JP2022543242A - ヒトアミノステロールｅｎｔ－０３化合物、それを含む関連組成物、およびそれを使用する方法 - Google Patents

ヒトアミノステロールｅｎｔ－０３化合物、それを含む関連組成物、およびそれを使用する方法 Download PDF

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Abstract

本発明は、概して新規なアミノステロール化合物、それを含む組成物、および新規なアミノステロール化合物および組成物の製造方法および使用方法に関する。【選択図】 図１C

Description

本出願は、それぞれの内容全体が参照により本明細書に組み込まれる、2019年8月2日に出願された米国仮出願第62／882,358号、及び2020年6月18日に出願された米国仮出願第63／041,031号に対する35USC§119に基づく優先権利益を主張する。
本出願は、概して、ヒト疾患の治療のためのアミノステロール化合物に関する。
アミノステロールは、ステロールのアミノ誘導体である。スクアラミンは少なくとも１２の関連化合物を含む大きなアミノステロールファミリーの最も豊富なメンバーである（Raoら、2000）。
Figure 2022543242000002
スクアラミン（その構造は上記に示されている）の発見は、MichaelZasloffによって1993年に報告された（米国特許第5,192,756号）。
例示的なアミノステロールには、アミノステロール１４３６としても知られるＥＮＴ－０２、トロズスクエミンおよびＭＳＩ１４３６も含まれる。これらのアミノステロール（米国特許第5,192,756号）は、哺乳動物系において多様な薬理学的活性を示す。アミノステロール１４３６は脊椎動物において体重減少および脂肪組織動員を引き起こす（Zasloffら、2001）。
Figure 2022543242000003
アミノステロール１４３６は食欲とエネルギーバランスに関与する視床下部の核内で作用し、マウスとラットの食餌誘発と遺伝モデルの両方でインシュリン抵抗性を逆転させることが示された。この化合物は、活性化されたインスリン受容体をオフにするホスファターゼであるＰＴＰ１Ｂを、視床下部インスリン受容体に対するインビボでのその活性の証拠と共に阻害することが示された。肥満被験者にアミノステロール１４３６を静脈内投与した第1相ヒト臨床試験では、インスリン感受性の改善が示された。
アミノステロール１４３６がインビボでＰＴＰ１Ｂ阻害を示すことを認識して、多くの研究が行われた。これには、視床下部インスリン抵抗性のマウスモデルにおけるメタボリックシンドロームの改善、ＬＤＬ受容体ノックアウトマウスにおけるアテローム性動脈硬化症の逆転、悪性腫瘍の成長抑制、ゼブラフィッシュにおける尾および心筋の再生の促進、成体マウスにおける幹細胞動員による心筋梗塞および外傷性四肢筋損傷の再生修復、大脳辺縁系のmGluR5受容体を標的とすることによるマウスにおけるストレス誘発性不安の軽減、ニューロンのＰＴＰ１Ｂ依存性機構を介したアルツハイマー病モデルにおける行動の逆転およびニューロン消失の抑制、アルツハイマー病の線虫モデルにおけるβアミロイド凝集体のインビトロ毒性の低下（Limbockerら、2019年）、ならびに毒性αシヌクレイン凝集体形成の減少および線虫パーキンソンズモデルでの寿命の延長（Perniら、2018年）が含まれる。
アミノステロール１４３６の使用に関連して、以下のようないくつかの臨床試験が実施されている：（1)ClinicalTrials.gov Identifier NCT00509132、Genaera Corp.による「健康な志願者を被験体としたトロズスクエミンの第I相、二重盲検、無作為化、プラセボ対照、上行性静脈内単回投与耐性試験および薬物動態試験」（2) ClinicalTrials.gov.Identifier NCT00606112、Genaera Corp.による「肥満または過体重の2型糖尿病志願者を被験体とした単回投与、忍容性および薬物動態試験」、（3) ClinicalTrials.gov Identifier NCT00806338、Genaera Corp.による「肥満または過体重の2型糖尿病志願者を被験体とした複数用量漸増、忍容性および薬物動態試験」、および（4)ClinicalTrials.gov NCT00806338、Depy Med Inc.による「メタスティック乳がんにおけるＭＳＩ１４３６Cの安全性と許容性」。
新規アミノステロール化合物およびその使用方法が当該技術分野において必要とされている。本開示は、これらの必要性を満たす。
一つの局面では、下記式を有するアミノステロール化合物が提供される：
Figure 2022543242000004
式中、Ｒ1はＨまたはＤであり、Ｒ2はＨまたはＤであり、ただしすべてのＲ1はＨであり、すべてのＲ2はＨであり、またはすべてのＲ1およびＲ2はＨである、
またはそれらの薬学的に許容される塩、溶媒和物、プロドラッグ、または誘導体。
一実施形態では、アミノステロール化合物が以下の式を有する：
Figure 2022543242000005
またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、プロドラッグ、または誘導体。
一実施形態では、アミノステロールが以下の式を有する：
Figure 2022543242000006
またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、プロドラッグまたは誘導体。
一実施形態では、アミノステロールが以下の式を有する：
Figure 2022543242000007
またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、プロドラッグ、または誘導体。
一実施形態では、アミノステロールが以下の式を有する：
Figure 2022543242000008
またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、プロドラッグ、または誘導体。
別の局面において、下式を有するアミノステロール化合物：
Figure 2022543242000009
またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、プロドラッグ、または誘導体が提供される。
一実施形態では、アミノステロール化合物が以下の式を有する：
Figure 2022543242000010
またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、プロドラッグ、または誘導体。
１つの局面において、下式を有するアミノステロール化合物：
Figure 2022543242000011
薬学的に許容される塩、溶媒和物、プロドラッグ、または誘導体が提供される。
一実施形態では、アミノステロール化合物が以下の式を有する：
Figure 2022543242000012
またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、プロドラッグ、または誘導体。
別の局面において、下式を有するアミノステロール化合物：
Figure 2022543242000013
式中、Ｒ1はＨ、任意選択で置換されたアリール、任意選択で置換されたヘテロアリール、任意選択で置換されたＣ1－Ｃ6アリール、任意選択で置換されたＣ1－Ｃ6アルキニル、任意選択で置換されたヘテロシクリル、任意選択で置換されたＣ3－C8シクロアルキル、および任意選択で置換されたＣ1－Ｃ6アルケニル；およびＲ2はＨまたは－Ｃ（Ｏ）Ｒ3であり、ここでR3は任意選択で置換されたアリール、任意選択で置換されたヘテロアリール、任意選択で置換されたＣ1－C6アルキル、任意選択で置換されたＣ1－C6アルキニル、任意選択で置換されたヘテロシクリル、任意選択で置換されたＣ3－Ｃ8シクロアルキル、または任意選択で置換されたＣ1－Ｃ6アルケニルであり、ただしＲ1およびＲ2の少なくとも１つはＨではない；
またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、プロドラッグ、または誘導体、
が提供される。
一実施形態では、アミノステロール化合物が以下の式を有し：
Figure 2022543242000014
またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、プロドラッグ、または誘導体。
別の局面において、下式を有するアミノステロール化合物：
Figure 2022543242000015
式中、Ｒ1はＨ、任意選択で置換されたアリール、任意選択で置換されたヘテロアリール、任意選択で置換されたＣ1－Ｃ6アリール、任意選択で置換されたＣ1－Ｃ6アルキニル、任意選択で置換されたヘテロシクリル、任意選択で置換されたＣ3－Ｃ8シクロアルキル、または任意選択で置換されたＣ1－Ｃ6アルケニル；およびＲ2はＨまたは－Ｃ（Ｏ）Ｒ3であり、ここでＲ3は任意選択で置換されたアリール、任意選択で置換されたヘテロアリール、任意選択で置換されたＣ1－Ｃ6アルキル、任意選択で置換されたＣ1－Ｃ6アルキニル、任意選択で置換されたヘテロシクリル、任意選択で置換されたＣ3－Ｃ8シクロアルキル、または任意選択で置換されたＣ1－Ｃ6アルケニルであり、ただしＲ1およびＲ2の少なくとも１つはＨではない；またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、プロドラッグ、または誘導体、
が提供される。
いくつかの実施形態において、アミノステロールは、以下の式を有する：
Figure 2022543242000016
またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、プロドラッグまたは誘導体。
別の局面において、下式を有するアミノステロール化合物：
Figure 2022543242000017
が提供される。
式中、Ｒ1はＨ、任意選択で置換されたアリール、任意選択で置換されたヘテロアリール、任意選択で置換されたＣ1－C6アルキル、任意選択で置換されたC1－C6アルキニル、任意選択で置換されたヘテロシクリル、任意選択で置換されたC3－C8シクロアルキル、および任意選択で置換されたＣ1－Ｃ6アルケニルであり；およびＲ2はＨまたは－Ｃ（Ｏ）Ｒ3であり、Ｒ3は任意選択で置換されたアリール、任意選択で置換されたヘテロアリール、任意選択で置換されたＣ1－Ｃ6アルキル、任意選択で置換されたＣ1－Ｃ6 1アルキニル、任意選択で置換されたヘテロシクリル、任意選択で置換されたＣ3－Ｃ8シクロアルキル、または任意選択で置換されたＣ1－Ｃ6アルケニルであり；ただし、Ｒ1およびＲ2の少なくとも１つはＨではない；またはそれらの薬学的に許容される塩、溶媒和物、プロドラッグまたは誘導体である。
一実施形態では、アミノステロール化合物は以下の式を有し：
Figure 2022543242000018
またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、プロドラッグ、または誘導体である。
いくつかの実施形態では、アミノステロールが薬学的に許容される塩として製剤化される。いくつかの実施形態において、薬学的に許容される塩はリン酸塩である。
１つの局面において、本明細書のいずれかの実施形態に従うアミノステロール化合物を含む組成物が提供され、該組成物は、少なくとも１つの薬学的に許容される担体または賦形剤を含む。いくつかの実施形態では、組成物が（a）水性キャリア、（b）緩衝液、（c）糖、および／または（d）ポリオール化合物のうちの１つ以上を含む。いくつかの実施形態では、組成物が少なくとも１つの追加の活性剤を含む。
いくつかの実施形態では、組成物が（a）経口、肺、直腸、結腸、非経口、槽内、膣内、腹腔内、静脈内、皮下、筋肉内、噴霧、吸入、眼、耳、局所、口腔、鼻、および局所投与からなる群から選択される投与のために；(b)液体分散液、ゲル、エアロゾル、軟膏、クリーム、凍結乾燥製剤、錠剤、カプセルからなる群から選択される剤形に；(c)徐放製剤、急速溶融製剤、遅延放出製剤、徐放製剤、拍動放出製剤、および混合即時放出および徐放製剤からなる群から選択される剤形に；または（d）（a）、（b）および（c）の任意の組合せに製剤化される。
いくつかの実施形態では、組成物が経口投与のために製剤化される。いくつかの実施形態では、組成物が経口錠剤またはカプセル剤として製剤化される。いくつかの実施形態では、組成物が鼻腔内投与のために製剤化される。
一態様では必要とする被験体を治療する方法が提供され、この被験体はアミノステロールによる治療を受けやすい状態を有し、この方法は本明細書のいずれかの実施形態による組成物を被験体に投与することを含む。いくつかの実施形態において、この状態は、異常なα－シヌクレイン病理および／またはドーパミン作動性機能不全と相関している。
別の局面において、必要とされる被験体において、異常なα－シヌクレイン病理学および／またはドーパミン作動性機能不全と相関する状態もしくは障害、または関連症状の発症または進行を処置、予防および／または遅延させる方法が提供され、この方法は、本明細書中の任意の実施形態による組成物の治療有効量を投与する工程を包含する。
いくつかの実施形態において、（a）症状は便秘、幻覚、認知障害、および炎症からなる群から選択され；(b)症状はシヌクレオパシー、神経変性疾患、神経疾患または障害、心理学的および／または行動障害、または脳もしくは全身性虚血性障害もしくは状態と相関しており；(c)状態または障害は、シヌクレオパシー、神経変性疾患、または神経学的疾患もしくは障害であり；(d)状態または障害は、心理学的および／または行動障害であり；または（e）状態または障害は、脳もしくは全身性虚血性障害もしくは状態である。
いくつかの実施形態において、（a）シヌクレオパシー、神経変性疾患、または神経学的疾患または障害は、パーキンソン病、アルツハイマー病、統合失調症、多系統萎縮症、レビー小体型認知症、レビー小体病を伴う認知症、ハンチントン病、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、フリードライヒ失調症、血管性筋萎縮症、核上性麻痺、進行性核麻痺、前頭側頭型認知症、進行性核麻痺、グアドロピアンパーキンソニズム、脊髄小脳失調症、パーキンソニズム、外傷性脳損傷、加齢に伴う変性過程、および老化の認知症からなる群より選択され；(b)心理学的または行動障害は、うつ病、自閉症、スペクトラム障害、ダウン症候群、ゴーシェ病、クラッベ病、スフィンゴ糖脂質代謝に影響を及ぼすリソゾーム状態、ＡＤＨＤ、激越、不安、せん妄、易刺激性、錯覚および妄想、記憶喪失、無感動、双極性障害、脱抑制、異常運動および強迫行動、嗜癖、脳性麻痺、てんかん、大うつ病性障害、レム睡眠行動障害（ＲＢＤ）、睡眠断片化、ＲＥＭ行動障害、概日リズム障害、睡眠時無呼吸のような睡眠障害、および認知障害からなる群より選択され；または（c）脳または一般の虚血障害若しくは状態は、心停止または蘇生後の微小血管障害、分娩時脳虚血、脳虚血、頸動脈手術中の脳虚血、脳静脈への血液供給動脈の狭窄による慢性脳虚血、脳血管奇形、糖尿病性網膜症、高コレステロール、心筋梗塞、心不全、うっ血性心不全、心筋炎、心膜炎、冠動脈心疾患、狭心症、ショック、四肢の虚血、腎動脈の狭窄、糖尿病性網膜症、マラリアに伴う血栓症、人工心臓弁、貧血、脾機能亢進症候群、肺気腫、勃起機能不全、心臓伝導障害、高血圧、肺水腫からなる群から選択される。
別の局面において、必要とされる被験体において、異常なα－シヌクレイン病理学および／またはドーパミン作動性機能不全と相関する、脳または全身虚血障害および／または関連症状の発症または進行を処置、予防および／または遅延させる方法が提供され、この方法は、本明細書の任意の実施形態による組成物の治療有効量を投与する工程を包含する。
１つの実施形態において、脳または一般の虚血性障害および／または関連症状は、微小血管障害、分娩時脳虚血、心停止または心蘇生の間の／後の脳虚血、頸動脈手術中の脳虚血、脳静脈の血液供給動脈の狭窄による慢性脳虚血、脳血管奇形、高血圧、高コレステロール、心筋梗塞、心不全、うっ血性心不全、心筋炎、心膜炎、冠動脈心疾患、狭心症、ショック、四肢の虚血、腎動脈の狭窄、糖尿病性網膜症、マラリアに伴う血栓症、人工心臓弁、貧血脾機能亢進症候群、肺線維症、勃起不全、心伝導障害（ＣＣＤ）および／または関連症状、肺水腫からなる群より選択される。
１つの局面において、被験体における調節ホスファターゼ（例えば、タンパク質チロシンホスファターゼ1B(ＰＴＰ１Ｂ））を阻害する方法が提供され、この方法は、本明細書中の任意の実施形態による組成物の治療有効量を被験体に投与する工程を包含する。本明細書中に記載されるアミノステロールによって阻害される他の調節ホスファターゼもまた、本明細書中に詳述される。いくつかの実施形態では、１つ以上の調節ホスファターゼにおける阻害が約1％～約10％、約10％～約20％、約20％～約30％、約30％～約40％、約40％～約50％、約50％～約60％、約60％～約70％、約70％～約80％、約80％～約90％、および約90％～約100％から選択される。
別の局面において、食欲または体重増加の開始または進行、および／または１つ以上の関連する症状を、それを必要とする被験体において抑制、予防および／または遅延させる方法が提供され、この方法は、本明細書中の任意の実施形態による組成物の治療有効量を被験体に投与する工程を包含する。
別の局面において、被験体の腸における遺伝子転写を増加させる方法が提供され、この方法は、本明細書中の任意の実施形態のアミノステロール化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、プロドラッグまたは誘導体の治療有効量を被験体に投与する工程を包含する。
いくつかの実施形態において、遺伝子転写の増加は、カスパーゼ14、コラーゲンタイプＸＶＩＩα１、コルネオデスモシン、コルニフェリン、シスタチンE／M、デルモキン、デスモコリン1、デスモグレイン１β、フィラグリン、ギャップ結合タンパク質β４、ギャップ結合タンパク質β６、Ｈ１９インプリンティングされた母性発現転写産物、ホルネリン、カリクレイン関連－ペプチダーゼ７キモトリプティックストラタム、ケラチン１、ケラチン１０、ケラチン細胞分化関連タンパク質、プロリン富化ケラチン細胞、後期角化エンベロープ1A1、後期角化エンベロープ１Ａ２、後期角化エンベロープ１Ｂ、後期角化エンベロープ１IＣ、後期角化エンベロープ１Ｅ、後期角化エンベロープ１Ｆ、後期角化エンベロープ１Ｇ、後期角化エンベロープ１Ｈ、角質化エンベロープ１Ｉ、後期角化エンベロープ１Ｊ、後期角質化エンベロープ１Ｌ、後期角質化エンベロープ１Ｍ、後期角質化エンベロープ３Ｃ、後期角質化エンベロープ３Ｅ、後期角質化エンベロープ３Ｆ、レクチンガラクトース結合可溶性７、ロリクリン、ミオグロビン、ミオシン結合２プロテインＣスロータイプ、ミオシンＨポリペプチド１骨格筋、ミオシンＨポリペプチド８、ミオシン軽鎖リン酸化可能な速いスケ、ミオシン軽鎖ポリペプチド３、ミオゼニン１、ミオゼニン２、およびタイチンキャップから選択される１以上の遺伝子についてである。
いくつかの実施形態において、この方法は、カスパーゼ１４、コラーゲンタイプＸＶＩＩα１、コルネオデスモシン、コルニフェリン、シスタチンＥ／Ｍ、デルモキン、デスモコリン１、デスモグレイン１β、フィラグリン、ギャップ結合タンパク質β４、ギャップ結合タンパク質β６、Ｈ１９インプリンティングされた母性発現転写産物、ホルネリン、カリクレイン関連－ペプチダーゼ７キモトリプティックストラタム、ケラチン１、ケラチン１０、ケラチン細胞分化関連タンパク質、プロリン富化ケラチン細胞、後期角化エンベロープ１Ａ１、後期角化エンベロープ１Ａ２、後期角化エンベロープ１Ｂ、後期角化エンベロープ１Ｃ、後期角化エンベロープ１Ｅ、後期角化エンベロープ1F、後期角化エンベロープ1G、後期角化エンベロープ1H、角質化エンベロープ１Ｉ、後期角化エンベロープ１Ｊ、後期角質化エンベロープ１Ｌ、後期角質化エンベロープ１Ｍ、後期角質化エンベロープ３Ｃ、後期角質化エンベロープ３Ｅ、後期角質化エンベロープ３Ｆ、レクチンガラクトース結合可溶性７、ロリクリン、ミオグロビン、ミオシン結合２プロテインＣスロータイプ、ミオシンＨポリペプチド１骨格筋、ミオシンＨポリペプチド８、ミオシン軽鎖リン酸化可能な速いスケ、ミオシン軽鎖ポリペプチド３、ミオゼニン１、ミオゼニン２、およびタイチンキャップから選択される１つ以上の遺伝子をアップレギュレートまたはダウンレギュレートする１つ以上の非アミノステロール化合物を被験体に投与することをさらに含む。非アミノステロール化合物は、前述の遺伝子のいずれかを調節することが当技術分野で知られている任意の化合物であってよい。
いくつかの実施形態では、遺伝子転写の増加が約1％～約10％、約10％～約20％、約20％～約30％、約30％～約40％、約40％～約50％、約50％～約60％、約60％～約70％、約70％～約80％、約80％～約90％、約90％～約100％、約100％～約125％、約125％～約150％、約150％～約175％、約175％～約200％、約200％～約250％、約250％～約300％、約300％～約350％、約350％～約400％、約400％～約450％、約500％～約600％、約600％～約700％、約700％～約800％、約800％～約900％、約900％～約1000％、または約1000％～約1500％から選択される。遺伝子転写の増加は例えば、関連遺伝子の転写と相関するタンパク質の発現の増加を定性的または定量的に測定することによって、または臨床的に認証されるスケールまたはツールを使用して測定することができる。
１つの局面において、治療有効量のアミノステロール化合物またはそれを含む組成物を、本明細書で述べられると同様に投与することを含む、治療的または予防的利益を達成するために１つ以上の調節ホスファターゼを阻害する方法が包含される。
いくつかの実施形態では、投与方法が経口、経鼻、肺、舌下、頬側、直腸、膣、静脈内、動脈内、皮内、腹腔内、くも膜下、筋肉内、硬膜外、脳内、脳室内、経皮、またはそれらの任意の組合せを含む。いくつかの実施形態では、投与方法が経鼻投与、経口投与、またはそれらの組み合わせである。
いくつかの実施形態において、アミノステロール化合物またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、プロドラッグ、または誘導体の治療有効量は、（a）被験体の約0．1～約20mg／kg体重；(b)被験体の約0．1～約15mg／kg体重；(c)被験体の約0．1～約10mg／kg体重；(d)被験体の約0．1～約5mg／kg体重；または（e）被験体の約0．1～約2．5mg／kg体重を含む。
いくつかの実施形態において、アミノステロール化合物またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、プロドラッグ、または誘導体の治療有効量は、（a）約0．001～約500mg／日；(b)約0．001～約250mg／日；(c)約0．001～約125mg／日；(d)約0．001～約50mg／日；(e)約0．001～約25mg／日；(f)約0．001～約10mg／日；(g)約0．001～約6mg／日；(h)約0．001～約4mg／日；または（i）約0．001～約2mg／日を含む。
いくつかの実施形態において、投与方法は経口投与を含み、アミノステロール化合物またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、プロドラッグまたは誘導体の治療有効量は、（a）約1～約300mg／日；または（b）約25～約500mg／日を含む。
いくつかの実施形態において、アミノステロール化合物またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、プロドラッグまたは誘導体は添加剤または相乗効果のいずれかを達成するために、少なくとも１つの追加の活性剤と組み合わせて投与される。いくつかの実施形態では、追加の活性剤が（a）付随して(concomitantly)；(b)混合物として;(c)別々におよび同時に(simultaneously)、または共に(concurrently)；および（d）別々におよび連続してからなる群から選択される方法を介して投与される。いくつかの実施形態において、追加の活性剤は、本明細書のいずれかの実施形態において投与されるアミノステロールとは異なる構造を有する第２のアミノステロールである。
いくつかの実施形態では、組成物の投与が空の胃への投与を含み、任意選択で、被験体が覚醒してから2時間以内である。ある実施形態において、組成物の投与から約60～約90分後には、被験体によって食物は消費されない。
いくつかの実施形態ではアミノステロール、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、プロドラッグ、または誘導体は薬学的に許容される等級のものである。いくつかの実施形態では、アミノステロールのリン酸塩が投与される。いくつかの実施形態では、被験体はヒトである。
いくつかの実施形態では本方法が（a）被験体に対するアミノステロールまたは薬学的に許容される塩、溶媒和物、プロドラッグ、または誘導体の用量を決定することをさらに含み、ここで、アミノステロール用量は評価されている症状を改善または解消する際のアミノステロール用量の有効性に基づいて決定され、（b）続いて、ある期間、被験体にアミノステロールの用量を含む組成物を投与することであって、（i）評価されるべき症状を同定すること；(ii)被験体に対するアミノステロールの開始用量を同定すること；(iii)評価されている症状に対する有効用量が同定されるまでの期間にわたって、被験体にアミノステロールの漸増用量を投与することであって、有効用量は症状の改善または解消が観察されるアミノステロール用量であり、アミノステロール用量を、その特定の被験体におけるその特定の症状に対するそのレベルに固定することを含む。いくつかの実施形態では、症状の改善または解消が臨床的に認証されるスケールまたはツールを使用して測定される。
いくつかの実施形態において、組成物は経口投与され、（a）開始アミノステロール投薬量は約10mgから約150mg／日までの範囲であり；(b)漸増後の被験体に対するアミノステロールの投薬量が約25mgから約500mg／日までの範囲で固定され；および／または（c）アミノステロールまたはその塩もしくは誘導体の投薬量が約25mgの増分で漸増される。
いくつかの実施形態において、組成物は鼻腔内に投与され、（a）開始アミノステロール投薬量は約0．001mg～約3mg／日の範囲であり、（b）漸増後の被験体に対するアミノステロールの投薬量は約0．001mg～約6mg／日の範囲に固定され、（c）漸増後の被験体に対するアミノステロールの投薬量は経口または注射によって与えられる場合に治療量以下である投薬量であり、そして／または（c）アミノステロールの投薬量は約0．1、約0．2、約0．25、約0．3、約0．35、約0．4、約0．45、約0．5、約0．55、約0．6、約0．65、約0．7、約0．75、約0．8、約0．85、約0．9、約0．95、約1、約1．1、約1．2、約1．3、約1．4、約1．5、約1．6、約1．7、約1．8、約1．9、または約2mgの増分で漸増される。
いくつかの実施形態において、アミノステロールの投薬量は、約３～約５日毎に漸増される。いくつかの実施形態において、評価される症状が重篤である場合、開始アミノステロール投薬量はより高い。
いくつかの実施形態において、症状は、異常なα－シヌクレイン病理および／またはドーパミン作動性機能不全と相関している。いくつかの実施形態において、評価されるべき症状は、（a）認知障害、幻覚および精神病、抑うつ気分、不安気分、無気力、ドーパミン調節障害症候群の特徴、日中の眠気、疼痛、排尿問題、便秘問題、起立時のふらつき、および疲労からなる群から選択される統一パーキンソン病評価尺度のパートIで定義される少なくとも１つの日常生活の経験の非運動的側面；(b)発言、唾液およびよだれ、摂食および嚥下作業、着衣、衛生、手書き、寝返り、振戦、ベッドから出ること、車または深い椅子、歩行とバランスおよび静止からなる群から選択される統一パーキンソン病評価尺度のパートIIで定義される少なくとも１つの日常生活の経験の運動的側面；(c)会話、表情、固縮、手指運動、手の回内-回外動き、つま先タップ、足の機敏性、椅子からの歩行、歩様、すくみ足、姿勢の安定性、姿勢、身体の動作緩慢、手の姿勢時振戦、安静時振戦、および安静時振戦の恒久性からなる群から選択される統一パーキンソン病評価尺度のパートIIIで特定された少なくとも１つの運動症状；（d）運動障害に費やす時間、運動障害の機能的な影響、オフ状態に費やす時間、運動変動の機能的影響、運動性変動の複雑性および痛みを伴うオフ状態失調症からなる群から選択される統一パーキンソン病評価尺度の第IV部で特定された少なくとも１つの運動複雑性；（e）便秘、（f）うつ状態、（g）認知障害、（h）睡眠障害、睡眠問題（i）概日リズム機能障害、（j）幻覚、（k）疲労、(l)REM睡眠障害、(m)REM行動障害、（n）勃起不全、（o）無呼吸、（p）体位性低血圧、(q)血圧または起立性低血圧の矯正、（r）夜間高血圧、（s）体温の調節、（t）呼吸または無呼吸の改善、（u）心伝導欠損の矯正、（v）疼痛の改善、（w）膀胱感覚および排尿の回復、（x）尿失禁、および／または（y）夜間頻尿のコントロールである。
いくつかの実施形態において、評価される症状は便秘であり、以下のことが特徴である：(a)便秘に対する固定漸増アミノステロール投与量は、与えられた投与量において3日のうち少なくとも2日で投与後24時間以内に完全な自発的排便（ＣＳＢＭ）をもたらすアミノステロール投与量として定義される；(b)平均完全自発的排便（CSBM）または平均自発的排便（SBM）が週1回以上である場合、増量前の開始アミノステロール投与量は75mg／日である；および／または（c）平均CSBMまたはSBMが週1回未満である場合、増量前の開始アミノステロール投与量は150mg／日である。
１つの局面において、下式のアミノステロール
Figure 2022543242000019
を製造する方法が提供され、該方法は、化合物Iaへのスペルミンの添加を刺激する。
Figure 2022543242000020
いくつかの実施形態において、（a）前記アミノステロールは、被験体においてインビボで産生される；または（b）前記アミノステロールがインビトロで産生される。
別の局面において、下式のアミノステロール
Figure 2022543242000021
を製造する方法が提供され、この方法には、化合物Iaへのスペルミンの添加を抑制することが含まれる。
Figure 2022543242000022
いくつかの実施形態において、（a）化合物Iaへのスペルミンの添加は、被験体においてインビボで抑制される；または（b）化合物Iaへのスペルミンの添加がインビトロで抑制される。
いくつかの実施形態では、化合物Iaは以下の式を有し、
Figure 2022543242000023
また、ＥＮＴ－０３（化合物III）は次式を有する。
Figure 2022543242000024
別の局面において、下式のアミノステロールを製造する方法：
Figure 2022543242000025
を製造する方法が提供され、該方法は、化合物Iaへのスペルミンの添加を刺激することを含む。
Figure 2022543242000026
いくつかの実施形態において、（a）アミノステロールは、被験体においてインビボで産生される；または（b）アミノステロールはインビトロで産生される。
別の局面において、下式のアミノステロール
Figure 2022543242000027
の形成を抑制する方法が提供され、該方法は、化合物Iaへのスペルミンの添加を抑制することを含む。
Figure 2022543242000028
いくつかの実施形態において、（a）化合物Iaへのスペルミンの添加は、被験体においてインビボで抑制される；または（b）化合物Iaへのスペルミンの添加がインビトロで抑制される。
いくつかの実施形態では、化合物Iaが以下の式を有し：
Figure 2022543242000029
化合物IVは、以下の式を有する。
Figure 2022543242000030
別の局面において、下式のアミノステロール
Figure 2022543242000031
の製造方法が提供され、該方法は化合物Iaへのスペルミンの添加を刺激することを含む。
Figure 2022543242000032
いくつかの実施形態において、（a）アミノステロールは、被験体においてインビボで産生される；または（b）アミノステロールがインビトロで産生される。
別の局面において、下式のアミノステロール
Figure 2022543242000033
の形成を抑制する方法が提供され、該方法は、化合物Iaへのスペルミンの添加を抑制することを含む。
Figure 2022543242000034
いくつかの実施形態において、（a）化合物Iaへのスペルミンの添加は、被験体においてインビボで抑制される；または（b）化合物Iaへのスペルミンの添加がインビトロで抑制される。
いくつかの実施形態では、化合物Iaが以下の式を有し、
Figure 2022543242000035
化合物Vは次式を有する。
Figure 2022543242000036
上記の概要並びに以下の図面の説明および詳細な説明は、例示的かつ説明的なものである。それらは本開示のさらなる詳細を提供することを意図しているが、限定として解釈されるべきではない。他の目的、利点、および新規な特徴は、以下の本開示の詳細な説明から当業者には容易に明らかになるであろう。
図１Ａおよび１Ｂは、ＥＮＴ－０２（ＭＳＩ１４３６）（丸）またはＥＮＴ－０３（化合物III；四角）を投与したマウスにおける経時的な体重減少パーセントを示す。図１Ｃは、C57bl／6雄マウスにＥＮＴ－０３を週1回、6週間にわたって腹腔内投与したところ、用量依存的な体重減少が生じたことを示している。 成長マウスに対するＥＮＴ－０３（化合物III）およびＥＮＴ－０２（ＭＳＩ１４３６）の投与の結果を示す図である。両方の化合物が体重増加に影響を及ぼしたが、ＥＮＴ－０２はより深刻な効果を有し、成長を抑制し、ならびに体脂肪の消費を誘導した。対照的に、ＥＮＴ－０３で処置した動物は正常な成長を続けたが、それらは「スリムダウン」し、ＥＮＴ－０３が新たな最適体重「設定点」を再確立したことを示唆した。 ７８週齢の胃における粘膜層の減少を示す胃の粘膜層の画像（図３Ｂ）対より若い２０週齢の胃（図３Ａ）を示す図である。 実施例１に従ってＥＮＴ－０２（ＭＳＩ１４３６）、ＥＮＴ－０３（化合物III）、およびＤ－１４３６(図４Ａ）；および対照PTP1B阻害剤（図４Ｂ）を試験した３つのアミノステロールによるPTP1B阻害についてのＩＣ50曲線を示す。 ＥＮＴ－０３によるＰＴＰ１Ｂ阻害がhAPP－J20（図５Ａ～５Ｄ）およびPS19（図５Ｅ～５Ｈ）マウスの認知障害を改善することを示す図である。 以下の３つの対比において差次的に発現される遺伝子の大きさ（log2変換倍率変化）に対する有意性（負のlog10変換ＦＤＲ調整p値として）を示すボルケーノプロットを示す図である。（図６Ａ）若齢マウスと比較した老齢マウス（図６Ｃ）ビヒクル処置老齢マウスと比較したＥＮＴ－０３処置老齢マウス（図６Ｂ）ビヒクル処置若齢マウスと比較したＥＮＴ－０３処置若齢マウス。グループ間で異なるレベルを有すると同定された遺伝子は、赤色（アップレギュレート）または青色（ダウンレギュレート）のドットとして表され、有意でない遺伝子は黒点として表される。水平の赤い線は、適用されたp値閾値を表す。 ＥＮＴ－０３についての高齢ヒトからの脳抽出物のLC／MS／MS分析のためのクロマトグラムを示す図である。図７Ａは脳抽出物のクロマトグラムであり、図７Ｂは合成ＥＮＴ－０３の品質管理サンプルである。 マウス仔脳抽出物（図８Ａ）および肝臓抽出物（図８Ｂ）のLC／MS／MS分析のためのクロマトグラムを示す図である。 生後３週間にわたって新生児マウスの脳および肝臓で測定したＥＮＴ－０３のおおよその濃度を示す図である。 ＥＮＴ－０３または対照で処置した若齢および老齢マウスの空腸（図１０Ａ～１０Ｄ）または回腸（図１０Ｄ～１０Ｆ）の遺伝子発現プロフィールを示す図である。 対の対比の間で差次的に発現する遺伝子の重なりを調べる一連のヒートマップを示す図である。プロット内の値は、特定の対の対比間の交差性発現遺伝子数（調整p値＜0．05）を表している。四角の色はJaccard指数（遺伝子の交差と結合の指数）を表し、x枢軸とy枢軸の対比を表す。（図１１Ａ）両方向に異なって発現する遺伝子、（図１１Ｂ）アップレギュレートされた遺伝子、（図１１Ｃ）ダウンレギュレートされた遺伝子、（図１１Ｄ）一方の対比でアップレギュレートされた遺伝子、もう一方の対比でダウンレギュレートされた遺伝子である。灰色の四角の数字は、特定のコントラストの選択された差次的に発現された遺伝子の総数を表すことに留意されたい。 ＥＮＴ－０３、ＥＮＴ－０３Ｄ３の重水素化形態の投与と比較した、ＥＮＴ－０３の投与後のマウス体重増加に関する結果を示す図である。 ４日齢のマウス脳抽出物におけるＥＮＴ－０３の代表的なクロマトグラムを示す図である。図１３Ａ：MRM619．6／545．5、上部追跡：抽出物中の内因性ＥＮＴ－０３; MRM 623．6／549．5下部追跡：抽出物＋2．2ng ＥＮＴ－０３－ｄ4／g脳組織；図１３Ｂ: MRM 619．6／474．5、上部追跡：抽出物中の内因性ＥＮＴ－０３；MRM 623．6／478．5下部追跡：抽出物＋2．2ng ＥＮＴ－０３－ｄ4／g脳組織。 ＥＮＴ－０３を様々な用量またはビヒクルで３日毎に強制経口投与した雄C57bl6/j(N=5／群）マウスの体重減少結果を表すグラフである。 老化で下方制御され、ＥＮＴ－０３で上方制御された転写物のベン図を示す。老齢マウス対若齢マウスでダウンレギュレートされ、対照と比較した処理でアップレギュレートされた２セットの転写産物間の重複および非重複の差次的発現遺伝子の数を示すプロット。特徴の数は、ＥＮＴ－０２（ＭＳＩ１４３６）およびＥＮＴ－０３での処置から示される。 ＥＮＴ－０２（ＭＳＩ１４３６）と対照（若齢）の有意な遺伝子を、ＥＮＴ－０３と未処理（若齢）で比較した散布図である。遺伝子は点で表される。点の色は、遺伝子がどのセットに割り当てられるかを示す。各遺伝子について、ＥＮＴ－０２（ＭＳＩ１４３６）対対照（若年）対対比（y軸）のlog２（倍数変化）およびＥＮＴ－０３対未処理（若年）対対比（x軸）のlog２（倍数変化）を示す。 実施例１２による有意な遺伝子のアップセットプロットを示す図である。アップレギュレートした遺伝子とダウンレギュレートした遺伝子のセット間の相互作用を示すプロット。左端の棒グラフは、入力として使用される各セットのサイズを示す。一番上の棒グラフは各セットの排他的サイズを示す（すなわち、各遺伝子は、この棒グラフにおいて1回だけカウントされる）。中央のドットプロットは、それぞれの場合に相互作用するセットを示す。 図１８Ａ：ＥＮＴ－０３に対するＭＳＩ１４３６（アミノステロール１４３６）対対照（若齢）における重複遺伝子対未処置（若齢）－全部対全部－のベン図。図１８Ｂは、ＥＮＴ－０３対未処理（若齢）－アップ対アップ－に対するＭＳＩ１４３６対対照（若齢）における重複遺伝子のベン図を示す。図１８Ｃは、ＥＮＴ－０３対未処理（若齢）－ダウン対ダウンに対するＭＳＩ１４３６対対照（若齢）における重複遺伝子のベン図を示す。図１８Ｄは、ＥＮＴ－０３対未処理（若齢）－アップ対ダウン－に対するＭＳＩ１４３６対対照（若齢）における重複遺伝子のベン図を示す。図１８Ｅは、ＥＮＴ－０３対未処理（若齢）－ダウン対アップに対するＭＳＩ１４３６対対照（若齢）における重複遺伝子のベン図を示す。 ＭＳＩ１４３６（アミノステロール１４３６）対対照（老齢）における有意な遺伝子を、ＥＮＴ－０３対未処理（老齢）と比較した散布図を示す。遺伝子は点で表される。点の色は、遺伝子がどのセットに割り当てられるかを示す。各遺伝子について、ＭＳＩ１４３６対対照（老齢）の対比（y枢軸）におけるlog2（倍数変化）およびＥＮＴ－０３対未処理（老齢）の対比（x枢軸）におけるlog2（倍数変化）を示す。 実施例１２による有意な遺伝子のアップセットプロットを示す。アップレギュレートした遺伝子とダウンレギュレートした遺伝子のセット間の相互作用を示すプロット。左端の棒グラフは、入力として使用される各セットのサイズを示す。一番上の棒グラフは各セットの排他的サイズを示す（すなわち、各遺伝子は、この棒グラフにおいて1回だけカウントされる）。中央のドットプロットは、それぞれの場合に相互作用するセットを示す。 図２１Ａは、ＥＮＴ－０２（ＭＳＩ１４３６）対対照（老齢）における、ＥＮＴ－０３対未処理（老齢）－全部対全部の重複遺伝子のベン図を示す。図２１Ｂは、ＥＮＴ－０２（ＭＳＩ１４３６）対対照（老齢）における、ＥＮＴ－０３対未処理（老齢）－アップ対アップの重複遺伝子のベン図を示す。図２１Ｃは、ＥＮＴ－０２（ＭＳＩ１４３６）対対照（古い）における、ＥＮＴ－０３対未処理（老齢）－ダウン対ダウンの重複遺伝子のベン図を示す。図２１Ｄは、ＥＮＴ－０２（ＭＳＩ１４３６）対対照（老齢）における、ＥＮＴ－０３対未処理（老齢）－アップ対ダウンの重複遺伝子のベン図を示す。図２１Ｅは、ＥＮＴ－０２（ＭＳＩ１４３６）対対照（老齢）における、ＥＮＴ－０３対未処理（老齢）－ダウン対アップの重複遺伝子のベン図を示す。 老齢遺伝子対若齢遺伝子（対照）の有意な遺伝子を、老齢遺伝子対若齢遺伝子（未処理）の有意な遺伝子と比較した散布図を示す。遺伝子は点で表される。点の色は、遺伝子がどのセットに割り当てられるかを示す。各遺伝子について、旧対若（対照）コントラスト（y枢軸）におけるlog2（倍数変化）および旧対若（未処理）コントラスト（x軸）におけるlog2（倍数変化）を示す。 実施例１２による有意な遺伝子のアップセットプロットを示す。アップレギュレートした遺伝子とダウンレギュレートした遺伝子のセット間の相互作用を示すプロット。左端の棒グラフは、入力として使用される各セットのサイズを示す。一番上の棒グラフは各セットの排他的サイズを示す（すなわち、各遺伝子は、この棒グラフにおいて1回だけカウントされる）。中央のドットプロットは、それぞれの場合に相互作用するセットを示す。 図２４Ａは、老齢対若齢（未処理）に対しての老齢対若齢（対照）における(p全部対全部での)重複遺伝子のベン図を示す。図２４Ｂは、老齢遺伝子と若齢遺伝子（対照）の重複を、老齢遺伝子と若齢遺伝子（未処理の遺伝子）の重複と比較した図を示している。図２４Ｃは、老齢対若齢（対照）対老齢対若齢（未処理）－ダウン対ダウン－における重複遺伝子のベン図を示している。図２４Ｄは、老齢遺伝子と若齢遺伝子（対照）の重複を、老齢遺伝子と若齢遺伝子（未処理の遺伝子）の重複と比較した図を示している。図２４Ｅは、老齢遺伝子と若齢遺伝子（対照）の重複を、老齢遺伝子と若齢遺伝子（未処理の遺伝子）の重複と比較した図を示している。 老齢対若齢(ＥＮＴ－０２；ＭＳＩ１４３６）における有意な遺伝子を老齢対若齢(ＥＮＴ－０３）で比較した散布図である。遺伝子は点で表される。点の色は、遺伝子がどのセットに割り当てられるかを示す。各遺伝子について、老齢対若齢(ＥＮＴ－０２；ＭＳＩ１４３６）コントラスト（y軸）におけるlog2(倍数変化)および老齢対若齢(ＥＮＴ－０３）コントラスト（x軸）におけるlog2(倍数変化)を示す。 実施例１２による有意な遺伝子のアップセットプロットを示す。アップレギュレートした遺伝子とダウンレギュレートした遺伝子のセット間の相互作用を示すプロット。左端の棒グラフは、入力として使用される各セットのサイズを示す。一番上の棒グラフは各セットの排他的サイズを示す（すなわち、各遺伝子は、この棒グラフにおいて1回だけカウントされる）。中央のドットプロットは、それぞれの場合に相互作用するセットを示す。 図２７Ａは、老齢対若齢（ＭＳＩ１４３６）におけるオーバーラップ遺伝子の、老齢対若齢（ＥＮＴ－０３）に対するベン図を示す(－全て対全て-)。図２７Ｂは、老齢対若齢（ＥＮＴ－０３）－アップ対アップ－に対する老齢対若齢（ＭＳＩ１４３６）における重複遺伝子のベン図を示す。図２７Ｃは老齢対若齢（ＥＮＴ－０３）－ダウン対ダウン－に対する老齢対若齢（ＭＳＩ１４３６）における重複遺伝子のベン図を示す。図２７Ｄは、老齢対若齢（ＭＳＩ１４３６）におけるオーバーラップ遺伝子の老齢対若齢（ＥＮＴ－０３）に対するベン図－アップ対ダウンを示す。図２７Ｅは、老齢対若齢（ＭＳＩ１４３６）におけるオーバーラップ遺伝子の老齢対若齢（ＥＮＴ－０３）－ダウン対アップのベン図を示す。 対比間のオーバーラップのヒートマップ：実施した対比間のオーバーラップした選択された遺伝子の数を示すプロット。対角線上の数字は、各コントラストについて見出される選択された遺伝子の総数を表すことに留意されたい。正方形の色は、x軸上のコントラストとy軸上のコントラストのJaccardインデックス（和集合上の交点）を表す。図２８Ａ：各コントラストについて、アップレギュレートおよびダウンレギュレートされた（y軸）対、アップレギュレートおよびダウンレギュレートされた（x軸）選択された遺伝子のオーバーラップのヒートマップ。図２８Ｂ：アップレギュレートされた（y軸）対アップレギュレートされた（x軸）選択された遺伝子の各コントラストに対するオーバーラップのヒートマップ。図２８Ｃ：各コントラストについてダウンレギュレートされた（y軸）対ダウンレギュレートされた（x軸）選択された遺伝子のオーバーラップのヒートマップ。図２８Ｄ：アップレギュレートされた（y軸）対ダウンレギュレートされた（x軸）選択された遺伝子のそれぞれのコントラストの重なりのヒートマップ。
Ｉ． 概要
アミノステロールの薬理学的活性は高度に特異的な化学構造を必要とし、このことは、サメ分子が哺乳動物によって作製された類似の化合物を収容するために存在する生理学的回路によって利用されることを示唆する。今日まで、このような化合物は発見されておらず、存在すると仮定されてもいない。本開示は、そのような化合物、その改訂版、およびそれらの使用方法を提供する。したがって、いくつかの実施形態では、本技術が化合物III、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、プロドラッグまたは誘導体、そのような化合物を調製する方法、化合物IIIの１つ以上またはその誘導体を含む組成物、およびその使用方法に関する。
Ａ．開示の化学内容の概要
1980年代以降、特定の化学構造を有する３－オキソコレン酸は、特定の状況下でヒトから単離され得ることが知られている。特に、慢性硬膜下血腫から採取された流体は、高濃度の胆汁酸化合物Iを含有することが示され、その機能は未知である。
Figure 2022543242000037
その後、この同じ化合物が、クモ膜下出血後の脳脊髄液（ＣＳＦ）中に高濃度で、および健康な成人のＣＳＦ中に低濃度で存在することが見出された。Ｃ12位置に水酸基を有する化合物Ｉはまた、新生児の健康なヒトの羊水および尿の両方において発見された。化合物Ｉおよびその関連代謝変異体の機能は、依然として謎のままである。コレステロールを最初に２７－ヒドロキシコレステロールに変換し、次に化合物Iに変換する副胆汁酸経路によって産生されると思われる。この副経路の役割はまだわかっておらず、ヒトで産生される胆汁酸の約5％を担っている。この「酸性」経路の産物は、ヒト生理学における胆汁酸の主要な機能である脂肪の乳化において重要な役割を果たさないと考えられる。
同じではないが、化合物Iの構造は本明細書中に示され、議論されるものを含むスクワラスアミノステロールを思い起こさせる。両方のステロイド足場はＡリング状とＢリング状との間に強いられる立体的拘束のために、実質的に平坦である。化合物Iの場合、４－エン二重結合は平坦性を付与する。サメ分子では、５－α水素によって平坦性が強いられる。化合物Iのカルボキシル部分はサメ分子のＣ24上の硫酸塩と同様に空間的に位置し、両方の構造は、ステロイドスカフォールドに対して空間的に同じ一般的位置に負の荷電を示す。この空間的配置に基づいて、ＥＮＴ－０３（化合物III）を、以下に示すように、ポリアミン、スペルミンを化合物Ｉとカップリングすることによって合成した。
実施例に詳述されるように、本出願人は、ＥＮＴ－０３（化合物ＩＩＩ）がヒトおよびマウス仔脳の硬膜下血腫液中に見出されることを発見した。化合物IIIはスペルミンおよび化合物Iの縮合によって脳内で合成され得る。化合物Iが血管内皮およびマクロファージを含む多くの組織から循環中に放出される生物学的に活性なオキシステロールである27－ヒドロキシコレステロール（（（25R）26－ジヒドロキシコレステロールとも呼ばれる）の代謝から生じると考えられる（Griffithsら、2019；Bjorkhemら、2002；Javittら、2002）。脳内では、27－ヒドロキシコレステロールがＣＹＰ２７Ａ１、ＣＹＰ７Ｂ１、およびＨＳＤ－３Ｂ７によって連続的に代謝され、おそらくその順序で代謝される(Meaney ら、2007）。ＥＮＴ－０３（化合物III）の合成は、３つのさらなる生合成工程：５α水素を生成するためのコレステロールＡ環における二重結合の還元；イミンを形成するためのスペルミンの３－オキソ基との縮合；およびその後のイミンの還元を必要とする。第１の工程は脳ステロイド５α－レダクターゼによって触媒されよう（Celottiら、1992）。欠けている生合成的結合は、スペルミンを胆汁酸と共役させる酵素である。
Figure 2022543242000038
ＥＮＴ－０３（化合物III）は５－α水素を含み、サメ由来のＥＮＴ－０２のように、化合物I（化合物III）のもののような４－エンに対してより大きな化学的安定性を提供し、以下に議論され、そして以下の実施例によって証明されるように、動物モデルにおいて食物摂取を減少させ、そして体重減少を促進する。ＥＮＴ－０３（化合物III；３－β－スペルミノ－７α－ヒドロキシ－５α-クロルスタノイック酸)がサメ由来ＥＮＴ－０２（ＭＳＩ１４３６）と関連することが知られている同じ薬理活性を有することを確認することにより、ＥＮＴ－０２ならびに他のアミノステロールが有用であることが知られている他の用途におけるＥＮＴ－０３（化合物ＩＩＩ）の有用性を検証することができる。
ＥＮＴ－０３は、４－エンではなく５α水素を含有する。なぜなら前者の化学的安定性が後者よりも高いためである。ＥＮＴ－０３ではＥＮＴ－０２上のＣ24硫酸化ヒドロキシルがＣ27カルボン酸に置換されているため、ＥＮＴ－０３はすべての胆汁酸に共通の様式で、すなわちコレステロール側鎖の進行性切断を介して代謝を受ける。薬理学の違いは、一部には２つの化合物の代謝上の取り扱いの違いによる可能性が高い。
ＥＮＴ－０３（化合物III）はまた、実施例１において、タンパク質チロシンホスファターゼ1Ｂ(ＰＴＰ１Ｂ）阻害剤であることが示される。ＰＴＰ１Ｂは２型糖尿病と肥満の両方の治療の有効な標的である；しかし、薬剤発見のためのＰＴＰ１Ｂを標的とすることは、高度に保存され、正電荷を帯びた活性部位ポケットのため困難である。ＰＴＰ１Ｂはインスリンおよびレプチンシグナル伝達の負の調節因子であり、糖尿病および肥満のための高度に検証された治療標的である。薬物開発への従来のアプローチは強力で特異的なＰＴＰ１Ｂ阻害剤を産生したが、以前の刊行物は薬物が薬理学的効果を生じるために血流中に吸収されなければならないと考えられていたので、これらの阻害剤が経口バイオアベイラビリティーを欠くことを報告している（Krishnanら、2018）。
実施例にさらに記載されるように、ＥＮＴ－０３およびトロズスクエミンは、類似の薬理活性、アルツハイマー病などの状態における治療作用、および消化管の老化表現型を逆転させることが示されている。
Ｂ．ＥＮＴ－０３（化合物III）は食欲を抑制する
本開示の実施例２は、ＥＮＴ－０３（化合物III）がサメ由来ＥＮＴ－０２（ＭＳＩ１４３６）と食欲抑制および体重減少促進特性を共有することを実証する。食欲抑制自体がアミノステロールの有用性である一方で、ＥＮＴ－０３（化合物III）は、サメ由来アミノステロールが最近示されているのと同じ脳-腸障害に対しても有効性を有する可能性があると考えられている（データは示されていない。例えばClinicalTrials.gov Identifier NCT03047629、「パーキンソン病関連便秘（ＲＡＳＭＥＴ）治療のためのENT－01の安全性および忍容性の評価」；およびClinicalTrials.gov Identifier NCT03781791、「パーキンソン病関連便秘（ＫＡＲＭＥＴ）のための経口投与ENT－01」）。ENT－01はスクアラミンリン酸塩である。また、ＥＮＴ－０３（化合物III）およびその誘導体の活性は本明細書中に詳述されるように、αＳ病理学および／またはドーパミン作動性機能不全によって特徴付けられる種々の状態に及ぶことができる。
肥満はボディマスインデックス（ＢＭＩ）が30．0以上であると定義されるが、25．0以上30未満は過体重の範囲にあると定義される。BMIは、人の質量（kg）を身長（メートル）の二乗で割ることによって計算される。肥満の要因には、食生活の悪さ（カロリーが多い）、座りがちな生活習慣、睡眠不足、遺伝、加齢、妊娠などがある。成人の5％未満が毎日30分間の身体活動に参加し、３人の子供に１人だけが毎日身体活動をしている。また、体重増加や過度の空腹感や食物摂取を引き起こすことで、さまざまな病態が肥満につながることもある。最後に、人口の5％以上が食物依存症に罹患している可能性がある。
体重増加または肥満に関連する死亡率は、過剰な体重によって引き起こされる二次的状態の結果であることが多い。脂肪肝、２型糖尿病、心疾患、脳卒中、高血圧、胆嚢疾患、痛風、睡眠時無呼吸、変形性関節症、ＬＤＬコレステロール高値、ＨＤＬコレステロール低値、トリグリセリド高値（脂質異常症）、子宮内膜がん、乳がん、結腸がん、腎がん、胆嚢がん、肝がんなどである。また、肥満は関節の損傷や変形性関節症を引き起こす。脂肪含量の増加は炎症を促進し、関節をさらに損傷するとも考えられている。
サメ由来ＥＮＴ－０２（ＭＳＩ１４３６）は、食欲抑制および体重減少をもたらす薬理学的活性を有することが知られている。以下の実施例は、ＥＮＴ－０３（化合物III）もこの同じ活性を示すことを示す（実施例２）。実施例はまた、ＥＮＴ－０３（化合物III）がサメ由来ＥＮＴ－０２（ＭＳＩ１４３６）と同様に、プロテインチロシンホスファターゼ1B(PTP1B)(実施例１）などの調節ホスファターゼの阻害剤であることを示す。ＥＮＴ－０３（化合物III）およびサメ由来ＥＮＴ－０２は同じ食欲抑制および体重減少促進特性を共有し、ファルマコフォアを共有同様類似の化学構造を有するので、ＥＮＴ－０３（化合物III）およびその重水素化誘導体は、他のアミノステロールが有用であることが知られている適応症を治療する際に有用であり得ると考えられる。
Ｃ． ＥＮＴ－０２（ＭＳＩ１４３６またはアミノステロール１４３６）と疾患
理論に束縛されるものではないが、アミノステロールは胃腸管におけるα－シヌクレイン（αＳ）の神経毒性凝集体を標的にして、腸神経細胞の機能を回復させ、それによって本明細書に記載の脳－腸障害を治療および／または予防することによって作用すると考えられる。この理論に基づいて、パーキンソン病の治療にスクアラミンを使用するいくつかの臨床試験が進行中または完了している。例えば、（1) ClinicalTrials.gov Identifier: NCT03047629：「パーキンソン病関連便秘治療薬ENT－01を経口投与した際の安全性、忍容性、薬物動態および薬力学を評価するための多施設単回投与、多用量、二重盲検、プラセボ対照試験」、参加者50名（試験終了、2018年6月14日）（2) ClinicalTrials.gov Identifier: NCT03781791：「パーキンソン病関連便秘（KARMET）治療のために経口投与されたENT－01の安全性、忍容性および有効性を評価するための多施設共同、無作為化、二重盲検、プラセボ対照、多重用量試験」、参加者72名（推定試験終了日2019年6月）；および（3) ClinicalTrials.gov Identifier:NCT03938922：「パーキンソン病認知症治療薬ENT－01経口投与時の忍容性及び有効性を検討する多施設共同無作為化二重盲検試験」、参加者40名を目標とした（推定試験開始日2019年6月3日、推定試験終了日2020年2月）を参照されたい。
アミノステロールのこの効果はアミノステロールが非常に低いバイオアベイラビリティーを有することを考慮すると、非常に予想外であり；例えば、ＥＮＴ－０２およびＥＮＴ－０３は、血流への吸収を介するよりもむしろ局所的に作用するよう。現在機能している腸管神経細胞は、αＳなどのタンパク質の脳への逆行性輸送を妨げる。GI機能の回復に加えて、この効果は、パーキンソン病（PD）のような脳－腸障害、ならびに本明細書に記載される他の関連する脳－腸疾患および状態の疾患進行を遅らせ、そしておそらく逆転させると考えられる。
消化管におけるαＳの神経毒性凝集体を標的とする戦略はＰＤおよび本明細書に記載される他の神経疾患および状態のような脳－腸障害の治療に対する新規アプローチを表し、腸神経細胞の機能を回復させ、脳への逆行性輸送を防止する可能性がある。このような作用は、消化管機能の回復に加えて、脳腸疾患の進行を遅らせる可能性がある。したがって、理論に束縛されるものではないが、新規ＥＮＴ－０３（化合物III）またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、プロドラッグまたは誘導体、ならびにそれらを含む組成物を使用する本明細書に記載の方法は本明細書に記載の脳－腸疾患および症状のいずれかの治療および／または予防に適用されると予想される。
ＰＤは腸神経系（ＥＮＳ）内での毒性α－シヌクレイン（αＳ）凝集体の形成と相関する（Braakら、2003(a); Braakら、2003（b））。αＳは、脊椎動物の中枢神経系（CNS）に一般的に存在する可溶性蛋白質（αＳ、β－シヌクレインおよびγ－シヌクレイン）のシヌクレインファミリーのメンバーである。αＳは新皮質、海馬、無痛質、視床、小脳に発現し、ニューロンのシナプス前終末内の主な位置は膜結合型と細胞質遊離型の両方である。シナプス前終末はシナプス小胞として知られる区画から、神経伝達物質と呼ばれる化学的メッセンジャーを放出する。神経伝達物質の放出はニューロン間のシグナルを中継し、正常な脳機能にとって重要である。αＳは神経膠細胞やメラニン細胞にみられ、嗅球、海馬、線条体、視床の神経ミトコンドリアに高発現している。
ＰＤ、レビー小体を伴う認知症（ＤＬＢ）、多系統萎縮症（ＭＳＡ）など、レビー小体を特徴とする病的状態ではαＳが凝集して不溶性線維を形成する。これらの障害はシヌクレイノパチーとして知られている。αＳの病理所見はＡＤの散発例、家族例ともに認められる。このように、αＳ病態の一つの指標はαＳ凝集体の形成である。
分子レベルでは、蛋白質のミスフォールディング、蓄積、凝集、およびその後のアミロイド沈着の形成はアルツハイマー病（ＡＤ）およびＰＤを含む多くの神経疾患において共通の特徴であることから、神経変性疾患は蛋白質異常症と呼ばれることがある。共通の機序が存在することから、神経変性疾患は共通の誘因を共有している可能性が高く、病態の性質は凝集蛋白の種類および影響を受けた細胞の局在によって決定されることが示唆される。
αＳとＰＤリスクの間の遺伝的連関の発見、およびLewy病理の主要な蛋白質構成物としての凝集αＳの同定に始まり、αＳはPDおよび関連するシヌクレイノパシーにおける主要な治療標的として浮上している（Brundinら、2017年）。ＰＤに典型的にみられるα－シヌクレイン異常は、明らかなカテコールアミン欠乏の原因であると考えられている（ドーパミンは他のカテコールアミンと代謝経路を共有するカテコールアミン)(Frisina ら、2009）。
「脳－腸」障害とも呼ばれる、異常αＳ病理に関連する状態、および／またはドーパミン作動性機能不全の例としては、シヌクレイノパシー、神経疾患、心理学的および／または行動障害、脳および全身虚血性障害、および／または状態が挙げられるが、これらに限定されない。シヌクレイノパシー、神経変性疾患および／または神経疾患の例には、例えば、ＡＤ、ＰＤ、レビー小体病（ＬＢＤ）またはレビー小体型認知症（ＤＬＢ）、多系統萎縮症（ＭＳＡ）、ハンチントン病、多発性硬化症（MS）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、統合失調症、フリードライヒ運動失調症、血管性認知症、脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）、進行性核麻痺、核上麻痺、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、進行性核上性麻痺、グアデロピアンパーキンソニズム、パーキンソニズム、脊髄小脳失調症、脳卒中、加齢に伴う外傷性脳損傷、老化に伴う変性過程、および認知症が含まれる。心理的または行動障害の例には、例えば、うつ病、自閉症、ダウン症候群、ゴーシェ病（ＧＤ）、クラッベ病（ＫＤ）、スフィンゴ糖脂質代謝に影響を及ぼすリソソーム状態、ＡＤＨＤ、激越、不安、せん妄、易刺激性、錯覚および妄想、健忘、無感情、双極性障害、脱抑制、異常運動および強迫行動、嗜癖、脳性麻痺、てんかん、大うつ病性障害、およびレム睡眠行動障害（ＲＢＤ）などの睡眠障害、睡眠断片化、レム行動障害、概日リズム機能障害、睡眠時無呼吸、および認知障害が含まれる。一般的な虚血性または脳虚血性障害の例には、例えば、微小血管障害、分娩時脳虚血、心停止または心蘇生の間の／後の脳虚血、頸動脈手術中の脳虚血、脳静脈の血液供給動脈の狭窄による慢性脳虚血、脳血管奇形、高血圧、高コレステロール、心筋梗塞、心不全、うっ血性心不全、心筋炎、心膜炎、冠動脈心疾患、狭心症、ショック、四肢の虚血、腎動脈の狭窄、糖尿病性網膜症、マラリアに伴う血栓症、人工心臓弁、貧血、脾機能亢進症候群、肺線維症、勃起不全、心伝導障害、高血圧、低血圧、肺水腫が含まれる。
便秘は腸神経系（ＥＮＳ）内での毒性αＳ凝集体の形成と相関することが疑われる程度まで、ＰＤなどの多くの神経疾患の初期指標として役立つ（Braakら、2003（b））。迷走神経などの求心性神経を介して、ＥＮＳから中枢神経系（ＣＮＳ）へαＳ凝集体が正常に輸送された結果(Holmqvist ら、2014；Svenssonら、2015）、神経毒性凝集体が脳幹内およびより吻側の構造物内に漸進的に蓄積する。したがって、ENSにおけるαＳ凝集を阻害することで、ＥＮＳとＣＮＳの両方における継続的な神経疾患過程が減少する可能性がある（Phillipsら2008）。ＥＮＳとＣＮＳとの間のこの関係は、障害のクラスまたはアミノステロール活性の枢軸に関して、本明細書中で「脳－腸」と記載されることがある。
理論に束縛されるものではないが、アミノステロールは胃腸管に局所的に作用することによって腸機能を改善すると考えられる（低い経口バイオアベイラビリティー、例えば、約0．3％未満によって支持される）。ＥＮＴ－０２のような経口投与されたアミノステロールはヒトαＳの過剰発現による便秘マウスの胃腸運動を刺激する（Westら、準備中の原稿）。アミノステロールをＰＤマウスモデルから摘出した腸のセグメントの内腔を通して潅流すると、ENSの主要な感覚ニューロンであるIPAN（内在性一次求心性ニューロン）が興奮し、推進性の蠕動収縮の頻度が増加し、迷走神経の求心性アームに投射する神経シグナルが増大する。
化合物IIIのようなアミノステロールの投与後にＥＮＳから始まる神経インパルスは、ＣＮＳへの求心性神経シグナル伝達を増大させると理論付けられる。これは、神経刺激に伴い神経自食活性が亢進することが知られていることから(Shehataら、2012）、ＣＮＳ内で吻側に投射する二次・三次ニューロンと同様に、求心性ニューロン自身内のαＳ凝集体のクリアランスを刺激する可能性がある。アミノステロール投与の停止後、ＣＮＳのニューロンは局所的に、または腸内のαＳ再凝集からの輸送のいずれかを介して、徐々にαＳ負荷を再蓄積すると考えられる。
概日リズムの乱れは、臨床的および動物モデルの両方においてＰＤなどの神経疾患において記載されており、ＰＤなどの神経疾患に関連する異常な睡眠構造、認知症、気分および自律神経機能障害において役割を果たし得る（Breenら、2014；Videnovicら、2017；Antonio－Rubioら、2015；Madrid－Navarroら、2018）。手首の皮膚温度の概日周期は睡眠覚醒周期と相関することが示されており、これは、皮膚からの夜間の熱放散が中核温度の低下および睡眠の開始に及ぼす影響を反映している（Sarabiaら、2008；Ortiz－Tudelaら、2014）。ＥＮＴ－０３（化合物III）の投与は、患者の概日リズムに有意なプラスの影響を及ぼすと考えられる。化合物IIIは理論に束縛されることなく、マスター時計（視交叉上核）とその自律神経投射が関与する神経回路に影響を与え、概日機能障害の治療的修正の可能性を開くと考えられている。
１つの局面において、ＥＮＴ－０３（化合物ＩＩＩ）の治療有効用量はニューロン損傷の程度に関連し得るので、アミノステロール投薬は患者特異的であり得、より大きなニューロン損傷は所望の治療結果を得るためのより高いＥＮＴ－０３（化合物III）用量の必要性と相関する。本明細書中でより詳細に記載されるように、ＥＮＴ－０３（化合物III）の投薬量は約0．01～約500mg／日の範囲であり得、投薬量の決定は以下により詳細に記載される。しかしながら、本開示は、患者特異的でない治療用ＥＮＴ－０３（化合物III）用量も本明細書に記載されるので、患者特異的ＥＮＴ－０３（化合物III）用量を決定する方法に限定されない。
Ｄ． 実験結果
(1) ヒトおよびマウス仔脳におけるＥＮＴ－０３の検出
1992年に、Nagataらは高濃度の胆汁酸、７－αヒドロキシ－３－オキソ－４－コレステノイン酸（７－ＨＯＣＡ）、ヒト慢性硬膜下血腫液（図１Ｃ)(Nagataら、1992）、およびその後の急性くも膜下出血（Nagataら、1995）を同定した。1997年に、Zhangらはラット脳細胞が２７－ヒドロキシコレステロールを７－ＨＯＣＡに代謝し得ることを報告した（Zhangら、1997）。続いて、Bjorkhem、Sjovall、Griffithsおよびそれらの共同研究者は７－ＨＯＣＡがヒト脳脊髄液中で最も豊富な胆汁酸であることを同定した（Ogundareら、2010；Meaneyら、2007；Saeedら、2014；Saeedら、2014）。７－ＨＯＣＡは胆汁酸およびオキシステロールが既知のリガンドであるＦＸＲ、ＬＸＲ、またはＲＸＲ／ＮＵＲＲ１受容体のいずれも活性化しなかったという点で、生物学的に活性な胆汁酸であるとは思われなかった（Ogundareら、2010）。Bjorkhemは脳が末梢から７－ＨＯＣＡに入る27－ヒドロキシコレステロールを代謝して、オキシステロールの循環血液中への逆流を促進すると提唱した（Meaneyら、2007年）。
本開示は、硬膜下血腫液中のＥＮＴ－０３の存在がこの構造の発達におけるその可能な役割を反映することを示唆する。頭部損傷に続いて、一般に高齢者およびまれに乳児において、高度に血管化された胆嚢様「器官」が発達し、一方の側は硬膜（「外膜」）に由来し、他方はくも膜下（「内膜」）に由来する（Yamashimaら、2000）。ＶＥＧＦを含む多数の増殖因子の高濃度が流体内に蓄積する（Edlmannら、2017）。本開示は、ＥＮＴ－０３が頭蓋内損傷を修復する試みにおいて硬膜下血腫内に出現することを示唆している。これに関連して、産道を通過した後に頭蓋内外傷を経験し、硬膜下出血および実質出血を来した健康な新生児が一般的に無症候性に回復する理由を推測したいと考えるかもしれない（Looneyら、2007年）。
慢性硬膜下血腫液中の化合物Ｉa（７－ＨＯＣＡ）の既知の高濃度のために、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳを介して慢性硬膜下の３人の高齢患者から排出された液体を、ＥＮＴ－０３の存在について分析した。脳抽出物を、ＥＮＴ－０３についてＬＣ／ＭＳ／ＭＳを介して分析した。図７Ａは、脳抽出物中のＥＮＴ－０３の存在を示す。図７Ｂは、合成ＥＮＴ－０３の参照サンプルを示す。
これらのデータに基づき、生後２週間にわたる新生マウスからの脳、肝臓、および腎臓の抽出物について、ＥＮＴ－０３の存在について分析した。３－オキソ－胆汁酸はヒト胎児発生の最後の三半期の間に羊水内の非共役胆汁酸の18～40％を構成し（Nakagawaら、1990）、健康な新生児尿中の胆汁酸の有意なパーセンテージとして存在し、出生後の最初の月の間に徐々に減少する（Wahlenら、1989およびKimuraら、1999）。新生仔期には３－オキソ－胆汁酸が豊富に存在することから、新生仔マウスにおいて推定上のポリアミン‐胆汁酸分子の探索に焦点を当てた。脳および肝臓抽出物を、その物理的特性に基づいてＥＮＴ－０３を捕捉するように設計されたプロトコールを使用して、１日目から24日目までの間のマウスから調製した（実施例７を参照のこと）。
実験の結果、ＥＮＴ－０３は新生仔マウスの脳および肝臓で検出可能であった（それぞれ図８Ａおよび８Ｂ）。内因性ＥＮＴ－０３の同一性は、その保持時間、質量（［M＋H+ ]m/z =619．6）、および質量545．57（図１３Ａ）および474．39（図１３Ｂ）の特徴的なフラグメントのMS/MS MRMによって確立された。生後３週間にわたって新生仔マウスの脳および肝臓で測定したＥＮＴ－０３のおおよその濃度を図９に示す。脳、肝臓ともに出生時に最高濃度を示し、以後3週間かけて徐々に低下する。クロマトグラフィーされた試料中に存在する内生ＥＮＴ－０３の濃度を決定するために、合成重心ＥＮＴ－０３－d4（－C2D2、－C4D2）を内部スタンダードとして使用した。内因性および合成分子の同一の保持時間（図１３Ａおよび１３Ｂ）は、ＥＮＴ－０３の合成ステロイド前駆体の「平坦である」（５α）および「ねじれた」（５β）配座異性体を特徴付ける保持時間の有意差に基づいて、５－α配置の仮の割り当てを支持する。
(2)調節性ホスファターゼの阻害
１つの局面において、治療有効量のアミノステロール化合物またはそれを含む組成物を、本明細書と同様に投与することを含む、治療的または予防的利益を達成するために１つ以上の調節ホスファターゼを阻害する方法が包含される。
健康や病気にかかわる多くの細胞過程は、リン酸化によって調節されている。プロテインキナーゼは、細胞標的のリン酸化に関与する。ホスファターゼはキナーゼの作用を逆転させる。調節ホスファターゼには２つの広いクラスがある。第１のグループは、チロシン上のタンパク質基質を脱リン酸化するチロシン特異的ＰＴＰである。チロシン特異的ＰＴＰは、受容体様ＰＴＰおよび非膜貫通ＰＴＰを含む。第２のグループは、チロシン、セリン、およびトレオニン残基、ならびに脂質基質上のタンパク質基質を脱リン酸化するＤＳＰ（二重特異性ホスファターゼ）である。本発明の焦点は、ホスファターゼの第１の群にある。
プロテインキナーゼを阻害する治療薬の開発にかなりの努力が向けられている一方で、インヒビターの開発に関しては、成功が遅れている。ほとんどのホスファターゼの活性部位は、深いウェルとして構成され、その底部は正に荷電した残基である。対応する阻害剤はウェルの基部内にドッキングするために、負電荷または他の水素結合受容機能性を担持しなければならず、ウェル内に延在するのに十分に細長くなければならない。大きな強く荷電した分子は一般に、限定された細胞透過性を有するので、インビトロ酵素評価において活性を示す化合物は、細胞培養またはインビボで評価した場合、エキソビビット活性もほとんど示さない。
本発明が標的とするホスファターゼは、重要な細胞機能および生理学的機能を調節するいくつかのものを含む。これらには、インスリンおよびＩＧＦ受容体などの多くの受容体チロシンキナーゼをダウンレギュレートするＰＴＰ１Ｂ；ＶＥＧＦ、ＰＤＧＦ、ＥＧＦ、ＦＧＦなどの成長因子受容体；レプチン経路内のスタットタンパク質が含まれる。多数のヒト悪性腫瘍を駆動する癌遺伝子として認識されているPTPN11（Ｅ７６Ｋ）。ＰＴＰＲＣ／ＣＤ４５はリンパ球において広範に研究されており、抗原刺激後にＴ細胞においてシグナル伝達ゲートキーパーとして作用することが示されている。ＰＴＰＮ７／ＬＣ－ＰＴＰはＭＡＰＫを不活性化し、ニューロンシグナル伝達や成長因子刺激などの過程を減弱させる。ＰＴＰＮ１２／ＰＴＰ－ＰＥＳＴは、細胞移動、細胞拡散および細胞分裂などの過程に影響する細胞骨格再編成において主要な役割を有する。
ＥＮＴ－０３はＰＴＰ１Ｂに対して最も特異性の高い調節性ホスファターゼの阻害剤である。さらに、マウスにおいて期待される薬理活性、すなわち摂餌量の減少および体重減少を示す。本明細書中に記載されるアミノステロールは、調節性ホスファターゼに対してインビトロおよびインビボで阻害活性を示すＥＮＴ－０３の種々の誘導体である。
実施例１は、ＥＮＴ－０３（化合物III）がプロテインチロシンホスファターゼ１Ｂ(ＰＴＰ１Ｂ）などの調節ホスファターゼの阻害剤であることを示す。ＰＴＰ１Ｂはインスリンシグナル伝達経路の負の調節因子であり、特に２型糖尿病の治療の有望な潜在的治療標的と考えられている（Combsら、2010）。マウスモデルで実施された遺伝子ノックアウト研究はインスリンシグナル伝達の調節および肥満の発症においてＰＴＰ１Ｂが果たす役割について実質的な証拠を提供している（Elcheblyら、1999）。
ＥＮＴ－０３（化合物III）およびＥＮＴ－０２（ＭＳＩ１４３６）を、100μMから始めて、一重項で３倍連続希釈した10用量ＩＣ50様式で試験した。蛍光を測定して酵素活性をモニターした。表２に見られるように、すでにＰＴＰ１Ｂを抑制することが知られているＥＮＴ－０２（ＭＳＩ１４３６、アミノストロール１４３６）のＩＣ50は2．89μMであり、ＥＮＴ－０３（複合III）のIC50 は1．03μMであった。最大阻害濃度の半分、すなわちＩＣ50は、特異的な生物学的または生化学的機能を阻害する物質の効力の尺度である。この定量的尺度は所与の生物学的プロセスを半分阻害するために、特定の薬物または他の物質のどれだけが必要であるかを示す。従って、ＥＮＴ－０３（化合物III）のＩＣ50はＥＮＴ－０２（ＭＳＩ１４３６）のその半分未満であるので、ＥＮＴ－０３（化合物ＩＩＩ）はアミノステロール１４３６よりも有意に強力である。
実施例１に詳述するように、ＥＮＴ－０２（ＭＳＩ１４３６）はＰＴＰ１Ｂ阻害剤として記載されているが、ＥＮＴ－０３（化合物III）と同様に両方とも、細胞シグナル伝達に関与する他のホスファターゼに対して同等の阻害活性を示す。特に、両方とも全長ＰＴＰＮ１１／ＳＨＰ２に対して活性である。ＳＨＰ２（ＳＨ２ドメイン含有ホスファターゼ２）は複数の細胞シグナル伝達過程に関与し、ヒトの遺伝性疾患と癌の両方に直接関連する蛋白質チロシンホスファターゼである（Zhengら、2018；Chenら、2016）。さらに、両方の化合物は、多数のヒト悪性腫瘍を駆動する癌遺伝子として認識される機能獲得ＰＴＰＮ１１（Ｅ７６Ｋ）変異体を強力に阻害する。いずれの化合物も、生物学的経路において機能的に異なる役割を果たす近縁のホスファターゼPTPN6／SHP1を阻害しない。両者ともＰＴＰＲＣ／ＣＤ４５、ＰＴＰＮ７／ＬＣ－ＰＴＰ、およびＰＴＰＮ１２／ＰＴＰ－ＰＥＳＴを標的としている。ＰＴＰＲＣ／ＣＤ４５はリンパ球において広範に研究されており、抗原刺激後にＴ細胞においてシグナル伝達ゲートキーパーとして作用することが示されている。ＰＴＰＮ７／ＬＣ－ＰＴＰはＭＡＰＫを不活性化し、ニューロンシグナル伝達および成長因子刺激のような過程を減衰させる（Fukunagaら、1998；Eswaranら、2006）。PTPN12／PTP‐PESTは、細胞移動、細胞拡散および細胞分裂などの過程に影響する細胞骨格再編成において主要な役割を有する。
実施例２は、マウスにおける減量剤としてのＥＮＴ－０３（化合物ＩＩＩ）の活性を記載する。マウスを、0、2、4、6、8および10日目にＥＮＴ－０３（化合物III）またはＥＮＴ－０２（ＭＳＩ１４３６）のいずれかで処置したが、食餌は自由に与えた。図２に見られるように、両方の化合物の投与は、体重の減少をもたらした。
これらのデータは、ＥＮＴ－０３（化合物III）がＥＮＴ－０２（ＭＳＩ１４３６）と同様の食欲および体重に関して薬理学的応答を示すことを実証し、ＥＮＴ－０３（化合物III）が神経変性疾患または神経学的疾患（ＰＤなど）、心理学的障害または行動障害、ならびに全身虚血性障害または脳虚血性障害を含む、サメ由来アミノステロール１４３６に関連することが知られているすべての治療適用において有用性を有することができることを示唆する。
ＥＮＴ－０３（化合物III）はＰＴＰ１Ｂを阻害するが、ＥＮＴ－０２と共に、ＥＮＴ－０３（化合物III）も同様のＫiを有するいくつかの他のホスファターゼを阻害することも示した。特に興味深いのは、ＰＴＰ１Ｂ、ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ、Ｒａｓ／Ｒａｆ／Ｅｒｋ、およびＪＡＫ／ＳＴＡＴシグナル伝達経路とともに、インスリン、レプチン、多数の成長因子などのホルモンによって利用される、普遍的に発現する非受容体タンパク質チロシンホスファターゼであるSHP2とも呼ばれるがん原遺伝子ＰＴＰＮ１１である（Pulidoら、2013）。マウス前脳では、視床下部レプチンシグナル伝達の負の調節因子として主に作用するPTP1Bとは対照的に、ニューロンのＳＨＰ２は視床下部におけるレプチンシグナル伝達を増強すると思われる（Zhangら、2004年）。したがって、レプチンの下流の２つの主要な細胞内経路ＥＮＴ－０３（化合物III）を反対方向に調節する２つのホスファターゼを標的とすることによって、レプチン回路上のゲインを制御することができる。
最後に、実施例９は、インビボでのENT－05の活性の評価を詳述する。この実施例は、ＥＮＴ－０３（化合物III）を修飾してENT－05を作製すると、ＰＴＰＮ１１（Ｅ７６Ｋ）およびおそらく他の未記載のホスファターゼに対して特異性を有する化合物が得られることを実証する。オタマジャクシに対するインビボ薬理作用はナトリウム再吸収の阻害であり、腎臓での可能性が最も高い。おそらく標的は、塩化ナトリウム－カリウム共輸送体2型（ＮＫＣＣ２）である。腎尿細管のＮＫＣＣ２の活性を調節するホスファターゼについては、現在のところほとんどわかっていない。
この実施例は、ＥＮＴ－05がＥＮＴ－05によって阻害され得る経路のＮＫＣＣ２輸送体を活性化するホスファターゼを同定したことを教示する。ＥＮＴ－０５脳圧亢進（頭蓋内圧亢進）や眼圧亢進（緑内障）と同様に、ホスファターゼ活性の阻害を伴わない機序で腎臓のＮＫＣＣ２を阻害するフロセミドと同様に、明らかに高血圧の治療に有用である可能性がある。
(3)腸の若返り
実施例３は、スクアラミンが老齢マウスにおいてトランスクリプトームを増加させるのに有効であることを示す。セクションI．Aで論じたように、ＥＮＴ－０３（化合物III）およびスクアラミンなどのサメ由来アミノステロールは、官能基の類似の構造および空間的位置を共有する。従って、スクアラミンの活性は、ＥＮＴ－０３（化合物III）にまで及ぶと考えられる。
加齢は腸内の遺伝子発現の減少を含み、老齢マウス対若齢マウスにおける腸内のＲＮＡトランスクリプトームの減少により証明される。実施例３は、老齢マウスに対するＥＮＴ－０１（スクアラミンリン酸塩）の経口投与の影響を評価した。２週間の投与後、動物を安楽死させ、胃、十二指腸、空腸、回腸、盲腸、結腸、および直腸に消化管を切片化した。その後、胃組織を組織学的検査に供し、トランスクリプトームをＲＮＡ‐Ｓｅｑで解析した。
実施例における表４の全ての遺伝子についてのｍＲＮＡレベルはENT－01（スクアラミンリン酸塩）での処理後に有意な増加を示した（例えば、表５Ａを参照のこと）。これは、スクアラミンが老化した腸において若返らせる効果を有し、この活性がＥＮＴ－０３（化合物III）およびその塩、溶媒和物、誘導体、およびプロドラッグに及ぶと考えられることを示唆する。また、ＥＮＴ－０３(Compound III)の経口投与による組織のトランスクリプトームへの影響を検討したところ、いずれの場合も老齢動物に比べて若齢動物での転写応答が鈍化していることが観察された（図６Ａ－６Ｃ）。例えば、処置した若齢動物の胃において、13個の遺伝子が差次的に発現されたが、63個は老齢群であった。同様に、空腸についても42遺伝子が若齢群で、382遺伝子が加齢群で処理時に差次的に発現した。回腸では、ＥＮＴ－０３（化合物III）で処理した老齢動物において、若齢動物では80遺伝子、老齢動物では1162遺伝子が異なって発現した。
加齢に伴って差次的に発現した遺伝子セット（ＤＥＧ）を、処理老齢動物または処理若齢動物で差次的に発現した遺伝子セットと比較した。対照間の重複DEGの分析は例えば、老化（老齢対若齢）でダウンレギュレートされた胃の37遺伝子が、老齢マウスのＥＮＴ－０３処理によりアップレギュレートされた遺伝子と有意に重複していることを明らかにした。対照的に、胃の老化遺伝子と若いＥＮＴ－０３処理胃のそれらの間の唯一の有意な重複は、老化方向でさらにダウンレギュレートされた12の遺伝子であった。
ＥＮＴ－０３（化合物III）が胃内で最も有意に補完するよう「老化」遺伝子を表５Ｂに列挙する。特に、胃において、「回復した」老化遺伝子は、組織更新（線維芽細胞成長因子２；ジンクフィンガータンパク質383；フォークヘッドボックスC2）；ニューロン分化（神経細胞接着分子2）；免疫（トール様受容体9および12；インターロイキン2受容体、ベータ鎖）、神経伝達物質合成および取り込み（コリンおよびセロトニントランスポーター）、およびミトコンドリア呼吸（チトクロームcオキシダーゼサブユニット6B2）に関与する遺伝子を含む。
若齢マウスと老齢マウスの間で発現が有意に変化する遺伝子が同定された（図６Ａ）。加齢に伴い、胃の75遺伝子の発現が有意に減少し、11遺伝子の発現が有意に増加した（図６Ａ）。一方、若齢および老齢マウスの空腸（図１０Ａ－１０Ｄ）または回腸（図１０Ｄ－１０Ｆ）の遺伝子発現プロファイルの間には、より少ない差が観察された。空腸では加齢に伴い５遺伝子が発現減少し、２遺伝子が発現増加した。一方、回腸では１９遺伝子が減少し、９遺伝子が発現増加した。これらの結果は老化したげっ歯類胃の認識された減少した再生能力（Fukunagaら、1998）、および小腸の老化に伴う回復力（Eswaranら、2006）と一致する。
若齢マウス（20週）にＥＮＴ－０３(化合物III)を経口投与したところ、13個の胃遺伝子が応答し、すべてＥＮＴ－０３処理により転写抑制された（図６Ｂ）。若齢および老齢マウスの両方について、空腸および回腸におけるＥＮＴ－０３曝露に応答して２つ以下の遺伝子の発現が有意に変化した。
対照的に、胃における遺伝子発現に対するより強固な効果が、ＥＮＴ－０３（化合物III）で処置した高齢動物（78週）で観察された。63個の遺伝子が転写的に誘導された（図６Ｃ）。興味深いことに、老齢マウスのＥＮＴ－０３（化合物III）処置時に発現が増加した遺伝子の36個は、老齢に伴って発現が減少したものと同じであった。これらの遺伝子には、組織の更新に関わるもの（ファイバラスト成長因子2（Ｆｇｆ２）、亜鉛フィンガーたんぱく質382（Ｚｆｐ３８２）およびフォークヘッドボックスC2（Ｆｏｘ２））、神経分化に関わるもの（ニューラルセル接着分子2（Ｎｃａｍ２））、イミュニティ（トール類似受容体9および12（Ｔｌｒ９、Ｔｌｒ１２）、インターロイキン受容体連鎖（Ｉｌ２ｒｂ）およびベータ連鎖（CD300（ＣＤ３００ｌｄ）））、神経トランスミッターの合成と取り込み（コリンとセロトニントランスポーター（Ｓｌｃ５ａ７、Ｓｌｃ６ａ４））、ミトクロドリル酸酸化サブユニット6B2（Ｃｏｘ６ｂ２））が含まれる。これらのデータは、老齢マウスへのＥＮＴ－０３（化合物III）の経口投与がＧＩ管内の老化に関連する遺伝子発現の変化のいくつかを逆転させることができるという仮説を支持する。
(4)化合物ＩＩＩとアルツハイマー治療剤
実施例６は、アルツハイマー病などの神経疾患の治療におけるＥＮＴ－０３（化合物III）の使用を支持するデータを詳述する。PTP1B依存性機構は、アルツハイマー病のβアミロイドおよびタウマウスモデルにおいて、記憶障害の逆転および行動の正常化ならびにニューロン損失の減少のために利用されている（Ricke、Cruz ら、2020）。他の研究はＥＮＴ－０２によるβアミロイド凝集体の毒性の減少を、インビトロおよびアルツハイマー病のCelegansモデルにおいて示した（Limbocker、Chiaら、2019）。
ＥＮＴ－０２（ＭＳＩ１４３６）は、メタボリックシンドローム、アルツハイマー病、アテローム性動脈硬化症、癌、および再生修復能力の低下など、加齢に関連するいくつかの状態（マウス）を逆転させる。実施例６のデータは、ＥＮＴ－０３がヒトアルツハイマー病の受容可能な動物モデルであるマウスモデルにおいてアルツハイマー病を治療できることを実証する。
Morris水迷路を用いて、家族性アルツハイマー病の２つのマウスモデル、ヒトアミロイド前駆蛋白質の二重ミュータントを発現するhAPP‐J20マウス（Muckeら、2000）、およびヒト微小管関連蛋白質タウのP301Sミュータントを発現するＰＳ１９マウス（Yoshiyamaら、2007）における空間学習および記憶欠損に及ぼすＥＮＴ－０３（化合物III）の影響を試験した。両方の疾患モデルにおいて、一方はアミロイドパシーを有し、他方はタウオパシーを有し、訓練段階（図５Ａおよび５Ｅ）およびプローブ日の記憶（図５Ｂ、５Ｃ、５Ｆおよび５Ｇ）の間の学習は、ビヒクル処置hAPP－J20またはPS19同腹仔コントロールマウスと比較して、ＥＮＴ－０３処置で改善された（図５）。認知低下の予防に対する効果は関連化合物ＥＮＴ－０２およびhAPP－J20およびＰＳ１９マウスで観察されたものと同様である（Rickeら、2020）。
(5)ＥＮＴ－０３（化合物III）の合成方法
ＥＮＴ－０３（化合物III）を含む、本明細書に記載のアミノステロールを調製する合成方法は、実施例に記載されている。特に、合成方法は最初に、ＢＤＧ－４からｂｄｇ－５を調製することを含む：
Figure 2022543242000039
ＢＤＧ－５：1Ｈ ＮＭＲ(500 MHz, CDCl3) δ 3.93 (m,4H), 3.82 (br s, 1H), 3.66 (s, 3H), 2.4-2.2 (m, 2H),1.9-1.2 (m, 24H), 0.92 (d,3H, J = 7 Hz), 0.81 (s, 3H), 0.66 (s, 3H); 13C NMR (CDCl3)δ 177,109, 67.9, 64.2, 64.1, 55.8, 51.4, 50.5, 45.6, 42.6, 39.5, 39.4, 37.5,36.3, 36.1, 35.7, 35.5, 35.4, 31.2, 31.0, 30.9, 28.0, 23.6, 20.9, 18.3, 11.8,10.4。
次に、ＢＤＧ－５からＢＤＧ－６を調製する：
Figure 2022543242000040
ＢＤＧ－６：1Ｈ ＮＭＲ(500 MHz, CDCl3)δ 3.93 (m, 4H), 3.82 (br s, 1H), 3.61 (m, 2H), 1.97-1.84 (m, 4H), 1.7-1.0 (m,22H), 0.93 (d, 3H, J = 7 Hz), 0.81 (s, 3H), 0.66 (s, 3H); 13Ｃ ＮＭＲ (CDCl3) δ 109.3, 67.9,64.15, 64.13, 63.5, 56.0, 50.6, 45.6, 42.6, 39.51, 39.48, 37.5, 36.3, 36.1,35.7, 35.6, 35.5, 31.8, 31.2, 29.4, 28.2, 23.6, 20.9, 18.6, 11.8, 10.4。
次に、ＢＤＧ－６からＢＤＧ－７を調製する：
Figure 2022543242000041
ＢＤＧ－７：1Ｈ ＮＭＲ(500 MHz, CDCl3)δ 8.07 (d, 2H, J = 8 Hz), 8.00 (d, 2H, J = 8 Hz), 7.57 (t, 1H, J = 8 Hz), 7.53(t, 1H, J = 8 Hz), 7.47 (t, 2H, J = 8 Hz), 7.41 (t, 2H, J = 8Hz), 5.16 (br s,1H), 4.25 (m, 2H), 3.87 (m, 4H), 2.02-1.85 (m, 2H), 1.8-1.1 (m, 22H), 0.95 (d,3H, J = 7 Hz), 0.88 (s, 3H), 0.68 (s, 3H); 13C NMR (CDCl3)δ 166.7, 166.0, 132.8,131.1, 130.5, 129.7, 129.5, 128.4, 128.3, 109.0, 71.9,65.5, 64.2, 64.1, 55.8, 50.7, 47.2, 42.8, 39.5, 38.6, 37.4, 37.2, 35.7, 35.5,35.3, 33.3, 32.0, 31.2, 28.0, 25.2, 23.6, 21.1, 18.6, 11.8, 10.5。
次に、ＢＤＧ－７からＢＤＧ－８を調製する：
Figure 2022543242000042
ＢＤＧ－８:17.24 kg, 93.3%).1Ｈ ＮＭＲ(500 MHz, CDCl3) δ 8.07 (d, 2H, J = 8 Hz),7.57 (t, 1H, J = 7 Hz), 7.48 (t, 2H, J = 7 Hz), 5.15 (br s, 1H), 3.88 (m, 4H),3.56 (br s, 2H), 2.02-1.84 (m, 2H), 1.75-0.98 (m, 24 H), 0.92 (d, 3H, J = 6.5Hz), 0.88 (s, 3H), 0.67 (s, 3H). 13CNMR (CDCl3) δ 166.0, 132.7, 131.0, 129.7, 128.4, 109.0, 71.9, 64.2,64.1, 63.5, 55.8, 50.7, 47.2, 42.7, 39.5, 38.6, 37.3, 37.2 35.7, 35.5, 33.3,31.7, 31.3, 29.3, 28.0, 23.6, 21.1, 18.6, 11.8, 10.5。
次に、化合物１をＢＤＧ－８から調製する：
Figure 2022543242000043
化合物１：1Ｈ ＮＭＲ(500 MHz,ＣＤＣｌ3) δ 9.72 (s, 1H), 8.07 (d,2H, J = 7 Hz), 7.59 (t, 1H, J = 7 Hz), 7.49 (t, 2H, J = 7 Hz), 5.16 (br s, 1H),3.88 (m, 4H), 2.45-2.27 (m, 2H), 2.00-1.85 (m, 2H), 1.78-1.17 (m, 22H), 0.913(d, 3H, J = Hz), 0.88 (s, 3H), 0.68 (s, 3H). 13C ＮＭＲ(ＣＤＣｌ3) δ 203, 166,132.8, 131.0, 129.8, 128.4, 109, 72.0, 64.17, 64.11, 55.7, 50.7, 47.2, 42.8,40.8, 39.5, 38.6, 37.3, 37.2, 35.7, 35.5, 35.4, 33.3, 31.2, 27.9, 27.8, 23.7,21.1, 18.3, 11.7, 10.5。
次に、化合物１から化合物２を調製する：
Figure 2022543242000044
化合物２：1H ＮＭＲ (ＣＤＣｌ3, 300 MHz) δ8.10 - 8.07 (m, 2H), 7.60 - 7.57 (m, 1H), 7.52 - 7.47 (m, 2H), 6.7, 5.9(t, 1H), 5.17 (m, 1H), 4.21 - 4.12 (m, 2H), 3.92 - 3.88 (m, 4H), 2.06 (s, 3H),2.2 - 1.0 (m, 29 H), 0.95 (d, 3H, J = 7 Hz), 0.90 (s, 3H), 0.69 (s, 3H); MS(ES+) 485.45 (M-Ｃ7Ｈ7Ｏ2+Ｈ)。
次に、化合物２から化合物３を調製する：
Figure 2022543242000045
化合物３：1H ＮＭＲ (ＣＤＣｌ3, 300 MHz) δ8.09 - 8.06 (m, 2H), 7.58 - 7.56 (m, 1H), 7.55 - 7.45 (m, 2H), 5.16 (m,1H), 4.12 - 4.05 (m, 2H), 3.90 - 3.85 (m, 4H), 2.39 - 2.36 (m, 1H), 2.0-1.0 (m,35 H), 1.11 (d, 3H, J = 7Hz), 0.88 (s, 3H), 0.67 (s, 3H); MS (ES+) 487.46 (M-C7H7O2+H)。
次に、化合物４を化合物３から調製する：
Figure 2022543242000046
化合物４：1H ＮＭＲ(CDCl3, 300 MHz)δ 8.05 - 8.02 (m, 2H), 7.60- 7.57 (m, 1H), 7.51 - 7.45 (m, 2H), 5.21 (m, 1H), 2.4-1.0 (m, 32 H), 1.15 (d,3H, J = 7 Hz), 1.09 (s, 3H), 0.91 (d, 3H, J = 7 Hz), 0.67 (s, 3H); MS (ES+)415.52 (M-C7H7O2+H)。
次に、化合物４から化合物５を調製する：
Figure 2022543242000047
化合物５：1Ｈ ＮＭＲ(ＣＤ3ＯＤ, 300 MHz) δ 8.05 - 8.02 (m, 2H), 7.66- 7.60 (m, 1H), 7.54 - 7.49 (m, 2H), 5.17 (m, 1H), 3.36 - 3.04 (m, 13H), 2.37(m, 1H), 2.1-1.0 (m, 39 H), 1.10 (d, 3H, J = 7 Hz), 0.95 (m, 6H), 0.74 (s, 3H);MS (ES+) 723.78 (M+H)。
次に、ＥＮＴ－０３（化合物III）を化合物５から調製する：
Figure 2022543242000048
四塩酸塩としての化合物III(ＥＮＴ－０３）：1Ｈ ＮＭＲ(ＣＤ3ＯＤ, 300 MHz) δ 3.80 (br s, 1H), 3.20 -3.05 (m, 13H), 2.37 (m, 1H), 2.2-1.0 (m, 36 H), 1.13 (d, 3H, J = 7 Hz), 0.93(d, 3H, J = 7 Hz), 0.87 (s, 3H), 0.69 (s, 3H); MS (ES+) 619.31 (M+H)。
重水素化ＥＮＴ－０３（ＥＮＴ－０３－d3およびＥＮＴ－０３－d4）を調製する例示的な合成方法もまた、以下の実施例に記載される。
ＩＩ．化合物
一態様では、以下の式を有するアミノステロール化合物：
Figure 2022543242000049
式中、Ｒ1はＨまたはＤであり、Ｒ2はＨまたはＤであり、ただしすべてのＲ1がＨであり、すべてのＲ2がＨであリ、またはすべてのＲ1およびＲ2がＨであり、またはそれらの薬学的に許容される塩、溶媒和物、プロドラッグ、または誘導体である。
が提供される。
一実施形態では、下式のアミノステロール化合物：
Figure 2022543242000050
またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、プロドラッグまたは誘導体が提供される。
一実施形態では、アミノステロールが以下の式を有し：
Figure 2022543242000051
またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、プロドラッグまたは誘導体。
一実施形態では、アミノステロールが以下の式を有する：
Figure 2022543242000052
またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、プロドラッグまたは誘導体。
一実施形態では、アミノステロールが以下の式を有する：
Figure 2022543242000053
またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、プロドラッグまたは誘導体。
一つの局面では、以下の式を有するアミノステロール：
Figure 2022543242000054
またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、プロドラッグ、または誘導体、が提供される。
一実施形態では、アミノステロールが以下の式を有する：
Figure 2022543242000055
またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、プロドラッグ、または誘導体。
別の局面において、下式を有するアミノステロール化合物：
Figure 2022543242000056
薬学的に許容される塩、溶媒和物、プロドラッグ、または誘導体が提供される。
いくつかの実施形態では、アミノステロール化合物が以下の式を有する：
Figure 2022543242000057
またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、プロドラッグまたは誘導体。
一実施形態では、プロドラッグが下式の化合物を含む：
Figure 2022543242000058
式中、Ｒ1はＨ、任意選択で置換されたアリール、任意選択で置換されたヘテロアリール、任意選択で置換されたＣ1－C6アルキル、任意選択で置換されたＣ1－Ｃ6アルキニル、任意選択で置換されたヘテロシクリル、任意選択で置換されたＣ3－Ｃ8シクロアルキル、任意選択で置換されたＣ1－Ｃ6アルケニル；およびＲ2はＨまたは－Ｃ（Ｏ）Ｒ3であり、ここでＲ3は任意選択で置換されたアリール、任意選択で置換されたヘテロアリール、任意選択で置換されたＣ1－Ｃ6アルキル、任意選択で置換されたＣ1－Ｃ6アルキニル、任意選択で置換されたヘテロシクリル、任意選択で置換されたＣ3－Ｃ8シクロアルキル、または任意選択で置換されたＣ1－C6アルケニルであり、ただし、Ｒ1およびＲ2 の少なくとも１つはＨではなく；
またはそれらの薬学的に許容される塩、溶媒和物、プロドラッグ、または誘導体である。
一実施形態では、プロドラッグが下式の化合物を含む：
Figure 2022543242000059
またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、プロドラッグまたは誘導体。
一つの局面では、プロドラッグが次式を有する化合物を含む：
Figure 2022543242000060
式中、Ｒ1はＨ、任意選択で置換されたアリール、任意選択で置換されたヘテロアリール、任意選択で置換されたＣ1－Ｃ6アルキル、任意選択で置換されたＣ1－Ｃ6アルキニル、任意選択で置換されたヘテロシクリル、任意選択で置換されたＣ3－Ｃ8シクロアルキル、任意選択で置換されたＣ1－Ｃ6アルケニル；およびＲ2はＨまたは－Ｃ（Ｏ）Ｒ3であり、ここでＲ3は任意選択で置換されたアリール、任意選択で置換されたヘテロアリール、任意選択で置換されたＣ1－Ｃ6アルキル、任意選択で置換されたＣ1－Ｃ6アルキニル、任意選択で置換されたヘテロシクリル、任意選択で置換されたＣ3－Ｃ8シクロアルキル、または任意選択で置換されたＣ1－C6アルケニルであり、ただし、Ｒ1およびＲ2 の少なくとも１つはＨではなく；
またはそれらの薬学的に許容される塩、溶媒和物、プロドラッグ、または誘導体である。
一実施形態では、プロドラッグが式の化合物を含む：
Figure 2022543242000061
またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、プロドラッグまたは誘導体。
別の局面において、式：を有するアミノステロール化合物：
Figure 2022543242000062
式中、Ｒ1はＨ、任意選択で置換されたアリール、任意選択で置換されたヘテロアリール、任意選択で置換されたＣ1－Ｃ6アルキル、任意選択で置換されたＣ1－Ｃ6アルキニル、任意選択で置換されたヘテロシクリル、任意選択で置換されたＣ3－Ｃ8シクロアルキル、任意選択で置換されたＣ1－Ｃ6アルケニル；およびＲ2はＨまたは－Ｃ（Ｏ）Ｒ3であり、ここでＲ3は任意選択で置換されたアリール、任意選択で置換されたヘテロアリール、任意選択で置換されたＣ1－Ｃ6アルキル、任意選択で置換されたＣ1－Ｃ6アルキニル、任意選択で置換されたヘテロシクリル、任意選択で置換されたＣ3－Ｃ8シクロアルキル、または任意選択で置換されたＣ1－C6アルケニルであり、ただし、Ｒ1およびＲ2 の少なくとも１つはＨではなく；
またはそれらの薬学的に許容される塩、溶媒和物、プロドラッグ、または誘導体である。
一実施形態では、アミノステロール化合物が以下の式を有する：
Figure 2022543242000063
またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、プロドラッグまたは誘導体。
本明細書で提案される例示的な構造は以下を含む：
Figure 2022543242000064
Ｒ１ HまたはOH、
Figure 2022543242000065
Ｒ3 -CH３、イソプロピル、Ｈ。
本開示のアミノステロールは、不斉炭素原子を含んでもよい。そのようなものとして、本開示のアミノステロールは、個々の鏡像異性体、または上記の混合物のいずれかとして存在し得る。本開示は、Ｃ25での混合物および化合物の天然のＲ配向の両方を包含する。したがって、本開示のアミノステロールは、ラセミ混合物、および別の可能な立体異性体を実質的に含まない個々のそれぞれの立体異性体の両方を含むことができる。本明細書で使用される「他の立体異性体を実質的に含まない」という用語は、約25％未満、約20％未満、約15％未満、約10％未満、約5％未満、約4％未満、約3％未満、約2％未満、または約1％未満の他の立体異性体、または「約Ｘ」％未満の他の立体異性体（Ｘは0～100の数である）が存在することを意味する。
いくつかの実施形態において、アミノステロールは本明細書に開示されるアミノステロールのいずれかの誘導体、または化合物IIIの誘導体（ＥＮＴ－０３）であり、生体内分布、投与の容易さ、代謝安定性、またはそれらの任意の組み合わせを改善するために医化学によって修飾される。いくつかの実施形態では、化合物ＩＩＩまたは誘導体アミノステロールが（1）硫酸塩部分の代謝除去およびコレステロール側鎖の酸化を回避するように選択されたスルホン酸塩、リン酸塩、または他のアニオン性部分によるカルボキシレートの置換；（2）代謝酸化または共役を防止するためのフッ素原子などの非代謝性極性置換基によるヒドロキシル基の置換；および／または（3）ステロイド環系の酸化的または還元的代謝を防止するための種々の環水素原子の置換；のうちの１つ以上を含むように修飾される。
本技術はまた、本明細書中に開示されるアミノステロールの塩、溶媒和物および水和物を提供する。この技術のアミノステロールの塩は、アミノ官能基のようなアミノステロールの酸と塩基性基との間、またはカルボキシル官能基のようなアミノステロールの塩基と酸性基との間で形成される。別の実施形態によれば、アミノステロールは、薬学的に許容される酸付加塩である。薬学的に許容される塩の例としては塩酸塩、ナトリウム塩、硫酸塩、酢酸塩、リン酸塩または二リン酸塩、塩化物、カリウム、マレイン酸塩、カルシウム、クエン酸塩、メシル酸塩、硝酸塩、酒石酸塩、アルミニウム、およびグルコン酸塩が挙げられるが、これらに限定されない。
薬学的に許容される塩を形成するために一般に使用される酸としては、無機酸、例えば、重硫化水素、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸およびリン酸、ならびに有機酸、例えば、パラ－トルエンスルホン酸、サリチル酸、酒石酸、ビタル酸、アスコルビン酸、マレイン酸、ベシル酸、フマル酸、グルコン酸、グルクロン酸、ギ酸、グルタミン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、乳酸、シュウ酸、パラ－ブロモフェニルスルホン酸、炭酸、コハク酸、クエン酸、安息香酸および酢酸、ならびに関連する無機および有機酸が挙げられる。したがって、このような薬学的に許容される塩には、硫酸塩、ピロ硫酸塩、重硫酸塩、亜硫酸塩、重亜硫酸塩、リン酸塩、リン酸一水素塩、リン酸二水素塩、メタリン酸塩、ピロリン酸塩、塩化物、臭化物、ヨウ化物、酢酸塩、プロピオネート、デカノエート、カプリレート、アクリレート、ギ酸塩、イソブチレート、カプレート、ヘプタノエート、プロピオネート、シュウ酸塩、マロン酸塩、コハク酸塩、スベレート、セバケート、フマレート、マレエート、ブマレート、ブチン－１，４－ジオエート、ヘキシン－１，６－ジオエート、安息香酸塩、クロロ安息香酸塩、メチル安息香酸塩、ジニトロ安息香酸塩、ヒドロキシ安息香酸塩、メトキシ安息香酸塩、フタレート、テレフタレート、スルホネート、キシレンスルホネート、フェニルアセテート、フェニルプロピオネート、フェニルブチレート、クエン酸塩、乳酸塩、β－ヒドロキシブチレート、グリコレート、マレイン酸塩、酒石酸塩、メタンスルホネート、プロパンスルホネート、ナフタレン－１－スルホネート、ナフタレン－２－スルホネート、マンデレートおよびその他の塩が含まれる。ある実施形態において、薬学的に許容される酸付加塩は、塩酸、臭化水素酸、およびリン酸などの鉱酸で形成されるものを含む。
ＩＩＩ．本開示のアミノステロール化合物の製造方法
１つの局面において、下式のアミノステロール：
Figure 2022543242000066
を製造する方法であって、ＥＮＴ Ｉa (化合物Ia）へのスペルミンの添加を刺激することを含む方法が提供される。
Figure 2022543242000067
１つの局面において、下式のアミノステロールの形成を抑制する方法：
Figure 2022543242000068
の形成を抑制する方法が提供され、該方法はＥＮＴ－０１a（化合物Ia）へのスペルミンの添加を抑制することを含む。
Figure 2022543242000069
いくつかの実施形態において、ＥＮＴ－０１ａ（化合物Ia）は、下式を有し、
Figure 2022543242000070
ＥＮＴ－０３（化合物III）は下式を有する。
Figure 2022543242000071
１つの局面において、下式のアミノステロール：
Figure 2022543242000072
を製造する方法が提供され、該方法は、化合物Ia(ENT－01a）へのスペルミンの添加を刺激することを含む。
Figure 2022543242000073
１つの局面において、下式のアミノステロール：
Figure 2022543242000074
の形成を抑制する方法が提供され、該方法は、化合物Iaへのスペルミンの添加を抑制することを含む。
Figure 2022543242000075
いくつかの実施形態では、化合物Iaは以下の式を有し、
Figure 2022543242000076
また、化合物IVは、以下の式を有する。
Figure 2022543242000077
別の局面において、下式のアミノステロール：
Figure 2022543242000078
の製造方法が提供され、該方法は、化合物Iaへのスペルミンの添加を刺激することを含む。
Figure 2022543242000079
別の局面において、下式のアミノステロール：
Figure 2022543242000080
の形成を抑制する方法が提供され、該方法は、化合物Iaへのスペルミンの添加を抑制することを含む。
Figure 2022543242000081
いくつかの実施形態では、化合物Iaが以下の式を有し、
Figure 2022543242000082
化合物Vは下式を有する。
Figure 2022543242000083
いくつかの実施形態において、アミノステロールは、被験体においてインビボで産生される。いくつかの実施形態において、アミノステロールは、インビトロで産生される。
いくつかの実施形態において、化合物Iへのスペルミンの添加は、被験体においてインビボで抑制される。いくつかの実施形態において、化合物Iへのスペルミンの添加は、インビトロで抑制される。いくつかの実施形態において、化合物Iaへのスペルミンの添加は、被験体においてインビボで抑制される。いくつかの実施形態において、化合物Iaへのスペルミンの添加は、インビトロで抑制される。
いくつかの実施形態において、化合物Iaへのスペルミンの添加を刺激することは、スペルミンおよび化合物Iaを含むマトリックスを、化合物Iaへのスペルミンの添加を促進する薬剤と接触させることを含む。いくつかの実施形態において、化合物Iaへのスペルミンの添加を刺激することは、スペルミンおよび化合物Iaを含む細胞を、化合物Iaへのスペルミンの添加を促進する試薬と接触させることを含む。いくつかの実施形態において、アミノステロールは被験体においてインビボで産生され、化合物Iaへのスペルミンの添加を刺激することは化合物Iaへのスペルミンの添加を促進する有効量の作用物質を被験体に投与することを含み、作用物質の投与はアミノステロールを投与するための本明細書中で議論される同じ経路のいずれかによる投与を含み得る。
いくつかの実施形態では、化合物Iaへのスペルミンの添加を促進する薬剤がプロモーターまたはエフェクターを含む。エフェクターは、酵素活性化因子、酵素誘導因子、タンパク質、小分子、または核酸を含み得る。いくつかの実施形態では、薬剤がスペルミンの化合物Iaへの付加を活性化または触媒する任意の薬剤を含んでもよい。ある実施形態において、薬剤は、化合物Iaへのスペルミンの添加を触媒する１つ以上の酵素を含む。いくつかの実施形態では、薬剤が化合物Iaへのスペルミンの付加を触媒する酵素をコードする１つ以上のポリヌクレオチド、またはペプチドエフェクターをコードする１つ以上のポリヌクレオチドを含む。１つ以上のポリヌクレオチドは、組換えDNAおよび／またはRNAを含み得る。いくつかの実施形態において、薬剤は、１つ以上のポリヌクレオチドを含むベクターを含み得る。
いくつかの実施形態では、スペルミン付加は酵素的還元アミノ化である。いくつかの実施形態では、スペルミン付加が合成還元アミノ化である。いくつかの実施形態では、被験体はヒトである。いくつかの実施形態では、被験体が哺乳動物を含むヒトおよび非ヒト動物、ならびにヒト小児および成体を含む未成熟および成熟動物を含む。ヒト被験体は、乳児、幼児、学齢の子供、ティーンエイジャー、若年成人、成人、または高齢の患者であり得る。
ＩＶ． 組成物
別の局面において、本明細書中に提供されるのは、本明細書中に開示されるアミノステロール化合物、またはその薬学的に受容可能な塩、溶媒和物、プロドラッグまたは誘導体、ならびに１つ以上の薬学的に受容可能なキャリアおよび／または賦形剤を含む組成物である。本明細書中に開示されるアミノステロール、またはその薬学的に受容可能な塩、溶媒和物、またはプロドラッグの投与は、組成物の投与を含み得る。
Ａ． 医薬品担体
アミノステロール、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、またはプロドラッグを単独で投与することは可能であるが、１つ以上の薬学的に許容される担体と一緒に、それを医薬製剤として投与することが好ましい。担体は、アミノステロール、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、またはプロドラッグと適合性であるという意味で「許容可能」でなければならず、そのレシピエントに有害ではない。
一般に、製剤は、本明細書に記載のアミノステロール、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、プロドラッグまたは誘導体を、液体担体もしくは微細に分割された固体担体、またはその両方と均一かつ緊密に接触させることによって調製される。次いで、必要であれば、生成物を所望の製剤に成形する。凝固オイルおよびオレイン酸エチルのような非水溶性媒体はまた、リポソームと同様に有用である。
担体は、適当には等張性および化学的安定性を高める物質などの少量の添加剤を含む。そのような材料は使用される用量および濃度でレシピエントに無毒であり、リン酸塩、クエン酸塩、コハク酸塩、酢酸、および他の有機酸またはそれらの塩などの緩衝液；アスコルビン酸などの抗酸化剤；低分子量（約10残基未満）ポリペプチド、例えばポリアルギニンまたはトリペプチド；ゼラチン、血清アルブミン、または免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン酸、アスパラギン酸、またはアルギニンなどのアミノ酸；セルロースまたはその誘導体、グルコース、マンノース、またはデキストリンを含む単糖類、二糖類、および他の炭水化物；EDTAなどのキレート剤；マンニトールまたはソルビトールなどの糖アルコール；ナトリウムなどの対イオン；ならびに／またはポリ溶媒和物、ポロキサマー、またはPEGなどの非イオン性界面活性剤を含む。
エアロゾル投与が適切である場合、本明細書に記載されるアミノステロール、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、もしくはプロドラッグは、標準的な手順を使用してエアロゾルとして処方され得る。用語「エアロゾル」は細気管支または鼻腔に吸入することができる本明細書に記載の化合物の任意のガス浮遊相を含み、乾燥粉末および水性エアロゾル、ならびに肺および鼻エアロゾルを含む。具体的には、エアロゾルが定量吸入器もしくはネブライザー、またはミスト噴霧器で生成され得るような、本明細書に記載される化合物の液滴のガス媒介懸濁液を含む。エアゾールはまた、空気または他のキャリアガス中に懸濁された本技術の組成物の乾燥粉末組成物を含み、これは、例えば、吸入器デバイスからの通気によって送達され得る。Ganderton & Jones、「気道への薬剤送達」(EllisHorwood,1987); Gonda、Critical Reviews in therapeuticDrug Carrier Systems, 6：273－313（1990）；およびRaeburnら、Pharmacol.Toxicol. Methods ,27：143－159（1992）、を参照のこと。
Ｂ． 剤形
アミノステロール組成物は単位投薬形態で便利に提供することができ、薬学の分野で周知の方法のいずれかによって調製することができる。例示的なアミノステロール剤形には経口、鼻腔内、および注射可能（ＩＰ、ＩＶ、またはＩＭ）が含まれるが、これらに限定されない。好ましくは、アミノステロール製剤が経口、鼻腔内、またはそれらの組み合わせで投与される。さらに別の実施形態では、投与は非経口投与を含む。
本技術の製剤または組成物は、使用説明書または添付文書と一緒に包装するか、またはキットに含めることができる。「薬学的に許容される担体」は、任意のタイプの非毒性固体、半固体または液体充填剤、希釈剤、カプセル化材料または製剤補助剤を指す。
本技術による医薬組成物はまた、１つ以上の結合剤、充填剤、潤滑剤、懸濁剤、甘味料、香味料、防腐剤、緩衝剤、湿潤剤、崩壊剤、発泡剤、および他の賦形剤を含み得る。このような賦形剤は、当技術分野で知られている。
充填剤の例にはラクトース一水和物、ラクトース無水物、および様々なデンプンが含まれ、結合剤の例には様々なセルロースおよび架橋ポリビニルピロリドン、Avicel(登録商標)PH101およびAvicel(登録商標)PH102などの微結晶セルロース、微結晶セルロース、ならびにケイ化微結晶セルロース(ProSolv SMCC(商標））が含まれる。
圧縮される粉末の流動性に作用する薬剤を含む好適な潤滑剤は、Aerosil(登録商標)200、タルク、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、およびシリカゲルなどのコロイド状二酸化ケイ素を含むことができる。
甘味料の例としては、スクロース、キシリトール、サッカリンナトリウム、シクラメート、アスパルテーム、およびアセスルファムなどの任意の天然または人工甘味料を挙げることができる。香味剤の例は、Magnasweet(登録商標)（MAFCOの商標）、バブルガムフレーバー、およびフルーツフレーバーなどである。
防腐剤の例には、ソルビン酸カリウム、メチルパラベン、プロピルパラベン、安息香酸およびその塩、ブチルパラベンのようなパラヒドロキシ安息香酸の他のエステル、エチルまたはベンジルエチルアルコールのようなアルコール、フェノールのようなフェノール化合物、または塩化ベンザルコニウムのような四級化合物が含まれる。
適切な希釈剤には、微結晶セルロース、ラクトース、二塩基性リン酸カルシウム、糖類、および／または前述のいずれかの混合物などの薬学的に許容される不活性充填剤が含まれる。希釈剤の例としては、Avicel(登録商標)PH101およびAvicel(登録商標)PH102のような微結晶セルロース；ラクトース一水和物、無水ラクトースおよびPharmatose(登録商標)DCL21のようなラクトース、Emcompress(登録商標)のような二塩基性リン酸カルシウム、マンニトール、スターチ、ソルビトール、スクロース、およびグルコースがある。
適切な崩壊剤には、軽度に架橋されたポリビニルピロリドン、トウモロコシデンプン、ジャガイモデンプン、トウモロコシデンプン、および改変デンプン、クロスカルメロースナトリウム、クロスポビドン、デンプングリコール酸ナトリウム、およびそれらの混合物が含まれる。
C． 用法・用量及び投与期間
本明細書中に記載されるアミノステロールの用量は、約1～約500mg／日、またはこれらの2つの値の間の任意の量の範囲であり得る。いくつかの実施形態では、被験体に、本明細書に記載のアミノステロールの治療有効量を投与する。本開示の方法における少なくとも１つのアミノステロールまたはその塩もしくは誘導体の治療効果量は例えば、被験体の約0．1～約20mg／kg、約0．1～約15mg／kg、約0．1～約10mg／kg、約0．1～約5mg／kg、または約0．1～約2．5mg／kg体重であり得る。別の局面において、本開示の方法における少なくとも１つのアミノステロールまたはその塩もしくは誘導体の治療効果量は例えば、約0．001～約500mg／日、約0．001～約250mg／日、約0．001～約125mg／日、約0．001～約50mg／日、約0．001～約25mg／日、または約0．001～約10mg／日であり得る。
本明細書中に記載されるアミノステロールの経口投与量は、約1～約500mg／日、またはこれらの2つの値の間の任意の量の範囲であり得る。一実施形態では投与方法が経口投与を含み、アミノステロールの治療有効量は（i）約1～約300mg／日；(ii)約25～約300mg／日；(iii)約50～約300mg／日；または（iv）約75～約300mg／日を含む。経口投与されるアミノステロールの他の例示的な用量は約5、約10、約15、約20、約25、約30、約35、約40、約45、約50、約55、約60、約65、約70、約75、約80、約85、約90、約95、約100、約105、約110、約115、約120、約125、約130、約135、約140、約145、約150、約155、約160、約165、約170、約175、約180、約185、約190、約195、約200、約205、約210、約215、約220、約225、約230、約235、約240、約245、約250、約255、約260、約265、約270、約275、約280、約295、約300、約305、約310、約315、約320、約325、約330、約335、約340、約345、約350、約355、約360、約365、約370、約375、約380、約385、約390、約395、約400、約405、約410、約415、約420、約425、約430、約435、約440、約445、約450、約455、約460、約465、約470、約475、約480、約485、約490、約495、または約500mg／日を含むが、これらに限定されない。
アミノステロールの鼻腔内投与量は、アミノステロールの経口投与量よりはるかに少ない。そのような鼻腔内アミノステロール低用量の例としては約0．001～約6mg／日、またはこれらの2つの値の間の任意の量が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では投与方法が経鼻投与を含み、アミノステロールの治療有効量は（i）約0．001～約6mg／日;(ii)約0．001～約4mg／日；または（iii）約0．001～約2mg／日を含む。例えば、鼻腔内投与されるアミノステロールの低用量は、約0．001、約0．005、約0．01、約0．02、約0．03、約0．04、約0．05、約0．06、約0．07、約0．08、約0．09、約0．1、約0．2、約0．3、約0．4、約0．5、約0．6、約0．7、約0．8、約0．9、約1、約1．1、約1．2、約1．3、約1．4、約1．5、約1．6、約1．7、約1．8、約1．9、約2、約2．1、約2．2、約2．3、約2．4、約2．5、約2．6、約2．7、約2．8、約2．9、約3、約3．１、約3．2、約3．3、約3．4、約3．5、約3．6、約3．7、約3．8、約3．9、約4、約4．1、約4．2、約4．3、約4．4、約4．5、約4．6、約4．7、約4．8、約4．9、約5、約5．1、約5．2、約5．3、約5．4、約5．5、約5．6、約5．7、約5．8、約5．9、または約6mg／日であり得る。
鼻腔内（ＩＮ）投与のために、アミノステロール投与量は同じ投与量が任意の他の経路（例えば、「治療下」投与量）によって投与される場合、任意の薬理学的効果を提供せず、さらに、負の効果をもたらさないように選択され得ることが意図される。例えば、本明細書中に記載されるように、化合物III(ＥＮＴ－０３）は、食物摂取および体重減少の減少薬理学的効果を有する。従って、本開示のＩＮ方法の特定の実施形態において、アミノステロールが化合物III(ＥＮＴ－０３）またはその塩、溶媒和物、プロドラッグ、または誘導体であり得る場合、同じIN化合物III投薬量が別の経路（例えば、経口、ＩＰ、またはＩＶ）を介して投与される場合、化合物III投薬量は、食物摂取の顕著な減少または顕著な体重減少を生じない。同様に、いくつかのアミノステロールは、悪心、嘔吐および／または血圧低下の薬理学的効果を生じることが知られている。従って、本開示のＩＮ方法の特定の実施形態において、アミノステロールがＩＮで与えられた場合にこの効果を有する場合、同じＩＮアミノステロール投薬量が経口、ＩＰ、またはＩＶのような別の経路を介して投与される場合、アミノステロール投薬量は、顕著な悪心、嘔吐、および／または血圧の低下をもたらさない。いくつかの実施形態において、鼻腔内投与は、脳へのアミノステロールの送達を含む。適切な例示的なアミノステロール投与量は、上記に記載されている。
アミノステロールの投与量にかかわらず、下痢、嘔吐、吐き気などの望ましくない副作用が持続する場合には、アミノステロールの用量を漸減（減量）することができる。別の実施形態において、アミノステロールの用量は有害事象を排除するための用量の適度な減少、または臨床結果がこれが望ましいことを示唆する場合の用量の適度な増加（例えば、用量の適度な増加を伴う有害事象および潜在的な増加した効力がないか、または最小限である）を可能にするために、規定された量をプラスまたはマイナスして変動され得る。例えば、一実施形態では、アミノステロール用量が約1％、約2％、約3％、約4％、約5％、約6％、約7％、約8％、約9％、約10％、約11％、約12％、約13％、約14％、約15％、約16％、約17％、約18％、約19％、または約20％増加または減少させることができる。
アミノステロールまたはその誘導体、塩、溶媒和物、またはプロドラッグを含む医薬組成物は、長期間の維持用量を含む任意の適切な期間投与することができる。投薬は、任意の薬学的に許容される投薬レジメンを使用して、必要に応じて行われ得る。アミノステロールの投与は1日1回以下、1日おきに1回、3日おきに1回、4日おきに1回、5日おきに1回、6日おきに1回、週に1回、または所与の日中に複数の期間にわたって分割することができる（例えば、1日2回）。例示的な実施形態では、投与は1x／日である。
他の実施形態では、組成物が（1）単回投与として、または一定期間にわたる複数回投与として；（2）不定期間の維持用量で；（3）1回、2回または複数回；（4）毎日、隔日、3日ごと、週ごと、または月ごと；（5）約1、約2、約3、約2、約1、約3、約4週間、約2、約3、約4、約5、約6、約7、約8、約9、約10、約11、または約12ヶ月、約1年、約1．5年、約2、約2．5、約3、約3．5、約4、約4．5、約5、約5．5、約6、約6．5、約7、約7．5、約8、約8．5、約9 、約9．5、約10、約10．5、約11、約11．5、約12、約12．5、約13、約13．5、約14、約14．5、約15、約15．5、約16、約16．5、約17、約17．5、約18、約18．5、約19、約19．5、約20、約20．5、約21、約21．5、約22、約22．5、約23、約23．5、約24、約24．5、または約25年、または（6）これらのパラメータの任意の組合せ、例えば、6ヶ月間の毎日の投与、1年以上の毎日の投与。
さらに別の例示的な投薬レジメンは、有効用量が約1、約2、約3、約4、約5、約6日毎に1回、または週1回送達され得る、定期的な投薬を含む。
好ましい実施形態において、アミノステロール用量は朝に、すなわち、空腹時に、好ましくは起床の約2時間以内に摂取され、その後、例えば、約60～約90分など、食物を含まない期間が続き得る。他の実施形態において、アミノステロール用量は起床中に、約15分、約30分、約45分、約1時間、約1．25時間、約1．5時間、約1．75時間、約2時間、約2．25時間、約2．5時間、約2．75時間、約3時間、約3．25時間、約3．5時間、約3．75時間、または約4時間以内に摂取される。なおさらなる実施形態において、アミノステロール用量は食物を摂取しない期間に続くが、この期間は少なくとも約30分、約45分、約60分、約1．25時間、約1．5時間、約1．75時間、または約2時間である。
理論に束縛されることはないが、アミノステロールはおそらく、そのＥＮＳシグナリングに起因して、概日リズムに影響を及ぼし、朝にアミノステロール用量を服用することにより、日中に起こるすべての自律神経生理学的機能の同期化を可能にすると考えられる。本開示の他の実施形態において、アミノステロール投与量は、起床から約15分、約30分、約45分、約1時間、約1．25時間、約1．5時間、約1．75時間、約2時間、約2．25時間、約2．5時間、約2．75時間、約3時間、約3．25時間、約3．5時間、約3．75時間、または約4時間以内に摂取される。さらに、本開示の他の実施形態ではアミノステロール投薬後、被験体は食物を摂取しない、約15分、約30分、約45分、約1時間、約1．25時間、約1．5時間、約1．75時間、約2時間、約2．25時間、約2．5時間、約2．75時間、または約3時間の期間を有する。
D． 「アミノステロール固定用量」
１つの局面において、本出願は本明細書中に記載されるアミノステロールの「固定用量」（すなわち、年齢、サイズ、または体重依存性ではなく、むしろ個々に較正される）を決定するための方法の発見に関する。この方法によって得られる「固定用量」は、「固定用量」が決定された症状、「脳－腸」軸に沿った関連症状、および基礎疾患を治療する際に非常に有効な結果をもたらす。さらに、基礎疾患を予防する方法のために、この同じ「固定用量」方法を活用する方法が本明細書において意図される。本開示は、固定されたアミノステロール投薬量が特定の患者について決定される方法に限定されない。
治療的に有効である「固定アミノステロール用量」（本明細書中では「固定漸増アミノステロール用量」とも称される）は、アミノステロール組成物の開始用量およびアミノステロール用量の有効性を評価するためのツールまたはマーカーとして使用される特定の症状の改善のための閾値を確立することによって、各患者について決定される。特定の患者に対する開始アミノステロール用量を決定した後、アミノステロール用量は所望の改善が達成されるまで、一定の時間隔にわたって一貫した量ずつ漸増され、このアミノステロール用量はその特定の症状に対するその特定の患者に対する「固定漸増アミノステロール用量」である。例示的な実施形態では、経口投与されたアミノステロール用量が所望の改善が達成されるまで、約3～約5日毎に約25mgずつ漸増される。症状改善を測定するためのツールとともに評価された症状は、これらに限定されないが、以下に具体的に記載される、便秘、幻覚、睡眠障害（例えば、REM障害睡眠または概日リズム機能障害）、認知障害、うつ病、またはα－シヌクレイン凝集を包含する。
次いで、この治療的に有効な「固定用量」は、処置および／または予防を通して維持される。したがって、患者が「薬剤を外し」、アミノステロール組成物の摂取を中止しても、同じ「固定用量」が、アミノステロール治療の再開始後の上昇期間なしに摂取される。理論に拘束されるものではないが、アミノステロール用量は「固定用量」閾値を確立する症状に関連する神経損傷の重症度に依存すると考えられている－例えば、便秘については用量は患者の消化管における神経系損傷の程度に関連する可能性がある。
増量：特定の患者の「アミノステロールの固定用量」を決定する際には、より低用量から開始し、その後、評価被験体の症状について陽性結果が認められるまで増量する。評価されるべき例示的な症状は便秘であり得るが、処置されるべき疾患または障害に関連する任意の症状はアミノステロール投薬量を評価するためのマーカーとして使用され得る。アミノステロールの投与量にかかわらず、下痢、嘔吐、吐き気などの望ましくない副作用が持続する場合には、アミノステロールの用量を漸減（減量）することもできる。
アミノステロールの開始用量は症状の重症度に依存する－例えば、１週間に１回未満の自発的排便（ＳＢＭ）と定義される重度の便秘を経験している患者の場合、経口アミノステロールの開始用量は約150mg／日以上でよい。対照的に、中等度の便秘（例えば、1週間に１つ以上のSBMを有すると定義される）を有する患者について、開始経口アミノステロール用量は、約75mg／日であり得る。したがって、例として、中等度の便秘を経験する患者は約75mg／日の経口アミノステロール用量で開始することができ、一方、重度の便秘を経験する患者は、約150mg／日の経口アミノステロール用量で開始することができる。
他の実施形態では、中程度の症状を経験する患者（固定された漸増アミノステロール用量を計算するために使用される症状について）が約10mg／日～約75mg／日の経口アミノステロール用量、またはこれらの値の間の任意の量で開始され得る。例えば、中程度の症状のための開始経口アミノステロール投薬量は、約10、約15、約20、約25、約30、約35、約40、約45、約60、約65、約70、または約75mg／日であり得る。
なおさらなる実施形態において、患者が重篤な症状を経験している場合（固定された漸増されたアミノステロール用量を計算するために使用される症状について）、患者は、約75～約175mg／日の範囲の経口アミノステロール用量、またはこれらの2つの値の間の任意の量で開始され得る。例えば、重篤な症状のための開始経口アミノステロール投薬量は、約75、約80、約85、約90、約95、約100、約105、約110、約115、約120、約125、約130、約135、約140、約145、約150、約155、約160、約165、約170、または約175mg／日であり得る。
いくつかの実施形態では、開始経口アミノステロール用量が約125mgまたは約175mg／日であってもよく、これもまた、便秘などの症状の重症度に依存する。
用量漸増前の鼻腔内（ＩＮ）アミノステロール投薬量の開始は、例えば約0．001mg／日～約3mg／日、またはこれらの２つの値の間の任意の量であり得る。例えば、用量漸増前のＩＮ投与のための開始アミノステロール用量は例えば、約0．001、約0．005、約0．01、約0．02、約0．03、約0．05、約0．06、約0．07、約0．08、約0．09、約0．1、約0．15、約0．2、約0．25、約0．3、約0．35、約0．4、約0．45、約0．5、約0．55、約0．6、約0．65、約0．7、約0．75、約0．8、約0．85、約0．9、約1．0、約1．1、約1．25、約1．3、約1．4、約1．5、約1．6、約1．7、約1．75、約1．8、約1．9、約2．0、約2．1、約2．25、約2．3、約2．4、約2．5、約2．6、約2．7、約2．75、約2．8、約2．9、または約3mg／日。
例示的な実施形態において、アミノステロール用量は、必要に応じて定期的に与えられる。例えば、アミノステロール用量は、1日1回投与することができる。アミノステロールの投与量は、隔日、週2回、3回、4回、または5回／週、1回／週、または2回／週でもよい。別の実施形態において、アミノステロール用量は、1週間おきに与えられ得るか、または数週間与えられ得、続いて、数週間スキップし（効果が処置後に持続するため）、続いて、アミノステロール処置を再開する。
一定の漸増されたアミノステロール用量を計算する場合、用量は、任意の適切な期間の後に漸増され得る。一実施形態では、アミノステロール用量が所望の改善に達するまで、約3～約7日ごとにほぼ規定量ずつ増量される。例えば、治療／測定される症状が便秘である場合、閾値改善は、1週間あたり1ＳＢＭの増加、または1週間あたり少なくとも合計３回の排便であり得る。他の実施形態において、アミノステロール用量は、約1、約2、約3、約4、約5、約6、約7、約8、約9、約10、約11、約12、約13、または約14日ごとに増量することができる。他の実施形態において、アミノステロール用量は、約1x／週、約2x／週、約隔週、または約1x／月に漸増することができる。
用量漸増の間、アミノステロール用量は、規定された量だけ増加させることができる。例えば、アミノステロールが経口的に投与される場合、用量は、約5、約10、約15、約20、約25、約30、約35、約40、約45、または約50mgずつ漸増され得る。アミノステロールが鼻腔内に投与される場合、投薬量は例えば、約0．1、約0．2、約0．25、約0．3、約0．35、約0．4、約0．45、約0．5、約0．55、約0．6、約0．65、約0．7、約0．75、約0．8、約0．85、約0．9、約0．95、約1、約1．1、約1．2、約1．3、約1．4、約1．5、約1．6、約1．7、約1．8、約1．9、または約2mgの増分で増加され得る。
患者の一人定の増量されたアミノステロール投与量に対するアミノステロール投与量を決定するための終点として用いることができる他の症状は、治療されることが意図された疾患、障害、または状態に関連することが知られている任意の症状である。例えば、本明細書に記載される神経疾患症状には、これらには限られるものではないが、（a）例えば認知障害、幻覚および精神病、抑うつ気分、不安気分、無気力、ドーパミン調節障害症候群の特徴、日中の眠気、疼痛、排尿問題、便秘問題、起立時のふらつき、および疲労のような統一パーキンソン病評価尺度(ＵＰＤＲＳ)のパートIで定義される少なくとも１つの日常生活の経験の非運動的側面；(b)例えば発言、唾液およびよだれ、摂食および嚥下作業、着衣、衛生、手書き、寝返り、振戦、ベッドから出ること、車または深い椅子、歩行とバランスおよび静止のようなＵＰDRＳのパートＩＩで定義される少なくとも１つの日常生活の経験の運動的側面；(c)例えば会話、表情、固縮、手指運動、手の回内-回外動き、つま先タップ、足の機敏性、椅子からの歩行、歩様、すくみ足、姿勢の安定性、姿勢、身体の動作緩慢、手の姿勢時振戦、安静時振戦、および安静時振戦の恒久性のようなＵＰＤＲＳのパートIIIで特定された少なくとも１つの運動症状；（d）例えば運動障害に費やす時間、運動障害の機能的な影響、オフ状態に費やす時間、運動変動の機能的影響、運動性変動の複雑性および痛みを伴うオフ状態失調症のようなＵＰＤＲＳの第ＩＶ部で特定される少なくとも１つの運動複雑性；（e）便秘、（f）うつ状態、（g）認知障害、（h）睡眠障害、（i）概日リズム機能障害、（j）幻覚、（k）疲労、(l)REM睡眠障害、(m)REM行動障害、（n）勃起不全、（o）無呼吸、（p）体位性低血圧;(q)血圧または起立性低血圧の矯正、（r）夜間高血圧、（s）体温の調節、（t）呼吸または無呼吸の改善、（u）心伝導欠損の矯正、（v）疼痛の改善、（w）膀胱感覚および排尿の回復、（x）尿失禁、および／または（y）夜間頻尿のコントロールが挙げられる。
Ｖ． 治療および／または予防の方法
本開示の局面は本明細書中に開示される治療有効量のアミノステロール（例えば、ＥＮＴ－０３（化合物III）または本明細書中に記載される別のアミノステロール）、または任意に１つ以上の薬学的に受容可能なキャリア中に存在するその薬学的に受容可能な塩、溶媒和物、プロドラッグまたは誘導体の投与によって、これらの症状のうちの１つ以上に関連する疾患または障害を処置および／または予防する、特定の症状および／または方法を処置する方法に関する。治療有効量は本明細書に記載されるとおりであり得、これには本明細書に記載されるとおりに決定される「固定アミノステロール投与量」が含まれるが、これに限定されない。
一実施形態では症状、疾患、および／または障害は、一般に、異常なαＳ病理学および／またはドーパミン作動性機能不全と相関し、これはそれらが本明細書に記載されるアミノステロールでの治療を受けやすいことを意味する。本技術の組成物は経口、肺、鼻、および噴霧投与を含むが、発明に限定されない、任意の薬学的に許容される方法を使用して投与され得る。さらに別の実施形態では、投与は非経口投与を含む。
いくつかの実施形態では、アミノステロールによる治療を受けやすい状態または症状を有する必要な被験体を治療するための方法であって、治療有効量の本明細書に記載のアミノステロール、またはその薬学的に受容可能な塩、溶媒和物、もしくはプロドラッグを被験体に投与することを含む方法が本明細書で提供される。いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるのは、アミノステロールでの治療に感受性の状態を有する必要とする被験体を治療するための方法であって、本明細書で開示されるアミノステロール、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、もしくはプロドラッグ、および１つ以上の薬学的に許容される担体および／または賦形剤を含むか、または本質的にそれらからなる組成物の治療有効量を被験体に投与することを含む方法である。
アミノステロールによる治療を受けやすい症状の非限定的な例としては便秘、幻覚、睡眠障害、認知障害、うつ病、および炎症が挙げられるが、これらに限定されない。
アミノステロールによる治療に従う疾患の例は本明細書に記載され、本明細書に記載されるもの、例えば、ＰＤ、ＡＤ、ＭＳＡ、精神分裂病、ハンチントン病（ＨＤ）、進行性核上性麻痺、前頭側頭認知症（ＦＴＤ）、血管性認知症、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、多発性硬化症（ＭＳ）、脊髄筋萎縮症（ＳＭＡ）、フリードライヒ運動失調症などの神経疾患を含むが、これらに限定されない。別の実施形態では本明細書に記載されるアミノステロールおよびそれを含む組成物が心理学的障害および／または行動障害の発症または進行を治療、予防および／または遅延させる方法において提供され得る。１つの実施形態では心理学的障害および／または行動障害が例えば、うつ病、不安、せん妄、過敏性、錯乱および幻覚、健忘、自閉症、無気力、双極性障害、抑制解除、異常運動および強迫行動、睡眠障害、睡眠断片化、ＲＥＭ行動障害、概日リズム機能障害、睡眠時無呼吸、および認知障害であり得る。別の実施形態では、必要とする被験体における脳または全身の虚血性障害および／または関連症状の発症または進行を治療、予防および／または遅延させる方法が提供される。脳または全身の虚血性障害は、例えば、微小血管障害、分娩時脳虚血、心停止または心蘇生の間の／後の脳虚血、頸動脈手術中の脳虚血、脳静脈の血液供給動脈の狭窄による慢性脳虚血、脳血管奇形、高血圧、高コレステロール、心筋梗塞、心不全、うっ血性心不全、心筋炎、心膜炎、冠動脈心疾患、狭心症、ショック、四肢の虚血、腎動脈の狭窄、糖尿病性網膜症、マラリアに伴う血栓症、人工心臓弁、貧血、脾機能亢進症候群、肺線維症、勃起不全、および肺水腫であり得る。
一実施形態では、ＰＴＰ１Ｂを、本明細書に開示される少なくとも１つのアミノステロール、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、もしくはプロドラッグと接触させることを含む、タンパク質チロシンホスファターゼ1B(ＰＴＰ１Ｂ）を阻害する方法が提供される。
出願人は、実施例３において、スクアラミンが老齢マウスの腸における転写を増加させることができ、したがって腸に対する若返り効果を有することを示した。この活性は、ＥＮＴ－０３（化合物III）およびその誘導体に及ぶと考えられる。したがって、別の局面において、被験体の腸における転写を増加させる方法が提供され、この方法は、治療有効量の本明細書のいずれかの実施形態のアミノステロール化合物、またはその薬学的に受容可能な塩、溶媒和物、プロドラッグまたは誘導体を被験体に投与することを含む。
Ａ． 異常αＳ病態および／またはドーパミン作動性機能不全と相関する例示的症状とアミノステロール治療の適応
(1) 便秘
一実施形態では、本明細書に開示される少なくとも１つのアミノステロール、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、もしくはプロドラッグの治療有効量を被験体に投与することを含む、必要とする被験体における便秘および／または関連症状の発症または進行を治療、予防および／または遅延させる方法が提供される。
便秘は世界的によくみられる問題であり、人口の2％～27％が罹患し、ほとんどの推定値は12％～20％である。便秘の有病率は65歳以上の人で30～40％に増加し、女性は不相応に影響を受ける。北米では、6千3百万の人々が便秘のRome ＩＶ基準を満たしており、米国だけでも、便秘は毎年２百万以上が医師受診の原因となっている。緩下剤は毎年2～3百万の患者に処方され、さらに、大部分の患者では、症状は生涯にわたる治療を必要とする慢性である。
便秘は一般集団よりもＰＤ患者にはるかに多くみられる。米国では1百万人がＰＤに罹患しており、そのうち約60％、すなわち600,000人が慢性便秘に罹患しており、ほとんどの場合、この病態は慢性的で重度であり、標準治療に反応しない。これは、ＰＤを有する個体および医療システムに対する経済的負担を表す。fss．gsa．govで入手可能な2016年4月の連邦供給スケジュールによれば、便秘のために経口投与された薬物のバスケットの平均30日払い戻し価格は、年間約260ドルまたは3120ドルである。これは、ＰＤ患者にのみ処方される下剤約1．8Ｂドルに相当する。
便秘とは、一定期間（週３回未満など）の排便回数が正常よりも少ない場合と定義される。厳密には消化器症状として棄却されることが多いが、便秘はＥＮＳ変性が後のＣＮＳ変性の指標となりうる程度の神経変性疾患の早期指標であると考えられている。実際、理論に束縛されることはないが、便秘はＰＤ病態の最も初期の指標の１つと考えられている。したがって、本明細書に開示される方法の実施形態は、便秘の治療、または便秘に関連する基礎疾患の治療および／または予防に関する。
便秘はＰＤでよくみられ、運動機能障害の発症およびその後のＰＤ診断の数年前に症状が現れることが多い。ＰＤに伴う神経変性過程、すなわちαシヌクレインの毒性凝集体の蓄積が、脳内に現れる数年前に腸管神経系内で起こることを示す実質的な証拠がある。腸神経系（ＥＮＳ）はその広い表面積を有し、感染性物質および毒性物質からの連続的な傷害を受けやすいと考えられている。アルファシヌクレインの機能は知られていないが、神経系内の炎症はその細胞内レベルの増加につながる。ＰＤ患者ではアルファ－シヌクレインの増加により神経毒性凝集体が形成されるが、これはおそらく（遺伝的要因による）神経細胞が効果的に処理できないためであろう。その後、αシヌクレインの集合体は迷走神経に沿って脳幹内の背側運動核へ、そしてそこからより吻側の構造へと輸送される。
ＰＤ患者は、主に結腸通過の遅延によって引き起こされると考えられる便秘の形態に罹患している。さらに、ＰＤ被験者の直腸肛門反射の機能障害によって排便が障害されることが多い。多くの個人にとって、腸の問題は生活の質に対する重大な有害事象である。この問題を効果的に管理できないことも、特にＰＤの終末期が近づくにつれて腸閉塞につながる可能性がある。限られた数の治療法が臨床試験に供されており、それらは、体液吸収を遮断するか、または腸内の浸透圧負荷を増加させるかのいずれかによって、便の体液含有量を増加させる薬剤を含む。
ＰＤにおける消化管機能不全の病態生理学には、脳幹内と同様にＥＮＳ内のαＳの沈着が関与している。通常ニューロンで産生されるタンパク質であるαＳが未知の理由から、ＰＤでは神経毒性細胞内凝集体を形成する。多くの研究から、αＳ凝集体形成は運動症状の発症の何年も前にＰＤ個体のＥＮＳで始まることが示唆されている。迷走神経内で起こる正常な逆行性ニューロン輸送の結果として、中毒性αＳ凝集体はＥＮＳのニューロンから迷走神経の背側運動核へと輸送され、次第に脳内の物理的運動とバランスに関与する部位へと輸送される。便秘は基本的に後天性神経変性の性質のものであるため、この病態の他の形態とは異なる。
便秘に対するアミノステロール治療の効果を測定および評価するために使用され得るツールの例は、例えば、（1）便秘のためのローマ－IV基準（7つの基準、以下の２つ以上の便秘診断を必要とする：(i)排便の少なくとも25％の間の緊張；（ii）排便の少なくとも25％の間の不完全排便の感覚；（iv）排便の少なくとも25％に対する肛門直腸閉塞／閉塞；(v)排便の少なくとも25％での容易にするための手動操作；(vi)週に３回未満の排便；(vi)緩下剤の使用なしでは、軟便がほとんど存在しない；（2）便秘－緩和尺度（1～7で、１は失禁、4は普通、７は手動除去）；（3）便特性を分類する患者に優しい手段であるブリストル便チャート（便硬さの評価は腸運動の有効な代勘)および便日誌；（4）統一パーキンソン病尺度（ＵＰＳＲＳ）、セクション1．11；(5）便秘症状の患者評価（ＰＡＣ－ＳＹＭ）；および（5）便秘生活の質の患者評価（ＰＡＣ－ＱＯＬ）がある。
アミノステロール治療によって正の影響を受けうる便秘の特徴の例としては便秘の頻度、便秘症状の持続時間、排便回数、便の硬さ、腹痛、腹部膨満感、不完全な排便、排便の試みの不成功、排便に伴う疼痛、および排便に伴ういきみが挙げられるが、これらに限定されない。潜在的に、これらの特徴の全ては、本開示の方法によって積極的に影響され得る。さらに、これらの特徴の評価、例えば、自然排便（ＳＢＭ）／週、便の硬さ(Bristol Stool Form Scale)(Lewis and Heaton 1997；Heatonら、1992）、通過の容易さ(Easeof Evacuation Scale)(Andresenら、2007）、レスキュー薬物使用および腸機能に関連する症状および生活の質(ＰＡＣ―ＳＹＭ(Frank ら、1999）およびＰＡＣ―ＱＯＬ(Marquisら、2005））は、当技術分野で公知である。
便秘を治療および／または予防するために本開示によるアミノステロール組成物の治療有効量を使用する方法は、好ましくは1週間あたりの自然排便の数の増加および／または他の便状態の改善をもたらす。この増加は例えば、1週間で約1～約3回の自然排便の増加、または任意に、規則的な腸機能の完全な回復であり得る。
本開示の一実施形態では本明細書に記載の方法において、アミノステロールによる便秘を有する被験体の治療は、便秘の１つ以上の特徴の改善をもたらす。改善は例えば、約5、約10、約15、約20、約25、約30、約35、約40、約45、約50、約55、約60、約65、約70、約75、約80、約85、約90、約95、約100、約110、約120、約130、約140、約150、約160、約170、約180、約190、約200、約210、約220、約230、約240、約250、約260、約270、約280、約290、約300、約325、約350、約375または約400％であり得る。開示の方法によって改善できる便秘の特徴の例としては、便秘の頻度、便秘症状の持続時間、排便回数、便の硬さ、腹痛、腹部膨満感、不完全な排便、排便の試みの不成功、排便に伴う痛み、および排便に伴ういきみが挙げられるが、これらに限定されない。便秘特性の測定は、任意の臨床的に認識されたスケールまたはツールを使用して行うことができる。
一実施形態では、本明細書で「固定漸増アミノステロール用量」と呼ばれる、評価される症状にプラスの影響を与えるのに必要なアミノステロールの用量は、本明細書に記載されるように患者に特異的である。別の実施形態では、便秘の重症度がより高い必要とされる「固定漸増アミノステロール用量」と相関し、評価される症状について被験者において陽性効果を得るために必要とされるアミノステロール用量はニューロン損傷の程度と相関すると理論付けられる。したがって、評価されている症状の被験者において正の効果を得るためには、より大きなニューロン損傷がより高い必要アミノステロール用量と相関すると理論付けられる。所望の反応を達成するのに必要なアミノステロール用量が便秘の重症度とともに増加するという観察は、αＳが神経機能を妨げる負荷が大きいほど、正常な腸機能を回復するのに必要なアミノステロールの用量が高くなるという仮説を支持する。また、ＰＤにおける消化管運動障害はENSにおけるαＳの進行性の蓄積に起因し、アミノステロール治療はαＳを置き換え、腸ニューロンを刺激することによりニューロン機能を回復させることができるという仮説も立てられている。これらの結果は、ＰＤにおけるＥＮＳが不可逆的に損傷されず、正常な機能に回復され得ることを実証する。
特定の患者に対する固定アミノステロール用量のキャリブレーションにおいて、開始用量は便秘の重症度に基づいて変化する。従って、重度の便秘を有する被験体（例えば、1週間あたり1以下のＣＳＢＭまたはＳＭＢを有する被験体）について、経口アミノステロール投薬は、約100～約150mg／日以上（または本明細書中に記載されるようなこれらの値の間の任意の量）で開始される。より重度でない便秘、例えば、1週間あたり1 CSBMまたはSBMを超える患者については、経口アミノステロール投与を約25～約75mg／日（または本明細書に記載されるようなこれらの値の間の任意の量）で開始する。その後、患者に対する一定の増量用量が確認されるまで、規定の期間にわたって規定量ずつ増量する。アミノステロールの投与量にかかわらず、下痢、嘔吐、吐き気などの望ましくない副作用が持続する場合には、アミノステロールの用量を漸減（減量）することもできる。
例えば、重度の便秘を有する患者について、開始経口アミノステロール投薬量は、75mgから約300mg／日まで、またはこれらの２つの値の間の任意の量であり得る。他の実施形態において、重症便秘患者に対する開始経口アミノステロール投与量は例えば、約75、約80、約85、約90、約95、約100、約105、約110、約115、約120、約125、約130、約135、約140、約145、約150、約155、約160、約165、約170、約175、約180、約185、約190、約195、約200、約205、約210、約215、約220、約225、約230、約235、約240、約245、約250、約255、約260、約265、約270、約275、約280、約285、約290、約295、または約300mg／日であり得る。重度の便秘患者に対する「固定された漸増された」経口アミノステロール用量は、約75mgから約500mg／日までの範囲である可能性が高い。
より重度でない便秘を有する患者については、経口アミノステロール投薬が約10～約75mg／日、または本明細書中に記載されるようなこれらの2つの値の間の任意の量で開始される。例えば、中程度から軽度の便秘を有する患者に対する開始経口アミノステロール投薬量は、約1、約5、約10、約15、約20、約25、約30、約35、約40、約45、約50、約55、約60、約65、約70、約75mg／日以下であり得る。軽度または中等度の便秘患者に対する一定の漸増経口アミノステロール用量は、約5mg～約350mg／日、または本明細書に記載されるようなこれら２つの値の間の任意の量の範囲であり得る。
(2)幻覚
一実施形態では、本明細書に開示される少なくとも１つのアミノステロール（例えば、ＥＮＴ－０３（化合物III））、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、プロドラッグまたは誘導体の治療有効量を被験体に投与することを含む、必要とする被験体における幻覚および／または関連症状の発症または進行を治療、予防および／または遅延させる方法が提供される。
幻覚は、外部刺激に基づかない５つの感覚（視覚、触覚、音、嗅覚、または味覚）のいずれかにおける、物体または事象の感覚的印象または知覚である。幻覚は、被験者が日常的な状況で正常に機能することを困難にすること、および睡眠障害を引き起こすことによって、自己または他者に害を及ぼすことによって、被験者の健康および生活に衰弱させる影響を及ぼし得る。幻覚の例としては、誰かがそこにいない「見る」（幻視）、「他人が聞いていない声を聞く」（幻聴）、「何かを感じる」（幻触）、「においがする」（嗅覚）、および「味覚」（味覚）が挙げられる。幻覚のタイプの他の例としては、入眠幻覚（鮮明な幻覚、入眠時に起こる夢のような幻覚）、催眠幻覚（鮮明な幻覚、覚醒時に起こる夢のような幻覚）、運動感覚幻覚（体の動きの感覚を含む幻覚）、身体的幻覚（体内で起こる身体経験の知覚を含む幻覚）などがある。
幻覚は精神状態の結果であったり、神経疾患などの疾患と相関していたりすることがある。幻覚、特に幻聴は統合失調症のような特定の精神状態に特徴的であり、被験者の70～80％までに起こる。境界性人格障害の人の30～50％にも生じる。幻聴は行動または行動を制御し、暴力的な防御行動を誘発することができ、あるいは、自己害行動をもたらすことができる。これらは分娩後精神病でも起こりうる。幻聴は、重度のうつ病患者や躁病でもあまりみられないことがある。物質乱用はまた、幻視に関連し得る。アルコール中毒または禁酒、心的外傷後ストレス障害（ＰＴＳＤ）および死別も幻視と関連しうる。
一部の症例では、幻覚は精神障害または神経障害の結果である。アミノステロール組成物は、例えば、精神障害または神経障害の機能不全を逆転させ、幻覚を治療することができる。精神障害は例えば、双極性障害、境界性人格障害、うつ病（混合型）、解離性同一性障害、全般性不安障害、大うつ病、強迫性障害、心的外傷後ストレス障害、精神病（ＮＯＳ）、統合失調感情障害、および統合失調症からなる群より選択され得る。神経変性障害は例えば、ＰＤ、核上性麻痺、多系統萎縮症、パーキンソニズム、アルツハイマー病、前頭側頭型認知症、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、ハンチントン病、統合失調症、フリードライヒ運動失調症、多発性硬化症（ＭＳ）、レビー小体型認知症または疾患、脊髄性筋萎縮症、前頭側頭型認知症、進行性核麻痺、グアデロピアンパーキンソニズム、脊髄小脳失調症、または血管性認知症であり得る。好ましい実施形態では、本開示のアミノステロール組成物が神経変性障害の機能不全を逆転させ、幻覚を治療する。神経障害は例えば、（a）脳腫瘍、（b）ナルコレプシーなどの睡眠障害、または（c）後頭葉病変または側頭葉病変などの局所性脳病変の結果であり得る。例示的な実施形態では、側頭葉病変が鉤状脳回、大脳脚、または黒質の病変であり得る。神経障害は例えば、（d）ウイルス感染症によって引き起こされるような、大脳皮質のびまん性の関与の結果であり得る。
大脳皮質のびまん性病変は、脳血管炎状態の結果であり得、ウイルス感染症は例えば急性代謝性脳症、脳炎、または髄膜炎であり得る。脳血管炎の病態は、自己免疫疾患、細菌感染症、ウイルス感染症、全身性血管炎などが原因で起こる。自己免疫疾患は例えば、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）であり得る。
さらに、感覚消失によって幻覚が生じることもある。感覚喪失は、例えば視覚、聴覚、味覚、触覚、または嗅覚であり得る。好ましい実施形態では、本開示のアミノステロール組成物が感覚喪失の機能不全を逆転させ、幻覚を治療する。別の好ましい実施形態では、本開示のアミノステロール組成物が腸神経系の機能不全を逆転させ、幻覚を治療する。
幻覚を治療および／または予防するために、治療有効量の本開示によるアミノステロール組成物を使用する方法は、好ましくは幻覚の減少をもたらす。この減少は例えば、幻覚の発生の約5％、約10％、約15％、約20％、約25％、約30％、約35％、約40％、約45％、約50％、約55％、約60％、約65％、約70％、約75％、約80％、約85％、約90％、約95％、または約100％の減少であり得る。本開示の方法はまた、被験体が幻覚を伴わないことをもたらし得る。幻覚は例えば、視覚的、聴覚的、触覚的、味覚的または嗅覚的幻覚を含み得る。改善は、任意の臨床的に認識された評価またはツールを使用して測定することができる。
アミノステロール治療が幻覚に及ぼす影響を測定・評価するツールの例としては、マイアミ大学パーキンソン病幻覚質問票（ＵＭ－ＰＤＨＱ）、統一パーキンソン病尺度（ＵＰＳＲＳ）－セクション1．2（幻覚および精神病）、直接質問票、シカゴ幻覚評価尺度（ＣＨＡＴ）、精神症状評価尺度(PSYRATS)、聴覚幻覚評価尺度（ＡＨＲＳ）、統合失調症音声質問票のためのハミルトンプログラム（ＨＰＳＶＱ）、聴覚幻覚質問票（ＣＡＨＱ）、精神衛生研究所異常知覚スケジュール（ＭＵＰＳ）、正および負症候群尺度(ＰＡＮＳＳ)、陽性症状評価尺度（ＳＡＰＳ）、Launay－Slade幻覚尺度（ＬＳＨＳ）、Cardiff異常知覚尺度（ＣＡＰＳ）、および知覚異常評価のための構造化面接（ＳＩＡＰＡ）などがある。
(3) 異常αＳ病態に関連した炎症および／またはドーパミン作動性機能不全とアミノステロール治療の適応
一実施形態では、αＳ病理学に関連する炎症および／または関連症状の被験体における発症または進行を治療、予防および／または遅延させる方法が提供される。この方法は本明細書中に開示される少なくとも１つのアミノステロール（例えば、ＥＮＴ－０３（化合物III））、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、またはプロドラッグの治療有効量を被験体に投与する工程を包含する。
αＳは強力な炎症誘発性ホルモンである。炎症は、２つの戦略のいずれかによって遮断することができる。第１に、炎症は、αＳの産生を減少または停止させることによってαＳの組織濃度を減少させることによってブロックされ得る。あるいは、αＳとCD11bを発現する炎症細胞との間のシグナル伝達を中断することによって、炎症を阻止することもできる。本開示の方法の主題は、ヒトを含む任意の哺乳動物であり得る。
ニューロンαＳの過剰発現によって引き起こされる炎症性疾患または状態は、α－シヌクレイノパチーなどの神経変性疾患（ＮＤＤ）であり得る。例示的なα－シヌクレイノパシーはＰＤ、レビー小体痴呆、多系統萎縮症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン舞踏病、多発性硬化症または統合失調症を含むが、これらに限定されない。他の実施形態では、ニューロンアルファシヌクレインの過剰発現によって引き起こされる炎症性疾患または状態が自己免疫疾患、慢性炎症性疾患、または自己炎症性疾患であり得る。他の実施形態において、神経αＳの過剰発現によって引き起こされる炎症性疾患または状態は、喘息、慢性消化性潰瘍、結核、慢性歯周炎、慢性副鼻腔炎、慢性活動性肝炎、乾癬性関節炎、尋常性ざ瘡、骨関節炎、慢性関節リウマチ、ループス、全身性エリテマトーデス、多発性硬化症、強直性脊椎炎、クローン病、乾癬、原発性硬化性胆管炎、潰瘍性大腸炎、アレルギー、炎症性腸疾患、セリアック病、慢性前立腺炎、憩室炎、皮膚筋炎、多発性筋炎、全身性硬化症、糸球体腎炎、汗腺膿瘍、過敏症、間質性膀胱炎、耳炎、骨盤内炎症性疾患、再潅流障害、リウマチ熱、サルコイドーシス、移植拒絶反応および血管炎からなる群より選択され得る。
本開示のいくつかの実施形態において、αＳの過剰な産生または分泌に特に感受性である患者集団は本開示の方法から利益を得ること、例えば、予防的治療を含む治療を標的とすることができる。例えば組織中のαＳの量の増加をもたらすαＳの変異型を有する患者集団は、本開示の方法を使用して処置され得る。高レベルのαＳに感受性のある患者集団の別の例は、慢性炎症状態または疾患を有する患者である。なおさらなる例は、腸神経細胞において上昇したレベルのαＳ凝集を有し、便秘として現れる患者集団である。
本開示の方法は、対照と比較して、または治療前の同じ患者または被験体からの定性的または定量的な量と比較して、炎症の強度、炎症マーカーの血液レベル、組織中の炎症マーカー、または組織中の炎症細胞の数、またはそれらの組み合わせの減少をもたらすことができる。例えば、減少は、約5％、約10％、約15％、約20％、約25％、約30％、約35％、約40％、約45％、約50％、約55％、約60％、約65％、約70％、約75％、約80％、約85％、約90％、約95％、または約100％であり得る。改善は、任意の臨床的に認識されたツールまたは評価を使用して測定することができる。
いくつかの実施形態では、減少が高速液体クロマトグラフィー、液体クロマトグラフィー質量分析、酵素結合免疫吸着評価、タンパク質免疫沈降、免疫電気泳動、ウェスタンブロット、およびタンパク質免疫染色からなる群から選択される方法によって定量的または定性的に測定される。
さらに、本開示から、本明細書中に記載されるαＳを標的とする方法による処置または予防に適切な炎症状態を有する個体は、本開示の方法による処置に適切な患者と相関する、対照または健康な被験体と比較して、高レベルのαＳを有する、炎症部位におけるαＳの組織濃度の決定によって同定され得ることがわかる。
アミノステロールの投与は、生体内で神経毒性αＳ凝集体の形成を減少させ、PDや便秘などの神経疾患患者の消化管運動を刺激すると理論化されている。また、αＳが神経機能を阻害する負荷が大きいほど、αシヌクレイン凝集の他の症状に対処するとともに、正常な腸機能を回復させるのに必要なアミノステロールの用量が高くなるという仮説も立てられている。
Ｂ． 異常αＳ病理と相関する例示的な疾患または障害および／またはドーパミン作動性機能不不全とアミノステロール治療の適用可能
薬学的に許容される塩、溶媒和物、プロドラッグ、またはその誘導体を含む、本明細書に記載されるアミノステロール（例えば、ＥＮＴ－０３（化合物III））は、本明細書に記載されるように、および以下に記載されるように、異常なαＳ病理および／またはドーパミン作動性機能不全と一般的に相関する、種々の疾患および障害を処置および／または予防する方法において使用され得る。
１つの実施形態において、異常αＳ病理および／またはドーパミン作動性機能不全および／またはαＳ病理に関連する関連症状と相関する疾患または障害の被験体における発症または進行を治療、予防、および／または遅らせる方法が提供される。この方法は本明細書中に開示される少なくとも１つのアミノステロール（例えば、ＥＮＴ－０３（化合物III））、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、プロドラッグ、または誘導体の治療有効量を被験体に投与する工程を包含する。
(1) 神経または神経変性疾患または疾患
一実施形態では、本明細書に開示される少なくとも１つのアミノステロール、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、プロドラッグまたは誘導体の治療有効量を被験体に投与することを含む、必要とする被験体における神経変性疾患または神経疾患および／または関連症状の発症または進行を治療、予防、および／または遅延させる方法が提供される。
開示の方法およびアミノステロール組成物は本明細書に記載されているような神経障害または疾患を治療および／または予防するために使用することができ、これらの例にはＡＤ、ＰＤ、ハンチントン病、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、多系統萎縮症（ＭＳＡ）、統合失調症、フリードライヒ運動失調症、血管性認知症、レビー小体型認知症または疾患、脊髄性筋萎縮症、核上性麻痺、前頭側頭型認知症、進行性核麻痺、グアデロピアンパーキンソン症候群、脊髄小脳失調症、および自閉症が含まれるが、これらに限定されない。
様々な神経画像技術は、神経変性障害の早期診断および／または進行の測定に有用であり得る。このような技術の例としては神経画像化、機能的ＭＲＩ、構造的ＭＲＩ、拡散テンソル画像化(ＤＴＩ)(例えば、解剖学的連結性の拡散テンソル測定を含む）、［18F］フルオロデオキシグルコース（ＦＤＧ)ＰＥＴ、アミロイドを標識する薬剤、［18F］F－ドーパＰＥＴ、放射性トレーサー画像化、局所組織損失の容積測定分析、異常なタンパク質沈着の特異的画像化マーカー（例えば、AD進行のための）、マルチモーダル画像化、およびバイオマーカー分析が挙げられるが、例に限定されない。Jon Stoessl、「神経変性疾患の早めの診断の神経画像処理」, Transl. Neurodegener.,1：5 （2012）。これらの技術の組み合わせはまた、疾患の進行を測定するために使用され得る。
神経変性の進行は、周知の技術を用いて測定することができる。例えば、脳波（ＥＥＧ）は、神経変性疾患の存在および進行のためのバイオマーカーとして使用され得る（Morairty，2013）。ＭＲＩの神経変性の進行を測定するために使用することができる別の例示的な技術（Roccaら、2017）。あるいは、神経変性が、例えば、高速液体クロマトグラフィー、液体クロマトグラフィー質量分析、酵素結合免疫吸着評価、タンパク質免疫沈降、免疫電気泳動、ウェスタンブロット、およびタンパク質免疫染色からなる群より選択される分析技術を使用して、神経変性を示すことが当該分野で公知の１つ以上のバイオマーカーのレベルを測定することによって測定され得る。神経変性を示すバイオマーカーは当業者に公知であり、例えば、Beachら、2017の任意のもの（その開示全体が参照により本明細書に組み込まれる）を含み得る。
例えば、ＡＤにおける海馬および嗅内皮質の萎縮のほか、外側頭頂皮質、後上側頭皮質および内側後帯状皮質の病変を測定するために、構造的ＭＲＩを用いることができる。前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）において、構造的ＭＲＩは前頭極または側頭極の萎縮を示すことができる。ＤＴＩは、ＡＤと比較してレビー小体型認知症（ＤＬＢ）患者の頭頂葉における異常白質を示すために使用できる。機能的ＭＲＩは、ＡＤと比較して、ＦＴＤにおける作業記憶タスクの実行中に、減少した前頭部であるが増加した小脳活性化を明らかにし得る。他の例では、［18F］フルオロデオキシグルコース(ＦＤＧ)ＰＥＴはＡＤにおける頭頂側頭皮質でのグルコース代謝の低下を示すことができる。Id．。
本開示の１つの実施形態において、神経変性障害の進行または発症は医学的に認証された技術によって測定されるように、本開示によるアミノステロールの治療有効量を必要とする被験体に投与した後、規定された期間にわたって遅延または予防される。例えば、神経変性障害の進行または発症は、約5％、約10％、約15％、約20％、約25％、約30％、約35％、約40％、約45％、約50％、約55％、約60％、約65％、約70％、約75％、約80％、約85％、約90％、約95％、または約100％遅くすることができる。
神経変性障害の進行または発症が測定される期間は、例えば、1ヶ月以上または1年以上、例えば、約6ヶ月、約1年、約18ヶ月、約2年、約36ヶ月、約3、約4、約5、約6、約7、約8、約9、約10、約11、約12、約13、約14、約15、約16、約17、約18、約19、または約20年、または約6ヶ月から約20年以上の値の間の任意の値の月または年数であり得る。
別の実施形態では、神経変性障害が本開示による治療有効量のアミノステロールの投与によって積極的に影響され得る。「肯定的な影響」は、例えば、状態の進行を遅らせること、１つ以上の症状を改善することなどを含む。
(i) パーキンソン病
一実施形態では、パーキンソン病（ＰＤ）および／または必要な被験体における関連症状の発症、予防、および／または進行を治療、予防、および／または遅延させる方法であって、本明細書に開示される少なくとも１つのアミノステロール（例えば、ＥＮＴ－０３（化合物III））、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、プロドラッグまたは誘導体の治療有効量を被験体に投与することを含む方法が提供される。
ＰＤは、腸管神経系（ＥＮＳ）、自律神経および脳を含む末梢および中枢神経系（ＣＮＳ）内の蛋白質αＳの蓄積によって引き起こされる進行性の神経変性疾患である（Braakら2003（a）および（b））。ＰＤの診断には依然として運動症状が必要である一方で（Hughesら1992）、非運動症状はより大きな治療上の課題となっている（Zahodneら2012）。これらの症状には便秘(Ondoら、2012；Linら、2014）、睡眠構造における障害(Ondo ら、2001；Gjerstadら、2006）、認知機能障害(Auyeungら、2012）、幻覚(Friederichら、2016； Diederich ら、2009）、REM行動障害（RBD）およびうつ病(Aarslandら、2007）が含まれ、これらの全てはドーパミンの置換によって回復されない神経経路の機能障害から生じる。実際、長期の施設入所、介護者の負担および平均余命の減少は運動症状よりもこれらの症状の重症度と有意に相関する（Goetzら、1995年）。2003年、BraakはPDが消化管内で始まるのはｅｎｓ内のαＳ型の神経毒性凝集体が原因であると提唱し、臨床的には運動症状の発現より何年も前にＰＤの大多数の人に便秘が出現することで証明された（Braakら、2003年（a）および（b））。ラットを用いた最近の研究では、迷走神経や他の求心性神経を介したＥＮＳからＣＮＳへのαＳの集合体の移動が示されている。神経毒性凝集物は脳幹内に徐々に蓄積し、次いで、間脳内の構造に吻側に分散し、最終的に大脳半球に到達した。
ＰＤはシヌクレイン症と定義され、シヌクレイン沈着が診断の主な最終的な判断材料となっている。さらに、認知症およびレビー小体の患者は、臨床疾患規準を満たしていればＰＤであるとみなされる。画像診断（MRI、シングルフォトンエミッションコンピュータ断層撮影［ＳＰＥＣＴ］、およびポジトロンエミッショントモグラフィ［ＰＥＴ］など）により、ＰＤ患者の構造的、機能的、および分子的変化のインビボ脳画像診断が可能になる。
過去数年間に、前駆期ＰＤの確率的推定に用いられる特定のマーカーまたはマーカーの組み合わせを同定する研究が行われている。研究者らは前駆期ＰＤを示す症状のタイムラインを特定し、ＰＤを予測する。それぞれの存在は前駆期ＰＤの可能性の推定に寄与する。前駆期ＰＤの同定に採用されているものもある。他の研究では症状と画像検査を組み合わせて用いる（例えば、ドーパミン受容体画像法と組み合わせた嗅覚減退症は、高い予測値を有することが明らかにされている）。別の例ではＲＥＭ睡眠行動障害（ＳＢＤ）、便秘、嗅覚減退は個々に共通しているが、ＰＤのない人に併発することはまれであり、ＰＤの高い適中率につながることが明らかにされた。
また、以下に示す４つのサブスケールについての４２項目からなるＵＰＤＲＳを用いてＰＤを評価することができる：（1）第I部、日常生活体験の非運動性側面（ｎＭ－ＥＤＬ）；認知症(1．1項）、幻覚・精神病（1．2項）、抑うつ気分（1．3項）、不安気分（1．4項）、感情鈍麻（1．5項）、ドーパミン調節異常症候群の特徴（1．6項）、睡眠問題（1．7項）、日中の眠気（1．8項）、疼痛・その他の感覚（1．9項）、排尿問題（1．10項）、便秘問題（1．11項）、立ちくらみ（1．12項）、疲労（1．13項）、（2）第II部、日常生活体験の運動性側面（Ｍ－ＥＤＬ）；発語（2．1項）、唾液 摂食・嚥下（2．3項）、摂食（2．4項）、更衣（2．5項）、衛生（2．6項）、着衣（2．7項）、趣味・その他の動作（2．8項）、寝返り（2．9項）、振戦（2．10項）、ベッドから出る、車、椅子深部（2．11項）、歩行・平衡感覚（2．12項）、すくみ足（2．13項）第III部、運動検査；発話（3．1項）、表情硬直（3．2項）、固縮（3．3項）、指タッピング3．4項）、手の動き（3．5項）、手の回内・回外運動（3．6項）、つま先タッピング（3．7項）、足の機敏性（3．8項）、ベッドでの寝返り（3．9項）、歩行（3．10項）、すくみ足（3．11項）、姿勢安定性（3．12項）、姿勢安定性（3．13項）、動作の全般的自発性（動作緩慢）（3．14項）、手の姿勢時振戦（3．15項）、手の運動性振戦（3．16項）、安静時振戦振戦（3．17節）、および安静時振戦の一定性（3．18項）；第IV部、運動紛糾：運動障害に費やす時間（4．1節）、運動障害の機能的影響（4．2項）、オフ状態に費やす時間（4．3項）、変動の機能的影響（4．4項）、運動変動の複雑性（4．5項）、および有痛性オフ状態運動障害（4．6項）。
さらに、症状に基づく終点は既知の尺度を用いて評価できる。例えば、（1）うつ病はBeck 落込み表(BDI－II)(Steerら、2000）を使用して評価することができ、認知症はミニ精神状態試験(ＭＭＳＥ)(Palsetiaら、2018）を使用して評価することができ、睡眠およびREM行動障害（ＲＢＤ）は日記およびＲＢＤ質問票（ＲＢＤＱ)(Stiasny－Kolsterら、2007）を使用して評価することができ、幻覚はＰＤ幻覚質問表(ＰＤＨＱ)(Papapetropoulosら、2008）および直接質問を使用して評価することができる。概日系状態はまた、公開された手順（Sarabiaら、2008）に従って、手首の皮膚温度を連続的にモニターすることによって評価され得る(Thermochron iButton DS1921H; Maxim、Dallas）。
別の実施形態では、本明細書に記載されるアミノステロール組成物の治療有効量のＰＤ患者への投与がＰＤの１つ以上の症状の改善、または１つ以上の臨床的に許容される評価メトリックに対する改善を、約5％、約10％、約15％、約20％、約25％、約30％、約35％、約40％、約45％、約50％、約55％、約60％、約65％、約70％、約75％、約80％、約85％、約90％、約95％、または約100％もたらす。改善は、任意の臨床的に認識されたツールまたは評価を使用して測定することができる。
ＰＤの進行および治療は患者がドーパミンに対する抵抗性を発現し、その後反応が誘発されなくなるまで用量を漸増することを考慮すると、特に困難である。理論に束縛されるものではないが、本開示によるアミノステロール組成物（例えば、ＥＮＴ－０３（化合物III））の事前投与または同時投与はパーキンソン症状の治療効果を引き出すために必要とされるドーパミン用量を減少させ、および／または患者がドーパミンに感受性である期間を増加させ得ると考えられる。本開示によるアミノステロール組成物の前投与または同時投与は、患者がドーパミン療法を開始するように勧められる期間を遅延させ得ることも理論化される。このことは重要である。なぜなら、現在の患者には、一定期間の被験者がドーパミンに抵抗性を示すようになった後も、可能な限りドーパミン治療の開始を遅らせることが奨励されているからである。
(ii) アルツハイマー病
一実施形態では、本明細書に開示される少なくとも１つのアミノステロール（例えば、ＥＮＴ－０３（化合物III））、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、プロドラッグまたは誘導体の治療有効量を被験体に投与することを含む、必要とする被験体におけるアルツハイマー病（ＡＤ）および／または関連症状の発症または進行を治療、予防および／または遅延させる方法が提供される。
アルツハイマー病（ＡＤ）は慢性神経変性疾患であり、通常はゆっくりと始まり、時間とともに悪化する。認知症症例の60～70％の原因である。疾患が進行することにつれて、症状には言語障害、見当識障害、気分の変動、意欲の喪失、セルフケアの管理ではなく、行動上の問題などが含まれる可能性がある。人の状態が低下することにつれて、彼らはしばしば家族や社会から離脱する。徐々に、身体機能は失われ、最終的には死に至る。進行の速さは様々であるが、診断後の典型的な平均余命は3～9年である。2015年のADの世界人口は約2980万人である。65歳以上の人に発症することが最も多いが、4～5％の症例は早期発症型アルツハイマー病である。65歳以上の人の約6％に発症する。2015年には、認知症による死亡者数は約190万人であった。
アルツハイマー病の症状は、主に記憶障害、言語機能障害、視空間スキルなどの認知障害；職業的・社会的問題（日常生活動作など）に及ぶ可能性のある機能障害；うつ病、不安、攻撃性、精神病などの行動症状も、疾患の重症度が進むにつれて出現することがある。
現時点では、ＡＤの明確な診断にはＡＤと一致する認知障害の臨床所見およびＡＤと一致する脳病態の死後の同定が必要である。ＡＤ認知症という用語は、ＡＤの病態生理による認知症を表すのに用いられる。「アルツハイマー病の可能性が高い」という用語は被験者がＡＤの臨床的特徴を示し、認知症の他の可能性のある生物学的原因（例えば、ＰＤまたは脳卒中）が除外される場合に、その生において使用される。現在、有望なＡＤを診断するための様々な当技術分野で受け入れられている方法が存在する。典型的には、これらの方法が組み合わせて使用され、そして日常的な活動を行う個体の能力を決定すること、ならびに行動および性格の変化を同定することを包含する。ＡＤ型の認知症はまた、典型的には、健忘症状（記憶障害）または言語、視空間または実行機能障害を特徴とする。認知能力／障害はグローバル認知を評価する検証された機器（例えば、改変されたミニ精神状態検査（３ＭＳ－Ｅ））、ならびに視覚および言語記憶（例えば、簡易視覚空間記憶試験（改訂)(ＢＶＭＴ－Ｒ）およびホプキンス言語学習試験（改訂)（ＨＶＬＴ－Ｒ））、言語（例えば、生成言語フルエンシー試験（ＧＶＦＴ））、ならびに実行機能および注意（例えば、数字スパン試験（ＤＳＴ））などの特定の領域を含むが、これらに限定されない、当技術分野で許容される方法によって決定されてもよい。ＡＤによる認知症は、潜行性の発症および認知能力の悪化の病歴によっても定義される。
「推定ＡＤ」の基準は、National Institute of Aging-Alzheimer'sAssociation workgroup (McKhannら、2011）に記載されている。このワークグループによると、ＡＤ認知症の中核的臨床特性を最初に示す人にとって、疾患に関連するバイオマーカーの証拠が診断の確実性を高める可能性がある。
別の実施形態では、治療有効量のアミノステロール組成物のＡＤ患者への投与がＡＤの１つ以上の症状の改善、または１つ以上の臨床的に許容される評価メトリックでの改善を、約5％、約10％、約15％、約20％、約25％、約30％、約35％、約40％、約45％、約50％、約55％、約60％、約65％、約70％、約75％、約80％、約85％、約90％、約95％、または約100％もたらす。
(iii) 多系統萎縮症
一実施形態では、本明細書に開示される少なくとも１つのアミノステロール（例えば、ＥＮＴ－０３（化合物ＩＩＩ））、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、プロドラッグまたは誘導体の治療有効量を被験体に投与することを含む、必要とする被験体における多系統萎縮（ＭＳＡ）および／または関連症状の発症または進行を治療、予防、および／または遅延させる方法が提供される。
多系統萎縮症（ＭＳＡ）は、自律神経系（血圧や消化などの不随意運動を制御する神経系の一部）と運動の両方に影響を及ぼす症状が組み合わさって発症する進行性の神経変性疾患である。ＭＳＡはShy－Drager症候群としても知られ、振戦、動作緩慢、筋強剛、自律神経系の機能異常による姿勢の不安定（まとめてパーキンソニズムとして知られる）、運動失調を特徴とする神経変性疾患である。これは、黒質、線条体、下オリーブ核、小脳など、脳のいくつかの部分のニューロンが進行性に変性することによって引き起こされる。ＭＳＡの治療法は知られておらず、管理は主に支持的である。
神経変性の進行は、周知の技術を用いて測定することができる。例えば、脳波（ＥＥＧ）は、神経変性疾患の存在および進行のためのバイオマーカーとして使用され得る（Morairty，2013）。ＭＲＩの神経変性の進行を測定するために使用することができる別の例示的な技法(Roccaら、2017)。
ＭＳＡの早期診断および／または進行の測定には、様々な神経画像技術が有用であると考えられる。このような技術の例としては、神経画像化、機能的ＭＲＩ、構造的ＭＲＩ、拡散テンソル画像化(ＤＴＩ)（例えば、解剖学的連結性の拡散テンソル測定を含む）、［１８Ｆ］フルオロデオキシグルコース(ＦＤＧ)ＰＥＴ、アミロイドを標識する薬剤、［１８Ｆ］F－ドーパＰＥＴ、放射性トレーサー画像化、局所組織損失の体積分析、異常なタンパク質沈着の特異的画像化マーカー（例えば、ＭＳＡ進行のための）、マルチモーダル画像化、およびバイオマーカー分析（Stoessl、2012）が挙げられるが、これら例に限定されない。これらの技術の組み合わせはまた、疾患の進行を測定するために使用され得る。
例えば、ＭＳＡにおける海馬および嗅内皮質の萎縮のほか、外側頭頂皮質、後上側頭皮質および内側後帯状皮質の病変を測定するために、構造的ＭＲＩを用いることができる。前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）において、構造的ＭＲＩは前頭極または側頭極の萎縮を示すことができる。
別の実施形態では、治療有効量のアミノステロール組成物をＭＳＡ患者に投与すると、ＭＳＡの１つ以上の症状が約5％、約10％、約15％、約20％、約25％、約30％、約35％、約40％、約45％、約50％、約55％、約60％、約65％、約70％、約75％、約80％、約85％、約90％、約95％、または約100％改善される。改善は、任意の臨床的に認識されたツールまたは評価を使用して測定することができる。
(iv) 統合失調症
一実施形態では、本明細書に開示される少なくとも１つのアミノステロール（例えば、ＥＮＴ－０３（化合物ＩＩＩ））またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、プロドラッグ、または誘導体の治療有効量を被験体に投与することを含む、必要とする被験体における統合失調症（ＳＺ）および／または関連症状の発症または進行を治療、予防および／または遅延させる方法が提供される。
統合失調症は、白質と灰白質の両方の脳の構造変化を起源とする慢性進行性疾患である。これらの変化は、皮質領域、特に言語処理に関する臨床症状の開始前に始まる可能性が高い。その後、進行性の脳室拡大によって検出できる。現在の磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ）技術は、統合失調症を発症するかもしれない皮質萎縮と言語処理異常の早期変化を検出するための価値あるツールを提供することができる。
統合失調症患者を被験体とした2013年の研究では、200人以上の患者が最初のエピソードに始まり、一定間隔でスキャンを続けて最長１５年間にわたりＭＲＩスキャンでみられた脳の変化が立証された。スキャンの結果、初発時の脳組織は健常者よりも少ないことがわかった。この知見は、統合失調症の人が病気の外見上の徴候を示す前に何かの影響を受けていることを示唆している。
治療の主力はカウンセリング、職業訓練、社会的リハビリテーションとともに、抗精神病薬である。しかし、2013年の研究では、一般的に抗精神病薬の投与量が多いほど、脳組織の損失が大きくなることが明らかになった。
約0．3～0．7％の人が生涯にわたって統合失調症にかかる。2013年には、世界的に推定23．6百万の症例があった。男性の方が罹患することが多く、平均すると症状が重くなる。約20％の人が健康で、完全に回復する人もいる。約50％が生涯障害を有する。長期失業、貧困、ホームレスなどの社会問題が一般的である。この病気の人々の平均余命は、一般の人々の平均余命よりも10～25年短い。これは、身体的健康問題が増加し、自殺率が高くなった結果（約5％）である。2015年には、世界中の推定17，000人が統合失調症に関連した、または統合失調症によって引き起こされた行動によって死亡した。
理論に束縛されることを望まないが、統合失調症患者への治療有効量のアミノステロール組成物の投与は統合失調症またはその任意の１つ以上の症状を処置および／または予防し得ることが理論化される。いくつかの実施形態では、投与は経口であってもよく、ＥＮＳにおける吸収をもたらす。いくつかの実施形態において、投与は鼻腔内であり得、神経発生の刺激をもたらし、これは、統合失調症被験体に特徴的な脳組織の喪失にプラスの影響を有する。
本開示の１つの実施形態において、統合失調症患者への治療有効量のアミノステロール組成物の投与は臨床的に認証される精神症状評価尺度によって決定されるように、１つ以上の症状の改善を生じる。このような評価尺度の例としては、例えば、正および負症候群尺度（ＰＡＮＳＳ)、精神病徴候評価尺度(ＰＳＹＲＡＴＳ)、生活の質尺度(ＱＬＳ)、統合失調症認識尺度(ＳＣｏＲＳ)、薬に対する構え目録（ＤＡＩ)、異常無意識行動尺度(ＡＩＭＳ)。
別の実施形態では、統合失調症患者への治療有効量のアミノステロール組成物の投与が臨床的に認証される精神症状評価尺度によって決定される１つ以上の症状を、約5％、約10％、約15％、約20％、約25％、約30％、約35％、約40％、約45％、約50％、約55％、約60％、約65％、約70％、約75％、約80％、約85％、約90％、約95％、または約100％改善する。改善は、任意の臨床的に認識されたツールまたは評価を使用して測定することができる。
(v) その他神経疾患
本開示の方法および組成物はまた、種々の他の神経疾患を処置および／または予防する際に有用であり得る。一実施形態では本明細書に記載される神経疾患、および／または関連症状の発症、予防、および／または進行を、必要とする被験体において処置、予防、および／または遅延させる方法が提供され、これは本明細書に開示される少なくとも１つのアミノステロール（例えば、ＥＮＴ－０３（化合物ＩＩＩ））、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、プロドラッグまたは誘導体の治療有効量を被験体に投与することを含む。例示的な神経疾患の例は、以下および本明細書に記載される。
ハンチントン病（HD）は、脳の神経細胞の進行性崩壊を引き起こす致死的な遺伝性疾患である。これは、初年度の労働期間中に人の身体的および精神的能力を低下させ、治癒しない。病気の後期には、フルタイムのケアが必要である。ハンチントン病の症状は35～44歳の間に顕著になるが、乳児期から老年期にかけてはどの年齢層からも発症する可能性がある。最も特徴的な初期の身体症状は、舞踏病と呼ばれる痙攣性、ランダム、制御不能な運動である。約9％の症例で自殺が死因となっている。病気が最初に発見されてから15～20年で死亡するのが典型的である。
進行性核上性麻痺はSteele－Richardson－Olszewski症候群とも呼ばれ、歩行、平衡感覚、眼球運動に重大な問題を引き起こす脳の病気である。この病気は、体の動きや思考を制御する脳の領域にある細胞が悪化することによって起こる。ＰＳＰの治療法は知られておらず、管理は主に支持的である。
前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）は、脳の側頭葉および前頭葉の進行性変性に起因する一群の関連状態である。脳のこれらの領域は、意思決定、行動制御、情動および言語において重要な役割を果たす。前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）は、前頭葉または側頭葉を含む６種類の認知症を包含する。ＦＴＤの行動変異型、意味変異型原発性進行性失語、非流暢性失文法変異型原発性進行性失語、皮質基底核症候群、進行性核上性麻ひ、運動神経疾患に伴うＦＴＤである。現在、ＦＴＤの治療法はない。
脳血管性認知症は多発梗塞性認知症（ＭＩＤ）および血管性認知障害（ＶＣＩ）としても知られており、脳への血液供給の問題、典型的には一連の軽度の脳卒中によって引き起こされる認知症であり、段階的に生じる認知機能低下の悪化につながる。脳血管性認知症の危険因子には、年齢、高血圧、喫煙、高コレステロール血症、糖尿病、心血管疾患、脳血管疾患などがある。その他の危険因子には、地理的起源、遺伝的素因、脳卒中の既往などがある。
運動ニューロン疾患（ＭＮＤ）またはルー・ゲーリッグ病としても知られる筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）は、随意筋を制御する神経の死を引き起こす特異的疾患である。ＡＬＳは筋肉が硬くなり、筋肉が攣縮し、筋肉が小さくなるために徐々に筋力低下が悪化するのが特徴である。その結果、話すこと、飲みこむこと、最終的には呼吸が困難になる。原因は90％～95％の症例では不明である。残りの5～10％の症例は遺伝性である。基礎となる機序には、上位運動ニューロンと下位運動ニューロンの両方の損傷が関与している。ＡＬＳの治療法は知られていない。この病気はどの年齢層の人にも発症するが、通常は60歳前後に発症し、遺伝性の場合は50歳前後に発症する。発症から死亡までの平均生存期間は2～4年であるが、約10％は10年以上生存する。
多発性硬化症(Multiple sclerosis：ＭＳ)は、脳や脊髄の神経細胞の遮蔽層が損傷する脱髄疾患である。この損傷は神経系の各部のコミュニケーション能力を破壊し、その結果、身体的、精神的、ときには精神医学的な問題など、さまざまな徴候や症状が現れる。ＭＳにはいくつかの形態があり、新たな症状は孤立性の発作（再発型）で起こるか、経時的に増強する（進行型）かのいずれかである。ＭＳの治療法は知られておらず、平均余命は非罹患集団よりも5～10年低い。
脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）は運動ニューロンの消失と進行性筋消耗を特徴とする遺伝性神経筋疾患であり、しばしば早期死に至る。この疾患は、運動ニューロンの生存に必要なタンパク質であるＳＭＮをコードするＳＭＮ１遺伝子の遺伝的欠損によって引き起こされる。このタンパク質のレベルが低いと、脊髄前角のニューロン細胞の機能が失われ、それに続いて骨格筋の系全体にわたる萎縮が起こる。ＳＭＡは乳児死亡の最も一般的な遺伝的原因である。2016年12月、ヌシネルセンは中小企業治療薬として初めて承認されたが、他のいくつかの化合物は治験中である。
フリードライヒ運動失調症は、常染色体劣性の遺伝性疾患で、神経系に進行性の損傷を引き起こす。歩行障害などの協調運動障害の初期症状で発現する；側弯症、心疾患および糖尿病につながることもあるが、認知機能には影響しない。フリードライヒ運動失調症は、脊髄の神経組織、特に腕や脚の筋肉の運動を指令するのに不可欠な（小脳とのつながりを通して）感覚ニューロンの変性によって起こる。脊髄は薄くなり、神経細胞はミエリン鞘（神経インパルスの伝導を助ける一部の神経細胞を覆っている）の一部を失う。
(2) 心理的または行動障害および／または関連症状
一実施形態では、本明細書に開示される少なくとも１つのアミノステロール（例えば、ＥＮＴ－０３（化合物III））、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、プロドラッグまたは誘導体の治療有効量を被験体に投与することを含む、必要とする被験体における心理的障害もしくは行動障害および／または関連症状の発症または進行を治療、予防および／または遅延させる方法が提供される。１つの実施形態において、心理学的または行動障害は、うつ病、不安、せん妄、易刺激性、錯覚および妄想、健忘、自閉症、無感情、双極性障害、脱抑制、異常運動および強迫行動、睡眠障害、睡眠断片化、ＲＥＭ行動障害、概日リズム機能障害、睡眠時無呼吸、または認知障害である。
(i)うつ病
一実施形態では、本明細書に開示される少なくとも１つのアミノステロール（例えば、ＥＮＴ－０３（化合物ＩＩＩ））、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、プロドラッグまたは誘導体の治療有効量を被験体に投与することを含む、必要とする被験体におけるうつ病および／または関連症状の発症または進行を治療、予防および／または遅延させる方法が提供される。
臨床的うつ病は、正常な悲しみまたは悲しみを超える悲しい青い気分を特徴とする。10人に1人が生涯にうつ病を患う。医師はうつ病を臨床的に診断する。うつ病の臨床検査やＸ線検査はない。
海馬は一部のうつ病患者では小さいことが研究によって示されている。例えば、The Journal ofNeuroscience誌に発表された1件のｆＭＲＩ研究では、研究者らはうつ病の既往がある女性24人を対象に研究を行った。うつ病女性では、うつ病でない女性と比較して、海馬が平均して9％～13％小さかった。女性のうつ病の発作が多いほど、海馬は小さくなった。ストレスは海馬における新たなニューロン（神経細胞）の産生を抑制できると専門家は考えていることから、うつ病において役割を果たすストレスが鍵となる因子である可能性がある。
研究者らは、海馬における新しいニューロンの産生の鈍さと気分の低さとの間の可能性のある関連性を探求している。抗うつ薬についての興味深い事実は、この理論を支持する。これらの薬を服用すると、ただちに脳内の化学伝達物質（神経伝達物質）の濃度が上昇する。しかし、人々は、典型的には数週間以上は気分が良くなり始めない。専門家は長い間、うつ病が主に神経伝達物質の低値の結果であったとしても、神経伝達物質のレベルが上昇するとすぐには、なぜ人々はより良い感覚を得られないのか不思議に思ってきた。答えは、神経が成長して新しい接続を形成するときだけ気分が改善するということかもしれない。この過程には数週間かかる。実際、動物実験では、抗うつ薬が海馬の神経細胞の成長を促し、分岐を亢進させることが示されている。だから、この理論はこれらの投薬の本当の価値が新しいニューロン（ニューロン新生と呼ばれる過程）を作り出し、神経細胞結合を強化し、神経回路間の情報交換を改善することにあるかもしれないと言う。
したがって、本開示の一実施形態では、治療有効量の本開示によるアミノステロール組成物を投与することを含む、うつ病を治療および／または予防する方法が包含される。理論に束縛されることを望まないが、本開示のアミノステロール組成物はうつ病と闘うように機能する神経発生を誘発すると理論付けられる。
いくつかの実施形態では、本開示の方法が被験体の臨床的うつ病の改善をもたらす。被験者のうつ病の改善は、臨床的に認識されたいかなる測定値を用いても測定することができる。例えば、改善は、うつ病評価尺度を用いて測定することができる。本開示の一実施形態では治療後、被験体は約5、約10、約15、約20、約25、約30、約35、約40、約45、約50、約55、約60、約65、約70、約75、約80、約85、約90、約95または約100％の改善を経験する。改善は、任意の臨床的に認識されたツールまたは評価を使用して測定することができる。
抑うつおよび／または気分およびアミノステロール治療後の改善を評価するために用いることができるツールの例には、例えば、（1）ベック抑うつ尺度(ＢＤＩ－ＩＩ)；(2)ＵＰＤＲＳ、セクション1．3（抑うつ気分）、1．4（不安気分）、1．5（感情鈍麻）、および1．13（疲労）；および（3）パーキンソン病疲労尺度（ＰＦＳ－１６）がある。いくつかの実施形態において、改善は、患者健康質問票－9（ＰＨＱ－９)；Zung自己評価うつ病尺度；疫学研究センター－うつ病尺度（ＣＥＳ－Ｄ）；およびうつ病のハミルトン評価尺度（ＨＲＳＤ）からなる群から選択される１つ以上の医学的に認証された技術から測定することができる。
(ii) 認知障害
一実施形態では、本明細書に開示される少なくとも１つのアミノステロール（例えば、ＥＮＴ－０３（化合物III））、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、プロドラッグまたは誘導体の治療有効量を被験体に投与することを含む、必要とする被験体における認知障害および／または関連症状の発症または進行を治療、予防および／または遅延させる方法が提供される。
軽度の認知障害（ＭＣＩ）を含む認知障害は、同じ年齢の正常な被験体と比較して、被験体によって示される記憶または思考の問題の増加を特徴とする。65歳以上の約15～20％がＭＣＩであり、ＭＣＩは特にＡＤなどの神経変性疾患やＰＤなどのシヌクレイン病との関連が指摘されており、2002年、米国では70歳以上の約540万人（22％）が認知症を伴わない認知障害を有していたと推定されている。Plassmanら、2009。
認知障害は、記憶および思考スキルを含む、認知能力のわずかではあるが顕著かつ測定可能な低下を含む記憶問題を伴い得る。健忘ＭＣＩを有する人は例えば、予約、会話、または最近のイベントなど、以前に容易に呼び出されたものであろう情報を忘れることがある。ＭＣＩが主に記憶以外の思考スキルに影響を及ぼす場合、それは「非健忘性ＭＣＩ」として知られている。非健忘性ＭＣＩを有する人は例えば、健全な決定を下し、複雑な仕事を完了するのに必要な時間または一連のステップを判断し、または視覚的知覚を行う能力が低下することがある。
軽度の認知障害は臨床診断である。認知機能障害を十分に評価するには、認知機能検査と、被験者と頻繁に接触する人からの情報を組み合わせて用いる。医学的精密検査には、被験体の病歴（現在の症状、以前の疾患、および家族歴を含む）の医師による評価、自立した機能および日常活動の評価、記憶、計画、判断、視覚情報、および他の重要な思考能力を評価するための簡易検査を用いた精神状態の評価、神経および反射機能、運動、協調、バランス、および感覚を評価するための神経学的検査、気分の評価、脳画像、または神経心理学的検査が含まれる。ＭＣＩの診断ガイドラインは、米国国立衛生研究所（ＮＩＨ）の機関であるNational Institute on Aging(ＮＩＡ)と提携するAlzheimer'S Associationをはじめ、様々なグループによって作成されている。Jack ら、2011；McKhann ら、2011；Albertら、2011。認知障害のスクリーニングに関する勧告は、米国予防サービスタスクフォースによって発行されている。高齢者における認知障害のスクリーニング、米国予防サービスタスクフォース（2014年3月）、https://www.uspreventiveservicestaskforce.org/Home/GetFileByID/1882。例えば、ＭＭＳＥ(ミニ精神状態試験)を用いてもよい。Palsetiaら、（2018)；Kirkevold、O&Selbaek、G（2015）。ＭＭＳＥでは、24点以上（30点中）のスコアは正常な認知を示すことがあり、スコアが低い場合は重度（9点以下）、中等度（10～18点）、または軽度（19～23点）の認知障害を示す。その他のスクリーニングツールとしては、Informant Questionnaire on Cognitive Decline in Elderly（ＩＱＣＯＤＥ)があり、平均スコアが3点であれば認知機能の低下はなく、スコアが3点を超える場合はある程度の低下が示される。Jorm,A.F.2004。あるいは7分スクリーナー、略称:精神検査スコア（ＡＭＴＳ）、ケンブリッジ認知検査（ＣＡＭＣＯＧ）、時計描画検査（ＧＰＣＯＧ）、ミニコグ、記憶障害スクリーニング（ＭＩＳ）、モントリオール認知評価（ＲＵＤＡ）、Rowland Universal Dementia Assessment(ＲＵＤＡ)、自己管理性遺伝学的検査（ＳＡＧＥ）、Short and Sweet Screening Instrument（ＳＡＳ－ＳＩ）、Short Blessed Test（ＳＢＴ）、セントルイス精神状態（ＳＬＵＭＳ）、ショートポータブル精神状態質問票（ＳＰＭＳＱ）、精神状態の短問（ＳＴＭＳ）、またはタイムアンドチェンジテスト（Ｔ＆Ｃ）は、とりわけ、臨床および研究環境において頻繁に使用される。Cordell ら、2013。単一のツールが「ゴールドスタンダード」と認識されていないため、多数の検査が用いられることがあり、どの標準化された検査でもスコアの改善は認知障害の治療の成功を示すが、非障害集団と同等のスコアを得ることは総回復を示す。
いくつかの実施形態では、治療有効量のアミノステロール組成物の必要な患者への投与が臨床的に認証される評価尺度によって決定されるように、約5％、約10％、約15％、約20％、約25％、約30％、約35％、約40％、約45％、約50％、約55％、約60％、約65％、約70％、約75％、約80％、約85％、約90％、約95％、または約100％の認知障害の改善をもたらす。改善は、任意の臨床的に認識されたツールまたは評価を使用して測定することができる。
アミノステロール治療後の認知障害および改善を評価するために使用することができるツールの例には、例えば、（1）ミニメンタルステート検査（ＭＭＳＥ）、（2）トレールメーキング試験（ＴＭＴ）パートAおよびB、ならびに（3)ＵＰＤＲＳ、セクション1．1（認知障害）が含まれる。
(iii)睡眠障害／睡眠問題（例、REM睡眠障害または概日リズム機能障害）
一実施形態では、本文書に開示された少なくとも１つの治療効果のある量のアミノステロール（例えば、ＥＮＴ－０３（化合物ＩＩＩ））、または製薬的に許容される塩、溶媒和物、プロドラッグまたはその誘導体）を被験体に施すことを含んだ、不眠症、睡眠障害、概日リズム障害および／または必要とする被験体の関連する兆候の治療、予防および／または進行の方法が提供される。
24時間ごとに起こる睡眠と覚醒の交互パターンは概日リズムとして知られている。リズムは、視床下部に位置する視交叉上核（ＳＣＮ）として知られる実体である「ゼイトゲバー（zeitgeber）」（時間設定器）によって設定される。ＳＣＮは、通常、外部の明暗サイクルによって「同伴」または同期される。概日睡眠－覚醒サイクルはまた、１つの時間帯から別の時間帯への移動（ジェットラグ）の間に生じる非同期化のような、外部の明暗サイクルの変化に応答してシフトすることができる。このような状況下では、ＳＣＮが外部明暗サイクルと再同期されるまで、漸進的な調整が行われる。同様の「移相」および調整は、夜勤労働者においても起こる。
ある種の病気や状態では、「ゼイツジェバー」や概日時計の正常な機能が損なわれることがある。これらの状態は、時差、夜勤、空腹、適応または食物摂取によって容易に改善される状態から生じる非同期化など、可逆的であり得る。対照的に、網膜からＳＣＮへの明暗関連情報を運ぶ神経の損傷（失明につながる可能性のある状態）、または腸からＳＣＮへメッセージを中継する腸神経および神経構造の損傷（神経変性障害につながる可能性のある状態）は、概日リズムの永続的な機能不全および異常な睡眠行動を引き起こす可能性がある。
概日リズムの機能障害は、最初に現れ、最も前に異常な睡眠パターンによって現れる。このような異常は典型的には発症時に軽度であり、経時的に進行性に悪化する。睡眠障害でよくみられる症状は、入眠の遅れである。この遅延は数時間もの長さであり得、個体は朝の早い時間まで眠ることができないかもしれない。もう１つの一般的な症状は睡眠の断片化であり、これは夜の経過中に個人が数回目覚めることを意味する。一旦覚醒すると、個体は睡眠に戻ることができず、各覚醒断片は1時間以上持続し、さらに「総睡眠時間」を減少させ、これは、ベッドで費やされた総時間から覚醒断片の総時間を差し引くことによって計算される。総睡眠時間も年齢とともに短縮し、新生児では1日約14～16時間、1歳までに約12時間、若年成人では約7～8時間となり、高齢者では約5～6時間に漸減する。総睡眠時間を使用して、個体の「睡眠年齢」を計算し、それをそれらの年齢と比較することができる。睡眠年齢と暦年齢との間の有意な不一致は、睡眠障害の重症度の反映である。「睡眠効率」は、睡眠障害の重症度を判定するために用いることができるもう一つの指標である。これはベッドでの睡眠に費やす時間のパーセンテージとして定義される。睡眠効率は、パーセンテージが約70％未満である場合に異常であると言われる。
睡眠障害および／または睡眠障害にはＲＥＭ行動障害、概日リズムの障害（「概日リズム機能障害」）、入眠遅延、睡眠断片化、ＲＥＭ行動障害（ＲＢＤ）、および幻覚が含まれるが、これらに限定されない。開示された方法に従って治療および／または予防することができる他の睡眠障害または障害には過眠症（すなわち、日中の眠気）、睡眠随伴症（悪夢、悪夢、夢恐怖、睡眠歩行、および錯乱覚醒など）、周期性四肢運動障害（レストレスレッグ症候群など）、時差ぼけ、ナルコレプシー、進行睡眠相障害、非24時間睡眠－覚醒症候群が含まれるが、これらに限定されない。
「正常である」または「安静である」睡眠期間は、覚醒によって中断されない睡眠期間として定義される。あるいは、前記期間が例えば、（i）0～3ヶ月＝約11～約19時間、（ii）乳児＝約4ヶ月～約11ヶ月＝約12～約18時間、（iii）幼児＝約1～約2歳＝約9～約16時間、（iv）就学前の子供＝約3～約5歳＝約10～約14時間、（v）学齢の子供＝約6～約13歳＝約7～約12時間、（v）ティーンエイジャー＝約14～約17歳＝約7～約11時間、（vi）若年成人＝約18～約25歳＝約6～約64歳成人＝約6～約10時間、および（viii）高齢成人＞65歳＝約5～約9時間など、被験体の年齢カテゴリーについての推奨または適切な睡眠量によって定義することができる。したがって、被験体における睡眠障害を治療するために、治療は、少なくとも約4、約5、約6、約7、約8、約9、約10、約11、または約12時間の安静睡眠期間をもたらすことができる。
Figure 2022543242000084
覚醒によって中断されない睡眠期間を測定するためのいくつかの異なる科学的に許容可能な方法がある。第１に、被験者の頭部に取り付けられた電極は、脳波記録法（ＥＥＧ）によって脳内の電気的活動を測定することができる。この尺度が使用されるのは、覚醒に関連するＥＥＧ信号が睡眠中に見られるものとは異なるからである。第２に、筋緊張も覚醒時と睡眠時で異なるため、筋電図（ＥＭＧ）を用いて筋活動を測定できる。第３に、睡眠中の眼球運動は、眼電図（ＥＯＧ）を用いて測定することができる。これは、迅速な眼球運動またはレム睡眠を識別するのに役立つ非常に特殊な測定である。これらの方法のいずれか、またはそれらの組み合わせを使用して、被験体に少なくとも１つのアミノステロールまたはその塩もしくは誘導体を投与した後に、被験体が安静睡眠期間を得るかどうかを決定することができる。
さらに、概日リズム調節はSarabiaら、2008に記載されているように、手首の皮膚温度を監視することを含むが、これに限定されない様々な方法で監視することができる。同様に、ＲＢＤの症状は毎日の日記およびＲＢＤ質問票を用いてモニターすることができる（Stiasny－Kolsterら、2007）。
いくつかの実施形態では、妨げられた結果をもつ患者への治療有効量のアミノステロール組成物の投与が約5％、約10％、約15％、約20％、約25％、約30％、約35％、約40％、約45％、約50％、約55％、約60％、約65％、約70％、約75％、約80％、約85％、約90％、約95％、または約100％だけ、１つまたは複数のタイプの睡眠調節障害について臨床的に認証される評価尺度によって決定されるような正常または安静睡眠の頻度の改善をもたらす。改善は、任意の臨床的に認識されたツールまたは評価を使用して測定することができる。
睡眠に対するアミノステロール治療の効果を測定および評価するために使用することができるツールの例には例えば、（1）睡眠日記（参加者は研究全体を通して毎日睡眠日記を完了した。日記には就寝時間および睡眠時間ならびに夜間の覚醒時間および持続時間が含まれる）、（2）Ｉボタン温度評価が含まれる。Ｉボタンは温度を測定し、結果を保護されたメモリセクションに記録する、小型で頑丈な自己充足システムである。Thermochron I-Button DS1921H (Maxim Integrated、Dallas、TX）を皮膚温度測定に使用した。Ｉボタンは10分毎にサンプリングするようにプログラムされ、Velcroを使用して両面綿スポーツリストバンドに取り付けられ、Iボタンのセンサ面は利き手の橈骨動脈上の手首の内側の上に配置された。被験者は必要に応じて（すなわち、バスまたはシャワーを有するために）データロガーを取り外し、交換した。睡眠研究における皮膚温度評価の価値は、増加した皮膚血流から生じる内因性皮膚温暖化が睡眠傾向に機能的に関連することである。収集したデータから、メソ、振幅、アクロフェーズ（ピーク温度の時間）、Rayleight試験（日間安定性の指標）、平均波形を計算した；（3)ＵＰＤＲＳ、セクション1．7（睡眠障害）、セクション1．8（日中眠気）および1．13（疲労)；(4）パーキンソン病疲労スケール（PFS‐16);(5)ＲＥＭ睡眠行動障害スクリーニング質問票；および（6）パーキンソン病睡眠スケール。
(iv) 自閉症
一実施形態では、本明細書に開示される少なくとも１つのアミノステロール（例えば、ＥＮＴ－０３（化合物ＩＩＩ））、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、プロドラッグまたは誘導体の治療有効量を被験体に投与することを含む、自閉症スペクトル障害（ASD）および／または関連症状の発症または進行を治療、予防および／または遅延させる方法が提供される。
自閉症、または自閉症スペクトル障害は、社会的技能、反復行動、言語および非言語コミュニケーションを伴う課題、ならびに独特の強さおよび差異によって特徴付けられる、一連の状態を指す。自閉症にはさまざまなタイプがあり、遺伝的影響と環境的影響の組み合わせが異なるために起こる。自閉症の最も明白な徴候は、2～3歳の間に現れる傾向がある。18カ月という早期に診断できる場合もある。自閉症に伴う発達の遅れには、さらに早期に特定して対処できるものもある。
米国疾病対策センター（ＣＤＣ）は、自閉症の有病率を米国の小児59人に1人と推定している。男子37人に1人、女子151人に1人が含まれる。自閉症の人の約3分の1は非言語的なままであり、自閉症の人の約3分の1は知的障害を有する。自閉症には、しばしば特定の医学的、精神的健康上の問題が伴う。胃腸（ＧＩ）障害、発作、睡眠障害、注意欠陥・多動性障害（ＡＤＨＤ）、不安および恐怖症などがある。
専門家は自閉症の原因についてまだ不明である。すべての可能性において、複数の原因が存在する。環境因子、生物学的因子、遺伝的因子など、さまざまな状況が自閉症の病期を決定し、子供がこの病気にかかりやすくしているよう。自閉症の発症には遺伝学が大きな要因を果たしている可能性が高い。一卵性双生児は、（遺伝的に同一ではない）同系の双生児よりも、両方に罹患しやすい。1人の自閉症の子供がいる家族では、自閉症の子供もう1人いる確率は約5％であり、これは正常な集団よりもはるかに高い。また、自閉症の子供の家族では、躁うつ病などの情緒障害がより頻繁に起こることも、研究によって明らかになっている。
少なくとも1人の研究者グループが、異常な遺伝子と自閉症との関連を見出している。遺伝子は、何らかの方法で相互作用して状態を引き起こす3～5個以上の遺伝子のうちの１つにすぎないこともある。科学者は出生時の化学的不均衡、ウイルスや化学物質、出生時の酸素不足など、他の要因もある場合には遺伝子や遺伝子に欠陥があると、自閉症を発症しやすくなるのではないかと疑っている。自閉症の他の潜在的な原因は農薬および重金属（例えば、水銀）を含む環境毒素である。重金属は過去よりも、今日の環境において、確実に、より一般的に遭遇する。自閉症の人や、自閉症を発症するリスクが高い人は、これらの毒素に対して他の人よりも感受性が高いことがある。
最近の脳組織の研究では、自閉症にかかった子供はシナプス、つまり脳細胞間の接続が過剰になっていることが示唆されている。この過剰は、脳の発達中に起こる正常な枝刈りプロセスの減速によるものである。正常な脳の発達過程では、幼児期にシナプス形成のバーストが起こる。これは、感覚からの情報を思考・処理する中枢である皮質で特に顕著である。しかし、青年期後期までには、剪定によってこれらの皮質シナプスの約半分が排除される。さらに、自閉症に関連する多くの遺伝子が脳シナプスの発達や機能に影響を及ぼすことが知られている。また、この研究では、自閉症の人の脳細胞は損傷部分で満たされており、「オートファジー」(Tangら、2014)と呼ばれる正常な分解経路の徴候が欠損していることも明らかになった。
したがって、本開示の一実施形態は、治療有効量の本開示によるアミノステロール組成物を投与することを含む、自閉症を治療する方法を対象とする。一実施形態では、治療が自閉症の１つ以上の特徴の改善をもたらす。そのような特性は例えば、コミュニケーションスキル、社会的相互作用、感覚感受性、および行動であり得る。改善は、任意の臨床的に認識されたツールまたは評価を使用して測定することができる。
えば、本開示の方法は、医学的に認証された尺度によって測定される、行動、コミュニケーション、気分などの自閉症の１つまたは複数の特徴の改善を示すことができる。改善は例えば、約5％、約10％、約15％、約20％、約25％、約30％、約35％、約40％、約45％、約50％、約55％、約60％、約65％、約70％、約75％、約80％、約85％、約90％、約95％、または約100％であり得る。
(3) 脳または全身の虚血性障害および／または関連症状
一実施形態では、本明細書に開示される少なくとも１つのアミノステロール（例えば、ＥＮＴ－０３（化合物III））、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、プロドラッグまたは誘導体の治療有効量を被験体に投与することを含む、必要とする被験体における脳または全身の虚血性障害および／または関連症状の発症または進行を治療、予防および／または遅延させる方法が提供される。
一実施形態では、脳または全身の虚血性障害は、微小血管障害、分娩時脳虚血、心停止または心蘇生の間の／後の脳虚血、頸動脈手術中の脳虚血、脳静脈の血液供給動脈の狭窄による慢性脳虚血、脳血管奇形、高血圧、高コレステロール、心筋梗塞、心不全、うっ血性心不全、心筋炎、心膜炎、冠動脈心疾患、狭心症、ショック、四肢の虚血、腎動脈の狭窄、糖尿病性網膜症、マラリアに伴う血栓症、人工心臓弁、貧血、脾機能亢進症候群、肺線維症、勃起不全または肺水腫から選択される。
例えば、本開示の方法は、医学的に認証されるスケールによって測定されるような、脳または全身の虚血性障害の１つ以上の特徴における改善を示し得る。改善は例えば、約5％、約10％、約15％、約20％、約25％、約30％、約35％、約40％、約45％、約50％、約55％、約60％、約65％、約70％、約75％、約80％、約85％、約90％、約95％、または約100％であり得る。
改善を測定するための医学的に認証された尺度または技術には、例えば、コレステロール試験、高感度C反応性タンパク質試験、リポタンパク質（a）、血漿セラミド、ナトリウム利尿ペプチド、低密度リポタンパク質コレステロール、高密度リポタンパク質コレステロール、トリグリセリド、心電図（EKG）、ホルターモニタ、ストレステスト、心エコー図、ポジトロン放出断層撮影（PET）、タリウムスキャン、心筋潅流スキャン、植込み型ループレコーダー、傾斜テーブル試験、電気生理学試験、冠動脈造影、磁気共鳴血管造影、心臓CTスキャン、およびイベントレコーダーが含まれる。
(i) 勃起不全
一実施形態では、治療的有効量の本明細書に開示される少なくとも１つのアミノステロール（例えば、ＥＮＴ－０３（化合物III））、または薬学的に許容されるその塩、溶媒和物、プロドラッグまたは誘導体、または薬学的に許容されるその塩、溶媒和物、もしくはプロドラッグを被験体に投与することを含む、必要とする被験体における勃起不全（ＥＤ）および／または関連症状の発症または進行を治療、予防および／または遅延させる方法が提供される。
勃起機能不全は、身体的または心理的状態の徴候である可能性がある。それは、応力、関係ひずみ、および低い自己信頼性を引き起こし得る。主な症状は性交に十分な勃起を得ることができなかったり、勃起をしっかりと保つことができなかったりすることである。ＥＤは、異なるメカニズムを介して現れ得る。ＥＤはその機構に基づいて、心因性、神経因性（勃起を開始できない）、動脈原性（陰茎が血液で満たされない）、海綿体（いったん満たされると陰茎に血液を保持する血管系の障害）に分類できる（Deanら2005）。
ＰＤのようなＥＤを引き起こす多くの神経疾患は腸神経系（ＥＮＳ）内の毒性αＳ凝集体の形成と相関することが疑われる（Braakら、2003（a）および（b））。ＥＤはＰＤを有する男性の60～79％の範囲で影響を及ぼすことが報告されているが、非パーキンソン男性におけるＥＤの有病率は約37．5％に過ぎない（Papatsoris、2006）。迷走神経などの求心性神経を介して、ＥＮＳから中枢神経系（ＣＮＳ）へαＳ凝集体が正常に輸送された結果(Holmqvist ら、2014；Svenssonら、2015）、神経毒性凝集体が脳幹内およびより吻側の構造物内に漸進的に蓄積する。ＥＮＳにおけるαＳ凝集を阻害することにより、ＥＮＳとＣＮＳの両方における継続的な神経疾患過程が減少し（Phillipsら、2008）、それによって異常αＳ病態と関連するＥＤに正の影響を及ぼす可能性がある。
中枢ドーパミンは勃起を含む性機能の制御において重要な神経伝達物質であることが知られている(Giuliano ら、2001）。ＰＤ患者にしばしば認められる勃起障害の原因としてドーパミン欠乏が考えられている(Palma ら、2014）。ＰＤ患者では、αＳ関連の病態が黒質ドーパミンニューロンにみられるものと平行してセロトニン作動性およびコリン作動性ニューロンに発現する。このように、αＳの調節はドーパミン作動性機能不全を介してＰＤにおけるＥＤの役割を果たしている可能性がある。
一実施形態では、本方法が被験者が勃起を達成することができない場合の数を減少させ、被験者が勃起を達成することができない場合の数を減少させることは、被験者が定義された期間にわたって勃起を達成することができない場合の数を減少させることを含む。別の局面において、この方法は規定された期間にわたってＥＤの重症度の減少を結果、ここで、ＥＤの重症度の減少は骨圧迫直立長さ（ＢＰＥＬ）測定、ガース測定、矯正硬度スケール（ＥＨＳ）、および国際矯正機能指数（ＩＩＥＦ）からなる群より選択される医学的に認証される技術によって測定される。
(ii) 血圧
一実施形態では、必要とする被験体における高血圧（ＨＢＰ）または低血圧（ＬＢＰ）および／または関連症状の発症または進行を治療、予防および／または遅延させる方法であって、本明細書に開示される少なくとも１つのアミノステロール（例えば、ＥＮＴ－０３（化合物III））、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、プロドラッグまたは誘導体の治療有効量を被験体に投与することを含む方法が提供される。
高血圧とも呼ばれる高血圧（ＨＢＰ）は、動脈内の血圧が持続的に上昇する長期的な医学的状態である。長期にわたる高血圧は、冠動脈疾患、脳卒中、心不全、心房細動、末梢血管疾患、視力障害、慢性腎臓病、認知症の主要な危険因子である。ＨＢＰは（a）収縮期血圧（ＢＰ）≧120および拡張期ＢＰ＜80；または（b）収縮期血圧（ＢＰ）≧130または拡張期BP≧80；一方、低血圧（LBP）は（a）収縮期血圧≦80；または（b）拡張期血圧≦50）として特徴付けられることがある。
低血圧（ＬＢＰ）は低血圧とも呼ばれ、一般に、90ミリメートル水銀(mmHg)未満の収縮期血圧または60mmHg未満の拡張期血圧として分類される。主な症状はふらつき、回転性めまいおよび失神である。血圧がひどく低下すると、脳や他の重要な臓器から酸素や栄養分が奪われ、ショックと呼ばれる命にかかわる状態になる。運動をしていて体調が上の人にとって、低血圧は健康と体力が良い徴候である。多くの人にとって、過度の低血圧はめまいや失神を引き起こしたり、重篤な心臓、内分泌または神経障害を示したりする。
血圧（ＢＰ）とαＳ病態：ＰＤなどのＨＢＰまたはＬＢＰを引き起こす神経疾患の多くは、腸管神経系（ＥＮＳ）内の毒性αＳ凝集体の形成と相関することが疑われている（Braakら2003（a）および（b））。米国のＰＤ患者の医師受診1155万例を対象とした研究では、最も多く記録された併存疾患は高血圧であり、受診の37．8％であった（Lingalaら、2017年）。起立性低血圧（ＯＨ）は、特発性パーキンソン病（ＩＰＤ）患者によくみられる非運動症状の１つである（Fereshtehnejadら2014）。
ＨＢＰまたはＬＢＰと相関する、異常αＳ病理と関連した状態、および／またはドーパミン作動性機能不全の例にはシヌクレオパシー、神経疾患、心理学的および／または行動障害、脳および全身性虚血性障害が含まれるが、これらに限定されない。これらの例は本明細書に記載されている。
一実施形態ではＨＢＰを有する被験体において、この方法は臨床的に認証されるスケールまたはツールを使用して測定して、収縮期血圧および／または拡張期血圧を、少なくとも約10％、少なくとも約15％、少なくとも約20％、少なくとも約25％、少なくとも約30％、少なくとも約35％、少なくとも約40％、少なくとも約45％、少なくとも約50％、少なくとも約55％、少なくとも約60％、少なくとも約65％、少なくとも約70％、少なくとも約75％、少なくとも約80％、少なくとも約85％、少なくとも約90％、少なくとも約95％、または少なくとも約100％低下させる。
１つの実施形態において、ＬＢＰを有する被験体において、この方法は、臨床的に認証されるスケールまたはツールを使用して測定される場合、収縮期および／または拡張期血圧を、少なくとも約10％、少なくとも約15％、少なくとも約20％、少なくとも約25％、少なくとも約30％、少なくとも約35％、少なくとも約40％、少なくとも約45％、少なくとも約50％、少なくとも約55％、少なくとも約60％、少なくとも約65％、少なくとも約70％、少なくとも約75％、少なくとも約80％、少なくとも約85％、少なくとも約90％、少なくとも約95％、または少なくとも約100％上昇させる。
１つの実施形態では、臨床的に認証されるスケールまたはツールが、血圧測定、動脈浸透、動脈拍動、加速度測定、振動測定、連続非侵襲性動脈圧（ＣＮＡＰ）、脈波速度、および歩行モニタリングからなる群から選択される。
(iii) 心伝導欠損
一実施形態では、本明細書に開示される少なくとも１つのアミノステロール（例えば、ＥＮＴ－０３（化合物III））、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、プロドラッグまたは誘導体の治療有効量を被験体に投与することを含む、必要とする被験体における心臓伝導障害（ＣＣＤ）および／または関連症状の発症または進行を治療、予防、および／または遅延させる方法が提供される。
心臓伝導障害（ＣＣＤ）は、電気インパルスがどのように心臓へ、および心臓を通って移動するかの異常を伴う。心臓伝導系は通常洞房結節によって発生する電気信号を伝達し、心筋の収縮を引き起こす。心臓伝導欠損（ＣＣＤ）は重篤で生命を脅かす可能性のある疾患である。房室（ＡＶ）結節を介する心伝導の変化、右または左脚ブロックを伴うHis‐Purkinje系、および心電図（ＥＫＧ）におけるＱＲＳ波の拡大を伴う病態群に属する。本来、ＣＣＤは、異常なインパルス伝播の基礎となる伝導系における解剖学的変化を伴う心臓の構造的疾患と考えられた。しかしながら、かなりの数の症例では、解剖学的異常がなくても伝導障害が起こることが明らかにされている。これらの場合、構造的変化よりも機能的変化が伝導障害の基礎をなすと思われる。これらの機能的欠損は「心臓の原発性電気病」と呼ばれている。ＣＣＤの基礎にある病態生理学的機序は多様であるが、ＣＣＤの最も頻度の高い病型はレネーグレ－レブ病（特発性両脚線維症）とも呼ばれる変性型である。今日、レネーグレ－レブ病は、世界中のペースメーカー移植の主要な原因である。
一実施形態では、ＣＣＤが(a)ＱＴ間隔（QTc）≧440ms;(b)失神;(c)心電図中のデルタ波の存在(ＥＫＧ)；(d)ＥＫＧの中の偽正常な脚ブロック(e)ＥＫＧ中のV1～V3のＳＴ上昇；（f）ＥＫＧ中のＱＲＳ群＞100ms；(g)ＥＫＧ中のＰＲ間隔＜120ms；（h）毎分100拍を超える心拍数(ＢＰＭ)；（i）心拍数が60ＢＰＭ未満；(j) ＥＫＧ中のＰＲ間隔＞200ms；(k)ＥＫＧ中のｐ波に従わないＱＲＳ；（l）ＥＫＧ中のｐ波とＱＲＳ群との間に反復関係がないこと；（m）心房および心室速度の相違（n）ＥＫＧ中のリードＶ1のＱＳまたはｒＳコンプレックス；(o)リードＶ６中のノッチ付き（M型）Ｒ波；（p）ＥＫＧ中のＴ波の不一致；(q) ＥＫＧにおける左軸の－４５°と－６０°の間の偏差；(r)ＥＫＧ中の側部肢I およびaVLにおけるｑＲパターン（小ｑ、高さＲ）；（s）ＥＫＧi中の前部肢ＩＩ、ＩＩＩおよびaVFにおけるｒＳパターン（小さいｒ、深さｓ）；（t）ＥＫＧにおけるａＶＬ誘導における遅延内因性偏向（＞0．045s）；（u）ＥＫＧ中の９０°と１８０°の間の前頭面軸；（v）ＥＫＧにおけるｉ誘導とａＶＬにおけるｒＳパターン；（w）ＥＫＧにおけるＩＩＩ誘導とａＶＦにおけるｑＲパターン；(x)胸痛；(y)呼吸困難；(aa)急速呼吸；(bb)吐き気；(cc)疲労；(dd)睡眠障害または睡眠障害;(ee)便秘；および（ff）認知障害。
一実施形態において、ＣＣＤの進行または開始は医学的に認証された技術によって測定されるように、アミノステロールまたはその塩もしくは誘導体の固定された漸増用量の投与後、規定された期間にわたって、遅くされるか、停止されるか、または逆転される。さらに、ＣＣＤは医学的に認証された技術によって測定されるように、アミノステロールまたはその塩もしくは誘導体の固定された漸増用量によって積極的に影響され得る。ＣＣＤの正の影響および／または進行は、心エコー検査、心電図検査（ＥＣＧまたはＥＫＧ）、磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ）、ポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）；冠動脈カテーテル法、血管内超音波、ホルターモニタリング、ストレステスト、コンピュータ断層撮影血管造影（ＣＴＡ）、および冠動脈ＣＴカルシウムスキャンからなる群から選択される１つ以上の技術によって、定量的または定性的に測定することができる。さらに、CCDの進行または開始は医学的に認証された技術によって測定されるように、約5％、約10％、約15％、約20％、約25％、約30％、約35％、約40％、約45％、約50％、約55％、約60％、約65％、約70％、約75％、約80％、約85％、約90％、約95％、または約100％遅らせる、停止させる、または逆転させることができる。
別の実施形態において、アミノステロールまたはその塩もしくは誘導体は、ＣＣＤによって引き起こされる機能不全を逆転させ、評価される症状を処置、予防、改善、および／または解消する。ＣＣＤ症状の改善または解像度は、臨床的に認証されるスケールまたはツールを使用して測定される。さらに、ＣＣＤ症状の改善は例えば、上記の技術を使用して測定した場合、少なくとも約10％、少なくとも約15％、少なくとも約20％、少なくとも約25％、少なくとも約30％、少なくとも約35％、少なくとも約40％、少なくとも約45％、少なくとも約50％、少なくとも約55％、少なくとも約60％、少なくとも約65％、少なくとも約70％、少なくとも約75％、少なくとも約80％、少なくとも約85％、少なくとも約90％、少なくとも約95％、または少なくとも約100％であり得る。
Ｃ． 食欲抑制／肥満治療
一実施形態では、本明細書に開示される少なくとも１つのアミノステロール（例えば、ＥＮＴ－０３（化合物ＩＩＩ））、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、プロドラッグまたは誘導体の治療有効量を被験体に投与することを含む、必要とする被験体における食欲および／または１つ以上の関連症状の発症または進行を抑制、予防および／または遅延させる方法が提供される。
一実施形態では被験体は食欲増加状態に罹患し、食欲の増加は食欲増加状態に罹患する前の被験体の食欲と比較される。食欲の増加は、臨床的尺度またはツールを用いて測定することができる。
１つの実施形態において、この方法は、規定された期間にわたる被験体の食欲の減少を引き起こし、ここで、この食欲の減少はアミノステロール（例えば、v）または薬学的に受容可能なその塩、溶媒和物、プロドラッグ、または誘導体の投与前の被験体の食欲と比較される。被験体の食欲の減少は、臨床的食欲スケールまたはツールによって測定して、約5％、約10％、約15％、約20％、約25％、約30％、約35％、約40％、約45％、約50％、約55％、約60％、約65％、約70％、約75％、約80％、約85％、約90％、約95％または約100％であり得る。１つの実施形態において、臨床的食欲スケールまたはツールは、食欲の自己評価、食欲の主観的評価、視覚アナログスケール（ＶＡＳ）、食欲不振／悪液質療法の機能的評価（ＦＡＡＣＴ）スコア、および食欲不振質問票（ＡＱ）からなる群から選択される。
１つの実施形態において、食欲増加状態は、ストレス、不安、うつ病、月経前症候群、妊娠、過食症、甲状腺機能亢進症、レプチン抵抗性、Grave病、低血糖症、糖尿病、Prader－Willi症候群（ＰＷＳ）、過食症、（ＢＥＤ）、肥満、断薬、および薬物消費からなる群から選択される。
１つの実施形態において、１つ以上の関連する食欲症状は腹鳴（ゴロゴロなる胃）；失神、めまい、またはふらつき；頭痛；短気；認知障害；および吐き気からなる群より選択される。方法を実施することにより、関連症状の１つまたは複数の減少または消失もたらされる可能性がある。
１つの実施形態において、（a）この方法は、臨床的に認証される失神、めまい、またはふらつきの尺度またはツールによって測定される、被験者の失神、めまい、またはふらつきを一定期間にわたり重症度の低下をもたらし、（b）その方法は臨床的に認証される失神、めまい、またはふらつきの尺度またはツールによって測定される、約5％、約10％、約15％、約20％、約25％、約30％、約35％、約45％、約50％、約55％、約60％、約65％、約70％、約75％、約80％、約90％、約95％、および約100％までからなる群から選択される重症度の低下をもたらし、および／または（c）この方法は被験者が、失神、めまい、ふらつきをしないことをもたらす。
１つの実施形態において、臨床的に認証される失神、めまい、またはふらつきのスケールまたはツールは、エーマーめまい診断スケール（ADDS）、めまい症状スケール、めまいハンディキャップインベントリー、日常生活の前庭障害スケール、Activities‐specific平衡自信、めまいハンディキャップアンケート、めまい-めまい-不均衡アンケート、ＵＣＬＡめまいアンケート、めまい因子インベントリー、ヨーロピアンめまいの評価、およびメニエール病患者由来重症度指数からなる群から選択される。
１つの実施形態において、（a）この方法は１つ以上の臨床的に認識された頭痛評価尺度によって測定される、被験者の頭痛の減少を一定期間にわたってもたらす;(b)この方法は１つ以上の臨床的に認識された頭痛評価尺度によって測定される、被験者の頭痛の減少を１つ以上の期間にわたってもたらし、１つ以上の臨床的に認識された頭痛評価尺度によって測定され、かつ減少が緊張性、群発性、片頭痛、高血圧性頭痛および低血圧性頭痛からなる群から選択される１つ以上の頭痛タイプにおいて測定される；および／または（c）この方法は１つ以上の臨床的に認識された頭痛評価尺度によって測定される、一定期間にわたる被験者の頭痛の減少をもたらし、そして被験者の頭痛の減少は約5、約10、約15、約20、約25、約30、約35、約40、約45、約50、約55、約60％、約65％、約70％、約75％、約80％、約90％、約95％、および約100％である。
１つの実施形態において、１つ以上の臨床的に認識された頭痛評価尺度は、ID－片頭痛、視覚的前兆評価尺度（ＶＡＲＳ）、片頭痛障害評価質問票（ＭＩＤＡＳ）、片頭痛特異的生活の質調査（ＭＳＱ 2．1）、および治療応答下の頭痛(ＨＵＲＴ)質問票からなる群から選択される。
１つの実施形態において、（a）方法は１つ以上の臨床的に認証される認知評価尺度によって測定されるように、規定された期間にわたる被験体の認知障害の改善をもたらし、（b）方法は１つ以上の臨床的に認証される認知評価尺度によって測定されるように、規定された期間にわたる被験体の認知障害の改善をもたらし、改善は、約5、約10、約15、約20、約25、約30、約35、約40、約45、約50、約55、約60、約65、約70、約75、約80、約85、約90、約95、または約100％である。
１つの実施形態において、１つ以上の臨床的に認識された認知評価尺度は、ＡＤＡＳＣｏｇ、Woodcock－Johnson認知能力テスト、Miller国際性能尺度、Raven's Progressive Matrices、Wonderlic人事テスト、ＩＱテスト、統一パーキンソン病尺度（ＵＰＤＲＳ）、Mini Mental Parkinson(ＭＭＰ)、Informant Questionnaire on Cognition in Elderly（ＩＱＣＯＤＥ)、The 7-Minute Screen、簡略型認知機能スコア(AMTS)、Cambridge 認知試験(ＣＡＭＣＯＧ)、時計描画試験(ＣＤＴ)、General Practitioner Assessment記憶障害スクリーニング（ＭＩＳ）、Montreal認知評価(ＲＵＤＡ)、Self-Administered Gerocognitive Examination(ＳＡＧＥ)、Short and Sweet Screening Instrument(ＳＢＴ)、St.Louis精神状態(ＳＬＵＭＳ)、Short Portable Mental Status Questionnaire(SPMSQ)、Short test精神状態（STMS）、時間と変化試験（T＆C試験）、記憶（TYM）試験、Addenbrookeの認知試験‐改訂（ACER）；およびCantab Mobile、Cognigram、Cognivue、Cognision、および自動神経心理学的評価計量認知能力試験（ＣＰＴ）から選択したコンピュータ化された試験。
一実施形態では、本明細書に開示される少なくとも１つのアミノステロール（例えば、ＥＮＴ－０３（化合物III））、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、プロドラッグまたは誘導体の治療有効量を被験体に投与することを含む、必要とする被験体における体重増加および／または関連症状の開始または進行を逆転させる、予防する、および／または遅延させる方法が提供される。
一実施形態では、本明細書に開示される治療有効量のアミノステロール（例えば、ＥＮＴ－０３（化合物III））、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、プロドラッグまたは誘導体を被験体に投与することを含む、それを必要とする被験体の体重を減少させる方法が提供される。
いくつかの実施形態では、本方法が約5％、約10％、約15％、約20％、約25％、約30％、約35％、約40％、約45％、約50％、約55％、約60％、約65％、約70％、約75％、約80％、約85％、約90％、約95％、または約100％の規定された期間にわたる被験体の体重減少をもたらす。
いくつかの実施形態において、この方法は規定された期間にわたる被験体によるカロリーの消費の減少をもたらし、ここで、この減少はアミノステロール（例えば、ＥＮＴ－０３（化合物III））または薬学的に受容可能なその塩、溶媒和物、プロドラッグ、または誘導体の投与前の期間に被験体によって消費されるカロリーと比較される。定義された期間および期間は、同じ長さの時間とすることができる。さらに、カロリー消費の減少は、約5％、約10％、約15％、約20％、約25％、約30％、約35％、約40％、約45％、約50％、約55％、約60％、約65％、約70％、約75％、約80％、約85％、約90％、約95％、または約100％であり得る。
いくつかの実施形態ではこの方法がアミノステロールまたはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、またはプロドラッグの投与前の期間中に被験体によって消費される食物質量に対して、規定された期間にわたって被験体による食物質量消費の減少をもたらし；ここで、規定された期間および期間は同じ長さの時間であり、ここで、食物質量消費の減少は約5％、約10％、約15％、約20％、約25％、約30％、約35％、約40％、約45％、約50％、約55％、約60％、約65％、約70％、約75％、約80％、約85％、約90％、約95％、または約100％である。
いくつかの実施形態において、この方法は規定された期間にわたる被験体の体重の減少をもたらし、ここで、体重の減少はアミノステロールまたはその薬学的に受容可能な塩、溶媒和物、プロドラッグ、もしくは誘導体の投与前の被験体の体重の約5％、約10％、約15％、約20％、約25％、約30％、約35％、約40％、約45％、約50％、約55％、約60％、約65％、約70％、約75％、約80％、約85％、約90％、約95％、または約100％である。
いくつかの実施形態では、各定義された期間が約1日～約10日、約10日～約30日、約30日～約3ヶ月、約3ヶ月～約6ヶ月、約6ヶ月～約12ヶ月、および約12ヶ月超からなる群から独立して選択される。
いくつかの実施形態において、被験体は、肥満、脂肪肝疾患、２型糖尿病、心疾患、脳卒中、高血圧、胆嚢疾患、痛風、睡眠時無呼吸、変形性関節症、高ＬＤＬコレステロール、低ＨＤＬコレステロール、高レベルのトリグリセリド（脂質異常症）、子宮内膜癌、乳癌、結腸癌、腎臓癌、胆嚢癌、および肝臓癌からなる群より選択される１以上の状態を患っている、および／またはそのリスクを有する。
Ｄ． 抗菌薬治療
(1) 微生物感染
１つの局面において、本明細書中に記載されるアミノステロールは、微生物感染を処置する必要がある被験体に投与され得る。いくつかの実施形態において、必要とする被験体は、ウイルス感染症、微生物感染症、細菌感染症、例えばグラム陰性および／またはグラム陽性細菌感染症、マイコバクテリア感染症、真菌感染症、および／または原虫感染症からなる群より選択される状態を有する。
いくつかの実施形態において、ウイルス感染は、黄熱病、サイトメガロウイルス、東部ウマ脳炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、肝炎デルタウイルス、デングウイルス、およびヒト免疫不全ウイルスからなる群より選択されるウイルスによって引き起こされる。いくつかの実施形態において、治療すべき状態は、「アフリカ豚発熱ウイルス」、アルボウイルス科、アデノウイルス科、アレナウイルス科、アルテリウィルス、アストロウイルス科、バクロウイルス科、ビマウイルス科、ビルナウイルス科、ブニヤウイルス科、カリシウイルス科、カウリモウイルス科、シロコウイルス科、コロナウイルス科、シストウイルス科、デングウイルス科、HIV科、デルタウイルス科、フィルウイルス科、フィロウイルス科、ヘパドナウイルス科（肝炎）、ヘルペスウイルス科（例えばサイトメガロウイルス、単純ヘルペス科、帯状疱疹科）、イリドウイルス科、モノネガウイルス科（例えばパラミクソウイルス科、モルビリウイルス科、ラブドウイルス科）、ミオウイルス科、オルトミクソウイルス科（例えばＡ型インフルエンザ、Ｂ型インフルエンザ、パラインフルエンザ）、パピローマウイルス、パポバウイルス科、パラミクソウイルス科、プリオンス、パルボウイルス科、フィコドナウイルス科、ピコマウイルス科（例えばライノウイルス、ポリオウイルス）、ポックスウイルス科（例えばスモールポックスまたはバクシニア）、ポティウイルス科、レオウイルス科（例えばロタウイルス）、レトロウイルス科（ＨＴＬＶ－Ｉ、ＨＴＬＶ－ＩＩ、レンチウイルス）、ラブドウイルス科、テクチウイルス科、トガウイルス科（例えばルビウイルス）、ヘルペス、痘瘡、乳頭腫、コロナ、インフルエンザ、肝炎、センダイ、シンドビス、ワクシニアウイルス、西ナイル、ハンタ、感冒を引き起こすウイルス、およびそれらの任意の組み合わせからなる群より選択されるウイルス感染である。いくつかの実施形態において、治療されるべき症状は、ＡＩＤＳ、ウイルス性髄膜炎、デング熱、ＥＢＶ、肝炎、ウイルス由来と疑われる慢性疾患、多発性硬化症、I型糖尿病、II型糖尿病、アテローム性動脈硬化症、心筋症、カワサキ病、再生不良性貧血、およびこれらの任意の組み合わせからなる群より選択される。
いくつかの実施形態では、方法が1つ以上の抗ウイルス薬を投与することをさらに含む。
(2) コロナウイルス感染
１つの局面において、被験体におけるコロナウイルスによる感染を処置または予防する方法が提供され、これは、本明細書中の任意の実施形態のアミノステロール化合物の治療有効量または本明細書中の任意の実施形態の組成物を被験体に投与することを包含する。
いくつかの実施形態において、コロナウイルスは、αコロナウイルス；バットコロナウイルスCDPHE15のようなコラコウィルス；バットコロナウイルスHKU10またはリノロファスフェルメキニウムαコロナウイルスHuB-2013のようなデカウィルス；ヒトコロナウイルス229Eのようなデュビナウイルス；ルチェンRnラットコロナウィルスのようなルッチャコロナウィルス；フェレットコロナウイルスまたはミンクコロナウイルスのようなミナコウイルス；ミニオペテルスバットコロナウイルスまたはミニオペトルスバットコロナウイルスHKU8のようなミヌナコロナウイルス；ミョーティスリケッティαコロナウイルスSax-2011のようなミョータコウイルス；ニョクタルスベルティナスαコロナウイルスSC-2013のようなニョクタコロナウイルス；ポーシンエピデミックディアーレアウイルスまたはスコットフィルスバットコロナウイルス512のようなペダコウイルス；リノロファスバットコロナウイルスHKU2のようなリナコウイルス；ヒトコロナウィルスNL63またはNL63関連バットコロナウイルスストレインBtKYNL63－9bのようなセトラコウイルス；αコロナウイルス１のようなテガコロナウィルス；βコロナウィルス；ベタコロナウィルス１、ヒトコロナウイルスOC43、チャイナラッタスコロナウイルス１、HKU24, ヒトコロナウイルスHKU1またはムリンコロナウイルスのようなエンベコウイルス；バットHp-βコロナウィルスツェジァン2013などのヒペコウィルス；ヘジェホクコロナウィルス1、中東呼吸器症候群関連コロナウイルス（MERS－CoV）、ピピステレウスバットコロナウイルスGKU5またはTylonycteris Bat coronavirus HKU9またはタイロニクテバットコロナウィルスHKU4などのメルべコロナウィルス；ローセタスバットコロナウイルスGCCDC、ローセタスHKU9などのノベコウィルス；重症急性呼吸器症候群関連コロナウイルス、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス（SARS－CoV）または重症急性呼吸器症候群コロナウイルス2（SARS－CoV－2、COVID－19）のようなサーベコウィルス；δコロナウイルス；ウィジオンコロナウイルスHKU20などのアンデコウイルス；ブルブルコロナウイルスHKU11のようブルデコロナウィルス；ポルシンコロナウィルスHKU15、ムニアコロナウィルスHKU13またはホワイトアイコロナウィルスHKU16；ナイトヘロンコロナウィルスHKU19などのヘルデコウイルス；コモンムーヘンコロナウィルスHKU21などのムーデコロナウィルス；γコロナウイルス；ベルガホエールコロナウイルスSW1などのセガコウィルス；アピアンコロナウイルスなどのイガコウィルスからなる群より選択される。
いくつかの実施形態では、コロナウイルスがSARS－CoV－2の配列を含むポリヌクレオチド、またはSARS－CoV－2の配列を含むポリヌクレオチドに対して少なくとも80％の配列同一性を有するポリヌクレオチドによってコードされる。いくつかの実施形態では、コロナウイルスがヒトコロナウイルス229E、ヒトコロナウイルスOC43、SARS－CoV、HCoV NL63、HKU1、MERS－CoV、またはSARS－CoV－2を含むか、またはそれらに特徴的である。いくつかの実施形態において、コロナウイルスはSARS－CoV－2を含むか、またはそれらに特徴的である。
いくつかの実施形態では、被験体がコロナウイルス感染による重篤な疾患および／または重篤な合併症のリスクがあると考えられる。いくつかの実施形態では、被験体が約50歳以上、約55歳以上、約60歳以上、または約65歳以上である。いくつかの実施形態では、被験体が糖尿病、喘息、呼吸器障害、高血圧、および心疾患からなる群より選択される１つ以上の既存の状態を患う。いくつかの実施形態では、被験体は免疫不全である。いくつかの実施形態では、被験体がＡＩＤＳ、癌、癌治療、肝炎、自己免疫疾患、ステロイド投与、免疫老化、またはそれらの任意の組合せにより免疫不全になる。
いくつかの実施形態では、投与がコロナウイルスへの暴露後の被験体の生存の機会を増加させる。いくつかの実施形態において、生存の機会は、任意の臨床的に認証される技術を使用して測定される場合、約10％、約20％、約30％、約40％、約50％、約60％、約70％、約80％、約90％、または約100％増加する。
いくつかの実施形態では、被験体がコロナウイルスに対して伝染性である個体に曝露されるか、または曝露されることが予想される。いくつかの実施形態において、コロナウイルスに対して伝染性である個人は発熱、咳、息切れ、下痢、くしゃみ、鼻水、および咽頭痛からなる群より選択される１以上の症状を有する。いくつかの実施形態において、被験体は、60歳以上の医療従事者、頻繁な旅行者、軍関係者、介護者、または感染による死亡のリスク増加をもたらす既存の状態を有する被験体である。
いくつかの実施形態では、方法が１つ以上の抗ウイルス薬を投与することをさらに含む。いくつかの実施形態において、１つ以上の抗ウイルス薬は、クロロキン、ヒドロキシクロロキン、ダルナビル、ガリデシビル、インターフェロンβ、ロピナビル、リトナビル、レムデシビル、および／またはトリアザビリンからなる群から選択される。
いくつかの実施形態において、投与は、コロナウイルスの伝播のリスクを減少させる。いくつかの実施形態において、伝播のリスクの減少は、任意の臨床的に認証される技術を使用して測定される場合、約10％、約20％、約30％、約40％、約50％、約60％、約70％、約80％、約90％、または約100％である。いくつかの実施形態において、医学的に認証される技術は、PCR(ポリメラーゼ連鎖反応）または免疫測定法を含む。
ＶＩ． 患者集団
開示されたアミノステロールおよびそれを含む組成物は、哺乳動物を含むヒトおよび非ヒト動物、ならびにヒトの子供および成体を含む未成熟および成熟動物を含む、ある範囲の被験体を処置するために使用され得る。治療されるべきヒト被験体は、乳児、幼児、学齢の子供、ティーンエイジャー、若齢成人、成人、または老齢の患者であり得る。
予防に関する本明細書に開示される実施形態では、特定の患者集団が本明細書に開示される状態のいずれかの発症の「リスクがある」ことに基づいて選択されてもよい。例えば、病態または家族の経歴の遺伝子マーカーを徴候として用いて、特定の病態を発症する可能性が高い被験者を同定することができる。したがって、いくつかの実施形態では、予防がまず、状態を発症する危険性のある患者集団を同定することを含み得る。あるいは、特定の症状は特定の疾患の初期徴候と考えられる。したがって、いくつかの実施形態では、患者集団が年齢および状態に関連する症状を経験することに基づいて、症状を発症する「リスクがある」ために選択されてもよい。患者集団を改良するために、さらなる遺伝的または遺伝的徴候が用いられることがある。
ＶＩＩ． キット
本開示のアミノステロール製剤または組成物は、説明書または添付文書とともにキットと一緒に包装され得るか、またはキットに含まれ得る。そのような使用説明書又は添付文書は、アミノステロール又はその誘導体若しくは塩の有効期間を考慮して、時間、温度及び光のような推奨される貯蔵条件に対処することができる。そのような説明書または添付文書はまた、管理された病院、診療所、またはオフィスの状態以外の、現場での使用を必要とし得る製剤のための貯蔵の容易さなど、アミノステロールまたはその誘導体もしくは塩の特定の利点に対処し得る。
本開示はまた、本明細書中に開示される1つ以上のアミノステロール医薬組成物で満たされた1つ以上の容器を含む医薬パックまたはキットを提供する。キットは例えば、溶解されるべき粉末、錠剤、または滅菌溶液のいずれかとして、適切な量のアミノステロール医薬組成物で満たされた容器を含み得る。そのような容器と関連して、医薬品または生物学的製品の製造、使用または販売を監督している政府機関により定められた形式の注意書があり、そのような注意書は、人への投与のための製造、使用または販売の政府による認可の事実を示している。さらに、アミノステロールまたはその誘導体もしくは塩は、他の治療化合物と併せて使用され得る。
他の局面において、本明細書中に記載されるような鼻スプレー装置を含むキットが開示される。１つの局面において、キットは開示される低用量アミノステロール組成物を含む、本明細書に開示されるような１つ以上のデバイスを含み得、ここで、デバイスはデバイスを大気の影響から保護するのに十分な容器内に密封される。容器は例えば、箔、またはプラスチックパウチ、特に箔パウチ、またはヒートシールされた箔パウチであってもよい。装置を適切に保護するのに十分な適切な容器は、当業者には容易に理解されるであろう。
一態様ではキットが本明細書に開示されるような１つまたは複数のデバイスを含むことができ、デバイスは製品の物理的完全性を保護する、第１の保護パッケージング、または第２の保護パッケージング、または第３の保護パッケージング内に封止することができる。第１、第２、または第３の保護包装のうちの１つまたは複数は、ホイルパウチを含むことができる。キットは、装置の使用説明書をさらに含んでもよい。一態様では、キットが２つ以上のデバイスを含む。
１つの局面において、キットは、本明細書中に開示されるようなデバイスを含み得、そして使用のための説明書をさらに含み得る。一態様では、説明書は視覚的補助／絵画的および／または書面による装置の管理者への指示を含むことができる。
ＶＩＩＩ． 併用療法
本開示の方法において、アミノステロール組成物は、単独で、または１つ以上の他の治療剤と組み合わせて投与され得る。追加の治療剤の例は、アミノステロールが治療のために投与されている状態を治療することが知られているものである。
例えば、PDおよび／または関連症状の発症または進行を治療、予防、および／または遅らせる方法において、アミノステロール組成物を、ＰＤまたは関連症状を治療するために一般的に処方される薬物、例えばレボドパ（通常、ドパ脱炭酸酵素阻害剤またはＣＯＭＴ阻害剤と組み合わせる）、ドパミンアゴニストおよびＭＡＯ－Ｂ阻害剤と組み合わせることができる。例示的なドーパデカルボキシラーゼ阻害剤は、カルビドパおよびベンセラジドである。例示的なＣＯＭＴ阻害剤は、トルカポンおよびエンタカポンである。ドパミンアゴニストには、例えば、ブロモクリプチン、ペルゴリド、プラミペキソール、ロピニロール、ピリベジル、カベルゴリン、アポモルフィン、リスリド、およびロチゴチンが含まれる。ＭＡＯ－Ｂ阻害剤には、例えば、セレギリンおよびラサジリンが含まれる。ＰＤの治療によく用いられる他の薬物には、例えば、アマンタジン、抗コリン作動薬、精神病に対するクロザピン、認知症に対するコリンエステラーゼ阻害薬、および日中の眠気に対するモダフィニルがある。
ＡＤまたはＡＤに関連する関連症状の発症、予防および／または進行を治療、予防および／または遅延させる方法において、アミノステロール組成物は、ＡＤまたは関連症状を治療するために一般に処方される薬物、例えばグルタミン酸塩、抗精神病薬、ヒューペルジンＡ、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤、およびメマンチン（Akatinol(登録商標)、Axura(登録商標)、Ebixa(登録商標)／Abixa(登録商標)、Memox(登録商標)およびNamenda(登録商標)）などのＮＭＤＡ受容体アンタゴニストと同時投与または組み合わせることができる。アセチルコリンエステラーゼ阻害剤の例は、ドネペジル（Aricept(登録商標)）、ガランタミン（Razadyne(登録商標)）、およびリバスチグミン（Exelon(登録商標)）である。
１型糖尿病および２型糖尿病の両方を含む糖尿病および／または糖尿病に関連する関連症状、または糖尿病の神経障害を治療、予防、および／または進行を遅らせる方法において、アミノステロール組成物は糖尿病を治療するために一般的に処方される薬物、またはインスリン（ＮＰＨインスリンまたは合成インスリン類似物）（例えば、Humulin(登録商標)、Novolin(登録商標)）および経口血糖降下薬と組み合わせて同時投与することができる。経口抗高血糖薬には（1）メトホルミン（Glucophage(登録商標)）のようなビグアニド；（2）アセトヘキサミド、クロルプロパミド（Diabinese(登録商標)）、グリメピリド（Amaryl(登録商標)）、グリピジド（Glucotrol(登録商標)）、トラザミド、トルブタミド、およびグリブリド（Diabeta(登録商標)、Micronase(登録商標)）のようなスルホニルグアニド；（3）レパグリニド（Prandin(登録商標)）およびナテグリニド（Starlix(登録商標)）のようなメグリチニド；（4）ロシグリタゾン（Avandia(登録商標)）およびピオグリタゾン（Actos(登録商標)）のようなチアゾリジンジオン；（5）アカルボース（Precose(登録商標)）およびミグリトール（Glyset(登録商標)）のようなα－グルコシダーゼ阻害剤；（6）シタグリプチン（ジャヌビア(登録商標)）のようなジペプチジルペプチダーゼ－４阻害剤；（7）エキセナチド（Byetta(登録商標)）のようなグルカゴン様ペプチドアゴニスト；および（8）プラムリンチド（Symlin(登録商標)）のようなアミリン類似物が含まれるが、これらに限定されない。
ＨＤまたはハンチントン舞踏病または疾患に関連する症状の発症もしくは進行を治療、予防、および／または遅らせる方法において、アミノステロール組成物を、ハンチントン舞踏病または関連する情動および運動の問題を制御するのに役立てるために処方される薬物などの、ハンチントン舞踏病または関連する症状を治療するために一般的に処方される薬物と同時投与するか、または併用することができる。このような薬物には（1）ハロペリドールおよびクロナゼパムのような抗精神病薬；（2）ジストニアを処置するために使用される薬物（例えば、アセチルコリン調節薬（トリヘキシフェニジル、ベンズトロピン（Cogentin(登録商標)）、およびプロシクリジンＨＣｌ)；ＧＡＢＡ調節薬（ジアゼパム（Valium(登録商標)）、ロラゼパム（Ativan(登録商標)）、クロナゼパム（Klonopin(登録商標)）、およびバクロフェン（Lioresal(登録商標)））；ドーパミン調節薬（レボドパ／カルビドパ（Sinemet(登録商標)）、ブロモクリプチン（パロデル）、レセルピン、テトラベンザイン）；抗痙攣薬（カルバマゼピン（Tegretol(登録商標)）およびボツリヌス毒素（Botox(登録商標)））；ならびに（3）うつ病を処置するために使用される薬物（フルオキセチン、セルトラリン、およびノルトリプチリン）が含まれるが、これらに限定されない。ＨＤを治療するために一般に使用される他の薬物には、アマンタジン、テトラベナジン、ドーパミン遮断薬、および補酵素Q10が含まれる。
末梢性感覚ニューロパチー、または末梢性感覚ニューロパチーに関連する関連症状の発症または進行を治療、予防、および／または遅らせる方法において、アミノステロール組成物を、末梢性感覚ニューロパチーまたは関連症状を治療するために一般的に処方される薬物と同時投与するか、または併用することができる。末梢性感覚ニューロパチーとは、末梢神経系の神経が損傷を受けることをいい、神経の病気や外傷、全身の病気の副作用のいずれかによって起こることがある。この状態を治療するために一般的に使用される薬物には限定されるわけではないが、ニューロトロフィン－３、三環系抗うつ薬（例えば、アミトリプチリン）、抗てんかん療法（例えば、ガバペンチンまたはバルプロ酸ナトリウム）、合成カンナビノイド（ナビロン）および吸入大麻、オピエート誘導体、およびプレガバリン（リリカ(登録商標)）が含まれる。
外傷性頭部および／または脊椎損傷に関連する外傷性頭部および／または脊椎損傷の発症または進行を治療、予防、および／または遅らせる方法において、アミノステロール組成物は、外傷性頭部および／または脊椎損傷などの関連症状を治療するために一般的に処方される薬物、または鎮痛薬（アセトアミノフェン、NSAID、サリチル酸塩、およびモルヒネおよびアヘンなどのオピオイド薬物）および麻痺薬と同時投与または併用することができる。
脳卒中または脳卒中に関連する関連症状の発症または進行を治療、予防、および／または遅らせる方法において、アミノステロール組成物を、アスピリン、クロピドグレル、ジピリダモール、組織プラスミノーゲン活性化因子（tPA）、および抗凝固剤（例えば、アルテプラーゼ、ワルファリン、ダビガトラン）などの脳卒中または関連症状を治療するために一般的に処方される薬物と同時投与または併用することができる。
ＡＬＳまたはＡＬＳに関連する関連症状の発症または進行を治療、予防、および／または遅らせる方法において、アミノステロール組成物は、リルゾール（Rilutek(登録商標)）、KNS－760704（プラミペキソールのエナンチオマー）、オレソキシム（TRO19622）、タランパネル、アリモクロモル、疲労を軽減するのを助ける薬物、筋痙攣を緩和するのを助ける薬物、痙縮を制御するのを助ける薬物、過剰な唾液および痰を減少させるのを助ける薬物、疼痛を制御するのに、うつ病、睡眠障害、嚥下障害、および便秘のような、筋萎縮性側索硬化症または関連症状を治療するために一般に処方される薬物と同時投与または組み合わせることができる。
多発性硬化症に関連するＭＳまたは関連症状の発症または進行を治療、予防および／または遅延させる方法において、アミノステロール組成物はコルチコステロイド（例えば、メチルプレドニゾロン）、プラスマフェレーシス、フィンゴリモド（Gilenya(登録商標)）、インターフェロンβ－1a（Avonex(登録商標)、CinnoVex(登録商標)、ReciGen(登録商標)およびRebif(登録商標)）、インターフェロンβ－1b（Betaseron(登録商標)およびBetaferon(登録商標)）、酢酸グラチラマー（Copaxone(登録商標)）、ミトキサントロン、ナタリズマブ（Tysabri(登録商標)）、アレムツズマブ（Campath(登録商標)）、ダクリズマブ（Zenapax(登録商標)）、リツキシマブ、ジルコチド、BHT－3009、クラドリビン、フマル酸ジメチル、エストリオール、フィンゴリモド、ラキニモド、ミノサイクリン、スタチン、テムシロリムス、テリフルノミド、ナルトレキソン、およびビタミンＤ類似物のような、多発性硬化症または関連症状を治療するために一般に処方される薬物と同時投与または組み合わせることができる。
脳性麻痺または脳性麻痺に関連する関連症状の発症もしくは進行を治療、予防、および／または遅らせる方法において、アミノステロール組成物を、脳性麻痺または関連する症状を治療するために一般的に処方される薬物、例えばボツリヌス毒素Ａ注射と同時投与または併用することができる。
てんかんまたはてんかんに関連する関連症状の発症、予防および／または進行を遅らせる方法において、アミノステロール組成物は、てんかん薬（例えば、カルバマゼピン（Tegretol(登録商標)）、クロラゼパテ(Tranxene(登録商標))、クロラゼパム（Klonopin(登録商標)）、クロナゼパム（Zarontin(登録商標)）、フェルバメート（Felbatol(登録商標)）、ホスフェニトイン（Cerebyx(登録商標)）、ガバペンチン（Neurontin(登録商標)）、ラコサミド(Vimpat(登録商標))、ラモトリジン（Lamictal(登録商標)）、レベチラセタム（Keppra(登録商標)）、オキサカルバゼピン(Trileptal(登録商標))、フェノバビタール（Luminal(登録商標)）、フェニトイン（Dilantin(登録商標)）、プレガバリン(Lyrica(登録商標)),プリミドン（Mysoline(登録商標)）、チアガビン（Gabitril(登録商標)）、トピラメート(Topamax(登録商標))、（Vimpat(登録商標)）、バルプロ酸半ナトリウム(Depakote(登録商標))、バルプロ酸(Depakene(登録商標))、およびゾニサミド(Zonegran(登録商標))、クロバザム(Frisium(登録商標))、ビガバトリン（Sabril(登録商標)）、レチガビン、ブリバラセタム、セレトラセタム、ジアゼパム(Valium(登録商標)およびDiastat(登録商標))、ロバゼタム(Ativan(登録商標))、パラアルデヒド（Paral(登録商標)）、ミダゾラム（Versed(登録商標)）、ペントバルビタール(Nembutal(登録商標))、アセタゾールアミド(Diamox(登録商標))、 プロゲステロン、アドレノコルチコホルモン(ＡＣＴＨおよびActhar(登録商標)), 種々のコルチコトロピックステロイドホルモン（プレドニゾン）、および臭化物）などの、てんかんまたは関連症状を治療するために一般に処方される薬物と同時投与または併用することができる。
認知障害または認知障害に関連する関連症状の発症または進行を治療、予防および／または遅延させる方法において、アミノステロール組成物は、ドネペジル（Aricept(登録商標)）、ガランタミン（Razadyne(登録商標)）、リバスチグミン（Exelon(登録商標)）；ならびにカフェイン、アンフェタミン（Adderall(登録商標)）、リスデキサンフェタミン（Vyvanse(登録商標)）、およびメチルフェニデート（Ritalin(登録商標)）などの刺激剤；メマンチン（Nameda(登録商標)）などのＮＭＤＡアンタゴニスト；イチョウ葉、Ｌ－テアニン、ピラセタム、オキシラセタム、アニラセタム、トルカポン、アトモキセチン、ニンジン、およびサルビアオフィシナリスなどのサプリメントなどの認知障害を治療するために一般に処方される薬物と同時投与または組み合わせることができる。
悪性腫瘍または悪性腫瘍に関連する関連症状の発症または進行を処置、予防および／または遅延させる方法において、アミノステロール組成物は、悪性腫瘍を処置するために一般的に使用される薬物と同時投与または組み合わせることができる。これらには2014年5月5日現在、http://www.cancer.gov/cancertopics/druginfo/αlistに列挙されているものなどの（ただし、これらに限定されない）、すべての公知がん薬物が含まれ、これは本明細書中に参考として援用される。１つの実施形態において、悪性腫瘍を治療するために一般的に使用される薬剤は、アクチノマイシン－Ｄ、アルケラン、ara-Ｃ、アナストロゾール、ビカルタミド、ＢｉＣＮＵ、ビカルタミド、ブレオマイシン、ブスルファン、カペシタビン、カルボプラチン、カルボプラチナム、カルムスチン、ＣＣＮＵ、クロラムバシル、シスプラチン、クラドリビン、ＣＰＴ－１１、シクロホスファミド、シトシンアラビノシド、シタラビン、シトキサン、ダカルバジン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デキサラゾキサン、ドセタクセル、ドキソルビシン、ＤＴＩＣ、エピルビシン、エチレンイミン、エトポシド、フロクスウリジン、フルダラビン、フルオロウラシル、フルタミド、ホテムスチン、ゲムシタビン、ヘキサメチルアミン、ヒドロキシウレア、イダルビシン、イホスファミド、イリノテカン、ロムスチン、メクロレタミンからメルファラン、メルカプトプリン、メソトレキセイト、ミトマイシン、ミトタン、ミトキサントロン、オキサリプラチン、パシリタクセル、パミドロネート、ベントスタチン、プリカマイシン、プロカルバジン、ステロイド、ストレプトゾシン、ＳＴＩ－５７１、タモキシフェン、テモゾロミド、テニポシド、テトラジン、チオグアニン、チオテパ、トムデックス、トモテカン、トレオスルファン、トリメトレキサート、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビノレルビン、ＶＰ－１６、キセロダ、アスパラギナーゼ、ＡＩＮ－４５７、バピヌズマブ、ベリムマブ、ブレンツキシマブ、ブリアキヌマブ、カナキヌマブ、セツキシマブ、ダロツズマブ、デノスマブ、エプラツズマブ、エスタフェナトクス、ファレツズマブ、フィギツムマブ、ガリクシマブ、ゲムツズマブ、ギレンツズマブ(ＷＸ―Ｇ２５０)、ヘルセプチン、イブリツモマブ、イノツズマブ、イピリムマブ、メポリズマブ、ムロモナブ－ＣＤ３、ナプツモマブ、ネシツモマブ、ニモツズマブ、オクレリズマブ、オファツムマブ、オテリズマブ、オゾガミシン、パジバキシマブ、パニツムマブ、ペルツズマブ、ラムシルマブ、レスリズマブ、リツキシマブ、ＲＥＧＮ８８、ソラネズマブ、タネズマブ、テプリズマブ、チウキセタン、トシツモマブ、トラスツズマブ、トレメリムマブ、ベドリズマブ、ザルツムマブ、ザノリムマブ、５ＦＣ、アキュータンホフマンラロッシェ、ＡＥＥ７８８ノバ―ティス、ＡＭＧ－１０２、アンチネオプラストン、ＡＱ４Ｎ(Banoxantrone)、ＡＶＡＮＤＩＡ (RosiglitazoneMaleate)、アバスティン(Bevacizumab)genetech、ＢＣＮＵ、ｂｉＣＮＵカルマスチン、ＣＣＩ－７７９、ＣＣＮＵ、ＣＣＮＵロムスチン、セレコキシブ（Systemic）、クロロキン、シレンギチド（ＥＭＤ 121974）、ＣＰＴ－１１（ＣＡＭＰＴＯＳＡＲ、イリノテカン）、ダサチニブ（ＢＭＳ－354825、Sprycel）、樹状細胞療法、エトポシド（Eposin、Etopophos、Vepesid）、ＧＤＣ－０４４９、グレベック（メシル酸イマチニブ）、ヒドロキシクロロキン、グリアドウエファ、ＩＬ－１３、ＩＭＣ－３Ｇ３、免疫療法、イレッサ(ZD-1839)、ラバチニブ(GW572016）、癌用メトトレキサート(Systemic)、ノボキュア、OSI-774、ＰＣＶ、ＲＡＤ００１ novartis(mＴＯＲ阻害薬）、ラパマイシン（Rapamune、Sirolimus）、ＲＭＰ－７、RTA 744、シンバスタチン、シロリムス、ソラフェニブ、ＳＵ－１０１、ＳＵ5416スゲン、スルファサラジン（Azulfidine）、ステント（Pfizer）、ＴＡＲＣＥＶＡ(erlotinib HCl)、タキソール、ＴＥＭＯＤＡＲ schering-plough、ＴＧＦ－Ｂアンチセンス、サロミド(thalidomide)、プテカン（Systemic）、ＶＥＧＦトラップ、ＶＥＧＦ－ｔｒａｐ、ボリノスタット（SAHA）、Ｘ７６５、ＸＬ１８４、ＸＬ765、ザルネストラ（tipifarnib）、ＺＯＣＯＲ(simvastatin)、シクロホスファミド(Cytoxan),（Alkeran）、クロラムブシル(Leukeran)、チオペタ（Thioplex）、ブスルファン（Myleran）、プロカルバジン（Matulane）、ダカルバジン（ＤＴＩＣ）、アルトレタミン(Hexalen)、クロラムブシル、シスプラチン（Platinol）、イホスファミド、メトトレキサート（MTX）、６－チオプリン(Mercaptopurine[6－MP］,Thioguanine [6-TG])、メルカプトプリン(Purinethol)、リン酸フルダラビン(Leustatin)、フルロウラシル（5－FU）、シタラビン(ara-C)、アザシチジン、ビンブラスチン（Velban）、ビンクリスチン（Oncovin）、ポドフィロトキシン（エトポシド｛VP－16｝およびテニポシデ｛VM－26｝）、カンフトセシン(topotecan and irinotecan)、テキサン例えばパクリタキセル(Taxol)およびドセタクセル(Taxotere),(Adriamycin,Rubex,Doxil)、ダクチノマイシン(Cosmegen)、プリカマイシン(Mithramycin)、ミトマイシン(Mutamycin)、ブレオマイシン(Blenoxane)、エストロゲンおよびアンドロゲン阻害薬(Tamoxifen)、ゴナドトロピン放出ホルモンアゴニスト（LeuprolideおよびGoserelin (Zoladex)）、アロマターゼ阻害薬（AminoglutethimideおよびAnastrozole (Arimidex)）、アムサクリン、アスパラギナーゼ（El－spar）、ミトキサントロン(Novantrone)、ミトタン（Lysodren）、レチノイン酸誘導体、骨髄増殖因子（サルグラモスチムおよびフィルグラスチム）、アミフォスチン、ペメトレクスト、デシタビン、イニパリブ、オラパリブ、べリパリブ、エベロリムス、ボリノスタット、エンチノスタット（SNDX－275）、モセチノスタット（ＭＧＣＤ103)、パノビノスタット（ＬＢＨ589）、ロミデプシン、バルプロ酸、フラボピリドール、オロモウシン、ロスコビチン、ケンパウロン、ＡＧ－024322 (Pfizer)、ファスカプリジン、リュビディン、パバロノールA、ＮＵ２０５８、ＢＭＬ－２５９、ＳＵ９５１６、ＰＤ－０３３２９９１、Ｐ２７６－００、ゲルダナマイシン、タネスピマイシン、アルベスピマイシン、ラディシコール、デグエリン、ＢＩＩＢ０２１、cis－イミダゾリン、ベンゾジアゼピンジオン、スピロ－オキシインドール、イソキノリノン、チオフェン、５－デアザフラビン、トリプタミン、アミノピリミジン、ジアミノピリミジン、ピリドイソキノリン、ピロロビラゾール、インドロカルバゾール、ピロロピリミジン、ジアニリノピリミジン、ベンズアミド、フタラジノン、トリサイクリックインドール、ベンズイミダゾール、インダゾール、ピロロカルバゾール、イソインドリノン、モルホリニルアントラサイクリン、マイタンシノイド、デュサルマイシン、オーリスタチン、カリケアマイシン（ＤＮＡ損傷剤）、α－アマニチン（ＲＮＡポリメラーゼＩＩ阻害剤）、センタナマイシン、ピロロベンゾジアゼピン、ストレプトニグチン、ナイトロジェンマスタード、ニトロソウレア、アルカンスルホネート、ピリミジン類似物、プリン類似物、代謝拮抗剤、葉酸類似物、アントラサイクリン、タキサン、ビンカアルカロイド、トポイソメラーゼ阻害剤、ホルモン剤、およびこれらの任意の組合せからなる群より選択される。
うつ病またはうつ病に関連する関連症状の発症または進行を処置、予防および／または遅延させる方法において、アミノステロール組成物は、うつ病を処置するために一般に使用される薬物と同時投与または組み合わせることができる。これらには、シタロプラム(Celexa(登録商標)、Celexa (登録商標))、エスシタロプラム(Lexapro(登録商標)、Cipralex(登録商標))、パロクセチン(Paxil(登録商標)、Seroxat(登録商標))、フルオセチン(Prozac(登録商標))、フルボキサミン(Luvox(登録商標)、Faverin(登録商標))、セルトラリン(Zoloft(登録商標)、Lustral(登録商標))、インダルピン(Upstene(登録商標))、ジメルジン(Normud(登録商標)、Zelmid(登録商標))のような選択的セロトニン再取り込み阻害剤(ＳＳＲＩ)；デスベンラファキシン(Pristiq(登録商標))、デュロキセティン(Cymbalta(登録商標))、レボミルナシプラン(Fetzima(登録商標))、ミルナシプラン(Ixel(登録商標)、avella(登録商標))、ベンラファキシン(Effexor(登録商標))などのセロトニン－ノルピネフリン再取り込み阻害薬(ＳＮＲＩ)；ビラゾドン(Viibryd(登録商標))、ボルチオキセチン(Trintellix(登録商標))のようなセロトニン調節薬および刺激薬（ＳＭＳ）；ネファドゾン(Dutonin(登録商標)、Nefadar(登録商標)、Serzone(登録商標))、トラゾドン(Desyrel(登録商標))、エトペリドンのようなセロトニン拮抗薬および再取り込み阻害薬；レボキセチン(Edronax(登録商標))、テニロキサチン(Lucelan(登録商標)、Metatone(登録商標))、ビロキサジン(Vivalan(登録商標))、アトモキセチン(Strattera(登録商標))のようなノレピネフリン再取り込み阻害薬（ＮＲＩ)；ブポロピン(Wellbutrin(登録商標))、アミネプチン(Survector(登録商標)、Maneon(登録商標))、ノミフェンシン(Merital(登録商標)、Alival(登録商標))、メチルフェニデート(Ritalin(登録商標)、Concerta(登録商標))、リスデキサムフェタミン(Vyvanse(登録商標))のようなノレピネフリン－ドーパミン再取り込み阻害薬；アサミトリプチリン(Elavil(登録商標)、Endep(登録商標))、アミトリプチリンオキサイド(Amioxid(登録商標)、Ambivalon(登録商標)、 Equilibrin(登録商標))、コロミプラミン(Anafranil(登録商標))、デシプラミン(Norpramin(登録商標)、Pertofrane(登録商標))、ジベンゼピン(Noveril(登録商標)、Victoril(登録商標))、ジメタクリン(Istonil(登録商標))、ドスレビン(Prothiaden(登録商標))、ドキセピン(Adapin(登録商標)、Sinequan(登録商標))、イミプラミン(Tofranil(登録商標))、ロフェプラミン(Lomont(登録商標)、Gamanil(登録商標))、メリトラセン(Dixeran(登録商標)、Melixeran(登録商標)、Trausabun(登録商標))、トロキサゼピン(Sintamil(登録商標))、ノルトリプチリン(Pamelor(登録商標)、Aventyl(登録商標))、 キシプチリン(Agedal(登録商標)、Elronon(登録商標)、Nogedal(登録商標))、オピプラモール(Insidon(登録商標))、ピプロフェジン(Azafen(登録商標)/Azaphen(登録商標))、プロトリプチリン(Vivactil(登録商標))、トリピプラミン(Surmontil(登録商標))、ブチリプチリンチリン(Evadyne(登録商標))、デメキシプチリン(Deparon(登録商標)、Tinoran(登録商標))、フルアシジン(Phtorazisin(登録商標))、イミプラミキシド(Imiprex(登録商標)、Elepsin(登録商標))、イブリンドール(Prondol(登録商標)、Galatur(登録商標)、Tertran(登録商標))、メタプラミン(Timaxel(登録商標))、プロピゼピン(Depressin(登録商標)、Vagran(登録商標))、キヌプラミン(Kinupril(登録商標)、Kevopril(登録商標))、チアゼシム(Altinil(登録商標))、トフェナシン(Elamol(登録商標)、Tofacine(登録商標))、アミネプシン(Survector(登録商標)、Maneon(登録商標))、チアネプチン(Stablon(登録商標)、Coaxil(登録商標))のような三環系抗うつ剤；アモキサピン(Asendin(登録商標))、マプロチリン(Ludiomil(登録商標))、ミアンセリン(Bolvidon(登録商標)、Norval(登録商標)、Tolvon(登録商標))、ミルタザピン(Remeron(登録商標))、セチプチリン(Tecipul(登録商標))、ミアンセリン、ミルタザピン、セチプチリンのような四環系抗うつ剤；イソカルボキサアジト(Marplan(登録商標))、フェネルジン(Nardil(登録商標))、トラニルシプロミン(Parnate(登録商標))、ベンモキシン(Neuralex(登録商標))、イプロクロジド(Sursum(登録商標))、イプロアジド(Marsilid(登録商標))、メバナジン(Actomol(登録商標))、ニアラミド(Niamid(登録商標))、オクタノキシン(Ximaol(登録商標))、フェニプラジン(Catron(登録商標))、フェノキシプロパジン(Drazine(登録商標))、ピブハイドラジン(Tersavid(登録商標))、サフラジン(Safra(登録商標))、セレジリン(Eldepryl(登録商標)、Zelapar(登録商標)、Emsam(登録商標))、カロキサゾン(Surodil(登録商標)、Timostenil(登録商標))、メトラリンドール(Inkazan(登録商標))、モクロベミド(Aurorix(登録商標)、Manerix(登録商標))、ピルリンドール(Pirazidol(登録商標))、トロキサトン(Humoryl(登録商標))、エプロペミド(Befol(登録商標))、ミナプリン(Brantur(登録商標)、Cantor(登録商標))、ビフェメラン(Alnert(登録商標)、Celeport(登録商標))のようなモノアミンオキシターゼ阻害剤(MAOIs)；アミスルプリド(Solian(登録商標))、ルラシドン(Latuda(登録商標))、クエチアピン(Seroquel(登録商標))のような非定型抗精神病薬；およびケタミン(Ketalar(登録商標))Ｎ-メチルＤ-アスパラギン酸(ＮＭＤＡ)拮抗薬を含む。
肥満を処置および／または予防する方法において、アミノステロール組成物は肥満を処置するために一般に処方される薬物（オルリスタット（Xenical）、ロルカセリン（Belviq）、フェンテルミン－トピラマート（Qsymia）、ナルトレキソン－ブプロピオン（Contrave）、リラグルチド（Saxenda）、フェンテルミン、ベンズフェタミン、ジエチルプロピオン、およびフェンジメトラジンを含むが、これらに限定されない）と同時投与または組み合わせることができる。
組み合わせは、同時に、例えば、混合物として、別々に、しかし同時に、または同時に；または連続的に、のいずれかで投与され得る。これは、組み合わされた薬剤が治療混合物として一緒に投与される手順、および組み合わされた薬剤が別々に、しかし同時に、例えば、同じ個体への別々の静脈ラインを介するように投与される手順を含む。「組み合わせて」投与することは、最初に投与される化合物または薬剤の１つ、続いて２番目の化合物または薬剤を別々に投与することをさらに含む。アミノステロール誘発反応の活性化は、アミノステロールの血流中への全身吸収を必要とせず、したがって、アミノステロールと投与された薬物との間の薬物－薬物相互作用の可能性に対する懸念を排除するため、選択されたレジメンは同時に投与することができる。
ＩＸ．定義
以下の定義は、本明細書を通して使用される特定の用語の理解を容易にするために提供される。
本明細書で使用される技術用語および科学用語は、別段の定義がない限り、当業者によって一般に理解される意味を有する。当業者に公知の任意の適切な材料および／または方法を、本明細書に記載の方法を実施する際に利用することができる。
本明細書中に提供される、組成物、アミノステロールまたは薬剤の「薬理学的に有効な量」または「治療有効量」との用語は、所望の応答を提供するための組成物、アミノステロールまたは薬剤の非毒性であるが十分な量を指す。必要とされる正確な量は、被験体の種、年齢、および全身状態、治療される状態の重篤度、使用される特定の薬物、投与様式などに依存して、被験体ごとに変化する。任意の個々の場合における適切な「有効」量は、本明細書中に提供される情報に基づいて、日常的な実験を使用して、当業者によって決定され得る。単に便宜上、例示的な用量が本明細書に提供される。当業者は、特定の症状または疾患を患う特定の被験体を治療するために、本明細書中に開示される方法に従って、そのような量を調節し得る。治療有効量は、投与の経路および剤形に基づいて変化し得る。
本明細書中で使用される場合、「含む」という用語は、化合物、組成物および方法が列挙された要素を含むが、他を排除しないことを意味することが意図される。「本質的にからなる」とは、化合物、組成物および方法を定義するために使用される場合、その組み合わせにとって本質的に重要な他の要素を除外することを意味するものとする。したがって、本質的に本明細書で定義される元素からなる組成物は、例えば、単離および精製方法ならびに薬学的に許容される担体、防腐剤などから、微量汚染物質を排除しない。「からなる」とは、微量元素以上の他の成分を排除することを意味する。各遷移用語のそれぞれによって定義される実施形態は、本技術の範囲内である。
範囲を含む、質量、温度、時間、および濃度などのすべての数値表示は、１％、５％、または１０％の増分で変化する（＋）または（－）近似である。必ずしも明示的に述べられているわけではないが、全ての数字の指定には、「約」という用語が先行することを理解されたい。
「約」という用語は、当業者によって理解され、それが使用される文脈に依存してある程度変化するであろう。それが使用される文脈を考えると、当業者に明らかでない用語の使用がある場合、「約」は、特定の用語の最大プラスまたはマイナス１０％を意味する。例えば、いくつかの実施形態では、それは特定の用語のプラスまたはマイナス５％を意味する。本明細書では、特定の範囲が示され、数値の前に「約」という用語が付いている。用語「約」は、本明細書では、それが先行する正確な数、ならびにその用語が先行する数に近いか、またはほぼその数に近い数についての文字通りのサポートを提供するために使用される。数が具体的に列挙された数に近いか、またはほぼそうであるかを決定する際に、暗示されていない数に近いかまたは近似する数は、それが提示される文脈において、具体的に引用された数と実質的に同等である数であり得る。
「任意選択的」または「任意選択で」は後述の状況が発生しても発生しなくてもよいことを手段し、したがって、本明細書は、状況が発生する場合と発生しない場合とを含む。
「薬学的に許容される賦形剤または担体」は、本開示の組成物に任意に含まれてもよく、患者に有意な有害な毒物学的影響を引き起こさない賦形剤を指す。
実質的に」または「本質的に」は、ほぼ完全にまたは完全に、例えば、ある与えられた量の９５％以上を意味する。いくつかの実施形態では、「実質的に」または「本質的に」は、95％、96％、97％、98％、99％、99．5％、または99．9％を意味する。
本開示の説明および添付の特許請求の範囲で使用されるように、単数形「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は互換的に使用され、文脈が別段の明確な指示をしない限り、複数形も同様に含み、各意味内に入ることが意図される。また、本明細書で使用される場合、「および／または」は、列挙された項目のうちの１つまたは複数の任意のおよびすべての可能な組合せ、ならびに代替（「または」）で解釈されるときの組合せの欠如を指し、包含する。
本開示の説明および添付の特許請求の範囲で使用されるように、単数形「a」、「an」および「the」は互換的に使用され、文脈が別段の明確な指示をしない限り、複数形も同様に含み、各意味内に入ることが意図される。また、本明細書で使用されるとき、「および／または」は列挙された項目のうちの1つまたは複数の任意のおよびすべての可能な組合せ、ならびに代替（「または」）で解釈されるときの組合せの欠如を指し、包含する。
本明細書中で使用される場合、「アミノステロール」という用語は、ステロールのアミノ誘導体をいう。本明細書中に開示される組成物および方法において使用するための適切なアミノステロールの非限定的な例は、ＥＮＴ－０３（化合物III）を含む。
本明細書で使用される「投与する」という用語は、投与のための処方ならびに実際に投与することを含み、治療される被験体または別の被験体によって物理的に投与することを含む。
本明細書中で使用される場合、「調節ホスファターゼ」または「ホスファターゼ」は、その基質タンパク質のリン酸化されたアミノ酸残基からリン酸基を除去した、当業者に公知の酵素をいう。非限定的な例としては、１型（ＰＰ1）および２型（ＰＰ２すなわち、PP2A、PP2CおよびPP2B）、例えば、PPP1CA、PPP1CB、PPP1CC、PPP2CA、PPP3CA、PPP3CB、PPP3CC、PPP4C、PPP5C、およびPPP6C；クラスICysに基づくタンパク質チロシンホスファターゼ(PTP)；クラスIIICysに基づくPTP；クラスIVCysに基づくDSP（二重特異性ホスファターゼ)；PTP、例えば、PTP1B、CDC14(CDC14A、CDC14B、CDC14C、CDKN3)；ホスファターゼおよびテンシンホモログ、例えばPTEN；スリングショット例えばSSH1、SSH2、SSH3；DUSP1、DUSP2、DUSP3、DUSP4、DUSP5、DUSP6、DUSP7、DUSP8、DUSP11、DUSP12、DUSP13、DUSP14、DUSP15、DUSP16、DUSP18、DUSP19、DUSP21、DUSP22、DUSP23、DUSP26、DUSP27、DUSP28などのなどの二重特異性ホスファターゼ；およびCTDP1、CTDSP1、CTDSP2、CTDSPL、DULLARD、EPM2A、ILKAP、MDSP、PGAM5、PHLPP1、PHPLPP2、PPEF1、PPEF2、PPM1A、PPM1B、PPM1D、PPM1E、PPM1F、PPM1G、PPM1H、PPM1J、PPM1K、PPM1L、PPM1M、PPM1N、PPTC7、PTPMT1、SSU72、UBLCP1、PP1B、PP1A、PP2α/PP2R1A複合体、PTPN6/SHP1、PTPRC/CD45、DUSP22/MKPX、PTPN2/TC-PTP、PTPN7/LC-PTP、PTPN12/PTP-PEST、PTPN1/PTP1B-CD、PTPN11/SHP2、PTPN11/SHP2-FL、およびPTPN11/SHP2-FL(E76K)を含むタンパク質Ser／Thrホスファターゼが挙げられる。
本明細書で使用される「被験体」、「患者」、または「個体」は、任意の被験体、患者、または個体を指し、これらの用語は、本明細書において互換的に使用される。この点に関して、「被験体」、「患者」および「個体」という用語は、哺乳類、特にヒトを含む。「それを必要とする」と併せて使用される場合、「被験体」、「患者」、または「個体」という用語は、特定の症状または疾患を有するか、またはその危険性がある任意の被験体、患者、または個体を意味する。
「治療」、「治療する」、またはそれらの任意の変形の用語は、（ｉ）１つ以上の特定の症状および／または（ｉｉ）特定の疾患の１つ以上の症状または影響を軽減、改善、または排除することを含む。「予防する」、「予防する」、またはそれらの任意の変形の用語は、（ｉ）１つ以上の特定の症状および／または（ｉｉ）特定の疾患の１つ以上の症状または影響を発症するリスクを低減、改善、または排除することを含む。
「プロドラッグ」は、投与後に、薬理学的に活性な薬物、例えばＥＮＴ－０３（化合物III）に代謝される（すなわち、体内で変換される）薬物または化合物である。いくつかの実施形態において、プロドラッグは、アルコールおよび／またはカルボン酸塩がエステル化されている、ＥＮＴ－０３の誘導体（化合物III）を含む。
「任意に置換された」とは、その群から選択される基およびその基の置換された形態をいう。「置換された」基は、化学置換基で置換された基を指し、例えば、Ｃ－Ｈ結合の、そのＣと置換基との間の結合による置換である。一実施形態では、置換基が、例えばＣＦ３、ＯＣＦ３、ハロ、ハロアリール、Ｃ１－Ｃ６アルコキシ、アシル、プロピオニル、ブチル（butyrl）、アシルアミノ、アシルオキシ、アミノ、置換アミノ、アミノカルボニル、アミノチオカルボニル、アミノカルボニルアミノ、アミノチオカルボニルアミノ、カルボキシルエステル、カルボキシルエステルアミノ、（カルボキシルエステル）オキシ、ハロアルキル、アリールオキシ、ハロアルコキシ、ヒドロキシル、チオール、ジヒドロキシ、アミノヒドロキシ、カルボキシ、アミド、スルホキシ、スルホニル、ハロアリールオキシ、アリール、ベンジル、ベンジルオキシ、ヘテロアリール、ニトリル、Ｃ１－Ｃ６アルキル、Ｃ１－Ｃ６アルケニル、Ｃ１－Ｃ６アルキニル、Ｃ３－Ｃ６シクロアルキル、Ｃ１－Ｃ６ハロアルキル、Ｃ１－Ｃ６ハロアルケニル、Ｃ１－Ｃ６ハロアルキニル、Ｃ３－Ｃ６ハロシクロアルキル、Ｃ６－Ｃ１０アリール、Ｃ３－Ｃ８シクロアルキル、Ｃ２－Ｃ１０ヘテロシクリル、Ｃ１－Ｃ１０ヘテロアリール、－Ｎ３、ニトロ、－ＣＯ２ＨまたはそのＣ１－Ｃ６アルキルエステル、ならびにこれらの組合せから選択される。
本明細書で使用される「誘導体」は例えば、化合物III、ＩＩＩ－Ｐ、ＩＶ、およびＩＶ－P、またはそれらの塩もしくは溶媒和物を指す。ＥＮＴ－０３（化合物III）の「誘導体」はまた、ＥＮＴ－０３（化合物III）の重水素化誘導体、例えば、本明細書中に開示されるＥＮＴ－０３－ｄ４およびＥＮＴ－０３－ｄ３を指し得る。
Ｘ． 実施例
実施例１：タンパク質チロシンホスファターゼ１Ｂ(ＰＴＰ１Ｂ）の阻害剤としてのＥＮＴ－０３（化合物III）の活性
この実施例は、ＥＮＴ－０３（化合物III）およびＥＮＴ－０２（MSI－１４３６）のPTP１B阻害活性を試験した。また、その構成を有するアミノステロール誘導体であるD7－１４３６（D－１４３６）の阻害活性の比較データも含まれる。
Figure 2022543242000085
ＥＮＴ－０２（MSI－１４３６）、ＥＮＴ－０３（化合物III）、およびＤ－１４３６を、10mMのストック濃度までジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解した。既知のＰＴＰ１Ｂ阻害剤、３－（３，５－ジブロモ－４－ヒドロキシ－ベンゾイル）－２－エチル－ベンゾフラン－６－スルホン酸－（４－（チアゾール－２－イルスルファミル）－フェニル）－アミド(Wiesmannら、2004）を対照として用いた。化合物を、100μMから始めて、一重項で3倍連続希釈した１０投与IC50様式で試験した。本酵素はヒト切断型（1‐321）であり、大腸菌で組換え生産された。蛍光を測定して酵素活性をモニターした。ホスファターゼ活性を、蛍光基質からの蛍光シグナルの増加の時間経過測定としてモニターし、勾配の初期直線部分（シグナル／分）を分析した。評価を妨害し得る蛍光バックグラウンドを示す化合物はなかった。
試験した３つのアミノステロール（図４A）および対照化合物（図４B）についてＩC50曲線を作成した。曲線適合は、化合物の最高濃度での活性が６５％未満であった場合に行った。
表２に見られるように、すでにＰＴＰ１Ｂを抑制することが知られているＥＮＴ－０２（MSI‐１４３６）は 2．89μMのＩC50を示し、ＥＮＴ－０３（化合物ＩＩＩ）は1．03μMのＩC50を示し、D‐１４３６は2．09μMのIC50を示し、対照PTP1B化合物は2．47μMのIC50を示した。
Figure 2022543242000086
多くの他のホスファターゼに対するＥＮＴ－０３およびＥＮＴ－０６の活性も調査した。両方の化合物を、ヒトホスファターゼに対してインビトロで評価した（表２Ｂおよび２Ｃ）。２つの化合物は、それらの対応するＩC50に関して非常に類似したホスファターゼ「指紋」を示した。これらの結果は、ＥＮＴ－０３とトロズスクエミンが系統発生化学的オルソログであるという仮説を強く支持する。化合物はＰＰ１Ａ、ＰＰ１Ｂ、ＰＰ２Ａα，ＰＴＰＮ６、ＰＴＰＮ２で不活性であった。
Figure 2022543242000087
Figure 2022543242000088
これらのデータはＥＮＴ－０３（化合物III）がＰＴＰ１Ｂの強力な阻害剤であり、ＰＴＰ１Ｂ阻害剤と関連することが知られている潜在的な治療的有用性を有することを実証する。
実施例２：マウスの体重減少剤としてのＥＮＴ－０３（化合物III）
この実施例は、マウスにおけるＥＮＴ－０３（化合物III）による体重減少の促進を実証した。
ＥＮＴ－０２（MSI－１４３６）は、食欲を制御する特定の脳回路が関与する機構を介して体重減少を誘発することが知られている。トロズスクエミンは、マウスに全身的に投与された場合、体重減少および脂質酸化への変化を引き起こす。薬理学的標的は、脳室内投与後の放射性トロズスクエミン、およびc－Fos活性化の局在に基づいて、弓状核、正中隆起、および室傍核を含む視床下部内にあるようである（Ahimaら、2002）。
体重減少に関するＥＮＴ－０２の構造活性関係に関する研究はこの薬理学的効果に必要とされる高度の構造特異性を実証した（Zasloffら、2001）。例えば、Ｃ－３のスペルミン、Ｃ－７のヒドロキシル、またはＣ－２１のメチルのキラリティーを変化させると、体重減少が排除される。スペルミンがスペルミジンに置き換わっている場合や、スペルミンの末端アミノ基がメチル化されている場合には、活性が失われる。対照的に、Ｃ－２４における硫酸塩の両方の立体異性体は等しく活性であり、空間的拘束が、ＥＮＴ－０３について観察された活性と一致して、アニオン性部分の周りで緩和されることを実証する。
ＥＮＴ－０３（化合物III）が同様の活性を示したかどうかを決定するために、予め自由に与えた雄スイスウェブスターマウス（各群について約50グラム、N＝3）を、ＥＮＴ－０２（MSI－１４３６）またはＥＮＴ－０３（化合物III）のいずれかの５用量で、10mg／kgで1日おきに、例えば、０、２、４、６、８および１０日目に腹腔内処置した。食物は自由に与えた。
図１Ａ、１Ｂおよび２に見られるように、ＥＮＴ－０３投与は、ＥＮＴ－０２の投与後に見られるのと同様の動力学で体重減少を生じる。両方の化合物の投与は体重の減少をもたらし、約１６日目に最低値を示し、その後、約４５日目までに開始体重に徐々に回復した。体重の最初の減少は両方の化合物について同様であったが、約１０日までに効果は異なり、ＥＮＴ－０２はより重篤な減少を引き起こした。27日までに、処置マウスの両方のセットは、それらの出発体重の約１０％を失った。
これらのデータは、ＥＮＴ－０３（化合物III）がＥＮＴ－０２（MSI－１４３６）と同様の体重に関して薬理学的応答を示すことを実証し、ＥＮＴ－０３（化合物III）がＥＮＴ－０２（MSI－１４３６）ならびに他のアミノステロールと関連することが知られているすべての治療適用において有用性を有し得ることを示唆する。
第２の実験では、成長中の雄マウス（約25グラム）に、同様の投薬レジメンに従って、いずれかの化合物を投与した。前の実験と同様に、両方の化合物は体重増加に影響を及ぼした。図２参照。しかし、増殖マウスの場合、ＥＮＴ－０２はより深刻な効果を有し、増殖を抑制し、ならびに体脂肪の消費を誘導した。ＥＮＴ－０３で処置した動物は正常な成長を続けたが、それらは「スリムダウン」し、ＥＮＴ－０３が新たな最適体重「設定点」を再確立したことを示唆した。
第３の実験では、図１Ｃに示すように、C57bl／6雄マウスにＥＮＴ－０３を週１回、６週間にわたって腹腔内投与すると、用量依存的な体重減少が認められた。体重減少以外は、投与群の動物は臨床的に正常であるように思われた。
最後に、第４の実験において、図１４に見られるように、ＥＮＴ－０３（3mg／kg、5mg／kg、10mg／kg、またはビヒクル）のC57bl／6雄マウスへの２週間にわたる週１回の腹腔内投与は、用量依存性の体重減少を引き起こした。体重減少以外は、投与群の動物は臨床的に正常であるように思われた。
これらの研究は、ＥＮＴ－０３（化合物III）がＥＮＴ－０２と同様に、マウスにおいて強力な薬理学的活性を示すことを実証する。
実施例３：腸管におけるＲＮＡトランスクリプトームの若返り
本実施例の目的は、ＥＮＴ－０２およびＥＮＴ－０３（化合物III）の経口投与の、老化した腸組織に対する影響を評価することであった。
加齢には、消化管における遺伝子発現の枯渇が関与している。若齢マウス（20週齢、図３Ａ）と老齢マウス（78週齢、図３Ｂ）の胃の粘膜組織を示す画像を比較すると、老齢の標本では粘膜層の厚さが減少していることがわかる。この粘膜の減少は、老齢マウス（78週齢）対若齢マウス（20週齢）の胃におけるＲＮＡトランスクリプトームの減少と関連している。以下の表３を参照のこと。本実施例は、ＥＮＴ－０１およびＥＮＴ－０２の経口投与および老齢マウスに対する影響を評価した。
経口投与されたスクアラミンおよびＥＮＴ－０２が若齢および老齢マウスのＧＩ管に及ぼす影響を明らかにするために用いた投与スケジュールは、以下のとおりであった。２０週齢および７８週齢の雄Ｃ５７Ｂｌ／６マウスを、Jackson labsから入手した。動物を１２時間の明暗サイクルに暴露し、Teklad標準マウス食餌および水を自由に与えた。動物を、表３に示す処置群に割り当てた。
Figure 2022543242000089
動物に、朝、経口強制経口投与により、合計14日間、１日１回投与した。動物は投与前３～４時間、投与後１時間以上絶食させ、絶食は６時間を超えないこととされた。被験物質を水中0．5％ヒドロキシプロピルセルロースに溶解した。１５日目に、動物をＣＯ2窒息により安楽死させ、剖検し、組織学およびＲＮＡシークエンシング解析のために組織を調製した。
動物の消化管を胃、十二指腸、空腸、回腸、盲腸、結腸、直腸に切片化した。その後、組織学的検査のために組織を送付し、ＲＮＡシークエンシングによりトランスクリプトームを分析した。表４は、若齢および老齢マウス胃におけるそれぞれのmRNA量を示す。
以下の表５Ａに示すように、表中のすべての遺伝子のｍＲＮＡレベルは、スクアラミン（ＥＮＴ－０１）による処理後に有意な増加を示した。同様に注目すべきことは、ＥＮＴ－０３が老齢マウスの消化管のこれらのセグメントのトランスクリプトームの誘導を刺激する一方で、若齢動物ではごくわずかな抑制または老化とは関連しない特定の遺伝子の誘導に対応して、ごくわずかな影響しか及ぼさないことである。おそらくＥＮＴ－０３は、若い動物には存在しない老齢マウスの欠損を補完しているのであろう。このことは、スクアラミン（ＥＮＴ－０１）、および拡張により構造的に関連するアミノステロール、例えばＥＮＴ－０３（化合物III）およびその誘導体が腸において若返り効果を有することを示唆する。
Figure 2022543242000090
Figure 2022543242000091
Figure 2022543242000092
Figure 2022543242000093
出願人は、また、GI管の各セグメント内のトランスクリプトーム変化を調べた。老齢マウスに経口投与すると、胃、空腸、回腸の加齢とともに減少する遺伝子転写産物の量が図６Ａ－６Ｃに示すように、若い個体で観察されるレベルまで、場合によっては増加する。
若齢（20週）および老齢（80週）のC57bl／6雄マウスに、ＥＮＴ－０３（40mg／kg）またはビヒクル（水）を２週間毎日強制経口投与した。この間、消化管の肉眼的および顕微鏡的検査と同様に、臨床所見に特記すべき所見は認められなかった。胃、空腸および回腸のトランスクリプトームをＲＮＡシークエンシング技術により分析した。未処理動物の転写産物の比較分析により、老齢個体と若齢個体の対応する組織間で存在量が異なる多数の転写産物が同定された。異なる状態が観察され、86の胃転写物（p（adj）＜0．05）：70は減少し、16は加齢とともに増加した；空腸の場合、400以上の転写物は減少し、200は加齢とともに増加した；回腸の場合、700の転写物は減少したが、400は加齢とともに増加した。従って、マウスGI管のこれらの３つの異なる領域内で、老化はトランスクリプトームの変化に関連する。
ＥＮＴ－０３の経口投与による組織のトランスクリプトームへの影響を調べたところ、いずれの場合も老齢動物に比べて若齢動物の転写応答が鈍化していることが観察された（図６Ａ－６Ｃ）。例えば、処理した若齢動物の胃では、１３の遺伝子が差次的に発現したが（p（adj）＜0．05）、６３は老齢群であった。同様に、空腸についても４２遺伝子が若齢群で、382遺伝子が加齢群で処理時に差次的に発現した。回腸では、ＥＮＴ－０３で処理した老齢動物において、若齢動物では８０遺伝子、老齢動物では1162遺伝子が異なって発現した。
次に、加齢に伴って差次的に発現した遺伝子セット（ＤＥＧ）を、処理老齢動物または処理若齢動物で差次的に発現した遺伝子セットと比較した。例えば、老化（老齢対若齢）でダウンレギュレートされた胃３７遺伝子は、老齢マウスでＥＮＴ－０３処理によりアップレギュレートされた遺伝子と有意に重複した(P <0．0001、超幾何学的試験）。対照的に、胃の老化遺伝子と若いＥＮＴ－０３処理胃のそれらの間の唯一の有意な重複は、老化方向でさらにダウンレギュレートされた１２の遺伝子であった。
ＥＮＴ－０３が胃内で最も有意に相補すると思われる「老化」遺伝子を表５Ｂに挙げる。特に、胃において、「回復した」老化遺伝子は、組織更新（線維芽細胞成長因子２；ジンクフィンガータンパク質383；フォークヘッドボックスC2）；ニューロン分化（神経細胞接着分子2）；免疫（トール様受容体9および12；インターロイキン2受容体、ベータ鎖）、神経伝達物質合成および取り込み（コリンおよびセロトニントランスポーター）、およびミトコンドリア呼吸（チトクロームｃオキシダーゼサブユニット6B2）に関与する遺伝子を含む。
Figure 2022543242000094
まず、若齢マウスと老齢マウスの間で発現が有意に変化する遺伝子を同定した（FDR調整p値＜0．05）（図６Ａ）。加齢に伴い、胃の75遺伝子の発現が有意に減少し、11遺伝子の発現が有意に増加しました（図６Ａ）。一方、若齢および老齢マウスの空腸（図１０Ａ－１０Ｄ）または回腸（図１０Ｄ－１０Ｆ）の遺伝子発現プロファイルの間には、より少ない差が観察された。空腸では加齢に伴い5遺伝子が発現減少し、2遺伝子が発現増加した。一方、回腸では19遺伝子が減少し、9遺伝子が発現増加した。これらの結果は老化したげっ歯類胃の認識された減少した再生能力（Fukunagaら、1998）、および小腸の老化に伴う回復力（Eswaranら、2006）と一致する。
若齢マウス（20週）にＥＮＴ－０３を経口投与すると、13個の胃遺伝子が応答し、すべてＥＮＴ－０３処理により転写抑制された（図６Ｂ）。若齢および老齢マウスの両方について、空腸および回腸におけるＥＮＴ－０３曝露に応答して２つ以下の遺伝子の発現が有意に変化した。
対照的に、胃における遺伝子発現に対するより強固な効果は、ＥＮＴ－０３で処置した老齢動物（78週）で観察された。６３遺伝子が転写誘導された（FDR調整p＜0．05）（図６Ｃ）。興味深いことに、老齢マウスのＥＮＴ－０３投与で発現が増加した遺伝子のうち３６は、老化に伴って発現が減少したのと同じであった。これらの遺伝子には、組織の更新に関わるもの（ファイバラスト成長因子2（Fgf2）、亜鉛フィンガーたんぱく質382（Zfp382）およびフォークヘッドボックスC2（Foxc2））、神経分化に関わるもの（ニューラルセル接着分子2（Ncam2））；免疫において（トール様受容体9および12（Tlr9、Tlr12）；インターロイキン受容体連鎖（Il2rb）およびベータ連鎖（CD300（CD300ld））において；神経トランスミッターの合成と取り込み（コリンとセロトニントランスポーター（Slc5a7、Slc6a4））において；ミトクロドリアル呼吸(シトクロームオキシターゼｃサブユニット6B2（Cox6b2））において；が含まれる。
RNA配列決定データの統計分析は、Ｒプログラミング言語を用いて行った。各組織の全てのサンプルにおいて、100万回の読み取りあたり1回未満の読み取りカウントを有する転写物を除去した。次いで、サンプルの生カウントデータを、M値の正規化のトリミングされた平均を使用して正規化し、ブームで変換し（ロー（Law）ら、2014）、関連する精度重みを有する100万当たりのlog2変換カウントを得た。正規化されたデータは、サンプル群間で有意に異なる遺伝子が同定される統計的仮説検定のための入力を提供する。統計的比較はBioconductor package limma(Ritchieら、2015）において実施されるように、線形モデリングを使用して行った。有意値（ｐ値）を、Benjamini-Hochberg手順（Benjaminiら、1995）を使用して、複数の試験について調整した。各比較（例えば、群Ａ対群Ｂ）について、正のlog2変換倍率変化は、群Ｂに対する群Ａにおけるアップレギュレーションを示す。
対比間の重複を調べるために、実施した比較のすべての対組み合わせ間で重複する差次的発現遺伝子（調整p値＜0．05を用いて定義）の数を計数した。各比較について、和集合上の交差として定義されるジャッカードインデックスは、考慮中の２つの対比間の類似性を測定する。p値は、対比および遺伝子が独立であるという仮定の下で宇宙サイズを考慮に入れている超幾何学的検定を用いて計算した。
図１１は、対比の対の間の差次的に発現される遺伝子の重複を調査するヒートマップのセットを示す。
これらのデータは、老齢マウスへのＥＮＴ－０３の経口投与がＧＩ管内での加齢に伴う遺伝子発現の変化のいくつかを逆転できるという仮説を支持する。
実施例４：静脈内および経口投与によるＥＮＴ－０３（化合物III）の薬物動態試験
本実施例の目的は、雄ＳＤラットにおける静脈内および経口投与によるＥＮＴ－０３（化合物III）の薬物動態プロファイルを決定することであった。
研究の群を以下の表６に示す。
Figure 2022543242000095
動物の摂餌管理：動物は、投与前に一晩絶食させ、投与４時間後に自由に水を摂取させて給餌した。
投与中の用量製剤処理：用量製剤を室温で撹拌し続け、２時間以内に使用した。
Figure 2022543242000096
Figure 2022543242000097
Figure 2022543242000098
Figure 2022543242000099
Figure 2022543242000100
Figure 2022543242000101
Figure 2022543242000102
ＰＫ試料分析：血漿および用量試料中のＥＮＴ－０３（化合物III）の濃度を、LC－MS／MS方法を用いて分析した。WinNonlin（Phoenix(登録商標）、Ver．6．1）などの類似ソフトウエアを用いて、薬理学的計算を行った。血漿中濃度対時間データから可能な限り、以下の薬物動態パラメータを算出した。
ＩＶボーラス管理：T1/2、Ｃ0、ＡＵＣlast、ＡＵＣinf、ＭＲＴinf、Ｃｌ、Ｖｓｓ、回帰点数。
ＰＯ管理：Ｆ、T1/2、Ｃmax、Ｔmax、ＡＵＣinf、ＡＵＣlast、ＭＲＴinf、回帰点数。
薬物動態データは、平均値及び標準偏差等の記述統計量を用いて記載した。全ての残留生物学的サンプルを、試験後６ヶ月間、フリーザー（－75±15℃）中に保持した。結果を以下の表１４に示す。
Figure 2022543242000103
実施例５：ＥＮＴ－０３の調製のための合成方法
この実施例は、本明細書中に記載される化合物を作製する合成方法を記載する。
ＢＤＧ－５の調製
Figure 2022543242000104
ＢＤＧ－４（370．54g、916．3mmol）をジクロロメタン（DCM、3，600mL）に溶解し、p－トルエンスルホン酸水和物（36．27mmol、0．04当量）と共にエチレングリコール（210mL、3．77mol、4．11当量）で処理した。反応が完了するまで混合物を還流した（70：30ヘキサン：アセトン中のＴＬＣは、変化しない約3～5％の残留出発物質を示した）。約4時間還流した後、混合物を冷却し、10％炭酸カリウム（150mL）で処理し、層を分離した。ＤＣＭを800mLの5％塩化ナトリウム溶液および10mLの10％重炭酸カリウム溶液で再抽出した。２つの水層を500mLのＤＣＭで逆抽出した。合わせたＤＣＭ抽出物を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、ＤＣＭ(2×100mL）で洗浄し、真空下で濃縮して固体を得、これをトリエチルアミン（2mL）を含有するアセトニトリル（4．8L）中で55℃で1時間、次いで35℃で1時間、最後に12℃で2時間スラリー化した。生成物を濾過し、トリエチルアミン（0．1mL）を含有する冷アセトニトリル（2×100mL）で洗浄した。結晶を減圧炉（0．2mm）中で50℃で一晩乾燥させて、BDG－5（351．0g、85％）を得た；融点は175．6～177．5℃（約140℃から2℃／分で）であった；１ＨＮＭＲ (500 MHz, ＣＤＣｌ3) δ 3.93 (m, 4H), 3.82 (br s, 1H), 3.61 (m, 2H),1.97-1.84 (m, 4H), 1.7-1.0 (m, 22H), 0.93 (d, 3H, J = 7 Hz), 0.81 (s, 3H), 0.66(s, 3H); 13ＣＮＭＲ (ＣＤＣｌ3) δ 109.3, 67.9,64.15, 64.13, 63.5, 56.0, 50.6, 45.6, 42.6, 39.51, 39.48, 37.5, 36.3, 36.1,35.7, 35.6, 35.5, 31.8, 31.2, 29.4, 28.2, 23.6, 20.9, 18.6, 11.8, 10.4。
ＢＤＧ－６の調製
Figure 2022543242000105
水素化アルミニウムリチウム（7．44g、196．05mmol、ペレット）を無水THF(435mL）に窒素下で添加し、20℃で一晩撹拌してペレットを粉砕した。懸濁液を10℃に冷却し、ＢＤＧ－５の溶液（77．57g、172．91mmol）を160分かけて滴下した。混合物をさらに1時間撹拌し、酢酸エチル2mLを添加し、続いて20％水酸化カリウム水溶液（7．44mL）を10分間かけて滴下することによってクエンチした。混合物は非常に濃厚になり、次いで薄くなり、20℃で15時間さらに撹拌しながら、より顆粒状になった。混合物をCelite（登録商標）545を通して濾過し、アルミニウム塩を除去した。ろ過ケーキをＴＨＦ(5×90mL）で洗浄して、すべての生成物がろ液中に得られることを確実にし、これを濃縮して、粗ＢＤＧ－６（82．01g、理論＝72．7g）を得た。より大きな実際的実験ではＴＨＦ、溶液を濃縮乾固し、ＤＣＭで再濃縮して、次の工程の前に微量の水分を除去した；１ＨＮＭＲ (500 MHz, CDCl3) δ 3.93 (m, 4H),3.82 (br s, 1H), 3.61 (m, 2H), 1.97-1.84 (m, 4H), 1.7-1.0 (m, 22H), 0.93 (d,3H, J = 7 Hz), 0.81 (s, 3H), 0.66 (s, 3H); 13C NMR (CDCl3)δ109.3, 67.9, 64.15, 64.13, 63.5, 56.0, 50.6, 45.6, 42.6, 39.51, 39.48, 37.5,36.3, 36.1, 35.7, 35.6, 35.5, 31.8, 31.2, 29.4, 28.2, 23.6, 20.9, 18.6, 11.8,10.4。
ＢＤＧ－７の調製
Figure 2022543242000106
ＢＤＧ－６ （214．55g、510．1mmol）をＤＣＭ(3．0L）に溶解し、4－ジメチルアミノピリジン（250．3g、2．048mol）、次いで塩化ベンゾイル（180mL、217．98g、1．551mol）で滴下処理した。約40mLの塩化ベンゾイルを添加した後、31℃までの発熱が認められた。添加の残りの間、温度を25℃に保持し、合計35分を要した。溶液を25℃で一晩撹拌し、ＤＣＭ(200mL）で希釈し、10％重炭酸カリウム水溶液（2L）で処理して、少量の二酸化炭素を生成した。層を分離し、水層をＤＣＭ(500mL）で再抽出した。全有機層を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濃縮して、ＢＤＧ－７を固体として得た（163．6g、100％）。実際には、より大きな実験においては、ジベンゾエート溶液を次の工程に適した体積に濃縮した。1Ｈ ＮＭＲ(500 MHz,ＣＤＣｌ3) δ 8.07 (d, 2H,J = 8 Hz), 8.00 (d, 2H, J = 8 Hz), 7.57 (t, 1H, J = 8 Hz), 7.53 (t, 1H, J = 8Hz), 7.47 (t, 2H, J = 8 Hz), 7.41 (t, 2H, J = 8Hz), 5.16 (br s, 1H), 4.25 (m,2H), 3.87 (m, 4H), 2.02-1.85 (m, 2H), 1.8-1.1 (m, 22H), 0.95 (d, 3H, J = 7 Hz),0.88 (s, 3H), 0.68 (s, 3H); 13Ｃ ＮＭＲ(ＣＤＣｌ3) δ 166.7, 166.0,132.8,131.1, 130.5, 129.7, 129.5, 128.4, 128.3, 109.0, 71.9, 65.5, 64.2, 64.1,55.8, 50.7, 47.2, 42.8, 39.5, 38.6, 37.4, 37.2, 35.7, 35.5, 35.3, 33.3, 32.0,31.2, 28.0, 25.2, 23.6, 21.1, 18.6, 11.8, 10.5。
ＢＤＧ－８の調製
Figure 2022543242000107
ＢＤＧ－７（22．13kg、35．2mol）を、25 ℃の1：1テトラヒドロフラン：メタノール溶液（220 L）に溶解し、脱イオン水（11 L）中の50％水酸化ナトリウム（3．7L、70．4mol、2．0当量）の溶液で処理し、4時間撹拌した。反応混合物のアリコート（0．1mL）を酢酸エチル（各0．5mL）と1M重炭酸カリウム溶液との間で分配した。有機層をＴＬＣ(70：30ヘキサン：アセトン）で分析し、反応が完了したと判断した。脱イオン水（23L）、96％硫酸（3．7L、66．6モル）、および45％水酸化カリウム（5．7L、66．7モル）を混合することによって、重硫酸カリウムの水溶液を調製した。得られた重硫酸カリウム溶液を、スプレーボールを介して反応混合物に最終pH8．39（pHメーター）まで添加した。混合物を約60L容量まで真空蒸留し、酢酸エチル（100L）および水（100L）で処理した。２相混合物を10分間撹拌し、層を約20分間分離した。水相を酢酸エチル37Lで再抽出した。全酢酸エチル層（約160L）を50℃で80Lの体積まで真空濃縮した。さらに50Lの酢酸エチルを加え、溶液を無水硫酸ナトリウム（15kg）で一晩撹拌して乾燥させた。溶液をCelite（登録商標）545で濾過して、硫酸ナトリウムを除去した。フィルターケーキおよび反応器を2×37Lの酢酸エチルでリンスした。乾燥した酢酸エチル溶液を約225L容量から40Lまで真空濃縮した。アセトニトリル（50L）を加え、溶液を再蒸留して酢酸エチルを除去した。第2および第3バッチのアセトニトリル（50および100L）を添加し、蒸発させた。最後に、100Lのアセトニトリルを添加し、この溶液を3×104Lのヘキサンで向流抽出して、安息香酸メチルの大部分を除去した。３つのヘキサン抽出物を、第２の104Lのアセトニトリルで再抽出した。
ヘキサン層は、ＢＤＧ－８中間体についてＴＬＣによってチェックしたが、存在しなかった。アセトニトリル（約300L）を真空濃縮して約50L容量とした。イソプロパノール（57L）を添加し、約50Lまで濃縮した。この操作をさらに2回繰り返して、すべてのアセトニトリルを除去した。体積をイソプロパノールで100Lに調整し、溶液を0℃に徐冷し、結晶性ＢＤＧ－８を播種して結晶化を開始した。混合物を－20℃に一晩ゆっくりと冷却した。結晶スラリーを－20℃のジャケット付きフィルターを通して濾過し、10Lの－20℃イソプロパノールですすいだ。フィルターケーキを－20℃で数時間真空乾燥し、続いてフィルターをゆっくり室温（約18℃）に温め、次いで温窒素で乾燥して、11．92kgのＢＤＧ－８を得た。母液をクロマトグラフィーにかけて、さらなる生成物を単離した。シリカゲルカラム（19kg）を塩化メチレンに充填した。生成物の濾液を真空濃縮乾固し、1／2を塩化メチレン中でカラムに添加した。塩化メチレン（ＤＣＭ）100Lで溶離して生成物を得た。カラムを20Lの85：15塩化メチレン：酢酸エチル、次いで20Lの60：40塩化メチレン：酢酸エチルでフラッシュし、最後に塩化メチレン（40L）に戻した。
母液の第2の1／2を同様にクロマトグラフィーにかけて、全部で5．32kgの純粋なＢＤＧ－８を得た（ＢＤＧ－８の全収率：17．24kg、93．3％）。1Ｈ ＮＭＲ (500 MHz, ＣＤＣｌ3) δ 8.07 (d, 2H, J = 8 Hz), 7.57 (t, 1H, J = 7 Hz), 7.48(t, 2H, J = 7 Hz), 5.15 (br s, 1H), 3.88 (m, 4H), 3.56 (br s, 2H), 2.02-1.84(m, 2H), 1.75-0.98 (m, 24 H), 0.92 (d, 3H, J = 6.5 Hz), 0.88 (s, 3H), 0.67 (s,3H). 13Ｃ ＮＭＲ (ＣＤＣｌ3) δ 166.0, 132.7,131.0, 129.7, 128.4, 109.0, 71.9, 64.2, 64.1, 63.5, 55.8, 50.7, 47.2, 42.7,39.5, 38.6, 37.3, 37.2 35.7, 35.5, 33.3, 31.7, 31.3, 29.3, 28.0, 23.6, 21.1,18.6, 11.8, 10.5。
化合物１の調製
Figure 2022543242000108
窒素下の50Lジャケット付き反応器に、臭化カリウム（250g、2．23mol）、重炭酸ナトリウム（265g、3．15mol）、および水（5L）を装入し、－5℃ジャケットで撹拌および冷却した。反応器に、～13Lのジクロロメタンに溶解したＢＤＧ－８（5．32kg、10．14mol）を添加し、続いて8Lのジクロロメタンでリンスした。温度が5℃未満になったとき、マンホールを通してＴＥＭＰＯ(50g、0．286モル）を加えた。次に、反応器に12．5％漂白剤（5．5kg）をポンプで充填し、5℃未満に保ち、必要な漂白剤の追加量を推定するために試料を採取した。反応が完了したと判断されるまで（＜2%ＢＤＧ－８が残っている；合計6．2kgの漂白剤を添加した）、定期的にサンプリングしながら、漂白剤を少量ずつ添加し続けた。水（1L）中のチオ硫酸ナトリウム（200g）の溶液を、負のデンプン／ヨウ化物試験が得られるまで激しく撹拌しながら添加した。ヘキサン（20L）を撹拌しながら反応器に添加し、層を沈降させた。下側の水相を排水し、有機層を飽和重炭酸カリウム水溶液（5L）で洗浄した。有機相を、焼結ガラス濾過漏斗中の硫酸ナトリウム／シリカゲル（各1kg）のパッドを通して真空濾過し、ヘキサン／ジクロロメタン（1／1）、ジクロロメタン、および最後にジクロロメタン中の5％メチル－t－ブチルエーテル（ＭＴＢＥ）ですすいだ。合わせた濾液を、ブチ装置中、40℃のヘキサンで２つのバッチで蒸発させ、濃厚なスラリーが形成されるまで、ヘキサンをそれぞれのバッチに添加し、再度蒸発させた。固体を濾過し、ヘキサンで洗浄し、真空オーブン中で乾燥させて、化合物１（4．58kg）を得た。濾液および洗浄液を合わせ、濃縮して第２のクロップを得、これを濾過し、5%ＭＴＢＥ／ヘキサン、次いでヘキサンで洗浄し、乾燥させて、別の565gの製品1を得て、総収量5．145kg(収率97％）となった。
この原料は約1．5％の残留出発原料を含有したが、検出可能な（ＮＭＲ）カルボン酸は含有しなかった。1Ｈ ＮＭＲ (500 MHz, CDCl3) δ 9.72 (s, 1H),8.07 (d, 2H, J = 7 Hz), 7.59 (t, 1H, J = 7 Hz), 7.49 (t, 2H, J = 7 Hz), 5.16(br s, 1H), 3.88 (m, 4H), 2.45-2.27 (m, 2H), 2.00-1.85 (m, 2H), 1.78-1.17 (m,22H), 0.913 (d, 3H, J = Hz), 0.88 (s, 3H), 0.68 (s, 3H). 13Ｃ ＮＭＲ (ＣＤＣｌ3) δ 203, 166, 132.8,131.0, 129.8, 128.4, 109, 72.0, 64.17, 64.11, 55.7, 50.7, 47.2, 42.8, 40.8,39.5, 38.6, 37.3, 37.2, 35.7, 35.5, 35.4, 33.3, 31.2, 27.9, 27.8, 23.7, 21.1,18.3, 11.7, 10.5。
化合物２の調製：
Figure 2022543242000109
ホスホネート（A、3．69g、15mmol）を無水テトラヒドロフラン（100ml）に加え、塩氷浴中で冷却して～0oCとし、カリウムtert－ブトキシド（1．72g、15mmol）を窒素下で激しく磁気攪拌しながら加え、30分間攪拌した。化合物1（8．0g、15mmol）を添加し、テトラヒドロフラン（80mL）に溶解し、氷浴を除去し、反応物を一晩室温に温めた。約16時間後、合計でヘキサン／酢酸エチル（50／50、400mL）と水（400mL）との間で分配することによって反応を後処理した。有機層を追加の水（100ml）で洗浄し、有機層をＮａ2ＳＯ4で乾燥させ、濾過し、溶剤を真空中で除去した。残渣を最少量のヘキサン／酢酸エチル（3／1）に再溶解し、シリカゲルのプラグ（～3×9インチ）に通した。
次いで、溶離液を回転蒸発させて、さらなる精製、1Ｈ ＮＭＲなしで次の工程に利用するのに十分な純度の化合物２（8．3g、12．4ミリモル、83％）を得た。1ＨＮＭＲ (ＣＤＣｌ3, 300 MHz) δ8.10- 8.07 (m, 2H), 7.60 - 7.57 (m, 1H), 7.52 - 7.47 (m, 2H), 6.7, 5.9 (t, 1H),5.17 (m, 1H), 4.21 - 4.12 (m, 2H), 3.92 - 3.88 (m, 4H), 2.06 (s, 3H), 2.2 - 1.0(m, 29 H), 0.95 (d, 3H, J = 7 Hz), 0.90 (s, 3H), 0.69 (s, 3H)； ＭＳ(ＥＳ+) 485.45 (Ｍ-Ｃ7Ｈ7Ｏ2+Ｈ)。
化合物３の調製：
Figure 2022543242000110
化合物２（8．25g、13．5ミリモル）を無水エタノールに溶解し、Ｃ上の10%Ｐｄ (400mg）をＮ2下でパル瓶（500ml）に加えた。フラスコをバキュームとＮ2で２回フラッシュし満たし、次いで50psiで24時間水素化した。水素の取り込みはほぼ停止するまで遅くなったが、ＴＬＣはごく痕跡量の出発物質を示した。追加の触媒（400mg）を添加し、反応をさらに１２時間放置した。
触媒のろ過および溶媒の減圧除去により、飽和生成物、化合物３（8．25g、13．5mmol）を定量収率で得た。1Ｈ ＮＭＲ(ＣＤＣｌ3、300MHz）δ8.09- 8.06 (m, 2H), 7.58 - 7.56 (m, 1H), 7.55 - 7.45 (m, 2H), 5.16 (m, 1H), 4.12 -4.05 (m, 2H), 3.90 - 3.85 (m, 4H), 2.39 - 2.36 (m, 1H), 2.0-1.0 (m, 35 H), 1.11(d, 3H, J = 7Hz), 0.88 (s, 3H), 0.67 (s, 3H)； ＭＳ(ＥＳ+) 487.46。
化合物４の調製：
Figure 2022543242000111
化合物３（8．2g、13．5mmol）を3／1／1テトラヒドロフラン／メタノール／1MＫＯＨ(～100mL）に溶解し、エチルエステルの加水分解がＴＬＣによって完了したように思われるまで撹拌した。これらの条件下では、安息香酸塩加水分解の証拠はなかった。溶液を1M塩酸溶液で中和し、蒸発させて有機溶媒を除去し、アセトン（～100mL）で処理し、再び蒸発させてメタノールを確実に除去した。アセトン（～250mL）をフラスコに添加し、3M ＨＣｌを添加して、pH紙により1～2の範囲に登録されるポイントまでpHを低下させた。ケタールの加水分解を室温で一晩行い、次いで水をフラスコに加え、アセトンの大部分を真空中で除去した。材料を酢酸エチルと水との間に分配し、次いで有機層をブラインで洗浄した。有機相を真空中で乾燥させて、これをさらに精製することなく、十分な純度で化合物４（6．36g、11．9ミリモル、87％）を得た。1 Ｈ ＮＭＲ(ＣＤＣｌ3, 300 MHz) δ 8.05 - 8.02 (m, 2H), 7.60 -7.57 (m, 1H), 7.51 - 7.45 (m, 2H), 5.21 (m, 1H), 2.4-1.0 (m, 32 H), 1.15 (d,3H, J = 7 Hz), 1.09 (s, 3H), 0.91 (d, 3H, J = 7 Hz), 0.67 (s, 3H); ＭＳ (ES+) 415.52 (ＣＤＣｌ3, 300 MHz) δ 8.05 - 8.02 (m, 2H), 7.60 -7.57 (m, 1H), 7.51 - 7.45 (m, 2H), 5.21 (m, 1H), 2.4-1.0 (m, 32 H), 1.15 (d,3H, J = 7 Hz), 1.09 (s, 3H), 0.91 (d, 3H, J = 7 Hz), 0.67 (s, 3H); MS (ES+)415.52 (M-C7H7O2+H)。
化合物５の調製：
Figure 2022543242000112
化合物4（3．5g、6．5mmol）をメタノール（100mL）に溶解し、メタノール（～10mL）中のスペルミン（5g、24．8mmol）で処理した。混合物を室温で2時間撹拌し、その後、２－プロパノール（100mL）を添加し、溶媒の大部分を真空中で除去した。残渣をメタノール（200mL）に再溶解し、一晩撹拌した。イソプロピルアルコール（200mL）を加え、混合物を蒸発させて濃厚な残渣を得た。残渣を無水メタノール（200ml）に溶解し、溶液をＮ2下でドライアイスアセトン浴中で激しく磁気撹拌しながら冷却した。内温が－74℃に達したとき、ＮａＢＨ4（1．89g、50mmol）を追加した。温度をドライアイスアセトン浴で約4時間維持し、次いで一晩室温にした。反応混合物を、pH紙がpH2～3の範囲を示すまで、水中10％トリフルオロ酢酸で注意深く酸性化した。水を混合物に加え、混合物を特大フラスコに移し（回転蒸発で混合物の泡立てを可能にするため）、メタノールの大部分を真空中で除去した。得られた溶液をアンバークロムに直接適用し、アミノステロールが溶出するまで（～60％アセトニトリル）、0．5%ＴＦＡを含む水中アセトニトリルの段階勾配（1増分あたり10％増分500mL）で溶出した。勾配は、全てのアミノステロールが溶出するまで、このポイントで保持した。
アミノステロールを含む画分を分析し、比較的清浄な画分をプールし、凍結乾燥して、化合物５を、さらなる精製なしで続けるのに充分な純度のテトラ－ＴＦＡ塩（～4．5g、3．8ミリモル）として得た。1Ｈ ＮＭＲ(CD3OD, 300 MHz) δ8.05 - 8.02 (m,2H), 7.66 - 7.60 (m, 1H), 7.54 - 7.49 (m, 2H), 5.17 (m, 1H), 3.36 - 3.04 (m,13H), 2.37 (m, 1H), 2.1-1.0 (m, 39 H), 1.10 (d, 3H, J = 7 Hz), 0.95 (m, 6H),0.74 (s, 3H)；ＭＳ（ＥＳ+) 723.78 (Ｍ+Ｈ)。
ＥＮＴ－０３（化合物III）の調製：
Figure 2022543242000113
化合物5（3．0g、2．5ミリモル）を5％メタノール性水酸化カリウム（40ml）に添加し、該溶液をN2下110℃で２日間撹拌し、ＴＬＣ(6：3：1クロロホルム、メタノール、濃ＮＨ4 ＯＨ）でモニターした。２日後、室温まで冷却し、減圧蒸発させ、Ｈ2Ｏ（40ml）に溶解した。次に、この溶液を6M ＨＣｌで酸性化し、白色沈殿を穏やかに加熱し撹拌しながら溶液中に押し戻した。該溶液をアンバークロムの大きな塔に注ぎ、Ｈ2Ｏ（350mL）、10％、15％および25％アセトニトリル／水の増分（500mL）で洗浄した。２５％溶液の1カラム体積が通過するとすぐに、化合物は溶出し始めた。回収した画分（４０mL）をＬＣ／ＭＳにより分析して、３－α副生成物を分離し、これは所望の３－β生成物の直後にカラムから出た。いくらかの共溶出があったが、材料のかなりの部分がきれいに剥がれた。
これらの画分を合わせ、一晩凍結乾燥して、テトラ－ＨＣｌ塩としてのＥＮＴ－０３（化合物III）（1．31g、1．7ミリモル、68％）を得た。1ＨＮＭＲ（ＣＤ3ＯＤ、300MHz） δ3.80 (br s, 1H), 3.20 - 3.05 (m, 13H), 2.37 (m, 1H), 2.2-1.0 (m, 36H), 1.13 (d, 3H, J = 7 Hz), 0.93 (d, 3H, J = 7 Hz), 0.87 (s, 3H), 0.69 (s, 3H)。ＥＮＴ－０３を、以下の条件下で、ＨＰＬＣ(Waters Acquity ELSD)によって純度について分析した：移動相Ａ：水中0．1％ギ酸；移動相Ｂ：アセトニトリル中0．1％ギ酸；カラム： Kinetex XB－C18（2．1×75mm、1．7μm）；勾配：5～95％／8分、保持95% B/1分；流量0．6mL／分；ＥＬＳＤ検出器；保持時間：1．96分および99．9％ピーク面積。ＥＮＴ－０３を質量分析(Waters Acquity TQD) によって分析した；移動相Ａ： 0．1％ギ酸水溶液；移動相Ｂ： 0．1％ギ酸アセトニトリル；カラム：Kinetex XB－C18（2．1×75mm、1．7μm）；勾配：5～95％／8分、95% B/l分を保持；流速：0．6ml／分；ＭＳ(ＥＳ＋、Ｍ＋Ｈ)：計算値 619．55；実測値：619．31。
ＥＮＴ－０３－ｄ３の調製：
Figure 2022543242000114
化合物1（2．6g、5mmol）をテトラヒドロフラン（ＴＨＦ、50mL）に溶解し、クエン酸ナトリウム／クエン酸緩衝液～0．5M（100mL）上で撹拌した。亜塩素酸ナトリウム（900mg、10mmol）を脱イオン（ＤＩ）水（20mL）に溶解し、氷浴冷却しながらアルデヒド溶液に添加した。わずかに黄色が観察され、そしてＴＬＣ（ＳｉＯ2、ヘキサン中15%ＥｔＡｃ)は、20分以内に酸への迅速な転化を示した。酢酸エチル／ヘキサン50／50（100mL）を添加し、水を除去し、有機層を水、10％チオ硫酸塩溶液、およびブラインで洗浄して、さらなる精製なしに満足な純度の所望の生成物１１（2．7g、5mmol、100％）を得た。
Figure 2022543242000115
化合物１１（2．6g、4．9ミリモル）をＮ－メチルピロリドン（ＮＭＰ、25ml）に溶解し、無水Ｋ2ＣＯ3（～2g）を加え、窒素下で20分間撹拌した。ヨードメタン（2．8g、20mmol）を一度に加え、反応物を窒素下で一晩撹拌した。反応は、化合物１２への完全な変換をほぼ定量的な収率（2．6g、4．9mmol）で示した。
化合物１２（1．3g、2．3mmol）を無水ＴＨＦ(30mL）に溶解し、無水塩化リチウム（～1g）を加えた。この溶液を40℃に温め、窒素下で撹拌した。ＮａＢＤ4のＥｔＯＤ溶液を500mgバッチ（2×3ml）で、ＮａＢＤ4をＥｔＯＤに室温で溶解し、次いで冷却してアルコキシホウ水素化物による分解を防止することによって調製した。ＮａＢＤ4液を少しずつ時間をかけて（４時間）添加し、次いで50℃に加温し、窒素下で一晩撹拌した。反応物を水で希釈し、50／50ヘキサン／酢酸エチルで抽出した。オーガニック複数層をＮａ2ＳＯ4の上で乾燥させ、バキュームに集中させた。残渣を、ヘキサン中25％酢酸エチルを用いるシリカゲルクロマトグラフィーにかけて、所望の化合物１３を白色固体として得た（1．1g、2．0mmol、87％）。
化合物１３（1．0g、1．9mmol）をジクロロメタン（50mL）に溶解し、活性化4Å篩（～1g）および４－メチルモルホリンＮ－オキシド（500mg、4．3mmol）で処理し、室温で10分間撹拌した。過ルテニウム酸テトラプロピルアンモニウム（～40mg）を反応物に添加し、撹拌を室温で一晩窒素下で続けた。これにより、ＴＬＣによる非標識化合物１と一致する単一の生成物が得られた。1Ｈ ＮＭＲは、予想通りアルデヒドプロトンを示さなかった。
Figure 2022543242000116
トリエチルホスホノプロピオネート（500mg、2．0mmol）をＥｔＯＤに溶解し、接触ナトリウムエトキシドを添加し、２時間撹拌し、反応混合物をストリッピングして、酸性メチレンプロトンの大部分を重水素と交換した。ホスホネートを無水ＴＨＦ(30mL）に添加し、窒素下、0℃で30分間、カリウムｔ－ブトキシド（225mg、2．0mmol）で処理した。アルデヒド14（1．0g、1．9mmol）を、ＴＨＦ（～5mL）中0℃でリンスしながら一度に添加した。氷浴を除去し、反応混合物を室温で一晩流した。反応混合物は比較的迅速にわずかに濁り、おそらく1～2時間で行われる。反応混合物をヘキサン／酢酸エチル50／50（～100mL）と水との間で分配し、次いでブラインで洗浄した。有機層をＮａ2ＳＯ4で乾燥し、溶剤を真空で除去した。比較的清浄な原料を、ヘキサン酢酸エチル勾配を用いてシリカゲル上でクロマトグラフィーにかけて、化合物１５（860mg、1．4mmol、74％）を得た。
Figure 2022543242000117
不飽和エステル１５（860mg、1．4mmol）を20%ＥｔＯＤを含有する酢酸エチルに溶解し、窒素下で触媒（炭素上10%Ｐｄ、～100mg）で処理した。反応物をパージし、重水素ガスで再充填し、次いで、500mLのパルシェーカーボトル中に40PSIまで充填した。室温で一晩撹拌すると、圧力がわずかに低下した。さらに８時間後、さらなる取り込みは観察されなかったので、反応混合物をパージし、窒素で３回充填し、Celite（登録商標）を通して吸引濾過した。濾液を真空中で蒸発させて、化合物１６（850mg、1．4mmol、100％）を得た。
Figure 2022543242000118
化合物３のＥＮＴ－０３（化合物III）への変換について記載したのと同じ手順を用いて、化合物１６をＥＮＴ－０３－ｄ３に変換した。1Ｈ ＮＭＲ (Ｄ2Ｏ、400MHz） δ 3．90(br s、1H）、3．06－3．01 （m、13H）、2．0－1．0 （m、34 H）、1．02 （s、3H）、0．80(br s、3H）、0．73 （s、3H）、および 0．57 （s、3H）。ＥＮＴ－０３－ｄ３を、以下の条件下でＨＰＬＣ(Agilent)によって純度について分析した：移動相Ａ：水中0．1％ギ酸；移動相Ｂ：アセトニトリル中0．1％ギ酸；カラム: Kinetex XB－C18（2．1×75mm、1．7μm）；勾配：5～95％／8分、保持95%Ｂ; 0．6ml／分流量; ＥＬＳＤ検出器；保持時間：4．93および95．5％ピーク面積。ＥＮＴ－０３－ｄ３をＬＣ/ＭＳ(Waters Aquity HPLC－ZQ MS)；移動相Ａ：水中0．1％ギ酸；移動相Ｂ：アセトニトリル；カラム：Waters XBridge C18（4．6×50mm、3．5μm）によって分析した。流速：1．1mL／分。MS (ＥＳ＋、Ｍ＋Ｈ)：計算値：622.57；実測値：622.60。
ＥＮＴ－０３－ｄ４の調製：
化合物４（2．14g、4．0ミリモル）をＭｅＯＤ(50mL）に溶解し、Ｄ2Ｏ中の10%Ｋ2ＣＯ3を添加した（10mL）。混合物を窒素下で還流しながら16時間撹拌した。溶媒を真空下で除去し、残渣をＭｅＯＤ(50mL）に再懸濁し、還流下で8時間撹拌した。ＴＬＣによる唯一の変化は脱保護されたＣ－７ヒドロキシルの小さなアンマウントの出現であり、これは問題ではなかった。溶媒を真空中で除去し、化合物２１をＭｅＯＤ(50mL）に再懸濁した。スペルミン（2．1g、10mmol）を、メタノール撹拌中に5分間溶解させることによってＭｅＯＤ(3×10mL）と交換し、次いで溶媒を真空中で除去した。ＭｅＯＤの最終部分を添加し、スペルミン溶液を交換されたステロールに添加し、混合物を室温で一晩撹拌した。溶媒を真空中で除去し、残渣をＭｅＯＤ(50mL）に再懸濁した。この溶液を室温で約9時間撹拌した後、ドライアイスアセトン浴中で40分間冷却した。固体ＮａＢＨ4（740mg、20ミリモル）を固体として約15分間隔で２回に分けて添加した。浴にドライアイスを入れ、一晩室温に温めた。約14時間の反応時間での反応の薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ、ＳｉＯ26／3／1ＣＨＣｌ3／ＭｅＯＨ／ＮＨ4ＯＨ）は、出発物質を示さず、ごく僅かの化合物２０の３－ヒドロキシルの徴候を示した。反応物を脱イオン（ＤＩ）水で希釈し、pH紙（pH＜2）で強酸性になるまでトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）でゆっくり酸性化した。これにより濃厚な白色沈殿が得られ、これを濾過し、水中0．5% TFAで洗浄し、次いでＭｅＯＨ中5%ＫＯＨ(100mL）に溶解し、窒素下で一晩還流した。一晩還流した後、Ｃ７－安息香酸塩加水分解はＴＬＣによって完了した。メタノールの大部分を真空中で除去し、材料をＤＩＨ２Ｏで希釈した。材料をアンバークロム充填カラム（5×20cm）に直接適用し、強塩基性部分が溶出するまで水で洗浄した。次いで、カラムを、溶離液が酸性になるまで、水中の1%ＴＦＡおよび5％アセトニトリルで洗浄した。工程勾配を5％工程で実施し、ＴＬＣにより最も清浄な原料を含有する画分をプールし、溶媒の大部分を溶媒除去の終わり近くで真空中で除去した。
6N ＨＣｌの溶液（1mL）を添加し、溶媒を除去して、TFAをＨＣｌに交換した。これを３回繰り返し、２－プロパノール（100mL）を添加し、迅速にストリッピングして、ＥＮＴ－０３－ｄ４の清浄画分中に自由流動性白色固体（700mg、0．96mmol、全収率24％）を得た。1Ｈ ＮＭＲ (Ｄ2Ｏ、400MHz）δ 3．77(br s、1H）、3．06－2．99 （m、13H）、2．36 （m、1H）、2．0－1．0 （m、33 H）、1．05 （d、3H）、0．84(br s、3H）、0．73 （s、3H）、および0．57 （s、3H）。ＥＮＴ－０３－ｄ４を、以下の条件下でＨＰＬＣ(Agilent)によって純度について分析した：移動相Ａ：水中0．1％ギ酸；移動相Ｂ：アセトニトリル中0．1％ギ酸；カラム：Kinetex XB－C18（2．×75mm、1．7μm）；勾配：5～95％／8分、保持95%Ｂ；0．6ml／分流量；ELSD検出器；保持時間：4．94および100％ピーク面積。ＥＮＴ－０３－d4をＬＣ/ＭＳ(WatersAquity HPLC－ZQ MS)；移動相Ａ：水中0．1％ギ酸；移動相Ｂ：アセトニトリル；カラム：Waters XBridge C18（4．6×50mm、3．5μm）によって分析した。流速：1．1mL／分。MS (ＥＳ＋、Ｍ＋Ｈ)：計算値：623．58；実測値：623．31。
実施例６：ＥＮＴ－０３（化合物III）は、マウスにおけるアルツハイマーを逆転させる
PTP１B依存性機構は、アルツハイマー病のβアミロイドおよびタウマウスモデルにおいて、記憶障害の逆転および行動の正常化ならびにニューロン損失の減少のために利用されている（Ricke、Cruz ら、2020）。他の研究はインビトロおよびアルツハイマー病の線虫モデルにおけるトロズスクエミンによるβアミロイド凝集体の毒性の減少を示した（Limbocker、Chiaら、2019）。
ＥＮＴ－０２（MSI‐１４３６）は、メタボリックシンドローム、アルツハイマー病、アテローム性動脈硬化症、癌、および再生修復能力の低下など、加齢に関連するいくつかの状態（マウスでの）を逆転させる。本報告で示したように、ＥＮＴ－０３はマウスモデルにおいてアルツハイマー病を治療することができる。
Morris water maze wawsaは、ファミリアルアルツハイマー病の２つのマウスモデルにおける空間学習および記憶欠損に及ぼすＥＮＴ－０３の影響を試験するために使用された；ヒトアミロイド前駆蛋白質（Muckeら、2000）の二重ミュータントを発現するhAPP－J20マウス、およびヒト微小管関連蛋白質タウのP301Sミュータントを発現するＰＳ１９マウス（Yoshiyamaら、2007）である。
スウェーデンとインディアナの家族的なミューテーション（B6.Cg－Zbt20Tg（PDGFB－APPSwInd）20Lms／2Mmjax（Mucke他、2000））を持つヒトＡＰＰを発現するhAPP－J20マウス、およびヒトタウたんぱく質のP301Sのミューテーション（B6；C3－Tg（Prnp－MAPT＊P301S）PS19Vle/J(Yoshiyamaら、2007）））を発現するPS19マウスは、ジャクソン研究所から購入され、オタワ大学の動物施設のコロニーとして維持された。ヘテロ接合性hAPP－J20およびPS19マウスを使用した。遺伝子型は、尾または耳の生検から単離したゲノムDNAを用いたPCRにより検証した。
臨床グレードＥＮＴ－０３（Enterin, Inc.製）は、生後4．5ヵ月から開始し、2．5mg／kg体重の用量で週1回（i．p．）、6週間腹腔内投与した。最終注射の10日後に行動実験を行った。ビヒクル処理対照には、無菌食塩水（水中0．9%ＮａＣｌ)を与えた。
Morris水迷路試験は、オッタワ大学医学部行動コア研究所において、不透明な水を含むプール内の水中プラットフォームの位置を学習し、記憶するマウスの能力を分析するために行われた。80cm2のプラットホーム表面は、総プールエリアの0．6％に相当する。マウスを実験室に慣らし、昼から午後4時の間に連続実験を行った。マウスを５日間訓練し（１日当たり４回の試行、20分の試行間隔および４つの位置のうちの１つにおけるランダムな開始位置）、固定された位置で不可視の水中プラットフォームを見出した。プール周辺のキューは、空間参照として提供された。試験は、１分間、またはマウスがプラットフォームを見つけるまで続けた。プラットフォームが見つからなかった場合には、マウスをプラットフォームに導いた。マウスはケージに移す前に、各試行の15秒間プラットフォーム上にとどまった。訓練期間後、プラットフォームをプールから取り出し、翌日1分以内に調査試験を実施した。調査日に、プラットフォーム領域と標的四分円との交差を計数し、Ethovision自動ビデオ追跡ソフトウェア（Noldus）を用いて水泳速度を測定した。
両方の疾患モデルにおいて、一方はアミロイドパシーを有し、他方はタウオパシーを有し、訓練段階（図５Ａおよび５Ｅ）および調査日の記憶（図５Ｂ、５Ｃ、５Ｆおよび５Ｇ）の間の学習は、ビヒクル投与hAPP－J20またはPS19同腹仔コントロールマウスと比較して、ＥＮＴ－０３投与で改善された（図５）。認知低下の予防に対する影響は、関連化合物トロズスクエミンhAPP－J20およびPS19マウスで観察されたものと同様である（リッケら、2020）。
特に、Morris水迷路試験は、６週間にわたるＥＮＴ－０３処置（2．5mg／kg／週、i．p．）が訓練相（図５Ａおよび５Ｅ）の間にhAPP－J20マウスのための隠れたプラットフォームを見つけるための潜伏時間を減少させ、そして改善された記憶（プラットフォームが位置する領域での交差（図５Ｂおよび５Ｆ）および調査日のプラットフォーム領域での時間（図５Ｃおよび５Ｇ）を明らかにする。（図５Ｄおよび５Ｈ）遊泳速度。図５Ａは、反復測定二元配置ＡＮＯＶＡ：遺伝子型／処置、F（3，42）＝13．47、p＜0．0001；時間、F（4，168）＝23．45、p＜0．0001；一致（被験体）、F（42，168）＝4．420、p＜0．0001；相互作用、F（12，168）＝3．458、p＝0．0001；＊、Veh WTとVeh APP-J20との間の事後ペアワイズ比較、2、3、4、5：それぞれp＝0．0073、0．0101、＜0．0001、＜0．0001；＃、Veh APP-J20とＥＮＴ－０３ hAPP－J20との間の事後ペアワイズ比較、4、5：p=0．0260、0．0298。図５Ｂ、双方向ANOVA：遺伝子型、F（1，42）＝10．44、p＝0．0024；治療、F（1，42）＝4．509、p＝0．0396；相互作用、F（1，42）＝3．625、p＝0．0638；＊、Veh WTとVeh APP-J20との間の事後比較、p＝0．0020、およびVehとＥＮＴ－０３ hAPP－J20との間のp＝0．0487。図５Ｃ、双方向ANOVA：遺伝子型、F（1，41）＝9．977、p＝0．0030；投与、F（1，41）＝4．149、p＝0．0482；相互作用、F（1，41）＝1．570、p＝0．2173。＊、Veh WTとVehhAPP-J20との事後比較、p＝0．0080、Veh APP-J20とＥＮＴ－０３ hAPP－J20との事後比較、p＝0．0032。図５Ｄ、双方向ANOVA、遺伝子型、F（1，42）＝10．95、p＝0．0019；治療、F（1，42）＝1．352、p＝0．2515；相互作用、F（1，42）＝0．1378、p＝0．7123。図５Ｅ：遺伝子型／治療、F（3，45）＝11．90、p＜0．0001；時間、F（4,180）＝29．09、p＜0．0001；被験体（マッチング）、F（45，180）＝2．780、p＜0．0001；相互作用、F（12，180）＝2．325、p＝0．0087；＊、Veh WTとVehAPP-J20との事後対比較、2日目、3日目、4日目、5日目： p=0．0143、＜0．0001、0．0037、＜0．0001；＃、Veh APP-J20とＥＮＴ－０３ hAPP－J20との事後対比較、4日目：p=0．0111。図５Ｆ、双方向ANOVA：遺伝子型、F（1，45）＝5．413、p＝0．0245；処理、F（1，45）＝16．87、p＝0．0002；相互作用、F（1，45）＝3．630、p＝0．0631；＊、Veh WTとVehAPP-J20との間の事後比較、p＝0．0236、およびVeh hAPP-J20とＥＮＴ－０３ hAPP－J20との間の事後比較、p＝0．0004。図５Ｇ、双方向ANOVA：遺伝子型、F（1，45）＝4．829、p＝0．0332；処置、F（1，45）＝6，861、p＝0．0120；相互作用、F（1，45）＝4．500、p＝0．0394。＊, Veh WTとVeh hAPP-J20との事後比較、p＝0．0201、およびVeh hAPP-J20とＥＮＴ－０３ hAPP－J20との事後比較、p＝0．0064。図５Ｈ、双方向ANOVA、遺伝子型、F（1，45）＝4．572、p＝0380；処置、F（1，45）＝0．6015、p＝0．4421；相互作用、F（1，45）＝0．0090、p＝0．9249。
実施例７：ヒトおよびマウス仔脳におけるＥＮＴ－０３の検出
1992年に、Nagataらは高濃度の胆汁酸、７－αヒドロキシ－３－オキソ－４－コレステノイン酸（７－ＨＯＣＡ）、ヒト慢性硬膜下血腫液（図１Ｃ)(Nagataら、1992）、およびその後の急性くも膜下出血（Nagataら、1995）を同定した。1997年に、Zhangらはラット脳細胞が２７－ヒドロキシコレステロールを７－ＨＯＣＡに代謝し得ることを報告した（Zhangら、1997）。続いて、Bjorkhem、Sjovall、Griffithsおよびそれらの共同研究者は７－HOCAがヒト脳脊髄液中で最も豊富な胆汁酸であることを同定した（Ogundareら、2010；Meaneyら、2007；Saeedら、2014；Saeedら、2014）。７－ＨＯＣＡは胆汁酸およびオキシステロールが既知のリガンドであるFXR、LXR、またはRXR／NURR1受容体のいずれも活性化しなかったという点で、生物学的に活性な胆汁酸であるとは思われなかった（Ogundareら、2010）。Bjorkhemは脳が末梢から７－ＨＯＣＡに入った２７－比土ロキシコレステロールを代謝して、オキシステロールの循環血液中への逆流を促進すると提唱している（Meaneyら、2007年）。
出願人は、硬膜下血腫液中のＥＮＴ－０３の存在がこの構造の発生におけるその可能な役割を反映していることを示唆した。頭部損傷に続いて、一般に老齢者およびまれに乳児において、高度に血管化された嚢様「器官」が発達し、一方の側は硬膜（「外膜」）に由来し、他方はくも膜下（「内膜」）に由来する（Yamashimaら、2000）。ＶＥＧＦを含む多数の増殖因子の高濃度が流体内に蓄積する（Edlmannら、2017）。ＥＮＴ－０３は頭蓋内損傷を修復する試みにおいて硬膜下血腫内に出現することを示唆した。これに関連して、産道を通過した後に頭蓋内外傷を経験し、硬膜下出血および実質出血を来した健康な新生児が一般的に無症候性に回復する理由を推測したいと考えるかもしれない（Looneyら、2007年）。
ヒト試験
慢性硬膜下血腫液中の化合物Ｉａ（７－ＨＯＣＡ）の既知の高濃度のために、出願人は、ＥＮＴ－０３の存在についてＬＣ／ＭＳ／ＭＳを介して慢性硬膜下を有する3人の老齢患者から排出された流体を分析した。
患者番号１：66歳男性、３週間の歩行不安定、頭痛、微細運動困難。2．2cm右側の亜急性硬膜下血腫（ＳＤＨ）を伴うＣＴで、有意な腫瘤効果／正中偏位を認めた。ドレナージの適応は大きく、症候性ＳＤＨであった。ドレナージ処置は、ＳＤＨの除去のための右側開頭術であった。
患者番号２：３週間前に転倒した75歳の男性。頭痛悪化、歩行不安定、左下肢脱力を2～3日呈した。両側亜急性ＳＤＨ(右1．7cm、左側1．6cm）を伴うＣＴ。ドレナージの適応は大きく、症候性ＳＤＨであった。ドレナージ手術はベッドサイドツイストドリル孔頭蓋瘻術であった。
患者番号３： 94歳の男性で、進行性の錯乱／精神状態の変化／歩行不安定が認められた。精査の結果、2．5～3．0cmの大きさで、腫瘤効果／脳圧迫を伴う、慢性硬膜下血腫上の両側性の亜急性が示された。ドレナージの適応は大きく、症候性ＳＤＨであった。ドレナージ手術はベッドサイドツイストドリル孔頭蓋瘻術であった。
脳抽出物を、ＥＮＴ－０３についてLC／MS／MSを介して分析した。図７Ａは、脳抽出物中のＥＮＴ－０３の存在を示す。図７Ｂは、合成ＥＮＴ－０３の参照サンプルを示す。
マウス仔試験
これらの報告に基づき、出願人は、ＥＮＴ－０３の存在について、生後２週間にわたって新生マウスからの脳、肝臓、および腎臓の抽出物を分析した。３－オキソ－胆汁酸はヒト胎児発生の最後の三半期の間に羊水内の非共役胆汁酸の18～40％を構成し（Nakagawaら、1990）、健康な新生児尿中の胆汁酸の有意なパーセンテージとして存在し、出生後の最初の月の間に徐々に減少する（Wahlenら、1989およびKimuraら、1999）。新生仔期には３－オキソ－胆汁酸が豊富に存在することから、出願人は新生仔マウスにおける推定上のポリアミン－胆汁酸分子の探索に焦点を当てた。脳および肝臓抽出物を、ＥＮＴ－０３をその物理的特性に基づいて以下のように捕捉するように設計されたプロトコールを用いて、１日目から24日目までの間のマウスから調製した。
凍結した新生児マウスをLayne Laboratoriesから入手し、組織を凍結状態で切開した。組織を凍結状態で切開した：「ピンキー」（1d）；「大きなピンキー」（2～5d）；「小さなファジー」（6～9d）；「大きなファジー」（10～14d）；「ホッパー」（15～18d）；「小さな凍結」（18～24d）。組織（0．5～7g）を0．12N塩酸を含む4容量のメタノール中に入れ、80℃で５時間加熱した。組織を軟化させ、続いて短時間の遠心分離を行った。上清を回収し、空気流下で体積を減少させ、１体積のクロロホルム／１体積のメタノールで抽出した。上相の体積を減少させ、サンプルをＬＣ／ＭＳ／ＭＳによってさらに分析した。
合成ＥＮＴ－０３をＬＣ／ＭＳ／ＭＳ分析における内部標準として使用して、クロマトグラフィー分析内の対応する分子の局在化および同定を可能にした。
ＥＮＴ－０３（化合物III）は、新生仔マウスの脳と肝臓で検出できた（それぞれ図８Ａと８Ｂ）。内因性ＥＮＴ－０３の同一性は、その保持時間、質量（［M＋H+ ]m/z =619．6）、および質量545．57（図１３Ａ）および474．39（図１３Ｂ）の特徴的なフラグメントのＭＳ/ＭＳ ＭＲＭによって確立された。生後最初の３週間にわたって新生児マウスの脳および肝臓において測定されたＥＮＴ－０３（化合物III）のおよその濃度を図９に示す。脳、肝臓ともに出生時に最高濃度を示し、以後３週間かけて徐々に低下する。
分析手順：組織抽出物をＥＮＴ－０３－ｄ4でスパイクし、機器制御用のAnalyst（登録商標）1．7．1ソフトウエアを使用して、ExionLC(商標)LC(SCIEX、RedwoodCity、CA）を備えたTriple Quad 5500MS／MS系で分析した。
組織マトリックス成分からのＥＮＴ－０３（化合物III）の分離は、Kinetex（登録商標）5μm C18 100Å 50×2．1mmクロマトグラフィーカラム（Phenomenex、Torrance、CA、USA）を用いて達成した。カラムを25℃に維持し、流速は0．3mL／分であり、注入容量は10μLであった。移動相（ＭＰ）は、Ａ：水中0．1％ギ酸およびＢ：アセトニトリル中0．1％ギ酸（ＡＣＮ、v／v）からなった。移動相勾配は注入後、80％のＭＰＡを有する初期条件を0．3分間保持し、1．7分で70％に低下させ、0．5分で50％に低下させ、0．5分間一定に保持し、再平衡化時間のさらに3．5分間初期条件に戻した。
ＥＮＴ－０３（化合物III）の保持時間は約2．3分であり、全ランタイムは７分であった。ターボイオンスプレーインターフェイスをイオン源として使用し、陽イオンモードで動作させた。収集は、m／z 619．6 （［M＋H］+） → 545．5 （74．1 （Ｃ3Ｈ10Ｎ2） の損失とm／z 619．6 （［M＋H］+） → 474．4 （単位分解能で145．2 （Ｃ7Ｈ19Ｎ3）の損失） を使用して、多重反応監視（ＭＲＭ）モードで実行された。内部標準は、m／z 623．6 （［M＋H］+） → 549．5 またはm／z 623．6 （［M＋H］+） → 478．5 のＭＲＭを使用したＥＮＴ－０３－ｄ４であった。イオンスプレー電圧は4500V、衝突エネルギーは55（619．6／474．5）または43（619．5／545．5）Vで、デクラスタリング電位は70Vであった。衝突ガスは窒素であり、イオンスプレー温度は650℃であった。ＭＲＭ転移は、X500 QTOFシステム（SCIEX）上の高分解能ＭＲＭを使用して、10ppm以下の質量誤差で確認した。
ＥＮＴ－０３（化合物III）組織レベル推定のために、内標準に対するＥＮＴ－０３クロマトグラフィーピーク面積比から、そして決定係数（r2）、個々のキャリブレーターの逆算濃度、および切片値の最小化を含む適合度基準に基づいて選択された（1／x2）重み係数を用いた線形回帰を用いて、検量線を作成した。
実施例８：ＥＮＴ－０５および調節性ホスファターゼ阻害
本実施例の目的は、ＥＮＴ－０５による調節ホスファターゼの阻害を評価することであった。
ＥＮＴ－０５を合成し、調節ホスファターゼのバンクに対して評価した。
Figure 2022543242000119
ＥＮＴ－０５はポリアミンおよびC12上の水酸基の存在に関してＥＮＴ－０３（化合物III）とは異なり、以下の表１５Ａおよび１５Ｂに示すように、癌原遺伝子PTPN11（E76K）に対して大きな特異性を有する阻害活性を示す。
Figure 2022543242000120
Figure 2022543242000121
Figure 2022543242000122
ＥＮＴ－０６はＥＮＴ－０３とは、スペルミジンをスペルミンに置き換えた点で異なる。ＥＮＴ－０６は、ヒト調節ホスファターゼに対して以下の阻害活性を示す（表１６Ａおよび１６Ｂ）。
Figure 2022543242000123
Figure 2022543242000124
この実施例に見られるように、スペルミンの代わりにスペルミジンを置換しても、ＥＮＴ－０３の阻害プロフィールは変化しない。この実施例はまた、ＥＮＴ－０５上のC－１２部分（上記）が、ヒト調節ホスファターゼに対する分子の特異性を劇的に変化させることを教示する。
評価使用したホスファターゼ：評価に供したのは、Recation Biology Inc.からのものであった：PTPN11／SHP2－FL：組換えヒトPTPN11全長（Genbank受託番号NM_00133043.1；aa 2597、アイソフォーム1（カノニカル））を、Ｎ末端StrepII－TEV、Ｃ末端Hisタグを有する大腸菌中で発現させた。Mw＝71．93kDa。
PTPN11／SHP2（E76K）‐FL：E76K突然変異を有する組換えヒトPTPN11全長（Genbank受託番号NM_00133043.1；aa 2597、アイソフォーム1（カノニカル））を、Ｎ末端StrepII‐TEV、Ｃ末端Hisタグを有する大腸菌において発現させた。Mw＝71．93kDa。
活性化ペプチド：H2N－LN（pY）IDLDLV（dPEG8）LST（pY）ASINFQK－アミド（Fortanetら、2016）基質：ＤｉＦＭＵＰ[６，８－ジフルオロ－７－ヒドロキシ－４－メチルクマリン］評価における最終濃度：野生型について：0．35μM活性化ペプチド；100μM DiFMUP;突然変異体について：活性化ペプチドなし；100μM DiFMUP評価緩衝液：60mM Ｈｅｐｅｓ(pH 7．4）、1mM ＥＤＴＡ、75mM ＫＣｌ、75mMＮａＣｌ、0．01% Ｂｒｉｊ－３５、5mM ＤＴＴ、および10%ＤＭＳＯ(最終）。
評価した他のホスファターゼ：評価緩衝液： 25mM ＨＥＰＥＳ(pH 7．5）、5mM ＭｇＣｌ２、0．01% Ｂｒｉｊ－３５、1mM ＤＴＴ、および1% ＤＭＳＯ。ＰＰ２Ａについては、α／ＰＰＰ２Ｒ１Ａ複合体、ＰＰ１Ａ、およびＰＰ１Ｂ 1mM ＭｎＣｌ2 を分析緩衝液に添加した。ＤｉＦＭＵＰの濃度は、選択されたホスファターゼによって変化した：ＰＴＰＮ１／ＰＴＰ１Ｂ－ＣＤについて2μM；PP1Bについて30μM；他の全てのホスファターゼについて10μM。ホスファターゼ阻害剤は、ＰＴＰ１Ｂ CAS 765317－72－4(SigmaAldrich cat# 539741）；カンタリジン酸(Santa Cruz Biotech、cat# sc－201323); ＳＨＰ００９（ChemieTek、cat# CT－SHP099）であった。
一般手順：酵素および基質を評価緩衝液中で新たに調製し；酵素溶液を反応ウェルに導入し、続いて音響技術（Echo550；ナノリットル範囲）を介して100% ＤＭＳＯ中で阻害剤を送達し；反応を室温で２０分間インキュベートし；次に基質を反応ウェルに送達して反応を開始させ；酵素活性を、室温で120分間蛍光を増加させることによってモニターする（Ex／Em 355／460）。時間経過の直線部分の勾配（シグナル／分）を決定し、ＤＭＳＯ対照に対する阻害剤の存在下で速度を計算する。
実施例９：ＥＮＴ－０５のインビボ活性の評価
この実施例の目的は、インビボでのＥＮＴ－０５の活性を評価することであった。
インビボでのＥＮＴ－０５の活性を評価するために、化合物を500mlの蒸留水に10μg／mlの濃度まで添加した。アフリカツメガエル(Xenopus leavistadpole)、プレメタモルフィック（premetamorphic）を溶液中に入れた。約1時間にわたり、オタマジャクシは徐々に膨潤し、移動を停止し、最終的に死亡した。第２の動物を、10μg／mlのＥＮＴ－０５のみならず50mMのＮａＣｌも含有する500mlの水中に置いた。この場合、動物は生存した。次いで、動物を、塩またはＥＮＴ－０５のいずれも含まない湧水に移し、その後の日々にわたって活性を維持した。ＥＮＴ－０６またはＥＮＴ－０３でも同様の効果は観察されなかった。
この実施例はＥＮＴ－０３を修飾してＥＮＴ－０５を作製することにより、ＰＴＰＮ１１（Ｅ７６Ｋ）およびおそらく他の未記載のホスファターゼに対して特異性を有する化合物が得られたことを実証する。オタマジャクシに対するインビボ薬理作用はナトリウム再吸収の阻害であり、腎臓での可能性が最も高い。おそらく標的は、塩化ナトリウム－カリウム共輸送体2型（ＮＫＣＣ２）である。腎尿細管のＮＫＣＣ２の活性を調節するホスファターゼについては、現在のところほとんどわかっていない。
この実施例は、ＥＮＴ－０５がＥＮＴ－０５によって阻害され得る経路のＮＫＣＣ２輸送体を活性化するホスファターゼを同定したことを教示する。ＥＮＴ－０５は、脳圧亢進（頭蓋内圧亢進）や眼圧亢進（緑内障）と同様に、ホスファターゼ活性の阻害を伴わない機序で腎臓のＮＫＣＣ２を阻害するフロセミドと同様に、明らかに高血圧の治療に有用である可能性がある。
実施例１０：重水素化ＥＮＴ－０３化合物の評価
ＥＮＴ－０３、ポリアミン－胆汁酸抱合体は、胆汁酸の合成に利用される一連の反応を通じて代謝されると予想される。下記の分子、ＥＮＴ－０３Ｄ3 (C24D2、C25D1）を合成した。
Figure 2022543242000125
マウスに腹腔内投与した場合、ＥＮＴ－０３を投与した場合に観察された体重減少とは対照的に、動物は体重が増加した。図１２参照。ＥＮＴ－０３の重水素化形態はＥＮＴ－０３と同じ薬理学を示すはずであるので、薬理学的効果は、コレステロール側鎖を連続的に代謝する酵素の動力学に対する重水素同位体の存在によって最もよく説明される。側鎖に重水素が存在すると、Ｃ－２５に対する２－メチルアシル補酵素Ａラセマーゼの作用、Ｃ２４およびＣ２５で重水素原子を除去することによって２４，２５－トランス－不飽和誘導体を生成するデヒドロゲナーゼの作用、およびＤ－二官能性タンパク質によって触媒されるＣ２４結合での水和および酸化が遅くなる可能性がある。代わりに、ＥＮＴ－０３Ｄ3 の代謝はＣＹＰ４６Ａ１によるＣ２４での酸化で始まり、以下の化合物を生じる：
Figure 2022543242000126
薬理学的効果は体重増加であるので、ＳＨＰ２は中枢レプチン経路を増強することが知られているので、化合物が最も高い特異性でＰＴＰＮ１１／ＳＨＰ２を阻害することを容易に予測することができる。ＳＨＰ２を阻害すると、レプチン抵抗性が増大し、その結果、食欲が亢進し、脂肪組織が蓄積すると考えられる。
実施例１１：ＥＮＴ－０３は老齢マウスの脾臓における赤血球産生及び免疫細胞機能に関与する遺伝子の点写を促進する
ヒトにおけるように、マウスの脾臓は一次免疫機能を果たす（Smithら、2019）。しかし、成体マウスでは脾臓が通常、出生後数週間の間にこの機能を骨髄に優先させるが、様々な試験条件下で赤血球形成器官になり得る（森田ら、2011）（Wolberら、2002）。
若齢および老齢マウスの脾臓の造血系および免疫系に対するＥＮＴ－０３（化合物III）の効果を探るために、以前の腸トランスクリプトーム例の若返りで述べた動物の脾臓のトランスクリプトームを研究した。
老齢脾臓におけるＥＮＴ－０３（化合物III）に対する転写応答（以下の表17）は、より若い動物の脾臓よりも強かった（以下の表18）。老齢脾臓の109遺伝子は、若齢の4遺伝子と比較して≧1．5倍に有意にアップレギュレートされた。老齢脾臓で最も強固に誘導される遺伝子は、赤血球産生（表17のイタリック体の列）と免疫機能（表17の太字の列）の原因となる。ヘモグロビン合成に関与する遺伝子は赤血球の構造／機能に関与する豊富なタンパク質（塩素－重炭酸交換体、バンド4．2タンパク質、2，3ビホスホグリセリン酸ムターゼ）とともに、一覧表の上位にある（ヘモグロビンαおよびβタンパク質、アミノレブリン酸シンターゼ）。これらのデータは、ＥＮＴ－０３が出生後の最初の数週間の間、正常に操作されている老齢マウスにおいてプログラムを刺激しているという仮説と矛盾しない。
一般的に言えば、ＥＮＴ－０３によって誘導される免疫遺伝子は、先天性アームのものに相当する。これらには、自然免疫系の幅広い刺激作用を有するT細胞およびＮＫＴ細胞から分泌されるＩＬ－２１(Spolski ら、 2014）；および多数の自然免疫細胞から分泌されるＩＬ２２結合タンパク質（IL22rα2）が含まれ、感染の消散に続く炎症誘発性サイトカインＩＬ２２の作用を抑制するのを助ける(Huber ら、 2012）ことにより、炎症後腫瘍形成の確率が低下する(Huber ら、2012）。他の高度に誘導された遺伝子は樹状細胞やマクロファージによって発現される受容体をコードしている。例えば、ウイルスや他の病原体の樹状細胞による認識に重要な役割を果たすDC-SIGN(CD209)(Svajger ら、2010）；組織傷害に対する正常な修復反応に重要な役割を果たすマクロファージケモカイン受容体ＣＣＲ２(Boniakowski ら、 2018）；およびマクロファージによるＩｇＭ被覆病原体のエンドサイトーシスを媒介するＦｃα／ｍｕ受容体(Fcamr)(Shibuya ら、2000）などである。
老齢脾臓でＥＮＴ－０３により高度に誘導される脾臓遺伝子は、いずれも若齢動物の脾臓では応答遺伝子セットには出現しない。
Figure 2022543242000127
Figure 2022543242000128
Figure 2022543242000129
Figure 2022543242000130
実施例１２:マウス胃組織における処理誘導遺伝子発現、ＥＮＴ－０３とＥＮＴ－０２（MSI-１４３６）の比較
この実施例の目的は若齢および老齢マウス間の転写変化を同定し、ＥＮＴ－０２（MSI‐１４３６）処理の遺伝子発現に対する効果をＥＮＴ－０３のそれらと比較することである。マウスをＥＮＴ－０３、ＥＮＴ－０２（MSI－１４３６）またはビヒクル対照で処置した。マウス由来の胃組織のサンプルを、Illuminaプラットフォーム上でのRNA配列決定によって分析した。
本解析の目的は、若齢および老齢マウス間の転写変化を同定すること；ＥＮＴ－０１またはＥＮＴ－０２（MSI‐１４３６）処理がこれらの加齢変化を逆転できるかどうかを決定すること；およびＥＮＴ－０２（MSI‐１４３６）処理の遺伝子発現に対する効果をＥＮＴ－０３のそれらと比較することであった。
これらの目的を達成するために、データを、品質管理評価、差次的発現および機能強化分析、ならびに合同分析に供した。ＥＮＴ－０３治療のデータを、ＥＮＴ－０２（MSI－１４３６）について作成した結果と比較した。
群間で有意に差次的に発現したこれらの遺伝子を同定するために、任意の閾値を発現の倍数変化に基づいて適用した。群間の発現の４倍の変化を、複製サンプルの非存在下での偽有意性の尺度として使用した。この閾値では、差次的に発現する遺伝子がすべての対比で同定された。加齢に伴う遺伝子発現変化、または若齢マウスにおけるＥＮＴ－０２（MSI‐１４３６）処理について、ダウンレギュレートされた遺伝子の割合（72～80％）はアップレギュレートされた遺伝子の割合（20～28％）よりも高かった。この傾向は老齢マウスでは両処理とも逆であり、遺伝子発現変化の82～89％はアップレギュレーション、12～18％はダウンレギュレーションであった。
対照を越えて差次的に発現した遺伝子を比較すると、老齢マウスでダウンレギュレートされた遺伝子が老齢マウスでＥＮＴ－０２処理に応答してアップレギュレートされた遺伝子と有意に重複していることが明らかであった（超幾何学的P＜0.0001）。程度は低いもの、老齢マウスではダウンレギュレートされ、老齢マウスでは処理に応答してアップレギュレートされた遺伝子にも有意なオーバーラップが認められた。若齢マウスでは、ＥＮＴ－０２処理でダウンレギュレートされた遺伝子が加齢に関連するダウンレギュレートされた遺伝子と有意に重複した。この結果は、両方の対比でアップレギュレートされた遺伝子にも当てはまった。
各比較について、様々な統計的閾値および倍率変化４で有意なサンプル遺伝子数を集計した。前述のように、統計的ロバスト性のためには、調整されたp値＜0．05を有するものみが考慮されるべきである。
以下の統計的有意性閾値を選択して、差次的に発現される遺伝子を決定した：倍率変化≧4
Figure 2022543242000131
実施した複数の対比から選択した遺伝子間の重複を調べるために、実施した比較のすべての対組み合わせ間で、重複する差次的発現遺伝子の数を数えた（倍率変化４を用いて定義）。オーバーラップの量は、図２８Ａ～２８Ｄに示されている。各比較について、プロット中の値は交差する選択された遺伝子の数を表し、そして色は、考慮中の２つの対比についてのJaccardインデックス（和集合に対する交差）を表す。
実施した対比から有意な遺伝子間の重複を調べるために、対の対比間の倍率変化を比較する散布図のセットを作成した。個々の対比において発現差が４倍以上であったこれらの遺伝子について、機能的濃縮分析を行った。リアクトームおよびＧＯ用語データベースを調べ、差次的に発現する遺伝子で有意に濃縮されている関連用語を同定した（濃縮P＜0．05）。血小板脱顆粒、抗菌ペプチドおよび補体カスケードのような免疫系に関係する経路は一般的に、対照を越えて最も濃縮された経路の中であった。ケラチン化およびケラチノサイト分化のような経路は、老齢マウスにおける老化またはＥＮＴ－０２（MSI－１４３６）処置に際して変化した遺伝子において濃縮された。筋収縮およびサルコメア組織化などの経路は加齢に伴って変化した遺伝子で豊富であったが、若齢マウスのＥＮＴ－０２処理で影響された遺伝子でも豊富であった。
（適切であれば）遺伝子を遺伝子にマッピングすることにより、超幾何学的検定を用いて、各対比からの有意な遺伝子(倍率変化４で）について、リアクトーム経路メンバーシップの強化について分析した。選択した遺伝子の結合について濃縮（p値＜0．05）を評価した。
本試験で同定されたように、ＥＮＴ－０２投与に反応して差次的に発現した遺伝子を、それぞれＥＮＴ－０３投与に関連した遺伝子と比較した。ＥＮＴ－０３治療関連遺伝子発現変化は以前に同定されていた。
有意な特徴を同定するために用いた関連する統計的閾値におけるすべての対比において、両処理（ＥＮＴ－０２およびＥＮＴ－０３）で発現が変化した遺伝子は１０個以下であった。これには加齢に伴う遺伝子発現変化が含まれていたことに注意すべきである。具体的には、両試験の老齢マウスと若齢マウスの間で、1つの遺伝子Sypl2のみの発現が有意に変化した。
加齢でダウンレギュレートされ、投与でアップレギュレートされた遺伝子の比較は、ＥＮＴ－０２投与に影響された遺伝子がＥＮＴ－０３に影響された遺伝子と重複しないことを明らかにした。
一致分析を行った。具体的には、分析がマウス胃組織遺伝子発現プロフィールに対するヒト由来またはサメ由来の化合物類似体の効果を以下のように比較した：
ＥＮＴ－０２（MSI－１４３６）をＥＮＴ－０３と比較した。
散乱プロット、アップセットプロット、ベン図、超幾何学的試験、およびスピアマン順位相関試験を用いて、図１５～２７における重なりのレベルを評価した。ＥＮＴ－０３に特異的な対比で有意に差次的に発現する遺伝子は、ＦＤＲ調整P＜0．05の統計的閾値を用いて測定したことに注意すべきである。本研究におけるＥＮＴ－０２（MSI１４３６）特異的対比では、発現の４倍を超える変化のカットオフ値を用いて有意な遺伝子が定義された。
老化時にダウンレギュレートされ、治療時にアップレギュレートされる遺伝子
老化において有意にダウンレギュレートされ、老齢マウスの処置によってアップレギュレートされた転写物を、各化合物について同定した。次に、ＥＮＴ－０２（MSI－１４３６）に罹患した遺伝子をＥＮＴ－０３の遺伝子と比較することにより、これらの遺伝子セット間の一致を評価した。これらの結果を図１５のベン図に図示した。
一致分析結果を図１６に示し、これは、ＥＮＴ－０２（MSI－１４３６） 対 対照（若齢）における有意な遺伝子を、ＥＮＴ－０３対 未処理（若齢）に対して比較する散布図を示す。図２２は、老齢遺伝子対若齢遺伝子（対照群）の有意な遺伝子を、老齢遺伝子対若齢遺伝子（未処理）の有意な遺伝子と比較した散布図を示す。図２５は、老齢対若齢(ＥＮＴ－０２（MSI－１４３６））における有意な遺伝子を老齢対若齢(ＥＮＴ－０３）で比較した散布図である。
図１８は、ＥＮＴ－０２（MSI－１４３６）対照群（若齢）におけるＥＮＴ－０３対未処理（若齢）に対する有意な遺伝子の静脈図を示す。各プロットでは、セットの異なる相互作用を考慮する。すなわち、攪乱の方向を無視し、アップレギュレートされた遺伝子のみを考慮する、ダウンレギュレートされた遺伝子のみを考慮する、またはあるコントラストでアップレギュレートされたそれらの遺伝子と別のコントラストでダウンレギュレートされたそれらの遺伝子との重複を検討するかのいずれかである。記号Uは全体を意味する。
一致分析結果を図１９に示し、これは、ＥＮＴ－０２（MSI－１４３６）対対照（老齢）における有意な遺伝子を、ＥＮＴ－０３対未処理（老齢）に対して比較する散乱プロットを示す。図２１は、ＥＮＴ－０２（MSI－１４３６）対対照（老齢）における、ＥＮＴ－０３対未処理（老齢）に対する有意な遺伝子のベン図を示す。図２４は、老齢対若齢（対照群）における有意な遺伝子のベン図を、老齢対若齢（未処理）に対して示している。図２７は、老齢対若齢（ＥＮＴ－０２（MSI－１４３６））における有意な遺伝子の、老齢対若齢（ＥＮＴ－０３）に対するベン図を示す。アップレギュレートされた遺伝子とダウンレギュレートされた遺伝子のベン図。各プロットでは、セットの異なる相互作用を考慮する。すなわち、攪乱の方向を無視する、アップレギュレートされた遺伝子のみを考慮する、ダウンレギュレートされた遺伝子のみを考慮する、またはあるコントラストでアップレギュレートされたそれらの遺伝子と別のコントラストでダウンレギュレートされたそれらの遺伝子との重複を検討するかのいずれかである。記号Uは全体を意味する。
特定の実施形態を図示し、説明してきたが、以下の特許請求の範囲に定義されるようなより広い態様における技術から逸脱することなく、当業者によれば、その中で変更および修正を行うことができることを理解されたい。
本明細書に例示的に記載される実施形態は本明細書に特に開示されていない任意の要素または要素、限定または限定が存在しない場合に、適切に実施され得る。したがって、例えば、「構成する」、「含む」、「含有する」等の用語は、制限なく広範囲に読むものとする。さらに、本明細書で使用される用語および表現は限定ではなく説明の用語として使用されており、そのような用語および表現の使用において、示され、説明された特徴またはその一部の任意の均等物を排除する意図はないが、特許請求される技術の範囲内で種々の変形が可能であることが認識される。さらに、「から本質的になる」という語句は、特に列挙された要素、および特許請求される技術の基本的および新規な特徴に実質的に影響を及ぼさない追加の要素を含むと理解される。「からなる」という語句は、指定されていない要素を除外する。
当業者によって理解されるように、任意のおよびすべての目的のために、特に記述された説明を提供することに関して、本明細書に開示されるすべての範囲はまた、エンドポイントを含む、任意のおよびすべての可能なサブ範囲およびそのサブ範囲の組み合わせを包含する。列挙されたいずれの範囲も、同じ範囲が少なくとも半に等しい部分、3分の１、４分の１、５分の１、１０分の１等に等しい部分に分割されうるることを説明し、可能にするものとして容易に認識することができる。非限定的な例として、本明細書で論じる各範囲は、下３分の1、中３分の1、上３分の1などに容易に分解することができる。また、当業者には理解されるように、「最大」、「少なくとも」、「より大きい」、「より小さい」などのすべての言語は列挙された数を含み、上述のように、後にサブレンジに分解することができるレンジを指す。最後に、当業者によって理解されるように、範囲は、各個々のメンバーを含む。
本明細書で言及されるすべての刊行物、特許出願、発行特許、および他の文書は、あたかもそれぞれの個々の刊行物、特許出願、発行特許、または他の文書が参照によりその全体が組み込まれるように具体的かつ個別に示されたかのように、参照により本明細書に組み込まれる。参照により組み込まれるテキストに含まれる定義は、それらが本開示における定義と矛盾する程度まで除外される。
他の実施形態は、以下の特許請求の範囲に記載されている。
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Claims (76)

  1. 下式を有するアミノステロール化合物：
    Figure 2022543242000132
     式中、Ｒ1はＨまたはＤであり、Ｒ2はＨまたはＤであり、
    ただしすべてのＲ1はＨであり、すべてのＲ2はＨであり、またはすべてのＲ1およびＲ2はＨであり、
    またはそれらの薬学的に許容される塩、溶媒和物、プロドラッグ、または誘導体。
  2. 下式を有する、請求項１に記載のアミノステロール化合物：
    Figure 2022543242000133
     またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、プロドラッグ、または誘導体。
  3. 下式を有する、請求項１または２に記載のアミノステロール化合物：
    Figure 2022543242000134
     またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、プロドラッグ、または誘導体。
  4. 下式を有する、請求項１に記載のアミノステロール化合物：
    Figure 2022543242000135
     またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、プロドラッグ、または誘導体。
  5. 下式を有する、請求項１に記載のアミノステロール化合物：
    Figure 2022543242000136
     またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、プロドラッグ、または誘導体。
  6. 下式を有する、請求項1に記載のアミノステロール化合物：
    Figure 2022543242000137
     またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、プロドラッグ、または誘導体。
  7. 下式を有する、請求項１に記載のアミノステロール化合物：
    Figure 2022543242000138
     またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、プロドラッグ、または誘導体。
  8. 下式を有する、請求項１に記載のアミノステロール化合物：
    Figure 2022543242000139
     またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、プロドラッグ、または誘導体。
  9. 下式を有する、請求項１に記載のアミノステロール化合物：
    Figure 2022543242000140
     またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、プロドラッグ、または誘導体。
  10. 下式を有するアミノステロール化合物：
    Figure 2022543242000141
     式中、Ｒ1はＨ、任意選択で置換されたアリール、任意選択で置換されたヘテロアリール、任意選択で置換されたＣ1－Ｃ6アリール、任意選択で置換されたＣ1－Ｃ6アルキニル、任意選択で置換されたヘテロシクリル、任意選択で置換されたＣ3－C8シクロアルキル、および任意選択で置換されたＣ1－Ｃ6アルケニル；および
    Ｒ2はＨまたは－Ｃ（Ｏ）Ｒ3であり、ここでＲ3は任意選択で置換されたアリール、任意選択で置換されたヘテロアリール、任意選択で置換されたＣ1－C6アルキル、任意選択で置換されたＣ1－C6アルキニル、任意選択で置換されたヘテロシクリル、任意選択で置換されたＣ3－Ｃ8シクロアルキル、または任意選択で置換されたＣ1－Ｃ6アルケニルであり；
    ただしＲ1およびＲ2の少なくとも１つはＨではない；
    またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、プロドラッグ、または誘導体。
  11. 下式を有する、請求項１０に記載のアミノステロール化合物：
    Figure 2022543242000142
     またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、プロドラッグ、または誘導体。
  12. 下式を有するアミノステロール化合物：
    Figure 2022543242000143
     式中、Ｒ1はＨ、任意選択で置換されたアリール、任意選択で置換されたヘテロアリール、任意選択で置換されたＣ1－Ｃ6アリール、任意選択で置換されたＣ1－Ｃ6アルキニル、任意選択で置換されたヘテロシクリル、任意選択で置換されたＣ3－C8シクロアルキル、および任意選択で置換されたＣ1－Ｃ6アルケニル；および
    Ｒ2はＨまたは－Ｃ（Ｏ）Ｒ3であり、ここでR3は任意選択で置換されたアリール、任意選択で置換されたヘテロアリール、任意選択で置換されたＣ1－C6アルキル、任意選択で置換されたＣ1－C6アルキニル、任意選択で置換されたヘテロシクリル、任意選択で置換されたＣ3－Ｃ8シクロアルキル、または任意選択で置換されたＣ1－Ｃ6アルケニルであり、
    ただしＲ1およびＲ2の少なくとも１つはＨではない；
    またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、プロドラッグ、または誘導体。
  13. 下式を有する、請求項１２に記載のアミノステロール化合物：
    Figure 2022543242000144
     またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、プロドラッグ、または誘導体。
  14. 下式を有するアミノステロール化合物：
    Figure 2022543242000145
     式中、Ｒ1はＨ、任意選択で置換されたアリール、任意選択で置換されたヘテロアリール、任意選択で置換されたＣ1－Ｃ6アリール、任意選択で置換されたＣ1－Ｃ6アルキニル、任意選択で置換されたヘテロシクリル、任意選択で置換されたＣ3－Ｃ8シクロアルキル、または任意選択で置換されたＣ1－Ｃ6アルケニル；
    およびＲ2はＨまたは－Ｃ（Ｏ）Ｒ3であり、ここでＲ3は任意選択で置換されたアリール、任意選択で置換されたヘテロアリール、任意選択で置換されたＣ1－Ｃ6アルキル、任意選択で置換されたＣ1－Ｃ6アルキニル、任意選択で置換されたヘテロシクリル、任意選択で置換されたＣ3－Ｃ8シクロアルキル、または任意選択で置換されたＣ1－Ｃ6アルケニルであり、
    ただしＲ1およびＲ2の少なくとも１つはＨではない；
    またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、プロドラッグ、または誘導体。
  15. 下式を有する、請求項１４に記載のアミノステロール化合物：
    Figure 2022543242000146
     またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、プロドラッグ、または誘導体。
  16. 薬学的に許容される塩として処方される、請求項１～１５のいずれか１項に記載のアミノステロール化合物。
  17. リン酸塩である請求項１６に記載のアミノステロール化合物。
  18. 請求項１～１７のいずれか1項に記載のアミノステロール化合物と、少なくとも1つの薬学的に許容される担体または賦形剤とを含む組成物。
  19. 以下の1つ以上を含む、請求項１８に記載の組成物：
    (a) 水性担体；
    (b) 緩衝液；
    (c) 糖；および／または
    (d)ポリオール化合物。
  20. 前記組成物が、少なくとも１つの追加の活性剤をさらに含む、請求項１８または１９に記載の組成物。
  21. 前記組成物が以下のように処方される、請求項１８～２０のいずれか1項に記載の組成物：
    (a) 経口、肺、直腸、結腸、非経口、槽内、膣内、腹腔内、静脈内、皮下、筋肉内、噴霧、吸入、眼、耳、局所、頬、鼻、および局所投与からなる群より選択される投与のために、
    (b) 液体分散液、ゲル、エアロゾル、軟膏、クリーム、凍結乾燥製剤、錠剤、カプセルからなる群から選択される剤形に；
    (c) 徐放性製剤、急速溶性製剤、遅延放出製剤、徐放性製剤、拍動放出製剤、および混合即時放出および徐放製剤からなる群から選択される剤形に；
    (d) （a）、（b）および（c）の任意の組み合わせ。
  22. 経口投与のために製剤化された、請求項１８～２１のいずれか１項に記載の組成物。
  23. 経口錠剤またはカプセル剤として処方された、請求項１８～２２のいずれか１項に記載の組成物。
  24. 鼻腔内投与のために処方された、請求項１８～２１のいずれか１項に記載の組成物。
  25. 治療有効量の請求項１～１７のいずれか１項に記載のアミノステロール化合物、または請求項１８～２４のいずれか１項に記載の組成物を投与することを含む、アミノステロールによる治療に感受性の状態を有する必要とする被験体を治療する方法。
  26. 前記状態が、異常なα－シヌクレイン病理および／またはドーパミン作動性機能不全と相関している、請求項２５記載の方法。
  27. 必要とする被験体において、異常なα－シヌクレイン病理学および／またはドーパミン作動性機能不全と相関する状態もしくは障害、または関連症状の発症または進行を処置、予防および／または遅延させる方法であって、治療有効量の請求項１８～２４のいずれか1項に記載の組成物を投与することを含む、方法。
  28. 請求項２７に記載の方法であって：
    (a) 前記症状は、便秘、幻覚、認知障害、および炎症からなる群から選択され；
    (b) 前記症状は、シヌクレオパシー、神経変性疾患、神経疾患または障害、心理的および／または行動障害、または脳もしくは全身の虚血性疾患または状態と相関しており；または
    (c) 前記状態または障害は、シヌクレオパシー、神経変性疾患、または神経学的疾患または障害であり；
    (d) 前記状態または障害が心理的および／または行動的障害であり；
    (e) 前記状態または障害は、脳または全身の虚血性疾患または状態である；
    方法。
  29. 請求項２８に記載の方法であって：
    (a) シヌクレオパシー、神経変性疾患、または神経学的疾患または障害は、パーキンソン病、アルツハイマー病、統合失調症、多系統萎縮症、レビー小体型認知症、レビー小体型認知症、ハンチントン病、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、フリードライヒ運動失調症、血管性認知症、脊髄筋萎縮症、核上性麻痺、進行性核麻痺、前頭温帯性認知症、進行性核麻痺、グアドループパーキンソニズム、脊髄小脳失調症、パーキンソニズム、外傷性脳損傷、加齢に伴う変性過程、および老化性認知症からなる群より選択され；
    (b) 心理的または行動障害は、うつ病、自閉症、スペクトラム障害、ダウン症候群、ゴーシェ病、クラッベ病、スフィンゴ糖脂質代謝に影響を及ぼすリソゾーム状態、ＡＤＨＤ、激越、不安、せん妄、易刺激性、錯覚および妄想、記憶喪失、無感動、双極性障害、脱抑制、異常運動および強迫行動、嗜癖、脳性麻痺、てんかん、大うつ病性障害、およびレム睡眠行動障害（ＲＢＤ）などの睡眠障害、睡眠断片化、レム行動障害、概日リズム機能障害、睡眠時無呼吸、および認知障害からなる群より選択され；または
    (c)脳または全身の虚血性障害または状態は、微小血管障害、分娩中または心停止後の脳虚血、術中問題による脳虚血、脳への血液供給動脈の狭窄による慢性脳虚血、脳静脈の静脈洞血栓症または血栓症、糖尿病性網膜症、高コレステロール、心不全、うっ血性心不全、心筋炎、心膜炎、冠動脈心疾患、狭心症、四肢の虚血、腎動脈の狭窄、糖尿病性網膜症、マラリアに伴う血栓症、人工心臓弁、貧血、脾機能亢進症候群、肺気腫、勃起機能不全、心臓伝導障害、高血圧、肺水腫からなる群から選択される、
    方法。
  30. 必要とする被験体において、異常なα－シヌクレイン病理学および／またはドーパミン作動性機能不全と相関する、脳または全身虚血性障害および／または関連症状の発症または進行を処置、予防および／または遅延させる方法であって、治療有効量の請求項１８～２４のいずれか1項に記載の組成物を投与することを含む、方法。
  31. 脳または一般の虚血性障害および／または関連症状が、微小血管障害、分娩時脳虚血、心停止または心蘇生の間の／後の脳虚血、頸動脈手術中の脳虚血、脳静脈の血液供給動脈の狭窄による慢性脳虚血、脳血管奇形、高血圧、高コレステロール、心筋梗塞、心不全、うっ血性心不全、心筋炎、心膜炎、冠動脈心疾患、狭心症、ショック、四肢の虚血、腎動脈の狭窄、糖尿病性網膜症、マラリアに伴う血栓症、人工心臓弁、貧血脾機能亢進症候群、肺線維症、勃起不全、心伝導障害（ＣＣＤ）および／または関連症状、肺水腫からなる群より選択される請求項３０記載の方法。
  32. 被験体における１つ以上の調節ホスファターゼを阻害する方法であって、治療有効量の請求項１８～２４のいずれか1項に記載の組成物を被験体に投与することを含む方法。
  33. 調節ホスファターゼが1型（ＰＰ１）および2型（ＰＰ２、すなわちPP2A、PP2CおよびPP2B）、例えばPPP1CA、PPP1CB、PPP1CC,PPP2CA、PPP2CB、PPP3CA、PPP3CB、PPP3CC、PPP4C、PPP5C,およびPPP6C；クラスＩCysベースのタンパク質チロシンホスフォターゼ(PTP)；クラスＩＩ CysベースのPTP；クラスIIICysベースのPTP；クラスIV CysベースのDSP（二重特異性ホスファターゼ)；PTP、例えば、PTP1B、CDC14s (CDC14A、CDC14B、CDC14C、CDKN3)；ホスファターゼおよびテンシンホモログ、例えば、PTEN; スリングショット、例えばSSH1、SSH2、および SSH3；二重特異性ホスファターゼ、例えばDUSP1、DUSP2、DUSP3、DUSP4、DUSP5、DUSP6、DUSP7、DUSP8、DUSP9、DUSP10、 DUSP11、DUSP12、DUSP13、DUSP14、DUSP15、DUSP16、DUSP18、DUSP19、 DUSP21、DUSP22、DUSP23、DUSP26、DUSP27、およびDUSP28などのホスファターゼ；CTDP1、CTDSP1、CTDSP2、CTDSPL、DULLARD、EPM2A、ILKAP、MDSP、PGAM5、PHLPP1、PHPLPP2、PPEF1、PPEF2、PPM1A、PPM1B、PPM1D、PPM1E、PPM1F、PPM1G、PPM1H、PPM1J、PPM1K、PPM1L、PPM1M、PPM1N、 PPTC7、PTPMT1、SSU72、UBLCP1、PP1B、PP1A、PP2Aα/PP2R1A複合体、PTPN6/SHP1、PTPRC/CD45、DUSP22/MKPX、PTPN2/TC-PTP、PTPN7/LC-PTP、PTPN12/PTP-PEST、PTPN1/PTP1B-CD、PTPN11/SHP2、PTPN11/SHP2-FL、およびPTPN11/SHP2-FL(E76K)などの他のホスファターゼ；を含むタンパク質Ser／Thrを含む請求項３２に記載の方法。
  34. 前記調節ホスファターゼが、タンパク質チロシンホスファターゼ１Ｂ(ＰＴＰ１Ｂ）を含む、請求項３２または３３に記載の方法。
  35. 食欲または体重増加、および／または１つ以上の関連症状の発症または進行を、それを必要とする被験体において抑制、予防および／または遅延させる方法であって、治療有効量の請求項１８～２４のいずれか１項に記載の組成物を被験体に投与することを含む、方法。
  36. 投与方法が、経口、経鼻、舌下、頬側、直腸、膣、静脈内、動脈内、皮内、腹腔内、髄腔内、筋肉内、硬膜外、脳内、脳室内、経皮、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項２５～３５のいずれか１項に記載の方法。
  37. 投与方法が、経鼻投与、経口投与、またはそれらの組み合わせである請求項２５～３６のいずれか１項に記載の方法。
  38. アミノステロール化合物またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、プロドラッグ、または誘導体の治療有効量が、下記量を含む、請求項２５～３７のいずれか1項に記載の方法：
    (a) 約0．1～約20mg／kg被験者の体重；
    (b) 約0．1～約15mg／kg被験者の体重；
    (c) 約0．1～約10mg／kg被験者の体重；
    (d) 約0．1～約5mg／kg被験者の体重；または
    (e) 約0．1～約2．5mg／kg被験者の体重。
  39. アミノステロール化合物またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、プロドラッグ、または誘導体の治療有効量が、下記量を含む、請求項２５～３８のいずれか1項に記載の方法：
    (a) 約0．001～約500mg／日；
    (b) 約0．001～約250mg／日；
    (c) 約0．001～約125mg／日；
    (d) 約0．001～約50mg／日；
    (e) 約0．001～約25mg／日；
    (f) 約0．001～約10mg／日；
    (g) 約0．001～約6mg／日；
    (h) 約0．001～約4mg／日；または
    (i) 約0．001～約2mg／日。
  40. 投与方法が経口投与を含み、治療有効量のアミノステロール化合物またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、プロドラッグまたは誘導体が下記量を含む、請求項２５～３９のいずれか1項に記載の方法：
    (a) 約1～約300mg／日；または
    (b) 約25～約500mg／日。
  41. 前記アミノステロール化合物またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、プロドラッグ、または誘導体を、少なくとも1つの追加の活性剤と組み合わせて投与して、相加的または相乗的効果のいずれかを達成する、請求項２５～４０のいずれか１項に記載の方法。
  42. 前記追加の活性剤が、以下からなる群から選択される方法を介して投与される、請求項４１に記載の方法：
    (a) 付随して；
    (b) 混合物として；
    (c) 別々におよび同時に、または共に；および
    (d) 別々におよび連続して
  43. 追加の活性剤が、請求項２５～４０のいずれか１項に記載の方法において投与されるアミノステロールとは異なる構造を有する第２のアミノステロールである請求項４１または４２に記載の方法。
  44. 前記組成物の投与が、空の胃への投与を含み、任意選択で、被験体が覚醒してから２時間以内である請求項２５～４３のいずれか１項に記載の方法。
  45. 前記組成物の投与から約６０～約９０分後に被験体によって食物が消費されない、請求項２５～４４のいずれか１項に記載の方法。
  46. アミノステロール、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、プロドラッグ、または誘導体が、薬学的に許容される等級のものである請求項２５～４５のいずれか１項に記載の方法。
  47. アミノステロールのリン酸塩が投与される、請求項２５～４６のいずれか１項に記載の方法。
  48. 前記被験体がヒトである請求項２５－４７のいずれか１項に記載の方法。
  49. 下記をさらに含む、請求項２５～４８のいずれか１項に記載の方法：
    (a) 被験体に対するアミノステロールまたは薬学的に許容される塩、溶媒和物、プロドラッグ、または誘導体の用量を決定し、ここで、アミノステロールの用量は、評価される症状の改善または解消におけるアミノステロール用量の有効性に基づいて決定され、
    (b) 続いて、ある期間、被験体にアミノステロールの用量を含む組成物を投与し、更に前記方法は以下を含む、
    (i)評価されるべき症状を同定すること(ここで該症状はアミノステロールの処置で影響を受けやすく)；
    (ii)被験体に対するそのアミノステロールの開始用量を同定すること；
    (iii)評価されている症状に対する有効用量が同定されるまでの期間にわたって、被験体にアミノステロールの漸増用量を投与し、ここで有効用量は症状の改善または解消が観察されるアミノステロール用量であり、およびアミノステロール用量を、その特定の被験体におけるその特定の症状に対するそのレベルに固定すること。
  50. 前記症状の改善または解消が、臨床的に認証されたスケールまたはツールを使用して測定される請求項４９に記載の方法。
  51. 組成物が経口投与され、および
    (a) 開始アミノステロール用量は、約10mg～約150mg／日の範囲であり；
    (b) 漸増後の被験体に対するアミノステロールの用量は、約25mgから約500mg／日までの範囲に固定され；および／または
    (c)アミノステロールまたはその塩もしくは誘導体の用量は、約25mgずつ増加する、
    請求項４９または５０に記載の方法。
  52. 組成物が鼻腔内に投与され、および
    (a)開始アミノステロール用量は約0．001mg／日～約3mg／日の範囲であり；
    (b)漸増後の被験体に対するアミノステロールの用量は、約0．001mgから約6mg／日までの範囲に固定され；
    (c)増量後の被験体に対するアミノステロールの投与量は、経口または注射によって投与される場合には治療量以下の投与量であり；および／または
    (d)アミノステロールの用量は、約0．1、約0．2、約0．25、約0．3、約0．35、約0．4、約0．45、約0．5、約0．55、約0．6、約0．65、約0．7、約0．75、約0．8、約0．85、約0．9、約0．95、約1、約1．1、約1．2、約1．3、約1．4、約1．5、約1．6、約1．7、約1．8、約1．9、または約2mgの増分で漸増される；
    請求項４９～５１のいずれか１項に記載の方法。
  53. アミノステロールの投薬量が、約３～約５日毎に漸増される、請求項４９～５２のいずれか1項に記載の方法。
  54. 評価される症状が重篤である場合、開始アミノステロール投薬量がより高い、請求項４９～５３のいずれか１項に記載の方法。
  55. 症状が異常なα－シヌクレイン病理および／またはドーパミン作動性機能不全と相関している、請求項４９～５４のいずれか１項に記載の方法。
  56. 評価されるべき症状が、以下からなる群より選択される、請求項４９～５５のいずれか1項に記載の方法：
    (a）認知障害、幻覚および精神病、抑うつ気分、不安気分、無気力、ドーパミン調節障害症候群の特徴、睡眠障害、日中の眠気、疼痛、排尿問題、便秘問題、起立時のふらつき、および疲労からなる群から選択される統一パーキンソン病評価尺度のパートIで定義される少なくとも１つの日常生活の経験の非運動的側面；
    (b)発話、唾液およびよだれ、摂食および嚥下作業、着衣、衛生、手書き、寝返り、振戦、ベッドから出ること、車または深い椅子、歩行とバランスおよび静止からなる群から選択される統一パーキンソン病評価尺度のパートIIで定義される少なくとも１つの日常生活の経験の運動的側面；
    (c)会話、表情、固縮、手指運動、手の動き、手の回内-回外動き、つま先タップ、足の機敏性、椅子からの歩行、歩様、すくみ足、姿勢の安定性、姿勢、身体の動作緩慢、手の姿勢時振戦、安静時振戦、および安静時振戦の恒久性からなる群から選択される統一パーキンソン病評価尺度のパートIIIで特定された少なくとも１つの運動症状；
    (d）運動障害に費やす時間、運動障害の機能的な影響、オフ状態に費やす時間、運動変動の機能的影響、運動性変動の複雑性および痛みを伴うオフ状態失調症からなる群から選択される統一パーキンソン病評価尺度の第IV部で特定された少なくとも１つの運動複雑性；
    (e)便秘；
    (f)うつ病；
    (g)認知障害；
    (h)睡眠障害や睡眠問題；
    (i)概日リズム機能障害；
    (j)幻覚；
    (k)疲労；
    (l)レム睡眠障害；
    (m)レム行動障害；
    (n)勃起機能不全；
    (o)無呼吸；
    (p)体位性低血圧；
    (q)血圧や起立性低血圧の改善；
    (r)夜間高血圧；
    (s)温度調節；
    (t)呼吸または無呼吸の改善；
    (u)心伝導障害の矯正；
    (v)疼痛の改善；
    (w)膀胱感覚および排尿の回復；
    (x)尿失禁；および／または
    (y)夜間頻尿のコントロール。
  57. 評価されるべき症状が便秘であり、ここで
    (a)便秘に対するアミノステロールの一定の増量用量とは、所定の用量で３日間のうち２日以上で投与後２４時間以内に完全な自発的排便（ＣＳＢＭ）をもたらすアミノステロール用量と定義され；
    (b)平均完全自発排便量（ＣＳＢＭ）または平均自発排便量（ＳＢＭ）が週１回以上であれば、増量前のアミノステロールの開始用量は75mg／日であり；および／または
    (c)平均ＣＳＢＭまたはＳＢＭが１週間あたり１未満である場合、漸増前の開始アミノステロール用量は150mg／日である；
    請求項５６に記載の方法。
  58. 治療有効量の請求項１～１７のいずれか１項に記載のアミノステロール化合物、または請求項１８～２４のいずれか１項に記載の組成物を被験体に投与することを含む、被験体の腸における遺伝子転写を増加させる方法。
  59. 遺伝子転写の増加が、カスパーゼ１４、コラーゲンタイプＸＶＩＩα１、コルネオデスモシン、コルニフェリン、シスタチンＥ／Ｍ、デルモキン、デスモコリン1、デスモグレイン１β、フィラグリン、ギャップ結合タンパク質β４、ギャップ結合タンパク質β６、Ｈ１９インプリンティングされた母性発現転写産物、ホルネリン、カリクレイン関連－ペプチダーゼ７キモトリプティックストラタム、ケラチン１、ケラチン１０、ケラチン細胞分化関連タンパク質、プロリン富化ケラチン細胞、後期角化エンベロープ1A1、後期角化エンベロープ１Ａ２、後期角化エンベロープ１Ｂ、後期角化エンベロープ１Ｃ、後期角化エンベロープ１Ｅ、後期角化エンベロープ１Ｆ、後期角化エンベロープ１Ｇ、後期角化エンベロープ１Ｈ、角質化エンベロープ１Ｉ、後期角化エンベロープ１Ｊ、後期角質化エンベロープ１Ｌ、後期角質化エンベロープ１Ｍ、後期角質化エンベロープ３Ｃ、後期角質化エンベロープ３Ｅ、後期角質化エンベロープ３Ｆ、レクチンガラクトース結合可溶性７、ロリクリン、ミオグロビン、ミオシン結合２プロテインＣスロータイプ、ミオシンＨポリペプチド１骨格筋、ミオシンＨポリペプチド８、ミオシン軽鎖リン酸化可能な速いスケ、ミオシン軽鎖ポリペプチド３、ミオゼニン１、ミオゼニン２、およびタイチンキャップから選択される１以上の遺伝子についてである請求項５８記載の方法。
  60. 遺伝子転写の増加が約1％～約10％、約10％～約20％、約20％～約30％、約30％～約40％、約40％～約50％、約50％～約60％、約60％～約70％、約70％～約80％、約80％～約90％、約90％～約100％、約100％～約125％、約125％～約150％、約150％～約175％、約175％～約200％、約200％～約250％、約250％～約300％、約300％～約350％、約350％～約400％、約400％～約450％、約500％～約600％、約600％～約700％、約700％～約800％、約800％～約900％、約900％～約1000％、または約1000％～約1500％から選択される請求項５８または５９に記載の方法。
  61. 治療上有効な量の請求項１～１７のいずれか１項に記載のアミノステロール化合物、または請求項１８～２４のいずれか１項に記載の組成物を投与することを含む、治療上または予防上の利益を達成するために１つ以上の調節ホスファターゼを阻害する方法。
  62. 下式のアミノステロールを製造する方法であって、
    Figure 2022543242000147
     下式化合物Iaへの、
    Figure 2022543242000148
     スペルミンの添加を刺激することを含む製造方法。
  63. (a)アミノステロールは、被験体においてインビボで産生され；または
    (b)アミノステロールはインビトロで産生される、
    請求項６２に記載の方法。
  64. 下式のアミノステロールの形成を抑制する方法であって、
    Figure 2022543242000149
     下式化合物Iaへの、
    Figure 2022543242000150
     スペルミンの添加を抑制することを含む方法。
  65. (a)化合物Ｉaへのスペルミンの添加は、被験体においてインビボで抑制され、または
    (b)化合物Ｉaへのスペルミンの添加は、インビトロで抑制される、
    請求項６４に記載の方法。
  66. 化合物Iaは下式を有し、
    Figure 2022543242000151
     ＥＮＴ－０３（化合物III）は、次式を有する、
    Figure 2022543242000152
     請求項６２～６５のいずれか1項に記載の方法。
  67. 下式のアミノステロールを製造する方法であって、
    Figure 2022543242000153
     下式化合物Iaへの、
    Figure 2022543242000154
     スペルミンの添加を刺激することを含む製造方法。
  68. (a)被験体においてインビボでアミノステロールが産生され；または
    (b)アミノステロールはインビトロで産生される、
    請求項６７に記載の方法。
  69. 下式のアミノステロールの形成を抑制する方法であって、
    Figure 2022543242000155
     下記化合物Iaへの、
    Figure 2022543242000156
     スペルミンの添加を抑制することを含む方法。
  70. (a)化合物Iaへのスペルミンの添加は、被験体においてインビボで抑制され、または
    (b)化合物Iaへのスペルミンの添加は、インビトロで抑制される、
    請求項６９に記載の方法。
  71. 化合物Iaが下式を有し、
    Figure 2022543242000157
     化合物IVは、下式を有する、
    Figure 2022543242000158
     請求項６７～７０のいずれか１項に記載の方法。
  72. 下式のアミノステロールを製造する方法であって、
    Figure 2022543242000159
     下記化合物Iaへの、
    Figure 2022543242000160
     スペルミンの添加を刺激することを含む方法。
  73. (a)アミノステロールは、被験体においてインビボで産生され；または；
    (b)アミノステロールはインビトロで産生される、
    請求項７２に記載の方法。
  74. 下式のアミノステロールの形成を抑制する方法であって、
    Figure 2022543242000161
     下記化合物Ia
    Figure 2022543242000162
     へのスペルミンの添加を抑制することを含む方法。
  75. (a)化合物Iaへのスペルミンの添加は、被験体においてインビボで抑制され、または
    (b)化合物Iaへのスペルミンの添加は、インビトロで抑制される、
    請求項７４に記載の方法。
  76. 化合物Iaは下式を有し、
    Figure 2022543242000163
     化合物Vは下式を有する、
    Figure 2022543242000164
     請求項7２～７５のいずれか１項に記載の方法。
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