酸化することを、追加の研究は示している。ｐ１６－Ａｒｃは、アクチン細胞骨格の調節に役割を果たし、これにより、ＭＫ２がこのプロセスに関与し得ることが示唆される（同上）。

小さな熱ショックタンパク質ＨＳＰ２７（ＨＳＰＢ１としても既知）、リンパ球特異的タンパク質ＬＳＰ－１、及びビメンチンが、ＭＫ２によりリン酸化されることを、さらなる研究は示している。ＨＳＰ２７としても既知のＨＳＰＢ１は、大きなオリゴマーを形成し、これは、分子シャペロンとして機能し、細胞を熱ショック及び酸化ストレスから保護し得る。リン酸化されると、ＨＳＰＢ１は大きなオリゴマーを形成する能力を失い、アクチン重合をブロックできず、これにより、ＨＳＰＢ１のＭＫ２媒介性リン酸化が、ストレス時に、他の点で不安定になるアクチンダイナミクスの調節を目的とした恒常性機能を果たすことが示唆される。ＭＫ３は、ｉｎｖｉｔｒｏ及びｉｎｖｉｖｏでＨＳＰＢ１をリン酸化することも示された。（Ｇｕｒｇｉｓ，ＦＭＳ，ｅｔａｌ．，ＭｏｌｅｃｕｌａｒＰｈａｒｍａｃｏｌ．２０１４）８５：３４５－５６）；Ｇｕａｙ，Ｊ．ｅｔａｌ．，（１９９７）Ｊ．ＣｅｌｌＳｃｉ．１１０（ｐｔ．３）：３５７－６８）。

ＨＳＰＢ１が、ｉｎｖｉｔｒｏ及びｉｎｖｉｖｏでポリユビキチン鎖及び２６Ｓプロテアソームに結合することも示された。ユビキチン－プロテアソーム経路は、主な阻害剤であるＩカッパＢ－アルファ（ＩκＢ－アルファ）を分解することにより、転写因子ＮＦ－カッパＢ（ＮＦ－κＢ）の活性化に関与し、ＨＳＰＢ１の過剰発現が、ＮＦ－αカッパＢ（ＮＦ－κＢ）核再局在化、ＤＮＡ結合、ならびにエトポシド、ＴＮＦ－アルファ、及びインターロイキン１ベータ（ＩＬ－１β）により誘導される転写活性を増加させることが示された。さらに、ＨＳＰＢ１が、ストレス条件下で、ユビキチン化タンパク質、例えば、リン酸化ＩカッパＢ－アルファ（ＩκＢ－アルファ）分解を好むこと、及び、ＨＳＰＢ１のこの機能が、ＮＦ－カッパＢ（ＮＦ－κＢ）活性の増強を通じてその抗アポトーシス特性を説明することを、以前の研究は示唆している（Ｐａｒｃｅｌｌｉｅｒ，Ａ．ｅｔａｌ．，（２００３）ＭｏｌＣｅｌｌＢｉｏｌ，２３（１６）：５７９０－５８０２）。

ＮＦ－κＢシグナル伝達経路。
本明細書で使用される略語「ＮＦκＢ」は、前炎症性転写因子であるものを指す。それは、サイトカイン、ケモカイン、プロテアーゼ、及びアポトーシス阻害剤を含む複数の炎症遺伝子のスイッチをオンにし、炎症性応答の増幅がもたらされる（Ｂａｒｎｅｓ，ＰＪ，（２０１６）Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｒｅｖ．６８：７８８－８１５）。ＮＦ－κＢの活性化に関与する分子経路は、いくつかのキナーゼを含む。炎症性刺激及び感染がＮＦ－κＢシグナル伝達を活性化する典型的な（標準的な）経路は、ＩＫＫ（κＢキナーゼの阻害剤）複合体を含み、これは、２つの触媒サブユニット、ＩＫＫ－α及びＩＫＫ－β、ならびに調節サブユニットＩＫＫ－γ（またはＮＦκＢ必須モジュレーターで構成される。（同上。Ｈａｙｄｅｎ，ＭＳａｎｄＧｈｏｓｈ，Ｓ（２０１２）ＧｅｎｅｓＤｅｖ．２６：２０３－２３４を引用）。ＩＫＫ複合体は、Ｎｆ－κＢ結合ＩκＢ（プロテアソームによる分解のためにそれらを標的とし、それにより、ｐ６５及びｐ５０サブユニットで構成されるＮｆ－κＢ二量体を放出する）をリン酸化し、これは、核に移行し、それらは、プロモーター領域ｏ炎症性及び免疫遺伝子のκＢ認識部位に結合し、これにより、転写活性化がもたらされる（図１２）。この応答は、主に、ＩκＢリン酸化を実行する触媒サブユニットＩＫＫ－β（ＩＫＫ２としても既知）に依存する。非標準（代替）経路は、ＴＮＦファミリーの特定のメンバー、例えば、リンホトキシンβに応答して、ＩＫＫ－αホモ二量体をリン酸化してＲｅｌＢを放出させ、ｐ１００～ｐ５２を処理する上流キナーゼＮＦ－κＢ誘導性キナーゼ（ＮＩＫ）を含む（同上、Ｓｕｎ，ＳＣ．（２０１２）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．２４６：１２５－１４０を引用）。この経路は、様々な遺伝子セットのスイッチをオンにし、標準的な経路とは異なる免疫機能を媒介し得る。ドミナントネガティブＩＫＫ－βは、ＮＦ－κＢの前炎症性機能のほとんどを阻害するが、ＩＫＫ－αを阻害することは、限られた刺激に応答して、及びＢリンパ球などの特定の細胞でのみ役割を果たす。非標準的な経路は、免疫系の発達及び適応免疫応答に関与する。樹状細胞及びマクロファージなどの抗原提示細胞で発現されるコアクチベーター分子ＣＤ４０は、リンパ球で発現されたＣＤ４０Ｌと相互作用する時、非標準経路を活性化する（同上、Ｌｏｍｂａｒｄｉ，Ｖｅｔａｌ．（２０１０）Ｉｎｔ．Ａｒｃｈ．ＡｌｌｅｒｇｙＩｍｍｎｏｌ．１５１：１７９－８９を引用）。

本明細書で使用される「ＮＯＤ様受容体」またはＮＬＲという用語は、他の様々なドメインに関連するヌクレオチドオリゴマー化ドメイン（ＮＯＤ）を含有するタンパク質の大きなファミリーを指し、この一般的な機能が、微生物及び細胞ストレスの検出である。ＮＯＤサブファミリーは、カスパーゼ活性化及び動員（ＣＡＲＤ）ドメインを含有するＮＬＲタンパク質のサブグループであり、これは、下流のシグナル伝達の活性化に使用される。

「核酸」という用語は、本明細書では、一本鎖または二本鎖形態のデオキシリボヌクレオチドまたはリボヌクレオチドポリマーを指すために使用され、別途限定されない限り、天然に存在するヌクレオチドと同様の様式で一本鎖核酸（例えば、ペプチド核酸）にハイブリダイズするという点で天然ヌクレオチドの本質的な性質を有する既知のアナログを包含する。

「ヌクレオチド」という用語は、本明細書では、複素環式塩基、糖、及び１つ以上のリン酸基からなる化学化合物を指すために使用される。最も一般的なヌクレオチドでは、塩基は、プリンまたはピリミジンの誘導体であり、糖は、ペントースデオキシリボースまたはリボースである。ヌクレオチドは、核酸を形成するために一体となった３つ以上の結合を有する核酸のモノマーである。ヌクレオチドは、ＲＮＡ、ＤＮＡ、ならびに、限定されないが、ＣｏＡ、ＦＡＤ、ＤＭＮ、ＮＡＤ、及びＮＡＤＰを含むいくつかの補因子の構造単位である。プリンは、アデニン（Ａ）、及びグアニン（Ｇ）を含み、ピリミジンは、シトシン（Ｃ）、チミン（Ｔ）、及びウラシル（Ｕ）を含む。

本明細書で使用される「骨形成」という用語は、骨または骨性組織が形成されるプロセスを指す。骨組織は、明確な構造である骨に通常組織化された結合組織の剛性のある形態である。骨形成には２つの主要なモードがあり、これらの両方は、骨組織への既存の間葉組織の転換を含む。間葉組織の骨への直接変換は、膜内骨化と呼ばれる。本プロセスは、主に、頭蓋骨の骨で生じる。他の場合では、間葉細胞は、軟骨に分化し、これは、後に骨に置き換わる。軟骨中間体が形成され、骨細胞に置き換わるプロセスは、軟骨内骨化と呼ばれる。

膜内骨化は、肩甲骨、頭蓋骨、及び亀の甲羅の扁平骨が形成される特徴的な方法である。膜内骨化では、骨は、線維性結合組織のシートを発達させる。頭蓋骨の膜内骨化中に、神経堤由来の間葉系細胞は増殖し、凝縮して緻密な小結節になる。これらの細胞のうち毛管に進展するものもあれば、形を変化させ骨芽細胞になり、骨前駆細胞になることがコミットされるものもある。骨芽細胞は、カルシウム塩に結合できるコラーゲン－プロテオグリカンマトリックスを分泌する。この結合により、プレボネ（ｐｒｅｂｏｎｅ）（類骨）マトリックスは、石灰化するようになる。ほとんどの場合、骨芽細胞は、分泌する類骨基質の層で石灰化の領域から分離される。時折、骨芽細胞は、石灰化したマトリックスに閉じ込められ、骨細胞になる。石灰化が進む時、骨化が始まった領域から骨の棘が放射状に広がり、石灰化した棘の全領域が、骨膜を形成する緻密な間葉細胞に囲まれ、骨膜の内面の細胞も骨芽細胞になり、既存の針骨のものと平行した類骨基質を沈着させる。このように、骨の多くの層が形成される。

膜内骨化は、間葉帯への毛細血管の侵入、ならびに間葉細胞の成熟骨芽細胞への出現及び分化を特徴とし、これは、骨基質を構成的に沈着させ、骨の棘状突起の形成をもたらし、これは、成長及び発達して、最終的に他の棘状突起と融合して小柱を形成する。小柱のサイズ及び数が増えるにつれて、それらは相互接続されて織骨（骨細胞の割合が高い無秩序な弱い構造）を形成し、最終的にはより組織化された、より強い、層状の骨に置き換わる。

膜内骨化の分子機序は、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）及びＣＢＦＡ１と呼ばれる転写因子の活性化を含む。頭の表皮由来の骨形成タンパク質、例えば、ＢＭＰ２、ＢＭＰ４、及びＢＭＰ７は、神経堤由来の間葉系細胞が直接骨細胞になるように指示すると考えられる。ＢＭＰは、間葉系細胞のＣｂｆａ１遺伝子を活性化する。ＣＢＦＡ１転写因子は、間葉系細胞を骨芽細胞に変換することが知られている。マウスＣＢＦＡ１のｍＲＮＡは、主に骨を形成する間葉凝縮に限定されており、骨芽細胞系列に限定されることを、研究は示している。ＣＢＦＡ１は、オステオカルシン、オステオポンチン、及び他の骨特異的な細胞外マトリックスタンパク質の遺伝子を活性化することが知られている。

軟骨内骨化（ｅｎｄｏｃｈｏｎｄｒａｌＯｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ）（軟骨内骨化（ＩｎｔｒａｃａｒｔｉｌａｇｉｎｏｕｓＯｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ））。凝集した間葉系細胞からの軟骨組織のｉｎｖｉｖｏ形成を含む軟骨内骨化、及びその後の、骨による軟骨組織の置換は、５つの段階に分けることができる。脊柱、骨盤、及び四肢の骨格構成要素は、最初に軟骨で形成され、後で骨になる。

まず、間葉系細胞は、軟骨細胞になることがコミットされる。このコミットメントは、近くの中胚葉細胞に２つの転写因子、Ｐａｘ１及びＳｃｌｅｒａｘｉｓを発現させるパラクリン因子により引き起こされる。これらの転写因子は、軟骨特異的遺伝子を活性化することが知られている。例えば、Ｓｃｌｅｒａｘｉｓは、硬節からの間充織、骨への軟骨前駆体を形成する顔面間葉、及び四肢の間葉で発現される。

軟骨内骨化の第２段階では、コミットされた間葉細胞が凝縮して緻密な小結節になり、軟骨細胞（主にコラーゲン及びプロテオグリカンからなる軟骨基質を生成及び維持する軟骨細胞）に分化する。Ｎ－カドヘリンが、これらの凝縮の開始に重要であり、Ｎ－ＣＡＭが、それらを維持するために重要であることを、研究は示している。ヒトでは、ＤＮＡ結合タンパク質をコードするＳＯＸ９遺伝子は、軟骨前凝縮で発現される。

軟骨内骨化の第３段階では、軟骨細胞が急速に増殖して骨のモデルを形成する。それらが分裂するにつれて、軟骨細胞は、軟骨特異的な細胞外マトリックスを分泌する。

第４段階では、軟骨細胞は、分裂を停止し、体積を劇的に増加させて、肥大型軟骨細胞になる。これらの大きな軟骨細胞は、（コラーゲンＸ及びより多くのフィブロネクチンを追加することにより）生成するマトリックスを変化させて、炭酸カルシウムでミネラル化されるようにする。

第５段階は、血管による軟骨モデルへの侵入を含む。肥大型軟骨細胞は、アポトーシスによって死滅し、この空間が骨髄になる。軟骨細胞が死滅する時、軟骨モデルを取り囲んでいた細胞のグループが、骨芽細胞に分化し、これにより、部分的に分解された軟骨上に骨基質が形成し始める。最終的に、全ての軟骨が、骨に置き換えられる。従って、軟骨組織は、続く骨のモデルとして機能する。

軟骨細胞の骨細胞による置換は、細胞外マトリックスのミネラル化に依存している。好気性呼吸から嫌気性呼吸への最初の切り替えを含む多くのイベントは、軟骨細胞の肥大及びミネラル化につながる。これにより、細胞代謝及びミトコンドリアのエネルギーポテンシャルが変化する。肥大軟骨細胞は、細胞外マトリックスに多数の小さな膜結合小胞を分泌する。これらの小胞は、カルシウムイオン及びリン酸イオンの生成に活性があり、軟骨基質内でミネラル化プロセスを開始する酵素を含有する。肥大型軟骨細胞、それらの代謝及びミトコンドリア膜は変化し、次に、アポトーシスにより死滅する。

多くの哺乳類（ヒトを含む）の長骨では、軟骨内骨化は、骨の中心から両方向に外側に広がる。骨化前線が軟骨モデルの端に近づくにつれて、骨化前線の近くの軟骨細胞が肥大する前に増殖し、骨の軟骨端を押し出す。長骨の端の軟骨領域は、骨端成長板と呼ばれる。これらのプレートは、３つの領域：軟骨細胞増殖の領域、成熟軟骨細胞の領域、及び肥大型軟骨細胞の領域を含有する。内側の軟骨肥大及び骨化前線がさらに外側に伸びるにつれて、骨端成長板に残っている軟骨が増殖する。骨端成長板が軟骨細胞を生成できる限り、骨は、成長し続ける。

本明細書で使用される「骨減少症」という用語は、骨粗鬆症よりも重症度が低い骨量の減少を指す。それは、骨密度測定で、－１～－２．５のＴスコアとして定義される。

本明細書で使用される「骨粗鬆症」という用語は、骨密度の低下を指し、骨は、より多孔性で壊れやすくなり、骨折のリスクが高まる。これは、－２．５以下のＴスコアとして定義される。

本明細書で使用される「臓器」という用語は、細胞及び組織からなり、生物においていくつかの特定の機能を実施する分化した構造を指す。

本明細書で使用される場合、「パラクリンシグナル伝達」という用語は、隣接する細胞に作用する分泌されたシグナル分子を介した短距離の細胞間コミュニケーションを指す。

本明細書で使用される「病原体関連分子パターン」（ＰＡＭＰ）という用語は、自然免疫系の細胞により認識される病原体のグループに特異的に関連する分子を指す。

「ポリペプチド」及び「タンパク質」という用語は、本明細書では、それらの最も広い意味で、サブユニットアミノ酸、アミノ酸アナログ、またはペプチド模倣物の配列を指すために使用される。記載された場合を除き、サブユニットは、ペプチド結合で連結されている。これらの用語は、１つ以上のアミノ酸残基が対応する天然に存在するアミノ酸の人工化学アナログであるアミノ酸ポリマー、ならびに天然に存在するアミノ酸ポリマーにも適用される。これらの用語はまた、限定されないが、グリコシル化、脂質付着、硫酸化、グルタミン酸残基のガンマカルボキシル化、ヒドロキシル化、及びＡＤＰリボシル化を含む改変を含んでいる。よく知られているように、及び上記のように、ポリペプチドが完全に線状ではない場合があることは、理解されるであろう。例えば、ポリペプチドは、一般に、翻訳後イベントの結果として、自然なプロセシングによるものであれ、自然には起こらないヒトの操作でもたらされるイベントによるものであれ、ユビキチン化の結果として分岐されても、または、分岐の有無にかかわらず環状であってもよい。環状、分岐、及び分岐環状ポリペプチドは、完全に合成方法で合成されてもよい。

「医薬組成物」という用語は、本明細書では、標的の状態または疾患を予防するか、強度を低減させるか、治癒するか、または他の方法で処置するために用いられる組成物を指すために使用される。「製剤」及び「組成物」という用語は、本明細書では、全ての活性及び不活性成分を含む、記載された本発明の製品を指すために互換的に使用される。

「薬学的に許容される」という用語は、製剤または組成物の他の成分と適合性があり（通常の使用条件下で、組成物の有効性を実質的に低減する相互作用がないような方法で、互いに組み合わせることができることを意味する）、且つ、そのレシピエントに有害ではない担体、希釈剤、または賦形剤を指すために使用される。担体は、処置される対象への投与に適するようにするために、十分に高い純度及び十分に低い毒性のものでなければならない。担体は、さらに、活性剤の安定性及び生物学的利用能を維持しなければならない。例えば、「薬学的に許容される」という用語は、連邦もしくは州政府の規制機関により承認されているか、または、使用のために米国薬局方もしくは他の一般的に認められている薬局方に記載されることを意味し得る。

本明細書で使用される「前駆細胞」という用語は、成長因子が加えられた培養皿中で骨髄細胞の懸濁液を成長させることにより単離され得る骨髄中の未成熟細胞を指す。前駆細胞は、血液細胞に成熟する前駆細胞に成熟する。前駆細胞は、コロニー形成単位（ＣＦＵ）またはコロニー形成細胞（ＣＦＣ）と呼ばれる。前駆細胞の特定の系列は、限定されないが、ＣＦＵ－Ｅ（赤血球）、ＣＦＵ－ＧＭ（顆粒球／マクロファージ）、及びＣＦＵ－ＧＥＭＭ（多能性造血前駆細胞）などの接尾辞で示される。

本明細書で使用される「精製」という用語及びその様々な文法形式は、外来の、無関係な、または好ましくない要素を分離または除去するプロセスを指す。

本明細書で使用される「静止」という用語は、多くの場合、組織に存在する幹細胞を特性決定し、恒常性の間に組織を補充し得る休眠予備として、それらを機能させることを可能にする特性である。静止は、造血幹細胞（ＨＳＣ）の基本的な特徴であると考えられ、これは、多系列の分化及び自己複製の可能性を有し、血液系列内の全ての細胞型を生じさせることができる（Ｎａｋａｍｕｒａ－Ｉｓｃｈｉｚｕ，Ａ．ｅｔａｌ．，Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ（２０１４）１４１：４６５６－６６，Ｐｉｅｔｒａｓ，ＥＭ．ｅｔａｌ．，Ｊ．ＣｅｌｌＢｉｏｌ．（２０１１）１９５：７０９－７２０を引用）。静止状態のＨＳＣの細胞周期の正確な調節は、幹細胞の消耗を最小限に抑えた成熟造血細胞の効果的な産生に必要とされる（同上、Ｏｒｆｏｒｄ，ＫＷａｎｄＳｃａｄｄｅｎ，ＤＴ，ＮａｔｕｒｅＲｅｖ．Ｇｅｎｅｔ．（２００８）９：１１５－１２８を引用）。増殖中の細胞が、遺伝子変異の影響をより受けやすく、ターンオーバーが最大（ヘイフリック限界として知られる限界）に達すると、老化するので、（同上、Ｈａｙｆｌｉｃｋ，Ｌ．ａｎｄＭｏｏｒｈｅａｄ，ＰＳ，ＥｘｐｌＣｅｌｌＲｅｓ．，（１９６１）２５：５８５－６２１を引用）、静止は、おそらく、悪性形質転換及び機能不全からＨＳＣを保護する（同上、Ｗａｎｇ，ＪＣＹａｎｄＤｉｃｋ，ＪＥ，ＴｒｅｎｄｓＣｅｌｌＢｉｏｌ．（２００５）１５：４９４－５０１を引用）。炎症または失血などの様々なストレスに応答して誘導される細胞内因性及び外因性シグナルの両方により、静止状態のＨＳＣが細胞周期に再び入り、増殖及び分化することが可能になる（同上、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，ＳＪａｎｄＷｅｉｓｓｍａｎ，ＩＬＩｍｍｕｎｉｔｙ（１９９４）１：６６１－６７３；Ｓｕｄａ，Ｔ．ｅｔａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（１９８３）８０：６６８９－９３を引用）。

「参照配列」という用語は、配列比較の基準として使用される配列を指す。参照配列は、指定された配列のサブセットまたは全体であってよい。

本明細書で使用される「再発」という用語は、寛解期後の疾患の再出現を指す。

本明細書で使用される「寛解」という用語は、疾患及びその症状の減少または消失を指す。

本明細書で使用される「スプライス部位バリアント」という用語は、タンパク質コード配列の変化をもたらし得るエクソン及びイントロン（スプライス部位）の境界で生じるＤＮＡ配列の遺伝的変化を指す。

本明細書で使用される「定常状態」という用語は、損失率が利得率と等しい動的平衡状態を指す。

本明細書で使用される「幹細胞」という用語は、複数の別個の細胞表現型への最終分化を受け得る娘細胞を生成し得る自己複製能力を有する高い増殖能を有する未分化細胞を指す。幹細胞は、２つの特徴で他の細胞型と区別される。まず、それらは、場合により、長期間の不活動後に、細胞分裂により自己を再生することが可能な未分化細胞である。次に、特定の生理学的または実験的条件下で、それらは、特別な機能を備えた組織または臓器に特異的な細胞になるように誘導することができる。腸及び骨髄などの一部の臓器では、幹細胞が定期的に分裂して、摩耗または損傷した組織を修復及び置き換える。しかし、膵臓及び心臓などの他の臓器では、幹細胞は、特別な条件下でのみ分裂する。

成体（体性）幹細胞は、組織または臓器の分化した細胞の中に見られる未分化の細胞である。ｉｎｖｉｖｏでのそれらの主要な役割は、それらが見出される組織を維持及び修復することである。成体幹細胞は、脳、骨髄、末梢血、血管、骨格筋、皮膚、歯、胃腸管、肝臓、卵巣上皮、及び精巣を含む、多くの臓器及び組織で同定されている。成体幹細胞は、幹細胞ニッチとして既知の各組織の特定の領域に存在すると考えられ、それらは、より多くの細胞が組織を維持する通常の必要性により、または病気もしくは組織損傷により活性化されるまで、長期間静止（非分裂）したままであってよい。

骨髄幹細胞。本明細書で使用される「骨髄幹細胞」という用語は、骨髄に由来する幹細胞を指し、ＨＳＣ及びＭＳＣを含む。骨髄の単核分画は、間質細胞、造血前駆体、及び内皮前駆体を含有する。

末梢血幹細胞。本明細書で使用される「末梢血幹細胞」という用語は、末梢血に由来する幹細胞を指す。末梢血は、組織または臓器の分化細胞の中に見られる未分化細胞である成体（体細胞）幹細胞を収容する。末梢血幹細胞の例には、造血幹細胞、及び間葉系幹細胞が挙げられるが、これらに限定されない［ＤｚｉｅｒｚａｋＥ．ｅｔａｌ．，“Ｏｆｌｉｎｅａｇｅａｎｄｌｅｇａｃｙ：ｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｍａｍｍａｌｉａｎｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌｓ”，ＮａｔｕｒｅＩｍｍｕｎｏｌ．，Ｖｏｌ．９（２）：１２９－１３６，（２００８）］。

造血幹細胞。本明細書で使用される場合、「造血幹細胞」（骨髄及びリンパ系細胞（ＣＦＵ－Ｍ、Ｌ）のコロニー形成ユニット、またはＣＤ３４⁺細胞としても既知）という用語は、生涯にわたり血液細胞の継続的な産生に関与している造血臓器内のまれな多能性細胞である［ＬｉＹ．ｅｔａｌ．，“Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｓｉｇｎａｌｉｎｇｒｅｇｕｌａｔｅｓｅｍｂｒｙｏｎｉｃｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｓｔｅｍａｎｄｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒｃｅｌｌｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ”，ＧｅｎｅｓＤｅｖ．，Ｖｏｌ．２８（２３）：２５９６－２６１２，（２０１４）］。ＨＳＣは、赤血球、好中球、好塩基球、好酸球、血小板、肥満細胞、単球、組織マクロファージ、破骨細胞、ならびに、Ｔ及びＢリンパ球を含む、様々な細胞型を生成し得る。造血幹細胞の調節は、自己複製、生存及び増殖、系列の関与及び分化を含む複雑なプロセスであり、内因性細胞プログラミングならびに微小環境間質との接着相互作用及びサイトカインの作用などの外部刺激を含む多様な機序により調整される。

造血幹細胞を特定の経路に沿って分化させる際には、種々のパラクリン因子（サイトカイン）が重要である。サイトカインは、いくつかの細胞型で作成することができるが、造血部位の間質（間葉系）細胞の細胞外マトリックスにより収集及び濃縮される。例えば、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）及び多系列成長因子ＩＬ－３は、双方ともに、骨髄間質のヘパラン硫酸グリコサミノグリカンに結合する。次に、細胞外マトリックスは、これらの因子を受容体に結合するのに十分に高い濃度で幹細胞に提示する［ＡｌｖａｒｅｚＳ．ｅｔａｌ．，“ＧＭ－ＣＳＦａｎｄＩＬ－３ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｉｎｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａｌｌｉｖｅｒｇｒａｎｕｌｏｍａｓａｒｅｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄｂｙｓｔｒｏｍａ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｈｅｐａｒａｎｓｕｌｆａｔｅｐｒｏｔｅｏｇｌｙｃａｎｓ”，ＪＬｅｕｋｏｃＢｉｏｌ．，Ｖｏｌ．５９（３）：４３５－４４１，（１９９６）］。

間葉系幹細胞。間葉系幹細胞（ＭＳＣ）（骨髄間葉系幹細胞または骨格幹細胞としても既知）は、様々な組織に見られる非血液の成人幹細胞である。それらは、以下を特徴とする：紡錘形の形態学的、細胞表面上の特定のマーカーの発現、ならびに適切な条件下で、最低３つの系列（骨形成、軟骨形成、及び脂肪生成）に沿って分化する能力［ＮａｊａｒＭ．ｅｔａｌ．，“Ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｒｏｍａｌｃｅｌｌｓａｎｄｉｍｍｕｎｏｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ：Ａｇａｔｈｅｒｉｎｇｏｆｒｅｇｕｌａｔｏｒｙｉｍｍｕｎｅｃｅｌｌｓ”，Ｃｙｔｏｔｈｅｒａｐｙ，Ｖｏｌ．１８（２）：１６０－１７１，（２０１６）］。ｉｎｖｉｖｏでＭＳＣを明確に描写する単一のマーカーは、ＭＳＣ表現型に関するコンセンサスがないので同定されていないが、ＭＳＣは細胞表面マーカーＣＤ１０５、ＣＤ１６６、ＣＤ９０、及びＣＤ４４に対して陽性であり、ＭＳＣは、代表的な造血抗原、例えば、ＣＤ４５、ＣＤ３４、及びＣＤ１４に陰性であることが一般的である。ＭＳＣの分化の可能性については、骨髄由来のＭＳＣの集団が、骨、軟骨、腱、筋肉、脂肪組織、及び間質をサポートする造血を含む、ｉｎｖｉｔｒｏ及びｉｎｖｉｖｏの両方で最終分化した間葉系表現型に発達する能力を有することが研究で報告されている。トランスジェニック及びノックアウトマウス及びヒト筋骨格障害を使用した研究では、胚発生及び成体恒常性の間に、ＭＳＣが複数の系列に分化することが報告されている。［ＮａｊａｒＭ．ｅｔａｌ．，“Ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｒｏｍａｌｃｅｌｌｓａｎｄｉｍｍｕｎｏｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ：Ａｇａｔｈｅｒｉｎｇｏｆｒｅｇｕｌａｔｏｒｙｉｍｍｕｎｅｃｅｌｌｓ”，Ｃｙｔｏｔｈｅｒａｐｙ，Ｖｏｌ．１８（２）：１６０－１７１，（２０１６）］。

Ｉｎｖｉｖｏプロセスを再現する適切な条件下でのＭＳＣのｉｎｖｉｔｒｏ分化の分析は、幹細胞のコミットメントに不可欠な様々な要因の同定につながっている。それらの中で、分泌された分子及びそれらの受容体（例えば、トランスフォーミング成長因子－（β）、細胞外マトリックス分子（例えば、コラーゲン及びプロテオグリカン）、アクチン細胞骨格、ならびに細胞内転写因子（例えば、Ｃｂｆａｌ／Ｒｕｎｘ２、ＰＰＡＲｙ、Ｓｏｘ９、及びＭＥＦ２）は、多能性ＭＳＣの特定の系列へのコミットメントを引き起こすこと、ならびに、それらの分化した表現型を維持することに重要な役割を果たすことが示されている［ＤａｖｉｓＬ．Ａ．ｅｔａｌ．，“Ｍｅｓｏｄｅｒｍａｌｆａｔｅｄｅｃｉｓｉｏｎｓｏｆａｓｔｅｍｃｅｌｌ：ｔｈｅＷｎｔｓｗｉｔｃｈ”，ＣｅｌｌＭｏｌＬｉｆｅＳｃｉ．，Ｖｏｌ．６５（１７）：２５６８－２５７４，（２００８）］。

本明細書で使用される「幹細胞ニッチ」という用語は、成体幹細胞が存在する各組織の特定の領域を指し、それらは、より多くの細胞が組織を維持する通常の必要性により、または病気もしくは組織損傷により活性化されるまで、長期間静止（非分裂）したままであってよい。幹細胞ニッチの細胞は、幹細胞と相互作用して、幹細胞を維持するか、または幹細胞の分化を促進する。

本明細書で使用される「幹細胞レスキュー」または「レスキュー移植」という用語は、高用量の抗がん剤または放射線療法による処置により破壊された造血幹細胞を置き換える方法を指す。これは通常、処置前に保存された患者自身の幹細胞を使用して行われる。幹細胞は、骨髄が回復し、健康な血球を生成するのを助ける。幹細胞レスキューは、より多くのがん細胞が死滅するように、より多くの化学療法または放射線療法が投与されることを可能にし得る。

本明細書で使用される場合、特定の状態の処置について「必要とする対象」という表現は、その状態を有する対象、その状態を有すると診断された対象、またはその状態を発症するリスクがある対象である。いくつかの実施形態によると、そのような処置を「必要とする対象」という表現は、また、別途文脈及び使用法の表現により示されない限り、（ｉ）記載の発明の組成物を投与されることになる患者；（ｉｉ）記載の発明の組成物を受けている患者；または、（ｉｉｉ）記載の発明の組成物を少なくとも１つ受けた患者を指すために使用される。

本明細書で使用される「懸濁液」という用語は、細かく分割された種が別の種と組み合わされ、前者が細かく分割されて混合されるので、急速に沈降しない分散液（混合物）を指す。

本明細書で使用される「標的」という用語は、例えば、限定されないが、タンパク質、細胞、臓器、または核酸などの生物学的実体を指し、その活性は、外部刺激によって改変され得る。刺激の性質に応じて、標的に直接的な変化がなくても、または標的の立体配座変化が誘導されてもよい。

本明細書で使用される場合、「治療薬」または「活性薬」という用語は、意図された治療効果に関与する記載された発明の組成物の成分、構成成分、または構成要素を指す。

本明細書で使用される「治療構成成分」という用語は、あるパーセンテージの集団における特定の疾患症状の進行を排除、低減、または防止する治療上有効な投薬量（すなわち、投与の用量及び頻度）を指す。

本明細書で使用される「治療効果」という用語は、処置の結果を指し、その結果は、望ましく且つ有益であると判断される。治療効果は、直接的または間接的に、疾患の症状の阻止、軽減、または排除を含んでもよい。治療効果は、直接的または間接的に、疾患症状の進行の阻止、軽減、または排除も含んでもよい。

本明細書で使用される場合、「組織」という用語は、類似の細胞及びそれらを取り巻く細胞間物質の集合を指す。例えば、結合組織は、様々な種類の多数の細胞を含む繊維状及び粉砕された物質で形成された体の支持またはフレームワーク組織である。それは、間葉に由来し、これもまた、中胚葉に由来する。結合組織の種類は、疎性（ａｒｅｏｌａｒ）または疎性（ｌｏｏｓｅ）；脂肪；センス、規則的または不規則的な、白い繊維；弾性；粘液性；リンパ組織；軟骨；及び骨を含むが、これらに限定されない。

本明細書で使用される「トール様受容体」という用語は、マクロファージ、樹状細胞、ならびに、病原体及びそれらの産物を認識する他のいくつかの細胞上の先天性受容体を指す。認識は、受容体を有する細胞を刺激して、免疫応答の開始を助けるサイトカインを産生する。

本明細書で使用される「移植」という用語及びその様々な文法的形態は、組織または臓器が、ヒトの体のある領域から別の領域へ、またはあるヒト（ドナー）から別のヒト（レシピエント）へ移動される外科処置を指す。

本明細書で使用される「処置する」、「処置される」、または「処置すること」という用語は、治療的処置及び／または予防的（ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ）もしくは予防的（ｐｒｅｖｅｎｔａｔｉｖｅ）手段の両方を指し、目的は、望ましくない生理学的状態、障害もしくは疾患を予防もしくは減速（軽減）すること、または有益なもしくは所望の臨床結果を得ることである。本発明の目的のために、有益なまたは所望の臨床結果は、症状の軽減；状態、障害、または疾患の程度の減少；状態、障害、または疾患の状態の安定化（すなわち、悪化しないこと）；状態、障害、または疾患の発症の遅延または進行の遅延；状態、障害、または疾患状態の改善；及び検出可能または検出不可能にかかわらない、寛解（部分的もしくは全体的にかかわらず）、または状態、障害、もしくは疾患の改善もしくは好転を含むが、これに限定されない。処置は、過剰なレベルの副作用なしに臨床的に有意な応答を誘発することを含む。処置は、処置を受けていない場合に予想される生存期間と比較して生存期間を延長することも含む。

本明細書で使用される「脈管形成」という用語は、新しい血管形成のプロセスを指す。

「体積／体積パーセント」という用語は、溶液中の物質の濃度の尺度である。これは、溶質の体積対溶液の総体積×１００の割合として表される。純粋な液体溶液を混合することにより溶液を調製する時はいつでも、体積パーセント（ｖｏｌ／ｖｏｌ％またはｖ／ｖ％）が使用されるべきである。

略語「ＷＢＭ」は、全骨髄を表す。

「重量パーセントによる重量」または重量／重量％という用語は、本明細書では、溶質の重量対溶液の総重量の割合を指すために使用される。

本明細書で使用される場合、「野生型」、「天然に存在する」という用語、またはそれらの文法的同等物は、天然に見出され、対立遺伝子変異を含むアミノ酸配列またはヌクレオチド配列、つまり、通常は意図的に改変されていないアミノ酸配列またはヌクレオチド配列を指すことを意味する。従って、「天然に存在しない」、「合成の」、「組み換え」という用語、またはそれらの文法的同等物は、天然に見出されないアミノ酸配列またはヌクレオチド配列、つまり、通常は意図的に改変されているアミノ酸配列またはヌクレオチド配列を指すために互換的に使用される。組み換え核酸が作製され、宿主細胞または生物に再導入されると、それは非組み換え的に、すなわち、ｉｎｖｉｔｒｏ操作ではなく、宿主細胞のｉｎｖｉｖｏ細胞機序を使用して複製することになると理解される。但し、そのような核酸は、一度組み換え的に産生されると、その後、非組み換え的に複製されるが、依然として、記載の発明のための組み換え体と考えられる。

方法
一態様によると、記載の発明は、骨髄内の内皮細胞特異的ＮＦ－κＢを阻害することを含む、骨髄抑制性傷害後のＢＭの造血再構成を改善するための方法を提供する。

いくつかの実施形態によると、骨髄抑制性傷害は、亜致死放射線、化学療法、またはその両方を含む。いくつかの実施形態によると、骨髄抑制性傷害は、亜致死照射を含む。いくつかの実施形態によると、骨髄抑制性傷害は、全身照射を含む。いくつかの実施形態によると、骨髄抑制性傷害は、全リンパ節照射を含む。いくつかの実施形態によると、骨髄抑制性傷害は、放射線への曝露を含む。いくつかの実施形態によると、放射線は、反対のコバルト６０供給源などの任意の適切な供給源から誘導することができる。

いくつかの実施形態によると、骨髄抑制性傷害は、骨髄破壊的である。

いくつかの実施形態によると、骨髄抑制性傷害は、物質１キログラム当たりに吸収された約１ジュールのエネルギー（Ｇｙ）～約３０Ｇｙを含む。いくつかの実施形態によると、骨髄抑制性傷害は、約１Ｇｙ、約２Ｇｙ、約３Ｇｙ、約４Ｇｙ、約５Ｇｙ、約６Ｇｙ、約７Ｇｙ、約８Ｇｙ、約９Ｇｙ、約１０Ｇｙ、約１１Ｇｙ、約１２Ｇｙ、約１３Ｇｙ、約１４Ｇｙ、約１５Ｇｙ、約１６Ｇｙ、約１７Ｇｙ、約１８Ｇｙ、約１９Ｇｙ、約２０Ｇｙ、約２１Ｇｙ、約２２Ｇｙ、約２３Ｇｙ、約２４Ｇｙ、約２５Ｇｙ、約２６Ｇｙ、約２７Ｇｙ、約２８Ｇｙ、約２９Ｇｙ、約３０Ｇｙを含む。いくつかの実施形態によると、骨髄抑制性傷害は、約１Ｇｙ～約１６Ｇｙを含む。

いくつかの実施形態によると、骨髄抑制性傷害は、単一線量の全身照射を含む。いくつかの実施形態によると、骨髄抑制性傷害は、分割線量の全身照射を含む。いくつかの実施形態によると、照射を含む骨髄抑制性傷害は、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、または１４日にわたってもたらされる。いくつかの実施形態によると、照射を含む骨髄抑制性傷害は、２日～約６日にわたってもたらされる。いくつかの実施形態によると、骨髄抑制性傷害は、放射線の最終送達後に生じる。

骨髄抑制性傷害が照射を含む場合のいくつかの実施形態によると、照射線量は、約１Ｇｙ～約１６Ｇｙである。骨髄抑制性傷害が照射を含む場合のいくつかの実施形態によると、総照射線量は、約１Ｇｙ～約１６Ｇｙである。骨髄抑制性傷害が照射を含む場合のいくつかの実施形態によると、総照射線量は、約２日～約６日にわたって提供される約１Ｇｙ～約１６Ｇｙである。いくつかの実施形態によると、照射は、さらに肺シールドを含む。

いくつかの実施形態によると、骨髄抑制性傷害は、化学療法を含む。いくつかの実施形態によると、骨髄抑制性傷害は、大量化学療法を含む。いくつかの実施形態によると、骨髄抑制性傷害は、アルキル化剤を用いる化学療法を含む。いくつかの実施形態によると、骨髄抑制性傷害は、アルキル化剤を用いる大量化学療法を含む。

いくつかの実施形態によると、骨髄抑制性傷害の後、対象の骨髄は、ＨＳＣニッチにおける炎症を含む。いくつかの実施形態によると、骨髄抑制性傷害は、骨髄破壊を含む。いくつかの実施形態によると、骨髄抑制性傷害は、自家血液学的回復の不能をもたらす。

いくつかの実施形態によると、ＢＭ内の内皮細胞におけるＮＦ－κＢ阻害は、骨髄（ＢＭ）における下流のＮＦ－κＢシグナル伝達を抑制するのに効果的である。いくつかの実施形態によると、ＢＭ内の内皮細胞におけるＮＦ－κＢ阻害は、ＢＭ内の標的ＮＦκＢ遺伝子を下方調節するのに効果的である。いくつかの実施形態によると、ＢＭ内の内皮細胞におけるＮＦ－κＢ阻害は、ＢＭにおける下流のＮＦ－κＢシグナル伝達を抑制し、ＢＭ内の内皮細胞における標的ＮＦκＢ遺伝子を下方調節するのに効果的である。いくつかの実施形態によると、ＢＭ内の内皮細胞におけるＮＦ－κＢ阻害は、造血区画を保護し、骨髄抑制損傷後の回復を高める。

いくつかの実施形態によると、骨髄中の造血細胞集団は、骨髄内皮細胞（ＢＭＥＣ）、造血幹細胞（ＨＳＣ）、及び間質細胞（ＭＳＣ）を含む。

いくつかの実施形態によると、ＢＭＥＣは、骨髄（ＢＭ）間質細胞、ＢＭＬｅｐｒ＋細胞、及びＢＭ骨芽細胞を含む。いくつかの実施形態によると、ＢＭＥＣの免疫表現型は、ＣＤ４５－Ｔｅｒ１１９－ＣＤ３１＋ＶＥカドヘリン＋である。いくつかの実施形態によると、ＢＭ間質細胞は、ＢＭＬｅｐｒ＋及びＢＭ骨芽細胞間質サブセットを含む。いくつかの実施形態によると、ＢＭ間質細胞の免疫表現型は、ＣＤ４５－Ｔｅｒ１１９－ＣＤ３１－ＶＥカドヘリン－である。いくつかの実施形態によると、ＢＭ間質集団内のＢＭＬｅｐｒ＋細胞の免疫表現型は、ＣＤ４５－Ｔｅｒ１１９－ＣＤ３１－Ｌｅｐｒ＋である。いくつかの実施形態によると、ＢＭ骨芽細胞の免疫表現型は、ＣＤ４５－Ｔｅｒ１１９－ＣＤ３１－ＳＣＡ１－ＣＤ５１＋である。

いくつかの実施形態によると、造血幹細胞及び前駆細胞（ＨＳＰＣ）は、造血幹細胞（ＨＳＣ）及び造血前駆細胞（ＨＰＣ）を含む。いくつかの実施形態によると、ＨＳＣの免疫表現型は、Ｌｉｎｅａｇｅ－ＣＤ４８－ＣＤ１５０ブライトを含む。いくつかの実施形態によると、ＨＳＣの免疫表現型は、Ｌｉｎｅａｇｅ－（Ｔｅｒ１１９／ＣＤ１１ｂ／ＧＲ１／Ｂ２２０／ＣＤ３）－ＣＤ４１－ｃＫＩＴ＋ＳＣＡ１＋ＣＤ４８－ＣＤ１５０＋である。

いくつかの実施形態によると、ＫＬＳＨＳＰＣの免疫表現型は、Ｌｉｎ－ｃＫＩＴ＋ＳＣＡ１＋である。いくつかの実施形態によると、ＫＬＳコンパートメントは、ＨＳＣが豊富である。

いくつかの実施形態によると、成熟造血幹細胞系列のマーカーは、Ｂ２２０、ＣＤ４、ＣＤ８、Ｇｒ－１、Ｍａｃ－１、及びＴｅｒ－１１９を含む。

いくつかの実施形態によると、ＢＭＥＣは、ＢＭ内の炎症性ストレスの間、ＢＭ機能及び造血に影響を与える。いくつかの実施形態によると、内皮ＭＡＰＫは、成人の内皮において構成的に活性化することができる。いくつかの実施形態によると、ＢＭ内皮ニッチ活性は、内皮ＭＡＰＫの慢性的活性化により低減する。いくつかの実施形態によると、低減したＢＭ内皮ニッチ活性は、定常状態の造血及びＨＳＣ機能の欠陥をもたらす。

いくつかの実施形態によると、内皮ＭＡＰＫの慢性的活性化は、内皮ネットワークを破壊する炎症性ストレス反応をもたらす。いくつかの実施形態によると、炎症性ストレス反応は、血管拡張の増加、ＢＭ血管漏出の増加を含む血管完全性の減少、ならびにｓＩＣＡＭ、ＶＣＡＭ、及びＩＬ１ｂを含む炎症性メディエーターのレベルの増加のうちの１つ以上を含む。いくつかの実施形態によると、内皮ＭＡＰＫの慢性的活性化は、標準的なＮＦ－κＢシグナル伝達の下流の活性化を介して炎症をもたらす。いくつかの実施形態によると、標準的なＮＦ－κＢシグナル伝達の下流の活性化は、総ｉκＢαレベルの有意な変化を伴わない内皮内のｐ６５リン酸化の増加、ＭＥＫ１ＤＤ駆動型ＥＲＫ１／２リン酸化の増加、またはレベルの増加を含む、前炎症性サイトカイン及びケモカインＩＬ－１ａ、ＩＬ－１ｂ、Ｃｘｃｌ１、Ｃｘｃｌ３、Ｃｃｌ１２、及びＣｃｌ２２を含むＮＦ－κＢシグナル伝達標的の発現のレベルの増加のうちの１つ以上を含む。

いくつかの実施形態によると、内皮ＭＡＰＫの構成的活性化は、同腹仔対照と比較して、骨髄細胞性を減少させ、ＫＬＳ細胞、多能性前駆細胞（ＭＰＰ）、及び造血前駆細胞サブセット（ＨＰＣ－１及びＨＰＣ－２）を含む造血幹細胞（ＨＳＣ）、造血幹細胞及び前駆細胞（ＨＳＰＣ）の頻度及び絶対数を減少させる。いくつかの実施形態によると、ＭＭＰの免疫表現型は、ｃＫＩＴ＋Ｌｉｎ－ＳＣＡ１＋ＣＤ１５０－ＣＤ４８－である。いくつかの実施形態によると、ＨＰＣ－１の免疫表現型は、ｃＫＩＴ＋Ｌｉｎ－ＳＣＡ１＋ＣＤ１５０－ＣＤ４８＋である。いくつかの実施形態によると、ＨＰＣ－２の免疫表現型は、ｃＫＩＴ＋Ｌｉｎ－ＳＣＡ１＋ＣＤ１５０＋ＣＤ４８＋である

いくつかの実施形態によると、構成的に活性化された内皮ＭＡＰＫを含むＢＭ内皮細胞は、対照と比較して減少した長期ＨＳＣ生着能を含む。いくつかの実施形態によると、構成的に活性化された内皮ＭＡＰＫを有する動物由来のＨＳＣ及びＨＳＰＣは、同腹仔対照と比較して、静止状態の喪失及びアポトーシスの増加を含む。

いくつかの実施形態によると、内皮ＮＦ－κＢシグナル伝達の阻害は、慢性的にＭＡＰＫ活性化された内皮におけるＢＭ血管完全性を回復するのに効果的である。いくつかの実施形態によると、ＩｋＢ－ＳＳの発現の増加は、慢性的に活性化されたＭＡＰＫ内皮におけるｐ６５核転座を抑制する。

いくつかの実施形態によると、ＩｋＢＳＳにより抑制された慢性的に活性化されたＭＡＰＫ上皮におけるＢＭ内皮ニッチの完全性の回復は、ＨＳＣ及び造血系の機能的回復に影響を与える。いくつかの実施形態によると、ＨＳＣの機能的回復は、ＢＭ細胞性の回復を含む。いくつかの実施形態によると、ＨＳＣの機能的回復は、ＢＭ細胞性及び表現型ＨＳＣ及びＨＳＰＣの頻度の回復を含む。いくつかの実施形態によると、長期の生着能の回復ならびに骨髄バイアス分化の逆転を含むＨＳＣの機能的回復。いくつかの実施形態によると、ＨＳＣの機能的回復は、ＢＭ細胞性ならび表現型ＨＳＣ及びＨＳＰＣの頻度の回復、長期生着能の回復、及び骨髄バイアス分化の逆転を含む。

いくつかの実施形態によると、亜致死骨髄抑制損傷とそれに続く下流のＮＦ－κＢ活性化を含む内皮による骨髄抑制後の造血再構成は、造血回復を遅らせる。いくつかの実施形態によると、造血回復の分析は、末梢血分析によるものである。いくつかの実施形態によると、ＮＦ－κＢの内皮特異的阻害は、造血区画を保護し、骨髄抑制損傷後の回復を高める。いくつかの実施形態によると、ＮＦκＢの内皮特異的阻害は、ＩｋＢＳＳによるものである。いくつかの実施形態によると、分析は、末梢血分析によるものである。

いくつかの実施形態によると、ＢＭ及びＨＳＣ内の血管ニッチは、定常状態の末梢血産物を維持する系列にコミットされた造血前駆細胞を維持することにおいて役割を果たす。

いくつかの実施形態によると、ＢＭ及び脾臓において下流のＮＦ－κＢシグナル伝達の活性化を伴う慢性的に活性化された内皮ＭＡＰＫを有する対象は、免疫表現型的に定義されたＢＭ多能性前駆細胞（ＭＰＰ）、リンパ球系共通前駆細胞（ＣＬＰ）、骨髄系共通前駆細胞（ＣＭＰ）、顆粒球／マクロファージ前駆細胞（ＧＭＰ）、巨核球／赤血球前駆細胞（ＭＥＰ）、及びＢ細胞前駆細胞サブセットの減少；ならびにＣＤ４５＋ＢＭ細胞内のＣＤ１１ｂ＋ＧＲ１＋細胞の割合の増加を示す。いくつかの実施形態によると、Ｂ細胞前駆細胞サブセットは、ＳＩｇＭ－Ｂ２２０＋Ｂ細胞、Ｐｒｅ－ＰｒｏＢ細胞、ＰｒｏＢ細胞、及びＰｒｅＢ細胞を含む。いくつかの実施形態によると、骨髄内の内皮ＮＦκＢシグナル伝達のＩｋＢ抑制は、ＢＭ及び末梢血の造血障害を回復し、すなわち、免疫表現型的に定義されたＢＭ多能性前駆細胞（ＭＰＰ）、リンパ球系共通前駆細胞（ＣＬＰ）、骨髄系共通前駆細胞（ＣＭＰ）、顆粒球／マクロファージ前駆細胞（ＧＭＰ）、巨核球／赤血球前駆細胞（ＭＥＰ）、及びＢ細胞前駆細胞サブセットを増加させ、ＣＤ４５＋ＢＭ細胞内のＣＤ１１ｂ＋ＧＲ１＋細胞の割合を低減させる。

いくつかの実施形態によると、下流の内皮ＮＦ－κＢ活性化は、ＢＭ微小環境内で一般化された炎症性ストレス応答を誘導する。いくつかの実施形態によると、下流の内皮ＮＦ－κＢ活性化は、骨髄内で慢性的に活性化された内皮ＭＡＰＫを有する対象において、ＢＭ微小環境内で一般化された炎症性ストレス応答を誘導する。いくつかの実施形態によると、一般化された炎症性ストレス応答は、造血細胞（ＣＤ４５＋）、間質細胞（ＣＤ４５－Ｔｅｒ１１９－ＣＤ３１－ＶＥカドヘリン－）、及び未分画全骨髄細胞における標的ＮＦκＢ遺伝子の上方調節を含む。いくつかの実施形態によると、一般化された炎症性ストレス応答は、静止状態が喪失し且つＨＰＳＣのアポトーシスが増加した状態の、細胞周期が喪失し且つＢＭ間質細胞のアポトーシスが増加した状態の、ＢＭ間質細胞の数が減少した状態の、静止状態が喪失し且つＢＭ内皮細胞の数が増加した状態の、低酸素症及びＲＯＳレベルの増加のうちの１つ以上を含む。いくつかの実施形態によると、内皮ＮＦ－κＢシグナル伝達の抑制は、炎症により誘導された、内皮及びＢＭ間質サブセットを含むＨＳＰＣ及びＢＭニッチ細胞の欠陥を回復させる。

いくつかの実施形態によると、内皮ＭＡＰＫ活性化とそれに続く下流の内皮ＮＦ－κＢ活性化は、Ｌｅｐｒ＋細胞及び骨芽細胞においてＮＦ－κＢ調節標的遺伝子の発現の増加を引き起こした。いくつかの実施形態によると、Ｌｅｐｒ＋細胞及び骨芽細胞におけるＮＦ－κＢ調節標的遺伝子の発現の増加は、内皮ＮＦ－κＢシグナル伝達の阻害により抑制された。いくつかの実施形態によると、内皮ＭＡＰＫ活性化時のＢＭ内皮、造血、及び間質区画内で発現の増加を示した前炎症性遺伝子は、Ｉｌ１ｂ、Ｃｓｆ１、Ｃｄｋｎ１ａ、及びｃｓｆ２を含む。Ｉｌ１ｂ及びｃｓｆ１は、ＨＳＣ機能に直接影響を与え、リンパ球形成を犠牲にして骨髄バイアス分化を促進することが報告されている。慢性的なＨｌ１曝露は、ＨＳＣサイクリング及び消耗の増加を引き起こすことが示されている。

いくつかの実施形態によると、内皮ＭＡＰＫ活性化とそれに続く下流の内皮ＮＦ－κＢ活性化は、ＨＳＰＣサイクリングの増加、ＨＳＰＣ再増殖能力の障害、及び骨髄性バイアス分化を含むＨＳＰＣの造血障害を引き起こす。いくつかの実施形態によると、内皮ＮＦ－κＢシグナル伝達の阻害は、内皮細胞、間質細胞、及び造血細胞内のＩｌｌｂの発現を減少させ、内皮Ｉｌ１ｂ発現の減少は、炎症の大幅な下方調節、ならびに間質細胞及び造血細胞におけるＣｓｆ１発現の減少と相関していた。

いくつかの実施形態によると、ＨＳＣ機能を調節し、炎症後の回復を高める候補タンパク質は、Ｃｌｅｃ１１α、Ｈａｐｌｎ１、Ｈｓｐｄ１、Ｉｇｆｂｐ１、Ｂｇｎ、Ｗｎｔ７ａ、Ｓｐａｒｃ、ＲＰ５３、Ｂｍｐｒ１ａ、Ｉｇｈｍ、Ｔｈｂｓ４、Ｃａｍｋ２ｄ、Ｓｉｒｔ２、Ｃａｍｋ２ｂ、Ｓｌｉｔｒｋ５、Ｄｃｔｐｐ１、Ｈｎｒｎｐａ２ｂ、Ｅｒａｐ１のうちの１つ以上を含む。

１１Ａを含有するＣ型レクチンドメインにコードされるタンパク質（ＣＬＥＣ１１Ａ）は、分泌された硫酸化糖タンパク質であり、原始造血前駆細胞の成長因子として機能し、選択的スプライシングバリアントが記載されている。

Ｈａｐｌｎ１（ヒアルロン酸及びプロテオグリカン結合タンパク質１）は、細胞外軟骨基質中のヒアルロン酸でプロテオグリカンモノマーの凝集体を安定化する。

熱ショックタンパク質ファミリーＤ（ＳＰ６０）メンバー１Ｈｓｐｄ１は、ミトコンドリアタンパク質の移入及び高分子集合体に関与するシャペロニンであり；Ｈｓｐ１０と共に、それは、移入タンパク質の正しいフォールディングを容易にする。それはまた、ミスフォールディングを防ぎ、ミトコンドリア基質中、ストレス条件下で生成されたアンフォールドポリペプチドのリフォールド及び適切なアセンブリを促進し得る。

インスリン様成長因子結合タンパク質１（ＩＧＦＢＰ－１）は、ＩＧＦ結合タンパク質であり；ＩＧＦ結合タンパク質は、ＩＧＦの半減期を延長し、細胞培養に対するＩＧＦの成長促進効果を阻害または刺激することが示されている。それらは、細胞表面受容体とのＩＧＦの相互作用を変化させ、細胞遊走を促進する。

骨／軟骨プロテオグリカン－１（Ｂｇｎ）としても既知のビグリカンは、コラーゲン線維のアセンブリに関与していることがある。

Ｗｎｔ－７ａ遺伝子は、ＷＮＴ遺伝子ファミリーのメンバーであり、これは、分泌されたシグナル伝達タンパク質をコードする構造的に関連する遺伝子で構成される。これらのタンパク質は、発がんに、ならびに、細胞の運命の調節及び胚発生時のパターン形成を含むいくつかの発生プロセスに関与している。タンパク質Ｗｎｔファミリーメンバー７Ａ（Ｗｎｔ７ａ）は、Ｗｎｔ－７ａ遺伝子の遺伝子産物である。これは、Ｗｎｔ／β－カテニンシグナル伝達経路のリガンドである。その発現は、低酸素培養条件で増加する。（Ｗｕ，ＤＪｅｔａｌ，ＳｃｉＲｅｐ（２０１８）８（１）：１５７９２）。

ＳＰＡＲＣ（ＳｅｃｒｅｔｅｄＰｒｏｔｅｉｎＡｃｉｄｉｃａｎｄＣｙｓｔｅｉｎｅＲｉｃｈ）は、タンパク質をコードする遺伝子である。このタンパク質は、細胞外マトリックス及びサイトカインの相互作用を通じて細胞増殖を調節しているように見える。

ＲＰ５３遺伝子（レチノールデヒドロゲナーゼ１２遺伝子、短鎖デヒドロゲナーゼ／レダクターゼファミリー７Ｃメンバー２としても既知）は、タンパク質をコードする遺伝子である。この遺伝子にコードされるタンパク質は、ＮＡＤＰＨ依存性レチナールレダクターゼであり、その最高の活性が、９－ｃｉｓ及びａｌｌ－ｔｒａｎｓ－レチノールに対するものである。コードされた酵素は、短鎖アルデヒドの代謝にも役割を果たすが、ステロイドデヒドロゲナーゼ活性を示さない。

骨形態形成タンパク質受容体タイプ１Ａ（Ｂｍｐｒ１ａ）は、膜貫通型セリン／スレオニンキナーゼのファミリーの１つである。これらの受容体のリガンドは、ＴＧＦ－ベータスーパーファミリーのメンバーである。

Ｉｇｈｍ遺伝子は、免疫グロブリン重鎖ｍｕの定常領域をコードする。Ｔｈｂｓ４（トロンボスポンジン４）は、細胞間及び細胞－マトリックス間相互作用を媒介する接着性糖タンパク質である。これは構造的なＥＣＭタンパク質に結合し、組織の損傷に応じてＥＣＭを調節する。

カルシウム／カルモジュリン依存性プロテインキナーゼＩＩデルタ（ｃａｍｋ２ｄ）は、セリン／スレオニンプロテインキナーゼファミリー及びＣａ（２＋）／カルモジュリン依存性プロテインキナーゼサブファミリーに属する。

サーチュイン２（ｓｉｒｔ２）は、ＮＡＤ依存性タンパク質デアセチラーゼである。それは、細胞周期の進行及びゲノムの安定性の制御に主要な役割を果たす。それはアンテファーゼチェックポイントで機能し、微小管ストレス剤に応答した早熟な有糸分裂の侵入を防ぐ。ヒトサーチュインの機能は、まだ決定されていないが、酵母サーチュインタンパク質は、エピジェネティックな遺伝子サイレンシングを調節することが既知である。

カルシウム／カルモジュリン依存性プロテインキナーゼＩＩベータ（Ｃａｍｋ２ｂ）は、セリン／スレオニンプロテインキナーゼファミリー及びＣａ（２＋）／カルモジュリン依存性プロテインキナーゼファミリーに属する。

ＳＬＩＴ及びＮＴＲＫ様ファミリーメンバー５（ＳＬｉｔｒｋ５）は、ＳＬＩＴタンパク質と同様の２つのＮ末端ロイシンリッチリピート（ＬＲＲ）ドメインを有する統合膜タンパク質である。ＳＬＩＴＲＫ５を含むほとんどのＳＬＩＴＲＫは、ニューロトロフィン受容体と相同性を共有するＣ末端領域も有する。ＳＬＩＴＲＫは、主に神経組織で発現し、ｎｒｕｒｉｔｅ調節活性を有する。

ＤＣＴＰＰ１遺伝子でコードされるタンパク質は、ｄＣＴＰピロホスファターゼ（Ｄｃｔｐｐ１）であり、これは、ｄＣＴＰをｄＣＭＰ及び無機ピロリン酸に変換する。リボソームタンパク質Ｓ３（Ｒｐｓ３）は、４０Ｓ小リボソームサブユニットの構成要素として翻訳に関与する。これはエンドヌクレアーゼ活性があり、損傷したＤＮＡの修復に関与する。

異種核リボ核タンパク質Ａ２／Ｂ１（Ｈｎｒｎｐａ２Ｂ１）は、異種核ＲＮＡと複合体を形成する遍在的に発現するＲＮＡ結合タンパク質である。これらのタンパク質は、核内のプレｍＲＮＡと会合しており、プレｍＲＮＡプロセッシングならびにｍＲＮＡ代謝及び輸送の他の態様に影響を与えるように見える。

ＥＲＡＰ１遺伝子にコードされるタンパク質である小胞体アミノペプチダーゼ１（Ｅｒａｐ１）は、ＭＨＣクラスＩ分子に提示することができるように、ＨＬＡクラスＩ結合前駆体のトリミングに関与するアミノペプチダーゼである。

いくつかの実施形態によると、Ｃｌｅｃ１１ａ／幹細胞成長因子α（ＳＣＧＦ）は、内皮炎症後のＨＳＣ機能を調節する潜在的な造血促進因子である。

いくつかの実施形態によると、下流のＮＦ－κＢ活性化を伴う対象において、ＳＣＧＦの注入は、表現型ＨＳＣの頻度を増加させた。いくつかの実施形態によると、下流のＮＦ－κＢ活性化を伴う対象において、ＳＣＧＦの注入は、ＢＭ細胞の増強されたコロニー形成能力に反映されるＨＳＰＣの頻度を増加させた。いくつかの実施形態によると、下流のＮＦ－κＢ活性化を伴う対象において、ＳＣＧＦの注入は、末梢血骨髄性バイアスを解消し、血球数を回復させた。いくつかの実施形態によると、下流のＮＦ－κＢ活性化を伴う対象において、ＳＣＧＦの注入は、ＢＭ細胞の長期の生着の能力を回復させた。いくつかの実施形態によると、下流のＮＦ－κＢ活性化を伴う対象において、ＳＣＧＦの注入は、血管拡張を解消し、ＢＭ微小環境内の血管漏出を抑制した。いくつかの実施形態によると、下流のＮＦ－κＢ活性化を伴う対象において、ＳＣＧＦの注入は、ＢＭ内のＮＦ－κＢ標的遺伝子の発現を減少させた。いくつかの実施形態によると、ＨＳＣの炎症誘導性系列スキューイングは、連続移植中に野生型ＢＭ微小環境に曝露される際に可逆的である。いくつかの実施形態によると、下流のＮＦ－κＢ活性化を伴う対象において、ＳＣＧＦの注入は、ＢＭ内皮内の核ｐ６５レベルの減少をもたらした。いくつかの実施形態によると、下流のＮＦ－κＢ活性化を伴う対象において、ＳＣＧＦの注入は、内皮の炎症を抑制し、血管完全性を回復させ、これは、造血系の回復につながる。

いくつかの実施形態によると、下流のＮＦ－κＢ活性化を伴う対象において、ＳＣＧＦの注入は、骨小柱の体積ならびに骨小柱の数及び厚さの増加を含む骨の健康の大幅な増加を引き起こした。いくつかの実施形態によると、下流のＮＦ－κＢ活性化、ＳＣＧＦの注入を有する対象において、ＳＣＧＦは、主に、ＢＭＬｅｐｒ＋及び骨芽細胞間質サブセットを含むＢＭ間質細胞で発現された。

いくつかの実施形態によると、骨髄抑制ストレス後に、ＳＣＧＦの注入は、白血球、赤血球、及び血小板の回復を高めた。いくつかの実施形態によると、骨髄抑制ストレスは、骨髄抑制線量の照射（６５０Ｒａｄ）である。いくつかの実施形態によると、下流の内皮ＮＦ－κＢ活性化による対照及び内皮ＭＡＰＫ活性化マウスの両方の骨髄抑制照射後に、ＳＣＧＦの注入は、血管完全性の保存及び増加したＢＭ細胞性を含む造血回復を改善した。いくつかの実施形態によると、改善は、骨髄抑制損傷の２８日後であった。

いくつかの実施形態によると、下流の内皮ＮＦ－κＢ活性化を伴う内皮ＭＡＰＫ活性化マウスまたは同腹仔対照（２．５×１０⁶）に由来するドナーＷＢＭ細胞をＣＤ４５．１競合ＷＢＭ細胞（５×１０⁵）と共に、照射後２８日目に、致死的に照射（９５０Ｒａｄ）されたＣＤ４５．１マウスに移植する競合的ＢＭ移植を実施することができる。

いくつかの実施形態によると、ＥＢＭは、最終分化した造血細胞が枯渇している。

いくつかの実施形態によると、ＢＭ内皮は、細胞懸濁液から免疫精製され、ＢＭＥＣは、抗体捕捉より選択される。

いくつかの実施形態によると、競合的ＢＭ移植後の、ＳＣＧＦの注入は、下流の内皮ＮＦ－κＢ活性化を伴う内皮ＭＡＰＫ活性化マウスまたは同腹仔対照の両方に由来する造血細胞の長期の生着潜在能力及び多系列再構成能を高める。いくつかの実施形態によると、競合的ＢＭ移植後のＳＣＧＦ注入は、二次移植アッセイ中に、下流の内皮ＮＦ－κＢ活性化を伴う内皮ＭＡＰＫ活性化マウスに由来する造血細胞の連続再増殖能力を維持する。いくつかの実施形態によると、競合的ＢＭ移植後のＳＣＧＦ注入は、定常状態での下流の内皮ＮＦ－κＢ活性化を伴う内皮ＭＡＰＫ活性化マウスにおけるＨＳＣ機能性を維持する。いくつかの実施形態によると、競合的ＢＭ移植後のＳＣＧＦ注入は、骨髄抑制損傷後の下流の内皮ＮＦ－κＢ活性化を伴う内皮ＭＡＰＫ活性化マウスにおけるＨＳＣ機能性を維持する。いくつかの実施形態によると、競合的ＢＭ移植後のＳＣＧＦ注入は、骨髄抑制損傷後の対照マウスにおけるＨＳＣ機能性を維持する。

いくつかの実施形態によると、本明細書に記載の方法は、対照と比較して、血管完全性を維持するのに効果的である。いくつかの実施形態によると、本明細書に記載の方法は、対照と比較して、骨髄細胞性を増加させるのに効果的である。いくつかの実施形態によると、本明細書に記載の方法は、対照と比較して、長期の生着の能力を高めるのに効果的である。いくつかの実施形態によると、本明細書に記載の方法は、対照と比較して、多系列の再構成を行うのに効果的である。いくつかの実施形態によると、本明細書に記載の方法は、対照と比較して、血管炎症を抑制するのに効果的である。いくつかの実施形態によると、本明細書に記載の方法は、対照と比較して、ＨＳＣ機能を保持するのに効果的である。

いくつかの実施形態によると、記載の方法は、血管完全性を維持するのに効果的である。いくつかの実施形態によると、本明細書に記載の方法は、対照と比較して、血管完全性を維持するのに、少なくとも０．０１％、少なくとも０．１０％、少なくとも１％、少なくとも２％、少なくとも３％、少なくとも４％、少なくとも５％、少なくとも６％、少なくとも７％、少なくとも８％、少なくとも９％、少なくとも１０％、少なくとも１１％、少なくとも１２％、少なくとも１３％、少なくとも１４％、少なくとも１５％、少なくとも１６％、少なくとも１７％、少なくとも１８％、少なくとも１９％、少なくとも２０％、少なくとも２１％、少なくとも２２％、少なくとも２３％、少なくとも２４％、少なくとも２５％、少なくとも２６％、少なくとも２７％、少なくとも２８％、少なくとも２９％、少なくとも３０％、少なくとも３１％、少なくとも３２％、少なくとも３３％、少なくとも３４％、少なくとも３５％、少なくとも３６％、少なくとも３７％、少なくとも３８％、少なくとも３９％、少なくとも４０％、少なくとも４１％、少なくとも４２％、少なくとも４３％、少なくとも４４％、少なくとも４５％、少なくとも４６％、少なくとも４７％、少なくとも４８％、少なくとも４９％、少なくとも５０％、少なくとも５１％、少なくとも５２％、少なくとも５３％、少なくとも５４％、少なくとも５５％、少なくとも５６％、少なくとも５７％、少なくとも５８％、少なくとも５９％、少なくとも６０％、少なくとも６１％、少なくとも６２％、少なくとも６３％、少なくとも６４％、少なくとも６５％、少なくとも６６％、少なくとも６７％、少なくとも６８％、少なくとも６９％、少なくとも７０％、少なくとも７１％、少なくとも７２％、少なくとも７３％、少なくとも７４％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または少なくとも１００％効果的である。

いくつかの実施形態によると、本明細書に記載の方法は、骨髄細胞性を増加させるのに効果的である。いくつかの実施形態によると、本明細書に記載の方法は、対照と比較して、骨髄細胞性を増加させるのに、少なくとも０．０１％、少なくとも０．１０％、少なくとも１％、少なくとも２％、少なくとも３％、少なくとも４％、少なくとも５％、少なくとも６％、少なくとも７％、少なくとも８％、少なくとも９％、少なくとも１０％、少なくとも１１％、少なくとも１２％、少なくとも１３％、少なくとも１４％、少なくとも１５％、少なくとも１６％、少なくとも１７％、少なくとも１８％、少なくとも１９％、少なくとも２０％、少なくとも２１％、少なくとも２２％、少なくとも２３％、少なくとも２４％、少なくとも２５％、少なくとも２６％、少なくとも２７％、少なくとも２８％、少なくとも２９％、少なくとも３０％、少なくとも３１％、少なくとも３２％、少なくとも３３％、少なくとも３４％、少なくとも３５％、少なくとも３６％、少なくとも３７％、少なくとも３８％、少なくとも３９％、少なくとも４０％、少なくとも４１％、少なくとも４２％、少なくとも４３％、少なくとも４４％、少なくとも４５％、少なくとも４６％、少なくとも４７％、少なくとも４８％、少なくとも４９％、少なくとも５０％、少なくとも５１％、少なくとも５２％、少なくとも５３％、少なくとも５４％、少なくとも５５％、少なくとも５６％、少なくとも５７％、少なくとも５８％、少なくとも５９％、少なくとも６０％、少なくとも６１％、少なくとも６２％、少なくとも６３％、少なくとも６４％、少なくとも６５％、少なくとも６６％、少なくとも６７％、少なくとも６８％、少なくとも６９％、少なくとも７０％、少なくとも７１％、少なくとも７２％、少なくとも７３％、少なくとも７４％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または少なくとも１００％効果的である。

いくつかの実施形態によると、本明細書に記載の方法は、長期生着の可能性を高めるのに効果的である。いくつかの実施形態によると、本明細書に記載の方法は、対照と比較して、長期生着の可能性を増強するのに、少なくとも０．０１％、少なくとも０．１０％、少なくとも１％、少なくとも２％、少なくとも３％、少なくとも４％、少なくとも５％、少なくとも６％、少なくとも７％、少なくとも８％、少なくとも９％、少なくとも１０％、少なくとも１１％、少なくとも１２％、少なくとも１３％、少なくとも１４％、少なくとも１５％、少なくとも１６％、少なくとも１７％、少なくとも１８％、少なくとも１９％、少なくとも２０％、少なくとも２１％、少なくとも２２％、少なくとも２３％、少なくとも２４％、少なくとも２５％、少なくとも２６％、少なくとも２７％、少なくとも２８％、少なくとも２９％、少なくとも３０％、少なくとも３１％、少なくとも３２％、少なくとも３３％、少なくとも３４％、少なくとも３５％、少なくとも３６％、少なくとも３７％、少なくとも３８％、少なくとも３９％、少なくとも４０％、少なくとも４１％、少なくとも４２％、少なくとも４３％、少なくとも４４％、少なくとも４５％、少なくとも４６％、少なくとも４７％、少なくとも４８％、少なくとも４９％、少なくとも５０％、少なくとも５１％、少なくとも５２％、少なくとも５３％、少なくとも５４％、少なくとも５５％、少なくとも５６％、少なくとも５７％、少なくとも５８％、少なくとも５９％、少なくとも６０％、少なくとも６１％、少なくとも６２％、少なくとも６３％、少なくとも６４％、少なくとも６５％、少なくとも６６％、少なくとも６７％、少なくとも６８％、少なくとも６９％、少なくとも７０％、少なくとも７１％、少なくとも７２％、少なくとも７３％、少なくとも７４％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または少なくとも１００％効果的である。

いくつかの実施形態によると、記載の方法は、多系列の再構成を行うのに効果的である。いくつかの実施形態によると、本明細書に記載の方法は、対照と比較して、多系列の再構成を行うのに、少なくとも０．０１％、少なくとも０．１０％、少なくとも１％、少なくとも２％、少なくとも３％、少なくとも４％、少なくとも５％、少なくとも６％、少なくとも７％、少なくとも８％、少なくとも９％、少なくとも１０％、少なくとも１１％、少なくとも１２％、少なくとも１３％、少なくとも１４％、少なくとも１５％、少なくとも１６％、少なくとも１７％、少なくとも１８％、少なくとも１９％、少なくとも２０％、少なくとも２１％、少なくとも２２％、少なくとも２３％、少なくとも２４％、少なくとも２５％、少なくとも２６％、少なくとも２７％、少なくとも２８％、少なくとも２９％、少なくとも３０％、少なくとも３１％、少なくとも３２％、少なくとも３３％、少なくとも３４％、少なくとも３５％、少なくとも３６％、少なくとも３７％、少なくとも３８％、少なくとも３９％、少なくとも４０％、少なくとも４１％、少なくとも４２％、少なくとも４３％、少なくとも４４％、少なくとも４５％、少なくとも４６％、少なくとも４７％、少なくとも４８％、少なくとも４９％、少なくとも５０％、少なくとも５１％、少なくとも５２％、少なくとも５３％、少なくとも５４％、少なくとも５５％、少なくとも５６％、少なくとも５７％、少なくとも５８％、少なくとも５９％、少なくとも６０％、少なくとも６１％、少なくとも６２％、少なくとも６３％、少なくとも６４％、少なくとも６５％、少なくとも６６％、少なくとも６７％、少なくとも６８％、少なくとも６９％、少なくとも７０％、少なくとも７１％、少なくとも７２％、少なくとも７３％、少なくとも７４％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または少なくとも１００％効果的である。

いくつかの実施形態によると、記載の方法は、血管炎症を抑制するのに効果的である。いくつかの実施形態によると、本明細書に記載の方法は、対照と比較して、血管炎症を阻害するのに、少なくとも０．０１％、少なくとも０．１０％、少なくとも１％、少なくとも２％、少なくとも３％、少なくとも４％、少なくとも５％、少なくとも６％、少なくとも７％、少なくとも８％、少なくとも９％、少なくとも１０％、少なくとも１１％、少なくとも１２％、少なくとも１３％、少なくとも１４％、少なくとも１５％、少なくとも１６％、少なくとも１７％、少なくとも１８％、少なくとも１９％、少なくとも２０％、少なくとも２１％、少なくとも２２％、少なくとも２３％、少なくとも２４％、少なくとも２５％、少なくとも２６％、少なくとも２７％、少なくとも２８％、少なくとも２９％、少なくとも３０％、少なくとも３１％、少なくとも３２％、少なくとも３３％、少なくとも３４％、少なくとも３５％、少なくとも３６％、少なくとも３７％、少なくとも３８％、少なくとも３９％、少なくとも４０％、少なくとも４１％、少なくとも４２％、少なくとも４３％、少なくとも４４％、少なくとも４５％、少なくとも４６％、少なくとも４７％、少なくとも４８％、少なくとも４９％、少なくとも５０％、少なくとも５１％、少なくとも５２％、少なくとも５３％、少なくとも５４％、少なくとも５５％、少なくとも５６％、少なくとも５７％、少なくとも５８％、少なくとも５９％、少なくとも６０％、少なくとも６１％、少なくとも６２％、少なくとも６３％、少なくとも６４％、少なくとも６５％、少なくとも６６％、少なくとも６７％、少なくとも６８％、少なくとも６９％、少なくとも７０％、少なくとも７１％、少なくとも７２％、少なくとも７３％、少なくとも７４％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または少なくとも１００％効果的である。

いくつかの実施形態によると、記載の方法は、ＨＳＣ機能を維持するのに効果的である。いくつかの実施形態によると、本明細書に記載の方法は、対照と比較して、ＨＳＣ機能を維持するのに、少なくとも０．０１％、少なくとも０．１０％、少なくとも１％、少なくとも２％、少なくとも３％、少なくとも４％、少なくとも５％、少なくとも６％、少なくとも７％、少なくとも８％、少なくとも９％、少なくとも１０％、少なくとも１１％、少なくとも１２％、少なくとも１３％、少なくとも１４％、少なくとも１５％、少なくとも１６％、少なくとも１７％、少なくとも１８％、少なくとも１９％、少なくとも２０％、少なくとも２１％、少なくとも２２％、少なくとも２３％、少なくとも２４％、少なくとも２５％、少なくとも２６％、少なくとも２７％、少なくとも２８％、少なくとも２９％、少なくとも３０％、少なくとも３１％、少なくとも３２％、少なくとも３３％、少なくとも３４％、少なくとも３５％、少なくとも３６％、少なくとも３７％、少なくとも３８％、少なくとも３９％、少なくとも４０％、少なくとも４１％、少なくとも４２％、少なくとも４３％、少なくとも４４％、少なくとも４５％、少なくとも４６％、少なくとも４７％、少なくとも４８％、少なくとも４９％、少なくとも５０％、少なくとも５１％、少なくとも５２％、少なくとも５３％、少なくとも５４％、少なくとも５５％、少なくとも５６％、少なくとも５７％、少なくとも５８％、少なくとも５９％、少なくとも６０％、少なくとも６１％、少なくとも６２％、少なくとも６３％、少なくとも６４％、少なくとも６５％、少なくとも６６％、少なくとも６７％、少なくとも６８％、少なくとも６９％、少なくとも７０％、少なくとも７１％、少なくとも７２％、少なくとも７３％、少なくとも７４％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または少なくとも１００％効果的である。

いくつかの実施形態によると、本明細書に記載の方法は、骨髄破壊的傷害を受けた対象における内皮ＭＡＰＫの活性化を低減または阻害し得る。いくつかの実施形態によると、本明細書に記載の方法は、骨髄破壊的傷害を受けた対象における標準的なＮＦ－κＢシグナル伝達の活性化を低減または阻害し得る。いくつかの実施形態によると、本明細書に記載の方法いくつかの実施形態によると、本明細書に記載の方法は、骨髄破壊的傷害を受けた対象におけるＲＯＳレベル及び低酸素症を調節し得る。いくつかの実施形態によると、本明細書に記載の方法は、骨髄破壊的傷害を受けた対象の内皮細胞内のＩｌ１ｂの発現を減少させ得る。

組成物
別の態様によると、記載された発明は、ＨＳＣ機能を調節し、炎症後の回復を促進するのに有効なタンパク質、スプライスバリアント、生物学的に活性なフラグメント、アゴニスト、または模倣物を含む組成物を提供する。いくつかの実施形態によると、ＨＳＣ機能を調節し、炎症後の回復を高めるのに有効なタンパク質、スプライスバリアント、生物学的に活性なフラグメント、アゴニスト、または模倣物は、アンジオクライン因子である。いくつかの実施形態によると、アンジオクライン因子は、ＳＣＧＦ；ＯＰＧ；ＳＥＭ－ＩＩＩ；ＩＬ－３３；ＢＭＰ－２；マトリックスメタロプロテイナーゼ、ＴＩＭＰメタロペプチダーゼ阻害剤；ＳＣＦ、ニドゲン－１、ＩＬ－７、ＣＸＣＬ１２；テネイシン－Ｃ、ＦＧＦ－２、Ｊａｇ－１；ＮＯＳ２；ＰＤＧＦ；ＴＧＦ；ＦＧＦ１；Ｎｏｇｇｉｎ；ＢＭＰ－４；アンジオポエチン－１；ＶＣＡＭ－１；Ｅ－セレクチン；フォンウィルブランド因子；トロンボスポンジン－１；ＩＧＦＢＰ２；、またはＩＣＡＭ－１のうちの１つ以上を含む。いくつかの実施形態によると、ＨＳＣ機能を調節し、炎症後の回復を促進するのに有効なタンパク質、スプライスバリアント、または生物学的に活性なフラグメントは、Ｃｌｅｃ１１α、Ｈａｐｌｎ１、Ｈｓｐｄ１、Ｉｇｆｂｐ１、Ｂｇｎ、Ｗｎｔ７ａ、Ｓｐａｒｃ、Ｒｐｓ３、Ｂｍｐｒ１ａ、Ｉｇｈｍ、Ｔｈｂｓ４、Ｃａｍｋ２ｄ、Ｓｉｒｔ２、Ｃａｍｋ２ｂ、Ｓｌｉｔｒｋ５、Ｄｃｔｐｐ１、Ｈｎｒｎｐｓ２ｂ、Ｅｒａｐ１のうちの１つ以上である。

いくつかの実施形態によると、アンジオクライン因子は、Ｃｌｅｃ１１Ａ、ＬＳＬＣＬ、またはＰ４７としても既知の幹細胞成長因子α（ＳＣＧＦ）を含む。事実上、ＳＣＧＦは、ＣＬＥＣ１１Ａ遺伝子にコードされる。例えば、ＳＣＧＦのマウスｍＲＮＡ配列は、アクセッション番号ＮＭ＿００９１３１¹（配列番号３）で見つけることができ、マウスタンパク質配列は、アクセッション番号ＮＰ＿０３３１５７²（配列番号４）で見つけることができる。

ＳＣＧＦのヒトｍＲＮＡ配列は、アクセッション番号ＮＭ＿００２９７５³（配列番号５）で見つけることができ、ヒトタンパク質配列は、アクセッション番号ＮＰ＿００２９６６⁴（配列番号６）で見つけることができる。いくつかの実施形態によると、アンジオクライン因子は、商業的供給元から入手できる。例えば、Ｃｌｅｃ１１ａ（ＳＣＧＦ）タンパク質は、Ｒ＆ＤＳｙｓｔｅｍｓ３７２９－ＳＣ／ＣＦから供給されてもよい。

本明細書に記載のタンパク質は、化学的に合成されても、組み換え的に発現されてもよい。

固相、液相、もしくはペプチド濃縮技術の周知の手法、またはそれらの任意の組み合わせを使用して調製された合成ポリペプチドは、天然及び非天然アミノ酸を含み得る。ペプチド合成に使用されるアミノ酸は、Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ（１９６３，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．８５：２１４９－２１５４）の元の固相手順の標準的な脱保護、中和、カップリング、及び洗浄プロトコルを用いた標準的Ｂｏｃ（Ｎ－α－アミノ保護Ｎ－α－ｔ－ブチルオキシカルボニル）アミノ酸樹脂、または、ＣａｒｐｉｎｏａｎｄＨａｎ（１９７２，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．３７：３４０３－３４０９）により最初に記載された、塩基に不安定なＮ－α－アミノ保護９－フルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）アミノ酸であってよい。Ｆｍｏｃ及びＢｏｃＮ－α－アミノ保護アミノ酸は、双方ともに、Ｓｉｇｍａ，ＣａｍｂｒｉｄｇｅＲｅｓｅａｒｃｈＢｉｏｃｈｅｍｉｃａｌまたは当業者によく知られている他の化学会社から入手することができる。さらに、ポリペプチドは、当業者によく知られている他のＮ－α－保護基を用いて合成することができる。固相ペプチド合成は、当業者によく知られており、例えば、ＳｔｅｗａｒｔａｎｄＹｏｕｎｇ，１９８４，ＳｏｌｉｄＰｈａｓｅＳｙｎｔｈｅｓｉｓ，ＳｅｃｏｎｄＥｄｉｔｉｏｎ，ＰｉｅｒｃｅＣｈｅｍｉｃａｌＣｏ．，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，Ｉｌｌ．；ＦｉｅｌｄｓａｎｄＮｏｂｌｅ，１９９０，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｅｐｔ．ＰｒｏｔｅｉｎＲｅｓ．３５：１６１－２１４で提供される手法で、または自動合成装置を使用して、達成されてもよい。ポリペプチドは、特殊な特性を伝達するために、Ｄ－アミノ酸（ｉｎｖｉｖｏでＬ－アミノ酸特異的プロテアーゼに耐性がある）、Ｄ－アミノ酸及びＬ－アミノ酸の組み合わせ、ならびに様々な「デザイナー」アミノ酸（例えば、β－メチルアミノ酸、Ｃ－α－メチルアミノ酸、及びＮ－α－メチルアミノ酸など）を含んでもよい。合成アミノ酸は、リジンの場合には、オルニチン、ロイシンまたはイソロイシンの場合には、ノルロイシンを含む。さらに、ポリペプチドは、新規の特性を有するペプチドを調製するために、エステル結合などのペプチド模倣結合を有し得る。例えば、還元されたペプチド結合、すなわち、Ｒ１－ＣＨ２－ＮＨ－Ｒ２（式中、Ｒ１及びＲ２が、アミノ酸残基または配列である）を組み込んだペプチドが生成されてもよい。いくつかの実施形態によると、還元されたペプチド結合は、ジペプチドサブユニットとして導入されてもよい。そのようなポリペプチドは、プロテアーゼ活性に耐性があり、ｉｎｖｉｖｏでの延長された半減期を有するであろう。

いくつかの実施形態によると、アンジオクライン因子の供給源は、生体組織などの天然に存在する供給源からの単離または精製によるものである。いくつかの実施形態によると、アンジオクライン因子の供給源は、レシピエント対象に対して自家の組織である。いくつかの実施形態によると、アンジオクライン因子の供給源は、レシピエント対象に対して同種異系の組織である。いくつかの実施形態によると、供給源組織は、哺乳類である。いくつかの実施形態によると、供給源組織は、ヒトである。いくつかの実施形態によると、供給源組織は、マウスである。いくつかの実施形態によると、アンジオクライン因子の供給源は、全骨髄である。いくつかの実施形態によると、アンジオクライン因子の供給源は、大腿骨及び脛骨などの１つ以上の領域から得られた全骨髄である。いくつかの実施形態によると、アンジオクライン因子の供給源は、骨髄間質細胞である。

アンジオクライン因子がＳＣＧＦであるいくつかの実施形態によると、ＳＣＧＦの供給源は、生体組織などの天然に存在する供給源からの単離または精製によるものである。いくつかの実施形態によると、ＳＣＧＦの供給源は、レシピエント対象に対して自家の組織である。いくつかの実施形態によると、ＳＣＧＦの供給源は、レシピエント対象に対して同種異系の組織である。いくつかの実施形態によると、組織は、哺乳類である。いくつかの実施形態によると、組織は、ヒトである。いくつかの実施形態によると、組織は、マウスである。いくつかの実施形態によると、ＳＣＧＦの供給源は、全骨髄である。いくつかの実施形態によると、ＳＣＧＦの供給源は、大腿骨及び脛骨などの１つ以上の領域から得られた全骨髄である。

例えば、ＳＣＧＦの供給源が骨髄組織からのものである場合、簡単に言えば、無傷の骨髄プラグを長骨からフラッシュし、消化された骨髄細胞が得られるまで、酵素消化を受けることができる。次に、試料は、前駆体の生存及び増殖を高めるために、成長培地で培養することができる。分化は、脂肪生成、骨形成、または軟骨形成分化培地（例えば、ＳｔｅｍＰｒｏＭＳＣ分化キット；ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）と、培地を交換することにより誘導し、染色してＳＣＧＦを発現する細胞を同定することができる。ＳＣＧＦタンパク質は、骨髄間質細胞、骨髄Ｌｅｐｒ＋細胞、骨芽細胞、骨細胞、肥大型軟骨細胞、及び骨髄ＥＣにより、例えば、Ｈ型ＥＣ、類洞ＥＣ、及び動脈ＥＣにより発現される。

いくつかの実施形態によると、アンジオクライン因子は、当技術分野で既知の任意の方法により単離または精製することができる。例としては、硫酸アンモニウムまたはエタノール沈殿、酸抽出、陰イオンまたは陽イオン交換クロマトグラフィー、ホスホセルロースクロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、及びレクチンクロマトグラフィーの使用が挙げられる。タンパク質のリフォールディングステップは、必要に応じて、成熟タンパク質の構成の完了に使用することができる。最後に、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を、最終精製ステップに用いることができる。

例えば、アングリオクリン因子がＳＣＧＦの場合、ＳＣＧＦ細胞は、既知のフローサイトメトリー法で選別でき、ＳＣＧＦを発現する安定した細胞株、例えば、ＢＭＬｅｐｒ＋間質細胞を開発するために、最高発現細胞を取得することができる。ＳＣＧＦの発現が高い安定した細胞株は、培地で培養し、遠心分離して細胞破片を除去し、プロテアーゼ活性を阻害するために、フェニルメチルスルホニルフルオリドなどの薬剤と共に保存することができる。分泌されたＳＣＧＦは、抗ＦｌａｇＭ２ｂｅａｄｓなどのビーズを使用してアフィニティー精製し、溶出し、遠心フィルター装置で濃縮し、ＳＤＳ－ＰＡＧＥで定量し、－８０℃などの低温で保存することができる。

いくつかの実施形態によると、アンジオクライン因子の供給源は、操作された供給源からの単離または精製によるものである。操作された供給源は、本明細書に記載のアンジオクライン因子を生成するために、クローニングベクターまたは発現ベクターなどのベクターで遺伝子操作された（すなわち、形質導入または形質転換またはトランスフェクトされた）細胞である。いくつかの実施形態によると、宿主細胞は、組み換え手法により、本明細書で使用されるアンジオクライン因子を生成するために、ベクターで遺伝子操作することができる。

いくつかの実施形態によると、宿主細胞は、本明細書で使用されるようなアンジオクライン因子を生成するために、ベクターでトランスフェクト、形質転換、または形質導入されるのに適切な任意の宿主細胞であり得る。宿主細胞は、哺乳類細胞などの高等真核細胞、もしくは酵母細胞などの下等真核細胞であり得るか、または、宿主細胞は、細菌細胞などの原核細胞であり得る。例示的な宿主細胞には、細菌細胞、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ；真菌細胞、例えば、酵母；昆虫細胞、例えば、ＤｒｏｓｏｐｈｉｌａＳ２及びＳｆ９；動物細胞、例えば、ＣＨＯ、ＣＯＳ、またはＢｏｗｅｓメラノーマ；アデノウイルス；植物細胞などが挙げられるが、これらに限定されない。

いくつかの実施形態によると、ベクターは、クローニングベクターまたは発現ベクターであり得る。例えば、プラスミド、ウイルス粒子、ファージなどの形態のベクター。いくつかの実施形態によると、ベクターは、発現ベクターであり、発現ベクターは、本明細書で使用されるアンジオクライン因子を発現する任意の適切な発現ベクターである。例示的な発現ベクターには、染色体、非染色体、及び合成のＤＮＡ配列、例えば、ＳＶ４０の誘導体；細菌プラスミド；ファージＤＮＡ；バキュロウイルス；酵母プラスミド；プラスミドとファージＤＮＡとの組み合わせから誘導されるベクター；ウイルスＤＮＡ、例えば、ワクシニア、アデノウイルス、鶏痘ウイルス、ならびに、仮性狂犬病が挙げられるが、これらに限定されない。さらなる例示的なベクターには、以下が挙げられる：細菌：ｐＱＥ７０、ｐＱＥ６０、ｐＱＥ－９（Ｑｉａｇｅｎ）、ｐＢＳ、ｐＤ１０、ファージスクリプト、ｐｓｉＸ１７４、ｐｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔＳＫ、ＰＢＳＫＳ、ｐＮＨ８Ａ、ｐＮＨ１６ａ、ｐＮＨ１８Ａ、ｐＮＨ４６Ａ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）；ｐＴＲＣ９９ａ、ｐＫＫ２２３３、ｐＫＫ２３３－３、ｐＤＲ５４０、ｐＲＩＴ５（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）。真核生物：ＰＷＬＮＥＯ、ｐＳＶ２ＣＡＴ、ｐＯＧ４４、ｐＸＴ１、ｐＳＧ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）ｐＳＶＫ３、ＰＢＰＶ、ＰＭＳＧ、ｐＳＶＬ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）。いくつかの実施形態によると、ベクターは、アンジオクライン因子の配列と共に挿入される。いくつかの実施形態によると、ベクターは、アンジオクライン因子の配列と共に挿入され、アンジオクライン配列が順方向または逆方向に挿入される。いくつかの実施形態によると、ベクターは、細胞培養システムである。いくつかの実施形態によると、ベクターは、哺乳類細胞培養システムである。哺乳類発現系の例には、Ｇｌｕｚｍａｎ，Ｃｅｌｌ，２３：１７５（１９８１）で記載されたサル腎臓線維芽細胞のＣＯＳ－７株、及び適合性ベクター、例えば、Ｃ１２７、３Ｔ３、ＣＨＯ、ＨｅＬａ、及びＢＨＫ細胞株を発現することが可能な他の細胞株が挙げられる。哺乳類の発現ベクターは、複製起点、適切なプロモーター及びエンハンサー、ならびにさらに必要なリボソーム結合部位、ポリアデニル化部位、スプライスドナー及びアクセプター部位、転写終結配列、ならびに５’隣接非転写配列を含むことになる。ＳＶ４０スプライスに由来するＤＮＡ配列、及びポリアデニル化部位は、必要な非転写遺伝子要素を提供するために使用されてもよい。アンジオクライン因子ＤＮＡ配列は、様々な手順でベクターに挿入されてもよい。一般に、ＤＮＡ配列は、当該技術分野で既知の手順により適切な制限エンドヌクレアーゼ部位（複数可）に挿入される。

いくつかの実施形態によると、ベクターは、さらにプロモーター、エンハンサーなどの調節配列を含み、これは、本明細書で使用されるアンジオクライン因子のアングリオクリン配列に作動可能に連結される。いくつかの実施形態によると、ベクターは、プロモーター配列または領域を含む。いくつかの実施形態によると、プロモーターは、本明細書では、ＤＮＡ合成を開始するために使用される。いくつかの実施形態によると、プロモーターは、本明細書では、ＲＮＡポリメラーゼＩＩの開始部位の周りにクラスター化される転写制御モジュールの群を説明するために使用される。いくつかの実施形態によると、プロモーターは、別個の機能モジュールであり、それぞれは、転写活性化因子または抑制タンパク質の１つ以上の認識部位を含有する約７～２０ｂｐのＤＮＡで構成される。いくつかの実施形態によると、各プロモーターの少なくとも１つの領域は、ＲＮＡ合成の開始部位を配置するように機能する。例示的な機能領域には、ＴＡＴＡボックス、またはＴＡＴＡボックスを欠くいくつかのプロモーターにおいて、哺乳類の末端デオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ遺伝子のプロモーター、及びＳＶ４０後期遺伝子のプロモーター、開始の場所を示すために使用され得る開始部位自体を覆う別個の要素が挙げられる。いくつかの実施形態によると、ウイルスまたは哺乳類の細胞または細菌ファージプロモーターは、標的配列の発現を達成するために使用され、発現レベルが所与の目的に十分であるという条件で、当技術分野で既知である。例示的なプロモーターには、ウイルスプロモーター、例えば、ヒトサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）前初期遺伝子プロモーター、ＳＶ４０初期プロモーター、ルース肉腫ウイルス長末端反復、ラットインスリンプロモーター、及びグリセルアルデヒド－３－リン酸デヒドロゲナーゼが挙げられ、使用され、ウイルスプロモーターは、目的のコード配列の高レベル発現を得ることがある。いくつかの実施形態によると、特定の生理学的シグナルに応答して調節され得、遺伝子産物の誘導性発現を可能にし得るプロモーターが使用される。

いくつかの実施形態によると、本明細書で使用されるプロモーターは、転写開始の頻度を調節する追加のプロモーターエレメントを利用する。例えば、開始部位の３０～１１０ｂｐ上流の領域に位置する追加のプロモーターエレメント。プロモーターエレメント間の間隔は、頻繁に、柔軟であり、それ故、いくつかの実施形態によると、追加のプロモーターエレメントは、エレメントが互いに反転または移動された時にプロモーター機能が維持されるようにすることにより同定される。例えば、ｔｋプロモーターでは、活性が低下し始める前に、プロモーターエレメント間の間隔を、５０ｂｐ離して増加させることができる。いくつかの実施形態によると、個々の追加のプロモーターエレメントは、転写を活性化するために協調的または独立して機能し得る。いくつかの実施形態によると、プロモーター領域または配列は、ＣＡＴ（クロラムフェニコールトランスフェラーゼ）ベクターまたは選択可能なマーカーを有する他のベクターを使用して、任意の所望の遺伝子から選択することができる。例示的なプロモーターには、細菌プロモーター、例えば、ｌａｃＩ、ｌａｃＺ、Ｔ３、Ｔ７、ｇｐｔ、ラムダＰＲＩＰＬ、及びｔｒｐ；真核生物プロモーター、例えば、ＣＭＶ前初期、ＨＳＶチミジンキナーゼ、初期及び後期ＳＶ４０、レトロウイルス由来のＬＴＲ、及びマウスメタロチオネインＩが挙げられる。

いくつかの実施形態によると、ベクターは、エンハンサー配列または領域を含む。いくつかの実施形態によると、エンハンサー配列は、高等真核生物による本発明のアンジオクライン因子をコードするＤＮＡの転写を増加させる。いくつかの実施形態によると、エンハンサーは、ＤＮＡのシス作用エレメントであり、通常、プロモーターに作用して、その転写を増加させる約１０～３００ｂｐである。いくつかの実施形態によると、エンハンサーが使用され、エンハンサーは、ＤＮＡの同じ分子上の離れた位置に位置するプロモーターからの転写を増加させる遺伝子エレメントである。エンハンサーは、プロモーターと同様に、多くの個別のエレメントで構成され、これらのそれぞれは、１つ以上の転写タンパク質に結合する。エンハンサーとプロモーターとの基本的な差異は、機能的である。エンハンサー領域は、全体として、離れた場所で転写を刺激することができなければならないが、これは、プロモーター領域またはその構成要素に当てはまる必要がない。他方では、プロモーターは、特定の部位及び特定の方向で、ＲＮＡ合成の開始を指示する１つ以上のエレメントを有さなければならず、エンハンサーは、これらの特異性を欠いている。プロモーター及びエンハンサーは、多くの場合、重複して隣接している。例としては、複製起点ｂｐ１００～２７０の後側のＳＶ４０エンハンサー、サイトメガロウイルス初期プロモーターエンハンサー、複製起点の後側のポリオーマエンハンサー、及びアデノウイルスエンハンサーが挙げられるが、これらに限定されない。

いくつかの実施形態によると、任意のプロモーター／エンハンサーの組み合わせは、標的遺伝子（ＣＬＥＣ１１Ａ）の発現を引き起こすために使用することができる。プロモーター／エンハンサーの組み合わせは、真核生物プロモーターデータベースＥＰＤＢなどの公的に利用可能なデータベースで見出すことができる。真核細胞は、適切な細菌ポリメラーゼが、送達複合体の一部として、または追加の遺伝子発現構築物として提供される場合、特定の細菌プロモーターからの細胞質転写をサポートし得る。

いくつかの実施形態によると、ベクターは、プロモーター、エンハンサー、またはその両方、転写開始シグナル、転写終結シグナル、ポリＡ領域、増幅領域、選択可能マーカー、多目的クローニング部位などを含む複製起点のうちの１つ以上を含む。

いくつかの実施形態によると、発現ベクターがｃＤＮＡインサートを利用する場合、発現ベクターは、さらに、ポリアデニル化シグナルを含み、ポリアデニル化シグナルは、遺伝子転写物の適切なポリアデニル化をもたらす。いくつかの実施形態によると、そのような任意の配列は、当技術分野で知られているように使用されてもよい。例示的なポリアデニル化シグナルには、ヒト成長ホルモン及びＳＶ４０ポリアデニル化シグナルが含まれる。

いくつかの実施形態によると、ベクターは、翻訳開始のためのリボソーム結合部位及び転写ターミネーターを含む。いくつかの実施形態によると、発現ベクターは、ターミネーターまたは終結シグナルも含み、ターミネーターは、メッセージレベルを高め、転写の重複を最小化するのに役立つ。

いくつかの実施形態によると、形質転換体が使用され、形質転換体は、本明細書に記載の発現ベクターで形質転換される。形質転換体は、適切な任意の生物種に由来し得る。いくつかの実施形態によると、形質転換体は、本明細書に記載の発現ベクターで適切な宿主を形質転換することにより調製される。例示的な形質転換体には、Ｅ．ｃｏｌｉ、例えば、ＨＢ１０１、ＪＭ１０９、ＭＣ１０６１、ＢＬ２１、ＸＬ１－ブルー、ＳＵＲＥ、ＤＨ１、ＤＨ５；酵母菌株、例えば、ＨＩＳ／ＬＩ、ＨＦ７ｃ；昆虫細胞、例えば、ＢｍＮ、Ｓｆ細胞；及び哺乳類細胞、例えば、ＣＨＯ、ＣＯＳ、ＭＯＰ、ｃ１２７、Ｊｕｒｋａｔ、ＷＯＰ、ＨｅＬａ、Ｎａｍａｌｗａ細胞が挙げられるが、これらに限定されない。宿主に応じて、適切な形質転換方法を選択しなければならない。例えば、Ｅ．ｃｏｌｉのリン酸カルシウム沈殿またはエレクトロポレーション法；酢酸リチウム法、酵母のスフェロプラスト融合またはエレクトロポレーション；昆虫細胞のウイルス感染；リン酸カルシウム沈殿、プロトプラスト融合、リポフェクション、赤血球ゴースト法、リポソーム融合、ＤＥＡＥ－デキストラン法、エレクトロポレーション、または哺乳類細胞のウイルス感染。

いくつかの実施形態によると、ベクターは、翻訳の開始、終結、及び／またはリーダー配列及び／またはシグナルを用いて適切な段階で組み立てられる。いくつかの実施形態によると、ベクターは、翻訳開始、終結、及び／またはリーダー配列及び／または機能的プロモーターを伴う操作可能な読み取り段階におけるシグナルを伴う適切な段階で組み立てられる。

いくつかの実施形態によると、宿主細胞は、当該技術分野で既知の方法により、例えば、リン酸カルシウムトランスフェクション、ＤＥＡＥ－デキストラン媒介性トランスフェクション、またはエレクトロポレーションにより、ベクターを用いて操作され、脂質送達ビヒクルもしくはナノ粒子内またはその上で送達される。いくつかの実施形態によると、操作された宿主細胞は、プロモーターの活性化、形質転換体の選択、またはアンジオクライン因子遺伝子の増幅に適切するものとして濃縮された従来の栄養培地で培養される。温度、ｐＨなどの培養条件は、通常、当業者には明らかであろう。

いくつかの実施形態によると、操作された宿主細胞は、操作された細胞株を産生するであろう。いくつかの実施形態によると、操作された細胞株を達成するための適切な宿主株の形質転換、操作された細胞株の安定化、及び適切な細胞密度への安定な操作された細胞株の増殖の後に、選択されたプロモーターは、適切な手段により誘導され（例えば、温度シフトまたは化学的誘導）、操作された細胞は、本明細書に記載されるように、アンジオクライン因子を生成するために、さらなる期間培養される。いくつかの実施形態によると、細胞株は、生成物を発現する永続的で安定な細胞クローンを確立するための任意の数の優勢な薬物選択マーカーの使用により安定化される。そのような安定化方法は、本明細書に記載のアンジオクライン因子の発現に、薬物選択マーカーの発現をつなぐエレメントと同様に、当該技術分野で既知である。

いくつかの実施形態によると、本発明のアンジオクライン因子のＤＮＡ構築物に由来するＲＮＡを使用して、本明細書に記載されるようなアンジオクライン因子を生成するために、無細胞翻訳システムを用いることもできる。原核生物及び真核生物の宿主で使用される適切なクローニング及び発現ベクターは、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ｅｔａｌ．，ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ，ＳｅｃｏｎｄＥｄｉｔｉｏｎ，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，（１９８９）（この開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に記載される。

いくつかの実施形態によると、本発明のアンジオクライン因子は、硫酸アンモニウムまたはエタノール沈殿、酸抽出、陰イオンまたは陽イオン交換クロマトグラフィー、ホスホセルロースクロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、及びレクチンクロマトグラフィーを含む方法により、組み換え細胞培養物から回収及び精製することができる。タンパク質のリフォールディングステップは、必要に応じて、成熟タンパク質の構成の完了に使用することができる。最後に、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を、最終精製ステップに用いることができる。

いくつかの実施形態によると、例えば、アンジオクライン因子がＳＣＧＦである場合、ＳＣＧＦの標的遺伝子は、本明細書に記載されるように決定することができる。いくつかの実施形態によると、標的遺伝子は、本明細書に記載されるように検出することができる。いくつかの実施形態によると、標的遺伝子は、配列番号Ｘ及び配列番号Ｘに示されるヌクレオチド配列に基づいて合成された順方向及び逆方向プライマーを使用して、テンプレートとして哺乳類ｍＲＮＡ由来のｃＤＮＡ上でＰＣＲによってｍＲＮＡから合成することができる。本発明で使用される例示的な哺乳類には、ヒト及びマウスが含まれるが、これらに限定されない。ＳＣＧＦｍＲＮＡの調製、ｃＤＮＡ合成、及びＰＣＲは、ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔＩＩＩ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）の使用などの従来の方法で実行することができる。マウスＳＣＦＧｍＲＮＡのプライマーは、（順方向）５’－ＡＧＧＴＣＣＴＧＧＧＡＧＧＧＡＧＴＧ－３’（配列番号７）及び（逆方向）５’－ＧＧＧＣＣＴＣＣＴＧＧＡＧＡＴＴＣＴＴ－３’（配列番号：８）であり得る。ヒトＳＣＦＧｍＲＮＡのプライマーは、（順方向）５’－ＡＧＧＴＣＣＴＧＧＧＡＧＧＧＡＧＴＧ－３’（配列番号７）及び（逆方向）５’－ＧＧＧＣＣＴＣＣＴＧＧＡＧＡＴＴＣＴＴ－３’（配列番号：８）であり得る。ＳＣＧＦＤＮＡは、市販のｐｃＤＮＡＩまたはｐｃＤＮＡ３ベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）などのベクターにクローニングし、ＨＥＫ２９３細胞にトランスフェクトし、安定した細胞株を選択することができる。ＳＣＧＦの発現が高い適切な細胞株は、培地で培養し、遠心分離して細胞破片を除去し、プロテアーゼ活性を阻害するために、フェニルメチルスルホニルフルオリドなどの薬剤と共に保存することができる。分泌された組み換えＳＣＧＦは、抗ＦｌａｇＭ２ｂｅａｄｓなどのビーズを使用してアフィニティー精製し、溶出し、遠心フィルター装置で濃縮し、ＳＤＳ－ＰＡＧＥで定量し、－８０℃などの低温で保存することができる。

製剤／管理
いくつかの実施形態によると、アンジオクライン因子、スプライスバリアント、フラグメント、アゴニスト、またはそれらの模倣物は、遊離塩基、中性または塩形態またはエステルの組成物に製剤化されてもよい。

薬学的に許容される塩には、酸付加塩、例えば、タンパク性組成物の遊離アミノ基で形成されるもの、または、例えば、塩酸もしくはリン酸などの無機酸、または酢酸、シュウ酸、酒石酸、フマル酸、もしくはマンデル酸のような有機酸で形成されるものを含む。遊離カルボキシル基で形成された塩は、例えば、ナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、もしくは水酸化第二鉄などの無機塩基；または、イソプロピルアミン、トリメチルアミン、ヒスチジン、もしくはプロカインのような有機塩基から誘導することができる。製剤化時に、溶液は、剤形と適合性のある方法で、治療上有効であるような量で投与されるであろう。

いくつかの実施形態によると、記載の本発明の組成物は、限定されないが、溶媒を含む賦形剤、担体、またはビヒクルで製剤化されてもよい。本明細書で使用される「賦形剤」、「担体」、または「ビヒクル」という用語は、本明細書に記載の組成物の製剤化及び投与に適する担体材料を指す。本明細書における有用な担体及びビヒクルには、非毒性であり、他の構成要素と相互作用しない、当該技術分野で知られるような任意の材料が挙げられる。本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される担体」という句は、本発明の組成物の製剤化及び投与に使用可能な任意の実質的に非毒性の担体を指し、この場合、本発明のアンジオクライン因子が、依然として、安定で生物学的に利用可能であろう。

薬学的に許容される担体は、処置される哺乳類への投与に適するものにするために、十分に高純度であり、十分に低毒性でなければならない。さらに、アンジオクライン因子の安定性及び生物学的利用能を維持すべきである。記載された発明の組成物のための例示的な薬学的に許容される担体には、緩衝液、希釈剤、及び他の好適な添加剤が挙げられるが、これらに限定されない。本明細書で使用される「緩衝液」という用語は、その化学的構成が、ｐＨを大幅に変化させることなく、酸または塩基を中和する溶液または液体を指す。本発明により想定される緩衝液の例としては、ダルベッコのリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、リンゲル液、水中の５％のデキストロース（Ｄ５Ｗ）、通常／生理食塩水（０．９％のＮａＣｌ）が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態によると、注入溶液は、対象組織に対して等張である。いくつかの実施形態によると、注入溶液は、対象組織に対して高張性である。記載の発明の組成物は、滅菌水溶液、アルコールなどの一般的な溶媒中の非水溶液、または液体油ベース中の溶液などの薬学的に許容される担体を含み得る。

いくつかの実施形態によると、組成物は、薬学的に許容される担体を含む医薬組成物である。いくつかの実施形態によると、本発明の組成物の担体は、持続放出または遅延放出性担体などの放出剤を含んでもよい。そのような実施形態によると、担体は、より効率的な投与を提供するために、活性物質の持続放出または遅延放出が可能な任意の材料であり得、例えば、組成物の頻度が少なくなり、及び／または投薬量が減少すると、取り扱いの容易さを改善し、処置、予防、または促進されている疾患、障害、状態、症状などへの影響を拡大または遅延させる。そのような担体の非限定例としては、天然及び合成ポリマーなどのリポソーム、マイクロスポンジ、ミクロスフェア、またはマイクロカプセルが挙げられる。リポソームは、コレステロール、ステアリルアミン、またはホスファチジルコリンなどの様々なリン脂質から形成されてもよい。

いくつかの実施形態によると、医薬組成物は、注射可能な組成物として製剤化される。いくつかの実施形態によると、医薬組成物は、非経口的に投与することができ、これは、例えば、皮下（すなわち、皮下注射）、筋肉内（すなわち、筋肉への注射）、静脈内（すなわち、静脈への注射）：または注入手法により体内に導入されることを意味する。無菌の注射可能な水性または油性懸濁液などの注射可能な調製物は、好適な分散剤または湿潤剤及び懸濁剤を使用して、既知の技術に従って製剤化されてもよい。いくつかの実施形態によると、医薬組成物は、局所的または全身的に投与される。いくつかの実施形態によると、組成物は、口腔内、経皮的、髄腔内、局所的、粘膜的、経口的に、吸入（例えば、エアロゾル吸入）、カテーテルを介して、洗浄を介して、脂質組成物（例えば、ナノ粒子、リポソーム）中で、または他の方法、もしくは当業者に知られる上述の任意の組み合わせにより、投与することができる（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈＥｄ．ＭａｃｋＰｒｉｎｔｉｎｇＣｏｍｐａｎｙ，１９９０（本明細書では参照により組み込まれる）を参照のこと）。

いくつかの実施形態によると、本明細書に記載の組成物は、組成物の投与方法に応じて製剤化される。例えば、医薬組成物が経口的に送達される場合、本明細書に記載の組成物は、経口剤形で製剤化することができる。例示的な経口剤形には、粉末、錠剤、カプセル剤、シロップ剤、丸剤、または顆粒剤（複数可）が挙げられる。別の例では、医薬組成物が、非経口的に送達される場合、本明細書に記載の組成物は、非経口剤形で製剤化することができる。

遊離塩基または薬理学的に許容される塩としての活性化合物の溶液は、ヒドロキシプロピルセルロースなどの界面活性剤と好適に混合された水中で調製されてもよい。分散液は、また、グリセロール、液体ポリエチレングリコール、及びそれらの混合物、ならびに油中で調製されてもよい。注射可能な使用に適する医薬品形態は、滅菌の注射可能な溶液または分散液の即時調製のための滅菌水溶液または分散剤及び滅菌散剤を含む。全ての場合について、形態は、無菌でなければならず、容易な注射可能性が存在する程度まで流動性がなければならない。製造及び保管の条件下で安定していなければならず、細菌及び真菌などの微生物の汚染作用から保護されなければならない。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（すなわち、グリセロール、プロピレングリコール、及び液体ポリエチレングリコールなど）、それらの適切な混合物、及び／または植物油を含有する溶媒または分散媒体であり得る。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングの使用により、分散の場合に必要な粒径の維持により、及び界面活性剤の使用により維持されてもよい。微生物の作用の防止は、様々な抗菌剤及び抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサールなどによりもたらすことができる。多くの場合、等張剤、例えば、糖または塩化ナトリウムを含めることが望ましいことがある。注射可能な組成物の長期吸収は、吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンの組成物での使用によりもたらすことができる。

いくつかの実施形態によると、医薬組成物が水溶液中での非経口投与用に製剤化される場合、溶液は、必要に応じて、適切に緩衝されるべきであり、液体希釈剤は、最初に、十分な生理食塩水またはグルコースで等張にした。これらの特定の水溶液は、特に、静脈内、筋肉内、皮下、及び腹腔内投与に適する。いくつかの実施形態によると、用いることができる滅菌水性媒体は、本開示に照らして当業者に既知であろう。いくつかの実施形態によると、製剤は、ＦＤＡの生物学局の基準により要求されるように、滅菌性、発熱性、ならびに一般的な安全性及び純度の基準を満たすべきである。

いくつかの実施形態によると、親医薬組成物は、無菌になるように製剤化される。滅菌注射液は、必要な量の活性化合物を適切な溶媒に、必要に応じて、上記に列挙した他の成分と共に組み込み、続いて、濾過滅菌することにより調製することができる。一般に、分散液は、様々な滅菌された有効成分を滅菌ビヒクルに組み込むことにより調製され、これは、基本的な分散媒及び上に列挙されたものからの必要な他の成分を含有する。滅菌注射可能溶液の調製のための滅菌粉末の場合、例示的な調製方法には、真空乾燥及び凍結乾燥手法を含み、これは、有効成分の粉末及び以前に滅菌濾過された溶液から任意の追加の所望の成分を生じる。粉末組成物は、安定剤の有無にかかわらず、例えば、水または生理食塩水などの液体担体と組み合わせることができる。

例えば、いくつかの実施形態によると、記載の本発明の医薬組成物が非経口的に投与される場合、アンジオクライン因子を含む医薬組成物は、ＰＢＳに懸濁され、ＩＶ流体に添加されても、提案された注入部位に注射されてもよい。

いくつかの実施形態によると、医薬組成物は、追加の治療薬を含む。いくつかの実施形態によると、追加の治療薬は、抗炎症薬、鎮痛薬、抗感染薬、成長因子、免疫抑制薬、及びそれらの組み合わせからなる群より選択される。いくつかの実施形態によると、医薬組成物は、治療量の追加の治療薬を含む。

いくつかの実施形態によると、医薬組成物は、さらに治療量の抗炎症薬を含み、抗炎症薬は、炎症を低減または阻害するのに有効である。

いくつかの実施形態によると、抗炎症薬は、ステロイド性抗炎症薬を含む。本明細書で使用される「ステロイド性抗炎症薬」という用語は、１７炭素の４環系を含有する多数の化合物のいずれか１つを指し、ステロール、様々なホルモン（アナボリックステロイドとして）、及びグリコシドを含む。ステロイド性抗炎症薬の代表例には、コルチコステロイド、例えば、ヒドロコルチゾン、ヒドロキシルトリアムシノロン、アルファ－メチルデキサメタゾン、デキサメタゾン－ホスファート、ベクロメタゾンジプロピオナート、クロベタゾールバレラート、デソニド、デオキシメタゾン、デスオキシコルチコステロンアセタート、デキサメタゾン、ジクロリゾン、ジフルコルトロンバレラート、フルアドレノロン（ｆｌｕａｄｒｅｎｏｌｏｎｅ）、フルクロロロンアセトニド、フルメタゾンピバラート、フルオシノロンアセトニド、フルオシノニド、フルコルチンブチルエステル、フルオコルトロン、フルプレドニデン（フルプレドニリデン）アセタート、フルランドレノロン、ハルシノニド、ヒドロコルチゾンアセタート、ヒドロコルチゾンブチラート、メチルプレドニゾロン、トリアムシノロンアセトニド、コルチゾン、コルトドキソン、フルセトニド（ｆｌｕｃｅｔｏｎｉｄｅ）、フルドロコルチゾン、ジフルオロゾンジアセタート（ｄｉｆｌｕｏｒｏｓｏｎｅｄｉａｃｅｔａｔｅ）、フルラドレノロン（ｆｌｕｒａｄｒｅｎｏｌｏｎｅ）、フルドロコルチゾン、ジフロロゾンジアセタート、フルラドレノロンアセトニド、メドリゾン、アムシナファル、アムシナフィド、ベタメタゾン及びそのエステルの残部、クロロプレドニゾン、クロルプレドニソンアセタート、クロコルテロン、クレシノロン、ジクロリゾン、ジフルウルプレドナート、フルクロロニド、フルニソリド、フルオロメタロン、フルペロロン、フルプレドニゾロン、ヒドロコルチゾンバレラート、ヒドロコルチゾンシクロペンチルプロピオナート、ヒドロコルタマート、メプレドニゾン、パラメタゾン、プレドニゾロン、プレドニゾン、ベクロメタゾンジプロピオナート、トリアムシノロン、ならびに、その混合物及び組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。

いくつかの実施形態によると、抗炎症薬は、非ステロイド性抗炎症薬を含む。本明細書で使用される「非ステロイド性抗炎症薬」という用語は、限定されないが、イブプロフェン（Ａｄｖｉｌ（登録商標））、ナプロキセンナトリウム（Ａｌｅｖｅ（登録商標））、及びアセトアミノフェン（Ｔｙｌｅｎｏｌ（登録商標））を含む、作用においてアスピリン様である薬剤の大きな群を指す。記載の発明の文脈で使用可能な非ステロイド性抗炎症薬のさらなる例には、オキシカム、例えば、ピロキシカム、イソキシカム、テノキシカム、スドキシカム、及びＣＰ－１４，３０４；ジサルシド、ベノリラート、トリリサート、サファプリン、ソルプリン、ジフルニサル、及びフェンドサル；酢酸誘導体、例えば、ジクロフェナク、フェンクロフェナク、インドメタシン、スリンダク、トルメチン、イソキセパック、フロフェナク、チオピナク、ジドメタシン、アセマタシン、フェンティアザク、ゾメピラク、クリンダナク、オキセピナク、フェルビナク、及びケトロラク；フェナマート、例えば、メフェナム酸、メクロフェナム酸、フルフェナム酸、ニフルム酸、及びトルフェナム酸；プロピオン酸誘導体、例えば、ベノキサプロフェン、フルルビプロフェン、ケトプロフェン、フェノプロフェン、フェンブフェン、インドプロフェン、ピルプロフェン、カルプロフェン、オキサプロジン、プラノプロフェン、ミロプロフェン、チオキサプロフェン、スプロフェン、アルミノプロフェン、及びチアプロフェン酸；ピラゾール、例えば、フェニルブタゾン、オキシフェンブタゾン、フェプラゾン、アザプロパゾン、及びトリメタゾン、ならびにそれらの混合物及び組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。

別の実施形態によると、抗炎症薬は、抗炎症性サイトカイン及び／または前炎症性メディエーターを含む。いくつかの実施形態によると、抗炎症薬は、トランスフォーミング成長因子－ベータ３（ＴＧＦ－β３）、抗腫瘍壊死因子－アルファ（ＴＮＦ－α）剤、またはそれらの組み合わせを含むが、これらに限定されない。

いくつかの実施形態によると、医薬組成物は、さらに、治療量の鎮痛薬を含み、鎮痛薬は、意識を乱すことなく、または他の感覚モダリティを変更することなく、痛みの閾値を上げることによって、疼痛を低減、抑制、または緩和するのに有効である。いくつかのそのような実施形態によると、鎮痛薬は、非オピオイド鎮痛薬である。「非オピオイド鎮痛薬」は、疼痛を低減するが、オピオイド鎮痛薬ではない天然または合成物質である。非オピオイド鎮痛薬の例には、エトドラク、インドメタシン、スリンダック、トルメチン、ナブメタン、ピロキシカム、アセトアミノフェン、フェノプロフェン、フルビプロフェン、イブプロフェン、ケトプロフェン、ナプロキセン、ナプロキセンナトリウム、オキサプロジン、アスピリン、コリンマグネシウムトリサリチラート、ジフルニサル、メクロフェナム酸、メフェナム酸、及びフェニルブタゾン、ならびにそれらの組み合わせ及び混合物が挙げられるが、これらに限定されない。

いくつかの他の実施形態によると、鎮痛薬は、オピオイド鎮痛薬である。「オピオイド鎮痛薬」、「オピオイド」、または「麻薬性鎮痛薬」は、中枢神経系のオピオイド受容体に結合して、アゴニスト作用を生じる天然または合成の物質である。オピオイド鎮痛薬の例には、コデイン、フェンタニル、ヒドロモルフォン、レボルファノール、メペリジン、メタドン、モルヒネ、オキシコドン、オキシモルフォン、プロポキシフェン、ブプレノルフィン、ブトルファノール、デゾシン、ナルブフィン、及びペンタゾシン、ならびにそれらの組み合わせ及び混合物が含まれるが、これらに限定されない。

いくつかの実施形態によると、医薬組成物は、さらに、治療量の抗感染剤を含み、抗感染剤は、細菌、真菌、及び他の微生物を低減、成長を阻害、または破壊するのに有効である。いくつかの実施形態によると、抗感染剤は、抗生物質、抗菌剤、抗真菌剤、抗ウイルス剤、抗原虫剤、及びそれらの組み合わせからなる群より選択される。

いくつかの実施形態によると、抗感染剤は、抗生物質を含む。抗生物質の例には、ペニシリンＧ；メチシリン；ナフシリン；オキサシリン；クロキサシリン；ジクロキサシリン；アンピシリン；アモキシシリン；チカルシリン；カルベニシリン；メズロシリン；アズロシリン；ピペラシリン；イミペネム；アズトレオナム；セファロチン；セファクロル；セフォキシチン；セフロキシム；セフォニシド；セフメタゾール；セフォテタン；セフプロジル；ロラカルベフ；セフェタメット；セフォペラゾン；セフォタキシム；セフチゾキシム；セフトリアキソン；セフタジジム；セフェピム；セフィキシム；セフポドキシム；セフスロジン；フレロキサシン；ナリジクス酸；ノルフロキサシン；シプロフロキサシン；オフロキサシン；エノキサシン；ロメフロキサシン；シノキサシン；ドキシサイクリン；ミノサイクリン；テトラサイクリン；アミカシン；ゲンタマイシン；カナマイシン；ネチルマイシン；トブラマイシン；ストレプトマイシン；アジスロマイシン；クラリスロマイシン；エリスロマイシン；エリスロマイシンエストラート；エリスロマイシンエチルスクシナート；エリスロマイシングルコヘプトナート；エリスロマイシンラクトビオナート；エリスロマイシンステアラート；バンコマイシン；テイコプラニン；クロラムフェニコール；クリンダマイシン；トリメトプリム；スルファメトキサゾール；ニトロフラントイン；リファンピン；ムピロシン；メトロニダゾール；セファレキシン；ロキシスロマイシン；コ－アモキシクラバネート（Ｃｏ－ａｍｏｘｉｃｌａｖｕａｎａｔｅ）；ピペラシリン及びタゾバクタムの組み合わせ；ならびにそれらの様々な塩、酸、塩基、及びそれらの他の誘導体；ならびにそれらの組み合わせ及び混合物が挙げられるが、これらに限定されない。

いくつかの実施形態によると、抗感染剤は、抗菌剤を含む。例示的な抗菌剤には、ペニシリン、セファロスポリン、カルバセフェム、セファマイシン、カルバペネム、モノバクタム、アミノグリコシド、グリコペプチド、キノロン、テトラサイクリン、マクロリド、及びフルオロキノロン、ならびにそれらの組み合わせ及び混合物が含まれるが、これらに限定されない。

いくつかの実施形態によると、抗感染剤は、抗真菌剤を含む。本明細書で使用される「抗真菌剤」という用語は、真菌の成長を阻害する、または真菌を破壊する能力を有する化学物質の群のいずれかを意味する。例示的な抗真菌剤には、アンホテリシンＢ、カンジシジン、デルモスタチン、フィリピン、ファンギクロミン、ハチマイシン、ハマイシン、ルセンソマイシン、メパルトリシン、ナタマイシン、ナイスタチン、ペシロシン、ペリマイシン、アザセリン、グリセオフルビン、オリゴマイシン、ネオマイシン、ピロルニトリン、シッカニン、ツベルシジン、ビリジン、ブテナフィン、ナフチフィン、テルビナフィン、ビホナゾール、ブトコナゾール、クロルダントイン、クロルミダゾール、クロコナゾール、クロトリマゾール、エコナゾール、エニルコナゾール、フェンチコナゾール、フルトリマゾール、イソコナゾール、ケトコナゾール、ラノコナゾール、ミコナゾール、オモコナゾール、オキシコナゾール、セルタコナゾール、スルコナゾール、チオコナゾール、トルシクラート、トリンダート、トルナフテート、フルコナール（Ｆｌｕｃｏｎａｗｌｅ）、イトラコナゾール、サペルコナゾール、テルコナゾール、アクリソルシン、アモロルフィン、ビフェナミン、ブロモサリチルクロラニリド、ブクロサミド、プロピオン酸カルシウム、クロルフェネシン、シクロピロックス、クロキシキン、コパラフィナート、ディアムタゾール、エキサラミド、フルシトシン、ハレタゾール、ヘキセチジン、ロフルカルバン、ニフラテル、ヨウ化カリウム、プロピオン酸、ピリチオン、サリチルアニリド、プロピオン酸ナトリウム、スルベンチン、テノニトロゾール、トリアセチン、ウジョチオン（Ｕｊｏｔｈｉｏｎ）、ウンデシレン酸、及びプロピオン酸亜鉛、ならびにそれらの組み合わせ及び混合物が挙げられるが、これらに限定されない。

いくつかの実施形態によると、抗感染剤は、抗原虫剤を含む。本明細書で使用される「抗原虫剤」という用語は、原生動物の疾患の処置に主に使用される原生動物の成長を阻害する能力または原生動物を破壊する能力を有する化学物質の群のいずれかを意味する。抗原虫剤の例には、ピリメタミン（ダラプリム（登録商標））スルファジアジン、及びロイコボリン、ならびにそれらの混合物及び組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。

いくつかの実施形態によると、抗感染剤は、抗ウイルス剤を含む。本明細書で使用される「抗ウイルス剤」という用語は、ウイルス性疾患の処置に主に使用されるウイルスの複製を阻害する能力またはウイルスを破壊する能力を有する化学物質の群のいずれかを意味する。抗ウイルス剤には、アシクロビル、シドフォビル、シタラビン、ジデオキシアデノシン、ジダノシン、エドクスジン、ファムシクロビル、フロクスウリジン、ガンシクロビル、イドクスウリジン、イノシンプラノベックス、ラミブジン、ＭＡＤＵ、ペンシクロビル、ソリブジン、スタブジン、トリフルジン、バラシクロビル、ビダラビン、ザルシタビン、アセマンナン、アセチルロイシン、アマンタジン、アミジノマイシン、デラビルジン、ホスカルメット、インジナビル、インターフェロン（例えば、ＩＦＮ－アルファ）、ケトキサール、リゾチーム、メチサゾン、モロキシジン、ネビラピン、ポドフィロトキシン、リバビリン、リマンタジン、リトナビル２、サキナビル、スタイリマイシン（Ｓｔａｉｌｉｍｙｃｉｎ）、スタトロン、トロマンタジン、ジドブジン（ＡＺＴ）、及びキセナゾ酸、ならびにそれらの混合物及び組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。

いくつかの実施形態によると、医薬組成物は、さらに、治療量の成長因子を含む。いくつかの実施形態によると、成長因子は、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）、及びそれらの組み合わせからなる群より選択される。

いくつかの実施形態によると、成長因子は、外因性造血成長因子を含む。いくつかの実施形態によると、Ｇ－ＣＳＦ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＧＭ－ＣＳＦ／ＩＬ－３融合タンパク質（ＰＩＸＹ３２１）、ｒｈＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－１、ＩＬ－３、ＩＬ－６、ＩＬ－１１、ＳＣＦ、ＦＴＬ３－リガンド、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、トロンボポエチン（ＴＰＯ）、ストロマ、及びそれらの組み合わせを含む外因性造血成長因子。

いくつかの実施形態によると、医薬組成物は、併用療法と共に投与される。いくつかの実施形態によると、医薬組成物は、治療量の併用療法と共に投与される。いくつかの実施形態によると、本明細書の医薬組成物は、併用療法の前に投与される。いくつかの実施形態によると、本明細書の医薬組成物は、併用療法の後に投与される。いくつかの実施形態によると、本明細書の医薬組成物は、併用療法と同時に投与される。

いくつかの実施形態によると、補助療法は、幹細胞療法である。いくつかの実施形態によると、医薬組成物は、治療量の幹細胞治療と共に投与され、治療量は、幹細胞レスキューを促進または誘導するのに有効である。

いくつかの実施形態によると、幹細胞移植は、任意の適切な方法により製剤化されてもよい。簡単に言うと、幹細胞療法は、組織源から単離された単核細胞の集団から造血幹細胞を単離するステップ、正または負の選択により造血幹細胞の単核細胞の単離集団を濃縮するステップ、及び対象に造血幹細胞の濃縮された単離集団を注入するステップ、を含む。いくつかの実施形態によると、組織源は、自家である。いくつかの実施形態によると、組織源は、同種異系である。上記の方法の特異性は、幹細胞の組織源に依存する。

自家組織。いくつかの実施形態によると、組織源は、自家組織を含む。いくつかの実施形態によると、自家組織は、骨髄破壊的傷害の前に採取される。いくつかの実施形態によると、幹細胞を含む採取された自家組織は、汚染腫瘍細胞を枯渇させるためにさらにパージングを受ける。いくつかの実施形態によると、悪性細胞が採取された組織に存在する場合、幹細胞は、抗ＣＤ３４特異的モノクローナル抗体及び免疫ビーズの使用により濃縮され（「正の選択」）、及び／または、悪性細胞は、抗腫瘍モノクローナル抗体の使用により除去される（「負の選択」）。

同種異系組織。いくつかの実施形態によると、組織源は、同種異系組織を含む。いくつかの実施形態によると、ドナー同種異系組織は、レシピエント対象との組織適合性についてスクリーニングされる。いくつかの実施形態によると、組織適合性は、ドナー及びレシピエント対象が、同一もしくはほぼ同一または類似のヒト白血球抗原（ＨＬＡ）である組織適合性マッチングによりスクリーニングされる。いくつかの実施形態によると、悪性細胞が採取された組織に存在する場合、採取された組織は、上記のようにパージされる。いくつかの実施形態によると、組織適合性のない材料は、採取された材料から除去されてもよい。いくつかの実施形態によると、同種異系で採取された組織は、また、ｅｘ－ｖｉｖｏＴ細胞枯渇（ＴＣＤ）を経験することがある。

骨髄組織。いくつかの実施形態によると、組織源は、組織が同種異系または自家のいずれかである骨髄を含む。いくつかの実施形態によると、骨髄組織を採取するための任意の既知の方法が使用されてもよい。例えば、移植用の骨髄は、全身麻酔または脊髄麻酔下で２～３時間にわたって腸骨稜を複数回吸引することにより得られる（「採取される」）ことがある。約１０～４０ｘ１０⁹の有核細胞（２ｘ１０⁸／ｋｇのレシピエント体重）、最大２０ｍＬ／ｋｇのドナー体重が得られるであろう。骨髄吸引液は、主に、間質細胞、未分化幹細胞、初期にコミットされた前駆細胞、Ｔリンパ球、及び赤血球、骨髄、単球、巨核球、ならびに様々な発達段階のリンパ系細胞株で構成される。骨髄中の粒子状物質は、濾過により除去されるであろう。ＡＢＯ式血液型の不適合性が存在する場合、血漿交換は、イソヘマグルチニンを除去するために利用されてもよいが、分画遠心分離は、不適合な赤血球を除去するために利用することができる。特別な処理（「パージング」）は、腫瘍細胞、Ｔリンパ球、またはレシピエント対象に有害な影響を与え得る他の特定の構成成分の骨髄負荷を低減するために実施されてもよい。処理後、幹細胞を含む採取され処理された組織は、静脈内注入を介してレシピエントに直ちに投与されるか、または凍結保存され、後の輸血のために保存される。

末梢血。いくつかの実施形態によると、組織源は、組織が同種異系または自家のいずれかである末梢血である。いくつかの実施形態によると、末梢血を採取するための任意の既知の方法が使用されてもよい。いくつかの実施形態によると、単核細胞の集団は、造血幹細胞動員剤での処置後に得られる。そのようないくつかの実施形態によると、造血幹細胞動員剤は、Ｇ－ＣＳＦ、ＧＭ－ＣＳＦ（例えば、サルグラモスチム（ＬＥＵＫＩＮＥ（登録商標）））、またはそれらの薬学的に許容されるアナログもしくは誘導体を含む。いくつかの実施形態によると、造血幹細胞動員剤は、コロニー刺激因子の組み換えアナログまたは誘導体である。いくつかの実施形態によると、造血幹細胞動員剤は、フィルグラスチム（ＮＥＵＰＯＧＥＮ（登録商標））である。いくつかの実施形態によると、造血幹細胞動員剤は、プレリキサフォル（ＭＯＺＯＢＩＬ（登録商標））、エルトロンボパグ（ＰＲＯＭＡＣＴＡ（登録商標））、ロミプロスチム（ＮＰＬＡＴＥ（登録商標））、ペグフィルグラスチム（ＮＥＵＬＡＳＴＡ（登録商標））、ダルベポイエチンアルファ（ＡＲＡＮＥＳＰ（登録商標））のうちの１つ以上である。次に、幹細胞を含むドナーのバフィーコートは、白血球除去により単離されてもよい。処理後、造血幹細胞の濃縮された集団は、静脈内注入を介してレシピエントに直ちに投与されるか、または凍結保存されて凍結され、後の輸血のために保存される。

投与量／投薬量レジメン
いくつかの実施形態によると、医薬組成物は、単位の重量及び投与経路に応じて、約１０％～約９０％（ｗｔ／ｗｔ％）、約２０％～約８０％（ｗｔ／ｗｔ％）、約３０％～約７０％（ｗｔ／ｗｔ％）、または約４０％～約６０％（ｗｔ／ｗｔ％）及びそこから導出できる任意の範囲を含む、約０．０１％～約９９．９９％（ｗｔ／ｗｔ％）のアンジオクライン因子、その生物学的に活性なフラグメント、スプライスバリアント、アゴニスト、または模倣物を含んでもよい。例えば、医薬組成物は、約０．０１％、約０．１０％、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、約４５％、約４６％、約４７％、約４８％、約４９％、約５０％、約５１％、約５２％、約５３％、約５４％、約５５％、約５６％、約５７％、約５８％、約５９％、約６０％、約６１％、約６２％、約６３％、約６４％、約６５％、約６６％、約６７％、約６８％、約６９％、約７０％、約７１％、約７２％、約７３％、約７４％、約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、約１００％（ｗｔ／ｗｔ％）のアンジオクライン因子、スプライスバリアント、生物活性フラグメント、アゴニストまたは模倣物を含んでもよい。

いくつかの実施形態によると、治療上有用な組成物中のアンジオクライン因子、スプライスバリアント、生物学的に活性なフラグメント、アゴニストまたは模倣物の量は、好適な用量が化合物の単位用量に含有されるように調製することができる。溶解性、バイオアベイラビリティ、生物学的半減期、投与経路、製品の貯蔵寿命、及び他の薬理学的考察などの要因は、そのような医薬製剤を調製する当業者により企図されることになり、従って、様々な投薬量及び処置レジメンが望ましいことがある。

いくつかの実施形態によると、対象に投与される本開示の組成物の実際の投薬量は、物理的及び生理学的要因、例えば、体重、状態の重症度、処置されている疾患のタイプ、以前または同時の治療的介入、患者の特発性疾患、及び投与経路により決定することができる。投薬量及び投与経路に応じて、好ましい投薬量及び／または有効量の投与回数は、対象の応答に応じて変動することがある。

対象。本明細書に記載の組成物及び方法は、記載された利点を経験し得る任意の対象での使用が意図される。従って、「対象」、「患者」、及び「個体」（互換的に使用）は、ヒトならびに非ヒト対象、特に、飼育動物が含まれる。

いくつかの実施形態によると、対象及び／または動物は、哺乳類、例えば、ヒト、マウス、ラット、モルモット、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ブタ、ウサギ、ヒツジ、または非ヒト霊長類、例えば、サル、チンパンジー、もしくはヒヒである。他の実施形態によると、対象及び／または動物は、例えば、ゼブラフィッシュなどの非哺乳類である。いくつかの実施形態において、対象及び／または動物は、蛍光標識された細胞（例えば、ＧＦＰを伴う）を含んでもよい。いくつかの実施形態において、対象及び／または動物は、蛍光細胞を含むトランスジェニック動物である。

いくつかの実施形態によると、対象及び／または動物は、ヒトである。いくつかの実施形態によると、ヒトは、小児科ヒトである。いくつかの実施形態によると、ヒトは、成人ヒトである。いくつかの実施形態によると、ヒトは、高齢者ヒトである。他の実施形態によると、ヒトは、患者と呼ばれてもよい。

いくつかの実施形態によると、対象は、非ヒト動物であり、それ故、記載の発明は、獣医学的使用に関する。いくつかの実施形態によると、非ヒト動物は、家庭用ペットである。いくつかの実施形態によると、非ヒト動物は、家畜動物である。

値の範囲が提供される場合、文脈に別途明示のない限り、その範囲の上限と下限との間の下限の単位の１０分の１までの各介在値、ならびに他の任意の記載値またはその記載範囲の介在値が発明に含まれると理解される。より小さな範囲に独立して含まれ得るこれらのより小さな範囲の上限及び下限もまた、本発明に含まれ、記載の範囲において任意の特に除外された限界に従う。記載の範囲が、限界の一方または両方を含む場合、それらの含まれる限界の両方を除外する範囲も本発明に含まれる。

別途定義のない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、本発明が属する当業者により一般に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書に記載されているものと類似または同等の任意の方法及び材料も、本発明の実施または試験に使用することができるが、例示的な方法及び材料が記載されている。本明細書で言及される全ての刊行物は、刊行物が引用されることに関連する方法及び／または材料を開示及び説明するために、参照により本明細書に組み込まれる。

本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎｄ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈に別途明示のない限り、複数の指示対象を含むことに留意しなければならない。

本明細書で考察される刊行物は、本出願の出願日の前に、それらの開示のためにのみ提供され、それぞれは、全体が参照により組み込まれる。本明細書に記載のいずれも、本発明が、先行発明によって、そのような刊行物に先行する権利がないことを認めるものと解釈されるべきではない。さらに、提供される発行日は、個別に確認する必要があり得る実際の発行日とは異なることがある。

以下の実施例は、当業者に、本発明の製造及び使用方法の完全な開示及び説明を提供するために記載され、発明者らが自らの発明と見なす範囲を制限することを意図するものもなく、以下の実験が実施された全てまたは唯一の実験であることを表すことを意図するものでもない。使用される数値（例えば、量、温度など）に関して正確さを保証するための努力がなされているが、いくつかの実験誤差及び偏差を考慮に入れなければならない。別途指示のない限り、部は、重量部であり、分子量は、重量平均分子量であり、温度は、セ氏温度であり、圧力は、大気圧または大気圧付近である。

方法
動物Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ（ＣＤ４５．２；在庫番号０００６６４）、Ｂ６．ＳＪＬ－Ｐｔｐｒｃ^a Ｐｅｐｃ^b／ＢｏｙＪ（ＣＤ４５．１；在庫番号００２０１４）、及びＣ５７ＢＬ／６－Ｇｔ（ＲＯＳＡ）２６Ｓｏｒ^{tm(Map2k1*、EGFP)Rsky/J}（Ｍａｐｋ^fl/fl）（在庫番号０１２３５２）マウスを、ＪａｃｋｓｏｎＬａｂｏｒａｔｏｒｙ（ＢａｒＨａｒｂｏｒ，ＭＥ）から購入した。（Ｓｒｉｎｉｖａｓａｎ，Ｌ．ｅｔａｌ．ＰＩ３ｋｉｎａｓｅｓｉｇｎａｌｓＢＣＲ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｍａｔｕｒｅＢｃｅｌｌｓｕｒｖｉｖａｌ．Ｃｅｌｌ１３９，５７３－５８６，ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｃｅｌｌ．２００９．０８．０４１（２００９））。Ｃｄｈ５（ＰＡＣ）－ｃｒｅＥＲＴ２マウスを、分子生物医学のためのＴｈｅＭａｘＰｌａｎｃｋＩｎｓｔｉｔｕｔｅのＲａｌｆＨ．Ａｄａｍｓから入手した。（Ｂｅｎｅｄｉｔｏ，Ｒ．ｅｔａｌ．ＴｈｅｎｏｔｃｈｌｉｇａｎｄｓＤｌｌ４ａｎｄＪａｇｇｅｄ１ｈａｖｅｏｐｐｏｓｉｎｇｅｆｆｅｃｔｓｏｎａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ．Ｃｅｌｌ１３７，１１２４－１１３５，ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｃｅｌｌ．２００９．０３．０２５（２００９））。Ｔｉｅ２．ＩｋＢ－ＳＳマウスを、ＣｏｌｕｍｂｉａＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙのＪａｎＫｉｔａｊｅｗｓｋｉから入手した。（Ｂｒｏｗｎ，Ｋ．，Ｇｅｒｓｔｂｅｒｇｅｒ，Ｓ．，Ｃａｒｌｓｏｎ，Ｌ．，Ｆｒａｎｚｏｓｏ，Ｇ．＆Ｓｉｅｂｅｎｌｉｓｔ，Ｕ．ＣｏｎｔｒｏｌｏｆＩｋａｐｐａＢ－ａｌｐｈａｐｒｏｔｅｏｌｙｓｉｓｂｙｓｉｔｅ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ，ｓｉｇｎａｌ－ｉｎｄｕｃｅｄｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ．Ｓｃｉｅｎｃｅ２６７，１４８５－１４８８，ｄｏｉ：１０．１１２６／ｓｃｉｅｎｃｅ．７８７８４６６（１９９５））。Ｌｅｐｒ－ｃｒｅマウスを、ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｅｘａｓＳｏｕｔｈｗｅｓｔｅｒｎＭｅｄｉｃａｌＣｅｎｔｅｒのＳｅａｎＪＭｏｒｒｉｓｏｎから入手し、Ｃｄｈ５（ＰＡＣ）－ｃｒｅＥＲＴ２、及びＴｉｅ２．ＩκＢ－ＳＳマウスをＣ５７ＢＬ／６Ｊ（ＣＤ４５．２）遺伝的背景で飼育及び維持した。（ＤｅＦａｌｃｏ，Ｊ．ｅｔａｌ．Ｖｉｒｕｓ－ａｓｓｉｓｔｅｄｍａｐｐｉｎｇｏｆｎｅｕｒａｌｉｎｐｕｔｓｔｏａｆｅｅｄｉｎｇｃｅｎｔｅｒｉｎｔｈｅｈｙｐｏｔｈａｌａｍｕｓ．Ｓｃｉｅｎｃｅ２９１，２６０８－２６１３，ｄｏｉ：１０．１１２６／ｓｃｉｅｎｃｅ．１０５６６０２（２００１））。全てのマウスを、ＨＥＰＡフィルター付き空気交換（ＴｈｏｒｅｎＣａｇｉｎｇＳｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．）を備えたＰｏｓｉｔｉｖｅＩｎｄｉｖｉｄｕａｌＶｅｎｔｉｌａｔｉｏｎ（ＰＩＶ）ケージに収容し、ＰｉｃｏＬａｂＲｏｄｅｎｔＤｉｅｔ２０（ＬａｂＤｉｅｔ５０５３）で維持し、水を自由に摂取させた。Ｃｄｈ５（ＰＡＣ）－ｃｒｅＥＲＴ２媒介性組み換えを誘導するために、ひまわり油（Ｓｉｇｍａ－ＡｌｄｒｉｃｈＳ５００７）に可溶化されたタモキシフェン（Ｓｉｇｍａ－ＡｌｄｒｉｃｈＴ５６４８）を３０ｍｇ／ｍＬの用量の腹腔内注射（１５０ｍｇ／ｋｇ体重）により８～１２週齢に３日間連続投与するか、または、動物に０．０２５％ｗ／ｗのタモキシフェン（Ｅｎｖｉｇｏ）が補充されたＣｕｓｔｏｍＴｅｋｌａｄ２０２０を６～１０週齢に４週間連続自由に給餌させた。年齢を一致させたｃｒｅ陰性同腹仔マウスは、また、同じタモキシフェン誘導レジメンを受け、対照として利用された。実験分析の前に、マウスをタモキシフェン誘導後４週間回復させた。全てのマウスを、特定病原体のないハウジングで維持した。後続の方法論に示される線量で１３７^Cs源から、全身γ線照射（ＴＢＩ）を行った。照射されたレシピエントには、照射の２４時間前に、ＰｉｃｏＬａｂＭｏｕｓｅ２０抗生物質飼料（０．０２５％のトリメトプリム及び０．１２４％のスルファメトキサゾール；ＬａｂＤｉｅｔ）を与え、その後、４週間維持した。ＷｅｉｌｌＣｏｒｎｅｌｌＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅ及びＩｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌＡｎｉｍａｌＣａｒｅａｎｄＵｓｅＣｏｍｍｉｔｔｅｅ（ＩＡＣＵＣ）の承認の下、ＡｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｆｏｒＡｓｓｅｓｓｍｅｎｔａｎｄＡｃｃｒｅｄｉｔａｔｉｏｎｏｆＬａｂｏｒａｔｏｒｙＡｎｉｍａｌＣａｒｅ，Ｉｎｔｌ．（ＡＡＡＬＡＣ）及びＮａｔｉｏｎａｌＩｎｓｔｉｔｕｔｅｓｏｆＨｅａｌｔｈ（ＮＩＨ）ＯｆｆｉｃｅｏｆＬａｂｏｒａｔｏｒｙＡｎｉｍａｌＷｅｌｆａｒｅ（ＯＬＡＷ）ガイドラインに従って実験を行った。

緩衝液及び培地
磁気活性化細胞選別（ＭＡＣＳ）緩衝液。０．５％Ｗ／Ｖのウシ血清アルブミン（ＢＳＡ；ＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＢＰ１６０５）及び２ｍＭのＥＤＴＡ（Ｃｏｒｎｉｎｇ４６－０３４－ＣＩ）を含有するＣａ＋＋／Ｍｇ＋＋（ｐＨ７．２）（Ｃｏｒｎｉｎｇ２１－０４０－ＣＶ）を含まないＰＢＳ。

消化緩衝液。２０ｍＭのＨＥＰＥＳ（Ｃｏｒｎｉｎｇ２５－０６０－ＣＩ）、２．５ｍｇ／ｍＬのコラゲナーゼＡ（Ｒｏｃｈｅ１１０８８７９３００１）、及び１単位／ｍＬのＤｉｓｐａｓｅＩＩ（Ｒｏｃｈｅ０４９４２０７８００１）を含有する１×ハンクス平衡塩類溶液（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ１４０６５）。

内皮成長培地。１：１の比の低グルコースＤＭＥＭ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ１１８８５－０８４）及びＨａｍ’ｓＦ－１２（Ｃｏｒｎｉｎｇ１０－０８０）（２０％の熱不活化ＦＢＳ（ＤｅｎｖｉｌｌｅＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＦＢ５００２－Ｈ）、１％の抗生物質－抗真菌剤（Ｃｏｒｎｉｎｇ３０－００４－ＣＩ）、１％の非必須アミノ酸（Ｃｏｒｎｉｎｇ２５－０２５－ＣＩ）、１０ｍＭのＨＥＰＥＳ（Ｃｏｒｎｉｎｇ２５－０６０－ＣＩ）、１００μｇ／ｍＬのヘパリン（Ｓｉｇｍａ－ＡｌｄｒｉｃｈＨ３１４９）、及び５０μｇ／ｍＬの内皮細胞成長サプリメント（ＡｌｆａＡｅｓａｒＢＴ－２０３）を補充した）］。

造血、ＢＭＥＣ、及び間質細胞の定量化
総造血細胞を定量化するために、大腿骨を乳鉢及び乳棒で穏やかに粉砕し、消化緩衝液で３７℃で１５分間酵素的に分離し、この後、細胞懸濁液を濾過し（４０μｍ；Ｃｏｒｎｉｎｇ３５２３４０）、ＭＡＣＳ緩衝液で洗浄した。トリパンブルー（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）排除法で血球計数器を使用して、生細胞数を定量化した。ＢＭ内の造血幹細胞及び前駆細胞（ＨＳＰＣ）を定量化するために、ＭＡＣＳ緩衝液を含む２６Ｇ×１／２針を使用して、大腿骨及び脛骨をフラッシュした。脾臓ＨＳＰＣを定量化するために、脾臓を穏やかに粉砕し、４０μｍのフィルターで濾過して、単細胞懸濁液を得た。ＢＭＥＣ、全ＢＭ間質細胞、ＢＭＬｅｐｒ＋細胞、及びＢＭ骨芽細胞を定量化するために、大腿骨を乳鉢及び乳棒で穏やかに粉砕し、消化緩衝液中で３７℃で１５分間酵素的に分離した後、細胞懸濁液を濾過し（４０μｍ；Ｃｏｒｎｉｎｇ３５２３４０）、ＭＡＣＳ緩衝液で洗浄した。製造者の推奨に従って、蛍光色素コンジュゲート抗体を使用して、細胞を表面染色した。フローサイトメトリーを使用して、細胞集団を分析した。

フローサイトメトリー
細胞表面染色の前に、ＭＡＣＳ緩衝液中のＣＤ１６／３２（９３；Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）に対する抗体を使用して、Ｆｃ受容体を４℃で１０分間ブロックした。ＣＭＰ／ＧＭＰ／ＭＥＰ染色の場合、試料を１０％正常ラット血清で、４℃で１０分間ブロックした。続いて、記載されているように、ブロックされた試料を、ＭＡＣＳ緩衝液中の蛍光色素コンジュゲート抗体で、４℃で３０分間染色した。ビオチン化抗Ｌｅｐｒ抗体で染色された試料を洗浄し、ストレプトアビジンコンジュゲート蛍光色素で、４℃で１５分間染色した。染色細胞をＭＡＣＳ緩衝液で洗浄し、２ｍＭのＥＤＴＡを含むＰＢＳ（ｐＨ７．２）中の１％のパラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）で固定した。ＬＳＲＩＩＳＯＲＰ（ＢＤＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）またはＦｏｒｔｅｓｓａ（ＢＤＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）とＦＡＣＳＤＩＶＡ８．０．１ソフトウェア（ＢＤＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して、試料データを収集及び分析した。未染色対照及び標準的な蛍光から１つの方策を差し引いたものを使用して、ゲートを確立した。この研究で利用された抗体クローンの一覧は、補足表２に含まれる。

細胞集団を、表６に示されるように定義した。

前駆細胞活性
造血前駆細胞活性を評価するために、半固体メチルセルロースのコロニー形成単位（ＣＦＵ）を定量した。ＭＡＣＳ緩衝液を含む２６Ｇ×１／２針を使用して、ＷＢＭを大腿骨及び脛骨からフラッシュした。トリパンブルー（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用した血球計算盤で、生細胞数を決定した。ＷＢＭ細胞（５×１０⁴細胞／ウェル）を、製造者の提案に従って、ＭｅｔｈｏｃｕｌｔＧＦＭ３４３４メチルセルロース（ＳｔｅｍＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）に２回ずつプレーティングした。ＳＺＸ１６６０４実体顕微鏡（Ｏｌｙｍｐｕｓ）を使用して、表現型ＣＦＵ－ＧＥＭＭ、ＣＦＵ－ＧＭ、ＣＦＵ－Ｇ、ＣＦＵ－Ｍ、及びＢＦＵ－Ｅコロニーのコロニーをスコア化した。

競合的移植及び希釈の制限
成体ＣＤ４５．１レシピエントマウスを、移植の１６時間前に致死的照射（９５０Ｒａｄ）でプレコンディショニングした。ＷＢＭを、乳鉢及び乳棒で穏やかに粉砕することにより大腿骨から分離し、消化緩衝液で３７℃で１５分間酵素的に分離し、この後、細胞懸濁液を濾過し（４０μｍ；Ｃｏｒｎｉｎｇ３５２３４０）、ＭＡＣＳで洗浄して、単細胞懸濁液を得た。生／死の排除のためにトリパンブルー（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を含む血球計算盤を使用して、生細胞数を定量した。定常状態（１：１の比）での競合移植実験では、５×１０⁵のドナーＷＢＭ細胞（ＣＤ４５．２）を、５×１０⁵の競合ＷＢＭ細胞（ＣＤ４５．１）と共に、骨髄破壊的照射（９５０Ｒａｄ）でプレコンディショニングされたＣＤ４５．１レシピエントマウスに、眼窩後洞注射を介して移植した。骨髄抑制損傷（５：１の比）後の競合移植実験では、２．５×１０⁶のドナーＷＢＭ細胞（ＣＤ４５．２）に、５×１０⁵の競合ＷＢＭ細胞（ＣＤ４５．１）を移植した。７５ｍｍのヘパリン化ガラス毛細血管（Ｋｉｍｂｌｅ－Ｃｈａｓｅ）を使用した、眼窩後洞出血を使用して、多系列の造血生着を評価した。ＲＢＣ溶解緩衝液（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ４２０３０１）を使用して、末梢血から赤血球を枯渇させ、製造者の推奨に従って、蛍光色素コンジュゲート抗体で染色した。造血生着抗体図は、ＣＤ４５．１（Ａ２０；Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、ＣＤ４５．２（１０４；Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、及びＴＥＲ１１９（ＴＥＲ１１９；Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）を含む。多系列生着図は、ＣＤ４５．２（１０４；Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、ＧＲ１（ＲＢ６－８Ｃ５；Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、ＣＤ１１Ｂ（Ｍ１／７０；Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、Ｂ２２０（ＲＡ３－６Ｂ２；Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、ＣＤ３（１７Ａ２；Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、ＣＤ４（ＧＫ１．５；Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、及びＣＤ８（５３－６．７；Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）を含む。限界希釈分析では、示された数のＷＢＭを、プレコンディショニングされたＣＤ４５．１レシピエントマウスに、眼窩後洞注射を介して非競合的に移植した。移植後４ヶ月間、陰性応答／死亡マウス％を監視した。ＣＤ４５．２（１０４；Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、ＧＲ１（ＲＢ６－８Ｃ５；Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、ＣＤ１１Ｂ（Ｍ１／７０；Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、Ｂ２２０（ＲＡ３－６Ｂ２；Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、及びＣＤ３（１７Ａ２；Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）に対して産生された抗体を使用して赤血球（ＲＢＣ）溶解末梢血中、フローサイトメトリーで、生存しているマウスにおける多系列の造血生着を確認した。ＥｘｔｒｅｍｅＬｉｍｉｔｉｎｇＤｉｌｕｔｉｏｎＡｎａｌｙｓｉｓ（ＥＬＤＡ）ソフトウェア（ｈｔｔｐ：／／ｂｉｏｉｎｆ．ｗｅｈｉ．ｅｄｕ．ａｕ／ｓｏｆｔｗａｒｅ／ｅｌｄａ／）を使用して、ＨＳＣの頻度及び統計的有意性を計算した。（Ｈｕ，Ｙ．＆Ｓｍｙｔｈ，Ｇ．Ｋ．ＥＬＤＡ：ｅｘｔｒｅｍｅｌｉｍｉｔｉｎｇｄｉｌｕｔｉｏｎａｎａｌｙｓｉｓｆｏｒｃｏｍｐａｒｉｎｇｄｅｐｌｅｔｅｄａｎｄｅｎｒｉｃｈｅｄｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓｉｎｓｔｅｍｃｅｌｌａｎｄｏｔｈｅｒａｓｓａｙｓ．ＪＩｍｍｕｎｏｌＭｅｔｈｏｄｓ３４７，７０－７８，ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｊｉｍ．２００９．０６．００８（２００９））。

血管透過性。以前に記載されたように、骨髄血管完全性を試験した。（Ｐｏｕｌｏｓ，Ｍ．Ｇ．ｅｔａｌ．“Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎｒｅｊｕｖｅｎａｔｅｓａｇｅｄｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌｆｕｎｃｔｉｏｎ．”Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．（２０１７）１２７：４１６４－７８．Ｄｏｉ：１０．１１７２／ｊｃｉ９３９４０）。要するに、ＰＢＳ（ｐＨ７．２）中の０．５％ｗ／ｖのＥｖａｎｓＢｌｕｅＤｙｅ（Ｓｉｇｍａ－ＡｌｄｒｉｃｈＥ２１２９）を、２５ｍｇ色素／ｋｇ総体重で尾静脈から注射した。注射の３時間後、マウスを頸椎脱臼により死亡させ、１０ｍＬのＰＢＳ（ｐＨ７．２）で心臓を灌流した。大腿骨を、乳鉢及び乳棒で６００μＬのホルムアミドと共に粉砕し、５５℃で一晩インキュベートした。抽出物を短時間ボルテックスし、１６，０００×ｇ、室温で５分間遠心分離した。上清を除去し、６２０ｎｍ及び７４０ｎｍで吸光度（Ａｂｓ）を測定した。試料Ａｂｓをヘム含有タンパク質に対して補正し［Ａｂｓ６２０－（１．４２６×Ａｂｓ₇₄₀＋０．０３）］、非注入対照を使用してブランクにした［補正試料Ａｂｓ６２０－補正された非注入対照Ａｂｓ６２０］。標準曲線を使用して、Ｅｖａｎ'ｓＢｌｕｅＤｙｅの血管外漏出を計算し、大腿骨重量に正規化した。

免疫組織化学。血管系を標識するために、マウスに２５μｇのＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ６４７コンジュゲートＣＤ１４４／ＶＥカドヘリン抗体（クローンＢＶ１３；Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）を眼窩後洞注射により静脈内投与した。注射の１０分後に、動物を死亡させ、１０ｍＬのＰＢＳ（ｐＨ７．２）で心臓を灌流した。大腿骨をＰＢＳ（ｐＨ７．２）中の４％のＰＦＡで一晩固定し、１０％のＥＤＴＡで、室温で７２時間脱灰させ、３０％のスクロースで４℃で、４８時間凍結保存し、５０％の最適切断温度（ＯＣＴ）及び５０％スクロースで包埋した。ＣＭ３０５０Ｓクライオスタット（Ｌｅｉｃａ）を使用して、縦方向の大腿骨切片（１２μｍ）を切断し、１μｇ／ｍＬの４－６，ジアミジノ－２－フェニルインドール（ＤＡＰＩ）（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）で対比染色し、ＰｒｏｌｏｎｇＧｏｌｄ退色防止溶液（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用してマウントした。切片を、ＬＳＭ７１０共焦点顕微鏡（Ｚｅｉｓｓ）でイメージングした。

ホールマウント免疫蛍光。マウスに、２５μｇのＡｌｅｘａＦｌｕｏｒコンジュゲートＣＤ１４４／ＶＥカドヘリン抗体（クローンＢＶ１３；Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）を眼窩後洞注射により静脈内投与した。１０分後、マウスを安楽死させ、４％のＰＦＡで心臓灌流し、この後、大腿骨を分離し、筋肉及び結合組織を剥ぎ取り、４％のＰＦＡで、室温で３０分間固定した。骨を１×ＰＢＳで３×５分間洗浄し、１５％のスクロースで、４℃で２４時間凍結保存し、さらに３０％のスクロースで、４℃で２４時間凍結保存した。次に、骨を５０％のＯＣＴ及び５０％のスクロース溶液に包埋し、液体窒素で瞬間冷凍した。抗体の浸透のために骨髄腔を完全に露出させるために、ＬｅｉｃａＣＭ３０５０Ｓクリオスタットで、骨を縦方向に剃った。剃った骨を外し、ＯＣＴが完全に溶けるまで、１×ＰＢＳで３×５分間洗浄した。光から保護されたブロッキング緩衝液［０．５％のＴｒｉｔｏｎＸ－１００を含有する１×ＰＢＳ中の２０％の正常ヤギ血清（ＪａｃｋｓｏｎＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）］中で、露出した骨を室温で２時間ブロックした。次に、１．５ｍＬのエッペンドルフマイクロ遠心チューブ中、４℃で４８時間浸漬インキュベーションすることにより、ブロッキング緩衝液で希釈された蛍光色素コンジュゲート一次抗体（表７を参照）で骨を染色した。骨を、１×ＰＢＳで３×１０分間洗浄した。ＮｉｋｏｎＣ２共焦点レーザー走査型顕微鏡で、４０μｍのＺスタック画像を取得した。ＨＳＣの免疫表現型をＬｉｎｅａｇｅ^negＣＤ４８^negＣＤ１５０^brightとして定義し、最も近い血管細胞（ＶＥ－カドヘリン／ＣＤ１４４＋）に対する距離を定量化のために測定した。

プロテオミクス分析
上述のように、ＳｏｍａＬｏｇｉｃｓ（Ｂｏｕｌｄｅｒ，ＣＯ）で、アプタマーベースのＳｏｍａＳｃａｎプラットフォームを使用して、血漿プロテオーム分析を実施した。（Ｇｏｌｄ，Ｌ．ｅｔａｌ．Ａｐｔａｍｅｒ－ｂａｓｅｄｍｕｌｔｉｐｌｅｘｅｄｐｒｏｔｅｏｍｉｃｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｆｏｒｂｉｏｍａｒｋｅｒｄｉｓｃｏｖｅｒｙ．ＰｌｏＳｏｎｅ５，ｅ１５００４，ｄｏｉ：１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｏｎｅ．００１５００４（２０１０）．）。血漿を生成するために、７５ｍｍのヘパリン化ガラス毛細管（Ｋｉｍｂｌｅ－Ｃｈａｓｅ）を使用して眼窩後洞を介してマウスから採血して、ＥＤＴＡ含有マイクロ遠心管に入れた（最終濃度５μＭ）。全血を２２００×ｇ、室温で１５分間遠心分離し、血漿を収集して－８０℃で保存した。ＳｏｍａＳｃａｎＡｓｓａｙ１．１Ｋプラットフォームを使用して、凍結保存されたマウス血漿ＥＤＴＡ試料を分析し、プロテオミクスデータは、相対蛍光単位（ＲＦＵ）として提示される。差次的に発現されたタンパク質を同定するために、ＳｏｍａＳｕｉｔｅソフトウェア（ＳｏｍａＬｏｇｉｃｓ）を使用して、有意性の閾値をＰ≦０．０７５に設定された両側スチューデントのｔ検定を実施した。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスで有意に強化される生物学的プロセスを特定するために、Ｉｎｇｅｎｕｉｔｙｐａｔｈｗａｙａｎａｌｙｓｉｓ（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して、データセット全体（ｐ値カットオフ≦０．０５）で、コア分析を実施した。（ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｑｉａｇｅｎｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ．ｃｏｍ／ｐｒｏｄｕｃｔｓ／ｉｎｇｅｎｕｉｔｙ－ｐａｔｈｗａｙ－ａｎａｌｙｓｉｓ／）。

レンチウイルス
製造者の提案に従って、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ１２５６６－０１４）を使用して、８０％コンフルエント状態の２９３Ｔ／１７細胞（ＡＴＣＣＣＲＬ－１１２６８）の１０ｃｍの皿上で、ＲＲＥ（５μｇ）、ＲＥＶ（２．５μｇ）、及びＶＳＶ－Ｇ（３μｇ）パッケージングプラスミドと、ｐＣＣＬ－ｍｙｒＡｋｔ１バックボーン（１３μｇ）（Ｋｏｂａｙａｓｈｉ，Ｈ．ｅｔａｌ．ＡｎｇｉｏｃｒｉｎｅｆａｃｔｏｒｓｆｒｏｍＡｋｔ－ａｃｔｉｖａｔｅｄｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓｂａｌａｎｃｅｓｅｌｆ－ｒｅｎｅｗａｌａｎｄｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｏｆｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌｓ．Ｎａｔｕｒｅｃｅｌｌｂｉｏｌｏｇｙ１２，１０４６－１０５６，ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｃｂ２１０８（２０１０）を参照）を同時トランスフェクトすることにより、ミリストイル化－Ａｋｔ１（ｍｙｒＡｋｔ１）レンチウイルスを生成した。トランスフェクションの４８時間後、製造者の提案に従って、Ｌｅｎｔｉ－Ｘコンセントレーター（ＣｌｏｎＴｅｃｈ６３１２３２）を使用して、上清を処理した。沈殿したｍｙｒＡｋｔ１レンチウイルスを、０．５ｍＬのＴＮＥ緩衝液（５０ｍＭのＴｒｉｓｐＨ８．０、１ｍＭのＥＤＴＡ、１３０ｍＭのＮａＣｌ）に再懸濁し、分注して、－８０℃で保存した。Ｌｅｎｔｉ－Ｘｐ２４ＲａｐｉｄＴｉｔｅｒＫｉｔ（ＣｌｏｎＴｅｃｈ６３２２００）を使用して、ウイルス力価を決定した。レンチウイルスベクターを発現するＩｋＢ－ＳＳを、ヒトＩκＢαスーパーサプレッサー（Ａｄｄｇｅｎｅ番号１５２６４）の配列をｐＬＶＸＰｕｒｏＶｅｃｔｏｒ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ番号６３２１６４）にサブクローニングすることにより生成した。前述の通り、２９３Ｔ細胞でｐＬＶＸ－ＰｕｒｏＩｋＢ－ＳＳベクターをＲＲＥ、ＲＥＶ、及びＶＳＶ－Ｇパッケージングプラスミドと同時トランスフェクトすることにより、ＩｋＢ－ＳＳレンチウイルスを生成した。ｐＬＶＸＰｕｒｏＶｅｃｔｏｒ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ番号６３２１６４）を利用して、「Ｐｕｒｏｅｍｐｔｙ」レンチウイルスを生成した。

内皮細胞培養：上述のように、一次骨髄内皮細胞（ＢＭＥＣ）培養を、Ｃｄｈ５（ＰＡＣ）－ｃｒｅＥＲＴ２；Ｍａｐｋｆｌ／ｆｌから生成した。（Ｐｏｕｌｏｓ，Ｍ．Ｇ．ｅｔａｌ．Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎｒｅｊｕｖｅｎａｔｅｓａｇｅｄｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌｆｕｎｃｔｉｏｎ．ＪＣｌｉｎＩｎｖｅｓｔ（２０１７）１２７，４１６３－４１７８，ｄｏｉ：１０．１１７２／ｊｃｉ９３９４０）。要約すると、大腿骨及び脛骨を乳鉢及び乳棒を使用して穏やかに粉砕し、消化緩衝液を用いて、３７℃で１５分間消化させ、濾過（４０μｍ；Ｃｏｒｎｉｎｇ３５２３４０）し、ＭＡＣＳ緩衝液で洗浄した。製造者の推奨に従って、マウスＬｉｎｅａｇｅＣｅｌｌＤｅｐｌｅｔｉｏｎＫｉｔ（ＭｉｌｔｅｎｙｉＢｉｏｔｅｃ１３０－０９０－８５８）を使用して、ＷＢＭから最終分化した造血細胞を枯渇させた。製造者の提案に従って、ＭＡＣＳ緩衝液中のＣＤ３１抗体（ＭＥＣ１３．３；Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）で事前に捕捉されたヒツジ抗ラットＩｇＧＤｙｎａｂｅａｄｓ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ１１０３５）を使用して、ＢＭ内皮を細胞懸濁液から免疫精製した。ＣＤ３１で選択されたＢＭＥＣを、内皮増殖培地で培養し、３×１０⁴ＥＣ／ｃｍ²当たり１０４ｐｇのｍｙｒＡｋｔ１レンチウイルスで形質導入した。Ａｋｔで形質導入されたＢＭＥＣを、血清及びサイトカイン不含ＳｔｅｍＳｐａｎＳＦＥＭ（ＳｔｅｍＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓＩｎｃ．０９６５０）培地で７日間選択した。ＶＥＣＡＤ（ＢＶ１３；Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、ＣＤ３１（３９０；Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、及びＣＤ４５（３０－Ｆ１１；Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）としても知られるカドヘレイン（ｃａｄｈｅｒｅｉｎ）５に対する抗体で、ＢＭＥＣ株を染色し、純度（ＣＤ４５－ＣＤ３１＋ＶＥカドヘリン＋として定義されたＢＭＥＣ）でＦＡＣＳ選別した。確立されたＢＭＥＣ株をＧＦＰレンチウイルス（対照ＢＭＥＣ）またはＧＦＰ－Ｃｒｅレンチウイルス（ＣＤＨ５－ＭＡＰＫＢＭＥＣ）のいずれかで形質導入し、得られたＧＦＰ＋細胞を純度でＦＡＣＳ選別した。続いて、対照及びＣＤＨ５－ＭＡＰＫＢＭＥＣを、Ｐｕｒｏ－ｅｍｐｔｙまたはＰｕｒｏ－ＩＫＢ－ＳＳレンチウイルスのいずれかで形質導入して、それぞれ、対照、ＩｋＢ、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫ、及びＣＤＨ５－ＭＡＰＫ：：ＩｋＢ細胞株を生成した。形質導入された細胞株を、２μｇ／ｍＬのピューロマイシンで５日間選択した。細胞を内皮増殖培地で、３７℃、５％のＣＯ₂、及び２０％のＯ₂、相対湿度７０％で培養した。成長培地を２日毎に交換し、製造者の提案に従って、ＡｃｃｕｔａｓｅＣｅｌｌＤｅｔａｃｈｍｅｎｔＳｏｌｕｔｉｏｎ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ４２３２０１）を用いて、細胞を９５％のコンフルエンシーで１：２で継代した。

イムノブロット
細胞溶解物を調製する前、３６時間前にわたって、確立されたＢＭＥＣ株を、低グルコースＤＭＥＭで血清飢餓状態にした。培養細胞を氷冷ＰＢＳ（ｐＨ７．２）で洗浄し、ＰｈｏｓＳｔｏｐホスファターゼ阻害剤（Ｒｏｃｈｅ０４９０６８４５００１）及び完全ＥＤＴＡ不含プロテアーゼ阻害剤カクテル（Ｒｏｃｈｅ１１８３６１７０００１）を含むＲＩＰＡ緩衝液（１５０ｍＭのＮａＣｌ、１％のＩＧＥＰＡＬＣＡ－６３０、０．５％のデオキシコラート、０．１％のドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）、及び５０ｍＭのＴｒｉｓＨＣｌ、ｐＨ８．０）で、４℃で２０分間に溶解させ、超音波処理し、４℃で２１，０００×ｇで１０分間遠心分離して、不溶性の破片を除去した。上清を－８０℃で保存した。ＤＣプロテインアッセイ（ＢｉｏＲａｄ５０００１１１）を使用して、タンパク質濃度を決定し、５μｇの総タンパク質を、Ｌａｅｍｍｌｉ緩衝液で、９５℃で３分間変性させ、１２．５％のＳＤＳ－アクリルアミドゲルで分離し、ニトロセルロースにエレクトロブロッティングした。０．０５％のＩＧＥＰＡＬＣＡ－６３０（Ｓｉｇｍａ－ＡｌｄｒｉｃｈＩ８８９６）を含むＰＢＳ（ｐＨ７．２）中の５％の無脂肪ドライミルク中で、転写されたブロットを１時間ブロックし、１：１０００のホスホ－ｐ６５（Ｓｅｒ５３６）に対して作成された一次抗体（ＣｅｌｌＳｉｇｎａｌｉｎｇ３０３３）、１：１０００のｐ６５に対して作成された一次抗体（ＣｅｌｌＳｉｇｎａｌｉｎｇ４７６４）、１：２０００のホスホ－ＥＲＫ１／２（Ｔｈｒ２０２／Ｔｙｒ２０４）に対して作成された一次抗体（ＣｅｌｌＳｉｇｎａｌｉｎｇ４３７０）、１：１０００のＥＲＫ１／２に対して作成された一次抗体（ＣｅｌｌＳｉｇｎａｌｉｎｇ９１０２）、１：１０００の総ＩκＢαに対して作成された一次抗体（ＣｅｌｌＳｉｇｎａｌｉｎｇ４８１４）、及び１：１０００のＴｕｂｕｌｉｎに対して作成された一次抗体（ＣｅｌｌＳｉｇｎａｌｉｎｇ２１４６）を含む、０．０５％のＩＧＥＰＡＬＣＡ－６３０を含むＰＢＳ（ｐＨ７．２）中の５％の無脂肪ドライミルク中、４℃で一晩インキュベートした。ブロットを０．０５％のＩＧＥＰＡＬＣＡ－６３０を含むＰＢＳ（ｐＨ７．２）で、室温で３×１０分間洗浄し、０．０５％のＩＧＥＰＡＬＣＡ－６３０及び１：１０，０００希釈の抗ウサギまたは抗マウスＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＪａｃｋｓｏｎＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）二次抗体を含むＰＢＳ（ｐＨ７．２）中の５％の無脂肪ドライミルク中、室温で１時間インキュベートした。製造者の提案に従って、０．０５％のＩＧＥＰＡＬＣＡ－６３０を含むＰＢＳ（ｐＨ７．２）で、室温で３×１０分間ブロットを洗浄し、ＡｍｅｒｓｈａｍＥＣＬプライムウエスタンブロッティング検出試薬（ＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅＲＰＮ２２３２）を使用して展開した。ＣａｒｅｓｔｒｅａｍＫｏｄａｋＢｉｏＭａｘＬｉｇｈｔＦｉｌｍ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）を使用して、全てのブロットを展開した。

核ｐ６５の定量化：ＲｅｌＡとしても既知のｐ６５は、ＮＦ－κＢ（活性化Ｂ細胞の核因子カッパ－軽鎖エンハンサー）転写因子ファミリーを形成する５つの構成要素の１つである。核ｐ６５の評価のために、ＢＭＥＣをチャンバースライド（ＮｕｎｃＬａｂ－ＴｅｋＩＩＣＣ²チャンバースライド；カタログ番号１５４９４１）の内皮成長培地にプレーティングした。約７０％のコンフルエンシーで、細胞を低グルコースＤＭＥＭで３６時間血清飢餓状態にし、この後、細胞をＰＢＳ（ｐＨ７．２）で洗浄し、ＰＢＳ（ｐＨ７．２）中の４％のＰＦＡで、室温で１５分間固定した。次に、細胞を、ＰＢＳ（ｐＨ７．２）中の１％のＴｒｉｔｏｎＸ－１００を含有する５％の正常ヤギ血清で３０分間透過処理した。次に、抗体希釈緩衝液（１％ＢＳＡを含むＰＢＳ中の１％Ｔｒｉｔｏｎ（商標）Ｘ－１００）中のｐ６５抗体（Ｃ２２Ｂ４；ＣｅｌｌＳｉｇｎａｌｉｎｇ、１：１００希釈）で、細胞を室温で１時間染色した。細胞をＰＢＳで３回洗浄し、抗体希釈緩衝液中のヤギ抗ウサギＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ６４７（ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ番号Ａ－２１２４５、１：２５０希釈）を用いて室温で３０分間染色した。細胞をＰＢＳで３回洗浄し、１μｇ／ｍＬのＤＡＰＩで対比染色し、ＰｒｏｌｏｎｇＧｏｌｄ退色防止溶液（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用してマウントした。核ｐ６５レベルに対するＳＣＧＦの効果を決定するために、０．４μｇ／ｍＬのＳＣＧＦ（またはビヒクル対照）と共に、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスに由来するＢＭＥＣを低グルコースＤＭＥＭで３６時間インキュベートした。濃度が一致したアイソタイプ対照抗体（ＣｅｌｌＳｉｇｎａｌｉｎｇ番号３９００）を使用して、バックグラウンド蛍光を確立した。ＮｉｋｏｎＣ２共焦点レーザー走査型顕微鏡で、画像を取得した。上述のようにＩｍａｇｅＪを使用して、核ｐ６５レベルを定量した。（Ｗｅｓｓｅｌ，Ａ．Ｗ．＆Ｈａｎｓｏｎ，Ｅ．Ｐ．Ａｍｅｔｈｏｄｆｏｒｔｈｅｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅａｎａｌｙｓｉｓｏｆｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ－ｉｎｄｕｃｅｄ９８８ｎｕｃｌｅａｒｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｐ６５ｓｕｂｕｎｉｔｏｆＮＦ－ｋａｐｐａＢｆｒｏｍｐａｔｉｅｎｔ－ｄｅｒｉｖｅｄｄｅｒｍａｌｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ．９８９ＭｅｔｈｏｄｓＭｏｌＢｉｏｌ１２８０，４１３－４２６，ｄｏｉ：１０．１００７／９７８－１－４９３９－２４２２－６＿２５（２０１５）．９９０）。

遺伝子発現解析：ＭＡＣＳ緩衝液を含む２６Ｇ×１／２針を使用して、大腿骨及び脛骨からＷＢＭをフラッシュし、製造者の推奨に従って、１×ＲＢＣ溶解緩衝液（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ４２０３０１）を使用して、赤血球を枯渇させた。製造者の指示に従って、ＲＮｅａｓｙｐｌｕｓＭｉｎｉＫｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ７４１３４）を使用して、４×１０⁶のＲＢＣ溶解ＷＢＭ細胞から全ＲＮＡを分離した。要約すると、細胞を、６００μＬの緩衝液ＲＬＴで溶解させ、ＱＩＡｓｈｒｅｄｄｅｒカラム（Ｑｉａｇｅｎ７９６５４）を使用してホモジナイズした。ＣＤ４５細胞、間質細胞、Ｌｅｐｒ＋細胞、及び骨芽細胞からＲＮＡを分離するために、ＦＡＣＳを使用して、細胞をＴｒｉｚｏｌＬＳに直接選別し、製造者の推奨を使用して、ＲＮＡを精製した。間質細胞、Ｌｅｐｒ＋細胞、及び骨芽細胞について、試料当たり１００，０００のＣＤ４５＋細胞、及び試料当たり１０００の細胞から、ＲＮＡを単離した。ＷＢＭ及びＣＤ４５細胞の場合、ＲＴ２ＦｉｒｓｔＳｔｒａｎｄＫｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ３３０４０１）を使用して、総ＲＮＡを逆転写した。続いて、１００ｎｇの総ＲＮＡから生成されたｃＤＮＡを、ＲＴ２ＰＣＲプロファイラーアレイにロードし、ＮＦ－ｋＢシグナル伝達標的（ＱｉａｇｅｎＰＡＭＭ－２２５ＺＣ）の遺伝子発現を評価した。間質細胞、Ｌｅｐｒ＋細胞、及び骨芽細胞の場合、製造者が提案するプロトコルに従って、ＯｖａｔｉｏｎＰｉｃｏＷＴＡＳｙｓｔｅｍＶ２（Ｎｕｇｅｎ）を使用して、ｃＤＮＡを生成及び増幅し、１００ｎｇの増幅ｃＤＮＡを、ｑＰＣＲアレイに利用した。推奨されるサイクリングパラメーターを用いるＶｉｉＡ７ｑＰＣＲシステム（ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）で、ＲＴ２ＳＹＢＲＧｒｅｅｎｑＰＣＲＭａｓｔｅｒｍｉｘ（Ｑｉａｇｅｎ３３０５２２）を使用して、ｑＰＣＲを実施した。Ｑｉａｇｅｎのオンラインデータ分析ツールを利用して、倍率変化を計算し、教師なし階層的クラスタリング及び遺伝子発現ヒートマップを生成した（ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｑｉａｇｅｎ．ｃｏｍ／ｉｎ／ｓｈｏｐ／ｇｅｎｅｓ－ａｎｄ－ｐａｔｈｗａｙｓ／ｄａｔａａｎａｌｙｓｉｓ－ｃｅｎｔｅｒ－ｏｖｅｒｖｉｅｗ－ｐａｇｅ／）。各条件に対して最も安定した参照遺伝子を選択する、Ｑｉａｇｅｎオンラインツールの「ハウスキーピング遺伝子の自動選択」を使用して、正規化のための参照遺伝子を、５つのハウスキーピング遺伝子（Ａｃｔｂ、Ｂ２ｍ、Ｇａｐｄｈ、Ｇｕｓｂ、及びＨｓｐ９０ａ１ｂ）の図から選択した。２^-ΔΔCT法を使用して、倍率変化を計算した。Ｑｉａｇｅｎから入手したプライマー（カタログ番号ＰＰＭ０３１０９Ｆ－２００及びＰＰＭ０３１１６Ｃ－２００）を使用したＲＴ－ｑＰＣＲにより、Ｉｌ１ｂ及びＣｓｆ１の発現の確認を実施した。造血細胞におけるｃｒｅ及びＩｋＢ－ＳＳ導入遺伝子の発現を評価するために、試料当たり１００，０００のＣＤ４５＋細胞からＲＮＡを単離した。ＲＴ２ＦｉｒｓｔＳｔｒａｎｄＫｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ３３０４０１）を使用して、総ＲＮＡを逆転写した。２０００細胞のＲＮＡ含有量に相当するｃＤＮＡを、ＲＴ－ＰＣＲ分析に利用した。ｃｒｅ及びＩｋＢ－ＳＳ発現のＲＴＰＣＲ分析のプライマー（図６）は、次の通りである：

末梢造血回復：骨髄抑制損傷後の造血回復を評価するために、マウスに、１３７^Cs源からの亜致死的照射（６５０Ｒａｄ）を照射した。７５ｍｍのヘパリン処理されたガラス毛細血管（Ｋｉｍｂｌｅ－Ｃｈａｓｅ）を使用して、示された時点で眼窩後洞出血を介して末梢血を収集した。Ａｄｖｉａ１２０（ＢａｙｅｒＨｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して、ＷＢＣ、ＲＢＣ、及び血小板の集団を分析した。

活性酸素種の推定：活性酸素種（ＲＯＳ）を調べるために、眼窩後方注射により、２５μｇのＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ６４７コンジュゲートＣＤ１４４／ＶＥ－カドヘリン抗体（ＢＶ１３；Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）で、マウスを１０分間生体内標識した。マウスを安楽死させ、大腿骨をフラッシュするか（ＨＳＰＣ分析の場合）、または穏やかに撹拌しながら３７℃で１５分間、消化緩衝液で穏やかに粉砕して酵素的に分離した（ＢＭＥＣ及び間質細胞分析の場合）。細胞懸濁液を濾過し（４０μｍ）、ＭＡＣＳ緩衝液で洗浄し、続いて、示された抗体を使用して、４℃で２０分間表面染色した。染色された細胞懸濁液を、ＭＡＣＳ緩衝液で洗浄し、次に、ＳｔｅｍｓｐａｎＳＦＥＭ（ＳｔｅｍＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中の５μＭのＣｅｌｌＲＯＸＯｒａｎｇｅ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）と共に３７℃で３０分間インキュベートし、ＭＡＣＳ緩衝液で洗浄し、２ｍＭのＥＤＴＡを含有するＰＢＳに再懸濁した。フローサイトメトリーを使用して、示された細胞型のＲＯＳレベルを推定した。

Ｈｙｐｏｘｙｐｒｏｂｅ。骨髄の酸素化状態を評価するために、マウスに、１００ｍｇ／ｋｇのピモニダゾールＨＣｌ（Ｈｙｐｏｘｙｐｒｏｂｅ－１；Ｈｙｐｏｘｙｐｒｏｂｅ，Ｉｎｃ．）及び２５μｇのＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ６４７コンジュゲートＣＤ１４４／ＶＥ－カドヘリン（ＢＶ１３；Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）を、後眼窩注射を介して共に注射した。２０分後、マウスを安楽死させ、大腿骨を単離した。穏やかに撹拌しながら３７℃で１５分間、大腿骨をフラッシュするか（ＨＳＰＣ分析の場合）、または消化緩衝液で穏やかに粉砕して酵素的に分離した（ＢＭＥＣ及び間質細胞の分析の場合）。製造者の提案に従って、表面染色後、ＢＤＣｙｔｏｆｉｘ／ＣｙｔｏｐｅｒｍＫｉｔ（ＢＤＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して、細胞を固定及び透過処理し、Ｈｙｐｏｘｙｐｒｏｂｅ－１に対して１：１００希釈で生じたモノクローナル抗体（ＨＰ－Ｒｅｄ５４９；Ｈｙｐｏｘｙｐｒｏｂｅ，Ｉｎｃ．）で染色した。フローサイトメトリーを使用して、示された細胞型のＨｙｐｏｘｙｐｒｏｂｅレベルを推定した。

細胞周期及びアポトーシス。ＢＭＥＣ、間質細胞、及びＨＳＰＣの細胞周期分析では、製造者の推奨に従って、上述のセクションで説明したように、ＢＤＣｙｔｏｆｉｘ／ＣｙｔｏｐｅｒｍＫｉｔ（ＢＤＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して、細胞を表面染色、固定、及び透過処理し、この後、Ｋｉ６７（Ｂ５６、ＢＤ５６１２８４）に対して作成された抗体で細胞を染色し、Ｈｏｅｃｈｓｔ３３３４２（ＢＤＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で対比染色した。ＨＳＣの細胞周期分析では、表面染色の前に、ｌｉｎｅａｇｅ－ｃｅｌｌｄｅｐｌｅｔｉｏｎｋｉｔ（ＭｉｌｔｅｎｙｉＢｉｏｔｅｃ番号１３０－１１０－４７０）を使用して、ＷＢＭ細胞から系列陽性細胞を最初に枯渇させた。低い取得率（３５０イベント／秒）のフローサイトメトリーを使用して、細胞を分析した。細胞周期の状態を、次の通り分類した：Ｇ０（Ｋｉ－６７陰性；２ＮのＤＮＡ含有量）、Ｇ１（Ｋｉ－６７＋；２ＮのＤＮＡ含有量）、及びＳ／Ｇ２／Ｍ（Ｋｉ－６７＋；＞２ＮのＤＮＡ含有量）。Ｓｕｂ－Ｇ０／Ｇ１領域の一重項細胞の割合は、アポトーシスとして分類された。

血漿ＥＬＩＳＡ。アプタマーベースのサンドイッチＥＬＩＳＡの場合、製造者の推奨に従って、ストレプトアビジンでコーティングした９６ウェルプレート（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ１５１２４）を、ＳＢＴ緩衝液（４０ｍＭのＨＥＰＥＳｐＨ７．５、１２０ｍＭのＮａＣｌ、５ｍＭのＫＣｌ、５ｍＭのＭｇＣｌ２、及び０．０５％のＴｗｅｅｎ２０）中の２０ｎＭのビオチン化αＣｌｅｃ１１ａアプタマー（ＳｏｍａＬｏｇｉｃｓ；Ｂｏｕｌｄｅｒ，ＣＯ）と共に、４℃で一晩インキュベートした。プレートをＳＢＴ緩衝液で３回洗浄し、ＳＢＴ緩衝液中の１００μＭのビオチン（Ｓｉｇｍａ－ＡｌｄｒｉｃｈＢ４５０１）を用いて、室温で１０分間ブロックした。プレートを１００ＲＰＭで１分間、ＳＢＴ緩衝液で３回洗浄し、ＳＢＴ緩衝液中の３％のＢＳＡを用いて、室温で３０分間ブロックした。プレートを１００ＲＰＭで１分間、ＳＢＴ緩衝液で３回洗浄した。マウス血漿生物学的複製物をＳＢＴ緩衝液で１：８０に希釈し（社内で決定された最適な血漿希釈範囲）、４５０ＲＰＭ、３７℃で２時間インキュベートした。ＳＢＴのみを使用して、バックグラウンドシグナルを決定した。次に、ＴＢＳＴ緩衝液（Ｔｒｉｓ－ＨＣｌｐＨ７．６、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．０５％のＴｗｅｅｎ－２０）で、プレートを１００ＲＰＭで１分間３回洗浄し、ＴＢＳＴ緩衝液中の３％ＢＳＡ中の１μｇ／ｍＬのαＣｌｅｃ１１ａポリクローナル抗体（Ｒ＆ＤＳｙｓｔｅｍｓＡＦ３７２９）共に、４５０ＲＰＭ、室温で１時間インキュベートした。ＴＢＳＴ緩衝液で、プレートを１００ＲＰＭで１分間、３回洗浄し、ＴＢＳＴ緩衝液（社内で決定された最適な二次抗体希釈範囲）中、３％のＢＳＡ中の８ｎｇ／ｍＬのペルオキシダーゼコンジュゲートロバ－αヤギ二次抗体（ＪａｃｋｓｏｎＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ７０５－０３５－１４７）と共に４５０ＲＰＭ、室温で３０分間インキュベートした。プレートを、ＴＢＳＴ緩衝液中、１００ＲＰＭで１分間、３回洗浄し、１－ＳｔｅｐＵｌｔｒａＴＭＢ基質（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ３４０２８）で、室温で１２分間インキュベートした。硫酸を最終濃度１Ｍになるように添加して、反応を止させ、４５０ｎｍで吸光度を読み取った。

直接ＥＬＩＳＡを、前述のプロトコルから採用した。（Ｙｕｅ，Ｒ．，Ｓｈｅｎ，Ｂ．＆Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｓ．Ｊ．Ｃｌｅｃ１１ａ／ｏｓｔｅｏｌｅｃｔｉｎｉｓａｎｏｓｔｅｏｇｅｎｉｃｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｔｈａｔｐｒｏｍｏｔｅｓｔｈｅｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅｏｆｔｈｅａｄｕｌｔｓｋｅｌｅｔｏｎ．Ｅｌｉｆｅ５，ｄｏｉ：１０．７５５４／ｅＬｉｆｅ．１８７８２（２０１６））。マウス血漿を、ＰＢＳ（ｐＨ７．２）で１：５０に希釈し（最大の信号対雑音比を達成するために、社内で決定された最適な血漿希釈範囲）、Ｃｏｒｎｉｎｇ１×８Ｓｔｒｉｐｗｅｌｌ９６ウェルプレート（Ｓｉｇｍａ－ＡｌｄｒｉｃｈＣＬＳ２５９２）にコーティングし、４℃で一晩インキュベートした。ＰＢＳ（ｐＨ７．２）のみを使用して、バックグラウンドシグナルを測定した。プレートを、０．０１％のＴｗｅｅｎ－２０を含むＰＢＳ（ｐＨ７．２）で３回洗浄し、ＥＬＩＳＡＢｌｏｃｋｅｒブロッキング緩衝液（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＮ５０２）を使用して、室温で２時間ブロックした。０．０１％のＴｗｅｅｎ－２０を含むＰＢＳ（ｐＨ７．２）で、プレートを３回洗浄し、０．０１％のＴｗｅｅｎ－２０を含むＰＢＳ（ｐＨ７．２）中の１μｇ／ｍＬのαＣｌｅｃ１１ａポリクローナル抗体（Ｒ＆ＤＳｙｓｔｅｍｓＡＦ３７２９）と共に室温で２時間インキュベートした。一次抗体のインキュベーション後、プレートを、０．０１％のＴｗｅｅｎ－２０を含むＰＢＳ（ｐＨ７．２）で３回洗浄し、０．０１％のＴｗｅｅｎ－２０を含むＰＢＳ（ｐＨ７．２）中の８ｎｇ／ｍＬのペルオキシダーゼコンジュゲートロバ－αヤギ二次抗体（ＪａｃｋｓｏｎＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ７０５－０３５－１４７）（社内で決定された最適な二次抗体希釈範囲）と共に室温で１時間インキュベートした。次に、プレートを０．０１％のＴｗｅｅｎ－２０を含むＰＢＳ（ｐＨ７．２）で３回洗浄し、１－ＳｔｅｐＵｌｔｒａＴＭＢ基質（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ３４０２８）中、室温で１２分間インキュベートした。硫酸を最終濃度１Ｍになるように添加して、反応を止させ、４５０ｎｍで吸光度を読み取った。組み換えマウスＣｌｅｃ１１ａタンパク質（Ｒ＆ＤＳｙｓｔｅｍｓ３７２９－ＳＣ／ＣＦ）を使用して、標準曲線を確立し、タンパク質濃度を決定した。

Ｃｌｅｃ１１ａ／ＳＣＧＦ注入
組み換えマウスＣｌｅｃ１１ａ（ＳＣＧＦ）タンパク質（Ｒ＆ＤＳｙｓｔｅｍｓ３７２９－ＳＣ／ＣＦ）を、ＰＢＳ（ｐＨ７．２）に再懸濁して１００μｇ／ｍＬにし、使い捨てアリコートとして－８０℃で保存した。定常状態の分析では、ＰＢＳ（ｐＨ７．２）中の４μｇのＳＣＧＦまたはＰＢＳのみのいずれか１００μＬを、分析前に５日間連続して皮下注射した。定常状態の動物における総ＳＣＧＦタンパク質投与は、以前の報告から適応された。⁶³再生分析のために、ＰＢＳ（ｐＨ７．２）中の２μｇのＳＣＧＦまたはＰＢＳのみのいずれか１００μＬをＴＢＩ後１、３、５、７、９、１１、及び１３日目に皮下注射した（６５０Ｒａｄ）。用量応答実験により、骨髄抑制損傷後のＳＣＧＦ投与を決定した（補足図１０）。

μＣＴ分析では、大腿骨を分離し、４％のＰＦＡで、４℃で２４時間固定し、７０％のエタノールで４℃にて保存した。等方性ボクセルサイズ７μｍのＳｃａｎｃｏＭｅｄｉｃａｌ μＣＴ３５システムを使用して、遠位大腿骨をイメージングした。スキャンは、５５ｋＶｐのＸ線管電位、０．１４５ｍＡのＸ線強度、及び６００ｍｓの積分時間を使用した。骨小柱分析では、成長板の近位２８０μｍから始まる上部２．１ｍｍの領域の輪郭を描いた。皮質骨の分析では、中軸を中心とした長さ０．６ｍｍの領域を使用した。骨小柱及び皮質骨は、ｍｇＨＡ／ｃｍ³当たりそれぞれ２１１及び３５０で閾値を決定された。２値化された画像の距離変換に基づく方法により輪郭を描かれた２Ｄ画像から３Ｄ画像が取得された。

定量化及び統計分析
マウス造血パラメーターの表現型及び機能分析の試料サイズを、以前の実験で観察された分散及び効果サイズの以前の推定に基づいて決定した。検出力８０％で有意性の閾値（α）を０．０５に設定して、平均の２倍の変化を検出する能力に基づいて、必要な動物の数を計算した。少なくとも２つの独立したマウスのコホートで、全ての実験結果を確認した。原稿に示されるデータは、独立した実験からプールされたデータを表す。両側スチューデントのｔ検定を使用して、２群間の統計的比較を実施した。テューキー補正を用いた一元ＡＮＯＶＡ分析を使用して、複数の比較を行った。別途記載のない限り、データは、平均の±平均の標準誤差（ＳＥＭ）として提示される。統計的有意性は、＊（ｐ＜０．０５）、＊＊（ｐ＜０．０１）、＊＊＊（ｐ＜０．００１）、及びｎ．ｓ．（有意ではない）として示される。Ｐｒｉｓｍ６（ＧｒａｐｈＰａｄＳｏｆｔｗａｒｅ）を使用して、統計分析を実施した。ＥｘｔｒｅｍｅＬｉｍｉｔｉｎｇＤｉｌｕｔｉｏｎＡｎａｌｙｓｉｓ（ＥＬＤＡ）ソフトウェア（ｈｔｔｐ：／／ｂｉｏｉｎｆ．ｗｅｈｉ．ｅｄｕ．ａｕ／ｓｏｆｔｗａｒｅ／ｅｌｄａ／）を使用して、ＨＳＣ頻度及び９５％信頼区間を決定した。（Ｈｕ，Ｙ．＆Ｓｍｙｔｈ，Ｇ．Ｋ．ＥＬＤＡ：ｅｘｔｒｅｍｅｌｉｍｉｔｉｎｇｄｉｌｕｔｉｏｎａｎａｌｙｓｉｓｆｏｒｃｏｍｐａｒｉｎｇｄｅｐｌｅｔｅｄａｎｄｅｎｒｉｃｈｅｄｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓｉｎｓｔｅｍｃｅｌｌａｎｄｏｔｈｅｒａｓｓａｙｓ．ＪＩｍｍｕｎｏｌＭｅｔｈｏｄｓ３４７，７０－７８，ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｊｉｍ．２００９．０６．００８（２００９））。

結果
内皮ＭＡＰＫ活性化は、ＨＳＣ機能及び造血を損なう。内皮ＭＡＰＫ活性化がＨＳＣ活性及び造血に影響を与えるかどうかを判定するために、ＭＡＰＫシグナル伝達が成体内皮細胞において特異的に構成的に活性化されるマウスモデルを作成した。Ｒｏｓａ２６Ｓｔｏｐ／ＦｌｏｘｅｄＭＥＫ１ＤＤカセット（ＥＲＫ－ＭＡＰＫシグナル伝達を構成的に活性化する誘導性Ｓ２１８Ｄ／Ｓ２２２ＤＭＡＰＫＫ１変異体）を保有するマウスを、成体内皮特異的ＶＥカドヘリンプロモーター（Ｃｄｈ５（ＰＡＣ）－ｃｒｅＥＲＴ２）の制御下で、タモキシフェン誘導性ｃｒｅトランスジェニックマウスと交配させて、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスを生成した。内皮細胞のＭＡＰＫシグナル伝達を活性化するために、６～１０週齢のオス及びメスマウスを、タモキシフェンを含浸させた飼料（２５０ｍｇ／ｋｇ）で４週間維持し、実験分析の前に４週間回復させた。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスは、同腹仔対照と比較して、骨髄細胞性の有意な低下及び、免疫表現型で定義されたＨＳＣ（ｃＫＩＴ＋ＬｉｎｅａｇｅＮｅｇＣＤ４１－ＳＣＡ１＋ＣＤ１５０＋ＣＤ４８Ｎｅｇとして定義）、ならびに造血幹細胞及び前駆細胞（ＨＳＰＣ）、例えば、ＫＬＳ細胞（ｃＫＩＴ＋ＬｉｎｅａｇｅＮｅｇＳＣＡ１＋）、多能性前駆細胞（ＭＰＰ；ｃＫＩＴ＋ＬｉｎｅａｇｅＮｅｇＳＣＡ１＋ＣＤ１５０ＮｅｇＣＤ４８Ｎｅｇ）及び造血前駆細胞サブセット（それぞれ、ｃＫＩＴ＋ＬｉｎｅａｇｅＮｅｇＳＣＡ１＋ＣＤ１５０ＮｅｇＣＤ４８＋及びｃＫＩＴ＋Ｌｉｎｅａｇｅ^NegＳＣＡ１＋ＣＤ１５０＋ＣＤ４８＋として定義されたＨＰＣ－１及びＨＰＣ－２）の頻度及び絶対数の有意な低下を示した（図１Ａ～ｄ、補足図１Ａ）。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスにおける表現型ＨＳＰＣの頻度の低下は、メチルセルロースベースのコロニーアッセイによる前駆細胞活性の機能的喪失として現れた（図１ｅ）。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウス由来のＢＭ細胞が、長期生着能及び著しい骨髄バイアス末梢血産物の低下を示したことが、競合的ＢＭ移植により明らかになった（図１ｆ、ｇ）。さらに、限界希釈移植アッセイでは、内皮ＭＡＰＫ活性化が、対照マウスと比較してＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスにおいて安定した（＞４ヶ月；＞１％のＣＤ４５．２生着）多系列生着を生じさせることができる真正の長期ＨＳＣ（ＬＴ－ＨＳＣ）の頻度を大幅に低減させることが確認された（図１ｈ、ｉ）。細胞周期分析では、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウス由来のＨＳＣ及びＨＳＰＣが、同腹仔対照と比較して静止状態の喪失及びアポトーシスの増加を示したことが示された（図１ｊ、ｋ、補足図１Ｂ～ｆ）。総合すると、これらのデータは、内皮ＭＡＰＫの慢性的な活性化が、ニッチ活性に悪影響を及ぼし、これにより、定常状態の造血及びＨＳＣ機能の欠陥がもたらされることを示唆する。

内皮ＭＡＰＫは、ＮＦ－ｋＢ依存性炎症性ストレス応答を引き起こす。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスで観察された造血障害は、構成的ＭＡＰＫ活性化がＢＭ内皮ニッチの完全性に影響を与える可能性が高いことを示唆する。ＢＭの免疫蛍光分析では、ＭＡＰＫの活性化が血管拡張の増加を含む内皮ネットワークの破壊につながったことが確認された（図２ａ）。修正されたＥｖａｎ‘ｓＢｌｕｅアッセイによる血管完全性の分析では、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスが、血管完全性の喪失を示す、ＢＭ血管漏出の有意な増加を発現することが明らかになった（図２ｂ～ｄ）。特に、血管拡張の増加及び漏出の増加は、炎症性ストレスの特質である³⁰。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの血漿プロテオーム分析では、ｓＩＣＡＭ、ＶＣＡＭ、及びＩＬ１ｂを含む炎症性メディエーターのレベルの有意な増加が示された（図２ｅ及び補足表１）。差次的に発現されるタンパク質の創意工夫経路分析（ＩｎｇｅｎｕｉｔｙＰａｔｈｗａｙＡｎａｌｙｓｉｓ）では、『炎症性応答』がＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウス（ｐ値１．３×１０^-13、活性化ｚスコア２．３２）で最も有意に濃縮された疾患プロセスであり、この中で、『臓器の炎症』（ｐ値５．７×１０^-16、活性化ｚスコア０．２１）及び『絶対解剖学的起源の炎症』（ｐ値２．８×１０^-15、活性化ｚスコア０．８４）が最も影響を受けたプロセスであった（図２ｆ）ことが明らかになった。これにより、内皮ＭＡＰＫ活性化が炎症性ストレス応答につながることが示された。ＮＦ－κＢシグナル伝達は、炎症性応答を引き起こすことに中心的な役割を果たし、最近の報告は、内皮ＭＡＰＫの活性化が、標準的なＮＦ－κＢシグナル伝達の下流の活性化を介して炎症を引き起こし得ることを示す。（Ｓａｎｃｈｅｚ，Ａ．ｅｔａｌ．Ｍａｐ３ｋ８ｃｏｎｔｒｏｌｓｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅｃｏｌｏｎｙ－ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇｆａｃｔｏｒｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎａｎｄｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌｐｒｅｃｕｒｓｏｒｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｉｎｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ－ｉｎｄｕｃｅｄｅｍｅｒｇｅｎｃｙｇｒａｎｕｌｏｐｏｉｅｓｉｓ．ＳｃｉＲｅｐ７，５０１０，ｄｏｉ：１０．１０３８／ｓ４１５９８－０１７－０４５３８－３（２０１７）．；ＲｏｔｈＦｌａｃｈ，Ｒ．Ｊ．ｅｔａｌ．ＥｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅＭＡＰ４Ｋ４ｐｒｏｍｏｔｅｓｖａｓｃｕｌａｒｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎａｎｄａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ．ＮａｔＣｏｍｍｕｎ６，８９９５，ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｃｏｍｍｓ９９９５（２０１５）；Ｖａｎｄｏｏｒｎｅ，Ｋ．ｅｔａｌ．ＩｍａｇｉｎｇｔｈｅＶａｓｃｕｌａｒＢｏｎｅＭａｒｒｏｗＮｉｃｈｅＤｕｒｉｎｇＩｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙＳｔｒｅｓｓ．ＣｉｒｃＲｅｓ１２３，４１５－４２７，ｄｏｉ：１０．１１６１／ｃｉｒｃｒｅｓａｈａ．１１８．３１３３０２（２０１８）；Ｂａｋｅｒ，Ｒ．Ｇ．，Ｈａｙｄｅｎ，Ｍ．Ｓ．＆Ｇｈｏｓｈ，Ｓ．ＮＦ－ｋａｐｐａＢ，ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ，ａｎｄｍｅｔａｂｏｌｉｃｄｉｓｅａｓｅ．Ｃｅｌｌｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ１３，１１－２２，ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｃｍｅｔ．２０１０．１２．００８（２０１１）；Ｂｏｔｔｅｒｏ，Ｖ．，Ｗｉｔｈｏｆｆ，Ｓ．＆Ｖｅｒｍａ，Ｉ．Ｍ．ＮＦ－ｋａｐｐａＢａｎｄｔｈｅｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｓｉｓ．Ｃｅｌｌｄｅａｔｈａｎｄｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ１３，７８５－７９７，ｄｏｉ：１０．１０３８／ｓｊ．ｃｄｄ．４４０１８８８（２００６））。

この可能性を検証するために、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスのＢＭに由来する内皮のイムノブロット分析を実施し、これにより、ＭＥＫ１ＤＤ駆動形ＥＲＫ１／２リン酸化の増加が確認され（図２ｇ、ｈ）、ｐ６５リン酸化において、総ＩκＢαレベルに有意な変化がなく、適度であるが一貫した増加が明らかになった。これらの特徴は、ＮＦ－κＢシグナル伝達の持続的な活性化を示し、内因性フィードバック機序が、総ＩκＢαレベルの合成を増加させる（Ｂｒｏｗｎ，Ｋ．，Ｐａｒｋ，Ｓ．，Ｋａｎｎｏ，Ｔ．，Ｆｒａｎｚｏｓｏ，Ｇ．＆Ｓｉｅｂｅｎｌｉｓｔ，Ｕ．ＭｕｔｕａｌｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌａｃｔｉｖａｔｏｒＮＦ－ｋａｐｐａＢａｎｄｉｔｓｉｎｈｉｂｉｔｏｒ，ＩｋａｐｐａＢ－ａｌｐｈａ．ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ９０，２５３２－２５３６，ｄｏｉ：１０．１０７３／ｐｎａｓ．９０．６．２５３２（１９９３）；Ｗｕ，Ｃ．＆Ｇｈｏｓｈ，Ｓ．Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｓｉｇｎａｌ－ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅｄｏｍａｉｎｏｆＩｋａｐｐａＢａｌｐｈａａｎｄＩｋａｐｐａＢｂｅｔａｂｙＩｋａｐｐａＢｋｉｎａｓｅｓ．ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ２７８，３１９８０－３１９８７，９８３ｄｏｉ：１０．１０７４／ｊｂｃ．Ｍ３０４２７８２００（２００３）；Ｙａｎｇ，Ｆ．，Ｔａｎｇ，Ｅ．，Ｇｕａｎ，Ｋ．＆Ｗａｎｇ，Ｃ．Ｙ．ＩＫＫｂｅｔａｐｌａｙｓａｎｅｓｓｅｎｔｉａｌｒｏｌｅｉｎｔｈｅｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎｏｆＲｅｌＡ／ｐ６５ｏｎｓｅｒｉｎｅ５３６ｉｎｄｕｃｅｄｂｙｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ．ＪＩｍｍｕｎｏｌ１７０，５６３０－５６３５，ｄｏｉ：１０．４０４９／ｊｉｍｍｕｎｏｌ．１７０．１１．５６３０（２００３））。免疫蛍光分析によるｐ６５核転座の定量化では、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの内皮内の核ｐ６５の増加が示された。これにより、内皮ＭＡＰＫ活性化の下流のＮＦ－κＢシグナル伝達の活性化が確認された（図２ｉ、ｊ）。（Ｗｅｓｓｅｌ，Ａ．Ｗ．＆Ｈａｎｓｏｎ，Ｅ．Ｐ．Ａｍｅｔｈｏｄｆｏｒｔｈｅｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅａｎａｌｙｓｉｓｏｆｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ－ｉｎｄｕｃｅｄ９８８ｎｕｃｌｅａｒｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｐ６５ｓｕｂｕｎｉｔｏｆＮＦ－ｋａｐｐａＢｆｒｏｍｐａｔｉｅｎｔ－ｄｅｒｉｖｅｄｄｅｒｍａｌｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ．９８９ＭｅｔｈｏｄｓＭｏｌＢｉｏｌ１２８０，４１３－４２６，ｄｏｉ：１０．１００７／９７８－１－４９３９－２４２２－６＿２５（２０１５））。まとめると、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの内皮内でのＮＦ－κＢシグナル伝達の増加が、血管及び造血の障害につながる炎症性ストレス応答を引き起こす可能性が高いことを、これらの知見は示唆する。

内皮ＮＦ－κＢ阻害は、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの血管障害を解消する。次に、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの内皮内でのＮＦ－κＢシグナル伝達の抑制が血管の欠陥を回復するのに十分であるかどうかを決定した。この目的のために、対照のＢＭ及びＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスに由来する内皮細胞に、核転座を防止する、細胞質内でＮＦ－ｋＢ（ｐ６５／ｐ５０）を分離するドミナントネガティブＩκＢαＳ３２Ａ／Ｓ３６Ａスーパーサプレッサー（ＩｋＢ－ＳＳ）構築物を発現するレンチウイルスを導入した。（Ｂｏｅｈｍ，Ｊ．Ｓ．ｅｔａｌ．ＩｎｔｅｇｒａｔｉｖｅｇｅｎｏｍｉｃａｐｐｒｏａｃｈｅｓｉｄｅｎｔｉｆｙＩＫＢＫＥａｓａｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒｏｎｃｏｇｅｎｅ．９９１Ｃｅｌｌ１２９，１０６５－１０７９，ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｃｅｌｌ．２００７．０３．０５２（２００７）；Ｂｒｏｗｎ，Ｋ．，Ｇｅｒｓｔｂｅｒｇｅｒ，Ｓ．，Ｃａｒｌｓｏｎ，Ｌ．，Ｆｒａｎｚｏｓｏ，Ｇ．＆Ｓｉｅｂｅｎｌｉｓｔ，Ｕ．ＣｏｎｔｒｏｌｏｆＩｋａｐｐａＢ－ａｌｐｈａｐｒｏｔｅｏｌｙｓｉｓｂｙｓｉｔｅ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ，ｓｉｇｎａｌ－ｉｎｄｕｃｅｄｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ．Ｓｃｉｅｎｃｅ２６７，１４８５－１４８８，ｄｏｉ：１０．１１２６／ｓｃｉｅｎｃｅ．７８７８４６６（１９９５））。イムノブロット分析では、ＩｋＢ－ＳＳ導入遺伝子の発現が確認され、導入遺伝子の発現によるＥＲＫ１／２またはｐ６５のリン酸化レベルに有意な変化が明らかにならなかった（図３ａ、ｂ）。免疫蛍光分析では、ＩｋＢ－ＳＳの発現がＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウス由来の内皮におけるｐ６５核転座を減少させることが確認された（図３ｃ、ｄ）。これらのデータは、ｉｎｖｉｖｏでのＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの内皮内でのＮＦ－κＢシグナル伝達の増加が、内皮内でのＩｋＢ－ＳＳの発現により抑制することができることを示唆した。この仮説を検証するために、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスをＴｉｅ２．ＩｋＢ－ＳＳマウスと交配させた（ＣＤＨ５－ＭＡＰＫ：：ＩｋＢマウス）。この場合、ＩｋＢ－ＳＳ導入遺伝子が、成体マウスの内皮内で選択的に発現される。（Ｂｒｏｗｎ，Ｋ．，Ｇｅｒｓｔｂｅｒｇｅｒ，Ｓ．，Ｃａｒｌｓｏｎ，Ｌ．，Ｆｒａｎｚｏｓｏ，Ｇ．＆Ｓｉｅｂｅｎｌｉｓｔ，Ｕ．ＣｏｎｔｒｏｌｏｆＩｋａｐｐａＢ－ａｌｐｈａｐｒｏｔｅｏｌｙｓｉｓｂｙｓｉｔｅ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ，ｓｉｇｎａｌ－ｉｎｄｕｃｅｄｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ．Ｓｃｉｅｎｃｅ２６７，１４８５－１４８８，ｄｏｉ：１０．１１２６／ｓｃｉｅｎｃｅ．７８７８４６６（１９９５））。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの骨髄由来内皮細胞（ＢＭＥＣ；ＣＤ４５－Ｔｅｒ１１９－ＣＤ３１＋ＶＥカドヘリン＋として定義）内のＮＦ－κＢ調節標的遺伝子発現の分析では、前炎症性サイトカイン及びケモカインＩｌ１ａ、Ｉｌ１ｂ、Ｃｘｃｌ１、Ｃｘｃｌ３、Ｃｃｌ１２、及びＣｃｌ２２を含むＮＦ－ｋＢシグナル伝達標的レベルの増加が明らかになった（図３ｅ～ｆ、補足表２）。重要なことに、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫ：：ＩｋＢマウスに由来するＢＭＥＣは、ＮＦ－ｋＢ標的遺伝子の発現の全体的な減少を示した。これにより、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスのＢＭＥＣ内でのＩｋＢ－ＳＳ導入遺伝子発現が、ＮＦ－κＢシグナル伝達を減少させたことが示された（図３ｅ～ｆ、補足表２）。さらに、ＢＭ内皮ニッチの免疫蛍光分析では、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫ：：ＩｋＢマウスの血管拡張の正常化が示され、内皮ＮＦ－κＢシグナル伝達の阻害が、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスのＢＭ血管完全性を回復するのに十分であることが確認された（図３ｇ）。まとめると、ＢＭ血管ニッチに対する内皮ＭＡＰＫ活性化の有害な影響が、主に内皮ＮＦ－κＢ依存性炎症性ストレスの下流活性化により媒介されることが、これらの知見により確認された。

内皮ＮＦ－κＢ阻害は、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスのＨＳＣ活性を回復させる。次に、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫ：：ＩｋＢマウスにおけるＢＭ内皮ニッチの完全性の回復がＨＳＣ及び造血系の機能回復をもたらすかどうかを研究した。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫ：：ＩｋＢマウスの造血分析は、ＢＭ細胞性の回復と表現型ＨＳＣ及びＨＳＰＣの頻度を示した（図４ａ、ｂ；補足図２ａ）。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫ：：ＩｋＢマウスのＢＭ内での前駆細胞の表現型の回復は、メチルセルロースベースのコロニーアッセイにおける前駆細胞活性にも反映された（図４ｃ）。さらに、競合的ＢＭ移植によりアッセイされたＨＳＣ機能性は、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫ：：ＩｋＢマウスにおける長期生着能の完全な回復及び骨髄バイアス分化の逆転を示した（図４ｄ、ｅ；補足図２ｂ）。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫ：：ＩｋＢマウスに由来するＷＢＭ細胞は、二次移植アッセイ中に連続再増殖１８０及び多系列再構成能を維持することもできた（補足図２ｃ、ｄ）。さらに、限界希釈ＢＭ移植により、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫ：：ＩｋＢマウスに長期の多系列生着を引き起こすことができた真正のＬＴ－ＨＳＣの頻度の回復が確認された（図４ｆ、ｇ）。恒常性条件下では、ＨＳＣは、主に血管周囲のニッチに存在し、静止状態及び自己複製を調節する内皮細胞及び血管周囲のニッチ細胞から有益な手がかりを受ける。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫのＢＭ内皮内の炎症がＨＳＣ－ニッチ相互作用を破壊したかどうかを判定するために、ＨＳＣのホールマウント免疫蛍光イメージングを実施し、これにより、血管系からのＨＳＣの平均距離の増加が明らかになった（図４ｈ、ｉ）。特に、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫ：：ＩｋＢマウスは、血管ニッチへのＨＳＣ近接の回復を示した（図４ｈ、ｉ）。これらのデータは、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫ：：ＩｋＢマウスにおけるＢＭ内皮の完全性の回復が、ＨＳＣ－ニッチ相互作用の正常化及びＨＳＣ機能性の回復をもたらしたことを示す。内皮ＭＡＰＫ活性化に関連する炎症が骨髄抑制後の造血再構成に影響を与えるかどうかを判定するために、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫ、Ｔｉｅ２．ＩｋＢ－ＳＳ、及びＣＤＨ５－ＭＡＰＫ：：ＩｋＢマウスならびに同腹仔対照が亜致死骨髄抑制損傷を受け、造血回復を評価した。末梢血の分析では、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスが、造血回復の有意な遅延を示したことが明らかになり、これにより、持続的な内皮ＭＡＰＫ活性化が骨髄抑制損傷後の回復に有害であるが示された（図４ｊ）。しかし、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスにおける内皮特異的ＮＦ－κＢ阻害は、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫ及び対照マウスと比較して、照射後の白血球、好中球、赤血球、及び血小板の喪失を保護した（図４ｊ）。特に、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫ：：ＩｋＢマウスの造血回復率は、Ｔｉｅ２．ＩｋＢ－ＳＳマウスで観察された回復と同様であり、これは、骨髄抑制損傷後の造血系の強力な保護を示すことが以前に実証されている。（Ｐｏｕｌｏｓ，Ｍ．Ｇ．ｅｔａｌ．Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ－ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆＮＦ－ｋａｐｐａＢｅｎｈａｎｃｅｓｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｓｉｓＮａｔＣｏｍｍｕｎ（２０１６）７，１３８２９，ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｃｏｍｍｓ１３８２９）。これらのデータは、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの内皮炎症が、造血回復を遅延させるが、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの内皮特異的ＮＦ－κＢ阻害は、造血区画を保護し、骨髄抑制損傷後の回復を促進することを示唆する。

内皮の炎症は、造血前駆細胞活性を損なう。ＨＳＣと共に、ＢＭ内の血管ニッチは、定常状態の末梢血産物を維持する、系列にコミットされた造血前駆細胞の多様な配列を維持することに重要な役割を果たす。（Ｗｅｉ，Ｑ．＆Ｆｒｅｎｅｔｔｅ，Ｐ．Ｓ．ＮｉｃｈｅｓｆｏｒＨｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃＳｔｅｍＣｅｌｌｓａｎｄＴｈｅｉｒＰｒｏｇｅｎｙ．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ（２０１８）４８，６３２－６４８，ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｉｍｍｕｎｉ．２０１８．０３．０２４；Ｃｒａｎｅ，Ｇ．Ｍ．，Ｊｅｆｆｅｒｙ，Ｅ．＆Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｓ．Ｊ．Ａｄｕｌｔｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌｎｉｃｈｅｓ．Ｎａｔｕｒｅｒｅｖｉｅｗｓ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（２０１７）１７，５７３－５９０，ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｒｉ．２０１７．５３；Ｃｏｍａｚｚｅｔｔｏ，Ｓ．ｅｔａｌ．ＲｅｓｔｒｉｃｔｅｄＨｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃＰｒｏｇｅｎｉｔｏｒｓａｎｄＥｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｓｉｓＲｅｑｕｉｒｅＳＣＦｆｒｏｍＬｅｐｔｉｎＲｅｃｅｐｔｏｒ＋ＮｉｃｈｅＣｅｌｌｓｉｎｔｈｅＢｏｎｅＭａｒｒｏｗ．Ｃｅｌｌｓｔｅｍｃｅｌｌ（２０１９）２４，４７７－４８６．ｅ４７６，ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｓｔｅｍ．２０１８．１１．０２２）。さらに、脾臓内の血管ニッチは、髄外造血の重要な構成要素であることが示されている。（Ｉｎｒａ，Ｃ．Ｎ．ｅｔａｌ．Ａｐｅｒｉｓｉｎｕｓｏｉｄａｌｎｉｃｈｅｆｏｒｅｘｔｒａｍｅｄｕｌｌａｒｙｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｓｉｓｉｎｔｈｅｓｐｌｅｅｎ．Ｎａｔｕｒｅ（２０１５）５２７，４６６－４７１，ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎａｔｕｒｅ１５５３０）。

次に、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスのＢＭ及び脾臓内の造血前駆細胞に対する内皮ＭＡＰＫ活性化の影響を調べた。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスは、免疫表現型で定義されたＢＭ多能性前駆細胞（ＭＰＰ）、一般的なリンパ系前駆細胞（ＣＬＰ）、一般的な骨髄系前駆細胞（ＣＭＰ）、顆粒球／マクロファージ前駆細胞（ＧＭＰ）、巨核球／赤血球系前駆細胞（ＭＥＰ）、及びＢ細胞前駆細胞サブセット（ｓＩｇＭ－Ｂ２２０＋Ｂ細胞、Ｐｒｅ－ＰｒｏＢ細胞、ＰｒｏＢ細胞、及びＰｒｅＢ細胞）の減少を示し、これは、末梢血数の減少に機能的に反映された（図５ａ、ｂ、ｄ；補足図２ｅ、ｆ）。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスのＢＭ内の造血細胞も、骨髄バイアス産物（ＣＤ４５＋ＢＭ細胞内のＣＤ１１ｂ＋ＧＲ１＋細胞の割合の増加）を示し、これは、ＨＳＣの骨髄バイアス分化を促進する炎症性サイトカインの効果によって媒介される可能性がある（図５ｃ）。ＢＭの系列スキューイングは、末梢血の系列構成にも反映された（図５ｅ）。まとめると、内皮ＭＡＰＫ活性化が、ＨＳＣ及び前駆細胞の活性の喪失により血球数の減少をもたらし、骨髄バイアス産物と関連していたことを、これらの知見は示す。重要なことに、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスで観察されたＢＭ及び末梢血の欠陥は、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫ：：ＩｋＢマウスでは完全に回復した。次に、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスのＢＭ内の造血障害が、ＨＳＰＣ集結及び髄外造血を引き起こし得るかどうかを、本発明者らは決定しようとした。末梢血分析では、循環ＫＬＳＨＳＰＣに有意差は見られず、内皮ＭＡＰＫ活性化がＨＳＰＣ集結をもたらさなかったことが明らかにならなかった（図５ｆ）。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの脾臓の分析では、ＨＳＣ及び造血サブセットの頻度の減少と共に、サイズ及び細胞性の有意な減少が明らかになり、これにより、髄外造血がないことが示された（図５ｇ～ｋ）。脾臓のＣＤ４５＋細胞の系列組成は、骨髄性バイアス（ＣＤ１１ｂ＋ＧＲ１＋細胞）を明らかにした。これにより、内皮ＭＡＰＫ依存性炎症が脾臓内のニッチ活性及び造血に悪影響を与えることが確認された（図５ｌ）。特に、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫ：：ＩｋＢマウスは、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの脾臓で観察された欠陥の回復を示していた（図５ｇ～１）。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスが、一次（骨髄）及び二次（脾臓）造血臓器の両方で造血障害を表すこと、ならびに、内皮ＮＦ－κＢシグナル伝達の抑制が内皮ＭＡＰＫ活性化に起因する造血障害を無効にすることを、これらのデータは示す。

内皮ＭＡＰＫ活性化は、骨髄内の炎症性ストレス応答を引き起こす。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫ２３８マウスのＢＭ内の血管拡張に伴うＨＳＣ及び造血障害（図１、２）は、下流の内皮ＮＦ－κＢ活性化がＢＭ微小環境内で一般化された炎症性ストレス応答を誘導する可能性を高めた。この考えを支持して、ＲＴ－ｑＰＣＲ分析では、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの造血細胞（ＣＤ４５＋）、間質細胞（ＣＤ４５－Ｔｅｒ１１９－ＣＤ３１－ＶＥカドヘリン－）、及び、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの未分画の全骨髄（ＷＢＭ）細胞におけるＮＦ－ｋＢ標的遺伝子の全体的な上方調節が明らかになった（補足図３ａ～ｆ、補足表２）。これにより、内皮ＭＡＰＫの活性化が、ＢＭ内の一般化された炎症性応答を引き起こすことが示された。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスのＷＢＭ内でのＮＦ－ｋＢ標的遺伝子の発現の著しい増加（補足図３ｅ、ｆ）は、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの造血細胞内でのＭＥＫ１ＤＤ導入遺伝子の無差別発現の可能性を高めた。この可能性を検証するために、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスにおける導入遺伝子発現の忠実度は、内因性のＲｏｓａ２６：ｅＧＦＰレポーターシステムを使用して、ｃｒｅ媒介性２４８組み換えを追跡することにより検証された（図６）。ＧＦＰの発現は、骨髄内の内皮細胞に厳密に限定され、ＨＳＣ、ならびに骨髄細胞、Ｂ細胞、及びＴ細胞を含む分析された造血サブセットのいずれにも検出可能な発現はなかった（補足図６ａ～ｅ；補足図４ａ、ｂ）。フローサイトメトリー分析では、タモキシフェン投与は、ｉｎｖｉｖｏでの内皮ＭＡＰＫシグナル伝達の活性化をもたらしたことが示され（図６ｃ）、また、組み換え効率を追跡するためのＧＦＰレポーターシステムの忠実度が確認された（図６ｄ）。さらに、ＦＡＣＳ選別細胞のＲＴＰＣＲ分析では、ｃｒｅ発現が内皮細胞に限定され、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの造血細胞で検出されないことが示された（図６ｇ）。これらの知見は、Ｃｄｈ５（ＰＡＣ）－ｃｒｅＥＲＴ２マウスが、成体マウスにおいて忠実な内皮制限発現を示し、ＨＳＣまたは造血細胞でのオフターゲット発現がないという以前の報告を裏付ける。（Ｓｏｒｅｎｓｅｎ，Ｉ．，Ａｄａｍｓ，Ｒ．Ｈ．＆Ｇｏｓｓｌｅｒ，Ａ．ＤＬＬ１－ｍｅｄｉａｔｅｄＮｏｔｃｈａｃｔｉｖａｔｉｏｎｒｅｇｕｌａｔｅｓｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｉｄｅｎｔｉｔｙｉｎｍｏｕｓｅｆｅｔａｌａｒｔｅｒｉｅｓ．Ｂｌｏｏｄ（２００９）１１３，５６８０－５６８８，ｄｏｉ：１０．１１８２／ｂｌｏｏｄ－２００８－０８－１７４５０８；Ｌａｎｇｅｎ，Ｕ．Ｈ．ｅｔａｌ．Ｃｅｌｌ－ｍａｔｒｉｘｓｉｇｎａｌｓｓｐｅｃｉｆｙｂｏｎｅｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓｄｕｒｉｎｇｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌｏｓｔｅｏｇｅｎｅｓｉｓ．Ｎａｔｕｒｅｃｅｌｌｂｉｏｌｏｇｙ（２０１７）１９，１８９－２０１，ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｃｂ３４７６．４６Ｐａｙｎｅ，Ｓ．，ＤｅＶａｌ，Ｓ．＆Ｎｅａｌ，Ａ．Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ－ＳｐｅｃｉｆｉｃＣｒｅＭｏｕｓｅＭｏｄｅｌｓ．ＡｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒＴｈｒｏｍｂＶａｓｃＢｉｏｌ（２０１８）３８，２５５０－２５６１，ｄｏｉ：１０．１１６１／ａｔｖｂａｈａ．１１８．３０９６６９；Ｋｉｌａｎｉ，Ｂ．ｅｔａｌ．ＣｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｆｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｐｒｏｍｏｔｅｒｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙａｎｄｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙｉｎｍｉｃｅｒｅｖｅａｌｓａｓｕｂｓｅｔｏｆＰｄｇｆｂ－ｐｏｓｉｔｉｖｅｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｃｅｌｌｓ．ＪＴｈｒｏｍｂＨａｅｍｏｓｔ（２０１９）１７，８２７－８４０，ｄｏｉ：１０．１１１１／ｊｔｈ．１４４１７）。

Ｔｉｅ２．ＩｋＢ－ＳＳマウスにおけるＩｋＢ－ＳＳ導入遺伝子の発現は、造血細胞では検出可能な発現がなく、内皮細胞に限定されていることが確認された（図６ｆ、ｇ）。成人の造血細胞におけるＴｉｅ２駆動型導入遺伝子発現の欠如は、以前の報告と一致している。（Ｆｏｒｄｅ，Ａ．，Ｃｏｎｓｔｉｅｎ，Ｒ．，Ｇｒｏｎｅ，Ｈ．Ｊ．，Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇ，Ｇ．＆Ａｒｎｏｌｄ，Ｂ．ＴｅｍｐｏｒａｌＣｒｅ－ｍｅｄｉａｔｅｄｒｅｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｅｘｃｌｕｓｉｖｅｌｙｉｎｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓｕｓｉｎｇＴｉｅ２ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙｅｌｅｍｅｎｔｓ．Ｇｅｎｅｓｉｓ（２００２）３３，１９１－１９７，ｄｏｉ：１０．１００２／ｇｅｎｅ．１０１１７；Ｔａｎｇ，Ｙ．，Ｈａｒｒｉｎｇｔｏｎ，Ａ．，Ｙａｎｇ，Ｘ．，Ｆｒｉｅｓｅｌ，Ｒ．Ｅ．＆Ｌｉａｗ，Ｌ．ＴｈｅｃｏｎｔｒｉｂｕｔｉｏｎｏｆｔｈｅＴｉｅ２＋ｌｉｎｅａｇｅｔｏｐｒｉｍｉｔｉｖｅａｎｄｄｅｆｉｎｉｔｉｖｅｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｃｅｌｌｓ．Ｇｅｎｅｓｉｓ（２０１０）４８，５６３－５６７，ｄｏｉ：１０．１００２／ｄｖｇ．２０６５４；Ｇａｒｅｕｓ，Ｒ．ｅｔａｌ．Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌ－ｓｐｅｃｉｆｉｃＮＦ－ｋａｐｐａＢｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｐｒｏｔｅｃｔｓｍｉｃｅｆｒｏｍａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ．Ｃｅｌｌｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ（２００８）８，３７２－３８３，ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｃｍｅｔ．２００８．０８．０１６；Ｋｏｒｈｏｎｅｎ，Ｈ．ｅｔａｌ．ＡｎａｐｈｙｌａｃｔｉｃｓｈｏｃｋｄｅｐｅｎｄｓｏｎｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌＧｑ／Ｇ１１．ＪＥｘｐＭｅｄ（２００９）２０６，４１１－４２０，ｄｏｉ：１０．１０８４／ｊｅｍ．２００８２１５０；Ｐｏｕｌｏｓ，Ｍ．Ｇ．ｅｔａｌ．Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ－ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆＮＦ－ｋａｐｐａＢｅｎｈａｎｃｅｓｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｓｉｓ．ＮａｔＣｏｍｍｕｎ（２０１６）７，１３８２９，ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｃｏｍｍｓ１３８２９）．

まとめると、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスのＨＳＣ及び造血障害が、ＢＭ内の内皮ＮＦ－κＢ依存性炎症性ストレスにより排他的に媒介されることが、これらの観察結果により確認される。重要なことに、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫ：：ＩｋＢマウスにおけるＮＦ－κＢシグナル伝達の内皮特異的抑制は、教師なし階層的クラスタリング及びＮＦ－ｋＢシグナル伝達標的の発現の全体的な減少により示されるようにＢＭ炎症を解消した（補足図３ａ～ｆ、補足表２）。まとめると、内皮細胞が、ＢＭ内のまれな集団であるにもかかわらず（図６ｂ）、炎症性ストレス中のＨＳＣ機能及び造血に大きな影響を与えていることを、これらの結果は強調する。

内皮ＮＦ－κＢ阻害は、炎症誘導性低酸素傷害を解決する。ＢＭ炎症がニッチ活性及びＨＳＣ機能に影響を与える正確な機序は、依然として、十分に理解されない。慢性炎症は、組織の低酸素症を誘導することにより、臓器の損傷を引き起こすことが知られる。（Ｂａｒｔｅｌｓ，Ｋ．，Ｇｒｅｎｚ，Ａ．＆Ｅｌｔｚｓｃｈｉｇ，Ｈ．Ｋ．Ｈｙｐｏｘｉａａｎｄｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎａｒｅｔｗｏｓｉｄｅｓｏｆｔｈｅｓａｍｅｃｏｉｎ．ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ（２０１３）１１０，１８３５１－１８３５２，ｄｏｉ：１０．１０７３／ｐｎａｓ．１３１８３４５１１０；Ｋａｒｈａｕｓｅｎ，Ｊ．，Ｈａａｓｅ，Ｖ．Ｈ．＆Ｃｏｌｇａｎ，Ｓ．Ｐ．Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｈｙｐｏｘｉａ：ｒｏｌｅｏｆｈｙｐｏｘｉａ－ｉｎｄｕｃｉｂｌｅｆａｃｔｏｒ．ＣｅｌｌＣｙｃｌｅ（２００５）４，２５６－２５８；Ｅｌｔｚｓｃｈｉｇ，Ｈ．Ｋ．＆Ｃａｒｍｅｌｉｅｔ，Ｐ．Ｈｙｐｏｘｉａａｎｄｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ．ＮＥｎｇｌＪＭｅｄ（２０１１）３６４，６５６－６６５，ｄｏｉ：１０．１０５６／ＮＥＪＭｒａ０９１０２８３）。さらに、炎症部位での活性酸素種（ＲＯＳ）の生成の増加は、内皮機能障害、血管漏出、及び組織損傷につながる。（Ｍｉｔｔａｌ，Ｍ．，Ｓｉｄｄｉｑｕｉ，Ｍ．Ｒ．，Ｔｒａｎ，Ｋ．，Ｒｅｄｄｙ，Ｓ．Ｐ．＆Ｍａｌｉｋ，Ａ．Ｂ．Ｒｅａｃｔｉｖｅｏｘｙｇｅｎｓｐｅｃｉｅｓｉｎ１０３５ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎａｎｄｔｉｓｓｕｅｉｎｊｕｒｙ．ＡｎｔｉｏｘｉｄＲｅｄｏｘＳｉｇｎａｌ（２０１４）２０，１１２６－１１６７，ｄｏｉ：１０．１０８９／ａｒｓ．２０１２．５１４９）。重要なことに、過剰なＲＯＳ及び低酸素症は、静止状態の喪失及び消耗を促進することにより、ＨＳＰＣ機能に悪影響を与えることが示されている。（Ｂｉｇａｒｅｌｌａ，Ｃ．Ｌ．，Ｌｉａｎｇ，Ｒ．＆Ｇｈａｆｆａｒｉ，Ｓ．ＳｔｅｍｃｅｌｌｓａｎｄｔｈｅｉｍｐａｃｔｏｆＲＯＳｓｉｇｎａｌｉｎｇ．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ（２０１４）１４１，４２０６－４２１８，ｄｏｉ：１０．１２４２／ｄｅｖ．１０７０８６；Ｔａｋｕｂｏ，Ｋ．ｅｔａｌ．ＲｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｔｈｅＨＩＦ－１ａｌｐｈａｌｅｖｅｌｉｓｅｓｓｅｎｔｉａｌｆｏｒｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌｓ．Ｃｅｌｌｓｔｅｍｃｅｌｌ（２０１０）７，３９１－４０２，ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｓｔｅｍ．２０１０．０６．０２０；Ｌｕｄｉｎ，Ａ．ｅｔａｌ．Ｒｅａｃｔｉｖｅｏｘｙｇｅｎｓｐｅｃｉｅｓｒｅｇｕｌａｔｅｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌｓｅｌｆ－ｒｅｎｅｗａｌ，ｍｉｇｒａｔｉｏｎａｎｄｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，ａｓｗｅｌｌａｓｔｈｅｉｒｂｏｎｅｍａｒｒｏｗｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ．ＡｎｔｉｏｘｉｄＲｅｄｏｘＳｉｇｎａｌ（２０１４）２１，１６０５－１６１９，ｄｏｉ：１０．１０８９／ａｒｓ．２０１４．５９４１）。

ＢＭ炎症がＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの造血及び血管欠損を引き起こす機序への洞察を得るために、ＨＳＰＣ及びＢＭニッチ細胞の酸素化状態及びＲＯＳレベルを試験した（図７）。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスのＨＳＰＣは、静止状態の喪失及びアポトーシスの増加と共に低酸素及びＲＯＳレベルの大幅な増加を示した（図７ａ～ｄ；補足図５）。特に、ＢＭ内皮細胞及びＢＭ間質細胞の両方が、低酸素症の増加も示した（図７ｅ）。これにより、炎症により誘導された低酸素損傷がＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスのＨＳＰＣ及びＢＭニッチ細胞の両方に影響を及ぼし、内皮ＮＦκＢシグナル伝達の抑制により回復したことが示される。興味深いことに、ニッチ細胞は、ＲＯＳレベルに大幅な変化を示さず（図７ｆ）、これは、ＨＳＰＣと比較した場合の、炎症性ストレスに応答した産生が不変であること、またはＲＯＳ解毒能の高さもしくは炎症性ストレスに応答した産生の悪化のいずれかを示した。しかし、ＢＭ間質細胞は、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスでサイクリングの喪失及びアポトーシスの増加を示した（図７ｇ、ｈ）。これに反して、恒常性条件下で観察されたＢＭ内皮の静止状態は、ＭＡＰＫ活性化によって駆動される細胞周期侵入の直接的な影響に起因する可能性があるＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスで破壊された（図７ｇ）。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスのニッチ細胞の細胞周期状態の変化をＢＭ細胞性に反映し、内皮細胞は、絶対数の増加を示したが、間質細胞を減少させた（図７ｉ、ｋ）。特に、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスのニッチ細胞で観察された欠陥は、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫ：：ＩｋＢマウスで回復した（図７ｅ～ｈ）。

内皮細胞及び様々なＢＭ間質サブセットを含むＢＭニッチ細胞は、ＫｉｔＬ及びＳＤＦ１などのｐｒｏ－ＨＳＣ因子を発現させることにより、ＨＳＣの維持に重要な役割を果たすことが既知である。（Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｓ．Ｊ．＆Ｓｃａｄｄｅｎ，Ｄ．Ｔ．Ｔｈｅｂｏｎｅｍａｒｒｏｗｎｉｃｈｅｆｏｒｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌｓ．Ｎａｔｕｒｅ（２０１４）５０５，３２７－３３４，ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎａｔｕｒｅ１２９８４）。内皮ＭＡＰＫ活性化がこれらのＨＳＣ調節因子のレベルを変化させたかどうかを判断するために、ＲＴ－ｑＰＣＲによって候補ＢＭニッチ細胞におけるそれらの発現を、本発明者らは評価した。しかし、遺伝子型の中でＢＭＥＣまたはＢＭ間質細胞のいずれかで、それらの発現に大幅な変化は観察されなかった（図７ｊ、ｌ）。ＢＭ間質集団内では、Ｌｅｐｒ＋細胞（Ｎｅｓｔｉｎ＋及びＣＸＣＬ１２の豊富な細網細胞を含む）がＨＳＣ維持のためのＫｉｔＬ及びＳＤＦ１の重要な供給源であることが示されている。（Ｚｈｏｕ，Ｂ．Ｏ．，Ｙｕｅ，Ｒ．，Ｍｕｒｐｈｙ，Ｍ．Ｍ．，Ｐｅｙｅｒ，Ｊ．Ｇ．＆Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｓ．Ｊ．Ｌｅｐｔｉｎ－ｒｅｃｅｐｔｏｒ－ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｒｏｍａｌｃｅｌｌｓｒｅｐｒｅｓｅｎｔｔｈｅｍａｉｎｓｏｕｒｃｅｏｆｂｏｎｅｆｏｒｍｅｄｂｙａｄｕｌｔｂｏｎｅｍａｒｒｏｗ．Ｃｅｌｌｓｔｅｍｃｅｌｌ（２０１４）１５，１５４－１６８，ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｓｔｅｍ．２０１４．０６．００８）。ＳＤＦ１は、ＣＤ４５－Ｔｅｒ１１９－ＣＤ３１－Ｓｃａ１－ＣＤ５１＋ＢＭ骨芽細胞により発現されることも既知である。（Ｄｉｎｇ，Ｌ．＆Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｓ．Ｊ．Ｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌｓａｎｄｅａｒｌｙｌｙｍｐｈｏｉｄｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒｓｏｃｃｕｐｙｄｉｓｔｉｎｃｔｂｏｎｅｍａｒｒｏｗｎｉｃｈｅｓ．Ｎａｔｕｒｅ（２０１３）４９５，２３１－２３５，ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎａｔｕｒｅ１１８８５）。

ＢＭＬｅｐｒ＋細胞及び骨芽細胞の分析は、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの細胞性またはＨＳＣ調節因子の発現において大幅な変化を明らかにしなかった（補足図６ａ～ｅ、ｇ、ｈ）。しかし、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスのＬｅｐｒ＋細胞及び骨芽細胞の両方が、他のＢＭ細胞サブセットと同様にＮＦ－κＢ調節標的遺伝子の発現増加を示し、これは、内皮ＮＦ－κＢシグナル伝達の阻害時に抑制された（補足図６ｆ、ｉ）。まとめると、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスで観察されたニッチ及びＨＳＰＣ欠陥が、ＲＯＳレベル及び低酸素症の炎症誘導性変化と相関すること、ならびに、ＣＤＨ５－３０６ＭＡＰＫの内皮細胞内のＮＦ－κＢシグナル伝達の阻害が、これらの欠陥を解決することを、これらの結果は示す。

ＣＤＨ５－３０８ＭＡＰＫマウスのＨＳＰＣ及びニッチ欠陥を潜在的に媒介する前炎症性遺伝子を同定するために、ＢＭ内皮、造血、及び間質区画内で発現の増加を示した遺伝子について、ｑＰＣＲアレイデータ（補足表２）を調査し；Ｉｌ１ｂ、Ｃｓｆ１、Ｃｄｋｎ１ａ、及びＣｓｆ２は、内皮ＭＡＰＫ活性化時に、３つの細胞サブセット全てで大幅に上方調節された（図７ｍ）。Ｉｌ１ｂ及びＣｓｆ１は、ＨＳＣ機能に直接影響を与え、リンパ球形成を犠牲にして骨髄バイアス分化を促進することが以前に報告されている。（Ｐｉｅｔｒａｓ，Ｅ．Ｍ．ｅｔａｌ．Ｃｈｒｏｎｉｃｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－１ｅｘｐｏｓｕｒｅｄｒｉｖｅｓｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌｓｔｏｗａｒｄｓｐｒｅｃｏｃｉｏｕｓｍｙｅｌｏｉｄｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎａｔｔｈｅｅｘｐｅｎｓｅｏｆｓｅｌｆ－ｒｅｎｅｗａｌ．Ｎａｔｕｒｅｃｅｌｌｂｉｏｌｏｇｙ（２０１６）１８，６０７－６１８，ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｃｂ３３４６；Ｍｏｓｓａｄｅｇｈ－Ｋｅｌｌｅｒ，Ｎ．ｅｔａｌ．Ｍ－ＣＳＦｉｎｓｔｒｕｃｔｓｍｙｅｌｏｉｄｌｉｎｅａｇｅｆａｔｅｉｎｓｉｎｇｌｅｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌｓ．Ｎａｔｕｒｅ（２０１３）４９７，２３９－２４３，ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎａｔｕｒｅ１２０２６）。慢性的なＩｌ１曝露は、ＨＳＣサイクリング及び消耗の増強を引き起こすことも示されている。（Ｐｉｅｔｒａｓ、Ｅ．Ｍ．ｅｔａｌ．Ｃｈｒｏｎｉｃｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－１ｅｘｐｏｓｕｒｅｄｒｉｖｅｓｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌｓｔｏｗａｒｄｓｐｒｅｃｏｃｉｏｕｓｍｙｅｌｏｉｄｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎａｔｔｈｅｅｘｐｅｎｓｅｏｆｓｅｌｆ－ｒｅｎｅｗａｌ．Ｎａｔｕｒｅｃｅｌｌｂｉｏｌｏｇｙ（２０１６）１８，６０７－６１８，ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｃｂ３３４６）。ＨＳＰＣサイクリングの増加、再増殖能の障害、及び骨髄バイアス分化を含むＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスで観察された造血障害は、場合により、Ｉｌ１ｂ及びＣｓｆ１がＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスでのＨＳＰＣ欠陥を媒介し、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫ：：ＩｋＢマウスでの抑制は、造血機能を潜在的に回復させることを示唆する。この可能性を検証するために、ＲＴ－ｑＰＣＲ分析を実施し、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスにおける内皮ＮＦ－κＢシグナル伝達の阻害が、内皮細胞、間質細胞、及び造血細胞内のＩｌ１ｂの発現を減少させるが、Ｃｓｆ１発現を間質細胞及び造血細胞で減少したことが確認された（図７ｎ～ｐ）。特に、内皮Ｃｓｆ１発現が減少しなかったが、内皮Ｉｌ１ｂ発現の減少は、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫ：：ＩｋＢマウスの未分画ＷＢＭ細胞内の炎症の大幅な下方調節と相関していた（図７ｑ、補足図３ｅ）。これにより、内皮Ｉｌ１ｂがＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスのＢＭ炎症を媒介することに重要な役割を果たす可能性が高いことが示唆される。しかし、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの血漿プロテオームで観察された多様な変化は、慢性炎症が、炎症性応答及びＨＳＣ機能を調節する複数の前炎症性及び抗炎症性メディエーターのバランスを伴う可能性があることを示唆する（図２ｅ、ｆ）。

ＳＣＧＦは、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスのＢＭ炎症を抑制し、ＨＳＣ機能を回復させる。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスをＴｉｅ２．ＩｋＢ－ＳＳマウスに交配すると、炎症が解消され、血管及び造血の障害が回復したことを考えると、本発明者らは、炎症中のＨＳＣ機能を調節し得る新規候補タンパク質をスクリーニングするために、これらのモデルを利用した。この目的のために、Ｔｉｅ２．ＩｋＢ－ＳＳマウスに由来する血漿のプロテオミクス分析（ＳｏｍａＬｏｇｉｃ）により、同腹仔対照と比較して差次的に発現する８２のタンパク質が同定された（データは示されず）。潜在的な造血促進タンパク質は、Ｔｉｅ２．ＩｋＢ－ＳＳマウスと比較して、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスでは反対の傾向を示すと仮定された。このアプローチを使用して、大幅に変化し、逆相関した１８の候補因子を同定した（すなわち、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスでは下、Ｔｉｅ２．ＩｋＢ－ＳＳでは上、及び逆もまた同様）（補足図７ａ、ｂ）。これらの中で、Ｃｌｅｃ１１ａ／幹細胞成長因子－α（ＳＣＧＦ）は、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスで最も有意に下方調節されたタンパク質であった（補足図７ｃ）。

ＳＣＧＦは、最近、老齢マウスの骨形成を回復させるための潜在的な若返り因子として同定されている。（Ｙｕｅ，Ｒ．，Ｓｈｅｎ，Ｂ．＆Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｓ．Ｊ．Ｃｌｅｃ１１ａ／ｏｓｔｅｏｌｅｃｔｉｎｉｓａｎｏｓｔｅｏｇｅｎｉｃｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｔｈａｔｐｒｏｍｏｔｅｓｔｈｅｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅｏｆｔｈｅａｄｕｌｔｓｋｅｌｅｔｏｎ．Ｅｌｉｆｅ５，ｄｏｉ：１０．７５５４／ｅＬｉｆｅ．１８７８２（２０１６））。ＳＣＧＦは、定常状態の造血に不要であることが報告されているが、ＳＣＧＦの血漿レベルは、重度のマラリア貧血患者で下方調節され、血漿ＳＣＧＦのレベルの低下が、骨髄移植後の造血回復不良と相関していること報告されている。これにより、ＳＣＧＦが、ストレス造血中に重要な役割を果たし得ることが示される。（Ｙｕｅ，Ｒ．，Ｓｈｅｎ，Ｂ．＆Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｓ．Ｊ．Ｃｌｅｃ１１ａ／ｏｓｔｅｏｌｅｃｔｉｎｉｓａｎｏｓｔｅｏｇｅｎｉｃｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｔｈａｔｐｒｏｍｏｔｅｓｔｈｅｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅｏｆｔｈｅａｄｕｌｔｓｋｅｌｅｔｏｎ．Ｅｌｉｆｅ（２０１６）５，ｄｏｉ：１０．７５５４／ｅＬｉｆｅ．１８７８２；Ｋｅｌｌｅｒ，Ｃ．Ｃ．ｅｔａｌ．Ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆａｎｏｖｅｌｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｍｅｄｉａｔｏｒｉｎｃｈｉｌｄｒｅｎｗｉｔｈｓｅｖｅｒｅｍａｌａｒｉａｌａｎｅｍｉａ．ＩｎｆｅｃｔＩｍｍｕｎ（２００９）７７，３８６４－３８７１，ｄｏｉ：１０．１１２８／ＩＡＩ．００３４２－０９；Ｉｔｏ，Ｃ．ｅｔａｌ．Ｓｅｒｕｍｓｔｅｍｃｅｌｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｆｏｒｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｒｅｃｏｖｅｒｙｆｏｌｌｏｗｉｎｇｓｔｅｍｃｅｌｌｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ．ＢｏｎｅＭａｒｒｏｗＴｒａｎｓｐｌａｎｔ（２００３）３２，３９１－３９８，ｄｏｉ：１０．１０３８／ｓｊ．ｂｍｔ．１７０４１５２）。ＳＣＧＦアプタマーの特異性が確認され、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスで観察された血漿ＳＣＧＦの減少が検証された（補足図７ｄ）。特に、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫ：：ＩｋＢマウスは、血漿ＳＣＧＦレベルの回復を示した。これにより、さらに、ＳＣＧＦがＣＤＨ５－ＭＡＰＫ：：ＩｋＢマウスの回復を促進する潜在的な造血促進因子であり得ることが示される。（補足図７ｅ、ｆ）。

ＳＣＧＦがＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの造血障害を回復し得るかどうかを判定するために、４μｇのＳＣＧＦを５日間連続して皮下注入し、最後の注射から２４時間後に造血系の表現型及び機能特性を分析した（補足図８ａ）。同腹仔対照マウスへのＳＣＧＦ注入により、ＳＣＧＦが以前に報告されたように定常状態の造血に影響を及ぼさなかったことが確認された（図８及び補足図８）。（Ｙｕｅ，Ｒ．，Ｓｈｅｎ，Ｂ．＆Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｓ．Ｊ．Ｃｌｅｃ１１ａ／ｏｓｔｅｏｌｅｃｔｉｎｉｓａｎｏｓｔｅｏｇｅｎｉｃｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｔｈａｔｐｒｏｍｏｔｅｓｔｈｅｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅｏｆｔｈｅａｄｕｌｔｓｋｅｌｅｔｏｎ．Ｅｌｉｆｅ（２０１６）５，ｄｏｉ：１０．７５５４／ｅＬｉｆｅ．１８７８２）。しかし、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスへのＳＣＧＦの注入は、造血に重大な影響を及ぼした（図８及び補足図８）。ＳＣＧＦ注入は、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの表現型ＨＳＣ及びＨＳＰＣの頻度を大幅に増加させた（図８ａ、ｂ；補足図８ｃ）。ＨＳＰＣ頻度の増加は、ＳＣＧＦ処置ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスから単離されたＢＭ細胞のコロニー形成能の向上に反映された（図８ｃ）。また、ＳＣＧＦ注入により、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの末梢血骨髄バイアスが解消され、血球数を回復させた（補足図８ｄ、ｅ）。さらに、競合的ＢＭ移植では、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスへのＳＣＧＦ注入より、骨髄性バイアスの有意な減少を伴って、長期の生着能が回復したことが示された（図８ｄ、ｅ）。ＳＣＧＦで処理されたＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスに由来するＢＭ細胞の生着能の増加は、二次移植アッセイの間も維持され、これにより、連続的な再増殖能力の維持が示される（図８ｆ、ｇ）。興味深いことに、一次移植で観察されたＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの骨髄バイアス産物は、二次移植で解決された。これにより、炎症誘導性のＨＳＣの系列スキューイングは永続的ではなく、連続移植中に野生型ＢＭ微小環境に曝露すると可逆的であることが示される（図８ｆ、ｇ）。

ＳＣＧＦノックアウトマウスが、正常な造血パラメーター及び骨量減少の加速（Ｙｕｅ，Ｒ．，Ｓｈｅｎ，Ｂ．＆Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｓ．Ｊ．Ｃｌｅｃ１１ａ／ｏｓｔｅｏｌｅｃｔｉｎｉｓａｎｏｓｔｅｏｇｅｎｉｃｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｔｈａｔｐｒｏｍｏｔｅｓｔｈｅｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅｏｆｔｈｅａｄｕｌｔｓｋｅｌｅｔｏｎ．Ｅｌｉｆｅ（２０１６）５，ｄｏｉ：１０．７５５４／ｅＬｉｆｅ．１８７８２）ならびにＳＣＧＦ注入対照マウスの造血に対する識別可能な効果の欠如（図８ａ～ｇ）を示すことを考えると、ＳＣＧＦ注入ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスで観察された造血回復は、おそらく、血管ニッチへの影響により媒介される可能性がある。内皮ニッチの分析では、ＳＣＧＦの注入が血管拡張を解決し、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスのＢＭ微小環境内の血管漏出を抑制したことが明らかになった（図８ｈ、ｉ）。ＳＣＧＦ注入により媒介される血管の回復は、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスのＢＭ内のＮＦ－ｋＢ標的遺伝子の発現の全体的な減少とも関連していた（図８ｊ）。ＳＣＧＦ注入により媒介される顕著な血管回復は、ＳＣＧＦがＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの内皮に直接作用してＮＦ－ｋＢシグナル伝達を抑制する可能性を高めた。免疫蛍光分析では、ＳＣＧＦ処置がＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスから単離されたＢＭ内皮内の核ｐ６５レベルの減少をもたらしたことが示された。これにより、内皮細胞に対するＳＣＧＦの直接効果が確認される（図８ｋ、ｌ）。総合すると、これらのデータにより、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスへのＳＣＧＦの注入が、内皮の炎症を抑制し、血管完全性を回復させ、造血系の回復につながることが示される。

ＳＣＧＦが骨形成を促進することが示されているので、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスで観察されたＢＭ炎症に伴う血漿ＳＣＧＦレベルの減少が骨減少症を引き起こし得る可能性がある。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスは、実に、骨小柱の体積、骨小柱の数、及び厚さの全体的な減少を示し、これにより、内皮ＭＡＰＫの活性化が骨の健康に有害な影響を与えたことが示された（補足図９ａ～ｄ）。次に、ＳＣＧＦのＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの骨形成を回復する能力を研究した。造血への影響と同様に、ＳＣＧＦは、対照マウスの骨形成に影響を与えなかった（補足図９ａ～ｄ）。しかし、ＳＣＧＦの注入は、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの骨小柱の体積ならびに骨小柱の数及び厚さの有意な増加を引き起こし、これにより、骨形成の促進において役割を果たすことが確認される（補足図９ａ～ｄ）。特に、ＳＣＧＦの発現は、造血細胞及びＢＭＥＣには見られず、主に、ＢＭＬｅｐｒ＋及び骨芽細胞間質サブセットを含むＢＭ間質細胞で発現された（補足図９ｅ）。しかし、Ｔｉｅ２－ＩｋＢ－ＳＳ、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫ、及びＣＤＨ５－ＭＡＰＫ：：ＩｋＢマウスのＢＭからの全間質細胞、Ｌｅｐｒ＋細胞、及び骨芽細胞におけるＳＣＧＦ発現の分析では、ｍＲＮＡ発現の大幅な変化が明らかにならなかった（補足図９ｆ）。これにより、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスにおける血漿ＳＣＧＦの減少が転写変化によるものではないことが示される。

炎症性応答を媒介するサイトカインは、翻訳レベルで調節することができることが知られており、最近の報告では、Ｉｌ１ｂが翻訳を調節することにより軟骨細胞の分泌応答を調節することが示された。（Ｍａｚｕｍｄｅｒ，Ｂ．，Ｌｉ，Ｘ．＆Ｂａｒｉｋ，Ｓ．Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎｃｏｎｔｒｏｌ：ａｍｕｌｔｉｆａｃｅｔｅｄｒｅｇｕｌａｔｏｒｏｆｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｒｅｓｐｏｎｓｅ．ＪＩｍｍｕｎｏｌ（２０１０）１８４，３３１１－３３１９，ｄｏｉ：１０．４０４９／ｊｉｍｍｕｎｏｌ．０９０３７７８；ＭｃＤｅｒｍｏｔｔ，Ｂ．Ｔ．，Ｐｅｆｆｅｒｓ，Ｍ．Ｊ．，ＭｃＤｏｎａｇｈ，Ｂ．＆Ｔｅｗ，Ｓ．Ｒ．ＴｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｓｔｏｔｈｅｓｅｃｒｅｔｏｒｙｒｅｓｐｏｎｓｅｏｆｃｈｏｎｄｒｏｃｙｔｉｃｃｅｌｌｓｆｏｌｌｏｗｉｎｇｅｘｐｏｓｕｒｅｔｏＩｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－１ｂｅｔａ．ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ（２０１９）ｄｏｉ：１０．１０７４／ｊｂｃ．ＲＡ１１８．００６８６５）。ＳＣＧＦが分泌タンパク質であり、炎症性応答を調節しているように見えることを考えると、翻訳調節を受け得る可能性がある。しかし、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスにおける血漿ＳＣＧＦの減少の最も可能性の高い説明は、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスにおけるＢＭ間質細胞数（血漿ＳＣＧＦを産生する細胞）のアポトーシスによる全体的な減少によるものと思われる（図７ｈ、ｋ）。まとめると、ＳＣＧＦ注入が、血管完全性を回復し、ＢＭ炎症を解消し、骨の健康を改善することによってＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスで観察された造血障害を回復させ、従って、ＳＣＧＦがストレス状況下で造血回復を媒介することにおいて重要な役割を果たし得ることが示唆されることを、これらのデータが示す。

ＳＣＧＦは、骨髄抑制損傷後の造血再生を高める。骨髄抑制性傷害は、内皮のニッチに悪影響を及ぼし、これにより、血管完全性の損失及び造血回復の遅れがもたらされることが示されている。（Ｈｏｏｐｅｒ，Ａ．Ｔ．ｅｔａｌ．ＥｎｇｒａｆｔｍｅｎｔａｎｄｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎｏｆｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｓｉｓｉｓｄｅｐｅｎｄｅｎｔｏｎＶＥＧＦＲ２－ｍｅｄｉａｔｅｄｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｏｆｓｉｎｕｓｏｉｄａｌｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓ．Ｃｅｌｌｓｔｅｍｃｅｌｌ（２００９）４，２６３－２７４，ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｓｔｅｍ．２００９．０１．００６；Ｌｉ，Ｘ．Ｍ．，Ｈｕ，Ｚ．，Ｊｏｒｇｅｎｓｏｎ，Ｍ．Ｌ．，Ｗｉｎｇａｒｄ，Ｊ．Ｒ．＆Ｓｌａｙｔｏｎ，Ｗ．Ｂ．Ｂｏｎｅｍａｒｒｏｗｓｉｎｕｓｏｉｄａｌｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓｕｎｄｅｒｇｏｎｏｎａｐｏｐｔｏｔｉｃｃｅｌｌｄｅａｔｈａｎｄａｒｅｒｅｐｌａｃｅｄｂｙｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｎｇｓｉｎｕｓｏｉｄａｌｃｅｌｌｓｉｎｓｉｔｕｔｏｍａｉｎｔａｉｎｔｈｅｖａｓｃｕｌａｒｎｉｃｈｅｆｏｌｌｏｗｉｎｇｌｅｔｈａｌｉｒｒａｄｉａｔｉｏｎ．ＥｘｐＨｅｍａｔｏｌ（２００８）３６，１１４３－１０６６１１５６，ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｅｘｐｈｅｍ．２００８．０６．００９）。特に、電離放射線は、内皮内のＮＦ－ｋＢシグナル伝達を活性化し、炎症及び内皮機能障害につながることが既知である。（Ｂａｓｅｌｅｔ，Ｂ．，Ｓｏｎｖｅａｕｘ，Ｐ．，Ｂａａｔｏｕｔ，Ｓ．＆Ａｅｒｔｓ，Ａ．Ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌｅｆｆｅｃｔｓｏｆｉｏｎｉｚｉｎｇｒａｄｉａｔｉｏｎ：ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌａｃｔｉｖａｔｉｏｎａｎｄｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ．ＣｅｌｌＭｏｌＬｉｆｅＳｃｉ（２０１９）７６，６９９－７２８，ｄｏｉ：１０．１００７／ｓ０００１８－０１８－２９５６－ｚ）。

ＳＣＧＦ注入がＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの血管及び造血の障害を解決することを考えると、ＳＣＧＦが骨髄抑制ストレス後の造血回復を高め得るかどうかが試験される。野生型マウスに骨髄抑制線量の照射（６５０Ｒａｄ）を与え、照射後＋１日目から開始する合計７回の注射で、０．５μｇ、１μｇ、または２μｇのいずれかのＳＣＧＦを１日おきに注入し、造血回復を２１日間評価した（補足図１０ａ）。２μｇのＳＣＧＦの注入が、白血球、赤血球、及び血小板の回復の大幅な増強をもたらしたことを、用量応答実験は示した。これにより、ＳＣＧＦが骨髄抑制ストレス後の造血回復を高めることが確認される（補足図１０ａ）。この方策を利用して、ＳＣＧＦが造血回復を改善し、対照マウス及びＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの両方でＨＳＰＣ活性を維持し得るかどうかが試験された（補足図１０ｂ）。ＳＣＧＦの注入により、対照マウス及びＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの両方において、６５０Ｒａｄの骨髄抑制照射後の造血回復が改善されたことを、本発明者らは見出した（図９ａ、ｂ）。ＳＣＧＦ注入により、対照マウス及びＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの両方において血管完全性が維持されることを、照射後２８日目の大腿骨ＢＭ切片の免疫蛍光分析は明らかにした。（図９ｃ、ｄ）。対照マウス及びＳＣＧＦで処置されたＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの両方において、ＢＭ細胞性に大幅な増加が見られたが（図９ｅ）、表現型ＨＳＣ頻度に大幅な変化は観察されなかった（図９ｆ）ことを、骨髄抑制損傷の２８日後のＢＭ細胞性及びＨＳＣ頻度の評価は明らかにした。ＨＳＣ頻度が炎症性ストレスの条件下で生着能と十分に相関しないことが示されていることを考慮して、ＳＣＧＦ注入が骨髄抑制後のＨＳＣ機能性を高めることができる能力を研究した。（Ｚｈａｎｇ，Ｈ．ｅｔａｌ．ＳｅｐｓｉｓＩｎｄｕｃｅｓＨｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃＳｔｅｍＣｅｌｌＥｘｈａｕｓｔｉｏｎａｎｄＭｙｅｌｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎｔｈｒｏｕｇｈＤｉｓｔｉｎｃｔＣｏｎｔｒｉｂｕｔｉｏｎｓｏｆＴＲＩＦａｎｄＭＹＤ８８．ＳｔｅｍＣｅｌｌＲｅｐｏｒｔｓ（２０１６）６，９４０－９５６，ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｓｔｅｍｃｒ．２０１６．０５．００２）。この目的のために、照射後２８日目に競合的ＢＭ移植を実施し、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスまたは同腹仔対照（ＰＢＳまたはＳＣＧＦで処置）由来の２．５×１０⁶のドナーＷＢＭ細胞を、致死的に照射された（９５０Ｒａｄ）ＣＤ４５．１マウスに、５×１０⁵のＣＤ４５．１競合物質ＷＢＭ細胞と共に移植した（図９ｇ、ｈ）。ＳＣＧＦの注入により、対照マウス及びＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの両方に由来する造血細胞の長期生着能及び多系列再構成能が大幅に向上することを、移植の４ヶ月後のＣＤ４５．２細胞生着の分析は明らかにした（図９ｇ、ｈ）。特に、ＳＣＧＦ注入は、二次移植アッセイ中にＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスに由来する造血細胞の連続的な再増殖能力を維持することが可能であった（図９ｇ、ｈ）。これは、ＳＣＧＦが、定常状態（図８ｄ～ｇ）及び骨髄抑制損傷後（図９ｇ～ｊ）の両方でＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスのＨＳＣ機能性を維持することを示した。さらに重要なことに、ＳＣＧＦ注入が対照マウスの定常状態の造血に影響を与えなかったが（図８）、これらのデータは、ＳＣＧＦが骨髄抑制損傷後の対照マウスのＨＳＣ機能を維持することを示し（図９ｇ、ｈ）、それにより、造血ストレス中のＳＣＧＦの新しい役割を定義した。まとめると、ＳＣＧＦが炎症性ストレス下での血管及び造血回復を高めるだけでなく、造血系への骨髄抑制性傷害後のＨＳＣの機能性を大幅に改善する強力な治療特性を有することを、これらの知見は示す。

考察
ＨＳＣ機能に対する特定の炎症性サイトカインの直接的な影響は、広く研究されている。（Ｍｉｒａｎｔｅｓ，Ｃ．，Ｐａｓｓｅｇｕｅ，Ｅ．＆Ｐｉｅｔｒａｓ，Ｅ．Ｍ．Ｐｒｏ－ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｃｙｔｏｋｉｎｅｓ：ｅｍｅｒｇｉｎｇｐｌａｙｅｒｓｒｅｇｕｌａｔｉｎｇＨＳＣｆｕｎｃｔｉｏｎｉｎｎｏｒｍａｌａｎｄｄｉｓｅａｓｅｄｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｓｉｓ．Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｃｅｌｌｒｅｓｅａｒｃｈ（２０１４）３２９，２４８－２５４，ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｙｅｘｃｒ．２０１４．０８．０１７）。しかし、ＢＭ微小環境内のＨＳＣをサポートするニッチ細胞への慢性炎症の影響は、微小環境由来の炎症を概括するモデルシステムが不足しているので、十分に理解されていないままである。本研究では、ＢＭ内皮ニッチ内の持続性炎症が、ＢＭ微小環境内の酸素化状態、ＲＯＳレベル、及び前炎症性サイトカイン環境の変化に起因するＨＳＣ機能に悪影響を与えることが示された。成体マウスの内皮内で選択的にＭＡＰＫシグナル伝達を活性化すると、ＨＳＰＣ及び複数のニッチ細胞を含むＢＭ微小環境内でＮＦ－ｋＢ依存性の炎症性ストレス応答が引き起こされる。これは、慢性炎症時の内皮の重要な役割を強調する（図１０）。さらに、内皮ＭＡＰＫ活性化に起因する炎症性ストレスは、骨髄抑制損傷後の造血回復及びＨＳＣ機能性に重大な障害を引き起こした。重要なことに、遺伝子（内皮ＮＦ－ｋＢの抑制）または薬理学的（ＳＣＧＦ注入）手段による炎症の寛解は、内皮ＭＡＰＫ活性化により観察された造血及びＨＳＣ欠陥の全てを解決することが可能であった。これにより、組織特異的微小環境内の炎症によって誘導された幹細胞機能障害が可逆的であることが示される。

ＮＦ－ｋＢ及びＭＡＰＫ経路は、感染への応答、骨髄抑制損傷からの回復、及び炎症の調節に密接に関与する。ＨＳＣの維持、造血、及び免疫細胞機能におけるこれらの経路の細胞固有の役割が、徹底的に調査されているが、これらの経路が、微小血管内皮内の炎症性応答の調節に不可欠な役割を果たすことがますます明らかになる。（Ｐｏｂｅｒ，Ｊ．Ｓ．＆Ｓｅｓｓａ，Ｗ．Ｃ．Ｅｖｏｌｖｉｎｇｆｕｎｃｔｉｏｎｓｏｆｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓｉｎｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ．Ｎａｔｕｒｅｒｅｖｉｅｗｓ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（２００７）７，８０３－８１５，ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｒｉ２１７１；Ｂｏｔｔｅｒｏ，Ｖ．，Ｗｉｔｈｏｆｆ，Ｓ．＆Ｖｅｒｍａ，Ｉ．Ｍ．ＮＦ－ｋａｐｐａＢａｎｄｔｈｅｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｓｉｓ．Ｃｅｌｌｄｅａｔｈａｎｄｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ（２００６）１３，７８５－７９７，ｄｏｉ：１０．１０３８／ｓｊ．ｃｄｄ．４４０１８８８；Ｇｅｅｓｔ，Ｃ．Ｒ．＆Ｃｏｆｆｅｒ，Ｐ．Ｊ．ＭＡＰＫｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙｓｉｎｔｈｅｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｓｉｓ．Ｊｏｕｒｎａｌｏｆｌｅｕｋｏｃｙｔｅｂｉｏｌｏｇｙ（２００９）８６，２３７－２５０，ｄｏｉ：１０．１１８９／ｊｌｂ．０２０９０９７）。

内皮細胞内では、ＮＦ－κＢは、前炎症性サイトカインの膨大なレパートリーのマスター調節因子として機能する。（Ｘｉａｏ，Ｌ．，Ｌｉｕ，Ｙ．＆Ｗａｎｇ，Ｎ．Ｎｅｗｐａｒａｄｉｇｍｓｉｎｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｓｉｇｎａｌｉｎｇｉｎｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓ．Ａｍ．ＪＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙ．Ｈｅａｒｔａｎｄｃｉｒｃｕｌａｔｏｒｙｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ（２０１４）３０６，Ｈ３１７－３２５，ｄｏｉ：１０．１１５２／ａｊｐｈｅａｒｔ．００１８２．２０１３）。侵入する病原体に対する免疫応答の開始における内皮ＮＦ－ｋＢシグナル伝達の確立された役割に加えて、それは、照射などの損傷後にも活性化される。これは、慢性血管炎症、組織損傷、及び臓器機能障害を引き起こす。（Ｂａｓｅｌｅｔ，Ｂ．，Ｓｏｎｖｅａｕｘ，Ｐ．，Ｂａａｔｏｕｔ，Ｓ．＆Ａｅｒｔｓ，Ａ．Ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌｅｆｆｅｃｔｓｏｆｉｏｎｉｚｉｎｇｒａｄｉａｔｉｏｎ：ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌａｃｔｉｖａｔｉｏｎａｎｄｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ．ＣｅｌｌＭｏｌＬｉｆｅＳｃｉ（２０１９）７６，６９９－７２８，ｄｏｉ：１０．１００７／ｓ０００１８－０１８－２９５６－ｚ；Ｋｏｒｐｅｌａ，Ｅ．＆Ｌｉｕ，Ｓ．Ｋ．Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｐｅｒｔｕｒｂａｔｉｏｎｓａｎｄｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓｔｒａｔｅｇｉｅｓｉｎｎｏｒｍａｌｔｉｓｓｕｅｒａｄｉａｔｉｏｎｄａｍａｇｅ．Ｒａｄｉａｔｉｏｎｏｎｃｏｌｏｇｙ（Ｌｏｎｄｏｎ，Ｅｎｇｌａｎｄ）（２０１４）９，２６６，ｄｏｉ：１０．１１８６／ｓ１３０１４－０１４－０２６６－１０８３７）。

興味深いことに、血管内のＮＦ－ｋＢシグナル伝達は、放射線療法後数年間、活性化されたままである。これにより、前炎症性サイトカインの持続的な発現につながる。（Ｈａｌｌｅ，Ｍ．ｅｔａｌ．Ｓｕｓｔａｉｎｅｄｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎｄｕｅｔｏｎｕｃｌｅａｒｆａｃｔｏｒ－ｋａｐｐａＢａｃｔｉｖａｔｉｏｎｉｎｉｒｒａｄｉａｔｅｄｈｕｍａｎａｒｔｅｒｉｅｓ．Ｊ．Ａｍ．Ｃｏｌｌ．Ｃａｒｄｉｏｌ．５（２０１０）５，１２２７－１２３６，ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｊａｃｃ．２００９．１０．０４７）。ＮＦ－κＢの阻害が、移植片から分泌されたサイトカインの量を減少させることにより、骨髄破壊療法、移植片拒絶反応、及び移植片対宿主病からの保護に有益であり得ることを、研究は示唆している。（Ｂｏｔｔｅｒｏ，Ｖ．，Ｗｉｔｈｏｆｆ，Ｓ．＆Ｖｅｒｍａ，Ｉ．Ｍ．ＮＦ－ｋａｐｐａＢａｎｄｔｈｅｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｓｉｓ．Ｃｅｌｌｄｅａｔｈａｎｄｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ（２００６）１３，７８５－７９７，ｄｏｉ：１０．１０３８／ｓｊ．ｃｄｄ．４４０１８８８）。

実に、特に、内皮細胞における、標準的なＮＦ－κＢシグナル伝達経路の阻害が、１つには前炎症性サイトカインを減少させることにより、定常状態の造血及び照射誘導性骨髄抑制後の再生の両方を高めることに重大な影響を有することを、本研究は示した。（Ｐｏｕｌｏｓ，Ｍ．Ｇ．ｅｔａｌ．Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ－ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆＮＦ－ｋａｐｐａＢｅｎｈａｎｃｅｓｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｓｉｓ．ＮａｔＣｏｍｍｕｎ（２０１６）７，１３８２９，ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｃｏｍｍｓ１３８２９）。最近の研究は、特に、患者が中～高線量の全身照射に曝露される場合、造血系の再生中のＭＡＰＫシグナル伝達の役割を明らかにし始めている。（Ｍｕｎｓｈｉ，Ａ．＆Ｒａｍｅｓｈ，Ｒ．Ｍｉｔｏｇｅｎ－ａｃｔｉｖａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅｓａｎｄｔｈｅｉｒｒｏｌｅｉｎｒａｄｉａｔｉｏｎｒｅｓｐｏｎｓｅ．ＧｅｎｅｓＣａｎｃｅｒ（２０１３）４，４０１－４０８，ｄｏｉ：１０．１１７７／１９４７６０１９１３４８５４１４）。放射線損傷後の造血回復の遅れは、ＭＡＰＫシグナル伝達の増加に起因している。（Ｗａｎｇ，Ｙ．，Ｌｉｕ，Ｌ．＆Ｚｈｏｕ，Ｄ．Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆｐ３８ＭＡＰＫａｔｔｅｎｕａｔｅｓｉｏｎｉｚｉｎｇｒａｄｉａｔｉｏｎ－ｉｎｄｕｃｅｄｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｃｅｌｌｓｅｎｅｓｃｅｎｃｅａｎｄｒｅｓｉｄｕａｌｂｏｎｅｍａｒｒｏｗｉｎｊｕｒｙ．ＲａｄｉａｔＲｅｓ（２０１１）１７６，７４３－７５２）。慢性的な内皮ＭＡＰＫ活性化は、特に炎症誘導性損傷後の血管機能障害の特徴である、血管透過性の増加を引き起こすことが示されている。（Ｄｏｎｇ，Ｆ．ｅｔａｌ．Ｃａｄｍｉｕｍｉｎｄｕｃｅｓｖａｓｃｕｌａｒｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙｖｉａａｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｐ３８ＭＡＰＫｐａｔｈｗａｙ．ＢｉｏｃｈｅｍＢｉｏｐｈｙｓＲｅｓＣｏｍｍｕｎ（２０１４）４５０，４４７－４５２，ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｂｂｒｃ．２０１４．０５．１４０；Ｌｉ，Ｌ．ｅｔａｌ．Ｐ３８／ＭＡＰＫｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｓｔｏｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｂａｒｒｉｅｒｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎｖｉａＭＡＰ４ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅｄｉｓａｓｓｅｍｂｌｙｉｎｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ－ｉｎｄｕｃｅｄａｃｕｔｅｌｕｎｇｉｎｊｕｒｙ．ＳｃｉＲｅｐ（２０１５）５，８８９５，ｄｏｉ：１０．１０３８／ｓｒｅｐ０８８９５）。内皮細胞におけるＭＡＰＫ活性化が血管炎症及び内皮機能不全の増加をもたらすことを示唆する証拠が増えている。（ＲｏｔｈＦｌａｃｈ，Ｒ．Ｊ．ｅｔａｌ．ＥｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅＭＡＰ４Ｋ４ｐｒｏｍｏｔｅｓｖａｓｃｕｌａｒｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎａｎｄａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ．ＮａｔＣｏｍｍｕｎ（２０１５）６，８９９５，ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｃｏｍｍｓ９９９５）。まとめると、内皮内の慢性炎症が、ＭＡＰＫ及びＮＦ－ｋＢの両方のシグナル伝達経路間の相互作用を伴い得ることを、これらの研究は示す。

ＥＲＫ－ＭＡＰＫ経路及びＮＦ－ｋＢ経路間のクロストークが、ＢＭ内の慢性内皮炎症の結果ならびにニッチ活性及びＨＳＣ機能への得られた影響を調節することを、本研究は示す。ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスで観察されたＨＳＣの骨髄バイアス産物は、ＨＳＣ機能に対する慢性血管炎症の影響を示し、骨髄新生物の素因を含む加齢関連ＨＳＣ表現型に影響を与える持続的なニッチ駆動炎症の可能性を強調する。重要なことに、内皮ＮＦ－ｋＢ阻害時にＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスで観察された造血障害の完全なレスキューにより、慢性炎症中の幹細胞ニッチ相互作用を調べるための検証可能な仮説を導き出すために、及び炎症関連ＨＳＣ及びニッチの欠陥を解決するＳＣＧＦのような新しい因子を同定するために、これらの遺伝子モデルを利用する機会が可能なる。ＳＣＧＦ／Ｃｌｅｃ１１ａは、テトラネクチンファミリーに属するＣ型レクチンタンパク質のメンバーである。（Ｂｒｏｗｎ，Ｇ．Ｄ．，Ｗｉｌｌｍｅｎｔ，Ｊ．Ａ．＆Ｗｈｉｔｅｈｅａｄ，Ｌ．Ｃ－ｔｙｐｅｌｅｃｔｉｎｓｉｎｉｍｍｕｎｉｔｙａｎｄｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ．Ｎａｔｕｒｅｒｅｖｉｅｗｓ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（２０１８）１８，３７４－３８９，ｄｏｉ：１０．１０３８／ｓ４１５７７－０１８－０００４－８）。最近の研究では、免疫、炎症、及び様々な生理学的プロセスとの関連でＣ型レクチンが果たす重要な役割が強調されている。（同上を参照。）ＳＣＧＦが、対照マウスの定常状態の造血に影響を与えなかったが、ＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスへのＳＣＧＦの注入は、表現型及び機能的造血属性に多大な利益をもたらした。これにより、ＳＣＧＦが、ストレス状況下での造血回復の媒介に重要な役割を果たし得ることが示される。対照マウス及びＣＤＨ５－ＭＡＰＫマウスの両方において、骨髄抑制後の造血回復を高めるＳＣＧＦの能力は、ストレス造血中の若返り因子としての役割を確認する。ＢＭ炎症の抑制、血管完全性の回復、骨髄抑制の回復の促進、及びその骨形成特性におけるＳＣＧＦの影響を考慮すると、その遺伝子調節機序、同族受容体（複数可）、及び下流のシグナル伝達経路の同定は、刺激的な将来の方向性である。これらの研究は、ＳＣＧＦが造血再生を高める正確な分子機序を理解するために、ならびに、骨髄抑制療法後の造血系及びＢＭ内皮ニッチの保護に向けられた処置方策を開発するために、重要になるであろう。

本発明が、その特定の実施形態を参照して説明されているが、様々な変更がなされ得ること、ならびに、均等物が、本発明の真の趣旨及び範囲から逸脱することなく置き換えられ得ることを、当業者は理解すべきである。加えて、本発明の目的の趣旨及び範囲に、特定の状況、材料、物質の組成、プロセス、プロセスステップ（複数可）を採用する多くの改変がなされてもよい。そのような全ての変更は、本明細書に添付された特許請求の範囲内にあることが意図される。

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４８．Ｆｏｒｄｅ，Ａ．，Ｃｏｎｓｔｉｅｎ，Ｒ．，Ｇｒｏｎｅ，Ｈ．Ｊ．，Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇ，Ｇ．＆Ａｒｎｏｌｄ，Ｂ．ＴｅｍｐｏｒａｌＣｒｅ－ｍｅｄｉａｔｅｄｒｅｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｅｘｃｌｕｓｉｖｅｌｙｉｎｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓｕｓｉｎｇＴｉｅ２ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙｅｌｅｍｅｎｔｓ．Ｇｅｎｅｓｉｓ３３，１９１－１９７，ｄｏｉ：１０．１００２／ｇｅｎｅ．１０１１７（２００２）．
４９．Ｔａｎｇ，Ｙ．，Ｈａｒｒｉｎｇｔｏｎ，Ａ．，Ｙａｎｇ，Ｘ．，Ｆｒｉｅｓｅｌ，Ｒ．Ｅ．＆Ｌｉａｗ，Ｌ．ＴｈｅｃｏｎｔｒｉｂｕｔｉｏｎｏｆｔｈｅＴｉｅ２＋ｌｉｎｅａｇｅｔｏｐｒｉｍｉｔｉｖｅａｎｄｄｅｆｉｎｉｔｉｖｅｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｃｅｌｌｓ．Ｇｅｎｅｓｉｓ４８，５６３－５６７，ｄｏｉ：１０．１００２／ｄｖｇ．２０６５４（２０１０）．
５０．Ｇａｒｅｕｓ，Ｒ．ｅｔａｌ．Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌ－ｓｐｅｃｉｆｉｃＮＦ－ｋａｐｐａＢｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｐｒｏｔｅｃｔｓｍｉｃｅｆｒｏｍａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ．Ｃｅｌｌｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ８，３７２－３８３，ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｃｍｅｔ．２００８．０８．０１６（２００８）．
５１．Ｋｏｒｈｏｎｅｎ，Ｈ．ｅｔａｌ．ＡｎａｐｈｙｌａｃｔｉｃｓｈｏｃｋｄｅｐｅｎｄｓｏｎｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌＧｑ／Ｇ１１．ＪＥｘｐＭｅｄ２０６，４１１－４２０，ｄｏｉ：１０．１０８４／ｊｅｍ．２００８２１５０（２００９）．
５２．Ｐｏｕｌｏｓ，Ｍ．Ｇ．ｅｔａｌ．Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ－ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆＮＦ－ｋａｐｐａＢｅｎｈａｎｃｅｓｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｓｉｓ．ＮａｔＣｏｍｍｕｎ７，１３８２９，ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｃｏｍｍｓ１３８２９（２０１６）．
５３．Ｂａｒｔｅｌｓ，Ｋ．，Ｇｒｅｎｚ，Ａ．＆Ｅｌｔｚｓｃｈｉｇ，Ｈ．Ｋ．Ｈｙｐｏｘｉａａｎｄｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎａｒｅｔｗｏｓｉｄｅｓｏｆｔｈｅｓａｍｅｃｏｉｎ．ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ１１０，１８３５１－１８３５２，ｄｏｉ：１０．１０７３／ｐｎａｓ．１３１８３４５１１０（２０１３）．
５４．Ｋａｒｈａｕｓｅｎ，Ｊ．，Ｈａａｓｅ，Ｖ．Ｈ．＆Ｃｏｌｇａｎ，Ｓ．Ｐ．Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｈｙｐｏｘｉａ：ｒｏｌｅｏｆｈｙｐｏｘｉａ－ｉｎｄｕｃｉｂｌｅｆａｃｔｏｒ．ＣｅｌｌＣｙｃｌｅ４，２５６－２５８（２００５）．
５５．Ｅｌｔｚｓｃｈｉｇ，Ｈ．Ｋ．＆Ｃａｒｍｅｌｉｅｔ，Ｐ．Ｈｙｐｏｘｉａａｎｄｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ．ＮＥｎｇｌＪＭｅｄ３６４，６５６－６６５，ｄｏｉ：１０．１０５６／ＮＥＪＭｒａ０９１０２８３（２０１１）．
５６．Ｍｉｔｔａｌ，Ｍ．，Ｓｉｄｄｉｑｕｉ，Ｍ．Ｒ．，Ｔｒａｎ，Ｋ．，Ｒｅｄｄｙ，Ｓ．Ｐ．＆Ｍａｌｉｋ，Ａ．Ｂ．Ｒｅａｃｔｉｖｅｏｘｙｇｅｎｓｐｅｃｉｅｓｉｎ１０３５ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎａｎｄｔｉｓｓｕｅｉｎｊｕｒｙ．ＡｎｔｉｏｘｉｄＲｅｄｏｘＳｉｇｎａｌ２０，１１２６－１１６７，ｄｏｉ：１０．１０８９／ａｒｓ．２０１２．５１４９（２０１４）．
５７．Ｂｉｇａｒｅｌｌａ，Ｃ．Ｌ．，Ｌｉａｎｇ，Ｒ．＆Ｇｈａｆｆａｒｉ，Ｓ．ＳｔｅｍｃｅｌｌｓａｎｄｔｈｅｉｍｐａｃｔｏｆＲＯＳｓｉｇｎａｌｉｎｇ．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ１４１，４２０６－４２１８，ｄｏｉ：１０．１２４２／ｄｅｖ．１０７０８６（２０１４）．
５８．Ｔａｋｕｂｏ，Ｋ．ｅｔａｌ．ＲｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｔｈｅＨＩＦ－１ａｌｐｈａｌｅｖｅｌｉｓｅｓｓｅｎｔｉａｌｆｏｒｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌｓ．Ｃｅｌｌｓｔｅｍｃｅｌｌ７，３９１－４０２，ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｓｔｅｍ．２０１０．０６．０２０（２０１０）．
５９．Ｌｕｄｉｎ，Ａ．ｅｔａｌ．Ｒｅａｃｔｉｖｅｏｘｙｇｅｎｓｐｅｃｉｅｓｒｅｇｕｌａｔｅｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌｓｅｌｆ－ｒｅｎｅｗａｌ，ｍｉｇｒａｔｉｏｎａｎｄｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，ａｓｗｅｌｌａｓｔｈｅｉｒｂｏｎｅｍａｒｒｏｗｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ．ＡｎｔｉｏｘｉｄＲｅｄｏｘＳｉｇｎａｌ２１，１６０５－１６１９，ｄｏｉ：１０．１０８９／ａｒｓ．２０１４．５９４１（２０１４）．
６０．Ｚｈｏｕ，Ｂ．Ｏ．，Ｙｕｅ，Ｒ．，Ｍｕｒｐｈｙ，Ｍ．Ｍ．，Ｐｅｙｅｒ，Ｊ．Ｇ．＆Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｓ．Ｊ．Ｌｅｐｔｉｎ－ｒｅｃｅｐｔｏｒ－ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｒｏｍａｌｃｅｌｌｓｒｅｐｒｅｓｅｎｔｔｈｅｍａｉｎｓｏｕｒｃｅｏｆｂｏｎｅｆｏｒｍｅｄｂｙａｄｕｌｔｂｏｎｅｍａｒｒｏｗ．Ｃｅｌｌｓｔｅｍｃｅｌｌ１５，１５４－１６８，ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｓｔｅｍ．２０１４．０６．００８（２０１４）．
６１．Ｄｉｎｇ，Ｌ．＆Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｓ．Ｊ．Ｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌｓａｎｄｅａｒｌｙｌｙｍｐｈｏｉｄｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒｓｏｃｃｕｐｙｄｉｓｔｉｎｃｔｂｏｎｅｍａｒｒｏｗｎｉｃｈｅｓ．Ｎａｔｕｒｅ４９５，２３１－２３５，ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎａｔｕｒｅ１１８８５（２０１３）．
６２．Ｍｏｓｓａｄｅｇｈ－Ｋｅｌｌｅｒ，Ｎ．ｅｔａｌ．Ｍ－ＣＳＦｉｎｓｔｒｕｃｔｓｍｙｅｌｏｉｄｌｉｎｅａｇｅｆａｔｅｉｎｓｉｎｇｌｅｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌｓ．Ｎａｔｕｒｅ４９７，２３９－２４３，ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎａｔｕｒｅ１２０２６（２０１３）．
６３．Ｙｕｅ，Ｒ．，Ｓｈｅｎ，Ｂ．＆Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｓ．Ｊ．Ｃｌｅｃ１１ａ／ｏｓｔｅｏｌｅｃｔｉｎｉｓａｎｏｓｔｅｏｇｅｎｉｃｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｔｈａｔｐｒｏｍｏｔｅｓｔｈｅｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅｏｆｔｈｅａｄｕｌｔｓｋｅｌｅｔｏｎ．Ｅｌｉｆｅ５，ｄｏｉ：１０．７５５４／ｅＬｉｆｅ．１８７８２（２０１６）．
６４．Ｋｅｌｌｅｒ，Ｃ．Ｃ．ｅｔａｌ．Ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆａｎｏｖｅｌｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｍｅｄｉａｔｏｒｉｎｃｈｉｌｄｒｅｎｗｉｔｈｓｅｖｅｒｅｍａｌａｒｉａｌａｎｅｍｉａ．ＩｎｆｅｃｔＩｍｍｕｎ７７，３８６４－３８７１，ｄｏｉ：１０．１１２８／ＩＡＩ．００３４２－０９（２００９）．
６５．Ｉｔｏ，Ｃ．ｅｔａｌ．Ｓｅｒｕｍｓｔｅｍｃｅｌｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｆｏｒｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｒｅｃｏｖｅｒｙｆｏｌｌｏｗｉｎｇｓｔｅｍｃｅｌｌｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ．ＢｏｎｅＭａｒｒｏｗＴｒａｎｓｐｌａｎｔ３２，３９１－３９８，ｄｏｉ：１０．１０３８／ｓｊ．ｂｍｔ．１７０４１５２（２００３）．
６６．Ｍａｚｕｍｄｅｒ，Ｂ．，Ｌｉ，Ｘ．＆Ｂａｒｉｋ，Ｓ．Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎｃｏｎｔｒｏｌ：ａｍｕｌｔｉｆａｃｅｔｅｄｒｅｇｕｌａｔｏｒｏｆｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｒｅｓｐｏｎｓｅ．ＪＩｍｍｕｎｏｌ１８４，３３１１－３３１９，ｄｏｉ：１０．４０４９／ｊｉｍｍｕｎｏｌ．０９０３７７８（２０１０）．
６７．ＭｃＤｅｒｍｏｔｔ，Ｂ．Ｔ．，Ｐｅｆｆｅｒｓ，Ｍ．Ｊ．，ＭｃＤｏｎａｇｈ，Ｂ．＆Ｔｅｗ，Ｓ．Ｒ．ＴｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｓｔｏｔｈｅｓｅｃｒｅｔｏｒｙｒｅｓｐｏｎｓｅｏｆｃｈｏｎｄｒｏｃｙｔｉｃｃｅｌｌｓｆｏｌｌｏｗｉｎｇｅｘｐｏｓｕｒｅｔｏＩｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ１ｂｅｔａ．ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ，ｄｏｉ：１０．１０７４／ｊｂｃ．ＲＡ１１８．００６８６５（２０１９）．
６８．Ｌｉ，Ｘ．Ｍ．，Ｈｕ，Ｚ．，Ｊｏｒｇｅｎｓｏｎ，Ｍ．Ｌ．，Ｗｉｎｇａｒｄ，Ｊ．Ｒ．＆Ｓｌａｙｔｏｎ，Ｗ．Ｂ．Ｂｏｎｅｍａｒｒｏｗｓｉｎｕｓｏｉｄａｌｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓｕｎｄｅｒｇｏｎｏｎａｐｏｐｔｏｔｉｃｃｅｌｌｄｅａｔｈａｎｄａｒｅｒｅｐｌａｃｅｄｂｙｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｎｇｓｉｎｕｓｏｉｄａｌｃｅｌｌｓｉｎｓｉｔｕｔｏｍａｉｎｔａｉｎｔｈｅｖａｓｃｕｌａｒｎｉｃｈｅｆｏｌｌｏｗｉｎｇｌｅｔｈａｌｉｒｒａｄｉａｔｉｏｎ．ＥｘｐＨｅｍａｔｏｌ３６，１１４３１０６６１１５６，ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｅｘｐｈｅｍ．２００８．０６．００９（２００８）．
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７０．Ｚｈａｎｇ，Ｈ．ｅｔａｌ．ＳｅｐｓｉｓＩｎｄｕｃｅｓＨｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃＳｔｅｍＣｅｌｌＥｘｈａｕｓｔｉｏｎａｎｄＭｙｅｌｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎｔｈｒｏｕｇｈＤｉｓｔｉｎｃｔＣｏｎｔｒｉｂｕｔｉｏｎｓｏｆＴＲＩＦａｎｄＭＹＤ８８．ＳｔｅｍＣｅｌｌＲｅｐｏｒｔｓ６，９４０－９５６，ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｓｔｅｍｃｒ．２０１６．０５．００２（２０１６）．
７１．Ｍｉｒａｎｔｅｓ，Ｃ．，Ｐａｓｓｅｇｕｅ，Ｅ．＆Ｐｉｅｔｒａｓ，Ｅ．Ｍ．Ｐｒｏ－ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｃｙｔｏｋｉｎｅｓ：ｅｍｅｒｇｉｎｇｐｌａｙｅｒｓｒｅｇｕｌａｔｉｎｇＨＳＣｆｕｎｃｔｉｏｎｉｎｎｏｒｍａｌａｎｄｄｉｓｅａｓｅｄｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｓｉｓ．Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｃｅｌｌｒｅｓｅａｒｃｈ３２９，２４８－２５４，ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｙｅｘｃｒ．２０１４．０８．０１７（２０１４）．
７２．Ｇｅｅｓｔ，Ｃ．Ｒ．＆Ｃｏｆｆｅｒ，Ｐ．Ｊ．ＭＡＰＫｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙｓｉｎｔｈｅｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｓｉｓ．Ｊｏｕｒｎａｌｏｆｌｅｕｋｏｃｙｔｅｂｉｏｌｏｇｙ８６，２３７－２５０，ｄｏｉ：１０．１１８９／ｊｌｂ．０２０９０９７（２００９）．
７３．Ｘｉａｏ，Ｌ．，Ｌｉｕ，Ｙ．＆Ｗａｎｇ，Ｎ．Ｎｅｗｐａｒａｄｉｇｍｓｉｎｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｓｉｇｎａｌｉｎｇｉｎｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓ．Ａｍｅｒｉｃａｎｊｏｕｒｎａｌｏｆｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ．Ｈｅａｒｔａｎｄｃｉｒｃｕｌａｔｏｒｙｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ３０６，Ｈ３１７－３２５，ｄｏｉ：１０．１１５２／ａｊｐｈｅａｒｔ．００１８２．２０１３（２０１４）．
７４．Ｋｏｒｐｅｌａ，Ｅ．＆Ｌｉｕ，Ｓ．Ｋ．Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｐｅｒｔｕｒｂａｔｉｏｎｓａｎｄｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓｔｒａｔｅｇｉｅｓｉｎｎｏｒｍａｌｔｉｓｓｕｅｒａｄｉａｔｉｏｎｄａｍａｇｅ．Ｒａｄｉａｔｉｏｎｏｎｃｏｌｏｇｙ（Ｌｏｎｄｏｎ，Ｅｎｇｌａｎｄ）９，２６６，ｄｏｉ：１０．１１８６／ｓ１３０１４－０１４－０２６６１０８３７（２０１４）．
７５．Ｈａｌｌｅ，Ｍ．ｅｔａｌ．Ｓｕｓｔａｉｎｅｄｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎｄｕｅｔｏｎｕｃｌｅａｒｆａｃｔｏｒ－ｋａｐｐａＢａｃｔｉｖａｔｉｏｎｉｎｉｒｒａｄｉａｔｅｄｈｕｍａｎａｒｔｅｒｉｅｓ．ＪｏｕｒｎａｌｏｆｔｈｅＡｍｅｒｉｃａｎＣｏｌｌｅｇｅｏｆＣａｒｄｉｏｌｏｇｙ５５，１２２７－１２３６，ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｊａｃｃ．２００９．１０．０４７（２０１０）．
７６．Ｍｕｎｓｈｉ，Ａ．＆Ｒａｍｅｓｈ，Ｒ．Ｍｉｔｏｇｅｎ－ａｃｔｉｖａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅｓａｎｄｔｈｅｉｒｒｏｌｅｉｎｒａｄｉａｔｉｏｎｒｅｓｐｏｎｓｅ．ＧｅｎｅｓＣａｎｃｅｒ４，４０１－４０８，ｄｏｉ：１０．１１７７／１９４７６０１９１３４８５４１４（２０１３）．
７７．Ｗａｎｇ，Ｙ．，Ｌｉｕ，Ｌ．＆Ｚｈｏｕ，Ｄ．Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆｐ３８ＭＡＰＫａｔｔｅｎｕａｔｅｓｉｏｎｉｚｉｎｇｒａｄｉａｔｉｏｎ－ｉｎｄｕｃｅｄｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｃｅｌｌｓｅｎｅｓｃｅｎｃｅａｎｄｒｅｓｉｄｕａｌｂｏｎｅｍａｒｒｏｗｉｎｊｕｒｙ．ＲａｄｉａｔＲｅｓ１７６，７４３－７５２（２０１１）．
７８．Ｄｏｎｇ，Ｆ．ｅｔａｌ．Ｃａｄｍｉｕｍｉｎｄｕｃｅｓｖａｓｃｕｌａｒｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙｖｉａａｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｐ３８ＭＡＰＫｐａｔｈｗａｙ．ＢｉｏｃｈｅｍＢｉｏｐｈｙｓＲｅｓＣｏｍｍｕｎ４５０，４４７－４５２，ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｂｂｒｃ．２０１４．０５．１４０（２０１４）．
７９．Ｌｉ，Ｌ．ｅｔａｌ．Ｐ３８／ＭＡＰＫｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｓｔｏｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｂａｒｒｉｅｒｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎｖｉａＭＡＰ４ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅｄｉｓａｓｓｅｍｂｌｙｉｎｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ－ｉｎｄｕｃｅｄａｃｕｔｅｌｕｎｇｉｎｊｕｒｙ．ＳｃｉＲｅｐ５，８８９５，ｄｏｉ：１０．１０３８／ｓｒｅｐ０８８９５（２０１５）．
８０．Ｂｒｏｗｎ，Ｇ．Ｄ．，Ｗｉｌｌｍｅｎｔ，Ｊ．Ａ．＆Ｗｈｉｔｅｈｅａｄ，Ｌ．Ｃ－ｔｙｐｅｌｅｃｔｉｎｓｉｎｉｍｍｕｎｉｔｙａｎｄｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ．Ｎａｔｕｒｅｒｅｖｉｅｗｓ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ１８，３７４－３８９，ｄｏｉ：１０．１０３８／ｓ４１５７７－０１８－０００４－８（２０１８）．
８１．Ｓｒｉｎｉｖａｓａｎ，Ｌ．ｅｔａｌ．ＰＩ３ｋｉｎａｓｅｓｉｇｎａｌｓＢＣＲ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｍａｔｕｒｅＢｃｅｌｌｓｕｒｖｉｖａｌ．Ｃｅｌｌ１３９，５７３－５８６，ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｃｅｌｌ．２００９．０８．０４１（２００９）．
８２．Ｂｅｎｅｄｉｔｏ，Ｒ．ｅｔａｌ．ＴｈｅｎｏｔｃｈｌｉｇａｎｄｓＤｌｌ４ａｎｄＪａｇｇｅｄ１ｈａｖｅｏｐｐｏｓｉｎｇｅｆｆｅｃｔｓｏｎａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ．Ｃｅｌｌ１３７，１１２４－１１３５，ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｃｅｌｌ．２００９．０３．０２５（２００９）．
８３．ＤｅＦａｌｃｏ，Ｊ．ｅｔａｌ．Ｖｉｒｕｓ－ａｓｓｉｓｔｅｄｍａｐｐｉｎｇｏｆｎｅｕｒａｌｉｎｐｕｔｓｔｏａｆｅｅｄｉｎｇｃｅｎｔｅｒｉｎｔｈｅｈｙｐｏｔｈａｌａｍｕｓ．Ｓｃｉｅｎｃｅ２９１，２６０８－２６１３，ｄｏｉ：１０．１１２６／ｓｃｉｅｎｃｅ．１０５６６０２（２００１）．
８４．Ｈｕ，Ｙ．＆Ｓｍｙｔｈ，Ｇ．Ｋ．ＥＬＤＡ：ｅｘｔｒｅｍｅｌｉｍｉｔｉｎｇｄｉｌｕｔｉｏｎａｎａｌｙｓｉｓｆｏｒｃｏｍｐａｒｉｎｇｄｅｐｌｅｔｅｄａｎｄｅｎｒｉｃｈｅｄｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓｉｎｓｔｅｍｃｅｌｌａｎｄｏｔｈｅｒａｓｓａｙｓ．ＪＩｍｍｕｎｏｌＭｅｔｈｏｄｓ３４７，７０－７８，ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｊｉｍ．２００９．０６．００８（２００９）．
８５．Ｐｏｕｌｏｓ，Ｍ．Ｇ．ｅｔａｌ．Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎｒｅｊｕｖｅｎａｔｅｓａｇｅｄｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌｆｕｎｃｔｉｏｎ．ＪＣｌｉｎＩｎｖｅｓｔ１２７，４１６３－４１７８，ｄｏｉ：１０．１１７２／ｊｃｉ９３９４０（２０１７）．
８６．Ｇｏｌｄ，Ｌ．ｅｔａｌ．Ａｐｔａｍｅｒ－ｂａｓｅｄｍｕｌｔｉｐｌｅｘｅｄｐｒｏｔｅｏｍｉｃｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｆｏｒｂｉｏｍａｒｋｅｒｄｉｓｃｏｖｅｒｙ．ＰｌｏＳｏｎｅ５，ｅ１５００４，ｄｏｉ：１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｏｎｅ．００１５００４（２０１０）．

Claims

骨髄抑制性傷害後の骨髄内皮細胞（ＢＭＥＣ）、造血幹細胞（ＨＳＣ）、及び骨髄間質細胞を含む造血骨髄微小環境内の血管炎症を低減するための方法であって、ＢＭＥＣ活性の低減が、定常状態の造血及びＨＳＣ機能の欠陥をもたらし、前記方法が、
ａ．組み換えまたは合成アンジオクライン因子及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を前記対象に投与すること、ならびに
ｂ．
ａ．前記骨髄の前記造血微小環境において炎症を低減すること、
ｂ．前記骨髄の前記造血微小環境において血管完全性を維持すること、
ｃ．造血幹細胞（ＨＳＣ）、造血幹細胞及び前駆細胞（ＨＳＰＣ）、多能性前駆細胞（ＭＰＰ）、ならびに造血前駆細胞サブセットのうちの１つ以上を含む造血区画における細胞型の頻度及び数を増加させて、多系列の再構成を行うこと、
のうちの１つ以上により、前記骨髄抑制性傷害後の前記造血骨髄微小環境における造血回復を増強すること、
を含み、
前記血管炎症が、血管拡張の増加、骨髄血管漏出の増加を含む血管完全性の減少、及び炎症性メディエーターのレベルの増加うちの１つ以上を含む、前記方法。
前記アンジオクライン因子が、Ｃｌｅｃ１１ａ、Ｈａｐｌｎ１、Ｈｓｐｄ１、Ｉｇｆｂｐ１、Ｂｇｎ、Ｗｎｔ７ａ、Ｓｐａｒｃ、ＲＰ５３、Ｂｍｐｒ１ａ、Ｉｇｈｍ、Ｔｈｂｓ４、Ｃａｍｋ２ｄ、Ｓｉｒｔ２、Ｃａｍｋ２ｂ、Ｓｌｉｔｒｋ５、Ｄｃｔｐｐ１、Ｈｎｒｎｐａ２ｂ、Ｅｒａｐ１からなる群から選択される１つ以上の組み換えまたは合成タンパク質である、請求項１に記載の方法。
前記アンジオクライン因子が、組み換えまたは合成Ｃｌｅｃ１１α（幹細胞成長因子）である、請求項２に記載の方法。
前記骨髄の前記造血微小環境における前記炎症が、血管炎症、ＢＭ間質細胞の炎症、及び造血細胞の炎症を含む、請求項１に記載の方法。
ＨＳＣ機能の前記欠陥が、ＨＳＣ静止の障害及びＨＳＣアポトーシスの増加を含む、請求項１に記載の方法。
血管の炎症を低減することが、前記骨髄内の前記ＢＭＥＣにおいて下流のＮＦｋＢシグナル伝達を抑制すること、前記骨髄の内皮細胞において標的ＮＦｋＢ遺伝子を下方調節すること、またはその両方を含む、請求項１に記載の方法。
前記骨髄抑制性傷害が、放射線、化学療法、またはその両方への曝露を含む、請求項１に記載の方法。
前記放射線が、亜致死放射線、全身照射、全リンパ節照射である、請求項７に記載の方法。
前記骨髄抑制性傷害が、化学療法を含む、請求項７に記載の方法。
前記骨髄抑制性傷害が、骨髄破壊的である、請求項７に記載の方法。
前記骨髄（ＢＭ）微小環境が、ＢＭＥＣ、ＢＭ間質細胞、ＢＭＬｅｐｒ＋細胞、及びＢＭ骨芽細胞を含む、請求項１に記載の方法。
前記ＢＭＥＣが、類洞及び細動脈ＢＭＥＣである、請求項１１に記載の方法。
ＢＭＥＣの前記免疫表現型が、ＣＤ４５－Ｔｅｒ１１９－ＣＤ３１＋ＶＥカドヘリン＋である、請求項１に記載の方法。
ＢＭ間質細胞の前記免疫表現型が、ＣＤ４５－Ｔｅｒ１１９－ＣＤ３１－ＶＥカドヘリン－である、請求項１に記載の方法。
前記ＢＭ間質集団内のＢＭＬｅｐｒ＋細胞の前記免疫表現型が、ＣＤ４５－Ｔｅｒ１１９－ＣＤ３１－Ｌｅｐｒ＋である、請求項１１に記載の方法。
マウスＨＳＣの前記免疫表現型が、ｌｉｎ－Ｔｅｒ１１９－ＣＤ１１ｂ－ＧＲ１－Ｂ２２０－ＣＤ３－ＣＤ４１－ｃｋｉｔ＋ＳＣＡ１＋ＣＤ４８－ＣＤ１５０＋を含む、請求項１に記載の方法。
ヒトＨＳＣの前記免疫表現型が、ＣＤ４５ＲＡ－ＣＤ３８－ＣＤ３４＋ＣＤ９０＋を含む、請求項１に記載の方法。
前記骨髄破壊的傷害後のＢＭＥＣ活性の低減が、定常状態の造血及びＨＳＣ機能の欠陥をもたらす、請求項１に記載の方法。
骨髄抑制性傷害後の造血ホーミング、生着、再構成、及び骨髄の再生を改善をそれを必要とする対象において行う方法であって、
ａ．組み換えまたは合成アンジオクライン因子及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を前記対象に投与すること、ならびに
ｂ．前記血液系を再生し、前記骨髄の造血再構成を促進するのに有効な治療量の多能性の自己再生造血幹細胞（ＨＳＣ）の移植を含む幹細胞併用療法を施行すること、ならびに
ｃ．前記血液系を再生し、前記骨髄の造血再構成を促進するのに有効な治療量のＢＭ内皮細胞（ＢＭＥＣ）の移植を含む血管内皮併用療法を施行すること、ならびに
ｄ．前記骨髄抑制性傷害後の骨髄内皮細胞（ＢＭＥＣ）、造血幹細胞（ＨＳＣ）、及び骨髄間質細胞を含む造血骨髄微小環境内の血管炎症を低減することであって、ＢＭＥＣ活性の低減が、定常状態の造血及びＨＳＣ機能の欠陥をもたらす、前記低減すること、
ｅ．

ａ．前記骨髄の前記造血微小環境における炎症を低減すること、
ｂ．前記骨髄の前記造血微小環境における血管完全性を維持すること、
ｃ．造血幹細胞（ＨＳＣ）、造血幹細胞及び前駆細胞（ＨＳＰＣ）、多能性前駆細胞（ＭＰＰ）、ならびに造血前駆細胞サブセットのうちの１つ以上を含む造血区画における細胞型の頻度及び数を増加させて、多系列の再構成を行うこと、
のうちの１つ以上により、前記骨髄抑制性傷害後の前記造血骨髄微小環境における造血回復を増強すること、
を含み、
前記血管炎症が、血管拡張の増加、骨髄血管漏出の増加を含む血管完全性の減少、及び炎症性メディエーターのレベルの増加うちの１つ以上を含む、前記方法。
前記アンジオクライン因子が、Ｃｌｅｃ１１ａ、Ｈａｐｌｎ１、Ｈｓｐｄ１、Ｉｇｆｂｐ１、Ｂｇｎ、Ｗｎｔ７ａ、Ｓｐａｒｃ、ＲＰ５３、Ｂｍｐｒ１ａ、Ｉｇｈｍ、Ｔｈｂｓ４、Ｃａｍｋ２ｄ、Ｓｉｒｔ２、Ｃａｍｋ２ｂ、Ｓｌｉｔｒｋ５、Ｄｃｔｐｐ１、Ｈｎｒｎｐａ２ｂ、Ｅｒａｐ１からなる群から選択される１つ以上の組み換えまたは合成タンパク質である、請求項１９に記載の方法。
前記アンジオクライン因子が、組み換えまたは合成Ｃｌｅｃ１１α（幹細胞成長因子）である、請求項２０に記載の方法。
ＨＳＣ機能の前記欠陥が、ＨＳＣ静止の障害及びＨＳＣアポトーシスの増加を含む、請求項１９に記載の方法。
前記幹細胞併用療法が、
ａ．組織源から単離された単核細胞の集団から造血幹細胞を単離すること、
ｂ．正または負の選択により造血幹細胞の単核細胞の前記単離集団を濃縮すること、及び
ｃ．前記対象に、造血幹細胞の前記濃縮された単離集団を投与すること、
を含む、請求項１９に記載の方法。
前記血管内皮細胞併用療法が、
ａ．ヒト臍帯由来の内皮細胞を分離すること、
ｂ．正または負の選択により血管内皮細胞について前記単離集団を濃縮すること、及び
ｃ．前記対象に、血管内皮細胞の前記濃縮された単離集団を投与すること、
を含む、請求項１９に記載の方法。
前記組織源が、自家である、請求項２３に記載の方法。
前記組織源が、同種異系である、請求項２３に記載の方法。
血管の炎症を低減することが、前記骨髄内の前記ＢＭＥＣにおいて下流のＮＦｋＢシグナル伝達を抑制すること、前記骨髄の内皮細胞において標的ＮＦｋＢ遺伝子を下方調節すること、またはその両方を含む、請求項１９に記載の方法。
前記骨髄抑制性傷害が、放射線、化学療法、またはその両方への曝露を含む、請求項１９に記載の方法。
前記放射線が、亜致死放射線、全身照射、全リンパ節照射である、請求項２８に記載の方法。
前記骨髄抑制性傷害が、化学療法である、請求項２８に記載の方法。
前記骨髄抑制性傷害が、骨髄破壊的である、請求項２８に記載の方法。
前記骨髄（ＢＭ）微小環境が、ＢＭＥＣ、ＢＭ間質細胞、ＢＭＬｅｐｒ＋細胞、及びＢＭ骨芽細胞を含む、請求項１９に記載の方法。
前記ＢＭＥＣが、類洞及び細動脈ＢＭＥＣである、請求項３２に記載の方法。
ＢＭＥＣの前記免疫表現型が、ＣＤ４５－Ｔｅｒ１１９－ＣＤ３１＋ＶＥカドヘリン＋である、請求項３２に記載の方法。
ＢＭ間質細胞の前記免疫表現型が、ＣＤ４５－Ｔｅｒ１１９－ＣＤ３１－ＶＥカドヘリン－である、請求項３２に記載の方法。
前記ＢＭ間質集団内のＢＭＬｅｐｒ＋細胞の前記免疫表現型が、ＣＤ４５－Ｔｅｒ１１９－ＣＤ３１－Ｌｅｐｒ＋である、請求項３２に記載の方法。
マウスＨＳＣの前記免疫表現型が、ｌｉｎ－Ｔｅｒ１１９－ＣＤ１１ｂ－ＧＲ１－Ｂ２２０－ＣＤ３－ＣＤ４１－ｃｋｉｔ＋ＳＣＡ１＋ＣＤ４８－ＣＤ１５０＋を含む、請求項３２に記載の方法。
ヒトＨＳＣの前記免疫表現型が、ＣＤ４５ＲＡ－ＣＤ３８－ＣＤ３４＋ＣＤ９０＋を含む、請求項３２に記載の方法。
前記方法が、前記骨髄の安定した長期生着、前記末梢血中の骨髄性バイアスの低減、またはその両方を高める、請求項１９に記載の方法。
前記医薬組成物が、前記幹細胞併用療法の施行前に、投与後に、または投与と同時に投与される、請求項１９に記載の方法。
前記骨髄の前記造血微小環境における前記炎症が、血管炎症、ＢＭ間質細胞の炎症、及び造血細胞の炎症を含む、請求項１９に記載の方法。