JP2022548780A

JP2022548780A - タウオパチーの治療

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Publication number: JP2022548780A
Application number: JP2022518237A
Authority: JP
Inventors: イットナーラース; イットナーアーン
Original assignee: マックォーリー・ユニバーシティ
Priority date: 2019-09-23
Filing date: 2020-09-23
Publication date: 2022-11-21
Also published as: EP4034240A4; CN114728169A; WO2021056064A9; EP4034240A1; AU2020353719A1; WO2021056064A1; CA3152239A1; US20220339183A1

Abstract

ｐ３８γの完全長アイソフォーム２またはその構成的活性型の変異体ｐ３８γ Ｄ１７９Ａのいずれかを投与することにより、対象のタウオパチーを治療する方法。これは、ヒトタウのアミノ酸位置スレオニン２０５（Ｔ２０５）に相当する、タウの配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲのスレオニンでのリン酸化を促進する。本方法はまた、リン酸化タウのホスホミメティックを導入することを含み、ここで、リン酸化タウは、タウの配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲにおいてスレオニンでリン酸化されている。本治療方法は、タウオパチーに関連する認知障害を罹患している対象の認知能力を改善し、タウ凝集体および神経原線維変化を減少させる結果となる。

Description

本発明は、対象におけるタウオパチーを治療する方法、タウオパチーに関連する認知障害に罹患している対象における認知能力を改善する方法、タウ凝集体および神経原線維変化を低減する方法、ならびにそのような方法のための組成物および薬剤に関する。

タウタンパク質（本明細書ではタウとも呼ばれる）は、通常の状態では、中枢神経系に豊富に存在する溶解性の高いタンパク質である。健康な条件下では、タウタンパク質は微小管、特に神経細胞の微小管と関連しており、それらを安定させる。

タウオパチーは、脳の神経細胞における過剰リン酸化タウの異常な凝集の存在によって病理学的に定義される進行性神経変性障害のクラスである。異常な凝集は、タウタンパク質が過剰リン酸化され、微小管から解離して不溶性の凝集体を形成するときに起こる。タウ凝集体が神経細胞に蓄積すると、それらは神経原線維変化（ＮＦＴ）を形成し、最終的に神経細胞死および認知機能低下を引き起こす。

過剰リン酸化タウの凝集体は、アルツハイマー病（ＡＤ）、前頭側頭型認知症、およびその他のタウオパチー等の神経変性疾患の病因に関与している。脳全体のＮＦＴ病理の進行は、変性疾患の疾患進行と相関している。しかしながら、今日まで、これらの神経原線維変化が疾患を引き起こすメカニズムは不明である。

タウオパチーの早期診断は通常不可能である。現在の臨床診断は、病歴および症状の進行に依存している。結果として、タウオパチーの診断は、症状の発症後にのみ行われることが多く、通常、タウオパチーの有意な凝集が生じた後、疾患が進行した段階にあるときに行われる。

現在まで、進行段階の（すなわち、タウ凝集体を伴う）ＡＤ、またはタウの凝集のみに関連するタウオパチー等、タウ凝集が起こった後にタウオパチーを治療するための選択肢は限られている。

タウ凝集およびＮＦＴ形成が既に起こっている、および／またはタウ凝集が唯一の原因因子であるタウオパチーを治療するための方法が必要とされている。

本発明者らは、全長の野生型ヒトタウの２０５位に対応するスレオニン（Ｔ２０５）等の、タウの配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲ（配列番号７）のスレオニンでのタウのリン酸化を促進すること、および／または全長の野生型ヒトタウ（配列番号１）の２０５位に対応するスレオニン（Ｔ２０５）等の、タウの配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲ（配列番号７）のスレオニンでリン酸化されているタウタンパク質のホスホミメティックを対象のニューロンに導入することにより、タウオパチーに関連する認知低下および他の症状を低減できることを見出した。

第一の態様は、対象におけるタウオパチーを治療または予防する方法であって、
（ａ）タウの配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲ（配列番号７）のスレオニンでのタウのリン酸化を促進する；および／または
（ｂ）対象のニューロンにリン酸化タウのホスホミメティックを導入する、ここで、リン酸化タウは、タウの配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲ（配列番号７）のスレオニンでリン酸化されているタウである、
薬剤を投与する工程を含む、方法を提供する。

代替の第一の態様は、対象におけるタウオパチーの治療または予防に使用するための薬剤であって、
（ａ）タウの配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲのスレオニンでのタウのリン酸化を促進する；および／または
（ｂ）対象のニューロンにリン酸化タウのホスホミメティックを導入する、ここで、リン酸化タウは、タウの配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲのスレオニンでリン酸化されているタウである、
薬剤；または
対象におけるタウオパチーを治療または予防するための医薬品の製造における薬剤の使用であって、ここで該薬剤は、
（ａ）タウの配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲのスレオニンでのタウのリン酸化を促進する；および／または
（ｂ）対象のニューロンにリン酸化タウのホスホミメティックを導入する、ここで、リン酸化タウは、タウの配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲのスレオニンでリン酸化されているタウである、
使用を提供する。

第二の態様は、対象におけるタウオパチーを治療または予防する方法であって、
（ａ）ヒトタウの２０５位に対応するスレオニンでのタウのリン酸化を促進する；および／または
（ｂ）対象のニューロンにリン酸化ヒトタウのホスホミメティックを導入する、ここで、リン酸化ヒトタウは、タウの２０５位に対応するスレオニンでリン酸化されている、
薬剤を投与する工程を含む、方法を提供する。

代替の第二の態様は、対象におけるタウオパチーの治療または予防に使用するための薬剤であって、
（ａ）ヒトタウの２０５位に対応するスレオニンでのタウのリン酸化を促進する；および／または
（ｂ）対象のニューロンにリン酸化ヒトタウのホスホミメティックを導入する、ここで、リン酸化ヒトタウは、タウの２０５位に対応するスレオニンでリン酸化されている、
薬剤；または
対象におけるタウオパチーを治療または予防するための医薬品の製造における薬剤の使用であって、ここで該薬剤は、
（ａ）ヒトタウの２０５位に対応するスレオニンでのタウのリン酸化を促進する；および／または
（ｂ）対象のニューロンにリン酸化ヒトタウのホスホミメティックを導入する、ここで、リン酸化ヒトタウは、タウの２０５位に対応するスレオニンでリン酸化されている、
使用を提供する。

第三の態様は、対象におけるタウオパチーを治療または予防する方法であって、
（ａ）対象のニューロンにおける、ｐ３８γ活性、またはｐ３８γのバリアントの活性を上昇させる；および／または
（ｂ）対象のニューロンにリン酸化タウのホスホミメティックをコードするヌクレオチド配列を導入する、ここでリン酸化タウは、タウの配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲのスレオニンで、および／またはヒトタウの２０５位に対応するスレオニンで、リン酸化されているタウである、
薬剤を投与する工程を含む、方法を提供する。

代替の第三の態様は、対象におけるタウオパチーの治療または予防に使用するための薬剤であって、
（ａ）対象のニューロンにおける、ｐ３８γ活性、またはｐ３８γのバリアントの活性を上昇させる；および／または
（ｂ）対象のニューロンにリン酸化タウのホスホミメティックをコードするヌクレオチド配列を導入する、ここでリン酸化タウは、タウの配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲのスレオニンで、および／またはヒトタウの２０５位に対応するスレオニンで、リン酸化されているタウである、
薬剤；または
対象におけるタウオパチーを治療または予防するための医薬品の製造における薬剤の使用であって、ここで該薬剤は、
（ａ）対象のニューロンにおける、ｐ３８γ活性、またはｐ３８γのバリアントの活性を上昇させる；および／または
（ｂ）対象のニューロンにリン酸化タウのホスホミメティックをコードするヌクレオチド配列を導入する、ここでリン酸化タウは、タウの配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲのスレオニンで、および／またはヒトタウの２０５位に対応するスレオニンで、リン酸化されているタウである、
使用を提供する。

第四の態様は、対象のニューロンにおける、ｐ３８γ活性、またはｐ３８γのバリアントの活性を上昇させる薬剤を投与する工程を含む、対象におけるタウオパチーを治療または予防する方法を提供する。

代替の第四の態様は、対象におけるタウオパチーの治療または予防における使用のための、ニューロンにおける、ｐ３８γ活性、またはｐ３８γのバリアントの活性を上昇させる薬剤；および／または対象におけるタウオパチーを治療または予防するための医薬品の製造における、ニューロンにおいてｐ３８γ活性、またはｐ３８γのバリアントの活性を上昇させる薬剤の使用を提供する。

第五の態様は、リン酸化タウのホスホミメティックが発現されるように、対象のニューロンにおいてタウをコードするヌクレオチド配列を改変する薬剤を投与する工程を含む、対象におけるタウオパチーを治療または予防する方法を提供し、ここでリン酸化タウは、タウの配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲのスレオニンで、および／またはヒトタウの２０５位に対応するスレオニンで、リン酸化されているタウである。

代替の第五の態様は、対象におけるタウオパチーの治療または予防における使用のための薬剤であって、ここで該薬剤は、リン酸化タウのホスホミメティックが発現されるように、対象のニューロンにおいてタウをコードするヌクレオチド配列を改変し、ここで該リン酸化タウは、タウの配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲのスレオニンで、および／またはヒトタウの２０５位に対応するスレオニンで、リン酸化されている、薬剤；または対象におけるタウオパチーを治療または予防するための医薬品の製造における薬剤の使用であって、ここで該薬剤は、リン酸化タウのホスホミメティックが発現されるように、対象のニューロンにおいてタウをコードするヌクレオチド配列を改変し、ここでリン酸化タウは、タウの配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲのスレオニンでリン酸化されている、使用を提供する。

第六の態様は、タウオパチーを治療または予防する方法であって、
（ａ）ｐ３８γ、またはそのバリアント、またはｐ３８γ、またはそのバリアントを発現することができる核酸；または
（ｂ）リン酸化タウのホスホミメティックであるように、タウをコードするヌクレオチド配列を改変することができる核酸であって、ここで該リン酸化タウは、タウの配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲのスレオニンで、および／またはヒトタウの２０５位に対応するスレオニンで、リン酸化されているタウである、核酸
を対象のニューロンに導入する工程を含む。

代替の第六の態様は、タウオパチーの治療または予防における使用のための、
（ａ）ｐ３８γ、またはそのバリアント、またはｐ３８γ、またはそのバリアントを発現することができる核酸；または
（ｂ）リン酸化タウのホスホミメティックであるように、タウをコードするヌクレオチド配列を改変することができる核酸であって、ここで該リン酸化タウは、タウの配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲのスレオニンで、および／またはヒトタウの２０５位に対応するスレオニンで、リン酸化されているタウである、核酸；または
タウオパチーの治療または予防するための医薬品の製造における
（ａ）ｐ３８γ、またはそのバリアント、またはｐ３８γ、またはそのバリアントを発現することができる核酸；または
（ｂ）リン酸化タウのホスホミメティックであるように、タウをコードするヌクレオチド配列を改変することができる核酸であって、ここで該リン酸化タウは、タウの配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲのスレオニンで、および／またはヒトタウの２０５位に対応するスレオニンで、リン酸化されているタウである、核酸
の使用、を提供する。

第七の態様は、タウオパチーに関連する認知障害に罹患している対象の認知能力を改善する方法であって、対象に
（ａ）タウの配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲのスレオニンでのタウのリン酸化を促進する；および／または
（ｂ）リン酸化タウのホスホミメティックを導入する、ここで、リン酸化タウは、タウの配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲのスレオニンでリン酸化されているタウである、
薬剤を投与する工程を含む方法を提供する。

代替の第七の態様は、タウオパチーに関連する認知障害に罹患している対象の認知能力の改善における使用のための薬剤であって、
（ａ）タウの配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲのスレオニンでのタウのリン酸化を促進する；および／または
（ｂ）対象のニューロンにリン酸化タウのホスホミメティックを導入する、ここで、リン酸化タウは、タウの配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲのスレオニンでリン酸化されているタウである、
薬剤；または
タウオパチーに関連する認知障害に罹患している対象の認知能力を改善するための医薬品の製造における薬剤の使用であって、ここで該薬剤は、
（ａ）タウの配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲのスレオニンでのタウのリン酸化を促進する；および／または
（ｂ）対象のニューロンにリン酸化タウのホスホミメティックを導入する、ここで、リン酸化タウは、タウの配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲのスレオニンでリン酸化されているタウである、
使用、を提供する。

第八の態様は、タウオパチーに関連する認知障害に罹患している対象の認知能力を改善する方法であって、
（ａ）ヒトタウの２０５位に対応するスレオニンでのタウのリン酸化を促進する；および／または
（ｂ）対象のニューロンにリン酸化ヒトタウのホスホミメティックを導入する、ここで、リン酸化ヒトタウは、２０５位でスレオニンでリン酸化されているヒトタウである、
薬剤を投与する工程を含む、方法を提供する。

代替の第八の態様は、タウオパチーに関連する認知障害に罹患している対象の認知能力の改善における使用のための薬剤であって、
（ａ）ヒトタウの２０５位に対応するスレオニンでのタウのリン酸化を促進する；および／または
（ｂ）対象のニューロンにリン酸化ヒトタウのホスホミメティックを導入する、ここで、リン酸化ヒトタウは、タウの２０５位でスレオニンでリン酸化されている、
薬剤；または
タウオパチーに関連する認知障害に罹患している対象の認知能力を改善するための医薬品の製造における薬剤の使用であって、ここで該薬剤は、
（ａ）ヒトタウの２０５位に対応するスレオニンでのタウのリン酸化を促進する；および／または
（ｂ）対象のニューロンにリン酸化ヒトタウのホスホミメティックを導入する、ここで、リン酸化ヒトタウは、タウの２０５位でスレオニンでリン酸化されている、
使用、を提供する。

第九の態様は、タウオパチーに関連する認知障害に罹患している対象の認知能力を改善する方法であって、
（ａ）対象のニューロンにおける、ｐ３８γ活性、またはｐ３８γのバリアントの活性を上昇させる；および／または
（ｂ）対象のニューロンにリン酸化タウのホスホミメティックをコードするヌクレオチド配列を導入する、ここでリン酸化タウは、タウの配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲのスレオニンで、および／または全長のヒトタウの２０５位に対応するスレオニンで、リン酸化されているタウである、
薬剤を投与する工程を含む、方法を提供する。

代替の第九の態様は、タウオパチーに関連する認知障害に罹患している対象の認知能力の改善における使用のための、
（ａ）対象のニューロンにおける、ｐ３８γ活性、またはｐ３８γのバリアントの活性を上昇させる；および／または
（ｂ）対象のニューロンにリン酸化タウのホスホミメティックをコードするヌクレオチド配列を導入する、ここでリン酸化タウは、タウの配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲのスレオニンで、および／または全長のヒトタウの２０５位に対応するスレオニンで、リン酸化されているタウである、
薬剤；または
タウオパチーに関連する認知障害に罹患している対象の認知能力を改善するための医薬品の製造における薬剤の使用であって、ここで該薬剤は、
（ａ）対象のニューロンにおける、ｐ３８γ活性、またはｐ３８γのバリアントの活性を上昇させる；および／または
（ｂ）対象のニューロンにリン酸化タウのホスホミメティックをコードするヌクレオチド配列を導入する、ここでリン酸化タウは、タウの配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲのスレオニンで、および／または全長のヒトタウの２０５位に対応するスレオニンで、リン酸化されているタウである、
使用、を提供する。

第十の態様は、対象のニューロンにおける、ｐ３８γ活性、またはｐ３８γのバリアントの活性を上昇させる薬剤を投与する工程を含む、タウオパチーに関連する認知障害に罹患している対象の認知能力を改善する方法を提供する。

代替の第十の態様は、タウオパチーに関連する認知障害に罹患している対象の認知能力の改善における使用のための、ニューロンにおけるｐ３８γ活性、またはｐ３８γのバリアントの活性を上昇させる薬剤；またはタウオパチーに関連する認知障害に罹患している対象の認知能力を改善するための医薬品の製造における、ニューロンにおけるｐ３８γ活性、またはｐ３８γのバリアントの活性を上昇させる薬剤の使用、を提供する。

第十一の態様は、リン酸化タウのホスホミメティックが発現されるように、対象のニューロンのタウをコードするヌクレオチド配列を改変する薬剤を投与する工程を含む、タウオパチーに関連する認知障害に罹患している対象の認知能力を改善する方法を提供する。ここで、リン酸化タウは、タウの配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲのスレオニンで、および／または全長のヒトタウの２０５位に対応するスレオニンで、リン酸化されているタウである。

代替の第十一の態様は、タウオパチーに関連する認知障害に罹患している対象の認知能力の改善における使用のための薬剤であって、ここで該薬剤はリン酸化タウのホスホミメティックが発現されるように、対象のニューロンのタウをコードするヌクレオチド配列を改変し、ここで該リン酸化タウは、タウの配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲのスレオニンで、および／または全長のヒトタウの２０５位に対応するスレオニンで、リン酸化されているタウである、薬剤；またはタウオパチーに関連する認知障害に罹患している対象の認知能力を改善するための医薬品の製造における薬剤の使用であって、ここで該薬剤はリン酸化タウのホスホミメティックが発現されるように、対象のニューロンのタウをコードするヌクレオチド配列を改変し、ここで該リン酸化タウは、タウの配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲのスレオニンで、および／または全長のヒトタウの２０５位に対応するスレオニンで、リン酸化されているタウである、使用を提供する。

第十二の態様は、タウオパチーに関連する認知障害に罹患している対象の認知能力を改善する方法であって、対象のニューロンに、
（ａ）ｐ３８γ、またはそのバリアント、またはｐ３８γ、またはそのバリアントを発現することができる核酸；および／または
（ｂ）リン酸化タウのホスホミメティックが発現されるように、タウをコードするヌクレオチド配列を改変することができる遺伝子編集システムであって、ここで該リン酸化タウは、タウの配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲのスレオニンで、および／または全長のヒトタウの２０５位に対応するスレオニンで、リン酸化されているタウである、遺伝子編集システム
を導入する工程を含む、方法を提供する。

代替の第十二の態様は、タウオパチーに関連する認知障害に罹患している対象の認知能力の改善における使用のための
（ａ）ｐ３８γ、またはそのバリアント、またはｐ３８γ、またはそのバリアントを発現することができる核酸；および／または
（ｂ）リン酸化タウのホスホミメティックが発現されるように、タウをコードするヌクレオチド配列を改変することができる遺伝子編集システムであって、ここで該リン酸化タウは、タウの配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲのスレオニンで、および／または全長のヒトタウの２０５位に対応するスレオニンで、リン酸化されているタウである、遺伝子編集システム；または
タウオパチーに関連する認知障害に罹患している対象の認知能力を改善するための医薬品の製造における
（ａ）ｐ３８γ、またはそのバリアント、またはｐ３８γ、またはそのバリアントを発現することができる核酸；および／または
（ｂ）リン酸化タウのホスホミメティックが発現されるように、タウをコードするヌクレオチド配列を改変することができる遺伝子編集システムであって、ここで該リン酸化タウは、タウの配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲのスレオニンで、および／または全長のヒトタウの２０５位に対応するスレオニンで、リン酸化されているタウである、遺伝子編集システム
の使用を提供する。

第十三の態様は、ニューロンにおけるタウ凝集を低減または予防する方法であって、ニューロンに
（ａ）タウの配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲのスレオニンでのタウのリン酸化を促進する；および／または
（ｂ）リン酸化タウのホスホミメティックを導入する、ここで、リン酸化タウは、タウの配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲのスレオニンでリン酸化されているタウである、
薬剤を導入する工程を含む、方法を提供する。

代替の第十三の態様は、ニューロンにおけるタウ凝集の低減または予防における使用のための薬剤であって、
（ａ）タウの配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲのスレオニンでのタウのリン酸化を促進する；および／または
（ｂ）対象のニューロンに、リン酸化タウのホスホミメティックを導入する、ここで、リン酸化タウは、タウの配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲのスレオニンでリン酸化されているタウである、
薬剤；または
対象のニューロンにおけるタウ凝集を低減または予防するための医薬品の製造における薬剤の使用であって、ここで該薬剤は
（ａ）タウの配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲのスレオニンでのタウのリン酸化を促進する；および／または
（ｂ）対象のニューロンに、リン酸化タウのホスホミメティックを導入する、ここで、リン酸化タウは、タウの配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲのスレオニンでリン酸化されているタウである、
使用を提供する。

第十四の態様は、ニューロンにおけるタウ凝集を低減または予防する方法であって、ニューロンに
（ａ）ヒトタウの２０５位に対応するスレオニンでのタウのリン酸化を促進する；および／または
（ｂ）対象のニューロンにリン酸化ヒトタウのホスホミメティックを導入する、ここで、リン酸化ヒトタウは、タウの２０５位に対応するスレオニンでリン酸化されている、
薬剤を導入する工程を含む、方法を提供する。

代替の第十四の態様は、ニューロンにおけるタウ凝集の低減または予防における使用のための薬剤であって、
（ａ）ヒトタウの２０５位に対応するスレオニンでのタウのリン酸化を促進する；および／または
（ｂ）対象のニューロンにリン酸化ヒトタウのホスホミメティックを導入する、ここで、リン酸化ヒトタウは、タウの２０５位に対応するスレオニンでリン酸化されている、
薬剤；または
対象のニューロンにおけるタウ凝集を低減または予防するための医薬品の製造における薬剤の使用であって、該薬剤は、
（ａ）ヒトタウの２０５位に対応するスレオニンでのタウのリン酸化を促進する；および／または
（ｂ）対象のニューロンにリン酸化ヒトタウのホスホミメティックを導入する、ここで、リン酸化ヒトタウは、タウの２０５位に対応するスレオニンでリン酸化されている、
使用を提供する。

第十五の態様は、ニューロンにおけるタウ凝集を低減または予防する方法であって、ニューロンに
（ａ）対象のニューロンにおける、ｐ３８γ活性、またはｐ３８γのバリアントの活性を上昇させる；および／または
（ｂ）対象のニューロンにリン酸化タウのホスホミメティックをコードするヌクレオチド配列を導入する、ここでリン酸化タウは、タウの配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲのスレオニンで、および／または全長のヒトタウの２０５位に対応するスレオニンで、リン酸化されているタウである、
薬剤を導入する工程を含む、方法を提供する。

代替の第十五の態様は、ニューロンにおけるタウ凝集の低減または予防における使用のための薬剤であって、
（ａ）対象のニューロンにおける、ｐ３８γ活性、またはｐ３８γのバリアントの活性を上昇させる；および／または
（ｂ）対象のニューロンにリン酸化タウのホスホミメティックをコードするヌクレオチド配列を導入する、ここでリン酸化タウは、タウの配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲのスレオニンで、および／または全長のヒトタウの２０５位に対応するスレオニンで、リン酸化されているタウである、
薬剤；または
対象のニューロンにおけるタウ凝集を低減または予防するための医薬品の製造における薬剤の使用であって、該薬剤は、
（ａ）対象のニューロンにおける、ｐ３８γ活性、またはｐ３８γのバリアントの活性を上昇させる；および／または
（ｂ）対象のニューロンにリン酸化タウのホスホミメティックをコードするヌクレオチド配列を導入する、ここでリン酸化タウは、タウの配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲのスレオニンで、および／または全長のヒトタウの２０５位に対応するスレオニンで、リン酸化されているタウである、
使用を提供する。

第十六の態様は、ニューロンにおけるタウ凝集を低減または予防する方法であって、対象のニューロンに
（ａ）ｐ３８γ、またはそのバリアント、またはｐ３８γ、またはそのバリアントを発現することができる核酸；および／または
（ｂ）タウの配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲのスレオニンで、および／またはヒトタウの２０５位に対応するスレオニンで、リン酸化されているタウである、リン酸化タウのホスホミメティックが発現されるように、タウをコードするヌクレオチド配列を改変することができる核酸、
を導入する工程を含む、方法を提供する。

代替の第十六の態様は、対象のニューロンにおけるタウ凝集の低減または予防における使用のための、
（ａ）ｐ３８γ、またはそのバリアント、またはｐ３８γ、またはそのバリアントを発現することができる核酸；および／または
（ｂ）タウの配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲのスレオニンで、および／またはヒトタウの２０５位に対応するスレオニンで、リン酸化されているタウである、リン酸化タウのホスホミメティックが発現されるように、タウをコードするヌクレオチド配列を改変することができる核酸；または
対象のニューロンにおけるタウ凝集を低減または予防するための医薬品の製造における、
（ａ）ｐ３８γ、またはそのバリアント、またはｐ３８γ、またはそのバリアントを発現することができる核酸；および／または
（ｂ）タウの配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲのスレオニンで、および／またはヒトタウの２０５位に対応するスレオニンで、リン酸化されているタウである、リン酸化タウのホスホミメティックが発現されるように、タウをコードするヌクレオチド配列を改変することができる核酸、
の使用を提供する。

第十七の態様は、対象のニューロンにおける神経原線維変化を低減または予防する方法であって、有効量の
（ａ）タウの配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲのスレオニンでのタウのリン酸化を促進する；および／または
（ｂ）リン酸化タウのホスホミメティックを導入する、ここで、リン酸化タウは、タウの配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲのスレオニンでリン酸化されているタウである、
薬剤を投与する工程を含む、方法を提供する。

代替の第十七の態様は、対象のニューロンにおける神経原線維変化の低減または予防における使用のための、
（ａ）タウの配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲのスレオニンでのタウのリン酸化を促進する；および／または
（ｂ）対象のニューロンに、リン酸化タウのホスホミメティックを導入する、ここで、リン酸化タウは、タウの配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲのスレオニンでリン酸化されているタウである、
薬剤；または
対象のニューロンにおける神経原線維変化を低減または予防するための医薬品の製造における薬剤の使用であって、ここで該薬剤は、
（ａ）タウの配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲのスレオニンでのタウのリン酸化を促進する；および／または
（ｂ）対象のニューロンに、リン酸化タウのホスホミメティックを導入する、ここで、リン酸化タウは、タウの配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲのスレオニンでリン酸化されているタウである、
使用を提供する。

第十八の態様は、対象のニューロンにおける神経原線維変化を低減または予防する方法であって、有効量の
（ａ）ヒトタウの２０５位に対応するスレオニンでのタウのリン酸化を促進する；および／または
（ｂ）対象のニューロンにリン酸化ヒトタウのホスホミメティックを導入する、ここで、リン酸化ヒトタウは、タウの２０５位に対応するスレオニンでリン酸化されている、
薬剤を投与する工程を含む、方法を提供する。

代替の第十八の態様は、対象のニューロンにおける神経原線維変化の低減または予防における使用のための、
（ａ）ヒトタウの２０５位に対応するスレオニンでのタウのリン酸化を促進する；および／または
（ｂ）対象のニューロンにリン酸化ヒトタウのホスホミメティックを導入する、ここで、リン酸化ヒトタウは、タウの２０５位に対応するスレオニンでリン酸化されている、
薬剤；または
対象のニューロンにおける神経原線維変化を低減または予防するための医薬品の製造における薬剤の使用であって、ここで該薬剤は、
（ａ）ヒトタウの２０５位に対応するスレオニンでのタウのリン酸化を促進する；および／または
（ｂ）対象のニューロンにリン酸化ヒトタウのホスホミメティックを導入する、ここで、リン酸化ヒトタウは、タウの２０５位に対応するスレオニンでリン酸化されている、
使用を提供する。

第十九の態様は、対象のニューロンにおける神経原線維変化を低減または予防する方法であって、ニューロンに
（ａ）対象のニューロンにおける、ｐ３８γ活性、またはｐ３８γのバリアントの活性を上昇させる；および／または
（ｂ）対象のニューロンにリン酸化タウのホスホミメティックをコードするヌクレオチド配列を導入する、ここでリン酸化タウは、タウの配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲのスレオニンで、および／または全長のヒトタウの２０５位に対応するスレオニンで、リン酸化されているタウである、
薬剤を導入する工程を含む、方法を提供する。

代替の第十九の態様は、対象のニューロンにおける神経原線維変化の低減または予防における使用のための、
（ａ）対象のニューロンにおける、ｐ３８γ活性、またはｐ３８γのバリアントの活性を上昇させる；および／または
（ｂ）対象のニューロンにリン酸化タウのホスホミメティックをコードするヌクレオチド配列を導入する、ここでリン酸化タウは、タウの配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲのスレオニンで、および／または全長のヒトタウの２０５位に対応するスレオニンで、リン酸化されているタウである、
薬剤；または
対象のニューロンにおける神経原線維変化を低減または予防するための医薬品の製造における薬剤の使用であって、ここで該薬剤は、
（ａ）対象のニューロンにおける、ｐ３８γ活性、またはｐ３８γのバリアントの活性を上昇させる；および／または
（ｂ）対象のニューロンにリン酸化タウのホスホミメティックをコードするヌクレオチド配列を導入する、ここでリン酸化タウは、タウの配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲのスレオニンで、および／または全長のヒトタウの２０５位に対応するスレオニンで、リン酸化されているタウである、
使用を提供する。

第二十の態様は、対象のニューロンにおける神経原線維変化を低減または予防する方法であって、対象のニューロンに
（ａ）ｐ３８γ、またはそのバリアント、またはｐ３８γ、またはそのバリアントを発現することができる核酸；および／または
（ｂ）タウの配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲのスレオニンで、および／またはヒトタウの２０５位に対応するスレオニンで、リン酸化されているタウである、リン酸化タウのホスホミメティックが発現されるように、タウをコードするヌクレオチド配列を改変することができる核酸、
を導入する工程を含む、方法を提供する。

代替の第二十の態様は、対象のニューロンにおける神経原線維変化の低減または予防における使用のための、
（ａ）ｐ３８γ、またはそのバリアント、またはｐ３８γ、またはそのバリアントを発現することができる核酸；および／または
（ｂ）タウの配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲのスレオニンで、および／またはヒトタウの２０５位に対応するスレオニンで、リン酸化されているタウである、リン酸化タウのホスホミメティックが発現されるように、タウをコードするヌクレオチド配列を改変することができる核酸；または
対象のニューロンにおける神経原線維変化を低減または予防するための医薬品の製造における、
（ａ）ｐ３８γ、またはそのバリアント、またはｐ３８γ、またはそのバリアントを発現することができる核酸；および／または
（ｂ）タウの配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲのスレオニンで、および／またはヒトタウの２０５位に対応するスレオニンで、リン酸化されているタウである、リン酸化タウのホスホミメティックが発現されるように、タウをコードするヌクレオチド配列を改変することができる核酸
の使用を提供する。

第二十一の態様は、タウオパチーに罹患している対象におけるヒトタウの４２２位でのセリンのリン酸化を低減する方法であって、有効量の
（ａ）タウの配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲのスレオニンでのタウのリン酸化を促進する；および／または
（ｂ）リン酸化タウのホスホミメティックを導入する、ここで、リン酸化タウは、タウの配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲのスレオニンでリン酸化されているタウである、
薬剤を投与する工程を含む、方法を提供する。

代替の第二十一の態様は、タウオパチーに罹患している対象におけるヒトタウの４２２位でのセリンのリン酸化の低減のための薬剤であって、
（ａ）タウの配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲのスレオニンでのタウのリン酸化を促進する；および／または
（ｂ）対象のニューロンに、リン酸化タウのホスホミメティックを導入する、ここで、リン酸化タウは、タウの配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲのスレオニンでリン酸化されているタウである、
薬剤；または
タウオパチーに罹患している対象におけるヒトタウの４２２位でのセリンのリン酸化を低減するための医薬品の製造における薬剤の使用であって、ここで薬剤は、
（ａ）タウの配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲのスレオニンでのタウのリン酸化を促進する；および／または
（ｂ）対象のニューロンに、リン酸化タウのホスホミメティックを導入する、ここで、リン酸化タウは、タウの配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲのスレオニンでリン酸化されているタウである、
使用を提供する。

第二十二の態様は、対象におけるヒトタウの４２２位でのセリンのリン酸化に関連するタウオパチーを治療または予防する方法であって、有効量の
（ａ）タウの配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲのスレオニンでのタウのリン酸化を促進する；および／または
（ｂ）リン酸化タウのホスホミメティックを導入する、ここで、リン酸化タウは、タウの配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲのスレオニンでリン酸化されているタウである、
薬剤を投与する工程を含む、方法を提供する。

代替の二十二の態様は、対象におけるヒトタウの４２２位でのセリンのリン酸化に関連するタウオパチーの治療または予防のための薬剤であって、
（ａ）タウの配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲのスレオニンでのタウのリン酸化を促進する；および／または
（ｂ）対象のニューロンに、リン酸化タウのホスホミメティックを導入する、ここで、リン酸化タウは、タウの配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲのスレオニンでリン酸化されているタウである、
薬剤；または
対象におけるヒトタウの４２２位でのセリンのリン酸化に関連するタウオパチーを治療または予防するための医薬品の製造における薬剤の使用であって、ここで薬剤は、
（ａ）タウの配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲのスレオニンでのタウのリン酸化を促進する；および／または
（ｂ）対象のニューロンに、リン酸化タウのホスホミメティックを導入する、ここで、リン酸化タウは、タウの配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲのスレオニンでリン酸化されているタウである、
使用を提供する。

第二十三の態様は、タウ遺伝子（Ｍａｐｔ遺伝子）編集システムまたはその一部、またはタウ遺伝子（Ｍａｐｔ遺伝子）編集システムまたはその一部をコードする核酸、野生型タウ遺伝子に変異を導入してリン酸化タウのホスホミメティックの発現を引き起こす一つまたは複数の核酸を含む遺伝子編集システムまたはその一部、を含む薬剤であって、ここでリン酸化タウは、配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲのスレオニンで、および／または全長ヒトタウの２０５位に対応するスレオニンでリン酸化されている、薬剤を提供する。

アクティブなｐ３８γＭＡＰキナーゼの送達は、進行した段階でアルツハイマー病のマウスの認知能力を改善する。図１（ａ）は、１３カ月齢のＡＰＰ２３（および非トランスジェニック対照）マウスでニューロン発現を達成するためのＡＡＶ９／ＰＨＰ．Ｂｓｙｎ－ｐ３８γ^CA、および対照のｓｙｎ－ｅＧＦＰ送達（静脈内（ｉ．ｖ．）、１００μｌ）のタイムラインを示す実験の概略図である。２つの異なるＡＡＶ力価（１０¹¹または１０¹³ビリオン粒子／ｍｌ）を異なる実験で使用した。認知能力および組織学的および生化学的データは、ＡＡＶの送達後２カ月で評価した。図１（ｂ）は、ＡＰＰ２３マウスの皮質および海馬の免疫蛍光分析を示す画像であり、ニューロンにおける活性ｐ３８γＣＡ（ＨＡ）のＡＡＶ媒介性発現およびＡＰＰ（６Ｅ１０）のトランスジェニック発現を確認している。スケールバー、５０μｍ。図１（ｃ～ｇ）は、モリス水迷路（ｎ＝１０～１１）での、ＡＡＶ９／ＰＨＰ．Ｂｓｙｎ－ｐ３８γ^CA、および対照のｓｙｎ－ｅＧＦＰ送達（ｉ．ｖ．、１００μｌ；１μｌあたり１０¹¹ウイルスゲノム）の２カ月後の１３カ月齢のＡＰＰ２３の記憶評価を示す。図１（ｃ）は獲得段階を示す図である：６日目の代表的な水泳経路のトレース。図１（ｄ）は示されたＡＡＶ治療を受けたＡＡＰ２３マウスの獲得段階（１～６日目）の間の逃避潜時を示すグラフである。図１（ｅ）は（Ｃ）の取得曲線の線形回帰を示すグラフである。図１（ｆ）は学習曲線の比較を示すグラフである。図１（ｇ）は、水迷路四分円のプローブ試行（７日目）の占有率を示すグラフである。Ｑ１、標的四分円。破線、ランダム占有のしきい値。図（ｈ－ｌ）は、示されたＡＡＶの送達から２カ月後の１３カ月齢のＡＰＰ２３マウスにおけるモリス水迷路潜時（ｉ．ｖ．、１００μｌ；１μｌあたり１０¹³ウイルスゲノム）。（ＡＰＰ２３ＡＡＶ^eGFPおよびＡＰＰ２３ＡＡＶｐ３８γ^CAについてｎ＝９、対照ＡＡＶ^eGFPおよびＡＡＶｐ３８γ^CAについてｎ＝５～６）。図１（ｈ）は獲得段階を示す図である：６日目の代表的な水泳経路のトレースである。図１（ｉ）は獲得段階中の逃避潜時を示すグラフである。図１（ｊ）は（ｉ）の取得曲線の線形回帰を示すグラフである。図１（ｋ）は学習曲線の比較を示すグラフである。図（ｌ）は、水迷路四分円のプローブ試行（７日目）の占有率を示すグラフである。Ｑ１、標的四分円。データは平均値±Ｓ．Ｅ．Ｍ．として表される。＊＊ｐ＜０．０１＊ｐ＜０．０５ｎｓ、有意差がない。（ｄ、ｉの場合は二元配置分散分析；ｆ、ｇ、ｋ、ｌの場合はＡＮＯＶＡ）。タウの毒性は、内因性のｐ３８γおよびスレオニン－２０５（Ｔ２０５）のリン酸化レベルによって調節される。図２（ａ）は、ヒト野生型タウトランスジェニックマウス（Ａｌｚ１７）をｐ３８γノックアウト（ｐ３８γ^-/-）マウスと交配して、Ｔ２０５タウおよびその同族キナーゼｐ３８γでのタウリン酸化レベルの低下を達成したことを示す概略図である。図２（ｂ）は、Ａｌｚ１７．ｐ３８γ^+/+およびＡｌｚ１７．ｐ３８γ^-/-マウスのタウおよびｐ３８γ皮質切片の免疫蛍光染色を示す画像である。スケールバー、１０μｍ。図２（ｃ～ｅ）は、１０カ月齢のＡｌｚ１７．ｐ３８γ^+/+、Ａｌｚ１７．ｐ３８γ^-/-、ｐ３８γ^+/+、およびｐ３８γ^-/-対照マウスのモリス水迷路における記憶／認知能力を示す。（ｎ＝１０）。図２（ｃ）は、獲得段階を示す図である：６日目の代表的な水泳経路のトレースである。図２（ｄ）は、示された遺伝子型のマウスにおける１～６日目の逃避潜時を示すグラフである。図２（ｅ）は線形回帰勾配による学習曲線の比較を示すグラフである。図２（ｆ）は、示された遺伝子型のマウスにおける７日目のプローブ試験中のモリス水迷路四分円占有率を示すグラフである。Ｑ１、標的四分円。破線、ランダム占有のしきい値。データは平均値±Ｓ．Ｅ．Ｍ．として表される。＊＊ｐ＜０．０１＊ｐ＜０．０５ｎｓ、有意差がない。（ｄの場合は二元配置分散分析；ｅ、ｆの場合はＡＮＯＶＡ）。Ｔ２０５での内因性タウのリン酸化は興奮毒性シグナル伝達を調節する。図３（ａ）は、ゲノム編集によるｔａｕＴ２０５^AおよびｔａｕＴ２０５^Eマウスの作製を示す概略図である。図３（ｂ）は、野生型（ｔａｕＴ２０５^T/T）と比較したｔａｕＴ２０５^A/AおよびｔａｕＴ２０５^E/EマウスのＴ２０５残基をコードするタウ（Ｍａｐｔ）遺伝子のコドン編集の成功を示すＤＮＡシーケンシングクロマトグラムである。図３（ｃ）は、ｐ－Ｔ２０５特異的タウ抗体で検出された抗タウ（ｔａｕ５）抗体を使用した、ｔａｕＴ２０５^T/TおよびｔａｕＴ２０５^A/Aマウスの皮質溶解物からの内因性タウの免疫沈降を示す画像である。図３（ｄ～ｅ）は、ｔａｕＴ２０５^E/Eマウスが興奮毒性発作から保護されていることを示す。図３（ｄ）は発作潜時を示すグラフである。図３（ｅ）は、ペンチレンテトラゾール（ＰＴＺ；５０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）によって誘発されたｔａｕＴ２０５^T/TおよびｔａｕＴ２０５^E/Eマウスにおける平均発作重症度を示すグラフである。（ｎ＝２０～２２）。図３（ｆ～ｇ）は、ｔａｕＴ２０５^A/Aマウスが興奮毒性発作に対してより感受性が高いことを示す。図３（ｆ）は発作潜時を示すグラフである。図３（ｇ）は、ペンチレンテトラゾール（ＰＴＺ；３０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）によって誘発されたｔａｕＴ２０５^T/TおよびｔａｕＴ２０５^A/Aマウスにおける平均発作重症度を示すグラフである。（ｎ＝９～１２）。データは平均値±Ｓ．Ｅ．Ｍ．として表される。＊＊＊ｐ＜０．００１＊＊ｐ＜０．０１＊ｐ＜０．０５ｎｓ、有意差がない。（ｅの場合は二元配置分散分析；ｆの場合はＡＮＯＶＡ）。Ｔ２０５での内因性タウのリン酸化は、ＡＰＰ２３マウスの認知障害を調節する。図４（ａ）は、ＡＰＰ２３マウスをｔａｕＴ２０５^A/AまたはｔａｕＴ２０５^E/Eマウスと交配して、それぞれＡＰＰ２３．ｔａｕＴ２０５^A/AおよびＡＰＰ２３．ｔａｕＴ２０５^E/Eマウスを得たことを示す概略図である。図４（ｂ）は、ＡＰＰ２３．ｔａｕＴ２０５^T/TおよびＡＰＰ２３．ｔａｕＴ２０５^A/Aマウスの皮質におけるホスホ－Ｔ２０５タウおよびヒトＡＰＰ（６Ｅ１０）の免疫蛍光染色を示す画像である。ＤＡＰＩ、核マーカー。スケールバー、５０μｍ。図４（ｃ）は、ＡＰＰ２３．ｔａｕＴ２０５^T/T（ｎ＝７２）、ＡＰＰ２３．ｔａｕＴ２０５^A/A（ｎ＝５５）、およびＡＰＰ２３．ｔａｕＴ２０５^E/E（ｎ＝３８）の生存曲線を示すグラフである。図４（ｅ～ｈ）は、ＡＰＰ２３．ｔａｕＴ２０５^T/TおよびＡＰＰ２３．ｔａｕＴ２０５^A/A、ならびにｔａｕＴ２０５^T/TおよびｔａｕＴ２０５^A/Aマウスにおけるモリス水迷路の結果を示す。（ｎ＝６～１０）。図４（ｅ）は、獲得段階を示す図である：４日目の代表的な水泳経路のトレースである。図４（ｆ）は、１～６日目の学習中の逃避潜時を示すグラフである。図４（ｇ）は逃避潜時曲線の比較を示すグラフである。図４（ｈ）は、プローブ試行（７日目）中のモリス水迷路四分円占有率を示すグラフである。Ｑ１、標的四分円。破線、ランダムな占有しきい値。図４（ｉ－ｌ）は、ＡＰＰ２３．ｔａｕＴ２０５^T/TおよびＡＰＰ２３．ｔａｕＴ２０５^E/E、ならびにｔａｕＴ２０５^T/TおよびｔａｕＴ２０５^E/Eマウスにおけるモリス水迷路の結果を示す。（ｎ＝６～１０）。図４（ｉ）は獲得段階を示す図である：６日目のトレース。図４（ｊ）はＡＰＰ２３．ｔａｕＴ２０５^T/TおよびＡＰＰ２３．ｔａｕＴ２０５^E/E、ならびにｔａｕＴ２０５^T/TおよびｔａｕＴ２０５^E/Eマウスにおける１～６日目の学習中の逃避潜時を示すグラフである。図４（ｋ）は逃避潜時曲線の比較を示すグラフである。図４（ｌ）は、ＡＰＰ２３．ｔａｕＴ２０５^T/TおよびＡＰＰ２３．ｔａｕＴ２０５^E/E、ならびにｔａｕＴ２０５^T/TおよびｔａｕＴ２０５^E/Eマウスにおける７日目のプローブ試行結果中のモリス水迷路四分円占有率を示すグラフである。Ｑ１、標的四分円。破線、ランダムな占有しきい値。データは平均値±Ｓ．Ｅ．Ｍ．として表される。＊＊＊ｐ＜０．００１＊＊ｐ＜０．０１＊ｐ＜０．０５ｎｓ、有意差がない。（ｃ、ｄの場合はＭａｎｔｅｌ－Ｃｏｘ検定；ｆ、ｊの場合は二元配置分散分析；ｇ、ｈ、ｋ、ｌの場合はＡＮＯＶＡ）。タウのＴ２０５は、アルツハイマー病のマウスモデルにおいてｐ３８γ活性の保護効果を仲介するために必要である。図５（ａ）は、ＡＰＰ２３マウスにおけるｐ３８γの保護効果に対するＴ２０５の要件を試験するためにＡＰＰ２３．ｔａｕ^-/-．ｐ３８γ^CAマウスを取得するための交雑を示す概略図である。ＡＰＰ２３マウスをｐ３８γ^CAマウスおよびｔａｕ^-/-マウスと交配させた。図５（ｂ）は実験概略図である：ＡＰＰ２３．ｔａｕ^-/-．ｐ３８γ^CAマウスにおいて、生後０日目（Ｐ０）に頭蓋内にＡＡＶを注射して、ｔａｕＷＴまたはｔａｕＴ２０５ＡまたはｅＧＦＰ対照のニューロン発現を達成した。モリス水迷路におけるＡＡＶを介したタウの発現および学習／記憶のパフォーマンスは６ヶ月で対処された。図５（ｃ）は、示されたＡＡＶベクターを注射したＡＰＰ２３．ｔａｕ^-/-．ｐ３８γ^CAマウスの皮質切片におけるｐ３８γ^CA（ＨＡ）およびヒトタウの免疫蛍光染色を示す画像である。ＤＡＰＩ、核マーカー。スケールバー、５０μｍ。（ｎ＝５）。図５（ｄ～ｆ）は、ｔａｕＷＴまたはｔａｕＴ２０５Ａのニューロン発現を伴うＡＰＰ２３．ｔａｕ^-/-．ｐ３８γ^CAマウスでモリス水迷路を使用して評価された記憶／認知能力の結果を示す。（ｎラベルの凡例に示されている数字）。図５（ｄ）は獲得段階を示すグラフである：４日目の代表的な水泳経路のトレース。図５（ｅ）は獲得段階を示すグラフである：逃避潜時。図５（ｆ）は、モリス水迷路を示すグラフである。８日目のプローブ試行の結果。Ｑ１、標的四分円。破線、ランダムな占有しきい値。データは平均値±Ｓ．Ｅ．Ｍ．として表される。＊＊ｐ＜０．０１＊ｐ＜０．０５ｎｓ、有意差がない。（ｄの場合は二元配置分散分析；ｅ、ｆの場合はＡＮＯＶＡ）。ＡＡＶｐ３８γ^CAで処理されたＡＰＰ２３の認知検査の制御パラメーター。図６（ａ、ｂ）は、ＡＰＰ２３マウスの皮質（ａ）および海馬（ｂ）の免疫蛍光分析の画像であり、ニューロンにおける活性ｐ３８γのＡＡＶを介した発現を確認している。スケールバー、５０μｍ。ｐ３８γを欠くタウトランスジェニックマウスでは、タウの病状は増強されない。図７（ａ）は、Ａｌｚ１７．ｐ３８γ^+/+およびＡｌｚ１７．ｐ３８γ^-/-マウスのタウおよびｐ３８γ皮質切片の免疫蛍光染色を示す画像である。スケールバー、１０μｍ。図７（ｂ）は、１０カ月齢のＡｌｚ１７．ｐ３８γ^+/+、Ａｌｚ１７．ｐ３８γ^-/-、ｐ３８γ^+/+、およびｐ３８γ^-/-対照マウスにおける８日目のモリス水迷路視覚的刺激試験を示すグラフである。（ｎ＝１０）。図７（ｃ）は、示された遺伝子型を有するマウスにおける７日目のプローブ試行中のモリス水迷路四分円占有率を示すグラフである。Ｑ１、標的四分円。破線、ランダムな占有しきい値。図７（ｄ）は、２０カ月齢のＡｌｚ１７．ｐ３８γ^+/+およびＡｌｚ１７．ｐ３８γ^-/-の皮質切片の鍍銀染色を示す画像である。スケールバー、１０μｍ。図７（ｅ）は、Ａｌｚ１７．ｐ３８γ^+/+およびＡｌｚ１７．ｐ３８γ^-/-マウスの皮質切片におけるホスホ－Ｓ２１４タウ（ｐＳ２１４タウ）および神経フィラメント（ＮＦ）の免疫蛍光染色を示す画像である。スケールバー、５０μｍ。ｐ３８γ^CAマウスにおけるニューロンのｐ３８γおよびタウＴ２０５リン酸化のレベルの増加は、ヒトタウの毒性を増加させない。図８（ａ）は概略図である：ヒト野生型タウトランスジェニックマウス（Ａｌｚ１７）をｐ３８γ^CA（γＣＡ）マウスと交配させて、ニューロンで活性型Ｔ２０５タウキナーゼｐ３８γのレベルを上昇させた。図８（ｂ）は、ＨＡ（ｐ３８γ^CA）およびヒトタウのＡｌｚ１７．ｐ３８γ^CA、Ａｌｚ１７（１０カ月齢）の組織切片の免疫蛍光を示す画像である。ＤＡＰＩ、核マーカー。スケールバー、１０μｍ。（ｎ＝４）。図８（ｃ）は、ｐＴ２０５タウ、ＰＳＤ－９５、ｐ３８γ、ＨＡ（ｐ３８γ^CA）、およびＳＮＡＰ２５について、Ａｌｚ１７．ｐ３８γ^+/+、Ａｌｚ１７．ｐ３８γ^-/-、およびＡｌｚ１７．ｐ３８γ^CAの皮質由来の粗シナプトソーム（ＣＳ）由来の溶解物の免疫ブロットを示す画像である。Ａｌｚ１７．ｐ３８γ^+/+皮質由来の全脳溶解物（Ｗ）および非シナプトソーム画分（ＮＳ）は、濃縮されていない対照試料として示している。＃、非特異的バンド。（ｎ＝３～４）。図８（ｄ）は、ホスホ－Ｔ２０５タウ、ｐ３８γ、およびヒトタウについてＡｌｚ１７およびＡｌｚ１７．ｐ３８γ^CA脳（１０カ月齢）の皮質組織切片の免疫蛍光を示す画像である。スケールバー、１０μｍ。（ｎ＝４）。図８（ｅ）は、２０カ月齢のＡｌｚ１７およびＡｌｚ１７．ｐ３８γ^CAマウスの皮質切片の鍍銀染色を示す画像である。スケールバー、１００μｍ。（ｎ＝４）。図８（ｆ～ｈ）は、１０カ月齢のＡｌｚ１７、Ａｌｚ１７．ｐ３８γ^CA、ならびにｐ３８γ^CA、非トランスジェニック対照マウスでモリス水迷路を使用して評価された記憶／認知能力を示す。（ｎ＝１０）。図８（ｆ）は、モリス水迷路獲得段階を示すグラフである：示された遺伝子型を持つマウスの１～７日目の逃避潜時。図８（ｇ）は線形回帰勾配による学習曲線の比較を示すグラフである。図８（ｈ）は、示された遺伝子型を有するマウスにおける８日目のプローブ試行中のモリス水迷路四分円占有率を示すグラフである。データは平均値±Ｓ．Ｅ．Ｍ．として表される。＊＊ｐ＜０．０１＊ｐ＜０．０５ｎｓ、有意差がない。（ｅの場合は二元配置分散分析；ｆの場合はＡＮＯＶＡ）。ｔａｕＴ２０５のゲノム編集アレルを有するＡＰＰ２３マウスの認知検査のアミロイド負荷および対照パラメーター。図９（ａ）は、ＡＰＰ２３．ｔａｕＴ２０５^T/TおよびＡＰＰ２３．ｔａｕＴ２０５^A/Aマウスの皮質におけるホスホ－Ｔ２０５タウおよびヒトＡＰＰ（６Ｅ１０）の免疫蛍光染色を示す画像である。ＤＡＰＩ、核マーカー。スケールバー、５０μｍ。（ｎ＝６）。図９（ｂ）は、ＡＰＰ２３．ｔａｕＴ２０５^T/T（ｎ＝４０）、ＡＰＰ２３．ｔａｕＴ２０５^T/A（ｎ＝６２）、およびＡＰＰ２３．ｔａｕＴ２０５^A/A（ｎ＝５５）の生存曲線を示すグラフである。図９（ｃ）は、ＡＰＰ２３．ｔａｕＴ２０５^T/T（ｎ＝３２）、ＡＰＰ２３．ｔａｕＴ２０５^T/E（ｎ＝７１）、およびＡＰＰ２３．ｔａｕＴ２０５^E/E（ｎ＝３８）の生存曲線を示すグラフである。図９（ｄ）は、モリス水迷路獲得段階を示すグラフである。ＡＰＰ２３．ｔａｕＴ２０５^T/TおよびＡＰＰ２３．ｔａｕＴ２０５^A/A、ならびにｔａｕＴ２０５^T/TおよびｔａｕＴ２０５^A/Aマウスでの視覚的刺激試行。図９（ｅ）は、ＡＰＰ２３．ｔａｕＴ２０５^T/TおよびＡＰＰ２３．ｔａｕＴ２０５^E/E、ならびにｔａｕＴ２０５^T/TおよびｔａｕＴ２０５^E/Eマウスにおけるモリス水迷路の視覚的刺激試行を示すグラフである。図９（ｆ）は、モリス水迷路検索試験（ｒｅｔｒｉｅｖａｌｔｅｓｔ）を示すグラフである：ＡＰＰ２３．ｔａｕＴ２０５^T/TおよびＡＰＰ２３．ｔａｕＴ２０５^E/E、ならびにｔａｕＴ２０５^T/TおよびｔａｕＴ２０５^E/Eマウスでのプローブ試行中の遊泳速度。データは平均値±Ｓ．Ｅ．Ｍ．として表される。ニューロンのｔａｕＷＴまたはｔａｕＴ２０５Ａを発現するＡＡＶを伴うＡＡＰ２３．ｔａｕ^-/-．ｐ３８γ^CAにおけるウイルス導入遺伝子の免疫検出および認知検査の制御パラメーター。図１０（ａ）は、示されたＡＡＶを注射したＡＡＰ２３．ｔａｕ^-/-．ｐ３８γ^CAマウスの皮質切片におけるｐ３８γ^CA（ＨＡ）およびヒトタウの免疫蛍光染色を示す画像である。ＤＡＰＩ、核マーカー。スケールバー、５０μｍ。（ｎ＝５）。（ｂ）は、示されたＡＡＶを注射したＡＡＰ２３．ｔａｕ^-/-．ｐ３８γ^CAマウスの皮質におけるホスホ－Ｔ２０５タウおよびヒトＡＰＰ（６Ｅ１０）の免疫蛍光染色を示す画像である。ＤＡＰＩ、核マーカー。スケールバー、５０μｍ。（ｎ＝５）。図１０（ｃ～ｇ）は、ｔａｕＷＴまたはｔａｕＴ２０５Ａのニューロン発現を伴うＡＡＰ２３．ｔａｕ^-/-．ｐ３８γ^CAでモリス水迷路を使用して評価された記憶／認知能力を示す。（ｎはラベルの凡例に示されている）。図１０（ｃ、ｄ、ｅ）は、獲得段階を示すグラフである： AAVを介したｔａｕＷＴまたはｔａｕＴ２０５Ａの発現を伴う、すべての実験群（ｃ）、非トランスジェニックｔａｕ^-/-およびｔａｕ^-/-．ｐ３８γ^CAマウス（ｄ）、およびＡＰＰ２３．ｔａｕ^-/-およびＡＰＰ２３．ｔａｕ^-/-．ｐ３８γ^CAマウス（ｅ）の逃避潜時。図１０（ｆ）は、獲得段階を示すグラフである：すべての実験群の学習曲線の比較。図１０（ｇ）は、モリス水迷路を示すグラフである：８日目のプローブ試行の結果。Ｑ１、標的四分円。破線、ランダムな占有しきい値。データは平均値±Ｓ．Ｅ．Ｍ．として表される。＊＊ｐ＜０．０１＊ｐ＜０．０５ｎｓ、有意差がない。（ｃ、ｄ、ｅの場合は二元配置分散分析；ｆ、ｇの場合はＡＮＯＶＡ）。図１１は、野生型マウス、ＧＦＰを発現するＴａｕ５８変異マウス、または構成的に活性なｐ３８γ（Ｃａｐ３８γ）を発現するＴａｕ５８変異マウスがマウス迷路のオープンアームで費やした時間を示すグラフである。図１２は、野生型マウス、ＧＦＰを発現するＴａｕ５８変異マウス、または構成的に活性なｐ３８γ（Ｃａｐ３８γ）を発現するＴａｕ５８変異マウスが、マウス迷路のクローズドアームで費やした時間、およびクローズドアームのエントリーの数を示すグラフである。図１３は、マウス迷路の中央で費やした時間、および迷路内のマウス、野生型マウス、ＧＦＰを発現するＴａｕ５８変異マウス、または構成的に活性なｐ３８γ（Ｃａｐ３８γ）を発現するＴａｕ５８変異マウスが移動した距離を示すグラフである。図１４は、マチュアな野生型ヒトｐ３８γのアミノ酸配列を示す。図１５は、マチュアなヒトｐ３８γをコードするヌクレオチド配列の一例を示す。図１６は、ｐ３８γ（Ｄ１７９Ａ）（ｐ３８γ^CA）の構成的に活性な変異体の一例のアミノ酸配列を示す。図１７は、マチュアな野生型の全長ヒトタウのアミノ酸配列を示す。タウ内のアミノ酸配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲは太字で、Ｔ２０５とＳ４２２には下線が引かれている。図１８は、野生型タウの２０５位のスレオニンがグルタミン酸（Ｔ２０５Ｅ）に変化したタウのホスホミメティックの例のアミノ酸配列を示す。図１９は、示された抗体でプローブされたＴＡＵ５８／２マウス由来のＡＡＶ－ｐ３８ｇ^CAおよび対照（ＡＡＶ－ＧＦＰ）で処理された脳抽出物のウエスタンブロットの画像である。

詳細な説明
本発明は、タウオパチーを治療する方法に関する。タウオパチーは、対象の脳のニューロンにおけるタウタンパク質の凝集に関連する状態であり、通常、タウタンパク質から形成される神経原線維変化（ｎｅｕｒｏｆｉｂｒｉｌｌａｒｙｔａｎｇｌｅ）等の神経原線維沈着（ｎｅｕｒｏｆｉｂｒｉｌｌａｒｙｄｅｐｏｓｉｔ）に関連する。タウオパチーでは、タウタンパク質が時間の経過とともに凝集し、タウを含む神経原線維の沈着物が形成され、最終的に神経細胞死を引き起こすと考えられている。通常、タウオパチーは認知機能低下に関連する神経変性疾患である。タウオパチーの例は、アルツハイマー病、前頭側頭葉認知症（ｆｒｏｎｔｏｔｅｍｐｏｒａｌｌｏｂａｒｄｅｍｅｎｔｉａ）、大脳皮質基底核変性症、進行性核上性麻痺、原発性加齢性タウオパチー、慢性外傷性脳症、１７番染色体に連鎖しパーキンソニズムを伴う前頭側頭型認知症（ｆｒｏｎｔｏｔｅｍｐｏｒａｌｄｅｍｅｎｔｉａｗｉｔｈｐａｒｋｉｎｓｏｎｉｓｍｌｉｎｋｅｄｔｏｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ１７）、ピック病、球状グリア性タウオパチー（ｇｌｏｂｕｌａｒｇｌｉａｌｔａｕｏｐａｔｈｙ）、パーキンソン病を含む。

アルツハイマー病（ＡＤ）およびその他の神経変性疾患の初期段階では、ＰＳＤ－９５／タウ／ＦＹＮ受容体複合体等のタウ依存性シグナル伝達複合体の刺激によってニューロンの興奮毒性が引き起こされると考えられている。本発明者らは、特定の部位でのタウのリン酸化がＰＳＤ－９５／タウ／ＦＹＮ受容体複合体の破壊を引き起こし、それにより興奮毒性およびＰＳＤ－９５／タウ／ＦＹＮシグナル伝達複合体によって媒介される神経変性状態のさらなる進行を防ぐことを以前に示した。

しかしながら、進行したＡＤおよびその他のタウオパチーでは、タウ毒性はＰＳＤ－９５／タウ／ＦＹＮ受容体複合体等のタウ依存性シグナル伝達複合体を介したシグナル伝達とは無関係であり、ニューロンの毒性および死は凝集した過剰リン酸化タウによって媒介されると考えられている。本発明以前は、タウ凝集が発生するとタウ凝集の影響を停止または元に戻すことができず、その結果、タウ凝集が発生するとニューロンの損傷および死が避けられないため、進行性ＡＤおよび他のタウオパチーは治療できないと考えられていた。

本発明者らは、タウの最長のヒトアイソフォーム（Ｔ２０５）の２０５位のスレオニン残基等のタウの配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲ（配列番号７）におけるスレオニンのリン酸化を促進すること、または対象のニューロンにおいて、野生型タウをＴ２０５でリン酸化されたタウのホスホミメティックを発現するよう変異させると、タウオパチーの認知機能が改善されることを見出した。本明細書でタウに使用されるアミノ酸番号付けは、一般に２Ｎ４Ｒタウ（および本明細書では完全長ヒトタウとも呼ばれる）と呼ばれる、４４１アミノ酸を有するタウの最長のヒトアイソフォームのアミノ酸番号付けに基づく。タウの最長のヒトアイソフォーム（２Ｎ４Ｒ）のアミノ酸配列を図１７に示し、配列番号１で表す。タウのアミノ酸番号付けは、４４１アミノ酸を含む完全長のヒトタウアイソフォーム（配列番号１）に基づく。

実施例に記載されるように、本発明者らは、２０５位（スレオニン）でのヒト野生型タウのリン酸化が、進行したＡＤのマウスモデルにおける認知機能を改善し、場合によってはタウオパチーの影響を元に戻すことができることを見出した。

実施例にさらに記載されているように、本発明者らは、タウオパチーの症状がタウの凝集のみに起因する場合でも、タウオパチーの症状を軽減または元に戻すことができることを見出した。これに関して、本発明者らは、タウ凝集が疾患の進行に寄与する唯一の因子であるマウスモデルにおいて、Ｔ２０５のリン酸化によってタウ凝集に起因する効果を元に戻す、または低減することができることを示した。

したがって、一態様では、対象におけるタウオパチーを治療または予防する方法であって、対象に有効量の
（ａ）全長ヒトタウの２０５位のスレオニン等の、タウのアミノ酸配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲのスレオニンでのタウのリン酸化を促進する；および／または
（ｂ）リン酸化タウのホスホミメティックを導入する、ここで、リン酸化タウは、全長ヒトタウの２０５位のスレオニン等の、タウのアミノ酸配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲのスレオニンでのタウのリン酸化を促進する、
薬剤を投与する工程を含む、方法が提供されている。

別の態様では、タウオパチーに関連する認知障害に罹患している対象において認知能力を改善する方法であって、対象に有効量の
（ａ）全長ヒトタウの２０５位のスレオニン等の、タウの配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲのスレオニンでのタウのリン酸化を促進する；および／または
（ｂ）リン酸化タウのホスホミメティックを導入する、ここで、リン酸化タウは、全長ヒトタウの２０５位のスレオニン等の、タウの配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲのスレオニンでリン酸化されているタウである、
薬剤を投与する工程を含む、方法が提供されている。

認知能力は、情報を処理、取得、および／または保存する脳の能力である。認知能力の例は記憶である。一実施形態は、タウオパチーに関連する認知障害に罹患している対象の記憶を改善する方法であって、対象に有効量の
（ａ）全長ヒトタウの２０５位のスレオニン等の、タウの配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲのスレオニンでのタウのリン酸化を促進する；および／または
（ｂ）全長ヒトタウの２０５位のスレオニン等の、タウの配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲのスレオニンでリン酸化されているタウタンパク質のホスホミメティックを導入する、
薬剤を投与する工程を含む、方法を提供する。

認知能力の改善は、本明細書に記載の方法で治療する前の対象の認知能力と比較した、対象の認知能力の改善または増加または増強である。記憶の改善は、本明細書に記載の方法で治療する前の対象の記憶と比較した、対象の記憶の改善または増加または増強である。

実施例に記載されるように、本発明者らはさらに、不溶性または凝集タウ中のリン酸化セリン４２２（ｐＳ４２２）のレベルが、タウオパチーのマウスモデルにおける未処理マウスと比較して、活性化ｐ３８γ（全長ヒトタウにおけるＴ２０５のリン酸化を促進する）で処理されたマウスにおいて減少することを見出した。

したがって、一態様は、タウオパチーに罹患している対象においてヒトタウの４２２位でのセリンのリン酸化を低減する方法であって、対象に有効量の
（ａ）全長ヒトタウの２０５位のスレオニン等の、タウの配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲのスレオニンでのタウのリン酸化を促進する；および／または
（ｂ）リン酸化タウのホスホミメティックを導入する、ここで、リン酸化タウは、全長ヒトタウの２０５位のスレオニン等の、タウの配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲのスレオニンでリン酸化されているタウである、
薬剤を投与する工程を含む、方法を提供する。

別の態様は、対象におけるヒトタウの４２２位でのセリンのリン酸化に関連する疾患または状態を治療または予防する方法であって、対象に有効量の
（ａ）全長ヒトタウの２０５位のスレオニン等の、タウの配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲのスレオニンでのタウのリン酸化を促進する；および／または
（ｂ）リン酸化タウのホスホミメティックを導入する、ここで、リン酸化タウは、全長ヒトタウの２０５位のスレオニン等の、タウの配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲのスレオニンでリン酸化されているタウである、
薬剤を投与する工程を含む、方法を提供する。

ヒトタウの４２２位でのセリンのリン酸化は、神経原線維変化の形成に関連している。

したがって、別の態様は、対象のニューロンにおける神経原線維変化を低減または予防する方法であって、有効量の
（ａ）全長ヒトタウの２０５位のスレオニン等の、タウの配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲのスレオニンでのタウのリン酸化を促進する；および／または
（ｂ）リン酸化タウのホスホミメティックを導入する、ここで、リン酸化タウは、全長ヒトタウの２０５位のスレオニン等の、タウの配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲのスレオニンでリン酸化されているタウである、
薬剤を投与する工程を含む、方法を提供する。

一実施形態では、方法は、タウのアミノ酸配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲにおけるスレオニンでのタウのリン酸化を促進する有効量の薬剤を対象に投与する工程を含む。一実施形態では、タウの配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲにおけるスレオニンは、全長ヒトタウ（Ｔ２０５）の２０５位のスレオニンである。

一実施形態では、方法は、対象のニューロン、通常は対象の脳のニューロンにおいて、タウのアミノ酸配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲのスレオニン、たとえば、全長ヒトタウの２０５位のスレオニンでのタウのリン酸化を促進する有効量の薬剤を投与する工程を含む。

一実施形態では、対象は、Ｔ２０５でリン酸化されたタウを上昇させる有効量の薬剤を投与することによって治療される。

一実施形態では、対象は、タウｐＴ２０５のホスホミメティックの発現を引き起こす薬剤を投与することによって治療される。

全長ヒトタウの２０５位のスレオニンでリン酸化されたタウは、本明細書ではタウｐＴ２０５とも呼ばれる。

一実施形態では、対象は、野生型タウ、典型的には内因性野生型タウをコードする一つまたは複数の遺伝子をタウｐＴ２０５のホスホミメティックをコードする遺伝子に変換する有効量の薬剤を投与することによって治療される。一実施形態では、タウｐＴ２０５のホスホミメティックは、ＸがＥまたはＤであるアミノ酸配列ＳＳＰＧＳＰＧＸＰＧＳＲＳＲ（配列番号８）を含むタウである。一実施形態では、タウｐＴ２０５のホスホミメティックは、Ｔ２０５ＥまたはＴ２０５Ｄである。

本明細書で使用される場合、リン酸化タウのホスホミメティックは、リン酸化野生型タウと同一または実質的に同じように機能するタウのバリアントである。したがって、ｐＴ２０５のホスホミメティックは、２０５位でスレオニンがリン酸化されている全長野生型タウと同一または同様の効果を示すタウのバリアントである。本明細書で使用される場合、タウのバリアントは、野生型タウ、典型的には完全長の野生型タウ（たとえば、配列番号１）の、一つまたは複数のアミノ酸の置換、総大丹生、まあは欠失を含むタウタンパク質である。

タウｐＴ２０５のホスホミメティックは、必ずしもＴ２０５での変異を含まず、タウの他の部位での一つまたは複数のアミノ酸残基の置換、欠失または挿入を含んでもよく、その結果、変異したタウがＴ２０５Ｅと同一または同様の効果を有してもよいことが理解される。

薬剤は、たとえば、核酸、核酸アナログ、タンパク質、ペプチド、または小分子、またはそれらの組み合わせを含んでもよい。通常、薬剤の投与は、対象のニューロンに薬剤を導入する。より典型的には、薬剤の投与は、対象の脳のニューロンに薬剤を導入する。

一部の実施形態では、薬剤は、対象のニューロンに導入される核酸を含む。一部の実施形態では、核酸はニューロンにおいて転写される。一部の実施形態では、核酸は、ニューロンにおいて転写および翻訳される。一部の実施形態では、核酸はＤＮＡを含む。一部の実施形態では、核酸はＲＮＡを含む。

一部の実施形態では、薬剤は、血液脳関門を通過することができるか、または血液脳関門を通過するように処方することができる。

一実施形態では、タウオパチーは、タウ凝集によって媒介されるアルツハイマー病である。

一実施形態では、タウオパチーは、タウ凝集によって媒介される前頭側頭葉認知症（ｆｒｏｎｔｏｔｅｍｐｏｒａｌｌｏｂａｒｄｅｍｅｎｔｉａ）である。

一実施形態では、タウオパチーは大脳皮質基底核変性症である。

一実施形態では、タウオパチーは進行性核上性麻痺である。

一実施形態では、タウオパチーは原発性加齢性タウオパチーである。

一実施形態では、タウオパチーは慢性外傷性脳症である。

一実施形態では、タウオパチーは、１７番染色体に連鎖しパーキンソニズムを伴う前頭側頭型認知症（ｆｒｏｎｔｏｔｅｍｐｏｒａｌｄｅｍｅｎｔｉａｗｉｔｈｐａｒｋｉｎｓｏｎｉｓｍｌｉｎｋｅｄｔｏｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ１７）である。

一実施形態では、タウオパチーはピック病である。

一実施形態では、タウオパチーは球状グリア性タウオパチー（ｇｌｏｂｕｌａｒｇｌｉａｌｔａｕｏｐａｔｈｙ）である。

一実施形態では、タウオパチーはパーキンソン病である。

本明細書で使用される場合、「対象」は哺乳動物である。哺乳動物は、ヒト、非ヒト霊長類、ヒツジ、マウス、ラット、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ブタ、またはタウオパチーに罹患する可能性のある任意の他の哺乳動物であってもよい。通常、対象はヒトである。

一実施形態では、対象は、対象のニューロンにおいて、有効量のｐ３８γ活性、またはｐ３８γのバリアントの活性を上昇させる薬剤を投与することによって治療される。ｐ３８γは、ＥＲＫ６、ＳＡＰＫ３、およびＭＡＰＫ１２とも呼ばれ、マイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＡＰキナーゼ）である。一実施形態では、ｐ３８γは哺乳動物由来である。たとえば、ｐ３８γは、ヒト、マウス、イヌ、ネコ、ブタ、ウシ、ラット、非ヒト霊長類、ヤギ、ヒツジに由来していてもよい。通常、ｐ３８γはヒトｐ３８γである。野生型ｐ３８γは、モチーフＴＧＹのチロシンおよびスレオニン残基のリン酸化によって活性化される。野生型ｐ３８γは、活性化後にタウをリン酸化する。ｐ３８γの活性化は、ＭＡＰキナーゼキナーゼＭＫＫ３およびＭＫＫ６によって行われ、ＭＡＰＫキナーゼＭＡＰ３Ｋによるリン酸化によって活性化される。

実施例に記載されているように、本発明者らは、ｐ３８γによるＴ２０５での野生型ヒトタウのリン酸化が、進行性アルツハイマー病のマウスモデルにおいて認知機能の改善をもたらすことを見出した。本発明者らは、進行性ＡＤに罹患しているマウスのニューロンにｐ３８γ、またはｐ３８γの構成的に活性なバリアントを導入することにより、記憶が改善されることを示した。

一実施形態は、対象のニューロンにおいて、有効量のｐ３８γ活性、またはｐ３８γのバリアントの活性を上昇させる薬剤を投与する工程を含む、対象のタウオパチーを治療または予防する方法を提供する。

一実施形態は、タウオパチーに関連する認知障害に罹患している対象の認知能力を改善する方法であって、対象のニューロンにおいて、有効量のｐ３８γ活性またはｐ３８γのバリアントの活性を上昇させる薬剤を投与する工程を含む、方法を提供する。

一実施形態は、タウオパチーに罹患している対象において、ヒトタウの４２２位でのセリンのリン酸化を低減する方法であって、対象のニューロンにおけるｐ３８γ活性またはｐ３８γのバリアントの活性を上昇させる有効量の薬剤を投与する工程を含む、方法を提供する。

一実施形態は、対象におけるヒトタウの４２２位でのセリンのリン酸化に関連するタウオパチーを治療または予防する方法であって、対象のニューロンにおけるｐ３８γ活性またはｐ３８γのバリアントの活性を上昇させる有効量の薬剤を投与する工程を含む、方法を提供する。

一実施形態は、対象のニューロンにおけるタウ凝集を低減または予防する方法であって、対象のニューロンにおけるｐ３８γ活性またはｐ３８γのバリアントの活性を上昇させる有効量の薬剤を投与することを含む、方法を提供する。

一実施形態は、対象のニューロンにおける神経原線維変化を低減または防止する方法であって、対象のニューロンにおけるｐ３８γ活性またはｐ３８γのバリアントの活性を上昇させる有効量の薬剤を投与することを含む、方法を提供する。

ニューロンにおけるｐ３８γ活性またはｐ３８γのバリアントの活性を上昇させる薬剤は、以下のような薬剤であってもよい：（ａ）ｐ３８γの量、通常はニューロン内の活性ｐ３８γの量を上昇させる；および／または（ｂ）ｐ３８γのバリアントの量、通常はニューロン内の活性のあるｐ３８γのバリアントの量を上昇させる；および／または（ｃ）ニューロン内のｐ３８γ活性化の量を上昇させる；および／または（ｄ）バリアントが活性のあるバリアントでない場合、ニューロン内のｐ３８γのバリアントの活性化の量を上昇させる。本明細書で使用される場合、「ｐ３８γ活性」は、タウの配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲのスレオニンでタウをリン酸化し、野生型全長ヒトタウの場合、Ｔ２０５でタウをリン酸化する活性化ｐ３８γの活性である。「ｐ３８γのバリアントの活性」とは、ｐ３８γのバリアントの活性を指す。これは、ｐ３８γの活性と同一であるか、実質的に類似している。活性化せずにｐ３８γ活性を示す場合もあれば（たとえば、構成的に活性なバリアント等の活性バリアント）、または活性化後にｐ３８γ活性を示す場合もある。治療前のニューロンのｐ３８γ活性の量と比較して、治療後のニューロンのｐ３８γ活性の量が増加すると、ニューロンのｐ３８γ活性が上昇する。治療前のニューロンのバリアントの活性量と比較して、治療後のニューロンのバリアントの活性量が増加すると、ニューロンのｐ３８γのバリアントの活性は上昇する。ｐ３８γ活性、またはｐ３８γのバリアントの活性は、以下を上昇させる有効量の薬剤を投与することによって上昇する可能性がある：
（ａ）内因性ｐ３８γの発現（転写および／または翻訳）の増加等、ニューロン内の内因性ｐ３８γの量；および／または
（ｂ）ニューロン内の外因性ｐ３８γの量；および／または
（ｃ）ニューロン内のｐ３８γのバリアントの量；および／または
（ｄ）ニューロン内の内因性ｐ３８γ、外因性ｐ３８γ、および／またはｐ３８γのバリアントの活性化。

一実施形態では、ｐ３８γ活性、またはｐ３８γのバリアントの活性は、ニューロンにおいて外因性ｐ３８γまたはそのバリアントの量を上昇させる有効量の薬剤を投与することによって上昇する。外因性ｐ３８γまたはそのバリアントの量は、ニューロンにｐ３８γまたはそのバリアントを導入することによって、またはニューロンにｐ３８γまたはそのバリアントを発現することができる核酸を導入することによって上昇させることができる。

したがって、一実施形態では、対象のニューロンにおいて、ｐ３８γ活性、またはｐ３８γのバリアントの活性を上昇させる薬剤は、ｐ３８γタンパク質またはそのバリアント、または対象のニューロンにおいてｐ３８γまたはそのバリアントを発現することができる核酸を含んでもよい。本明細書に記載の実施例で使用される完全長野生型ヒトｐ３８γをコードする核酸配列および完全長野生型ヒトｐ３８γのアミノ酸配列を図１５（配列番号２）および図１４（配列番号３）に示す。ヒトｐ３８γの天然に存在するアイソフォームおよびバリアントも知られている（例：Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ＿００１２９０１８１、ＣＲ４５６５１５）。Ｔ２０５でタウをリン酸化するｐ３８γの天然アイソフォームまたはバリアントを、本明細書に記載の方法で使用できることが想定されている。

一実施形態では、ｐ３８γ活性、またはｐ３８γのバリアントの活性を上昇させる薬剤は、ｐ３８γまたはそのバリアントをコードする核酸を含む。当業者は、ｐ３８γまたはそのバリアントのアミノ酸配列をコードする適切な核酸配列を決定することができるであろう。たとえば、ｐ３８γをコードする核酸は、ヒトｐ３８γの野生型コード配列（配列番号３）と約６０％～１００％の範囲同一の核酸配列を含んでもよい。たとえば、ｐ３８γをコードする核酸は、標準的なパラメーターを使用して本明細書に記載のアラインメントプログラムの１つを使用して、ｐ３８γの野生型コード配列に対して少なくとも６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を有してもよい。当業者は、これらの値を適切に調整して、コドン縮重、読み枠の位置決め（ｒｅａｄｉｎｇｆｒａｍｅｐｏｓｉｔｉｏｎｉｎｇ）等を考慮に入れることにより、ヌクレオチド配列によってコードされるタンパク質の対応する同一性を決定することができることを認識するであろう。

一実施形態では、ｐ３８γ活性、またはｐ３８γのバリアントの活性を上昇させる薬剤は、ｐ３８γのバリアントを含む。一実施形態では、ｐ３８γ活性、またはｐ３８γのバリアントの活性を上昇させる薬剤は、ｐ３８γのバリアントをコードする核酸を含む。本明細書で使用される場合、ｐ３８γのバリアントは、一つまたは複数のアミノ酸置換、付加または欠失によって野生型ヒトｐ３８γタンパク質とは異なり、配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＳＲＳＲのスレオニンでタウをリン酸化することができる、たとえばスレオニン残基Ｔ２０５で野生型ヒトタウをリン酸化することができるタンパク質である。ｐ３８γのバリアントは、残基Ｔ２０５で野生型ヒトタウをリン酸化する。一実施形態では、ｐ３８γのバリアントは、野生型ヒトｐ３８γのアミノ酸配列と少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ｐ３８γのバリアントは、配列番号３で表されるアミノ酸配列と少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む。

本明細書で使用される場合、ポリペプチドに関して「％同一性」、またはポリペプチドの「アミノ酸配列と％同一」は、本明細書で使用される場合、「％同一性」は、配列比較アルゴリズムまたは目視検査によって測定される、特定の比較ウィンドウにわたって最大の対応のために整列されたときに同じである２つの配列中の残基のパーセンテージを指す。

２つのポリペプチド間の％同一性を決定するための配列比較アルゴリズムは、当技術分野で知られている。このようなアルゴリズムの例は、ＭｙｅｒｓａｎｄＭｉｌｌｅｒ（１９８８）のアルゴリズム；Ｓｍｉｔｈｅｔａｌ．（１９８１）のローカルホモロジーアルゴリズム；ＮｅｅｄｌｅｍａｎａｎｄＷｕｎｓｃｈ（１９７０）のホモロジーアルゴリズム；ＰｅａｒｓｏｎａｎｄＬｉｐｍａｎ（１９８８）の類似検索方法（ｓｅａｒｃｈ－ｆｏｒ－ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ－ｍｅｔｈｏｄ）；およびＫａｒｌｉｎａｎｄＡｌｔｓｃｈｕｌ（１９９３）のように改変されたＫａｒｌｉｎａｎｄＡｌｔｓｃｈｕｌ（１９９０）のアルゴリズムである。２つのポリペプチド間の％同一性を決定するためのこれらのアルゴリズムのコンピューター実装は、たとえば、以下を含む：ＣＬＵＳＴＡＬ（Ｉｎｔｅｌｌｉｇｅｎｅｔｉｃｓ、カリフォルニア州マウンテンビューから入手可能）（Ｐｅａｒｓｏｎｅｔａｌ．（１９９４））．；ＷｉｓｃｏｎｓｉｎＧｅｎｅｔｉｃｓＳｏｆｔｗａｒｅＰａｃｋａｇｅ、バージョン８（ＧｅｎｅｔｉｃｓＣｏｍｐｕｔｅｒＧｒｏｕｐ（ＧＣＧ）、５７５ＳｃｉｅｎｃｅＤｒｉｖｅ、米国ウィスコンシン州マディソンから入手可能）のＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）およびＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＢＬＡＳＴ、ＦＡＳＴＡ、およびＴＦＡＳＴＡ。

一部の実施形態では、ｐ３８γのバリアントは、ｐ３８γの一部を含んでもよい。

一部の実施形態では、ｐ３８γのバリアントは、ｐ３８γの一部を含んでもよいが、そうでなければ、野生型ｐ３８γとは異なる。これに関して、本発明者らは、ｐ３８γのバリアントが、ｐ３８γの相互作用モチーフが、ＭＡＰキナーゼまたは他のセリン／スレオニンキナーゼなどの他のキナーゼ、またはそれらの活性を改変するための変異を有する他のキナーゼのバリアントの部分に融合されているキメラｐ３８γタンパク質を含み得ることを想定している。たとえば、ｐ３８γのバリアントは、ｐ３８α、ｐ３８βおよびｐ３８δ、またはそれらの活性を改変するための変異を有するｐ３８α、ｐ３８βおよびｐ３８δのバリアントからなる群から選択されるキナーゼのＮ末端部分に融合したｐ３８γのカルボキシ末端部分を含み得る。一実施形態では、ｐ３８γのバリアントはキメラｐ３８γである。様々な実施形態では、キメラｐ３８γは、以下からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む：ＥＴＰＬ（配列番号９）、ＫＥＴＰＬ（配列番号１０）、ＳＫＥＴＰＬ（配列番号１１）、ＶＳＫＥＴＰＬ（配列番号１２）、ＲＶＳＫＥＴＰＬ（配列番号１３）、ＡＲＶＳＫＥＴＰＬ（配列番号１４）、ＧＡＲＶＳＫＥＴＰＬ（配列番号１５）、ＬＧＡＲＶＳＫＥＴＰＬ（配列番号１６）、ＱＬＧＡＲＶＳＫＥＴＰＬ（配列番号１７）、ＲＱＬＧＡＲＶＳＫＥＴＰＬ（配列番号１８）、ＰＲＱＬＧＡＲＶＳＫＥＴＰＬ（配列番号１９）、ＰＰＲＱＬＧＡＲＶＳＫＥＴＰＬ（配列番号２０）、ＫＰＰＲＱＬＧＡＲＶＳＫＥＴＰＬ（配列番号２１）、ＦＫＰＰＲＱＬＧＡＲＶＳＫＥＴＰＬ（配列番号２２）、ＳＦＫＰＰＲＱＬＧＡＲＶＳＫＥＴＰＬ（配列番号２３）、ＬＳＦＫＰＰＲＱＬＧＡＲＶＳＫＥＴＰＬ（配列番号２４）、ＶＬＳＦＫＰＰＲＱＬＧＡＲＶＳＫＥＴＰＬ（配列番号２５）、ＥＶＬＳＦＫＰＰＲＱＬＧＡＲＶＳＫＥＴＰＬ（配列番号２６）、ＫＥＶＬＳＦＫＰＰＲＱＬＧＡＲＶＳＫＥＴＰＬ（配列番号２７）、ＹＫＥＶＬＳＦＫＰＰＲＱＬＧＡＲＶＳＫＥＴＰＬ（配列番号２８）、ＴＹＫＥＶＬＳＦＫＰＰＲＱＬＧＡＲＶＳＫＥＴＰＬ（配列番号２９）、ＶＴＹＫＥＶＬＳＦＫＰＰＲＱＬＧＡＲＶＳＫＥＴＰＬ（配列番号３０）、ＲＶＴＹＫＥＶＬＳＦＫＰＰＲＱＬＧＡＲＶＳＫＥＴＰＬ（配列番号３１）、ＫＲＶＴＹＫＥＶＬＳＦＫＰＰＲＱＬＧＡＲＶＳＫＥＴＰＬ（配列番号３２）、ＥＴＡＬ（配列番号３３）、ＫＥＴＡＬ（配列番号３４）、ＰＫＥＴＡＬ（配列番号３５）、ＶＰＫＥＴＡＬ（配列番号３６）、ＲＶＰＫＥＴＡＬ（配列番号３７）、ＡＲＶＰＫＥＴＡＬ（配列番号３８）、ＧＡＲＶＰＫＥＴＡＬ（配列番号３９）、ＬＧＡＲＶＰＫＥＴＡＬ（配列番号４０）、ＱＬＧＡＲＶＰＫＥＴＡＬ（配列番号４１）、ＲＱＬＧＡＲＶＰＫＥＴＡＬ（配列番号４２）、ＰＲＱＬＧＡＲＶＰＫＥＴＡＬ（配列番号４３）、ＰＰＲＱＬＧＡＲＶＰＫＥＴＡＬ（配列番号４４）、ＫＰＰＲＱＬＧＡＲＶＰＫＥＴＡＬ（配列番号４５）、ＦＫＰＰＲＱＬＧＡＲＶＰＫＥＴＡＬ（配列番号４６）、ＳＦＫＰＰＲＱＬＧＡＲＶＰＫＥＴＡＬ（配列番号４７）、ＬＳＦＫＰＰＲＱＬＧＡＲＶＰＫＥＴＡＬ（配列番号４８）、ＶＬＳＦＫＰＰＲＱＬＧＡＲＶＰＫＥＴＡＬ（配列番号４９）、ＥＶＬＳＦＫＰＰＲＱＬＧＡＲＶＰＫＥＴＡＬ（配列番号５０）、ＫＥＶＬＳＦＫＰＰＲＱＬＧＡＲＶＰＫＥＴＡＬ（配列番号５１）、ＹＫＥＶＬＳＦＫＰＰＲＱＬＧＡＲＶＰＫＥＴＡＬ（配列番号５２）、ＴＹＫＥＶＬＳＦＫＰＰＲＱＬＧＡＲＶＰＫＥＴＡＬ（配列番号５３）、ＶＴＹＫＥＶＬＳＦＫＰＰＲＱＬＧＡＲＶＰＫＥＴＡＬ（配列番号５４）、ＲＶＴＹＫＥＶＬＳＦＫＰＰＲＱＬＧＡＲＶＰＫＥＴＡＬ（配列番号５５）、およびＫＲＶＴＹＫＥＶＬＳＦＫＰＰＲＱＬＧＡＲＶＰＫＥＴＡＬ（配列番号５６）。

一実施形態では、ｐ３８γのバリアントは、ｐ３８γの活性バリアントである。ｐ３８γの活性バリアントは、ｐ３８γ活性を示すためにＭＡＰキナーゼキナーゼＭＫＫ３およびＭＫＫ６による活性化を必要としないバリアントである。一実施形態では、ｐ３８γの活性バリアントは、ｐ３８γの構成的に活性なバリアントである。ｐ３８γの構成的に活性なバリアントは、連続的に活性であり、したがって、ＭＡＰキナーゼキナーゼＭＫＫ３およびＭＫＫ６による活性化を必要としないｐ３８γのバリアントである。典型的には、構成的に活性なバリアントは、連続的な活性をもたらす一つまたは複数のアミノ酸置換を含む。様々な実施形態では、ｐ３８ｇの構成的に活性なバリアントは、以下のアミノ酸配列を含む：
（ａ） ARQAASEMTGY （配列番号５７）；
（ｂ） LARQAASEMTGYV （配列番号５８）
（ｃ） DFGLARQAASEMTGYVVTRW (配列番号５９）
（ｄ） VNEDCELKILDFGLARQAASEMTGYVVTRWYRAPEVILNW (配列番号６０）
（ｅ） HRDLKPGNLAVNEDCELKILDFGLARQAASEMTGYVVTRWYRAPEVILNWMRYTQTVDIW （配列番号６１）；
（ｆ） LRYIHAAGIIHRDLKPGNLAVNEDCELKILDFGLARQAASEMTGYVVTRWYRAPEVILNWMRYTQTVDIWSVGCIMAEMI （配列番号６２）；
（ｇ） QFLVYQMLKGLRYIHAAGIIHRDLKPGNLAVNEDCELKILDFGLARQAASEMTGYVVTRWYRAPEVILNWMRYTQTVDIWSVGCIMAEMITGKTLFKGSD （配列番号６３）；
（ｈ） KHEKLGEDRIQFLVYQMLKGLRYIHAAGIIHRDLKPGNLAVNEDCELKILDFGLARQAASEMTGYVVTRWYRAPEVILNWMRYTQTVDIWSVGCIMAEMITGKTLFKGSDHLDQLKEIMK （配列番号６４）；
（ｉ） FMGTDLGKLMKHEKLGEDRIQFLVYQMLKGLRYIHAAGIIHRDLKPGNLAVNEDCELKILDFGLARQAASEMTGYVVTRWYRAPEVILNWMRYTQTVDIWSVGCIMAEMITGKTLFKGSDHLDQLKEIMKVTGTPPAEFV （配列番号６５）；
（ｊ） DFTDFYLVMPFMGTDLGKLMKHEKLGEDRIQFLVYQMLKGLRYIHAAGIIHRDLKPGNLAVNEDCELKILDFGLARQAASEMTGYVVTRWYRAPEVILNWMRYTQTVDIWSVGCIMAEMITGKTLFKGSDHLDQLKEIMKVTGTPPAEFVQRLQSDEAKN （配列番号６６）；
（ｋ） DVFTPDETLDDFTDFYLVMPFMGTDLGKLMKHEKLGEDRIQFLVYQMLKGLRYIHAAGIIHRDLKPGNLAVNEDCELKILDFGLARQAASEMTGYVVTRWYRAPEVILNWMRYTQTVDIWSVGCIMAEMITGKTLFKGSDHLDQLKEIMKVTGTPPAEFVQRLQSDEAKNYMKGLPELEK （配列番号６７）；
（ｌ） MRHENVIGLLDVFTPDETLDDFTDFYLVMPFMGTDLGKLMKHEKLGEDRIQFLVYQMLKGLRYIHAAGIIHRDLKPGNLAVNEDCELKILDFGLARQAASEMTGYVVTRWYRAPEVILNWMRYTQTVDIWSVGCIMAEMITGKTLFKGSDHLDQLKEIMKVTGTPPAEFVQRLQSDEAKNYMKGLPELEKKDFASILTNA （配列番号６８）。

一実施形態では、ｐ３８γの構成的に活性なバリアントは、野生型ヒトｐ３８γのＤ１７９Ａのアミノ酸置換を含む。ｐ３８γの構成的に活性なバリアントの例のアミノ酸配列を図１６（配列番号４）に示す。

一実施形態では、対象のタウオパチーを治療または予防する方法が提供され、該方法は、対象のニューロンにおいて有効量のｐ３８γまたはそのバリアント、典型的にはｐ３８γの構成的に活性なバリアントを発現する核酸を投与する工程を含む。通常、タウオパチーは、ヒトタウの４２２位でのセリンのリン酸化に関連している。一実施形態では、タウオパチーに関連する認知障害に罹患している対象において、記憶等の認知能力を改善する方法が提供され、該方法は、対象のニューロンにおいてｐ３８γまたはそのバリアント、典型的には、ｐ３８γの構成的に活性なバリアントを発現する、有効量の核酸を投与する工程を含む。通常、タウオパチーは、ヒトタウの４２２位でのセリンのリン酸化に関連している。

一実施形態では、対象において進行性アルツハイマー病を治療する方法が提供され、該方法は、対象のニューロンにおいてｐ３８γまたはそのバリアント、典型的には、ｐ３８γの構成的に活性なバリアントを発現する、有効量の核酸を投与する工程を含む。通常、進行性アルツハイマー病は、ヒトタウの４２２位でのセリンのリン酸化に関連している。

一実施形態では、対象の進行性前頭側頭型認知症（ｆｒｏｎｔｏｔｅｍｐｏｒａｌｄｅｍｅｎｔｉａ）を治療する方法が提供され、該方法は、対象のニューロンにおいてｐ３８γまたはそのバリアント、典型的には、ｐ３８γの構成的に活性なバリアントを発現する、有効量の核酸を投与する工程を含む。通常、前頭側頭型認知症は、ヒトタウの４２２位でのセリンのリン酸化に関連している。

一実施形態では、タウオパチーに罹患している対象において、ヒトタウの４２２位でのセリンのリン酸化を低減する方法が提供され、該方法は、対象のニューロンにおいてｐ３８γまたはそのバリアント、典型的には、ｐ３８γの構成的に活性なバリアントを発現する、有効量の核酸を投与する工程を含む。

一実施形態では、対象におけるヒトタウの４２２位でのセリンのリン酸化に関連するタウオパチーを治療または予防する方法が提供され、該方法は、対象のニューロンにおいてｐ３８γまたはそのバリアント、典型的には、ｐ３８γの構成的に活性なバリアントを発現する、有効量の核酸を投与する工程を含む。

別の実施形態は、対象のニューロンにおけるタウ凝集を低減または予防する方法を提供し、該方法は、対象のニューロンにおいてｐ３８γまたはそのバリアント、典型的には、ｐ３８γの構成的に活性なバリアントを発現する、有効量の核酸を投与する工程を含む。

別の実施形態は、対象のニューロンにおける神経原線維変化を低減または予防する方法を提供し、該方法は、対象のニューロンにおいてｐ３８γまたはそのバリアント、典型的には、ｐ３８γの構成的に活性なバリアントを発現する、有効量の核酸を投与する工程を含む。

別の実施形態では、対象は、対象のニューロンにタウｐＴ２０５のホスホミメティックを導入する薬剤を投与することによって治療される。一形態では、タウｐＴ２０５のホスホミメティックを導入する薬剤は、野生型タウ、典型的には内因性野生型タウにホスホミメティック変異を導入する薬剤である。本明細書で使用される場合、タウｐＴ２０５のホスホミメティックは、一つまたは複数のアミノ酸置換、挿入または欠失を含み、スレオニン２０５での非置換タウのリン酸化後の非置換野生型ヒトタウと同一または実質的に同じ方法で機能するタウのバリアントである。一実施形態では、ホスホミメティックは、ホスホミメティック置換を含む。

実施例に記載されているように、本発明者らは、ニューロンにおけるタウのＴ２０５Ｅバリアントの発現が、ＡＤマウスモデルにおける認知機能および生存を改善することを示した。タウのＴ２０５Ｅバリアントは、Ｔ２０５（ｐＴ２０５）でリン酸化されたタウのホスホミメティックである。ホスホミメティック置換は、タンパク質のアミノ酸置換であり、非置換タンパク質のリン酸化後の非置換タンパク質と同一または実質的に同じ方法でタンパク質が機能することをもたらす。リン酸化タウのホスホミメティック置換は、タウの部位でのアミノ酸置換であり、野生型タウの特定部位でのリン酸化後に、野生型タウと同一または実質的に同じように機能するタウタンパク質をもたらす。

一実施形態では、方法は、Ｔ２０５でのタウのホスホミメティック置換を含むタウのホスホミメティックを導入するように対象を治療する工程を含む。

一実施形態では、タウのホスホミメティック置換は、タウの２０５位（Ｔ２０５ＥまたはＴ２０５Ｄ）でのスレオニンからグルタミン酸またはアスパラギン酸への置換であり、アミノ酸番号は、４４１個のアミノ酸を含む最長のヒトタウアイソフォームに基づく。全長野生型ヒトタウ（配列番号１）およびタウＴ２０５Ｅ（配列番号５）のアミノ酸配列を図１７および１８に示す。

通常、タウのバリアントはヒトのタウのバリアントである。他の実施形態では、タウのバリアントは、非ヒト哺乳動物由来のタウのバリアントであってもよい。たとえば、タウのバリアントは、マウス、イヌ、ネコ、ブタ、ウシ、ラット、非ヒト霊長類、ヤギ、またはヒツジ由来のタウのバリアントであってもよい。

対象におけるタウパシーを治療または予防する方法であって、対象のニューロンにおいて、２０５位でのスレオニンのグルタミン酸またはアスパラギン酸へのアミノ酸置換（Ｔ２０５ＥまたはＴ２０５Ｄ）において野生型ヒトタウとは異なるタウの産生をもたらすヌクレオチド配列を含む核酸を投与する工程を含む、方法が提供される。

一実施形態では、タウオパチーに関連する認知障害に罹患している対象において認知能力を改善する方法であって、対象のニューロンにおいて、２０５位でのスレオニンのグルタミン酸またはアスパラギン酸へのアミノ酸置換（Ｔ２０５ＥまたはＴ２０５Ｄ）において野生型ヒトタウとは異なるタウの産生をもたらすヌクレオチド配列を含む核酸を投与する工程を含む、方法が提供される。

一実施形態では、対象における進行性アルツハイマー病を治療する方法であって、対象のニューロンにおいて、発現されると、２０５位でのスレオニンのグルタミン酸またはアスパラギン酸へのアミノ酸置換（Ｔ２０５ＥまたはＴ２０５Ｄ）において野生型ヒトタウとは異なるタウの産生をもたらすヌクレオチド配列を含む核酸を投与する工程を含む、方法が提供される。

一実施形態では、対象における進行した前頭側頭型認知症を治療する方法であって、対象のニューロンにおいて、発現されると、２０５位でのスレオニンのグルタミン酸またはアスパラギン酸へのアミノ酸置換（Ｔ２０５ＥまたはＴ２０５Ｄ）において野生型ヒトタウとは異なるタウの産生をもたらすヌクレオチド配列を含む核酸を投与する工程を含む、方法が提供される。

一実施形態では、タウオパチーに罹患している対象において、ヒトタウの４２２位でのセリンのリン酸化を低減する方法であって、対象のニューロンにおいて、発現されると、２０５位でのスレオニンのグルタミン酸またはアスパラギン酸へのアミノ酸置換（Ｔ２０５ＥまたはＴ２０５Ｄ）において野生型ヒトタウとは異なるタウの産生をもたらすヌクレオチド配列を含む核酸を投与する工程を含む、方法が提供される。

一実施形態では、対象におけるヒトタウの４２２位でのセリンのリン酸化に関連するタウオパチーを治療または予防する方法であって、対象のニューロンにおいて、発現されると、２０５位でのスレオニンのグルタミン酸またはアスパラギン酸へのアミノ酸置換（Ｔ２０５ＥまたはＴ２０５Ｄ）において野生型ヒトタウとは異なるタウの産生をもたらすヌクレオチド配列を含む核酸を投与する工程を含む、方法が提供される。

別の実施形態は、対象のニューロンにおけるタウ凝集を低減または予防する方法であって、対象のニューロンにおいて、発現されると、２０５位でのスレオニンのグルタミン酸またはアスパラギン酸へのアミノ酸置換（Ｔ２０５ＥまたはＴ２０５Ｄ）において野生型ヒトタウとは異なるタウの産生をもたらすヌクレオチド配列を含む核酸を投与する工程を含む、方法を提供する。

別の実施形態は、対象のニューロンにおける神経原線維変化を低減または予防する方法であって、対象のニューロンにおいて、発現されると、２０５位でのスレオニンのグルタミン酸またはアスパラギン酸へのアミノ酸置換（Ｔ２０５ＥまたはＴ２０５Ｄ）において野生型ヒトタウとは異なるタウの産生をもたらすヌクレオチド配列を含む核酸を投与する工程を含む、方法を提供する。

一実施形態では、核酸はタウＴ２０５ＥまだはＴ２０５Ｄをコードするヌクレオチド配列を含む。

一部の実施形態では、リン酸化タウのホスホミメティックは、ニューロンの野生型タウをコードするヌクレオチド配列に変異を導入することによってニューロンに導入され得る。通常、変異はニューロンの内因性タウ遺伝子に導入される。したがって、一実施形態では、核酸は、遺伝子編集システム、または遺伝子編集システムの一部であり、またはそれらをコードしており、対象のニューロンにおいて、野生型タウをコードするヌクレオチド配列、典型的には内因性タウ遺伝子にホスホミメティック変異を導入するためのものである。一実施形態では、核酸は、対象のニューロンにおいて、野生型タウをコードするヌクレオチド配列に、典型的には内因性タウ遺伝子に、ホスホミメティック変異を導入するための遺伝子編集システム、またはタウ遺伝子編集システムの一部を含む。一実施形態では、核酸は、タウ遺伝子編集システムまたはその一部をコードするヌクレオチド配列を含み、これは、野生型タウ遺伝子に変異を導入して、ホスホミメティックタウの発現を引き起こす。通常、ホスホミメティックタウはＴ２０５ＥまたはＴ２０５Ｄである。一実施形態では、遺伝子編集システムは、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ複合体、典型的にはＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９複合体であり、これは、ヒトタウの２０５位でグルタミン酸またはアスパラギン酸の代わりにスレオニンの置換をタウ遺伝子に導入する。通常、遺伝子編集システムまたはその一部をコードする核酸は、ガイドＲＮＡ、またはガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）をコードする核酸を含む。通常、ｇＲＮＡは単一のガイドＲＮＡまたは一対のガイドＲＮＡである。

本明細書で使用される場合、「タウ遺伝子」という用語は、「Ｍａｐｔ遺伝子」と同じ意味を有する。

薬剤が、対象のニューロンにおいて、ｐ３８γまたはそのバリアント、またはタウのバリアント、または遺伝子編集システムを発現することができる核酸を含む実施形態において、ｐ３８γまたはそのバリアント、またはタウのバリアント、または遺伝子編集システムをコードする核酸配列は、通常、調節配列に作動可能に連結されて、対象のニューロンにおけるｐ３８γまたはそのバリアント、またはタウのバリアント、または遺伝子編集システムの発現を指示する。対象のニューロンにおけるｐ３８γまたはそのバリアント、またはタウのバリアント、または遺伝子編集システムの発現が可能な核酸は、ｐ３８γまたはそのバリアント、またはタウのバリアント、または遺伝子編集システムのコード配列を含む発現カセットを含んでいてもよい。発現カセットは、細胞内のコード配列によってコードされるタンパク質を発現するために一緒に作用するコード配列および調節配列を含む核酸である。「コード配列」とは、特定のアミノ酸配列をコードするＤＮＡまたはＲＮＡ配列を指す。コード配列は、「中断されないコード配列」を構成する場合がある。すなわちｃＤＮＡ等のイントロンがないか、または適切なスプライスジャンクションで囲まれた一つまたは複数のイントロンを含む場合がある。

発現カセットは通常、調節配列を含む。「調節配列」は、コード配列の上流（５’非コード配列）、内部、または下流（３’非コード配列）に位置するヌクレオチド配列であり、関連するコード配列の転写、ＲＮＡプロセシングまたは安定性、または翻訳に影響を与える。調節配列は当技術分野で知られており、たとえば、プロモーター、エンハンサー、翻訳リーダー配列、イントロン、およびポリアデニル化シグナル配列等の転写調節配列を含んでもよい。コード配列は、通常、プロモーターに作動可能に連結されている。プロモーターは、ＲＮＡポリメラーゼに結合し、通常はプロモーターの下流（３’方向）に位置するコード配列の転写を開始する特定の条件下で可能なＤＮＡ領域である。コード配列はまた、終結シグナルに作動可能に連結されていてもよい。発現カセットはまた、コード配列の適切な翻訳に必要な配列を含んでいてもよい。コード配列を含む発現カセットはキメラであってもよい。本明細書で使用される「キメラ」ベクターまたは発現カセットは、少なくとも２つの異なる種由来の核酸配列を含むベクターまたはカセットを意味し、または種の「天然」または野生型で発生しない方法で結合または関連付けられている同じ種由来の核酸配列を有することを意味する。発現カセットのコード配列は、構成的プロモーターまたは特定の組織または細胞型でのみ転写を開始するか、または宿主細胞が特定の刺激に曝露されたときに制御され得る調節可能なプロモーターの制御下にある。たとえば、ｐ３８γをコードする核酸を含む発現カセットにおいて、コード配列は、ニューロンでコード配列を発現する、またはニューロンで誘導されるプロモーター等、ｐ３８γ遺伝子に天然ではないプロモーターに作動可能に連結され得る。一実施形態では、プロモーターは神経プロモーターである。適切な神経プロモーターの例は、シナプシン（ＳＹＮ）、カルシウム／カルモジュリン依存性プロテインキナーゼ（ＣａＭＫＩＩ）、チューブリンアルファＩ（Ｔａ１）、ニューロン特異的エノラーゼ（ＮＳＥ）、血小板由来増殖因子ベータ鎖（ＰＤＧＦ）、ＭｆＰ、ｄｏｘ、ＧＦＡＰ、プレプロエンケファリン、ドーパミンβ－ヒドロキシラーゼ（ｄβＨ）、プロラクチン、ニワトリベータアクチン、プリオンタンパク質、マウスＴｈｙ１．２、ミエリン塩基性プロモーター、または部分的サイトメガリーウイルスプロモーター（ｐａｒｔｉａｌｃｙｔｏｍｅｇａｌｙｖｉｒｕｓｐｒｏｍｏｔｅｒ）等のエンハンサーと組み合わせた上記のいずれかを含む。ニューロンにおいて核酸配列を発現するために使用され得る他のプロモーターの例は、ＳＶ４０初期プロモーター、マウス乳がんウイルスの末端反復配列（ＬＴＲ）プロモーター；アデノウイルス主要後期プロモーター（ＡｄＭＬＰ）；単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）プロモーター、ＣＭＶ前初期プロモーター領域（ＣＭＶＩＥ）等のサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）プロモーター、合成プロモーター、ハイブリッドプロモーター等を含む。誘導性または制御可能なプロモーターは、たとえば、ミフェプリストン、ドキシサイクリン、テトラサイクリン、またはタモキシフェンの存在下または非存在下で転写活性が改変されるプロモーターを含む。

タンパク質をコードする核酸（コード配列）は、細胞内でのタンパク質の発現を可能にするために調節配列に対して配置されている場合、調節配列に作動可能に連結されている。たとえば、プロモーターがコード配列の転写を開始するのを補助する場合、プロモーターはコード領域に作動可能に連結されている。

本明細書で使用される場合、核酸配列の「発現」は、コード配列によってコードされるポリペプチドを生成するためのコード配列を含む、またはＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ配列等の遺伝子編集配列をコードする配列を含む、核酸配列の転写および／または翻訳を指す。

一実施形態では、薬剤はベクターである。そのようなベクターにおいて、ｐ３８γまたはそのバリアント、またはタウのバリアント、またはタウ遺伝子編集システム、またはそのような配列を含む発現カセットをコードする核酸配列は、適切なベクター配列に挿入される。「ベクター」という用語は、ニューロン等の宿主細胞に遺伝子を移入するのに適した核酸を指す。「ベクター」という用語は、プラスミド、コスミド、ネイキッドＤＮＡ、ウイルスベクター等を含む。一実施形態では、ベクターはプラスミドベクターである。プラスミドベクターは、追加の配列を挿入することができる二本鎖環状DNA分子である。プラスミドは発現ベクターであってもよい。プラスミドおよび発現ベクターは当技術分野で知られており、たとえば、Ｓａｍｂｒｏｏｋｅｔａｌ．ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ，４ｔｈＥｄ．Ｖｏｌ．１－３，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．（２０１２）に記載されている。

一部の実施形態では、ベクターはウイルスベクターである。ウイルスベクターは、ウイルスベクターに応じて、ウイルス粒子の産生および／または宿主細胞ゲノムへの組み込みおよび／またはウイルス複製を可能にするウイルス配列を含む。本明細書に記載の方法および組成物と共に利用することができるウイルスベクターは、核酸をニューロン、典型的には脳のニューロンに導入することができる任意のウイルスベクターを含む。ウイルスベクターの例は、アデノウイルスベクター；レンチウイルスベクター；アデノ随伴ウイルスベクター；狂犬病ウイルスベクター；単純ヘルペスウイルスベクター；ＳＶ４０；ポリオーマウイルスベクター；ポックスウイルスベクターを含む。

一実施形態では、ウイルスベクターは、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）にパッケージングするためのアデノ随伴ウイルスベクターである。一実施形態では、ＡＡＶベクターは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ６．２、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶｒｈ１０、ＡＡＶｒｈ２０、ＡＡＶｒｈ３９、ＡＡＶｒｈ４３、およびＡＡＶｃｙ５ベクター、またはそれらのバリアントからなる群から選択される血清型である。一実施形態では、ウイルスベクターは、血清型ＡＡＶ１、ＡＡＶ９、ＡＡＶｒｈ１０、またはＡＡＶｃｙ５である。一実施形態では、ＡＡＶベクターの血清型はＡＡＶ１である。別の実施形態では、ＡＡＶベクターの血清型はＡＡＶ９である。別の実施形態では、ＡＡＶベクターの血清型はＡＡＶｒｈ１０である。別の実施形態では、ＡＡＶベクターの血清型はＡＡＶｃｙ５である。核酸を細胞に導入するための組換えＡＡＶの使用は当技術分野で知られており、たとえば、ＵＳ２０１６００３８６１３；ＧｒｉｅｇｅｒａｎｄＳａｍｕｌｓｋｉ（２００５）Ａｄｅｎｏ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｖｉｒｕｓａｓａｇｅｎｅｔｈｅｒａｐｙｖｅｃｔｏｒ：ｖｅｃｔｏｒｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎａｎｄｃｌｉｎｉｃａｌａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ＡｄｖａｎｃｅｓｉｎＢｉｏｃｈｅｍｉｃａｌＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ／Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ９９：１１９－１４５に記載されている；組換えＡＡＶの産生方法は当技術分野で知られており、たとえばＨａｒａｓｔａｅｔａｌ（２０１５）Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ４０：１９６９－１９７８に記載されている。神経細胞でｐ３８γおよびｐ３８γ^CAを発現させるためのアデノ随伴ウイルスベクターの例は、国際公開第２０１７／１４７６５４号に記載されている。

別の実施形態では、レンチウイルスベクターの製造および使用の方法は当技術分野で知られており、たとえば、Ｎａｌｄｉｎｉｅｔａｌ．（１９９６）Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎｅｄｅｌｉｖｅｒｙａｎｄｓｔａｂｌｅｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎｏｆｎｏｎｄｉｖｉｄｉｎｇｃｅｌｌｓｂｙａｌｅｎｔｉｖｉｒａｌｖｅｃｔｏｒ，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２７２：２６３－２６７；Ｌｏｉｓｅｔａｌ．（２００２）Ｇｅｒｍｌｉｎｅｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎａｎｄｔｉｓｓｕｅ－ｓｐｅｃｉｆｉｃｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｔｒａｎｓｇｅｎｅｓｄｅｌｉｖｅｒｅｄｂｙｌｅｎｔｉｖｉｒａｌｖｅｃｔｏｒｓ，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２９５：８６８－８７２；Ｖｏｇｅｌｅｔａｌ（２００４），Ａｓｉｎｇｌｅｌｅｎｔｉｖｉｒｕｓｖｅｃｔｏｒｍｅｄｉａｔｅｓｄｏｘｙｃｙｃｌｉｎｅ－ｒｅｇｕｌａｔｅｄｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｔｒａｎｓｇｅｎｅｓｉｎｔｈｅｂｒａｉｎ．ＨｕｍＧｅｎｅＴｈｅｒ．２００４；１５（２）：１５７-１６５に記載されている。

アデノウイルスはまた、核酸剤（ｎｕｃｌｅｉｃａｃｉｄａｇｅｎｔ）の送達における使用が企図されている。したがって、別の実施形態では、ウイルスベクターはアデノウイルスベクターである。アデノウイルスベクターは当技術分野で知られており、たとえば、ＫｏｚａｒｓｋｙａｎｄＷｉｌｓｏｎ，ＣｕｒｒｅｎｔＯｐｉｎｉｏｎｉｎＧｅｎｅｔｉｃｓａｎｄＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ３：４９９－５０３（１９９３）；Ｓｏｕｔｈｇａｔｅｅｔａｌ．（２００８）Ｇｅｎｅｔｒａｎｓｆｅｒｉｎｔｏｎｅｕｒａｌｃｅｌｌｓｉｎｖｉｔｒｏｕｓｉｎｇａｄｅｎｏｖｉｒａｌｖｅｃｔｏｒｓ，ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＮｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｕｎｉｔ４２３，Ｃｈａｐｔｅｒ４；Ａｋｌｉｅｔａｌ．（１９９３）Ｔｒａｎｓｆｅｒｏｆａｆｏｒｅｉｇｎｇｅｎｅｉｎｔｏｔｈｅｂｒａｉｎｕｓｉｎｇａｄｅｎｏｖｉｒｕｓｖｅｃｔｏｒｓ．Ｎａｔｕｒｅｇｅｎｅｔｉｃｓ，３（３）：２２４－２２８に記載されている。

別の態様は、本明細書に記載のベクター、典型的には本明細書に記載のウイルスベクターを提供する。

ウイルスベクターは、通常、当技術分野で知られている方法を使用してウイルス粒子にパッケージ化される。次に、ウイルス粒子を使用して、神経細胞株を含む細胞株、または神経組織を、インビトロまたはインビボのいずれかで移行することができる。したがって、別の態様は、本明細書に記載のベクターを含むウイルス粒子を提供する。

さらなる態様は、本明細書に記載されるように、タウ遺伝子編集システムまたはその一部を含む薬剤、またはタウ遺伝子編集システムまたはその一部をコードする核酸を提供する。一実施形態では、タウ遺伝子編集システムまたはその一部は、野生型タウ遺伝子、典型的には内因性タウ遺伝子に変異を導入して、ホスホミメティックタウの発現を引き起こす。通常、ホスホミメティックタウはＴ２０５ＥまたはＴ２０５Ｄである。一実施形態では、タウ遺伝子編集システムは、野生型タウ遺伝子、典型的には内因性野生型タウ遺伝子に、タウの配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲにおけるグルタミン酸またはアスパラギン酸の代わりのスレオニン、典型的には野生型ヒトタウの２０５位のスレオニンを導入するドナー核酸と組み合わせて、野生型タウ遺伝子を標的とするＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ、典型的にはＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９を含む。

典型的には、タウ遺伝子編集システムまたはその一部は、ガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）、またはガイドＲＮＡをコードする核酸を含み、これは、タウ遺伝子配列のコード領域の一部に、典型的にはタウのT205をコードする配列またはその近くで相補的である。通常、ｇＲＮＡは単一のガイドＲＮＡまたは一対のガイドＲＮＡである。マウスおよびヒトのタウを標的とするためのガイドＲＮＡ配列の適切な対の例は、以下に示される配列を含む：
ガイドＲＮＡ１：
マウス： CGAGCGACTGCCAGGCGTTC （配列番号６９）
ヒト： GGAGCGGCTGCCGGGAGTGC （配列番号７０）
ガイドＲＮＡ２：
マウス： CCCGGCTCTCCCGGAACGCC （配列番号７１）
ヒト： CCCGGCTCCCCAGGCACTCC （配列番号７２）

通常、タウ遺伝子編集システムは、ドナー核酸と組み合わせたＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９複合体を含む。

通常、ガイドＲＮＡは、たとえば、Ｃａｓタンパク質、典型的にはＣａｓ９タンパク質等のエンドヌクレアーゼに結合する配列をさらに含む。通常、ガイドＲＮＡは、プロトスペーサー隣接モチーフ（ＰＡＭ）配列、およびＣａｓタンパク質に結合するための細菌のｃｒＲＮＡおよびｔｒａｃｒＲＮＡの融合体を含む。したがって、ガイドＲＮＡは、Ｃａｓエンドヌクレアーゼの標的特異性およびスキャフォールド／結合能力の両方を提供する。これに関して、ガイドＲＮＡ配列は、Ｃａｓ等のエンドヌクレアーゼを標的部位に向け、そこでヌクレアーゼは、標的ＤＮＡに二本鎖切断を作り出す。タウ遺伝子編集システムを使用して変異を導入するために、ｇＲＮＡおよびＣａｓタンパク質、またはＣａｓタンパク質をコードする核酸を、内因性野生型タウ遺伝子に組み込むための変異タウ配列を含むドナー配列とともに細胞に導入する。ドナー核酸は、通常、相同性指向修復によって、変異タウ配列をタウアレルに組み込む。マウスおよびヒトのタウ遺伝子（ＭＡＰＴ遺伝子）を変異させるためのドナー配列の例は次のとおりである：
マウス：
CCAGGTGAACCACCAAAATCCGGAGAACGAAGCGGCTACAGCAGCCCCGGCTCTCCCGGAGAGCCTGGCAGTCGCTCGCGCACCCCATCCCTACCAACACCGCCCACCCGGGAGCCCAA （配列番号７３）
ヒト：
TCTGGTGAACCTCCAAAATCAGGGGATCGCAGCGGCTACAGCAGCCCCGGCTCCCCAGGCGAGCCCGGCAGCCGCTCCCGCACCCCGTCCCTTCCAACCCCACCCACCCGGGAGCCCAAG （配列番号６）

一実施形態では、ヒトタウ遺伝子を変異させるためのドナー配列は、SPGSPGXPGSRSR （配列番号７４）、SSPGSPGXPGSRSRT （配列番号７５）、SSPGSPGXPGSRSRT （配列番号７６）、YSSPGSPGXPGSRSRTP （配列番号７７）、GYSSPGSPGXPGSRSRTPS （配列番号７８）、SGYSSPGSPGXPGSRSRTPSL （配列番号７９）、RSGYSSPGSPGXPGSRSRTPSLP （配列番号８０）、DRSGYSSPGSPGXPGSRSRTPSLPT （配列番号８１）、GDRSGYSSPGSPGXPGSRSRTPSLPTP （配列番号８２）、SGDRSGYSSPGSPGXPGSRSRTPSLPTPP （配列番号８３）、KSGDRSGYSSPGSPGXPGSRSRTPSLPTPPT （配列番号８４）、PKSGDRSGYSSPGSPGXPGSRSRTPSLPTPPTR （配列番号８５）、PPKSGDRSGYSSPGSPGXPGSRSRTPSLPTPPTRE （配列番号８６）、EPPKSGDRSGYSSPGSPGXPGSRSRTPSLPTPPTREP （配列番号８７）、GEPPKSGDRSGYSSPGSPGXPGSRSRTPSLPTPPTREPK （配列番号８８）、およびSGEPPKSGDRSGYSSPGSPGXPGSRSRTPSLPTPPTREPK （配列番号８９）からなる群から選択されるアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含み、
ここでＸはＥまたはＤである。

一実施形態では、ヒトタウ遺伝子を変異させるためのドナー配列は、配列番号６と少なくとも６０％、より典型的には少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％、同一であるヌクレオチド配列を含む。

一実施形態では、ヒトタウ遺伝子を変異させるためのドナー配列は、配列番号６と少なくとも６０％、より典型的には少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％、同一であるヌクレオチド配列を含み、アミノ酸配列ＳＧＥＰＰＫＳＧＤＲＳＧＹＳＳＰＧＳＰＧＸＰＧＳＲＳＲＴＰＳＬＰＴＰＰＴＲＥＰＫをコードしており、ここでＸはＥまたはＤである。

ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９を使用したゲノム編集の方法は当技術分野で知られており、たとえば、米国特許第１０，２４０，１４５号；およびＵＳ２０１１８０１２７７８３に記載されている；

様々な実施形態では：
（ｉ）ｇＲＮＡは、Ｃａｓタンパク質をコードするＲＮＡ、およびｄｓまたはｓｓドナーＤＮＡとともに投与される；
（ｉｉ）ｇＲＮＡはＣａｓタンパク質、およびｄｓまたはｓｓドナーＤＮＡとともに投与される；
（ｉｉｉ）ｇＲＮＡをコードするＤＮＡは、Ｃａｓタンパク質をコードするＤＮＡ、およびｄｓまたはｓｓドナーＤＮＡとともに投与される；
（ｉｖ）ｇＲＮＡをコードするＤＮＡは、Ｃａｓタンパク質、およびｄｓまたはｓｓドナーＤＮＡとともに投与される；
（ｖ）ｇＲＮＡをコードするＤＮＡは、Ｃａｓタンパク質をコードするＲＮＡ、およびｄｓまたはｓｓドナーＤＮＡとともに投与される。

ｇＲＮＡをコードするＤＮＡまたはＣａｓタンパク質をコードするＤＮＡは、本明細書に記載の適切な調節配列に作動可能に連結されたｇＲＮＡ配列またはＣａｓコード配列を含むことが理解されよう。

タウ編集システムの各構成要素（たとえば、ｇＲＮＡ、エンドヌクレアーゼ、およびドナー配列）は、一緒に、または別々に投与することができることも理解されよう。

一部の実施形態では、タウ遺伝子編集システムは、ベクターを介して対象のニューロンに導入される。たとえば、タウ遺伝子編集システムは、ＡＡＶベクターシステムにおいて対象のニューロンに導入することができる。

本明細書に記載の薬剤は、医薬組成物として製剤化することができる。したがって、別の態様では、本明細書に記載の薬剤を含む医薬組成物が提供される。組成物は、薬学的に許容される担体中の薬剤を含む。医薬担体を用いて薬剤を製剤化するための方法は当技術分野で知られており、たとえば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅ，（１７ｔｈｅｄ．ＭａｃｋＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇＣｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．１９８５）；Ｇｏｏｄｍａｎ＆Ｇｉｌｌｍａｎ’ｓ：ＴｈｅＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌＢａｓｉｓｏｆＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ（１１ｔｈＥｄｉｔｉｏｎ，ＭｃＧｒａｗ－ＨｉｌｌＰｒｏｆｅｓｓｉｏｎａｌ，２００５）に記載されている。

許容される担体、希釈剤、およびアジュバントは、レシピエントに対して無毒であり、好ましくは、使用される投与量および濃度で不活性であり、リン酸塩、クエン酸塩、または他の有機酸等の緩衝液；アスコルビン酸等の抗酸化剤；低分子量ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリン等のタンパク質；ポリビニルピロリドン等の親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン、またはリジン等のアミノ酸；単糖、二糖、およびグルコース、マンノース、またはデキストリンを含む他の炭水化物；ＥＤＴＡ等のキレート剤；マンニトールまたはソルビトール等の糖アルコール；ナトリウム等の塩を形成する対イオン；および／またはＴｗｅｅｎ（登録商標）、プルロニック（登録商標）、またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）等の非イオン性界面活性剤を含む。

対象への薬剤の投与は、頭蓋内、静脈内、腹腔内、皮下、筋肉内、鼻腔内または髄腔内注射によるものであってもよい。頭蓋内、静脈内、腹腔内、皮下、筋肉内、鼻腔内または髄腔内での使用に適した組成物は、無菌の注射可能な溶液または分散液の即時調製のための無菌の水溶液または分散液および無菌の粉末を含む。薬学的に許容される担体は、たとえば、水、エタノール、ポリオール（たとえば、グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコール等）、それらの適切な混合物、および植物油を含む溶媒または分散媒体であってもよい。適切な流動性は、たとえば、レシチン等のコーティングの使用、分散液の場合に必要な粒子サイズの維持、および界面活性剤の使用によって維持することができる。微生物の作用の防止は、様々な抗菌剤および抗真菌剤、たとえば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサール等によってもたらすことができる。多くの場合、等張剤、たとえば、糖または塩化ナトリウムを含めることが好ましいであろう。

薬剤がウイルス粒子にパッケージされている実施形態では、医薬組成物は、薬剤が有効であることを可能にする任意の濃度のウイルス粒子を含んでもよい。そのような実施形態では、医薬組成物は、０．１重量％～９９．９重量％の量のウイルス粒子を含んでもよい。薬学的に許容される担体は、水、緩衝用水、たとえば、通常の生理食塩水またはハンクスまたはアールの平衡溶液等の平衡食塩水等の食塩水、グリシン、ヒアルロン酸等を含む。

投与されるウイルス粒子の力価は、たとえば、使用される特定のベクター、投与の様式、状態の程度、個体に応じて変化し、当技術分野で標準的な方法によって決定することができる。

本明細書に記載の薬剤は、マイクロインジェクション、エレクトロポレーション、パーティクルガン（ｍｉｃｒｏｐａｒｔｉｃｌｅｂｏｍｂａｒｄｍｅｎｔ）、リポソーム取り込み、ナノ粒子ベースの送達等の非ウイルス法による神経細胞への導入のために製剤化することができる。

一実施形態では、本明細書に記載の薬剤は、一つまたは複数のリポソーム、リポプレックス、または脂質ナノ粒子に製剤化することができる。一実施形態では、本明細書に記載の薬剤は、リポソームに製剤化される。リポソームは、親油性材料および水性内部から形成された膜を有する単層または多層の小胞である。水性部分は、送達される組成物を含む。リポソームの設計は、たとえば、組織へのリポソームの付着を改善するために、またはたとえば、エンドサイトーシス等の事象を活性化するために、オプソニンまたはリガンドを含んでもよい。

リポソームの形成は、薬剤およびリポソーム成分等の物理化学的特性、脂質小胞が分散される媒体の性質、薬剤の有効濃度、投与および／または小胞の送達中に関与する追加のプロセス、最適化サイズ、多分散性および意図された用途のための小胞の有効期間、ならびにバッチ間の再現性および安全で効率的なリポソーム製品の大規模生産の可能性に依存し得る。

薬剤を送達するためのリポソームおよび脂質ナノ粒子の製造方法は当技術分野で知られており、たとえば、米国特許第５，２６４，２２１号に記載されている。

「投与する」という用語は、治療を必要とする対象に化合物または薬剤を提供することを意味すると理解されるべきである。

「有効量」という用語は、求められている、システム、組織、または対象の生物学的応答を誘発する薬剤の量を指す。

任意の特定の対象の特定の用量レベルおよび投与頻度は変化する可能性があり、たとえば、使用される特定の化合物または薬剤の活性、その化合物または薬剤の代謝安定性および作用の長さ、年齢、体重、全体的な健康状態、性別、食事、投与の様式および時間、薬物の組み合わせ、特定の状態の重症度、および治療を受けている対象を含む様々な要因に依存することが理解されよう。

薬剤を含む容器を含むキットも提供される。容器は、非経口剤形の薬剤を含む単純なボトルであってもよく、各剤形は、単位用量の薬剤を含む。キットは、印刷された説明書をさらに含む。製造品は、本発明の方法による対象の治療を示すラベル等を含む。一形態では、製造品は、非経口投与用の形態の薬剤を含む容器であってもよい。たとえば、薬剤は、使い捨て容器内の注射可能な溶液の形態であってもよい。

本明細書で使用される場合、「治療」は、対象、組織または細胞に影響を及ぼして、所望の薬理学的および／または生理学的効果を得ることを意味し、状態を阻害すること、すなわちその進行を阻止すること；または、状態の影響を緩和または改善すること、すなわち、状態の影響を元に戻すこと、または退行を引き起こすことを含む。

本明細書で使用される場合、「予防する」とは、状態を有するリスクがある可能性のある細胞または対象において状態が発生するのを防ぐことを意味するが、必ずしも状態が最終的に発症しないこと、または対象が最終的に状態を発症しないことを意味するわけではない。予防は、細胞または対象の状態の発症を遅らせることを含む。

以下の特許請求の範囲および本発明の前述の記載では、表現言語または不可欠な意味のために文脈が別の方法で要求する場合を除いて、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」という単語または「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」または「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」等の変形は、包括的意味で使用される。すなわち、記載された特徴の存在を特定するが、本発明の様々な実施形態におけるさらなる特徴の存在または追加を排除するものではない。

本明細書で言及されているすべての刊行物は、参照により本明細書に組み込まれる。広く記載されている本発明の趣旨または範囲から逸脱することなく、特定の実施形態に示されるように、本発明に対して多数の変形および／または改変を行うことができることは、当業者によって理解されるであろう。したがって、本実施形態は、すべての点において例示的であり、限定的ではないと見なされるべきである。

本出願は、その全体は参照により本明細書に組み込まれる、オーストラリアの仮出願第２０１９９０３５３０号の優先権を主張している。

より明確に理解できるように本発明の性質を例示するために、以下の非限定的な例が提供される。

材料および方法
マウス
ニューロンでヒトＫ６７０Ｎ／Ｍ６７１Ｌ変異ＡＰＰを発現するＡＰＰ２３マウス（Ｓｔｕｒｃｈｌｅｒ－Ｐｉｅｒｒａｔｅｔａｌ．，１９９７）、ニューロンでヒト非変異タウを発現するＡＬＺ１７マウス（Ｐｒｏｂｓｔｅｔａｌ．，２０００）、ｔａｕ^-/-（Ｔｕｃｋｅｒｅｔａｌ．，２００１）、ｐ３８γ^-/-｛Ｐｅｒｄｉｇｕｅｒｏ、２００７＃１６４｝マウス、ニューロンで構成的に活性なｐ３８γ^CAを発現するトランスジェニックマウス（Ｉｔｔｎｅｒｅｔａｌ．，２０１６）、および脳でＰ３０１Ｓ変異ヒトタウを発現するトランスジェニックＴａｕ５８マウス（ｖａｎＥｅｒｓｅｌｅｔａｌ．，２０１５）は以前に記載されている。すべての系統はＣ５７Ｂｌ／６バックグラウンドで維持された。動物実験は、ニューサウスウェールズ大学の動物倫理委員会によって承認された。尾生検由来のイソプロパノール沈殿ＤＮＡをテンプレートとして使用するポリメラーゼ連鎖反応によってマウスの遺伝子型を決定した。ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）による標的アレルおよび導入遺伝子の遺伝子型決定用のオリゴヌクレオチドプライマーを表１に示す。

ゲノム編集
マウスのＭａｐｔ遺伝子は、前述のようにＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９を使用して標的化された（ＤｅｌｅｒｕｅａｎｄＩｔｔｎｅｒ，２０１７；Ｙａｎｇｅｔａｌ．，２０１４）。簡単に説明すると、内因性マウスＭａｐｔ遺伝子のコドンＴ１９４（ヒトコドンＴ２０５と相同）を標的とする２つのガイドを、計算ツール｛Ｒａｎ、２０１３＃４１７｝（ｈｔｔｐ：／／ｃｒｉｓｐｒ．ｍｉｔ．ｅｄｕ）を使用して設計した。これらのシングルガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）は、非クローニング法を使用して生成され、これにより、Ｔ７コンジュゲートフォワードプライマーを使用して、ＰＣＲによって線形テンプレートを生成した。ｐＸ３３０のｓｇＲＮＡスキャフォールド（Ａｄｄｇｅｎｅ＃４２２３０、ＤｒＦｅｎｇＺｈａｎｇからの贈与）をテンプレートとして使用した。得られた線状ＤＮＡは、Ｔ７ＱｕｉｃｋＨｉｇｈＹｉｅｌｄＲＮＡ合成キットを使用して、製造元の指示（ＮＥＢ＃Ｅ２０５０Ｓ）に従って、インビトロでｓｇＲＮＡに転写した。ｓｇＲＮＡは、ＮｕｃＡｗａｙＳｐｉｎカラム（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ＃ＡＭ１００７０）を使用して精製した。Ｃａｓ９タンパク質（ＮＥＢ＃Ｍ０６４６Ｔ）、ｓｇＲＮＡ、およびドナー一本鎖オリゴ（ｓｓＯｌｉｇｏｓ）をＣ５７Ｂｌ／６接合子に前核注射すると、生きた子（ｐｕｐ）が生まれた。樹立系統（ｆｏｕｎｄｅｒ）の最初の同定は、クローニングによる各子の個々のアレルの配列決定によって行った。簡単に説明すると、Ｍａｐｔエクソン９（ＥＮＳＥＭＢＬＥＮＳＭＵＳＴ０００００１０６９８９．２）の配列をマウスＤＮＡからＰＣＲで増幅し、ＨｉＦｉＡｓｓｅｍｂｌｙ（ＮｅｗＥｎｇｌａｎｄＢｉｏｌａｂｓ）を使用してｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）にクローニングした。スレオニン－１９４で正しいコドン交換を行っている潜在的な樹立系統を特定するために、子あたり少なくとも５つのクローンの配列を決定した。コドン交換が確認された樹立系統をＣ５７Ｂｌ／６マウスと交配させて、それぞれｔａｕＴ２０５ＡおよびｔａｕＴ２０５Ｅ系統を確立した。ｔａｕＴ２０５ＡおよびｔａｕＴ２０５Ｅマウスは、テトラプライマーＡＲＭＳ－ＰＣＲ｛Ｙｅ，２００１＃３９５｝のテンプレートとして尾生検からイソプロパノールで沈殿させたＤＮＡを使用して遺伝子型を決定した。テトラプライマーＡＲＭＳＰＣＲ用のオリゴヌクレオチドプライマーは、Ｐｒｉｍｅｒ１（ｈｔｔｐ：／／ｐｒｉｍｅｒ１．ｓｏｔｏｎ．ａｃ．ｕｋ／ｐｒｉｍｅｒ１．ｈｔｍｌ）を使用して設計した。ガイドＲＮＡ、ＭａｐｔのＴ２０５でのコドン交換のための相同修復テンプレート、およびテトラプライマーＡＲＭＳＰＣＲ用のオリゴヌクレオチドプライマーの配列を表１に示す。

記憶検査（Ｍｅｍｏｒｙｔｅｓｔｉｎｇ）
空間学習／記憶は、モリス水迷路（ＭｏｒｒｉｓＷａｔｅｒｍａｚｅ；ＭＷＭ）パラダイムで試験した｛Ｖｏｒｈｅｅｓ、２００６＃３５；Ｉｔｔｎｅｒ、２０１６＃２１７；Ｔａｎ、２０１８＃３９０｝。簡単に説明すると、低照度の間接照明のある部屋で、白色の無反射内面を備えたマウスＭＷＭ（直径１２２ｃｍ、高さ５０ｃｍ）用の特注の水タンクを、希釈された非刺激性の白い染料を含む水（１９～２２℃）で満たした。４つの四分円の垂直位置でタンクを囲む４つの異なる周囲の手がかり（ｄｉｓｔａｌｃｕｅ）を配置した。標的四分円（Ｑ１）では、プラットフォーム（１０ｃｍ²）を水面下１ｃｍに沈めた。ビデオはＣＣＤカメラで記録し、ＡｎｙＭａｚｅソフトウェアを使用して分析した。空間獲得（ｓｐａｔｉａｌａｃｑｕｉｓｉｔｉｏｎ）では、セッションごとに６０秒ごとの４回の試行を行った。開始位置は、すべての試行で開始四分円の外縁に沿ってランダム化した。参照記憶を試験するために、プラットフォームなしのプローブ試行を６０秒間の試行期間行い、各四分円内で費やされた時間について記録を分析した。視覚的に手がかりとなる対照の獲得［ｖｉｓｕａｌｌｙ－ｃｕｅｄｃｏｎｔｒｏｌａｃｑｕｉｓｉｔｉｏｎ］（視覚障害を除外するため）では、プラットフォームの上部にマーカーを貼り付け、セッションごとに４回の試行（６０秒）を行った。すべてのマウスは年齢および性別が一致し、４カ月齢で試験された。継続的な浮水行動（ｆｌｏａｔｉｎｇｂｅｈａｖｉｏｒ）を示したマウスは除外した。遺伝子型は、試験を記録し、ビデオトラックを分析するスタッフには知らせなかった。水泳経路の追跡は、ＡｎｙＭａｚｅソフトウェア（Ｓｔｏｌｔｉｎｇ）を使用して行った。平均水泳速度は、運動障害を除外するために決定した。

行動実験（Ｂｅｈａｖｉｏｒａｌｔｅｓｔｉｎｇ）
以前に公開された標準プロトコル（Ｋｅｅｔａｌ．，２０１５）を使用して、脱抑制および不安を評価するために、マウスを高架式十字迷路で１０分間試験した。

発作
以前に記載されたように（Ｉｔｔｎｅｒｅｔａｌ．，２０１０）、ペンチレンテトラゾール（ＰＴＺ、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）で発作を誘発した。簡単に説明すると、ＰＴＺは３０または５０ｍｇ／ｋｇ体重で腹腔内注射した。発作は以下のように評価した：０、発作なし；１、不動（ｉｍｍｏｂｉｌｉｔｙ）；２、尾の拡張（ｔａｉｌｅｘｔｅｎｓｉｏｎ）；３、前肢クローヌス；４、全身クローヌス（ｇｅｎｅｒａｌｉｚｅｄｃｌｏｎｕｓ）；５、バウンス発作（ｂｏｕｎｃｉｎｇｓｅｉｚｕｒｅ）；６、完全な拡張；７、てんかん重積状態。

プラスミド構築物
ＰＣＲベースでプラスミド構築物を生成するためのオリゴヌクレオチドプライマーを表２に示す。ＡＡＶ粒子を生成するための構築物は、ｐＡＡＶ－ｈｓｙｎ１－ｅＧＦＰ－ＷＰＲＥ（Ａｄｄｇｅｎｅ＃５８８６７）ベースである。ｅＧＦＰコード配列は、（Ｉｔｔｎｅｒｅｔａｌ．，２０１６）に記載されているように、ＨｉＦｉＡｓｓｅｍｂｌｙ（ＮｅｗＥｎｇｌａｎｄＢｉｏｌａｂｓ）を使用して、Ｐ３８γ^CAコード配列（ｐ３８γＡｓｐ１７９Ａｌａ）、ｔａｕＷＴ（ヒトｔａｕ４０４４１アミノ酸）、またはｔａｕＴ２０５Ａに置換した。コドン交換Ｔ２０５Ａを有するタウ構築物は以前に記載された（Ｉｔｔｎｅｒｅｔａｌ．，２０１６）。すべてのプラスミドを、Ｅ．ｃｏｌｉＤＨ５αまたはＸＬ－１ｂｌｕｅで増幅した。組換えイベントを回避するために、ＡＡＶベクターをＥ．ｃｏｌｉＳｔｂｌ３で増殖させた。すべての構築物は、配列決定によって検証した。

アデノ随伴ウイルスの産生および投与
ＡＡＶベクターのパッケージングは、記載されているように行った｛Ｈａｒａｓｔａ、２０１５＃８０｝。簡単に説明すると、ＡＡＶ粒子をパッケージ化するために、２９３Ｔ細胞を７０～８０％のコンフルエンスで１０％ＦＢＳを含む完全ＤＭＥＭ（Ｓｉｇｍａ）に播種した。トランスフェクションの３時間前に培地を、５％ＦＢＳを含むＩＭＤＭ（Ｓｉｇｍａ）に交換した。トランスフェクション試薬としてポリエチレンイミン－Ｍａｘ（ＰＥＩ－Ｍａｘ、Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して、ウイルスゲノムを含むプラスミド、ヘルパープラスミドとしてのｐＦｄｅｌｔａ６、およびｒｅｐおよびｃａｐ配列を含むＡＡＶ－ＰＨＰ．Ｂプラスミドを細胞にトランスフェクトした。トランスフェクションの７２時間後に細胞および上清を回収した。上清は、４０％ＰＥＧ８０００／２．５ＭＮａＣｌを最終濃度８％ＰＥＧ８０００／０．５ＭＮａＣｌに添加して清澄化し、４℃で少なくとも２時間インキュベートした。清澄化した上清を２０００ｇで３０分間遠心分離した。清澄化した上清および細胞ペレットからの合わせた沈殿物を、デオキシコール酸ナトリウム（最終濃度０．５％）およびベンゾナーゼ（～５００Ｕ）で３７℃で４０分間処理した。ＮａＣｌを添加し、５６℃で４０分間インキュベートし、凍結融解した後、溶液を５００００ｇ、４℃で３０分間遠心分離した。超遠心分離（４７５，９００ｇ、１８℃で２時間）によるイオジキサノール勾配を使用して、上清を精製した。ＡＡＶ粒子を濃縮し、Ａｍｉｃｏｎ１００ｋＤａ１５ｍＬｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｏｒで５０００ｇ、４℃でＰＢＳに交換した。ｑＰＣＲで力価測定した後、アリコートを－８０℃で保存した。力価は、定量的ポリメラーゼ連鎖反応（ｑＰＣＲ）によって決定した。ＡＡＶ力価は（１ｍｌあたりのウイルスゲノムで）以下の通りであった：ＡＡＶ－ＰＨＰ．Ｂ－ｓｙｎ１－ｅＧＦＰ（１．４６×１０¹⁴）、ＡＡＶ－ＰＨＰ．Ｂ－ｓｙｎ１－ｐ３８γＣＡ（１．３７×１０¹⁴）、ＡＡＶ－ＰＨＰ．Ｂ－ｓｙｎ１－ｔａｕＷＴ（８．４２×１０¹³）、ＡＡＶ－ＰＨＰ．Ｂ－ｓｙｎ１－ｔａｕＴ２０５Ａ（２．８０×１０¹³）。生後０日目（Ｐ０）に未希釈のＡＡＶを使用するか、または静脈内（ｉ．ｖ．）に滅菌生理食塩水（０．９％ＮａＣｌ）で希釈して投与する。Ｐ０注射の場合、１μｌ（１×１０⁹ウイルス粒子）のＡＡＶ粒子を、記載されているように（Ｉｔｔｎｅｒｅｔａｌ．，２０１６）、寒冷麻酔した（ｃｒｙｏ－ａｎａｅｓｔｈｅｔｉｚｅｄ）新生児マウスの脳の両側の３つの部位に注射した。全身送達のために、１００μｌのＡＡＶ粒子溶液（１０¹¹または１０¹³ビリオン粒子／ｍｌのいずれか）をマウスの尾静脈に注射した。

マウスの脳溶解物およびイムノブロッティング
マウス皮質組織は、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳｐＨ７．４）による経心的に灌流後に抽出した。皮質組織をＲＩＰＡバッファー（２０ｍＭＴｒｉｓｐＨ８．０、１５０ｍＭＮａＣｌ、１ｍＭＥＤＴＡ、１ｍＭＮａ₃ＶＯ₄、１ｍＭＮａＦ、１ｍＭグリセロリン酸塩、２．５ｍＭＮａ₂Ｈ₂Ｐ₂Ｏ₇、１ｍＭＰＭＳＦ、プロテアーゼ阻害剤（Ｃｏｍｐｌｅｔｅ、Ｒｏｃｈｅ）、１％ＮＰ－４０代替品（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）、０．１％ＳＤＳ、０．５％デオキシコール酸ナトリウム）でダウンスホモジナイザー（Ｈｅｉｄｏｌｐｈ）を使用して氷上でホモジナイズした。溶解物を遠心分離（１６，０００×ｇ／１０分／４℃）で除去した。タンパク質濃度を測定した（ＤＣタンパク質アッセイ、ＢｉｏＲａｄ）。以前に記載されたように（Ｉｔｔｎｅｒｅｔａｌ．，２０１２）ウエスタンブロッティングを行った。バンドは、Ｘ線フィルムまたはデジタルイメージングシステム（ＣｈｅｍｉＤｏｃＭＰ、Ｂｉｏｒａｄ）の化学発光によって視覚化した。ウエスタンブロット結果の濃度測定定量化は、ＩｍａｇｅＪ２．０．０－ｒｃ－４９／１．５１ｄ（ＮＩＨ）を使用して行った。この研究で使用された抗体は、以下の通りであった：抗ＰＳＤ９５（ミリポア）、抗Ａβ（６Ｅ１０）、抗タウ（ＤＡＫＯ）、抗タウ（タウ－１、ミリポア）、抗タウ（タウ１３、アブカム）、抗ホスホスレオニン２０５タウ（アブカム）、抗ホスホセリン２１４タウ（ミリポア）、抗グリセルアルデヒドデヒドロゲナーゼ（抗ＧＡＰＤＨ、ミリポア）、抗ｐ３８γ（Ｒ＆Ｄ）、抗ＨＡ７（シグマ）、抗ＨＡ（ＣｅｌｌＳｉｇｎａｌｉｎｇＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、抗ＳＮＡＰ２５（ミリポア）、抗神経フィラメント（ＮＦ２００、アブカム）。

免疫沈降
以前に記載されたように（Ｉｔｔｎｅｒｅｔａｌ．，２０１０）、組織溶解物から免疫沈降を行った。簡単に説明すると、皮質または海馬組織をＲＩＰＡバッファー（２０ｍＭＴｒｉｓｐＨ８．０、１５０ｍＭＮａＣｌ、１ｍＭＥＤＴＡ、１ｍＭＮａ₃ＶＯ₄、１ｍＭＮａＦ、１ｍＭグリセロリン酸塩、２．５ｍＭＮａ₂Ｈ₂Ｐ₂Ｏ₇、１ｍＭＰＭＳＦ、プロテアーゼ阻害剤（Ｃｏｍｐｌｅｔｅ、Ｒｏｃｈｅ）、１％ＮＰ－４０代替品（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）、０．１％ＳＤＳ、０．５％デオキシコール酸ナトリウム）で氷上でホモジナイズした。溶解物を遠心分離（１６，０００×ｇ／１０分／４℃）で除去した。タンパク質濃度を測定し（ＤＣタンパク質アッセイ、ＢｉｏＲａｄ）、２００μｇの溶解物を抗体と（１：４００）４℃のローテーターで３時間インキュベートした。平衡化およびブロックされたプロテインＧビーズ（ＮｅｗＥｎｇｌａｎｄＢｉｏｌａｂｓ）を、溶解物とともにローテーター上で４℃で４５分間インキュベートした。次にビーズを３回洗浄し、ＳＤＳ－ＰＡＧＥの前にサンプルバッファー中で９５℃で５分間インキュベートした。定量的濃度測定分析は、ＩｍａｇｅＪ２．０．０－ｒｃ－４９／１．５１ｄ（ＮＩＨ）を使用して行った。

組織切片および染色
マウスをリン酸緩衝生理食塩水で経心的に灌流し、続いて４％パラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）で灌流し、４％ＰＦＡで一晩後固定した。組織を、パラフィン包埋のためにＥｘｃｅｌｓｉｏｒｔｉｓｓｕｅｐｒｏｃｅｓｓｏｒ（Ｔｈｅｒｍｏ）で処理した。タウトランスジェニックマウスの脳におけるタウ凝集体およびＮＦＴ様構造を視覚化するための銀染色（Ｇａｌｌｙａｓ）を以前に記載されたように（Ｉｔｔｎｅｒｅｔａｌ．，２０１５）行った。ＡＡＶを注射したマウスの脳切片をタウ（Ｔａｕ１３；アブカム）またはＨＡタグ（ＨＡ－７；Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）に対する一次抗体で染色し、ウイルス導入遺伝子の発現を可視化した。すべての組織切片は、ＤＰ７０カラーカメラ（オリンパス）を備えたＢＸ５１明視野／落射蛍光顕微鏡（ＵＰｌａｎＦＬＮｌｅｎｓｅｓ［∞／０．１７／ＦＮ２６．５］：１０×／０．３、２０×／０．５、４０×／０．７５、６０×／１．２５ｏｉｌ、および１００×／１．３ｏｉｌ）で画像化した。

免疫蛍光
組織学的組織切片の免疫蛍光染色は、以前に記載されたように行った（Ｉｔｔｎｅｒｅｔａｌ．，２０１０）。簡単に説明すると、組織切片を脱パラフィンし、再水和し、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で洗浄し、ＰＢＳ中の０．０２％ＮＰ－４０で処理し、ブロッキングバッファー（ＰＢＳ中の３％馬血清／１％ウシアルブミン）でブロックした。ブロッキングバッファーで希釈した一次抗体を４℃で一晩または室温で１時間インキュベートした。ＰＢＳで洗浄した後、細胞核を可視化するためにＤＡＰＩの添加の有無にかかわらずブロッキングバッファーで希釈した二次抗体を室温で１時間インキュベートした。次に、細胞を洗浄し、退色防止封入剤（ＰｒｏｌｏｎｇＧｏｌｄ、ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して封入した。使用した二次抗体は、Ａｌｅｘａ４８８、５５５、５６８、または６４７色素（ＭｏｌｅｃｕｌａｒＰｒｏｂｅｓ）に結合した。落射蛍光イメージングは、ＣｅｌｌＳｅｎｓソフトウェア（オリンパス）を使用して、ＤＰ７０カラーカメラ（オリンパス）を備えたＢＸ５１明視野／落射蛍光顕微鏡（ＵＰｌａｎＦＬＮｌｅｎｓｅｓ［∞／０．１７／ＦＮ２６．５］：１０×／０．３、２０ｘ／０．５、４０×／０．７５、６０×／１．２５ｏｉｌ、および１００×／１．３ｏｉｌ）で画像化した。組織学的マウス脳切片（８μｍ）の鍍銀染色は、以前に記載されたように行った（Ｉｔｔｎｅｒｅｔａｌ．，２０１５）。アミロイド斑の数およびサイズは、ＩｍａｇｅＪ（ｈｔｔｐｓ：／／ｉｍａｇｅｊ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｉｊ／）を使用して、アミロイド－β（６Ｅ１０）の免疫蛍光染色を用いた皮質切片の顕微鏡写真で決定された。プラークの数は、組織の表面積に対して正規化された。

統計分析
含む統計分析は、ＧｒａｐｈｐａｄＰｒｉｓｍバージョン６．０を使用して行った。スチューデントのｔ検定はペアワイズ比較のために実行され、複数のデータグループはＡＮＯＶＡによって分析された。線形回帰および相関分析は、二乗和の最小化によって行った。生存データは、ログランクのＭａｎｔｅｌ－Ｃｏｘ検定によって分析した。すべての値は、平均±平均の標準誤差（ＳＥＭ）として表される。

結果
一例では、本発明者らは、アルツハイマー病のＡＰＰ２３マウスモデルを使用し、１３カ月齢の高齢でヒト変異アミロイド－β前駆体タンパク質（ＡＰＰ）のトランスジェニック発現を行った。ここで、それらは重度の記重度の記憶障害を発症しており、対照としての構成的活性ｐ３８γ（ｐ３８γ^CA）または強化緑色蛍光タンパク質（ｅＧＦＰ）のいずれかのニューロン発現のために異なる力価のＡＡＶでそれらを治療した（図１ａ）。記憶能力は、１５カ月齢の治療マウスで試験した（図１ａ）。低（１０¹⁰ＡＡＶ粒子）または高（１０¹²ＡＡＶ粒子）ＡＡＶ力価で処理されたＡＰＰ２３マウスの脳におけるｐ３８γ^CAの発現は、ｐ３８γ^CAに融合したHAタグの染色によって視覚化した（図１ｂ）。６Ｅ１０抗体によって視覚化されたＡβの染色パターンは、ｐ３８γ^CAの発現によって変化しなかった。これにより、全身ＡＡＶ送達時にＡＰＰ２３マウスの脳でｐ３８γ^CAの発現が成功したことが確認された。

１５カ月齢のモリス水迷路（ＭＷＭ）でのマウスの記憶評価は、ＡＡＶ－ｅＧＦＰで処理されたＡＰＰ２３同腹仔の持続的な記憶障害と比較して、ＡＡＶ－ｐ３８γ^CAの低力価で処理されたＡＰＰ２３マウスの記憶性能が大幅に改善されたことを示した（図１ｃ～ｇ）。ＡＡＶ－ｐ３８γ^CAで処理されたＡＰＰ２３マウスは、同様の記憶形成年齢が一致する非トランスジェニック対照マウスを示した。まとめると、これらの結果は、低力価のＡＡＶ－ｐ３８γ^CAでＡＤマウスを治療すると、高齢になると記憶障害が効率的に回復したことを示している。

同様に、より高い力価のＡＡＶ－ｐ３８γ^CAまたはＡＡＶ－ｅＧＦＰで治療されたマウスの記憶評価は、ＡＰＰ２３マウスの既存の記憶障害の効率的な逆転を示した（図１ｈ～ｌ）。したがって、高力価のＡＡＶ－ｐ３８γ^CAでの老化したＡＰＰ２３マウスの治療は、ＡＡＶ－ｐ３８γ^CAまたはＡＡＶ－ｅＧＦＰで治療された非トランスジェニックマウスと同等の記憶形成および強化を示したが、ＡＡＶ－ｅＧＦＰで治療されたＡＰＰ２３マウスは、ＭＷＭ試験中に継続的な記憶パフォーマンスの低下を示した。まとめると、これらの結果は、高力価のＡＡＶ－ｐ３８γ^CAでＡＤマウスを治療すると、高齢になると記憶障害が効率的に回復したことを示している。

別の例では、本発明者らは、ヒト非変異タウトランスジェニックＡｌｚ１７マウスをｐ３８γ欠損ｐ３８γ^-/-マウスと交配させた（図２ａ）。これにより、Ａｌｚ１７．ｐ３８γ^+/+マウスと比較して、Ａｌｚ１７．ｐ３８γ^-/-の皮質における内因性ｐ３８γおよびタウの免疫染色によって視覚化されるように、Ａｌｚ１７．ｐ３８γ^-/-マウスの脳にｐ３８γが存在しなくなった（図２ｂ）。これにより、Ａｌｚ１７．ｐ３８γ^-/-マウスの脳におけるｐ３８γの枯渇が成功したことが確認された。

ＭＷＭにおけるＡｌｚ１７．ｐ３８γ^-/-およびＡｌｚ１７．ｐ３８γ^+/+マウスの記憶評価により、Ａｌｚ１７．ｐ３８γ^+/+マウスに記憶障害がないことが確認され、ｐ３８γ^+/+およびｐ３８γ^-/-同腹仔と同等の記憶形成および強化が見られた（図２ｃ～ｆ）。対照的に、Ａｌｚ１７．ｐ３８γ^-/-マウスは、Ａｌｚ１７．ｐ３８γ^+/+マウスと比較して、有意に遅延した記憶形成および有意に減少した記憶統合を示した。これは、ｐ３８γがタウオパチーのマウスモデルにおいてＡβの非存在下で増加したレベルのヒト過剰リン酸化タウの毒性効果を制限することを示している。

別の例では、本発明者らは、ＣＲＳＰＲ／Ｃａｓ９遺伝子編集技術を使用してタウをコードする内因性マウスＭａｐｔ遺伝子を改変し、異なるマウス系統にＴ２０５ＥまたはＴ２０５Ａ変異を導入した（図３ａ）。得られた系統をホモ接合性に交配して、それぞれＴ２０５Ｅ／ＥおよびＴ２０５Ａ／Ａマウスを得た。ゲノム編集の成功は、両方の系統から得られたゲノムＤＮＡの配列決定によって確認され、非変異Ｔ２０５Ｔ／Ｔマウスと比較された（図３ｂ）。翻訳されたマウスタンパク質でアミノ酸交換を伴うＴ２０５Ａ／Ａのゲノム編集の成功は、Ｔ２０５でリン酸化されたタウに特異的な抗体を用いた免疫沈降によって確認した（図３ｃ）。まとめると、本発明者らは、変異タウ発現を有する２つの新規マウス系統、Ｔ２０５Ｅ／ＥおよびＴ２０５Ａ／Ａを生成した。

内因性タウタンパク質におけるＴ２０５変異の機能的影響を決定するために、Ｔ２０５Ｅ／ＥマウスとＴ２０５Ａ／Ａマウスの両方に、誘発性発作の確立された興奮毒性試験パラダイムに供した。５０ｍｇ／ｋｇのペンチレンテトラゾールの投与時にヘテロ接合型Ｔ２０５Ｔ／Ｅおよび非変異型Ｔ２０５Ｔ／Ｔ対照で急速に発症し、より重症の発作を発症するのと比較して、Ｔ２０５Ｅ／Ｅマウスは、より重症の発作を発症するまでの潜時が長くなり、平均発作の重症度が低下した（図３ｄ～ｅ）。逆に、Ｔ２０５Ａ／Ａマウスは、３０ｍｇ／ｋｇのペンチレンテトラゾールの注射後のＴ２０５Ｔ／Ｔ同腹仔と比較して、より重度の発作のより迅速な発症および有意に増加した平均発作重症度を示した（図３ｆ～ｇ）。まとめると、このデータは、リン酸化を模倣するＴ２０５Ｅ／Ｅ変異の存在が興奮毒性発作を減少し、リン酸化を防止するＴ２０５Ａ／Ａ変異が興奮毒性発作を増強し、誘発しやすいことを示している。したがって、このデータは、インビボでのてんかんからのＴ２０５タウリン酸化の保護効果を示している。

別の例では、本発明者らは、Ｔ２０５Ｅ／ＥおよびＴ２０５Ａ／ＡマウスをＡＰＰ２３マウスと交配して、ＡＤに関連する記憶障害におけるＴ２０５タウリン酸化の役割を決定した（図４ａ）。Ｔ２０５（ｐＴ２０５）およびＡβ（６Ｅ１０）でリン酸化されたタウに対する抗体を用いたマウス脳の免疫染色により、ＡＰＰ２３．Ｔ２０５Ａ／ＡマウスにＴ２０５タウリン酸化がないことが確認された（図４ｂ）。ＡＰＰ２３．Ｔ２０５Ｅ／Ｅマウスは、ＡＰＰ２３．Ｔ２０５Ｔ／Ｔ動物と比較して有意に改善された生存率を示したが、ＡＰＰ２３．Ｔ２０５Ａ／Ａは、死亡率がさらに加速する傾向を示した（図４ｃ）。このデータは、ＡＰＰ２３マウスの生存の調節におけるＴ２０５タウリン酸化の重要な役割を示している。

ＭＷＭでの記憶検査では、ＡＰＰ２３．Ｔ２０５Ｔ／Ｔマウスの記憶障害と比較して、ＡＰＰ２３．Ｔ２０５Ａ／Ａマウスの記憶形成および記憶の固定がさらに悪化していることが明らかになった（図４ｅ～ｈ）。逆に、ＡＰＰ２３．Ｔ２０５Ｅ／Ｅマウスは、ＡＰＰ２３．Ｔ２０５Ｔ／Ｔマウスに見られる記憶障害の発症が予防された（図４ｉ～ｌ）。注目すべきことに、Ｔ２０５Ａ／ＡおよびＴ２０５Ｅ／ＥマウスはＭＷＭで正常な記憶形成を示した。このデータは、Ｔ２０５でのタウのリン酸化がＡＰＰ２３マウスの記憶障害を制限している一方で、ナイーブマウスのテストパラダイムの記憶には寄与していないことを示している。

別の例では、発明者らは、タウ欠損バックグラウンドでＡＰＰ２３マウスを交配し、さらに得られたＡＰＰ２３．ｔａｕ^-/-マウスを、ニューロンでトランスジェニックｐ３８γ^CAを発現する系統と交配し、ＡＰＰ２３．ｔａｕ^-/-．ｐ３８γ^CAマウスを作製した（図５ａ）。次に、ＡＰＰ２３．ｔａｕ^-/-．ｐ３８γ^CAマウスの脳におけるタウ発現を、非変異タウ（ｔａｕＷＴ）またはリン酸化防止Ｔ２０５Ａタウ（ｔａｕＴ２０５Ａ）のタウバリアントを使用して、出生時に脳にＡＡＶを注射することによって再構成し、その後に６カ月齢で記憶検査を行った（図５ｂ）。ｐ３８γ^CAのＨＡタグおよび脳のヒトタウに対する抗体を用いた免疫蛍光染色により、ＡＡＶを注射したＡＰＰ２３．ｔａｕ^-/-．ｐ３８γ^CAマウスにおけるｐ３８γ^CAの発現およびタウの再構成の成功が確認された（図５ｃ）。

ＡＡＶを注射したＡＰＰ２３．ｔａｕ^-/-．ｐ３８γ^CAマウスの記憶検査は、ＡＡＶ－ｔａｕＷＴを注射したＡＰＰ２３．ｔａｕ^-/-．ｐ３８γ^CAマウスの記憶能力の改善を明らかにしたが、ＡＡＶ－ｔａｕＴ２０５Ａによる再構成はＡＰＰ２３．ｔａｕ^-/-．ｐ３８γ^CAマウスの記憶障害を予防することができなかった（図５ｄ～ｆ）。比較のために、ＡＰＰ２３．ｔａｕ^-/-マウス（ｐ３８γの非存在下）のＡＡＶ－ｔａｕＷＴおよびＡＡＶ－ｔａｕＴ２０５Ａ注射の両方は、記憶能力を改善しなかった。ＴａｕＷＴで再構成されたｔａｕ^-/-マウスを、通常の記憶課題のパフォーマンスの基準として使用した。まとめると、このデータは、Ｔ２０５でのタウのリン酸化がＡＤマウスにおけるｐ３８γ^CAの治療効果に必要であることを示している。

別の例では、本発明者らは、ヒト非変異タウトランスジェニックＡｌｚ１７マウスをニューロンでｐ３８γ^CAを発現するトランスジェニックマウスと交配させ、Ａｌｚ１７．ｐ３８γ^CAマウスをもたらした（図８ａ）。ｐ３８γ^CAおよびヒトタウのＨＡタグに対する抗体を用いた脳の免疫蛍光染色は、脳ニューロンにおけるタウおよびｐ３８γ^CAの共発現を示した（図８ｂ）。マウス脳からのシナプトソーム調製物のウエスタンブロッティングは、Ａｌｚ１７．ｐ３８γ^+/+対照と比較して、Ａｌｚ１７．ｐ３８γ^CAマウスのシナプス後のＴ２０５でタウのリン酸化の増加を示した（図８ｃ）。対照的に、Ｔ２０５でのタウのリン酸化は、シナプス後（ｐｏｓｔ－ｓｙｎａｐｓｅｓ）のｐ３８γも欠いているＡｌｚ１７．ｐ３８γ^-/-マウスではもはや検出できなかった（図８ｃ）。シナプス後肥厚タンパク質９５（ＰＳＤ－９５）およびシナプトソーム関連タンパク質２５（ＳＮＡＰ２５）の検出により、調製中にシナプトソームが同等に濃縮されていることが確認された。ｐ３８γはＡｌｚ１７．ｐ３８γ^+/+およびＡｌｚ１７．ｐ３８γ^CAマウスのシナプトソームに存在したが、Ａｌｚ１７．ｐ３８γ^-/-マウスのシナプトソームには存在せず、それらの遺伝子型と一致していた。タウおよびＴ２０５でリン酸化されたタウに対する抗体を用いた脳の免疫蛍光染色は、Ａｌｚ１７マウスと比較してＡｌｚ１７．ｐ３８γ^CAマウスにおけるＴ２０５タウリン酸化の増加を明らかにした（図８ｄ）。しかしながら、老化したマウスの脳の銀染色は、Ａｌｚ１７同腹仔と比較してＡｌｚ１７．ｐ３８γ^CAマウスの脳の神経原線維変化（ＮＦＴ）の明白な増加を示さなかった（図８ｅ）。ＭＷＭでのＡｌｚ１７．ｐ３８γ^CAマウスの記憶検査では、記憶障害は見られず、Ａｌｚ１７またはｐ３８γ^CAまたは非トランスジェニック対照と区別できないパフォーマンスが示された（図８ｆ～ｈ）。まとめると、このデータは、Ａｌｚ１７マウスでのｐ３８γ^CA発現がシナプス後でを含むＴ２０５タウリン酸化を増加させたが、タウ病理を加速したり、記憶障害を引き起こしたりしなかったことを示している。

別の例では、本発明者らは、ヒトＰ３０１Ｓ変異タウトランスジェニックＴａｕ５８マウスを、３カ月齢で低力価および高力価の治療用ＡＡＶ－ｐ３８γ^CAまたは対照ＡＡＶ－ＧＦＰで処理した。Ｔａｕ５８マウスは、３カ月齢での高架式十字迷路（ＥＰＭ）試験中に脱抑制表現型（=オープンアーム時間の増加）を示し、時間とともにさらに悪化する。高力価のＡＡＶ－ｐ３８γ^CAで治療したＴａｕ５８マウスは、５カ月齢のＡＡＶ－ＧＦＰで治療したＴａｕ５８マウスと比較してオープンアーム時間の短縮を示した（図１１）。さらに、ＡＡＶ－ｐ３８γ^CAで治療したＴａｕ５８マウスは、ＡＡＶ－ＧＦＰで治療したＴａｕ５８対照と比較して、力価に依存した多動性の改善を示した（図１２～１３）。まとめると、このデータは、ｐ３８γ^CAの発現がタウオパチーのマウスモデルにおけるタウ病理に関連する障害を効率的に元に戻すことを示している。

タウのリン酸化および凝集に対するｐ３８γの効果
Ｔ２０５でのタウのリン酸化がタウのリン酸化および凝集に及ぼす影響を調べるために、ＴＡＵ５８／２マウスをＡＡＶ－ｐ３８γ^CAまたは対照（ＡＡＶ－ＧＦＰ）で治療した。

ＡＡＶ－ｐ３８γ^CAおよび対照（ＡＡＶ－ＧＦＰ）で治療したＴＡＵ５８／２マウスからの脳の連続抽出は、ｐ３８γでの治療時に、明白なタウリン酸化の欠如、および不溶性の欠如を示した。

脳ニューロンでＰ３０１Ｓ変異タウを発現し、ヒトアルツハイマー病および前頭側頭型認知症に似ている進行性タウ病理を形成するＴＡＵ５８／２マウスに、３カ月齢で、ニューロン発現用のｐ３８γ^CAをコードするＡＡＶ（ヒトシナプシンプロモーターに作動可能にリンク）または対照としての緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）を静脈内注射した。１１カ月齢で、すべての脳は、ストリンジェンシーが増加するバッファー（ＲＡＢ（０．１ＭＭｅｓ／１ｍＭＥＧＴＡ／０．５ｍＭＭｇＳＯ₄、７５０ｍＭＮａＣｌ、２０ｍＭＮａＦ、１ｍＭＮａ₃ＶＯ₄、０．１％Ｒｏｃｈｅプロテアーゼ阻害剤、ｐＨ７．４）、ＲＩＰＡ（５０ｍＭＴｒｉｓ／１５０ｍＭＮａＣｌ、１％ノニデットＰ－４０／５ｍＭＥＤＴＡ／０．５％デオキシコール酸ナトリウム／０．１％ＳＤＳ、ｐＨ８．０）、および７０％ギ酸）（ＲＡＢ＞ＲＩＰＡ＞ＦＡ）を使用した連続抽出によって分析し、それぞれ可溶性、中間可溶性、および不溶性のタンパク質を得た。抽出物を、ＨＡ、ＧＴＰ、Ｔａｕ１３、ＧＡＤＰＨおよびｐＴａｕＳ４２２抗体を用いたウエスタンブロッティングによって分析した。ＨＡ抗体を使用してｐ３８γ^CAの発現を確認し、ＧＦＰ抗体を使用して対照を特定した。結果を図１９に示す。全ヒトトランスジェニックタウはＴａｕ１３抗体で検出され、リン酸化タウは部位特異的抗体（ｐＴａｕＴ２０５およびｐＴａｕＳ４２２）で検出された。タウレベルの変化（すなわち、増加）、ｐ３８γ^CA発現時のタウのリン酸化または不溶性は見出されず、ＡＡＶ－ｐ３８ｇＣＡ治療がタウ病理の進行を加速しないことを確認した。実際、後期状態（ｌａｔｅｓｔａｔｅ）の疾患エピトープｐＴａｕＳ４２２での不溶性タウのリン酸化は、ＡＡＶ－ｐ３８γ^CAで治療したＴＡＵ５８／２マウスの不溶性画分で減少することが見出された。

セリン－４２２（ｐＳ４２２）でのタウのリン酸化は疾患に関連した修飾であり、タウはアルツハイマー病および他のタウオパチーにおいてセリン４２２でリン酸化が増加することが見出されている。ｐＳ４２２エピトープの出現は、神経原線維変化の形成および認知機能の低下と強い相関関係を有する。したがって、ｐＳ４２２と認知機能低下との密接な関連を考えると、Ｐ３８γがＴＡＵ５８／２マウス脳由来のタウの不溶性画分でｐＴａｕＳ４２２を減少させる能力は、ｐ３８γが認知機能低下、および脳のニューロンにおけるタウのセリン４２２のリン酸化に関連する、または脳のニューロンにおけるタウのセリン４２２によって媒介されるタウオパチーを元に戻す、または減少させることができることを示している。

まとめると、このデータは、ｐ３８γ^CAの発現がタウの病状の進行を予防または軽減することを示している。

参考文献
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Claims

対象のタウオパチーを治療または予防する方法であって、
（ａ）タウの配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲのスレオニンでのタウのリン酸化を促進する；および／または
（ｂ）リン酸化タウのホスホミメティックを導入する、ここで、リン酸化タウは、タウの配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲのスレオニンでリン酸化されているタウである、
薬剤を投与する工程を含む、方法。
タウオパチーに関連する認知障害に罹患している対象の認知能力を改善する方法であって、
（ａ）タウの配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲのスレオニンでのタウのリン酸化を促進する；および／または
（ｂ）リン酸化タウのホスホミメティックを対象のニューロンに導入する、ここで、リン酸化タウは、タウの配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲのスレオニンでリン酸化されているタウである、
薬剤を投与する工程を含む、方法。
タウオパチーに罹患している対象のニューロンにおけるタウ凝集を低減または予防する方法であって、ニューロンに
（ａ）タウの配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲのスレオニンでのタウのリン酸化を促進する；および／または
（ｂ）リン酸化タウのホスホミメティックを導入する、ここで、リン酸化タウは、タウの配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲのスレオニンでリン酸化されているタウである、
薬剤を導入する工程を含む、方法。
対象のニューロンにおける神経原線維変化を低減または予防する方法であって、
（ａ）タウの配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲのスレオニンでのタウのリン酸化を促進する；および／または
（ｂ）リン酸化タウのホスホミメティックを導入する、ここで、リン酸化タウは、タウの配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲのスレオニンでリン酸化されているタウである、
有効量の薬剤を投与する工程を含む、方法。
タウオパチーに罹患している対象のニューロンにおけるヒトタウの４２２位でのセリンのリン酸化を低減する方法であって、
（ａ）タウの配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲのスレオニンでのタウのリン酸化を促進する；および／または
（ｂ）リン酸化タウのホスホミメティックを導入する、ここで、リン酸化タウは、タウの配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲのスレオニンでリン酸化されているタウである、
有効量の薬剤を投与する工程を含む、方法。
タウの配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲにおけるスレオニンが、ヒトタウの２０５位にあるスレオニンである、請求項１～５のいずれか一項に記載の方法。
タウオパチーは、ヒトタウの４２２位でのセリンのリン酸化に関連している、請求項１～６のいずれか一項に記載の方法。
タウのリン酸化は、前記対象のニューロンにおける、ｐ３８γ活性、またはｐ３８γのバリアントの活性を上昇させる薬剤を投与することによって促進される、請求項１～７のいずれか一項に記載の方法。
前記薬剤は、ｐ３８γ、またはそのバリアントを含む、請求項８に記載の方法。
前記薬剤は、前記対象のニューロンにおいて、ｐ３８γ、またはそのバリアントを発現することができる核酸を含む、請求項８に記載の方法。
ｐ３８γは、配列番号２のアミノ酸配列を含む、請求項８～１０のいずれか一項に記載の方法。
ｐ３８γのバリアントは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項８～１１のいずれか一項に記載の方法。
ｐ３８γのバリアントは、ETPL、KETPL、SKETPL、VSKETPL、RVSKETPL、ARVSKETPL、GARVSKETPL、LGARVSKETPL、QLGARVSKETPL、RQLGARVSKETPL、PRQLGARVSKETPL、PPRQLGARVSKETPL、KPPRQLGARVSKETPL、FKPPRQLGARVSKETPL、SFKPPRQLGARVSKETPL、LSFKPPRQLGARVSKETPL、VLSFKPPRQLGARVSKETPL、EVLSFKPPRQLGARVSKETPL、KEVLSFKPPRQLGARVSKETPL、YKEVLSFKPPRQLGARVSKETPL、TYKEVLSFKPPRQLGARVSKETPL、VTYKEVLSFKPPRQLGARVSKETPL、RVTYKEVLSFKPPRQLGARVSKETPL、KRVTYKEVLSFKPPRQLGARVSKETPL、ETAL、KETAL、PKETAL、VPKETAL、RVPKETAL、ARVPKETAL、GARVPKETAL、LGARVPKETAL、QLGARVPKETAL、RQLGARVPKETAL、PRQLGARVPKETAL、PPRQLGARVPKETAL、KPPRQLGARVPKETAL、FKPPRQLGARVPKETAL、SFKPPRQLGARVPKETAL、LSFKPPRQLGARVPKETAL、VLSFKPPRQLGARVPKETAL、EVLSFKPPRQLGARVPKETAL、KEVLSFKPPRQLGARVPKETAL、YKEVLSFKPPRQLGARVPKETAL、TYKEVLSFKPPRQLGARVPKETAL、VTYKEVLSFKPPRQLGARVPKETAL、RVTYKEVLSFKPPRQLGARVPKETAL,、およびKRVTYKEVLSFKPPRQLGARVPKETALからなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項８～１２のいずれか一項に記載の方法。
ｐ３８γのバリアントは、ｐ３８γの構成的活性型である、請求項８～１３のいずれか一項に記載の方法。
ｐ３８γの構成的活性型（ｐ３８γ^CA）は、配列番号３を含む、請求項１４に記載の方法。
前記リン酸化タウのホスホミメティックは、前記対象のニューロンにタウ遺伝子編集システムを導入することによって、前記対象のニューロンに導入される、請求項１～１５のいずれか一項に記載の方法。
前記タウ遺伝子編集システムは、ヒトタウの２０５位でグルタミン酸の代わりにスレオニンの置換をタウ遺伝子に導入する、請求項１６に記載の方法。
前記遺伝子編集システムは、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ複合体、またはその一部である、請求項１６または１７に記載の方法。
前記ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ複合体は、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９複合体である、請求項１８に記載の方法。
前記タウオパチーは、進行性アルツハイマー病、前頭側頭葉認知症（ｆｒｏｎｔｏｔｅｍｐｏｒａｌｌｏｂａｒｄｅｍｅｎｔｉａ）、大脳皮質基底核変性症、進行性核上性麻痺、原発性加齢性タウオパチー、慢性外傷性脳症、１７番染色体に連鎖しパーキンソニズムを伴う前頭側頭型認知症（ｆｒｏｎｔｏｔｅｍｐｏｒａｌｄｅｍｅｎｔｉａｗｉｔｈｐａｒｋｉｎｓｏｎｉｓｍｌｉｎｋｅｄｔｏｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ１７）、ピック病、球状グリア性タウオパチー（ｇｌｏｂｕｌａｒｇｌｉａｌｔａｕｏｐａｔｈｙ）、またはパーキンソン病である、請求項１～１９のいずれか一項に記載の方法。
前記認知能力の改善は、記憶の改善である、請求項２または６～２０のいずれか一項に記載の方法。
タウ（Ｍａｐｔ）遺伝子編集システムまたはその一部、またはタウ遺伝子編集システムまたはその一部をコードする核酸、野生型タウ遺伝子に変異を導入してリン酸化タウのホスホミメティックの発現を引き起こす核酸を含む前記遺伝子編集システムまたはその一部、を含む薬剤であって、ここで前記リン酸化タウは、前記タウの配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲのスレオニンでリン酸化されている、薬剤。
前記タウ遺伝子編集システムは、前記タウの配列ＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲのスレオニンまたはその近くのヌクレオチド配列を標的とするｇＲＮＡを含むＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９システムである、請求項２２に記載の薬剤。
請求項２２または２３に記載の薬剤を含む組成物。