JP2022534990A - 非感染性免疫炎症性眼障害を処置するための治療アプローチ - Google Patents

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Abstract

被験体における非感染性免疫炎症性眼障害を処置する方法が開示される。被験体における非感染性免疫炎症性眼障害の症状、例えば赤眼を低減する方法、ならびに活性成分としてのＳＰブロッカー、ＳＰアンタゴニスト、ＳＰ受容体ブロッカー、またはＳＰ受容体アンタゴニスト、および薬学的に許容される担体または賦形剤を含む医薬組成物も記載される。本発明の実施形態は、ＤＥＤ、角膜神経痛（ｋｅｒａｔｏｎｅｕｒａｌｇｉａ）、および／または赤眼、例えば非感染性免疫炎症性眼障害に伴う赤眼の処置における組成物ならびにこれらの組成物の使用を指向している。

Description

関連出願への相互参照
本出願は、２０１９年７月２９日出願の米国仮特許出願第６２／８７９，８３９号および２０１９年５月３０日出願の米国仮特許出願第６２／８５４，５７５号の利益を主張する。これらの出願の全内容は、参照によりそれらの全体において本明細書に組み込まれる。
連邦政府支援の研究および開発
本発明は、国立衛生研究所によって授与されたＲ０１－ＥＹ２０８８９による政府の支援によって行なわれた。政府は本発明に一定の権利を有する。
技術分野
本発明は一般に、眼科の分野に関する。
ドライアイ疾患（ＤＥＤ）は、慢性的な眼球表面の炎症によって特徴付けられ、患者が専門医による眼科治療を求める最も頻度の高い非屈折性の理由である。ドライアイ疾患は５０歳を超える約５百万人の米国人に影響し、数百万人超がドライアイの間欠的な症状を経験している。この疾患は視力に関連する生活の質および生産性に有害な影響を有し、公衆衛生にかなりの経済的負担を引き起こしている。
赤眼（ｏｃｕｌａｒ ｒｅｄｎｅｓｓ）は、眼科医院において最も一般的に見られる徴候の１つで、一般的には結膜血管の拡張に起因し、感染性および非感染性の原因を有する。非感染性の赤眼の中で、ＤＥＤおよびアレルギーが根底にある２つの典型的な障害である。赤眼の処置は、根底にある原因に依存する。治療戦略は症状の軽減に限定されてきた。
ＤＥＤおよび赤眼の処置のための満たされていない必要性が残っている。
本発明の実施形態は、ＤＥＤ、角膜神経痛（ｋｅｒａｔｏｎｅｕｒａｌｇｉａ）、および／または赤眼、例えば非感染性免疫炎症性眼障害に伴う赤眼の処置における組成物ならびにこれらの組成物の使用を指向している。本開示は、サブスタンスＰ（ＳＰ）シグナル伝達のブロッキングを介して、赤眼、ドライアイ疾患、および／または眼の疼痛（ｏｃｕｌａｒ ｐａｉｎ）等の非感染性免疫炎症性眼障害における制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）の抑制機能を回復または強化することによって免疫静止状態を達成することを記載している。サブスタンスＰの内因性受容体はニューロキニン１受容体（ＮＫ１受容体、ＮＫ１Ｒ）である。本明細書に記載した結果は、ＳＰ－ＮＫ１Ｒシグナル伝達の阻害によってＴｒｅｇ機能が回復または強化され、それにより免疫炎症性眼障害において炎症が抑制され、免疫静止状態が達成されることを実証した。ＮＫ１Ｒアンタゴニストは、上述のＴｒｅｇ関連眼障害と診断されたまたはこれに罹患した被験体に臨床的有益性を付与する。
したがって、ある特定の実施形態では、被験体における非感染性免疫炎症性眼障害を処置する方法は、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）関連眼障害、例えば、上記の障害を有する被験体に、治療有効量のニューロキニン１受容体（ＮＫ１Ｒ）アンタゴニストを含む組成物を投与するステップを含み、ＮＫ１Ｒアンタゴニストは対照と比較してＴｒｅｇ機能を増大または回復させる。
このおよびその他の実施形態では、Ｔｒｅｇ関連眼障害は、ドライアイ疾患（ＤＥＤ）、非ＤＥＤ関連赤眼、アレルギー性結膜炎、および眼の疼痛から選択される１つである。
ある特定の実施形態では、非ＤＥＤ関連赤眼はアレルギー性赤眼である。ある特定の実施形態では、非ＤＥＤ関連赤眼は非アレルギー性赤眼である。
ある特定の実施形態では、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）の活性または機能をモジュレートする方法は、活性成分としての治療有効量のサブスタンスＰ（ＳＰ）ブロッカー、ＳＰアンタゴニスト、ＳＰ受容体ブロッカー、ＳＰ受容体アンタゴニスト、またはそれらの組合せを含む医薬組成物を、それを必要とする被験体に投与するステップを含む。ある特定の実施形態では、ＳＰシグナル伝達ブロッキング誘起剤は、ＳＰブロッカー、ＳＰアンタゴニスト、ＳＰ受容体ブロッカー、およびＳＰ受容体アンタゴニストから選択される。ある特定の実施形態では、ＳＰ受容体はＮＫ１Ｒ（配列番号１）である。
免疫炎症性眼疾患、例えばＴｒｅｇ関連眼障害に罹患した被験体は、１つまたは複数の症状に罹患し得る。ある特定の実施形態では、被験体における非感染性免疫炎症性眼障害の症状を低減する方法は、治療有効量のＳＰシグナル伝達ブロッキング誘起剤を含む組成物を、Ｔｒｅｇ関連眼障害を有する被験体に投与するステップを含む。ある特定の実施形態では、Ｔｒｅｇ関連眼障害は、ドライアイ疾患（ＤＥＤ）、非ＤＥＤ関連赤眼、アレルギー性結膜炎、および眼の疼痛から選択される１つである。そのような症状の非限定的な例には、何かが眼の中に入っているかのような（例えば被験体によって自己申告される）砂のようなもしくはざらざらした感触、眼の乾燥、重い眼瞼（ｈｅａｖｙ ｅｙｅｌｉｄ）、刺すような痛み（ｓｔｉｎｇｉｎｇ）、痒み、灼熱感、刺激感（ｉｒｒｉｔａｔｉｏｎ）、疼痛、赤み、炎症、分泌、感情的ストレスを受けた際に泣けないこと、眼精疲労、視野のぼやけ、または過剰の水分が含まれ、本方法は、何かが眼の中に入っているかのような砂のようなもしくはざらざらした感触、眼の乾燥、重い眼瞼、刺すような痛み、痒み、灼熱感、刺激感、疼痛、赤み、炎症、分泌、感情的ストレスを受けた際に泣けないこと、眼精疲労、視野のぼやけ、および過剰の水分を阻害または重篤度を低減する。実施形態では、本明細書に記載した方法は、これらの症状の１つまたは複数を有する被験体を特定するステップを含み得る。
本明細書の主題の種々の実行は、抗原提示細胞およびＴＨ１７細胞が媒介する免疫炎症性眼障害である免疫炎症性眼障害の処置に関する。ある特定の実施形態では、ＴＨ１７細胞が媒介する免疫炎症性眼障害は、ドライアイ疾患（ＤＥＤ）である。
本明細書で具現化した組成物は、１つまたは複数のＮＫ１Ｒアンタゴニストを含む。
これらのおよびその他の実施形態では、ＮＫ１Ｒアンタゴニストは、ＮＫ１Ｒの小分子アンタゴニスト、中和性抗ＮＫ１Ｒ抗体、サブスタンスＰ（ＳＰ）に対するブロッキング融合タンパク質、抗ＳＰ抗体、核酸、またはポリペプチド（例えば抗体、または受容体の細胞外ドメインもしくはそのリガンド結合部分等の可溶性ペプチド）を含む。
ある特定の実施形態では、ＮＫ１Ｒアンタゴニストは小分子である。小分子は質量２０００ダルトン未満の化合物である。小分子の分子量は、好ましくは１０００ダルトン未満、より好ましくは６００ダルトン未満であり、例えば化合物は５００ダルトン、４００ダルトン、３００ダルトン、２００ダルトン、または１００ダルトン未満である。小分子は、例えば有機または無機であってよい。例示的な有機小分子には、それだけに限らないが、脂肪族炭化水素、アルコール、アルデヒド、ケトン、有機酸、エステル、単糖および二糖、芳香族炭化水素、アミノ酸、ならびに脂質が含まれる。例示的な無機小分子には、微量ミネラル、イオン、フリーラジカル、および代謝物が含まれる。あるいは、小分子阻害剤は、酵素の結合ポケットを充填するための断片、または小部分、またはより長いアミノ酸鎖からなるように合成的に操作され得る。典型的には小分子は１キロダルトン未満である。
ある特定の実施形態では、医薬組成物はＮＫ１Ｒアンタゴニストを含む。例えば、ＮＫ１Ｒペプチドアンタゴニストは、スパンチド（ＲＰＫＰＱＱＷＦＷＬＬ、配列番号２）を含む。一部の例では、ＮＫ１Ｒアンタゴニストは化学化合物、例えば小分子アンタゴニストである。例示的なＮＫ１Ｒ小分子アンタゴニストを以下に示す。
Figure 2022534990000002
 （２Ｓ，３Ｓ）－Ｎ－［（２－メトキシフェニル）メチル］－２－フェニル－３－ピペリジンアミン二塩酸塩、
Figure 2022534990000003
 （２Ｓ，３Ｓ）－３－［［３，５－ビス（トリフルオロメチル）フェニル］メトキシ］－２－フェニルピペリジン塩酸塩、
Figure 2022534990000004
 ５－［［（２Ｒ，３Ｓ）－２－［（１Ｒ）－１－［３，５－ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エトキシ］－３－（４－フルオロフェニル）－４－モルホリニル］メチル］－１，２－ジヒドロ－３Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－オン、
Figure 2022534990000005
 （２Ｓ，３Ｓ）－Ｎ－［［２－メトキシ－５－（トリフルオロメトキシ）フェニル］メチル］－２－フェニル－３－ピペリジンアミン二塩酸塩、
Figure 2022534990000006
 （２Ｓ，３Ｓ）－Ｎ－（２－メトキシフェニル）メチル－２－ジフェニルメチル－１－アザビシクロ［２．２．２］オクタン－３－アミン、
Figure 2022534990000007
 （４Ｒ）－４－ヒドロキシ－１－［（１－メチル－１Ｈ－インドール－３－イル）カルボニル］－Ｌ－プロリル－Ｎ－メチル－３－（２－ナフタレニル）－Ｎ－（フェニルメチル）－Ｌ－アラニンアミド、
Figure 2022534990000008
 （２Ｓ，３Ｓ）－Ｎ－［［２－メトキシ－５－（１Ｈ－テトラゾール－１－イル）フェニル］メチル］－２－フェニル－３－ピペリジンアミン二塩酸塩、
Figure 2022534990000009
 ＧＲ８２３３４、
Figure 2022534990000010
 ５－［［（２Ｒ，３Ｓ）－２－［（１Ｒ）－１－［３，５－ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エトキシ］－３－（４－フルオロフェニル）－４－モルホリニル］メチル－Ｎ，Ｎ－ジメチル－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－４－メタンアミン塩酸塩、
Figure 2022534990000011
 Ｎ－アセチル－Ｌ－トリプトファン３，５－ビス（トリフルオロメチル）ベンジルエステル、
Figure 2022534990000012
 （３ａＲ，７ａＲ）－オクタヒドロ－２－［１－イミノ－２－（２－メトキシフェニル）エチル］－７，７－ジフェニル－４Ｈ－イソインドール、
Figure 2022534990000013
 １－［［（２－ニトロフェニル）アミノ］カルボニル］－Ｌ－プロリル－Ｎ－メチル－３－（２－ナフタレニル）－Ｎ－（フェニルメチル）－Ｌ－アラニンアミド、
Figure 2022534990000014
 １－［２－［（３Ｓ）－３－（３，４－ジクロロフェニル）－１－［２－［３－（１－メチルエトキシ）フェニル］アセチル］－３－ピペリジニル］エチル］－４－フェニル－１－アゾニアビシクロ［２．２．２］オクタンクロリド、
またはそれらの組合せ。
ある特定の実施形態では、医薬組成物はＮＫ１Ｒアンタゴニストを含む。ある特定の実施形態では、ＮＫ１Ｒアンタゴニストは、ニューロキニン－１受容体アンタゴニストのアキラルピリジンクラス；ネツピタント（ｎｅｔｕｐｉｔａｎｔ）２１；ベトクツピタント（ｂｅｔｃｔｕｐｉｔａｎｔ）２９；エルズロピタント（ｅｌｚｌｏｐｉｔａｎｔ）；ラネピタント（ｌａｎｅｐｉｔａｎｔ）；オサネタント（ｏｓａｎｅｔａｎｔ）；タルネタント（ｔａｌｎｅｔａｎｔ）；ＧＲ２０５１７１；ＭＫ０５１７；ＭＫ５１７；ＭＥＮ１１４６７；ネパヅタント（ｎｅｐａｄｕｔａｎｔ）；ＭＥＮ１１４２０；Ｍ２７４７７３；［Ｓａｒ（９），Ｍｅｔ（０２）（１１）］－サブスタンスＰ； Ｔｙｒ（６），Ｄ－Ｐｈｅ（７），Ｄ－Ｈｉｓ（９）－サブスタンス－Ｐ（６－１１）（センディド（ｓｅｎｄｉｄｅ））；（ベータ；－Ａｌａ（８））－ニューロキニンＡ（４－１０）；（Ｔｙｒ（５），Ｄ－Ｔｒｐ（６，８，９），Ｌｙｓ－ＮＨ（２）（１０））－ニューロキニンＡ；［Ｄ－Ｐｒｏｚ，Ｄ－Ｔｒｉｐ７，９］－ＳＰ ＤＰＤＴ－ＳＰ；［Ｄ－Ｐｒｏｚ，Ｄ－Ｐｈｅ７，Ｄ－Ｔｒｐ９］－ＳＰ；ＳＲ４８９６８および４－アルキルピペリジン誘導体；テルネタント（ｔｅｌｎｅｔａｎｔ）；ＳＢ２２３４１２；ＳＢ２２３４１２Ａ；テルネタント塩酸塩；ＭＤＬ１０３３９２；リン酸化モルホリンアセタールヒトニューロキニン－１受容体アゴニスト；ＳＤＺ ＮＫＴ ３４３；ＬＹ ３０３ ８７０；Ｙｍ－３５３７５およびスピロ置換ピペリジン類；ＹＭ－４４７７８；ＹＭ－３８３３６；セプチド（Ｓｅｐｔｉｄｅ）；Ｌ７３２，１３；ダクチノマイシン（Ｄａｃｔｉｎｏｍｙａｎ）アナログ；ＭＥＮ１０２０７；Ｌ６５９８７４；Ｌ６６８，１６９；ＦＲ１１３６８０および誘導体；ＧＲ８３０７４；トリペプチドポッセルシ（ｐｏｓｓｅｒｓｉ）；グルタミニル－Ｄ－トリプトファイフェニルアロナイト（ｇｌｕｔａｍｉｎｙｌ－Ｄ－ｔｒｙｐｔｏ ｐｈｙ ｐｈｅｎｙｌ ａｌｏｎｉｔｅ）配列；Ｌ６５９，８７７；Ｒ３９６；ニューロキニンアンタゴニストとしてのイミダゾ［４，５－ｂ］キノキサリンシオニン（ｃｙｏｎｉｎｅ）；ＭＥＮ１０２０８；ＤＰＤＴＰ－オクタ；ＧＲ７３６３２；ＧＲ６４３４９；センクチド（ｓｅｎｋｔｉｄｅ）；ＧＲ７１２５１；［Ｄ－Ａｒｇ１，Ｄ－Ｐｒｏ２，Ｄ－Ｔｒｐ７，９，Ｌｅｕ１１］－ＳＰ（１－１１）；Ａｃ ｈｅｕ－Ａｓｐ－Ｇｌｎ－Ｔｒｐ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ ＮＨ２；Ｔｈｒ－Ａｓｐ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｔｖｐ－Ｖａｌ－Ｄ－Ｔｒｐ－Ｄ－Ｔｒｐ－Ａｒｇ ＮＨ２；シクロ［Ｅｌｎ－Ｔｒｐ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｍｅｔ］；Ｄ－Ｐｒｏ２Ｄ－Ｔｒｐ７，９；Ｄ－Ａｒｇ１Ｄ－Ｔｒｐ７，９ ｌｅｕ１１；［Ｇｌｙ６］－ＮＫＢ［３－１０］；［Ａｒｇ３，Ｄ－Ａｌａ６］－ＮＫＢ［３－１０］；ＣＰ－９６３４；３ アミノキヌジジン；ＣＰ－９９９９４；Ｓ１８５２５；Ｓ１９７５２；４－キノリンカルボキシニドフレミンシク（ｆｒｅｍｉｎｃｉｋ）クラス；ＣＰ－１２２７２１；ＭＫ－８６９；ＧＲ２０５１７１；スパンチド（Ｓｐａｎｔｉｄｅ）ＩＩ；ＣＰ－９６，３４５；Ｌ７０３，６０６；ＳＲ１４０，ＤＮＫ３３３；２－フェニル－４－キノリンカルボキシミドクラス；ＦＫ２２４；ＦＲ１１５２２４；ＦＫ８８８；非ペプチドニューロキニンアンタゴニストのＺＭ２５３２７０－ピロロピリミジンクラス；ＧＲ７１２５１；ＧＲ８２３３４；ＲＰ６７５８０；ヒトニューロキニンのジアシルピペラジンアンタゴニスト、例えばＬ－１６１６６４；ＲＰ６７５８０；ＭＥＮ１０３７６；ＧＲ９８４００；Ｎ２－［Ｎ２－（１Ｈ－インドール－３－イルカルボニル）－Ｌ－リジル］－Ｎ－メチル－Ｎ－（フェニル－メチル）－Ｌ－フェニルアラニンアミド（ｐｈｅｎ－ｙｌａｌａｎｉｎａｍｉｂｅ）（２ｂ）；ＳＰ－（１－１１）；ＳＰ－（６－１１）；ＳＰ－（４－１１）ＷＩＮ５１７０３；スパンチドＩＩ；スパンチドＩＩＩ；スパンチドＩ；アプレピタント；Ｌ７５４０３０；ＭＫ０８６９；ＯＮＯ－７４３６；ＯＮＯ ７４３６；ＭＥＮ１３５１０；１－［２－（Ｒ）－｛１－１Ｒ）－［３，５－ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エトキシ｝－３－（Ｒ）－（３，４－ジフルオロフェニル）－４－（Ｒ）－テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－４－イルメチル］－３－（ｒ）－メチルピペラジン（ｍｅｔｈｙｌｐｉｐｅｒｄｉｎｅ）－３－カルボン酸（１）；ＬＹ３０６，７４０；ＳＬＶ－３２３；２－置換－４－アリール－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ピリミド［４，５－ｂ］［１，５］オキサゾシン－５－－オン；９－置換－７－アリール－３，４，５，６－テトラヒドロ－２Ｈ－ピリド［４，３－ｂ］－および［２，３－ｂ］－１，５－オキサゾシン－６－オン；ＳＲ１４２８０１；ＳＢ２２２２００；ＣＰ９６３４５；ＳＲ４８９６８；エズロピタント（ｅｚｌｏｐｉｔａｎｔ）；ＣＪ１１９７４；ＭＥＮ１１５５８；［１８Ｆ］ＳＰＡーＲＱ；ニューロピタント（ｎｅｕｒｏｐｉｔａｎｔ）２１；ベツピタント（ｂｅｔｕｐｉｔａｎｔ）２９；ＳＲ１４４１９０；ＳＲ４８６９２；ＳＲ１４１７１６；Ｌ７３３０６０；ボホピタント（ｖｏｆｏｐｉｔａｎｔ）；Ｒ－６７３；ネパヅタント（ｎｅｐａｄｕｔａｎｔ）；サレヅタント（ｓａｒｅｄｕｔａｎｔ）；ＵＫ２９０７９５；２－（４－ビフェニリル）キノリン－４－カルボキシレートおよびカルボキサミドアナログ（ニューロキニン－３受容体アンタゴニスト）；４－アミノ－２－（アリール）－ブチルベンザミドおよびアナログ；ＭＫ－８６９；Ｌ７４２６９４；ＣＰ１２２７２１；１－アルキル－５－（３，４－ジクロロフェニル）－５－［２－［（３－置換）－１－アゼチジニル－］エチル］－２－ピペリジン類；Ｌ７６０７３５；Ｌ７５８，２９８，Ｃｂｚ－Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｔｒｐ－０Ｂｚｌ（ＣＦ（３））（２）；Ｌ７３３，０６１；ＳＲ１４４１９０；ＳＢ２３５３７５；Ｎ－－［（Ｒ，Ｒ）－（Ｅ）－１－アリールメチル－３－（２－オキソ－アゼパン－３－イル）カルバモイル］アリル－Ｎ－メチル－３，５－ビス（トリフルオロメチル）ベンズアミド類；３－［Ｎ１－３，５－ビス（トリフルオロメチル）ベンゾイル－Ｎ－アリールメチル－Ｎ１－メチルヒドラジノ］－Ｎ－－［（Ｒ）－２－－オキソ－アゼパン－３－イル］プロピオンアミド類（ｐｒｏｐｉｏｎａｎｉｄｅｓ）；ＳＲ１４２８０６；ＳＲ４８，９６８；ＣＰ１４１，９３８；ＬＹ３０６７４０；ＳＢ４００２３；ＳＢ４１４２４０；ノルピタンチウム（Ｎｏｌｐｉｔａｎｔｉｕｍ）；ＳＲ１４０３３３；ペルヒドロイソインドール（ｐｅｒｈｙｄｒｏｉｓｏｉｎｄｏｌｅ） ＲＰ ６７５８０，デピタント（Ｄｅｐｉｔａｎｔ）；ＲＰＲ１００８９３；ラネピタント（Ｌａｎｅｐｉｔａｎｔ）；ＬＹ－３０３８７０；ｓａｎｏｔｉ ｓｙｎｔｈｅｌａｂｏ；ノルピタニウム（ｎｏｌｐｉｔａｎｉｕｍ）；ＳＲ１４０３３３；ＳＲ４８９６８；サベヅタント（Ｓａｖｅｄｕｔａｎｔ）；ＡＶ ６０８；ＡＶ－６０８，ＡＶ６０８；ＣＧＰ６０８２９；ＮＫ－６０８；ＮＫＰ－６０８Ｃ；ＮＫＰ６０８；ＣＳ００３；Ｒ１１３２８１；ベスチピタント（Ｖｅｓｔｉｐｉｔａｎｔ）；５９７５９９；ＧＷ５９７５９９；ＧＷ５９７５９９Ｂ；ＳＳＲ２４０６００；カソピタント（ｃａｓｏｐｉｔａｎｔ）；６７９７６９；ＧＷ６７９７６９；ＴＡ５５３８；ＳＳＲ１４６９７７；ＳＬＶ３１７；ＳＬＶ－３１７；８２３２９６；ＧＷ８２３２９６；ＡＶＥ５８８３；ＡＶＥ－５８８３；ＡＺ３１１；ＳＢ２３５３７５；ＳＢ７３３２１０；ＡＺ６８５；ＳＡＲ１０２２７９；ＳＡＲ１０２７９；ＳＳＲ２４１５８６；ＳＬＶ３３２；ニューロキニン２アンタゴニスト－Ｓｏｌｖａｙ；ＳＬＶ－３３２；ＳＬＶ３３２，ＮＩＫ６１６；ＭＰＶ４５０５；ＮＩＫ６１６；ＭＰＣ４５０５；Ｚ５０１；Ｚ－５０１；１ＴＡＫ６３７；ＣＰ９６３４５；Ｌ６５９８７７；ＣＧＰ４９８２３；ＧＲ２０３０４０；Ｌ７３２１３８；Ｓ１６４７４；ＷＩＮ５１７０８；ＺＤ７９４４；Ｓ１８５２３；ＣＩ１０２１；ＰＤ１５４０７５；７５８２９８；ＺＤ４９７４；Ｓ１８９２０；ＨＭＲ２０９１；ＦＫ３５５；ＳＣＨ２０５５２８；ＮＫ５８０７；ＮＩＰ５３１；ＳＣＨ６２３７３；ＵＫ２２４６７１；ＭＥＮ１０６２７；ＷＩＮ６４８２１；ＭＤＬ１０５２１２Ａ；ＭＥＮ１０５７３；ＴＡＣ３６３；１ＭＥＮ１１１４９；ＨＳＰ１１７；ＮＩＰ５３０；ＡＺＤ５１０６、またはそれらの組合せから選択される。
ある特定の実施形態では、ＮＫ１Ｒアンタゴニストは、ＣＰ－９９，９９４、Ｌ－７３３，０６０、またはスパンチドを含む。
ある特定の実施形態では、ＮＫ１Ｒアンタゴニストは核酸分子である。核酸分子の非限定的な例には、ＲＮＡ干渉誘起（ＲＮＡｉ）分子（例えばｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｓｎｏＲＮＡ）、アンチセンスオリゴヌクレオチド、アプタマー（例えばＤＮＡアプタマーおよびＲＮＡアプタマー）が含まれる。ある特定の実施形態では、核酸は、アプタマー、低分子干渉性ＲＮＡ、ミクロＲＮＡ、低分子ヘアピンＲＮＡ、およびアンチセンス核酸から選択される１つである。
本主題の組成物は、種々の形態で製剤化され得る。種々の実施形態では、組成物は、固体、軟膏、ゲル、液体、エアロゾル、ミスト、ポリマー、コンタクトレンズ、フィルム、エマルジョン、または懸濁物の形態である。一部の実施形態では、組成物は局所に投与される。好ましい実施形態では、処置は全身投与または眼ではない組織への実質的な散布を含まない。
これらのおよびその他の実施形態では、組成物は局所投与、結膜下投与、または硝子体内投与によって被験体に投与される。ある特定の実施形態では、１つまたは複数のＮＫ１Ｒアンタゴニストを含む組成物は、眼疾患、例えば角膜神経痛に伴う疼痛の軽減または疼痛の管理のために、皮下に投与される。組成物は眼の周囲の領域、例えば額、眼瞼、その他の皮下に注射することができる。例えば、ＮＫ１Ｒアンタゴニストは、眼の周界から０．１、０．２、０．５、１．０、２．０、３．０、４．０、５．０、６．０、７．０、８．０、９．０、１０．０ｃｍに皮下注射される。皮下投与の投薬量およびスケジュールは、（疼痛管理について指示したように）局所投与について記載したものと同様またはより低頻度でよい。疼痛管理のための眼瞼または額の皮膚への皮下投与のため、例えば帯状疱疹／ヘルペスと診断されたもしくはそれに罹患した、および慢性疼痛および赤眼に罹患した患者のために、ＮＫ１Ｒアンタゴニストは、週１～３回、ほぼ１～２か月の間、またはこの疾患に伴う疼痛が継続している間、投与される。
ある特定の実施形態では、組成物は少なくとも１日１回、被験体に局所投与される。ある特定の実施形態では、組成物は少なくとも１日２回、被験体に局所投与される。ある特定の実施形態では、組成物は少なくとも１日３回、被験体に局所投与される。ある特定の実施形態では、組成物は被験体の眼に投与される。ある特定の実施形態では、組成物は二次治療または二次薬剤と組み合わせて被験体に投与される。
ある特定の実施形態では、医薬組成物は、活性成分としてのＳＰブロッカー、ＳＰアンタゴニスト、ＳＰ受容体ブロッカー、ＳＰ受容体アンタゴニスト、またはそれらの組合せ、および薬学的に許容される担体を含む。
種々の実施形態では、ＳＰおよび／またはＮＫ１Ｒの阻害されたまたはアンタゴナイズされた発現または活性は、対照における発現または活性のレベルと比較して、約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、またはそれより大きく、低減する。一部の実施形態では、阻害された発現または活性は、対照における発現または活性のレベルの約１０％～約２５％、約１０％～約５０％、約１０％～約７５％、約１％～約５０％、約１％～約２５％、約２５％～約５０％、５０％～約７５％、または０．５％～９９％の間の他の任意の範囲である。
これらのおよびその他の実施形態では、免疫炎症性眼障害の症状は、阻害剤の投与の後、約５、１５、３０、もしくは６０分、または１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、もしくは１４日以内に低減する。一部の実施形態では、組成物は被験体の眼に、１日あたり１、２、３、４、５、もしくは６回未満、１週あたり約１、２、３、４、５、６、もしくは７回、または毎日１回、投与される。ある特定の実施形態では、組成物は被験体によって（即ち自己投与）、または臨床医によって投与される。本主題の態様によって、免疫炎症性眼障害に苦しむ被験体を処置する方法が提供される。そのような方法には、有効量のＮＫ１Ｒアンタゴニストを有する組成物を被験体の眼に局所投与して、それにより被験体を処置するステップが含まれる。
本開示の態様によって、有効量のＮＫ１Ｒおよび／またはＳＰのアンタゴニストを含む組成物を含むコンタクトレンズも提供される。組成物はレンズの中に組み込まれるか、またはその上にコートされる。ポリマーならびに有効量のＮＫ１Ｒおよび／またはＳＰのアンタゴニストを有する生物活性組成物を含むデバイスも提供される。種々の実施形態では、デバイスは眼組織の中またはその上への送達のためである。例えば、デバイスは眼組織に接触する。ある特定の実施形態では、そのようなデバイスは眼組織または流体腔に埋め込まれまたは注射される。本発明の態様によって、眼科的に許容されるビヒクルの中に有効量のＮＫ１Ｒおよび／もしくはＳＰのアンタゴニストまたは阻害剤を含む組成物がさらに提供される。
ある特定の実施形態では、点眼組成物は、治療有効量のＮＫ１Ｒアンタゴニストおよび薬学的に許容される担体を含む。ある特定の実施形態では、組成物は、組成物の滴を被験体の眼に投与するために適したディスペンサーの中にある。ある特定の実施形態では、組成物は約２００～約４００ミリオスモル／ｋｇ（両端を含む）の容量オスモル濃度および約６．５～約７．５（両端を含む）のｐＨを有する。
ある特定の実施形態では、組成物は、ＮＫ１Ｒおよび／もしくはＳＰに対する、ならびに／またはＮＫ１Ｒ／ＳＰ相互作用に対する、中和性または機能ブロッキング抗体を含む。中和性または機能ブロック性抗体は、親和性精製されたポリクローナル抗体の再製剤化されたまたはヒト化された誘導体であり得るか、または親和性精製されたポリクローナル抗体のエピトープに結合し得る。
免疫炎症性眼疾患を阻害するかまたはその重症度を低減する例示的な方法は、ＮＫ１ＲもしくはＳＰおよび／またはＮＫ１ＲもしくはＳＰの任意の成分をコードするポリヌクレオチドまたはポリペプチドの転写、転写物の安定性、翻訳、改変、局在化、分泌、相互作用、結合、または機能を阻害または改変するポリヌクレオチド、ポリペプチド、抗体、化合物、または小分子を含む組成物を被験体の眼に局所投与することによって行なわれ得る。
種々の実施形態では、組成物は、遺伝子発現を低減またはサイレンシングするリボザイム、アンチセンスオリゴヌクレオチド（モルホリノ等）、ミクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、短いヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、または短い干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）を含む。
ある特定の実施形態では、組成物は、ＮＫ１ＲまたはＳＰに結合するイントラボディ（ｉｎｔｒａｂｏｄｙ）を含み得る。組成物は、あるいはまたはさらに、ＮＫ１Ｒに結合するがシグナル伝達を誘起しないＳＰの可溶性断片またはその模倣体を含む。例示的なポリペプチドには、それだけに限らないが、ＳＰ／ＮＫ１Ｒ機能を妨害することができる融合および／またはキメラタンパク質が含まれる。
一部の実施形態では、ＮＫ１ＲまたはＳＰを標的とする機能ブロック性抗体は、モノクローナルまたはポリクローナルである。抗体は、ＮＫ１Ｒ受容体ポリペプチドの中の１つまたは複数の配列に結合する抗体を含む。ある特定の実施形態では、抗体はイントラボディである。一部の実施形態では、抗体は一本鎖、ヒト化、組換え、またはキメラ抗体を含む。
ある特定の実施形態では、ＮＫ１Ｒアンタゴニストは、第２の治療剤または処置と組み合わせて投与される。ＮＫ１Ｒアンタゴニストは、以下：抗生剤、免疫抑制性組成物、抗炎症性組成物、成長因子、ステロイド、ケモカイン、またはケモカイン受容体の１つまたは複数を含む第２の組成物と同時にまたは逐次的に投与される。
その他の実施形態を以下に記載する。
本明細書で開示したそれぞれの実施形態は、開示したその他の実施形態のそれぞれに適用可能であることを意図している。即ち、本明細書に記載した種々の要素の全ての組合せは本発明の範囲内である。
一般的定義
他に具体的に定義しない限り、本明細書で使用する全ての技術用語および科学用語は、当技術分野（例えば細胞培養、分子遺伝学、および生化学）における当業者によって一般的に理解されるものと同じ意味を有すると解釈すべきである。
本明細書で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、文脈によって他が明確に指示されない限り、複数の言及を含む。即ち、例えば「疾患」、「疾患状態」、または「核酸」への言及は１つまたは複数のそのような実施形態への言及であり、当技術分野における当業者に公知の等価物等を含む。
本明細書で使用される場合、数値または範囲の文脈における用語「約」は、文脈によってより限定された範囲が要求されない限り、引用または主張した数値または範囲の±１０％を意味する。他に指示しない限り、本明細書および特許請求の範囲で使用した量（ａｍｏｕｎｔｓ）、大きさ、寸法、割合、形状、処方、パラメーター、パーセンテージ、パラメーター、量（ｑｕａｎｔｉｔｙ）、特徴、およびその他の数値を表わす全ての数は、用語「約」がその値、量、または範囲とともに明示的に出現しなくても、全ての場合において用語「約」によって改変されていると理解すべきである。したがって、逆が指示されなければ、以下の明細書および添付した特許請求の範囲で説明する数値パラメーターは正確であることも正確である必要もなく、許容範囲、変換係数、丸め、測定誤差、その他、ならびに本開示の主題によって得られることが求められる所望の特性に応じて当技術分野における当業者に公知の他の因子を反映して、近似的でも、および／または所望より大きくもしくは小さくてもよい。例えば、用語「約」は、値に言及する場合には、開示された方法を実施するためまたは開示された組成物を採用するためにそのような変動が適切であれば、一部の実施形態では±１００％、一部の実施形態では±５０％、一部の実施形態では±２０％、一部の実施形態では±１０％、一部の実施形態では±５％、一部の実施形態では±１％、一部の実施形態では±０．５％、および一部の実施形態では±０．１％の特定した量からの変動を包含していることを意味し得る。
さらに、用語「約」は、１つもしくは複数の数または数値範囲に関連して使用される場合には、範囲内の全ての数を含む全ての数を指すと理解すべきであり、説明した数値の上および下に境界を拡張することによってその範囲を改変する。エンドポイントによる数値範囲の言及は、全ての数、例えばその範囲に含まれる小数を含む全整数（例えば１～５への言及は、１、２、３、４、および５、ならびにその小数、例えば１．５、２．２５、３．７５、４．１等を含む）およびその範囲内の任意の範囲を含む。
本明細書で使用される場合、用語「アプタマー」または「アプタマー配列」は、その独特のヌクレオチド配列が分子のユニークな三次元構造への折り畳みを決定する一本鎖核酸（ＲＮＡまたはＤＮＡ）を指すことを意味している。１５～１２０ヌクレオチドを含むアプタマーは、オリゴヌクレオチド（１０１４～１０１５分子）のランダム化されたプールからｉｎ ｖｉｔｒｏで選択することができる。タンパク質およびペプチドを含む予め選択された標的に高い親和性および特異性で結合するアプタマーは、当技術分野で公知の方法を使用して設計および／または選択することができる。例えばＣｏｘ， Ｊ． Ｃ．； Ｅｌｌｉｎｇｔｏｎ， Ａ． Ｄ． （２００１） Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ ＆ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ９ （１０）： ２５２５－２５３１； Ｃｏｘ， Ｊ． Ｃ．； Ｈａｙｈｕｒｓｔ， Ａ．； Ｈｅｓｓｅｌｂｅｒｔｈ， Ｊ．； Ｂａｙｅｒ， Ｔ． Ｓ．； Ｇｅｏｒｇｉｏｕ， Ｇ．； Ｅｌｌｉｎｇｔｏｎ， Ａ． Ｄ． （２００２） Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ３０ （２０）： ｅ１０８．； およびＮｅｖｅｓ， Ｍ．Ａ．Ｄ．； Ｏ． Ｒｅｉｎｓｔｅｉｎ； Ｍ．Ｓａａｄ； Ｐ．Ｅ． Ｊｏｈｎｓｏｎ （２０１０） Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｃｈｅｍ １５３ （１）： ９－１６を参照されたい。これらのそれぞれの全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
上記の記載および特許請求の範囲において、「～の少なくとも１つ」または「～の１つまたは複数」のような語句は、要素または特徴の連結的リストの前に生じ得る。用語「および／または」も、２つまたはそれより多い要素または特徴のリストにおいて生じ得る。それが使用される文脈によって暗黙的または明示的に相反しない限り、そのような語句は、列挙された要素または特徴のいずれかを別個に意味するか、または引用された要素または特徴のいずれかを他の引用された要素または特徴のいずれかと組み合わせて意味することが意図されている。例えば、語句「ＡおよびＢの少なくとも１つ」、「ＡおよびＢの１つまたは複数」、および「Ａおよび／またはＢ」は、それぞれ「Ａのみ、Ｂのみ、またはＡとＢを共に」を意味することが意図されている。３つまたはそれより多い項目を含むリストについても同様の解釈が意図される。例えば、語句「Ａ、Ｂ、およびＣの少なくとも１つ」、「Ａ、Ｂ、およびＣの１つまたは複数」、および「Ａ、Ｂ、および／またはＣ」は、それぞれ「Ａのみ、Ｂのみ、Ｃのみ、ＡとＢを共に、ＡとＣを共に、ＢとＣを共に、またはＡとＢとＣを共に」を意味することが意図されている。さらに、上記および特許請求の範囲における用語「に基づく」の使用は、「少なくとも部分的に～に基づく」を意味し、それにより、引用していない特徴または要素も許容できることを意図している。
用語「組合せ治療」は、本明細書で使用される場合、２つまたはそれより多い異なる医薬剤が重なったレジメンで投与され、それにより被験体が同時に両方の薬剤に曝露される状況を指す。組合せ治療で使用される場合、２つまたはそれより多い異なる薬剤は、同時にまたは別個に投与され得る。この組合せ投与には、同一剤型中の２つまたはそれより多い薬剤の同時投与、別個の剤型中の同時投与、および別個の投与が含まれ得る。即ち、２つまたはそれより多い薬剤を同一の剤型中で共に製剤化し、同時に投与することができる。あるいは、別々の製剤の中に存在する、２つまたはそれより多い薬剤を同時に投与してもよい。別の選択肢では、第１の薬剤を投与した直後に１つまたは複数のさらなる薬剤を投与してもよい。別個の投与プロトコールでは、２つまたはそれより多い薬剤を数分の間をあけて、または数時間の間をあけて、または数日の間をあけて、投与してもよい。
「比較ウィンドウ」は、ある配列と参照配列とを最適に整列させた後で、その配列を同数の隣接した位置の参照配列とを比較することができる隣接した位置の数（例えば少なくとも約１０～約１００、約２０～約７５、約３０～約５０、１００～５００、１００～２００、１５０～２００、１７５～２００、１７５～２２５、１７５～２５０、２００～２２５、２００～２５０）のうち任意の１つのセグメントを指す。種々の実施形態では、比較ウィンドウは２つの整列した配列の一方または両方の全長である。一部の実施形態では、比較する２つの配列は異なる長さを含み、比較ウィンドウは２つの配列のうち長い方または短い方の全長である。比較のための配列の整列方法は当技術分野で周知されている。比較のための配列の最適なアラインメントは、例えばＳｍｉｔｈ ＆ Ｗａｔｅｒｍａｎ， Ａｄｖ． Ａｐｐｌ． Ｍａｔｈ． ２：４８２ （１９８１）のローカルホモロジーアルゴリズムによって、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ ＆ Ｗｕｎｓｃｈ， Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ４８：４４３ （１９７０）のホモロジーアラインメントアルゴリズムによって、Ｐｅａｒｓｏｎ ＆ Ｌｉｐｍａｎ， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔ’ｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８５：２４４４ （１９８８）の類似性探索法によって、これらのアルゴリズム（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｐａｃｋａｇｅ，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ，５７５ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄｒ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．におけるＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、およびＴＦＡＳＴＡ）のコンピューター実行によって、または手作業のアラインメントおよび目視検査（例えばＣｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ （Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．， ｅｄｓ． １９９５ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ）を参照）によって、実行することができる。
種々の実施形態では、配列同一性および配列類似性のパーセントを決定するために好適なアルゴリズムは、ＢＬＡＳＴおよびＢＬＡＳＴ２．０アルゴリズムであり、これらはそれぞれＡｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．， Ｎｕｃ． Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ． ２５：３３８９－３４０２ （１９７７）およびＡｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ２１５：４０３－４１０ （１９９０）に記載されている。ＢＬＡＳＴおよびＢＬＡＳＴ２．０は、本明細書に記載したパラメーターとともに、核酸およびタンパク質についての配列同一性パーセントを決定するために使用され得る。ＢＬＡＳＴ解析を実施するためのソフトウェアは、当技術分野で公知のように、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎを通して公衆利用可能である。このアルゴリズムには、最初にクエリー配列における長さＷの短いワードを特定することによって高スコアの配列ペア（ＨＳＰ）を特定することが含まれ、この短いワードは、データベース配列中の同じ長さのワードと整列させたときにいくつかの正の閾値スコアＴとマッチするか、これを満足する。Ｔは近隣ワードスコア閾値と称される（Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．、上掲）。これらの初期近隣ワードヒットは、それらを含むより長いＨＳＰを発見するための探索を開始するシーズとして作用する。ワードヒットは、集積アラインメントスコアが増大できる限り、それぞれの配列に沿って両方の方向に延長される。集積スコアは、ヌクレオチド配列については、パラメーターＭ（マッチする残基のペアについてのリウォードスコア、常に＞０）およびＮ（マッチしない残基についてのペナルティスコア、常に＜０）を使用して計算される。アミノ酸配列については、集積スコアを計算するためにスコアリングマトリックスが使用される。それぞれの方向へのワードヒットの延長は、集積アラインメントスコアがその最大達成値から量Ｘだけ低下した場合、集積スコアが１つもしくは複数の負のスコア残基アラインメントの集積によってゼロもしくはそれ未満に低下した場合、またはいずれかの配列の末端に到達した場合に、停止される。ＢＬＡＳＴアルゴリズムのパラメーターＷ、Ｔ、およびＸは、アラインメントの感度および速度を決定する。（ヌクレオチド配列のための）ＢＬＡＳＴＮプログラムは、デフォルトとしてワード長（Ｗ）１１、期待値（Ｅ）１０、Ｍ＝５、Ｎ＝－４、および両方の鎖の比較を使用する。アミノ酸配列について、ＢＬＡＳＴＰプログラムは、デフォルトとしてワード長３および期待値（Ｅ）１０を使用し、ＢＬＯＳＵＭ６２スコアリングマトリックス（Ｈｅｎｉｋｏｆｆ ＆ Ｈｅｎｉｋｏｆｆ， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８９：１０９１５ （１９８９）を参照）はアラインメント（Ｂ）５０、期待値（Ｅ）１０、Ｍ＝５、Ｎ＝－４、および両方の鎖の比較を使用する。
配列比較のため、典型的には１つの配列が試験配列を比較するための参照配列として作用する。種々の実施形態では、配列比較アルゴリズムを使用する場合には、試験配列および参照配列がコンピューターに入力され、必要であれば部分配列座標が指定され、配列アルゴリズムプログラムパラメーターが指定される。好ましくは、デフォルトプログラムパラメーターを使用することができるか、または代替のパラメーターを指定することができる。次いで配列比較アルゴリズムにより、参照配列に対する試験配列の配列同一性パーセントがプログラムパラメーターに基づいて計算される。
移行的な用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「含む（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」、または「～によって特徴付けられる」と同義であり、包括的またはオープンエンドであって、引用していない追加的な要素または方法ステップを除外しない。対照的に、移行的な語句「～からなる」は、特許請求の範囲で特定していないいずれの要素、ステップ、または成分をも除外する。移行的な語句「本質的に～からなる」は、特許請求の範囲を、特定した材料またはステップ、および特許を請求する発明の「基礎的かつ新規な特徴に実質的に影響しない材料またはステップ」に限定する。
本明細書で使用される場合、「有効な」は、治療用化合物の量に言及する場合には、本開示の様式において使用した場合に、妥当な有益性／リスクの比に相応する不都合な有害副作用（例えば毒性、刺激、またはアレルギー反応）なしに所望の治療応答を得るために十分な化合物の量を指す。
用語「強化（ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ）」、「強化する（ｅｎｈａｎｃｅ）」、「強化する（ｅｎｈａｎｃｅｓ）」または「強化すること（ｅｎｈａｎｃｉｎｇ）」は、特定したパラメーターの増大（例えば少なくとも約１．１倍、１．２５倍、１．５倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、８倍、１０倍、１２倍、もしくは１５倍、またはそれより多い増大）および／または特定した活性の少なくとも約５％、１０％、２５％、３５％、４０％、５０％、６０％、７５％、８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、または１００％の増大を指す。
本明細書で使用される場合、用語「免疫細胞」は一般に、骨髄で産生される造血幹細胞（ＨＳＣ）由来の白血球（ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ）を含む。「免疫細胞」は、例えばリンパ球（Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞）および骨髄由来細胞（好中球、好酸球、好塩基球、単球、マクロファージ、樹状細胞）を含む。
用語「免疫エフェクター細胞」は、本明細書で使用される場合、免疫応答、例えば免疫エフェクター応答の促進に関与する細胞を指す。免疫エフェクター細胞の例には、Ｔ細胞、例えばアルファ／ベータＴ細胞およびガンマ／デルタＴ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫ－Ｔ）細胞、肥満細胞、および骨髄由来食細胞が含まれる。「免疫エフェクター機能または免疫エフェクター応答」は、その用語が本明細書で使用される場合、例えば標的細胞に対する免疫攻撃を強化または促進する、免疫エフェクター細胞の、機能または応答を指す。例えば、免疫エフェクター機能または応答は、標的細胞の死滅または成長もしくは増殖の阻害を促進するＴ細胞またはＮＫ細胞の特性を指す。Ｔ細胞の場合、一次刺激および共刺激は、免疫エフェクター機能または応答の例である。
２つまたはそれより多い核酸またはポリペプチドの配列に関する用語「同一性の」または「同一性」パーセントは、比較ウィンドウまたは配列比較アルゴリズムを使用してもしくは手作業のアラインメントおよび目視検査によって測定して指定した領域にわたって比較し、最大の対応のために整列させたときに、同一の（例えば全ポリペプチド配列またはその別個のドメインの、指定した領域にわたって、例えば５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれより大きい同一性の）アミノ酸残基またはヌクレオチドと同一であるか、またはその特定したパーセンテージを有する２つもしくはそれより多い配列または部分配列を指す。少なくとも約８０％同一であるそのような配列は、「実質的に同一」であると言われる。一部の実施形態では、２つの配列は１００％同一である。ある特定の実施形態では、２つの配列は、それらの配列の１つ（例えば２つの配列が異なる長さを有している場合には、２つの配列のうち短い方）の全長にわたって１００％同一である。種々の実施形態では、同一性は試験配列の相補体を指し得る。一部の実施形態では、同一性は少なくとも約１０～約１００、約２０～約７５、約３０～約５０のアミノ酸またはヌクレオチドの長さである領域にわたって存在する。ある特定の実施形態では、同一性は少なくとも約５０アミノ酸の長さの領域にわたって、またはより好ましくは１００～５００、１００～２００、１５０～２００、１７５～２００、１７５～２２５、１７５～２５０、２００～２２５、２００～２５０、またはそれより長いアミノ酸の長さの領域にわたって存在する。
用語「阻害する」、「減衰させる」、「低減する」、または「抑制する」は、特定したパラメーターの低下（例えば少なくとも約１．１倍、１．２５倍、１．５倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、８倍、１０倍、１２倍、もしくは１５倍、またはそれより大きな増大）および／または特定した活性の少なくとも約５％、１０％、２５％、３５％、４０％、５０％、６０％、７５％、８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、または１００％の減少または低減を指す。これらの用語は、参照または対照に対することが意図されている。
本明細書で使用される場合、「単離された」または「精製された」核酸分子、ポリヌクレオチド、ポリペプチド、もしくはタンパク質、または化学化合物は、その他の細胞材料、または組換え技法によって産生した場合には培養培地、または化学合成した場合には化学的前駆体もしくはその他の化学物質を実質的に含まない。精製された化合物は、重量（乾燥重量）で少なくとも６０％が目的の化合物である。好ましくは、調製物は重量で少なくとも７５％、より好ましくは少なくとも９０％、最も好ましくは少なくとも９９％が目的の化合物である。例えば、精製された化合物は、重量で所望の化合物の少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９８％、９９％、または１００％（ｗ／ｗ）である化合物である。純度は任意の適切な標準的方法、例えばカラムクロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィー、または高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）解析によって測定される。精製または単離されたポリヌクレオチド（リボ核酸（ＲＮＡ）またはデオキシリボ核酸（ＤＮＡ））またはポリペプチドは、遺伝子またはその天然に存在する状態でその側部にある配列を含まない。精製または単離されたペプチドまたはタンパク質断片は、天然に存在する全長の参照タンパク質のペプチドまたはタンパク質断片の配列の側部にあるアミノ酸を含まない。参照配列は配列番号によって特定される。「精製された」は、ヒト被験体への投与のために安全な無菌性の程度、例えば感染性または毒性の薬剤を含まないことも定義する。
用語「代謝物」は、活性薬剤がいったん被験体に投与された際にｉｎ ｖｉｖｏでそれに変換され得る任意の化合物を含む。そのような代謝物の例としては、グルクロニド、硫酸塩、およびヒドロキシレートが挙げられる。
本明細書で使用される場合、「モジュレートする（ｍｏｄｕｌａｔｅ）」、「モジュレートする（ｍｏｄｕｌａｔｅｓ）」、または「モジュレーション（ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ）」は、特定した活性の強化（例えば増大）または阻害（例えば減衰、低減、または抑制）を指す。モジュレーションは、ベースラインの値に対して１倍、２倍、３倍、５倍、１０倍、１００倍等を超えて活性を増大させることがある。モジュレーションは、ベースラインの値未満に活性を低下させることもある。モジュレーションは、ベースラインの値にまで活性を正常化することもある。
本明細書で使用される場合、「ＮＫアンタゴニスト」は、ニューロキニン１、ニューロキニン２、またはサブスタンスＰの活性を阻害、低下もしくはブロック、またはその他の方法で損なう、公知および未知の化合物（それらの薬学的に許容される塩、誘導体、ホモログ、またはアナログを含む）を包含することを意図している。そのような化合物は、ニューロキニン１、ニューロキニン２、またはサブスタンスＰに直接作用してそれらの活性を阻害することができるか、またはＮＫ１、ＮＫ２、もしくはＮＫ３受容体等のＮＫ受容体のファミリーに作用することができる。そのような薬剤の例には、ニューロキニン１受容体アンタゴニストのアキラルピリジンクラス；アプレピタント；ネツピタント２１；ベトクツピタント２９；エルズロピタント；ラネピタント；オサネタント；タルネタント；ＧＲ２０５１７１；ＭＫ０５１７；ＭＫ５１７；ＭＥＮ１１４６７；ネパヅタント；ＭＥＮ１１４２０；Ｍ２７４７７３；［Ｓａｒ（９），Ｍｅｔ（０２）（１１）］－サブスタンスＰ；Ｔｙｒ（６），Ｄ－Ｐｈｅ（７），Ｄ－Ｈｉｓ（９）－サブスタンス－Ｐ（６－１１）（センディド）；（β－Ａｌａ（８））－ニューロキニンＡ（４－１０）；（Ｔｙｒ（５），Ｄ－Ｔｒｐ（６，８，９），Ｌｙｓ－ＮＨ（２）（１０））－ニューロキニンＡ；［Ｄ－Ｐｒｏｚ，Ｄ－Ｔｒｉｐ７，９］－ＳＰ ＤＰＤＴ－ＳＰ；［Ｄ－Ｐｒｏｚ，Ｄ－Ｐｈｅ７，Ｄ－Ｔｒｐ９］－ＳＰ；ＳＲ４８９６８および４－アルキルピペリジン誘導体；テルネタント；ＳＢ２２３４１２；ＳＢ２２３４１２Ａ；テルネタント塩酸塩；ＭＤＬ１０３３９２；リン酸化モルホリンアセタールヒトニューロキニン－１受容体アゴニスト；ＳＤＺ ＮＫＴ３４３；ＬＹ３０３ ８７０；Ｙｍ－３５３７５およびスピロ置換ピペリジン類；ＹＭ－４４７７８；ＹＭ－３８３３６；セプチド；Ｌ７３２，１３；ダクチノマイシンアナログ；ＭＥＮ１０２０７；Ｌ６５９８７４；Ｌ６６８，１６９；ＦＲ１１３６８０および誘導体；ＧＲ８３０７４；トリペプチドポッセルシ，グルタミニル－Ｄ－トリプトファイフェニルアロナイト配列；Ｌ６５９，８７７；Ｒ３９６；ニューロキニンアンタゴニストとしてのイミダゾ［４，５－ｂ］キノキサリンシオニン類；ＭＥＮ１０２０８；ＤＰＤＴＰ－オクタ；ＧＲ７３６３２；ＧＲ６４３４９；センクチド；ＧＲ７１２５１；［Ｄ－Ａｒｇ１，Ｄ－Ｐｒｏ２，Ｄ－Ｔｒｐ７，９，Ｌｅｕ１１］－ＳＰ（１－１１）；Ａｃ ｈｅｕ－Ａｓｐ－Ｇｌｎ－Ｔｒｐ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ ＮＨ２；Ｔｈｒ－Ａｓｐ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｔｖｐ－Ｖａｌ－Ｄ－Ｔｒｐ－Ｄ－Ｔｒｐ－Ａｒｇ ＮＨ２；シクロ［Ｅｌｎ－Ｔｒｐ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｍｅｔ］；Ｄ－Ｐｒｏ２Ｄ－Ｔｒｐ ７，９；Ｄ－Ａｒｇ１Ｄ－Ｔｒｐ ７，９ ｌｅｕ１１；［Ｇｌｙ６］－ＮＫＢ［３－１０］；［Ａｒｇ３，Ｄ－Ａｌａ６］－ＮＫＢ［３－１０］；ＣＰ－９６３４；３アミノキヌジジン；ＣＰ－９９９９４；Ｓ１８５２５；Ｓ１９７５２；４－キノリンカルボキシニドフレミンシククラス；ＣＰ－１２２７２１；ＭＫ－８６９；ＧＲ２０５１７１；スパンチドＩＩ；ＣＰ－９６，３４５；Ｌ７０３，６０６；ＳＲ１４０，ＤＮＫ３３３；２－フェニル－４－キノリンカルボキシミドクラス；ＦＫ２２４；ＦＲ１１５２２４；ＦＫ８８８；非ペプチドニューロキニンアンタゴニストのＺＭ２５３２７０－ピロロピリミジン（ｙｒｒｏｌｏｐｙｒｉｍｉｄｉｎｅ）クラス；ＧＲ７１２５１；ＧＲ８２３３４；ＲＰ６７５８０；ヒトニューロキニンのジアシルピペラジンアンタゴニスト、例えばＬ－１６１６６４；ＲＰ６７５８０；ＭＥＮ１０３７６；ＧＲ９８４００；Ｎ２－［Ｎ２－（１Ｈ－インドール－３－イルカルボニル）－Ｌ－リジル］－Ｎ－メチル－Ｎ－（フェニル－メチル）－Ｌ－フェニルアラニンアミド（２ｂ）；ＳＰ－（１－１１）；ＳＰ－（６－１１）；ＳＰ－（４－１１）ＷＩＮ５１７０３；スパンチドＩＩ；スパンチドＩＩＩ；スパンチドＩ；Ｌ７５４０３０；ＭＫ０８６９；ＯＮＯ－７４３６；ＯＮＯ７４３６；ＭＥＮ１３５１０；１－［２－（Ｒ）－｛１－１Ｒ）－［３，５－ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エトキシ｝－３－（Ｒ）－（３，４－ジフルオロフェニル）－４－（Ｒ）－テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－４－イルメチル］－３－（ｒ）－メチルピペリジン－３－カルボン酸（１）；ＬＹ３０６，７４０；ＳＬＶ－３２３；２－置換－４－アリール－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ピリミド［４，５－ｂ］［１，５］オキサゾシン－５－－オン；９－置換－７－アリール－３，４，５，６－テトラヒドロ－２Ｈ－ピリド［４，３－ｂ］－および［２，３－ｂ］－１，５－オキサゾシン－６－オン；ＳＲ１４２８０１；ＳＢ２２２２００；ＣＰ９６３４５；ＳＲ４８９６８；エズロピタント；ＣＪ１１９７４；ＭＥＮ１１５５８；［１８Ｆ］ＳＰＡ－ＲＱ；ニューロピタント２１；ベツピタント２９；ＳＲ１４４１９０；ＳＲ４８６９２；ＳＲ１４１７１６；Ｌ７３３０６０；ボホピタント；Ｒ－６７３；ネパヅタント；サレヅタント；ＵＫ２９０７９５；２－（４－ビフェニリル）キノリン－４－カルボキシレートおよびカルボキサミドアナログ（ニューロキニン－３受容体アンタゴニスト）；４－アミノ－２－（アリール）－ブチルベンザミドおよびアナログ；ＭＫ－８６９；Ｌ７４２６９４；ＣＰ１２２７２１；１－アルキル－５－（３，４－ジクロロフェニル）－５－［２－［（３－置換）－１－アゼチジニル－］エチル］－２－ピペリジン類；Ｌ７６０７３５；Ｌ７５８，２９８，Ｃｂｚ－Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｔｒｐ－０Ｂｚｌ（ＣＦ（３））（２）；Ｌ７３３，０６１；ＳＲ１４４１９０；ＳＢ２３５３７５；Ｎ－－［（Ｒ，Ｒ）－（Ｅ）－１－アリールメチル－３－（２－オキソ－アゼパン－３－イル）カルバモイル］アリル－Ｎ－メチル－３，５－ビス（トリフルオロメチル）ベンザミド類；３－［Ｎ１－３，５－ビス（トリフルオロメチル）ベンゾイル－Ｎ－アリールメチル－Ｎ１－メチルヒドラジノ］－Ｎ－－［（Ｒ）－２－オキソ－アゼパン－３－イル］プロピオンアミド類；ＳＲ１４２８０６；ＳＲ４８，９６８；ＣＰ１４１，９３８；ＬＹ３０６７４０；ＳＢ４００２３；ＳＢ４１４２４０；ノルピタンチウム；ＳＲ１４０３３３；ペルヒドロイソインドールＲＰ６７５８０，デピタント；ＲＰＲ１００８９３；ラネピタント；ＬＹ－３０３８７０；ＬＹ３０３８７０；ｓａｎｏｔｉ ｓｙｎｔｈｅｌａｂｏ；ノルピタニウム；ＳＲ１４０３３３；ＳＲ４８９６８；サベヅタント；ＡＶ６０８；ＡＶ－６０８，ＡＶ６０８；ＣＧＰ６０８２９；ＮＫ－６０８；ＮＫＰ－６０８Ｃ；ＮＫＰ６０８；ＣＳ００３；Ｒ１１３２８１；ベスチピタント；５９７５９９；ＧＷ５９７５９９；ＧＷ５９７５９９Ｂ；ニューロキニンアンタゴニスト；ＳＳＲ２４０６００；カソピタント；６７９７６９；ＧＷ６７９７６９；ＴＡ５５３８；ＳＳＲ１４６９７７；ＳＬＶ３１７；ＳＬＶ－３１７；８２３２９６；ＧＷ８２３２９６；ＡＶＥ５８８３；ＡＶＥ－５８８３；ＡＺ３１１；ＳＢ２３５３７５；ＳＢ７３３２１０；ＡＺ６８５；ＳＡＲ１０２２７９；ＳＡＲ１０２７９；ＳＳＲ２４１５８６；ＳＬＶ３３２；ニューロキニン２アンタゴニスト－Ｓｏｌｖａｙ；ＮＫ－２アンタゴニスト－Ｓｏｌｖａｔ；ＳＬＶ－３３２；ＳＬＶ３３２，ＮＩＫ６１６；ＭＰＶ４５０５；ＮＩＫ６１６；ＭＰＣ４５０５；Ｚ５０１；Ｚ－５０１；１ＴＡＫ６３７；ＣＰ９６３４５；Ｌ６５９８７７；ＣＧＰ４９８２３；ＧＲ２０３０４０；Ｌ７３２１３８；Ｓ１６４７４；ＷＩＮ５１７０８；ＺＤ７９４４；Ｓ１８５２３；ＣＩ１０２１；ＰＤ１５４０７５；７５８２９８；ＺＤ４９７４；Ｓ１８９２０；ＨＭＲ２０９１；ＦＫ３５５；ＳＣＨ２０５５２８；ＮＫ５８０７；ＮＩＰ５３１；ＳＣＨ６２３７３；ＵＫ２２４６７１；ＭＥＮ１０６２７；ＷＩＮ６４８２１；ＭＤＬ１０５２１２Ａ；ＭＥＮ１０５７３；ＴＡＣ３６３；１ＭＥＮ１１１４９；ＨＳＰ１１７；ＮＩＰ５３０；およびＡＺＤ５１０６が含まれる。
本明細書で使用される場合、用語「ＮＫ－１受容体」は、当技術分野で一般に理解されるように使用され、分子量５８．０００を有する４０７アミノ酸のタンパク質で、Ｇタンパク質共役受容体のファミリー１（ロドプシン様）のメンバーである、タキキニンＮＫ－１受容体とも称される哺乳動物の受容体、およびその保存的バリアントを指す。
本明細書で使用される場合、用語「ＮＫ－１受容体アンタゴニスト」は、ＮＫ－１受容体に選択的に結合して、その生物活性を低減または排除する化合物を指す。例えば、選択的結合は、ＮＫ－１受容体に対するアンタゴニストの、ＮＫ－２受容体またはＮＫ－３受容体に対する親和性よりも約２倍～１０，０００倍高い親和性を指す。例えば、ＮＫ１Ｒアンタゴニストは、ＮＫ－２またはＮＫ－３受容体と比較して、２倍、５倍、１０倍、５０倍、１００倍、１０００倍、５０００倍、１０，０００倍、またはそれより大きい親和性で、ＮＫ－１受容体に結合する。
「配列同一性のパーセンテージ」は、比較ウィンドウにわたって２つの最適に整列させた配列を比較することによって決定され、比較ウィンドウ中のポリヌクレオチドまたはポリペプチドの配列の部分は、２つの配列の最適アラインメントのための参照配列（これは付加または欠失を含まない）と比較して、付加または欠失（即ちギャップ）を含み得る。パーセンテージは、両方の配列の中で同一の核酸塩基またはアミノ酸残基が現れる位置の数を決定してマッチした位置の数を得て、マッチした位置の数を比較ウィンドウ中の位置の全数で割り、その結果に１００を掛けて配列同一性のパーセンテージを得ることによって計算される。
本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される」担体または賦形剤は、妥当な有益性／リスクの比に相応する不都合な有害副作用（例えば毒性、刺激、およびアレルギー反応）がなく、ヒトおよび／または動物における使用に適した担体または賦形剤を指す。これは、例えば本発明の化合物を被験体に送達するための薬学的に許容される溶媒、懸濁化剤、またはビヒクルであってよい。そのような担体または賦形剤は、ＮＫ１Ｒアンタゴニスト活性を含まない。
本明細書で使用される場合、用語「プロドラッグ」は、薬理学的に活性な薬剤である別の化合物の前駆体である化合物を指し、前駆化合物は不活性な形態で被験体に投与され、いったん投与されれば、ｉｎ ｖｉｖｏで代謝されて薬理学的に活性な薬剤になる。
小分子は、質量２０００ダルトン未満の化合物である。小分子の分子量は、好ましくは１０００ダルトン未満、より好ましくは６００ダルトン未満であり、例えば化合物は５００ダルトン、４００ダルトン、３００ダルトン、２００ダルトン、または１００ダルトン未満である。
本明細書で使用される用語「被験体」、「患者」、「個体」等は限定することを意図しておらず、一般に相互交換可能である。即ち、「患者」と記載された個体は所与の疾患を必ずしも有さず、単に医学的アドバイスを求めている場合がある。本明細書で使用される用語「被験体」は動物界の任意のメンバー、例えば哺乳動物を含む。一実施形態では、被験体はヒトである。別の実施形態では、被験体はマウスである。
同様に、「実質的に純粋」は、天然にそれに付随する成分から分離されたヌクレオチドまたはポリペプチドを意味する。典型的には、ヌクレオチドおよびポリペプチドは、それらが天然に会合しているタンパク質および天然に存在する有機分子を重量で少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または９９％も含まない場合に、実質的に純粋である。
本明細書で使用される場合、障害に伴う「症状」は、障害に伴う臨床的または検査的な徴候を含み、被験体が感じるか観察するかができるものに限らない。
本明細書で使用される場合、「処置すること」は、例えば障害または疾患の阻害、退縮、進行の停止、または重症度の低減を包含する。処置することは、障害の何らかの症状（複数可）の防止または改善も包含する。本明細書で使用される場合、被験体における疾患の進行または疾患の合併症の「阻害」は、被験体における疾患の進行および／または疾患の合併症、徴候、または症状を防止または低減することを意味する。
本明細書で引用した受託番号によって示されるＧｅｎＢａｎｋおよびＮＣＢＩの寄託は、参照により本明細書に組み込まれる。本明細書で引用した他の全ての出版された参考文献、書類、原稿、および科学文献は、参照により本明細書に組み込まれる。矛盾が生じた場合には、定義を含む本明細書が優先する。さらに、材料、方法、および実施例は説明のためのみであり、限定することを意図していない。
本明細書で提供した範囲は、範囲内の全ての値の簡略表現であると理解される。例えば、１～５０の範囲は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、または５０からなる群の中の任意の数、数の組合せ、または部分範囲を含むと理解される。濃度、量、細胞数、パーセンテージ、およびその他の数値は、範囲フォーマットで本明細書に提示され得る。そのような範囲フォーマットは、便利さおよび簡略化のためのみに使用され、範囲の限界として明示的に引用した数値を含むだけでなく、それぞれの数値および部分範囲が明示的に引用されたかのようにその範囲内に包含される別個の数値または部分範囲の全てを含むと柔軟に解釈すべきであることが理解される。例えば、パラメーター範囲が提供されれば、その範囲内の全ての整数およびそれらの１０分の１も、本発明によって提供されている。例えば、「０．２～５ｍｇ」は、０．２ｍｇ、０．３ｍｇ、０．４ｍｇ、０．５ｍｇ、０．６ｍｇ等、５．０ｍｇを含む５．０ｍｇまでの開示である。
本明細書で開示したそれぞれの実施形態は、開示した他の実施形態のそれぞれに適用可能であることが意図されている。即ち、本明細書に記載した種々の要素の全ての組合せは、本発明の範囲内である。
本発明のその他の特徴および利点は、その好ましい実施形態の以下の説明および特許請求の範囲から明らかになる。他に定義しない限り、本明細書で使用する全ての技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野における当業者によって一般的に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書に記載したものと同様または等価の方法および材料を本発明の実施または試験に使用することができるが、好適な方法および材料を以下に記載する。
図１Ａ～１Ｃは、ＤＥＤマウスモデルにおけるサブスタンスＰ（ＳＰ）の増大したレベルを示すグラフである。
図２は、免疫炎症性眼障害の処置においてＳＰ－ＮＫ１Ｒシグナル伝達をブロックする機構を示すダイアグラムである。
図３Ａおよび３Ｂは、ＮＫ１ＲアンタゴニストがＳＰ媒介制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）の減少を無効にすることを示すグラフである。
図４は、サブスタンスＰのレベルがＤＥＤの経過における眼球表面において増大することを示すグラフである。ＤＥＤはＣ５７ＢＬ／６マウスにおいて１４日間誘起された。対照（０日目）およびＤＥＤマウス（４日目）の三叉神経節（ＴＧ）を採取し、組織をホモジナイズした。対照およびＤＥＤマウスのホモジナイズした組織の上清におけるＴＧ中のサブスタンスＰのタンパク質レベルを、ＥＬＩＳＡを使用して分析し、タンパク質レベルをＢＣＡタンパク質アッセイキットによって測定した総タンパク質に対して調節した。データは２つの独立した実験の平均±ＳＥＭを表わす。＊ｐ＜０．０５。
図５Ａおよび５Ｂは、三叉神経節由来のサブスタンスＰが、骨髄由来の樹状細胞の成熟を促進することを示すグラフである。図５Ａ。骨髄由来の樹状細胞（ＢＭＤＣ）を、種々の用量のサブスタンスＰ（２５、５０、および１００ｐｇ／ｍＬ）の存在下で１８時間培養した。ＢＭＤＣの成熟は、フローサイトメトリーを使用してＭＨＣ ＩＩの発現（平均蛍光強度［ＭＦＩ］）を見積もることによって評価した。図５Ｂ。ＤＥＤまたは対照マウスから採取した三叉神経節（ＴＧＮ）を３日間培養し、続いてＢＭＤＣと２４時間共培養した。ＢＭＤＣに対するＴＧＮ由来ＳＰの影響をブロックするため、ニューロキニン－１－受容体アンタゴニストであるスパンチド（１０μＭおよび１００μＭ）を共培養系に添加した。ＣＤ１１ｃ＋ＢＭＤＣによるＭＨＣ ＩＩの発現を、フローサイトメトリーを使用して様々な群で見積もった。データは２つの独立した実験の平均±ＳＥＭを表わす。ＭＦＩ：平均蛍光強度。＊ｐ＜０．０５。 同上。
図６Ａ～６Ｅは、ＮＫ１Ｒの局所的ブロッキングが抗原提示細胞の成熟を阻害し、ドライアイ疾患を改善することを示す一連のグラフおよび散布図である。ＤＥＤを４日間誘起した後、マウスをＮＫ１ＲアンタゴニストであるＣＰ－９９，９９４もしくはＬ－７３３，０６０（１μｇ／μｌ）またはＰＢＳ（対照として）で１日３回、ＤＥＤ誘起の１４日後まで局所処置した。未処置のＤＥＤマウスを対照とした。（図６Ａ）疾患の重症度を見積もるため、角膜フルオレセイン染色（ＣＦＳ）を４、７、１０、および１４日目に実施した。１４日目における角膜（図６Ｂ）および流入領域リンパ節（図６Ｃおよび６Ｄ）における成熟ＭＨＣ ＩＩｈｉＣＤ１１ｂ＋抗原提示細胞（ＡＰＣ）の頻度、ならびに流入領域リンパ節におけるＡＰＣによるＭＨＣ ＩＩの発現（図６Ｅ）を、フローサイトメトリーを使用して種々の群で見積もった。ＭＦＩ：平均蛍光強度。データは２つの独立した実験の平均±ＳＥＭを表わす。＊ｐ＜０．０５。 同上。 同上。 同上。
図７Ａ～７Ｄは、ＮＫ１Ｒの局所的ブロッキングが流入領域リンパ節におけるＴＨ１７細胞の活性化および結膜におけるその浸潤を抑制することを示す一連のグラフおよびプロットである。ＤＥＤを４日間誘起した後、マウスはＮＫ１ＲアンタゴニストであるＣＰ－９９，９９４もしくはＬ－７３３，０６０（１μｇ／μｌ）またはＰＢＳ（対照として）による局所処置を１日３回、ＤＥＤ誘起の１４日後まで受けた。未処置のＤＥＤマウスを対照とした。（図７Ａ）ＣＰ－９９，９９４、Ｌ－７３３，０６０もしくはＰＢＳで処置したナイーブなＤＥＤマウス、および未処置のＤＥＤマウスのＤＬＮにおけるＣＤ４＋ＩＬ－１７＋ＴＨ１７細胞の頻度を、フローサイトメトリーを使用してＤＥＤ誘起の１４日後に評価した。（図７Ｂおよび７Ｃ）ナイーブな、ＮＫ１Ｒアンタゴニスト処置したおよび未処置のＤＥＤマウスの結膜におけるＴＨ１７細胞の頻度、ならびに（図７Ｄ）様々な群の結膜におけるＩＬ－１７のｍＲＮＡ発現レベルを、それぞれフローサイトメトリーおよびリアルタイムＰＣＲを使用して、１４日目に見積もった。データは２つの独立した実験の平均±ＳＥＭを表わす。Ｃｏｎｊ：結膜。＊ｐ＜０．０５。 同上。 同上。
図８Ａ～８Ｃは、サブスタンスＰが阻害性分子および分泌された免疫制御性サイトカインのＴｒｅｇ発現を抑制することによってＴｒｅｇの機能不全を誘起し、これがスパンチドＩによって逆転させられることを示す一連のグラフである。図８Ａは、ＳＰがｉｎ ｖｉｔｒｏにおけるＴｒｅｇによる阻害性分子Ｆｏｘｐ３、ＣＴＬＡ４、およびＰＤ－１の発現を抑制することを実証する一連のグラフである。さらに、ＴｒｅｇをＳＰとインキュベーションすることにより、（図８Ｂ）Ｔｒｅｇによる有意に低いレベルの免疫調節性サイトカイン（ＴＧＦβおよびＩＬ－１０）の分泌および（図８Ｃ）ｉｎ ｖｉｔｒｏでエフェクターＴ細胞の増殖を抑制するＴｒｅｇの低い能力がもたらされる。しかし、ＮＫ－１ＲのアンタゴニストであるスパンチドＩ（Ｓｐｔ）を共培養に添加すると、ＳＰに誘起されるＴｒｅｇの機能不全が逆転する。データは平均±ＳＥＭを表わす。＊ｐ＜０．０５。 同上。
図９Ａ～９Ｄは、スパンチドＩの全身投与によるＳＰシグナル伝達の阻害がＴｒｅｇ機能を回復させ、ＴＨ１７細胞を抑制し、ＤＥＤの重症度を低減させることを実証する一連のグラフおよびプロットである。図９Ａ：スパンチドＩ（Ｓｐｔ）で処置したＤＥＤマウスは、ＰＢＳ処置した対照と比較して、有意に低い角膜蛍光染色（ＣＦＳ）スコアを有していた。図９Ｂ：スパンチドＩで処置したＤＥＤマウスのＤＬＮから単離したＴｒｅｇは、エフェクターＴ細胞の増殖の抑制において、対照群由来のＴｒｅｇよりも高い能力を有していた。さらに、ＤＥＤマウスをスパンチドＩで処置すると、対照と比較して、ＤＥＤマウスの（図９Ｃ）流入領域リンパ節および（図９Ｄ）結膜におけるＣＤ４＋ＩＬ－１７＋ＴＨｈ１７細胞の頻度の有意な低減がもたらされた。データは平均±ＳＥＭを表わす。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．００１。 同上。
図１０は、赤眼指標（Ｏｃｕｌａｒ Ｒｅｄｎｅｓｓ Ｉｎｄｅｘ）（ＯＲＩ）をＩｍａｇｅ Ｊとともに使用する動物モデルにおける赤眼の評価を実証する一連の写真画像である。ステップ１：デジタルカメラを使用して結膜の画像を取得し、ＲＧＢカラーＪＰＥＧ画像（３２６４×２４４８画素）として記録した。ステップ２：画像におけるバックグラウンドノイズを低減するため、選択したフィルターペーパー区域（ブラックボックス）に従って色補正（ホワイトバランス）を行なった。ステップ３：使用者による評価区域としてＲＯＩ（目的の領域、黄色の円の内部の区域）を選択し、プログラムによって各画素の赤－緑－青（ＲＧＢ）値を読み取り、これを色相・彩度・明度（ＨＳＶ）空間に変換し、これらの値を選択した区域における発赤についての百進法での値に自動的に変換した（Ｉｍａｇｅ Ｊコンピュータープログラム、ＮＩＨ）。
図１１は、非アレルギー性（非感染性）赤眼のウサギモデルから得られた結果を実証する一連の画像、表、およびグラフである。動物を麻酔し、４０μｌの一連の増加する濃度のダピプラゾールを動物の右眼に適用して赤眼を誘起した。対照としてＰＢＳを左の眼に使用した。眼を細隙灯で検査し、誘起前、誘起後最初の２分間について３０秒ごと、さらに８分間について４分ごと、および１時間まで１０分ごとに、画像を取得した。表は、誘起後のＯＲＩスコアの最大変化および１時間の観察期間の間にそのような変化が起こった時（ピーク時）をまとめている。代表的な画像は赤眼の発生を示し、グラフはＯＲＩスコアの変化の動力学を、平均±ＳＥＭを表わすデータとともにまとめている。結果は、５％のダピプラゾールがＯＲＩスコアの最大の増加を誘起することを示している。５％ダピプラゾール対ＰＢＳについて、＊ｐ＜０．０５、†ｐ＜０．０１。
図１２は、アレルギー性の赤眼のモルモットモデルから得られた結果を実証する一連の画像、表、およびグラフである。動物を麻酔し、２０μｌの１．５ｍｇ／ｍｌヒスタミンを動物の右眼に適用して赤眼を誘起した。対照としてＰＢＳを左の眼に使用した。眼を細隙灯で検査し、誘起の前、誘起後最初の２分間について３０秒ごと、さらに８分間について４分ごと、および１時間まで１０分ごとに、画像を取得した。表は、誘起後のＯＲＩスコアの最大変化および１時間の観察期間の間にそのような変化が起こった時（ピーク時）をまとめている。代表的な画像は赤眼の発生を示し、グラフはＯＲＩスコアの変化の動力学を、平均±ＳＥＭを表わすデータとともにまとめている。ＰＢＳと比較して、†ｐ＜０．０１。
図１３は、ニューロキニン－１受容体アンタゴニズムが非アレルギー性赤眼を改善することを実証するグラフおよび一連の画像である。動物を、体積４０μｌの５％ダピプラゾールの点眼と同時に１．０ｍｇ／ｍｌのＬ－７０３，６０６（高度に選択的なＮＫ１Ｒアンタゴニスト）で局所処置した。ダピプラゾールで誘起したがＬ－７０３，６０６処置をしていない動物を対照とした。眼を細隙灯で検査し、誘起の前、誘起後最初の２分間について３０秒ごと、さらに８分間について４分ごと、および１時間まで１０分ごとに、画像を取得した。ＯＲＩスコアの変化の動力学と平均±ＳＥＭを表わすデータをまとめた。結果は、ＳＰ／ＮＫ１Ｒのブロッキングが赤眼を迅速かつ一貫して改善することを示している。対照と比較して、＊ｐ＜０．０５、†ｐ＜０．０１。
図１４は、ニューロキニン－１受容体アンタゴニズムがアレルギー性赤眼を改善することを実証するグラフおよび一連の画像である。動物を、体積２０μｌの１．５ｍｇ／ｍｌのヒスタミンの点眼と同時に１．０ｍｇ／ｍｌのＬ－７０３，６０６（高度に選択的なＮＫ１Ｒアンタゴニスト）で局所処置した。ヒスタミンで誘起したがＬ－７０３，６０６処置をしていない動物を対照とした。眼を細隙灯で検査し、誘起の前、誘起後最初の２分間について３０秒ごと、さらに８分間について４分ごと、および１時間まで１０分ごとに、画像を取得した。ＯＲＩスコアの変化の動力学と平均±ＳＥＭを表わすデータをまとめた。結果は、ＳＰ／ＮＫ１Ｒのブロッキングが赤眼を迅速かつ一貫して改善することを示している。対照と比較して、＊ｐ＜０．０５、†ｐ＜０．０１。
図１５Ａおよび１５Ｂは、サブスタンスＰのレベルがドライアイ疾患（ＤＥＤ）の経過において眼球表面で増加することを示す一連のグラフである。ＤＥＤはＣ５７ＢＬ／６マウスにおいて１４日間誘起した。対照（０日目）およびＤＥＤマウス（４日目および１４日目）の角膜、結膜、および三叉神経節（ＴＧ）を採取し、組織をホモジナイズした。図１５Ａ：酵素結合免疫吸着検定法を使用して、対照およびＤＥＤマウスのホモジナイズした組織の上清において、角膜、結膜、およびＴＧにおけるサブスタンスＰのタンパク質レベルを分析し、タンパク質レベルをＢＣＡプロテインアッセイキット（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）によって測定した総タンパク質に対して調節した。図１５Ｂ：リアルタイムＰＣＲを使用して、対照およびＤＥＤマウスの角膜、結膜、およびＴＧにおけるサブスタンスＰ ｍＲＮＡレベルを分析した。データは平均±ＳＥＭとして表わす（図１５Ａおよび１５Ｂ）。ｎ＝２回の独立した実験（図１５Ａおよび１５Ｂ）。 同上。
図１６Ａ～１６Ｃは、本明細書に記載した方法において有用な非ペプチド小分子化合物の概略図である。これらの非ペプチド化合物のそれぞれは、３つの要素：（ａ）橋頭の窒素を有するピペリジンまたはキヌクリジン環、（ｂ）ベンズヒドリル基、および（ｃ）ベンジルアミノ側鎖からなる類似の構造を共有している。これら３つの要素は全て、ＮＫ１Ｒとの相互活性に必要である。Ｌ－７３３，０６０は、化学療法によって誘起される吐き気および嘔吐に適応する最初のＦＤＡ承認済みＮＫ１ＲアンタゴニストであるＭＫ－８６９（Ｌ－７５４，０３０）／アプレピタントに構造的に最も近い。この薬物は、片頭痛またはうつ病にも使用されてきた。ＭＫ－８６９が水に難溶性であることが、点眼製剤としてのその使用を妨げている。図１６Ａは、ＣＰ－９９，９９４（Ｐｆｉｚｅｒ）の分子構造を示す概略図である。図１６Ｂは、ＣＰ－９９，９９４のアナログであるＬ－７３３，０６０（Ｍｅｒｃｋ）の分子構造を示す概略図である。図１６Ｃは、ＣＰ－９６，３４５のアナログであるＬ－７０３，０６０（Ｍｅｒｃｋ）の分子構造を示す概略図である。Ｌ－７０３，０６０はＣｐ－９６，３４５よりも高いＮＫ１Ｒ親和性を有する。ピペリジン環の代わりに、Ｌ－７０３，０６０はベンジルアミノキヌクリジン構造を有している。 同上。
図１７は、ダピプラゾールの分子構造を示す概略図である。
本開示は、好適なビヒクル調製物と組み合わせたアンタゴニストのＳＰまたはＳＰ受容体（例えばニューロキニン１受容体、ＮＫ１Ｒ）のブロッカーまたはアンタゴニストの眼送達（例えば局所、結膜下、または硝子体内の投与）を含む、ドライアイ疾患（ＤＥＤ）、赤眼、アレルギー性結膜炎、および眼の疼痛を含むサブスタンスＰ（ＳＰ）に関連する非感染性の眼障害の方法または処置に関する。「ＳＰまたはＮＫ１Ｒのブロッカーまたはアンタゴニスト」は、ＳＰ受容体媒介シグナル変換を抑制することができる任意の薬剤を含み、それだけに限らないが、ＮＫ１Ｒの小分子アンタゴニスト、中和性抗ＮＫ１Ｒ抗体、ＳＰを指向するブロッキング融合タンパク質もしくは抗体、またはＮＫ１ＲもしくはＳＰの発現もしくはそれらによって媒介されるシグナル伝達を低減する他の任意の薬剤（例えばＤＮＡアプタマー、ＲＮＡアプタマー、またはオリゴヌクレオチド）を含み得る。ＤＥＤ、赤眼、アレルギー性結膜炎、および眼の疼痛を含むがこれらに限定されない非感染性の眼の表面の疾患におけるＳＰ関連炎症性応答を抑制する。
眼球表面（角膜および結膜）は、体内で最も神経支配されている組織である。種々の神経由来因子の中で、サブスタンスＰ（ＳＰ）は１１アミノ酸のニューロペプチドであり、炎症の活性メディエーターとして働く（Ｊ Ｃｅｌｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ， ２００４； ２０１：１６７－１８０）。ＳＰのブロッキングは、角膜感染における重症度（Ｉｎｖｅｓｔ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ Ｖｉｓ Ｓｃｉ． ２００８； ４９：４４５８－４４６７； Ｉｎｖｅｓｔ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ Ｖｉｓ Ｓｃｉ． ２０１１； ５２：８６０４－８６１３）および新血管形成（Ｉｎｖｅｓｔ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ Ｖｉｓ Ｓｃｉ， ２０１４； ５５：６７８３－６７９４）を低減させることが示されている。しかし、ＤＥＤおよび赤眼（非ＤＥＤ関連）等の非感染性眼球表面障害の病因におけるＳＰの役割についてはほとんど知られていない。
ＳＰ関連の非感染性眼障害は高度に流行している。例えば、慢性的眼球表面炎症として特徴付けられるＤＥＤは、患者が専門医による眼科治療を求める最も頻度の高い非屈折性の理由である。（Ａｍ Ｊ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ． ２００７； １４３：４０９－１５）。ＤＥＤは成人人口の１０～２０％（Ｏｃｕｌ Ｓｕｒｆ ２００７； ５：７５－９２）およびほぼ５百万人の５０歳を超える米国人が罹患していると推定され、数百万人超がドライアイの間欠的な症状を経験している（Ｏｃｕｌ Ｓｕｒｆ． ２００７； ５：９３－１０７）。女性における有病率は男性の約２倍高い（Ａｍ Ｊ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ． ２００３； １３６：３１８－２６； Ａｒｃｈ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ． ２００９； １２７：７６３－８）。この疾患は視力に関連する生活の質および生産性に有害な影響を有し、公衆衛生にかなりの経済的負担を引き起こしている（Ｏｃｕｌ Ｓｕｒｆ． ２０１７； １５：３３４－６５）。治療戦略は根底にある疾患のプロセスに対処しない種々の型の潤滑点眼剤および軟膏による症状の緩和、ならびに眼圧の上昇および白内障という視力を脅かす副作用によって長期使用が制限されるコルチコステロイドによる非特異的抗炎症処置に限られていた（Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ ２０００； １１：４７８－４８３）。例えば、非特異的抗炎症治療は、局所的シクロスポリンおよびリフィテグラストとともに中程度から重症のＤＥＤの治療の中心である。２つのＦＤＡ承認済み治療である局所的シクロスポリン（ＲＥＳＴＡＳＩＳ（登録商標））およびリフィテグラスト（ＸＩＩＤＲＡ（登録商標））が最近登場したにも関わらず、ＤＥＤにおいて根底にある免疫応答の特定の成分を標的とすることに焦点を当てた免疫調節剤に対する満たされていない必要性がある。
赤眼はさらに流行しており、大部分の人々はある時点で赤眼を経験している。ある研究において、１０名の被験体のうち９名が赤眼の自己治療を報告している。今までのところ、赤眼の重症度の主観的な定量化のみが臨床的に使用されている（Ｅｆｒｏｎ Ｎａｔｈａｎ， ｅｔ ａｌ． ”Ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ ｏｆ Ｇｒａｄｉｎｇ Ｓｃａｌｅｓ ｆｏｒ Ｃｏｎｔａｃｔ Ｌｅｎｓ Ｃｏｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ．” Ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ ａｎｄ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｏｐｔｉｃｓ， ｖｏｌ． ２１， ｎｏ． １， ２００１， ｐｐ． １７－２９； Ｓｃｈｕｌｚｅ， Ｍａｒｃ Ｍ．， ｅｔ ａｌ． ”Ｔｈｅ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ Ｖａｌｉｄａｔｅｄ Ｂｕｌｂａｒ Ｒｅｄｎｅｓｓ Ｇｒａｄｉｎｇ Ｓｃａｌｅｓ．” Ｏｐｔｏｍｅｔｒｙ ａｎｄ Ｖｉｓｉｏｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ， ｖｏｌ． ８４， ｎｏ． １０， ２００７， ｐｐ． ９７６－９８３； Ｓｃｈｕｌｚｅ， Ｍａｒｃ Ｍ．， ｅｔ ａｌ． ”Ｔｈｅ Ｐｅｒｃｅｉｖｅｄ Ｂｕｌｂａｒ Ｒｅｄｎｅｓｓ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｇｒａｄｉｎｇ Ｓｃａｌｅｓ．” Ｏｐｔｏｍｅｔｒｙ ａｎｄ Ｖｉｓｉｏｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ， ｖｏｌ． ８６， ｎｏ． １１， ２００９， ｐｐ． Ｅ１２５０－Ｅ１２５８）。赤眼は眼科医院で最も一般的に見られる徴候の１つであり、一般に感染性および非感染性の原因による結膜血管の拡張による（Ｉｎｖｅｓｔ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ Ｖｉｓ Ｓｃｉ． ２０１３； ５４：４８２１－４８２６）。赤眼は結膜血管の反応性拡張によって特徴付けられ、結膜の充血をもたらす（Ｌｅｉｂｏｗｉｔｚ， Ｈｏｗａｒｄ Ｍ． ”Ｔｈｅ Ｒｅｄ Ｅｙｅ．” Ｔｈｅ Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ， ｖｏｌ． ３４３， ｎｏ． ５， ２０００， ｐｐ． ３４５－３５１； Ａｍｐａｒｏ， ｅｔ ａｌ． ”Ｔｈｅ Ｏｃｕｌａｒ Ｒｅｄｎｅｓｓ Ｉｎｄｅｘ： Ａ Ｎｏｖｅｌ Ａｕｔｏｍａｔｅｄ Ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ Ｍｅａｓｕｒｉｎｇ Ｏｃｕｌａｒ Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ．” Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ ＆ Ｖｉｓｕａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ， ２０１３， ｐｐ． Ｑｕｉｃｋ ｓｕｂｍｉｔ： ２０１７－０６－１８Ｔ２１：１４：３３－０４００； ＭｃＬａｕｒｉｎ， Ｅｕｇｅｎｅ， ｅｔ ａｌ． ”Ｂｒｉｍｏｎｉｄｉｎｅ Ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ ０．０２５％ ｆｏｒ Ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｏｃｕｌａｒ Ｒｅｄｎｅｓｓ： Ａ Ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｔｒｉａｌ．” Ｏｐｔｏｍｅｔｒｙ ａｎｄ Ｖｉｓｉｏｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ， ｖｏｌ． ９５， ｎｏ． ３， ２０１８， ｐｐ． ２６４－２７１）。非感染性の赤眼の中で、ＤＥＤおよびアレルギーは根底にある２つの典型的な障害である（Ｃｌｉｎ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ． ２０１３； ７：１１９７－１２０４； Ｃｕｒｒ Ｅｙｅ Ｒｅｓ． ２０１８； ４３：４３－５）。赤眼の処置は、根底にある原因に依存する。軽度のアレルギー性結膜炎に対しては抗ヒスタミン剤および肥満細胞安定化剤が現在使用され、より重篤な形態には局所ステロイドが必要である。コルチコステロイドの長期使用は、その顕著な副作用のために制限される。非アレルギー性赤眼については、局所血管収縮剤が一般に使用される。例えば、非感染性の赤眼の現在の処置は、主として血管収縮剤を含む店頭販売（ＯＴＣ）の点眼剤、例えばＣＬＥＡＲ ＥＹＥＳ（登録商標）およびＶＩＳＩＮＥ（登録商標）を含む。しかし、それらの有効性は、タキフィラキシー（耐性または有効性の喪失）、処置の中断による発赤のリバウンド（ベースラインと比較した状態の悪化）、および全身性副作用のために限定的である（Ｃｕｒｒ Ｅｙｅ Ｒｅｓ． ２０１８； ４３：４３－４５）。ずっと最近になって、より選択的な血管収縮剤であるＬＵＭＩＦＹ（登録商標）（０．０２５％ブリモニジン）が赤眼を処置するためのＯＴＣとしてＦＤＡによって承認された。しかし医薬自体が医薬成分または保存剤に対するアレルギー反応によって赤眼を引き起こすことがあり、タキフィラキシーおよびリバウンドの有害作用を起こす可能性を未だに有している。
本発明は、ＤＥＤおよび赤眼（独立した臨床的適応症）を含む非感染性免疫炎症性眼疾患の処置への根本的に異なるアプローチであり、非感染性眼科免疫障害の処置におけるいかなる現行の治療アプローチにも関連しない。コルチコステロイドは非特異的抗炎症剤であり、現在ＤＥＤおよび赤眼に承認外で使用されているが、これらは多くの厄介な副作用を伴っている。米国におけるＤＥＤに対する２つのＦＤＡ承認済みの処方治療は、局所的シクロスポリン（ＲＥＳＴＡＳＩＳ（登録商標））およびリフィテグラスト（ＸＩＩＤＲＡ（登録商標））である。ＲＥＳＴＡＳＩＳ（登録商標）は眼の熱感を含む無数の有効性および耐性の課題を有している。ＸＩＩＤＲＡ（登録商標）は２０１６年に承認されたが、初期の結果はＲＥＳＴＡＳＩＳ（登録商標）と大きな相違はなく、有効性が低く、患者が処置を中断するような多くの耐性の課題および副作用があった。さらに、いずれも赤眼を助けるものではない。
ニューロキニン－１（ＮＫ－１）受容体アンタゴニスト
ニューロキニン－１（ＮＫ－１）受容体は神経伝達物質サブスタンスＰの受容体であり、中枢神経系全体に分布している。ある種のニューロキニン－１（ＮＫ－１）受容体アンタゴニストは、抗うつ、抗不安、および制吐特性を有することが公知である。現在のところ、任意のＮＫ１Ｒアゴニスト（ＳＰ等）による処置がＤＥＤを低減し得ることを実証する証拠はない。実際、ＮＫ１Ｒ－／－マウスは神経学的病理を含む野生型マウスと区別される複数の異なる表現型を有している。ＳＰシグナル伝達は、野生型の場合における「好ましくない」ＳＰ受容体（ＮＫ２ＲまたはＮＫ３Ｒ）を通してこの遺伝的に改変されたマウス系統においても存在し、むしろ強化されている可能性がある（ノックアウトマウスにおいて「好ましく」なる）。したがって、ＤＥＤの病因におけるＳＰシグナル伝達の正確な役割は、より良い動物モデルを使用するさらなる研究を必要としている。
したがって、ある特定の実施形態では、組成物は、治療有効量のＮＫ－１受容体アンタゴニスト、その薬学的に許容される塩、ＮＫ－１受容体アンタゴニストのプロドラッグもしくはその薬学的に許容される塩、またはＮＫ－１化合物、ＮＫ－１受容体アンタゴニスト、もしくはその薬学的に許容される塩の溶媒和物もしくは水和物を含む。
ある特定の実施形態では、ＮＫ１Ｒアンタゴニストは、ＮＫ１Ｒの小分子アンタゴニスト、中和性抗ＮＫ１Ｒ抗体、ＳＰに対するブロッキング融合タンパク質、抗ＳＰ抗体、または核酸を含む。ある特定の実施形態では、ＮＫ１Ｒアンタゴニストは小分子である。
ある特定の実施形態では、ＮＫ１Ｒアンタゴニストは、
スパンチド（ＲＰＫＰＱＱＷＦＷＬＬ；配列番号２）、
Figure 2022534990000015
 （２Ｓ，３Ｓ）－Ｎ－［（２－メトキシフェニル）メチル］－２－フェニル－３－ピペリジンアミン二塩酸塩、
Figure 2022534990000016
 （２Ｓ，３Ｓ）－３－［［３，５－ビス（トリフルオロメチル）フェニル］メトキシ］－２－フェニルピペリジン塩酸塩、
Figure 2022534990000017
 ５－［［（２Ｒ，３Ｓ）－２－［（１Ｒ）－１－［３，５－ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エトキシ］－３－（４－フルオロフェニル）－４－モルホリニル］メチル］－１，２－ジヒドロ－３Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－オン、
Figure 2022534990000018
 （２Ｓ，３Ｓ）－Ｎ－［［２－メトキシ－５－（トリフルオロメトキシ）フェニル］メチル］－２－フェニル－３－ピペリジンアミン二塩酸塩、
Figure 2022534990000019
 （２Ｓ，３Ｓ）－Ｎ－（２－メトキシフェニル）メチル－２－ジフェニルメチル－１－アザビシクロ［２．２．２］オクタン－３－アミン、
Figure 2022534990000020
 （４Ｒ）－４－ヒドロキシ－１－［（１－メチル－１Ｈ－インドール－３－イル）カルボニル］－Ｌ－プロリル－Ｎ－メチル－３－（２－ナフタレニル）－Ｎ－（フェニルメチル）－Ｌ－アラニンアミド、
Figure 2022534990000021
 （２Ｓ，３Ｓ）－Ｎ－［［２－メトキシ－５－（１Ｈ－テトラゾール－１－イル）フェニル］メチル］－２－フェニル－３－ピペリジンアミン二塩酸塩、
Figure 2022534990000022
 ＧＲ８２３３４、
Figure 2022534990000023
 ５－［［（２Ｒ，３Ｓ）－２－［（１Ｒ）－１－［３，５－ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エトキシ］－３－（４－フルオロフェニル）－４－モルホリニル］メチル－Ｎ，Ｎ－ジメチル－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－４－メタンアミン塩酸塩、
Figure 2022534990000024
 Ｎ－アセチル－Ｌ－トリプトファン３，５－ビス（トリフルオロメチル）ベンジルエステル、
Figure 2022534990000025
 （３ａＲ，７ａＲ）－オクタヒドロ－２－［１－イミノ－２－（２－メトキシフェニル）エチル］－７，７－ジフェニル－４Ｈ－イソインドール、
Figure 2022534990000026
 １－［［（２－ニトロフェニル）アミノ］カルボニル］－Ｌ－プロリル－Ｎ－メチル－３－（２－ナフタレニル）－Ｎ－（フェニルメチル）－Ｌ－アラニンアミド、
Figure 2022534990000027
 １－［２－［（３Ｓ）－３－（３，４－ジクロロフェニル）－１－［２－［３－（１－メチルエトキシ）フェニル］アセチル］－３－ピペリジニル］エチル］－４－フェニル－１－アゾニアビシクロ［２．２．２］オクタンクロリド、それらのアナログ、または組合せを含む。
ある特定の実施形態では、ＮＫ１Ｒアンタゴニストは、ＣＰ－９９，９９４［（２Ｓ，３Ｓ）－Ｎ－［（２－メトキシフェニル）メチル］－２－フェニル－３－ピペリジンアミン二塩酸塩］、またはＬ－７３３，０６０［（２Ｓ，３Ｓ）－３－［［３，５－ビス（トリフルオロメチル）フェニル］メトキシ］－２－フェニルピペリジン塩酸塩］を含む。
ある特定の実施形態では、ＮＫ１Ｒアンタゴニストは、Ｌ－７３３，０６０、Ｌ－７０３，０６０、またはそれらの組合せを含む。ある特定の実施形態では、ＤＥＤおよび／または赤眼を防止または処置する方法は、治療有効量のＬ－７３３，０６０、Ｌ－７０３，０６０、またはそれらの組合せの、それを必要とする被験体への投与を含む。
ある特定の実施形態では、医薬組成物はＮＫアンタゴニストを含む。ある特定の実施形態では、ＮＫアンタゴニストは、ニューロキニン－１受容体アンタゴニストのアキラルピリジンクラス；ネツピタント２１；ベトクツピタント２９；エルズロピタント；ラネピタント；オサネタント；タルネタント；ＧＲ２０５１７１；ＭＫ０５１７；ＭＫ５１７；ＭＥＮ１１４６７；ネパヅタント；ＭＥＮ１１４２０；Ｍ２７４７７３；［Ｓａｒ（９），Ｍｅｔ（０２）（１１）］－サブスタンス－Ｐ；Ｔｙｒ（６），Ｄ－Ｐｈｅ（７），Ｄ－Ｈｉｓ（９）－サブスタンス－Ｐ（６－１１）（センディド）；（ベータ；Ａｌａ（８））－ニューロキニンＡ（４－１０）；（Ｔｙｒ（５），Ｄ－Ｔｒｐ（６，８，９），Ｌｙｓ－ＮＨ（２）（１０））－ニューロキニンＡ；［Ｄ－Ｐｒｏｚ，Ｄ－Ｔｒｉｐ７，９］－ＳＰ ＤＰＤＴ－ＳＰ；［Ｄ－Ｐｒｏｚ，Ｄ－Ｐｈｅ７，Ｄ－Ｔｒｐ９］－ＳＰ；ＳＲ４８９６８および４－アルキルピペリジン誘導体；テルネタント；ＳＢ２２３４１２；ＳＢ２２３４１２Ａ；テルネタント塩酸塩；ＭＤＬ１０３３９２；リン酸化モルホリンアセタールヒトニューロキニン－１受容体アゴニスト；ＳＤＺ ＮＫＴ ３４３；ＬＹ ３０３ ８７０；Ｙｍ－３５３７５およびスピロ置換ピペリジン類；ＹＭ－４４７７８；ＹＭ－３８３３６；セプチド；Ｌ７３２，１３；ダクチノマイシンアナログ；ＭＥＮ１０２０７；Ｌ６５９８７４；Ｌ６６８，１６９；ＦＲ１１３６８０および誘導体；ＧＲ８３０７４；トリペプチドポッセルシ；グルタミニル－Ｄ－トリプトファイフェニルアロナイト配列；Ｌ６５９，８７７；Ｒ３９６；ニューロキニンアンタゴニストとしてのイミダゾ［４，５－ｂ］キノキサリンシオニン；ＭＥＮ１０２０８；ＤＰＤＴＰ－オクタ；ＧＲ７３６３２；ＧＲ６４３４９；センクチド；ＧＲ７１２５１；［Ｄ－Ａｒｇ１，Ｄ－Ｐｒｏ２，Ｄ－Ｔｒｐ７，９，Ｌｅｕ１１］－ＳＰ（１－１１）；Ａｃ ｈｅｕ－Ａｓｐ－Ｇｌｎ－Ｔｒｐ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ ＮＨ２；Ｔｈｒ－Ａｓｐ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｔｖｐ－Ｖａｌ－Ｄ－Ｔｒｐ－Ｄ－Ｔｒｐ－Ａｒｇ ＮＨ２；シクロ［Ｅｌｎ－Ｔｒｐ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｍｅｔ］；Ｄ－Ｐｒｏ２Ｄ－Ｔｒｐ７，９；Ｄ－Ａｒｇ１Ｄ－Ｔｒｐ７，９ ｌｅｕ１１；［Ｇｌｙ６］－ＮＫＢ［３－１０］；［Ａｒｇ３，Ｄ－Ａｌａ６］－ＮＫＢ［３－１０］；ＣＰ－９６３４；３ アミノキヌジジン；ＣＰ－９９９９４；Ｓ１８５２５；Ｓ１９７５２；４－キノリンカルボキシニドフレミンシククラス；ＣＰ－１２２７２１；ＭＫ－８６９；ＧＲ２０５１７１；スパンチドＩＩ；ＣＰ－９６，３４５；Ｌ７０３，６０６；ＳＲ１４０，ＤＮＫ３３３；２－フェニル－４－キノリンカルボキシミドクラス；ＦＫ２２４；ＦＲ１１５２２４；ＦＫ８８８；非ペプチドニューロキニンアンタゴニストのＺＭ２５３２７０－ピロロピリミジンクラス；ＧＲ７１２５１；ＧＲ８２３３４；ＲＰ６７５８０；ヒトニューロキニンのジアシルピペラジンアンタゴニスト、例えばＬ－１６１６６４；ＲＰ６７５８０；ＭＥＮ１０３７６；ＧＲ９８４００；Ｎ２－［Ｎ２－（１Ｈ－インドール－３－イルカルボニル）－Ｌ－リジル］－Ｎ－メチル－Ｎ－（フェニル－メチル）－Ｌ－フェニルアラニンアミド（２ｂ）；ＳＰ－（１－１１）；ＳＰ－（６－１１）；ＳＰ－（４－１１）ＷＩＮ５１７０３；スパンチドＩＩ；スパンチドＩＩＩ；スパンチドＩ；アプレピタント；Ｌ７５４０３０；ＭＫ０８６９；ＯＮＯ－７４３６；ＯＮＯ ７４３６；ＭＥＮ１３５１０；１－［２－（Ｒ）－｛１－１Ｒ｝－［３，５－ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エトキシ｝－３－（Ｒ）－（３，４－ジフルオロフェニル）－４－（Ｒ）－テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－４－イルメチル］－３－（ｒ）－メチルピペラジン－３－カルボン酸（１）；ＬＹ３０６，７４０；ＳＬＶ－３２３；２－置換－４－アリール－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ピリミド［４，５－ｂ］［１，５］オキサゾシン－５－オン；９－置換－７－アリール－３，４，５，６－テトラヒドロ－２Ｈ－ピリド［４，３－ｂ］－および［２，３－ｂ］－１，５－オキサゾシン－６－オン；ＳＲ１４２８０１；ＳＢ２２２２００；ＣＰ９６３４５；ＳＲ４８９６８；エズロピタント；ＣＪ１１９７４；ＭＥＮ１１５５８；［１８Ｆ］ＳＰＡ－ＲＱ；ニューロピタント２１；ベツピタント２９；ＳＲ１４４１９０；ＳＲ４８６９２；ＳＲ１４１７１６；Ｌ７３３０６０；ボホピタント；Ｒ－６７３；ネパヅタント；サレヅタント；ＵＫ２９０７９５；２－（４－ビフェニリル）キノリン－４－カルボキシレートおよびカルボキサミドアナログ類（ニューロキニン－３受容体アンタゴニスト）；４－アミノ－２－（アリール）－ブチルベンザミドおよびアナログ；ＭＫ－８６９；Ｌ７４２６９４；ＣＰ１２２７２１；１－アルキル－５－（３，４－ジクロロフェニル）－５－［２－［（３－置換）－１－アゼチジニル－］エチル］－２－ピペリジン類；Ｌ７６０７３５；Ｌ７５８，２９８，Ｃｂｚ－Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｔｒｐ－０Ｂｚｌ（ＣＦ（３））（２）；Ｌ７３３，０６１；ＳＲ１４４１９０；ＳＢ２３５３７５；Ｎ－－［（Ｒ，Ｒ）－（Ｅ）－１－アリールメチル－３－（２－オキソ－アゼパン－３－イル）カルバモイル］アリル－Ｎ－メチル－３，５－ビス（トリフルオロメチル）ベンザミド類；３－［Ｎ１－３，５－ビス（トリフルオロメチル）ベンゾイル－Ｎ－アリールメチル－Ｎ１－メチルヒドラジノ］－Ｎ－－［（Ｒ）－２－－オキソ－アゼパン－３－イル］プロピオンアミド類；ＳＲ１４２８０６；ＳＲ４８，９６８；ＣＰ１４１，９３８；ＬＹ３０６７４０；ＳＢ４００２３；ＳＢ４１４２４０；ノルピタニウム；ＳＲ１４０３３３；ペルヒドロイソインドール ＲＰ ６７５８０，デピタント；ＲＰＲ１００８９３；ラネピタント；ＬＹ－３０３８７０；ｓａｎｏｔｉ ｓｙｎｔｈｅｌａｂｏ；ノルピタニウム；ＳＲ１４０３３３；ＳＲ４８９６８；サベヅタント；ＡＶ ６０８；ＡＶ－６０８，ＡＶ６０８；ＣＧＰ６０８２９；ＮＫ－６０８；ＮＫＰ－６０８Ｃ；ＮＫＰ６０８；ＣＳ００３；Ｒ１１３２８１；ベスチピタント；５９７５９９；ＧＷ５９７５９９；ＧＷ５９７５９９Ｂ；ＳＳＲ２４０６００；カソピタント；６７９７６９；ＧＷ６７９７６９；ＴＡ５５３８；ＳＳＲ１４６９７７；ＳＬＶ３１７；ＳＬＶ－３１７；８２３２９６；ＧＷ８２３２９６；ＡＶＥ５８８３；ＡＶＥ－５８８３；ＡＺ３１１；ＳＢ２３５３７５；ＳＢ７３３２１０；ＡＺ６８５；ＳＡＲ１０２２７９；ＳＡＲ１０２７９；ＳＳＲ２４１５８６；ＳＬＶ３３２；ニューロキニン２アンタゴニスト－Ｓｏｌｖａｙ；ＳＬＶ－３３２；ＳＬＶ３３２，ＮＩＫ６１６；ＭＰＶ４５０５；ＮＩＫ６１６；ＭＰＣ４５０５；Ｚ５０１；Ｚ－５０１；１ＴＡＫ６３７；ＣＰ９６３４５；Ｌ６５９８７７；ＣＧＰ４９８２３；ＧＲ２０３０４０；Ｌ７３２１３８；Ｓ１６４７４；ＷＩＮ５１７０８；ＺＤ７９４４；Ｓ１８５２３；ＣＩ１０２１；ＰＤ１５４０７５；７５８２９８；ＺＤ４９７４；Ｓ１８９２０；ＨＭＲ２０９１；ＦＫ３５５；ＳＣＨ２０５５２８；ＮＫ５８０７；ＮＩＰ５３１；ＳＣＨ６２３７３；ＵＫ２２４６７１；ＭＥＮ１０６２７；ＷＩＮ６４８２１；ＭＤＬ１０５２１２Ａ；ＭＥＮ１０５７３；ＴＡＣ３６３；１ＭＥＮ１１１４９；ＨＳＰ１１７；ＮＩＰ５３０；およびＡＺＤ５１０６から選択される。
ある特定の実施形態では、アンタゴニストは、式（Ｉ）
Figure 2022534990000028
 を有する化合物、またはその薬学的に許容される塩を含む。
Ａｒは置換または未置換のアリールまたはヘテロアリールである。
ｎは１～３の整数である。
Ｘ１は－ＮＨ－、－Ｃ（Ｏ）－、または－Ｏ－である。
Ｘ２は－ＣＨＲ７－または－Ｏ－である。
Ｌ１は結合、または置換もしくは未置換のＣ１～Ｃ４アルキレンである。
Ｌ２は結合、または置換もしくは未置換のＣ１～Ｃ４アルキレンである。
それぞれのＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、およびＲ７は独立に、水素、ハロゲン、置換もしくは未置換のＣ１～Ｃ４アルキレン、置換もしくは未置換の２～４員のヘテロアルキル、置換もしくは未置換のシクロアルキル、置換もしくは未置換のヘテロシクロアルキル、置換もしくは未置換のアリール、または置換もしくは未置換のヘテロアリールであり、あるいはＲ６とＲ７は結合して置換もしくは未置換のヘテロシクロアルキルを形成する。
ある特定の実施形態では、Ｌ２は結合であり、ｎは１であり、Ａｒはフェニルであり、Ｘ２は－ＣＨ２－であり、Ｒ６は水素である。
一部の実施形態では、アンタゴニストは式（ＩＩ）
Figure 2022534990000029
 を有する化合物、またはその薬学的に許容される塩である。Ｘ１、Ｌ１、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５は本明細書に記載されている。
一部の実施形態では、Ｘ１は－ＮＨ－または－Ｏ－である。一部の実施形態では、Ｌ１は置換または未置換のメチレンである。
一部の実施形態では、アンタゴニストは以下の式
Figure 2022534990000030
 またはその薬学的に許容される塩を有する。
一部の実施形態では、それぞれのＲ１、Ｒ２、Ｒ４、およびＲ５は独立に水素、－ＯＣＨ３、－ＯＣＦ３、－ＯＣＨ３、－ＣＦ３、または
Figure 2022534990000031
 である。
一部の実施形態では、Ｒ３は水素である。
一部の実施形態では、Ｒ１またはＲ５は独立に水素または－ＯＣＨ３である。
一部の実施形態では、Ｒ２またはＲ４は独立に水素、
Figure 2022534990000032
 、
－ＣＦ３、または－ＯＣＦ３である。
一部の実施形態では、式（ＩＩ－ａ）の化合物は、
Figure 2022534990000033
 を含む。
一部の実施形態では、式（ＩＩ－ｂ）の化合物は、
Figure 2022534990000034
 を含む。
ある特定の実施形態では、Ｘ２は－Ｏ－であり、Ｌ２は結合であり、ｎは１である。
一部の実施形態では、アンタゴニストは式（ＩＩＩ）
Figure 2022534990000035
 を有する化合物、またはその薬学的に許容される塩である。Ａｒ、Ｘ１、Ｌ１、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、およびＲ６は本明細書に記載されている。
一部の実施形態では、Ｌ１は置換または未置換のメチレンである。例えば、Ｌ１は－ＣＨ（ＣＨ３）－である。
一部の実施形態では、アンタゴニストは式（ＩＩＩ－ａ）
Figure 2022534990000036
 を有する化合物、またはその薬学的に許容される塩である。Ａｒ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、およびＲ６は本明細書に記載されている。
一部の実施形態では、Ａｒは置換または未置換のフェニルである。一部の実施形態では、Ａｒは
Figure 2022534990000037
 である。
一部の実施形態では、Ｒ６は置換Ｃ１～Ｃ４アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ６は
Figure 2022534990000038
 である。
一部の実施形態では、それぞれのＲ１、Ｒ２、Ｒ４、およびＲ５は独立に水素または－ＣＦ３である。一部の実施形態では、Ｒ３は水素である。
一部の実施形態では、それぞれのＲ１およびＲ５は独立に水素である。
一部の実施形態では、それぞれのＲ２およびＲ４は独立に水素または－ＣＦ３である。
一部の実施形態では、式（ＩＩＩ－ａ）の化合物は、
Figure 2022534990000039
 を含む。
ある特定の実施形態では、Ｒ６とＲ７は結合して５～６員のヘテロシクロアルキルを形成する。ある特定の実施形態では、Ｘ２は－ＣＨＲ７－であり、Ｒ６とＲ７は結合して６員のヘテロシクロアルキルを形成し、ｎは２である。
一部の実施形態では、アンタゴニストは式（ＩＶ）
Figure 2022534990000040
 を有する化合物、またはその薬学的に許容される塩である。Ｘ１、Ｌ１、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５は本明細書に記載されている。Ａｒ１およびＡｒ２はＡｒと同一である。
一部の実施形態では、Ｌ２はメチレンである。
一部の実施形態では、アンタゴニストは式（ＩＶ－ａ）
Figure 2022534990000041
 を有する化合物、またはその薬学的に許容される塩である。Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５は本明細書に記載されている。Ａｒ１およびＡｒ２はＡｒと同一である。
一部の実施形態では、Ａｒ１およびＡｒ２はフェニルである。
一部の実施形態では、それぞれのＲ１およびＲ５は独立に水素または－ＯＣＨ３である。
一部の実施形態では、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４は水素である。
一部の実施形態では、式（ＩＶ）の化合物は
Figure 2022534990000042
 を含む。
種々の実施形態では、組成物は、薬学的に適切な担体とともに局所投与される、ＮＫ１Ｒに結合するかまたはその機能を改変するポリヌクレオチド、アプタマー、ポリペプチド、抗体もしくはその断片、または小分子を含む。ポリヌクレオチド組成物の送達方法には、それだけに限らないが、リポソーム、受容体媒介送達システム、裸のＤＮＡ、ならびにとりわけヘルペスウイルス、レトロウイルス、アデノウイルス、およびアデノ随伴ウイルス等の操作されたウイルスベクターが含まれる。ポリヌクレオチド組成物は、薬学的に許容される液体担体、例えば水性または部分的水性の液体担体とともに局所投与され得る。ある特定の実施形態では、組成物中のポリヌクレオチド配列は、リポソーム（例えばカチオン性またはアニオン性リポソーム）に会合している。
一部の実施形態では、ＮＫ１Ｒアンタゴニストは核酸分子、例えばリボ核酸（ＲＮＡ）、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）、合成のＲＮＡもしくはＤＮＡ配列、改変されたＲＮＡもしくはＤＮＡ配列、相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）、短いガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）、短い干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、ミクロ干渉ＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、小型一過性ＲＮＡ（ｓｍａｌｌ，ｔｅｍｐｏｒａｌ ＲＮＡ）（ｓｔＲＮＡ）、短いヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、ｍＲＮＡ、１つもしくは複数の改変された核酸塩基もしくは骨格を含む核酸配列、またはそれらの組合せを含む。ある特定の実施形態では、核酸分子はアンチセンスオリゴヌクレオチドである。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、特定のＤＮＡまたはＲＮＡ配列に相補的なヌクレオチド配列である。いったん細胞内に導入されれば、相補的ヌクレオチドは細胞によって産生された天然の配列と結合して複合体を形成し、転写または翻訳をブロックする。好ましくは、アンチセンスオリゴヌクレオチドは少なくとも１１ヌクレオチドの長さであるが、少なくとも１２、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、もしくは５０、またはそれより長いヌクレオチドの長さであり得る。より長い配列も使用することができる。
「アンチセンスオリゴヌクレオチド」または「アンチセンス化合物」は、別のＲＮＡまたはＤＮＡ（標的ＲＮＡ、ＤＮＡ）に結合するＲＮＡまたはＤＮＡ分子を意味する。例えば、それがＲＮＡオリゴヌクレオチドであれば、これはＲＮＡ－ＲＮＡ相互作用によって別のＲＮＡ標的に結合し、標的ＲＮＡの活性を変化させる。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、特定のポリヌクレオチドの発現および／もしくは機能を上方制御または下方制御することができる。この定義は、治療、診断、またはその他の観点から有用な任意の外来のＲＮＡまたはＤＮＡ分子を含むことを意味する。そのような分子には、例えばアンチセンスＲＮＡまたはＤＮＡ分子、干渉ＲＮＡ（ＲＮＡｉ）、ミクロＲＮＡ、デコイＲＮＡ分子、ｓｉＲＮＡ、酵素的ＲＮＡ、短いヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、治療用編集ＲＮＡならびにアゴニストおよびアンタゴニストＲＮＡ、アンチセンスオリゴマー化合物、アンチセンスオリゴヌクレオチド、外部ガイド配列（ＥＧＳ）オリゴヌクレオチド、選択的スプライサー（ａｌｔｅｒｎａｔｅ ｓｐｌｉｃｅｒ）、プライマー、プローブ、ならびに標的核酸の少なくとも一部にハイブリダイズするその他のオリゴマー化合物が含まれる。したがって、これらの化合物は一本鎖、二本鎖、部分的一本鎖、または環状のオリゴマー化合物の形態で導入することができる。
アンチセンスオリゴヌクレオチド分子は、直接投与されまたはＤＮＡ構築物中に提供されて細胞内に導入され、例えばＳＰのレベルを低下させることができる。ある特定の実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは制御領域に特異的に結合し、阻害または増強された転写をもたらす。
一部の実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドはデオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、または両方の組合せであり得る。種々の実施形態では、オリゴヌクレオチドはｉｎ ｖｉｖｏにおけるオリゴヌクレオチドの半減期を増大させるように改変され得る。オリゴヌクレオチドは、アルキルホスホネート、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、アルキルホスホノチオエート、アルキルホスホネート、ホスホルアミデート、ホスフェートエステル、カルバメート、アセトアミデート、カルボキシメチルエステル、カーボネート、およびホスフェートトリエステル等の非ホスホジエステルヌクレオチド間結合によって１つのヌクレオチドの５’端と別のヌクレオチドの３’端を共有結合的に連結することによって、手作業でまたは自動合成機によって、合成することができる。
改変されたまたは変異した核酸配列。一部の実施形態では、本明細書で具現化した核酸配列のいずれも、例えば核酸塩基、骨格、その他に変異、欠失、置換、改変を導入することによって、天然の核酸配列から改変または誘導することができる。核酸配列には、ベクター、遺伝子編集剤、単離された核酸、アンチセンスオリゴヌクレオチド等が含まれる。本発明の核酸配列には、化合物中のヌクレオチドの位置の１つまたは複数に異なる塩基が存在するバリアントも含まれる。例えば、第１のヌクレオチドがアデノシンであれば、この位置にチミジン、グアノシン、またはシチジンを含むバリアントが生成され得る。これは、単離された核酸配列の位置のいずれでも行なうことができる。本発明の核酸配列は、核酸塩基または骨格に改変を有してよい。本発明のために想定されるいくつかの改変された核酸配列の例には、改変された骨格、例えばホスホロチオエート、ホスホトリエステル、メチルホスホネート、短鎖アルキルもしくはシクロアルキル糖間結合または短鎖ヘテロ原子もしくはヘテロ環状糖間結合を含む核酸配列が含まれる。一部の実施形態では、改変されたオリゴヌクレオチドは、ホスホロチオエート骨格を有するものおよびヘテロ原子骨格、ＣＨ２－－ＮＨ－－Ｏ－－ＣＨ２、ＣＨ、－－Ｎ（ＣＨ３）－－Ｏ－－ＣＨ２［メチレン（メチルイミノ）またはＭＭＩ骨格として公知である］、ＣＨ２－－Ｏ－－Ｎ（ＣＨ３）－－ＣＨ２、ＣＨ２－－Ｎ（ＣＨ３）－－Ｎ（ＣＨ３）－－ＣＨ２およびＯ－－Ｎ（ＣＨ３）－－ＣＨ２－－ＣＨ２骨格を有するものが含まれ、ここで天然のホスホジエステル骨格はＯ－－Ｐ－－Ｏ－－ＣＨとして表わされる。Ｄｅ Ｍｅｓｍａｅｋｅｒ ｅｔ ａｌ． Ａｃｃ． Ｃｈｅｍ． Ｒｅｓ． １９９５， ２８：３６６－３７４）によって開示されたアミド骨格も本明細書で具現化される。一部の実施形態では、モルホリノ骨格構造を有する核酸配列（Ｓｕｍｍｅｒｔｏｎ ａｎｄ Ｗｅｌｌｅｒ、米国特許第５，０３４，５０６号）、ペプチド核酸（ＰＮＡ）骨格、ここでオリゴヌクレオチドのホスホジエステル骨格はポリアミド骨格で置き換えられ、核酸塩基はポリアミド骨格のアザ窒素原子に直接または間接に結合している（Ｎｉｅｌｓｅｎ ｅｔ ａｌ． Ｓｃｉｅｎｃｅ １９９１， ２５４， １４９７）。核酸配列は１つまたは複数の置換された糖部分を含んでもよい。核酸配列は、ペントフラノシル基の代わりにシクロブチル等の糖模倣体を含んでもよい。
核酸配列はさらにまたはその代わりに、核酸塩基（当技術分野では単に「塩基」と称することが多い）の改変または置換を含んでもよい。本明細書で使用される場合、「未改変の」または「天然の」核酸塩基には、アデニン（Ａ）、グアニン（Ｇ）、チミン（Ｔ）、シトシン（Ｃ）、およびウラシル（Ｕ）が含まれる。改変された核酸塩基には、天然の核酸では稀にまたは一時的にのみ見出される核酸塩基、例えばヒポキサンチン、６－メチルアデニン、５－Ｍｅピリミジン類、特に５－メチルシトシン（５－メチル－２’デオキシシトシンとも称され、当技術分野ではしばしば５－Ｍｅ－Ｃとも称される）、５－ヒドロキシメチルシトシン（ＨＭＣ）、グリコシルＨＭＣ、およびゲントビオシル（ｇｅｎｔｏｂｉｏｓｙｌ）ＨＭＣ、ならびに合成核酸塩基、例えば２－アミノアデニン、２－（メチルアミノ）アデニン、２－（イミダゾリルアルキル）アデニン、２－（アミノアルキルアミノ）アデニン、またはその他のヘテロ置換アルキルアデニン類、２－チオウラシル、２－チオチミン、５－ブロモウラシル、５－ヒドロキシメチルウラシル、８－アザグアニン、７－デアザグアニン、Ｎ６（６－アミノヘキシル）アデニン、および２，６－ジアミノプリンが含まれる。Ｋｏｒｎｂｅｒｇ， Ａ．， ＤＮＡ Ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ， Ｗ． Ｈ． Ｆｒｅｅｍａｎ ＆ Ｃｏ．， Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ， １９８０， ｐｐ７５－７７； Ｇｅｂｅｙｅｈｕ， Ｇ．， ｅｔ ａｌ． Ｎｕｃｌ． Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ． １９８７， １５：４５１３）。当技術分野で公知の「ユニバーサル」塩基、例えばイノシンが含まれ得る。５－Ｍｅ－Ｃ置換は、核酸二重鎖の安定性を０．６～１．２℃増大させることが示されている（Ｓａｎｇｈｖｉ， Ｙ． Ｓ．， ｉｎ Ｃｒｏｏｋｅ， Ｓ． Ｔ． ａｎｄ Ｌｅｂｌｅｕ， Ｂ．， ｅｄｓ．， Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ， ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ， Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ， １９９３， ｐｐ． ２７６－２７８）。
本発明の核酸配列の別の改変には、オリゴヌクレオチドの活性または細胞への取り込みを強化させる１つまたは複数の部分またはコンジュゲートを核酸配列に化学的に連結することが含まれる。そのような部分には、それだけに限らないが、コレステロール部分、コレステリル部分（Ｌｅｔｓｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ １９８９， ８６， ６５５３）等の脂質部分、コール酸（Ｍａｎｏｈａｒａｎ ｅｔ ａｌ． Ｂｉｏｏｒｇ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． Ｌｅｔ． １９９４， ４， １０５３）、チオエーテル、例えばヘキシル－Ｓ－トリチルチオール（Ｍａｎｏｈａｒａｎ ｅｔ ａｌ． Ａｎｎ． Ｎ．Ｙ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． １９９２， ６６０， ３０６； Ｍａｎｏｈａｒａｎ ｅｔ ａｌ． Ｂｉｏｏｒｇ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． Ｌｅｔ． １９９３， ３， ２７６５）、チオコレステロール（Ｏｂｅｒｈａｕｓｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｎｕｃｌ． Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ． １９９２， ２０， ５３３）、脂肪族鎖、例えばドデカンジオールもしくはウンデシル残基（Ｓａｉｓｏｎ－Ｂｅｈｍｏａｒａｓ ｅｔ ａｌ． ＥＭＢＯ Ｊ． １９９１， １０， １１１； Ｋａｂａｎｏｖ ｅｔ ａｌ． ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ． １９９０， ２５９， ３２７； Ｓｖｉｎａｒｃｈｕｋ ｅｔ ａｌ． Ｂｉｏｃｈｉｍｉｅ １９９３， ７５， ４９）、リン脂質、例えばジヘキサデシル－ｒａｃ－グリセロールもしくはトリエチルアンモニウム１，２－ジ－Ｏ－ヘキサデシル－ｒａｃ－グリセロ－３－Ｈ－ホスホネート（Ｍａｎｏｈａｒａｎ ｅｔ ａｌ． Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ． １９９５， ３６， ３６５１； Ｓｈｅａ ｅｔ ａｌ． Ｎｕｃｌ． Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ． １９９０， １８， ３７７７）、ポリアミンもしくはポリエチレングリコール鎖（Ｍａｎｏｈａｒａｎ ｅｔ ａｌ． Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ ＆ Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ １９９５， １４， ９６９）、またはアダマンタン酢酸（Ｍａｎｏｈａｒａｎ ｅｔ ａｌ． Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ． １９９５， ３６， ３６５１）が含まれる。
ある特定の実施形態では、単離された核酸配列は、ホスホロチオエートヌクレオチド間結合と、アルキルホスホネート、ホスホロジチオエート、アルキルホスホノチオエート、ホスホルアミデート、カルバメート、カーボネート、ホスフェートトリエステル、アセトアミデート、カルボキシメチルエステル、および／またはそれらの組合せからなる群より選択される少なくとも１つのヌクレオチド間結合との組合せを含む。別の好ましい実施形態では、単離された核酸配列は、必要に応じて、ペプチド核酸、ロックド核酸（ＬＮＡ）分子、それらのアナログ、誘導体、および／または組合せを含む少なくとも１つの改変された核酸塩基を含む。
所与の核酸配列における全ての位置が均一に改変されている必要はなく、実際上、上記の改変の２つ以上が単一の核酸配列の中に、または核酸配列の中の単一のヌクレオシドの中にさえ、組み込まれていてもよい。
ある種の単離された核酸配列は、キメラ分子である。「キメラ分子」または「キメラ」は、本開示の文脈では、それぞれが少なくとも１つのヌクレオチドから構成される２つまたはそれより多い化学的に異なる領域を含む単離された核酸配列である。これらの単離された核酸配列は、典型的には、１つまたは複数の有益な特性（例えば増大したヌクレアーゼ耐性、増大した細胞への取り込み、標的に対する増大した結合親和性）を付与する改変されたヌクレオチドの少なくとも１つの領域、およびＲＮＡ：ＤＮＡまたはＲＮＡ：ＲＮＡハイブリッドを切断することができる酵素の基質である領域を含む。例として、ＲＮアーゼＨは、ＲＮＡ：ＤＮＡ二重鎖のＲＮＡ鎖を切断する細胞エンドヌクレアーゼである。したがってＲＮアーゼＨの活性化はＲＮＡ標的の切断をもたらし、それにより遺伝子発現のアンチセンスモジュレーションの効率が大きく強化される。その結果、キメラの単離された核酸配列を使用した場合に、同じ標的領域にハイブリダイズするホスホロチオエートデオキシオリゴヌクレオチドと比較して、より短い単離された核酸配列によって同程度の結果が得られることが多い。キメラの単離された核酸配列は、２つまたはそれより多いオリゴヌクレオチド、改変されたオリゴヌクレオチド、オリゴヌクレオシド、および／またはオリゴヌクレオチド模倣体の複合構造として形成され得る。
別の実施形態では、単離された核酸配列の改変される領域は、糖の２’位が改変された少なくとも１つのヌクレオチド、最も好ましくは２’－Ｏ－アルキル、２’－Ｏ－アルキル－Ｏ－アルキル、または２’－フルオロ改変ヌクレオチドを含む。別の実施形態では、単離された核酸配列はヌクレアーゼ耐性を強化するように改変することもできる。細胞は、核酸を分解することができる種々のエキソ－およびエンド－ヌクレアーゼを含む。その中に組み込まれる核酸配列のヌクレアーゼ消化に対する耐性を天然のオリゴデオキシヌクレオチドよりも大きくする、いくつかのヌクレオチドおよびヌクレオシドの改変が示されている。ヌクレアーゼ耐性は日常的に、単離された核酸配列を細胞抽出物または単離されたヌクレアーゼ溶液とインキュベートし、残留するインタクトなオリゴヌクレオチドの程度を経時的に、通常はゲル電気泳動によって測定することによって測定される。そのヌクレアーゼ耐性を強化するように改変された単離された核酸配列は、改変されていない単離された核酸配列よりも長時間、インタクトなまま存続する。種々のオリゴヌクレオチド改変がヌクレアーゼ耐性を強化または付与することが実証されている。単離された核酸配列は、少なくとも１つのホスホロチオエート改変を含み得る。一部の例では、標的結合親和性を強化するオリゴヌクレオチド改変はまた、独立にヌクレアーゼ耐性を強化することができる。いくつかの望ましい改変は、Ｄｅ Ｍｅｓｍａｅｋｅｒ ｅｔ ａｌ． Ａｃｃ． Ｃｈｅｍ． Ｒｅｓ． １９９５， ２８：３６６－３７４に見出すことができる。
一部の実施形態では、ＲＮＡ分子を含むＮＫ１Ｒアンタゴニストは、１つまたは複数の改変された核酸塩基を含むように操作される。改変されたＲＮＡ成分には以下：２’－Ｏ－メチルシチジン；Ｎ４－メチルシチジン；Ｎ４－２’－Ｏ－ジメチルシチジン；Ｎ４－アセチルシチジン；５－メチルシチジン；５，２’－Ｏ－ジメチルシチジン；５－ヒドロキシメチルシチジン；５－ホルミルシチジン；２’－Ｏ－メチル－５－ホルミルシチジン（ｆｏｒｍａｙｌｃｙｔｉｄｉｎｅ）；３－メチルシチジン；２－チオシチジン；リシジン；２’－Ｏ－メチルウリジン；２－チオウリジン；２－チオ－２’－Ｏ－メチルウリジン；３，２’－Ｏ－ジメチルウリジン；３－（３－アミノ－３－カルボキシプロピル）ウリジン；４－チオウリジン；リボシルチミン；５，２’－Ｏ－ジメチルウリジン；５－メチル－２－チオウリジン；５－ヒドロキシウリジン；５－メトキシウリジン；ウリジン５－オキシ酢酸；ウリジン５－オキシ酢酸メチルエステル；５－カルボキシメチルウリジン；５－メトキシカルボニルメチルウリジン；５－メトキシカルボニルメチル－２’－Ｏ－メチルウリジン；５－メトキシカルボニルメチル－２’－チオウリジン；５－カルバモイルメチルウリジン；５－カルバモイルメチル－２’－Ｏ－メチルウリジン；５－（カルボキシヒドロキシメチル）ウリジン；５－（カルボキシヒドロキシメチル）ウリジンメチルエステル；５－アミノメチル－２－チオウリジン；５－メチルアミノメチルウリジン；５－メチルアミノメチル－２－チオウリジン；５－メチルアミノメチル－２－セレノウリジン；５－カルボキシメチルアミノメチルウリジン；５－カルボキシメチルアミノメチル－２’－Ｏ－メチル－ウリジン；５－カルボキシメチルアミノメチル－２－チオウリジン；ジヒドロウリジン；ジヒドロリボシルチミン；２’－メチルアデノシン；２－メチルアデノシン；Ｎ６Ｎメチルアデノシン；Ｎ６，Ｎ６－ジメチルアデノシン；Ｎ６，２’－Ｏ－トリメチルアデノシン；２メチルチオ－Ｎ６Ｎイソペンテニルアデノシン；Ｎ６－（ｃｉｓ－ヒドロキシイソペンテニル）－アデノシン；２－メチルチオ－Ｎ６－（ｃｉｓ－－ヒドロキシイソペンテニル）－アデノシン；Ｎ６－グリシニルカルバモイル）アデノシン；Ｎ６スレオニルカルバモイルアデノシン；Ｎ６－メチル－Ｎ６－スレオニルカルバモイルアデノシン；２－メチルチオ－Ｎ６－メチル－Ｎ６－スレオニルカルバモイルアデノシン；Ｎ６－ヒドロキシノルバリルカルバモイルアデノシン；２－メチルチオ－Ｎ６－ヒドロキシノルバリルカルバモイルアデノシン；２’－Ｏ－リボシルアデノシン（ホスフェート）；イノシン；２’Ｏ－メチルイノシン；１－メチルイノシン；１，２’－Ｏ－ジメチルイノシン；２’－Ｏ－メチルグアノシン；１－メチルグアノシン；Ｎ２－メチルグアノシン；Ｎ２，Ｎ２－ジメチルグアノシン；Ｎ２，２’－Ｏ－ジメチルグアノシン；Ｎ２，Ｎ２，２’－Ｏ－トリメチルグアノシン；２’－Ｏ－リボシルグアノシン（ホスフェート）；７－メチルグアノシン；Ｎ２，７－ジメチルグアノシン；Ｎ２，Ｎ２，７－トリメチルグアノシン；ワイオシン；メチルワイオシン；低改変ヒドロキシワイブトシン；ワイブトシン；ヒドロキシワイブトシン；ペルオキシワイブトシン；キューオシン；エポキシキューオシン；ガラクトシル－キューオシン；マンノシル－キューオシン；７－シアノ－７－デアザグアノシン；アラケオシン［７－ホルムアミド－７－デアザグアノシンとも呼ばれる］；および７－アミノメチル－７－デアザグアノシンが含まれる。
他の実施形態では、ＲＮＡ改変には、ＲＮＡの３’端におけるピリミジン、無塩基残基、または逆転塩基（ｉｎｖｅｒｔｅｄ ｂａｓｅ）のリボースにおける２’－フルオロ、２’－アミノ、および２’Ｏ－メチル改変が含まれる。そのような改変は日常的にオリゴヌクレオチドに組み込まれ、これらのオリゴヌクレオチドは所与の標的に対して２’－デオキシオリゴヌクレオチドよりも高いＴｍ（即ち、高い標的結合親和性）を有することが示されている。
短いＤＮＡまたはＲＮＡ配列を細胞内に送達するためのいくつかの方法が開発されてきた。例えば、ポリヌクレオチド分子を組織部位に直接接触させること、または改変されたポリヌクレオチド分子（例えば標的細胞表面に発現された受容体または抗原に特異的に結合するペプチドまたは抗体に連結された配列）を、所望の細胞型を特異的に標的とするように設計することができる。
例示的なアプローチでは、短いポリヌクレオチド配列が強力なポリメラーゼＩＩＩまたはポリメラーゼＩＩのプロモーターの制御下に置かれた組換えＤＮＡ構築物が使用される。そのような構築物の使用により、本発明の核酸の内因性転写物と相補的塩基対を形成し、それにより内因性ｍＲＮＡ転写物の翻訳を防止する十分な量のポリヌクレオチドの転写がもたらされる。本発明は、鋳型として相補鎖を使用する短いポリヌクレオチドの構築を包含する。例えば、細胞に取り込まれて干渉ＲＮＡまたは二本鎖ＲＮＡ分子の前駆体の転写を指向するように、ｉｎ ｖｉｖｏでベクターを導入することができる。あるいは、短いポリヌクレオチド転写物のための鋳型を、細胞型特異的プロモーターまたはその他の制御エレメントの転写制御下に置く。このようにして、局所的に投与した組成物が意図した眼の標的組織を超えて拡散または吸収されることによる有害なまたは全身性の副作用は起こらない。ベクターは、それが転写されて所望のポリヌクレオチドを産生することができる限り、エピソームに留まるか、または染色体に一体化される。
発現ベクターは、当技術分野で標準的な組換えＤＮＡ技術方法によって構築される。ベクターはプラスミド、ウイルス、またはその他の当技術分野で公知のものでよく、哺乳動物細胞における複製および発現のために使用される。短いポリヌクレオチドをコードする配列の発現は、当技術分野で公知の任意のプロモーターの制御下に置かれ、哺乳動物、好ましくはヒトの細胞内で作用することができる。プロモーターは誘導性または構成的である。例示的なプロモーターには、それだけに限らないが、ＳＶ４０早期プロモーター領域（Ｂｅｒｎｏｉｓｔ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ ２９０：３０４， １９８１）、Ｒｏｕｓ肉腫ウイルスの３’末端反復配列に含まれるプロモーター（Ｙａｍａｍｏｔｏ ｅｔ ａｌ．， Ｃｅｌｌ， ２２：７８７－７９７， １９８８）、ヘルペスチミジンキナーゼプロモーター（Ｗａｇｎｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， ７８：１４４１， １９８１）、またはメタロチオネイン遺伝子の制御配列（Ｂｒｉｎｓｔｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ， ２９６：３９， １９８８）が含まれる。
一部の実施形態では、ポリペプチド組成物は単独でまたは受容体媒介送達システムとの組合せでリポソームと会合し、原形質膜を横切る輸送を可能にする。ポリペプチド組成物は、例えば可溶性でもよく、または膜に結合してもよい。例示的な受容体媒介送達システムには、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）感染とＨＣＶ媒介薬物送達法で観察されるように、低密度または超低密度リポタンパク質を含む粒子またはベシクルと低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）受容体（ＬＤＬＲ）との融合が関与している。
ある特定の実施形態では、組成物は、ＮＫ１Ｒおよび／またはＳＰ（またはそのサブユニット）に対して生じたまたはそれを指向する１つまたは複数の細胞外または細胞内抗体（イントラボディとも呼ばれる）を含む。細胞外抗体は、薬理学的に適切な水性または非水性の担体とともに局所投与される。細胞内抗体をコードする配列は、ウイルスまたは哺乳動物の発現ベクターの中にサブクローニングされ、原形質膜を横切る輸送を可能にするように親油性デバイスにパッケージングされ、薬理学的に適切な水性または非水性の担体とともに眼組織に局所投与される。いったん原形質膜の中に入れば、宿主細胞の機構はイントラボディコードを転写、翻訳、およびプロセッシングして、ＮＫ１Ｒおよび／またはＳＰ（またはそのサブユニット）を標的とする細胞内機能ブロッキング抗体を生成する。分泌される分子の場合には、細胞内抗体は標的タンパク質の翻訳後修飾または分泌を防止する。膜結合分子の場合には、細胞内抗体は受容体の係合またはＳＰによる結合に際して細胞内シグナル伝達事象をも防止し得る。
一部の実施形態では、組成物はＮＫ１ＲアンタゴニストまたはＳＰ阻害剤を含み、阻害剤はＳＰの転写、転写物の安定性、翻訳、改変、局在化、分泌、または受容体結合を阻害する。
処置の方法
種々の実施形態は、眼組織において抗原提示細胞の成熟およびＴＨ１７細胞の活性化、ならびにＳＰに媒介されるＴｒｅｇの細胞数および／または機能の低下を阻害することによる、免疫炎症性眼障害を処置する方法に関する。非限定的な例では、免疫炎症性障害には赤眼、ＤＥＤ、自己免疫性ブドウ膜炎、角膜神経痛、角膜痛覚過敏症、角膜異痛症、または眼の移植片対宿主病が含まれる。一部の実施形態では、本方法は、ＳＰ－ＮＫ１Ｒシグナル伝達を優先的に阻害する化合物を局所投与するステップを含む。
ある特定の実施形態では、被験体における非感染性免疫炎症性眼障害を処置する方法は、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）関連眼障害を有する被験体に、治療有効量の１つまたは複数のニューロキニン１受容体（ＮＫ１Ｒ）アンタゴニストを含む組成物を投与するステップを含む。
Ｔ細胞ならびに／またはＣＤ４＋および／もしくはＣＤ８＋Ｔ細胞のサブタイプおよび部分集団の中には、ナイーブＴ（ＴＮ）細胞、エフェクターＴ細胞（ＴＥＦＦ）、メモリーＴ細胞、およびそれらのサブタイプ、例えば幹細胞メモリーＴ（ＴＳＣＭＸ）、セントラルメモリーＴ（ＴＣＭ）、エフェクターメモリーＴ（ＴＥＭ）、または最終分化エフェクターメモリーＴ細胞、腫瘍浸潤性リンパ球（ＴＩＬ）、未成熟Ｔ細胞、成熟Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、粘膜関連インバリアントＴ（ＭＡＩＴ）細胞、天然に存在する適応制御性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞、ヘルパーＴ細胞、例えばＴＨ１細胞、ＴＨ２細胞、ＴＨ３細胞、ＴＨ１７細胞、ＴＨ９細胞、ＴＨ２２細胞、濾胞ヘルパーＴ細胞、アルファ／ベータＴ細胞、およびデルタ／ガンマＴ細胞がある。
一般に、Ｔ制御性細胞は、免疫応答を抑制することができるＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔ細胞集団として同定されてきた。Ｔｒｅｇの「マスターレギュレーター」としてのＦｏｘｐ３の同定は、Ｔｒｅｇを明確なＴ細胞系統として定義することを助けた。Ｔｒｅｇの表面におけるさらなる抗原マーカーの同定は、より大きな純度への生存能力のあるＴｒｅｇの同定およびＦＡＣＳソーティングを可能にし、より高度に富化され、より抑制性の高いＴｒｅｇ集団をもたらした。ＣＤ４およびＣＤ２５に加えて、マウスおよびヒトのＴｒｅｇはいずれもＧＩＴＲ／ＡＩＴＲ、ＣＴＬＡ－４を発現し、低レベルのＣＤ１２７（ＩＬ－７Ｒａ）を発現する。さらに、Ｔｒｅｇはそれらの表面マーカーの発現に基づいて同定され得る様々な状態で存在し得る。胸腺においてＣＤ４＋胸腺細胞から発生するＴｒｅｇは「天然の」Ｔｒｅｇとして公知であるが、ＴｒｅｇはナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞からＴＣＲ、ＴＧＦベータ、およびＩＬ－２の低用量の係合に応答して末梢でも誘起され得る。これらの「誘起された」Ｔｒｅｇは免疫抑制性サイトカインＩＬ－１０を分泌する。Ｔｒｅｇが活性化されるとともにＴｒｅｇの表現型は再び変化し、マウスおよびヒトにおけるＧＡＲＰ、ヒトにおけるＣＤ４５ＲＡ、およびマウスにおけるＣＤ１０３を含むマーカーは活性化されたＴｒｅｇの同定に有用であることが示されている。
Ｔｒｅｇは、ＩＬ－９、ＩＬ－１０、およびＴＧＦベータ等の免疫抑制性可溶性因子の分泌、高親和性ＴＣＲおよびその他の共刺激分子、例えばＣＴＬＡ－４、ＧＩＴＲを介する細胞接触媒介制御、ならびに細胞溶解活性を含み得る多数の機構によって、その機能を獲得するという証拠が増加している。ＴＧＦベータの影響下で、適応性Ｔｒｅｇ細胞は、粘膜関連リンパ系組織（ＭＡＬＴ）を含む末梢部位においてＣＤ４＋Ｔｒｅｇ前駆体から成熟し、ここでＣＤ２５、ＣＴＬＡ４、およびＧＩＴＲ／ＡＩＴＲを含むＴｒｅｇに典型的なマーカーの発現を獲得する。転写因子Ｆｏｘｐ３の上方制御に際してＴｒｅｇ細胞はその抑制効果を開始する。これには、エフェクターＴ細胞における細胞サイクルの停止またはアポトーシス、および樹状細胞の共刺激および成熟のブロッキングを誘起し得るＩＬ－１０およびＴＧＦベータを含むサイトカインの分泌が含まれる。
以下の実施例の部において、ＳＰシグナル伝達のブロッキングを介してＤＥＤを含む非感染性免疫炎症性眼障害におけるＴｒｅｇの抑制機能を回復または強化することにより、免疫静止状態が達成できることが実証された。ＳＰ－ＮＫ１Ｒシグナル伝達のブロッキングがＴｒｅｇ機能を回復または強化し、したがって赤眼、ドライアイ疾患、および眼の疼痛等の免疫炎症性眼障害において炎症を抑制し、免疫静止状態を達成したことが見出された。ニューロキニン－１受容体アンタゴニズムが、抗原提示細胞の成熟およびＴＨ１７細胞の活性化を阻害することによって、ドライアイ疾患を改善することも実証された。
本主題の態様は、ＮＫ１Ｒアンタゴニストを含む組成物を被験体に投与するステップを含む、それを必要とする被験体の眼、付属器、またはリンパ組織におけるＴＨ１７細胞の存在量を低減する方法を提供する。
したがって、ある特定の実施形態では、被験体における非感染性免疫炎症性眼障害、例えば赤眼および／またはＤＥＤを処置する方法は、治療有効量のＮＫ１Ｒアンタゴニストを含む組成物を被験体に投与するステップを含み、ＮＫ１Ｒアンタゴニストは抗原提示細胞の成熟およびＴＨ１７細胞の活性化を阻害する。
ある特定の実施形態では、被験体における非感染性免疫炎症性眼障害を処置する方法は、治療有効量の１つまたは複数のニューロキニン１受容体（ＮＫ１Ｒ）アンタゴニストを含む組成物を、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）関連眼障害を有する被験体に投与するステップを含む。ある特定の実施形態では、Ｔｒｅｇ関連眼障害は、非ドライアイ疾患（ＤＥＤ）関連の赤眼、ドライアイ疾患（ＤＥＤ）、アレルギー性結膜炎、および眼の疼痛から選択される１つである。ある特定の実施形態では、非ＤＥＤ関連赤眼はアレルギー性赤眼を含む。ある特定の実施形態では、非ＤＥＤ関連赤眼は非アレルギー性赤眼を含む。
ある特定の実施形態では、制御性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞の活性または機能をモジュレートする方法は、治療有効量の１つまたは複数のニューロキニン１受容体（ＮＫ１Ｒ）アンタゴニストを含む医薬組成物を、それを必要とする被験体に投与するステップを含む。
ある特定の実施形態では、被験体における非感染性免疫炎症性眼障害の症状を低減する方法は、治療有効量のＳＰシグナル伝達ブロッキング誘起剤を含む組成物を、Ｔｒｅｇ関連眼障害を有する被験体に投与するステップを含む。ある特定の実施形態では、Ｔｒｅｇ関連眼障害は、非ＤＥＤ関連赤眼、ドライアイ疾患（ＤＥＤ）、アレルギー性結膜炎、眼の疼痛、角膜神経痛、角膜痛覚過敏症、角膜異痛症を含む。角膜神経痛は最近、認識の増大のために臨床医と科学者の両方で、また説明できない眼球表面の疼痛および症状に罹患した患者の間で、顕著な関心を生じている。眼における乾燥および灼熱の感覚は神経障害性の眼の疼痛とドライアイの両方に共通の症状であるので、この状態はドライアイ疾患と関連することが多いが、眼の神経障害性疼痛は、それ自体で疾患とみなすべきである。神経障害性疼痛の患者は水性ドライアイ（ａｑｕｅｏｕｓ ｄｒｙ ｅｙｅ）の徴候を示すことがないかほとんどなく、従来のドライアイの処置にあまり応答しないことが多い。従来のドライアイ疾患と異なり、眼球表面の損傷の徴候はないかほとんどない場合がある（この状態は「変色のない疼痛」と称されることがある）。しかし患者はドライアイの症状を有するがドライアイの提示とは釣り合いが取れない疼痛症状も有し得る。
この状態における疼痛の感覚の経験は広く変化することがあり、眼球表面の侵害受容器の損傷を引き起こす侵害性刺激の種類、（冷感熱受容器、機械的受容器、およびポリモーダル受容器を含む）冒された角膜感覚受容器の種類、炎症性応答の程度、および神経系を冒す障害および損傷の種類等の種々の原因因子を反映している。
したがって、ある特定の実施形態では、被験体における角膜神経痛、角膜痛覚過敏症、角膜異痛症を処置しまたはそれらの症状を低減する方法は、治療有効量の１つまたは複数のニューロキニン１受容体（ＮＫ１Ｒ）アンタゴニストを含む組成物を被験体に投与するステップを含む。
ある特定の実施形態では、角膜神経痛の処置またはその症状において、１つまたは複数の第２の薬剤を、他の治療アプローチと共投与するか、これと併用して投与することができる。例えば、第２の薬剤は、局所コルチコステロイド、局所および経口のアジスロマイシン、経口のドキシサイクリン、シクロスポリン、タクロリムス、アナキンラ等の抗炎症剤であってよい。その他の処置アプローチには、再生治療、例えば自己血清点眼（２０～１００％）、神経成長因子、富血小板血漿、臍帯血清点眼が含まれる。疼痛のための全身薬物治療は、本明細書で具現化した組成物と組み合わせることができる別の治療アプローチである。例えば、ノルトリプチリン、アミトリプチリン、カルバマゼピン、３．ＧＡＢＡ作動性薬物（ガバペンチン、プレガバリン）、ＳＮＲＩ様ヅロキセチンおよびベンラファキシン、オピオイド様トラマドール、クラス１Ｂナトリウムチャネルブロッカーメキシレチン。
ある特定の実施形態では、ＮＫ１Ｒアンタゴニストは、第２の治療剤または処置と組み合わせて投与される。ＮＫ１Ｒアンタゴニストは、以下：抗生剤、免疫抑制性組成物、抗炎症組成物、成長因子、ステロイド、ケモカイン、またはケモカイン受容体のうち１つまたは複数を含む第２の組成物と同時にまたは逐次的に投与される。
ある特定の実施形態では、組成物はＮＫ１Ｒアンタゴニストと組み合わせて使用される１つまたは複数の抗生剤組成物を含む。抗生剤とＮＫ１Ｒアンタゴニスト組成物は同時にまたは逐次的に投与される。ＮＫ１Ｒアンタゴニストとの組合せ治療に使用される例示的な抗生剤組成物には、それだけに限らないが、アミカシン、ゲンタマイシン、カナマイシン、ネオマイシン、ネチルマイシン、ストレプトマイシン、トブラマイシン、テイコプラニン、バンコマイシン、アジスロマイシン、クラリスロマイシン、クラリスロマイシン、ジリスロマイシン、エリスロマイシン、ロキシスロマイシン、トロレアンドマイシン、アモキシシリン、アンピシリン、アズロシリン、カルベニシリン、クロザシリン、ジクロキサシリン、フルコザシリン、メズロシリン、ナフシリン、ペニシリン、ピペラシリン、チカルシリン、バシトラシン、コリスチン、ポリミキシンＢ、シプロフロキサシン、エノキサシン、ガチフロキサシン、レボフロキサシン、ロメフロキサシン、モキシフロキサシン、ノルフロキサシン、オフラザシン、トロバフロキサシン、マフェニド、スルファセタミド、スルファメチゾール、スルファサラジン、スルフィソキサゾール、テトラサイクリン、トリメトプリム、コトリモキサゾール、デメクロサイクリン、ソキシサイクリン、ミノサイクリン、ドキシサイクリン、オキシテトラサイクリン、またはテトラサイクリンが含まれる。
一部の実施形態では、組成物はＮＫ１Ｒアンタゴニストを含み、第２の免疫抑制性組成物と同時にまたは逐次的に投与される。組成物は、例えば局所にまたは眼内に投与され得る。第２の免疫抑制性組成物は、局所に、眼内に、または全身的に投与され得る。種々の実施形態では、免疫抑制性化合物は、０．０５～４．０％（ｍｇ／ｍｌ）の濃度のシクロスポリンＡまたはそのアナログを含み得る。あるいは、またはさらに、免疫抑制性組成物には、グルココルチコイド、細胞増殖抑制剤、アルキル化剤（ナイトロジェンマスタード／シクロホスファミド、ニトロソウレア、白金化合物）、代謝拮抗剤（メトトレキサート、任意の葉酸アナログ、アザチオプリン、メルカプトプリン、任意のプリンアナログ、任意のピリミジンアナログ、任意のタンパク質合成阻害剤）、細胞傷害性抗生剤（ダクチノマイシン、アンスラサイクリン、マイトマイシンＣ、ブレオマイシン、ミスラマイシン）、ポリクローナル抗体（ＡＴＧＡＭ（登録商標）、ＴＨＹＭＰＧＬＯＢＵＬＩＮＥ（登録商標）、抗リンパ球抗原または抗胸腺細胞抗原に対する任意の抗体）、モノクローナル抗体（ＯＫＴ３（登録商標）、Ｔ細胞受容体に対する任意の抗体、ＩＬ－２に対する任意の抗体、バシリキシマブ／ＳＩＭＵＬＥＣｔ（登録商標）、デクリズマブ／ＺＥＮＡＰＡＸ（登録商標））、タクロリムス／ＰＲＯＧＲＡＦ（商標）／ＦＫ５０６、シロリムス／ＲＡＰＡＭＵＮＥ（商標）／ラパマイシン、インターフェロンベータ、インターフェロンガンマ、オピオイド、ＴＮＦα結合タンパク質、ミコフェノレート、またはＦＴＹ７２０が含まれ得る。
医薬製剤および眼への送達
ＮＫ１Ｒをアンタゴナイズするための投薬量、処方、投薬体積、レジメン、および方法は変動し得る。即ち、最小および最大の有効投薬量は、投与の方法に応じて変動する。ある特定の実施形態では、ＮＫ１Ｒアンタゴニストは、局所製剤として製剤化される。ある特定の実施形態では、局所製剤は液滴である。ある特定の実施形態では、液滴は少なくとも０．０００１μｇ／μｌ～約５０μｇ／μｌの１つまたは複数のＮＫ１Ｒアンタゴニストを含む。ある特定の実施形態では、液滴は少なくとも０．００１μｇ／μｌ～約５０μｇ／μｌの１つまたは複数のＮＫ１Ｒアンタゴニストを含む。ある特定の実施形態では、液滴は少なくとも０．０１μｇ／μｌ～約５０μｇ／μｌの１つまたは複数のＮＫ１Ｒアンタゴニストを含む。ある特定の実施形態では、液滴は少なくとも０．１μｇ／μｌ～約５０μｇ／μｌの１つまたは複数のＮＫ１Ｒアンタゴニストを含む。ある特定の実施形態では、液滴は少なくとも０．０００１μｇ／μｌ～約４０μｇ／μｌの１つまたは複数のＮＫ１Ｒアンタゴニストを含む。ある特定の実施形態では、液滴は少なくとも０．０００１μｇ／μｌ～約３５μｇ／μｌの１つまたは複数のＮＫ１Ｒアンタゴニストを含む。ある特定の実施形態では、液滴は少なくとも０．０００１μｇ／μｌ～約３０μｇ／μｌの１つまたは複数のＮＫ１Ｒアンタゴニストを含む。ある特定の実施形態では、液滴は少なくとも０．０００１μｇ／μｌ～約２５μｇ／μｌの１つまたは複数のＮＫ１Ｒアンタゴニストを含む。ある特定の実施形態では、液滴は少なくとも０．１μｇ／μｌ～約１０μｇ／μｌの１つまたは複数のＮＫ１Ｒアンタゴニストを含む。
ある特定の実施形態では、ＮＫ１Ｒアンタゴニストを含む液滴は、少なくとも１日１回、１日４回または５回まで、それぞれの眼に局所投与される。ある特定の実施形態では、ＮＫ１Ｒアンタゴニストを含む液滴は、赤眼については少なくとも１～２日もしくはそれより長い期間、またはドライアイの治療については必要に応じておよび無期限に、投与される。
本発明の種々の実施形態では、ＮＫ１Ｒアンタゴニストを含む組成物は、１回だけ、または多数回、投与してよい。例えば、ＮＫ１Ｒアンタゴニストは、本明細書に開示された方法を使用して、１日、１週、１月、または１年あたり、少なくとも約１回、２回、３回、４回、５回、６回、または７回、投与してよい。一部の実施形態では、ＮＫ１Ｒアンタゴニストを含む組成物は、月１回投与される。ある特定の実施形態では、組成物は硝子体内注射によって月１回投与される。点眼剤を含む実施形態等の種々の実施形態では、組成物は自己投与される。
ある特定の実施形態では、液体点眼剤は、リン酸緩衝食塩水等の薬学的に許容される不活性な賦形剤または担体の中で製剤化され、４℃で保存される。
好ましい製剤は、固体、ペースト、軟膏、ゲル、液体、エアロゾル、ミスト、ポリマー、コンタクトレンズ、フィルム、エマルジョン、または懸濁物の形態である。製剤は局所投与され、例えば組成物は眼に送達されて直接接触する。組成物は０．０１～５０％（重量／体積）の濃度で存在する。例えば、阻害性組成物は１％（重量／体積）、１０％（重量／体積）、２０％（重量／体積）、２５％（重量／体積）、３０％（重量／体積）、４０％（重量／体積）、５０％（重量／体積）、またはその間の任意のパーセンテージ点の濃度で存在する。本方法は全身投与または眼ではない組織への組成物の計画された実質的な散布を含まない。
必要に応じて、組成物は薬学的に許容される担体をさらに含む。例示的な薬学的担体には、それだけに限らないが、生理学的に許容される塩、カルボポールを含むポロキサマーアナログ、カルボポール／ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、カルボポール－メチルセルロース、粘液溶解剤、カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）、ヒアルロン酸、シクロデキストリン、および石油からなる群より選択される化合物が含まれる。一実施形態では、粘液溶解剤はＮ－アセチルシステインである。
免疫炎症性眼疾患の処置のため、ＮＫ１Ｒアンタゴニスト（例えばＮＫ１Ｒアンタゴニストを含む医薬組成物）は、例えば局所点眼、眼球周囲注射（例えばテノン嚢下）、眼球内注射、硝子体内注射、眼球後方注射、網膜内注射、結膜下注射として、またはイオントフォレーシスもしくは能動的もしくは受動的に薬物を送達することができる眼球周囲デバイスを使用して、局所的に投与してよい。
局所投与に適合された医薬製剤は、水性溶液、軟膏、クリーム、懸濁物、ローション、粉末、溶液、ペースト、ゲル、スプレー、エアロゾル、リポソーム、マイクロカプセル、マイクロスフェアまたはオイルとして製剤化してよい。
眼への局所投与に適合された医薬製剤には点眼剤が含まれ、ＮＫ１Ｒアンタゴニストは好適な担体、特に水性溶媒に溶解または懸濁される。眼に投与される製剤は、眼科的に適合するｐＨおよび質量オスモル濃度を有することになる。用語「眼科的に許容されるビヒクル」は、眼組織と生理学的に適合する物理特性（例えばｐＨおよび／または質量オスモル濃度）を有する医薬組成物を意味する。
一部の実施形態では、本発明の眼科組成物は、約２００～約４００ミリオスモル／ｋｇ水（「ｍＯｓｍ／ｋｇ」）の質量オスモル濃度および生理学的に適合するｐＨを有する無菌の水性溶液として製剤化される。溶液の質量オスモル濃度は、従来の薬剤、例えば無機塩（例えばＮａＣｌ）、有機塩（例えばクエン酸ナトリウム）、多価アルコール（例えばプロピレングリコールまたはソルビトール）、またはそれらの組合せによって調節してよい。
種々の実施形態では、本発明の眼科用製剤は、液体、固体、または半固体の剤型の形態であってよい。本発明の眼科用製剤は、最終の剤型に応じて、眼科的に許容される好適な賦形剤を含んでよい。一部の実施形態では、眼科用製剤は、生理学的に耐えられるｐＨ範囲を維持するように製剤化される。ある特定の実施形態では、眼科用製剤のｐＨ範囲は約５～約９の範囲内である。一部の実施形態では、眼科用製剤のｐＨ範囲は、約６～約８の範囲、もしくは約６．５、約７、または約７．５である。
一部の実施形態では、組成物は水性溶液の形態、例えば点眼剤の形態で提示することができる水性溶液である。好適なディスペンサーを使用して、１滴、２滴、３滴、４滴、または５滴等の既知の滴数を眼に投与することによって、所望の投薬量の活性薬剤を計量することができる。
酢酸、ホウ酸、クエン酸、乳酸、リン酸、および塩酸等の酸、水酸化ナトリウム、リン酸ナトリウム、ホウ酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、および乳酸ナトリウム等の塩基、ならびにクエン酸／デキストロース、重炭酸ナトリウム、および塩化アンモニウム等の緩衝液を含む１つまたは複数の眼科的に許容されるｐＨ調節剤および／または緩衝化剤を本発明の組成物に含ませてよい。そのような酸、塩基、および緩衝液は、組成物のｐＨを眼科的に許容される範囲に維持するために必要な量で含ませてよい。１つまたは複数の眼科的に許容される塩を、組成物の質量オスモル濃度を眼科的に許容される範囲に入れるために十分な量で、組成物に含ませてよい。そのような塩には、ナトリウム、カリウム、またはアンモニウムカチオン、および塩化物、クエン酸、アスコルビン酸、ホウ酸、リン酸、重炭酸、硫酸、チオ硫酸、または亜硫酸水素アニオンを有する塩が含まれる。
眼送達用の医薬組成物は、ｉｎ ｓｉｔｕでゲル化可能な水性組成物をも含む。そのような組成物は、眼または涙液との接触に際してゲル化を促進するために有効な濃度でゲル化剤を含む。好適なゲル化剤には、それだけに限らないが、熱硬化性ポリマーが含まれる。本明細書で使用される用語「ｉｎ ｓｉｔｕでゲル化可能」は、眼または涙液との接触に際してゲルを形成する低粘度の液体を含むだけでなく、眼への投与に際して実質的に増大した粘度またはゲル剛性を呈する半流体およびチキソトロピー性ゲル等の高粘度の液体も含む。例えば、その全ての内容が参照により本明細書に組み込まれるＬｕｄｗｉｇ， Ａｄｖ． Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ． Ｒｅｖ． ３； ５７：１５９５－６３９ （２００５）を参照されたい。
コンタクトレンズによる薬物送達
ＮＫ１Ｒアンタゴニストを含むコンタクトレンズおよび組成物が、本明細書で提供される。例えば、組成物はレンズに組み込まれ、またはコートされる。組成物はコンタクトレンズポリマーによって化学的に結合されまたは物理的に捕捉される。あるいは、着色添加物が治療用薬物組成物と同じ速度で放出されるポリマー組成物によって化学的に結合されまたは物理的に捕捉され、それにより着色添加物の強度の変化がポリマー中に結合しまたは捕捉されて残留した治療用薬物組成物の量または用量の変化を指示する。あるいは、またはさらに、紫外（ＵＶ）吸収剤がコンタクトレンズポリマーの中に化学的に結合されまたは物理的に捕捉される。コンタクトレンズは疎水性または親水性である。
本発明の組成物を送達するための手段とともに疎水性レンズを製造するために使用される例示的な材料には、それだけに限らないが、アメフォコン（ａｍｅｆｏｃｏｎ）Ａ、アムシルフォコン（ａｍｓｉｌｆｏｃｏｎ）Ａ、アキラフォコン（ａｑｕｉｌａｆｏｃｏｎ）Ａ、アルフォコン（ａｒｆｏｃｏｎ）Ａ、カブフォコン（ｃａｂｕｆｏｃｏｎ）Ａ、カブフォコンＢ、カルボシルフォコン（ｃａｒｂｏｓｉｌｆｏｃｏｎ）Ａ、クリルフォコン（ｃｒｉｌｆｏｃｏｎ）Ａ、クリルフォコンＢ、ジメフォコン（ｄｉｍｅｆｏｃｏｎ）Ａ、エンフルフォコン（ｅｎｆｌｕｆｏｃｏｎ）Ａ、エンフロフォコンＢ、エリフォコン（ｅｒｉｆｏｃｏｎ）Ａ、フルロフォコン（ｆｌｕｒｏｆｏｃｏｎ）Ａ、フルシルフォコン（ｆｌｕｓｉｌｆｏｃｏｎ）Ａ、フルシルフォコンＢ、フルシルフォコンＣ、フルシルフォコンＤ、フルシルフォコンＥ、ヘキサフォコン（ｈｅｘａｆｏｃｏｎ）Ａ、ホフォコン（ｈｏｆｏｃｏｎ）Ａ、ヒブフォコン（ｈｙｂｕｆｏｃｏｎ）Ａ、イタビスフルオロフォコン（ｉｔａｂｉｓｆｌｕｏｒｏｆｏｃｏｎ）Ａ、イタフルオロフォコン（ｉｔａｆｌｕｏｒｏｆｏｃｏｎ）Ａ、イタフォコン（ｉｔａｆｏｃｏｎ）Ａ、イタフォコンＢ、コルフォコン（ｋｏｌｆｏｃｏｎ）Ａ、コルフォコンＢ、コルフォコンＣ、コルフォコンＤ、ロチフォコン（ｌｏｔｉｆｏｃｏｎ）Ａ、ロチフォコンＢ、ロチフォコンＣ、メラフォコン（ｍｅｌａｆｏｃｏｎ）Ａ、ミガフォコン（ｍｉｇａｆｏｃｏｎ）Ａ、ネフォコン（ｎｅｆｏｃｏｎ）Ａ、ネフォコンＢ、ネフォコンＣ、オンシフォコン（ｏｎｓｉｆｏｃｏｎ）Ａ、オプリフォコン（ｏｐｒｉｆｏｃｏｎ）Ａ、オキシフルフロコン（ｏｘｙｆｌｕｆｌｏｃｏｎ）Ａ、パフルフォコン（ｐａｆｌｕｆｏｃｏｎ）Ｂ、パフルフォコンＣ、パフルフォコンＤ、パフルフォコンＥ、パフルフォコンＦ、パシフォコン（ｐａｓｉｆｏｃｏｎ）Ａ、パシフォコンＢ、パシフォコンＣ、パシフォコンＤ、パシフォコンＥ、ペムフォコン（ｐｅｍｕｆｏｃｏｎ）Ａ、ポロフォコン（ｐｏｒｏｆｏｃｏｎ）Ａ、ポロフォコンＢ、ロフルフォコン（ｒｏｆｌｕｆｏｃｏｎ）Ａ、ロフルフォコンＢ、ロフルフォコンＣ、ロフルフォコンＤ、ロフルフォコンＥ、ロシルフォコン（ｒｏｓｉｌｆｏｃｏｎ）Ａ、サタフォコン（ｓａｔａｆｏｃｏｎ）Ａ、シフルフォコン（ｓｉｆｌｕｆｏｃｏｎ）Ａ、シラフォコン（ｓｉｌａｆｏｃｏｎ）Ａ、ステラフォコン（ｓｔｅｒａｆｏｃｏｎ）Ａ、スルフォコン（ｓｕｌｆｏｃｏｎ）Ａ、スルフォコンＢ、テラフォコン（ｔｅｌａｆｏｃｏｎ）Ａ、チシルフォコン（ｔｉｓｉｌｆｏｃｏｎ）Ａ、トロフォコン（ｔｏｌｏｆｏｃｏｎ）Ａ、トリフォコン（ｔｒｉｆｏｃｏｎ）Ａ、ユニフォコン（ｕｎｉｆｏｃｏｎ）Ａ、ビナフォコン（ｖｉｎａｆｏｃｏｎ）Ａ、およびウィロフォコン（ｗｉｌｏｆｏｃｏｎ）Ａが含まれる。
本発明の組成物を送達するための手段とともに親水性レンズを製造するために使用される例示的な材料には、それだけに限らないが、アバフィルコン（ａｂａｆｉｌｃｏｎ）Ａ、アコフィルコン（ａｃｏｆｉｌｃｏｎ）Ａ、アコフィルコンＢ、アクアフィルコン（ａｃｑｕａｆｉｌｃｏｎ）Ａ、アロフィルコン（ａｌｏｆｉｌｃｏｎ）Ａ、アルファフィルコン（ａｌｐｈａｆｉｌｃｏｎ）Ａ、アムフィルコン（ａｍｆｉｌｃｏｎ）Ａ、アスチフィルコン（ａｓｔｉｆｉｌｃｏｎ）Ａ、アトラフィルコン（ａｔｌａｆｉｌｃｏｎ）Ａ、バラフィルコン（ｂａｌａｆｉｌｃｏｎ）Ａ、ビスフィルコン（ｂｉｓｆｉｌｃｏｎ）Ａ、ブフィルコン（ｂｕｆｉｌｃｏｎ）Ａ、コムフィルコン（ｃｏｍｆｉｌｃｏｎ）Ａ、クロフィルコン（ｃｒｏｆｉｌｃｏｎ）Ａ、シクロフィルコン（ｃｙｃｌｏｆｉｌｃｏｎ）Ａ、ダルフィルコン（ｄａｒｆｉｌｃｏｎ）Ａ、デルタフィルコン（ｄｅｌｔａｆｉｌｃｏｎ）Ａ、デルタフィルコンＢ、ジメフィルコン（ｄｉｍｅｆｉｌｃｏｎ）Ａ、ドロクスフィルコン（ｄｒｏｘｆｉｌｃｏｎ）Ａ、エラストフィルコン（ｅｌａｓｔｏｆｉｌｃｏｎ）Ａ、エプシルフィルコン（ｅｐｓｉｌｆｉｌｃｏｎ）Ａ、エステリフィルコン（ｅｓｔｅｒｉｆｉｌｃｏｎ）Ａ、エタフィルコン（ｅｔａｆｉｌｃｏｎ）Ａ、フォコフィルコン（ｆｏｃｏｆｉｌｃｏｎ）Ａ、ガリフィルコン（ｇａｌｙｆｉｌｃｏｎ）Ａ、ゲンフィルコン（ｇｅｎｆｉｌｃｏｎ）Ａ、ゴバフィルコン（ｇｏｖａｆｉｌｃｏｎ）Ａ、ヘフィルコン（ｈｅｆｉｌｃｏｎ）Ａ、ヘフィルコンＢ、ヘフィルコンＣ、ヒラフィルコン（ｈｉｌａｆｉｌｃｏｎ）Ａ、ヒラフィルコンＢ、ヒオキシフィルコン（ｈｉｏｘｉｆｉｌｃｏｎ）Ａ、ヒオキシフィルコンＢ、ヒオキシフィルコンＣ、ヒドロフィルコン（ｈｙｄｒｏｆｉｌｃｏｎ）Ａ、レネフィルコン（ｌｅｎｅｆｉｌｃｏｎ）Ａ、リクリフィルコン（ｌｉｃｒｙｆｉｌｃｏｎ）Ａ、リクリフィルコンＢ、リドフィルコン（ｌｉｄｏｆｉｌｃｏｎ）Ａ、リドフィルコンＢ、ロトラフィルコン（ｌｏｔｒａｆｉｌｃｏｎ）Ａ、ロトラフィルコンＢ、マフィルコン（ｍａｆｉｌｃｏｎ）Ａ、メサフィルコン（ｍｅｓａｆｉｌｃｏｎ）Ａ、メタフィルコン（ｍｅｔｈａｆｉｌｃｏｎ）Ｂ、ミパフィルコン（ｍｉｐａｆｉｌｃｏｎ）Ａ、ネルフィルコン（ｎｅｌｆｉｌｃｏｎ）Ａ、ネトラフィルコン（ｎｅｔｒａｆｉｌｃｏｎ）Ａ、オクフィルコン（ｏｃｕｆｉｌｃｏｎ）Ａ、オクフィルコンＢ、Ｃ、オクフィルコンＤ、オクフィルコンＥ、オフィルコン（ｏｆｉｌｃｏｎ）Ａ、オマフィルコン（ｏｍａｆｉｌｃｏｎ）Ａ、オキシフィルコン（ｏｘｙｆｉｌｃｏｎ）Ａ、ペンタフィルコン（ｐｅｎｔａｆｉｌｃｏｎ）Ａ、ペルフィルコン（ｐｅｒｆｉｌｃｏｎ）Ａ、ペバフィルコン（ｐｅｖａｆｉｌｃｏｎ）Ａ、フェムフィルコン（ｐｈｅｍｆｉｌｃｏｎ）Ａ、ポリマコン（ｐｏｌｙｍａｃｏｎ）、セノフィルコン（ｓｅｎｏｆｉｌｃｏｎ）Ａ、シラフィルコン（ｓｉｌａｆｉｌｃｏｎ）Ａ、シロキシフィルコン（ｓｉｌｏｘｙｆｉｌｃｏｎ）Ａ、スルフィルコン（ｓｕｒｆｉｌｃｏｎ）Ａ、テフィルコン（ｔｅｆｉｌｃｏｎ）Ａ、テトラフィルコン（ｔｅｔｒａｆｉｌｃｏｎ）Ａ、トリフィルコン（ｔｒｉｌｆｉｌｃｏｎ）Ａ、ビフィルコン（ｖｉｆｉｌｃｏｎ）Ａ、ビフィルコンＢ、およびキシロフィルコン（ｘｙｌｏｆｉｌｃｏｎ）Ａが含まれる。
本発明のより完全な理解を容易にするために、以下に実施例を提供する。以下の実施例は、本発明を作製し実施するための例示的な様式を説明する。しかし、本発明の範囲はこれらの実施例に開示された特定の実施形態に限定されず、代替の方法を利用して同様の結果を得ることができるので、これらの実施例は説明の目的のためのみである。
（実施例１：ＤＥＤマウスモデルにおけるサブスタンスＰ（ＳＰ）のレベルの増大）
制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）は、炎症を抑制し、免疫静止状態を維持する主要な成分である（Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ． ２００８； ８：５２３－５３２）。ＴｒｅｇはＤＥＤにおける炎症の抑制において欠陥があり、ＤＥＤの処置にはＴｒｅｇ機能の回復が重要であることが示されている（Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２００９）。さらに、図１Ａ～１ＣはＤＥＤの眼球表面（図１Ａおよび１Ｂ）および流入領域リンパ節（図１Ｃ）において増大したレベルのＳＰを示し、ＤＥＤにおいてＳＰシグナル伝達をブロックすることの治療有効性の可能性を示している。図１Ａ～１Ｃにおいて、ＤＥＤマウスからの角膜、結膜、および流入領域リンパ節（ＤＬＮ）組織を採取し、ホモジナイズした。組織ホモジネート中のＳＰのレベルは、ＥＬＩＳＡキットを使用して測定した。ＳＰタンパク質は、ＤＥＤにおいて有意に増大していた（＊、ｐ＜０．０５）。
しかし、ＳＰシグナル伝達は角膜上皮のホメオスタシスの維持において重要な生理学的役割を果たし（ＰＬｏＳ Ｏｎｅ ２０１６； １１：ｅ０１４９８６５； Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． ２０１６； １９７：４０２１－３３）、角膜創傷の治癒を促進する（Ｄｉａｂｅｔｅｓ ２０１４； ６３：４２６２－７４； Ｊ Ｃｅｌｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ． １９９６； １６９：１５９－６）ことも報告されている。例えば、米国特許出願公開第２０１７／０２４６２３８号は、ＳＰシグナル伝達を（ブロックする代わりに）活性化することが眼の保護を媒介し、ドライアイを低減することができると主張しており（米国特許出願公開第２０１７／０２４６２３８号）、これはＳＰ受容体ＮＫ１Ｒを遺伝的に欠くマウス（ＮＫ１Ｒ－／－）がＤＥＤに関連する臨床的特徴を呈するというＳｕｖａｓ Ｓ． ｅｔ ａｌ．の観察によって支持された。しかし、現在のところ、何らかのＮＫ１Ｒアゴニスト（ＳＰ等）による処置がＤＥＤを低減し得ることを実証する証拠はない。実際上、ＮＫ１Ｒ－／－マウスは神経学的病理を含む野生型マウスとは明確に異なる多種の表現型を有している。ＳＰシグナル伝達は、野生型の場合における「好ましくない」ＳＰ受容体（ＮＫ２ＲまたはＮＫ３Ｒ）を通してこの遺伝的に改変されたマウス系統においても存在し、むしろ強化されている可能性がある（ノックアウトマウスにおいて「好ましく」なる）。したがって、ＤＥＤの病因におけるＳＰシグナル伝達の正確な役割は、より良い動物モデルを使用したさらなる研究を必要としている。
本出願は、ＳＰシグナル伝達をブロックすることを介して、ＤＥＤを含む非感染性免疫炎症性眼障害におけるＴｒｅｇの抑制機能を回復または強化することによって免疫静止状態を達成することを記載している（図２）。例えば、図２は、ＳＰ－ＮＫ１Ｒシグナル伝達のブロッキングがＴｒｅｇ機能を回復または強化させ、それにより、赤眼、ドライアイ疾患、および眼の疼痛等の免疫炎症性眼障害において炎症を抑制し、免疫静止状態を達成することを示している（┤：ブロック、↑：増強、↓：抑制または低下）。
本出願はＳＰアンタゴニズム（アゴニズムではない）が治療的であることを提示しているので、この観察は明らかに米国特許出願公開第２０１７／０２４６２３８号における観察とは反対である。
（実施例２：ＮＫ１ＲアンタゴニストはＳＰに媒介されるＴｒｅｇの減少を無効化する）
図３Ａおよび３Ｂは、Ｔｒｅｇ細胞に対するＳＰのｉｎ ｖｉｔｒｏでの影響の結果を示す。ナイーブなマウスから正常な機能性Ｆｏｘｐ３＋ＣＤ４＋Ｔｒｅｇを単離し、様々な用量、例えば０．０１、０．１、１、および１０ｎＭのＳＰとｉｎ ｖｉｔｒｏで共培養した。０．１ｎＭから出発し、０．１、１、および１０ｎＭのＳＰは、Ｔｒｅｇを有意に低減させることが見出された（図３Ａ）。反対に、ＮＫ１Ｒアンタゴニストの添加はＴｒｅｇの損失を防止した（図３Ｂ）。単離したＴｒｅｇをＳＰ（１ｎＭ）と共培養すると、回収されたＴｒｅｇが有意に減少した。ＮＫ１ＲのアンタゴニストであるスパンチドＩ（１００μＭ）を培養に添加すると、ＳＰによって誘起されるＴｒｅｇの低減が無効化された（＊、ｐ＜０．０５）（図３Ｂ）。これらのデータは、ＴｒｅｇにおけるＳＰ－ＮＫ１Ｒシグナル伝達をブロッキングすることのｉｎ ｖｉｔｒｏ保護効果を実証しており、臨床治療の有効性を示している。
（実施例３：局所ＮＫ１ＲアンタゴニストはＤＥＤの重症度を低減し、眼球表面炎症を抑制する）
サブスタンスＰは、阻害性分子および分泌された免疫制御性サイトカインのＴｒｅｇによる発現を抑制することによってＴｒｅｇの機能不全を誘起し、これはスパンチドＩによって逆転される。図１５Ａおよび１５Ｂは得られた結果であり、ドライアイ疾患（ＤＥＤ）の経過における眼球表面のサブスタンスＰのレベルが増大することを実証する。ＤＥＤはＣ５７ＢＬ／６マウスで１４日間、誘起した。対照（０日目）およびＤＥＤマウス（４および１４日目）の角膜、結膜、および三叉神経節（ＴＧ）を採取し、組織をホモジナイズした。図１５Ａは、酵素結合免疫吸着検定法を使用して対照およびＤＥＤのマウスのホモジナイズした組織の上清において角膜、結膜、およびＴＧにおけるサブスタンスＰのタンパク質レベルを分析した研究の結果を示す。タンパク質レベルをＢＣＡプロテインアッセイキット（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）によって測定した総タンパク質に対して調節した。図１５Ｂは、リアルタイムＰＣＲを使用して対照およびＤＥＤのマウスの角膜、結膜、およびＴＧにおけるサブスタンスＰのｍＲＮＡレベルを分析した研究の結果を示す。データは平均±ＳＥＭとして表わす（図１５Ａおよび１５Ｂ）。ｎ＝２回の独立した実験（図１５Ａおよび１５Ｂ）。
図６Ａ、６Ｂ、７Ｃ、８Ａ～８Ｃ、および９Ａ～９Ｄは、ＤＥＤおよび赤眼の動物モデルにおいてＳＰシグナル伝達をブロックすることのｉｎ ｖｉｖｏ治療有効性を評価した結果を示す。ＤＥＤは、環境を調整したチャンバーを使用して野生型マウスを乾燥ストレスに１４日間曝露することによって誘起した。このモデルでは他の操作は何ら使用しなかった。４日間の誘起の後、臨床的に明白な疾患がマウスで発症した（当技術分野で認知されているモデル）。次いでＣＰ－９９，９９４またはＬ－７３３，０６０の局所ＮＫ１Ｒアンタゴニスト（１日３回）を開始し、１０日間（１４日目まで）継続した。未処置またはＰＢＳ処置マウスを対照とした。疾患の臨床重症度は、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｅｙｅ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ／ＩｎｄｕｓｔｒｙのＮＥＩグレーディングスキームを使用する臨床フルオレセインスコアリング（ＣＦＳ）によって評価した。フルオレセイン染色をグレーディングするＮＥＩスケールは、角膜と結膜の表面を分割してフルオレセインの取り込みの測定を助けるものである。それぞれの角膜の５つの区域のそれぞれについて０から３の標準化されたグレーディングシステムを使用する。染色が存在しない場合にはグレード０が特定され、最大スコアは１５である。
局所ＣＰ－９９，９９４またはＬ－７３３，０６０は、未処置またはビヒクル（例えば７、１０、および１４日目におけるリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）処置マウス）と比較して、ＤＥＤマウスにおけるＣＦＳスコアを有意に低下させた（ｐ＜０．０５）（図６Ａ）。さらに、眼球表面における炎症性浸潤はＮＫ１Ｒアンタゴニズム（例えば局所ＣＰ－９９，９９４またはＬ－７３３，０６０）によって顕著に抑制、例えば低減され、角膜における活性化されたＣＤ１１ｂ＋細胞（例えばＭＨＣ－ＩＩ＋ＣＤ１１ｂ＋細胞）（図６Ｂ）および結膜におけるＴＨ１７細胞（例えばＩＬ－１７＋ＣＤ４＋細胞）（図６Ｃ）の有意の低減（＊、ｐ＜０．０５）によって証拠付けられた。これらのデータは、ＳＰ受容体ＮＫ１Ｒの局所的ブロッキングが眼球表面の免疫静止状態を回復することによってＤＥＤの重症度を有効に低減させることを実証しており、局所ＮＫ１Ｒブロッカーが免疫炎症性眼疾患の処置に有効であることを示している。
図８Ａは、ＳＰがＴｒｅｇによる阻害性分子、Ｆｏｘｐ３、ＣＴＬＡ４、およびＰＤ－１の発現をｉｎ ｖｉｔｒｏで抑制することを実証する結果を示す。さらに、ＴｒｅｇをＳＰとインキュベートすると、Ｔｒｅｇによる免疫制御性サイトカイン（ＴＧＦβおよびＩＬ－１０）の有意に低いレベルの分泌がもたらされる（図８Ｂ）。図８Ｃは、ＳＰとプレインキュベートしたＴｒｅｇの、エフェクターＴ細胞の増殖をｉｎ ｖｉｔｒｏで抑制する低い能力を実証している。しかし、ＮＫ－１ＲアンタゴニストであるスパンチドＩ（Ｓｐｔ）の共培養への添加は、ＳＰに誘起されたＴｒｅｇの機能不全を逆転させる。データは平均±ＳＥＭを表わす。＊ｐ＜０．０５。
図９Ａ～９Ｄは、スパンチドＩの全身投与によるＳＰシグナル伝達の阻害がＴｒｅｇ機能を回復させ、ＴＨ１７細胞を抑制し、ＤＥＤの重症度を低減させることを実証する結果を示す。図９Ａは、スパンチドＩ（Ｓｐｔ）で処置したＤＥＤマウスがＰＢＳで処置した対照と比較して有意に低い角膜フルオレセイン染色（ＣＦＳ）スコアを有していたことを示す。図９Ｂは、スパンチドＩで処置したＤＥＤマウスのＤＬＮから単離したＴｒｅｇがエフェクターＴ細胞の増殖の抑制において対照群由来のＴｒｅｇよりも高い能力を有していたことを示す。スパンチドＩによるＤＥＤマウスの処置は、ＤＥＤマウスの（図９Ｃ）流入領域リンパ節および（図９Ｄ）結膜において、対照と比較してＣＤ４＋ＩＬ－１７＋ＴＨｈ１７細胞の頻度の有意な低減をもたらし、ＤＥＤの重症度の低減における有効性を実証した。データは平均±ＳＥＭを表わす。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．００１。
これらのデータは、ＳＰ受容体ＮＫ１Ｒの局所的ブロッキングが眼球表面の免疫静止状態を回復することによってＤＥＤの重症度を有効に低下させたことを実証しており、局所ＮＫ１ＲブロッカーがＤＥＤおよび／または赤眼等の免疫炎症性眼疾患の有効な治療介入であることを示している。
ＮＫ１Ｒ：ＵｎｉＰｒｏｔ Ｐ２５１０３
ＭＤＮＶＬＰＶＤＳＤＬＳＰＮＩＳＴＮＴＳＥＰＮＱＦＶＱＰＡＷＱＩＶＬＷＡＡＡＹＴＶＩＶＶＴＳＶＶＧＮＶＶＶＭＷＩＩＬＡＨＫＲＭＲＴＶＴＮＹＦＬＶＮＬＡＦＡＥＡＳＭＡＡＦＮＴＶＶＮＦＴＹＡＶＨＮＥＷＹＹＧＬＦＹＣＫＦＨＮＦＦＰＩＡＡＶＦＡＳＩＹＳＭＴＡＶＡＦＤＲＹＭＡＩＩＨＰＬＱＰＲＬＳＡＴＡＴＫＶＶＩＣＶＩＷＶＬＡＬＬＬＡＦＰＱＧＹＹＳＴＴＥＴＭＰＳＲＶＶＣＭＩＥＷＰＥＨＰＮＫＩＹＥＫＶＹＨＩＣＶＴＶＬＩＹＦＬＰＬＬＶＩＧＹＡＹＴＶＶＧＩＴＬＷＡＳＥＩＰＧＤＳＳＤＲＹＨＥＱＶＳＡＫＲＫＶＶＫＭＭＩＶＶＶＣＴＦＡＩＣＷＬＰＦＨＩＦＦＬＬＰＹＩＮＰＤＬＹＬＫＫＦＩＱＱＶＹＬＡＩＭＷＬＡＭＳＳＴＭＹＮＰＩＩＹＣＣＬＮＤＲＦＲＬＧＦＫＨＡＦＲＣＣＰＦＩＳＡＧＤＹＥＧＬＥＭＫＳＴＲＹＬＱＴＱＧＳＶＹＫＶＳＲＬＥＴＴＩＳＴＶＶＧＡＨＥＥＥＰＥＤＧＰＫＡＴＰＳＳＬＤＬＴＳＮＣＳＳＲＳＤＳＫＴＭＴＥＳＦＳＦＳＳＮＶＬＳ（配列番号１）
（実施例４：ＮＫ１Ｒアンタゴニストは赤眼の重症度を低減する）
赤眼の重症度のＩｍａｇｅ Ｊに基づく客観的な定量方法が、眼科医の主観的なスコアリングに依拠することなく開発された（Ａｍｐａｒｏ， ｅｔ ａｌ． ”Ｔｈｅ Ｏｃｕｌａｒ Ｒｅｄｎｅｓｓ Ｉｎｄｅｘ： Ａ Ｎｏｖｅｌ Ａｕｔｏｍａｔｅｄ Ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ Ｍｅａｓｕｒｉｎｇ Ｏｃｕｌａｒ Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ．” Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ ＆ Ｖｉｓｕａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ， ２０１３， ｐｐ． Ｑｕｉｃｋ ｓｕｂｍｉｔ： ２０１７－０６－１８Ｔ２１：１４：３３－０４００）。このデジタルスコアリング法は、患者の眼の画像を自動的に解析し、赤眼指標（ＯＲＩ）としてスコアを生じる。このスコアは０から１００の連続的な百進法のスケールの範囲にあり、１００が最も重症の発赤である。この方法は赤眼の動物モデルにおいて発赤の重症度を評価するために使用されてきた。
得られた結果は図１０～１４で見ることができる。Ｉｍａｇｅ Ｊによる赤眼指標（ＯＲＩ）を使用する動物モデルにおける赤眼の評価において、以下のステップ。ステップ１：デジタルカメラを使用して結膜の画像を取得し、ＲＧＢカラーＪＰＥＧ画像（３２６４×２４４８画素）として記録した。ステップ２：画像におけるバックグラウンドノイズを低減するため、選択したフィルターペーパー区域（ブラックボックス）に従って色補正（ホワイトバランス）を行なった。ステップ３：使用者による評価区域としてＲＯＩ（目的の領域、黄色の円の内部の区域）を選択し、プログラムによって各画素の赤－緑－青（ＲＧＢ）値を読み取り、これを色相・彩度・明度（ＨＳＶ）空間に変換し、最終的にこれらの値を選択した区域における発赤についての百進法での値に自動的に変換した。
図１１は、非アレルギー性（非感染性）赤眼のウサギモデルから得られた結果を示す。動物を麻酔し、４０μｌの一連の増加する濃度のダピプラゾールを動物の右眼に適用して赤眼を誘起した。対照としてＰＢＳを左眼に使用した。眼を細隙灯で検査し、誘起前、誘起後最初の２分間について３０秒ごと、さらに８分間について４分ごと、および１時間まで１０分ごとに、画像を取得した。表は、誘起後のＯＲＩスコアの最大変化および１時間の観察期間の間にそのような変化が起こった時（ピーク時）をまとめている。代表的な画像は赤眼の発生を示し、グラフはＯＲＩスコアの変化の動力学を、平均±ＳＥＭを表わすデータとともにまとめている。結果は、５％のダピプラゾールがＯＲＩスコアの最大の増加を誘起することを示している。５％ダピプラゾール対ＰＢＳについて、＊ｐ＜０．０５、†ｐ＜０．０１。
図１２は、アレルギー性の赤眼のモルモットモデルから得られた結果を示す。動物を麻酔し、２０μｌの１．５ｍｇ／ｍｌヒスタミンを動物の右眼に適用して赤眼を誘起した。対照としてＰＢＳを左の眼に使用した。眼を細隙灯で検査し、誘起の前、誘起後最初の２分間について３０秒ごと、さらに８分間について４分ごと、および１時間まで１０分ごとに、画像を取得した。表は、誘起後のＯＲＩスコアの最大変化および１時間の観察期間の間にそのような変化が起こった時（ピーク時）をまとめている。代表的な画像は赤眼の発生を示し、グラフはＯＲＩスコアの変化の動力学を、平均±ＳＥＭを表わすデータとともにまとめている。ＰＢＳと比較して、†ｐ＜０．０１。
ニューロキニン－１受容体アンタゴニズムは非アレルギー性赤眼を改善することが示された（図１３）。動物を、体積４０μｌの５％ダピプラゾールの点眼と同時に１．０ｍｇ／ｍｌのＬ－７０３，６０６（高度に選択的なＮＫ１Ｒアンタゴニスト）で局所処置した。ダピプラゾールで誘起したがＬ－７０３，６０６処置をしていない動物を対照とした。眼を細隙灯で検査し、誘起の前、誘起後最初の２分間について３０秒ごと、さらに８分間について４分ごと、および１時間まで１０分ごとに、画像を取得した。ＯＲＩスコアの変化の動力学と平均±ＳＥＭを表わすデータをまとめた。結果は、ＳＰ／ＮＫ１Ｒのブロッキングが赤眼を迅速かつ一貫して改善することを示している。対照と比較して、＊ｐ＜０．０５、†ｐ＜０．０１。
図１４に示す結果は、ニューロキニン－１受容体アンタゴニズムがアレルギー性赤眼を改善することを実証した。動物を、体積２０μｌの１．５ｍｇ／ｍｌのヒスタミンの点眼と同時に１．０ｍｇ／ｍｌのＬ－７０３，６０６（高度に選択的なＮＫ１Ｒアンタゴニスト）で局所処置した。ヒスタミンで誘起したがＬ－７０３，６０６処置をしていない動物を対照とした。眼を細隙灯で検査し、誘起の前、誘起後最初の２分間について３０秒ごと、さらに８分間について４分ごと、および１時間まで１０分ごとに、画像を取得した。ＯＲＩスコアの変化の動力学と平均±ＳＥＭを表わすデータをまとめた。結果は、ＳＰ／ＮＫ１Ｒのブロッキングが赤眼を迅速かつ一貫して改善することを示している。対照と比較して、＊ｐ＜０．０５、†ｐ＜０．０１。
１時間の研究期間の間に動物の眼に１滴のＮＫ１Ｒアンタゴニストを適用する。最適の投薬量および頻度は、当技術分野で公知のまたは臨床医によって決定された方法を使用して被験体の必要性に従って評価する。処置は１日４回の適用を必要とすることが多い。
例示的な処置レジメンを以下に記載する。ヒトにおける臨床使用のため、組成物は１日あたり少なくとも１、２、３、４、５、または６回、１週あたり約１、２、３、４、５、６、または７回、被験体の眼に投与する。免疫炎症性眼障害の症状は、阻害剤の投与後、約５、１５、３０、または６０分以内、または１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、または１４日以内に低減する。
典型的には、０．１～１０μｇ／μＬ点眼剤の１滴を１日１～４回、赤眼については１～２日と短い期間、またはドライアイの治療の場合には無期限（一生）と長い期間、局所に送達する。一部の場合には、投与は１日１回未満でもよい。
（実施例５：眼球表面におけるＴｒｅｇ関連バイオマーカー（ＴＧＦβ、ＩＬ－１０）の測定）
Ｔｒｅｇ関連免疫炎症性眼障害に対するＮＫ１Ｒアンタゴニストの治療有効性をモニターするため、刺激していない涙液を患者から収集し（Ｍａｓｓｉｎｇａｌｅ， Ｍ．Ｌ．， ｅｔ ａｌ．， ２００９． Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｔｅａｒｓ ｏｆ ｄｒｙ ｅｙｅ ｐａｔｉｅｎｔｓ． Ｃｏｒｎｅａ ２８， １０２３－１０２７）、ＥＬＩＳＡを使用して、ＴＧＦ－βおよびＩＬ－１０等のＴｒｅｇ機能性バイオマーカーのタンパク質レベルを定量する。さらに、印象細胞診（ｉｍｐｒｅｓｓｉｏｎ ｃｙｔｏｌｏｇｙ）手法を使用して結膜試料を収集し（Ｄｅ Ｐａｉｖａ， Ｃ．Ｓ．， ｅｔ ａｌ． ２００９． ＩＬ－１７ ｄｉｓｒｕｐｔｓ ｃｏｒｎｅａｌ ｂａｒｒｉｅｒ ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ ｄｅｓｉｃｃａｔｉｎｇ ｓｔｒｅｓｓ． Ｍｕｃｏｓａｌ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． ２， ２４３－２５３）、ＴＧＦ－βおよびＩＬ－１０のｍＲＮＡレベルについて分析する。
（実施例６：ニューロキニン－１受容体アンタゴニズムは、抗原提示細胞の成熟およびＴＨ１７細胞の活性化を阻害することによって、ドライアイ疾患を改善する）
ＳＰの発現におけるＤＥＤ誘起性変化を評価し、刺激された角膜神経終末由来のＳＰのＡＰＣ成熟に対する影響を調べた。これは、ＤＥＤにおけるエフェクターＴＨ１７機構の活性化の重要なステップである。さらに、ＤＥＤの重症度の低減におけるＮＫ１Ｒアンタゴニストを使用するＳＰシグナル伝達のブロッキングの有効性を評価した。本明細書に記載した結果は、ＳＰが眼球表面で構成的に発現され、その発現はＤＥＤの過程において上方制御されることを示している。ｉｎ ｖｉｔｒｏの研究から、ＳＰは骨髄由来の樹状細胞の成熟を増強し、アンタゴナイズするＮＫ１Ｒはこの効果を無効化することが実証された。最後に、ＤＥＤのよく確立されたマウスモデルを使用して、ＤＥＤマウスを局所ＮＫ１Ｒアンタゴニスト、ＣＰ－９９，９９４およびＬ－７３３，０６０で処置することによって、ＡＰＣの成熟およびＴＨ１７細胞の活性化が抑制され、疾患の重症度が顕著に低減されることが示された。
本明細書に記載した研究では、以下の材料および方法を使用した。
動物：８～９週齢の雌Ｃ５７ＢＬ／６マウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＭＡ）をこれらの実験に使用した。
ドライアイ疾患（ＤＥＤ）の誘起：ＤＥＤは、一定の空気流量１５Ｌ／分および温度２１～２３℃の低湿度（相対湿度＜２０％）に制御した環境チャンバー（ＣＥＣ）にマウスを１４日間収容することによって誘起した。室内空調下に収容した同週齢、同性のマウスを対照とした。角膜上皮疾患はフルオレセイン（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）染色を使用して評価し、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｅｙｅ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅのグレーディングシステム（ＮＥＩ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ；Ｃｈｅｎ Ｙ． ｅｔ ａｌ． ＩＦＮ－ｇａｍｍａ－Ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ ＴＨ１７ Ｃｅｌｌｓ Ａｒｅ Ｒｅｑｕｉｒｅｄ ｆｏｒ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ Ｓｅｖｅｒｅ Ｏｃｕｌａｒ Ｓｕｒｆａｃｅ Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ． Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２０１７， １９９：１１６３－９）を使用してスコアリングした。１μｌの２．５％フルオレセインをマウスの側部結膜嚢に適用し、３分後にコバルトブルー光の下で細隙灯生物顕微鏡を用いて角膜を検査した。角膜の５つの区域のそれぞれについて、０から３の標準的Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｅｙｅ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅグレーディングシステムにより、マスクした様式で点状染色を記録した。
ＮＫ１Ｒアンタゴニストによる局所処置：マウスを４つの群の１つに割り付けた（それぞれｎ＝５）。ＤＥＤを誘起した後、４日目から１４日目まで、１μｇ／μｌのＮＫ１Ｒアンタゴニスト、ＣＰ－９９，９９４およびＬ－７３３，０６０（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）またはＰＢＳを１日３回、局所に投与した。未処置のＤＥＤマウスを対照とした。
骨髄由来樹状細胞（ＢＭＤＣ）の生成：Ｃ５７ＢＬ／６マウスから長骨（大腿骨および脛骨）を採取し、細胞懸濁物を調製した。細胞を赤血球（ＲＢＣ）溶解緩衝液（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）と３７℃で１０分インキュベートした。骨髄細胞を、５％の熱不活化ウシ胎仔血清（Ａｔｌａｎｔａ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ，Ｆｌｏｗｅｒ Ｂｒａｎｃｈ，ＧＡ）、２ｍＭのＬ－グルタミン（Ｌｏｎｚａ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ，Ｉｎｃ．）、１００Ｕ／ｍＬのペニシリン（Ｌｏｎｚａ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ，Ｉｎｃ．）、１００μｇ／ｍＬのストレプトマイシン（Ｌｏｎｚａ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ，Ｉｎｃ．）、５０ｍＭの２－メルカプトエタノール（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）、および２０ｎｇ／ｍＬの顆粒球／マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ，Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）を添加した５ｍＬのＲＰＭＩ－１６４０培地／ウェル（Ｌｏｎｚａ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ，Ｉｎｃ．，Ｈｏｐｋｉｎｔｏｎ，ＭＡ，ＵＳＡ）中、５×１０６細胞の濃度で６～７日間、平板培養した。培養２日目および４日目に洗浄することによってリンパ球を除去した。７日目に、非付着性および弱付着性の未成熟ＢＭＤＣを採取した。ＢＭＤＣを活性化するため、２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１β（ＰｅｐｒｏＴｅｃｈ，Ｒｏｃｋｙ Ｈｉｌｌ，ＮＪ）の存在下、６ウェルプレート中、２４時間にわたり、未成熟ＢＭＤＣを培養した。
初代三叉神経節培養：公知の方法、例えばＢｅｒｔｋｅ ＡＳ， ｅｔ ａｌ． Ａ５－ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｐｒｉｍａｒｙ ｓｅｎｓｏｒｙ ｎｅｕｒｏｎｓ ａｒｅ ｎｏｎｐｅｒｍｉｓｓｉｖｅ ｆｏｒ ｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｈｅｒｐｅｓ ｓｉｍｐｌｅｘ ｖｉｒｕｓ １ ｉｎ ｖｉｔｒｏ． Ｊ Ｖｉｒｏｌ ２０１１， ８５：６６６９－７７を使用して、三叉神経節（ＴＧ）を培養した。６～８週齢のＣ５７ＢＬ／６マウスからＴＧを採取し、パパインおよび続いてＩＩ型コラーゲナーゼ／ディスパーゼ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で消化した。５層のＯｐｔｉＰｒｅｐ密度勾配（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）の低層によってＴＧを選択した。神経細胞を計数して、ポリ－Ｌ－リジンおよびラミニンでコートした４チャンバーのスライドまたは２４ウェルのプレートに、３，０００細胞／ウェルの密度で播種した（Ｍａｌｉｎ ＳＡ， ｅｔ ａｌ． Ｎａｔ Ｐｒｏｔｏｃ ２００７， ２：１５２－６０）。神経細胞の培養を、最初の３日間、完全神経細胞培地：２％のＢ２７サプリメント、１％のペニシリンおよびストレプトマイシン、Ｌ－グルタミン（５００μＭ）、神経成長因子（ＮＧＦ、５０ｎｇ／ｍｌ）、グリア細胞由来神経栄養因子（ＧＤＮＦ、５０ｎｇ／ｍｌ）、ならびに分裂阻害剤であるフルオロデオキシウリジン（４０μＭ）およびアフィジコリン（１６．６μｇ／ｍｌ）を添加したＮｅｕｒｏｂａｓａｌ Ａ培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｔ．Ｎｏ．１０８８８－０２２）で維持した。次いで培地を、フルオロデオキシウリジンおよびアフィジコリンを含まない新鮮な培地に交換した（成長因子はＲ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、その他のサプリメントはＳｉｇｍａから入手）。
骨髄由来樹状細胞と三叉神経節の共培養：初代ＴＧ培養を実施し、培養７日後に弱付着性の未成熟ＢＭＤＣを収集した。ＢＭＤＣ数を計数した後、ＧＭ－ＣＳＦを含まないＢＭＤＣ培養培地（ＲＰＭＩ－１６４０に基づく）中で細胞密度を１５０，０００細胞／ｍＬに調整した。ＴＧ培養培地を除去した後、未成熟ＢＭＤＣを含む１ｍＬの培地を各ウェルに加えた。２時間後、ＩＬ－１β（２０ｎｇ／１０μＬ）を各ウェルに加えてＢＭＤＣの成熟を誘起し、細胞を１８時間、共培養した。
単一細胞懸濁物の調製およびフローサイトメトリー：顎下および頸部の流入領域リンパ節（ＤＬＮ）を採取し、単一細胞懸濁物を調製した。細胞を、市販のタンパク質輸送阻害剤（０．７μＬ／１００μＬ培地、Ｇｏｌｇｉｓｔｏｐ；ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ Ｊｏｓｅ，ＣＡ）の存在下、ホルボール１２－ミリステート１３－アセテート（ＰＭＡ、５０ｎｇ／ｍＬ、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）およびイオノマイシン（５００ｎｇ／ｍＬ、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）で６時間、刺激した。眼球結膜と眼瞼結膜との接合部で挙上し、眼球と眼瞼の挿入点に沿って切開する（Ｖａｎｎａｓ Ｓｃｉｓｓｏｒｓ；Ｓｔｏｒｚ，Ｂａｕｓｃｈ ＆ Ｌｏｍｂ）ことによって、結膜を採取した。１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）を添加したＲＰＭＩ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）中で結膜試料を培養し、タンパク質輸送阻害剤（０．７μＬ／１００μＬ培地、Ｇｏｌｇｉｓｔｏｐ；ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）の存在下、ＰＭＡ（５０ｎｇ／ｍＬ、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）およびイオノマイシン（５００ｎｇ／ｍＬ、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）で、３７℃で２４時間刺激した。採取した角膜を、２ｍｇ／ｍｌのＩＶ型コラーゲナーゼ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）および２ｍｇ／ｍｌのＤＮアーゼＩ（Ｒｏｃｈｅ）を含むＲＰＭＩ培地中、３７℃で１時間、消化した。次いで懸濁物を７０μｍの細胞ストレーナーで濾過した。ＤＬＮおよび角膜の単一細胞懸濁物を以下の抗体：Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ Ｖｉｏｌｅｔ ４２１－コンジュゲート抗マウスＩ－Ａ／Ｉ－Ｅ（ＭＨＣ－ＩＩ）、ＰＥ－コンジュゲート抗ＣＤ１１ｃ（ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ，Ｓａｎ Ｊｏｓｅ，ＣＡ）、ＰｅｒＣＰ／Ｃｙ５．５－コンジュゲート抗ＣＤ１１ｂ、ＦＩＴＣ－コンジュゲート抗ＣＤ４（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）、およびＰＥ－コンジュゲート抗インターロイキン１７Ａ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）で染色した。細胞の固定および透過化の後で、ＰＥ／Ｃｙ７－コンジュゲート抗Ｆｏｘｐ３（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）による核内染色を実施した。対照試料はアイソタイプを一致させた適切な抗体で染色した。染色した細胞を、ＬＳＲＩＩフローサイトメーター（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ，ＮＪ，ＵＳＡ）を使用して検査し、市販のＳｕｍｍｉｔソフトウェア（Ｓｕｍｍｉｔ ｖ４．３；Ｄａｋｏ Ｃｏｌｏｒａｄｏ，Ｉｎｃ．，Ｆｏｒｔ Ｃｏｌｌｉｎｓ，ＣＯ）を使用してデータを解析した。
酵素結合免疫吸着検定法：タンパク質の抽出のため、角膜および三叉神経節を採取して、プロテアーゼ阻害剤（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）を含む冷たい無菌のＰＢＳ中に－８０℃で使用まで保存した。試料を氷上でホモジナイズし、遠心分離した。上清を、市販の競合酵素免疫アッセイキット（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）を使用してＳＰのレベルについてアッセイした。
リアルタイムＰＣＲ：マウスから眼球と眼瞼の結膜、角膜、および三叉神経節を採取し、ＲＮＡを単離して、ＲＮｅａｓｙマイクロキット（Ｑｉａｇｅｎ，Ｖａｌｅｎｃｉａ，ＣＡ）およびＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔＩＩＩキット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して逆転写を行うまでＴＲＩｚｏｌ試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）中に－８０℃で保存した。リアルタイムＰＣＲは、ＴａｑＭａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ ＰＣＲ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘならびに予め設計したＩＬ－１７Ａ（Ｍｍ００４３９６１８＿ｍ１）、ＳＰ（Ｍｍ０１１６６９９６＿ｍ１）、およびグリセルアルデヒド３－ホスフェートデヒドロゲナーゼ（ＧＡＰＤＨ，Ｍｍ９９９９９９１５＿ｇ１）用のプライマー（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）を使用して実施した。試料はリアルタイムＰＣＲシステム（ＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ ４８０ ＩＩ Ｓｙｓｔｅｍ；Ｒｏｃｈｅ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）を使用して分析し、結果はＧＡＰＤＨを内部対照として使用する比較閾値サイクル法によって解析した。
統計解析：２つの群の比較のために独立ステューデントｔ－検定を実施し、ｐ＜０．０５を統計的有意とした。結果は少なくとも２つの独立した実験の平均±ＳＥＭとして表わす。
サブスタンスＰの発現はドライアイ疾患の経過中に増大する
ＤＥＤの様々な相におけるＳＰの発現レベルを評価するため、正常およびＤＥＤのマウスの角膜および三叉神経節（ＴＧ）においてＳＰのｍＲＮＡおよびタンパク質のレベルを測定した。既に示された（Ｃｈａｕｈａｎ ＳＫ， ｅｔ ａｌ．， Ａ ｎｏｖｅｌ ｐｒｏ－ｌｙｍｐｈａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｆｏｒ ＴＨ１７／ＩＬ－１７． Ｂｌｏｏｄ ２０１１， １１８：４６３０－４）ように、環境を調整したチャンバー中に動物を２週間収容することによってＤＥＤを誘起する周知のＤＥＤのマウスモデルを採用した。ＤＥＤ誘起後、４日目および１４日目に角膜およびＴＧを採取し、両方の組織中のＳＰのタンパク質およびｍＲＮＡのレベルを、それぞれＥＬＩＳＡおよびリアルタイムＰＣＲを使用して評価した。ＳＰタンパク質レベルは、ＥＬＩＳＡを使用してＴＧ培養上清中で見積もった。本発明者らの結果は角膜とＴＧの両方でＳＰのベースライン発現を実証し、それらのレベルはＤＥＤの誘起後、両方の組織で上方制御された（図４、それぞれｐ＝０．０１およびｐ＝０．００３）。１４日目までに、角膜とＴＧの両方におけるＳＰタンパク質レベルは正常値近くに戻った。ｍＲＮＡレベルでは、ＤＥＤマウスの角膜におけるＳＰの発現は、健常対照よりも有意に高かった（４日目で０．８４倍、ｐ＝０．００１、１４日目で１．４３倍、ｐ＝０．０２）。さらに、ＴＧにおいて、ＳＰ ｍＲＮＡレベルは角膜で見られたものよりも有意に高く、乾燥ストレスによって誘起された発現の増大はＤＥＤの経過の後期に生じた。これらの結果は、主としてＴＧ神経細胞における眼球表面のＳＰの構成的発現を示し、そのレベルは乾燥ストレスに応答して上方制御される。
三叉神経由来のＳＰはｉｎ ｖｉｔｒｏで骨髄由来樹状細胞の成熟を促進する
成熟ＡＰＣは、ＴＨｈ１７細胞の活性化およびＤＥＤにおける自己免疫応答において重要な役割を果たしている（Ｂａｒａｂｉｎｏ Ｓ． ｅｔ ａｌ． Ｐｒｏｇ Ｒｅｔｉｎ Ｅｙｅ Ｒｅｓ ２０１２， ３１：２７１－８５； Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎ Ｗ， Ｃｈａｕｈａｎ ＳＫ， Ｄａｎａ Ｒ： Ｄｒｙ ｅｙｅ ｄｉｓｅａｓｅ： ａｎ ｉｍｍｕｎｅ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｏｃｕｌａｒ ｓｕｒｆａｃｅ ｄｉｓｏｒｄｅｒ． Ａｒｃｈ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ ２０１２， １３０：９０－１００； Ｈａｍｒａｈ Ｐ， ｅｔ ａｌ． Ｉｎｖｅｓｔ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ Ｖｉｓ Ｓｃｉ ２００３， ４４：５８１－９）。乾燥ストレスに応答してＳＰレベルの増大が観察されたことを考慮して、次にＡＰＣの成熟に対するＳＰの影響を評価した。マウス骨髄細胞を２０ｎｇ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦと６日間培養することによって、未成熟の骨髄由来樹状細胞（ＢＭＤＣ）を培養した。続いてＢＭＤＣをＧＭ－ＣＳＦの非存在下に２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１βで２４時間プライミングした。プライミングしたＢＭＤＣを３つの異なる濃度のＳＰ（２５、５０、および１００ｐｇ／ｍＬ）の存在下に１８時間培養し、ＢＭＤＣによるＭＨＣ ＩＩ成熟マーカーの発現を、フローサイトメトリーを使用して評価した（図５Ａ）。結果は、ＳＰの濃度の増大がＣＤ１１ｃ＋ＢＭＤＣにおけるＭＨＣ ＩＩの平均蛍光強度（ＭＦＩ）において有意かつ用量依存的な増大をもたらしたことを実証した（ビヒクルに対してＳＰ ５０および１００ｐｇ／ｍＬでそれぞれｐ＝０．０３およびｐ＝０．０２）。ＢＭＤＣの成熟に対するＴＧ神経細胞（これは角膜を神経支配する）の役割を調べるため、ＤＥＤまたは対照のマウスから採取したＴＧを３日間培養し、続いてプライミングしたＢＭＤＣと１８時間共培養した。さらに、ＳＰシグナル伝達をブロックするため、２つの異なる用量（１０および１００μＭ）のニューロキニン－１受容体アンタゴニストであるスパンチドを共培養系に加えた。ＣＤ１１ｃ＋ＢＭＤＣによるＭＨＣ ＩＩ成熟マーカーの発現を、フローサイトメトリーを使用して異なる群で解析した。図５Ｂに示すように、ＤＥＤマウス由来のＴＧは、正常な健常マウス由来のＴＧと比較して、ＢＭＤＣによるＭＨＣ ＩＩの発現の有意な増大を誘起した（７４３±３２対６４４±２６、ｐ＝０．０４）。最後に、１００μＭの濃度のスパンチドによるＳＰのブロッキングは、ＢＭＤＣの成熟に対するＤＥＤ ＴＧの影響を有意に無効化し（ｐ＝０．０４、図５Ｂ）、ＴＧ神経細胞由来のＳＰがＢＭＤＣによるＭＨＣ ＩＩの上方制御された発現に関与していることを示している。
ＮＫ１ＲアンタゴニストはＤＥＤを改善し、角膜および流入領域リンパ節における抗原提示細胞の成熟を阻害する
ＳＰに誘起されるＡＰＣの成熟を無効化することにおけるＮＫ１Ｒアンタゴニストのｉｎ ｖｉｔｒｏ効果が示されたので、ＤＥＤの臨床徴候に対するＳＰ受容体の局所的ブロッキングの効果を調べた。ＤＥＤを４日間誘起した後、マウスにＮＫ１ＲアンタゴニストであるＣＰ－９９，９９４、Ｌ－７３３，０６０、またはＰＢＳ対照を、１日３回、ＤＥＤ誘起後１４日目まで局所適用した。図６Ａに示すように、未処置およびＰＢＳ処置した対照と比較して、ＮＫ１ＲアンタゴニストであるＣＰ－９９，９９４またはＬ－７３３，０６０の局所適用は、ＤＥＤ誘起後７、１０、および１４日目のＣＦＳスコアおよびＤＥＤ重症度を有意に低減した（ｐ＜０．０５）。ＤＥＤマウスにおけるＡＰＣ成熟に対するＳＰの局所的ブロッキングの効果を確認するため、フローサイトメトリーを使用して角膜およびＤＬＮにおけるＭＨＣ－ＩＩｈｉＣＤ１１ｂ＋細胞の頻度を調べた（図７Ｂおよび７Ｃ）。未処置およびＰＢＳ処置したＤＥＤマウスの角膜は、ナイーブなマウスの角膜と比較して、ＭＨＣ－ＩＩｈｉＣＤ１１ｂ＋細胞の頻度の有意な増大を示した。しかし、角膜におけるＭＨＣ－ＩＩｈｉＣＤ１１ｂ＋細胞の頻度は、ＣＰ－９９，９９４およびＬ－７３３，０６０で処置したマウスの両方で有意に低かった（図６Ｂ）。同様に、ＣＰ－９９，９９４およびＬ－７３３，０６０で処置したマウスのＤＬＮは、ＰＢＳ処置したマウスのＤＬＮと比較して、成熟ＭＨＣ－ＩＩｈｉＣＤ１１ｂ＋細胞の頻度（図７Ｃおよび７Ｄ、ＣＰ－９９，９９４対ＰＢＳについてｐ＝０．００５、Ｌ－７３３，０６０対ＰＢＳについてｐ＝０．００１）、ならびにＣＤ１１ｂ＋細胞によるＭＨＣ－ＩＩの発現のレベル（図６Ｅ、ＣＰ－９９，９９４対ＰＢＳについてｐ＝０．００３、Ｌ－７３３，０６０対ＰＢＳについてｐ＝０．０２）において有意な減少を示した。
ＮＫ１Ｒアンタゴニストは、ＤＬＮにおけるＴＨ１７細胞の活性化および結膜におけるそれらの浸潤を抑制する
ＤＬＮおよび結膜におけるＴＨ１７細胞の活性化に対するＳＰシグナル伝達の局所的ブロッキングの効果を次に調べた。未処置およびＰＢＳ処置したマウスのＤＬＮは、ナイーブなマウスのＤＬＮと比較して、ＴＨ１７細胞の頻度の増大（１～１．５倍）を示した（それぞれｐ＝０．００３およびｐ＝０．０１３）。しかし、いずれかのＮＫ１Ｒアンタゴニストの局所適用は、ＤＬＮにおけるＴＨ１７細胞の頻度を有意に低下させた（図８Ａおよび８Ｂ、ＣＰ－９９，９９４対ＰＢＳについてｐ＝０．０２、Ｌ－７３３，０６０対ＰＢＳについてｐ＝０．０１）。ＮＫ１Ｒアンタゴニストで処置したマウスの結膜におけるＴＨ１７細胞の頻度についても同様の減少傾向が観察された（図８Ｃおよび８Ｄ、ＣＰ－９９，９９４対ＰＢＳについてｐ＝０．０２、Ｌ－７３３，０６０対ＰＢＳについてｐ＝０．０１）。さらに、リアルタイムＰＣＲデータは、ＮＫ１Ｒアンタゴニストで処置したマウスの結膜において炎症性サイトカインＩＬ－１７のｍＲＮＡ発現レベルにおいて有意な低減を実証し（ＣＰ－９９，９９４対ＰＢＳおよびＬ－７３３，０６０対ＰＢＳについてｐ＝０．００１）、ＤＥＤマウスにおけるＴＨ１７免疫応答の抑制に対してＳＰシグナル伝達をブロックすることの効果がさらに確認された。
ＮＫ１ＲアンタゴニズムはＤＥＤの重症度および症状を低減する
神経性炎症はＤＥＤの発生および慢性度に関与する可能な機構として関係しているとされてきた（Ｂｅｕｅｒｍａｎ ＲＷ， ｅｔ ａｌ．， Ｏｃｕｌ Ｓｕｒｆ ２００５， ３：Ｓ２０３－６； Ｓｔｅｒｎ ＭＥ， ｅｔ ａｌ．， Ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ｔｈｅ ｌａｃｒｉｍａｌ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｕｎｉｔ ｉｎ ｔｈｅ ｐａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｄｒｙ ｅｙｅ． Ｅｘｐ Ｅｙｅ Ｒｅｓ ２００４， ７８：４０９－１６）。しかし、ＤＥＤの病因におけるＳＰ等の神経モジュレーターの正確な役割はこれまでのところ解明されていない（Ｓａｂａｔｉｎｏ Ｆ． ｅｔ ａｌ． Ｔｈｅ Ｉｎｔｒｉｇｕｉｎｇ Ｒｏｌｅ ｏｆ Ｎｅｕｒｏｐｅｐｔｉｄｅｓ ａｔ ｔｈｅ Ｏｃｕｌａｒ Ｓｕｒｆａｃｅ． Ｏｃｕｌ Ｓｕｒｆ ２０１７， １５：２－１４）。本明細書で、ＴＧがＤＥＤの経過におけるＳＰの主要な供給源であることが実証された。本明細書で、ＴＧ由来のＳＰがＢＭＤＣによるＭＨＣ ＩＩの発現を強化し（ＤＣの抗原提示機能に連結する重要な機構）、この効果はＮＫ１Ｒアンタゴニストであるスパンチドを使用するＳＰシグナル伝達のブロッキングによって無効化されることが示された。最後に、よく確立されたＤＥＤのマウスモデルを使用して、ＮＫ１ＲアンタゴニストであるＣＰ－９９，９９４およびＬ－７３３，０６０によるＤＥＤマウスの局所処置がＭＨＣ ＩＩのＡＰＣ獲得を抑制し、ＴＨｈ１７細胞の浸潤および活性を低減し、ＤＥＤの重症度を改善することも示された。
角膜は体内で最も豊富に神経支配されている組織であり、これは三叉神経の眼枝（ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ ｂｒａｎｃｈ）から高密度の知覚神経線維を受容する。ＳＰを発現する線維の高密度のネットワークは、より表在の層に浸透する終末分枝によって、角膜上皮の基底区域を神経支配する。ＳＰは、神経系と免疫系との間の交差通信（ｃｒｏｓｓ－ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ）における重要な分子として公知である。神経細胞がＳＰの主要な供給源として働くが、ＳＰの内因性発現も免疫細胞、角膜細胞、および上皮細胞において実証されている（Ｏ’Ｃｏｎｎｏｒ Ｔ． Ｍ． ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｃｅｌｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ ２００４， ２０１：１６７－８０； Ｗａｔａｎａｂｅ Ｍ． ｅｔ ａｌ． Ｊｐｎ Ｊ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ ２００２， ４６：６１６－２０）。これまでのところ、ＤＥＤにおけるＳＰレベルの変化に関する研究は少ない。本明細書に記載した結果は、角膜と比較してＴＧ神経細胞におけるＳＰの有意に高いベースライン発現レベルを実証しており、この両方は乾燥ストレスに応答して上方制御される。これらの実験における神経ＳＰ ｍＲＮＡレベルがＤＥＤの誘起の後、遅い時点で増大するという事実は、タンパク質レベルにおけるＳＰの早期の発現がおそらく角膜上皮において予め形成されたタンパク質によるであろうという証拠を提供する。
樹状細胞（ＤＣ）を含む抗原提示細胞（ＡＰＣ）は先天免疫と適応免疫の接点における免疫応答の制御において重要な役割を果たしている（Ｆｒａｎｓｅｎ Ｊ．Ｈ． ｅｔ ａｌ． Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｅｓ Ｔｈｅｒ ２０１０， １２：２０７）。組織に存在するＤＣの不均一な集団が、角膜上皮および間質において記載されている（Ｈａｍｒａｈ Ｐ， Ｈｕｑ ＳＯ， Ｌｉｕ Ｙ， Ｚｈａｎｇ Ｑ， Ｄａｎａ ＭＲ． Ｊ Ｌｅｕｋｏｃ Ｂｉｏｌ ２００３， ７４：１７２－８）。炎症性条件下では、これらのＤＣは成熟プロセスを受け、抗原提示能を獲得して、Ｔリンパ球依存性応答を刺激する（Ｌｉｕ Ｙ．Ｊ． ｅｔ ａｌ． Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２００１， ２：５８５－９）。成熟ＭＨＣ ＩＩ＋ＤＣの存在が、ドライアイ疾患を含む多様な免疫炎症性状態の経過において観察されている（Ｃａｔｒｙ Ｌ， ｅｔ ａｌ． Ｇｒａｅｆｅｓ Ａｒｃｈ Ｃｌｉｎ Ｅｘｐ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ １９９１， ２２９：１８２－５）。眼球表面からＤＬＮへの成熟ＡＰＣのホーミングは、ＤＥＤの初期免疫病因における重要なステップである（Ｂａｒａｂｉｎｏ Ｓ， Ｃｈｅｎ Ｙ， Ｃｈａｕｈａｎ Ｓ， Ｄａｎａ Ｒ． Ｐｒｏｇ Ｒｅｔｉｎ Ｅｙｅ Ｒｅｓ ２０１２， ３１：２７１－８５； Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎ Ｗ， Ｃｈａｕｈａｎ ＳＫ， Ｄａｎａ Ｒ． Ａｒｃｈ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ ２０１２， １３０：９０－１００）。エフェクターＴ細胞のＡＰＣ媒介プライミングが、ＤＥＤにおける自己免疫の可能性のある供給源として提案されてきた（Ｂａｒａｂｉｎｏ Ｓ， Ｃｈｅｎ Ｙ， Ｃｈａｕｈａｎ Ｓ， Ｄａｎａ Ｒ： Ｏｃｕｌａｒ ｓｕｒｆａｃｅ ｉｍｍｕｎｉｔｙ： Ｈｏｍｅｏｓｔａｔｉｃ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｄｉｓｒｕｐｔｉｏｎ ｉｎ ｄｒｙ ｅｙｅ ｄｉｓｅａｓｅ． Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｉｎ Ｒｅｔｉｎａｌ ａｎｄ Ｅｙｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２０１２， ３１：２７１－８５）。ＴＧ－ＢＭＤＣの共培養の結果は、ＴＧ由来のＳＰがＤＣによるＭＨＣクラスＩＩの発現を強化し、それによりそれらの抗原提示能を強化することを実証している。共培養においてＮＫ１Ｒをアンタゴナイズすることは、興味あることにＳＰによって誘起されるＤＣの成熟を無効化し、ＡＰＣの活性化の誘起におけるＳＰシグナル伝達の役割をさらに実証している。
これまでのところ、ＤＥＤの動物モデルにおけるＮＫ１Ｒアンタゴニストの有効性は、まだ記述されていない。ＤＥＤの状況におけるＮＫ１Ｒアンタゴニストの有効性を評価するため、高度に特異的かつ強力な２つの異なるＮＫ１Ｒアゴニスト、即ちＣＰ－９９，９９４およびＬ－７３３，０６０を試験した。結果は、ＣＰ－９９，９９４［（２Ｓ，３Ｓ）－Ｎ－［（２－メトキシフェニル）メチル］－２－フェニル－３－ピペリジンアミン二塩酸塩］、またはＬ－７３３，０６０［（２Ｓ，３Ｓ）－３－［［３，５－ビス（トリフルオロメチル）フェニル］メトキシ］－２－フェニルピペリジン塩酸塩］の局所適用がＡＰＣの成熟およびＴＨ１７の活性を抑制し、角膜上皮症の改善をもたらすことを示した。ＣＰ－９９，９９４の適用は、眼疾患においてはこれまでに報告されていない。しかし、ＳＰは眼球表面の生理学的ホメオスタシスを含む多数の機能を有する多面的な分子である。ＳＰの局所適用は糖尿病マウスにおける角膜上皮創傷の治癒を促進し、Ｌ－７３３，０６０の結膜下注射は上皮の治癒に対するＳＰの保護的役割を顕著に阻害する（Ｙａｎｇ Ｌ， ｅｔ ａｌ． Ｄｉａｂｅｔｅｓ ２０１４， ６３：４２６２－７４）。
まとめると、ＤＥＤの誘起後の角膜およびＤＬＮにおけるＭＨＣ－ＩＩｈｉＣＤ１１ｂ＋ＡＰＣの頻度の増大に関する本明細書のデータは、存在する角膜ＡＰＣの成熟およびＤＬＮへのそれらの遊走の増強における乾燥ストレスの影響を実証した。ＮＫ１ＲアンタゴニストによるＤＥＤマウスの処置が角膜およびＤＬＮにおける成熟ＡＰＣの頻度を顕著に減少させ、ここでＡＰＣがナイーブＴ細胞をＩＬ－１７分泌ＴＨ１７細胞に分化させるようにプライミングすることも示された。ＡＰＣの成熟に対するＮＫ１Ｒアンタゴニストの観察された抑制効果は、ＴＨ１７細胞の活性化の阻害におけるＮＫ１Ｒアンタゴニストの有効性の評価を促した。ＮＫ１Ｒアンタゴニストで処置したマウスのＤＬＮと結膜の両方で、ＴＨ１７細胞の頻度の大幅な低下が観察され、これはＩＬ－１７ ｍＲＮＡレベルの有意な低減を伴っていた。
本明細書に記載した知見は、ＮＫ１Ｒ媒介シグナル伝達をアンタゴナイズすることはＴＨ１７媒介眼球表面疾患の抑制およびＤＥＤの重症度の低減に有効であるという証拠を提供する。
（実施例７：サブスタンスＰ／ニューロキニン１受容体を標的とすることによるドライアイ疾患における制御性Ｔ細胞機能の回復）
これらの実験の目的は、ＳＰに応答するＴｒｅｇの表現型および機能の変化を見積もり、ＤＥＤのマウスモデルにおいてＴｒｅｇ機能を回復することにおけるニューロキニン１受容体（ＮＫ－１Ｒ）をブロックすることの役割を評価することであった。
ナイーブ雌Ｃ５７ＢＬ／６マウスの流入領域リンパ節（ＤＬＮ）からＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇを単離した。
単離したＴｒｅｇを、スパンチドＩ（１０μＭ）ありとなしで、ＳＰ（１μＭ）と４８時間共培養した。Ｔｒｅｇの表現型をフローサイトメトリーによって評価し、エフェクターＴ細胞の増殖を抑制するＴｒｅｇの能力を調べた。
マウスでＤＥＤを１４日間誘起した。ＤＥＤ誘起の１日前から１４日目まで、スパンチドＩまたはＰＢＳ（対照）を腹腔内投与（３６μｇ／日）した。ＤＬＮにおけるＴｒｅｇの抑制機能、ＤＬＮおよび結膜におけるＴＨ１７細胞の頻度、ならびに角膜上皮症の重症度を評価した。
結果は、サブスタンスＰが阻害性分子および分泌された免疫調節性サイトカインのＴｒｅｇ発現を抑制することによってＴｒｅｇの機能不全を誘起し、これがスパンチドＩによって逆転させられることを実証している（図９Ａ～９Ｃ）。スパンチドＩの全身投与によるＳＰシグナル伝達の阻害はＴｒｅｇ機能を回復させ、ＴＨ１７細胞を抑制し、ＤＥＤの重症度を低減する（図１０Ａ～１０Ｄ）。
ＳＰは阻害性分子および免疫調節性サイトカインのＴｒｅｇ発現を抑制することによってＴｒｅｇの機能不全を誘起する。ＳＰによって誘起されたＴｒｅｇの機能不全は、ＮＫ－１ＲアンタゴニストであるスパンチドＩによって逆転させられる。全身スパンチドＩによるＤＥＤマウスの処置は、Ｔｒｅｇの抑制機能を回復させ、ＴＨ１７細胞を抑制し、ＤＥＤの重症度を改善する。
その他の実施形態
本発明をその詳細な説明と併せて説明したが、上の記載は説明を意図しており、本発明の範囲を限定するものではない。本発明の範囲は、添付した特許請求の範囲によって定義される。その他の態様、利点、および改変は、以下の特許請求の範囲内である。
本明細書で参照した特許および科学文献は、当業者が利用可能な知識を規定している。本明細書で引用した全ての米国特許および公開または未公開の米国特許出願は、参照により組み込まれる。本明細書で引用した全ての公開された外国特許および特許出願は、参照により本明細書に組み込まれる。本明細書で引用したその他すべての公開された参考文献、書類、原稿、および科学文献は、参照により本明細書に組み込まれる。
本発明は特にその好ましい実施形態に関して示し、記載しているが、添付した特許請求の範囲に包含される本発明の範囲から逸脱することなく、形態および詳細における種々の変更が本明細書で行なわれ得ることは、当業者には理解されよう。

Claims (68)

  1. 被験体における非感染性免疫炎症性眼障害を処置する方法であって、１つまたは複数のニューロキニン１受容体（ＮＫ１Ｒ）アンタゴニストを含む組成物を前記被験体に投与するステップを含み、前記被験体が制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）関連眼障害と診断されているかまたはこれに罹患している、方法。
  2. 前記組成物がＬ－７３３，０６０またはＬ－７０３，０６０を含む、請求項１に記載の方法。
  3. 前記Ｔｒｅｇ関連眼障害が、非ドライアイ疾患（ＤＥＤ）関連赤眼、ドライアイ疾患（ＤＥＤ）、アレルギー性結膜炎、および／または眼の疼痛から選択される１つである、請求項１に記載の方法。
  4. 前記非ＤＥＤ関連赤眼が、アレルギー性赤眼または非アレルギー性赤眼を含む、請求項２に記載の方法。
  5. 前記ＮＫ１Ｒアンタゴニストが、ＮＫ１Ｒの小分子アンタゴニスト、中和性抗ＮＫ１Ｒ抗体、ＳＰに対するブロッキング融合タンパク質、抗ＳＰ抗体、または核酸から選択される１つである、請求項１に記載の方法。
  6. 前記ＮＫ１Ｒアンタゴニストが小分子である、請求項５に記載の方法。
  7. 前記ＮＫ１Ｒアンタゴニストが、スパンチド（ＲＰＫＰＱＱＷＦＷＬＬ、配列番号２）、
    Figure 2022534990000043
     （２Ｓ，３Ｓ）－Ｎ－［（２－メトキシフェニル）メチル］－２－フェニル－３－ピペリジンアミン二塩酸塩、
    Figure 2022534990000044
     （２Ｓ，３Ｓ）－３－［［３，５－ビス（トリフルオロメチル）フェニル］メトキシ］－２－フェニルピペリジン塩酸塩、
    Figure 2022534990000045
     （２Ｓ，３Ｓ）－３－［［３，５－ビス（トリフルオロメチル）フェニル］メトキシ］－２－フェニルピペリジン塩酸塩、
    Figure 2022534990000046
     ５－［［（２Ｒ，３Ｓ）－２－［（１Ｒ）－１－［３，５－ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エトキシ］－３－（４－フルオロフェニル）－４－モルホリニル］メチル］－１，２－ジヒドロ－３Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－オン、
    Figure 2022534990000047
     （２Ｓ，３Ｓ）－Ｎ－［［２－メトキシ－５－（トリフルオロメトキシ）フェニル］メチル］－２－フェニル－３－ピペリジンアミン二塩酸塩、
    Figure 2022534990000048
     （２Ｓ，３Ｓ）－Ｎ－（２－メトキシフェニル）メチル－２－ジフェニルメチル－１－アザビシクロ［２．２．２］オクタン－３－アミン、
    Figure 2022534990000049
     （４Ｒ）－４－ヒドロキシ－１－［（１－メチル－１Ｈ－インドール－３－イル）カルボニル］－Ｌ－プロリル－Ｎ－メチル－３－（２－ナフタレニル）－Ｎ－（フェニルメチル）－Ｌ－アラニンアミド、
    Figure 2022534990000050
     （２Ｓ，３Ｓ）－Ｎ－［［２－メトキシ－５－（１Ｈ－テトラゾール－１－イル）フェニル］メチル］－２－フェニル－３－ピペリジンアミン二塩酸塩、
    Figure 2022534990000051
     ＧＲ８２３３４、
    Figure 2022534990000052
     ５－［［（２Ｒ，３Ｓ）－２－［（１Ｒ）－１－［３，５－ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エトキシ］－３－（４－フルオロフェニル）－４－モルホリニル］メチル－Ｎ，Ｎ－ジメチル－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－４－メタンアミン塩酸塩、
    Figure 2022534990000053
     Ｎ－アセチル－Ｌ－トリプトファン３，５－ビス（トリフルオロメチル）ベンジルエステル、
    Figure 2022534990000054
     （３ａＲ，７ａＲ）－オクタヒドロ－２－［１－イミノ－２－（２－メトキシフェニル）エチル］－７，７－ジフェニル－４Ｈ－イソインドール、
    Figure 2022534990000055
     １－［［（２－ニトロフェニル）アミノ］カルボニル］－Ｌ－プロリル－Ｎ－メチル－３－（２－ナフタレニル）－Ｎ－（フェニルメチル）－Ｌ－アラニンアミド、
    Figure 2022534990000056
     １－［２－［（３Ｓ）－３－（３，４－ジクロロフェニル）－１－［２－［３－（１－メチルエトキシ）フェニル］アセチル］－３－ピペリジニル］エチル］－４－フェニル－１－アゾニアビシクロ［２．２．２］オクタンクロリド、それらのアナログ、または組合せを含む、請求項６に記載の方法。
  8. 前記核酸が、アプタマー、低分子干渉性ＲＮＡ、ミクロＲＮＡ、低分子ヘアピンＲＮＡ、およびアンチセンス核酸から選択される１つである、請求項５に記載の方法。
  9. 前記組成物が、局所投与、結膜下投与、硝子体内投与、皮下、またはそれらの組合せによって前記被験体に投与される、請求項１に記載の方法。
  10. 前記組成物が少なくとも１日１回、前記被験体に局所投与される、請求項９に記載の方法。
  11. 前記組成物が少なくとも１日２回、前記被験体に局所投与される、請求項９に記載の方法。
  12. 前記組成物が少なくとも１日３回、前記被験体に局所投与される、請求項９に記載の方法。
  13. 前記組成物が前記被験体の眼に投与される、請求項１に記載の方法。
  14. 前記組成物が二次治療または二次薬剤と組み合わせて前記被験体に投与される、請求項１に記載の方法。
  15. 被験体における非感染性免疫炎症性眼障害の症状を低減する方法であって、治療有効量のＳＰシグナル伝達ブロッキング誘起剤を含む組成物を、Ｔｒｅｇ関連眼障害を有する前記被験体に投与するステップを含む、方法。
  16. 前記Ｔｒｅｇ関連眼障害が、非ＤＥＤ関連赤眼、ドライアイ疾患（ＤＥＤ）、アレルギー性結膜炎、および眼の疼痛から選択される１つである、請求項１５に記載の方法。
  17. 前記ＳＰシグナル伝達ブロッキング誘起剤が、ＳＰブロッカー、ＳＰアンタゴニスト、ＳＰ受容体ブロッカー、およびＳＰ受容体アンタゴニストから選択される、請求項１５に記載の方法。
  18. ＳＰ受容体がＮＫ１Ｒ（配列番号１）である、請求項１６に記載の方法。
  19. 前記組成物が、局所投与、結膜下投与、硝子体内投与、皮下投与、またはそれらの組合せによって前記被験体に投与される、請求項１６に記載の方法。
  20. 前記皮下投与が、眼瞼、額、またはそれらの組合せに投与される、請求項１９に記載の方法。
  21. 活性成分としてのＳＰブロッカー、ＳＰアンタゴニスト、ＳＰ受容体ブロッカー、ＳＰ受容体アンタゴニスト、またはそれらの組合せ、および薬学的に許容される担体を含む、請求項１または１５に記載の方法のための医薬組成物。
  22. 制御性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞の活性または機能をモジュレートする方法であって、請求項１９に記載の医薬組成物を、それを必要とする被験体に投与するステップを含む、方法。
  23. 被験体における角膜神経痛、角膜痛覚過敏症、角膜異痛症を処置する方法であって、治療有効量の１つまたは複数のニューロキニン１受容体（ＮＫ１Ｒ）アンタゴニストを含む組成物を前記被験体に投与するステップを含む、方法。
  24. 前記ＮＫ１Ｒアンタゴニストが、ＮＫ１Ｒの小分子アンタゴニスト、中和性抗ＮＫ１Ｒ抗体、ＳＰに対するブロッキング融合タンパク質、抗ＳＰ抗体、または核酸から選択される１つである、請求項２３に記載の方法。
  25. 前記ＮＫ１Ｒアンタゴニストが小分子である、請求項２４に記載の方法。
  26. 前記ＮＫ１Ｒアンタゴニストが、スパンチド（ＲＰＫＰＱＱＷＦＷＬＬ、配列番号２）またはそのバリアント、
    Figure 2022534990000057
     （２Ｓ，３Ｓ）－Ｎ－［（２－メトキシフェニル）メチル］－２－フェニル－３－ピペリジンアミン二塩酸塩、
    Figure 2022534990000058
     （２Ｓ，３Ｓ）－３－［［３，５－ビス（トリフルオロメチル）フェニル］メトキシ］－２－フェニルピペリジン塩酸塩、
    Figure 2022534990000059
     ５－［［（２Ｒ，３Ｓ）－２－［（１Ｒ）－１－［３，５－ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エトキシ］－３－（４－フルオロフェニル）－４－モルホリニル］メチル］－１，２－ジヒドロ－３Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－オン、
    Figure 2022534990000060
     （２Ｓ，３Ｓ）－Ｎ－［［２－メトキシ－５－（トリフルオロメトキシ）フェニル］メチル］－２－フェニル－３－ピペリジンアミン二塩酸塩、
    Figure 2022534990000061
     （２Ｓ，３Ｓ）－Ｎ－（２－メトキシフェニル）メチル－２－ジフェニルメチル－１－アザビシクロ［２．２．２］オクタン－３－アミン、
    Figure 2022534990000062
     （４Ｒ）－４－ヒドロキシ－１－［（１－メチル－１Ｈ－インドール－３－イル）カルボニル］－Ｌ－プロリル－Ｎ－メチル－３－（２－ナフタレニル）－Ｎ－（フェニルメチル）－Ｌ－アラニンアミド、
    Figure 2022534990000063
     （２Ｓ，３Ｓ）－Ｎ－［［２－メトキシ－５－（１Ｈ－テトラゾール－１－イル）フェニル］メチル］－２－フェニル－３－ピペリジンアミン二塩酸塩、
    Figure 2022534990000064
     ＧＲ８２３３４、
    Figure 2022534990000065
     ５－［［（２Ｒ，３Ｓ）－２－［（１Ｒ）－１－［３，５－ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エトキシ］－３－（４－フルオロフェニル）－４－モルホリニル］メチル－Ｎ，Ｎ－ジメチル－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－４－メタンアミン塩酸塩、
    Figure 2022534990000066
     Ｎ－アセチル－Ｌ－トリプトファン３，５－ビス（トリフルオロメチル）ベンジルエステル、
    Figure 2022534990000067
     （３ａＲ，７ａＲ）－オクタヒドロ－２－［１－イミノ－２－（２－メトキシフェニル）エチル］－７，７－ジフェニル－４Ｈ－イソインドール、
    Figure 2022534990000068
     １－［［（２－ニトロフェニル）アミノ］カルボニル］－Ｌ－プロリル－Ｎ－メチル－３－（２－ナフタレニル）－Ｎ－（フェニルメチル）－Ｌ－アラニンアミド、
    Figure 2022534990000069
     １－［２－［（３Ｓ）－３－（３，４－ジクロロフェニル）－１－［２－［３－（１－メチルエトキシ）フェニル］アセチル］－３－ピペリジニル］エチル］－４－フェニル－１－アゾニアビシクロ［２．２．２］オクタンクロリド、それらのアナログ、または組合せを含む、請求項２４に記載の方法。
  27. 前記核酸が、アプタマー、低分子干渉性ＲＮＡ、ミクロＲＮＡ、低分子ヘアピンＲＮＡ、およびアンチセンス核酸から選択される１つである、請求項２４に記載の方法。
  28. 前記組成物が、局所投与、結膜下投与、または硝子体内投与によって前記被験体に投与される、請求項２３に記載の方法。
  29. 前記組成物が少なくとも１日１回、前記被験体に局所投与される、請求項２８に記載の方法。
  30. 前記組成物が少なくとも１日２回、前記被験体に局所投与される、請求項２８に記載の方法。
  31. 前記組成物が少なくとも１日３回、前記被験体に局所投与される、請求項２８に記載の方法。
  32. 前記組成物が前記被験体の眼に投与される、請求項２３に記載の方法。
  33. 前記組成物が二次治療または二次薬剤と組み合わせて前記被験体に投与される、請求項２３に記載の方法。
  34. 式（Ｉ）
    Figure 2022534990000070
     を有する化合物、またはその薬学的に許容される塩を含む、ニューロキニン１受容体（ＮＫ１Ｒ）アンタゴニストであって、
    式中、
    Ａｒが置換または未置換のアリールまたはヘテロアリールであり、
    ｎが１～３の整数であり、
    Ｘ１が－ＮＨ－、－Ｃ（Ｏ）－、または－Ｏ－であり、
    Ｘ２が－ＣＨＲ７－または－Ｏ－であり、
    Ｌ１が結合、または置換もしくは未置換のＣ１～Ｃ４アルキレンであり、
    Ｌ２が結合、または置換もしくは未置換のＣ１～Ｃ４アルキレンであり、
    それぞれのＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、およびＲ７が独立に、水素、ハロゲン、置換もしくは未置換のＣ１～Ｃ４アルキレン、置換もしくは未置換の２～４員のヘテロアルキル、置換もしくは未置換のシクロアルキル、置換もしくは未置換のヘテロシクロアルキル、置換もしくは未置換のアリール、または置換もしくは未置換のヘテロアリールであるか、あるいはＲ６とＲ７は結合して置換もしくは未置換のヘテロシクロアルキルを形成する、
    ＮＫ１Ｒアンタゴニスト。
  35. Ｌ２が結合であり、ｎが１であり、Ａｒがフェニルであり、Ｘ２が－ＣＨ２－であり、Ｒ６が水素である、請求項３４に記載のＮＫ１Ｒアンタゴニスト。
  36. 式（ＩＩ）
    Figure 2022534990000071
     を有する化合物、またはその薬学的に許容される塩である、請求項３５に記載のニューロキニン１受容体（ＮＫ１Ｒ）アンタゴニスト。
  37. Ｘ１が－ＮＨ－または－Ｏ－である、請求項３６に記載のＮＫ１Ｒアンタゴニスト。
  38. Ｌ１が置換または未置換のメチレンである、請求項３６に記載のＮＫ１Ｒアンタゴニスト。
  39. 前記化合物が以下の式
    Figure 2022534990000072
     またはその薬学的に許容される塩を有する、請求項３６に記載のニューロキニン１受容体（ＮＫ１Ｒ）アンタゴニスト。
  40. それぞれのＲ１、Ｒ２、Ｒ４、およびＲ５が独立に水素、－ＯＣＨ３、－ＯＣＦ３、－ＯＣＨ３、－ＣＦ３、または
    Figure 2022534990000073
     である、請求項３９に記載のＮＫ１Ｒアンタゴニスト。
  41. Ｒ３が水素である、請求項３９に記載のＮＫ１Ｒアンタゴニスト。
  42. Ｒ１またはＲ５が独立に水素または－ＯＣＨ３である、請求項３９に記載のＮＫ１Ｒアンタゴニスト。
  43. Ｒ２またはＲ４が独立に水素、
    Figure 2022534990000074
     、－ＣＦ３、または－ＯＣＦ３である、請求項３９に記載のＮＫ１Ｒアンタゴニスト。
  44. 式（ＩＩ－ａ）の化合物が、
    Figure 2022534990000075
     を含む、請求項３９に記載のＮＫ１Ｒアンタゴニスト。
  45. 式（ＩＩ－ｂ）の化合物が、
    Figure 2022534990000076
     を含む、請求項３９に記載のＮＫ１Ｒアンタゴニスト。
  46. Ｘ２が－Ｏ－であり、Ｌ２が結合であり、ｎが１である、請求項３４に記載のＮＫ１Ｒアンタゴニスト。
  47. 式（ＩＩＩ）
    Figure 2022534990000077
     を有する化合物、またはその薬学的に許容される塩である、請求項４６に記載のニューロキニン１受容体（ＮＫ１Ｒ）アンタゴニスト。
  48. Ｌ１が未置換のメチレンまたは－ＣＨ（ＣＨ３）－である、請求項４７に記載のＮＫ１Ｒアンタゴニスト。
  49. 式（ＩＩＩ－ａ）
    Figure 2022534990000078
     を有する化合物、またはその薬学的に許容される塩である、請求項４８に記載のニューロキニン１受容体（ＮＫ１Ｒ）アンタゴニスト。
  50. Ａｒが置換または未置換のフェニルである、請求項４９に記載のＮＫ１Ｒアンタゴニスト。
  51. Ａｒが
    Figure 2022534990000079
     である、請求項４９に記載のＮＫ１Ｒアンタゴニスト。
  52. Ｒ６が置換Ｃ１～Ｃ４アルキルである、請求項４９に記載のＮＫ１Ｒアンタゴニスト。
  53. Ｒ６が
    Figure 2022534990000080
     である、請求項４９に記載のＮＫ１Ｒアンタゴニスト。
  54. それぞれのＲ１、Ｒ２、Ｒ４、およびＲ５が独立に水素または－ＣＦ３である、請求項４９に記載のＮＫ１Ｒアンタゴニスト。
  55. Ｒ３が水素である、請求項４９に記載のＮＫ１Ｒアンタゴニスト。
  56. それぞれのＲ１およびＲ５が独立に水素である、請求項４９に記載のＮＫ１Ｒアンタゴニスト。
  57. それぞれのＲ２およびＲ４が独立に水素または－ＣＦ３である、請求項４９に記載のＮＫ１Ｒアンタゴニスト。
  58. 式（ＩＩＩ－ａ）の化合物が、
    Figure 2022534990000081
     を含む、請求項４９に記載のＮＫ１Ｒアンタゴニスト。
  59. Ｒ６とＲ７が結合して５～６員のヘテロシクロアルキルを形成する、請求項３４に記載のＮＫ１Ｒアンタゴニスト。
  60. Ｘ２が－ＣＨＲ７－であり、Ｒ６とＲ７が結合して６員のヘテロシクロアルキルを形成し、ｎが２である、請求項５９に記載のＮＫ１Ｒアンタゴニスト。
  61. 前記アンタゴニストが、式（ＩＶ）
    Figure 2022534990000082
     を有する化合物、またはその薬学的に許容される塩であり、Ａｒ１およびＡｒ２がそれぞれ独立に、置換または未置換のアリールまたはヘテロアリールである、請求項６０に記載のニューロキニン１受容体（ＮＫ１Ｒ）アンタゴニスト。
  62. 式（ＩＶ－ａ）
    Figure 2022534990000083
     を有する化合物、またはその薬学的に許容される塩である、請求項６１に記載のニューロキニン１受容体（ＮＫ１Ｒ）アンタゴニスト。
  63. Ａｒ１およびＡｒ２がフェニルである、請求項６２に記載のＮＫ１Ｒアンタゴニスト。
  64. それぞれのＲ１およびＲ５が独立に水素または－ＯＣＨ３である、請求項６２に記載のＮＫ１Ｒアンタゴニスト。
  65. それぞれのＲ２、Ｒ３、およびＲ４が水素である、請求項６２に記載のＮＫ１Ｒアンタゴニスト。
  66. 式（ＩＶ）のそれぞれの化合物が
    Figure 2022534990000084
     を含む、請求項６２に記載のＮＫ１Ｒアンタゴニスト。
  67. 請求項５、６、７、または３４から６６のいずれか一項に記載のニューロキニン１受容体（ＮＫ１Ｒ）アンタゴニストを含む、局所眼科製剤。
  68. 請求項５、６、７、または３４から６６のいずれか一項に記載のニューロキニン１受容体（ＮＫ１Ｒ）アンタゴニストを含む医薬組成物。
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