JP2023047856A - Rice texture deterioration inhibitor, rice softness improver, and rice production method - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、セルラーゼを有効成分とする、米飯の食感劣化抑制剤、米飯の柔らかさ向上剤およびこれらを用いる米飯の製造方法に関する。 TECHNICAL FIELD The present invention relates to an agent for suppressing deterioration of the texture of cooked rice, an agent for improving the softness of cooked rice, and a method for producing cooked rice using these, which contain cellulase as an active ingredient.
米飯を用いた加工食品には、パック米やレトルト米、チルドあるいは常温で販売される弁当、おにぎり、冷凍食品(焼きおにぎり、炒飯、ピラフ等)など様々な形態のものがある。これら米飯を用いた加工食品においては、製造後の時間経過や低温保存に伴い米飯に含まれるデンプンが老化し、米飯の食感が劣化することが問題となっている。賞味期限も、微生物の増殖による品質劣化(腐敗)に加えて、米飯の食感劣化を理由として設定される側面がある。 Processed foods using boiled rice include various forms such as packed rice, retort rice, chilled or room temperature box lunches, rice balls, and frozen foods (grilled rice balls, fried rice, pilaf, etc.). In the processed foods using such cooked rice, there is a problem that the starch contained in the cooked rice deteriorates with the lapse of time after production or storage at low temperature, and the texture of the cooked rice deteriorates. The best-before date is also set for the deterioration of the texture of cooked rice, in addition to quality deterioration (rot) due to the growth of microorganisms.
このことから、米飯について、炊飯直後の食感を長く維持することができれば、商品の品質の維持や賞味期限の延長に寄与することができる。そこで、米飯の食感劣化を抑制するための技術が研究開発されており、例えば、特許文献1には、三糖類、四糖類および五糖類もしくはこれらの糖アルコール類のうち1種または2種以上を添加することにより長時間食感と食味の劣化しない米飯類を製造する技術が開示されている。 From this, if the texture of cooked rice can be maintained for a long time immediately after cooking, it can contribute to maintaining the quality of products and extending the expiration date. Therefore, techniques for suppressing the deterioration of the texture of cooked rice have been researched and developed. A technique for producing boiled rice that does not deteriorate in texture and taste for a long time by adding is disclosed.
一方、セルラーゼは、植物細胞壁の主成分であるセルロースを分解する酵素である。特許文献2には、玄米をセルラーゼ水溶液に浸漬した後、炊飯することにより、食感を改善する技術が開示されている
On the other hand, cellulase is an enzyme that decomposes cellulose, which is the main component of plant cell walls.
しかしながら、特許文献1に記載の技術は、72時間(3日間)後までの米飯について食感維持効果は確認されているものの、より長時間経過後において食感劣化を抑制できるか否かは不明である。また、特許文献2に記載の技術は、食物繊維を多く含む糠層に包まれた玄米の表面にセルラーゼを作用させて、難消化性繊維を分解し、元来の硬い食感を柔らかくするものである(段落[0002]、[0004]、[0008])。すなわち、特許文献2に記載のセルラーゼは、炊飯直後の玄米の食感を改善するために用いられているに過ぎず、玄米はおろか、分づき米や白米をも含めた米飯のデンプンの老化に伴う食感劣化を抑制できるか否かは不明である。
However, although the technology described in
以上のとおり、係る先行技術を鑑みても、炊飯後の時間経過や低温保存に伴う米飯の食感劣化を抑制できる技術は十分に供給されている状況とはいえない。本発明は、係る課題を解決するためになされたものであって、炊飯後の時間経過や低温保存に伴う米飯の食感劣化を抑制する技術を提供することを目的とする。また、本発明は、米飯の柔らかさを向上する技術を提供することを目的とする。 As described above, even in view of the prior art, it cannot be said that the technology capable of suppressing the deterioration of the texture of cooked rice due to the passage of time after cooking or storage at low temperature is sufficiently provided. The present invention has been made to solve such problems, and an object of the present invention is to provide a technique for suppressing the deterioration of the texture of cooked rice due to the passage of time after cooking or storage at low temperature. Another object of the present invention is to provide a technique for improving the softness of cooked rice.
本発明者らは、鋭意研究の結果、セルラーゼが、炊飯後の時間経過や低温保存に伴う米飯の食感劣化を抑制できること、および、米飯の柔らかさを向上できることを見出した。また、セルラーゼと所定の還元水飴とを併用することにより、米飯の食感劣化を顕著に抑制できることを見出した。そこで、これらの知見に基づいて下記の各発明を完成した。 As a result of intensive research, the present inventors have found that cellulase can suppress the deterioration of the texture of cooked rice due to the passage of time after cooking and storage at low temperature, and can improve the softness of cooked rice. In addition, the present inventors have found that deterioration of the texture of cooked rice can be remarkably suppressed by using cellulase and a predetermined reduced starch syrup in combination. Based on these findings, the inventors completed the following inventions.
(1)本発明に係る米飯の食感劣化抑制剤は、セルラーゼを有効成分とする。 (1) The agent for suppressing deterioration of texture of cooked rice according to the present invention contains cellulase as an active ingredient.
(2)本発明に係る米飯の柔らかさ向上剤は、セルラーゼを有効成分とする。 (2) The agent for improving the softness of cooked rice according to the present invention contains cellulase as an active ingredient.
(3)本発明において、米飯は、分つき米または白米を炊飯してなる米飯であってもよい。 (3) In the present invention, the cooked rice may be cooked rice obtained by cooking portioned rice or polished rice.
(4)本発明に係る米飯の食感劣化抑制剤または柔らかさ向上剤は、さらに有効成分として下記(ア)~(ウ)から選択される還元水飴を含有するものであってもよい;
(ア)糖組成が、単糖が30質量%未満かつ五糖以上が50質量%未満の還元水飴、
(イ)糖組成が、五糖以上が50質量%以上の還元水飴、
(ウ)デキストロース当量が10以上50以下の水飴を還元してなる還元水飴。
(4) The agent for suppressing deterioration of texture of cooked rice or the agent for improving softness of cooked rice according to the present invention may further contain a reduced starch syrup selected from the following (a) to (c) as an active ingredient;
(a) reduced starch syrup having a sugar composition of less than 30% by mass of monosaccharides and less than 50% by mass of pentasaccharides or higher;
(a) reduced starch syrup having a sugar composition of 50% by mass or more of pentasaccharide or higher;
(c) Reduced starch syrup obtained by reducing starch syrup having a dextrose equivalent of 10 or more and 50 or less.
(5)本発明において、還元水飴は、生米100重量部に対して0.3重量部以上7重量部以下の固形分濃度で用いてもよい。 (5) In the present invention, the reduced starch syrup may be used at a solid content concentration of 0.3 parts by weight or more and 7 parts by weight or less per 100 parts by weight of uncooked rice.
(6)本発明において、セルラーゼは、下記(a)~(d)を含む混合セルラーゼ組成物であってもよい;
(a)配列番号1と90%以上のアミノ酸配列同一性を有するセルラーゼ、
(b)配列番号2と90%以上のアミノ酸配列同一性を有するセルラーゼ、
(c)配列番号3と90%以上のアミノ酸配列同一性を有するセルラーゼ、
(d)配列番号4と90%以上のアミノ酸配列同一性を有するセルラーゼ。
(6) In the present invention, the cellulase may be a mixed cellulase composition containing the following (a) to (d);
(a) a cellulase having 90% or more amino acid sequence identity with SEQ ID NO: 1;
(b) a cellulase having 90% or more amino acid sequence identity with SEQ ID NO:2;
(c) a cellulase having 90% or more amino acid sequence identity with SEQ ID NO:3;
(d) a cellulase having greater than 90% amino acid sequence identity with SEQ ID NO:4;
(7)本発明に係る米飯の製造方法は、本発明に係る食感劣化抑制剤または柔らかさ向上剤を添加して炊飯する工程を有する。 (7) The method for producing cooked rice according to the present invention has a step of adding the agent for suppressing deterioration of texture or the agent for improving softness according to the present invention and cooking the rice.
本発明によれば、炊飯後の時間経過や低温保存に伴う米飯の食感劣化を抑制できる。よって、本発明によれば、米飯を含む加工食品について、製造後の時間経過や低温保存に伴う品質低下の抑制、賞味期限の延長、あるいは、フードロスの削減に寄与することができる。また、本発明によれば、米飯の柔らかさを向上できることから、米飯に好ましい食感を付与することができる。 ADVANTAGE OF THE INVENTION According to this invention, the food texture deterioration of cooked rice accompanying the passage of time after cooking and low-temperature storage can be suppressed. Therefore, according to the present invention, it is possible to contribute to suppression of deterioration in quality of processed foods containing boiled rice due to passage of time after production or storage at low temperatures, extension of best-before dates, or reduction of food loss. Moreover, according to the present invention, it is possible to improve the softness of cooked rice, so that it is possible to impart a preferable texture to the cooked rice.
以下、本発明について詳細に説明する。本発明は、「米飯の食感劣化抑制剤」および「米飯の柔らかさ向上剤」(以下、これらの剤をまとめて、またはこれらの剤のいずれかを指して「本剤」という場合がある。)ならびに米飯の製造方法(以下、「本方法」という場合がある。)を提供する。 The present invention will be described in detail below. The present invention is a "cooked rice texture deterioration inhibitor" and "cooked rice softness improver" (hereinafter, these agents may be collectively referred to as "this agent"). ) and a method for producing cooked rice (hereinafter sometimes referred to as “this method”).
本発明において「米飯」とは、米を炊いた飯をいう。米飯は、特に味付けをしていないものであってもよく、炊き込み飯やピラフ、すし等、何らかの味付けをしたものであってもよい。また「炊飯」とは、米を炊くこと、すなわち米を水分と併せた状態で喫食可能な程度に加熱する操作をいう。「米」は、特段の記載のない限り、過食できる程度に加熱をしていない、生の米を指す。本発明において、米の精米の程度は特に限定されず、玄米、白米(精白米)、3分づきや5分づき、7分づき等の分づき米などのいずれであってもよい。 In the present invention, "cooked rice" refers to cooked rice. The boiled rice may be unseasoned, or may be seasoned in some way, such as cooked rice, pilaf, and sushi. The term “cooking rice” refers to the process of cooking rice, that is, the operation of heating rice with water to an edible level. "Rice" refers to uncooked rice that has not been heated to the point where it can be overeaten, unless otherwise specified. In the present invention, the degree of rice polishing is not particularly limited, and it may be brown rice, polished rice (polished rice), or rice that has been polished for 3 minutes, 5 minutes, 7 minutes, or the like.
本発明において、米飯の食感の劣化を抑制するとは、炊飯後の米飯の食感が悪くなる程度を小さくすることをいう。 In the present invention, suppressing the deterioration of the texture of cooked rice means reducing the extent to which the texture of cooked rice deteriorates.
炊飯後に米飯の食感が劣化するのは、一般に、米の主成分であるデンプンが老化するのが主因と考えられている。デンプンの老化は60℃~0℃付近の温度環境下では時間経過とともに進み、この温度帯では0℃に近づく程速やかになる傾向があり、0~4℃付近で最も速やかに進行する(檜作進、炊飯とでんぷんの老化、調理科学、Vol.3、No.4、第225-229頁、1970年)。 The deterioration of the texture of cooked rice after cooking is generally considered to be due to aging of starch, which is the main component of rice. Starch retrogradation progresses with the passage of time in a temperature environment around 60°C to 0°C. Susumu, Rice Cooking and Aging of Starch, Culinary Science, Vol.3, No.4, pp.225-229, 1970).
すなわち、米飯の食感劣化も、一般に、60℃~0℃付近の温度環境下では、炊飯後の時間経過あるいは低温保存により進行する。係る食感劣化を具体的に例示すると、下記(i)~(vi)が挙げられる。
(i)硬化:柔らかい食感が低減し、硬くなる。
(ii)もちっと感の低下:もちっとした粘りや弾性のある食感が低減し、もろい食感になる。
(iii)粒感の低下:口中で、米飯の粒が感じにくくなる。
(iv)しっとり感の低下:しっとりした食感が低減し、パラパラあるいはパサパサとした食感になる。
(v)ふっくら感の低下:ふっくらした食感が低減し、締まった食感になる。
(vi)総合的な美味しさの低下:食感が総合的に悪くなり、美味しさが感じられなくなる。
That is, the deterioration of the texture of cooked rice generally progresses with the lapse of time after cooking or storage at low temperature under a temperature environment of about 60°C to 0°C. The following (i) to (vi) are given as specific examples of such deterioration in texture.
(i) Hardening: The soft texture is reduced and the food becomes hard.
(ii) Decrease in chewy texture: The chewy and elastic texture is reduced, resulting in a crumbly texture.
(iii) Decrease in feeling of grain: grains of cooked rice become difficult to feel in the mouth.
(iv) Decrease in moist feeling: The moist texture is reduced, and the texture becomes dry or dry.
(v) Decreased plumpness: The plumpness of the texture is reduced, resulting in a firmer texture.
(vi) Decrease in overall deliciousness: Overall texture deteriorates, and deliciousness cannot be felt.
本発明において、米飯の食感の劣化が抑制されたか否かは、例えば、本剤を用いた米飯Xと、本剤を用いていない米飯Yとを同条件下で一定時間保存した後、物性試験機でそれぞれの荷重を測定して比較することにより確認できる。それにより、米飯Xの方が米飯Yよりも荷重が小さい(すなわち、柔らかい)との比較結果が得られれば、本剤により食感劣化が抑制されたと判断することができる。 In the present invention, whether or not the deterioration of the texture of cooked rice is suppressed can be determined, for example, by storing cooked rice X using the present agent and cooked rice Y not using the present agent under the same conditions for a certain period of time, and then measuring the physical properties. It can be confirmed by measuring each load with a testing machine and comparing them. As a result, if a comparison result is obtained in which the cooked rice X has a smaller load (that is, is softer) than the cooked rice Y, it can be determined that deterioration of the texture is suppressed by the present agent.
あるいは、米飯の食感の劣化が抑制されたか否かは、例えば、本剤を用いた米飯Xと、本剤を用いていない米飯Yとを同条件下で一定時間保存した後、上記(i)~(vi)を評価項目とした官能試験を行い、その結果を比較することにより確認できる。それにより、米飯Xの方が米飯Yよりも(i)硬化の程度が小さい(すなわち、柔らかい)、(ii)もちっと感が大きい、(iii)粒感が大きい、(iv)しっとり感が大きい、(v)ふっくら感が大きい、あるいは(vi)総合的に美味しい、との比較結果が得られれば、本剤により食感劣化が抑制されたと判断することができる。 Alternatively, whether or not the deterioration of the texture of the cooked rice was suppressed can be determined, for example, by storing the cooked rice X using the present agent and the cooked rice Y not using the present agent under the same conditions for a certain period of time, and then measuring the above (i ) to (vi) are performed as evaluation items, and the results can be compared. As a result, cooked rice X has (i) a lesser degree of hardening (that is, softer), (ii) a greater crispness, (iii) a greater graininess, and (iv) a greater moistness than cooked rice Y. , (v) great plumpness, or (vi) overall good taste, it can be judged that deterioration of texture is suppressed by this agent.
本発明において、米飯の柔らかさを向上するとは、炊飯直後~1日程度の米飯について、食感の柔らかさ増大させる(食感をより柔らかくする)ことをいう。 In the present invention, improving the softness of cooked rice means increasing the softness of the texture (making the texture softer) of cooked rice immediately after cooking for about one day.
本発明において、米飯の柔らかさが向上したか否かは、例えば、本剤を用いた米飯Xと、本剤を用いていない米飯Yとを同条件下で炊飯した後、物性試験機でそれぞれの荷重を測定して比較することにより確認できる。それにより、米飯Xの方が米飯Yよりも荷重が小さい(すなわち、柔らかい)との比較結果が得られれば、本剤により柔らかさが向上したと判断することができる。 In the present invention, whether or not the softness of cooked rice is improved is determined, for example, by cooking rice X using the present agent and rice Y not using the present agent under the same conditions, and then using a physical property tester. It can be confirmed by measuring and comparing the load of If the comparison results show that the load on the cooked rice X is smaller than that of the cooked rice Y (that is, it is softer), it can be determined that the softness is improved by the present agent.
本剤は、セルラーゼを有効成分とする。セルラーゼは、セルロースを加水分解する酵素であり、代表的酵素として、エンドグルカナーゼ(EC3.2.1.4)、β-グルコシダーゼ(EC3.2.1.21)、セロビオハイドロラーゼ(EC3.2.1.91)およびグルカン1,4-β-グルコシダーゼ(EC3.2.1.74)がある。
This drug contains cellulase as an active ingredient. Cellulase is an enzyme that hydrolyzes cellulose. .1.91) and
エンドグルカナーゼ(EG)(EC3.2.1.4)は、エンド型の作用形式でセルロース鎖を加水分解し、グルコース、セロビオースおよびセロオリゴ糖を生成する酵素で、エンド1,4-β-グルカナーゼ、エンドセルラーゼなどとも呼ばれる。セロビオハイドロラーゼ(EC3.2.1.91)およびグルカン1,4-β-グルコシダーゼ(EC3.2.1.74)は、エキソ型の作用形式で作用し、セルロース鎖の末端からセロビオースまたはグルコースを遊離する。このうち、セロビオハイドロラーゼ(CBH)はセルロース鎖の末端からセロビオースを生成する酵素で、セルロース1,4-β-セロビオシターゼ、アビセラーゼ、エキソセルラーゼなどとも呼ばれる。β-グルコシダーゼ(EC3.2.1.21)は短鎖長のセロオリゴ糖、セロビオースおよびβ-グルコシドに作用し非還元末端からグルコースを遊離する。
Endoglucanases (EG) (EC 3.2.1.4) are enzymes that hydrolyze cellulose chains in an endo-type mode of action to produce glucose, cellobiose and cellooligosaccharides, endo-1,4-β-glucanases, Also called endocellulase. Cellobiohydrolase (EC 3.2.1.91) and
本発明において、セルラーゼは、1種類の酵素でもよく、2種以上を併用して用いてもよい。なお、2種類以上のセルラーゼを含む組成物(混合物)について、本発明では「混合セルラーゼ組成物」という場合がある。すなわち、本発明では、セルラーゼとして「混合セルラーゼ組成物」を用いてもよい。 In the present invention, the cellulase may be one type of enzyme, or two or more types may be used in combination. A composition (mixture) containing two or more types of cellulases is sometimes referred to as a "mixed cellulase composition" in the present invention. That is, in the present invention, a "mixed cellulase composition" may be used as the cellulase.
セルラーゼは、細菌から糸状菌にわたる多くの微生物が生産することが知られている。セルラーゼ生産微生物として、例えば、細菌ではButyrivibrio fibrisolvens, Cellulomonas fimi, Cellulomonas uda, Cellvibrio gilvus, Clostridium thermocellum, Pseudomonas fluorescence, Ruminococcus albusなどが挙げられる。放線菌では、Streptomyces lividans, Thermomonospora curvata, Thermomonospora fuscaなどが挙げられる。糸状菌では、Aspergillus aculeatus, Aspergillis niger, Aspergillus oryzae, Chaetomium cellulolyticum, Humicola insolens, Irpex lacteus, Phanerochaete chrysosporium, Penicillium purpurogenum, Schizophyllum commune, Sporotrichum thermophile, Trichoderma reesei, Trichoderma viride, Trichoderma koninngiなどが挙げられる。 Cellulases are known to be produced by many microorganisms ranging from bacteria to filamentous fungi. Examples of cellulase-producing microorganisms include bacteria such as Butyrivibrio fibrisolvens, Cellulomonas fimi, Cellulomonas uda, Cellvibrio gilvus, Clostridium thermocellum, Pseudomonas fluorescence, and Ruminococcus albus. Actinomycetes include Streptomyces lividans, Thermomonospora curvata, and Thermomonospora fusca. Examples of filamentous fungi include Aspergillus aculeatus, Aspergillis niger, Aspergillus oryzae, Chaetomium cellulolyticum, Humicola insolens, Irpex lacteus, Phanerochaete chrysosporium, Penicillium purpurogenum, Schizophyllum commune, Sporotrichum thermophile, Trichoderma reesei, Trichoderma viride, Trichoderma koninngi, and the like.
セルラーゼは、上記に例示したような微生物が生産したものが市販されており、本発明ではそれらを用いることができる。市販のセルラーゼとしては、例えば、「スミチームAC」(新日本化学工業)、「セルラーゼA『アマノ』3」(天野エンザイム)、「セルロシンAC40」(エイチビィアイ)、「セルロシンT3」(エイチビィアイ)、「セルラーゼSS」(ナガセケムテックス)、「オノズカ RS」(ヤクルト薬品工業)、「Cellulase from Trichoderma sp. BioReagent(C1794)」(Sigma Aldrich)、「GODO セルラーゼ F」(合同酒精)、「GODO セルラーゼ F」(合同酒精)、「スクラーゼC」(三菱ケミカルフーズ)、「ビスカミルフロー」(デュポン)、「ラミネックス」(デュポン)、「セルラーゼY-NC」(ヤクルト薬品工業)、「セルロシンAL8」(エイチビィアイ)、「セルラーゼXL-531」(ナガセケムテックス)、「セルレースナガセ」(ナガセケムテックス)、「ソフターゲン」(タイショーテクノス)などを例示することができる。 Cellulases produced by microorganisms such as those exemplified above are commercially available, and they can be used in the present invention. Commercially available cellulases include, for example, "Sumizyme AC" (Shinnihon Kagaku Kogyo), "Cellulase A 'Amano' 3" (Amano Enzyme), "Cellulosine AC40" (HBI), "Cellulosin T3" (HBI), "Cellulase SS” (Nagase ChemteX), “Onozuka RS” (Yakult Pharmaceutical Industry), “Cellulase from Trichoderma sp. Godo Shusei), “Sucrase C” (Mitsubishi Chemical Foods), “Viscamyl Flow” (DuPont), “Laminex” (DuPont), “Cellulase Y-NC” (Yakult Pharmaceutical Industry), “Cellulosein AL8” (HBI), Examples include "Cellulase XL-531" (Nagase ChemteX), "Cellulase Nagase" (Nagase ChemteX), and "Softagen" (Taisho Technos).
また、市販のトリコデルマ・リーセイ由来セルラーゼ製剤としては、例えば、「セルクラスト(Celluclast:登録商標)」(ノボザイムズ)、「GODO-TCL」(合同酒精)、「ベッセレックス(登録商標)」(合同酒精)、「オノズカ 3S」(ヤクルト薬品工業)、「バイオセルラーゼW」(Kerry I&F Cork/Ireland)、「バイオベークZIP」、「セルラーゼT『アマノ』4」(天野エンザイム)、「スチームC」 (新日本化学工業)、「BAKEZYME X-CELL」(DSM FOOD Speciakties)、「BAKEZYME WholeGain」(DSM FOOD Speciakties)などを挙げることができる。 Examples of commercially available Trichoderma reesei-derived cellulase preparations include "Celluclast (registered trademark)" (Novozymes), "GODO-TCL" (Godo Shusei Co., Ltd.), and "Besserex (registered trademark)" (Godo Shusei Co., Ltd.). ), “Onozuka 3S” (Yakult Pharmaceutical Industry), “Biocellulase W” (Kerry I & F Cork/Ireland), “Biobake ZIP”, “Cellulase T ‘Amano’ 4” (Amano Enzyme), “Steam C” (new Nippon Kagaku Kogyo), "BAKEZYME X-CELL" (DSM FOOD Speciakties), and "BAKEZYME WholeGain" (DSM FOOD Speciakties).
混合セルラーゼ組成物としては、下記(a)~(d)を含むものを例示することができる;
(a)配列番号1と90%以上のアミノ酸配列同一性を有するセルラーゼ、
(b)配列番号2と90%以上のアミノ酸配列同一性を有するセルラーゼ、
(c)配列番号3と90%以上のアミノ酸配列同一性を有するセルラーゼ、
(d)配列番号4と90%以上のアミノ酸配列同一性を有するセルラーゼ。
Examples of the mixed cellulase composition include those containing the following (a) to (d);
(a) a cellulase having 90% or more amino acid sequence identity with SEQ ID NO: 1;
(b) a cellulase having 90% or more amino acid sequence identity with SEQ ID NO:2;
(c) a cellulase having 90% or more amino acid sequence identity with SEQ ID NO:3;
(d) a cellulase having greater than 90% amino acid sequence identity with SEQ ID NO:4;
ここで、配列番号1(514aa)は、トリコデルマ・リーセイ(Trichoderma reesei)の基準株であるQM6a株に由来するセロビオハイドロラーゼI(CBHI、Cel7A)のアミノ酸配列である(GenBank: EGR44817.1)。 Here, SEQ ID NO: 1 (514aa) is the amino acid sequence of cellobiohydrolase I (CBHI, Cel7A) derived from QM6a strain, the type strain of Trichoderma reesei (GenBank: EGR44817.1). .
配列番号2(471aa)は、トリコデルマ・リーセイQM6a株に由来するセロビオハイドロラーゼII(CBHII、Cel6A)のアミノ酸配列である(GenBank: EGR51017.1)。 SEQ ID NO: 2 (471aa) is the amino acid sequence of cellobiohydrolase II (CBHII, Cel6A) from Trichoderma reesei strain QM6a (GenBank: EGR51017.1).
配列番号3(459aa)は、トリコデルマ・リーセイQM6a株に由来するエンドグルカナーゼI(EGI、Cel7B)のアミノ酸配列である(GenBank: EGR48251.1)。 SEQ ID NO: 3 (459aa) is the amino acid sequence of endoglucanase I (EGI, Cel7B) from Trichoderma reesei strain QM6a (GenBank: EGR48251.1).
配列番号4(418aa)は、トリコデルマ・リーセイQM6a株に由来するエンドグルカナーゼII(EGII、Cel5A)のアミノ酸配列である(GenBank: EGR51020.1)。 SEQ ID NO: 4 (418aa) is the amino acid sequence of endoglucanase II (EGII, Cel5A) from Trichoderma reesei strain QM6a (GenBank: EGR51020.1).
すなわち、(a)~(d)は、アミノ酸配列および酵素活性の点で、トリコデルマ・リーセイに由来するセルラーゼ(CBHI、CBHII、EGIおよびEGII)と、それぞれ同一または高い類似性を有する酵素ということができる。 That is, enzymes (a) to (d) are identical or highly similar to Trichoderma reesei-derived cellulases (CBHI, CBHII, EGI and EGII) in terms of amino acid sequence and enzymatic activity, respectively. can.
トリコデルマ・リーセイは、多種のセルラーゼを生産・分泌するが、タンパク質レベルでは(a)が40~60%、(b)が12~20%、(c)が5~10%および(d)が1~10%を占めるため、これら(a)~(d)が主たる酵素成分ということができる(Lisa Rosgaard et. al., Biotechnol. Prog. 2007, 23, 1270-1276)(Vinzant, T. B. et. al., Appl. Biochem. Biotechnol. 2001, 91-93, 99-107)。 Trichoderma reesei produces and secretes a variety of cellulases, but at the protein level, (a) is 40-60%, (b) is 12-20%, (c) is 5-10%, and (d) is 1. These (a) to (d) can be said to be the main enzyme components (Lisa Rosgaard et. al., Biotechnol. Prog. 2007, 23, 1270-1276) (Vinzant, T. B. et. ., Appl. Biochem. Biotechnol. 2001, 91-93, 99-107).
すなわち、(a)~(d)を含む混合セルラーゼ組成物は、トリコデルマ・リーセイを培養することにより得ることができる。トリコデルマ・リーセイは多数の菌株が入手可能であり、本発明においてはセルラーゼ生産能を失っていない限り、いずれの菌株も使用することができる。入手可能な菌株としては、例えば、T. reesei NBRC 31326、T. reesei NBRC 31327、T. reesei NBRC 31328、T. reesei NBRC 31329、T. reesei ATCC 66589、T. reesei ATCC 26921などを例示することができる。 That is, a mixed cellulase composition containing (a) to (d) can be obtained by culturing Trichoderma reesei. Many strains of Trichoderma reesei are available, and any strain can be used in the present invention as long as it does not lose the ability to produce cellulase. Examples of available strains include T. reesei NBRC 31326, T. reesei NBRC 31327, T. reesei NBRC 31328, T. reesei NBRC 31329, T. reesei ATCC 66589, and T. reesei ATCC 26921. can.
トリコデルマ・リーセイを培養してセルラーゼを得る方法もまた、当業者に公知である(Studies on the production and application of cellulase from Trichoderma reesei QM-9414 Krishna SH, et al. Bioprocess Engineering 22(5), 467-470, (2000))(特開2018-19622号公報)。本発明でも、係る公知の方法に従い、トリコデルマ・リーセイ菌株を培養して、セルラーゼないし混合セルラーゼ組成物を得ることができる。例えば、培地は、炭素源、窒素源、無機塩、ビタミンなど、当該菌株の増殖およびセルラーゼ生産に必要な栄養素を含む限り、合成培地、天然培地のいずれでもよい。なお、培地には、セルロースやソホロース、セロオリゴ糖(セロビオース、セロトリオース、セロテトラオース、セロペンタオース、セロヘキサオース等)などのセルラーゼ誘導物質を添加する。 Methods for obtaining cellulase by culturing Trichoderma reesei are also known to those skilled in the art (Studies on the production and application of cellulase from Trichoderma reesei QM-9414 Krishna SH, et al. Bioprocess Engineering 22(5), 467- 470, (2000)) (JP 2018-19622). Also in the present invention, a cellulase or a mixed cellulase composition can be obtained by culturing a Trichoderma reesei strain according to such a known method. For example, the medium may be either a synthetic medium or a natural medium, as long as it contains nutrients such as carbon sources, nitrogen sources, inorganic salts, vitamins, etc. necessary for growth of the strain and cellulase production. Cellulase inducers such as cellulose, sophorose, and cellooligosaccharides (cellobiose, cellotriose, cellotetraose, cellopentaose, cellohexaose, etc.) are added to the medium.
培養は、好ましくは振とう培養や通気攪拌培養のような好気的条件で行う。培養温度は好ましくは10℃以上、より好ましくは20℃以上、より好ましくは25℃以上であり、且つ好ましくは50℃以下、より好ましくは42℃以下、より好ましくは35℃以下である。また、好ましくは10~50℃、より好ましくは20~42℃、より好ましくは25~35℃である。培養時のpHは3~9、好ましくは4~5である。培養時間は、10時間~10日間、好ましくは2~7日間である。 Cultivation is preferably carried out under aerobic conditions such as shaking culture or aeration stirring culture. The culture temperature is preferably 10° C. or higher, more preferably 20° C. or higher, more preferably 25° C. or higher, and preferably 50° C. or lower, more preferably 42° C. or lower, more preferably 35° C. or lower. Also, it is preferably 10 to 50°C, more preferably 20 to 42°C, and more preferably 25 to 35°C. The pH during culture is 3-9, preferably 4-5. The culture time is 10 hours to 10 days, preferably 2 to 7 days.
より具体的な培養方法を、以下に例示する。まず、前培養として500mLフラスコに前培養用の培地を50mL仕込む。ここに、1×105個/mLとなるようトリコデルマ・リーセイ菌株の胞子を植菌し、28℃、220rpmにて2日間、振とう培養する。次に、本培養として、前培養用の培地を入れたジャーファーメンターに、前培養液を10%(v/v)植菌し、28℃、通気量0.5vvmで5日間培養を行う。pHは4.5となるよう5% アンモニア水で調整し、撹拌数は溶存酸素が3.0ppmとなるよう変動させる。培地の組成は以下とする。
前培養用の培地組成:1% グルコース、0.14% (NH4)2SO4、0.2%KH2PO4 、0.03% CaCl2・2H2O、0.03%MgSO4・7H2O、0.1% 獣肉ペプトン、0.05% 酵母エキス、0.1% Tween80、50mM 酒石酸バッファー(pH4.0)。
本培養用の培地組成:10% 結晶性セルロース、0.42% (NH4)2SO4、0.2%KH2PO4 、0.03% CaCl2・2H2O、0.03%MgSO4・7H2O、0.1% 獣肉ペプトン、0.05%酵母エキス、0.1% Tween80、0.2% 消泡剤。
A more specific culture method is exemplified below. First, a 500 mL flask is charged with 50 mL of preculture medium for preculture. Spores of the Trichoderma reesei strain are inoculated here so as to be 1×10 5 spores/mL, and cultured with shaking at 28° C. and 220 rpm for 2 days. Next, as the main culture, 10% (v/v) of the preculture solution is inoculated into a jar fermenter filled with the preculture medium, and cultured at 28° C. and an aeration rate of 0.5 vvm for 5 days. The pH is adjusted to 4.5 with 5% aqueous ammonia, and the stirring rate is varied so that the dissolved oxygen is 3.0 ppm. The composition of the medium is as follows.
Medium composition for preculture: 1% glucose, 0.14% ( NH4 ) 2SO4 , 0.2 % KH2PO4 , 0.03% CaCl2.2H2O , 0.03% MgSO4.7H 2 O, 0.1% meat peptone, 0.05% yeast extract, 0.1% Tween 80, 50 mM tartrate buffer (pH 4.0).
Medium composition for main culture: 10% crystalline cellulose , 0.42% ( NH4 ) 2SO4 , 0.2% KH2PO4 , 0.03% CaCl2.2H2O , 0.03 % MgSO4 • 7H2O , 0.1% meat peptone, 0.05% yeast extract, 0.1% Tween 80, 0.2% antifoam.
培養終了後、培養物を回収し、必要に応じて超音波や加圧等による菌体破砕処理を行い、ろ過や遠心分離等によって固液分離した後、限外ろ過、塩析、透析、クロマトグラフィー等を適宜組み合わせることによりセルラーゼないし混合セルラーゼ組成物を抽出精製できる。なお、精製の程度は特に限定されない。培養上清やその粗精製物自体をセルラーゼないし混合セルラーゼ組成物として利用することもできる。また、セルラーゼを含む溶液をそのまま液体状で使用してもよく、真空乾燥または凍結乾燥して得られた粉末状の組成物として使用してもよい。 After the culture is completed, the culture is collected, and if necessary, the bacterial cells are disrupted by ultrasonic waves or pressurization. After solid-liquid separation by filtration or centrifugation, ultrafiltration, salting out, dialysis, chromatography Cellulases or mixed cellulase compositions can be extracted and purified by appropriate combination of lithography and the like. The degree of purification is not particularly limited. The culture supernatant or its crudely purified product itself can also be used as a cellulase or mixed cellulase composition. In addition, the cellulase-containing solution may be used as it is in liquid form, or may be used as a powdery composition obtained by vacuum drying or freeze drying.
また、トリコデルマ・リーセイの基準株であるQM6a株はゲノム配列が決定されている(Diego Martinez et. al., Nature Biotechnology, Vol. 26, Num. 5, May 2008)。よって、トリコデルマ・リーセイ由来のセルラーゼは、遺伝子組換え技術によって得ることもできる。この方法では、(a)、(b)、(c)および/または(d)のセルラーゼを好適な発現系にて発現させればよい。すなわち、(a)、(b)、(c)および/または(d)をコードする核酸配列を、適当なベクターに挿入して組換えベクターを得た後、その組換えベクターを適当な宿主に導入して形質転換体を得る。そして、得られた形質転換体を培養して(a)、(b)、(c)および/または(d)を発現させれば、培養物からセルラーゼないし混合セルラーゼ組成物を得ることができる。 In addition, the QM6a strain, which is the type strain of Trichoderma reesei, has been sequenced (Diego Martinez et. al., Nature Biotechnology, Vol. 26, Num. 5, May 2008). Therefore, cellulase derived from Trichoderma reesei can also be obtained by gene recombination technology. In this method, the cellulases (a), (b), (c) and/or (d) may be expressed in a suitable expression system. That is, after inserting a nucleic acid sequence encoding (a), (b), (c) and/or (d) into a suitable vector to obtain a recombinant vector, the recombinant vector is transferred to a suitable host. to obtain a transformant. Then, by culturing the resulting transformant to express (a), (b), (c) and/or (d), a cellulase or mixed cellulase composition can be obtained from the culture.
また、セルラーゼは、配列番号1~4等の公知のアミノ酸配列情報に基づいて、Fmoc法(フルオレニルメチルオキシカルボニル法)、tBoc法(t-ブチルオキシカルボニル法)などの化学合成法に従って化学合成することができる他、各種の市販のペプチド合成機を利用して化学合成することもできる。 In addition, cellulases are chemically synthesized according to chemical synthesis methods such as the Fmoc method (fluorenylmethyloxycarbonyl method) and the tBoc method (t-butyloxycarbonyl method) based on known amino acid sequence information such as SEQ ID NOs: 1 to 4. In addition to being able to be synthesized, it can also be chemically synthesized using various commercially available peptide synthesizers.
セルラーゼの活性は、カルボキシメチルセルロース(CMC)を基質として、酵素反応(加水分解)により生成した還元末端をジニトロサルチル酸試薬、あるいは、ソモギ-ネルソン法などにより定量することにより、測定することができる。例えば、1%CMC基質液に酵素液を加え、一定時間酵素反応を行わせたのち、煮沸などによって酵素反応を停止する。酵素反応液 0.1mLを試験管にとり、ジニトロサルチル酸試薬 0.3mLを加えて良く混合し、ガラス球にてふたをして5分間煮沸する。水道水にて冷却後、蒸留水2.5mLを加えて希釈し、500nmの吸光度を測定して、還元糖を定量する。セルラーゼ活性の大きさ(強さ)と還元糖の生成量とは正の相関関係にある。 The activity of cellulase can be measured by quantifying reducing ends produced by an enzymatic reaction (hydrolysis) using carboxymethylcellulose (CMC) as a substrate using a dinitrosalicylic acid reagent or the Somogyi-Nelson method. For example, the enzyme solution is added to a 1% CMC substrate solution, the enzyme reaction is allowed to proceed for a certain period of time, and then the enzyme reaction is stopped by boiling or the like. Take 0.1 mL of the enzyme reaction solution in a test tube, add 0.3 mL of dinitrosalicylic acid reagent, mix well, cover with a glass bulb and boil for 5 minutes. After cooling with tap water, 2.5 mL of distilled water is added to dilute, and the absorbance at 500 nm is measured to quantify reducing sugars. There is a positive correlation between the magnitude (intensity) of cellulase activity and the amount of reducing sugar produced.
セルラーゼ活性の1ユニットは、例えば、pH5.0、37℃、1時間で、1.0μモルのグルコースを基質セルロース(例えば、カルボキシメチルセルロース)から遊離させる酵素量(インキュベーションは2時間)と定義することができる。 One unit of cellulase activity is defined as the amount of enzyme that liberates 1.0 μmole of glucose from a substrate cellulose (e.g., carboxymethylcellulose) at pH 5.0, 37° C. for 1 hour (incubation for 2 hours). can be done.
セルラーゼの酵素反応条件は、その種類や由来にもよるが、例えば、至適温度としては、40℃~70℃、好ましくは45℃~65℃、より好ましくは50℃~65℃、さらに好ましくは60~65℃、至適pHとしてはpH4~6を例示することができる。
The enzyme reaction conditions for cellulase depend on its type and origin. 60 to 65° C., and
アミノ酸配列の同一性は、常法に従って確認することができ、例えば、FASTA(http://www.genome.JP/tools/fasta/)、Basic local alignment search tool(BLAST;http://www.ncbi.nlm.nih.gov.)、Position-Specific Iterated BLAST(PSI-BLAST;http://www.ncbi.nlm.nih.gov.)などのプログラムを用いて確認することができる。なお、「同一性」とは一致性を指し、「identity」と交換可能に用いられる。 The identity of amino acid sequences can be confirmed according to conventional methods, for example, FASTA (http://www.genome.JP/tools/fasta/), Basic local alignment search tool (BLAST; http://www. ncbi.nlm.nih.gov.) and Position-Specific Iterated BLAST (PSI-BLAST; http://www.ncbi.nlm.nih.gov.). The term “identity” refers to consistency and is used interchangeably with “identity”.
還元水飴は、水飴を還元して得られる糖アルコールの一種である。ここで、水飴は、デンプンを酸や酵素などで糖化して得られる物質であり、単糖(ブドウ糖)および多糖(オリゴ糖やデキストリンなど)の混合物である。よって、還元水飴もまた、単糖の糖アルコールおよび多糖(二糖、三糖、四糖または五糖以上)の糖アルコールのうち、2種以上の糖アルコールを含む混合物である。 Reduced starch syrup is a kind of sugar alcohol obtained by reducing starch syrup. Here, starch syrup is a substance obtained by saccharifying starch with acid or enzyme, and is a mixture of monosaccharide (glucose) and polysaccharide (oligosaccharide, dextrin, etc.). Therefore, the reduced starch syrup is also a mixture containing two or more sugar alcohols among monosaccharide sugar alcohols and polysaccharide sugar alcohols (disaccharide, trisaccharide, tetrasaccharide, pentasaccharide or more).
還元水飴は、糖化の程度により高糖化還元水飴、中糖化還元水飴および低糖化還元水飴に分けられる場合がある。本発明においては、これらのうち、中糖化還元水飴および/または低糖化還元水飴を用いることが好ましい。 Reduced starch syrup is sometimes classified into high-saccharified reduced starch syrup, medium-saccharified reduced starch syrup and low-saccharified reduced starch syrup according to the degree of saccharification. In the present invention, among these, medium-saccharified and reduced starch syrup and/or low-saccharified and reduced starch syrup are preferably used.
中糖化還元水飴の糖組成として、具体的には、(ア)単糖を30質量%未満および五糖以上を50質量%未満含有する糖組成、あるいは、(エ)単糖を2~10質量%、二糖を15~55質量%、三糖を15~65質量%、四糖を1~15質量%および五糖以上を1~38質量%含有する糖組成を例示することができる。 Specifically, the sugar composition of the medium-saccharified reduced starch syrup includes (a) a sugar composition containing less than 30% by mass of monosaccharides and less than 50% by mass of pentasaccharides or higher, or (d) 2 to 10% by mass of monosaccharides. %, 15-55% by weight of disaccharides, 15-65% by weight of trisaccharides, 1-15% by weight of tetrasaccharides and 1-38% by weight of pentasaccharides and higher.
低糖化還元水飴の糖組成として、具体的には、(イ)五糖以上を50質量%以上含有する糖組成、あるいは、(オ)単糖を1~10質量%、二糖を6~21質量%、三糖を7~23質量%、四糖を5~13質量%および五糖以上を50~82質量%含有する糖組成を例示することができる。 Specifically, the sugar composition of the low-saccharification reduced starch syrup includes (a) a sugar composition containing 50% by mass or more of pentasaccharide or higher, or (e) 1 to 10% by mass of monosaccharides and 6 to 21% of disaccharides. 7-23% by weight of trisaccharides, 5-13% by weight of tetrasaccharides and 50-82% by weight of pentasaccharides and higher.
なお、本発明において、糖組成とは、糖の総質量に占める各糖の質量割合を百分率で示すものをいう。すなわち、糖の総質量を100とした場合の、各糖の質量百分率である。 In the present invention, the sugar composition refers to the ratio of each sugar to the total sugar mass expressed as a percentage. That is, it is the mass percentage of each saccharide when the total mass of saccharides is 100.
糖組成は、高速液体クロマトグラフィー(HPLC)を用いて確認することができる。すなわち、還元水飴を試料としてHPLCに供してクロマトグラムを得る。当該クロマトグラムにおいて、全ピークの面積の総和が「糖の総質量」に、各ピークの面積が「各糖の質量」に相当する。よって、試料における各糖の質量百分率は、検出された全ピークの面積の総和に対する各ピークの面積の割合として算出することができる。HPLCの条件は、定法に従って適宜設定することができるが、下記条件を例示することができる。
《HPLCの条件》
カラム;MCI GEL CK04S(10mm ID x 200mm)
溶離液;高純水
流速;0.4mL/分
注入量;20μL
カラム温度;65℃
検出;示差屈折率検出器RI-10A(島津製作所)
Sugar composition can be confirmed using high performance liquid chromatography (HPLC). That is, a chromatogram is obtained by subjecting the reduced starch syrup to HPLC as a sample. In the chromatogram, the sum of the areas of all peaks corresponds to the "total sugar mass", and the area of each peak corresponds to the "mass of each sugar". Therefore, the mass percentage of each sugar in the sample can be calculated as the ratio of the area of each peak to the sum of the areas of all detected peaks. The conditions for HPLC can be appropriately set according to standard methods, and the following conditions can be exemplified.
<<Conditions of HPLC>>
Column; MCI GEL CK04S (10mm ID x 200mm)
Eluent; high pure water flow rate; 0.4 mL/min injection volume; 20 μL
Column temperature; 65°C
Detection; Differential refractive index detector RI-10A (Shimadzu Corporation)
還元水飴は、水飴を還元して製造することから、還元水飴の糖化の程度は、水飴の糖化の程度に準じる。すなわち、原料水飴の糖化の程度が高いほど還元水飴の糖化の程度が高く、原料水飴の糖化の程度が低いほど還元水飴の糖化の程度は低い。水飴の糖化の程度の指標は、一般に、デキストロース当量(Dextrose Equivalent値;DE)が用いられる。DEは、試料中の還元糖をブドウ糖として測定したときの、当該還元糖の全固形分に対する割合(百分率)である。DEの最大値は100で、固形分の全てがブドウ糖であることを意味し、DEが小さくなるほど少糖類や多糖類が多いことを意味する。 Since the reduced starch syrup is produced by reducing the starch syrup, the degree of saccharification of the reduced starch syrup conforms to the degree of saccharification of the starch syrup. That is, the higher the degree of saccharification of the raw starch syrup, the higher the degree of saccharification of the reduced starch syrup, and the lower the degree of saccharification of the raw starch syrup, the lower the degree of saccharification of the reduced starch syrup. A dextrose equivalent value (DE) is generally used as an index of the degree of saccharification of starch syrup. DE is the ratio (percentage) of the reducing sugar to the total solid content when the reducing sugar in the sample is measured as glucose. The maximum value of DE is 100, which means that all the solid content is glucose, and the smaller the DE, the more oligosaccharides and polysaccharides are.
すなわち、中糖化還元水飴の原料水飴のDEとしては、30超、31以上、32以上、45以下、46以下、47以下、48以下、49以下、50以下を例示することができる。 That is, the DE of the raw material starch syrup for medium-saccharified reduced starch syrup can be exemplified by more than 30, 31 or more, 32 or more, 45 or less, 46 or less, 47 or less, 48 or less, 49 or less, and 50 or less.
また、低糖化還元水飴の原料水飴のDEとしては、10以上、11以上、12以上、13以上、14以上、30以下を例示することができる。 Examples of the DE of raw starch syrup for low-saccharification reduced starch syrup include 10 or more, 11 or more, 12 or more, 13 or more, 14 or more, and 30 or less.
また、中糖化~低糖化還元水飴の原料水飴のDEとしては、(ウ)10以上50以下を例示することができる。 In addition, as the DE of the raw material starch syrup for medium-saccharified to low-saccharified reduced starch syrup, (c) 10 or more and 50 or less can be exemplified.
なお、水飴のDEは、下記の方法により測定することができる。
《DEの測定方法》
試料2.5gを正確に量り、水で溶かして200mLとする。この液10mLを量り、1/25mol/L ヨウ素溶液(注1)10mLと1/25mol/L 水酸化ナトリウム溶液(注2)15mLを加えて20分間暗所に放置する。次に、2mol/L塩酸(注3)を5mL加えて混和した後、1/25mol/L チオ硫酸ナトリウム溶液(注4)で滴定する。滴定の終点近くで液が微黄色になったら、デンプン指示薬(注5)2滴を加えて滴定を継続し、液の色が消失した時点を滴定の終点とする。水を用いてブランク値を求め、次式1によりDEを求める。
(注1)1/25mol/L ヨウ素溶液:ヨウ化カリウム20.4gとヨウ素10.2gを2Lのメスフラスコに入れ、少量の水で溶解後、標線まで水を加える。
(注2)1/25mol/L 水酸化ナトリウム溶液:水酸化ナトリウム3.2gを2Lのメスフラスコに入れ、少量の水で溶解後、標線まで水を加える。
(注3)2mol/L 塩酸:水750mLに塩酸150mLをかき混ぜながら徐々に加える。
(注4)1/25mol/L チオ硫酸ナトリウム溶液:チオ硫酸ナトリウム20gを2Lのメスフラスコに入れ、少量の水で溶解後、標線まで水を加える。
(注5)デンプン指示薬:可溶性デンプン5gを水500mLに溶解し、これに塩化ナトリウム100gを溶解する。
The DE of starch syrup can be measured by the following method.
《How to measure DE》
Accurately weigh 2.5 g of the sample and dissolve it in water to make 200 mL. Measure 10 mL of this solution, add 10 mL of 1/25 mol/L iodine solution (Note 1) and 15 mL of 1/25 mol/L sodium hydroxide solution (Note 2), and leave in a dark place for 20 minutes. Next, after adding 5 mL of 2 mol/L hydrochloric acid (Note 3) and mixing, titrate with 1/25 mol/L sodium thiosulfate solution (Note 4). When the liquid turns slightly yellow near the end point of titration, add 2 drops of starch indicator (Note 5) and continue the titration until the color of the liquid disappears. A blank value is obtained using water, and DE is obtained from the following equation (1).
(Note 1) 1/25 mol/L iodine solution: Put 20.4 g of potassium iodide and 10.2 g of iodine into a 2 L volumetric flask, dissolve with a small amount of water, and add water up to the marked line.
(Note 2) 1/25 mol/L sodium hydroxide solution: Put 3.2 g of sodium hydroxide into a 2 L volumetric flask, dissolve with a small amount of water, and add water up to the marked line.
(Note 3) 2 mol/L hydrochloric acid: Gradually add 150 mL of hydrochloric acid to 750 mL of water while stirring.
(Note 4) 1/25 mol/L sodium thiosulfate solution: Put 20 g of sodium thiosulfate into a 2 L volumetric flask, dissolve with a small amount of water, and add water up to the marked line.
(Note 5) Starch indicator: Dissolve 5 g of soluble starch in 500 mL of water, and dissolve 100 g of sodium chloride therein.
本発明において、還元水飴は、市販されているものをそのまま用いてもよく、当業者に公知の方法に従って製造して用いてもよい。市販の中糖化還元水飴としては、例えば、「スイートOL」、「スイートG3」、「エスイー57」および「エスイー58」(以上、物産フードサイエンス)などを、市販の低糖化還元水飴としては、例えば、「スイートNT」、「エスイー30」および「エスイー100」(以上、物産フードサイエンス)などを例示することができる。
In the present invention, a commercially available reduced starch syrup may be used as it is, or it may be produced and used according to a method known to those skilled in the art. Examples of commercially available medium-saccharified reduced starch syrup include "Sweet OL", "Sweet G3", "SE 57" and "SE 58" (manufactured by Bussan Food Science). , “Sweet NT”, “
還元水飴の公知の製造方法としては、水飴(原料糖)に水素を添加する還元反応を挙げることができる。水素添加による還元反応は、例えば、40~75質量%の原料糖水溶液を、還元触媒と併せて高圧反応器中に仕込み、反応器中の水素圧を4.9~19.6MPa、反応液温を70~180℃として、混合攪拌しながら、水素の吸収が認められなくなるまで反応を行なえばよい。その後、還元触媒を分離し、イオン交換樹脂処理、必要であれば活性炭処理等で脱色脱塩した後、所定の濃度まで濃縮すれば、高濃度の還元水飴を作ることができる。 A known method for producing reduced starch syrup includes a reduction reaction in which hydrogen is added to starch syrup (raw sugar). In the reduction reaction by hydrogenation, for example, a 40 to 75% by mass raw sugar aqueous solution is charged into a high-pressure reactor together with a reduction catalyst, the hydrogen pressure in the reactor is 4.9 to 19.6 MPa, and the reaction liquid temperature is is adjusted to 70 to 180° C., and the reaction is carried out with stirring until hydrogen absorption is no longer observed. Thereafter, the reduced catalyst is separated, decolorized and desalted by ion-exchange resin treatment and, if necessary, activated carbon treatment, etc., and then concentrated to a predetermined concentration, whereby high-concentration reduced starch syrup can be produced.
セルラーゼまたはセルラーゼおよび還元水飴は、米飯の製造過程において、砂糖などの調味料や他の添加物と同様に、一材料として配合して用いることができる。好ましくは、炊飯の前または炊飯中に、米あるいは米を浸漬させている水分に添加して用いる。セルラーゼと還元水飴とは、同時に添加してもよく、別個のタイミングで添加してもよい。 Cellulase or cellulase and reduced starch syrup can be blended and used as one material in the process of producing cooked rice, like seasonings such as sugar and other additives. Preferably, it is used by adding to rice or water in which rice is soaked before or during rice cooking. Cellulase and reduced starch syrup may be added at the same time or at different times.
すなわち、本発明に係る米飯の製造方法は、本剤を添加して炊飯する工程を有する。本方法には、本発明の特徴を損なわない限り他の工程を含んでもよい。係る工程としては、例えば、食品材料の混合工程、調味工程、成型工程、冷却工程、包装工程、殺菌工程などを例示することができる。 That is, the method for producing cooked rice according to the present invention has a step of adding this agent and cooking rice. The method may include other steps as long as they do not impair the features of the present invention. Such processes include, for example, a food material mixing process, a seasoning process, a molding process, a cooling process, a packaging process, a sterilization process, and the like.
セルラーゼの配合量(添加量)は、米の種類や所望の食感、味、副材料の有無・種類・量などに応じて適宜設定することができる。具体的な配合量としては、米100重量部に対してセルラーゼが0.07~700ユニットを例示することができる。 The amount of cellulase to be added (addition amount) can be appropriately set according to the type of rice, the desired texture and taste, the presence/absence/type/amount of auxiliary materials, and the like. As a specific blending amount, 0.07 to 700 units of cellulase can be exemplified per 100 parts by weight of rice.
還元水飴の配合量(添加量)もまた、米の種類や所望の食感、味、副材料の有無・種類・量などに応じて適宜設定することができる。具体的な配合量としては、米100重量部に対して、還元水飴の下限が0.1重量部以上、0.15重量部以上、0.2重量部以上、0.25重量部以上、0.3重量部以上、0.35重量部以上を例示することができる。また、還元水飴の上限は、米100重量部に対して、10重量部以下、9.5重量部以下、9重量部以下、8.5重量部以下、8重量部以下、7.5重量部以下、7重量部以下を例示することができる。 The blending amount (addition amount) of the reduced starch syrup can also be appropriately set according to the type of rice, the desired texture and taste, the presence/absence/type/amount of auxiliary materials, and the like. As a specific amount, the lower limit of the reduced starch syrup per 100 parts by weight of rice is 0.1 parts by weight or more, 0.15 parts by weight or more, 0.2 parts by weight or more, 0.25 parts by weight or more, 0 .3 parts by weight or more and 0.35 parts by weight or more can be exemplified. In addition, the upper limit of the reduced starch syrup is 10 parts by weight or less, 9.5 parts by weight or less, 9 parts by weight or less, 8.5 parts by weight or less, 8 parts by weight or less, or 7.5 parts by weight with respect to 100 parts by weight of rice. Below, 7 parts by weight or less can be exemplified.
以下、本発明について、各実施例に基づいて説明する。なお、本発明の技術的範囲は、これらの実施例によって示される特徴に限定されない。 Hereinafter, the present invention will be described based on each embodiment. However, the technical scope of the present invention is not limited to the features shown by these examples.
<試験方法>
(1)改良剤
本実施例においては、改良剤としてセルラーゼおよび/または還元水飴を用いた。
<Test method>
(1) Improver In this example, cellulase and/or reduced starch syrup were used as improvers.
セルラーゼは別段の記載のない限り、表1に示す市販品を用いた。当該市販品「セルクラスト1.5L」は、トリコデルマ・リーセイ由来の、(a)~(d)を含む混合セルラーゼ組成物である(Lisa Rosgaard et. al., Biotechnol. Prog. 2007, 23, 1270-1276)。
還元水飴は、表2に示す市販品を用いた。
(2)炊飯
炊飯は、下記の手順<1>~<7>により行った。
<1>無洗米を水に1時間浸漬した。
<2>浸漬に使用した水を捨て、浸漬した米(浸漬米)のみとした。
<3>浸漬米に、新しい水ならびに静菌剤、サラダ油、セルラーゼおよび還元水飴を添加した。各物質の添加量の詳細は各実施例の配合に示すが、特段の記載のない限り、無洗米の重量に対して、静菌剤は1質量%、サラダ油は1.3質量%、還元水飴は0~7質量%(固形分濃度))とした。セルラーゼは無洗米100gに対して0.35Uとした。
<4>炊飯器で炊飯して米飯とした。
<5>米飯をほぐした後、約170gずつ小分けして蓋付容器に入れた。
<6>容器の蓋をせずに米飯を常温で15分放冷した。
<7>容器の蓋を閉めて、米飯を20℃または5℃で2時間~5日間、保存した。
(2) Rice Cooking Rice was cooked according to the following procedures <1> to <7>.
<1> Wash-free rice was soaked in water for 1 hour.
<2> The water used for soaking was discarded, and only the soaked rice (soaked rice) was used.
<3> Fresh water and bacteriostatic agent, salad oil, cellulase and reduced starch syrup were added to the soaked rice. The details of the amount of each substance to be added are shown in the formulation of each example. is 0 to 7% by mass (solid content concentration)). The amount of cellulase was 0.35 U per 100 g of rinse-free rice.
<4> Rice was cooked in a rice cooker to obtain rice.
<5> After the cooked rice was loosened, it was subdivided into portions of about 170 g and placed in containers with lids.
<6> The boiled rice was allowed to cool at room temperature for 15 minutes without covering the container.
<7> The lid of the container was closed and the cooked rice was stored at 20°C or 5°C for 2 hours to 5 days.
(3)荷重の測定
約15gの米飯をカップに入れ、クリープメーターRE2-33005C(山電)の円形のプランジャーを用いて、圧縮速度1.0mm/秒で50体積%圧縮変形するまで圧縮し、荷重(N)を測定した。各試料につき8検体を行い、最大荷重について平均値を算出した。
(3) Measurement of load About 15 g of cooked rice was placed in a cup and compressed using a creep meter RE2-33005C (Yamaden) circular plunger at a compression rate of 1.0 mm/sec until it was compressed and deformed by 50% by volume. , the load (N) was measured. Eight specimens were performed for each sample, and the average value was calculated for the maximum load.
(4)官能試験
2~7名(甲~庚)の分析型パネルにより米飯を喫食して官能試験を行った。官能試験に用いた評価シートを図1に示す。図1に示すように、評価項目は「柔らかさ」、「もちっと感」、「粒感」および「しっとり感」の4項目とした。上記4項目は、試料1(改良剤無し)を基準の3点として、下記に示す基準により1~5点の5段階で各パネルが採点した。
「柔らかさ」5点:明らかに柔らかい、4点:やや柔らかい、3点:試料1と同等、2点:やや硬い、1点:明らかに硬い。
「もちっと感」5点:もちっと感が明らかに強い、4点:もちっと感がやや強い、3点:試料1と同等、2点:ややもろい食感、1点:明らかにもろい食感。
「粒感」5点:粒感が明らかに強い、4点:粒感がやや強い、3点:試料1と同等、2点:粒感がやや弱い、1点:粒感が明らかに弱い。
「しっとり感」5点:しっとり感が明らかに強い、4点:しっとり感がやや強い、3点:試料1と同等、2点:パラパラ感がやや強い、1点:パラパラ感が明らかに強い。
(4) Sensory test A sensory test was performed by eating cooked rice by an analytical panel consisting of 2 to 7 persons (A to Ko). The evaluation sheet used for the sensory test is shown in FIG. As shown in FIG. 1, the evaluation items were four items of "softness", "sticky feeling", "grainy feeling" and "moist feeling". The above four items were scored by each panel on a five-point scale from 1 to 5 according to the criteria shown below, with Sample 1 (without improver) as the standard of 3 points.
"Softness" 5 points: clearly soft, 4 points: slightly soft, 3 points: equivalent to
“Moist feeling” 5 points: clearly strong sticky feeling, 4 points: slightly strong sticky feeling, 3 points: equivalent to
"Grainy feel" 5 points: Clearly strong grainy feel, 4 points: Slightly strong grainy feel, 3 points: Same as
"Moist feeling" 5 points: obviously strong moist feeling, 4 points: slightly strong moist feeling, 3 points: equivalent to
採点結果は、試料ごとに全パネルによる評点の平均値を求め、小数点第2位を四捨五入して評価点とした。また、上記4項目の評価点の平均値を算出し、これを「総合評価」の評価点とした。 The scoring results were obtained by averaging the scores of all panels for each sample and rounding off to the second decimal place to obtain the score. In addition, the average value of the evaluation points of the above four items was calculated, and this was used as the evaluation point of the "comprehensive evaluation".
<実施例1>米飯の柔らかさ向上効果
表3に示す配合で炊飯して米飯を製造し、2時間保存した。
2時間保存した米飯について、試験方法(3)により荷重を測定した。その結果を図2に示す。図2に示すように、試料1と比較して試料2~5のいずれも荷重が小さかった。特に、試料2の荷重が顕著に小さかった。すなわち、「セルラーゼ」、「低糖化還元水飴」、「中糖化還元水飴」または「セルラーゼおよび低糖化還元水飴」を配合した試料では、配合しない試料と比較して、柔らかかった。特に、「セルラーゼ」を配合した試料が顕著に柔らかかった。この結果から「セルラーゼ」、「低糖化還元水飴」、「中糖化還元水飴」または「セルラーゼおよび低糖化還元水飴」を配合すると、米飯の柔らかさを向上できることが明らかになった。
The load of the cooked rice stored for 2 hours was measured by test method (3). The results are shown in FIG. As shown in FIG. 2, all of
<実施例2>常温保存時の食感劣化抑制効果
表4に示す配合で炊飯して米飯を製造し、20℃で5日間保存した。
(1)荷重の測定
20℃で5日間保存した米飯について、試験方法(3)により荷重を測定した。その結果を図3に示す。図3に示すように、試料1と比較して試料2~6のいずれも荷重が小さかった。特に、試料2および試料6の荷重が顕著に小さかった。すなわち、「セルラーゼ」、「低糖化還元水飴」、「中糖化還元水飴」、「セルラーゼおよび低糖化還元水飴」または「セルラーゼ、低糖化還元水飴および中糖化還元水飴」を配合した試料では、配合しない試料と比較して、柔らかかった。特に、「セルラーゼ」または「セルラーゼ、低糖化還元水飴および中糖化還元水飴」を配合した試料が顕著に柔らかかった。この結果から「セルラーゼ」、「低糖化還元水飴」、「中糖化還元水飴」、「セルラーゼおよび低糖化還元水飴」または「セルラーゼ、低糖化還元水飴および中糖化還元水飴」を配合すると、炊飯後の時間経過に伴う米飯の硬化を抑制できることが明らかになった。
(1) Measurement of load The load of cooked rice stored at 20°C for 5 days was measured according to test method (3). The results are shown in FIG. As shown in FIG. 3, all of
(2)官能評価
20℃で5日間保存した米飯について、試験方法(4)により3名のパネル(甲~丙)で官能試験を行った。その結果を図4に示す。図4に示すように、試料2(セルラーゼ)は、試料1(改良剤無し)と比較して「柔らかさ」および「もちっと感」の評価点が高く、「粒感」および「しっとり感」は同等であった。また、「総合評価」は試料1よりも高かった。この結果から、セルラーゼを添加すると、炊飯後の時間経過に伴う米飯の食感劣化(硬化、もちっと感の低下)を抑制できることが明らかになった。
(2) Sensory evaluation The cooked rice stored at 20°C for 5 days was subjected to a sensory test by three panelists (A to C) according to test method (4). The results are shown in FIG. As shown in FIG. 4, sample 2 (cellulase) had higher evaluation points for "softness" and "sticky feeling" than sample 1 (no improver), and had higher scores for "grainy feeling" and "moist feeling". were equivalent. In addition, the "comprehensive evaluation" was higher than that of
次に、試料3(低糖化還元水飴)は、試料1(改良剤無し)と比較して「粒感」の評価点が高かった一方で、「柔らかさ」、「もちっと感」および「しっとり感」の評価点は低かった。「総合評価」は試料1と同等であった。この結果から、低糖化還元水飴のみでは、炊飯後の時間経過に伴う米飯の食感劣化(硬化、もちっと感の低下、しっとり感の低下)の抑制には不十分であることが明らかになった。
Next, sample 3 (low saccharification reduced starch syrup) had a higher evaluation score for "grain feeling" than sample 1 (no improver), but "softness", "sticky feeling" and "moist". The score for “feeling” was low. "Comprehensive evaluation" was equivalent to
次に、試料4(中糖化還元水飴)は、試料1(改良剤無し)と比較して「粒感」の評価点が低かった一方で、「柔らかさ」、「もちっと感」および「しっとり感」の評価点は高かった。「総合評価」は試料1よりも高かった。この結果から、中糖化還元水飴を添加すると、炊飯後の時間経過に伴う米飯の食感劣化(硬化、もちっと感の低下、しっとり感の低下)を抑制できることが明らかになった。
Next, sample 4 (medium saccharified reduced starch syrup) had a lower evaluation score for "grain feeling" than sample 1 (no improver), but had "softness", "sticky feeling" and "moist feeling". The evaluation score for “feeling” was high. The "comprehensive evaluation" was higher than
次に、試料5(低糖化還元水飴およびセルラーゼ)は、試料1(改良剤無し)と比較して、「柔らかさ」、「もちっと感」、「粒感」および「しっとり感」の全ての評価点が高かった。「総合評価」は試料1よりも顕著に高かった。試料2(セルラーゼ)および試料3(低糖化還元水飴)と比較しても、「柔らかさ」、「もちっと感」、「しっとり感」および「総合評価」は試料5が最も高かった。また、試料5の評価点は、試料2および試料3と比較して、「柔らかさ」、「もちっと感」、「しっとり感」および「総合評価」において、相乗効果が見られた。この結果から、低糖化還元水飴およびセルラーゼを併せて添加すると、炊飯後の時間経過に伴う米飯の食感劣化(硬化、もちっと感の低下、粒感の低下、しっとり感の低下)を顕著に抑制できることが明らかになった。
Next, sample 5 (low-saccharification-reduced starch syrup and cellulase) was compared to sample 1 (no improver), and all of "softness", "sticky feeling", "grainy feeling" and "moist feeling" It was highly rated. The "overall evaluation" was significantly higher than
最後に、試料6(低糖化還元水飴、中糖化還元水飴およびセルラーゼ)は、試料1(改良剤無し)と比較して、「柔らかさ」、「もちっと感」、「粒感」および「しっとり感」の全ての評価点が高かった。「総合評価」は試料1よりも顕著に高かった。試料2(セルラーゼ)、試料3(低糖化還元水飴)および試料4(中糖化還元水飴)と比較しても、「もちっと感」、「しっとり感」および「総合評価」は試料6が最も高かった。また、試料6においては、試料3および試料4のそれぞれと比較して低糖化還元水飴および中糖化還元水飴の添加量が半分になっており、還元水飴の総添加量が等しくなるよう配合している。このことを鑑みれば、試料6の評価点は、試料2、試料3および試料4と比較して、「もちっと感」、「粒感」、「しっとり感」および「総合評価」において、相乗効果が見られた。この結果から、低糖化還元水飴、中糖化還元水飴およびセルラーゼを併せて添加すると、炊飯後の時間経過に伴う米飯の食感劣化(硬化、もちっと感の低下、粒感の低下、しっとり感の低下)を顕著に抑制できることが明らかになった。
Finally, sample 6 (low-saccharification-reduced starch syrup, medium-saccharification-reduced starch syrup, and cellulase) had "softness", "stickiness", "graininess" and "moistness" compared to sample 1 (no improver). All of the evaluation points for "feeling" were high. The "overall evaluation" was significantly higher than
<実施例3>冷蔵保存時の食感劣化抑制効果
実施例2の表4に示す配合で炊飯して米飯を製造し、5℃で1~2日間保存した。
<Example 3> Effect of suppressing deterioration of texture during refrigerated storage Cooked rice was produced by cooking rice according to the formulation shown in Table 4 of Example 2, and stored at 5°C for 1 to 2 days.
(1)荷重の測定
5℃で1日間保存した米飯について、試験方法(3)により荷重を測定した。その結果を図5に示す。図5に示すように、試料1と比較して試料2~6のいずれも荷重が小さかった。特に、試料2、試料3、試料4および試料6の荷重が顕著に小さかった。すなわち、「セルラーゼ」、「低糖化還元水飴」、「中糖化還元水飴」、「セルラーゼおよび低糖化還元水飴」または「セルラーゼ、低糖化還元水飴および中糖化還元水飴」を配合した試料では、配合しない試料と比較して、柔らかかった。特に、「セルラーゼ」、「低糖化還元水飴」、「中糖化還元水飴」または「セルラーゼ、低糖化還元水飴および中糖化還元水飴」を配合した試料が顕著に柔らかかった。この結果から「セルラーゼ」、「低糖化還元水飴」、「中糖化還元水飴」、「セルラーゼおよび低糖化還元水飴」または「セルラーゼ、低糖化還元水飴および中糖化還元水飴」を配合すると、低温保存に伴う米飯の硬化を抑制できることが明らかになった。
(1) Measurement of load The load of cooked rice stored at 5°C for 1 day was measured according to test method (3). The results are shown in FIG. As shown in FIG. 5, all of
(2)官能評価
5℃で2日間保存した米飯について、試験方法(4)により6名のパネル(甲、乙、丁~庚)で官能試験を行った。その結果を図6に示す。図6に示すように、試料2(セルラーゼ)は、試料1(改良剤無し)と比較して「もちっと感」の評価点は低かった一方で、「柔らかさ」、「粒感」および「しっとり感」の評価点は高かった。また、「総合評価」は試料1よりも高かった。この結果から、セルラーゼを添加すると、低温保存に伴う米飯の食感劣化(硬化、粒感の低下、しっとり感の低下)を抑制できることが明らかになった。
(2) Sensory Evaluation The cooked rice stored at 5° C. for 2 days was subjected to a sensory test by 6 panelists (A, Otsu, Ding-Kung) according to test method (4). The results are shown in FIG. As shown in FIG. 6, sample 2 (cellulase) had a lower evaluation score for "sticky feeling" than sample 1 (no improver), but "softness", "graininess" and " Moist feeling” score was high. In addition, the "comprehensive evaluation" was higher than that of
次に、試料3(低糖化還元水飴)は、試料1(改良剤無し)と比較して「柔らかさ」、「もちっと感」、「粒感」および「しっとり感」の全ての評価点が高かった。また、「総合評価」は試料1よりも高かった。この結果から、低糖化還元水飴を添加すると、低温保存に伴う米飯の食感劣化(硬化、もちっと感の低下、粒感の低下、しっとり感の低下)を抑制できることことが明らかになった。
Next, sample 3 (low saccharification reduced starch syrup) has all the evaluation points of "softness", "sticky feeling", "granular feeling" and "moist feeling" compared to sample 1 (no improver). it was high. In addition, the "comprehensive evaluation" was higher than that of
次に、試料4(中糖化還元水飴)は、試料1(改良剤無し)と比較して、「柔らかさ」、「もちっと感」および「粒感」の評価点が高く、「しっとり感」の評価点は同等であった。「総合評価」は試料1よりも高かった。この結果から、中糖化還元水飴を添加すると、低温保存に伴う米飯の食感劣化(硬化、もちっと感の低下、粒感の低下)を抑制できることが明らかになった。
Next, sample 4 (medium saccharified reduced starch syrup) has higher evaluation points for "softness", "sticky feeling" and "grainy feel" than sample 1 (no improver), and "moist feeling". were equivalent. The "comprehensive evaluation" was higher than
次に、試料5(低糖化還元水飴およびセルラーゼ)は、試料1(改良剤無し)と比較して、「柔らかさ」、「もちっと感」、「粒感」および「しっとり感」の全ての評価点が高かった。「総合評価」は試料1よりも顕著に高かった。試料2(セルラーゼ)および試料3(低糖化還元水飴)と比較しても、「柔らかさ」、「もちっと感」、「しっとり感」および「総合評価」は試料5が最も高かった。また、試料5の評価点は、試料2および試料3と比較して、「柔らかさ」、「もちっと感」、「しっとり感」および「総合評価」において、相乗効果が見られた。この結果から、低糖化還元水飴およびセルラーゼを併せて添加すると、低温保存に伴う米飯の食感劣化(硬化、もちっと感の低下、粒感の低下、しっとり感の低下)を顕著に抑制できることが明らかになった。
Next, sample 5 (low-saccharification-reduced starch syrup and cellulase) was compared to sample 1 (no improver), and all of "softness", "sticky feeling", "grainy feeling" and "moist feeling" It was highly rated. The "overall evaluation" was significantly higher than
最後に、試料6(低糖化還元水飴、中糖化還元水飴およびセルラーゼ)は、試料1(改良剤無し)と比較して、「柔らかさ」、「もちっと感」、「粒感」および「しっとり感」の全ての評価点が高かった。「総合評価」は試料1よりも顕著に高かった。試料2(セルラーゼ)、試料3(低糖化還元水飴)および試料4(中糖化還元水飴)と比較しても、「柔らかさ」、「もちっと感」、「しっとり感」および「総合評価」は試料6が最も高かった。また、試料6においては、試料3および試料4のそれぞれと比較して低糖化還元水飴および中糖化還元水飴の添加量が半分になっており、還元水飴の総添加量が等しくなるよう配合している。このことを鑑みれば、試料6の評価点は、試料2、試料3および試料4と比較して、「柔らかさ」、「もちっと感」、「しっとり感」および「総合評価」において、相乗効果が見られた。この結果から、低糖化還元水飴、中糖化還元水飴およびセルラーゼを併せて添加すると、低温保存に伴う米飯の食感劣化(硬化、もちっと感の低下、粒感の低下、しっとり感の低下)を顕著に抑制できることが明らかになった。
Finally, sample 6 (low-saccharification-reduced starch syrup, medium-saccharification-reduced starch syrup, and cellulase) had "softness", "stickiness", "graininess" and "moistness" compared to sample 1 (no improver). All of the evaluation points for "feeling" were high. The "overall evaluation" was significantly higher than
<実施例4>還元水飴の添加量の検討
表5に示す配合で炊飯して米飯を製造し、20℃で5日間保存した。試料1は改良剤を配合しない米飯であり、試料2~試料8はセルラーゼ、中糖化還元水飴および低糖化還元水飴を併用して配合した米飯である。セルラーゼの添加量は、試料2~8のいずれも生米に対して5ppm量(生米100gに対して0.35U)である。還元水飴の添加量は、生米に対して0.35~7質量%(固形分濃度、外割)の間で、試料毎に異なる。中糖化還元水飴および低糖化還元水飴の割合は、試料2~8のいずれも1:1である。
(1)荷重の測定
20℃で5日間保存した米飯のうち、試料1(改良剤無し、0%)、試料2(0.35%)、試料3(0.7%)、試料5(2.1%)、試料6(3.5%)および試料8(7%)について、試験方法(3)により荷重を測定した。その結果を図7に示す。図7に示すように、試料1と比較して試料2、試料3、試料5、試料6および試料8のいずれも荷重が小さかった。特に、試料2、試料3、試料5および試料6の荷重が顕著に小さかった。すなわち、還元水飴の添加濃度が0.35%、0.7%、2.1%、3.5%および7%のいずれの場合も、改良剤を配合しない試料と比較して、米飯が柔らかかった。この結果から、還元水飴はその添加濃度にかかわらず、炊飯後の時間経過に伴う米飯の硬化を抑制できることが明らかになった。
(1) Measurement of load Of the cooked rice stored at 20 ° C. for 5 days, sample 1 (no improver, 0%), sample 2 (0.35%), sample 3 (0.7%), sample 5 (2 .1%), Sample 6 (3.5%) and Sample 8 (7%) were measured for load by test method (3). The results are shown in FIG. As shown in FIG. 7, compared with
(2)官能評価
20℃で5日間保存した米飯について、試験方法(4)により2名のパネル(甲、乙)で官能試験を行った。その結果を図8に示す。
(2) Sensory evaluation The cooked rice stored at 20°C for 5 days was subjected to a sensory test by two panelists (A and B) according to test method (4). The results are shown in FIG.
図8に示すように、「柔らかさ」および「しっとり感」の評価点は、試料2(0.35%)~試料8(7%)のいずれも、試料1(0%)と比較して高かった。「もちっと感」の評価点は、試料8では試料1より低かったが、試料2~試料7(5.6%)では、試料1と比較して高かった。「粒感」の評価点は、試料3(0.7%)では試料1と同等であったが、試料2および試料4(1.4%)~試料8では、試料1と比較して高かった。「総合評価」は、試料2~試料8のいずれも試料1と比較して高かった。
As shown in FIG. 8, the evaluation points for “softness” and “moist feeling” were higher than those of sample 1 (0%) for all of sample 2 (0.35%) to sample 8 (7%). it was high. The evaluation score of “sticky feeling” was lower in sample 8 than in
すなわち、還元水飴の配合濃度が、0.35%、0.7%、1.4%、2.1%、3.5%、5.6%および7%のいずれの場合も、改良剤を配合しない試料と比較して、柔らかさ、もちっと感、粒感および/またはしっとり感が大きかった。この結果から、還元水飴はその添加濃度にかかわらず、炊飯後の時間経過に伴う米飯の食感劣化(硬化、もちっと感の低下、粒感の低下および/またはしっとり感の低下)を抑制できることが明らかになった。 That is, when the concentration of the reduced starch syrup was 0.35%, 0.7%, 1.4%, 2.1%, 3.5%, 5.6% and 7%, the improver was added. Softness, sticky feeling, grainy feeling and/or moist feeling were greater than those of the samples not blended. From these results, reduced starch syrup can suppress the deterioration of the texture of cooked rice (hardening, decrease in chewy texture, decrease in graininess and/or decrease in moist texture) over time after cooking, regardless of the addition concentration. became clear.
<実施例5>酵素の種類の検討
表6に示す配合で炊飯して米飯を製造し、20℃で5日間保存した。ただし、セルラーゼは、試験方法(1)の表1に示す市販品(本実施例5において「セルラーゼA」という。)および市販の糸状菌由来セルラーゼ(本実施例5において「セルラーゼB」という。)を用いた。試料1は改良剤を配合しない米飯である。改良剤として、試料2はセルラーゼA、試料3はセルラーゼB、試料4および試料5はセルラーゼAまたはセルラーゼBと、中糖化還元水飴および低糖化還元水飴とを併用して配合した米飯である。セルラーゼBの仕様を以下に示す。
セルラーゼB:1100 CUN/g(液状品)。Aspergillus属由来。エンド型およびエキソ型の両セルラーゼ活性を有する。至適pH;pH3-5。至適温度;40-70℃(pH4.5)。耐熱性;60℃まで(残存活性90%以上、pH4.5、60分)。
※0.625%の CMC-Na(pH5.5)4mLに酵素液1mLを加え、40℃で30分間作用させた時、1分間に1μモルのグルコースに相当する還元力を生成する活性を 1CUNとする。
Cellulase B: 1100 CUN/g (liquid product). Derived from the genus Aspergillus. It has both endo-type and exo-type cellulase activities. Optimal pH; pH 3-5. Optimal temperature: 40-70°C (pH 4.5). Heat resistance; up to 60°C (residual activity of 90% or more, pH 4.5, 60 minutes).
* 1 CUN is the activity that generates a reducing power equivalent to 1 μmole of glucose per minute when 1 mL of the enzyme solution is added to 4 mL of 0.625% CMC-Na (pH 5.5) and allowed to act at 40°C for 30 minutes. and
(1)荷重の測定
20℃で5日間保存した米飯のうち、試料2~試料5について、試験方法(3)により荷重を測定した。その結果を図9に示す。図9に示すように、試料2(セルラーゼA)と試料3(セルラーゼB)とは、同等の荷重であった。また、試料4(セルラーゼAおよび還元水飴)と試料5(セルラーゼBおよび還元水飴)とは、同等の荷重であった。すなわち、セルラーゼBを配合した米飯は、セルラーゼAを配合した米飯と同様の硬さであった。この結果からセルラーゼはその種類にかかわらず、炊飯後の時間経過に伴う米飯の硬化を抑制できることが明らかになった。
(1) Measurement of load Load was measured for
(2)官能評価
20℃で5日間保存した米飯について、試験方法(4)により2名のパネル(甲、乙)で官能試験を行った。その結果を図10に示す。
(2) Sensory evaluation The cooked rice stored at 20°C for 5 days was subjected to a sensory test by two panelists (A and B) according to test method (4). The results are shown in FIG.
図10に示すように、まず、試料2(セルラーゼA)と試料3(セルラーゼB)とを比較すると、「柔らかさ」、「もちっと感」および「しっとり感」の評価点が、試料2および試料3で同じ値であった。「粒感」の評価点のみ試料3で試料1より低く、試料2では試料1より高かった。「総合評価」は、試料2の方がやや高いものの、ほぼ同等であった。次に、試料4(セルラーゼAおよび還元水飴)と試料5(セルラーゼBおよび還元水飴)とを比較すると、「柔らかさ」および「しっとり感」の評価点が、試料4および試料5で同じ値であった。「もちっと感」、「粒感」および「総合評価」の評価点は試料4の方が高いものの、ほぼ同等であった。
As shown in FIG. 10, first, when sample 2 (cellulase A) and sample 3 (cellulase B) are compared, the evaluation points for "softness", "sticky feeling" and "moist feeling" are the same for
すなわち、セルラーゼBを配合した米飯は、セルラーゼAを配合した米飯と同様の柔らかさ、もちっと感、粒感およびしっとり感であった。この結果から、セルラーゼはその種類にかかわらず、炊飯後の時間経過に伴う米飯の食感劣化(硬化、もちっと感の低下、粒感の低下および/またはしっとり感の低下)を抑制できることが明らかになった。 That is, the cooked rice containing cellulase B had the same softness, stickiness, graininess and moistness as the cooked rice containing cellulase A. From these results, it is clear that cellulase, regardless of its type, can suppress the deterioration of the texture of cooked rice (hardening, reduction in stickiness, reduction in graininess, and/or reduction in moistness) over time after cooking. Became.
Claims (7)
(ア)糖組成が、単糖が30質量%未満かつ五糖以上が50質量%未満の還元水飴、
(イ)糖組成が、五糖以上が50質量%以上の還元水飴、
(ウ)デキストロース当量が10以上50以下の水飴を還元してなる還元水飴。 The agent according to any one of claims 1 to 3, further comprising a reduced starch syrup selected from the following (a) to (c) as an active ingredient;
(a) reduced starch syrup having a sugar composition of less than 30% by mass of monosaccharides and less than 50% by mass of pentasaccharides or higher;
(a) reduced starch syrup having a sugar composition of 50% by mass or more of pentasaccharide or higher;
(c) Reduced starch syrup obtained by reducing starch syrup having a dextrose equivalent of 10 or more and 50 or less.
(a)配列番号1と90%以上のアミノ酸配列同一性を有するセルラーゼ、
(b)配列番号2と90%以上のアミノ酸配列同一性を有するセルラーゼ、
(c)配列番号3と90%以上のアミノ酸配列同一性を有するセルラーゼ、
(d)配列番号4と90%以上のアミノ酸配列同一性を有するセルラーゼ。 The agent according to any one of claims 1 to 5, wherein the cellulase is a mixed cellulase composition containing the following (a) to (d);
(a) a cellulase having 90% or more amino acid sequence identity with SEQ ID NO: 1;
(b) a cellulase having 90% or more amino acid sequence identity with SEQ ID NO:2;
(c) a cellulase having 90% or more amino acid sequence identity with SEQ ID NO:3;
(d) a cellulase having greater than 90% amino acid sequence identity with SEQ ID NO:4;
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JP2021157004A JP2023047856A (en) | 2021-09-27 | 2021-09-27 | Rice texture deterioration inhibitor, rice softness improver, and rice production method |
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