JP2023008599A

JP2023008599A - Ｒｕｎｘ結合配列を標的とする抗脳腫瘍剤

Info

Publication number: JP2023008599A
Application number: JP2021112278A
Authority: JP
Inventors: 靖彦上久保; Yasuhiko Kamikubo; 弘杉山; Hiroshi Sugiyama
Original assignee: Kyoto University
Current assignee: Kyoto University
Priority date: 2021-07-06
Filing date: 2021-07-06
Publication date: 2023-01-19

Abstract

【課題】膠芽腫を含む脳腫瘍の治療に効果的であり、かつ、脳内への局所投与に限定されない投与経路を有する薬剤を提供すること。【解決手段】ＲＵＮＸ結合配列に結合するピロール－イミダゾールポリアミドとアルキル化剤との複合体を含む、脳腫瘍を予防または治療するための医薬組成物が提供される。【選択図】なし

Description

本発明は、抗脳腫瘍剤に関する。

脳腫瘍のなかでも膠芽腫（グリオブラストーマ）は、成人において最も頻度が高く、かつ、２年生存率が約３０％という悪性度の高い脳腫瘍である。膠芽腫の治療には、外科的摘出、放射線治療、化学療法などが試みられており、現在、可能な限り腫瘍を摘出後、放射線治療およびテモゾロミドによる化学療法を併用することが標準治療となっている。しかしながら、これらの膠芽腫の治療の奏効率は芳しくない。過去３０年間、膠芽腫の診断後生存率は大きな変化がなく、生存期間中央値は約１年である。このため、膠芽腫に対して優れた奏効率を示し、かつ、安全性が高い治療法が求められている。

一方、高悪性度神経膠腫の悪性表現型に関与する転写因子の一つとしてＲＵＮＸ１［ラント関連転写因子（Runt-related transcription factor）１］が報告された（非特許文献１）。ＲＵＮＸ１は、血液関連遺伝子および造血幹細胞関連遺伝子の発現を制御する重要な転写因子であるＲＵＮＸファミリーのメンバーである。ＲＵＮＸファミリーのメンバーには、ＲＵＮＸ１の他に、ＲＵＮＸ２およびＲＵＮＸ３がある。ＲＵＮＸファミリーは、ラントドメインを介して、ＤＮＡ上のコンセンサス結合配列５’－ＴＧＴＧＧＴ－３’および非常に稀には５’－ＴＧＣＧＧＴ－３’を認識し、結合することにより、下流遺伝子の転写を調節する。ＤＮＡ上のＲＵＮＸ結合配列に結合してその転写活性を減少させるピロール－イミダゾールポリアミド（以後、「ＰＩポリアミド」または「ＰＩＰ」ともいう）が開発され、ＲＵＮＸファミリーの標的遺伝子への結合の阻害（遺伝子スイッチ－オフ）が急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）や、胃がんのような固形腫瘍において腫瘍抑制効果をもたらすことが報告された（非特許文献２および特許文献１）。しかしながら、腫瘍の悪性度においてＲＵＮＸ１またはＲＵＮＸファミリーがどのように関与するのか詳細はいまだ不明である。

さらに、現在、血液脳関門（Blood Brain Barrier、以下、「ＢＢＢ」ともいう）を通過する抗腫瘍剤はほとんど存在しておらず、テモゾロミドなどの数種類に限られる。そのため、脳腫瘍の治療では、薬剤を直接脳内に局所投与する方法が一般的である。また、ＰＩポリアミドの取込量は細胞種によって異なり、正常な脳にはほとんど取り込まれないことが報告された（非特許文献３）。

国際公開第ＷＯ２０１８／０２１２００号

Nature 463, 318-325, 2010 The Journal of Clinical Investigation, Volume 127, Number 7, pp. 2815-2828, 2017 Journal of Medicinal Chemistry, 2014, 57, 8471-8476

本発明は、膠芽腫を含む脳腫瘍の治療に効果的であり、かつ、脳内への局所投与に限定されない投与経路を有する薬剤を提供することを目的とする。

本発明者らは、鋭意研究の結果、ＲＵＮＸ結合配列に結合するＰＩポリアミドとアルキル化剤との複合体（コンジュゲート）が脳腫瘍の増殖を抑制し、さらに驚くべきことに、静脈内投与により脳内に送達できることを見出し、本発明を完成させた。

本発明は以下の態様を提供する。
［１］ＲＵＮＸ結合配列に結合するピロール－イミダゾールポリアミドおよびアルキル化剤を含む複合体を含む、脳腫瘍を予防または治療するための医薬組成物。
［２］全身投与用である、［１］記載の医薬組成物。
［３］前記アルキル化剤がクロラムブシル、デュオカルマイシン、ｓｅｃｏ－ＣＢＩ、ＣＢＩ、ピロロベンゾジアゼピン、ナイトロジェンマスタード、ナイトラミン、シクロホスファミド、イホスファミド、メルファランチオテパ、カルボコン、ブスルファン、および塩酸ニムスチンからなる群から選択される、［１］または［２］記載の医薬組成物。
［４］前記アルキル化剤がクロラムブシルである、［３］記載の医薬組成物。
［５］前記脳腫瘍が悪性脳腫瘍である、［１］～［４］のいずれか１項記載の医薬組成物。
［６］前記脳腫瘍が膠芽腫または髄芽腫である、［５］記載の医薬組成物。
［７］前記複合体におけるピロール－イミダゾールポリアミドが、
（１）ＰｙＰｙＰｙＰｙ－γ－ＩｍＩｍＰｙＩｍ
（２）ＰｙＰｙＰｙＰｙ－γ－ＩｍＰｙＩｍＩｍ
（３）ＩｍＩｍＰｙＩｍ－γ－ＰｙＰｙＰｙＰｙ
（４）ＩｍＰｙＩｍＩｍ－γ－ＰｙＰｙＰｙＰｙ
（５）ＩｍＩｍＰｙＩｍ－γ－ＰｙＩｍＰｙＰｙ
（６）ＩｍＰｙＩｍＩｍ－γ－ＰｙＰｙＩｍＰｙ
（７）ＰｙＩｍＰｙＰｙ－γ－ＩｍＩｍＰｙＩｍ、または
（８）ＰｙＰｙＩｍＰｙ－γ－ＩｍＰｙＩｍＩｍ
で示される構造を有し、ここに、Ｐｙは下記式：

（式中、ＸはＣＨまたはＣＯＨを示し、Ｒ’はＨまたはアルキル基を示す。）
で示されるピロール単位であり、ピロール単位の少なくとも１つは、下記式：

で示されるβアラニン残基によって置換されていてもよく、Ｉｍは下記式：

（式中、Ｒ’’はＨまたはアルキル基を示す。）
で示されるイミダゾール単位であり、γはγ－ターンを示す、［１］～［６］のいずれか１項記載の医薬組成物。
［８］前記複合体が下記式：

で示される化合物からなる群から選択される、［７］記載の医薬組成物。
［９］ＲＵＮＸ結合配列に結合するピロール－イミダゾールポリアミドおよびアルキル化剤を含む複合体を含む、膠芽腫または髄芽腫を予防または治療するための静脈内投与用医薬組成物であって、前記複合体におけるピロール－イミダゾールポリアミドが、
（１）ＰｙＰｙＰｙＰｙ－γ－ＩｍＩｍＰｙＩｍ
（２）ＰｙＰｙＰｙＰｙ－γ－ＩｍＰｙＩｍＩｍ
（３）ＩｍＩｍＰｙＩｍ－γ－ＰｙＰｙＰｙＰｙ
（４）ＩｍＰｙＩｍＩｍ－γ－ＰｙＰｙＰｙＰｙ
（５）ＩｍＩｍＰｙＩｍ－γ－ＰｙＩｍＰｙＰｙ
（６）ＩｍＰｙＩｍＩｍ－γ－ＰｙＰｙＩｍＰｙ
（７）ＰｙＩｍＰｙＰｙ－γ－ＩｍＩｍＰｙＩｍ、または
（８）ＰｙＰｙＩｍＰｙ－γ－ＩｍＰｙＩｍＩｍ
で示される構造を有し、ここに、Ｐｙは下記式：

（式中、Ｒ’’はＨまたはアルキル基を示す。）
で示されるイミダゾール単位であり、γはγ－ターンを示す、医薬組成物。
［１０］ＲＵＮＸ結合配列に結合するピロール－イミダゾールポリアミドおよびアルキル化剤を含む複合体を含む、悪性脳腫瘍を予防または治療するための静脈内投与用医薬組成物であって、前記複合体が下記式：

で示される化合物群から選択される、医薬組成物。

本明細書に開示される医薬組成物は、驚くべきことに、脳腫瘍に対して全身投与、例えば静脈内投与でも効果を奏する。したがって、本開示による医薬組成物を用いれば、患者の肉体的負担を減じ、かつ効率的な脳腫瘍の治療が可能になる。特に、膠芽腫は不均一な腫瘍であり、多様な組織学的タイプおよび複数の遺伝子変異を有する。本開示によれば、ＲＵＮＸ結合配列を標的とするＰＩポリアミドコンジュゲートによって、複数の遺伝子の発現を調節し、かつ、腫瘍の悪性度の維持に関与する転写因子であるＲＵＮＸを調節することにより、膠芽腫を含む脳腫瘍の治療を達成することができる。

正常脳（Control）および各グレードのグリオーマ（DA gradeII：グレード２、およびPrimary GBM：原発性グリオブラストーマ）における、ＧＡＰＤＨに対して標準化されたＲＵＮＸ１の相対的発現レベルを示す。データは、ＧＳＥ１１１２６０から回収した。ボックスは四分位範囲を示し、上縁は上位四分位点を示し、中央の線は中央値を示し、下縁は下位四分位点を示す。上のラインおよび下のラインはそれぞれ、最大および最小値を示す。Ｐ値は、一元配置分散分析（ANOVA）によって分析した。各膠芽腫細胞株のＲＵＮＸファミリーの発現を示す。膠芽腫ＲＵＮＸ１発現レベルに基づく生存曲線を示す。ＲＵＮＸ１ｈｉｇｈ（上の半分）およびｌｏｗ（下の半分）における対象数はそれぞれ、８３および８４であった。データは、ＴｈｅＣａｎｃｅｒＧｅｎｏｍｅＡｔｌａｓ（ＴＣＧＡ）から回収した。０．５μＭおよび２μＭＣｈｂ－Ｍ’で処理した膠芽腫細胞の増殖曲線を示す。クロラムブシル（Ｃｈｂ）、Ｃｈｂ－Ｍ’またはＣｈｂ－Ｓでの７２時間処理後の膠芽腫細胞の用量応答曲線を示す。細胞生存能力は、水溶性テトラゾリウム塩（ＷＳＴ）アッセイによって試験した。エラーバーは、±９５％ＣＩを示す。Ｃｈｂ－Ｍ’によって誘導されたアポトーシス細胞を示す。Ｃｈｂ－Ｍ’によって引き起こされた細胞周期停止を示す。各細胞周期について、パーセンテージ細胞数が示される。^＊＊＊ｐ＜０．００１（両側スチューデントのｔ検定）。異種移植マウスにおいて計画された処理の概略図である。ＬＮ２２９を移植した後に、Ｃｈｂ－Ｍ’またはＣｈｂ－ＳまたはＤＭＳＯ（ｎ＝６）で処理されたＢＡＬＢ／ｃＳｌｃ－ｎｕ／ｎｕマウスの全生存率を示す。ｐ＜０．０５（ログランク検定、Bonferroni補正）。異種移植マウスにおいて計画された処理の概略図である。ヤギ抗－ＦＩＴＣ抗体で免疫染色した、ＦＩＴＣ標識したＣｈｂ－Ｍ’およびＤＭＳＯで処理した正常脳および頭蓋内腫瘍および皮下腫瘍の病理サンプルを示す。スケールバー：５０μｍ。

１．ＰＩポリアミド
ＰＩポリアミドは、アミド結合により連結されたＮ－メチルピロールとＮ－メチルイミダゾールから構成される合成リガンドであり、ＤＮＡの副溝に塩基配列選択的に結合する化合物である。ＰＩポリアミドは、一般に、Ｎ－メチルピロール（Ｐｙ）残基およびＮ－メチルイミダゾール（Ｉｍ）残基からなる逆平行に配向した２本の鎖を含み、ＰおよびＩは互いにアミド結合「－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－」で連結されている［Trauger et al, Nature, 382, 559-61(1996); White et al, Chem.Biol., 4,569-78(1997);およびDervan, Bioorg. Med. Chem., 9, 2215-35(2001)］。ここで「逆平行」とは、ＰＩポリアミドの２本のポリアミド鎖が平行に並んでおり、かつ、該２本のポリアミド鎖のＮおよびＣ末端が互いに逆向きになるよう配向されていることをいう。ＰＩポリアミドはいくつかの形態をとることができ、例えば、ヘアピン型、環状、Ｈ－ｐｉｎ型、Ｕ－ｐｉｎ型等のＰＩポリアミドが知られている。ヘアピン型ＰＩポリアミドは、上記した２本のポリアミド鎖の他にγ－アミノ酪酸部分（以下、「γ－リンカー」または「γ－ターン」ともいう）を含み、一方の鎖のＣ末端ともう一方の鎖のＮ末端がγ－リンカーによって連結されたＵ字型のコンフォメーション（ヘアピン型）をとる。ＰｙとＩｍとγ－アミノ酪酸部分とは互いにアミド結合で連結される。環状ＰＩポリアミドは、ヘアピン構造の末端を第２のγ－ターンによって閉環させて環状のコンフォメーションをとったものである。Ｈ－ｐｉｎ型およびＵ－ｐｉｎ型ＰＩポリアミドは、γ－ターンを含まず、一般に、それぞれ２本のポリアミド鎖の中央のＰのＮ－メチル基間および末端のＰおよびＩのＮ－メチル基間が脂肪族リンカーによって連結されている。本開示において、いずれの形態のＰＩポリアミドを使用してもよく、例えば、ヘアピン型、環状、Ｈ－ｐｉｎ型、またはＵ－ｐｉｎ型のＰＩポリアミドが使用され、好ましくは、ヘアピン型のＰＩポリアミドが使用される。

ＰＩポリアミドは、上記２本のポリアミド鎖間で向かい合うＰｙおよび／またはＩｍからなる対（以下、「ピロール－イミダゾール対」ともいう）が特定の組み合わせ（Ｐｙ／Ｉｍ対、Ｉｍ／Ｐｙ対、またはＰｙ／Ｐｙ対）のときに、ＤＮＡ中の特定の塩基対に高い親和性で結合する。例えば、Ｐｙ／Ｉｍ対はＣ（シトシン）・Ｇ（グアニン）塩基対を、Ｉｍ／Ｐｙ対はＧ・Ｃ塩基対を、Ｐｙ／Ｐｙ対はＡ（アデニン）・Ｔ（チミン）塩基対およびＴ・Ａ塩基対の両方を認識し、結合することができる。また、ＰＩポリアミドには、ＰｙおよびＩｍの他に、３－ヒドロキシピロール（Ｈｐ）およびβ－アラニン残基（βアラニン）が含まれていてもよく、ＰｙをＨｐまたはβアラニンに置き換えることができる。Ｈｐ／Ｐｙ対は、Ｔ・Ａ塩基対に結合することができる。Ｐｙ／Ｈｐ対は、Ａ・Ｔ塩基対に結合することができる。βアラニン／βアラニン対は、Ｔ・Ａ塩基対およびＡ・Ｔ塩基対の両方に結合することができる。βアラニン／Ｉｍ対は、Ｃ・Ｇ塩基対に結合することができる。Ｉｍ／βアラニン対は、Ｇ・Ｃ塩基対に結合することができる。βアラニン／Ｐｙ対およびＰｙ／βアラニン対は、Ｔ・Ａ塩基対およびＡ・Ｔ塩基対の両方に結合することができる。さらに、γ－ターン部分は、Ｔ・Ａ塩基対およびＡ・Ｔ塩基対の両方に結合することができる。さらに、ＰＩポリアミドのＮ末端に付加したβ－アラニン残基も、Ｔ・Ａ塩基対およびＡ・Ｔ塩基対の両方に結合することができる。Ｐｙ、Ｉｍ、Ｈｐ、および／またはβアラニンによって形成される対の構成、順序、および組み合わせ等を適宜変更することにより、所望のＤＮＡ配列を特異的に認識し、結合するＰＩポリアミドを設計することができる。例えば、ポリアミドのＮ末端側が標的ＤＮＡ配列の５’側にくるよう設計する。

本開示において、ＰＩポリアミドを構成するＰおよびＩの１位の窒素上のメチル基は、水素またはメチル基以外のアルキル基で置き換わっていてもよい。メチル基以外のアルキル基の例としては、炭素数２～１０個の直鎖、分枝鎖または環状の飽和または不飽和アルキル基、好ましくは、炭素数２～５個の直鎖、分枝鎖直鎖、分枝鎖または環状の飽和または不飽和アルキル基が挙げられ、例えば、エチル、ｎ－プロピル、イソプロピル、ｎ－ブチル、ｓｅｃ－ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ－ブチル等が挙げられる。また、メチル基を含め、アルキル基は置換されていてもよく、例えば、アルキル基中のメチレンは、酸素等で置換されていてもよい。さらに、上記したように、ＰＩポリアミドを構成するＰの３位はヒドロキシ基で置換されていてもよい。本明細書においてＰＩポリアミドに関して用いる場合、「Ｐｙ」または「ピロール」および「Ｉｍ」または「イミダゾール」なる語は、上記したようなＮ置換またはＮ非置換ピロール、３－ヒドロキシピロール、およびＮ置換またはＮ非置換イミダゾールを包含する。

ＰＩポリアミドのγ－ターン部分は置換されていてもよく、好ましくはγ－ターン部分のα位またはβ位に置換基を有していてもよく、さらに好ましくはγ－ターン部分のα位に置換基を有していてもよい。置換基としては、例えば、限定するものではないが、アミノ基、アセチルアミノ基、ジメチルアミノプロピルアミノ基、水酸基、メトキシ基等が挙げられる。例えば、γ－ターン部分は、α位またはβ位がアミノ基で置換された、Ｎ－α－Ｎ－γ－ジアミノ酪酸残基またはＮ－β－Ｎ－γ－ジアミノ酪酸残基であってもよい。

ＰＩポリアミドのＮ末端およびＣ末端には、種々の官能基または分子が付加されていてもよい。ＰＩポリアミドのＮ末端およびＣ末端に付加する官能基または分子は、当業者が適宜決定することができる。例えば、アミド結合を介して様々な官能基を付加することができる。該官能基の例としては、限定するものではないが、β－アラニン残基、γ－アミノ酪酸残基などのカルボキシル基、アセチル基、アミノ基等が挙げられる。例えば、限定するものではないが、Ｎ末端にはアセチル基が付加されていてもよい。例えば、限定するものではないが、Ｃ末端にはジメチルアミノプロピルアミノ基が付加されていてもよい。

ＰＩポリアミドのＮ末端、Ｃ末端、およびγ－ターン部分はまた、蛍光基やビオチン、イソフタル酸等の分子で修飾されていてもよい。本願明細書において、蛍光基としては、限定するものではないが、例えば、フルオレセイン、ローダミン系色素、ＴＡＭＲＡ（５－カルボキシテトラメチルローダミン）、シアニン系色素、ＡＴＴＯ系色素、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ系色素、ＢＯＤＩＰＹが挙げられる。フルオレセインには、フルオレセイン誘導体（例えば、フルオレセインイソチオシアネート等）も含まれる。

ＰＩポリアミドの設計方法および製造方法は公知である（例えば、特許第３０４５７０６号、特開２００１－１３６９７４号、ＷＯ０３／０００６８３号、特開２０１３－２３４１３５号、特開２０１４－１７３０３２号参照）。例えば、Ｆｍｏｃ（９－フルオレニルメトキシカルボニル）を用いた固相合成法（Ｆｍｏｃ固相合成法）による自動合成によって簡便に製造することができる。また、液相合成法によって製造することもできる。

また、本開示において、ＰＩポリアミドは、ＤＮＡに対する結合能力を維持または向上するように修飾されたＰＩポリアミド修飾物であってもよい。該ＰＩポリアミド修飾物としては、例えば、ＰＩポリアミドのγ－ターンのα位またはβ位にアミノ基を付加した修飾物、すなわち、Ｎ－α－Ｎ－γ－ジアミノ酪酸残基またはＮ－β－Ｎ－γ－ジアミノ酪酸残基からなるγ－ターンを有する修飾物、該修飾物の上記アミノ基を蛍光基やビオチン等の分子で修飾した修飾物、ＰＩポリアミドのＮ末端を蛍光基やビオチン等の分子で修飾した修飾物、およびＰＩポリアミドのＣ末端をイソフタル酸等の分子で修飾した修飾物等が挙げられる。

本開示において使用されるＰＩポリアミドは、ゲノム上のＲＵＮＸ結合部位のコンセンサス配列（「ＲＵＮＸコンセンサス結合配列」または「ＲＵＮＸ結合配列」ともいう）を認識するように設計される、ＲＵＮＸ結合配列に結合するＰＩポリアミドである。該ＲＵＮＸ結合配列は、５’－ＴＧＴＧＧＴ－３’または５’－ＴＧＣＧＧＴ－３’であることが知られている。したがって、標的となるＲＵＮＸ結合配列に基づいて、ＰＩポリアミドを構成するピロール－イミダゾール対の組み合わせ（ピロール－イミダゾール対の数、種類、およびその順序）を決定すればよい。なお、本開示において用いられる場合、「ピロール－イミダゾール対」なる語は、Ｐｙ、Ｉｍ、Ｈｐ、およびβアラニンのいずれの組み合わせからなる対も包含する。

本開示において使用されるＰＩポリアミドの例として、限定するものではないが、
（１）ＰｙＰｙＰｙＰｙ－γ－ＩｍＩｍＰｙＩｍ
（２）ＰｙＰｙＰｙＰｙ－γ－ＩｍＰｙＩｍＩｍ
（３）ＩｍＩｍＰｙＩｍ－γ－ＰｙＰｙＰｙＰｙ
（４）ＩｍＰｙＩｍＩｍ－γ－ＰｙＰｙＰｙＰｙ
（５）ＩｍＩｍＰｙＩｍ－γ－ＰｙＩｍＰｙＰｙ
（６）ＩｍＰｙＩｍＩｍ－γ－ＰｙＰｙＩｍＰｙ
（７）ＰｙＩｍＰｙＰｙ－γ－ＩｍＩｍＰｙＩｍ、または
（８）ＰｙＰｙＩｍＰｙ－γ－ＩｍＰｙＩｍＩｍ
で示される構造を有するＰＩポリアミド、ここに、Ｐｙの少なくとも１つはβアラニンによって置換されていてもよく、γはγ－ターンを示し、隣接するＰｙ、Ｉｍおよびγ－ターンは互いにアミド結合で連結されている、
が挙げられる。

なお、本明細書においてＰＩポリアミドのピロール－イミダゾール対に関して使用される場合、「Ｐｙ」は下記式：

［式中、ＸはＣＨまたはＣＯＨを示し、Ｒ’はＨまたはアルキル基を示す。］
で示されるピロール単位を示し、「Ｉｍ」は下記式：

［式中、Ｒ’’はＨまたはアルキル基を示す。］
で示されるイミダゾール単位を示し、「βアラニン」は、

で示されるβアラニン残基を示す。

２．ＰＩポリアミドおよびアルキル化剤を含む複合体
本明細書で使用される場合、「複合体」（または「コンジュゲート」ともいう）とは、安定したより大きな構築物を形成するのに十分な結合（例えば、共有結合）を介して連結されて、当該構築物を形成している２つまたはそれより多くの分子を指す。本開示において、上記ＰＩポリアミドとアルキル化剤とを含む複合体が提供される。

アルキル化剤とは、ＤＮＡと共有結合を作る官能基を有する化合物であり、例えば、ＤＮＡをアルキル基を有する分子に変化（アルキル化）させることによって、ＤＮＡの合成を阻害することができる。本開示において使用されるアルキル化剤としては、特に限定されないが、後述する医薬組成物における使用を考慮して、細胞毒性が低いまたは無いものが好ましい。アルキル化剤としては、例えば、限定するものではないが、クロラムブシル（chlorambucil）、デュオカルマイシン（duocarmycin）、ｓｅｃｏ－ＣＢＩ（１－クロロメチル－５－ヒドロキシ－１，２－ジヒドロ－３Ｈ－ベンゾ［ｅ］インドール）、ＣＢＩ（１，２，９，９ａ－テトラヒドロシクロプロパン［ｃ］ベンゾ［ｅ］インドール－４－オン）、ピロロベンゾジアゼピン、ナイトロジェンマスタード、ナイトラミン、シクロホスファミド、イホスファミド、メルファランチオテパ、カルボコン、ブスルファン、塩酸ニムスチン等が挙げられる。ｓｅｃｏ－ＣＢＩまたはＣＢＩとＰＩポリアミドとの複合体を製造する場合は、ＰＩポリアミドとｓｅｃｏ－ＣＢＩまたはＣＢＩとの間にインドールまたはビニルピロールを挿入してもよい。

上記アルキル化剤の例として挙げられたクロラムブシル、ｓｅｃｏ－ＣＢＩ、およびＣＢＩは、下記の化学式で表される。

アルキル化剤は、ＰＩポリアミドのＮ末端、Ｃ末端、またはγ－ターン部分のいずれに結合していてもよい。また、Ｎ末端、Ｃ末端、およびγ－ターン部分から選ばれる２以上の位置に結合していてもよい。例えば、アルキル化剤は、ＰＩポリアミドのＮ末端またはＣ末端に結合される。アルキル化剤がＰＩポリアミドのＮ末端、Ｃ末端およびγ－ターン部分から選ばれる２以上の位置に結合する場合、各位置に結合するアルキル化剤は同一であってもよく、または異なっていてもよい。

アルキル化剤は、例えばアミド結合、ホスホジスルフィド結合、エステル結合、配位結合、エーテル結合等を介して、ＰＩポリアミドに直接結合していてもよく、またはリンカーを介して結合していてもよい。リンカーとしては、アルキル化剤の作用を妨げず、かつＰＩポリアミドの標的配列認識を妨げないものであれば特に限定されない。リンカーの例としては、限定するものではないが、アミド結合、ホスホジスルフィド結合、エステル結合、配位結合、エーテル結合等からなる群から選択される１種類以上の結合を形成する官能基を含む分子であってもよい。リンカーのさらなる例としては、限定するものではないが、β－アラニンリンカー、ポリエチレングリコールリンカー、ペプチドリンカー、アルキルリンカー、アミノアルキルリンカー、ポリエーテルリンカー等が挙げられる。リンカーの末端は、ＰＩポリアミドおよびアルキル化剤と、例えばアミド結合、ホスホジスルフィド結合、エステル結合、配位結合、またはエーテル結合等を介して結合される。上記リンカーは当業者により適宜決定することができる。

ＰＩポリアミドとアルキル化剤との結合（コンジュゲーション）は、既知のカップリング方法または合成方法にしたがって行うことができる。

本開示におけるＰＩポリアミドとアルキル化剤とを含む複合体の例としては、式Ｉ：

［式Ｉ中、
Ｘ_１はＣＨ、ＣＯＨまたはＮを示し、Ｘ_２はＣＨ、ＣＯＨまたはＮを示し、Ｘ_３はＣＨ、ＣＯＨまたはＮを示し、Ｘ_４はＣＨ、ＣＯＨまたはＮを示し、Ｘ_５はＣＨ、ＣＯＨまたはＮを示し、Ｘ_６はＣＨ、ＣＯＨまたはＮを示し、Ｘ_７はＣＨ、ＣＯＨまたはＮを示し、Ｘ_８はＣＨ、ＣＯＨまたはＮを示し、ここに、Ｘ_１～Ｘ_８は、ＰＩポリアミドがＲＵＮＸコンセンサス配列を認識可能になる組み合わせで選択される、
Ｒ_１はＨまたはアルキル基を示し、Ｒ_２はＨまたはアルキル基を示し、Ｒ_３はＨまたはアルキル基を示し、Ｒ_４はＨまたはアルキル基を示し、Ｒ_５はＨまたはアルキル基を示し、Ｒ_６はＨまたはアルキル基を示し、Ｒ_７はＨまたはアルキル基を示し、Ｒ_８はＨまたはアルキル基を示し、
Ｒ_９はＨ、－ＮＨＲ_１１、または－Ｙｍ－Ｚを示し、
Ｒ_１０はＨ、－ＮＨＲ_１１、または－Ｙｍ－Ｚを示し、
Ｒ_１１はＨ、またはビオチン、蛍光基等の分子を示し、
Ａは、

から選択されるいずれかの基、または－Ｙｍ－Ｚを示し、
Ｂは、アセチル基、または－Ｙｍ－Ｚを示し、
整数ｎは、０～５の値のいずれかであり、
Ｚは、アルキル化剤を示し、
Ｙｍは、リンカー部分を示し、
整数ｍは０～５の値のいずれかであり、好ましくは０～３、より好ましくは０または１であり、
ここに、Ｒ_９、Ｒ_１０、Ａ、およびＢの少なくとも１つは、－Ｙｍ－Ｚであり、
式Ｉの複合体が、複数のＹｍ－Ｚで示される構造を含むとき、それらの複数のＹｍ－Ｚにおける、Ｙｍの各々は、他のＹｍと互いに同一であっても、異なっていてもよく、それぞれが独立して選択され得るものであり、かつ、それらの複数のＹｍ－Ｚにおける、Ｚの各々は、他のＺと互いに同一であっても、異なっていてもよく、それぞれが独立して選択され得るものであり、
さらに、式Ｉ中、下記式：

（式中、ＸはＸ_１～Ｘ_８のいずれかであって、かつ、ＣＨまたはＣＯＨを示し、Ｒ’はＲ_１～Ｒ_８のいずれかであって、Ｈまたはアルキル基を示す。）
で示されるピロール単位の少なくとも１つはβアラニンによって置換されていてもよい。］
によって示される化合物、ならびにその修飾物が挙げられる。

上記式Ｉで表される複合体のさらなる態様において、
Ａは、

［式中、整数ｎは、０～５の値のいずれかである］
から選択されるいずれかの基を示すか、または－Ｙｍ－Ｚを示し、ここに、該－Ｙｍ－Ｚは下記の式：

で表されるいずれかの基であり、
Ｂは、－Ｙｍ－Ｚを示し、ここに、該－Ｙｍ－Ｚは下記の式：

［式中、整数ｎは、０～５の値のいずれかであり、好ましくは０～２の値のいずれかである］
で表される基である。

本開示におけるＰＩポリアミドとアルキル化剤とを含む複合体のさらなる例としては、式ＩＩ：

または式ＩＩＩ：

［式ＩＩおよび式ＩＩＩ中、
Ｘ_１はＣＨ、ＣＯＨまたはＮを示し、Ｘ_２はＣＨ、ＣＯＨまたはＮを示し、Ｘ_３はＣＨ、ＣＯＨまたはＮを示し、Ｘ_４はＣＨ、ＣＯＨまたはＮを示し、Ｘ_５はＣＨ、ＣＯＨまたはＮを示し、Ｘ_６はＣＨ、ＣＯＨまたはＮを示し、Ｘ_７はＣＨ、ＣＯＨまたはＮを示し、Ｘ_８はＣＨ、ＣＯＨまたはＮを示し、ここに、Ｘ_１～Ｘ_８は、ＰＩポリアミドがＲＵＮＸコンセンサス配列を認識可能になる組み合わせで選択される、
Ｒ_１はＨまたはアルキル基を示し、Ｒ_２はＨまたはアルキル基を示し、Ｒ_３はＨまたはアルキル基を示し、Ｒ_４はＨまたはアルキル基を示し、Ｒ_５はＨまたはアルキル基を示し、Ｒ_６はＨまたはアルキル基を示し、Ｒ_７はＨまたはアルキル基を示し、Ｒ_８はＨまたはアルキル基を示し、
Ｒ_９はＨまたは－ＮＨＲ_１１を示し、Ｒ_１０はＨまたは－ＮＨＲ_１１を示し、
Ｒ_１１はＨ、またはビオチン、蛍光基等の分子を示し、
Ｚはアルキル化剤を示し、
Ｙｍは、リンカー部分を示し、
整数ｍは０～５のいずれかの値であり、好ましくは０～３、より好ましくは０または１であり、
ここに、下記式：

（式中、ＸはＸ_１～Ｘ_８のいずれかであって、かつ、ＣＨまたはＣＯＨを示し、Ｒ’はＲ_１～Ｒ_８のいずれかであって、Ｈまたはアルキル基を示す。）
で示されるピロール単位の少なくとも１つは、βアラニンによって置換されていてもよい。］
によって示される化合物、ならびにその修飾物が挙げられる。

一実施態様において、上記式Ｉ～ＩＩＩにおいて、Ｙｍで示されるリンカー部分の一例としては、下記式ＩＶ：

［式中、
Ｑは、カルボニル［－Ｃ（＝Ｏ）－］またはイミノ（－ＮＨ－）であり、
Ｑ’は、エーテル結合（－Ｏ－）またはイミノ（－ＮＨ－）もしくはメチルイミノ［－Ｎ（－ＣＨ_３）－］であり、
整数ｇおよびｋは各々独立して、１～３の値のいずれかであり、
整数ｈおよびｊは各々独立して、０～５の値のいずれかであり、
整数ｉは、０～２の値のいずれかである］
で示される構造が挙げられる。例えば、整数ｈおよびｊは各々独立して、０～３の値のいずれかであることが好ましい。また、上記の式ＩＶ中、エステル結合の位置と、Ｑ’で表されるエーテル結合またはイミノ結合の位置は入れ替わっていてもよい。上記式ＩＶで示されるリンカー部分において、例えば、右端の位置はアルキル化剤と連結し、左端の位置はＰＩポリアミドと連結するが、該連結位置は逆であってもよい。例えば、上記式ＩＶで示されるリンカー部分の左端の位置がＰＩポリアミドのＣ末端と連結する場合、Ｑはイミノであることが好ましい。

式ＩＶで示されるＹの一例として、下記式Ｖ：

で示される構造が挙げられる。

式ＩＶで示されるＹの別の例として、下記式ＶＩ：

［式中、ｌは１～５の整数を示す］
で示される構造が挙げられる。例えば、ｌは１～３の整数であり、好ましくは、ｌは１である。

式ＩＶで示されるＹの別の例として、下記式ＶＩＩ：

で示される構造が挙げられる。好ましくは、式ＶＩＩで表されるリンカー部分は、アルキル化剤がＰＩポリアミドのＣ末端側に結合される場合に用いられる。

上記式ＩＶ～式ＶＩＩで示されるリンカー部分において、例えば、右端の位置はアルキル化剤と連結し、左端の位置はＰＩポリアミドと連結するが、該連結位置は逆であってもよい。

上記の式ＩＩ中、－Ｙｍ－Ｚは、例えば、

［式中、整数ｎは１～５のいずれかの値であり、好ましくは０～２のいずれかの値である］
で表される基である。

上記の式ＩＩＩ中、－Ｙｍ－Ｚは、例えば、

で表される基である。

本明細書において、アルキル基の例としては、炭素数１～１０個の直鎖、分枝鎖または環状の飽和または不飽和アルキル基、好ましくは、炭素数１～５個の直鎖、分枝鎖直鎖、分枝鎖または環状の飽和または不飽和アルキル基が挙げられ、例えば、メチル、エチル、ｎ－プロピル、イソプロピル、ｎ－ブチル、ｓｅｃ－ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ－ブチル等が挙げられる。また、アルキル基は置換されていてもよく、例えば、アルキル基中のメチレンは、酸素等で置換されていてもよい。

本開示において、ＰＩポリアミドとアルキル化剤とを含む複合体の例示的な態様としては、さらに、下記式：

［式中、
Ｚはアルキル化剤を示し、
ｎは０、１、２、３、４、または５を示し、好ましくは１、２、または３を示し、さらに好ましくはｎは１を示し、
ピロール単位の少なくとも１つは、βアラニンによって置換されていてもよい。］
によって示される化合物、ならびにその修飾物が挙げられる。

本開示における上記複合体の例示的なさらなる態様としては、下式によって示されるＰＩポリアミドとクロラムブシルとを含む複合体、ならびにその修飾物が挙げられる。

［式中、
Ｚはアルキル化剤を示し、
ｎは０、１、２、３、４、または５を示し、好ましくは１、２、または３を示し、さらに好ましくはｎは１を示し、
ピロール単位の少なくとも１つは、βアラニンによって置換されていてもよい。］

さらに、ＰＩポリアミドとクロラムブシルとを含む複合体の具体例としては、限定するものではないが、下記の化合物が挙げられる。

ＰＩポリアミドとアルキル化剤とを含む複合体は、薬理学的に許容し得る塩の形態であってもよい。薬理学的に許容し得る塩としては、例えば、塩酸塩、硫酸塩、リン酸塩もしくは臭化水素酸塩等の無機酸塩、または酢酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、シュウ酸塩、クエン酸塩、メタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩もしくはトルエンスルホン酸塩等の有機酸塩が挙げられる。

ＰＩポリアミドとアルキル化剤とを含む複合体は、ＰＩポリアミド、アルキル化剤、および／またはリンカー部分から選択される１以上が、エナンチオマーもしくはジアステレオマーの形態またはこれらの混合物として存在していてもよい。例えば、ＰＩポリアミドがγ－ターン部分において置換基を有する場合またはアルキル化剤とコンジュゲートする場合、該置換基またはアルキル化剤は、Ｒ配置またはＳ配置を取るようにγ－ターン部分に結合していてもよい。ＰＩポリアミドとアルキル化剤とを含む複合体がジアステレオマーまたはエナンチオマーの形態で得られる場合、これらを当該技術で周知の慣用方法、例えば、クロマトグラフィーまたは分別結晶法等で分離することができる。

また、上記複合体は、ＰＩポリアミド、アルキル化剤、および／またはリンカー部分の少なくとも１つ以上の部分または分子上で、同位元素（例えば、^３Ｈ、^１３Ｃ、^１４Ｃ、^１５Ｎ、^１８Ｆ、^３２Ｐ、^３５Ｓ、^１２５Ｉ等）等で標識されていてもよく、または重水素変換体であってもよい。

３．医薬組成物
本開示において、上記ＰＩポリアミドおよびアルキル化剤を含む複合体を含む医薬組成物が提供される。本開示における医薬組成物は、脳腫瘍の予防または治療に有効である。本開示における医薬組成物は、脳腫瘍への直接的投与（局所投与）はもちろん、全身投与であっても脳腫瘍部位へ送達され、効果を奏することができる。

本開示における医薬組成物による予防または治療対象疾患は、脳腫瘍であり、特に悪性脳腫瘍である。悪性脳腫瘍には、限定するものではないが、膠芽腫、髄芽腫等が包含される。脳腫瘍は、原発性または転移性のいずれであってもよい。膠芽腫には、原発性膠芽腫（Primary glioblastoma）および二次性膠芽腫（Secondary glioblastoma）が包含される。

本開示における医薬組成物の投与対象は、二本鎖ＤＮＡを生体制御に利用するあらゆる生物、特に哺乳動物（例、ヒト、ラット、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ネコ、イヌ、サル等）であり、好ましくはヒトに使用することができる。

本開示における医薬組成物は、経口または非経口経路によって投与され、好ましくは、経口または非経口経路によって全身的に投与され、さらに好ましくは、非経口経路によって全身的に投与される。非経口投与方法としては、例えば、静脈内投与、腹腔内投与、皮下投与、皮内投与、筋肉内投与、髄腔内投与等が挙げられる。

本開示における医薬組成物は、上記ＰＩポリアミドおよびアルキル化剤を含む複合体そのものであってもよく、または剤形に応じて適宜、医薬上許容される担体または添加物を含んでいてもよい。本開示における医薬組成物の剤形としては、上記の投与経路に適したいずれの剤形であってもよく、例えば、注射剤が挙げられる。これらの剤形は常法にしたがって製剤化することができる。医薬上許容される担体および添加物としては、限定するものではないが、水、酢酸、医薬上許容される有機溶剤、コラーゲン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カルボキシビニルポリマー、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリル酸ナトリウム、アルギン酸ナトリウム、水溶性デキストラン、カルボキシメチルスターチナトリウム、ペクチン、メチルセルロース、エチルセルロース、キサンタンガム、アラビアゴム、カゼイン、寒天、ポリエチレングリコール、ジグリセリン、グリセリン、プロピレングリコール、ワセリン、パラフィン、ステアリルアルコール、ステアリン酸、ヒト血清アルブミン、マンニトール、ソルビトール、ラクトース、医薬添加物として許容される界面活性剤等が挙げられる。

本開示における医薬組成物を注射用製剤として使用する場合、例えば、本開示における医薬組成物を溶剤（例えば、生理食塩水、緩衝液、ブドウ糖溶液、０．１％酢酸等）に溶解し、これに適当な添加剤（ヒト血清アルブミン、ＰＥＧ、マンノース修飾デンドリマー、シクロデキストリン結合体等）を加えたものを使用することができる。あるいは、使用前に溶解する剤形とするために凍結乾燥したものであってもよい。凍結乾燥用賦形剤としては、例えば、マンニトール、ブドウ糖等の糖アルコールや糖類を使用することができる。

本開示における医薬組成物中の上記複合体の含有量は、当業者により適宜決定することができる。本開示における医薬組成物の投与量は、投与対象、対象の年齢、性別、および症状、投与経路、投与回数、剤形等によって異なり、当業者によって適宜決定される

本開示における医薬組成物、他の抗脳腫瘍剤と併用してもよい。他の抗脳腫瘍剤としては、限定するものではないが、ニドラン（ＡＣＮＵ）や、テモゾロミド（ＴＭＺ）等が挙げられる。本開示における医薬組成物と他の抗脳腫瘍剤との投与比率は、特に限定されず、所望の抗腫瘍効果が得られるように当業者が適宜決定すればよい。

さらに本開示によれば、上記医薬組成物を対象に投与することを含む、脳腫瘍の予防または治療方法が提供される。例えば、上記医薬組成物を対象に全身投与することを含む、脳腫瘍の予防または治療方法が提供される。

以下、実施例を用いて本発明を説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。

実施例で使用された材料および方法を下記する。

細胞培養
実施例において使用される膠芽腫細胞株Ａ１７２、ＬＮ２２９およびＴ９８Ｇは、ＡＴＣＣ（American Type Culture Collection）（Manassas, VA）から、ＫＡＬＳ－１はＪＣＲＢ細胞バンク（Japanese Collection of Research Bioresources Cell Bank）（国立研究開発法人医薬基盤・健康・栄養研究所）から購入し、湿潤インキュベーター中において５％ＣＯ_２の雰囲気下で、１０％熱不活性化胎仔ウシ血清および１％ペニシリン－ストレプトマイシンを補足したダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）中、３７℃で培養した。

統計分析
実施例において、コントロール群と実験群との間の統計学的差は、対応のない両側スチューデントのｔ検定（two-tailed unpaired Student’s t-test）を用いて評価し、ｐ＜０．０５値で差を示した。２集団における等分散性は、Ｆ検定を用いて計算した。結果は、３つの独立した実験から得られた平均±９５％ＣＩとして示す。

調製例１：Ｃｈｂ－Ｍ’の調製
ＲＵＮＸ結合配列５’－ＴＧＴＧＧＴ－３’を標的とするＰＩポリアミドを設計し、該ＰＩポリアミドとアルキル化剤クロラムブシルとの複合体（Ｃｈｂ－Ｍ’）を合成した。Ｃｈｂ－Ｍ’の化学式を下記に示す。

Ｃｈｂ－Ｍ’

試薬および溶媒は、標準的な供給元から入手し、さらに精製することなく使用した。フラッシュカラム精製は、Ｃ１８ＲｅｄｉＳｅｐＲｆフラッシュカラムを用いてＣｏｍｂｉＦｌａｓｈＲｆ（Teledyne Isco, Inc.）によって行った。ＥＳＩ－ＴＯＦＭＳ（Electrospray ionization time-of-flight mass spectrometry）は、Ｂｉｏ－ＴＯＦＩＩ（Bruker Daltonics）マススペクトロメ－ターで、陽イオン化モードを用いて行った。機械によるポリアミド合成は、コンピューターアシストオペレーションシステムを有する自動合成機ＰＳＳＭ－８システム（Shimadzu）を用いて行った。プロトン核磁気共鳴（^１ＨＮＭＲ）スペクトルは、６００ＭＨｚで作動しているＪＥＯＬＪＮＭＥＣＡ－６００スペクトロメーターで、内部標準として使用されるテトラメチルシランと比べて低磁場側への百万分率（ｐｐｍ）として記録された。下記の略語は、スピン多重度：ｓ（シングレット）、ｄ（ダブレット）、ｔ（トリプレット）、ｑ（カルテット）、ｑｕｉｎｔ（クインテット）、ｍ（マルチプレット）を示す。

Ｆｍｏｃ固相合成法による段階的反応によって、オキシム樹脂によって担持されたＰＩポリアミドを調製した。オキシム樹脂を有する生産物に、Ｎ，Ｎ－ジメチル－１，３－プロパンジアミン（１．０ｍＬ）を加え、４５℃で３時間処理して、切り出しを行った。ろ過により樹脂を除き、残留物を最少量のジクロロメタン中に溶解し、ジエチルエーテルで洗浄して、５９．６ｍｇを得た。この粗化合物（５９．６ｍｇ、４８．１μｍｏｌ）に、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）（３００μＬ）中のクロラムブシル（３２．６ｍｇ、１０７μｍｏｌ）、ＰｙＢＯＰ（ベンゾトリアゾール－１－イル－オキシ－トリス－ピロリジノ－ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート）（１０１ｍｇ、１９５μｍｏｌ）、およびＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（１００μＬ、５８１μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１．５時間インキュベートし、ジエチルエーテルおよびＤＭＦで３回洗浄し、真空乾燥させた。該粗生成物を逆相フラッシュカラムクロマトグラフィー（０．１％トリフルオロ酢酸水溶液／ＭｅＣＮ）で精製した。凍結乾燥後、生成物を得た（３０．２ｍｇ、１９．８μｍｏｌ）。

Chb-M'
¹H NMR (600 MHz, DMSO (ジメチルスルホキシド)-d6)：δ＝10.43 (s, 1H), 10.30 (s, 1H), 9.92 (s, 1H), 9.90 (s, 1H), 9.894 (s, 1H), 9.890 (s, 1H), 9.83 (s, 1H), 9.44 (s, 1H), 8.30 (t, J = 6.2 Hz, 1H), 8.15 (t, J = 6.2 Hz, 1H), 7.86 (t, J = 5.9 Hz, 1H), 7.63 (s, 1H), 7.52 (s, 1H), 7.44 (s, 1H), 7.39 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.22 (d, J = 1.4 Hz, 2H), 7.18 (d, J = 1.3 Hz, 1H), 7.17 (d, J = 1.3 Hz, 1H), 7.15 (d, J = 1.3 Hz, 1H), 7.073 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 7.066 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 6.98 (d, J = 8.9 Hz, 2H), 6.95 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 6.88 (d, J = 1.4 Hz, 1H), 6.62 (d, J = 8.9 Hz, 2H), 4.01 (s, 3H), 3.96 (s, 3H), 3.94 (s, 3H), 3.87 (s, 3H), 3.84 (s, 6H), 3.83 (s, 3H), 3.81 (s, 3H), 3.67 (m, 8H), 3.32-3.23 (m, 6H), 3.07 (m, 2H), 2.79 (d, J = 4.8 Hz, 6H), 2.52 (m, 2H), 2.40 (apparent t, J = 7.6 Hz, 2H), 2.28 (apparent t, J = 7.2 Hz, 2H), 2.04 (apparent t, J = 7.4 Hz, 2H), 1.82 (m, 4H), 1.70 (m, 2H)
ESI-TOF-MS m/z C₇₁H₉₀Cl₂N₂₄O₁₁ ²⁺ [M + 2H]²⁺ 計算値762.3293, 763.3279, 測定値 762.3277, 763.3244

調製例２：Ｃｈｂ－Ｓの調製
Ｃｈｂ－Ｓは、５’－ＷＧＧＣＣＷ－３’配列（ここで、ＷはＡもしくはＴのいずれかである）を標的とするＰＩポリアミドとクロラムブシルとの複合体であり、調製例１と同様の手法により合成した。Ｃｈｂ－Ｓの化学式を下記に示す。

Ｃｈｂ－Ｓ

Chb-S
¹H NMR (600 MHz, DMSO-d6)：δ＝10.34 (s, 2H), 10.33 (s, 1H), 10.32 (s, 1H), 9.93 (s, 2H), 9.33 (s, 1H), 9.31 (s, 1H), 8.15 (t, J = 5.5 Hz, 1H), 8.04 (t, J = 5.2 Hz, 1H), 7.89 (t, J = 5.5 Hz, 1H), 7.58 (s, 2H), 7.55 (s, 1H), 7.52 (s, 1H), 7.26 (s, 2H), 7.17 (s, 4H), 6.97 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 6.95 (s, 1H), 6.91 (s, 1H), 6.61 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 4.01 (s, 6H), 3.99 (s, 3H), 3.98 (s, 3H), 3.85 (s, 6H), 3.813 (s, 3H), 3.807 (s, 3H), 3.66 (m, 8H), 3.32 (q, J = 6.2 Hz, 2H), 3.23 (m, 4H), 3.06 (m, 2H), 2.79 (d, J = 3.4 Hz, 6H), 2.52 (m, 2H), 2.38 (m, 4H), 2.04 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 1.82 (m, 4H), 1.70 (m, 2H).
ESI-TOF-MS m/z C₇₀H₈₉Cl₂N₂₅O₁₁ ²⁺ [M + 2H]²⁺ 計算値762.8270, 763.8255, 測定値762.8247, 763.8230

調製例３：ＦＩＴＣ－Ｃｈｂ－Ｍ’の調製
Ｃｈｂ－Ｍ’のＣ末端をフレオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）で標識した化合物（ＦＩＴＣ－Ｃｈｂ－Ｍ’）を合成した。ＦＩＴＣ－Ｃｈｂ－Ｍ’の化学式を下記に示す。

ＦＩＴＣ－Ｃｈｂ－Ｍ’

まず、ＰＳＳＭ－８ペプチド合成機（Shimadzu）を用いて、ＰＩＰＭ’の合成を行った。合成シーケンスを入力した。リアクションベッセル（Small Libra tube）にＦｍｏｃ－Ｐｙ－ｏｘｉｍｅＲｅｓｉｎ（０．３７ｍｍｏｌ／ｇ）レジン８４ｍｇ（３１μｍｏｌ／０．１ｇ）を入れ、ＲＶインサートをセット後、膨潤させるため１ｍｌのＮＭＰ（N-methylpyrrolidone）を壁面に付着したレジンを洗い落としながら加え、２０分程度室温で放置した。

（ＨＣＴＵ溶液の調製）
１５ｍｌ遠心管を使用して、ＨＣＴＵ（5-Chloro-1-[bis(dimethylamino)methyliumyl]-1H-benzotriazole-3-oxide hexafluorophosphate）７９ｍｇ×８（カップリング数）＝６３２ｍｇを秤量後、１ｍｌ×８（カップリング数）＝８ｍｌのＮＭＰに溶かした。水道水入り超音波洗浄機に１５ｍｌ遠心管を入れ、１０分程度超音波をあてながら、溶解させた。

（ポリアミドモノマー溶液の調製）
１５ｍｌ遠心管を使用して、モノマー毎に以下の指定量を秤量後、上記で調製したＨＣＴＵ溶液に溶かした。超音波洗浄機に１５ｍｌ遠心管を入れ、１０分程度放置した。Ｆｍｏｃ－Ｐｙ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｉｍ－ＯＨは、不溶物をろ過するため、５ｍｌチップに脱脂綿をつめ、溶液をピペットマンで押し、新しい１５ｍｌ遠心管に入れた。１カップリングあたりの必要量２１１μｍｏｌとなるように秤量した。（合成機に使用するレジン量、そのレジンの担持量を入力、８０ｍｇ，０．６６０ｍｍｏｌ／ｇとしたとき、４倍当量のＦｍｏｃ体が２１１μｍｏｌとなる。）
Ｆｍｏｃ－Ｐｙ－ＯＨ７６．５４ｍｇＭｗ：３６２．３８
Ｆｍｏｃ－γＡｂｕ－ＯＨ６８．７２ｍｇＭｗ：３２５．３６
Ｆｍｏｃ－Ｉｍ－ＯＨ７６．７５ｍｇＭｗ：３６３．３７
Ｆｍｏｃ－βＡｌａ－ＯＨ６５．７６ｍｇＭｗ：３１１．３３
なお、「γＡｂｕ」はγアミノ酪酸部分を示し、「βＡｌａ」はβ－アラニン残基を示す。

（ポリアミドダイマー溶液の調製）
Ｆｍｏｃ－Ｉｍ－ＯＨの後のＦｍｏｃ－Ｐｙ－ＯＨは固相合成機ではカップリングしないため、予め液相で合成したＦｍｏｃ－ＰｙＩｍ－ＯＨ（Ｄｉｍｅｒ）を使用し、モノマーと同様に調製した。
Ｆｍｏｃ－ＰｙＩｍ－ＯＨ１０２．７５ｍｇＭｗ：４８６．４８

（ポリアミド合成用反応溶液調製）
褐色スクリュー管ｎｏ．６（３０ｍｍ×６５ｍｍ）にそれぞれ、Ｆｍｏｃ脱保護用反応液としてＤＭＦ中の２０％ピペリジン溶液を１８．２ｍｌ（１回の脱保護に、ＤＭＦ中の２０％ピペリジン溶液を５００μｌ×２を使用し、ピペリジンは９８％から２０％となるようにＤＭＦで希釈した。）、活性化剤として、ＤＭＦ中の１０％ＤＩＥＡ溶液４．９１ｍｌを入れ、合成機にセットした。

（ＰＳＳＭ－８合成機を用いたポリアミド合成）
２ｍｌのエッペンチューブ（2ml sampling tube）にモノマー溶液を９８２μｌ毎分注した。シーケンス順に固相合成機にセットした。ポリアミドのシーケンスは以下（Ｃ末端からＮ末端へ合成）である。
Ｐｙ（レジン上）－Ｐｙ－Ｐｙ－Ｐｙ－γＡｂｕ－Ｉｍ－Ｄｉｍｅｒ－Ｉｍ－βＡｌ（Ｂｏｃ）
なお、「Ｂｏｃ」はｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル基を示す。

（切り出し工程）
リアクションベッセルを合成機から取り出し、キャップ後、１ｍｌのジアミン（３，３’－ジアミノ－Ｎ－メチルジプロピルアミン）を加え、５５℃、３時間、８８０ｒｐｍ、振とう器で攪拌させた。ジエチルエーテル４０ｍｌを５０ｍｌ遠心管に入れ、先の反応液を一滴ずつ加え、粉体化させた。１０，０００ｒｐｍで５分間遠心後、沈澱を１．５ｍｌチューブに移し、１０分程度、デジケーターで乾燥させた。

（ＰＩＰＭ’のＣ末端にＦＩＴＣを導入する）
１．５ｍｌチューブに以下のものを秤量し、室温で２時間攪拌した。

ジエチルエーテル４０ｍｌを５０ｍｌ遠心管に入れ、先の反応液を一滴ずつ加え、粉体化させた。１０，０００ｒｐｍで５分遠心後、１．５ｍｌチューブに粉体を移した。

（β－Ａｌ（Ｂｏｃ）を脱保護する）
４ＮＨＣｌ＋ＡｃＯＥｔ１ｍｌを粉体に加え、室温で２時間攪拌させた。ジエチルエーテル４０ｍｌに滴下し粉体化し、デジケーターで乾燥させた。

（ＨＰＬＣ精製１）
ＨＰＬＣ高速液体クロマトグラフィーはＪＡＣＳＯ（PU-2089Plus）、カラムは５Ｃ１８－ＭＳ－ＩＩ（COSMOSIL catalog No. 3455-91）を使用した。１．５ｍｌチューブに入った粉体ＦＩＴＣ－ＰＩＰＭ’にＤＭＦ（２００μＬ）を加え、ボルテックスにて溶解させた。０－７５％アセトニトリル／０．１％ＴＦＡ（トリフルオロ酢酸）水を、１５分、流速３ｍｌ／分に設定し、目的物に由来する２５４ｎｍの吸収ピークを回収した。その後速やかに、スクリュー管（３０ｍｍ×６５ｍｍ）に移し、コンビニエバポｃ１８（（株）バイオクロマト）を使用し、３０℃、１時間でアセトニトリルを蒸発させた。

（凍結乾燥１）
５０ｍｌチューブに移し、２０ｍｌ程度入れ、液体窒素に入れ、凍結させ、凍結乾燥機（ＥＹＥＬＡＦＤＵ－１１００）で４８時間、乾燥させた。

（ＦＩＴＣ－ＰＩＰＭ’のＮ末端にクロラムブシルを導入する）
１．５ｍｌチューブに以下のものを秤量し、室温で２．５時間攪拌した。

ジエチルエーテル４０ｍｌを５０ｍｌ遠心管に入れ、先の反応液を一滴ずつ加え、粉体化させた。１０，０００ｒｐｍで５分遠心した。上澄を除き、ＤＭＦ１ｍｌを加え、再びジエチルエーテル４０ｍｌに滴下し、遠心この操作を２回繰り返した。１．５ｍｌチューブに粉体を移した。

（ＨＰＬＣ精製、凍結乾燥２）
前述と同様に精製、凍結乾燥を行った。

（粉体の回収）
ジエチールエーテルを５０ｍｌチューブに加え、Ｔサンプルストックチューブ１．５ｍｌ（BMBio，catlogNo.T-202）に回収し、遠心、上澄みを除く操作を繰り返し、デシケーターで乾燥させ、サンプル（ＦＩＴＣ－Ｃｈｂ－Ｍ’）４．１ｍｇを得た。

実施例１：ＲＵＮＸとグリオーマ悪性度の関係
膠芽腫（グリオブラストーマ）組織におけるＲＵＮＸ１の発現レベルを確認するために、ＧＳＥ１１１２６０マイクロアレイデータセットにおいて、正常脳および低グレードグリオーマ組織と比較分析した。ＧＳＥ１１１２６０データセットは、公共のデータベース（https://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/query/acc.cgi?acc=GSE111260）より入手した。その結果、正常組織またはグレード２の低グレードグリオーマと比べて、原発性膠芽腫においてＲＵＮＸ１の発現が有意に高いことが分かった（ｐ＜０．０００１）（図１）。さらに、ＲＵＮＸ１、ＲＵＮＸ２およびＲＵＮＸ３の総発現レベルを示すＰａｎ－ＲＵＮＸもまた、原発性膠芽腫において有意に高かった（ｐ＜０．０００１）。したがって、ＲＵＮＸファミリーがグリオーマの悪性度に関与することが示唆された。

さらに、膠芽腫細胞株（Ａ１７２、ＫＡＬＳ－１、ＬＮ２２９およびＴ９８Ｇ）においてＲＵＮＸファミリー発現についてウェスタンブロッティングを行った。２×ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）サンプルバッファー［０．１ＭＴｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ６．８）、４％ＳＤＳ、１２％２－メルカプトエタノール、１０％グリセロール、１％ブロモフェノールブルー］を用いて全細胞タンパク質ライゼートを抽出し、９５℃で５分間沸騰させた。タンパク質濃度を、Ｂｉｏ－ＲａｄＰｒｏｔｅｉｎＡｓｓａｙＤｙｅＲｅａｇｅｎｔＣｏｎｃｅｎｔｒａｔｅ（Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA）によって測定し、８～１２％ＳＤＳ－ポリアクリルアミドゲル電気泳動で分離した後、０．４５μｍフッ化ポリビニリデン（ＰＶＤＦ）膜（Merck Millipore, Germany）に移した。ブロットを、ＰＶＤＦブロッキング試薬（TOYOBO）中、室温で１時間ブロックし、次いで、以下の一次抗体：抗－ＲＵＮＸ１（sc-365644; Santa Cruz Biotechnology）、抗－ＲＵＮＸ２（#8486; Cell Signaling Technology, Danvers, MA）、抗－ＲＵＮＸ３（#9647; Cell Signaling Technology）、および抗－ＧＡＰＤＨ（sc-47724; Santa Cruz Biotechnology）と共に４℃で一晩インキュベートした。一次反応後、膜を１×ＴＲＩＳ－ＮａＣｌ－Ｔｗｅｅｎ２０（ＴＮＴ）を用いて洗浄し、以下のパーオキシダーゼ結合型二次抗体：抗－ウサギＩｇＧ（NA934V; GE Healthcare, Chicago, IL）および抗－マウスＩｇＧ（NA931V; GE Healthcare）と共に室温で１時間インキュベートした。二次反応後、膜を１×ＴＮＴを用いて洗浄し、Ｃｈｅｍｉ－ＬｕｍｉＯｎｅＳｕｐｅｒ（Nacalai Tesque）およびＣｈｅｍｉＤｏｃＴＭＸＲＳｐｏｓｉｔｉｖｅＩｍａｇｅｒ（Bio-Rad Laboratories）によって視覚化した。その結果、４つの細胞株の全てにおいてＲＵＮＸ１およびＲＵＮＸ２の両方が発現し、他の３株に比べてＴ９８ＧにおいてＲＵＮＸ３が有意に発現していることが示された（図２）。

さらに、膠芽腫のＴＣＧＡ（The Cancer Genome Atlas）データセットにおいて、ＲＵＮＸ１の発現および生存について評価した。ＴＣＧＡデータセットは、ＧＤＣＴＣＧＡグリオブラストーマレポジトリ（https://gdc-hub.s3.us-east-1.amazonaws.com/latest/TCGA-GBM.htseq_fpkm.tsv.gz）より入手した。その結果、ＲＵＮＸ１発現レベルおよび生存についてのデータを入手できた１６７事例のうち、半分をＲＵＮＸ１発現が高い「Ｈｉｇｈ」群として、半分をＲＵＮＸ１発現が低い「Ｌｏｗ」群として分類し、生存率を比較した。その結果、Ｈｉｇｈ群は有意に低い生存率を示した（Ｐ＝０．０４４７）（図３）。したがって、ＲＵＮＸ１と膠芽腫悪性度の維持との間に関連があることが分かった。かくして、ＲＵＮＸ１がグリオーマ悪性度の維持における重要な成分であることが示唆された。

実施例２：膠芽腫細胞増殖抑制試験
本実施例では、Ｃｈｂ－Ｍ’を用いて、ＲＵＮＸ結合コンセンサス部位へのＲＵＮＸの結合を妨げることによって、ＲＵＮＸ標的遺伝子の転写を抑制した（遺伝子スイッチ－オフ法）。以前の研究により、Ｃｈｂ－Ｍ’は、複数の癌細胞系統において抗腫瘍効果を有し、野生型ＴＰ５３に対してより効果的であることが示され、また、髄芽腫細胞株ＤＡＯＹ（ＴＰ５３変異型）の増殖を抑制することも示された（特許文献１）。そこで、今回、膠芽腫細胞株に対するＣｈｂ－Ｍ’の増殖抑制効果を調べた。

まず、４つの膠芽腫細胞株（Ａ１７２、ＫＡＬＳ－１、ＬＮ２２９およびＴ９８Ｇ）がＴＰ５３変異を有するか否かをＳａｎｇｅｒシークエンシングによって調べた。ＮｕｃｌｅｏＳｐｉｎ（登録商標）Ｔｉｓｓｕｅ（TAKARA BIO，Japan）を用いて膠芽腫細胞からＤＮＡを抽出し、遺伝子特異的ＰＣＲプライマー（表３）、ＡｍｐｌｉＴａｑＧｏｌｄ３６０（Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA）およびＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓＧｅｎｅＡｍｐＰＣＲＳｙｓｔｅｍ９７００（Applied Biosystems, Foster City, CA）を用いて、目的のゲノム領域をＰＣＲによって増幅した。ＰＣＲプログラムは、９５℃で１０分後、９５℃で３０秒、６０℃で３０秒および７２℃で１分３０秒を３５サイクルであった。７２℃で７分の最終増幅工程により反応を完了した。ＰＣＲ産物をＥｘｏＳＡＰ－ＩＴ（Affymetrix, Santa Clara, CA）によって精製した後、ＰＣＲプライマーまたはシークエンシングプライマー（表３および表４）の１つを用い、ＢｉｇＤｙｅ（登録商標）ＴｅｒｍｉｎａｔｏｒＶ１．１ＣｙｃｌｅＳｅｑｕｅｎｃｉｎｇＫｉｔ（Thermo Fisher Scientific）およびＡＢＩ３１３０ｘＬＧｅｎｅｔｉｃＡｎａｌｙｚｅｒ（Thermo Fisher Scientific）を用いて配列決定した。その結果、全ての細胞株がＴ５３変異を有していた（表５）。

次に、Ａ１７２、ＫＡＬＳ－１、ＬＮ２２９は２０００個／ウェル、Ｔ９８Ｇは１７００個／ウェルの細胞密度で９６ウェルプレートに播種し、２４時間後、Ｃｈｂ－Ｍ’（０．５μＭまたは２μＭ）を添加して５日間インキュベートした。コントロールとしてジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を添加した。毎日、細胞カウント試薬ＳＦ（ＷＳＴ－８）により吸光度（４５０ｎｍ）を測定して細胞増殖に対するＣｈｂ－Ｍ’の影響を評価した。その結果、全ての細胞株において、Ｃｈｂ－Ｍ’の代わりにＤＭＳＯを添加した場合と比べて、細胞増殖に対する濃度依存性阻害が示された（図４）。

次に、細胞を以下の密度：Ａ１７２、ＫＡＬＳ－１およびＬＮ２２９について２０００細胞／ウェル、Ｔ９８Ｇについて１７００細胞／ウェルで９６ウェルプレート中に３連で播種した。２４時間後、種々の濃度（１０ｎＭ～５０μＭ範囲）のＣｈｂ－Ｍ’を添加した。４８、７２および９６時間後に、細胞カウント試薬ＳＦ（ＷＳＴ－８）（Nacalai Tesque, Inc., Japan）を用いて細胞生存能力（Cell viability）を測定した。薬物を含有しないＤＭＳＯをコントロールとして用いた。さらに、Ｃｈｂ－Ｓおよびクロラムブシル（Ｃｈｂ）を用い、膠芽腫細胞株応答を比較した。その結果、Ｃｈｂ－Ｍ’は、Ｃｈｂ－ＳおよびＣｈｂよりも低濃度（約１μＭ）で７２時間処理後、膠芽腫細胞株の増殖を約５０％阻害した（図５）。さらに、ＩＣ_５０値を、ＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍ５ソフトウェアにおけるデータフィッティングによって得た（表６－１～表６－３）。

これらの結果から、クロラムブシル自体による抗がん効果よりもむしろ、Ｃｈｂ－Ｍ’によって達成されるＲＵＮＸ転写活性における減少が、膠芽腫細胞成長の抑制に関与したことが分かった。

実施例３：膠芽腫細胞株のアポトーシス誘導
膠芽腫細胞株Ａ１７２、ＫＡＬＳ－１、ＬＮ２２９およびＴ９８Ｇを１．２×１０^５個／ウェルの細胞密度で６ウェルプレートに播種し、２４時間後、Ｃｈｂ－Ｍ’（１μＭまたは５μＭ）を添加して４８時間インキュベートした。コントロールとしてジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を添加した。これらの細胞を用いて、ＡＰＣＡｎｎｅｘｉｎＶＡｐｏｐｔｏｓｉｓＤｅｔｅｃｔｉｏｎＫｉｔｗｉｔｈＰＩ（BioLegend, San Diego, CA）によるアポトーシスアッセイを行った。簡単に言うと、約１×１０^５細胞のコントロール群または実験群をリン酸緩衝化セーライン（ＰＢＳ）で２回洗浄し、アネキシン結合バッファー中に懸濁した。次に、５μＬのアネキシンＶおよび１０μＬのヨウ化プロピジウム溶液（BioLegend）を加えた。反応混合物を２５℃で１５分間インキュベートし、細胞をフローサイトメトリック分析に付した。その結果、Ｃｈｂ－Ｍ’による細胞増殖阻害の原因がアポトーシスであることが示された（図６）。

さらに、上記の細胞を用いて細胞サイクルアッセイを行った。簡単に言うと、約１×１０^６細胞のコントロール群または実験群をＰＢＳで洗浄し、７０％氷冷エタノール中に固定した。２５００ｒｐｍで遠心分離後、細胞をＲＮａｓａＡ（F. Hoffmann-La Roche, Ltd., Switzerland）と共に３０分間インキュベートし、次いで２５００ｒｐｍで再び遠心分離した。次に、５μＬの７－ＡＡＤ（BioLegend）を加えた。反応混合物を３０分間インキュベートした。インキュベーション後、細胞をフローサイトメトリック分析に付した。その結果、Ｇ２／Ｍ期の細胞数の増加が示された（図７）。

これらの結果から、Ｃｈｂ－Ｍ’がアポトーシス媒介性細胞死を介して膠芽腫における腫瘍抑制効果を有することが分かった。

実施例４：膠芽腫頭蓋移植マウスを用いた生存曲線実験
脳腫瘍モデルマウスに対するＣｈｂ－Ｍ’の効果を調べた。ヒト膠芽腫細胞株の異種移植モデルマウスは、４～５週齢の雌ＢＡＬＢ／ｃＳｌｃ－ｎｕ／ｎｕマウスの左脳に膠芽腫細胞株ＬＮ２２９を頭蓋内移植することによって作製した。マウスの頭蓋骨を正中切開し、ブレグマの右に２．２ｍｍおよびブレグマに対して下位０．５ｍｍに穿頭孔を開けた。次に、３μＬのＭｉｎｉｍｕｍＥｓｓｅｎｔｉａｌＭｅｄｉｕｍ（ＭＥＭ）ａｌｆａ（Thermo Fisher Scientific）中に懸濁した３．０×１０^５個のＬＮ２２９細胞を、２６ゲージの針を有するハミルトン（Hamilton）シリンジを用いて定位的に注射した。針は、３．５ｍｍの深さに挿入し、次いで０．５ｍｍ引き出した。頭蓋内注射の３日後に、Ｃｈｂ－Ｍ’（３２０μｇ／ｋｇ体重）、またはコントロールとして、Ｃｈｂ－Ｓ（３２０μｇ／ｋｇ体重）または等量のＤＭＳＯを週に２回静脈内投与した（図８）。該投与量は、以前の研究で、マウスにおいて安全であると保証された量である。該処理はマウスが死ぬまで続けた。

その結果、Ｃｈｂ－Ｍ’処理マウスにおいて、全生存率において有意な改善が見られた（図９）。

実施例５：膠芽腫頭蓋移植マウスを用いた病理学検査
実施例４により、Ｃｈｂ－Ｍ’が同所性移植された脳腫瘍細胞に対して効果があることが分かった。さらに、該ＰＩポリアミド（Ｃｈｂ－Ｍ’）が全身投与により作用することを確認するために、本実施例を行った。

実施例４に記載されたのと同様の方法で脳腫瘍モデルマウスを作製し、頭蓋内注射の３週間後に、調製例３で合成したＦＩＴＣ－Ｃｈｂ－Ｍ’（原液または５倍希釈液）（３２０μｇ／ｋｇ体重）または等量のＤＭＳＯを週に２回静脈内投与した。さらに、コントロールとして、２００μＬのＭＥＭａｌｆａ中に懸濁した５．０×１０^６個のＬＮ２２９細胞をマウスの右肩中に移植することによって、皮下マウスモデルを作製した。皮下モデルマウスには、皮下移植の３週間後に、ＦＩＴＣ－Ｃｈｂ－Ｍ’（３２０μｇ／ｋｇ体重）または等量のＤＭＳＯを週に２回静脈内投与した。頭蓋内移植および皮下移植モデルマウスへの上記の処理は２週間続けた（図１０）。次いで、マウスを殺し、脳腫瘍モデルマウスの左脳（膠芽腫）および右脳（正常脳）ならびに皮下移植マウスの皮下組織を採取し、ＦＩＴＣの免疫染色を行った。ＦＩＴＣの免疫染色は、ＦＩＴＣ－Ｃｈｂ－Ｍ’をヤギポリクローナル抗－ＦＩＴＣ抗体（A150-112A; Bethyl Laboratories）によって検出することによって行った。

その結果、脳腫瘍モデルマウスの左脳（膠芽腫）および皮下移植マウスの皮下組織において、腫瘍細胞の核が特に強く染色され、Ｃｈｂ－Ｍ’が蓄積していることが分かった（図１１）。一方、正常脳（右脳）において染色はほとんど見られなかった。したがって、Ｃｈｂ－Ｍ’は頭蓋内腫瘍細胞中に取り込まれたことが分かった。故に、Ｃｈｂ－Ｍ’はＢＢＢを通過したと考えられる。

SEQ ID NO:1; PCR primer Forward
SEQ ID NO:2; PCR primer Reverse
SEQ ID NO:3; PCR primer Forward
SEQ ID NO:4; PCR primer Reverse
SEQ ID NO:5; PCR primer Forward
SEQ ID NO:6; PCR primer Reverse
SEQ ID NO:7; Sequencing primer
SEQ ID NO:8; Sequencing primer

Claims

ＲＵＮＸ結合配列に結合するピロール－イミダゾールポリアミドおよびアルキル化剤を含む複合体を含む、脳腫瘍を予防または治療するための医薬組成物。
全身投与用である、請求項１記載の医薬組成物。
前記アルキル化剤がクロラムブシル、デュオカルマイシン、ｓｅｃｏ－ＣＢＩ、ＣＢＩ、ピロロベンゾジアゼピン、ナイトロジェンマスタード、ナイトラミン、シクロホスファミド、イホスファミド、メルファランチオテパ、カルボコン、ブスルファン、および塩酸ニムスチンからなる群から選択される、請求項１または２記載の医薬組成物。
前記アルキル化剤がクロラムブシルである、請求項３記載の医薬組成物。
前記脳腫瘍が悪性脳腫瘍である、請求項１～４のいずれか１項記載の医薬組成物。
前記脳腫瘍が膠芽腫または髄芽腫である、請求項５記載の医薬組成物。
前記複合体におけるピロール－イミダゾールポリアミドが、
（１）ＰｙＰｙＰｙＰｙ－γ－ＩｍＩｍＰｙＩｍ
（２）ＰｙＰｙＰｙＰｙ－γ－ＩｍＰｙＩｍＩｍ
（３）ＩｍＩｍＰｙＩｍ－γ－ＰｙＰｙＰｙＰｙ
（４）ＩｍＰｙＩｍＩｍ－γ－ＰｙＰｙＰｙＰｙ
（５）ＩｍＩｍＰｙＩｍ－γ－ＰｙＩｍＰｙＰｙ
（６）ＩｍＰｙＩｍＩｍ－γ－ＰｙＰｙＩｍＰｙ
（７）ＰｙＩｍＰｙＰｙ－γ－ＩｍＩｍＰｙＩｍ、または
（８）ＰｙＰｙＩｍＰｙ－γ－ＩｍＰｙＩｍＩｍ
で示される構造を有し、ここに、Ｐｙは下記式：

（式中、ＸはＣＨまたはＣＯＨを示し、Ｒ’はＨまたはアルキル基を示す。）
で示されるピロール単位であり、ピロール単位の少なくとも１つは、下記式：

で示されるβアラニン残基によって置換されていてもよく、Ｉｍは下記式：

（式中、Ｒ’’はＨまたはアルキル基を示す。）
で示されるイミダゾール単位であり、γはγ－ターンを示す、請求項１～６のいずれか１項記載の医薬組成物。
前記複合体が下記式：

で示される化合物からなる群から選択される、請求項７記載の医薬組成物。
ＲＵＮＸ結合配列に結合するピロール－イミダゾールポリアミドおよびアルキル化剤を含む複合体を含む、膠芽腫または髄芽腫を予防または治療するための静脈内投与用医薬組成物であって、前記複合体におけるピロール－イミダゾールポリアミドが、
（１）ＰｙＰｙＰｙＰｙ－γ－ＩｍＩｍＰｙＩｍ
（２）ＰｙＰｙＰｙＰｙ－γ－ＩｍＰｙＩｍＩｍ
（３）ＩｍＩｍＰｙＩｍ－γ－ＰｙＰｙＰｙＰｙ
（４）ＩｍＰｙＩｍＩｍ－γ－ＰｙＰｙＰｙＰｙ
（５）ＩｍＩｍＰｙＩｍ－γ－ＰｙＩｍＰｙＰｙ
（６）ＩｍＰｙＩｍＩｍ－γ－ＰｙＰｙＩｍＰｙ
（７）ＰｙＩｍＰｙＰｙ－γ－ＩｍＩｍＰｙＩｍ、または
（８）ＰｙＰｙＩｍＰｙ－γ－ＩｍＰｙＩｍＩｍ
で示される構造を有し、ここに、Ｐｙは下記式：

（式中、ＸはＣＨまたはＣＯＨを示し、Ｒ’はＨまたはアルキル基を示す。）
で示されるピロール単位であり、ピロール単位の少なくとも１つは、下記式：

で示されるβアラニン残基によって置換されていてもよく、Ｉｍは下記式：

（式中、Ｒ’’はＨまたはアルキル基を示す。）
で示されるイミダゾール単位であり、γはγ－ターンを示す、医薬組成物。
ＲＵＮＸ結合配列に結合するピロール－イミダゾールポリアミドおよびアルキル化剤を含む複合体を含む、悪性脳腫瘍を予防または治療するための静脈内投与用医薬組成物であって、前記複合体が下記式：

で示される化合物群から選択される、医薬組成物。